KR20150048140A

KR20150048140A - 디스피로피롤리딘 유도체의 결정

Info

Publication number: KR20150048140A
Application number: KR1020157005386A
Authority: KR
Inventors: 쇼코 요시다; 유우이치 스기모토
Original assignee: 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤
Priority date: 2012-09-06
Filing date: 2013-09-05
Publication date: 2015-05-06
Also published as: EP2894156B1; CN104812757A; CA2884238A1; KR102217410B1; BR112015004816A2; CN104812757B; RU2015112098A; US20170081337A1; US20170081335A1; RU2647840C2; HK1210172A1; WO2014038606A1; CA2884238C; ES2637150T3; US9884871B2; BR112015004816B1; US9540386B2; US20170081334A1; JP6016284B2; US20150210707A1

Abstract

Mdm2 의 작용을 저해하는 디스피로피롤리딘 화합물 또는 그 염의 결정을 제공하는 것. 본 발명은 Mdm2 를 저해하고, 항종양 활성을 갖는, (3'R,4'S,5'R)-N-[(3R,6S)-6-카르바모일테트라하이드로-2H-피란-3-일]-6"-클로로-4'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-4,4-디메틸-2"-옥소-1",2"-디하이드로디스피로[시클로헥산-1,2'-피롤리딘-3',3"-인돌]-5'-카르복사미드 또는 그 염의 결정 및 그들을 포함하는 의약을 제공한다.

Description

디스피로피롤리딘 유도체의 결정 {CRYSTAL OF DISPIROPYRROLIDINE DERIVATIVE}

본 발명은 Mdm2 (murine double minute 2) 저해에 의한 항종양 활성을 갖는 디스피로피롤리딘 화합물 또는 그 염의 결정에 관한 것이다.

세포의 암화를 억제하는 중요한 인자의 하나로서, p53 이 알려져 있다. p53 은 세포 주기나 세포의 아포토시스에 관여하는 유전자의 발현을 다양한 스트레스에 응답하여 유도하는 전사 인자이다. p53 은 이 전사 조절 기능에 의해 세포의 암화를 억제하는 것으로 생각되고 있으며, 실제, 인간의 암의 약 절반에서 p53 유전자의 결실 또는 변이가 관찰되고 있다.

한편, p53 이 정상임에도 불구하고 암화되어 있는 세포의 암화 요인의 하나로서, E3 유비퀴틴 리가아제의 1 종인 Mdm2 (murine double minute 2) 의 과잉 발현이 알려져 있다. Mdm2 는 p53 에 의해 발현이 유도되는 단백질이다. Mdm2 는 p53 의 전사 활성 도메인에 결합하여 p53 의 전사 활성을 저하시킴과 함께, p53 을 핵 외로 배출하고, 나아가, p53 에 대한 유비퀴틴화 리가아제로서 작용하여 p53 의 분해를 매개함으로써, p53 을 부 (負) 로 제어하고 있다. 이 때문에, Mdm2 가 과잉 발현하고 있는 세포에서는, p53 기능의 불활화 및 분해가 촉진되어, 암화가 일어나는 것으로 생각되고 있다 (비특허문헌 1).

이와 같은 Mdm2 의 기능에 주목하여, Mdm2 에 의한 p53 의 기능 억제를 저해하는 물질을 항종양제의 후보로 하는 어프로치가 다수 이루어져 왔다. Mdm2 와 p53 의 결합 부위를 표적으로 한 Mdm2 저해제로는, 스피로옥시인돌 유도체 (특허문헌 1 ∼ 15, 비특허문헌 1 ∼ 3), 인돌 유도체 (특허문헌 16), 피롤리딘-2-카르복사미드 유도체 (특허문헌 17), 피롤리디논 유도체 (특허문헌 18), 이소인돌리논 유도체 등 (특허문헌 19, 비특허문헌 4) 이 보고되어 있다.

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J. Am. Chem. Soc., 2005, 127, 10130-10131 J. Med. Chem., 2006, 49, 3432-3435 J. Med. Chem., 2009, 52, 7970-7973 J. Med. Chem., 2006, 49, 6209-6221

디스피로피롤리딘 유도체는 우수한 Mdm2 저해 활성을 나타내어, 의약, 특히 항암제로서의 이용이 기대된다. 또한 이들 유도체의 결정을 알아내는 것은 공업적으로 의의가 있다.

본 발명자들은, Mdm2 저해 활성을 나타내고, 항종양 활성을 갖는 디스피로피롤리딘 유도체의 의료 상의 유용성을 높이기 위해서, 고체 물성을 향상시키기 위하여, 예의 검토한 결과, 하기 식 (1) 로 나타내는 디스피로피롤리딘 유도체 또는 그 염의 결정을 알아냈다.

즉, 본 발명은 하기 [1] 내지 [14] 에 관한 것이다.

[1] 하기 식 (1)

[화학식 1]

로 나타내는 (3'R,4'S,5'R)-N-[(3R,6S)-6-카르바모일테트라하이드로-2H-피란-3-일]-6"-클로로-4'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-4,4-디메틸-2"-옥소-1",2"-디하이드로디스피로[시클로헥산-1,2'-피롤리딘-3',3"-인돌]-5'-카르복사미드 또는 그 염의 결정.

[2] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 1 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 [1] 에 기재된 화합물의 결정.

[3] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 2 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 [1] 에 기재된 화합물의 결정.

[4] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 3 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 [1] 에 기재된 화합물의 결정.

[5] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 4 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 [1] 에 기재된 화합물의 염산염의 결정.

[6] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 6 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 [1] 에 기재된 화합물의 메탄술폰산염의 결정.

[7] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 7 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 [1] 에 기재된 화합물의 에탄술폰산염의 결정.

[8] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 8 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 [1] 에 기재된 화합물의 벤젠술폰산염의 결정.

[9] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 9 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 [1] 에 기재된 화합물의 톨루엔술폰산염의 결정.

[10] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 7.78, 9.14, 10.06, 10.78, 12.18, 13.42, 14.34, 15.50, 16.62, 17.06, 17.66, 18.18, 18.74, 20.18, 22.46, 24.90, 25.54, 26.94, 27.58, 28.90 에 특징적 피크를 나타내는 [2] 에 기재된 결정.

[11] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 7.62, 13.06, 15.10, 17.22, 21.98 에 특징적 피크를 나타내는 [3] 에 기재된 결정.

[12] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 9.18, 12.18, 15.58, 16.22, 17.22, 18.42, 18.82, 19.86 에 특징적 피크를 나타내는 [4] 에 기재된 결정.

[13] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 6.46, 7.86, 9.12, 13.00, 14.42, 19.32, 20.34, 20.42, 21.98 에 특징적 피크를 나타내는 [5] 에 기재된 결정.

[14] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 7.56, 8.26, 14.00, 16.26, 16.78, 17.72, 18.42, 18.62, 20.28, 23.06 에 특징적 피크를 나타내는 [6] 에 기재된 결정.

[15] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 6.28, 7.72, 12.62, 14.06, 15.50, 16.62, 16.96, 19.68, 21.18, 25.82 에 특징적 피크를 나타내는 [7] 에 기재된 결정.

[16] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 6.22, 7.34, 7.90, 12.46, 13.60, 14.22, 15.56, 18.86, 19.04, 19.52, 19.72, 20.54 에 특징적 피크를 나타내는 [8] 에 기재된 결정.

[17] 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 6.16, 7.18, 7.88, 12.38, 13.50, 13.88, 15.46, 18.46, 19.10, 19.28, 19.66, 20.28, 21.88, 24.68 에 특징적 피크를 나타내는 [9] 에 기재된 결정.

[18] [1] 내지 [17] 의 어느 한 항에 기재된 결정을 함유하는 의약.

본 발명에 의해, Mdm2 저해 활성을 갖는, (3'R,4'S,5'R)-N-[(3R,6S)-6-카르바모일테트라하이드로-2H-피란-3-일]-6"-클로로-4'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-4,4-디메틸-2"-옥소-1",2"-디하이드로디스피로[시클로헥산-1,2'-피롤리딘-3',3"-인돌]-5'-카르복사미드 또는 그 염의 결정이 제공된다. 본 발명의 결정은 고체 물성이 우수하고, 항종양제로서 유용하다.

도 1 은 실시예 1-1 로 얻어진 결정 (프리체) 의 분말 X 선 회절도이다. 도면의 세로축은 회절 강도를 카운트/초 (cps) 단위로 나타내고, 가로축은 회절 각도 2θ 의 값을 나타낸다.
도 2 는 실시예 1-2 로 얻어진 결정 (프리체) 의 분말 X 선 회절도이다. 도면의 세로축은 회절 강도를 카운트/초 (cps) 단위로 나타내고, 가로축은 회절 각도 2θ 의 값을 나타낸다.
도 3 은 실시예 1-3 으로 얻어진 결정 (프리체) 의 분말 X 선 회절도이다. 도면의 세로축은 회절 강도를 카운트/초 (cps) 단위로 나타내고, 가로축은 회절 각도 2θ 의 값을 나타낸다.
도 4 는 실시예 2 로 얻어진 결정 (염산염) 의 분말 X 선 회절도이다. 도면의 세로축은 회절 강도를 카운트/초 (cps) 단위로 나타내고, 가로축은 회절 각도 2θ 의 값을 나타낸다.
도 5 는 실시예 3 으로 얻어진 화합물 (황산염) 의 분말 X 선 회절도이다. 도면의 세로축은 회절 강도를 카운트/초 (cps) 단위로 나타내고, 가로축은 회절 각도 2θ 의 값을 나타낸다.
도 6 은 실시예 4 로 얻어진 결정 (메탄술폰산염) 의 분말 X 선 회절도이다. 도면의 세로축은 회절 강도를 카운트/초 (cps) 단위로 나타내고, 가로축은 회절 각도 2θ 의 값을 나타낸다.
도 7 은 실시예 5 로 얻어진 결정 (에탄술폰산염) 의 분말 X 선 회절도이다. 도면의 세로축은 회절 강도를 카운트/초 (cps) 단위로 나타내고, 가로축은 회절 각도 2θ 의 값을 나타낸다.
도 8 은 실시예 6 으로 얻어진 결정 (벤젠술폰산염) 의 분말 X 선 회절도이다. 도면의 세로축은 회절 강도를 카운트/초 (cps) 단위로 나타내고, 가로축은 회절 각도 2θ 의 값을 나타낸다.
도 9 는 실시예 7 로 얻어진 결정 (톨루엔술폰산염) 의 분말 X 선 회절도이다. 도면의 세로축은 회절 강도를 카운트/초 (cps) 단위로 나타내고, 가로축은 회절 각도 2θ 의 값을 나타낸다.
도 10 은 실시예 1-1 로 얻어진 결정 (프리체) 의 등온 흡습 탈습 곡선도이다. 도면의 세로축은 화합물의 중량 변화 (％) 를 나타내고, 가로축은 습도 (％ RH) 를 나타낸다.
도 11 은 실시예 1-2 로 얻어진 결정 (프리체) 의 등온 흡습 탈습 곡선도이다. 도면의 세로축은 화합물의 중량 변화 (％) 를 나타내고, 가로축은 습도 (％ RH) 를 나타낸다.
도 12 는 실시예 2 로 얻어진 결정 (염산염) 의 등온 흡습 탈습 곡선도이다. 도면의 세로축은 화합물의 중량 변화 (％) 를 나타내고, 가로축은 습도 (％ RH) 를 나타낸다.
도 13 은 실시예 4 로 얻어진 결정 (메탄술폰산염) 의 등온 흡습 탈습 곡선도이다. 도면의 세로축은 화합물의 중량 변화 (％) 를 나타내고, 가로축은 습도 (％ RH) 를 나타낸다.
도 14 는 실시예 5 로 얻어진 결정 (에탄술폰산염) 의 등온 흡습 탈습 곡선도이다. 도면의 세로축은 화합물의 중량 변화 (％) 를 나타내고, 가로축은 습도 (％ RH) 를 나타낸다.
도 15 는 실시예 6 으로 얻어진 결정 (벤젠술폰산염) 의 등온 흡습 탈습 곡선도이다. 도면의 세로축은 화합물의 중량 변화 (％) 를 나타내고, 가로축은 습도 (％ RH) 를 나타낸다.
도 16 은 실시예 7 로 얻어진 결정 (톨루엔술폰산염) 의 등온 흡습 탈습 곡선도이다. 도면의 세로축은 화합물의 중량 변화 (％) 를 나타내고, 가로축은 습도 (％ RH) 를 나타낸다.
도 17 은 실시예 1-1 로 얻어진 결정 (프리체) 의 열 분석 데이터를 나타낸 도면이다. 도면의 세로축은 온도차 (DTA) 및 중량 변화 (TG) 를 나타내고, 가로축은 온도 (℃) 를 나타낸다. 실선이 DTA 곡선, 파선이 TG 곡선을 나타낸다.
도 18 은 실시예 1-2 로 얻어진 결정 (프리체) 의 열 분석 데이터를 나타낸 도면이다. 도면의 세로축은 온도차 (DTA) 및 중량 변화 (TG) 를 나타내고, 가로축은 온도 (℃) 를 나타낸다. 실선이 DTA 곡선, 파선이 TG 곡선을 나타낸다.
도 19 는 실시예 1-3 으로 얻어진 결정 (프리체) 의 열 분석 데이터를 나타낸 도면이다. 도면의 세로축은 온도차 (DTA) 및 중량 변화 (TG) 를 나타내고, 가로축은 온도 (℃) 를 나타낸다. 실선이 DTA 곡선, 파선이 TG 곡선을 나타낸다.
도 20 은 실시예 2 로 얻어진 결정 (염산염) 의 열 분석 데이터를 나타낸 도면이다. 도면의 세로축은 온도차 (DTA) 및 중량 변화 (TG) 를 나타내고, 가로축은 온도 (℃) 를 나타낸다. 실선이 DTA 곡선, 파선이 TG 곡선을 나타낸다.
도 21 은 실시예 4 로 얻어진 결정 (메탄술폰산염) 의 열 분석 데이터를 나타낸 도면이다. 도면의 세로축은 온도차 (DTA) 및 중량 변화 (TG) 를 나타내고, 가로축은 온도 (℃) 를 나타낸다. 실선이 DTA 곡선, 파선이 TG 곡선을 나타낸다.
도 22 는 실시예 5 로 얻어진 결정 (에탄술폰산염) 의 열 분석 데이터를 나타낸 도면이다. 도면의 세로축은 온도차 (DTA) 및 중량 변화 (TG) 를 나타내고, 가로축은 온도 (℃) 를 나타낸다. 실선이 DTA 곡선, 파선이 TG 곡선을 나타낸다.
도 23 은 실시예 6 으로 얻어진 결정 (벤젠술폰산염) 의 열 분석 데이터를 나타낸 도면이다. 도면의 세로축은 온도차 (DTA) 및 중량 변화 (TG) 를 나타내고, 가로축은 온도 (℃) 를 나타낸다. 실선이 DTA 곡선, 파선이 TG 곡선을 나타낸다.
도 24 는 실시예 7 로 얻어진 결정 (톨루엔술폰산염) 의 열 분석 데이터를 나타낸 도면이다. 도면의 세로축은 온도차 (DTA) 및 중량 변화 (TG) 를 나타내고, 가로축은 온도 (℃) 를 나타낸다. 실선이 DTA 곡선, 파선이 TG 곡선을 나타낸다.

본 발명은 하기 식 (1)

[화학식 2]

로 나타내는 (3'R,4'S,5'R)-N-[(3R,6S)-6-카르바모일테트라하이드로-2H-피란-3-일]-6"-클로로-4'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-4,4-디메틸-2"-옥소-1",2"-디하이드로디스피로[시클로헥산-1,2'-피롤리딘-3',3"-인돌]-5'-카르복사미드 (이하, 본 명세서에 있어서, 화합물 (1) 이라고 기재하는 경우가 있다) 또는 그 염의 결정에 관한 것이다. 여기서, 결정이란, 그 내부 구조가 삼차원적으로 구성 원자 (또는 그 집단) 의 규칙적인 반복으로 이루어져 있는 고체를 말하며, 그러한 규칙적인 내부 구조를 갖지 않는 무정형 고체와는 구별된다.

또한, 화합물 (1) 의 염으로는, 실시예 중 어느 것을 들 수 있고, 화합물 (1) 또는 그 염은 유리체 혹은 용매화물로서 존재하는 경우도 있다. 공기 중의 수분을 흡수하는 것 등에 의해 수화물로서 존재하는 경우도 있다. 용매화물로는, 의약적으로 허용할 수 있는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 구체적으로는, 수화물, 에탄올화물, 2-프로판올화물 등을 들 수 있다.

동일한 화합물의 결정이어도, 결정화의 조건에 따라, 복수의 상이한 내부 구조 및 물리화학적 성질을 갖는 결정 (결정 다형) 이 생성되는 경우가 있는데, 본 발명의 결정은 이들 결정 다형 중 어느 것이어도 되고, 2 이상의 결정 다형의 혼합물이어도 된다.

본 발명의 결정은, 대기 중에 방치해 둠으로써, 수분을 흡수하여, 부착수가 부착되는 경우나 통상적인 대기 조건하에 있어서 25 내지 150 ℃ 로 가열하는 것 등에 의해, 수화물을 형성하는 경우가 있다. 나아가, 본 발명의 결정은 부착 잔류 용매 또는 용매화물 중에, 결정화시의 용매를 포함하는 경우도 있다.

본 명세서에 있어서, 본 발명의 결정을 분말 X 선 회절의 데이터에 기초하여 나타내는 경우가 있는데, 분말 X 선 회절은, 통상적으로, 당해 분야에 있어서 사용되는 수법에 의해 측정·해석을 실시하면 되고, 예를 들어, 실시예에 기재된 방법에 의해 실시할 수 있다. 또한, 일반적으로, 수화물이나 탈수물은 결정수의 착탈에 의해, 그 격자 정수 (定數) 가 변화하고, 분말 X 선 회절에 있어서의 회절각 (2θ) 에 변화를 주는 경우가 있다. 또한, 피크의 강도는 결정의 성장면 등의 차이 (정벽 (晶癖)) 등에 의해 변화하는 경우도 있다. 따라서, 본 발명의 결정을 분말 X 선 회절의 데이터에 기초하여 나타낸 경우, 분말 X 선 회절에 있어서의 피크의 회절각 및 분말 X 선 회절 패턴이 일치하는 결정 외에, 그들로부터 얻어지는 수화물 및 탈수물도 본 발명의 범위에 포함된다.

본 발명의 결정의 하나의 바람직한 형태는, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 1 에 나타내는 분말 X 선 회절 패턴을 갖는 결정 (프리체) 이다. 또한, 본 결정은, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 7.78, 9.14, 10.06, 10.78, 12.18, 13.42, 14.34, 15.50, 16.62, 17.06, 17.66, 18.18, 18.74, 20.18, 22.46, 24.90, 25.54, 26.94, 27.58, 28.90 에 특징적 피크를 나타내는 결정이다.

본 발명의 결정의 다른 하나의 바람직한 형태는, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 2 에 나타내는 분말 X 선 회절 패턴을 갖는 결정 (프리체) 이다. 또한, 본 결정은, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 7.62, 13.06, 15.10, 17.22, 21.98 에 특징적 피크를 나타내는 결정이다.

본 발명의 결정의 다른 하나의 바람직한 형태는, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 3 에 나타내는 분말 X 선 회절 패턴을 갖는 결정 (프리체) 이다. 또한, 본 결정은, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 9.18, 12.18, 15.58, 16.22, 17.22, 18.42, 18.82, 19.86 에 특징적 피크를 나타내는 결정이다.

본 발명의 결정의 다른 하나의 바람직한 형태는, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 4 에 나타내는 분말 X 선 회절 패턴을 갖는 결정 (염산염) 이다. 또한, 본 결정은, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 6.46, 7.86, 9.12, 13.00, 14.42, 19.32, 20.34, 20.42, 21.98 에 특징적 피크를 나타내는 결정이다.

본 발명의 결정의 다른 하나의 바람직한 형태는, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 6 에 나타내는 분말 X 선 회절 패턴을 갖는 결정 (메탄술폰산염) 이다. 또한, 본 결정은, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 7.56, 8.26, 14.00, 16.26, 16.78, 17.72, 18.42, 18.62, 20.28, 23.06 에 특징적 피크를 나타내는 결정이다.

본 발명의 결정의 다른 하나의 바람직한 형태는, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 7 에 나타내는 분말 X 선 회절 패턴을 갖는 결정 (에탄술폰산염) 이다. 또한, 본 결정은, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 6.28, 7.72, 12.62, 14.06, 15.50, 16.62, 16.96, 19.68, 21.18, 25.82 에 특징적 피크를 나타내는 결정이기도 하다.

본 발명의 결정의 다른 하나의 바람직한 형태는, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 8 에 나타내는 분말 X 선 회절 패턴을 갖는 결정 (벤젠술폰산염) 이다. 또한, 본 결정은, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 6.22, 7.34, 7.90, 12.46, 13.60, 14.22, 15.56, 18.86, 19.04, 19.52, 19.72, 20.54 에 특징적 피크를 나타내는 결정이다.

본 발명의 결정의 다른 하나의 바람직한 형태는, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 9 에 나타내는 분말 X 선 회절 패턴을 갖는 결정 (톨루엔술폰산염) 이다. 또한, 본 결정은, 구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 6.16, 7.18, 7.88, 12.38, 13.50, 13.88, 15.46, 18.46, 19.10, 19.28, 19.66, 20.28, 21.88, 24.68 에 특징적 피크를 나타내는 결정이다.

본 발명의 다른 양태는 본 발명의 결정을 유효 성분으로서 함유하는 의약에 관한 것이다.

본원 발명의 결정을 유효 성분으로서 포함하는 의약은, 바람직하게는, 본 발명의 결정과 1 종 또는 2 종 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 의약 조성물의 형태로 제공된다. 본 발명의 의약의 투여 형태는 특별히 제한되지 않고, 경구적 또는 비경구적으로 투여할 수 있지만, 바람직하게는, 경구적으로 투여된다.

본 발명의 의약 조성물은 화합물 (I) 로서 본 발명의 결정을 적어도 일부 포함한다. 당해 의약 조성물에는, 화합물 (I) 로서 본원 발명의 결정 이외의 결정형이 존재하고 있어도 된다. 당해 의약 조성물에 포함되는 본원 발명의 결정의 비율은, 당해 의약 조성물 중의 화합물 (I) 전체에 대하여, 0.01 중량％ ∼ 99.9 중량％ 의 범위, 예를 들어, 0.01 중량％ 이상, 0.05 중량％ 이상, 0.1 중량％ 이상, 0.5 중량％ 이상, 1 중량％ 이상, 2 중량％ 이상, 3 중량％ 이상, 4 중량％ 이상, 5 중량％ 이상, 10 중량％ 이상, 20 중량％ 이상, 30 중량％ 이상, 40 중량％ 이상, 50 중량％ 이상, 60 중량％ 이상, 70 중량％ 이상, 80 중량％ 이상, 90 중량％ 이상, 95 중량％ 이상, 96 중량％ 이상, 97 중량％ 이상, 98 중량％ 이상, 99 중량％ 이상, 99.5 중량％ 이상, 99.6 중량％ 이상, 99.7 중량％ 이상, 99.8 중량％ 이상 또는 99.9 중량％ 이상 포함되어 있으면 된다. 본원 발명의 결정이 의약 조성물에 포함되어 있는지 여부는 본 명세서에 기재되는 기기 분석 방법 (예를 들어, 분말 X 선 회절, 열 분석, 적외 흡수 스펙트럼 등) 에 의해 확인할 수 있다.

본 발명의 결정은 Mdm2 저해제로서 사용할 수 있고, 본 발명의 결정을 함유하는 의약, 특히 바람직하게는 항암제로서 사용할 수 있다.

본 발명의 하나의 실시형태에 있어서, 화합물 (1) 은 p53 과 Mdm2 의 결합을 저해하고, Mdm2 에 의한 p53 의 유비퀴틴화를 저해하기 때문에, 본 발명의 결정은 p53 과 Mdm2 의 결합 저해제 및/또는 Mdm2 유비퀴틴 리가아제 저해제로서 사용할 수 있다.

p53 과 Mdm2 의 결합 상태는 단백질 사이의 결합 상태를 조사하기 위해서 당업자에게 통상적으로 사용되는 방법 (예를 들어, 면역학적 수법 또는 표면 플라즈몬 공명 기술 등) 을 이용하여 검출할 수 있다. 면역학적 수법을 이용하여 Mdm2 와 p53 의 결합 상태를 조사하는 방법으로는, 예를 들어, 면역 침강법 또는 ELISA (Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay) 를 들 수 있다. 이와 같은 면역학적 수법에 사용하는 항체는 Mdm2 및/또는 p53 을 직접 검출할 수 있는 항 Mdm2 항체 및/또는 항 p53 항체여도 되고, Mdm2 및/또는 p53 을 태그 (예를 들어, GST 태그 또는 히스티딘 태그) 등으로 표지하는 경우에는, 표지에 적합한 항체 (예를 들어 항 GST 항체 또는 항히스티딘 항체) 를 이용하면 된다. 면역학적 수법을 이용하여 p53 과 Mdm2 의 결합 상태를 조사하는 방법은, 예를 들어, 국제 공개 제2003/51359호 팜플렛, 국제 공개 제2003/51360호 팜플렛, 미국 특허 출원 공개 제2004/259867호 명세서 또는 미국 특허 출원 공개 제2004/259884호 명세서 또는 국제 공개 제2005/110996호 팜플렛에 기재되어 있다. 표면 플라즈몬 공명 기술을 이용하여 p53 과 Mdm2 의 결합 상태를 조사하는 방법에 대해서는, 예를 들어, Science, 제303권, 844-848 페이지, 2004년에 기재되어 있다.

p53 에 대한 Mdm2 의 유비퀴틴 리가아제 활성은 당업자에게 통상적으로 사용되는 유비퀴틴 리가아제 어세이를 이용하여 조사할 수 있다. 유비퀴틴 리가아제 활성은, 예를 들어, 유비퀴틴 활성화 효소 (E1), 유비퀴틴 결합 효소 (E2) 및 유비퀴틴 리가아제 (E3) (Mdm2) 에 의한 p53 의 유비퀴틴화를, 시험 화합물의 존재하와 비존재하로 비교함으로써 검출할 수 있다 (예를 들어, 국제 공개 제2001/75145호 팜플렛 또는 국제 공개 제2003/76608호 팜플렛).

다른 실시형태에 있어서, 화합물 (1) 은, p53 전사 활성화 도메인에 대한 Mdm2 의 결합을 저해함으로써, Mdm2 에 의해 억제되어 있던 p53 의 전사 인자로서의 기능을 회복시키기 때문에, 본 발명의 결정은 p53 전사 활성 억제의 저해제로서 사용할 수 있다. p53 전사 활성 억제의 저해제는, 예를 들어, 시험 화합물의 존재하 또는 비존재하에 있어서, p53 에 의해 전사가 제어되는 단백질 (예를 들어, p21^Waf1/Cip1) 의 mRNA 량 또는 단백질량을 당업자에게 통상적으로 사용되는 mRNA 측정법 (예를 들어, 노던 블롯법) 또는 단백질 측정법 (예를 들어, 웨스턴 블롯법) 을 이용하여 측정하고, 시험 화합물의 존재하에 있어서의 그 mRNA 량 또는 단백질량이 시험 화합물의 비존재하에 있어서의 경우와 비교하여 증가해 있는 경우에, 그 시험 화합물을 p53 전사 활성 억제의 저해제로서 선택함으로써 얻을 수 있다. 또한, p53 전사 활성 억제의 저해제는 p53 응답 배열을 포함하는 리포터 유전자의 리포터 활성을 지표로 한 리포터 어세이에 의해 동정할 수도 있다.

다른 실시형태에 있어서, 화합물 (1) 은 Mdm2 에 의한 p53 의 유비퀴틴화를 저해하고, p53 의 프로테아솜에 있어서의 분해를 방지하기 때문에, 본 발명의 결정은 p53 분해의 저해제로서 사용할 수 있다. p53 분해의 저해제는, 예를 들어, 시험 화합물의 존재하 또는 비존재하에 있어서, p53 의 단백질량을 당업자에게 통상적으로 사용되는 단백질 측정법 (예를 들어, 웨스턴 블롯법) 을 이용하여 측정하고, 시험 화합물의 존재하에 있어서의 그 단백질량이 시험 화합물의 비존재하에 있어서의 경우와 비교하여 증가해 있는 경우에, 그 시험 화합물을 p53 분해의 저해제로서 선택함으로써 얻을 수 있다.

다른 실시형태에 있어서, 화합물 (1) 은, Mdm2 와 p53 의 결합 저해 및/또는 Mdm2 에 의한 p53 유비퀴틴화의 저해에 의해, p53 의 암 억제 유전자로서의 기능을 정상화시키기 때문에, 본 발명의 결정은 항종양제로서 사용할 수 있다.

세포의 증식 저해 활성은 당업자에게 통상적으로 사용되는 증식 저해 시험법을 이용하여 조사할 수 있다. 세포의 증식 저해 활성은, 예를 들어, 하기의 시험예 2 에 기재된 바와 같이, 시험 화합물의 존재하 또는 비존재하에 있어서의 세포 (예를 들어, 종양 세포) 의 증식의 정도를 비교함으로써 실시할 수 있다. 증식의 정도는, 예를 들어, 생세포를 측정하는 시험계를 이용하여 조사할 수 있다. 생세포의 측정 방법으로는, 예를 들어, [³H]-티미딘의 취입 시험, BrdU 법 또는 MTT 어세이 등을 들 수 있다.

또한, in vivo 에서의 항종양 활성은 당업자에게 통상적으로 사용되는 항종양 시험법을 이용하여 조사할 수 있다. 예를 들어, 마우스, 래트 등에 각종 종양 세포를 이식하고, 이식 세포의 생착이 확인된 후에, 본 발명의 화합물을 경구 투여, 정맥내 투여 등을 하여, 몇일 ∼ 수주일 후에, 약제 무투여군에 있어서의 종양 증식과 화합물 투여군에 있어서의 종양 증식을 비교함으로써 본 발명의 in vivo 에서의 항종양 활성을 확인할 수 있다.

본 발명의 결정은 종양 또는 암, 예를 들어, 폐암, 소화기암, 난소암, 자궁암, 유방암, 전립선암, 간암, 두경부암, 혈액암, 신장암, 피부암 (악성 흑색종 등), 망막아세포종, 고환 종양, 육종 등, 보다 바람직하게는, 폐암, 유방암, 전립선암, 대장암, 급성 골수성 백혈병, 악성 림프종, 악성 흑색종, 망막아세포종, 신경아세포종 또는 육종의 치료에 사용할 수 있지만 이들 암에 한정되지 않는다.

본 발명의 의약은 본 발명의 결정과 약학적으로 허용할 수 있는 담체를 포함하고, 정맥내 주사, 근육내 주사, 피하 주사 등의 각종 주사제로서, 혹은, 경구 투여 또는 경피 투여 등의 다양한 방법에 의해 투여할 수 있다. 약학적으로 허용할 수 있는 담체란, 본 발명의 결정을 포함하는 조성물을, 어느 기관 또는 장기로부터 다른 기관 또는 장기에 수송하는 것에 관여하는, 약학적으로 허용되는 재료 (예를 들어, 부형제, 희석제, 첨가제, 용매 등) 를 의미한다.

제제의 조제 방법으로는 투여법에 따라 적당한 제제 (예를 들어, 경구제 또는 주사제) 를 선택하고, 통상적으로 이용되고 있는 각종 제제의 조제법으로 조제할 수 있다. 경구제로는, 예를 들어, 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 트로키제, 용액제, 시럽제, 엘릭시르제, 유제, 또는 유성 내지 수성의 현탁액 등을 예시할 수 있다. 경구 투여의 경우에는 유리체인 채여도 되고, 염의 형태 중 어느 것이어도 된다. 수성 제제는 약학적으로 허용되는 산과 산 부가물을 형성시키거나, 나트륨 등의 알칼리 금속염으로 함으로써 조제할 수 있다. 주사제의 경우에는 제제 중에 안정제, 방부제 또는 용해 보조제 등을 사용할 수도 있다. 이들 보조제 등을 포함하는 경우도 있는 용액을 용기에 수납 후, 동결 건조 등에 의해 고형 제제로 하여 용시 조제의 제제로 해도 된다. 또한, 1 회 투여량을 1 개의 용기에 수납해도 되고, 또한 복수 회 투여량을 1 개의 용기에 수납해도 된다.

고형 제제로는, 예를 들어, 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 또는 트로키제를 들 수 있다. 이들 고형 제제는 본 발명의 결정과 함께 약학적으로 허용할 수 있는 첨가물을 포함해도 된다. 첨가물로는, 예를 들어, 충전제류, 증량제류, 결합제류, 붕괴제류, 용해 촉진제류, 습윤제류 또는 활택제류를 들 수 있고, 이들을 필요에 따라 선택하여 혼합하여, 제제화할 수 있다.

액체 제제로는, 예를 들어, 용액제, 시럽제, 엘릭시르제, 유제, 또는 현탁제를 들 수 있다. 이들 액체 제제는 본 발명의 결정과 함께 약학적으로 허용할 수 있는 첨가물을 포함해도 된다. 첨가물로는, 예를 들어, 현탁화제 또는 유화제를 들 수 있고, 이들을 필요에 따라 선택하여 혼합하여, 제제화할 수 있다.

본 발명의 결정은 포유류, 특히 인간의 암 치료에 사용할 수 있다. 투여량 및 투여 간격은, 질환의 장소, 환자의 신장, 체중, 성별 또는 병력에 따라, 의사의 판단에 의해 적절히 선택될 수 있다. 본 발명의 화합물을 인간에게 투여하는 경우, 투여량의 범위는, 1 일당, 약 0.01 ㎎/㎏ 체중 ∼ 약 500 ㎎/㎏ 체중, 바람직하게는, 약 0.1 ㎎/㎏ 체중 ∼ 약 100 ㎎/㎏ 체중이다. 인간에게 투여하는 경우, 바람직하게는, 1 일당 1 회, 혹은 2 내지 4 회로 나누어 투여되고, 적당한 간격으로 반복하는 것이 바람직하다. 또한, 1 일량은 의사의 판단에 의해 필요에 따라 상기의 양을 초과해도 된다.

본 발명의 결정은 다른 항종양제와 병용하여 사용해도 된다. 예를 들어, 항종양 항생 물질, 항종양성 식물 성분, BRM (생물학적 응답성 제어 물질), 호르몬, 비타민, 항종양성 항체, 분자 표적약, 그 밖의 항종양제 등을 들 수 있다.

보다 구체적으로, 알킬화제로는, 예를 들어, 나이트로젠마스타드, 나이트로젠마스타드 N-옥사이드 혹은 클로람부틸 등의 알킬화제, 칼보콘 혹은 티오테파 등의 아지리딘계 알킬화제, 디브로모만니톨 혹은 디브로모덜시톨 등의 에폭사이드계 알킬화제, 카르무스틴, 로무스틴, 세무스틴, 니무스틴하이드로클로라이드, 스트렙토조신, 클로로조토신 혹은 라니무스틴 등의 니트로소우레아계 알킬화제, 부술판, 토실산임프로술판 또는 다카르바진 등을 들 수 있다.

각종 대사 길항제로는, 예를 들어, 6-메르캅토푸린, 6-티오구아닌 혹은 티오이노신 등의 푸린 대사 길항제, 플루오로우라실, 테가푸르, 테가푸르·우라실, 카르모푸르, 독시플루리딘, 브록수리딘, 시타라빈 혹은 에노시타빈 등의 피리미딘 대사 길항제, 메토트렉세이트 혹은 트리메트렉세이트 등의 엽산 대사 길항제 등을 들 수 있다.

항종양성 항생 물질로는, 예를 들어, 마이토마이신 C, 블레오마이신, 페플로마이신, 다우노루비신, 아클라르비신, 독소루비신, 피라루비신, THP-아드리아마이신, 4'-에피독소루비신 혹은 에피루비신 등의 안트라사이클린계 항생 물질 항종양제, 크로모마이신 A3 또는 액티노마이신 D 등을 들 수 있다.

항종양성 식물 성분으로는, 예를 들어, 빈데신, 빈크리스틴 혹은 빈블라스틴 등의 빈카 알카로이드류, 파클리탁셀, 도세탁셀 등의 탁산류, 또는 에토포시드 혹은 테니포시드 등의 에피포도필로톡신류를 들 수 있다.

BRM 으로는, 예를 들어, 종양 괴사 인자 또는 인도메타신 등을 들 수 있다.

호르몬으로는, 예를 들어, 하이드로코르티손, 덱사메타손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프라스테론, 베타메타손, 트리암시놀론, 옥시메톨론, 난드롤론, 메테놀론, 포스페스트롤, 에티닐에스트라디올, 클로르마디논 또는 메드록시프로게스테론 등을 들 수 있다.

비타민으로는, 예를 들어, 비타민 C 또는 비타민 A 등을 들 수 있다.

항종양성 항체, 분자 표적약으로는, 트라스투주맙, 리툭시맙, 세툭시맙, 니모투주맙, 데노수맙, 베바시주맙, 인플릭시맙, 메실산이매티닙, 게피티닙, 에를로티닙, 수니티닙, 라파티닙, 소라페닙 등을 들 수 있다.

그 밖의 항종양제로는, 예를 들어, 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 타목시펜, 캠토테신, 이포스파미드, 시클로포스파미드, 멜팔란, L-아스파라기나제, 아세글라톤, 시조피란, 피시바닐, 프로카바진, 피포브로만, 네오카르지노스타틴, 하이드록시우레아, 우베니멕스 또는 크레스틴 등을 들 수 있다.

본 발명에는, 본 발명의 결정을 투여하는 것을 특징으로 하는 암의 예방 방법 및/또는 치료 방법도 포함된다.

본 발명의 결정의 원료가 되는 (3'R,4'S,5'R)-N-[(3R,6S)-6-카르바모일테트라하이드로-2H-피란-3-일]-6"-클로로-4'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-4,4-디메틸-2"-옥소-1",2"-디하이드로디스피로[시클로헥산-1,2'-피롤리딘-3',3"-인돌]-5'-카르복사미드 또는 그 염은, 예를 들어, 이하에 서술하는 실시예에 따라 제조할 수 있다.

또한, 분말 X 선 회절의 측정은, 실시예 1 에 대해서는 Bruker Axs 주식회사 D8 Discover with GADDS CST 에 의해, 파장 : CuKα, λ = 1.54 옹스트롬, 투과법에 의해 측정하였다 (관 전압 : 40 ㎸, 관 전류 : 40 ㎃, 주사 범위 : 2 ∼ 40, 주사 속도 : 20°／min). 그 밖의 실시예에 대해서는, 주식회사 리가쿠사 제조의 반사형 분말 X 선 회절 장치 (RINT-TTRIII) 에 의해, 파장 : CuKα, λ = 1.54 옹스트롬, 검체는 무반사 샘플 홀더를 이용하여 측정하였다 (관 전압 50 ㎸, 관 전류 300 ㎃, 주사 범위 2 ∼ 40°, 주사 속도 20°/min, 샘플링 폭 0.02°, 회전 속도 120 rpm).

흡습 탈습 측정 장치는 TA instruments SGA-CX (실시예 2, 6, 7), TA instruments VTI-SA (실시예 1, 4, 5) 를 사용하였다 (온도 : 25 ℃, 습도 : 40, 60, 70, 80, 90, 80, 70, 60, 40, 20, 10, 20, 40, 60, 70 ％ RH).

열 분석 (TG/DTA) 분석은 SII 나노 테크놀로지 (주) 제조의 TG/DTA6200 을 사용하였다 (승온 속도 : 10 ℃／min, 분위기 가스 : 질소, 질소 가스 유량 : 200 ㎖/min).

실시예

실시예 1

[화학식 3]

(3'R,4'S,5'R)-N-[(3R,6S)-6-카르바모일테트라하이드로-2H-피란-3-일]-6"-클로로-4'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-4,4-디메틸-2"-옥소-1",2"-디하이드로디스피로[시클로헥산 -1,2'-피롤리딘-3',3"-인돌]-5'-카르복사미드

참고예 1 의 공정 3 에서 얻은 화합물 (100 ㎎, 0.20 m㏖) 의 N,N-디메틸포름아미드 (4 ㎖) 용액에, 참고예 2 의 공정 3 에서 얻은 화합물 (35 ㎎, 0.24 m㏖), 트리에틸아민 (0.04 ㎖, 0.30 m㏖), 1-하이드록시벤조트리아졸 (27 ㎎, 0.20 m㏖) 및 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염 (46 ㎎, 0.24 m㏖) 을 첨가하고, 50 ℃ 에서 1 시간 교반하였다. 방랭 후, 반응액을 아세트산에틸로 희석하고, 물, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 식염수로 순차적으로 세정한 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거 후, 잔류물을 NH-실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 [클로로포름 : 메탄올 = 50 : 1 (v/v)] 로 정제하고, 얻어진 정제물을 메탄올 (10 ㎖) 에 용해시키고, 60 ℃ 에서 24 시간 교반하였다. 용매를 감압 증류 제거하여, 표기 화합물 94 ㎎ (76 ％) 을 고체로서 얻었다.

실시예 1-1

실시예 1 에서 얻은 화합물 (302 ㎎, 0.49 m㏖) 에, 트리클로로에틸렌/에탄올 혼합액 (95/5) (4.75 ㎖) 을 첨가한 후, 약 50 ℃ 로 가온하여 용해시켰다. 실온에서 정치하여 결정을 석출시켰다. 석출된 결정을 여과 채취하고 실온에서 건조시켜 본 결정을 얻었다. 본 결정에 대하여, 분말 X 선 회절, 시차열·열 중량 동시 측정 (TG/DTA) 및 흡탈습 거동을 측정하였다.

본 결정은 그 밖에 포름산에틸, 아세토니트릴로부터도 얻을 수 있다.

분말 X 선 회절도를 도 1 에, 등온 흡습 탈습 곡선도를 도 10 에, 열 분석 데이터 (TG/DTA) 를 도 17 에 나타낸다.

실시예 1-2

실시예 1 에서 얻은 화합물 (301 ㎎, 0.49 m㏖) 에, 메탄올 (3.6 ㎖) 을 첨가한 후, 약 50 ℃ 로 가온하여 용해시켰다. 실온에서 정치하여 결정을 석출시켰다. 석출된 결정을 여과 채취하고 실온에서 건조시켜 본 결정을 얻었다. 본 결정에 대하여, 분말 X 선 회절, TG/DTA 및 흡탈습 거동을 측정하였다.

본 결정은 그 밖에 2-부타논으로부터도 얻을 수 있다.

분말 X 선 회절도를 도 2 에, 등온 흡습 탈습 곡선도를 도 11 에, 열 분석 데이터 (TG/DTA) 를 도 18 에 나타낸다.

실시예 1-3

실시예 1 에서 얻은 화합물 (100 ㎎, 0.16 m㏖) 에, 트리클로로에틸렌 (1.5 ㎖) 을 첨가한 후, 약 50 ℃ 로 가온하여 용해시켰다. 실온에서 정치하여 결정을 석출시켰다. 석출된 결정을 여과 채취하고 실온에서 건조시켜 본 결정을 얻었다.

본 결정에 대하여, 분말 X 선 회절 및 TG/DTA 를 측정하였다.

분말 X 선 회절도를 도 3 에, 열 분석 데이터 (TG/DTA) 를 도 19 에 나타낸다.

실시예 2

(3'R,4'S,5'R)-N-[(3R,6S)-6-카르바모일테트라하이드로-2H-피란-3-일]-6"-클로로-4'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-4,4-디메틸-2"-옥소-1",2"-디하이드로디스피로[시클로헥산-1,2'-피롤리딘-3',3"-인돌]-5'-카르복사미드 염산염 물 및 2-프로판올 (IPA) 화물 결정

실시예 1 에서 얻은 화합물 (192 ㎎, 0.31 m㏖) 의 2-프로판올 (2.0 ㎖) 용액에 진한 염산 (0.026 ㎖, 0.31 m㏖) 을 첨가한 후, 실온에서 18 시간 교반하였다. 석출물을 여과 채취하여, 표기 결정 173 ㎎ (85 ％) 을 얻었다.

표기 결정의 분말 X 선 회절도를 도 4 에, 등온 흡습 탈습 곡선도를 도 12 에, 열 분석 데이터 (TG/DTA) 를 도 20 에 나타낸다.

실시예 3

(3'R,4'S,5'R)-N-[(3R,6S)-6-카르바모일테트라하이드로-2H-피란-3-일]-6"-클로로-4'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-4,4-디메틸-2"-옥소-1",2"-디하이드로디스피로[시클로헥산-1,2'-피롤리딘-3',3"-인돌]-5'-카르복사미드 황산염 물 및 2-프로판올 (IPA) 화물

실시예 1 에서 얻은 화합물 (52 ㎎, 0.08 m㏖) 의 2-프로판올 (0.5 ㎖) 용액에 진한 황산 (0.005 ㎖, 0.08 m㏖) 을 첨가한 후, 실온에서 2 일간 교반하였다. 석출물을 여과 채취하여, 표기 화합물 20 ㎎ (34 ％) 을 고체로서 얻었다.

표기 화합물의 분말 X 선 회절도를 도 5 에 나타낸다.

실시예 4

(3'R,4'S,5'R)-N-[(3R,6S)-6-카르바모일테트라하이드로-2H-피란-3-일]-6"-클로로-4'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-4,4-디메틸-2"-옥소-1",2"-디하이드로디스피로[시클로헥산-1,2'-피롤리딘-3',3"-인돌]-5'-카르복사미드 메탄술폰산염 수화물 결정

실시예 1 에서 얻은 화합물 (221 ㎎, 0.36 m㏖) 의 2-프로판올 (3 ㎖) 용액에 메탄술폰산 (0.026 ㎖, 0.39 m㏖) 을 첨가한 후, 실온에서 16 시간 교반하였다. 석출물을 여과 채취하여, 표기 결정 48 ㎎ (19 ％) 을 얻었다.

표기 결정의 분말 X 선 회절도를 도 6 에, 등온 흡습 탈습 곡선도를 도 13 에, 열 분석 데이터 (TG/DTA) 를 도 21 에 나타낸다.

실시예 5

(3'R,4'S,5'R)-N-[(3R,6S)-6-카르바모일테트라하이드로-2H-피란-3-일]-6"-클로로-4'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-4,4-디메틸-2"-옥소-1",2"-디하이드로디스피로[시클로헥산-1,2'-피롤리딘-3',3"-인돌]-5'-카르복사미드 에탄술폰산염 수화물 결정

실시예 1 에서 얻은 화합물 (221 ㎎, 0.36 m㏖) 의 2-프로판올 (3 ㎖) 용액에 에탄술폰산 (0.032 ㎖, 0.39 m㏖) 을 첨가한 후, 실온에서 23 시간 교반하였다. 석출물을 여과 채취하여, 표기 결정 128 ㎎ (49 ％) 을 얻었다.

표기 결정의 분말 X 선 회절도를 도 7 에, 등온 흡습 탈습 곡선도를 도 14 에, 열 분석 데이터 (TG/DTA) 를 도 22 에 나타낸다.

실시예 6

(3'R,4'S,5'R)-N-[(3R,6S)-6-카르바모일테트라하이드로-2H-피란-3-일]-6"-클로로-4'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-4,4-디메틸-2"-옥소-1",2"-디하이드로디스피로[시클로헥산-1,2'-피롤리딘-3',3"-인돌]-5'-카르복사미드 벤젠술폰산염 수화물 결정

실시예 1 에서 얻은 화합물 (104 ㎎, 0.17 m㏖) 의 2-프로판올 (1 ㎖) 용액에 벤젠술폰산 1 수화물 (30 ㎎, 0.17 m㏖) 을 첨가한 후, 실온에서 24 시간 교반하였다. 석출물을 여과 채취하여, 표기 결정 116 ㎎ (89 ％) 을 얻었다.

표기 결정의 분말 X 선 회절도를 도 8 에, 등온 흡습 탈습 곡선도를 도 15 에, 열 분석 데이터 (TG/DTA) 를 도 23 에 나타낸다.

실시예 7

(3'R,4'S,5'R)-N-[(3R,6S)-6-카르바모일테트라하이드로-2H-피란-3-일]-6"-클로로-4'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-4,4-디메틸-2"-옥소-1",2"-디하이드로디스피로[시클로헥산-1,2'-피롤리딘-3',3"-인돌]-5'-카르복사미드 p-톨루엔술폰산염 수화물 결정

실시예 1 에서 얻은 화합물 (300 ㎎, 0.50 m㏖) 의 아세토니트릴 (4 ㎖) 현탁액에, p-톨루엔술폰산 1 수화물 (85 ㎎, 0.45 m㏖) 의 아세토니트릴 (4 ㎖) 용액을 첨가한 후, 약 50 ℃ 에서 가열하여 용해시켰다. 실온에서 1 일 교반하였다. 석출물을 여과 채취하여, 표기 결정 255 ㎎ (66 ％) 을 얻었다.

표기 결정의 분말 X 선 회절도를 도 9 에, 등온 흡습 탈습 곡선도를 도 16 에, 열 분석 데이터 (TG/DTA) 를 도 24 에 나타낸다.

참고예 1

[화학식 4]

[공정 1] (3E/Z)-6-클로로-3-[(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)메틸렌]-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온

6-클로로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온 (2.20 g, 13.11 m㏖) 및 2-클로로-3-플루오로이소니코틴알데하이드 (2.20 g, 13.8 m㏖) 의 메탄올 (130 ㎖) 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민 (0.46 ㎖, 2.63 m㏖) 을 첨가하고 16 시간 가열 환류하였다. 방랭 후, 석출물을 여과 채취, 냉메탄올로 세정하여 건조시킴으로써, 표기 화합물 3.37 g (83 ％) 을 고체로서 얻었다.

MS(APCI)m/z : 309(M+H)⁺.

[공정 2] (3'S,4'R,7'S,8'S,8a'R)-6"-클로로-8'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-4,4-디메틸-3',4'-디페닐-3',4',8',8a'-테트라하이드로-1'H-디스피로[시클로헥산-1,6'-피롤로[2,1-c][1,4]옥사진-7',3"-인돌]-1',2"(1"H)-디온

질소 분위기하, 공정 1 에서 얻은 화합물 (1.86 g, 6.00 m㏖), (5R,6S)-5,6-디페닐모르폴린-2-온 (1.67 g, 6.60 m㏖), 4,4-디메틸시클로헥사논 (0.83 g, 6.60 m㏖) 의 테트라하이드로푸란 (30 ㎖) 용액에, 삼불화붕소디에틸에테르 착물 (0.15 ㎖, 1.20 m㏖), 몰레큘러시브 4A (분말) (3 g) 를 첨가하고, 70 ℃ 에서, 7 일간 가열 교반하였다. 방랭 후, 불용물을 셀라이트 여과 제거하고, 여과액을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 [n-헥산 : 아세트산에틸 = 4 : 1 → 1 : 1 (v/v)] 로 정제하여, 표기 화합물 3.39 g (84 ％) 을 고체로서 얻었다.

[공정 3] (4'S,5'R)-6"-클로로-4'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-4,4-디메틸-2"-옥소-1",2"-디하이드로디스피로[시클로헥산-1,2'-피롤리딘-3',3"-인돌]-5'-카르복실산

공정 2 에서 얻은 화합물 (630 ㎎, 0.94 m㏖) 을 아세토니트릴 (10 ㎖) 과 물 (4 ㎖) 에 용해시키고, 탄산칼륨 (130 ㎎, 0.94 m㏖) 을 첨가하고, 85 ℃ 에서 16 시간 가열 환류하였다. 방랭 후, 무수 황산마그네슘 (113 ㎎, 0.94 m㏖) 을 첨가하고 실온에서 15 분간 교반하였다. 아세트산에틸로 추출하고, 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하여 (4'S,5'R)-6"-클로로-4'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-1'-[(1R, 2S)-2-하이드록시-1,2-디페닐에틸]-4,4-디메틸-2"-옥소-1",2"-디하이드로디스피로[시클로헥산-1,2'-피롤리딘-3',3"-인돌]-5'-카르복실산 (650 ㎎, 100 ％) 을 고체로서 얻었다 [MS(ESI)m/z : 688(M+H)⁺]. 얻어진 카르복실산 (650 ㎎, 0.94 m㏖) 을 메탄올 (30 ㎖) 과 물 (8 ㎖) 에 용해시키고, 빙랭 하, 질산이암모늄세륨 (IV) (1.55 g, 2.82 m㏖) 을 첨가하고, 동일 온도에서 30 분간 교반하였다. 빙랭 하, 탄산칼륨 (780 ㎎, 5.64 m㏖) 을 첨가하고, 동일 온도에서 1 시간 교반하였다. 불용물을 셀라이트 여과 제거 후, 여과액을 감압 농축하고, 얻어진 잔류물에 물을 첨가하고, 아세트산에틸로 추출하였다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하고, 얻어진 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 [클로로포름 : 메탄올 = 20 : 1 → 4 : 1 (v/v)] 로 정제하여, 표기 화합물 152 ㎎ (33 ％) 을 고체로서 얻었다.

참고예 2

[화학식 5]

[공정 1] 2,6-안하이드로-3,4,5-트리데옥시-5-(디벤질아미노)-L-에리트로-헥손산

메틸 2,6-안하이드로-3,4,5-트리데옥시-5-(디벤질아미노)-L-에리트로-헥소네이트메틸 2,6-안하이드로-3,4,5-트리데옥시-5-(디벤질아미노)-L-에리트로-헥소네이트 (1.60 g, 4.70 m㏖) 를 메탄올 (30 ㎖) 에 용해시키고, 1 N 수산화나트륨 수용액 (10 ㎖) 을 빙랭 하 서서히 첨가하고, 그 후 실온에서 3 시간 교반하였다. 반응액에 Dowex50W-X8 을 첨가하고 pH 를 5 ∼ 6 으로 조제하고, 불용물을 여과 제거한 후, 여과액을 감압 농축하여, 표기 화합물 1.7 g (100 ％) 을 고체로서 얻었다.

[공정 2] (2S,5R)-5-(디벤질아미노)테트라하이드로-2H-피란-2-카르복사미드

상기 공정 1 에서 얻은 화합물 (870 ㎎, 2.67 m㏖) 을 N,N-디메틸포름아미드 (30 ㎖) 에 용해시키고, 1-하이드록시벤조트리아졸 (361 ㎎, 2.67 m㏖), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염 (614 ㎎, 3.20 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 15 분간 교반하였다. 염화암모늄 (285 ㎎, 5.44 m㏖), N,N-디이소프로필에틸아민 (l.86 ㎖, 10.7 m㏖) 을 첨가하고, 실온에서 8 시간 교반하였다. 아세트산에틸로 희석하고, 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액, 포화 식염수의 순서로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압 증류 제거하여, 표기 화합물 495 ㎎ (57 ％) 을 고체로서 얻었다.

[공정 3] (2S,5R)-5-아미노테트라하이드로-2H-피란-2-카르복사미드

상기 공정 2 에서 얻은 화합물 (490 ㎎, 1.51 m㏖) 을 에탄올 (10 ㎖) 에 용해시키고, 20 ％ 수산화팔라듐 (100 ㎎) 을 첨가하고, 수소 분위기하, 실온에서 16 시간 교반하였다. 촉매를 셀라이트 여과 제거 후, 여과액을 감압 증류 제거, 건조시켜, 표기 화합물 215 ㎎ (99 ％) 을 고체로서 얻었다.

(시험예 1 Mdm2/p53 결합 어세이)

단백질 완충액 (20 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 0.1 ％ BSA) 을 이용하여, His-p53 (p53 의 1 ∼ 132 번째의 아미노산으로 이루어지는 p53 부분 단백질과 히스티딘 단백질의 융합 단백질) 및 GST-Mdm2 (Mdm2 의 25 ∼ 108 번째의 아미노산으로서, 33 번째의 류신 잔기를 글루탐산으로 변환한 Mdm2 부분 단백질과 글루타티온 트랜스퍼라아제의 융합 단백질) 의 단백질을 각각 6.25 nM 포함하는 단백질 희석 용액을 제조하였다. 이 단백질 희석 용액을 384 웰 플레이트 (384-well low volume NBC, Corning, 카탈로그 번호 3676) 의 각 웰에 8 ㎕ 씩 첨가하였다.

다음으로, DMSO 를 이용하여 시험 화합물을 희석하고, 이 희석액을 10 ％ 포함하는 단백질 완충액을 제작하고, 각 웰에 4 ㎕ 씩 첨가하였다.

계속해서, 항체 희석 완충액 (20 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 0.1 ％ BSA, 0.5 M KF) 을 이용하여, XL665 표지 항 His 항체 (HTRF monoclonal anti-6HIS antibody labeled with XL665 (카탈로그 번호 61HISXLB), Schering/Cisboio Bioassays) 및 유로퓸 (Eu) 표지 항 GST 항체 (HTRF monoclonal anti-GST antibody labeled with europium cryptate, Schering/Cisboio Bioassays, 카탈로그 번호 61 GSTKLB) 를 각각 2.5 ㎍/㎖ 및 0.325 ㎍/㎖ 의 농도로 포함하는 용액을 제작하고, 각 웰에 8 ㎕ 씩 첨가하였다 (반응액 총량 : 20 ㎕/웰). 그 후, 플레이트를 25 ℃ 에서 1 시간 방치하였다.

여기 파장 320 ㎚ 에 있어서의 620 ㎚ 및 665 ㎚ 의 시간 분해 형광을 플레이트 리더 (ARVOsx, PerkinElmer, 또는 PHERAstar, BMGLABTECH) 를 이용하여 측정하였다. 계측치 (RFU 620 ㎚ 와 RFU 665 ㎚) 를 이용하여, 이하의 식으로 Ratio(R) 을 산출하였다.

R = (RFU 665 ㎚ - BI - C × RFU 620 ㎚)/RFU 620 ㎚

BI : 각 단백질, 화합물, 및 항체를 첨가하지 않은 반응액 (각 완충액만) 의 665 ㎚ 의 계측치

C (보정 계수) = (A - BI)/D

A 및 D 는 Eu 표지 항 GST 항체 용액만을 첨가한 반응액의 665 ㎚ 및 620 ㎚ 의 각 계측치

His-p53, GST-Mdm2, 시험 화합물 및 각 항체를 첨가한 웰로부터 산출한 R 치를 R (sample) 로 하고, His-p53, GST-Mdm2 및 각 항체를 첨가했지만 시험 화합물을 첨가하지 않은 웰로부터 산출한 R 치를 R (control) 로 하고, GST-Mdm2, 시험 화합물 및 각 항체를 첨가했지만 His-p53 을 첨가하지 않은 웰로부터 산출한 R 치를 R (bac㎏round) 로 하여, 하기의 식으로부터 T/C 를 산출하고, 시그모이드 피팅을 실시하여, Mdm2/p53 결합에 대한 IC₅₀ 치를 산출하였다. 결과를 표 1 에 나타낸다.

T/C = (R (sample) - R (bac㎏round))/(R (control) - R (bac㎏round))

화합물 (1) 은 0.1 μM 이하의 IC₅₀ 치를 나타냈다.

(시험예 2 항세포 시험)

야성형 p53 을 갖는 인간 폐암 유래 세포주 NCI-H460 을 이용하여 항세포 시험을 실시하였다.

NCI-H460 세포를 배지 (10 ％ 소 태아 혈청을 포함하는 RPMI1640 배지) 에 현탁하고, 96 웰의 멀티 웰 플레이트에 각각 500 세포/150 ㎕/웰로 파종하였다. 시험 화합물을 DMSO 에 용해시키고, 이것을 배지로 희석하여 검체 용액으로 하였다 (DMSO 농도 1 ％ 이하). 파종 다음날, 시험 화합물을 첨가하지 않은 배지 또는 검체 용액을 각 웰에 50 ㎕ 씩 첨가하였다. 세포 파종 다음날에 배지를 50 ㎕ 씩 첨가한 직후와, 검체 용액 또는 배지를 세포에 첨가하고, 37 ℃, 5 ％ CO₂ 에서 3 일간 배양한 후에, MTT 어세이를 실시하였다. MTT 어세이는 이하와 같이 실시하였다.

인산 완충액 (Dulbecco's Phosphate-buffered Salines) 을 이용하여 5 ㎎/㎖ 의 MTT (3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨브로마이드, Sigma, M-2128) 용액을 제작하고, 이 MTT 용액을 20 ㎕ 씩 각 웰에 첨가하였다. 그 후, 플레이트를 37 ℃, 5 ％ CO₂ 하에서 4 시간 배양하였다. 플레이트를 1200 rpm 으로 5 분간 원심 처리한 후, 배양 상청을 디스펜서로 흡인 제거하였다. DMSO 를 각 웰에 150 ㎕ 씩 첨가하고, 생성된 포르마잔을 용해시켰다. 플레이트 믹서를 이용하여 플레이트를 교반함으로써, 각 웰의 발색을 균일하게 하였다. 각 웰의 흡광도를 OD 540 ㎚, reference 660 ㎚ 의 조건 하, 플레이트 리더 (SpectraMaxPLUS384, Molecular Devices, CA USA) 를 이용하여 측정하였다.

검체 용액 첨가 당일에 측정한 OD 치를 S 로 하고, 검체 용액 첨가의 3 일 후에 측정한 OD 치를 T 로 하고, DMSO 희석액 첨가의 3 일 후에 측정한 OD 치를 C 로 하여, 하기의 계산식으로부터 각 농도에 있어서의 T/C (％) 를 구하여 용량 반응 곡선을 그리고, 50 ％ 증식 억제 농도 (GI₅₀ 치) 를 산출하였다.

T/C (％) = (T - S)/(C - S) × 100

화합물 (1) 은 GI₅₀ (μM) ＜ 0.1 의 항세포 효과를 나타냈다.

(제제예 1) ＜캡슐제＞

실시예로 얻어진 결정 5 g, 유당 115 g, 옥수수 전분 58 g 및 스테아르산마그네슘 2 g 을 V 형 혼합기를 이용하여 혼합한 후, 3 호 캡슐에 180 ㎎ 씩 충전하면 캡슐제가 얻어진다.

(제제예 2) ＜정제＞

실시예로 얻어진 결정 5 g, 유당 90 g, 옥수수 전분 34 g, 결정 셀룰로오스 20 g 및 스테아르산마그네슘 1 g 을 V 형 혼합기를 이용하여 혼합한 후, 1 정 당 150 ㎎ 의 질량으로 정제기로 타정하면 정제가 얻어진다.

(제제예 3) ＜현탁제＞

메틸셀룰로오스를 정제수에 분산, 용해시킨 분산매를 조제하고, 실시예로 얻어진 결정을 유발에 칭량하여 담고, 전술한 분산매를 소량씩 첨가하면서 잘 혼련하고, 정제수를 첨가하여 현탁액 100 g 을 조제한다.

Claims

하기 식 (1)
[화학식 1]

로 나타내는 (3'R,4'S,5'R)-N-[(3R,6S)-6-카르바모일테트라하이드로-2H-피란-3-일]-6"-클로로-4'-(2-클로로-3-플루오로피리딘-4-일)-4,4-디메틸-2"-옥소-1",2"-디하이드로디스피로[시클로헥산-1,2'-피롤리딘-3',3"-인돌]-5'-카르복사미드 또는 그 염의 결정.
제 1 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 1 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 화합물의 결정.
제 1 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 2 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 화합물의 결정.
제 1 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 3 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 화합물의 결정.
제 1 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 4 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 화합물의 염산염의 결정.
제 1 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 6 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 화합물의 메탄술폰산염의 결정.
제 1 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 7 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 화합물의 에탄술폰산염의 결정.
제 1 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 8 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 화합물의 벤젠술폰산염의 결정.
제 1 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 도 9 에 나타내는 X 선 회절 패턴을 갖는 화합물의 톨루엔술폰산염의 결정.
제 2 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 7.78, 9.14, 10.06, 10.78, 12.18, 13.42, 14.34, 15.50, 16.62, 17.06, 17.66, 18.18, 18.74, 20.18, 22.46, 24.90, 25.54, 26.94, 27.58, 28.90 에 특징적 피크를 나타내는 결정.
제 3 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 7.62, 13.06, 15.10, 17.22, 21.98 에 특징적 피크를 나타내는 결정.
제 4 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 9.18, 12.18, 15.58, 16.22, 17.22, 18.42, 18.82, 19.86 에 특징적 피크를 나타내는 결정.
제 5 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 6.46, 7.86, 9.12, 13.00, 14.42, 19.32, 20.34, 20.42, 21.98 에 특징적 피크를 나타내는 결정.
제 6 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 7.56, 8.26, 14.00, 16.26, 16.78, 17.72, 18.42, 18.62, 20.28, 23.06 에 특징적 피크를 나타내는 결정.
제 7 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 6.28, 7.72, 12.62, 14.06, 15.50, 16.62, 16.96, 19.68, 21.18, 25.82 에 특징적 피크를 나타내는 결정.
제 8 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 6.22, 7.34, 7.90, 12.46, 13.60, 14.22, 15.56, 18.86, 19.04, 19.52, 19.72, 20.54 에 특징적 피크를 나타내는 결정.
제 9 항에 있어서,
구리의 Kα 선 (파장 λ = 1.54 옹스트롬) 의 조사로 얻어지는 분말 X 선 회절도에 있어서, 회절 각도 2θ = 6.16, 7.18, 7.88, 12.38, 13.50, 13.88, 15.46, 18.46, 19.10, 19.28, 19.66, 20.28, 21.88, 24.68 에 특징적 피크를 나타내는 결정.
제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 기재된 결정을 함유하는 의약.