KR20100126544A - 항 ｒｎａ 바이러스 작용을 가지는 아닐린 유도체 - Google Patents

항 ｒｎａ 바이러스 작용을 가지는 아닐린 유도체 Download PDF

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Abstract

바이러스, 특히 RNA 바이러스는 돌연변이 속도가 빠르기 때문에, 지금까지 개발된 바이러스의 프로테아제나 역전사 효소 등을 표적으로 한 항바이러스제는, 유효성이 조기에 상실되어 내성 바이러스가 출현하고 있다. 또한, 최근 SARS, 조류 인플루엔자, C형 감염을 비롯하여 각각의 신규 바이러스에 의한 바이러스성 질환이 사회적인 위협이 되고 있다. 이 때문에, 기존 약에 내성을 나타내는 바이러스나 신규한 바이러스에 대응할 수 있고, 적용성이 넓은 새로운 항바이러스제의 개발이 희구되고 있다. 본 발명은 신규한 항 RNA 바이러스제 및 그의 사용 방법을 제공한다. 또한 본 발명은 신규 바이러스나 약제 내성 바이러스에 대해서도 유효한 항 RNA 바이러스제 및 그의 사용 방법을 제공한다.

Description

항 ＲＮＡ 바이러스 작용을 가지는 아닐린 유도체 {ANILINE DERIVATIVE HAVING ANTI-RNA VIRAL ACTIVITY}
본 발명은 바이러스 감염에 관여하는 숙주 세포의 인산화 효소를 저해하는 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 특히 바이러스 단백질의 번역을 제어하는 인산화 효소의 저해제에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 인산화 효소 저해제를 유효 성분으로서, 포함하는 플라비 바이러스과, 레오 바이러스과, 파라믹소 바이러스과, 오소믹소 바이러스과, 레트로 바이러스과 등에 속하는 RNA 바이러스에 대한 항바이러스제에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 RNA 바이러스에 의해 야기되는 질환의 예방 또는 치료에 유효한 화합물에 관한 것이고, 구체적으로는 C형 간염의 예방 또는 치료제 및 인플루엔자 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제에 관한 것이다.
종래부터 미생물의 인간에 대한 감염이 문제시되고 있다. 특히, 최근에는 교통 수단의 발달이나 사람들의 생활권이 확대됨에 따라, 인간에 대한 여러가지 감염증의 위험성이 더욱 높아지고 있다. 감염증에 대한 치료약제의 대표적인 것으로서 항생 물질을 들 수 있지만, 항생 물질은 병원체의 체내에서의 대사 경로를 저해시킴으로써 비로소 그 효과를 발휘하는 약제이다. 그러나 바이러스의 경우는, 바이러스가 그의 단백질 합성과 에너지 생산 기구를 모두 숙주 세포에 의존하고, 자기의 대사 경로를 갖지 않기 때문에, 항생 물질에서는 직접적인 바이러스 억제 작용을 발휘시킬 수 없다. 따라서, 현재에는 세균보다도 바이러스에 의한 감염증이 위협이 되고 있다.
바이러스는 세포 구조를 갖지 않는 미소한 미생물이고, DNA 바이러스와 RNA 바이러스로 크게 구별된다. 바이러스의 감염 양식으로는, 숙주 세포의 붕괴가 현저한 급성 감염, 임상 증상은 비교적 경미하게 그치지만 만성화되는 지속 감염 및 바이러스 단백질의 합성이 장기간 나타나지 않는 상태에서 계속 잔존하는 잠복 감염의 3가지 형태가 있고, 일부의 경우에는 암을 유발하는 경우도 있다.
인간에게 질환을 야기하는 RNA 바이러스로는 일본뇌염 바이러스, C형 간염 바이러스(HCV) 등의 플라비 바이러스과, 로타 바이러스 등의 레오 바이러스과, 뭄푸스 바이러스, 홍역 바이러스 등의 파라믹소 바이러스과, 인플루엔자 바이러스 등의 오소믹소 바이러스과, 인간 면역 부전 바이러스(HIV) 등의 레트로 바이러스과 등을 들 수 있다.
이 중, C형 간염 바이러스의 감염에 의해 야기되는 C형 간염은 만성화되기 쉽고, 만성화되면 높은 비율로 간경변 또는 간암으로 진행되는 중대 질환이기 때문에, 유효한 치료법이 매우 요망되고 있다. 인플루엔자 바이러스에 대해서는, 수년마다 세계적인 유행이 발생하는 것으로 잘 알려져 있고, 감염을 방치하면 환자가 사망하는 경우가 있는 것도 주지되어 있다. 따라서, 인플루엔자 바이러스에 대한 유효한 치료약을 시장에 제공하는 것도 급선무이다.
RNA 바이러스에 대한 항바이러스제로는, 인플루엔자 바이러스에 대해서 아만타딘, 자나미빌 및 오셀타미빌 등, HIV에 대해서 지도부딘, 네비라핀 및 리토나빌 등, HCV에 대해서, 리바비린 등을 들 수 있다.
그러나 바이러스성 질환에 대한 치료약은, 현재 이용되고 있는 것에 대해서 부작용이나 유효성 등의 관점에서 문제가 지적되는 등, 아직 개발 도상에 있다. 또한, 유효하다고 알려진 항바이러스제에 대해서 내성을 가지는 바이러스가 발생한다는 문제가 일어나는 경우도 있다. 따라서, 현재도 신규 항바이러스제의 개발이 요망되고 있다.
본 발명자들은 지금까지 스플라이싱의 조절에 관여하는 단백질의 연구를 행하여 왔다. 그 과정에서, 이하의 화학식으로 표시되는 화합물을 비롯한 1군의 화합물이 인산화 효소인 SRPK에 대한 저해 활성을 나타내고, 항바이러스 작용을 가지는 것을 발견하여 특허문헌 1 중에 개시하고 있다.
Figure pct00001
국제 공개 공보 WO 2005/063293
바이러스, 특히 RNA 바이러스는 돌연변이 속도가 빠르기 때문에, 지금까지 개발된 바이러스의 프로테아제나 역전사 효소 등을 표적으로 하는 기존의 항바이러스제는, 유효성이 소실되는 속도도 빨라 한층 더 효과적인 항바이러스제의 개발이 기대되어 왔다.
특히, 최근 SARS, 조류 인플루엔자, C형 간염을 비롯하여 여러가지 신규 바이러스에 의한 바이러스성 질환이 사회적인 위협이 되고 있다. 이 때문에, 본 발명의 과제는 기존 약에 내성을 나타내는 바이러스나 신규 바이러스에 대응할 수 있으며, 적용성이 넓은 새로운 항바이러스제의 개발이다.
본 발명자들은 종래부터 바이러스 유전자의 발현에 관여하는 숙주 세포의 단백질 인산화 효소에 주목하여 연구를 행하여 왔다. 특히 바이러스 단백질의 번역을 제어하는 단백질 인산화 효소를 저해하는 다수의 화합물을 합성하고, 스크리닝한 결과, 하기 화학식 I의 구조를 가지는 화합물이 우수한 항바이러스 활성을 가지는 것을 발견하였다.
즉, 본 발명은 숙주 세포의 단백질 인산화 효소를 저해하는 화합물을 함유하는 항바이러스제, 특히 화학식 I의 구조를 가지는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 유효 성분으로서 함유하는 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 RNA 바이러스에 의해 야기되는 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제 및 그의 사용 방법에 관한 것이다.
보다 구체적으로는, 본 발명은 이하의 특징을 가진다.
〔1〕숙주 세포의 단백질 인산화 효소를 저해하는 화합물을 유효 성분으로서 함유하는 항바이러스제.
〔2〕상기〔1〕에 있어서, 상기 단백질 인산화 효소가 바이러스 감염으로 활성화되는 숙주 세포의 단백질 인산화 효소인 항바이러스제.
〔3〕상기〔1〕또는〔2〕에 있어서, 상기 단백질 인산화 효소가 바이러스 단백질의 번역을 제어하는 숙주 세포의 단백질 인산화 효소인 항바이러스제.
〔4〕상기〔1〕 내지〔3〕중 어느 하나에 있어서, 바이러스 감염증이 RNA 바이러스에 의해서 야기되는 것인 항바이러스제.
〔5〕상기〔1〕 내지〔4〕중 어느 하나에 있어서, 바이러스 감염증이 C형 간염 바이러스 또는 인플루엔자 바이러스에 의해서 야기되는 것인 항바이러스제.
〔6〕이하의 화학식 I로 표시되는 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 함유하는 RNA 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제.
<화학식 I>
Figure pct00002
(식 중, R1은 할로겐 원자, 또는 할로겐 원자로 치환될 수도 있는 C1-6알킬기를 나타내고;
R2는 수소 원자 또는 C1 -6 알킬기를 나타내며;
R3은 C1 - 6알킬기, C1 - 6알콕시기 또는 할로겐 원자로 치환될 수도 있는 페닐기 또는 단환식 복소환기를 나타내고;
Q는 -C(O)-, -C(S)-, -SO2-, -C(O)NHC(O)-, -C(S)NHC(O)-또는 -C(O)NHC(S)-를 나타내며;
W는 할로겐 원자 또는 할로겐 원자로 치환될 수도 있는 단환식 또는 이환식 질소 함유 복소환기를 나타낸다)
〔7〕상기〔6〕에 있어서, 상기 화학식 I 중,
R1은 불소 또는 트리플루오로메틸기를 나타내고;
R2는 수소 원자이며;
R3은 메틸기, 메톡시기 또는 불소로 치환될 수도 있는 페닐기, 또는 메틸기로 치환될 수도 있는 단환식 복소환기를 나타내고;
Q는 -C(O)-, -C(S)-, -C(O)NHC(O)-또는 -C(S)NHC(O)-를 나타내며;
W는 불소 원자, 또는 환 원자로서 질소 1개와 탄소 5 내지 9개를 포함하는 포화 단환식 또는 이환식 복소환기를 나타내는 RNA 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제.
〔8〕상기〔6〕에 있어서, 상기 화학식 I의 화합물이 이하의 것으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 RNA 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제.
Figure pct00003
Figure pct00004
〔9〕상기〔6〕에 있어서, 상기 화학식 I 중,
R1은 트리플루오로메틸기를 나타내고;
R2는 수소 원자를 나타내며;
R3은 페닐기, 또는 단환식 복소환기를 나타내고;
Q는 -C(O)-, -C(S)- 또는 -C(S)NHC(O)-을 나타내며;
W는 환 원자로서 질소 1개와 탄소 5 내지 9개를 포함하는 포화 단환식 또는 이환식 복소환기를 나타내는 RNA 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제.
〔10〕상기〔6〕에 있어서, 상기 화학식 I의 화합물이 하기의 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 RNA 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제.
Figure pct00005
〔11〕하기 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 그의 수화물.
Figure pct00006
〔12〕 또한, 본 발명은 RNA 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제의 제조를 위한, 상기 화학식 I로 표시되는 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도에 관한 것이다.
〔13〕 또한, 본 발명은 상기 화학식 I로 표시되는 표시되는 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 유효량을 RNA 바이러스 감염증의 환자에게 투여하는 것을 포함하는 RNA 바이러스 감염증의 치료 방법에 관한 것이다.
본 발명자들은 다수의 화합물을 합성하고 스크리닝한 결과, 화학식 I의 구조를 가지는 화합물이 우수한 항 RNA 바이러스 활성을 가지는 것을 발견하였다. 이들 화합물은 동물 세포 내에 존재하는 인산화 효소를 저해한다. 놀랍게도, 이들 화합물은 복수의 상이한 유형의 RNA 바이러스에 대해서 각각 유효한 것이 발견되었다.
즉, 본 발명은 RNA 바이러스 질환의 치료에 새로운 선택지를 제공하는 것이다. 특히, 본 발명에 따른 항 RNA 바이러스제는, 사회적으로 문제가 되는 중대 질환을 야기하는 C형 간염 바이러스 및 인플루엔자 바이러스에 대해서 유효하다.
도 1a는 LuHCV 세포를 이용하여, HCV의 발현·복제의 정도를 루시페라아제 활성을 지표로 산출한 도면이다. 얻어진 발광 강도의 수치로부터, 각 시험 화합물, 각 농도에서의 평균값을 산출하고, 시험 물질의 대조로서 이용한 DMSO의 발광 강도를 100 ％로 하여 각각의 시험 화합물의 발광 강도의 비율을 산출하였다. 흑색 삼각: 화합물 2, ×: 화합물 5, *: 화합물 6을 이용한 경우의 결과를 나타낸다.
도 1b는, 도 1a의 조건하에서의 LuHCV 세포의 생세포의 비율을 나타낸 도면이고, 시험 물질의 대조로서 이용한 DMSO 첨가시의 생세포를 100 ％로 하여 산출한 값을 나타내고 있다. 흑색 삼각: 화합물 2, ×: 화합물 5, *: 화합물 6을 이용한 경우를 나타낸다.
도 2a는, 도 1a와 마찬가지의 방법에 의해 LuHCV 세포를 이용하여 시험 화합물 존재하·비존재하에서의 HCV의 발현·복제의 정도를 루시페라아제 활성을 지표로 산출한 결과이다. 시험 물질의 대조로서 이용한 DMSO의 발광 강도를 100 ％로 하여, 각각의 시험 화합물에 대해서 각각의 농도에서의 발광 강도의 비율을 나타내고 있다.
도 2b는, 도 1b와 마찬가지의 방법에 의해 LuHCV 세포의 생세포의 비율을 나타낸 도면이고, 시험 물질의 대조로서 이용한 DMSO 첨가시의 생세포를 100 ％로 하여 산출한 값을 나타내고 있다.
도 3a는, 본 발명의 화합물의 HCV 단백질에 대한 번역 억제 효과를 나타낸 도면이다. LuHCV 세포 배양 중에 화합물 5 또는 시험 화합물의 대조로서 DMSO를 첨가하고, 도면 중에 나타낸 각각의 시간 동안 배양한 후, 항 NS5A 항체 또는 항 β-액틴 항체에 의해 면역 블로팅(immuno blotting)을 행하고, 화합물 5 첨가시 NS5A의 발현에 대해서 검토하였다.
도 3b는, 본 발명의 화합물이 HCV-RNA 복제에는 작용하지 않는 것을 나타낸 도면이다. LuHCV 세포 배양 중에 화합물 5 또는 시험 화합물의 대조로서 DMSO를 첨가하고, 도면 중에 나타낸 각각의 시간 동안 배양한 후, NS5A에 대한 특이적 프라이머 또는 GAPDH에 대한 특이적 프라이머를 이용하고, RT-PCR법에 의해 화합물 5 첨가시 NS5A-RNA의 양에 대해서 검토를 행하였다.
도 4는, 화합물 5가 LuHCV 세포에 대해서 전혀 증식 억제능이나 세포 장해성을 가지지 않는 것을 나타낸 도면이다. 화합물 5의 20 μM 첨가시에, 대조로서 이용한 DMSO와 완전히 동일한 증식을 도 4에 나타내고 있다.
도 5는, 본 발명의 화합물이 인플루엔자 바이러스에 대해서도 항바이러스 효과를 가지는 것을 나타낸 도면이다. 시험 화합물을 첨가하지 않은 DMSO 대조의 MDCK 세포는 인플루엔자 바이러스에 감염되어 높은 비율로 사멸하고, 플레이트로부터 박리되었지만, 시험 화합물 첨가군에서는 세포사에 의한 세포의 박리는 억제되었다.
도 6은, 본 발명의 화합물의 인플루엔자 바이러스 감염 세포에 대한 세포사억제 효과를 나타낸 도면이다. 시험 화합물 비존재하에서는 인플루엔자 바이러스의 감염에 의해, 생세포의 비율이 40 ％ 이하가 되었지만, 화합물 5, 화합물 6 또는 화합물 14의 첨가에 의해 세포사가 감소되는 것이 명백해졌다.
도 7은, 본 발명의 화합물 5의 생체내 독성 시험 결과를 나타낸 도면이다. 1000 mg/kg/일에서의 7일간 반복 투여시에도 사망한 예는 나타나지 않았고, 시험 화합물 투여군은 대조 용매 투여군(플라시보(Placebo) 투여군)과 비교하여 전혀 차이를 보이지 않는 순조로운 체중 증가를 나타냈다.
이하에, 본 명세서에서 기재하는 용어, 기호 등의 의의를 설명하고, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명에서 "숙주 세포의 단백질 인산화 효소"란, 동물 세포의 세포 내에 존재하는 단백질 인산화 효소를 의미한다. 본 명세서 중에서는, "단백질 인산화 효소"는 단순히 "인산화 효소"라 불리는 경우도 있다. 본 발명에서의 인산화 효소는, 특히 바이러스 단백질의 번역을 제어하는 인산화 효소이다.
인산화 효소 활성의 평가 방법은 해당 기술 분야에서 주지이다. 구체적으로는, 예를 들면 일본 특허 공개 제2002-236125호, 일본 특허 공개 (평)9-68527호(1997) 및 일본 특허 공개 제2005-112812호 등에 기재되어 있다.
본 명세서에서의 "C1-6알킬기"란, 탄소수 1 내지 6개의 지방족 탄화수소로부터 임의의 수소 원자를 1개 제외하고 유도되는 1가의 기인, 탄소수 1 내지 6개의 직쇄상 또는 분지쇄상의 알킬기를 의미하고, 구체적으로는 예를 들면 메틸기, 에틸기, 1-프로필기, 2-프로필기, 2-메틸-1-프로필기, 2-메틸-2-프로필기, 1-부틸기, 2-부틸기, 1-펜틸기, 2-펜틸기, 3-펜틸기, 2-메틸-1-부틸기, 3-메틸-1-부틸기, 2-메틸-2-부틸기, 3-메틸-2-부틸기, 2,2-디메틸-1-프로필기, 1-헥실기, 2-헥실기, 3-헥실기, 2-메틸-1-펜틸기, 3-메틸-1-펜틸기, 4-메틸-1-펜틸기, 2-메틸-2-펜틸기, 3-메틸-2-펜틸기, 4-메틸-2-펜틸기, 2-메틸-3-펜틸기, 3-메틸-3-펜틸기, 2,3-디메틸-1-부틸기, 3,3-디메틸-1-부틸기, 2,2-디메틸-1-부틸기, 2-에틸-1-부틸기, 3,3-디메틸-2-부틸기, 2,3-디메틸-2-부틸기 등을 들 수 있다.
본 명세서에서의 "C1-6알콕시기"란 상기 정의의 "C1-6알킬기"가 결합한 옥시기인 것을 의미하고, 구체적으로는 예를 들면, 메톡시기, 에톡시기, 1-프로필옥시기, 2-프로필옥시기, 2-메틸-1-프로필옥시기, 2-메틸-2-프로필옥시기, 1-부틸옥시기, 2-부틸옥시기, 1-펜틸옥시기, 2-펜틸옥시기, 3-펜틸옥시기, 2-메틸-1-부틸옥시기, 3-메틸-1-부틸옥시기, 2-메틸-2-부틸옥시기, 3-메틸-2-부틸옥시기, 2,2-디메틸-1-프로필옥시기, 1-헥실옥시기, 2-헥실옥시기, 3-헥실옥시기, 2-메틸-1-펜틸옥시기, 3-메틸-1-펜틸옥시기, 4-메틸-1-펜틸옥시기, 2-메틸-2-펜틸옥시기, 3-메틸-2-펜틸옥시기, 4-메틸-2-펜틸옥시기, 2-메틸-3-펜틸옥시기, 3-메틸-3-펜틸옥시기, 2,3-디메틸-1-부틸옥시기, 3,3-디메틸-1-부틸옥시기, 2,2-디메틸-1-부틸옥시기, 2-에틸-1-부틸옥시기, 3,3-디메틸-2-부틸옥시기, 2,3-디메틸-2-부틸옥시기 등을 들 수 있다.
본 명세서에서의 "할로겐 원자"란, 불소 원자, 염소 원자, 브롬 원자 또는 요오드 원자를 의미한다.
본 명세서에서의 "할로겐화 C1-6알킬기"란 상기 정의 "C1-6알킬기" 중 임의의 적어도 하나의 수소 원자를, 상기 정의 "할로겐 원자"로 치환한 기를 의미한다. 예를 들면, 트리플루오로메틸기, 디플루오로메틸기, 모노플루오로메틸기 등을 들 수 있다.
본 명세서에서의 "단환식 복소환기" 및 "단환식 또는 이환식 복소환기"란, 환 원자로서 탄소 원자 및 헤테로 원자를 포함하는 환상 구조를 가지는 기를 의미한다. 헤테로 원자는, 일반적으로는 산소, 질소 또는 황이다.
본 명세서에서의 "염"이란, 본 발명에 따른 화합물과 염을 형성하고, 또한 제약상 허용되는 것이면 특별히 한정되지 않으며, 예를 들면 무기산염, 유기산염, 무기 염기염, 유기 염기염, 산성 또는 염기성 아미노산염 등을 들 수 있다.
무기산염의 바람직한 예로는, 예를 들면 염산염, 브롬화수소산염, 황산염, 질산염, 인산염 등을 들 수 있고, 유기산염의 바람직한 예로는, 예를 들면 아세트산염, 숙신산염, 푸마르산염, 말레산염, 타르타르산염, 시트르산염, 락트산염, 스테아르산염, 벤조산염, 메탄술폰산염, p-톨루엔술폰산염 등을 들 수 있다.
무기 염기염의 바람직한 예로는, 예를 들면 나트륨염, 칼륨염 등의 알칼리 금속염, 칼슘염, 마그네슘염 등의 알칼리 토금속염, 알루미늄염, 암모늄염 등을 들 수 있고, 유기 염기염의 바람직한 예로는, 예를 들면 디에틸아민염, 디에탄올아민염, 메글루민염, N,N'-디벤질에틸렌디아민염 등을 들 수 있다.
산성아미노산염의 바람직한 예로는, 예를 들면 아스파라긴산염, 글루탐산염 등을 들 수 있고, 염기성 아미노산염의 바람직한 예로는, 예를 들면 아르기닌염, 리신염, 오르니틴염 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물은 대기중에 방치해 둠으로써, 수분을 흡수하고, 흡착수가 부착되거나, 수화물이 되는 경우가 있고, 그러한 수화물도 본 발명의 염으로서 포함된다.
또한, 본 발명의 화합물은 다른 종류의 용매를 흡수하고, 용매화물이 되는 경우가 있지만, 그러한 염도 본 발명에 포함된다.
또한, 본 명세서에서 "또는"이라는 용어는 비배타적으로 이용된다. 예를 들면 "A, B 또는 C"는 A, B 또는 C 중 어느 하나의 요소를 적어도 포함하는 것을 의미하는 것에 지나지 않고, A, B 및 C의 2개 이상 또는 3개를 모두 포함하는 것 및 그것 이외의 요소를 포함하는 것도 포함된다.
또한 본 명세서에서 하기의 표에 나타내는 화합물은, 화합물 번호로 나타내는 경우도 있다. 이들 화합물은, 화합물 번호를 인용하여 "화합물--"로서 표기되는 경우도 있다.
본 명세서에서 "항바이러스제"란, 바이러스에 의한 감염증의 예방 또는 치료에 대해서 유효한 약제를 의미한다. 본 명세서에서 "항 RNA 바이러스제"란, RNA 바이러스에 의한 감염증의 예방 또는 치료에 대해서 유효한 약제를 의미한다.
본 명세서에서 "항바이러스 작용"이란, 바이러스의 증식을 억제하는 작용, 바이러스의 감염을 감소시키는 작용, 감염된 바이러스를 감소 또는 배제하는 작용 등, 바이러스 감염을 예방 또는 치료하기 위한 기구로서 유용한 어느 작용도 포함하는 것으로 이해된다. 본 명세서에서 "항 RNA 바이러스 작용"이란, RNA 바이러스의 증식을 억제하는 작용, RNA 바이러스의 감염을 감소시키는 작용, 감염된 RNA 바이러스를 감소 또는 배제하는 작용 등, RNA 바이러스 감염을 예방 또는 치료하기 위한 기구로서 유용한 어느 작용도 포함하는 것으로 이해된다.
본원 발명의 RNA 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제의 유효 성분으로는, 하기 화학식 I로 표시되는 화합물 및 이들의 제약상 허용되는 염을 사용할 수 있다.
화학식 I:
<화학식 I>
Figure pct00007
식 중,
R1은 할로겐 원자 또는 할로겐 원자로 치환될 수도 있는 C1-6알킬기를 나타내고;
R2는 수소 원자 또는 C1-6알킬기를 나타내며;
R3은 C1-6알킬기, C1-6알콕시기 또는 할로겐 원자로 치환될 수도 있는 페닐기 또는 단환식 복소환기를 나타내고;
Q는 -C(O)-, -C(S)-, -SO2-, -C(O)NHC(O)-, -C(S)NHC(O)- 또는 -C(O)NHC(S)-를 나타내며;
W는 할로겐 원자, 또는 할로겐 원자로 치환될 수도 있는 단환식 또는 이환식 질소 함유 복소환기를 나타낸다.
또한, 바람직하게는 상기 화학식 I 중,
R1은 불소 또는 트리플루오로메틸기를 나타내고;
R2는 수소 원자를 나타내며;
R3은 메틸기, 메톡시기 또는 불소로 치환될 수도 있는 페닐기, 또는 메틸기로 치환될 수도 있는 단환식 복소환기를 나타내고;
Q는 -C(O)-, -C(S)-, -C(O)NHC(O)- 또는 -C(S)NHC(O)-를 나타내며;
W는 불소 원자, 또는 환 원자로서 질소 1개와 탄소 5 내지 9개를 포함하는 포화 단환식 또는 이환식 복소환기를 나타낸다.
또한, 바람직하게는 상기 화학식 I 중,
R1은 트리플루오로메틸기를 나타내고;
R2는 수소 원자를 나타내며;
R3은 페닐기 또는 단환식 복소환기를 나타내고;
Q는 -C(O)-, -C(S)- 또는 -C(S)NHC(O)-를 나타내며;
W는 환 원자로서 질소 1개와 탄소 5 내지 9개를 포함하는 포화 단환식 또는 이환식 복소환기를 나타낸다.
또한 보다 바람직하게는, 화학식 I의 화합물은, 이하의 것으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
Figure pct00008
Figure pct00009
가장 바람직하게는, 화학식 I의 화합물은 이하의 것으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
Figure pct00010
이하, 화학식 I로 표시되는 구체적인 화합물에 대해서 하기에 들 수 있지만, 본 발명은 이하에 열거된 화합물로 한정되는 것은 아니다.
Figure pct00011
Figure pct00012
즉, 본 발명은 상기에 예시한 임의의 화합물, 특히 상기 예시 화합물 번호: 화합물 2, 화합물 3, 화합물 4, 화합물 5, 화합물 6, 화합물 7, 화합물 8, 화합물 9, 화합물 10, 화합물 11, 화합물 12, 화합물 13, 화합물 14, 화합물 15, 화합물 16, 화합물 17, 화합물 18, 화합물 19, 화합물 20, 화합물 21, 화합물 22, 화합물 23 및 화합물 24의 적어도 1종을 함유하는 항바이러스제에 관한 것이고, 더욱 바람직하게는 이하의 구조식으로 표시되는 상기 예시 화합물 번호: 화합물 2, 화합물 5, 화합물 6, 화합물 14, 화합물 17, 화합물 18, 화합물 20 및 화합물 22의 화합물의 적어도 1종을 함유하는 항바이러스제에 관한 것이다.
Figure pct00013
이들 화합물(아닐린 유도체) 또는 그의 제약상 허용되는 염은, 항 RNA 바이러스제로서 유효하다.
본 발명의 화합물을 항바이러스제로서 이용하는 대상이 되는 바이러스로는, 플라비 바이러스과 및 오소믹소 바이러스과에 속하는 RNA 바이러스를 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다. 다른 바이러스로는 레트로 바이러스과, 파라믹소 바이러스과, 아레나 바이러스과, 필로 바이러스과, 랍도 바이러스과, 분야 바이러스과, 코로나 바이러스과, 토가 바이러스과, 레오 바이러스과, 칼리시 바이러스과 및 피코나 바이러스과에 속하는 RNA 바이러스를 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다. 바람직한 것은 인간 병원성 RNA 바이러스이다. 가장 바람직한 바이러스는 C형 간염 바이러스 및 인플루엔자 바이러스이다.
본 발명에 따른 상기 화학식 I로 표시되는 화합물의 대표적인 제조 방법에 대해서 이하에 기재한다. 또한, 본 발명에 따른 상기 화학식 I로 표시되는 화합물에 대해서는, 국제 공개 공보 WO 2005/063293 중에도 기재가 있고, 그의 내용은 참조에 의해 본 명세서 중에 도입된다.
이하, R1, R2, R3, R4, R5, R6, Q, W는 상기 화학식 I에서의 정의와 동일한 의의이다. 실온이란, 약 20 내지 30 ℃ 정도의 온도를 의미한다.
제조 방법 A
Figure pct00014
단계 1
단계 1은 화합물 1a와 화합물 2a를 반응시켜 화합물 3a를 얻는 단계이다. 원료인 니트로벤젠 유도체 1a는, 시판품 또는 적절하게 관능기를 유도하여 입수한다. Hal은 이탈기가 되는 할로겐 원자이다. 화합물 2a는 도입하는 -NR5R6을 포함하는 시약이고, X는 수소 원자 등을 나타낸다. 화합물 2a는 1 내지 2 당량 이용하는 것이 바람직하다. 반응은 용매 중, 염기의 존재하에서 행할 수 있다.
염기로는 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 피리딘, 4-(디메틸아미노)피리딘 등을 사용할 수 있다. 염기는 1 내지 5 당량 이용하는 것이 바람직하다. 또한, 대체 염기로서 과잉량(1 내지 5 당량)의 X-NR5R6을 사용할 수 있다.
용매로는, 예를 들면 디메틸술폭시드, N,N-디메틸포름아미드, N-메틸피롤리돈, 디옥산, 테트라히드로푸란, 톨루엔 등을 들 수 있다.
반응은 0 ℃ 내지 150 ℃의 반응 온도에서 행할 수 있지만, 바람직하게는 실온에서 행할 수 있다.
단계 2
단계 2는 화합물 3a의 니트로기를 아미노기로 환원하고, 화합물 4a를 얻는 단계이다.
환원 방법으로는, 용매 중 염화주석 등의 존재하에 농염산 등을 접촉시켜 행할 수 있다. 그 밖에, 접촉 수소화 등의 일반적인 환원 반응도 이용 가능하다.
반응 용매로는 메탄올, 에탄올, N,N-디메틸포름아미드, 테트라히드로푸란, 1,2-디메톡시에탄, 1,4-디옥산, 물 또는 이들 혼합 용매를 사용할 수 있다.
환원제로 사용되는 염화주석 등은 질량비로 1 내지 20 당량의 양을 이용하는 것이 바람직하다. 반응 온도는 0 내지 100 ℃에서 반응을 행할 수 있다.
또한 화합물 3a 및 4a는 시판품을 입수할 수 있는 경우도 있고, 그 경우는 시판품을 이용할 수 있다. 특히 화학식 I의 "W"가 수소 또는 할로겐인 경우는, 대부분의 경우, 시판품을 입수할 수 있다.
단계 3a
단계 3a는 화합물 4a와 화합물 5a를 반응시켜 화합물 6a를 얻는 단계이다. L은 할로겐 원자 등이다.
반응은 용매 중 염기의 존재하에 필요에 따라 촉매를 첨가하여 행할 수 있다. 이 경우, 화합물 5a를 1 내지 3 당량 이용하는 것이 바람직하다.
반응 용매는 디클로로메탄, 클로로포름, 1,4-디옥산, 테트라히드로푸란, 톨루엔, 피리딘, N,N-디메틸포름아미드, N-메틸피롤리돈 등을 사용할 수 있다.
염기로는 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 피리딘, 4-(디메틸아미노)피리딘 등을 사용할 수 있다.
그 밖에, "L"이 수산기인 경우 축합제를 이용하는 일반적인 아미드 결합 형성 반응 등이나, "L"로서 숙신이미딜기나 이미다조일기 등의 이탈기인 경우의 일반적인 아미드 결합 형성 반응도 이용 가능하다.
촉매로는 4-(디메틸아미노)피리딘 등을 들 수 있다.
반응 온도 0 ℃ 내지 100 ℃에서 반응을 행할 수 있다.
단계 3b
단계 3b는 화합물 4a와 화합물 5b를 반응시켜 화합물 6b를 얻는 단계이다.
반응은 용매 중에 염기의 존재하에서 아실이소티오시아네이트를 작용시켜 행할 수 있다. 아실이소티오시아네이트는 시판품 또는 적절하게 아실할라이드와 티오시안산염으로부터 반응 용액 중에서 제조한 것을 그대로 사용할 수 있다. 아실이소티오시아네이트는 1 내지 5 당량 이용하는 것이 바람직하다. 티오시안산염으로는 티오시안산칼륨, 티오시안산나트륨, 티오시안산암모늄 등을 사용할 수 있고, 1 내지 5 당량 이용하는 것이 바람직하다.
용매로는, 예를 들면 아세토니트릴, N,N-디메틸포름아미드, N-메틸피롤리돈, 테트라히드로푸란, 에틸렌글리콜디메틸에테르, 1,4-디옥산 등을 들 수 있다.
염기로는, 예를 들면 트리에틸아민, 디이소프로필아민, 피리딘, 4-(디메틸아미노)피리딘 등을 사용할 수 있다. 염기는 1 내지 5 당량 이용하는 것이 바람직하다.
반응 온도 0 ℃ 내지 150 ℃에서 반응을 행할 수 있다.
단계 4a
단계 4a는 화합물 6a의 아미드기 부분을 알킬화(R2로 전환)하고, 화합물 7a를 얻는 단계이다.
반응은 용매 중에 염기의 존재하에서 알킬화 시약(R2-X)을 이용하여 행할 수 있다. X는 이탈기가 되는 할로겐 원자 또는 술폰산에스테르이다. 알킬화 시약(R2-X)은 1 내지 5 당량 이용하는 것이 바람직하다.
용매로는, 예를 들면 N,N-디메틸포름아미드, N-메틸피롤리돈, 테트라히드로푸란, 에틸렌글리콜디메틸에테르, 1,4-디옥산, 아세토니트릴, 에테르 등을 들 수 있다.
염기로는 수소화나트륨, 수소화칼륨, 수소화리튬, 부틸리튬, 메틸리튬, 페닐리튬, 리튬디이소프로필아미드 등을 사용할 수 있다. 염기는 1 내지 5 당량 이용하는 것이 바람직하다.
반응 온도 0 ℃ 내지 150 ℃에서 반응을 행할 수 있다.
단계 4b
단계 4b는 화합물 6a의 아미드 결합의 카르보닐기를 티오카르보닐기로 변환하여 화합물 7b를 얻는 단계이다.
반응은 용매 중에 티오카르보닐화 시약을 이용하여 행한다. 티오카르보닐화 시약으로는, 예를 들면 라웨슨(Lawesson's) 시약(2,4-비스(4-메톡시페닐)-1,3,2,4-디티아디포스페탄 2,4-디술피드), 오황화이린(십황화사린, P4S10) 등을 사용할 수 있다. 티오카르보닐화 시약은 1 내지 5 당량 이용하는 것이 바람직하다.
용매로는, 예를 들면 톨루엔, 벤젠, 클로로벤젠, 크실렌, N,N-디메틸포름아미드, N-메틸피롤리돈, 에틸렌글리콜디메틸에테르, 1,4-디옥산, 테트라히드로푸란 등을 들 수 있다.
반응 온도 0 ℃ 내지 200 ℃에서 반응을 행할 수 있다.
이상이 본 발명에 따른 화합물 (I)의 제조 방법의 대표예이지만, 본 발명의 화합물의 제조시에 사용되는 원료 화합물·각종 시약은, 염이나 수화물 또는 용매화물을 형성할 수도 있고, 모두 출발 원료, 사용하는 용매 등에 따라 다르며, 반응을 저해하지 않는 한 특별히 한정되지 않는다. 이용하는 용매에 대해서도, 출발 원료, 시약 등에 따라 다르며, 반응을 저해하지 않고 출발 물질을 어느 정도 용해시키는 것이면 특별히 한정되지 않는 것은 물론이다. 본 발명에 따른 화합물 (I)이 프리체로서 얻어지는 경우, 상기 화합물 (I)이 형성할 수도 있는 염 또는 이들의 수화물의 상태로 통상법에 따라서 변환할 수 있다.
본 발명에 따른 화합물 (I)이 화합물 (I)의 염 또는 화합물 (I)의 수화물로서 얻어지는 경우, 상기 화합물 (I)의 프리체에 통상법에 따라서 변환할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 화합물 (I)로부터 얻어지는 여러가지 이성체(예를 들면 기하 이성체, 비대칭 탄소에 기초하는 광학 이성체, 회전 이성체, 입체 이성체, 호변 이성체 등)는, 통상의 분리 수단, 예를 들면 재결정, 디아스테레오머염법, 효소 분할법, 다양한 크로마토그래피(예를 들면 박층 크로마토그래피, 칼럼 크로마토그래피, 가스 크로마토그래피 등)를 이용함으로써 정제하여 단리할 수 있다.
본 발명의 화합물은 제약상 허용되는 담체와 함께 조성물로 제조할 수 있다. 예를 들면 주지의 제제 기술을 적용하여 의약 조성물로 제조할 수 있다. 본 발명의 의약 조성물을 항바이러스제(즉, 바이러스 감염증의 예방제 또는 치료제) 또는 그 밖의 의약으로서 사용하는 경우, 그의 투여 형태로는, 예를 들면 정제, 캡슐제, 과립제, 산제, 환제, 트로키제 및 시럽제 등에 의한 경구 투여, 또는 주사제, 에어로졸제, 좌제, 점포제, 파프제, 로션제, 리니먼트제, 연고제 또는 점안제 등에 의한 비경구 투여를 들 수 있다. 이들 제제는 부형제, 활택제, 결합제, 붕괴제, 안정화제, 교미 교취제, 희석제 등의 첨가제를 이용하여 주지의 방법으로 제조된다.
예를 들면, 부형제로는 감자 전분, 옥수수 전분 등의 전분, 젖당, 결정 셀룰로오스, 인산수소칼슘 등을 들 수 있다.
코팅제로는, 예를 들면 에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 셸락, 탈크, 카르나우바 왁스, 파라핀 등을 들 수 있다.
결합제로는, 예를 들면 폴리비닐피롤리돈, 매크로골 및 상기 부형제와 마찬가지의 화합물을 들 수 있다.
붕괴제로는, 예를 들면 상기 부형제와 마찬가지의 화합물 및 크로스카르멜로오스나트륨, 카르복시메틸스타치나트륨, 가교 폴리비닐피롤리돈과 같은 화학 수식된 전분·셀룰로오스류를 들 수 있다.
안정화제로는, 예를 들면 메틸파라벤, 프로필파라벤과 같은 파라옥시벤조산에스테르류; 클로로부탄올, 벤질알코올, 페닐에틸알코올과 같은 알코올류; 염화벤잘코늄; 페놀, 크레졸과 같은 페놀류; 티메로살; 데히드로아세트산; 및 소르브산을 들 수 있다.
교미 교취제로는, 예를 들면 통상 사용되는 감미료, 산미료, 향료 등을 들 수 있다.
또한, 액제를 제조하기 위한 용매로는 에탄올, 페놀, 클로로크레졸, 정제수, 증류수 등을 사용할 수 있다.
계면활성제 또는 유화제로는, 예를 들면 폴리소르베이트 80, 스테아르산폴리옥실 40, 라우로매크로골 등을 들 수 있다.
본 발명의 의약 조성물을 항바이러스제로서 사용하는 경우, 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 사용량은 증상, 연령, 투여 방법 등에 따라 다르다. 예를 들면 경구 투여의 경우, 환자(온혈 동물, 특히 인간)에 대해서 1일당, 하한으로서 0.01 mg(바람직하게는 0.1 mg), 상한으로서 2000 mg(바람직하게는 500 mg, 보다 바람직하게는 100 mg)을 1회 또는 수회로 나눠, 증상에 따라서 투여하는 것이 바람직하다. 정맥내 투여의 경우에는, 성인에 대해서 1일당, 하한으로서 0.001 mg(바람직하게는 0.01 mg), 상한으로서 500 mg(바람직하게는 50 mg)을 1회 또는 수회로 나눠, 증상에 따라서 투여하는 것이 바람직하다.
[대상 바이러스]
본 발명의 화합물을 항바이러스제로서 이용하는 대상이 되는 바이러스로는, 상기한 바와 같이, 플라비 바이러스과 및 오소믹소 바이러스과에 속하는 RNA 바이러스를 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다. 대상이 되는 다른 바이러스로는, 예를 들면 레트로 바이러스과, 파라믹소 바이러스과, 아레나 바이러스과, 필로 바이러스과, 랍도 바이러스과, 분야 바이러스과, 코로나 바이러스과, 토가 바이러스과, 레오 바이러스과, 칼리시 바이러스과 및 피코나 바이러스과에 속하는 RNA 바이러스를 들 수 있지만, 바람직한 것은 인간 병원성 RNA 바이러스이다. 가장 바람직한 바이러스는 C형 간염 바이러스 및 인플루엔자 바이러스이다.
[바이러스 감염증]
본 발명의 화합물을, 그의 예방 및 치료 목적으로 사용할 수 있는 바이러스 감염증으로는, C형 간염 및 일본뇌염 등의 플라비 바이러스 감염증, 인플루엔자 등의 오소믹소 바이러스 감염증, AIDS 등의 레트로 바이러스 감염증, 홍역 또는 유행성 이하선염 등의 파라믹소 바이러스 감염증, 풍진 등의 토가 바이러스 감염증, 로타 바이러스 감염증 등을 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다.
[치료 방법]
본 발명에는, 본 발명에 따른 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제를 투여하는 것에 의한 바이러스 감염증의 예방 또는 치료 방법이 포함된다. 본 발명의 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제는, 예를 들면 체내 농도가 100 nM 내지 1 mM 사이가 되도록 간헐적 또는 지속적으로 경구, 경피, 점막하, 피하, 근육내, 혈관내, 뇌내 또는 복강 내에 투여할 수 있다.
<실시예>
이하, 실시예에 의해 본 발명을 더욱 상세히 설명하지만, 이들은 예시적인 것이며, 본 발명이 이들 실시예로 제한되는 것은 아니다. 또한, 본 명세서 중에 인용된 문헌은 모두 본 명세서의 일부로서 도입된다.
하기에서 칼럼 크로마토그래피는 실리카 겔(머크(MERCK) 9385-5B, 70-230 메쉬)을 이용하여 행하였다. 박층 크로마토그래피(TLC)는, 미리 실리카 겔이 도포된 유리 플레이트(머크 5715, 실리카 겔 60 F254)를 이용하여 행하였다. 융점은 야나코사 제조 미량 융점 측정 장치 야나코(YANACO) MP-500D 또는 MP-J3을 이용하여 측정하였다. 1H NMR 스펙트럼 및 13C NMR 스펙트럼은 니혼 덴시(JEOL)사 제조 JNM AL-400 핵 자기 공명 장치 또는 바리안(Varian)사 제조 머큐리(MERCURY) 300을 이용하여 측정하였다. NMR 스펙트럼 측정용 용매에는, CDCl3 또는 CD3OD(이소테크(ISOTEC)사 제조 또는 CIL사 제조)를 사용하였다. 화학적 이동은 테트라메틸실란((CH3)4Si)을 내부 표준(0 ppm)으로 하여 상대적인 값으로서 나타내고, 결합상수(J)는 Hz로 나타내었다. 약호 s, d, t, m 및 br은 각각 단중선, 이중선, 삼중선, 사중선, 다중선 및 브로드 피크를 나타낸다. 적외 분광 스펙트럼(IR)은 시마즈 세이사꾸쇼 제조 FTIR-8100A 또는 IR Prestige-21을 이용하여 측정하였다. 질량 분석(MS)은 시마즈 세이사꾸쇼 제조 GCMS-QP5050을 이용하여 측정하였다. MS의 분자 이온 피크는 정수값으로 표기하였다. 원소 분석은 야나코 분세끼 고교사 제조 MT-6을 이용하여 행하였다.
[참고예 1] 화합물 1의 합성
화합물 1의 대표적인 합성법은 이하와 같다.
Figure pct00015
[참고예 1-1A]
1-플루오로-2-니트로-4-(트리플루오로메틸)벤젠(427 mg, 2.04 mmol, 시판품)의 N,N-디메틸포름아미드(DMF) 용액(1 ㎖)으로 순차적으로 피페리딘(220 ㎕, 2.22 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(220 ㎕, 2.40 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 1 시간 동안 교반하였다. 이것에 물을 첨가하고, 혼합물을 에테르(×3)로 추출하였다. 추출된 유기층은 브라인(brine)으로 세정, Na2SO4 상에서 건조, 필터링하고 감압하에서 농축하였다.
잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(40 g, 헥산/에틸아세테이트=10/1)로 정제하여 1-[2-니트로-4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘(561 mg, 2.04 mmol, quant.)을 오렌지색의 고체로서 얻었다.
TLC 및 1H NMR(CDCl3,400 MHz)의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00016
[참고예 1-2A]
참고예 1-1A에서 얻어진 1-[2-니트로-4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘(559 mg, 2.03 mmol)의 메탄올 용액(10 ㎖)에 순차적으로 농염산(2.00 ㎖, 24.0 mmol) 및 무수 이염화주석(2.50 g, 13.1 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 복귀시키고, 17.5 시간 동안 교반하였다. 이것에 중탄산나트륨의 포화 수용액을 첨가하였다. 혼합물을 에틸아세테이트(×3)로 추출하였다. 얻어진 유기층을 브라인으로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조한 후, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(50 g, 헥산/에틸아세테이트=14/1)로 정제하여 2-(1-피페리디닐)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(448 mg, 1.83 mmol, 90.4 ％)을 담황색의 고체로서 얻었다.
TLC 및 1H NMR(CDCl3, 400 MHz)의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00017
[참고예 1-3A]
참고예 1-2A에서 얻어진 2-(1-피페리디닐)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(173 mg, 0.708 mmol)의 디클로로메탄 용액(5 ㎖)에 순차적으로 이소니코티노일클로라이드 염산염(151 mg, 0.850 mmol, 시판품), 트리에틸아민(450 ㎕, 3.23 mmol) 및 촉매량의 4-(디메틸아미노)피리딘을 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 복귀시키고, 19.5 시간 동안 교반하였다. 이것에 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸아세테이트(×3)로 추출하였다. 얻어진 유기층을 중탄산나트륨 포화 수용액으로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조하고 여과한 후, 감압 농축하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(10 g, 헥산/에틸아세테이트=1.5/1) 및 재결정(헥산)으로 정제하여 N-[2-(1-피페리디닐)-5-(트리플루오로메틸)페닐]이소니코틴산아미드(화합물 1)(83.8 mg, 0.240 mmol, 33.9 ％)를 무색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00018
[참고예 1-1B]
1-클로로-2-니트로-4-(트리플루오로메틸)벤젠(5.00 g, 22.4 mmol, 시판품)의 N,N-디메틸포름아미드(DMF)(7 ㎖) 용액에 피페리딘(5.50 ㎖, 55.5 mmol, 시판품)을 0 ℃에서 가하고, 혼합물을 40 분간 교반하였다. 이것에 물을 가한 후, 혼합물을 에틸아세테이트로 추출하였다(×3). 얻어진 유기층을 포화 식염수로 세정한 후, 무수 황산나트륨을 이용하여 건조하고, 여과를 행하여 감압 농축하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(200 g, 헥산/에틸아세테이트=8/1)로 정제하여 1-[2-니트로-4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘(6.13 g, quant.)을 오렌지색의 고체로서 얻었다.
[참고예 1-2B]
참고예 1-1B에서 얻어진 1-[2-니트로-4-(트리플루오로메틸)페닐]피페리딘(6.13 g, 22.4 mmol)의 디클로로메탄 용액(10 ㎖)에 농염산(12.2 ㎖, 146 mmol) 및 무수 이염화주석(12.7 g, 67.2 mmol)을 0 ℃에서 순차적으로 가하고, 혼합물을 7 시간 동안 교반하였다. 이것에 물을 가하고, 혼합물을 에틸아세테이트(×3)로 추출하였다. 얻어진 유기층을 포화식염수로 세정한 후, 무수 황산나트륨을 이용하여 건조하고, 여과를 행하여 감압 농축하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(200 g, 헥산/에틸아세테이트=15/1)로 정제하여 2-(1-피페리디닐)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(4.55 g, 83.0 ％)을 담황색의 고체로서 얻었다.
[참고예 1-3B]
참고예 1-2B에서 얻어진 2-(1-피페리디닐)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(4.45 g, 18.2 mmol)의 디클로로메탄 용액(10 ㎖)에 이소니코티노일클로라이드 염산염(6.48 g, 36.4 mmol, 시판품) 및 트리에틸아민(5.57 ㎖, 54.6 mmol)을 0 ℃에서 순차적으로 가하고, 혼합물을 0.5 시간 동안 교반하였다. 이것에 물을 가하고, 혼합물을 에틸아세테이트(×3)로 추출하였다. 얻어진 유기층을 포화식염수로 세정한 후, 무수 황산나트륨을 이용하여 건조하고, 여과를 행하여 감압 농축하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(200 g, 헥산/에틸아세테이트=1/1) 및 재결정(헥산)으로 정제하여 N-[2-(1-피페리디닐)-5-(트리플루오로메틸)페닐]이소니코틴산아미드(화합물 1)(5.49 g, 86.3 ％)를 무색의 고체로서 얻었다.
[참고예 2] 화합물 2의 합성
Figure pct00019
참고예 1-3에서 얻어진 N-[2-(1-피페리디닐)-5-(트리플루오로메틸)페닐]이소니코틴산아미드(화합물 1)(528 mg, 1.51 mmol)의 톨루엔 용액(2.5 ㎖)에 라웨슨 시약(328 mg, 0.811 mmol, 시판품)을 가하고, 혼합물을 100 ℃에서 12 시간 동안 환류 교반하였다. 혼합물을 실온으로 복귀시킨 후, 이것에 2 M 수산화나트륨 수용액을 가하여 용액을 알칼리성으로 하고, 추가로 혼합물을 12 M 수산화나트륨 수용액(×3)으로 역추출하였다. 얻어진 수층에 2 M 염산을 가하여 용액을 산성으로 한 후 혼합물을 에테르(×3)로 추출하였다. 얻어진 유기층을 포화식염수로 세정한 후, 무수 황산나트륨을 이용하여 건조하고, 여과를 행하여 감압 농축하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(50 g, 헥산/에틸아세테이트=1/1)로 정제하여 N-[2-(1-피페리디닐)-5-(트리플루오로메틸)페닐]이소니코틴산티오아미드(화합물 2)(186 mg, 33.7 ％)를 무색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00020
[참고예 3] 화합물 3의 합성
Figure pct00021
티오시안산칼륨(시판품)(198 mg, 2.04 mmol) 및 니코티노일클로라이드 염산염(272 mg, 1.53 mmol, 시판품)의 아세토니트릴 용액(15 ㎖)을 80 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 복귀시킨 후, 이것에 참고예 1-2에서 얻어진 2-(1-피페리디닐)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(250 mg, 1.02 mmol) 및 트리에틸아민(285 ㎕, 2.04 mmol)을 순차적으로 가하고, 혼합물을 50 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 이를 포화 탄산수소나트륨 수용액에 주입하고, 혼합물을 디클로로메탄(×3)으로 추출하였다. 얻어진 유기층을 물로 세정한 후, 무수 황산나트륨을 이용하여 건조하고, 여과를 행하여 감압 농축하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(30 g, 헥산/에틸아세테이트/디클로로메탄=6/3/4)로 정제하여 1-니코티노일-3-[2-(1-피페리디닐)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 3)(70.7 mg, 30.1 ％)를 담황색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CD3OD, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00022
[참고예 4] 화합물 4의 합성
Figure pct00023
Figure pct00024
1-플루오로-2-니트로-4-(트리플루오로메틸)벤젠(500 mg, 2.39 mmol, 시판품)의 N,N-디메틸포름아미드 용액(4 ㎖)에 헥사메틸렌이민(673 ㎕, 5.98 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 복귀시키고, 1 시간 동안 교반하였다. 이것에 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸아세테이트로 3회 추출하였다. 추출한 유기 혼합물을 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=10/1)에 의해 정제하여 1-[2-니트로-4-(트리플루오로메틸)페닐]헥사메틸렌이민(696 mg, quant.)을 주황색 유상 물질로서 얻었다.
TLC 및 1H NMR(CDCl3, 400 MHz)의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00025
1-[2-니트로-4-(트리플루오로메틸)페닐]헥사메틸렌이민(500 mg, 1.73 mmol)의 메탄올 용액(5 ㎖)에 순차적으로 12 N HCl(0.94 ㎖, 11.3 mmol), SnCl2(1.15 g, 6.06 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 복귀시키고, 2 시간 동안 교반하였다. 이것에 탄산수소나트륨의 포화 수용액을 첨가한 후, 흡인 여과하였다. 혼합물은 에틸아세테이트로 3회 추출하였다. 추출한 유기 혼합물을 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=15/1)로 정제하여 2-(아자시클로헵탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(356 mg, 79.8 ％)을 주황색 유상 물질로서 얻었다.
TLC 및 1H NMR(CDCl3, 400 MHz)의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00026
티오시안산칼륨(97.2 mg, 1.00 mmol)의 아세토니트릴 용액(15 ㎖)에 니코티노일클로라이드 염산염(356 mg, 2.00 mmol)을 가하고, 70 ℃에서 40 분간 교반하였다. 이 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 2-(아자시클로헵탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(258 mg, 1.00 mmol)의 아세토니트릴(5 ㎖) 용액, 트리에틸아민(279 ㎕, 2.00 mmol)을 순차적으로 가하고, 반응 용액을 50 ℃로 가열하여 1 시간 동안 교반하였다. 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 이것에 물을 첨가하였다. 혼합액을 에틸아세테이트로 3회 추출한 후, 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실라카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=2/1)로 정제하여 N-니코티노일-N'-[2-(아자시클로헵탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 4)(406 mg, 96.1 ％)를 황색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00027
[참고예 5] 화합물 5의 합성
Figure pct00028
1-플루오로-2-니트로-4-(트리플루오로메틸)벤젠(550 mg, 2.63 mmol, 시판품)의 N,N-디메틸포름아미드 용액(4 ㎖)에 헵타메틸렌이민(760 ㎕, 5.98 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 복귀시키고, 1 시간 동안 교반하였다. 이것에 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸아세테이트로 3회 추출하였다. 추출한 유기 혼합물을 포화 식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=10/1)로 정제하여 1-[2-니트로-4-(트리플루오로메틸)페닐]헵타메틸렌이민(794 mg, quant.)을 주황색 유상 물질로서 얻었다.
TLC 및 1H NMR(CDCl3, 400 MHz)의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00029
1-[2-니트로-4-(트리플루오로메틸)페닐]헵타메틸렌이민(500 mg, 1.65 mmol)의 메탄올 용액(6 ㎖)에, 순차적으로 12 N HCl(890 ㎕, 10.7 mmol), SnCl2(1.10 g, 5.78 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 복귀시키고, 1 시간 동안 교반하였다. 이것에 탄산수소나트륨의 포화 수용액을 첨가한 후, 흡인 여과하였다. 혼합물은 에틸아세테이트로 3회 추출하였다. 추출한 유기 혼합물은 포화 식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다.
잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=15/1)로 정제하여 2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(323 mg, 71.7 ％)을 주황색 유상 물질로서 얻었다.
TLC 및 1H NMR(CDCl3, 400 MHz)의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00030
티오시안산칼륨(97.2 mg, 1.00 mmol)의 아세토니트릴 용액(15 ㎖)에 니코티노일클로라이드 염산염(356 mg, 2.00 mmol)을 가하고, 70 ℃에서 40 분간 교반하였다. 이 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(272 mg, 1.00 mmol)의 아세토니트릴(5 ㎖) 용액, 트리에틸아민(278 ㎕, 2.00 mmol)을 순차적으로 가하고, 반응 용액을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 이것에 물을 첨가하였다. 혼합액을 에틸아세테이트로 3회 추출한 후, 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=2/1)로 정제하여 N-니코티노일-N'-[2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 5)(405 mg, 92.8 ％)를 황색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00031
[참고예 6] 화합물 6의 합성
Figure pct00032
Figure pct00033
1-플루오로-2-니트로-4-(트리플루오로메틸)벤젠(500 mg, 2.39 mmol, 시판품)의 N,N-디메틸포름아미드 용액(4 ㎖)에 옥타메틸렌이민(855 ㎕, 5.98 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 복귀시키고, 1 시간 반 동안 교반하였다. 이것에 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸아세테이트로 3회 추출하였다. 추출한 유기 혼합물은 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=10/1)로 정제하여 1-[2-니트로-4-(트리플루오로메틸)페닐]옥타메틸렌이민(771 mg, quant.)을 주황색 유상 물질로서 얻었다.
TLC 및 1H HMR(CDCl3, 400 MHz)의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00034
1-[2-니트로-4-(트리플루오로메틸)페닐]옥타메틸렌이민(500 mg, 1.58 mmol)의 메탄올 용액(6 ㎖)에 순차적으로 12 N HCl(860 ㎕, 10.3 mmol), SnCl2(1.05 g, 5.53 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 복귀시키고, 2 시간 동안 교반하였다. 이것에 탄산수소나트륨의 포화 수용액을 첨가한 후, 흡인 여과하였다. 혼합물을 에틸아세테이트로 3회 추출하였다. 추출한 유기 혼합물은 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=15/1)로 정제하여 2-(아자시클로노난-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(200 mg, 44.2 ％)을 주황색 유상 물질로서 얻었다.
TLC 및 1H NMR(CDCl3, 400 MHz)의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00035
티오시안산칼륨(34.0 mg, 0.350 mmol)의 아세토니트릴 용액(6 ㎖)에 니코티노일클로라이드 염산염(125 mg, 0.700 mmol)을 가하고, 70 ℃에서 40 분간 교반하였다. 이 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 2-(아자시클로노난-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(100 mg, 0.349 mmol)의 아세토니트릴 용액(2 ㎖), 트리에틸아민(97.6 ㎕, 0.700 mmol)을 순차적으로 가하고, 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 이것에 물을 첨가하였다. 혼합액을 에틸아세테이트로 3회 추출한 후, 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=2/1)로 정제하여 N-니코티노일-N'-[2-(아자시클로노난-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 6)(146 mg, 92.9 ％)를 황색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00036
[참고예 7] 화합물 7의 합성
Figure pct00037
티오시안산칼륨(70.9 mg, 0.730 mmol)의 아세토니트릴 용액(15 ㎖)에 이소니코티노일클로라이드 염산염(261 mg, 1.47 mmol)을 가하고, 70 ℃에서 40 분간 교반하였다. 이 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(200 mg, 0.730 mmol)의 아세토니트릴(5 ㎖) 용액, 트리에틸아민(205 ㎕, 1.47 mmol)을 순차적으로 가하고, 반응 용액을 50 ℃로 가열하고 1 시간 동안 교반하였다. 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 이것에 물을 첨가하였다. 혼합액을 에틸아세테이트로 3회 추출한 후, 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=1/1)로 정제하여 N-이소니코티노일-N'-[2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 7)(149 mg, 46.8 ％)를 황색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00038
[참고예 8] 화합물 8의 합성
Figure pct00039
시안산나트륨(47.5 mg, 0.730 mmol)의 아세토니트릴 용액(5 ㎖)에 니코티노일클로라이드 염산염(130 mg, 0.730 mmol)을 가하고, 70 ℃에서 1.5 시간 동안 교반하였다. 이 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(100 mg, 0.367 mmol)의 아세토니트릴 용액(5 ㎖), 트리에틸아민(103 ㎕, 0.730 mmol)을 순차적으로 가하고, 반응 용액을 50 ℃로 가열하고 4 시간 동안 교반하였다. 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 이것에 물을 첨가하였다. 혼합액을 에틸아세테이트로 3회 추출한 후, 포화 식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=2/1)로 정제하여 N-니코티노일-N'-[2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]우레아(화합물 8)(80.1 mg, 51.9 ％)을 무색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00040
[참고예 9] 화합물 9의 합성
Figure pct00041
2,5-디플루오로니트로벤젠(1.00 g, 6.29 mmol, 시판품)의 N,N-디메틸포름아미드 용액(2.5 ㎖)에 헵타메틸렌이민(1.84 ㎖, 14.5 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 복귀시키고, 2 시간 동안 교반하였다. 이것에 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸아세테이트로 3회 추출하였다. 추출한 유기 혼합물을 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=10/1)로 정제하여 1-(4-플루오로-2-니트로페닐)헵타메틸렌이민(quant.)을 주황색 유상 물질로서 얻었다.
TLC 및 1H NMR(CDCl3, 400 MHz)의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00042
1-(4-플루오로-2-니트로페닐)헵타메틸렌이민(1.50 g, 5.95 mmol)의 메탄올 용액(10 ㎖)에 순차적으로 12 N HCl(3.22 ㎖, 38.6 mmol), SnCl2(3.95 g, 20.8 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 복귀시키고, 밤새 교반하였다. 이것에 탄산수소나트륨의 포화 수용액을 첨가한 후, 흡인 여과하였다. 혼합물은 에틸아세테이트로 3회 추출하였다. 추출한 유기 혼합물은 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=10/1)로 정제하여 5-플루오로-2-(아자시클로옥탄-1-일)아닐린(478 mg, 36.1 ％)을 황색 유상 물질로서 얻었다.
TLC 및 1H NMR(CDCl3, 400 MHz)의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00043
티오시안산칼륨(87.5 mg, 0.900 mmol)의 아세토니트릴 용액(10 ㎖)에 니코티노일클로라이드 염산염(320 mg, 1.80 mmol)을 가하고, 70 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 이 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-플루오로아닐린(200 mg, 0.900 mmol)의 아세토니트릴 용액(5 ㎖), 트리에틸아민(251 ㎕, 1.80 mmol)을 순차적으로 가하고, 반응 용액을 50 ℃로 가열하고 4 시간 동안 교반하였다. 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 이것에 물을 첨가하였다. 혼합액을 에틸아세테이트로 3회 추출한 후, 포화 식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=2/1)로 정제하여 N-니코티노일-N'-[2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 9)(117 mg, 33.6 ％)를 황색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00044
[참고예 10] 화합물 10의 합성
Figure pct00045
6-메틸니코틴산(252 mg, 1.84 mmol)의 톨루엔 용액(5 ㎖)에 N,N-디메틸포름아미드(3방울), 염화티오닐(643 ㎕, 8.81 mmol)을 순차적으로 가하고, 60 ℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 이 유기 혼합 용액을 실온으로 복귀시키고, 감압하에서 농축하였다. 얻어진 잔사를 아세토니트릴(5 ㎖)에 현탁하고, 이것에 티오시안산칼륨(178 mg, 1.84 mmol)을 가하고, 60 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 이 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(200 mg, 0.734 mmol), 트리에틸아민(256 ㎕, 1.84 mmol)을 순차적으로 가하고, 반응 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 가하고, 얻어진 유기 혼합액을 에틸아세테이트로 3회 추출한 후, 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨으로 건조하였다. 그리고 여과를 행하고, 감압 농축하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(20 g, 헥산/에틸아세테이트=2/1)로 정제하여 N-(6-메틸니코티노일)-N'-[2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 10)(19.2 mg, 5.81 ％)를 적색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00046
[참고예 11] 화합물 11의 합성
티오시안산암모늄(55.6 mg, 0.730 mmol)의 아세톤 용액(5 ㎖)에 4-메톡시벤조일클로라이드(96.5 ㎕, 0.730 mmol)를 가하고, 60 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 이 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(100 mg, 0.367 mmol), 트리에틸아민(102 ㎕, 0.730 mmol)을 순차적으로 가하고, 반응 용액을 실온에서 5 시간 동안 교반하였다. 물을 가하고, 혼합액을 에틸아세테이트로 3회 추출한 후, 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=10/1)로 정제하여 N-(6-메틸벤조일)-N'-[2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 11)(80.4 mg, 48.7 ％)를 무색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00048
[참고예 12] 화합물 12의 합성
Figure pct00049
티오시안산암모늄(55.6 mg, 0.730 mmol)의 아세톤 용액(5 ㎖)에 4-메틸벤조일클로라이드(125 mg, 0.730 mmol)를 가하고, 60 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 이 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(100 mg, 0.367 mmol), 트리에틸아민(102 ㎕, 0.730 mmol)을 순차적으로 가하고, 반응 용액을 실온에서 5 시간 동안 교반하였다. 물을 가하고, 혼합액을 에틸아세테이트로 3회 추출한 후, 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=5/1)로 정제하여 N-(4-메톡시벤조일)-N'-[2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 12)(77.8 mg, 45.5 ％)를 무색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00050
[참고예 13] 화합물 13의 합성
Figure pct00051
티오시안산암모늄(55.6 mg, 0.730 mmol)의 아세톤 용액(5 ㎖)에 4-플루오로벤조일클로라이드(86.3 ㎕, 0.730 mmol)를 가하고, 60 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 이 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(100 mg, 0.367 mmol), 트리에틸아민(102 ㎕, 0.730 mmol)을 순차적으로 가하고, 반응 용액을 실온에서 5 시간 동안 교반하였다. 물을 가하고, 혼합액을 에틸아세테이트로 3회 추출한 후, 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=10/1)로 정제하여 N-(4-플루오로벤조일)-N'-[2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 13)(93.9 mg, 56.4 ％)를 무색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00052
[참고예 14] 화합물 14의 합성
Figure pct00053
티오시안산암모늄(55.6 mg, 0.730 mmol)의 아세톤 용액(5 ㎖)에 염화벤조일(84.7 ㎕, 0.730 mmol)을 가하고, 60 ℃에서 1.5 시간 동안 교반하였다. 이 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(100 mg, 0.367 mmol), 트리에틸아민(102 ㎕, 0.730 mmol)을 순차적으로 가하고, 반응 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 가하고, 혼합액을 에틸아세테이트로 3회 추출한 후, 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=8/1)로 정제하여 N-벤조일-N'-[2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 14)(95.2 mg, 59.6 ％)를 무색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00054
[참고예 15] 화합물 15의 합성
Figure pct00055
티오시안산암모늄(55.6 mg, 0.730 mmol)의 아세톤 용액(5 ㎖)에 2-메톡시벤조일클로라이드(109 ㎕, 0.730 mmol)를 가하고, 60 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 이 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(100 mg, 0.367 mmol), 트리에틸아민(102 ㎕, 0.730 mmol)을 순차적으로 가하고, 반응 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 가하고, 혼합액을 에틸아세테이트로 3회 추출한 후, 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=5/1)로 정제하여 N-(2-메톡시벤조일)-N'-[2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 15)(51.5 mg, 30.1 ％)를 무색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00056
[참고예 16] 화합물 16의 합성
Figure pct00057
1-플루오로-2-니트로-4-(트리플루오로메틸)벤젠(1.50 g, 7.17 mmol)의 메탄올 용액(5 ㎖)에 순차적으로 12 N HCl(3.89 ㎖, 46.6 mmol), SnCl2(4.76 g, 25.1 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 복귀시키고, 밤새 교반하였다. 이것에 탄산수소나트륨의 포화 수용액을 첨가한 후, 흡인 여과하였다. 혼합물은 에틸아세테이트로 3회 추출하였다. 추출한 유기 혼합물은 포화 식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=10/1)로 정제하여 2-플루오로-5-(트리플루오로메틸)아닐린(942 mg, 73.4 ％)을 주황색 유상 물질로서 얻었다.
TLC 및 1H NMR(CDCl3, 400 MHz)의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00058
티오시안산암모늄(85.3 mg, 1.12 mmol)의 아세톤 용액(5 ㎖)에 니코티노일클로라이드 염산염(199 mg, 1.12 mmol)을 가하고, 60 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 이 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 2-플루오로-5-(트리플루오로메틸)아닐린(100 mg, 0.558 mmol), 트리에틸아민(155 ㎕, 1.12 mmol)을 순차적으로 가하고, 반응 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 가하고, 혼합액을 에틸아세테이트로 3회 추출한 후, 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=2/1)로 정제하여 N-니코티노일-N'-[2-플루오로-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 16)(128 mg, 66.8 ％)를 무색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00059
[참고예 17] 화합물 17의 합성
Figure pct00060
3-푸란카르복실산(100 mg, 0.892 mmol)의 디클로로메탄 용액(5 ㎖)에 염화티오닐(130 ㎕, 1.78 mmol)을 가하고, 60 ℃에서 밤새 교반하였다. 이 유기 혼합 용액을 실온으로 복귀시키고, 감압하에서 농축하였다. 얻어진 잔사를 아세토니트릴(5 ㎖)에 현탁하고, 이것에 티오시안산칼륨(95.4 mg, 0.982 mmol)을 가한 후, 60 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 이 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(100 mg, 0.367 mmol)을 가하고, 반응 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 가하고, 얻어진 유기 혼합액을 에틸아세테이트로 3회 추출한 후, 포화 식염수로 세정, 무수 황산나트륨으로 건조하였다. 그리고 여과를 행하고, 감압 농축하였다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=10/1)로 정제하여 N-(3-푸라닐)-N'-[2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 17)(quant.)를 황색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00061
[참고예 18] 화합물 18의 합성
Figure pct00062
티오시안산칼륨(98.2 mg, 1.01 mmol)의 디클로로메탄 용액(5 ㎖)에 3-티오펜카르보닐클로라이드(135 mg, 0.920 mmol)를 가하고, 60 ℃에서 밤새 교반하였다. 이 유기 혼합액을 실온으로 복귀시키고, 2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(100 mg, 0.367 mmol)을 가하고, 반응 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 가하고, 혼합액을 에틸아세테이트로 3회 추출한 후, 포화식염수로 세정, 무수 황산나트륨 상에서 건조, 흡인 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 잔사는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥산/에틸아세테이트=10/1)로 정제하여 N-(티오푸란-3-일)-N'-[2-(아자시클로옥탄-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 18)(157 mg, 96.9 ％)를 황색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 400 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00063
[참고예 19] 화합물 19의 합성
Figure pct00064
1-플루오로-2-니트로-4-(트리플루오로메틸)벤젠(2.50 g, 12.0 mmol, 시판품)의 N,N-디메틸포름아미드(DMF)(6.0 ㎖) 용액에 순차로 trans-데카히드로퀴놀린(1.84 g, 13.2 mmol, 시판품) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(2.51 ㎖, 14.4 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 19 시간 동안 교반하였다. 이 혼합 용액을 물에 붓고, 혼합물을 에테르(×3)로 추출하였다. 추출된 유기층은 물(×3), 브라인(×1)으로 순차 세정하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고 감압하에서 농축하였다.
잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(220 g, 헥산/디에틸에테르=50/1)로 정제하여 4-(trans-2-아자비시클로[4.4.0]데칸-2-일)-3-니트로벤조트리플루오라이드)(3.57 g, 10.9 mmol, 91.8 ％)를 주황색 유상 물질로서 얻었다.
TLC, 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00065
아르곤 분위기하에 4-(trans-2-아자비시클로[4.4.0]데칸-2-일)-3-니트로벤조트리플루오라이드)(2.94 g, 8.95 mmol)의 에틸아세테이트 용액(25 ㎖)에 팔라듐-탄소(팔라듐/활성탄)(10 ％ Pd)(100 mg, 시판품)를 실온에서 첨가하고, 수소 분위기하에 실온에서 10 시간 동안 교반하였다. 아르곤으로 치환한 후, 이것에 디클로로메탄(60 ㎖)을 첨가하고, 실온에서 30 분간 교반한 후, 여과에 의해 팔라듐-탄소를 제거하고, 감압 농축하였다.
잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(110 g, 헥산/디에틸에테르=50/1)로 정제하여 2-(trans-2-아자비시클로[4.4.0]데칸-2-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(2.63 g, 8.82 mmol, 98.4 ％)을 무색의 고체로서 얻었다.
TLC, 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00066
2-(trans-2-아자비시클로[4.4.0]데칸-2-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(430 mg, 1.44 mmol)의 디클로로메탄(9 ㎖) 용액에 트리에틸아민(605 ㎕, 4.34 mmol) 및 이소니코틴산클로라이드 염산염(시판품)(385 mg, 2.16 mmol)을 0 ℃에서 순차 첨가하고, 혼합물을 실온으로 복귀시킨 후, 23 시간 동안 교반하였다. 이를 물에 주입하고, 혼합물을 디클로로메탄(×3)으로 추출하였다. 추출된 유기층은 물(×1)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조, 여과하고 감압하에서 농축하였다.
잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(50 g, 헥산/에틸아세테이트=4/1)로 정제하여 N-[2-(trans-2-아자비시클로[4.4.0]데칸-2-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]이소니코틴산아미드(화합물 19)(574 mg, 1.42 mmol, 98.7 ％)를 무색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00067
[참고예 20] 화합물 20의 합성
Figure pct00068
2-(아자시클로노난-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(381 mg, 1.33 mmol)의 디클로로메탄 용액(7 ㎖)에 트리에틸아민(560 ㎕, 4.02 mmol) 및 이소니코틴산클로라이드 염산염(시판품)(356 mg, 2.00 mmol)을 0 ℃에서 순차 첨가하고, 혼합물을 실온으로 복귀시킨 후, 14 시간 동안 교반하였다. 이를 물에 주입하고, 혼합물을 디클로로메탄(×3)으로 추출하였다. 추출된 유기층은 물(×1)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조, 여과하고 감압하에서 농축하였다.
잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(30 g, 헥산/에틸아세테이트=2/1)로 정제하여 N-[2-(아자시클로노난-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]이소니코틴산아미드(화합물 20)(392 mg, 1.00 mmol, 75.3 ％)를 무색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00069
[참고예 21] 화합물 21의 합성
Figure pct00070
[참고예 19]에서 얻어진 N-[2-(trans-2-아자비시클로[4.4.0]데칸-2-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]이소니코틴산아미드(138 mg, 342 μmol)의 톨루엔 용액(5 ㎖)에 라웨슨 시약(82.9 mg, 205 μmol, 시판품)을 실온에서 가하고, 혼합물을 120 ℃에서 7 시간 동안 교반하였다. 교반 후, 혼합 용액을 실온으로 복귀시킨 후, 감압하에서 농축하였다.
잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(8 g, 헥산/디클로로메탄/에틸아세테이트=4/3/1)로 정제하여 N-[2-(trans-2-아자비시클로[4.4.0]데칸-2-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]이소니코틴산티오아미드(화합물 21)(85.3 mg, 203 μmol, 59.4 ％)를 황색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00071
[참고예 22] 화합물 22의 합성
Figure pct00072
1-플루오로-2-니트로-4-(트리플루오로메틸)벤젠(2.00 g, 9.56 mmol, 시판품)의 N,N-디메틸포름아미드(DMF) 용액(5.0 ㎖)에 순차적으로 trans-데카히드로이소퀴놀린(1.58 ㎖, 10.6 mmol, 시판품) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(2.00 ㎖, 11.5 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 이 혼합 용액을 물에 주입하고, 혼합물을 에테르(×3)로 추출하였다. 추출된 유기층은 물(×3), 브라인(×1)으로 순차적으로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조, 여과하고 감압하에서 농축하였다.
잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(50 g, 헥산/디에틸에테르=50/1)로 정제하여 4-(trans-3-아자비시클로[4.4.0]데칸-3-일)-3-니트로벤조트리플루오라이드)(3.06 g, 9.32 mmol, 97.4 ％)를 주황색 유상 물질로서 얻었다.
TLC, 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00073
아르곤 분위기하에 4-(trans-3-아자비시클로[4.4.0]데칸-3-일)-3-니트로벤조트리플루오라이드)(2.93 g, 8.92 mmol)의 에틸아세테이트(17 ㎖) 용액에 팔라듐-탄소(팔라듐/활성탄)(10 ％ Pd)(100 mg, 시판품)를 실온에서 첨가하고, 수소 분위기하에 실온에서 22.5 시간 동안 교반하였다. 아르곤으로 치환한 후, 이것에 디클로로메탄(200 ㎖)을 첨가하고, 실온에서 30 분간 교반한 후, 여과에 의해 팔라듐-탄소를 제거하고, 감압 농축하였다.
잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(100 g, 헥산/디에틸에테르=50/1)로 정제하여 2-(trans-3-아자비시클로[4.4.0]데칸-3-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(2.58 g, 8.65 mmol, 96.9 ％)을 무색의 고체로서 얻었다.
TLC, 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00074
2-(trans-3-아자비시클로[4.4.0]데칸-3-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(784 mg, 2.63 mmol)의 디클로로메탄 용액(14 ㎖)에 트리에틸아민(1.10 ㎖, 7.89 mmol) 및 이소니코틴산클로라이드 염산염(2.10 g, 11.8 mmol, 시판품)을 0 ℃에서 순차 첨가하고, 혼합물을 실온으로 복귀시킨 후, 20 시간 동안 교반하였다. 이를 물에 주입하고, 혼합물을 디클로로메탄(×3)으로 추출하였다. 추출된 유기층은 물(×1)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고 감압하에서 농축하였다.
잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(50 g, 헥산/에틸아세테이트=7/2)로 정제하여 N-[2-(trans-3-아자비시클로[4.4.0]데칸-3-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]이소니코틴산아미드(574 mg, 1.42 mmol, 98.7 ％)를 무색의 고체로서 얻었다.
TLC, 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00075
N-[2-(trans-3-아자비시클로[4.4.0]데칸-3-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]이소니코틴산아미드(261 mg, 647 μmol)의 톨루엔 용액(10.0 ㎖)에 라웨슨 시약(158 mg, 391 μmol, 시판품)을 실온에서 가하고, 혼합물을 120 ℃에서 14 시간 동안 교반하였다. 교반 후, 혼합 용액을 실온으로 복귀시킨 후, 감압하에서 농축하였다.
잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(30 g, 헥산/디클로로메탄/에틸아세테이트=4/3/1)로 정제하여 N-[2-(trans-3-아자비시클로[4.4.0]데칸-3-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]이소니코틴산티오아미드(화합물 22)(173 mg, 412 μmol, 63.7 ％)를 황색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00076
[참고예 23] 화합물 23의 합성
Figure pct00077
아르곤 분위기하에 2-(trans-3-아자비시클로[4.4.0]데칸-3-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(2.99 mg, 1.00 mmol)의 디클로로메탄 용액(5 ㎖)에 트리에틸아민(280 ㎕, 2.01 mmol) 및 이소티오시안산벤조일(165 ㎕, 1.23 mmol, 시판품)을 실온에서 순차 첨가하고, 혼합물을 50 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 교반 후, 혼합 용액을 실온으로 복귀시킨 후, 이를 물에 주입하고, 혼합물을 디클로로메탄(×3)으로 추출하였다. 추출된 유기층을 물(×1)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고 감압하에서 농축하였다.
잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(30 g, 헥산/에틸아세테이트=15/1)로 정제하여 1-벤조일-3-[2-(trans-3-아자비시클로[4.4.0]데칸-3-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 23)(158 mg, 342 μmol, 34.2 ％)를 무색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00078
[참고예 24] 화합물 24의 합성
Figure pct00079
아르곤 분위기하에 2-(아자시클로노난-1-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(287 mg, 1.00 mmol)의 디클로로메탄 용액(5 ㎖)에 트리에틸아민(280 ㎕, 2.01 mmol) 및 이소티오시안산벤조일(165 ㎕, 1.23 mmol, 시판품)을 실온에서 순차 첨가하고, 혼합물을 50 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 교반 후, 혼합 용액을 실온으로 복귀시킨 후, 이를 물에 주입하고, 혼합물을 디클로로메탄(×3)으로 추출하였다. 추출된 유기층은 물(×1)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고 감압하에서 농축하였다.
잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(30 g, 헥산/에틸아세테이트=10/1)로 정제하여 1-벤조일-3-[2-(아자시클로노난-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]티오우레아(화합물 24)(88.7 mg, 197 μmol, 19.7 ％)를 무색의 고체로서 얻었다.
융점, TLC, 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) 및 IR의 결과는 다음과 같다.
Figure pct00080
[실시예 1A]
LuHCV 세포를 이용한 항 HCV 활성을 가지는 화합물의 스크리닝
HCV 바이러스 단백질 발현 어세이로서, 루시페라아제의 활성을 측정함으로써, 세포 내의 HCV 단백질(NS3-NS4-NS5A-NS5B)의 복제 및 발현을 평가할 수 있는 인간 간세포(이하, LuHCV라 기재함)를 이용하여, 항 HCV 활성을 가지는 화합물의 스크리닝을 행하였다.
LuHCV 세포를 96웰 플레이트에 5×103 세포/50 ㎕/웰의 비율로 파종하고, 밤새 인큐베이팅하였다. 시험 화합물은 디메틸술폭시드(DMSO)에 용해시키고, 필요에 따라서 DMSO를 이용하여 희석 계열을 제조하였다. LuHCV 세포 파종의 다음날, 최종 시험 농도의 2배 농도의 시험 화합물을 포함하는 배지를 50 ㎕/웰로 첨가하고, 48 시간, 37 ℃, 5 ％ CO2의 배양 조건하에서 조용히 배양하였다(시험 화합물 최종 농도 0, 10, 20 μM). 그 때, 시험 웰로서 각 시험 화합물, 각 농도에 대해서 3웰씩 이용하여 해석하였다.
48 시간 후에 배양액을 제거하고, Glo Lysis 버퍼(프로메가(Promega)사)를 각 웰에 100 ㎕ 가하고, 세포를 파쇄함으로써, 세포 추출액을 얻었다. 얻어진 세포 추출액 50 ㎕를 이용하고, Bright-GloTM 루시페라아제 어세이 시스템(프로메가사) 시약을 50 ㎕ 첨가하였다. 추출액 중 루시페라아제 활성을, 측정 장치 ARVO(퍼킨 엘마사 제조)를 이용하는 1 초간 발광 강도의 측정에 의해 행하였다.
얻어진 발광 강도의 수치로부터, 각 시험 화합물, 각 농도의 평균값을 산출하였다. 시험 물질의 대조로서 이용한 DMSO의 발광 강도를 100 ％로 한 각각의 시험 화합물의 발광 강도의 비율을 산출하였다. 도 1a에 시험 화합물의 발광 강도의 비율을 나타낸다.
시험 화합물(화합물 2, 화합물 5 및 화합물 6) 존재하에서, 농도 의존적으로 루시페라아제 활성의 저하가 관찰되었다. 또한, 시험 화합물 20 μM의 존재하에서는, 대조(DMSO)와 비교하여 현저한 루시페라아제 활성의 저하가 관측되었다. 특히, 화합물 5 및 화합물 6에서는, 10 μM에서도 대조와 비교하여 약 50 ％ 정도의 발광 강도의 저하가 관측되었다.
이 결과로부터, 시험한 화합물이 유효하게 HCV 단백질의 발현을 억제하는 것이 나타났다.
[실시예 1B]
LuHCV 세포를 이용한 시험 화합물의 세포 증식 억제의 평가
LuHCV 세포를 96웰 플레이트에 5×103 세포/50 ㎕/웰의 비율로 파종하고, 밤새 인큐베이팅하였다. 시험 화합물은 디메틸술폭시드(DMSO)에 용해시키고, 필요에 따라서 DMSO를 이용하여 희석 계열을 제조하였다. LuHCV 세포 파종의 다음날, 최종 시험 농도의 2배 농도의 시험 화합물을 포함하는 배지를 50 ㎕/웰에서 첨가하고, 48 시간, 37 ℃, 5 ％ CO2의 배양 조건하에서 조용히 배양하였다(시험 화합물 최종 농도 0, 10, 20 μM). 그 때, 시험웰로서 각 시험 화합물, 각 농도에 대해서 3웰씩 이용하여 해석을 진행시켰다.
48 시간 후에 생세포율을 측정하기 위해서, 생세포수 측정 시약 SF(나카라이 테스크사 제조)를 10 ㎕/웰로 첨가하고, 37 ℃, 5 ％ CO2의 배양 조건하에서 조용히 배양하고, 발색 반응을 행하였다. 그 후, 측정 장치 ARVO(퍼킨 엘마사 제조)를 이용하여 450 nm에서의 흡광도를 측정하였다.
그 때, 흡광도의 백그라운드로서, 시험 화합물(대조로서 이용한 DMSO를 포함함)을 함유하고, 추가로 세포를 포함하지 않는 웰에 대해서도 측정을 행하였다. 얻어진 수치를 동일한 화합물에 대해서 동일한 농도로 측정된, 세포를 포함하는 웰의 흡광도의 값으로부터 뺌으로써 얻은 값을, 백그라운드를 포함하지 않는 실제 생세포수의 측정값으로 하였다. 얻어진 실제 생세포수의 측정값으로부터, 각 시험 화합물, 각 농도에서의 평균값을 산출하고, 시험 물질의 대조로서 이용한 DMSO의 측정 평균값을 100 ％로 하고, 각각의 시험 화합물의 생세포수의 비율을 산출하였다. 도 1b에 시험 화합물 첨가시에 산출된 생세포수의 비율(세포의 생존력(% 대조))을 나타낸다.
그 결과, 도 1b에서 도시된 바와 같이, 시험 화합물 첨가에 의해 생세포수의 비율이 변화하는 경우는 없었다. 이는 실시예 1A의 조건하에서 이들 화합물이 생세포의 비율을 변경하지 않는 것을 나타내고 있다. 즉, 실시예 1A에 의해 얻어진 결과는, 순수히 시험 화합물이 HCV 단백질의 발현을 억제한 것을 의미하고 있다.
[실시예 2A]
LuHCV 세포를 이용한 항 HCV 활성을 가지는 구조 전개 화합물의 스크리닝
LuHCV 세포를 96웰 플레이트에 5×103 세포/50 ㎕/웰의 비율로 파종하고, 밤새 인큐베이팅하였다. 시험 화합물은 디메틸술폭시드(DMSO)에 용해시키고, 필요에 따라서 DMSO를 이용하여 희석 계열을 제조하였다. LuHCV 세포 파종의 다음날, 최종 시험 농도의 2배 농도의 시험 화합물을 포함하는 배지를 50 ㎕/웰로 첨가하고, 48 시간, 37 ℃, 5 ％ CO2의 배양 조건하에서 조용히 배양하였다(시험 화합물 최종 농도 0, 10, 20 μM). 그 때, 시험웰로서 각 시험 화합물, 각 농도에 대해서 3웰씩 이용하여 해석을 진행시켰다.
48 시간 후에 배양액을 제거하고, Glo Lysis 버퍼(프로메가사)를 각 웰에 100 ㎕ 가하고, 세포를 파쇄함으로써 세포 추출액을 얻었다. 얻어진 세포 추출액 50 ㎕를 이용하고, Bright-GloTM 루시페라아제 어세이 시스템(프로메가사) 시약을 50 ㎕ 첨가하였다. 추출액 중 루시페라아제 활성의 측정을, 측정 장치 ARVO(퍼킨 엘마사 제조)를 이용하여 1 초간 발광 강도로부터 측정하였다.
얻어진 발광 강도의 수치로부터 각 시험 화합물, 각 농도의 평균값을 산출하였다. 시험 물질의 대조로서 이용한 DMSO의 발광 강도를 100 ％로 한 각각의 시험 화합물의 발광 강도의 비율을 산출하였다. 하기 표 1-1, 도 2a에 시험 화합물의 발광 강도의 비율을 나타낸다.
결과로부터, 시험한 모든 화합물에 대해서 농도 의존적인 루시페라아제 활성의 저하가 관찰되었다. 이는 이들 화합물이 농도 의존적으로 세포 내에서의 HCV 단백질의 발현을 억제하는 활성을 가지는 것이 관찰되었다.
[실시예 2B]
LuHCV 세포를 이용한 구조 전개 화합물의 세포 증식 억제의 평가
LuHCV 세포를 96웰 플레이트에 5×103 세포/50 ㎕/웰의 비율로 파종하고, 밤새 인큐베이팅하였다. 시험 화합물은 디메틸술폭시드(DMSO)에 용해시키고, 필요에 따라서 DMSO를 이용하여 희석 계열을 제조하였다. LuHCV 세포 파종의 다음날, 최종 시험 농도의 2배 농도의 시험 화합물을 포함하는 배지를 50 ㎕/웰로 첨가하고, 48 시간, 37 ℃, 5 ％ CO2의 배양 조건하에서 조용히 배양하였다(시험 화합물 최종 농도 0, 10, 20 μM). 그 때, 시험웰로서 각 시험 화합물, 각 농도에 대해서 3웰씩 이용하여 해석을 진행시켰다.
48 시간 후에 생세포율을 측정하기 위해서, 생세포수 측정 시약 SF(나카라이 테스크사 제조)를 10 ㎕/웰 첨가하고, 37 ℃, 5 ％ CO2의 배양 조건하에서 조용히 배양하고, 발색 반응을 행하였다. 그 후, 측정 장치 ARVO(퍼킨 엘마사 제조)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 때, 흡광도의 백그라운드로서, 시험 화합물(대조로서 이용한 DMSO를 포함함)을 함유하고, 또한 세포를 포함하지 않는 웰에 대해서도 측정을 행하였다. 얻어진 수치를, 동일한 화합물에 대해서 동일한 농도로 측정된 세포를 포함하는 웰의 흡광도의 값으로부터 뺌으로써 얻은 값을, 백그라운드를 포함하지 않는 실제 생세포수의 측정값으로 하였다. 얻어진 실제 생세포수의 측정값으로부터 각 시험 화합물, 각 농도의 평균값을 산출하고, 시험 물질의 대조로서 이용한 DMSO 첨가시의 값을 100 ％로 한 각각의 시험 화합물의 생세포수의 비율을 산출하였다. 하기 표 1-2, 도 2b에 각 시험 화합물, 각 농도의 생세포의 비율(세포의 생존력(% 대조))을 나타낸다.
결과로부터, 시험한 화합물의 대부분에서 현저한 세포 생존율의 저하가 없는 것이 나타났다. 이는 실시예 2A의 조건하에서 이들 화합물이 세포 독성을 전혀 갖지 않거나, 가지고 있어도 약한 세포 독성밖에 갖지 않는 것을 나타내고 있다. 즉, 실시예 2A에 의해 얻어진 결과는 순수히 시험 화합물이 HCV 단백질의 발현을 억제한 것을 의미하고 있다.
Figure pct00081
[실시예 3A]
화합물 5의 HCV 단백질 발현 억제 활성의 해석
LuHCV 세포를 10 cm 접시에 1×106 세포/접시의 비율로 파종하고, 하룻밤 이상 인큐베이팅하였다. 그 후, DMSO에 용해된 화합물 5를 최종 농도 20 μM이 되도록 첨가하고, 추가로 37 ℃, 5 ％ CO2의 배양 조건하에서 조용히 배양을 계속하였다. 대조 접시에는 DMSO만을 첨가하였다. 화합물 5의 첨가 14 시간 후 및 60 시간 후에 세포를 회수하였다. 세포 용해액(25 mM NaPO4(pH 7.5), 150 mM NaCl, 1 ％ Triton X-100, 1 mM EDTA, 20 ％ 글리세롤, 프로테아제 인히비터 칵테일(로쉬 다이아그노스틱스))을 이용하여 세포를 용해시키고, 세포 추출액을 얻었다. 얻어진 각각의 세포 추출액 각 10 ㎍을 이용하여, 웨스턴 블로팅법으로 HCV-NS5A 단백질(항체 판매원: Virogen) 및 β-액틴(항체 판매원: Sigma)의 발현 해석을 행하였다.
결과를 도 3a에 나타낸다. 화합물 5의 첨가 14 시간 후, 60 시간 후 각각의 시간 동안, 화합물 5 첨가의 유무에 관계없이 β-액틴의 발현량에 변화는 없었지만, 화합물 5 첨가 세포에서는 NS5A의 발현 저하가 보였다.
이는 시험한 화합물 5가 정상적인 세포 기능에 악영향을 미치지 않고, HCV 단백질에 대해서 효율적으로 그의 발현을 억제할 수 있는 것을 시사하고 있다.
[실시예 3B]
HCV RNA의 복제 및 안정성에 대한 화합물 5의 영향
LuHCV 세포를 10 cm 접시에 1×106 세포/접시의 비율로 파종하고, 하룻밤 이상 인큐베이팅하였다. 그 후, DMSO에 용해된 화합물 5를 최종 농도 20 μM이 되도록 첨가하고, 추가로 37 ℃, 5 ％ CO2의 배양 조건하에서 조용히 배양을 계속하였다. 대조 접시에는 DMSO만을 첨가하였다. 화합물 5의 첨가 14 시간 후 및 60 시간 후에 세포를 회수하고, 세파졸 RNA(나카라이 테스크사 제조)에 의해 전체 RNA를 추출하고, SuperScript II 역전사 효소(인비트로젠사 제조) 및 oligo-dT 프라이머(프로메가사 제조) 또는 랜덤 프라이머(인비트로젠사 제조)를 이용하여 cDNA 합성을 행하였다. 합성된 cDNA를 주형으로서 이용하여 NS5A 특이적 프라이머(5'-AGTTTTTCACGGAGGTGGATGGG-3'(서열번호 1), 5'-GTCCGGGTTCTTCCAAGACTCTA-3'(서열번호 2)), GAPDH 프라이머(5'-ACGGATTTGGTCGTATTGGG-3'(서열번호 3), 5'-GTAGTTGAGGTCAATGAAGGGGTC-3'(서열번호 4)), PrimeSTAR HS DNA polymerase(다카라 바이오사 제조)를 이용하는 PCR을 행하였다. DNA 증폭 반응 후, 아가로스겔로 전기 영동, 에티듐브로마이드에 의한 염색을 행하였다. UV 트랜스 일루미네이터를 이용하여 각각의 유전자의 발현량을 평가하였다.
결과를 도 3b에 나타낸다. 화합물 5 첨가 14 시간 후, 60 시간 후 각각의 시간 동안, 화합물 5 첨가의 유무에 관계없이 NS5A, GAPDH 모두 양적 변화를 보이지 않았다.
이는 시험한 화합물 5가 HCV-RNA의 복제 및 안정성에는 영향을 미치지 않는 것을 나타내고 있다.
실시예 3A 및 실시예 3B 양쪽의 결과로부터, 화합물 5는 HCV-RNA의 복제나 안정성에 영향을 미치지 않고, HCV 단백질의 발현을 번역 수준으로 억제할 수 있는 것이 명백해졌다.
[실시예 4]
LuHCV 세포의 세포 증식에 대한 화합물 5의 영향
LuHCV 세포를 6웰 플레이트에 5×104 세포/1 ㎖/웰의 비율로 파종하고, 밤새 인큐베이팅하였다. LuHCV 세포 파종의 다음날, 최종 시험 농도의 2배 농도의 화합물 5를 포함하는 배지를 각 웰에 1 ㎖씩 첨가하고, 화합물 5의 최종 농도를 20 μM으로 하였다. 세포를 37 ℃, 5 ％ CO2의 배양 조건하에서 조용히 배양하였다. 화합물 5 첨가 후, 0, 6, 12, 24, 36 및 48 시간 후에 각 3웰씩의 세포를 회수하고, 혈구 계산반을 이용하여 웰당에 생존하고 있는 세포수를 계측하고, 평균값을 산출하였다. 대조로서 DMSO만을 가한 웰을 이용하였다.
결과를 도 4에 나타낸다. DMSO를 첨가한 대조와, 화합물 5 첨가 세포 사이에서, 각 시간 동안 세포수에는 전혀 변화가 없었다. 이에 따라, 화합물 5는 LuHCV 세포의 세포 증식을 억제하지 않고, 또한 세포 상해성을 갖지 않는 것이 명백해졌다.
[실시예 5]
인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 활성의 평가
본 발명에 개시하는 시험 화합물에 대해서, A형 인플루엔자 바이러스(PR-8)에 대한 증식 억제 작용을 평가하였다. MDCK 세포를 6웰 플레이트에 5×105 세포/웰의 비율로 파종하고, 밤새 인큐베이팅하였다. 시험 화합물은 디메틸술폭시드(DMSO)에 용해시키고, 필요에 따라서 DMSO를 이용하여 희석 계열을 제조하였다. MDCK 세포 파종의 다음날, A형 인플루엔자 바이러스(PR-8)를 첨가함과 동시에, 시험 화합물을 최종 농도 14 μM이 되도록 첨가하고, 72 시간, 37 ℃, 5 ％ CO2의 배양 조건하에서 조용히 배양하였다. 72 시간 배양 후에, 2 ㎖의 PBS(-)로 2회 세정을 행하고, 이어서 15 ％ 아세트산/85 ％ 에탄올 용액 중에서 30 분간 고정시킨 후, 크리스탈바이올렛에 의한 염색을 행하였다.
위상차 현미경하에서 염색 후의 세포를 관찰하였다. 도 5에 나타낸 바와 같이, 시험 화합물을 첨가하지 않은 DMSO 대조의 MDCK 세포는 인플루엔자 바이러스에 감염되어 높은 비율로 사멸하고, 플레이트로부터 박리하였지만, 시험 화합물 첨가군에서는 세포사에 의한 세포의 박리는 억제되어 있었다.
이는 시험 화합물이 인플루엔자 바이러스에 대해서도 항바이러스 효과를 가지는 것을 나타내고 있다.
[실시예 6]
인플루엔자 바이러스 감염에 의한 세포사의 억제
MDCK 세포를 96웰 플레이트에 1×104 세포/100 ㎕/웰의 비율로 파종하고, 밤새 인큐베이팅하였다. 시험 화합물은 DMSO에 용해시키고, 필요에 따라서 DMSO를 이용하여 희석 계열을 제조하였다. MDCK 세포 파종의 다음날, 시험 화합물을 인플루엔자 바이러스 감염용 배지로 희석하고, 96웰 플레이트 중 배양액으로 치환하였다. 그 후, 인플루엔자 바이러스를 필요한 웰에 첨가하고, 48 시간, 37 ℃, 5 ％ CO2의 배양 조건하에서 조용히 배양하였다(시험 화합물 최종 농도 0, 5, 10 μM). 그 때, 시험웰로서 각 시험 화합물, 각 농도에 대해서 3웰씩 이용하여 해석을 행하였다.
생세포율을 측정하기 위해서, 48 시간 후에 생세포수 측정 시약 SF(나카라이 테스크사 제조)를 10 ㎕/웰로 첨가하고, 37 ℃, 5 ％ CO2의 배양 조건하에서 조용히 배양하고, 발색 반응을 행하였다. 그 후, 측정 장치 ARVO(퍼킨 엘마사 제조)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 때, 흡광도의 백그라운드로서 시험 화합물(대조로서 이용한 DMSO를 포함함)을 함유하고, 또한 세포를 포함하지 않는 웰에 대해서도 측정을 행하였다. 얻어진 수치를 동일한 화합물에 대해서 동일한 농도로 측정된 세포를 포함하는 웰의 흡광도의 값으로부터 뺌으로써 얻은 값을, 백그라운드를 포함하지 않는 실제 생세포수의 측정값으로 하였다. 얻어진 실제 생세포수의 측정값으로부터 각 시험 화합물, 각 농도의 평균값을 산출하였다. 시험 물질의 대조로서 이용한 DMSO 첨가시 산출된 값을 100 ％로 하고, 각각의 시험 화합물의 생세포수의 비율을 산출하였다.
결과를 도 6, 하기 표 2에 나타낸다. 시험 화합물 비존재하에서는 인플루엔자 바이러스의 감염에 의해, 생세포의 비율이 40 ％ 이하가 되었지만, 화합물 5, 화합물 6 또는 화합물 14의 첨가에 의해 세포사가 감소되는 것이 명백해졌다.
Figure pct00082
[실시예 7]
화합물 5의 생체내 반복 투여 독성 시험
마우스(Crlj/CD1(ICR) 계통, 수컷, 5주령)에 대해서, 1주간 순화 기간을 두고(day-7 내지 day-1), 시험 개시 전일의 체중량 평균값으로부터 군을 나누었다. 또한, 체중 평균값으로부터 화합물 5의 투여량을 산출하였다(day-1). 투여군은 플라시보 투여군(n=6), 화합물 5 투여군(n=6)의 2군으로 하였다. 투여 당일(day 00 내지 day 07)에 0.5 ％ 카르복시메틸셀룰로오스를 이용하여 제제화한 시험 화합물을 7일간 연속으로 경구 투여하고, 투여 기간 중 증상을 관찰하였다.
시험 기간 중 day-7, day-3, day-1, day4, day7에서 각 개체의 체중을 측정하였다. 화합물 5 투여 개시 당일의 투여 1/2, 1, 2, 3, 4 시간 후, 투여 개시 2일 후부터는 1일 1회의 증상을 관찰하였다.
그 결과, 7일간의 투여 기간 동안 플라시보 군과 비교하여 1000 mg/kg/일에서의 화합물 5 투여군에 의한 사망 개체는 보이지 않아, 그의 무독성량은 1000 mg/kg 이상이라는 결과가 얻어졌다.
각 군의 체중 추이에 대해서, 플라시보군과 화합물 5 투여군에 유의한 차는 없고, 투여 기간 동안 순조로운 체중량 증가를 보이며, 건강 상태를 유지하고 있었다(도 7, 표 3).
Figure pct00083
이는 시험 화합물이 생체 내에서의 독성을 갖지 않는 것을 의미한다.
통합
이상으로부터, 본 발명의 화합물은 현저한 세포 독성 및 생체내 독성을 나타내지 않고, HCV 및 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 가지는 것이 나타났다.
<산업상 이용 가능성>
본 발명자들은 다수의 화합물을 합성하여 스크리닝한 결과, 화학식 I의 구조를 가지는 화합물이 우수한 항 RNA 바이러스 활성을 가지는 것을 발견하였다. 현재 이용할 수 있는 항바이러스제는 매우 한정되어 있으며, 본 발명에 따른 약제는 새로운 치료 선택지를 제공할 수 있는 것이다. 즉 본 발명은 RNA 바이러스 감염증의 치료에 새로운 선택지를 제공하는 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> KinoPharma Inc. <120> Aniline Derivative Having Anti-RNA Viral Activity <130> PH-3818-PCT <140> PCT/JP2009/052253 <141> 2009-02-04 <150> JP 2008-078728 <151> 2008-03-25 <160> 4 <170> PatentIn version 3.4 <210> 1 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 1 agtttttcac ggaggtggat ggg 23 <210> 2 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 2 gtccgggttc ttccaagact cta 23 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 3 acggatttgg tcgtattggg 20 <210> 4 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 4 gtagttgagg tcaatgaagg ggtc 24 1/2

Claims (11)

  1. 숙주 세포의 단백질 인산화 효소를 저해하는 화합물을 유효 성분으로서 함유하는 항바이러스제.
  2. 제1항에 있어서, 상기 단백질 인산화 효소가 바이러스 감염으로 활성화되는 숙주 세포의 단백질 인산화 효소인 항바이러스제.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단백질 인산화 효소가 바이러스 단백질의 번역을 제어하는 숙주 세포의 단백질 인산화 효소인 항바이러스제.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 바이러스 감염증이 RNA 바이러스에 의해서 야기되는 것인 항바이러스제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 바이러스 감염증이 C형 간염 바이러스 또는 인플루엔자 바이러스에 의해서 야기되는 것인 항바이러스제.
  6. 하기 화학식 I로 표시되는 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 함유하는 RNA 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제.
    <화학식 I>
    Figure pct00084

    (식 중, R1은 할로겐 원자 또는 할로겐 원자로 치환될 수도 있는 C1-6알킬기를 나타내고;
    R2는 수소 원자 또는 C1-6알킬기를 나타내며;
    R3은 C1-6알킬기, C1-6알콕시기 또는 할로겐 원자로 치환될 수도 있는 페닐기 또는 단환식 복소환기를 나타내고;
    Q는 -C(O)-, -C(S)-, -SO2-, -C(O)NHC(O)-, -C(S)NHC(O)- 또는 -C(O)NHC(S)-를 나타내며;
    W는 할로겐 원자 또는 할로겐 원자로 치환될 수도 있는 단환식 또는 이환식 질소 함유 복소환기를 나타낸다)
  7. 제6항에 있어서, 상기 화학식 I 중,
    R1은 불소 또는 트리플루오로메틸기를 나타내고;
    R2는 수소 원자이며;
    R3은 메틸기, 메톡시기 또는 불소로 치환될 수도 있는 페닐기, 또는 메틸기로 치환될 수도 있는 단환식 복소환기를 나타내고;
    Q는 -C(O)-, -C(S)-, -C(O)NHC(O)- 또는 -C(S)NHC(O)-를 나타내며;
    W는 불소 원자, 또는 환 원자로서 질소 1개와 탄소 5 내지 9개를 포함하는 포화 단환식 또는 이환식 복소환기를 나타내는, RNA 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제.
  8. 제6항에 있어서, 상기 화학식 I의 화합물이 하기 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 RNA 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제.
    Figure pct00085

    Figure pct00086
  9. 제6항에 있어서, 상기 화학식 I 중,
    R1은 트리플루오로메틸기를 나타내고;
    R2는 수소 원자를 나타내며;
    R3은 페닐기, 또는 단환식 복소환기를 나타내고;
    Q는 -C(O)-, -C(S)-, 또는 -C(S)NHC(O)-를 나타내며;
    W는 환 원자로서 질소 1개와 탄소 5 내지 9개를 포함하는 포화 단환식 또는 이환식 복소환기를 나타내는, RNA 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제.
  10. 제6항에 있어서, 상기 화학식 I의 화합물이 하기 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 RNA 바이러스 감염증의 예방 또는 치료제.
    Figure pct00087
  11. 하기 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 그의 수화물.
    Figure pct00088
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