TWI461194B - 吡咯啶取代黃酮作為輻射致敏劑 - Google Patents

吡咯啶取代黃酮作為輻射致敏劑 Download PDF

Info

Publication number
TWI461194B
TWI461194B TW099112188A TW99112188A TWI461194B TW I461194 B TWI461194 B TW I461194B TW 099112188 A TW099112188 A TW 099112188A TW 99112188 A TW99112188 A TW 99112188A TW I461194 B TWI461194 B TW I461194B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
compound
radiation
cancer
formula
cdk inhibitor
Prior art date
Application number
TW099112188A
Other languages
English (en)
Other versions
TW201039817A (en
Inventor
Maggie Joyce Rathos
Kalpana Sanjay Joshi
Nikhil Krishnamurthy Hebbar
Somesh Sharma
Original Assignee
Piramal Entpr Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Piramal Entpr Ltd filed Critical Piramal Entpr Ltd
Publication of TW201039817A publication Critical patent/TW201039817A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI461194B publication Critical patent/TWI461194B/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4025—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. cromakalim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

吡咯啶取代黃酮作為輻射致敏劑
本發明係關於一種治療癌症的組合，其中該組合顯現加乘作用。該組合包含輻射及至少一種選自分子式I化合物(如此處所敘述)或其醫藥可接受鹽類或溶劑化物的細胞週期依賴激酶(CDK)抑制劑。本發明係亦關於一種癌症治療方法，特別是頭頸部癌症，此方法包含投藥醫療有效量的此組合至需要此種治療的病人。本發明係亦關於一種以選自分子式I化合物的CDK抑制劑作為輻射致敏劑之用途，輻射致敏劑可增加治療癌症，特別是頭頸部癌症，的輻射治療效用。
有用於癌症治療的大部分輻射致敏劑已由實驗室或臨床觀察發現，但沒有這些試劑交互作用的分子基礎之足夠知識。加強輻射效用的努力係基於利用輻射效果及抵抗的機制。六個一般機制如下：缺氧性增敏、DNA損傷的增加、減少的DNA修護、因DNA損傷造成的增加凋亡性細胞死亡、於腫瘤血管的作用、及細胞週期影響(Nature Clinical Practice Oncology,2007,4(5),282-294)。數十年來，許多研究集中腫瘤缺氧的問題為因輻射抗性而引起(British Journal of Cancer,2000,83(3),354-359)。缺氧細胞活體外及活體內抵抗輻射。早期實驗顯示在施以輻射時DNA損傷需要中度量的氧；但是一旦存在臨界值的氧(例如在正常組織)，則提供更多的氧不 會進一步加強輻射效果。氧為自由基媒介輻射誘發DNA損傷所必須。已提出抗性缺氧細胞族群可能為治療失敗的主要原因及此可由增加氧傳送或是施以作用類似分子氧的藥物而克服。優先殺死缺氧腫瘤細胞的藥物，例如絲裂黴素及替拉札明，顯示潛在優勢及正在研究中。
儘管缺氧現象的重要性，著重於腫瘤缺氧的研究並未成功。此失敗的許多可能原因包含藥劑的毒性(其限制劑量)、缺氧的自修正(其在分次放療期間發生，藉以含氧量正常細胞的死亡使得氧可到達先前的缺氧細胞)、抗病基因的缺氧媒介向上調控、及缺氧的存在為抗性腫瘤的標記而非快速蔓延腫瘤的原因之事實(Nature Clinical Practice Oncology,2007,4(5),282-294)。
於克服缺氧的有限成就產生正在發展以加強輻射效用的其他研究。與腫瘤缺氧搏鬥的最常研究及臨床成功方法為伴隨輻射施用細胞毒性化學療法，使用此組合產生改善結果的機制包含下列：於殺死細胞的簡單獨立累加效應；於細胞循環的輻射致敏部分(例如G2-M)捕獲細胞；標的抗性族群例如缺氧細胞或是在細胞循環的抵抗部份之缺氧細胞；及加強雷射誘發DNA損傷或防止其修護。此外，腫瘤可在輻射時以可對抗大部分輻射細胞毒效應的生長速率而增生。此增生稱為加速再增值，及結果為對存活細胞或是抗輻射細胞的剩餘族群之改善營養及血液供應。此增生反應可藉由除輻射外使用細胞毒性化療劑而克服。化療已與放療合併以最適化癌症治療中放療的治療指數。希望發展一種加強癌症輻射治療功效的輻射致敏劑，由此提供較低輻射劑量、潛在目標特定性及臨床上可接受毒性。
PCT專利公開第WO2004004632號(對應於美國專利第 7,272,193號)及PCT專利公開第WO2007148158號，敘述吡咯啶取代黃酮作為CDK抑制劑並用於不同型式的癌症之治療。CDK抑制劑為較不具毒性的及於是對評估CDK抑制劑於增加人類癌症中輻射致敏性的作用及可能機制為有利的。此對經由輻射的癌症治療為高度有益的。
在一方面，本發明係關於一種包含輻射及選自分子式I化合物(如此處所敘述)或其醫藥可接受鹽類或溶劑化物的細胞週期依賴激酶(CDK)抑制劑之組合；其中該組合顯現於癌症治療的加乘作用。
在另一方面，本發明係關於一種包含輻射及選自分子式I化合物或其醫藥可接受鹽類或溶劑化物的細胞週期依賴激酶(CDK)抑制劑之組合，以進行癌症治療的同時或循序投藥。
在另一方面，本發明係關於一種包含輻射及選自分子式I化合物或其醫藥可接受鹽類或溶劑化物的細胞週期依賴激酶(CDK)抑制劑之組合於癌症治療之用途。
在另一方面，本發明係關於一種癌症治療方法，此方法包含投藥醫療有效量的輻射及醫療有效量的選自分子式I化合物或其醫藥可接受鹽類或溶劑化物的細胞週期依賴激酶(CDK)抑制劑之組合至需要此種治療的病人。
在另一方面，本發明係關於一種以選自分子式I化合物的CDK抑制劑作為輻射致敏劑之用途，輻射致敏劑可增加癌症治療的放射治療效用。
本發明應用性的其他方面及進一步範圍可由下列詳細敘述 而更明顯。
FaDu‧‧‧人類頭頸部癌症，ATCC,USA
Gy‧‧‧戈雷
第1圖說明1微莫耳濃度化合物A(48小時治療)於FaDu細胞系(3500細胞/盤)的輻射響應之作用。
第2圖說明1微莫耳濃度化合物A(96小時治療)於FaDu細胞系(3500細胞/盤)的輻射響應之作用。
第3圖說明1微莫耳濃度化合物A(72小時治療)於FaDu細胞系(1500細胞/盤)的輻射響應之作用。
第4圖說明1微莫耳濃度化合物A(96小時治療)於FaDu細胞系(1500細胞/盤)的輻射響應之作用。
第5圖說明輻射、化合物A、組合及對照組投藥期間的平均組體重。
第6圖說明輻射、化合物A、組合及對照組投藥期間頭頸部癌症(FaDu)異種移植的平均%腫瘤重量。
本發明係關於一種組合，該組合包含輻射及選自分子式I化合物(如此處所敘述)或其醫藥可接受鹽類或溶劑化物的CDK抑制劑，其當用於治療癌症，特別是頭頸部癌症，會顯現加乘作用。
由下列分子式I所表示的CDK抑制劑係揭示於PCT專利公開第WO2004004632號(對應於美國專利第7,272,193號)及PCT專利公開第WO2007148158號。分子式I化合物為CDK抑制劑，其抑制許多癌症細胞的 增生。當用於本發明時，分子式I化合物在對抗各種實體及血液腫瘤為有效的。本發明發明者發現將分子式I的CDK抑制劑與輻射組合會產生細胞凋亡，或程序性細胞死亡的增加。
前文及後文所使用的一般名稱在此揭示內文較佳為具下列意義，除非另外指出：單數形式"一(a),""一(an),"及"該"包含複數參考物除非另外清楚指出。
當用於本文時，名稱"加乘"表示使用本發明方法及組合所達到的效果大於在相同劑量條件下分別使用輻射、及分子式I或是其醫藥可接受鹽類或溶劑化物的CDK抑制劑所得到的效果總和為高。有利的是，此種加乘提供相同劑量的更大效用，及/或預防或延緩多抗藥性的累積。
當用於本文時，名稱"醫療有效量"係表示一種輻射或分子式I的CDK抑制劑的量，其以對非增生細胞的最低毒性提供最大量的增生細胞凋亡。
當用於本文時，名稱“醫療加乘”係表示一種使用輻射及分子式I的CDK的組合治療的耐受療法所達到的醫療效果，其超過於僅使用輻射或CDK抑制劑的單一藥物治療之任何耐受劑量所達到的最適效果。
名稱“細胞凋亡”係表示一種形式的細胞死亡，其中細胞中一系列的分子步驟導致其死亡。此為身體除去不需要或不正常細胞的正常途徑。細胞凋亡過程可能在癌症細胞受阻。細胞凋亡亦稱為程序性細胞死亡。
當用於本文時名稱"增加的細胞凋亡”係定義為程序性細胞 死亡速率的增加，亦即與僅暴露(接觸)於輻射或是僅CDK抑制劑相較更多細胞引入死亡過程。
名稱"物體"當用於本文時，係表示一種動物，較佳為哺乳動物，更佳為人類，其為治療、觀察或實驗的物體。
頭頸部癌症係表示一組源自上呼吸消化道(包含唇、口腔、鼻腔、副鼻竇、咽頭、及喉頭)的類似生物類似癌症。頭頸部鱗狀上皮細胞癌(HNSCC's)構成極大部分的頭頸部癌症，及由此解剖學部位各處的黏液膜表面引起。這些包含鼻腔、副鼻竇、口腔、鼻咽、口咽、咽下部、及喉頭的腫瘤。
頭及頸部的癌症係由癌症開始的區域辨識：
1.口腔：鱗狀上皮細胞癌常見於口腔，其包含內唇、舌頭、口底、牙齦、及硬顎。
2.鼻咽：鼻咽癌發生於鼻咽(即鼻腔與耳咽管與喉嚨上方部分接觸之區域)。
3.口咽：口咽癌開始於口咽(即喉嚨中間部分)，其包含軟顎、舌底、及扁桃腺。與頭頸部其他區域的癌症相較，癌症扁桃腺的鱗狀上皮細胞癌更強烈伴隨著人類乳突病毒感染。
4.下咽：下咽包含梨狀竇、後咽壁、及環狀軟骨後區。下咽腫瘤常具有晚期診斷，及具有咽頭癌最不良預後。他們因在喉頭附近的廣泛淋巴網路而傾向於早期向其他部位轉移。
5，喉頭：喉癌開始於喉頭，癌症可發生於聲帶本身("聲門”癌)，或是於真聲帶上方及下方的組織(分別為"聲門上"癌症及"聲門下"癌 症)。
6.氣管：氣管癌症為少見的惡性腫瘤，其以許多方式生物上類似於頭頸部癌症，及有時分類為頭頸部癌症。
具有HNSCC's的病人治療模式係依據疾病部位與階段及病人整體健康狀態而定。外科手術切除及輻射療法為大多數頭頸部癌症治療的主要依靠及在大多數情況仍為照顧標準。因為在僅以放療治療的具有無法手術切除及/或不能動手術的局部晚期頭頸部癌症的病人中得到不令人滿意的結果，故研究同時的化療-輻射療法。用於本發明的CDK抑制劑係選自 下列分子式I所代表的化合物，
其中Ar為苯基，其為未經取代的或是以1、2、或3個相同或不同取代基取代，取代基係選自：鹵素(例如氯、溴、氟或碘；硝基、氰基、C1-C4-烷基、三氟甲基、羥基、C1-C4-烷氧基、羧基、C1-C4-烷氧基羰基、CONH2、及NR1R2；其中R1及R2每一個係獨立地選自氫或C1-C4-烷基。
在一個具體實施例，CDK抑制劑係為分子式I化合物的(+)- 反式異構物，如在下文分子式IA所指出，
其中Ar為苯基，其為未經取代的或是以1、2、或3個相同或不同取代基取代，取代基係選自：鹵素(例如氯、溴、氟或碘)；硝基、氰基、C1-C4-烷基、三氟甲基、羥基、C1-C4-烷氧基、羧基、C1-C4-烷氧基羰基、CONH2、及NR1R2；其中R1及R2每一個係獨立地選自氫或C1-C4-烷基。
分子式I化合物可根據PCT專利公開第WO2004004632號及PCT專利公開第WO2007148158號所揭示的方法製備，其係併入本文做為參考。敘述於下列機制I的方法可用於製備分子式(VIA)的中間物。
自分子式(II)化合物開始至分子式V化合物的製備步驟係敘述於美國專利第4900727號，其係併入本文做為參考。1-甲基-4-哌啶酮(分子式III化合物)與1,3,5-三甲氧基苯(分子式II化合物)於冰醋酸的溶液反應，以產生1-甲基-4-(2,4,6-三甲氧苯基)-1,2,3,6-四氫吡啶(分子式IV化合物)。分子式IV化合物與三氟化硼乙醚、硼氫化鈉及四氫呋喃反應以得到分子式V化合物。以上機制中分子式V化合物至分子式V1A化合物的轉化中，於哌啶環上的羥基官能在氧親核劑(例如三乙胺、吡啶、碳酸鉀或碳酸鈉)存在下以適當試劑(例如對-甲苯磺醯氯、甲基磺醯氯、三氟甲磺酸酐或五氯化磷)處理而轉化為離去基(例如甲苯磺醯基、甲磺醯基、三氟甲磺酸或鹵化物)，接著在氧親核劑(例如醋酸鈉或醋酸鉀)存在下於醇類溶劑(例如異丙醇、乙醇或丙醇)中進行縮環反應。在此步驟所涉及的縮環反應可在如上文機制所說明黃酮形成前進行或是在以所欲取代反應建立黃酮之後進行。
如所定義的分子式V1A中間化合物的對映異構地純(-)-反式對映異構物，係用於分子式I的對映異構地純化合物之製備。藉由使用具有高對映異構純度的中間物做為該製程的起始化合物，由該製程所產生以分子式I所表示的黃酮取代的所得吡咯啶(+)-反式對映異構物具有相對應高對映異構純度。
由分子式V1A中間化合物的經分辨異構地純(-)-反式對映異構物製備分子式I化合物或是其醫藥可接受鹽類的對映異構地純(+)-反式對映異構物之方法包含下列步驟：
(a)將分子式V1A中間化合物的經分辨異構地純(-)-反式對映 異構物，
在路易士酸觸媒存在下以醋酸酐處理處理以得到分子式 VIIA的經分辨乙醯化化合物，
(b)在鹼及溶劑存在下，將分子式VIIA的經分辨乙醯化化合物與分子式ArCOOH的酸或分子式ArCOCl的醯基氯或是分子式(ArCO)2O的酸酐或是分子式ArCOOCH3的酯反應，其中Ar係如上文所定義 以得到分子式VIIIA的經分辨化合物；
(c)在適當溶劑中將分子式VIIIA的經分辨化合物與鹼反應 以得到分子式IXA的相對應經分辨b-二酮化合物；
其中Ar係如上文所定義，
(d)將分子式IXA的經分辨b-二酮化合物與酸(例如鹽酸)反 應以得到分子式XA的相對應環化化合物，
(e)藉由使用脫烷劑於範圍自120-180℃的溫度加熱使分子式XA化合物進行脫烷反應以得到分子式I化合物的(+)-反式對映異構物，及選擇性地轉化此主題化合物為其醫藥可接受鹽類。
上文步驟(a)所使用的路易士酸觸媒可選自：BF3、Et2O、氯化鋅、氯化鋁及氯化鈦。
在製程步驟(b)所使用的鹼可選自三乙胺、吡啶及DCC-DMAP組合(N,N’-二環己基碳二亞胺及4-二甲基胺基吡啶的組合)。
熟知該技藝者明顯可知，已知分子式VIIIA化合物成為分子式IXA的相對應b-二酮化合物之重排為Baker-Venkataraman重排(J.Chem.Soc.,1381(1933)及Curr.Sci.,4,214(1933))。
在製程步驟(c)所使用的鹼可選自：六甲基二矽基胺基鋰、六甲基二矽基胺基鈉、六甲基二矽基胺基鉀、氫化鈉及氫化鉀。較佳鹼為六甲基二矽基胺基鋰。
在製程步驟(e)用於分子式IXA化合物脫烷反應的脫烷劑可選自：鹽酸吡啶、三溴化硼、三氟化硼乙醚及三氯化鋁。較佳脫烷劑為鹽酸吡啶。
在一個具體實施例CDK抑制劑係為一種分子式I化合物，其中苯基為以1、2、或3個相同或不同取代基取代，取代基係選自：選自氯、溴、氟或碘的鹵素，C1-C4-烷基或三氟甲基。
在另一具體實施例CDK抑制劑係為一種分子式I化合物，其中苯基為以1、2、或3個選自氯、溴、氟或碘的鹵素所取代。
在另一具體實施例CDK抑制劑係為一種分子式I化合物，其中苯基係以氯取代。
分子式I化合物(其可為醫藥可接受鹽類或溶劑化物的形式)之製造，及包含上述化合物的口服及/非腸道醫藥組合物之製造係揭示於PCT專利公開第WO2004004632號及PCT專利公開第WO2007148158號。這些PCT專利出版品，揭示由分子式I所表示的CDK抑制劑顯現顯著抗癌效用。
如在上文所指出分子式I的CDK抑制劑可以其鹽類或溶劑化物的形式使用。分子式I化合物的較佳鹽類包含鹽酸鹽類、甲磺酸鹽類及三氟醋酸鹽類。
分子式I化合物包含至少兩個對掌中心及於是以兩種不同的旋光異構物(亦即(+)或(-)對映異構物)的形式存在。所有此種對映異構物及 包含消旋混合物的其混合物係包含於本發明範圍。分子式I化合物的對映異構物可如上文所敘述由在PCT專利公開第WO2004004632、WO2008007169及WO2007148158號所揭示方法得到，或者分子式I化合物的對映異構物亦可由該技藝者所熟知的方法得到，例如對掌HPLC及酶法分割。或者是，分子式I化合物的對映異構物可由使用光學活性起始物質合成。於是，分子式I的CDK抑制劑之定義包含所有可能的立體異構物及其混合物。分子式I定義包含消旋形式及具有指定活性的經分離旋光異構物。
用於本發明組合的輻射為γ-照射。在一個具體實施例，用於γ-照射的來源為鈷-60、銥-192、或銫-137。在較佳具體實施例，用於γ-照射的來源為鈷60。
在一個具體實施例，γ-照射的可容許劑量範圍為每天1至25戈雷(Gy)。
在一個具體實施例，該組合包含輻射及CDK抑制劑，其中該CDK抑制劑係由分子式I、或是其醫藥可接受鹽類或溶劑化物表示。
在另一具體實施例，該組合包含輻射及CDK抑制劑，其中該CDK抑制劑係為如由分子式LA所表示之分子式I化合物的(+)-反式異構物，或是其醫藥可接受鹽類或溶劑化物。
在另一具體實施例，該組合包含輻射及CDK抑制劑，其中該CDK抑制劑係為(+)-反式-2-(2-氯-苯基)-5,7-二羥基-8-(2-羥甲基-1-甲基-吡咯啶-3-基))-苯並吡喃-4-酮，或是其醫藥可接受鹽類。
在一個具體實施例，包含輻射及分子式I的CDK抑制劑的該組合包括允許可同時、循序或是間隔一段時間的分別投藥之組合以得到組 合的最大效用。
為本發明目的，由分子式I化合物所選出的CDK抑制劑可在例如輻射前、後或同時投藥。在本發明較佳具體實施例，輻射係在以下文所敘述劑量投藥分子式I的CDK抑制劑或是其醫藥可接受鹽類或溶劑化物之前施用。然而，在已知情況下輻射及CDK抑制劑投藥的最適方法及順序可藉由下列慣常技術及於本專利說明書所包含資訊由熟知該技藝者適當地選擇。
在一個具體實施例，分子式I的CDK抑制劑可口服或非腸道投藥以產生及維持其最適血液含量。
為口服使用，分子式I的CDK抑制劑可以錠劑或膠囊、粉末、可分散顆粒、或扁囊劑、或做為含水溶液或懸浮液的形式投藥。在口服用錠劑的情況，通常加入的常使用載劑包含乳糖、玉米澱粉、碳酸鎂、滑石、及糖，及潤滑劑(例如硬脂酸鎂。為以膠囊形式口服投藥，有用載劑包含乳糖、玉米澱粉、碳酸鎂、滑石、及糖。
為肌肉內、腹腔內、皮下及靜脈內使用，一般使用CDK抑制劑的殺菌溶液，及應適當地調整及緩衝溶液的pH值。
在一個具體實施例，本發明組合係用於治療由頭頸部癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌(包含小及非小細胞肺癌及肺腺癌)、卵巢癌、胰臟癌(包含胰腺癌)、胃癌、大腸癌、肝細胞腺癌、多發性骨髓瘤、被套細胞淋巴瘤及惡性黑色素瘤所組成族群選出的癌症。
在一個較佳具體實施例，本發明組合係用於頭頸部癌症的治療。
在一個具體實施例，本發明組合顯現醫療加乘。
在另一具體實施例，本發明係關於一種癌症治療方法，此方法包含投藥醫療有效量的此組合至需要此種治療的病人。於是，在本發明方法中，個體中癌症的治療是靠結合選自分子式I化合物或是其醫藥可接受鹽類或溶劑化物的醫療有效量的CDK抑制劑而投藥有效於治療該癌症的醫療量的輻射至個體，其中加乘作用產生。
在一個具體實施例，本發明係關於一種癌症治療方法，此方法包含結合選自分子式I化合物的(+)-反式異構物(如由分子式IA所表示)或是其醫藥可接受鹽類或溶劑化物的醫療有效量的CDK抑制劑而投藥有效於治療該癌症的醫療量的輻射至需此治療的個體，其中加乘作用產生。
在另一具體實施例，本發明係關於一種癌症治療方法，此方法包含結合醫療有效量的CDK抑制劑而投藥有效於治療該癌症的醫療量的輻射至需要此種治療的個體，其中該CDK抑制劑為(+)-反式-2-(2-氯-苯基)-5,7-二羥基-8-(2-羥甲基-1-甲基-吡咯啶-3-基)-苯並吡喃-4-酮，或是其醫藥可接受鹽類。
在一個具體實施例，本發明係提供一種頭頸部癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胰臟癌、胃癌、大腸癌、肝細胞腺癌、多發性骨髓瘤、被套細胞淋巴瘤及惡性黑色素瘤的治療方法，此方法包含結合醫療有效量的CDK抑制劑而投藥有效於治療該癌症的醫療量的輻射至需要此種治療的個體。
在另一具體實施例，本發明係提供一種頭頸部癌症治療方法，此方法包含結合醫療有效量的CDK抑制劑而投藥有效於治療該癌症的 醫療量的輻射至需要此種治療的個體。
如在前文所指出，輻射及CDK抑制劑可同時或循序投藥。
在一個具體實施例，癌症治療方法係包含同時投藥醫療量的輻射與醫療量的CDK抑制劑至需要此種治療的個體。
在另一具體實施例，癌症治療方法係牽涉循序投藥醫療量的輻射與醫療有效量的CDK抑制劑至需要此種治療的個體。
在另一具體實施例，癌症治療方法係牽涉在投藥CDK抑制劑之前投藥醫療量的輻射至需要此種治療的個體。
在一個具體實施例，本發明係關於一種由分子式I化合物或是其醫藥可接受鹽類或溶劑化物所表示的CDK抑制劑作為輻射致敏劑之用途，輻射致敏劑可增加頭頸部癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胰臟癌、胃癌、大腸癌、肝細胞腺癌、多發性骨髓瘤、被套細胞淋巴瘤及惡性黑色素瘤治療的放射治療效用。
在另一具體實施例，本發明係關於一種選自分子式I化合物或是其醫藥可接受鹽類或溶劑化物的(+)-反式異構物的CDK抑制劑作為輻射致敏劑之用途，輻射致敏劑可增加頭頸部癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胰臟癌、胃癌、大腸癌、肝細胞腺癌、多發性骨髓瘤、被套細胞淋巴瘤及惡性黑色素瘤治療的放射治療效用。
在另一具體實施例，本發明係關於一種CDK抑制劑作為輻射致敏劑之用途，輻射致敏劑可增加頭頸部癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胰臟癌、胃癌、大腸癌、肝細胞腺癌、多發性骨髓瘤、被套細胞淋巴瘤及惡性黑色素瘤治療的放射治療效用，其中該CDK抑制劑為(+)-反式 -2-(2-氯-苯基)-5,7-二羥基-8-(2-羥甲基-1-甲基-吡咯啶-3-基)-苯並吡喃-4-酮，或是其醫藥可接受鹽類。
在另一具體實施例，本發明係關於該CDK抑制劑作為輻射致敏劑之用途，輻射致敏劑可增加頭頸部癌症治療的放射治療效用。
在一個具體實施例，本發明係關於該CDK抑制劑用於製備一種試劑(或藥物)的用途以增加頭頸部癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胰臟癌、胃癌、大腸癌、肝細胞腺癌、多發性骨髓瘤、被套細胞淋巴瘤及惡性黑色素瘤治療的放射治療效用。
在較佳具體實施例，本發明係關於該CDK抑制劑用於製備一種試劑(或藥物的用途以增加頭頸部癌治療的放射治療效用。
在一個具體實施例，本發明組合係為一種治療頭頸部癌、子宮頸癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胰臟癌、胃癌、大腸癌、肝細胞腺癌、多發性骨髓瘤、被套細胞淋巴瘤及惡性黑色素瘤的藥物，其包含隨輻射治療使用的該CDK抑制劑。
在較佳具體實施例，本發明組合係為一種治療頭頸部癌症的藥物，其包含隨輻射治療使用的該CDK抑制劑。
包含於該組合的活性成分之實際劑量可依據病人需求及要治療情況嚴重性而異。特定情況的適當劑量之決定係為該技藝技術範疇內。一般，治療係以小於該化合物最適劑量的較小劑量開始。之後，以小量增加每一個成分的劑量直到達到在這些情況下的最適效果。然而，組合中每一個成分的量將典型上少於若單獨投藥時可產生醫療效果的量。在較佳具體實施例，γ-照射及由分子式I化合物或是其醫藥可接受鹽類或溶劑化 物所表示的CDK抑制劑係循序投藥，使得γ-照射以範圍自1至25戈雷/天(較佳為1至10戈雷/天)的加乘有效劑量投藥，及CDK抑制劑以範圍自5毫克至750毫克(較佳為範圍自100毫克至500毫克)的加乘有效劑量投藥。
γ-照射或CDK抑制劑的所選擇劑量位準係依據各種因素而定，其包含所使用CDK抑制劑的活性及其投藥路徑、投藥時間、所使用CDK抑制劑的排泄速率、治療期間、與所使用CDK抑制劑合併使用的其他藥物、化合物及/或物質、所治療癌症的形式及階段、年齡、性別、重量、情況、所治療病人一般健康及先前藥物史、及藥物技藝所熟知的類似因素。
由本發明所提供的組合已在某些研究系統中，及以活體外許多不同投藥時程評估。實驗細節提供於下文。此處所呈現數據清楚顯示當與分子式I的CDK抑制劑合併時輻射顯現加乘效果。於表1-4所提供的數據清楚知道CDK抑制劑(一種代表性分子式I化合物，其此處被指名為化合物A)在活體外分析加乘地增加輻射對頭頸部癌症細胞的細胞毒性。
代表性化合物之用於藥理研究的化合物A指的是(+)-反式-2-(2-氯-苯基)-5,7-二羥基-8-(2-羥甲基-1-甲基-吡咯啶-3-基)-苯並吡喃-4-酮鹽酸及為揭示於所公開PCT專利申請案第WO2004004632號及第WO2007148158號中的一個化合物。
包含γ-照射及CDK抑制劑的本發明組合的加乘作用現在參考本發明較佳具體實施例更詳細解釋。要注意這些較佳具體實施例僅提供做為實例及不欲限制本發明。實例1至10提供化合物A(實例10化合物)的合成，然而實例11及12提供具有放射治療的活體外化合物A之組合研究。實例13提供活體內研究且實例14提供臨床研究。
下列簡寫或名稱係用於此處：ATCC：美國菌種中心
BF3：三氟化硼
CHCl3：氯仿
CO2：二氧化碳
DBTA：二苯甲醯酒石酸
DMSO：二甲亞碸
EtOAc：醋酸乙酯
Gy：戈雷
HCl：鹽酸
IPA：異丙醇
KBr：溴化鉀
MeOH：甲醇
MTT：溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2-基-2,5-二苯基四唑
Na2CO3：碳酸鈉
Na2SO4：硫酸鈉
NaBH4：氫硼化鈉
NaOH：氫氧化鈉
TFA：三氟醋酸
THF：四氫呋喃
實例
實例1：
1-甲基-4-(2,4,6-三甲氧基苯基)-1,2,3,6-四氫吡啶之製備
將1-甲基-4-哌啶酮(340公克，3.0莫耳)緩慢加至1,3,5-三甲氧基苯(500公克，2.97莫耳)於冰醋酸(600毫升)的溶液，維持反應混合物溫度低於40℃。於20分鐘期間加入濃鹽酸(450毫升)。提高溫度至85-90℃及攪拌反應混合物3.5小時。使之冷卻至40℃，倒至碎冰(4公斤)上及攪拌20分鐘。過濾未反應1,3,5-三甲氧基苯的沉澱物。使用50% NaOH水溶液在於10℃以下鹼化濾液至pH 11-12。過濾所得到灰白色固體，其以水洗及被乾燥以得到化合物：1-甲基-4-(2,4,6-三甲氧基-苯基)-1,2,3,6-四氫吡啶。
產率：580公克(74%)；熔點：112-114℃；IR(KBr)：3045,2900,2837,1600,1585公分-1；1H NMR(CDCl3,300MHz)：δ 6.15(s,2H),5.55(s,1H),3.85(s,3H),3.75(s,6H),3.10(d,2H),2.55(t,2H),2.40(s,3H),2.35(m,2H)；MS(EI)：m/z 263(M+).
實例2：
(±)-反式-1-甲基-4-(2,4,6-三甲氧基苯基)-哌啶-3-醇之製備
於氮氣壓下，在0℃，將三氟化硼乙醚(300毫升，2.36莫耳)攪拌並緩慢加至實例(1)化合物(300公克，1.14莫耳)及NaBH4(75公克，1.97莫耳)於乾THF(2.25公升)的溶液。緩慢提高反應混合物的溫度至55℃及攪拌1.5小時。冷卻至30℃。緩慢加入冰水(100毫升)接著使用濃鹽酸(375毫升)酸化。於50-55℃攪拌反應混合物1小時。冷卻至30℃及使用50% NaOH水溶液鹼化至pH 11-12。於0.5小時期間加入過氧化氫(30%，225毫升)。於55-60℃攪拌反應混合物1.5小時。冷卻至30℃及加入足夠水以溶解經沉澱鹽類。分離有機層及以醋酸乙酯(2 x 1公升)萃取水相部分。乾燥有機提出物(無水 Na2SO4)及濃縮之。所得到粗黏性棕色油以4當量濃度HCl(1.2公升)處理及以醋酸乙酯(2 x 500毫升)萃取。冷卻水相部分，以50%氫氧化鈉水溶液鹼化及使用醋酸乙酯(2 x 1公升)萃取。乾燥有機提出物(無水Na2SO4)及濃縮之以得到化合物：(±)-反式-1-甲基-4-(2,4,6-三甲氧基苯基)-哌啶-3-醇。
產率：210公克(65.6%)；熔點：96-97℃；IR(KBr)：3582,3374,3017公分-1；1H NMR(CDCl3,300MHz)：d 6.15(s,2H),4.40(m,1H),3.79(s,3H),3.74(s,6H),3.20(dd,1H),3.00(m,1H),2.80(m,1H),2.40(m,1H),2.37(s,3H),2.00(m,1H),1.90(t,1H),1.52(m,1H)；MS(CI)：m/z 282(M+1)
實例3：
(±)-反式-醋酸-1-甲基-3-(2,4,6-三甲氧基苯基)-吡咯啶-2-基甲基酯之製備
將甲基磺醯氯(30.27毫升，44.8公克，0.4莫耳)逐滴加至實例(2)化合物(100公克，0.35莫耳)及三乙胺(71.88公克，0.7莫耳)於乾THF(1.0公升)的經冷卻及攪拌溶液。於0℃進一步攪拌反應混合物45分鐘。過濾三乙胺HCl的沉澱物及以乾THF(2 x 100毫升)洗。將濾液逐滴加至醋酸鈉(115公克，1.40莫耳)於2-丙醇(1.0公升)的回流懸浮液。進一步回流反應混合物15分鐘，以EtOAc(1.0公升)稀釋及過濾鹽類。以EtOAc(2 x 100毫升)洗鹽類混合物。濃縮所合併濾液以得到膠質。將水(50毫升)加至膠質並攪拌以得到固體，過濾固體及乾燥之以得到化合物：(±)-反式-醋酸-1-甲基-3-(2,4,6-三甲氧基-苯基)-吡咯啶-2-基甲基酯。
產率：90公克(81%)；熔點：74-77℃；1H NMR(CDCl3, 300MHz)：δ 6.13(s,2H),4.00(m,2H),3.81(m,1H),3.79(s,3H),3.76(s,6H),3.20(m,1H),2.75(m,1H),2.69(m,1H),2.47(s,3H),2.00(m,2H),1.99(s,3H).
實例4：
(±)-反式-[1-甲基-3-(2,4,6-三甲氧基苯基)-吡咯啶-2-基]-甲醇之製備
將10% NaOH水溶液(596毫升)加至實例(3)化合物(241公克，0.75莫耳)於甲醇(596毫升)的溶液。於50℃攪拌反應混合物45分鐘。將之濃縮成膠質及接著倒至冰水(2公升)。過濾所得固體以得到化合物：(±)-反式-[1-甲基-3-(2,4,6-三甲氧基-苯基)-吡咯啶-2-基]-甲醇。
產率：198公克(94%)；熔點：82-85℃；IR(KBr)：3421,3009,1607公分-1；1H NMR(CDCl3,300MHz)：d 6.15(s,2H),3.92(m,1H),3.80(s,9H),3.60(dd,1H),3.45(d,1H),3.20(m,1H),2.78(m,1H),2.50(m,1H),2.42(s,3H),2.00(m,1H),1.92(m,1H)；MS(ES+：m/z 282(M+1).
實例5：
(-)-反式-[1-甲基-3-(2,4,6-三甲氧基苯基)-吡咯啶-2-基]-甲醇之製備
將(-)-DBTA(321.7公克，897.7毫莫耳)加至實例(4)化合物(250公克，889.6毫莫耳)接著加入甲醇(1715毫升)。回流反應混合物10分鐘，於室溫緩慢攪拌3小時，過濾結晶鹽類及乾燥之。
產率：185公克(30%)；熔點：102-105℃；[α]D25=-82.66°(c =0.7，甲醇)。
將鹽類以10% Na2CO3水溶液(765毫升)及EtOAc(200 x 3毫升)攪拌以在EtOAc層得到游離鹼。濃縮EtOAc層以得到化合物：(-)-反式-[1-甲基-3-(2,4,6-三甲氧基-苯基)-吡咯啶-2-基]-甲醇。
產率：80公克(98.3%)；[α]D25=-20.0°(c=0.7，甲醇)； 1H NMR(CDCl3,300MHz)：d 6.13(s,2H),3.90(m,1H),3.79(s,9H),3.57(dd,1H),3.38(d,1H),3.13(m,1H),2.69(m,1H),2.47(m,1H),2.34(s,3H),2.00(m,1H),1.93(m,1H).
將此化合物進行對掌HPLC，對掌HPLC的進行係使用柱Chiralcel OD-H(250 x 4.6毫米)及溶劑系統己烷：乙醇(92：08)與TFA(0.4%)。於264奈米紀錄結果且溶劑流率為1毫升/分鐘。如在第1圖所說明，對掌HPLC顯示100% e.e的化合物：(-)-反式-[1-甲基-3-(2,4,6-三甲氧基-苯基)-吡咯啶-2-基]-甲醇。
實例6：
(-)-反式-醋酸-3-(3-乙醯基-2-羥基-4,6-二甲氧基苯基-1-甲基-吡咯啶-2-基甲酯之製備
在N2氣壓下，於0℃，將BF3-乙醚(25.2公克，178毫莫耳)攪拌並逐滴加至實例(5)化合物(10公克，35.58毫莫耳)於醋酸酐(19.48毫升，176毫莫耳)的溶液。於室溫攪拌反應混合物2小時。將之倒至碎冰(1公斤)上，使用飽和Na2CO3水溶液鹼化及使用EtOAc(3 x 200毫升)萃取。使用鹽水洗有機提出物，乾燥(無水Na2SO4)及濃縮以得到化合物：(-)-反式-醋酸-3-(3-乙醯基-2-羥基-4,6-二甲氧基-苯基)-1-甲基-吡咯啶-2-基甲酯。
產率：10公克(83%)；1H NMR(CDCl3,300MHz)：δ 14.20(s,1H),5.96(s,1H),4.10(d,2H),3.90(s,3H),3.89(s,3H),3.85(m,1H),3.26(m,1H),2.82(m,1H),2.74(m,1H),2.66(s,3H),2.52(s,3H),2.21(m,2H),2.10(s,3H).
實例7：
(-)-反式-1-[2-羥基-3-(2-羥甲基-1-甲基吡咯啶-3-基)-4,6-二甲氧基苯基)-乙酮之製備
對實例(6)化合物(10公克，28.4毫莫耳)於甲醇(25毫升)的溶液於室溫攪拌並加入10% NaOH(25毫升)水溶液。將反應混合物溫度提高至50℃維持45分鐘。將之冷卻至室溫，使用濃鹽酸酸化及濃縮以移除甲醇，使用飽和Na2CO3水溶液鹼化。過濾、以水洗及乾燥化合物：(-)-反式-1-[2-羥基-3-(2-羥甲基-1-甲基-吡咯啶-3-基)-4,6-二甲氧基苯基)-乙酮。
產率：7.14公克(82%)；IR(KBr)：3400,3121,3001,1629,1590公分-1；1H NMR(CDCl3,300MHz)：d 5.96(s,1H),3.93(m,1H),3.90(s3H),3.88(s,3H),3.59(dd,1H),3.37(d,1H),3.13(m,1H),2.75(m,1H),2.61(s,3H),2.59(m,1H),2.37(s,3H),2.00(m,2H)；MS(ES+)：m/z 310(M+1).
實例8：
(+)-反式-2-(2-氯苯基)-8-(2-羥甲基-1-甲基吡咯啶-3-基)-5,7-二甲氧基-苯並吡喃-4-酮之製備
在氮氣壓下，於0℃，將氫化鈉(50%，0.54公克)，11.25毫 莫耳)以比例分次加至實例(7)化合物(0.7公克，2.2毫莫耳)於乾DMF(15毫升)的溶液並攪拌。於10分鐘後，加入2-氯苯酸甲酯(1.15公克，6.75毫莫耳)。於25℃攪拌反應混合物2小時。在20℃以下小心加入甲醇。將反應混合物倒至碎冰(300公克)上，以1：1 HCl(pH 2)酸化及使用EtOAc(2 x 100毫升)萃取。使用飽和Na2CO3(pH 10)鹼化水層及使用CHCl3(3 x 200毫升)萃取。乾燥(無水Na2SO4)有機層及濃縮之。對此餘留物，加入濃HCl(25毫升)及於室溫攪拌2小時。將反應混合物倒至碎冰(300公克)上及使用飽和Na2CO3水溶液使成鹼性。使用CHCl3(3 x 200毫升)萃取混合物。乾燥(無水Na2SO4)、濃縮及以水洗有機提出物，以得到化合物：(+)-反式-2-(2-氯苯基)-8-(2-羥甲基-1-甲基-吡咯啶-3-基)-5,7-二甲氧基-苯並吡喃-4-酮。
產率：0.67公克(64%)；熔點：91-93℃；[α]D25=+5.8°(c=0.7，甲醇)；IR(KBr)：3431,1648,1598,1571公分-1；1H NMR(CDCl3,300MHz)：δ 7.70(dd,1H),7.52(m,1H),7.45(m,2H),6.50(s,1H),6.44(s,1H),4.17(m,1H),4.00(s,3H),3.97(s,3H),3.64(dd,1H),3.40(d,1H),3.15(m,1H),2.74(d,1H),2.52(m,1H),2.32(s,3H),2.00(m,2H)；MS(ES+)：m/z 430(M+1).
實例9：
(+)-反式-2-(2-氯苯基)-5,7-二羥基-8-(2-羥甲基-1-甲基吡咯啶-3-基)-苯並吡喃-4-酮之製備
將熔融鹽酸吡啶(4.1公克，35.6毫莫耳)加至實例(8)化合物(0.4公克，0.9毫莫耳)及於180℃加熱1.5小時。冷卻反應混合物至25℃，以 MeOH(10毫升)稀釋及使用Na2CO3鹼化至pH 10。過濾混合物及濃縮有機層。將餘留物懸浮於水(5毫升)，攪拌30分鐘，過濾及乾燥以得到化合物：(+)-反式-2-(2-氯苯基)-5,7-二羥基-8-(2-羥甲基-1-甲基-吡咯啶-3-基)-苯並吡喃-4-酮。
產率：0.25公克(70%)；IR(KBr)：3422,3135,1664,1623,1559公分-1；1H NMR(CDCl3,300MHz)：d 7.56(d,1H),7.36(m,3H),6.36(s,1H),6.20(s,1H),4.02(m,1H),3.70(m,2H),3.15(m,2H),2.88(m,1H),2.58(s,3H),2.35(m,1H),1.88(m,1H)；MS(ES+)：m/z 402(M+1)；Analysis：C21H20ClNO5 C,62.24(62.71)；H,5.07(4.97)；N,3.60(3.48)；Cl,9.01(8.83).
實例10：
(+)-反式-2-(2-氯苯基)-5,7-二羥基-8-(2-羥甲基-1-甲基-吡咯啶-3-基)-苯並吡喃-4-酮鹽酸之製備
(化合物A)
將實例(9)化合物(0.2公克，0.48毫莫耳)懸浮於IPA(5毫升)及加入3.5% HCl(25毫升)。加熱懸浮液以得到清澈溶液。冷卻溶液及過濾固體以得到化合物：(+)-反式-2-(2-氯苯基)-5,7-二羥基-8-(2-羥甲基-1-甲基-吡咯啶-3-基)-苯並吡喃-4-酮鹽酸或化合物A。
產率：0.21公克(97%)；熔點：188-192℃；[α]D25=+21.3°(c=0.2，甲醇)；1H NMR(CD3OD,300MHz)：δ 7.80(d,1H),7.60(m,3H), 6.53(s,1H),6.37(s,1H),4.23(m,1H),3.89(m,2H),3.63(m,1H),3.59(dd,1H),3.38(m,1H),2.90(s,3H),2.45(m,1H),2.35(m,1H)；MS(ES+)：m/z 402(M+1)(自由基).
將此化合物進行對掌HPLC。對掌HPLC的進行係使用柱Chiralcel OD-H(250 x 4.6毫米)及溶劑系統己烷：乙醇(92：08)與TFA(0.4%)。於264奈米紀錄結果且溶劑流率為1毫升/分鐘。如在第3圖所說明，對掌HPLC顯示100% e.e的化合物：(+)-反式-2-(2-氯-苯基)-5,7-二羥基-8-(2-羥基-甲基-1-甲基-吡咯啶-3-基)-苯並吡喃-4-酮鹽酸。
實例11：
活體外MTS試驗
該試驗係根據敘述於Molecular Cancer Therapeutics,2007,6(9)的方法進行；其揭示係併入做為試驗意旨參考。
MTS(Promega,Cat # G1111)為一種四唑化合物((3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑，內鹽；MTS)以用於決定增生中活細胞數目的比色試驗、細胞毒性或化學致敏性試驗。此是隨電子耦合試劑PMS(吩嗪硫酸甲脂)使用。MTS由細胞生物還原為可溶於組織培養介質的甲暨。甲暨於490奈米的吸收值可自96孔試驗培養板直接測量且不需額外處理。在代謝活性細胞中發現的脫氫酶完成MTS成為水溶性甲暨的轉化。於490奈米吸收值測得的甲暨產物量直接正比於培養中活細胞數目。
在測試化合物A於FaDu(人類頭頸部癌症，ATCC,USA)細胞的輻射致敏性之作用之前，使用MTS試驗決定單單化合物A的劑量相依細胞 毒性。腫瘤細胞在各種濃度的化合物A存在下培養48小時及進行MTS試驗。發現FaDu細胞中化合物A的IC30、IC50及IC70分別為0.7、1.0及2微莫耳)濃度。僅輻射亦引起細胞存活的劑量相依減少。
步驟流程
Fa-Du(人類頭頸部癌症，ATCC,USA)細胞係以1500細胞/孔的密度在組織培養等級96孔培養板中播種於180微升的MEM(極限必需培養基)及使之在37±1℃的飽和溼度的5% CO2培養箱生長24小時。
製做三組相同的細胞。播種後在24小時的時間間隔之後，於室溫分別以劑量2、4、6、8及10戈雷照射第一及第二組細胞的不同孔。照射後24小時(亦即在實驗第三天)將第二組進一步以IC30濃度的化合物A處理。第三組在實驗第三天僅以IC30濃度的化合物A處理。
為在任何孔得到IC30濃度(0.7微莫耳濃度)的化合物，加入20微升濃度10 x IC30。(亦即7微莫耳濃度)的貯存液於孔中(先溶解於DMSO及接著溶解於細胞介質，最後DMSO濃度應不超過0.5%)及使用MEM稀釋至200微升。將孔在37±1℃的飽和溼度的5% CO2培養箱分別培養48小時及96小時。在48小時及96小時分別完成後，自所有孔移除介質及加入新鮮MEM及將培養板進一步培養額外4-6天或是自實驗開始總共8-10天。在實驗結束時，自所有孔移除介質及於每孔及細胞介質加入20微升MTS(2毫克/毫升於磷酸鹽緩衝溶液，pH 6-6.5及過濾器殺菌)及1微升PMS(3毫莫耳濃度於PBS，pH 7.3及過濾器殺菌)，以調整總體積為200微升/孔。將培養板在37±1℃的飽和溼度的5% CO2培養箱培養2-4小時。將培養板於490奈米於分光光度計(SpectraMax,Molecular Devices,USA)讀取，及使用SoftMax(用於 SpectraMax的軟體)計算百分率細胞毒性。
使用IC50及IC70濃度的化合物A重複以上實驗。
在FaDu細胞系的輻射效果之加強係使用Chou及Talalay的CompuSyn軟體(如在Pharmacological Reviews,2006,58,621-681所敘述，其係併入此處做為參考)評估。合併用藥指標(CI)係用於評估組合是否為累加的，加乘的或是對抗的。CI<1為加乘的，CI=1為累加的及CI>1為對抗的。例如，在使用濃度IC70的化合物A處理48小時，於所有輻射劑量組合為加乘的(CI=0.7)。在兩種情況(亦即IC30及IC50的化合物A處理96小時)於所有輻射劑量組合指標為累加的(CI=1)。在使用濃度IC70的化合物A之96小時的處理，在2、4及6戈雷之組合為加乘的(CI<1)。
結果示於表1、表2及表3。
表2：MTS試驗中僅化合物A IC50(48小時及96小時)、僅輻射
結論
MTS試驗顯示在FaDu細胞系的輻射效果之加強，其在6、8 及10戈雷於輻射後暴露於IC30及IC50的化合物A 48小時為加乘的。甚至在僅2、4、及6戈雷的臨床相關劑量，亦觀察到輻射響應的顯著增強。類似地，在化合物A的濃度IC70的，在所有輻射劑量之組合為加乘的。
輻射響應的增強亦在96小時的化合物A治療觀察到。雖然在兩種情況(亦即IC30及IC50的化合物A)組合指標於所有劑量都是為累加的，可清楚地看到在6戈雷非常顯著的輻射響應之增強。類似地，在化合物A的IC70，在2、4、及6戈雷組合為加乘的。
實例12：
活體外同本繁殖試驗
該試驗係根據敘述於Radiotherapy and Oncology,2004,71,213-221的方法進行；其揭示係併入做為試驗教示參考。
因為在臨床化療合併放療的日益增加關注及具有輻射加強潛力的新藥劑發展，存在輻射及化療藥物之間的交互作用之臨床前研究的增加需求。一般認為同本繁殖試驗為活體外輻射研究的最適測試系統。的確，對於化學致敏性測試，比色試驗(例如四唑(MTT/MTS)及磺醯羅丹明B(SRB)試驗)已取代同本繁殖試驗。然而，對於輻射致敏性測試，同本繁殖試驗仍為黃金標準。認為比色試驗不足以測量輻射致敏性(因為短的試驗期間)。在輻雷射處理之後，註定要死的細胞仍可進行一或更多次細胞分裂。所以，在這些經照射細胞表現其輻射-誘發損傷之前需要相當一段時間。
步驟流程
自對數增值期培養的Fa-Du細胞藉由胰蛋白酶消化收穫、計數及以1500細胞/孔的細胞密度置於六-孔培養板及製做四個相同組。第一組 用做未經處理的對照組。第二及第三組的不同孔。在播種後24小時於室溫分別以2、4、6、8及10戈雷的劑量照射。第三組在照射後24小時(亦即在實驗第三天)進一步以IC50濃度的化合物A處理。第四組係在實驗第三天僅以IC50濃度的化合物A處理。
在分別完成72小時及96小時之後，更換所有孔的介質及自實驗第一天(亦即細胞播種天)算起培養板培養總共12-14天以使得細胞有足夠時間形成至少50個細胞的群落。吸出介質及以比例為2：1的甲醇及醋酸混合物固著群落。在以水清洗之後重複固著步驟。乾燥培養板及將群落使用0.1%結晶紫染色5分鐘，最後以水洗孔及乾燥。計數群落及結果示於表4。
實驗最初使用3500細胞/孔進行及以1微莫耳濃度的劑量使用化合物A處理48小時及96小時，但是在對照組的群落數太多及於是無法計數群落。然而，觀察到於輻射響應的視覺增強(如在第1圖及第2圖所觀察)。第3圖及第4圖顯示於FaDu細胞系(播種密度：1500細胞/培養板)因1微莫耳濃度的劑量的化合物A的輻射響應之視覺增強。
結論
以1微莫耳)濃度的劑量使用化合物A的處理72小時及96小時增強在4及6戈雷的這些細胞之輻射響應。
實例13：
活體內研究
該試驗係根據敘述於Clinical Cancer ResearcH),2003,9,6052-6061的方法進行；其揭示係併入做為試驗教示參考。
該活體內研究可藉由下列所敘述方法於重度合併性免疫不全症(SCID)老鼠菌種-CBySmn.CB17-Prkdcscid/J使用異種移植模型進行。選擇每一組老鼠的統計顯著性數目(n=6)以能夠統計地評估研究數據。使用六至八周大的SCID老鼠。頭頸部癌症細胞在37℃的5% CO2培養箱生長於包含10%胎兒血清的MEM介質。藉由在1000rpm離心10分鐘而將細胞顆粒化。再次將細胞懸浮於鹽水以得到計數為30 X 106細胞每毫升；將0.2毫升的此細胞懸浮液藉由皮下路徑注入SCID老鼠的右側腹。每天觀察老鼠的可觸知腫瘤質體。一旦腫瘤到達5-10毫米直徑的大小，將動物隨機分為個別組的藥物/輻射治療及媒劑(鹽水)治療。將化合物A(腹膜內)及輻射依時程投藥且每天進行腫瘤測量。在整個期間紀錄所有組的體重。每天記錄腫瘤大小及其他毒性徵狀(外部)。腫瘤重量(毫克)的估計係根據長橢球體公式：{長度(毫米)x[寬度(毫米)2]x 0.5}。經化合物處理動物的腫瘤生長的計算是依照：T/C(經處理組/對照組)x 100%及生長抑制百分率(GI%)為[100-T/C%]。
研究組的分派
當腫瘤大小到達5-10毫米直徑的大小時，將動物隨機分為對 照組及治療組。
研究設計
使用分次劑量的輻射。所使用總輻射劑量為15戈雷。
分次輻射劑量為每周兩次3戈雷，接著為化合物A每天35mpk(毫克/公斤)持續18天。
劑量時程
所有老鼠皆藉由腹膜內路徑投藥CDK抑制劑。對照組(未經治療)動物係以鹽水注入。如在研究設計所提及持續治療18天。
觀察與測量
觀察下列參數
1.總體動物健康-每天
2.體重-每天
3.腫瘤測量每兩天
使用長橢球體公式計算腫瘤重量(以毫克表示：腫瘤重量(毫克)=長度(毫米)X[幅度(毫米)2]X 0.5
於已知日子，經治療組與對照組比值(T/C%)的計算係使用 公式：
於已知日子，經治療組與對照組比值(T/C%的計算係使用公式：
4.生長抑制(GI)的計算為 第X天的GI於=第X天的100-T/C%
CDK抑制劑非常活性GI%≧75%
CDK抑制劑普通活性GI%≧50%
CDK抑制劑弱活性GI%=30-50%
CDK抑制劑不活性GI%≦30%
結束步驟
在實驗結束時，使用高劑量戊巴比妥鈉(100毫克/公斤腹膜內/靜脈內)或暴露於二氧化碳氣體使動物安樂死。
結果
結果說明於表5。第5圖說明在所繪製藥物投藥期間平均組體重。第6圖說明在18天期間頭頸部癌症(FaDu)異種移植的平均%腫瘤重量。
結論
輻射接著化合物A的組合於人類FaDu異種移植模型顯示較僅有輻射或僅有化合物A為顯著的活體內效用。
實例14：
臨床步驟流程：
臨床研究可由下列所敘述方法進行。
主要目的：
決定具有再發性及/或局部末期的頭頸部鱗狀上皮細胞癌(SCCHN)的個體中與輻射結合的化合物A的最大耐受劑量(MTD)及劑量限制毒性(多種毒性)(DLT/s)。
次要目的：
1.評估研究族群中化合物A及輻射組合療法的安全及耐受性；2.分析研究族群中化合物A藥物動力(PK)；及3.評估研究族群中化合物A及輻射組合療法的效用。
研究設計：
此為階段I/II開放性標示研究，其要評估具有再發性及/或局部末期的頭頸部鱗狀上皮細胞癌的個體中與輻射結合的化合物A的安全及效用。預期在此研究會使用約22至28個個體。
在階段I成分中，每群3個個體於21-天循環以化合物A及輻射處理，接著進行安全評估。若該配方在第一循環可耐受，則在下一群的3個個體執行化合物A劑量升高。
化合物A劑量升高如下進行：
1)3個個體於劑量位準1(如30分鐘靜脈滴注的100毫克/公尺2/天)進入此研究。
2)若在循環1期間3個個體都沒有經歷DLT，依據步驟流程設計持續劑量升高。
3)若3個個體中的一個經歷第一循環DLT，則加入多至三個 額外個體至此群(最多6個)及若3個額外個體中都沒有經歷DLT，則允許劑量升高。
4)若在初始或經擴充群中的2個個體(6個中的2個)經歷第一循環DLT，則將此劑量標示為最大投藥劑量(MAD)及MTD，與所建議階段II劑量(RPTD)相同的是先前劑量(在此先前劑量：≦1/6個體經歷DLT)。在階段II成分中，10個額外個體使用於RPTD以評估臨床效用及進一步定義配方的安全數據。
階段I成分的化合物A劑量位準係示於下表6：
沒有任何個體內劑量升高。
在此研究中化合物A的初始劑量(100毫克/公尺2/天)幾乎為化合物A單一藥劑RPTD的一半。在階段I研究使用給藥配方以決定RPTD。
研究治療：
化合物A係以上文所敘述劑量以靜脈滴注的方式於5%葡萄糖在每一個21天循環自第1天至第5天投藥30分鐘。所有個體藉由使用標準習知分次方式(亦即每天2戈雷(Gy)，每週5天，總輻射劑量為60戈雷(Gy))而接收所涉及區域之外部光束放射治療。脊髓的總輻射劑量小於46戈雷。化合物A及放射治療的投藥進行六週(亦即2循環的化合物A及60分次的輻射)。一個21-天循環的組合配方包含自第1天至第5天投藥的化合物A及於第1至5天、第8至12天及第15至19天的放射治療(每天2戈雷)。個體在疾病(臨床 或目標)發展或是不可接受毒性發展的情況下中斷。
FaDu‧‧‧人類頭頸部癌症，ATCC,USA
Gy‧‧‧戈雷

Claims (7)

  1. 一種包含輻射及一CDK抑制劑的組合，用以治療頭頸部癌，其中該CDK抑制劑係由下列分子式I表示； 其中Ar為苯基，其為以1或2個不同的取代基取代，該取代基係選自：氯、硝基、氰基、C1-C4-烷基以及三氟甲基；或其一醫藥可接受鹽類或溶劑化物。
  2. 如申請專利範圍第1項的組合，其中該CDK抑制劑係為如分子式IA所表示的分子式I化合物的(+)-反式異構物或其一醫藥 可接受鹽類或溶劑化物； 其中Ar為苯基，其為以1或2個不同的取代基取代，該取代基係選自：氯、硝基、氰基、C1-C4-烷基以及三氟甲基。
  3. 如申請專利範圍第1項或第2項的組合，其中由分子式I化合物所表示的該CDK抑制劑係為(+)-反式-2-(2-氯-苯基)-5,7-二 羥基-8-(2-羥甲基-1-甲基-吡咯啶-3-基)-苯並吡喃-4-酮，或是其醫藥可接受鹽類。
  4. 如申請專利範圍第1項或第2項的組合，其中所使用的該輻射係為γ-輻射。
  5. 如申請專利範圍第1項的組合，其中一醫療量的輻射與一醫療量的該CDK抑制劑或其一醫藥可接受鹽類或溶劑化物，係同時或循序投藥至對其需要的一個體。
  6. 如申請專利範圍第5項的組合，其中一醫療量的輻射與一醫療量的該CDK抑制劑或其一醫藥可接受鹽類或溶劑化物，係循序投藥至對其需要的一個體。
  7. 如申請專利範圍第6項的組合，其中一醫療量的輻射係在一醫療量的該CDK抑制劑或其一醫藥可接受鹽類或溶劑化物之前投藥至對其需要的個體。
TW099112188A 2009-05-05 2010-04-19 吡咯啶取代黃酮作為輻射致敏劑 TWI461194B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IN1174MU2009 2009-05-05
US22452409P 2009-07-10 2009-07-10

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201039817A TW201039817A (en) 2010-11-16
TWI461194B true TWI461194B (zh) 2014-11-21

Family

ID=42352216

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW099112188A TWI461194B (zh) 2009-05-05 2010-04-19 吡咯啶取代黃酮作為輻射致敏劑

Country Status (14)

Country Link
US (1) US8895605B2 (zh)
EP (1) EP2427188B1 (zh)
JP (1) JP5730288B2 (zh)
KR (1) KR20120032476A (zh)
CN (1) CN102458398B (zh)
AR (1) AR079092A1 (zh)
AU (1) AU2010244101A1 (zh)
CA (1) CA2761182A1 (zh)
IL (1) IL216163A0 (zh)
MX (1) MX2011011687A (zh)
NZ (1) NZ596861A (zh)
RU (1) RU2011148954A (zh)
TW (1) TWI461194B (zh)
WO (1) WO2010128443A1 (zh)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012123889A1 (en) * 2011-03-14 2012-09-20 Piramal Healthcare Limited A synergistic pharmaceutical combination for the treatment of pancreatic cancer
TW201300105A (zh) * 2011-05-31 2013-01-01 Piramal Life Sciences Ltd 治療頭頸鱗狀細胞癌之相乘藥物組合物
WO2012176163A2 (en) * 2011-06-24 2012-12-27 Piramal Enterprises Limited Compounds for the treatment of cancers associated with human papillomavirus
US20140348950A1 (en) * 2012-01-13 2014-11-27 Piramal Enterprises Limited Pyrrolidine- substituted flavone derivatives for prevention or treatment of oral mucositis
CA2880764C (en) 2012-08-03 2022-08-30 Foundation Medicine, Inc. Human papilloma virus as predictor of cancer prognosis
US11007174B2 (en) * 2013-07-12 2021-05-18 Piramal Enterprises Limited Pharmaceutical combination for the treatment of melanoma
CN114478524A (zh) * 2022-03-15 2022-05-13 江苏省肿瘤医院 1,8-萘啶类化合物及其应用
CN114560799A (zh) * 2022-03-15 2022-05-31 江苏省肿瘤医院 腈基取代苯基类化合物及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200913991A (en) * 2007-05-15 2009-04-01 Piramal Life Sciences Ltd A synergistic pharmaceutical combination for the treatment of cancer

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IN164232B (zh) 1986-04-11 1989-02-04 Hoechst India
US6281223B1 (en) * 1999-04-13 2001-08-28 Supergen, Inc. Radioenhanced camptothecin derivative cancer treatments
TWI331034B (en) 2002-07-08 2010-10-01 Piramal Life Sciences Ltd Inhibitors of cyclin-dependent kinases and their use
US7272193B2 (en) 2003-06-30 2007-09-18 Intel Corporation Re-mapping trellis encoded data associated with a 2-bit constellation tone to data associated with a pair of 1-bit constellation tones
BRPI0621777A2 (pt) * 2006-06-21 2013-03-12 Piramal Life Sciences Ltd derivados de flavona enantiomericamente puros para o tratamento de distérbios proliferativos e processos para sua preparaÇço
WO2008007169A1 (en) 2006-07-07 2008-01-17 Piramal Life Sciences Limited An enantioselective synthesis of pyrrolidine-substituted flavones

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200913991A (en) * 2007-05-15 2009-04-01 Piramal Life Sciences Ltd A synergistic pharmaceutical combination for the treatment of cancer

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Peter M Fischer et al., CDK inhibitors in clinical development for the treatment of cancer, Expert Opinion on Investigational Drugs, 2003, 12(6), 955-970. Suzy Kim et al., Enhancement of Radiaion Effects by Flavopiridol in Uterine Cervix Canc *

Also Published As

Publication number Publication date
US8895605B2 (en) 2014-11-25
NZ596861A (en) 2014-01-31
CN102458398A (zh) 2012-05-16
KR20120032476A (ko) 2012-04-05
RU2011148954A (ru) 2013-06-10
MX2011011687A (es) 2012-02-29
JP5730288B2 (ja) 2015-06-10
IL216163A0 (en) 2012-01-31
AR079092A1 (es) 2011-12-28
WO2010128443A1 (en) 2010-11-11
AU2010244101A1 (en) 2012-01-12
CA2761182A1 (en) 2010-11-11
JP2012526098A (ja) 2012-10-25
CN102458398B (zh) 2014-07-16
TW201039817A (en) 2010-11-16
EP2427188B1 (en) 2016-08-10
US20120046334A1 (en) 2012-02-23
EP2427188A1 (en) 2012-03-14
AU2010244101A2 (en) 2011-12-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI461194B (zh) 吡咯啶取代黃酮作為輻射致敏劑
CN105712991B (zh) 7‑氮杂吲哚衍生物
CN106866571B (zh) 杂环脲类化合物及其药物组合物和应用
ES2906785T3 (es) Pirazoles 3,5-disustituidos útiles como inhibidores de la quinasa de punto de control 1 (CHK1), y sus preparaciones y aplicaciones
KR20080091948A (ko) 락탐형 피리딘 화합물을 포함하는 허혈성 질환의 예방 및치료용 약학조성물
CN102365271A (zh) 作为自分泌运动因子抑制剂的杂环化合物
CN106029614A (zh) 化合物的组合物及其用途
CN101808988A (zh) 用于肿瘤治疗的哌啶和哌嗪衍生物
US20190134029A1 (en) Carboxamide derivatives useful as rsk inhibitors
CN110382501A (zh) 用于治疗认知损害的苯并二氮杂环庚三烯衍生物，组合物和方法
CN105530931A (zh) 用于治疗黑素瘤的药物组合
US20190167639A1 (en) Synergistic pharmaceutical combination for the treatment of squamous cell carcinoma of head and neck
TW200524614A (en) Combination of mGluR2 antagonist and AChE inhibitor
CN103403005A (zh) 5-([1,2,3]-三唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶衍生物
CN106029657A (zh) 作为肾上腺素能受体α2C拮抗剂的取代的联哌啶基衍生物
ES2963054T3 (es) Derivado de guanidina
Luthra et al. Design, synthesis and in vitro study of densely functionalized oxindoles as potent α-glucosidase inhibitors
KR20200054096A (ko) Yap-tead 결합을 저해하는 화합물 및 이를 유효 성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물
CN104337812B (zh) 取代的杂芳基化合物及其使用方法和用途
TW201242597A (en) A synergistic pharmaceutical combination for the treatment of pancreatic cancer
ES2893001T3 (es) Nuevos derivados de dihidropiranopirimidinona y su uso
TW200906831A (en) Kinase inhibitor
WO2021017880A1 (zh) 一类靶向stat3双功能磷酸化位点的三芳香环类化合物及其应用
CN107586281A (zh) 芳烷杂环类衍生物及其在多靶点抗抑郁症中的应用
CN103764651B (zh) 适合治疗癌症疾病的7-氮杂吲哚衍生物

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Annulment or lapse of patent due to non-payment of fees