KR20150094710A - 소량의 시료로 콜레스테롤과 중성지방을 신속하게 분석 검사하는 방법 - Google Patents

소량의 시료로 콜레스테롤과 중성지방을 신속하게 분석 검사하는 방법 Download PDF

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Abstract

혈액 시료로부터 콜레스테롤과 콜레스테롤 소분획을 신속하게 측정하기 위한, 시약, 분석 검사, 키트, 장치 및 시스템이 제공되었습니다. 총콜레스테롤, 저밀도 지질단백질 콜레스테롤 및 고밀도 지질단백질 콜레스테롤은, 콜레스테롤 변종(sub-species)을 분명한(구분 가능한) 비율(속도)로 탐지 가능한 결과물로 변환하는 조건하에서, 역학적 측정(kinetic measurements)을 사용하여 단일 분석 검사로 측정할 수 있습니다. 탐지 가능한 결과물은 분석 검사를 시작한 후에 서로 다른 시점에서 측정됩니다. 지질분해효소, 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 과산화효소를 함께 사용하여, 변환된 콜레스테롤의 양에 대해 정비례되는 양으로 착색된 결과물을 생성할 수 있습니다. 중성지방 측정을 포함하여, 초저밀도 지질단백질 콜레스테롤 수준을 계산하는 방법이 공개되었습니다. 단일 반응 혼합물로 분석 검사를 수행할 수 있으므로, 다양한 반응 혼합물로 다수의 다양한 분석 검사를 수행하여 얻을 수 있는 것보다 더 정밀하고 정확하게 더 적은 비용으로 콜레스테롤 값들을 결정하고, 총콜레스테롤에 대한 콜레스테롤 소분획의 비율을 결정할 수 있습니다.

Description

소량의 시료로 콜레스테롤과 중성지방을 신속하게 분석 검사하는 방법{RAPID, LOW-SAMPLE-VOLUME CHOLESTEROL AND TRIGLYCERIDE ASSAYS}
본 발명은 소량의 시료로 콜레스테롤과 중성지방을 신속하게 분석 검사하는 방법에 관한 것이다.
지질, 특히 콜레스테롤은 사람의 건강과 질환에 매우 중요한 역할을 수행합니다. 콜레스테롤은 필수 영양 성분이며, 세포와 세포 소기관의 경계 부분을 형성하는 지질막의 핵심 성분입니다.
그러나 콜레스테롤이 지나치게 많으면 혈관에 "플라크(plaque)"가 축적되고, 혈전증과 노졸중을 유발하고 인간의 생명에 치명적인 영향을 끼칩니다. 이런 위험을 줄이려면, 지질 성분인 특히 콜레스테롤을 지질단백질(lipoproteins)로 포장하여 혈관을 통해 신체에 전송할 수 있어야 합니다.
콜레스테롤(C)과 중성지방(TG)을 함유하고 있는 다양한 형태의 지질단백질이 알려져 있으며, 이런 지질단백질에는, 예를 들어, 카일로미크론(유미지립, chylomicrons), 초저밀도 지질단백질(VLDL: very low density lipoprotein), 저밀도 지질단백질(LDL: low density lipoprotein) 및 고밀도 지질단백질(HDL: high density lipoprotein) 등과 같은 것들이 있습니다. 이런 지질단백질의 콜레스테롤 성분은 VLDL-콜레스테롤(VLDL-C), LDL-콜레스테롤(LDL-C) 및 HDL-콜레스테롤(HDL-C) 등으로 각각 불립니다.
VLDL, LDL, HDL의 콜레스테롤 성분과 혈장 또는 혈청의 총콜레스테롤 함량(TC: total cholesterol)은 일상적으로 측정 또는 계산하여, 죽상동맥경화증(atherosclerosis)의 위험을 평가하고 "스타틴(statins)" 같은 "콜레스테롤 저하" 약품의 이점을 평가하는 데 사용합니다.
선행 기술 방식에서 혈액 시료를 원심 분리하여 혈청 또는 혈장에 들어 있는, 구별할 수 있는 정도의 VLDL, LDL 및 HDL 소량을 얻을 수 있습니다; 이런 소량은 원심력을 가하면 밀도 차이로 인해 서로 다른 비율(속도)로 이동하여 분명한 띠(band)를 형성합니다. 또한, 지질단백질(Lipoproteins)은, 덱스트란 황산염(dextran-sulfates), 시클로덱스트린 황산염(cyclodextrin-sulfates) 및 양이온(cations) 같은 시약을 사용하여, 차동 침전법(differential precipitation)으로 분리할 수 있습니다. 예를 들어, VLDL 및 LDL은, 모든 HDL을 용액에 남겨둔 채로, 완전하게 침전시킬 수 있습니다. VLDL 및 LDL을 원심분리기 또는 필터를 사용하여 일단 제거하고 나면, 남아 있는 콜레스테롤은 HDL 분획과만 연관이 있습니다. 효소를 이용하는 다른 선행 기술을 사용하여 HDL-C 및 LDL-C을 추정할 수도 있습니다. 여기에서, 효소는 폴리에틸렌 글리콜(PEG: polyethylene glycol) 체인을 공유 결합으로 부착하여 변경됩니다. PEG는 특정 지질단백질의 분획에 대해 효소 활동을 제한하는 것으로 여겨집니다. 또한, 이런 선행 기술은 특정 지질단백질 분획을 선택적으로 용해하거나 감싸는 특정 시약을 사용하여, 단일 지질단백질 분획만이 침전되거나 또는 분석 검사(assay)에서 분석 검사 화학물질과 반응하도록 할 수도 있습니다.
이런 콜레스테롤 성분의 측정이 유효하도록 하려면, 소량의 차이만으로도 임상적 결과가 크게 달라질 수 있기 때문에, 이런 측정은 매우 정확하고 정밀해야 합니다(오차 5% 미만). 콜레스테롤 소분획(sub-fraction)을 측정하기 위한 기존 방식은 여러 개의 독립적인 분석 검사(일반적으로 최소한 3 개, TC, LDL-C 및 HDL-C) 및/또는 3 개의 피분석물(TC, TG, HDL-C)에 대한 측정 및 프리드왈드(Friedewald) 공식을 사용한 LDL-C의 계산 값으로 이루어져 있습니다. 프리드왈드(Friedewald) 공식:
Figure pct00001
여기에서 "TG"는 중성지방(triglyceride)의 수치이고, "x"는 곱셈을 뜻하고, "k"는 mg/dl 단위로 측정한 양에 대해 0.2입니다(양을 mmol/l 단위로 측정한 경우, k는 약 0.45).
프리드왈드 공식은 LDL-C를 사용할 경우 다음과 같이 동등하게 표현할 수도 있습니다:
Figure pct00002
역시, 여기에도 "TG"는 중성지방(triglyceride)의 수준이고, "x"는 곱셈을 뜻하고, "k"는 mg/dl 단위로 측정한 양에 대해 0.2입니다(양을 mmol/l 단위로 측정한 경우, k는 약 0.45).
가장 중요한 것은 지질단백질 콜레스테롤의 다음과 같은 파생형(sub-forms)의 상대적인 수치입니다: 예를 들어, TC (HDL-C/TC)에 대한 HDL-C의 비율(HDL-C/TC), TC에 대한 LDL-C 비율(LDL-C/TC), 또는 TC에 대한 VLDL-C의 비율(VLDL-C/TC)입니다. 지질단백질 콜레스테롤의 파생형의 수치는 일반적으로 개별적으로 측정하거나, 원심분리 또는 전기영동(electrophoresis) 같은 번거롭고 값비싼 물리적 분리 방법을 사용합니다. 이런 수치들(levels)은 기존 방식에서 여러 단계의 독립적인 분석 검사를 통해 측정되고, 각각의 분석 검사에는 자체의 오차 원인이 있고, 콜레스테롤 소분획(sub-fraction)의 계산된 비율의 오차가 누적되어, 이런 누적된 오차는 효과적인 진단과 치료법의 모니터링에 대해 원하는 값 보다 더 큽니다. 또한, 지질단백질 소분획의 분석 비용은 여러 단계의 분석 검사의 필요성으로 인해 증가됩니다.
참조를 통한 결합(INCORPORATION BY REFERENCE)
본 문서에서 언급된 모든 특허, 특허 출원, 및 출판물은 참조에 의해 그 자체로 완전히 통합되었습니다.
요약
출원인들은, 지질단백질을 침전하거나 분리하는 단계 없이, 역학적 측정법(kinetic measurements)으로 지질단백질 콜레스테롤을 한 번(단일) 분석 검사하여, T-C, LDL-C 및 HDL-C의 매우 정밀하고 정확한 값을 얻는 방법을 발견했습니다. 본 문서에서 공개된 분석 검사는 지질분해효소(lipase, 예를 들어, 콜레스테롤 에스테르분해효소(esterase)), 산화효소(oxidase, 예를 들어, 콜레스테롤 산화효소) 및 과산화효소(peroxidase)를 사용하여 착색된 결과물을 형성합니다. 본 문서에서 공개된 분석 검사는 지질분해효소(lipase, 예를 들어, 콜레스테롤 에스테르분해효소(esterase)), 탈수소효소(dehydrogenase, 예를 들어, 콜레스테롤 탈수소효소) 및 니코틴 아데닌 디누클레오티드(nicotine adenine dinucleotide)를 사용하여, 빛 흡수 결과물(예를 들어, NADH) 또는 기타 탐지 가능한 결과물을 형성합니다. 이런 결과물은 분광 광도계(spectrophotometry)를 사용하여 측정할 수 있습니다. 본 문서에서 공개된 분석 검사에서, 모든 종류의 콜레스테롤 함유 지질단백질로부터 형성한 결과물의 양은 변환된 콜레스테롤의 양과 정비례합니다. 본 문서에서 공개된 분석 검사, 방법, 시약 및 키트는 지질단백질 콜레스테롤과 지질단백질 콜레스테롤 소분획(sub-fraction)을 신속하고 효율적이고 저렴하게 분석 검사하는 데 유용하며, 단일 분석 검사로 지질단백질 콜레스테롤과 지질단백질 콜레스테롤 소분획을 측정할 수 있는 이점을 제공합니다. 본 문서에 공개된 분석 검사는, 지질단백질의 침전 없이, 지질단백질 콜레스테롤과 지질단백질 콜레스테롤 소분획을 측정할 수 있는 장점을 제공합니다. 본 문서에 공개된 분석 검사는, 원심분리 또는 전기영동(electrophoresis) 없이, 지질단백질 콜레스테롤과 지질단백질 콜레스테롤 소분획을 측정할 수 있는 장점을 제공합니다.
출원인들은, 분석 검사 조건(예를 들어, 시약, 프로토콜 또는 온도)을 제공하여 HDL-C, LDL-C 및 VLDL-C을 착색된 결과물로 변환하는 역학적 반응이, 분석 검사가 끝난 시점에 모든 종류의 지질단백질(예: HDL, LDL 및 VLDL)의 완전한 반응이 완료되도록 하면서도, 매우 크게 다른 비율로 진행하도록 할 수 있다는 것을 발견했습니다. 예를 들어, 본 문서에서 공개된 분석 검사에서 HDL-C에 대한 진행 시간에는 1 분 미만에서 예측되는 반감기(half-time)가 있으며, LDL-C 변환에는 지연 단계가 있으며, 전반적인 굴곡 모양(sigmoid shape)이 약 3분 전후로 형성됩니다. 본 문서에 공개된 분석 검사에서, 나머지 지질단백질 콜레스테롤(유미지립(chylomicrons)과 VLDL-C)은 휠씬 더 느리게 반응합니다(반감기가 약 5분 또는 그 이상). 서로 다른 종류의 콜레스테롤 사이에 이런 반감기의 차이와 반응역학(reaction kinetics)의 차이로 인해, 예를 들어, 분석 검사 동안 특정 시점에서 두 종류 이상으로부터 신호가 생성되도록 하여, 간단한 알고리즘으로 분석 검사 신호를 각각의 종류에 해당하는 신호로 분해(de-convolution)할 수 있습니다. 따라서, 본 문서에 공개된 분석 검사와 방법에서 사용할 시약의 공식(reagent formulations)은 단일 분석 검사로 지질단백질, HDL, LDL 및 VLDL의 역학적 구별화(kinetic differentiation)를 달성하기 위해 고안되었습니다.
본 문서에 공개된 새로운 방법과 분석 검사는 출원인들의 놀라운 발견을 이용합니다. 이런 분석 검사에서 콜레스테롤 변종들(sub-species)은, 뚜렷한 속도로, 측정된 결과물로 변환됩니다. 따라서, HDL-C는 매우 신속하게 결과물로 변환되고, LDL-C는 HDL-C가 결과물로 변환되는 것 보다는 더 느리게 결과물로 변환되고, 유미지립 콜레스테롤(chylomicron cholesterol)은 훨씬 더 느리게 변환됩니다. 총콜레스테롤(total cholesterol)이 결과물로 완전하게 변환되는 것은 HDL-C 또는 LDL-C가 결과물로 변환되는 것보다 훨씬 더 느립니다. 결과물로 변환되는 속도의 이런 차이로 인해, 서로 다른 종류의 지질단백질로부터 콜레스테롤 측정이 서로 다른 시점에서 단일 용액으로 가능하므로, 이런 측정에 필요한 단계 수를 줄이고 가능한 오차를 줄여, 절차를 단순화시킬 수 있습니다.
따라서, 본 문서에서 출원인들은 혈액의 단일 시료 또는 시료의 부분을 사용하여 HDL-C, LDL-C 및 TC를 결정하는 방법을 공개합니다. 이런 방법들은, 지질단백질의 상당한 침전 없이, 예를 들어, 혈액 시료 또는 시료의 부분에 들어 있는 HDL 또는 LDL의 상당한 침전 없이도, 혈액의 단일 시료 또는 시료의 부분으로 HDL-C, LDL-C 및 TC를 결정할 수 있습니다. 본 문서에 공개된 것처럼, 혈액 시료에 들어 있는 HDL-C의 양은, 시료의 지질단백질에서 방출된 콜레스테롤의 산화를 허용하는데 효과적인 시약의 결합 이후, 제1기 동안에 형성된 과산화물의 양을 비색 판별하여(colorimetric determination), 상당한 지질단백질의 침전 없이도, 측정할 수 있습니다. 제1기는, 예를 들어, 약 3 분 미만의 기간이며, 실시예에서 약 2 분 미만의 기간이 될 수도 있습니다. 본 문서에 공개된 것처럼, 혈액 시료에 들어 있는 LDL-C의 양은, 시료의 지질단백질에서 방출된 콜레스테롤의 산화를 허용하는 데 효과적인 시약의 결합 이후, 제2기 동안에 형성된 과산화물의 양을 비색 판별하여(colorimetric determination), 상당한 지질단백질의 침전 없이도, 측정할 수 있습니다. 실시예에서, 혈액 시료에 들어 있는 LDL-C의 양은 해당 제2기의 시작 부분에서 결정한 비색 판별법과 해당 제2기의 끝 부분에서 결정한 비색 판별법 간의 차이를 사용하여 측정할 수도 있습니다. 예를 들어, 제2기는 시료에서 지질단백질에서 방출된 콜레스테롤의 산화를 허용하는 데 효과적인 시약의 결합 이후, 약 2 분과 6 분 사이의 기간이 될 수도 있습니다. 본 문서에 공개된 것처럼, 혈액 시료에 들어 있는 TC의 양은, 시료의 지질단백질에서 방출된 콜레스테롤의 산화를 허용하는 데 효과적인 시약의 결합 후에 형성된 과산화물의 양을 비색 판별하여(colorimetric determination), 상당한 지질단백질의 침전 없이도, 측정할 수 있습니다. 이런 TC 측정(예를 들어, 비색 판별법)은 제3기의 시작 부분 또는 중간 특정 부분에서 수행할 수도 있습니다. 제3기는 해당 제2기 이후의 기간이며, 예를 들어, 시료에 들어 있는 지질단백질에서 방출된 콜레스테롤의 산화를 허용하는 데 효과적인 시약의 결합 이후, 약 6 분에서 시작하는 기간이 될 수도 있습니다. 서로 다른 시료를 서로 다른 판별법(different determination)으로 측정할 경우, 서로 다른 시료들 간의 측정 일치를 위해, 각각의 시료에 대한 제3기의 시작 이후에 동일한 시점에서 각각의 서로 다른 시료에 대해 비색 판별법을 수행할 수도 있습니다.
따라서, HDL-C, LDL-C 및 TC 측정은 피험자 혈액의 단일 시료 또는 시료의 단일 부분으로 수행할 수 있습니다. 실시예에서, 본 문서에 공개된 것처럼, HDL-C, LDL-C 및 TC 측정은 피험자 혈액의 단일 시료 또는 시료의 단일 부분으로 순차적으로 수행할 수도 있습니다. 예를 들어, 피험자 혈액의 단일 시료 또는 시료의 단일 부분에 들어 있는 VLDL-C 수치는 VLDL-C = TC - (HDL-C + LDL-C) 관계식이나 기타 관계식으로 계산할 수 있습니다. 실시예에서, 피험자 혈액의 단일 시료 또는 시료의 단일 부분에 들어 있는 VLDL-C 수치는 이런 측정값으로 계산할 수 있으며, 예를 들어, VLDL-C = αTC + βHDL-C + γLDL-C + λ 관계식으로 계산할 수도 있습니다. 여기에서, α, β 및 γ는 각각 TC, HDL-C 및 LDL-C에 곱해주는 상수입니다. 여기에서, λ는 기타 모든 인수들의 합에 대해 더해주는 가산 상수입니다. 추가 실시예에서, 피험자 혈액의 단일 시료 또는 시료의 단일 부분에 들어 있는 VLDL-C 수치는 TC, HDL-C 및 LDL-C의 일부 측정값 또는 모든 측정값 및 상기 제공된 관계식과 비슷한 형식의 곱셈 및 덧셈 상수(multiplicative and additive constants)를 사용하여, 다른 관계식으로도 계산할 수 있습니다.
그러므로, 출원인들은, 본 문서에서, HDL-C, LDL-C 및 TC에 대한 새롭고 유용한 측정법과 VLDL-C 계산법을 공개합니다. 이 측정법은, 단일 혈액 시료 또는 혈액 시료의 부분을 사용하여 측정에 필요한 혈액 양을 줄이고 혈액에 들어 있는 다양한 지질단백질 분획을 측정하는 방법의 복잡성을 줄이면서도, 정확하고 신속하게 혈액의 지질단백질을 측정할 수 있습니다. 이런 측정은 시료에 들어 있는 지질단백질의 상당한 침전 없이도 수행할 수 있습니다.
또한, 출원인들은, 본 문서에서, 혈액 시료에 들어 있는 중성지방(triglyceride)의 수치를 결정하는 방법을 공개합니다. 이 방법에서, 혈액 시료를 지질분해효소(lipase), 키나아제(kinase) 및 산화효소(oxidase)와 접촉시켜 혈액 시료에 들어 있는 중성지방(TG)으로부터 글리세롤(glycerol)을 자유롭게 하고, 글리세롤을 인산화(phosphorylate)하여, 과산화수소(hydrogen peroxide)를 제공하도록 하는 방법을 사용하여, 중성지방(TG)의 수준(동등하게: 양 또는 수치)을 결정할 수도 있습니다. 과산화효소(peroxidase)가 있을 때 과산화수소는 착색제를 형성하고, 이 착색제를 측정하면 혈액 시료에 들어 있는 중성지방(TG) 수치(수준)를 결정할 수 있습니다.
본 문서에서 출원인들은 혈액의 지질단백질을 정확하고 신속하게 측정할 수 있도록 해주는, HDL-C, LDL-C, TC 및 TG를 측정하는, 새롭고 유용한 방법을 공개합니다. HDL-C, LDL-C 및 TC는 혈액의 단일 시료 또는 시료 부분으로 측정할 수 있으나, TG는 다양한 혈액 시료 또는 시료 부분을 사용하여 측정할 수도 있습니다. 이런 측정은 시료에 들어 있는 지질단백질의 상당한 침전 없이도 수행할 수 있습니다. 혈액의 4 가지 지질 성분 모두를 피험자 혈액의 2 개의 시료만 또는 시료의 2 개의 부분만을 사용하여 측정합니다. 출원인들은, HDL-C, TC 및 TG 측정값 또는 HDL-C, LDL-C, TC 및 TG 측정값을 사용하여, 피험자 혈액의 VLDL-C를 계산하는, 향상된 방법을 본 문서에서 추가적으로 공개합니다. 실시예에서, VLDL-C는 HDL-C, TC 및 TG 측정값이나 HDL-C, LDL-C, TC 및 TG 측정값으로 계산할 수도 있습니다. 이런 측정값들은 본 문서에서 공개된 방법에 따라 측정할 수 있습니다. 실시예에서, 피험자 혈액의 단일 시료 또는 시료의 단일 부분에 들어 있는 VLDL-C의 수치는 이런 측정값으로 계산할 수 있으며, 예를 들어, VLDL-C = αTC + βHDL-C + γLDL-C + δTG + a1(TG+ε)(TC+κ) + λ 관계식으로 계산할 수 있습니다. 여기에서, α, β, γ, δ 및 a1은 각각 TC, HDL-C, LDL-C, TG 및 (TG+ε)(TC+κ)에 곱하는 상수이고, ε, κ 및 λ는 각각 TG, TC 및 다른 모든 인수들의 합에 더하는 상수입니다. 실시예에서, 피험자 혈액의 단일 시료 또는 시료의 단일 부분에 들어 있는 VLDL-C의 수치는 이런 측정값으로 계산할 수 있으며, 예를 들어, VLDL-C = αTC + βHDL-C + δTG + a1(TG+ε)(TC+κ) + λ 관계식으로 계산할 수 있습니다. 여기에서, α, β, δ 및 a1은 각각 TC, HDL-C, TG 및 (TG+ε)(TC+κ)에 곱하는 상수이고, ε, κ 및 λ는 각각 TG, TC 및 다른 모든 인수들의 합에 더하는 상수입니다. 추가 실시예에서, 피험자 혈액의 단일 시료 또는 시료의 단일 부분에 들어 있는 VLDL-C 수치는 TC, TG, HDL-C 및 LDL-C의 일부 측정값 또는 모든 측정값 및 상기 제공된 관계식과 비슷한 형식의 곱셈 및 덧셈 상수(multiplicative and additive constants)를 사용하여, 다른 관계식으로도 계산할 수 있습니다.
실시예에서, 본 문서에서 공개된 분석 검사와 방법에 사용할 시약의 공식(formulations)은 지질단백질의 침전 없이 상기 설명한 역학적 구별화(kinetic differentiation)를 달성하기 위해 고안되었습니다. 본 문서에서 공개된 시약과 분석 검사에서, 양이온(선택적으로 마그네슘, 칼슘, 망간, 코발트, 카드뮴 또는 기타 양이온 같은 2가 양이온)과 음전하를 띤 다당류(예를 들어, 덱스트란 황산염 같은 덱스트란 에스테르, 시클로덱스트린 에스테르(cyclodextrin ester) 같은 α-시클로덱스트린 황산염, 헤파린, 또는 기타 음전하를 띤 다당류)와 지질단백질의 결합체는 지질단백질의 침전이 없는 조건으로 형성됩니다. 예를 들어, 실시예에서, 마그네슘 이온과 덱스트란 황산염(dextran sulfate)과의 지질단백질 결합체는 지질단백질의 침전이 거의 없거나 없는 상태에서 형성됩니다. 계면활성제(surfactants) 같은 양쪽친매성 화합물(amphiphilic compounds)이 본 문서에서 공개된 시약과 분석 검사에 포함될 수도 있습니다. 예를 들어, 지질단백질이 용해될 수 있도록 유지하는 데 다양한 계명활성제가 적합할 수도 있습니다. 실시예에서, 시약은 LDL 및 VLDL 콜레스테롤과 콜레스테롤 에스테르(cholesterol esters)에 대한 (예를 들어, 콜레스테롤 에스테르분해효소(cholesterol esterases) 및/또는 산화효소(oxidases)에 의한) 접근을 제한하지만 방해하지는 않는 방식으로 LDL 및 VLDL 지질단백질 입자의 표면을 변경하는 데 효과적인 성분을 제공합니다. LDL 및 VLDL 입자 표면을 이렇게 변경하는 데 알맞은 시약과 방법을 사용하면, 상호작용제(interactants 또는 반응물) 또는 계면활성제(surfactants)가 없거나, 또는 본 문서에서 공개한 분석 검사와 시약에서 발견되는 것과는 다른 농도 또는 다른 상대적인 비율의 이런 시약으로 수행한, 비슷한 분석 검사에서 착색 결과물이 형성되는 속도와 비교할 경우, 이런 종류의 지질단백질로부터 착색된 결과물의 형성을 느리게 하는 데 효과적입니다. 지질단백질 종류들로부터 착색된 결과물의 형성을 느리게 하면, 서로 다른 지질단백질 부분을 물리적으로 분리할 필요 없이(예를 들어, 원심분리 또는 전기영동의 필요성이 없음), 서로 다른 때에 서로 다른 지질단백질 분획의 콜레스테롤 함량을 측정할 수 있도록 하는데 효과적인, 반응 역학(reaction kinetics)의 분리를 제공하는 데 유용할 수도 있습니다.
따라서, 본 문서에서 출원인들은 피험자의 혈액 시료에 들어 있는 총콜레스테롤(TC: total cholesterol), LDL-콜레스테롤(LDL-C) 및 HDL-콜레스테롤(HDL-C) 중에서 적어도 두 개 이상을, 혈액 지질단백질(blood lipoproteins)의 상당한 침전 없이도, 동시에 신속하게 측정하기 위한 분석 검사에서 사용할 수 있는 첫 번째 시약을 공개합니다. 첫 번째 시약에는 지질단백질 용해제(lipoprotein solubilization agent)와 지질단백질 상호작용제(또는 반응물, interactant)가 포함되어 있습니다. 실시예에서 첫 번째 시약에는 완충제가 포함되어 있을 수도 있습니다. 실시예에서, 본 문서에 공개된 첫 번째 시약에 사용하는 지질단백질 용해제(lipoprotein solubilization agent)에는 계면활성제(surfactant)가 포함될 수도 있습니다. 지질단백질 상호작용제(또는 반응물, interactant)에는, 예를 들어, 시클로덱스트린(cyclodextrin), 덱스트란(dextran), 또는 둘 모두가 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 첫 번째 시약에 사용하는 지질단백질 상호작용제(interactant)에는 저분자량 덱스트란이 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 첫 번째 시약에 사용하는 지질단백질 상호작용제(interactant)에는 α-시클로덱스트린(α-cyclodextrin)이 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 첫 번째 시약에는 착색제(colorant)가 포함되어 있을 수 있습니다. 실시예에서, 첫 번째 시약에는 아닐린이 함유된(aniline-containing) 화합물이나 아미노안티피렌(aminoantipyrene) 화합물 중, 하나 또는 둘 모두가 포함될 수 있으며, 이 두 화합물 모두는 과산화물(peroxide)이나 과산화효소(peroxidase)가 있을 경우 반응을 일으켜 탐지 가능한 결과물을 형성합니다. 본 문서에 공개된 시약, 분석 검사, 방법 및 키트의 실시예에서, 이런 첫 번째 시약에는 α-시클로덱스트린 황산염(α-cyclodextrin sulfate), 덱스트란 황산염(dextran sulfate), 염화마그네슘, 4 아미노안티피렌(4 aminoantipyrene) 및 인산염 완충제(phosphate buffer) 같은 완충제가 포함될 수도 있습니다. 본 문서에 공개된 시약, 분석 검사, 방법 및 키트의 실시예에서, 이런 첫 번째 시약에는 α-시클로덱스트린 황산염(1 mM), 덱스트란 황산염(20 μM), 염화마그네슘(4 mM), 4 아미노안티피렌(2.25 mM) 및 NaxPO4 (100 mM) (여기에서 NaxPO4 는 인산나트륨염(sodium phosphate salt), 예를 들어, NaH2PO4, Na2HPO4 또는 Na3PO4)이 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 이런 첫 번째 시약의 pH 농도는 약 pH 5 ~ pH 9 사이, 또는 약 pH 6 ~ pH 8 사이가 될 수 있으며, 선택적으로 약 pH 6.8 ~ pH 7.8 사이, 예를 들어, 약 pH 7.4가 될 수 있습니다.
출원인들은 또한 피험자의 혈액 시료에 들어 있는 총콜레스테롤(TC: total cholesterol), LDL-콜레스테롤(LDL-C) 및 HDL-콜레스테롤(HDL-C) 중에서 적어도 두 개 이상을, 혈액 지질단백질(blood lipoproteins)의 상당한 침전 없이도, 동시에 신속하게 측정하기 위한 분석 검사에서 사용할 수 있는 두 번째 시약을 공개합니다. 두 번째 시약은 지질분해효소(lipase), 산화효소(oxidase) 및 착색제(colorant)를 포함합니다. 실시예에서, 두 번째 시약에는 완충제가 포함될 수도 있습니다. 해당 두 번째 시약의 실시예에서, 지질분해효소(lipase)에는 콜레스테롤 에스테르분해효소(cholesterol esterase)가 포함될 수 있으며, 산화효소(oxidase)에는 콜레스테롤 산화효소가 포함될 수 있고, 착색제에는 과산화효소(peroxidase)와 과산화효소용 기질(substrate) 또는 둘 모두가 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 과산화효소와 과산화효소용 기질은 해당 두 번째 시약에 들어 있을 수 있습니다.
실시예에서, 해당 두 번째 시약에는 완충제(buffer), 양쪽친매성제(amphiphilic agent), 콜레스테롤 에스테르분해효소(cholesterol esterase), 콜레스테롤 산화효소(cholesterol oxidase) 및 착색제가 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 이런 두 번째 시약에 사용하는 양쪽친매성제(amphiphilic agent)에는 계면활성제가 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 이런 두 번째 시약에 사용하는 착색제에는 과산화효소(peroxidase)와 과산화효소용 기질(substrate)이 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 이런 두 번째 시약에 사용하는 착색제에는 서양고추냉이 과산화효소(horseradish peroxidase)가 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 이런 두 번째 시약에 사용하는 착색제(colorant)에는 N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline (ALPS) 같은 아닐린 함유 화합물(aniline-containing compound), 4-아미노안티피렌(4-aminoantipyrene) 같은 아미노안티피렌 화합물, 또는 기타 화합물 및 과산화효소 같은 효소와 반응하는 화합물의 조합이 포함될 수 있습니다(예를 들어, 서양고추냉이 과산화효소, horseradish peroxidase). 실시예에서, 두 번째 시약에는 아닐린 함유(aniline-containing) 화합물과 아미노안티피렌(aminoantipyrene) 화합물 둘 모두가 포함될 수 있으며, 이 두 화합물 모두는 과산화물(peroxide)이나 과산화효소(peroxidase)가 있을 경우 반응을 일으켜 탐지 가능한 결과물을 형성합니다. 실시예에서, 지질분해효소에는 콜레스테롤 에스테르분해효소(cholesterol esterase)가 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 이런 두 번째 시약에서 사용하는 콜레스테롤 에스테르분해효소에는 녹농균(Pseudomonas bacterium)에서 얻은 콜레스테롤 에스테르분해효소 같은 박테리아성 콜레스테롤 에스테르분해효소(bacterial cholesterol esterase)가 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 산화효소에는 콜레스테롤 산화효소(cholesterol oxidase)가 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 이런 두 번째 시약에서 사용하는 콜레스테롤 산화효소에는 녹농균(Pseudomonas bacterium)에서 얻은 콜레스테롤 산화효소 같은 박테리아성 콜레스테롤 산화효소(bacterial cholesterol oxidase)가 포함될 수 있습니다. 본 문서에 공개된 시약, 분석 검사, 방법 및 키트의 실시예에서, 이런 두 번째 시약에는 인산염 완충제(예를 들어, NaxPO4 (여기에서, NaxPO4는 인산나트륨염(sodium phosphate salt), 예를 들어, NaH2PO4 , Na2HPO4 또는 Na3PO4)), Triton X-100, 플루론(pluronic) L64, N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline (ALPS), 녹농균 콜레스테롤 에스테르분해효소(Pseudomonas cholesterol esterase), 녹농균 콜레스테롤 산화효소(Pseudomonas cholesterol oxidase) 등이 포함될 수 있습니다. 예를 들어, 이런 두 번째 시약에는 NaxPO4 (50 mM), Triton X-100 (0.06%), 플루론 L64 (3 g/L), N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline (ALPS) (3 mM), 녹농균(Pseudomonas sp.) (750 U/L)에서 얻은 콜레스테롤 에스테르분해효소, 녹농균(Pseudomonas sp.) (1.5 kU/L)에서 얻은 콜레스테롤 산화효소 등이 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 이런 두 번째 시약의 pH 농도는 약 pH 5 ~ pH 9 사이, 또는 약 pH 6 ~ pH 8 사이가 될 수 있으며, 선택적으로 약 pH 6.8 ~ pH 7.8 사이, 예를 들어, 약 pH 7.4가 될 수 있습니다.
출원인들은 본 문서에서 콜레스테롤 분석 검사에 사용하는 방법과 시약(두 번째 시약 포함)을 공개합니다. 두 번째 시약에는 지질분해효소(lipase), 산화효소 및 착색제가 포함되고, 해당 두 번째 시약에는 지질단백질 상호작용제(또는 반응물, interactant)가 포함되어 있으며, 본 문서에서 공개된 방법에서 사용할 때, 지질단백질 상호작용제는 LDL-C를 측정 가능한 착색된 결과물(또는 측정 가능한 결과물, 예를 들어, 스펙트럼의 자외선 범위에 가까운 정도)로 변환할 때보다 확연히 다른 속도로 HDL-C를 측정 가능한 착색된 결과물(또는 측정 가능한 결과물, 예를 들어, 스펙트럼의 자외선 범위에 가까운 정도)로 변환할 수 있는 정도의 농도를 제공합니다. 출원인들은 본 문서에서 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하기 위한 방법과 시약을 공개합니다. 이 분석 검사법은 지질분해효소, 산화효소, 착색제 및 두 번째 시약으로 구성되며, 두 번째 시약에는 지질단백질 상호작용제(또는 지질단백질 반응물, lipoprotein interactant)가 포함됩니다. 본 문서에서 공개된 방법에서 사용할 때, 지질단백질 상호작용제는 VLDL-C를 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 때보다 상당히 다른 속도로 HDL-C를 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 수 있는 정도의 농도를 제공합니다. 출원인들은 본 문서에서 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하기 위한 방법과 시약을 공개합니다. 이 분석 검사법은 지질분해효소, 산화효소, 착색제 및 두 번째 시약으로 구성되며, 두 번째 시약에는 지질단백질 상호작용제(또는 지질단백질 반응물, lipoprotein interactant)가 포함됩니다. 본 문서에서 공개된 방법에서 사용할 때, 지질단백질 상호작용제는 VLDL-C를 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 때보다 상당히 다른 속도로 LDL-C를 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 수 있는 정도의 농도를 제공합니다. 출원인들은 본 문서에서 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하기 위한 방법과 시약을 공개합니다. 이 분석 검사법은 지질분해효소, 산화효소, 착색제 및 두 번째 시약으로 구성되며, 두 번째 시약에는 지질단백질 상호작용제(또는 지질단백질 반응물, lipoprotein interactant)가 포함됩니다. 본 문서에서 공개된 방법에서 사용할 때, 지질단백질 상호작용제는 LDL-C 및/또는 VLDL-C를 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 때보다 상당히 다른 속도로 HDL-C를 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 수 있는 정도의 농도를 제공합니다. 출원인들은 본 문서에서 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하기 위한 방법과 시약을 공개합니다. 이 분석 검사법은 지질분해효소, 산화효소, 착색제 및 두 번째 시약으로 구성되며, 두 번째 시약에는 지질단백질 상호작용제(또는 지질단백질 반응물, lipoprotein interactant)가 포함됩니다. 본 문서에서 공개된 방법에서 사용할 때, 지질단백질 상호작용제는 HDL-C 및 VLDL-C를 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 때보다 상당히 다른 속도로 LDL-C를 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 수 있는 정도의 농도를 제공합니다.
실시예에서, 착색제에는 과산화효소(peroxidase)와 과산화효소용 기질(substrate)이 포함될 수 있습니다. 예를 들어, 실시예에서, 착색제에는 과산화효소, 아닐린 함유 화합물(aniline-containing compound) 및 아미노안티피렌 화합물(aminoantipyrene compound)이 포함될 수 있습니다.
출원인들은 본 문서에서 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하기 위한 시약을 공개합니다. 이 분석 검사법에는 콜레스테롤 에스테르분해효소(cholesterol esterase), 콜레스테롤 산화효소(cholesterol oxidase) 및 지질단백질 상호작용제가 포함되어 있는 시약으로 구성됩니다. 지질단백질 상호작용제의 농도는, LDL-C 및 VLDL-C를 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 때보다 상당히 다른 속도로 HDL-C를 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 수 있는 정도이며, LDL-C 및 VLDL-C를 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 때보다 상당히 다른 속도로 HDL-C를 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 수 있는 정도입니다.
출원인들은 본 문서에서 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하기 위한 시약을 공개합니다. 이 분석 검사법에는 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 시약이 포함되어 있으며, 시약에는 음전하를 띠고 있는 다당류 유도체(polysaccharide derivative)와 2가 양전하(divalent cation)가 들어 있습니다. 다당류 유도체와 2가 양전하의 농도는, 혈액 시료 또는 혈액 시료의 부분이 해당 시약과 접촉할 때 LDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나 또는 VLDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나, 또는 둘 모두, 정도의 농도로 되어 있습니다. 출원인들은 본 문서에서 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하기 위한 시약을 공개합니다. 이 분석 검사법에는 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 시약이 포함되어 있으며, 시약에는 2가 양이온(divalent cations)에 대한 음전하를 가진 다당류의 비율이 0.002 ~ 0.02 사이 이고, 실시예에서 약 0.005이며, 혈액 시료 또는 혈액 시료의 부분이 해당 시약과 접촉할 때, HDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나 또는 VLDL의 상당한 침전이 발생하지 않는 정도의 비율(2가 양이온(divalent cations)에 대한 음전하를 띤 다당류의 비율)입니다. 실시예에서, 해당 시약에는 본 문서에 공개된 것처럼 첫 번째 시약이 포함됩니다.
출원인들은 본 문서에서 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하기 위한 시약을 공개합니다. 이 분석 검사법에는 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 시약이 포함되어 있으며, 시약에 음전하를 띤 다당류, 2가 양이온 및 계면활성제가 포함되어 있으며, 혈액 시료 또는 혈액 시료의 부분이 해당 시약과 접촉할 때, LDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나 또는 VLDL의 상당한 침전이 발생하지 않는 정도의 농도(음전하를 띤 다당류, 2가 양이온 및 계면활성제의 농도)로 되어 있습니다. 실시예에서, 해당 시약에는 본 문서에 공개된 것처럼 첫 번째 시약이 포함됩니다.
출원인들은 본 문서에서 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하기 위한 시약을 공개합니다. 이 분석 검사법에는 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 시약이 포함되어 있으며, 시약에는 덱스트란 황산염(또는 기타 음전하를 띤 다당류) 및 마그네슘(또는 기타 2가 양이온)이 포함되어 있으며, 혈액 시료 또는 혈액 시료의 부분이 해당 시약과 접촉할 때, HDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나 LDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나 또는 VLDL의 상당한 침전이 발생하지 않는 정도의 농도로 되어 있습니다. 출원인들은 본 문서에서 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하기 위한 시약을 공개합니다. 이 분석 검사법에는 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 시약이 포함되어 있으며, 시약에는 마그네슘 이온(또는 기타 2가 양이온(divalent cations))에 대한 덱스트란 황산염(또는 기타 음전하를 띤 다당류)의 비율이 0.002 ~ 0.02 사이 이고, 실시예에서 약 0.005이며, 혈액 시료 또는 혈액 시료의 부분이 해당 시약 또는 구성물과 접촉할 때, HDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나 또는 LDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나 또는 VLDL의 상당한 침전이 발생하지 않는 정도의 비율입니다. 출원인들은 본 문서에서 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하기 위한 시약을 공개합니다. 이 분석 검사법에는 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 시약이 포함되어 있으며, 시약에는 덱스트란 황산염, 마그네슘, 계면활성제가 들어 있습니다. 이것들(덱스트란 황산염, 마그네슘, 계면활성제)의 농도는, 혈액 시료 또는 혈액 시료의 부분이 해당 시약 또는 구성물과 접촉할 때 LDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나 또는 VLDL의 상당한 침전이 발생하지 않는 정도의 농도로 되어 있습니다. 실시예에서, 해당 시약에는 본 문서에 공개된 것처럼 첫 번째 시약이 포함됩니다.
본 문서에서 출원인들은, 피험자의 혈액 시료에 들어 있는 총콜레스테롤(TC: total cholesterol), LDL-콜레스테롤(LDL-C) 및 HDL-콜레스테롤(HDL-C) 중에서 적어도 두 개 이상을, 해당 혈액 지질단백질의 상당한 침전 없이도, 동시에 신속하게 측정하기 위한 분석 검사에서 사용할 수 있는 구성물을 공개합니다. 이 구성물에는 지질단백질 용해제(lipoprotein solubilization agent), 지질단백질 상호작용제(또는 반응물, interactant), 지질분해효소(lipase), 산화효소(oxidase) 및 착색제(colorant)가 포함되어 있습니다. 실시예에서, 이런 구성물에는 완충제가 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 착색제에는 과산화효소, 아닐린 함유 화합물(aniline-containing compound) 및 아미노안티피렌 화합물(aminoantipyrene compound)이 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 구성물에는 본 문서에 공개된 것처럼 첫 번째 시약과 두 번째 시약의 성분이 포함됩니다. 이런 구성물은, 예를 들어, 본 문서에 공개된 것처럼, 해당 첫 번째 시약과 두 번째 시약을 조합하여 제공될 수도 있습니다. 실시예에서, 이런 구성물에는 음전하를 띤 다당류와 2가 양이온(예를 들어, 마그네슘염과 덱스트란 황산염)이 들어 있는 염(salt)이 포함되어 있으며, 2가 양이온에 대한 음전하를 띤 다당류의 비율(예를 들어, 마그네슘 이온에 대한 덱스트란 황산염의 비율)이 약 0.002 ~ 약 0.02 사이 이고, 실시예에서 이 비율은 약 0.005 이며, 혈액 시료 또는 혈액 시료의 부분이 해당 구성물과 접촉할 때, HDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나 LDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나 VLDL의 상당한 침전이 발생하지 않는 정도입니다. 실시예에서, 이런 구성물에는 해당 첫 번째 시약과 해당 두 번째 시약, 또는 해당 첫 번째 시약의 부분표본과 해당 두 번째 시약의 부분표본이 들어 있습니다. 추가 실시예에서, 이런 구성물에는 해당 첫 번째 시약, 해당 두 번째 시약 및 혈액 시료 또는 해당 첫 번째 시약, 해당 두 번째 시약 및 해당 혈액 시료의 부분표본 또는 하나 또는 그 이상의 부분표본이 포함되어 있습니다.
실시예에서, 이런 구성물에 들어 있는 지질단백질 용해제에는 계면활성제가 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 이런 구성물에 들어 있는 지질단백질 상호작용제(또는 반응물, interactant)에는 2가 양이온(예를 들어, 마그네슘 이온)과 음전하를 띤 다당류 유도체가 포함될 수도 있습니다. 음전하를 띤 다당류 유도체에는 시클로덱스트린 에스테르(cyclodextrin-ester), 덱스트란 에스테르(dextran-ester), 또는 시클로덱스트린 에스테르와 덱스트란 에스테르 모두가 포함될 수도 있습니다. 예를 들어, 덱스트란 에스테르에는 저분자량 덱스트란 에스테르, 예를 들어, 저분자량 덱스트란 황산염이 포함될 수 있으며, 시클로덱스트린 에스테르에는 α-시클로덱스트린 에스테르(α-cyclodextrin-ester), 예를 들어, α-시클로덱스트린 황산염(α-cyclodextrin-sulfate)이 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 지질분해효소에는 콜레스테롤 에스테르분해효소(cholesterol esterase)가 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 산화효소에는 콜레스테롤 산화효소(cholesterol oxidase)가 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 착색제에는 과산화효소(peroxidase)가 포함될 수 있습니다.
따라서, 실시예에서, 본 문서에서 공개된 콜레스테롤 분석 검사에 사용하는 구성물에는 콜레스테롤 에스테르분해효소; 콜레스테롤 산화효소; 과산화효소; 과산화효소용 기질; 계면활성제; 2가 양이온이 들어 있는 염(salt); 및 음전하를 띤 다당류(예를 들어, 덱스트란 황산염 같은 덱스트란 유도체)가 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 이런 구성물에 들어 있는 과산화효소용 기질에는 아닐린 함유(aniline-containing) 화합물과 아미노안티피렌(aminoantipyrene) 화합물 둘 모두가 포함될 수 있으며, 이 두 화합물 모두는 과산화물(peroxide)이나 과산화효소(peroxidase)가 있을 경우 반응을 일으켜 탐지 가능한 결과물을 형성합니다. 실시예에서, 과산화효소용 기질에는 과산화효소와 반응하는 기타 화합물 및 화합물들의 조합이 들어 있을 수 있습니다(예를 들어, 서양고추냉이 과산화효소(horseradish peroxidase)). 아닐린 함유 화합물은, 예를 들어, N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline (ALPS)가 될 수도 있습니다. 아미노안티피렌 화합물(aminoantipyrene compound)은 4-아미노안티피렌(4-aminoantipyrene)이 될 수도 있습니다.
실시예에서, 본 문서에 공개된 것처럼, 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하기 위한 구성물에는 덱스트란 황산염(또는 기타 음전하를 띤 다당류) 및 마그네슘이 포함되어 있으며, 혈액 시료 또는 혈액 시료의 부분이 해당 구성물과 접촉할 때, HDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나 LDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나 또는 VLDL의 상당한 침전이 발생하지 않는 정도의 농도로 되어 있습니다. 출원인들은 본 문서에서 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하기 위한 구성물을 공개합니다. 이 분석 검사법에는 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 해당 구성물이 포함되어 있으며, 마그네슘 이온에 대한 덱스트란 황산염의 비율이 약 0.002 ~ 약 0.02 사이 이고, 실시예에서 약 0.005 이며, 혈액 시료 또는 혈액 시료의 부분이 해당 시약과 접촉할 때, HDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나 LDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나 또는 VLDL의 상당한 침전이 발생하지 않는 정도의 비율입니다. 출원인들은 본 문서에서 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하기 위한 구성물을 공개합니다. 이 분석 검사법에는 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 해당 구성물이 포함되어 있으며, 해당 구성물에는 덱스트란 황산염, 마그네슘, 계면활성제가 들어 있습니다. 이것들(덱스트란 황산염, 마그네슘, 계면활성제)의 농도는, 혈액 시료 또는 혈액 시료의 부분이 해당 구성물과 접촉할 때 LDL의 상당한 침전이 발생하지 않거나 또는 VLDL의 상당한 침전이 발생하지 않는 정도의 농도로 되어 있습니다.
실시예에서, 피험자의 혈액 시료에 들어 있는 총콜레스테롤(TC), LDL-콜레스테롤(LDL-C) 및 HDL-콜레스테롤(HDL-C) 중에서 적어도 두 개 이상을, 해당 혈액 지질단백질의 상당한 침전 없이, 동시에 신속하게 측정하기 위한 분석 검사에 사용할 수 있는 구성물에는 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소, (서양고추냉이 과산화효소 같은) 과산화효소, 4-아미노안티피렌, ALPS, α-시클로덱스트린 황산염, 덱스트란 황산염, 염화마그네슘, 계면활성제(예를 들어, Triton X-100 및/또는 플루론 L64) 및 완충제가 들어 있을 수 있습니다. 적합한 완충제는, 예를 들어, 인산염 완충제(phosphate buffer)가 될 수 있으며, 적합한 pH 농도는 약 pH 5 ~ pH 9 사이, 또는 약 pH 6 ~ pH 8 사이가 될 수 있으며, 선택적으로 약 pH 6.8 ~ pH 7.8 사이, 예를 들어, 약 pH 7.4가 될 수 있습니다. 이런 구성물에 사용할 적합한 콜레스테롤 에스테르분해효소에는 녹농균(Pseudomonas bacterium)에서 얻은 콜레스테롤 에스테르분해효소 같은 박테리아성 콜레스테롤 에스테르분해효소가 포함되어 있을 수 있으며, 적합한 콜레스테롤 산화효소에는 녹농균(Pseudomonas bacterium)에서 얻은 콜레스테롤 산화효소 같은 박테리아성 콜레스테롤 산화효소가 포함될 수도 있습니다.
실시예에서, 출원인들은 피험자 혈액 시료의 지질단백질에 들어 있는, 총콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 및 HDL-콜레스테롤 중에서 적어도 두 개 이상을, 해당 지질단백질의 상당한 침전 없이, 동시에 신속하게 측정하기 위한 분석 검사에서 사용하기 위한 시약을 공개합니다. 해당 시약에는 지질단백질 용해제, 지질단백질 상호작용제 및 완충제가 들어 있으며, 해당 지질단백질 상호작용제의 농도는 LDL-콜레스테롤을 측정 가능한 착색된 결과물로 변환하는 것보다 상당히 다른 속도로 HDL-콜레스테롤을 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 수 있는 정도의 농도이고, 해당 지질단백질 상호작용제의 농도는 VLDL-콜레스테롤을 측정 가능한 착색된 결과물로 변환하는 것보다 상당히 다른 속도로 HDL-콜레스테롤을 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 수 있는 정도의 농도입니다.
실시예에서, 출원인들은, 피험자 혈액 시료의 지질단백질에 들어 있는 총콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 및 HDL-콜레스테롤 중에서 적어도 두 개 이상을, 해당 지질단백질의 상당한 침전 없이, 동시에 신속하게 측정하기 위한 분석 검사에서 사용하는 시약을 공개합니다. 해당 시약에는 α-시클로덱스트린 황산염, 덱스트란 황산염, 염화마그네슘, 4-아미노안티피렌 및 인산나트륨 완충제가 포함되어 있으며, 여기에서 마그네슘 이온에 대한 덱스트란 황산염의 비율은 약 0.002 ~ 약 0.02 사이입니다.
실시예에서, 출원인들은 피험자 혈액 시료의 지질단백질에 들어 있는 총콜레스테롤(TC: total cholesterol), 저밀도 지질단백질(LDL) 콜레스테롤 및 고밀도 지질단백질(HDL) 콜레스테롤 중에서 적어도 두 개 이상을, 해당 지질단백질의 상당한 침전 없이, 측정하기 위한 분석 검사에서 사용할 수 있는 시약을 공개합니다. 이 시약은 완충제, 양쪽친매성제(amphiphilic agent), 지질분해효소(lipase), 산화효소(oxidase) 및 착색제(colorant)로 구성됩니다. 실시예에서, 시약에는 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 과산화효소가 들어 있습니다. 시약의 실시예에서, 양쪽친매성제(amphiphilic agent)에는 비이온 계면활성제(nonionic surfactants)로 이루어진 그룹에서 선택된 계면활성제; 양이온 계면활성제(cationic surfactants); 쌍성 이온성 계면활성제(zwitterionic surfactants); 유도체, 유사물 및 이런 것들의 조합 등이 포함됩니다. 시약의 실시예에서, 착색제에는 과산화효소, 과산화효소 기질, 아미노안티피렌 화합물 및 아닐린 함유 화합물이 하나 또는 그 이상 포함되어 있습니다. 실시예에서, 시약에는 인산나트륨 완충제, Triton X-100, 플루론 L64, N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline (ALPS), 녹농균(Pseudomonas sp)에서 얻은 콜레스테롤 에스테르분해효소 및 녹농균(Pseudomonas sp)에서 얻은 콜레스테롤 산화효소가 포함되어 있습니다.
실시예에서, 출원인들은 피험자 혈액 시료의 지질단백질에 들어 있는 총콜레스테롤(TC: total cholesterol), LDL-콜레스테롤 및 HDL-콜레스테롤 중에서 적어도 두 개 이상을, 해당 지질단백질(lipoproteins)의 상당한 침전 없이, 측정하기 위한 분석 검사에서 사용할 수 있는 시약을 공개합니다. 이 시약은 완충제, 양쪽친매성제(amphiphilic agent), 지질분해효소(lipase), 산화효소(oxidase) 및 착색제(colorant)로 구성됩니다. 실시예에서, 출원인들은 피험자 혈액 시료의 지질단백질에 들어 있는 총콜레스테롤(TC: total cholesterol), LDL-콜레스테롤 및 HDL-콜레스테롤 중에서 적어도 두 개 이상을, 해당 지질단백질(lipoproteins)의 상당한 침전 없이, 동시에 신속하게 측정하기 위한 분석 검사에서 사용할 수 있는 시약을 공개합니다. 이 시약은 완충제, 양쪽친매성제(amphiphilic agent), 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 과산화효소로 구성됩니다.
실시예에서, 시약은 키트 형태로 제공될 수 있습니다; 키트에는 시약의 사용법(예를 들어, 본 문서에 공개된 구성물) 또는 다수 시약에 대한 사용법, 예를 들어, 피험자 혈액 시료의 지질단백질에 들어 있는 총콜레스테롤(total cholesterol), LDL-콜레스테롤 및 HDL-콜레스테롤 중에서 적어도 둘 이상을, 해당 지질단백질의 상당한 침전 없이, 콜레스테롤 분석 검사에서 또는 다른 분석 검사 또는 분석 검사들에서 다수의 시약을 동시에 사용하기 위한 추가적인 설명이 포함될 수도 있습니다. 키트에 들어 있는 시약은 용기에 들어 있거나, 다수의 시약이 다수의 용기에 들어 있을 수도 있습니다.
출원인들은 피험자 혈액 시료에 들어 있는 TC, LDL-C 및 HDL-C 중에서 적어도 두 개 이상을, 해당 지질단백질의 상당한 침전 없이, 동시에 신속하게 측정하기 위한 분석 검사에서 사용할 수 있는, 시약이 포함되어 있는 키트를 공개합니다. 본 문서에 공개된 키트의 실시예에는 첫 번째 용기가 들어 있을 수 있으며, 첫 번째 용기에는 첫 번째 시약이 들어 있고, 첫 번째 시약에는 지질단백질 용해제, 지질단백질 상호작용제 및 완충제가 들어 있으며, 두 번째 용기가 들어 있을 수 있으며, 두 번째 용기에는 두 번째 시약이 들어 있고, 두 번째 시약에는 완충제, 양쪽친매성제(amphiphilic agent), 지질분해효소(lipase), 산화효소 및 착색제가 포함되어 있습니다. 본 문서에 공개된 키트의 실시예에는 첫 번째 용기가 들어 있을 수 있으며, 첫 번째 용기에는 첫 번째 시약이 들어 있고, 첫 번째 시약에는 지질단백질 용해제, 지질단백질 상호작용제 및 완충제가 들어 있으며, 두 번째 용기가 들어 있을 수 있으며, 두 번째 용기에는 두 번째 시약이 들어 있고, 두 번째 시약에는 완충제, 양쪽친매성제(amphiphilic agent), 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 착색제가 포함되어 있습니다. 실시예에서, 착색제에는 과산화효소(peroxidase)와 과산화효소용 기질(substrate) 또는 둘 모두가 포함될 수 있습니다.
본 문서에 공개된 키트의 실시예에는 첫 번째 용기가 들어 있을 수 있으며, 첫 번째 용기에는 첫 번째 시약이 들어 있고, 첫 번째 시약에는 지질단백질 용해제, 지질단백질 상호작용제 및 완충제가 들어 있으며, 두 번째 용기가 들어 있을 수 있으며, 두 번째 용기에는 두 번째 시약이 들어 있고, 두 번째 시약에는 완충제, 양쪽친매성제(amphiphilic agent), 지질분해효소(lipase), 산화효소 및 착색제가 들어 있으며, 이것들의 사용법이 들어 있을 수 있습니다. 실시예에서, 이런 키트에는 첫 번째 용기가 들어 있을 수 있으며, 첫 번째 용기에는 첫 번째 시약이 들어 있고, 첫 번째 시약에는 지질단백질 용해제, 지질단백질 상호작용제 및 완충제가 들어 있으며, 두 번째 용기가 들어 있을 수 있으며, 두 번째 용기에는 두 번째 시약이 들어 있고, 두 번째 시약에는 완충제, 양쪽친매성제(amphiphilic agent), 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 착색제가 들어 있으며, 이것들의 사용법이 들어 있을 수 있습니다. 실시예에서, 착색제에는 과산화효소(peroxidase)와 과산화효소용 기질(substrate)이 포함될 수 있습니다.
실시예에서, 출원인들은 시약과 이 시약을 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하는 방법이 들어 있는 키트를 공개합니다. 이 시약에는 본 문서에서 공개된 것과 같은 종류의 시약이 들어 있습니다. 실시예에서, 출원인들은 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하는 시약과 시약의 사용법을 공개합니다. 이 시약에는 α-시클로덱스트린 황산염(α-cyclodextrin sulfate), 덱스트란 황산염, 염화마그네슘, 4-아미노안티피렌(4-aminoantipyrene) 및 인산나트륨 완충제가 포함되어 있으며, 마그네슘 이온에 대한 덱스트란 황산염의 비율은 약 0.002 ~ 0.02 사이입니다. 실시예에서, 출원인들은 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하는 시약과 사용법이 들어 있는 키트를 공개합니다. 이 시약에는 인산나트륨 완충제, Triton X-100, 플루론 L64, N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline (ALPS) 및 녹농균(Pseudomonas sp.)에서 얻은 콜레스테롤 에스테르분해효소와 녹농균(Pseudomonas sp.)에서 얻은 콜레스테롤 산화효소가 들어 있습니다.
실시예에서, 출원인들은 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하는 첫 번째 시약과 두 번째 시약 및 이것들의 사용법 등이 적어도 들어 있는 키트를 공개합니다. 여기에서 해당 첫 번째 시약에는 본 문서에서 공개된 것과 같은 종류의 시약(예: 지질단백질 용해제, 지질단백질 상호작용제 및 완충제 등이 들어 있는 시약)이 들어 있으며, 이 두 번째 시약에는 본 문서에서 공개된 것과 같은 종류의 시약(예: 완충제, 양쪽친매성제(amphiphilic agent), 지질분해효소, 산화제(oxidant) 및 착색제가 들어 있는 시약)이 들어 있습니다. 실시예에서, 출원인들은 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하는 첫 번째 시약과 두 번째 시약 및 이 시약들의 사용법이 들어 있는 키트를 공개합니다. 여기에서 첫 번째 시약에는 계면활성제에서 선택된 지질단백질 용해제와 음전하를 띤 α-시클로덱스트린(α-cyclodetrin) 유도체가 포함되어 있습니다. 지질단백질 상호작용제에는 저분자 음전하를 띤 덱스트란 유도체 및 완충제가 포함되어 있으며, 해당 두 번째 시약에는 인산나트륨 완충제, Triton X-100, 플루론 L64, N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline (ALPS), 녹농균(Pseudomonas sp .)에서 얻은 콜레스테롤 에스테르분해효소 및 녹농균(Pseudomonas sp .)에서 얻은 콜레스테롤 산화효소가 들어 있습니다.
실시예에서, 출원인들은 콜레스테롤 분석 검사에서 사용하는 첫 번째 시약과 두 번째 시약 및 이것들의 사용법이 들어 있는 키트를 공개합니다. 여기에서, 첫 번째 시약에는 i) 지질단백질 용해제, 지질단백질 상호작용제 및 완충제가 들어 있으며, 여기에서 해당 지질단백질 상호작용제의 농도는, LDL-콜레스테롤을 측정 가능한 착색된 결과물로 변환하는 것과는 상당히 다른 속도로 HDL-콜레스테롤을 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 수 있는 정도의 농도이고, VLDL-콜레스테롤을 측정 가능한 착색된 결과물로 변환하는 것과는 상당히 다른 속도로 HDL-콜레스테롤을 측정 가능한 착색된 결과물로 변환할 수 있는 정도의 농도이며, 또는 첫 번째 시약에는 α-시클로덱스트린 황산염(α-cyclodextrin sulfate), 덱스트란 황산염, 염화마그네슘, 4-아미노안티피렌(4-aminoantipyrene) 및 인산나트륨 완충제가 포함되어 있으며, 여기에서, 마그네슘 이온에 대한 덱스트란 황산염의 비율은 약 0.002 ~ 0.02 사이이고, 해당 두 번째 시약에는 a) 완충제, 양쪽친매성제(amphiphilic agent), 지질분해효소, 산화효소, 착색제로 구성되거나, 또는 b) 완충제, 양쪽친매성제(amphiphilic agent), 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 과산화효소로 구성됩니다.
또한 본 문서에서, 피험자 혈액 시료에 들어 있는 TC, LDL-C 및 HDL-C 중에서 적어도 두 개 이상을, 지질단백질의 상당한 침전 없이, 동시에 신속하게 측정하기 위한 방법을 공개합니다. 피험자 혈액 시료에 들어 있는 TC, LDL-C 및 HDL-C를, 지질단백질의 상당한 침전 없이, 동시에 신속하게 측정하기 위한 방법의 실시예에는 다음과 같은 절차가 포함됩니다: 초기(initial time)에 해당 혈액 시료의 적어도 일부분을 지질단백질 용해제, 지질단백질 상호작용제 및 완충제가 들어 있는 첫 번째 시료와 결합하여, 혼합된 용액을 만듭니다; 해당 혼합된 용액에 완충제, 양쪽친매성제(amphiphilic agent), 지질분해효소(lipase), 산화효소(lipase) 및 착색제가 들어 있는 두 번째 시약을 추가하여, 착색된 용액을 만듭니다; 해당 두 번째 시약을 첨가한 후에, 제1기, 제2기, 제3기 내에 해당 착색된 용액에 의한 빛의 흡수도(absorbance of light)를 측정합니다.
이런 방법의 실시예에서, 해당 제1기는 해당 초기(initial time) 시간 이후 약 3분 이하로 구성되고, 해당 제3기는 해당 초기 시간 이후 약 5분 이상의 시간으로 구성됩니다. 여기에서, 해당 초기 시간에는 해당 두 번째 시약을 해당 혼합된 용액에 추가하는 시점이 포함됩니다.
실시예에서, 피험자 혈액 시료에 들어 있는 TC, LDL-C 및 HDL-C를, 해당 지질단백질의 상당한 침전 없이, 동시에 신속하게 측정하기 위한 방법에는 다음과 같은 절차가 포함됩니다: 초기에 해당 혈액 시료의 적어도 일부분을 지질단백질 용해제, 지질단백질 상호작용제 및 완충제가 들어 있는 첫 번째 시료와 결합하여, 혼합된 용액을 만듭니다; 해당 혼합된 용액에 완충제, 양쪽친매성제, 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 착색제가 들어 있는 두 번째 시약을 추가하여, 착색된 용액을 만듭니다; 제1기, 제2기, 제3기 내에 해당 착색된 용액에 의한 빛의 흡광도를 측정합니다.
이런 방법의 실시예에서, 해당 제1기는 해당 초기(initial time) 시간 이후 약 3분 이하로 구성되고, 해당 제3기는 해당 초기 시간 이후 약 5분 이상의 시간으로 구성됩니다. 여기에서, 해당 초기 시간에는 해당 두 번째 시약을 해당 혼합된 용액에 추가하는 시점이 포함됩니다.
본 문서에 공개된 방법의 실시예에서, 제1기는 해당 초기 기간 이후에 약 0 분 ~ 약 2 분 사이 간격이고, 제2기는 해당 초기 기간 이후에 약 2 분 ~ 약 6 분 사이 간격이고, 제3기는 약 6 분 ~ 약 10 분 사이 간격, 또는 이 보다 더 긴 시간 간격이 될 수도 있습니다. 실시예에서, 해당 제3기는 해당 초기 기간 이후 약 5 분 또는 6 분 이후에, 끝 시간이 지정되지 않은 임의의 시간을 포함합니다. 실시예에서, 초기(initial time)는 두 번째 시약을 용액에 추가한 시간입니다.
다른 시간 및 시간 간격도 사용할 수 있으며, 지질분해효소, 산화효소 또는 둘 모두의 양이 감소할 경우, 더 긴 시간 및 시간 간격을 사용할 수도 있음을 인식해야 합니다. 지질분해효소, 산화효소 또는 둘 모두의 양이 증가할 경우, 더 짧은 시간 및 시간 간격을 사용할 수도 있음을 인지해야 합니다. 마찬가지로, 지질단백질 용해제 및/또는 지질단백질 상호작용제의 양이 변할 경우에도 다른 시간 및 시간 간격을 사용할 수도 있습니다. 따라서, 본 문서에 공개된 방법의 추가적인 실시예에서, 시간 기간은 상기한 시간 기간 보다 길 수도 있습니다; 예를 들어, 제1기가 해당 초기 기간 이후에 약 0 분 ~ 약 10 분 사이 간격이고, 제2기는 해당 초기 기간 이후에 약 10 분 ~ 약 20 분 또는 약 30 분 사이 간격이고, 제3기는 약 20 분 ~ 약 40 분 또는 약 60 분 사이 간격, 또는 이 보다 더 긴 시간 간격이 될 수도 있도록, 시약과 방법을 구성할 수도 있습니다. 본 문서에 공개된 방법의 또 다른 추가적인 실시예에서, 시간 기간은 상기한 기간 보다 짧아 질 수도 있습니다; 예를 들어, 제1기가 해당 초기 기간 이후에 약 0 분 ~ 약 1 분 사이 간격이고, 제2기는 해당 초기 기간 이후에 약 1 분 ~ 약 4 분 또는 약 5 분 사이 간격이고, 제3기는 약 4 분 ~ 약 8 분 사이 간격, 또는 약 5 분 ~ 약 9 분 사이 간격이 될 수 있도록 시약과 방법을 구성할 수도 있습니다.
실시예에서, 흡광도(absorbance)를 측정하는 단계에는 분광 광도계(spectrophotometer)를 사용하여 흡광도를 측정하는 방법이 포함될 수도 있습니다. 흡광도를 측정하는 단계에는 일반적으로 분광 광도계를 사용하여 특정 진동수 또는 특정 진동수에 가까운 (빛의) 흡광도를 측정하는 것이 포함됩니다. 실시예에서, 흡광도(absorbance)를 측정하는 단계에는 분광 광도계(spectrophotometer)를 사용하여 약 560 나노미터(nm)의 파장에서 또는 (이 파장과) 가까운 파장에서 흡광도를 측정하는 방법이 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 흡광도를 측정하는 단계에는, 추가로, 첫 번째 파장에서 또는 이 파장과 가까운 곳에의 흡광도와 두 번째 파장에서 또는 이 파장과 가까운 곳에서의 흡광도 사이의 차이를 측정하기 위해 분광 광도계를 사용할 수 있습니다; 두 개의 파장에서 측정한 흡광도 간의 이런 차(difference)는 "ΔA" 이라고 부릅니다. 예를 들어, 이런 두 파장은 약 560 nm 및 약 700 nm가 될 수 있습니다. 실시예에서, 흡광도를 측정하는 단계에는, 추가로, 약 560 nm와 약 700 nm 사이의 흡광도 차를 얻는 데 효과적인, 약 560 nm 파장과 약 700 nm 파장에서 흡광도를 측정하기 위해, 분광 광도계를 사용하는 것이 포함될 수 있습니다. 특정 착색제의 경우, 다른 파장 및 다른 파장 간격을 사용할 수도 있음을 인지해야 합니다; 예를 들어, 약 400 nm와 약 700 nm 사이에서 파장을 탐지할 수 있는 색원체 과산화효소 기질(chromogenic peroxidase substrates)이 있을 수 있습니다.
이런 흡광도 측정은 특정 시점, 또는 특정 두 시점, 또는 3 개의 시점, 또는 그 이상의 특정 시점에서 측정될 수도 있으며, 여기에서, 특정 시점은 초기 시간을 기준으로 정의됩니다. 특정 시점에서의 측정에는 초기 시간 이후 0 ~ 약 2 분 사이, 또는 초기 시간 이후 약 2 분 ~ 약 6 분 사이, 또는 초기 시간 이후 약 6 분에서 약 10 분 사이, 또는 기타 시간 및/또는 다른 시간 기간 동안 측정할 수도 있습니다.
실시예에서, 흡광도를 측정하는 단계에는 두(2) 시점에서 분광 광도계를 사용하여 흡광도를 측정할 수도 있으며, 해당 두 시점에서의 측정값들 사이의 차를 기록 또는 계산할 수도 있습니다. 실시예에서, 흡광도는 두 파장에서 측정된 흡광도의 차, ΔA가 될 수도 있으며, 첫 번째 시점에서 측정한 ΔA와 두 번째 시점에서 측정한 ΔA 사이의 차를 기록 또는 계산할 수 있습니다; 두 시점에서 측정한 ΔA 사이의 차는 "ΔAt"라고 부릅니다. 예를 들어, ΔAt는, 560 nm와 700 nm에서 측정한 흡광도 차(difference)로 ΔA를 측정하여, 측정할 수 있습니다. 여기에서, ΔA는 초기 기간 이후 약 2 분 후와 초기 기간 후 약 6 분 후에 측정하고, ΔAt는 두 ΔA 측정값 사이의 차(difference)입니다. 추가적인 실시예에서, ΔAt는, 560 nm와 700 nm에서 측정한 흡광도 차이로 ΔA를 측정하여, 측정할 수 있습니다. 여기에서, ΔA는 초기에 측정하고 초기 기간 후 약 2 분 후에 측정합니다. 여기에서, ΔAt는 두 ΔA 측정값 사이의 차(difference)입니다. 추가적인 실시예에서, ΔAt는, 560 nm와 700 nm에서 측정한 흡광도 차이로 ΔA를 측정하여, 측정할 수 있습니다. 여기에서, ΔA는 초기 기간 이후 약 6 분 후와 초기 기간 이후 약 10 분 후에 측정하고, ΔAt는 두 ΔA 측정값 사이의 차(difference)입니다. 추가적인 실시예에서, 특정 시간 후에 ΔA를 측정할 때, "약 5 분 후에", "약 10 분 후에", "약 5 분 이상의 시간 기간에서", "약 10 분 이상의 시간 기간에서", 등등과 같은 말은, 해당 언급된 시간 이후의 아무 때에 또는 합리적인 시간 이후에 측정할 수 있다는 뜻으로 인지해야 합니다. 실시예에서, 측정하기 위한 시간 기간은, 초기 시간 이후, 약 30 분 이상을 초과하지 않을 수 있으며, 또는 약 20 분 이상을 초과하지 않을 수도 있습니다.
실시예에서, 첫 번째 시약에는 지질단백질 용해제, 지질단백질 상호작용제 및 완충제가 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 지질단백질 용해제에는 계면활성제가 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 지질단백질 상호작용제에는 덱스트란(술폰산화 덱스트란(sulfonated dextran) 또는 인산화 덱스트란(phosphorylated dextran) 같은 덱스트란 유도체), 시클로덱스트린(술폰산화 시클로덱스트린(sulfonated cyclodextrin) 또는 메틸화 시클로덱스트린(methylated cyclodextrin) 같은 시클로덱스트린 유도체), 헤파린(heparin) 같은 음전하를 띤 천연 물질 또는 이런 것들의 조합이 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 지질단백질 상호작용제에는 음전하를 띤 저분자 덱스트란 에스테르, 예를 들어, 저분자 덱스트란 황산염(dextran sulfate)이 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 지질단백질 상호작용제에는 α-시클로덱스트린 황산 에스테르(α-cyclodextrin sulfate ester) 같은 α-시클로덱스트린 유도체가 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 첫 번째 시약에는 과산화효소 기질(peroxidase substrate)이 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 과산화효소 기질에는 4-아미노안티피렌(4-aminoantipyrene) 같은 아미노안티피렌 화합물 및 ALPS 같은 아닐린 함유 화합물이 포함될 수도 있습니다. 추가적인 실시예에서, 첫 번째 시약에는 α-시클로덱스트린 황산염(α-cyclodextrin sulfate), 덱스트란 황산염(dextran sulfate), 염화마그네슘, 4-아미노안티피렌(4-aminoantipyrene), ALPS 및 인산염 완충제(예: NaxPO4, 여기에서 NaxPO4는 인산나트륨 염(sodium phosphate salt)이고, 예를 들어, NaH2PO4, Na2HPO4 또는 Na3PO4) 같은 완충제가 포함될 수 있으며, 완충제는 pH 농도를 약 pH 6 ~ pH 8 사이로 조절합니다. 예를 들어, 실시예에서, 첫 번째 시약에는 α-시클로덱스트린 황산염 (1 mM), 덱스트란 황산염 (20 μM), 염화마그네슘 (4 mM), 4-아미노안티피렌 (2.25 mM), 3 mM ALPS 및 NaxPO4 (100 mM)가 포함될 수 있으며, pH 농도는 약 7 입니다.
실시예에서, 과산화효소 기질의 성분은 서로 다른 시약으로 분리될 수 있습니다. 시약 하나 또는 둘 모두의 안정성을 위해, 또는 시약 하나 또는 둘 모두의 분해(degradation)를 줄이거나 방지하기 위해, 과산화효소 기질의 성분을 서로 다른 시약으로 분리할 필요가 있을 수도 있습니다. 그러므로, 실시예에서, 첫 번째 시약에는 안티피렌 화합물(antipyrene compound)이 포함될 수 있고, 두 번째 시약에는 아닐린 함유 화합물(aniline-containing compound)이 포함될 수도 있습니다. 추가적인 실시예에서, 첫 번째 시약에는 4-아미노안티피렌(4-aminoantipyrene)이 포함되고 두 번째 시약에는 N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline (ALPS)가 포함될 수 있습니다. 추가적인 실시예에서, 첫 번째 시약에는 약 1 mM ~ 약 5 mM 사이의 4-아미노안티피렌이 포함되고, 두 번째 시약에는 약 0.5 mM ~ 20 mM의 ALPS가 포함될 수도 있습니다. 예를 들어, 첫 번째 시약에는 2.25 mM의 4-아미노안티피렌(4-aminoantipyrene)이 포함되고, 두 번째 시약에는 3 mM의 ALPS가 포함될 수 있습니다.
실시예에서, 과산화효소 기질의 성분은 단일 시약에 포함될 수 있습니다. 제조상의 단순성과 사용상의 편리성 또는 기타 이유로, 다수의 성분을 단일 시약에 포함시킬 필요가 있을 수도 있습니다. 예를 들어, 과산화효소 기질의 모든 성분이 들어 있는 시약에는 아미노안티피렌 화합물과 아닐린 함유 화합물이 들어 있을 수 있습니다. 추가적인 실시예에서, 과산화효소 기질의 모든 성분이 들어 있는 시약에는 4-아미노안티피렌(4-aminoantipyrene) 및 N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline (ALPS)가 들어 있을 수 있습니다. 추가적인 실시예에서, 과산화효소 기질의 모든 성분이 들어 있는 시약에는 약 1 mM ~ 약 5 mM 사이의 4-아미노안티피렌(4-aminoantipyrene)과 약 0.5 mM ~ 약 20 mM 사이의 ALPS가 포함될 수 있습니다. 예를 들어, 과산화효소 기질의 모든 성분이 들어 있는 시약에는 2.25 mM의 4-아미노안티피렌(4-aminoantipyrene)과 3 mM의 ALPS가 포함될 수 있습니다. 다른 실시예에서, 안정성을 향상시키기 위해 시약을 건조할(dried) 수도 있습니다. 시약은 동결진공건조(lyophilized)하거나 용기 벽에 달라 붙을 수 있는 필름 같은, 유리 모양 필름(glassy films) 형태로 제공될 수도 있습니다. 이런 시약을 건조하면, 물이나 완충제 용액 같은 다른 수분 함유 용제(aqueous solvent)를 추가할 경우, 신속하게(예들 들어, 몇 초 ~ 몇 분 내에) 용해될 수 있도록 만들 수 있습니다.
본 문서에서 공개된 방법의 실시예에서, 두 번째 시약에는 지질분해효소, 산화효소 및 착색제가 포함될 수도 있습니다. 해당 두 번째 시약의 실시예에서, 지질분해효소(lipase)에는 콜레스테롤 에스테르분해효소(cholesterol esterase)가 포함될 수 있으며, 산화효소(oxidase)에는 콜레스테롤 산화효소가 포함될 수 있고 착색제에는 과산화효소(peroxidase)가 포함될 수 있습니다. 본 문서에서 공개된 방법의 실시예에서, 해당 두 번째 시약에는 완충제(buffer), 양쪽친매성제(amphiphilic agent), 콜레스테롤 에스테르분해효소(cholesterol esterase), 콜레스테롤 산화효소(cholesterol oxidase) 및 착색제가 포함될 수 있습니다. 본 문서에서 공개된 방법의 실시예에서, 양쪽친매성제(amphiphilic agent)에는 계면활성제가 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 착색제에는 과산화효소 또는 과산화효소 기질이 포함될 수 있으며, 과산화효소와 과산화효소 기질 모두를 포함할 수도 있습니다. 과산화효소에는, 예를 들어, 서양고추냉이(HRP: horseradish, Armoracia rusticana)에서 얻은 과산화효소가 포함될 수도 있습니다. 과산화효소 기질에는 아닐린 함유 화합물, 아미노안티피렌 화합물 또는 둘 모두가 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 착색제에는 4-아미노인티피렌(4-aminoantipyrene) 같은 아미노안티피렌 화합물이 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 착색제에는 N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline (ALPS)가 포함될 수도 있습니다. 본 문서에서 공개된 방법의 실시예에서, 두 번째 시약에는 녹농균(Pseudomonas bacterium)에서 얻은 콜레스테롤 에스테르분해효소 같은 박테리아성 콜레스테롤 에스테르분해효소가 포함되어 있을 수 있으며, 실시예에는 녹농균(Pseudomonas bacterium)에서 얻은 박테리아성 콜레스테롤 산화효소 같은 박테리아성 콜레스테롤 산화효소가 포함될 수도 있습니다. 본 문서에서 공개된 방법의 실시예에서, 두 번째 시약에는 인산염 완충제(예, NaxPO4 (50 mM)), Triton X-100 (0.06%), 플루론 L64 (3 g/L), N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline (ALPS) (3 mM), 녹농균(Pseudomonas sp.)에서 얻은 콜레스테롤 에스테르분해효소 (750 U/L) 및 녹농균(Pseudomonas sp.)에서 얻은 콜레스테롤 산화효소 (1.5 kU/L)가 포함될 수 있습니다.
실시예에서, 본 문서에서 공개된 구성물에는 α-시클로덱스트린 황산염, 덱스트린 황산염, 염화마그네슘, 과산화효소 기질(예, 다이아미노벤지딘(diaminobenzidine) 또는 4-아미노안티피렌 및 ALPS), 콜레스테롤 에스테르분해효소(예, 녹농균(Pseudomonas sp .)에서 얻은 콜레스테롤 에스테르분해효소), 콜레스테롤 산화효소(예, 녹농균(Pseudomonas sp .)에서 얻은 콜레스테롤 산화효소), 계면활성제 및 완충제가 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 본 문서에 공개된 구성물에는 첫 번째 시약과 두 번째 시약이 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 본 문서에 공개된 구성물에는 첫 번째 시약, 두 번째 시약, 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분이 들어 있을 수 있습니다.
완충제에는, 예를 들어, 인산염 완충제(예, NaxPO4, 여기에서 NaxPO4는 인산나트륨 염(sodium phosphate salt), 예를 들어, NaH2PO4, Na2HPO4 또는 Na3PO4)가 들어 있을 수 있으며, pH 농도를 약 pH 5 ~ 약 pH 9 사이, 약 pH 6 ~ 약 pH 8 사이 또는 선택적으로 약 pH 6.8 ~ 약 pH 7.8 사이, 예를 들어, pH 7.4로 조정할 수 있습니다. 실시예에서, 본 문서에 공개된 구성물에는 녹농균(Pseudomonas sp .)에서 얻은 약 100 U/L ~ 약 2000 U/L 사이의 콜레스테롤 에스테르분해효소(예, 약 750 U/L), 녹농균(Pseudomonas sp .)에서 얻은 약 100 U/L ~ 약 3000 U/L 사이의 콜레스테롤 산화효소(예, 약 1.5 kU/L)가 들어 있을 수 있습니다.
실시예에서, 예를 들어, 과산화효소 기질에는 약 1 mM ~ 약 5 mM 사이의 4-아미노안티피렌(4-aminoantipyrene), 약 0.5 mM ~ 약 20 mM 사이의 ALPS, 예를 들어, 약 2.25 mM의 4-아미노안티피렌과 약 3 mM의 ALPS가 들어 있을 수 있습니다. 실시예에서, 계면활성제는, 예를 들어, Triton X-100 및/또는 플루론 L64가 될 수 있으며, 예를 들어, 구성물에는 약 0.01 ~ 1%의 Triton X-100이 들어 있을 수 있으며, 약 1 ~ 약 10 g/L의 플루론 L64가 들어 있을 수 있습니다; 특정 실시예에서, 구성물에는 약 0.06%의 Triton X-100과 약 3 g/L의 플루론 L64가 들어 있을 수 있습니다.
본 문서에 공개된 방법의 실시예에서, 제1기 내에서 측정하여 해당 시료에 들어 있는 HDL-콜레스테롤의 양을 결정할 수 있습니다. 본 문서에 공개된 방법의 실시예에서, 제2기 내에서 측정하여 해당 시료에 들어 있는 LDL-콜레스테롤의 양을 결정할 수 있습니다. 본 문서에 공개된 방법의 실시예에서, 제3기 내에서 측정하여 해당 시료에 들어 있는 총콜레스테롤의 양을 결정할 수 있습니다. 본 문서에서 공개된 방법의 실시예에서, 측정에는 분광 광도계(spectrophotometer)를 사용한 흡광도(absorbance)의 측정이 포함될 수 있습니다. 본 문서에 공개된 방법의 실시예에서, 측정에는 분광 광도계를 이용한 ΔA (여기에서, ΔA는 첫 번째 파장과 두 번째 파장에서 측정된 흡광도의 차(difference))의 측정이 포함될 수도 있습니다. 본 문서에 공개된 방법의 실시예에서, 측정에는 분광 광도계를 이용한 ΔAt (여기에서, ΔAt는 첫 번째 측정한 흡광도와 두 번째 측정한 흡광도 사이의 차(difference))의 측정이 포함될 수도 있습니다. ΔAt를 측정하기 위한 흡광도 측정은 ΔA의 측정이 될 수도 있습니다.
본 문서에 공개된 방법의 실시예에서, 피험자 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는 방법은 다음과 같은 단계를 포함할 수 있습니다: 콜레스테롤 소분획(cholesterol sub-fraction)과 (지질분해효소 및 산화효소로 구성된) 시약 혼합물 사이의 반응으로부터의 결과물 형성을 제1기 내에, 제2기 내에, 제3기 내에 측정하여, 콜레스테롤 측정 데이터를 제공할 수 있습니다; 여기에서 저밀도 지질단백질-콜레스테롤(LDL-C) 측정은 해당 제2기 내에서 얻은 해당 콜레스테롤 측정 데이터로부터 얻습니다; 여기에서 총콜레스테롤(TC) 측정은 해당 제3기 내에서 얻은 해당 콜레스테롤 측정 데이터로부터 얻습니다; 여기에서 고밀도 지질단백질 콜레스테롤(HDL-C) 측정은 해당 제2기 동안 얻은 콜레스테롤 측정 데이터와 해당 제1기 동안 측정한 결과물 형성 속도를 이용하여 얻습니다; 이때, 피험자 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터가 분석됩니다.
본 문서에 공개된, 피험자 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는 방법의 실시예에서, 해당 지질분해효소에는 콜레스테롤 에스테르분해효소가 들어 있을 수 있으며, 해당 산화효소에는 콜레스테롤 산화효소가 들어 있을 수 있습니다. 예를 들어, 본 문서에 공개된 방법의 실시예에서, 피험자 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는 방법은 다음과 같은 단계를 포함할 수 있습니다: 콜레스테롤 소분획(cholesterol sub-fraction)과 (콜레스테롤 에스테르분해효소 및 콜레스테롤 산화효소로 구성된) 시약 혼합물 사이의 반응으로부터의 결과물 형성을 제1기 내에, 제2기 내에, 제3기 내에 측정하여, 콜레스테롤 측정 데이터를 제공할 수 있습니다; 여기에서 LDL-C 측정은 해당 제2기 내에서 얻은 해당 콜레스테롤 측정 데이터로부터 얻습니다; 여기에서 TC 측정은 해당 제3기 내에서 얻은 해당 콜레스테롤 측정 데이터로부터 얻습니다; 여기에서 HDL-C 측정은 해당 제2기 동안 얻은 콜레스테롤 측정 데이터와 해당 제1기 동안 측정한 결과물 형성 속도를 이용하여 얻습니다; 이때, 피험자 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터가 분석됩니다.
피험자의 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는 방법의 실시예에는, 초기 이후에 약 3 분 미만으로 구성되는 제1기 단계, 두 번째 시약이 혼합된 용액에 추가되는 시점이 들어 있는 초기 단계 등이 포함되어 있으며, 여기에서 혼합된 용액에는 첫 번째 시약과 혈액 시료의 적어도 일부분이 포함됩니다. 실시예에서, 피험자의 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는 방법에는 초기 이후에 약 5 분 이상의 기간으로 구성되는 제3기 단계가 포함될 수도 있습니다. 여기에서, 초기 기간(initial time)에는 두 번째 시약을 혼합된 용액에 추가하는 시점이 들어 있습니다. 실시예에서, 해당 제1기에는 해당 초기 기간 이후에 약 0 분 ~ 약 2 분 사이 간격이 들어 있고, 제2기에는 해당 초기 기간 이후에 약 2 분 ~ 약 6 분 사이 간격이 들어 있고, 제3기에는 약 6 분 ~ 약 10 분 사이의 시간 간격, 또는 이 보다 더 긴 시간 간격이 포함되어 있습니다. 실시예에서, 해당 제3기에는 해당 초기 기간 이후 약 5 분 이상의 기간, 또는 해당 초기 기간 이후 6 분 이상의 기간 등, 끝 시간이 지정되지 않은 임의의 시간이 포함됩니다.
실시예에서, 결과물 형성을 측정하는 단계에는 흡광도 측정이 포함됩니다. 실시예에서, 흡광도(absorbance) 측정 단계에는 분광 광도계(spectrophotometer)를 이용한 ΔA의 측정이 포함됩니다. 추가적인 실시예에서, 분광 광도계로 흡광도를 측정하는 단계에는 첫 번째 파장에서 흡광도를 측정하고 두 번째 파장에서 흡광도를 측정하여, ΔA 측정값을 얻습니다. 여기에서, ΔA는 첫 번째 파장에서 측정한 흡광도와 두 번째 파장에서 측정한 흡광도 사이의 차(difference)입니다. 실시예에서, 분광 광도계로 ΔA를 측정하는 단계는 약 300 nm ~ 약 700 nm 사이의 한 파장에서 ΔA를 측정하고, 약 600 nm ~ 약 900 nm 사이의 한 파장에서도 측정합니다. 보다 특정적인 실시예에서, 분광 광도계로 ΔA를 측정하는 단계는 약 560 nm의 파장에서 및 약 700 nm의 파장에서 ΔA를 측정합니다.
적어도 일부 실시예에서, 본 문서에 공개된 방법에는 피험자의 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는 추가적인 방법이 포함되어 있습니다. 여기에서, HDL-C 측정은 제2기 동안 얻은 해당 콜레스테롤 측정 데이터와 다음과 같은 공식으로 제1기 동안 측정한 결과물 형성 비율(속도)을 이용하여 얻을 수 있습니다:
K1 - K2 x (LDL-C) + K3 x R1
여기에서, K1은 약 0 ~ 약 250 사이의 상수입니다;
여기에서, K2은 약 0 ~ 약 100 사이의 상수입니다;
여기에서, LDL-C의 양은, 해당 제2기의 시작 시점과 해당 제2기의 끝 시점 사이에서 측정한 흡광도의 차(difference)를 사용하여 결정됩니다.
여기에서, K3은 약 1 ~ 약 20,000 사이 상수이고;
여기에서, R1은 해당 제1기의 시작 시점과 해당 제1기의 끝 시점 사이에서 측정한 흡광도의 차이를 이용하여 결정됩니다. 여기에서 해당 시간 기간은 초기 기간을 기준으로 결정되고, 초기 기간에는 두 번째 시약이 혼합된 용액에 추가되는 시점이 포함되며, 혼합된 용액에는 첫 번째 시약과 해당 혈액 시료의 적어도 일부분이 포함되어 있습니다.
실시예에서, K1의 값은 약 0 ~ 약 100 사이 또는 약 0 ~ 50 사이가 될 수 있습니다. 실시예에서, K2의 값은 약 0 ~ 약 50 사이 또는 약 0 ~ 25 사이가 될 수 있습니다. 실시예에서, K3의 값은 약 0 ~ 약 10,000 사이 또는 약 0 ~ 5,000 사이가 될 수 있습니다. 추가적인 실시예에서, K1의 값은 약 0 ~ 약 25 사이 또는 약 0 ~ 10 사이가 될 수 있습니다. 추가적인 실시예에서, K2의 값은 약 0 ~ 약 5 사이 또는 약 0 ~ 2 사이가 될 수 있습니다.
피험자의 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는, 추가적인 방법의 실시예에서, 제1기에는 초기 기간 이후에 약 0 분 ~ 약 2 분 사이 시간 기간이 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 해당 제2기는 해당 초기 기간 이후 약 2 분 ~ 6 분 사이의 시간 간격으로 구성될 수 있습니다. 실시예에서, 해당 제3기는 해당 초기 기간 이후 약 6 분 ~ 10 분 사이의 시간 간격 또는 더 긴 시간 간격을 포함합니다. 실시예에서, 해당 제3기에는 해당 초기 기간 이후 약 5 분 이상의 기간, 또는 해당 초기 기간 이후 6 분 이상의 기간 등, 끝 시간이 지정되지 않은 임의의 시간이 포함됩니다.
피험자의 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는, 추가적인 방법의 실시예에서, K1은 약 0 ~ 약 3 사이의 값이 될 수 있습니다. 피험자의 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는, 추가적인 방법의 실시예에서, K2은 약 0 ~ 약 1 사이의 값이 될 수 있습니다. 피험자의 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는, 추가적인 방법의 실시예에서, K3은 약 800 ~ 약 1,800 사이의 값이 될 수 있습니다. 피험자의 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는, 추가적인 방법의 실시예에서, K1의 값은 약 1.30이 될 수 있습니다. 피험자의 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는, 추가적인 방법의 실시예에서, K2의 값은 약 0.446이 될 수 있습니다. 피험자의 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는, 추가적인 방법의 실시예에서, K3의 값은 약 1255가 될 수 있습니다.
피험자의 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는, 추가적인 방법의 실시예에서, 콜레스테롤 측정 데이터는 흡광도 측정에서 얻은 데이터로 구성될 수 있습니다. 피험자의 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는, 추가적인 방법의 실시예에서, 흡광도 측정값에는 분광 광도계로 측정한 흡광도 측정값이 포함될 수 있습니다. 피험자의 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는, 추가적인 방법의 실시예에서, 분광 광도계로 얻은 흡광도 측정에는 ΔA 측정이 포함될 수 있으며, 여기에서, ΔA 측정에는 첫 번째 파장에서 얻은 흡광도 측정이 포함되고 두 번째 파장에서 얻은 흡광도 측정이 포함되며, 해당 첫 번째 파장에서의 흡광도와 해당 두 번째 파장에서의 흡광도 사이의 차(difference)를 얻는 데 효과적입니다. 피험자의 혈액 시료에서 얻은 콜레스테롤 측정 데이터를 분석하는, 추가적인 방법의 실시예에서, 분광 광도계로 얻은 ΔA의 측정에는 약 560 nm의 파장과 약 700 nm의 파장에서 얻은 흡광도 측정이 포함될 수 있습니다.
출원인들은 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분에 들어 있는 총콜레스테롤 또는 콜레스테롤 소분획(cholesterol sub-fraction)을 측정하기 위한 장치를 추가적으로 공개합니다. 실시예에서, 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분에 들어 있는 총콜레스테롤 또는 콜레스테롤 소분획을 측정하기 위한 장치에는 다음이 포함될 수 있습니다: 혼합된 용액을 얻기 위해, 첫 번째 시약과 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분을 혼합하기 위한 수단; 착색된 용액을 얻기 위해, 두 번째 시약과 해당 혼합된 용액을 혼합하기 위한 수단; 해당 착색된 용액의 광학적 특성을 측정하기 위한 수단; 및 해당 착색된 용액의 해당 광학적 특성의 해당 측정 결과를 표시하고 보고하기 위한 수단. 추가적인 실시예에서, 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분에 들어 있는 총콜레스테롤 또는 콜레스테롤 소분획을 측정하기 위한 장치에는 다음이 포함될 수 있습니다: 혼합된 용액을 얻기 위해, 첫 번째 시약과 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분을 혼합하기 위한 챔버(소실, chamber); 착색된 용액을 얻기 위해, 두 번째 시약과 해당 혼합된 용액을 혼합하기 위한 통로(conduit); 해당 착색된 용액의 광학적 특성을 측정하기 위한 광학 탐지기(optical detector); 및 해당 착색된 용액의 해당 광학적 특성의 해당 측정 결과를 표시하고 보고하기 위한 디스플레이 소자(display element) 또는 통신 링크(communication link). 실시예에서, 디스플레이 소자 및/또는 통신 링크는 양방향 통신에 적합할 수도 있습니다.
출원인들은 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분에 들어 있는 총콜레스테롤 또는 콜레스테롤 소분획(cholesterol sub-fraction)을 측정하기 위한 시스템을 공개합니다. 실시예에서, 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분에 들어 있는 총콜레스테롤 또는 콜레스테롤 소분획을 측정하기 위한 시스템에는 본 문서에 공개된 장치, 해당 장치에서 컴퓨터, 컴퓨터 네트워크, 전화, 전화 네트워크로 정보를 통신하기 위한 수단 또는 해당 장치에서 전송된 정보를 표시하도록 구성된 장치가 포함될 수도 있습니다. 정보 통신용 수단에는 단방향 통신용 수단이 포함될 수도 있으며 양방향 통신용 수단이 포함될 수도 있고, 다수의 장소 또는 단일체(회사 또는 기관, entities)와 통신하기 위한 수단이 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분에 들어 있는 총콜레스테롤 또는 콜레스테롤 소분획을 측정하기 위한 시스템에는 본 문서에 공개된 장치 및 해당 장치에서 컴퓨터로 정보를 통신하기 위한 채널이 포함되어 있으며, 여기에서, 해당 채널은 컴퓨터 네트워크, 전화망, 금속 통신 링크, 광학 통신 링크 및 무선 통신 링크 중에서 선택됩니다. 정보 통신용 수단에는 단방향 통신 채널이 포함될 수도 있으며 양방향 통신 채널이 포함될 수도 있고, 다수의 장소 또는 단일체(회사 또는 기관, entities)와 통신하기 위한 채널이 포함될 수도 있습니다.
실시예에서, 혈액 시료에 들어 있는 TG에서 지방산과 글리세롤을 얻기 위해 혈액 시료를 지질분해효소와 접촉시키는 방법을 사용하여, 중성지방의 수준을 결정할 수 있습니다. 글리세롤 인산염(glycerol phosphate)을 얻기 위해 글리세롤 키나아제(kinase) 같은 키나아제와 이 글리세롤을 접촉시킬 수 있으며, 디히드록시아세톤 인산염(dihydroxyacetone phosphate) 및 과산화수소(hydrogen peroxide)를 얻기 위해 글리세롤 3-인산 산화효소(glycerol 3-phosphate oxidase) 같은 산화효소와 접촉시킬 수 있습니다. 4-아미노안티피렌 및 N-Ethyl-N-(술포프로필 아닐린, sulfopropyl aniline) 같은 착색제는, 퀴논이민 염료(quinoneimine dye) 같은 염료를 형성하는 데 효과적인 과산화수소가 있을 때, 서양고추냉이 과산화효소(horseradish peroxidase)와 접촉시킬 수도 있으며, 이 염료(dye)를 측정하면 혈액 시료에 들어 있는 TG 수준을 측정할 수 있습니다. 이런 염료는 분광 광도계(spectrophotometric) 같은 수단을 이용하여 측정할 수 있습니다; 예를 들어, 특정 파장(예, 560 나노미터(nm))에서 또는 특정 파장 범위(예, 555 nm ~ 565 nm) 내의 흡광도를 측정하여, 이런 염료를 측정하고 TG 수준을 결정할 수 있습니다.
VLDL-C는 시료에 들어 있는 TG의 농도를 5로 나누어, TG 측정값에서 추정할 수 있습니다:
VLDL-C = TG/5
이렇게 하여, TG를 측정한, 혈액 시료에 들어 있는 VLDL-C의 수치를 제공할 수 있습니다. 이런 방식으로 추정한 VLDL-C 수치는, HDL-C, LDL-C 및 VLDL-C의 수치를 더하여, 혈액 시료에 들어 있는 TC를 계산할 수 있습니다(VLDL-C = TG/5 공식으로 추정됨).
그러나, 이런 추정값 대신에, 출원인들은 HDL-C, LDL-C, TC 및 TG를 새롭고 유용하게 측정하는, 본 문서에서 공개된 방법을 기반으로 VLDL-C를 계산하는 추가적인 방법을 공개합니다. 이런 추가적인 방법들은 이전 방법들 보다 더욱 뛰어난 정확도를 제공하는 것으로 여겨집니다. 실시예에서, VLDL-C는 HDL-C, TC 및 TG 측정값으로부터 계산할 수 있습니다. 이런 측정값들은 본 문서에 공개된 방법에 따라 측정됩니다. 실시예에서, VLDL-C는 HDL-C, LDL-C, TC 및 TG 측정값으로부터 계산할 수 있습니다. 이런 측정값들은 본 문서에 공개된 방법에 따라 측정됩니다.
실시예에서, 피험자 혈액의 단일 시료 또는 시료의 단일 부분에 들어 있는 VLDL-C의 수치는, 예를 들어, 다음과 같은 관계식을 사용하여, HDL-C, TC 및 TG 측정값으로부터 계산할 수 있습니다:
Figure pct00003
여기에서, α, β, δ 및 a1은 TC, HDL-C, TG 및 (TG+ε)(TC+κ)에 각각 곱하는 상수이고; 여기에서 ε, κ 및 λ는 TG, TC 및 기타 모든 인수들의 합에 각각 더해주는 상수입니다. "(TG+ε)(TC+κ)" 항은 한 괄호 속의 항을 다른 괄호 속의 항과 곱하는, "곱셈 항(cross-term)"이라고 부를 수 있습니다. α, β, δ 및 a1 곱셈 상수들(multiplicative constants)과 ε, κ 및 λ 덧셈 상수(additive constants)들은 양수, 음수 또는 영(0)과 같은 임의의 값을 가질 수 있습니다.
실시예에서, 피험자 혈액의 단일 시료 또는 시료의 단일 부분에 들어 있는 VLDL-C의 수준은, 예를 들어, 다음과 같은 관계식을 사용하여, HDL-C, LDL-C, TC 및 TG 측정값으로부터 계산할 수 있습니다:
Figure pct00004
여기에서, α, β, γ, δ 및 a1은 TC, HDL-C, LDL-C, TG 및 (TG+ε)(TC+κ)에 각각 곱하는 상수이고; 여기에서 ε, κ 및 λ는 TG, TC 및 기타 모든 인수들의 합에 각각 더해주는 상수입니다. α, β, γ, δ 및 a1 곱셈 상수들과 ε, κ 및 λ 덧셈 상수들은 양수, 음수 또는 영(0)과 같은 임의의 값을 가질 수 있습니다. 상기한 것처럼, 및 본 문서의 다른 어느 곳에서 사용한 것처럼, "(TG+ε)(TC+κ)" 항과 이와 유사한 항들은 한 괄호 속의 항을 다른 괄호 속의 항과 곱하는, "곱셈 항(cross-term)"이라고 부를 수 있습니다.
실시예에서, 모든 가능한 곱셈 항들(cross-terms) 및 곱셈 항들의 모든 가능한 조합이 VLDL-C를 계산하는 데 사용하는 관계식에 포함될 수도 있음을 인지해야 합니다. 그러므로, 예를 들어, (TG+ε)(TC+κ) 곱셈 항에 더하여, 및/또는 대신하여, 다음과 같은 모든 곱셈 항들의 일부 또는 전체를 VLDL-C를 계산하는 관계식에 포함할 수도 있습니다: (TG+ε)(HDL-C+μ); (TG+ε)(LDL-C+ν); (TC+κ)(HDL-C+μ); (TC+κ)(LDL-C+ν); 및 (LDL-C+ν)(HDL-C+μ), 여기에서, λ, ε, κ, μ 및 ν 덧셈 상수들은 양수, 음수, 또는 영(0)에 관계 없이 임의의 값이 될 수 있습니다.
따라서, 실시예에서, VLDL-C는 다음과 같은, 측정된 수치(quantities)로부터 계산할 수도 있습니다:
Figure pct00005
여기에서, α, β, γ, δ, a1, a2, a3, a4, a5 및 a6 곱셈 계수들은 양수, 음수, 또는 영(0)에 관계 없이 임의의 값이 될 수 있습니다;
여기에서, λ, ε, κ, μ 및 ν 덧셈 상수들은 양수, 음수, 또는 영(0)에 관계없이 임의의 값이 될 수 있습니다.
추가 실시예에서, 피험자 혈액의 단일 시료 또는 시료의 단일 부분에 들어 있는 VLDL-C 수치는 TC, TG, HDL-C 및 LDL-C의 일부 측정값 또는 모든 측정값 및 상기 제공된 관계식과 비슷한 형식의 곱셈 및 덧셈 상수(multiplicative and additive constants)를 사용하여, 다른 관계식으로도 계산할 수 있습니다.
본 문서에서 출원인들은 한 장치에서 시료의 적어도 두 개 이상의 생물학적 관련 속성(biologically relevant attributes)을 측정하기 위한 방법, 장치 및 시스템을 추가로 공개합니다. 실시예에서, 시료의 생물학적 관련 속성(biologically relevant attribute)에는 다음이 포함되나 이런 것들에만 국한되지는 않습니다: TC, HDL-C, LDL-C 및 VLDL-C를 포함하는 지질단백질 수준(또는 수치); 혈액 중성지방(TG) 수준; 혈액 헤마토크리트(hematocrit); 혈액 철 함유량; 적혈구침강속도(ESR: erythrocyte sedimentation rate); 혈구계산 측정(예, 세포 종류 또는 세포 종류들의 존재 유무 및/또는 양의 결정), 항체 기반, 염료 기반, 유동 세포 측정(flow-cytometric), 이미지 확보(imaging) 및 시료에 들어 있는 기타 세포, 세포 개수, 세포 종류 및 세포 특성 등에 대한 측정 포함; pH 농도 측정, 염분 농도 측정(예, 염분을 구성하는 양이온 및/또는 음이온), 비타민, 단백질 등의 존재 유무 및/또는 농도, 단백질 또는 저분자의 대사물질(metabolite), 의료적 상황 또는 조건을 알려주는 표지자(marker) 및 혈액, 소변, 조직 또는 기타 생체 시료의 측정 등을 포함하는 화학물질 측정. 시료의 적어도 두 개 이상의 생물학적 관련 속성은 동시에 측정할 수도 있으며, 연속적으로(순차적으로) 측정할 수도 있습니다. 또는, 시료의 생물학적 관련 속성을 적어도 3 개 이상 측정할 수도 있으며, 일부는 동시에 측정할 수 있고, 시료의 생물학적 관련 속성을 동시에 측정하기 전에 또는 후에 측정할 수도 있습니다.
실시예에서, 이런 측정들 중 하나 또는 그 이상은 신속한 측정이 될 수도 있으며, 여기에서 신속한 측정은 한(1) 시간의 시간 기간 내에 수행되는 측정을 말하거나; 또는 반 시간(30 분)의 시간 기간 내에 측정되거나; 또는 15 분의 시간 기간 내에 측정되거나; 또는 10 분의 시간 기간 내에 측정되거나; 또는 5 분의 시간 기간 내에 측정되거나; 또는 4 분의 시간 기간 내에 측정되거나; 또는 3 분의 시간 기간 내에 측정되거나; 또는 2 분의 시간 기간 내에 측정되거나; 또는 1 분의 시간 기간 내에 측정되거나; 또는 30 초의 시간 기간 내에 측정되거나; 또는 15 초의 시간 기간 내에 측정되거나; 또는 10 초의 시간 기간 내에 측정되거나; 또는 5 초의 시간 기간 내에 측정되거나; 또는 1 초의 시간 기간 내에 측정될 수도 있습니다.
실시예에서, 이런 측정들 중 하나 또는 그 이상은 소량의 혈액 시료를 사용할 수도 있으며, 또는 혈액 시료의 소량의 부분만을 사용할 수도 있고, 여기에서, 소량의 혈액 시료 및 혈액 시료의 소량의 부분은 약 5 mL 정도가 될 수 있으며; 또는 약 3 mL 정도가 될 수 있으며; 또는 약 1 mL 정도가 될 수 있으며; 또는 약 250 μL 정도가 될 수 있으며; 또는 약 100 μL 정도가 될 수 있으며; 또는 약 50 μL 정도가 될 수 있으며; 또는 약 25 μL 정도가 될 수 있으며; 또는 약 20 μL 정도가 될 수 있으며; 또는 약 15 μL 정도가 될 수 있으며; 또는 약 10 μL 정도가 될 수 있으며; 또는 약 5 μL 정도가 될 수 있으며; 또는 약 1 μL 정도가 될 수 있으며; 또는 본 문서에서 공개된 다른 소량이 될 수도 있습니다.
본 문서에서 공개된 분석 검사 및 방법은 시료를 처리하기 위한 장치 또는 시스템 상에서 수행할 수도 있습니다. 본 문서에서 공개된 분석 검사 및 방법은 자동 분석 검사 장치 및 자동 분석 검사 시스템에 바로 통합하거나 즉시 사용할 수도 있습니다. 예를 들어, 본 문서에서 공개된 시스템에는 탐지할 피분석물(예, 총콜레스테롤(TC), 콜레스테롤 소분획(예: LDL, HDL, VLDL 등등), 중성지방(TG) 또는 기타 피분석물)을 기반으로 또는 장치 또는 시스템으로 탐지할 기타 피분석물을 기반으로, 프로토콜을 전송하거나 수신하기 위한 통신 어셈블리가 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 분석 검사 프로토콜(계획서)은 장치로 수행할, 다수의 분석 검사의 최적 일정을 기반으로 변경될 수 있고 또는 피험자의 시료에서 이전에 확보한 결과를 기반으로 변경될 수도 있으며, 또는 피험자의 다른 시료에서 이전에 확보한 결과를 기반으로 변경될 수 있습니다. 실시예에서, 통신 어셈블리에는 해당 장치에서 컴퓨터로 정보 통신용 채널이 포함될 수 있으며, 여기서, 해당 채널은 컴퓨터 네트워크, 전화망, 금속 통신 링크, 광학 통신 링크, 및 무선 통신 링크 중에서 선택됩니다. 실시예에서, 본 문서에서 공개된 시스템은 신호를 중앙 위치, 또는 최종 사용자에게 전송할 수도 있고, 이런 신호를 전송하기 위한 통신 어셈블리를 포함할 수도 있습니다. 본 문서에서 공개된 이런 시스템은 필요에 따라 또는 정기적으로 프로토콜을 업데이트하도록 구성될 수도 있습니다.
따라서, 출원인들은, 본 문서에서 공개된 방법에 따라, 혈액 시료에 들어 있는 TC 또는 콜레스테롤 소분획, TG 및 이런 것들의 조합을 측정하기 위한 장치를 공개합니다. 본 문서에 공개된 방법에 따라, 혈액 시료에서 TC, 콜레스테롤 소분획, TG 및 기타 지질 분획(lipid fractions) 및 피분석물(analytes)을 측정하도록 구성된 장치는 약 1000 μL 이하의 혈액 시료로, 또는 약 500 μL 이하의 혈액으로, 또는 약 250 μL 이하의 혈액으로, 또는 약 150 μL 이하의 혈액으로, 또는 약 100 μL 이하의 혈액으로, 또는 약 50 μL 이하의 혈액으로, 또는 실시예에서, 해당 혈액 시료의 혈액 양은 약 25 μL 이하이며, 또는 여기에서, 해당 혈액 시료의 혈액 양은 약 10 μL 이하이며, 또는 여기에서, 해당 혈액 시료의 혈액 양은 약 10 μL 이하에서 TC, 콜레스테롤 소분획, TG 및 기타 지질 분획(lipid fractions) 및 피분석물을 결정하도록 구성할 수 있습니다. 이런 장치는 혈액 시료에 들어 있는 TC, 콜레스테롤 소분획, TG, 기타 지질 분획(lipid fractions) 및 피분석물을, 약 1 시간 이내에 측정하거나, 또는 실시예에서, 약 40 분 이내에, 또는 약 30 분 이내에 측정하도록 구성할 수 있습니다.
본 문서에서 공개된 장치는 혈액 시료에 들어 있는 TC, 콜레스테롤 소분획, TG, 기타 지질 분획(lipid fractions) 및 피분석물의 측정에 대해 분석 검사를 수행하거나, 혈액 시료에 들어 있는 다른 피분석물의 측정에 대해 분석 검사를 수행하도록 구성할 수 있습니다. 본 문서에서 공개된 장치는 혈액 시료에 들어 있는 TC, 콜레스테롤 소분획, TG, 기타 지질 분획(lipid fractions) 및 피분석물의 측정에 대해 분석 검사를 수행하거나, 혈액 시료에 들어 있는 혈구의 형태적 특성(morphological characteristic)에 대한 측정을 포함하는 분석 검사를 수행하도록 구성할 수 있습니다. 본 문서에서 공개된 장치는 TC, 콜레스테롤 소분획, TG, 기타 지질 분획(lipid fractions) 및 피분석물의 측정에 대해 분석 검사를 수행하거나, 혈액의 다른 피분석물, 예를 들어, 비타민, 호르몬, 약 또는 약의 대사물질 또는 기타 대사물질의 측정을 포함하는, 분석 검사를 수행하도록 구성할 수 있습니다. 이런 장치는 장치에서 수행되는 분석 검사 또는 분석 검사의 순서를 다른 장치와의 통신을 통해 변경할 수 있도록 구성할 수 있습니다.
또한, 출원인들은 본 문서에 공개된 것과 같은 장치를 포함하는 시스템을 공개합니다. 실시예에서, 시스템에는 혈액 시료에 들어 있는 TC, 콜레스테롤 소분획, TG, 기타 지질 분획(lipid fractions) 및 피분석물의 측정에 대해 분석 검사를 수행하거나, 혈액 시료에 들어 있는 다른 피분석물의 측정에 대해 분석 검사를 수행하도록 구성된 장치가 포함되어 있습니다. 실시예에서, 시스템에는 혈액 시료에 들어 있는 TC, 콜레스테롤 소분획, TG, 기타 지질 분획(lipid fractions) 및 피분석물의 측정에 대해 분석 검사를 수행하거나, 혈액 시료에 들어 있는 혈구의 형태적 특성(morphological characteristic)의 측정에 대해 분석 검사를 수행하도록 구성된 장치가 포함되어 있습니다. 이런 시스템의 실시예에서, 해당 장치에서 수행되는 분석 검사 또는 분석 검사의 실행 순서는 다른 장치와의 통신을 통해 변경될 수 있습니다.
본 문서에서 공개된 장치와 시스템의 실시예에서, 장치에는 a) 피험자 혈액 시료의 적어도 일부분에서 TC 또는 콜레스테롤 소분획과 b) 해당 피험자 혈액 시료의 다른 피분석물 또는 속성, a)와 b) 모두를 측정하기 위한 장치가 포함되어 있을 수 있습니다. 실시예에서, 해당 피분석물 또는 속성에는 TG가 포함될 수도 있으며, 혈액의 TG와 추가적인 피분석물 또는 속성이 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 해당 다른 피분석물 또는 속성은, TC 또는 콜레스테롤 소분획을 측정하는 데 사용한 것과는 다른, 피험자의 혈액 시료의 다른 부분에 대해 측정할 수도 있습니다. 실시예에서, 해당 다른 피분석물 또는 속성은, TC 또는 콜레스테롤 소분획을 측정하는 데 사용한 것과 같은, 피험자의 혈액 시료의 동일한 부분에 대해 측정할 수도 있습니다. 실시예에서, 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분에 들어 있는 a) TC 또는 콜레스테롤 소분획을 측정하고 b) 피험자의 해당 혈액 시료의 다른 피분석물 또는 속성, a)와 b) 모두를 측정하기 위한 장치에는 다음이 포함될 수 있습니다: 혼합된 용액을 얻기 위해, 첫 번째 시약과 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분을 혼합하기 위한 수단; 착색된 용액을 얻기 위해, 두 번째 시약과 해당 혼합된 용액을 혼합하기 위한 수단; 해당 착색된 용액의 광학적 특성을 측정하기 위한 수단; 및 해당 착색된 용액의 해당 광학적 특성의 해당 측정 결과를 표시하고 보고하기 위한 수단; 피험자 혈액 시료의 다른 속성을 측정하기 위한 수단. 실시예에서, 해당 다른 속성에는 TG가 포함될 수 있으며, 혈액의 TG와 추가적인 속성이 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, a) 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분에 들어 있는 TC 또는 콜레스테롤 소분획, b) 해당 피험자의 해당 혈액 시료의 다른 속성, a)와 b) 모두를 측정하기 위한 장치는, 혈액 시료 같은 시료에 대한 다수의 측정들 중에서, 둘 또는 그 이상을 측정하거나 측정할 수 있도록 구성될 수 있습니다. a) 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분에 들어 있는 TC 또는 콜레스테롤 소분획, b) 해당 피험자의 해당 혈액 시료의 다른 속성, a)와 b) 모두를 측정하기 위한 장치의 실시예에서, 첫 번째 시료에 대해 다수의 측정들 중 일부 또는 전체를 선택할 수 있으며, 두 번째 시료에 대해 수행할 측정에 대해, 해당 다수의 측정들 중 일부 또는 전체를 다르게 선택할 수도 있습니다. 실시예에서, 해당 다른 속성에는 TG가 포함될 수 있으며, 혈액의 TG와 추가적인 속성이 포함될 수도 있습니다.
추가적인 실시예에서, a) 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분에 들어 있는 TC 또는 콜레스테롤 소분획, b) 해당 피험자의 해당 혈액 시료의 다른 속성, a)와 b) 모두를 측정하기 위한 장치에는 다음이 포함될 수 있습니다: 혼합된 용액을 얻기 위해, 첫 번째 시약과 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분을 혼합하기 위한 챔버(소실, chamber); 착색된 용액을 얻기 위해, 두 번째 시약과 해당 혼합된 용액을 혼합하기 위한 통로(conduit); 해당 착색된 용액의 광학적 특성을 측정하기 위한 광학 탐지기(optical detector); 원심분리기; 및 해당 착색된 용액의 해당 광학적 특성의 해당 측정 결과를 표시하고 보고하기 위한 디스플레이 소자(display element) 또는 통신 링크(communication link). 실시예에서, 해당 피분석물 또는 속성에는 TG가 포함될 수 있으며, 혈액의 TG와 추가적인 피분석물 또는 속성이 포함될 수도 있습니다. 이런 장치의 실시예에서, 장치는, 시료에 대한 다수의 측정들 중에서, 둘 또는 그 이상의 측정을 수행하거나 수행할 수 있도록 구성될 수 있습니다. 이런 장치의 실시예에서, 첫 번째 시료에 대한 다수의 측정들 중에서 일부 또는 전체를 선택할 수 있으며, 두 번째 시료에 대한 다수의 측정들 중에서 일부 또는 전체를 다르게 선택할 수도 있습니다.
피험자 혈액 시료의 적어도 일부분에 들어 있는 총콜레스테롤 또는 콜레스테롤 소분획과 피험자의 해당 혈액 시료에서 생물학적으로 관련이 있는 다른 속성을 측정하기 위한 시스템에는 a) 피험자 혈액 시료의 적어도 일 부분에 들어 있는 TC 또는 콜레스테롤 소분획, b) 해당 피험자의 해당 혈액 시료의 다른 피분석물 또는 속성, a)와 b) 모두를 측정하기 위한 장치가 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 해당 피분석물 또는 속성에는 TG가 포함될 수 있으며, 혈액의 TG와 추가적인 피분석물 또는 속성이 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 이런 시스템에는 본 문서에 공개된 a)와 b) 모두를 측정하는 장치, 해당 장치에서 컴퓨터로, 컴퓨터 네트워크로, 전화, 전화망으로 정보 통신하기 위한 수단 또는 해당 장치에서 통신한 정보를 표시하도록 구성된 장치가 포함되어 있습니다. 실시예에서, 피험자 혈액 시료의 적어도 한 부분에 들어 있는 a) TC 또는 콜레스테롤 소분획, b) 피험자의 해당 혈액 시료의 다른 피분석물 또는 속성, a)와 b) 둘 모두를 측정하기 위한 시스템에는 본 문서에 공개된 장치 및 해당 장치에서 컴퓨터로 정보를 통신하기 위한 채널이 포함되어 있으며, 여기에서, 해당 채널은 컴퓨터 네트워크, 전화망, 금속 통신 링크, 광학 통신 링크, 및 무선 통신 링크 중에서 선택됩니다. 본 문서에 공개된 시스템에는 시료에 대한 다수의 측정값들 중에서 둘 또는 그 이상을 측정하거나 측정할 수 있도록 구성된 장치가 포함될 수 있습니다. 이런 장치가 들어 있는 시스템의 실시예에서, 첫 번째 시료에 대한 다수의 측정들 중에서 일부 또는 전체를 선택할 수도 있고, 두 번째 시료에 대한 해당 다수의 측정들 중에서 일부 또는 전체를 다르게 선택할 수도 있습니다.
혈액 시료의 적어도 일부분에 들어 있는 총콜레스테롤 또는 콜레스테롤 소분획 및 피험자의 해당 혈액 시료에서 다른 생물학적 관련 피분석물 또는 속성을 측정하기 위한 시스템의 구현에는 미국 특허 8,088,593 또는 미국 특허 출원 번호 13/244,947 (2011년 9월 26일 접수)에 공개된 장치가 포함되어 있습니다. 이들 특허 둘 모두는 모든 용도에 대해 참조에 의해 본 문서에 완전히 통합되었으며, 본 문서에서 공개된 시스템을 포함할 수도 있습니다. 예를 들어, 본 문서에서 공개된 시스템에는 탐지할 피분석물을 기반으로 또는 장치 또는 시스템으로 탐지할 기타 피분석물을 기반으로, 프로토콜을 전송하거나 수신하기 위한 통신 어셈블리를 포함할 수도 있습니다. 예를 들어, 실시예에서, 분석 검사 프로토콜(계획서)은 장치로 수행할, 다수의 분석 검사의 최적 일정을 기반으로 변경될 수 있고 또는 피험자의 시료에서 이전에 확보한 결과를 기반으로 변경될 수도 있으며, 또는 피험자의 다른 시료에서 이전에 확보한 결과를 기반으로 변경될 수 있습니다. 실시예에서, 통신 어셈블리에는 해당 장치에서 컴퓨터로 정보 통신용 채널이 포함될 수 있으며, 여기서, 해당 채널은 컴퓨터 네트워크, 전화망, 금속 통신 링크, 광학 통신 링크, 및 무선 통신 링크 중에서 선택됩니다. 실시예에서, 본 문서에서 공개된 시스템은 신호를 중앙 위치, 또는 최종 사용자에게 전송할 수도 있고, 이런 신호를 전송하기 위한 통신 어셈블리를 포함할 수도 있습니다. 본 문서에서 공개된 이런 시스템은 필요에 따라 또는 정기적으로 프로토콜을 업데이트하도록 구성될 수도 있습니다.
본 문서에서 공개된 분석 검사, 방법, 시약, 키트, 장치 및 시스템은, 단일 분석 검사를 통해 콜레스테롤과 콜레스테롤 소분획을 신속하고 저렴하게 측정할 수 있으므로, 선행 분석 검사, 방법, 시약, 키트 및 시스템 보다 장점을 제공합니다. 본 문서에 공개된 방법과 분석 검사를 사용하면, 동일한 혈액 시료 또는 혈액 시료의 동일한 부분에 대해 다수의 지질단백질 분획(또는 함유 비율)을 측정할 수 있습니다; 예를 들어, HDL-C, LDL-C 및 TC는 동일한 혈액 시료 또는 혈액 시료의 동일한 부분에 대해 측정할 수 있습니다. 이런 측정은 시료 또는 시료의 부분에 들어 있는 지질단백질의 상당한 침전 없이도 수행할 수 있습니다. 단일 분석 검사로 원하는 측정을 얻으면, 오차의 가능성을 줄이고 결과의 변동성(variability)를 줄일 수 있으므로 보다 신속하고 저렴하게 분석 검사 절차를 수행할 수 있습니다. 공개된 분석 검사, 방법, 시약, 키트 및 시스템은 TC, HDL-C, LDL-C 및 기타 콜레스테롤 소분획(cholesterol sub-fractions) 및 혈액 지질단백질 성분(예: VLDL-C 및 TG)을 결정하는 데 필요한 분석 검사 횟수를 줄이는 데 효과적입니다. 따라서, 본 문서에서 공개된 분석 검사, 방법, 시약, 키트, 장치 및 시스템은 해당 분야의 선행 기술 보다 개선 사항을 제공합니다.
본 문서에서 공개된 방법과 구성물을 이용하면, 매우 적은 소량의 혈액 같은, 소량의 시료만으로도 신속한 분석 검사를 수행할 수 있습니다. 본 문서에서 공개된 장치와 시스템을 이용하면, 매우 적은 소량의 혈액 같은, 소량의 시료만으로 신속한 분석 검사를 수행할 수 있습니다. 따라서, 이런 방법, 구성물, 장치 및 시스템은 소량의 생체 시료만으로 신속한 분석 검사를 제공하므로, 소량의 생체 시료만으로 신속한 분석 검사를 제공할 필요가 있을 때, 다른 방법, 구성물, 분석 검사, 장치 및 시스템 보다 추가적인 장점을 제공합니다.
본 요약에는 선별된 개념들이 간략하게 소개되어 있습니다. 아래에 있는 [상세 설명]에는 더 자세하게 설명되어 있습니다. 본 요약은 청구된 주제의 핵심 기능이나 필수 기능을 식별하기 위한 용도가 아니며, 청구된 주제의 범위를 제한하기 위한 용도로 작성된 것도 아닙니다.
그림에 대한 설명
그림 1A에는 콜레스테롤 에스테르(예: 혈액 시료의 지질단백질에서 발견할 수 있는 것)가 콜레스테롤 에스테르분해효소와 반응하여 콜레스테롤을 형성하고, 콜레스테롤은 콜레스테롤 산화효소 및 산소와 반응하여 과산화수소를 형성하는, 대표적인 반응 도식이 표시되어 있습니다. 과산화수소는, 아미노안티피렌(예: 4-아미노안티피렌) 및 아닐린 함유 화합물(예: N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline) 같은, 서양고추냉이 과산화효소(horseradish peroxidase)와 착색제가 있을 때, 반응하여 착색된 결과물(예: 그림에 표시된 것처럼, Trinder (예, 퀴논이민, quinoneimine) 염료)을 형성할 수 있습니다.
그림 1B에는 중성지방이 지질분해효소와 반응하여 글리세롤과 지방산을 형성하는 대표적인 반응 도식이 표시되어 있습니다. 글리세롤은 아데노신 3인산(ATP: adenosine triphosphate)이 있을 때 글리세롤 키나아제(glycerol kinase)에 의해 인산화(phosphorylated)될 수 있으며, 결과로 생긴 글리세롤 인산(glycerol phosphate)은 글리세롤 3인산(glycerol-3-phosphate) 산화효소에 의해 산화되어 디히드록시아세톤인산(dihydroxyacetone phosphate)과 과산화수소를 제공합니다. 과산화수소는, 아미노안티피렌(예: 4-아미노안티피렌) 및 아닐린 함유 화합물(예: N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline)같은, 서양고추냉이 과산화효소(horseradish peroxidase)와 착색제가 있을 때, 반응하여 착색된 결과물(예: 그림에 표시된 것처럼, 퀴논이민 염료 또는 Trinder 염료)을 형성할 수 있습니다.
그림 2에는 지질단백질에 들어 있는 샘플 지질(지방질) 값이 표시되어 있습니다. 세로 축에는 데시리터 당 밀리그램(mg/dL) 단위로 지질 값이 표시되어 있고 세로 축에는 총콜레스테롤 양이 표시되어 있습니다. 지질 값과 총콜레스테롤은 Advia® Chemistry Systems 시약과 방법(Siemens Healthcare Diagnostics, Inc., Tarrytown, NY)을 사용하여 측정되었습니다.
그림 3에는 예시 실험용 분석 검사 역학(assay kinetics)이 표시되어 있습니다. 여기에서, 시료, 시약 A와 시약 B가 들어 있는 용액에 의한 흡광도(absorbance of light)의 차(difference)는 560 나노미터(nm)의 파장과 700 nm("흡광도 (A560-A700mm)")의 파장에서 분광 광도계를 사용하여 측정되었습니다. 파장 560 nm에서의 흡광도는 550 nm와 570 nm 사이의 흡광도를 측정하여 결정되었으며; 파장 700 nm에서의 흡광도는 690 nm와 710 nm 사이의 흡광도를 측정하여 결정되었습니다. 가로 축에 표시된 시간은 시약 B를 추가한 후의 시간(단위: 분)입니다(시약 B의 구성물은 표 2에 설명되어 있음).
그림 4에는 본 문서에서 공개된 것처럼 단일 대표적인 분석 검사로 얻은 역학적 데이터를 사용한, LDL-C (4A), HDL-C (4B) 및 TC (4C) 측정값이 표시되어 있습니다. 세로 축(단위: mg/dL)에는 본 문서에서 공개된 분석 검사로 결정한, 보고된 LDL-C, HDL-C 및 TC 값이 표시되어 있고, 세로 축에는 Siemens Direct 분석 검사를 사용하여, 덱스트란 황산염(dextran sulfate)으로 결정한 LDL-C, HDL-C 및 TC 값(mg/dL)이 표시되어 있습니다. 그림 4A와 4C에서 (0,0)에 가까운 초기점은 실험적 데이터를 나타내는 것은 아니지만, 명확성을 제공하고 최적선(fitted line)의 시작점(anchor point)을 제공하기 위해 분석과 그림에 포함되었습니다. 그림 4A: LDL-C 결과(6 분에서 측정한 흡광도에서 2 분에서 측정한 흡광도를 뺀, 흡광도의 차를 보여줍니다); 그림 4B: HDL-C 결과; 그림 4C: TC 결과, 10 분에서 측정한 흡광도.
그림 5에는 예 3에서 설명한 것처럼, 시약 AT 및 시약 BT를 사용한, 대표적인 중성지방 분석 검사의 결과가 표시되어 있습니다. 현재의 새로운 방법을 사용하여 얻은 중성지방 수준은 그림에서 각 다이아몬드의 Y-축 값으로 표시되어 있고, 선행 기술을 사용한 중성지방 측정값은 각 다이아몬드의 X-축 값으로 표시되어 있습니다. 데이터는 기울기가 거의 1 (0.9536)에 가까운 직선으로 맞춤 되어 있습니다; 최소 제곱법 맞춤(least-squares fitting)의 R2 값은 0.9537이었습니다.
그림 6에는 VLDL-C 값이 비교되어 있습니다. 여기에서, 선행 기술(초고속 원심 분리기)을 사용하여 얻은 VLDL-C 값은 가로 축에 표시되어 있으며, 본 문서에서 공개된 것과 같은 HDL-C, TC 및 TG 측정값으로 계산하여 얻은 VLDL-C 값은 세로 축에 있습니다. R의 제곱(R2)과 기타 값들은 그림에서 적합성의 정도(goodness of fit)를 나타냅니다. 그림 6에 표시된 측정값의 결과에 대해, VLDL-C은 다음 관계식으로 가장 잘 계산할 수 있습니다:
Figure pct00006

(여기에서, "x"는 곱셈). 그림 6에 표시된 것처럼, 그림에 표시된 20 개의 데이터 점에 대해, VLDL-C 값은 본 문서에서 공개된 방법, 즉, 상기한 식으로 계산한 것이며, 초고속 원심 분리법(ultracentrifugation methods)을 사용하여 얻은 VLDL-C 값과 매우 잘 일치합니다(R의 제곱은 0.959).
상세 설명
출원인들은, 역학적 측정법(kinetic measurements)을 사용하여 콜레스테롤에 대해 단일 분석 검사로 T-C, LDL-C 및 HDL-C 값을 매우 정밀하고 정확하게 얻는 방법을 발견했습니다. 본 분서에서 공개된 분석 검사는 분광 광도계로 측정할 수 있는 착색된 결과물을 형성하기 위해, 지질분해효소, 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소 및 과산화효소를 사용할 수 있습니다. 본 문서에서 공개된 분석 검사에서, 모든 콜레스테롤 함유 물질(cholesterol-containing species)에서 얻은 색(color)은 변환된 콜레스테롤의 양과 정비례합니다.
본 문서에서 공개된 것과 같은 방식으로 사용할 수 있는, 시약, 분석 검사, 방법, 키트, 장치 및 시스템의 예(examples)의 공개와 설명은, 예를 들어, 미국 특허 8,088,593; 미국 특허 출원 번호 13/244,947; 미국 특허 출원 번호 61/673,037; 미국 특허 출원 번호 61/673,245; 미국 특허 출원 번호 61/675,758; 미국 특허 출원 번호 61/675,811; 미국 특허 출원 번호 61/676,178; 미국 특허 출원 번호 61/697,797; 미국 특허 출원 번호 61/705,552; 미국 특허 출원 번호 61/706,753; 및 미국 특허 출원 번호 61/735,424에서 찾아볼 수 있으며, 이런 특허와 특허 출원의 공개는 그 자체로서 참조에 의해 통합되었습니다.
정의
현재의 사용 공식(formulations)과 방법을 공개하고 설명하기 전에, 본 문서에서 사용한 용어는 특정 실시예를 설명하기 위한 용도이며 제한적인 것이 아니라는 것을 인지해야 합니다. 현재의 공개는 설명적이고(explanatory) 대표적인(또는 예시적인, exemplary) 설명과 예를 제공하기 위함이므로, 별도로 명시하지 않을 경우, 본 문서에서 공개된 분석 검사, 시약, 방법, 장치 및 시스템은 본 문서에 기술된 특정 구현에만 제한되는 것이 아님을 인지해야 합니다.
상세 설명과 첨부된 청구항에 사용된 단수형 "한" 또는 "어떤" 또는 "특정한" ("a," "an") 및 "그" 또는 "해당"은 문맥상 별도로 명시하지 않은 경우, 복수에도 해당됩니다. 그러므로, 예를 들어, "한 계면활성제" 또는 "특정 계면활성제" 또는 "계면활성제" ("a surfactant") 라는 말은 단일 계면활성제 또는 서로 다른 계면활성제들의 혼합물, 또는 이런 것과 비슷한 것을 뜻합니다.
본 상세 설명과 후속 청구항(claims)에서, 여러 가지 용어에 대한 참조가 있으며, 다음과 같은 뜻을 갖는 다고 정의됩니다:
본 문서에서 사용된 "상당한(substantial)"이라는 용어는 초소한의 또는 중요하지 않을 정도의 양 이상을 의미하고 "상당히(substantially)"라는 말은 초소한의 정도(minimally) 또는 중요하지 않을 정도(insignificantly) 이상을 뜻합니다. 그러므로, 예를 들어, 본 문서에서 사용된 "상당히 다른" 이란 말은 두 숫자 값들 사이에 충분히 높은 정도로 차이가 있음을 나타내고, 해당 기술 분야 지식을 가진 자가, 해당 값으로 측정된 특성의 문맥 내에서, 두 값들 사이의 차(difference)가 통계적으로 중요한 의미가 있다고 생각할 수 있는 정도라야 합니다. 그러므로, 서로 상당히 다른 두 값들 사이의 차이는 기준값 또는 비교값 역할을 하려면 일반적으로 약 10% 이상, 약 20% 이상, 선택적으로 약 30% 이상, 선택적으로 약 40% 이상, 선택적으로 약 50% 이상 더 클 수도 있습니다.
본 문서에서 사용된 것처럼, "쌍성 이온성(zwitterionic)" 및 "쌍극성(dipolar)"이라는 용어는 반대 극성으로 전하를 띤(하전된) 그룹이 있는 분자를 뜻합니다.
본 문서에서 사용된 것처럼, "양쪽친매성(amphiphilic)"이라는 용어는 소수성 및 친수성 특성을 모두 지닌 화합물 또는 화합물들을 뜻합니다; 일반적으로, 양쪽친매성 분자에는 소수성(hydrophobic) 부분과 친수성(hydrophilic) 부분을 모두 갖고 있습니다. 분자의 소수성(hydrophobic) 부분은 비극성 부분(nonpolar portion)일 수 있으며, 탄화수소 결합(hydrocarbon chain) 부분 같은, 상대적으로 물에 용해되지 않은(water-insoluble) 부분입니다. 분자의 친수성(hydrophilic) 부분은 극성일 수 있으며, 수용액 속에서 전하를 얻거나 잃을 수 있는, 산성 또는 염기성 모이어티(moiety)를 포함할 수도 있습니다. 계면활성제는 일반적으로 양쪽친매성 화합물입니다. 상업적으로 이용 가능한 대표적인 양쪽친매성 화합물에는 Triton™ 계면활성제, TWEEN® 화합물 같은 폴리에틸렌소르비탄(polyethylenesorbitans) 및 Pluronics® 화합물 같은 폴록사머(poloxamers, 예: 산화에틸렌(ethylene oxide)/산화 프로필렌 블록 혼성 중합체(propylene oxide block copolymers))가 있습니다.
본 문서에서 사용된 것처럼, "계면활성제(surfactant)"는 물 같은 액체의 표면 장력을 줄이는 데 효과적인 화합물입니다. 일반적으로 계면활성제는 양쪽친매성 화합물이고, 소수성과 친수성 성질을 모두 갖고 있으며, 다른 화합물을 용해시키는 데 도움이 됩니다. 계면활성제는, 예를 들어, 친수성(hydrophilic) 계면활성제, 친유성(lipophilic) 계면활성제 또는 기타 화합물, 또는 이런 것들의 혼합물이 될 수도 있습니다. 특정 계면활성제에는 긴사슬 지방족 기질(long-chain aliphatic base)이 있는 염분이나 또는 산(acids), 또는 당(sugar) 같은 친수성 모이어티(hydrophilic moieties)가 포함되어 있을 수도 있습니다. 계면활성제에는 음이온성, 양이온성, 쌍성, 및 비이온성 화합물(여기에서, "비이온성, non-ionic"이라는 용어는 용액 속에서 이온화되지 않는 분자, 즉, "이온적으로" 비활성인 분자를 뜻합니다)이 포함됩니다. 예를 들어, 시약, 분석 검사, 방법, 키트에 유용하고, 본 문서에서 공개된 장치와 시스템에 사용하기 편리한 계면활성제에는, 예를 들어, 다음이 포함됩니다; Tergitol™ 비이온성(nonionic) 계면활성제 및 Dowfax™ 음이온성(anionic) 계면활성제(Dow Chemical Company, Midland, Michigan 48642); 폴리소르베이트(polysorbates, 폴리옥시에틸렌소르비탄(polyoxyethylenesorbitans)), 예를 들어, 폴리소르베이트(polysorbate) 20, 폴리소르베이트 80, 예를 들어, TWEEN® 계면활성제로 판매됨 (ICI Americas, New Jersey, 08807); Pluronics® 화합물(BASF, Florham Park, N.J) 같은 폴록사머(poloxamers, 예를 들어, 산화에틸렌(ethylene oxide) / 산화프로필렌 블록 공중합체(propylene oxide block copolymers)); 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycols) 및 이런 것들의 유도체(derivatives), Triton™ 계면활성제(예: Triton™ X-100; Dow Chemical Company, Midland, Michigan 48642) 및 기타 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycols) 포함, PEG-10 라우린산염(laurate), PEG-12 라우린산염, PEG-20 라우린산염, PEG-32 라우린산염, PEG-32 디라우레이트(dilaurate), PEG-12 올레산염(oleate), PEG-15 올레산염, PEG-20 올레산염, PEG-20 디올리에이트(dioleate), PEG-32 올레산염, PEG-200 올레산염, PEG-400 올레산염, PEG-15 스테아르산염(stearate), PEG-32 디스테아레이트(distearate), PEG-40 스테아르산염, PEG-100 스테아르산염, PEG-20 디라우레이트(dilaurate), PEG-25 글리세릴 트리올리에이트(glyceryl trioleate), PEG-32 디올리에이트(dioleate), PEG-20 글리세릴 라우린산염(glyceryl laurate), PEG-30 글리세릴 라우린산염, PEG-20 글리세실 스테아르산염(glyceryl stearate), PEG-20 글리세실 올레산염, PEG-30 글리세릴 올레산염, PEG-30 글리세릴 라우린산염, PEG-40 글리세릴 라우린산염, PEG-40 야자핵 기름(palm kernel oil), PEG-50 수소첨가(경화) 피마자 기름(hydrogenated castor oil), PEG-40 피마자 기름(castor oil), PEG-35 피마자 기름(castor oil), PEG-60 피마자 기름(castor oil), PEG-40 수소첨가 피마자 기름(hydrogenated castor oil), PEG-60 수소첨가(경화) 피마자 기름, PEG-60 옥수수 기름(corn oil), PEG-6 카프르산(caprate)/카푸릴산(caprylate) 글리세리드(glycerides), PEG-8 카프르산(caprate)/카푸릴산(caprylate) 글리세리드(glycerides), 폴리글리세릴(polyglyceryl)-10 라우린산염, PEG-30 콜레스테롤, PEG-25 식물성 스테롤(phyto sterol), PEG-30 소야 스테롤(soya sterol), PEG-20 트리올리에이트(trioleate), PEG-40 소르비탄 올레산염(sorbitan oleate), PEG-80 소르비탄 라우린산염(sorbitan laurate), 폴리소르베이트(polysorbate) 20, 폴리소르베이트(polysorbate) 80, POE-9 라우릴 에테르(lauryl ether), POE-23 라우릴 에테르(lauryl ether), POE-10 올레일 에테르(oleyl ether), POE-20 올레일 에테르(oleyl ether), POE-20 스테아릴 에테르(stearyl ether), 토코페릴(tocopheryl) PEG-100 속신산염(succinate), PEG-24 콜레스테롤, 폴리글리세릴(polyglyceryl)-10 올레산염(oleate), 수크로스 모노스테아레이트(sucrose monostearate), 수크로스 모노라우레이트(sucrose monolaurate), 수크로스 모노팔미테이트(sucrose monopalmitate), PEG 10-100 노닐 페놀 시리즈(nonyl phenol series), PEG 15-100 옥틸 페놀 시리즈(octyl phenol series) 및 폴로사머(poloxamers); 폴리에틸렌 글리콜 아킬 에테르(polyethylene glycol alkyl ethers) 같은 폴리옥시아킬렌 아킬 에테르(polyoxyalkylene alkyl ethers); 폴리에틸렌 글리콜 아킬 페놀(polyethylene glycol alkyl phenols) 같은 폴리옥시아킬렌 아킬페놀(polyoxyalkylene alkylphenols); 폴리에틸렌 글리콜 지방산 모노에스테르(polyethylene glycol fatty acids monoesters) 및 폴리에틸렌 글리콜 지방산 디에스테르(polyethylene glycol fatty acids diesters) 같은 폴리옥시아킬렌 아킬 페놀 지방산 에스테르(polyoxyalkylene alkyl phenol fatty acid esters); 폴리에틸렌 글리콜 글리세롤 지방산 에스테르(polyethylene glycol glycerol fatty acid esters); 폴리글리세롤 지방산 에스테르(polyglycerol fatty acid esters); 폴리에틸렌 글리콜 소르비탄 지방산 에스테르(polyethylene glycol sorbitan fatty acid esters) 같은 폴리옥시아킬렌 소르비탄 지방산 에스테르(polyoxyalkylene sorbitan fatty acid esters); n-도데실포스포콜린(dodecylphosphocholine) (DDPC) 같은 포스포콜린(phosphocholines); 도데실황산나트륨(sodium dodecyl sulfate) (SDS); n-라우릴 사르코신(lauryl sarcosine); n-dodecyl-N,N-dimethylamine-N-oxide (LADO); n-dodecyl-β-D-maltoside (DDM); decyl maltoside (DM), n-dodecyl-N,N-dimethylamine N-oxide (LADO); n-decyl-N,N-dimethylamine-N-oxide, 1,2-diheptanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DHPC); 1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DLPC); 2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine (MPC); 1-oleoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-[phospho-RAC-(1-glycerol)] (LOPC); 1-palmitoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-[phospho-RAC-(1-glycerol)] (LLPG); 3-[(3-cholamidopropyl) dimethylammonio]-1-propanesulfonate (CHAPS); n-Octyl-N,N-dimethyl-3-ammonio-1-propanesulfonate; n-Decyl-N,N-dimethyl-3-ammonio-1-propanesulfonate; n-Dodecyl-N,N-dimethyl-3-ammonio-1-propanesulfonate; n-Hexadecyl-N,N-dimethyl-3-ammonio-1-propanesulfonate; Tetradecanoylamidopropyl-dimethylammonio-propanesulfonate; Hexadedecanoylamidopropyl-dimethylammonio-propanesulfonate; 4-n-Octylbenzoylamido-propyl-dimethylammonio Sulfobetaine; a Poly(maleic anhydride-alt-1-tetradecene), 3-(dimethylamino)-1-propylamine 유도체; a nonyl phenoxylpolyethoxylethanol (NP40) 계면활성제; 아킬암모늄염(alkylammonium salts); 푸시딘산염(fusidic acid salts); 아미노산, 올리고펩타이드(oligopeptides) 및 폴리펩타이드(polypeptides)의 지방산 유도체; 아미노산, 올리고펩타이드(oligopeptides) 및 폴리펩타이드(polypeptides)의 글리세리드 유도체(glyceride derivatives); 레시틴(lecithins) 및 수소첨가(경화) 레시틴(hydrogenated lecithins), 레시틴(lecithin), 리졸레시틴(lysolecithin), 포스파티딜콜린(phosphatidylcholine), 포스파티딜에탄올아민(phosphatidylethanolamine), 포스파티딜글리세롤(phosphatidylglycerol), 포스파딘산(phosphatidic acid), 포스파티딜세린(phosphatidylserine) 포함;
리졸레시틴(lysolecithins) 및 수소첨가(경화) 리졸레시틴(hydrogenated lysolecithins); 인지질(phospholipids) 및 그것의 유도체; 리소인지질(lysophospholipids) 및 그것의 유도체, 리소포스파티딜콜린(lysophosphatidylcholine), 리소포스파티딜에탄올아민(lysophosphatidylethanolamine), 리소포스파티딜글리세롤(lysophosphatidylglycerol), 리소포스파티드산(lysophosphatidic acid), 리소포스파티딜세렌(lysophosphatidylserine), PEG-포스파티딜에탄올아민, PVP-포스파티딜에탄올아민 포함; 카르니틴 지방산 에스테르 염(carnitine fatty acid ester salts); 아킬황산 염(salts of alkylsulfates); 지방산 염(fatty acid salts); 나트륨 도쿠세이트(sodium docusate); 아실 젖산(acyl lactylates); 모노글리세리드 및 디글리세리드의 모노아세틸 및 디아세틸 주석산 에스테르(mono- and di-acetylated tartaric acid esters of mono- and di-glycerides); 숙시닐화 모노글리세리드 및 디글리세리드(succinylated mono- and di-glycerides); 모노글리세리드 및 디글리세리드의 구연산 에스테르(citric acid esters of mono- and di-glycerides); 지방산의 락틸 에스테르(lactylic esters of fatty acids), stearoyl-2-lactylate, 스테아릴 젖산(stearoyl lactylate), 숙시닐화 모노글리세리드(succinylated monoglycerides), 모노글리세리드/디글리세리드의 모노아세틸/디아세틸 주석산 에스테르(mono/diacetylated tartaric acid esters of mono/diglycerides), 모노글리세리드/디글리세리드의 구연산 에스테르(citric acid esters of mono/diglycerides), 코릴사르코신(cholylsarcosine), 카프론산염(caproate), 카푸릴산염(caprylate), 카프린산염(caprate), 라우린산염(laurate), 미리스트산염(myristate), 팔미트산염(palmitate), 올레산염(oleate), 리시놀리에이트(ricinoleate), 리놀레산염(linoleate), 리놀렌산염(linolenate), 스테아르산염(stearate), 라우릴황산염(lauryl sulfate), 터라세실황산염(teracecyl sulfate), 도쿠세이트(docusate), 라우로일 카르니틴(lauroyl carnitines), 팔미토일 카르니틴(palmitoyl carnitines), 미리스토일 카르니틴(myristoyl carnitines), 이런 것들의 염(salts) 및 혼합물(mixtures); 아킬말토오스배당체(alkylmaltosides); 아킬싸이오글루코사이드(alkylthioglucosides); 라우릴 마크로골글리세리드(lauryl macrogolglycerides); 글리세리드(glycerides), 식물성 기름, 수소첨가(경화) 식물성 기름(hydrogenated vegetable oils), 지방산 및 스테롤(sterols)로 구성된 그룹 중에 적어도 하나가 포함된, 폴리올의 친수성 에스테르 교환반응 결과물(hydrophilic transesterification products of a polyol); 폴리옥시에틸렌 스테롤(polyoxyethylene sterols), 유도체, 및 이런 것들의 유사물;
폴리옥시에틸화 비타민(polyoxyethylated vitamins) 및 이런 것들의 유도체; 폴리옥시에틸렌-폴리옥시에틸렌 블록 공중합체(polyoxyethylene-polyoxypropylene block copolymers); 이런 것들의 혼합물; 지방 알코올(fatty alcohols); 글리세롤 지방산 에스테르; 아세틸화 글리세롤 지방산 에스테르(acetylated glycerol fatty acid esters); 저알코올 지방산 에스테르(lower alcohol fatty acids esters); 프로필렌 글리콜 지방산 에스테르(propylene glycol fatty acid esters); 소르비탄 지방산 에스테르(sorbitan fatty acid esters); 폴리에틸렌 글리콜 소르비탄 지방산 에스테르(polyethylene glycol sorbitan fatty acid esters); 스테롤(sterol) 및 스테롤 유도체; 폴리옥시에틸화 스테롤(polyoxyethylated sterols) 및 스테롤 유도체; 폴리에틸렌 글리콜 아킬 에테르(polyethylene glycol alkyl ethers); 당 에스테르(sugar esters); 당 에테르(sugar ethers); 모노글리세리드 및 디글리세리드의 젖산 유도체(lactic acid derivatives of mono- and di-glycerides); 글리세리드(glycerides), 식물성 기름, 수소첨가(경화) 식물성 기름(hydrogenated vegetable oils), 지방산 및 스테롤(sterols)로 구성된 그룹 중에서 적어도 하나를 포함하는, 폴리올의 소수성 에스테르 교환 반응 결과물(hydrophobic transesterification products of a polyol); 유용성 비타민(oil-soluble vitamins)/비타민 유도체; 및 이런 것들의 조합.
본 문서에 사용된 "용해(solubilizing)"라는 용어는 용액 속에서 분자를 용해하는 것을 말합니다.
본 문서에서 사용된 "지질단백질 용해제(lipoprotein solubilization agent)"라는 용어는 지질단백질 입자를 용액 속에서 유지하는 데 도움되는 작용제(또는 첨가제, agent)를 말합니다. 계면활성제 같은 양쪽친매성 화합물은 본 문서에 공개된 시약, 분석 검사, 방법 및 키트에서, 이런 방법의 사용을 위한 장치 및 시스템에서, 지질단백질 용해제로 사용하기에 알맞을 수도 있습니다.
본 문서에서 사용된 "착색제"는 (독립적으로 또는 다른 화합물과 함께 작용할 수도 있음) 용액의 광학적 특성을 변경하는 데 유용하거나 또는 용액에 대해 새로운 광학적 특성을 제공할 수 있는 화합물입니다. 예를 들어, 착색제는 염료(dye), 색소포(chromophore), 색원체 화합물(chromogenic compound), 화학 발광 화합물(chemiluminescent compound), 형광 화합물(fluorescent compound), 형광 발광 화합물(fluorogenic compound, 예: Amplex red), 양자점(quantum dot) 같은 나노입자, 또는 용액의 광학적 성질을 변경할 수 있는 기타 원소 또는 화합물이 될 수 있습니다. 예를 들어, 착색제는 작용하거나, 반응에 참가할 수도 있으며, 착색제가 첨가된 용액의 광학적 성질을 변경하거나 또는 용액 속에서 발광, 형광 또는 기타 광학적으로 활동적인 결과물(optically active product)을 제공하거나 생성할 수 있습니다. 용액의 광학적 특성(또는 성질)은, 예를 들어, 용액의 색이 될 수도 있습니다; 특정 파장, 파장 범위 또는 파장들의 조합에 대한 용액의 흡광도; 용액의 발광 또는 형광의 양 또는 최고 파장; 용액의 혼탁도; 또는 용액의 반사 또는 흡광도에 영향을 줄 수 있는 기타 특성이 될 수 있습니다. 본 문서에 사용된, "착색제"라는 용어는, 또한, 용액의 혼탁도(turbidity)나 용액의 선명도(clarity)를 변경할 수 있는 화합물 또는 반응의 결과물을 뜻할 수도 있습니다. 착색제는 작용하거나 또는 반응에 참가하여, 착색제가 추가된 용액을 통해 통과하는 빛의 흡광도를 변경할 수 있습니다. "착색제"는 하나의 분자 또는 한 종류의 분자들(class of molecules)을 뜻할 수도 있으며 또는 용액의 광학적 특성을 함께 작용하여 변경할 수 있는 한 쌍의 분자들 또는 여러 종류들의 분자들(classes of molecules)을 뜻할 수도 있으며, 용액의 광학적 특성을 함께 작용하여 변경할 수도 있는 다수의 분자들 또는 종류들의 분자들을 뜻할 수도 있습니다.
기질(substrate)과 함께 반응에 참가하여 착색된 결과물을 만드는 과산화효소는 착색제이고, 과산화효소의 기질도 착색제입니다. 예를 들어, 착색제 서양고추냉이 과산화효소(HRP)는 하나 또는 그 이상의 여러 분자들과 반응하여, HRP가 첨가된 용액의 광학적 특성을 변경합니다(예를 들어, 색을 변경하여, HRP가 첨가된 용액을 통과하는 빛의 흡광도를 변경하거나 및/또는 용액의 기타 광학적 특성을 변경합니다). 예를 들어, HRP는 N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline (ALPS) 같은 아닐린 함유 화합물과 반응하거나 또는 4-아미노안티피렌 같은 아미노안티피렌(aminoantipyrene) 화합물 또는 페놀(phenolic) 화합물과 반응할 수 있습니다. 그러므로, 예를 들어, 과산화효소(peroxidase, 예를 들어, HRP, 미엘로페록시다제(myeloperoxidase, 또는 기타 과산화효소), 아닐린 함유 화합물, 아미노안티피렌(aminoantipyrene) 등은 모두 "착색제"라고 할 수 있습니다. 추가적인 예에서, HRP는 벤지딘 함유 화합물(예를 들어, 디아미노벤지딘(diaminobenzidine)(DAB); 테트라메틸벤지딘(tetramethylbenzidine)(TMB); 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) (DABS); 3-dimethylaminobenzoic acid (DMAB); hydroquinone; o-tolidine; o-phenylenediamine; o-chlorophenol; p-hydroxy-benzenesulfonate; p-anisidine; Trinder 시약 (예: 4-aminoantipyrene, methylbenzothiazolinonehydrazone (MBTH), 또는 Trinder 염료 생성 기타 화합물)과 반응할 수 있으며; 유도체 및 관련 화합물과 반응하여 착색된 결과물을 형성할 수 있습니다. HRP 또는 기타 과산화효소는 다른 화합물과 반응하여 화학 발광(chemiluminescent) 결과물을 형성할 수도 있습니다; 예를 들어, HRP 또는 과산화효소는 루미놀(luminol)과 반응하여 화학 발광 결과물을 형성할 수도 있습니다(다른 분자들도 존재할 수 있으며, 이런 반응을 향상시킬 수도 있습니다; 예를 들어, 루미놀(luminol)로부터 발광 결과물의 HRP-매개 생성은 4-iodophenol이 있을 때 향상됩니다). 기타 착색제에는, 예를 들어, 다음이 포함됩니다: 알카리 포스파타아제(alkaline phosphatase); 레자주린(resazurin) (7-Hydroxy-3H-phenoxazin-3-one 10-oxide); 10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (Amplex Red) 및 유사 화합물 (예: Amplex UltraRed (A36006 from Life Technologies, Carlsbad, CA 92008); 레조루핀(resorufin) 화합물 (예: 7-ethoxyresorufin); 플루오레세인(fluorescein), 칼세인(calcein), 로다민(rhodamine) 및 에티듐(ethidium) 염료 같은 염료들; N-methyl-4-hydrazino-7-nitrobenzofurazan; 이런 화합물과 반응하여 용액의 광학적 특성을 변경하는, 아크리디늄(acridinium) (acridine-9-carboxylic acid) 에스테르; 페놀 및 페놀 유도체(예: p-iodophenol 및 p-phenylphenol); 아민 부가물(amine adducts, 예를 들어, 시안화동(copper cyanide)에서 유도 가능)을 포함하여, 발광 아민(luminescent amines) 및 기타 분자. 기타 효소 및 반응물을 사용하여 착색된 결과물을 형성할 수 있으며, 혈액 시료에 들어 있는 콜레스테롤을 탐지할 수도 있음을 인지해야 합니다.
본 문서에서 공개된 "결과물 형성," "착색된 결과물," "착색된 결과물 형성" 등등은 용액에 착색체를 첨가하는 행위나 착색제 첨가의 결과로 생성되는 결과물을 뜻합니다. 예를 들어, 용액에 착색제를 첨가하면 용액의 광학적 특성을 변경할 수 있는 반응이 일어날 수도 있습니다. 이런 반응으로 인해 용액에 원래는 존재하지 않았던 분자가 형성될 수도 있으며, 또는 용액에 이전에 들어 있던 분자나 화합물이 응집될 수도 있고, 용액에 이전에 들어 있던 분자나 화합물이 분해되거나 변경될 수도 있으며, 착색제가 첨가된 용액의 색, 흡광도 및/또는 기타 광학적 특성이 변경될 수도 있습니다.
본 문서에 사용된 시료는 피험자로부터 얻은 생체 표본(biological specimen)일 수도 있으며, 혈액 시료, 뇨 시료, 목구멍 또는 볼 면봉, 조직 시료, 뇌척수액 시료, 또는 피험자로부터 얻은 기타 시료가 될 수 있습니다. 본 문서에 사용된 "시료"라는 용어에는 완전한 생체 표본이 포함되고, 피험자로부터 얻은 채혈 같은, 생체 표본의 부분 또는 부분표본(aliquot)이 포함됩니다. 시료는 일반적으로 총콜레스테롤 및/또는 기타 지질단백질 측정과 같은, 하나 또는 그 이상의 생체 관련 특성을 결정하기 위한 분석을 위해 확보합니다. 이런 측정에는 다음이 포함됩니다: 혈액 중성지방 수치(blood triglyceride (TG) level); 적혈구용적률(hematocrit); pH, 포도당 수치(glucose level); 요산 수치(uric acid level); 염분 농도(예를 들어, 염분을 구성하는 양이온 및/또는 음이온); 혈액 철 함유량 (blood iron content); 적혈구침강속도(erythrocyte sedimentation) (ESR); 혈구계산 측정(예, 세포 크기, 세포 밀도, 세포 모양, 세포 종류, 세포 표면의 탐지 및/또는 세포내 표지자(intracellular markers) 및 특성 등); 비타민, 단백질, 단백질 또는 저분자의 대사물질의 존재 여부 및/또는 농도, 및 혈액, 소변, 조직 또는 기타 생체 시료의 측정을 포함하는, 화학물질 측정.
혈액 시료 같은 시료 또는 혈액 시료의 부분은 임의의 적당한 크기 또는 양이 될 수 있으며 선택적으로 작은 크기 또는 소량이 될 수도 있습니다. 본 문서에서 공개된 분석 검사(assay) 및 방법의 일부 실시예에서, 소량의 혈액 시료를 사용하여 측정할 수도 있으며, 소량의 혈액 시료 이하를 사용하여 측정할 수도 있습니다. 여기에서 소량은 약 5 mL 이하가 될 수 있습니다; 약 3 mL 이하가 될 수도 있습니다; 약 2 mL 이하가 될 수도 있습니다; 약 1 mL 이하가 될 수도 있습니다; 약 500 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 250 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 100 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 75 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 50 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 35 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 25 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 20 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 15 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 10 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 8 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 6 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 5 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 4 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 3 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 2 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 1 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 0.8 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 0.5 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 0.3 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 0.2 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 0.1 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 0.05 μL 이하가 될 수도 있습니다; 약 0.01 μL 이하가 될 수도 있습니다.
본 문서에 사용된 "지질단백질" 및 "지질단백질 입자"에는 유미지립(chylomicrons), 초저밀도 지질단백질(VLDL), 저밀도 지질단백질(LDL) 및 고밀도 지질단백질(HDL)이 포함되어 있으며, 그러나 이것들에만 국한되지는 않습니다. 지질단백질에는, 다수의 구성 성분 중에서, 중성지방(TG) 및 콜레스테롤이 포함되어 있으며, 콜레스테롤 에스테르와 기타 형태의 콜레스테롤이 포함되어 있습니다. 지질단백질 내에 또는 지질단백질에 부착되어 있는 콜레스테롤(모든 형태 중에서)은 각각 VLDL-C, LDL-C 및 HDL-C라고 부릅니다. 혈액 시료의 총콜레스테롤(TC)에는 콜레스테롤 소분획 VLDL-C, LDL-C 및 HDL-C가 포함됩니다.
본 문서에 사용된 "지질단백질 침전," "지질단백질의 침전" 및 유사 용어는 지질단백질의 응집(예를 들어, 음전하를 띤 중합체(polymer), 예를 들어, 덱스트란 황산염 같은, 음전하를 띤 다당류가 있을 때, 마그네슘 이온 같은 2가 양이온에 노출됨)을 뜻하며, 지질단백질을 다른 혈액 성분과 추가로 분리하기 위한 원심분리 또는 기타 활동을 뜻할 수도 있습니다. 혈액 시료에 들어 있는 지질단백질의 약 75% 이상, 또는 약 80% 이상, 또는 약 85% 이상, 또는 약 90% 이상, 또는 약 99% 이상 같은, 큰 분획이 응집되거나 침전될 때, 지질단백질의 상당한 침전이 발생할 수도 있습니다.
본 문서에서 사용된 "지질단백질 상호작용제(lipoprotein interactant)"는 용액에서 지질단백질을 응집 및/또는 침전시키는 화합물, 화합물의 쌍 또는 그룹을 뜻합니다. 그러나, "지질단백질 상호작용제"는 본 문서에서 식별자(identifier)로 사용되며, 지질단백질 상호작용제가 들어 있을 수도 있는 용액 또는 분석 검사에서, 이런 화합물을 사용하거나 포함시켜도 지질단백질의 침전이 필요하지 않을 수도 있음을 인지해야 합니다. 지질단백질과의 상호작용의 대표적인 형태는, 마그네슘 및 기타 2가 양이온 같은, 양이온에 의해 영향을 받습니다. 여기에서, 음전하를 띠는 다당류(예: 덱스트란 황산염) 같은, 음전하를 띠는 중합체(polymer)는 하전된 양이온을 통해 지질단백질과 결합합니다. 그러므로, 예를 들어, 마그네슘(일반적으로 MgCl2) 같은 양이온을 "지질단백질 상호작용제"라고 부릅니다. 기타 지질단백질 상호작용제에는 덱스트란(dextrans), 시클로덱스트린(cyclodextrins), 포스포텅스텐산(phosphotungstic acid), 포스포텅스텐산염(phosphotungstic acid salts, 예를 들어, 나트륨 포스포텅스테이트(sodium phosphotungstate), 염화마그네슘이 들어 있는 나트륨 포스포텅스테이트(sodium phosphotungstate) 포함), 폴리비닐 황산염, 헤파린, 염화망간(manganese chloride)이 들어 있는 헤파린, 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycols, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 6000) 및 항체(antibodies, 예를 들어, anti-apolipoprotein-B-specific 단일 클론 항체)가 포함되나, 이런 것들에만 국한되지는 않습니다. 항체는 지질단백질 분석 검사에서 일반적으로 원심분리 방법에서 사용됩니다.
본 문서에서 공개된 방법과 시약에서 사용하는 덱스트란은, 예를 들어, 덱스트란 황산염 형태로 얻을 수 있습니다.
본 문서에 공개된 방법과 시약에 사용하는 α-시클로덱스트린(α-cyclodextrins) 같은 시클로덱스트린은, 예를 들어, 시클로덱스트린 황산염 형태로 얻을 수 있습니다. 선행 기술의 일부 방법에서, 지질단백질은 상대적으로 낮은 농도의 덱스트란 황산염과 상대적으로 높은 농도의 염화마그네슘을 사용하여, 혈액 시료에서 침전될 수도 있습니다(예를 들어, 0.182 μM 덱스트란 황산염 및 32 mM MgCl2, Kimberly et al. (Clinical Chemistry 45(10):18803-1812 (1999))에 설명되어 있음).
본 문서에 사용된 "덱스트란(dextran)"이라는 용어는, 다양한 길이의 다당류 체인으로 구성된, 복합체, 분기형 글루칸(branched glucan, 즉, 많은 포도당 분자로 이루어진 다당류)을 뜻합니다. 다당류 체인(예를 들어, 분기(branches) 사이)의 직선 길이를 따라, 포도당 분자 사이의 결합(linkages)은 일반적으로 α-1,6 배당결합(glycosidic linkages)이고, 포도당 분자 간의 분기 결합(branching linkages)은 일반적으로 α-1,3 배당결합(glycosidic linkages)입니다. 덱스트란의 크기와 분자량은 크게 변합니다; 예를 들어, 덱스트란 다당류 사슬(dextran polysaccharide chains)은 길이가 매우 다양하고, 덱스트란의 분자량은 매우 다양합니다(예를 들어, 약 3 킬로돌턴(kD) ~ 약 2000 kD 또는 그 이상). 본 문서에 사용된 "덱스트란(dextran)"이라는 용어에는, 덱스트란 황산 염(dextran sulfate salts), 덱스트란 에세테이트 염(dextran acetate salts), 덱스트란 프로피온산 염(dextran propionate salts), 덱스트란 숙신산 염(dextran succinate salts) 및 기타 덱스트란 염 같은, 덱스트란 에스테르 및 염(salts)이 포함됩니다.
덱스트란 분자는, 덱스트란의 주요 구성물(bulk composition)처럼, 덱스트란 화합물에 들어 있는 다른 덱스트란 분자와는 각각 서로 다른 구조 및/또는 서로 다른 분자량의, 서로 다른 덱스트란 분자가 들어 있는 이질적인 구성물 형태로 제공될 수 있음을 인지해야 합니다. 본 문서에 사용된 "덱스트란 분자량," "덱스트란의 분자랑" 및 이와 비슷한 용어는 덱스트란의 주요 구성물(bulk composition)에 들어 있는 덱스트란 분자의 평균 분자량을 뜻하며, 덱스트란의 주요 구성물에 들어 있는 모든 또는 대부분의 덱스트란 분자들이 "덱스트란 분자랑"으로 식별되는 특정 분자량을 갖고 있다는 것을 뜻하지는 않습니다. 그러므로, 덱스트란 분자량은, 분자량과 구조가 서로 다를 수도 있는 덱스트란 분자들의, 이질적인 혼합으로 구성된, 주요 구성물(bulk composition)의 평균값을 뜻합니다.
본 문서에 사용된 "저분자량 덱스트란"이라는 용어는 덱스트란 분자량이 약 100 킬로달톤(kD) 이하이고 일반적으로 약 75 kD 이하입니다; 실시예에서, 저분자량 덱스트란의 분자량은 약 25 kD ~ 75 kD 사이, 또는 약 40 kD ~ 약 60 kD 사이일 수도 있습니다. 실시예에서, 저분자량 덱스트란의 분자량은 약 50 kD일 수도 있습니다.
본 문서에 사용된 "시클로덱스트린(cyclodextrin)"이라는 용어는 환식 다당류(cyclic polysaccharide), 예를 들어, 당 분자를 구성하는 환식 화합물(cyclic compound)을 뜻합니다. 시클로덱스트린(cyclic compound)의 고리에 들어 있는 당 분자의 개수는 변할 수 있습니다; 예를 들어, 고리(ring)에 6 개의 당이 있는 시클로덱스트린을 α-시클로덱스트린(α-cyclodextrins)이라고 부릅니다; 고리에 7 개의 당이 있으면 β-시클로덱스트린(β-cyclodextrins)이라고 부릅니다; 고리에 8 개의 당이 있는 시클로덱스트린은 γ-시클로덱스트린(γ-cyclodextrins)이라고 부릅니다.
본 문서에서 사용된, 음전하를 띤 중합체(polymer)는 반복되는 단위를 갖고 있으며 중성에 가까운 pH 농도(예를 들어, pH 농도가 약 pH 5 ~ pH 9 사이, 선택적으로 약 pH 6 ~ pH 8 사이)에서 음전하를 띠는, 모든 유기 분자(organic molecule)입니다. 예를 들어, 폴리비닐 황산염(polyvinyl sulfate)은 음전하를 띠는 중합체(polymer)입니다. 음전하로 하전된 기타 중합체에는 음전하로 하전된 다당류를 포함하여, 헤파린과 덱스트란 에스테르가 포함됩니다.
콜레스테롤은, 인간 피험자 같은, 피험자의 혈액에서 측정할 수 있습니다. 혈액 시료에서 측정한 콜레스테롤은 하나 또는 그 이상의 콜레스테롤 소분획의 구성 콜레스테롤(comprising cholesterol)이라고 부를 수도 있습니다. 본 문서에 사용된 "총콜레스테롤(total cholesterol)" 또는 이것의 축약어 "TC"는 시료에 들어 있는 콜레스테롤의 전체 양을 나타내는 데 사용됩니다. 혈액 시료에 들어 있는 콜레스테롤의 양에 대해 말할 때, 별도로 명시하지 않을 경우, "콜레스테롤"이라는 용어는 "총콜레스테롤"을 뜻합니다. 콜레스테롤은 피험자(예, 인간 피험자)의 혈액에서 수많은 형태로 발견됩니다; 예를 들어, 콜레스테롤은 혈액 속에서 유미지립(chylomicrons) 형태로, VLDL 형태로, LDL 형태로 및/또는 HDL 형태로 발견될 수 있습니다. 각각의 유미지립(chylomicrons), VLDL, LDL 및 HDL은 콜레스테롤 소분획(cholesterol sub-fraction)이라고 부를 수도 있습니다. 유미지립, VLDL, LDL 및 HDL 소분획에 들어 있는 콜레스테롤의 합계는 피험자 혈액 시료의 총콜레스테롤입니다.
콜레스테롤의 전체 양과 각각의 콜레스테롤 소분획에 들어 있는 콜레스테롤의 양은 해당 기술 분야에 알려져 있는 다양한 방법과 본 문서에 공개된 새로운 방법과 수단을 사용하여 측정할 수 있습니다. 본 문서에 사용된 "콜레스테롤 측정 데이터"는 시료에 들어 있는 콜레스테롤에 대한 측정의 결과로 얻은 데이터이며, TC, VLDL-C, LDL-C, HDL-C, 유미지립 콜레스테롤 및 이런 것들의 조합에 대한 측정을 뜻하며, 이런 것들에만 국한되지는 않습니다. 예를 들어, 본 문서에 공개된 것처럼, 콜레스테롤은 전류 측정법(amperommetry), 전압전류법(voltammetry) 또는 기타 수단을 포함하여, 적합한 임의의 수단으로 측정할 수 있으며, 본 문서에 공개된 방법과 분서 검사에 따라, 시약 또는 시약들을 첨가한 혈액 시료의 광학적 특성을 측정하여, 콜레스테롤을 측정할 수도 있습니다. 예를 들어, 본 문서에 공개된 것처럼, 혈액 시료에서 흡광도를 측정하여 콜레스테롤을 측정할 수도 있으며, 본 문서에 공개된 시약 또는 시약들을 첨가한 혈액 시료에서 흡광도를 측정하여, 콜레스테롤을 측정할 수도 있습니다. 실시예에서, 콜레스테롤 측정 데이터에는 분광 광도계를 사용하여 흡광도를 측정하여 얻은 데이터가 포함됩니다. 실시예에서, 콜레스테롤 측정 데이터에는 분광 광도계로 ΔA를 측정하여 얻은 데이터도 포함됩니다. 여기에서, ΔA는 두 개의 파장에서, 예를 들어, 약 560 nm ~ 약 700 nm 사이에서 측정한 흡광도의 차(difference)입니다. 그러므로, 예를 들어, 콜레스테롤 측정 데이터는 분광 광도계로 ΔA를 측정하여 얻을 수도 있으며, 약 560 nm 파장에서 및 700 nm 파장에서 흡광도를 측정하고, 계산하거나 또는 흡광도 측정값 사이의 차(difference)를 확보하여, 콜레스테롤 측정 데이터를 확보할 수도 있습니다.
본 문서에서 사용된 "흡광도(absorbance)"라는 용어는 해당 기술 분야에서 일상적으로 사용되는 용어로, [용액(예를 들어, 시료)으로 투과되는(transmitted through) 광학적 방사선의 양]에 대한 [용액(예를 들어, 시료)에 투사되는(falling upon) 광학적 방사선(예를 들어, 전자기파)의 양]의 비율을 뜻합니다.
흡광도는 매개체(medium)를 통과하는 동안 흡수된 빛의 양을 측정하거나, 매개체를 통과하는 빛의 양을 측정하거나 또는 해당 기술 분야에서 알려져 있는 기타 방법을 사용하여 측정할 수 있습니다. 일반적으로 투과율(transmittance)(T)은 [컨트롤(control, 예, 공백)을 통과하는 빛의 양]에 대한 [시료를 통과하는 빛의 양]의 비율로 정의됩니다. 여기에서, 일반적으로 빛의 양은 빛의 세기(light intensity)로 측정됩니다. 그러므로, 매개체(medium)를 통과하지 못한 빛의 양은 1-T입니다. 흡광도 A는 일반적으로 T의 음수 log10(negative log10 of T) 값으로 정의됩니다. 그러므로, 흡광도와 투과율은 함께 측정하며, 이들 중 하나의 값을 결정하면 다른 한 값도 결정할 수 있습니다. 그러므로, 본 문서에 사용된 "흡광도(absorbance)"는, 흡광도를 결정하면 투과율도 결정할 수 있기 때문에, "투과율(transmittance)"을 뜻하기도 합니다.
본 문서에서 사용된 흡광도(및 투과율)는 특정 범위의 파장 내에서 또는 특정 파장에서 또는 다수의 특정 파장에서 측정할 수 있습니다. 특정 파장에서 측정한 흡광도는 해당 특정 파장이 가운데 들어 있는 파장들의 범위 내에서 측정한 값들을 사용하여 확보할 수 있습니다. 예를 들어, 560 nm에서의 흡광도는 약 530 nm ~ 약 590 nm의 파장 범위 내에서, 약 540 nm ~ 약 580 nm 사이의 파장 범위에서 흡광도를 측정하여 구할 수 있으며; 선택적으로 약 550 nm ~ 약 570 nm 사이의 파장 범위에서 흡광도를 측정하거나 또는 560 nm 보다 더 크거나 더 적은 파장의 기타 범위에서 측정하여, 흡광도를 측정하여 구할 수 있습니다. 비슷한 방법으로, 700 nm에서의 흡광도는 약 670 nm ~ 약 730 nm의 파장 범위 내에서, 약 680 nm ~ 약 720 nm 사이의 파장 범위에서 흡광도를 측정하여 구할 수 있으며; 선택적으로 약 690 nm ~ 약 710 nm 사이의 파장 범위에서 흡광도를 측정하거나 또는 700 nm 보다 더 크거나 더 적은 파장의 기타 범위에서 측정하여, 흡광도를 측정하여 구할 수 있습니다. 본 문서에 공개된 예에서 흡광도는 분광 광도계(spectrophotometer)를 사용하여 측정되었습니다.
본 문서에 사용된 "ΔA"라는 용어는 첫 번째 파장에서 측정한 흡광도와 두 번째 파장에서 측정한 흡광도 사이의 차(difference)를 뜻합니다; 예를 들어, 첫 번째 파장이 약 560 nm이고 두 번째 파장이 약 700 nm일 수도 있습니다. 예를 들어, ΔA는 약 560 nm의 파장과 약 700 nm의 파장에서 측정한 흡광도의 차(difference)를 사용하거나 또는 이들 두 흡광도 측정값의 차를 계산하거나 확보하여 측정할 수 있습니다. 그러므로, 예를 들어, 560 nm와 700 nm에서 측정한 이런 ΔA는 "ΔA(560-700nm)"라고 부릅니다.
본 문서에 사용된 "분광 광도계(spectrophotometer)"라는 용어는 특정 파장의 범위 내에서, 또는 특정 파장에서, 또는 다수의 특정 파장에서 광학적 세기를 측정하도록 구성되었거나, 광학적 세기를 측정하는 데 효과적인 장치를 뜻합니다. 분광 광도계는 시료의 흡광도를 측정하는 데 효과적일 수도 있습니다. 분광 광도계는 시료에서 방출된 빛을 측정하는 데 효과적일 수도 있습니다(예, 형광 및/또는 발광). 분광 광도계는 시료의 흡광도를 측정하는 데 효과적일 수도 있으며 시료에서 방출된 빛을 측정하는 데 효과적일 수도 있습니다.
본 문서에 사용된 "분광 광도법(spectrophotometry)"이라는 용어는 분광 광도기를 사용하여 측정하는 것을 뜻합니다; 즉 특정 파장의 범위 내에서, 또는 특정 파장에서, 또는 다수의 특정 파장들에서 광학적 측정을 합니다.
본 문서에 사용된 "광학(적) 탐지기(optical detector)"라는 용어와 광학적 특성(예를 들어, 착색된 용액)을 측정하기 위한 수단은 전자기 방출(예를 들어, 임의 파장의 빛)을 탐지하기 위한 임의의 적합한 광학적 수단, 광학 장치, 광 탐지기(photodetector) 및 광학 소자 등을 뜻합니다. 예를 들어, 광학 탐지기 및 광학 탐지 수단은 흡광도, 투과율, 혼탁도(turbidity), 발광(화학 발광 포함), 형광 및/또는 기타 광학적 신호를 탐지하는 데 사용할 수 있습니다. 광학 탐지기에는 이미지 포착 장치(imaging devices)도 포함되나 이것에만 국한되지는 않습니다. 광학적 수단, 광학 장치, 광 탐지기 및 광학 소자에는 다음이 포함되나 이런 것들에만 국한되지는 않습니다: 디지털 카메라 같은 전자 탐지기, 전하 결합 소자(CCDs, 초냉각 CCDs 포함), 포토다이오드(photodiodes, 핀 다이오드(pin diodes) 및 애벌란시 포토다이오드(avalanche photodiode) 포함), 광전자 증배관(photomultipliers), 광전관(phototube), 광양자 계측 탐지기(photon counting detector), 포토다이오드 어레이(핀 다이오드 어레이(pin diode arrays) 및 애벌란시 포토다이오드 어레이(avalanche photodiode arrays) 포함), 전하 결합 소자 어레이(초냉각 CCD 어레이 포함), 포토다이오드 어레이, 광전자 증배관 어레이(arrays of photomultipliers), 광전관 어레이(arrays of phototubes), 광전자 계측 탐지기 어레이(arrays of photon counting detectors) 및 기타 탐지 장치 및 탐지 소자. 일부 실시예에서, 핀 다이오드(pin diode) 또는 기타 소자는 증폭기에 결합할 수 있습니다.
일부 실시예에서, 광학 탐지기에는 카메라(예, 디지털 카메라)가 포함될 수도 있습니다. 카메라에는 렌즈가 포함될 수 있으며 렌즈 없이 작동할 수도 있습니다. 일부의 예에서, 카메라에는 CCDs가 포함될 수 있으며, CMOS(complementary metal-oxide semiconductor) 소자를 사용할 수도 있고, 렌즈가 없는 카메라일 수도 있고, 마이크로렌즈 어레이(microlens-array) 카메라가 될 수도 있고, 오픈소스 카메라(예를 들어, Frankencamera, Levoy에 의해 설명됨, "Experimental Platforms for Computational Photography," IEEE Computer Graphics and Applications, Vol. 30, No. 5, September/October, 2010, pp. 81-87)가 될 수도 있으며, 이미 알려져 있거나 기술 분야에서 이후에 개발될 수 있는 시각적 탐지 기술을 사용할 수도 있습니다. 카메라는 기존(conventional) 및/또는 비기존(non-conventional) 이미지, 예를 들어, 홀로그램 이미지(holographic images), 단선 X선 이미지(tomographic images), 간섭 측정 이미지(interferometric images), 푸리에 변환 스펙트럼(Fourier-transformed spectra), 계산적 방식(computational methods)의 도움이 있거나 없이 해석할 수 있는 임의의 것 또는 모든 것들을 확보할 수 있습니다. 카메라에는 사용하는 동안 카메라의 초점을 맞추거나, 또는 나중에 초점을 맞출 수 있는, 이미지를 캡처하는 데 필요한, 하나 또는 그 이상의 기능이 포함되어 있을 수 있습니다. 일부 실시예에서, 이미지 확보 장치에는 2차원(2-D) 이미지, 3차원(3-D) 이미지, 및/또는 4차원(4-D) 이미지 확보(시간 변화 정보 포함) 기술이 포함되어 있을 수 있습니다. 이미지 확보 장치는 정적(고정된) 이미지를 캡처할 수 있습니다. 3-D 또는 4-D 이미지를 확보하는 데 사용하는 광학적 체계(optical schemes)는 해당 기술 분야에서 알려진 하나 또는 그 이상의 기술이 될 수도 있으며, 예를 들어, 구조 조명 현미경(SLM: structured illumination microscopy), 디지털 홀로그램 현미경(DHM: digital holographic microscopy), 공초점 현미경(confocal microscopy), 명시야 현미경(light field microscopy) 등이 될 수 있습니다. 정적 이미지는 하나 또는 그 이상의 시점(point in time)에서 포착될 수도 있습니다. 이미지 확보 장치는 비디오 및/또는 동적 이미지를 캡처할 수 있습니다. 비디오 이미지는 단일 기간 동안 연속적으로 포착할 수 있으며, 하나 또는 그 이상의 시간 기간 동안 포착할 수도 있습니다. 이미지 확보 장치는 임의의 스캔 패턴(예를 들어, 래스터 스캔)으로 목표물(예를 들어, 분석 검사에 사용되는 시료)을 스캔(검색)하는 광학 시스템으로부터 신호를 수집할 수도 있습니다.
광학 탐지기 및 광학 탐지 수단에는, 제한 없이, 현미경이 포함되며, 광학적 탐지를 위한 수단에는 현미경법, 외관 검사(visual inspection), 사진 필름 판독 등이 포함되며, 디지털 카메라, 전하 결합 소자(CCDs), 초냉각 CCD 어레이(super-cooled CCD arrays), 광전관(phototubes), 광 탐지기(photodetectors), 본 문서에 공개된 것처럼, 기술 분야에 알려진 기타 탐지 장치가 포함됩니다. 광학 탐지기(optical detector) 및 광학 탐지 수단(optical detection means)에는 CCD 탐지기 또는 PMT 어레이에, 예를 들어, 기능적으로 연결되어 있을 수도 있는 광섬유(optical fiber) 또는 다수의 광섬유(예를 들어, 광섬유 케이블)가 포함되어 있을 수도 있습니다. 광섬유 다발은 개별 광섬유(discrete fibers)로 구성되거나 및/또는 고체형 다발(solid bundle)을 형성하도록 함께 융합된(fused) 수많은 작은 광섬유들이 포함될 수도 있습니다.
광학 탐지기에는 전구, 백열등, 전자 발광 램프(electroluminescent lamp), 레이저, 레이저 다이오드, 빛 방출 다이오드(LED), 가스 방전 램프(gas discharge lamp), 고강도 방전 램프(high-intensity discharge lamp), 화학 발광 광원(chemiluminescent light source), 생물 발광 광원(bioluminescent light source), 인광성 광원(phosphorescent light source), 형광 광원(fluorescent light source), 자연 일광(natural sunlight) 같은 광원이 포함될 수도 있습니다. 실시예에서, 예를 들어, 화학 발광(chemiluminesence)이 탐지되는 곳에는 분석 검사 화학(반응)에 의해 빛이 생성될 수도 있습니다. 실시예에서, 광원은 결과를 탐지하는 데 도움이 되도록, 부품을 조명할 수 있습니다. 예를 들어, 광원은 분석 검사의 결과를 탐지하기 위해, 분석 검사에서 용액을 조명할 수도 있습니다. 예를 들어, 분석 검사는 핵산 분석 검사에 일반적으로 사용되는 형광 분석 검사(fluorescence assay) 또는 흡광 분석 검사(absorbance assay)가 될 수도 있습니다. 탐지기에는 빛을 광원에서 분석 검사 또는 분석 검사 소실(assay chamber)로 전달하는 데 효과적인 광학 소자(optical elements)가 포함되어 있을 수도 있습니다. 이런 광학 소자에는, 제한 없이, 예를 들어, 렌즈, 거울(예를 들어, 스캐닝 또는 갤버노미러(galvano-mirror)), 프리즘, 광섬유 또는 광섬유 다발, 도광기(light guide, 예를 들어, liquid light guide), 및/또는 기타 광학 소자가 포함될 수 있습니다. 광 탐지기에는 이런 광학 소자가 포함될 수 있으며, 이런 광학 소자는 빛을 탐지기에 전달하는 데 효과적이도록 배치됩니다. 예를 들어, 광학 탐지기는 선택한 파장 또는 파장 범위의 전자기 방출을 탐지하도록 구성할 수 있습니다. 광학 탐지기는 시료로 이동하거나 시료의 부분을 볼 수 있도록 구성할 수 있습니다. 광학 탐지기에는, 예를 들어, 시료를 스캔하기 위해, 서로 다른 시점에서, 목표 위치의 서로 다른 부분에서 나오는 빛을 탐지할 수 있도록 해주는, 거울, 모터, 압전기 소자(piezoelectric), 또는 기타 소자가 포함될 수 있습니다.
광학 탐지기는 하나 또는 그 이상의 광학 신호를 탐지하는 데 사용할 수도 있습니다. 예를 들어, 발광을 제공하는 반응의 유무 또는 진행 상황을 탐지하는 데 사용할 수도 있습니다. 탐지기는 하나 또는 그 이상의 형광 발광(fluorescence), 화학 발광(chemiluminscence), 광 발광(photoluminescence), 전기 발광(electroluminescence), 소리 발광(sonoluminescence), 흡광도(absorbance), 혼탁도(turbidity), 광 회전 분산(ORD: optical-rotary-dispersion), 원편광 이색성(CD: circular dichroism) 또는 편광(polarization)을 제공하는 반응을 탐지하는 데 사용할 수도 있습니다. 광학 탐지기는 색의 세기(color intensity), 상(phase), 공간적 시간적 기울기(gradients) 등과 관련된 광학 신호를 탐지할 수도 있습니다.
본 문서에 사용된, 해당 장치에서 컴퓨터 또는 기타 외부 장치로 정보를 통신하기 위한 수단 및 컴퓨터 또는 기타 외부 장치로 정보를 통신하기 위한 채널은, 제한 없이, 컴퓨터 네트워크, 전화, 전화망, 해당 장치로부터 통신으로 받은 정보를 표시하도록 구성된 장치 등을 뜻합니다. 실시예에서, 정보 통신용 수단 및 정보 통신용 채널에는 전선(꼬임 선(twisted pair), 동축케이블(coaxial), 리본 케이블 및 기타 케이블 포함)을 사용하는 직접 연결과 무선 수단 및 무선 기술(예, 블루투스 기술 또는 RTM(retransmission mode) 기술)이 포함됩니다. 통신 수단과 통신용 채널에는, 모뎀을 이용한 전화접속 유선 연결, 전선을 이용한 직접 연결 등과 같은 적합한 통신 방법이 포함되고, 적외선, 휴대전화, 와이맥스(wimax), 와이파이(wifi), 위성 통신, 호출기, 일반 패킷 무선 서비스(GPRS: general packet radio service), 로컬 데이터 전송 시스템(예를 들어, 이더넷 또는 token ring over a local area network (LAN) 또는 기타 네트워크) 같은 무선 접속 방식이 포함됩니다.
통신에 사용할 외부 장치는 이런 통신을 수신할 수 있는 임의의 장치가 될 수 있습니다. 예를 들어, 외부 장치는 서버, 개인용 컴퓨터, 랩톱 컴퓨터, 테블릿(tablet), 휴대용 단말기, 피처폰, 위성 전화기, 스마트폰(예를 들어, iPhone®, Android™, Blackberry®, Palm, Symbian, Windows®), 개인 정보 단말기(PDA), 호출기 및 기타 장치를 포함하여, 네트워크에 연결된 장치가 될 수 있습니다. 실시예에서, 외부 장치는 진단 장치(diagnostic device)가 될 수도 있습니다. 외부 장치에 진단 장치(diagnostic device)가 포함된 일부 실시예에서, 본 문서에 공개된 장치 및 시스템과 외부 장치와의 관계에는 마스터 슬레이브(master-slave) 관계, 피어 투 피어(peer-to-peer) 관계 또는 분산 관계(a distributed relationship)가 포함될 수도 있습니다.
본 문서에 사용된 "지질분해효소(lipase)"라는 용어는, 반응 기질의 일부로써 지질(lipid)과의 반응에 대해 촉매작용을 하는 효소들의 종류를 뜻합니다. 지질분해효소는 가수분해 또는 기타 반응에 대해 촉매작용을 합니다. 예를 들어, 지질분해효소는 콜레스테롤 에스테르(cholesterol ester)를 콜레스테롤과 지방산으로 대사 작용을 합니다(metabolize).
본 문서에 사용된 "콜레스테롤 에스테르분해효소(cholesterol esterase)"는 콜레스테롤 함유 분자의, 카르복시산(carboxylic acid) 같은, 콜레스테롤 분자 또는 콜레스테롤 모이어티(cholesterol moiety)의 에스테르 결합(ester bond)을 제거하거나 변경하는 반응에 대해 촉매작용을 하는 효소를 뜻합니다. 콜레스테롤 에스테르분해효소("스테롤 에스테르분해효소(sterol esterases)" 또는 "담즙 지질분해효소(bile lipases)"라고도 함)는 일반적으로 스테릴 에스테르(steryl ester)가 물과 결합하여 스테롤(sterol)과 지방산을 형성하는 반응에서 촉매작용을 합니다. 콜레스테롤 에스테르분해효소는 흔하며, 단세포 생물이나 다세포 생물에서 발견할 수 있습니다; 상용으로 유용한 많은 수의 콜레스테롤 에스테르분해효소는 박테리아성 콜레스테롤 에스테르분해효소(bacterial cholesterol esterases)이지만, 다른 출처로부터 얻은 콜레스테롤 에스테르분해효소도 알려져 있으며 또한 유용합니다. 예를 들어, 유용한 콜레스테롤 에스테르분해효소는, 그램 음성균(Gram-negative bacteria)에서 얻은 콜레스테롤 에스테르분해효소, 녹농균(Pseudomonas species)에서 얻은 콜레스테롤 에스테르분해효소 같은, 박테리아성 콜레스테롤 에스테르분해효소(bacterial cholesterol esterase)가 될 수 있습니다.
본 문서에 사용된 "콜레스테롤 산화효소(cholesterol oxidase)"는 콜레스테롤 함유 분자의 콜레스테롤 분자 또는 콜레스테롤 모이어티가 산소와 결합하여 cholest-4-en-3-one 같은 산화 콜레스테롤 모이어티(과산화수소도 형성)를 형성하는 반응에서 촉매작용을 하는 효소를 뜻합니다. 많은 수의 콜레스테롤 산화효소는 박테리아성 콜레스테롤 산화효소입니다. 예를 들어, 유용한 콜레스테롤 산화효소는, 그램 음성균(Gram-negative bacteria)에서 얻을 수 있으며, 녹농균(Pseudomonas species)에서 얻은 콜레스테롤 산화효소 등이 될 수 있습니다.
본 문서에 사용된 "완충제(buffer)"는 용액 속에서 용액의 pH 농도를 특정 값이나 특정 값에 가깝게 유지하는 화합물 또는 화합물 그룹입니다. 예를 들어, 인산염(phosphate salts)을 완충제로 사용할 수 있습니다. 인산염에는 NaH2PO4, Na2HPO4 및 Na3PO4가 있습니다. 다른 완충제도 본 문서에 공개된 시약, 분석 검사 및 방법에서 사용하는 데 알맞으며, 제한 없이, 다음과 같은 것들이 있습니다: 구연산염(citrate), 암모늄(ammonium), 아세트산염(acetate), 탄산염(carbonate), tris(hydroxymethyl)aminomethane (TRIS), 3-(N-morpholino) propanesulfonic acid (MOPS), 3-morpholino-2-hydroxypropanesulfonic acid (MOPSO), 2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid (MES), N-(2-Acetamido)-iminodiacetic acid (ADA), piperazine-N,N′-bis(2-ethanesulfonic acid) (PIPES), N-(2-Acetamido)-2-aminoethanesulfonic acid (ACES), cholamine chloride, N,N-Bis(2-hydroxyethyl)-2-aminoethanesulfonic acid (BES), 2-[[1,3-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)propan-2-yl]amino]ethanesulfonic acid (TES), 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazine ethanesulfonic acid (HEPES), acetamidoglycine, tricine (N-(2-Hydroxy-1,1-bis(hydroxymethyl)ethyl)glycine), glycinamide, bicine (2-(Bis(2-hydroxyethyl)amino)acetic acid) 및 기타 완충제. 수용액을 원하는 pH 농도로 완충할 수 있고 본 문서에 공개된 분석 검사 및 방법과 친화성(또는 호환성)이 있으면, 완충제가 될 수 있습니다. 실시예에서, 완충제는 pH 농도가 거의 중성에 가까운 용액을 약간 산성인 pH 농도로 완충하는 데 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 약 pH 5에서 약 pH 9로, 또는 약 pH 6 ~ pH 8 사이로, 또는 약 pH 6 ~ 약 pH 8 사이로, 또는 약 pH 6.8 ~ 약 pH 7.8 사이로 완충하거나, 실시예에서, 약 pH 7 또는 약 pH 7.4의 pH 농도로 완충할 수 있습니다.
장치 및 시스템
본 문서에 공개된 분석 검사 및 방법은 시료를 처리하기 위한 장치 또는 시스템 상에서 수행할 수도 있습니다. 본 문서에 공개된 분석 검사와 방법은 시료를 처리하는 데 사용하는 장치 또는 시료를 처리하는 데 사용하는 시스템에 즉시 통합하거나 사용할 수도 있습니다. 이런 장치는 자동 분석 검사 장치(automated assay device) 또는 자동 분석 검사 시스템(automated assay system)이 될 수도 있습니다. 이런 장치와 이런 시스템은 본 문서에 공개된 방법을 수행하는 데 유용할 수도 있습니다. 예를 들어, 장치는 시료를 수납(receiving)하는 데 유용할 수도 있습니다. 장치는 시료를 준비 또는 처리하는 데 유용할 수도 있습니다. 장치는 시료에 대해 분석 검사를 수행하는 데 유용할 수도 있습니다. 장치는 시료에서 데이터를 확보하는 데 유용할 수도 있습니다. 장치는 시료에서 얻은 데이터를 전송하는 데 유용할 수도 있습니다. 장치는 시료를 처리 또는 분석 검사한 후에 시료를 처분(또는 폐기)하는 데 유용할 수도 있습니다.
장치는 시스템의 일부이거나 또는 시스템의 시료 처리 장치인 부품일 수도 있습니다. 장치는 시료 처리 장치가 될 수도 있습니다. 시료 처리 장치는, 본 문서에 공개된 것처럼, 시료의 수집을 용이하게 하고, 임상 검사를 위해 시료를 준비하거나, 하나 또는 그 이상의 시약 또는 다른 화학품과 화학 반응을 일으키게 하거나 또는 (시료를) 물리적으로 가공(처리)하도록 구성될 수도 있습니다. 시료 처리 장치는 시료로부터 데이터를 확보하도록 구성될 수도 있습니다. 시료 처리 장치는 시료로부터 확보한 데이터를 전송하도록 구성될 수도 있습니다. 시료 처리 장치는 시료로부터 확보한 데이터를 분석하도록 구성될 수도 있습니다. 시료 처리 장치는, 시료에서 확보한 데이터를 분석하기 위해, 다른 장치 또는 연구실(또는 검사실) 또는 연구실의 특정 개인과 통신하도록 구성할 수 있습니다.
시료 처리 장치는 피험자 내부에 또는 피험자 위에 배치하도록 구성될 수도 있습니다. 시료 처리 장치는 피험자로부터 직접 또는 간접적으로 시료를 받아 들이도록 구성할 수 있습니다. 시료는, 예를 들어, 혈액 시료(예를 들어, 핑거스틱 또는 정맥 천자(venipuncture)로 확보한 시료나 동맥혈 시료), 소변 시료, 생검 시료(biopsy sample), 조직 조각, 대변 시료, 또는 기타 생체 시료; 물 시료, 흙 시료, 음식물 시료, 공기 시료; 또는 기타 시료가 될 수 있습니다. 혈액 시료에는, 예를 들어, 전혈(whole blood), 혈장 또는 혈청이 포함됩니다. 시료 처리 장치는 장치의 하우징을 통해 피험자로부터 시료를 수납할 수 있습니다. 시료 수집은 시료 수집 현장에서 또는 다른 곳에서 발생할 수도 있습니다. 시료는 시료 수집 현장에서 장치에 제공될 수도 있습니다.
일부 실시예에서, 시료 처리 장치는 카트리지(cartridge)를 수납하거나 보관하도록 구성될 수도 있습니다. 일부 실시예에서, 시료 처리 장치에는 카트리지가 포함될 수도 있습니다. 카트리지를 시료 처리 장치에서 제거할 수도 있습니다. 일부 실시예에서, 시료는 시료 처리 장치의 카트리지에 제공될 수도 있습니다. 그렇지 않은 경우, 시료는 시료 처리 장치의 다른 부분에 제공될 수도 있습니다. 카트리지 및/또는 장치에는 시료를 수납하도록 구성된 시료 수집 장치(sample collection unit)가 포함될 수도 있습니다.
카트리지에는 시료가 포함될 수 있고, 시료를 처리하거나 검사하기 위해 시약이 포함될 수도 있으며, 시료를 처리 또는 검사하는 데 사용하기 위한 일회용 또는 기타 물질이 들어 있을 수도 있습니다. 카트리지를 시료 처리 장치에 배치하거나 또는 삽입한 후에, 카트리지의 하나 또는 그 이상의 부품이 시료 처리 장치의 다른 부품과 액체 소통(fluid communication)할 수도 있습니다. 예를 들어, 시료를 카트리지에 수집한 경우, 해당 시료는 시료 처리 장치의 다른 부분으로 이동될 수도 있습니다. 마찬가지로, 하나 또는 그 이상의 시약이 카트리지에 제공된 경우, 해당 시약은 시료 처리 장치의 다른 부분으로 이동되거나, 시료 처리 장치의 다른 부품을 해당 시약으로 가져 올 수도 있습니다. 일부 실시예에서, 카트리지의 시약 또는 부품은 카트리지 내부에 둘 수도 있습니다. 일부 실시예에서, 관을 설치하거나(tubing) 유지관리(예를 들어, 수동 또는 자동 유지관리)할 필요가 있는, 유체 공학 장치(fluidics)는 포함되어 있지 않습니다.
시료 또는 시약은 시료 처리 장치 같은 장치로 이동될 수도 있습니다. 시료 또는 시약은 장치 내에서 이동될 수도 있습니다. 시료 또는 시약의 이런 이동은 카트리지에서 장치로 연속적인 유체 통로를 제공할 필요 없이 수행될 수도 있습니다. 시료 또는 시약의 이런 이동은 장치 내에서 연속적인 유체 통로를 제공할 필요 없이 수행될 수도 있습니다. 실시예에서, 시료 또는 시약의 이런 이동은 시료 취급 장치(예를 들어, 피펫(pipette))를 사용하여 수행될 수도 있습니다; 예를 들어, 시료, 시약, 또는 이런 것들의 부분표본(aliquot)은 피펫 팁 같은 끝이 열려 있는 이동 부품(open-tipped transfer component)으로 흡인될 수도 있으며, 이동 부품은, 시료, 시약 또는 이런 것의 부분표본이 들어 있는 팁을 시료 처리 장치의 위치로 또는 내부로 이동하는, 시료 처리 장치와 작동이 연결되어 있을 수도 있습니다. 시료, 시약 또는 이런 것들의 부분표본은 시료 처리 장치의 위치에 또는 내부에 배치될 수도 있습니다. 시료 및 시약, 또는 다수의 시료는 비슷한 방식으로 시료 처리 시스템을 사용하여 혼합될 수도 있습니다. 카트리지의 하나 또는 그 이상의 부품은 시료 처리 장치의 다른 부분으로 자동으로 전달되거나 그 반대로 전달될 수도 있습니다.
시료 처리 장치 같은 장치에는 유체 취급 시스템(fluid handling system)이 들어 있을 수도 있습니다. 유체 취급 시스템은 이런 시료 같은 유체에 대해 이동, 희석, 추출, 부분표본으로 나누기, 혼합 및 기타 작동을 수행하거나 수행하는 데 도움이 될 수도 있습니다. 일부 실시예에서, 유체 취급 시스템은 장치의 하우징 내부에 들어 있을 수도 있습니다. 유체 취급 시스템은, 비유체성(non-fluidic) 성분, 시료 또는 재료의 수집, 전달, 처리 및/또는 이동뿐만 아니라, 유체의 수집, 전달, 처리 및/또는 이동, 건 시약(dry reagents)의 용해, 액체와의 혼합 및/또는 액체와 건 시약의 혼합 등을 허용할 수도 있습니다. 유체(fluid)에는 시료, 시약, 희석제, 와시(wash), 염료 또는 장치에서 사용할 수 있는 기타 유체, 균질 유체(homogenous fluids), 다른 액체, 유화액(emulsions), 현탁액(suspensions) 및 기타 유체가 포함되나 이런 것들에만 제한되지는 않습니다. 유체 취급 시스템에는, 제한 없이, 피펫(pipette)이 포함되고, 유체 취급 시스템은 장치 주위로 (유체가 들어 있거나 들어 있지 않은) 용기(vessels )를 이동하는 데 사용할 수도 있습니다. 유체 취급 시스템은 유체를 분배하거나 흡인할 수도 있습니다. 시료에는, 유체 내에서 부유 중인(floating) 하나 또는 그 이상의 미립자(particulate) 또는 고체 물질이 들어 있을 수도 있습니다.
실시예에서, 유체 취급 시스템은 피펫, 피펫 팁, 주사기, 모세관 또는 기타 부품으로 구성될 수도 있습니다. 유체 취급 시스템에는 내부 표면, 외부 표면 및 개방된 끝이 있는 부분이 들어 있습니다. 유체 취급 시스템에는, 피펫 본체(pipette body)와 피펫 노즐이 들어 있을 수도 있는 피펫이 들어 있으며, 피펫 팁이 들어 있을 수도 있습니다. 피펫 팁은 피펫 노즐에서 제거할 수 있거나 제거할 수 없을 수도 있습니다. 실시예에서, 유체 취급 시스템은 피펫을 피펫 팁과 결합하여 사용할 수도 있으며, 피펫 팁은 일회용 일 수도 있습니다. 팁은 피펫과 결합될 때 유체를 밀폐할 수도 있습니다. 피펫 팁은 한 번, 두 번, 또는 여러 번 사용할 수도 있습니다. 실시예에서, 유체 취급 시스템은, 피펫 팁이 있거나 없이, 피펫 또는 유사한 장치를 사용하여, 유체를 흡인, 분배, 혼합, 이동하거나 또는 기타 방식으로 취급할 수도 있습니다. 유체는 필요할 경우 유체 취급 시스템으로 분배할 수 있습니다. 유체에는, 예를 들어, 피펫 팁에 있는 구멍 같은 것으로부터 분배하기 전에, 피펫 팁 내부에 들어 있을 수도 있습니다. 실시예 또는 예시에서 사용하는 동안, 유체 전체를 분배할 수도 있습니다. 다른 실시예 또는 예시에서 사용하는 동안, 팁의 내부에 있는 유체의 부분을 분배할 수도 있습니다. 피펫은 유체를 선택적으로 흡인할 수도 있습니다. 피펫은 유체의 선택한 양을 흡인할 수도 있습니다. 피펫은 혼합 작동(또는 작업)을 수행하여 팁 또는 용기에 들어 있는 유체를 혼합할 수도 있습니다. 피펫에는, 비유체 형태(non-liquid form)의 재료 또는 시약이 포함될 수도 있으며, 혼합하기 위해 연속적인 흐름 루프(loop)를 형성하는 팁 또는 용기가 들어 있을 수도 있습니다. 피펫 텝은 다수의 유체를, 2 부분 기질 반응(2-part substrate reactions)에서 처럼, 연속적으로 또는 순차적으로, 정량적으로 전달하여(metered delivery), 혼합을 용이하게 할 수도 있습니다.
유체 취급 시스템에는 하나 또는 그 이상의 유체적으로 격리되었거나 또는 수압적으로(hydraulically) 독립적인 장치가 포함될 수도 있습니다. 예를 들어, 유체 취급 시스템에는 하나, 둘, 또는 그 이상의 피펫 팁이 포함될 수도 있습니다. 피펫 팁은 유체를 수용하고 제한하도록 구성될 수도 있습니다. 팁들은 유체적으로 서로 격리되거나 또는 수압적으로 독립될 수도 있습니다. 각 팁에 들어 있는 유체는, 다른 팁 또는 장치 내의 다른 유체에 대해, 유체적으로 격리되어 있거나 수압적으로 독립적 일 수도 있습니다. 유체적으로 격리되어 있거나 수압적으로 독립적인 장치는, 기기의 다른 부분 및/또는 다른 장치에 대해, 상대적으로 이동할 수도 있습니다. 유체적으로 격리되었거나 수압적으로 독립적인 장치는 개별적으로 이동할 수도 있습니다. 유체 취급 시스템에는 하나 또는 그 이상의 받침대(base) 또는 지지물(support)을 포함할 수 있습니다. 받침대(base) 또는 지지물(support)은 하나 또는 그 이상의 피펫 또는 피펫 장치를 지지할 수 있습니다. 받침대 또는 지지물은 유체 취급 시스템의 하나 또는 그 이상의 피펫들을 서로 연결할 수도 있습니다.
시료 처리 장치는 피험자로부터 확보한 시료에 대해 처리 단계 또는 작업을 수행하도록 구성할 수 있습니다. 시료 처리에는, 예를 들어, 시료 희석을 포함하여, 시료 준비, 시료를 부분표본으로 분할, 추출, 시약과의 접촉, 걸러내기(filtration), 분리, 원심분리, 또는 기타 준비 또는 처리 작업 또는 단계가 포함될 수 있습니다. 시료 처리 장치는 시료에 대해 하나 또는 그 이상의 시료 준비 작업 또는 단계를 수행하도록 구성할 수 있습니다. 선택적으로, 시료는 화학 반응 및/또는 물리적 처리 단계를 위해 준비할 수 있습니다. 시료 처리 작업 또는 단계에는 하나 또는 그 이상의 다음과 같은 작업이 포함될 수 있습니다: 원심분리, 분리, 걸러내기, 희석, 농축(enriching), 정화, 침전, 배양, 피펫 작업, 이동, 크로마토그래피(chromatography), 세포 용해(lysis), 혈구 계산(cytometry), 분쇄, 갈기(또는 빻기, grinding), 활성화, 초음파 처리(ultrasonication), 미세 기둥 처리(micro column processing), 자기 비드 처리(processing with magnetic beads), 나노입자 처리(processing with nanoparticles), 기타 시료 준비 작업 또는 단계. 예를 들어, 시료 준비에는, 혈액을 혈청 및/또는 미립 분획(particulate fractions)으로 분리하거나 기타 다른 시료를 다양한 성분으로 분리하는, 하나 또는 그 이상의 단계가 포함될 수 있습니다. 시료 준비에는 혈액 시료 또는 기타 생체 시료를 희석하거나 및/또는 농축하는 하나 또는 그 이상의 단계가 포함될 수 있습니다. 시료 준비에는 시료에 응고 방지제(anti-coagulant) 또는 기타 물질을 추가하는 것이 포함 될 수 있습니다. 시료 준비에는 시료의 정제(purification)가 포함될 수 있습니다. 실시예에서, 모든 시료 처리, 준비 또는 분석 검사 작업 또는 단계는 단일 장치에 의해 수행됩니다. 실시예에서, 모든 시료 처리, 준비 또는 분석 검사 작업 또는 단계는 단일 장치의 하우징 내에서 수행됩니다. 실시예에서, 대부분의 시료 처리, 준비, 분석 검사 작업 또는 단계는 단일 장치에 의해 수행되고, 단일 장치의 하우징 내에서 수행될 수 있습니다. 실시예에서, 많은 시료 처리, 준비, 분석 검사 작업 또는 단계는 단일 장치에 의해 수행되고, 단일 장치의 하우징 내에서 수행될 수 있습니다. 실시예에서, 시료 처리, 준비, 분석 검사 작업 또는 단계는 하나 이상의 장치에 의해 수행될 수 있습니다.
시료 처리 장치는 시료에 대해 하나 또는 그 이상의 분석 검사를 실행하고 해당 시료로부터 데이터를 확보하도록 구성될 수도 있습니다. 분석 검사에는 하나 또는 그 이상의 물리적 또는 화학적 처리가 포함될 수 있으며, 하나 또는 그 이상의 화학적 또는 물리적 반응을 실행하는 것이 포함될 수도 있습니다. 시료 처리 장치는 소량의 체액 시료에 대해 하나, 둘, 또는 그 이상의 분석 검사를 수행하도록 구성될 수 있습니다. 하나 또는 그 이상의 화학 반응이, 본 문서의 다른 어느 곳에 설명된 것과 같은, 양의 시료에 대해 발생할 수도 있습니다. 예를 들어, 하나 또는 그 이상의 화학 반응이 펨토리터(femtoliter) 부피보다 작은 알약에 대해 발생할 수도 있습니다. 한 예에서, 시료 수집 장치는 혈액 또는 간질액(interstitial fluid)의 한 방울 또는 그 보다 더 작은 양에 해당하는 체액 시료를 받아 들이도록 구성될 수 있습니다. 실시예에서, 시료의 양은 소량이 될 수 있으며, 여기에서 소량은 약 1000 μL 이하이거나, 약 250 μL 이하이거나, 약 150 μL 이하이거나, 약 100 μL 이하이거나, 약 75 μL 이하이거나, 약 50 μL 이하이거나, 약 40 μL 이하이거나, 약 20 μL 이하이거나, 약 10 μL 이하이거나, 또는 기타 작은 양이 될 수도 있습니다. 실시예에서, 모든 시료 분석 검사 작업이나 단계는 단일 시료에 대해 수행됩니다. 실시예에서, 모든 시료 분석 검사 작업이나 단계는 단일 장치에 의해 수행됩니다. 실시예에서, 모든 시료 분석 검사나 단계는 단일 장치의 하우징 내에서 수행됩니다. 실시예에서, 모든 시료 분석 검사 작업이나 단계는 단일 장치에 의해 수행되고, 단일 장치의 하우징 내에서 수행될 수 있습니다. 실시예에서, 많은 시료 분석 검사 작업이나 단계는 단일 장치에 의해 수행되고, 단일 장치의 하우징 내에서 수행될 수 있습니다. 실시예에서, 시료 처리, 준비, 분석 검사 작업 또는 단계는 하나 이상의 장치에 의해 수행될 수 있습니다.
시료 처리 장치는 시료에 대해 다수의 분석 검사를 수행하도록 구성할 수 있습니다. 실시예에서, 시료 처리 장치는 단일 시료에 대해 다수의 분석 검사를 수행하도록 구성할 수 있습니다. 실시예에서, 시료 처리 장치는 단일 시료에 대해 다수의 분석 검사를 수행하도록 구성하고, 여기에서 시료는 소량이 될 수도 있습니다. 예를 들어, 소량의 시료의 부피는 약 1000 μL 이하이거나, 약 250 μL 이하이거나, 약 150 μL 이하이거나, 약 100 μL 이하이거나, 약 75 μL 이하이거나, 약 50 μL 이하이거나, 약 40 μL 이하이거나, 약 20 μL 이하이거나, 약 10 μL 이하이거나 또는 기타 작은 양이 될 수도 있습니다. 시료 처리 장치는 단일 시료에 대해 다중 분석 검사(multiplexed assays)를 수행하도록 구성할 수도 있습니다. 다수의 분석 검사들은 동시에 실행될 수 있습니다; 순차적으로 실행될 수 있습니다; 또는 일부 분석 검사는 다른 분석 검사들이 순차적으로 실행되는 동안 동시에 실행될 수도 있습니다. 하나 또는 그 이상의 컨트롤 분석 검사(control assays) 및/또는 교정기(calibrators, 예를 들어, 분석 검사/검사를 위한 교정기의 컨트롤이 있는 구성 포함)를 장치에 통합할 수 있으며; 컨트롤 분석 검사(control assays)와 교정기에 대한 분석 검사(assay on calibrators)를, 시료에 대한 분석 검사를 수행하는 동안 동시에 수행하거나, 시료에 대한 분석 검사를 수행하기 전후에 수행하거나, 또는 이런 것들의 조합을 이용할 수 있습니다. 실시예에서, 모든 시료 분석 검사 작업이나 단계는 단일 장치에 의해 수행됩니다. 실시예에서, 다수의 분석 검사 작업 또는 단계 모두를 단일 장치의 하우징 내에서 수행할 수 있습니다. 실시예에서, 대부분의 시료 분석 검사 작업이나 단계, 다수의 분석 검사의 작업이나 단계는 단일 장치에 의해 수행되고, 단일 장치의 하우징 내에서 수행될 수 있습니다. 실시예에서, 많은 시료 분석 검사 작업이나 단계, 다수의 분석 검사의 작업이나 단계는 단일 장치에 의해 수행되고, 단일 장치의 하우징 내에서 수행될 수 있습니다. 실시예에서, 시료 처리, 준비, 분석 검사 작업 또는 단계는 하나 이상의 장치에 의해 수행될 수 있습니다.
실시예에서, 다수의 분석 검사 모두는 짧은 기간 내에 수행될 수도 있습니다. 실시예에서, 이런 짧은 기간은 약 3 시간 이하, 약 2 시간 이하, 약 1 시간 이하, 약 40 분 이하, 약 30 분 이하, 약 25 분 이하, 약 20 분 이하, 약 15 분 이하, 약 10 분 이하, 약 5 분 이하, 약 4 분 이하, 약 3 분 이하, 약 2 분 이하, 약 1 분 이하 또는 기타 짧은 시간 간격이 될 수도 있습니다.
시료 처리 장치는 시료와 관련된 하나 또는 그 이상의 신호를 탐지하도록 구성될 수도 있습니다. 시료 처리 장치는 시료의 하나 또는 그 이상의 특성을 식별하도록 구성될 수도 있습니다. 예를 들어, 시료 처리 장치는 시료(예를 들어, 체액, 분비물, 조직 또는 기타 시료)에 들어 있는 하나의 피분석물 또는 다수의 피분석물(analytes)의 유무(presence)나 농도, 또는 질병 상태의 유무를 탐지하도록 구성할 수 있습니다. 그렇지 않은 경우, 시료 처리 장치는 시료에 들어 있는 하나 또는 그 이상의 피분석물(질병 상태를 나타내는 것일 수도 있음)의 유무나 농도 또는 질병 상태를 탐지하기 위해 분석할 수 있는, 신호 또는 신호들을 탐지하도록 구성할 수 있습니다. 신호는 장치 내에서 분석하거나 다른 위치에서 분석할 수도 있습니다. 임상 검사 수행에는 수집한 데이터의 분석 또는 비교가 포함되거나 포함되지 않을 수도 있습니다.
화학 반응 또는 기타 처리 단계는, 시료가 있거나 또는 없이, 수행할 수도 있습니다. 장치를 사용하여 준비하거나 수행할 수 있는 단계, 검사, 또는 분석 검사의 예에는 다음이 포함되나 이런 것들에만 국한되지는 않습니다: 핵산 분석 검사, 수용기 기반 분석 검사(receptor-based assay), 혈구계산 분석 검사(cytometric assay), 비색 분석 검사(colorimetric assay), 효소 분석 검사, 전기영동 분석 검사(electrophoretic assay), 전기 화학 분석 검사(electrochemical assay), 분광 분석 검사(spectroscopic assay), 크로마토그래피 분석 검사, 현미경 분석 검사, 국소 분석 검사(topographic assay), 열량 측정 분석 검사(calorimetric assay), 비탁 분석 검사(turbidimetric assay), 응집 분석 검사(agglutination assay), 방사선동위원소 분석 검사(radioisotope assay), 점성도 분석 검사(viscometric assay), 응고 분석 검사(coagulation assay), 응고 시간 분석 검사(clotting time assay), 단백질 합성 분석 검사(protein synthesis assay), 조직학 분석 검사(histological assay), 배양 분석 검사(culture assay), 삼투성 분석 검사(osmolarity assay), 및/또는 기타 분석 검사, 원심분리, 분리, 걸러내기, 희석, 농축(enriching), 정제(purification), 침전, 분쇄(pulverization), 배양, 피펫 작업, 이동, 세포 용해(lysis), 기타 시료 준비 작업 또는 단계, 또는 이런 것들의 조합. 장치를 사용하여 준비하거나 수행할 수 있는 단계, 검사, 또는 분석 검사에는 현미경 검사, 혈구계산 및 기타 이미지 준비 및 이용 기술을 포함하여, 이미지 확보가 포함될 수 있습니다. 장치를 사용하여 준비하거나 수행할 수 있는 단계, 검사, 또는 분석 검사에는 조직학 평가(assessment of histology), 형태학(morphology), 운동학(kinematics), 역학(dynamics), 및/또는 시료의 상태 등을 추가로 포함할 수 있으며, 이것에는 세포에 대한 평가도 포함될 수 있습니다.
장치는 짧은 시간 동안 이 모든 단계를(예를 들어, 단일 장치로 수행하는 단계 또는 작업) 장치 내에서 수행할 수 있습니다. 장치는 짧은 시간 동안 이 모든 단계를 단일 시료에 대해 장치 내에서 수행할 수 있습니다. 예를 들어, 피험자로부터 시료를 수집하는 것에서 데이터를 전송 및/또는 분석 검사할 때까지 약 3 시간 이하, 2 시간 이하, 1 시간 이하, 50 분 이하, 45 분 이하, 40 분 이하, 30 분 이하, 20 분 이하, 15 분 이하, 10 분 이하, 5 분 이하, 4 분 이하, 3 분 이하, 2 분 이하, 1 분 이하, 또는 이보다 더 적은 시간이 걸릴 수도 있습니다. 장치 내에 시료를 받아 들이는 것에서 이런 시료에 대한 장치로 데이터를 전송 및/또는 분석 검사하는 데 걸리는 시간은 해당 시료에 대해 수행하는 단계, 검사 또는 분석 검사의 개수와 종류에 따라 달라질 수 있습니다. 피험자로부터 장치 내에 시료를 받아 들이는 것에서 이런 시료에 대한 장치로 데이터를 전송 및/또는 분석 검사하는 데 걸리는 시간은 약 3 시간 이하, 2 시간 이하, 1 시간 이하, 50 분 이하, 45 분 이하, 40 분 이하, 30 분 이하, 20 분 이하, 15 분 이하, 10 분 이하, 5 분 이하, 4 분 이하, 3 분 이하, 2 분 이하, 1 분 이하, 또는 이보다 더 적은 시간이 걸릴 수도 있습니다.
장치는, 시료를 처리하거나 분석 검사한 후에, 생체 시료 같은 시료를 폐기 처리하기 위해, 시료를 준비하도록 구성할 수 있습니다.
실시예에서, 시료 처리 장치는 시료로부터 확보한 데이터를 전송하도록 구성될 수 있습니다. 실시예에서, 시료 처리 장치는 네트워크 상에서 통신하도록 구성될 수도 있습니다. 시료 처리 장치에는 네트워크와 연결할 수 있는 통신 모듈이 포함되어 있을 수도 있습니다. 시료 처리 장치는 유선 또는 무선 연결을 통해 네트워크와 연결할 수도 있습니다. 네트워크는 근거리 통신망(LAN) 또는 인터넷 같은 광역 통신망(WAN)이 될 수도 있습니다. 일부 실시예에서, 네트워크는 개인 통신망(personal area network)이 될 수도 있습니다. 네트워크에는 클라우드가 포함될 수도 있습니다. 시료 처리 장치는, 시료 처리 장치를 네트워크에 연결하는 데 필요한, 중간 장치가 있거나 없이 네트워크에 연결할 수도 있습니다. 시료 처리 장치는 다음과 같은 다른 네트워크 장치와 네트워크를 통해 통신할 수 있으나, 그러나 이런 장치들에만 국한되지는 않습니다: 개인용 컴퓨터, 서버 컴퓨터, 랩톱 컴퓨터; Windows CE 장치 같은 개인용 디지털 단말기(PDAs); 휴대전화기, 스마트폰(예를 들어, iPhone, Android, Blackberry), 위치 인식 휴대용 전화기(GPS); 네트워크 연결 로밍 장치 같은 로밍 장치; 무선 이메일 장치 같은 무선 장치 또는 컴퓨터 네트워크와 무선으로 통신할 수 있는 기타 장치; 네트워크 상에서 통신할 수 있거나 전자 거래를 처리할 수 있는 기타 종류의 네트워크 장치. 이런 통신에는 클라우드 컴퓨팅 인프라(infrastructure) 또는 다른 장치에서 액세스 가능한 기타 종류의 데이터 스토리지 인프라에 데이터를 제공하는 기능이 포함될 수 있습니다.
시료 처리 장치는 시료에 대한 데이터를, 예를 들어, 보건 전문의, 보건 전문의의 검사실 또는 기타 관련 시설 또는 관계자에게 보낼 수도 있습니다. 하나 또는 그 이상의 검사실, 보건 전문의, 또는 피험자는 시료 처리 장치에서 제공된 데이터를 받거나 액세스(또는 열람)할 수 있는 네트워크를 보유할 수도 있습니다. 시료 처리 장치는 시료에 대한 데이터를 데이터베이스에 제공하도록 구성될 수도 있습니다. 시료 처리 장치는 시료에 대한 데이터를 전자 의료 기록 시스템, 검사실 정보 시스템, 검사실 자동화 시스템, 기타 시스템 또는 소프트웨어에 제공하도록 구성될 수도 있습니다. 시료 처리 장치는 보고서 형식으로 데이터를 제공할 수도 있습니다.
검사실, 장치, 기타 단일체(또는 기관, entity) 또는 소프트웨어는 시료에 대한 데이터를 실시간으로 분석할 수도 있습니다. 소프트웨어 시스템은 화학 분석 및/또는 병리 분석을 수행할 수도 있으며, 이런 것들은 검사실, 임상실, 특수 또는 전문가 등에게 배포될 수도 있습니다. 분석에는 시료에 대한 정성적(qualitative) 및/또는 정량적(quantitative) 평가가 포함될 수도 있습니다. 데이터 분석에는, 시료에 대해, 차후(subsequent) 정성적(qualitative) 및/또는 정량적(quantitative) 평가가 포함될 수도 있습니다. 선택적으로, 미가공 데이터(raw data), 처리 전 데이터(pre-processed data) 또는 분석된 데이터(analyzed data)를 기반으로 보고서를 생성할 수도 있습니다. 이런 보고서는 시료에서 얻은 데이터의 기밀성(confidentiality)을 유지하고, 시료를 채취한 피험자에 대한 신원 정보, 기타 정보, 데이터의 분석 등에 대한 기밀성과 기타 기밀 정보를 유지하도록 준비될 수도 있습니다. 보고서 및/또는 데이터는 보건 전문의에게 전송될 수도 있습니다. 시료 처리 장치를 사용하여 확보한 데이터, 이런 데이터의 분석, 또는 보고서는 데이터베이스, 전자 의료 기록 시스템, 검사실 정보 시스템, 검사실 자동화 시스템, 기타 시스템 또는 소프트웨어에 제공할 수도 있습니다.
본 문서에 공개된 복합체(complexes), 구성물(compositions), 항체(antibodies) 또는 기타 시약을 사용하거나, 함께 사용할 수도 있는, 시약, 분석 검사, 방법, 키트, 장치의 예시에 대한 설명과 공개는 다음 특허(들)에서 찾아볼 수 있습니다: 미국 특허 8,088,593; 미국 특허 8,380,541; 미국 특허 출원 일련 번호 13/769,798, 2013년 2월 접수; 미국 특허 출원 일련 번호 13/769,779, 2013년 2월 접수; 미국 특허 출원 일련 번호 13/244,947, 2011년 9월 16일 접수; PCT/US2012/57155, 2012년 9월 25일 접수; 미국 특허 출원 일련 번호 13/244,946, 2011년 9월 26일 접수; 미국 특허 출원 13/244,949, 2011년 9월 26일 접수; 및 미국 특허 출원 일련 번호 61/673,245, 2011년 9월 26일 접수, 특허와 특허 출원의 공개는 그 자체로서 참조에 의해 완전히 통합됩니다.
지질 및 지질 분획 방법과 분석 검사
본 문서에 공개된 새로운 방법과 분석 검사는 출원인들의 발견을 이용합니다. 이런 발견에서 콜레스테롤 변종들(sub-species)이 분명한 비율(또는 속도)로 측정된 결과물로 변환됩니다. 따라서, HDL-C는 매우 신속하게 결과물로 변환되고, LDL-C는 HDL-C가 결과물로 변환되는 것 보다는 더 느리게 결과물로 변환되고, 유미지립(chylomicron)은 훨씬 더 느리게 변환됩니다. 총콜레스테롤(total cholesterol)이 결과물로 완전하게 변환되는 것은 HDL-C 또는 LDL-C가 결과물로 변환되는 것보다 훨씬 더 느립니다. 결과물로 변환되는 속도의 이런 차이로 인해, 서로 다른 종류의 지질단백질로부터 콜레스테롤 측정이 서로 다른 시점에서 단일 용액으로 가능하므로, 이런 측정에 필요한 단계 수를 줄이고 가능한 오차를 줄여, 절차를 단순화시킬 수 있습니다. 본 문서에 공개된 실시예에서, "결과물"은 서양고추냉이 과산화효소(horseradish peroxidase) 같은 과산화효소로 형성된, 착색된 결과물 같은, 착색된 결과물이 될 수도 있습니다. 착색된 결과물을, 예를 들어, (1) 매우 이른 시점(예를 들어, 0 - 2 분), 약간 이후 시점(예를 들어, 2- 6 분) 및 늦은 시점(예를 들어, 10 분 또는 이후)에서 측정하여, 가장 중요한 콜레스테롤 소분획(HDL-C 및 LDL-C)과 총콜레스테롤(T-C)을 단일 분석 검사로 측정할 수 있습니다. 중요하게도, 분석 검사는 단일 반응 혼합물을 사용하여 수행되므로, 총콜레스테롤에 대한 콜레스테롤 소분획(cholesterol sub-fractions)의 비율은 서로 다른 반응 혼합물을 사용하여 서로 다른 여러 분석 검사로 수행하는 것보다 더 정밀하고 정확하게 결정할 수 있습니다. 또한, 본 문서에 공개된 분석 검사와 방법은 단일 반응 혼합물을 사용하여 수행되므로, 콜레스테롤 소분획과 총콜레스테롤 값을 확보하기 위해 3 번 이상의 분석 검사가 필요했던, 이전 방법 및 분석 검사와 비교할 경우, 콜레스테롤 측정 비용을 크게 줄일 수 있습니다.
본 문서에 공개된 방법과 분석 검사에서, 지질분해효소(예를 들어, 콜레스테롤 에스테르분해효소)와 산화효소(예를 들어, 콜레스테롤 산화효소)는 각각의 콜레스테롤 함유 지질단백질 분획에 대해 차등 비율(또는 속도, differential rate)로 작용(반응)합니다. 지질단백질들은 포함하고 있는 지질(lipids)의 구성물(예를 들어, 중성지방, 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르 및 인지질)이 다르고, 혈액 속에서 이동이 용이하도록 지질의 용해를 돕는 아포리포 단백질(apo-lipoproteins)에서 다릅니다. 지질단백질은 매우 불균일하지만(heterogeneous), 임상 진단용으로 지질의 상태를 평가할 때 가장 유용할 것으로 여겨지는 분획은 물리적 화학적 특성이 충분히 분명하고, 원심력을 받을 때 또는 전기영동법으로 분리할 때(electrophoretic separation)의 이동 비율(속도)을 이용하여, 선행기술의 방법으로 분리되어 왔습니다.
선행 기술의 방법과는 대조적으로, 본 문서에 공개된 분석 검사와 방법 및 본 문서에 공개된 시약은, 동일한 용액 속에서 상당한 침전 없이, HDL, LDL 및 VLDL 지질단백질이 분석 검사 화학물질과 충분히 다른 비율(속도)로 반응할 수 있는, 조건을 제공하므로, 단일 분석 검사로 서로 다른 시점에서 여러 번 측정하여, 각 분획을 측정할 수 있습니다. 그러므로, 본 문서에 공개된 한 예에서, HDL-C는 약 2 분 만에 완전히 소모되지만, LDL-C는 측정된 결과물로 완전히 변환되는 데 약 6 분이 필요합니다. 약간 더 오래 기다리면 (예를 들어, 10 분 또는 그 이상), 시료에 들어 있는 모든 콜레스테롤이 변환됩니다. 본 문서에 공개된 방법에 따라, 총콜레스테롤은 착색된 결과물의 흡광도를 측정하여, 분석 검사의 끝 시점에서 추정할 수 있습니다. 본 분서에 공개된 방법에 따라, LDL-C는 시간 범위(예를 들어, 2 - 6 분)에 대해 착색 생성 비율(속도)을 이용하여 측정할 수 있습니다. 반응의 가장 이른 초기 동안(예를 들어, 0 - 2 분), HDL과 LDL 모두가 소모됩니다; HDL의 기여 정도(contribution)는 분석 검사 내에서 측정한 LDL 농도를 사용하여 추정할 수 있습니다(예를 들어, 분석 검사로 얻은 측정값으로부터 LDL 농도를 알 수 있을 때). 본 문서에 공개된 것처럼, 계산하는 방법이 확정되었습니다. 그러므로, 현재 방법은 비율 데이터만을 사용하여 HDL-C, LDL-C 및 총콜레스테롤을 계산할 수 있습니다. LDL-C는 분석 검사 반응의 중간 부분에서 확보한 역학 데이터(kinetic data)를 사용하여 계산할 수 있고, HDL-C는, LDL의 기여(contribution)를 허용하는, 반응의 초기 부분(예를 들어, 분석 검사 시작후 약 0 - 2 분)으로부터 추정할 수 있습니다.
출원인들은 본 문서에 공개된 분석 검사의 한 면은 분석 검사 조건(예를 들어, 시약, 프로토콜 및 온도)을 설정하는 것과 관련되어 있음을 발견했습니다. 이렇게 조건을 설정하여, 동일한 용액 속에서 지질단백질의 상당한 침전 없이, 분석 검사가 끝나기 전에 모든 지질단백질의 종류들(예를 들어, HDL, LDL 및 VLDL)의 반응이 근본적으로 완료되도록 하면서도, HDL-C, LDL-C, 유미지립(chylomicrons) 및 VLDL-C를 착색된 결과물로 변환하는 반응 역학(kinetics of reactions)이 상당히 다른 비율(속도)로 진행되도록 합니다. 본 문서에 공개된 시약과 방법은, 상당한 지질단백질의 침전 없이, 단일 반응 혼합물을 사용하여 서로 다른 지질단백질 분획들 간에, 시간을 두고, 분별할 수 있도록 해주는, 조건을 제공합니다.
예를 들어, 본 문서에 공개된 조건하에서, HDL-C에 대한 진행 시간에는 1 분 미만에서 예측되는 반감기(half-time)가 있으며, LDL-C 변환에는 지연 단계가 있으며, 전반적인 굴곡 모양(sigmoid shape)이 약 3분 전후로 형성됩니다. 본 문서에 공개된 조건 하에서, 나머지 지질단백질 콜레스테롤(유미지립(chylomicrons)과 VLDL-C)은 휠씬 더 느리게 반응합니다(예를 들어, 반감기가 약 5분 또는 그 이상의 반감기). 서로 다른 종류의 지질단백질 콜레스테롤 사이에 이런 반감기의 차이와 반응역학(reaction kinetics)의 차이로 인해, 예를 들어, 분석 검사 동안 특정 시점에서 두 종류 이상으로부터 신호가 생성되도록 하여, 간단한 알고리즘으로 분석 검사 신호를 각각의 종류에 해당하는 신호로 분해(de-convolution)할 수 있습니다. 그러므로, 본 문서에 공개된 방법은 주요 지질단백질 분획에 들어 있는 콜레스테롤을 신속하고, 편리하며, 정확하게 결정할 수 있도록 해줍니다.
기존 선행 기술의 분석 검사에서, LDL과 VLDL은 다양한 시약들 중 하나를 사용하여 침전되었습니다. 예를 들어, 덱스트란 황산염과 마그네슘 이온은 음전하로 하전된 지질단백질 입자를 교상 결합(bridge)시켜, 예를 들어, LDL:Mg2 +:덱스트란 황산염:Mg2+:LDL 복합물(complexes)을 형성하도록 응집시킵니다. 이런 기존 분석 검사에서 침전물 형성에는 두 시약 모두의 정확한 비율의 특정 농도가 요구됩니다. 이런 기존 분석 검사에서 침전물은 원심분리나 필터를 사용하여 제거할 수 있습니다. LDL과 VLDL을 침전시키는 다른 알려진 시약에는 포스포텅스텐산(phosphotungstic acid), 폴리비닐 황산염(polyvinyl sulfate), 염화마그네슘 함유 헤파린(Heparin with Manganese Chloride), 폴리에틸렌 글리콜(Polyethylene glycol) (PEG) 6000, 염화마그네슘 함유 나트륨 포스포텅스테이트(Sodium Phosphotungstate with Magnesium Chloride) 및 anti-apolipoprotein-B-specific 단클론성 항체(monoclonal antibodies) 등이 있습니다.
그에 반해서, 본 문서에서 공개된 분석 검사와 방법에 사용할 시약의 공식(formulations)은 지질단백질의 침전 없이 상기 설명한 역학적 구별화(kinetic differentiation)를 달성하기 위해 고안되었습니다. 본 문서에 공개된 시약에서, 마그네슘 이온과 덱스트란 황산염과의 결합체는 지질단백질의 침전이 근본적으로 없는 상태에서 형성됩니다. α-시클로덱스트린(cyclodextrin) 같은 다양한 계면활성제와 기타 시약은 지질단백질을 용해 가능 하도록 유지하는 데 적합합니다. LDL 및 VLDL 입자의 표면이 LDL 및 VLDL 콜레스테롤과 콜레스테롤 에스테르에 대한 접근을 제한하지만 차단하지 않는 방식으로 변경됩니다. LDL과 VLDL 입자의 표면을 이렇게 변경하는 데 알맞는 시약과 방법을 사용하면, 이런 지질단백질 종류에서 착색된 결과물의 형성을 늦추는 데 효과적입니다.
표 3에 표시된 대표적인 시약 구성물은 저분자량 덱스트란 황산염을 사용하고, 선행 기술의 기존 방법과 비교할 때, 훨씬 더 높은 농도의 마그네슘 이온을 사용하고, 덱트스란 황산염에 대한 마그네슘 이온의 비율이 훨씬 더 높습니다. 분석 검사의 첫 단계에서, 현재 방법과 기존 방법 모두에서, 시료의 첨가로 인해, 이런 성분의 농도는 반으로 줄어듭니다.
특정 성분들과 이런 성분들의 양은 본 문서에 공개된 방법을 수행할 때 사용하는 시약에서 달라질 수도 있음을 인식해야 합니다. 표 3에 표시된 시약 구성물은 이런 방법에서 사용하는 데 적합한 수많은 시약들 중의 한 예입니다. 일반적으로, 시약에는 양이온이 포함되고, 이런 방법에서 사용하는 데 적합한 시약에 들어 있는 양이온은 선택적으로 마그네슘, 망간, 칼슘, 바륨 및 기타 2가 양이온이 될 수 있습니다. 본 문서에 공개된 방법에서 사용하기 위한 시약의 실시예에서, 2가 양이온의 농도는 약 0.1 mM ~ 약 20 mM 사이 범위가 될 수 있으며, 선택적으로 약 1 mM ~ 약 10 mM가 될 수 있고, 또는 선택적으로 약 2 mM ~ 약 8 mM가 될 수도 있습니다. 일반적으로, 시약에는 음전하로 하전된 다당류(polysaccharides)가 포함되어 있으며, 이런 방법에서 사용하는 데 적합한 시약에 들어 있는, 음전하로 하전된 다당류는 선택적으로 덱스트란 황산염 같은 덱스트란 에스테르입니다. 본 문서에 공개된 방법에서 사용하기 위한 시약의 실시예에서, 음전하로 하전된 다당류(예를 들어, 덱스트란 황산염)의 양은 약 0.1 g/L ~ 약 20 g/L 범위 내에 있게 되며, 선택적으로 약 0.3 g/L ~ 약 10 g/L, 또는 선택적으로 약 0.5 g/L ~ 약 5 g/L 사이 범위가 될 수 있습니다. 본 문서에 공개된 방법에서 사용하기 위한 시약의 특정 실시예에서, 음전하로 하전된 다당류(예를 들어, 덱스트란 황산염)의 분자량은 약 10,000 ~ 약 1,000,000 범위가 될 수 있으며, 선택적으로 약 20,000 ~ 약 500,000 범위, 선택적으로 약 25,000 ~ 약 100,000 범위, 또는 선택적으로 약 30,000 ~ 약 80,000 범위가 될 수 있습니다. 본 문서에 공개된 방법에서 사용하기 위한 시약의 특정 실시예에서, 2가 양이온에 대한 음전하로 하전된 다당류(예를 들어, 덱스트란 황산염)의 비율은 약 0.001 ~ 약 0.1 범위가 될 수 있으며, 선택적으로 약 0.001 ~ 약 0.05 범위, 선택적으로 약 0.002 ~ 약 0.02 범위, 또는 선택적으로 약 0.003 ~ 약 0.007 범위가 될 수 있습니다.
본 문서에 공개된 예에서, 콜레스테롤과 콜레스테롤 소분획의 컨트롤("기존 방식의") 측정(값)은 Advia® 1800 기계를 사용하고, Advia® 화학약품과 방법을 사용하고, Advia® 제품의 제조 및 공급사인 Siemens Healthcare Diagnostics (Tarrytown, NY 10591 USA)이 제안한 지침에 따라 수행되었습니다.
따라서, 위에서 설명한 것처럼, 분석 검사의 초기 시간 이후에 혈액 시료와 결합된 시약에서, 음전하로 하전된 다당류(덱스트란 에스테르, 예를 들어, 덱스트란 황산염), 선택적으로 음전하로 하전된 시클로덱스트린(α-시클로덱스트린(cyclodextrin) 황산염) 및 양이온(예를 들어, 마그네슘 같은 2가 양이온)을 제공하는, 시약, 분석 검사 및 방법은, 위에서 설명한 것처럼, 서로 다른 지질단백질 분획에 대해 콜레스테롤의 서로 다른 분해 속도를 제공하는 데 효과적이므로, 위에서 설명한 것처럼, 서로 다른 시점에서 및/또는 서로 다른 기간 동안, 반응의 진행을 측정하면, HDL-C, LDL-C, VLDL-C 및/또는 TC를 측정하고 결정하는 데 효과적입니다.
본 문서에 공개된 시약, 분석 검사 및 방법의 대체 실시예에서, 지질분해효소(예를 들어, 콜레스테롤 에스테르분해효소), 탈수효소(예를 들어, 콜레스테롤 탈수효소(cholesterol dehdrogenase)) 및 니코틴 아데닌 디뉴클레오티드(NAD: nicotine adenine dinucleotide)가 분석 검사 동안 결합할 수 있으며, 예를 들어, 혈액 시료를 시약 또는 시약들의 혼합물에 추가하고, 혈액 시료, 지질분해효소, 탈수효소(dehydrogenase) 및 NAD(예를 들어, 산화된 NAD+) 모두가 용액 속에 존재하여, 시료에 들어 있는 지질단백질의 콜레스테롤 에스테르에서 콜레스테롤을 방출하도록 지질단백질이 반응할 수 있으며, 탈수효소와 니코틴 아데닌 디누클레오티드(NAD)가 반응하여, 니코틴 아데닌 디누클레오티드의 탈산소화된(reduced) 형태(NADH)와 cholest-4-en-3-one 또는 콜레스테롤의 다른 형태를 제공하고, 착색된 결과물(예를 들어, NADH) 또는 기타 탐지 가능한 결과물을 제공할 수 있게 됩니다. 이런 대체 실시예에서, 음전하로 하전된 다당류(덱스트란 에스테르, 예를 들어, 덱스트란 황산염), 선택적으로 음전하로 하전된 시클로덱스트린(α-cyclodextrin) 및 양이온(예를 들어, 마그네슘 같은 2가 양이온), 이런 것들의 비슷한 양이, 위에서 설명한 것처럼, 초기 시간 이후 분석 검사 동안, 시약과 결합된 시약에 존재하고, 서로 다른 지질단백질 분획에 대해 콜레스테롤의 서로 다른 분해 속도를 제공하는 데 효과적이므로, 위에서 설명한 것처럼, 서로 다른 시점에서 및/또는 서로 다른 기간 동안, 반응의 진행을 측정하면, HDL-C, LDL-C, VLDL-C 및/또는 TC를 측정하고 결정하는 데 효과적입니다.
그러므로, 이런 대체 실시예에서, 니코틴 아데닌 디누클레오티드(nicotine adenine dinucleotide)는 착색제입니다. 위에서 설명한 것처럼, 콜레스테롤의 수치를 탐지하고 측정하는 데 효과적인, 분광 광도계(spectrophotometric) 또는 기타 수단을 사용하여, NADH를 탐지할 수도 있습니다. 예를 들어, NADH는 탐지할 수 있으며, NADH의 수치는 340 nm 파장 또는 340 nm가 중심에 들어 있는 파장 범위에서 흡광도를 측정하여 결정할 수 있습니다. NADH는 약 340 nm 파장의 빛으로 여기(excite)시키면, 약 440 nm 파장의 빛을 방출합니다; 그러므로 NADH는 약 340 nm 파장에서 여기하고(excite) 약 440 nm 파장에서 방출된 빛을 측정하여 탐지할 수 있습니다. NADH 수치(예를 들어, 혈액 시료에 들어 있는 콜레스테롤 수치)를 탐지하고 측정하기 위한 다른 방법에는, 디아포라아제(diaphorase) 같은 산화환원 매개체(redox mediator)가 있을 때, 테트라졸륨염(tetrazolium salt) 같은 산화환원에 민감한 분자를 사용하여, NADH 형성을 측정; 전류 측정법(amperometric methods); 및 NADH를 소모하는 발광법(luminogenic methods, 예를 들어, 박테리아성 루시페라아제(bacterial luciferase)를 사용하는, 루시페라아제-매개 빛 생성(luciferase-mediated light production)의 사용) 등이 포함됩니다.
상기 공개한 내용은 특정 구현과 관련하여 설명되었지만, 상기 설명과 뒤 따라 오는 예시(examples)는 설명하기 위한 용도이며, 본 발명의 범위를 제한하는 것이 아님을 인지해야 합니다. 본 발명의 범위 내에 있는 기타 면, 장점 및 변경 사항은 본 발명과 관련된, 해당 기술 분야에 지식을 갖춘 사람들에게는 분명합니다.
예
예시 1 화학 및 시약
콜레스테롤 분석 화학:
본 문서에 공개된 분석 검사는, 혈액 시료에서 발견되는 콜레스테롤 및 콜레스테롤 유도체(예를 들어, 콜레스테롤 에스테르)와 반응하여, 착색된 결과물을 형성하는 데 사용할 수 있습니다. 그림 1에 표시된 것처럼, 콜레스테롤 에스테르는 콜레스테롤 에스테르분해효소와 반응하여 자유 콜레스테롤(free cholesterol)을 제공할 수 있습니다. 자유 콜레스테롤은 콜레스테롤 산화효소와 산소와 반응하여 과산화수소를 형성할 수 있습니다. 이런 반응으로 형성된 과산화수소는 시료에 들어 있는 콜레스테롤의 양을 정량화하는 데 사용할 수 있습니다. 과산화수소는, 예를 들어, 착색제가 있을 때 또는 착색제를 사용하여, 과산화효소와 반응하여 착색된 결과물을 형성할 수도 있으며, 이런 반응을 탐지하고 정량화할 수도 있습니다. 예를 들어, 과산화수소는, 아미노안티피렌 화합물(예를 들어, 4-아미노안티피렌) 및 N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline 같은 서양고추냉이 과산화효소(horseradish peroxidase) 및 착색제가 있을 대, 반응하여 착색된 결과물(예를 들어, 그림 1에 표시된 Trinder (퀴논이민, quinoneimine) 염료)을 형성합니다.
콜레스테롤 분석 검사 시약:
두 개의 대표적인 시약인 AC와 BC에 대한 구성물은 아래에서 표 1과 표 2에 나열되어 있습니다. 시약 AC는 본 문서에 공개된 것처럼 첫 번째 시약의 예를 제공하고, 시약 BC는 본 문서에 공개된 것처럼 두 번째 시약의 예를 제공합니다. 시약 AC와 BC에는 표 1A와 표 1B에서 공개된 것과 같은 구성물이 있을 수 있습니다:
Figure pct00007
Figure pct00008
여기에서, "ALPS"는 N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline이고 "NaxPO4"는 NaH2PO4, Na2HPO4 및 Na3PO4이며, pH 농도를 약 pH 6 ~ 약 pH 8.5 사이를 제공하는 데 효과적인 비율; 즉, 약 pH 7.4.
예를 들어, 특정 실시예에서, 시약 AC와 BC에는 아래에 있는 표 2A와 표 2B에 나열된 것과 같은 구성물이 들어 있을 수도 있습니다:
Figure pct00009
Figure pct00010
여기에서, "ALPS"는 N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline 이고, "NaxPO4"는 NaH2PO4, Na2HPO4 및 Na3PO4 이며, pH 농도를 약 pH 6 ~ 약 pH 8.5 사이를 제공하는 데 효과적인 비율인, 예를 들어, 약 pH 7.4입니다.
표 3에는, 본 문서에 공개된 새로운 시약과 분석 검사에서 사용된 덱스트란 황산염과 염화마그네슘의 양과, 선행기술의 방법에 사용된 덱스트란 황산염과 염화마그네슘의 양이 비교되어 있습니다. 일부 선행 기술의 분석 검사에서, 덱스트란 황산염과 염화마그네슘은 콜레스테롤과 콜레스테롤 에스테르에 대한 분석 검사 동안 지질단백질을 침전시키는 데 사용될 수도 있습니다. 표 3에서 설명된 것처럼, 현재 분석 검사에는 다른 농도의 덱스트란 황산염과 염화마그네슘이 포함되어 있으므로, 현재의 분석 검사에서 지질단백질의 상당한 침전은 없습니다.
Figure pct00011
예 2 - 콜레스테롤 분석 검사
1) 37℃에서, 30μL 시료(물이나 인산완충식염수(PBS)와 1:30으로 희석한 순수 혈장 또는 혈청)는 384-웰 마이크로플레이트 리더(MTP)의 한 웰(well)에서 20μL의 시약 AC와 혼합되었습니다.
2) 플레이트를 1800 rpm으로 약 2 초간 흔들었습니다.
3) 플레이트는 37℃에서 5 분간 배양되었습니다.
4) 20 μL의 시약 BC가 추가되었습니다. 플레이트를 1800 rpm(1분 당 회전 수)으로 2 초 동안 흔들었습니다.
5) 플레이트는 주어진 시간 간격 동안 흡광도를 판독할 수 있는 분광 광도계(spectrophotometer) 속에서, 37℃로 12 분간 배양되었습니다.
6) 흡광도 (A)는 매 30 초마다 560nm 및 700nm에서 기록되었습니다(M5 분광 광도계(Molecular Devices, Sunnyvale, CA)를 사용하여 측정했습니다). 더 긴 간격을 포함하여, 다른 간격도 적합합니다.
시료:
그림 2에는, 예(examples)에 표시된 연구에서 사용된 임상 혈청 시료(중성지방에 대한 결과 포함)에서 측정한, 지질단백질의 지질 함유량이 표시되어 있습니다. 알 수 있는 것처럼, 다양한 지질단백질 파생형(sub-form)에 들어 있는 콜레스테롤 사이에는 연관성이 거의 없습니다. 또한, 콜레스테롤 수준은 정상적인 피험자와 지질혈증(lipemia)이 있는 피험자에게서 보이는 범위로 퍼져 있으며, 본 발명의 방법에 사용하기 좋은 검사 세트를 제공했습니다. 아래에 있는 데이터에서, 시료는 Advia® Chemistry System (Siemens Healthcare Diagnostics, Inc., Tarrytown, NY)를 사용하여, 참조 방법(reference method)으로 분석되었습니다.
콜레스테롤 분석 검사 반응의 시간 경로:
현재 콜레스테롤 분석 검사 방법에서 색 형성(color formation)은 여러 단계(several phases)에 걸쳐 발생합니다. 이런 단계가 있는 색 형성의 예는, 그림 3에 표시된 것처럼, 실례 실험(exemplary experiment)에서 측정된 시료에 대해 얻은 결과에 표시되어 있습니다(시간은 시약 BC를 추가한 이후의 시간을 뜻합니다). 단계에는 다음이 포함됩니다:
1. 신속한 단계(0 ~ 약 2 분), HDL-C와 LDL-C가 소모됩니다.
2. 약간의 "처진 부분"에 해당하는 완곡부 처리 과정(sigmoidal process), 이후에 색 형성이 신속하게 상승합니다(약 2 - 6 분), 이 때 나머지 LDL-C가 소모됩니다.
3. 세 번째 단계에서 VLDL-콜레스테롤은 비교적으로 느리게 소모됩니다(액 6 - 10 분 이상).
현재 방법을 사용한 지질단백질 종류의 측정 및 참조 방법(reference methods)의 결과와 연관성:
일부 경우에서, 상업적으로 사용 가능한 컨트롤 물질(control materials)도 측정되었습니다. TC는 10 분 에서 ΔA (560-700 nm)을 사용하여 측정되었습니다. LDL-C는 2 분과 6 분 사이에 발생한 ΔA (560-700 nm)의 차(difference)를 사용하여 측정되었습니다. HDL-C는 ΔAt를 사용하여 측정되었습니다. 이것은 0 ~ 2 분 사이에 발생한 ΔA (560-700 nm)의 변화량입니다. (ΔA는 560 nm에서 측정한 흡광도와 700 nm에서 측정한 흡광도 사이의 차(difference)입니다.) 현재 실시예의 실험에서, ΔA는 M5 분광 광도계(Molecular Devices, Sunnyvale, CA)를 사용하여 측정되었습니다.
"참조 분석 검사"가 표시된 측정은 Siemens Advia® 화학품과 방법(Siemens Healthcare Diagnostics, Inc.)을 사용하여 측정되었습니다.
임상 분석 검사의 요구조건을 충족하는, 다음 연관성(또는 상관관계, correlations)을 얻었습니다.
LDL-콜레스테롤: 15 개의 시료와 컨트롤(controls): y = 0.989*x; R2 = 0.978; x range: 7.7 - 230 mg/dL; x mean =118.1; 추정치의 표준 오차/Mean = 6.8 %
HDL-콜레스테롤: 10 개의 시료에 대해: y = 0.98*x + 1.35; R2 = 0.98; x range 40.3 - 103.4 mg/dL; x mean 67.2 mg/dL; 추정치의 표준 오차/Mean = 4.0 %
총콜레스테롤: 14 개의 시료와 컨트롤(controls)에 대해: y = 0.977*x; R2 = 0.980; x range 15 - 304 mg/dL; x mean =195.6 mg/dL; 추정치의 표준 오차/Mean6 = 4.3 % (여기에서 *는 곱셈 기호).
현재 방법과 참조 방법의 이런 결과는 그림 4에서 그래프 형식으로 표시되어 있습니다. 현재 방법과 참조 방법의 LDL-C 결과는 그림 4A에서 그래프 형식으로 표시되어 있습니다. 현재 방법과 참조 방법의 HDL-C 결과는 그림 4B에서 그래프 형식으로 표시되어 있습니다. 현재 방법과 참조 방법의 TC 결과는 그림 4C에서 그래프 형식으로 표시되어 있습니다.
HDL-C의 계산식은, 동일한 분석 검사와 0 ~ 2 분 사이에서 측정한 속도에서 얻은 LDL-C의 추정치를 사용하여, 유도되었습니다(여기에서, *는 곱셈 기호):
Figure pct00012
HDL-C의 계산식은, 동일한 분석 검사와 0 ~ 2 분 사이에서 측정한 속도에서 얻은 LDL-C의 추정치를 사용하여, 유도되었습니다(여기에서, *는 곱셈 기호):
Figure pct00013
두 인수 모두(LDL-C and (ΔA (560-700 nm), 2min - (ΔA (560-700 nm), 0 min)는 매우 크게 상관되어 있습니다(p < 0.0001).
여기에 제시된 분석 검사의 결과를 여러 번 회기 분석하고, 흡광도 데이터로부터 측정한 흡광도, TC 및 LDL-C의 값들을 시행착오 방식으로 조합하여, 상기 계산식이 유도되었습니다.
결론: 특정 시약 공식(specific reagent formulations)과 반응 결과물의 역학적 측정을 사용하면, 총콜레스테롤, LDL 및 HDL 콜레스테롤을 동시에 측정할 수 있습니다.
예 3 중성지방 분석 검사
시료에 들어 있는 중성지방이 지방산과 글리세롤로 분해되고, 글리세롤 수치는 그림 1B에 표시된 것처럼 광도를 이용하여 측정하는, 분석 검사를 사용하여, 중성지방(TG)의 수치를 측정할 수 있습니다. 글리세롤은 아데노신 3인산(ATP: adenosine triphosphate)이 있을 때 인산화(phosphorylated)될 수 있으며, 결과로 생긴 글리세롤 인산(glycerol phosphate)은 글리세롤 3-인산 산화효소(glycerol 3-phosphate oxidase)에 의해 산화되어 디히드록시아세톤인산(dihydroxyacetone phosphate)과 과산화수소를 생성합니다. 과산화수소는 서양고추냉이 과산화효소(horseradish peroxidase, 또는 기타 과산화효소)와 함께 착색제와 반응하여 염료(dye)를 생성할 수 있으며, 이 염료를 분광 광도계로 측정하여 시료의 중성지방 함유량을 결정할 수 있습니다. 중성지방(TG) 분석 검사에서 사용하는, 대표적인 시약인 시약 AT와 시약 BT는 표 4에 표시되어 있습니다. 현재 예에 표시된 것처럼, N-Ethyl-N-(3-sulfopropyl) 아닐린(aniline)과 함께 4-아미노안티피렌(4-aminoantipyrene)은 과산화수소가 있을 때 서양고추냉이 과산화효소(horseradish peroxidase)와 반응하여 자주색 퀴논이민 염료(quinoneimine dye)를 형성합니다; 형성된 염료의 양은, 아래 절차에서 표시된 것처럼, 그림 5에 보고된 실험 결과에서 표시된 것처럼, 560 nm에서 흡광도를 측정하여 결정할 수 있습니다.
중성지방 분석 검사 시약
이 분석 검사는 과산화수소(H2O2) 생성의 결과와 효소 연쇄 반응을 사용합니다. 과산화수소는 서양고추냉이 과산화효소(HRP: Horseradish Peroxidase)에 의해 사용되어 자주색 결과물을 생성합니다. 이런 분석 검사에 사용된 시약에는 시약 AT와 시약 BT가 있습니다. 이런 시약으로 적합한 구성물의 예는 표 4A에 표시되어 있으며, 대표적인 시약 AT와 BT의 구성물은 표 4B에 표시되어 있습니다.
Figure pct00014
대표적인 시약 AT와 BT는 표 4B에 명시된 성분과 양에 따라 만들 수 있습니다.
Figure pct00015
EDTA -항응고 플라즈마의 혈청에 들어 있는 중성지방에 대한 대표적인 분석 검사 절차:
1. 시료(및/또는 교정기(calibrators))는 물과 1:30으로 희석되었습니다.
2. 시약과 희석된 시료는, 분석 검사하기 전에, 37℃로 온도를 맞췄습니다.
3. 표 4B에 설명된 것처럼, 20 μL의 각각의 희석된 시료, 시약 AT 및 시약 BT은 384-웰 마이크로티터 플레이트(384-well microtiter plate)의 웰 속에서 혼합되었습니다.
4. 표 4B에 설명된 것처럼, 희석된 시료, 시약 AT 및 시약 BT의 혼합물은 10 분 동안 37℃에서 배양되었습니다.
5. 단계 4 후에, 560 nm에서 흡광도를 마이크로티터플레이트 리더(Molecular Devices M5)에서 값을 읽었습니다.
위에서 설명한 방법에 따라 측정한 TG 측정값은 그림 5에 표시되어 있습니다(데이터 점들의 위치를 제공하는 측정값들은 세로 축에 표시되어 있습니다); 데이터 점들은 선행 기술의 방법(Teco Diagnostics에서 제안한 방법, 상용으로 구입 가능한 Teco 키트(Teco Diagnostics, Anaheim, CA 92807)의 시약 사용)에 따라 측정한 TG 측정값에 대해 도표화되었습니다. 현재 방법으로 측정한 TG는 선행 기술의 방법으로 측정한 TG 측정값과 매우 잘 일치합니다. 선행 기술 방법과 현재 방법 간에 완전 일치할 경우, 이런 점들을 지나는 선의 기울기는 1이 됩니다. 그림 5에 표시된 것처럼, 이런 점들을 지나 가도록 그린 선형 회기 선의 기울기는 거의 1(기울기 = 0.9536)에 가깝습니다. 그러므로, 이 예에서 표시된 TG 결정 방법들은 잘 받아 들여진 다른 방법의 TG 결정 방법과 연관성이 매우 큽니다.
예 4, 혈액 콜레스테롤과 중성지방의 통합 측정
콜레스테롤(C)과 중성지방(TG)은 동일한 혈액 시료의 분액(aliquots)에 대해 측정하거나, 동일한 환자로부터 얻은 혈액 시료의 다른 부분에 대해 측정하여, 콜레스테롤(C) 또는 중성지방(TG) 하나만 특정하여 얻을 수 있는 것보다 더 완전한 임상 정보를 제공합니다. 또한, 혈액 시료에 들어 있는 VLDL의 측정값을 제공하기 위해 TG 측정값을 사용할 수도 있습니다. 그러므로, LDL-C, HDL-C, TC, VLDL-C 및 TG의 측정값은 예 1, 2 및 3의 방법과 다음 식으로 VLDL-C를 추정하여 확보할 수 있습니다:
VLDL-C = TG/5.
TC는 본 문서에 공개된 방법과 분석 검사에 따라 직접 측정할 수 있습니다; 이와 유사하게, HDL-C 및 LDL-C은 본 문서에 공개된 방법과 분석 검사에 따라 직접 측정할 수 있습니다. TC는 시료에 들어 있는 콜레스테롤의 전체에 대한 측정값이기 때문에, TC는 시료에 들어 있는 지질단백질 분획의 콜레스테롤 합(sum)이므로, TC = HDL-C + LDL-C + VLDL-C 관계식으로 추정할 수 있습니다. 따라서, 이 식을 다시 정리하여, 다음과 같은 식으로, HDL-C, LDL-C 및 TC의 측정값으로 VLDL-C를 더 잘 결정할 수 있습니다:
VLDL-C = TC - HDL-C - LDL-C
VLDL-C는 본 문서에 공개된 방법과 식에 따라 결정할 수 있습니다.
위에서 설명한 것처럼, HDL-C, LDL-C 및 TC의 측정값으로 VLDL-C를 결정하고, TG, HDL-C, LDL-C 및 TC의 측정값으로 VLDL-C를 결정하는 추가적인 방법은 본 문서에 공개되었습니다. 예를 들어, 실시예에서, 피험자 혈액의 단일 시료 또는 시료의 단일 부분에 들어 있는 VLDL-C의 수준은 다음 관계식으로 계산할 수 있습니다:
Figure pct00016
여기에서, α, β, γ, δ 및 a1은 TC, HDL-C, LDL-C, TG 및 곱셈항 (TG+ε)(TC+κ)과 각각 곱하는 상수입니다(곱셈항에서, 한 괄호 속에 들어 있는 항은 다른 괄호 속에 들어 있는 항과 곱셈합니다); 여기에서, ε, κ 및 λ는 TG, TC 및 기타 모든 인수들의 합에 대해 각각 더해주는 덧셈 상수입니다. 특정 실시예에서, γ=0 일 때, 피험자 혈액의 단일 시료 또는 시료의 단일 부분에 들어 있는 VLDL-C의 수준은 이런 측정값들로부터, 예를 들어, 다음 관계식으로 계산할 수 있습니다:
VLDL-C = αTC + βHDL-C + δTG + a1(TG+ε)(TC+κ) + λ
여기에서, α, β, δ 및 a1은 TC, HDL-C, TG 및 (TG+ε)(TC+κ)에 각각 곱하는 상수이고; 여기에서 ε, κ 및 λ는 TG, TC 및 기타 모든 인수들의 합에 각각 더해주는 상수입니다.
VLDL-C의 이런 계산의 예는 그림 6에 표시되어 있습니다. 여기에서, VLDL-C의 값 20 개는 본 문서에 공개된 측정값들을 기반으로 식을 사용하여 결정되었으며, 이런 값들(y 축)은, 선행 기술의 초고속 원심분리법(ultracentrifugation methods)으로 측정한 VLDL-C의 해당 값들(x 축에 표시)에 대해 y 축에 표시되었습니다. 그림 6에 표시된 것처럼, 상기한 식에 따라 계산된 VLDL-C 값들은 선행 기술의 방법으로 얻은 값들과 매우 정확하게 일치합니다. 그림 6에 표시된 도표에서, λ ("절편")의 값은 -2.62입니다; α의 값은 0.15; β의 값은 -0.55; δ의 값은 0.15; a1의 값은 0.0015; ε의 값은 -192; 및 κ의 값은 -188입니다. 위의 계산식으로 계산한 VLDL-C 값은 초고속 원심분리 방법으로 얻은 VLDL-C 값과 잘 일치합니다(R의 제곱 = 0.959). 그림에서 최적선(best fit line)은 JMP 소프트웨어(SAS institute, Inc., Cary NC, 27513)를 사용하여 계산되었으며, 이 모델과 이 파라미터들(parameters)의 편차 분석의 F 비(ratio)는 93.4이고, 이 값은 0.001 보다 적은 확률의 가능성으로 이런 최적선을 찾을 수 있다는 것을 나타내므로, 이것은 매우 중요한 결과입니다.
상기 내용은 본 문서에 공개된 실시예에 대한 설명이지만, 다양한 대안, 변경 및 동등한 것들을 사용할 수도 있습니다. 상세 설명과 첨부된 주장에 사용된 단수형은 문맥상 별도로 명시하지 않은 경우, 복수에도 해당됩니다. 또한, 본 문서에 사용되었으며 청구항(claims) 전체에서 사용된 "내에서, 속에서, ~의(in)"라는 의미는, 문맥상 별도로 명시하지 않는 한, "~위에, ~상에, ~에 대해(on)"라는 뜻으로도 사용됩니다. 마지막으로, 본 문서의 설명에서 또는 청구항 전체에서, "및, 그리고(and)"와 "또는(or)"의 의미는 모두 접속사(또는 연결형, conjunctive) 및 비접속사(또는 비연결형, disjunctive)로 사용되었으며, 문맥상 별도로 명시하지 않은 경우, 상호 교환 가능합니다. 그러므로, "및, 그리고(and)" 또는 "또는(or)"이 사용된 문맥에서, 이런 접속사의 사용은, 문맥에서 별도로 명시하지 않는 한, "및/또는"의 의미를 배제하지(exclude) 않습니다.
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Claims (41)

  1. 대상체로부터의 혈액 샘플에서 2 이상의 지질단백질 성분의 측정 방법으로서, 상기 2 이상의 지질단백질 성분은 총 콜레스테롤(TC), 저밀도 지질단백질 콜레스테롤(LDL-C), 및 고밀도 지질단백질 콜레스테롤(HDL-C)로부터 선택되고, 상기 방법은
    상기 혈액 샘플의 적어도 일부를 제1 시약과 배합하여 제1 배합 용액을 제공하는 단계로서, 상기 제1 시약은 지질단백질 용해제(solubilization agent), 지질단백질 상호작용제(interactant), 및 완충제를 포함하는 것인 단계;
    상기 제1 배합 용액에 제2 시약을 첨가하여 제2 배합 용액을 제공하는 단계로서, 상기 제2 시약은 완충제, 양쪽친매성제(amphiphilic agent), 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소, 및 착색제를 포함하고, 상기 제1 배합 용액에 상기 제2 시약의 상기 첨가 시간이 초기 시간(initial time)으로 명명되는 것인 단계; 및
    제1 기간(time period) 내에, 제2 기간 내에, 그리고 제3 시간 후에 상기 제2 배합 용액에 의한 흡광도를 측정하는 단계로서, 상기 기간들 및 상기 제3 시간은 상기 초기 시간에 대하여 결정될 수 있는 것인 단계, 및
    상기 흡광도 측정치로부터 혈액 샘플 중 2 이상의 지질단백질 성분의 지질단백질 양을 측정하는 단계를 포함하며,
    이에 의해 대상체로부터의 혈액 샘플 중 2 이상의 지질단백질 성분이 측정되는 것인 측정 방법.
  2. 제1항에 있어서, TC, LDL-C, 및 HDL-C로부터 선택된 2 이상의 지질단백질 성분을 측정하는 단계를 포함하고,
    여기서 HDL-C는 상기 초기 시간에 측정된 ΔA와 상기 제1 기간의 후반(end)에 측정된 ΔA의 차이에 의해 측정되고, 이때 ΔA는 2개의 상이한 광 파장에서 측정된 흡광도 간의 차이이며;
    LDL-C는 상기 제2 기간의 초반(beginning)에 측정된 ΔA와 상기 제2 기간의 후반에 측정된 ΔA의 차이에 의해 측정되고;
    TC는 상기 제3 시간에 측정된 ΔA에 의해 측정되며;
    이에 의해 HDL-C, LDL-C, 및 TC 중 2 이상이 혈액의 샘플에서 측정되는 것인 방법.
  3. 제2항에 있어서, 혈액의 동일 샘플에서 또는 혈액의 샘플의 동일 부분에서 모든 지질단백질 고밀도 지질단백질 콜레스테롤(HDL-C), 저밀도 지질단백질 콜레스테롤(LDL-C), 및 총 콜레스테롤(TC)의 통합 측정(combined measurement)을 포함하는 방법.
  4. 제2항에 있어서, 상기 지질단백질은 혈액의 샘플에서 지질단백질의 실질적인 침전없이 측정되는 것인 방법.
  5. 제2항에 있어서, ΔA는 560 nm에서 측정된 흡광도와 700 nm에서 측정된 흡광도 간의 차이인 방법.
  6. 제2항에 있어서, 상기 제1 기간은 상기 초기 시간 후 약 3분 미만의 기간을 포함하고, 상기 제3 시간은 상기 초기 시간 후 약 5분을 초과하는 시간인 방법.
  7. 제2항에 있어서, 상기 제1 기간은 상기 초기 시간 후 약 0분 내지 약 2분의 기간을 포함하고, 상기 제2 기간은 상기 초기 시간 후 약 2분 내지 약 6분의 기간을 포함하고, 상기 제3 시간은 상기 초기 시간 후 약 6분 내지 약 10분의 시간인 방법.
  8. 제2항에 있어서, 상기 양쪽친매성제는 비이온성 계면활성제; 음이온성 계면활성제; 양이온성 계면활성제; 쌍성 이온성(zwitterionic) 계면활성제; 및 이의 유도체, 유사체, 및 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 계면활성제를 포함하는 것인 방법.
  9. 제2항에 있어서, 상기 착색제는 과산화효소, 과산화효소 기질, 아미노안티피렌 화합물, 및 아닐린 함유 화합물 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
  10. 제2항에 있어서, 상기 제1 시약은 α-시클로덱스트린 황산염, 덱스트란 황산염, 염화마그네슘, 4-아미노안티피렌, 및 인산나트륨 완충제를 포함하고, 상기 제2 시약은 트리톤(Triton) X-100, 플루로닉(pluronic) L64, N-에틸-N-(2-히드록시-3-설포프로필)-3,5-디메톡시아닐린(ALPS), 슈도모나스속 종(Pseudomonas sp .)으로부터의 콜레스테롤 에스테르분해효소, 슈도모나스속 종으로부터의 콜레스테롤 산화효소, 및 인산나트륨 완충제를 포함하는 것인 방법.
  11. 대상체로부터의 혈액의 2개 이하의 샘플에서 고밀도 지질단백질 콜레스테롤(HDL-C), 저밀도 지질단백질 콜레스테롤(LDL-C), 초저밀도 콜레스테롤(VLDL-C), 총 콜레스테롤(TC), 및 중성지방(triglyceride) 수치(TG)의 통합 측정 방법으로서, 상기 방법은
    상기 대상체로부터의 혈액의 제1 샘플의 적어도 일부 또는 상기 대상체로부터의 혈액의 샘플의 제1 부분을, 지질단백질 용해제, 지질단백질 상호작용제, 및 완충제를 포함하는 제1 시약과 배합하여 제1 배합 용액을 제공하는 단계;
    상기 제1 배합 용액에 완충제, 양쪽친매성제, 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소, 및 착색제를 포함하는 제2 시약을 첨가하여 제2 배합 용액을 제공하는 단계로서, 상기 제1 배합 용액에 상기 제2 시약의 상기 첨가 시간이 초기 시간으로 명명되는 것인 단계; 및
    제1 기간 내에, 제2 기간 내에, 그리고 제3 시간에 상기 제2 배합 용액에 의한 흡광도를 측정하는 단계로서, 상기 기간들 및 상기 제3 시간은 상기 초기 시간에 대하여 결정될 수 있고,
    HDL-C는 상기 초기 시간에 측정된 ΔA와 상기 제1 기간의 후반에 측정된 ΔA의 차이에 의해 측정되고, 이때 ΔA는 2개의 상이한 광 파장에서 측정된 흡광도 간의 차이이며;
    LDL-C는 상기 제2 기간의 초반에 측정된 ΔA와 상기 제2 기간의 후반에 측정된 ΔA의 차이에 의해 측정되고;
    TC는 상기 제3 시간에 측정된 ΔA에 의해 측정되며;
    이에 의해 HDL-C, LDL-C, 및 TC의 측정이 혈액의 상기 제1 샘플에서 또는 혈액의 상기 샘플의 상기 제1 부분에서 실시되는 것인 단계;
    상기 대상체로부터의 혈액의 제2 샘플에서 또는 상기 대상체로부터의 혈액의 샘플의 제2 부분에서 TG를 측정하는 단계; 및
    VLDL-C를 계산하는 단계를 포함하고;
    이에 의해 혈액의 2개 샘플에서 또는 혈액의 샘플의 2개 부분에서 HDL-C, LDL-C, VLDL-C, TC, 및 TG의 통합 측정이 달성되는 것인 통합 측정 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 제1 기간은 상기 초기 시간 후 약 3분 미만의 기간을 포함하고, 상기 제3 시간은 상기 초기 시간 후 약 5분을 초과하는 시간인 방법.
  13. 제11항에 있어서, 상기 제1 기간은 상기 초기 시간 후 약 0분 내지 약 2분의 기간을 포함하고, 상기 제2 기간은 상기 초기 시간 후 약 2분 내지 약 6분의 기간을 포함하고, 상기 제3 시간은 상기 초기 시간 후 약 6분 내지 약 10분의 시간인 방법.
  14. 제11항에 있어서, ΔA는 560 nm에서 측정된 흡광도와 700 nm에서 측정된 흡광도 간의 차이인 방법.
  15. 제11항에 있어서, 혈액의 2개 샘플에서 또는 혈액의 샘플의 2개 부분에서 HDL-C, LDL-C, VLDL-C, TC, 및 TG의 통합 측정은 상기 지질단백질의 실질적인 침전없이 달성되는 것인 방법.
  16. 제11항에 있어서, VLDL-C를 계산하는 단계는 하기 식에 의해 VLDL-C를 계산하는 것을 포함하는 것인 방법:
    Figure pct00017

    식 중, λ는 약 10 내지 약 -10의 값을 가지고; α는 약 0.05 내지 약 0.5의 값을 가지고; β는 약 0 내지 약 -5의 값을 가지고; δ는 약 0.05 내지 약 0.5의 값을 가지고; a1은 약 0.0005 내지 약 0.005의 값을 가지고; ε 및 κ는 약 -50 내지 약 -500의 값을 가진다.
  17. 제16항에 있어서, λ는 약 0 내지 약 -5의 값을 가지고; α는 약 0.1 내지 약 0.3의 값을 가지고; β는 약 0 내지 약 -2의 값을 가지고; δ는 약 0.1 내지 약 0.3의 값을 가지고; a1은 약 0.001 내지 약 0.003의 값을 가지고; ε 및 κ 각각은 약 -100 내지 약 -300의 값을 가지는 것인 방법.
  18. 제16항에 있어서, 초저밀도 콜레스테롤(VLDL-C)은 하기 식에 의해 계산되는 것인 방법:
    Figure pct00018

    식 중, 계수(multiplicative coefficients) α, β, γ, δ, a1, a2, a3, a4, a5, 및 a6은, 양수, 음수, 또는 0에 상관없이, 임의의 값을 취할 수 있고;
    덧셈 상수(additive constants) λ, ε, κ, μ, 및 ν는, 양수, 음수, 또는 0에 상관없이, 임의의 값을 취할 수 있다.
  19. 제16항에 있어서, λ는 약 10 내지 약 -10의 값을 가지고; α는 약 0.05 내지 약 0.5의 값을 가지고; β는 약 0 내지 약 -5의 값을 가지고; δ는 약 0.05 내지 약 0.5의 값을 가지고; a1, a2, a3, a4, a5, 및 a6 각각은 약 0.0005 내지 약 0.005의 값을 가지고; ε, κ, μ, 및 ν 각각은 약 -50 내지 약 -500의 값을 가지는 것인 방법.
  20. 제11항에 있어서, 상기 제1 시약은 α-시클로덱스트린 황산염, 덱스트란 황산염, 염화마그네슘, 4-아미노안티피렌, 및 인산나트륨 완충제를 포함하고, 상기 제2 시약은 트리톤 X-100, 플루로닉 L64, N-에틸-N-(2-히드록시-3-설포프로필)-3,5-디메톡시아닐린(ALPS), 슈도모나스속 종으로부터의 콜레스테롤 에스테르분해효소, 슈도모나스속 종으로부터의 콜레스테롤 산화효소, 및 인산나트륨 완충제를 포함하는 것인 방법.
  21. 콜레스테롤 분석에 사용하기 위한 시약으로서, 상기 시약은 지질단백질 용해제, 지질단백질 상호작용제, 및 완충제를 포함하고, 상기 지질단백질 상호작용제는 LDL-콜레스테롤의 측정가능한 착색된 결과물(colored product)로의 전환을 위한 것과 실질적으로 상이한 속도로 그리고 VLDL-콜레스테롤의 측정가능한 착색된 결과물로의 전환을 위한 것과 실질적으로 상이한 속도로 HDL-콜레스테롤의 측정가능한 착색된 결과물로의 전환을 제공하는 농도 수준으로 존재하는 것인 시약.
  22. 제21항에 있어서, α-시클로덱스트린 황산염, 덱스트란 황산염, 염화마그네슘, 4-아미노안티피렌, 및 인산나트륨 완충제를 포함하는 시약.
  23. 제21항에 있어서, 상기 시약은 저밀도 지질단백질(LDL)의 실질적인 침전이 없거나, 또는 초저밀도 지질단백질(VLDL)의 실질적인 침전이 없거나, 또는 둘다에 효과적인 덱스트란 황산염 : 마그네슘 이온의 비로 마그네슘 및 덱스트란 황산염을 포함하는 것인 시약.
  24. 제23항에 있어서, 상기 덱스트란 황산염 : 마그네슘 이온의 비는 약 0.002 내지 약 0.02인 시약.
  25. 제21항에 있어서, 상기 지질단백질 용해제는 계면활성제 및 음으로 하전된 α-시클로덱스트린 유도체로부터 선택되고; 상기 지질단백질 상호작용제는 저분자량의 음으로 하전된 덱스트란 유도체를 포함하는 것인 시약.
  26. 지질단백질의 실질적인 침전없이 대상체로부터의 혈액의 샘플에서 지질단백질 중 총 콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 및 HDL-콜레스테롤의 2 이상의 동시의, 빠른 측정을 위한 분석에 사용하기 위한 시약으로서, 상기 시약은 지질단백질 용해제, 지질단백질 상호작용제, 및 완충제를 포함하고, 상기 지질단백질 상호작용제는 LDL-콜레스테롤의 측정가능한 착색된 결과물로의 전환을 위한 것과 실질적으로 상이한 속도로 그리고 VLDL-콜레스테롤의 측정가능한 착색된 결과물로의 전환을 위한 것과 실질적으로 상이한 속도로 HDL-콜레스테롤의 측정가능한 착색된 결과물로의 전환을 제공하는 농도 수준으로 존재하는 것인 시약.
  27. 지질단백질의 실질적인 침전없이 대상체로부터의 혈액의 샘플에서 지질단백질 중 총 콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 및 HDL-콜레스테롤의 2 이상의 동시의, 빠른 측정을 위한 분석에 사용하기 위한 시약으로서, 상기 시약은 α-시클로덱스트린 황산염, 덱스트란 황산염, 염화마그네슘, 4-아미노안티피렌, 및 인산나트륨 완충제를 포함하고, 덱스트란 황산염 : 마그네슘 이온의 비가 약 0.002 내지 약 0.02인 시약.
  28. 완충제, 양쪽친매성제, 지질분해효소, 산화효소, 및 착색제를 포함하는, 지질단백질의 실질적인 침전없이 대상체로부터의 혈액의 샘플에서 지질단백질 중 총 콜레스테롤, 저밀도 지질단백질(LDL)-콜레스테롤 및 고밀도 지질단백질(HDL)-콜레스테롤의 2 이상의 측정을 위한 분석에 사용하기 위한 시약.
  29. 제28항에 있어서, 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소, 및 과산화효소를 포함하는 시약.
  30. 제28항에 있어서, 상기 양쪽친매성제는 비이온성 계면활성제; 음이온성 계면활성제; 양이온성 계면활성제; 쌍성 이온성 계면활성제; 및 이의 유도체, 유사체, 및 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 계면활성제를 포함하는 것인 시약.
  31. 제28항에 있어서, 상기 착색제는 과산화효소, 과산화효소 기질, 아미노안티피렌 화합물, 및 아닐린 함유 화합물 중 하나 이상을 포함하는 것인 시약.
  32. 제28항에 있어서, 인산나트륨 완충제, 트리톤 X-100, 플루로닉 L64, N-에틸-N-(2-히드록시-3-설포프로필)-3,5-디메톡시아닐린(ALPS), 슈도모나스속 종으로부터의 콜레스테롤 에스테르분해효소, 및 슈도모나스속 종으로부터의 콜레스테롤 산화효소를 포함하는 시약.
  33. 완충제, 양쪽친매성제, 지질분해효소, 산화효소, 및 착색제를 포함하는, 지질단백질의 실질적인 침전없이 대상체로부터의 혈액의 샘플에서 지질단백질 중 총 콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 및 HDL-콜레스테롤의 2 이상의 동시의, 빠른 측정을 위한 분석에 사용하기 위한 시약.
  34. 완충제, 양쪽친매성제, 콜레스테롤 에스테르분해효소, 콜레스테롤 산화효소, 및 과산화효소를 포함하는, 지질단백질의 실질적인 침전없이 대상체로부터의 혈액의 샘플에서 지질단백질 중 총 콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 및 HDL-콜레스테롤의 2 이상의 동시의, 빠른 측정을 위한 분석에 사용하기 위한 시약.
  35. 시약 및 콜레스테롤 분석에서 상기 시약의 사용을 위한 설명서를 포함하는 키트로서, 시약은 제21항 내지 제27항 중 어느 한 항의 시약을 포함하는 것인 키트.
  36. 시약 및 콜레스테롤 분석에서 상기 시약의 사용을 위한 설명서를 포함하는 키트로서, 시약은 α-시클로덱스트린 황산염, 덱스트란 황산염, 염화마그네슘, 4-아미노안티피렌, 및 인산나트륨 완충제를 포함하고, 덱스트란 황산염 : 마그네슘 이온의 비가 약 0.002 내지 약 0.02인 키트.
  37. 시약 및 콜레스테롤 분석에서 상기 시약의 사용을 위한 설명서를 포함하는 키트로서, 시약은 제28항 내지 제34항 중 어느 한 항의 시약을 포함하는 것인 키트.
  38. 시약 및 콜레스테롤 분석에서 상기 시약의 사용을 위한 설명서를 포함하는 키트로서, 시약은 인산나트륨 완충제, 트리톤 X-100, 플루로닉 L64, N-에틸-N-(2-히드록시-3-설포프로필)-3,5-디메톡시아닐린(ALPS), 슈도모나스속 종으로부터의 콜레스테롤 에스테르분해효소, 및 슈도모나스속 종으로부터의 콜레스테롤 산화효소를 포함하는 것인 키트.
  39. 적어도 제1 시약과 제2 시약, 및 콜레스테롤 분석에서 상기 시약들의 사용을 위한 설명서를 포함하는 키트로서, 상기 제1 시약은 제21항 내지 제27항 중 어느 한 항의 시약을 포함하고, 상기 제2 시약은 제28항 내지 제34항 중 어느 한 항의 시약을 포함하는 것인 키트.
  40. 적어도 제1 시약과 제2 시약, 및 콜레스테롤 분석에서 상기 시약들의 사용을 위한 설명서를 포함하는 키트로서, 상기 제1 시약은 제25항의 시약을 포함하고, 상기 제2 시약은 제32항의 시약을 포함하는 것인 키트.
  41. 적어도 제1 시약과 제2 시약, 및 콜레스테롤 분석에서 상기 시약들의 사용을 위한 설명서를 포함하는 키트로서, 상기 제1 시약은 제26항 또는 제27항의 시약을 포함하고, 상기 제2 시약은 제33항 또는 제34항의 시약을 포함하는 것인 키트.
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