KR20140012024A

KR20140012024A - 국소 진피 제형들

Info

Publication number: KR20140012024A
Application number: KR1020137006347A
Authority: KR
Inventors: 존 엠 매슬로스키; 데클란 댈리
Original assignee: 파이브로셀 테크놀로지스, 인코퍼레이티드
Priority date: 2010-08-27
Filing date: 2011-08-29
Publication date: 2014-01-29
Also published as: JP2013536252A; US20140099383A1; CA2809371A1; WO2012027742A3; WO2012027742A2; EP2608768A2; CN103269684A; US20120219634A1; AU2011293146A1

Abstract

본 발명은 자가 섬유아세포들의 배양으로부터 얻어지는 조절된 배지를 함유하는 자가 국소 제형에 관한 것이다. 다른 국소 제형들과는 달리, 이것은 단지 제형을 사용하려는 사람에 의해 얻어지는 세포들로부터 유도되므로 자가이다. 이는 세포들로부터 유도되는 단백질과의 임의의 가능한 반응을 방지한다. 바람직한 제형들은 겔들, 크림들, 로션들, 및 연고들을 포함한다. 자가 진피 섬유아세포들을 배양시킴으로써 얻어지는 조절된 배지의 국소 제형들은 흉터의 예방 및 치료, 노화의 징후들의 감소 및 피부의 질의 개선을 위해 개인들에게 국소적으로 투여된다.

Description

국소 진피 제형들 {TOPICAL DERMAL FORMULATIONS}

본 출원은 2010년 8월 27일에 출원된 미국 특허 출원 번호 61/377,803 및 2010년 12월 9일에 출원된 미국 특허 출원 번호 61/421,516에 대한 우선권을 주장한다.

본 출원은 사람의 피부의 복구, 유지 및/또는 장기간 교정을 위한 국소 제형들에 관한 것이다.

피부 질은 연령, 손상, 일광 및 다른 환경적 제제들에 대한 노출, 가끔은, 질환 또는 자가면역 기능장애들로 악화된다. 많은 국가들에서는, 진흙 및 본초 혼합물들, 동물 지방들로부터 더욱 최근에는 에멀션들, 로션들, 크림들, 겔들, 및 생물학적 제제들까지의 광범위한 물질들이 적용되어 왔다. 이들 물질들 중 많은 것은 약제학적 활성제들을 함유하지 않지만, 대신에, 피부를 재수화시키고 매끄럽게하기 위해 비교적 비활성 물질들의 특성에 의존한다. 이러한 이점들은 보통 당해 제제가 피부에 발라져 있는 동안에만 지속된다.

많은 약제학적 활성제들은 국소 도포를 위해 로션들, 겔들, 크림들, 용액들, 및 스프레이들과 혼합되어 왔다. 예들은 염증을 감소시키기 위한 코르티손 및 항히스타민제들, 감염을 치료하기 위한 항생제들, 항균제들, 가려움 방지제, 및 건조제들을 포함한다. 일부는 노화 반점들을 치료하기 위한 표백제들 및 털을 제거하기 위한 화학약품들을 포함한다. 이들 제형들은 특정 활성 성분들에 대해 매우 특이적이며, 피부 질을 회복시키거나 노화의 효과를 감소시키지 않는다.

더욱 최근에는, 국소 생물학적 제형들이 개발되어 왔다. 이들은 시토카인들 및 성장인자들과 같은 제제들, 콜라겐 및 다른 세포외 매트릭스 물질들, 및 폴리히드록시산들과 같은 수화 화합물들을 함유하는 제형들을 포함한다. 결과들은 대부분의 경우에 생물학의 특이적 효과로 제한되어 왔다.

다른 생물학적 제형들은 성장인자들, 세포외 매트릭스 물질들, 및 예들 들어 아래 비특허문헌과 2009년 5월 14일에 공고된 특허문헌 1에 기술된 것과 같은 세포배양기에서 발견된 다른 활성물질들과 같은 활성 성분들의 확실하지 않은 혼합물들을 함유한다. 그러나, 이들 제형들의 많은 것들의 문제점은 이들이 사람에게 혼합물이 투여되지 않고, 배양기의 제안된 유익한 효과들을 무효화시킬 수 있는 외래 단백질들에 대한 면역 반응들을 유도할 수 있다.

US

20090123503

A1

Mehta, et al., in J Drugs Dermatol. 2008 Sep;7(9):864-71

따라서, 본 발명의 목적은 흉터의 예방 및 치료, 노화의 징후들의 감소 및 피부의 질의 개선을 위해 환자들에 대한 국소 투여를 위해 자가 진피 섬유아세포들을 배양시킴으로써 얻어지는 조절된 배지의 국소 제형들을 제공하는 데에 있다.

자가 섬유아세포들의 배양으로부터 얻어지는 조절된 배지를 함유하는 자가 국소 제형이 개발되어 왔다. 다른 국소 제형들과는 달리, 이것은 단지 제형을 사용하려는 사람에 의해 얻어지는 세포들로부터 유도되므로 자가성이다. 이는 세포들로부터 유도되는 단백질들과의 임의의 가능한 반응을 방지한다. 바람직한 제형들은 겔들, 크림들, 로션들, 및 연고들을 포함한다.

자가 진피 섬유아세포들을 배양시킴으로써 얻어지는 조절된 배지의 국소 제형들은 흉터의 예방 및 치료, 노화의 징후들의 감소 및 피부의 질의 개선을 위해 개인들에게 국소 투여된다.

대안적으로, 생성물의 동종 변형은 일반 대중의 사용을 위해 유사한 제조 과정을 사용하여 대량 생산될 수 있다. 생성물의 상기 변형에서, 선별된 공여자는 섬유아세포들의 증대 및 마스터 셀 뱅크 (MCB)의 생성을 위한 조직을 제공한다. 적절한 시험들이 MCB에 대해 수행된 후에, 마스터 뱅크로부터 증대된 세포들은 작업 세포 뱅크 (WCB)를 생성시키기 위해 사용되며, 이는 결과적으로 동종 국소 생성물의 제형에 사용하기 위한 조절된 배지의 제조를 위해 증대된다. 제조 과정은 자가 과정과 유사하고, 동일한 적용들을 가지며, 국소 생성물의 모든 최종 제형들은 동일한 농도 범위 내에 있을 것이다.

도 1a 내지 도 1c는 자가 섬유아세포들을 배양시키기 위한 표준 제조 과정 흐름도이다.

섬유아세포들은 콜라겐 및 다른 세포외 매트릭스 성분들을 생성시키는 피부에서의 특수화된 세포들이다. 이들은 연결 조직들을 발달시키는 세포들이며, 그 자체로, 콜라겐을 포함하는, 피부결 및 매트릭스 섬유들의 분비에 기여하는 세포외 매트릭스 성분들을 합성시키는 능력을 포함하는 사람 조직의 발달에서 중요한 역할을 한다. 콜라겐은 피부의 일차 성분들 중 하나를 구성하는 천연 단백질이며; 구조 및 지지를 제공하는 섬유들의 매트릭스로서 존재한다. 자가 섬유아세포 생성물이 발달되었다. 세포 치료 생성물은 표준 조직 배양 방법들을 사용하여 각각의 개인의 고유 피부의 생검으로부터 성장한 자가 섬유아세포들의 현탁액으로 조성된다. 효소 분해를 통해 조직으로부터 단리된 섬유아세포들은 환자의 표적 치료 부위 내로의 주입에 충분한 양까지 증대된다. 자가 국소 치료 생성물은 국소 투여를 위해 적합한 부형제로 제형화된 증대된 섬유아세포들로부터 얻어진 조절된 배양 배지로 구성된다.

상기 과정은 또한 대량 생산된 국소 생성물의 제형에 대한 조절된 배지를 생성시키기 위해 증대되는 동종 세포주들을 생성시키기 위해 사용될 수 있다.

I. 제형

하기의 정의들이 본원에 사용된다 :

ATM 분석 시헙 방법

AZFICEL-T USAN 자가 배양된 섬유아세포들에 대한 명명법

벌크 수확 냉동보존 배지에서의 제형화 전의 최종 수확 후의 물질

CGMP 현재의 우수한 생산 실행

CS 세포 스택

DMEM 이글 배지의 둘베코 변형

DMSO 술폭시화 디메틸

약물 생성물 - DMEM 중에서 세척되고 재제형화되고, 유리병에 넣어지고 임상 자리들로의 운반을 위해 준비된 주입 물질

약물 물질 - 냉동보존 배지 중에서 제형화되고 냉동바이알들 내로 분취된 냉동바이알 물질

EDTA 에틸렌디아민테트라 아세트산

ES 배아계

FACS 형광 활성화된 세포 분류

FBS 소태아혈청

GA 겐타마이신 및 암포테리신 B

IMDM 이스코브 변형 둘베코 배지

IND 시험용 신약 도포

MCB 마스터 세포 뱅크

PBS 인산염 완충 식염

PCA 개인 세포 분석

QC 질 관리

SCNT 체세포 핵 치환

SEC 크기 배제 크로마토그래피

USP 미국약전

WCB 작업 세포 뱅크

A. 조절된 세포 배양 배지 제형들

표준 조직 배양 방법들을 사용하는 각각의 개인의 고유 피부의 생검으로부터 성장된 자가 섬유아세포들의 현탁액은 국소 자가 제형에 사용하기 위한 조절된 배지를 제조기 위해 사용될 수 있다. 피부 조직 (피부 및 상피층들)은 환자의 이개후방 부위로부터 생체검사된다.

상기 과정은 또한 대량 생산된 국소 생성물의 제형에 대한 조절된 배지를 위해 증대되는 동종 세포주들을 생성시키기 위해 사용될 수 있다. 동종 과정을 위해 마스터 세포 뱅크 (MCB)을 생성시키기 위한 출발 물질 및 세포 증대 과정은 자가 과정과 동일하다.

섬유아세포들은 또한 조직 회복 또는 재생을 위해 사용하기 위한 물질들을 생성시키기 위해 배양하려는 다른 세포형들을 생성시키기 위해 사용될 수 있다. 체세포 핵 치환 (SCNT)에 의한 환자들과 유전적으로 동일한 배아줄기 (ES) 세포들의 유도는 많은 퇴행성 질환들의 증상들을 치유하거나 완화시키면서 숙주 면역계에 의한 거부에 대한 관련을 피하기 위한 잠재성을 보유한다. Byrne, et al., Nature. 2007 Nov 22;450(7169):497-502는 어른 피부 섬유아세포들로부터의 붉은털원숭이 배반포들을 생성시키기 위해 변형된 SCNT 접근법을 사용하였고, 이들 배아들로부터 2가지 ES 세포주들을 성공적으로 단리시켰다. DNA 분석은 핵 DNA가 공여자 체세포들과 동일하고, 미토콘드리아 DNA가 난모 세포들로부터 기원함을 확인하였다. 세포주들은 둘 모두는 정상 ES 세포 형태를 나타내고, 주요 줄기세포 마아커들을 발현시키고, 대조군 ES 세포들과 전사적으로 유사하고, 생체외 및 생체내에서 다중 세포형들로 분화되었다. 또한, Sparman, et al. Stem Cells, 2009;27(6):1255-64를 참조한다. 도 2는 피부 유도 섬유아세포들이 뉴런들, 심장 근육 세포들, 베타 섬세포들, 및 조혈 세포들로 분화될 수 있는 다능성 줄기 세포들 내로의 후성적 재프로그래밍을 사용하여 탈-분화될 수 있는 방식을 나타내는 Byrne 2008 Hum. Mol. Gen. 17:R37-R41로부터의 개략도이다. 참조 : Hochedlinger, et al., Development. 2009 Feb;136(4):509-23 및 Kanawaty, et al. Bioessays. 2009 Feb;31(2):134-8.

섬유아세포들은 세포 융합 (Cowan et al. Science. 2005 Aug 26;309(5739): 1369-73), 직접 재프로그램화 (Takahashi, et al., Cell. 2007 30;131(5):861-72), 및 체세포 핵 치환 (Byrne, et al. 2007)에 의해 탈-분화될 수 있다. Takahashi 등은 동일한 4개의 인자들: Oct3/4, Sox2, Klf 4, 및 c-Myc를 갖는 어른 사람 진피 섬유아세포들로부터의 iPS 세포들의 발생을 입증하였다. 사람 iPS 세포들은 다능성 세포-특이적 유전자들의 형태, 증식, 표면 항원들, 유전자 발현, 후성적 상태, 및 텔로머라아제 활성에서 사람 배아줄기 (ES) 세포들과 유사하였다. 더욱더, 이들 세포들은 생체내 및 기형종에서 3가지 배엽들의 세포형들로 분화할 수 있다. 이들 발견은 iPS 세포들이 어른 사람 섬유아세포들로부터 발생될 수 있음을 입증한다.

B. 세포들의 제조

자가 생산:

자가 섬유아세포들은 수용자의 고유 피부의 생검의 효소 분해 후에, 표준 세포 배양 기술들을 사용하는 배양에서의 증대에 의해 유도된다. 피부 조직 (피부 및 상피층들)은 대상자의 이개후방 부위로부터 생체검사된다. 대표적으로, 출발 물질은 표준 무균성 실행들을 사용하여 수집된 3가지 3-㎜ 펀치 피부 생검들로 조성된다. 생검들은 치료 의사에 의해 수집되고, 살균 인산염 완충 식염(PBS)을 함유하는 바이알 내에 넣어진다. 생검들은 2-8℃ 냉동 쉬퍼에서 생산 설비로 다시 수송된다.

생산 설비에 도달한 후에, 생검은 검사되고, 수용 시에, 생산 부위로 직접 전달된다. 과정의 개시 시에, 생검 조직은 효소 분해 전에 세척된다. 세척 후에, 리버라제 분해 효소 용액 (Liberase Digestive Enzyme Solution)이 민싱 없이 첨가되고, 생검 조직은 1시간 동안 37.0±2℃에서 인큐베이팅된다. 생검 조직 분해의 시간은 배양액 중의 세포들의 생존율 및 성장율에 영향을 줄 수 있는 임계적 과정 파라미터이다. 리버라제는 Lonza Walkersville, Inc. (Walkersville, MD)로부터 제형화되고 Roche Diagnostics Corp. (Indianapolis, IN)으로부터 제형화되지 않은 얻어진 콜라게나아제/중성 프로테아제 칵테일이다. 대안적으로, 콜라게나아제 NB6 (Helidelburg, Germany)와 같은 다른 시판용 콜라게나아제가 사용될 수 있다. 분해 후에, 초기 성장 배지 (IMDM, GA, 10% 소태아혈청(FBS))가 첨가되어 효소를 중화시킨다. 세포들은 원심분리에 의해 펠릿화되고, 5.0 mL 초기 성장 배지 중에 재현탁된다. 대안적으로, 원심분리는 단지 초기 성장 배지의 첨가에 의해 일어나는 효소의 완전 불활성화로 수행되지 않는다. 초기 성장 배지는 세포 성장 및 증대의 개시를 위해 T-175 세포 배양 플라스크 내로의 세포 현탁액의 씨딩 전에 첨가된다. T-75, T-150, T-185 또는 T-225 플라스크가 T-75 플라스크 대신에 사용될 수 있다. 세포들은 37±2.0℃에서 5.0±1.0% CO2로 인큐베이팅되고, 매 3 내지 5일 동안 신선한 완전 성장 배지가 공급된다. 과정에서의 모든 공급은 완전 성장 배지의 반을 제거하고 동일한 부피를 신선한 배지로 대체함으로써 수행된다. 대안적으로, 완전 공급이 수행될 수 있다. 세포들은 통과 전에 30일을 초과하여 T -175 플라스크에서 유지되지 않아야 한다. 밀집도가 과정 전체에 걸쳐 관측되어, 배양 분열 동안 충분한 씨딩 밀도들을 보장한다.

세포 밀집도가 T-175 플라스크 중에서 40% 이상이면, 이들은 연속 세포 증대를 위해 트립신화되고 T-500 플라스크 내로 씨딩된다. 대안적으로, 하나 또는 2개의 T-300 플라스크, 하나의 층 세포 스택 (1 CS), 하나의 층 세포 팩토리 (1 CF) 또는 2개의 층 세포 스택 (2 CS)이 T-500 플라스크 대신에 사용될 수 있다. 형태는 과정 전체에 걸쳐 배양 순도를 관측하기 위해 각각의 통과에서 그리고 수확 전에 평가된다. 형태는 세포 배양액의 형태 시험을 위해 관찰된 샘플을 가시적 표준들과 비교함으로써 평가될 수 있다. 세포들은 배양된 단층들에서 성장하는 경우에 대표적 섬유아세포 형태들을 나타낸다. 세포들 약간 연장된 신장된 방추형 또는 스핀들 외형을 나타내고, 세포질 유도 에지들을 가질 수 있는 더 큰 평평해진 방사상 세포들로서 나타난다. 이들 형태들의 혼합이 또한 관찰될 수 있다. 덜 융합된 부위들에서의 섬유아세포들은 유사하게 형상화되지만, 무작위로 배향된다. 세포 배양에서의 각질세포들의 존재가 또한 관찰된다. 각질세포들은 둥글고 불규칙적으로 형상화되는 것으로 보이며, 더 높은 밀집도에서, 이들은 자갈 형태로 조직되는 것으로 보인다. 더 낮은 밀집도에서, 각질세포들은 작은 콜로니들 중에서 관찰될 수 있다. 세포들은 37±2.0℃에서 5.0±1.0% CO₂로 인큐베이팅되고, 매 3 내지 5일 동안 T-500 플라스크 중에 공급되고 매 5일 내지 7일 동안 10개의 층 세포 스택 (10CS) 중에 공급된다. 세포들은 통과 전 10일 초과 동안 T-500 플라스크에서 유지되지 않아야 한다. 벌크 약물 물질의 안전성에 대한 QC 방출 시험은 살균성 및 내독소 시험을 포함한다. 세포 밀집도가 95% 이상이 되면, 세포들은 하나의 10CS 배양 용기, 2개의 5층 세포 스택들 (5 CS) 또는 하나의 10층 세포 팩토리 (10 CF)로 통과된다. 통과는 소모된 배지를 제거하고, 세포들을 세척하고, 트립신-EDTA로 처리하여 플라스크들 중의 지지 세포들을 용액 내로 방출시킴으로써 수행된다. 부가적 완전 성장 배지가 첨가되어 트립신을 중화시키고, T-500 플라스크로부터의 세포들은 신선한 완전 성장 배지를 함유하는 2L 병 내로 피펫팅된다. 2L 병의 함유물들은 10CS 내로 전달되고, 모든 층들을 가로질러 씨딩된다. 세포들은 37±2.0℃에서 5.0±1.0% CO₂로 인큐베이팅되고. 매 5 내지 7일마다 신선한 완전 성장 배지가 공급된다. 세포들은 통과 전에 20일 초과 동안 10CS에서 유지되지 않아야 한다.

일차 수확: 10CS 중의 세포 밀집도가 95% 이상이 되면, 세포들은 수확된다. 수확은 소모된 배지를 제거하고, 세포들을 세척하고, 트립신-EDTA로 처리하여 지지 세포들을 용액 내로 방출시키고, 추가의 완전 성장 배지를 첨가하여 트립신을 중화시킴으로써 수행된다. 세포들은 원심분리에 의해 수집되고, 재현탁되고, 제조 과정의 질 관리(QC) 시험이 수행되어 전체 생존 세포 계수 및 세포 생존율을 결정한다. 조절된 배지가 수집되어야 하는 이상점은 배지의 질이 현저히 더 높고 더많은 세포들이 존재하여 부생성물들을 생성시키므로 상기 지점에 있다.

일차 10CS 수확물로부터의 세포 계수 결과들을 수용한 수에 부가적 세포들이 필요한 경우, 다중 세포 스택들 (4개 이하의 10CS) 내로의 부가적 통과가 수행된다 (도 1에서의 단계 5a). 부가적 통과를 위해, 일차 수확물로부터의 세포들은 신선한 완전 성장 배지를 함유하는 2L 배지 병에 첨가된다. 재현탁된 세포들은 다중 세포 스택들에 첨가되고, 37±2.0℃에서 5.0±1.0% CO₂로 인큐베이팅된다. 세포 스택들이 세포 밀집도가 세포 수확 전에 80% 이상이 되어야 하는 것을 제외하고는 상기 기술된 바와 같이 공급되고 수확된다. 수확 공정은 상기 일차 수확에 대해 기술된 것과 같다. 세포들 및 소모된 배지로부터의 마이코플라즈마 샘플이 수집되고, 세포 계수 생존성이 상기 일차 수확에 대해 기술된 바와 같이 수행된다.

국소 제형의 조제용 물질에 사용하기 위한 조절된 배지는 상기 기술된 섬유아세포 생산 과정으로부터의 일차 수확 및 일차 수확 후의 부가적 통과 단계로부터 이상적으로 수집된다. 과정에서 초기에 사용된 플라스크들 (T-175 및 T-500 플라스크들)과 비교하여 지지된 세포들의 가장 큰 집단과 일치하는 융합 10CS는 완전 성장 배지의 최고 부피를 갖는다. 그러나, 조절된 배지는 과정의 임의의 스테이지에서 수집될 수 있으며. 여기에서 배지는 과정에서 초기에 국소 생성물을 생성시키기 위해 인큐베이션 기간 후에 제거되고, 더 높은 수율을 위해 푸울링된다.

10CS (또는 다른 선택된 배양 용기)의 수확에서, 1.5L (또는 업스트림 배양 용기들에 대해서는 더 적음)의 조절된 배지가 용기들로부터 제거되고, 2L 병과 같은 적절한 용기 중에서 수집된다. 배지는 한외여과, 탈수 또는 동결 건조에 의해 농축된다.

농축된 배지는 상이한 배지 수확 지점들 (예를 들어 T-500 및 10CS)로부터 조합될 수 있거나, 개별적 배지 수확물들이 별도로 처리될 수 있다.

동종 제조:

동종 섬유아세포 배양액을 생성시키기 위해, 공여자들은 출발 조직을 제공하도록 선택된다. 생검 피부 조직의 수집 전에, 개인은 양호한 건강에 대해 일반적 시험을 받고, HIV 및 B형 간염과 같은 혈액매체병원균 질환에 대해 선별된다. 공여자가 참여를 위한 자격을 얻으면, 생검 샘플들은 상기 자가 과정에 대해 기술된 바와 같이 수집되고 수송될 수 있다.

조절된 배지를 큰 집단의 소비자들에게 제공하기 위해, MCB는 먼저 나중의 세포 증대 및 배지 수집을 위해 확립된다. MCB를 생성시키기 위해, 공여자로부터 수집된 생검들은 상기 기술된 자가 과정을 사용하여 확장된다. 수확이 완결되면, 하기를 포함하는 일련의 안전성 시험들이 수행되어 세포주의 순도를 보장할 수 있다:

바이러스성 선별: 바이러스 입자들의 패널에 대한 시험.

살균성: 미생물들의 부재에 대한 시험.

마이코플라즈마: 특히 세포 배양에서 잠재적 불순물인 것으로 고려되는 마이코플라즈마 종으로서 분류된 미생물들의 부재에 대한 시험.

내독소: 발열성 (열) 반응을 유발시키는 단백질들에 대한 시험.

또한, 세포들의 질을 확인하기 위한 효율성 시험들이 수행된다;

세포 계수: 수확된 집단에서의 세포들의 정량화.

세포 생존율: 집단에서의 생존 세포들의 비율.

동일성: 섬유아세포들인 것으로 결정된 세포들의 비율.

콜라겐 함량: 세포들의 생물학적으로 활성인 집단을 나타내는, 세포 현탁액 중에 존재하는 콜라겐의 양.

최종 수화 후에, 세포들은 상기 자가 과정에 대해 상기 기술된 바와 같이 분취되고 액화 질소의 증기상으로 저온으로 저장된다. 이들 세포들은 MCB를 나타내고, 조절된 배지 수집을 위해 부가적 배양액을 씨딩하기 위해 하류에서 사용된다. 다중 공여자 세포주들은 생산을 위한 진행 중인 목록을 제공한다.

각각의 MCB 바이알은 작업 세포 뱅크 (WCB)를 생성시키기 위해 새로운 섬유아세포 서브컬쳐 라인을 씨딩할 수 있다. 섬유아세포들은 통상적인 배양 용기들에 통과하여 대규모 배양 생물반응기에 씨딩하기에 충분한 세포들을 생성시킬 것이다. 배양을부터 수확한 바이알들은 냉동되고 저온 저장기 내로 넣어져서 최종 WCB를 생성시킨다.

WCB로부터의 냉동된 세포들은 통상적인 세포 배양을 사용하여 해동되고 증대된다. 세포들은 생물반응기에 씨딩하기 위해 충분해질 때까지 통과된다. 생물반응기들은 백신들, 항체들 및 작은 분자들의 생성을 지지하기 위해 생명 공학에서 공통적으로 사용된다. 국소 생성물의 제형에 사용하기 위해 다량의 조절된 배지를 생성시키기 위해, 생물반응기는 대규모 배양을 생성시켜서 수집된 배지의 양을 최대화시키기 위해 사용될 수 있다.

생물반응기에서의 지지 세포 배양은 상기 도포에 직접 적용될 수 있는 기존 기술이다. 많은 규격 유닛들이 온도, CO₂, pH 및 용해된 산소와 같은 배양 조건들을 일정하게 관측하는 다양한 크기들로 존재하여, 로트로부터 로트까지의 일관성을 보장한다. 예들은 하기를 포함한다:

CelliGen®Series (New Brunswick Scientific, Edison, NJ)

WAVE^TM Bioreactor System (GE Healthcare, Piscataway, NJ)

생물반응기들은 미립담체들을 사용하여 섬유아세포들과 같은 지지 세포에 대한 성장 표면으로서 작용한다. 담체들은 표면으로의 직접 세포 증대를 지지할 수 있는 작은 2D 또는 3D 구조이다. 다량으로, 미립담체들은 세포들을 생물반응기 내에 부착시키기 위한 다량의 성장 표면 부위를 제공한다. 잠재적 담체들은 하기 담체들을 포함한다:

BioNOC II®(Bellco Biotechnology, Vineland, NJ에 의해 분배되는 Cesco Bioengineering) 및 FibraCel®(New Brunswick Scientific, Edison, NJ)과 같은 폴리 배합물

Cultispher-G (Percell Biolytica, Astrop, Sweden)와 같은 젤라틴

Cytopore®(GE Healthcare, Piscataway, NJ)과 같은 셀룰로오스

2D MicroHex^TM (Nunc, Weisbaden, Germany), Cytodex®(GE Healthcare, Piscataway, NJ) 또는 Hy-Q Sphere^TM (Thermo Scientific Hyclone, Logan, UT)와 같은 코팅/비코팅 폴리스티렌.

미립담체들을 함유하는 생물반응기 내로 씨딩되면, 배양액에 과정 동안에 걸쳐 신선한 배지가 공급된다. 다중 공급은 매 수일 동안 배양 동안 수행된다. 조절된 배지가 무균적으로 수집되고, 적절한 용기들 내로 분취되고, 나중 처리를 위해 냉동된다.

대안적으로, 조직 플라크들 및 및 세포 스택들과 같은 고전적 배양 용기들이 사용되어 생물반응기들 대신에 WCB를 팽창시키고, 국소 제형에 사용하기 위해 배지를 수집할 수 있다.

C. 제형들

담체는 세포 배양 배지로부터 조직으로 활성물질들을 전달할 수 있는 임의의 겔, 연고, 로션, 에멀션, 크림, 폼, 무스, 리퀴드, 스프레이, 현탁액, 분산액 또는 에어로졸일 수 있다. 적합한 유화제는 활성제가 수성 환경 중에 불용성인 경우에 필요하다. 침투 증강제는 활성제들을 각질층의 장벽을 가로지를 수 있게 하기 위해 첨가될 수 있다. 하나의 구현예에서, 담체는 하이드로알코올성 겔과 같은, 향이 없고 맛이 없으며 쉽게 용해되는 겔이다.

1. 부형제들

본원에 사용되는 바와 같은 "수용성"은 5g/lOOml 물 이상의 용해도를 갖는 물질들을 의미한다.

본원에 사용되는 바와 같은 "지용성"은 피마자유와 같은 소수성 액체 중에 5g/lOOml 이상의 용해도를 갖는 물질들을 의미한다.

본원에 사용되는 바와 같은 "친수성"은 물과 쉽게 상호작용하는 강한 극성 기들을 갖는 물질들을 의미한다.

"친유성"은 지질들에 대한 친화성을 갖는 화합물들을 의미한다.

"양친매성"은 친수성 및 친유성 (소수성) 특성을 조합시킨 분자를 의미한다.

본원에 사용되는 바와 같은 "소수성"은 물을 발수시키고 물을 흡수하지 않을 뿐만 아니라 물 중에 용해되거나 물과 혼합되지 않으려는 경향이 있는, 물에 대한 친화성이 결핍된 물질들을 의미한다.

"겔"은 분산상을 연속상과 조합시켜서 젤리와 같은 반고체 물질을 생성시키는 콜로이드이다.

"오일"은 적어도 95 중량%의 친유성 물질을 함유하는 조성물이다. 친유성 물질들의 예들은 천연 및 합성 오일들, 지방들, 지방산들, 레시틴들, 트리글리세라이드들 및 이들의 조합물들을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다.

"연속 상"은 고체들을 현탁시키거나 또 다른 액체의 방울들을 분산시키는 액체를 의미하며, 종종 외부 상으로 명명된다. 이는 또한 고체 또는 유체 입자들이 분산되는 콜로이드의 유체 상을 의미한다. 연속 상이 물 (또는 또 다른 친수성 용매)인 경우, 수용성 또는 친수성 약물들은 연속 상으로 용해될 수 있다 (분산되는 것과는 상반되게). 다상 제형 (예를 들어, 에멀션)에서는, 불연속 상이 연속 상 중에 현탁되거나 분산된다. 국소 투여용 부형제들은 항균성 화합물들, 예를 들어 파라벤들, 산화방지제들, 예를 들어 나트륨 아스코르빌 아세테이트 및 알파-토코페롤, 안정화제들, 예를 들어 소르비톨, 및/또는 친수성 및 소수성 둘 모두를 갖는 안정한 에멀션을 생성시키기 위한 유화제들을 포함할 수 있다.

"희석제들"은 담체를 용해시키거나, 분산시키거나, 달리 혼입시키기 위해 제형들 중에 포함될 수 있다. 희석제들의 예들은 물, 완충된 수용액들, 일가 알코올들과 같은 유기 친수성 희석제들, 및 저분자량 글리콜들 및 폴리올들 (예를 들어 프로필렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 글리세롤, 부틸렌 글리콜)을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다.

적절한 부형제들은 제형의 유형을 기준으로 선택된다. 표준 부형제들은 젤라틴, 카세인, 레시틴, 아카시아 검, 콜레스테롤, 트래거컨트, 스테아르산, 벤잘코늄 클로라이드, 칼슘 스테아레이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 세토스테아릴 알코올, 세토매크로골 유화 왁스, 소르비탄 에스테르들, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르들, 폴리옥시에틸렌 피마자유 유도체들, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르들, 폴리에틸렌 글리콜들, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트들, 콜로이드성 이산화규소, 인산염들, 나트륨 도데실 황산염, 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨, 메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메티셀룰로오스 프탈레이트, 비경질 셀룰로오스, 마그네슘 알루미늄 규산염, 트리에탄올아민, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐피롤리돈, 당류, 및 전분류를 포함한다.

에멀션은 제 2 액체의 부분 전체에 걸쳐 작은 구상체들 중에 분포된 하나의 액체의 조제용 물질이다. 분산된 액체는 불연속 상이며, 분산 배지는 연속 상이다. 오일이 분산된 액체이고, 수용액이 연속 상인 경우, 이것은 수중유 에멀션으로 공지되어 있으며, 반면에, 물 또는 수용액이 분산상이고, 오일 또는 유성 물질이 연속 상인 경우, 이것은 유중수 에멀션으로 공지되어 있다. 오일 상은 적어도 부분적으로 HFA 추진제와 같은 추진제로 구성될 수 있다. 오일 상 및 수성 상 중 어느 하나 또는 둘 모두는 하나 이상의 계면활성제들, 유화제들, 에멀션 안정화제들, 완충제들, 및 다른 부형제들을 함유할 수 있다. 바람직한 부형제들은 계면활성제들, 특히 비이온성 계면활성제들; 유화제들, 특히 유화 왁스들; 및 액체 리퀴드 비휘발성 비수성 물질들, 특히 프로필렌 글리콜과 같은 글리콜들을 포함한다. 오일 상은 다른 유성의 약제학적으로 시도된 부형제들을 함유할 수 있다. 예들 들어, 히드록실레이트화된 피마자유 또는 참기름들이 계면활성제들 또는 유화제들로서 오일 상으로 사용될 수 있다.

"연화제들"은 피부를 연화시키고 매끄럽게 하는 외부에 도포되는 제제이며, 일반적으로 당분야에 공지되어 있고 "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 4^th Ed., Pharmaceutical Press, 2003와 같은 개요서에 기재되어 있다. 이들은 제한 없이, 아몬드 오일, 피마자유, 세라토니아 추출물, 세토스테아로일 알코올, 세틸 알코올, 세틸 에스테르들 왁스, 콜레스테롤, 목화씨 오일, 시클로메티콘, 에틸렌 글리콜 팔미토스테아레이트, 글리세린, 글리세린 모노스테아레이트, 글리세릴 모노올레에이트, 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 라놀린, 레시틴, 백색 광물 오일, 중쇄 트리글리세라이드들, 광유 및 라놀린 알코올들, 페트롤라툼, 페트롤라툼 및 라놀린 알코올들, 대두유, 전분, 스테아릴 알코올, 해바라기 오일, 크실리톨 및 이들의 조합물들을 포함한다. 하나의 구현예에서, 피부연화제들은 에틸헥실스테아레이트 및 에틸헥실 팔미테이트.

"계면활성제들"은 표면 장력을 감소시키고, 이에 의해 생성물의 유화, 발포, 분산, 분무 및 습윤 특성들을 증가시키는 표면-활성제들이다. 적합한 비이온성 계면활성제들은 유화 왁스, 글리세릴 모노올레에이트, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르들, 폴리옥시에틸렌 피마자유 유도체들, 폴리소르베이트, 소르비탄 에스테르들, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 시클로덱스트린들, 글리세린 모노스테아레이트, 폴록사머, 포비돈 및 이들의 조합물들을 포함한다. 하나의 구현예에서, 비이온성 계면활성제는 스테아릴 알코올이다.

"유화제들"은 하나의 액체의 또 다른 액체 중의 현탁을 촉진시키고, 오일 및 물의 안정한 혼합물 또는 에멀션의 형성을 촉진시키는 표면 활성 물질들이다. 공통 유화제들은 금속 비누, 특정 동물 및 식물 오일들, 및 다양한 극성 화합물들이다. 적합한 유화제들은 아카시아, 음이온성 유화 왁스, 칼슘 스테아레이트, 카르보머들, 세토스테아릴 알코올, 세틸 알코올, 콜레스테롤, 디에탄올아민, 에틸렌 글리콜 팔미토스테아레이트, 글리세린 모노스테아레이트, 글리세릴 모노올레에이트, 히드록스프로필 셀룰로오스, 하이포멜로오스, 라놀린 수화물, 라놀린 알코올들, 레시틴, 중쇄 트리글리세라이드들, 메틸셀룰로오스, 광유 및 라놀린 알코올들, 일염기성 나트륨 포스페이트, 모노에탄올아민, 비이온성 유화 왁스, 올레산, 폴록사머, 폴록사머들, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르들, 폴리옥시에틸렌 피마자유 유도체들, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르들, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트들, 프로필렌 글리콜 알기네이트, 자체 유화 글리세릴 모노스테아레이트, 나트륨 시트레이트 탈수화물, 나트륨 라우릴 황산염, 소르비탄 에스테르들, 스테아르산, 해바라기 오일, 트래거컨트, 트리에탄올아민, 크산탄 검 및 이들의 조합물들을 포함한다. 하나의 구현예에서, 유화제는 글리세롤 스테아레이트이다.

"로션"은 저점도 내지 중간 점도 액체 제형이다. 로션은 현탁제들 및 분산제들의 사용을 통해 분산 배지 중에 용해될 수 있는 미세 분말 물질들을 함유할 수 있다. 대안적으로, 로션들은 비히클과 비혼화성이고 일반적으로 유화제들 또는 다른 적합한 안정화제들에 의해 분산되는 액체 물질들을 분산상으로서 가질 수 있다. 하나의 구현예에서, 로션은 100 내지 1000 센티스토크의 점도를 갖는 에멀션의 형태를 갖는다. 로션들의 유동성은 넓은 표면 부위 위로의 빠르고 균일한 도포를 허용한다. 로션들은 대표적으로 피부 상에서 건조되어 피부의 표면 상의 의약 성분들의 얇은 피막을 남기도록 예정된다.

"크림"은 "수중유" 또는 "유중수 유형"의 점성 액체 또는 반고체 에멀션이다. 크림들은 유화제들 및/또는 다른 안정화제들을 함유할 수 있다. 하나의 구현예에서, 제형은 1000 센티스토크 초과, 대표적으로 20,000-50,000 센티스토크의 점도를 갖는 크림의 형태를 갖는다. 크림들은 보통 이들이 일반적으로 분무하기가 더 쉽고 제거하기가 더 쉬우므로 종종 연고들보다 바람직하다.

크림과 로션 사이의 기본적 차이는 점도이며, 이는 다양한 오일들의 양/용도 및 제형들을 제조하기 위해 사용되는 물의 비율에 의존한다. 크림들은 대표적으로 로션들보다 진하고, 다양한 용도들을 가질 수 있으며, 보통 피부에 대한 바람직한 효과에 의존하여 더 변동된 오일들/버터들을 사용한다. 크림 제형에서, 수성 비율은 전체의 약 60-75%이고 및 유성은 약 20-30%이며, 총 100%에 나머지 비율들은 유화제, 방부제들 및 첨가제들이다.

"연고"는 연고 기재 및 임의적으로 하나 이상의 활성제들을 함유하는 반고체 조제용 물질이다. 적합한 연고 기재들의 예들은 탄화수소 기재들 (예를 들어, 페트롤라툼, 백색 페트롤라툼, 황색 연고, 및 광유); 흡수 기재들 (친수성 페트롤라툼, 무수 라놀린, 라놀린, 및 콜드 크림); 물-제거성 기재들 (예를 들어, 친수성 연고), 및 수용성 기재들 (예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 연고들)을 포함한다. 페이스트들은 이들이 더 많은 비율의 고체들을 함유한다는 점에서 연고들과는 상이하다. 페이스트들은 대표적으로 동일한 성분들로 제조한 연고들을 더 흡수성 및 덜 지성이 되게 한다.

"겔"은 액체 비히클 중에 용해되거나 현탁된 농후제 또는 중합체 물질의 작용에 의해 반고체가 되는 액체 비히클 중의 작거나 큰 분자들의 분산액들을 함유하는 반고체계이다. 액체는 친유성 성분, 수성 성분 또는 둘 모두를 포함할 수 있다. 일부 에멀션들은 겔들일 수 있거나, 달리 겔 성분을 포함한다. 그러나, 일부 겔들은 비혼화성 성분들의 균질 배합물을 함유하지 않기 때문에 에멀션들이 아니다. 적합한 겔화제들은 히드록시프로필 셀룰로오스 및 히드록시에틸 셀룰로오스와 같은 변형된 셀룰로오스들; 카르보폴 단일중합체들 및 공중합체들; 및 이들의 조합물들을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다. 액체 비히클 중의 적합한 용매들은 디글리콜 모노에틸 에테르; 프로필렌 글리콜과 같은 알켄 글리콜들; 디메틸 이소소르바이드; 이소프로필 알코올 및 에탄올과 알코올들을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다. 용매들은 대표적으로 약물을 용해시키는 능력에 대해 선택된다. 제형의 피부 촉감 및/또는 연화성을 개선시키는 다른 첨가제들이 또한 혼입될 수 있다. 이러한 첨가제들의 예들은 이소프로필 미리스테이트, 에틸 아세테이트, C12-C15 알킬 벤조에이트들, 광유, 스쿠알렌, 시클로메티콘, 카프르산/카프릴산 트리글리세라이드들 및 이들의 조합물들을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다.

폼들은 기체상 추진제와 조합하여 에멀션으로 구성된다. 기체상 추진제는 주로 하이드로플루오로알칸들 (HFA들)로 구성된다. 적합한 추진제들은 1,1,1,2-테트라플루오로에탄 (HFA 134a) 및 1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로프로판 (HFA 227)과 같은 HFA들을 포함하지만, 현재 의료용으로 시도되거나 시도될 수 있는 이들과 다른 HFA들의 혼합물들 및 첨가혼합물들이 적합하다. 추진제들은 바람직하게는 분무 동안 가연성 또는 폭발성 증기들을 생성시킬 수 있는 탄화수소 추진제 기체들이 아니다. 더욱더, 조성물들은 바람직하게는 사용 동안 가연성 또는 폭발성 증기들을 생성시킬 수 있는 휘발성 알코올들을 함유하지 않는다.

완충제들은 조성물의 pH를 조절하기 위해 사용된다. 바람직하게는, 완충제들은 조성물을 약 4의 pH 내지 약 7.5의 pH, 더욱 바람직하게는 약 4 내지 약 7의 pH, 가장 바람직하게는 약 5의 pH 내지 약 7의 pH로 완충시킨다. 바람직한 구현에에서, 완충제는 트리에탄올아민이다.

방부제들은 균류 및 미생물들의 성장을 방지하기 위해 사용될 수 있다. 적합한 항진균제 및 항균제 제제들은 벤조산, 부틸파라벤, 에틸 파라벤, 메틸 파라벤, 프로필파라벤, 나트륨 벤조에이트, 나트륨 프로피오네이트, 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 벤질 알코올, 세틸피리디늄 클로라이드, 클로로부탄올, 페놀, 페닐에틸 알코올, 및 티메로살을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다.

2. 침투 증강제들

침투 증강제들은 피부를 가로지르는, 특히 각질층을 가로지르는 약물들의 경피 전달을 촉진시키기 위해 자주 사용된다. 일부 침투 증강제들은 진피 자극, 진피 독성 및 진피 알레르기를 유발시킨다. 그러나, 더욱 공통적으로 사용되는 것들은 우레아, (카르보닐디아미드), 이미드우레아, N,N-디에틸포름아미드, N-메틸-2-피롤리딘, 1-도데칼-아자시클로헵탄-2-온, 칼슘 티오글리케이트, 2-피롤리딘, N,N-디에틸-m-톨루아미드, 올레산 및 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 비닐 및 글리세릴모노올레에이트와 같은 이의 에스테르 유도체들, 소르비탄 모노라우레이트 및 소르비탄 모노올레에이트와 같은 소르비탄 에스테르들, 이소프로필 라우레이트, 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 디이소프로필 아디페이트, 프로필렌 글리콜 모노라우레이트, 프로필렌 글리콜 모노올레에이트와 같은 다른 지방산 에스테르들 및 BRIJ®76 (스테아릴 폴리(10) 옥시에틸렌 에테르), BRIJ^®78 (스테아릴 폴리(20)옥시에틸렌 에테르), BRIJ^®96 (올레일 폴리(1O)옥시에틸렌 에테르), 및 BRIJ^®721 (스테아릴 폴리 (21) 옥시에틸렌 에테르) (ICI Americas Inc. Corp.)과 같은 비이온성 세정제들을 포함한다.

3. 제형들

배지가 충분히 농축되면, 분말 또는 액체는 선택된 국소 비히클과 배합된다. 배합은 수동으로 또는 기계 장치를 사용하여 일어날 수 있다. 제형화 후에, 생성물을 적절한 분배기 내로 채우고, 최종 사용자에게 수송한다. 최종 용기의 예는 펌프 보틀, 스퀴즈 보틀, 용기, 병, 튜브 또는 유리병을 포함할 수 있다.

농축된 물질은 사용되는 농축 방법에 의존하여 액체 (100ml 미만) 또는 분말 형태일 수 있다. 시험 공정들에서, 10CS의 섬유아세포 배양액으로부터 수집한 전체 1.5L의 동결 건조는 23-27g 사이의 분말 물질 (N=3)을 수득하였다. 첨가된 농도 조절 배지는 예정된 용도에 의존하여 부형제에 대해 1-95%의 범위에 있지만, 대표적으로 1-5%이다. 이들 농도에서, 국소 생성물의 다중 용기가 연속 공급을 위한 단일 환자를 위해, 또는 동종 조절 배지로부터 공급되는 경우에는 대량 판매를 위해 제조될 수 있다.

4. 조절된 배지 특성

총 콜라겐:

총 콜라겐 함량에 대한 시험은 주입할 수 있는 자가 세포 치료 생성물에 대한 방출 기준의 일부이며, 이는 섬유아세포들이 배양액 중에서 생물학적으로 활성임을 나타내는 것이다. 조절된 배지를 또한 특징화 시험의 일부로서 콜라겐 함량에 대해 역사학적으로 시험하였다. 시험을 Sicrol Assay Kit (Biocolor Life Science Assays, United Kingdom)을 사용하여 수행하였다. 킷은 콜라겐 I-V를 측정하고, 총 콜라겐 함량 값을 보고한다.

표 1은 배양액 (N=lO, 4개의 별개의 세포 배양액 로트로부터 채취)으로부터 직접 채취한 조절된 배지로부터의 콜라겐 함량 결과들을 제공한다. 또한, 배지 수집에서 세포들의 통과 수 및 세포 밀집도를 표 1에 제공하였으며, 이는 콜라겐이 40 - 100%의 밀집도 및 상이한 세포 통과 수에서 상기 과정에서 다양한 통과 수로 존재함을 나타낸다.

아미노산들:

완전 성장 배지의 IMDM 성분은 세포 증대의 지지체 중에 아미노산들을 함유한다. 자가 생산 과정 동안 수집된 조절된 배지 샘플들을 크기 배제 크로마토그래피 (SEC, N=6)를 사용하여 아미노산 함량에 대해 시험하였다. 표 3은 선택된 아미노산들에 대한 보고된 농도 범위들을 제공한다.

II . 투여 및 치료 방법들

조제용 물질은 임의의 위치, 특히 피부가 연령으로 인해 얇아지거나, 변색되거나 주름지는 부위들로의 국부적 국소 전달을 위해 사용될 수 있다. 피부의 노화 과정은 내인성 및 외인성 인자들 둘 모두의 결과로서 일어난다. 내인성 또는 천연 노화에 기여하는 인자들은 구조적 및 기능적 둘 모두이다. 구조적으로, 상피는 더 얇아지고, 코르네오사이트는 덜 접착성이 되고, 진피-상피 결합부는 평평해진다. 기능적으로는, 섬유아세포들의 수 및 생합성 용량이 감소되고, 피부는 위축성 및 상대적으로 무세포성 및 무혈관성이 된다. 자외광 방사선에 대한 노출은 외인성 또는 광 노화의 일차 원인이다. 외인성 노화 특징들은 탄력의 손실, 증가된 거칠기 및 건조, 불규칙적 색소형성, 깊은 주름, 가죽 같은 외형, 수포 형성 및 손상된 상처 치유이다. 노화의 가시적 외형, 특히 얼굴 주름들 및 주름살들은 환자들이 감소시키고자 하는 공통 효과들이다. 얼굴선들, 주름들 및 주름살들의 치료에 대한 선택은 수술, 신경독, 충전제, 레이저, 비박피성 치료들, 미세박피 및 화학적 박피를 포함한다. 이들 치료 중 많은 것은 노화의 징후들의 치료에서 안전성, 효율성, 및 지속성이 변동한다. 본원에 기술된 제형은 피부에서 세포들을 자극하여 성장 및 분열시키고/거나, 세포외 매트릭스 성분들 (예를 들어 콜라겐)의 생성을 증가시키고/거나 기존 세포외 매트릭스의 재조직을 자극시킴으로써 작용할 수 있으며, 이는 피부의 개선을 위한 다인성 효과들을 가질 수 있다.

Claims

국소 도포용 부형제, 및
생체검사된 섬유아세포들을 배양시킴으로써 얻어지는 조절된 배양기
를 포함하는 국소 제형으로서,
상기 섬유아세포들이 예정된 수용자로부터 얻어지거나, 상기 섬유아세포들이 배양 전에 질환 및 양립성에 대해 선별된 1명 이상의 개인들로부터 얻어지며,
상기 부형제가 상기 조절된 배양기 또는 그 안의 물질들과 배합되어 상기 제형을 생성시키는, 국소 제형.
청구항 1에 있어서, 겔, 연고, 로션, 에멀션, 크림, 폼, 무스, 리퀴드, 스프레이, 현탁액, 분산액 및 에어로졸로 구성된 군으로부터 선택되는, 국소 제형.
청구항 1에 있어서, 상기 섬유아세포들이 다회 통과되어 상기 조절된 배양기를 생성시키는, 국소 제형.
청구항 3에 있어서, 상기 섬유아세포들이 40% 밀집도에 도달한 후에 통과되는, 국소 제형.
청구항 1에 있어서, 상기 자가 섬유아세포들이 3가지 3-㎜ 펀치 피부 생검들로부터 얻어지는, 국소 제형.
청구항 1에 있어서, 상기 제형이 1.5L의 조절된 세포 배양기로부터 얻어지는 상기 물질을 함유하며, 여기에서 상기 세포들이 적어도 80% 세포 밀집도까지 성장하는, 국소 제형.
국소 도포용 부형제, 및
생체검사된 섬유아세포들을 배양시킴으로써 얻어지는 조절된 배양기
를 포함하는 자가 국소 제형을 제조하는 방법으로서,
상기 섬유아세포들이 예정된 수용자로부터 얻어지거나, 상기 섬유아세포들이 배양 전에 질환 및 양립성에 대해 선별된 1명 이상의 개인들로부터 얻어지며,
세포 배양액 중의 상기 섬유아세포들을 배양시키는 단계, 및 상기 조절된 배양기, 또는 그 안의 물질들을 상기 부형제와 혼합시켜서 국소 도포용 제형을 제조하는 단계를 포함하는, 자가 국소 제형을 제조하는 방법.
청구항 7에 있어서, 겔, 연고, 로션, 에멀션, 크림, 폼, 무스, 리퀴드, 스프레이, 현탁액, 분산액 및 에어로졸로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
청구항 7에 있어서, 상기 섬유아세포들이 다회 통과되어 상기 조절된 배양기를 생성시키는, 방법.
청구항 7에 있어서, 상기 섬유아세포들이 40% 밀집도에 도달한 후에 통과되는, 방법.
청구항 7에 있어서, 상기 자가 섬유아세포들이 3가지 3-㎜ 펀치 피부 생검들로부터 얻어지는, 방법.
청구항 7에 있어서, 상기 제형이 1.5L의 조절된 세포 배양기로부터 얻어지는 상기 물질을 함유하며, 여기에서 상기 세포들이 적어도 80% 세포 밀집도까지 성장하는, 방법.
청구항 7에 있어서, 상기 조절된 세포 배양기가 건조되어 상기 부형제와 배합된 물질을 생성시키는, 방법.
청구항 1 내지 청구항 6 중의 어느 하나의 청구항에서 규정된 바와 같이 진피 섬유아세포들을 배양시킴으로써 얻어지는 조절된 배지의 제형들을 국소적으로 투여하는 것을 포함하여 피부를 치료하는 방법.
청구항 14에 있어서, 상기 제형이 흉터 또는 노화의 징후들을 감소시키기에 효과적인 양으로 투여되는, 방법.
청구항 14에 있어서, 상기 제형이 피부 질을 개선시키기에 효과적인 양으로 투여되는, 방법.