KR20150013651A - 항-ｉｌ-23ｐ19 항체 - Google Patents

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토르슈텐 슐츠-파뎀레흐트
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Abstract

본 발명은, 항-IL-23p19 결합 화합물, 특히, 새로운 사람화된 항-IL-23p19 항체, 약제학적 조성물, 및 치료학적 및 진단학적 방법, 및 이를 사용하기 위한 조성물에 관한 것이다.

Description

항-ＩＬ-23Ｐ19 항체{ANTI-IL-23P19 ANTIBODIES}
본 발명은, 일반적으로, 진단학적 및 치료학적 사용을 위한 항-IL-23p19 항체에 관한 것이다. 보다 구체적으로는, 사람화된 항-IL-23p19 항체 및 각종 질환 또는 장애의 치료를 위해 사용하는 방법이 개시되어 있다. 또한, 이러한 화합물을 포함하는 약제학적 조성물 및 키트도 개시되어 있다.
고등 진핵생물은, 선천적(innate) 면역 반응에 의해 개시되어 후천적(adaptive) 면역 반응으로 이어지는, 병원체에 대한 복잡한 반응을 진화시켜 왔다. 이들 두 메커니즘들은, 함께, 유기체를 감염시키는 병원체를 근절시킬 뿐만 아니라 장래의 노출에 대한 장기적 면역학적 반응도 확립시킨다. 이들 반응의 결핍은, 감염에 대해 증가된 감수성 및/또는 만성 염증 및 자가면역을 초래하는 후천적 면역 반응의 변경을 초래할 수 있다. p40 및 p35 단백질 서브유닛으로 이루어진 이종이량체 사이토카인인 IL-12는, 후천적 면역성에 대한 주요 영향을 지닌 선천적 면역 반응의 특징적 사이토카인으로 오랫동안 간주되어 왔다. 그러나, 이러한 사이토카인의 생물학적 역할의 연구로부터의 데이터는 혼란스러운 결과를 초래하였다. 예를 들면, p40-결핍성 마우스는, 콜라겐 유도된 관절염(CIA: Collagen Induced Arthritis) 및 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE: Experimental Autoimmune Encephalomyelitis)에 대해 내성이었고, p35-결핍성 마우스는 둘 다에 대해 민감성이었고, 심지어 악화된 질환을 나타냈다. 이러한 난제는, 1990년대 후반에, 면역 반응에서 별도의 역할을 갖는 IL-12 사이토카인 패밀리의 새로운 구성원 ― IL-23의 발견으로 해결되기 시작하였다.
IL-23은, IL-12를 갖는 일반 서브유닛(p40) 및 고유한 p19 서브유닛으로 이루어진다. 이들이 p40 서브유닛을 공유함에도 불구하고, IL-23 및 IL-12에 있어서의 역할은 상당히 상이하다. IL-12는, Th1 세포 분화, 증식, 및 활성화의 촉진을 통한 Th1 반응에 중요하다. 대조적으로, IL-23은, IL17 및 관련 사이토카인을 생산하는 이들의 능력에 기인하여, Th17 세포라고 칭하는 CD4+ T 헬퍼 세포의 최근 정의된 세트의 발달 및 유지를 지지한다. IL-23이 만성 자가면역 염증에 관여하고 IL-23 활성의 조정이 자가면역 질환에 대한 유망한 치료요법을 제공할 수 있다는 증거가 증가하고 있다.
따라서, 질환, 특히, 사람에서의 면역학적 질환 및 자가면역 질환을 치료하기 위한 치료제로서 사용될 수 있는, 이로운 약리학적 특성을 갖는 IL-23에 대한 길항제 분자에 대한 요구가 존재한다.
따라서, 본 발명의 한 목표는, 항-IL-23 길항제 분자, 특히, IL-23에 대해 높은 결합 친화도를 갖는 항-IL-23 길항제 분자를 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목표는, IL-23에 대한 높은 특이성을 갖는 항-IL-23 길항제 분자를 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목표는, IL-23 및 이의 수용체의 회합에 대해 높은 차단 활성을 갖는 항-IL-23 길항제를 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목표는, 강력한 세포 활성을 갖는 항-IL-23 길항제를 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목표는, 바람직한 생체 이용률(bioavailability)을 갖는 항-IL-23 길항제를 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목표는, 유리한 생체 물리학적 특성을 갖는 항-IL-23 길항제를 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목표는, 항체 분자를 위한, 특히, 항-IL23p19 항체를 위한 약제학적 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 특정 목표는, 바람직한 안정성 및 저장성을 갖는 항체 분자를 위한 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목표는, 상기에 제시된 목표들 중 임의의 것의 조합을 포함한다.
발명의 요약
본 발명은, 상기 요구들을 처리하고, IL-23 단백질의 p19 서브유닛에 결합하는 항체들을 제공한다. 한 양상에서, 본 발명의 항체는, 높은 친화도로 사람 IL-23에 결합한다. 다른 양상에서, 본 발명의 항체는, 마우스 비장세포로부터 IL-17의 IL-23 자극된 생산을 저해한다. 다른 양상에서, 본 발명의 항체는, IL-23과 밀접하게 관련된 패밀리 구성원인 IL-12에 결합하지도 않고 IL-12를 길항하지도 않는다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 마우스 하이브리도마로부터 유도된 항-IL-23p19 항체, 예를 들면, 모노클로날 항체를 제공한다. 한 실시형태에서, 본 발명은, 전장 항-IL-23p19 항체를 제공한다. 다른 실시형태에서, 본 발명은, 항-IL-23p19 사람화된 항체, 예를 들면, 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체, 예를 들면, 전장 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체를 제공한다. 한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는, 높은 친화도로 사람 IL-23에 결합한다. 다른 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는, 또한, 높은 친화도로 사이노몰거스 IL-23에 결합한다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는, DB 세포에서의 IL-23-유도된 STAT3 인산화를 저해한다. 다른 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는, IL-17 및 IL-22와 같은 사이토카인의 저해에 의해 측정되는 바와 같이 IL-23의 p19 서브유닛에 결합함으로써 IL-23의 작용을 길항하고, 이의 생산은 IL-23에 의해 자극된다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는, 바람직한 약동학적(PK) 프로필을 갖는다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는, 바람직한 생체 물리학적 특성, 예를 들면, 단량체 형태로의 항체의 백분율로 정의되는, 예를 들면, 품질, 안정성, 또는 용해도를 갖는다.
추가의 실시형태는, 본 발명의 항체를 암호화하는 DNA 분자, 이러한 DNA 분자를 포함하는 발현 벡터 및 숙주 세포, 및 본 발명의 항체의 제조 방법을 포함한다. 본 발명은, 특히, 면역학적 질환 및 자가면역 질환에 대한 본 발명의 항체의 치료학적 용도를 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 1, 4, 6, 7, 8, 11, 15, 18, 19, 22, 27, 또는 30의 경쇄 CDR1(L-CDR1) 서열; 서열번호 2, 5, 9, 12, 16, 20, 23, 25, 28, 또는 31의 경쇄 CDR2(L-CDR2) 서열; 서열번호 3, 10, 13, 14, 17, 21, 24, 26, 29, 또는 32의 경쇄 CDR3(L-CDR3) 서열; 서열번호 33, 36, 38, 40, 43, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 67, 68, 69, 77, 또는 80의 중쇄 CDR1(H-CDR1) 서열; 서열번호 34, 39, 41, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 70, 72, 73, 75, 78, 또는 81의 중쇄 CDR2(H-CDR2) 서열; 및 서열번호 35, 37, 42, 44, 47, 50, 52, 56, 59, 62, 65, 71, 74, 76, 79, 또는 82의 중쇄 CDR3(H-CDR3) 서열을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 상기 열거된 L-CDR1, 상기 열거된 L-CDR2 및 상기 열거된 L-CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 상기 열거된 H-CDR1, 상기 열거된 H-CDR2 및 상기 열거된 H-CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 각각 서열번호 1, 2, 3, 33, 34, 및 35의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 HCDR3 서열; 또는 각각 서열번호 4, 5, 3, 36, 34, 및 37의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 1, 2, 3, 38, 39, 및 35의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 6, 2, 3, 40, 41, 및 42의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 7, 2, 3, 43, 41, 및 44의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 8, 9, 10, 45, 46, 및 47의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 8, 9, 10, 48, 49, 및 50의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 11, 12, 13, 51, 52, 및 53의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 7, 2, 14, 54, 55, 및 56의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 15, 16, 17, 57, 58, 및 59의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 18, 16, 17, 60, 61, 및 62의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 19, 20, 21, 63, 66 또는 67, 64, 및 65의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 22, 23, 24, 69, 70, 및 71의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 22, 25, 26, 55, 72, 및 71의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 8, 9, 10, 45, 73, 및 74의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 27, 28, 29, 45, 75, 및 76의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 8, 9, 10, 77, 78, 및 79의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열번호 30, 31, 32, 80, 81, 및 82의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 상기 열거된 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3 조합을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 상기 열거된 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 조합을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 99의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 148의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열번호 158, 160, 162, 및 164로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열번호 166, 168, 170, 및 172로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, IL-23에 대한 KD가 40pM 미만, 또는 IL-23에 대한 KD가 20pM 미만, 또는 IL-23에 대한 KD가 10pM 미만, 또는 IL-23에 대한 KD가 1pM 미만인, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다.
추가의 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 181의 아미노산 잔기 108 내지 126 및 아미노산 잔기 137 내지 151로 이루어진 에피토프에서 사람 IL-23p19에 결합하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
추가의 실시형태에서, 본 발명은, 사람 IL-23p19에, 본 발명의 항체와 경쟁적으로 결합하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 한 실시형태에서, 본 발명은, 사람 IL-23p19에, 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체와 경쟁적으로 결합하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 한 실시형태에서, 본 발명은, 사람 IL-23p19에, 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체와 경쟁적으로 결합하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 한 실시형태에서, 본 발명은, 사람 IL-23p19에, 서열번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체와 경쟁적으로 결합하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 한 실시형태에서, 본 발명은, 사람 IL-23p19에, 서열번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체와 경쟁적으로 결합하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는, 사람화된 항체이다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 모노클로날 항체이다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 전장 항체이다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는, 사람화된 모노클로날 항체, 예를 들면, 전장 사람화된 모노클로날 항체이다. 한 실시형태에서, 항원-결합 단편은 Fab, F(ab')2, 또는 단일쇄 Fv 단편이다. 한 실시형태에서, 항원-결합 단편은 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 포함한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열번호 19의 아미노산 서열(CDR1 -L); 서열번호 20의 아미노산 서열(CDR2 -L); 서열번호 21의 아미노산 서열(CDR3 -L); 서열번호 63, 66, 67, 또는 68의 아미노산 서열(CDR1 -H); 서열번호 64의 아미노산 서열(CDR2 -H); 및 서열번호 65의 아미노산 서열(CDR3 -H)을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열번호 19의 아미노산 서열(CDR1 -L); 서열번호 20의 아미노산 서열(CDR2 -L); 서열번호 21의 아미노산 서열(CDR3 -L); 서열번호 66의 아미노산 서열(CDR1 -H); 서열번호 64의 아미노산 서열(CDR2 -H); 및 서열번호 65의 아미노산 서열(CDR3 -H)을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열번호 19의 아미노산 서열(CDR1 -L); 서열번호 20의 아미노산 서열(CDR2 -L); 및 서열번호 21의 아미노산 서열(CDR3 -L)을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 서열번호 63, 66, 67, 또는 68의 아미노산 서열(CDR1 -H); 서열번호 64의 아미노산 서열(CDR2 -H); 및 서열번호 65의 아미노산 서열(CDR3 -H)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열번호 19의 아미노산 서열(CDR1 -L); 서열번호 20의 아미노산 서열(CDR2 -L); 및 서열번호 21의 아미노산 서열(CDR3 -L)을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 서열번호 66의 아미노산 서열(CDR1 -H); 서열번호 64의 아미노산 서열(CDR2 -H); 및 서열번호 65의 아미노산 서열(CDR3 -H)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열번호 158, 160, 162, 또는 164 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 서열번호 166, 168, 170, 또는 172 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는, 사람화된 항체이다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 모노클로날 항체이다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 전장 항체이다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는, 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체, 예를 들면, 전장 사람화된 모노클로날 항체이다. 한 실시형태에서, 항원-결합 단편은 Fab, F(ab')2, 또는 단일쇄 Fv 단편이다. 한 실시형태에서, 항원-결합 단편은 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 포함한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 사람 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA 또는 IgE 중쇄 불변 영역에 연결된 서열번호 166 또는 168의 아미노산 서열을 포함하는, 항체를 추가로 제공한다. 사람 IgG1 중쇄 불변 영역에 연결된 서열번호 166 또는 168의 아미노산 서열을 포함하는 항체. 사람 IgG1 중쇄 불변 영역에 연결된 서열번호 166 또는 168의 아미노산 서열을 포함하는 항체. 사람 카파 또는 람다 경쇄 불변 영역에 연결된 서열번호 158 또는 160의 아미노산 서열을 포함하는 항체. 사람 카파 경쇄 불변 영역에 연결된 서열번호 158 또는 160의 아미노산 서열을 포함하는 항체.
한 실시형태에서, 본 발명은, 사람 IgG1 중쇄 불변 영역에 연결된 서열번호 166 또는 168의 아미노산 서열; 및 사람 카파 경쇄 불변 영역에 연결된 서열번호 158 또는 160의 아미노산 서열을 포함하는 항체를 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 158, 160, 162 및 164 중 어느 하나로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열번호 166, 168, 170 및 172 중 어느 하나로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 174 또는 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 176 또는 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
추가의 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 160의 CDR들 및 서열번호 160의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 프레임워크의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인, 및 서열번호 166의 CDR들 및 서열번호 166의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 프레임워크 영역의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는, 사람화된 모노클로날 항체, 예를 들면, 전장 사람화된 모노클로날 항체이다.
추가의 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 160의 CDR들 및 서열번호 160의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 프레임워크 영역의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인, 및 서열번호 168의 CDR들 및 서열번호 168의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 프레임워크 영역의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는, 사람화된 모노클로날 항체, 예를 들면, 전장 사람화된 모노클로날 항체이다.
추가의 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 158의 CDR들 및 서열번호 158의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 프레임워크 영역의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인, 및 서열번호 166의 CDR들 및 서열번호 166의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 프레임워크 영역의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는, 사람화된 모노클로날 항체, 예를 들면, 전장 사람화된 모노클로날 항체이다.
추가의 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 158의 CDR들 및 서열번호 158의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 프레임워크 영역의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인, 및 서열번호 168의 CDR들 및 서열번호 168의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 프레임워크 영역의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는, 사람화된 모노클로날 항체, 예를 들면, 전장 사람화된 모노클로날 항체이다.
한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 1pM 이하의 사람 IL-23에 대한 KD를 추가로 특징으로 할 수 있다. 한 양상에서, 50% 사람 혈청에서 결합 온-레이트(on-rate)의 변화는 존재하지 않았다.
한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 시험관내에서 IL-23이 사람 IL-23R/Fc에 결합하는 것을 차단함을 추가로 특징으로 할 수 있다.
한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 사람 IL-12에 결합하지 않음을 추가로 특징으로 할 수 있다.
한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, IC50 20pM 이하로 마우스 비장세포에서의 사람 IL-23 유도된 IL-17 생산을 저해함을 추가로 특징으로 할 수 있다.
한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, IC50 40pM 이하로 사람 DB 세포에서의 사람 IL-23 유도된 STAT3 인산화를 저해함을 추가로 특징으로 할 수 있다.
한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, ADCC/CDC에서 예측된 활성을 갖지 않음을 추가로 특징으로 할 수 있다.
한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 사이노몰거스 원숭이 IL-23에 대해 KD가 1pM 이하임을 추가로 특징으로 할 수 있다.
한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 마우스 또는 래트 IL-23에 대해 교차 반응성을 갖지 않음을 추가로 특징으로 할 수 있다.
한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 마우스 귀에서의 사람 IL-23 유도된 IL-17 및 IL-22 생산을, 1mg/kg으로의 사이토카인 둘 다의 80% 이상의 저해율로 저해함을 추가로 특징으로 할 수 있다.
한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 시차 주사 열량 측정법(differential scanning calorimetry)에 의해 측정시 83℃의 용융 온도를 추가로 특징으로 할 수 있다.
한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, UV 분광법에 의한 측정 및 탁도에 의한 모니터링시 용해도가 100mg/ml 이상임을 추가로 특징으로 할 수 있다.
추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 완충액에서 90% 이상의 단량체 형태로, 또는 92% 이상의 단량체 형태로, 또는 95% 이상의 단량체 형태로 존재함을 추가로 특징으로 할 수 있다.
추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 1개월 동안 또는 4개월 동안 완충액에서 90% 이상의 단량체 형태로, 또는 92% 이상의 단량체 형태로, 또는 95% 이상의 단량체 형태로 잔존함을 추가로 특징으로 할 수 있다.
한 양상에서, 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 사람화된 모노클로날 항체, 예를 들면, 전장 사람화된 모노클로날 항체이다.
추가의 실시형태들은, 상기 가변 경쇄 영역을 암호화하는 DNA 분자, 상기 가변 중쇄 영역을 암호화하는 DNA 분자, 상기 경쇄 영역을 암호화하는 DNA 분자, 또는 상기 중쇄 영역을 암호화하는 DNA 분자를 포함한다.
추가의 실시형태들은, 상기 DNA 분자를 함유하는 발현 벡터를 포함한다. 한 실시형태에서, 발현 벡터는, 가변 중쇄 및/또는 가변 경쇄를 각각 암호화하는 DNA 분자에 각각 연결된 불변 중쇄 및/또는 불변 경쇄를 암호화하는 DNA 분자를 포함한다. 추가의 실시형태들은, 상기 발현 벡터들을 하나 이상 갖는 숙주 세포를 포함한다. 한 실시형태에서, 숙주는 포유동물 세포이다.
추가의 실시형태들은, 포유동물 숙주 세포를 상기 벡터들 중 하나 이상으로 형질감염시키고, 상기 숙주 세포를 배양하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 회수 및 정제함을 포함하는, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 제조 방법을 포함한다.
추가의 실시형태들은, 상기 벡터들 중 하나 이상을 포함하는 포유동물 숙주 세포를 수득하고, 상기 숙주 세포를 배양함을 포함하는, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 제조 방법을 포함한다. 한 실시형태에서, 상기 방법은, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 회수 및 정제함을 추가로 포함한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 의약에 사용하기 위한, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 특히, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 예를 들면, 본원에 개시되어 있는 약제학적 조성물을 추가로 제공한다. 한 실시형태에서, 항체는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다. 한 실시형태에서, 용도는, 염증성 질환의, 자가면역 질환의, 호흡기 질환의, 대사 장애의, 또는 암의 치료이다. 한 실시형태에서, 용도는 건선, 염증성 장 질환(크론(Crohn) 질환, 궤양성 결장염), 건선성 관절염, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 강직성 척추염, 또는 카와사키(Kawasaki) 증후군의 치료를 위한 것이다. 한 실시형태에서, 용도는, 건선의 치료를 위한 것이다. 한 실시형태에서, 용도는, 염증성 장 질환, 예를 들면, 크론 질환의 치료를 위한 것이다. 한 실시형태에서, 용도는, 강직성 척추염의 치료를 위한 것이다.
한 실시형태에서, 용도는, 예를 들면, 성인 환자에서의 플라크 건선, 예를 들면, 만성 플라크 건선, 예를 들면, 중간 정도 내지 중증의 만성 플라크 건선의 치료를 위한 것이다. 한 실시형태에서, 환자는 전신 치료요법 또는 광선 치료요법(phototherapy)을 위한 후보자이다. 한 실시형태에서, 용도는, 예를 들면, 전신 치료요법 또는 광선 치료요법을 위한 후보자들인 환자, 예를 들면, 성인 환자에서의 중간 정도 내지 중증의 만성 플라크 건선의 치료를 위한 것이다.
한 실시형태에서, 용도는, 수장 농포성 건선(palmar pustular psoriasis), 적상 건선(guttate psoriasis), 역위 건선(inverse psoriasis), 농포성 건선, 또는 홍피성 건선의 치료를 위한 것이다.
한 실시형태에서, 용도는, 크론 질환의 치료를 위한 것이다. 추가의 양상에서, 용도는, 중간 정도 내지 중증 활성의 크론 질환을 지닌 성인 환자, 특히, 종래 치료요법에 대해 부적절한 반응을 가졌던 환자에서 징후 및 증상을 감소시키고, 점막 치유를 개선시키고, 임상학적 완화를 유지하기 위한 것이다. 추가의 양상에서, 용도는, 누공성(fistulizing) 크론 질환을 지닌 성인 환자에서 유출성 장피 누공(draining enterocutaneous fistula) 및 직장질루(rectovaginal fistula)의 수를 감소시키고, 누공 폐쇄를 유지하기 위한 것이다.
한 실시형태에서, 용도는, 척추관절염의 치료를 위한 것이다. 추가의 양상에서, 용도는, 강직성 척추염의 치료를 위한 것이다. 추가의 양상에서, 용도는, 활성 강직성 척추염을 지닌 환자에서 징후 및 증상을 감소시키기 위한 것이다.
추가의 양상에서, 용도는, 성인 환자, 특히, 종래 치료요법에 부적절하게 반응한 환자에서의 중증의 방사능성 활성 강직성 척추염의 치료를 위한 것이다.
추가의 양상에서, 용도는, 비-방사능성 축성 척추관절염의 치료를 위한 것이다. 추가의 양상에서, 용도는, 축성 척추관절염의 방사능성 증거는 부재하지만 상승된 CRP 및/또는 MRI에 의한 염증의 타각 징후를 갖는 중증의 축성 척추관절염을 지니는 성인, 특히, 비스테로이드성 소염제에 부적절한 반응을 가졌거나 이에 불내약성(intolerant)인 환자의 치료를 위한 것이다.
추가의 양상에서, 용도는, 말초 척추관절염의 치료를 위한 것이다.
한 실시형태에서, 용도는, 원판상 루푸스(discoid lupus), 말라리아, 악성 흑색종, 무형성 빈혈(aplastic anaemia), 헌팅턴(Huntington) 질환, 수장족저 농포증(palmoplantar pustulosis), IgA 신염, ANCA-관련 혈관염, 공막염 또는 패혈증의 치료를 위한 것이다.
한 실시형태에서, 용도는, 수장족저 농포증의 치료를 위한 것이다. 한 실시형태에서, 용도는, 전신성 강피증의 치료를 위한 것이다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 본원에 개시되어 있는 질환 또는 장애 중 어느 하나의 치료를 위한 의약의 제조시, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 특히, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 예를 들면, 본원에 개시되어 있는 약제학적 조성물의 용도를 제공한다. 한 실시형태에서, 항체는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 상기 항체 분자 또는 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 상기 항체 분자 및 석시네이트 완충액을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 한 실시형태에서, 약제학적 조성물은 50mM 이하의 석시네이트 완충액을 포함한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 1 내지 40mg/ml의 항체 분자를 포함하고 5 내지 50mM의 석시네이트 완충액 및 50 내지 200mM의 나트륨 클로라이드를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물을 제공한다. 한 추가의 실시형태에서, 상기 약제학적 조성물의 pH는 pH 6.0 내지 7.0의 범위 내이다. 한 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 2.5 내지 30mg/ml의 상기 항체 분자를 포함하고, 추가의 실시형태에서 5 내지 20mg/ml의 상기 항체 분자를 포함한다. 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 10 내지 40mM의 석시네이트 완충액을 포함하고, 추가의 실시형태에서 20 내지 30mM의 석시네이트 완충액을 포함한다. 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 75 내지 175m의 나트륨 클로라이드를 포함하고, 추가의 실시형태에서 100 내지 150mM의 나트륨 클로라이드를 포함한다. 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 세제, 예를 들면, 폴리소르베이트 20(Tween 20)을 예를 들면, 0.20g/l의 농도로 추가로 포함한다. 한 양상에서, 약제학적 조성물 중의 항체 분자는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 10mg/ml의 항체 분자, 25mM의 석시네이트 완충액, 125mM의 나트륨 클로라이드, 및 0.02% Tween 20을 6.0 내지 7.0의 pH로 포함하는 약제학적 조성물을 추가로 제공한다. 한 양상에서, 약제학적 조성물의 pH는 6.5이다. 한 양상에서, 약제학적 조성물 중의 항체 분자는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다. 한 실시형태에서, 약제학적 조성물은 환자에게 정맥내 투여된다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 70 내지 100mg/ml의 항체 분자 및 100 내지 300mM의 소르비톨을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 25mM 이상의 석시네이트 완충액을 추가로 포함한다. 한 추가의 실시형태에서, 상기 약제학적 조성물의 pH는 5.5 내지 6.5의 pH 범위 내이고, 예를 들면, 5.5 내지 6.1의 pH 범위 내이다. 한 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 80 내지 95mg/ml의 상기 항체 분자를 포함한다. 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 10mM 이상의 석시네이트 완충액을 포함하고, 추가의 실시형태에서 5mM 이상의 석시네이트 완충액을 포함하고, 추가의 실시형태에서 1mM 이상의 석시네이트 완충액을 포함하고, 추가의 실시형태에서 2.5mM 이상의 석시네이트 완충액을 포함하고, 추가의 실시형태에서 1 내지 10mM의 석시네이트 완충액을 포함하고, 추가의 실시형태에서 2.5 내지 5mM의 석시네이트 완충액을 포함한다. 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 150 내지 300mM의 소르비톨을 포함하고, 추가의 실시형태에서 175 내지 275mM의 소르비톨을 포함하고, 추가의 실시형태에서 200 내지 250mM의 소르비톨을 포함한다. 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 세제, 예를 들면, 폴리소르베이트 20(Tween 20)을 예를 들면, 0.20g/l의 농도로 추가로 포함한다. 한 양상에서, 약제학적 조성물 중의 항체 분자는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 90mg/ml의 항체 분자, 4.4mm의 석시네이트 완충액, 225mM의 소르비톨, 및 0.02%의 Tween 20을 pH 5.5 내지 6.5의 pH로 포함하는, 약제학적 조성물을 추가로 제공한다. 한 양상에서, 약제학적 조성물의 pH는 5.5 내지 6.1이다. 한 양상에서, 약제학적 조성물의 pH는 5.8이다. 한 양상에서, 약제학적 조성물 중의 항체 분자는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다. 한 실시형태에서, 약제학적 조성물은 환자에게 피하 투여된다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 90mg/ml의 항체 분자, 240mM의 소르비톨, 및 0.02% Tween 20을 5.5 내지 6.5의 pH로 포함하는 약제학적 조성물을 추가로 제공한다. 한 양상에서, 약제학적 조성물의 pH는 5.5 내지 6.1이다. 한 양상에서, 약제학적 조성물의 pH는 5.8이다. 한 양상에서, 약제학적 조성물 중의 항체 분자는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다. 한 실시형태에서, 약제학적 조성물은 환자에게 피하 투여된다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 치료를 필요로 하는 대상체에게, 예를 들면, 환자에게, 유효량의 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 특히, 상기 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 예를 들면, 본원에 개시되어 있는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하는, 염증성 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 대사 장애 또는 암을 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 한 실시형태에서, 항체는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다. 한 실시형태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 비경구 투여 경로에 의해 투여되거나, 정맥내 또는 피하 투여된다. 한 실시형태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 피하 투여된다. 한 실시형태에서, 질환은 건선, 염증성 장 질환(크론 질환, 궤양성 결장염), 건선성 관절염, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 강직성 척추염, 또는 카와사키 증후군이다. 한 실시형태에서, 질환은 건선이다. 한 실시형태에서, 질환은 염증성 장 질환, 예를 들면, 크론 질환이다. 한 실시형태에서, 질환은 강직성 척추염이다.
한 실시형태에서, 질환은 플라크 건선, 예를 들면, 만성 플라크 건선, 예를 들면, 중간 정도 내지 중증의 만성 플라크 건선이다. 한 실시형태에서, 환자는 성인 환자, 예를 들면, 전신 치료요법 또는 광선 치료요법에 대한 후보자인 환자이다. 한 실시형태에서, 질환은 중간 정도 내지 중증의 만성 플라크 건선이다.
한 실시형태에서, 질환은 수장 농포성 건선, 적상 건선, 역위 건선, 농포성 건선, 또는 홍피성 건선이다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 중간 정도 내지 중증 활성의 크론 질환을 지닌 성인 환자, 특히, 종래 치료요법에 대해 부적절한 반응을 가졌던 환자에서 징후 및 증상을 감소시키고, 점막 치유를 개선시키고, 임상학적 완화를 유지하는 방법으로서, 상기 방법은, 상기 환자에게 유효량의 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 특히, 상기 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 예를 들면, 본원에 개시되어 있는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하는, 방법을 제공한다. 한 실시형태에서, 항체는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다. 추가의 양상에서, 본 발명은, 누공성 크론 질환을 지닌 성인 환자에서 유출성 장피 누공 및 직장질루의 수를 감소시키고, 누공 폐쇄를 유지하는 방법으로서, 상기 환자에게, 유효량의 상기 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 예를 들면, 본원에 개시되어 있는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하는, 방법을 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은 척추관절염의 치료 방법을 제공한다. 한 실시형태에서, 본 발명은 강직성 척추염의 치료 방법을 제공한다. 추가의 양상에서, 본 발명은, 활성 강직성 척추염을 지닌 환자에서의 징후 및 증상을 감소시키는 방법을 제공한다. 상기 방법은, 투여를 필요로 하는 대상체, 예를 들면, 환자에게, 유효량의 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 특히, 상기 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 예를 들면, 본원에 개시되어 있는 약제학적 조성물을 투여함을 포함한다. 한 실시형태에서, 항체는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다.
추가의 양상에서, 본 발명은, 성인 환자, 특히, 종래 치료요법에 대해 부적절하게 반응한 환자에서의 중증의 방사능성 활성 강직성 척추염의 치료 방법으로서, 상기 환자에게, 유효량의 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 특히 상기 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 예를 들면, 본원에 개시되어 있는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하는, 방법을 제공한다. 한 실시형태에서, 항체는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다.
한 실시형태에서, 본 발명은 비-방사능성 축성 척추관절염의 치료 방법을 제공한다. 추가의 양상에서, 본 발명은, 축성 척추관절염의 방사능성 증거는 부재하지만 상승된 CRP 및/또는 MRI에 의한 염증의 타각 징후를 갖는 중증의 축성 척추관절염을 지니는 성인, 특히, 비스테로이드성 소염제에 부적절한 반응을 가졌거나 이에 불내약성인 환자의 치료 방법을 제공한다. 한 실시형태에서, 본 발명은 말초 척추관절염의 치료 방법을 제공한다. 상기 방법은, 치료를 필요로 하는 대상체, 예를 들면, 환자에게, 유효량의 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 특히, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 특히, 상기 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 예를 들면, 본원에 개시되어 있는 약제학적 조성물을 투여함을 포함한다. 한 실시형태에서, 항체는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다.
한 실시형태에서, 질환은 원판상 루푸스, 말라리아, 악성 흑색종, 무형성 빈혈, 헌팅턴 질환, 수장족저 농포증, IgA 신염, ANCA-관련 혈관염, 공막염 또는 패혈증이다.
한 실시형태에서, 질환은 수장족저 농포증이다. 한 실시형태에서, 질환은 전신성 강피증이다.
한 실시형태에서, 본 발명은, IL-23이 포유동물 세포 상의 IL-23 수용체에 결합하는 것을 저해하는 방법으로서, 상기 세포에 상기 항체 분자 또는 항원-결합 단편을 투여함을 포함하고, 이에 의해 IL-23 수용체에 의해 매개된 신호전달이 저해되는, 방법을 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, IL-23-관련 장애를 갖는 대상체의 치료 방법으로서, 상기 대상체에게 상기 항체 또는 항원-결합 단편, 또는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 예를 들면, 본원에 개시되어 있는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하고, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 사람 IL-23에 결합하는, 방법을 추가로 제공한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 생물학적 샘플을 상기 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시켜, 항체 또는 이의 단편과 IL-23p19의 결합을 검출함으로써, 생물학적 샘플 중의 IL-23 수준을 검출하고/검출하거나 정량하는 방법을 추가로 제공한다. 이러한 정보는, IL-23-관련 장애를 진단하는데 사용될 수 있다. 따라서, IL-23-관련 장애의 진단 방법, 또는 대상체가 IL-23-관련 장애를 발병할 증가된 위험을 갖는지를 측정하는 방법이 제공되고, 여기서, 상기 방법은, 대상체 유래의 생물학적 샘플을 상기 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키고 IL-23p19에 대한 상기 항체 또는 항원 결합 단편의 결합을 검출하여 IL-23의 발현 또는 농도를 측정함을 포함한다.
한 실시형태에서, 본 발명은, 세포 상의 IL-23 수용체에 대한 IL-23의 결합을 저해하는 방법으로서, 세포 또는 세포 환경에 상기 항체 또는 항원-결합 단편을 투여함을 포함하고, 이에 의해, IL-23 수용체에 의해 매개된 신호전달이 저해되는, 방법을 추가로 제공한다.
도 1: 마우스 및 사람화된 가변 영역의 정렬. 도 1a: 항-IL-23p19 6B8 조작된 Vk 영역. 도 1b: 항-IL-23p19 6B8 조작된 VH 영역.
아미노산의 번호매김은 표준 캐뱃(Kabat) 번호매김 스킴(scheme)에 의한 것이다. 보통 폰트 = 사람; 이탤릭/밑줄 폰트 = 뮤린; 그림자 폰트 = 합성; 볼드/이탤릭/밑줄 폰트 = CDR.
도 2: IL-23R/Fc에 대한 사람 IL-23 결합의 경쟁 결합 검정.
IL-23의 p19 서브유닛(본원에서 "IL-23p19" 및 "p19 서브유닛"으로서도 언급됨)은, 21개 아미노산 리더 서열(Oppmann et al. Immunity 13:715 (2000), 서열번호 181)을 포함하는 189개 아미노산의 폴리펩타이드이다. 분자의 생물학적 활성은, IL-12p40 서브유닛과 파트너가 되어 IL-23을 형성하는 경우에만 검출된다. IL-23은, 활성화된 수지상 세포(DC) 및 식세포에 의해 대부분 발현된다. IL-23에 대한 수용체는, IL-23R이라고 칭하는 고유한 서브유닛과 파트너가 된 IL-12 수용체의 IL-12Rb1 서브유닛으로 이루어진 것으로 밝혀졌다(Parham et al. J. Immunol. 168:5699 (2002)). 수용체의 발현은, 기억 T 세포 및 NK 세포 상에서 주로 검출된다. 따라서, 이러한 사이토카인:수용체 쌍의 발현은 면역 세포의 특정 집단에 제한되는 것으로 나타난다. 처음에, IL-12 및 IL-23이 많은 기능을 공유할 수 있는 것으로 생각되었지만, 데이터는 상이한 그림을 나타냈다. IL-12는 Th1 세포의 생산에서 우세한 역할을 갖는 반면, IL-23은, Th17이라고 칭하는 최근 인지된 Th 세포 서브세트의 생산 및 유지에 중요하게 관여하는 것으로 밝혀졌다(Kikly et al. Curr. Opin. Immunol. 18:670 (2006), Kastelein et al. Ann. Rev. Immunol. 25:221 (2007)). 이들 세포는, IL-17A, IL-17F, IL-22, 및 기타 소염성 사이토카인, 예를 들면, IL-6 및 TNF-α를 생산한다. 하기에 기술되는 바와 같이, 이들 Th17 세포의 역할에 대한 동물 모델 연구는, 만성 염증 및 자가면역에서의 추진력(driving force)으로서의 이들의 중요성을 나타낸다.
본 발명은, IL-23의 p19 서브유닛, 특히, 사람 IL-23p19에 결합하는 항체를 제공한다. 본 발명은, 또한, IL-23의 p18 서브유닛을 인식하는 사람화된 항체에 관한 것이다. 특정 실시형태에서, 이들 사람화된 항체의 서열은 소정 리드 마우스 항체의 서열에 기초하여 동정되었다.
본 발명의 리드 마우스 항체는 마우스 하이브리도마로부터 유도되었다. 마우스의 면역화는 다양한 기술을 이용하여 행한다. 예를 들면, 사람 IL-23p19 단백질 또는 이의 단편에 대해 특이적인 항체는, 면역원성 항원, 예를 들면, 단리된 IL-23p19 단백질, 단리된 IL-23 단백질, 단리된 하이브리드 IL-23 단백질, 및/또는 상기 중 임의의 것의 일부(합성 펩타이드 포함)에 대항하여 생성될 수 있다. 예를 들면, 마우스 IL-23p40 서브유닛 및 사람 IL-23p19 서브유닛을 포함하는 하이브리드 IL-23 단백질을 이용하여 마우스를 면역화시킨다. 면역원성 항원의 제조 및 모노클로날 항체 생산은 당해 분야에 공지되어 있는 임의의 적합한 기술을 이용하여 수행할 수 있다.
리드 마우스 항체는, 사람 IL-23에 대한 이들의 높은 친화도에 기초하여 선택하였다. 따라서, 한 양상에서, 본 발명은, 높은 친화도로 사람 IL-23에 결합하는 항체를 제공한다. 선택된 마우스 항체를 사람화하여 사람화된 항체를 얻었다. 본 발명의 사람화된 항체는 사람 IL-23에 높은 친화도로 결합한다. 따라서, 다른 양상에서, 본 발명은, 사람 IL-23에 높은 친화도로 결합하는 사람화된 항체를 제공한다.
따라서, 한 실시형태에서, 본 발명은, KD가 40pM 미만인 항-IL-23p19 항체를 제공한다. 추가의 실시형태에서, 본 발명은, KD가 20pM 미만인 항-IL-23p19 항체를 제공한다. 추가의 실시형태에서, 본 발명은, KD가 10pM 미만인 항-IL-23p19 항체를 제공한다. 추가의 실시형태에서, 본 발명은, KD가 1pM 미만인 항-IL-23p19 항체를 제공한다.
다른 양상에서, 본 발명은 항체는, 사람 혈청의 부재시에 또는 50% 사람 혈청의 존재시에, IL-23p19에 높은 친화도로 결합한다.
추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는, 또한, 사이노몰거스 원숭이 IL-23에 높은 친화도로 결합한다.
다른 양상에서, 본 발명의 항체는 IL-23에 결합하지만, IL-12에는 결합하지 않는다. 추가의 양상에서, 본 발명의 항체는, IL-23에 밀접하게 관련된 패밀리 구성원인 IL-12의 생물학적 활성을 간섭하지 않는다.
다른 양상에서, 본 발명의 항체는, 마우스 비장세포 유래의 IL-17의 IL-23 자극된 생산을 저해한다.
추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는, DB 세포에서의 IL-23-유도된 STAT3 인산화를 저해한다.
추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는, 사이토카인, 예를 들면, IL-17 및 IL-22의 저해에 의한 측정시 IL-23의 p10 서브유닛에 결합함으로써 IL-23의 작용을 길항하고, 이의 생산은 IL-23에 의해 자극되고, 이들 사이토카인의 수준의 감소에 의해 검출된다.
추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는, 사이노몰거스 원숭이에서의 체내 반감기로 예시되는 바와 같이, 바람직한 약동학적(PK) 프로필을 갖는다.
추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 모노클로날 항-IL-23p19 항체는, 바람직한 생체 물리학적 특성, 예를 들면, 품질, 안정성, 또는 용해도를 갖는다.
한 양상에서, 항-IL-23p19 항체는, 사람화된 항체이다. 한 양상에서, 항-IL-23p19 항체는 모노클로날 항체이다. 한 양상에서, 항-IL-23p19 항체는 전장 항체이다. 한 양상에서, 항-IL-23p19 항체는, 사람화된 모노클로날 항체, 예를 들면, 전장 사람화된 모노클로날 항체이다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 특이적 "IL-23p19 항원 에피토프" 또는 "IL-23p19 에피토프"를 인식한다. 본원에 사용되는 바와 같이, 이들 용어는, 항-IL-23p19 항체와 면역 반응할 수 있는, 분자(예를 들면, 펩타이드) 또는 분자의 단편을 말하고, 예를 들면, 서열번호 84/121, 86/123, 88/125, 90/127, 91/128, 93/130, 95/132, 97/134, 99/136, 101/138, 103/140, 105/142, 107/144, 109/146, 111/148, 113/150, 115/152, 117/154, 119/156, 160/166, 160/168, 158/166, 또는 158/168의 경쇄/중쇄 서열 조합을 갖는 항체들 중 임의의 항체에 의해 인식되는 IL-23p19 항원 결정 부위를 포함한다. IL-23p19 항원 에피토프는, 단백질, 단백질 단편, 또는 펩타이드 등에 포함될 수 있다. 에피토프는 가장 일반적인 단백질, 짧은 올리고펩타이드, 올리고펩타이드 모방체(즉, IL-23p19 항원의 항체 결합 특성을 모방하는 유기 화합물), 또는 이들의 조합이다. 항체에 대한 펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프의 최소 크기는, 약 4개 내지 5개의 아미노산인 것으로 생각된다. 펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프는, 예를 들면, 7개 이상의 아미노산, 또는 예를 들면, 9개 이상의 아미노산, 또는 예를 들면, 약 15개 내지 약 20개의 아미노산을 함유한다. 항체는, 항원성 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 이들의 3차원 형태로 인식할 수 있으므로, 에피토프를 포함하는 아미노산들은 인접할 필요가 없고, 몇몇의 경우에는 심지어 동일한 펩타이드 쇄 상에 존재하지 않을 수 있다. 에피토프는, 당해 분야에 공지되어 있는 각종 기술, 예를 들면, X-선 결정학, 수소/중수소 교환 질량 분광분석법(HXMS), 부위-지정된 돌연변이 유발, 알라닌 스캐닝 돌연변이 유발, 및 펩타이드 스크리닝 방법에 의해 측정할 수 있다.
항체 또는 면역글로불린의 일반화된 구조는 당해 분야의 숙련가에게 익히 공지되어 있다. 이들 분자는, 전형적으로 2개의 동일한 경(L)쇄들 및 2개의 동일한 중(H)쇄들로 이루어진 약 150,000달톤의 이종사량체 당단백질이고, 전형적으로 전장 항체로서 언급된다. 각각의 경쇄는, 1개의 디설파이드 결합에 의해 중쇄에 공유결합적으로 연결되어 이종이량체를 형성하고, 이종이량체의 2개의 동일한 중쇄들 사이의 공유결합적 디설파이드 연결을 통해 이종사량체 분자가 형성된다. 경쇄 및 중쇄가 1개의 디설파이드 결합에 의해 함께 연결되지만, 2개의 중쇄들 사이의 디설파이드 연결의 수는 면역글로불린 이소타입(isotype)에 따라 다르다. 각각의 중쇄 및 경쇄는, 또한, 일정 간격으로 배치된(regularly spaced) 쇄내 디설파이드 가교도 갖는다. 각각의 중쇄는, 아미노-말단에 가변 도메인(VH), 이어서, 3개 또는 4개의 불변 도메인(CH1, CH2, CH3, 및 CH4), 및 CH1과 CH2 사이에 힌지 영역을 갖는다. 각각의 경쇄는, 아미노-말단 가변 도메인(VL) 및 카복시-말단 불변 도메인(CL)의 2개의 도메인들을 갖는다. VL 도메인은 비-공유결합적으로 회합하고, 반면, CL 도메인은 통상적으로 디설파이드 결합을 통해 CH1 도메인에 공유결합적으로 연결된다. 특정 아미노산 잔기는, 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 사이에 간섭을 형성하는 것으로 생각된다(Chothia et al., 1985, J. Mol. Biol. 186:651-663). 가변 도메인은, 또한, 본원에 가변 영역으로서도 언급된다.
가변 도메인들 내의 몇몇 도메인들은, 상이한 항체들 사이에서 광범위하게 상이하고, 즉, "초가변성"이다. 이들 초가변성 도메인은, 항체의 특이적 항원 결정 부위에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 직접적으로 관여하는 잔기들을 함유한다. 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 다에서의 초가변성은, 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변성 루프(HVL)로서 공지되어 있는 3개의 분절에 집중되어 있다. CDR은 문헌[Kabat et al., 1991, In: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.]에서의 서열 비교에 의해 정의되고, 반면, HVL(본원에서 CDR로서도 언급됨)은 문헌[Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917]에 기술되어 있는 바와 같이, 가변 도메인의 3차원 구조에 따라 구조적으로 정의된다. 이들 2개의 방법은 약간 상이한 CDR의 정의를 야기한다. 캐뱃에 의해 정의된 바, 경쇄 가변 도메인에서, CDR-L1은 대략 잔기 24 내지 34에 위치하고, CDR-L2는 대략 잔기 50 내지 56에 위치하고, CDR-L3은 대략 잔기 89 내지 97에 위치하며; 중쇄 가변 도메인에서, CDR-H1은 대략 잔기 31 내지 35에 위치하고, CDR-H2는 대략 잔기 50 내지 65에 위치하고, CDR-H3은 대략 잔기 95 내지 102에 위치한다. 특정 CDR을 포함하는 정확한 잔기 번호들은, CDR의 서열 및 크기에 따라 다를 것이다. 당해 분야 숙련가는, 항체의 가변 영역 아미노산 서열을 고려하여, 어느 잔기가 특정 CDR을 포함하는지를 통상적으로 결정할 수 있다. 따라서, 중쇄 및 경쇄의 CDR1, CDR2, CDR3은, 특정한 항체에 대한 특이적인 고유하고 기능적인 특성들을 정의한다.
중쇄 및 경쇄 각각의 내에 3개의 CDR들은, 덜 가변성인 경향이 있는 서열을 함유하는 프레임워크 영역(FR)들에 의해 분리된다. 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 아미노 말단으로부터 카복시 말단으로, FR들 및 CDR들은 하기 순서: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4로 배열된다. FR들의 큰 β-시트 입체배치(configuration)는, 쇄들 각각의 내의 CDR들이 서로에 대해 그리고 다른 쇄로부터의 CDR들에 인접하게 한다. 얻어진 입체배좌(conformation)는 항원 결합 부위(참조: Kabat et al., 1991, NIH Publ. No. 91-3242, Vol. I, pages 647-669)에 기여하지만, 모든 CDR 잔기들이 항원 결합에 직접적으로 관여할 필요는 없다.
FR 잔기들 및 IG 불변 도메인들은 항원 결합에 직접적으로 관여하지 않지만, 항원 결합에 기여하고/기여하거나 항체 이펙터(effector) 기능을 매개한다. 몇몇의 FR 잔기들은, 3개 이상의 방법으로: 에피토프에 직접 비공유결합적으로 결합함으로써, 1개 이상의 CDR 잔기들과 상호작용함으로써, 및 중쇄와 경쇄 사이의 계면에 영향을 미침으로써, 항원 결합에 대해 유의한 효과를 갖는 것으로 생각된다. 불변 도메인은 항원 결합에 직접적으로 관여하지 않지만, 각종 Ig 이펙터 기능, 예를 들면, 항체 의존적 세포의 세포독성(ADCC), 보체 의존적 세포독성(CDC) 및 항체 의존적 세포의 식세포 작용(ADCP)에서의 항체의 참여를 매개한다.
척추동물 면역글로불린의 경쇄는, 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 2개의 명백하게 별개인 클래스(class)들인 카파(κ) 및 람다(λ) 중 하나로 지정된다. 비교에 의해, 포유동물 면역글로불린의 중쇄는, 불변 도메인의 서열에 따라 5개의 주요 클래스들: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM 중 하나로 지정된다. IgG 및 IgA는 서브클래스(이소타입)들, 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 추가로 세분된다. 면역글로불린의 상이한 부류들에 상응하는 중쇄 불변 도메인들은, 각각 α, δ, ε, γ, 및 μ라고 칭한다. 본래 면역글로불린의 부류들의 서브유닛 구조 및 3차원 입체배치는 익히 공지되어 있다.
용어 "항체", "항-IL-23p19 항체", "사람화된 항-IL-23p19 항체", "사람화된 항-IL-23p19 에피토프 항체", 및 "변이체 사람화된 항-IL-23p19 에피토프 항체"는, 구체적으로 모노클로날 항체(전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 다특이적 항체(예를 들면, 이특이적 항체), 및 항체 단편, 예를 들면, 가변 도메인, 및 바람직한 생물학적 활성, 예를 들면, IL-23p19 결합을 나타내는 항체의 기타 부분을 포함한다. 용어 "모노클로날 항체"(mAb)는, 단일 항원 결정 부위, "에피토프"에 대항하는 고도로 특이적인 항체를 말한다. 따라서, 한정어 "모노클로날"은 동일한 에피토프에 대항하는 항체를 나타내는 것이고, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 요구하는 것으로 해석되지 않는다. 모노클로날 항체는, 예를 들면, 하이브리도마법(Kohler et al., 1975, Nature 256:495), 또는 당해 분야에 공지되어 있는 재조합체 DNA법(예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호 참조), 또는 문헌[Clackson et al., 1991, Nature 352: 624-628, 및 Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222: 581-597]에 기재되어 있는 기술을 이용하여 파지 항체 라이브러리를 이용하여 재조합적으로 생산된 모노클로날의 단리 방법을 포함하는 당해 분야에 공지되어 있는 임의의 기술 또는 방법론에 의해 제조될 수 있음이 이해되어야만 한다.
용어 "단량체"는 항체의 동종 형태를 말한다. 예를 들면, 전장 항체의 경우, 단량체는, 2개의 동일한 중쇄들 및 2개의 동일한 경쇄들을 갖는 단량체 항체를 의미한다.
키메라 항체는, 1종(예를 들면, 비사람 포유동물, 예를 들면, 마우스) 유래의 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역, 및 다른 종(예를 들면, 사람) 항체의 중쇄 및 경쇄 불변 영역으로 이루어지고, 키메라 항체는, 제1종(예를 들면, 마우스) 유래의 항체의 가변 영역을 암호화하는 DNA 서열을 제2종(예를 들면, 사람) 유래의 항체의 불변 영역에 대한 DNA 서열에 연결시키고, 연결된 서열을 함유하는 발현 벡터로 숙주를 형질감염시켜 키메라 항체를 생산하는 것을 가능하게 함으로써 얻을 수 있다. 대안으로, 키메라 항체는, 또한, 중쇄 및/또는 경쇄의 1개 이상의 영역들 또는 도메인들이, 다른 면역글로불린 부류 또는 이소타입으로부터, 또는 컨센서스 또는 생식선 서열로부터 모노클로날 항체에서 상응하는 서열의 변이체이거나, 이들과 동일하거나, 이들과 상동성인, 키메라 항체일 수 있다. 키메라 항체는 이러한 항체의 단편을 포함할 수 있고, 단, 항체 단편은, 이의 모 항체의 바람직한 생물학적 활성, 예를 들면, 동일한 에피토프에 대한 결합을 나타낸다(예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호; 및 Morrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855 참조).
용어 "항체 단편", "항-IL-23p19 항체 단편", "항-IL-23p19 에피토프 항체 단편", "사람화된 항-IL-23p19 항체 단편", "사람화된 항-IL-23p19 에피토프 항체 단편", "변이체 사람화된 항-IL-23p19 에피토프 항체 단편"은, 가변 영역 또는 기능적 능력, 예를 들면, 특정 IL-23p19 에피토프 결합이 유지되는, 전장 항-IL-23p19 항체의 부분을 말한다. 항체 단편의 예로는, Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, scFv 및 scFv-Fc 단편, 디아바디, 직쇄상 항체, 단일쇄 항체, 미니바디, 항체 단편들로 이루어진 디아바디, 및 항체 단편들로 이루어진 다특이적 항체가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
전장 항체를 효소, 예를 들면, 파파인 또는 펩신으로 처리하여 유용한 항체 단편을 생성할 수 있다. 파파인 소화를 이용하여, 각각 단일 항원-결합 부위를 갖는 "Fab" 단편이라고 칭하는 2개의 동일한 항원-결합 항체 단편들, 및 잔여 "Fc" 단편을 생산한다. Fab 단편은, 또한, 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 CH1 도메인을 함유한다. 펩신 처리는, 2개의 항원-결합 부위를 갖고 여전히 항원을 가교-연결할 수 있는 F(ab')2 단편을 생산한다.
Fab' 단편은, CH1 도메인의 C-말단에서의 항체 힌지 영역 유래의 1개 이상의 시스테인을 포함하는 추가의 잔기의 존재로 Fab 단편과 상이하다. F(ab')2 항체 단편은, 힌지 영역 중의 시스테인 잔기에 의해 연결된 Fab' 단편들의 쌍이다. 항체 단편들의 다른 화학적 커플링도 또한 공지되어 있다.
"Fv" 단편은, 1개의 중쇄 및 1개의 경쇄 가변 도메인의 단단한 비공유결합적 회합으로의 이량체로 이루어진 완전 항원-인식 및 결합 부위를 함유한다. 이러한 입체 배치에서, 각각의 가변 도메인의 3개의 CDR들은 상호작용하여 VH-VL 이량체의 표면 상의 항원-결합 부위를 규정한다. 총체적으로, 6개의 CDR들은 항체에 항원-결합 특이성을 부여한다.
"단일쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은, 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 단일쇄 Fv 변이체이고, 여기서, 상기 도메인들은 단일 폴리펩타이드 쇄 내에 존재한다. 단일쇄 Fv는 항원을 인식하여 이에 결합할 수 있다. scFv 폴리펩타이드는, 또한, scFv에 의한 항원 결합에 바람직한 3차원 구조의 형성을 가능하게 하기 위해서, VH와 VL 도메인 사이에 위치된 폴리펩타이드 링커를 임의로 함유할 수 있다(예를 들면, Pluckthun, 1994, In The Pharmacology of monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 참조).
"디아바디"는, 2개의 항원-결합 부위를 갖는 소 항체 단편을 말하고, 이 단편은, 동일한 폴리펩타이드 쇄 내의 경쇄 가변 도메인(V.sub.L)에 접속된 중쇄 가변 도메인(V.sub.H)을 포함한다(V.sub.H-V.sub.L 또는 V.sub.L-V.sub.H). 디아바디는, 예를 들면, 문헌[Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448]에 보다 완전하게 기술되어 있다.
다른 인식되는 항체 단편으로는, 탠덤(tandem) Fd 분절의 쌍(VH-CH1-VH-CH1)을 포함하는 것을 포함하여 항원 결합 영역의 쌍을 형성한다. 이들 직쇄상 항체는, 예를 들면, 문헌[Zapata et al. 1995, Protein Eng. 8(10):1057-1062]에 기재되어 있는 바와 같이 이특이적이거나 단일특이적일 수 있다.
"사람화된 항체" 또는 "사람화된 항체 단편"은, 면역글로불린 아미노산 서열 변이체 또는 이의 단편을 포함하는 특이적 유형의 키메라 항체이고, 이는, 소정 항원에 결합할 수 있고, 실질적으로 사람 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 1개 이상의 FR들 및 실질적으로 비-사람 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 1개 이상의 CDR들을 포함한다. "임포트(import)" 서열로서 언급되는 경우도 있는 비-사람 아미노산 서열은, 전형적으로 "임포트" 항체 도메인, 특히 가면 도메인으로부터 취한다. 일반적으로, 사람화된 항체는, 적어도 사람 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인의 FR들 사이에 삽입된 비-사람 항체의 CDR들 또는 HVL들을 포함한다. 본 발명은, 사람 생식선 서열 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 FR들 사이에 삽입된, 표 3 및 표 4에 나타내어진 마우스 모노클로날 항체로부터 유도된 CDR들 또는 사람화된 CDR들을 함유하는, 특이적 사람화된 항-IL-23p19 항체를 기술한다. 소정 마우스 FR 잔기들이, 사람화된 항체의 기능에 중요할 수 있고, 따라서, 소정의 사람 생식선 서열 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 잔기들이, 상응하는 마우스 서열의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 잔기들과 동일하게 변형됨이 이해될 것이다.
다른 양상에서, 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 1개 이상, 전형적으로 2개의 가변 도메인의 모두를 실질적으로 포함하고,(예를 들면, Fab, Fab', F(ab')2, Fabc, 및 Fv 단편에 함유됨), 여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 CDR들은 비-사람 면역글로불린의 CDR들에 상응하고, 본원에서는 구체적으로 모든 CDR들은, 표 1 내지 표 4에 상세히 기재되어 있는 바와 같은 마우스 또는 사람화된 서열이며, 모든 또는 실질적으로 모든 FR들은 사람 면역글로불린 컨센서스 또는 생식선 서열의 FR들이다. 다른 양상에서, 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 또한, 면역글로불린 Fc 영역의 적어도 일부, 전형적으로, 사람 면역글로불린의 것을 포함한다. 통상적으로, 항체는 적어도 중쇄의 가변 도메인뿐만 아니라 경쇄 둘 다를 함유할 것이다. 항체는, 또한, 중쇄의 CH1, 힌지, CH2, CH3, 및/또는 CH4 영역들 중 하나 이상을 적절하게 포함할 수 있다.
사람화된 항-IL-23p19 항체는, IgM, IgG, IgD, IgA, 및 IgE를 포함하는 면역글로불린들 중 임의의 클래스, 및 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2를 포함하는 임의의 이소타입으로부터 선택될 수 있다. 예를 들면, 불변 도메인은, 사람화된 항체가 세포독성 활성을 나타내는 것이 바람직한 보체 고정 불변 도메인일 수 있고, 이소타입은 보통 IgG1이다. 이러한 세포독성 활성이 바람직하지 않은 경우, 불변 도메인은 다른 이소타입, 예를 들면, IgG2로 이루어질 수 있다. 대안의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 1종 초과의 면역글로불린 부류 또는 이소타입 유래의 서열을 포함할 수 있고, 바람직한 이펙터 기능을 최적화하기 위한 특정 불변 도메인의 선택은, 당해 분야의 숙련 기술 범위 내이다. 특정 실시형태에서, 본 발명은, IgG1 항체인 항체, 보다 구체적으로는 이펙터 기능의 녹-아웃(knock-out)이 존재하는 IgG1 항체를 제공한다.
사람화된 항-IL-23p19 항체의 FR 및 CDR, 또는 HVL은, 모 서열에 대해 정확하게 상응할 필요는 없다. 예를 들면, 임포트 CDR, 또는 HVL, 컨센서스 또는 생식선 FR 서열 내의 1개 이상의 잔기들은, 얻어지는 아미노산 잔기가, 모 서열 내의 상응하는 위치의 본래 잔기와 더 이상 동일하지 않지만, 그럼에도 불구하고 항체가 IL-23p19에 대한 결합의 기능을 유지하도록, 치환, 삽입, 또는 결실에 의해 변경(예를 들면, 돌연변이 유발)될 수 있다.
이러한 변경은 보통 광범위하지 않을 것이고, 보존적 변경일 것이다. 일반적으로, 사람화된 항체 잔기들의 75% 이상, 보다 종종 90% 이상, 그리고, 가장 빈번하게는 95% 초과, 또는 98% 초과, 또는 99% 초과가, 모 컨센서스 또는 생식선 FR 및 임포트 CDR 서열의 잔기에 상응할 것이다.
중쇄와 경쇄 가변 영역 사이의 계면("VL-VH 계면")에 영향을 미치는 면역글로불린 잔기는, 서로에 대한 2개의 쇄의 근접성(proximity) 또는 배향(orientation)에 영향을 미치는 잔기이다. 쇄간 상호작용에 관여할 수 있는 소정 잔기로는, VL 잔기 34, 36, 38, 44, 46, 87, 89, 91, 96, 및 98, 및 VH 잔기 35, 37, 39, 45, 47, 91, 93, 95, 100, 및 103(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987)에 제시되어 있는 번호매김 시스템을 이용함)이 포함된다. 미국 특허 제6,407,213호는, 또한, VL 잔기 43 및 85, VH 잔기 43 및 60과 같은 잔기들도 이러한 상호작용에 관여할 수 있음을 논한다. 이들 잔기는 사람 IgG에 대해서만 권고되지만, 이들은 종간에 걸쳐 적용가능하다. 쇄간 상호작용에 관여하는 것으로 합리적으로 예측되는 중요한 항체 잔기들은, 컨센서스 서열로의 치환을 위해 선택된다.
용어 "컨센서스 서열" 및 "컨센서스 항체"는, 임의의 특정 클래스, 이소타입, 또는 서브유닛 구조, 예를 들면, 사람 면역글로불린 가변 도메인의 모든 면역글로불린의 각각의 위치에서 가장 빈번하게 발생하는 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 서열을 말한다. 컨센서스 서열은, 특정 종의 또는 다수의 종의 면역글로불린들을 기반으로 할 수 있다. "컨센서스" 서열, 구조, 또는 항체는, 소정 실시형태에서 기술되는 바와 같은 컨센서스 사람 서열을 포함하는 것으로 이해되고, 임의의 특정 클래스, 이소타입, 또는 서브유닛 구조의 모든 사람 면역글로불린의 각각의 위치에서 가장 빈번하게 발생하는 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 서열을 나타내는 것으로 이해된다. 따라서, 컨센서스 서열은, 각각의 위치에 1개 이상의 공지의 면역글로불린에 존재하는 아미노산을 갖는 아미노산 서열을 함유하지만, 컨센서스 서열은 임의의 단일 면역글로불린의 전체 아미노산 서열을 정확하게 복제할 수 있는 것은 아니다. 가변 영역 컨센서스 서열은, 임의의 천연 생산된 항체 또는 면역글로불린[Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.], 및 이의 변이체로부터 얻어지지 않는다. 중쇄 및 경쇄 컨센서스 서열의 FR, 및 이의 변이체는, 사람화된 항-IL-23p19 항체의 제조에 유용한 서열을 제공한다. 예를 들면, 미국 특허 제6,037,454호 및 제6,054,297호를 참조한다.
사람 생식선 서열은 사람 집단에서 자연적으로 발견된다. 이들 생식선 유전자의 조합은 항체 다양성을 생성시킨다. 항체의 경쇄에 대한 생식선 항체 서열은, 보존된 사람 생식선 카파 또는 람다 v-유전자 및 j- 유전자로부터 유래한다. 유사하게, 중쇄 서열은 생식선 v-, d-, 및 j-유전자로부터 유래한다(LeFranc, M-P, and LeFranc, G, "The Immunoglobulin Facts Book" Academic Press, 2001).
본원에서 사용되는 바와 같은 "변이체", "항-IL-23p19 변이체", "사람화된 항-IL23p19 변이체", 또는 "변이체 사람화된 항-IL-23p19"는, 각각, 적어도 표 1에 나타낸 바와 같은 서열들 중 임의의 서열 유래의 경쇄 가변 뮤린 CDR, 또는 표 2에 나타낸 바와 같은 뮤린 모노클로날 항체로부터 유도된 중쇄 뮤린 CDR 서열을 갖는, 사람화된 항-IL23p19 항체를 말한다. 변이체로는, 하나 또는 둘 다의 경쇄 또는 중쇄 가변 도메인에서 1개 이상의 아미노산 변화를 갖는 것이 포함되고, 단, 아미노산 변화는 IL-23p19에 대한 항체의 결합을 실질적으로 손상시키지 않는다. 본원에서 생산되는 예시의 사람화된 항체로는, 항체 A, 항체 B, 항체 C, 및 항체 D로서 지정된 것들이 포함되고, 이들의 각종 경쇄 및 중쇄는 서열번호 174 및 180, 그리고 서열번호 176 및 178에 각각 나타낸다.
"단리된" 항체는, 자연 환경의 구성 성분으로부터 확인되어 왔고, 분리되고/분리되거나 회수되는 것이다. 항체의 자연 환경의 오염성 구성 성분은, 항체의 진단학적 및 치료학적 사용을 간섭할 수 있는 물질이고, 이는, 효소, 호르몬, 또는 기타 단백질성 또는 비단백질성 용질일 수 있다. 한 양상에서, 항체는 항체의 95중량% 이상의 단리로 정제될 것이다.
단리된 항체는, 항체의 자연 환경의 1개 이상의 구성 성분이 존재하지 않을 것이므로, 이들이 생산되는 재조합체 세포 내의 제자리에(in situ) 항체를 포함한다. 그러나, 통상적으로, 단리된 항체는, 재조합체 세포 물질이 제거되는 1개 이상의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
용어 "항체 성능"은, 항원의 항체 인식 또는 생체내 항체의 유효성에 기여하는 인자를 말한다. 항체의 아미노산 서열에서의 변화는, 항체 특성, 예를 들면, 폴딩에 영향을 미칠 수 있고, 물리적 인자, 예를 들면, 항원에 대한 항체 결합의 개시율(ka), 항원으로부터의 항체의 해리 상수(kd), 항원에 대한 항체의 친화도 상수(Kd), 항체의 입체배좌, 단백질 안정성, 및 항체의 반감기에 영향을 미칠 수 있다.
본원에서 사용되는 경우 용어 "에피토프 태그된"은, "에피토프 태그"에 융합된 항-IL-23p19 항체를 말한다. "에피토프 태그"는, 항체 생산을 위한 에피토프를 제공하기 위한 충분한 수의 아미노산을 갖지만, 사람화된 항-IL-23p19 항체의 바람직한 활성을 간섭하지 않도록 설계되는, 폴리펩타이드이다. 에피토프 태그는, 일반적으로, 에피토프 태그에 대항하여 생성된 항체가 다른 에피토프와 실질적으로 교차-반응하지 않을 만큼 충분히 고유하다. 적합한 태그 폴리펩타이드는 일반적으로 6개 이상의 아미노산 잔기를 함유하고, 일반적으로 8개 내지 50개의 아미노산 잔기, 또는 약 9개 내지 30개의 잔기를 함유한다. 에피토프 태그 및 에피토프에 결합하는 항체의 예로는 flu HA 태그 폴리펩타이드 및 이의 항체 12CA5가 포함된다(Field et al., 1988 Mol. Cell. Biol. 8: 2159-2165; c-myc tag and 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 and 9E10 antibodies thereto (Evan et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5(12):3610-3616; 및 Herpes simplex virus glycoprotein D (gD) tag and its antibody (Paborsky et al. 1990, Protein Engineering 3(6): 547-553). 소정 실시형태에서, 에피토프 태그는 "재생(salvage) 수용체 결합 에피토프"이다. 본원에 사용되는 바와 같은 용어 "재생 수용체 결합 에피토프"는, IgG 분자의 생체내 혈청 반감기를 증가시키는데 관여하는, IgG 분자(예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 영역의 에피토프를 말한다.
몇몇의 실시형태에서, 본 발명의 항체는 세포독성제에 접합될 수 있다. 이는, 세포의 기능을 저해하거나 방지하고/하거나 세포의 파괴를 야기하는 임의의 물질이다. 상기 용어는, 방사성 동위원소(예를 들면, I131, I125, Y90, 및 Re186), 화학 치료요법제, 및 독소, 예를 들면, 세균, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소적 활성 독소, 및 이들의 단편을 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 세포독성제는, 표준 절차를 이용하여 본 발명의 사람화된 항체에 커플링되어, 예를 들면, 항체를 이용한 치료요법이 권고되는 환자를 치료하는데 사용할 수 있다.
"화학 치료요법제"는, 암의 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 본 발명의 치료학적 항체와 접합될 수 있는 화학 치료요법제의 다수의 예가 존재한다. 이러한 화학 치료요법제의 예로는, 알킬화제, 예를 들면, 티오테파 및 사이클로포스파미드; 알킬설포네이트, 예를 들면, 부설판, 임프로설판, 및 피포설판; 아지리딘, 예를 들면, 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드, 및 트리메틸롤로멜라민을 포함하는, 에틸렌이민 및 메틸라멜라민; 아세토게닌(특히, 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신(합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(아도젤레신, 카르젤레신, 및 비젤레신 합성 유사체); 크립토파이신(구체적으로, 크립토파이신 1 및 크립토파이신 8); 돌라스타틴, 아우리스타틴(유사체 모노메틸-아우리스타틴 E 및 모노메틸-아우리스타틴 F 포함); 듀오카르마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CBI-TMI 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕타인; 스폰기스타틴; 질소 머스타드, 예를 들면, 클로람부실, 클로마파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로르에타민, 메클로르에타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴; 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예를 들면, 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴; 항생제, 예를 들면, 에네다인 항생제(예를 들면, 칼리키아마이신, 특히, 칼리키아마이신 감마1I 및 칼리키아마이신 phil1, 예를 들면, Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186 참조; 다이네마이신 A를 포함하는 다이네마이신; 비스포스포네이트, 예를 들면, 클로드로네이트; 에스페라마이신; 및 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색소 단백질 에네다인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 옥소루비신(AdriamycinTM)(모르폴리노-옥소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루부신, 이소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예를 들면, 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항-대사물질, 예를 들면, 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 엽산 유사체, 예를 들면, 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트, 퓨린 유사체, 예를 들면, 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예를 들면, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록스우리딘; 안드로겐, 예를 들면, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항-아드라날, 예를 들면, 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충제, 예를 들면, 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코사이드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트렉세이트; 데포파민; 데모콜신; 디아지쿠온; 엘포미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 메이탄시노이드, 예를 들면, 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존, 미토크산트론, 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸하이드라지드; 프로카르바진; PSK®; 라족산; 리족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(특히, T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미타브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가사이토신; 아라비노사이드("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들면, 파클리탁셀(TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.) 및 독세탁셀(TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); 클로람부실; 겜시타빈(GemzarTM); 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예를 들면, 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드(VP-16); 이포스파미드; 미토크산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈(NavelbineTM); 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 저해제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티노이드, 예를 들면, 레티노산; 카페시타빈; 및 상기 중 임의의 것의 약제학적으로 허용되는 염, 산, 또는 유도체가 포함된다. 또한, 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 저해하도록 작용하는 항-호르몬제, 예를 들면, 항-에스트로겐, 및 예를 들면, 타목시펜(NolvadexTM), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 토레미펜(FarestonTM)을 포함하는 선택적 에스트로겐 수용체 조절인자(SERM); 부신에서의 에스트로겐 생산을 조절하는 효소 아로마타제를 저해하는 아로마타제 저해제, 예를 들면, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메게스트롤 아세테이트(MegaceTM), 엑세메스탄, 포르메스탄, 파드로졸, 보로졸(RivisorTM), 레트로졸(FemaraTM), 및 아나스트로졸(ArimidexTM); 및 항-안드로겐, 예를 들면, 플루타미드, 닐루타미드, 비카루타미드, 류프롤리드, 및 고세렐린; 및 상기 중 임의의 것의 약제학적으로 허용되는 염, 산, 또는 유도체도 이러한 정의에 포함된다. 이들 제제 중 임의의 하나 이상은, 본 발명의 사람화된 항체에 접합되어 각종 장애의 치료에 유용한 치료제를 제공할 수 있다.
또한, 항체는 프로드럭에 접합될 수 있다. "프로드럭"은, 모 약물에 비교하여 종양 세포에 덜 세포독성인 약제학적 활성 물질의 전구체 또는 유도체 형태이고, 효소적으로 활성화될 수 있거나 보다 활성인 형태로 전환될 수 있다. 예를 들면, 문헌[Wilman, 1986, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy", In Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast 및 Stella et al., 1985, "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery, In: "Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp. 247-267, Humana Press]을 참조한다. 유용한 프로드럭으로는 포스페이트-함유 프로드럭, 티오포스페이트-함유 프로드럭, 설페이트-함유 프로드럭, 펩타이드-함유 프로드럭, D-아미노산-변형된 프로드럭, 글리코실화된 프로드럭, β-락탐-함유 프로드럭, 임의로 치환된 페녹시아세트아미드-함유 프로드럭 및 임의로 치환된 페닐아세트아미드-함유 프로드럭, 5-플루오로사이토신 및 보다 활성인 세포독성 불포함 약물로 전환될 수 있는 기타 5-플루오로우리딘 프로드럭이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 프로드럭 형태로 유도체화될 수 있는 세포독성 약물의 예로는 상기 기술된 화학 치료요법제가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
진단학적 및 치료학적 모니터링 목적을 위해, 본 발명의 항체는, 또한, 표지, 표지 단독 또는 표지 및 추가의 제2 제제(프로드럭, 및 화학 치료요법제 등)에 접합될 수 있다. 기타 제2 제제와 구별되는 표지는, 검출가능한 화합물 또는 조성물인 제제를 말하고, 본 발명의 사람화된 항체에 직접적으로 또는 간접적으로 접합될 수 있다. 표지는 자체로 검출가능할 수 있거나(예를 들면, 방사성 동위원소 표지 또는 형광성 표지), 효소 표지의 경우에는 검출가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변경을 촉진시킬 수 있다. 표지화된 사람화된 항-IL-23p19 항체는 제조되어, 시험관내 및 생체내 진단학에서 포함되는 각종 적용에 사용될 수 있다.
본 발명의 항체는, 리포솜 제제의 일부로서 제형화되어 생체내 항체의 전달에 영향을 미칠 수 있다. "리포솜"은, 지질, 인지질, 및/또는 계면활성제의 각종 형태로 이루어진 소포체이다. 리포솜은, 화합물 또는 제형, 예를 들면, 임의로, 1종 이상의 약제학적 활성제 및/또는 표지에 커플링되거나 이들과의 조합으로의 본원에 개시되어 있는 사람화된 항-IL-23p19 항체의 포유동물에의 전달에 유용하다. 리포솜의 구성 성분은, 일반적으로 생체막의 지질 배열과 유사하게 2층 형성으로 배열된다.
본 발명의 소정 양상은, 본 발명의 사람화된 항체의 1개 이상의 도메인을 암호화하는 단리된 핵산에 관한 것이었다. "단리된" 핵산 분자는, 항체 핵산의 천연 공급원과 통상적으로 회합되어 있는 1개 이상의 오염성 핵산 분자를 확인하고 이로부터 분리되는, 핵산 분자이다. 단리된 핵산 분자는, 천연 세포에 존재하므로 핵산 분자와 구별된다.
본 발명의 각종 양상에서, 사람화된 항체의 1개 이상의 도메인은 재조합적으로 발현될 것이다. 이러한 재조합 발현은, 1개 이상의 제어 서열, 즉, 특정 숙주 유기체에서 작동가능하게 연결된 암호화 서열의 발현에 필요한 폴리뉴클레오타이드 서열을 사용할 수 있다. 원핵생물 세포에 사용하기에 적합한 제어 서열로는, 예를 들면, 프로모터, 오퍼레이터, 및 리보솜 결합 부위 서열이 포함된다. 진핵생물 제어 서열로는, 프로모터, 폴리아데닐화 신호, 및 인핸서가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 이들 제어 서열은, 원핵생물 및 진핵생물 숙주 세포에서의 사람화된 항-IL-23p19 항체의 발현 및 생산에 유용할 수 있다.
핵산 서열은, 다른 핵산 서열과의 기능적 관계에 놓이는 경우에 "작동가능하게 연결"된다. 예를 들면, 핵산 전서열(presequence) 또는 분비성 리더가, 폴리펩타이드의 분비에 참여하는 전구단백질(preprotein)로서 발현되는 경우에 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산에 작동가능하게 연결되거나; 프로모터 또는 인핸서가, 서열의 전사에 영향을 미치는 경우에 암호화 서열에 작동가능하게 연결되거나; 리보솜 결합 부위가, 번역을 가능하게 하도록 위치되는 경우에 암호화 서열에 작동가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동가능하게 연결된"은, 연결되는 DNA 서열이 인접하고, 분비성 리더의 경우에 인접하고 판독 프레임 내에 존재함을 의미한다. 그러나, 인핸서는 임의로 인접한다. 연결은 편리한 제한 부위에서의 라이게이션에 의해 달성될 수 있다. 이러한 부위가 존재하지 않는 경우, 합성 올리고뉴클레오타이드 어댑터 또는 링커를 사용할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은 표현 "세포", "세포주", 및 "세포 배양물"은 상호교환적으로 사용되고, 이러한 명칭 모두는 이의 자손(progeny)을 포함한다. 따라서, "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"로는 전이의 수에 관계없이 이들로부터 유도된 1차 대상체 세포 및 배양물이 포함된다.
치료의 목적을 위한 용어 "포유동물"은, 사람, 가축 및 농장 동물, 및 동물원, 스포츠 또는 애완 동물을 포함하는 포유동물로서 분류된 임의의 동물, 예를 들면, 개, 말, 고양이, 및 소 등을 말한다. 바람직하게는 포유동물은 사람이다.
본원에서 사용되는 바와 같은 "장애"는, 본원에 기술되어 있는 사람화된 항-IL-23p19 항체를 이용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 임의의 병태이다. 이는, 포유동물이 의문의 장애에 취약하게 하는 병리학적 병태를 포함하는, 만성 및 급성 장애 또는 질환을 포함한다. 비제한적 예시 또는 본원에서 치료되는 장애로는 염증성, 혈관신생성, 자가면역성, 및 면역학적 장애, 호흡기 장애, 암, 혈액학적 악성 종양, 양성 및 악성 종양, 백혈병 및 림프구 악성 종양이 포함된다.
용어 "암" 및 "암성"은, 보통 비조절된 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물에서의 생리학적 병태를 나타내거나 기술한다. 암의 예로는 암종, 림프종, 아세포종, 육종, 및 백혈병이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "IL-23-관련 장애" 또는 "IL-23-관련 질환"은, IL-23 활성이 질환에 기여하고 보통 IL-23이 비정상적으로 발현되는 병태를 말한다. IL-23-관련 장애로는 면역계의 질환 및 장애, 예를 들면, 자가면역 장애 및 염증성 장애가 포함된다. 이러한 병태로는 류마티스 관절염(RA), 전신성 홍반 루푸스(SLE), 강피증, 쇼그렌 증후군, 다발성 경화증, 건선, 건선성 관절염, 염증성 장 질환(예를 들면, 궤양성 결장염 및 크론 질환), 폐 염증, 천식, 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 및 척추관절염, 예를 들면, 강직성 척추관절염, 비-방사능성 축성 척추관절염, 또는 말초 척추관절염이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
용어 "정맥내 주입"은, 대략 15분 초과, 일반적으로 대략 30 내지 90분의 시간에 걸친 동물 또는 사람 환자의 정맥으로의 제제의 도입을 말한다.
용어 "정맥내 볼루스" 또는 "정맥내 푸시"는, 대략 15분 이하, 일반적으로 5분 이하 내에 신체가 약물을 투여받도록 하는 동물 또는 사람의 정맥으로의 약물 투여를 말한다.
용어 "피하 투여"는, 약물 리셉터클(receptable)로부터의 상대적으로 느리고 지속적인 전달에 의해, 동물 또는 사람 환자의 피부 하에의, 바람직하게는 피부와 피부 아래 조직 사이의 포켓(pocket) 내에의 제제의 도입을 말한다. 피부 아래 조직으로부터 피부를 핀칭 업(pinching up) 또는 드로잉 어웨이(drawing away)하는 것은 포켓을 생성시킬 수 있다.
용어 "피하 주입"은, 30분 이하, 또는 90분 이하를 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아닌 시간 동안, 약물 리셉터클로부터의 상대적으로 느리고 지속적인 전달에 의해 동물 또는 사람 환자의 피부 하에의, 바람직하게는 피부와 피부 아래 조직 사이의 포켓 내에의 약물의 도입을 말한다. 임의로, 주입은 동물 또는 사람 환자의 피부 하에 이식된 약물 전달 펌프의 피하 이식에 의해 이루어질 수 있고, 여기서, 펌프는, 소정량의 약물을 소정 시간, 예를 들면, 30분, 90분, 또는 치료 용법의 길이에 걸친 시간 동안 전달한다.
용어 "피하 볼루스"는, 동물 또는 사람 환자의 피부 아래에의 약물 투여를 말하고, 여기서, 볼루스 약물 전달은 대략 15분 미만이고; 다른 양상에서는 5분 미만이고, 또 다른 양상에서는 60초 미만이다. 또 다른 양상에서, 피부와 피부 아래 조직 사이의 포켓 내에서 투여가 이루어지고, 여기서, 포켓은 피부 아래 조직으로부터 피부를 핀칭 업 또는 드로잉 어웨이함으로써 생성될 수 있다.
용어 "치료학적 유효량"은, 치료되는 장애의 증상들 중 하나 이상을 완화시키거나 개선하는 활성제의 양을 나타내기 위해 사용된다. 다른 양상에서, 치료학적 유효량은, 예를 들면, 질환 진행을 느리게 하는데 유효한 것으로 밝혀진 표적 혈청 농도를 말한다. 효능은, 치료되는 병태에 따라 종래 방법으로 측정할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "치료" 및 "치료요법" 등은, 질환 또는 장애에 대한 치료학적 및 예방학적 또는 억제 수단을 포함하여, 질환 또는 장애의 증상들 중 하나 이상의 개선 또는 완화, 질환 또는 장애의 진행의 퇴행, 서행, 또는 중지를 포함하지만 이들에 제한되지 않는 임의의 임상학적으로 바람직하거나 이로운 효과를 유도하는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들면, 용어 치료는, 질환 또는 장애의 증상의 개시 전에 또는 후에 제제를 투여함에 의해 상기 질환 또는 장애의 하나 이상의 징후들을 예방하거나 제거함을 포함한다. 다른 예로서, 용어 치료는, 질환의 임상학적 증상발현 후에 제제를 투여하여 질환의 증상을 방지함을 포함한다. 추가로, 투여가 질환 또는 장애의 임상학적 매개변수, 예를 들면, 조직 손상의 정도 또는 전지의 양 또는 정도, 치료가 질환의 개선을 유도하는지의 여부에 영향을 미치는, 임상학적 증상들의 개시 후의, 그리고 임상학적 증상들이 전개된 후의 제제의 투여는, 본원에서 사용된 바와 같은 "치료" 또는 "치료요법"을 포함한다. 또한, 본 발명의 조성물이, 단독으로 또는 다른 치료학적 제제와 병용하여, 사람화된 항-IL-23p19 항체 조성물 사용의 부재시의 증상과 비교하여 치료되는 장애의 하나 이상의 증상을 경감시키거나 개선시키는 한, 결과는, 장애의 모든 증상들이 경감되는지의 여부에 관계없이 근본적인 장애의 효과적인 치료임이 고려되어야만 한다.
용어 "패키지 삽입물"은, 치료학적 제품의 상업적 패키지 내에 관례상 포함되는, 이러한 치료학적 제품의 사용에 관한 지시사항, 용도, 투여, 사용 금지 사유 및/또는 경고에 대한 정보를 함유하는 지침서를 나타내기 위해 사용된다.
항체
한 양상에서, 항-IL-23 항체, 특히, 사람화된 항-IL-23p19 항체, 및 1개 이상의 항-IL-23 항체, 특히, 1개 이상의 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체를 포함하는 조성물 및 제조 물품이 본원에 기술 및 개시되어 있다. 또한, 항-IL-23 항체, 특히, 사람화된 항-IL-23p19 항체의 항원-결합 단편을 포함하는 결합제도 기술되어 있다. 사람화된 항-IL-23p19 항체 및 결합제는 Th17 관련 사이토카인의 생산을 저해할 수 있고, 이는 만성 자가면역 및 염증성 질환에 기여한다. 따라서, 사람화된 항-IL-23p19 항체 및 결합제는 각종 질환 또는 장애의 치료에 사용될 수 있다. 사람화된 항-IL-23p19 항체 및 IL-23p19 결합제는, 각각, 적어도 IL-23p19 에피토프를 특이적으로 인식하는 부분(항원-결합 단편)을 포함한다.
초기 특성 확인에 있어서, 마우스 항체는 IL-23p19 결합 특성 확인에 기반하여 선택하였다.
따라서, 한 양상에서, 본 발명의 항체는 IL-23, 특히, 사람 IL-23에 대해 100pM 미만의 KD를 갖는다. 다른 양상에서, 본 발명의 항체는 40pM 미만의 KD를 갖는다. 다른 양상에서, 본 발명의 항체는 20pM 미만의 KD를 갖는다. 다른 양상에서, 본 발명의 항체는 10pM 미만의 KD를 갖는다. 다른 양상에서, 본 발명의 모노클로날 항체는 1pM 미만의 KD를 갖는다.
선택된 마우스 항체는, 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같은 하기 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 갖는다:
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
사람 프레임워크 서열은, 프레임워크 상동성, CDR 구조, 보존된 정규(canonical) 잔기, 보존된 계면 패킹(interface packing) 잔기 및 다른 매개변수들을 기반으로 하여 마우스 리드의 각각에 대해 선택되었다.
각종 마우스 항체의 마우스 경쇄 및 중쇄 CDR들은 각각 표 3 및 표 4에 나타낸다. 또한, 표 4는, 사람화 프로세스 동안 마우스 항체 6B8로부터 유도된 3개의 중쇄 CDR들도 나타낸다.
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
표 3 및 표 4에 상기 열거된 CDR들은, 쵸티아 번호매김 시스템(Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948)을 이용하여 정의한다.
키메라 모 Fab와 비교하여 보다 우수하거나 동등한 결합을 나타낸 Fab를 IgG로의 전환을 위해 선택하였다. 6B8을 IgG1KO 포맷으로 전환시켰다. IgG1KO(이펙터 기능의 녹아웃(knock-out))은, Fc 영역에 2개의 돌연변이, Leu234Ala 및 Leu235Ala를 갖고, 이는, 이펙터 기능, 예를 들면, FcγR과 보체 결합을 감소시킨다. IgG 포맷은 문헌(예를 들면, Hezareh et al. (2001) Journal of Virology 75: 12161-12168 참조)에 기술되어 있다. 실시예 1은, 사람화 프로세스를 보다 상세하게 기술한다. 이러한 사람화의 결과, 사람화된 항체 서열이 얻어졌다. 마우스 항체 6B8로부터 유도된 사람화된 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 대표 번호가 제공되고, 표 5 및 표 6에 나타낸다. 마우스 항체 6B8로부터 유도된 사람화된 경쇄 및 중쇄 가변 영역과 마우스 항체 6B8 유래의 중쇄 가변 영역 사이의 정렬은 도 1에 나타낸다.
마우스 항체 6B8로부터 유도된 사람화된 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 선택된 조합은 항체 A, 항체 B, 항체 C, 및 항체 D를 얻었다:
항체 A: IgK-66을 갖는 6B8-IgG1KO-2(중쇄 가변 영역 6B8CVH-02 및 경쇄 가변 영역 6B8CVK-66);
항체 B: IgK-66을 갖는 6B8-IgG1KO-5(중쇄 가변 영역 6B8CVH-05 및 경쇄 가변 영역 6B8CVK-66);
항체 C: IgK-65를 갖는 6B8-IgG1KO-2(중쇄 가변 영역 6B8CVH-02 및 경쇄 가변 영역 6B8CVK-65);
항체 D: IgK-65를 갖는 6B8-IgG1KO-5(중쇄 가변 영역 6B8CVH-05 및 경쇄 가변 영역 6B8CVK-65).
항체 A, 항체 B, 항체 C, 및 항체 D는, 표 7에 나타낸 중쇄 및 경쇄 서열을 갖는다.
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
항체 A, 항체 B, 항체 C, 및 항체 D의 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 상기 표 7에서 밑줄 그어져 있다.
한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 중 1개 이상을 갖는다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 하기 특성들 중 2개 이상, 또는 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 11개 이상의 임의의 조합을 갖는다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성 모두를 갖는다.
● 사람 IL-23에 대한 KD ≤ 1pM (50% 사람 혈청에서의 결합 온-레이트의 변화 없음)
● 시험관내 사람 IL-23R/Fc에 대한 IL-23의 결합을 차단함
● 사람 IL-12에 결합하지 않음
● 마우스 비장세포에서의 사람 IL-23 유도된 IL-17 생산을 20pM 이하의 IC50으로 저해함
● 사람 DB 세포에서의 사람 IL-23 유도된 STAT3 인산화를 40pM 이하의 IC50으로 저해함
● ADCC/CDC에서의 활성이 예측되지 않음
● 사이노몰거스 원숭이 IL-23에 대한 KD ≤ 1pM
● 마우스 또는 래트 IL-23에 대한 교차 반응성 없음
● 마우스 귀에서의 사람 IL-23 유도된 IL-17 및 IL-22 생산을 저해함(1mg/kg으로의 사이토카인 둘 다의 80% 이상의 저해)
● 83℃ 안정성(시차 주사 열량계에 의한 측정시 융점 온도 83℃)
● 100mg/ml 이상의 용해도(UV 분광법에 의해 측정하고 탁도에 의해 모니터링시)
● 3마리의 사이노몰거스 원숭이에서의 1.0mg/kg의 피하 투여는, 대략 70%의 생체 이용률로 대략 28일 동안 10nM 이상의 지속적인 노출을 나타낸다.
본원에서, ADCC/CDC에서의 활성이 예측되지 않음은, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체가 Fc 수용체에 대해 감소된 친화도를 가지므로 ADCC/CDC에서 활성을 갖지 않는 것으로 예측됨을 의미한다.
한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 중 1개 이상을 갖는다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 하기 특성들 중 2개 이상, 또는 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개 이상의 임의의 조합을 갖는다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성 모두를 갖는다.
● 사람 IL-23에 대한 KD ≤ 1pM (50% 사람 혈청에서의 결합 온-레이트의 변화 없음)
● 시험관내 사람 IL-23R/Fc에 대한 IL-23의 결합을 차단함
● 사람 IL-12에 결합하지 않음
● 마우스 비장세포에서의 사람 IL-23 유도된 IL-17 생산을 20pM 이하의 IC50으로 저해함
● 사람 DB 세포에서의 사람 IL-23 유도된 STAT3 인산화를 40pM 이하의 IC50으로 저해함
● ADCC/CDC에서의 활성이 예측되지 않음
● 사이노몰거스 원숭이 IL-23에 대한 KD ≤ 1pM
● 마우스 또는 래트 IL-23에 대한 교차 반응성 없음
● 마우스 귀에서의 사람 IL-23 유도된 IL-17 및 IL-22 생산을 저해함(1mg/kg으로의 사이토카인 둘 다의 80% 이상의 저해)
● 83℃ 안정성(시차 주사 열량계에 의한 측정시 융점 온도 83℃)
● 100mg/ml 이상의 용해도(UV 분광법에 의해 측정하고 탁도에 의해 모니터링시).
추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는 하기 결합 특성(특성 A)들 중 1개 이상을 갖는다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 하기 특성들 중 2개 이상, 또는 3개 이상의 임의의 조합을 갖는다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성 모두를 갖는다.
● 사람 IL-23에 대한 KD ≤ 1pM (50% 사람 혈청에서의 결합 온-레이트의 변화 없음)
● 사람 IL-12에 결합하지 않음
● 사이노몰거스 원숭이 IL-23에 대한 KD ≤ 1pM
● 마우스 또는 래트 IL-23에 대한 교차 반응성 없음.
특히, 본 발명의 사람화된 항체는, 1pM 이하의 사람 IL-23에 대한 KD를 갖고(50% 사람 혈청에서의 결합 온-레이트의 변화 없음), 사람 IL-12에 결합하지 않는다.
추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는 하기 기능적 특성(특성 B)들 중 1개 이상을 갖는다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 중 2개 이상, 또는 3개 이상의 임의의 조합을 갖는다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성 모두를 갖는다.
● 시험관내 사람 IL-23R/Fc에 대한 IL-23의 결합을 차단함
● 마우스 비장세포에서의 사람 IL-23 유도된 IL-17 생산을 20pM 이하의 IC50으로 저해함
● 사람 DB 세포에서의 사람 IL-23 유도된 STAT3 인산화를 40pM 이하의 IC50으로 저해함
● 마우스 귀에서의 사람 IL-23 유도된 IL-17 및 IL-22 생산을 저해함(1mg/kg으로의 사이토카인 둘 다의 80% 이상의 저해).
추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는 하기 특성(특성 C)들 중 1개 이상을 갖는다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 중 2개 이상, 또는 3개 이상의 임의의 조합을 갖는다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성 모두를 갖는다.
● ADCC/CDC에서의 활성이 예측되지 않음
● 83℃ 안정성(시차 주사 열량계에 의한 측정시 융점 온도 83℃)
● 100mg/ml 이상의 용해도(UV 분광법에 의해 측정하고 탁도에 의해 모니터링시)
● 3마리의 사이노몰거스 원숭이에서의 1.0mg/kg의 피하 투여는, 대략 70%의 생체 이용률로 대략 28일 동안 10nM 이상의 지속적인 노출을 나타낸다.
추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는 하기 특성(특성 C)들 중 1개 이상을 갖는다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 중 2개 이상의 임의의 조합을 갖는다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성 모두를 갖는다.
● ADCC/CDC에서의 활성이 예측되지 않음
● 83℃ 안정성(시차 주사 열량계에 의한 측정시 융점 온도 83℃)
● 100mg/ml 이상의 용해도(UV 분광법에 의해 측정하고 탁도에 의해 모니터링시).
추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는 1개 이상의 특성 A, 1개 이상의 특성 B, 및 1개 이상의 특성 C를 갖는다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 특성 A, 특성 B, 및 특성 C 중 2개 이상, 또는 3개 이상의 임의의 조합을 갖는다.
몇몇의 양상에서, 사람화된 항체는 차단 활성을 나타냄으로써, IL-23 수용체에 대한 IL-23의 결합을 45% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, H는 95% 이상 감소시킨다. IL-23 수용체에 대한 IL-23의 결합을 차단하는 항체의 능력은, 당해 분야에 공지되어 있는 경쟁적 결합 검정을 이용하여 측정할 수 있다. 대안으로, 항체의 차단 활성은, IL-23 수용체에 의해 매개되는 신호전달이 저해되는지를 결정하기 위해, IL-23의 생물학적 효과, 예를 들면, IL-17 및 IL-22의 생산을 평가함으로써 측정할 수 있다.
추가의 양상에서, 본 발명은, 바람직한 생물학적 특성을 갖는 사람화된 항-IL-23p19 항체를 제공한다. 한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 완충액 중에 90% 이상의 단량체 형태로 또는 92% 이상의 단량체 형태로, 또는 95% 이상의 단량체 형태로 존재한다. 추가의 양상에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 완충액 중에 90% 이상의 단량체 형태로, 또는 92% 이상의 단량체 형태로, 또는 95% 이상의 단량체 형태로 1개월 동안 또는 4개월 동안 잔존한다.
한 양상에서, 본 발명의 사람화된 항체는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다. 따라서, 한 실시형태에서, 본 발명의 사람화된 항체는 서열번호 174의 경쇄 서열 및 서열번호 176의 중쇄 서열을 포함한다(항체 A). 다른 실시형태에서, 본 발명의 사람화된 항체는 서열번호 174의 경쇄 서열 및 서열번호 178의 중쇄 서열을 포함한다(항체 B). 다른 실시형태에서, 본 발명의 사람화된 항체는 서열번호 180의 경쇄 서열 및 서열번호 176의 중쇄 서열을 포함한다(항체 C). 다른 실시형태에서, 본 발명의 사람화된 항체는 서열번호 180의 경쇄 서열 및 서열번호 178이 중쇄 서열을 포함한다(항체 D).
추가의 실시형태에서, 본 발명의 사람화된 항체는 서열번호 174의 경쇄 서열 및 서열번호 176의 중쇄 서열로 이루어진다(항체 A). 추가의 실시형태에서, 본 발명의 사람화된 항체는 서열번호 174의 경쇄 서열 및 서열번호 178의 중쇄 서열로 이루어진다(항체 B). 추가의 실시형태에서, 서열번호 180의 경쇄 서열 및 서열번호 176의 중쇄 서열로 이루어진다(항체 C). 추가의 실시형태에서, 본 발명의 사람화된 항체는 서열번호 180의 경쇄 서열 및 서열번호 178의 중쇄 서열로 이루어진다(항체 D).
몇몇의 실시형태에서, 사람화된 항-IL-23p19 항체(이의 항원-결합 단편, 예를 들면, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 포함)는, 항체 A(경쇄 서열 = 서열번호 174; 중쇄 서열 = 서열번호 176), 항체 B(경쇄 서열 = 서열번호 174; 중쇄 서열 = 서열번호 178), 항체 C(경쇄 서열 = 서열번호 180; 중쇄 서열 = 서열번호 176), 또는 항체 D(경쇄 서열 = 서열번호 180; 중쇄 서열 = 서열번호 178)로부터 유도된 잔기의 아미노산 서열을 포함한다.
추가의 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 181의 아미노산 잔기 108 내지 126 및 아미노산 잔기 137 내지 151로 이루어진 에피토프에서 사람 IL-23p19에 결합하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
추가의 실시형태에서, 본 발명은, 사람 IL-23p19에, 본 발명의 항체, 예를 들면, 본원에 기술되어 있는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D와 경쟁적으로 결합하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. IL-23p19에 경쟁적으로 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편의 능력은, 당해 분야에 공지되어 있는 경쟁적 결합 검정을 이용하여 측정할 수 있다.
사람화된 항-IL-23p19 항체는, 컨센서스 또는 생식선 프레임워크 영역 내에 특정 아미노산 치환들을 임의로 포함한다. 이들 프레임워크 위치에서의 아미노산 잔기들의 특정 치환들은, 사람 생식선 프레임워크 영역으로의 CDR들 또는 HVL들의 "직접적인 스왑(direct swap)"에 의해 형성된 사람화된 항체에서 입증된 것에 비해, 결합 친화도 및/또는 안정성을 포함하는 항체 성능의 각종 양상을 향상시킬 수 있다.
몇몇의 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 또는 119에 제시되는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 갖는 다른 모노클로날 항체를 기술한다. 몇몇의 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 또는 156에 제시되는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 갖는 다른 모노클로날 항체를 기술한다(상기 표 1 및 표 2 참조). 이들 마우스 항체의 CDR 서열은 표 3 및 표 4에 나타낸다. 이들 CDR들을 사람 컨센서스 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 FR들에 위치시킴은, 유용한 본 발명의 사람화된 항체를 얻을 것이다.
특히, 본 발명은, 서열번호 84/121, 86/123, 88/125, 90/127, 91/128, 93/130, 95/132, 97/134, 99/136, 101/138, 103/140, 105/142, 107/144, 109/146, 111/148, 113/150, 115/152, 117/154, 또는 119/156의 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 조합을 갖는 모노클로날 항체를 제공한다. 이러한 가변 영역은 사람 불변 영역과 조합될 수 있다.
몇몇의 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 158, 160, 162, 또는 164에 제시되는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 서열을 갖는 다른 사람화된 항체를 기술한다. 몇몇의 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 166, 168, 170, 또는 172에 제시되는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 서열을 갖는 다른 사람하된 항체를 기술한다(상기 표 5 및 표 6 참조). 이들 항체의 CDR 서열은 표 3 및 표 4에 나타낸다. 특히, 본 발명은, 서열번호 160/166, 160/168, 158/166, 또는 158/168의 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 조합을 갖는 모노클로날 항체를 제공한다. 이러한 가변 영역은 사람 불변 영역과 조합될 수 있다.
추가의 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 160의 CDR들, 및 서열번호 160의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 프레임워크 영역들의 아미노산 서열과 90% 이상 동일하거나, 93% 이상 동일하거나, 또는 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인, 및 서열번호 166의 CDR들, 및 서열번호 166의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 프레임워크 영역들의 아미노산 서열과 90% 이상 동일하거나, 93% 이상 동일하거나, 또는 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는, 사람화된 모노클로날 항체이다.
추가의 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 160의 CDR들, 및 서열번호 160의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 프레임워크 영역들의 아미노산 서열과 90% 이상 동일하거나, 93% 이상 동일하거나, 또는 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인, 및 서열번호 168의 CDR들, 및 서열번호 168의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 프레임워크 영역들의 아미노산 서열과 90% 이상 동일하거나, 93% 이상 동일하거나, 또는 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는, 사람화된 모노클로날 항체이다.
추가의 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 158의 CDR들, 및 서열번호 158의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 프레임워크 영역들의 아미노산 서열과 90% 이상 동일하거나, 93% 이상 동일하거나, 또는 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인, 및 서열번호 166의 CDR들, 및 서열번호 166의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 프레임워크 영역들의 아미노산 서열과 90% 이상 동일하거나, 93% 이상 동일하거나, 또는 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는, 사람화된 모노클로날 항체이다.
추가의 실시형태에서, 본 발명은, 서열번호 158의 CDR들, 및 서열번호 158의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 프레임워크 영역들의 아미노산 서열과 90% 이상 동일하거나, 93% 이상 동일하거나, 또는 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인, 및 서열번호 168의 CDR들, 및 서열번호 168의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 프레임워크 영역들의 아미노산 서열과 90% 이상 동일하거나, 93% 이상 동일하거나, 또는 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역들을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 한 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는, 사람화된 모노클로날 항체이다.
몇몇의 특정 실시형태에서, 본원에 개시되어 있는 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 적어도, 표 1 내지 표 6에 나타낸 바와 같은 뮤린 모로클로날 항체 또는 사람화된 항체의 CDR들 또는 HVL들, 및 사람 생식선 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 FR들을 포함하는, 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
이들 서열의 CDR들은 표 3 및 표 4에 나타낸다. 따라서, 한 양상에서, 본 발명은, 서열번호 1, 4, 6, 7, 8, 11, 15, 18, 19, 22, 27, 또는 30의 경쇄 CDR1(L-CDR1) 서열; 서열번호 2, 5, 9, 12, 16, 20, 23, 25, 28, 또는 31의 경쇄 CDR2(L-CDR2) 서열; 서열번호 3, 10, 13, 14, 17, 21, 24, 26, 29, 또는 32의 경쇄 CDR3(L-CDR3) 서열; 서열번호 33, 36, 38, 40, 43, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 67, 68, 69, 77, 또는 80의 중쇄 CDR1(H-CDR1) 서열; 서열번호 34, 39, 41, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 70, 72, 73, 75, 78, 또는 81의 중쇄 CDR2(H-CDR2) 서열; 및 서열번호 35, 37, 42, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 65, 71, 74, 76, 79, 또는 82의 중쇄 CDR3(H-CDR3) 서열을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 한 양상에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 상기 열거된 L-CDR1, 상기 열거된 L-CDR2 및 상기 열거된 L-CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 상기 열거된 H-CDR1, 상기 열거된 H-CDR2 및 상기 열거된 H-CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
추가의 양상에서, 본 발명은,
a) 각각 서열번호 1, 2, 3, 33, 34, 및 35의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
b) 각각 서열번호 4, 5, 3, 36, 34, 및 37의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
c) 각각 서열번호 1, 2, 3, 38, 39, 및 35의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
d) 각각 서열번호 6, 2, 3, 40, 41, 및 42의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
e) 각각 서열번호 7, 2, 3, 43, 41, 및 44의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
f) 각각 서열번호 8, 9, 10, 45, 46, 및 47의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
g) 각각 서열번호 8, 9, 10, 48, 49, 및 50의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
h) 각각 서열번호 11, 12, 13, 51, 52, 및 53의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
i) 각각 서열번호 7, 2, 14, 54, 55, 및 56의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
j) 각각 서열번호 15, 16, 17, 57, 58, 및 59의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
k) 각각 서열번호 18, 16, 17, 60, 61, 및 62의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
l) 각각 서열번호 19, 20, 21, 63, 66, 및 67의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
m) 각각 서열번호 22, 23, 24, 69, 70, 및 71의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
n) 각각 서열번호 22, 25, 26, 55, 72, 및 71의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
o) 각각 서열번호 8, 9, 10, 45, 73, 및 74의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
p) 각각 서열번호 27, 28, 29, 45, 75, 및 76의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
q) 각각 서열번호 8, 9, 10, 77, 78, 및 79의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열; 또는
r) 각각 서열번호 30, 31, 32, 80, 81, 및 82의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3 서열
을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
한 양상에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 상기 열거된 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3 조합을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 상기 열거된 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 조합을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 실시형태에서, 이들 예시의 면역글로불린들 사이에 스위칭된 CDR 영역(즉, 예를 들면, 이들로부터 유도된 마우스 항체 또는 사람화된 항체 중 하나의 1개 또는 2개의 CDR을, 이들로부터 유도된 다른 마우스 항체 또는 사람화된 항체 유래의 유사한 CDR로 스위칭함)들을 갖는 키메라 항체는 유용한 항체를 수득할 수 있다.
소정 실시형태에서, 사람화된 항-IL-23p19 항체는 항체 단편이다. 각종 항체 단편이 상기에 일반적으로 논의되었고, 항체 단편의 생산을 위해 개발되어온 기술이 존재한다. 단편들은 온전한 항체의 단백질분해적 소화를 통해 유도될 수 있다(예를 들면, Morimoto et al., 1992, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117; 및 Brennan et al., 1985, Science 229:81을 참조한다). 대안으로, 단편들은, 재조합체 숙주 세포에서 직접적으로 생산될 수 있다. 예를 들면, Fab'-SH 단편들은, 이. 콜라이(E. coli)로부터 직접적으로 회수될 수 있고, 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 단편들을 형성할 수 있다(예를 들면, Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167을 참조한다). 다른 접근법에 의해, F(ab')2 단편들은, 재조합체 숙주 세포 배양물로부터 직접적으로 단리될 수 있다. 항체 단편의 생산을 위한 다른 기술들은 당해 분야 숙련가에게 명백할 것이다. 따라서, 한 양상에서, 본 발명은, 본원에 기술되어 있는 CDR들, 특히, 본원에 기술되어 있는 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3의 조합들 중 하나를 포함하는 항체 단편들을 제공한다. 추가의 양상에서, 본 발명은, 본원에 기술되어 있는 가변 영역, 예를 들면, 본원에 기술되어 있는 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 조합들 중 하나를 포함하는 항체 단편을 제공한다.
소정 실시형태는, 서열번호 174 또는 180 중 어느 하나의 경쇄 서열을 서열번호 176 또는 178의 중쇄 서열과 조합하여 포함하는, 사람화된 항-IL-23p19 항체의 F(ab')2 단편을 포함한다. 이러한 실시형태는, 이러한 F(ab')2를 포함하는 온전한 항체를 포함할 수 있다.
몇몇의 실시형태에서, 항체 또는 항체 단편은, 이펙터 기능을 매개하는 불변 영역을 포함한다. 불변 영역은, IL-23 발현 표적 세포에 대항하여 항체-의존적 세포의 세포독성(ADCC), 항체-의존적 세포의 식세포 작용(ADCP) 및/또는 보체-의존적 세포독성(CDC) 반응을 제공할 수 있다. 이펙터 도메인(들)은, 예를 들면, Ig 분자의 Fc 영역일 수 있다.
항체의 이펙터 도메인은 임의의 적합한 척추동물 종 및 이소타입 유래일 수 있다. 상이한 동물 종 유래의 이소타입은, 이펙터 기능을 매개하는 능력이 상이하다. 예를 들면, CDC 및 ADCC/ADCP를 매개하는 사람 면역글로불린의 능력은, 일반적으로, 각각 IgM
Figure pct00027
IgG1
Figure pct00028
IgG3 > IgG2 > IgG4 및 IgG1
Figure pct00029
IgG3 > IgG2/IgM/IgG4의 순서이다. 뮤린 면역글로불린은, 일반적으로, 각각 뮤린 IgM
Figure pct00030
IgG3 >> IgG2b >> IgG1 및 IgG2b > IgG2a > IgG1 >> IgG3의 순서로, CDC 및 ADCC/ADCP를 매개한다. 다른 예에서, 뮤린 IgG2a는 ADCC를 매개하지만, 뮤린 IgG2a 및 IgM 둘 다는 CDC를 매개한다.
항체 변형
사람화된 항-IL-23p19 항체 및 제제는, 사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 변형을 포함할 수 있다. 예를 들면, 암을 치료하는데 있어서 항체의 유효성을 향상시키기 위해서, 항체를 이펙터 기능과 관련하여 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 변형의 하나는 Fc 영역으로의 시스테인 잔기(들)의 도입이고, 이에 의해 이 영역에서의 쇄간 디설파이드 결합 형성이 가능해진다. 이로써 형성된 동종이량체 항체는, 내재화 능력을 향상시키고/향상시키거나, 보체-매개된 세포 사멸 및/또는 항체-의존적 세포의 세포독성(ADCC)을 증가시켰을 수 있다. 예를 들면, 문헌[Caron et al., 1992, J. Exp Med. 176:1191-1195; 및 Shopes, 1992, J. Immunol. 148:2918-2922]을 참조한다. 항-종양 활성이 향상된 동종이량체 항체는, 또한, 문헌[Wolff et al., 1993, Cancer Research 53: 2560-2565]에 기술되어 있는 바와 같은 이종이기능성 가교-링커를 이용하여 제조할 수 있다. 대안으로, 항체는, 항체의 보체 용해 및 ADCC 능력을 향상시키는 이원 Fc 영역을 함유하도록 조작될 수 있다. 문헌[Stevenson et al., 1989, Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230]을 참조한다.
ADCC를 지지하는 능력이 향상된 항체는, 이들의 Fc 영역의 글리코실화 패턴을 변형시킴으로써 생성되었다. 이는, CH2 도메인 내의 아스파라긴 잔기에서의 항체 글리코실화가, ADCC의 전제 조건인 IgG와 Fcγ 수용체 사이의 상호작용에 관여하므로, 가능하다. 숙주 세포주는, 변경된 글리코실화, 예를 들면, 증가된 양분성(bisecting) N-아세틸글루코사민 또는 감소된 퓨코스를 갖는 항체를 발현하도록 조작되었다. 퓨코스 감소는, 양분성 N-아세틸글루코사민의 존재를 증가시키는 것보다 더 큰 향샹을 ADCC 활성에 제공한다. 또한, 저 퓨코스 항체에 의한 ADCC의 향상은 FcγRIIIa V/F 다형성과는 관계가 없다.
항체의 Fc 영역의 아미노산 서열을 변형시키는 것은, ADCC를 향상시키기 위한 글리코실화 조작에 대한 대안이다. Fcγ 수용체에 대한 사람 IgG1 상의 결합 부위는 광범위 돌연변이 분석에 의해 측정되었다. 이는, FcγRIIIa에 대한 결합 친화도를 증가시키고 시험관내 ADCC를 향상시키는 Fc 돌연변이를 갖는 사람화된 IgG1 항체를 생성시킨다. 추가로, Fc 변이체는 결합 특성의 다양한 순열(permutation), 예를 들면, 다른 FcγR 수용체에 대해서는 비하전되거나 감소된 결합을 갖는 특정 FcγR 수용체에 대해 향상된 결합을 갖는 Fc 변이체를 얻었다.
다른 양상은, 세포독성제, 예를 들면, 화학 치료요법제, 독소(예를 들면, 세균, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소, 또는 이들의 단편), 또는 방사성 동위원소(즉, 방사 접합체)에 접합된 사람화된 항체 또는 이의 단편을 포함하는 면역접합체를 포함한다.
이러한 면역 접합체의 생성에 유용한 화학 치료요법제는 상기에 기술되어 있다. 유용한 면역 접합체를 형성하는데 사용될 수 있는 효소적으로 활성인 독소 및 이의 단편으로는 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 쇄(슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 유래), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 유동 나무(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 미국 자리공(Phytolaca americana) 단백질(PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 여주(Momordica charantia) 저해제, 큐르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(Sapaonaria officinalis) 저해제, 게롤닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 및 트리코테센 등이 포함된다. 각종 방사성 핵종(radionuclide)이, 방사 접합된 사람화된 항-IL-23p19 항체의 생산에 이용가능하다. 예로는 212Bi, 131I, 131In, 90Y, 및 186Re이 포함된다.
사람화된 항-IL-23p19 항체와 세포독성제 또는 화학 치료요법제의 접합체는, 이기능성 단백질 커플링제, 예를 들면, N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티올) 프로피오네이트(SPDP), 이미노티올란(IT), 이미도에스테르의 이기능성 유도체(예를 들면, 디메틸 아디피미데이트 HCL), 활성 에스테르(예를 들면, 디석신이미딜 수베레이트), 알데하이드(예를 들면, 글루타르알데하이드), 비스-아지도 화합물(예를 들면, 비스 (p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체(예를 들면, 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트(예를 들면, 톨루엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 플루오린 화합물(예를 들면, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 이용하여 공지의 방법에 의해 제조할 수 있다. 예를 들면, 리신 면역 독소는, 문헌[Vitetta et al., 1987, Science 238:1098]에 기술되어 있는 바와 같이 제조할 수 있다. 탄소-14-표지화된 1-이소티오시아나토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산(MX-DTPA)은, 항체에 대한 방사성 핵종의 접합을 위한 예시 킬레이팅제이다. 접합체는, 또한, 개열가능한 링커를 이용하여 형성될 수 있다.
본원에 개시되어 있는 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 또한, 면역 리포솜으로서 제형화될 수 있다. 항체를 함유하는 리포솜은, 당해 분야에 공지되어 있는, 예를 들면, 문헌[Epstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688; Hwang et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030; 및 미국 특허 제4,485,045호 및 제4,544,545호]에 기술되어 있는 방법에 의해 제조된다. 순환 시간이 향상된 리포솜은, 예를 들면, 미국 특허 제5,013,556호에 개시되어 있다.
특히 유용한 리포솜은, 포스파티딜콜린, 콜레스테롤, 및 PEG-유도체화된 포스파티딜에탄올아민(PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물을 이용한 역상 증발법(reverse phase evaporation method)에 의해 생성시킬 수 있다. 리포솜은, 리포솜을 수득하기 위한 규정된 세공 크기의 필터를 통해 바람직한 직경으로 압출한다. 본원에 개시되어 있는 항체의 Fab' 단편은, 디설파이드 상호교환 반응을 통해 문헌[Martin et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:286-288]에 기술되어 있는 바와 같은 리포솜에 접합될 수 있다. 화학 치료요법제(예를 들면, 독소루비신)는 리포솜 내에 임의로 함유된다. 예를 들면, 문헌[Gabizon et al., 1989, J. National Cancer Inst. 81(19):1484]을 참조한다.
본원에 기술 및 개시되어 있는 항체는, 또한, 프로드럭(예를 들면, 펩티딜 화학 치료요법제)을 활성 항암 약물로 전환시키는 프로드럭-활성화 효소에 항체를 접합시킴으로써, ADEPT(항체-지정된 효소 프로드럭 치료요법) 절차에 사용될 수 있다. 예를 들면, 문헌[WO 81/01145, WO 88/07378, 및 미국 특허 제4,975,278호]을 참조한다. ADEPT에 유용한 면역 접합체의 효소 구성 성분은, 보다 활성인 세포독성 형태로 전환시키도록 하는 방식으로 프로드럭에 작용할 수 있는 효소이다. ADEPT에서 유용한 특정 효소로는, 포스페이트-함유 프로드럭을 유리(free) 약물로 전환시키기 위한 알칼리성 포스파타제; 설페이트-함유 프로드럭을 유리 약물로 전환시키기 위한 아릴설파타제; 비독성 5-플루오로사이토신을 항암 약물, 5-플루오로우라실로 전환시키기 위한 사이토신 데아미나제; 펩타이드-함유 프로드럭을 유리 약물로 전환시키기 위한 프로테아제, 예를 들면, 세라티아 프로테아제, 써모라이신, 서브틸리신, 카르복시펩티다제, 및 카텝신(예를 들면, 카텝신 B 및 L); D-아미노산 치환체를 함유하는 프로드럭을 전환시키기 위한 D-알라닐카르복시펩티다제; 글리코실화된 프로드럭을 유리 약물로 전환시키기 위한 탄수화물-개열 효소, 예를 들면, β-갈락토시다제 및 뉴라미니다제; β-락탐으로 유도체화된 약물을 유리 약물로 전환시키기 위한 β-락타마제; 및 페녹시아세틸 또는 페닐아세틸 그룹을 갖는 아민 질소에서 유도체화된 약물을 각각 유리 약물로 전환시키기 위한 페니실린 아미다제, 예를 들면, 페니실린 V 아미다제 또는 페니실린 G 아미다제가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 대안으로, 효소 활성을 갖는 항체("항체효소(abzyme)")는, 프로드럭을 유리 활성 약물로 전환시키는데 사용될 수 있다(예를 들면, 문헌[Massey, 1987, Nature 328: 457-458]을 참조한다). 항체-항체효소 접합체는, 종양 세포 집단에의 항체효소의 전달을 위한 공지의 방법에 의해, 예를 들면, 상기 논의된 사람화된 항-IL-23p19 항체/이종이기능성 가교연결 시약에 효소를 공유결합적으로 결합시킴으로써 제조할 수 있다. 대안으로, 상기 기술되어 있는 바와 같은 효소의 적어도 기능적 활성 부분에 연결된 본원에 개시되어 있는 항체의 적어도 항원 결합 영역을 포함하는 융합 단백질은, 재조합 DNA 기술을 이용하여 작제할 수 있다(예를 들면, 문헌[Neuberger et al., 1984, Nature 312:604-608]을 참조한다).
소정 실시형태에서, 예를 들면, 조직 침투를 증가시키기 위해서, 온전한 항체보다는 사람화된 항-IL-23p19 항체 단편을 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 혈청 반감기를 증가시키기 위해서, 항체 단편을 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 이는, 예를 들면, 항체 단편에의 재생 수용체 결합 에피토프의 포함에 의해 달성될 수 있다. 한 방법에서, 항체 단편의 적절한 영역은 변경(예를 들면, 돌연변이)될 수 있거나, 에피토프는, 예를 들면, DNA 또는 펩타이드 합성에 의해 말단에서 또는 중간에서 항체 단편에 융합되는, 펩타이드 태그에 포함될 수 있다. 예를 들면, WO 96/32478을 참조한다.
다른 실시형태에서, 사람화된 항-IL-23p19 항체의 공유결합적 변형도 또한 포함된다. 공유결합적 변형으로는 시스테이닐 잔기, 히스티딜 잔기, 라이시닐 및 아미노-말단 잔기, 아르기닐 잔기, 티로실 잔기, 카르복실 측쇄 그룹(아스파틸 또는 글루타밀), 글루타미닐 및 아스파라기닐 잔기, 또는 세릴, 또는 트레오닐 잔기의 변형이 포함된다. 공유결합적 변형의 다른 유형은, 항체의 화학적 또는 효소적 커플링 글리코사이드에 관여한다. 이러한 변형은, 적용가능한 경우, 항체의 화학적 합성에 의해, 또는 효소적 또는 화학적 개열에 의해 이루어질 수 있다. 항체의 공유결합적 변형의 다른 유형은, 항체의 표적 아미노산 잔기를, 선택된 측쇄 또는 아미노- 또는 카복시-말단 잔기와 반응시킬 수 있는 유기 유도체화 제제와 반응시킴으로써 분자에 도입될 수 있다.
항체 상에 존재하는 임의의 탄수화물 모이어티의 제거는 화학적으로 또는 효소적으로 달성될 수 있다. 화학적 탈글리코실화는 문헌[Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys. 259:52 및 Edge et al., 1981, Anal. Biochem., 118:131]에 기술되어 있다. 항체 상의 탄수화물 모이어티의 효소적 개열은, 문헌[Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol 138:350]에 기술되어 있는 바와 같은 각종 엔도- 및 엑소-글리코시다제의 사용에 의해 달성될 수 있다.
유용한 공유결합적 변형의 다른 유형은, 각종 비단백질성 중합체들 중 하나, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알킬렌에 항체를 문헌[미국 특허 제4,640,835호, 미국 특허 제4,496,689호, 미국 특허 제4,301,144호, 미국 특허 제4,670,417호, 미국 특허 제4,791,192호, 및 미국 특허 제4,179,337호 중 하나 이상]에 제시되는 방식으로 연결시키는 것을 포함한다.
사람화 및 아미노산 서열 변이체
항-IL-23p19 항체의 아미노산 서열 변이체는, 항-IL-23p19 항체 DNADP 적절한 뉴클레오타이드 변화를 도입함으로써, 또는 펩타이드 합성에 의해 제조될 수 있다. 이러한 변이체는, 예를 들면, 본원의 실시예의 항-IL-23p19 항체의 아미노산 서열 내의 잔기로부터의 결실 및/또는 이들 잔기로의 삽입 및/또는 이들 잔기의 치환을 포함한다. 결실, 삽입, 및 치환의 임의의 조합은, 최종 작제물에 이르도록 이루어지고, 단, 최종 작제물은 바람직한 특성을 지닌다. 아미노산 변화는, 또한, 예를 들면, 글리코실화 부위의 번호 또는 위치를 변화시켜, 사람화된 또는 변이체 항-IL-23p19 항체의 번역-후 프로세스를 변경할 수도 있다.
돌연변이 유발을 위해 바람직한 위치인 항-IL-23p19 항체의 소정 잔기 또는 영역의 동정에 유용한 방법은, Cunningham 및 Wells에 의해 기술되어 있는 바와 같이(Science, 244:1081-1085 (1989)) "알라닌 스캐닝 돌연변이 유발"이라고 칭한다. 여기서, 잔기 또는 표적 잔기들의 그룹은, 동정되고(예를 들면, 하전된 잔기, 예를 들면, arg, asp, his, lys, 및 glu), 천연 또는 음으로 하전된 아미노산(전형적으로 알라닌)에 의해 대체되어 아미노산과 IL-23p19 항원의 상호작용에 영향을 미친다. 이어서, 치환에 대한 기능적 감도(functional sensitivity)를 보여주는 이들 아미노산 위치는, 치환의 부위에 또는 치환의 부위에 대해 추가의 또는 다른 변이체를 도입함으로써 개선된다. 따라서, 아미노산 서열 변이를 도입하기 위한 부위는 사전에 결정되지만, 돌연변이 자체의 성질은 사전에 결정될 필요는 없다. 예를 들면, 주어진 부위에서의 돌연변이의 성능을 분석하기 위해서, 알라닌 스캐닝 또는 랜덤 돌연변이 유발은 표적 코돈 또는 영역에서 수행하고, 발현된 항-IL-23p19 항체 변이체를 바람직한 활성에 대해 스크리닝한다.
아미노산 서열 삽입은, 1개의 잔기 내지 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩타이드의 길이 범위의 아미노- 및/또는 카복실-말단 융합, 및 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예로는, 에피토프 태그에 융합된 항-IL-23p19 항체가 포함된다. 항-IL-23p19 항체 분자의 다른 삽입성 변이체는, 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 효소 또는 폴리펩타이드의 항-IL-23p19 항체의 N- 또는 C-말단에의 융합을 포함한다.
변이체의 다른 유형은 아미노산 치환 변이체이다. 이들 변이체는, 제거된 항-IL-23p19 항체 내에 1개 이상의 아미노산 잔기 및 이의 공간 내에 삽입된 상이한 잔기를 갖는다. 치환적 돌연변이 유발을 위해 가장 흥미로운 부위로는 초가변성 영역이 포함되지만, FR 변경도 또한 고려된다. 보존적 치환은, "바람직한 치환"의 표제 하에 표 5에 나타낸다. 이러한 치환이 생물학적 활성에서 변화를 초래하는 경우, "예시적 치환"이라고 명명하거나, 아미노산 클래스를 참조하여 하기 추가로 기술되는 바와 같은 보다 실질적인 변화가 도입될 수 있고, 생성물을 스크리닝하였다.
Figure pct00031
단백질 화학에서, 항체의 생물학적 특성은, (a) 치환의 구역(area)에서 예를 들면, 시트 또는 나선형 입체배좌로서의 폴리펩타이드 주쇄(backbone)의 구조, (b) 표적 부위에서의 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 벌크(bulk)를 유지하는 것에 대한 항체의 효과가 유의하게 상이한 치환을 선택함으로써 달성될 수 있음이 일반적으로 받아들여지고 있다. 천연 발생 잔기들은, 일반적인 측쇄 특성들을 기반으로 하여 하기 그룹들로 나누어진다:
(1) 소수성: 노르류신, met, ala, val, leu, ile;
(2) 중성 친수성: cys, ser, thr;
(3) 산성: asp, glu;
(4) 염기성: asn, gln, his, lys, arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: gly, pro; 및
(6) 방향족: trp, tyr, phe.
비-보존적 치환은, 이들 클래스들 중 하나의 구성원을 다른 클래스로 교환함을 수반할 것이다.
사람화된 또는 변이체 항-IL-23p19 항체의 적절한 입체배좌를 유지하는데 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기는, 또한, 일반적으로 세린으로 치환되어, 분자의 산화 안정성을 향상시키거나, 이상(aberrant) 가교연결을 방지하거나, 세포독성 또는 세포정지(cytostatic) 화합물에의 접합의 확립된 포인트를 제공할 수 있다. 역으로, 시스테인 결합(들)은 항체에 부가되어 항체의 안정성을 향상시킬 수 있다(특히, 여기서, 상기 항체는 Fv 단편과 같은 항체 단편이다).
치환 변이체의 유형은, 모 항체(예를 들면, 사람화된 또는 사람 항체)의 1개 이상의 초가변성 영역 잔기를 치환시킴을 포함한다. 일반적으로, 추가의 개발을 위해 선택된 얻어진 변이체(들)는, 모 항체로부터 이들이 생성되는 모 항체에 비해 향상된 생물학적 특성을 가질 것이다. 이러한 치환 변이체를 생성하기 위한 편리한 방법은, 파지 디스플레이를 이용한 친화도 성숙이다. 간략하게, 몇몇의 초가변성 부위(예를 들면, 6 내지 7 부위)를 돌연변이시켜 각각의 부위에서 모든 가능한 아미노산 치환을 생성시킨다. 이로써 생성된 항체 변이체는, 각각의 입자 내의 패키징된 M13의 유전자 III 생성물에의 융합으로서의 사상 파지 입자로부터 1가의 방식으로 디스플레이된다. 이어서, 파지-디스플레이된 변이체는 이들의 생물학적 활성(예를 들면, 결합 친화도)에 대해 스크리닝된다. 변형을 위한 후보자 초가변성 영역 부위를 동정하기 위해서, 알라닌 스캐닝 돌연변이 유발을 수행하여, 항원 결합에 유의하게 기여하는 초가변성 영역 잔기를 동정할 수 있다. 대안으로, 또는 추가로, 항원-항체 복합체의 결정 구조를 분석하여 항체와 사람 IL-23p19 사이의 접촉점을 동정하는 것이 이로울 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 근처의 잔기는, 본원에서 상술하는 기술에 따른 치환을 위한 후보자들이다. 이러한 변이는 일단 생성되면, 변이체의 패널을 본원에 기술되어 있는 바와 같이 스크리닝하고, 1개 이상의 관련 검정에서 우수한 특성을 갖는 항체를 추가의 개발을 위해 선택할 수 있다.
항체의 아미노산 변이체의 다른 유형은, 항체의 본래 글리코실화 패턴을 변경한다. "변경"은, 항체에서 발견되는 1개 이상의 탄수화물 모이어티를 결실시키고/결실시키거나, 항체 내에 존재하지 않는 1개 이상의 글리코실화 부위를 부가함을 의미한다.
몇몇의 실시형태에서, 본 발명의 항체를 변형시켜 글리코실화 부위를 부가하는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 글리코실화는 전형적으로 N-연결되거나 O-연결된다. N-연결은, 아스파라긴 잔기의 측쇄에의 탄수화물 모이어티의 부착을 말한다. 트리펩타이드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌[여기서, X는, 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이다]은, 아스파라긴 측쇄에의 탄수화물 모이어티의 효소적 부착을 위한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩타이드에서 이들 트리펩타이드 서열들 중 어느 하나의 존재는, 강력한 글리코실화 부위를 생성시킨다. O-연결된 글리코실화는, 하이드록시아미노산, 가장 일반적으로는 세린 또는 트레오닌에 대한 당들, N-아세일갈라토사민, 갈락토스, 또는 크실로스 중 하나의 부착을 말하지만, 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시라이신도 또한 사용할 수 있다. 따라서, 주어진 단백질, 예를 들면, 항체를 글리코실화하기 위해서, 상기-기술된 트리펩타이드 서열들 중 1개 이상을 함유하도록 단백질의 아미노산 서열을 조작한다(N-연결된 글리코실화 부위의 경우). 변경은, 또한, 본래 항체의 서열에의 1개 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 부가 또는 치환에 의해 이루어질 수 있다(O-연결된 글리코실화 부위의 경우).
항-IL-23p19 항체의 아미노산 서열 변이체를 암호화하는 핵산 분자는, 당해 분야에 공지되어 있는 각종 방법에 의해 제조된다. 이들 방법으로는, 천연 공급원으로부터의 단리(천연 발생 아미노산 서열 변이체의 경우), 또는 항-IL-23p19 항체의 이전에 제조된 변이체 또는 비-변이체 버젼의 올리고뉴클레오타이드-매개된(또는 부위-지시된) 돌연변이 유발, PCR 돌연변이 유발, 및 카세트(cassette) 돌연변이 유발에 의한 제조가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
폴리뉴클레오타이드 , 벡터, 숙주 세포, 및 재조합 방법
다른 실시형태는, 사람화된 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 및 상기 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 숙주 세포, 및 사람화된 항체의 생산을 위한 재조합 기술을 포함한다. 단리된 폴리뉴클레오타이드는, 예를 들면, 전장 모노클로날 항체, Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편, 디아바디, 직쇄상 항체, 단일쇄 항체 분자, 및 항체 단편들로 이루어진 다특이적 항체를 포함하는 항-IL-23p19 항체의 바람직한 형태를 암호화할 수 있다.
몇몇의 실시형태는, 서열번호 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 또는 119 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편의 경쇄 가변 영역을 암호화하는 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 이러한 아미노산 서열을 암호화하는 예시 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열번호 83, 85, 87, 89, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 및 118이다. 몇몇의 실시형태는, 서열번호 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 또는 156의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편의 중쇄 가변 영역을 암호화하는 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 이러한 아미노산 서열을 암호화하는 예시 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열번호 120, 122, 124, 126, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 또는 155이다.
몇몇 실시형태는, 서열번호 158, 160, 162, 또는 164 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편의 경쇄 가변 영역을 암호화하는 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 이러한 아미노산 서열을 암호화하는 예시 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열번호 157, 159, 161, 또는 163이다. 몇몇의 실시형태는, 서열번호 166, 168, 170, 또는 172의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편의 중쇄 가변 영역을 암호화하는 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 이러한 아미노산 서열을 암호화하는 예시 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열번호 165, 167, 169, 또는 171이다.
몇몇의 실시형태는, 서열번호 174 또는 180 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 항체의 경쇄를 암호화하는 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 이러한 아미노산 서열을 암호화하는 예시 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열번호 173 또는 179이다. 몇몇의 실시형태는, 서열번호 176 또는 178의 아미노산 서열을 갖는 항체의 중쇄를 암호화하는 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 이러한 아미노산 서열을 암호화하는 예시 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열번호 175 또는 177이다.
한 양상에서, 단리된 폴리뉴클레오타이드 서열(들)은, 각각 서열번호 174 및 서열번호 176; 각각 서열번호 174 및 서열번호 178; 각각 서열번호 180 및 서열번호 176; 각각 서열번호 180 및 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화한다. 이러한 아미노산 서열을 암호화하는 예시 폴리뉴클레오타이드 서열은 각각 서열번호 173 및 175, 각각 서열번호 173 및 177, 각각 서열번호 179 및 175, 각각 서열번호 179 및 177이다.
사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 이의 단편 또는 쇄를 암호화하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드(들)는, 당해 분야에 공지되어 있는 바와 같은 1개 이상의 조절 또는 제어 서열에 융합될 수 있고, 당해 분야에 공지되어 있는 바와 같은 적합한 발현 벡터 또는 숙주 세포 내에 함유될 수 있다. 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 암호화하는 각각의 폴리뉴클레오타이드 분자는, 불변 도메인, 예를 들면, 사람 불변 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 독립적으로 융합하여, 온전한 항체의 생산을 가능하게 할 수 있다. 대안으로, 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 일부는 함께 융합되어, 단일쇄 항체의 생산을 위한 주형(template)을 제공할 수 있다.
재조합체 생산을 위해, 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를, 클로닝(DNA의 증폭)을 위해 또는 발현을 위해 복제가능한 벡터에 삽입한다. 재조합 항체를 발현시키기 위한 다수의 적합한 벡터들이 이용가능하다. 벡터 구성 성분은 일반적으로 하기 중 하나 이상을 포함하지만, 이들에 한정되는 것은 아니다: 신호 서열, 복제의 기원(origin), 1개 이상의 마커 유전자, 인핸서 요소, 프로모터, 및 전사 종결 서열.
사람화된 항-IL-23p19 항체는, 또한, 융합 폴리펩타이드로서 생산될 수 있고, 여기서, 상기 항체는, 이종 폴리펩타이드, 예를 들면, 신호 서열 또는 성숙 단백질 또는 폴리펩타이드의 아미노 말단에서 특정 개열 부위를 갖는 다른 폴리펩타이드와 융합된다. 선택된 이종 신호 서열은, 전형적으로, 숙주 세포에 의해 인식되고 프로세싱되는(즉, 신호 펩티다제에 의해 개열되는) 것이다. 사람화된 항-IL-23p19 항체 신호 서열을 인식하고 프로세싱하지 않는 원핵생물 숙주 세포의 경우, 신호 서열은 원핵생물 신호 서열로 치환될 수 있다. 신호 서열은, 예를 들면, 알칼리성 포스파타제, 페니실리나제, 지단백질, 및 가열-안정성 장독소 II 리더 등일 수 있다. 효모 분비를 위해, 본래 신호 서열은, 예를 들면, 효모 인버타제(invertase) 알파-인자(사카로마이세스(Saccharomyces) 및 클루이베로마이세스(Kluyveromyces) α-인자 리더 포함), 산 포스파타제, 씨. 알비칸스(C. albicans) 글루코아밀라제, 또는 WO90/13646에 기술되어 있는 신호로부터 얻어지는 리더 서열로 치환될 수 있다. 포유동물 세포에서, 포유동물 신호 서열 및 바이러스성 분비 리더, 예를 들면, 헤르페스 심플렉스 gD 신호를 사용할 수 있다. 이러한 전구체 영역에 대한 DNA는, 판독 프레임 내에서, 사람화된 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 DNA에 라이게이션된다.
발현 및 클로닝 벡터는, 하나 이상의 선택된 숙주 세포에서 벡터가 복제하는 것을 가능하게 하는 핵산 서열을 함유한다. 일반적으로, 클로닝 벡터에서, 이러한 서열은, 벡터가 숙주 염색체 DNA를 독립적으로 복제하는 것을 가능하게 하고, 복제의 기원 또는 자가 복제 서열을 포함하는 것이다. 이러한 서열은 각종 세균, 효모, 및 바이러스에 대해 익히 공지되어 있다. 플라스미드 pBR322로부터의 복제 기원은, 가장 그람-음성인 세균, 2-υ에 적합하다. 플라스미드 기원은 효모에 적합하고, 각종 바이러스 기원(SV40, 폴리오마, 아데노바이러스, VSV, 및 BPV)은 포유동물 세포에서의 클로닝 벡터에 유용하다. 일반적으로, 복제 구성 성분의 기원은, 포유동물 발현 벡터에 필요하지 않다(SV40 기원은, 조기 프로모터를 함유하기 때문에 이것이 전형적으로 사용될 수 있다).
발현 및 클로닝 벡터는, 발현의 확인을 가능하게 하는 선별가능한 마커를 암호화하는 유전자를 함유할 수 있다. 대표적인 선별가능한 마커 유전자는, 항생제 또는 다른 독소, 예를 들면, 암피실린, 네오마이신, 메토트렉세이트, 또는 테트라사이클린에 대한 내성을 부여하는 단백질을 암호화하거나, 대안으로, 보체 영양요구 결핍성이거나, 또는 다른 대안으로 복합 배지에 존재하지 않은 특정 영양분, 예를 들면, 바실러스를 위한 D-알라닌 라세마제를 암호화하는 유전자를 공급한다.
선택 스킴의 한 예는 숙주 세포의 성장을 정지시키기 위한 약물을 이용한다. 이종 유전자로 성공적으로 형질전환된 이들 세포는, 약물 내성을 부여하는 단백질을 생산하고, 따라서, 선택 용법을 견뎌낸다. 이러한 우세한 선택의 예는 약물 네오마이신, 마이코페놀산, 및 하이그로마이신을 사용한다. 포유동물 세포에 대한 통상의 선택가능한 마커는, 사람화된 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 핵산을 사용하는데 적격인 세포의 동정을 가능하게 하는 것들, 예를 들면, DHFR(디하이드로폴레이트 리덕타제), 티미딘 키나제, 메탈로티오네인-I 및 -II(예를 들면, 영장류 메탈로티오네인 유전자), 아데노신 데아미나제, 및 오르니틴 데카르복실라제 등이다. DHFR 선택 유전자로 형질전환된 세포는, 우선, DHFR의 경쟁적 길항제인 메토트렉세이트(Mtx)를 함유하는 배양 배지에서 형질전환체의 전부를 배양함으로써 동정된다. 야생형 DHFR이 사용되는 경우의 적절한 숙주 세포는, DHFR 활성이 결핍된 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포주(예를 들면, DG44)이다.
대안으로, 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 DNA 서열로 형질전환되거나 동시-형질전환된 숙주 세포(특히, 내인성 DHFR을 함유하는 야생형 숙주), 야생형 DHFR 단백질, 및 다른 선택가능한 마커, 예를 들면, 아미노글리코시드 3'-포스포트랜스퍼라제(APH)는, 선택가능한 마커에 대한 선택 제제, 예를 들면, 아미노글리코시드성 항생제, 예를 들면, 카나마이신, 네오마이신, 또는 G418을 함유하는 배지에서의 세포 성장에 의해 선택될 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 제4,965,199호를 참조한다.
재조합체 생산이 숙주 세포로서의 효모 세포에서 수행되는 경우, 효모 플라스미드 YRp7에 존재하는 TRP1 유전자(Stinchcomb et al., 1979, Nature 282: 39)를 선택가능한 마커로서 사용할 수 있다. TRP1 유전자는, 트립토판에서 성장하는 능력이 결여되어 있는 효모의 돌연변이 균주, 예를 들면, ATCC 제44076 또는 PEP4-1에 대한 선택 마커를 제공한다(Jones, 1977, Genetics 85:12). 이어서, 효모 숙주 세포 게놈 내의 trp1 병소의 존재는, 트립토판의 부재시 성장에 의해 형질전환을 검출하기 위한 효과적인 환경을 제공한다. 유사하게, Leu2p-결핍 효모 균주, 예를 들면, ATCC 20,622 및 38,626에는, LEU2 유전자를 지닌 공지의 플라스미드가 보충된다.
또한, 1.6㎛ 환형 플라스미드 pKD1로부터 유도된 벡터는, 클루이베로마이세스 효모의 형질전환을 위해 사용될 수 있다. 대안으로, 재조합 소 카이모신의 대규모 생산을 위한 발현 시스템은 케이. 락티스(K. lactis)에 대해 보고되었다[Van den Berg, 1990, Bio/Technology 8:135]. 클루이베로마이세스의 산업적 균주에 의한 성숙한 재조합체 사람 혈청 알부민의 분비를 위한 안정한 다중-카피 발현 벡터도, 또한, 개시되어 있다[Fleer et al., 1991, Bio/Technology 9:968-975].
발현 및 클로닝 벡터는, 일반적으로, 숙주 유기체에 의해 인식되어, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 폴리펩타이드 쇄를 암호화하는 핵산 분자에 작동적으로 연결되는 프로모터를 함유한다. 원핵생물 숙주와 사용하기에 적합한 프로모터로는 phoA 프로모터, β-락타마제 및 락토스 프로모터 시스템, 알칼리성 포스파타제, 트립토판(trp) 프로모터 시스템, 및 하이브리드 프로모터, 예를 들면, tac 프로모터가 포함된다. 다른 공지의 세균성 프로모터도 또한 적합하다. 세균 시스템에 사용하기 위한 프로모터는, 또한, 사람화된 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 DNA에 작동적으로 연결된 샤인-달가르노(S.D.: Shine-Dalgarno) 서열을 함유할 것이다.
다수의 진핵생물 프로모터 서열이 공지되어 있다. 사실상 모든 진핵생물 유전자는, 전사가 개시되는 부위로부터 대략 25 내지 30개 염기 상류에 위치되는 AT-풍부 영역을 갖는다. 다수의 유전자의 전사의 시작으로부터 70 내지 80 염기 상류에서 발견되는 다른 서열은 CNCAAT 영역이고, 여기서, N은 임의의 뉴클레오타이드일 수 있다. 대부분의 진핵생물 유전자의 3' 말단은, 암호화 서열의 3' 말단에 폴리 A 테일(tail)의 부가를 위한 신호일 수 있는 AATAA 서열이다. 이들 서열의 전부는 진핵생물 발현 벡터에 적합하게 삽입된다.
효모 숙주와 사용하기 위한 적합한 프로모팅 서열의 예로는, 3-포스포글리세레이트 키나제 또는 다른 당분해 효소, 예를 들면, 에놀라제, 글리세르알데하이드-3-포스페이트 데하이드로게나제, 헥소키나제, 피루베이트 데카르복실라제, 포스포프럭토키나제, 글루코스-6-포스페이트 이소머라제, 3-포스포글리세레이트 뮤타제, 피루베이트 키나제, 트리오스포스페이트 이소머라제, 포스포글루코스 이소머라제, 및 글루코키나제에 대한 프로모터가 포함된다.
유도가능한 프로모터는, 성장 조건에 의해 제어되는 전사의 추가의 이점을 갖는다. 이들로는, 알콜 데하이드로게나제 2, 이소사이토크롬 C, 산 포스파타제, 질소 대사와 관련된 유도체 효소, 메탈로티오네인, 글리세르알데하이드-30포스페이트 데하이드로게나제, 및 말토스 및 갈락토스 이용에 관여하는 효소를 위한 효모 프로모터 영역이 포함된다. 효모 발현에 사용하기에 적합한 벡터 및 프로모터는 EP 73,657에 추가로 기술되어 있다. 또한, 효모 인핸서는 효모 프로모터와 유리하게 사용된다.
포유동물 숙주 세포에서의 벡터로부터의 사람화된 항-IL-23p19 항체 전사는, 예를 들면, 바이러스, 예를 들면, 폴리오마 바이러스, 계두 바이러스, 아데노 바이러스(예를 들면, 아데노 바이러스 2), 소 유두종 바이러스, 조류 육종 바이러스, 사이토메갈로 바이러스, 레트로 바이러스, 간염-B 바이러스 및 시미안 바이러스 40(SV40)의 게놈으로부터, 이종 포유동물 프로모터로부터, 예를 들면, 액틴 프로모터 또는 면역글로불린 프로모터, 또는 가열-쇼크 프로머트로부터 얻어진 프로모터에 의해 제어되고, 단, 이러한 프로모터는 숙주 세포 시스템과 적합성(compatible)이다.
SV40 바이러스의 조기 및 후기 프로모터는, 복제의 SV40 바이러스 기원도 함유하는 SV40 제한 단편으로서 편리하게 얻어진다. 사람 사이토메갈로바이러스의 즉시 조기 프로모터는 HindIII E 제한 단편으로서 편리하게 얻어진다. 벡터로서 소 유두종 바이러스를 사용하는 포유동물 숙주에서 DNA를 발현시키기 위한 시스템은 미국 특허 제4,419,446호에 개시되어 있다. 이러한 시스템의 변형은 미국 특허 제4,601,978호에 기술되어 있다. 또한, 헤르페스 심플렉스 바이러스 유래의 티미딘 키나제 프로모터의 제어 하에 마우스 세포에서 사람 p-인터페론 cDNA의 발현을 개시하는 문헌[Reyes et al., 1982, Nature 297:598-601]을 참조한다. 대안으로, 라우스(Rous) 육종 바이러스 긴 말단 반복을 프로모터로서 사용할 수 있다.
재조합 발현 벡터에서 사용될 수 있는 다른 유용한 요소는 인핸서 서열이고, 이는, 고등 진핵생물에 의해 사람화된 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 DNA의 전사를 증가시키는데 사용된다. 포유동물 유전자 유래의 다수의 인핸서 서열이 현재 공지되어 있다(예를 들면, 글로빈, 엘라스타제, 알부민, α-태아 단백질, 및 인슐린). 그러나, 전형적으로, 진핵생물 세포 바이러스 유래의 인핸서를 사용한다. 그 예로는 복제 기원(bp 100-270)의 후기 측 상의 SV40 인핸서, 사이토메갈로 조기 프로모터 인핸서, 복제 기원의 후기 측 상의 폴리오마 인핸서, 및 아데노 바이러스 인핸서가 포함된다. 또한, 진핵생물 프로모터의 활성화를 위한 요소의 인핸싱의 설명에 관한 문헌[Yaniv, 1982, Nature 297:17-18]을 참조한다. 인핸서는, 사람화된 항-IL-23p19 항체-암호화 서열에 대해 위치 5' 또는 3'에서 벡터로 스플라이싱될 수 있지만, 바람직하게는 프로모터로부터 5' 부위에 위치한다.
진핵생물 숙주 세포(효모, 진균, 곤충, 식물, 동물, 사람, 또는 다른 다세포 유기체 유래의 유핵 세포)에서 사용되는 발현 벡터는, 또한, 전사의 종결을 위해, 그리고, mRNA를 안정화시키기 위해 필요한 서열을 함유할 수 있다. 이러한 서열은, 보통, 진핵생물 또는 바이러스 DNA 또는 cDNA의 비번역 영역 5' 및 종종 3'으로부터 입수가능하다. 이들 영역은, 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 mRNA의 비번역 부분에 폴리아데닐화된 단편으로서 전사된 뉴클레오타이드 분절을 함유한다. 하나의 유용한 전사 종결 구성 성분은 소 성장 호르몬 폴리아데닐화 영역이다. WO94/11026 및 이에 개시되어 있는 발현 벡터를 참조한다. 몇몇의 실시형태에서, 사람화된 항-IL-23p19 항체는, CHEF 시스템을 이용하여 발현될 수 있다. (예를 들면, 미국 특허 제5,888,809호를 참조하고; 이의 개시는 본원에 인용에 의해 포함된다.)
본원 벡터에서 DNA를 클로닝하거나 발현시키기 위한 적합한 숙주 세포는, 상기 기술되어 있는 원핵생물, 효모, 또는 고등 진핵생물 세포이다. 이러한 목적을 위한 적합한 원핵생물로는 진정 세균, 예를 들면, 그람-음성 또는 그람-양성 유기체, 예를 들면, 엔테로박테리아세아에, 예를 들면, 에스케리키아, 예를 들면, 이. 콜라이, 엔테로박터, 어위니아, 클렙시엘라, 프로테우스, 살모넬라, 예를 들면, 살모넬라 타이피뮤리움, 세라티아, 예를 들면, 세라티아 마르세스칸스, 및 시겔라, 및 바실러스, 예를 들면, 비. 서브틸리스 및 비. 리케니포르미스(예를 들면, 1989년 4월 12일에 공개된 DD 266,710에 개시되어 있는 비. 리케니포르미스 41 P), 슈도모나스, 예를 들면, 피. 아에루기노사, 및 스트렙토마이세스가 포함된다. 하나의 바람직한 이. 콜라이 클로닝 숙주는 이. 콜라이 294(ATCC 31,446)이지만, 다른 균주, 예를 들면, 이. 콜라이 B, 이. 콜라이 X1776(ATCC 31,537), 및 이. 콜라이 W3110(ATCC 27,325)이 적합하다. 이들 예는 제한되기 보다는 실증적인 것이다.
원핵 생물 이외에도, 진핵 생물 미생물, 예를 들면, 사상 진균 또는 효모도, 사람화된 항-IL-23p19 항체-암호화 벡터에 대한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 사카로마이세스 세레비지아에, 또는 보통의 빵 효모가 하등 진핵 생물 숙주 미생물들 중에서 가장 흔하게 사용된다. 그러나, 많은 다른 속(genera), 종(species), 및 계통(strains), 예를 들면, 스키조사카로마이세스 폼베; 클루이베로마이세스 숙주, 예를 들면, 케이. 락티스, 케이. 프라길리스(ATCC 12,424), 케이. 불가리쿠스(ATCC 16,045), 케이. 위커라미(ATCC 24,178), 케이. 왈티(ATCC 56,500), 케이. 드로소필라룸(ATCC 36,906), 케이. 써모톨레란스, 및 케이. 마르크시아누스; 야로위아(EP 402,226); 피키아 파스토르스(EP 183,070); 캔디다; 트리코더마 레에시아(EP 244,234); 뉴로스포라 크라사; 슈반니오마이세스, 예를 들면, 슈반니오마이세스 옥시덴탈리스; 및 사상 진균, 예를 들면, 뉴로스포라, 페니실리움, 톨리포클라디움, 및 아스퍼질러스 숙주, 예를 들면, 에이. 니둘란스 및 에이. 나이거가 흔히 이용될 수 있고 본원에서 유용하다.
글리코실화된 사람화된 항-IL-23p19 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 다세포 유기체로부터 유도된다. 비척추동물 세포의 예로는, 예를 들면, 다수의 배큘로바이러스 균주 및 변이체, 및 예를 들면, 스포도프테라 프루기페르다(캐터필러), 아에데스 아에깁티(모기), 아에데스 알보픽투스(모기), 드로소필라 멜라노가스터(초파리) 및 봄빅스 모리(누에)와 같은 숙주 유래의 상응하는 허용되는 곤충 숙주 세포를 포함하는, 식물 및 곤충 세포가 포함된다. 형질감염을 위한 각종 바리어스 균주, 예를 들면, 오토그라파 칼리포르니카 NPV의 L-1 변이체 및 봄빅스 모리 NPV의 Bm-5 균주가 공공으로 이용가능하고, 이러한 바이러스는, 특히, 스포도프테라 프루기페르다 세포의 형질감염을 위해 사용할 수 있다.
면, 옥수수, 감자, 대두, 페튜니아, 토마토, 및 담배의 식물 배양물도 또한 숙주로서 사용할 수 있다.
다른 양상에서, 사람화된 항-IL-23p19의 발현은 척추동물 세포에서 수행한다. 배양액(조직 배양액) 중의 척추동물 세포의 증식은 일상적인 절차가 되어 왔고, 기술들은 익히 이용가능하다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 예로는, SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 주(COS-7, ATCC CRL 1651), 사람 배아 신장 주(293 또는 현탁 배양액 중의 성장을 위해 서브클로닝된 293 세포(Graham et al., 1977, J. Gen Virol. 36: 59), 새끼 햄스터 신장 세포(BHK, ATCC CCL 10), 차이니즈 햄스터 난소 세포/-DHFR1(CHO, Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 7: 4216; 예를 들면, DG44), 마우스 세르톨리 세포(TM4, Mather, 1980, Biol. Reprod. 23:243-251), 원숭이 신장 세포(CV1 ATCC CCL 70), 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76, ATCC CRL-1587), 사람 자궁경부 암종 세포(HELA, ATCC CCL 2), 개 신장 세포(MDCK, ATCC CCL 34), 버팔로 래트 간 세포(BRL 3A, ATCC CRL 1442), 사람 폐 세포(W138, ATCC CCL 75), 사람 간 세포(Hep G2, HB 8065), 마우스 유방 종양(MMT 060562, ATCC CCL51), TR1 세포(Mather et al., 1982, Annals N.Y. Acad. Sci. 383: 44-68), MRC 5 세포, FS4 세포, 및 사람 간암 주(Hep G2)가 있다.
숙주 세포는, 사람화된 항-IL-23p19 항체 생산을 위해 상기-기술되어 있는 발현 또는 클로닝 벡터로 형질전환시키고, 프로모터를 유도하거나 형질전환체를 선택하거나 바람직한 서열을 암호화하는 유전자를 증폭시키기 위해 적절하게 변형된 종래 영양분 배지에서 배양한다.
본원에 기술되어 있는 사람화된 항-IL-23p19 항체를 생산하기 위해 사용되는 숙주 세포는 각종 배지에서 배양될 수 있다. 시판 배지, 예를 들면, Ham's F10(Sigma-Aldrich co., St. Louis, Mo.), 최소 필수 배지((MEM), (Sigma-Aldrich Co.), RPMI-1640(Sigma-Aldrich Co.), 및 둘베코 변형 이글 배지((DMEM), Sigma-Aldrich Co.)는 숙주 세포를 배양하기에 적합하다. 또한, 문헌들[Ham et al., 1979, Meth. Enz. 58: 44, Barnes et al., 1980, Anal. Biochem. 102: 255, 미국 특허 제4,767,704호, 미국 특허 제4,657,866호, 미국 특허 제4,927,762호, 미국 ㅌ특허 제4,560,655호, 미국 특허 제5,122,469호, WO 90/103430, 및 WO 87/00195] 중 하나 이상에 기술되어 있는 배지 중 어느 하나를 숙주 세포를 위한 배양 배지로서 사용할 수 있다. 이들 배지 중 어느 하나는 필요에 따라 호르몬 및/또는 다른 성장 인자(예를 들면, 인슐린, 트랜스페린, 또는 표피 성장 인자), 염(예를 들면, 나트륨 클로라이드, 칼슘, 마그네슘, 및 포스페이트), 완충액(예를 들면, HEPES), 뉴클레오타이드(예를 들면, 아데노신 및 티미딘), 항생제(예를 들면, 겐타마이신), 미량 원소(일반적으로 마이크로몰 범위의 최종 농도로 존재하는 무기 화합물로서 정의됨), 및 글루코스 또는 등가의 에너지원으로 보충될 수 있다. 다른 보충물도, 또한, 당해 분야 숙련가에게 공지되어 있는 적절한 농도로 포함될 수 있다. 배양 조건, 예를 들면, 온도, 및 pH 등은, 발현을 위해 선택된 숙주 세포와 이전에 사용된 것들이고, 당해 분야 숙련가에게 명백할 것이다.
재조합 기술을 이용하는 경우, 항체는, 세포내에서, 주변 세포질 공간에서 생산될 수 있거나, 또는 배지에 직접 분비될 수 있다. 항체가 세포내에서 생산되는 경우, 제1 단계로서 세포를 파쇄하여 단백질을 방출시킬 수 있다. 숙주 세포 또는 용해된 단편 중 어느 하나의 미립자 잔해는, 예를 들면, 원심분리 또는 한외여과에 의해 제거될 수 있다. 문헌[Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167]은, 이. 콜라이의 주변 세포질 공간으로 분비되는 항체를 단리하기 위한 절차를 기술한다. 간략하게, 세포 페이스트는 나트륨 아세테이트(pH 3.5), EDTA, 및 페닐메틸설포닐플루오라이드(PMSF)의 존재 하에 약 30분에 걸쳐 해동시킨다. 세포 잔해는 원심분리에 의해 제거할 수 있다. 항체가 배지로 분비되는 경우, 이러한 발현 시스템 유래의 상청은 우선 일반적으로 시판 단백질 농축 필터, 예를 들면, Amicon 또는 Millipore Pellicon 한외여과 유닛을 이용하여 농축시킨다. 프로테아제 저해제, 예를 들면, PMSF를 상기 단계들 중 어느 하나에 포함시켜 단백질 분해를 저해할 수 있고, 항생제를 포함시켜 우발적인 오염물의 성장을 방지할 수 있다. 각종 방법을 이용하여 숙주 세포로부터 항체를 단리시킬 수 있다.
세포로부터 제조된 항체 조성물은, 예를 들면, 하이드록시아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 및 친화성 크로마토그래피를 이용하여 정제할 수 있고, 친화성 크로마토그래피가 전형적인 정제 기술이다. 친화성 리간드로서의 단백질 A의 적합성은, 항체 내에 존재하는 임의의 면역글로불린 Fc 도메인의 종 및 이소타입에 의존한다. 단백질 A를 사용하여 사람 감마1, 감마2, 또는 감마4 중쇄(예를 들면, Lindmark et al., 1983 J. Immunol. Meth. 62:1-13을 참조한다)를 기반으로 하는 항체를 정제할 수 있다. 단백질 G는 모든 마우스 이소타입에 대해 그리고 사람 감마3에 대해 추천된다(예를 들면, Guss et al., 1986 EMBO J. 5:1567-1575를 참조한다). 친화성 리간드가 부착되는 매트릭스는 가장 흔하게 아가로스이지만, 다른 매트릭스들도 이용가능하다. 기계적으로 안정한 매트릭스들, 예를 들면, 제어된 공극 유리 또는 폴리(스티렌디비닐)벤젠은, 아가로스를 이용하여 달성될 수 있는 것보다 더 빠른 유속 및 더 짧은 프로세싱 시간을 가능하게 한다. 항체가 CH3 도메인을 포함하는 경우, Bakerbond ABXTM 수지(J. T. Baker, Phillipsburg, N.J.)는 정제에 유용하다. 단백질 정제를 위한 다른 기술, 예를 들면, 이온-교환 컬럼 상의 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 상의 크로마토그래피, 헤파린 SEPHAROSETM 상의 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교화 수지 상의 크로마토그래피(예를 들면, 폴리아스파르트산 컬럼), 크로마토포커싱, SDS-PAGE, 및 암모늄 설페이트 침전도, 또한, 회수되는 항체에 따라 이용가능하다.
임의의 예비 정제 단계(들)에 따라, 목적하는 항체 및 오염물을 포함하는 혼합물은, 용출 완충액을 이용하여 약 2.5 내지 4.5의 pH에서 낮은 pH 소수성 상호작용 크로마토그래피를 수행하고, 전형적으로 저염 농도(예를 들면, 약 0 내지 0.25M 염)에서 수행할 수 있다.
또한, 본원에 정의된 바와 같이, 낮은, 중간, 및 높은 엄격성 조건 하에 본 발명의 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오타이드 서열(들)에 의해 나타내어지는 뉴클레오타이드 서열의 전부 또는 일부(예를 들면, 가변 영역을 암호화하는 부분)로 하이브리드화하는 핵산도 포함된다. 하이브리드화 핵산의 하이브리드화 부분은 전형적으로 길이가 15개 이상(예를 들면, 20개, 25개, 30개, 또는 50개)의 뉴클레오타이드이다. 하이브리드화 핵산의 하이브리드화 부분은, 항-IL-23p19 폴리펩타이드(예를 들면, 중쇄 또는 경쇄 가변 영역), 또는 이의 보체를 암호화하는 핵산의 전부 또는 일부의 서열과 80% 이상, 예를 들면, 90% 이상, 95% 이상, 또는 98% 이상 동일하다. 본원에 기술되어 있는 유형의 하이브리드화 핵산은, 예를 들면, 클로닝 프로브, 프라이머, 예를 들면, PCR 프라이머, 또는 진단학적 프로브로서 사용할 수 있다.
몇몇의 실시형태는, 서열번호 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 또는 119 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하고, 서열번호 83, 85, 87, 89, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 또는 118의 폴리뉴클레오타이드와 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
몇몇의 실시형태는, 서열번호 158, 160, 162, 또는 164 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하고, 서열번호 157, 159, 161, 또는 163의 폴리뉴클레오타이드 서열과 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
몇몇의 실시형태는, 서열번호 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 또는 156 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하고, 서열번호 120, 122, 124, 126, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 또는 155의 폴리뉴클레오타이드 서열과 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
몇몇의 실시형태는, 서열번호 166, 168, 170, 또는 172 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하고, 서열번호 165, 167, 169, 또는 171의 폴리뉴클레오타이드 서열과 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
몇몇의 실시형태는, 서열번호 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 또는 119 중 어느 하나의 아미노산 서열과 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 몇몇의 실시형태는, 서열번호 158, 160, 162, 또는 164 중 어느 하나의 아미노산 서열과 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 몇몇의 실시형태는, 서열번호 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 또는 156 중 어느 하나의 아미노산 서열과 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 몇몇의 실시형태는, 서열번호 166, 168, 170, 또는 172 중 어느 하나의 아미노산 서열과 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 2개 이상의 핵산 또는 폴리펩타이드 서열들과 관련하여 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "동일한" 또는 "동일성 백분율"은, 최대 관련성에 대해 정렬시켜 비교하는 경우, 동일하거나, 동일한 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기의 특정 백분율을 갖는 2개 이상의 서열들 또는 서브서열(subseqeunce)들을 말한다. 백분율 동일성을 측정하기 위해, 서열을 최적 비교 목적을 위해 정렬시킨다(예를 들면, 제1 아미노산 또는 핵산 서열과의 최적의 정렬을 위해 제1 아미노산 또는 핵산 서열의 서열에 갭을 도입할 수 있다). 이어서, 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오타이드 위치에서의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드를 비교한다. 제1 서열에서의 위치에, 제2 서열에서의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드가 차지하는 경우, 그 위치에서의 분자는 동일하다. 2개의 서열 사이의 백분율 동일성은 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다(즉, % 동일성 = 동일한 위치의 #/위치의 전체 #(예를 들면, 오버래핑 위치)x100). 몇몇의 실시형태에서, 비교되는 2개의 서열은, 갭이 서열 내에 적절하게 도입된 후 동일한 길이이다(예를 들면, 비교되는 서열을 지나 연장되는 추가의 서열 제외). 예를 들면, 가변 영역 서열이 비교되는 경우, 리더 및/또는 불변 도메인 서열은 고려되지 않는다. 2개의 서열 사이의 서열 비교를 위해, "상응하는" CDR은, 서열 둘 다에서의 동일한 위치의 CDR(예를 들면, 각각의 서열의 CDR-H1)을 말한다.
2개의 서열들 사이의 백분율 동일성 또는 백분율 유사성의 측정은, 수학적 알고리듬을 이용하여 달성할 수 있다. 2개의 서열들의 비교를 위해 이용되는 수학적 알고리듬의 바람직한 비제한적 예는, 문헌[Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877]에서와 같이 변형된 문헌[Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268]의 알고리듬이다. 이러한 알고리듬은 문헌[Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램에 포함된다. BLAST 뉴클레오타이드 연구는 NBLAST 프로그램(score=100, wordlegth=12)으로 수행하여 목적하는 단백질을 암호화하는 핵산에 상동성인 뉴클레오타이드 서열을 수득할 수 있다. BLAST 단백질 연구는 XBLAST 프로그램(score=50, wordlength=3)으로 수행하여 목적하는 단백질에 상동성이 아미노산 서열을 수득할 수 있다. 비교 목적을 위한 갭이 있는(gapped) 정렬을 수득하기 위해서, 갭이 있는 BLAST를 문헌[Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402]에 기술되어 있는 바와 같이 사용할 수 있다. 대안으로, PSI-Blast를 사용하여, 분자들 사이의 먼 관계를 검출하는 반복된 연구를 수행할 수 있다(Id.). BLAST, 갭이 있는 BLAST, 및 PSI-Blast 프로그램을 이용하는 경우, 각각의 프로그램의 디폴트 매개변수(예를 들면, XBLAST 및 NBLAST)를 사용할 수 있다. 서열들의 비교를 위해 사용된 수학적 알고리듬의 다른 바람직한 비제한적 예는, 문헌[Myers and Miller, CABIOS (1989)]의 알고리듬이다. 이러한 알고리듬은, GCG 서열 정렬 소프트웨어 패키지의 부분인 ALIGN 프로그램(버젼 2.0)에 포함된다. 아미노산 서열들을 비교하기 위해 ALIGN 프로그램을 이용하는 경우, PAM120 중량 잔기 표, 12의 갭 길이 패널티, 및 4의 갭 패널티가 사용될 수 있다. 서열 분석을 위한 추가의 알고리듬은 당해 분야에 공지되어 있고, 문헌[Torellis and Robotti, 1994, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5]에 기술되어 있는 바와 같은 ADVANCE 및 ADAM; 및 문헌[Pearson and Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444-8]에 기술되어 있는 FASTA를 포함한다. FASTA 내에서, ktup는, 연구의 감도 및 속도를 설정하는 제어 옵션이다. ktup가 2인 경우, 비교되는 2개의 서열 내의 유사한 영역들은, 정렬된 잔기의 쌍을 찾음으로써 발견되고; ktup가 1인 경우, 단일 정렬된 아미노산을 실험한다. ktup는, 단백질 서열에 대해 2 또는 1로, DNA에 대해 1 내지 6으로 설정될 수 있다. ktup가 특정되지 않는 경우의 디폴트는, 단백질에 대해 2이고, DNA에 대해 6이다. 대안으로, 단백질 서열 정렬은, 문헌[Higgins et al., 1996, Methods Enzymol. 266:383-402]에 기술되어 있는 바와 같은 CLUSTAL W 알고리듬을 이용하여 수행할 수 있다.
비-치료학적 용도
본원에 기술되어 있는 항체는 친화성 정제 제제(affinity purification agent)로서 유용하다. 이러한 프로세스에서, 항체는, 당해 분야에 익히 공지되어 있는 방법을 이용하여 고체상의 이러한 단백질 A 수지 상에 고정화된다. 고정화된 항체는, 정제될 IL-23p19 단백질(또는 이의 단편)을 함유하는 샘플과 접촉시키고, 그 후, 지지체를, 고정화된 항체에 결합되는IL-23p19 단백질을 제외한 샘플 중의 모든 물질을 실질적으로 제거할 것인 적합한 용매로 세척한다. 마지막으로, 지지체를, 항체로부터 IL-23p19 단백질을 방출할 것인 다른 적합한 용매로 세척한다.
항-IL-23p19 항체, 예를 들면, 사람화된 항-IL-23p19 항체도, 또한, IL-23 단백질을 검출하고/검출하거나 정량하기 위한 진단학적 검정, 예를 들면, 특정 세포, 조직, 또는 혈청에서 IL-23 발현을 검출하는 것에 유용하다. 항-IL-23p19 항체는, 예를 들면, 임상학적 시험 절차의 부분으로서 질환의 발병 또는 진행을 모니터링하기 위해, 예를 들면, 주어진 치료 및/또는 예방 용법의 효능을 측정하기 위해 진단학적으로 사용할 수 있다. 항-IL-23p19 항체를 커플링시킴으로써 검출이 가능해질 수 있다. 검출가능한 물질의 예로는 각종 효소, 보결분자 그룹, 형광성 물질, 발광성 물질, 생체발광성 물질, 방사성 물질, 각종 양전자 방출 단층 촬영을 이용한 양전자 방출 금속, 및 비방사성 상자성(paramagnetic) 금속 이온이 포함된다. 예를 들면, 본 발명에 따른 진단학으로서 사용하기 위한 항체에 접합될 수 있는 금속 이온에 관한 미국 특허 제4,741,900호를 참조한다.
항-IL-23p19 항체는, IL-23-관련 장애(예를 들면, IL-23의 비정상적 발현을 특징으로 하는 장애)를 진단하거나 또는 대상체가 IL-23-관련 장애를 발병할 증가된 위험을 갖는지를 측정하기 위한 방법에 사용될 수 있다. 이러한 방법은, 대상체 유래의 생물학적 샘플을 IL-23p19 항체와 접촉시켜 IL-23p19에 대한 항체의 결합을 검출함을 포함한다. "생물학적 샘플"은 개체, 세포주, 조직 배양물, 또는 IL-23을 잠재적으로 발현하는 세포의 다른 공급원으로부터 수득되는 임의의 생물학적 샘플인 것으로 의도된다. 포유동물로부터 조직 생검 및 체액을 수득하기 위한 방법은 당해 분야에 익히 공지되어 있다.
몇몇의 실시형태에서, 당해 방법은, 환자가 IL-23-관련 장애를 갖거나 IL-23-관련 장애를 발병할 위험이 있는지를 측정하기 위해, 대조군 샘플(예를 들면, IL-23-관련 장애를 갖지 않는 대상체)에 대해 환자 샘플 중의 IL-23의 수준을 비교함을 추가로 포함할 수 있다.
몇몇의 실시형태에서, 예를 들면, 진단학적 목적을 위해, 검출가능한 모이어티로 항체를 표지화하는 것이 유리할 것이다. 방사성 동위원소, 형광성 표지, 및 효소 기질 표지 등을 포함하는 다수의 검출가능한 표지가 이용가능하다. 표지는, 각종 공지의 기술을 이용하여 항체에 간접적으로 접합될 수 있다. 예를 들면, 항체는 비오틴과 접합될 수 있고, 상기에 언급된 표지의 3개의 광범위한 카테고리 중 어느 하나는 아비딘과 접합될 수 있고, 또는 그 역으로도 마찬가지이다. 비오틴은 아비딘에 선택적으로 결합하고, 따라서, 표지는 이러한 간접적인 방식으로 항체와 접합될 수 있다. 대안으로, 표지의 항체와의 간접적인 접합을 달성하기 위해, 항체는 작은 합텐(예를 들면, 디곡신)과 접합될 수 있고, 상기 언급된 다양한 유형의 표지들 중 하나가 항-합텐 항체(예를 들면, 항-디곡신 항체)와 접합된다. 따라서, 표지의 항체와의 간접적인 접합이 달성될 수 있다.
예시 방사성 동위원소 표지로는 35S, 14C, 125I, 3H, 및 131I가 포함된다. 항체는, 예를 들면, 문헌[Current Protocols in Immunology, Volumes 1 and 2, 1991, Coligen et al., Ed. Wiley-Interscience, New York, N.Y., Pubs]에 기재되어 있는 기술을 이용하여 방사성 동위원소로 표지화될 수 있다. 방사능(radioactivity)은, 예를 들면, 섬광 계수에 의해 측정할 수 있다.
예시 형광성 표지로는, 희토류 킬레이트(유로퓸 킬레이트)로부터 유도된 표지가 포함되거나, 플루오레세인 및 이의 유도체, 로다민 및 이의 유도체, 단실, 리사민, 피코에리트린, 및 텍사스 레드가 이용가능하다. 형광성 표지는, 예를 들면, 문헌[Current Protocols in Immunology]에 개시되어 있는 것과 같은 공지의 기술을 통해 항체에 접합될 수 있다. 형광성은 형광 측정계를 이용하여 정량화할 수 있다.
당해 분야에 공지되어 있는 각종의 익히-특성확인된 효소-기질 표지가 존재한다(검토를 위해, 예를 들면, 미국 특허 제4,275,149호를 참조한다). 효소는, 일반적으로, 각종 기술을 이용하여 측정될 수 있는 발색성 기질의 화학적 변경을 촉진시킨다. 예를 들면, 변경은, 분광 광도 측정적으로 측정될 수 있는 기질 중의 색 변화일 수 있다. 대안으로, 효소는 기질의 형광성 또는 화학발광성을 변경시킬 수 있다. 형광성의 변화를 정량화하기 위한 기술은 상기에 기술되어 있다. 화학 발광성 기질은 화학적 반응에 의해 전자적으로 여기되게 되고, 이어서, 화학 발광 측정기를 이용하여 측정될 수 있는 광을 방사하거나, 예를 들면, 형광성 억셉터에 에너지를 공여할 수 있다.
효소 표지의 예로는 루시페라제, 예를 들면, 반딧불이 루시페라제 및 세균성 루시페라제(미국 특허 제4,737,456), 루시페린, 2,3-디하이드로프탈라진디온, 말레이트 데하이드로게나제, 우레아제, 퍼옥시다제, 예를 들면, 고추냉이 퍼옥시다제(HRPO), 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코아밀라제, 라이소자임, 사카라이드 옥시다제(예를 들면, 글루코스 옥시다제, 갈락토스 옥시다제, 및 글루코스-6-포스페이트 데하이드로게나제), 헤테로사이딕(heterocydic) 옥시다제(예를 들면, 우리카제 및 크산틴 옥시다제), 락토퍼옥시다제, 및 마이크로퍼옥시다제 등이 포함된다. 항체에 효소를 접합시키기 위한 기술은, 예를 들면, 문헌[O'Sullivan et al., 1981, Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in Methods in Enzym. (J. Langone & H. Van Vunakis, eds.), Academic press, N.Y., 73: 147-166]에 기술되어 있다.
효소-기질 조합의 예로는, 예를 들면, 기질로서의 수소 퍼옥시다제를 갖는 고추냉이 퍼옥시다제(HRPO)가 포함되고, 여기서, 수소 퍼옥시다제는 염료 전구체, 예를 들면, 오르토페닐렌 디아민(OPD) 또는 3,3',5,5'-테트라메틸 벤지딘 하이드로클로라이드(TMB); 발색성 기질로서의 파라-니트로페닐 포스페이트를 갖는 알칼리성 포스파타제(AP); 및 발색성 기질을 갖는 β-D-갈락토시다제(β-D-Gal), 예를 들면, p-니트로페닐-β-D-갈락토시다제 또는 형광원성 기질 4-메틸움벨리페릴-β-D-갈락토시다제를 산화시킨다.
다수의 다른 효소-기질 조합이 당해 분야 숙련가에게 이용가능하다. 이들의 일반적인 검토를 위해, 미국 특허 제4,275,149호 및 미국 특허 제4,318,980호를 참조한다.
다른 실시형태에서, 비표지화되고 사람화된 항-IL-23p19 항체에 결합하는 표지화된 항체로 검출되는 사람화된 항-IL-23p19 항체를 이용한다.
본원에 기술되어 있는 항체는 임의의 공지의 검정법, 예를 들면, 경쟁적 결합 검정, 직접적 및 간접적 샌드위치 검정, 및 면역침전 검정에서 사용할 수 있다. 예를 들면, 문헌[Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987)]을 참조한다.
항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 이용하여 IL-23 수용체에 대한 IL-23의 결합을 저해할 수 있다. 이러한 방법은, 세포(예를 들면, 포유동물 세포) 또는 세포 환경에 항-IL23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여함을 포함하여, IL-23 수용체에 의해 매개되는 신호전달이 저해된다. 이들 방법은 시험관내에서 또는 생체내에서 수행할 수 있다. "세포 환경"은 조직, 배지, 또는 세포 주위의 세포외 매트릭스인 것으로 의도된다. 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 항체 또는 단편이 세포의 외부 및 주위의 IL-23 분자에 결합할 수 있는 방식으로 세포의 세포 환경에 투여하여, IL-23의 수용체에 대한 IL-23의 결합을 방지한다.
진단학적 키트
항-IL-23p19 항체는, 진단학적 키트, 즉, 진단학적 검정을 수행하기 위한 지침서와 소정량의 시약의 패키징된 조합에 사용될 수 있다. 항체가 효소로 표지화되는 경우, 키트는, 기질 및 검출가능한 발색단 또는 형광단을 제공하는 기질 전구체와 같은 효소가 필요로 하는 공동 인자를 포함할 수 있다. 또한, 다른 첨가제는 안정화제, 및 완충액(예를 들면, 차단 완충액 또는 용해 완충액) 등으로서 포함될 수 있다. 각종 시약의 상대적 양은, 검정의 감도를 실질적으로 최적화하는 시약의 용액 중의 농도를 제공하도록 광범위하게 변할 수 있다. 시약은, 용해시 적절한 농도를 갖는 시약 용액을 제공할 것인 부형제를 포함하는 일반적으로 동결건조된 건조 분말로서 제공될 수 있다.
치료학적 용도
다른 실시형태에서, 본원에 개시되어 있는 사람화된 항-IL-23p19 항체는, 본원에 기술되어 있는 바와 같은 IL-23p19의 발현과 관련된 각종 장애의 치료에 유용하다. IL-23 관련 장애의 치료 방법은, 치료를 필요로 하는 대상체에게 사람화된 항-IL-23p19 항체의 치료학적 유효량을 투여함을 포함한다.
사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 제제는, 비경구, 피하, 복강내, 폐내, 및 비강내, 및 국소 면역 억제 치료에 바람직한 경우 병변내 투여(관류, 또는 이식 전에 이식편을 항체와 접촉시키는 것을 포함)를 포함하는 임의의 적합한 수단에 의해 투여된다. 사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 제제는, 예를 들면, 주입으로서 또는 볼루스로서 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 또는 피하 투여를 포함한다. 또한, 사람화된 항-IL-23p19 항체는 맥박 주입에 의해, 특히, 항체의 용량을 감소시키면서 적합하게 투여된다. 한 양상에서, 투약은, 투여가 간단한지 또는 만성인지에 부분적으로 의존하여 주사, 가장 바람직하게는 정맥내 또는 피하 주사에 의해 제공된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, 항체의 적절한 용량은, 각종 인자들, 예를 들면, 상기 정의된 바와 같은 치료되는 질환의 유형, 질환의 중증도 및 과정, 항체가 예방학적 또는 치료학적 목적을 위해 투여되는지, 이전 치료요법, 환자의 병력 및 항체에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 의존할 것이다. 항체는, 환자에게 1회에 또는 일련의 치료에 걸쳐 적합하게 투여한다.
질환의 유형 및 중증도에 따라, 약 1㎍/kg 내지 20mg/kg(예를 들면, 0.1 내지 15mg/kg)의 항체는, 예를 들면, 1회 이상의 개별 투여에 의한, 또는 연속적 주입에 의한 환자에게의 투여를 위한 개시 후보 용량이다. 전형적인 1일 용량은, 상기 언급된 인자들에 의존하여 약 1㎍/kg 내지 100mg/kg 이상의 범위일 수 있다. 수일 이상에 걸친 반복된 투여를 위해, 조건에 따라, 질환 증상의 바람직한 억제가 일어날 때까지 치료를 계속한다. 그러나, 다른 용량 용법이 유용할 수 있다. 이러한 치료요법의 진행은 종래 기술 및 검정에 의해 쉽게 모니터링된다. 예시 투약 용법은 WO 94/04188호에 개시되어 있는 것이다.
용어 "억제"는, 본원에서 "개선" 및 "완화"와 동일한 맥락으로 사용되어 질환의 1개 이상의 특징을 경감시키는 것을 의미한다.
항체 조성물은 양호한 의료 행위와 일치하는 방식으로 제형화되고, 투약 및 투여될 것이다. 이러한 맥락에서 고려되는 인자들로는, 치료되는 특정 장애, 치료되는 특정 포유동물, 개체 환자의 임상학적 병태, 장애의 원인, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케쥴, 및 주치의에게 공지되어 있는 다른 인자들이 포함된다. 투여되는 항체의 "치료학적 유효량"은, 이러한 고려들에 의해 좌우될 것이고, 치료학적 유효량은, IL-23 발현과 관련된 장애를 예방하거나, 개선시키거나, 또는 치료하는데 필요한 최소량이다.
항체는, 반드시 그럴 필요는 없지만, 임의로, 문제의 장애를 예방하거나 치료하는데 현재 사용되고 있는 1개 이상의 제제와 함께 제형화된다. 이러한 다른 제제의 유효량은, 제형 내에 존재하는 사람화된 항-IL-23p19 항체의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기 논의된 다른 인자들에 의존한다. 이들은, 일반적으로 동일한 용량으로, 그리고, 상기에 사용된 바와 동일한 용량 및 투여 경로로, 또는 지금까지 사용된 용량의 약 1 내지 99%로 사용된다.
IL -23-관련 장애
항-IL-23p19 항체 또는 제제는, IL-23의 비정상적 발현, 예를 들면, 면역 세포(예를 들면, 림프구 또는 수지상 세포)의 부적절한 활성화를 특징으로 하는 면역학적 장애를 치료하거나 예방하는데 유용하다. 이러한 IL-23의 비정상적 발현은, 예를 들면, 증가된 IL-23 단백질 수준으로 인한 것일 수 있다. 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 또한, 호흡기 장애, 대사 장애, 예를 들면, 진성 당뇨병, 및 소정 암의 치료 또는 예방에서의 용도도 발견된다. 본원에 기술되어 있는 방법에 따른 면역학적 장애, 호흡기 장애, 대사 장애 또는 암의 치료 또는 예방은, 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 항-IL-23p19 항체 또는 제제의 유효량을 투여함으로써 달성되고, 이에 의해 상기 항체는 질환 상태와 관련된 IL-23의 활성을 감소시킨다.
면역 세포의 부적절한 활성화를 특징으로 하고 본원에 기술되어 있는 방법에 의해 치료되거나 예방될 수 있는 면역학적 질환은, 장애의 기저를 이루는 과민 반응(들)의 유형(들)에 의해 분류될 수 있다. 이들 반응은 전형적으로 4개의 유형들로 분류된다: 아나필락시스 반응, 세포독성(세포분해) 반응, 면역 복합체 반응, 또는 세포-매개된 면역성(CMI) 반응(지연형 과민(DTH) 반응이라고도 칭함). (예를 들면, 기초 면역학[William E. Paul ed., Raven Press, N.Y., 3rd ed. 1993]을 참조한다.) 면역학적 질환으로는 염증성 질환 및 자가면역 질환이 포함된다.
면역학적 질환의 구체예로는 하기가 포함된다: 류마티스 관절염, 자가면역 탈수초성 질환(예를 들면, 다발성 경화증, 알레르기성 뇌척수염), 내분비 안병증, 포도막 망막염, 전신성 홍반 루푸스, 중증 근무력증, 그레이브 질환, 사구체신염, 자가면역 간 장애, 염증성 장 질환(예를 들면, 크론 질환 또는 궤양성 결장염), 아나필락시스, 알레르기성 반응, 쇼그렌 증후군, I형 진성 당뇨병, 원발성 담즙성 간경변, 베게너 육아종증, 섬유 근육통, 다발성 근염, 피부근염, 염증성 근염, 다발성 내분비 부전, 슈미트 증후군, 자가면역 포도막염, 애디슨 질환, 부신염, 갑상선염, 하시모토 갑상선염, 자가면역 갑상선 질환, 악성 빈혈, 위 위축증, 만성 간염, 루포이드 간염, 죽상 동맥경화증, 아급성 피부 홍반 루푸스, 부갑상선 기능 저하증, 드레슬러 증후군, 자가면역 혈소판 감소증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 용혈성 빈혈, 심상성 천포창, 천포창, 포진상 피부염, 원형 탈모증, 유천포창, 강피증, 진행성 전신 경화증, CREST 증후군(석회증, 레이노이드 현상, 식도 운동성 이상, 수지 경화증), 및 모세혈관 확장증), 남성 및 여성 자가면성 불임, 강직성 척추염, 궤양성 결장염, 혼합 결합 조직 질환, 결절성 다발성 동맥염, 전신 괴사성 혈관염, 아토피성 피부염, 아토피성 비염, 굿 패스튜어 증후군, 샤가스 질환, 유육종증, 류마티스성 발열, 천식, 반복 유산, 항-인지질 증후군, 농부의 폐, 다형 홍반, 심장절개술 후 증후군, 쿠싱 증후군, 자가면역 만성 활성 간염, 새-애호가의 폐, 독성 표피 괴사 용해, 알포트 증후군, 폐포염, 알레르기성 폐포염, 섬유성 폐포염, 간질성 폐 질환, 결절성 홍반, 괴저성 농포증, 수혈 반응, 타카야스 동맥염, 류마티스성 다발성 근육통, 측두 동맥염, 주혈흡충증, 거대 세포 동맥염, 회충증, 아스퍼질러스증, 샘프터 증후군, 습진, 림프종상 육아종증, 베체트 질환, 카플란 증후군, 카와사키 질환(카와사키 증후군 또는 피부 점막 림프절 증후군으로서도 공지되어 있음), 뎅기, 뇌척수염, 심내막염, 심근내막 섬유증, 내안구염, 지속적 융기성 홍반, 건선, 건선성 관절염, 태아 적아구증, 호산성 근막염, 슐먼 증후군, 펠티 증후군, 필라리아증, 모양체염, 만성 모양체염, 비동시성 모양체염, 퓨크(Fuch) 모양체염, IgA 신장병증, 헤노흐-쇤라인 자반증, 이식편 대 숙주 질환, 이식 거부, 심근병증, 이튼-램버트 증후군, 재발성 다발 연골염, 한랭 글로불린혈증, 발덴스트롬 매크로글로불린혈증, 에반 증후군, 급성 호흡 곤란 증후군, 폐 염증, 골다공증, 지연형 과민증, 및 자가면역 생식선 부전증.
한 양상에서, 면역학적 질환은 건선이다. 건선은, 이상기능 각질세포 분화 및 과다 증식, 및 염증성 T 세포 및 수지상 세포의 현저한 축적을 특징으로 하는 피부의 만성 염증 질환이다. 예를 들면, 면역학적 질환으로는, 예를 들면, 전신 치료요법 또는 광 치료요법에 대한 후보자인 환자에서의 플라크 건선, 예를 들면, 만성 플라크 건선, 예를 들면, 중간 정도 내지 중증의 만성 플라크 건선이 포함된다. 예를 들면, 면역학적 질환으로는 수장 농포성 건선, 적상 건선, 역위 건선, 농포성 건선, 또는 홍피성 건선이 포함된다.
추가의 양상에서, 면역학적 질환은 크론 질환이다. 크론 질환(CD)은, 위장의 상피 장벽 및 점막에서의 만성 경벽(transmural) 염증성 병변을 특징으로 하는 염증성 장 질환이다. CD는, GI관 내의 임의의 부위, 가장 빈번하게는 말단 회장에 영향을 미칠 수 있다. CD는 전형적으로 재발 및 완화 과정에 따르고, 실질적인 급성 및 장기 이환율 및 증가된 사망률을 야기한다. 환자는, 종종 국소 합병증(예를 들면, 누공, 농양), 전신성 합병증(예를 들면, 포도막염, 관절염), 또는 치료의 부작용을 발병하여 대수술을 필요로 할 수 있다. 대략 환자의 1/3은 경증, 중간 정도, 및 중증의 질환의 카테고리의 각각에 속한다. 중간 정도 내지 중증의 크론 질환을 갖는 환자들은, 복통, 설사, 농양 형성, 및 누공과 같은 임상학적 특징을 갖는 쇠약성 질병을 갖는다.
추가의 양상에서, 면역학적 질환은 척추관절염이다. 추가의 양상에서, 질환은 강직성 척추염(방사능성 척추관절염이라고도 칭함)이다. 강직성 척추염(AS; 방사능성 축성 척추관절염)은 척추관절염(SpA)의 원형(prototype) 형태이다. 손상성 서행 류마티스 질환은 여성보다 남성에서 보다 흔하고, 젊은 개체에게 영향을 미치며; 환자의 80%에서 30년 미만의 연령에서 증상의 개시가 일어난다. 치료 연구에서의 향상의 척도로서 사용되는 강직성 척추염 활성 스코어(ASAS)에 기여하는 염증성 구성 성분을 특징으로 한다. 추가로, 비정상적 골 성장은, 결국 골 강직 및 척추 변형을 유도하는 증가된 척추 강직을 수반하는 단순 방사선 사진에서 보이는 골극(bony spur)(인대골극(syndesmophyte))의 형성을 초래한다.
추가의 양상에서, 면역학적 질환은 비-방사능성 축성 척추관절염이다. AS보다 더 최근에 정의된 실체인 비-방사능성 축성 척추관절염(nrSpA)은, AS와 동일한 병리학적 프로세스의 조기 징후를 나타내는 것으로 생각되지만, 몇몇의 환자(특히, 여성)가 방사능성 질환으로 진행하지 않을 수 있고, 따라서, 이러한 질환의 별개의 아형을 갖는 것으로 생각될 수 있다. 추가의 양상에서, 질환은 말초 척추관절염이다. 말초 척추관절염은, 1개 이상의 '특이적' SpA 특징(영상에서의 건선, 염증성 장 질환, 선행 감염, HLA-B27, 포도막염, 천장골염) 또는 나머지 SpA-특징들(관절염, 부착 부위염, 지염, 과거의 염증성 등 통증, SpA에 대한 양성 가족력) 중 2개 이상을 갖는, 관절염, 부착 부위염, 또는 지염의 존재에 의해 정의될 수 있다. 이러한 정의는, 예를 들면, ASAS(Association SpondyloArthritis investigation Society)에 의해 사용되고, 또한, 예를 들면, 문헌[Carron P. et al. (Curr Opinion Rheumatol 2012; 24: 370-4)]을 참조한다.
몇몇의 실시형태에서, 면역학적 장애는, T 세포-매개된 면역학적 장애이고, 따라서, 본원에 기술되어 있는 바와 같은 항-IL-23p19 항체 및 제제는, 또한, T 세포-매개된 면역학적 장애를 치료하거나 예방하는데 유용하다.
한 양상에서, 항-IL-23p19 항체 또는 제제는, IL-23이 비정상적으로 발현되는 호흡기 장애를 치료하거나 예방하는데 유용하다. 본원에 기술되어 있는 방법에 따르면, 호흡기 장애의 치료 또는 예방은, 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 항-IL-23p19 항체 또는 제제의 유효량을 투여함으로써 달성되고, 이에 의해, 상기 항체는, 질환 상태와 관련된 IL-23의 활성을 감소시킨다. 이들로는, 호흡기 통증(complaint), 각종 기원의 폐쇄성 폐 질환, 각종 기원의 폐 기종, 제한성 폐 질환, 간질성 폐 질환, 간질성 폐 질환, 낭포성 섬유증, 각종 기원의 기관지염, 기관지 확장증, ARDS(성인 호흡 곤란 증후군) 및 폐 부종의 모든 형태; COPD(만성 폐쇄성 폐 질환), 천식, 기관지 천식, 소아 천식, 중증의 천식, 급성 천식 공격 및 만성 기관지염; COPD에 그 기원을 갖는 폐 기종(만성 폐쇄성 폐 질환) 또는 α1-프로테이나제 저해제 결핍증; 알레르기성 폐포염, 업무-관련 유해성 물질에 의해 유발되는 제한성 폐 질환, 예를 들면, 석면증 또는 규폐증으로부터 선택되는 제한성 폐 질환; 및 폐 종양에 의해 야기되는 제한, 예를 들면, 암종성 림프관염(lymphangitis carcinomatosa), 기관지 폐포암, 및 림프종; 및 감염, 예를 들면, 바이러스, 세균, 진균, 원생 동물, 연충류(helminths) 또는 다른 병원체에 의한 감염에 의해 야기되는 폐렴, 각종 인자, 예를 들면, 흡인 및 좌심 부전증에 의해 야기되는 폐렴, 방사선-유도된 폐렴 또는 섬유증, 아교섬유증, 예를 들면, 홍반 루푸스, 전신성 강피증 또는 유육종증, 육아종증, 예를 들면, 뵈크(Boeck) 질환, 특발성 간질성 폐렴 또는 특발성 폐 섬유증(IPF); 점액성 점착증, 세균 또는 바이러스 감염에 의해 야기되는 기관지염, 알레르기성 기관지염, 및 독성 기관지염; 기관지 확장증; 폐 부종, 예를 들면, 독성 물질 및 외래 물질의 흡인 또는 흡입 후의 독성 폐 부종; 비염, 관절염 및 관련된 관절병증, 건선, 골수성 백혈병, 다발성 경화증, 알츠하이머 질환, 사구체신염, 및 만성 아토피성 피부염이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
다른 양상에서, 본원에 기술되어 있는 바와 같은 항-IL-23p19 항체 및 제제는, 또한, IL-23이 비정상적으로 발현되는 암을 치료하는데 유용하다.
본원에 기술되어 있는 방법에 의해 치료될 수 있는 IL-23-발현 암으로는, 예를 들면, 백혈병, 예를 들면, 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병(예를 들면, 골수아구성, 전골수성, 골수 단핵구성, 단핵구성, 또는 적백혈병), 만성 백혈병, 만성 골수성 (과립구성) 백혈병, 또는 만성 림프구성 백혈병; 진성 적혈구 증가증; 림프종(예를 들면, 호지킨 질환, 또는 비-호지킨 질환); 다발성 골수종, 발덴스트롬 매크로글로불린혈증; 중쇄 질환; 고형 종양, 예를 들면, 육종 및 암종(예를 들면, 섬유 육종, 점액 육종, 지방 육종, 연골 육종, 골원성 육종, 골육종, 척색종, 혈관 육종, 내피 육종, 림프관 육종, 림프관 내피 육종, 활막종, 중피종, 유윙 종양, 평활근 육종, 횡문근 육종, 결장 암종, 결장직장 암종, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종, 선암종, 한선 암종, 피지선 암종, 유두 암종, 유두 선암종, 낭선암종, 수질 암종, 기관지원성 암종, 신세포 암종, 간암, 담관 암종, 융모 암종, 정상피종, 배아 암종, 빌름스 종양, 자궁경부암, 자궁암, 고환 종양, 폐 암종, 소세포 폐 암종, 비 소세포 폐 암종, 방광 암종, 상피 암종, 신경교종, 성상세포종, 수아세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관아세포종, 청신경종, 희소돌기신경교종, 뇌수막종, 흑색종, 신경아세포종, 망막아세포종, 비인두 암종, 또는 식도 암종)이 포함된다.
다른 양상에서, 본원에 기술되어 있는 바와 같은 항-IL-23p19 항체 및 제제는, 또한, 원판상 루푸스, 말라리아, 악성 흑색종, 재생불량성 빈혈, 헌팅턴 질환, 수장 족저 농포증, IgA 신염, ANCA-관련 혈관염, 공막염 또는 패혈증을 치료하는데 유용하다.
약제학적 조성물 및 이의 투여
IL-23p19 결합제(예를 들면, 항-IL-23p19 항체)를 포함하는 조성물은, 면역학적 장애, 호흡기 장애, 또는 암을 갖거나 가질 위험이 있는 대상체에게 투여될 수 있다. 본 발명은, 추가로, 암, 호흡기 장애, 또는 면역학적 장애의 예방 또는 치료를 위한 의약의 제조시의 IL-23p19 결합제(예를 들면, 항-IL-23p19 항체)의 용도를 제공한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "대상체"는, IL-23p19 결합제가 투여될 수 있는 임의의 포유동물 환자를 의미하고, 예를 들면, 사람 및 비-사람 포유동물, 예를 들면, 영장류, 설치류, 및 개가 포함된다. 본원에 기술되어 있는 방법을 이용한 치료에 대해 특히 의도되는 대상체로는 사람이 포함된다. 항체 또는 제제는, 면역학적 장애, 호흡기 장애, 또는 암의 예방 또는 치료시, 단독으로 또는 다른 조성물과 병용하여 투여될 수 있다. 항체 또는 제제와 병용하여 투여될 수 있는 이러한 조성물로는 메토트렉세이트(MTX) 및 면역조절제, 예를 들면, 항체 또는 소분자가 포함된다.
이러한 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항체의 예로는, 서열번호 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 또는 119 중 어느 하나의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 사람화된 항체 또는 항체 단편을 포함하는 것이 있다. 이러한 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항체의 예로는, 또한, 서열번호 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 또는 156 중 어느 하나의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 사람화된 항체 또는 항체 단편을 포함하는 것이 있다.
이러한 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항체의 추가의 예로는, 또한, 서열번호 158, 160, 162, 또는 164 중 어느 하나의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 사람화된 항체 또는 항체 단편을 포함하는 것이 있다. 이러한 약제학적 조성물에 사용하기 위한 바람직한 항체는, 또한, 서열번호 166, 168, 170, 또는 172 중 어느 하나의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 사람화된 항체 또는 항체 단편을 포함하는 것이다.
이러한 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항체의 추가의 예로는, 또한, 서열번호 160 및 166, 서열번호 160 및 168, 서열번호 158 및 166, 또는 서열번호 158 및 168 중 어느 하나의 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 갖는 사람화된 항체 또는 항체 단편을 포함하는 것이 있다.
이러한 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항체의 추가의 예로는, 또한, 서열번호 174 또는 180 중 어느 하나의 경쇄 영역 아미노산 서열을 갖는 사람화된 항체를 포함하는 것이 있다. 이러한 약제학적 조성물에 사용하기 위한 바람직한 항체는, 또한, 서열번호 176 또는 178 중 어느 하나의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 사람화된 항체를 포함하는 것이다.
이러한 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항체의 추가의 예로는, 또한, 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D를 포함하는 것이 있다.
각종 전달 시스템이 공지되어 있고, 이들을 이용하여 IL-23p19 결합제를 투여할 수 있다. 도입 방법으로는, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비강내, 경막외, 및 경구 경로가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. IL-23p19 결합제는, 예를 들면, 주입, 볼루스, 또는 주사에 의해 투여될 수 있고, 다른 생물학적 활성제, 예를 들면, 화학 치료요법제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신 또는 국소일 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 투여는 피하 주사에 의한 것이다. 이러한 주사를 위한 제형은, 예를 들면, 2주에 1회 투여될 수 있는 사전에 충전된 시린지로 제조될 수 있다.
특정 실시형태에서, IL-23p19 결합제 조성물은 주사에 의해, 카테터 수단에 의해, 좌제의 수단에 의해, 또는 다공성, 비-다공성, 또는 젤라틴성 물질로 이루어진 이식물(막, 예를 들면, 시알라스틱 막, 또는 섬유 포함)의 수단에 의해 투여된다. 전형적으로, 조성물을 투여할 때, 항-IL-23p19 항체 또는 제제가 흡수되지 않는 물질이 사용된다.
다른 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 제제는 제어 방출 시스템으로 전달된다. 한 실시형태에서, 펌프를 사용할 수 있다(예를 들면, 문헌[Langer, 1990, Science 249:1527-1533; Sefton, 1989, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574]을 참조한다). 다른 실시형태에서, 중합체 물질을 사용할 수 있다. (예를 들면, 문헌[Medical Applications of Controlled Release (Langer and Wise eds., CRC Press, Boca Raton, Fla., 1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smolen and Ball eds., Wiley, New York, 1984); Ranger and Peppas, 1983, Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61]을 참조한다). 또한, 문헌[Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105]도 참조한다. 다른 제어 방출 시스템은, 예를 들면, 문헌[Langer, supra]에 논의된다.
IL-23p19 결합제(예를 들면, 항-IL-23p19 항체)는, 결합제의 치료학적 유효량 및 1개 이상의 약제학적으로 적합한 성분을 포함하는 약제학적 조성물로서 투여될 수 있다.
전형적인 실시형태에서, 약제학적 조성물은 일상적인 절차에 따라 사람에게의 정맥내 또는 피하 투여를 위해 개작된(adapted) 약제학적 조성물로서 제형화된다. 전형적으로, 주사에 의한 투여를 위한 조성물은 멸균 등장성 수성 완충액 중의 용액이다. 필요한 경우, 약제는, 또한, 가용화제 및 국소 마취제, 예를 들면, 주사 부위에서의 통증을 덜어 주기 위한 리그노카인도 포함한다. 일반적으로, 성분들은, 별도로, 또는 단위 용량형, 예를 들면, 동결 건조 분말 또는 무수 농축물로서, 용봉된 컨테이너, 예를 들면, 앰플, 또는 활성제의 양이 표시된 사쉐트 내에 함께 혼합되어 공급된다. 약제가 주입에 의해 투여되는 경우, 멸균 약제 등급 물 또는 염수를 함유하는 주입 보틀(bottle)로 조제될 수 있다. 약제가 주사에 의해 투여되는 경우, 주사용 멸균수 또는 염수의 앰플은, 성분들이 투여 전에 혼합될 수 있도록 제공될 수 있다.
추가로, 약제학적 조성물은, (a) 동결건조 형태로의 IL-23p19 결합제(예를 들면, 항-IL-23p19 항체)를 함유하는 컨테이너, 및 (b) 주사를 위한 약제학적으로 허용되는 희석제(예를 들면, 멸균수)를 함유하는 제2 컨테이너를 포함하는, 약제학적 키트로서 제공될 수 있다. 약제학적 허용되는 희석제는, 동결건조된 항-IL-23p19 항체 또는 제제의 재구성(reconstitution) 또는 희석에 사용될 수 있다. 약제 또는 생물학적 생성물의 제조, 사용, 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 규정된 형태의 경고문이 이러한 컨테이너(들)와 임의로 관련될 수 있고, 이 경고문은 제조, 사용, 또는 판매 기관에 의해 사람 투여에 대한 승인을 반영한다.
면역학적 장애 또는 암의 치료 또는 예방에 유효한 IL-23p19 결합제(예를 들면, 항-IL-23p19 항체)의 양은, 표준 임상 기술에 의해 결정될 수 있다. 또한, 시험관내 검정은, 최적 용량 범위를 동정하는 것을 돕기 위해 임의로 사용될 수 있다. 제형에 사용되는 정확한 용량은, 또한, 투여의 경로, 및 면역학적 장애 또는 암의 단계에 의존할 것이고, 의사의 판단 및 각 환자의 상황에 따라 결정되어야만 한다. 유효 용량은, 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유도된 용량-반응 곡선으로부터 추론될 수 있다.
일반적으로, 면역학적 장애 또는 IL-23p19-발현 암을 앓고 있는 환자에게 투여되는 항-IL-23p19 항체 또는 IL-23p19 결합제의 용량은, 전형적으로 대상체의 체중의 약 0.1mg/kg 내지 약 100mg/kg이다. 대상체에게 투여되는 용량은, 대상체의 체중의 약 0.1mg/kg 내지 약 50mg/kg, 약 1mg/kg 내지 약 30mg/kg, 약 1mg/kg 내지 약 20mg/kg, 약 1mg/kg 내지 약 15mg/kg, 또는 약 1mg/kg 내지 약 10mg/kg이다.
예시 용량으로는 1ng/kg 내지 100mg/kg이 포함되지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 몇몇의 실시형태에서, 용량은 약 0.5mg/kg, 약 1mg/kg, 약 2mg/kg, 약 3mg/kg, 약 4mg/kg, 약 5mg/kg, 약 6mg/kg, 약 7mg/kg, 약 8mg/kg, 약 9mg/kg, 약 10mg/kg, 약 11mg/kg, 약 12mg/kg, 약 13mg/kg, 약 14mg/kg, 약 15mg/kg, 또는 약 16mg/kg이다. 용량은, 예를 들면, 매일, 1주당 1회(매주), 1주당 2회, 1주당 3회, 1주당 4회, 1주당 5회, 1주당 6회, 2주마다 또는 매월 마다, 2개월 마다, 또는 3개월 마다 투여될 수 있다. 특정 실시형태에서, 용량은 약 0.5mg/kg/주, 약 1mg/kg/주, 약 2mg/kg/주, 약 3mg/kg/주, 약 4mg/kg/주, 약 5mg/kg/주, 약 6mg/kg/주, 약 7mg/kg/주, 약 8mg/kg/주, 약 9mg/kg/주, 약 10mg/kg/주, 약 11mg/kg/주, 약 12mg/kg/주, 약 13mg/kg/주, 약 14mg/kg/주, 약 15mg/kg/주, 또는 약 16mg/kg/주이다. 몇몇의 실시형태에서, 용량은 약 1mg/kg/주 내지 약 15mg/kg/주의 범위이다.
몇몇의 실시형태에서, IL-23p19 결합제를 포함하는 약제학적 조성물은, 결합제에 접합되거나 비접합된 치료제를 추가로 포함할 수 있다. 항-IL-23p19 항체 또는 IL-23p19 결합제는, 면역학적 장애 또는 암의 치료 또는 예방을 위해 1개 이상의 치료제와 병용하여 공동-투여될 수 있다.
이러한 병용 치료요법 투여는, 첨가제 또는 질환 매개변수(예를 들면, 증상의 중증도, 증상의 수, 반복의 빈도)에 대한 상승작용 효과를 가질 수 있다.
특정 실시형태에서, 조합적 투여를 위한 치료학적 용법에 관해서, 항-IL-23p19 항체 또는 IL-23p19 결합제는, 치료제와 동시에 투여된다. 다른 특정 실시형태에서, 치료제는, 항-IL-23p19 항체 또는 IL-23p19 결합제의 투여 전에 또는 후에, 항-IL-23p19 항체 또는 IL-23p19 결합제의 투여 전에 또는 후에 1시간 이상 수개월 이하, 예를 들면, 1시간, 5시간, 12시간, 1일, 1주, 1개월, 또는 3개월 이상 투여된다.
예를 들면, 본 발명의 약제학적 조성물은, 항체 분자, 예를 들면, 본원에 기술되어 있는 항체 분자, 및 석시네이트 완충액을 포함한다. 한 실시형태에서, 약제학적 조성물은 50mM 이하의 석시네이트 완충액을 포함한다.
추가의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은, 1 내지 40mg/ml의 항체 분자, 예를 들면, 본원에 기술되어 있는 항체 분자를 포함하고, 5 내지 50mM의 석시네이트 완충액, 및 50 내지 200mM의 나트륨 클로라이드를 추가로 포함한다. 한 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물의 pH는 pH 6.0 내지 7.0의 범위 내이다. 한 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 2.5 내지 30mg/ml의 항체 분자를 포함하고, 추가의 실시형태에서는 5 내지 20mg/ml의 항체 분자를 포함한다. 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 10 내지 40mM의 석시네이트 완충액을 포함하고, 추가의 실시형태에서는 20 내지 30mM의 석시네이트 완충액을 포함한다. 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은, 75 내지 175mM의 나트륨 클로라이드를 포함하고, 추가의 실시형태에서는 100 내지 150mM의 나트륨 클로라이드를 포함한다. 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 세제, 예를 들면, 폴리소르베이트 20(Tween 20)을, 예를 들면, 0.20g/l의 농도로 추가로 포함한다. 한 양상에서, 약제학적 조성물 중의 항체 분자는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다.
추가의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은, 6.0 내지 7.0의 pH에서 10mg/ml의 항체 분자, 25mM의 석시네이트 완충액, 125mM의 나트륨 클로라이드, 및 0.02% Tween 20을 포함한다. 한 양상에서, 약제학적 조성물의 pH는 6.5이다. 한 양상에서, 약제학적 조성물 중의 항체 분자는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다.
추가의 실시형태에서, 본 발명은, 70 내지 100mg/ml의 항체 분자, 본원에 기술되어 있는 바와 같은 항체 분자, 및 100 내지 300mM의 소르비톨을 포함하는, 약제학적 조성물을 제공한다. 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 25mM 이하의 석시네이트 완충액을 추가로 포함한다. 한 추가의 실시형태에서, 상기 약제학적 조성물의 pH는 5.5 내지 6.5의 범위 내이다. 한 양상에서, 약제학적 조성물의 pH는 5.5 내지 6.1이다. 한 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 80 내지 95mg/ml의 항체 분자를 포함한다. 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 10mM 이하의 석시네이트 완충액을 포함하고, 추가의 실시형태에서는 5mM 이하의 석시네이트 완충액을 포함하며, 추가의 실시형태에서 1mM 이상의 석시네이트 완충액을 포함하고, 추가의 실시형태에서 2.5mM 이상의 석시네이트 완충액을 포함하고, 추가의 실시형태에서 1 내지 10mM의 석시네이트 완충액을 포함하고, 추가의 실시형태에서 2.5 내지 5mM의 석시네이트 완충액을 포함한다. 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 150 내지 300mM의 소르비톨을 포함하고, 추가의 실시형태에서, 175 내지 275mM의 소르비톨을 포함하며, 추가의 실시형태에서 200 내지 250mM의 소르비톨을 포함한다. 추가의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 세제, 예를 들면, 폴리소르베이트 20(Tween 20)을, 예를 들면, 0.20g/l의 농도로 포함한다. 한 양상에서, 약제학적 조성물 중의 항체 분자는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다.
추가의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은, 5.5 내지 6.5의 pH에서 90mg/ml의 항체 분자, 4.4mM의 석시네이트 완충액, 225mM의 소르비톨, 및 0.02%의 Tween 20을 포함한다. 한 양상에서, 약제학적 조성물은 pH는 5.5 내지 6.1이다. 한 양상에서, 약제학적 조성물의 pH는 5.8이다. 한 양상에서, 약제학적 조성물 중의 항체 분자는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다.
추가의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은, 5.5 내지 6.5의 pH에서 90mg/ml의 항체 분자, 240mM의 소르비톨, 및 0.02% Tween 20을 포함한다. 한 양상에서, 약제학적 조성물의 pH는 5.5 내지 6.1이다. 한 양상에서, 약제학적 조성물의 pH는 5.8이다. 한 양상에서, 약제학적 조성물 중의 항체 분자는 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 이하에 보다 상세하게 기술된다. 한 양상에서, 본원에 개시되어 있는 약제학적 조성물은, 물리-화학적으로 안정하고, 예를 들면, 하기에 나타낸 바와 같이 40℃에서 8주 동안 저장하는 경우에 상기 약제학적 조성물에 포함된 항체의 통합성(integrity)을 유지한다.
제조 물품
다른 양상에서, 상기 기술되어 있는 장애의 치료에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품이 포함된다. 제조 물품은 컨테이너 및 라벨을 포함한다. 적합한 컨테이너로는, 예를 들면, 보틀, 바이알, 시린지, 및 시험관이 포함된다. 컨테이너는 각종 물질, 예를 들면, 유리 또는 플라스틱으로 이루어질 수 있다. 컨테이너는, 병태를 치료하는데 유효한 조성물을 수용하고, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다. 예를 들면, 컨테이너는, 정맥내 용액 백(bag) 또는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개(stopper)를 갖는 바이알일 수 있다. 조성물 중의 활성제는, 사람화된 항-IL-23p19 항체이다. 컨테이너 상의 라벨 또는 컨테이너와 관련된 라벨은, 조성물이, 선택되는 병태의 치료에 사용됨을 나타낸다. 제조 물품은, 약제학적으로 허용되는 완충액, 예를 들면, 포스페이트-완충된 염수, 링거액, 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 컨테이너를 추가로 포함할 수 있다. 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘, 시린지, 및 사용 지침서와 패키지 동봉물을 포함하는, 상업적 관점 또는 사용자 관점에서 바람직할 수 있는 다른 물질들을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명은, 하기 실시예에서 추가로 기술되고, 이 실시예는 본 발명의 범위를 한정하도록 의도되는 것은 아니다.
실시예
실시예 1: 사람화된 항- IL -23 p19 항체의 생산
마우스 리드 항체 6B8은, 6B8의 마우스 가변 도메인 및 사람 불변 IgG1KO 도메인으로 이루어진 키메라 항체로 전환되었다. 마우스 항체 6B8은 상기 본원에서 표 1 및 표 2에 나타낸다. IgG1KO(knock out: 녹 아웃)은, 이펙터 기능, 예를 들면, FcγR 및 보체 결합을 감소시킴으로써 ADCC 및 CDC 활성을 제거하는 2개의 대체 돌연변이(Leu234Ala 및 Leu235Ala)를 갖는다. 마우스와 키메라 항체의 가변 도메인은 동일하다. 키메라 항체는, 항체의 기능을 확인하고 정확한 서열이 얻어졌는지를 확실히 하기 위해서 생성시킨다. 이어서, 항체의 가변 영역은 설계 및 스크리닝 프로세스를 통해 사람화된다. 임의의 주어진 위치에서 사람 또는 마우스 잔기 중 어느 하나가 존재하는 방식으로 사람 및 마우스 잔기가 변하는 경우에 라이브러리가 제작되었다. 이러한 라이브러리는 사람 생식선과 마우스 항체 사이에 상이한 이들 아미노산에 대해 제작되었다. 모 마우스 항체의 기능을 유지하는 클론만이 선택되었다. 항체 6B8에 대한 대표적인 사람화된 가변 영역은 표 5 및 표 6에 나타낸다.
이러한 방식으로, 항체 A, 항체 B, 항체 C, 및 항체 D는, 마우스 항체 6B8로부터 유도된 사람화된 항체였다(사람 IgG1-KO(KO=녹-아웃)/카파 주쇄로 클로닝됨). 항체 A, 항체 B, 항체 C, 및 항체 D는 표 7에 나타낸다.
실시예 2: 재조합체 IL-23 단백질에 대한 항체의 결합
A) 재조합체 사람 IL-23에 결합하는 마우스 항-IL-23p19 항체의 키네틱 및 친화도는 하기에 나타낸다(표 9). 키네틱 및 결합 친화도는, 단일 컬럼 정제에 따른 하이브리도마로부터 생성된 물질을 이용한 Fortebio Octet(Fortebio, Menlo Park, CA)을 이용하여 측정하였다. Octet은 유체 공학 기반 기술이 아니므로, 이러한 방법은 오프-레이트의 정확한 측정을 제공하지 않는다. 몇몇의 경우에, 친화도의 추정값만을 수득할 수 있다.
Figure pct00032
B) 친화도는, 마우스 항체 6B8로부터 유도된 사람화된 항체에 대해 측정하였다. ProteON XPR36(Biorad, Hercules, CA) 및 1:1 결합 모델에 대한 글로벌 피트를 이용하여 측정한 키네틱 결합 데이터는, 1pM 내지 100pM 범위 내의 높은 친화도로 이루어진 p19 및 p40 서브유닛을 공유결합적으로 연결하는 21개 아미노산 링커의 존재 또는 부재 하의 재조합체 IL-23과의 상호작용을 입증하였다(표 10). 항체 6H12(WO 2007/027714에 개시되어 있음), 항체 QF20(WO 2007/024846에 개시되어 있음) 및 항체 C1273(WO 2007/005955에 개시되어 있음)도, 또한, 시험되었다.
Figure pct00033
C) 사이노몰거스 IL-23에 결합하는 항-IL-23p19 항체에 대한 친화도 및 키네틱 데이터는, ProteON XPR36 및 1:1 결합 모델에 대한 글로벌 피트에 대해 측정하였다(표 11). 항체 6H12(WO 2007/027714에 개시되어 있음), 항체 QF20(WO 2007/024846에 개시되어 있음) 및 항체 C1273(WO 2007/005955에 개시되어 있음)도, 또한, 시험되었다.
Figure pct00034
D) 사람 IL-12에 걸친 분자 선택성
항-IL-23p19 항체는, 또한, 사람 IL-23 표면에 거쳐 100nM의 농도로 주사하였다. Fortebio Octet을 이용하여 측정한 이들 항체에 대한 결합 신호는 0이고, 이는, 이들 항체가 사람 IL-23에 선택적으로 결합함을 나타낸다. IL-23에 대한 항-IL-23p19 항체의 결합은, 또한, 50% 사람 혈청의 존재 하에 분석되었고, 높은 특이성을 입증하는 결합 온-레이트에 대한 혈청의 유의한 효과는 관찰되지 않았다.
실시예 3: 사람 IL-23R/Fc에 대한 사람 IL-23 결합의 경쟁 결합 검정
사람 IL-23R-Fc는 바이오센서 표면 상에 포획되었고, 10nM의 사람 IL-23이 주사되었다. 센소그램은 IL-23과 IL-23 수용체 사이의 특이적 결합을 나타낸다(도 2, 상부 트레이스). 이어서, 항체를 10nM의 사람 IL-23과 동시-주사하여, IL-23에 대한 항체 결합이 IL-23과 IL-23 수용체 사이의 상호작용을 저해할 수 있는지를 평가하였다. 본 실시예에서, 항체가 사람 IL-23에 결합하여 상호작용을 저해할 수 있는 경우, 감소된 결합이 관찰되거나 결합이 관찰되지 않을 것이다(도 2, 하단 트레이스). 나타낸 실시예에서, 등가의 몰 농도의 항체 A를 10nM의 재조합체 사람 IL-23과 동시-주사하였다.
실시예 4: 기능성 세포 검정, IL-23 자극된 마우스 비장세포로부터의 IL-17 생산의 저해
항-IL-23p19 항체에 대한 한 기능성 세포 검정은, 마우스 비장으로부터 단리된 단핵 세포로부터의 IL-23 자극된 IL-17 생산을 저해하는 상기 항체의 능력을 측정한다. 사람 재조합체 IL-23 단백질은 마우스 비장세포로부터 IL-17 방출을 자극할 수 있다. 또한, 활성화된 사람 단구성 THP-1 세포의 상청에서 발견된 사람 IL-23의 천연 공급원은, 마우스 단핵 세포로부터 IL-17 생산을 자극하기 위해 사용될 수 있다.
활성화된 THP-1 세포 유래의 사람 재조합체 IL-23 또는 천연 사람 IL-23을 적정된 항-IL-23p19 항체와 예비 항온배양하였다. 이어서, IL-23/항체 조합을 신선하게 단리된 뮤린 비장세포에 첨가하였다. 재조합체 IL-23 단독을 양성 대조군으로서 사용하였다. 배양 2일 후, 세포 상청을 수집하고, ELISA(R&D Systems, Minneapolis, MN)에 의해 IL-17에 대해 검정하였다. 항-IL-23p19 항체에 대한 대표적인 IC50 값은 하기에 나타낸다. 시험된 항체는, 하이브리도마로부터 유도된 마우스 항체(1 내지 19행, 표 1 및 표 2 참조), 키메라 항체(20 내지 23행), 및 항체 A 내지 항체 D이다. 항체 6H12(WO 2007/027714에 개시되어 있음), 항체 QF20(WO 2007/024846에 개시되어 있음), 및 항체 C1273(WO 2007/005955)도, 또한, 시험되었다.
Figure pct00035
Figure pct00036
실시예 5: 사람 활성화된 T 세포 검정에서의 IL-12에 대한 기능적 특이성 시험
항-IL-23p19 항체는, 사람 활성화된 T 세포 검정에서 IL-12의 기능적 저해에 대해 시험되었다. 사람 재조합체 IL-12(1ng/ml)는 5㎍/ml의 항-IL-23p19 항체와 함께 예비 항온배양하였다. 이어서, IL-12/항체 조합은 사람 PHA-유도된 T 세포 블라스트에 첨가하였다. 재조합체 IL-12 단독을 양성 대조군으로서 사용하였다. 항-IL-12p70 항체(Bender MedSystems, Vienna, Austria)를 대조군 저해성 항체로서 사용하였다. 배양 2일 후, 세포 상청을 수집하고, ELISA(R&D Systems)에 의해 IFN-γ에 대해 검정하였다. 샘플을 3중으로 시험하였고, IFN-γ의 평균 pg/ml를 측정하였다. 결과(및 표준 편차)는 하기 표에 나타낸다.
Figure pct00037
실시예 6: 사람 세포주 DB에서의 IL-23 유도된 STAT3 인산화의 저해
사람 세포주 DB(ATCC, Manassas, VA)는, 내인성 IL-23R 복합체(IL-23R 및 IL-12Rβ1)를 통한 IL-23 자극에 반응하고, IL-23 용량 의존 방식으로 STAT3을 인산화시킨다. IL-23 유도된 STAT3 인산화의 항-IL-23p19 항체 저해를 시험하기 위해 검정을 시작하였다. DB 세포를 96 웰 플레이트에 1x10e6 세포/웰로 플레이팅하였다. 시험되는 항체를 순차적으로 희석하였고, 재조합체 사람 IL-23(10ng/ml)과 실온에서 1시간 동안 예비 항온배양하였다. 이어서, 항체/IL-23 혼합물을 세포에 37℃에서 30분 동안 첨가하였다. 4℃에서 10분 동안의 원심분리에 의해 세포를 수거하였고, 이어서, 빙냉 완충액(Cell Signaling Technology, Beverly, MA)에 용해시켰다. 용해물의 일부를 포스포-STAT3 ELISA(Invitrogen) 수행하였다. 항체 부재의 대조군 웰에 비교하여 STAT3 인산화의 백분율 저해로서 항체 IC50 값을 계산하였다. 대표적인 IC50 값을 하기 표에 나타낸다.
Figure pct00038
실시예 7: 마우스 귀에서의 IL -23 유도된 사이토카인 생산의 생체내 모델
마우스에서 생체내 모델을 사용하였다. 재조합체 사람 IL-23을 연이어 4일 동안 마우스 귀의 피부에 주사하여 표피 비후화 및 IL-17 및 IL-22 단백질의 상향-조절을 초래한다. 항-IL-23p19 항체가 이 모델에서 평가되었다. 1mg/kg 또는 5mg/kg 항체의 단일 복강내 주사를 개시 IL-23 주사의 1시간 전에 피부에 투여하였다. 재조합체 사람 IL-23(링커 포함)을 추가의 일 동안 1일 1회 주사하였고, 사이토카인 평가를 위해 조직을 수집하였다. 사이토카인 생산의 저해는 항체들에 대해 입증되었다. 3회의 실험 결과를 하기 표에 나타낸다(실험 1: 1 내지 7행, 실험 2: 8 내지 10행, 실험 3: 11 내지 14행).
Figure pct00039
실시예 8: 사이노몰거스 원숭이에서의 약동학적 연구
3마리의 사이노몰거스 원숭이에게 사람화된 항-IL-23p19 항체를 1.0mg/kg의 용량으로 10분 정맥내 주입에 의해 투여하였다. 혈청 샘플을 6주의 시간 과정에 걸쳐 수집하였고, 유리 항체 농도는 특이적 ELISA를 이용하여 측정하였다. 항체에 대한 혈청 농도-시간 프로파일 및 상응하는 약동학적 매개변수는 하기 표 16에 요약된다.
Figure pct00040
실시예 9: NSO 세포 및 생체물리학적 데이터
NSO 세포의 형질감염 및 안정한 풀의 생성:
형질감염 전에 1% FBS의 존재 하에 NSO 세포를 성장시켰다. 40x10e6 세포를 수집하였고, 20ug의 선형화된 DNA(중쇄 및 경쇄 발현 벡터)와 2% FBS를 함유하는 배지 0.8ml 중에 재현탁시켰고, 이어서, 750V/25uF(Bio-Rad Gene Pulser Xcell)로 세포를 전기천공하기 전에 대략 15분 동안 세포를 빙상에서 항온배양하였다. 37℃ 및 5% CO2에서 대략 48시간 동안 2% FBS를 이용하여 세포를 회수하였고, 이어서, 콜로니 형성까지 14일 내지 21일 동안 G418 및 마이코페놀산을 함유하는 96웰 플레이트에 2x10e5세포/ml로 플레이팅하였다.
콜로니를 갖는 96웰 플레이트로부터의 상청을 ELISA에 의해 스크리닝하였다. ELISA 플레이트를 PBS 중의 1ug/ml의 염소 항-카파(Southern Biotech, Birmingham, AL)로 코팅하였고, 희석된 상청을 항온배양하였고, 이어서, 염소 항-사람 IgG Fc-HRP(Jakson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA)로 검출하였다. 양성 콜로니를 규모 확장(scale up)을 위해 풀링하였다. 항체 생산에 대한 역가는, 제조업자의 프로토콜에 따라 단백질 A 팁을 이용하여 ForteBio에 의해 측정하였다. 항체 A 및 항체 D에 대한 역가는 250 내지 350mg/L였고, 단백질 정제로부터 80% 초과의 회수율, IEX 정제 후 94% 초과의 단량체를 가졌다. 단백질을 20mM 나트륨 시트레이트 및 115mM NaCl을 함유하는 pH 6.0의 최종 완충액 중에 재현탁시켰고, 4개월 이상 동안 4℃에서 안정하고, 이 완충액에서 100mg/ml 이하의 용해도를 갖는다.
Figure pct00041
Figure pct00042
실시예 10: 에피토프 맵핑
수소/중수소 교환 질량 분광 측정(HXMS)을 사용하여, 사람 IL-23p19에 결합하는 항체 A의 에피토프를 맵핑하였다. 이 방법은, D2O와 교환하기 위한 IL-23p19의 아미드 주쇄 수소의 감수성을 측정하였다. 실험은, IL-23 단독 및 항체 A가 첨가된 IL-23을 이용하여 수행하였다. 따라서, 항체 A의 결합으로 인한 교환으로부터 유의한 보호를 나타내는 IL-23p19 서열의 영역이 동정되었다. 당해 방법의 분해능은 펩신 또는 프로테아제 XVIII로의 소화에 의해 생산된 펩타이드에 의해 측정된다. 이들 IL-23p19 유도된 펩타이드는, 표준의 정확한 질량 및 HPLC MS/MS 기술을 사용하는 비교환 샘플을 이용한 추가의 제어 실험에 의해 동정되었다.
재조합체 사람 IL-23을 사용하였다. 단백질 + 항체 샘플에 대해, 50ul의 IL-23(0.8mg/ml)을 10ul의 항체 A(12.7mg/ml)와 실온에서 15분 동안 항온배양하였다. 항체 A/IL-23의 최종 몰비는 1.2:1이었다.
교환을 위해, 5ul의 IL-23 단백질을 50ul 중수소화 완충액(D2O 중의 50mM PBS)에 첨가하였고, 실온에서 100초 동안 항온배양하였다. 50ul의 2M 우레아/0.5M TCEP를 첨가하였고, 실온에서 60초 동안 항온배양하였다. 5ul의 펩신 또는 프로테아제 XVIII(0.1% 포름산 중의 4mg/ml)을 첨가하였고, 샘플을 즉시 4℃로 냉각시켰다.
5분 후, 50ul의 샘플을 하기 조건 하에 Shimadzu HPLC 시스템(SCL10A 제어기 및 2개의 LC10AD 펌프)에 주사하였다:
이동상 A = 99/1/0.1 (물/아세토니트릴/포름산).
이동상 B = 95/5/0.1 (아세토니트릴/물/포름산).
유속 = 100ul/분.
컬럼 = Phenomenex Jupiter C5, 5u, 50x1.0mm.
이동상 라인, 컬럼, 인젝터 루프는 빙욕 내에 존재한다.
구배 = 시간 0 (3%B), 시간 2.2 (3%B), 시간 10.1 (90%B), 시간 12.0 (90%B), 시간 12.1 (3%B).
질량 분광 측정은 하기와 같이 수행하였다:
질량 분광 측정 = Thermo Orbitrap Velos (0900865).
방법:
A. (ID 펩타이드로의) 단편화: 12분의 취득 시간(3분 시작 지연), 해상도 30,000에서의 풀-스캔 FTMS, 7개의 이온 트랩 데이터 의존적 스캔(CID).
B. MS 수행: 12분의 취득 시간(3분 시작 지연), 해상도 60,000에서의 풀-스캔 FTMS.
펩신 및 프로테아제 XVIII 펩타이드는 단편화 데이터 및 프로그램 Proteome Discoverer(Thermoscientific, Waltham, MA)를 이용하여 동정하였다. 동정된 펩타이드를 Xcalibur 소프트웨어(Thermoscientific)를 이용하여 가시적으로 비교하였다(단백질 단독 VS. 항체와 함께 존재하는 단백질). IL-23p19 영역의 이외에서 IL-23 단독 VS. IL-23과 항체 A에 대해, 교환시 유의한 이동이 관찰되지 않았다. 단백질의 p19 부분에 대해서, 프로그램 PepMap(Thermoscientific)을 이용하여 데이터를 분석하였다. 이러한 프로그램은, 교환된 펩타이드에 대한 평균 질량을 계산한다. PepMap 결과를 확인하였고, 유효한 결과가 수득되지 않은 펩타이드들은 마이크로소프트 엑셀의 보조로 계산하였다.
항체 A의 결합으로 인한 교환으로부터 유의한 보호를 나타내는 IL-23 서열의 영역은, 서열번호 181의 아미노산 잔기 108 내지 126 및 서열번호 181의 아미노산 잔기 137 내지 151로서 동정되었다.
실시예 11: 약제학적 조성물
본 발명의 항체에 적합한 제형의 예는 하기에 나타낸다. 하기 제형에 사용된 항체는, 예를 들면, 항체 A, 항체 B, 항체 C, 또는 항체 D이다.
제형 1:
Figure pct00043
제형 1의 pH는 전형적으로 pH 6.0 내지 7.0의 범위 내이고, 예를 들면, pH 6.5이다. 이러한 제형은 정맥내 투여에 특히 적합하다.
사용된 부형제의 분자량(g/mol로의 MW): 2나트륨 석시네이트 6수화물 = 270.14g/mol; 석신산 = 118.09g/mol; 나트륨 클로라이드 = 58.44g/mol.
제형의 삼투질 농도는, Osmomat 030(Gonotec GmbH, Berlin, Germany)을 이용하여 측정시 300 +/- 30mOsmol/kg이다. 제형의 20℃에서의 밀도는, 측정 유닛 DMA 4500(Anton Paar GmbH, Ostfildern-Scharnhausen, Germany)을 이용하여 측정시 대략 1.0089g/㎤이다.
제형 2:
Figure pct00044
제형 2의 pH는 전형적으로 pH 5.5 내지 6.5의 범위 내이고, 예를 들면, 5.5 내지 6.1이고, 예를 들면, pH는 5.8이다. 이러한 제형은 피하 투여에 특히 적합하다.
사용된 부형제의 분자량(g/mol로의 MW):
MW: 석신산(C4H6O4) = 118.09g/mol
MW: 2나트륨 석시네이트 6수화물(C4O4Na2H4 x 6H2O) = 270.14g/mol
MW: 소르비톨 = 182.17g/mol
MW: 폴리소르베이트 20 = 1227.72g/mol
제형의 삼투질 농도는, Osmomat 030(Gonotec GmbH, Berlin, Germany)을 이용하여 측정시 300 +/- 30mOsmol/kg이다. 제형의 20℃에서의 밀도는, 측정 유닛 DMA 4500(Anton Paar GmbH, Ostfildern-Scharnhausen, Germany)을 이용하여 측정시 대략 1.040g/㎤이다.
제형 3:
Figure pct00045
제형 3의 pH는 전형적으로 pH 5.5 내지 6.5, 예를 들면, 5.5 내지 6.1의 범위 내이고, 예를 들면, pH는 5.8이다. 이러한 제형은 피하 투여에 특히 적합하다.
사용된 부형제의 분자량(g/mol로의 MW):
MW: 소르비톨 = 182.17g/mol
MW: 폴리소르베이트 20 = 1227.72g/mol
제형의 삼투질 농도는, Osmomat 030(Gonotec GmbH, Berlin, Germany)을 이용하여 측정시 300 +/- 30mOsmol/kg이다.
실시예 12: 약제학적 조성물의 안정성
약제학적 조성물은, 제형 2 및 제형 3의 경우에, 시린지 내에 8주 동안 40℃에 저장하였다. 제형의 특성은 초기에, 그리고, 40℃에서의 저장 8주 후에 측정하여 하기에 나타낸다.
탁도는, 비탁측정법을 이용하여 측정한 바와 같은 포르마진 비탁측정 유닛(FNU)으로 나타낸다. 단량체 %는, 고성능 크기-배제 크로마토그래피(HP-SEC)에 의해 측정한다.
제형 2 및 제형 3의 저장 안정성:
Figure pct00046
SEQUENCE LISTING <110> BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONAL GMBH <120> ANTI-IL-23P19 ANTIBODIES <130> 09-0597 <150> US 61/642,032 <151> 2012-05-03 <160> 181 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 1 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Glu Tyr Leu His 1 5 10 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Mouse <400> 2 Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Mouse <400> 3 Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 4 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu Tyr 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Mouse <400> 5 Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser 1 5 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 6 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Val Tyr Leu His 1 5 10 <210> 7 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 7 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His 1 5 10 <210> 8 <211> 16 <212> PRT <213> Mouse <400> 8 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Mouse <400> 9 Lys Val Ser Asn Arg 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<211> 321 <212> DNA <213> Mouse <400> 92 gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60 ctttcctgca gggccagtca gagtattagc gactacttat actggtatca acaaaaatca 120 catgagtctc caaggcttct catcaaattt gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180 aggttcactg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcgacag tgtggaacct 240 gatgatgttg gagtcttttt ctgtcaaaat ggtcacagct ttccgttcac gttcggaggg 300 gggaccaagc tggaaataaa a 321 <210> 93 <211> 107 <212> PRT <213> Mouse <400> 93 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asp Ser Val Glu Pro 65 70 75 80 Asp Asp Val Gly Val Phe Phe Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 94 <211> 321 <212> DNA <213> Mouse <400> 94 gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60 ctttcctgca gggccagcca gagtattagc gagtacttac actggtatca acaaaaatca 120 catgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180 aggttcagtg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240 gaagatgttg gagtgtatta ctgtcaaaat ggtcacagct ttccattcac gttcggctcg 300 gggacaaagt tggaaataaa a 321 <210> 95 <211> 107 <212> PRT <213> Mouse <400> 95 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Glu Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 96 <211> 321 <212> DNA <213> Mouse <400> 96 gacattgtga 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gaggacgtgg ccgactactt ctgccaccag tacagcagct acccattcac cttcggcagc 300 ggcaccaagc tggagatcaa g 321 <210> 162 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 162 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Leu 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 163 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 163 gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60 atcacctgca aggccagccg cgacgtggcc atcgccgtgg cctggtacca gcagaagcca 120 ggcaaggtgc caaagctgct gctgttctgg gccagcaccc gccacaccgg cgtgccagac 180 cgcttcagcg gcagcggcag ccgcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240 gaggacctgg ccgactacta ctgccaccag tacagcagct acccattcac cttcggcagc 300 ggcaccaagc tggagatcaa g 321 <210> 164 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 164 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Leu 35 40 45 Phe Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 165 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 165 caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc caggcagcag cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc gaccagacca tccactggat gcgccaggcc 120 ccaggccagg gcctggagtg gatcggctac atctacccac gcgacgacag cccaaagtac 180 aacgagaact tcaagggcaa ggtcaccatc accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240 atggagctga gcagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc catcccagac 300 cgcagcggct acgcctggtt catctactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360 <210> 166 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 166 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Gln 20 25 30 Thr Ile His Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ile Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 167 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 167 caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc caggcagcag cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggctt caccttcacc gaccagacca tccactgggt gcgccaggcc 120 ccaggccagg gcctggagtg gatgggctac atctacccac gcgacgacag cccaaagtac 180 aacgagaact tcaagggcaa ggtcaccctg accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240 atggagctga gcagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc catcccagac 300 cgcagcggct acgcctggtt catctactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360 <210> 168 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 168 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Gln 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala 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acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320 cagaagagcc tctccctgtc tccgggt 1347 <210> 176 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 176 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Gln 20 25 30 Thr Ile His Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ile Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 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gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tcgacaagag agttgagccc 660 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag caccagaagc tgctggggga 720 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780 gaggtcacat gcgtcgtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320 cagaagagcc tctccctgtc 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180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly <210> 179 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 179 gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60 atcacctgca aggccagccg cgacgtggcc atcgccgtgg cctggtacca gcagaagcca 120 ggcaaggtgc caaagctgct gctgttctgg gccagcaccc gccacaccgg cgtgccagac 180 cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240 gaggacctgg ccgactacta ctgccaccag tacagcagct acccattcac cttcggccag 300 ggcaccaagc tggagatcaa gcgtactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 180 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 180 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Leu 35 40 45 Phe Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 181 <211> 189 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 181 Met Leu Gly Ser Arg Ala Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Trp Thr 1 5 10 15 Ala Gln Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln 20 25 30 Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His 35 40 45 Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr 50 55 60 Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln 65 70 75 80 Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly 85 90 95 Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu 100 105 110 Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu 115 120 125 Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr 130 135 140 Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu 145 150 155 160 Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala 165 170 175 Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro 180 185

Claims (30)

  1. 항체를 포함하는 약제학적 조성물로서,
    상기 약제학적 조성물은:
    a) 1 내지 40mg/ml의 상기 항체를 포함하고, 5 내지 50mM의 석시네이트 완충액 및 50 내지 200mM의 나트륨 클로라이드를 추가로 포함하며, 여기서, 상기 약제학적 조성물의 pH는 pH 6.0 내지 7.0의 범위 내이거나;
    b) 70 내지 100mg/ml의 상기 항체를 포함하고, 100 내지 300mM의 소르비톨을 추가로 포함하며, 여기서, 상기 약제학적 조성물의 pH는 pH 5.5 내지 6.5의 범위 내인, 항체를 포함하는 약제학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 b)의 약제학적 조성물이 25mM 이하의 석시네이트 완충액을 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이, 2.5 내지 30mg/ml의 상기 항체를 포함하고, 10 내지 40mM의 석시네이트 완충액 및 75 내지 175mM의 나트륨 클로라이드를 추가로 포함하며, 여기서, 상기 약제학적 조성물의 pH는 6.0 내지 7.0의 범위 내인, 약제학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이, 80 내지 95mg/ml의 상기 항체를 포함하고, 150 내지 300mM의 소르비톨 및 10mM 이하의 석시네이트 완충액을 추가로 포함하며, 여기서, 상기 약제학적 조성물의 pH는 pH 5.5 내지 6.5의 범위 내인, 약제학적 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가, 서열번호 174 또는 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 176 또는 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항-IL-23p19 항체인, 약제학적 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 항체가, 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 약제학적 조성물.
  7. 제5항에 있어서, 상기 항체가, 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 약제학적 조성물.
  8. 제5항에 있어서, 상기 항체가, 서열번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 약제학적 조성물.
  9. 제5항에 있어서, 상기 항체가, 서열번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 약제학적 조성물.
  10. IL-23-관련 장애를 갖는 대상체의 치료 방법으로서,
    상기 방법은, 상기 대상체에게, 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 조성물을 투여함을 포함하고, 여기서, 상기 항체는 사람 IL-23에 결합하는, IL-23-관련 장애를 갖는 대상체의 치료 방법.
  11. 염증성 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 대사 장애 또는 암의 치료 방법으로서,
    상기 방법은, 상기 치료를 필요로 하는 대상체에게 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 조성물의 유효량을 투여함을 포함하는, 염증성 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 대사 장애 또는 암의 치료 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 질환이 건선, 염증성 장 질환, 건선성 관절염, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 또는 척추관절염인, 방법.
  13. 제11항에 있어서, 상기 질환이 플라크 건선, 만성 플라크 거선, 또는 중간 정도 내지 중증의 만성 플라크 건선인, 방법.
  14. 제11항에 있어서, 상기 질환이 수장 농포성 건선(palmar pustular psoriasis), 적상 건선(guttate psoriasis), 역위 건선(inverse psoriasis), 농포성 건선, 또는 홍피성 건선인, 방법.
  15. 제11항에 있어서, 상기 질환이 크론 질환 또는 궤양성 결장염인, 방법.
  16. 제11항에 있어서, 상기 질환이 강직성 척추염, 비-방사능성 축성 척추관절염 또는 말초 척추관절염인, 방법.
  17. 제11항에 있어서, 상기 질환이 원판상 루푸스, 말라리아, 악성 흑색종, 무형성 빈혈, 헌팅턴 질환, 수장족저 농포증, IgA 신염, ANCA-관련 혈관염, 공막염 또는 패혈증인, 방법.
  18. 제10항 내지 제17항 중 어느 한 항에 따른 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 조성물.
  19. 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 투여함을 포함하는, 질환의 치료 방법으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은:
    a) 서열번호 19의 아미노산 서열CDR1 -L); 서열번호 20의 아미노산 서열(CDR2 -L); 및 서열번호 21의 아미노산 서열(CDR3 -L)을 포함하는, 경쇄 가변 영역; 및
    b) 서열번호 63, 66, 67, 또는 68의 아미노산 서열(CDR1 -H); 서열번호 64의 아미노산 서열(CDR2 -H); 및 서열번호 65의 아미노산 서열(CDR3 -H)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고,
    여기서, 상기 질환은:
    i) 플라크 건선, 만성 플라크 건선, 또는 중간 정도 내지 중증의 만성 플라크 건선이거나;
    ii) 수장 농포성 건선, 적상 건선, 역위 건선, 농포성 건선, 또는 홍피성 건선이거나;
    iii) 비-방사능성 축성 척추관절염 또는 말초 척추관절염이거나;
    iv) 원판상 루푸스, 말라리아, 악성 흑색종, 무형성 빈혈, 헌팅턴 질환, 수장족저 농포증, IgA 신염, ANCA-관련 혈관염, 공막염 또는 패혈증인,
    질환의 치료 방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 서열번호 158, 160, 162, 또는 164 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열번호 166, 168, 170, 또는 172 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  21. 제19항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  22. 제19항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  23. 제19항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  24. 제19항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  25. 제19항에 있어서, 상기 항체가, 서열번호 174 또는 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 176 또는 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 방법.
  26. 제19항에 있어서, 상기 항체가, 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 방법.
  27. 제19항에 있어서, 상기 항체가, 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 방법.
  28. 제19항에 있어서, 상기 항체가, 서열번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 방법.
  29. 제19항에 있어서, 상기 항체가, 서열번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 방법.
  30. 제19항에 따른 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, 제19항 내지 제29항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
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