KR20120060225A - 지질 펩티드 화합물의 제조방법 - Google Patents

지질 펩티드 화합물의 제조방법 Download PDF

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Abstract

[과제] 번잡한 조작을 필요로 하지 않으면서, 저비용으로 대량생산을 가능하게 하는 실용적인 지질 펩티드 화합물의 제조방법을 제공한다. [해결수단] 식(1)으로 표시되는 에스테르 화합물과, 식(2)으로 표시되는 α-아미노산 화합물을, 염기 존재 하에서, 비극성 유기용매를 포함하는 용매 중에서 반응시켜, 식(3)으로 표시되는 지질 펩티드 화합물 또는 그 약학적으로 사용 가능한 염을 제조한다.

Description

지질 펩티드 화합물의 제조방법{METHOD FOR MANUFACTURING A LIPIDIC PEPTIDE COMPOUND}
본 발명은, 지질 펩티드 화합물의 신규한 제조방법에 관한 것이다.
최근, 물질유지 성능이나 외부자극 응답 성능, 나아가, 환경을 고려한 생분해 성능과 같은, 각종 기능을 부여시킨 기능성 겔이 주목을 받고 있다.
예를 들어, 펩티드쇄 등의 생체내 성분(친수부)과 알킬쇄(소수부) 등의 조합으로 이루어진 펩티드 유도체는, 의약품이나 농약 등의 원료 및 중간체, 또는 양친매성을 살린 재료로서, 겔화제, 증점제 등으로의 응용이 기대되고 있으며, 예를 들면, 「2-(나프탈렌-2-일옥시)아세트산」+「글리실글리신이나 글리실세린 등」과 같은 특수한 지질부를 가지는 디펩티드 화합물로, 하이드로겔이 되는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 1).
최근, 상기 지질 펩티드 화합물로서, 팔미트산 등에 글리신이나 히스티딘이 결합된 신규 지질 펩티드가 제안되어 있다(특허문헌 1 및 2 등). 이 지질 펩티드의 제조방법으로서 고상 펩티드 합성에 따른 방법이 개시되어 있지만, 소량의 합성으로밖에 반응하지 못하므로, 대량의 제조는 어렵다.
한편, 지질 펩티드 화합물의 액상 합성에 의한 방법으로서, 1-시아노아세트산에틸과 히스티딘을 나트륨에톡시드 존재 하에서 반응시켜, N-(1-시아노아세토)-히스티딘을 얻는 반응이 보고되어 있다(비특허문헌 2).
또한, 히스티딘과 에스테르 화합물의 아미드화로서, 수중에서 효소를 이용한 방법 등도 보고되어 있다(비특허문헌 3).
단, 이들 앞선 보고예에서, 말단이 히스티딘(His)인 지질 펩티드 화합물은 물론, 말단이 아르기닌(Arg), 아스파라긴(Asn), 글루타민(Gln), 리신(Lys), 트립토판(Trp)인 지질 펩티드 화합물에 관하여, 비극성 유기용매와 알코올 용매의 혼합용매로 반응을 행하고 있는 예는 제안되어 있지 않다.
국제공개 제2009/005151호 팜플렛 국제공개 제2009/005152호 팜플렛
Z. Yang, B. Xu et al., J. Mater. Chem. 2007, 17, 850-854 Huanan Shifan Daxue Xuebao, Ziran Kexueban(2007), (2), 89-92. Yokozeki, Kenzo; Hara, Seiichi; Journal of Biotechnology(2005), 115(2), 211-220.
본 발명은, 번잡한 조작을 필요로 하지 않으면서, 저비용으로 대량생산을 가능하게 하는 실용적인 지질 펩티드 화합물의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자는, 상기 목적을 달성하기 위하여 예의 검토를 거듭한 결과, 아미노산의 아미노기와 에스테르 화합물을 아미드화시킬 때, 염기의 존재 하에서, 비극성 유기용매를 포함하는 용매 중에서 반응시킴으로써, 보호기를 이용하지 않고 직접 지질 펩티드 화합물을 얻을 수 있음을 발견하여, 본 발명을 완성시켰다.
즉, 본 발명은,
1. 식(1)
Figure pct00001
(식 중, R1은 탄소원자수 9 내지 23의 지방족기를 나타내고, R2는 수소원자, 또는 탄소원자수 1 또는 2의 분지쇄를 가질 수 있는 탄소원자수 1 내지 4의 알킬기를 나타내고, R3은, 탄소원자수 1 내지 6의 알킬기, 탄소원자수 1 내지 6의 할로알킬기, 탄소원자수 1 내지 6의 하이드록시알킬기, 또는 탄소원자수 1 내지 6의 알킬기로 치환되어 있을 수도 있는 아릴기를 나타낸다.)으로 표시되는 에스테르 화합물과, 식(2)
Figure pct00002
(식 중, R4는 -(CH2)n-X기를 나타내고, n은 1 내지 4의 수를 나타내고, X는 아미노기, 구아니디노기, -CONH2기, 또는 질소원자를 1 내지 3개 가질 수 있는 5원환 또는 6원환 또는 5원환과 6원환으로 구성되는 축합복소환을 나타낸다.)으로 표시되는 α-아미노산 화합물을, 염기의 존재 하에서, 비극성 유기용매를 포함하는 용매 중에서 반응시키는 것을 특징으로 하는, 식(3)
Figure pct00003
(식 중, R1, R2 및 R4는 앞서 정의된 바와 같다.)으로 표시되는 지질 펩티드 화합물 또는 그 약학적으로 사용 가능한 염의 제조방법에 관한 것이다.
2. 상기 용매가, 비극성 유기용매 및 알코올을 포함하는 것을 특징으로 하는, 1.에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
3. 상기 n이 1 내지 4의 수를 나타내고, 또한 X가 아미노기, 구아니디노기 또는 -CONH2기를 나타내거나, 또는 n이 1을 나타내고, 또한 X가 피롤기, 이미다졸기, 피라졸기 또는 이미다졸기를 나타내는, 1.에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
4. 상기 R1이, 불포화결합을 0 내지 2개 가질 수 있는 탄소원자수 11 내지 21의 직쇄상 지방족기를 나타내는, 1.에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
5. 상기 R2가, 수소원자, 또는 탄소원자수 1의 분지쇄를 가질 수 있는 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기를 나타내는, 1.에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
6. R2가 수소원자, 메틸기, 에틸기, n-프로필기, 이소프로필기, n-부틸기, 이소부틸기, sec-부틸기 또는 tert-부틸기를 나타내고, R4가 아미노메틸기, 아미노에틸기, 3-아미노프로필기, 4-아미노부틸기, 카바모일메틸기, 2-카바모일에틸기, 3-카바모일부틸기, 2-구아니디노에틸기, 3-구아니디노프로필기, 피롤메틸기, 이미다졸메틸기, 피라졸메틸기 또는 3-인돌메틸기를 나타내는, 1.에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
7. R2가 수소원자, 메틸기, 이소프로필기, 이소부틸기 또는 sec-부틸기를 나타내고, R4가 4-아미노부틸기, 카바모일메틸기, 2-카바모일에틸기, 3-구아니디노프로필기, 이미다졸메틸기 또는 3-인돌메틸기를 나타내는, 6.에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
8. R3이 메틸기 또는 에틸기를 나타내는, 1.에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
9. 상기 염기가, 알칼리 금속, 알칼리 금속 무기산염, 알칼리 금속 수산화물, 알칼리 금속 알콕사이드, 지환식 아민 및 그 알코올 용액, 또는 그 알코올 분산액에서 선택되는 적어도 1종인, 1. 내지 8. 중 어느 하나에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
10. 상기 염기가, 금속나트륨, 금속칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 인산칼륨, 인산나트륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 나트륨메톡사이드, 나트륨에톡시드, 칼륨메톡사이드, 칼륨에톡시드, t-부톡시칼륨, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센, 1,5-디아자비시클로[4.3.0]-5-노넨 및 그 알코올 용액, 또는 알코올 분산액에서 선택되는 적어도 1종인, 9.에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
11. 상기 염기가, 나트륨메톡사이드 및 그 메탄올 용액, 또는 메탄올 분산액인, 10.에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
12. 상기 비극성 유기용매가, 방향족 화합물, 포화 지방족 화합물 및 불포화 지방족 화합물로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 1종인, 1. 내지 11. 중 어느 하나에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
13. 상기 비극성 유기용매가, 톨루엔, 크실렌, 오르토디클로로벤젠, 펜탄, 헥산, 헵탄, 옥탄, 시클로펜탄, 시클로헥산, 메틸시클로헥산, 시클로헵탄 및 1-헥센으로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 1종인, 12.에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
14. 상기 용매가, 시클로헥산과 메탄올 또는 에탄올을 포함하는 2.에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
15. 상기 식(1)으로 표시되는 에스테르 화합물과 상기 식(2)으로 표시되는 α-아미노산 화합물과의 반응이, 60±5℃의 반응온도에서 행해지는, 1. 내지 14. 중 어느 하나에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
16. 상기 식(1)으로 표시되는 에스테르 화합물과 상기 식(2)으로 표시되는 α-아미노산 화합물과의 반응을 통해 얻은 생성물을, 할로겐화 수소를 사용하여 중화하는 공정을 포함하는, 1. 내지 15. 중 어느 하나에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
17. 상기 중화 공정이, 물 및 알코올을 포함하는 용매 중에서 행해지는, 16.에 기재된 제조방법에 관한 것이다.
18. 식(4)
Figure pct00004
(식 중, X는, 할로겐원자, 탄소원자수 1 내지 6의 알콕시기, -OC(O)R1기를 나타내고, R1은 탄소원자수 9 내지 23의 지방족기를 나타낸다.)으로 표시되는 화합물과, 식(5)
Figure pct00005
(식 중, R2는 수소원자, 또는 탄소원자수 1 또는 2의 분지쇄를 가질 수 있는 탄소원자수 1 내지 4의 알킬기를 나타내고, R3은, 탄소원자수 1 내지 6의 알킬기, 탄소원자수 1 내지 6의 할로알킬기, 탄소원자수 1 내지 6의 하이드록시알킬기, 또는 탄소원자수 1 내지 6의 알킬기로 치환되어 있을 수도 있는 아릴기를 나타낸다.)으로 표시되는 화합물을 반응시켜, 식(1)
Figure pct00006
(식 중, R1, R2 및 R3은 앞서 정의된 바와 같다.)으로 표시되는 에스테르 화합물을 얻는 공정 및
상기 식(1)으로 표시되는 에스테르 화합물과 식(2)
Figure pct00007
(식 중, R4는, 수소원자, 탄소원자수 1 내지 3의 분지쇄를 가질 수 있는 탄소원자수 1 내지 7의 알킬기, 페닐메틸기, 페닐에틸기, -(CH2)n-X기를 나타내고, n은 1 내지 4의 수를 나타내고, X는 아미노기, 구아니디노기, -CONH2기, 또는 질소원자를 1 내지 3개 가질 수 있는 5원환 또는 6원환 또는 5원환과 6원환으로 구성되는 축합복소환을 나타낸다.)으로 표시되는 α-아미노산 화합물을, 염기의 존재 하에서, 비극성 유기용매를 포함하는 용매 중에서 반응시키는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 식(3)
Figure pct00008
(식 중, R1, R2 및 R4는, 앞서 정의된 바와 같다.)으로 표시되는 지질 펩티드 화합물 또는 그 약학적으로 사용 가능한 염의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 제조방법에 의해, 원하는 지질 펩티드 화합물을 고수율로 얻을 수 있다.
또한, 본 발명의 제조방법은, 사용한 아미노산의 라세미화를 수반하지 않으며, 번잡한 보호, 탈보호 조작을 필요로 하지 않을 뿐 아니라, 축합제와 같은 고가의 시약을 사용하지 않으므로, 공업적 제조법으로서 이용할 수 있는 실용적인 제조방법이다.
나아가, 본 발명에 따르면, 대상으로 하는 지질 펩티드 화합물이 겔화능을 갖기 위하여 자유형(Free form)의 단리(單離)가 곤란한 경우에도 적용할 수 있다.
도 1은 실시예 20에서 얻은 N-팔미토일-Gly-His의 IR 스펙트럼을 나타내는 도면이다.
도 2는 비교예 2에서 얻은 N-팔미토일-Gly-His의 IR 스펙트럼을 나타내는 도면이다.
도 3은 비교예 3에서 얻은 N-팔미토일-Gly-His의 IR 스펙트럼을 나타내는 도면이다.
도 4는 비교예 4에서 얻은 N-팔미토일-Gly-His의 IR 스펙트럼을 나타내는 도면이다.
도 5는 비교예 5에서 얻은 N-팔미토일-Gly-His의 IR 스펙트럼을 나타내는 도면이다.
도 6은 비교예 6에서 얻은 N-팔미토일-Gly-His의 IR 스펙트럼을 나타내는 도면이다.
도 7은 비교예 7에서 얻은 N-팔미토일-Gly-His의 IR 스펙트럼을 나타내는 도면이다.
도 8은 비교예 8에서 얻은 N-팔미토일-Gly-His의 IR 스펙트럼을 나타내는 도면이다.
도 9는 실시예 21에서 얻은 N-팔미토일-Gly-His?자유형의 HPLC 스펙트럼(도 9(a))과, 라세미형(racemic form)의 N-팔미토일-Gly-His?자유형의 HPLC 스펙트럼(도 9(b))을 나타내는 도면이다.
상술한 바와 같이, 지질 펩티드 화합물의 제조방법으로서 각종 방법이 제안되어 있지만, 관능기의 보호, 탈보호의 번잡한 조작, 고가의 축합제 혹은 보호기의 시약을 필요로 하지 않고 대량으로 제조할 수 있는 방법이 요구되고 있었다.
또한 예를 들면, 비특허문헌 2에 제안된 방법으로는, 용매로서 이용한 고비점이고 고극성인 DMF의 반응 후의 제거가 곤란하고, 비특허문헌 2나 비특허문헌 3에 제안된 방법으로 본 발명이 목적으로 하는 지질 디펩티드 화합물을 제조하고자 하는 경우, 반응용매인 DMF나 물을 겔화시키는 등의 문제도 있었다.
상기 과제에 대하여, 본 발명자들은, 우선, 식(1)으로 표시되는 에스테르 화합물의 제조에 있어서, R3을 보호기로서 이용함으로써, 생성물의 수율이나 조작성의 향상을 도모함과 동시에, 그 결과, 형성된 -OR3 부위를, 이어지는 식(2)으로 표시되는 α-아미노산 화합물과의 아미드화에서는, 이탈(脫離)기로서 이용함으로써, 경제적으로 우수하고, 폐기물이 적고, 환경부하가 적은 제조방법이 된다는 것을 발견하였다.
나아가, 반응용매로서 비극성 용매와, 이것과는 상온에서는 혼화되지 않는 알코올을 이용하여, 가열한 조건 하에서 거의 균일하게 혼합용매가 된 상태로 반응시킨다. 반응 종료 후에 냉각하여, 비극성 용매와, 생성물인 지질 펩티드 화합물의 염(알칼리 금속염 등)을 포함하는 알코올 용액으로 분리시킴으로써, 비극성 용매의 용이한 회수, 폐기를 가능하게 하였다.
더욱이, 비극성 용매를 사용함으로써, 지금까지 지질 펩티드 화합물의 제조에 사용되었던 DMF나 물 등의 경우와 달리, 반응 종료?냉각 후에, 겔화를 방지할 수 있었다.
그리고, 반응 후의 알코올 용액의 액성(알칼리성)을, 중화에 필요한 양의 할로겐화 수소수용액을 이용함으로써, 겔화를 동반하지 않고 중화가 완료되어, 지질 펩티드 화합물의 자유형을 용이하게 회수할 수 있었다.
이상으로부터, 사용한 아미노산의 라세미화가 동시에 일어나지 않고 간편하면서 고수율로 지질 펩티드 화합물을 합성할 수 있는 것을 발견하여, 본 발명을 완성하였다.
이하, 본 발명에 대하여 더욱 상세하게 설명한다.
한편, 본 명세서에서, 「n」은 노르말을, 「i」는 이소를, 「s」 또는 「sec」는 세컨더리를, 「t」 또는 「tert」는 터셔리를, 「c」는 시클로를, 「o」는 오르토를, 「m」은 메타를, 「p」는 파라를, 「Me」는 메틸기를, 「Bu」는 부틸기를, 「tBu」는 터셔리부틸기를 의미한다.
상기 식(1)에서, R1은, 탄소원자수 9 내지 23의 지방족기를 나타내고, 바람직하게는, R1은 탄소원자수 11 내지 21의 직쇄상 지방족기 또는 불포화결합을 1 또는 2개 가지는 탄소원자수 11 내지 21의 직쇄상 지방족기인 것이 바람직하다.
여기서, 특히 바람직한 R1로 나타나는 지방족기의 구체예로는, 노닐기, 데실기, 운데실기, 도데실기(라우릴기), 트리데실기, 테트라데실기(미리스틸기), 펜타데실기, 헥사데실기(팔미틸기), 헵타데실기(마가릴기), 옥타데실기(스테아릴기), 노나데실기, 이코실기, 헨이코실기 등을 들 수 있다.
상기 식(1)에서, R2는 수소원자, 또는 탄소원자수 1 또는 2의 분지쇄를 가질 수 있는 탄소원자수 1 내지 4의 알킬기를 나타낸다.
상기 R2에서의 탄소원자수 1 또는 2의 분지쇄를 가질 수 있는 탄소원자수 1 내지 4의 알킬기란, 주쇄의 탄소원자수가 1 내지 4이고, 또한 탄소원자수 1 또는 2의 분지쇄를 가질 수 있는 알킬기를 의미하고, 그 구체예로는, 메틸기, 에틸기, n-프로필기, i-프로필기, n-부틸기, i-부틸기, sec-부틸기 또는 tert-부틸기 등을 들 수 있다.
R2는 바람직하게는, 수소원자, 또는 탄소원자수 1의 분지쇄를 가질 수 있는 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기이고, 보다 바람직하게는 수소원자이다. 탄소원자수 1의 분지쇄를 가질 수 있는 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기란, 주쇄의 탄소원자수가 1 내지 3이고, 또한 탄소원자수 1의 분지쇄를 가질 수 있는 알킬기를 의미하고, 그 구체예로는, 메틸기, 에틸기, n-프로필기, i-프로필기, i-부틸기 또는 sec-부틸기 등을 들 수 있고, 바람직하게는 메틸기, i-프로필기, i-부틸기 또는 sec-부틸기이다.
상기 식(1)에서, R3은, 탄소원자수 1 내지 6의 알킬기, 탄소원자수 1 내지 6의 할로알킬기, 탄소원자수 1 내지 6의 하이드록시알킬기, 또는 탄소원자수 1 내지 6의 알킬기로 치환되어 있을 수도 있는 아릴기를 나타낸다.
여기서, 특히 바람직한 R3로 나타나는 알킬기의 구체예로는, 메틸기, 에틸기, n-프로필기, i-프로필기, n-부틸기, i-부틸기, sec-부틸기 또는 tert-부틸기 등을 들 수 있는데, 보다 바람직하게는 메틸기 또는 에틸기이다.
상기 식(2)에서, R4은 수소원자, 탄소원자수 1 내지 3의 분지쇄를 가질 수 있는 탄소원자수 1 내지 7의 알킬기, 페닐메틸기, 페닐에틸기, -(CH2)n-X기를 나타내고, 바람직하게는 -(CH2)n-X기이다.
상기 -(CH2)n-X기에서, n은 1 내지 4의 수를 나타내고, X는 아미노기, 구아니디노기, -CONH2기, 또는 질소원자를 1 내지 3개 가질 수 있는 5원환 또는 6원환 또는 5원환과 6원환으로 구성되는 축합복소환을 나타낸다.
상기 -(CH2)n-X기에서는, X는 바람직하게는 아미노기, 구아니디노기, -CONH2기, 피롤기, 이미다졸기, 피라졸기 또는 인돌기를 나타내고, 보다 바람직하게는 이미다졸기이다. 또한, 상기 -(CH2)n-기에서, n은 바람직하게는 1 또는 2이고, 보다 바람직하게는 1이다.
따라서, 상기 -(CH2)n-기는, 바람직하게는 아미노메틸기, 2-아미노에틸기, 3-아미노프로필기, 4-아미노부틸기, 카바모일메틸기, 2-카바모일에틸기, 3-카바모일부틸기, 2-구아니디노에틸기, 3-구아니디노프로필기, 피롤메틸기, 이미다졸메틸기, 피라졸메틸기, 또는 3-인돌메틸기를 나타내고, 보다 바람직하게는 4-아미노부틸기, 카바모일메틸기, 2-카바모일에틸기, 3-구아니디노프로필기, 이미다졸메틸기 또는 3-인돌메틸기를 나타내고, 더욱 바람직하게는 이미다졸메틸기이다.
따라서, 상기 식(3)으로 표시되는 지질 펩티드 화합물에서, 특히 적합한 화합물의 구체예로는, 이하의 지질부와 디펩티드부로 형성되는 화합물을 들 수 있다. 한편, 아미노산의 약칭으로서, 히스티딘(His), 글리신(Gly), 발린(Val), 이소류신(Ile), 알라닌(Ala), 아르기닌(Arg), 아스파라긴(Asn), 글루타민(Gln), 류신(Leu), 리신(Lys), 트립토판(Trp)을 사용한다. :
N-라우로일-Gly-His, N-라우로일-Gly-Trp, N-라우로일-Gly-Gln, N-라우로일-Gly-Asn, N-라우로일-Gly-Arg, N-라우로일-Gly-Lys, N-라우로일-Ala-His, N-라우로일-Ala-Trp, N-라우로일-Ala-Gln, N-라우로일-Ala-Asn, N-라우로일-Ala-Arg, N-라우로일-Ala-Lys, N-라우로일-Val-His, N-라우로일-Val-Trp, N-라우로일-Val-Gln, N-라우로일-Val-Asn, N-라우로일-Val-Arg, N-라우로일-Val-Lys, N-라우로일-Leu-His, N-라우로일-Leu-Trp, N-라우로일-Leu-Gln, N-라우로일-Leu-Asn, N-라우로일-Leu-Arg, N-라우로일-Leu-Lys, N-라우로일-Ile-His, N-라우로일-Ile-Trp, N-라우로일-Ile-Gln, N-라우로일-Ile-Asn, N-라우로일-Ile-Arg, N-라우로일-Ile-Lys, N-미리스토일-Gly-His, N-미리스토일-Gly-Trp, N-미리스토일-Gly-Gln, N-미리스토일-Gly-Asn, N-미리스토일-Gly-Arg, N-미리스토일-Gly-Lys, N-미리스토일-Ala-His, N-미리스토일-Ala-Trp, N-미리스토일-Ala-Gln, N-미리스토일-Ala-Asn, N-미리스토일-Ala-Arg, N-미리스토일-Ala-Lys, N-미리스토일-Val-His, N-미리스토일-Val-Trp, N-미리스토일-Val-Gln, N-미리스토일-Val-Asn, N-미리스토일-Val-Arg, N-미리스토일-Val-Lys, N-미리스토일-Leu-His, N-미리스토일-Leu-Trp, N-미리스토일-Leu-Gln, N-미리스토일-Leu-Asn, N-미리스토일-Leu-Arg, N-미리스토일-Leu-Lys, N-미리스토일-Ile-His, N-미리스토일-Ile-Trp, N-미리스토일-Ile-Gln, N-미리스토일-Ile-Asn, N-미리스토일-Ile-Arg, N-미리스토일-Ile-Lys, N-팔미토일-Gly-His, N-팔미토일-Gly-Trp, N-팔미토일-Gly-Gln, N-팔미토일-Gly-Asn, N-팔미토일-Gly-Arg, N-팔미토일-Gly-Lys, N-팔미토일-Ala-His, N-팔미토일-Ala-Trp, N-팔미토일-Ala-Gln, N-팔미토일-Ala-Asn, N-팔미토일-Ala-Arg, N-팔미토일-Ala-Lys, N-팔미토일-Val-His, N-팔미토일-Val-Trp, N-팔미토일-Val-Gln, N-팔미토일-Val-Asn, N-팔미토일-Val-Arg, N-팔미토일-Val-Lys, N-팔미토일-Leu-His, N-팔미토일-Leu-Trp, N-팔미토일-Leu-Gln, N-팔미토일-Leu-Asn, N-팔미토일-Leu-Arg, N-팔미토일-Leu-Lys, N-팔미토일-Ile-His, N-팔미토일-Ile-Trp, N-팔미토일-Ile-Gln, N-팔미토일-Ile-Asn, N-팔미토일-Ile-Arg, N-팔미토일-Ile-Lys, N-마가로일-Gly-His, N-마가로일-Gly-Trp, N-마가로일-Gly-Gln, N-마가로일-Gly-Asn, N-마가로일-Gly-Arg, N-마가로일-Gly-Lys, N-마가로일-Ala-His, N-마가로일-Ala-Trp, N-마가로일-Ala-Gln, N-마가로일-Ala-Asn, N-마가로일-Ala-Arg, N-마가로일-Ala-Lys, N-마가로일-Val-His, N-마가로일-Val-Trp, N-마가로일-Val-Gln, N-마가로일-Val-Asn, N-마가로일-Val-Arg, N-마가로일-Val-Lys, N-마가로일-Leu-His, N-마가로일-Leu-Trp, N-마가로일-Leu-Gln, N-마가로일-Leu-Asn, N-마가로일-Leu-Arg, N-마가로일-Leu-Lys, N-마가로일-Ile-His, N-마가로일-Ile-Trp, N-마가로일-Ile-Gln, N-마가로일-Ile-Asn, N-마가로일-Ile-Arg, N-마가로일-Ile-Lys, N-마가로일-Gly-His, N-마가로일-Gly-Trp, N-마가로일-Gly-Gln, N-마가로일-Gly-Asn, N-마가로일-Gly-Arg, N-마가로일-Gly-Lys, N-마가로일-Ala-His, N-마가로일-Ala-Trp, N-마가로일-Ala-Gln, N-마가로일-Ala-Asn, N-마가로일-Ala-Arg, N-마가로일-Ala-Lys, N-마가로일-Val-His, N-마가로일-Val-Trp, N-마가로일-Val-Gln, N-마가로일-Val-Asn, N-마가로일-Val-Arg, N-마가로일-Val-Lys, N-마가로일-leu-His, N-마가로일-Leu-Trp, N-마가로일-Leu-Gln, N-마가로일-Leu-Asn, N-마가로일-Leu-Arg, N-마가로일-Leu-Lys, N-마가로일-Ile-His, N-마가로일-Ile-Trp, N-마가로일-Ile-Gln, N-마가로일-Ile-Asn, N-마가로일-Ile-Arg, N-마가로일-Ile-Lys, N-스테아로일-Gly-His, N-스테아로일-Gly-Trp, N-스테아로일-Gly-Gln, N-스테아로일-Gly-Asn, N-스테아로일-Gly-Arg, N-스테아로일-Gly-Lys, N-스테아로일-Ala-His, N-스테아로일-Ala-Trp, N-스테아로일-Ala-Gln, N-스테아로일-Ala-Asn, N-스테아로일-Ala-Arg, N-스테아로일-Ala-Lys, N-스테아로일-Val-His, N-스테아로일-Val-Trp, N-스테아로일-Val-Gln, N-스테아로일-Val-Asn, N-스테아로일-Val-Arg, N-스테아로일-Val-Lys, N-스테아로일-Leu-His, N-스테아로일-Leu-Trp, N-스테아로일-Leu-Gln, N-스테아로일-Leu-Asn, N-스테아로일-Leu-Arg, N-스테아로일-Leu-Lys, N-스테아로일-Ile-His, N-스테아로일-Ile-Trp, N-스테아로일-Ile-Gln, N-스테아로일-Ile-Asn, N-스테아로일-Ile-Arg, N-스테아로일-Ile-Lys, N-엘라이도일-Gly-His, N-엘라이도일-Gly-Trp, N-엘라이도일-Gly-Gln, N-엘라이도일-Gly-Asn, N-엘라이도일-Gly-Arg, N-엘라이도일-Gly-Lys, N-엘라이도일-Ala-His, N-엘라이도일-Ala-Trp, N-엘라이도일-Ala-Gln, N-엘라이도일-Ala-Asn, N-엘라이도일-Ala-Arg, N-엘라이도일-Ala-Lys, N-엘라이도일-Val-His, N-엘라이도일-Val-Trp, N-엘라이도일-Val-Gln, N-엘라이도일-Val-Asn, N-엘라이도일-Val-Arg, N-엘라이도일-Val-Lys, N-엘라이도일-Leu-His, N-엘라이도일-Leu-Trp, N-엘라이도일-Leu-Gln, N-엘라이도일-Leu-Asn, N-엘라이도일-Leu-Arg, N-엘라이도일-Leu-Lys, N -엘라이도일-Ile-His, N-엘라이도일-Ile-Trp, N-엘라이도일-Ile-Gln, N-엘라이도일-Ile-Asn, N-엘라이도일-Ile-Arg, N-엘라이도일-Ile-Lys, N-아라키도일-Gly-His, N-아라키도일-Gly-Trp, N-아라키도일-Gly-Gln, N-아라키도일-Gly-Asn, N-아라키도일-Gly-Arg, N-아라키도일-Gly-Lys, N-아라키도일-Ala-His, N-아라키도일-Ala-Trp, N-아라키도일-Ala-Gln, N-아라키도일-Ala-Asn, N-아라키도일-Ala-Arg, N-아라키도일-Ala-Lys, N-아라키도일-Val-His, N-아라키도일-Val-Trp, N-아라키도일-Val-Gln, N-아라키도일-Val-Asn, N-아라키도일-Val-Arg, N-아라키도일-Val-Lys, N-아라키도일-Leu-His, N-아라키도일-Leu-Trp, N-아라키도일-Leu-Gln, N-아라키도일-Leu-Asn, N-아라키도일-Leu-Arg, N-아라키도일-Leu-Lys, N-아라키도일-Ile-His, N-아라키도일-Ile-Trp, N-아라키도일-Ile-Gln, N-아라키도일-Ile-Asn, N-아라키도일-Ile-Arg, N-아라키도일-Ile-Lys, N-베헤노일-Gly-His, N-베헤노일-Gly-Trp, N-베헤노일-Gly-Gln, N-베헤노일-Gly-Asn, N-베헤노일-Gly-Arg, N-베헤노일-Gly-Lys, N-베헤노일-Ala-His, N-베헤노일-Ala-Trp, N-베헤노일-Ala-Gln, N-베헤노일-Ala-Asn, N-베헤노일-Ala-Arg, N-베헤노일-Ala-Lys, N-베헤노일-Val-His, N-베헤노일-Val-Trp, N-베헤노일-Val-Gln, N-베헤노일-Val-Asn, N-베헤노일-Val-Arg, N-베헤노일-Val-Lys, N-베헤노일-Leu-His, N-베헤노일-Leu-Trp, N-베헤노일-Leu-Gln, N-베헤노일-Leu-Asn, N-베헤노일-Leu-Arg, N-베헤노일-Leu-Lys, N-베헤노일-Ile-His, N-베헤노일-Ile-Trp, N-베헤노일-Ile-Gln, N-베헤노일-Ile-Asn, N-베헤노일-Ile-Arg, N-베헤노일-Ile-Lys.
상기 화합물 중, 보다 적합한 지질 펩티드 화합물로는, N-라우로일-Gly-His, N-라우로일-Gly-Trp, N-라우로일-Gly-Gln, N-라우로일-Gly-Asn, N-라우로일-Gly-Lys, N-라우로일-Ala-His, N-라우로일-Ala-Trp, N-라우로일-Ala-Gln, N-라우로일-Ala-Asn, N-라우로일-Ala-Lys, N-라우로일-Val-His, N-라우로일-Val-Trp, N-라우로일-Val-Gln, N-라우로일-Val-Asn, N-라우로일-Val-Lys, N-미리스토일-Gly-His, N-미리스토일-Gly-Trp, N-미리스토일-Gly-Gln, N-미리스토일-Gly-Asn, N-미리스토일-Gly-Lys, N-미리스토일-Ala-His, N-미리스토일-Ala-Trp, N-미리스토일-Ala-Gln, N-미리스토일-Ala-Asn, N-미리스토일-Ala-Lys, N-미리스토일-Val-His, N-미리스토일-Val-Trp, N-미리스토일-Val-Gln, N-미리스토일-Val-Asn, N-미리스토일-Val-Lys, N-팔미토일-Gly-His, N-팔미토일-Gly-Trp, N-팔미토일-Gly-Gln, N-팔미토일-Gly-Asn, N-팔미토일-Gly-Lys, N-팔미토일-Ala-His, N-팔미토일-Ala-Trp, N-팔미토일-Ala-Gln, N-팔미토일-Ala-Asn, N-팔미토일-Ala-Lys, N-팔미토일-Val-His, N-팔미토일-Val-Trp, N-팔미토일-Val-Gln, N-팔미토일-Val-Asn, N-팔미토일-Val-Lys, N-마가로일-Gly-His, N-마가로일-Gly-Trp, N-마가로일-Gly-Gln, N-마가로일-Gly-Asn, N-마가로일-Gly-Lys, N-마가로일-Ala-His, N-마가로일-Ala-Trp, N-마가로일-Ala-Gln, N-마가로일-Ala-Asn, N-마가로일-Ala-Lys, N-마가로일-Val-His, N-마가로일-Val-Trp, N-마가로일-Val-Gln, N-마가로일-Val-Asn, N-마가로일-Val-Lys, N-마가로일-Gly-His, N-마가로일-Gly-Trp, N-마가로일-Gly-Gln, N-마가로일-Gly-Asn, N-마가로일-Gly-Lys, N-마가로일-Ala-His, N-마가로일-Ala-Trp, N-마가로일-Ala-Gln, N-마가로일-Ala-Asn, N-마가로일-Ala-Lys, N-마가로일-Val-His, N-마가로일-Val-Trp, N-마가로일-Val-Gln, N-마가로일-Val-Asn, N-마가로일-Val-Lys, N-스테아로일-Gly-His, N-스테아로일-Gly-Trp, N-스테아로일-Gly-Gln, N-스테아로일-Gly-Asn, N-스테아로일-Gly-Lys, N-스테아로일-Ala-His, N-스테아로일-Ala-Trp, N-스테아로일-Ala-Gln, N-스테아로일-Ala-Asn, N-스테아로일-Ala-Lys, N-스테아로일-Val-His, N-스테아로일-Val-Trp, N-스테아로일-Val-Gln, N-스테아로일-Val-Asn, N-스테아로일-Val-Lys, N-엘라이도일-Gly-His, N-엘라이도일-Gly-Trp, N-엘라이도일-Gly-Gln, N-엘라이도일-Gly-Asn, N-엘라이도일-Gly-Lys, N-엘라이도일-Ala-His, N-엘라이도일-Ala-Trp, N-엘라이도일-Ala-Gln, N-엘라이도일-Ala-Asn, N-엘라이도일-Ala-Lys, N-엘라이도일-Val-His, N-엘라이도일-Val-Trp, N-엘라이도일-Val-Gln, N-엘라이도일-Val-Asn, N-엘라이도일-Val-Lys, N-아라키도일-Gly-His, N-아라키도일-Gly-Trp, N-아라키도일-Gly-Gln, N-아라키도일-Gly-Asn, N-아라키도일-Gly-Lys, N-아라키도일-Ala-His, N-아라키도일-Ala-Trp, N-아라키도일-Ala-Gln, N-아라키도일-Ala-Asn, N-아라키도일-Ala-Lys, N-아라키도일-Val-His, N-아라키도일-Val-Trp, N-아라키도일-Val-Gln, N-아라키도일-Val-Asn, N-아라키도일-Val-Lys, N-베헤노일-Gly-His, N-베헤노일-Gly-Trp, N-베헤노일-Gly-Gln, N-베헤노일-Gly-Asn, N-베헤노일-Gly-Lys, N-베헤노일-Ala-His, N-베헤노일-Ala-Trp, N-베헤노일-Ala-Gln, N-베헤노일-Ala-Asn, N-베헤노일-Ala-Lys, N-베헤노일-Val-His, N-베헤노일-Val-Trp, N-베헤노일-Val-Gln, N-베헤노일-Val-Asn, N-베헤노일-Val-Lys를 들 수 있다.
가장 적합한 화합물로는, N-라우로일-Ala-His, N-라우로일-Ala-Trp, N-라우로일-Gly-His, N-라우로일-Gly-Gln, N-라우로일-Gly-Asn, N-라우로일-Gly-Lys, N-미리스토일-Gly-His, N-미리스토일-Gly-Gln, N-미리스토일-Gly-Asn, N-미리스토일-Gly-Lys, N-팔미토일-Gly-His, N-팔미토일-Gly-Trp, N-팔미토일-Gly-Gln, N-팔미토일-Gly-Asn, N-팔미토일-Gly-Lys, N-팔미토일-Ala-His, N-팔미토일-Ala-Trp, N-팔미토일-Ala-Gln, N-팔미토일-Ala-Asn, N-팔미토일-Ala-Lys, N-팔미토일-Val-His, N-팔미토일-Val-Trp, N-팔미토일-Val-Gln, N-팔미토일-Val-Asn, N-팔미토일-Val-Lys, N-마가로일-Gly-His, N-마가로일-Gly-Gln, N-마가로일-Gly-Asn, N-마가로일-Gly-Lys, N-마가로일-Gly-His, N-마가로일-Gly-Gln, N-마가로일-Gly-Asn, N-마가로일-Gly-Lys, N-스테아로일-Gly-His, N-스테아로일-Gly-Gln, N-스테아로일-Gly-Asn, N-스테아로일-Gly-Lys, N-엘라이도일-Gly-His, N-엘라이도일-Gly-Gln, N-엘라이도일-Gly-Asn, N-엘라이도일-Gly-Lys, N-아라키도일-Gly-His, N-아라키도일-Gly-Gln, N-아라키도일-Gly-Asn, N-아라키도일-Gly-Lys, N-베헤노일-Gly-His, N-베헤노일-Gly-Gln, N-베헤노일-Gly-Asn, N-베헤노일-Gly-Lys를 들 수 있다.
상기 식(1)으로 표시되는 에스테르 화합물과, 상기 식(2)으로 표시되는 α-아미노산 화합물과의 반응에 이용되는 염기로는, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들면, 금속나트륨, 금속칼륨 등의 알칼리 금속; 탄산나트륨, 탄산칼륨, 인산칼륨, 인산나트륨 등의 알칼리 금속 무기산염; 수산화나트륨, 수산화칼륨 등의 알칼리 금속 수산화물; 나트륨메톡사이드, t-부톡시칼륨 등의 알칼리 금속 알콕사이드; 트리에틸아민, 트리-n-부틸아민 등의 지방족 아민; 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센(이하, DBU라고도 함), 1,5-디아자비시클로[4.3.0]-5-노넨(이하, DBN이라고도 함) 등의 지환식 아민; 피리딘, 2-메틸-5-에틸피리딘 등의 방향족 아민 등, 그리고 이들 염기(고체) 화합물의 알코올 용액 또는 알코올 분산액 등을 들 수 있다. 이것들은 1종 단독으로, 또는 2종 이상 조합하여 사용할 수 있다.
이상의 염기 중에서도, 전화율을 높여 목적물의 수율을 보다 향상시키는 것을 고려했을 때, 나트륨메톡사이드, 나트륨에톡시드, 칼륨메톡사이드, 칼륨에톡시드, t-부톡시칼륨, DBU 또는 DBN이 바람직하고, 나트륨메톡사이드 또는 이들 금속 알콕사이드의 알코올 용액 또는 알코올 분산액이 바람직하다.
나트륨메톡사이드는 고체, 메탄올 용액, 메탄올 분산액 중 어느 것이어도 되며, 또한, 금속나트륨과 메탄올을 이용하여 사전에, 혹은 반응계 중에서 조제하여 사용하는 것도 가능하다. 조작성 및 수율을 고려했을 때, 시판 중인 나트륨메톡사이드의 약 28%의 메탄올 용액을 사용하는 것이 바람직하다.
염기의 사용량은, 특별히 한정되어 있지 않으며, 통상, 식(1)의 화합물에 대하여 1~10당량 정도이지만, 1~5당량이 바람직하고, 1.3~2당량이 보다 바람직하다.
상기 반응에 사용되는 용매에 포함되는 비극성 유기용매는, 특별히 한정되어 있지 않으며, 일반적인 유기합성에 사용되는 각종 용매 중에서, 반응에 영향을 미치지 않는 것을 적당히 선택하여 사용할 수 있다.
그 구체예로는, 펜탄, c-펜탄, 헥산, c-헥산, 메틸c-헥산, 헵탄, c-헵탄, 옥탄, 데칸, 데칼린 등의 포화 지방족 탄화수소 화합물; 1-헥센, 1-옥틴 등의 불포화 지방족 탄화수소 화합물; 벤젠, 톨루엔, 크실렌, o-디클로로벤젠 등의 방향족 탄화수소 화합물 등을 들 수 있다. 이들 용매는, 1종 단독으로, 또는 2종 이상 조합하여 사용할 수 있다.
이들 비극성 유기용매 중에서도, 식(1)으로 표시되는 에스테르 화합물의 가수분해를 방지하고, 전화율을 높여 목적물의 수율을 보다 향상시키는 것을 고려할 때, 톨루엔, 크실렌, 오르토디클로로벤젠, 펜탄, 헥산, 헵탄, 옥탄, c-펜탄, c-헥산, 메틸c-헥산, c-헵탄 및 1-헥센으로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 1종이 바람직하고, 특히, c-헥산이 적합하다.
상기 반응에 이용되는 용매에는, 상기 비극성 용매에 더하여, 바람직하게는 알코올을 포함한다. 여기서 사용되는 알코올로는 특별히 한정되어 있지 않으며, 일반적인 유기합성에 이용되는 각종 알코올 용매 중에서, 반응에 영향을 미치지 않는 것을 적당히 선택하여 사용할 수 있다.
그 구체예로는, 메탄올, 에탄올, n-프로판올, i-프로판올, n-부탄올, i-부탄올, s-부탄올, t-부탄올, n-펜타놀, i-펜타놀, s-펜타놀, t-펜타놀, n-헥산올, i-헥산올, s-헥산올, t-헥산올, 옥탄올, 데칸올, 에틸렌글리콜, 1,3-부탄디올, 글리세린 등을 들 수 있다. 이들 용매는, 1종 단독으로, 또는 2종 이상 조합하여 사용할 수 있다.
이들 용매 중에서도, 식(3)으로 표시되는 지질 펩티드 화합물과 염기를 용해시키고, 또한 가열한 반응조건에서는 상기 비극성 유기용매와 균일하게 혼화됨과 함께, 반응 후에 냉각함으로써, 생성물인 지질 펩티드 화합물의 염(알칼리 금속염 등)을 용해시킨 상태로 비극성 유기용매와 상분리하는 것을 고려할 때, 메탄올, 에탄올, n-프로판올, i-프로판올, n-부탄올, i-부탄올, s-부탄올 및 t-부탄올로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 1종이 바람직하고, 특히, 메탄올 또는 에탄올이 적합하다.
상기 식(1)으로 표시되는 에스테르 화합물과 상기 식(2)으로 표시되는 α-아미노산 화합물과의 반응온도는, 사용하는 용매의 비점 이하라면 임의의 온도로 실시할 수 있지만, 단시간에 수율 좋게 목적물을 얻는 것을 고려한다면, 20~150℃가 바람직하고, 40~80℃가 보다 바람직하고, 55~65℃가 더욱 한층 바람직하다.
반응시간은, 반응온도나, 사용하는 염기 및 유기용매 종류에 따라 변동하기 때문에 일률적으로 규정할 수 없지만, 통상 1~48시간 정도이다.
반응의 형식은, 시제를 실온에서 모두 혼합하고 나서 반응온도까지 가열하는 것도 가능하고, 필요한 시제를 적하함으로써 반응을 제어하는 것도 가능하다. 또한, 회분식, 연속식, 감압, 상압, 가압 하의 어떠한 형식으로든지 실시 가능하다. 상압에서 염기를 적하하는 형식이 보다 바람직하다.
반응 종료 후, 냉각하여 비극성 유기용매(상층)와 생성물인 지질 펩티드 화합물의 염의 알코올 용액의 층(하층)을 상(相)분리시켜, 분액 조작에 의해 비극성 유기용매를 제거한다. 여기서, 분리의 용이함을 고려할 때에는, 지질 펩티드 화합물의 염으로서 알칼리 금속염이 바람직하다.
그 후, 바람직하게는 물 및 알코올을 포함하는 용매 중에서, 얻어진 생성물을 할로겐화 수소를 사용하여 중화한다. 예를 들면, 상기 식(1)으로 표시되는 에스테르 화합물과 식(2)으로 표시되는 α-아미노산 화합물의 반응 후, 비극성 유기용매를 제거하고, 남은 지질 펩티드 화합물의 염의 알코올 용액을 할로겐화 수소의 용액에 첨가하여 중화한다.
상기 중화 조작에서 사용되는 할로겐화 수소는, 통상, 조작이 용이한 면에서 수용액의 형태로 이용되는데, 예를 들면, 염산, 브롬화수소산 등을 들 수 있고, 바람직하게는 염산이다.
한편, 할로겐화 수소를 사용하여 중화할 때, 중화에 필요한 필요량을 넘으면, 이번에는 지질 펩티드의 염산염이 형성되어, 자유형의 회수율이 감소되므로, 할로겐화 수소의 사용량에는 주의가 필요하다.
중화시킨 후, 재침전 등에 의해 지질 펩티드 화합물(자유형)의 조(crude) 생성물을 회수하고, 이것을 필요에 따라 세정?재결정 등의 후처리를 하여, 정제물을 얻는다.
한편, 본 발명에서 이용하는 상기 식(3)으로 표시되는 에스테르 화합물은, 하기 식(4)으로 표시되는 화합물과, 하기 식(5)으로 표시되는 화합물과의 반응을 통해 얻을 수 있다.
Figure pct00009
(식 중, X, R1, R2 및 R3은 앞서 정의된 바와 같다.)
이상 설명한 바와 같이, 본 발명의 제조방법은 반응 종료 후에 반응 용액을 냉각함으로써 비극성 유기용매(상층)와, 생성물인 지질 펩티드 화합물의 염의 알코올 용액의 층(하층)을 상분리시키고, 분액 조작에 의해 비극성 유기용매의 회수, 폐기가 용이하다.
또한, 지질 펩티드 화합물이 겔화능을 가지는 경우, 지질 펩티드 제조시에 지금까지 사용되었던 DMF 등의 극성 용매는 냉각 후에 지질 펩티드의 작용에 의해 겔화되는 경향이 있지만, 비극성 유기용매를 이용함으로써 겔화를 방지할 수 있으므로, 제조 상 매우 유용하다.
나아가, 본 반응에서는 반응 후에 용액이 알칼리성으로 되어 있지만, 중화에 필요한 양의 염화수소수용액을 사용함으로써, 겔화를 동반하지 않고 중화가 완료되어, 자유형을 회수할 수 있다. 석출된 자유형의 조(crude)결정을 재결정 등의 공지된 수법에 의해 정제하여, 순수한 목적물을 얻을 수 있다.
한편, 중화를 하지 않는 경우에는, 지질 펩티드 화합물의 염의 알코올 용액의 층(하층)을 유기용매 중에 적하함으로써, 지질 펩티드 화합물의 염을 고체로서 재침전시켜 회수할 수 있다.
[실시예]
이하, 합성예, 실시예 및 비교예를 들어, 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하는데, 본 발명은 하기의 실시예에 한정되는 것은 아니다.
한편, 합성예, 실시예에서 사용하고 있는 시약은, 이하에 나타내는 바와 같이 시판 중인 시약을 사용했으며, 합성한 각 화합물의 분석 및 물성 측정은, 이하에 나타내는 기기를 사용하였다.
메탄올: Kanto Chemical Co., Inc.(특급)
에탄올: Kanto Chemical Co., Inc.(1급)
시클로헥산: Junsei Chemical Co.,Ltd.(특급)
테트라하이드로퓨란: Kanto Chemical Co., Inc.(1급)
i-프로판올: Kanto Chemical Co., Inc.(1급)
N,N-디메틸포름아미드(DMF): Kanto Chemical Co., Inc.(1급)
톨루엔: Kanto Chemical Co., Inc.(1급)
헥산: Kanto Chemical Co., Inc.(1급)
헵탄: Kanto Chemical Co., Inc.(1급)
크실렌: Kanto Chemical Co., Inc.(1급)
팔미트산클로라이드: Wako Pure Chemical Industries(1급, 염화팔미토일), Aldrich사(팔미토일클로라이드), NOF Corporation(증류 팔미트산클로라이드)
글리신메틸에스테르염산염: Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., Hamari Chemicals, Ltd.
글리신에틸에스테르염산염: Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.
알라닌메틸에스테르염산염: Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.
류신메틸에스테르염산염: Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.
발린메틸에스테르염산염: Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.
라우로일클로라이드: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
미스트일클로라이드: Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.
스테아로일클로라이드: Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.
L-히스티딘: Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., Kyowa Hakko Bio Co., Ltd.
L-트립토판: Kanto Chemical Co., Inc.(특급)
염화티오닐: Wako Pure Chemical Industries(특급)
글리신: Wako Pure Chemical Industries(특급)
무수아세트산: Wako Pure Chemical Industries(특급)
피발로일클로라이드: Kanto Chemical Co., Inc.
나트륨메톡사이드: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.(1급)
나트륨메톡사이드 28% 메탄올 용액: Nippon Soda Co., Ltd.(액체 소듐메틸레이트 28%), Wako Pure Chemical Industries, Ltd.(28% 나트륨메톡사이드메탄올 용액)
나트륨에톡시드: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.(1급)
수산화나트륨: Kanto Chemical Co., Inc.(1급)
탄산나트륨: Junsei Chemical Co.,Ltd.(1급)
디에틸아민: Junsei Chemical Co.,Ltd.(1급)
트리에틸아민: Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.
염산: Kanto Chemical Co., Inc.(1급)
아세트산: Junsei Chemical Co.,Ltd.(특급)
숙신산: Junsei Chemical Co.,Ltd.(특급)
인산: Junsei Chemical Co.,Ltd.(1급)
인산이수소나트륨: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
트리플루오로아세트산: Kanto Chemical Co., Inc.(1급)
NMR: JNM-ECP300(JEOL Ltd.제)
융점: 자동융점 측정장치 FP-62(주식회사 Mettler-Toledo제)
pH 미터: AS-212(HORIBA, Ltd.제)
IR: Nicolet 6700/Nicolet Cotiniuum(Thermo FISHER SCIENTIFIC製)
[0043]
HPLC 분석 조건을 이하에 나타낸다.
?HPLC 조건(1)
컬럼: Inertsil ODS-3 (GL sciences제)
전개용매: MeOH/인산완충액(pH=2.1)=85/15(용적비),
* 인산완충액(pH=2.1)의 조제법
인산이수소나트륨(NaH2PO4?2H2O) 7.8g(50mmol), 85% 인산 3.4mL(50mmol)에 물을 넣어 전체량을 1L로 한다.
오븐온도: 40℃
검출법: UV205nm 및 RID
유속: 2.0mL/분
주입량: 20μL
유지시간: N-팔미토일-Gly-His…5.5분, N-팔미토일-Gly…9.3분, N-팔미토일-Gly-메틸…11.2분, N-팔미토일-Gly-에틸…11.4분
?HPLC 조건(2)(실시예 21만)
컬럼: ChiralPak(등록상표) IC (Daicel Chemical Industries, Ltd,.제)
전개용매: 헥산/에탄올/트리플루오로아세트산/디에틸아민=90/10/0.1/0.1(용적비)
오븐온도: 25℃
검출법: UV205nm
유속: 1.0mL/분
주입량: 10μL
유지시간: N-팔미토일-Gly-His L형 9.5분, D형 10.9분
[실시예 1] N-팔미토일-Gly-메틸의 합성
Figure pct00010
2L의 4구 플라스크에, 글리신메틸에스테르염산염 89.1g(709mmol), 염기인 탄산나트륨 75.2g(709mmol), 물 750g 및 유기용매인 톨루엔 450g을 투입하고, 교반하였다. 그 후, 이 안에 팔미트산클로라이드 150g(546mmol)을 톨루엔 900g에 용해시킨 용액을, 반응온도 25±5℃에서 2시간에 걸쳐 적하한 결과, 백색의 고체가 석출되어, 슬러리가 되었다. 25℃에서 2시간 교반한 후, 물 750g을 추가하여 1시간 교반하고, 그 후 여과하여, 물 150g으로 세정하였다. 얻어진 습품을 감압 건조시켜, N-팔미토일-Gly-메틸의 백색 결정, 150.61g(순도 99.8%, 수율 87%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,MeOH-d4,δppm): 3.97(2H,s), 3.71(3H,s),2.23(2H,t,J=7.4Hz), 1.61(2H,m), 1.28(24H,m), 0.89(3H,t,J=6.8Hz)
?MS(ESI)m/z: 327.78(M+)
?융점: 78.1℃(N=3)
[실시예 2] N-팔미토일-Gly-His?자유형의 합성
Figure pct00011
2L의 4구 플라스크에, L-히스티딘 28.4g(183mmol), N-팔미토일-Gly-메틸60g(183mmol), 시클로헥산 600g을 투입하고, 유욕(oil bath)에서 가열 교반하였다. 반응 용액이 60℃에 달한 시점에서, 염기인 나트륨메톡사이드 28% 메탄올 용액70.7g(366mmol)의 적하를 개시하고, 20분 동안 적하를 완료하였다. 적하 종료 후, 약 60℃에서 시간동안 교반을 계속하였다.
그 후, 유욕을 꺼내어, 25℃까지 방랭한 결과, 시클로헥산을 주성분으로 하는 상층과 메탄올을 주성분으로 하는 하층으로 분액되었다. 2층으로 나뉜 반응 용액의 하층을, 분액 깔대기를 이용하여 마이어(meyer)에 모으고, 남은 상층에 물 180g, 메탄올 420g을 혼합한 용액을 넣고, 다시 2층으로 분액한 용액을 20분간 정치하였다. 그 후, 하층을 마이어에 모으고, 이전에 모은 하층과 혼합하였다.
그 혼합용액을, 물 720g, 메탄올 780g, 6규정 염산 36.5ml(366mmol, 상기 염기에 대하여 1당량)의 혼합용액으로 25℃에서 교반하면서 첨가하였다. 전량을 다 넣은 후, 반응 용액을 60℃로 가열하고, 1시간 교반하였다. 그 후, 25℃까지 방랭하여 석출한 고체를 여취(濾取; filter residue)하고, 물 180g으로 세정하였다.
다음에, 얻어진 고체에 물 900g, 메탄올 1,800g을 넣고, 60℃에서 1시간 가열 교반하였다. 그 후, 25℃까지 방랭하여 석출한 고체를 여취하였다. 동일한 조작을 한번 더 반복한 후에, 얻어진 고체를 감압 건조하였다. 그 다음, 건조한 고체에 테트라하이드로퓨란 650g을 넣고, 25℃에서 시간 교반하였다. 그 후, 고체를 여취하여, 얻어진 고체에 메탄올 1,300g, 테트라하이드로퓨란 650g을 넣고 60℃에서 가열 용해시킨 후에, 2시간에 걸쳐 0℃까지 냉각하고, 0℃에서 하룻밤 동안 교반하였다. 석출한 고체를 여취, 감압 건조함으로써 N-팔미토일-Gly-His?자유형의 백색 결정, 60.0g(수율 72.8%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,DMSO-d6,δppm): 8.12(1H,d,J=7.8Hz), 8.06(1H,t,J=5.7Hz),7.56(1H,s), 6.81(1H,s), 4.38(1H,q,J=7.8Hz), 3.69(2H,dd,J=5.7Hz and J=10.2Hz), 2.89(2H,m), 2.20(2H,t,J=6.9Hz), 1.48(2H,m), 1.23(24H,s), 0.85(3H,t,J=7.2Hz)
?MS(EI)m/z: 451.43(M++1,bp)
?융점: 관측되지 않음
[실시예 3] N-팔미토일-Gly-His?자유형의 합성
실시예 2와 거의 동일한 방법으로, N-팔미토일-Gly-메틸10.3kg(31.45mol)을 사용하여 N-팔미토일-Gly-His?자유형의 합성을 행하여, 9.02kg(수율 63.6%)을 얻었다.
[실시예 4] N-팔미토일-Gly-His?나트륨염의 합성
200mL 4구 플라스크에 N-팔미토일-Gly-메틸 9.0g(27.5mmol), L-히스티딘 4.3g(27.5mmol), 유기용매인 시클로헥산 90g을 넣고, 교반하면서 60℃로 승온하였다. 그 후 이 안에 염기인 나트륨메톡사이드 28% 메탄올 용액을 15분에 걸쳐 적하하여, 60℃±5℃에서 1시간 반응시켰다. 반응 종료 후 35℃ 이하까지 냉각시키고, 시클로헥산층과 메탄올층에 분액한 용액의 메탄올층을, 헥산 270g에 재침전하여 결정을 석출시켰다. 이 용액을 0℃까지 냉각시키고, 1시간 교반시킨 후에 여과를 행하였다. 얻어진 습품을 감압 건조시켜, N-팔미토일-Gly-His?나트륨염의 담황색 결정 10g(순도 94%, 수율 77%)을 얻었다.
[실시예 5~12]
실시예 2와 동일한 원료를 사용하여, 용매, 염기, 반응온도 및 반응시간을 표 1에 나타내는 바와 같이 변경하여, N-팔미토일-Gly-His를 합성하였다. HPLC(RID 검출기)에서의 전화율, 목적물의 상대면적 백분율을 표 1에 함께 나타낸다.
Figure pct00012
[비교예 1]
용매를 DMF로 변경하고, 반응온도를 80℃로 한 것을 제외하고는, 실시예 2와 동일한 조건으로 반응을 행하였다. 그러나, 반응은 종료되지 않고, 냉각 후에 반응계가 겔화됨과 함께, 가수분해체가 증가하였으며, 수율은 65%로 저하되었다.
[실시예 13~19]
중화할 때의 pH를 표 2에 나타내는 바와 같이 조정한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 순서로 N-팔미토일-Gly-His?자유형의 합성을 행하고, 여액 유출의 값의 변화를 확인하였다.
Figure pct00013
[실시예 20, 비교예 2~8]
반응 후의 중화에 이용하는 산의 종류, 양을 표 3에 나타내는 바와 같이 변경한 것을 제외하고는, 실시예 2와 동일하게 합성을 행하였다. 그러나, 비교예 2~8에 대해서는 N-팔미토일-Gly-His를 회수하는 것이 곤란하였다. 얻어진 N-팔미토일-Gly-His의 IR 차트를 도 1 내지 도 8에 나타낸다.
Figure pct00014
[비교예 9]
반응 후의 중화에 이용하는 산의 혼합용액을, 물에 염산을 넣은 수용액(염기에 대하여 2당량)으로 변경한 것을 제외하고는, 실시예 2와 동일하게 합성을 행하였다. 그러나, 중화, 재침전을 행한 결과, 겔화되어 반응기로부터 빼낼 수 없었다.
[실시예 21]
실시예 2와 마찬가지로, N-팔미토일-Gly-메틸과 L-히스티딘을 염기인 나트륨메톡사이드 28% 메탄올 용액을 이용하여 시클로헥산 중 60℃에서 반응시키고, 그 후 중화, 정제하여, N-팔미토일-Gly-His?자유형을 얻었다.
얻어진 N-팔미토일-Gly-His?자유형의 HPLC 스펙트럼을 확인한 결과(HPLC 조건(2)으로, 도 9 참조), 라세미화는 확인되지 않았다. 한편, 도 9(a)에 본 실시예(L-히스티딘을 사용)에서 얻은 N-팔미토일-Gly-His?자유형의 HPLC 스펙트럼을, 도 9(b)에 라세미형의 히스티딘을 이용하여 얻은 N-팔미토일-Gly-His?자유형의 HPLC 스펙트럼을 나타낸다.
<N-팔미토일-Gly로부터의 N-팔미토일-Gly-His의 합성>
[합성예 1] N-팔미토일-Gly의 합성
Figure pct00015
글리신 27.3g(364mmol) 및 수산화나트륨 29.1g(727mmol)을 i-프로판올 450g과 물 200g의 혼합용매 중, 실온에서 교반하여 용해시킨 후에, 10℃로 냉각하였다. 여기에 팔미트산클로라이드 100g(364mmol)을 1시간에 걸쳐 적하하였다. 반응물을 실온까지 되돌린 후, 약 15시간 교반하였다. 이것에 물을 400g 넣고, 계속해서 35% 염산 73.8g(727mmol)을 적하하였다. 석출한 고체를 회수하여, 슬러리 세정, 메탄올에서의 재결정을 행하여 정제하여, N-팔미토일-Gly의 백색 고체 36.4g(수율 32%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,DMSO-d6,δppm): 12.43(1H,brs), 8.07(1H,t,J=5.7Hz), 3.70(2H,d,J=5.7Hz), 2.09(2H,t,J=7.8Hz), 1.47(2H,m), 1.23(24H,brs), 0.85(3H,t,J=6.9Hz).
?융점: 125.0℃(N=3)
[비교예 10]
N-팔미토일-Gly을 톨루엔 중, 실온에서 염화티오닐을 사용하여 산클로라이드물로 한 후에, 염기로서 트리에틸아민을 이용하여 L-히스티딘과 반응시켰지만, N-팔미토일-Gly-His는 흔적량만 생성되었다.
[비교예 11]
N-팔미토일-Gly을 톨루엔 중, 80℃에서 무수아세트산과 작용시켜 아세틸화 한 후에, 염기로서 트리에틸아민을 이용하여, DMF 중, 70℃에서 L-히스티딘과 반응시켰지만, N-팔미토일-Gly-His는 생성되지 않았다.
[비교예 12]
염기로서 트리에틸아민 존재 하에서, N-팔미토일-Gly을 톨루엔 중, 0℃で피발로일클로라이드와 반응시키고, 산무수물을 계 중에서 발생시킨 후에, 트리에틸아민을 추가하여, L-히스티딘과 반응시켰지만, N-팔미토일-Gly-His는 생성되지 않았다.
[실시예 22] N-팔미토일-Gly-에틸의 합성
Figure pct00016
300mL의 4구 플라스크에, 글리신에틸에스테르염산염 6.6g(47.3mmol), 염기인 탄산나트륨 5.0g(47.3mmol), 물 50g 및 유기용매인 톨루엔 30g을 투입하고, 교반하였다. 그 후, 이 안에 팔미트산클로라이드 10g(36.4mmol)을 톨루엔 60g에 용해시킨 용액을, 반응온도 25±5℃에서 2시간에 걸쳐 적하한 결과, 백색의 고체가 석출되어, 슬러리가 되었다. 25℃에서 시간 교반한 후, 물 50g을 추가하여 1시간 교반하고, 그 후 여과하여, 물 30g으로 세정하였다. 얻어진 습품을 감압 건조시켜, N-팔미토일-Gly-에틸의 백색 결정, 7.0g(수율 56%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,CDCl3,δppm): 6.02-5.86(m,1H)4.22(2H,q,J=7.2Hz), 4.03(2H,d,J=5.4Hz), 2.23(2H,t,J=8.1Hz), 1.72-1.56(2H,m), 1.34-1.22(27H,m), 0.89(3H,t,J=6.6Hz)
?MS(ESI)m/z: 342.37 (M+H)+.
?융점: 110.0℃(N=3)
[실시예 23] N-팔미토일-Gly-His?자유형의 합성
100mL의 4구 플라스크에, L-히스티딘 0.91g(5.8mmol), N-팔미토일-Gly-에틸 2.0g(5.8mmol), 시클로헥산 20g을 투입하고, 염기인 나트륨메톡사이드 28% 메탄올 용액 2.2g(11.6mmol)을 넣어, 유욕에서 60℃로 가열 교반하였다. 약 60℃에서 시간동안 교반을 계속하였다.
그 후, 유욕에서 꺼내어 25℃까지 방랭하고, 이 용액을, 물 30g, 메탄올 40g, 6규정 염산 1.9ml(11.6mmol)의 혼합용액으로 25℃에서 교반하면서 첨가하였다. 전량을 다 넣은 후, 반응 용액을 60℃로 가열하고, 1시간 교반하였다. 그 후, 25℃까지 방랭하여, 석출한 고체를 여취하고, 물 6g으로 세정하였다. 얻은 고체를 감압 건조하였다.
다음에, 건조한 고체에 테트라하이드로퓨란 20g, 메탄올 40g을 넣고, 60℃에서 시간 교반하였다. 그 후, 0℃로 냉각한 테트라하이드로퓨란 20g에, 60℃의 혼합용액을 적하하였다. 이 때 적하되는 측의 온도는 상한 15℃로 하여, 서서히 적하하였다. 적하 종료 후, 0℃에서 10분간 숙성하고, 고체를 여취, 감압 건조함으로써 N-팔미토일-Gly-His?자유형의 백색 결정, 1.1g(수율 41%)을 얻었다.
[실시예 24] N-팔미토일-Gly-Trp?자유형의 합성
Figure pct00017
100mL의 4구 플라스크에, L-트립토판 1.25g(6.1mmol), N-팔미토일-Gly-메틸 2.0g(6.1mmol), 시클로헥산 20g, 메탄올 0.8g을 투입하고, 유욕에서 60℃로 가열 교반하였다. 염기인 나트륨메톡사이드 28% 메탄올 용액 2.4g(12.2mmol)을 넣고, 약 60℃에서 2시간동안 교반을 계속하였다. 그 후, 유욕에서 꺼내어 메탄올 0.4g을 넣고, 25℃까지 방랭하여, 이 용액을, 물 30g, 메탄올 40g, 6규정 염산 2.0ml(12.2mmol)의 혼합용액으로 25℃에서 교반하면서 첨가하였다. 전량을 다 넣은 후, 반응 용액을 60℃로 가열하고, 1시간 교반하였다. 그 후, 25℃까지 방랭하여 석출한 고체를 여취하고, 물 6g으로 세정하였다. 얻어진 고체에 물 30g, 메탄올 40g을 넣고, 60℃로 가열하고, 1시간 교반하였다. 그 후, 25℃까지 방랭하여, 석출한 고체를 여취하고, 물 6g으로 세정하였다. 얻은 고체를 감압 건조함으로써 N-팔미토일-Gly-Trp?자유형의 백색 결정, 2.3g(수율 74%, 순도 90%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,DMSO-d6,δppm): 10.76(1H,s), 7.98(1H,t,J=6.0Hz), 7.74(1H,d,J=7.2Hz), 7.51(1H,d,J=7.5Hz), 7.29(1H,d,J=7.5Hz), 7.08(1H,s), 7.02(1H,d,J=7.5Hz), 6.93(1H,d,J=7.5Hz), 4.31(1H,q,J=7.8Hz), 3.84-3.50(2H,m), 3.17(1H,dd,J=5.4Hz,J=5.4Hz), 3.01(1H,dd,J=6.6Hz,J=6.6Hz), 2.07(2H,t,J=6.9Hz), 1.55-1.35(2H,m), 1.35-1.25(24H,m), 0.85(3H,t,J=6.9Hz)
?MS(ESI)m/z: 500.2 (M+H)+.
?융점: 159.6℃(N=4)
[실시예 25] N-라우로일-Ala-메틸의 합성
Figure pct00018
500mL의 4구 플라스크에, L-알라닌메틸에스테르염산염 16.6g(118.9mmol), 염기인 탄산나트륨 12.6g(118.9mmol), 물 100g, 그리고 유기용매인 톨루엔 60g을 투입하고, 교반하였다. 그 후, 이 안에 라우로일클로라이드 20g(91.4mmol)을 톨루엔 120g에 용해시킨 용액을, 반응온도 25±5℃에서 시간에 걸쳐 적하하였다. 25℃에서 2시간 교반한 후, 물 200g을 추가하여, 다시 1시간 교반하였다. 유기층을 분액하고, 감압 농축, 진공 건조를 행함으로써 백색 고체가 얻어졌다. 얻은 고체를 물 250g 내에서 2시간 현탁 교반한 후에, 여과, 건조를 행함으로써 N-라우로일-Ala-메틸의 백색 결정, 24.7g(수율 94.5%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,CDCl3,δppm): 6.02(1H,s), 4.61(1H,t,J=7.3Hz), 3.75(3H,s), 2.23-2.17(3H,m), 1.26-1.41(20H,m), 0.88(3H,t, J=6.6Hz)
?MS(ESI)m/z: 286.1 (M+H)+.
[실시예 26] N-라우로일-Ala-His?자유형의 합성
Figure pct00019
200mL의 4구 플라스크에, L-히스티딘 3.81g(24.5mmol), N-라우로일-Ala-메틸 7.0g(24.5mmol), 시클로헥산 70g, 메탄올 2.8g을 투입하고, 유욕에서 60℃로 가열 교반하였다. 염기인 나트륨메톡사이드 28% 메탄올 용액 9.5g(49.0mmol)을 넣고, 약 60℃에서 2시간동안 교반을 계속하였다. 그 후, 유욕에서 꺼내어 메탄올 1.4g을 넣고, 25℃까지 방랭하고, 이 용액을, 물 84g, 메탄올 91g, 6규정 염산 8.0ml(49.0mmol)의 혼합용액으로 25℃에서 교반하면서 첨가하였다. 전량을 다 넣은 후, 반응 용액을 60℃로 가열하고, 1시간 교반하였다. 그 후, 25℃까지 방랭하고, 농축함으로써 점토상 고체를 얻었다. 얻은 고체를 톨루엔 35g, 메탄올 35g의 혼합용매에 투입하고, 50℃에서 현탁시켜, 열시(熱時) 여과로 불용물을 제거하였다. 얻어진 여액을 농축, 감압 건조함으로써 N-라우로일-Ala-His?자유형의 담갈색 결정, 7.9g(수율 79%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,DMSO-d6,δppm): 8.02(1H,dd,J1=12.3Hz,J2=7.8Hz), 7.9(1H,dd,J1=12.4Hz,J2=7.2Hz), 7.50(1H,t,J=1.2Hz), 6.74(1H,d,J=5.8Hz), 4.24(2H,dd,J1=14.6Hz,J2=7.2Hz), 2.80-2.96(2H,m), 1.09-1.47(23H,m), 0.85(3H,t,J=6.3Hz)
?MS(ESI)m/z: 409.0 (M-H)-.
[실시예 27] N-라우로일-Ala-Trp?자유형의 합성
Figure pct00020
100mL의 4구 플라스크에, L-트립토판 5.0g(24.5mmol), N-라우로일-Ala-메틸 7.0g(24.5mmol), 시클로헥산 70g, 메탄올 2.8g을 투입하고, 유욕에서 60℃로 가열 교반하였다. 염기인 나트륨메톡사이드 28% 메탄올 용액 9.5g(49.0mmol)을 넣고, 약 60℃에서 2시간동안 교반을 계속하였다. 그 후, 유욕에서 꺼내어 메탄올 1.4g을 넣고, 25℃까지 방랭하고, 이 용액을, 물 84g, 메탄올 91g, 6규정 염산 8.2mL(49.0mmol)의 혼합용액으로 35℃에서 교반하면서 첨가하였다. 0.1규정 수산화나트륨 수용액을 넣어 pH를 6.7로 한 후, 감압 농축에 의해 용매를 유거하였다. 잔사에 아세트산에틸, 물을 넣고, 물층을 아세트산에틸로 추출하였다. 물층을 감압 농축에 의해 물을 유거하고, 건조시킴으로써 N-라우로일-Ala-Trp?자유형의 백색 결정, 9.2g(수율 83%, 순도 99%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,DMSO-d6,δppm): 10.75(1H,s), 8.01(1H,t,J=7.8Hz), 7.58-6.89(5H,m,), 4.22(2H,m,), 3.48-2.94(2H,m), 2.06(2H,t,J=5.4Hz), 1.44(2H,brs,), 1.22-1.11(16H,m), 1.05(2H,d,J=7.2Hz), 0.85(3H,t,J=6.9Hz)
?MS(ESI)m/z: 456.5 (M-H)-.
[실시예 28] N-라우로일-Gly-메틸의 합성
Figure pct00021
500mL의 4구 플라스크에, 글리신메틸에스테르염산염 16.4g(130.7mmol), 염기인 탄산나트륨 13.9g(201.1mmol), 물 110g 및 유기용매인 톨루엔 66g을 투입하고, 교반하였다. 그 후, 이 안에 라우로일클로라이드 22g(100.6mmol)을 톨루엔 132g에 용해시킨 용액을, 반응온도 25±5℃에서 시간에 걸쳐 적하하였다. 25℃에서 2시간 교반한 후, 물 100g을 추가하고, 다시 1시간 교반하였다. 유기층을 분액하고, 감압 농축, 진공 건조를 행함으로서 N-라우로일-Gly-메틸의 백색 결정, 27.3g(수율 100%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,CDCl3,δppm): 5.91(s,1H), 4.05(d,J=5.2Hz,2H), 3.77(s,3H), 2.24(t,J=7.6Hz,2H), 1.65-1.25(m,18H), 0.88(t,J=6.7Hz,3H)
?MS(API)m/z:272.0(M+H)+.
?융점: 62.5℃
[실시예 29] N-라우로일-Gly-His?자유형의 합성
Figure pct00022
500mL의 4구 플라스크에, L-히스티딘 11.4g(73.7mmol), N-라우로일-Gly-메틸 20.0g(73.7mmol), 시클로헥산 200g, 메탄올 8.0g을 투입하고, 유욕에서 60℃로 가열 교반하였다. 염기인 나트륨메톡사이드 28% 메탄올 용액 28.4g(147.4mmol)을 넣고, 약 60℃에서 2시간동안 교반을 계속하였다. 그 후, 반응 용액을 약 50℃로 냉각하고, 물 24g, 메탄올 26g, 6규정 염산 2.5g(14.7mmol)의 혼합용액을 넣었다. 그 후, 25℃까지 냉각하고, 이 용액을, 물 216g, 메탄올 234g, 6규정 염산 22.5g(132.7mmol)의 혼합용액으로 25℃에서 교반하면서 첨가하였다. 그 후, 25℃까지 방랭하고, 농축함으로써 담황색 고체를 얻었다. 얻은 고체를 톨루엔 250g, 메탄올 250g의 혼합용매에 투입하고, 50℃에서 현탁시키고, 열시 여과에 의해 불용물을 제거하였다. 얻어진 여액을 농축, 감압 건조함으로써 N-라우로일-Gly-His?자유형의 담황색 결정, 22.8g(수율 79%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,DMSO-d6,δppm): 8.12(s,1H), 7.78(d,J=6.6Hz,1H), 7.46(s,1H), 6.70(s,1H), 4.15(d,J=5.8Hz,1H), 3.66-3.60(m,2H), 2.90-2.85(m,2H), 2.11(t,J=7.2Hz,2H), 1.48-1.23(m,18H) 0.84(t,J=3.7Hz,3H)
?MS(ESI)m/z: 395.5(M+H)+.
[실시예 30] N-미스트로일-Gly-메틸의 합성
Figure pct00023
500mL의 4구 플라스크에, 글리신메틸에스테르염산염 14.6g(115.9mmol), 염기인 탄산나트륨 12.3g(115.9mmol), 물 110g 및 유기용매인 톨루엔 66g을 투입하고, 교반하였다. 그 후, 이 안에 미스트로일클로라이드 22g(89.1mmol)을 톨루엔 132g에 용해시킨 용액을, 반응온도 25±5℃에서 시간에 걸쳐 적하하였다. 25℃에서 2시간 교반한 후, 물 100g을 추가하고, 다시 1시간 교반하였다. 여과를 행하고, 여물을 회수하여, 진공 건조를 행하였다. 여액은 분액처리를 하여, 유기층을 감압 농축하여, 진공 건조를 행하였다. 각각으로부터 얻어진 고체를 모두 더하여 N-미스트로일-Gly-메틸의 백색 결정, 26.8g(수율 100%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,CDCl3,δppm): 5.92(s,1H), 4.03(t,J=7.7Hz,2H), 3.77(s,3H), 2.24(t,J=7.6Hz,2H), 1.65-1.25(m,22H), 0.88(t,J=6.7Hz,3H)
?MS(ES)m/z:300.0(M+H)+.
?융점: 72.5℃
[0078]
[실시예 31] N-미스트로일-Gly-His?자유형의 합성
Figure pct00024
500mL의 4구 플라스크에, L-히스티딘 10.4g(66.8mmol), N-미스트로일-Gly-메틸 20.0g(66.8mmol), 시클로헥산 200g, 메탄올 8.0g을 투입하고, 유욕에서 60℃로 가열 교반하였다. 염기인 나트륨메톡사이드 28% 메탄올 용액 25.8g(133.6mmol)을 넣고, 약 60℃에서 2시간동안 교반을 계속하였다. 그 후, 반응 용액을 농축한 후에 진공 건조를 행한 결과, 점토상의 고체가 얻어졌다. 얻은 고체를 톨루엔 250g, 메탄올 250g의 혼합용매에 투입하고, 50℃에서 현탁시키고, 열시 여과에 의해 불용물을 제거하였다. 얻어진 여액을 -10℃로 냉각한 1L의 아세토니트릴에 적하함으로써, 백색 고체가 석출되었다. 이 용액을 여과하여 얻은 백색 고체를 감압 건조함으로써 N-미스트로일-Gly-His?자유형의 담황색 결정, 19.5g(수율 69%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,DMSO-d6,δppm): 8.06(t,J=7.3Hz,2H), 7.56(s,1H), 6.80(s,1H), 4.35(d,J=6.9Hz,2H), 3.67(d,J=5.5Hz,2H), 2.92(dd,J1=14.6Hz,J2=9.1Hz,2H), 2.12(t,J=7.3Hz,2H), 1.49-1.02(m,22H) 0.85(t,J=3.7Hz,3H)
?MS(ESI)m/z: 423.0(M+H)+.
[실시예 32] N-스테아로일-Leu-메틸의 합성
Figure pct00025
500mL의 4구 플라스크에, L-류신메틸에스테르염산염 15.5g(85.8mmol), 염기인 탄산나트륨 9.1g(85.8mmol), 물 100g 및 유기용매인 톨루엔 60g을 투입하고, 교반하였다. 그 후, 이 안에 스테아로일클로라이드 20g(66.0mmol)을 톨루엔 120g에 용해시킨 용액을, 반응온도 25±5℃에서 시간에 걸쳐 적하하였다. 25℃에서 2시간 교반한 후, 물 100g을 추가하고, 다시 1시간 교반하였다. 유기층을 분액하고, 감압 농축, 진공 건조를 행함으로서 N-스테아로일-Leu-메틸의 백색 결정, 27.3g(수율 100%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,CDCl3,δppm): 5.77(d,J=8.3Hz,1H), 4.66(td,J1=8.6Hz,J2=5.0Hz,1H), 3.73(s,3H), 2.21(t,J=7.6Hz,2H), 1.69-0.87(m,42H)
?MS(ESI)m/z: 412.1(M+H)+.
?융점: 62.4℃
[실시예 33] N-스테아로일-Leu-Trp?자유형의 합성
Figure pct00026
100mL의 4구 플라스크에, L-트립토판 1.49g(7.3mmol), N-스테아로일-Leu-메틸 3.0g(7.3mmol), 시클로헥산 30g, 메탄올 1.2g을 투입하고, 유욕에서 60℃로 가열 교반하였다. 염기인 나트륨메톡사이드 28% 메탄올 용액 2.8g(14.6mmol)을 넣고, 약 60℃에서 20시간동안 교반을 계속하였다. 그 후, 유욕에서 꺼내어 메탄올 0.6g을 넣고, 25℃까지 방랭하고, 이 용액을, 물 50g, 메탄올 68g, 6규정 염산 2.4g(14.6mmol)의 혼합용액으로 35℃에서 교반하면서 첨가하였다. 전량을 다 넣은 후, 감압 건조에 의해 용매를 유거하고, 잔사에 아세트산에틸을 넣어 60℃로 가열하고 여과하였다. 여액을 감압 건조시킴으로써 N-스테아로일-Leu-Trp?자유형을 4.0g(수율 95%) 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,MeOD-d4,δppm): 7.48(d,J=6.3Hz,1H), 7.19(dd,J=2.5Hz,J=0.3Hz,1H), 6.99-6.83(m,3H), 4.40(t,J=5.6Hz,1H), 4.28(dd,J=9.1Hz,J=5.5Hz,2H), 3.19(m,2H), 2.14(t,J=4.2Hz,1H), 1.97(t,J=7.2Hz,1H), 1.60-1.17(m,31H), 0.87-0.69(m,9H)
?MS(ESI)m/z: 584.1(M+H)+.
[실시예 34] N-스테아로일-Leu-His?자유형의 합성
Figure pct00027
100mL의 4구 플라스크에, L-히스티딘 1.13g(7.29mmol), N-스테아로일-Leu-메틸 3.00g(7.29mmol), 시클로헥산 30g, 메탄올 2.8g을 투입하고, 유욕에서 60℃로 가열 교반하였다. 염기인 나트륨메톡사이드 28% 메탄올 용액 2.9g(14.6mmol)을 넣고, 약 60℃에서 3시간동안 교반을 계속하였다. 그 후, 유욕에서 꺼내어 메탄올 0.6g을 넣고, 25℃까지 방랭하고, 이 용액을, 물 39.1g, 메탄올 35.8g, 6규정 염산 2.43ml(14.6mmol)의 혼합용액으로 25℃에서 교반하면서 첨가하였다. 전량을 다 넣은 후, 반응 용액을 60℃로 가열하고, 1시간 교반하였다. 이 용액을 빙냉한 아세토니트릴에 떨어뜨림으로써 고체를 석출시켜 여취하였다. 얻은 고체를 감압 건조함으로써 N-스테아로일-Leu-Trp?자유형의 백색 결정, 1.2g(수율 27%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,DMSO-d6,δppm): 8.22-8.17(m,1H), 8.01-7.90(m,2H), 7.05-6.96(m,1H), 4.42-4.27(m,2H), 3.10-2.92(m,4H), 2.11-2.08(m,2H), 1.60-1.43(m,3H), 1.35-1.05(m,28H), 0.86-0.76(m,9H)
?MS(ESI)m/z: 535.1(M+H)+.
[실시예 35] N-스테아로일-Val-메틸의 합성
Figure pct00028
500mL의 4구 플라스크에, L-발린메틸에스테르염산염 10.8g(64.3mmol), 염기인 탄산나트륨 6.82g(64.3mmol), 물 75g 및 유기용매인 톨루엔 45g을 투입하고, 교반하였다. 그 후, 이 중에 스테아로일클로라이드 15.0g(49.5mmol)을 톨루엔 90g에 용해시킨 용액을, 반응온도 25±5℃에서 15분에 걸쳐 적하하였다. 25℃에서 17시간 교반한 후, 물 150g을 추가하고, 다시 교반한 후, 유기층을 분액하였다. 유기층을 물 150g으로 2회 세정한 후, 감압 농축, 진공 건조를 행함으로서, N-스테아로일-Val-메틸의 백색 결정, 19.7g(수율 100%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,CDCl3,δppm): 5.89(d,J=8.7Hz,1H), 4.59(dd,J=8.7Hz,8.7Hz,1H), 3.74(s,3H), 2.23(t,J=7.5Hz,2H),2.22-2.18(m,1H), 1.72-1.56(m,2H), 1.34-1.22(m,28H), 0.98-0.82(m,9H)
?MS(ESI)m/z: 398.3(M+H)+.
?융점: 75.7℃(N=2)
[실시예 36] N-스테아로일-Val-His?자유형의 합성
Figure pct00029
200mL의 오토클레이브에, L-히스티딘 1.17g(7.54mmol), N-스테아로일-Val-메틸 3.00g(7.54mmol), 시클로헥산 30g, 메탄올 1.2g, 염기인 나트륨메톡사이드 28% 메탄올 용액 2.91g(15.1mmol)을 넣고, 약 110℃에서 4시간동안 교반을 계속하였다. 그 후, 25℃까지 교반하면서 방랭하고, 이 용액에, 물 10.0g, 메탄올 30.0g을 넣고, 다시 6규정 염산 2.51ml(15.1mmol)을 넣었다. 이 용액을 아세토니트릴 200g에 재침전함으로써 고체를 석출시켜 여취하였다. 얻어진 고체에 물 100g을 넣어, 1시간 교반하고, 이 용액을 200g의 아세토니트릴에 재침전하여, 고체를 여취하였다. 얻은 고체를 감압 건조함으로써 N-스테아로일-Val-His?자유형의 담갈색 결정, 0.41g(수율 11%)을 얻었다.
?1H-NMR(300MHz,DMSO-d6,δppm): 8.15(d,J=7.8Hz,1H), 7.85-7.65(m,1H), 7.60-7.50(m,1H), 6.85-6.70(m,1H), 4.45-4.20(m,1H), 4.25-4.10(m,2H), 3.00-2.75(m,2H), 2.25-1.80(m,4H), 1.60-1.35(m,2H), 1.35-1.10(m,26H), 0.90-0.60(m,9H)
?MS(ESI)m/z: 521.1(M+H)+.
?융점: 196.5℃(N=2)
[실시예 37] 고체 NaOMe를 사용한 N-팔미토일-Gly-His?자유형의 합성
100mL의 4구 플라스크에, L-히스티딘 0.14g(0.92mmol), N-팔미토일-Gly-메틸0.30g(0.92mmol), 톨루엔 3.0g, 염기인 고체의 나트륨메톡사이드 0.10g(1.8mmol), 메탄올 0.25g을 넣고, 약 60℃에서 시간동안 교반을 계속하였다.
HPLC(RID 검출기)로 분석한, 목적물의 상대면적 백분율 및 이를 통해 구한 N-팔미토일-Gly-메틸의 전환율의 결과를 이하에 나타낸다.
Figure pct00030
[실시예 38] 염기 당량의 비교
50mL의 4구 플라스크에, N-팔미토일-Gly-메틸 2g(6.1mmol), L-히스티딘 0.95g(6.1mmol), 유기용매인 시클로헥산 20g, 염기인 28% 나트륨메톡사이드의 메탄올 용액을 넣고, 교반하면서 60℃로 승온하였다. 그 후, 60℃±5℃에서 반응시켰다. 이하, 28% 나트륨메톡사이드의 메탄올 용액의 N-팔미토일-Gly-메틸에 대한 당량, 반응시간 및 N-팔미토일-Gly-His?자유형의 생성량을 HPLC로 분석한 결과를 나타낸다.
Figure pct00031
따라서, 1~2당량의 염기를 이용한 경우에도, 반응은 양호하게 진행된다.

Claims (18)

  1. 식(1)
    [화학식 1]

    (식 중, R1은 탄소원자수 9 내지 23의 지방족기를 나타내고, R2는 수소원자, 또는 탄소원자수 1 또는 2의 분지쇄를 가질 수 있는 탄소원자수 1 내지 4의 알킬기를 나타내고, R3은, 탄소원자수 1 내지 6의 알킬기, 탄소원자수 1 내지 6의 할로알킬기, 탄소원자수 1 내지 6의 하이드록시알킬기, 또는 탄소원자수 1 내지 6의 알킬기로 치환되어 있을 수도 있는 아릴기를 나타낸다.)으로 표시되는 에스테르 화합물과, 식(2)
    [화학식 2]
    Figure pct00033

    (식 중, R4는 -(CH2)n-X기를 나타내고, n은 1 내지 4의 수를 나타내고, X는 아미노기, 구아니디노기, -CONH2기, 또는 질소원자를 1 내지 3개 가질 수 있는 5원환 또는 6원환 또는 5원환과 6원환으로 구성되는 축합복소환을 나타낸다.)으로 표시되는 α-아미노산 화합물을, 염기의 존재 하에서, 비극성 유기용매를 포함하는 용매 중에서 반응시키는 것을 특징으로 하는, 식(3)
    [화학식 3]
    Figure pct00034

    (식 중, R1, R2 및 R4는 앞서 정의된 바와 같다.)으로 표시되는 지질 펩티드 화합물 또는 그 약학적으로 사용 가능한 염의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 용매가, 비극성 유기용매 및 알코올을 포함하는 것을 특징으로 하는, 제조방법.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 n이 1 내지 4의 수를 나타내고, 또한 X가 아미노기, 구아니디노기 또는 -CONH2기를 나타내거나, 또는 n이 1을 나타내고, 또한 X가 피롤기, 이미다졸기, 피라졸기 또는 이미다졸기를 나타내는, 제조방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 R1이, 불포화결합을 0 내지 2개 가질 수 있는 탄소원자수 11 내지 21의 직쇄상 지방족기를 나타내는, 제조방법.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 R2가, 수소원자, 또는 탄소원자수 1의 분지쇄를 가질 수 있는 탄소원자수 1 내지 3의 알킬기를 나타내는, 제조방법.
  6. 제1항에 있어서,
    R2가 수소원자, 메틸기, 에틸기, n-프로필기, 이소프로필기, n-부틸기, 이소부틸기, sec-부틸기 또는 tert-부틸기를 나타내고, R4가 아미노메틸기, 아미노에틸기, 3-아미노프로필기, 4-아미노부틸기, 카바모일메틸기, 2-카바모일에틸기, 3-카바모일부틸기, 2-구아니디노에틸기, 3-구아니디노프로필기, 피롤메틸기, 이미다졸메틸기, 피라졸메틸기 또는 3-인돌메틸기를 나타내는, 제조방법.
  7. 제6항에 있어서,
    R2가 수소원자, 메틸기, 이소프로필기, 이소부틸기 또는 sec-부틸기를 나타내고, R4가 4-아미노부틸기, 카바모일메틸기, 2-카바모일에틸기, 3-구아니디노프로필기, 이미다졸메틸기 또는 3-인돌메틸기를 나타내는, 제조방법.
  8. 제1항에 있어서,
    R3이 메틸기 또는 에틸기를 나타내는, 제조방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 염기가, 알칼리 금속, 알칼리 금속 무기산염, 알칼리 금속 수산화물, 알칼리 금속 알콕사이드, 지환식 아민 및 그 알코올 용액, 또는 그 알코올 분산액에서 선택되는 적어도 1종인, 제조방법.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 염기가, 금속나트륨, 금속칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 인산칼륨, 인산나트륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 나트륨메톡사이드, 나트륨에톡시드, 칼륨메톡사이드, 칼륨에톡시드, t-부톡시칼륨, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센, 1,5-디아자비시클로[4.3.0]-5-노넨 및 그 알코올 용액, 또는 알코올 분산액에서 선택되는 적어도 1종인, 제조방법.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 염기가, 나트륨메톡사이드 및 그 메탄올 용액, 또는 메탄올 분산액인, 제조방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 비극성 유기용매가, 방향족 화합물, 포화 지방족 화합물 및 불포화 지방족 화합물로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 1종인, 제조방법.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 비극성 유기용매가, 톨루엔, 크실렌, 오르토디클로로벤젠, 펜탄, 헥산, 헵탄, 옥탄, 시클로펜탄, 시클로헥산, 메틸시클로헥산, 시클로헵탄 및 1-헥센으로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 1종인, 제조방법.
  14. 제2항에 있어서,
    상기 용매가, 시클로헥산과 메탄올 또는 에탄올을 포함하는, 제조방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식(1)으로 표시되는 에스테르 화합물과 상기 식(2)으로 표시되는 α-아미노산 화합물과의 반응이, 60±5℃의 반응온도에서 행해지는, 제조방법.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식(1)으로 표시되는 에스테르 화합물과 상기 식(2)으로 표시되는 α-아미노산 화합물과의 반응을 통해 얻은 생성물을, 할로겐화 수소를 사용하여 중화하는 공정을 포함하는, 제조방법.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 중화 공정이, 물 및 알코올을 포함하는 용매 중에서 행해지는, 제조방법.
  18. 식(4)
    [화학식 4]
    Figure pct00035

    (식 중, X는, 할로겐원자, 탄소원자수 1 내지 6의 알콕시기, -OC(O)R1기를 나타내고, R1은 탄소원자수 9 내지 23의 지방족기를 나타낸다.)으로 표시되는 화합물과, 식(5)
    [화학식 5]
    Figure pct00036

    (식 중, R2는 수소원자, 또는 탄소원자수 1 또는 2의 분지쇄를 가질 수 있는 탄소원자수 1 내지 4의 알킬기를 나타내고, R3은, 탄소원자수 1 내지 6의 알킬기, 탄소원자수 1 내지 6의 할로알킬기, 탄소원자수 1 내지 6의 하이드록시알킬기, 또는 탄소원자수 1 내지 6의 알킬기로 치환되어 있을 수도 있는 아릴기를 나타낸다.)으로 표시되는 화합물을 반응시켜, 식(1)
    [화학식 6]
    Figure pct00037

    (식 중, R1, R2 및 R3은 앞서 정의된 바와 같다.)으로 표시되는 에스테르 화합물을 얻는 공정 및
    상기 식(1)으로 표시되는 에스테르 화합물과 식(2)
    [화학식 7]
    Figure pct00038

    (식 중, R4는, 수소원자, 탄소원자수 1 내지 3의 분지쇄를 가질 수 있는 탄소원자수 1 내지 7의 알킬기, 페닐메틸기, 페닐에틸기, -(CH2)n-X기를 나타내고, n은 1 내지 4의 수를 나타내고, X는 아미노기, 구아니디노기, -CONH2기, 또는 질소원자를 1 내지 3개 가질 수 있는 5원환 또는 6원환 또는 5원환과 6원환으로 구성되는 축합복소환을 나타낸다.)으로 표시되는 α-아미노산 화합물을, 염기의 존재 하에서, 비극성 유기용매를 포함하는 용매 중에서 반응시키는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 식(3)
    [화학식 8]
    Figure pct00039

    (식 중, R1, R2 및 R4는, 앞서 정의된 바와 같다.)으로 표시되는 지질 펩티드 화합물 또는 그 약학적으로 사용 가능한 염의 제조방법.
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