KR20120092552A - 치환된 2-카르복스아미드 시클로아미노 우레아 - Google Patents

Abstract

본 발명은, 치환기가 명세서에 정의된 바와 같은 하기 화학식 I의 화합물 및 그의 염, 조성물, 및 포스파티딜이노시톨 3-키나제의 억제에 의해 완화되는 질환의 치료에서의 상기 화합물의 용도에 관한 것이다.
<화학식 I>

Description

치환된 2-카르복스아미드 시클로아미노 우레아 {SUBSTITUTED 2-CARBOXAMIDE CYCLOAMINO UREAS}

본 발명은 신규한 포스파티딜이노시톨 (PI) 3-키나제 억제제 화합물로서의 치환된 2-카르복스아미드 시클로아미노 우레아, 그의 제약상 허용되는 염, 그의 전구약물 및 그의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 단독의 또는 하나 이상의 추가의 치료제와 조합된 이들 화합물을 임의로 제약상 허용되는 담체와 조합하여 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 수많은 질환, 특히 성장 인자, 수용체 티로신 키나제, 단백질 세린/트레오닌 키나제, G 단백질 커플링된 수용체 및 인지질 키나제 및 포스파타제의 비정상적인 활성 중 하나 이상에 의해 매개되는 질환의 예방 또는 치료에서, 단독의 또는 하나 이상의 추가의 치료제와 조합된 이들 화합물의 사용 방법에 관한 것이다.

포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K)는, 포스페이트를 이노시톨 지질의 D-3' 위치로 전달하는 것을 촉매화하여 포스포이노시톨-3-포스페이트 (PIP), 포스포이노시톨-3,4-디포스페이트 (PIP₂) 및 포스포이노시톨-3,4,5-트리포스페이트 (PIP₃)를 생성하고, 이어서 플렉스트린-상동성 부위, FYVE, Phox 및 다른 인지질-결합 도메인을 함유하는 단백질을 대개 원형질 막에서의 다양한 신호전달 복합체에 결합시킴으로써 신호전달 캐스케이드에서 제2 메신저로 작용하는 지질 키나제의 패밀리를 구성한다 (문헌 [Vanhaesebroeck et al., Annu. Rev. Biochem 70:535 (2001)]; [Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615 (2001)]). 두 가지 클래스 1 PI3K 중, 클래스 1A PI3K는 p85α, p55α, p50α, p85β 또는 p55γ일 수 있는 조절 서브유닛과 구성적으로 관련이 있는 p110 촉매 서브유닛 (α, β, δ 이소형)으로 이루어진 이종이량체이다. 클래스 1B 하위 클래스는 p101 또는 p84의 두 가지 조절 서브유닛 중 하나와 관련이 있는 촉매 p110γ 서브유닛으로 이루어진 이종이량체를 패밀리의 한 구성원으로 갖는다 (문헌 [Fruman et al., Annu Rev. Biochem. 67:481 (1998)]; [Suire et al., Curr. Biol. 15:566 (2005)]). p85/55/50 서브유닛의 모듈 도메인은 활성화된 수용체 및 세포질 티로신 키나제 상의 특정 서열 환경에서 포스포티로신 잔기에 결합하여 클래스 1A PI3K를 활성화 및 국소화시키는 Src 상동성 (SH2) 도메인을 포함한다. 클래스 1B PI3K는 펩티드 및 비-펩티드 리간드의 여러 가지 레퍼토리에 결합하는 G 단백질-커플링된 수용체에 의해 직접적으로 활성화된다 (문헌 [Stephens et al., Cell 89:105 (1997)]; [Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615-675 (2001)]). 결과적으로, 생성된 클래스 I PI3K의 인지질 생성물은 상류 수용체를, 증식, 생존, 주화성, 세포 소통, 운동성, 대사, 염증성 및 알레르기 반응, 전사 및 번역을 비롯한 하류 세포 활성과 연결시킨다 (문헌 [Cantley et al., Cell 64:281 (1991)]; [Escobedo and Williams, Nature 335:85 (1988)]; [Fantl et al., Cell 69:413 (1992)]).

여러 경우, PIP2 및 PIP3은 바이러스성 종양유전자 v-Akt의 인간 상동체의 생성물인 Akt를 원형질 막으로 동원하고, 여기서 이는 성장 및 생존에 중요한 여러 세포내 신호전달 경로를 위한 중심점으로서 작용한다 (문헌 [Fantl et al., Cell 69:413-423(1992)]; [Bader et al., Nature Rev. Cancer 5:921 (2005)]; [Vivanco and Sawyer, Nature Rev. Cancer 2:489 (2002)]). 대개 Akt 활성화를 통해 생존을 증가시키는 PI3K의 비정상적인 조절은 인간 암에서 가장 일반적인 사건 중 하나이며, 다양한 수준으로 일어나는 것으로 밝혀졌다. 이노시톨 고리의 3' 위치에서 포스포이노시티드를 탈인산화시켜 PI3K 활성을 길항시키는 종양 억제인자 유전자 PTEN은 다양한 종양에서 기능적으로 결실되어 있다. 다른 종양에서, p110α 이소형, PIK3CA 및 Akt에 대한 유전자가 증폭되며, 이의 유전자 생성물의 증가된 단백질 발현은 여러 인간 암에서 입증되었다. 게다가, p85-p110 복합체를 상향 조절하는 p85α의 돌연변이 및 전좌가 인간 암에서 보고되었다. 최종적으로, 하류 신호전달 경로를 활성화시키는 PIK3CA에서의 체세포 과오 돌연변이는 광범위한 인간 암에서 상당한 빈도로 보고되었다 (문헌 [Kang at el., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:802 (2005)]; [Samuels et al., Science 304:554 (2004)]; [Samuels et al., Cancer Cell 7:561-573 (2005)]). 이러한 관찰은, 포스포이노시톨-3 키나제의 탈조절 및 이 신호전달 경로의 상류 및 하류 성분이 인간 암 및 증식성 질환과 관련된 가장 흔한 탈조절 중 하나임을 나타낸다 (문헌 [Parsons et al., Nature 436:792 (2005)]; [Hennessey at el., Nature Rev. Drug Disc. 4:988-1004 (2005)]).

상기에 비추어 볼 때, PI3K의 억제제는 증식성 질환 및 다른 장애의 치료에서 특히 가치가 있을 것이다. PI3Kα 이소형에 대한 선택성이 바람직하고, 추가의 바람직한 특성에는 향상된 약물동력학적 특성 및/또는 화학적 안정성이 포함된다.

WO 2004/096797에는 PI3 키나제의 억제제로서의 특정 티아졸 유도체, 및 그의 약제로서의 용도가 개시되어 있다.

WO 2005/021519에는 또한 PI3 키나제의 억제제로서의 특정 티아졸 유도체, 및 그의 약제로서의 용도가 개시되어 있다.

본 발명에 이르러, 하기 주어진 화학식 I의 치환된 2-카르복스아미드 시클로아미노 우레아가 유리한 약리학적 특성을 가지며, 예를 들어 PI3 키나제 (포스파티딜이노시톨 3-키나제)를 억제한다는 것이 밝혀졌다. 특히, 이들 화합물은 바람직하게는 생화학적 및/또는 세포 검정에서 PI3K 베타 및/또는 델타 및/또는 감마 아형보다 알파에 대해 선택성을 나타낸다. 화학식 I의 화합물에 대해 특히 바람직한 추가의 특성에는, 예를 들어 고체 형태 및/또는 완충 용액에서의 향상된 안정성, 예를 들어 향상된 화학적 안정성이 포함된다. 따라서, 화학식 I의 화합물은, 예를 들어 PI3 키나제 (특히, PI3K 알파, 예컨대 PIK3CA의 체세포 돌연변이, 또는 PTEN의 생식세포주 돌연변이 또는 체세포 돌연변이를 나타내는 것들) 의존성 질환, 특히 증식성 질환, 예컨대 종양 질환 및 백혈병의 치료에 사용하기에 적합하다.

제1 측면에서, 본 발명은 화합물 (1R,2S,5S)-3-아자-비시클로[3.1.0]헥산-2,3-디카르복실산 2-아미드 3-{[5-(2-tert-부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}를 제외한 하기 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 제공한다.

<화학식 I>

[상기 화학식에서,

m은 0 또는 1이고;

n은 0 또는 1이고;

R¹은 H, 할로겐, 비치환된 C₁-C₄-알킬 또는 치환된 C₁-C₄-알킬을 나타내고;

R²는 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알킬, 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알콕시, 비치환된 또는 치환된 아미노, 할로겐 또는 히드록시로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고;

R³은 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알킬, 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알콕시, 비치환된 또는 치환된 아미노, 할로겐 또는 히드록시로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고;

R⁴는 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알킬, 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알콕시, 할로겐 또는 히드록시로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되거나; 또는

R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 동일 또는 상이한 탄소 원자와 함께, C₃-C₈-시클로알킬 또는 헤테로시클릴을 형성하고;

R⁵는 비치환된 또는 치환된 헤테로아릴임]

하기 용어 설명 및 종결부의 실시예를 포함하는 하기 명세서에 입각하여 본 발명이 더욱 상세히 이해될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "포함되는", "함유하는" 및 "포함하는"은 본원에서 이들의 개방적, 비제한적 의미로 사용된다.

본원에 제시된 임의의 화학식은 구조식에 의해 도시된 구조를 갖는 화합물 뿐만 아니라 특정 변형 또는 형태들을 나타내는 것으로 의도된다. 특히, 본원에 제시된 임의의 화학식의 화합물은 비대칭 중심을 가질 수 있어서, 상이한 입체이성질체 형태, 예컨대 상이한 거울상이성질체 형태로 존재할 수 있다. 적어도 하나의 비대칭 탄소 원자가 화학식 I의 화합물 내에 존재하는 경우, 상기 화합물은 광학 활성 형태 또는 광학 이성질체의 혼합물의 형태, 예를 들어 라세미체 혼합물의 형태로 존재할 수 있다. 따라서, 비대칭 탄소 원자는 (R)-, (S)- 또는 (R,S)- 배치, 바람직하게는 (R)- 또는 (S)-배치로 존재할 수 있다. 라세미체 혼합물을 비롯한 모든 광학 이성질체 및 그의 혼합물은 본 발명의 일부이다. 따라서, 본원에 제시된 임의의 제시 화학식은 라세미체, 하나 이상의 거울상이성질체 형태, 하나 이상의 부분입체이성질체 형태, 하나 이상의 회전장애이성질체 형태, 및 그의 혼합물을 나타내는 것으로 의도된다. 게다가, 특정 구조들은 기하이성질체 (즉, 시스 및 트랜스 이성질체)로서, 호변이성질체로서, 또는 회전장애이성질체로서 존재할 수 있다. 예를 들어, 이중 결합 또는 고리에서의 치환기는 시스- (=Z-) 또는 트랜스 (=E-) 형태로 존재할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 이성질체의 혼합물로서 또는 바람직하게는 순수한 이성질체로서, 바람직하게는 거울상이성질체-순수한 부분입체이성질체 또는 순수한 거울상이성질체로서 존재할 수 있다.

본원에 제시된 임의의 화학식은 상기 화합물의 수화물, 용매화물 및 다형체 및 그의 혼합물을 나타내는 것으로 의도된다.

본원에 제시된 임의의 화학식은 또한 화합물의 표지되지 않은 형태 뿐만 아니라 동위원소 표지된 형태를 나타내는 것으로 의도된다. 동위원소 표지된 화합물은 하나 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체된 것을 제외하고는, 본원에 제시된 화학식으로 도시된 구조를 갖는다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 동위 원소의 예로는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소 및 염소의 동위원소, 예컨대 각각 ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ³¹P, ³²P, ¹⁸F, ³⁵S, ³⁶Cl, ¹²⁵I가 포함된다. 본 발명의 동위원소 표지된 다양한 화합물, 예를 들어 ³H, ¹³C 및 ¹⁴C와 같은 방사성 동위원소가 혼입된 것들이 포함된다. 이러한 동위원소 표지된 화합물은 대사성 연구 (바람직하게는 ¹⁴C 사용), 반응 역학 연구 (예를 들어, ²H 또는 ³H 사용), 약물 또는 기질 조직 분포 분석을 비롯한 검출 또는 영상 기술, 예컨대, 양전자 방출 단층촬영 (PET) 또는 단일 광자 방출 전산화된 단층촬영 (SPECT)에서, 또는 환자의 방사성 치료에서 유용하다. 특히, ¹⁸F 또는 표지된 화합물이 PET 또는 SPECT 연구에서 특히 바람직할 수 있다. 또한, 보다 무거운 동위원소, 예컨대 중수소 (즉, ²H)로의 치환은 보다 큰 대사 안정성, 예를 들어 생체내 반감기 증가 또는 투여 요구량 감소를 야기하여 특정한 치료 이점을 제공할 수 있다. 동위원소 표지된 본 발명의 화합물 및 그의 전구약물은 일반적으로, 동위원소 표지되지 않은 시약을 손쉽게 입수가능한 동위 원소 표지된 시약으로 대체하여 이하 기재된 반응식, 또는 실시예 및 제조에 개시된 절차를 수행함으로써 제조할 수 있다.

추가로, 보다 무거운 동위원소, 특히 중수소 (즉, ²H 또는 D)로의 치환은 보다 큰 대사 안정성, 예를 들어 생체내 반감기 증가 또는 투여 요구량 감소 또는 치료 지수의 개선을 야기하여 특정한 치료 이점을 제공할 수 있다. 이러한 맥락에서 중수소는 화학식 I의 화합물의 치환기로서 간주된다고 이해된다. 상기 보다 무거운 동위원소, 상세하게는 중수소의 농도는 동위원소 농축 계수에 의해 정의될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "동위원소 농축 계수"는 동위원소 존재량 및 특정 동위원소의 자연 존재량 사이의 비율을 의미한다. 본 발명의 화합물 내 치환기가 표시된 중수소인 경우, 이러한 화합물은 각 지정된 중수소 원자에 대하여 적어도 3500 (각 지정된 중수소 원자에서 52.5％의 중수소 혼입), 적어도 4000 (60％의 중수소 혼입), 적어도 4500 (67.5％의 중수소 혼입), 적어도 5000 (75％의 중수소 혼입), 적어도 5500 (82.5％의 중수소 혼입), 적어도 6000 (90％의 중수소 혼입), 적어도 6333.3 (95％의 중수소 혼입), 적어도 6466.7 (97％의 중수소 혼입), 적어도 6600 (99％의 중수소 혼입), 또는 적어도 6633.3 (99.5％의 중수소 혼입)의 동위원소 농축 계수를 갖는다. 본 발명의 화합물에서, 특정 동위원소로서 구체적으로 지정되지 않은 임의의 원자는 상기 원자의 임의의 안정한 동위원소를 나타내는 것을 의미한다. 달리 언급하지 않는 한, 위치가 "H" 또는 "수소"로서 구체적으로 지정된 경우, 상기 위치는 그의 자연 존재량 동위원소 조성으로 수소를 갖는 것으로 이해한다. 따라서, 본 발명의 화합물에서 중수소 (D)로서 구체적으로 지정된 임의의 원자는, 예를 들어 앞서 제시된 범위의 중수소를 나타내는 것을 의미한다.

본원에 제시된 임의의 화학식이 참조되는 경우, 특정 변수에 대하여 가능한 종들의 목록에서 특정 잔기를 선택하는 것은, 다른 곳에 나타낸 그 변수에 대한 잔기를 한정하는 것으로 의도되지 않는다. 즉, 변수가 1회를 초과하여 나타나는 경우, 구체적인 목록으로부터의 종의 선택은 화학식 내 다른 곳에서의 동일 변수에 대한 종의 선택과 무관하다 (상기 또는 하기에 바람직한 것으로서 특징화된 실시양태에서의 하나 이상 내지 모든 보다 일반적인 표현이 보다 구체적인 정의로 대체되어, 각각 본 발명의 보다 바람직한 실시양태를 유도할 수 있음).

복수 형태 (예를 들어, 화합물들, 염들, 제약 제제들, 질환들 등)가 사용되는 경우, 이에는 단수형 (예를 들어, 단일 화합물, 단일 염, 단일 제약 제제, 단일 질환 등)이 포함된다. "화합물"은 (예를 들어, 제약 제제에서) 하나 초과의 화학식 I의 화합물 (또는 그의 염)이 존재하는 것을 배제하지 않는다.

화학식 I의 화합물이 염-형성 기를 갖고 있는 경우, 염은 바람직하게는 화학식 I의 화합물의 제약상 허용되는 염이다. 염의 형성에 요구되는 산/염기는 일반적으로 당업계에 공지되어 있다.

달리 명시하지 않는 한, 하기 일반적 정의가 본 명세서에서 적용될 것이다.

할로겐 (또는 할로)은 불소, 브롬, 염소 또는 요오드, 특히 불소, 염소를 나타낸다. 할로겐-치환된 기 및 잔기, 예컨대 할로겐으로 치환된 알킬 (할로겐알킬)은 모노-, 폴리- 또는 퍼-할로겐화될 수 있다.

헤테로 원자는 탄소 및 수소 이외의 원자, 바람직하게는 질소 (N), 산소 (O) 또는 황 (S), 특히 질소이다.

"알킬"은 직쇄 또는 분지쇄 알킬기를 지칭하고, 언급된 C_{1 - 4}알킬 및 C_{1 -8} 알킬을 포함한다. 이러한 알킬기에는, 예를 들어 메틸, 에틸, n- 또는 이소-프로필, n-, 이소-, sec- 또는 tert-부틸, n-펜틸, n-헥실, n-헵틸, n-옥틸, 특히 바람직하게는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필 및 n-부틸 및 이소-부틸이 포함된다. 알킬은 비치환 또는 치환될 수 있다. 예시적인 치환기로는 히드록시, 알콕시, 할로겐 (특히 플루오로), 아미노, 모노- 또는 디-알킬 치환된 아미노, 아세틸아미노 및 모르폴리닐이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 치환된 알킬의 예는 트리플루오로메틸이다. 시클로알킬이 알킬에 대한 치환기일 수도 있다. 이러한 경우의 예는 잔기 (알킬)-시클로알킬, 예컨대 (알킬)-시클로프로필 또는 (알킬)-시클로부틸, 예를 들어 메틸-시클로프로필 또는 메틸-시클로부틸이다. (알킬)-시클로알킬 잔기의 보다 구체적인 예로는 같은자리-유형의 치환 패턴, 예를 들어 1-알킬 시클로알킬, 예컨대 1-메틸 시클로프로필이 포함된다. 알킬에 대한 치환기로서의 시클로알킬의 또 다른 예는 알칸디일-시클로알킬, 예컨대 알칸디일-시클로프로필, 예를 들어 -CH₂-시클로프로필이다. C₁-C₈-알킬은 바람직하게는 1 이상 8개 이하의 탄소 원자를 갖는 알킬, 바람직하게는 1 이상 4개 이하의 탄소 원자를 갖는 알킬 (C₁-C₄-알킬)이고, 선형 또는 분지형이고; 바람직하게는, 저급 알킬이 부틸, 예컨대 n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 프로필, 예컨대 n-프로필 또는 이소프로필, 에틸 또는 바람직하게는 메틸이다."알콕시", "알콕시알킬", "알콕시카르보닐", "알콕시카르보닐알킬", "알킬술포닐", "알킬술폭실", "알킬아미노", "할로겐알킬"과 같은 기타 기에서의 각 알킬 부분은 상기 언급된 "알킬"의 정의에 기재된 바와 동일한 의미를 가질 것이다.

"알콕시", "알콕시알킬", "알콕시카르보닐", "알콕시카르보닐알킬", "알킬술포닐", "알킬술폭실", "알킬아미노", "할로겐알킬"과 같은 기타 기에서의 각 알킬 부분은 상기 언급된 "알킬"의 정의에 기재된 바와 동일한 의미를 가질 것이다.

"C_{3 -8}-시클로알킬"은 카르보사이클 당 3 내지 8개의 고리 원자를 갖는, 포화 또는 부분 포화된 모노시클릭, 융합된 폴리시클릭 또는 스피로 폴리시클릭, 카르보사이클을 지칭한다. 시클로알킬기의 예시적 예로는 하기 잔기가 포함된다: 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실. 시클로알킬은 비치환 또는 치환될 수 있고; 예시적인 치환기는 알킬에 대한 정의에 제공되어 있다.

"헤테로시클릴"은 포화 또는 부분 포화 헤테로시클릭 라디칼을 지칭하고, 바람직하게는 모노시클릭이거나 또는, 본 발명의 보다 넓은 측면에서는 비시클릭, 트리시클릭 또는 스피로시클릭 고리이고; 3 내지 24개, 보다 바람직하게는 4 내지 16개, 가장 바람직하게는 5 내지 10개, 및 가장 바람직하게는 5 또는 6개의 고리 원자를 가지며; 여기서 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 4개, 특히 1 또는 2개의 탄소 고리 원자가 헤테로원자에 의해 대체되고, 이 결합 고리는 바람직하게 4 내지 12개, 특히 5 내지 7개의 고리 원자를 갖는다. 헤테로시클릭 라디칼 (헤테로시클릴)은 비치환되거나, 또는 알킬 또는 치환된 알킬에 대해 상기 정의된 치환기로 이루어진 군, 및/또는 하기 치환기: 옥소 (=O), 티오카르보닐 (=S), 이미노(=NH), 이미노-저급 알킬 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 1개 이상, 특히 1 내지 3개의 치환기로 치환될 수 있다. 또한, 헤테로시클릴은, 특히 옥시라닐, 아지리디닐, 1,2-옥사티올라닐, 테트라히드로푸릴, 테트라히드로피라닐, 피롤리닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, (S-옥소 또는 S,S-디옥소)-티오모르폴리닐, 아제파닐, 디아제파닐, 특히 1,4-디아제파닐, 테트라히드로퀴놀릴, 테트라히드로이소퀴놀릴, 데카히드로퀴놀릴, 옥타히드로이소퀴놀릴, 이소크로마닐, 크로마닐 및 2,3-디히드로-벤조[1,4]디옥신-6-일로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로시클릴 라디칼이고, 이들 각각의 라디칼은 비치환되거나, 또는 상기 언급된 것들 및/또는 하기 치환기: 옥소 (=O), 티오카르보닐 (=S), 이미노 (=NH), 이미노-저급 알킬 중 하나 이상으로부터 선택되는 1개 이상의, 바람직하게는 3개 이하의 치환기로 치환된다.

"헤테로아릴"은 불포화 (특히, 최대로 불포화, 예컨대 접합된 이중 결합을 고리(들)에 가능한 최대수로 함유함) 헤테로시클릭 라디칼을 지칭하고, 바람직하게는 모노시클릭이거나, 또는 본 발명의 보다 넓은 측면에서는 비시클릭 또는 트리시클릭 고리이고; 3 내지 24개, 보다 바람직하게는 4 내지 16개, 가장 바람직하게는 5 내지 10개 및 가장 바람직하게는 5 또는 6개의 고리 원자를 가지며; 여기서 1개 이상, 바람직하게는 1 내지 4개, 특히 1 또는 2개의 고리 원자가 헤테로원자이고, 이 결합 고리 (즉, 분자의 나머지에 결합하는 고리)는, 바람직하게 4 내지 12개, 특히 5 내지 7개의 고리 원자를 갖는다. 헤테로아릴 라디칼은 비치환되거나, 또는 알킬, 또는 치환된 알킬에 대해 상기 정의된 치환기로 이루어진 군, 및/또는 하기 치환기: 옥소 (=O), 티오카르보닐 (=S), 이미노 (=NH), 이미노-저급 알킬 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되는 1개 이상, 특히 1 내지 3개의 치환기로 치환될 수 있고, 질소 함유 헤테로아릴의 경우에는 그의 N-옥시드를 포함한다. 또한, 헤테로아릴은, 특히 아지리닐, 티에닐 (=티오페닐), 푸라닐, 피라닐, 티오피라닐, 티안트레닐, 이소벤조푸라닐, 벤조푸라닐, 크로메닐, 2H-피롤릴, 피롤릴, 이미다졸릴, 이미다졸리디닐, 벤즈이미다졸릴, 피라졸릴, 피라지닐, 피라졸리디닐, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 디티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 피리딜, 피리미디닐, 피리다지닐, 인돌리지닐, 이소인돌릴, 3H-인돌릴, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 쿠마릴, 인다졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 퓨리닐, 4H-퀴놀리지닐, 이소퀴놀릴, 퀴놀릴, 디벤조푸라닐, 벤조티오페닐, 디벤조티오페닐, 프탈라지닐, 나프티리디닐, 퀴녹살릴, 퀴나졸리닐, 신놀리닐, 프테리디닐, 카르바졸릴, 베타-카르볼리닐, 페난트리디닐, 아크리디닐, 페리미디닐, 페난트롤리닐, 푸라자닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 페녹사지닐, 크로메닐 및 벤조[1,3]디옥솔-5-일로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로아릴 라디칼이고, 이들 각각의 라디칼은 비치환되거나, 또는 아릴에 대해 상기 언급된 것들 및/또는 하기 치환기: 옥소 (=O), 티오카르보닐 (=S), 이미노 (=NH), 이미노-저급 알킬 중 하나 이상으로부터 선택되는 1개 이상의, 바람직하게는 3개 이하의 치환기로 치환되고, 및 질소 함유 헤테로아릴의 경우에는 그의 N-옥시드를 포함한다.

"치료"에는 질환 또는 장애의 예방적 (방지적) 및 치유적 치료 뿐만 아니라 진행의 지연이 포함된다.

"PI3 키나제 매개 질환" (특히, PI3K 알파 매개 질환)은 특히 PI3 키나제의 억제, 특히 PI3K알파의 억제에 대해 유익한 방식 (예를 들어, 하나 이상의 증상의 개선, 질환 발병의 지연, 질환으로부터의 최대 일시적이거나 또는 완전한 치유)으로 반응하는 장애이다 (여기서, 치료되는 질환은 PIK3CA의 체세포 돌연변이, 또는 PTEN의 생식세포주 돌연변이 또는 체세포 돌연변이를 나타내는 것들을 포함할 수 있음). 치료되는 질환은 특히 증식성 질환을 포함하고, 예컨대 고형 종양, 백혈병, 교아세포종, 유방암 및 전립선암을 비롯한 종양 질환이 언급될 수 있다.

"염" ("또는 그의 염들" 또는 "또는 그의 염"의 의미)은 단독으로 또는 화학식 I의 유리 화합물과의 혼합물로 존재할 수 있으며, 바람직하게는 제약상 허용되는 염이다. 화학식 I의 화합물의 염-형성 기는 염기성 또는 산성 특성을 갖는 기 또는 라디칼이다. 하나 이상의 염기성 기 또는 하나 이상의 염기성 라디칼, 예를 들어, 아미노; 펩티드 결합을 형성하지 않는 2차 아미노 기 또는 피리딜 라디칼을 갖는 화합물은, 예를 들어 무기산, 예컨대 염산, 황산 또는 인산과의; 또는 적합한 유기 카르복실 또는 술폰산, 예를 들어, 지방족 모노- 또는 디-카르복실산, 예컨대 트리플루오로아세트산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 히드록시말레산, 말산, 타르타르산, 시트르산 또는 옥살산; 또는 아미노산, 예컨대 아르기닌 또는 라이신; 방향족 카르복실산, 예컨대 벤조산; 2-페녹시-벤조산; 2-아세톡시-벤조산; 살리실산; 4 아미노살리실산; 방향족-지방족 카르복실산, 예컨대 만델산 또는 신남산; 헤테로방향족 카르복실산, 예컨대 니코틴산 또는 이소니코틴산; 지방족 술폰산, 예컨대 메탄-, 에탄- 또는 2-히드록시에탄술폰산; 또는 방향족 술폰산, 예를 들어 벤젠-, p-톨루엔- 또는 나프탈렌-2-술폰산과의 산 부가염을 형성할 수 있다. 여러 염기성 기가 존재하는 경우, 모노- 또는 폴리-산 부가염이 형성될 수 있다. 산성 기, 카르복시 기 또는 페놀 히드록시 기를 갖는 화학식 I의 화합물은, 금속 또는 암모늄 염, 예컨대 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염, 예를 들어 나트륨, 칼륨, 마그네슘 또는 칼슘 염; 또는 암모니아 또는 적합한 유기 아민, 예컨대 3차 모노아민, 예를 들어 트리에틸아민 또는 트리(2 히드록시에틸)-아민, 또는 헤테로시클릭 염기, 예를 들어 N-에틸-피페리딘 또는 N,N'-디메틸피페라진과의 암모늄 염을 형성할 수 있다. 염의 혼합물도 가능하다. 산성 및 염기성 기 둘 모두를 갖는 화학식 I의 화합물은 내부 염을 형성할 수 있다.

단리 또는 정제 목적상, 제약상 허용되지 않는 염, 예를 들어 피크레이트 또는 퍼클로레이트를 사용하는 것도 가능하다. 치료 용도를 위해서는, 제약상 허용되는 염 또는 유리 화합물만을 사용하므로 (제약 제제의 형태로 적용가능한 경우), 이들이 바람직하다. 유리 형태의 화합물 및 그의 염 (예를 들어, 신규 화합물의 정제 또는 동정에서 중간체로서 사용될 수 있는 염 포함) 형태의 신규 화합물 사이의 밀접한 관계를 고려할 때, 상기 및 하기의 유리 화합물에 대한 임의의 언급은, 적절하게 상응하는 염 및 부형제도 지칭하는 것으로 이해해야 한다.

본 발명의 화합물은 또한 용매화물 및 수화물을 형성할 수 있고, 이에 따라 화학식 I의 화합물에 대한 임의의 언급은, 적절하게 화학식 I의 화합물의 상응하는 용매화물 및/또는 수화물 및 부형제도 지칭하는 것으로 이해해야 한다.

본 발명은 또한 화학식 I의 화합물 그 자체로 생체내 전환되는 화학식 I의 화합물의 전구약물에 관한 것이다. 이에 따라, 화학식 I의 화합물에 대한 임의의 언급은 적절하게 화학식 I의 화합물의 상응하는 전구약물 및 부형제도 지칭하는 것으로 이해해야 한다.

조합물은 하나의 투여 단위 형태인 고정 조합물을 지칭하거나, 또는 화학식 I의 화합물 및 조합 파트너 (예를 들어, 이하 설명되며, 또한 "치료제" 또는 "공동-작용제"로서 칭해지는 또 다른 약물)를 동일한 시간에 독립적으로 투여하거나, 또는 특히 조합 파트너가 협동 효과, 예를 들어 상승작용 효과를 나타내게 하는시간 간격 이내에 별도로 투여할 수 있는 조합 투여용 부분품의 키트를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "공동-투여" 또는 "조합 투여" 등은 이를 필요로 하는 단일 대상체 (예를 들어, 환자)로의 선택된 조합 파트너의 투여를 포함하는 것을 의미하며, 작용제가 반드시 동일한 투여 경로를 통해 또는 동일한 시간에 투여될 필요는 없는 치료 투약법을 포함하는 것으로 의도된다. 본원에 사용된 용어 "제약 조합물"은 하나 초과의 활성 성분을 혼합 또는 조합하여 얻은 생성물을 의미하며, 활성 성분들의 고정 및 비-고정 조합물을 모두 포함한다. 용어 "고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 화학식 I의 화합물 및 조합 파트너가 모두 단일 개체 또는 투여 형태로 환자에게 동시에 투여되는 것을 의미하다. 용어 "비-고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 화학식 I의 화합물 및 조합 파트너가 분리체(separate entities)로서 동시에, 함께, 또는 구체적시간 제한 없이 순차적으로 환자에게 투여되는 것을 의미한다 (여기서, 상기 투여는 환자 체내에서 두 화합물의 치료적 유효 수준을 제공함). 후자는 또한 칵테일(cocktail) 요법, 예를 들어 셋 이상의 활성 성분의 투여에 적용된다.

바람직한 실시양태 (독립적으로, 총괄적으로 또는 임의의 조합 또는 하위-조합으로 바람직함)에서, 본 발명은 유리 염기 형태 또는 염 형태의 화학식 I의 화합물 (여기서, 치환기는 본원에서 정의된 바와 같음)에 관한 것이다.

화학식 I에 나타난 바와 같이, 알파-아미드 치환기는 피롤리딘 고리 상의 2-위치에 있고, 입체화학은 도시된 바와 같고, R⁴ 치환기는 피롤리딘 고리의 위치 3에 있고, 각각의 치환기는 서로에 대해 시스- 인 한정된 입체화학을 갖는다.

R¹은 바람직하게 C_{1 -}C₄-알킬, 가장 바람직하게는 메틸을 나타낸다.

R²는 바람직하게 C_{1 -}C₄-알킬, C_{1 -}C₄-알콕시, 디-C_{1 -}C₄-알킬-아미노, 할로겐 또는 히드록시를 나타낸다.

R²는 보다 바람직하게 메틸, 메톡시, 디메틸아미노, 플루오로 또는 히드록시를 나타낸다.

R²는 보다 더 바람직하게 메톡시, 디메틸아미노, 플루오로 또는 히드록시를 나타낸다.

R³은 바람직하게 C_{1 -}C₄-알킬, C_{1 -}C₄-알콕시, 디-C_{1 -}C₄-알킬-아미노, 할로겐 또는 히드록시를 나타낸다.

R³은 보다 바람직하게 메틸, 메톡시, 디메틸아미노, 플루오로 또는 히드록시를 나타낸다.

R³은 보다 더 바람직하게 메틸, 메톡시, 디메틸아미노, 플루오로 또는 히드록시를 나타낸다.

존재하다면 (즉, m=1 및/또는 n=1), R² 또는 R³ 기는 화학식 I의 피롤리딘 고리의 2- 및/또는 3- 및/또는 4- 및/또는 5-위치에 부착될 수 있다. 가장 바람직하게, R² 또는 R³ 기는 피롤리딘 고리의 3-위치, 즉 R⁴ 기에 의해 동시에 치환된 동일 탄소에 부착된다.

R⁴는 바람직하게, 히드록시, C_{1 -}C₄-알킬, 또는 C₁-C₄-알콕시, 비치환된 또는 치환된 아미노, 헤테로시클릴 또는 헤테로아릴에 의해 치환된 C₁-C₄-알킬을 나타낸다.

R⁴는 보다 바람직하게, 히드록시, C_{1 -}C₄-알킬, 또는 C₁-C₄-알콕시, 디-C₁-C₄-알킬-아미노, 아세틸아미노, 모르폴리닐 또는 피리딜에 의해 치환된 C₁-C₄-알킬을 나타낸다.

R⁴는 보다 바람직하게, 히드록시, 메틸, 또는 C_{1 -}C₄-알콕시, 디-C_{1 -}C₄-알킬-아미노, 아세틸아미노, 모르폴리닐 또는 피리딜에 의해 치환된 메틸을 나타낸다.

R⁴는 가장 바람직하게, 히드록시, 메틸, 메톡시메틸, 디메틸아미노-메틸, 아세틸아미노-메틸, 모르폴린-4-일메틸 또는 피리딜-메틸을 나타낸다.

상기한 바와 같이, R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 동일 또는 상이한 탄소 원자와 함께, C₃-C₈-시클로알킬 또는 헤테로시클릴을 형성하고, 화합물 (1R,2S,5S)-3-아자-비시클로[3.1.0]헥산-2,3-디카르복실산 2-아미드 3-{[5-(2-tert-부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}는 제외된 화학식 I에 따른 화합물이 제공된다.

화학식 I에 따른 화합물은, 치환기가 화학식 (I)의 화합물에 대해 정의되고, R⁴가 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알킬, 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈--알콕시, 할로겐 또는 히드록시로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되거나; 또는, R³ 및 R⁴가 이들이 부착되어 있는 동일 탄소 원자와 함께, C₃-C₈-시클로알킬을 형성하거나; 또는 R³ 및 R⁴가 이들이 부착되어 있는 동일 또는 상이한 탄소 원자와 함께, 헤테로시클릴을 형성하는 것을 포함한다.

추가로, 화학식 I에 따른 별법의 화합물은, 치환기가 화학식 (I)의 화합물에 대해 정의되고, R⁴가 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알킬, 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알콕시, 할로겐 또는 히드록시로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되거나; 또는, R³ 및 R⁴가 이들이 부착되어 있는 동일 탄소 원자와 함께, C₃-C₈-시클로알킬 또는 헤테로시클릴 (바람직하게는 시클로알킬)을 형성하는 것을 포함한다.

따라서, R³ 및 R⁴가 C₃-C₈-시클로알킬 (바람직함) 또는 헤테로시클릴을 형성할 때, R³ 기는 피롤리딘 고리의 3-위치, 즉 R⁴ 기에 의해 동시에 치환된 동일 탄소에 부착된다.

상기한 바와 같이, R⁵는 비치환되거나, 또는 바람직하게는 할로겐, 히드록시, 시아노, 니트로, C₁-C₇-알킬, 퍼-듀테로 (per-deutero) C₁-C₇-알킬, C₃-C₁₂-시클로알킬, (C₁-C₇-알킬)-C₃-C₁₂-시클로알킬, (할로-C₁-C₇-알킬)-C₃-C₁₂-시클로알킬, 아미노-C₁-C₇-알킬, 할로-C₁-C₇-알킬, N-C₁-C₇-알카노일아미노-C₁-C₇-알킬, N-C₁-C₇-알칸술포닐-아미노-C₁-C₇-알킬, 피롤리디노-C₁-C₇-알킬, 옥소-피롤리디노-C₁-C₇-알킬, C₁-C₇-알칸술피닐, C₁-C₇-알칸술포닐, C₁-C₇-알콕시, 아미노, N-모노- 또는 N,N-디-(C₁-C₇-알킬)-아미노, N-모노- 또는 N,N-디-(퍼-듀테로 C₁-C₇-알킬)-아미노, N-모노- 또는 N,N-디-(C₁-C₇-시클로알킬)-아미노 C₁-C₇-알카노일아미노, 피롤리디노, 옥소-피롤리디노, 피페리디노, 피페라진-1-일, 4-(C₁-C₇-알킬, C₁-C₇-알콕시-C₁-C₇-알킬, 할로-C₁-C₇-알킬 또는 C₃-C₁₀-시클로알킬)-피페라진-1-일, 4-(아미노-C₁-C₇-알킬)-피페라진-1-일, 4-[N-모노- 또는 N,N-디-(C₁-C₇-알킬아미노)-C₁-C₇-알킬]-피페라진-1-일, 모르폴리노, 티오모르폴리노, S-옥소- 또는 S,S-디옥소티오모르폴리노, C₁-C₇-알칸술포닐아미노, 카르바모일, N-모노- 또는 N,N-디-(C₁-C₇-알킬, C₁-C₇-알콕시-C₁-C₇-알킬, 아미노-C₁-C₇-알킬 및/또는 (N'-모노- 또는 N',N'-디-(C₁-C₇-알킬)-아미노-C₁-C₇-알킬)-카르바모일, 피롤리딘-1-카르보닐, 피페리딘-1-카르보닐, 피페라진-1-카르보닐, 4-(C₁-C₇-알킬)피페라진-1-카르보닐, 모르폴린-1-카르보닐, 티오모르폴린-1-카르보닐, S-옥소- 또는 S,S-디옥소티오모르폴린-1-카르보닐, 술포, C₁-C₇-알칸술포닐, C₁-C₇-알칸술피닐, 술파모일, N-모노- 또는 N,N-디-(C₁-C₇-알킬)-술파모일, 모르폴리노술포닐, 티오모르폴리노술포닐, 티아졸릴로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상, 바람직하게는 하나의 잔기에 의해 치환된, 치환된 헤테로아릴을 나타낸다.

R⁵는 보다 바람직하게는, 비치환된 헤테로아릴, 또는 C₁-C₄-알킬 (특히, tert-부틸), 퍼-듀테로 C₁-C₄-알킬 (특히, d₉-tert-부틸), 할로-C₁-C₄-알킬 (특히, 1-플루오로-1-메틸-에틸, 2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸), 1-(C₁-C₄-알킬)-C₃-C₆-시클로알킬 (특히, 1-메틸-시클로프로필), (할로-C₁-C₄-알킬)-C₃-C₆-시클로알킬 (특히, 1-트리플루오로메틸-시클로프로필), 디-C₁-C₄-알킬아미노 (특히, 디에틸아미노), 디-(퍼-듀테로 C₁-C₄-알킬)아미노 (특히, d₁₀-디에틸아미노)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나의 치환기에 의해 치환된 헤테로아릴을 나타낸다.

R⁵는 보다 바람직하게는, 피리딜 (특히, 4-피리딜), 피리미디닐 (특히, 4-피리미디닐), 피라지닐 (특히, 2-피라지닐) 및 티아졸릴 (특히, 티아졸-4-일)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 헤테로아릴을 나타내고, 여기서 상기 치환기는 C₁-C₄-알킬 (특히, tert-부틸), 퍼-듀테로 C₁-C₄-알킬 (특히, d₉-tert-부틸), 할로-C₁-C₄-알킬 (특히, 1-플루오로-1-메틸-에틸, 2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸), 1-(C₁-C₄-알킬)-C₃-C₆-시클로알킬 (특히, 1-메틸-시클로프로필), (할로-C₁-C₄-알킬)-C₃-C₆-시클로알킬 (특히, 1-트리플루오로메틸-시클로프로필), 디-C₁-C₄-알킬아미노 (특히, 디에틸아미노), 디-(퍼-듀테로 C₁-C₄-알킬)아미노 (특히, d₁₀-디에틸아미노)로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

R⁵는 매우 바람직하게는, 2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일, 2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일, 2-(1-플루오로-1-메틸-에틸)-피리미딘-4-일, 2-(1-(트리플루오로메틸)시클로프로필)티아졸-4-일, 2-d₉-tert-부틸-피리미딘-4-일, 6-tert-부틸-피라진-2-일로 이루어지는 군으로부터 선택되는 헤테로아릴을 나타낸다.

R⁵는 또다른 실시양태에서, 매우 바람직하게는, 2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일, 2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일, 2-(1-플루오로-1-메틸-에틸)-피리미딘-4-일, 2-(1-(트리플루오로메틸)시클로프로필)티아졸-4-일, 2-d₉-tert-부틸-피리미딘-4-일, 6-tert-부틸-피라진-2-일, 2-tert-부틸-피리딘-4-일로 이루어지는 군으로부터 선택되는 헤테로아릴을 나타낸다.

R⁵가 치환된 피리딜, 예컨대 적어도 하나의 치환기에 의해 치환된 4-피리딜 (치환기는 본원의 상기에서 정의한 바와 같음)일 때, 상기 치환기가 적어도 피리딜 기의 2-위치에 있는 것이 바람직하다.

R⁵가 치환된 피리미디닐, 예컨대 적어도 하나의 치환기에 의해 치환된 4-피리미디닐 (치환기는 본원의 상기에서 정의한 바와 같음)일 때, 상기 치환기가 적어도 피리미디닐 기의 2-위치에 있는 것이 바람직하다.

R⁵가 치환된 피라지닐, 예컨대 적어도 하나의 치환기에 의해 치환된 2-피라지닐 (치환기는 본원의 상기에서 정의한 바와 같음)일 때, 상기 치환기가 적어도 피라지닐 기의 6-위치에 있는 것이 바람직하다.

R⁵가 치환된 티아졸, 예컨대 적어도 하나의 치환기에 의해 치환된 티아졸-4-일 (치환기는 본원의 상기에서 정의한 바와 같음)일 때, 상기 치환기가 적어도 티아졸 기의 2-위치에 있는 것이 바람직하다.

본 발명의 실시양태는 m 및/또는 n이 0인 화학식 I의 화합물을 포함한다.

본 발명의 또다른 실시양태는 m 및 n이 둘 모두 0인 화학식 I의 화합물, 즉 피롤리딘 고리가 오직 위치 2에서의 아미드 및 위치 3에서의 R⁴ 기에 의해서 치환된, 즉 하기 화학식 IA의 화합물을 포함한다.

<화학식 IA>

[상기 화학식에서, 치환기는 화학식 (I)의 화합물에서 정의한 바와 같음]

본 발명의 추가의 실시양태는 m이 0 또는 1이고, n이 1인 화학식 I의 화합물을 포함한다. 이 실시양태에서, R³가 피롤리딘 고리의 위치 3에 결합하는 것, 즉 하기 화학식 IB의 화합물을 제공하는 것이 바람직하다.

<화학식 IB>

[상기 화학식에서, 치환기는 화학식 (I)의 화합물에서 정의한 바와 같음]

화학식 IB에 따른 화합물에서, m이 1 (즉, R²가 존재함)일 때, R² 기는 바람직하게, 피롤리딘 고리의 4- 또는 5-위치 (바람직하게는 4-위치)에 부착되고, 따라서 하기 화학식 IB'의 화합물이 제공된다.

<화학식 IB'>

화학식 IB 또는 IB'에서, 바람직하게 R³는 C₁-C₄-알킬이고, 가장 바람직하게는 메틸이다.

본 발명의 추가의 실시양태는, m이 0 또는 1이고, n이 1이고, R³가 피롤리딘 고리의 위치 3에 결합하고, R⁴와 함께 C₃-C₈-시클로알킬 또는 헤테로시클릴, 바람직하게는 C₃-C₈-시클로알킬, 특히 시클로프로필을 형성하여, 화학식 I의 화합물, 즉 하기 화학식 IC의 화합물을 제공하는 것을 포함한다.

<화학식 IC>

[상기 화학식에서, 치환기는 화학식 (I)의 화합물에서 정의한 바와 같음]

화학식 IC에 따른 화합물에서, m은 1 (즉, R²가 존재함)일 때, R² 기는 바람직하게 피롤리딘 고리의 4- 또는 5-위치 (바람직하게 4- 위치)에 부착된다.

본 발명은 또한 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물의 제약상 허용되는 전구약물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물의 제약상 허용되는 대사물에 관한 것이다.

본 발명은 특히 실시예에 주어진 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물뿐만 아니라 본원에 기재된 제조 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다. 원칙적으로 2개의 상이한 아민을 상응하는 우레아 유도체로 전환시키는 모든 공지된 방법이 적합하며, 이는 각 출발 물질을 사용하여 적용할 수 있다.

따라서, 본 발명은 특히, 각 경우에 임의로 희석제의 존재하에, 그리고 임의로 반응 보조제의 존재하에, 하기 화학식 II의 화합물을 활성화제의 존재하에 하기 화학식 IIIA의 화합물과 반응시키거나 ("방법 A"), 또는 하기 화학식 IIIB의 화합물과 반응시키는 단계 ("방법 B");

<화학식 II>

[상기 화학식에서, 치환기는 상기 정의한 바와 같음]

<화학식 IIIA>

[상기 화학식에서, 치환기는 상기 정의한 바와 같음]

<화학식 IIIB>

[상기 화학식에서, R¹은 상기 정의한 바와 같고; RG는 반응성 기 (예컨대, 이미다졸릴카르보닐)를 나타냄]

생성된 화학식 I의 화합물을 유리 형태 또는 염의 형태로 회수하는 단계; 및

임의로, 방법 A 또는 방법 B에 따라 수득가능한 화학식 I의 화합물을 화학식 I의 다른 화합물로 전환시키고/거나, 화학식 I의 화합물의 수득가능한 염을 그의 다른 염으로 전환시키고/거나, 화학식 I의 화합물의 수득가능한 유리 화합물을 그의 염으로 전환시키고/거나, 화학식 I의 화합물의 수득가능한 이성질체를 화학식 I의 하나 이상의 다른 수득가능한 이성질체로부터 분리하는 단계

를 포함하는 방법에 관한 것이다.

반응 조건

방법은 당업계에 공지된 방법에 따라 또는 하기 실시예에 개시된 바와 같이 수행할 수 있다. 예를 들어, 화학식 II의 화합물을 염기, 예를 들어 유기 아민, 예를 들어 트리에틸아민의 존재하에서 화학식 IIIA 또는 IIIB의 화합물과 용매, 예를 들어 디메틸포름아미드 중에서 반응시킬 수 있다.

상기 또는 하기에 온도가 제시된 경우, 제시된 수치값으로부터의 소폭의 편차, 예를 들어 ±10％의 편차가 전형적으로 허용될 수 있으므로, "약"이 추가되어야 한다.

모든 반응은 하나 이상의 희석제 및/또는 용매의 존재하에서 수행될 수 있다. 출발 물질은 등몰량으로 사용될 수 있고; 별법으로, 화합물이 과량으로 사용되어, 예를 들어 용매로서 기능하거나, 평형을 이동시키거나, 또는 일반적으로 반응 속도를 가속화시킬 수 있다.

반응 보조제, 예컨대 산, 염기 또는 촉매는, 일반적으로 공지된 절차에서와 유사하며 반응에 의해 요구되는 적합한 양으로, 당 분야에 공지된 바와 같이, 첨가될 수 있다.

보호기

하나 이상의 다른 관능기, 예를 들어 카르복시, 히드록시, 아미노, 술피드릴 등이 본원에 기재된 바와 같이 출발 물질 또는 임의의 다른 전구체에서 보호되거나 보호될 필요가 있는 경우, 이들이 반응에 참여하거나 반응을 방해해서는 안되기 때문에, 이들은 펩티드 화합물, 및 또한 세팔로스포린 및 페니실린 뿐만 아니라 핵산 유도체 및 당의 합성에 통상적으로 사용되는 기들이다. 보호기는 일단 제거되면 최종 화합물에는 더 이상 존재하지 않는 기이며 (한편 치환기로서 잔존하는 기는 본원에 사용되는 의미에서 보호기가 아님), 이는 출발 물질에 또는 중간 단계에 첨가되었다가 최종 화합물의 수득을 위해 제거되는 기이다. 또한 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물을 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 다른 화합물로 전환시키는 경우, 유용하거나 필요하면, 보호기를 도입 및 제거할 수 있다.

보호기는 전구체 내에 이미 존재할 수 있으며, 원치않는 2차 반응, 예컨대 아실화, 에테르화, 에스테르화, 산화, 가용매분해 및 유사한 반응에 대하여 관련 관능기를 보호해야 한다. 보호기는, 그들 스스로, 전형적으로는 가아세토산분해, 가양성자분해, 가용매분해, 환원, 광분해에 의해 또는 또한 예를 들어, 생리학적 조건과 유사한 조건하에서의 효소 활성에 의해 용이하게, 즉 바람직하지 않은 2차 반응없이 제거되며, 최종 생성물에 존재하지 않는 것을 특징으로 한다. 전문가들은 상기 및 하기 언급된 반응에 적합한 보호기를 인지하고 있거나 또는 용이하게 확립할 수 있다.

상기 보호기에 의한 상기 관능기의 보호, 보호기 그 자체, 및 그의 제거 반응은, 예를 들어 표준 참고 도서, 예컨대 [J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London and New York 1973], [T. W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1999], ["The Peptides"; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981], ["Methoden der organischen Chemie" (Methods of organic chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974], [H.-D. Jakubke and H. Jescheit, "Aminosauren, Peptide, Proteine" (Amino acids, peptides, proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982] 및 [Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of carbohydrates: monosaccharides and derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974]에 기재되어 있다.

임의의 반응 및 전환

화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물은 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 다른 화합물로 전환될 수 있다.

치환기가 아미노 또는 아미노-C₁-C₇-알킬 치환기를 함유하는 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물에서, 아미노는 3차 질소 염기, 예컨대 트리에틸아민 또는 피리딘의 존재하에 적절한 용매, 예컨대 메틸렌 클로라이드의 부재 또는 존재하에, 예를 들어 -20 내지 50℃의 온도에서, 예컨대 대략 실온에서 상응하는 C₁-C₇-알카노일할로게니드, 예를 들어 상응하는 클로라이드와의 반응에 의해 아실아미노, 예를 들어 C₁-C₇-알카노일아미노로 전환될 수 있다.

염-형성 기를 갖는 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물의 염은 그 자체로 공지된 방식으로 제조될 수 있다. 따라서, 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물의 산 부가염은 산 또는 적합한 음이온 교환 시약으로의 처리에 의해 수득될 수 있다. 2개의 산 분자를 갖는 염 (예를 들어, 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물의 디할로게니드)은 또한 화합물 당 1개의 산 분자를 갖는 염 (예를 들어, 모노할로게니드)으로 전환될 수 있으며; 이는 융점으로 가열하거나, 또는 예를 들어 고진공하에 승온 (예를 들어, 130 내지 170℃)에서 고체로서 가열하여 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물의 분자 당 1개의 산 분자를 방출시킴으로써 수행할 수 있다. 염은 통상적으로, 예를 들어 적합한 염기성 화합물, 예를 들어 알칼리 금속 카르보네이트, 알칼리 금속 히드로겐카르보네이트, 또는 알칼리 금속 히드록시드, 전형적으로는 탄산칼륨 또는 수산화나트륨을 이용한 처리에 의해 유리 화합물로 전환될 수 있다.

입체이성질체 혼합물, 예를 들어 부분입체이성질체의 혼합물은 그 자체로 공지된 방식으로 적합한 분리 방법에 의해 그의 상응하는 이성질체로 분리될 수 있다. 부분입체이성질체 혼합물은, 예를 들어 분별 결정화, 크로마토그래피, 용매 분포에 의해, 및 유사한 절차에 의해 그의 개별 부분입체이성질체로 분리될 수 있다. 이러한 분리는 출발 화합물의 수준에서 또는 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물 그 자체에서 수행될 수 있다. 거울상이성질체는, 예를 들어 거울상이성질체-순수 키랄 산과의 염 형성에 의한 부분입체이성질체 염의 형성을 통해, 또는 예를 들어 키랄 리간드를 갖는 크로마토그래피 기질을 사용하는 크로마토그래피, 예컨대 HPLC에 의해 분리될 수 있다.

본원에 언급된 전환과 유사한 반응이 적합한 중간체의 수준에서 일어날 수도 있음 (따라서 상응하는 출발 물질의 제조에 있어서 유용함)이 강조되어야 한다.

출발 물질:

화학식 II 및 III의 출발 물질 뿐만 아니라 본원, 예를 들어 하기에 언급된 다른 출발 물질은 당업계에 공지된 방법에 따라 제조되거나 또는 이와 유사하게 제조될 수 있으며, 이들은 당업계에 공지되어 있고/있거나 시중에서 입수가능하다. 출발 물질의 제조가 특별히 기재되어 있지 않은 한, 화합물은 공지된 것이거나 또는 당업계에 공지된 방법 (예를 들어, WO 05/021519 또는 WO 04/096797)과 유사하게, 또는 하기 개시된 바와 같이 제조할 수 있다. 신규한 출발 물질 뿐만 아니라 그의 제조 방법이 또한 본 발명의 실시양태이다. 바람직한 실시양태에서, 이러한 출발 물질이 사용되고, 선택된 반응은 바람직한 화합물이 수득될 수 있도록 선택된다.

출발 물질 (중간체 포함) (이는 또한 적절하고 편리한 경우 염으로서 사용되고/거나 수득될 수 있음)에서, 치환기는 바람직하게는 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물에 대해 정의된 바와 같다.

제약 조성물, 용도 및 치료 방법

본 발명은 또한 본원에 개시된 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물의 약제로서의 용도에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명은, 예를 들어 PI3K의 억제가 나타나는, 예를 들어 인간 또는 수의학적 용도를 위한, 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물을 포함하는 조성물을 포함한다.

한 실시양태에서, 본 발명은 PI3K에 의해 매개되는 세포 증식성 질환, 예컨대 종양 (양성 또는 악성) 및/또는 암성 세포 성장의 치료에 관한 것이다. 질환에는 PIK3CA의 체세포 돌연변이, 또는 PTEN의 생식세포주 돌연변이 또는 체세포 돌연변이를 나타내는 것들이 포함될 수 있다. 특히, 화합물은, 예를 들어 육종; 폐암; 기관지암; 전립선암; 유방암 (산발성 유방암 및 코우덴병의 환자 포함); 췌장암; 위장암; 결장암; 직장암; 결장 암종; 결장직장 선종; 갑상선암; 간암; 간내 담관암; 간세포암; 부신암; 위(stomach)암; 위(gastric)암; 신경교종; 교모세포종; 자궁내막암; 흑색종; 신장암; 신우암; 방광암; 자궁체부암; 자궁경부암; 질암; 난소암; 다발성 골수종; 식도암; 백혈병; 급성 골수성 백혈병; 만성 골수성 백혈병; 림프구성 백혈병; 골수양 백혈병; 뇌암; 구강 및 인두암; 후두암; 소장암; 비-호지킨 림프종; 흑색종; 융모성 결장 선종; 신생물; 상피 특성의 신생물; 림프종; 유방 암종; 기저 세포 암종; 편평 세포 암종; 광선 각화증; 충실성 종양을 비롯한 종양 질환; 경부 또는 두부의 종양; 진성 적혈구증가증; 본태성 혈소판증가증; 및 골수양화생을 수반하는 골수섬유증을 비롯한, 인간 또는 동물 (예를 들어, 쥐과) 암의 치료에 유용할 수 있다.

다른 실시양태에서, (예를 들어, PI3K-매개) 병태 또는 장애는 표피 과다증식, 전립선 비대증, 신생물, 상피 특성의 신생물, 코우덴 증후군, 레르미트-두도스(Lhermitte-Dudos) 질환 또는 바나얀-조나나(Bannayan-Zonana) 증후군, 천식, COPD, ARDS, 뢰플러 증후군, 호산구성 폐렴, 기생충 (특히 후생동물) 침습 (열대 호산구증가증 포함), 기관지폐 아스페르길루스증, 결절성 다발동맥염 (처크-스트라우스 증후군 포함), 호산구성 육아종, 약물-반응에 의해 발생하여 기도에 영향을 미치는 호산구-관련 장애, 건선, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 원형 탈모증, 다형 홍반, 포진성 피부염, 경피증, 백반증, 과민성 혈관염, 두드러기, 수포성 유천포창, 홍반성 루푸스, 천포창, 후천성 수포성 표피박리증, 자가면역성 혈액 장애 (예를 들어, 용혈성 빈혈, 재생불량 빈혈, 순수 적혈구 빈혈 및 특발성 혈소판감소증), 전신 홍반성 루푸스, 다발성연골염, 경피증, 베게너 육아종증, 피부근염, 만성 활성 간염, 중증 근무력증, 스티븐-존슨 증후군, 특발성 스프루, 자가면역성 염증성 장 질환 (예를 들어, 궤양성 대장염 및 크론병), 내분비 안병증, 그레이브병, 사르코이드증, 폐포염, 만성 과민성 폐렴, 다발성 경화증, 원발성 담즙성 간경변증, 포도막염 (전방 및 후방), 간질성 폐 섬유증, 건선성 관절염, 사구체신염, 심혈관 질환, 아테롬성동맥경화증, 고혈압, 심부 정맥 혈전증, 졸중, 심근경색증, 불안정형 협심증, 혈전색전증, 폐동맥 색전증, 혈전용해 질환, 급성 동맥 허혈, 말초 혈전성 폐쇄, 및 관상 동맥 질환, 재관류 손상, 망막병증, 예컨대 당뇨병성 망막병증 또는 고압 산소-유도 망막병증, 및 상승된 안내압 또는 안구 방수 분비를 특징으로 하는 병태, 예컨대 녹내장으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

상기 용도에 있어서, 필요한 투여량은 물론 투여 방식, 치료하고자 하는 특정 병태 및 목적 효과에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 전신적으로 체중 1 kg 당 약 0.03 내지 10.0 mg의 1일 투여량으로 만족스러운 결과가 얻어지도록 제시된다. 보다 큰 포유동물, 예컨대 인간에서 제시되는 1일 투여량은 약 0.5 mg 내지 약 1 g 범위이며, 이는 예를 들어 1일 4회 이하의 분할 투여량으로 또는 지연 형태로 편리하게 투여된다. 경구 투여를 위한 적합한 단위 투여 형태는 약 0.1 내지 500 mg의 활성 성분을 포함한다.

화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물은 임의의 통상의 경로에 의해, 특히 경장으로, 예를 들어 경구로, 예를 들어 정제 또는 캡슐의 형태로, 또는 비경구로, 예를 들어 주사가능한 용액 또는 현탁액의 형태로, 국소적으로, 예를 들어 로션, 겔, 연고 또는 크림의 형태로, 흡입에 의해, 비내로, 또는 좌제 형태로 투여될 수 있다.

화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물은, 예를 들어 상기 나타낸 바와 같이, 유리 형태로 또는 제약상 허용되는 염 형태로 투여될 수 있다. 이러한 염은 통상적 방식으로 제조될 수 있고, 유리 화합물과 동일한 정도의 활성을 나타낼 수 있다.

결론적으로, 본 발명은 또한 하기를 제공한다:

? 예를 들어, 상기 나타낸 것과 같은, PI3 (예컨대, PI3 키나제 알파)의 활성화에 의해 매개되는 병태, 장애 또는 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 상기 병태, 장애 또는 질환을 예방 또는 치료하는 방법.

? 예를 들어, 본원에 나타낸 임의의 방법에서 약제로서의, 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물의 용도.

? 예를 들어, 본원에 나타낸 임의의 방법에서, 특히 하나 이상의 포스파티딜이노시톨 3-키나제 매개 질환에 사용하기 위한 방법에서 약제로서 사용하기 위한, 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물.

? 본원에 나타낸 임의의 방법에서, 특히 하나 이상의 포스파티딜이노시톨 3-키나제 매개 질환의 치료를 위한 방법에서의, 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물의 용도.

? 본원에 나타낸 임의의 방법에서, 특히 하나 이상의 포스파티딜이노시톨 3-키나제 매개 질환의 치료용 의약의 제조를 위한 방법에서의, 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물의 용도.

PI3K는 대등한 신호전달 경로를 통합시키는 제2 메신저 중심으로 기능하며, PI3K 억제제와 다른 경로 억제제의 조합물이 인간에서 암 및 증식성 질환을 치료하는데 유용할 것이라는 증거가 드러나고 있다.

인간 유방암의 대략 20 내지 30％에서는 Her-2/neu-ErbB2가 과다발현되며, 이는 약물 트라스투주맙에 대한 표적이다. 트라스투주맙은 Her2/neu-ErbB2를 발현하는 일부 환자에서의 내성 반응이 입증되었으나, 이들 환자 중 하위세트에서만 반응한다. 최근의 작업을 통해, 이러한 제한된 반응률이 트라스투주맙과 PI3K 또는 PI3K/AKT 경로의 억제제의 조합물에 의해 실질적으로 개선될 수 있음이 확인되었다 (문헌 [Chan et al., Breast Can. Res. Treat. 91:187 (2005)], [Woods Ignatoski et al., Brit. J. Cancer 82:666 (2000)], [Nagata et al., Cancer Cell 6:117 (2004)]).

다양한 인간 악성 종양은 돌연변이 활성화 또는 Her1/EGFR 수준의 증가를 나타내며, 수많은 항체 및 소분자 억제제가 상기 수용체 티로신 키나제에 대항하도록 개발되었다 (예컨대, 타르세바, 게피티닙 및 에르비툭스). 그러나, EGFR 억제제는 특정 인간 종양 (예를 들어, NSCLC)에서 항-종양 활성이 입증된 반면, 이들은 EGFR-발현 종양을 가진 모든 환자에서 전반적인 환자 생존을 증가시키는데는 실패하였다. 이는 PI3K/Akt 경로를 비롯한 Her1/EGFR의 여러 하류 표적이 다양한 악성 종양에서 높은 빈도로 돌연변이되거나 탈조절된다는 사실에 의해 설명될 수 있다. 예를 들어, 게피티닙은 시험관내 검정에서 선암종 세포주의 성장을 억제한다. 그럼에도, 이들 세포주의 서브클론은 PI3/Akt 경로의 활성화를 증가시키는 것으로 입증된 게피티닙에 대해 내성인 것으로 선별될 수 있다. 이 경로의 하향-조절 또는 억제는 상기 내성 서브클론이 게피티닙에 대해 민감하도록 만든다 (문헌 [Kokubo et al., Brit. J. Cancer 92:1711 (2005)]). 게다가, PTEN 돌연변이를 가지며 EGFR을 과다발현하는 세포주를 이용한 유방암의 시험관내 모델에서, PI3K/Akt 경로 및 EGFR을 둘 다 억제시킨 결과 상승작용 효과가 나타났다 (문헌 [She et al., Cancer Cell 8:287-297(2005)]). 이들 결과는, 게피티닙 및 PI3K/Akt 경로 억제제의 조합이 암의 치료학적 방침에 유용함을 나타낸다.

AEE778 (Her-2/neu/ErbB2, VEGFR 및 EGFR의 억제제) 및 RAD001 (Akt의 하류 표적, mTOR의 억제제)의 조합은 교아세포종 이종이식 모델에서 단독의 상기 작용제보다 더 큰 조합 효능을 생성한다 (Goudar et al., Mol. Cancer. Ther. 4:101-112 (2005)).

항-에스트로겐, 예컨대 타목시펜은 세포 주기 억제제 p27Kip의 작용을 요하는 세포 주기 정지의 유도를 통해 유방암 성장을 억제한다. 최근, Ras-Raf-MAP 키나제 경로의 활성화가 p27Kip의 인산화 상태를 변경시켜, 세포 주기 정지에 있어 이의 억제 활성을 감쇠시키고, 이로써 항-에스트로겐 내성에 기여한다는 것이 밝혀졌다 (문헌 [Donovan, et al., J. Biol. Chem. 276:40888, (2001)]). 도노반(Donovan) 등에 의해 보고된 바와 같이, MEK 억제제로 처리하여 MAPK 신호전달을 억제하자, 호르몬 불응성 유방암 세포주에서 p27의 비정상적인 인산화 상태가 역행되었고 그에 따라 호르몬 민감성이 복구되었다. 유사하게, Akt에 의한 p27Kip의 인산화는 또한 세포 주기를 정지시키는 이의 역할을 폐기시켰다 (문헌 [Viglietto et al., Nat Med. 8:1145 (2002)]).

따라서, 추가의 측면에서, 본 발명은 호르몬 의존성 암, 예컨대 유방암 및 전립선암의 치료에 사용하기 위한 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물을 제공한다. 이러한 사용에 의해, 통상의 항암제 사용시 상기 암에서 흔히 보여지는 호르몬 내성을 역행시키는 것을 목적으로 한다.

혈액암, 예컨대 만성 골수성 백혈병 (CML)에서, 염색체 전좌는 구성적으로 활성화된 BCR-Abl 티로신 키나제를 유도한다. 발병 환자는 Abl 키나제 활성 억제의 결과로서 소분자 티로신 키나제 억제제인 이마티닙에 대해 반응성이다. 그러나, 진행된 단계의 질환을 가진 여러 환자가 초기에는 이마티닙에 대해 반응하지만, 이후에는 Abl 키나제 도메인에서의 내성-부여 돌연변이로 인해 재발하게 된다. 시험관내 연구는, BCR-Ab1이 Ras-Raf 키나제 경로를 이용하여 이의 효과를 이끌어 낸다는 것을 입증하였다. 또한, 동일한 경로에서 한 가지가 넘는 키나제의 억제는 내성-부여 돌연변이에 대해 추가의 보호를 제공한다.

따라서, 또 다른 측면에서, 본 발명은 혈액암, 예컨대 만성 골수성 백혈병 (CML)의 치료에 키나제 억제제의 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추가의 작용제, 예컨대 글리벡 (Gleevec, 등록상표)과 조합하여 사용하기 위한 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물을 제공한다. 이러한 사용에 의해, 상기 하나 이상의 추가의 작용제에 대한 내성을 역행시키거나 예방하는 것을 목적으로 한다.

PI3K/Akt 경로의 활성화가 세포 생존을 유도하기 때문에, 암 세포에서 아폽토시스를 유도하는 요법, 예컨대 방사선요법 및 화학요법과 조합하여 상기 경로를 억제하면 개선된 반응이 나타날 것이다 (문헌 [Ghobrial et al., CA Cancer J. Clin 55:178-194 (2005)]). 예를 들어, PI3 키나제 억제제와 카르보플라틴의 조합은 시험관내 증식 및 아폽토시스 검정의 둘 다에서 뿐만 아니라 난소암의 이종이식 모델의 생체내 종양 효능에서 상승작용 효과가 입증되었다 (문헌 [Westfall and Skinner, Mol. Cancer Ther. 4:1764-1771 (2005)]).

클래스 1A 및 1B PI3 키나제의 억제제가 암 및 증식성 질환 이외에도 다른 질환 분야에 치료적으로 유용할 것이라는 여러 증거가 있다. PIK3CB 유전자의 PI3K 이소형 생성물인 p110β의 억제가 전단-유도된 혈소판 활성화와 관련이 있는 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Jackson et al., Nature Medicine 11:507-514 (2005)]). 따라서, p110β를 억제하는 PI3K 억제제는 단일 제제로서 또는 항혈전 요법과 조합되어 유용할 것이다. PIK3CD 유전자의 생성물인 이소형 p110δ는 B 세포 기능 및 분화 (문헌 [Clayton et al., J. Exp. Med. 196:753-763 (2002)]), T-세포 의존성 및 독립성 항원 반응 (문헌 [Jou et al., Mol. Cell. Biol. 22:8580-8590 (2002)]) 및 비만 세포 분화 (문헌 [Ali et al., Nature 431:1007-1011 (2004)])에서 중요하다. 따라서, p110δ-억제제는 B-세포 유도된 자가면역성 질환 및 천식의 치료에서 유용할 것이 예상된다. 최종적으로, PI3KCG 유전자의 이소형 생성물인 p110γ의 억제는 T 세포 반응은 감소시키나 B 세포 반응은 감소시키지 않고 (문헌 [Reif et al., J. Immunol. 173:2236-2240 (2004)]), 이의 억제는 자가면역성 질환의 동물 모델에서 효능이 입증되었다 (문헌 [Camps et al., Nature Medicine 11:936-943 (2005)], [Barber et al., Nature Medicine 11:933-935 (2005)]).

본 발명은 또한 하나 이상의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물을 인간 또는 동물 대상체에 투여하기에 적합한 제약상 허용되는 부형제와 함께, 단독으로 또는 다른 치료제, 예를 들어 다른 항암제와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 세포 증식성 질환, 예컨대 암을 앓는 인간 또는 동물 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 따라서 본 발명은 상기 치료가 필요한 인간 또는 동물 대상체에게 치료 유효량의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물을 단독으로 또는 하나 이상의 다른 치료제, 예를 들어 다른 항암제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체의 치료 방법을 제공한다. 특히, 조성물은 조합 치료제로서 또는 별도 투여되도록 함께 제제화될 것이다. 화학식 I의 화합물과 사용하기에 적합한 항암제에는 하기에 제시된 키나제 억제제, 항에스트로겐, 항안드로겐, 다른 억제제, 암 화학요법 약물, 알킬화제, 킬레이트화제, 생물학적 반응 조절제, 암 백신, 안티센스 요법용 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 화합물이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다.

A. 키나제 억제제: 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물과 함께 항암제로 사용하기 위한 키나제 억제제로는 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 키나제의 억제제, 예컨대 소분자 퀴나졸린, 예를 들어 게피티닙 (US 5457105, US 5616582 및 US 5770599), ZD-6474 (WO 01/32651), 에를로티닙 (타르세바(Tarceva, 등록상표), US 5,747,498 및 WO 96/30347) 및 라파티닙 (US 6,727,256 및 WO 02/02552); 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR) 키나제 억제제, 예컨대 SU-11248 (WO 01/60814), SU 5416 (US 5,883,113 및 WO 99/61422), SU 6668 (US 5,883,113 및 WO 99/61422), CHIR-258 (US 6,605,617 및 US 6,774,237), 바탈라닙 또는 PTK-787 (US 6,258,812), VEGF-트랩 (WO 02/57423), B43-게니스테인 (WO-09606116), 펜레티니드 (레티노산 p-히드록시페닐아민) (US 4,323,581), IM-862 (WO 02/62826), 베바시주맙 또는 아바스틴(Avastin, 등록상표) (WO94/10202), KRN-951, 3-[5-(메틸술포닐피페라딘 메틸)-인돌릴]-퀴놀론, AG-13736 및 AG-13925, 피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진, ZK-304709, 베글린(Veglin, 등록상표), VMDA-3601, EG-004, CEP-701 (US 5,621,100), Cand5 (WO 04/09769); Erb2 티로신 키나제 억제제, 예컨대 페르투주맙 (WO 01/00245), 트라스투주맙 및 리툭시맙; Akt 단백질 키나제 억제제, 예컨대 RX-0201; 단백질 키나제 C (PKC) 억제제, 예컨대 LY-317615 (WO 95/17182) 및 페리포신 (US 2003171303); Raf/Map/MEK/Ras 키나제 억제제, 예컨대 소라페닙 (BAY 43-9006), ARQ-350RP, LErafAON, BMS-354825 AMG-548, 및 그외 WO 03/82272에 기재된 것; 섬유모세포 성장 인자 수용체 (FGFR) 키나제 억제제; 세포 의존성 키나제 (CDK) 억제제, 예컨대 CYC-202 또는 로스코비틴 (WO 97/20842 및 WO 99/02162); 혈전-유도된 성장 인자 수용체 (PDGFR) 키나제 억제제, 예컨대 CHIR-258, 3G3 mAb, AG-13736, SU-11248 및 SU6668; 및 Bcr-Abl 키나제 억제제 및 융합 단백질, 예컨대 STI-571 또는 글리벡(등록상표)(이마티닙)이 포함된다.

B. 항-에스트로겐: 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물과 함께 항암 요법에 사용하기 위한 에스트로겐-표적 작용제로는 선택적 에스트로겐 수용체 조절제 (SERM), 예컨대 타목시펜, 토레미펜, 랄록시펜; 아로마타제 억제제, 예컨대 아리미덱스(Arimidex, 등록상표) 또는 아나스트로졸; 및 에스트로겐 수용체 하향 조절제 (ERD), 예컨대 파슬로덱스(Faslodex, 등록상표) 또는 풀베스트란트가 포함된다.

C. 항-안드로겐: 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물과 함께 항암 요법에 사용하기 위한 안드로겐-표적 작용제로는 플루타미드, 비칼루타미드, 피나스테리드, 아미노글루테타미드, 케토코나졸 및 코르티코스테로이드가 포함된다.

D. 다른 억제제: 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물과 함께 항암제로 사용하기 위한 다른 억제제로는 단백질 파르네실 트랜스페라제 억제제, 예컨대 티피파르닙 또는 R-115777 (US 2003134846 및 WO 97/21701), BMS-214662, AZD-3409 및 FTI-277; 토포아이소머라제 억제제, 예컨대 메르바론 및 디플로모테칸 (BN-80915); 유사분열 키네신 방추 단백질 (KSP) 억제제, 예컨대 SB-743921 및 MKI-833; 프로테아좀 조절제, 예컨대 보르테조밉 또는 벨카데(Velcade, 등록상표) (US 5,780,454), XL-784; 및 시클로옥시게나제-2 (COX-2) 억제제, 예컨대 비-스테로이드성 항염증성 약물 I (NSAID)이 포함된다.

E. 암 화학요법 약물: 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물과 함께 항암제로 사용하기 위한 특정 암 화학요법제로는 아나스트로졸 (아리미덱스, 등록상표), 비칼루타미드 (카소덱스(Casodex, 등록상표)), 블레오마이신 술페이트 (블레녹산(Blenoxane, 등록상표)), 부술판 (미엘란(Myleran, 등록상표)), 부술판 주사제 (부술펙스(Busulfex, 등록상표)), 카페시타빈 (크셀로다(Xeloda, 등록상표)), N4-펜톡시카르보닐-5-데옥시-5-플루오로시티딘, 카르보플라틴 (파라플라틴(Paraplatin, 등록상표)), 카르무스틴 (BiCNU, 등록상표), 클로람부실 (류케란(Leukeran, 등록상표)), 시스플라틴 (플라틴올(Platinol, 등록상표)), 클라드리빈 (류스타틴(Leustatin, 등록상표)), 시클로포스파미드(시톡산(Cytoxan, 등록상표) 또는 네오사르(Neosar, 등록상표)), 시타라빈, 시토신 아라비노시드 (시토스타-유(Cytosar-U, 등록상표)), 시타라빈 리포좀 주사제 (데포시트(DepoCyt, 등록상표)), 다카르바진 (DTIC-Dome, 등록상표), 닥티노마이신 (안티노마이신 D, 코스메간(Cosmegan)), 다우노루비신 히드로클로라이드 (세루비딘(Cerubidine, 등록상표)), 다우노루비신 시트레이트 리포좀 주사제 (다우노좀(DaunoXome, 등록상표)), 덱사메타손, 도세탁셀 (탁소테레(Taxotere, 등록상표), US2004073044), 독소루비신 히드로클로라이드 (아드리아마이신(Adriamycin, 등록상표), 루벡스(Rubex, 등록상표)), 에토포시드 (베페시드(Vepesid, 등록상표)), 플루다라빈 포스페이트 (플루다라(Fludara, 등록상표)), 5-플루오로우라실 (아드루실(Adrucil, 등록상표), 에푸덱스(Efudex, 등록상표)), 플루타미드 (율렉신(Eulexin, 등록상표)), 테자시티빈, 겜시타빈 (디플루오로데옥시시티딘), 히드록시우레아 (히드레아(Hydrea, 등록상표)),이다루비신 (이다마이신(Idamycin, 등록상표)), 이포스파미드 (이펙스(IFEX, 등록상표)), 이리노테칸 (캄프토사르(Camptosar, 등록상표)), L-아스파라기나제 (엘스파(ELSPAR, 등록상표)), 류코보린 칼슘, 멜팔란 (알케란(Alkeran, 등록상표)), 6-머캅토퓨린 (퓨린톨(Purinethol, 등록상표)), 메토트렉세이트 (폴렉스(Folex, 등록상표)), 미톡산트론 (노반트론(Novantrone, 등록상표)), 밀로타르그, 파클리탁셀 (탁솔(Taxol, 등록상표)), 페닉스 (이트륨(Yttrium)90/MX-DTPA), 펜토스타틴, 폴리페프로산 20과 카르무스틴 임플란트 (글리아델(Gliadel, 등록상표)), 타목시펜 시트레이트 (놀바덱스(Nolvadex, 등록상표)), 테니포시드 (부몬(Vumon, 등록상표)), 6-티오구아닌, 티오테파, 티라파자민 (티라존(Tirazone, 등록상표)), 주사용 토포테칸 히드로클로라이드 (히캄프틴(Hycamptin, 등록상표)), 빈블라스틴 (벨반(Velban, 등록상표)), 빈크리스틴 (온코빈(Oncovin, 등록상표)) 및 비노렐빈 (나벨빈(Navelbine, 등록상표))이 포함된다.

F. 알킬화제 : 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물과 함께 사용하기 위한 알킬화제로는 VNP-40101M 또는 클로레티진, 옥살리플라틴 (US 4,169,846, WO 03/24978 및 WO 03/04505), 글루포스파미드, 마포스파미드, 에토포포스 (US 5,041,424), 프레드니무스틴; 트레오술판; 부술판; 이로플루벤 (아실플루벤); 펜클로메딘; 피라졸로아크리딘 (PD-115934); O6-벤질구아닌; 데시타빈 (5-아자-2-데옥시시티딘); 브로스탈리신; 미토마이신 C (미토엑스트라(MitoExtra)); TLK-286 (텔시타(Telcyta, 등록상표)); 테모졸로미드; 트라베크테딘 (US 5,478,932); AP-5280 (시스플라틴의 플라티네이트 제형); 포르피로마이신 및 클레아라지드 (메클로레타민)이 포함된다.

G. 킬레이트화제 : 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물과 함께 사용하기 위한 킬레이트화제로는 테트라티오몰리브데이트 (WO 01/60814); RP-697; 키메릭 T84.66 (cT84.66); 가도포스베세트 (바소비스트(Vasovist, 등록상표)); 데페록사민; 및 블레오마이신 (임의로 전기천공 (EPT)과 조합)이 포함된다.

H. 생물학적 반응 조절제: 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물과 함께 사용하기 위한 생물학적 반응 조절제, 예컨대 면역 조절제로는 스타우로스피린 및 그의 마크로시클릭 유사체, 예컨대 UCN-01, CEP-701 및 미도스타우린 (WO 02/30941, WO 97/07081, WO 89/07105, US 5,621,100, WO 93/07153, WO 01/04125, WO 02/30941, WO 93/08809, WO 94/06799, WO 00/27422, WO 96/13506 및 WO 88/07045 참조); 스쿠알라민 (WO 01/79255); DA-9601 (WO 98/04541 및 US 6,025,387); 알렘투주맙; 인터페론 (예를 들어 IFN-a, IFN-b 등); 인터류킨, 구체적으로 IL-2 또는 알데스류킨 및 IL-1, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, 및 천연 인간 서열의 70％보다 더 많은 아미노산 서열을 갖는 그의 활성 생물학적 변이체; 알트레타민 (헥살렌(Hexalen, 등록상표)); SU 101 또는 레플루노미드 (WO 04/06834 및 US 6,331,555); 이미다조퀴놀린, 예컨대 레시퀴모드 및 이미퀴모드 (US 4,689,338, 5,389,640, 5,268,376, 4,929,624, 5,266,575, 5,352,784, 5,494,916, 5,482,936, 5,346,905, 5,395,937, 5,238,944 및 5,525,612); 및 SMIP, 예컨대 벤즈아졸, 안트라퀴논, 티오세미카르바존 및 트립탄트린 (WO 04/87153, WO 04/64759 및 WO 04/60308)이 포함된다.

I. 암 백신: 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물과 함께 사용하기 위한 항암 백신으로는 아비신(Avicine, 등록상표) (문헌 [Tetrahedron Lett. 26:2269-70 (1974)]); 오레고보맙 (오바렉스(OvaRex, 등록상표)); 테라토프(Theratope, 등록상표) (STn-KLH); 흑색종 백신; GI-4000 시리즈 (GI-4014, GI-4015 및 GI-4016; 이들은 Ras 단백질에서의 5가지 돌연변이에 관한 것임); 글리오박스-1; 멜라박스; 아드벡신(Advexin, 등록상표) 또는 INGN-201 (WO 95/12660); Sig/E7/LAMP-1, 코딩 HPV-16 E7; MAGE-3 백신 또는 M3TK (WO 94/05304); HER-2VAX; 종양에 대해 특이적인 T-세포를 자극하는 액티브(ACTIVE); GM-CSF 암 백신; 및 리스테리아 모노사이토게네스(Listeria monocytogenes)-기재 백신이 포함된다.

J. 안티센스 요법제: 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물과 함께 사용하기 위한 항암제로는 또한 안티센스 조성물, 예컨대 AEG-35156 (GEM-640); AP-12009 및 AP-11014 (TGF-베타2-특이적 안티센스 올리고뉴클레오티드); AVI-4126; AVI-4557; AVI-4472; 오블리메르센 (게나센스(Genasense, 등록상표)); JFS2; 아프리노카르센 (WO 97/29780); GTI-2040 (R2 리보뉴클레오티드 환원효소 mRNA 안티센스 올리고) (WO 98/05769); GTI-2501 (WO 98/05769); 리포좀-캡슐화 c-Raf 안티센스 올리고데옥시뉴클레오티드 (LErafAON) (WO 98/43095); 및 시르나(Sirna)-027 (RNAi-기재 치료 표적 VEGFR-1 mRNA)가 포함된다.

화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물은 또한 기관지확장제 또는 항히스타민 약물 물질과 함께 제약 조성물로 조합될 수 있다. 이러한 기관지확장제 약물로는 항콜린작용제 또는 항무스카린제, 특히 글리코피롤레이트, 이프라트로퓸 브로마이드, 옥시트로퓸 브로마이드 및 티오트로퓸 브로마이드, OrM3, 아실리디늄, CHF5407, GSK233705 및 β-2-아드레날린수용체 효능제, 예컨대 살부타몰, 테르부탈린, 살메테롤, 카르모테롤, 밀베테롤, 및 특히 인다카테롤 및 포르모테롤이 포함된다. 공동-치유적 항히스타민 약물 물질로는 세티리진 히드로클로라이드, 클레마스틴 푸마레이트, 프로메타진, 로라타딘, 데슬로라타딘 디펜히드라민 및 펙소페나딘 히드로클로라이드가 포함된다.

본 발명은 추가의 측면에서 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물, 및 혈전용해 질환, 심장 질환, 졸중 등의 치료에 유용한 하나 이상의 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 화합물로는 아스피린, 스트렙토키나제, 조직 플라스미노겐 활성화제, 우로키나제, 항응집제, 항혈소판 약물 (예를 들어, 플라빅스(PLAVIX); 클로피도그렐 비술페이트), 스타틴 (예를 들어, 리피토르(LIPITOR) 또는 아토르바스타틴 칼슘), 조코르(ZOCOR) (심바스타틴(Simvastatin)), 그레스토르(CRESTOR) (로수바스타틴(Rosuvastatin)) 등), 베타 차단제 (예를 들어, 아테놀롤), 노바스크(NORVASC) (암로디핀 베실레이트) 및 ACE 억제제 (예를 들어, 리시노프릴)가 포함된다.

본 발명은 추가의 측면에서 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물, 및 항고혈압의 치료에 유용한 하나 이상의 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 화합물로는 ACE 억제제, 지질 강하제, 예컨대 스타틴, 리피토르 (아토르바스타틴 칼슘), 칼슘 채널 차단제, 예컨대 노바스크 (암로디핀 베실레이트)가 포함된다.

본 발명은 추가의 측면에서 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물, 및 피브레이트, 베타-차단제, NEPI 억제제, 안지오텐신-2 수용체 길항제 및 혈소판 응집 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다.

본 발명은 추가의 측면에서 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물, 및 염증성 질환, 예컨대 류마티스양 관절염의 치료에 적합한 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 화합물은 TNF-α 억제제, 예컨대 항-TNF-α 모노클로날 항체 (예컨대, 레미케이드(REMICADE), CDP-870) 및 D2E7 (휴미라(HUMIRA)) 및 TNF 수용체 이뮤노글로불린 융합 분자 (예컨대, 엔브렐(ENBREL)), IL-1 억제제, 수용체 길항제 또는 가용성 IL-1Rα (예를 들어, 키네레트(KINERET) 또는 ICE 억제제), 비스테로이드성 항염증제 (NSAID), 피록시캄, 디클로페낙, 나프록센, 플루비프로펜, 페노프로펜, 케토프로펜, 이부프로펜, 페나메이트, 메페남산, 인도메타신, 술린닥, 아파존, 피라졸론, 페닐부타존, 아스피린, COX-2 억제제 (예컨대, 셀레브렉스(CELEBREX) (셀레콕시브), 프렉시지(PREXIGE) (루미라콕시브)), 메탈로프로테아제 억제제 (바람직하게는 MMP-13 선택적 억제제), p2x7 억제제, α2α억제제, 뉴로틴(NEUROTIN), 프레가발린, 저용량 메토트렉세이트, 레플루노미드, 히드록식스클로로퀸, d-페니실라민, 아우라노핀 또는 비경구 또는 경구용 금으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명은 추가의 측면에서 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물, 및 골관절염의 치료에 적합한 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 화합물은 표준 비-스테로이드성 항염증제 (이후 NSAID), 예컨대 피록시캄, 디클로페낙, 프로피온산, 예컨대 나프록센, 플루비프로펜, 페노프로펜, 케토프로펜 및 이부프로펜, 페나메이트, 예컨대 메페남산, 인도메타신, 술린닥, 아파존, 피라졸론, 예컨대 페닐부타존, 살리실레이트, 예컨대 아스피린, COX-2 억제제, 예컨대 셀레콕시브, 발데콕시브, 루미콕시브 및 에토리콕시브, 진통제 및 관절내 요법제, 예컨대 코르티코스테로이드 및 히알루론산, 예컨대 히알간 및 신비스크로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명은 추가의 측면에서 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물, 및 항바이러스제 및/또는 항패혈증 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 항바이러스제는 비라셉트, AZT, 아시클로비르 및 팜시클로비르로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 이러한 항패혈증 화합물은 발란트(Valant)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명은 추가의 측면에서 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물, 및 CNS 작용제, 예컨대 항우울제 (세르트랄린), 항-파킨슨 약물 (예컨대, 데프레닐, L-도파, 레큅, 미라펙스; MAOB 억제제 (예컨대 셀레긴 및 라사길린); comP 억제제 (예컨대 타스마르); A-2 억제제; 도파민 재흡수 억제제; NMDA 길항제, 니코틴 효능제, 도파민 효능제; 및 뉴런 산화질소 신타제의 억제제)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 작용제를 포함하는 조합물을 제공한다.

본 발명은 추가의 측면에서 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물, 및 하나 이상의 항알츠하이머 약물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 항-알츠하이머 약물은 도네페질, 타크린, α2δ억제제, 뉴로틴, 프레가발린, COX-2 억제제, 프로펜토필린 또는 메트리포네이트로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명은 추가의 측면에서 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물, 및 골다공증 작용제 및/또는 면역억제제를 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 골다공증 작용제는 에비스타(EVISTA) (랄록시펜 히드로클로라이드), 드롤록시펜, 라소폭시펜 또는 포소막스로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 상기 면역억제제는 FK-506 및 라파마이신으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

바람직한 실시양태의 또 다른 측면에서, 하나 이상의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물을 본원에 개시된 조합 파트너와 함께 포함하는 키트가 제공된다. 대표적인 키트에는 PI3K 억제제 화합물 (예를 들어, 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물), 및 포장 삽입물 또는 다른 라벨, 예컨대 PI3K 억제량의 화합물(들)을 투여하여 세포 증식성 질환을 치료하는 것에 대한 지시서가 포함된다.

일반적으로, 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물은 유사한 용도로 작용하는 작용제에 대해 허용되는 임의의 투여 방식에 의해 치료 유효량으로 투여될 것이다. 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물, 즉 활성 성분의 실제 양은 수많은 요인, 예컨대 치료하고자 하는 질환의 중증도, 대상체의 연령 및 상대적인 건강, 사용된 화합물의 효능, 투여 경로 및 형태, 및 다른 요인에 따라 달라질 것이다. 약물은 1일 1회 넘게, 바람직하게는 1일 1 또는 2회 투여될 수 있다. 이들 모든 요인은 임상의의 기술 내에 있다. 화학식 I의 화합물의 치료 유효량은 수용자의 체중 1 kg 당 1일 약 0.05 내지 약 50 mg 범위; 바람직하게는 약 0.1 내지 25 mg/kg/일, 보다 바람직하게는 약 0.5 내지 10 mg/kg/일일 수 있다. 따라서, 70 kg의 사람에 대한 투여에 있어서, 가장 바람직한 투여량 범위는 약 35 내지 70 mg/일일 수 있다.

일반적으로, 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물은 하기 경로 중 어느 하나에 의해 제약 조성물로 투여될 것이다: 경구, 전신 (예를 들어, 경피, 비내 또는 좌제로서), 또는 비경구 (예를 들어, 근육내, 정맥내 또는 피하) 투여. 바람직한 투여 방식은 편리한 1일 투약법 (이는 발병 정도에 따라 조정될 수 있음)을 이용하여 경구 투여하는 것이다. 조성물은 정제, 환제, 캡슐, 반고체, 분말, 지속 방출 제제, 용액, 현탄액, 엘릭시르, 에어로졸, 또는 임의의 다른 적절한 조성물의 형태를 가질 수 있다. 화학식 I의 화합물의 또 다른 바람직한 투여 방식은 흡입이다. 이는 치료제를 기도로 직접 전달하는데 효과적인 방법이다.

제제의 선택은 다양한 요인, 예컨대 약물 투여 방식 및 약물 물질의 생체이용률에 따라 달라진다. 흡입에 의한 전달을 위하여, 화합물을 액체 용액, 현탁액, 에어로졸 추진제 또는 건조 분말로 제제화하여, 적합한 투여 분배기에 로딩할 수 있다. 여러 유형의 제약 흡입 장치-네불라이져 흡입기, 계량 투여 흡입기 (MDI) 및 건조 분말 흡입기 (DPI)가 있다. 네불라이져 장치는 치료제 (액체 형태로 제제화됨)를, 환자의 기도로 전달되는 미스트로서 분무하는 고속 공기 스트림을 생성한다. MDI는 전형적으로 압축 기체를 이용하여 포장한 제제이다. 작동시, 장치는 압축 기체에 의해 측정된 양의 치료제를 방출하여, 설정된 양의 작용제를 투여하는 신뢰할만한 방법을 제공한다. DPI는 환자가 장치를 통해 호흡하는 동안 흡기 스트림으로 분산될 수 있는 자유 유동 분말 형태로 치료제를 분배한다. 자유 유동 분말을 얻기 위해서는, 치료제를 락토스와 같은 부형제와 함께 제제화한다. 측정된 양의 치료제는 캡슐 형태로 저장되어 매 사용시에 분배된다.

본 발명은 또한 화학식 I의 화합물의 입자 크기가 10 내지 1000 nm, 바람직하게는 10 내지 400 nm인 제제에 관한 것이다. 이러한 제약 제제는 생체이용률이 표면적 증가, 즉 입자 크기 감소에 의해 증가될 수 있다는 원리에 기초하여 특히 불량한 셍체이용률을 나타내는 약물에 대해 개발되었다. 예를 들어, U.S. 4,107,288에는 거대 분자의 가교결합된 매트릭스에 활성 물질이 지지되어 있는, 입자 크기가 10 내지 1,000 nm인 입자를 갖는 제약 제제가 기재되어 있다. U.S. 5,145,684에는 표면 변형제의 존재하에 약물 물질을 나노입자 (평균 입자 크기 400 nm)로 분쇄한 다음 액체 매질에 분산시켜 생체이용률의 현저한 증가를 나타내는 제약 제제를 제공하는, 제약 제제의 제조가 기재되어 있다. 두 문헌이 참조로 포함된다.

추가의 측면에서, 본 발명은 (치료 유효량)의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 허용되는 부형제는 무독성이며, 투여를 보조하고, 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물의 치료적 이점에 불리한 영향을 미치지 않는다. 이러한 부형제는 임의의 고체, 액체, 반고체이거나, 또는, 에어로졸 조성물의 경우, 당업자가 일반적으로 입수할 수 있는 기체형 부형제일 수 있다.

고체 제약 부형제로는 전분, 셀룰로스, 활석, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 벼, 밀가루, 백악, 실리카겔, 스테아르산마그네슘, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 염화나트륨, 건조 탈지유 등이 포함된다.

액체 및 반고체 부형제는 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 물, 에탄올 및 다양한 오일, 예컨대 석유, 동물성유, 식물성유 또는 합성 기원 오일, 예를 들어 땅콩유, 대두유, 광유, 참깨유 등으로부터 선택될 수 있다. 특히 주사가능한 용액을 위한 바람직한 액체 담체로는 물, 염수, 수성 덱스트로스 및 글리콜이 포함된다.

압축 기체를 사용하여 화학식 I의 화합물을 에어로졸 형태로 분산시킬 수 있다. 이러한 목적에 적합한 불활성 기체는 질소, 이산화탄소 등이다. 다른 적합한 제약 부형제 및 그의 제제는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, edited by E. W. Martin (Mack Publishing Company, 18th ed., 1990)]에 기재되어 있다.

제제 내 화합물의 양은 당업자에게 이용되는 전체 범위 내에서 가변적일 수 있다. 전형적으로, 제제는 중량％ (wt％)로 (전체 제제 기준) 약 0.01 내지 99.99 중량％의 화학식 I의 화합물을 함유하고, 나머지는 하나 이상의 적합한 제약 부형제가 차지할 것이다. 바람직하게는, 화합물은 약 1 내지 80 중량％의 수준으로 존재한다.

본 발명은 또한 하나 이상의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 (즉 함유하거나 또는 그로 이루어지는) 제약 조성물에 관한 것이다.

유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물을 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제 (예컨대 담체 및/또는 희석제)와 함께 포함하는 제약 조성물은 통상의 방식으로 성분을 혼합하여 제조할 수 있다.

유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물, 및 추가로 조합 파트너 (하나의 투여 단위 형태로 또는 부분품의 키트로서)를 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제와 함께 포함하는 조합 제약 조성물은 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제와 상기 활성 성분을 통상의 방식으로 혼합하여 제조할 수 있다.

결론적으로, 본 발명은 추가의 측면에서 하기를 제공한다.

? 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물을 제약상 허용되는 희석제 및/또는 담체와 함께 포함하는, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 방법에 사용하기 위한, 조합 제약 조성물.

? 활성 성분으로서의 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물; 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 물질(들) 및/또는 희석제, 및 임의로 하나 이상의 추가의 약물 물질을 포함하는 조합 제약 조성물. 이러한 조합 제약 조성물은 하나의 투여 단위 형태의 형태로 또는 부분품의 키트로서 존재할 수 있다.

? 동시 또는 순차 투여를 위한, 치료 유효량의 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물 및 제2 약물 물질을 포함하는 조합 제약 조성물.

? 무독성의 치료 유효량의 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 적어도, 예를 들어 상기 나타낸 바와 같은 제2의 약물 물질의 공동-투여, 예를 들어 함께 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함하는 상기 정의된 바와 같은 방법.

? a) 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의, 본원에 개시된 화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물인 제1 작용제, 및 b) 하나 이상의, 예를 들어 상기 나타낸 바와 같은 공동-작용제를 포함하는 제약 조합물, 예를 들어 키트; 여기서, 상기 키트는 그의 투여를 위한 설명서를 포함할 수 있다.

화학식 (I), (IA), (IB), (IB') 및/또는 (IC)의 화합물의 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것으로서, 그의 범주를 제한하지는 않는다. 상기 화합물의 제조 방법이 하기 기재된다.

온도는 섭씨 온도로 측정하였다. 달리 언급하지 않는 한, 반응은 실온에서 아르곤 분위기 하에 일어났고, MS는 ESI로 얻었다. 하기의 HPLC 및 LC-MS 방법을 중간체 및 실시예의 제조 및 분석에 사용하였다.

HPLC (방법 A):

시스템: 애질런트 1100 시리즈

컬럼: HP 하이퍼실(Hypersil) BDS C18, 4 x 125 mm, 5 ㎛

온도: 25℃

용리액 A: H₂O, 0.1％ v/v TFA를 함유함

용리액 B: 아세토니트릴, 0.1％ v/v TFA를 함유함

구배: 10％ → 100％ B (5분 이내), 100％ B (2.5분), 이어서 → 10％ B (1분 이내)

유속: 1.5 ㎖/분

검출: UV 215 nm

HPLC (방법 B):

시스템: 애질런트 1100 시리즈

컬럼: 마슈레-나겔(Macherey-Nagel) 뉴클레오실 100-3 C18HD, 4 x 125 mm, 3 ㎛

온도: 30℃

용리액 A: H₂O, 0.1％ v/v TFA를 함유함

용리액 B: 아세토니트릴, 0.1％ v/v TFA를 함유함

구배: 2％ → 100％ B (7분 이내), 100％ B (2분), 이어서 → 2％ B (1분 이내)

유속: 1.0 ㎖/분

검출: UV 215 nm

LC - MS (방법 A):

시스템: 워터스 마이크로매스 ZQ 2000 ESI+/-를 갖는 워터스 액쿼티(Acquity) UPLC

컬럼: 액쿼티 HSS T3 C18, 2.1 x 50 mm, 1.8 ㎛

온도: 50℃

용리액 A: H₂O, 0.05％ v/v HCOOH 및 3.75 mM 암모늄 아세테이트를 함유함

용리액 B: 아세토니트릴, 0.04％ HCOOH를 함유함

구배: 2％ → 98％ B (4.3분 이내), 98％ B (0.7분), 이어서 → 2％ B (0.1분 이내) 및 2％ B (0.9분)

유속: 1.0 ㎖/분

LC - MS (방법 B):

시스템: 애질런트 1100 시리즈; MS: G1946D

컬럼: 시메트리(Symmetry) C8, 2.1 x 50 mm, 3.5 ㎛

용리액 A: H₂O, 0.1％ v/v HCOOH를 함유함

용리액 B: 아세토니트릴, 0.1％ v/v HCOOH를 함유함

구배: 0 내지 3.3분: 5％ → 95％의 B

유속: 1.0 ㎖/분

LC - MS (방법 C):

시스템: 워터스 액쿼티 UPLC

컬럼: 액쿼티 HSS T3 C18, 2.1 x 50 mm, 1.8 ㎛

용리액 A: H₂O, 0.05％ v/v HCOOH 및 0.05％ 암모늄 아세테이트를 함유함

용리액 B: 아세토니트릴, 0.04％ HCOOH를 함유함

구배: 2％ → 98％ B (1.7분 이내), 98％ B (0.45분), 이어서 → 2％ B (0.04분 이내)

유속: 1.2 ㎖/분

LC - MS (방법 D):

시스템: 워터스 액쿼티 UPLC; MS: 워터스 AQ 검출기

컬럼: 액쿼티 HSS, 1.8 ㎛ 2.1 x 50 mm, 3/pk

용리액 A: H₂O, 0.1％ v/v HCOOH를 함유함

용리액 B: 아세토니트릴, 0.1％ v/v HCOOH를 함유함

구배: 0 내지 1.5분: 10％ → 95％의 B, 이어서 1분: 95％ B

유속: 1.2 ㎖/분

ESI - MS:

기기: 마이크로매스 플랫폼 II

용리액: 0.2％ v/v의 25％ 수산화암모늄 용액을 함유하는 물 중의 15％ v/v 메탄올

유속: 0.05 ㎖/분

다음의 실시예에서, 하기에 주어진 약어를 사용하였다.

atm. 대기

CDI 1,1'-카르보닐디이미다졸

CH₂Cl₂ 디클로로메탄

DCE 1,2-디클로로에탄

DMF N,N-디메틸포름아미드

DMSO 디메틸 술폭시드

Et₂O 디에틸 에테르

EtOAc 에틸 아세테이트

EtOH 에탄올

Et₃N 트리에틸아민

eq 당량

h 시간

Hex 헥산

HPLC 고성능 액체 크로마토그래피

HV 고진공

LC-MS 질량 분석법과 커플링된 액체 크로마토그래피

LiHMDS 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드

MeOH 메탄올

㎖ 밀리리터

min 분

MS-ESI 전기분무 이온화 질량 분석법

MTBE 메틸 tert-부틸 에테르

MW 마이크로파

R_f TLC에서의 선단의 비율

rt 실온

TFA 트리플루오로아세트산

THF 테트라히드로푸란

TLC 박층 크로마토그래피

t_R 체류 시간

UV 자외선

실시예 1: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)

Et₃N (0.53 mmol)를 실온에서 DMF (1 ㎖) 중 이미다졸-1-카르복실산 {4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드 (단계 1.1) (0.177 mmol) 및 (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 1.8) (0.194 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 20시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 레디셉(RediSep, 등록상표) 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제한 후, EtOAc로 연화처리하여 백색 고체로서 표제 화합물을 수득하였다.

단계 1.1: 이미다졸-1-카르복실산 {4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드

CH₂Cl₂ (330 ㎖) 중 4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일아민 (단계 1.2) (28.5 mmol) 및 CDI (42.8 mmol)의 혼합물을 11시간 동안 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하여 연녹색 고체로서 표제 화합물을 수득하였다.

단계 1.2: 4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일아민

N-{4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아세트아미드 (단계 1.3) (34.8 mmol), 6 N HCl의 수용액 (53 ㎖) 및 EtOH (265 ㎖)의 혼합물을 5시간 동안 85℃에서 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 이어서 농축시켰다. 잔류물을 NaHCO₃의 포화 용액으로 천천히 희석하고, 이어서 EtOAc로 추출하였다 (3X). 합한 유기상을 NaHCO₃의 포화 용액 및 염수로 연속적으로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 CH₂Cl₂로 연화처리하고, 이어서 여과하여 황색-녹색 고체로서 표제 화합물을 수득하였다. HPLC: t_R = 3.55 분 (방법 B); LC-MS: t_R = 1.03 분, [M+H]⁺ 246; TLC: R_f = 0.26 (1:2 Hex/EtOAc).

단계 1.3: N-{4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아세트아미드

DMF (230 ㎖) 중 2-아세트아미도-4-메틸티아졸 [7336-51-8] (60.4 mmol), 탄산세슘 (110 mmol), 트리-tert-부틸포스피늄 테트라플루오로보레이트 (10.99 mmol), 팔라듐 (II) 아세테이트 (5.49 mmol) 및 4-브로모-2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘 (단계 1.4) (54.9 mmol)의 혼합물을 3.5시간 동안 100℃에서 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하고, 이어서 농축시켰다. 잔류물을 NaHCO₃의 포화 용액으로 희석하고, EtOAc로 추출하였다 (3X). 합한 유기상을 NaHCO₃의 포화 용액 및 염수로 연속적으로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 레디셉(등록상표) 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 미황색 고체로서 표제 화합물을 수득하였다. HPLC: t_R = 4.37 분 (방법 B); LC-MS: t_R = 1.47 분, [M+H]⁺ 288; TLC: R_f = 0.26 (1:2 Hex/EtOAc).

단계 1.4: 4-브로모-2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘

2-(1-메틸-시클로프로필)-1H-피리딘-4-온 (단계 1.5) (13.4 mmol) 및 POBr₃ (14.74 mmol)의 혼합물을 15분 동안 85℃에서 교반하고, 이어서 15분 동안 120℃에서 교반하였다. 약간 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 NaHCO₃의 포화 용액에 붓고, CH₂Cl₂로 추출하였다 (2X). 합한 유기상을 NaHCO₃의 포화 용액으로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 갈색 오일로서 표제 화합물을 수득하였다. HPLC: t_R = 4.11 분 (방법 B); LC-MS: t_R = 2.39 분, [M+H]⁺ 212/214; TLC: R_f = 0.31 (CH₂Cl₂).

단계 1.5: 2-(1-메틸-시클로프로필)-1H-피리딘-4-온

2-(1-메틸-시클로프로필)-피란-4-온 (단계 1.6) (66.6 mmol) 및 수산화암모늄의 28 내지 30％ 수용액 (182 ㎖)의 혼합물을 1시간 동안 65℃에서 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 기울여 따라내어 암갈색 고체를 제거하고, 이어서 농축시켰다. 잔류물을 MeOH로 희석하고, 다시 농축 (3X)시켜 갈색-오렌지색 고체로서 표제 화합물을 수득하였다. HPLC: t_R = 3.56 분 (방법 B); LC-MS: t_R = 0.87 분, [M+H]⁺ 151; TLC: R_f = 0.18 (9:1 CH₂Cl₂/MeOH).

단계 1.6: 2-(1-메틸-시클로프로필)-피란-4-온

톨루엔 (175 ㎖) 중 (1Z,4E)-1-히드록시-5-메톡시-1-(1-메틸-시클로프로필)-펜타-1,4-디엔-3-온 (단계 1.7) (111 mmol) 및 TFA (221 mmol)의 혼합물을 15.5시간 동안 실온에서 교반하고, 이어서 농축시켰다. 잔류물을 레디셉(등록상표) 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 백색 고체로서 표제 화합물을 수득하였다. LC-MS: t_R = 1.48 분, [M+H]⁺ 151; TLC: R_f = 0.26 (EtOAc).

단계 1.7: (1Z,4E)-1-히드록시-5-메톡시-1-(1-메틸-시클로프로필)-펜타-1,4-디엔-3-온

LiHMDS (THF 중의 1 M, 845 mmol)를 -78℃에서 THF (2 L) 중 트랜스-4-메톡시-3-부텐-2-온 [51731-17-0] (845 mmol)의 용액에 적가하였다. 15분 동안 교반한 후, THF (100 ㎖) 중 1-메틸-시클로프로판카르보닐 클로라이드 [16480-05-0] (407 mmol)의 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2.5시간에 걸쳐 실온이 되도록 하고, 이어서 NH₄Cl의 포화 용액을 첨가함으로써 켄칭시켰다. 혼합물을 Et₂O로 추출하였다 (2X). 합한 유기상을 NaHCO₃의 포화 용액 및 염수로 연속적으로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 황색 고체로서 표제 화합물을 수득하였다. ESI-MS: [M+H]⁺ 183; TLC: R_f = 0.29 (9:1 Hex/EtOAc).

단계 1.8: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드

MeOH (20 ㎖) 중 (2S,3R)-3-메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 1.9) (4.76 mmol) 및 10％ 차콜 상 Pd (0.947 mmol)의 혼합물을 46시간 동안 실온에서 수소화시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 플루오로포어 막 필터(Fluoropore Membrane Filter) (0.2 ㎛ FG)를 통해 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 CH₂Cl₂에 용해시키고, 증발에 의해 건조시켜 백색 고체로서 표제 화합물을 수득하였다. ESI-MS: [M+H]⁺ 129; TLC: R_f = 0.10 (1:3 Hex/EtOAc).

단계 1.9: (2S,3R)-3-메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드

톨루엔 중의 트리메틸알루미늄 (2 M, 6.46 mmol)을 0℃에서 메탄 기체를 형성하면서 톨루엔 (3.2 ㎖) 중 NH₄Cl (6.47 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온이 되도록 하고, 추가로 15분 동안 교반하고, 이어서 (2S,3R)-3-메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (6.47 mmol)로 천천히 처리하였다 (문헌 [Tet. Lett. 1997, 38, 85-88]에 기재된 바와 같이 제조됨). 56시간 동안 교반한 후, 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 1 M HCl로 켄칭시키고, 이어서 CH₂Cl₂로 세척하였다 (3X). 수성상을 NaHCO₃의 포화 용액으로 염기성화시키고, CH₂Cl₂로 추출하였다 (3X). 합한 유기층을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 레디셉(등록상표) 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여, 무색 오일로서 표제 화합물을 수득하였다. ESI-MS: [M+H]⁺ 233; HPLC: t_R 2.35 분 (방법 A).

실시예 2: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)

표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, 단계 1.7에서는, 1-메틸-시클로프로판카르보닐 클로라이드 대신에 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피오닐 클로라이드 (단계 2.1)를 사용하였다.

표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.

단계 2.1: 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피오닐 클로라이드

DMF (3 방울)를 실온에서 CH₂Cl₂ (160 ㎖) 중 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피온산 [889940-13-0] (179 mmol)의 용액에 첨가하였다. CH₂Cl₂ (20 ㎖) 중 옥살릴 클로라이드 (197 mmol)의 용액을 천천히 첨가하였다. 14시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 조십스럽게 증발시켜 (500 mbar, 33℃) 황색 용액으로서 표제 화합물 (휘발성!)을 수득하였다.

실시예 3: (rac)-3,3-디메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)

표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (rac)-3,3-디메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (문헌 [J. Org. Chem., 2008, 73, 3946-3949]에 기재된 바와 같이 제조됨)를 사용하였다.

표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다.

실시예 4: (rac)-3,3-디메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)

표제 화합물을 실시예 2에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (rac)-3,3-디메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (문헌 [J. Org. Chem., 2008, 73, 3946-3949]에 기재된 바와 같이 제조됨)를 사용하였다.

표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다.

실시예 5: (2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)

표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 5.1)를 사용하였다.

표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.

단계 5.1: (2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드

표제 화합물을 단계 1.8에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, (2S,3R)-3-메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 5.2)를 사용하였다. 또한, 건조 촉매 대신에 50％ H₂O로 습윤화된, 10％ 차콜 상 Pd (알드리치(Aldrich) 330108)를 사용하였다.

표제 화합물을 회백색 고체로서 수득하였다. ESI-MS: [M+H]⁺ 186; TLC: R_f = 0.08 (200:20:1 CH₂Cl₂/MeOH/진한 NH₄OH).

단계 5.2: (2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드

티오아세트산 (2.312 mmol)을 실온에서 질소 기체를 형성하면서 (2S,3S)-3-아지도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 5.3) (0.578 mmol)에 첨가하였다. 16시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 Et₂O로 희석하고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 연황색 오일 (티올(thiol) 냄새)로서 표제 화합물을 수득하였다. HPLC: t_R = 3.71 분 (방법 B); LC-MS: t_R = 0.64 분, [M+H]⁺ 290; TLC: R_f = 0.38 (200:20:1 CH₂Cl₂/MeOH/진한 NH₄OH).

단계 5.3: (2S,3S)-3-아지도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드

표제 화합물을 단계 1.9에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, (2S,3R)-3-메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 대신에 (2S,3S)-3-아지도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (단계 5.4)를 사용하였다. 또한, 1:1의 NaHCO₃의 포화 용액/로첼스 염(Rochelle's salt)의 포화 용액을 염기성화시키는 데에 사용하고, 염기성화된 수성층을 THF로 남김없이 추출하였다.

표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다. HPLC: t_R = 2.50 분 (방법 A); ESI-MS: [M+H]⁺ 274; TLC: R_f = 0.26 (3:1 Hex/EtOAc).

단계 5.4: (2S,3S)-3-아지도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르

나트륨 아지드 (5.34 mmol)를 실온에서 DMF (30 ㎖) 중 (2S,3R)-3-요오도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (단계 5.5) (3.56 mmol)의 용액에 첨가하였다. 18시간 후, 반응 혼합물을 물에 붓고, MTBE로 추출하였다 (2X). 합한 유기상을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 레디셉(등록상표) 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 갈색 오일로서 표제 화합물을 수득하였다. HPLC: t_R = 3.26 분 (방법 A); ESI-MS: [M+H]⁺ 289.

단계 5.5: (2S,3R)-3-요오도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르

THF (10 ㎖) 중 [부트-3-엔일-((S)-1-페닐-에틸)-아미노]-아세트산 메틸 에스테르 [432555-77-6] (20.22 mmol)의 용액을 -78℃에서 1:2의 헥산/THF (30 ㎖) 중 리튬 디이소프로필아미드 (24.26 mmol)의 용액에 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 가온하고, 1시간 동안 교반하고, 이어서 -78℃로 다시 냉각시켰다. Et₂O (40 ㎖) 중 아연 브로마이드 (50.5 mmol)의 용액을 첨가하고, 이어서 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 0℃로 냉각하고, 요오드 (22.24 mmol)를 일부분씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고, 또다른 2시간 동안 실온에서 교반하고, Et₂O로 희석하고, 이어서 Na₂S₂O₃의 포화 용액 및 NH₄Cl의 포화 용액으로 연속적으로 세척하였다. 수성층을 Et₂O로 각각 역-추출하였다. 합한 유기상을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 적색 오일로서 표제 화합물을 수득하였다. HPLC: t_R = 3.46 분 (방법 A); ESI-MS: [M+H]⁺ 374.

실시예 6: (2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)

표제 화합물을 실시예 2에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 5.1)를 사용하였다.

표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.

실시예 7: (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)

표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 7.1)를 사용하였다.

표제 화합물을 미황색 고체로서 수득하였다.

단계 7.1: (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드

표제 화합물을 단계 1.8에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, (2S,3R)-3-메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 7.2)를 사용하였다. 또한, 건조 촉매 대신에 50％ H₂O로 습윤화된, 10％ 차콜 상 Pd (알드리치 330108)를 사용하였다.

표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다. ESI-MS: [M+H]⁺ 214; TLC: R_f = 0.14 (200:20:1 CH₂Cl₂/MeOH/진한 NH₄OH).

단계 7.2: (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드

표제 화합물을 단계 1.9에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, (2S,3R)-3-메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 대신에 (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (단계 7.3)를 사용하였다. 또한, 염기성화된 수성층을 CH₂Cl₂ 대신에 THF로 남김없이 추출하였다.

표제화합물을 황색 오일로서 수득하였다. HPLC: t_R = 2.18 분 (방법 A); ESI-MS: [M+H]⁺ 318.

단계 7.3: (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르

아세토니트릴 (24 ㎖) 중 (2S,3R)-3-요오도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (단계 5.5) (7.07 mmol), K₂CO₃ (21.22 mmol) 및 모르폴린 (10.61 mmol)의 혼합물을 50℃에서 62시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음물에 붓고, EtOAc로 추출하였다 (3X). 합한 유기층을 물 및 염수로 연속적으로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 레디셉(등록상표) 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 황색 오일로서 표제 화합물을 수득하였다. HPLC: t_R = 2.56 분 (방법 A); ESI-MS: [M+H]⁺ 333.

실시예 8: (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)

표제 화합물을 실시예 2에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 7.1)를 사용하였다.

표제 화합물을 황색 발포체로서 수득하였다.

실시예 9: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-플루오로-1-메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드)

표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, 이미다졸-1-카르복실산 {4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드 대신에 이미다졸-1-카르복실산 {5-[2-(1-플루오로-1-메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드 (단계 9.1)를 사용하였다.

단계 9.1: 이미다졸-1-카르복실산 {5-[2-(1-플루오로-1-메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드

CDI (0.10 g)를 실온에서 CH₂Cl₂ (4 ㎖) 중 5-[2-(1-플루오로-1-메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일아민 (단계 9.2) (0.15 g)의 교반 용액에 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 56시간 동안 25℃에 정치시켜 두고, 표제 화합물을 여과에 의해 단리시켰다.

단계 9.2: 5-[2-(1-플루오로-1-메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일아민

N'-[5-((E)-3-디메틸아미노-아크릴로일)-4-메틸-티아졸-2-일]-N,N-디메틸-포름아미딘 [507487-90-3] (2.1 g), 2-플루오로-2-메틸프로피온아미딘 (유럽 특허 제0227415의 실시예 1에 기재된 절차와 유사한 절차에 의해 제조된 1.7 g) 및 2-메톡시에탄올 (3.8 ㎖)의 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. NaOH (0.3 g)를 첨가하고, 혼합물을 125℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 물을 첨가하고, 혼합물을 증발에 의해 건조시키고, 97.5:2:0.5의 CH₂Cl₂:MeOH:진한 NH₄OH로 용리시키는 실리카겔 상에서의 정상 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 10: (2S,3R)-3-히드록시-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[4'-메틸-2-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-[4,5']비티아졸릴-2'-일]-아미드}

표제 화합물을 실시예 1에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, 이미다졸-1-카르복실산 {4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드 대신에 이미다졸-1-카르복실산 [4'-메틸-2-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-[4,5']비티아졸릴-2'-일]-아미드 (단계 10.1)를 사용하고, (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (2S,3R)-3-히드록시-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (문헌 [H. Fukushima et al., Biorg. Med Chem. 2004, 12, 6053], [H. Ji et al., J. Med Chem. 2006, 49, 6254]에 기재되어 있음)를 사용하였다.

단계 10.1: 이미다졸-1-카르복실산 [4'-메틸-2-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-[4,5']비티아졸릴-2'-일]-아미드

CDI (0.13 g)를 실온에서 CH₂Cl₂ (5 ㎖) 중 4'-메틸-2-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-[4,5']비티아졸릴-2'-일아민 (단계 10.2) (0.16 g)의 교반 용액에 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 3시간 동안 25℃에 정치시켜 두고, 표제 화합물을 여과에 의해 단리시켰다.

단계 10.2: 4'-메틸-2-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-[4,5']비티아졸릴-2'-일아민

HCl (1.17 g의 32％ 수용액)을 EtOH (10 ㎖) 중 N-[4'-메틸-2-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-[4,5']비티아졸릴-2'-일]-아세트아미드 (단계 10.3) (0.18 g)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 7시간 동안 환류 하에 가열하였다. 냉각시킨 반응 혼합물을 EtOAc 및 NaHCO₃ 수용액 사이에 분배하고, 유기층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다. MS (ESI): 양성 306.1 (M+H), 음성 304.1 (M-H).

단계 10.3: N-[4'-메틸-2-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-[4,5']비티아졸릴-2'-일]-아세트아미드

MeOH (15 ㎖) 중 N-[5-(2-브로모-아세틸)-4-메틸-티아졸-2-일]-아세트아미드 (0.29 g, WO 2005/068444에 기재된 바와 같이 제조하였음)의 용액에 1-트리플루오로메틸-시클로프로판카르보티산 아미드 [871913-36-9] (0.20 g) 및 암모늄포스포몰리브데이트 (0.15 g)를 실온에서 첨가하였다. 18시간 동안 실온에서 교반한 후, 반응 혼합물을 EtOAc 및 물 사이에 분배하고, 유기층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. CH₂Cl₂ 중 1％ MeOH의 용리액과 함께 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. MS (ESI): 양성 348.1 (M+H), 음성 346.1 (M-H).

실시예 11: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[4'-메틸-2-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-[4,5']비티아졸릴-2'-일]-아미드}

이미다졸-1-카르복실산 [4'-메틸-2-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-[4,5']비티아졸릴-2'-일]-아미드 (단계 10.1) (20 mg)를 실온에서 DMF (0.5 ㎖) 중 (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 1.8) (9 mg) 및 Et₃N (21 ㎕)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 56시간 동안 교반하고, 증발시키고, 수성 MeOH로부터 결정화시켜 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 12: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-d₉-tert-부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}

이미다졸-1-카르복실산 [5-(2-d₉-tert-부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드 (단계 12.1) (222 mg)를 실온에서 DMF (3 ㎖) 중 (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 1.8) (95 mg) 및 Et₃N (264 ㎕)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 56시간 동안 교반하고, 증발시키고, 수성 MeOH로부터 결정화시켜 표제 화합물을 수득하였다. MS (ESI): 양성 412.1 (M+H), 음성 410.2 (M-H).

단계 12.1: 이미다졸-1-카르복실산 [5-(2-d₉-tert-부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드

CDI (0.77 g)를 실온에서 DMF (4.3 ㎖) 중 5-(2-d₉-tert-부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민 (단계 12.2) (1.11 g)의 교반 용액에 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 18시간 동안 25℃에 정치시켜 두고, 표제 화합물을 여과에 의해 단리시켰다.

단계 12.2: 5-(2-d₉-tert-부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민

분말화된 NaOH (3.71 g)를 2-메톡시에탄올 (41 ㎖) 중 N'-[5-(3-디메틸아미노-아크릴로일)-4-메틸-티아졸-2-일]-N,N-디메틸-포름아미딘 [507487-90-3] (5.51 g) 및 d₉-2,2-디메틸-프로피온아미딘 히드로클로라이드 (단계 12.3) (4.50 g)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 125℃에서 1시간 동안 교반하면서 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 물을 첨가하고, 조 생성물을 여과에 의해 단리시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC로 정제하고, 표제 화합물을 함유하는 분획물을 CH₂Cl₂ 및 수성 NaHCO₃ 사이에 분배하였다. 건조시킨 CH₂Cl₂ 층의 증발 후, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다. LC-MS: t_R = 1.12 분, M+H 258.4.

단계 12.3: d₉-2,2-디메틸-프로피온아미딘 히드로클로라이드

톨루엔 (61 ㎖) 중 2 M 트리메틸알루미늄의 용액을 빙조에서 냉각시키면서 톨루엔 (46 ㎖) 중 염화암모늄 (6.53 g)의 현탁액에 적가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반하고, d₉-2,2-디메틸-프로피온산 부틸 에스테르 (단계 12.4) (6.3 g)를 첨가하였다. 80℃에서 4일 동안 가열한 후, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, MeOH (200 ㎖)를 조심스럽게 적가하였다. 교반하고, 1시간 동안 실온에서 초음파처리한 후, 반응 혼합물을 하이플로(Hyflo)를 통해 여과하고, MeOH로 세척하고, 여과물을 증발시켜 회백색 고체로서 표제 화합물을 수득하였다.

단계 12.4: d₉-2,2-디메틸-프로피온산 부틸 에스테르

d₉-tert-부틸클로라이드 (5.0 g)를, 촉매량의 요오드로 활성화시킨 THF (20 ㎖) 중 마그네슘 (1.50 g)의 현탁액에 1시간에 걸쳐 가열 (일정한 환류를 유지하기 위해 필요함)하면서 조금씩 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 추가의 1시간 동안 가열하여 완전한 그리냐드(Grignard) 형성을 보장하였다. 이어서, 상기 그리냐드 용액을 빙조로 냉각시킨 THF (40 ㎖) 중 이미다졸-1-카르복실산 부틸 에스테르 (7.5 g, 문헌 [T. Werner and A.G.M. Barrett, J. Org. Chem. 2006, 71, 4302-4304]에 의해 기재된 바와 같이 제조됨)의 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하고, (200 ㎖)를 첨가하고, 혼합물을 하이플로를 통해 여과하고, 여과물을 Et₂O로 추출하고, Et₂O 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 13: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(6- d₁₀-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}

이미다졸-1-카르복실산 [5-(6-d₁₀-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드 (단계 13.1) (19 mg)를 실온에서 DMF (0.5 ㎖) 중 (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 1.8) (9 mg) 및 Et₃N (21 ㎕)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 56시간 동안 교반하고, 물 (1 ㎖)을 첨가하고, 표제 화합물을 여과에 의해 수집하였다. MS (ESI): 양성 428.1 (M+H), 음성 426.2 (M-H).

단계 13.1: 이미다졸-1-카르복실산 [5-(6-d₁₀-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드

CDI (78 mg)를 실온에서 DMF (2 ㎖) 중 5-(6-d₁₀-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민 (단계 13.2) (121 mg)의 용액에 첨가하고, 3.5시간 동안 실온에 정치시켜 두었다. 반응 혼합물을 여과하고, CH₂Cl₂로 세척하여 표제 화합물을 수득하였다.

단계 13.2: 5-(6-d₁₀-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일아민

진한 HCl (0.4 ㎖)을 실온에서 EtOH (9 ㎖) 중의 N-[5-(6-d₁₀-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아세트아미드 (단계 13.3) (140 mg)에 첨가하고, 혼합물을 40시간 동안 환류 하에 가열하였다. 냉각시킨 반응 혼합물을 증발시키고, 수성 NaHCO₃로 중성화시키고, CH₂Cl₂ 중의 10％ MeOH로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다. LC-MS: t_R = 1.17 분, M+H 274.4 (방법 A).

단계 13.3: N-[5-(6-d₁₀-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아세트아미드

DMF (3 ㎖) 중 2-d₁₀-디에틸아미노-6-클로로피라진 (단계 13.4) (293 mg), 2-아세트아미도-4-메틸티아졸 (300 mg), 팔라듐 아세테이트 (24 mg), 트리-tert-부틸포스포늄 테트라플루오로보레이트 (61 mg) 및 탄산세슘 (1.02 g)의 혼합물을 통해 아르곤을 실온에서 5분 동안 버블링시켰다. 반응 혼합물을 밀봉된 바이알에서 아르곤 분위기 하에 45분 동안 150℃의 바이오티지 개시제(Biotage Initiator)(상표명) 마이크로파 장치에서 가열하고, 여과하고, 정제용 HPLC로 정제하였다. 표제 화합물을 함유하는 분획물을 합하고, 증발시켜 아세토니트릴을 제거하고, 여과에 의해 베이지색 고체로서 표제 화합물을 수득하였다. LC-MS: t_R = 1.68 분, M+H 316.3 (방법 A).

단계 13.4: 2-d₁₀-디에틸아미노-6-클로로피라진

d₁₀-디에틸아민 (0.5 g)을 실온에서 아세토니트릴 (4 ㎖) 중 2,6-디클로로피라진 [4774-14-5] (0.93 g) 및 탄산칼륨 (1.41 g)의 교반 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 55℃에서 60시간 동안 가열하고, 냉각시키고, 물을 첨가하고, CH₂Cl₂로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 증발시키고, 정상 크로마토그래피로 정제하여 (용리액 CH₂Cl₂) 표제 화합물을 수득하였다. LC-MS: t_R = 2.10 분, M+H 196.4 및 198.4 (방법 A).

실시예 14: (2S,3R)-3-메톡시메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)

표제 화합물을 실시예 2에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (2S,3R)-3-메톡시메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 14.1)를 사용하였다.

표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.

단계 14.1: (2S,3R)-3-메톡시메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드

표제 화합물을 단계 1.8에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, (2S,3R)-3-메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (2S,3R)-3-메톡시메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 14.2)를 사용하였다. 또한, 건조 촉매 대신에 50％ H₂O로 습윤화된, 10％ 차콜 상 Pd (알드리치 330108)를 사용하였다.

표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-MS: [M+H]⁺ 159.

단계 14.2: (2S,3R)-3-메톡시메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드

표제 화합물을 단계 1.9에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, (2S,3R)-3-메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 대신에 (2S,3R)-3-메톡시메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (단계 14.3)를 사용하였다. 또한, 염기성화된 수성층을 CH₂Cl₂ 대신에 THF로 남김없이 추출하였다.

표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다. HPLC: t_R = 2.35 분 (방법 A); LC-MS: t_R = 0.47 분, [M+H]⁺ 263 (방법 C); TLC: R_f = 0.05 (1:1 헵탄/EtOAc).

단계 14.3: (2S,3R)-3-메톡시메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르

톨루엔 (79 ㎖) 중의 (3aR,6aS)-1-((S)-1-페닐-에틸)-헥사히드로-푸로[3,4-b]피롤-6-온 [805246-48-4] (17.05 mmol), KOH (71.60 mmol) 및 요오도메탄 (68.20 mmol)의 혼합물을 80℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물과 MTBE 사이에 분배하였다. 수성층을 MTBE로 추출하였다 (3X). 합한 유기층을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다. HPLC: t_R = 2.98 분 (방법 A); LC-MS: t_R= 0.69 분, [M+H]⁺ 278 (방법 C); TLC: R_f = 0.25 (1:3 헵탄/EtOAc).

실시예 15: (2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)

표제 화합물을 실시예 2에 기재된 절차와 유사하게 제조하였으나, (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 15.1)를 사용하였다.

표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다.

단계 15.1: (2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드

(2S,3R)-3-메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 15.2)를 사용하여, 표제 화합물을 단계 1.8에 기재된 절차와 유사하게 제조하였다. 또한, 4 bar 기압 하에 수소화를 수행하였다.

표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다. ESI-MS: [M+H]⁺ 172.

단계 15.2: (2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드

MeOH (3.3 ㎖) 중의 (2S,3S)-3-아미노메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 15.3) (0.418 mmol), 나트륨 시아노보로하이드라이드 (2.86 mmol) 및 37％ 수성 포름알데히드 (2.14 mmol)의 혼합물을 55℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 레디셉 (등록상표) 실리카겔 컬럼을 사용하여 잔류물을 정제하여, 표제 화합물을 백색 발포체로서 수득하였다. HPLC: t_R 3.59 분 (방법 B); LC-MS: t_R= 0.86 분, [M+H]⁺ 276 (방법 A); TLC: R_f = 0.13 (9:1 CH₂Cl₂/MeOH).

단계 15.3: (2S,3S)-3-아미노메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드

THF (3 ㎖) 중의 (2S,3S)-3-아지도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 5.3) (0.723 mmol) 및 트리페닐포스핀 (0.867 mmol)의 혼합물을 실온에서 25시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜, 조 표제 화합물을 담갈색 고체로서 수득하였다. HPLC: t_R 3.53 분 (방법 B); ESI-MS: [M+H]⁺ 248.

실시예 16: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-tert-부틸-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}

표제 화합물을 실시예 1의 제조를 위해 기재된 바와 같은 합성 방법을 사용하여 시판되는 (콤비-포스(Combi-Phos)) 4-브로모-2-tert-부틸-피리딘 (4-브로모-2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘을 대신하여)으로부터 제조하였다.

PI3 키나제 억제제로서의 효능

PI3K 키나제글로(KinaseGlo) 검정: 화합물 희석액 50 nL를 흑색 384-웰 저용적 비결합 스티렌 (NBS) 플레이트 (코스타(Costar) 카탈로그 번호 NBS#3676)에 분산시켰다. 메탄올 중 10 mg/㎖ 용액으로서 제공된 L-a-포스파티딜이노시톨 (PI)을 유리 튜브로 옮기고, 질소 빔하에 건조시켰다. 이어서, 이를 볼텍싱함으로써 3％ 옥틸글루코시드 (OG)에 재현탁시키고, 4℃에서 보관하였다. 키나제글로 발광 키나제 검정 (프로메가(Promega), 미국 위스콘신주 메디슨)은 키나제 반응 후 용액에 잔류하는 ATP의 양을 정량함으로써 키나제 활성을 측정하는 균일 HTS 방법이다.

PI/OG와 PI3K 아형의 혼합물 5 ㎕를 첨가하였다 (표 1). 10 mM TRIS-HCl (pH 7.5), 3 mM MgCl₂, 50 mM NaCl, 0.05％ CHAPS, 1 mM DTT 및 1 μM ATP를 최종 부피 10 ㎕로 함유하는 ATP 혼합물 5 ㎕를 첨가하여 키나제 반응을 개시하였고, 실온에서 반응이 일어났다. 키나제글로 10 ㎕를 사용하여 반응을 중단시키고, 10분 후에 플레이트를 시너지2(Synergy2) 판독기에서 웰 당 0.1 초의 통합 시간을 사용하여 판독하였다. 2.5 μM의 팬(pan)-클래스 1 PI3 키나제 억제제 (표준물)를 검정 플레이트에 첨가하여 키나제 반응의 100％ 억제를 생성하였고, 0％ 억제는 용매 비히클 (물 중 90％ DMSO)에 의해 제공되었다. 표준물을 기준 화합물로서 사용하였고, 16 희석점의 형태로 이벌식으로 모든 검정 플레이트에 포함되었다.

<표 1> 키나제글로에 의한 PI3K: 검정 조건 및 시약 프로토콜

PI3K의 클로닝

PI3Kα, PI3Kβ 및 PI3Kδ 구조체는 p85α iSH2 도메인 및 각 p110 이소형의 융합물이다. p85α 단편 및 p110 이소형 유전자는, 하기 기재된 바와 같이 태반, 고환 및 뇌로부터의 시판되는 RNA로부터 RT-PCR에 의해 생성된 제1 가닥 cDNA로부터 PCR에 의해 생성되었다. PI3Kγ 구조체는 영국 캠브리지 소재의 엠알씨 래버러토리즈 오브 몰레큘라 바이올로지(MRC Laboratory of Molecular Biology)의 로저 윌리엄스 랩(Roger Williams lab) (2003년 11월)으로부터 입수하였고, 문헌 [Pacold, Michael E.; Suire, Sabine; Perisic, Olga; Lara-Gonzalez, Samuel; Davis, Colin T.; Walker, Edward H.; Hawkins, Phillip T.; Stephens, Len; Eccleston, John F.; Williams, Roger L. Crystal structure and functional analysis of Ras binding to its effector phosphoinositide 3-kinase gamma. Cell (2000), 103(6), 931-943)]에 기재되어 있다.

PI3Kα 구조체 및 단백질

BV1075: 바쿨로바이러스 BV-1075에 대한 구조체는 벡터 pBlueBac4.5에 클로닝된 p85 단편 및 p110α 단편으로 이루어진 3-부분 라이게이션에 의해 생성되었다. p85 단편은 Nhe/Spe에 의해 절단된 플라스미드 p1661-2로부터 유래되었다. 클론으로부터 유래된 p110α 단편은 서열분석에 의해 확인되었고, SpeI/HindIII 단편으로서 LR410에 사용되었다. 바쿨로바이러스 발현 벡터 LR410의 생성을 위해, 삽입체를 게이트웨이(Gateway)에 적합화된 pBlueBac4.5 (인비트로젠(Invitrogen)) 벡터로 전달하는 게이트웨이 LR 반응을 이용하였다. 클로닝 벡터 pBlueBac4.5 (인비트로젠)를 Nhe/HindIII에 의해 절단하였다. 이와 같이 하여, 구조체 PED 153.8이 생성되었다. p85 성분 (iSH2)은 주형으로서의 ORF 318 (상기 기재됨), 및

1개의 전방향 프라이머 KAC1028

및

2개의 역방향 프라이머 KAC1029

및 KAC1039

를 사용하여 PCR에 의해 생성되었다. 상기 두 역방향 프라이머는 중첩되어, 12x Gly 링커 및 p110α 유전자의 N-말단 서열을 SpeI 부위에 통합시켰다. 12x Gly 링커는 BV1052 구조체에서 단일 Gly 링커를 대체하였다. PCR 단편을 pCR2.1 TOPO (인비트로젠)에 클로닝하였다. 생성된 클론 중에서 p1661-2를 서열분석에 의해 올바른 것으로 결정하였다. 이 플라스미드를 Nhe 및 SpeI에 의해 절단시키고, 생성된 단편을 서브-클로닝을 위해 겔-단리 및 정제하였다.

p110α 클로닝 단편은 Spe I 및 HindIII에 의한 클론 LR410 (상기 참조)의 효소적 절단에 의해 생성되었다. SpeI 부위는 p110α 유전자의 코딩 영역에 있다. 생성된 단편을 서브-클로닝을 위해 겔-단리 및 정제하였다. 클로닝 벡터 pBlueBac4.5 (인비트로젠)는 Nhe 및 HindIII에 의한 효소적 절단에 의해 제조되었다. 절단된 벡터를 퀴아젠(Qiagen) 칼럼으로 정제한 후, 송아지 창자 알칼리 포스파타제 (CIP) (바이오랩스(BioLabs))로 탈포스포릴화시켰다. CIP 반응을 완료한 후, 절단된 벡터를 다시 칼럼 정제하여, 최종 벡터를 생성하였다. 3-부분 라이게이션을 로슈 래피드(Roche Rapid) 리가제 및 제조업체의 설명서를 사용하여 수행하였다. 최종 플라스미드를 서열분석에 의해 확인하였다.

키나제 도메인.

BV 1075의 단백질 서열:

PI3Kβ 구조체 및 단백질

BV949: p85 PI3Kα, PI3Kβ 및 PI3Kδ 서브유닛의 내부 SH2 도메인 (iSH2)을 위한 PCR 생성물 및 전장 p110β 서브유닛을 위한 PCR 생성물을 생성하여, 중첩 PCR에 의해 융합시켰다. iSH2 PCR 생성물은 태반, 고환 및 뇌로부터의 시판되는 인간 RNA로부터 RT-PCR에 의해 생성된 제1 가닥 cDNA (클론테크(Clontech))로부터

먼저 프라이머 gwG130-p01

및

gwG130-p02

를 사용하여 수득하였다. 후속적으로, 2차 PCR 반응에서, 게이트웨이 재조합 AttB1 부위 및 링커 서열을 각각

프라이머 gwG130-p03

및 gwG130-p05

를 사용하여 p85 iSH2 단편의 5' 말단 및 3' 말단에 부가하였다. p110β 단편은 주형으로서 p110β 클론 (서열이 확인된 미지의 공급원으로부터)을 사용하고, 링커 서열 및 p110β의 5' 말단을 함유하는 프라이머 gwG130-p04

및 히스티딘 태그에 융합된 p110-β의 3' 말단 서열을 함유하는 프라이머 gwG130-p06

을 사용하여 PCR에 의해 수득하였다. p85-iSH2/p110β 융합 단백질은 상기 언급한 gwG130-p03 프라이머, 및 중첩 히스티딘 태그 및 AttB2 재조합 서열을 함유하는 프라이머

를 사용하여 iSH2 단편의 3' 말단 및 p110β 단편의 5' 말단에서 링커의 반응을 중첩 PCR에 의해 어셈블리하였다. 이 최종 생성물을 게이트웨이 (인비트로젠) OR 반응으로 공여자 벡터 pDONR201 (인비트로젠)에 재조합하여, ORF253 엔트리 클론을 생성하였다. 이 클론을 서열분석으로 확인하고, 바쿨로바이러스 발현 벡터 LR280의 생성을 위해 게이트웨이 LR 반응 (인비트로젠)에 사용하여 삽입체를 게이트웨이에 적합화된 pBlueBac4.5 (인비트로젠) 벡터로 전달하였다. 이 LR280은 p85 서열에서 아미노산 돌연변이를 가졌다.

키나제 도메인.

BV949의 단백질 서열:

키나제 도메인.

PI3Kγ 구조체 및 단백질

구조체는 영국 캠브리지 소재의 엠알씨 래버러토리즈 오브 몰레큘라 바이올로지의 로저 윌리엄스 랩 (2003년 11월)으로부터 입수하였다. 상기 구조체는 문헌 [Pacold, Michael E.; Suire, Sabine; Perisic, Olga; Lara-Gonzalez, Samuel; Davis, Colin T.; Walker, Edward H.; Hawkins, Phillip T.; Stephens, Len; Eccleston, John F.; Williams, Roger L. Crystal structure and functional analysis of Ras binding to its effector phosphoinositide 3-kinase gamma. Cell (2000), 103(6), 931-943)]에 기재되어 있다. 구조체에는 N-말단 144 aa가 결여되어 있다.

BV950의 단백질 서열:

PI3Kδ 구조체 및 단백질

BV1060: p85 서브유닛의 내부 SH2 도메인 (iSH2)에 대한 PCR 생성물 및 전장 p110δ 서브유닛에 대한 PCR 생성물을 생성하여, 중첩 PCR에 의해 융합시켰다. iSH2 PCR 생성물은 주형으로서의 ORF318 (상기 참조), 및 프라이머 gwG130-p03

및 gwG154-p04

를 사용하여 생성하였다. p110δ 단편은 태반, 고환 및 뇌로부터의 시판되는 인간 RNA로부터 RT-PCR에 의해 생성된 제1 가닥 cDNA (클론테크)로부터

먼저 프라이머 gwG154-p01

및 gwG154-p02

를 사용하여 수득하였다. 후속적인 PCR 반응에서, 링커 서열 및 히스티딘 태그를 각각 프라이머 gw154-p03

및 gwG154-p06

을 사용하여 p110δ 단편의 5' 말단 및 3' 말단에 부가하였다. p85-iSH2/p110δ 융합 단백질은 상기 언급된 gwG130-p03 프라이머, 및 중첩 히스티딘 태그 및 게이트웨이 (인비트로젠) AttB2 재조합 서열을 함유하는 프라이머

를 사용하여 iSH2 단편의 3' 말단 및 p110δ 단편의 5' 말단에서 중첩 링커에 의해 제3 PCR 반응으로 어셈블리하였다. 이 최종 생성물을 게이트웨이 OR 반응으로 공여자 벡터 pDONR201 (인비트로젠)에 재조합하여, ORF319 엔트리 클론을 생성하였다. 이 클론을 서열분석으로 확인하고, 바쿨로바이러스 발현 벡터 LR415의 생성을 위해 게이트웨이 LR 반응 (인비트로젠)에 사용하여 삽입체를 게이트웨이에 적합화된 pBlueBac4.5 (인비트로젠) 벡터로 전달하였다.

BV1060의 단백질 서열:

PI3Kα, PI3Kβ 및 PI3Kγ 구조체의 정제

PI3Kα, PI3Kβ 및 PI3Kγ를 두 크로마토그래피 단계로 정제하였다: Ni 세파로스 수지 (GE 헬쓰케어(GE Healthcare)) 상에서의 고정화 금속 친화성 크로마토그래피 (IMAC), 및 수퍼덱스(Superdex) 200 26/60 칼럼 (GE 헬쓰케어)을 이용한 겔 여과. 모든 완충액을 4℃로 냉각시키고, 얼음 상의 냉각하에 용해를 수행하였다. 칼럼 분획화를 실온에서 수행하였다. PI3Kβ를 정제하기 위해 사용된 모든 완충액은 하기 기재된 것 이외에도 0.05％ 트리톤 X100을 함유하였다.

전형적으로, Tn5 세포 배양물 10 L로부터의 동결 세포를 "용해 완충액" 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 5 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ 오카다산 (OAA), 5 mM BME, 1 x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유) (20개 정제/1 L 완충액, 로슈 어플라이드 사이언시즈(Roche Applied Sciences)), 벤조나제 (25 U/㎖ 완충액, 이엠디 바이오사이언시즈(EMD Biosciences))에 1:6 v/v 펠릿 대 용해 완충액의 비율로 재현탁시키고, 꼭 맞는 막자를 이용하여 20회 타격을 다운싱(douncing)하여 기계적으로 용해시켰다. 용해물을 45,000 g에서 30분 동안 원심분리하고, 상층액을 예비-평형화된 IMAC 칼럼에 로딩하였다 (3 ㎖ 수지/100 ㎖ 용해물). 상기 칼럼을 3 내지 5 칼럼 부피의 용해 완충액으로 세척한 후, 3 내지 5 칼럼 부피의 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 45 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM BME, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 2차 세척하였다. 단백질을 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 0.5 M NaCl, 5％ 글리세롤, 250 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM BME, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 용리시켰다. 적절한 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석하고, 이에 따라 수집하였다. 단백질을 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 0.5 M NaCl, 5％ 글리세롤, 1 mM NaF, 5 mM DTT, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 평형화된 수퍼덱스 200 26/60 칼럼 상에서 겔 여과에 의해 추가로 정제하였다. 적절한 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석하고, 이에 따라 수집하였다. 동등한 부피의 투석 완충액 (20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 50％ 글리세롤, 5 mM NaF, 5 mM DTT)을 수집물에 첨가한 후, 투석 완충액 2회 변화에 대해 투석하였다 (밤새 1회 변화). 단백질을 -20℃에서 보관하였다.

PI3Kδ의 정제

PI3Kδ를 세 크로마토그래피 단계로 정제하였다: Ni 세파로스 수지 (GE 헬쓰케어) 상에서의 고정화 금속 친화성 크로마토그래피, 수퍼덱스 200 26/60 칼럼 (GE 헬쓰케어)을 이용한 겔 여과, 및 최종적으로 Q-HP 칼럼 (GE 헬쓰케어) 상에서의 이온 교환 단계. 모든 완충액을 4℃로 냉각시키고, 얼음 상의 냉각하에 용해를 수행하였다. 칼럼 분획화를 실온에서 수행하였다.

전형적으로, Tn5 세포 배양물 10 L로부터의 동결 세포를 "용해 완충액" 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 5 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ 오카다산 (OAA), 5 mM BME, 1 x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유) (20개 정제/1 L 완충액, 로슈 어플라이드 사이언시즈), 벤조나제 (25U/㎖ 용해 완충액, 이엠디 바이오사이언시즈)에 1:10 v/v 펠릿 대 용해 완충액의 비율로 재현탁시키고, 꼭 맞는 막자를 이용하여 20회 타격을 다운싱하여 기계적으로 용해시켰다. 용해물을 45,000 g에서 30분 동안 원심분리하고, 상층액을 예비-평형화된 IMAC 칼럼에 로딩하였다 (5 ㎖ 수지/100 ㎖ 용해물). 상기 칼럼을 3 내지 5 칼럼 부피의 용해 완충액으로 세척한 후, 3 내지 5 칼럼 부피의 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 40 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM BME, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 2차 세척하였다. 단백질을 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 250 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM BME, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 용리시켰다. 적절한 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석하고, 이에 따라 수집하였다. 단백질을 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM DTT, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 평형화된 수퍼덱스 200 칼럼 상에서 겔 여과에 의해 추가로 정제하였다. 적절한 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석하고, 이에 따라 수집하였다. 이들 분획을 "완충액 A" 20 mM Tris-Cl, pH 8.2, 5％ 글리세롤, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM DTT를 사용하여 1:10 v/v 수집물 부피 대 완충액의 비율로 희석하고, 준비된 Q-HP 칼럼 상에 로딩하였다. 샘플 로딩을 완료한 후, 완충액 A 및 5％ "완충액 B" 20 mM Tris-Cl, pH 8.2, 1 M NaCl, 5％ 글리세롤, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM DTT로 3 내지 5 칼럼 부피로 세척하였다. 단백질을 완충액 B의 5％→30％ 구배를 이용하여 용리시켰다. 전형적으로, 단백질은 대략 200 mM NaCl에서 용리되었다. 적절한 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석하고, 이에 따라 수집하였다. 동등한 부피의 투석 완충액 (20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 50％ 글리세롤, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM DTT)을 수집물에 첨가한 후, 투석 완충액 2회 변화에 대해 투석하였다 (밤새 1회 변화). 단백질을 -20℃에서 보관하였다.

상기 기재된 검정을 이용하여 하기 결과를 수득하였다. PI3K 베타, 감마 및 델타 이소형에 대한 선택성 인자는, 각각의 IC₅₀ 값을 PI3K알파 IC₅₀ 값으로 나눔으로써 계산하였다.

SEQUENCE LISTING <110> Novartis AG <120> Substituted 2-carboxamide cycloamino ureas <130> PAT053553A <150> US 61/270029 <151> 2009-07-02 <160> 20 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR Primer <400> 1 gctagcatgc gagaatatga tagattatat gaagaatata cc 42 <210> 2 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 2 gcctccacca cctccgcctg gtttaatgct gttcatacgt ttgtc 45 <210> 3 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 3 tactagtccg cctccaccac ctccgcctcc accacctccg cc 42 <210> 4 <211> 1180 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> PI3K kinase construct <400> 4 Met Arg Glu Tyr Asp Arg Leu Tyr Glu Glu Tyr Thr Arg Thr Ser Gln 1 5 10 15 Glu Ile Gln Met Lys Arg Thr Ala Ile Glu Ala Phe Asn Glu Thr Ile 20 25 30 Lys Ile Phe Glu Glu Gln Cys Gln Thr Gln Glu Arg Tyr Ser Lys Glu 35 40 45 Tyr Ile Glu Lys Phe Lys Arg Glu Gly Asn Glu Lys Glu Ile Gln Arg 50 55 60 Ile Met His Asn Tyr Asp Lys Leu Lys Ser Arg Ile Ser Glu Ile Ile 65 70 75 80 Asp Ser Arg Arg Arg Leu Glu Glu Asp Leu Lys Lys Gln Ala Ala Glu 85 90 95 Tyr Arg Glu Ile Asp Lys Arg Met Asn Ser Ile Lys Pro Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Leu Val Glu Cys Leu Leu Pro 115 120 125 Asn Gly Met Ile Val Thr Leu Glu Cys Leu Arg Glu Ala Thr Leu Ile 130 135 140 Thr Ile Lys His Glu Leu Phe Lys Glu Ala Arg Lys Tyr Pro Leu His 145 150 155 160 Gln Leu Leu Gln Asp Glu Ser Ser Tyr Ile Phe Val Ser Val Thr Gln 165 170 175 Glu Ala Glu Arg Glu Glu Phe Phe Asp Glu Thr Arg Arg Leu Cys Asp 180 185 190 Leu Arg Leu Phe Gln Pro Phe Leu Lys Val Ile Glu Pro Val Gly Asn 195 200 205 Arg Glu Glu Lys Ile Leu Asn Arg Glu Ile Gly Phe Ala Ile Gly Met 210 215 220 Pro Val Cys Glu Phe Asp Met Val Lys Asp Pro Glu Val Gln Asp Phe 225 230 235 240 Arg Arg Asn Ile Leu Asn Val Cys Lys Glu Ala Val Asp Leu Arg Asp 245 250 255 Leu Asn Ser Pro His Ser Arg Ala Met Tyr Val Tyr Pro Pro Asn Val 260 265 270 Glu Ser Ser Pro Glu Leu Pro Lys His Ile Tyr Asn Lys Leu Asp Lys 275 280 285 Gly Gln Ile Ile Val Val Ile Trp Val Ile Val Ser Pro Asn Asn Asp 290 295 300 Lys Gln Lys Tyr Thr Leu Lys Ile Asn His Asp Cys Val Pro Glu Gln 305 310 315 320 Val Ile Ala Glu Ala Ile Arg Lys Lys Thr Arg Ser Met Leu Leu Ser 325 330 335 Ser Glu Gln Leu Lys Leu Cys Val Leu Glu Tyr Gln Gly Lys Tyr Ile 340 345 350 Leu Lys Val Cys Gly Cys Asp Glu Tyr Phe Leu Glu Lys Tyr Pro Leu 355 360 365 Ser Gln Tyr Lys Tyr Ile Arg Ser Cys Ile Met Leu Gly Arg Met Pro 370 375 380 Asn Leu Met Leu Met Ala Lys Glu Ser Leu Tyr Ser Gln Leu Pro Met 385 390 395 400 Asp Cys Phe Thr Met Pro Ser Tyr Ser Arg Arg Ile Ser Thr Ala Thr 405 410 415 Pro Tyr Met Asn Gly Glu Thr Ser Thr Lys Ser Leu Trp Val Ile Asn 420 425 430 Ser Ala Leu Arg Ile Lys Ile Leu Cys Ala Thr Tyr Val Asn Val Asn 435 440 445 Ile Arg Asp Ile Asp Lys Ile Tyr Val Arg Thr Gly Ile Tyr His Gly 450 455 460 Gly Glu Pro Leu Cys Asp Asn Val Asn Thr Gln Arg Val Pro Cys Ser 465 470 475 480 Asn Pro Arg Trp Asn Glu Trp Leu Asn Tyr Asp Ile Tyr Ile Pro Asp 485 490 495 Leu Pro Arg Ala Ala Arg Leu Cys Leu Ser Ile Cys Ser Val Lys Gly 500 505 510 Arg Lys Gly Ala Lys Glu Glu His Cys Pro Leu Ala Trp Gly Asn Ile 515 520 525 Asn Leu Phe Asp Tyr Thr Asp Thr Leu Val Ser Gly Lys Met Ala Leu 530 535 540 Asn Leu Trp Pro Val Pro His Gly Leu Glu Asp Leu Leu Asn Pro Ile 545 550 555 560 Gly Val Thr Gly Ser Asn Pro Asn Lys Glu Thr Pro Cys Leu Glu Leu 565 570 575 Glu Phe Asp Trp Phe Ser Ser Val Val Lys Phe Pro Asp Met Ser Val 580 585 590 Ile Glu Glu His Ala Asn Trp Ser Val Ser Arg Glu Ala Gly Phe Ser 595 600 605 Tyr Ser His Ala Gly Leu Ser Asn Arg Leu Ala Arg Asp Asn Glu Leu 610 615 620 Arg Glu Asn Asp Lys Glu Gln Leu Lys Ala Ile Ser Thr Arg Asp Pro 625 630 635 640 Leu Ser Glu Ile Thr Glu Gln Glu Lys Asp Phe Leu Trp Ser His Arg 645 650 655 His Tyr Cys Val Thr Ile Pro Glu Ile Leu Pro Lys Leu Leu Leu Ser 660 665 670 Val Lys Trp Asn Ser Arg Asp Glu Val Ala Gln Met Tyr Cys Leu Val 675 680 685 Lys Asp Trp Pro Pro Ile Lys Pro Glu Gln Ala Met Glu Leu Leu Asp 690 695 700 Cys Asn Tyr Pro Asp Pro Met Val Arg Gly Phe Ala Val Arg Cys Leu 705 710 715 720 Glu Lys Tyr Leu Thr Asp Asp Lys Leu Ser Gln Tyr Leu Ile Gln Leu 725 730 735 Val Gln Val Leu Lys Tyr Glu Gln Tyr Leu Asp Asn Leu Leu Val Arg 740 745 750 Phe Leu Leu Lys Lys Ala Leu Thr Asn Gln Arg Ile Gly His Phe Phe 755 760 765 Phe Trp His Leu Lys Ser Glu Met His Asn Lys Thr Val Ser Gln Arg 770 775 780 Phe Gly Leu Leu Leu Glu Ser Tyr Cys Arg Ala Cys Gly Met Tyr Leu 785 790 795 800 Lys His Leu Asn Arg Gln Val Glu Ala Met Glu Lys Leu Ile Asn Leu 805 810 815 Thr Asp Ile Leu Lys Gln Glu Lys Lys Asp Glu Thr Gln Lys Val Gln 820 825 830 Met Lys Phe Leu Val Glu Gln Met Arg Arg Pro Asp Phe Met Asp Ala 835 840 845 Leu Gln Gly Phe Leu Ser Pro Leu Asn Pro Ala His Gln Leu Gly Asn 850 855 860 Leu Arg Leu Glu Glu Cys Arg Ile Met Ser Ser Ala Lys Arg Pro Leu 865 870 875 880 Trp Leu Asn Trp Glu Asn Pro Asp Ile Met Ser Glu Leu Leu Phe Gln 885 890 895 Asn Asn Glu Ile Ile Phe Lys Asn Gly Asp Asp Leu Arg Gln Asp Met 900 905 910 Leu Thr Leu Gln Ile Ile Arg Ile Met Glu Asn Ile Trp Gln Asn Gln 915 920 925 Gly Leu Asp Leu Arg Met Leu Pro Tyr Gly Cys Leu Ser Ile Gly Asp 930 935 940 Cys Val Gly Leu Ile Glu Val Val Arg Asn Ser His Thr Ile Met Gln 945 950 955 960 Ile Gln Cys Lys Gly Gly Leu Lys Gly Ala Leu Gln Phe Asn Ser His 965 970 975 Thr Leu His Gln Trp Leu Lys Asp Lys Asn Lys Gly Glu Ile Tyr Asp 980 985 990 Ala Ala Ile Asp Leu Phe Thr Arg Ser Cys Ala Gly Tyr Cys Val Ala 995 1000 1005 Thr Phe Ile Leu Gly Ile Gly Asp Arg His Asn Ser Asn Ile Met 1010 1015 1020 Val Lys Asp Asp Gly Gln Leu Phe His Ile Asp Phe Gly His Phe 1025 1030 1035 Leu Asp His Lys Lys Lys Lys Phe Gly Tyr Lys Arg Glu Arg Val 1040 1045 1050 Pro Phe Val Leu Thr Gln Asp Phe Leu Ile Val Ile Ser Lys Gly 1055 1060 1065 Ala Gln Glu Cys Thr Lys Thr Arg Glu Phe Glu Arg Phe Gln Glu 1070 1075 1080 Met Cys Tyr Lys Ala Tyr Leu Ala Ile Arg Gln His Ala Asn Leu 1085 1090 1095 Phe Ile Asn Leu Phe Ser Met Met Leu Gly Ser Gly Met Pro Glu 1100 1105 1110 Leu Gln Ser Phe Asp Asp Ile Ala Tyr Ile Arg Lys Thr Leu Ala 1115 1120 1125 Leu Asp Lys Thr Glu Gln Glu Ala Leu Glu Tyr Phe Met Lys Gln 1130 1135 1140 Met Asn Asp Ala His His Gly Gly Trp Thr Thr Lys Met Asp Trp 1145 1150 1155 Ile Phe His Thr Ile Lys Gln His Ala Leu Asn Glu Leu Gly Gly 1160 1165 1170 Ala His His His His His His 1175 1180 <210> 5 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 5 cgagaatatg atagattata tgaagaat 28 <210> 6 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 6 tggtttaatg ctgttcatac gtttgtcaat 30 <210> 7 <211> 76 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 7 gggacaagtt tgtacaaaaa agcaggctac gaaggagata tacatatgcg agaatatgat 60 agattatatg aagaat 76 <210> 8 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 8 actgaagcat cctcctcctc ctcctcctgg tttaatgctg ttcatacgtt tgtc 54 <210> 9 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 9 attaaaccag gaggaggagg aggaggatgc ttcagtttca taatgcctcc tgct 54 <210> 10 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 10 agctccgtga tggtgatggt gatgtgctcc agatctgtag tctttccgaa ctgtgtg 57 <210> 11 <211> 61 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 11 gggaccactt tgtacaagaa agctgggttt aagctccgtg atggtgatgg tgatgtgctc 60 c 61 <210> 12 <211> 1194 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> PI3K kinase construct <400> 12 Met Arg Glu Tyr Asp Arg Leu Tyr Glu Glu Tyr Thr Arg Thr Ser Gln 1 5 10 15 Glu Ile Gln Met Lys Arg Thr Ala Ile Glu Ala Phe Asn Glu Thr Ile 20 25 30 Lys Ile Phe Glu Glu Gln Cys Gln Thr Gln Glu Arg Tyr Ser Lys Glu 35 40 45 Tyr Ile Glu Lys Phe Lys Arg Glu Gly Lys Glu Lys Glu Ile Gln Arg 50 55 60 Ile Met His Asn Tyr Asp Lys Leu Lys Ser Arg Ile Ser Glu Ile Ile 65 70 75 80 Asp Ser Arg Arg Arg Leu Glu Glu Asp Leu Lys Lys Gln Ala Ala Glu 85 90 95 Tyr Arg Glu Ile Asp Lys Arg Met Asn Ser Ile Lys Pro Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Cys Phe Ser Phe Ile Met Pro Pro Ala Met Ala Asp Ile 115 120 125 Leu Asp Ile Trp Ala Val Asp Ser Gln Ile Ala Ser Asp Gly Ser Ile 130 135 140 Pro Val Asp Phe Leu Leu Pro Thr Gly Ile Tyr Ile Gln Leu Glu Val 145 150 155 160 Pro Arg Glu Ala Thr Ile Ser Tyr Ile Lys Gln Met Leu Trp Lys Gln 165 170 175 Val His Asn Tyr Pro Met Phe Asn Leu Leu Met Asp Ile Asp Ser Tyr 180 185 190 Met Phe Ala Cys Val Asn Gln Thr Ala Val Tyr Glu Glu Leu Glu Asp 195 200 205 Glu Thr Arg Arg Leu Cys Asp Val Arg Pro Phe Leu Pro Val Leu Lys 210 215 220 Leu Val Thr Arg Ser Cys Asp Pro Gly Glu Lys Leu Asp Ser Lys Ile 225 230 235 240 Gly Val Leu Ile Gly Lys Gly Leu His Glu Phe Asp Ser Leu Lys Asp 245 250 255 Pro Glu Val Asn Glu Phe Arg Arg Lys Met Arg Lys Phe Ser Glu Glu 260 265 270 Lys Ile Leu Ser Leu Val Gly Leu Ser Trp Met Asp Trp Leu Lys Gln 275 280 285 Thr Tyr Pro Pro Glu His Glu Pro Ser Ile Pro Glu Asn Leu Glu Asp 290 295 300 Lys Leu Tyr Gly Gly Lys Leu Ile Val Ala Val His Phe Glu Asn Cys 305 310 315 320 Gln Asp Val Phe Ser Phe Gln Val Ser Pro Asn Met Asn Pro Ile Lys 325 330 335 Val Asn Glu Leu Ala Ile Gln Lys Arg Leu Thr Ile His Gly Lys Glu 340 345 350 Asp Glu Val Ser Pro Tyr Asp Tyr Val Leu Gln Val Ser Gly Arg Val 355 360 365 Glu Tyr Val Phe Gly Asp His Pro Leu Ile Gln Phe Gln Tyr Ile Arg 370 375 380 Asn Cys Val Met Asn Arg Ala Leu Pro His Phe Ile Leu Val Glu Cys 385 390 395 400 Cys Lys Ile Lys Lys Met Tyr Glu Gln Glu Met Ile Ala Ile Glu Ala 405 410 415 Ala Ile Asn Arg Asn Ser Ser Asn Leu Pro Leu Pro Leu Pro Pro Lys 420 425 430 Lys Thr Arg Ile Ile Ser His Val Trp Glu Asn Asn Asn Pro Phe Gln 435 440 445 Ile Val Leu Val Lys Gly Asn Lys Leu Asn Thr Glu Glu Thr Val Lys 450 455 460 Val His Val Arg Ala Gly Leu Phe His Gly Thr Glu Leu Leu Cys Lys 465 470 475 480 Thr Ile Val Ser Ser Glu Val Ser Gly Lys Asn Asp His Ile Trp Asn 485 490 495 Glu Pro Leu Glu Phe Asp Ile Asn Ile Cys Asp Leu Pro Arg Met Ala 500 505 510 Arg Leu Cys Phe Ala Val Tyr Ala Val Leu Asp Lys Val Lys Thr Lys 515 520 525 Lys Ser Thr Lys Thr Ile Asn Pro Ser Lys Tyr Gln Thr Ile Arg Lys 530 535 540 Ala Gly Lys Val His Tyr Pro Val Ala Trp Val Asn Thr Met Val Phe 545 550 555 560 Asp Phe Lys Gly Gln Leu Arg Thr Gly Asp Ile Ile Leu His Ser Trp 565 570 575 Ser Ser Phe Pro Asp Glu Leu Glu Glu Met Leu Asn Pro Met Gly Thr 580 585 590 Val Gln Thr Asn Pro Tyr Thr Glu Asn Ala Thr Ala Leu His Val Lys 595 600 605 Phe Pro Glu Asn Lys Lys Gln Pro Tyr Tyr Tyr Pro Pro Phe Asp Lys 610 615 620 Ile Ile Glu Lys Ala Ala Glu Ile Ala Ser Ser Asp Ser Ala Asn Val 625 630 635 640 Ser Ser Arg Gly Gly Lys Lys Phe Leu Pro Val Leu Lys Glu Ile Leu 645 650 655 Asp Arg Asp Pro Leu Ser Gln Leu Cys Glu Asn Glu Met Asp Leu Ile 660 665 670 Trp Thr Leu Arg Gln Asp Cys Arg Glu Ile Phe Pro Gln Ser Leu Pro 675 680 685 Lys Leu Leu Leu Ser Ile Lys Trp Asn Lys Leu Glu Asp Val Ala Gln 690 695 700 Leu Gln Ala Leu Leu Gln Ile Trp Pro Lys Leu Pro Pro Arg Glu Ala 705 710 715 720 Leu Glu Leu Leu Asp Phe Asn Tyr Pro Asp Gln Tyr Val Arg Glu Tyr 725 730 735 Ala Val Gly Cys Leu Arg Gln Met Ser Asp Glu Glu Leu Ser Gln Tyr 740 745 750 Leu Leu Gln Leu Val Gln Val Leu Lys Tyr Glu Pro Phe Leu Asp Cys 755 760 765 Ala Leu Ser Arg Phe Leu Leu Glu Arg Ala Leu Gly Asn Arg Arg Ile 770 775 780 Gly Gln Phe Leu Phe Trp His Leu Arg Ser Glu Val His Ile Pro Ala 785 790 795 800 Val Ser Val Gln Phe Gly Val Ile Leu Glu Ala Tyr Cys Arg Gly Ser 805 810 815 Val Gly His Met Lys Val Leu Ser Lys Gln Val Glu Ala Leu Asn Lys 820 825 830 Leu Lys Thr Leu Asn Ser Leu Ile Lys Leu Asn Ala Val Lys Leu Asn 835 840 845 Arg Ala Lys Gly Lys Glu Ala Met His Thr Cys Leu Lys Gln Ser Ala 850 855 860 Tyr Arg Glu Ala Leu Ser Asp Leu Gln Ser Pro Leu Asn Pro Cys Val 865 870 875 880 Ile Leu Ser Glu Leu Tyr Val Glu Lys Cys Lys Tyr Met Asp Ser Lys 885 890 895 Met Lys Pro Leu Trp Leu Val Tyr Asn Asn Lys Val Phe Gly Glu Asp 900 905 910 Ser Val Gly Val Ile Phe Lys Asn Gly Asp Asp Leu Arg Gln Asp Met 915 920 925 Leu Thr Leu Gln Met Leu Arg Leu Met Asp Leu Leu Trp Lys Glu Ala 930 935 940 Gly Leu Asp Leu Arg Met Leu Pro Tyr Gly Cys Leu Ala Thr Gly Asp 945 950 955 960 Arg Ser Gly Leu Ile Glu Val Val Ser Thr Ser Glu Thr Ile Ala Asp 965 970 975 Ile Gln Leu Asn Ser Ser Asn Val Ala Ala Ala Ala Ala Phe Asn Lys 980 985 990 Asp Ala Leu Leu Asn Trp Leu Lys Glu Tyr Asn Ser Gly Asp Asp Leu 995 1000 1005 Asp Arg Ala Ile Glu Glu Phe Thr Leu Ser Cys Ala Gly Tyr Cys 1010 1015 1020 Val Ala Ser Tyr Val Leu Gly Ile Gly Asp Arg His Ser Asp Asn 1025 1030 1035 Ile Met Val Lys Lys Thr Gly Gln Leu Phe His Ile Asp Phe Gly 1040 1045 1050 His Ile Leu Gly Asn Phe Lys Ser Lys Phe Gly Ile Lys Arg Glu 1055 1060 1065 Arg Val Pro Phe Ile Leu Thr Tyr Asp Phe Ile His Val Ile Gln 1070 1075 1080 Gln Gly Lys Thr Gly Asn Thr Glu Lys Phe Gly Arg Phe Arg Gln 1085 1090 1095 Cys Cys Glu Asp Ala Tyr Leu Ile Leu Arg Arg His Gly Asn Leu 1100 1105 1110 Phe Ile Thr Leu Phe Ala Leu Met Leu Thr Ala Gly Leu Pro Glu 1115 1120 1125 Leu Thr Ser Val Lys Asp Ile Gln Tyr Leu Lys Asp Ser Leu Ala 1130 1135 1140 Leu Gly Lys Ser Glu Glu Glu Ala Leu Lys Gln Phe Lys Gln Lys 1145 1150 1155 Phe Asp Glu Ala Leu Arg Glu Ser Trp Thr Thr Lys Val Asn Trp 1160 1165 1170 Met Ala His Thr Val Arg Lys Asp Tyr Arg Ser Gly Ala His His 1175 1180 1185 His His His His Gly Ala 1190 <210> 13 <211> 966 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> PI3K kinase construct <400> 13 Met Ser Glu Glu Ser Gln Ala Phe Gln Arg Gln Leu Thr Ala Leu Ile 1 5 10 15 Gly Tyr Asp Val Thr Asp Val Ser Asn Val His Asp Asp Glu Leu Glu 20 25 30 Phe Thr Arg Arg Gly Leu Val Thr Pro Arg Met Ala Glu Val Ala Ser 35 40 45 Arg Asp Pro Lys Leu Tyr Ala Met His Pro Trp Val Thr Ser Lys Pro 50 55 60 Leu Pro Glu Tyr Leu Trp Lys Lys Ile Ala Asn Asn Cys Ile Phe Ile 65 70 75 80 Val Ile His Arg Ser Thr Thr Ser Gln Thr Ile Lys Val Ser Pro Asp 85 90 95 Asp Thr Pro Gly Ala Ile Leu Gln Ser Phe Phe Thr Lys Met Ala Lys 100 105 110 Lys Lys Ser Leu Met Asp Ile Pro Glu Ser Gln Ser Glu Gln Asp Phe 115 120 125 Val Leu Arg Val Cys Gly Arg Asp Glu Tyr Leu Val Gly Glu Thr Pro 130 135 140 Ile Lys Asn Phe Gln Trp Val Arg His Cys Leu Lys Asn Gly Glu Glu 145 150 155 160 Ile His Val Val Leu Asp Thr Pro Pro Asp Pro Ala Leu Asp Glu Val 165 170 175 Arg Lys Glu Glu Trp Pro Leu Val Asp Asp Cys Thr Gly Val Thr Gly 180 185 190 Tyr His Glu Gln Leu Thr Ile His Gly Lys Asp His Glu Ser Val Phe 195 200 205 Thr Val Ser Leu Trp Asp Cys Asp Arg Lys Phe Arg Val Lys Ile Arg 210 215 220 Gly Ile Asp Ile Pro Val Leu Pro Arg Asn Thr Asp Leu Thr Val Phe 225 230 235 240 Val Glu Ala Asn Ile Gln His Gly Gln Gln Val Leu Cys Gln Arg Arg 245 250 255 Thr Ser Pro Lys Pro Phe Thr Glu Glu Val Leu Trp Asn Val Trp Leu 260 265 270 Glu Phe Ser Ile Lys Ile Lys Asp Leu Pro Lys Gly Ala Leu Leu Asn 275 280 285 Leu Gln Ile Tyr Cys Gly Lys Ala Pro Ala Leu Ser Ser Lys Ala Ser 290 295 300 Ala Glu Ser Pro Ser Ser Glu Ser Lys Gly Lys Val Arg Leu Leu Tyr 305 310 315 320 Tyr Val Asn Leu Leu Leu Ile Asp His Arg Phe Leu Leu Arg Arg Gly 325 330 335 Glu Tyr Val Leu His Met Trp Gln Ile Ser Gly Lys Gly Glu Asp Gln 340 345 350 Gly Ser Phe Asn Ala Asp Lys Leu Thr Ser Ala Thr Asn Pro Asp Lys 355 360 365 Glu Asn Ser Met Ser Ile Ser Ile Leu Leu Asp Asn Tyr Cys His Pro 370 375 380 Ile Ala Leu Pro Lys His Gln Pro Thr Pro Asp Pro Glu Gly Asp Arg 385 390 395 400 Val Arg Ala Glu Met Pro Asn Gln Leu Arg Lys Gln Leu Glu Ala Ile 405 410 415 Ile Ala Thr Asp Pro Leu Asn Pro Leu Thr Ala Glu Asp Lys Glu Leu 420 425 430 Leu Trp His Phe Arg Tyr Glu Ser Leu Lys His Pro Lys Ala Tyr Pro 435 440 445 Lys Leu Phe Ser Ser Val Lys Trp Gly Gln Gln Glu Ile Val Ala Lys 450 455 460 Thr Tyr Gln Leu Leu Ala Arg Arg Glu Val Trp Asp Gln Ser Ala Leu 465 470 475 480 Asp Val Gly Leu Thr Met Gln Leu Leu Asp Cys Asn Phe Ser Asp Glu 485 490 495 Asn Val Arg Ala Ile Ala Val Gln Lys Leu Glu Ser Leu Glu Asp Asp 500 505 510 Asp Val Leu His Tyr Leu Leu Gln Leu Val Gln Ala Val Lys Phe Glu 515 520 525 Pro Tyr His Asp Ser Ala Leu Ala Arg Phe Leu Leu Lys Arg Gly Leu 530 535 540 Arg Asn Lys Arg Ile Gly His Phe Leu Phe Trp Phe Leu Arg Ser Glu 545 550 555 560 Ile Ala Gln Ser Arg His Tyr Gln Gln Arg Phe Ala Val Ile Leu Glu 565 570 575 Ala Tyr Leu Arg Gly Cys Gly Thr Ala Met Leu His Asp Phe Thr Gln 580 585 590 Gln Val Gln Val Ile Glu Met Leu Gln Lys Val Thr Leu Asp Ile Lys 595 600 605 Ser Leu Ser Ala Glu Lys Tyr Asp Val Ser Ser Gln Val Ile Ser Gln 610 615 620 Leu Lys Gln Lys Leu Glu Asn Leu Gln Asn Ser Gln Leu Pro Glu Ser 625 630 635 640 Phe Arg Val Pro Tyr Asp Pro Gly Leu Lys Ala Gly Ala Leu Ala Ile 645 650 655 Glu Lys Cys Lys Val Met Ala Ser Lys Lys Lys Pro Leu Trp Leu Glu 660 665 670 Phe Lys Cys Ala Asp Pro Thr Ala Leu Ser Asn Glu Thr Ile Gly Ile 675 680 685 Ile Phe Lys His Gly Asp Asp Leu Arg Gln Asp Met Leu Ile Leu Gln 690 695 700 Ile Leu Arg Ile Met Glu Ser Ile Trp Glu Thr Glu Ser Leu Asp Leu 705 710 715 720 Cys Leu Leu Pro Tyr Gly Cys Ile Ser Thr Gly Asp Lys Ile Gly Met 725 730 735 Ile Glu Ile Val Lys Asp Ala Thr Thr Ile Ala Lys Ile Gln Gln Ser 740 745 750 Thr Val Gly Asn Thr Gly Ala Phe Lys Asp Glu Val Leu Asn His Trp 755 760 765 Leu Lys Glu Lys Ser Pro Thr Glu Glu Lys Phe Gln Ala Ala Val Glu 770 775 780 Arg Phe Val Tyr Ser Cys Ala Gly Tyr Cys Val Ala Thr Phe Val Leu 785 790 795 800 Gly Ile Gly Asp Arg His Asn Asp Asn Ile Met Ile Thr Glu Thr Gly 805 810 815 Asn Leu Phe His Ile Asp Phe Gly His Ile Leu Gly Asn Tyr Lys Ser 820 825 830 Phe Leu Gly Ile Asn Lys Glu Arg Val Pro Phe Val Leu Thr Pro Asp 835 840 845 Phe Leu Phe Val Met Gly Thr Ser Gly Lys Lys Thr Ser Pro His Phe 850 855 860 Gln Lys Phe Gln Asp Ile Cys Val Lys Ala Tyr Leu Ala Leu Arg His 865 870 875 880 His Thr Asn Leu Leu Ile Ile Leu Phe Ser Met Met Leu Met Thr Gly 885 890 895 Met Pro Gln Leu Thr Ser Lys Glu Asp Ile Glu Tyr Ile Arg Asp Ala 900 905 910 Leu Thr Val Gly Lys Asn Glu Glu Asp Ala Lys Lys Tyr Phe Leu Asp 915 920 925 Gln Ile Glu Val Cys Arg Asp Lys Gly Trp Thr Val Gln Phe Asn Trp 930 935 940 Phe Leu His Leu Val Leu Gly Ile Lys Gln Gly Glu Lys His Ser Ala 945 950 955 960 His His His His His His 965 <210> 14 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 14 tcctcctcct cctcctcctg gtttaatgct gttcatacgt ttgtc 45 <210> 15 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 15 atgccccctg gggtggactg ccccat 26 <210> 16 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 16 ctactgcctg ttgtctttgg acacgt 26 <210> 17 <211> 53 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 17 attaaaccag gaggaggagg aggaggaccc cctggggtgg actgccccat gga 53 <210> 18 <211> 56 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 18 agctccgtga tggtgatggt gatgtgctcc ctgcctgttg tctttggaca cgttgt 56 <210> 19 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> PCR primer <400> 19 gggaccactt tgtacaagaa agctgggttt aagctccgtg atggtgatgg tgagtgctcc 60 <210> 20 <211> 1169 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> PI3K kinase construct <400> 20 Met Arg Glu Tyr Asp Arg Leu Tyr Glu Glu Tyr Thr Arg Thr Ser Gln 1 5 10 15 Glu Ile Gln Met Lys Arg Thr Ala Ile Glu Ala Phe Asn Glu Thr Ile 20 25 30 Lys Ile Phe Glu Glu Gln Cys Gln Thr Gln Glu Arg Tyr Ser Lys Glu 35 40 45 Tyr Ile Glu Lys Phe Lys Arg Glu Gly Asn Glu Lys Glu Ile Gln Arg 50 55 60 Ile Met His Asn Tyr Asp Lys Leu Lys Ser Arg Ile Ser Glu Ile Ile 65 70 75 80 Asp Ser Arg Arg Arg Leu Glu Glu Asp Leu Lys Lys Gln Ala Ala Glu 85 90 95 Tyr Arg Glu Ile Asp Lys Arg Met Asn Ser Ile Lys Pro Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Pro Pro Gly Val Asp Cys Pro Met Glu Phe Trp Thr Lys 115 120 125 Glu Glu Asn Gln Ser Val Val Val Asp Phe Leu Leu Pro Thr Gly Val 130 135 140 Tyr Leu Asn Phe Pro Val Ser Arg Asn Ala Asn Leu Ser Thr Ile Lys 145 150 155 160 Gln Leu Leu Trp His Arg Ala Gln Tyr Glu Pro Leu Phe His Met Leu 165 170 175 Ser Gly Pro Glu Ala Tyr Val Phe Thr Cys Ile Asn Gln Thr Ala Glu 180 185 190 Gln Gln Glu Leu Glu Asp Glu Gln Arg Arg Leu Cys Asp Val Gln Pro 195 200 205 Phe Leu Pro Val Leu Arg Leu Val Ala Arg Glu Gly Asp Arg Val Lys 210 215 220 Lys Leu Ile Asn Ser Gln Ile Ser Leu Leu Ile Gly Lys Gly Leu His 225 230 235 240 Glu Phe Asp Ser Leu Cys Asp Pro Glu Val Asn Asp Phe Arg Ala Lys 245 250 255 Met Cys Gln Phe Cys Glu Glu Ala Ala Ala Arg Arg Gln Gln Leu Gly 260 265 270 Trp Glu Ala Trp Leu Gln Tyr Ser Phe Pro Leu Gln Leu Glu Pro Ser 275 280 285 Ala Gln Thr Trp Gly Pro Gly Thr Leu Arg Leu Pro Asn Arg Ala Leu 290 295 300 Leu Val Asn Val Lys Phe Glu Gly Ser Glu Glu Ser Phe Thr Phe Gln 305 310 315 320 Val Ser Thr Lys Asp Val Pro Leu Ala Leu Met Ala Cys Ala Leu Arg 325 330 335 Lys Lys Ala Thr Val Phe Arg Gln Pro Leu Val Glu Gln Pro Glu Asp 340 345 350 Tyr Thr Leu Gln Val Asn Gly Arg His Glu Tyr Leu Tyr Gly Ser Tyr 355 360 365 Pro Leu Cys Gln Phe Gln Tyr Ile Cys Ser Cys Leu His Ser Gly Leu 370 375 380 Thr Pro His Leu Thr Met Val His Ser Ser Ser Ile Leu Ala Met Arg 385 390 395 400 Asp Glu Gln Ser Asn Pro Ala Pro Gln Val Gln Lys Pro Arg Ala Lys 405 410 415 Pro Pro Pro Ile Pro Ala Lys Lys Pro Ser Ser Val Ser Leu Trp Ser 420 425 430 Leu Glu Gln Pro Phe Arg Ile Glu Leu Ile Gln Gly Ser Lys Val Asn 435 440 445 Ala Asp Glu Arg Met Lys Leu Val Val Gln Ala Gly Leu Phe His Gly 450 455 460 Asn Glu Met Leu Cys Lys Thr Val Ser Ser Ser Glu Val Ser Val Cys 465 470 475 480 Ser Glu Pro Val Trp Lys Gln Arg Leu Glu Phe Asp Ile Asn Ile Cys 485 490 495 Asp Leu Pro Arg Met Ala Arg Leu Cys Phe Ala Leu Tyr Ala Val Ile 500 505 510 Glu Lys Ala Lys Lys Ala Arg Ser Thr Lys Lys Lys Ser Lys Lys Ala 515 520 525 Asp Cys Pro Ile Ala Trp Ala Asn Leu Met Leu Phe Asp Tyr Lys Asp 530 535 540 Gln Leu Lys Thr Gly Glu Arg Cys Leu Tyr Met Trp Pro Ser Val Pro 545 550 555 560 Asp Glu Lys Gly Glu Leu Leu Asn Pro Thr Gly Thr Val Arg Ser Asn 565 570 575 Pro Asn Thr Asp Ser Ala Ala Ala Leu Leu Ile Cys Leu Pro Glu Val 580 585 590 Ala Pro His Pro Val Tyr Tyr Pro Ala Leu Glu Lys Ile Leu Glu Leu 595 600 605 Gly Arg His Ser Glu Cys Val His Val Thr Glu Glu Glu Gln Leu Gln 610 615 620 Leu Arg Glu Ile Leu Glu Arg Arg Gly Ser Gly Glu Leu Tyr Glu His 625 630 635 640 Glu Lys Asp Leu Val Trp Lys Leu Arg His Glu Val Gln Glu His Phe 645 650 655 Pro Glu Ala Leu Ala Arg Leu Leu Leu Val Thr Lys Trp Asn Lys His 660 665 670 Glu Asp Val Ala Gln Met Leu Tyr Leu Leu Cys Ser Trp Pro Glu Leu 675 680 685 Pro Val Leu Ser Ala Leu Glu Leu Leu Asp Phe Ser Phe Pro Asp Cys 690 695 700 His Val Gly Ser Phe Ala Ile Lys Ser Leu Arg Lys Leu Thr Asp Asp 705 710 715 720 Glu Leu Phe Gln Tyr Leu Leu Gln Leu Val Gln Val Leu Lys Tyr Glu 725 730 735 Ser Tyr Leu Asp Cys Glu Leu Thr Lys Phe Leu Leu Asp Arg Ala Leu 740 745 750 Ala Asn Arg Lys Ile Gly His Phe Leu Phe Trp His Leu Arg Ser Glu 755 760 765 Met His Val Pro Ser Val Ala Leu Arg Phe Gly Leu Ile Leu Glu Ala 770 775 780 Tyr Cys Arg Gly Ser Thr His His Met Lys Val Leu Met Lys Gln Gly 785 790 795 800 Glu Ala Leu Ser Lys Leu Lys Ala Leu Asn Asp Phe Val Lys Leu Ser 805 810 815 Ser Gln Lys Thr Pro Lys Pro Gln Thr Lys Glu Leu Met His Leu Cys 820 825 830 Met Arg Gln Glu Ala Tyr Leu Glu Ala Leu Ser His Leu Gln Ser Pro 835 840 845 Leu Asp Pro Ser Thr Leu Leu Ala Glu Val Cys Val Glu Gln Cys Thr 850 855 860 Phe Met Asp Ser Lys Met Lys Pro Leu Trp Ile Met Tyr Ser Asn Glu 865 870 875 880 Glu Ala Gly Ser Gly Gly Ser Val Gly Ile Ile Phe Lys Asn Gly Asp 885 890 895 Asp Leu Arg Gln Asp Met Leu Thr Leu Gln Met Ile Gln Leu Met Asp 900 905 910 Val Leu Trp Lys Gln Glu Gly Leu Asp Leu Arg Met Thr Pro Tyr Gly 915 920 925 Cys Leu Pro Thr Gly Asp Arg Thr Gly Leu Ile Glu Val Val Leu Arg 930 935 940 Ser Asp Thr Ile Ala Asn Ile Gln Leu Asn Lys Ser Asn Met Ala Ala 945 950 955 960 Thr Ala Ala Phe Asn Lys Asp Ala Leu Leu Asn Trp Leu Lys Ser Lys 965 970 975 Asn Pro Gly Glu Ala Leu Asp Arg Ala Ile Glu Glu Phe Thr Leu Ser 980 985 990 Cys Ala Gly Tyr Cys Val Ala Thr Tyr Val Leu Gly Ile Gly Asp Arg 995 1000 1005 His Ser Asp Asn Ile Met Ile Arg Glu Ser Gly Gln Leu Phe His 1010 1015 1020 Ile Asp Phe Gly His Phe Leu Gly Asn Phe Lys Thr Lys Phe Gly 1025 1030 1035 Ile Asn Arg Glu Arg Val Pro Phe Ile Leu Thr Tyr Asp Phe Val 1040 1045 1050 His Val Ile Gln Gln Gly Lys Thr Asn Asn Ser Glu Lys Phe Glu 1055 1060 1065 Arg Phe Arg Gly Tyr Cys Glu Arg Ala Tyr Thr Ile Leu Arg Arg 1070 1075 1080 His Gly Leu Leu Phe Leu His Leu Phe Ala Leu Met Arg Ala Ala 1085 1090 1095 Gly Leu Pro Glu Leu Ser Cys Ser Lys Asp Ile Gln Tyr Leu Lys 1100 1105 1110 Asp Ser Leu Ala Leu Gly Lys Thr Glu Glu Glu Ala Leu Lys His 1115 1120 1125 Phe Arg Val Lys Phe Asn Glu Ala Leu Arg Glu Ser Trp Lys Thr 1130 1135 1140 Lys Val Asn Trp Leu Ala His Asn Val Ser Lys Asp Asn Arg Gln 1145 1150 1155 Glu Leu Gly Gly Ala His His His His His His 1160 1165

Claims (16)

1. 화합물 (1R,2S,5S)-3-아자-비시클로[3.1.0]헥산-2,3-디카르복실산 2-아미드 3-{[5-(2-tert-부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}를 제외한 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염.
   <화학식 I>
   

   

   
   [상기 화학식에서,
   m은 0 또는 1이고;
   n은 0 또는 1이고;
   R¹은 H, 할로겐, 비치환된 C₁-C₄-알킬 또는 치환된 C₁-C₄-알킬이고;
   R²는 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알킬, 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알콕시, 비치환된 또는 치환된 아미노, 할로겐 또는 히드록시로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
   R³은 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알킬, 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알콕시, 비치환된 또는 치환된 아미노, 할로겐 또는 히드록시로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
   R⁴는 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알킬, 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알콕시, 할로겐 또는 히드록시로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되거나; 또는
   R³ 및 R⁴는 이들이 부착되어 있는 동일 또는 상이한 탄소 원자와 함께, C₃-C₈-시클로알킬 또는 헤테로시클릴을 형성하고;
   R⁵는 비치환된 또는 치환된 헤테로아릴임]
2. 제1항에 있어서, R²가 C₁-C₄-알킬, C₁-C₄-알콕시, 디-C₁-C₄-알킬-아미노, 할로겐 또는 히드록시, 또는 그의 염을 나타내는 것인 화합물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R³이 C₁-C₄-알킬, C₁-C₄-알콕시, 디-C₁-C₄-알킬-아미노, 할로겐 또는 히드록시, 또는 그의 염을 나타내는 것인 화합물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   R⁴가 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알킬, 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알콕시, 할로겐 또는 히드록시로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되거나; 또는
   R³ 및 R⁴가 이들이 부착되어 있는 동일한 탄소 원자와 함께, C₃-C₈-시클로알킬을 형성하거나; 또는
   R³ 및 R⁴가 이들이 부착되어 있는 동일 또는 상이한 탄소 원자와 함께, 헤테로시클릴을 형성하는 것인 화합물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
   R⁴가 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알킬, 비치환된 또는 치환된 C₁-C₈-알콕시, 할로겐 또는 히드록시로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되거나; 또는
   R³ 및 R⁴가 이들이 부착되어 있는 동일한 탄소 원자와 함께, C₃-C₈-시클로알킬 또는 헤테로시클릴을 형성하는 것인 화합물.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
   R⁵가 할로겐, 히드록시, 시아노, 니트로, C₁-C₇-알킬, 퍼-듀테로 (per-deutero) C₁-C₇-알킬, C₃-C₁₂-시클로알킬, (C₁-C₇-알킬)-C₃-C₁₂-시클로알킬, (할로-C₁-C₇-알킬)-C₃-C₁₂-시클로알킬, 아미노-C₁-C₇-알킬, 할로-C₁-C₇-알킬, N-C₁-C₇-알카노일아미노-C₁-C₇-알킬, N-C₁-C₇-알칸술포닐-아미노-C₁-C₇-알킬, 피롤리디노-C₁-C₇-알킬, 옥소-피롤리디노-C₁-C₇-알킬, C₁-C₇-알칸술피닐, C₁-C₇-알칸술포닐, C₁-C₇-알콕시, 아미노, N-모노- 또는 N,N-디-(C₁-C₇-알킬)-아미노, N-모노- 또는 N,N-디-(퍼-듀테로 C₁-C₇-알킬)-아미노, N-모노- 또는 N,N-디-(C₁-C₇-시클로알킬)-아미노 C₁-C₇-알카노일아미노, 피롤리디노, 옥소-피롤리디노, 피페리디노, 피페라진-1-일, 4-(C₁-C₇-알킬, C₁-C₇-알콕시-C₁-C₇-알킬, 할로-C₁-C₇-알킬 또는 C₃-C₁₀-시클로알킬)-피페라진-1-일, 4-(아미노-C₁-C₇-알킬)-피페라진-1-일, 4-[N-모노- 또는 N,N-디-(C₁-C₇-알킬아미노)-C₁-C₇-알킬]-피페라진-1-일, 모르폴리노, 티오모르폴리노, S-옥소- 또는 S,S-디옥소티오모르폴리노, C₁-C₇-알칸술포닐아미노, 카르바모일, N-모노- 또는 N,N-디-(C₁-C₇-알킬, C₁-C₇-알콕시-C₁-C₇-알킬, 아미노-C₁-C₇-알킬 및/또는 (N'-모노- 또는 N',N'-디-(C₁-C₇-알킬)-아미노-C₁-C₇-알킬)-카르바모일, 피롤리딘-1-카르보닐, 피페리딘-1-카르보닐, 피페라진-1-카르보닐, 4-(C₁-C₇-알킬)피페라진-1-카르보닐, 모르폴린-1-카르보닐, 티오모르폴린-1-카르보닐, S-옥소- 또는 S,S-디옥소티오모르폴린-1-카르보닐, 술포, C₁-C₇-알칸술포닐, C₁-C₇-알칸술피닐, 술파모일, N-모노- 또는 N,N-디-(C₁-C₇-알킬)-술파모일, 모르폴리노술포닐, 티오모르폴리노술포닐, 티아졸릴로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 잔기에 의해 치환된 헤테로아릴 또는 비치환된 헤테로아릴을 나타내는 것인 화합물.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R⁵가 C₁-C₄-알킬, 퍼-듀테로 C₁-C₄-알킬, 할로-C₁-C₄-알킬, 1-(C₁-C₄-알킬)-C₃-C₆-시클로알킬, (할로-C₁-C₄-알킬)-C₃-C₆-시클로알킬, 디-C₁-C₄-알킬아미노, 디-(퍼-듀테로 C₁-C₄-알킬)아미노로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나의 치환기에 의해 각각 독립적으로 치환된, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐 및 티아졸릴로 이루어지는 군으로부터 선택된 헤테로아릴을 나타내는 것인 화합물.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, m이 0 또는 1이고, n이 1인 화합물.
9. 제1항에 있어서,
   (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
   (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
   (rac)-3,3-디메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
   (rac)-3,3-디메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
   (2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
   (2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
   (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(1-메틸-시클로프로필)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
   (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
   (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({5-[2-(1-플루오로-1-메틸-에틸)-피리미딘-4-일]-4-메틸-티아졸-2-일}-아미드);
   (2S,3R)-3-히드록시-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[4'-메틸-2-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-[4,5']비티아졸릴-2'-일]-아미드}
   (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[4'-메틸-2-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-[4,5']비티아졸릴-2'-일]-아미드};
   (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-d₉-tert-부틸-피리미딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
   (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(6-d₁₀-디에틸아미노-피라진-2-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드};
   (2S,3R)-3-메톡시메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
   (2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드);
   (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[5-(2-tert-부틸-피리딘-4-일)-4-메틸-티아졸-2-일]-아미드}
   로부터 선택된 화합물.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의로 추가의 치료제를, 제약상 허용되는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물.
11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 지질 및/또는 단백질 키나제 의존성 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
12. 지질 및/또는 단백질 키나제 의존성 질환의 치료용 제약 조성물의 제조를 위한, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도.
13. 예방 또는 치료 유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을, 지질 및/또는 단백질 키나제의 억제에 반응하는 질환의 치료가 필요한 온혈동물에게 투여하는 것을 포함하는, 지질 및/또는 단백질 키나제의 억제에 반응하는 질환의 치료 방법.
14. 질환이 클래스 I PI3K에 의존성인 지질 키나제 의존성 질환인, 제11항에 따라 사용하기 위한 화합물, 또는 제12항에 따른 화합물의 용도, 또는 제13항에 따른 치료 방법.
15. 질환이 PI3K알파, PI3K베타, PI3K델타, PI3K감마로 이루어진 군으로부터 선택된 클래스 I PI3K에 의존성인 지질 키나제 의존성 질환인, 제11항에 따라 사용하기 위한 화합물, 또는 제12항에 따른 화합물의 용도, 또는 제13항에 따른 치료 방법.
16. 질환이 증식성 질환; 양성 또는 악성 종양; 육종, 폐암, 기관지암, 전립선암, 유방암 (산발성 유방암 및 코우덴병의 환자 포함), 췌장암, 위장암, 결장암, 직장암, 결장 암종, 결장직장 선종, 갑상선암, 간암, 간내 담관암, 간세포암, 부신암, 위(stomach)암, 위(gastric)암, 신경교종, 교아세포종, 자궁내막암, 흑색종, 신장암, 신우암, 방광암, 자궁체부암, 자궁경부암, 질암, 난소암, 다발성 골수종, 식도암, 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 림프구성 백혈병, 골수양 백혈병, 뇌암, 뇌의 암종, 구강 및 인두암, 후두암, 소장암, 비-호지킨 림프종, 흑색종, 융모성 결장 선종, 신생물, 상피 특성의 신생물, 림프종, 유방 암종, 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 광선 각화증, 고형 종양을 비롯한 종양 질환, 경부 또는 두부의 종양, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 및 골수양화생을 수반하는 골수섬유증으로부터 선택된 암인, 제11항에 따라 사용하기 위한 화합물, 또는 제12항에 따른 화합물의 용도, 또는 제13항에 따른 치료 방법.