KR20140056227A

KR20140056227A - 인간 유두종바이러스와 관련된 암의 치료를 위한 화합물

Info

Publication number: KR20140056227A
Application number: KR1020147002054A
Authority: KR
Inventors: 스와티 아자이 피라말; 무랄리드하라 파디가루; 비나 알 아가르왈; 간드할리 아쉬윈 데쉬판드
Original assignee: 피라말 엔터프라이지즈 리미티드
Priority date: 2011-06-24
Filing date: 2012-06-22
Publication date: 2014-05-09
Also published as: TW201302735A; AU2012274990A1; WO2012176163A2; US10098869B2; US20170189378A1; US20200289465A1; RU2014102089A; AR086741A1; US20140142159A1; MX2013014950A; WO2012176163A3; JP2014517063A; EP2723449A2; US11160789B2; US20220023263A1; US20180369200A1; BR112013033311A2; US10688079B2; CN103648588A; CA2840017A1

Abstract

본 발명은 인간 유두종바이러스와 관련된 암의 치료에 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체로 표시되는, 플라본 유도체로 치환된 피롤리딘에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 인간 유두종바이러스와 관련된 암의 치료에 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.

Description

인간 유두종바이러스와 관련된 암의 치료를 위한 화합물{COMPOUNDS FOR THE TREATMENT OF CANCERS ASSOCIATED WITH HUNAN PAPILLOMAVIRUS}

본 발명은, 인간 유두종바이러스(HPV)와 관련된 암의 치료에 사용하기 위한, (본원에서 기술되는 바와 같은) 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체로 표시되는, 플라본 유도체로 치환된 피롤리딘에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 인간 유두종바이러스와 관련된 암의 치료에 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.

인간 유두종바이러스(HPV)는 편평 상피세포를 감염시키는 원형의, 외피 비보유(non-enveloped) dsDNA 바이러스이다. HPV는 통상적으로 피부를 뚫고 신체로 들어간 다음, 피부층의 세포를 감염시킨다. HPV는 피부간 접촉을 통해 전염된다. HPV 감염은, 감염된 사람의 상처부위(cut)를 통해서나 또는 성관계를 통해 이루어질 수 있다. 이로는, 감염된 부위의 피부에 키스를 하거나 또는 만지고 관계를 맺는 것을 포함한다. 생식기가 HPV에 감염된 임부는 분만 중에 영아에게 이 바이러스를 전파할 수도 있다.

HPV는 120여 종 이상의 관련 바이러스의 그룹으로서, 이 중 33%는 생식관을 감염시키는 것으로 알려져 있다 (Microbiology and Molecular Biology Reviews, 2004, 68 (2):362-372). 소정의 유형의 인간 유두종바이러스는 정상 세포를 비정상 세포로 형질전환시킬 수 있으며, 이러한 비정상 세포는 더 진행되어 암을 형성할 수 있다. 이에, 이들 바이러스는 고위험군과 저위험군으로 분류된다. 고위험 HPV는 암과 관련이 있다. 생식기 HPV 감염은 매우 흔한 질병으로서, 항문생식기 암을 초래할 수 있다. 고위험 HPV에 지속적으로 감염이 되는 것은 자궁경부암의 1차 원인이다. HPV 감염은 또한, 항문암, 외음부암, 질암 및 음경암을 야기하기도 한다 (Int . J. Cancer , 2006, 118(12): 3030-44). 고위험 아형(subtype)은 HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 및 68로서, 가장 흔한 것은 HPV 16, 18, 31, 33 및 45이다. 또한, 몇 가지 유형의 HPV, 특히 16형은 두경부암의 한 형태인 HPV-양성 구강 인두암과 관련이 있는 것으로 밝혀진 바 있다 (N. Engl . J. Med., 2007, 356(19):1944-56).

고위험 HPV는 2가지 종양 단백질인 E6 및 E7을 생성하며, 이들은 바이러스 복제에 필수적이다. 인간에서의 HPV 감염 동안, HPV E6 단백질은, 종양 억제자 p53에 결합하고 유비퀴틴-매개의 경로에 의한 분해를 촉진하여, 세포자멸사를 수행하는 세포의 능력을 약화시킨다. HPV E7 단백질은 망막아종 단백질(pRb)에 결합하고 이를 분해하여, pRb가 전사 인자 E2F를 저해하는 것을 방지함으로써, 세포 주기의 조절을 방해한다.

세계적으로 전체 암 중 대략 5%가 HPV에 의한 것으로 추정된 바 있다 (Int . J. Cancer , 2006, 118(12):3030-3044).　

자궁경부암은 세계적으로 여성들이 걸리는 암 중 두번째로 가장 흔한 암이다. 사례들 중 약 86%가 개발도상국에서 발병하고 있다. 자궁경부암은 여성들이 걸리는 암 중 13%를 차지한다 (World: Human Pappilomavirus and related cancers, summary report, November 2010).

현재, 지속적인 인간 유두종바이러스(HPV) 감염은 본질적으로 모든 자궁경부암의 원인으로서 인지되고 있다. 미국 암 학회(American Cancer Society)에 따르면, 2010년에, 미국 여성들 중 약 12,000명이 이러한 유형의 암을 진단받을 것이며, 이로 인해 4,000명이 넘게 죽을 것이다. 세계적으로 매년 약 50만명의 여성들이 자궁경부암을 진단받고 있으며, 해마다 25만명이 생존한다고 주장되고 있다.

외음부암 및 질암은 약 3% 내지 약 5%이며, 모든 부인암 및 음경암 중 1% 내지 2%가 각각 미국에서의 전체 암 중 약 0.2%를 차지한다. 이들 암의 발병이 빈번하지 않지만, 외음부암, 질암 및 음경암은 성생활에 상당한 영향을 미치므로, 중요한 질병으로서 존재한다. 단순한 병인 요인(etiologic factor)은 존재하지 않지만, HPV 감염과 강한 연관성이 존재한다. HPV는 음경암 중 약 40%에 대한 원인으로 생각되고 있다. 많은 연구들에서, HPV 16형 및 18형이 음경암종에 존재하는 것으로 나타난 바 있다 (Hum . Pathol ., 1991, 22:908-913). HPV는 또한, 질암 중 약 65%의 원인이 되며 (International Journal of Cancer, 2009, 124(7):1626-1636) 외음부암 중 50%의 원인이 되고 (Vaccine,　2006, 24(suppl 3): S11-S25), HPV-16은 두 가지 암에 있어서 HPV 양성 사례의 대부분을 차지한다 (Obstet . Gynecol ., 2009, 113(4):917-24).

HPV 감염은 또한, 항문암과 관련이 있다. 미국에서 매년 HPV-관련 항문암의 새로운 사례 약 1,600가지가 여성에서 진단되고 있으며, 약 900가지가 남성에서 진단되고 있는 것으로 추정된다. 일반적으로, HPV는 항문암 중 약 90%의 원인이 되는 것으로 생각된다 (International Journal of Cancer, 2009, 124(7):1626-1636). 주목할만하게도, HPV 16은 대부분의 항문암의 원인인 것으로 보여진다. HPV 16에 관한 연구에 따르면, 조사된 항문암 표본 중 84%에서 HPV 16이 검출되었다 (New England Journal of Medicine , 1997, 337(19):1350-8).

두경부암은 전형적으로, 두경부 편평세포암종으로 지칭된다. 두경부암은 미국에서 전체 암 중 약 3%를 차지한다 (A Cancer Journal for Clinicians,　2010, 60(5): 277-300). 두경부암은 이들이 시작되는 영역에 의해 규정된다. 이들은 전형적으로, 구강암, 침샘암, 부비강암, 비강암, 인두암, 비인두암, 구강 인두암, 하인두(hypopharynx)암, 후두암, 및 목의 상부에 존재하는 림프절의 암으로 분류된다. 구강 (혀의 앞쪽 2/3, 잇몸, 협측 점막(buccal mucosa), 혀 아래의 구강저(floor of the mouth under the tongue), 경구개(hard palate), 및 지치 뒤편의 좁은 영역(the small area behind the wisdom teeth))의 암 및 구강 인두 (연구개(soft palate), 설근부(the base of the tongue), 및 편도선(tonsil))의 암은 HPV에 의해 발병하는 암 중 가장 흔한 유형이다. 연구들에서, 구강 인두암 중 약 60%가 HPV에 의해 야기되는 것으로 나타나 있으며 (Cancer Epidemiology , Biomarkers and Prevention,　2005, 14(2):467-475), 특히 HPV16은 일부 두경부 편평세포암종(HNSCC)의 유발 요인이다.

HPV는 또한, 폐암종과 관련이 있다. 발표된 논문들에 따르면, 폐암에서 HPV의 발병률(incidence)은 24.5%였다 (Lung Cancer, 2009, 65: 13-18). 중국에서 수행된 연구는, 폐 편평세포암종의 위험률이 HPV-음성 집단과 비교해 HPV-양성 집단에서 3.5배 더 높았으며, HPV-16 음성보다 HPV-16 양성 환자에서 16.9배 더 높았다고 발표하였다 (Oncol . Rep ., 2009, 21(6):1627-32).

인간 유두종바이러스에 대한 역할은 또한, 다양한 기타 악성 종양들, 특히 세계적으로 피부가 흰 집단에서 가장 흔한 악성 종양인 비-흑색종 피부암에서 제안된 바 있다. 피부암이 치명적인 경우는 드물며, 전체 암 사망 중 1% 미만을 차지한다. 그러나, 공중 보건에 미치는 영향은 상당하다. 인간의 피부암에서 HPV의 관련성은, 드물게 유전적인 질병인 사마귀표피형성이상(epidermodysplasia verruciformis) 환자에서 최초로 나타났다 (Journal of National Cancer Institute Monographs, 2003, No. 31).

HPV는 또한, 결막의 상피내 종양(intraepithelial neoplasia) (0% 내지 80%), 및 결막, 눈꺼풀 및 누낭(lacrimal sac)의 침습성 암종(invasive carcinoma) 중 62% 내지 100%와 관련이 있다 (IARC Monographs, 64:130). HPV와 결막유두종(conjunctival papilloma) 간에 강한 연관성이 존재한다. HPV 6/11형은 결막유두종에서 가장 흔한 HPV 유형이다 (Br . J. Ophthalmol ., 2001, 85:785-787).

HPV 6, 11 및 13은 전형적으로, 저위험군으로 라벨링되는데, 이들 유형으로 감염이 되면 종양유발 능력이 낮으며 통상적으로 (기술적으로는 첨규콘딜롬(condylomata acuminata)으로 알려져 있는) 생식기 사마귀 및 자궁경부의 경도 이형성(mild dysplasia)과 같은 양성 병변을 형성하며, HPV 6 및 11은 또한, 결막유두종과 관련이 있기 때문이다.

생식기 HPV 감염은 그 발병률이 높고 악성 질환과 관련성이 있음에도, HPV 감염에 대한 효과적인 항바이러스 치료법은 존재하지 않는다. Gardasil^? 및 Cervarix^?은 가장 보편적인 고위험군 HPV 중 2종 (HPV 16 및 18)에 대해 현재 시판되는 백신 2종이다. 그러나, 예방을 위한 종류만 존재할 뿐, 현존하는 HPV와 관련된 암을 치료하지는 못한다. 더욱이, 고비용, 사회적인 인정과 관련된 문제점, 및 백신이 공급될 수 있는 의료보험제도의 한계는, 특히 HPV-관련 항문생식기 암 (항문 및 생식기와 관련된 암)이 가장 흔하게 발견되는 개발도상국에서 이러한 백신을 여성에게 사용할 수 있는 가능성을 제한한다. 결과적으로, HPV와 관련된 암을 예방 및/또는 치료하는, 보다 저비용이면서 더욱 보편적으로 이용가능한 다른 방법들을 모색할 필요가 있다.

본 발명자들은 놀랍게도, 플라본 유도체로 치환된 피롤리딘이 HPV와 관련된 암에 효과적임을 발견하였다.

본원에서 기술되는 발명은 인간 유두종바이러스와 관련된 암의 치료를 위한, (본원에서 기술되는 바와 같은) 화학식 (I)로 표시되는 플라본 유도체로 치환된 피롤리딘을 제공한다.

본 발명의 일 측면에 따라, 인간 유두종바이러스와 관련된 암의 치료를 위한, 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체의 용도를 제공한다.

본 발명의 다른 측면에 따라, HPV와 관련된 암의 치료를 위한, 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체의 용도를 제공하며, 상기 암은 항문암, 외음부암, 질암, 음경암, 자궁경부암, 구강 인두암 및 구강암과 같은 두경부암, 폐암, 비-흑색종 피부암 또는 결막암이다.

본 발명의 보다 다른 측면에 따라, 자궁경부암의 치료를 위한, 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체의 용도를 제공한다.

본 발명의 다른 측면에 따라, 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 인간 유두종바이러스와 관련된 암의 치료 방법을 제공한다.

본 발명의 다른 측면에 따라, 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, HPV와 관련된 암의 치료 방법을 제공하며, 상기 암은 항문암, 외음부암, 질암, 음경암, 자궁경부암, 구강 인두암 및 구강암과 같은 두경부암, 폐암, 비-흑색종 피부암 또는 결막암으로부터 선택된다.

본 발명의 보다 다른 측면에 따라, 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 자궁경부암의 치료 방법을 제공한다.

본 발명의 다른 측면에 따라, 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 치료적 유효량으로 포함하는, HPV와 관련된 암 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 측면에 따라, HPV와 관련된 암의 치료에 유용한, 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 포함하는 약제의 제조 방법을 제공한다.

본 발명의 다른 측면들 및 이용가능성에 관한 추가적인 범위는 하기의 상세한 설명으로부터 확실해질 것이다.

도 1a는 화합물 A 및 화합물 B로 처리한 세포에서, p53이 상당히 상향조절되었음을 보여주는, 웨스턴 블롯의 사본(reproduction)을 나타낸 것이다.
도 1b는 화합물 A 및 화합물 B로 처리한 SiHa 세포에서 E6 및 E7의 발현이 상당히 하향조절되었음을 보여주는, 웨스턴 블롯의 사본을 나타낸 것이다.
도 2는 전사 단계에서, 화합물 A 및 화합물 B로 처리한 SiHa 및 HeLa 세포에서 E6 및 E7의 발현이 상당히 하향조절되었음을 보여주는, RT-PCR의 사본을 나타낸 것이다.
도 3a는 SiHa 세포에서 p53 - EGFP의 핵 전좌를 나타낸 그래프이다.
도 3b는 HeLa 세포에서 p53 - EGFP의 핵 전좌를 나타낸 그래프이다.
도 4는 화합물 A를 투여한 후, SiHa 이종이식 동물에서 종양 성장 프로파일을 나타낸 그래프이다.
도 5는 화합물 B를 투여한 후, SiHa 이종이식 동물에서 종양 성장 프로파일을 나타낸 그래프이다.

전후에서 사용되는 일반적인 용어들은 바람직하게는, 본 발명의 맥락 안에서 다르게 지시되지 않는 한, 하기의 의미들을 가진다. 이에, 본 발명의 맥락에서 사용되는 일반적인 용어들의 정의는 이하에서 제공된다:

단수형 ("a," "an," 및 "the")은 문맥상 다르게 명확하게 나타내지 않는 한, 복수형을 포함한다.

"~으로 치환" 또는 "~으로 치환된"은, 이러한 치환이, 치환된 원자 및 치환기의 허용된 원자가에 따라 이루어지며, 뿐만 아니라 재배열, 고리화, 삭제 등과 같은 변형이 쉽게 이루어지지 않는 안정한 화합물을 나타내는 조건 하에 수행됨을 내포하여 포함하는 것으로 이해해야 할 것이다.

용어 "C₁-C₄알킬"은, 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지쇄를 비롯하여, 포화된 지방족 기의 라디칼을 지칭한다. 알킬기의 예로는, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 아이소프로필, 아이소부틸, sec-부틸, tert-부틸 등을 포함하나, 이로 한정되지 않는다.

용어 "C₁-C₄ 알콕시"는 산소 결합을 통해 분자의 나머지 부분에 결합된 전술한 바와 같은 알킬기를 지칭한다. 알콕시의 예로는, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, tert-부톡시 등을 포함하나, 이로 한정되지 않는다.

용어 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 및 요오드를 지칭한다.

본원에서, 용어 "하이드록시" 또는 "하이드록실"은 -OH 기를 지칭한다.

본원에서, 용어 "치료적 유효량"은, 이러한 치료가 필요한 대상에게 투여되는 경우, HPV에 의해 매개되는 질환이 경감, 치료 또는 완화되도록 인간 유두종바이러스(HPV)의 활성을 저해하기에 충분한, 화학식 (I)로 표시되는 화합물로 표시되는 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체의 양을 지칭한다.

본원에서, 용어 "HPV" 또는 "인간 유두종바이러스"는 포유류를 감염시킬 수 있는 바이러스 중 유두종바이러스 패밀리의 구성원을 지칭한다. 이 용어는 다르게 나타내지 않는 한, 고위험군 HPV 및 저위험군 HPV를 둘 다 포함한다.

본원에서, 용어 "대상"은 HPV에 의해 매개되는 질환의 치료가 필요한 동물, 바람직하게는 포유류, 가장 바람직하게는 인간을 지칭한다. 대상이라는 이 용어는 본 발명의 맥락에서 환자라는 용어와 호환해서 사용될 수 있다.

본원에서, 용어 "포유류"는 인간, 뿐만 아니라 인간 유두종바이러스에 의해 감염되기 쉬운 인간이 아닌 포유류를 포함하는 것으로 의도된다. 인간이 아닌 포유류로는, 소, 돼지, 말, 개, 고양이, 토끼, 래트 및 마우스와 같은 가축류, 및 비-가축류를 포함하나, 이로 한정되지 않는다.

대상, 바람직하게는 포유류, 보다 바람직하게는 인간에서 HPV와 관련된 암에 관하여 "~을 치료하다" 또는 "치료" 또는 "치료되는"이라는 용어는, (i) 암의 저해, 즉, 암의 발병을 억제하는 것; (ii) 암의 퇴화(regression)의 감소 또는 암의 진행을 서행시키는 것; (iii) 암의 완화, 즉, 암과 관련된 증상의 중증도를 감소시키는 것, (iv) 암과 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도 경감시키는 것을 포함한다.

본원에서, "약학적으로 허용가능한"이라는 용어는, 담체, 희석제, 부형제, 및/또는 염이 제형의 다른 성분들과 융화성이어야 하며, 이의 수용자(recipient)에게 유해하지 않아야 함을 의미한다. "약학적으로 허용가능한"은 또한, 조성물 또는 투약 형태가 타당한 의학적 판단의 범위 내에 있으며, 동물이나 인간에게 사용하기에 적절하며, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 기타 문제점이나 합병증을 동반하지 않으며, 합리적인 유익/유해 비율(benefit/risk ratio)에 비례함을 의미한다.

아울러, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물의 모든 용매화물, 예를 들어, 수화물, 및 알코올, 에테르, 에틸 아세테이트, 다이옥산, 다이메틸포름아마이드, 또는 아세톤과 같은 저급 알킬 케톤과 같은 다른 결정화 용매를 이용해 형성되는 용매화물, 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 본 발명의 특정한 화합물은 비용매화된 형태 뿐만 아니라, 수화된 형태를 비롯해 용매화된 형태로 존재할 수 있다. 본 발명의 특정한 화합물은 다중 결정질 또는 비정질 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 모든 물리적 형태는 본 발명에서 고려하는 용도를 위한 등가물이며, 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 의도된다.

용어 "p53"은 종양 억제자로서 작용하는 핵 인단백질을 지칭한다.

용어 "pRb" 또는 "망막아종 단백질"은 종양 억제자 단백질을 지칭하며, 이는 많은 유형의 암에서 그 기능이 고장나 있다.

용어 "하향조절"은 지시된 활성 또는 발현을 부분적으로 또는 전반적으로 감소시키는 것을 지칭한다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "종양 단백질 E6 및 E7의 하향조절"은 E6 및 E7의 발현 수준을 각각 낮추는 것을 지칭한다. 상기 수준은 웨스턴 블롯 분석법을 비롯하여 당해 기술분야의 적절한 방법으로 측정될 수 있다.

용어 "p53의 상향조절"은 종양 억제자 단백질 53의 발현 수준을 높이는 것을 지칭한다.

용어 "노화"는 세포가 세포분열 능력을 상실하는 단계를 지칭한다.

용어 "세포자멸사"는 자연스런 프로그래밍된 세포 사멸 과정을 지칭한다. 이는 자가-파괴의 과정으로, 세포는 자기 자신을 죽이기 위해 특수화된 세포 기구(cellular machinery)를 이용한다. 세포는 막 결합성 입자로 분해된 다음, 식세포작용에 의해 제거된다. 세포자멸사는, 후생동물이 세포수를 조절하고, 동물의 생존을 위협하는 세포를 제거할 수 있게 하는 메커니즘이다.

용어 "전사"는 DNA 서열에 상보적인 RNA 복사체를 만드는 과정을 지칭한다.

용어 "세포 주기 억제"는 정상적인 기 (G1, S, G2, M) 중 하나의 기 동안에 세포 주기를 통한 진행을 중지시키는 조절 과정을 지칭한다.

항암 활성이 있는 화합물은 세포 증식을 저해할 수 있거나 또는 세포 사멸을 유도할 수 있는 성분을 지칭한다. 본 발명의 조성물에 사용하기에 적절한 항암제의 비-한정적인 예로는, (i) 탁산(taxane) 및 파클리탁셀(paclitaxel)과 같은 미세소관 분열 작용제, (ii) 이마티니브(imatinib), 에를로티니브(erlotinib) 및 BAY-43-9006과 같은 키나제 저해제, (iii) 라파마이신(rapamycin)과 같은 mTOR 저해제, (iv) 카르보플라틴(carboplatin), 시스플라틴(cisplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 에토포사이드(etoposide) 및 다카르바진(Dacarbazine)과 같은 항신생물제, 및 (xvi) 토포테칸(topotecan) 및 이리노테칸(irinotecan)과 같은 토포아이소머라제 저해제, (vi) 시타라빈(cytarabine), 플루오로우라실(flurouracil), 겜시타빈(gemcitabine), 토포테칸, 하이드록시우레아(Hidroxyurea), 티오구아닌(Thioguanine), 메토트렉세이트(Methotrexate)와 같은 대사 길항물질, (vii) 세포독성제, 독소루비신(doxorubicin), 블레오마이신(bleomycin) 및 닥티노마이신(dactinomycin)과 같은 항생제를 포함한다.

본 발명의 일 측면에 따라, HPV와 관련된 암의 치료에 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 제공한다:

(상기 식에서, Ar은 페닐기로서, 할로겐, 니트로, 시아노, C₁-C₄-알킬, 트라이플루오로메틸, 하이드록실 또는 C₁-C₄-알콕시로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 동일 또는 상이한 치환기에 의해 비치환 또는 치환됨).

본 발명의 일 측면에 따라, HPV와 관련된 암의 치료에 사용하기 위한, 하기 화학식 (IA)로 표시되는 바와 같이, 화학식 (I)의 화합물의 (+)-trans 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 제공한다:

본 발명의 다른 측면에 따라, HPV와 관련된 암의 치료에 사용하기 위한, Ar이 염소, 브롬, 불소, 요오드, C₁-C₄-알킬 또는 트라이플루오로메틸로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 동일 또는 상이한 치환기에 의해 치환된 페닐기인, 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 제공한다.

본 발명의 다른 측면에 따라, HPV와 관련된 암의 치료에 사용하기 위한, Ar이 염소, 브롬, 불소, 또는 요오드로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 동일 또는 상이한 치환기에 의해 치환된 페닐기인, 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 제공한다.

본 발명의 다른 측면에 따라, HPV와 관련된 암의 치료에 사용하기 위한, Ar이 염소에 의해 치환된 페닐기인, 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 제공한다.

본 발명의 다른 측면에 따라, HPV와 관련된 암의 치료에 사용하기 위한, Ar이 염소 및 트라이플루오로메틸에 의해 치환된 페닐기인, 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 제공한다.

당해 기술분야의 당업자는, 화학식 (I)의 화합물이 카이랄 중심을 2개 이상 포함하며, 따라서, 2가지의 서로 다른 광학 이성질체 (즉, (+) 거울상이성질체 또는 (-) 거울상이성질체), 2가지의 서로 다른 기하이성질체 (cis 및 trans) 및 4가지의 서로 다른 부분입체이성질체로 존재한다는 것을 알 것이다. 이러한 거울상이성질체, 기하이성질체, 부분입체이성질체, 및 라세미 혼합물을 비롯한 이들의 혼합물은 모두 본 발명의 범위에 포함된다. 화학식 (I)의 화합물의 거울상이성질체는, 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함된 PCT 출원 공개 제WO2004004632 호, 제WO2007148158 호 및 제WO2008007169 호에 개시된 방법에 의해 수득될 수 있거나, 또는 화학식 (I)의 화합물의 거울상이성질체는 카이랄 HPLC 및 효소적 분할(enzymatic resolution)과 같이 당해 기술분야에 잘 공지된 방법에 의해서 수득될 수도 있다. 다른 예로, 화학식 (I)의 화합물의 거울상이성질체는 광학 활성 출발 물질을 사용해 합성될 수 있다.

약학적으로 허용가능한 염의 형태일 수 있는 화학식 (I)의 화합물의 제조, 및 상기 화합물을 포함하며 경구, 직장 및/또는 비경구 투여에 적절한 약학 조성물의 제조는 일반적으로 PCT 출원 공개 제WO2004004632 호에 개시되어 있으며, 이는 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함되어 있다.

전술한 바와 같이, 화학식 (I)의 화합물은 이들의 염 형태로 사용될 수 있다. 화학식 (I)의 화합물의 바람직한 염으로는, 아세테이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파테이트, 벤조에이트, 벤젠설포네이트, 바이설페이트, 보레이트, 신나메이트, 시트레이트, 에탄설포네이트, 푸마레이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글리콜레이트, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로플루오라이드, 케토글루타레이트, 락테이트, 말레에이트, 말로네이트, 메실레이트, 니트레이트, 옥살레이트, 팔모에이트, 퍼클로레이트, 포스페이트, 피크레이트, 살리실레이트, 숙시네이트, 설파메이트, 설페이트, 타르트레이트, 토실레이트, 트라이플루오로아세트산 염, 및 당해 기술분야의 당업자에게 공지된 기타 산 부가염을 포함한다.

따라서, 본 발명의 일 측면에서, HPV와 관련된 암의 치료에 사용하기 위한 화학식 (IA)의 화합물은 (+)-trans-2-(2-클로로-페닐)-5,7-다이하이드록시-8-(2-하이드록시-메틸-1-메틸-피롤리딘-3-일)-크로멘-4-온 하이드로클로라이드 (본원에서 화합물 A로 지칭됨) 또는 (+)-trans-3-[2[(2-클로로-4-트라이플루오로메틸-페닐)-5,7-다이하이드록시-8-(2-하이드록시메틸-1-메틸-피롤리딘-3-일)-크로멘-4-온 하이드로클로라이드 (본원에서 화합물 B로 지칭됨)로부터 선택된다. 화합물 A 및 화합물 B는 WO2007148158에 개시되어 있으며, 구체적으로는 각각 실시예 10 및 실시예 44로 개시되어 있다.

HPV와 관련된 암의 치료에 사용하기 위한 화학식 (IA)의 화합물은 (+)-trans-2-(2-클로로-페닐)-5,7-다이하이드록시-8-(2-하이드록시-메틸-1-메틸-피롤리딘-3-일)-크로멘-4-온 하이드로클로라이드 (화합물 A)일 수 있다.

HPV와 관련된 암의 치료에 사용하기 위한 화학식 (IA)의 화합물은 (+)-trans-3-[2[(2-클로로-4-트라이플루오로메틸-페닐)-5,7-다이하이드록시-8-(2-하이드록시메틸-1-메틸-피롤리딘-3-일)-크로멘-4-온 하이드로클로라이드 (화합물 B)일 수 있다.

HPV와 관련된 암은 항문암, 외음부암, 질암, 음경암, 자궁경부암, 구강 인두암 및 구강암과 같은 두경부암, 폐암, 비-흑색종 피부암 및 결막암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체는 자궁경부암의 치료에 사용될 수 있다.

화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 인간 유두종바이러스와 관련된 암의 치료 방법이 기술되어 있다.

대상에서, 항문암, 외음부암, 질암, 음경암, 자궁경부암, 구강 인두암 및 구강암과 같은 두경부암, 폐암, 비-흑색종 피부암 및 결막암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 HPV와 관련된 암은 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 치료될 수 있다.

자궁경부암은 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 치료될 수 있다.

본 발명은 HPV에 감염된 세포를 화학식 (I)의 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하는, HPV와 관련된 암을 저해하는 방법을 제공한다.

본 발명의 일 측면에 따라, HPV에 감염된 세포를 화학식 (I)의 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하는, HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 및 68로부터 선택되는 고위험 HPV를 저해하는 방법을 제공한다.

일 실시 양태에서, HPV에 감염된 세포를 화학식 (I)의 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하는, HPV 16, 18 및 31을 저해하는 방법을 제공한다.

본 발명에 따라, HPV 상의 종양 단백질은 하향조절될 수 있다. 이 종양 단백질은 HPV 상에 존재하는 종양 단백질 E6 및 E7일 수 있다. 하향조절은, 화학식 (I)의 화합물을 치료적 유효량으로 대상에게 투여함으로써, 수행될 수 있다. HPV 상의 종양 단백질 E6 및 E7을 저해하는 것은, 세포 주기 억제, 노화 또는 세포자멸사를 유도하는 방법이다.

HPV 상의 종양 단백질 E6 및 E7은 전사 수준에서 하향조절될 수 있다.

인단백질 p53은 화학식 (I)의 화합물을 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 활성화될 수 있다.

본 발명의 보다 다른 실시 양태에 따라, 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, HPV 16과 관련된 암을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명의 다른 측면에 따라, 화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체를 포함하며, HPV와 관련된 암의 치료에 유용한 약제의 제조 방법을 제공한다.

화학식 (I)의 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체, 또는 부분입체이성질체를 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 치료적 유효량으로 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 이 조성물은 부가적인 약학 활성 화합물을 1종 이상 포함할 수 있으며, 상기 부가적인 약학 활성 화합물은 항암 활성을 가진다. 약학적으로 활성인 화합물은 블레오마이신(bleomycin), 시스플라틴(cispaltin), 토포테칸 하이드로클로라이드(topotecan hydrochloride), 이미퀴모드(imiquimod), 포도필록스(podofilox), 트라이클로로아세트산 등으로부터 선택될 수 있지만, 이로 한정되지 않는다.

약학 제제는 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 약 1 중량% 내지 99 중량%, 예를 들어, 약 5 중량% 내지 70 중량%, 또는 약 5 중량% 내지 약 30 중량%로 포함할 수 있다. 약학 제제 내 화학식 (I)의 활성 성분 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 양은 약 1 mg 내지 1000 mg이다.

화학식 (I)의 화합물은 경구, 질내, 외음질(vulvovaginally), 직장, 국소, 또는 (정맥내, 피하, 근육내, 혈관내 또는 투입을 비롯하여) 비경구로 투여될 수 있다. 화학식 (I)의 화합물은 치료될 증상에 적절한 경로로 투여되어야 할 수 있다. 바람직한 경로는 환자의 증상에 따라 다를 수 있는 것으로 이해해야 할 것이다.

약학적 용도로 의도되는 조성물은 약학 조성물의 제조에 대해 당해 기술분야에 공지된 방법, 예를 들어, Remington - The Science and Practice of Pharmacy (21 ^st Edition ) (2005), Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (11 ^th Edition ) (2006) 및 Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (9 ^th Edition ), edited by Allen et al., Lippincott Williams & Wilkins, (2011), Solid - State Chemistry of Drugs (2 ^nd Edition )(1999)에 따라 제조될 수 있으며, 이들은 각각 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함되어 있다.

본원에서 기술하는 조성물은 정제 또는 캡슐과 같이 경구 투여에 적절한 형태; 멸균액, 현탁액 또는 에멀젼과 같이 (정맥내, 피하, 근육내, 혈관내 또는 투입을 비롯한) 비경구 주사에 적절한 형태; 연고, 크림, 젤, 로션 또는 콜로디온(collodion)과 같이 국소 투여에 적절한 형태; 좌제, 탐폰, 질 좌약, 크림, 젤, 폼(foam) 또는 질내 고리(vaginal ring)와 같이 직장, 질내 또는 외음질 투여에 적절한 형태일 수 있다. 상기 조성물은 외임부와 같은 피부 표면의 외표면 및/또는 피부의 주변 영역으로 국소 투여될 수 있다. 그 외에도 또는 다른 예로, 상기 조성물은 질내 투여될 수 있다.

경구 사용 시, 화학식 (I)의 화합물은 예를 들어, 정제 또는 캡슐, 분말, 분산성 과립, 또는 카시에(cachet) 형태로, 또는 수용액 또는 현탁액으로서 투여될 수 있다. 경구용 정제의 경우, 보편적으로 사용되는 담체로는, 락토스, 옥수수 전분, 마그네슘 카르보네이트, 탈크, 및 당을 포함하며, 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제가 보편적으로 첨가된다. 캡슐 형태로 경구 투여 시, 유용한 담체로는 락토스, 옥수수 전분, 마그네슘 카르보네이트, 탈크 및 당을 포함한다.

근육내, 복강내, 피하 및 정맥내 용도의 경우, 화학식 (I)의 화합물의 멸균액이 통상 적용되며, 상기 용액의 pH는 적절하게 조정되고 완충되어야 한다.

연고, 크림의 경우, 화학식 (I)의 화합물은 수-중-유 또는 유-중-수 베이스에서 제형된다. 질내 크림은 질강(vaginal cavity) 내 점막 표면과 접촉하도록 투여될 수 있다.

직장 또는 질내 사용 시, 화학식 (I)의 화합물은 좌제의 형태로 투여될 수 있다. 좌제는 화학식 (I)의 화합물, 적절한 좌제 베이스, 및 방부제, 항산화제, 유화제 등과 같은 첨가제로 이루어진다. 적절한 좌제 베이스로는, 천연 및 합성 트라이글리세라이드 또는 파라핀 탄화수소를 포함한다. 질내 사용 시, 화학식 (I)의 화합물은 질내 크림의 형태로 투여될 수도 있다.

경구 전달용 조성물은 정제, 마름모꼴 알약(lozenge), 수성 또는 유성 현탁액, 과립, 분말, 에멀젼, 캡슐, 시럽, 또는 엘릭셔(elixir)의 형태일 수 있다. 경구 투여되는 조성물은, 프룩토스, 아스파탐 또는 사카린과 같은 감미제; 페퍼민트, 윈터그린 오일(oil of wintergreen), 또는 체리와 같은 풍미제; 착색제; 및 방부제와 같은 선택적인 제제를 하나 이상 포함하여, 약학적으로 미감이 양호한 제제를 제공할 수 있다. 삼투적으로 능동 수송되는 화합물(osmotically active driving compound)을 둘러싸는 선택 투과성인 막이 또한, 본 발명의 화합물의 경구 투여에 적절하다. 경구 조성물은, 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 사카린, 셀룰로스, 마그네슘 카르보네이트 등과 같은 표준 비히클을 포함할 수 있다. 이러한 비히클은 바람직하게는 약학 등급의 비히클이다.

또한, 약학 조성물에 포함되는 본 발명의 화합물의 효과는 적절한 제형에 의해 지연되거나 또는 연장될 수 있다. 예를 들어, 화합물을 서서히 녹는 펠렛 형태로 제조하여 정제 또는 캡슐에 투입할 수 있다. 이러한 기술은 용해 속도가 몇 가지 서로 다른 펠렛을 제조하고, 캡슐을 상기 펠렛들의 혼합물로 충전함으로써 개선될 수 있다. 정제 또는 캡슐은, 예측가능한 기간 동안 용해를 방해하는 필름으로 코팅될 수 있다. 심지어 비경구 제제도, 화합물을 유성 또는 에멀젼화된 비히클에 용해시키거나 또는 현탁하여, 상기 화합물이 혈청에서 느리게 분산되게 함으로써, 오랫동안 작용하도록 제조될 수 있다.

직장내 투여 또는 질내 투여용 조성물은 좌제이다. 좌제는 직장 또는 질 삽입용 고형체로서, 체온에서 용융 또는 연화되어 1종 이상의 약물학적 또는 치료적 활성 성분들을 방출한다. 직장 좌제에 이용되는 약학적으로 허용가능한 성분들은 베이스 또는 비히클 및 용융점을 높이는 제제들이다. 베이스의 예로는, 코코아 버터 (테오브로마 오일(theobroma oil)), 글리세린-젤라틴, 카르보왁스 (폴리옥시에틸렌 글리콜), 및 지방산의 모노글리세라이드, 다이글리세라이드 및 트라이글리세라이드의 적절한 혼합물을 포함한다. 여러 가지 베이스의 조합이 사용될 수 있다. 좌제의 용융점을 높이는 제제로는, 경랍(spermaceti) 및 왁스를 포함한다. 좌제는 압축 방법 또는 성형에 의해 제조될 수 있다.

화학식 (I)의 화합물의 유효 투여량은 적어도, 치료될 증상의 성질, 전달 방식, 및 약학 제형에 따라 다르며, 통상적인 용량 증가 연구(dose escalation study)를 이용해 임상의가 결정할 것이다. 투여량은 하루에 체중 kg 당 약 0.1 mg 내지 약 100 mg; 특히 하루에 체중 kg 당 약 0.1 mg 내지 약 10 mg; 보다 특히, 하루에 체중 kg 당 약 0.1 mg 내지 약 5 mg일 것으로 예상할 수 있다.

화학식 (I)의 화합물은, 원용에 의해 그 전체가 본 명세서에 포함되어 있는 PCT 특허 공개 제WO2004004632 호 및 PCT 특허 공개 제WO2007148158 호에 개시된 방법에 따라 제조될 수 있다.

화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 일반적인 제조 방법은 하기 단계를 포함한다:

(a) 화학식 VIA의 중간산물 화합물의 분할된 거울상이성질체적으로 순수한 (-)-trans 거울상이성질체를 루이스 산 촉매의 존재 하에 아세트산 무수물로 처리하여,

화학식 VIIA의 분할된 아세틸화된 화합물을 수득하는 단계:

;

(b) 화학식 VIIA의 분할된 아세틸화된 화합물을, 염기 및 용매의 존재 하에 화학식 ArCOOH의 산 또는 화학식 ArCOCl의 산 클로라이드 또는 화학식 (ArCO)₂O의 산 무수물 또는 화학식 ArCOOCH₃의 에스테르와 반응시켜, 화학식 VIIIA의 분할된 화합물을 수득하는 단계 (여기서, Ar은 화학식 (I)의 화합물에 관해 전술한 바와 동일함):

;

(c) 화학식 VIIIA의 분할된 화합물을 적합한 용매 중 염기로 처리하여, 화학식 IXA의 상응하는 분할된 β-다이케톤 화합물을 수득하는 단계:

(여기서, Ar은 전술한 바와 동일함);

(d) 화학식 IXA의 분할된 β-다이케톤 화합물을 염산과 같은 산으로 처리하여, 화학식 XA의 상응하는 고리화된 화합물을 수득하는 단계:

;

(e) 화학식 XA의 화합물을 탈알킬화제와 함께 120℃ 내지 180℃의 온도에서 가열함으로써 탈알킬화시켜, 화학식 (I)의 화합물의 (+)-trans 거울상이성질체를 수득하고, 선택적으로는 대상 화합물을 이의 약학적으로 허용가능한 염으로 전환하는 단계.

상기 (a) 단계에 이용되는 루이스 산 촉매는 BF₃ _, Et₂O, 아연 클로라이드, 알루미늄 클로라이드 및 티타늄 클로라이드로부터 선택될 수 있다.

(b) 단계에 이용되는 염기는 트라이에틸아민, 피리딘, 및 DCC-DMAP 조합 (N, N'-다이사이클로헥실 카르보다이이미드 및 4-다이메틸아미노피리딘의 조합)으로부터 선택될 수 있다.

당해 기술분야의 당업자는, 화학식 VIIIA의 화합물을 화학식 IXA의 상응하는 β-다이케톤 화합물로 재배열하는 것이 베이커-벤카타라만 재배열(Baker -Venkataraman rearrangement)로 알려져 있음을 알 것이다 (J. Chem . Soc., 1933, 1381 및 Curr . Sci ., 1933, 4, 214).

(c) 단계에 사용되는 염기는 리튬 헥사메틸 다이실라자이드, 소듐 헥사메틸다이실라자이드, 포타슘 헥사메틸다이실라자이드, 소듐 하이드라이드 및 포타슘 하이드라이드로부터 선택될 수 있다. 바람직한 염기는 리튬 헥사메틸 다이실라자이드이다.

화학식 IXA의 화합물의 탈알킬화를 위해 (e) 단계에 사용되는 탈알킬화제는 피리딘 하이드로클로라이드, 보론 트라이브로마이드, 보론 트라이플루오라이드 에테레이트 및 알루미늄 트라이클로라이드로부터 선택될 수 있다. 바람직한 탈알킬화제는 피리딘 하이드로클로라이드이다.

화학식 VIA의 출발 화합물의 제조는, 1-메틸-4-피페리돈을 빙초산 중 1,3,5-트라이메톡시벤젠의 용액과 반응시켜 1-메틸-4-(2,4,6-트라이메톡시페닐)-1,2,3,6-테트라하이드로피리딘을 수득하고, 이를 보론 트라이플루오라이드 다이에틸 에테레이트, 소듐 보로하이드라이드 및 테트라하이드로푸란과 반응시켜 1-메틸-4-(2,4,6-트라이메톡시페닐)피페리딘-3-올을 수득하는 것을 포함한다. 1-메틸-4-(2,4,6-트라이메톡시페닐)피페리딘-3-올을 화학식 VIA의 화합물로 전환하는 것은, 트라이에틸아민, 피리딘, 포타슘 카르보네이트 또는 소듐 카르보네이트와 같은 산소 친핵체의 존재 하에, p-톨루엔설포닐클로라이드, 메탄설포닐클로라이드, 트리플산 무수물 또는 포스포러스 펜타클로라이드와 같은 적절한 시약으로 처리함으로써, 화합물인 1-메틸-4-(2,4,6-트라이메톡시페닐) 피페리딘-3-올의 피페리딘 고리에 존재하는 하이드록실기를 토실, 메실, 트리플레이트 또는 할라이드와 같은 이탈기로 전환하고, 이어서 아이소프로판올, 에탄올 또는 프로판올과 같은 알코올 용매에서 소듐 아세테이트 또는 포타슘 아세테이트와 같은 산소 친핵체의 존재 하에 고리 축소반응시키는 것을 포함한다.

본 발명은, 반대로 명시되는 부분을 제외하고는, 다양한 대안적인 변형 및 단계의 순서를 가정할 수 있는 것으로 이해해야 한다.

더욱이, 실행 실시예가 아닌 곳에서, 또는 다르게 지시되는 곳에서, 예를 들어, 상세한 설명 및 청구항에서 사용되는 성분들의 양을 표현하는 모든 숫자는 모든 경우에서, "약"이라는 용어에 의해 변형을 받는 것으로 이해해야 한다.

즉, 다르게 지시되지 않는 한, 하기 상세한 설명 및 첨부된 청구항에 나타낸 수치는 어림값으로서, 본 발명에 의해 수득하고자 하는 원하는 특성에 따라 다를 수 있다. 적어도, 그리고 청구항의 범위에 대해 등가의 원칙의 적용을 한정하려는 시도가 아니라면, 각각의 수치는 적어도 보고된 유의한 숫자의 수치 면에서 이해되어야 하며, 통상적인 라운딩 기술(rounding techique)을 적용하여 이해되어야 한다.

당해 기술분야의 당업자는, 본 발명의 범위 및 사상 내에서 여러 가지 변화를 줄 수 있음을 알 것이다. 이에, 본 발명은 하기 비-한정적인 실시예를 참조로 더 상세히 기술될 것이다. 하기 실시예는 본 발명을 추가적으로 예시하는 것이지만, 본 발명의 범위를 한정하려는 것으로 간주되어서는 안 된다.

실시예

하기 실시예 및 다른 곳에서, 약어는 하기의 의미를 가진다:

실시예 1

A) (+)-trans-2-(2-클로로페닐)-5,7-다이하이드록시-8-(2-하이드록시메틸-1-메틸-피롤리딘-3-일)-크로멘-4-온 하이드로클로라이드 (화합물 A)의 제조

용융된 피리딘 하이드로클로라이드 (4.1 g, 35.6 mmol)를 (+)-trans-2-(2-클로로-페닐)-8-(2-하이드록시메틸-1-메틸-피롤리딘-3-일)-5,7-다이메톡시-크로멘-4-온 (0.4 g, 0.9 mmol)에 첨가하고, 180℃에서 1.5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, MeOH (10 mL)로 희석시키고, Na₂CO₃를 이용해 pH 10으로 염기성화하였다. 상기 혼합물을 여과하고, 유기층을 농축시켰다. 잔류물을 물 (5 mL)에 현탁하고, 30분 동안 교반하고, 여과한 다음, 건조하여, 화합물인 (+)-trans-2-(2-클로로-페닐)-5,7-다이하이드록시-8-(2-하이드록시메틸-1-메틸-피롤리딘-3-일)-크로멘-4-온을 수득하였다.

수율: 0.25 g (70%);

IR (KBr): 3422, 3135, 1664, 1623, 1559 cm^-1;

1H NMR (CDCl₃, 300MHz): δ 7.56 (d, 1H), 7.36 (m, 3H), 6.36 (s, 1H), 6.20 (s, 1H), 4.02 (m, 1H), 3.70 (m, 2H), 3.15 (m, 2H), 2.88 (m, 1H), 2.58 (s, 3H), 2.35 (m, 1H), 1.88 (m, 1H); MS (ES+): m/z 402 (M+1);

분석: C₂₁H₂₀ClNO₅; C, 62.24 (62.71); H, 5.07 (4.97); N, 3.60 (3.48); Cl, 9.01 (8.83).

상기와 같이 수득한 화합물 (0.2 g, 0.48 mmol)을 IPA (5 mL)에 현탁하고, 3.5% HCl (25 mL)을 첨가하였다. 현탁액을 가열하여, 맑은 용액을 수득하였다. 상기 용액을 냉각시키고, 여과하여, 화합물인 (+)-trans-2-(2-클로로페닐)-5,7-다이하이드록시-8-(2-하이드록시메틸-1-메틸-피롤리딘-3-일)크로멘-4-온 하이드로클로라이드를 수득하였다.

수율: 0.21 g (97%); mp: 188 - 192℃; [α] D25 = + 21.3° (c = 0. 2, 메탄올);

1H NMR (CD₃OD, 300MHz): δ 7.80 (d, 1H), 7.60 (m, 3H), 6.53 (s, 1H), 6.37 (s, 1H), 4.23 (m, 1H), 3.89 (m, 2H), 3.63 (m, 1H), 3.59 (dd, 1H), 3.38 (m, 1H), 2.90 (s, 3H), 2.45 (m, 1H), 2.35 (m, 1H); MS (ES+): m/z 402 (M +1)( 유리 염기(free base)).

이 화합물을 카이랄 HPLC로 처리하였다. 카이랄 HPLC는 컬럼 Chiralcel OD-H (250 x 4.6 mm) 및 용매계 헥산:에탄올 (92:08)을 TFA (0.4%)와 함께 사용하여 수행하였다. 그 결과는 264 nm에서 1 mL/분의 용매 유속으로 기록하였다. 카이랄 HPLC는, 화합물인 (+)-trans-2-(2-클로로-페닐)-5,7-다이하이드록시-8-(2-하이드록시-메틸-1-메틸-피롤리딘-3-일)-크로멘-4-온 하이드로클로라이드를 100% e.e로 나타내었다.

B) (+)-trans-2-(2-클로로-4-트라이플루오로메틸-페닐)-5,7-다이하이드록시-8-(2-하이드록시메틸-1-메틸-피롤리딘-3-일)-크로멘-4-온 하이드로클로라이드 (화합물 B)의 제조

화합물, (+)-trans-2-(2-클로로-4-트라이플루오로메틸페닐)-8-(2-하이드록시메틸-1-메틸 피롤리딘-3-일)-5,7-다이메톡시-크로멘-4-온 (0.25 g, 0.5 mmol), 피리딘 하이드로클로라이드 (0.25 g, 2.16 mmol) 및 촉매량의 퀴놀린의 혼합물을 180℃에서 2.5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 메탄올 (25 mL)로 희석시키고, 고체 Na₂CO₃를 이용해 pH 10으로 염기성화하였다. 상기 혼합물을 여과하고, 메탄올로 세정하였다. 유기층을 농축시키고, 잔류물을 클로로포름 중 4.5% MeOH 및 0.1% 암모니아를 용리제로 사용해 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 화합물, (+)-trans-2-(2-클로로-4-트라이플루오로메틸페닐)-5,7-다이하이드록시-8-(2-하이드록시-메틸-1-메틸피롤리딘-3-일)-크로멘-4-온을 황색 고체로서 수득하였다.

수율: 0.15 g (63.7%);

¹H NMR (CDCl₃, 300MHz): δ 7.99 (m, 2H), 7.83 (d, 1H), 6.65 (s, 1H), 6.41 (s, 1H), 4.24 (m, 1H), 3.90 (m, 2H), 3.70 (m, 1H), 3.60 (m, 1H), 3.41 (m, 1H), 2.99 (s, 3H), 2.54 (m, 1H), 2.28 (m, 1H); MS (ES+): m/z 470 (M+1).

상기와 같이 수득한 화합물 (0.1 g, 0.2 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 현탁하고, 에테레알(ethereal) HCl로 처리한 후, 유기 용매를 증발시켜, 화합물, (+)-trans-2-(2-클로로-4-트라이플루오로메틸-페닐)-5,7-다이하이드록시-8-(2-하이드록시메틸-1-메틸-피롤리딘-3-일)-크로멘-4-온 하이드로클로라이드를 수득하였다.

수율: 0.1 g (92.8%);

1H NMR (CDCl₃, 300MHz): δ 8.02 (d, 2H), 7.83 (d, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.41 (s, 1H), 4.23 (m, 1H), 3.73 (m, 2H), 3.68 (m, 1H), 3.51 (m, 1H), 3.39 (m, 1H), 2.99 (s, 3H), 2.54 (m, 1H), 2.31 (m, 1H).

시험관내 연구

재료 및 방법: 화합물 A 및 화합물 B의 평가를 위해 HPV 게놈에 대해 양성인 2가지 자궁경부암 세포주인 SiHa 및 HeLa (ATCC)를 사용하였다. 형광 단백질 EGFP와 융합된 p53 단백질을 발현하는 플라스미드 벡터를, 리포펙타민 (Invitrogen, CA, USA)을 사용해 상기 세포주에 형질감염시켰다. 형질감염 후 48시간째에, 상기 세포를 10% FBS 및 800 ㎍/mL Geneticin (Gibco BRL Life Technologies, Inc)을 보충한 DMEM (Sigma Aldrich, 카탈로그 번호 D5546)에서 30일 내지 45일 동안 유지시켰다. 안정하게 발현하는 세포를 증식시키고(expand), 형광 현미경 하에 융합 구축물이 존재하는지 조사하였다. 형질감염 후 24시간째에, 상기 세포를 24시간 동안 화합물 A 및 화합물 B로 개별적으로 처리하였다 (이후, 처리된 세포로 지칭됨). 세포를 수집하고, 웨스턴 블롯 및 RT-PCR에 의해 E6, E7, p53의 상태를 분석하는 데 사용하였다. 화합물 A 및 화합물 B로 처리하지 않은 세포 (이하 미처리 세포로 지칭됨)를 대조군으로 사용하였다. HPV 음성 C33A 세포를 음성 대조군으로 사용하였다.

신선한 배지 및 배양 배지라는 용어는 DMEM (카탈로그 번호 D5546)을 지칭한다.

실시예 2: 웨스턴 블롯에 의한 E6, E7, p53의 상태 분석

웨스턴 블롯을 위한 전세포(whole cell) 추출물을 제조하기 위해, 처리된 세포를 파쇄 완충액 (50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 1% NP-40, 40 mM NaF, 10 mM NaCl, 10 mM Na₃VO₄, 1 mM 페닐메틸설포닐 플루오라이드, 및 10 mM 다이티오트레이톨, 및 레우펩틴(leupeptin) 및 아프로티닌(aprotinin) 각각 1 ㎍/ml)에서 파쇄하였다. 세포 파쇄물 (50 ㎍)을 SDS-PAGE에 의해 분리하고, 분리된 단백질 (E6, E7 및 p53)을 Bio-Rad 전기-이동 장치를 사용해 습식 트랜스퍼 방법(wet transfer method)으로 폴리비닐리덴 다이플루오라이드 막(PVDF)으로 옮겼다. 0.2% Tween-20을 포함하는 Tris 완충화된 식염수 중 10% 비-지방 밀크로 블라킹한 후, 상기 막을 1차 항체와 함께, 이어서 HRP-공액된 2차 항체와 함께 인큐베이션하였다. 3, 3'-다이 아미노 벤지딘(DAB) 방법에 의해 단백질을 시각화하였다. 유사한 절차를 미처리 세포에서도 수행하였다.

웨스턴 블롯 수행 시, 하기 항체들을 지시된 희석비로 사용하였다.

1차 항체

2차 항체

결과: 화합물 A 및 화합물 B로 처리한 세포는 SiHa 및 HeLa 세포 모두에서 p53 단백질의 발현을 용량 의존적 방식으로 증가시킴을 관찰하였다. 그러나, 미처리 세포에서는 발현이 관찰되지 않았다. SiHa 세포에서, E6의 발현은 50 ㎍/mL의 농도에서 2가지 화합물 모두에 의해 하향조절되었다. 유사하게는, 대조군과 비교해, 25 ㎍/mL의 화합물 A로 처리한 세포에서 E7이 완전히 하향조절되어 나타났으며, 25 ㎍/mL의 화합물 B로 처리한 세포에서도 E7이 완전히 하향조절되어 나타났다 (도 1a 및 도 1b).

실시예 3: RT-PCR에 의한 E6, E7, p53의 상태 분석

전사 수준에서의 E6 및 E7 유전자의 발현 상태를 역전사효소 PCR (RT-PCR)에 의해 검출하였다. Qiagen AllPrep DNA/RNA Mini Kit (Cat. No.80204)를 사용해 처리 세포 및 미처리 세포에서 RNA를 분리하였다. RNA의 무결성(RNA integrity)은 아가로스 겔 전기영동 후에 자외선 하에 시각화하여 체크하였다. RNA의 함량 및 순도는 Nano Drop (Thermo Scientific)으로 분석하였다. RNA 500 ng을 0.1 ㎍/㎕의 Oligo dT (Promega), MMLV-RT, dNTPs, RNA guard 및 RT 완충액 (Promega)을 사용해 cDNA로 전환하고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 3분 동안 가열하여 반응을 종료시킨 후, E6 및 E7 유전자를 PCR 증폭시키는 데 사용하였다. PCR은 하기와 같이 수행하였다.

프라이머의 서열은 하기와 같다.

결과: RT-PCR 정량화에서, 50 ㎍/mL의 화합물 A 또는 화합물 B로 처리한 SiHa 및 HeLa 세포 모두에서 E6 및 E7 둘 다에 대한 전사체가 상당히 저해된 것으로 나타났다. β-액틴을 하우스 키핑 유전자(house keeping gene)로 사용하여, RT-PCR 분석법에서 데이터를 정규화하였다. 유전자 특이적 PCR의 특이성은 E6 및 E7 유전자에 대해 음성인 C33A 세포를 사용해 측정하였다 (도 2).

실시예 4: p53 핵 전좌 분석법

재료 및 방법: HPV 게놈에 대해 양성인 2가지 자궁경부암 세포주인 SiHa 및 HeLa (ATCC)를 사용하였다. p53-EGFP를 포함하는 발현 벡터를, 리포펙타민 (Invitrogen, CA, USA)을 사용해 상기 세포주에 형질감염시켰다. 형질감염 후 48시간째에, 상기 세포를 10% FBS 및 800 ㎍/mL Geneticin (Gibco BRL Life Technologies, Inc)을 보충한 DMEM (Sigma Aldrich, 카탈로그 번호 D5546)에서 30일 내지 45일 동안 유지시켰다. 안정하게 발현하는 세포를 p53 핵 전좌 분석법에 사용하였다.

생물학적 연구: 안정하게 발현하는 세포를 96웰 이미징 플레이트 (Becton Dickinson, USA)에 접종하고, 37℃의 습도조절된 CO₂ 인큐베이터에서 48시간 동안 증식시켰다. 세포의 핵은 필수적인 형광 핵 염료인 Hoechst 22334 (0.5 ㎍/ mL)를 사용해 5분 동안 염색한 다음, 신선한 배지로 교환하였다. 스탁 용액 50 mg/mL을 DMSO에서 제조하고, 농도가 2 ㎍/mL 내지 50 ㎍/mL가 되게, 5% FBS를 포함하는 배양 배지에서 추가로 희석한 것을 제조하였다. 세포를 서로 다른 농도 (2 ㎍/mL 내지 50 ㎍/mL)의 화합물 A 및 화합물 B로 개별적으로 처리하였다. 20x 대물렌즈를 사용하는 패스웨이 바이오 이미저(pathway Bio imager) (BD, USA)를 이용해 12시간마다 영상을 촬영하였다. 핵 채널(nuclear channel)을 토대로 상기 세포를 분할(segment)하고, 핵 - EGFP에 양성인 세포의 수를 계산하여, 활성의 점수를 매겼다. 다르게는, CCD 카메라 Retiga Exi 및 NIS 엘리먼트 소프트웨어가 장착된 Nikon Ti 인버티드 형광 현미경을 이용해 상기 세포의 영상을 촬영하였다. 밝은 부분의 영상도 수집하였다.

결과: EGFP와 결합된 p53 단백질의 핵 전좌에 대한 현미경 영상에서, 화합물 A 및 화합물 B의 첨가로 인해 HeLa 및 SiHa 세포 모두에서 EGFP-p53 단백질의 핵 전좌가 증가하였다. 아울러, 25 ㎍/mL 및 50 ㎍/mL 농도의 화합물 A 뿐만 아니라 화합물 B에서, 처리 후 12시간째에 핵 전좌가 시작하여, 24시간까지 증가한 것도 알게 되었다. 서로 다른 약물 농도에서, 각 약물에 대해 p53 EGFP 핵 양성인 세포의%를 보여주는 대표적인 도면이 나타나 있다 (도 3A 및 도 3B).

실시예 5: 노화 분석법

이 분석법은, 화합물로 처리한 세포에서 노화와 관련된 β-갈락토시다제 염색을 검출하여 노화 상태를 체크하기 위해 수행하였다.

재료 및 방법: HPV 게놈에 대해 양성인 2가지 자궁경부암 세포주인 SiHa 및 HeLa (ATCC)를 사용하였다. p53-EGFP를 포함하는 발현 벡터를, 리포펙타민 (Invitrogen, CA, USA)을 사용해 상기 세포주에 형질감염시켰다. 형질감염 후 48시간째에, 상기 세포를 10% FBS 및 800 ㎍/mL Geneticin (Gibco BRL Life Technologies, Inc)을 보충한 DMEM (Sigma Aldrich, 카탈로그 번호 D5546)에서 30일 내지 45일 동안 유지시켰다. 안정하게 발현하는 세포를 노화 분석법에 사용하였다.

생물학적 연구: 안정하게 발현하는 세포를 화합물 A 및 화합물 B로 개별적으로 처리하고, 3% 포름알데하이드에서 5분 동안 고정한 다음, 세정하고, 37℃에서 (40 mM 시트르산 (pH 6.5), 5 mM 포타슘 페로시아나이드, 5 mM 포타슘 페리시아나이드, 150 mM NaCl, 및 2 mM MgCl₂를 포함하는 용액에서 용해시켜서 제조한) 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴-β-D-갈락토피라노사이드 용액 (1 mg/ml)과 함께 인큐베이션하였다. 37℃에서 밤새 인큐베이션한 후, 조직 또는 세포를 현미경으로 시각화하였다. 세포기질에서 푸른색으로 진하게 염색된 부분은 상기 세포들에서 노화와 유사한 특징들이 유도되었음을 나타내었다.

실시예 6: 생체내 분석법

모든 실험은 인도, 뭄바이, 고레고안(Goregoan, Mumbai, India) 소재의 Piramal Healthcare Limited에서, 동물 실험에 관한 관리 및 감독을 목적으로 하는 위원회(Committee for the Purpose of Control and Supervision of Experiments on Animals, CPCSEA)의 가이드라인을 따르고, 동물 실험 윤리 위원회 (Institutional Animal Ethics Committee, IAEC)의 승인을 받아 수행하였다.

HPV와 관련된 암의 치료에 대해 본 발명의 화합물이 가지는 생체내 효능은 SiHa (HPV 16 양성 자궁경부암) 세포주를 사용해 연구하였다.

SiHa 인간 자궁경부암 이종이식 마우스 모델

사용된 동물: 4주 내지 6주령이고, 몸무게가 22 g 내지 25 g이며, FOXn1(Nu) 수컷 마우스에 대해 동종성인 누드 Nu/J (Harlan Laboratories, US)를 사용하였다. 동물은, 온도가 22℃ 내지 25℃이고 습도가 55% 내지 75%로 유지되는 특정한 병원균-무함유 조건 하에, 동물 격리실에서 12시간 명/12시간 암 주기로 양육하였다. 실험을 시작하기 전 7일 동안 마우스를 순응시켰다. 동물은 층류 후드(laminar flow hood) 안에서 취급하였다. 음식 및 물은 오토클레이브하였다.

누드 마우스에서 피하 이종이식 종양의 형성

1 단계: 누드 마우스에 주입할 단일-세포 현탁액의 제조

흡착성인 SiHa 세포 (SiHa 세포주 - ATCC - HBT 35)는 트립신-EDTA 용액을 사용해 수집하고, 현탁액을 800 rpm에서 5분 동안 원심분리하였다. 상층액을 제거하고, 세포 펠렛을 1 mL 혈청-무함유 MEM 배지에 재현탁하였다. 1:100 희석비를 이용해, 세포의 수를 수득하였다. 상기 세포를 희석시켜, 현탁액 0.2 mL 당 세포 5 x 10⁶개를 수득하였다.

2 단계: 누드 마우스에서 피하 이종이식 종양의 형성

종양 세포를 주입하는 날에, 1 단계의 세포 현탁액을 층류 후드 안에서 얼음에 보관하였다. 각각의 누드 마우스의 우측 옆구리에 세포 현탁액 0.2 mL을 피하 주입하였다. 5일 후, 주입한 부위 근처로 종양이 만져질 정도로 자랐는지 상기 동물들을 관찰하였다.

화합물의 보관 조건 및 투여량 제조

화합물 A: 3.5 mg/mL; 비히클: 수중에서 제조된 덱스트로스 (5%).

토포테칸 하이드로클로라이드 (표준으로 사용됨): 0.2 mg/mL; 비히클: 메틸 셀룰로스 (0.25%).

화합물 B: 20 mg/mL; 비히클: 메틸 셀룰로스 (0.25%).

시스플라틴 (표준으로 사용됨): 0.6 mg/mL; 비히클: 메틸 셀룰로스 (0.25%).

표준을 포함하는 화합물은 모두 4℃ 내지 8℃에 보관하였다.

투약

누드 마우스는, 오토클레이브된 허스크(husk)를 밑에 깐 케이지 (필터-탑 케이지(filter-top cage))에, 케이지 당 8마리를 한 그룹으로 해서 넣고, 먹이 및 물은 마음대로 섭취할 수 있게 하였다. 동물들은 표준 가이드라인에 따라 취급하였다. 종양 크기의 부피가 약 100 mm³ 정도가 되었을 때, 처치를 시작하였다. 종양이 생긴 마우스를 하기의 처리군으로 무작위로 나누었다 (n=8):

i) 제1 군: 종양이 생겼으며, 비히클이 투여되는 마우스.

ii) 제2 군: 종양이 생겼으며, 35 mg/kg의 화합물 A가 하루에 한 번 복강내 투여되는 마우스.

iii) 제3 군: 종양이 생겼으며, 2 mg/kg의 토포테칸 (표준)이 단일 투여량으로 복강내 투여되는 마우스.

iv) 제4 군: 종양이 생겼으며, 200 mg/kg의 화합물 B가 하루에 한 번 경구 투여되는 마우스.

v) 제5 군: 종양이 생겼으며, 6 mg/kg의 시스플라틴 (표준)이 단일 투여량으로 복강내 투여되는 마우스.

처치

제1 군, 제2 군 및 제4 군의 누드 마우스는 1-6일, 및 12-17일에 처치하였다. 제3 군 및 제5 군의 마우스는 1일째에 처치하였다. 23일째에, 모든 군의 마우스를 안락사시키고, 추가적인 분석을 위해 샘플을 수집하였다.

상기 군 모두에 투여되는 부피는 10 mL/kg이었다.

관찰 및 측정

처치 중, 하기 파라미터를 관찰하였다:

1. 전반적인 동물의 건강 상태를 매일 관찰하였다.

2. 체중을 매일 측정하였다.

3. 버니어 캘리퍼(vernier caliper)를 사용해 종양의 크기를 2-3일 간격으로 측정하였다.

mm³로 표시되는 종양 부피는 장형의 타원체(prolate ellipsoid)에 대한 수식을 이용해 계산하였으며:

종양 부피 (mm³) = 길이 (mm) x [폭 (mm)²] x 0.5

종양의 비중은 1로 가정하고, π는 3으로 가정한다.

해당 날짜에서 대조군에 대한 처리군의 비율 (△T/△C%)은 하기 수식을 이용해 계산하였다:

종양 저해(GI)는 하기 수식을 이용해 계산하였다:

종양 성장의 저해 결과는 도 4 및 도 5에 나타나 있다.

결론: 화합물 A 및 화합물 B는 HPV 매개의 자궁경부암 이종이식 모델에서 상당한 종양 성장 저해를 나타내었다.

Claims

인간 유두종바이러스(HPV)와 관련된 암의 치료에 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물; 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체;

(상기 식에서, Ar은 페닐기로서, 할로겐, 니트로, 시아노, C₁-C₄-알킬, 트라이플루오로메틸, 하이드록실 및 C₁-C₄-알콕시로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 동일 또는 상이한 치환기에 의해 비치환 또는 치환됨).
제1 항에 있어서,
상기 Ar이 염소, 브롬, 불소, 요오드, C₁-C₄-알킬 및 트라이플루오로메틸로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 동일 또는 상이한 치환기에 의해 치환된 페닐기인, 화학식 (I)의 화합물.
제1 항 또는 제2 항에 있어서,
상기 Ar이 염소에 의해 치환된 페닐기인, 화학식 (I)의 화합물.
제1 항 또는 제2 항에 있어서,
상기 Ar이 염소 및 트라이플루오로메틸에 의해 치환된 페닐기인, 화학식 (I)의 화합물.
제1 항에 있어서,
상기 화학식 (I)의 화합물이 화학식 (IA)로 표시되는 (+)-trans 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물인, 화학식 (I)의 화합물;

(상기 식에서, Ar은 페닐기로서, 할로겐, 니트로, 시아노, C₁-C₄-알킬, 트라이플루오로메틸, 하이드록실 또는 C₁-C₄-알콕시로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 동일 또는 상이한 치환기에 의해 비치환 또는 치환됨).
제5 항에 있어서,
상기 화학식 (IA)의 화합물이 (+)-trans-2-(2-클로로-페닐)-5,7-다이하이드록시-8-(2-하이드록시-메틸-1-메틸-피롤리딘-3-일)-크로멘-4-온 하이드로클로라이드 (화합물 A)인, 화학식 (IA)의 화합물.
제5 항에 있어서,
상기 화학식 (IA)의 화합물이 (+)-trans-3-[2[(2-클로로-4-트라이플루오로메틸-페닐)-5,7-다이하이드록시-8-(2-하이드록시-메틸-1-메틸-피롤리딘-3-일)-크로멘-4-온 하이드로클로라이드 (화합물 B)인, 화학식 (IA)의 화합물.
제1 항 내지 제7 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 HPV와 관련된 암이 항문암, 외음부암, 질암, 음경암, 자궁경부암, 구강 인두암, 구강암, 폐암, 비-흑색종 피부암 및 결막암으로부터 선택되는, 화학식 (I)의 화합물.
제8 항에 있어서,
상기 HPV와 관련된 암이 자궁경부암인, 화학식 (I)의 화합물.
제1 항 내지 제7 항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 입체이성질체 또는 부분입체이성질체, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 치료적 유효량으로 포함하며, HPV와 관련된 암의 치료에 사용하기 위한, 약학 조성물.
제10 항에 있어서,
부가적인 약학 활성 화합물을 1종 이상 추가로 포함하며,
상기 약학 활성 화합물이 항암 활성을 가지는, 약학 조성물.