KR20150030756A - 아난다미드-변형된 핵산 분자 - Google Patents

아난다미드-변형된 핵산 분자 Download PDF

Info

Publication number
KR20150030756A
KR20150030756A KR1020157003119A KR20157003119A KR20150030756A KR 20150030756 A KR20150030756 A KR 20150030756A KR 1020157003119 A KR1020157003119 A KR 1020157003119A KR 20157003119 A KR20157003119 A KR 20157003119A KR 20150030756 A KR20150030756 A KR 20150030756A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
conjugate
fatty acid
nucleoside
nucleic acid
formula
Prior art date
Application number
KR1020157003119A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102144140B1 (ko
Inventor
토마스 카렐
Original Assignee
바제클리크 게엠베하
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 바제클리크 게엠베하 filed Critical 바제클리크 게엠베하
Publication of KR20150030756A publication Critical patent/KR20150030756A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102144140B1 publication Critical patent/KR102144140B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

본 발명은 1개 이상의 다중불포화 지방산 잔기, 특히 아라키돈산 잔기, 더욱 특히 아난다미드 (아라키도노일 에탄올 아미드) 잔기 및 그에 공유 결합된, 핵산, 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드로부터 선택된 1개 이상의 뉴클레오시드 성분을 포함하는 접합체에 관한 것이다. 상기 접합체는 세포, 예컨대 인간 세포를 비롯한 포유동물 세포를 고효율로 형질감염시키는 데 적합하다. 따라서, 안티센스 분자, siRNA 분자, miRNA 분자, 안타고미르(antagomir) 또는 상기 분자의 전구체를 비롯한 치료 분자 뿐만 아니라 치료 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드에 대한 신규한 전달 비히클을 제공한다.

Description

아난다미드-변형된 핵산 분자 {ANANDAMIDE-MODIFIED NUCLEIC ACID MOLECULES}
본 발명은 1개 이상의 다중불포화 지방산 잔기, 특히 아라키돈산 잔기, 더욱 특히 아난다미드 (아라키도노일 에탄올 아미드) 잔기 및 그에 공유 결합된, 핵산, 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드로부터 선택된 1개 이상의 뉴클레오시드 성분을 포함하는 접합체에 관한 것이다. 상기 접합체는 세포, 예컨대 인간 세포를 비롯한 포유동물 세포를 고효율로 형질감염시키는 데 적합하다. 따라서, 안티센스 분자, siRNA 분자, miRNA 분자, 안타고미르(antagomir) 또는 상기 분자의 전구체를 비롯한 치료 분자 뿐만 아니라 치료 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드에 대한 신규한 전달 비히클을 제공한다.
RNA 간섭은 짧은 RNA 이중 가닥을 사용하여 세포에서 특정 단백질의 형성을 억제시키는 강력한 도구이다 (1-3). 사실상, 침묵 RNA 분자는 다이서(Dicer) 복합체에 의해 절단된 더욱 큰 전사체로부터 생성된다 (4). 그러나, 생명공학적으로 적용하는 경우, RNA 분자 (siRNA)는 화학적으로 제조되고, 투여된다. siRNA를 치료제로서 사용하고자 하는 생각 (5)은 지난 10년 동안 집중적으로 추구되었지만, RNA 듀플렉스의 열악한 세포 흡수라는 주된 장애는 극복되지 못하였다 (6). 현재, 나노입자 (7,8), 리포솜 (9, 10), 또는 다가양이온 중합체 (11)처럼 분기성인 RNA 전달 시스템이 집중적으로 연구되고 있는 중이다. 그러나, 이 분야에서 실질적인 진보가 이루졌음에도 불구하고, 종종 여전히 높은 독성 (12-14) 및 낮은 세포 특이성이 해결되지 못한 문제를 나타낸다.
가장 최근에는 수용체 매개 세포내이입이 siRNA를 특수한 세포 유형으로 표적화할 수 있도록 하는 대체 전달 전략법으로서 진화하였다 (16-25). 본 방법은 세포 유형 특이 수용체에 결합하는 리간드에 siRNA를 연결시키는 것을 요구한다. 이는 내재화 과정을 개시시키고, 이로써 RNA-리간드 접합체의 흡수가 이루어진다. 현재 상기 전략법은 콜레스테롤 변형된 RNA를 이용함으로써 가장 성공적으로 시행되고 있다 (24).
여기서, 본 발명자들은 상기와 같은 수용체 매개 전략법을 사용함으로써 현재까지도 감수성 세포, 예컨대 뉴런 세포 (26,27) 및 면역 세포 (28)는 형질감염시키기가 어렵다는 문제를 성공적으로 해결할 수 있다고 보고하였다. 본 발명자들은 상기 세포 유형 둘 모두에 존재하는 칸나비노이드 수용체 (29)가 아라키도노일 에탄올 아미드 (30,31) (아난다미드) 변형된 siRNA로 효율적으로 표적화될 수 있다는 것을 발견하게 되었다.
본 발명의 제1 측면은 다중불포화 지방산 잔기 및 그에 공유 결합된, 핵산, 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드로부터 선택된 1개 이상의 뉴클레오시드 성분을 포함하는 접합체이다.
"접합체"라는 용어는 또한 염, 특히 제약상 허용되는 염, 예컨대 관련 기술분야게 공지된 바와 같은 무기 또는 유기 산 또는 염기와의 부가 염을 포함한다.
접합체는 1개 이상의 다중불포화 지방산 잔기, 특히 1-10개, 더욱 특히 1-5개의 지방산을 포함한다. 더욱더 특히, 접합체는 1 또는 2개의 다중불포화 지방산 잔기를 포함한다. 가장 특히, 접합체는 1개의 다중불포화 지방산 잔기를 포함한다.
특정 실시양태에서, 다중불포화 지방산 잔기는 아라키돈산 (AA) 잔기, 더욱 특히 아라키도노일 에탄올 아미드 (아난다미드) 산 잔기이다.
추가의 특정 실시양태에서, 다중불포화 지방산 잔기에 부착된 뉴클레오시드 성분은 핵산 분자, 더욱 특히 RNA 분자이다.
접합체는 1개 이상의 뉴클레오시드 성분, 특히 1-25개, 더욱 특히 2-20개 또는 2-10개, 더욱더 특히 2-8개, 즉 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 뉴클레오시드 성분을 포함한다. 접합체가 1개 초과의 뉴클레오시드 성분을 포함할 경우, 뉴클레오시드 성분은 동일하거나, 상이할 수 있다.
추가의 특정 실시양태에서, 접합체는 1개의 다중불포화 지방산 잔기, 예컨대 아난다미드 잔기 및 2-20개, 특히 2-8개, 즉 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 뉴클레오시드 성분을 포함한다.
한 실시양태에서, 접합체는 선형 구조를 가질 수 있다. 따라서, 뉴클레오시드 성분은 선형 쇄로 연결될 수 있으며, 여기서 다중불포화 지방산 잔기는 쇄 내에, 상기 쇄의 한쪽 단부에, 또는 상기 쇄의 양쪽 단부에 존재할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 접합체는, 뉴클레오시드 성분이 분지형 링커, 예컨대 덴드리머 링커를 통해 다중불포화 지방산 잔기에 결합되어 있는 분지형 구조를 가진다.
"다중불포화 지방산 잔기"라는 용어는 유리 지방산 잔기 뿐만 아니라 지방산 유도체 잔기, 특히 지방산 에스테르 잔기, 또는 지방산 아미드 잔기, 지방산 술포네이트 잔기, 지방산 술페이트 잔기, 지방산 포스포네이트 잔기, 지방산 포스페이트 잔기 등을 포함한다. 다중불포화 지방산 잔기에는, 1개 이상의 뉴클레오시드 성분이 공유 결합될 수 있는 관능기가 있다. 관능기는 지방산의 카르복시 기 또는 또 다른 관능기, 예컨대 에스테르 잔기의 알콜 상에 존재하는 관능기, 또는 아미드 잔기의 아민 상에 존재하는 관능기로서, 예컨대 OH 또는 NH2 기일 수 있는 관능기일 수 있다. 에스테르 잔기의 알콜 모이어티는, 예컨대 추가 관능기를 갖는 C1-5 알콜, 예컨대 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 또는 글리세롤일 수 있다. 아미드 잔기의 아민 모이어티는 추가 관능기를 갖는 C1-5 아민, 예컨대 에탄올 아민, 프로판올 아민 또는 에틸렌 디아민일 수 있다.
접합체에 존재하는 다중포화 지방산 잔기는 바람직하게는 다중불포화 C16-C24 지방산 잔기, 특히 C18, C19, C20, C21 또는 C22 지방산 잔기, 더욱 특히 C20 지방산 잔기이다. 다중불포화 지방산 잔기는 2개 이상의 C=C 결합, 특히 3, 4, 5 또는 6개, 더욱 특히 4개의 C=C 결합을 가진다. 적어도 1-5개, 특히 4개의 C=C 결합은 Z-배위이다. 더욱 특히, 모든 이중 결합은 Z-배위이다.
다중불포화 지방산 잔기의 구체적인 예는 시스-5, 8, 11, 14-에이코사테트라엔산 (아라키돈산) 잔기, 시스-5, 8, 11, 14, 17-에이코사펜타엔산 (EPA) 잔기, 시스-4, 7, 10, 13, 16, 19-도코사헥사엔산 (DHA) 잔기, 시스-6, 9, 12-옥타데카트리엔산 (GLA) 잔기 및 시스-8, 11, 14-에이코사트리엔산 (DGLA) 잔기로부터 선택된다. 더욱 특히, 지방산 잔기는 아라키돈산 잔기이다. 특히 바람직한 실시양태에서, 지방산 잔기는 아라키도노일 에탄올 아미드 (아난다미드)이다.
지방산 잔기는 1개 이상의 뉴클레오시드 성분에 공유 결합되어 있다. 바람직하게, 지방산 잔기는 링커를 통해 1개 이상의 뉴클레오시드 성분에 결합되어 있다. 링커는 선형 또는 분지형 링커일 수 있고, 보통 탄소 원자 및 특히 헤테로원자, 예컨대 S, N, 및/또는 O 원자를 포함하는 것으로, 쇄 길이가 2-50개의 원자이다.
예를 들어, 링커는 선형 링커, 예컨대 1개 이상, 예컨대 1-10개, 특히 2-5개, 더욱 특히 3개의 C1-C3 알킬렌 옥시드 기, 특히 에틸렌 옥시드 기를 포함하는 링커일 수 있다.
별법으로, 링커는 분지형, 예컨대 덴드리머 링커일 수 있다.
다중불포화 지방산 잔기는 공지된 링커 기법을 통해 1개 이상의 뉴클레오시드 성분에 연결될 수 있다. 그러나, 바람직하게는 부착은 클릭(Click) 반응, 예컨대 아지드와 알킨 기 사이, 구속형 알켄, 예컨대 노르보르넨과 니트릴 이민, 니트릴 옥시드 또는 테트라진 사이의 것을 포함하며, 이를 통해 클릭 반응에 의해 형성된 시클릭 기, 특히 1,2,3-트리아졸 기가 생성된다.
바람직한 실시양태에서, 다중불포화 지방산 잔기는 수용체 리간드, 바람직하게는 진핵 세포의 막에 존재하는 수용체, 특히 포유동물 세포, 예컨대 인간 세포의 막에 존재하는 수용체의 리간드이다. 더욱 바람직하게, 다중불포화 지방산 잔기는 문헌 (48) (상기 문헌의 내용은 본원에 포함됨)에 기술되어 있는 바와 같은 칸나비노이드 수용체의 리간드이다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 하기 화학식 Ia 또는 Ib로 표시된다:
<화학식 Ia>
Fn－(Lm-N)r
<화학식 Ib>
Fn－(Lm-N)r－Lm-Fn
상기 식에서,
F는 다중불포화 지방산 잔기이고,
L은 링커이고,
N은 핵산, 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드으로부터 선택되는 뉴클레오시드 성분이고,
n은 정수 1-10, 바람직하게는 1-5, 더욱 바람직하게는 1이고,
m은 0 또는 1이고,
r은 정수 1-25, 바람직하게는 2-20, 더욱 바람직하게는 2-8이다.
상기 실시양태에서, 접합체는 하기 구조, 예컨대
F－L－N
F－(L－N)r
(여기서, F, L, N 및 r은 상기 정의된 바와 같음)
F－L*－(N)r
(여기서, L*은 분지형 링커이고, F, N 및 r은 상기 정의된 바와 같음)
F－(L－N)r－L－F
(여기서, F, L, N 및 r은 상기 정의된 바와 같음)로 표시될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 접합체는, 1개 이상의 뉴클레오시드 성분에 공유 결합된 추가의 수용체 리간드를 포함할 수 있다. 추가의 수용체 리간드는 다중불포화 지방산 잔기와 상이한 화합물, 예컨대 폴레이트, 콜레스테롤 또는 호르몬이다.
상기 실시양태에서, 접합체는 하기 화학식 II를 갖는 구조로 표시될 수 있다:
<화학식 II>
Fn－(Lm-N)r－Lm-Zs
상기 식에서,
F는 다중불포화 지방산 잔기이고,
L은 링커이고,
n은 정수 1-10, 바람직하게는 1-5, 더욱 바람직하게는 1이고,
m은 0 또는 1이고,
N은 핵산, 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드로부터 선택된 뉴클레오시드 성분이고,
r은 정수 1-25, 바람직하게는 2-20, 더욱 바람직하게는 2-8이고,
Z는 추가의 수용체 리간드이고,
s는 정수 1-10, 바람직하게는 1-5, 더욱 바람직하게는 1이다.
상기 실시양태에서, 접합체는 하기 구조, 예컨대
F－L－N－Z
F－(L－N)r－L－Z
(여기서, F, L, N, Z 및 r은 상기 정의된 바와 같음)
F－L*－(N)r－L－Z
(여기서, L*은 분지형 링커이고, F, L, N, Z 및 r은 상기 정의된 바와 같음)로 표시될 수 있다.
본 발명의 접합체는 핵산, 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드로부터 선택된 1개 이상의 뉴클레오시드 성분을 포함한다.
"핵산"이라는 용어는 단일-가닥 및 이중-가닥 핵산 분자, 예컨대 DNA 분자 또는 RNA 분자 및 이들의 유사체를 포함한다. 핵산의 유사체는 하기 기술된 바와 같이 1개 이상의 변형된 빌딩 블록을 포함하는 핵산 분자이다.
한 실시양태에서, 핵산 분자는 1개 이상의 변형된 빌딩 블록을 포함할 수 있는 DNA 분자이다. "DNA 분자"라는 용어는 단일-가닥 또는 이중-가닥 DNA 분자를 포함한다. 이중-가닥 DNA 분자에서, 개별 가닥은 분리형 분자로 존재할 수 있거나, 또는 단일-가닥 루프를 통해 또는 이종성 링커를 통해 공유 연결되어 있을 수 있다.
"DNA 분자"라는 용어는 천연 DNA 빌딩 블록, 즉 2'-데옥시리보뉴클레오티드 빌딩 블록으로 구성된 분자, 및 1개 이상의 변형된 빌딩 블록을 포함하는 분자를 포함한다.
추가의 실시양태에서, 핵산 분자는 1개 이상의 변형된 빌딩 블록을 포함할 수 있는 RNA 분자이다. "RNA 분자"라는 용어는 단일-가닥 또는 이중-가닥 RNA 분자를 포함하며, 여기서 이중-가닥 RNA 분자는 1개 이상의 오버행, 예컨대 1개 이상의 3'-오버행을 가질 수 있다. 이중-가닥 RNA 분자에서, 개별 가닥은 분리형 분자로 존재할 수 있거나, 또는 단일-가닥 루프를 통해 또는 이종성 링커를 통해 공유 연결되어 있을 수 있다.
"RNA 분자"라는 용어는 천연 RNA 빌딩 블록, 즉 2'-리보뉴클레오티드 빌딩 블록으로 구성된 분자, 및 1개 이상의 변형된 빌딩 블록을 포함하는 분자를 포함한다.
변형된 빌딩 블록은 당-, 골격- 및/또는 핵염기-변형된 빌딩 블록으로부터 선택될 수 있다. 당-변형된 데옥시리보뉴클레오티드는 데옥시리보스와 상이한 당 기, 예컨대 2'-H 기가 OH, R, OR, 할로, SH, SR, NH2, NHR, NR2 또는 CN으로부터 선택되는 기 (여기서, R은 C1-C6 알킬 또는 알콕시, 또는 C2-C6 알케닐 또는 알키닐이고, 할로는 F, Cl, Br, I임)에 의해 대체된 것인 변형된 데옥시리보스 기를 포함한다. 2'-H 변형의 구체적인 예로는 2'-F 및 2'-O 메틸이 있다. 당-변형된 리보뉴클레오티드는 리보스와 상이한 당 기, 예컨대 2'-OH 기가 H, R, OR, 할로, SH, SR, NH2, NHR, NR2 또는 CN으로부터 선택되는 기 (여기서, R은 C1-C6 알킬 또는 알콕시, 또는 C2-C6 알케닐 또는 알키닐이고, 할로는 F, Cl, Br, I임)에 의해 대체된 것인 변형된 리보스 기를 포함한다. 2'-OH 변형의 구체적인 예로는 2'-F 및 2'-O 메틸이 있다. 골격-변형된 빌딩 블록에서, 인접한 빌딩 블록을 연결하는 포스포에스테르는 변형된 연결기, 예컨대 포스포로티오에이트 기에 의해 대체될 수 있다. 핵염기-변형된 빌딩 블록에서, 비-자연 발생 핵염기가 자연 발생 핵염기 대신 존재할 수 있다. 퓨린 또는 피리미딘 핵염기의 상응하는 유사체는 관련 기술분야에 잘 공지되어 있다. 상기 변형은 조합될 수 있다는 점에 주목하여야 한다.
핵산 분자는 바람직하게는 제약 적용에 적합한 핵산 분자로부터, 특히 안티센스 분자로부터, 또는 RNA 간섭을 매개할 수 있는 RNA 분자, 예컨대 siRNA 분자 또는 그의 전구체로부터 선택된다. 추가로 적합한 RNA 분자로는 miRNA 분자, 안타고미르, 리보자임 및 이들의 전구체를 포함한다.
"뉴클레오시드 성분"이라는 용어는 또한 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 및 이들의 유사체를 포함한다. 뉴클레오시드는 핵염기 및 당 기를 포함하는 화합물이다. 뉴클레오티드 화합물은 핵염기, 당 기 및 포스페이트 기를 포함하는 화합물이다. 당-, 포스페이트- 및 핵염기-변형된 화합물, 특히 암 및/또는 바이러스 감염 치료에 적합한 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 유사체 치료제, 예컨대 AZT, 아시클로비르, 간시클로비르, 발라시클로비르, 겜시타빈, 시타라빈 등 또한 본 발명에 포함된다.
뉴클레오시드 성분은 분자의 핵염기, 당 또는 포스페이트 기를 통해 지방산 잔기에 연결될 수 있다. 화합물이 핵산일 경우, 이는 핵산 분자에 존재하는 빌딩 블록을 통해, 특히 말단 빌딩 블록, 즉 핵산 가닥의 5' 또는 3'-말단에 위치하는 빌딩 블록을 통해, 더욱 특히 핵산 가닥의 3'-말단 빌딩 블록을 통해 연결될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 연결은 핵산 분자, 특히 RNA 분자에 존재하는 변형된 말단 핵염기를 통해 이루어진다.
바람직한 실시양태에서, 다중불포화 지방산 잔기에의 공유 연결은 뉴클레오시드 성분에 존재하는 핵염기에, 예컨대 DNA 또는 RNA 분자의 빌딩 블록의 것에, 예컨대 퓨린 염기의 8번 위치, 또는 피리미딘 염기의 5번 위치에 부착될 수 있다.
핵산 분자, 예컨대 DNA 또는 RNA 분자의 길이는 5, 10, 12, 15 또는 18개의 빌딩 블록 내지 최대 25, 30, 50 또는 100개 또는 그 초과의 빌딩 블록이다. 핵산 분자는, 예컨대 RNA 폴리머라제에 의해, 예컨대 T3, T7 또는 SP6 RNA 폴리머라제에 의해 촉매되는 전사에 의해, 또는 DNA 복제에 의해, 또는 역전사에 의해 핵산 주형으로부터 화학적 합성에 의해 또는 효소적 방법에 의해 제조될 수 있다. 바람직하게, 화학적 또는 효소적 합성 동안 관능기, 예컨대 클릭 관능기, 예컨대 말단 알킨 기 또는 아지드 기, 구속형 알켄 기, 예컨대 노르보르넨 기, 니트릴 옥시드 기, 니트릴 이민 기 또는 테트라진 기를 포함하는 빌딩 블록이 혼입된다. 특정 실시양태에서, 임의로 링커를 통해 말단 알킨 기를 포함함으로써 변형된 빌딩 블록이 혼입된다. 클릭 변형된 빌딩 블록을 핵산 분자 내로 도입시키는 방법은 WO2006/117161 및 WO2008/052775 (이들의 내용은 본원에 참조로 포함됨)에 기술되어 있다. 공지된 방법에 따라 뉴클레오시드 성분 상의 관능기를 다중불포화 지방산 잔기에 부착된 상보적인 관능기에 커플링시킬 수 있다. 바람직하게, 커플링은, 예컨대 상보적인 클릭 관능성 반응기, 예컨대 아지드 기와의 클릭 반응에 의해 수행된다.
별법으로, 다중불포화 지방산 잔기에 연결된, 변형된 핵산 빌딩 블록은, 예컨대 포스포르아미다이트 빌딩 블록을 사용하여 표준 방법에 따라 고체상 합성 동안 핵산, 예컨대 RNA 분자 내로 도입될 수 있다.
본 발명은 또한 하기 화학식 V를 갖는, 본 발명의 접합체를 제조하기 위한 시약을 제공한다:
<화학식 V>
Fn―(L')m-(RG1)r
상기 식에서,
F, n, m 및 r은 상기 정의된 바와 같고,
L'은 링커이고,
RG1은 반응성 기, 특히 클릭 반응성 기, 예컨대 아지드 기이다.
하기 화학식 VI을 갖는, 본 발명의 핵산 접합체 제조를 위한 추가의 시약 또한 제공한다:
<화학식 VI>
BB―(L)m―Fn
상기 식에서,
F, L, n 및 m은 상기 정의된 바와 같고,
BB는 핵산 분자를 합성하기 위한 빌딩 블록, 예컨대 뉴클레오시드 트리포스페이트, 또는 고체상 합성에 적합한 빌딩 블록, 예컨대 포스포르아미다이트이다.
또한 본 발명의 추가의 측면은
(i) 시약 V를 하기의 1개 이상의 변형된 뉴클레오시드 성분 VII과 커플링시켜 접합체를 형성하거나, 또는
(ii) 시약 V를 하기의 1개 이상의 변형된 핵산 빌딩 블록 VIII과 커플링시켜 시약 VI을 형성하고, 시약 VI을 예컨대 화학적 또는 효소적 합성에 의해 핵산 분자 내로 혼입시켜 접합체를 형성하는 것
을 포함하는, 본 발명의 접합체를 제조하는 방법이다:
<화학식 VII>
(N)r―(L")m―RG2
<화학식 VIII>
BB―(L")m―RG2
상기 식에서,
N, r 및 n은 상기 정의된 바와 같고,
BB는 핵산 분자를 합성하기 위한 빌딩 블록이고,
L"은 링커이고,
m은 0 또는 1이고,
RG2는 RG1과 반응할 수 있는 반응성 기, 특히 클릭 반응성 기, 예컨대 알킨 기이다.
본 발명의 추가의 측면은
(a) 표적-특이 핵산 변형이 발생할 수 있는 조건하에서 세포 또는 유기체를 본 발명의 접합체와 접촉시키는 단계, 및
(b) 접합체의 뉴클레오시드 성분에 의해 수행되는 표적 핵산으로의 표적-특이 핵산 변형을 매개하는 단계
를 포함하는, 세포 또는 유기체에서 표적-특이 핵산 변형을 매개하는 방법에 관한 것이다.
접촉 단계 (a)는 표적 세포, 예컨대 세포 배양물, 단세포 미생물 중에 존재할 수 있는 단리된 표적 세포, 또는 다세포 유기체 내의 표적 세포 또는 복수 개의 표적 세포들 내로 접합체를 도입시키는 것을 포함할 수 있다. 표적 세포는 바람직하게는 인간 세포를 비롯한 포유동물 세포이다. 표적 유기체는 바람직하게는 포유동물 유기체, 예컨대 인간 유기체이다. 유기체 내로 도입시키는 것은, 예컨대 주사 또는 주입에 의한 비경구 투여, 경점막 투여 또는 경피 투여를 포함할 수 있다.
매개 단계 (b)는 바람직하게는, 예컨대 siRNA 접합체를 사용할 경우 RNA 간섭에 의해, 안티센스 분자 접합체를 사용할 경우 mRNA 전사 억제에 의해, 치료 뉴클레오시드/뉴클레오티드 접합체를 사용할 경우 바이러스 또는 종양 세포 복제 억제에 의해 표적 핵산의 억제를 포함한다.
접합체는 바람직하게는 수용체-매개 세포내이입에 의해, 더욱 바람직하게는 칸나비노이드 수용체-매개 세포내이입에 의해 표적 세포 내로 도입된다. 따라서, 접합체는 전달 비히클 및/또는 형질감염 시약의 부재하에서도 표적 내로 도입될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 시험관내 세포 형질감염에 사용하기 위한, 특히 시험관내에서의 인간 세포를 비롯한 포유동물 세포의 형질감염을 위한 것이다. 놀랍게도, 본 발명의 접합체는 특히 면역 세포, 예컨대 B 세포, T 세포, 대식 세포, 자연 킬러 세포 및 그의 전구체 뿐만 아니라 뉴런 세포, 성상세포 또는 칸나비노이드 수용체를 발현하는 다른 세포의 형질감염에 적합하다는 것을 발견하게 되었다. 칸나비노이드 수용체 CB2를 발현하는 면역 세포의 예는 문헌 (49, 50 및 51) (상기 문헌의 내용은 본원에 참조로 포함됨)에 기술되어 있다. 칸나비노이드 수용체 CB1을 발현하는 뉴런 세포의 예는 문헌 (52, 53, 54 및 55) (상기 문헌의 내용은 본원에 참조로 포함됨)에 기술되어 있다.
추가의 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 약제에서, 특히 인간용 약제에서 뿐만 아니라 수의학용 약제에서 사용하기 위한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 적합한 담체와 함께, 활성 성분으로서 상기 기술된 바와 같은 접합체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 진단 또는 치료 적용을 위해, 제약 조성물은 용액, 예컨대 주입 또는 주사용 용액, 크림, 연고, 정제, 현탁액 형태 등일 수 있다. 조성물은 임의의 적합한 방식으로, 예컨대 비경구 투여에 의해, 예컨대 주사 또는 주입에 의해, 경점막 적용에 의해, 또는 경피 적용에 의해, 또는 경구, 국소적, 코, 직장 적용 등에 의해 투여될 수 있다.
제약 조성물은 활성제로서의 접합체를 캡슐화되지 않은 형태로, 예컨대 전달 비히클, 예컨대 리포솜 없이 및/또는 형질감염 시약 없이 포함할 수 있다.
본 발명의 접합체는 세포 또는 유기체에서 유전자, 예컨대 바이러스 유전자 또는 세포 질환-연관 유전자, 예컨대 종양유전자, 또는 자가면역 또는 알레르기성 질환-연관 유전자의 하향 조절을 위해 사용될 수 있다. 바람직한 세포 표적 유전자는, 예컨대 IgE-의존성 염증성 신호전달 캐스케이드에 관여하는 비장 티로신 키나제 (SYK)를 코딩하는 자가면역 또는 알레르기성 질환-연관 유전자인 syk 유전자이다. 인간 SYK 오르토로그는 유니프로트(UniProt) P 43405로 기술되어 있고, 뮤린 SYK 오르토로그는 유니프로트 P 48025로 기술되어 있다. 추가의 바람직한 표적 유전자는 아밀로이드 전구체 단백질 (APP)을 코딩하는 APP 유전자이다. 인간 APP 오르토로그는 유니프로트 P 05067로 기술되어 있다. APP는 β 또는 γ 세크레타제에 의해, 알츠하이머병 발생과 연관된 신경독성 단편으로 절단된다. 바람직한 바이러스 표적 유전자는 모노네가바이랄레스(mononegavirales) 목의 바이러스, 예컨대 에볼라 바이러스, 홍역 바이러스 및 광견병 바이러스의 N 또는 P 단백질을 코딩하는 유전자이다.
본 발명의 추가의 측면은 하기에 기술되어 있는 바와 같다. 상기 측면의 구체적인 특징 및 특징들의 조합은 상기 측면의 개시내용으로부터 도출될 수 있다.
접합체는 수용체 리간드 성분, 예컨대 상기 기술된 바와 같은 다중불포화 지방산 잔기, 폴레이트, 콜레스테롤 또는 호르몬, 및 그에 공유 결합된 상기 기술된 바와 같은 1개 이상의 뉴클레오시드 성분을 포함하며, 여기서 접합체는 1개의 수용체 리간드 성분 및 2개 이상의 뉴클레오시드 성분 분자, 예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 분자를 포함한다.
접합체는 수용체 리간드 성분, 예컨대 상기 기술된 바와 같은 다중불포화 지방산 잔기, 폴레이트, 콜레스테롤 또는 호르몬, 및 그에 공유 결합된 상기 기술된 바와 같은 1개 이상의 뉴클레오시드 성분을 포함하며, 여기서 수용체 리간드 성분은 클릭 반응에 의해 형성된 기, 예컨대 상기 기술된 바와 같은 1,2,3-트리아졸 기를 포함하는 링커를 통해 뉴클레오시드 성분에 결합되어 있다.
접합체는 1개 이상의 C=C 불포화 화합물 및 그에 공유 결합된 상기 기술된 바와 같은 1개 이상의 뉴클레오시드 성분을 포함하며, 여기서 C=C 불포화 화합물은 클릭 반응에 의해 형성된 기, 예컨대 상기 기술된 바와 같은 1,2,3-트리아졸 기를 포함하는 링커를 통해 뉴클레오시드 성분에 결합되어 있다. C=C 불포화 화합물은 1개 이상의 C=C 결합, 특히 Z-배위의 C=C 결합을 포함한다. 바람직한 예로는 테르펜 및 불포화 지방산, 예컨대 단일 또는 다중불포화 지방산이 있다.
C=C 불포화 화합물, 바람직하게는 C4-C24 화합물, 특히 지방산 (그의 유도체 포함), 예컨대 자스모네이트, 예컨대 자스몬산 또는 자스모네이트 에스테르, 예를 들어 자스모네이트 메틸 에스테르이다.
일부 실시양태에서, C=C 불포화 화합물은 단일 C=C 결합, 특히 Z-배위의 것을 포함한다.
본 발명은 하기 도면 및 실시예에 의해 더욱 상세하게 개략될 것이다.
도 1
아지드 변형된 아난다미드 (1) 뿐만 아니라 폴레이트 (2) 및 콜레스테롤 (3) 유도체의 합성.
5 = 11-아지도-3,6,9-트리옥사운데칸-1-아민,
PyBOP = 벤조트리아졸-1-일옥시트리피트롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트,
TBTU = O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라-플루오로보레이트,
DIPEA = N,N-디이소프로필에틸아민,
DBU = 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔,
9 = 프테로산,
TFA = 트리플루오로아세트산, 및
CDI = 카르보닐디이미다졸.
도 2
레닐라 루시페라제(Renilla Luciferase)를 표적화하는 아난다미드 및 폴레이트 변형된 siRNA의 화학 구조 및 서열.
도 3
플루오레세인 표지된 siRNA 및 dsDNA의 RBL-2H3 및 HeLa 세포로의 전달. 칸나비노이드 수용체를 발현하는 RBL-2H3 세포를 아난다미드 (AEA) 변형된 dsDNA 및 siRNA와 함께 인큐베이션시켰다. 폴레이트 수용체를 발현하는 HeLa 세포를 폴레이트 (FA) 변형된 dsDNA 및 siRNA와 함께 인큐베이션시켰다. 음성 대조군으로서 두 세포주 모두를 리간드 변형이 없는 듀플렉스와 함께 인큐베이션시켰다.
도 4
a, b) HeLa 세포에서 폴레이트 (FA, 보라색) 변형된 siRNA에 의해 및 RBL-2H3 세포에서 아난다미드 (AEA, 청색) 변형된 siRNA에 의해 매개된 레닐라 루시페라제의 침묵화 상대치. 루시페라제 활성을 통한 정량화. c) RBL-2H3 세포에서 콜레스테롤 (Chol, 녹색) 및 아난다미드 (AEA, 청색) 변형된 siRNA에 의해 매개된 레닐라 루시페라제의 침묵화 상대치. 루시페라제 활성을 통한 정량화. d) RBL-2H3 세포에서 콜레스테롤 (Chol, 녹색) 및 아난다미드 (AEA, 청색) 변형된 siRNA에 의해 매개된 비장 티로신 키나제의 침묵화 상대치. mRNA 수준을 측정함으로써 정량화를 수행하였다.
도 5
인간 B 세포 (BJAB)에서 아난다미드 (AEA, 청색) 변형된 siRNA 및 제트 PRIME (JP, 회색) 캡슐화된 비-변형된 siRNA에 의해 매개된 루시페라제의 침묵화 상대치. AEA 변형된 siRNA의 유전자 침묵화 효과는 제트 프라임-캡슐화된 siRNA의 것과 유사하다.
도 6
아난다미드 (AEA, 청색) 변형된 siRNA 및 제트 PRIME-캡슐화된 siRNA (JP, 회색)의 세포독성이 제시되어 있다. 사이토톡스-지오(cytotox-Gio) 세포독성 검정 (프로메가(Promega))을 통한 정량화. 정상적인 세포 성장 (모의, 검은색) 및 유도성 세포 사멸 (pos. C, 적색) 또한 제시되어 있다. AEA-변형된 siRNA는 1.0 μM 농도에서는 세포독성을 나타내지 않았다. 그와 대조적으로, 제트 PRIME-캡슐화된 siRNA는 세포독성이 용량에 의존하는 방식으로 증가하는 것으로 나타났다.
도 7
상이한 아난다미드-변형된 siRNA 비교.
a) 아난다미드 (AEA 리간드), 링커 및 단일 siRNA 분자로 이루어진 접합체.
b) AEA-리간드, 분지형 링커 및 3개의 siRNA 분자로 이루어진 접합체.
도 8
a) 9-폴드 siRNA 변형된 아난다미드를 생성하기 위한, 시약으로서의 9-폴드 아지드 변형된 아난다미드 접합체.
b) 구리-촉매된 알킨-아지드 클릭 반응 (CuAAC)을 통한 알킨-변형된 RNA 올리고뉴클레오티드의 9-폴드 알킨-아지드-변형된 아난다미드에의 공유 커플링에 대한 반응식.
도 9
a, b) 9-폴드 아지드-변형된 아난다미드 구축물의 예시적인 합성.
도 10
HPLC 및 질량 분광측정법을 통한 9-폴드 및 8-폴드 아난다미드-변형된 RNA 올리고뉴클레오티드의 특징규명.
도 11
1, 3, 7, 8 및 9개의 siRNA 분자를 갖는 상이한 아난다미드 (AEA)-변형된 RNA 구축물의 siRNA 효능 비교. 루시페라제 활성을 통한 정량화. 수용체 리간드 1개당 3개 및 7개의 siRNA 분자를 갖는 구축물의 경우, 효능이 가장 높은 것으로 나타났다.
도 12
구축물당 1, 3, 8 또는 9개의 siRNA 분자를 갖는 접합체를 이용한 내인성 유전자 (SYK)의 하향 조절의 효능 비교.
아난다미드 1개당 3개의 siRNA 분자를 갖는 구축물이 가장 우수한 결과를 나타내었다.
실시예
1. RNA -리간드 접합체 합성
도 1에 도시된 바와 같이 아난다미드 변형된 RNA 가닥의 합성을 수행하였다. 합성의 중심 요소는 알킨 변형된 RNA 가닥 및 상응하는 리간드 아지드 (1) 사이의 Cu-촉매된 알킨-아지드 클릭 반응 (34-39)이다. 아난다미드 변형된 RNA 가닥을 다른 시스템과 비교하기 위하여, 본 발명자들은 폴레이트 아지드 (2)를 사용하는 폴레이트-RNA (40) 접합체 제조 및 콜레스테롤 아지드 (3)를 사용하는 콜레스테롤 변형된 RNA 가닥 제조를 위한 클릭 방법을 이용하였다. 본 발명자들은 모든 경우에서 RNA 가닥과 각 리간드 사이에 짧은 테트라에틸렌 글리콜 스페이서를 도입하였다. 모든 경우에서 클릭 기술을 통해 소수성 및 대개는 매우 불용성인 (폴레이트) 리간드 분자를 RNA에 효율적으로 라이게이션시킬 수 있었다. 추가로, 본 방법을 통해 siRNA 듀플렉스의 3'-말단에 접근하기 더욱 어려운 지점에서 효율적으로 접합이 이루어질 수 있었다. 3'-변형된 siRNA 가닥이 전형적으로는 RNAi 기구에 의해 더 우수하게 용인된다 (41). 3'-말단 부착을 달성하기 위하여 본 발명자들은 RNA 합성 동안 C5에 옥타디엔 핸들이 있는 데옥시우리딘 포스포르아미다이트를 사용하였다.
아라키돈산 (4) 및 아지도- 및 아미노-관능화된 올리고에틸렌 글리콜 (5)로부터 단 하나의 단계로 아난다미드 아지드 리간드 (1)를 제조하였다. 콜레스테롤 아지드 (3)의 합성을 위해 동일한 전략법을 사용하였다. 아미노-아지드 테트라에틸렌 글리콜 화합물 (5)과 축합시킨 보호된 글루탐산 유도체 (6)를 출발로 하여 좀 더 복잡한 합성을 통해 폴레이트 유도체 (2)를 제조하였다. 폴레이트 (2)의 탈보호 후 Fmoc 기의 절단 및 프테로산과의 커플링이 이루어졌다. 화합물 (2)은 이러한 방식으로 감마-카르복실 기에 부착된 에틸렌 글리콜 스페이서를 함유하며, 이를 통해 수용체 결합 특성이 우수한 폴레이트 화합물이 제공된다 (42). 이어서, 3개의 아지드가 탁월한 수율로 알킨 함유 RNA 센스 가닥에 클릭되었다. HPLC 정제 후, 리간드 변형된 RNA를 안티센스 역가닥(counterstrand)에 하이브리드화하여 도 2에 도시되어 있는 siRNA 듀플렉스를 수득하였다.
2. RNA -리간드 접합체의 세포 내로의 전달
살아있는 세포 내로의 RNA 듀플렉스의 전달을 시각화하기 위해, 본 발명자들은 먼저 플루오레세인 표지를 함유하는 안티센스 가닥에 아난다미드- 및 폴레이트-변형된 RNA 센스 가닥을 하이브리드화시켰다. 도 3에는 상이한 2개의 세포주를 이용하여 수행된 공초점 현미경 연구의 결과가 제시되어 있다. 아난다미드 변형된 RNA 듀플렉스의 경우, 본 발명자들은 면역 세포 기능에 대한 모델로서의 역할을 하는 RBL-2H3 세포를 이용하였다 (43). 바커(Barker) 등은 RBL-2H3 세포에 의한 아난다미드 흡수는 기능적으로 뉴런 세포 및 성상세포와 동일하다는 것을 밝혀낼 수 있었다 (44). 따라서, 상기 세포주는 면역 세포 및 뉴런에서의 아난다미드 흡수에 대하여 탁월한 모델이다.
폴레이트 수용체를 과다발현하는 것으로 알려져 있는 HeLa 암 세포를 이용하여 폴레이트 변형된 RNA 듀플렉스의 흡수를 연구하였다. 현미경 연구를 통해 비-변형된 siRNA는 예상된 바와 같이 두 세포주 모두에 진입할 수 없다는 것이 밝혀졌다. 그러나, 아난다미드 및 폴레이트 변형된 siRNA는 각 세포 내부에서 쉽게 검출되었으며, 이는 흡수를 입증하는 것이다. 흡수가 전적으로 리간드 의존성인 것으로 나타난 변형된 dsDNA인 경우에도 또한 같은 결과가 관찰되었다 (도 3).
전달된 siRNA 분자가 원하는 RNAi 효과를 보인다는 것을 입증하기 위하여, 본 발명자들은 상업적으로 이용가능한 이중-루시페라제 리포터 검정을 이용하였다. 2개의 루시페라제 (레닐라 및 반딧불이)를 함유하는 플라스미드를 세포 내로 형질감염시켰다. 레닐라 루시페라제의 발현을 표적화함으로써 RNAi를 평가하였고, 반면 반딧불이 루시페라제는 내부 표준으로서의 역할을 하였다. 상기 연구를 위해, 본 발명자들은 추가의 플루오레세인 변형 없이 리간드 변형된 siRNA를 사용하였다. 비-변형된 RNA 듀플렉스 (리간드 비포함, 플루오레세인 비포함)를 이용하여 수행된 초기 대조군 실험 결과, 레닐라 발현에는 어떤 영향도 없는 것으로 나타났다. 대조적으로, 본 발명자들은 두 세포주 모두에서 리간드 변형된 siRNA의 존재하에서는 레닐라 발현이 용량에 의존하는 방식으로 침묵화된 것을 관찰하였다 (도 4). 가장 중요하게는, 심지어 상대적으로 낮은 양의 siRNA-리간드 접합체도 이미 상당한 효과를 보였으며, 이는 최종적으로는 약 60%의 상대적인 침묵화를 유도하였다.
스크램블된 siRNA를 이용하여 최종 대조군 실험을 수행하였다. 여기서 또한 본 발명자들은 관찰된 침묵화가 아난다미드 변형된 siRNA의 mRNA 표적에의 특이적인 결합에 의해 유발된다는 것을 보여주는 어떤 발광 감소도 검출할 수 없었다.
이어서, 콜레스테롤-siRNA 접합체와 비교하여 아난다미드 변형된 siRNA의 침묵화 효능을 평가하였다 (24). 상기 비교 결과는 도 4에 도시되어 있다. 본 발명자들은 놀랍게도 새로운 아난다미드 (1) 변형된 siRNA가 광범위하게 이용된 콜레스테롤 시스템보다 일정하게 계속해서 유의적으로 더 큰 효력을 가지고 있다는 것을 관찰하게 되었으며, 이를 통해 아난다미드 리간드가 강력한 새 전달 도구로서 확립되었다.
아난다미드-siRNA 접합체가 치료학상 중요한 내인성 유전자 생성물을 하향 조절할 수 있는지 여부를 조사하기 위해, 본 발명자들은 이어서 IgE-의존성 염증성 신호전달 캐스케이드에 관여하는 중요한 단백질인 비장 티로신 키나제 (SYK)의 발현을 억제시키고자 시도하였다. 따라서, 상기 단백질은 알레르기 및 염증성 장애 치료를 위해 유망한 표적이 된다 (45,46). 본 실험을 위해, 본 발명자들은 산데르슨(Sanderson) 등에 의해 기술된 바와 같은 (47) 서열을 갖는 아난다미드 변형된 siRNA를 제조하였다. siRNA 접합체를 RBL-2H3 세포에 첨가한 후, 본 발명자들은 실시간 PCR을 사용하여 발현 수준을 모니터링하였다. 실제로, SYK 단백질의 발현은 약 55% 만큼 성공적으로 감소되었고 (도 4), 추가로, 아난다미드 접합체는 콜레스테롤 변형된 siRNA보다 실질적으로 더 큰 활성을 띠는 것으로 나타났다.
요약하면, 본 발명자들은 여기서 신규한 아난다미드 siRNA 접합체의 구축을 위한 Cu-촉매된 알킨-아지드 화학의 용도를 보고한다. 본 화학을 통해 탁월한 수율 및 순도로 3'-말단에서 상이한 리간드 변형된 RNA를 효율적으로 구축시킬 수 있었다. 특히, 접근하기가 악명 높게 어려운 폴레이트 변형된 올리고뉴클레오티드의 경우, 주목할 만하다. 아난다미드 접합을 통해 면역 세포의 형질감염이 이루어질 수 있고, 이는 탁월한 침묵화 데이터를 제공한다. 본 발명자들은 클릭 화학과 비교하였을 때, 아난다미드 리간드가 뉴런 및 면역 세포의 형질감염을 위해 가장 신뢰할만한 잠재능을 갖는 신규한 것이 된다고 믿고 있다.
3. 광견병 바이러스 단백질의 조절
아난다미드 siRNA는 광견병 바이러스 단백질을 조절하는 것으로 나타났다. siRNA는 바이러스 균주 SAD L16 (...)의 N- 및 P-단백질에 대해 지시되어 있었다. 바이러스 적정 및 성장 다이어그램에 의한 바, mRNA 녹다운이 광견병 바이러스의 전체 생활사에 부정적인 영향을 미치는 것으로 밝혀졌다.
세포를 광견병 바이러스로 감염시키고, 이어서 상이한 아난다미드-siRNA 구축물로 형질감염시킨 후, 세포 배지 중 바이러스 역가 (ffu/mL)를 측정하였다. 바이러스 역가가 최대 99%까지 감소된 것으로 나타났다.
BJAB 세포 (인간 버킷(Burkitt) 림프종 B 세포), Jurkat 세포 (인간 T 세포 백혈병 세포) 및 E14 세포 (마우스 피질 뉴런)를 이용하여 실험을 수행하였다.
4. 단백질 FKBP51 조절
단리된 인간 PBMC 세포에서, 단백질 FKBP51의 mRNA에 대해 지시되는 아난다미드-siRNA 접합체를 시험하였다. FKBP51은 스테로이드 호르몬 수용체의 신호전달을 조절하고, 그 중에서도 특히 특정 정신 장애 뿐만 아니라 알츠하이머와도 연관이 있다.
본 실험 결과, 단백질이 70% 녹다운된 것으로 나타났다.
참고문헌
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004

Claims (24)

1개 이상의 다중불포화 지방산 잔기 및 그에 공유 결합된, 핵산, 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드로부터 선택된 1개 이상의 뉴클레오시드 성분을 포함하는 접합체.
제1항에 있어서, 하기 화학식 Ia 또는 Ib를 갖는 접합체.
<화학식 Ia>
Fn－(Lm-N)r
<화학식 Ib>
Fn－(Lm-N)r－Lm-Fn
상기 식에서,
F는 다중불포화 지방산 잔기이고,
L은 링커이고,
N은 핵산, 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드로부터 선택된 뉴클레오시드 성분이고,
n은 정수 1-10, 바람직하게는 1-5, 더욱 바람직하게는 1이고,
m은 0 또는 1이고,
r은 정수 1-25, 바람직하게는 2-20, 더욱 바람직하게는 2-8이다.
제1항에 있어서, 1개 이상의 뉴클레오시드 성분에 공유 결합된 추가의 리간드를 포함하는 접합체.
제3항에 있어서, 하기 화학식 II를 갖는 접합체.
<화학식 II>
Fn－(Lm-N)r－Lm-Zs
상기 식에서,
F는 다중불포화 지방산 잔기이고,
L은 링커이고,
n은 정수 1-10, 바람직하게는 1-5, 더욱 바람직하게는 1이고,
m은 0 또는 1이고,
N은 핵산, 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드로부터 선택된 뉴클레오시드 성분이고,
r은 정수 1-25, 바람직하게는 2-20, 더욱 바람직하게는 2-8이고,
Z는 추가의 수용체 리간드이고,
s는 정수 1-10, 바람직하게는 1-5, 더욱 바람직하게는 1이다.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 다중불포화 지방산 잔기가 3, 4, 5 또는 6개, 바람직하게는 4개의 C=C 결합을 갖는 다중불포화 C16-C24 지방산의 잔기이며, 여기서 바람직하게는 적어도 1-5개, 더욱 바람직하게는 4개의 C=C 결합이 Z-배위이고, 특히 시스-5, 8, 11, 14-에이코사테트라엔산 (아라키돈산) 잔기, 시스-5, 8, 11, 14, 17-에이코사펜타엔산 (EPA) 잔기, 시스-4, 7, 10, 13, 16, 19-도코사헥사엔산 (DHA) 잔기, 시스-6, 9, 12-옥타데카트리엔산 (GLA) 잔기 및 시스-8, 11, 14-에이코사트리엔산 (DGLA) 잔기로부터 선택되는 것인 접합체.
제5항에 있어서, 다중불포화 지방산 잔기가 아라키돈산 잔기인 접합체.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산 잔기가 유리 지방산, 지방산 에스테르 또는 지방산 아미드, 지방산 술포네이트, 지방산 술페이트, 지방산 포스포네이트 또는 지방산 포스페이트의 잔기로부터 선택되는 것인 접합체.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 다중불포화 지방산 잔기가 링커를 통해 1개 이상의 뉴클레오시드 성분에 공유 결합되어 있는 것인 접합체.
제8항에 있어서, 링커가 클릭 반응에 의해 형성된 시클릭 기, 특히 알킨과 아지드 사이의 클릭 반응에 의해 형성된 1, 2, 3-트리아졸 기, 또는 노르보르넨과 니트릴 이민, 니트릴 옥시드 또는 테트라진 사이의 클릭 반응에 의해 형성된 기를 포함하는 것인 접합체.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 뉴클레오시드 성분이 핵산 분자, 특히 단일-가닥 RNA 분자 또는 임의로 1개 이상의 3'-오버행을 갖는 이중-가닥 RNA 분자, 더욱 특히 siRNA 분자인 접합체.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 뉴클레오시드 성분이 1개 이상의 변형된 빌딩 블록을 포함하는 핵산 분자인 접합체.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 뉴클레오시드 성분이 특히 핵산 분자에 존재하는 빌딩 블록의 핵염기, 당 또는 포스페이트 기를 통해, 특히 핵산 분자에 존재하는 말단 빌딩 블록을 통해 지방산 잔기에 연결되어 있는 것인 접합체.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 시험관내 세포 형질감염에 사용하기 위한, 특히 시험관내에서의 인간 세포를 비롯한 포유동물 세포의 형질감염을 위한 접합체.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 세포가 칸나비노이드 수용체-발현 세포, 특히 면역 세포, 뉴런 세포 및 성상세포인, 제13항에 따라 사용하기 위한 접합체.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 약제에서, 특히 인간용 약제에서 사용하기 위한 접합체.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 유전자, 예를 들어 바이러스 유전자 또는 세포 질환-연관 유전자, 예컨대 종양유전자 또는 자가면역 질환-연관 유전자의 하향 조절을 위한, 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 접합체.
하기 화학식 V를 갖는, RNA-리간드 접합체를 제조하기 위한 시약.
<화학식 V>
Fn―(L')m-(RG1)r
상기 식에서,
F, n, m 및 r은 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같고,
L'은 링커이고,
RG1은 반응성 기, 특히 클릭 반응성 기, 예컨대 아지드 기이다.
하기 화학식 VI을 갖는, 핵산 접합체를 제조하기 위한 시약.
<화학식 VI>
BB―(L)m―Fn
상기 식에서,
F, L, n 및 m은 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같고,
BB는 핵산 분자를 합성하기 위한 빌딩 블록, 예를 들어 뉴클레오시드 트리포스페이트, 또는 고체상 합성에 적합한 빌딩 블록, 예를 들어 포스포르아미다이트이다.
(i) 제18항의 시약을 하기의 1개 이상의 변형된 RNA 분자 VII과 커플링시켜 접합체를 형성하거나, 또는
(ii) 제17항의 시약을 하기의 1개 이상의 변형된 핵산 빌딩 블록 VIII과 커플링시키고, 시약이 커플링되어 있는 빌딩 블록을 핵산 분자 내로 혼입시켜 접합체를 형성하는 것
을 포함하는, 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 접합체를 제조하는 방법.
<화학식 VII>
(N)r―(L")m―RG2
<화학식 VIII>
BB―(L")m―RG2
상기 식에서,
N, r 및 n은 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같고,
BB는 핵산 분자를 합성하기 위한 빌딩 블록이고,
L"은 링커이고,
m은 0 또는 1이고,
RG2는 RG1과 반응할 수 있는 반응성 기, 특히 클릭 반응성 기, 예컨대 알킨 기이다.
1개 이상의 C=C 불포화 화합물 및 그에 공유 결합된, 핵산, 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드로부터 선택된 1개 이상의 뉴클레오시드 성분을 포함하며, 여기서 C=C 불포화 화합물은 클릭 반응에 의해 형성된 기를 포함하는 링커를 통해 뉴클레오시드 성분에 결합되어 있는 것인 접합체.
제20항에 있어서, C=C 불포화 화합물이 테르펜, 단일불포화 지방산 또는 다중불포화 지방산인 접합체.
제20항 또는 제21항에 있어서, C=C 불포화 화합물이 자스모네이트인 접합체.
제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 제2항 내지 제12항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 구조를 갖되, 단 (제2항 및 제4항에서 정의된 바와 같은) F는 임의의 C=C 불포화 화합물인 접합체.
제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같이 사용하기 위한 접합체.
KR1020157003119A 2012-07-10 2013-07-10 아난다미드-변형된 핵산 분자 KR102144140B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP12175737 2012-07-10
EP12175737.1 2012-07-10
PCT/EP2013/064610 WO2014009429A1 (en) 2012-07-10 2013-07-10 Anandamide-modified nucleic acid molecules

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20150030756A true KR20150030756A (ko) 2015-03-20
KR102144140B1 KR102144140B1 (ko) 2020-08-12

Family

ID=48771445

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157003119A KR102144140B1 (ko) 2012-07-10 2013-07-10 아난다미드-변형된 핵산 분자

Country Status (9)

Country Link
US (1) US9480752B2 (ko)
EP (1) EP2872180B1 (ko)
JP (1) JP6200500B2 (ko)
KR (1) KR102144140B1 (ko)
CN (1) CN104540525A (ko)
AU (1) AU2013288738A1 (ko)
BR (1) BR112015000236A2 (ko)
CA (1) CA2877985C (ko)
WO (1) WO2014009429A1 (ko)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2755643B1 (en) 2011-09-16 2019-05-08 Nanocare Technologies, Inc. Compositions of jasmonate compounds and methods of use
MX2017008655A (es) 2014-12-31 2018-04-10 Nanocare Tech Inc Derivados de jasmonato y composiciones de los mismos.
LT3277814T (lt) 2015-04-03 2020-10-26 University Of Massachusetts Oligonukleotidų junginiai, skirti nukreipimui į hantingtino mrnr
US10633653B2 (en) 2015-08-14 2020-04-28 University Of Massachusetts Bioactive conjugates for oligonucleotide delivery
JP2019503394A (ja) 2016-01-31 2019-02-07 ユニバーシティ・オブ・マサチューセッツＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ 分岐オリゴヌクレオチド
CN108778345B (zh) * 2016-02-01 2022-11-29 阿拉基斯医疗公司 治疗rna介导的疾病的化合物和方法
US11111222B2 (en) 2016-06-23 2021-09-07 The Regents Of The University Of Michigan Hydroxyeicosatrienoic acid compounds and their use as therapeutic agents
US11753638B2 (en) 2016-08-12 2023-09-12 University Of Massachusetts Conjugated oligonucleotides
EP3642341A4 (en) 2017-06-23 2021-06-16 University Of Massachusetts TWO-DAY SELF-RELEASING SIRNA AND RELATED PROCEDURES
RU2020112854A (ru) * 2017-11-30 2021-12-30 Арракис Терапьютикс, Инк. Фотозонды, связывающие нуклеиновые кислоты, и способы их применения
WO2019182294A1 (ko) * 2018-03-19 2019-09-26 주식회사 케이티 비디오 신호 처리 방법 및 장치
EP3770257A4 (en) * 2018-03-22 2022-03-09 National University Corporation Tokyo Medical and Dental University BHS-PASSING LIPID LIGAND OF A HETERONUCLEIC ACID
SG11202101288TA (en) 2018-08-10 2021-03-30 Univ Massachusetts Modified oligonucleotides targeting snps
AU2020329155A1 (en) 2019-08-09 2022-03-10 University Of Massachusetts Chemically modified oligonucleotides targeting SNPs
CN111557913B (zh) * 2020-07-07 2022-05-31 中国科学院空天信息创新研究院 靶向癫痫细胞的纳米光敏复合物及调控检测系统
IL302470B1 (en) * 2020-10-30 2024-07-01 Tod SPEER Oligonucleotide-based treatments and their uses
CN117677699A (zh) 2021-06-23 2024-03-08 马萨诸塞大学 用于治疗先兆子痫和其他血管生成病症的优化抗flt1寡核苷酸化合物

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000032200A1 (en) * 1998-11-24 2000-06-08 Alexandros Makriyannis Cannabimimetic lipid amides as useful medications
WO2006044381A2 (en) * 2004-10-13 2006-04-27 University Of Connecticut Cannabinergic lipid ligands
WO2009126933A2 (en) * 2008-04-11 2009-10-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1042341A1 (en) * 1997-11-25 2000-10-11 Protarga Inc. Nucleoside analog compositions and uses thereof
KR20020000147A (ko) * 1999-03-09 2002-01-04 니겔 엘. 웹 지방산-항암제 결합체 및 그의 용도
DE10302421A1 (de) 2003-01-21 2004-07-29 Ribopharma Ag Doppelsträngige Ribonukleinsäure mit verbesserter Wirksamkeit
CA2607530C (en) 2005-05-02 2014-07-08 Basf Aktiengesellschaft New labelling strategies for the sensitive detection of analytes
CA2667136A1 (en) 2006-10-31 2008-05-08 Baseclick Gmbh Click chemistry for the production of reporter molecules
JP5906508B2 (ja) * 2008-03-31 2016-04-20 国立研究開発法人産業技術総合研究所 Ｒｎａ干渉効果が高い２本鎖脂質修飾ｒｎａ

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000032200A1 (en) * 1998-11-24 2000-06-08 Alexandros Makriyannis Cannabimimetic lipid amides as useful medications
WO2006044381A2 (en) * 2004-10-13 2006-04-27 University Of Connecticut Cannabinergic lipid ligands
WO2009126933A2 (en) * 2008-04-11 2009-10-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components

Also Published As

Publication number Publication date
CA2877985C (en) 2020-10-27
CA2877985A1 (en) 2014-01-16
BR112015000236A2 (pt) 2017-06-27
JP6200500B2 (ja) 2017-09-20
US20150209441A1 (en) 2015-07-30
KR102144140B1 (ko) 2020-08-12
US9480752B2 (en) 2016-11-01
WO2014009429A1 (en) 2014-01-16
EP2872180A1 (en) 2015-05-20
CN104540525A (zh) 2015-04-22
JP2015527314A (ja) 2015-09-17
EP2872180B1 (en) 2018-08-08
AU2013288738A1 (en) 2015-01-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20150030756A (ko) 아난다미드-변형된 핵산 분자
ES2742102T3 (es) Moléculas de ácido nucleico modificadas con sacárido
Lonnberg Solid-phase synthesis of oligonucleotide conjugates useful for delivery and targeting of potential nucleic acid therapeutics
JP4584987B2 (ja) Ｃ５修飾ピリミジンを含むオリゴヌクレオチド
RU2571218C2 (ru) Конъюгат мирнк и способ его получения
CN102016036B (zh) 经修饰的RNAi多核苷酸及其用途
KR101752812B1 (ko) 고효율 나노입자형 이중나선 올리고 rna 구조체 및 그의 제조방법
EP2264167B1 (en) Double-stranded lipid-modified rna having high rna interference effect
KR20100106314A (ko) Ｒｎａ 간섭 효과가 높은 지질 수식 2중쇄 ｒｎａ
JP2023523345A (ja) モジュール官能基を有する核酸ナノ粒子を含有する組成物
Danielsen et al. Cationic oligonucleotide derivatives and conjugates: A favorable approach for enhanced DNA and RNA targeting oligonucleotides
JP2024505035A (ja) 中枢神経系における遺伝子発現を阻害するための組成物および方法
JP6826984B2 (ja) アシル−アミノ−ｌｎａオリゴヌクレオチドおよび／またはヒドロカルビル−アミノ−ｌｎａオリゴヌクレオチド
JP2024518564A (ja) 中枢神経系のニューロンを標的とするための脂質コンジュゲーション
EP3696270A1 (en) Regulation of nucleic acid molecule expression
WO2024040041A1 (en) Regulation of activity of rnai molecules
EP4426839A1 (en) Lipid conjugation for targeting astrocytes of the central nervous system
WO2022219409A2 (en) Compositions containing nucleic acid nanoparticles and processes related to alteration of their physicochemical characteristics
Bogojeski Synthesis and characterization of novel self-delivering amino acid-RNA conjugates for the development of potent siRNA prodrugs

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant