KR20110063873A - 정밀 화학물질의 대사 경로 단백질을 코딩하는 유전자 변이체 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 정밀 화학물질의 대사 경로 중 돌연변이된 핵산 및 단백질, 유전적으로 변형된 생산자 유기체를 제조하는 방법, 상기 유전적으로 변형된 유기체를 배양하여 정밀 화학물질을 제조하는 방법, 및 상기 유전적으로 변형된 유기체에 관한 것이다.
Description
본 발명은 정밀 화학물질의 대사 경로의 돌연변이된 핵산 및 단백질, 유전적으로 변형된 생산자 유기체를 제조하는 방법, 상기의 유전적으로 변형된 유기체를 배양하여 정밀 화학물질을 제조하는 방법 및 유전적으로 변형된 유기체 그 자체에 관한 것이다.
세포에서 자연 발생적 대사 과정의 특정 생성물 및 부산물은 식품 산업, 동물 사료 산업, 화장품 산업 및 제약 산업을 비롯한 다양한 산업 분야에 이용된다. 총체적으로 "정밀 화학물질(fine chemical)"로 언급되는 이들 분자에는 유기산, 단백질 생성 및 비-단백질생성 아미노산, 뉴클레오티드 및 뉴클레오시드, 지질 및 지방산, 디올, 탄수화물, 방향족 화합물, 비타민 및 보조인자, 및 효소가 포함된다.
이들은 예를 들면, 하나 이상의 원하는 정밀 화학물질을 대량으로 생산하고 분비하도록 개발된 박테리아의 대규모 배양을 통해 생산될 수 있다. 이러한 목적에 특히 유용한 유기체는 그람 양성의 비병원성 박테리아인 코리네박테리움 글루타미쿰(Corynebacterium glutamicum)이다. 균주 선별을 통해, 다양한 바람직한 화합물을 생산하는 다수의 돌연변이 균주가 개발되어 있다. 그러나, 특정 화합물의 생산과 관련하여 개선된 돌연변이체 선별은 시간 소모적이고 어려운 공정이다.
유전자 변형에 의해 생산자 유기체의 생산성을 증가시킬 수 있다. 예를 들면, 생산자 유기체에서 특정 유전자의 특이 돌연변이를 통해 원하는 정밀 화학물질의 생산성을 증가시킬 수 있다.
EP 1 108 790 A2에는 코리네박테리움 글루타미쿰호모세린 데히드로게나제를 코딩하는 야생형 서열로부터 출발하여, 야생형 서열과 비교되는 돌연변이 Val59Ala를 갖는 호모세린 데히드로게나제를 코딩하는 돌연변이된 핵산 서열이 기술되어 있다. 추가로, 코리네박테리움 글루타미쿰 야생형 아미노산 서열과 비교하여 돌연변이 Pro458Ser를 갖는 피루베이트 카르복실라제를 코딩하는 돌연변이된 핵산 서열이 기술되어 있다. 상기 돌연변이를 코리네박테리움 글루타미쿰내로 도입함으로써 리신 수득율은 증가된다.
WO 0063388에는 추가로 돌연변이 T3111을 갖는 아스파르토 키나제를 코딩하는 돌연변이된 ask 유전자가 기술되어 있다.
정밀 화학물질의 코리네박테리움 글루타미쿰 생합성 경로의 유전자 및 단백질내 다른 돌연변이는 WO 0340681, WO 0340357, WO 0340181, WO 0340293, WO 0340292, WO 0340291, WO 0340180, WO 0340290, WO 0346123, WO 0340289 및 WO 0342389에 기술되어 있다.
이미 선행 기술에 공지되어 있는 돌연변이를 통해 생산자 유기체는 최적의 생산성을 갖지만, 즉, 원하는 정밀 화학물질을 최적의 수율로 및 최적의 C 수율을 갖지만, 상기 유기체의 생산성을 추가로 개선시켜야 할 필요성은 여전히 남아있다.
본 발명의 목적은 추가로 돌연변이된 유전자 및 단백질을 제공하여 정밀 화학물질의 생산자 유기체에서 생산성을 증가시킴으로써 정밀 화학물질을 제조하는 바이오테크 방법을 개선시키는 것이다.
본 발명자는 본 목적이 표 1의 컬럼 7에 각각 나타낸 기능을 보유하고, 표 1의 컬럼 2에서 각각 언급한 아미노산 서열로부터 출발하여 표 1의 컬럼 4에서 상기 아미노산 서열에 대해 나타낸 아미노산 위치에 상응하는, 하나 이상의 아미노산 위치에서 표 1의 컬럼 5의 동일 열에 나타낸 특정 아미노산과는 상이한 단백질성 아미노산을 갖는 아미노산 서열을 갖는 단백질로서, 단, 표 2에 따른 단백질은 제외한 것에 의해 달성된다는 것을 발견하게 되었다.
본 발명은 한편으로는, 코리네박테리움 글루타미쿰 또는 관련 박테리아 종을 확인하거나 분류하기 위해 사용할 수 있고, 다른 한편으로는, 정밀 화학물질의 생산자 유기체의 생산성을 증가시켜 정밀 화학물질을 제조하는 바이오테크 방법을 개선시키는 신규 핵산 분자 및 단백질을 제공한다.
코리네박테리움 글루타미쿰은 수많은 정밀 화학물질의 대규모 생산, 탄화수소의 분해 (예를 들어, 원유 스필의 경우) 및 테르페노이드의 산화를 위해 산업적으로 널리 사용되는 그람 양성 호기성 박테리아이다. 따라서, 상기 핵산 분자는 발효 공정 등에 의한 정밀 화학물질 생산에 이용할 수 있는 미생물 확인에 사용할 수 있다. 코리네박테리움 글루타미쿰 그 자체는 인간에게 병원성이 아니지만, 코리네박테리움 디프테리애(Corynebacterium diphtheriae) (디프테리아의 원인균)와 같이, 인간에게 주요한 병원성인 종과 관련되어 있다. 그러므로, 코리네박테리움 종의 존재 확인 능력은 또한 임상적으로, 예를 들어, 진단 적용에 있어 상당히 중요할 수도 있다. 추가로, 상기 핵산 분자는 코리네박테리움 글루타미쿰의 게놈 또는 관련 유기체의 게놈을 지도화하기 위한 기준점으로 작용할 수 있다.
이하에서 대사 경로 단백질 또는 MP 단백질로서도 언급되는 본 발명의 단백질은 표 1의 컬럼 7에 각각 나타낸 기능을 보유한다. 추가로, 이들은 표 1의 컬럼 4에서 상기 아미노산 서열에 대해 나타낸 아미노산 위치에 상응하는, 하나 이상의 아미노산 위치에서 표 1의 컬럼 5의 동일 열에 나타낸 특정 아미노산과는 상이한 단백질성 아미노산을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
"상응하는" 아미노산 위치는 바람직하게, 당업자는 표 1의 컬럼 2에 각각 언급하고 표 1의 컬럼 4에서 각각 나타낸 아미노산 서열의 아미노산 위치를 갖는 아미노산 서열과의
a) 아미노산 서열의 상동성 비교에 의해, 또는
b) 상기 아미노산 서열의 2차, 3차 및(또는) 4차 구조의 구조적 비교에 의해 용이하게 찾을 수 있는, 본 발명의 MP 단백질의 아미노산 서열의 아미노산 위치를 의미한다.
아미노산 서열의 상동성을 비교하는 바람직한 방법은 예를 들면, 하기 파라미터로 세팅하여 클러스탈(Clustal) 방법 [Higgins DG, Sharp PM. Fast and sensitive multiple sequence alignments on a microcomputer. Comput Appl. Biosci. 1989 Apr; 5(2):151-1]을 사용하여 미국 위스콘신 매디슨에 소재하는 DNASTAR 인코포레이티드로부터의 레이저진 소프트웨어(Lasergene software)로 사용된다:
다중 정렬 파라미터:
갭 패널티 10
갭 길이 페널티 10
쌍 정렬 파라미터:
k-tuple 1
갭 패널티 10
윈도우 5
보존 대각선 5
바람직한 실시양태에서, 단백질은 표 1의 컬럼 7에 각각 나타낸 기능을 보유하고, 표 1의 컬럼 2에서 각각 언급한 아미노산 서열로부터 출발하여 표 1의 컬럼 4에서 상기 아미노산 서열에 대해 나타낸 아미노산 위치에 상응하는, 하나 이상의 아미노산 위치에서 표 1의 컬럼 5의 동일 열에 나타낸 특정 아미노산과는 상이한 단백질성 아미노산을 갖는 아미노산 서열을 갖는 단백질이되, 단, 표 2에 따른 단백질은 제외된다.
추가로 바람직한 실시양태에서, 단백질은 표 1의 컬럼 2에서 각각 언급한 아미노산 서열로부터 출발하여 표 1의 컬럼 4에서 상기 아미노산 서열에 대해 나타낸 아미노산 위치에 상응하는, 하나 이상의 아미노산 위치에서 표 1의 컬럼 5의 동일 열에 나타낸 특정 아미노산과는 상이한 단백질성 아미노산을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
추가로 바람직한 실시양태에서, 단백질은 표 1의 컬럼 2에서 각각 언급한 아미노산 서열로부터 출발하여 표 1의 컬럼 4에서 상기 아미노산 서열에 대해 나타낸 아미노산 위치에 상응하는, 하나의 아미노산 위치에서 표 1의 컬럼 5의 동일 열에 나타낸 특정 아미노산과는 상이한 단백질성 아미노산을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
표 1의 컬럼 2에 나타낸 아미노산 서열은 코리네박테리움 글루타미쿰 야생형 서열이다. 표 1의 컬럼 4는 본 발명의 단백질의 아미노산 서열이 표 1의 컬럼 5의 동일 열에 나타낸 특정 아미노산과는 상이한 단백질성 아미노산을 갖는, 하나 이상의 아미노산 위치에서 특정의 야생형 아미노산 서열에 대하여 나타낸다.
추가로 바람직한 실시양태에서, 단백질은 표 1의 컬럼 4에서 상기 아미노산 서열에 대해 나타낸 아미노산 위치에 상응하는, 하나 이상의 아미노산 위치에서 표 1의 컬럼 6의 동일 열에 나타낸 아미노산을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
본 발명의 또다른 일면은 단리된 MP 단백질 또는 그의 단편, 예를 들면, 생물학적으로 활성이 그의 단편에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 단리된 MP 단백질 또는 그의 단편은 유기체, 특히 코리네박테리아 및 브레비박테리아에서의 하나 이상의 대사 경로를 전사, 해독 또는 후해독 방법에 의해 조절한다.
MP 폴리펩티드 또는 그의 생물학적 활성 절편을 MP 폴리펩티드가 아닌 폴리펩티드와 기능적으로 연결하여 융합 단백질을 형성할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 이 융합 단백질의 활성은 MP 단백질만의 활성과 다르고, 다른 바람직한 실시양태에서, 코리네박테리움 글루타미쿰에서의 하나 이상의 대사 경로를 전사, 해독 또는 후 해독적으로 조절한다. 특히 바람직한 실시양태에서, 이 융합 단백질을 숙주 세포로 통합시켜 이 세포에 의해 관심의 대상이 되는 화합물이 생산되는 것을 조정한다.
본 발명은 추가로 상기 기술된 본 발명의 단백질을 코딩하는 단리된 핵산에 관한 것이다. 이들 핵산 분자는 이하에서 대사 경로 핵산 또는 MP 핵산 또는 MP 유전자로서도 언급된다. 이들 신규한 MP 핵산 분자는 본 발명의 MP 단백질을 코딩한다. 이들 MP 단백질은 예를 들어, 세포 의 정상적인 대사 기능에 결정적인 단백질의 전사, 해독 또는 후해독 조절에 관련된 기능을 발휘할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제4,649,119호 [Sinskey et al.]에 의해 개시된 클로닝 벡터와 같은 코리네박테리움 글루타미쿰에 사용하기 위한 클로닝 벡터, 및 관련된 브레비박테리움 종 (예를 들어, 락토페르멘툼(lactofermentum)의 유전자 조작 기술 (문헌 [Yoshihama et al, J. Bacteriol. 162: 591-597 (1985)], 문헌 [Katsumata et al., J. Bacteriol. 159: 306-311 (1984)], 및 문헌 [Santamaria et al., J. Gen. Microbiol. 130: 2237-2246 (1984)])을 이용하여 본 발명의 핵산 분자를 이용하여 이 유기체를 유전공학적으로 조작함으로써, 이 유기체가 1종 이상의 정밀 화학물질의 보다 우수하거나 보다 효율적인 생산자가 되도록 할 수 있다.
본 발명의 핵산 서열 제조에 적절한 출발점은 예를 들면, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)에서 ATCC 13032로 입수할 수 있는 코리네박테리움 글루타미쿰 균주의 게놈이다.
본 발명의 핵산 서열은 표 1에 나타낸 변형을 통해 통상의 방법을 이용하여 이들 핵산 서열로부터 제조할 수 있다. 본 발명의 MP 단백질의 아미노산 서열을 본 발명의 MP 유전자 핵산으로 역-해독(back-translation)하기 위해 본 발명의 MP 핵산 서열이 도입되거나 본 발명의 MP 핵산 서열이 존재하는 유기체의 코돈 사용(codon usage)을 사용하는 것이 유리하다. 예를 들면, 코리네박테리움 글루타미쿰을 위해 코리네박테리움 글루타미쿰의 코돈 사용을 사용하는 것이 유리하다. 특정 유기체의 코돈 사용은 관심의 대상이 되는 유기체의 적어도 하나의 단백질 및 상기 단백질을 코딩하는 적어도 하나의 유전자를 기술하는 특허 출원 또는 데이타베이스로부터 그 자체로서 공지되어 있는 방식으로 결정될 수 있다.
MP 단백질을 코딩하는 단리된 핵산 분자는 표 1의 컬럼 1에 나타낸 뉴클레오티드 서열에 하나 이상의 뉴클레오티드 치환, 부가 또는 결실을 도입하여 생성할 수 있으며, 이에 의해 코딩된 단백질에는 하나 이상의 아미노산 치환, 부가 또는 결실이 도입된다. 상기 돌연변이는 부위-지정 돌연변이유발법 및 PCR-매개 돌연변이유발법 등과 같은 표준 기술을 통해 표 1의 컬럼 1에 나타낸 서열중 하나에 도입될 수 있다. 비필수라고 예측되는 하나 이상의 아미노산 잔기에 보존적 아미노산 치환을 도입하는 것이 바람직하다. "보존적 아미노산 치환"은 해당 아미노산 잔기를 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체한다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 군은 당업계에 규정되어 있다. 이들 군은 염기성 측쇄를 갖는 아미노산 (예컨대, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄를 갖는 아미노산 (예컨대, 아스파르트산, 글루탐산), 대전되지 않은 극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예컨대, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예컨대, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지된 측쇄를 갖는 아미노산 (예컨대, 트레오닌, 발린, 이소루이신) 및 방향족 측쇄를 갖는 아미노산 (예컨대, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함한다. 따라서, MP 단백질에서 비필수라고 예측되는 아미노산 잔기는 동일 측쇄군의 또다른 아미노산 잔기로 대체되는 것이 바람직하다. 다르게는, 또다른 실시양태에서는 상기 돌연변이를 MP-코딩 서열 전체 또는 일부에 예를 들어, 포화 돌연변이유발법 등을 통해 무작위로 도입할 수 있고, 생성되는 돌연변이체를 본 원에 기재한 MP 활성에 대해 시험하여 MP 활성을 유지하는 돌연변이체를 확인할 수 있다. 첨부문서 A에 나타낸 임의의 서열을 돌연변이유발시킨 후에, 코딩되는 단백질을 재조합으로 발현시킬 수 있고, 상기 단백질의 활성을 예를 들어, 본 원에 기재한 분석법을 이용하여 측정할 수 있다 (실시예 단락의 실시예 8 참조).
본 발명은 유기체, 특히, 코리네박테리움 글루타미쿰에서의 하나 이상의 대사 경로를 전사, 해독 또는 후해독 방법에 의해 조절하는, 본 원에서 MP 핵산 및 MP 단백질 분자로 언급되는 새로운 분자의 검출을 기초로 한다. 한 실시양태에서, MP 분자는 유기체, 특히, 코리네박테리움 및 브레비박테리움 종, 특히 바람직하게, 코리네박테리움 글루타미쿰에서의 대사 경로를 전사, 해독 또는 후해독적으로 조절한다. 바람직한 실시양태에서, 유기체, 특히, 코리네박테리움 및 브레비박테리움 종, 특히 바람직하게, 코리네박테리움 글루타미쿰에서의 하나 이상의 대사 경로를 조절하기 위한 본 발명의 MP 분자의 활성은 이 유기체에 의한 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질의 생산에 영향을 준다. 특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 MP 단백질이 조절하는 유기체, 특히, 코리네박테리움 및 브레비박테리움 종, 특히 바람직하게, 코리네박테리움 글루타미쿰 대사 경로가 생산성 또는 효율 면에서 조정되도록 본 발명의 MP 분자의 활성을 조정하여, 유기체, 특히, 코리네박테리움 및 브레비박테리움 종, 특히 바람직하게, 코리네박테리움 글루타미쿰에 의한 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질의 수율, 생산량 및(또는) 생산 효율을 직접적 또는 간접적으로 조절한다.
용어 "MP 단백질" 또는 "MP 폴리펩티드"에는 유기체, 특히, 코리네박테리움 및 브레비박테리움 종, 특히 바람직하게, 코리네박테리움 글루타미쿰에서의 대사 경로를 전사, 해독 또는 후해독적으로 조절하는 단백질이 포함된다. MP 단백질의 예에는 표 1에 기재된 것들이 포함된다. 용어 "MP 유전자" 또는 "MP 핵산 서열"에는 코딩 영역 및 이에 상응하는 비해독 5' 및 3' 서열 영역으로 구성된, MP 단백질을 코딩하는 핵산 서열이 포함된다. MP 유전자의 예는 표 1에 기재된다.
용어 "생산량" 및 "생산성"은 당업계에 공지되어 있으며 소정의 기간 및 소정의 발효 부피에서 생산될 발효 산물 (예컨대, 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질)의 농도 (예컨대, 1 L 당 산물 질량 (kg)/시간)를 포함한다.
용어 "생산 효율"은 특정 생산량 (예를 들어, 세포에 의한 정밀 화학물질의 처리량이 특정 속도에 도달하는데 필요한 시간) 달성에 필요한 시간을 포함한다. 용어 "수율" 또는 "산물/탄소 수율"은 당업계에 공지되어 있으며 탄소 공급원을 산물 (즉, 정밀 화학물질)로 전환시키는 효율을 포함한다. 즉, 이는 예를 들어, 통상적으로 탄소 공급원 1 kg 당 산물의 질량 (kg)으로 표현된다. 화합물의 수율 또는 생산 증가는 특정량의 배양물에서 소정의 시간에 걸쳐 수득되는 상기 분자의 양 또는 이 화합물의 적합하게 수득되는 분자의 양을 증가시킨다.
용어 "생합성" 및 "생합성 경로"는 당업계에 공지되어 있으며 세포가 중간체로부터 화합물, 바람직하게는 유기 화합물을 예를 들어, 다단계 과정 또는 고도로 조절되는 과정을 통해 합성하는 것을 포함한다. 용어 "분해" 및 "분해 경로"는 당업계에 공지되어 있으며 세포가 화합물, 바람직하게는 유기 화합물을 예를 들어, 다단계 과정 또는 고도로 조절되는 과정을 통해 분해 산물 (더욱 일반적인 용어로는, 더 작거나 덜 복잡한 분자)로 절단하는 것을 포함한다.
용어 "대사"는 당업계에 공지되어 있으며 유기체에서 일어나는 전반적인 생화학적 반응을 포함한다. 이때, 특정 화합물의 대사 (예컨대, 글리신 등과 같은 아미노산의 대사)는 그 화합물의 세포내 모든 생합성, 변형 및 분해 경로를 포함한다.
용어 "조절"은 당업계에 공지되어 있으며, 또다른 단백질의 활성을 제어하기 위한 단백질의 활성을 포함한다. 용어 "전사 조절"은 당업계에 공지되어 있으며 표적 단백질을 코딩하는 DNA의 mRNA로의 전환을 억제하거나 활성화시키는 단백질의 활성을 포함한다. 용어 "해독 조절"은 당업계에 공지되어 있으며 표적 단백질을 코딩하는 mRNA의 단백질 분자로의 전환을 억제하거나 활성화시키는 단백질의 활성을 포함한다. 용어 "후해독 조절"은 당업계에 공지되어 있으며 표적 단백질을 공유결합적으로 (예컨대, 메틸화, 글리코실화 또는 인산화에 의해) 변형시킴으로써 표적 단백질의 활성을 억제하거나 개선시키는 단백질의 활성을 포함한다.
본 발명의 유전자를 조작함으로써 정밀 화학물질의 수율, 생산량 및(또는) 생산 효율을 직접적으로 또는 간접적으로 개선시킬 수 있다. 더욱 구체적으로, 보통 정밀 화학물질 대사 경로 중 정밀 화학물질의 수율, 생산량 및(또는) 생산 효율을 조절하는 MP 단백질의 변형은 상기 유기체로부터의 하나 이상의 상기 원하는 화합물의 총생산 또는 생산 속도에 직접적인 영향을 줄 수 있다.
이들 대사 경로에 관여하는 상기 단백질의 변형은 또한 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질의 수율, 생산량 및(또는) 생산 효율에 간접적인 영향을 줄 수도 있다. 대사 조절은 반드시 복잡하며, 상이한 경로에 영향을 주는 조절 메카니즘은 많은 장소에서 중복될 수 있으므로, 하나 이상의 대사 경로는 특정 세포내 사건에 따라 신속하게 조정될 수 있다. 이로 인해 하나의 대사 경로에 대한 조절 단백질의 변형이 수많은 다른 대사 경로에 영향을 줄 수 있고, 그 중 일부는 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질의 생합성 또는 분해에 관여할 수 있다. 이러한 간접적인 방식으로, MP 단백질의 작용 조정은 상기 MP 단백질에 의해 직접적으로 조절되는 대사 경로와 상이한 대사 경로를 통해 생산된 정밀 화학물질의 생산에 영향을 줄 수 있다.
본 발명의 MP 핵산 및 MP 단백질 분자를 이용하여, 비-인간 유기체로부터 하나 이상의 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질의 수율, 생산량 및(또는) 생산 효율을 직접 개선시킬 수 있다.
당업계에 공지된 유전자 재조합 기술을 이용하여, 본 발명의 하나 이상의 조절 단백질을 조작하여, 그 기능을 조절할 수 있다. 아미노산 생합성에 요구되는 효소를 코딩하는 유전자의 전사를 억제하는 데에 관여하는 MP 단백질의 돌연변이 (여기서, 상기 단백질은 더이상 전사를 억제할 수 없음)로 인해, 예를 들어, 상기 아미노산의 생산이 증가될 수 있다.
따라서, 해독 증가를 유발하거나 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질의 생합성에 관여하는 MP 단백질의 후해독 변형을 활성화시키는 MP 단백질의 활성이 변형되면, 상기 화학물질의 생산이 차례로 증가될 수 있다. 반대의 상황도 또한 유용할 수 있다: 전사 또는 해독의 억제를 증가시키거나, 화합물의 분해 경로 조절에 관여하는 MP 단백질을 후해독적으로 음으로 변형시킴으로써, 상기 화학물질의 생산을 증가시키는 것이 가능하다. 각 경우에서, 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질의 총 수율 또는 생산 속도가 증가될 수 있다.
또한, 본 발명의 단백질 및 뉴클레오티드 분자에서의 이러한 변형으로 간접적 메카니즘을 통해 정밀 화학물질의 수율, 생산량 및(또는) 생산 효율이 개선될 수 있는 것이 가능하다. 특정 화합물의 대사는 세포내 다른 생합성 및 분해 경로와 반드시 연결되어 있고, 한 대사 경로에 필요한 보조인자, 중간체 또는 기질은 또다른 대사 경로에 의해 공급되거나 제한되는 것으로 보인다. 그러므로, 본 발명의 하나 이상의 조절 단백질을 조정하여, 정밀 화학물질의 다른 생합성 또는 분해 경로의 활성 효율에 영향을 미칠 수 있다. 이에 더하여, 배양에서, 특히 성장 조건이 최적에 이르지 못할 수 있는 대규모 발효 배양에서, 하나 이상의 조절 단백질을 조작하여 세포가 생장 및 번식하는 전반적인 능력을 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 최적에 이르지 못하는 영양소의 세포외 공급 (그로 인한 세포 분열 저지)으로의 반응으로서 뉴클레오시드의 생합성을 보통 억제하는 본 발명의 MP 단백질을 돌연변이시킴으로써 (이 때 상기 단백질은 낮은 억제자 활성을 갖음) 뉴클레오시드의 생합성 및 아마도 세포 분열을 증가시키는 것이 가능하다. 배양 중 세포 성장 증가 및 세포 분열 증가를 유발하는 상기 MP 단백질을 변형시키는 것은 적어도 배양 중에 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질을 생산하는 세포의 수를 증가시킴으로써, 배양물로부터의 관심의 대상이 되는, 하나 이상의 상기 화학물질의 수율, 생산량 및(또는) 생산 효율 증가를 야기할 수 있다.
본 발명은 비-인간 유기체에서 대사 경로의 전사, 해독 또는 후해독 조절에 관여하는 효소 단계를 수행할 수 있는 단백질을 코딩하는 신규 핵산 분자를 제공한다. MP 단백질을 코딩하는 핵산 분자는 본 원에서 MP 핵산 분자로 언급된다. 바람직한 실시양태에서, MP 단백질은 하나 이상의 대사 경로의 전사, 해독 또는 후해독 조절에 관여한다. 이러한 단백질의 예로는 표 1에 기재된 유전자에 의해 코딩되는 것을 들 수 있다.
따라서, 본 발명의 한 측면은 MP 단백질 또는 생물학적으로 활성인 그의 절편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자 (예를 들어, cDNA) 뿐만 아니라 MP-코딩 핵산 (예를 들어, DNA 또는 mRNA)의 검출 또는 증폭을 위한 프라이머 또는 혼성화 프로브로서 적절한 핵산 단편에 관한 것이다. 다른 바람직한 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 표 1에 기재된 아미노산 서열중 어느 하나를 코딩한다. 본 발명의 바람직한 MP 단백질은 본 원에 기재된 MP 활성 중 적어도 하나를 갖는 것도 바람직하다.
추가의 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 그 길이가 뉴클레오티드 15개 이상이고 본 발명의 핵산 분자와 엄격 조건하에서 혼성화한다. 바람직하게는, 단리된 핵산 분자는 자연 발생된 핵산 분자에 상응한다. 더욱 바람직하게는, 단리된 핵산은 자연 발생된 코리네박테리움 글루타미쿰의 MP 단백질 또는 그의 생물학적 활성 절편을 코딩한다.
모든 살아있는 세포는 많은 대사 경로가 서로 연결되어 있는 복잡한 이화 및 동화 능력을 갖는다. 이러한 극히 복잡한 대사 네트워크의 각종 부분들 사이에 평형을 유지하기 위하여, 세포는 정밀하게 조율된 조절 네트워크를 이용한다. 효소 합성 및 효소 활성을 독립적으로 또는 동시에 조절함으로써, 세포는 완전하게 상이한 대사 경로의 활성을 조절하여 세포의 변화하는 요구들을 충족시킬 수 있다.
효소 합성의 유도 또는 억제는 전사 또는 해독 수준 중 하나에서 또는 전사와 해독 수준 모두에서 발생할 수 있다 (자세한 것은 문헌 [Lewin, B. (1990) Genes IV, Part 3: "Controlling prokaryote genes by transcription" Oxford University Press, Oxford, pp. 213-301]과 그의 참고문헌, 및 문헌 [Michal, G. (1999) Biochemical Pathways: An Atlas of Biochemistry and Molecular Biology, John Wiley & Sons] 참조). 상기 공지된 조절 방법 모두는 각종 외적 효과 (예컨대 온도, 영양소 공급 또는 빛)에 스스로 반응하는 추가의 유전자에 의해 매개된다. 상기 유형의 조절에 관여하는 단백질 인자의 예는 전사 인자를 포함한다. 이들은 DNA와 결합하여 유전자의 발현을 증가시키거나 (대장균 ara 오페론의 경우 양의 조절) 감소시키는 (대장균 lac 오페론의 경우 음의 조절) 단백질이다. 이들 발현-조정 전사 인자는 스스로 조절될 수 있다. 그의 활성은 예를 들어, DNA-결합 단백질에 결합된 저분자량 화합물에 의해 조절될 수 있는데, 상기 단백질과 DNA상의 적절한 결합 부위와의 결합이 자극되거나 (ara 오페론에 대해서는 아라비노스의 경우와 같음) 억제됨으로써 (lac 오페론에 대해서는 락토스의 경우와 같음) 조절된다 (예를 들어, 문헌 [Helmann, J.D. and Chamberlin, M.J. (1988) "Structure and function of bacterial sigma factors" Ann. Rev. Biochem. 57: 839-872]; [Adhya, S. (1995) "The lac and gal operons today" and Boos, W. et al., "The maltose system" both in Regulation of Gene Expression in Escherichia coli (Lin, E.C.C. and Lynch, A.S. editors) Chapman & Hall: New York, pp. 181-200 and 201-229]; 및 [Moran, C.P. (1993) "DNA polymerase and transcription factors" in: Bacillus subtilis and other Gram-positive bacteria, Sonenshein, A.L. editors ASM: Washington D.C. pp. 653-667] 참조).
단백질 합성은 전사 수준에서 뿐 아니라 해독 수준에서도 조절된다. 상기 조절은 리보솜이 하나 이상의 mRNA와 결합하는 능력, 리보솜과 mRNA의 결합, mRNA 2차 구조의 유지 또는 제거, 특정 유전자에 대한 통상적 또는 덜 통상적인 코돈의 이용, 하나 이상의 tRNA의 풍부도를 변형시키는 것을 포함하는 많은 메카니즘 및 약독화와 같은 특이적 조절 메카니즘을 통해 수행될 수 있다 (문헌 [Vellanoweth, R.I. (1993) Translation and its regulation in Bacillus subtilis and other Gram-positive bacteria, Sonenshein, A.L. et al. editors ASM: Washington, D.C., pp. 699-711] 및 그의 참고문헌 참조).
전사 및 해독의 조절은 단일 단백질을 향해 지시되거나 (순차적 조절), 동시에 각종 대사 경로의 복수개의 단백질을 향해 지시될 수 있다 (통합적 조절). 발현이 통합적 방식으로 조절되는 유전자는 종종 게놈상에서 오페론 또는 레귤론에 근접하게 위치한다. 유전자 전사 및 유전자 해독의 이러한 상향 또는 하향 조절은 기질 (하나 이상의 대사 경로에 사용되는 전구체 및 중간체), 이화산물 (당과 같은 복합체 유기 분자의 분해로 인한 에너지 생산과 연결된 생화학적 경로에 의해 생산된 분자) 및 최종 산물 (대사 경로의 마지막에 수득되는 분자) 등과 같은 각종 인자의 세포내 또는 세포외 양에 의해 제어된다. 특정 대사 경로의 활성에 요구되는 효소를 코딩하는 유전자의 발현은 상기 대사 경로에 대한 다량의 기질 분자에 대해 유도된다. 상응하게, 상기 유전자 발현은 상기 경로의 최종 산물이 세포간에 다량 존재함으로써 억제된다 [Snyder, L. and Champness, W. (1977) The Molecular Biology of Bacteria ASM: Washington]. 유전자 발현은 환경적 조건 (예컨대, 열, 산화적 스트레스 또는 기아)과 같은 내부 및 외부 인자에 의해 조절될 수도 있다. 이들 전체적인 환경적 변화는 DNA에 결합함으로써 유전자 발현을 직접적으로 또는 간접적으로 (추가의 유전자 또는 단백질을 통해) 유도하는 구체적인 조정 유전자의 발현을 변화시키고, 그로 인해 전사를 유도하거나 억제한다 (예를 들어, 문헌 [Lin, E.C.C. and Lynch, A.S. editors (1995) Regulation of Gene Expression in Escherichia coli, Chapman & Hall: New York] 참조).
세포내 대사를 조절할 수 있는 또다른 메카니즘은 단백질 수준에서 발생한다. 상기 조절은 단백질의 정상 기능을 방해하거나 허용하는 저분자량 성분의 결합 또는 다른 효소의 활성을 통해 수행된다. 저분자량 화합물의 결합에 의한 단백질 조절의 예는 GTP 또는 NAD의 결합을 포함한다. 저분자량 화학물질의 결합은 예를 들어, GTP-결합 단백질의 경우 보통 가역적이다. 이들 단백질은 (GTP 또는 GDP와 결합하여) 2가지 상태로 존재하는데, 한 상태는 단백질의 활성형이고 다른 상태는 비활성형이다.
단백질 활성은 보통 단백질의 공유결합적 변형 (즉, 히스티딘 또는 아스파르테이트와 같은 아미노산 잔기의 인산화 또는 메틸화)을 통한 다른 효소의 작용으로 조절된다. 상기 공유결합적 변형은 보통 가역적이고, 이는 반대 활성을 가진 효소에 의해 수행된다. 이의 예는 단백질 인산화에서의 키나제 및 포스포릴라제의 반대 활성이다: 단백질 키나제는 표적 단백질 (예컨대, 세린 또는 트레오닌)상의 특이적 잔기를 인산화하는 반면, 단백질 포스포릴라제는 상기 단백질로부터 포스페이트 기를 제거한다. 다른 단백질의 활성을 조정하는 효소는 보통 외부 자극에 의해 스스로 조정된다. 이들 자극은 감각기로서 작용하는 단백질에 의해 매개된다. 이들 감각기 단백질이 상기 외적 신호를 매개하는 널리 공지된 메카니즘은 이량체화이나, 다른 메카니즘도 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Msadek, T. et al. (1993) "Two-component Regulatory Systems" in: Bacillus subtilis and Other Gram-Positive Bacteria, Sonenshein, A.L. et al., editors, ASM: Washington, pp. 729-745] 및 그의 참고문헌).
미생물에서 세포내 대사를 제어하는 조절 네트워크의 상세한 이해는 발효에 의해 고수율로 화학물질을 생산하기 위해서 중대하다. 대사 경로를 하향조절하기 위한 제어 시스템은 관심의 대상이 되는 화학물질의 합성을 개선시키기 위해 제거되거나 감소될 수 있고, 이와 상응하게 관심의 대상이 되는 산물의 대사 경로를 상향조절하기 위한 제어 시스템은 활성 면에서 구조적으로 활성화되거나 최적화될 수 있다 (문헌 [Hirose, Y. and Okada, H. (1979) "Microbial Production of Amino Acids" in: Peppler, H.J. and Perlman, D. (editors) Microbial Technology 2nd edition, Vol. 1, Chapter 7, Academic Press, New York] 참조).
본 발명의 또 다른 측면은 예를 들면, 적어도 하나의 본 발명의 핵산을 포함하는, 재조합 발현 벡터와 같은 벡터인 핵산 작제물에 관한 것이다.
핵산 작제물은 바람직하게 기능적으로 연결된 방식으로 프로모터 및, 적절하게는, 종결자를 포함한다. 핵산에 대하여 이종이고 비-인간 유기체에서 당해 핵산을 발현시킬 수 있는 프로모터가 특히 바람직하다. 코리네박테리움 글루타미쿰 속의 바람직한 유기체에서 특히 바람직한 프로모터의 예는 tac 프로모터이다.
본 발명은 추가로
a) 상기 기술된 적어도 하나의 본 발명의 MP 핵산 또는
b) 상기 기술된 적어도 하나의 본 발명의 핵산 작제물 또는
c) 상기 기술된 본 발명의 내인성 MP 핵산에 대하여 이종이고 유기체에서 본 발명의 내인성 MP 핵산을 발현시킬 수 있는 프로모터를 비-인간 모체 유기체에 도입시킴으로써 상기 모체 유기체를 형질전환시켜 유전적으로 변형된 비-인간 유기체를 제조하는 방법에 관한 것이다.
바람직하게, 유기체에서 프로모터가 본 발명의 내인성 MP 핵산에 기능적으로 연결될 수 있도록 하기 위하여 실시양태 c)에 따른 프로모터를 유기체내로 도입한다. "기능적 연결"은 기능성인 연결, 즉, 본 발명의 내인성 MP 핵산이 도입된 프로모터에 의해 발현되도록 할 수 있는 연결을 의미한다.
용어 "모체 유기체"는 유전적으로 변형된 유기체로 형질전환되는, 상응하는 비-인간 유기체를 의미한다. 여기에서, 모체 유기체는 야생형 유기체이거나 이미 유전적으로 변형되어 있는 유기체일 수 있다. 추가로, 모체 유기체는 이미 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질을 생산할 수 있거나, 본 발명의 형질전환에 의해 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질을 생산할 수 있다.
용어 "유전적으로 변형된 유기체"는 바람직하게 모체 유기체와 비교하여 유전적으로 변형된 유기체를 의미한다.
상황에 따라, 용어 "유기체"는 비-인간 모체 유기체, 또는 본 발명의 유전적으로 변형된 비-인간 유기체 또는 둘 모두를 의미한다.
본 발명의 MP 핵산 또는 본 발명의 핵산 작제물은 자기-복제 플라스미드로서 염색체에 도입되거나 플라스미드로서 도입될 수 있다. 본 발명의 MP 핵산 또는 본 발명의 핵산 작제물은 바람직하게 염색체에 통합된다.
바람직한 실시양태에서, 사용되는 모체 유기체는 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질을 이미 생산할 수 있는 유기체이다. 특히 바람직한 코리네박테리움 글루타미쿰 속의 박테리아 유기체 및 특히 바람직한 정밀 화학물질 리신, 메티오닌 및 트레오닌 중에서 이미 리신을 생산할 수 있는 모체 유기체를 제공하는 것이 특히 바람직하다. 예를 들면, 아스파르토키나제에 대한 유전자 코딩(ask 유전자)이 탈조절되거나 피드백 저해가 제거되거나 감소되어 있는 코리네박테리아가 특히 바람직하다. 예를 들면, 이러한 종류의 박테리아는 피드백 저해를 제거하거나 감소시키는 ask 유전자상의 돌연변이, 예로서, 돌연변이 T311I를 갖는다.
따라서, 특히, 본 발명은 상기 기술된 방법에 의해 수득할 수 있는 유전적으로 변형된 유기체이다.
추가로, 본 발명은
a) 상기 기술된 적어도 하나의 본 발명의 MP 핵산 또는
b) 상기 기술된 적어도 하나의 본 발명의 핵산 작제물 또는
c) 상기 기술된 본 발명의 내인성 MP 핵산에 대하여 이종이고 유기체에서 본 발명의 내인성 MP 핵산을 발현시킬 수 있는 프로모터로 형질전환된, 유전적으로 변형된 비-인간 유기체에 관한 것이다.
또다른 실시양태에서, 모체 유기체의 게놈에서 내인성 MP 유전자는 변형된 MP 유전자와의 상동성 재조합에 의해 변형되는데, 예를 들면 기능적으로 파괴된다.
바람직하게, 본 발명의 핵산의 발현을 통해 당해 유기체로부터의 정밀 화학물질의 생산은 모체 유기체와 비교하여 조정된다.
바람직한 비-인간 유기체는 식물, 조류(algae) 및 미생물이다. 바람직한 미생물은 박테리아, 효모 또는 진균이다. 특히 바람직한 미생물은 박테리아, 특히 코리네박테리움 또는 브레비박테리움 속의 박테리아이고, 코리네박테리움 글루타미쿰이 특히 바람직하다.
모체 유기체 또는 유기체 또는 유전적으로 변형된 유기체로서 특히 바람직한 코리네박테리움 또는 브레비박테리움 속의 박테리아는 하기 표 3에 기재하는 박테리아이다.
약어는 하기 의미를 갖는다:
ATCC: 미국 메릴랜드주 록빌에 소재하는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)
FERM: 일본 시바에 소재하는 퍼멘테이션 리서치 인스티튜트(fermentation research institute)
NRRL: 미국 일리노이주 피오리아에 소재하는 ARS 컬쳐 콜렉션 노던 리저널 리서치 라보라토리(Northern Regional Research Laboratory)
CECT: 스페인 발렌시아에 소재하는 꼴레치온 에스파놀라 드 컬티보스 티보(Coleccion Espanola de Cultivos Tipo)
NCIMB: 영국 애버딘에 소재하는 내쇼날 콜렉션 오브 인더스트리얼 앤드 마린 박테리아 리미티드(National collection of Industrial and Marine Bacteria Ltd.)
CBS: 네덜란드 바아른에 소재하는 센트라알부로 부르 스키멜컬쳐스(centraalbureau voor Schimmelcultures)
NCTC: 영국 런던에 소재하는 내쇼날 콜렉션 오브 타입 컬쳐(National collection of Type Culture)
DSMZ: 독일 브런즈윅에 소재하는 도이치 삼릉 폰 미크로오르가니스멘 운트 젤쿨투렌(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen)
또 다른 바람직한 실시양태는 이하 "숙주 세포"로서 언급되는 되는, 하나 이상의 본 발명의 MP 핵산 분자를 갖는, 본 발명의 유전적으로 변형된 유기체이다. 상기 숙주 세포는 당업자에 공지된 다양한 방법으로 제조될 수 있다. 이는 예를 들면, 수개의 본 발명의 핵산 분자를 운반하는 벡터에 의해 형질감염될 수 있다. 그러나, 각각의 경우 하나의 본 발명의 핵산 분자를 숙주 세포내로 도입시키기 위해서도 사용할 수 있고, 따라서, 다양한 벡터를 동시에 또는 순차적으로도 사용할 수 있다. 따라서, 다수의, 단, 수백 개 이하의 본 발명의 핵산 분자를 운반하는 숙주 세포를 작제할 수 있다. 이러한 축적은 자주 정밀 화학물질의 생산성과 관련하여 숙주 세포에 대하여 초부가적인 효과를 가져올 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 유전적으로 변형된 유기체는 염색체에 통합된 방식으로 적어도 2개의 본 발명의 MP 핵산 또는 본 발명의 내인성 MP 핵산에 기능적으로 연결된 이종 프로모터를 포함한다.
또다른 실시양태에서, 본 발명의 MP 단백질 및(또는) MP 유전자는 유기체, 특히, 코리네박테리움 및 브레비박테리움 종, 특히 바람직하게, 코리네박테리움 글루타미쿰 내에서 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질의 생산을 조정할 수 있다. 유전자 재조합 기술을 이용하여 본 발명의 하나 이상의 본 발명의 조절 단백질을 조작함으로써 이들의 기능을 조정할 수 있다. 예를 들어, 생합성 효소를 효율 면에서 개선시키거나 그의 알로스테릭 제어 영역을 파괴하여 화합물 생산의 피드백 억제를 방해하는 것이 가능하다. 따라서, 분해 효소는 세포 생존력을 손상시키지 않으면서 관심의 대상이 되는 화합물에 대한 그의 분해 활성을 감소시키도록 치환, 결실 또는 부가에 의해 삭제 또는 변형될 수 있다. 어떤 경우에는, 임의의 상기 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질의 전반적 효율 또는 생산 속도를 증가시키는 것이 가능하다.
또한, 본 발명의 단백질 및 뉴클레오티드 분자에서의 이러한 변형은 정밀 화학물질의 생산을 간접적으로 개선시킬 수도 있다. 세포내 대사 경로의 조절 메카니즘은 반드시 연결되어 있고, 한 대사 경로의 활성화는 그에 수반되는 방식으로 또다른 대사 경로를 억제 또는 활성화시킬 수 있다. 본 발명의 하나 이상의 단백질의 활성을 조정하는 것은 다른 정밀 화학물질 생합성의 생산 또는 활성 효율 또는 분해 경로에 영향을 줄 수 있다. 이들 대사 경로는 서로 연결되어 있으므로 아미노산 생합성에서 특정 단백질을 코딩하는 유전자의 전사를 억제하는 MP 단백질의 능력을 감소시킴으로써 동시에 다른 아미노산 생합성 경로를 억제할 수 있게 된다. 본 발명의 MP 단백질을 변형시킴으로써 그의 세포외 환경으로부터 일정한 수준의 세포 성장 및 세포 분열로 분리하는 것이 가능하고; 성장 및 세포 분열을 위한 세포외 조건이 최적에 이르지 못해 이제 상기 기능이 결핍된 경우, 보통 뉴클레오티드의 생합성을 억제하는 MP 단백질에 영향을 줌으로써 세포외 조건이 불량할지라도 성장할 수 있게 하는 것이 가능하다. 상기 인자에 대한 세포내 조절 시스템이 제거된 후 온도, 영양소 공급 또는 공기공급에 대한 배양물 조건이 종종 최적에 이르지 못하지만 성장 및 세포 분열을 여전히 촉진시킬 수 있는 대규모 발효 배양의 경우 이는 특히 중요하다.
따라서, 본 발명은 추가로, 상기 기술된 바와 같은 본 발명의 유전적으로 변형된 유기체를 배양하여 정밀 화학물질을 제조하는 방법에 관한 것이다.
추가로, 본 발명은
A) 비-인간 모체 유기체를
a) 상기 기술된 적어도 하나의 본 발명의 MP 핵산 또는
b) 상기 기술된 적어도 하나의 본 발명의 핵산 작제물 또는
c) 상기 기술된 본 발명의 내인성 MP 핵산에 대하여 이종이고 유기체에서 본 발명의 내인성 MP 핵산을 발현시킬 수 있는 프로모터
로 형질전환시키고,
B) 상기 단계 A)에 따라 제조된 유전적으로 변형된 유기체를 배양하여
정밀 화학물질을 제조하는 방법에 관한 것이다.
유전적으로 변형된 유기체는 그 자체로서 공지된 방식으로 상기 유기체에 따라 배양한다. 예를 들면, 박테리아는 적절한 발효 배지중 배양액에서 배양한다.
바람직한 실시양태에서, 배양 단계 후 유전적으로 변형된 유기체 및(또는) 배양 배지로부터 적어도 하나의 정밀 화학물질을 단리시킨다.
용어 "정밀 화학물질"은 당업계에 공지되어 있고, 제약, 농업 및 화장품 산업과 같은, 그러나 이에 제한되지 않는 다양한 산업에 이용되는 유기체에 의해 생산되는 분자를 포함한다. 이러한 화합물로는 타르타르산, 이타콘산 및 디아미노피멜산과 같은 유기산, 단백질생성 및 비-단백질생성 아미노산, 퓨린 및 피리미딘 염기, 뉴클레오시드, 및 뉴클레오티드 (예를 들어, 문헌 [Kuninaka, A. (1996) Nucleotides and related compounds, p.561-612, in Biotechnology vol. 6, Rehm et al., eds. VCH: Weinheim]과 그의 참고문헌에 기재된 바와 같음), 지질, 포화 및 불포화 지방산 (예를 들어, 아라키돈산), 디올 (예를 들어, 프로판디올 및 부탄디올), 탄수화물 (예를 들어, 히알루론산 및 트레할로스), 방향족 화합물 (예를 들어, 방향족 아민, 바닐린 및 인디고), 비타민 및 보조인자 (문헌 [Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry, vol. A27, "Vitamins", p.443-613 (1996) VCH: Weinheim] 및 그의 참고문헌, 및 문헌 [Ong, A.S., Niki, E. & Packer, L. (1995) "Nutrition, Lipids, Health, and Disease" Proceedings of the UNESCO/Confederation of Scientific and Technological Associations in Malaysia, and the Society for Free Radical Research Asia, held Sept. 1-3, 1994 at Penang, Malaysia, AOCS Press, (1995)]에 기재된 바와 같음), 효소 및 문헌 [Gutcho (1983) Chemicals by Fermentation, Noyes Data Corporation, ISBN: 0818805086] 및 상기 문헌에 표시된 참고문헌에 기재된 다른 모든 화학물질이 있다. 특정 정밀 화학물질의 대사 및 용도는 아래에 추가로 예시된다.
I. 아미노산 대사 및 용도
아미노산은 모든 단백질의 기본 구조 단위를 구성하므로 정상적인 세포 기능에 필수적이다. 용어 "아미노산"은 당업계에 공지되어 있다. 아미노산 중 단백질생성 아미노산은 20종이며 펩티드 결합으로 연결되어 있는 단백질의 구조 단위로 작용하는 반면, 비-단백질생성 아미노산 (수백 종이 공지되어 있음)은 정상적으로는 단백질에서 발견되지 않는다 (문헌 [Ulmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry, vol. A2, p.57-97 VCH: Weinheim (1985)] 참조). L-아미노산이 통상적으로 자연 발생 단백질에서 발견되는 유일한 형태이지만, 아미노산은 D-광학 또는 L-광학 구조일 수 있다. 20종의 단백질생성 아미노산 각각의 생합성 및 분해 경로의 특징은 원핵세포 및 진핵세포 둘 다에서 잘 규명되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Stryer, L. Biochemistry, 3rd edition, pages 578-590 (1988)] 참조). 생합성의 복잡성으로 인해 일반적으로 섭식으로 흡수되어야 하기 때문에 "필수" 아미노산이라고 지칭되는 아미노산 (히스티딘, 이소루이신, 루이신, 리신, 메티오닌, 페닐알라닌, 트레오닌, 트립토판 및 발린)은 단순한 생합성 경로에 의해 나머지 1하나의 "비필수" 아미노산 (알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르테이트, 시스테인, 글루타메이트, 글루타민, 글리신, 프롤린, 세린 및 티로신)으로 쉽게 전환된다. 고등동물은 필수 아미노산 중 일부를 합성하는 능력을 보유하지만, 상기 필수 아미노산은 식사로부터 공급되어야 정상적인 단백질 합성이 일어난다.
아미노산의 단백질 생합성에서의 기능 이외에도, 이들 아미노산은 그 자체가 흥미로운 화학물질이고, 다수의 아미노산이 식품, 사료, 화학물질, 화장품, 농업 및 제약 산업에 다양하게 사용될 수 있는 것으로 밝혀져 있다. 리신은 인간뿐만 아니라 가금 및 돼지와 같은 단위(monogastric) 동물의 영양에 있어서도 중요한 아미노산이다. 글루타메이트는 향미제 첨가물 (모노-소듐 글루타메이트, MSG)로서 가장 흔히 사용되고, 아스파르테이트, 페닐알라닌, 글리신 및 시트테인도 식품 산업 전반에 걸쳐 광범위하게 사용된다. 글리신, L-메티오닌 및 트립토판은 모두 제약 산업에 사용된다. 글루타민, 발린, 루이신, 이소루이신, 히스티딘, 아르기닌, 프롤린, 세린 및 알라닌은 제약 및 화장품 산업 둘다에 사용된다. 트레오닌, 트립토판 및 D/L-메티오닌은 통상적인 사료 첨가제이다 (문헌 [Leuchtenberger, W. (1996) Amino acids technical production and use, p.466-502 in Rehm et al. (eds.) Biotechnology vol. 6, chapter 14a, VCH: Weinheim]). 또한, 이들 아미노산은 합성 아미노산 및 단백질, 예를 들어, N-아세틸시스테인, S-카르복시메틸-L-시스테인, (S)-5-히드록시트립토판, 및 문헌 [Ulmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry, vol. A2, p.57-97, VCH: Weinheim, 1985]에 기재된 다른 것의 합성을 위한 전구체로 추가로 적합하다는 것이 밝혀져 있다.
박테리아 등과 같이 이들 천연 아미노산을 생산할 수 있는 유기체에서의 이들 천연 아미노산의 생합성 특징은 잘 규명되어 있다 (박테리아 아미노산 생합성 및 그의 조절에 대한 자세한 것은 문헌 [Umbarger, H.E. (1978) Ann. Rev. Biochem. 47: 533-606] 참조). 글루타메이트는 시트르산 사이클의 중간체인 α-케토글루타레이트의 환원성 아미노화에 의해 합성된다. 글루타민, 프롤린 및 아르기닌은 각각 글루타메이트로부터 생성된다. 세린의 생합성은 3-포스포글리세레이트 (해당 작용의 중간체)로 출발하여, 산화, 트랜스아미노화 및 가수분해의 3 단계 과정 후에 세린이 생성된다. 시스테인 및 글리신은 둘다 세린으로부터 생성되는데, 시스테인은 호모시스테인과 세린의 축합에 의해 생성되며, 글리신은 세린 트랜스히드록시메틸라제에 의해 촉매되는 반응에서 측쇄 β-탄소 원자가 테트라히드로폴레이트로 전달되어 생성된다. 페닐알라닌 및 티로신은 프레페네이트의 합성 후 최종 두 단계에서만 다른 9 단계 생합성 경로에서 해당작용 및 펜토스 포스페이트 경로 전구체인 에리쓰로스 4-포스페이트 및 포스포에놀피루베이트로부터 합성된다. 트립토판도 이들 두 초기 분자로부터 합성되지만, 그의 합성은 11 단계 경로이다. 티로신은 페닐알라닌 히드록실라제에 의해 촉매되는 반응에서 페닐알라닌으로부터 합성될 수도 있다. 알라닌, 발린 및 루이신은 해당작용의 최종 산물인 피루베이트의 모든 생합성 산물이다. 아스파르테이트는 시트르산 사이클의 중간체인 옥살로아세테이트로부터 형성된다. 아스파라진, 메티오닌, 트레오닌 및 리신 각각은 아스파르테이트의 전환에 의해 생성된다. 이소루이신은 트레오닌으로부터 형성된다. 복잡한 9 단계 경로에서 활성화된 당인 5-포스포리보실-1-피로포스페이트로부터 히스티딘이 생성된다.
세포의 단백질 합성 필요량을 초과하는 아미노산은 저장될 수 없고, 그 대신에 분해되어 세포의 주요 대사 경로에 대한 중간체로 제공된다 (자세한 것은 문헌 [Stryer, L. Biochemistry 3rd ed. Ch. 21 "Amino Acid Degradation and the Urea Cycle" p.495-516 (1988)] 참조). 세포가 불필요한 아미노산을 유용한 대사 중간체로 전환시킬 수 있다 하더라도, 아미노산 생성은 에너지, 전구체 분자, 및 이들 아미노산을 합성하는 데 필요한 효소를 고려할 때 손실이 큰 합성이다. 따라서, 특정한 아미노산의 존재가 그 자신의 생성을 서서히 또는 완전히 중지시키는 피드백 억제에 의해 아미노산의 생합성이 조절된다는 것은 놀라운 일이 아니다 (아미노산 생합성 경로의 피드백 메카니즘에 대한 전체적인 내용은 문헌 [Stryer, L. Biochemistry 3rd ed. Ch. 24 "Biosynthesis of Amino Acids and Heme" p. 575-600 (1988)] 참조). 따라서, 임의의 특정 아미노산의 생산량은 세포에 존재하는 아미노산의 양에 의해 제한된다.
II. 비타민, 보조인자 및 영양제의 대사 및 용도
비타민, 보조인자 및 영양제는 분자의 다른 군을 구성한다. 이들은 박테리아와 같은 다른 유기체에 의해 쉽게 합성된다 하더라도 고등동물이 합성 능력을 상실했기 때문에 섭취해야 한다. 이들 분자는 그 자체가 생활성 물질이거나, 다양한 대사 경로에서 전자 전달자 또는 중간체로 작용할 수 있는 생물학적 활성 물질의 전구체이다. 이들 화합물은 그 영양적 가치뿐 아니라, 색소, 항산화제 및 촉매로서, 또는 다른 과정의 보조제로서도 상당한 산업적 가치를 갖는다 (이들 화합물의 구조, 활성 및 산업적인 용도에 대한 것은 예를 들어, 문헌 [Ullman's Encyclopedia of Industrial Chemistry, "Vitamins" vol. A27, p.443-613, VCH: Weinheim, 1996] 참조). 용어 "비타민"은 당업계에 공지되어 있고, 유기체의 정상적인 기능을 위해서는 필요하지만 유기체가 스스로 합성할 수 없는 영양분을 포함한다. 비타민 군은 보조인자 및 영양제 화합물도 포함할 수 있다. 용어 "보조인자"는 정상적인 효소 활성이 일어나는 데 필요한 비-단백질생성 화합물을 포함한다. 이러한 화합물은 유기성 또는 무기성일 수 있고, 본 발명의 보조인자 분자는 유기성인 것이 바람직하다. 용어 "영양제(nutraceutical)" 는 식물 및 동물, 특히 인간에게 건강상 유익한 식이성 보충물을 포함한다. 이러한 분자의 예로는 비타민, 항산화제 및 일부 지질 (예를 들어, 다불포화 지방산)이 있다.
이들을 생산할 수 있는 유기체, 예를 들어, 박테리아에서 일어나는 이들 분자의 생합성의 특징은 잘 규명되어 있다 (문헌 [Ullman's Encyclopedia of Industrial Chemistry, "Vitamins" vol. A27, p.443-613, VCH: Weinheim, 1996], 문헌 [Michal, G. (1999) Biochemical Pathways: An Atlas of Biochemistry and Molecular Biology, John Wiley & Sons], 문헌 [Ong, A.S., Niki, E. & Packer, L. (1995) "Nutrition, Lipids, Health, and Disease "Proceedings of the UNESCO/Confederation of Scientific and Technological Associations in Malaysia, and the Society for Free Radical Research-Asia, held Sept. 1-3, 1994 at Penang, Malaysia, AOCS Press: Champaign, IL X, 374 S]).
티아민 (비타민 B1)은 피리미딘과 티아졸 잔기의 화학적 커플링에 의해 생성된다. 리보플라빈 (비타민 B2)는 구아노신-5'-트리포스페이트 (GTP) 및 리보스-5'-포스페이트로부터 합성된다. 그 다음, 상기 리보플라빈은 플라빈 모노뉴클레오티드 (FMN) 및 플라빈 아데닌 디뉴클레오티드 (FAD)의 합성에 사용된다. 총칭하여 "비타민 B6"로 지칭되는 화합물 족 (예를 들어, 피리독신, 피리독사민, 피리독사-5'-포스페이트 및 시판되는 피리독신 히드로클로라이드)은 모두 통상적인 구조 단위인 5-히드록시-6-메틸피리딘의 유도체이다. 판토테네이트 (판토텐산, (R)-(+)-N-(2,4-디히드록시-3,3-디메틸-1-옥소부틸)-β-알라닌)은 화학적인 합성 또는 발효에 의해 생성될 수 있다. 판토테네이트의 생합성의 최종 단계는 β-알라닌과 판토산의 ATP-유도 축합으로 구성된다. 판토산으로 전환하는 생합성 단계, β-알라닌으로 전환하는 생합성 단계 및 판토텐산으로의 축합에 관여하는 효소는 공지되어 있다. 판토테네이트의 대사 활성 형태는 보조효소 A인데, 이 보조 효소 A를 위한 생합성은 5 단계 효소 반응으로 진행된다. 판토테네이트, 피리독살-5'-포스페이트, 시스테인 및 ATP는 보조효소 A의 전구체이다. 이들 효소는 판토테네이트의 형성을 촉매할 뿐만 아니라 (R)-판토산, (R)-판토락톤, (R)-판테놀 (프로비타민 B5), 판테테인 (및 그의 유도체) 및 보조효소 A의 생성도 촉매한다.
미생물에서 전구체 분자인 피멜로일-CoA로부터의 비오틴 생합성 과정은 자세히 연구되어 있고 이에 관련된 수개의 유전자가 확인되어 있다. 상응하는 다수의 단백질이 Fe-클러스터 합성에도 관여하는 것으로 밝혀져 있고 이들 단백질은 nifS 클래스 단백질의 구성원이다. 리포산은 옥타노산으로부터 유도되고, 에너지 대사에서 보조효소로 작용하는데, 상기 리포산은 에너지 대사에서 피루베이트 데히드로게나제 결합체 및 α-케토글루타레이트 데히드로게나제 결합체의 일부가 된다. 폴레이트는 모두 엽산의 유도체 물질의 군이고, 엽산은 L-글루탐산, p-아미노벤조산 및 6-메틸프테린으로부터 유도된다. 대사 중간체인 구아노신-5'-트리포스페이트 (GTP), L-글루탐산 및 p-아미노벤조산으로부터 출발하는, 엽산 및 그의 유도체의 생합성은 일부 미생물에서 상세히 연구되어 있다.
코리노이드 (예를 들어, 코발라민 및 특히 비타민 B12) 및 포피린은 테트라피롤 고리계에 의해 특징지워지는 화학물질의 군에 속한다. 비타민 B12의 생합성은 그 특징이 완전히 규명되어 있지는 않지만 다수의 효소 및 기질이 현재 공지되어 있다는 점에서 충분히 복잡하다. 니코틴산 (니코티네이트) 및 니코틴아미드는 "니아신"으로도 지칭되는 피리딘 유도체이다. 니아신은 중요한 보조효소인 NAD (니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드), NADP (니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 포스페이트) 및 그들의 환원된 형태의 전구체이다.
이들 화합물의 대량 생산은 비록 이들 화학물질 중 일부, 예를 들어, 리보플라빈, 비타민 B6, 판토테네이트 및 비오틴이 미생물의 대량 배양에 의해서도 생산된다 하더라도 세포-유리 화학 합성에 주로 의존한다. 비타민 B12만이 발효에 의해 전적으로 생성되는데, 이는 비타민 B12의 합성의 복잡성 때문이다. 시험관내 방법론은 재료 및 시간, 종종 많은 비용의 상당한 투입을 요구한다.
III. 퓨린, 피리미딘, 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드의 대사 및 용도
퓨린 및 피리미딘 대사 유전자 및 이들의 상응하는 단백질은 종양 질환 및 바이러스 감염의 치료에 중요한 표적이다. 용어 "퓨린" 또는 "피리미딘"은 핵산, 보조효소 및 뉴클레오티드의 구성 성분인 질소 함유 염기를 포함한다. 용어 "뉴클레오티드"는 질소 함유 염기, 오탄당 (RNA의 경우, 상기 당은 리보스이고, DNA의 경우, 상기 당은 D-데옥시리보스임) 및 인산으로 구성된, 핵산 분자의 기본 구조 단위를 포함한다. 용어 "뉴클레오시드"는 뉴클레오티드의 전구체로 작용하지만 뉴클레오티드가 갖는 인산 잔기가 없는 분자를 포함한다. 이들 분자의 생합성을 억제하거나 핵산 분자를 형성하기 위한 이들 분자의 동원을 억제함으로써, RNA 및 DNA 합성 억제가 가능하고, 암세포에 표적화시키는 방식으로 상기 활성을 억제하여 종양 세포의 분열 및 복제 능력을 억제할 수 있다.
또한, 핵산 분자를 형성하기 보다는 에너지 저장물 (즉, AMP) 또는 보조효소 (즉, FAD 및 NAD)로 작용하는 뉴클레오티드도 있다.
이들 화학물질이 퓨린 및(또는) 피리미딘 대사에 영향을 줌으로써 상기 의학적 증상에 사용될 수 있다는 것은 여러 가지 문헌에 기재되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Christopherson, R.I. and Lyons, S.D. (1990) "Potent inhibitors of de novo pyrimidine and purine biosynthesis as chemotherapeutic agents." Med. Res. Reviews 10: 505-548]). 퓨린 및 피리미딘 대사에 관여하는 효소의 연구는 예를 들어, 면역억제제 또는 항증식제로 사용할 수 있는 신약의 개발에 초점을 두고 있다 (문헌 [Smith, J.L., "Enzymes in nucleotide synthesis." Curr. Opin. Struct. Biol. 5 (1995) 752-757; Biochem Soc. Transact. 23: 877-902]). 그러나, 퓨린 및 피리미딘 염기, 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드는 여러 가지 정밀 화학물질 (예를 들어, 티아민, S-아데노실-메티오닌, 폴레이트 또는 리보플라빈)의 생합성에 있어서 중간체로서의 용도, 세포를 위한 에너지 전달자 (예를 들어, ATP 또는 GTP)로서의 용도, 및 통상적으로 향 상승제 (예를 들어, IMP 또는 GMP)로 사용되는 화학물질 자체를 위한 용도 또는 여러 가지 의학 용도를 갖는다 (예를 들어, 문헌 [Kuninaka, A. (1996) "Nucleotides and Related Compounds in Biotechnology" Vol. 6, Rehm et al., eds. VCH: Weinheim, p.561-612] 참조). 또한, 퓨린, 피리미딘, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 대사에 관여하는 효소를 표적으로 사용하여 살진균제, 제초제 및 살충제를 비롯한, 농작물 보호용 화학물질을 개발하는 연구가 증가하고 있다.
박테리아에서 이들 화합물 대사의 특징은 규명되어 있다 (자세한 내용은 예를 들어, 문헌 [Zalkin, H. and Dixon, J. E. (1992) "De novo purine nucleotide biosynthesis", in Progress in Nucleic Acid Research and Molecular Biology, vol. 42, Academic Press:, p.259-287], 및 문헌 [Michal, G. (1999) "Nucleotides and Nucleosides"; Chapter 8 in: Biochemical Pathways: An Atlas of Biochemistry and Molecular Biology, Wiley, New York] 참조). 퓨린의 대사는 집중적인 연구의 대상이고, 세포의 정상적인 기능에 필수적이다. 고등 동물의 손상된 퓨린 대사는 통풍과 같은 심각한 질환을 초래할 수 있다. 퓨린 뉴클레오티드는 구아노신-5'-모노포스페이트 (GMP) 또는 아데노신-5'-모노포스페이트 (AMP)를 생성시키는 중간체 화합물인 이노신-5'-포스페이트 (IMP)를 통해 일련의 단계에서 리보스-5-포스페이트로부터 합성되고, 이들 GMP 또는 AMP로부터 뉴클레오티드로 사용되는 트리포스페이트가 용이하게 형성된다. 이들 화합물은 에너지 저장물로도 사용되므로, 이들의 분해는 세포에서 다수의 다양한 생합성 과정을 위한 에너지를 공급한다. 피리미딘 생합성은 리보스-5-포스페이트로부터의 유리딘-5'-모노포스페이트 (UMP)의 형성에 의해 진행된다. 그 다음, UMP가 시티딘-5'-트리포스페이트 (CTP)로 전환된다. 이들 모든 뉴클레오티드의 디옥시 형태는 뉴클레오티드의 디포스페이트 리보스 형태가 뉴클레오티드의 디포스페이트 데옥시리보스 형태로 전환되는 1 단계 환원 반응에서 생성된다. 인산화 후에 이들 분자는 DNA 합성에 참여할 수 있다.
IV. 트레할로스의 대사 및 용도
트레할로스는 α,α-1,1 결합에 의해 결합된 두 가지 당 분자로 구성된다. 트레할로스는 감미료, 건조 또는 동결 식품용 첨가제로서 식품 산업, 및 음료 산업에 통상적으로 사용된다. 그러나, 제약, 화장품 및 생물공학 산업에도 사용된다 (예를 들어, 문헌 [Nishimoto et al., (1998) 미국 특허 제5,759,610호], 문헌 [Singer, M.A. and Lindquist, S. Trends Biotech. 16 (1998) 460-467], 문헌 [Paiva, C.L.A. and Panek, A.D. Biotech. Ann. Rev. 2 (1996) 293-314], 문헌 [Shiosaka, M. J. Japan 172 (1997) 97-102] 참조). 트레할로스는 다수의 미생물로부터 효소에 의해 생성되고 주변 배지내로 자연적으로 방출되는데, 트레할로스는 당업계에 공지된 방법을 이용하여 상기 배지로부터 수득할 수 있다.
특히 바람직하게, 정밀 화학물질은 아미노산, 특히, L-리신, L-트레오닌 및 L-메티오닌으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
본 발명의 또다른 측면은 비-인간 유기체로부터 정밀 화학물질이 생산되는 것을 조정하는 방법에 관한 것이다. 이러한 방법은 MP 단백질 활성 또는 MP 핵산 발현을 조정하는 물질과 세포를 접촉시켰을 때의 세포 관련 활성이 상기 물질의 부재 하에서의 동일한 활성에 비해 변형되도록 하는 것을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 유기체, 특히, 코리네박테리움 및 브레비박테리움 종 박테리아, 특히 바람직하게, 코리네박테리움 글루타미쿰에서의 대사 경로에 대한 하나 이상의 조절 시스템에 대해 세포를 조정하여, 이 미생물에 의한 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질의 생산 속도 또는 수율을 개선시킨다. MP 단백질 활성을 조절하는 물질은, 예를 들어, MP 단백질 활성 또는 MP 핵산 발현을 자극한다. MP 단백질 활성 또는 MP 핵산 발현을 자극하는 물질의 예로는 소분자, 활성 MP 단백질, 및 세포로 도입되어 MP 단백질을 코딩하는 핵산이 있다. MP 활성 또는 발현을 억제하는 물질의 예로는 소분자 및 안티센스 MP 핵산 분자 등이 있다.
본 발명의 또다른 측면은 MP 유전자가 별개의 플라스미드 상에 유지되거나 숙주 세포의 게놈 내로 통합되도록 이 유전자를 세포에 도입하는 것을 포함하는, 세포로부터의 관심의 대상이 되는 화합물의 수율을 조정하는 방법에 관한 것이다. 게놈 내로의 통합은 무작위적일 수도 있고 통합된 카피가 천연 유전자를 대체하도록 하는 상동성 재조합에 의해 일어날 수도 있는데, 이러한 통합에 의해 세포로부터의 관심의 대상이 되는 화합물의 생산이 조정된다. 바람직한 실시양태에서, 상기 수율은 증가한다.
또다른 바람직한 실시양태에서, 정밀 화학물질은 아미노산이다. 특히 바람직한 실시양태에서, 상기 아미노산은 L-리신, L-트레오닌 및 L-메티오닌이다.
하기 단락에서는 본 발명의 다양한 측면 및 바람직한 실시양태를 더욱 상세하게 기재한다:
A. 단리된 핵산 분자
본 원에서 사용된 바와 같이, 용어 "핵산 분자"는 DNA 분자 (예컨대, cDNA 또는 게놈 DNA) 및 RNA 분자 (예컨대, mRNA)를 포함하며, 또한 뉴클레오티드 유사체에 의해 생성된 DNA 또는 RNA 유사체를 포함한다. 추가로, 상기 용어는 코딩 유전자 영역의 3' 및 5' 말단에 위치한 비해독 서열 (코딩 영역의 5' 말단 상류 서열의 뉴클레오티드 약 100개 이상 및 코딩 유전자 영역의 3' 말단 하류 서열의 뉴클레오티드 약 20개 이상)을 포함한다.
핵산 분자는 단일 가닥일 수도 있고 이중 가닥일 수도 있으나, 바람직하게는 이중 가닥 DNA이다. "단리된" 핵산 분자는 해당 핵산의 천연 공급원에 존재하는 다른 핵산 분자가 제거된 것이다. "단리된" 핵산은 해당 핵산이 기원된 유기체의 게놈 DNA에서 천연적으로 핵산 측면에 위치하는(flanking)하는 임의의 서열 (예를 들어, 해당 핵산의 5' 또는 3' 말단에 위치한 서열)을 보유하지 않는 것이 바람직하다.
다양한 실시양태에서, 단리된 MP 핵산 분자는 해당 핵산이 기원된 세포 (예컨대, 코리네박테리움 글루타미쿰 세포)의 게놈 DNA에서 천연적으로 핵산 분자 측면에 위치하는 뉴클레오티드 서열을 예를 들어, 약 5 kb 미만, 약 4 kb 미만, 약 3 kb 미만, 약 2 kb 미만, 약 1 kb 미만, 약 0.5 kb 미만 또는 약 0.1 kb 미만으로 보유할 수 있다. 게다가, cDNA 분자 등과 같은 "단리된" 핵산 분자에는, 재조합 기술로 제조된 경우에는 다른 세포내 물질 또는 배양 배지가 본질적으로 존재하지 않으며 화학적으로 합성된 경우에는 화학적 전구체 또는 다른 화학물질이 본질적으로 존재하지 않을 수 있다.
추가로, 핵산 분자는 상기 서열을 기초로 생성한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하는 폴리머라제 연쇄 반응으로 단리할 수 있다 (예를 들어, 첨부문서 A로부터의 완전 서열 또는 그의 절편을 포함하는 핵산 분자는 첨부문서 A로부터의 동일 서열을 기초로 생성한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용한 폴리머라제 연쇄 반응으로 단리할 수 있음). 예를 들면, mRNA는 정상적인 내피 세포에서 단리할 수 있고 (예를 들어, 문헌 [Chirgwin et al. (1979) Biochemistry 18:5294-5299]의 구아니디늄-티오시아네이트 추출 방법에 의한 단리), cDNA는 역전사효소 (예를 들어, 미국 메릴랜드주 베테스다에 소재하는 Gibco/BRL이 시판하는 몰로니 (Moloney)-MLV 역전사효소 또는 미국 플로리다주 세인트 페터스부르크에 소재하는 세이카가꾸 아메리카, 인크. (Seikagaku America, Inc.)에서 구입한 AMV 역전사효소)로 제조할 수 있다. 폴리머라제 연쇄 반응을 통한 증폭에 사용하기 위한 합성 올리고뉴클레오티드 프라이머는 첨부문서 A에 나타낸 임의의 뉴클레오티드 서열을 기초로 생성할 수 있다. 본 발명의 핵산은 cDNA로 증폭시킬 수도 있고, 다르게는 주형으로서의 게놈 DNA 및 PCR 표준 증폭 기술에 따른 적절한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하여 증폭시킬 수도 있다. 이러한 방법으로 증폭된 핵산을 적절한 벡터에 클로닝하고 DNA 서열 분석함으로써 특성화할 수 있다. 또한, MP 뉴클레오티드 서열에 상응하는 올리고뉴클레오티드는 자동 DNA 합성기 등과 같은 표준 합성법을 통해 제조할 수도 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 단리된 핵산 분자는 표 1의 컬럼 4에 따른 아미노산 위치에 상응하는, 역-해독된 돌연변이를 포함하는, 표 1의 컬럼 1에 기재된 임의의 뉴클레오티드를 포함한다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 단리된 핵산 분자는 상기 기술된 임의의 뉴클레오티드 서열 또는 그의 절편과 상보적인 핵산 분자를 포함하며, 상기 핵산 분자는 상기 기술된 서열과 혼성화하여 안정한 이중나선을 형성할 정도로 상기 기술된 임의의 뉴클레오티드 서열과 충분히 상보적이다.
본 발명의 MP 핵산 분자가 코딩하는 단백질의 절편은 임의의 MP 단백질의 생물학적 활성 절편인 것이 바람직하다. 본 원에서 사용된 바와 같이, 용어 "MP 단백질의 생물학적 활성 절편"은 코리네박테리움 글루타미쿰에서 대사 경로를 전사, 해독 또는 후해독적으로 조절할 수 있는 MP 단백질의 절편, 예를 들어, 도메인 또는 모티프를 포함하는 것으로 의도되며, 표 1에 나타낸 활성을 갖는다. MP 단백질 또는 그의 생물학적 활성 절편이 코리네박테리움 글루타미쿰에서 대사 경로를 전사, 해독 또는 후해독적으로 조절할 수 있는 지의 여부는 효소 활성 분석을 수행하여 결정할 수 있다. 이러한 분석 방법은 실시예 단락의 실시예 8에 상세하게 기재한 바와 같이 당업자에게 공지되어 있다.
또한, 당업자는 집단 내에 존재할 수 있는 천연 MP 서열 변이체 뿐 아니라 표 1의 뉴클레오티드 서열에 돌연변이에 의한 변화를 도입시켜, 야생형과 비교하여 코딩된 MP 단백질의 아미노산 서열을 변화시키면서도 MP 단백질의 기능을 손상시키지 않을 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 예를 들어, 표 1의 서열에서 "비필수" 아미노산 잔기에서의 아미노산 치환을 일으키는 뉴클레오티드 치환을 생성할 수 있다. "비필수" 아미노산 잔기는 임의의 MP 단백질의 야생형 서열 (표 1)을 변경시키면서도 상기 MP 단백질의 활성을 변화시키지 않을 수 있는 잔기이며, "필수" 아미노산 잔기는 MP 단백질 활성에 필요한 잔기이다. 그러나, 다른 아미노산 잔기 (예컨대, MP 활성을 갖는 도메인에서 비-보존 또는 단지 반-보존된 아미노산 잔기)가 활성에 비필수일 수도 있기 때문에 이를 변형시키면서 MP 활성은 변형시키지 않을 수도 있을 것이다.
B. 재조합 발현 벡터 및 숙주 세포
본 발명의 또다른 측면은 MP 단백질을 코딩하는 핵산을 함유하는 벡터, 바람직하게는 발현 벡터에 관한 것이다. 본 원에서 사용된 바와 같이, 용어 "벡터"는 그와 결합된 또다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자와 관련된 것이다.
벡터의 유형 중 하나는 추가의 DNA 세그먼트가 결찰될 수 있는 원형 이중 가닥 DNA 루프를 의미하는 용어인 "플라스미드"이다. 또다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터이며, 여기서는 추가의 DNA 세그먼트를 바이러스 게놈에 결찰시킬 수 있다. 몇몇 벡터들은 그들이 도입된 숙주 세포 내에서 자율적으로 복제될 수 있다 (예를 들어, 박테리아 복제 기점을 갖는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유동물 벡터).
다른 벡터들 (예컨대, 비-에피솜 포유동물 벡터)은 숙주 세포에 도입될 때 상기 숙주 세포의 게놈에 통합됨으로써 숙주 게놈과 함께 복제된다.
추가로, 특정 벡터들은 기능적으로 연결된 유전자의 발현을 제어할 수 있다. 본 원에서는 이러한 벡터를 "발현 벡터"라고 지칭한다. 통상, DNA 재조합 기술에 사용되는 발현 벡터는 플라스미드 형태이다. 플라스미드가 가장 일반적으로 사용되는 유형의 벡터이므로, 본 명세서에서는 "플라스미드" 및 "벡터"를 혼용하여 사용한다. 본 발명은 유사한 기능을 발휘하는 상기 다른 유형의 발현 벡터, 예를 들어, 바이러스 벡터 (예컨대 복제-결핍 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노바이러스-관련 바이러스)를 포함한다.
본 발명의 재조합 발현 벡터는 본 발명의 핵산을 숙주 세포에서의 발현에 적절한 형태로 포함하며, 이는 재조합 발현 벡터가 발현에 사용될 숙주 세포를 기초로 하여 선택되고 발현될 핵산 서열에 기능적으로 연결된 하나 이상의 조절 서열을 포함함을 의미한다. 재조합 발현 벡터에서, 용어 "기능적으로 연결된"은 관심의 대상이 되는 뉴클레오티드 서열이 그의 발현 (예를 들어, 시험관내 전사/해독 시스템에서 발현되거나 또는 상기 벡터가 숙주 세포에 도입된 경우에는 그 숙주 세포에서 발현됨)이 가능하도록 조절 서열(들)에 결합된 것을 의미한다. 용어 "조절 서열"은 프로모터, 인핸서 및 다른 발현 제어 요소 (예컨대, 폴리아데닐화 신호)를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 조절 서열은 예를 들어, 문헌 [Goeddel: Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990)] 등에 기재되어 있다. 조절 서열은 여러 유형의 숙주 세포에서 뉴클레오티드 서열의 구성적(constitutive) 발현을 제어하는 서열 및 특정 숙주 세포에서만 뉴클레오티드 서열의 발현을 제어하는 서열을 포함한다. 당업자라면, 발현 벡터의 고안이 형질전환시킬 숙주 세포의 선택, 관심의 대상이 되는 단백질 발현 정도 등과 같은 인자에 따라 달라질 수 있음을 이해할 것이다. 본 발명의 발현 벡터를 숙주 세포에 도입함으로써, 본 원에 기재한 바와 같은 핵산에 의해 코딩되는 융합 단백질 또는 융합 펩티드 (예컨대, MP 단백질, MP 단백질의 돌연변이된 형태, 융합 단백질 등)를 비롯한 단백질 또는 펩티드를 제조할 수 있다.
본 발명의 재조합 발현 벡터는 원핵 세포 또는 진핵 세포에서 MP 단백질을 발현하도록 고안될 수 있다. 예를 들면, MP 유전자는 박테리아 세포, 예를 들어, 코리네박테리움 글루타미쿰, 곤충 세포 (이 경우에는 바큘로바이러스 발현 벡터를 사용함), 효모 세포 및 다른 진균 세포 (문헌 [Romanos, M.A. et al. (1992) "Foreign gene expression in yeast: a review" Yeast 8: 423-488], [van den Hondel, C.A.M.J.J. et al. (1991) "Heterologous gene expression in filamentous fungi" in: More Gene Manipulations in Fungi, J.W. Bennet & L.L. Lasure, Editors, pp. 396-428: Academic Press: San Diego] 및 [van den Hondel, C.A.M.J.J. & Punt, P.J. (1991) "Gene transfer systems and vector development for filamentous fungi" in: Applied Molecular Genetics of Fungi, Peberdy, J.F. et al., Editors, pp. 1-28, Cambridge University Press: Cambridge] 참조), 조류 및 다세포 식물 세포 (문헌 [Schmidt, R. and Willmitzer, L. (1988) "High efficiency Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of Arabidopsis thaliana leaf and cotyledon explants", Plant Cell Rep.: 583-586] 참조) 또는 포유동물 세포에서 발현될 수 있다. 적절한 숙주 세포는 문헌 [Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990)]에 추가로 논의되어 있다. 별법으로, 재조합 발현 벡터는 예를 들어, T7 프로모터 조절 서열 및 T7 폴리머라제를 사용하여 시험관내 전사 및 해독시킬 수 있다.
단백질은 융합 또는 비-융합 단백질의 발현을 제어하는 구성적 또는 유도가능한 프로모터를 함유하는 벡터를 주로 사용하여 원핵생물에서 발현시킨다. 융합 벡터는 그에 의해 코딩되는 단백질에, 통상적으로는 재조합 단백질의 아미노 말단에 수많은 아미노산을 부가한다. 이러한 융합 벡터는 통상적으로 다음의 3가지 기능을 수행한다: 1) 재조합 단백질의 발현을 증진시킴; 2) 재조합 단백질의 가용성을 증가시킴; 3) 친화성 정제시에 리간드로서 작용하여 재조합 단백질의 정제를 보조함. 종종, 융합 발현 벡터에서 융합 단위와 재조합 단백질의 접합부에 단백질분해성 절단 부위를 도입함으로써, 재조합 단백질이 융합 단백질의 정제 후에 상기 융합 단위로부터 분리될 수 있도록 한다. 이러한 효소 및 이들의 상응하는 인식 서열은 인자 Xa, 트롬빈 및 엔테로키나제를 포함한다.
통상의 융합 발현 벡터는 재조합 표적 단백질에 글루타티온 S-트랜스퍼라제 (GST)가 융합된 pGEX (파마시아 바이오테크 인크. (Pharmacia Biotech Inc.), [Smith, D.B. and Johnson, K.S. (1988) Gene 67:31-40]), 재조합 표적 단백질에 말토스 E-결합 단백질이 융합된 pMAL (미국 매사추세츠주 배벌리에 소재하는 뉴 잉글랜드 바이오랩스 (New England Biolabs)) 및 재조합 표적 단백질에 단백질 A가 융합된 pRIT 5 (미국 뉴저지주 피스카타웨이에 소재하는 파마시아)를 포함한다. 한 실시양태에서, MP 단백질-코딩 서열을 pGEX 발현 벡터에 클로닝하여, 상기 벡터가 N-말단에서 C-말단 방향으로 GST-트롬빈 절단 부위-단백질 X를 포함하는 융합 단백질을 코딩하도록 한다. 융합 단백질은 글루타티온-아가로스 수지를 사용한 친화성 크로마토그래피로 정제할 수 있다. GST에 융합되지 않은 재조합 MP 단백질은 융합 단백질을 트롬빈으로 절단하여 수득할 수 있다.
적절한 유도가능한 비-융합 대장균 발현 벡터의 예로는 pTrc [Amann et al., (1988) Gene 69:301-315] 및 pET 11d [Studier et al. Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, California (1990) 60-89] 등이 있다. pTrc 벡터로부터의 표적-유전자 발현은 숙주 RNA 폴리머라제에 의한 하이브리드 trp-lac 융합 프로모터로부터의 전사를 기초로 한다. pET 11d 벡터로부터의 표적-유전자 발현은 동시발현되는 바이러스 RNA 폴리머라제 (T7 gn1)에 의해 매개되는 T7-gn10-lac 융합 프로모터로부터의 전사를 기초로 한다. BL21 (DE3) 또는 HMS174 (DE3) 숙주 균주에서, 상기 바이러스 폴리머라제는 lacUV 5 프로모터의 전사 제어를 받는 T7 gn1 유전자를 보유하는 상재(resident) λ 프로파지에 의해 제공된다.
재조합 단백질의 발현을 최대화하기 위한 전략 중 하나는 상기 재조합 단백질을 그에 대한 단백질분해성 절단력이 파괴된 숙주 박테리아에서 발현시키는 것이다 [Gottesman, S. Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, California (1990) 119-128]. 또다른 전략은 발현 벡터로 삽입될 핵산의 핵산 서열을 변형시켜 각 아미노산에 대한 개개의 코돈이 발현을 위해 선택한 박테리아, 예를 들어, 코리네박테리움 글루타미쿰에서 바람직하게 이용되는 코돈이 되도록 하는 것이다 [Wada et al. (1992) Nucleic Acids Res. 20:2111-2118]. 본 발명의 핵산 서열에 대한 이러한 변형은 DNA 합성의 표준 기술을 이용하여 수행할 수 있다.
추가의 실시양태에서, MP 단백질 발현 벡터는 효모 발현 벡터이다. 효모 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae)에서 발현시키기 위한 벡터의 예로는 pYepSec1 [Baldari et al., (1987) Embo J. 6:229-234], pMFa [Kurjan and Herskowitz (1982) Cell 30:933-943], pJRY88 [Schultz et al. (1987) Gene 54:113-123] 및 pYES2 (미국 캘리포니아주 샌디에고에 소재하는 인비트로젠 코포레이션 (Invitrogen Corporation)) 등이 있다. 다른 진균, 예를 들어 섬유상 진균에 사용하기에 적절한 벡터 및 그의 제작 방법은 문헌 [van den Hondel, C.A.M.J.J. & Punt, P.J. (1991) "Gene Transfer systems and vector development for filamentous fungi, in: Applied Molecular Genetics of Fungi, J.F. Peberdy et al., Editors, pp. 1-28, Cambridge University Press: Cambridge]에 상세하게 기재된 것들을 포함한다.
대체 방법으로, 본 발명의 MP 단백질은 바큘로바이러스 발현 벡터를 사용한 곤충 세포에서 발현될 수도 있다. 배양된 곤충 세포 (예컨대, Sf9 세포)에서의 단백질 발현에 이용가능한 바큘로바이러스 벡터로는 pAc 계열 [Smith et al., (1983) Mol. Cell Biol. 3:2156-2165] 및 pVL 계열 [Lucklow and Summers (1989) Virology 170:31-39] 등이 있다.
추가의 실시양태에서, 본 발명의 MP 단백질은 단세포 식물 세포 (예컨대, 조류) 또는 고등 식물 (예컨대, 작물 등의 종자식물) 세포에서 발현될 수 있다. 식물 발현 벡터의 예로는 문헌 ([Becker, D., Kemper, E., Schell, J. and Masterson, R. (1992) "New plant binary vectors with selectable markers located proximal to the left border", Plant Mol. Biol. 20:1195-1197] 및 [Bevan, M.W. (1984) "Binary Agrobacterium vectors for plant transformation", Nucl. Acids Res. 12:8711-8721])에 상세하게 기재된 것들을 포함한다.
또다른 실시양태에서, 본 발명의 핵산 발현을 포유동물 발현 벡터를 사용한 포유동물 세포에서 수행한다. 포유동물 발현 벡터의 예로는 pCDM8 [Seed, B. (1987) Nature 329:840] 및 pMT2PC [Kaufman et al. (1987) EMBO J. 6:187-195] 등이 있다. 포유동물 세포에서 사용할 경우, 발현 벡터의 제어 기능은 종종 바이러스 조절 요소에 의해 제공된다. 통상 사용되는 프로모터는 예를 들어, 폴리오마, 아데노바이러스 2, 사이토메갈로바이러스 및 시미안 바이러스 40에서 유래된 것이다. 원핵 세포 및 진핵 세포에 적절한 다른 발현 시스템에 대해서는 문헌 [Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989]의 제16장 및 제17장에서 찾을 수 있다.
추가의 실시양태에서, 재조합 포유동물 발현 벡터는 바람직하게는 특정 세포 유형에서 핵산을 발현시킬 수 있다 (예를 들어, 조직-특이적 조절 요소를 사용하여 핵산을 발현시킴). 조직-특이적 조절 요소는 당업계에 공지되어 있다. 적절한 조직-특이적 프로모터의 예로는 알부민 프로모터 (간-특이적; [Pinkert et al. (1987) Genes De. 1:268-277]), 림프양-특이적 프로모터 [Calame and Eaton (1988) Adv. Immunol. 43:235-275], 특히 T-세포 수용체의 프로모터 [Winoto and Baltimore (1989) EMBO J. 8:729-733] 및 이뮤노글로불린의 프로모터 ([Banerji et al. (1983) Cell 33:729-740], [Queen and Baltimore (1983) Cell 33:741-748]), 뉴런-특이적 프로모터 (예컨대, 신경필라멘트 프로모터; [Byrne and Ruddle (1989) PNAS 86:5473-5477]), 췌장-특이적 프로모터 [Edlund et al., (1985) Science 230:912-916] 및 유선-특이적 프로모터 (예컨대, 유청(milk serum) 프로모터; 미국 특허 제4,873,316호 및 유럽 특허 출원 번호 제 264,166호) 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 또한, 발생-조절되는 프로모터의 예로는 뮤린(murine) hox 프로모터 [Kessel and Gruss (1990) Science 249:374-379] 및 α-태아단백질 프로모터 [Campes and Tilghman (1989) Genes Dev. 3:537-546] 등이 있다.
추가로, 본 발명은 발현 벡터에 안티센스 방향으로 클로닝된 본 발명의 DNA 분자를 포함하는 재조합 발현 벡터를 제공한다. 이는 DNA 분자가 조절 서열에 기능적으로 연결되어 MP mRNA에 대해 안티센스인 RNA 분자가 발현 (DNA 분자의 전사를 통해 발현됨)될 수 있음을 의미한다. 안티센스 방향으로 클로닝된 핵산에 기능적으로 결합되고 다수의 세포 유형에서 안티센스 RNA 분자가 지속적으로 발현되도록 제어하는 조절 서열을 선택할 수 있으며, 예를 들어, 안티센스 RNA가 구성적으로 조직-특이적 발현되거나 세포 유형-특이적 발현되도록 제어하는 바이러스 프로모터 및(또는) 인핸서 또는 조절 서열을 선택할 수 있다. 안티센스 발현 벡터는 재조합 플라스미드, 파지미드 또는 약독화 바이러스의 형태일 수 있으며, 이는 벡터가 도입된 세포 유형에 따라 활성이 결정되는 고도로 효과적인 조절 영역의 제어하에서 안티센스 핵산을 생산한다. 안티센스 유전자를 이용한 유전자 발현의 조절에 관해서는 문헌 [Weintraub, H. et al., Antisense-RNA as a molecular tool for genetic analysis, Reviews - Trends in Genetics, Vol. 1(1) 1986]에 논의되어 있다.
본 발명의 또다른 측면은 본 발명의 재조합 발현 벡터가 도입된 숙주 세포에 관한 것이다. 본 원에서는 용어 "숙주 세포" 및 "재조합 숙주 세포"를 혼용하여 사용한다. 사실상, 이러한 용어는 특정 표적 세포와만 관련된 것이 아니라 그 세포의 자손 또는 잠재적인 자손과도 관련된 것이다. 돌연변이 또는 환경적 요인으로 인해서 특정 변형이 세대에 걸쳐 연속적으로 나타날 수 있기 때문에, 이 자손이 모(母) 세포와 반드시 동일한 것은 아니지만, 본 원에서 사용된 바와 같이 상기 용어의 범위에 포함되는 것은 마찬가지이다.
숙주 세포는 원핵 세포이거나 진핵 세포일 수 있다. 예를 들면, MP 단백질은 박테리아 세포, 예를 들어, 코리네박테리움 글루타미쿰, 곤충 세포, 효모 또는 포유동물 세포 (예컨대, 차이니스 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 COS 세포)에서 발현될 수 있다. 다른 적절한 숙주 세포는 당업자에게 공지되어 있다. 코리네박테리움 글루타미쿰과 관련되어 있고 적절한 방식으로 본 발명의 핵산 분자 및 단백질 분자를 위한 숙주 세포로서 사용될 수 있는 미생물은 표 3에 기재되어 있다.
통상의 형질전환 또는 형질감염 방법을 이용하여 벡터 DNA를 원핵 세포 또는 진핵 세포에 도입할 수 있다. 본 원에서 사용된 바와 같이, 용어 "형질전환" 및 "형질감염"은 외래 핵산 (예컨대, DNA)을 숙주 세포에 도입하기 위한 인산칼슘 또는 염화 칼슘 동시침전법, DEAE-덱스트란-매개된 형질감염법, 리포펙션법 (lipofection) 또는 전기천공법 등과 같은 당업계에 공지된 다수의 방법을 포함한다. 숙주 세포의 형질전환 또는 형질감염에 적절한 방법은 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989] 및 다른 실험 안내서에서 찾을 수 있다.
포유동물 세포의 안정한 형질감염의 경우, 사용된 발현 벡터 및 이용된 형질감염 기술에 따라 오직 적은 비율의 세포만이 외래 DNA를 그의 게놈에 통합시킬 수 있음이 공지되어 있다. 통상적으로, 이러한 통합체는 선별가능한 마커 (예컨대, 항생제에 대한 내성)를 코딩하는 유전자를 관심의 대상이 되는 유전자와 함께 숙주 세포에 도입함으로써 확인 및 선별된다. 바람직한 선별가능한 마커로는 G418, 하이그로마이신 및 메토트렉세이트 등과 같은 약물에 내성을 부여하는 유전자 등이 있다. 선별가능한 마커를 코딩하는 핵산을 MP 단백질을 코딩하는 벡터에 함께 함유시켜서 숙주 세포에 도입하거나, 상기 벡터와는 별개인 벡터를 통해 숙주 세포에 도입할 수 있다. 안정하게 형질감염되어 핵산이 도입된 세포는 예를 들어, 약물 선별을 통해 확인할 수 있다 (예를 들어, 선별가능한 마커가 통합된 세포는 생존하지만 다른 세포는 사멸함).
상동성 재조합된 미생물을 생성하기 위해서는, MP 유전자에 결실, 부가 또는 치환을 도입하여 그를 변형시킨, 예를 들어, 기능적으로 파괴시킨 하나 이상의 MP-유전자 절편을 함유하는 벡터를 제조한다. 상기 MP 유전자는 코리네박테리움 글루타미쿰 MP 유전자인 것이 바람직하지만, 그와 관련된 박테리아 또는 심지어는 포유동물, 효모 또는 곤충 공급원으로부터의 상동체를 사용할 수도 있다. 바람직한 실시양태에서, 벡터는 상동성 재조합이 내인성 MP 유전자를 기능적으로 파괴 (즉, 유전자가 더이상 기능적 단백질을 코딩하지 않게됨; "녹아웃(knockout) 벡터"라고 지칭하기도 함)하도록 고안될 수 있다. 다르게는, 벡터는 상동성 재조합 돌연변이체 등이 내인성 MP 유전자를 변형시키지만 여전히 기능적 단백질을 코딩하도록 고안될 수 있다 (예를 들어, 상류에 위치한 조절 영역을 변형시킴으로써 내인성 MP 단백질의 발현이 변형되도록 할 수 있음). 상동성 재조합 벡터 내에 존재하는 변형된 MP-유전자 절편의 5' 및 3' 말단에는 MP 유전자의 추가 핵산이 측면에 위치하는데, 이는 벡터가 운반하는 외인성 MP 유전자와 미생물의 내인성 MP 유전자 사이의 상동성 재조합을 가능케 한다. 추가의 측면에 위치하는 MP 핵산은 내인성 유전자와의 성공적인 상동성 재조합에 충분한 길이이다. 통상적으로, 벡터는 측면에 위치하는 DNA를 수 kb 미만으로 함유한다 (5' 말단 및 3' 말단 모두에서) (상동성 재조합 벡터에 관해서는 예를 들어, 문헌 [Thomas, K.R. and Capecchi, M.R. (1987) Cell 51:503]의 기재 참조). 벡터를 미생물에 도입 (예를 들어, 전기천공법에 의해 도입)하고, 도입된 MP 유전자가 내인성 MP 유전자와 상동성 재조합된 세포를 당업계에 공지된 방법으로 선별한다.
또다른 실시양태에서, 도입된 유전자의 발현을 조절할 수 있는 것으로 선택한 시스템을 함유하는 재조합 미생물을 생산할 수 있다. 벡터로의 MP 유전자 삽입은 상기 유전자가 lac 오페론의 제어를 받게 하기 때문에, 예를 들어, MP-유전자 발현이 IPTG의 존재하에서만 가능해 진다. 이러한 조절 시스템은 당업계에 공지되어 있다.
본 발명의 숙주 세포, 예를 들어, 배양된 원핵 세포 또는 진핵 숙주 세포를 사용하여 MP 단백질을 생산할 수 있다 (즉, 발현시킬 수 있음). 추가로, 본 발명은 본 발명의 숙주 세포를 이용한 MP 단백질의 생산 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 본 발명의 숙주 세포 (MP 단백질을 코딩하는 재조합 발현 벡터가 도입되어 있거나 그의 게놈에 야생형 또는 변형된 MP 단백질을 코딩하는 유전자가 도입되어 있음)를 적절한 배지 중에서 MP 단백질이 생산될 때까지 배양하는 단계를 포함한다. 추가의 실시양태에서, 상기 방법은 상기 배지 또는 숙주 세포로부터 MP 단백질을 단리하는 단계를 포함한다.
C. 본 발명의 용도 및 방법
본 원에 기재한 핵산 분자, 단백질, 융합 단백질, 프라이머, 벡터 및 숙주 세포는 하기한 방법 중 하나 이상에서 사용할 수 있다: 코리네박테리움 글루타미쿰 및 그와 관련된 유기체의 확인, 코리네박테리움 글루타미쿰과 관련이 있는 유기체의 게놈 지도화, 코리네박테리움 글루타미쿰 관심의 대상이 되는 서열의 확인 및 위치분석, 진화 연구, 기능수행에 필요한 MP 단백질 영역의 결정, MP 단백질의 활성 조정; MP 경로의 활성 조정; 및 관심의 대상이 되는 화합물, 예컨대, 정밀 화학물질의 세포내 생산 조정. 본 발명의 MP 핵산 분자에는 여러가지 용도가 있다. 첫째로, 이들은 코리네박테리움 글루타미쿰 또는 그와 밀접한 관련이 있는 유기체의 확인에 이용될 수 있다. 또한, 이들은 미생물들이 혼합된 집단 내에서 코리네박테리움 글루타미쿰 또는 그와 관련된 유기체를 확인하는데 사용될 수 있다. 본 발명은 매우 다양한 코리네박테리움 글루타미쿰 유전자의 핵산 서열을 제공한다. 하나 미생물의 집단 또는 미생물들이 혼합된 집단의 배양물에서 추출한 게놈 DNA를 엄격 조건하에서 코리네박테리움 글루타미쿰에 고유한 유전자 영역을 포함하는 프로브로 프로빙(probing)함으로써 상기 유기체의 존재 여부를 결정할 수 있다. 코리네박테리움 글루타미쿰 자체는 병원성이 아니지만, 코리네박테리움 디프테리애 등과 같은 병원성 종과 관련이 있다. 이러한 유기체의 검출은 실질적인 임상적 중요성을 갖는다.
본 발명의 핵산 및 단백질 분자는 게놈의 특정 영역에 대한 마커로 작용할 수 있다. 본 발명의 핵산 및 단백질 분자는 게놈 지도화 뿐 아니라 코리네박테리움 글루타미쿰 단백질의 기능 연구에도 유용하다. 특정 코리네박테리움 글루타미쿰 DNA-결합 단백질이 결합하는 게놈 영역은 예를 들어, 코리네박테리움 글루타미쿰 게놈을 절단하고 그 단편들을 DNA-결합 단백질과 함께 인큐베이션 시켜서 확인할 수 있다. 상기 단백질과 결합하는 단편은 본 발명의 핵산 분자로 바람직하게는 쉽게 검출가능한 표지를 이용하여 추가로 프로빙될 수 있다; 이러한 핵산 분자와 게놈 단편의 결합을 통해, 코리네박테리움 글루타미쿰의 게놈 지도에서 상기 단편의 위치를 결정할 수 있으며 여러가지 효소를 사용하여 이 방법을 여러 회 수행함으로써, 단백질이 결합하는 핵산 서열의 신속한 결정을 용이하게 할 수 있다. 추가로, 본 발명의 핵산 분자는 관련 종의 서열에 충분한 상동성이 있을 수 있으며, 이 경우에도 이러한 핵산 분자를 마커로서 사용하여 해당 박테리아 (예컨대, 브레비박테리움 락토페르멘툼)의 게놈 지도를 제작할 수 있다.
또한, 본 발명의 MP 핵산 분자는 진화 연구 및 단백질 구조 연구에도 적합하다. 여러 원핵 세포 및 진핵 세포는 본 발명의 분자가 관여하는 대사 과정을 이용한다. 본 발명의 핵산 분자 서열을 다른 유기체에서의 유사 효소를 코딩하는 핵산 분자 서열과 비교함으로써 상기 유기체의 진화 관계 정도를 조사할 수 있다. 따라서, 이러한 비교를 통해 서열 영역이 보존되었는지의 여부를 결정할 수 있고, 이는 효소 기능에 필수적인 단백질의 보존 영역을 조사하는데 도움을 줄 수 있다. 이러한 방식의 조사는 단백질 조작 연구에 중요하며, 단백질에서 그의 기능 손실 없이 돌연변이유발을 허용할 수 있는 수준에 관한 지침을 제공할 수 있다.
본 발명의 MP 핵산 분자의 유전자 조작을 통해, 야생형 MP 단백질과는 기능적으로 상이한 MP 단백질이 생산되도록 할 수 있다. 이러한 단백질은 효율 또는 활성과 관련하여 개선될 수 있어서, 이들이 세포 내에 통상적인 수보다 더 많은 수로 존재하게 하거나 이들의 효율 또는 활성을 약화시킬 수도 있다.
이러한 활성 변화를 통해 코리네박테리움 글루타미쿰에서 하나 이상의 정밀 화학물질의 수율, 생산량 및(또는) 생산 효율을 직접 조정할 수 있다. 예를 들면, 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질의 생합성의 단백질을 코딩하는 유전자의 전사 또는 해독을 활성화시키는 MP 단백질의 활성을 최적화시키거나, 이러한 유전자의 전사 또는 해독을 억제하는 MP 단백질의 활성에 영향을 주거나 이 활성을 삭제함으로써, 예를 들어, 속도제한 효소가 증가된 양으로 존재하므로 상기 생합성 경로의 활성 또는 활성 속도가 증가될 수 있다. 상응하게, 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질의 분해 경로에 관여하는 단백질을 구조적으로 후해독적으로 비활성화 시키도록 MP 단백질의 활성을 변형시킴으로써 또는 이러한 유전자의 전사 또는 해독을 구조적으로 억제하도록 MP 단백질의 활성을 변형시킴으로써, 화합물의 분해가 감소하므로 세포로부터 상기 정밀 화학물질의 수율 및(또는) 생산 속도가 증가될 수 있다.
각종 대사 경로가 연결되어 있기 때문에, 하나 이상의 MP 단백질의 활성을 조정함으로써 세포로부터의 하나 이상의 정밀 화학물질 생산을 간접적으로 촉진시키거나 생산 속도를 개선시키는 것이 가능해진다. 예를 들어, 리신 생합성에서의 하나 이상의 효소의 발현을 활성화하여 수율, 생산량 및(또는) 생산 효율을 증가시킴으로써, 더 많은 양의 리신이 요구되는 경우 세포가 보통 더 많은 양을 필요로 하는 다른 아미노산과 같은 다른 화합물의 발현을 동시에 증가시키는 것이 가능하다. 발효 배양의 환경 조건 (영양소 및 산소의 공급이 불량할 수 있고, 독성 폐기물이 환경에 다량 존재할 수 있다고 추정됨)하의 세포가 성장 또는 복제를 개선시키도록 전체적인 세포에서의 대사 조절을 변형시키는 것이 또한 가능하다. 따라서, 성장 조건이 최적에 이르지 못할 지라도, 반응 중 세포막 생산에 요구되는 분자의 합성을 억제하는 MP 단백질을 세포외 매질 중의 고수준의 폐기물로 돌연변이시킴으로써 (최적에 이르지 못하는 성장 조건에서 세포 성장 및 세포 분열을 차단하기 위함) 상기 단백질이 더이상 상기 합성을 억제할 수 없게 하도록 배양중 세포의 성장 및 전파를 개선시키는 것 등이 가능하다. 배양물 중에는 상기 화합물을 생산하는 세포가 비교적 다수 존재하기 때문에, 이러한 증가된 성장 또는 증가된 생존력은 또한 발효 배양으로부터의 관심의 대상이 되는 정밀 화학물질의 수율 및(또는) 생산 속도를 증가시켜야 한다.
코리네박테리움 글루타미쿰으로부터의 정밀 화학물질 수율을 증가시키기 위해서 MP 단백질을 돌연변이유발시키는 상기 전략들은 그에 제한되는 것이 아니며, 당업자에게는 이러한 돌연변이유발 전략들에 대한 변형법이 매우 명백하다. 이러한 전략을 사용하고 본 원에 개시한 메카니즘을 포함시킴으로써, 돌연변이된 MP 핵산 및 단백질 분자를 발현하는 코리네박테리움 글루타미쿰 또는 그와 관련된 박테리아 균주를 생성하여 관심의 대상이 되는 화합물의 수율, 생산량 및(또는) 생산 효율을 개선시키는데 본 발명의 핵산 및 단백질 분자를 이용할 수 있다. 상기 관심의 대상이 되는 화합물은, 생합성 경로의 최종 산물 및 천연 대사 경로의 중간체 뿐 아니라 코리네박테리움 글루타미쿰 대사시에 천연적으로 생성되는 것은 아니지만 본 발명의 코리네박테리움 글루타미쿰 균주에 의해 생산되는 분자 등을 비롯하여 코리네박테리움 글루타미쿰에 의해 생산된 임의의 산물일 수 있다.
하기 실시예는 본 발명을 추가로 예시하기 위한 것으로서, 본 발명을 제한하는 것으로 이해해서는 안된다. 본 특허 출원 명세서에서 인용한 모든 참고문헌, 특허 출원 명세서, 특허 문헌 및 공개된 특허 출원 명세서의 내용은 본 원에 참고로 도입된다.
<실시예>
실시예 1: 코리네박테리움 글루타미쿰 ATCC13032로부터 전체 게놈 DNA의 제조
BHI 배지 (디프코(Difco))중의 코리네박테리움 글루타미쿰 (ATCC 13032) 배양물을 30℃에서 격렬히 진탕시키면서 밤새도록 배양하였다. 원심분리하여 세포를 회수하고, 상등액은 버리고, 세포를 5 mL의 완충액 I (배양물 처음 부피의 5%에 해당함-언급한 모든 부피는 배양 부피 100 mL에 대해 계산한 값임)중에 재현탁하였다. 완충액 I의 조성은 다음과 같았다: 140.34 g/L 수크로스, 2.46 g/L MgS04 ×7 H2O, 10 mL/L KH2PO4 용액 (100 g/L, KOH를 사용하여 pH 6.7로 조정함), 50 mL/L M12 농축물 (10 g/L (NH4)2SO4, 1 g/L NaCl, 2 g/L MgSO4·7 H2O, 0.2 g/L CaCl2, 0.5 g/L 효모 추출물 (디프코), 10 mL/L 미량 원소 혼합물 (200 mg/L FeSO4 ×H2O, 10 mg/L ZnSO4·7 H2O, 3 mg/L MnCl2·4 H2O, 30 mg/L H3BO3, 20 mg/L CoCl2·6 H2O, 1 mg/L NiCl2·6 H2O, 3 mg/L Na2MoO4·2 H2O), 500 mg/L 착화제 (EDTA 또는 시트르산), 100 mL/L 비타민 혼합물 (0.2 mg/L 바이오틴, 0.2 mg/L 엽산, 20 mg/L p-아미노 벤조산, 20 mg/L 리보플라빈, 40 mg/L Ca 판토테네이트, 140 mg/L 니코틴산, 40 mg/L 피리독솔 히드로클로라이드, 200 mg/L 미오이노시톨). 상기 현탁액에 리소짐을 최종 농도 2.5 mg/mL로 첨가하였다. 37℃에서 대략 4시간 동안 인큐베이션시킨 후, 세포벽을 파괴하고 원심분리하여 원형질체를 수거하였다. 펠릿을 5 mL의 완충액으로 1회 세척하고, 5 mL의 TE 완충액 (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8)으로 1회 세척하였다. 펠릿을 4 mL의 TE 완충액중에 재현탁하고, 0.5 mL의 SDS 용액(10%) 및 0.5 mL의 NaCl 용액 (5 M)을 첨가하였다. 프로테이나제 K를 최종 농도 200 ㎍/mL로 첨가한 후, 상기 현탁액을 37℃에서 대략 18시간 동안 인큐베이션시켰다. 표준 방법에 따라 DNA를 페놀, 페놀/클로로포름/이소아밀 알콜 및 클로로포름/이소아밀 알콜로 추출하여 정제하였다. 이어서, 1/50 부피의 3 M 아세트산나트륨 및 2 부피의 에탄올을 첨가하여 DNA를 침전시킨 후, -20℃에서 30분 동안 인큐베이션시키고, SS34 회전자 (소르발 (Sorvall))를 사용한 고속 원심분리기에서 12,000 rpm로 30분 동안 원심분리하였다. DNA를 20 ㎍/mL RNaseA를 함유하는 1 mL의 TE 완충액중에 용해시키고, 4℃에서 적어도 3시간 동안 1000 mL의 TE 완충액중에 투석하였다. 투석하는 동안, 상기 완충액을 3회 교환하였다. 투석된 DNA 용액을 0.4 mL씩 분취하여, 0.4 mL의 2 M LiCl 및 0.8 mL의 에탄올을 첨가하였다. -20℃에서 30분 동안 인큐베이션시킨 후, 원심분리 (13,000 rpm, 독일 하나우 헤래우스에 소재하는 바이오퓨지 프레스코 (Biofuge Fresco))하여 DNA를 수집하였다. DNA 펠릿을 TE 완충액중에 용해하였다. 이 방법으로 제조된 DNA를 서던 블럿팅 및 게놈 라이브러리 작제 등의 모든 목적에 이용하였다.
실시예 2: 대장균에서 코리네박테리움 글루타미쿰 (ATCC13032)의 게놈 뱅크 작제
실시예 1에 기재한 바와 같이 제조된 DNA로부터 출발하여, 공지되고 확립되어 있는 방법 (예를 들어, 문헌 [Sambrook, J. et al. (1989) "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press] 또는 문헌 [Ausubel, F.M. et al. (1994) "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons] 참조)에 따라 코스미드 및 플라스미드 뱅크를 제조하였다.
임의의 플라스미드 또는 코스미드를 사용할 수 있었다. 특히, 플라스미드 pBR322 [Sutcliffe, J.G. (1979) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75:3737-3741]; pACYC177 [Change & Cohen (1978) J. Bacteriol 134:1141-1156], pBS 계열의 플라스미드 (pBSSK+, pBSSK- 등; 미국 라졸라에 소재하는 스트라타진 (Stratagene)) 또는 SuperCos I (미국 라졸라에 소재하는 스트라타진) 또는 Lorist6 [Gibson, T.J., Rosenthal A. and Waterson, R.H. (1987) Gene 53:283-286] 등의 코스미드를 사용하는 것이 바람직하였다.
실시예 3: DNA 서열분석 및 컴퓨터를 이용한 기능 분석
실시예 2에 기재한 바와 같은 게놈 뱅크를 사용하여, 표준 방법, 특히 ABI377 서열 분석기를 사용한 쇄 종결 방법 (예를 들어, 문헌 [Fleischman, R.D. et al. (1995) "Whole-genome Random Sequencing and Assembly of Haemophilus Influenzae Rd.", Science, 269:496-512])에 따른 DNA 서열분석을 수행하였다. 하기 뉴클레오티드 서열을 갖는 서열분석 프라이머를 사용했다: 5'-GGAAACAGTATGACCATG-3' 또는 5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3'.
실시예 4: 생체내 돌연변이유발
코리네박테리움 글루타미쿰의 생체내 돌연변이유발은 유전 정보의 통합성을 유지할 수 없는 대장균 또는 다른 미생물 (예를 들면, 바실러스 종(Bacilus spp .) 또는 사카로마이세스 세레비지애 등의 효모)에 플라스미드 (또는 다른 벡터) DNA를 계대배양하여 수행할 수 있다. 전형적인 돌연변이유발 균주는 DNA 수복 시스템에 관한 유전자 (예를 들면, mutHLS, mutD, mutT 등; 비교하기 위해서는 문헌 [Rupp, W.D. (1996) DNA repair mechanisms, in Escherichia coli and Salmonella, p.2277-2294, ASM: Washington] 참조)에 돌연변이가 있다. 이러한 균주들은 당업자에게 공지되어 있다. 이러한 균주의 사용법은 예를 들어, 문헌 [Greener, A. and Callahan, M. (1994) Strategies 7:32-34]에 예시되어 있다.
실시예 5: 대장균과 코리네박테리움 글루타미쿰 사이의 DNA 전달
여러 코리네박테리움 및 브레비박테리움 종은 자율적으로 복제되는 내인성 플라스미드 (예를 들면, pHM1519 또는 pBL1 등)를 함유하고 있다 (이에 관해 검토하기 위해서는 예를 들어, 문헌 [Martin, J.F. et al. (1987) Biotechnology, 5:137-146] 참조). 대장균 및 코리네박테리움 글루타미쿰에 사용하기 위한 셔틀 벡터는 대장균의 경우에 사용하는 표준 벡터 (문헌 [Sambrook, J. et al. (1989), "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press] 또는 문헌 [Ausubel, F.M. et al. (1994) "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons])에 코리네박테리움 글루타미쿰의 복제 기점 및 적당한 마커를 부가하여 사용함으로써 쉽게 작제될 수 있다. 이러한 복제 기점은 코리네박테리움 및 브레비박테리움 종에서 단리한 내인성 플라스미드로부터 얻는 것이 바람직하다. 이들 종에 특히 유용한 형질전환 마커는 카나마이신 내성 유전자 (예를 들면, Tn5 또는 Tn903 트란스포손에서 유래함) 또는 클로람페니콜 내성 유전자 [Winnacker, E.L. (1987) "From Genes to Clones-Introduction to Gene Technology", VCH, Weinheim]이다. 대장균 및 코리네박테리움 글루타미쿰에서 복제되고 유전자 과다발현 등을 비롯한 각종 목적에 사용할 수 있는 매우 다양한 셔틀 벡터의 제조법에 관한 문헌들이 많이 있다 (예를 들어, [Yoshihama, M. et al. (1985) J. Bacteriol. 162:591-597], [Martin J.F. et al. (1987) Biotechnology, 5:137-146] 및 [Eikmanns, B.J. et al. (1991) Gene, 102:93-98] 참조).
표준 방법을 이용하여, 관심의 대상이 되는 유전자를 상기 기재한 셔틀 벡터들중 하나에 클로닝하고 이러한 하이브리드 벡터를 코리네박테리움 글루타미쿰 균주에 도입할 수 있다. 코리네박테리움 글루타미쿰은 원형질체 형질전환법 [Kastsumata, R. et al. (1984) J. Bacteriol. 159:306-311], 전기천공법 [Liebl, E. et al. (1989) FEMS Microbiol. Letters, 53:399-303]을 이용하고 특정 벡터가 사용되는 경우에는 접합법 (예를 들어, 문헌 [Schaefer, A et al. (1990) J. Bacteriol. 172:1663-1666]에 기재된 바와 같음)도 이용하여 형질전환시킬 수 있다. 또한, 코리네박테리움 글루타미쿰으로부터 플라스미드 DNA를 제조 (당업계에 공지된 표준 방법을 사용함)하고, 이것으로 대장균을 형질전환시켜 코리네박테리움 글루타미쿰의 셔틀 벡터를 대장균에 전달할 수도 있다. 이러한 형질전환 단계는 표준 방법으로 수행할 수 있지만, NM522 [Gough & Murray (1983) J. Mol. Biol. 166:1-19] 등과 같은 Mcr-결핍 대장균 균주를 사용하는 것이 유리하고 바람직하다.
실시예 6: 돌연변이된 단백질의 발현 평가
형질전환된 숙주 세포에서 돌연변이된 단백질의 활성 관찰은 상기 돌연변이 단백질이 야생형 단백질과 유사한 방식 및 유사한 양으로 발현된다는 사실을 바탕으로 한다. 돌연변이된 유전자의 전사량 (유전자 산물의 해독에 이용가능한 mRNA 양에 관한 지표) 측정에 적절한 방법은 관심의 대상이 되는 유전자에 결합하도록 고안되어 검출가능한 표지 (통상적으로 방사성 표지 또는 화학발광 표지)가 부착된 프라이머를 사용하여 노던 블럿팅 (예를 들어, 문헌 [Ausubel et al. (1988) Current Protocols in Molecular Biology, Wiley: New York] 참조)을 수행하는 것인데, 이는 유기체 배양물의 전체 RNA를 추출하고 겔상에서 분리하여 안정한 매트릭스에 옮긴 후에 상기 프로브와 인큐베이션시켜, 프로브의 결합 및 그 결합 활성이 상기 유전자에 대한 mRNA의 존재 여부 및 또한 그 존재량을 지시하는 방법이다. 이러한 정보는 돌연변이된 유전자의 전사 정도에 관한 지표가 된다. 예를 들어, 문헌 [Bormann, E.R. et al. (1992) Mol. Microbiol. 6:317-326]에 기재된 것과 같이 당업계에 공지된 각종 방법들을 이용하여 코리네박테리움 글루타미쿰의 세포내 전체 RNA를 단리할 수 있다.
상기 mRNA로부터 해독된 단백질의 존재 여부 또는 그 상대량은 웨스턴 블럿팅과 같은 표준 기술을 사용하여 측정할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Ausubel et al. (1988) Current Protocols in Molecular Biology, Wiley: New York] 참조). 이 방법에서는, 세포내 전체 단백질을 추출하여 겔 전기영동법으로 분리한 후에 이를 니트로셀룰로스 등과 같은 매트릭스에 옮겨서 관심의 대상이 되는 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 등과 같은 프로브와 함께 인큐베이션시킨다. 통상적으로, 이 프로브에는 쉽게 검출될 수 있는 화학발광 표지 또는 비색 표지가 부착되어 있다. 표지의 존재 여부 및 그의 관찰된 양은 그 세포 내에서 원하는 돌연변이 단백질의 존재 여부 및 그 존재량을 지시한다.
실시예 7: 유전자 변형된 코리네박테리움 글루타미쿰의 성장 - 배지 및 배양 조건
유전자 변형된 코리네박테리움을 합성 또는 천연 성장 배지에서 배양한다. 코리네박테리움을 위한 여러 다양한 성장 배지는 당업계에 공지되어 있으며 쉽게 입수가능하다 (문헌 [Lieb et al. (1989) Appl. Microbiol. Biotechnol. 32:205-210], [von der Osten et al. (1998) Biotechnology Letters, 11:11-16], 독일 특허 제4,120,867호, [Liebl (1992) "The Genus Corynebacterium", in: The Procaryotes, Volume II, Balows, A. et al., eds. Springer-Verlag]). 이들 배지는 1종 이상의 탄소 공급원, 질소 공급원, 무기염, 비타민 및 미량 원소로 구성된다. 바람직한 탄소 공급원은 단당류, 이당류 또는 다당류 등의 당이다. 매우 훌륭한 탄소 공급원의 예로는 글루코스, 프럭토스, 만노스, 갈락토스, 리보스, 소르보스, 리불로스, 락토스, 말토스, 수크로스, 라피노스, 녹말 및 셀룰로스 등이 있다. 또한, 당 정제시 생성되는 당밀 또는 다른 부산물 등과 같은 복합 화합물 등으로서 배지에 당을 공급할 수도 있다. 또한, 각종 탄소 공급원들의 혼합물을 첨가하는 것이 유리할 수도 있다. 다른 가능한 탄소 공급원은 메탄올, 에탄올, 아세트산 또는 락트산 등의 알콜 및 유기산이다. 질소 공급원은 통상적으로 유기 또는 무기 질소 화합물이거나 이러한 화합물을 함유하는 물질이다. 질소 공급원의 예로는 암모니아 기체 및 NH4Cl 또는 (NH4)2SO4, NH40H 등의 암모늄염, 질산염, 우레아, 아미노산 또는 옥수수 침유(cornsteep liquor), 대두 가루, 대두 단백질, 효모 추출물, 육류 추출물 등과 같은 복합 질소 공급원 등이 있다.
배지에 함유시킬 수 있는 무기 염 화합물로는 칼슘, 마그네슘, 나트륨, 코발트, 몰리브덴, 칼륨, 망간, 아연, 구리 및 철의 염산염, 인산염 또는 황산염 등이 있다. 킬레이팅제를 배지에 첨가하여 금속 이온을 용액 중에 유지할 수 있다. 특히 적절한 킬레이팅제로는 카테콜 또는 프로토카테쿠에이트 등과 같은 디히드록시페놀 또는 시트르산 등의 유기산 등이 있다. 또한, 배지에는 통상적으로 비타민 또는 성장 촉진제 등의 다른 성장 인자가 함유되어 있고, 이들의 예로는 바이오틴, 리보플라빈, 티아민, 엽산, 니코틴산, 판토테네이트 및 피리독신 등이 있다. 성장 인자 및 염은 흔히 효모 추출물, 당밀, 옥수수 침유 등과 같은 복합 배지 성분으로부터 생성된다. 배지의 정확한 조성은 특정 실험마다 크게 달라지고, 각 경우마다 따로 결정된다. 배지의 최적화에 관한 정보는 문헌 ["Applied Microbiol. Physiology, A Practical Approach (editors P.M. Rhodes, P.F. Stanbury, IRL Press (1997) pp.53-73, ISBN 0 19 963577 3)]에서 찾을 수 있다. 또한, 스탠다드 1(Standard 1) (머크(Merck)) 또는 BHI(Brain Heart Infusion, 디프코) 등과 같이 제조 회사가 시판하는 것을 구입할 수도 있다.
모든 배지 성분들을 열처리 (1.5 bar 및 121℃에서 20분) 또는 멸균 여과로 멸균시킨다. 이 성분들은 한꺼번에 멸균시킬 수도 있고 필요에 따라서는 따로 멸균시킬 수도 있다. 모든 배지 성분들은 배양 초기부터 함유시킬 수도 있고, 원한다면 연속적으로 또는 배치식으로(batchwise) 첨가할 수도 있다.
배양 조건은 각 실험마다 따로 정의된다. 온도는 15℃와 45℃ 사이의 범위이어야 하고, 실험하는 동안 일정하게 유지시키거나 변경시킬 수 있다. 배지의 pH는 5 내지 8.5의 범위, 바람직하게는 약 7.0 정도이어야 하며, 배지에 완충액을 첨가하여 유지시킬 수 있다. 이러한 목적으로 사용할 수 있는 완충액의 예로는 인산칼륨 완충액 등이 있다. MOPS, HEPES, ACES 등과 같은 합성 완충액을 대안적으로 사용하거나 동시에 사용할 수 있다. 또한, 배양하는 동안 NaOH 또는 NH4OH를 첨가하여 pH를 일정하게 유지시킬 수도 있다. 효모 추출물 등의 복합 배지 성분이 사용되는 경우, 많은 복합 화합물들은 완충 성능이 높기 때문에 추가 완충액에 대한 요구를 감소시킬 수 있다. 미생물 배양에 발효기를 사용하는 경우, pH는 암모니아 기체를 사용하여 조절할 수도 있다.
인큐베이션 기간은 통상적으로 수 시간 내지 수 일이다. 이 시간은 브로쓰(broth)에 축적되는 산물의 양이 최대가 되도록 선택한다. 개시한 성장 실험을 다양한 크기의 미량역가 플레이트, 유리관, 유리 플라스크 또는 유리 또는 금속 발효기 등의 각종 용기에서 수행할 수 있다. 다수의 클론을 스크리닝하기 위해서는, 미생물을 배플(baffle)이 있거나 없는 미량역가 플레이트, 유리관 또는 진탕 플라스크에서 배양해야 한다. 요구되는 성장 배지를 100 mL 진탕 플라스크에 10% (부피 기준) 채워 사용하는 것이 바람직하다. 이 플라스크들은 100 내지 300 rpm 속력 범위의 회전 진탕기 상에서 진탕 (진폭 25 mm)되어야 한다. 대기를 습하게 유지함으로써 증발로 인한 손실량을 감소시키거나, 다르게는, 증발로 인한 손실량을 정확하게 보정해야 한다.
유전자 변형된 클론을 연구하는 경우, 변형되지 않은 대조군 클론 또는 인서트가 없는 원래의 플라스미드를 함유하는 대조군 클론도 분석해야 한다. CM 플레이트 (10 g/L 글루코스, 2.5 g/L NaCl, 2 g/L 우레아, 10 g/L 폴리펩톤, 5 g/L 효모 추출물, 5 g/L 육류 추출물, 22 g/L 아가, 2 M NaOH을 사용하여 pH 6.8로 조정) 등과 같은 아가 플레이트 상에서 30℃에서 인큐베이션하여 성장시킨 세포를 OD600이 0.5 내지 1.5가 되도록 배지에 접종한다. 배지 접종은 CM 플레이트로부터의 코리네박테리움 글루타미쿰 세포의 염수 용액을 도입하거나, 상기 세균의 예비배양액을 첨가하여 수행한다.
실시예 8: 돌연변이된 단백질의 기능에 관한 시험관내 분석
효소의 활성 및 반응 속도(kinetics) 측정법은 당업계에 공지되어 있다. 특정하게 변형된 효소의 활성 측정 실험은 야생형 효소의 특정 활성에 적합화시켜야 하며, 당업자라면 이를 잘 수행할 수 있다. 효소에 관한 일반적인 개요뿐만 아니라 효소의 구조, 반응 속도, 원리, 방법, 적용에 관한 구체적인 세부사항 및 많은 효소들의 활성 측정 방법의 예는 예를 들어, 하기의 참고문헌에서 찾을 수 있다: ([Dixon, M., and Webb, E.C., (1979) Enzymes. Longmans: London; Fersht, (1985) Enzyme Structure and Mechanism. Freeman: New York], [Walsh, (1979) Enzymatic Reaction Mechanisms. Freeman: SanFrancisco], [Price, N.C., Stevens, L. (1982) Fundamentals of Enzymology. Oxford Univ. Press: Oxford], [Boyer, P.D., ed. (1983) The Enzymes, 3rd edition. Academic Press: New York], [Bisswanger, H., (1994) Enzymkinetik, 2nd edition. VCH: Weinheim (ISBN 3527300325)], [Bergmeyer, H.U., Bergmeyer, J., Grassl, M., eds. (1983-1986) Methods of Enzymatic Analysis, 3rd edition, Vol. I-XII, Verlag Chemie: Weinheim] 및 [Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry (1987) vol.A9, "Enzymes". VCH: Weinheim, p.352-363]).
DNA에 결합하는 단백질의 활성은 DNA 밴드시프트(bandshift) 분석법 (겔 지연 분석법 (gel retardation assays)이라고 지칭하기도 함) 등과 같이 잘 확립되어 있는 여러 방법들을 사용하여 측정할 수 있다. 상기 단백질들이 다른 분자들의 발현에 미치는 영향은 리포터 유전자 분석법 (예를 들어, 문헌 [Kolmar, H. et al. (1995) EMBO J. 14:3895-3904]과 그의 참고문헌에 기재된 바와 같음)을 사용하여 측정할 수 있다. 베타-갈락토시다제 등의 효소, 녹색 형광 단백질 및 수개의 다른 효소가 사용되는 리포터 유전자 시험 시스템은 원핵 세포 및 진핵 세포 모두에의 적용에 대해 공지되어 있으며 잘 확립되어 있다.
막 수송 단백질의 활성은 문헌 [Gennis, R.B. (1989) "Pores, Channels and Transporters", in Biomembranes, Molecular Structure and Function, Springer: Heidelberg, p.85-137, 199-234 및 270-322]에 기재된 기술에 따라 측정할 수 있다.
실시예 9: 돌연변이된 단백질이 관심의 대상이 되는 산물의 생산에 미치는 영향 분석
코리네박테리움 글루타미쿰에서의 유전자 변형이 관심의 대상이 되는 화합물 (예컨대, 아미노산)의 생산에 미치는 영향은 변형된 미생물을 적절한 조건 (예를 들어, 상기 기재한 조건)하에서 성장시키고, 관심의 대상이 되는 산물 (즉, 아미노산)의 생산 증가에 관여한 배지 성분 및(또는) 세포내 성분을 시험하여 결정할 수 있다. 이러한 분석 기술은 당업자에게 공지되어 있으며, 분광분석법, 박층 크로마토그래피법, 각종 유형의 착색법, 효소적 및 미생물학적 방법 및 고성능 액체 크로마토그래피법 등과 같은 분석용 크로마토그래피법 등이 있다 (예를 들어, 문헌 ([Ullman, Encyclopedia of Industrial Chemistry, vol.A2, p.89-90 및 p.443-613, VCH: Weinheim (1985)], [Fallon, A. et al., (1987) "Applications of HPLC in Biochemistry" in: Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, vol.17], [Rehm et al. (1993) Biotechnology, vol.3, Chapter III: "Product recovery and purification", page 469-714, VCH: Weinheim], [Belter, P.A. et al. (1988) Bioseparations: downstream processing for biotechnology, John Wiley and Sons], [Kennedy, J.F. and Cabral, J.M.S. (1992) Recovery processes for biological materials, John Wiley and Sons], [Shaeiwitz, J.A. and Henry, J.D. (1988) Biochemical separations, in Ulmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry, vol. B3, Chapter 11, page 1-27, VCH: Weinheim] 및 [Dechow, F.J. (1989) Separation and purification techniques in biotechnology, Noyes Publications]) 참조).
최종 발효 산물의 측정 뿐만 아니라, 중간체 및 부산물 등과 같이 관심의 대상이 되는 화합물의 생산에 이용된 대사 경로 중의 다른 성분들을 분석함으로써 전반적인 유기체의 생산량, 화합물의 수율 및(또는) 생산 효율을 측정할 수도 있다. 분석 방법으로는 배지 내의 영양분 (예컨대, 당, 탄화수소, 질소 공급원, 인산염 및 다른 이온) 함량 측정, 생물집단(biomass)의 조성 및 성장 측정, 생합성 경로의 공통 대사물질의 생산 분석 및 발효 동안에 생성된 기체의 측정 등이 있다. 이러한 측정을 위한 표준 방법은 문헌 [Applied Microbial Physiology, A Practical Approach, P.M.Rhodes and P.F.Stanbury, eds., IRL Press, p.103-129, 131-163 및 165-192 (ISBN:0199635773)과 그의 참고문헌]에 기재되어 있다.
실시예 10: 코리네박테리움 글루타미쿰 배양물로부터의 관심의 대상이 되는 산물 정제
당업계에 공지된 여러가지 방법을 사용하여, 코리네박테리움 글루타미쿰 세포 또는 상기 기재한 배양물의 상등액으로부터 관심의 대상이 되는 산물을 수득할 수 있다. 세포가 관심의 대상이 되는 산물을 분비하지 않는 경우에는 배양물을 저속 원심분리하여 세포를 수거하고 기계적인 힘이나 초음파 등과 같은 표준 기술로 세포를 용균시킬 수 있다. 원심분리로 세포 잔해를 제거하여 가용성 단백질을 함유하는 상등액 분획물을 수득하고, 이를 사용하여 관심의 대상이 되는 화합물을 추가로 정제한다. 코리네박테리움 글루타미쿰 세포가 산물을 분비하는 경우에는 배양물을 저속 원심분리하여 세포를 제거하고, 수득한 상등액 분획물을 추가로 정제 한다.
상기 두 가지 정제 방법 모두의 경우에서 수득한 상등액 분획물을 적절한 수지를 사용한 크로마토그래피에 적용하여 관심의 대상이 되는 분자는 크로마토그래피 수지상에 남지만 샘플 중의 많은 오염물질들은 남지 않게 하거나, 오염물질들은 수지에 남지만 원하는 분자는 남지 않게 한다. 필요에 따라서는, 동일하거나 상이한 크로마토그래피 수지를 사용하여 이러한 크로마토그래피 단계를 반복할 수 있다. 당업자라면, 적절한 크로마토그래피 수지를 선택하고 정제할 특정 분자에 대해 가장 효과적으로 이를 적용하는 것에 숙달되어 있을 것이다. 정제된 산물을 여과 또는 한외여과사켜 농축시키고, 산물의 안정성이 최대가 되는 온도에 저장할 수 있다.
당업계에는 상기 기재한 정제법 및 예를 들어, 문헌 [Bailey, J.E. & Ollis, D.F. Biochemical Engineering Fundamentals, McGraw-Hill: New York (1986)]에 기재된 정제법 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 다수의 정제법들이 공지되어 있다.
단리된 화합물의 확인 및 순도는 당업계의 기술로 측정할 수 있다. 이러한 기술로는 고성능 액체 크로마토그래피법 (HPLC), 분광분석법, 착색법, 박층 크로마토그래피법, NIRS법, 효소 분석법 또는 미생물학적 분석법 등이 있다. 이러한 분석 방법은 하기 문헌에서 고찰된다: ([Patek et al. (1994) Appl. Environ. Microbiol. 60:133-140], [Malakhova et al. (1996) Biotekhnologiya 11:27-32], [Schmidt et al. (1998) Bioprocess Engineer. 19:67-70], [Ulmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry, (1996) Vol. A27, VCH: Weinheim, p.89-90, p.521-540, p.540-547, p.559-566, p.575-581 및 p.581-587], [Michal, G. (1999) Biochemical Pathways: An Atlas of Biochemistry and Molecular Biology, John Wiley and Sons] 및 [Fallon, A. et al. (1987) Applications of HPLC in Biochemistry in: Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, vol. 17]).
등가물
당업자라면, 단순한 통상의 방법을 이용하여 본 발명의 특정 실시양태의 수많은 등가물을 알아내거나 확인할 수 있다. 이러한 등가물은 하기의 청구의 범위에 포함된다.
표 1 및 표 2의 정보는 다음과 같이 이해되어야 한다:
컬럼 1에서, "DNA 서열 번호"의 해당 번호는 첨부된 서열 목록에서의 서열 번호 각각을 지칭하는 것이다. 따라서, 컬럼 "DNA 서열 번호"의 "5"는 서열 5를 지칭한다.
컬럼 2에서, "아미노산 서열 번호"의 해당 번호는 첨부된 서열 목록에서의 서열 번호 각각을 지칭하는 것이다. 따라서, 컬럼 "아미노산 서열 번호"의 "6"은 서열 6을 지칭한다.
컬럼 3에서, "확인"은 각 서열에 대한 명확한 식별기호를 기재한 것이다.
컬럼 4에서, "아미노산 위치"의 해당 번호는 각 경우에서 동일 열에 있는 "아미노산 서열 번호"에 기재된 폴리펩티드 서열에서의 아미노산 위치를 지칭한다. 따라서, 컬럼 "아미노산 위치"의 "26"은 해당 폴리펩티드 서열의 아미노산 위치 26이다. 위치 번호는 N 말단을 +1로 하여 출발한다.
컬럼 5에서, "아미노산 야생형"의 해당 문자는 각 경우의 컬럼 4에 표시한 야생형 서열에서 해당 위치에 존재하는 아미노산을 지칭하며, 1문자 코드로 나타내었다.
컬럼 6에서, "아미노산 돌연변이체"의 해당 문자는 각 경우의 컬럼 4에 표시한 돌연변이체 서열에서 해당 위치에 존재하는 아미노산을 지칭하며, 1문자 코드로 나타내었다.
컬럼 7에서, "기능"은 해당 폴리펩티드 서열의 생리적 기능을 기재한 것이다.
컬럼 4, 5 및 6은 특정 기능 (컬럼 7) 및 특정 출발 아미노산 서열 (컬럼 2)을 갖는 MP 단백질에 대한 적어도 하나의 돌연변이, 몇몇 서열의 경우에는 또한, 수개의 돌연변이를 기술한다. 상기 수개의 돌연변이는 항상 상단에 기재된 것인 경우에는 가장 가까운 출발 아미노산 서열을 지칭한다. 용어 특정 아미노산 서열의 "하나 이상의 아미노산 위치"는 바람직하게 컬럼 4, 5 및 6에서 기술된 아미노산 서열에 대한 적어도 하나의 돌연변이를 의미한다.
단백질성 아미노산의 1문자 코드는 다음과 같다:
A 알라닌
C 시스테인
D 아스파르트산
E 글루탐산
F 페닐알라닌
G 글리신
H 히스티딘
I 이소루이신
*K 리신
L 루이신
M 메티오닌
N 아스파라긴
P 프롤린
Q 글루타민
R 아르기닌
S 세린
T 트레오닌
V 발린
W 트립토판
Y 티로신
<110> PAIK KWANG INDUSTRIAL CO., LTD
<120> GENE VARIANTS CODING FOR PROTEINS OF THE METABOLIC PATHWAY OF
FINE CHEMICALS
<160> 142
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 1848
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 1
ttgactgatc tcacaaagac tgcggtgccc gaggaacttt cagagaacct cgaaacttgg 60
tacaaggctg tggccggtgt tttcgcgcgc acacagaaaa aagacatcgg cgacattgcc 120
gtagatgtgt ggaagaaact catcgtcact acaccggatg gtgttgatat caatccgctg 180
tacaccagag cagatgagtc ccagaggaaa ttcactgagg ttcctggtga gtttcccttc 240
actaggggaa ccactgttga tggtgaacgc gttggttggg gtgttactga gactttcgga 300
catgacagcc cgaagaatat caacgctgcg gtgctgaatg ctctgaattc tggcaccacc 360
acattgggtt ttgagttctc tgaggaattc acggcagctg atcttaaagt tgctctcgaa 420
ggcgtgtatc tcaacatggc tccgttgctg attcatgcgg gtggatccac gtcagaggtt 480
gcagcggcgt tgtatacgtt ggcggaggaa gccggaacgt tttttgctgc gttgaccttg 540
ggttctcgtc ctttgacggc gcaggttgat ggttcgcaca gtgacaccat tgaagaagca 600
gttcagttgg cagtgaatgc ttccaagcgt gcgaatgtgc gcgctatctt ggtggatggt 660
tccagttttt ccaaccaggg cgcgtcggat gctcaagaaa ttggtctaag tatcgccgcc 720
ggtgtggatt atgtccgtcg cttggtcgat gcaggccttt ccacggaagc tgcacttaag 780
caggtggcgt tccgttttgc ggtcaccgat gagcagttcg cgcagatttc taagctgcgt 840
gtggctcgac gtctgtgggc cagggtgtgt gaggtgcttg gttttccaga gctggccgta 900
gcaccacagc atgcggtgac tgcacgagcg atgtttagcc agcgtgatcc gtgggtgaat 960
atgctgcgca gtactgttgc agctttcgct gcaggcgtcg gtggagcaac cgatgtggag 1020
gttcgtactt ttgatgatgc gatcccagat ggagttcctg gagtgtcgag gaatttcgct 1080
caccgcatcg cgcgcaatac taatttgttg ttgctagaag agtcacatct tggtcacgtg 1140
gttgatcctg ctggtggatc atatttcgtg gagagcttca ccgatgatct agcggagaag 1200
gcgtgggctg tgttcagtgg catcgaagct gagggcggat acagtgcagc ttgtgcatcc 1260
ggcacggtga ctgccatgct tgatcagacg tgggagcaga ctcgcgctga tgtggcgtcg 1320
agaaagaaga agctcactgg aattaatgag ttcccgaact tggcggagtc tccgctgcca 1380
gctgatcgtc gggtagaacc tgcaggtgtg cgtcgatggg cagcggattt tgaagcgctg 1440
cgcaatcgtt cggatgcttt cttggaaaag aacggcgcga ggccacagat cacgatgatt 1500
cctctgggac cgttgtccaa gcacaatatt cgcactggtt ttacttccaa cctgttggct 1560
tccggtggca ttgaagcaat caacccgggt caacttgttc ccggcactga cgcttttgca 1620
gaagctgcac aggccgcagg cattgtagtg gtgtgtggaa cggaccaaga gtatgccgaa 1680
acgggggagg gagccgtcga aaagctccgc gaagcgggcg ttgagcgcat cctgcttgct 1740
ggcgcgccga agagctttga gggcagcgcg catgcgcccg atggttattt gaacatgaca 1800
attgatgccg cggcgacgct ggctgacctg ctagatgctt tgggagct 1848
<210> 2
<211> 616
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 2
Met Thr Asp Leu Thr Lys Thr Ala Val Pro Glu Glu Leu Ser Glu Asn
1 5 10 15
Leu Glu Thr Trp Tyr Lys Ala Val Ala Gly Val Phe Ala Arg Thr Gln
20 25 30
Lys Lys Asp Ile Gly Asp Ile Ala Val Asp Val Trp Lys Lys Leu Ile
35 40 45
Val Thr Thr Pro Asp Gly Val Asp Ile Asn Pro Leu Tyr Thr Arg Ala
50 55 60
Asp Glu Ser Gln Arg Lys Phe Thr Glu Val Pro Gly Glu Phe Pro Phe
65 70 75 80
Thr Arg Gly Thr Thr Val Asp Gly Glu Arg Val Gly Trp Gly Val Thr
85 90 95
Glu Thr Phe Gly His Asp Ser Pro Lys Asn Ile Asn Ala Ala Val Leu
100 105 110
Asn Ala Leu Asn Ser Gly Thr Thr Thr Leu Gly Phe Glu Phe Ser Glu
115 120 125
Glu Phe Thr Ala Ala Asp Leu Lys Val Ala Leu Glu Gly Val Tyr Leu
130 135 140
Asn Met Ala Pro Leu Leu Ile His Ala Gly Gly Ser Thr Ser Glu Val
145 150 155 160
Ala Ala Ala Leu Tyr Thr Leu Ala Glu Glu Ala Gly Thr Phe Phe Ala
165 170 175
Ala Leu Thr Leu Gly Ser Arg Pro Leu Thr Ala Gln Val Asp Gly Ser
180 185 190
His Ser Asp Thr Ile Glu Glu Ala Val Gln Leu Ala Val Asn Ala Ser
195 200 205
Lys Arg Ala Asn Val Arg Ala Ile Leu Val Asp Gly Ser Ser Phe Ser
210 215 220
Asn Gln Gly Ala Ser Asp Ala Gln Glu Ile Gly Leu Ser Ile Ala Ala
225 230 235 240
Gly Val Asp Tyr Val Arg Arg Leu Val Asp Ala Gly Leu Ser Thr Glu
245 250 255
Ala Ala Leu Lys Gln Val Ala Phe Arg Phe Ala Val Thr Asp Glu Gln
260 265 270
Phe Ala Gln Ile Ser Lys Leu Arg Val Ala Arg Arg Leu Trp Ala Arg
275 280 285
Val Cys Glu Val Leu Gly Phe Pro Glu Leu Ala Val Ala Pro Gln His
290 295 300
Ala Val Thr Ala Arg Ala Met Phe Ser Gln Arg Asp Pro Trp Val Asn
305 310 315 320
Met Leu Arg Ser Thr Val Ala Ala Phe Ala Ala Gly Val Gly Gly Ala
325 330 335
Thr Asp Val Glu Val Arg Thr Phe Asp Asp Ala Ile Pro Asp Gly Val
340 345 350
Pro Gly Val Ser Arg Asn Phe Ala His Arg Ile Ala Arg Asn Thr Asn
355 360 365
Leu Leu Leu Leu Glu Glu Ser His Leu Gly His Val Val Asp Pro Ala
370 375 380
Gly Gly Ser Tyr Phe Val Glu Ser Phe Thr Asp Asp Leu Ala Glu Lys
385 390 395 400
Ala Trp Ala Val Phe Ser Gly Ile Glu Ala Glu Gly Gly Tyr Ser Ala
405 410 415
Ala Cys Ala Ser Gly Thr Val Thr Ala Met Leu Asp Gln Thr Trp Glu
420 425 430
Gln Thr Arg Ala Asp Val Ala Ser Arg Lys Lys Lys Leu Thr Gly Ile
435 440 445
Asn Glu Phe Pro Asn Leu Ala Glu Ser Pro Leu Pro Ala Asp Arg Arg
450 455 460
Val Glu Pro Ala Gly Val Arg Arg Trp Ala Ala Asp Phe Glu Ala Leu
465 470 475 480
Arg Asn Arg Ser Asp Ala Phe Leu Glu Lys Asn Gly Ala Arg Pro Gln
485 490 495
Ile Thr Met Ile Pro Leu Gly Pro Leu Ser Lys His Asn Ile Arg Thr
500 505 510
Gly Phe Thr Ser Asn Leu Leu Ala Ser Gly Gly Ile Glu Ala Ile Asn
515 520 525
Pro Gly Gln Leu Val Pro Gly Thr Asp Ala Phe Ala Glu Ala Ala Gln
530 535 540
Ala Ala Gly Ile Val Val Val Cys Gly Thr Asp Gln Glu Tyr Ala Glu
545 550 555 560
Thr Gly Glu Gly Ala Val Glu Lys Leu Arg Glu Ala Gly Val Glu Arg
565 570 575
Ile Leu Leu Ala Gly Ala Pro Lys Ser Phe Glu Gly Ser Ala His Ala
580 585 590
Pro Asp Gly Tyr Leu Asn Met Thr Ile Asp Ala Ala Ala Thr Leu Ala
595 600 605
Asp Leu Leu Asp Ala Leu Gly Ala
610 615
<210> 3
<211> 1890
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 3
gtggccaatc tagattcagt tcgccctggg gtgcgggcag ctcttcgacg tacccatacc 60
caggtaaaag gtgtcacgtt gaccagggcg ttgattgcgc ttgcagtaag cggagctttg 120
cttagttcca tgactccggc ggtggcgcag ccacagaatc cggatgacgc agccattgca 180
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tccagcactg acgcggaaat taaccgcgtc gagctggaaa tgggtgctct gcgtgaagaa 300
gtgaacaagt ccctcgtgga tttgcatgat gcgcaggcaa tcgccgagca ggcccgccaa 360
gatgcacttg cagccaagaa ggatctcgat gattctcaag cgcagatcga agcagcccaa 420
gagcgccttg atgagatttc acgtgcagcg tatcgccaaa acggaacctc caaggggctt 480
tcaggcatct cgggcaatgg aaattctgaa gatgcgctag atcgtcagac ttacctgcga 540
accagtgcgg aaaagcagca ggcagctgtt gaagagcttg atcgcctccg tacggaaaac 600
gccaacaagg aatcggtgtt gcgccaggcc cgcatcgttg ctgagcagcg tgaggcggaa 660
gccgtcgaaa agcaagtcca gaccgaggct gcaattgccg caaacagcga gcagctcaat 720
gtcttgacta acaatcgcag taccttggtt gcccagcgtg atggggctga gcgcaacttg 780
gccatcgctc gtgcgcaggc ggataatctg caaggtcagc gtgctgagta cgaggaattc 840
cagcaggcag agcaggctcg catccaggcg gaagcggaag ctcaggctgc tgcggaggag 900
aagcgtcgtg ccgatgaggc tgctgcacag gcagccgctg aagctcaaga agctgcccag 960
caagctcagg cggcggagga agcccaagcc gcgcaagcag ctgagacagc acaagcccaa 1020
gccgcgcaag ctgcggaaac ccaagctgca caagccgcgc aagctcaggc agaagcgaat 1080
gatcgtgccg ccgcgcaaca gcgtgctgca gaggctcaag cagcagcgga acaggcgcaa 1140
cgtgaggctg acgctcaggc ggccaacgat gcccaagctc aggcactgcg tgaacaggcg 1200
ctcaccgcag cctccatcgc tgcggctgct ctaattgcgg cgagccagtc cagccatgcc 1260
actactcaaa atccttaccc aactgatgaa gacgcggatc cgaccgatat tgcggacatc 1320
caaggcccaa cgcagccagg tacgggtgag tctggagatt cccagagcaa ctccagcgac 1380
aacgattcca caggcaacga ttccacaggc tctgactctt cagattcaga ttcctccggc 1440
aacgattctt cagaggttat ttccggcgat cgttccgctc agattgagac tgtgattgcg 1500
cgcgccatga gccagttggg tgtgcagtac gcatggggtg gcggtaacgc taatggccca 1560
actctgggta tccgtgacgg tggcgtggcg gactcttacg gcgattacaa caaggttggc 1620
ttcgactgct ctggactgac cttgtatgcg tttgcgggtg tgggaatttc acttcctcac 1680
tacacgggct accagtacca gcacggcacc aaggtgtcgc cttctgagat gcaacgtggc 1740
gatctgatct tctatggtcc gggagcgtct cagcacgtgg caatttacct cggtgatggt 1800
cagatgattg aggctccgaa ttcgggttct gtcgtgaaga tttctcctgt tcgctggagc 1860
ggaatgaccg agagcgtggt acgcctcatt 1890
<210> 4
<211> 630
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 4
Met Ala Asn Leu Asp Ser Val Arg Pro Gly Val Arg Ala Ala Leu Arg
1 5 10 15
Arg Thr His Thr Gln Val Lys Gly Val Thr Leu Thr Arg Ala Leu Ile
20 25 30
Ala Leu Ala Val Ser Gly Ala Leu Leu Ser Ser Met Thr Pro Ala Val
35 40 45
Ala Gln Pro Gln Asn Pro Asp Asp Ala Ala Ile Ala Gln Ala Glu Glu
50 55 60
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65 70 75 80
Ser Ser Thr Asp Ala Glu Ile Asn Arg Val Glu Leu Glu Met Gly Ala
85 90 95
Leu Arg Glu Glu Val Asn Lys Ser Leu Val Asp Leu His Asp Ala Gln
100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Glu Ile Ser Arg Ala Ala Tyr Arg Gln Asn Gly Thr Ser Lys Gly Leu
145 150 155 160
Ser Gly Ile Ser Gly Asn Gly Asn Ser Glu Asp Ala Leu Asp Arg Gln
165 170 175
Thr Tyr Leu Arg Thr Ser Ala Glu Lys Gln Gln Ala Ala Val Glu Glu
180 185 190
Leu Asp Arg Leu Arg Thr Glu Asn Ala Asn Lys Glu Ser Val Leu Arg
195 200 205
Gln Ala Arg Ile Val Ala Glu Gln Arg Glu Ala Glu Ala Val Glu Lys
210 215 220
Gln Val Gln Thr Glu Ala Ala Ile Ala Ala Asn Ser Glu Gln Leu Asn
225 230 235 240
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Glu Arg Asn Leu Ala Ile Ala Arg Ala Gln Ala Asp Asn Leu Gln Gly
260 265 270
Gln Arg Ala Glu Tyr Glu Glu Phe Gln Gln Ala Glu Gln Ala Arg Ile
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Gln Ala Glu Ala Glu Ala Gln Ala Ala Ala Glu Glu Lys Arg Arg Ala
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340 345 350
Ala Gln Ala Gln Ala Glu Ala Asn Asp Arg Ala Ala Ala Gln Gln Arg
355 360 365
Ala Ala Glu Ala Gln Ala Ala Ala Glu Gln Ala Gln Arg Glu Ala Asp
370 375 380
Ala Gln Ala Ala Asn Asp Ala Gln Ala Gln Ala Leu Arg Glu Gln Ala
385 390 395 400
Leu Thr Ala Ala Ser Ile Ala Ala Ala Ala Leu Ile Ala Ala Ser Gln
405 410 415
Ser Ser His Ala Thr Thr Gln Asn Pro Tyr Pro Thr Asp Glu Asp Ala
420 425 430
Asp Pro Thr Asp Ile Ala Asp Ile Gln Gly Pro Thr Gln Pro Gly Thr
435 440 445
Gly Glu Ser Gly Asp Ser Gln Ser Asn Ser Ser Asp Asn Asp Ser Thr
450 455 460
Gly Asn Asp Ser Thr Gly Ser Asp Ser Ser Asp Ser Asp Ser Ser Gly
465 470 475 480
Asn Asp Ser Ser Glu Val Ile Ser Gly Asp Arg Ser Ala Gln Ile Glu
485 490 495
Thr Val Ile Ala Arg Ala Met Ser Gln Leu Gly Val Gln Tyr Ala Trp
500 505 510
Gly Gly Gly Asn Ala Asn Gly Pro Thr Leu Gly Ile Arg Asp Gly Gly
515 520 525
Val Ala Asp Ser Tyr Gly Asp Tyr Asn Lys Val Gly Phe Asp Cys Ser
530 535 540
Gly Leu Thr Leu Tyr Ala Phe Ala Gly Val Gly Ile Ser Leu Pro His
545 550 555 560
Tyr Thr Gly Tyr Gln Tyr Gln His Gly Thr Lys Val Ser Pro Ser Glu
565 570 575
Met Gln Arg Gly Asp Leu Ile Phe Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gln His
580 585 590
Val Ala Ile Tyr Leu Gly Asp Gly Gln Met Ile Glu Ala Pro Asn Ser
595 600 605
Gly Ser Val Val Lys Ile Ser Pro Val Arg Trp Ser Gly Met Thr Glu
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Ser Val Val Arg Leu Ile
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<211> 1800
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 5
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cgcatcgttg ctgagcagcg tgaggcggaa gccgtcgaaa agcaagtcca gaccgaggct 600
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1800
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<211> 600
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
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Met Ile Ala Leu Ala Val Ser Gly Ala Leu Leu Ser Ser Met Thr Pro
1 5 10 15
Ala Val Ala Gln Pro Gln Asn Pro Asp Asp Ala Ala Ile Ala Gln Ala
20 25 30
Glu Glu Asn Val Ser Ala Gly Asp Gly Glu Val Ala Arg Leu Ala Gly
35 40 45
Ser Leu Ser Ser Thr Asp Ala Glu Ile Asn Arg Val Glu Leu Glu Met
50 55 60
Gly Ala Leu Arg Glu Glu Val Asn Lys Ser Leu Val Asp Leu His Asp
65 70 75 80
Ala Gln Ala Ile Ala Glu Gln Ala Arg Gln Asp Ala Leu Ala Ala Lys
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100 105 110
Leu Asp Glu Ile Ser Arg Ala Ala Tyr Arg Gln Asn Gly Thr Ser Lys
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Gly Leu Ser Gly Ile Ser Gly Asn Gly Asn Ser Glu Asp Ala Leu Asp
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Glu Glu Leu Asp Arg Leu Arg Thr Glu Asn Ala Asn Lys Glu Ser Val
165 170 175
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195 200 205
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Gly Ala Glu Arg Asn Leu Ala Ile Ala Arg Ala Gln Ala Asp Asn Leu
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Arg Ile Gln Ala Glu Ala Glu Ala Gln Ala Ala Ala Glu Glu Lys Arg
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435 440 445
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Ile Glu Thr Val Ile Ala Arg Ala Met Ser Gln Leu Gly Val Gln Tyr
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Gly Gly Val Ala Asp Ser Tyr Gly Asp Tyr Asn Lys Val Gly Phe Asp
500 505 510
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Gln His Val Ala Ile Tyr Leu Gly Asp Gly Gln Met Ile Glu Ala Pro
565 570 575
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<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
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<213> Corynebacterium glutamicum
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Tyr Ile Ser Thr Arg Asp Ala Ser Arg Thr Pro Ala Arg Phe Ser Asp
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Phe Val Asp Asp Ile Pro Val Glu Asp Ile Lys Ala Ile Thr Ala Arg
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Glu Leu Glu Asp Asn Ile Tyr Leu Gly His Leu Ser Glu Gly Pro Thr
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Ser Leu Ala Asp Asp Ala Asn Phe Glu Lys Ala Ala Ala Glu Tyr Gly
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Phe Ala Ser Gly Arg Ser Thr His Ala Asp Arg Val Ala Thr Ile Ala
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Asp Val His Ser Arg Leu Asp Val Leu Ile Asp Pro His Thr Ala Asp
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<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
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145 150 155 160
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325 330 335
Ser Val Phe Val Asn Val Phe Gly Gly Ile Thr Ala Cys Asp Val Val
340 345 350
Ala Lys Gly Ile Val Gly Ala Leu Asp Val Leu Gly Asp Gln Ala Thr
355 360 365
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<213> Corynebacterium glutamicum
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ctgaccgtcg tcaaggctca ggtcaaggtg ggcggacgtg gcaaggcggg tggcgtccgt 180
gtggcaccga cgtcggctca ggcttttgat gctgcggatg cgattctcgg catggatatc 240
aaaggacaca ctgttaatca ggtgatggtg gcgcagggcg ctgacattgc tgaggaatac 300
tatttctcca ttttgttgga tcgcgcgaat cgttcgtatc tggctatgtg ctctgttgaa 360
ggtggcatgg agatcgagat cctggcgaag gaaaagcctg aagctttggc aaaggtggaa 420
gtggatcccc tcactggtat tgatgaggac aaagcgcggg agattgtcac tgctgctggc 480
tttgaaactg aggtggcaga gaaagtcatt ccggtgctga tcaagatctg gcaggtgtat 540
tacgaagagg aagcaacact cgttgaggtg aacccgttgg tgctcacgga tgacggcgat 600
gtgattgcgc ttgatggcaa gatcacgctg gatgataacg ctgatttccg ccatgataac 660
cgtggtgcgt tggctgaatc tgccggtggc ttggacattt tggaactgaa ggccaagaag 720
aatgatctga actacgtgaa acttgatggc tctgtgggca tcattggcaa tggtgcaggt 780
ttggtgatgt ccacgttgga tatcgtggct gcagctggtg aacgccatgg tgggcagcgc 840
cccgcgaact tcctagacat tggtggcgga gcatcagctg aatcgatggc tgctggtctc 900
gatgtgatcc ttggggatag ccaggtacgc agtgtgtttg tgaatgtgtt tggtggcatc 960
accgcgtgtg atgtggtggc aaagggaatc gttggagctt tggatgtgct cggcgatcaa 1020
gcaacgaagc ctcttgtggt gcgccttgat ggcaacaacg tggtggaagg cagacgaatc 1080
ctcgcggaat ataaccaccc tttggtcacc gttgtggagg gtatggatgc agcggctgat 1140
cacgctgccc atttggccaa tcttgcccag cacggccagt tcgcaaccgc taat 1194
<210> 14
<211> 398
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 14
Met Asp Leu Phe Glu Tyr Gln Ala Arg Asp Leu Phe Glu Thr His Gly
1 5 10 15
Val Pro Val Leu Lys Gly Ile Val Ala Ser Thr Pro Glu Ala Ala Arg
20 25 30
Lys Ala Ala Glu Glu Ile Gly Gly Leu Thr Val Val Lys Ala Gln Val
35 40 45
Lys Val Gly Gly Arg Gly Lys Ala Gly Gly Val Arg Val Ala Pro Thr
50 55 60
Ser Ala Gln Ala Phe Asp Ala Ala Asp Ala Ile Leu Gly Met Asp Ile
65 70 75 80
Lys Gly His Thr Val Asn Gln Val Met Val Ala Gln Gly Ala Asp Ile
85 90 95
Ala Glu Glu Tyr Tyr Phe Ser Ile Leu Leu Asp Arg Ala Asn Arg Ser
100 105 110
Tyr Leu Ala Met Cys Ser Val Glu Gly Gly Met Glu Ile Glu Ile Leu
115 120 125
Ala Lys Glu Lys Pro Glu Ala Leu Ala Lys Val Glu Val Asp Pro Leu
130 135 140
Thr Gly Ile Asp Glu Asp Lys Ala Arg Glu Ile Val Thr Ala Ala Gly
145 150 155 160
Phe Glu Thr Glu Val Ala Glu Lys Val Ile Pro Val Leu Ile Lys Ile
165 170 175
Trp Gln Val Tyr Tyr Glu Glu Glu Ala Thr Leu Val Glu Val Asn Pro
180 185 190
Leu Val Leu Thr Asp Asp Gly Asp Val Ile Ala Leu Asp Gly Lys Ile
195 200 205
Thr Leu Asp Asp Asn Ala Asp Phe Arg His Asp Asn Arg Gly Ala Leu
210 215 220
Ala Glu Ser Ala Gly Gly Leu Asp Ile Leu Glu Leu Lys Ala Lys Lys
225 230 235 240
Asn Asp Leu Asn Tyr Val Lys Leu Asp Gly Ser Val Gly Ile Ile Gly
245 250 255
Asn Gly Ala Gly Leu Val Met Ser Thr Leu Asp Ile Val Ala Ala Ala
260 265 270
Gly Glu Arg His Gly Gly Gln Arg Pro Ala Asn Phe Leu Asp Ile Gly
275 280 285
Gly Gly Ala Ser Ala Glu Ser Met Ala Ala Gly Leu Asp Val Ile Leu
290 295 300
Gly Asp Ser Gln Val Arg Ser Val Phe Val Asn Val Phe Gly Gly Ile
305 310 315 320
Thr Ala Cys Asp Val Val Ala Lys Gly Ile Val Gly Ala Leu Asp Val
325 330 335
Leu Gly Asp Gln Ala Thr Lys Pro Leu Val Val Arg Leu Asp Gly Asn
340 345 350
Asn Val Val Glu Gly Arg Arg Ile Leu Ala Glu Tyr Asn His Pro Leu
355 360 365
Val Thr Val Val Glu Gly Met Asp Ala Ala Ala Asp His Ala Ala His
370 375 380
Leu Ala Asn Leu Ala Gln His Gly Gln Phe Ala Thr Ala Asn
385 390 395
<210> 15
<211> 1335
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 15
atgacctcag catctgcccc aagctttaac cccggcaagg gtcccggctc agcagtcgga 60
attgcccttt taggattcgg aacagtcggc actgaggtga tgcgtctgat gaccgagtac 120
ggtgatgaac ttgcgcaccg cattggtggc ccactggagg ttcgtggcat tgctgtttct 180
gatatctcaa agccacgtga aggcgttgca cctgagctgc tcactgagga cgcttttgca 240
ctcatcgagc gcgaggatgt tgacatcgtc gttgaggtta tcggcggcat tgagtaccca 300
cgtgaggtag ttctcgcagc tctgaaggcc ggcaagtctg ttgttaccgc caataaggct 360
cttgttgcag ctcactctgc tgagcttgct gatgcagcgg aagccgcaaa cgttgacctg 420
tacttcgagg ctgctgttgc aggcgcaatt ccagtggttg gcccactgcg tcgctccctg 480
gctggcgatc agatccagtc tgtgatgggc atcgttaacg gcaccaccaa cttcatcttg 540
gacgccatgg attccaccgg cgctgactat gcagattctt tggctgaggc aactcgtttg 600
ggttacgccg aagctgatcc aactgcagac gtcgaaggcc atgacgccgc atccaaggct 660
gcaattttgg catccatcgc tttccacacc cgtgttaccg cggatgatgt gtactgcgaa 720
ggtatcagca acatcagcgc tgccgacatt gaggcagcac agcaggcagg ccacaccatc 780
aagttgttgg ccatctgtga gaagttcacc aacaaggaag gaaagtcggc tatttctgct 840
cgcgtgcacc cgactctatt acctgtgtcc cacccactgg cgtcggtaaa caagtccttt 900
aatgcaatct ttgttgaagc agaagcagct ggtcgcctga tgttctacgg aaacggtgca 960
ggtggcgcgc caaccgcgtc tgctgtgctt ggcgacgtcg ttggtgccgc acgaaacaag 1020
gtgcacggtg gccgtgctcc aggtgagtcc acctacgcta acctgccgat cgctgatttc 1080
ggtgagacca ccactcgtta ccacctcgac atggatgtgg aagatcgcgt gggggttttg 1140
gctgaattgg ctagcctgtt ctctgagcaa ggaatctccc tgcgtacaat ccgacaggaa 1200
gagcgcgatg atgatgcacg tctgatcgtg gtcacccact ctgcgctgga atctgatctt 1260
tcccgcaccg ttgaactgct gaaggctaag cctgttgtta aggcaatcaa cagtgtgatc 1320
cgcctcgaaa gggac 1335
<210> 16
<211> 445
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 16
Met Thr Ser Ala Ser Ala Pro Ser Phe Asn Pro Gly Lys Gly Pro Gly
1 5 10 15
Ser Ala Val Gly Ile Ala Leu Leu Gly Phe Gly Thr Val Gly Thr Glu
20 25 30
Val Met Arg Leu Met Thr Glu Tyr Gly Asp Glu Leu Ala His Arg Ile
35 40 45
Gly Gly Pro Leu Glu Val Arg Gly Ile Ala Val Ser Asp Ile Ser Lys
50 55 60
Pro Arg Glu Gly Val Ala Pro Glu Leu Leu Thr Glu Asp Ala Phe Ala
65 70 75 80
Leu Ile Glu Arg Glu Asp Val Asp Ile Val Val Glu Val Ile Gly Gly
85 90 95
Ile Glu Tyr Pro Arg Glu Val Val Leu Ala Ala Leu Lys Ala Gly Lys
100 105 110
Ser Val Val Thr Ala Asn Lys Ala Leu Val Ala Ala His Ser Ala Glu
115 120 125
Leu Ala Asp Ala Ala Glu Ala Ala Asn Val Asp Leu Tyr Phe Glu Ala
130 135 140
Ala Val Ala Gly Ala Ile Pro Val Val Gly Pro Leu Arg Arg Ser Leu
145 150 155 160
Ala Gly Asp Gln Ile Gln Ser Val Met Gly Ile Val Asn Gly Thr Thr
165 170 175
Asn Phe Ile Leu Asp Ala Met Asp Ser Thr Gly Ala Asp Tyr Ala Asp
180 185 190
Ser Leu Ala Glu Ala Thr Arg Leu Gly Tyr Ala Glu Ala Asp Pro Thr
195 200 205
Ala Asp Val Glu Gly His Asp Ala Ala Ser Lys Ala Ala Ile Leu Ala
210 215 220
Ser Ile Ala Phe His Thr Arg Val Thr Ala Asp Asp Val Tyr Cys Glu
225 230 235 240
Gly Ile Ser Asn Ile Ser Ala Ala Asp Ile Glu Ala Ala Gln Gln Ala
245 250 255
Gly His Thr Ile Lys Leu Leu Ala Ile Cys Glu Lys Phe Thr Asn Lys
260 265 270
Glu Gly Lys Ser Ala Ile Ser Ala Arg Val His Pro Thr Leu Leu Pro
275 280 285
Val Ser His Pro Leu Ala Ser Val Asn Lys Ser Phe Asn Ala Ile Phe
290 295 300
Val Glu Ala Glu Ala Ala Gly Arg Leu Met Phe Tyr Gly Asn Gly Ala
305 310 315 320
Gly Gly Ala Pro Thr Ala Ser Ala Val Leu Gly Asp Val Val Gly Ala
325 330 335
Ala Arg Asn Lys Val His Gly Gly Arg Ala Pro Gly Glu Ser Thr Tyr
340 345 350
Ala Asn Leu Pro Ile Ala Asp Phe Gly Glu Thr Thr Thr Arg Tyr His
355 360 365
Leu Asp Met Asp Val Glu Asp Arg Val Gly Val Leu Ala Glu Leu Ala
370 375 380
Ser Leu Phe Ser Glu Gln Gly Ile Ser Leu Arg Thr Ile Arg Gln Glu
385 390 395 400
Glu Arg Asp Asp Asp Ala Arg Leu Ile Val Val Thr His Ser Ala Leu
405 410 415
Glu Ser Asp Leu Ser Arg Thr Val Glu Leu Leu Lys Ala Lys Pro Val
420 425 430
Val Lys Ala Ile Asn Ser Val Ile Arg Leu Glu Arg Asp
435 440 445
<210> 17
<211> 690
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 17
gtgaccacac aaaccgcccc taccgcagcc tccgatcttt ttgccgagtc ctacaaactc 60
agcccaaagc agcgcgaagt tttagatgcc ctacaaacct tccctgacgg tgcccgcgcg 120
atcgatgtcg ccaaaaaact cgaccttcac gtcaacaccg cccgcggcca cctcgaagaa 180
ctcgtagcaa aagaagccat ccgagtagtc accgcagcag ccaaaggtcg cggacgcccc 240
tccctcatct tccaaacacg cgtccccgac aaccgcgctg tcgccaaaga atacatcacc 300
ctgatcgaac tcatggccaa catgctcggc gatgtcgacg atgacgcaat gcacaacccc 360
gacctccgcg ccaaagcact ttccatcgga acccagtggg cacacgtcat gggcattaac 420
cacgccgaag ccgaagaact cgacgaagcc ctctccccgc tcattaaccg cctccgcgaa 480
atgggctttg accccaccga aaccgaagaa gcaaactccc tcgctctaca cagctgccca 540
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<210> 18
<211> 230
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 18
Met Thr Thr Gln Thr Ala Pro Thr Ala Ala Ser Asp Leu Phe Ala Glu
1 5 10 15
Ser Tyr Lys Leu Ser Pro Lys Gln Arg Glu Val Leu Asp Ala Leu Gln
20 25 30
Thr Phe Pro Asp Gly Ala Arg Ala Ile Asp Val Ala Lys Lys Leu Asp
35 40 45
Leu His Val Asn Thr Ala Arg Gly His Leu Glu Glu Leu Val Ala Lys
50 55 60
Glu Ala Ile Arg Val Val Thr Ala Ala Ala Lys Gly Arg Gly Arg Pro
65 70 75 80
Ser Leu Ile Phe Gln Thr Arg Val Pro Asp Asn Arg Ala Val Ala Lys
85 90 95
Glu Tyr Ile Thr Leu Ile Glu Leu Met Ala Asn Met Leu Gly Asp Val
100 105 110
Asp Asp Asp Ala Met His Asn Pro Asp Leu Arg Ala Lys Ala Leu Ser
115 120 125
Ile Gly Thr Gln Trp Ala His Val Met Gly Ile Asn His Ala Glu Ala
130 135 140
Glu Glu Leu Asp Glu Ala Leu Ser Pro Leu Ile Asn Arg Leu Arg Glu
145 150 155 160
Met Gly Phe Asp Pro Thr Glu Thr Glu Glu Ala Asn Ser Leu Ala Leu
165 170 175
His Ser Cys Pro Phe Val Val Asn Asp Lys Arg Pro Ser Ala Phe Val
180 185 190
Cys Ala Ile His Ala Gly Phe Ile Gln Glu Ser Leu Gly Glu Asn Asn
195 200 205
Arg Ile Gln Leu Glu Leu Lys Pro Leu Asn Ala Pro Gly Thr Cys Lys
210 215 220
Val His Val Phe Ser Glu
225 230
<210> 19
<211> 1476
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 19
atgccgtcaa gtacgatcaa taacatgact aatggagata atctcgcaca gatcggcgtt 60
gtaggcctag cagtaatggg ctcaaacctc gcccgcaact tcgcccgcaa cggcaacact 120
gtcgctgtct acaaccgcag cactgacaaa accgacaagc tcatcgccga tcacggctcc 180
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tgtgtcaccc acatcggccc agacggcgcc ggccacttcg tcaagatggt ccacaacggc 600
atcgagtacg ccgacatgca ggtcatcggc gaggcatacc accttctccg ctacgcagca 660
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tcctacctca tcgaaatcac cgcagaggtt ctctcccagg tggatgctga aaccggcaag 780
ccactaatcg acgtcatcgt tgacgctgca ggtcagaagg gcaccggacg ttggaccgtc 840
aaggctgctc ttgatctggg tattgctacc accggcatcg gcgaagctgt tttcgcacgt 900
gcactctccg gcgcaaccag ccagcgcgct gcagcacagg gcaacctacc tgcaggtgtc 960
ctcaccgatc tggaagcact tggcgtggac aaggcacagt tcgtcgaaga cgttcgccgt 1020
gcactgtacg catccaagct tgttgcttac gcacagggct tcgacgagat caaggctggc 1080
tccgacgaga acaactggga cgttgaccct cgcgacctcg ctaccatctg gcgcggcggc 1140
tgcatcattc gcgctaagtt cctcaaccgc atcgtcgaag catacgatgc aaacgctgaa 1200
cttgagtccc tgctgctcga tccttacttc aagagcgagc tcggcgacct catcgattca 1260
tggcgtcgcg tgattgtcac cgccacccag cttggcctgc caatcccagt gttcgcttcc 1320
tccctgtcct actacgacag cctgcgtgca gagcgtctgc cagcagccct gatccaagga 1380
cagcgcgact tcttcggtgc gcacacctac aagcgcatcg acaaggatgg ctccttccac 1440
accgagtggt ccggcgaccg ctccgaggtt gaagct 1476
<210> 20
<211> 492
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 20
Met Pro Ser Ser Thr Ile Asn Asn Met Thr Asn Gly Asp Asn Leu Ala
1 5 10 15
Gln Ile Gly Val Val Gly Leu Ala Val Met Gly Ser Asn Leu Ala Arg
20 25 30
Asn Phe Ala Arg Asn Gly Asn Thr Val Ala Val Tyr Asn Arg Ser Thr
35 40 45
Asp Lys Thr Asp Lys Leu Ile Ala Asp His Gly Ser Glu Gly Asn Phe
50 55 60
Ile Pro Ser Ala Thr Val Glu Glu Phe Val Ala Ser Leu Glu Lys Pro
65 70 75 80
Arg Arg Ala Ile Ile Met Val Gln Ala Gly Asn Ala Thr Asp Ala Val
85 90 95
Ile Asn Gln Leu Ala Asp Ala Met Asp Glu Gly Asp Ile Ile Ile Asp
100 105 110
Gly Gly Asn Ala Leu Tyr Thr Asp Thr Ile Arg Arg Glu Lys Glu Ile
115 120 125
Ser Ala Arg Gly Leu His Phe Val Gly Ala Gly Ile Ser Gly Gly Glu
130 135 140
Glu Gly Ala Leu Asn Gly Pro Ser Ile Met Pro Gly Gly Pro Ala Lys
145 150 155 160
Ser Tyr Glu Ser Leu Gly Pro Leu Leu Glu Ser Ile Ala Ala Asn Val
165 170 175
Asp Gly Thr Pro Cys Val Thr His Ile Gly Pro Asp Gly Ala Gly His
180 185 190
Phe Val Lys Met Val His Asn Gly Ile Glu Tyr Ala Asp Met Gln Val
195 200 205
Ile Gly Glu Ala Tyr His Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Gly Met Gln Pro
210 215 220
Ala Glu Ile Ala Glu Val Phe Lys Glu Trp Asn Ala Gly Asp Leu Asp
225 230 235 240
Ser Tyr Leu Ile Glu Ile Thr Ala Glu Val Leu Ser Gln Val Asp Ala
245 250 255
Glu Thr Gly Lys Pro Leu Ile Asp Val Ile Val Asp Ala Ala Gly Gln
260 265 270
Lys Gly Thr Gly Arg Trp Thr Val Lys Ala Ala Leu Asp Leu Gly Ile
275 280 285
Ala Thr Thr Gly Ile Gly Glu Ala Val Phe Ala Arg Ala Leu Ser Gly
290 295 300
Ala Thr Ser Gln Arg Ala Ala Ala Gln Gly Asn Leu Pro Ala Gly Val
305 310 315 320
Leu Thr Asp Leu Glu Ala Leu Gly Val Asp Lys Ala Gln Phe Val Glu
325 330 335
Asp Val Arg Arg Ala Leu Tyr Ala Ser Lys Leu Val Ala Tyr Ala Gln
340 345 350
Gly Phe Asp Glu Ile Lys Ala Gly Ser Asp Glu Asn Asn Trp Asp Val
355 360 365
Asp Pro Arg Asp Leu Ala Thr Ile Trp Arg Gly Gly Cys Ile Ile Arg
370 375 380
Ala Lys Phe Leu Asn Arg Ile Val Glu Ala Tyr Asp Ala Asn Ala Glu
385 390 395 400
Leu Glu Ser Leu Leu Leu Asp Pro Tyr Phe Lys Ser Glu Leu Gly Asp
405 410 415
Leu Ile Asp Ser Trp Arg Arg Val Ile Val Thr Ala Thr Gln Leu Gly
420 425 430
Leu Pro Ile Pro Val Phe Ala Ser Ser Leu Ser Tyr Tyr Asp Ser Leu
435 440 445
Arg Ala Glu Arg Leu Pro Ala Ala Leu Ile Gln Gly Gln Arg Asp Phe
450 455 460
Phe Gly Ala His Thr Tyr Lys Arg Ile Asp Lys Asp Gly Ser Phe His
465 470 475 480
Thr Glu Trp Ser Gly Asp Arg Ser Glu Val Glu Ala
485 490
<210> 21
<211> 1431
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 21
atgggcgtgg atagacgaac taagattgta tgtaccctag gcccagcggt ggctagtgca 60
gatggaattc tgcgtttggt agaagacggc atggatgttg ctcgcctcaa cttctcccat 120
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ggccgtgcag tcggtattct cgcagacctc caaggaccga agatccgtct tggccgtttc 240
actgacggcg caaccgtgtg ggaaaacggc gagaccattc ggatcaccgt tgacgatgta 300
gagggaacgc acgatcgtgt gtccaccacc tacaagaatc tggcaaaaga cgcgaagcca 360
ggcgaccgcc tgctcgttga tgacggcaag gttggcctcg tctgcgtttc cgtcgaaggt 420
aacgacgtca tctgtgaggt tgttgagggc ggaccagtct ccaacaacaa gggtgtttcc 480
ctgccaggta tggatatttc cgtacctgca ctgtccgaaa aggatatccg tgacctgcgc 540
ttcgccctga agctcggcgt ggactttatt gcactgtcct tcgtacgttc cccagcagat 600
gctgaactcg ttcacaagat catggacgaa gaaggtcgtc gtgttcctgt gatcgccaag 660
ctggaaaagc cagaggctgt cacctccctc gagccaatcg tgttggcatt cgacgccgtc 720
atggttgctc gtggtgacct cggcgttgag gttcctctgg aggaggttcc actggttcag 780
aagcgcgcaa tccagattgc ccgtgagaac gcaaagccag ttatcgtggc aacccagatg 840
ctggattcca tgattgagaa ctcccgccca acccgtgcgg aagcttctga cgtggcaaac 900
gctgtgctcg atggcgcaga tgctgtcatg ctttctggtg aaacttcagt gggcaaagat 960
ccgcacaacg ttgtgcgcac catgtctcgc attgttcgct tcgctgaaac cgacggtcgc 1020
gtcccagacc tgacccacat ccctcgcact aagcgtggcg ttatttccta ctctgcacgt 1080
gatatcgccg agcgcctcaa cgctcgtgca ttggttgcgt tcaccacctc tggtgatacc 1140
gcaaagcgtg tggctcgtct gcacagccac ctgccactgc tcgtgttcac tccaaatgag 1200
gcagttcgct ctgagctggc gctgacctgg ggtgcaacca ccttcctgtg tccacctgtc 1260
agcgataccg atgacatgat gcgcgaagtc gaccgtgctc ttttagcaat gcctgagtac 1320
aacaagggtg acatgatggt tgttgttgca ggttcccctc ctggtgttac cggtaacacc 1380
aacatgattc acgtccacct tcttggtgac gacacaagga ttgcaaagct c 1431
<210> 22
<211> 477
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 22
Met Gly Val Asp Arg Arg Thr Lys Ile Val Cys Thr Leu Gly Pro Ala
1 5 10 15
Val Ala Ser Ala Asp Gly Ile Leu Arg Leu Val Glu Asp Gly Met Asp
20 25 30
Val Ala Arg Leu Asn Phe Ser His Gly Asp His Pro Asp His Glu Gln
35 40 45
Asn Tyr Lys Trp Val Arg Glu Ala Ala Glu Lys Thr Gly Arg Ala Val
50 55 60
Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gln Gly Pro Lys Ile Arg Leu Gly Arg Phe
65 70 75 80
Thr Asp Gly Ala Thr Val Trp Glu Asn Gly Glu Thr Ile Arg Ile Thr
85 90 95
Val Asp Asp Val Glu Gly Thr His Asp Arg Val Ser Thr Thr Tyr Lys
100 105 110
Asn Leu Ala Lys Asp Ala Lys Pro Gly Asp Arg Leu Leu Val Asp Asp
115 120 125
Gly Lys Val Gly Leu Val Cys Val Ser Val Glu Gly Asn Asp Val Ile
130 135 140
Cys Glu Val Val Glu Gly Gly Pro Val Ser Asn Asn Lys Gly Val Ser
145 150 155 160
Leu Pro Gly Met Asp Ile Ser Val Pro Ala Leu Ser Glu Lys Asp Ile
165 170 175
Arg Asp Leu Arg Phe Ala Leu Lys Leu Gly Val Asp Phe Ile Ala Leu
180 185 190
Ser Phe Val Arg Ser Pro Ala Asp Ala Glu Leu Val His Lys Ile Met
195 200 205
Asp Glu Glu Gly Arg Arg Val Pro Val Ile Ala Lys Leu Glu Lys Pro
210 215 220
Glu Ala Val Thr Ser Leu Glu Pro Ile Val Leu Ala Phe Asp Ala Val
225 230 235 240
Met Val Ala Arg Gly Asp Leu Gly Val Glu Val Pro Leu Glu Glu Val
245 250 255
Pro Leu Val Gln Lys Arg Ala Ile Gln Ile Ala Arg Glu Asn Ala Lys
260 265 270
Pro Val Ile Val Ala Thr Gln Met Leu Asp Ser Met Ile Glu Asn Ser
275 280 285
Arg Pro Thr Arg Ala Glu Ala Ser Asp Val Ala Asn Ala Val Leu Asp
290 295 300
Gly Ala Asp Ala Val Met Leu Ser Gly Glu Thr Ser Val Gly Lys Asp
305 310 315 320
Pro His Asn Val Val Arg Thr Met Ser Arg Ile Val Arg Phe Ala Glu
325 330 335
Thr Asp Gly Arg Val Pro Asp Leu Thr His Ile Pro Arg Thr Lys Arg
340 345 350
Gly Val Ile Ser Tyr Ser Ala Arg Asp Ile Ala Glu Arg Leu Asn Ala
355 360 365
Arg Ala Leu Val Ala Phe Thr Thr Ser Gly Asp Thr Ala Lys Arg Val
370 375 380
Ala Arg Leu His Ser His Leu Pro Leu Leu Val Phe Thr Pro Asn Glu
385 390 395 400
Ala Val Arg Ser Glu Leu Ala Leu Thr Trp Gly Ala Thr Thr Phe Leu
405 410 415
Cys Pro Pro Val Ser Asp Thr Asp Asp Met Met Arg Glu Val Asp Arg
420 425 430
Ala Leu Leu Ala Met Pro Glu Tyr Asn Lys Gly Asp Met Met Val Val
435 440 445
Val Ala Gly Ser Pro Pro Gly Val Thr Gly Asn Thr Asn Met Ile His
450 455 460
Val His Leu Leu Gly Asp Asp Thr Arg Ile Ala Lys Leu
465 470 475
<210> 23
<211> 1704
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 23
gtggctactg tggctgatgt gaatcaagac actgtactga agggcaccgg cgttgtcggt 60
ggagtccgtt atgcaagcgc ggtgtggatt accccacgcc ccgaactacc ccaagcaggc 120
gaagtcgtcg ccgaagaaaa ccgtgaagca gagcaggagc gtttcgacgc cgctgcagcc 180
acagtctctt ctcgtttgct tgagcgctcc gaagctgctg aaggaccagc agctgaggtg 240
cttaaagcta ctgctggcat ggtcaatgac cgtggctggc gtaaggctgt catcaagggt 300
gtcaagggtg gtcaccctgc ggaatacgcc gtggttgcag caacaaccaa gttcatctcc 360
atgttcgaag ccgcaggcgg cctgatcgcg gagcgcacca cagacttgcg cgacatccgc 420
gaccgcgtca tcgcagaact tcgtggcgat gaagagccag gtctgccagc tgtttccgga 480
caggtcattc tctttgcaga tgacctctcc ccagcagaca ccgcggcact agacacagat 540
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cgcgcagtga tcgacgcagc agtc 1704
<210> 24
<211> 568
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 24
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1 5 10 15
Gly Val Val Gly Gly Val Arg Tyr Ala Ser Ala Val Trp Ile Thr Pro
20 25 30
Arg Pro Glu Leu Pro Gln Ala Gly Glu Val Val Ala Glu Glu Asn Arg
35 40 45
Glu Ala Glu Gln Glu Arg Phe Asp Ala Ala Ala Ala Thr Val Ser Ser
50 55 60
Arg Leu Leu Glu Arg Ser Glu Ala Ala Glu Gly Pro Ala Ala Glu Val
65 70 75 80
Leu Lys Ala Thr Ala Gly Met Val Asn Asp Arg Gly Trp Arg Lys Ala
85 90 95
Val Ile Lys Gly Val Lys Gly Gly His Pro Ala Glu Tyr Ala Val Val
100 105 110
Ala Ala Thr Thr Lys Phe Ile Ser Met Phe Glu Ala Ala Gly Gly Leu
115 120 125
Ile Ala Glu Arg Thr Thr Asp Leu Arg Asp Ile Arg Asp Arg Val Ile
130 135 140
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145 150 155 160
Gln Val Ile Leu Phe Ala Asp Asp Leu Ser Pro Ala Asp Thr Ala Ala
165 170 175
Leu Asp Thr Asp Leu Phe Val Gly Leu Val Thr Glu Leu Gly Gly Pro
180 185 190
Thr Ser His Thr Ala Ile Ile Ala Arg Gln Leu Asn Val Pro Cys Ile
195 200 205
Val Ala Ser Gly Ala Gly Ile Lys Asp Ile Lys Ser Gly Glu Lys Val
210 215 220
Leu Ile Asp Gly Ser Leu Gly Thr Ile Asp Arg Asn Ala Asp Glu Ala
225 230 235 240
Glu Ala Thr Lys Leu Val Ser Glu Ser Leu Glu Arg Ala Ala Arg Ile
245 250 255
Ala Glu Trp Lys Gly Pro Ala Gln Thr Lys Asp Gly Tyr Arg Val Gln
260 265 270
Leu Leu Ala Asn Val Gln Asp Gly Asn Ser Ala Gln Gln Ala Ala Gln
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
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325 330 335
Asp Ala Gly Ser Asp Lys Pro Val Pro Phe Ala Ser Met Ala Asp Glu
340 345 350
Met Asn Pro Ala Leu Gly Val Arg Gly Leu Arg Ile Ala Arg Gly Gln
355 360 365
Val Asp Leu Leu Thr Arg Gln Leu Asp Ala Ile Ala Lys Ala Ser Glu
370 375 380
Glu Leu Gly Arg Gly Asp Asp Ala Pro Thr Trp Val Met Ala Pro Met
385 390 395 400
Val Ala Thr Ala Tyr Glu Ala Lys Trp Phe Ala Asp Met Cys Arg Glu
405 410 415
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420 425 430
Met Ala Asp Lys Ile Met Pro His Leu Asp Phe Val Ser Ile Gly Thr
435 440 445
Asn Asp Leu Thr Gln Tyr Thr Met Ala Ala Asp Arg Met Ser Pro Glu
450 455 460
Leu Ala Tyr Leu Thr Asp Pro Trp Gln Pro Ala Val Leu Arg Leu Ile
465 470 475 480
Lys His Thr Cys Asp Glu Gly Ala Arg Phe Asn Thr Pro Val Gly Val
485 490 495
Cys Gly Glu Ala Ala Ala Asp Pro Leu Leu Ala Thr Val Leu Thr Gly
500 505 510
Leu Gly Val Asn Ser Leu Ser Ala Ala Ser Thr Ala Leu Ala Ala Val
515 520 525
Gly Ala Lys Leu Ser Glu Val Thr Leu Glu Thr Cys Lys Lys Ala Ala
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Glu Ala Ala Leu Asp Ala Glu Gly Ala Thr Glu Ala Arg Asp Ala Val
545 550 555 560
Arg Ala Val Ile Asp Ala Ala Val
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<210> 25
<211> 3327
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 25
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ctgatcactg aaatcgtgtt gggtgcggtg ctgacatcgc tggttattcc ggtccttacc 420
cgcgcggaaa aagaagacgc cgacggcggt tccgggttct tcaggcggct gctcaccctg 480
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<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 26
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1 5 10 15
Arg Ile Val Ala Pro Ala Pro Pro Ala Pro Val Pro Glu Ala Arg Lys
20 25 30
Lys Ala Val Ala Arg Thr Asp Gly Asp Arg Ser Ser Leu Lys Asn Ser
35 40 45
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50 55 60
Glu Pro Lys Lys His Thr Ser Asp Ser Asp Val Val Arg Ser Thr Gly
65 70 75 80
Ser Met Ala Ile Ala Thr Leu Leu Ser Arg Ile Thr Gly Phe Leu Arg
85 90 95
Thr Val Met Ile Gly Ala Ala Leu Ser Pro Ala Ile Ala Ser Ala Phe
100 105 110
Asn Thr Ala Asn Thr Leu Pro Asn Leu Ile Thr Glu Ile Val Leu Gly
115 120 125
Ala Val Leu Thr Ser Leu Val Ile Pro Val Leu Thr Arg Ala Glu Lys
130 135 140
Glu Asp Ala Asp Gly Gly Ser Gly Phe Phe Arg Arg Leu Leu Thr Leu
145 150 155 160
Ser Val Thr Leu Leu Gly Gly Val Thr Ile Leu Ser Ile Ile Gly Ala
165 170 175
Pro Leu Leu Thr Arg Met Met Leu Ser Ser Glu Gly Gln Val Asn Val
180 185 190
Val Met Ser Thr Ala Phe Ala Tyr Trp Leu Leu Pro Gln Ile Phe Phe
195 200 205
Tyr Gly Leu Phe Ala Leu Phe Met Ala Val Leu Asn Thr Arg Glu Val
210 215 220
Phe Lys Pro Gly Ala Trp Ala Pro Val Val Asn Asn Val Ile Thr Leu
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Thr Val Leu Gly Val Tyr Met Val Leu Pro Ala Arg Leu His Pro His
245 250 255
Glu Gln Val Gly Ile Phe Asp Pro Gln Ile Ile Phe Leu Gly Val Gly
260 265 270
Thr Thr Leu Gly Val Val Ala Gln Cys Leu Ile Met Ile Pro Tyr Leu
275 280 285
Arg Arg Ala Gly Ile Asp Met Arg Pro Leu Trp Gly Ile Asp Ala Arg
290 295 300
Leu Lys Gln Phe Gly Gly Met Ala Met Ala Ile Ile Val Tyr Val Ala
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Ile Ser Gln Phe Gly Tyr Ile Ile Thr Thr Arg Ile Ala Ser Ile Ala
325 330 335
Asp Asp Ala Ala Pro Phe Ile Tyr Gln Gln His Trp Met Leu Leu Gln
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Val Pro Tyr Gly Ile Ile Gly Val Thr Leu Leu Thr Ala Ile Met Pro
355 360 365
Arg Leu Ser Arg Asn Ala Ala Asp Gly Asp Asp Arg Ala Val Val Ser
370 375 380
Asp Leu Gln Leu Gly Ser Lys Leu Thr Phe Ile Ala Leu Ile Pro Ile
385 390 395 400
Val Val Phe Phe Thr Ala Phe Gly Val Pro Ile Ala Asn Gly Leu Phe
405 410 415
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Leu Ser Phe Ser Ala Phe Thr Leu Ile Pro Tyr Ala Leu Val Leu Leu
435 440 445
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Ile Ile Ala Gly Ile Thr Ala Thr Lys Val Val Leu Ser Leu Leu Ala
465 470 475 480
Pro Leu Leu Ser Ser Ser Pro Glu Arg Val Val Val Leu Leu Gly Ala
485 490 495
Ala Asn Gly Phe Ser Phe Ile Thr Gly Ala Val Ile Gly Ala Tyr Leu
500 505 510
Leu Arg Asn Lys Leu Gly Leu Leu Gly Met Arg Ser Leu Ala Lys Thr
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Ser Leu Trp Ala Leu Gly Ser Ala Ala Val Gly Ala Ala Ala Ala Trp
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Ala Thr Pro Val Pro Pro Pro Met Ser Ala Gly Ile Val Arg Gly Pro
645 650 655
Arg Leu Val Pro Gly Ala Pro Val Gly Asp Gly Arg Phe Arg Leu Leu
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Ala Asp His Gly Gly Val Gln Gly Ala Arg Phe Trp Gln Ala Arg Glu
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Ile Ala Thr Gly Lys Glu Val Ala Leu Ile Phe Val Asp Thr Ser Gly
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Asn Ala Pro Phe Ala Pro Leu Ser Ser Ala Ala Ala Ala Gly Ile Ala
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Ile Val Ala Asp Trp Val Pro Gly Ser Ser Leu Ser Ala Val Ala Glu
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885 890 895
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<210> 27
<211> 3249
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 27
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ttgagccggt ttattcgccc gaataccaag atctctttgg atgtcggcga agtctccgag 1800
caggatttct ccacccagct ggtcgcgcca agcgagttcg cagcaacccc tgtgccgcca 1860
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cgcgagatcg ccaccggcaa ggaagtcgcg ctgatctttg tggatacttc cggcaacgcc 2040
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gacgtcaccg acggcaacac ctccaccgca tggacctcca ccggcggcga cggcctccta 2940
gttgacctgt ccacgcctgc ccgcctcgac cgcgtcatct tgaccaccgg caccggctcc 3000
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<213> Corynebacterium glutamicum
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ctcatcgctg acaccaaccc actttcatgg gttcagcctg gcatgccagt tccagaccac 1320
cgcgacctcg acatcgagac ccacaacctg accatctggg atctggaccg taccttcaac 1380
gtcggtggct tcggcggcaa ggagaccatg accctgcgcg aggtactgtc ccgcctccgc 1440
gctgcgtaca ccctcaaggt cggctccgaa tacacccaca tcctggaccg cgacgagcgc 1500
acctggctgc aggaccgcct cgaggccgga atgccaaagc caacccaggc agagcagaag 1560
tacatcctgc agaagctgaa cgccgcggag gctttcgaga acttcctgca gaccaagtac 1620
gtcggccaga agcgcttctc cctcgaaggt gcagaagcac ttatcccact gatggactcc 1680
gccatcgaca ccgccgcagg ccaaggcctc gacgaagttg tcatcggtat gccacaccgt 1740
ggtcgcctca acgtgctgtt caacatcgtg ggcaagccac tggcatccat cttcaacgag 1800
tttgaaggcc aaatggagca gggccagatc ggtggctccg gtgacgtgaa gtaccacctc 1860
ggttccgaag gccagcacct gcagatgttc ggcgacggcg agatcaaggt ctccctgact 1920
gctaacccgt cccacctgga agctgttaac ccagtgatgg aaggtatcgt ccgcgcaaag 1980
caggactacc tggacaaggg cgtagacggc aagactgttg tgccactgct gctccacggt 2040
gacgctgcat tcgcaggcct gggcatcgtg ccagaaacca tcaacctggc taagctgcgt 2100
ggctacgacg tcggcggcac catccacatc gtggtgaaca accagatcgg cttcaccacc 2160
accccagact ccagccgctc catgcactac gcaaccgact acgccaaggc attcggctgc 2220
ccagtcttcc acgtcaacgg cgacgaccca gaggcagttg tctgggttgg ccagctggcc 2280
accgagtacc gtcgtcgctt cggcaaggac gtcttcatcg acctcgtctg ctaccgcctc 2340
cgcggccaca acgaagctga tgatccttcc atgacccagc caaagatgta tgagctcatc 2400
accggccgcg agaccgttcg tgctcagtac accgaagacc tgctcggacg tggagacctc 2460
tccaacgaag atgcagaagc agtcgtccgc gacttccacg accagatgga atctgtgttc 2520
aacgaagtca aggaaggcgg caagaagcag gctgaggcac agaccggcat caccggctcc 2580
cagaagcttc cacacggcct tgagaccaac atctcccgtg aagagctcct ggaactggga 2640
caggctttcg ccaacacccc agaaggcttc aactaccacc cacgtgtggc tcccgttgct 2700
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gccttcggtt ccctggctaa ctccggccgc ttggttcgcc ttgcaggtga agattcccgc 2820
cgcggtacct tcacccagcg ccacgcagtt gccatcgacc cagcgaccgc tgaagagttc 2880
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tccgcactga ccgagtacgc aggcatgggc ttcgagtacg gctactccgt aggaaacgaa 3000
gactccatcg ttgcatggga agcacagttc ggcgacttcg ccaacggcgc tcagaccatc 3060
atcgatgagt acgtctcctc aggcgaagct aagtggggcc agacctccaa gctgatcctt 3120
ctgctgcctc acggctacga aggccagggc ccagaccact cttccgcacg tatcgagcgc 3180
ttcctgcagc tgtgcgctga gggttccatg actgttgctc agccatccac cccagcaaac 3240
cacttccacc tactgcgtcg tcacgctctg tccgacctga agcgtccact ggttatcttc 3300
accccgaagt ccatgctgcg taacaaggct gctgcctccg caccagaaga cttcactgag 3360
gtcaccaagt tccagtccgt gatcaacgat ccaaacgttg cagatgcagc caaggtgaag 3420
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ggacgcgacg acatcgcgat cgttcgtatc gaaatgctcc acccaattcc gttcaaccgc 3540
atctccgagg ctcttgccgg ctaccctaac gctgaggaag tcctcttcgt tcaggatgag 3600
ccagcaaacc agggcccatg gccgttctac caggagcacc tcccagagct gatcccgaac 3660
atgccaaaga tgcgccgcgt ttcccgccgc gctcagtcct ccaccgcaac tggtgttgcc 3720
aaggtgcacc agctggagga gaagcagctt atcgacgagg ctttcgaggc t 3771
<210> 32
<211> 1257
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 32
Met Leu Gln Leu Gly Leu Arg His Asn Gln Pro Thr Thr Asn Val Thr
1 5 10 15
Val Asp Lys Thr Lys Leu Asn Lys Pro Ser Arg Ser Lys Glu Lys Arg
20 25 30
Arg Val Pro Ala Val Ser Ser Ala Ser Thr Phe Gly Gln Asn Ala Trp
35 40 45
Leu Val Asp Glu Met Phe Gln Gln Phe Gln Lys Asp Pro Lys Ser Val
50 55 60
Asp Lys Glu Trp Arg Glu Leu Phe Glu Ala Gln Gly Gly Pro Asn Thr
65 70 75 80
Thr Pro Ala Thr Thr Glu Ala Gln Pro Ser Ala Pro Lys Glu Ser Ala
85 90 95
Lys Pro Ala Pro Lys Ala Ala Pro Ala Ala Lys Ala Ala Pro Arg Val
100 105 110
Glu Thr Lys Pro Ala Asp Lys Thr Ala Pro Lys Ala Lys Glu Ser Ser
115 120 125
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130 135 140
Gly Ile Phe Lys Ser Ile Ala Lys Asn Met Asp Ile Ser Leu Glu Ile
145 150 155 160
Pro Thr Ala Thr Ser Val Arg Asp Met Pro Ala Arg Leu Met Phe Glu
165 170 175
Asn Arg Ala Met Val Asn Asp Gln Leu Lys Arg Thr Arg Gly Gly Lys
180 185 190
Ile Ser Phe Thr His Ile Ile Gly Tyr Ala Met Val Lys Ala Val Met
195 200 205
Ala His Pro Asp Met Asn Asn Ser Tyr Asp Val Ile Asp Gly Lys Pro
210 215 220
Thr Leu Ile Val Pro Glu His Ile Asn Leu Gly Leu Ala Ile Asp Leu
225 230 235 240
Pro Gln Lys Asp Gly Ser Arg Ala Leu Val Val Ala Ala Ile Lys Glu
245 250 255
Thr Glu Lys Met Asn Phe Ser Glu Phe Leu Ala Ala Tyr Glu Asp Ile
260 265 270
Val Ala Arg Ser Arg Lys Gly Lys Leu Thr Met Asp Asp Tyr Gln Gly
275 280 285
Val Thr Val Ser Leu Thr Asn Pro Gly Gly Ile Gly Thr Arg His Ser
290 295 300
Val Pro Arg Leu Thr Lys Gly Gln Gly Thr Ile Ile Gly Val Gly Ser
305 310 315 320
Met Asp Tyr Pro Ala Glu Phe Gln Gly Ala Ser Glu Asp Arg Leu Ala
325 330 335
Glu Leu Gly Val Gly Lys Leu Val Thr Ile Thr Ser Thr Tyr Asp His
340 345 350
Arg Val Ile Gln Gly Ala Val Ser Gly Glu Phe Leu Arg Thr Met Ser
355 360 365
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370 375 380
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Ala Ala Tyr Thr Leu Lys Val Gly Ser Glu Tyr Thr His Ile Leu Asp
485 490 495
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500 505 510
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Ala Ile Asp Thr Ala Ala Gly Gln Gly Leu Asp Glu Val Val Ile Gly
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Pro Leu Ala Ser Ile Phe Asn Glu Phe Glu Gly Gln Met Glu Gln Gly
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645 650 655
Val Arg Ala Lys Gln Asp Tyr Leu Asp Lys Gly Val Asp Gly Lys Thr
660 665 670
Val Val Pro Leu Leu Leu His Gly Asp Ala Ala Phe Ala Gly Leu Gly
675 680 685
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Gly Gly Thr Ile His Ile Val Val Asn Asn Gln Ile Gly Phe Thr Thr
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Thr Pro Asp Ser Ser Arg Ser Met His Tyr Ala Thr Asp Tyr Ala Lys
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Asn Pro Leu His Glu Leu Ala Gln Ser Lys Gly Asn Asn Gly Lys Phe
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<210> 33
<211> 1251
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 33
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<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 34
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Arg His Ile Ser Leu Ser Trp Asn Val Ser Gly Pro Thr Gly Gln Tyr
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Ile Ala Ser Val Pro Ala Gln Gln Arg Leu Gly Lys Arg Trp Phe Thr
100 105 110
Gly Ser Ala Asp Ala Ile Leu Gln Ser Leu Asn Leu Ile Ser Asp Glu
115 120 125
Lys Pro Asp Tyr Val Ile Val Phe Gly Ala Asp His Val Tyr Arg Met
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Asp Pro Ser Gln Met Leu Asp Glu His Ile Ala Ser Gly Arg Ala Val
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Ser Val Ala Gly Ile Arg Val Pro Arg Glu Glu Ala Thr Ala Phe Gly
165 170 175
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Ile Ile Pro Tyr Phe Val Ser Arg Asn Asp Ala His Val Tyr Asp Phe
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260 265 270
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275 280 285
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Gly Ile Ala Gln Ser Ser Met Val Ser Ser Gly Ser Ile Ile Ser Ala
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Gly Thr Val Arg Asn Ser Val Leu Ser Asn Asn Val Val Val Glu Glu
340 345 350
Gly Ala Thr Val Glu Gly Ala Val Leu Met Pro Gly Val Arg Ile Gly
355 360 365
Lys Gly Ala Val Val Arg His Ala Ile Leu Asp Lys Asn Val Val Val
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Phe Lys Val Ser Ala Gly Gly Val Val Val Val Gly Lys Asn Gln Val
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Val
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<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 35
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<400> 36
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Arg Glu Glu Ala Thr Ala Phe Gly Cys Ile Gln Ser Asp Val Asp Gly
165 170 175
Asn Ile Thr Glu Phe Leu Glu Lys Pro Ala Asp Pro Pro Gly Thr Pro
180 185 190
Asp Asp Pro Asp Met Thr Tyr Ala Ser Met Gly Asn Tyr Ile Phe Thr
195 200 205
Thr Glu Ala Leu Ile Gln Ala Leu Lys Asp Asp Glu Asn Asn Glu Asn
210 215 220
Ser Asp His Asp Met Gly Gly Asp Ile Ile Pro Tyr Phe Val Ser Arg
225 230 235 240
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245 250 255
Thr Glu Arg Asp Lys Gly Tyr Trp Arg Asp Val Gly Thr Ile Asp Ala
260 265 270
Phe Tyr Glu Cys His Met Asp Leu Ile Ser Val His Pro Ile Phe Asn
275 280 285
Leu Tyr Asn Ser Glu Trp Pro Ile His Thr Thr Ser Glu Gly Asn Leu
290 295 300
Pro Pro Ala Lys Phe Val Arg Gly Gly Ile Ala Gln Ser Ser Met Val
305 310 315 320
Ser Ser Gly Ser Ile Ile Ser Ala Gly Thr Val Arg Asn Ser Val Leu
325 330 335
Ser Asn Asn Val Val Val Glu Glu Gly Ala Thr Val Glu Gly Ala Val
340 345 350
Leu Met Pro Gly Val Arg Ile Gly Lys Gly Ala Val Val Arg His Ala
355 360 365
Ile Leu Asp Lys Asn Val Val Val Arg Asp Gly Glu Leu Ile Gly Val
370 375 380
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385 390 395 400
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405
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<211> 3465
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cagctggaag aagccaccac aactcagatg gaagtggaga tggagttggc ggagatcact 840
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tcggcaacga tgcgtattgc tgcagaccgt gcgagttcag gtgccgcgga tgtgccgtat 960
gcgggccagg atcctgatga gttgcttggt cgggccgaaa ctgctgacaa agaattagaa 1020
gaactcgaga tggccgtgga aatgaccacc gagcgtttga cctccattca agaggaagcc 1080
gaggataagg ccgcgcaggc tcgtgaggct gagcgtgaac acttggcgca ggtcagggcg 1140
atttctgatc gtcgtgaagg tgttgtgcgc ctgcttgcat ctgaggaatc tttgcgcacc 1200
cagcacacgt cagcagagga ggaagctgag cgactcagtg agcagcttga ggagttcatc 1260
ggccgcattt tggatgtgga acgtgaacgt cgcctcaccg atgagcgtaa acagggcgtt 1320
gacacggatc gtgcgccctt ggaagaagcc ctcaaacagg caaaacatga agccgaagca 1380
gcagagactc gtcttgagga gcttcgtact aagcgcagcg atctggaaaa agaagtatcc 1440
aggttgcagt cgcgcattga gacgcttaac caaaataggc cacgttccga tgctgctgat 1500
gtggtggatt acccgcagct ggccacgttg attcgaccgc aacgaaacgt cgataaggct 1560
ctcgctgccg ccctgggtgc gcatgccgag gcgctggctg gcgaggctgc ggaagggctc 1620
gtcgagaagc ttatcgacgc cggcgttgca cgcaccatca tcgttgatgg cacgcaggct 1680
ggcggcgcat ggcgcctgga cgcgaacatt ccggccgggg cgagctggct gctcgaccat 1740
gttgatctgg atccggcgat tgccggcccg gtaaaccggc tgcttgccga cgttgtgctt 1800
gtcgacgacc cctccctcgg ccgccaagca atcgaggatg atccccgtct gcgtgccgtt 1860
gaccgcaatg gtgtgctcat cggcgctggg tggattcagg tcggcaccga aacctcgact 1920
gtggaaatca cagctcaaat tgaggaagca gaagctcaac ttgctgcggc ctctgccgcc 1980
ttggacgaca ttgccggcac ttttgatggc gccctccacg ctgccgacaa cactcgcgtc 2040
gaggtggctg cccgcaccgc agccctgcgc gaactcgaca tgaccaggga ttccatcacc 2100
cgcgatctcg cgcgcttgga caaacaacat gaggccgccg aatccgagcg cgtccgccat 2160
gttggacgcc tgcatgctgc ggaaacacgc cgtgaagagc tgcgcgaaca gttagaagac 2220
atcgtcgatc gactctcccg cgtggaagac gaagaagacg ctgacgaacc ctcaaccacc 2280
gcccgcgacc aagcaaatgc cgagctgcaa caaatccgcg ccatggaaat ggaagcacgc 2340
cttgcccaac gcaccgccga agagcgcgcc gggcagcagc ggggcaaggg cgatagtctg 2400
cgacgccagg ccgagcatga gcgccaagcc aaaatccggc atgaacaagc catggaagcc 2460
cgtcgcaggc gcacccaatt ggctgcagcc gtgcaaaatg gcgcacgcga tgtggccgag 2520
cgtgtctcag ctgcccttgc ccaagcagcc atcgaaagag atcagcacaa ccgcgacaaa 2580
gcgctgctga cctcacactt agcgcgcgcc aaagatgctg tgagtgctgc acgccagcac 2640
ctcaatcgac tcagcgacaa cgcccactcc atggaacttg cgcgcagcca agctcaagtg 2700
cgcatggagg aagccgttgc caaaatcacc gagcaacttg gcattccggt cgcagaattg 2760
ctgcgcgatt acaccccaga tgaaaacttt gatgaaaagt tccaacgggc acgcctcaaa 2820
caagccgaaa aagacctcgc cgcactaggc aaagtcaacc ccctggcctt ggaagaattc 2880
aaagccttgg aagagcgcta cgagttcctc tccacccaat tggccgatgt ggaacaagcc 2940
cgcgccgatc tgagcggcgt gattgaagaa gtcgatgcga aaattctgca gcttttcacc 3000
gatgcctgga acgacgtgga agcagaattc ccacgcgtgt tcaacacctt gttcccaggt 3060
ggcgaaggca aactgatcct caccgagccc gatgatttgc tggcaaccgg catcgaagtg 3120
gaagcccgcc caccaggaaa acgcgtcaag cgcctatcgc tgctatccgg tggcgaaaaa 3180
tccctcaccg cactagccat gctcgtcgcg attttccgcg cccgacccag ccctttctac 3240
gtgatggatg aggtggaagc agcactcgat gatgtcaacc ttcgccgact tatcgcactg 3300
tttgaagagt tgcgccgcga ctcccagctc attgtgatca cccaccaaaa acccaccatg 3360
gatgtggcta acgtactcta cggcgtcacc atgcgtggcg atggcgttac ccgcgtgatc 3420
tcccaacgca tggaacctgc ttctgcaatg gaaactgtgg cgggg 3465
<210> 38
<211> 1155
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 38
Met Tyr Leu Lys Ser Leu Thr Leu Lys Gly Phe Lys Ser Phe Ala Ser
1 5 10 15
Ala Thr Thr Leu Lys Phe Glu Pro Gly Ile Cys Ala Val Val Gly Pro
20 25 30
Asn Gly Ser Gly Lys Ser Asn Val Val Asp Ala Leu Ala Trp Val Met
35 40 45
Gly Glu Gly Ser Ala Lys Thr Leu Arg Gly Gly Lys Met Glu Asp Val
50 55 60
Ile Phe Ala Gly Ala Gly Asp Arg Lys Pro Leu Gly Arg Ala Glu Val
65 70 75 80
Thr Leu Thr Ile Asp Asn Ser Asp Gly Ala Leu Pro Ile Glu Tyr Thr
85 90 95
Glu Val Ser Val Thr Arg Arg Met Phe Arg Asp Gly Ala Ser Glu Tyr
100 105 110
Glu Ile Asn Gly Ala Lys Ala Arg Leu Met Asp Ile Gln Glu Leu Leu
115 120 125
Ser Asp Thr Gly Ile Gly Arg Glu Met His Ile Met Val Gly Gln Gly
130 135 140
Lys Leu Ala Glu Ile Leu Glu Ser Arg Pro Glu Glu Arg Arg Ala Tyr
145 150 155 160
Ile Glu Glu Ala Ala Gly Val Leu Lys His Arg Arg Arg Lys Glu Lys
165 170 175
Ala Gln Arg Lys Leu Gln Gly Met Gln Val Asn Leu Asp Arg Leu Gln
180 185 190
Asp Leu Thr His Glu Leu Ala Lys Gln Leu Lys Pro Leu Ala Arg Gln
195 200 205
Ala Glu Ala Ala Gln Arg Ala Ala Thr Val Gln Ala Asp Leu Arg Asp
210 215 220
Ala Arg Phe Gln Ile Ala Gly Phe Glu Ile Val Lys Leu Ser Glu Lys
225 230 235 240
Leu Glu Thr Ser Thr Glu Arg Glu Lys Met Ile Arg Glu Gln Ala Glu
245 250 255
Ala Ala Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ala Thr Thr Thr Gln Met Glu Val
260 265 270
Glu Met Glu Leu Ala Glu Ile Thr Pro Gln Ala Glu Ala Ala Gln Gln
275 280 285
Leu Trp Phe Asp Leu Ser Ser Leu Ala Glu Arg Val Ser Ala Thr Met
290 295 300
Arg Ile Ala Ala Asp Arg Ala Ser Ser Gly Ala Ala Asp Val Pro Tyr
305 310 315 320
Ala Gly Gln Asp Pro Asp Glu Leu Leu Gly Arg Ala Glu Thr Ala Asp
325 330 335
Lys Glu Leu Glu Glu Leu Glu Met Ala Val Glu Met Thr Thr Glu Arg
340 345 350
Leu Thr Ser Ile Gln Glu Glu Ala Glu Asp Lys Ala Ala Gln Ala Arg
355 360 365
Glu Ala Glu Arg Glu His Leu Ala Gln Val Arg Ala Ile Ser Asp Arg
370 375 380
Arg Glu Gly Val Val Arg Leu Leu Ala Ser Glu Glu Ser Leu Arg Thr
385 390 395 400
Gln His Thr Ser Ala Glu Glu Glu Ala Glu Arg Leu Ser Glu Gln Leu
405 410 415
Glu Glu Phe Ile Gly Arg Ile Leu Asp Val Glu Arg Glu Arg Arg Leu
420 425 430
Thr Asp Glu Arg Lys Gln Gly Val Asp Thr Asp Arg Ala Pro Leu Glu
435 440 445
Glu Ala Leu Lys Gln Ala Lys His Glu Ala Glu Ala Ala Glu Thr Arg
450 455 460
Leu Glu Glu Leu Arg Thr Lys Arg Ser Asp Leu Glu Lys Glu Val Ser
465 470 475 480
Arg Leu Gln Ser Arg Ile Glu Thr Leu Asn Gln Asn Arg Pro Arg Ser
485 490 495
Asp Ala Ala Asp Val Val Asp Tyr Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ile Arg
500 505 510
Pro Gln Arg Asn Val Asp Lys Ala Leu Ala Ala Ala Leu Gly Ala His
515 520 525
Ala Glu Ala Leu Ala Gly Glu Ala Ala Glu Gly Leu Val Glu Lys Leu
530 535 540
Ile Asp Ala Gly Val Ala Arg Thr Ile Ile Val Asp Gly Thr Gln Ala
545 550 555 560
Gly Gly Ala Trp Arg Leu Asp Ala Asn Ile Pro Ala Gly Ala Ser Trp
565 570 575
Leu Leu Asp His Val Asp Leu Asp Pro Ala Ile Ala Gly Pro Val Asn
580 585 590
Arg Leu Leu Ala Asp Val Val Leu Val Asp Asp Pro Ser Leu Gly Arg
595 600 605
Gln Ala Ile Glu Asp Asp Pro Arg Leu Arg Ala Val Asp Arg Asn Gly
610 615 620
Val Leu Ile Gly Ala Gly Trp Ile Gln Val Gly Thr Glu Thr Ser Thr
625 630 635 640
Val Glu Ile Thr Ala Gln Ile Glu Glu Ala Glu Ala Gln Leu Ala Ala
645 650 655
Ala Ser Ala Ala Leu Asp Asp Ile Ala Gly Thr Phe Asp Gly Ala Leu
660 665 670
His Ala Ala Asp Asn Thr Arg Val Glu Val Ala Ala Arg Thr Ala Ala
675 680 685
Leu Arg Glu Leu Asp Met Thr Arg Asp Ser Ile Thr Arg Asp Leu Ala
690 695 700
Arg Leu Asp Lys Gln His Glu Ala Ala Glu Ser Glu Arg Val Arg His
705 710 715 720
Val Gly Arg Leu His Ala Ala Glu Thr Arg Arg Glu Glu Leu Arg Glu
725 730 735
Gln Leu Glu Asp Ile Val Asp Arg Leu Ser Arg Val Glu Asp Glu Glu
740 745 750
Asp Ala Asp Glu Pro Ser Thr Thr Ala Arg Asp Gln Ala Asn Ala Glu
755 760 765
Leu Gln Gln Ile Arg Ala Met Glu Met Glu Ala Arg Leu Ala Gln Arg
770 775 780
Thr Ala Glu Glu Arg Ala Gly Gln Gln Arg Gly Lys Gly Asp Ser Leu
785 790 795 800
Arg Arg Gln Ala Glu His Glu Arg Gln Ala Lys Ile Arg His Glu Gln
805 810 815
Ala Met Glu Ala Arg Arg Arg Arg Thr Gln Leu Ala Ala Ala Val Gln
820 825 830
Asn Gly Ala Arg Asp Val Ala Glu Arg Val Ser Ala Ala Leu Ala Gln
835 840 845
Ala Ala Ile Glu Arg Asp Gln His Asn Arg Asp Lys Ala Leu Leu Thr
850 855 860
Ser His Leu Ala Arg Ala Lys Asp Ala Val Ser Ala Ala Arg Gln His
865 870 875 880
Leu Asn Arg Leu Ser Asp Asn Ala His Ser Met Glu Leu Ala Arg Ser
885 890 895
Gln Ala Gln Val Arg Met Glu Glu Ala Val Ala Lys Ile Thr Glu Gln
900 905 910
Leu Gly Ile Pro Val Ala Glu Leu Leu Arg Asp Tyr Thr Pro Asp Glu
915 920 925
Asn Phe Asp Glu Lys Phe Gln Arg Ala Arg Leu Lys Gln Ala Glu Lys
930 935 940
Asp Leu Ala Ala Leu Gly Lys Val Asn Pro Leu Ala Leu Glu Glu Phe
945 950 955 960
Lys Ala Leu Glu Glu Arg Tyr Glu Phe Leu Ser Thr Gln Leu Ala Asp
965 970 975
Val Glu Gln Ala Arg Ala Asp Leu Ser Gly Val Ile Glu Glu Val Asp
980 985 990
Ala Lys Ile Leu Gln Leu Phe Thr Asp Ala Trp Asn Asp Val Glu Ala
995 1000 1005
Glu Phe Pro Arg Val Phe Asn Thr Leu Phe Pro Gly Gly Glu Gly Lys
1010 1015 1020
Leu Ile Leu Thr Glu Pro Asp Asp Leu Leu Ala Thr Gly Ile Glu Val
1025 1030 1035 1040
Glu Ala Arg Pro Pro Gly Lys Arg Val Lys Arg Leu Ser Leu Leu Ser
1045 1050 1055
Gly Gly Glu Lys Ser Leu Thr Ala Leu Ala Met Leu Val Ala Ile Phe
1060 1065 1070
Arg Ala Arg Pro Ser Pro Phe Tyr Val Met Asp Glu Val Glu Ala Ala
1075 1080 1085
Leu Asp Asp Val Asn Leu Arg Arg Leu Ile Ala Leu Phe Glu Glu Leu
1090 1095 1100
Arg Arg Asp Ser Gln Leu Ile Val Ile Thr His Gln Lys Pro Thr Met
1105 1110 1115 1120
Asp Val Ala Asn Val Leu Tyr Gly Val Thr Met Arg Gly Asp Gly Val
1125 1130 1135
Thr Arg Val Ile Ser Gln Arg Met Glu Pro Ala Ser Ala Met Glu Thr
1140 1145 1150
Val Ala Gly
1155
<210> 39
<211> 777
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 39
atgtcaaact ttgaaacgtt cctctgggtt gcctacccct ggctgtgtat cgccgcctac 60
atcatcggca tttcttggcg ctggcgcgcc gaccaattcg gttggaccac ccactcctcc 120
caaatctacg aatccaaact cctccgcatc gcctccccac tcttccactg gggcatggtg 180
ttcgtggtga tcggccacct catgggactt gccatcccca agagctggac ccaagctgta 240
ggaatttctg acgccgctta ccacctcatc gccaccatcc caggcaccat tgccggcatc 300
gctgcagtcc ttggactcat cggcttgatt atccgtcgcg tgatcaacaa aaccgtcttc 360
ctgtccacct cacgctccga caaagtgatg tatgtgctac tcggcgctgc aattttgtcc 420
ggtttcatcg ccaccgtctc cacccaggtc ttcggcggcg cacacggcta cgactaccgc 480
gaaaccatct ccccatgggt gcgccaactg ctcatcttca acgctcaacc agagctcatg 540
gctgatgtcc cttgggaatt caaggtccac atcgtcgctg gattcaccct catcgcactg 600
tggccattca cccgcctagt ccacgcgttc tccgcaccag ttggatacgt cacccgcccc 660
tacgtggtct atcgcacccg cgacaccacc tctgaaccgg cacgccaaaa cgtcgcctgg 720
gaaccgatcc gctcggtcaa aaatcagctc gacaatgact cgaaatggca cggcgcc 777
<210> 40
<211> 259
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 40
Met Ser Asn Phe Glu Thr Phe Leu Trp Val Ala Tyr Pro Trp Leu Cys
1 5 10 15
Ile Ala Ala Tyr Ile Ile Gly Ile Ser Trp Arg Trp Arg Ala Asp Gln
20 25 30
Phe Gly Trp Thr Thr His Ser Ser Gln Ile Tyr Glu Ser Lys Leu Leu
35 40 45
Arg Ile Ala Ser Pro Leu Phe His Trp Gly Met Val Phe Val Val Ile
50 55 60
Gly His Leu Met Gly Leu Ala Ile Pro Lys Ser Trp Thr Gln Ala Val
65 70 75 80
Gly Ile Ser Asp Ala Ala Tyr His Leu Ile Ala Thr Ile Pro Gly Thr
85 90 95
Ile Ala Gly Ile Ala Ala Val Leu Gly Leu Ile Gly Leu Ile Ile Arg
100 105 110
Arg Val Ile Asn Lys Thr Val Phe Leu Ser Thr Ser Arg Ser Asp Lys
115 120 125
Val Met Tyr Val Leu Leu Gly Ala Ala Ile Leu Ser Gly Phe Ile Ala
130 135 140
Thr Val Ser Thr Gln Val Phe Gly Gly Ala His Gly Tyr Asp Tyr Arg
145 150 155 160
Glu Thr Ile Ser Pro Trp Val Arg Gln Leu Leu Ile Phe Asn Ala Gln
165 170 175
Pro Glu Leu Met Ala Asp Val Pro Trp Glu Phe Lys Val His Ile Val
180 185 190
Ala Gly Phe Thr Leu Ile Ala Leu Trp Pro Phe Thr Arg Leu Val His
195 200 205
Ala Phe Ser Ala Pro Val Gly Tyr Val Thr Arg Pro Tyr Val Val Tyr
210 215 220
Arg Thr Arg Asp Thr Thr Ser Glu Pro Ala Arg Gln Asn Val Ala Trp
225 230 235 240
Glu Pro Ile Arg Ser Val Lys Asn Gln Leu Asp Asn Asp Ser Lys Trp
245 250 255
His Gly Ala
<210> 41
<211> 969
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 41
atgccacaaa aaccggccag tttcgcggtg ggctttgaca tcggcggcac caacatgcga 60
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cgatttgccc cgcaccttcc ttggcgcgat gagccagtgc gtgaaaagtt ggaaaacctt 300
ttgggcctgc ctgttcgttt ggaacatgat gccaactcag cagcgtgggg tgagcatcgt 360
tttggtgcag ctcaaggcgc tgacaactgg gttttgttgg cactcggcac tggaattggt 420
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ggtcatttgc gtgttgttcg tggcggacgc gcatgtgcgt gtggcaaaga aggctgcctg 540
gagcgttact gttccggtac tgccttggtt tacactgcgc gtgaattggc ttcgcatggc 600
tcattccgca acagcgggct gtttgacaag atcaaagccg atccgaattc catcaatgga 660
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ttcagcgagt ggctgggcga aactttggcg atcattgctg atgtccttga cccaggcatg 780
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cactattcca cccgcatcgt cggcgcagga tatcgccctt tggcacgcgt tgccacagct 900
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<210> 42
<211> 323
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 42
Met Pro Gln Lys Pro Ala Ser Phe Ala Val Gly Phe Asp Ile Gly Gly
1 5 10 15
Thr Asn Met Arg Ala Gly Leu Val Asp Glu Ser Gly Arg Ile Val Thr
20 25 30
Ser Leu Ser Ala Pro Ser Pro Arg Thr Thr Gln Ala Met Glu Gln Gly
35 40 45
Ile Phe Asp Leu Val Glu Gln Leu Lys Ala Glu Tyr Pro Val Gly Ala
50 55 60
Val Gly Leu Ala Val Ala Gly Phe Leu Asp Pro Glu Cys Glu Val Val
65 70 75 80
Arg Phe Ala Pro His Leu Pro Trp Arg Asp Glu Pro Val Arg Glu Lys
85 90 95
Leu Glu Asn Leu Leu Gly Leu Pro Val Arg Leu Glu His Asp Ala Asn
100 105 110
Ser Ala Ala Trp Gly Glu His Arg Phe Gly Ala Ala Gln Gly Ala Asp
115 120 125
Asn Trp Val Leu Leu Ala Leu Gly Thr Gly Ile Gly Ala Ala Leu Ile
130 135 140
Glu Lys Gly Glu Ile Tyr Arg Gly Ala Tyr Gly Thr Ala Pro Glu Phe
145 150 155 160
Gly His Leu Arg Val Val Arg Gly Gly Arg Ala Cys Ala Cys Gly Lys
165 170 175
Glu Gly Cys Leu Glu Arg Tyr Cys Ser Gly Thr Ala Leu Val Tyr Thr
180 185 190
Ala Arg Glu Leu Ala Ser His Gly Ser Phe Arg Asn Ser Gly Leu Phe
195 200 205
Asp Lys Ile Lys Ala Asp Pro Asn Ser Ile Asn Gly Lys Thr Ile Thr
210 215 220
Ala Ala Ala Arg Gln Glu Asp Pro Leu Ala Leu Ala Val Leu Glu Asp
225 230 235 240
Phe Ser Glu Trp Leu Gly Glu Thr Leu Ala Ile Ile Ala Asp Val Leu
245 250 255
Asp Pro Gly Met Ile Ile Ile Gly Gly Gly Leu Ser Asn Ala Ala Asp
260 265 270
Leu Tyr Leu Asp Arg Ser Val Asn His Tyr Ser Thr Arg Ile Val Gly
275 280 285
Ala Gly Tyr Arg Pro Leu Ala Arg Val Ala Thr Ala Gln Leu Gly Ala
290 295 300
Asp Ala Gly Met Ile Gly Val Ala Asp Leu Ala Arg Arg Ser Val Val
305 310 315 320
Glu Ala Asn
<210> 43
<211> 1068
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 43
atggtttgta cccagccaat attttcagtt gcggcaggat ctgctgctgc ggctaggagg 60
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gtgaaacagc gaatggtcgg ttcaagtggt ttgcgggtat ccaggctcgg tttgggcacc 180
tcaacatggg gctcgggcac cgagctggct gaggcaggcg atatctttaa ggcgttcatc 240
aattctggtg gcacgcttat cgacgtctcc cccaactaca ccaccggcgt cgcggaagaa 300
atgctcggca cgatgttgga tgcggaagtc tctcgttcgg ctgtcgtcat ttcctccagc 360
gcaggtgtca accccgctct gccgctcggc cgacgtgtgg attgctcccg ccgcaatttg 420
attgcccaat tagatgtcac cctgcgggca ttaaacactg actatttgga tttgtggtct 480
gtgggctatt gggatgaggg caccccaccg catgaggtgg ccgatacttt ggattacgcc 540
gtgcgcaccg gccgagtccg atatgccggt gtccgaggat attccggttg gcagttagcg 600
gtcacccacg ctgcatccaa tcatgcagcg gcctccgccc gccccgtggt cgttgcacaa 660
aatgaataca gcctgctgga acgccgcgca gaacaagaac tcctccctgc cacccaacac 720
ctaggtgtcg gattctttgc tggcgctccg ctggggcaag gcgtgctgac tgctaaatac 780
cgctccgaaa ttccccatga ttccagagct gcatccacag gacgcgacgc agaagtccaa 840
agctacctag ataatcgagg ccgcatcatt gtcgatgctc ttgatactgc agccaaagga 900
ttaggcatta gccccgctgt cacagccacc acctgggtgc gtgatcgtcc cggagtgaca 960
gctgtcatcg tgggcgctcg cacacatgaa cagctgtcac atcttctcaa ggcggaatcg 1020
gtgactttgc caacaccaat cacacaagcc cttgatgatg tctccctg 1068
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<211> 356
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 44
Met Val Cys Thr Gln Pro Ile Phe Ser Val Ala Ala Gly Ser Ala Ala
1 5 10 15
Ala Ala Arg Arg Val Ile Ser Ser Phe Thr Arg Ser Thr Val Leu Pro
20 25 30
Tyr Asp Leu Ser Ser Val Val Gly Val Lys Gln Arg Met Val Gly Ser
35 40 45
Ser Gly Leu Arg Val Ser Arg Leu Gly Leu Gly Thr Ser Thr Trp Gly
50 55 60
Ser Gly Thr Glu Leu Ala Glu Ala Gly Asp Ile Phe Lys Ala Phe Ile
65 70 75 80
Asn Ser Gly Gly Thr Leu Ile Asp Val Ser Pro Asn Tyr Thr Thr Gly
85 90 95
Val Ala Glu Glu Met Leu Gly Thr Met Leu Asp Ala Glu Val Ser Arg
100 105 110
Ser Ala Val Val Ile Ser Ser Ser Ala Gly Val Asn Pro Ala Leu Pro
115 120 125
Leu Gly Arg Arg Val Asp Cys Ser Arg Arg Asn Leu Ile Ala Gln Leu
130 135 140
Asp Val Thr Leu Arg Ala Leu Asn Thr Asp Tyr Leu Asp Leu Trp Ser
145 150 155 160
Val Gly Tyr Trp Asp Glu Gly Thr Pro Pro His Glu Val Ala Asp Thr
165 170 175
Leu Asp Tyr Ala Val Arg Thr Gly Arg Val Arg Tyr Ala Gly Val Arg
180 185 190
Gly Tyr Ser Gly Trp Gln Leu Ala Val Thr His Ala Ala Ser Asn His
195 200 205
Ala Ala Ala Ser Ala Arg Pro Val Val Val Ala Gln Asn Glu Tyr Ser
210 215 220
Leu Leu Glu Arg Arg Ala Glu Gln Glu Leu Leu Pro Ala Thr Gln His
225 230 235 240
Leu Gly Val Gly Phe Phe Ala Gly Ala Pro Leu Gly Gln Gly Val Leu
245 250 255
Thr Ala Lys Tyr Arg Ser Glu Ile Pro His Asp Ser Arg Ala Ala Ser
260 265 270
Thr Gly Arg Asp Ala Glu Val Gln Ser Tyr Leu Asp Asn Arg Gly Arg
275 280 285
Ile Ile Val Asp Ala Leu Asp Thr Ala Ala Lys Gly Leu Gly Ile Ser
290 295 300
Pro Ala Val Thr Ala Thr Thr Trp Val Arg Asp Arg Pro Gly Val Thr
305 310 315 320
Ala Val Ile Val Gly Ala Arg Thr His Glu Gln Leu Ser His Leu Leu
325 330 335
Lys Ala Glu Ser Val Thr Leu Pro Thr Pro Ile Thr Gln Ala Leu Asp
340 345 350
Asp Val Ser Leu
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<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 45
gtgaaacagc gaatggtcgg ttcaagtggt ttgcgggtat ccaggctcgg tttgggcacc 60
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atgctcggca cgatgttgga tgcggaagtc tctcgttcgg ctgtcgtcat ttcctccagc 240
gcaggtgtca accccgctct gccgctcggc cgacgtgtgg attgctcccg ccgcaatttg 300
attgcccaat tagatgtcac cctgcgggca ttaaacactg actatttgga tttgtggtct 360
gtgggctatt gggatgaggg caccccaccg catgaggtgg ccgatacttt ggattacgcc 420
gtgcgcaccg gccgagtccg atatgccggt gtccgaggat attccggttg gcagttagcg 480
gtcacccacg ctgcatccaa tcatgcagcg gcctccgccc gccccgtggt cgttgcacaa 540
aatgaataca gcctgctgga acgccgcgca gaacaagaac tcctccctgc cacccaacac 600
ctaggtgtcg gattctttgc tggcgctccg ctggggcaag gcgtgctgac tgctaaatac 660
cgctccgaaa ttccccatga ttccagagct gcatccacag gacgcgacgc agaagtccaa 720
agctacctag ataatcgagg ccgcatcatt gtcgatgctc ttgatactgc agccaaagga 780
ttaggcatta gccccgctgt cacagccacc acctgggtgc gtgatcgtcc cggagtgaca 840
gctgtcatcg tgggcgctcg cacacatgaa cagctgtcac atcttctcaa ggcggaatcg 900
gtgactttgc caacaccaat cacacaagcc cttgatgatg tctccctg 948
<210> 46
<211> 316
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 46
Met Lys Gln Arg Met Val Gly Ser Ser Gly Leu Arg Val Ser Arg Leu
1 5 10 15
Gly Leu Gly Thr Ser Thr Trp Gly Ser Gly Thr Glu Leu Ala Glu Ala
20 25 30
Gly Asp Ile Phe Lys Ala Phe Ile Asn Ser Gly Gly Thr Leu Ile Asp
35 40 45
Val Ser Pro Asn Tyr Thr Thr Gly Val Ala Glu Glu Met Leu Gly Thr
50 55 60
Met Leu Asp Ala Glu Val Ser Arg Ser Ala Val Val Ile Ser Ser Ser
65 70 75 80
Ala Gly Val Asn Pro Ala Leu Pro Leu Gly Arg Arg Val Asp Cys Ser
85 90 95
Arg Arg Asn Leu Ile Ala Gln Leu Asp Val Thr Leu Arg Ala Leu Asn
100 105 110
Thr Asp Tyr Leu Asp Leu Trp Ser Val Gly Tyr Trp Asp Glu Gly Thr
115 120 125
Pro Pro His Glu Val Ala Asp Thr Leu Asp Tyr Ala Val Arg Thr Gly
130 135 140
Arg Val Arg Tyr Ala Gly Val Arg Gly Tyr Ser Gly Trp Gln Leu Ala
145 150 155 160
Val Thr His Ala Ala Ser Asn His Ala Ala Ala Ser Ala Arg Pro Val
165 170 175
Val Val Ala Gln Asn Glu Tyr Ser Leu Leu Glu Arg Arg Ala Glu Gln
180 185 190
Glu Leu Leu Pro Ala Thr Gln His Leu Gly Val Gly Phe Phe Ala Gly
195 200 205
Ala Pro Leu Gly Gln Gly Val Leu Thr Ala Lys Tyr Arg Ser Glu Ile
210 215 220
Pro His Asp Ser Arg Ala Ala Ser Thr Gly Arg Asp Ala Glu Val Gln
225 230 235 240
Ser Tyr Leu Asp Asn Arg Gly Arg Ile Ile Val Asp Ala Leu Asp Thr
245 250 255
Ala Ala Lys Gly Leu Gly Ile Ser Pro Ala Val Thr Ala Thr Thr Trp
260 265 270
Val Arg Asp Arg Pro Gly Val Thr Ala Val Ile Val Gly Ala Arg Thr
275 280 285
His Glu Gln Leu Ser His Leu Leu Lys Ala Glu Ser Val Thr Leu Pro
290 295 300
Thr Pro Ile Thr Gln Ala Leu Asp Asp Val Ser Leu
305 310 315
<210> 47
<211> 408
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 47
atgctgcgca ccatcctcgg aagtaagatt caccgagcca ctgtcactca agctgatcta 60
gattatgttg gctctgtaac catcgacgcc gacctggttc acgccgccgg attgatcgaa 120
ggcgaaaaag ttgccatcgt agacatcacc aacggcgctc gtctggaaac ttatgtcatt 180
gtgggcgacg ccggaacggg caatatttgc atcaatggtg ccgctgcaca ccttattaat 240
cctggcgatc ttgtgatcat catgagctac cttcaggcaa ctgatgcgga agccaaggcg 300
tatgagccaa agattgtgca cgtggacgcc gacaaccgca tcgttgcgct cggcaacgat 360
cttgcggaag cactacctgg atccgggctt ttgacgtcga gaagcatt 408
<210> 48
<211> 136
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 48
Met Leu Arg Thr Ile Leu Gly Ser Lys Ile His Arg Ala Thr Val Thr
1 5 10 15
Gln Ala Asp Leu Asp Tyr Val Gly Ser Val Thr Ile Asp Ala Asp Leu
20 25 30
Val His Ala Ala Gly Leu Ile Glu Gly Glu Lys Val Ala Ile Val Asp
35 40 45
Ile Thr Asn Gly Ala Arg Leu Glu Thr Tyr Val Ile Val Gly Asp Ala
50 55 60
Gly Thr Gly Asn Ile Cys Ile Asn Gly Ala Ala Ala His Leu Ile Asn
65 70 75 80
Pro Gly Asp Leu Val Ile Ile Met Ser Tyr Leu Gln Ala Thr Asp Ala
85 90 95
Glu Ala Lys Ala Tyr Glu Pro Lys Ile Val His Val Asp Ala Asp Asn
100 105 110
Arg Ile Val Ala Leu Gly Asn Asp Leu Ala Glu Ala Leu Pro Gly Ser
115 120 125
Gly Leu Leu Thr Ser Arg Ser Ile
130 135
<210> 49
<211> 669
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 49
gtggagtgga ccgcttttgg caccctgatt ctgctcaatt tggtgggcag tttatccccg 60
gggcctgata cctttttcct cctccgctta gccacccgct ccagagcgca cgcgatcgct 120
ggcgtcgccg gcatcgtcac cggactcacg gtgtgggtga cgctgacggt cgtgggagca 180
gcggcgctgc tcaccactta tccgtcgatt ctcggaatca tccagctcgt cggcggcacg 240
tacctaagct tcattgggta caagttgctg cgctcggcgt cgagagagct tatcgacgcc 300
cgccagttcc gtttcaacgc cgatgcccga cctatcccgg atgcggtaga agcactggga 360
acccgcactc aggtatatcg acaaggtttg gccaccaacc tgtcaaaccc taaagttgtc 420
atgtacttcg cggcaattct ggctccgttg atgccagcgc acccatcacc ggtgctggcg 480
ttctctatca tcgtggcgat tttagtgcag acctttgtta ccttctctgc tgtgtgcctc 540
attgtctcta cggagcgtgt gcgcaaagca atgctgcgtg caggtccctg gtttgacctg 600
cttgctggcg ttgtcttcct cgttgtgggt gtgactctgc tgtatgaagg cctgaccggt 660
ttactcggg 669
<210> 50
<211> 223
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 50
Met Glu Trp Thr Ala Phe Gly Thr Leu Ile Leu Leu Asn Leu Val Gly
1 5 10 15
Ser Leu Ser Pro Gly Pro Asp Thr Phe Phe Leu Leu Arg Leu Ala Thr
20 25 30
Arg Ser Arg Ala His Ala Ile Ala Gly Val Ala Gly Ile Val Thr Gly
35 40 45
Leu Thr Val Trp Val Thr Leu Thr Val Val Gly Ala Ala Ala Leu Leu
50 55 60
Thr Thr Tyr Pro Ser Ile Leu Gly Ile Ile Gln Leu Val Gly Gly Thr
65 70 75 80
Tyr Leu Ser Phe Ile Gly Tyr Lys Leu Leu Arg Ser Ala Ser Arg Glu
85 90 95
Leu Ile Asp Ala Arg Gln Phe Arg Phe Asn Ala Asp Ala Arg Pro Ile
100 105 110
Pro Asp Ala Val Glu Ala Leu Gly Thr Arg Thr Gln Val Tyr Arg Gln
115 120 125
Gly Leu Ala Thr Asn Leu Ser Asn Pro Lys Val Val Met Tyr Phe Ala
130 135 140
Ala Ile Leu Ala Pro Leu Met Pro Ala His Pro Ser Pro Val Leu Ala
145 150 155 160
Phe Ser Ile Ile Val Ala Ile Leu Val Gln Thr Phe Val Thr Phe Ser
165 170 175
Ala Val Cys Leu Ile Val Ser Thr Glu Arg Val Arg Lys Ala Met Leu
180 185 190
Arg Ala Gly Pro Trp Phe Asp Leu Leu Ala Gly Val Val Phe Leu Val
195 200 205
Val Gly Val Thr Leu Leu Tyr Glu Gly Leu Thr Gly Leu Leu Gly
210 215 220
<210> 51
<211> 1344
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 51
gtggtcggca ccgcccattg cgaatcagca cttaaggaag tgactttgat gtcaaacgtt 60
ggaaagccac gtaccgcaca ggaaatccag caggattggg acaccaaccc tcgttggaac 120
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gagcacactc ttgctcgccg cggctcagag atcctctggg acgcagtcac ccaggaaggt 240
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gcaggcctga aggctgtcta cctgtccggt tggcaggtcg caggtgacgc caacctctcc 360
ggccacacct accctgacca gtccctctac ccagcgaact ccgttccaag cgtcgttcgt 420
cgcatcaaca acgcactgct gcgttccgat gaaatcgcac gcaccgaagg cgacacctcc 480
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aacgtctacg aactccagaa ggcaatgatc gcagctggcg ctgcaggcac ccactgggaa 600
gaccagctcg cttctgaaaa gaagtgtggc cacctcggcg gcaaggttct gatcccaacc 660
cagcagcaca tccgcaccct gaactctgcc cgccttgcag cagacgttgc aaacacccca 720
actgttgtta tcgcacgtac cgacgctgag gcagcaaccc tgatcacctc tgacgttgat 780
gagcgcgacc aaccattcat caccggtgag cgcaccgcag aaggctacta ccacgtcaag 840
aatggtctcg agccatgtat cgcacgtgca aagtcctacg caccatacgc agatatgatc 900
tggatggaga ccggcacccc tgacctggag ctcgctaaga agttcgctga aggcgttcgc 960
tctgagttcc cagaccagct gctgtcctac aactgctccc catccttcaa ctggtctgca 1020
cacctcgagg cagatgagat cgctaagttc cagaaggaac tcggcgcaat gggcttcaag 1080
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tacggatacg ctcgcgaagg catgacctcc ttcgttgacc tgcagaaccg tgagttcaag 1200
gcagctgaag agcgtggctt caccgctgtt aagcaccagc gtgaggttgg cgcaggctac 1260
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actgaagaag gccagttcca caac 1344
<210> 52
<211> 448
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 52
Met Val Gly Thr Ala His Cys Glu Ser Ala Leu Lys Glu Val Thr Leu
1 5 10 15
Met Ser Asn Val Gly Lys Pro Arg Thr Ala Gln Glu Ile Gln Gln Asp
20 25 30
Trp Asp Thr Asn Pro Arg Trp Asn Gly Ile Thr Arg Asp Tyr Thr Ala
35 40 45
Asp Gln Val Ala Asp Leu Gln Gly Ser Val Ile Glu Glu His Thr Leu
50 55 60
Ala Arg Arg Gly Ser Glu Ile Leu Trp Asp Ala Val Thr Gln Glu Gly
65 70 75 80
Asp Gly Tyr Ile Asn Ala Leu Gly Ala Leu Thr Gly Asn Gln Ala Val
85 90 95
Gln Gln Val Arg Ala Gly Leu Lys Ala Val Tyr Leu Ser Gly Trp Gln
100 105 110
Val Ala Gly Asp Ala Asn Leu Ser Gly His Thr Tyr Pro Asp Gln Ser
115 120 125
Leu Tyr Pro Ala Asn Ser Val Pro Ser Val Val Arg Arg Ile Asn Asn
130 135 140
Ala Leu Leu Arg Ser Asp Glu Ile Ala Arg Thr Glu Gly Asp Thr Ser
145 150 155 160
Val Asp Asn Trp Val Val Pro Ile Val Ala Asp Gly Glu Ala Gly Phe
165 170 175
Gly Gly Ala Leu Asn Val Tyr Glu Leu Gln Lys Ala Met Ile Ala Ala
180 185 190
Gly Ala Ala Gly Thr His Trp Glu Asp Gln Leu Ala Ser Glu Lys Lys
195 200 205
Cys Gly His Leu Gly Gly Lys Val Leu Ile Pro Thr Gln Gln His Ile
210 215 220
Arg Thr Leu Asn Ser Ala Arg Leu Ala Ala Asp Val Ala Asn Thr Pro
225 230 235 240
Thr Val Val Ile Ala Arg Thr Asp Ala Glu Ala Ala Thr Leu Ile Thr
245 250 255
Ser Asp Val Asp Glu Arg Asp Gln Pro Phe Ile Thr Gly Glu Arg Thr
260 265 270
Ala Glu Gly Tyr Tyr His Val Lys Asn Gly Leu Glu Pro Cys Ile Ala
275 280 285
Arg Ala Lys Ser Tyr Ala Pro Tyr Ala Asp Met Ile Trp Met Glu Thr
290 295 300
Gly Thr Pro Asp Leu Glu Leu Ala Lys Lys Phe Ala Glu Gly Val Arg
305 310 315 320
Ser Glu Phe Pro Asp Gln Leu Leu Ser Tyr Asn Cys Ser Pro Ser Phe
325 330 335
Asn Trp Ser Ala His Leu Glu Ala Asp Glu Ile Ala Lys Phe Gln Lys
340 345 350
Glu Leu Gly Ala Met Gly Phe Lys Phe Gln Phe Ile Thr Leu Ala Gly
355 360 365
Phe His Ser Leu Asn Tyr Gly Met Phe Asp Leu Ala Tyr Gly Tyr Ala
370 375 380
Arg Glu Gly Met Thr Ser Phe Val Asp Leu Gln Asn Arg Glu Phe Lys
385 390 395 400
Ala Ala Glu Glu Arg Gly Phe Thr Ala Val Lys His Gln Arg Glu Val
405 410 415
Gly Ala Gly Tyr Phe Asp Gln Ile Ala Thr Thr Val Asp Pro Asn Ser
420 425 430
Ser Thr Thr Ala Leu Lys Gly Ser Thr Glu Glu Gly Gln Phe His Asn
435 440 445
<210> 53
<211> 1296
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 53
atgtcaaacg ttggaaagcc acgtaccgca caggaaatcc agcaggattg ggacaccaac 60
cctcgttgga acggcatcac ccgcgactac accgcagacc aggtagctga tctgcagggt 120
tccgtcatcg aggagcacac tcttgctcgc cgcggctcag agatcctctg ggacgcagtc 180
acccaggaag gtgacggata catcaacgcg cttggcgcac tcaccggtaa ccaggctgtt 240
cagcaggttc gtgcaggcct gaaggctgtc tacctgtccg gttggcaggt cgcaggtgac 300
gccaacctct ccggccacac ctaccctgac cagtccctct acccagcgaa ctccgttcca 360
agcgtcgttc gtcgcatcaa caacgcactg ctgcgttccg atgaaatcgc acgcaccgaa 420
ggcgacacct ccgttgacaa ctgggttgtc ccaatcgtcg cggacggcga agctggcttc 480
ggtggagcac tcaacgtcta cgaactccag aaggcaatga tcgcagctgg cgctgcaggc 540
acccactggg aagaccagct cgcttctgaa aagaagtgtg gccacctcgg cggcaaggtt 600
ctgatcccaa cccagcagca catccgcacc ctgaactctg cccgccttgc agcagacgtt 660
gcaaacaccc caactgttgt tatcgcacgt accgacgctg aggcagcaac cctgatcacc 720
tctgacgttg atgagcgcga ccaaccattc atcaccggtg agcgcaccgc agaaggctac 780
taccacgtca agaatggtct cgagccatgt atcgcacgtg caaagtccta cgcaccatac 840
gcagatatga tctggatgga gaccggcacc cctgacctgg agctcgctaa gaagttcgct 900
gaaggcgttc gctctgagtt cccagaccag ctgctgtcct acaactgctc cccatccttc 960
aactggtctg cacacctcga ggcagatgag atcgctaagt tccagaagga actcggcgca 1020
atgggcttca agttccagtt catcaccctc gcaggcttcc actccctcaa ctacggcatg 1080
ttcgacctgg cttacggata cgctcgcgaa ggcatgacct ccttcgttga cctgcagaac 1140
cgtgagttca aggcagctga agagcgtggc ttcaccgctg ttaagcacca gcgtgaggtt 1200
ggcgcaggct acttcgacca gatcgcaacc accgttgacc cgaactcttc taccaccgct 1260
ttgaagggtt ccactgaaga aggccagttc cacaac 1296
<210> 54
<211> 432
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 54
Met Ser Asn Val Gly Lys Pro Arg Thr Ala Gln Glu Ile Gln Gln Asp
1 5 10 15
Trp Asp Thr Asn Pro Arg Trp Asn Gly Ile Thr Arg Asp Tyr Thr Ala
20 25 30
Asp Gln Val Ala Asp Leu Gln Gly Ser Val Ile Glu Glu His Thr Leu
35 40 45
Ala Arg Arg Gly Ser Glu Ile Leu Trp Asp Ala Val Thr Gln Glu Gly
50 55 60
Asp Gly Tyr Ile Asn Ala Leu Gly Ala Leu Thr Gly Asn Gln Ala Val
65 70 75 80
Gln Gln Val Arg Ala Gly Leu Lys Ala Val Tyr Leu Ser Gly Trp Gln
85 90 95
Val Ala Gly Asp Ala Asn Leu Ser Gly His Thr Tyr Pro Asp Gln Ser
100 105 110
Leu Tyr Pro Ala Asn Ser Val Pro Ser Val Val Arg Arg Ile Asn Asn
115 120 125
Ala Leu Leu Arg Ser Asp Glu Ile Ala Arg Thr Glu Gly Asp Thr Ser
130 135 140
Val Asp Asn Trp Val Val Pro Ile Val Ala Asp Gly Glu Ala Gly Phe
145 150 155 160
Gly Gly Ala Leu Asn Val Tyr Glu Leu Gln Lys Ala Met Ile Ala Ala
165 170 175
Gly Ala Ala Gly Thr His Trp Glu Asp Gln Leu Ala Ser Glu Lys Lys
180 185 190
Cys Gly His Leu Gly Gly Lys Val Leu Ile Pro Thr Gln Gln His Ile
195 200 205
Arg Thr Leu Asn Ser Ala Arg Leu Ala Ala Asp Val Ala Asn Thr Pro
210 215 220
Thr Val Val Ile Ala Arg Thr Asp Ala Glu Ala Ala Thr Leu Ile Thr
225 230 235 240
Ser Asp Val Asp Glu Arg Asp Gln Pro Phe Ile Thr Gly Glu Arg Thr
245 250 255
Ala Glu Gly Tyr Tyr His Val Lys Asn Gly Leu Glu Pro Cys Ile Ala
260 265 270
Arg Ala Lys Ser Tyr Ala Pro Tyr Ala Asp Met Ile Trp Met Glu Thr
275 280 285
Gly Thr Pro Asp Leu Glu Leu Ala Lys Lys Phe Ala Glu Gly Val Arg
290 295 300
Ser Glu Phe Pro Asp Gln Leu Leu Ser Tyr Asn Cys Ser Pro Ser Phe
305 310 315 320
Asn Trp Ser Ala His Leu Glu Ala Asp Glu Ile Ala Lys Phe Gln Lys
325 330 335
Glu Leu Gly Ala Met Gly Phe Lys Phe Gln Phe Ile Thr Leu Ala Gly
340 345 350
Phe His Ser Leu Asn Tyr Gly Met Phe Asp Leu Ala Tyr Gly Tyr Ala
355 360 365
Arg Glu Gly Met Thr Ser Phe Val Asp Leu Gln Asn Arg Glu Phe Lys
370 375 380
Ala Ala Glu Glu Arg Gly Phe Thr Ala Val Lys His Gln Arg Glu Val
385 390 395 400
Gly Ala Gly Tyr Phe Asp Gln Ile Ala Thr Thr Val Asp Pro Asn Ser
405 410 415
Ser Thr Thr Ala Leu Lys Gly Ser Thr Glu Glu Gly Gln Phe His Asn
420 425 430
<210> 55
<211> 2217
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 55
atgactgaac aggaactgtt gtctgctcag actgccgaca acgctggaac tgacagcacc 60
gaacgcgttg acgcgggcgg aatgcaggtt gcaaaagttc tctacgactt tgtaaccgaa 120
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gcccgggacc tcaccccacg caaccgcgag ctgcttgctc gccgcgatga actgcagatg 240
cttatcgacg actaccaccg caacaactcc ggcaccatcg accaagaggc gtacgaggat 300
ttcctcaaag aaatcggata cttggttgag gagccagaag ctgcagaaat ccgtacccaa 360
aacgtcgata cggaaatctc cagcaccgca ggacctcagc tggttgttcc aattctgaac 420
gcacgcttcg cgctgaacgc tgccaatgct cgctggggtt ccctctacga tgcgttgtac 480
ggcaccaacg ccatcccaga aactgatggc gctgaaaagg gcaaggagta caacccggtc 540
cgcggccaga aggtcatcga gtggggtcgt gaattcctcg acagcgttgt cccactggac 600
ggtgcttcgc atgccgatgt tgagaagtac aacatcaccg atggaaagct tgcagcccac 660
attggagata gcgtctaccg actgaaaaac cgtgaatcct accgtggctt caccggcaac 720
ttccttgatc cagaagcaat cctgctggaa accaacggcc tgcacatcga gctgcagatc 780
gatcctgtcc acccaatcgg caaggcagac aagactggtc tcaaagacat cgttttggaa 840
tctgcgatca ccacgatcat ggacttcgaa gactccgttg cagctgttga tgctgaagac 900
aagaccttag gttactctaa ctggttcgga ctcaacaccg gcgaactgaa agaagagatg 960
tccaagaacg gacgcatctt cacccgtgag ctcaacaagg accgcgtcta cattggccgc 1020
aatggtaccg agctggttct gcacggtcgt tccctgctgt tcgtccgcaa cgttggtcac 1080
ctcatgcaaa acccatccat cttgattgat ggcgaggaga tcttcgaagg catcatggat 1140
gctgtcttga ccactgtttg tgccatccca ggaattgctc cgcagaacaa gatgcgcaat 1200
tcccgcaagg gctccatcta catcgtgaag cctaagcagc acggccctga agaagtcgcg 1260
ttcaccaacg agctcttcgg ccgcgttgag gatctgcttg atctgccacg ccacaccttg 1320
aaggttggtg ttatggatga ggagcgtcgc acgtccgtga acctggatgc cagcatcatg 1380
gaagttgctg accgcttggc attcatcaac actggcttcc tggaccgcac cggcgatgaa 1440
atccacacct ccatggaagc aggcgccatg gtgcgcaagg ctgatatgca gaccgcaccg 1500
tggaagcagg cctacgagaa caacaacgtt gatgcaggta ttcagcgtgg tcttcctggc 1560
aaggctcaga tcggtaaggg catgtgggcg atgactgaac tcatggcaga aatgctggag 1620
aagaagatcg gccagccacg cgaaggcgcc aacactgcat gggttccttc accaactggt 1680
gcgacgctgc acgcaacgca ctaccacttg gttgatgtgt tcaaggttca agacgaactg 1740
cgtgctgccg gccgccgcga cagcctgcgc aacattctca ccattccaac cgcaccaaac 1800
accaattggt ctgaggaaga gaagaaggaa gagatggaca acaactgcca gtccatcctc 1860
ggatacgttg tgcgctgggt tgagcacggt gttggttgct ccaaggttcc agacatccat 1920
gacatcgacc tcatggaaga ccgcgcaacg ctgcgtattt cctcgcagat gctggccaac 1980
tggatccgcc atgatgttgt ctcgaaggag caggtcttgg agtcactgga acgaatggca 2040
gtggtcgtcg acaagcaaaa tgcgggcgac gaggcctacc gcgatatggc gccgaactac 2100
gacgcctccc tcgccttcca ggcggctaag gacttgattt tcgaaggcac caagtcccca 2160
tcgggctaca ccgagcccat cttgcacgca cgccgccgcg agttcaaagc aaaaaac 2217
<210> 56
<211> 739
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 56
Met Thr Glu Gln Glu Leu Leu Ser Ala Gln Thr Ala Asp Asn Ala Gly
1 5 10 15
Thr Asp Ser Thr Glu Arg Val Asp Ala Gly Gly Met Gln Val Ala Lys
20 25 30
Val Leu Tyr Asp Phe Val Thr Glu Ala Val Leu Pro Arg Val Gly Val
35 40 45
Asp Ala Glu Lys Phe Trp Ser Gly Phe Ala Ala Ile Ala Arg Asp Leu
50 55 60
Thr Pro Arg Asn Arg Glu Leu Leu Ala Arg Arg Asp Glu Leu Gln Met
65 70 75 80
Leu Ile Asp Asp Tyr His Arg Asn Asn Ser Gly Thr Ile Asp Gln Glu
85 90 95
Ala Tyr Glu Asp Phe Leu Lys Glu Ile Gly Tyr Leu Val Glu Glu Pro
100 105 110
Glu Ala Ala Glu Ile Arg Thr Gln Asn Val Asp Thr Glu Ile Ser Ser
115 120 125
Thr Ala Gly Pro Gln Leu Val Val Pro Ile Leu Asn Ala Arg Phe Ala
130 135 140
Leu Asn Ala Ala Asn Ala Arg Trp Gly Ser Leu Tyr Asp Ala Leu Tyr
145 150 155 160
Gly Thr Asn Ala Ile Pro Glu Thr Asp Gly Ala Glu Lys Gly Lys Glu
165 170 175
Tyr Asn Pro Val Arg Gly Gln Lys Val Ile Glu Trp Gly Arg Glu Phe
180 185 190
Leu Asp Ser Val Val Pro Leu Asp Gly Ala Ser His Ala Asp Val Glu
195 200 205
Lys Tyr Asn Ile Thr Asp Gly Lys Leu Ala Ala His Ile Gly Asp Ser
210 215 220
Val Tyr Arg Leu Lys Asn Arg Glu Ser Tyr Arg Gly Phe Thr Gly Asn
225 230 235 240
Phe Leu Asp Pro Glu Ala Ile Leu Leu Glu Thr Asn Gly Leu His Ile
245 250 255
Glu Leu Gln Ile Asp Pro Val His Pro Ile Gly Lys Ala Asp Lys Thr
260 265 270
Gly Leu Lys Asp Ile Val Leu Glu Ser Ala Ile Thr Thr Ile Met Asp
275 280 285
Phe Glu Asp Ser Val Ala Ala Val Asp Ala Glu Asp Lys Thr Leu Gly
290 295 300
Tyr Ser Asn Trp Phe Gly Leu Asn Thr Gly Glu Leu Lys Glu Glu Met
305 310 315 320
Ser Lys Asn Gly Arg Ile Phe Thr Arg Glu Leu Asn Lys Asp Arg Val
325 330 335
Tyr Ile Gly Arg Asn Gly Thr Glu Leu Val Leu His Gly Arg Ser Leu
340 345 350
Leu Phe Val Arg Asn Val Gly His Leu Met Gln Asn Pro Ser Ile Leu
355 360 365
Ile Asp Gly Glu Glu Ile Phe Glu Gly Ile Met Asp Ala Val Leu Thr
370 375 380
Thr Val Cys Ala Ile Pro Gly Ile Ala Pro Gln Asn Lys Met Arg Asn
385 390 395 400
Ser Arg Lys Gly Ser Ile Tyr Ile Val Lys Pro Lys Gln His Gly Pro
405 410 415
Glu Glu Val Ala Phe Thr Asn Glu Leu Phe Gly Arg Val Glu Asp Leu
420 425 430
Leu Asp Leu Pro Arg His Thr Leu Lys Val Gly Val Met Asp Glu Glu
435 440 445
Arg Arg Thr Ser Val Asn Leu Asp Ala Ser Ile Met Glu Val Ala Asp
450 455 460
Arg Leu Ala Phe Ile Asn Thr Gly Phe Leu Asp Arg Thr Gly Asp Glu
465 470 475 480
Ile His Thr Ser Met Glu Ala Gly Ala Met Val Arg Lys Ala Asp Met
485 490 495
Gln Thr Ala Pro Trp Lys Gln Ala Tyr Glu Asn Asn Asn Val Asp Ala
500 505 510
Gly Ile Gln Arg Gly Leu Pro Gly Lys Ala Gln Ile Gly Lys Gly Met
515 520 525
Trp Ala Met Thr Glu Leu Met Ala Glu Met Leu Glu Lys Lys Ile Gly
530 535 540
Gln Pro Arg Glu Gly Ala Asn Thr Ala Trp Val Pro Ser Pro Thr Gly
545 550 555 560
Ala Thr Leu His Ala Thr His Tyr His Leu Val Asp Val Phe Lys Val
565 570 575
Gln Asp Glu Leu Arg Ala Ala Gly Arg Arg Asp Ser Leu Arg Asn Ile
580 585 590
Leu Thr Ile Pro Thr Ala Pro Asn Thr Asn Trp Ser Glu Glu Glu Lys
595 600 605
Lys Glu Glu Met Asp Asn Asn Cys Gln Ser Ile Leu Gly Tyr Val Val
610 615 620
Arg Trp Val Glu His Gly Val Gly Cys Ser Lys Val Pro Asp Ile His
625 630 635 640
Asp Ile Asp Leu Met Glu Asp Arg Ala Thr Leu Arg Ile Ser Ser Gln
645 650 655
Met Leu Ala Asn Trp Ile Arg His Asp Val Val Ser Lys Glu Gln Val
660 665 670
Leu Glu Ser Leu Glu Arg Met Ala Val Val Val Asp Lys Gln Asn Ala
675 680 685
Gly Asp Glu Ala Tyr Arg Asp Met Ala Pro Asn Tyr Asp Ala Ser Leu
690 695 700
Ala Phe Gln Ala Ala Lys Asp Leu Ile Phe Glu Gly Thr Lys Ser Pro
705 710 715 720
Ser Gly Tyr Thr Glu Pro Ile Leu His Ala Arg Arg Arg Glu Phe Lys
725 730 735
Ala Lys Asn
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<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 57
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ggatcccagg ctgagtggga tcgcatggcg gaggatcttg ttgaagccgg taccctcatc 180
aagctcaacg aggaaaagcg tccgaacagc tacctagctc gttccaaccc atctgacgtt 240
gcgcgcgttg agtcccgcac cttcatctgc tccgagaagg aagaagatgc tggcccaacc 300
aacaactggg ctccaccaca ggcaatgaag gacgaaatgt ccaagcatta cgctggttcc 360
atgaaggggc gcaccatgta cgtcgtgcct ttctgcatgg gtccaatcag cgatccggac 420
cctaagcttg gtgtgcagct cactgactcc gagtacgttg tcatgtccat gcgcatcatg 480
acccgcatgg gtattgaagc gctggacaag atcggcgcga acggcagctt cgtcaggtgc 540
ctccactccg ttggtgctcc tttggagcca ggccaggaag acgttgcatg gccttgcaac 600
gacaccaagt acatcaccca gttcccagag accaaggaaa tttggtccta cggttccggc 660
tacggcggaa acgcaatcct ggcaaagaag tgctacgcac tgcgtatcgc atctgtcatg 720
gctcgcgaag aaggatggat ggctgagcac atgctcatcc tgaagctgat caacccagag 780
ggcaaggcgt accacatcgc agcagcattc ccatctgctt gtggcaagac caacctcgcc 840
atgatcactc caaccatccc aggctggacc gctcaggttg ttggcgacga catcgcttgg 900
ctgaagctgc gcgaggacgg cctctacgca gttaacccag aaaatggttt cttcggtgtt 960
gctccaggca ccaactacgc atccaaccca atcgcgatga agaccatgga accaggcaac 1020
accctgttca ccaacgtggc actcaccgac gacggcgaca tctggtggga aggcatggac 1080
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gaaaacgctg ctcaccctaa ctcccgttac tgcgtagcaa tcgaccagtc cccagcagca 1200
gcacctgagt tcaacgactg ggaaggcgtc aagatcgacg caatcctctt cggtggacgt 1260
cgcgcagaca ccgtcccact ggttacccag acctacgact gggagcacgg caccatggtt 1320
ggtgcactgc tcgcatccgg tcagaccgca gcttccgcag aagcaaaggt cggcacactc 1380
cgccacgacc caatggcaat gctcccattc attggctaca acgctggtga atacctgcag 1440
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tggttccgcc gtggcgaaga tggacgcttc ctgtggcctg gcttcggcga caactctcgc 1560
gttctgaagt gggtcatcga ccgcatcgaa ggccacgttg gcgcagacga gaccgttgtt 1620
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gtcaaggaag cactgaccgc tcctgcagag cagtgggcaa acgacgttga agacaacgcc 1740
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ctgaaggccc gcatttcagc agctcacgct 1830
<210> 58
<211> 610
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 58
Met Thr Thr Ala Ala Ile Arg Gly Leu Gln Gly Glu Ala Pro Thr Lys
1 5 10 15
Asn Lys Glu Leu Leu Asn Trp Ile Ala Asp Ala Val Glu Leu Phe Gln
20 25 30
Pro Glu Ala Val Val Phe Val Asp Gly Ser Gln Ala Glu Trp Asp Arg
35 40 45
Met Ala Glu Asp Leu Val Glu Ala Gly Thr Leu Ile Lys Leu Asn Glu
50 55 60
Glu Lys Arg Pro Asn Ser Tyr Leu Ala Arg Ser Asn Pro Ser Asp Val
65 70 75 80
Ala Arg Val Glu Ser Arg Thr Phe Ile Cys Ser Glu Lys Glu Glu Asp
85 90 95
Ala Gly Pro Thr Asn Asn Trp Ala Pro Pro Gln Ala Met Lys Asp Glu
100 105 110
Met Ser Lys His Tyr Ala Gly Ser Met Lys Gly Arg Thr Met Tyr Val
115 120 125
Val Pro Phe Cys Met Gly Pro Ile Ser Asp Pro Asp Pro Lys Leu Gly
130 135 140
Val Gln Leu Thr Asp Ser Glu Tyr Val Val Met Ser Met Arg Ile Met
145 150 155 160
Thr Arg Met Gly Ile Glu Ala Leu Asp Lys Ile Gly Ala Asn Gly Ser
165 170 175
Phe Val Arg Cys Leu His Ser Val Gly Ala Pro Leu Glu Pro Gly Gln
180 185 190
Glu Asp Val Ala Trp Pro Cys Asn Asp Thr Lys Tyr Ile Thr Gln Phe
195 200 205
Pro Glu Thr Lys Glu Ile Trp Ser Tyr Gly Ser Gly Tyr Gly Gly Asn
210 215 220
Ala Ile Leu Ala Lys Lys Cys Tyr Ala Leu Arg Ile Ala Ser Val Met
225 230 235 240
Ala Arg Glu Glu Gly Trp Met Ala Glu His Met Leu Ile Leu Lys Leu
245 250 255
Ile Asn Pro Glu Gly Lys Ala Tyr His Ile Ala Ala Ala Phe Pro Ser
260 265 270
Ala Cys Gly Lys Thr Asn Leu Ala Met Ile Thr Pro Thr Ile Pro Gly
275 280 285
Trp Thr Ala Gln Val Val Gly Asp Asp Ile Ala Trp Leu Lys Leu Arg
290 295 300
Glu Asp Gly Leu Tyr Ala Val Asn Pro Glu Asn Gly Phe Phe Gly Val
305 310 315 320
Ala Pro Gly Thr Asn Tyr Ala Ser Asn Pro Ile Ala Met Lys Thr Met
325 330 335
Glu Pro Gly Asn Thr Leu Phe Thr Asn Val Ala Leu Thr Asp Asp Gly
340 345 350
Asp Ile Trp Trp Glu Gly Met Asp Gly Asp Ala Pro Ala His Leu Ile
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His Pro Asn Ser Arg Tyr Cys Val Ala Ile Asp Gln Ser Pro Ala Ala
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Ala Pro Glu Phe Asn Asp Trp Glu Gly Val Lys Ile Asp Ala Ile Leu
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Phe Gly Gly Arg Arg Ala Asp Thr Val Pro Leu Val Thr Gln Thr Tyr
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Asp Trp Glu His Gly Thr Met Val Gly Ala Leu Leu Ala Ser Gly Gln
435 440 445
Thr Ala Ala Ser Ala Glu Ala Lys Val Gly Thr Leu Arg His Asp Pro
450 455 460
Met Ala Met Leu Pro Phe Ile Gly Tyr Asn Ala Gly Glu Tyr Leu Gln
465 470 475 480
Asn Trp Ile Asp Met Gly Asn Lys Gly Gly Asp Lys Met Pro Ser Ile
485 490 495
Phe Leu Val Asn Trp Phe Arg Arg Gly Glu Asp Gly Arg Phe Leu Trp
500 505 510
Pro Gly Phe Gly Asp Asn Ser Arg Val Leu Lys Trp Val Ile Asp Arg
515 520 525
Ile Glu Gly His Val Gly Ala Asp Glu Thr Val Val Gly His Thr Ala
530 535 540
Lys Ala Glu Asp Leu Asp Leu Asp Gly Leu Asp Thr Pro Ile Glu Asp
545 550 555 560
Val Lys Glu Ala Leu Thr Ala Pro Ala Glu Gln Trp Ala Asn Asp Val
565 570 575
Glu Asp Asn Ala Glu Tyr Leu Thr Phe Leu Gly Pro Arg Val Pro Ala
580 585 590
Glu Val His Ser Gln Phe Asp Ala Leu Lys Ala Arg Ile Ser Ala Ala
595 600 605
His Ala
610
<210> 59
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<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 59
gtgagtccga ctgcttgtct gaggagcttc gccacatgga tccagatttg ggctaccagc 60
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ttcattgagg ttgttgaagc agcaactgcc aataatggca ccgcacaggt agtgctcacc 240
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attcacggat atggtctcgg cgacgtagat cttgcagagg cagcccgcgc ttacgaagct 480
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<210> 60
<211> 275
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 60
Met Ser Pro Thr Ala Cys Leu Arg Ser Phe Ala Thr Trp Ile Gln Ile
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Trp Ala Thr Ser Thr His Tyr Pro Ala Cys Pro Ala Ser Ser Trp Lys
20 25 30
Pro Ser Lys Glu Lys Tyr Asn Thr Met Val Asp Val Val Arg Ala Arg
35 40 45
Asp Thr Glu Asp Leu Val Ala Gln Ala Ala Ser Lys Phe Ile Glu Val
50 55 60
Val Glu Ala Ala Thr Ala Asn Asn Gly Thr Ala Gln Val Val Leu Thr
65 70 75 80
Gly Gly Gly Ala Gly Ile Lys Leu Leu Glu Lys Leu Ser Val Asp Ala
85 90 95
Ala Asp Leu Ala Trp Asp Arg Ile His Val Phe Phe Gly Asp Glu Arg
100 105 110
Asn Val Pro Val Ser Asp Ser Glu Ser Asn Glu Gly Gln Ala Arg Glu
115 120 125
Ala Leu Leu Ser Lys Val Ser Ile Pro Glu Ala Asn Ile His Gly Tyr
130 135 140
Gly Leu Gly Asp Val Asp Leu Ala Glu Ala Ala Arg Ala Tyr Glu Ala
145 150 155 160
Val Leu Asp Glu Phe Ala Pro Asn Gly Phe Asp Leu His Leu Leu Gly
165 170 175
Met Gly Gly Glu Gly His Ile Asn Ser Leu Phe Pro His Thr Asp Ala
180 185 190
Val Lys Glu Ser Ser Ala Lys Val Ile Ala Val Phe Asp Ser Pro Lys
195 200 205
Pro Pro Ser Glu Arg Ala Thr Leu Thr Leu Pro Ala Val His Ser Ala
210 215 220
Lys Arg Val Trp Leu Leu Val Ser Gly Ala Glu Lys Ala Glu Ala Ala
225 230 235 240
Ala Ala Ile Val Asn Gly Glu Pro Ala Val Glu Trp Pro Ala Ala Gly
245 250 255
Ala Thr Gly Ser Glu Glu Thr Val Leu Phe Leu Ala Asp Asp Ala Ala
260 265 270
Gly Asn Leu
275
<210> 61
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<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 61
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<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 62
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1 5 10 15
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Gly Thr Ala Gln Val Val Leu Thr Gly Gly Gly Ala Gly Ile Lys Leu
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65 70 75 80
Ser Asn Glu Gly Gln Ala Arg Glu Ala Leu Leu Ser Lys Val Ser Ile
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Gly Phe Asp Leu His Leu Leu Gly Met Gly Gly Glu Gly His Ile Asn
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Ser Leu Phe Pro His Thr Asp Ala Val Lys Glu Ser Ser Ala Lys Val
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Thr Leu Pro Ala Val His Ser Ala Lys Arg Val Trp Leu Leu Val Ser
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Gly Ala Glu Lys Ala Glu Ala Ala Ala Ala Ile Val Asn Gly Glu Pro
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Ala Val Glu Trp Pro Ala Ala Gly Ala Thr Gly Ser Glu Glu Thr Val
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Leu Phe Leu Ala Asp Asp Ala Ala Gly Asn Leu
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<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 63
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<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 64
Met Ile Phe Glu Leu Pro Asp Thr Thr Thr Gln Gln Ile Ser Lys Thr
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Leu Thr Arg Leu Arg Glu Ser Gly Thr Gln Val Thr Thr Gly Arg Val
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Leu Thr Leu Ile Val Val Thr Asp Ser Glu Ser Asp Val Ala Ala Val
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Ile Leu Val Val Gly Asp Lys Thr Ala Glu Asn Lys Val Asp Ala Glu
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Val Arg Ile Gly Gly Asp Ala Gly Ala Ser Glu Met Ile Ile Met His
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Leu Leu Pro Asp Thr Pro Ile Val Ala Trp Trp Pro Gly Glu Ser Pro
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Leu Ala Ala Gly Trp Leu Ala Arg Arg Leu Lys Val Pro Val Ile Arg
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Ile Ile Thr Ile Tyr Asp Ala His Thr Leu Gln Val Glu Met Pro Glu
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<213> Corynebacterium glutamicum
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Met Ala Glu Ser Thr Glu Glu Ala Trp Arg Arg Val Ile Ile Glu Lys
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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245 250 255
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Gly Arg Arg Val Thr Glu Ile Ala Val Val Phe Lys Asp Ala Pro His
370 375 380
Gln Pro Phe Asp Gly Asp Met Thr Val Ser Leu Gly Gln Asn Ala Ile
385 390 395 400
Val Ile Arg Val Gln Pro Asp Glu Gly Val Leu Ile Arg Phe Gly Ser
405 410 415
Lys Val Pro Gly Ser Ala Met Glu Val Arg Asp Val Asn Met Asp Phe
420 425 430
Ser Tyr Ser Glu Ser Phe Thr Glu Glu Ser Pro Glu Ala Tyr Glu Arg
435 440 445
Leu Ile Leu Asp Ala Leu Leu Asp Glu Ser Ser Leu Phe Pro Thr Asn
450 455 460
Glu Glu Val Glu Leu Ser Trp Lys Ile Leu Asp Pro Ile Leu Glu Ala
465 470 475 480
Trp Asp Ala Asp Gly Glu Pro Glu Asp Tyr Pro Ala Gly Thr Trp Gly
485 490 495
Pro Lys Ser Ala Asp Glu Met Leu Ser Arg Asn Gly His Thr Trp Arg
500 505 510
Arg Pro
<210> 67
<211> 1080
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 67
atgtctcaca ttgatgatct tgcacagctc ggcacttcca cttggctcga cgacctctcc 60
cgcgagcgca ttacttccgg caatctcagc caggttattg aggaaaagtc tgtagtcggt 120
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cagatcgcag agctcaaggc cgctggcgca tctgttgacc aggctgttta cgccatgagc 240
atcgacgacg ttcgcaatgc ttgtgatctg ttcaccggca tcttcgagtc ctccaacggc 300
tacgacggcc gcgtgtccat cgaggttgac ccacgtatct ctgctgaccg cgacgcaacc 360
ctggctcagg ccaaggagct gtgggcaaag gttgatcgtc caaacgtcat gatcaagatc 420
cctgcaaccc caggttcttt gccagcaatc accgacgctt tggctgaggg catcagcgtt 480
aacgtcacct tgatcttctc cgttgctcgc taccgcgagg tcatcgctgc gttcatcgag 540
ggcatcaagc aggctgctgc aaacggccac gacgtctcca agatccactc tgtggcttcc 600
ttcttcgtct cccgcgtcga cgttgagatc gacaagcgcc tcgaggcaat cggatccgat 660
gaggctttgg ctctgcgcgg caaggcaggc gttgccaacg ctcagcgcgc ttacgctgtg 720
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ggcaacctgc acggtgacac cctgtccaac tccgcggcag aagctgacgc tgtgttctcc 960
cagcttgagg ctctgggcgt tgacttggca gatgtcttcc aggtcctgga gaccgagggt 1020
gtggacaagt tcgttgcttc ttggagcgaa ctgcttgagt ccatggaagc tcgcctgaag 1080
1080
<210> 68
<211> 360
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 68
Met Ser His Ile Asp Asp Leu Ala Gln Leu Gly Thr Ser Thr Trp Leu
1 5 10 15
Asp Asp Leu Ser Arg Glu Arg Ile Thr Ser Gly Asn Leu Ser Gln Val
20 25 30
Ile Glu Glu Lys Ser Val Val Gly Val Thr Thr Asn Pro Ala Ile Phe
35 40 45
Ala Ala Ala Met Ser Lys Gly Asp Ser Tyr Asp Ala Gln Ile Ala Glu
50 55 60
Leu Lys Ala Ala Gly Ala Ser Val Asp Gln Ala Val Tyr Ala Met Ser
65 70 75 80
Ile Asp Asp Val Arg Asn Ala Cys Asp Leu Phe Thr Gly Ile Phe Glu
85 90 95
Ser Ser Asn Gly Tyr Asp Gly Arg Val Ser Ile Glu Val Asp Pro Arg
100 105 110
Ile Ser Ala Asp Arg Asp Ala Thr Leu Ala Gln Ala Lys Glu Leu Trp
115 120 125
Ala Lys Val Asp Arg Pro Asn Val Met Ile Lys Ile Pro Ala Thr Pro
130 135 140
Gly Ser Leu Pro Ala Ile Thr Asp Ala Leu Ala Glu Gly Ile Ser Val
145 150 155 160
Asn Val Thr Leu Ile Phe Ser Val Ala Arg Tyr Arg Glu Val Ile Ala
165 170 175
Ala Phe Ile Glu Gly Ile Lys Gln Ala Ala Ala Asn Gly His Asp Val
180 185 190
Ser Lys Ile His Ser Val Ala Ser Phe Phe Val Ser Arg Val Asp Val
195 200 205
Glu Ile Asp Lys Arg Leu Glu Ala Ile Gly Ser Asp Glu Ala Leu Ala
210 215 220
Leu Arg Gly Lys Ala Gly Val Ala Asn Ala Gln Arg Ala Tyr Ala Val
225 230 235 240
Tyr Lys Glu Leu Phe Asp Ala Ala Glu Leu Pro Glu Gly Ala Asn Thr
245 250 255
Gln Arg Pro Leu Trp Ala Ser Thr Gly Val Lys Asn Pro Ala Tyr Ala
260 265 270
Ala Thr Leu Tyr Val Ser Glu Leu Ala Gly Pro Asn Thr Val Asn Thr
275 280 285
Met Pro Glu Gly Thr Ile Asp Ala Val Leu Glu Gln Gly Asn Leu His
290 295 300
Gly Asp Thr Leu Ser Asn Ser Ala Ala Glu Ala Asp Ala Val Phe Ser
305 310 315 320
Gln Leu Glu Ala Leu Gly Val Asp Leu Ala Asp Val Phe Gln Val Leu
325 330 335
Glu Thr Glu Gly Val Asp Lys Phe Val Ala Ser Trp Ser Glu Leu Leu
340 345 350
Glu Ser Met Glu Ala Arg Leu Lys
355 360
<210> 69
<211> 2100
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 69
ttgaccacct tgacgctgtc acctgaactt caggcgctca ctgtacgcaa ttacccctct 60
gattggtccg atgtggacac caaggctgta gacactgttc gtgtcctcgc tgcagacgct 120
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ggttccgctg acctcgcagg ttccaacaac accgtgatca agggctcccc ttccttcggc 1260
cctgagtcca tctccaccga gacctggtct gctgagcctt acggccgtaa cctgcacttc 1320
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tccaaggaaa ccccagatgt gatcctcatg ggctccggct ccgaggttca gcttgcagtt 1800
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cagggccgtg ctgtctccct tgagcacttc ggtgcttctg cggattacca gaccctgttt 2040
gagaagttcg gcatcaccac cgatgcagtc gtggcagcgg ccaaggactc cattaacggt 2100
2100
<210> 70
<211> 700
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 70
Met Thr Thr Leu Thr Leu Ser Pro Glu Leu Gln Ala Leu Thr Val Arg
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Asn Tyr Pro Ser Asp Trp Ser Asp Val Asp Thr Lys Ala Val Asp Thr
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Val Arg Val Leu Ala Ala Asp Ala Val Glu Asn Cys Gly Ser Gly His
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Arg Phe Val Leu Ser Cys Gly His Ser Ser Leu Thr Gln Tyr Ile Gln
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Leu Tyr Leu Gly Gly Phe Gly Leu Glu Met Asp Asp Leu Lys Ala Leu
100 105 110
Arg Thr Trp Asp Ser Leu Thr Pro Gly His Pro Glu Tyr Arg His Thr
115 120 125
Lys Gly Val Glu Ile Thr Thr Gly Pro Leu Gly Gln Gly Leu Ala Ser
130 135 140
Ala Val Gly Met Ala Met Ala Ala Arg Arg Glu Arg Gly Leu Phe Asp
145 150 155 160
Pro Thr Ala Ala Glu Gly Glu Ser Pro Phe Asp His His Ile Tyr Val
165 170 175
Ile Ala Ser Asp Gly Asp Leu Gln Glu Gly Val Thr Ser Glu Ala Ser
180 185 190
Ser Ile Ala Gly Thr Gln Gln Leu Gly Asn Leu Ile Val Phe Trp Asp
195 200 205
Asp Asn Arg Ile Ser Ile Glu Asp Asn Thr Glu Ile Ala Phe Asn Glu
210 215 220
Asp Val Val Ala Arg Tyr Lys Ala Tyr Gly Trp Gln Thr Ile Glu Val
225 230 235 240
Glu Ala Gly Glu Asp Val Ala Ala Ile Glu Ala Ala Val Ala Glu Ala
245 250 255
Lys Lys Asp Thr Lys Arg Pro Thr Phe Ile Arg Val Arg Thr Ile Ile
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Gly Phe Pro Ala Pro Thr Met Met Asn Thr Gly Ala Val His Gly Ala
275 280 285
Ala Leu Gly Ala Ala Glu Val Ala Ala Thr Lys Thr Glu Leu Gly Phe
290 295 300
Asp Pro Glu Ala His Phe Ala Ile Asp Asp Glu Val Ile Ala His Thr
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Arg Ser Leu Ala Glu Arg Ala Ala Gln Lys Lys Ala Ala Trp Gln Val
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Lys Phe Asp Glu Trp Ala Ala Ala Asn Pro Glu Asn Lys Ala Leu Phe
340 345 350
Asp Arg Leu Asn Ser Arg Glu Leu Pro Ala Gly Tyr Ala Asp Glu Leu
355 360 365
Pro Thr Trp Asp Ala Asp Glu Lys Gly Val Ala Thr Arg Lys Ala Ser
370 375 380
Glu Ala Ala Leu Gln Ala Leu Gly Lys Thr Leu Pro Glu Leu Trp Gly
385 390 395 400
Gly Ser Ala Asp Leu Ala Gly Ser Asn Asn Thr Val Ile Lys Gly Ser
405 410 415
Pro Ser Phe Gly Pro Glu Ser Ile Ser Thr Glu Thr Trp Ser Ala Glu
420 425 430
Pro Tyr Gly Arg Asn Leu His Phe Gly Ile Arg Glu His Ala Met Gly
435 440 445
Ser Ile Leu Asn Gly Ile Ser Leu His Gly Gly Thr Arg Pro Tyr Gly
450 455 460
Gly Thr Phe Leu Ile Phe Ser Asp Tyr Met Arg Pro Ala Val Arg Leu
465 470 475 480
Ala Ala Leu Met Glu Thr Asp Ala Tyr Tyr Val Trp Thr His Asp Ser
485 490 495
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Gly Thr Lys Glu Lys Ala Ala Glu Gly Val Arg Arg Gly Gly Tyr Val
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Leu Val Glu Gly Ser Lys Glu Thr Pro Asp Val Ile Leu Met Gly Ser
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Gly Ser Glu Val Gln Leu Ala Val Asn Ala Ala Lys Ala Leu Glu Ala
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Glu Gly Val Ala Ala Arg Val Val Ser Val Pro Cys Met Asp Trp Phe
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Gln Glu Gln Asp Ala Glu Tyr Ile Glu Ser Val Leu Pro Ala Ala Val
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Phe Leu Gly Thr Gln Gly Arg Ala Val Ser Leu Glu His Phe Gly Ala
660 665 670
Ser Ala Asp Tyr Gln Thr Leu Phe Glu Lys Phe Gly Ile Thr Thr Asp
675 680 685
Ala Val Val Ala Ala Ala Lys Asp Ser Ile Asn Gly
690 695 700
<210> 71
<211> 705
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 71
gtggagattc gttggttgga aggctttatc gcggtcgcgg aagaattgca ctttagtaat 60
gctgcgattc gtttggggat gccgcaatcg ccgttgagtc agttgatccg gcggttggag 120
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gcgttggata ttacgttgat gggtttgccc attgaggatc cagagattga gactcggctg 480
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<210> 72
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<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 72
Met Glu Ile Arg Trp Leu Glu Gly Phe Ile Ala Val Ala Glu Glu Leu
1 5 10 15
His Phe Ser Asn Ala Ala Ile Arg Leu Gly Met Pro Gln Ser Pro Leu
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Ser Gln Leu Ile Arg Arg Leu Glu Ser Glu Leu Gly Gln Lys Leu Phe
35 40 45
Asp Arg Ser Thr Arg Ser Val Glu Leu Thr Ala Ala Gly Arg Ala Phe
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Leu Pro His Ala Arg Gly Ile Val Ala Ser Ala Ala Val Ala Arg Glu
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Ala Val Asn Ala Ala Glu Gly Glu Ile Val Gly Val Val Arg Ile Gly
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Val His Lys Arg Leu Pro Asn Val Glu Leu Glu Leu Val Gly Gln Lys
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Leu Thr Arg Glu Ala Val Ser Leu Leu Arg Leu Gly Ala Leu Asp Ile
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Thr Leu Met Gly Leu Pro Ile Glu Asp Pro Glu Ile Glu Thr Arg Leu
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Ile Ser Leu Glu Glu Phe Cys Val Val Leu Pro Lys Asp His Arg Leu
165 170 175
Ala Gly Glu Gly Val Val Asp Leu Val Asp Leu Ala Lys Asp Gly Phe
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Val Thr Thr Pro Glu Phe Ala Gly Ser Val Phe Arg Asn Ser Thr Phe
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Gln Leu Cys Ala Glu Ala Gly Phe Val Pro Arg Ile Ser Gln Gln Val
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Asn Asp Pro Tyr Met Ala Leu Leu Leu Ala Arg
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<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 73
atggcatttc cgcttctagc ggttgctggc acagttgccc ccgttgcagc aggatgggca 60
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<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 74
Met Ala Phe Pro Leu Leu Ala Val Ala Gly Thr Val Ala Pro Val Ala
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Leu Gly Ala Gly Leu Ala Gly Ala Ala Thr Gly Ala Gly Leu Ala Tyr
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Ser Asp Phe Glu Asp Gly Gln Ser Leu Ser Ser Lys Ala Arg Asn Met
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Val Gly Lys Gly Leu Ala Gly Ala Gly Ala Gly Val Phe Thr Lys Leu
100 105 110
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Tyr Ser Ala Ile Ala Gly Gly Leu Gly Ser Tyr Leu Lys Asp Gly Gly
130 135 140
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Ala Asp Ser Leu Ser Gly Ala Ile Gln Gly Gly Gly Leu Gly Tyr Ser
180 185 190
Thr Leu Gly Gly Val Thr Gly Ala Gly Ile Gly Gly Ala Thr Gly Gly
195 200 205
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Asn Ala Gly Ala Ser Ala Ser Gly Phe Ser Ala Asn Gln Val Asn Ser
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Asp Lys Ser Tyr Asp Gln Gly Tyr Glu Ala
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<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 75
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ggacgagaaa tctacggttc tcacgcgttg atgactgttg gttccattcc aaacacggca 840
gatcttggcc tggagaacat cggtgttgag ctggcaccat ccggccatat caaggttgac 900
cgngtctccc gcaccaacat ccccggtgtg tacgcagcag gtgactgtac tgacctattc 960
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gcagcagtag gtatcaccca tgcacaagtt gattccggcg aagtgtctgc tcgcgtgatt 1140
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<211> 469
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<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 76
Met Ala Lys Arg Ile Val Ile Ile Gly Gly Gly Pro Ala Gly Tyr Glu
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Ala Ala Leu Ala Gly Ala Lys Tyr Gly Ala Glu Val Thr Val Ile Glu
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Lys Ser Phe Ile Ala Gly Thr Gly Ile Lys Thr Asp Leu Arg Arg Ala
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Asp Asp Met Gly Leu Asn Arg Gly Leu Gly Lys Ala His Leu Glu Ile
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180 185 190
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195 200 205
Ala Ser Arg Asp Arg Ile Leu Pro His Asp Asp Ala Asp Ala Ala Asp
210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
Thr Asn Ile Pro Gly Val Tyr Ala Ala Gly Asp Cys Thr Asp Leu Phe
305 310 315 320
Pro Leu Ala Ser Val Ala Ala Met Gln Gly Arg Ile Ala Met Tyr His
325 330 335
Ala Leu Gly Glu Gly Val Ser Pro Ile Arg Leu Lys Thr Val Ala Thr
340 345 350
Ala Val Phe Thr Arg Pro Glu Ile Ala Ala Val Gly Ile Thr His Ala
355 360 365
Gln Val Asp Ser Gly Glu Val Ser Ala Arg Val Ile Val Leu Pro Leu
370 375 380
Ala Thr Asn Pro Arg Ala Lys Met Arg Ser Leu Arg His Gly Phe Val
385 390 395 400
Lys Leu Phe Cys Arg Arg Asn Ser Gly Leu Ile Ile Gly Gly Val Val
405 410 415
Val Ala Pro Thr Ala Ser Glu Leu Ile Leu Pro Ile Ala Val Ala Val
420 425 430
Thr Asn Arg Leu Thr Val Ala Asp Leu Ala Asp Thr Phe Ala Val Tyr
435 440 445
Pro Ser Leu Ser Gly Ser Ile Thr Glu Ala Ala Arg Gln Leu Val Gln
450 455 460
His Asp Asp Leu Gly
465
<210> 77
<211> 792
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 77
atggtcagcc aaacggaaag acagcatgca attgcttctt tactggcacc aactggtgcg 60
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atcattgggt ccacggcagt agacatgatt tcgcagttgc gcgctgatat cgccttcgtg 540
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gtggtaaccc ca 792
<210> 78
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<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 78
Met Val Ser Gln Thr Glu Arg Gln His Ala Ile Ala Ser Leu Leu Ala
1 5 10 15
Pro Thr Gly Ala Val Ser Val Gly Asp Leu Ala Glu His Phe His Val
20 25 30
Thr Thr Glu Thr Val Arg Arg Asp Leu Arg Ile Met Glu Ser Leu Gly
35 40 45
Leu Leu Gln Arg Val His Gly Gly Ala Ile Ser Pro Glu Pro Met Gly
50 55 60
Thr Ser Pro Pro Arg Leu Lys Pro Ala Leu Gly Lys Gly Met Pro Pro
65 70 75 80
Glu Pro Arg Val Leu Glu Leu Ala Glu Thr Ala Val Ser Leu Ile Thr
85 90 95
Pro Leu Ala Arg Ser Ile Phe Leu Asp Ser Gly Leu Ala Cys Thr Ala
100 105 110
Ile Ala Thr Val Leu Gly Asp Pro Pro Glu Asp Ala Arg Trp Thr Val
115 120 125
Val Thr Ser Ser Pro Gly Ala Val Ile Ala Leu Ser Ala Thr Asp Ala
130 135 140
Thr Ser Thr Val Val Leu His Gly Gln Val His Gly Asn Cys Ser Ser
145 150 155 160
Ile Ile Gly Ser Thr Ala Val Asp Met Ile Ser Gln Leu Arg Ala Asp
165 170 175
Ile Ala Phe Val Glu Val Asp Ala Ile Gln Ser Asp Thr Ser Leu Cys
180 185 190
Thr Phe Phe Pro Glu Thr Ile Pro Ile Lys Gln Ala Met Ile Lys Asn
195 200 205
Ala Ala Phe Thr Val Ala Val Leu Ser Pro Arg Ser Pro Gln Asp Gln
210 215 220
Glu Leu Gln Leu Leu Lys His Pro Phe Ser Thr Leu Ala Asp Phe Asp
225 230 235 240
Ala Leu Val Thr Asp Asp His Thr Leu Asp Phe Pro Val Leu Pro Asp
245 250 255
His Asn Phe Gln Val Val Thr Pro
260
<210> 79
<211> 3420
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 79
gtgtcgactc acacatcttc aacgcttcca gcattcaaaa agatcttggt agcaaaccgc 60
ggcgaaatcg cggtccgtgc tttccgtgca gcactcgaaa ccggtgcagc cacggtagct 120
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attggtaccg aaggctcacc agtcaaggcg tacctggaca tcgatgaaat tatcggtgca 240
gctaaaaaag ttaaagcaga tgccatttac ccgggatacg gcttcctgtc tgaaaatgcc 300
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cttgatctca ccggtgataa gtctcgcgcg gtaaccgccg cgaagaaggc tggtctgcca 420
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gttgcttcac ctgatgagct tcgcaaatta gcaacagaag catctcgtga agctgaagcg 600
gctttcggcg atggcgcggt atatgtcgaa cgtgctgtga ttaaccctca gcatattgaa 660
gtgcagatcc ttggcgatca cactggagaa gttgtacacc tttatgaacg tgactgctca 720
ctgcagcgtc gtcaccaaaa agttgtcgaa attgcgccag cacagcattt ggatccagaa 780
ctgcgtgatc gcatttgtgc ggatgcagta aagttctgcc gctccattgg ttaccagggc 840
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gcgcagatgc gcttggctgc tggtgcaacc ttgaaggaat tgggtctgac ccaagataag 1020
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ttccgcccag ataccggaac tatcaccgcg taccgctcac caggcggagc tggcgttcgt 1140
cttgacggtg cagctcagct cggtggcgaa atcaccgcac actttgactc catgctggtg 1200
aaaatgacct gccgtggttc cgactttgaa actgctgttg ctcgtgcaca gcgcgcgttg 1260
gctgagttca ccgtgtctgg tgttgcaacc aacattggtt tcttgcgtgc gttgctgcgg 1320
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cttcaggctc cacctgctga tgatgagcag ggacgcatcc tggattactt ggcagatgtc 1440
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cctaacatca aggatctgcc actgccacgc ggttcccgtg accgcctgaa gcagcttggc 1560
ccagccgcgt ttgctcgtga tctccgtgag caggacgcac tggcagttac tgataccacc 1620
ttccgcgatg cacaccagtc tttgcttgcg acccgagtcc gctcattcgc actgaagcct 1680
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gcgacctacg atgtggcgat gcgtttcctc tttgaggatc cgtgggacag gctcgacgag 1800
ctgcgcgagg cgatgccgaa tgtaaacatt cagatgctgc ttcgcggccg caacaccgtg 1860
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ggcgtggaca tcttccgcat cttcgacgcg cttaacgacg tctcccagat gcgtccagca 1980
atcgacgcag tcctggagac caacaccgcg gtagccgagg tggctatggc ttattctggt 2040
gatctctctg atccaaatga aaagctctac accctggatt actacctaaa gatggcagag 2100
gagatcgtca agtctggcgc tcacatcttg gccattaagg atatggctgg tctgcttcgc 2160
ccagctgcgg taaccaagct ggtcaccgca ctgcgccgtg aattcgatct gccagtgcac 2220
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gctgtttctg acctcgagcc gtactgggaa gcagtgcgcg gactgtacct gccatttgag 2460
tctggaaccc caggcccaac cggtcgcgtc taccgccacg aaatcccagg cggacagttg 2520
tccaacctgc gtgcacaggc caccgcactg ggccttgcgg atcgtttcga actcatcgaa 2580
gacaactacg cagccgttaa tgagatgctg ggacgcccaa ccaaggtcac cccatcctcc 2640
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gctgccgatc cacaaaagta cgacatccca gactctgtca tcgcgttcct gcgcggcgag 2760
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tccgaaggca aggcacctct gacggaagtt cctgaggaag agcaggcgca cctcgacgct 2880
gatgattcca aggaacgtcg caatagcctc aaccgcctgc tgttcccgaa gccaaccgaa 2940
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ttctacggcc tggtcgaagg ccgcgagact ttgatccgcc tgccagatgt gcgcacccca 3060
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3420
<210> 80
<211> 1140
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 80
Met Ser Thr His Thr Ser Ser Thr Leu Pro Ala Phe Lys Lys Ile Leu
1 5 10 15
Val Ala Asn Arg Gly Glu Ile Ala Val Arg Ala Phe Arg Ala Ala Leu
20 25 30
Glu Thr Gly Ala Ala Thr Val Ala Ile Tyr Pro Arg Glu Asp Arg Gly
35 40 45
Ser Phe His Arg Ser Phe Ala Ser Glu Ala Val Arg Ile Gly Thr Glu
50 55 60
Gly Ser Pro Val Lys Ala Tyr Leu Asp Ile Asp Glu Ile Ile Gly Ala
65 70 75 80
Ala Lys Lys Val Lys Ala Asp Ala Ile Tyr Pro Gly Tyr Gly Phe Leu
85 90 95
Ser Glu Asn Ala Gln Leu Ala Arg Glu Cys Ala Glu Asn Gly Ile Thr
100 105 110
Phe Ile Gly Pro Thr Pro Glu Val Leu Asp Leu Thr Gly Asp Lys Ser
115 120 125
Arg Ala Val Thr Ala Ala Lys Lys Ala Gly Leu Pro Val Leu Ala Glu
130 135 140
Ser Thr Pro Ser Lys Asn Ile Asp Glu Ile Val Lys Ser Ala Glu Gly
145 150 155 160
Gln Thr Tyr Pro Ile Phe Val Lys Ala Val Ala Gly Gly Gly Gly Arg
165 170 175
Gly Met Arg Phe Val Ala Ser Pro Asp Glu Leu Arg Lys Leu Ala Thr
180 185 190
Glu Ala Ser Arg Glu Ala Glu Ala Ala Phe Gly Asp Gly Ala Val Tyr
195 200 205
Val Glu Arg Ala Val Ile Asn Pro Gln His Ile Glu Val Gln Ile Leu
210 215 220
Gly Asp His Thr Gly Glu Val Val His Leu Tyr Glu Arg Asp Cys Ser
225 230 235 240
Leu Gln Arg Arg His Gln Lys Val Val Glu Ile Ala Pro Ala Gln His
245 250 255
Leu Asp Pro Glu Leu Arg Asp Arg Ile Cys Ala Asp Ala Val Lys Phe
260 265 270
Cys Arg Ser Ile Gly Tyr Gln Gly Ala Gly Thr Val Glu Phe Leu Val
275 280 285
Asp Glu Lys Gly Asn His Val Phe Ile Glu Met Asn Pro Arg Ile Gln
290 295 300
Val Glu His Thr Val Thr Glu Glu Val Thr Glu Val Asp Leu Val Lys
305 310 315 320
Ala Gln Met Arg Leu Ala Ala Gly Ala Thr Leu Lys Glu Leu Gly Leu
325 330 335
Thr Gln Asp Lys Ile Lys Thr His Gly Ala Ala Leu Gln Cys Arg Ile
340 345 350
Thr Thr Glu Asp Pro Asn Asn Gly Phe Arg Pro Asp Thr Gly Thr Ile
355 360 365
Thr Ala Tyr Arg Ser Pro Gly Gly Ala Gly Val Arg Leu Asp Gly Ala
370 375 380
Ala Gln Leu Gly Gly Glu Ile Thr Ala His Phe Asp Ser Met Leu Val
385 390 395 400
Lys Met Thr Cys Arg Gly Ser Asp Phe Glu Thr Ala Val Ala Arg Ala
405 410 415
Gln Arg Ala Leu Ala Glu Phe Thr Val Ser Gly Val Ala Thr Asn Ile
420 425 430
Gly Phe Leu Arg Ala Leu Leu Arg Glu Glu Asp Phe Thr Ser Lys Arg
435 440 445
Ile Ala Thr Gly Phe Ile Ala Asp His Pro His Leu Leu Gln Ala Pro
450 455 460
Pro Ala Asp Asp Glu Gln Gly Arg Ile Leu Asp Tyr Leu Ala Asp Val
465 470 475 480
Thr Val Asn Lys Pro His Gly Val Arg Pro Lys Asp Val Ala Ala Pro
485 490 495
Ile Asp Lys Leu Pro Asn Ile Lys Asp Leu Pro Leu Pro Arg Gly Ser
500 505 510
Arg Asp Arg Leu Lys Gln Leu Gly Pro Ala Ala Phe Ala Arg Asp Leu
515 520 525
Arg Glu Gln Asp Ala Leu Ala Val Thr Asp Thr Thr Phe Arg Asp Ala
530 535 540
His Gln Ser Leu Leu Ala Thr Arg Val Arg Ser Phe Ala Leu Lys Pro
545 550 555 560
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Ala Trp Gly Gly Ala Thr Tyr Asp Val Ala Met Arg Phe Leu Phe Glu
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Tyr Pro Asp Ser Val Cys Arg Ala Phe Val Lys Glu Ala Ala Ser Ser
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Gly Val Asp Ile Phe Arg Ile Phe Asp Ala Leu Asn Asp Val Ser Gln
645 650 655
Met Arg Pro Ala Ile Asp Ala Val Leu Glu Thr Asn Thr Ala Val Ala
660 665 670
Glu Val Ala Met Ala Tyr Ser Gly Asp Leu Ser Asp Pro Asn Glu Lys
675 680 685
Leu Tyr Thr Leu Asp Tyr Tyr Leu Lys Met Ala Glu Glu Ile Val Lys
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Ser Gly Ala His Ile Leu Ala Ile Lys Asp Met Ala Gly Leu Leu Arg
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Pro Ala Ala Val Thr Lys Leu Val Thr Ala Leu Arg Arg Glu Phe Asp
725 730 735
Leu Pro Val His Val His Thr His Asp Thr Ala Gly Gly Gln Leu Ala
740 745 750
Thr Tyr Phe Ala Ala Ala Gln Ala Gly Ala Asp Ala Val Asp Gly Ala
755 760 765
Ser Ala Pro Leu Ser Gly Thr Thr Ser Gln Pro Ser Leu Ser Ala Ile
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Val Ala Ala Phe Ala His Thr Arg Arg Asp Thr Gly Leu Ser Leu Glu
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Ala Val Ser Asp Leu Glu Pro Tyr Trp Glu Ala Val Arg Gly Leu Tyr
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Leu Pro Phe Glu Ser Gly Thr Pro Gly Pro Thr Gly Arg Val Tyr Arg
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His Glu Ile Pro Gly Gly Gln Leu Ser Asn Leu Arg Ala Gln Ala Thr
835 840 845
Ala Leu Gly Leu Ala Asp Arg Phe Glu Leu Ile Glu Asp Asn Tyr Ala
850 855 860
Ala Val Asn Glu Met Leu Gly Arg Pro Thr Lys Val Thr Pro Ser Ser
865 870 875 880
Lys Val Val Gly Asp Leu Ala Leu His Leu Val Gly Ala Gly Val Asp
885 890 895
Pro Ala Asp Phe Ala Ala Asp Pro Gln Lys Tyr Asp Ile Pro Asp Ser
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Val Ile Ala Phe Leu Arg Gly Glu Leu Gly Asn Pro Pro Gly Gly Trp
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Gly His Val Ala Ala Pro Phe Ala Gly Val Val Thr Val Thr Val Ala
1075 1080 1085
Glu Gly Asp Glu Val Lys Ala Gly Asp Ala Val Ala Ile Ile Glu Ala
1090 1095 1100
Met Lys Met Glu Ala Thr Ile Thr Ala Ser Val Asp Gly Lys Ile Asp
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Arg Val Val Val Pro Ala Ala Thr Lys Val Glu Gly Gly Asp Leu Ile
1125 1130 1135
Val Val Val Ser
1140
<210> 81
<211> 366
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 81
gtgtttggcg atgtgatcag actaagtgat caccgtcacc agcaaaaggg gtttgcgaac 60
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<210> 82
<211> 122
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 82
Met Phe Gly Asp Val Ile Arg Leu Ser Asp His Arg His Gln Gln Lys
1 5 10 15
Gly Phe Ala Asn Phe Thr Lys Ser Leu Pro Pro Pro Asn Pro Asp Phe
20 25 30
Tyr Leu Gly His Thr Phe Glu Thr Tyr Gly Thr Leu Arg Cys Leu His
35 40 45
Phe Pro Ile Ser Glu His Leu Pro Ser Thr Ser Val Leu Ala Thr Pro
50 55 60
Pro Pro Thr Phe Ser Ala Lys Pro Glu Leu Cys Lys Leu His Asn Arg
65 70 75 80
Gly Asp His Pro Arg Thr Lys Leu Lys Asn Pro Asn Arg Leu Thr His
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Gln Cys Pro Met Glu Gln Cys Val Asn His Ala Thr Thr Gln Thr Asp
100 105 110
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115 120
<210> 83
<211> 2829
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 83
ttggagctca ctgtgactga aagcaagaac tccttcaatg ctaagagcac ccttgaagtt 60
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atgctgatcc ctcgcgttgt tggcttcaag ttgaccggcg agatcccagt aggcgttacc 780
gcaactgacg ttgtgctgac catcaccgaa atgctgcgcg accacggcgt cgtccagaag 840
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ggcaacatgt ccccagagtt cggctccacc tgtgcgatgt tcccaatcga cgaggagacc 960
accaagtacc tgcgcctcac cggccgccca gaagagcagg ttgcactggt cgaggcttac 1020
gccaaggcgc agggcatgtg gctcgacgag gacaccgttg aagctgagta ctccgagtac 1080
ctcgagctgg acctgtccac cgttgttcct tccatcgctg gccctaagcg cccacaggac 1140
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gacggctact accagcgcgc agacctctgg aaggaccttg aggccatggg cttctacctc 1620
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<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 84
Met Glu Leu Thr Val Thr Glu Ser Lys Asn Ser Phe Asn Ala Lys Ser
1 5 10 15
Thr Leu Glu Val Gly Asp Lys Ser Tyr Asp Tyr Phe Ala Leu Ser Ala
20 25 30
Val Pro Gly Met Glu Lys Leu Pro Tyr Ser Leu Lys Val Leu Gly Glu
35 40 45
Asn Leu Leu Arg Thr Glu Asp Gly Ala Asn Ile Thr Asn Glu His Ile
50 55 60
Glu Ala Ile Ala Asn Trp Asp Ala Ser Ser Asp Pro Ser Ile Glu Ile
65 70 75 80
Gln Phe Thr Pro Ala Arg Val Leu Met Gln Asp Phe Thr Gly Val Pro
85 90 95
Cys Val Val Asp Leu Ala Thr Met Arg Glu Ala Val Ala Ala Leu Gly
100 105 110
Gly Asp Pro Asn Asp Val Asn Pro Leu Asn Pro Ala Glu Met Val Ile
115 120 125
Asp His Ser Val Ile Val Glu Ala Phe Gly Arg Pro Asp Ala Leu Ala
130 135 140
Lys Asn Val Glu Ile Glu Tyr Glu Arg Asn Glu Glu Arg Tyr Gln Phe
145 150 155 160
Leu Arg Trp Gly Ser Glu Ser Phe Ser Asn Phe Arg Val Val Pro Pro
165 170 175
Gly Thr Gly Ile Val His Gln Val Asn Ile Glu Tyr Leu Ala Arg Val
180 185 190
Val Phe Asp Asn Glu Gly Leu Ala Tyr Pro Asp Thr Cys Ile Gly Thr
195 200 205
Asp Ser His Thr Thr Met Glu Asn Gly Leu Gly Ile Leu Gly Trp Gly
210 215 220
Val Gly Gly Ile Glu Ala Glu Ala Ala Met Leu Gly Gln Pro Val Ser
225 230 235 240
Met Leu Ile Pro Arg Val Val Gly Phe Lys Leu Thr Gly Glu Ile Pro
245 250 255
Val Gly Val Thr Ala Thr Asp Val Val Leu Thr Ile Thr Glu Met Leu
260 265 270
Arg Asp His Gly Val Val Gln Lys Phe Val Glu Phe Tyr Gly Ser Gly
275 280 285
Val Lys Ala Val Pro Leu Ala Asn Arg Ala Thr Ile Gly Asn Met Ser
290 295 300
Pro Glu Phe Gly Ser Thr Cys Ala Met Phe Pro Ile Asp Glu Glu Thr
305 310 315 320
Thr Lys Tyr Leu Arg Leu Thr Gly Arg Pro Glu Glu Gln Val Ala Leu
325 330 335
Val Glu Ala Tyr Ala Lys Ala Gln Gly Met Trp Leu Asp Glu Asp Thr
340 345 350
Val Glu Ala Glu Tyr Ser Glu Tyr Leu Glu Leu Asp Leu Ser Thr Val
355 360 365
Val Pro Ser Ile Ala Gly Pro Lys Arg Pro Gln Asp Arg Ile Leu Leu
370 375 380
Ser Glu Ala Lys Glu Gln Phe Arg Lys Asp Leu Pro Thr Tyr Thr Asp
385 390 395 400
Asp Ala Val Ser Val Asp Thr Ser Ile Pro Ala Thr Arg Met Val Asn
405 410 415
Glu Gly Gly Gly Gln Pro Glu Gly Gly Val Glu Ala Asp Asn Tyr Asn
420 425 430
Ala Ser Trp Ala Gly Ser Gly Glu Ser Leu Ala Thr Gly Ala Glu Gly
435 440 445
Arg Pro Ser Lys Pro Val Thr Val Ala Ser Pro Gln Gly Gly Glu Tyr
450 455 460
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465 470 475 480
Asn Thr Ser Asn Pro Ser Val Met Ile Gly Ala Gly Leu Ile Ala Arg
485 490 495
Lys Ala Ala Glu Lys Gly Leu Lys Ser Lys Pro Trp Val Lys Thr Ile
500 505 510
Cys Ala Pro Gly Ser Gln Val Val Asp Gly Tyr Tyr Gln Arg Ala Asp
515 520 525
Leu Trp Lys Asp Leu Glu Ala Met Gly Phe Tyr Leu Ser Gly Phe Gly
530 535 540
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565 570 575
Asn Arg Asn Phe Glu Gly Arg Ile Ser Pro Asp Val Lys Met Asn Tyr
580 585 590
Leu Ala Ser Pro Ile Met Val Ile Ala Tyr Ala Ile Ala Gly Thr Met
595 600 605
Asp Phe Asp Phe Glu Asn Glu Ala Leu Gly Gln Asp Gln Asp Gly Asn
610 615 620
Asp Val Phe Leu Lys Asp Ile Trp Pro Ser Thr Glu Glu Ile Glu Asp
625 630 635 640
Thr Ile Gln Gln Ala Ile Ser Arg Glu Leu Tyr Glu Ala Asp Tyr Ala
645 650 655
Asp Val Phe Lys Gly Asp Lys Gln Trp Gln Glu Leu Asp Val Pro Thr
660 665 670
Gly Asp Thr Phe Glu Trp Asp Glu Asn Ser Thr Tyr Ile Arg Lys Ala
675 680 685
Pro Tyr Phe Asp Gly Met Pro Val Glu Pro Val Ala Val Thr Asp Ile
690 695 700
Gln Gly Ala Arg Val Leu Ala Lys Leu Gly Asp Ser Val Thr Thr Asp
705 710 715 720
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725 730 735
Tyr Leu Asp Glu His Gly Val Glu Arg His Asp Tyr Asn Ser Leu Gly
740 745 750
Ser Arg Arg Gly Asn His Glu Val Met Met Arg Gly Thr Phe Ala Asn
755 760 765
Ile Arg Leu Gln Asn Gln Leu Val Asp Ile Ala Gly Gly Tyr Thr Arg
770 775 780
Asp Phe Thr Gln Glu Gly Ala Pro Gln Ala Phe Ile Tyr Asp Ala Ser
785 790 795 800
Val Asn Tyr Lys Ala Ala Gly Ile Pro Leu Val Val Leu Gly Gly Lys
805 810 815
Glu Tyr Gly Thr Gly Ser Ser Arg Asp Trp Ala Ala Lys Gly Thr Asn
820 825 830
Leu Leu Gly Ile Arg Ala Val Ile Thr Glu Ser Phe Glu Arg Ile His
835 840 845
Arg Ser Asn Leu Ile Gly Met Gly Val Val Pro Leu Gln Phe Pro Ala
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Gly Glu Ser His Glu Ser Leu Gly Leu Asp Gly Thr Glu Thr Phe Asp
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Ile Thr Gly Leu Thr Ala Leu Asn Glu Gly Glu Thr Pro Lys Thr Val
885 890 895
Lys Val Thr Ala Thr Lys Glu Asn Gly Asp Val Val Glu Phe Asp Ala
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Val Val Arg Ile Asp Thr Pro Gly Glu Ala Asp Tyr Tyr Arg His Gly
915 920 925
Gly Ile Leu Gln Tyr Val Leu Arg Gln Met Ala Ala Ser Ser Lys
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<210> 85
<211> 1293
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 85
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tacatcgatg gcgatgcggg aatcctgcgt taccgcggct atgacatcgc tgatctggct 240
gagaatgcca ccttcaacga ggtttcttac ctacttatca acggtgagct accaacccca 300
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gataaggcaa ccgttcgcct catggcaaag gttccaatgc tggctgcgta cgcacaccgc 540
gcacgcaagg gtgctcctta catgtaccca gacaactccc tcaatgcgcg tgagaacttc 600
ctgcgcatga tgttcggtta cccaaccgag ccatacgaga tcgacccaat catggtcaag 660
gctctggaca agctgctcat cctgcacgct gaccacgagc agaactgctc cacctccacc 720
gttcgtatga tcggttccgc acaggccaac atgtttgtct ccatcgctgg tggcatcaac 780
gctctgtccg gcccactgca cggtggcgca aaccaggctg ttctggagat gctcgaagac 840
atcaagagca accacggtgg cgacgcaacc gagttcatga acaaggtcaa gaacaaggaa 900
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gcaatcgtca aggagaccgc acacgagatc ctcgagcacc tcggtggcga cgatcttctg 1020
gatctggcaa tcaagctgga agaaattgca ctggctgatg attacttcat ctcccgcaag 1080
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gaatcccgca agttggttcc tcgcgaggag cgc 1293
<210> 86
<211> 431
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 86
Met Ala Thr Asp Asn Asn Lys Ala Val Leu His Tyr Pro Gly Gly Glu
1 5 10 15
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20 25 30
Leu Gly Lys Met Leu Ser Glu Thr Gly Leu Ile Thr Phe Asp Pro Gly
35 40 45
Tyr Val Ser Thr Gly Ser Thr Glu Ser Lys Ile Thr Tyr Ile Asp Gly
50 55 60
Asp Ala Gly Ile Leu Arg Tyr Arg Gly Tyr Asp Ile Ala Asp Leu Ala
65 70 75 80
Glu Asn Ala Thr Phe Asn Glu Val Ser Tyr Leu Leu Ile Asn Gly Glu
85 90 95
Leu Pro Thr Pro Asp Glu Leu His Lys Phe Asn Asp Glu Ile Arg His
100 105 110
His Thr Leu Leu Asp Glu Asp Phe Lys Ser Gln Phe Asn Val Phe Pro
115 120 125
Arg Asp Ala His Pro Met Ala Thr Leu Ala Ser Ser Val Asn Ile Leu
130 135 140
Ser Thr Tyr Tyr Gln Asp Gln Leu Asn Pro Leu Asp Glu Ala Gln Leu
145 150 155 160
Asp Lys Ala Thr Val Arg Leu Met Ala Lys Val Pro Met Leu Ala Ala
165 170 175
Tyr Ala His Arg Ala Arg Lys Gly Ala Pro Tyr Met Tyr Pro Asp Asn
180 185 190
Ser Leu Asn Ala Arg Glu Asn Phe Leu Arg Met Met Phe Gly Tyr Pro
195 200 205
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210 215 220
Leu Leu Ile Leu His Ala Asp His Glu Gln Asn Cys Ser Thr Ser Thr
225 230 235 240
Val Arg Met Ile Gly Ser Ala Gln Ala Asn Met Phe Val Ser Ile Ala
245 250 255
Gly Gly Ile Asn Ala Leu Ser Gly Pro Leu His Gly Gly Ala Asn Gln
260 265 270
Ala Val Leu Glu Met Leu Glu Asp Ile Lys Ser Asn His Gly Gly Asp
275 280 285
Ala Thr Glu Phe Met Asn Lys Val Lys Asn Lys Glu Asp Gly Val Arg
290 295 300
Leu Met Gly Phe Gly His Arg Val Tyr Lys Asn Tyr Asp Pro Arg Ala
305 310 315 320
Ala Ile Val Lys Glu Thr Ala His Glu Ile Leu Glu His Leu Gly Gly
325 330 335
Asp Asp Leu Leu Asp Leu Ala Ile Lys Leu Glu Glu Ile Ala Leu Ala
340 345 350
Asp Asp Tyr Phe Ile Ser Arg Lys Leu Tyr Pro Asn Val Asp Phe Tyr
355 360 365
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370 375 380
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385 390 395 400
Glu Gln Leu Gly Ala Ala Gly Asn Lys Ile Asn Arg Pro Arg Gln Val
405 410 415
Tyr Thr Gly Asn Glu Ser Arg Lys Leu Val Pro Arg Glu Glu Arg
420 425 430
<210> 87
<211> 1311
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 87
atgtttgaaa gggatatcgt ggctactgat aacaacaagg ctgtcctgca ctaccccggt 60
ggcgagttcg aaatggacat catcgaggct tctgagggta acaacggtgt tgtcctgggc 120
aagatgctgt ctgagactgg actgatcact tttgacccag gttatgtgag cactggctcc 180
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ctcgatgagg cacagcttga taaggcaacc gttcgcctca tggcaaaggt tccaatgctg 540
gctgcgtacg cacaccgcgc acgcaagggt gctccttaca tgtacccaga caactccctc 600
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<210> 88
<211> 437
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 88
Met Phe Glu Arg Asp Ile Val Ala Thr Asp Asn Asn Lys Ala Val Leu
1 5 10 15
His Tyr Pro Gly Gly Glu Phe Glu Met Asp Ile Ile Glu Ala Ser Glu
20 25 30
Gly Asn Asn Gly Val Val Leu Gly Lys Met Leu Ser Glu Thr Gly Leu
35 40 45
Ile Thr Phe Asp Pro Gly Tyr Val Ser Thr Gly Ser Thr Glu Ser Lys
50 55 60
Ile Thr Tyr Ile Asp Gly Asp Ala Gly Ile Leu Arg Tyr Arg Gly Tyr
65 70 75 80
Asp Ile Ala Asp Leu Ala Glu Asn Ala Thr Phe Asn Glu Val Ser Tyr
85 90 95
Leu Leu Ile Asn Gly Glu Leu Pro Thr Pro Asp Glu Leu His Lys Phe
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Asn Asp Glu Ile Arg His His Thr Leu Leu Asp Glu Asp Phe Lys Ser
115 120 125
Gln Phe Asn Val Phe Pro Arg Asp Ala His Pro Met Ala Thr Leu Ala
130 135 140
Ser Ser Val Asn Ile Leu Ser Thr Tyr Tyr Gln Asp Gln Leu Asn Pro
145 150 155 160
Leu Asp Glu Ala Gln Leu Asp Lys Ala Thr Val Arg Leu Met Ala Lys
165 170 175
Val Pro Met Leu Ala Ala Tyr Ala His Arg Ala Arg Lys Gly Ala Pro
180 185 190
Tyr Met Tyr Pro Asp Asn Ser Leu Asn Ala Arg Glu Asn Phe Leu Arg
195 200 205
Met Met Phe Gly Tyr Pro Thr Glu Pro Tyr Glu Ile Asp Pro Ile Met
210 215 220
Val Lys Ala Leu Asp Lys Leu Leu Ile Leu His Ala Asp His Glu Gln
225 230 235 240
Asn Cys Ser Thr Ser Thr Val Arg Met Ile Gly Ser Ala Gln Ala Asn
245 250 255
Met Phe Val Ser Ile Ala Gly Gly Ile Asn Ala Leu Ser Gly Pro Leu
260 265 270
His Gly Gly Ala Asn Gln Ala Val Leu Glu Met Leu Glu Asp Ile Lys
275 280 285
Ser Asn His Gly Gly Asp Ala Thr Glu Phe Met Asn Lys Val Lys Asn
290 295 300
Lys Glu Asp Gly Val Arg Leu Met Gly Phe Gly His Arg Val Tyr Lys
305 310 315 320
Asn Tyr Asp Pro Arg Ala Ala Ile Val Lys Glu Thr Ala His Glu Ile
325 330 335
Leu Glu His Leu Gly Gly Asp Asp Leu Leu Asp Leu Ala Ile Lys Leu
340 345 350
Glu Glu Ile Ala Leu Ala Asp Asp Tyr Phe Ile Ser Arg Lys Leu Tyr
355 360 365
Pro Asn Val Asp Phe Tyr Thr Gly Leu Ile Tyr Arg Ala Met Gly Phe
370 375 380
Pro Thr Asp Phe Phe Thr Val Leu Phe Ala Ile Gly Arg Leu Pro Gly
385 390 395 400
Trp Ile Ala His Tyr Arg Glu Gln Leu Gly Ala Ala Gly Asn Lys Ile
405 410 415
Asn Arg Pro Arg Gln Val Tyr Thr Gly Asn Glu Ser Arg Lys Leu Val
420 425 430
Pro Arg Glu Glu Arg
435
<210> 89
<211> 3663
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 89
atgtctactt cagttacttc accagcccac aacaacgcac attcctccga atttttggat 60
gcgttggcaa accatgtgtt gatcggcgac ggcgccatgg gcacccagct ccaaggcttt 120
gacctggacg tggaaaagga tttccttgat ctggaggggt gtaatgagat tctcaacgac 180
acccgccctg atgtgttgag gcagattcac cgcgcctact ttgaggcggg agctgacttg 240
gttgagacca atacttttgg ttgcaacctg ccgaacttgg cggattatga catcgctgat 300
cgttgccgtg agcttgccta caagggcact gcagtggcta gggaagtggc tgatgagatg 360
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cttccatcgc tgggccatgc accgtatgca gatttgcgtg ggcactacaa ggaagcagcg 480
cttggcatca tcgacggtgg tggcgatgcc tttttgattg agactgctca ggacttgctt 540
caggtcaagg ctgcggttca cggcgttcaa gatgccatgg ctgaacttga tacattcttg 600
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ggtgccgcgt tgacagcgct gcagccactg ggtatcgaca tgattggtct gaactgcgcc 720
accggcccag atgagatgag cgagcacctg cgttacctgt ccaagcacgc cgatattcct 780
gtgtcggtga tgcctaacgc aggtcttcct gtcctgggta aaaacggtgc agaataccca 840
cttgaggctg aggatttggc gcaggcgctg gctggattcg tctccgaata tggcctgtcc 900
atggtgggtg gttgttgtgg caccacacct gagcacatcc gtgcggtccg cgatgcggtg 960
gttggtgttc cagagcagga aacctccaca ctgaccaaga tccctgcagg ccctgttgag 1020
caggcctccc gcgaggtgga gaaagaggac tccgtcgcgt cgctgtacac ctcggtgcca 1080
ttgtcccagg aaaccggcat ttccatgatc ggtgagcgca ccaactccaa cggttccaag 1140
gcattccgtg aggcaatgct gtctggcgat tgggaaaagt gtgtggatat tgccaagcag 1200
caaacccgcg atggtgcaca catgctggat ctttgtgtgg attacgtggg acgagacggc 1260
accgccgata tggcgacctt ggcagcactt cttgctacca gctccacttt gccaatcatg 1320
attgactcca ccgagccaga ggttattcgc acaggccttg agcacttggg tggacgaagc 1380
atcgttaact ccgtcaactt tgaagacggc gatggccctg agtcccgcta ccagcgcatc 1440
atgaaactgg taaagcagca cggtgcggcc gtggttgcgc tgaccattga tgaggaaggc 1500
caggcacgta ccgctgagca caaggtgcgc attgctaaac gactgattga cgatatcacc 1560
ggcagctacg gcctggatat caaagacatc gttgtggact gcctgacctt cccgatctct 1620
actggccagg aagaaaccag gcgagatggc attgaaacca tcgaagccat ccgcgagctg 1680
aagaagctct acccagaaat ccacaccacc ctgggtctgt ccaatatttc cttcggcctg 1740
aaccctgctg cacgccaggt tcttaactct gtgttcctca atgagtgcat tgaggctggt 1800
ctggactctg cgattgcgca cagctccaag attttgccga tgaaccgcat tgatgatcgc 1860
cagcgcgaag tggcgttgga tatggtctat gatcgccgca ccgaggatta cgatccgctg 1920
caggaattca tgcagctgtt tgagggcgtt tctgctgccg atgccaagga tgctcgcgct 1980
gaacagctgg ccgctatgcc tttgtttgag cgtttggcac agcgcatcat cgacggcgat 2040
aagaatggcc ttgaggatga tctggaagca ggcatgaagg agaagtctcc tattgcgatc 2100
atcaacgagg accttctcaa cggcatgaag accgtgggtg agctgtttgg ttccggacag 2160
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atcattttgt ccaacaacgg ttacgacgtg gtgaacttgg gcatcaagca gccactgtcc 2400
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aaatccaccc gcggcaacga gggtccaagc tatgaggatt tggtggaaac tgaaggccga 3000
ccacgcctgc gctactggct ggatcgcctg aagtctgagg gcattttgga ccacgtggcc 3060
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ttcttgtgca tcgcggattt cattcgccca cgcgagcaag ctgtcaagga cggccaagtg 3240
gacgtcatgc cattccagct ggtcaccatg ggtaatccta ttgctgattt cgccaacgag 3300
ttgttcgcag ccaatgaata ccgcgagtac ttggaagttc acggcatcgg cgtgcagctc 3360
accgaagcat tggccgagta ctggcactcc cgagtgcgca gcgaactcaa gctgaacgac 3420
ggtggatctg tcgctgattt tgatccagaa gacaagacca agttcttcga cctggattac 3480
cgcggcgccc gcttctcctt tggttacggt tcttgccctg atctggaaga ccgcgcaaag 3540
ctggtggaat tgctcgagcc aggccgtatc ggcgtggagt tgtccgagga actccagctg 3600
cacccagagc agtccacaga cgcgtttgtg ctctaccacc cagaggcaaa gtactttaac 3660
gtc 3663
<210> 90
<211> 1221
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 90
Met Ser Thr Ser Val Thr Ser Pro Ala His Asn Asn Ala His Ser Ser
1 5 10 15
Glu Phe Leu Asp Ala Leu Ala Asn His Val Leu Ile Gly Asp Gly Ala
20 25 30
Met Gly Thr Gln Leu Gln Gly Phe Asp Leu Asp Val Glu Lys Asp Phe
35 40 45
Leu Asp Leu Glu Gly Cys Asn Glu Ile Leu Asn Asp Thr Arg Pro Asp
50 55 60
Val Leu Arg Gln Ile His Arg Ala Tyr Phe Glu Ala Gly Ala Asp Leu
65 70 75 80
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85 90 95
Asp Ile Ala Asp Arg Cys Arg Glu Leu Ala Tyr Lys Gly Thr Ala Val
100 105 110
Ala Arg Glu Val Ala Asp Glu Met Gly Pro Gly Arg Asn Gly Met Arg
115 120 125
Arg Phe Val Val Gly Ser Leu Gly Pro Gly Thr Lys Leu Pro Ser Leu
130 135 140
Gly His Ala Pro Tyr Ala Asp Leu Arg Gly His Tyr Lys Glu Ala Ala
145 150 155 160
Leu Gly Ile Ile Asp Gly Gly Gly Asp Ala Phe Leu Ile Glu Thr Ala
165 170 175
Gln Asp Leu Leu Gln Val Lys Ala Ala Val His Gly Val Gln Asp Ala
180 185 190
Met Ala Glu Leu Asp Thr Phe Leu Pro Ile Ile Cys His Val Thr Val
195 200 205
Glu Thr Thr Gly Thr Met Leu Met Gly Ser Glu Ile Gly Ala Ala Leu
210 215 220
Thr Ala Leu Gln Pro Leu Gly Ile Asp Met Ile Gly Leu Asn Cys Ala
225 230 235 240
Thr Gly Pro Asp Glu Met Ser Glu His Leu Arg Tyr Leu Ser Lys His
245 250 255
Ala Asp Ile Pro Val Ser Val Met Pro Asn Ala Gly Leu Pro Val Leu
260 265 270
Gly Lys Asn Gly Ala Glu Tyr Pro Leu Glu Ala Glu Asp Leu Ala Gln
275 280 285
Ala Leu Ala Gly Phe Val Ser Glu Tyr Gly Leu Ser Met Val Gly Gly
290 295 300
Cys Cys Gly Thr Thr Pro Glu His Ile Arg Ala Val Arg Asp Ala Val
305 310 315 320
Val Gly Val Pro Glu Gln Glu Thr Ser Thr Leu Thr Lys Ile Pro Ala
325 330 335
Gly Pro Val Glu Gln Ala Ser Arg Glu Val Glu Lys Glu Asp Ser Val
340 345 350
Ala Ser Leu Tyr Thr Ser Val Pro Leu Ser Gln Glu Thr Gly Ile Ser
355 360 365
Met Ile Gly Glu Arg Thr Asn Ser Asn Gly Ser Lys Ala Phe Arg Glu
370 375 380
Ala Met Leu Ser Gly Asp Trp Glu Lys Cys Val Asp Ile Ala Lys Gln
385 390 395 400
Gln Thr Arg Asp Gly Ala His Met Leu Asp Leu Cys Val Asp Tyr Val
405 410 415
Gly Arg Asp Gly Thr Ala Asp Met Ala Thr Leu Ala Ala Leu Leu Ala
420 425 430
Thr Ser Ser Thr Leu Pro Ile Met Ile Asp Ser Thr Glu Pro Glu Val
435 440 445
Ile Arg Thr Gly Leu Glu His Leu Gly Gly Arg Ser Ile Val Asn Ser
450 455 460
Val Asn Phe Glu Asp Gly Asp Gly Pro Glu Ser Arg Tyr Gln Arg Ile
465 470 475 480
Met Lys Leu Val Lys Gln His Gly Ala Ala Val Val Ala Leu Thr Ile
485 490 495
Asp Glu Glu Gly Gln Ala Arg Thr Ala Glu His Lys Val Arg Ile Ala
500 505 510
Lys Arg Leu Ile Asp Asp Ile Thr Gly Ser Tyr Gly Leu Asp Ile Lys
515 520 525
Asp Ile Val Val Asp Cys Leu Thr Phe Pro Ile Ser Thr Gly Gln Glu
530 535 540
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545 550 555 560
Lys Lys Leu Tyr Pro Glu Ile His Thr Thr Leu Gly Leu Ser Asn Ile
565 570 575
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Leu Asn Glu Cys Ile Glu Ala Gly Leu Asp Ser Ala Ile Ala His Ser
595 600 605
Ser Lys Ile Leu Pro Met Asn Arg Ile Asp Asp Arg Gln Arg Glu Val
610 615 620
Ala Leu Asp Met Val Tyr Asp Arg Arg Thr Glu Asp Tyr Asp Pro Leu
625 630 635 640
Gln Glu Phe Met Gln Leu Phe Glu Gly Val Ser Ala Ala Asp Ala Lys
645 650 655
Asp Ala Arg Ala Glu Gln Leu Ala Ala Met Pro Leu Phe Glu Arg Leu
660 665 670
Ala Gln Arg Ile Ile Asp Gly Asp Lys Asn Gly Leu Glu Asp Asp Leu
675 680 685
Glu Ala Gly Met Lys Glu Lys Ser Pro Ile Ala Ile Ile Asn Glu Asp
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Leu Leu Asn Gly Met Lys Thr Val Gly Glu Leu Phe Gly Ser Gly Gln
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Met Gln Leu Pro Phe Val Leu Gln Ser Ala Glu Thr Met Lys Thr Ala
725 730 735
Val Ala Tyr Leu Glu Pro Phe Met Glu Glu Glu Ala Glu Ala Thr Gly
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Gly Asp Val His Asp Ile Gly Lys Asn Leu Val Asp Ile Ile Leu Ser
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Asn Asn Gly Tyr Asp Val Val Asn Leu Gly Ile Lys Gln Pro Leu Ser
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Met Asp Glu Val Met Ala Glu Lys Arg Gly Glu Gly Leu Asp Pro Asn
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Gln Ala Val Lys Asp Gly Gln Val Asp Val Met Pro Phe Gln Leu Val
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1220
<210> 91
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<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 91
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gaatccacat tgttcgtgat cgcttcgaaa actttcacca cccaggagac gctgtccaac 780
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ttcgtcgcag tgtccaccaa tgctgaaaag gtcgcagagt tcggtatcga cacggacaac 900
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tccctcatgg cagtgatcgg ccctcgcgac ttcatgcgtt tcctcggtgg attccacgcg 1020
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ctcggtgtct ggtactccga tttctatggt gcagaaaccc acgctgtcct accttattcc 1140
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<210> 92
<211> 585
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 92
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Asn Val Asp Pro Ala Asp Leu Val Ser Val Leu Glu Asp Leu Asp Ala
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Trp Asp Trp Val Gly Gly Arg Tyr Ser Val Asp Ser Ala Val Gly Leu
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325 330 335
Gly Phe His Ala Met Asp Glu His Phe Arg Thr Thr Lys Phe Glu Glu
340 345 350
Asn Val Pro Ile Leu Met Ala Leu Leu Gly Val Trp Tyr Ser Asp Phe
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Arg Phe Ala Ala Tyr Leu Gln Gln Leu Thr Met Glu Ser Asn Gly Lys
385 390 395 400
Ser Val His Arg Asp Gly Ser Pro Val Ser Thr Gly Thr Gly Glu Ile
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Ile His Gln Gly Thr Arg Leu Val Pro Ala Asp Phe Ile Gly Phe Ala
435 440 445
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450 455 460
Leu Met Ser Asn Phe Phe Ala Gln Thr Lys Val Leu Ala Phe Gly Lys
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Asn Ala Glu Glu Ile Ala Ala Glu Gly Val Ala Pro Glu Leu Val Asn
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515 520 525
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Val Ser Gly Glu Glu Asp Val Asp Ser Gly Asp Ser Ser Thr Asp Ser
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Leu Ile Lys Trp Tyr Arg Ala Asn Arg
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<210> 93
<211> 1503
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 93
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ctt 1503
<210> 94
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<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 94
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50 55 60
Met Leu Ser Val Ala Phe Val Phe His Val Leu Ala Arg Arg Lys Pro
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Leu Leu Cys Phe Ile Ile Leu Val Ala Phe Leu Gly Phe Ser Trp Glu
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Leu Ala Ala Leu Pro Asp Asn Ser Met Ala Ser Val Leu Glu Ala Val
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Val Leu Gly Ala Tyr Val Ser Trp Gln Met Leu Cys Ala Glu Pro Leu
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Asn Ser Arg Gly Ala Ala Trp Met Ala Gln Leu Ile Ser Thr Ile Val
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<210> 95
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<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 95
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<400> 96
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35 40 45
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
Gly His Lys Gly Tyr Ala Ile Ser Phe Met Met Asp Val Leu Ser Gly
245 250 255
Val Leu Thr Gly Ser Gln His Ser Thr Lys Val His Gly Pro Tyr Asp
260 265 270
Pro Thr Pro Pro Gly Gly Ala Gly His Leu Phe Ile Ala Leu Asp Val
275 280 285
Ala Ala Phe Arg Asp Pro Gln Asp Phe Asp Asp Ala Leu Ser Asp Leu
290 295 300
Val Gly Glu Val Lys Ser Thr Pro Lys Ala Gln Asn Thr Glu Glu Ile
305 310 315 320
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Ala Ile Glu Asn His Val Val Thr His Arg
355 360
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<211> 1041
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 97
atgccagaag tcactgtcaa cgcccaacaa ctcactgttc tctgcacaga catcctcacc 60
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accaatgcat ctccggcgat ggcgccctgg ggtggcagag aaaaacggat cggtaccaac 480
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tgggcgatca cgagtgaggg cgcacccacc acggatcctg ctgaggcaat caacggtgtc 660
gtccttccca tggctggtca caaaggttat gcgattagct tcatgatgga tgtgctttct 720
ggagttctca ctggttccca gcacagcacc aaggtacatg gtccgtatga tcccactccc 780
ccaggtggag ctggccactt gttcatcgcg ttggatgttg cagcgtttcg cgatccacaa 840
gatttcgatg acgcactcag cgatctggtt ggggaagtta aatccactcc gaaagcacaa 900
aacaccgagg agattttcta ccccggtgaa tcggaagacc gtgcgcatcg gaaaaactct 960
gcgcacggta tttcattgcc tgaaaaaacg tggatggaac tgcaagaact ggcaatcgag 1020
aaccatgttg taactcaccg t 1041
<210> 98
<211> 347
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 98
Met Pro Glu Val Thr Val Asn Ala Gln Gln Leu Thr Val Leu Cys Thr
1 5 10 15
Asp Ile Leu Thr Lys Thr Gly Val Pro Ala Ala Asp Ala His Leu Val
20 25 30
Gly Asp Ser Leu Val Gln Ala Asp Leu Trp Gly His Pro Ser His Gly
35 40 45
Val Leu Arg Leu Pro Trp Tyr Val Arg Arg Leu His Ser Gly Ala Met
50 55 60
Thr Thr His Ala His Val Glu Val Leu Asn Asp Leu Gly Ala Val Leu
65 70 75 80
Ala Leu Asp Gly His Asn Gly Ile Gly Gln Val Leu Ala Asp His Ala
85 90 95
Arg Lys Glu Ala Val Thr Arg Ala Met Met Phe Gly Ile Gly Ala Val
100 105 110
Ser Val Arg Asn Ser Asn His Phe Gly Thr Ala Met Tyr Tyr Thr Arg
115 120 125
Lys Ala Ala Ala Gln Gly Cys Val Ser Ile Leu Thr Thr Asn Ala Ser
130 135 140
Pro Ala Met Ala Pro Trp Gly Gly Arg Glu Lys Arg Ile Gly Thr Asn
145 150 155 160
Pro Trp Ser Ile Ala Ala Pro Phe Gly Glu Thr Ala Thr Val Val Asp
165 170 175
Ile Ala Asn Thr Ala Val Ala Arg Gly Lys Ile Tyr His Ala Arg Gln
180 185 190
Thr Asn Met Pro Ile Pro Glu Thr Trp Ala Ile Thr Ser Glu Gly Ala
195 200 205
Pro Thr Thr Asp Pro Ala Glu Ala Ile Asn Gly Val Val Leu Pro Met
210 215 220
Ala Gly His Lys Gly Tyr Ala Ile Ser Phe Met Met Asp Val Leu Ser
225 230 235 240
Gly Val Leu Thr Gly Ser Gln His Ser Thr Lys Val His Gly Pro Tyr
245 250 255
Asp Pro Thr Pro Pro Gly Gly Ala Gly His Leu Phe Ile Ala Leu Asp
260 265 270
Val Ala Ala Phe Arg Asp Pro Gln Asp Phe Asp Asp Ala Leu Ser Asp
275 280 285
Leu Val Gly Glu Val Lys Ser Thr Pro Lys Ala Gln Asn Thr Glu Glu
290 295 300
Ile Phe Tyr Pro Gly Glu Ser Glu Asp Arg Ala His Arg Lys Asn Ser
305 310 315 320
Ala His Gly Ile Ser Leu Pro Glu Lys Thr Trp Met Glu Leu Gln Glu
325 330 335
Leu Ala Ile Glu Asn His Val Val Thr His Arg
340 345
<210> 99
<211> 2214
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 99
atggctaaga tcatctggac ccgcaccgac gaagcaccgc tgctcgcgac ctactcgctg 60
aagccggtcg tcgaggcatt tgctgctacc gcgggcattg aggtcgagac ccgggacatt 120
tcactcgctg gacgcatcct cgcccagttc ccagagcgcc tcaccgaaga tcagaaggta 180
ggcaacgcac tcgcagaact cggcgagctt gctaagactc ctgaagcaaa catcattaag 240
cttccaaaca tctccgcttc tgttccacag ctcaaggctg ctattaagga actgcaggac 300
cagggctacg acatcccaga actgcctgat aacgccacca ccgacgagga aaaagacatc 360
ctcgcacgct acaacgctgt taagggttcc gctgtgaacc cagtgctgcg tgaaggcaac 420
tctgaccgcc gcgcaccaat cgctgtcaag aactttgtta agaagttccc acaccgcatg 480
ggcgagtggt ctgcagattc caagaccaac gttgcaacca tggatgcaaa cgacttccgc 540
cacaacgaga agtccatcat cctcgacgct gctgatgaag ttcagatcaa gcacatcgca 600
gctgacggca ccgagaccat cctcaaggac agcctcaagc ttcttgaagg cgaagttcta 660
gacggaaccg ttctgtccgc aaaggcactg gacgcattcc ttctcgagca ggtcgctcgc 720
gcaaaggcag aaggtatcct cttctccgca cacctgaagg ccaccatgat gaaggtctcc 780
gacccaatca tcttcggcca cgttgtgcgc gcttacttcg cagacgtttt cgcacagtac 840
ggtgagcagc tgctcgcagc tggcctcaac ggcgaaaacg gcctcgctgc aatcctctcc 900
ggcttggagt ccctggacaa cggcgaagaa atcaaggctg cattcgagaa gggcttggaa 960
gacggcccag acctggccat ggttaactcc gctcgcggca tcaccaacct gcatgtccct 1020
tccgatgtca tcgtggacgc ttccatgcca gcaatgattc gtacctccgg ccacatgtgg 1080
aacaaagacg accaggagca ggacaccctg gcaatcatcc cagactcctc ctacgctggc 1140
gtctaccaga ccgttatcga agactgccgc aagaacggcg cattcgatcc aaccaccatg 1200
ggtaccgtcc ctaacgttgg tctgatggct cagaaggctg aagagtacgg ctcccatgac 1260
aagaccttcc gcatcgaagc agacggtgtg gttcaggttg tttcctccaa cggcgacgtt 1320
ctcatcgagc acgacgttga ggcaaatgac atctggcgtg catgccaggt caaggatgcc 1380
ccaatccagg attgggtaaa gcttgctgtc acccgctccc gtctctccgg aatgcctgca 1440
gtgttctggt tggatccaga gcgcgcacac gaccgcaacc tggcttccct cgttgagaag 1500
tacctggctg accacgacac cgagggcctg gacatccaga tcctctcccc tgttgaggca 1560
acccagctct ccatcgaccg catccgccgt ggcgaggaca ccatctctgt caccggtaac 1620
gttctgcgtg actacaacac cgacctcttc ccaatcctgg agctgggcac ctctgcaaag 1680
atgctgtctg tcgttccttt gatggctggc ggcggactgt tcgagaccgg tgctggtgga 1740
tctgctccta agcacgtcca gcaggttcag gaagaaaacc acctgcgttg ggattccctc 1800
ggtgagttcc tcgcactggc tgagtccttc cgccacgagc tcaacaacaa cggcaacacc 1860
aaggccggcg ttctggctga cgctctggac aaggcaactg agaagctgct gaacgaagag 1920
aagtccccat cccgcaaggt tggcgagatc gacaaccgtg gctcccactt ctggctgacc 1980
aagttctggg ctgacgagct cgctgctcag accgaggacg cagatctggc tgctaccttc 2040
gcaccagtcg cagaagcact gaacacaggc gctgcagaca tcgatgctgc actgctcgca 2100
gttcagggtg gagcaactga ccttggtggc tactactccc ctaacgagga gaagctcacc 2160
aacatcatgc gcccagtcgc acagttcaac gagatcgttg acgcactgaa gaag 2214
<210> 100
<211> 738
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 100
Met Ala Lys Ile Ile Trp Thr Arg Thr Asp Glu Ala Pro Leu Leu Ala
1 5 10 15
Thr Tyr Ser Leu Lys Pro Val Val Glu Ala Phe Ala Ala Thr Ala Gly
20 25 30
Ile Glu Val Glu Thr Arg Asp Ile Ser Leu Ala Gly Arg Ile Leu Ala
35 40 45
Gln Phe Pro Glu Arg Leu Thr Glu Asp Gln Lys Val Gly Asn Ala Leu
50 55 60
Ala Glu Leu Gly Glu Leu Ala Lys Thr Pro Glu Ala Asn Ile Ile Lys
65 70 75 80
Leu Pro Asn Ile Ser Ala Ser Val Pro Gln Leu Lys Ala Ala Ile Lys
85 90 95
Glu Leu Gln Asp Gln Gly Tyr Asp Ile Pro Glu Leu Pro Asp Asn Ala
100 105 110
Thr Thr Asp Glu Glu Lys Asp Ile Leu Ala Arg Tyr Asn Ala Val Lys
115 120 125
Gly Ser Ala Val Asn Pro Val Leu Arg Glu Gly Asn Ser Asp Arg Arg
130 135 140
Ala Pro Ile Ala Val Lys Asn Phe Val Lys Lys Phe Pro His Arg Met
145 150 155 160
Gly Glu Trp Ser Ala Asp Ser Lys Thr Asn Val Ala Thr Met Asp Ala
165 170 175
Asn Asp Phe Arg His Asn Glu Lys Ser Ile Ile Leu Asp Ala Ala Asp
180 185 190
Glu Val Gln Ile Lys His Ile Ala Ala Asp Gly Thr Glu Thr Ile Leu
195 200 205
Lys Asp Ser Leu Lys Leu Leu Glu Gly Glu Val Leu Asp Gly Thr Val
210 215 220
Leu Ser Ala Lys Ala Leu Asp Ala Phe Leu Leu Glu Gln Val Ala Arg
225 230 235 240
Ala Lys Ala Glu Gly Ile Leu Phe Ser Ala His Leu Lys Ala Thr Met
245 250 255
Met Lys Val Ser Asp Pro Ile Ile Phe Gly His Val Val Arg Ala Tyr
260 265 270
Phe Ala Asp Val Phe Ala Gln Tyr Gly Glu Gln Leu Leu Ala Ala Gly
275 280 285
Leu Asn Gly Glu Asn Gly Leu Ala Ala Ile Leu Ser Gly Leu Glu Ser
290 295 300
Leu Asp Asn Gly Glu Glu Ile Lys Ala Ala Phe Glu Lys Gly Leu Glu
305 310 315 320
Asp Gly Pro Asp Leu Ala Met Val Asn Ser Ala Arg Gly Ile Thr Asn
325 330 335
Leu His Val Pro Ser Asp Val Ile Val Asp Ala Ser Met Pro Ala Met
340 345 350
Ile Arg Thr Ser Gly His Met Trp Asn Lys Asp Asp Gln Glu Gln Asp
355 360 365
Thr Leu Ala Ile Ile Pro Asp Ser Ser Tyr Ala Gly Val Tyr Gln Thr
370 375 380
Val Ile Glu Asp Cys Arg Lys Asn Gly Ala Phe Asp Pro Thr Thr Met
385 390 395 400
Gly Thr Val Pro Asn Val Gly Leu Met Ala Gln Lys Ala Glu Glu Tyr
405 410 415
Gly Ser His Asp Lys Thr Phe Arg Ile Glu Ala Asp Gly Val Val Gln
420 425 430
Val Val Ser Ser Asn Gly Asp Val Leu Ile Glu His Asp Val Glu Ala
435 440 445
Asn Asp Ile Trp Arg Ala Cys Gln Val Lys Asp Ala Pro Ile Gln Asp
450 455 460
Trp Val Lys Leu Ala Val Thr Arg Ser Arg Leu Ser Gly Met Pro Ala
465 470 475 480
Val Phe Trp Leu Asp Pro Glu Arg Ala His Asp Arg Asn Leu Ala Ser
485 490 495
Leu Val Glu Lys Tyr Leu Ala Asp His Asp Thr Glu Gly Leu Asp Ile
500 505 510
Gln Ile Leu Ser Pro Val Glu Ala Thr Gln Leu Ser Ile Asp Arg Ile
515 520 525
Arg Arg Gly Glu Asp Thr Ile Ser Val Thr Gly Asn Val Leu Arg Asp
530 535 540
Tyr Asn Thr Asp Leu Phe Pro Ile Leu Glu Leu Gly Thr Ser Ala Lys
545 550 555 560
Met Leu Ser Val Val Pro Leu Met Ala Gly Gly Gly Leu Phe Glu Thr
565 570 575
Gly Ala Gly Gly Ser Ala Pro Lys His Val Gln Gln Val Gln Glu Glu
580 585 590
Asn His Leu Arg Trp Asp Ser Leu Gly Glu Phe Leu Ala Leu Ala Glu
595 600 605
Ser Phe Arg His Glu Leu Asn Asn Asn Gly Asn Thr Lys Ala Gly Val
610 615 620
Leu Ala Asp Ala Leu Asp Lys Ala Thr Glu Lys Leu Leu Asn Glu Glu
625 630 635 640
Lys Ser Pro Ser Arg Lys Val Gly Glu Ile Asp Asn Arg Gly Ser His
645 650 655
Phe Trp Leu Thr Lys Phe Trp Ala Asp Glu Leu Ala Ala Gln Thr Glu
660 665 670
Asp Ala Asp Leu Ala Ala Thr Phe Ala Pro Val Ala Glu Ala Leu Asn
675 680 685
Thr Gly Ala Ala Asp Ile Asp Ala Ala Leu Leu Ala Val Gln Gly Gly
690 695 700
Ala Thr Asp Leu Gly Gly Tyr Tyr Ser Pro Asn Glu Glu Lys Leu Thr
705 710 715 720
Asn Ile Met Arg Pro Val Ala Gln Phe Asn Glu Ile Val Asp Ala Leu
725 730 735
Lys Lys
<210> 101
<211> 984
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 101
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taccaggctg tttccggttc tggtcttgca ggtgtggaaa ccttggcaaa gcaggttgct 480
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cagatcgctg agctgctggt taag 984
<210> 102
<211> 328
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 102
Met Arg Thr Leu Leu Glu Glu Arg Asn Phe Pro Ala Asp Thr Val Arg
1 5 10 15
Phe Phe Ala Ser Pro Arg Ser Ala Gly Arg Lys Ile Glu Phe Arg Gly
20 25 30
Thr Glu Ile Glu Val Glu Asp Ile Thr Gln Ala Thr Glu Glu Ser Leu
35 40 45
Lys Asp Ile Asp Val Ala Leu Phe Ser Ala Gly Gly Thr Ala Ser Lys
50 55 60
Gln Tyr Ala Pro Leu Phe Ala Ala Ala Gly Ala Thr Val Val Asp Asn
65 70 75 80
Ser Ser Ala Trp Arg Lys Asp Asp Glu Val Pro Leu Ile Val Ser Glu
85 90 95
Val Asn Pro Ser Asp Lys Asp Ser Leu Val Lys Gly Ile Ile Ala Asn
100 105 110
Pro Asn Cys Thr Thr Met Ala Ala Met Pro Val Leu Lys Pro Leu His
115 120 125
Asp Ala Ala Gly Leu Val Lys Leu His Val Ser Ser Tyr Gln Ala Val
130 135 140
Ser Gly Ser Gly Leu Ala Gly Val Glu Thr Leu Ala Lys Gln Val Ala
145 150 155 160
Ala Val Gly Asp His Asn Val Glu Phe Val His Asp Gly Gln Ala Ala
165 170 175
Asp Ala Gly Asp Val Gly Pro Tyr Val Ser Pro Ile Ala Tyr Asn Val
180 185 190
Leu Pro Phe Ala Gly Asn Leu Val Asp Asp Gly Thr Phe Glu Thr Asp
195 200 205
Glu Glu Gln Lys Leu Arg Asn Glu Ser Arg Lys Ile Leu Gly Leu Pro
210 215 220
Asp Leu Lys Val Ser Gly Thr Cys Val Arg Val Pro Val Phe Thr Gly
225 230 235 240
His Thr Leu Thr Ile His Ala Glu Phe Asp Lys Ala Ile Thr Val Asp
245 250 255
Gln Ala Gln Glu Ile Leu Gly Ala Ala Ser Gly Val Lys Leu Val Asp
260 265 270
Val Pro Thr Pro Leu Ala Ala Ala Gly Ile Asp Glu Ser Leu Val Gly
275 280 285
Arg Ile Arg Gln Asp Ser Thr Val Asp Asp Asn Arg Gly Leu Val Leu
290 295 300
Val Val Ser Gly Asp Asn Leu Arg Lys Gly Ala Ala Leu Asn Thr Ile
305 310 315 320
Gln Ile Ala Glu Leu Leu Val Lys
325
<210> 103
<211> 1032
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 103
atgaccacca tcgcagttgt tggtgcaacc ggccaggtcg gccaggttat gcgcaccctt 60
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aagccacttc acgatgccgc tggtcttgta aagcttcacg tttcctctta ccaggctgtt 480
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cacaacgttg agttcgtcca tgatggacag gctgctgacg caggcgatgt cggaccttat 600
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gacctcaagg tctcaggcac ctgcgtccgc gtgccggttt tcaccggcca cacgctgacc 780
attcacgccg aattcgacaa ggcaatcacc gtggaccagg cgcaggagat cttgggtgcc 840
gcttcaggcg tcaagcttgt cgacgtccca accccacttg cagctgccgg cattgacgaa 900
tccctcgttg gacgcatccg tcaggactcc actgtcgacg ataaccgcgg tctggttctc 960
gtcgtatctg gcgacaacct ccgcaagggt gctgcgctaa acaccatcca gatcgctgag 1020
ctgctggtta ag 1032
<210> 104
<211> 344
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 104
Met Thr Thr Ile Ala Val Val Gly Ala Thr Gly Gln Val Gly Gln Val
1 5 10 15
Met Arg Thr Leu Leu Glu Glu Arg Asn Phe Pro Ala Asp Thr Val Arg
20 25 30
Phe Phe Ala Ser Pro Arg Ser Ala Gly Arg Lys Ile Glu Phe Arg Gly
35 40 45
Thr Glu Ile Glu Val Glu Asp Ile Thr Gln Ala Thr Glu Glu Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Ile Asp Val Ala Leu Phe Ser Ala Gly Gly Thr Ala Ser Lys
65 70 75 80
Gln Tyr Ala Pro Leu Phe Ala Ala Ala Gly Ala Thr Val Val Asp Asn
85 90 95
Ser Ser Ala Trp Arg Lys Asp Asp Glu Val Pro Leu Ile Val Ser Glu
100 105 110
Val Asn Pro Ser Asp Lys Asp Ser Leu Val Lys Gly Ile Ile Ala Asn
115 120 125
Pro Asn Cys Thr Thr Met Ala Ala Met Pro Val Leu Lys Pro Leu His
130 135 140
Asp Ala Ala Gly Leu Val Lys Leu His Val Ser Ser Tyr Gln Ala Val
145 150 155 160
Ser Gly Ser Gly Leu Ala Gly Val Glu Thr Leu Ala Lys Gln Val Ala
165 170 175
Ala Val Gly Asp His Asn Val Glu Phe Val His Asp Gly Gln Ala Ala
180 185 190
Asp Ala Gly Asp Val Gly Pro Tyr Val Ser Pro Ile Ala Tyr Asn Val
195 200 205
Leu Pro Phe Ala Gly Asn Leu Val Asp Asp Gly Thr Phe Glu Thr Asp
210 215 220
Glu Glu Gln Lys Leu Arg Asn Glu Ser Arg Lys Ile Leu Gly Leu Pro
225 230 235 240
Asp Leu Lys Val Ser Gly Thr Cys Val Arg Val Pro Val Phe Thr Gly
245 250 255
His Thr Leu Thr Ile His Ala Glu Phe Asp Lys Ala Ile Thr Val Asp
260 265 270
Gln Ala Gln Glu Ile Leu Gly Ala Ala Ser Gly Val Lys Leu Val Asp
275 280 285
Val Pro Thr Pro Leu Ala Ala Ala Gly Ile Asp Glu Ser Leu Val Gly
290 295 300
Arg Ile Arg Gln Asp Ser Thr Val Asp Asp Asn Arg Gly Leu Val Leu
305 310 315 320
Val Val Ser Gly Asp Asn Leu Arg Lys Gly Ala Ala Leu Asn Thr Ile
325 330 335
Gln Ile Ala Glu Leu Leu Val Lys
340
<210> 105
<211> 882
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 105
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actgagggca tcccagtgcg tgacgcttct gaggcgtggg cttatgccaa gaaggtggga 360
cacacccgca tcattggccc taactgccca ggcattatta ctcccggcga atctcttgcg 420
ggaattacgc cggcaaacat tgcaggttcc ggcccgatcg ggttgatctc aaagtcggga 480
acactgactt atcagatgat gtacgaactt tcagatattg gcatttctac ggcgattggt 540
attggcggtg acccaatcat cggtacaacc catatcgacg ctctggaggc ctttgaagct 600
gatcctgaga ccaaggcaat cgtcatgatc ggtgagatcg gtggagatgc agaggaacgc 660
gctgctgact tcatttctaa gcacgtgaca aaaccagttg tgggttacgt ggcaggcttt 720
accgcccctg aaggaaagac catggggcat gctggcgcca tcgtgacagg ttcagaaggc 780
actgcgcgag caaagaagca tgcattggag gccgtgggtg ttcgcgtggg aacaactccg 840
agtgaaaccg cgaagcttat gcgtgaggta gttgcagctt tg 882
<210> 106
<211> 294
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 106
Met Ser Ile Phe Leu Asn Ser Asp Ser Arg Ile Ile Ile Gln Gly Ile
1 5 10 15
Thr Gly Ser Glu Gly Ser Glu His Ala Arg Arg Ile Leu Ala Ser Gly
20 25 30
Ala Lys Leu Val Gly Gly Thr Asn Pro Arg Lys Ala Gly Gln Thr Ile
35 40 45
Leu Ile Asn Asp Thr Glu Leu Pro Val Phe Gly Thr Val Lys Glu Ala
50 55 60
Met Glu Glu Thr Gly Ala Asp Val Thr Val Ile Phe Val Pro Pro Ala
65 70 75 80
Phe Ala Lys Ala Ala Ile Ile Glu Ala Ile Asp Ala His Ile Pro Leu
85 90 95
Cys Val Ile Ile Thr Glu Gly Ile Pro Val Arg Asp Ala Ser Glu Ala
100 105 110
Trp Ala Tyr Ala Lys Lys Val Gly His Thr Arg Ile Ile Gly Pro Asn
115 120 125
Cys Pro Gly Ile Ile Thr Pro Gly Glu Ser Leu Ala Gly Ile Thr Pro
130 135 140
Ala Asn Ile Ala Gly Ser Gly Pro Ile Gly Leu Ile Ser Lys Ser Gly
145 150 155 160
Thr Leu Thr Tyr Gln Met Met Tyr Glu Leu Ser Asp Ile Gly Ile Ser
165 170 175
Thr Ala Ile Gly Ile Gly Gly Asp Pro Ile Ile Gly Thr Thr His Ile
180 185 190
Asp Ala Leu Glu Ala Phe Glu Ala Asp Pro Glu Thr Lys Ala Ile Val
195 200 205
Met Ile Gly Glu Ile Gly Gly Asp Ala Glu Glu Arg Ala Ala Asp Phe
210 215 220
Ile Ser Lys His Val Thr Lys Pro Val Val Gly Tyr Val Ala Gly Phe
225 230 235 240
Thr Ala Pro Glu Gly Lys Thr Met Gly His Ala Gly Ala Ile Val Thr
245 250 255
Gly Ser Glu Gly Thr Ala Arg Ala Lys Lys His Ala Leu Glu Ala Val
260 265 270
Gly Val Arg Val Gly Thr Thr Pro Ser Glu Thr Ala Lys Leu Met Arg
275 280 285
Glu Val Val Ala Ala Leu
290
<210> 107
<211> 681
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 107
gtggaaggtg tacaggagat cctgtcgcgc gccggaattt ttcaaggcgt tgacccaacg 60
gcagtcaata acctcatcca ggatatggag accgttcgct tcccacgcgg agcaaccatc 120
ttcgacgagg gcgagccagg tgaccgcctt tacatcatca cctccggcaa agtgaagctt 180
gcgcgccacg caccggacgg ccgcgaaaac ctgctgacca tcatgggtcc ttccgacatg 240
ttcggtgagc tctccatctt cgacccaggc ccacgcacct cctctgcagt gtgtgtcacc 300
gaagttcatg cagcaaccat gaactctgac atgctgcgca actgggtagc tgaccaccca 360
gctatcgctg agcagctcct gcgcgttctg gctcgtcgtc tgcgtcgcac caacgcttcc 420
ctggctgacc tcatcttcac cgacgtccca ggccgcgttg ctaagaccct tctgcagctg 480
gctaaccgct tcggcaccca agaagctggc gcgctgcgcg tgaaccacga cctcactcag 540
gaagaaatcg cacagctcgt cggtgcttcc cgtgaaactg tgaataaggc tcttgcaacg 600
ttcgcacacc gtggctggat tcgcctcgag ggcaagtccg tcctcattgt ggacaccgag 660
catttggcac gtcgcgctcg a 681
<210> 108
<211> 227
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 108
Met Glu Gly Val Gln Glu Ile Leu Ser Arg Ala Gly Ile Phe Gln Gly
1 5 10 15
Val Asp Pro Thr Ala Val Asn Asn Leu Ile Gln Asp Met Glu Thr Val
20 25 30
Arg Phe Pro Arg Gly Ala Thr Ile Phe Asp Glu Gly Glu Pro Gly Asp
35 40 45
Arg Leu Tyr Ile Ile Thr Ser Gly Lys Val Lys Leu Ala Arg His Ala
50 55 60
Pro Asp Gly Arg Glu Asn Leu Leu Thr Ile Met Gly Pro Ser Asp Met
65 70 75 80
Phe Gly Glu Leu Ser Ile Phe Asp Pro Gly Pro Arg Thr Ser Ser Ala
85 90 95
Val Cys Val Thr Glu Val His Ala Ala Thr Met Asn Ser Asp Met Leu
100 105 110
Arg Asn Trp Val Ala Asp His Pro Ala Ile Ala Glu Gln Leu Leu Arg
115 120 125
Val Leu Ala Arg Arg Leu Arg Arg Thr Asn Ala Ser Leu Ala Asp Leu
130 135 140
Ile Phe Thr Asp Val Pro Gly Arg Val Ala Lys Thr Leu Leu Gln Leu
145 150 155 160
Ala Asn Arg Phe Gly Thr Gln Glu Ala Gly Ala Leu Arg Val Asn His
165 170 175
Asp Leu Thr Gln Glu Glu Ile Ala Gln Leu Val Gly Ala Ser Arg Glu
180 185 190
Thr Val Asn Lys Ala Leu Ala Thr Phe Ala His Arg Gly Trp Ile Arg
195 200 205
Leu Glu Gly Lys Ser Val Leu Ile Val Asp Thr Glu His Leu Ala Arg
210 215 220
Arg Ala Arg
225
<210> 109
<211> 1650
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 109
atgacaccag ctgatctcgc aacattgatt aaagagaccg cggtagaggt tttgacctcc 60
cgcgagctcg atacttctgt tcttccggag caggtagttg tggagcgtcc gcgtaaccca 120
gagcacggcg attacgccac caacattgca ttgcaggtgg ctaaaaaggt cggtcagaac 180
cctcgggatt tggctacctg gctggcagag gcattggctg cagatgacgc cattgattct 240
gctgaaattg ctggcccagg ctttttgaac attcgccttg ctgcagcagc acagggtgaa 300
attgtggcca agattctggc acagggcgag actttcggaa actccgatca cctttcccac 360
ttggacgtga acctcgagtt cgtttctgca aacccaaccg gacctattca ccttggcgga 420
acccgctggg ctgccgtggg tgactctttg ggtcgtgtgc tggaggcttc cggcgcgaaa 480
gtgacccgcg aatactactt caacgatcac ggtcgccaga tcgatcgttt cgctttgtcc 540
cttcttgcag cggcgaaggg cgagccaacg ccagaagacg gttatggcgg cgaatacatt 600
aaggaaattg cggaggcaat cgtcgaaaag catcctgaag cgttggcttt ggagcctgcc 660
gcaacccagg agcttttccg cgctgaaggc gtggagatga tgttcgagca catcaaatct 720
tccctgcatg agttcggcac cgatttcgat gtctactacc acgagaactc cctgttcgag 780
tccggtgcgg tggacaaggc cgtgcaggtg ctgaaggaca acggcaacct gtacgaaaac 840
gagggcgctt ggtggctgcg ttccaccgaa ttcggcgatg acaaagaccg cgtggtgatc 900
aagtctgacg gcgacgcagc ctacatcgct ggcgatatcg cgtacgtggc tgataagttc 960
tcccgcggac acaacctaaa catctacatg ttgggtgctg accaccatgg ttacatcgcg 1020
cgcctgaagg cagcggcggc ggcacttggc tacaagccag aaggcgttga agtcctgatt 1080
ggccagatgg tgaacctgct tcgcgacggc aaggcagtgc gtatgtccaa gcgtgcaggc 1140
accgtggtca ccctagatga cctcgttgaa gcaatcggca tcgatgcggc gcgttactcc 1200
ctgatccgtt cctccgtgga ttcttccctg gatatcgatc tcggcctgtg ggaatcccag 1260
tcctccgaca accctgtgta ctacgtgcag tacggacacg ctcgtctgtg ctccatcgcg 1320
cgcaaggcag agaccttggg tgtcaccgag gaaggcgcag acctatctct actgacccac 1380
gaccgcgaag gcgatctcat ccgcacactc ggagagttcc cagcagtggt gaaggctgcc 1440
gctgacctac gtgaaccaca ccgcattgcc cgctatgctg aggaattagc tggaactttc 1500
caccgcttct acgattcctg ccacatcctt ccaaaggttg atgaggatac ggcaccaatc 1560
cacacagcac gtctggcact tgcagcagca acccgccaga ccctcgctaa cgccctgcac 1620
ctggttggcg tttccgcacc ggagaagatg 1650
<210> 110
<211> 550
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 110
Met Thr Pro Ala Asp Leu Ala Thr Leu Ile Lys Glu Thr Ala Val Glu
1 5 10 15
Val Leu Thr Ser Arg Glu Leu Asp Thr Ser Val Leu Pro Glu Gln Val
20 25 30
Val Val Glu Arg Pro Arg Asn Pro Glu His Gly Asp Tyr Ala Thr Asn
35 40 45
Ile Ala Leu Gln Val Ala Lys Lys Val Gly Gln Asn Pro Arg Asp Leu
50 55 60
Ala Thr Trp Leu Ala Glu Ala Leu Ala Ala Asp Asp Ala Ile Asp Ser
65 70 75 80
Ala Glu Ile Ala Gly Pro Gly Phe Leu Asn Ile Arg Leu Ala Ala Ala
85 90 95
Ala Gln Gly Glu Ile Val Ala Lys Ile Leu Ala Gln Gly Glu Thr Phe
100 105 110
Gly Asn Ser Asp His Leu Ser His Leu Asp Val Asn Leu Glu Phe Val
115 120 125
Ser Ala Asn Pro Thr Gly Pro Ile His Leu Gly Gly Thr Arg Trp Ala
130 135 140
Ala Val Gly Asp Ser Leu Gly Arg Val Leu Glu Ala Ser Gly Ala Lys
145 150 155 160
Val Thr Arg Glu Tyr Tyr Phe Asn Asp His Gly Arg Gln Ile Asp Arg
165 170 175
Phe Ala Leu Ser Leu Leu Ala Ala Ala Lys Gly Glu Pro Thr Pro Glu
180 185 190
Asp Gly Tyr Gly Gly Glu Tyr Ile Lys Glu Ile Ala Glu Ala Ile Val
195 200 205
Glu Lys His Pro Glu Ala Leu Ala Leu Glu Pro Ala Ala Thr Gln Glu
210 215 220
Leu Phe Arg Ala Glu Gly Val Glu Met Met Phe Glu His Ile Lys Ser
225 230 235 240
Ser Leu His Glu Phe Gly Thr Asp Phe Asp Val Tyr Tyr His Glu Asn
245 250 255
Ser Leu Phe Glu Ser Gly Ala Val Asp Lys Ala Val Gln Val Leu Lys
260 265 270
Asp Asn Gly Asn Leu Tyr Glu Asn Glu Gly Ala Trp Trp Leu Arg Ser
275 280 285
Thr Glu Phe Gly Asp Asp Lys Asp Arg Val Val Ile Lys Ser Asp Gly
290 295 300
Asp Ala Ala Tyr Ile Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Val Ala Asp Lys Phe
305 310 315 320
Ser Arg Gly His Asn Leu Asn Ile Tyr Met Leu Gly Ala Asp His His
325 330 335
Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Lys Ala Ala Ala Ala Ala Leu Gly Tyr Lys
340 345 350
Pro Glu Gly Val Glu Val Leu Ile Gly Gln Met Val Asn Leu Leu Arg
355 360 365
Asp Gly Lys Ala Val Arg Met Ser Lys Arg Ala Gly Thr Val Val Thr
370 375 380
Leu Asp Asp Leu Val Glu Ala Ile Gly Ile Asp Ala Ala Arg Tyr Ser
385 390 395 400
Leu Ile Arg Ser Ser Val Asp Ser Ser Leu Asp Ile Asp Leu Gly Leu
405 410 415
Trp Glu Ser Gln Ser Ser Asp Asn Pro Val Tyr Tyr Val Gln Tyr Gly
420 425 430
His Ala Arg Leu Cys Ser Ile Ala Arg Lys Ala Glu Thr Leu Gly Val
435 440 445
Thr Glu Glu Gly Ala Asp Leu Ser Leu Leu Thr His Asp Arg Glu Gly
450 455 460
Asp Leu Ile Arg Thr Leu Gly Glu Phe Pro Ala Val Val Lys Ala Ala
465 470 475 480
Ala Asp Leu Arg Glu Pro His Arg Ile Ala Arg Tyr Ala Glu Glu Leu
485 490 495
Ala Gly Thr Phe His Arg Phe Tyr Asp Ser Cys His Ile Leu Pro Lys
500 505 510
Val Asp Glu Asp Thr Ala Pro Ile His Thr Ala Arg Leu Ala Leu Ala
515 520 525
Ala Ala Thr Arg Gln Thr Leu Ala Asn Ala Leu His Leu Val Gly Val
530 535 540
Ser Ala Pro Glu Lys Met
545 550
<210> 111
<211> 750
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 111
atgaaactta cacttgagat ctggcgtcaa gcaggcccaa ctgcggaagg caagttcgaa 60
accgtccagg ttgacgacgc cgtcgcgcag atgtccatcc tggagctgct tgaccacgta 120
aacaacaagt tcatcgaaga aggcaaagaa ccattcgcgt tcgcctctga ctgccgcgaa 180
ggcatttgtg gtacctgtgg tctcctcgtg aacggtcgcc ctcacggcgc cgaccagaac 240
aagcctgcct gtgcgcagcg cctggtcagc tacaaggaag gcgacaccct caagatcgaa 300
ccactgcgtt ccgccgcata cccagtgatc aaggacatgg tcgtcgaccg ctccgcactg 360
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aagatggttg atgaaatgga aaccaacttc ggacactgct ccctctacgg cgagtgcgca 660
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cgtgcagctt tccgaggcaa agacgactag 750
<210> 112
<211> 249
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 112
Met Lys Leu Thr Leu Glu Ile Trp Arg Gln Ala Gly Pro Thr Ala Glu
1 5 10 15
Gly Lys Phe Glu Thr Val Gln Val Asp Asp Ala Val Ala Gln Met Ser
20 25 30
Ile Leu Glu Leu Leu Asp His Val Asn Asn Lys Phe Ile Glu Glu Gly
35 40 45
Lys Glu Pro Phe Ala Phe Ala Ser Asp Cys Arg Glu Gly Ile Cys Gly
50 55 60
Thr Cys Gly Leu Leu Val Asn Gly Arg Pro His Gly Ala Asp Gln Asn
65 70 75 80
Lys Pro Ala Cys Ala Gln Arg Leu Val Ser Tyr Lys Glu Gly Asp Thr
85 90 95
Leu Lys Ile Glu Pro Leu Arg Ser Ala Ala Tyr Pro Val Ile Lys Asp
100 105 110
Met Val Val Asp Arg Ser Ala Leu Asp Arg Val Met Glu Gln Gly Gly
115 120 125
Tyr Val Thr Ile Asn Ala Gly Thr Ala Pro Asp Ala Asp Thr Leu His
130 135 140
Val Asn His Glu Thr Ala Glu Leu Ala Leu Asp His Ala Ala Cys Ile
145 150 155 160
Gly Cys Gly Ala Cys Val Ala Ala Cys Pro Asn Gly Ala Ala His Leu
165 170 175
Phe Thr Gly Ala Lys Leu Val His Leu Ser Leu Leu Pro Leu Gly Lys
180 185 190
Glu Glu Arg Gly Leu Arg Ala Arg Lys Met Val Asp Glu Met Glu Thr
195 200 205
Asn Phe Gly His Cys Ser Leu Tyr Gly Glu Cys Ala Asp Val Cys Pro
210 215 220
Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Val Ala Ala Val Thr Lys Glu Arg Ala
225 230 235 240
Arg Ala Ala Phe Arg Gly Lys Asp Asp
245
<210> 113
<211> 837
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 113
atgggaacca ggcgagaacg gaaccttcgt ccgccacgca gaaccactgt tcttcgaatc 60
cgtcccactg cagacaagga actacaagta atgaaactta cacttgagat ctggcgtcaa 120
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atgtccatcc tggagctgct tgaccacgta aacaacaagt tcatcgaaga aggcaaagaa 240
ccattcgcgt tcgcctctga ctgccgcgaa ggcatttgtg gtacctgtgg tctcctcgtg 300
aacggtcgcc ctcacggcgc cgaccagaac aagcctgcct gtgcgcagcg cctggtcagc 360
tacaaggaag gcgacaccct caagatcgaa ccactgcgtt ccgccgcata cccagtgatc 420
aaggacatgg tcgtcgaccg ctccgcactg gaccgtgtca tggaacaggg tggctacgtg 480
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gaactcgcac ttgaccacgc agcctgcatc ggctgtggcg catgtgttgc tgcctgccct 600
aacggcgcag cacacctgtt caccggcgca aagcttgttc acctctccct cctcccactg 660
ggtaaggaag agcgcggact gcgtgcacgt aagatggttg atgaaatgga aaccaacttc 720
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gctgtggcag ctgtcaccaa ggaacgtgcg cgtgcagctt tccgaggcaa agacgac 837
<210> 114
<211> 279
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 114
Met Gly Thr Arg Arg Glu Arg Asn Leu Arg Pro Pro Arg Arg Thr Thr
1 5 10 15
Val Leu Arg Ile Arg Pro Thr Ala Asp Lys Glu Leu Gln Val Met Lys
20 25 30
Leu Thr Leu Glu Ile Trp Arg Gln Ala Gly Pro Thr Ala Glu Gly Lys
35 40 45
Phe Glu Thr Val Gln Val Asp Asp Ala Val Ala Gln Met Ser Ile Leu
50 55 60
Glu Leu Leu Asp His Val Asn Asn Lys Phe Ile Glu Glu Gly Lys Glu
65 70 75 80
Pro Phe Ala Phe Ala Ser Asp Cys Arg Glu Gly Ile Cys Gly Thr Cys
85 90 95
Gly Leu Leu Val Asn Gly Arg Pro His Gly Ala Asp Gln Asn Lys Pro
100 105 110
Ala Cys Ala Gln Arg Leu Val Ser Tyr Lys Glu Gly Asp Thr Leu Lys
115 120 125
Ile Glu Pro Leu Arg Ser Ala Ala Tyr Pro Val Ile Lys Asp Met Val
130 135 140
Val Asp Arg Ser Ala Leu Asp Arg Val Met Glu Gln Gly Gly Tyr Val
145 150 155 160
Thr Ile Asn Ala Gly Thr Ala Pro Asp Ala Asp Thr Leu His Val Asn
165 170 175
His Glu Thr Ala Glu Leu Ala Leu Asp His Ala Ala Cys Ile Gly Cys
180 185 190
Gly Ala Cys Val Ala Ala Cys Pro Asn Gly Ala Ala His Leu Phe Thr
195 200 205
Gly Ala Lys Leu Val His Leu Ser Leu Leu Pro Leu Gly Lys Glu Glu
210 215 220
Arg Gly Leu Arg Ala Arg Lys Met Val Asp Glu Met Glu Thr Asn Phe
225 230 235 240
Gly His Cys Ser Leu Tyr Gly Glu Cys Ala Asp Val Cys Pro Ala Gly
245 250 255
Ile Pro Leu Thr Ala Val Ala Ala Val Thr Lys Glu Arg Ala Arg Ala
260 265 270
Ala Phe Arg Gly Lys Asp Asp
275
<210> 115
<211> 2019
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 115
atgagcactc actctgaaac cacccgccca gagttcatcc acccagtctc agtcctccca 60
gaggtctcag ctggtacggt ccttgacgct gcagagccag caggcgttcc caccaaagat 120
atgtgggaat accaaaaaga ccacatgaac ctggtctccc cactgaaccg acgcaagttc 180
cgtgtcctcg tcgttggcac cggcctgtcc ggtggtgctg cagcagcagc cctcggcgaa 240
ctcggatacg acgtcaaggc gttcacctac cacgacgcac ctcgccgtgc gcactccatt 300
gctgcacagg gtggcgttaa ctccgcccgc ggcaagaagg tagacaacga cggcgcatac 360
cgccacgtca aggacaccgt caagggcggc gactaccgtg gtcgcgagtc cgactgctgg 420
cgtctcgccg tcgagtccgt ccgcgtcatc gaccacatga acgccatcgg tgcaccattc 480
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acctactaca cccgtggaca aaccggacag cagctgcagc tctccaccgc atccgcacta 600
cagcgccaga tccacctcgg ctccgtagaa atcttcaccc ataacgaaat ggttgacgtc 660
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accggcgagc tcaccgcaca caccggccat gccgttatcc tggcaaccgg tggctacggc 780
aacgtgtacc acatgtccac cctggccaag aactccaacg cctcggccat catgcgtgca 840
tacgaagccg gcgcatactt cgcgtcccca tcgttcatcc agttccaccc aaccggcctg 900
cctgtgaact ccacctggca gtccaagacc attctgatgt ccgagtcgct gcgtaacgac 960
ggccgcatct ggtcccctaa ggaaccgaac gataaccgcg atccaaacac catccctgag 1020
gatgagcgcg actacttcct ggagcgccgc tacccagcat tcggtaacct cgtcccacgt 1080
gacgttgctt cccgtgcgat ctcccagcag atcaatgctg gtctcggtgt tggacctctg 1140
aacaacgctg catacctgga cttccgcgac gccaccgagc gcctcggaca ggacaccatc 1200
cgcgagcgtt actccaacct cttcaccatg tacgaagagg caattggcga ggacccatac 1260
tccagcccaa tgcgtattgc accgacctgc cacttcacca tgggtggcct ctggactgac 1320
ttcaacgaaa tgacgtcact cccaggtctg ttctgcgcag gcgaagcatc ctggacctac 1380
cacggtgcaa accgtctggg cgcaaactcc ctgctctccg cttccgtcga tggctggttc 1440
accctgccat tcaccatccc taactacctc ggcccattgc ttggctccga gcgtctgtca 1500
gaggatgcac cagaagcaca ggcagcgatt gcgcgtgcac aggctcgcat tgaccgcctc 1560
atgggcaacc gcccagagtg ggtcggtgac aacgttcacg gacctgagta ctaccaccgc 1620
cagcttggcg atatcctgta cttctcctgt ggcgtttccc gaaacgtaga agacctccag 1680
gatggcatca acaagatccg tgccctccgc gatgacttct ggaagaacat gcgcatcacc 1740
ggcagcaccg atgagatgaa ccaggttctc gaatacgcag cacgcgtagc cgactacatc 1800
gacctcggcg aactcatgtg tgtcgacgcc ctcgaccgcg acgagtcctg tggcgctcac 1860
ttccgcgacg accacctctc cgaagatggc gaagcagaac gtgacgacga aaactggtgc 1920
ttcgtctccg catgggaacc aggcgagaac ggaaccttcg tccgccacgc agaaccactg 1980
ttcttcgaat ccgtcccact gcagacaagg aactacaag 2019
<210> 116
<211> 673
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 116
Met Ser Thr His Ser Glu Thr Thr Arg Pro Glu Phe Ile His Pro Val
1 5 10 15
Ser Val Leu Pro Glu Val Ser Ala Gly Thr Val Leu Asp Ala Ala Glu
20 25 30
Pro Ala Gly Val Pro Thr Lys Asp Met Trp Glu Tyr Gln Lys Asp His
35 40 45
Met Asn Leu Val Ser Pro Leu Asn Arg Arg Lys Phe Arg Val Leu Val
50 55 60
Val Gly Thr Gly Leu Ser Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Leu Gly Glu
65 70 75 80
Leu Gly Tyr Asp Val Lys Ala Phe Thr Tyr His Asp Ala Pro Arg Arg
85 90 95
Ala His Ser Ile Ala Ala Gln Gly Gly Val Asn Ser Ala Arg Gly Lys
100 105 110
Lys Val Asp Asn Asp Gly Ala Tyr Arg His Val Lys Asp Thr Val Lys
115 120 125
Gly Gly Asp Tyr Arg Gly Arg Glu Ser Asp Cys Trp Arg Leu Ala Val
130 135 140
Glu Ser Val Arg Val Ile Asp His Met Asn Ala Ile Gly Ala Pro Phe
145 150 155 160
Ala Arg Glu Tyr Gly Gly Ala Leu Ala Thr Arg Ser Phe Gly Gly Val
165 170 175
Gln Val Ser Arg Thr Tyr Tyr Thr Arg Gly Gln Thr Gly Gln Gln Leu
180 185 190
Gln Leu Ser Thr Ala Ser Ala Leu Gln Arg Gln Ile His Leu Gly Ser
195 200 205
Val Glu Ile Phe Thr His Asn Glu Met Val Asp Val Ile Val Thr Glu
210 215 220
Arg Asn Gly Glu Lys Arg Cys Glu Gly Leu Ile Met Arg Asn Leu Ile
225 230 235 240
Thr Gly Glu Leu Thr Ala His Thr Gly His Ala Val Ile Leu Ala Thr
245 250 255
Gly Gly Tyr Gly Asn Val Tyr His Met Ser Thr Leu Ala Lys Asn Ser
260 265 270
Asn Ala Ser Ala Ile Met Arg Ala Tyr Glu Ala Gly Ala Tyr Phe Ala
275 280 285
Ser Pro Ser Phe Ile Gln Phe His Pro Thr Gly Leu Pro Val Asn Ser
290 295 300
Thr Trp Gln Ser Lys Thr Ile Leu Met Ser Glu Ser Leu Arg Asn Asp
305 310 315 320
Gly Arg Ile Trp Ser Pro Lys Glu Pro Asn Asp Asn Arg Asp Pro Asn
325 330 335
Thr Ile Pro Glu Asp Glu Arg Asp Tyr Phe Leu Glu Arg Arg Tyr Pro
340 345 350
Ala Phe Gly Asn Leu Val Pro Arg Asp Val Ala Ser Arg Ala Ile Ser
355 360 365
Gln Gln Ile Asn Ala Gly Leu Gly Val Gly Pro Leu Asn Asn Ala Ala
370 375 380
Tyr Leu Asp Phe Arg Asp Ala Thr Glu Arg Leu Gly Gln Asp Thr Ile
385 390 395 400
Arg Glu Arg Tyr Ser Asn Leu Phe Thr Met Tyr Glu Glu Ala Ile Gly
405 410 415
Glu Asp Pro Tyr Ser Ser Pro Met Arg Ile Ala Pro Thr Cys His Phe
420 425 430
Thr Met Gly Gly Leu Trp Thr Asp Phe Asn Glu Met Thr Ser Leu Pro
435 440 445
Gly Leu Phe Cys Ala Gly Glu Ala Ser Trp Thr Tyr His Gly Ala Asn
450 455 460
Arg Leu Gly Ala Asn Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Asp Gly Trp Phe
465 470 475 480
Thr Leu Pro Phe Thr Ile Pro Asn Tyr Leu Gly Pro Leu Leu Gly Ser
485 490 495
Glu Arg Leu Ser Glu Asp Ala Pro Glu Ala Gln Ala Ala Ile Ala Arg
500 505 510
Ala Gln Ala Arg Ile Asp Arg Leu Met Gly Asn Arg Pro Glu Trp Val
515 520 525
Gly Asp Asn Val His Gly Pro Glu Tyr Tyr His Arg Gln Leu Gly Asp
530 535 540
Ile Leu Tyr Phe Ser Cys Gly Val Ser Arg Asn Val Glu Asp Leu Gln
545 550 555 560
Asp Gly Ile Asn Lys Ile Arg Ala Leu Arg Asp Asp Phe Trp Lys Asn
565 570 575
Met Arg Ile Thr Gly Ser Thr Asp Glu Met Asn Gln Val Leu Glu Tyr
580 585 590
Ala Ala Arg Val Ala Asp Tyr Ile Asp Leu Gly Glu Leu Met Cys Val
595 600 605
Asp Ala Leu Asp Arg Asp Glu Ser Cys Gly Ala His Phe Arg Asp Asp
610 615 620
His Leu Ser Glu Asp Gly Glu Ala Glu Arg Asp Asp Glu Asn Trp Cys
625 630 635 640
Phe Val Ser Ala Trp Glu Pro Gly Glu Asn Gly Thr Phe Val Arg His
645 650 655
Ala Glu Pro Leu Phe Phe Glu Ser Val Pro Leu Gln Thr Arg Asn Tyr
660 665 670
Lys
<210> 117
<211> 1875
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 117
atgaacctgg tctccccact gaaccgacgc aagttccgtg tcctcgtcgt tggcaccggc 60
ctgtccggtg gtgctgcagc agcagccctc ggcgaactcg gatacgacgt caaggcgttc 120
acctaccacg acgcacctcg ccgtgcgcac tccattgctg cacagggtgg cgttaactcc 180
gcccgcggca agaaggtaga caacgacggc gcataccgcc acgtcaagga caccgtcaag 240
ggcggcgact accgtggtcg cgagtccgac tgctggcgtc tcgccgtcga gtccgtccgc 300
gtcatcgacc acatgaacgc catcggtgca ccattcgccc gcgaatacgg tggcgccttg 360
gcaacccgtt ccttcggtgg tgtgcaggtc tcccgtacct actacacccg tggacaaacc 420
ggacagcagc tgcagctctc caccgcatcc gcactacagc gccagatcca cctcggctcc 480
gtagaaatct tcacccataa cgaaatggtt gacgtcattg tcaccgaacg taacggtgaa 540
aagcgctgcg aaggcctgat catgcgcaac ctgatcaccg gcgagctcac cgcacacacc 600
ggccatgccg ttatcctggc aaccggtggc tacggcaacg tgtaccacat gtccaccctg 660
gccaagaact ccaacgcctc ggccatcatg cgtgcatacg aagccggcgc atacttcgcg 720
tccccatcgt tcatccagtt ccacccaacc ggcctgcctg tgaactccac ctggcagtcc 780
aagaccattc tgatgtccga gtcgctgcgt aacgacggcc gcatctggtc ccctaaggaa 840
ccgaacgata accgcgatcc aaacaccatc cctgaggatg agcgcgacta cttcctggag 900
cgccgctacc cagcattcgg taacctcgtc ccacgtgacg ttgcttcccg tgcgatctcc 960
cagcagatca atgctggtct cggtgttgga cctctgaaca acgctgcata cctggacttc 1020
cgcgacgcca ccgagcgcct cggacaggac accatccgcg agcgttactc caacctcttc 1080
accatgtacg aagaggcaat tggcgaggac ccatactcca gcccaatgcg tattgcaccg 1140
acctgccact tcaccatggg tggcctctgg actgacttca acgaaatgac gtcactccca 1200
ggtctgttct gcgcaggcga agcatcctgg acctaccacg gtgcaaaccg tctgggcgca 1260
aactccctgc tctccgcttc cgtcgatggc tggttcaccc tgccattcac catccctaac 1320
tacctcggcc cattgcttgg ctccgagcgt ctgtcagagg atgcaccaga agcacaggca 1380
gcgattgcgc gtgcacaggc tcgcattgac cgcctcatgg gcaaccgccc agagtgggtc 1440
ggtgacaacg ttcacggacc tgagtactac caccgccagc ttggcgatat cctgtacttc 1500
tcctgtggcg tttcccgaaa cgtagaagac ctccaggatg gcatcaacaa gatccgtgcc 1560
ctccgcgatg acttctggaa gaacatgcgc atcaccggca gcaccgatga gatgaaccag 1620
gttctcgaat acgcagcacg cgtagccgac tacatcgacc tcggcgaact catgtgtgtc 1680
gacgccctcg accgcgacga gtcctgtggc gctcacttcc gcgacgacca cctctccgaa 1740
gatggcgaag cagaacgtga cgacgaaaac tggtgcttcg tctccgcatg ggaaccaggc 1800
gagaacggaa ccttcgtccg ccacgcagaa ccactgttct tcgaatccgt cccactgcag 1860
acaaggaact acaag 1875
<210> 118
<211> 625
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 118
Met Asn Leu Val Ser Pro Leu Asn Arg Arg Lys Phe Arg Val Leu Val
1 5 10 15
Val Gly Thr Gly Leu Ser Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Leu Gly Glu
20 25 30
Leu Gly Tyr Asp Val Lys Ala Phe Thr Tyr His Asp Ala Pro Arg Arg
35 40 45
Ala His Ser Ile Ala Ala Gln Gly Gly Val Asn Ser Ala Arg Gly Lys
50 55 60
Lys Val Asp Asn Asp Gly Ala Tyr Arg His Val Lys Asp Thr Val Lys
65 70 75 80
Gly Gly Asp Tyr Arg Gly Arg Glu Ser Asp Cys Trp Arg Leu Ala Val
85 90 95
Glu Ser Val Arg Val Ile Asp His Met Asn Ala Ile Gly Ala Pro Phe
100 105 110
Ala Arg Glu Tyr Gly Gly Ala Leu Ala Thr Arg Ser Phe Gly Gly Val
115 120 125
Gln Val Ser Arg Thr Tyr Tyr Thr Arg Gly Gln Thr Gly Gln Gln Leu
130 135 140
Gln Leu Ser Thr Ala Ser Ala Leu Gln Arg Gln Ile His Leu Gly Ser
145 150 155 160
Val Glu Ile Phe Thr His Asn Glu Met Val Asp Val Ile Val Thr Glu
165 170 175
Arg Asn Gly Glu Lys Arg Cys Glu Gly Leu Ile Met Arg Asn Leu Ile
180 185 190
Thr Gly Glu Leu Thr Ala His Thr Gly His Ala Val Ile Leu Ala Thr
195 200 205
Gly Gly Tyr Gly Asn Val Tyr His Met Ser Thr Leu Ala Lys Asn Ser
210 215 220
Asn Ala Ser Ala Ile Met Arg Ala Tyr Glu Ala Gly Ala Tyr Phe Ala
225 230 235 240
Ser Pro Ser Phe Ile Gln Phe His Pro Thr Gly Leu Pro Val Asn Ser
245 250 255
Thr Trp Gln Ser Lys Thr Ile Leu Met Ser Glu Ser Leu Arg Asn Asp
260 265 270
Gly Arg Ile Trp Ser Pro Lys Glu Pro Asn Asp Asn Arg Asp Pro Asn
275 280 285
Thr Ile Pro Glu Asp Glu Arg Asp Tyr Phe Leu Glu Arg Arg Tyr Pro
290 295 300
Ala Phe Gly Asn Leu Val Pro Arg Asp Val Ala Ser Arg Ala Ile Ser
305 310 315 320
Gln Gln Ile Asn Ala Gly Leu Gly Val Gly Pro Leu Asn Asn Ala Ala
325 330 335
Tyr Leu Asp Phe Arg Asp Ala Thr Glu Arg Leu Gly Gln Asp Thr Ile
340 345 350
Arg Glu Arg Tyr Ser Asn Leu Phe Thr Met Tyr Glu Glu Ala Ile Gly
355 360 365
Glu Asp Pro Tyr Ser Ser Pro Met Arg Ile Ala Pro Thr Cys His Phe
370 375 380
Thr Met Gly Gly Leu Trp Thr Asp Phe Asn Glu Met Thr Ser Leu Pro
385 390 395 400
Gly Leu Phe Cys Ala Gly Glu Ala Ser Trp Thr Tyr His Gly Ala Asn
405 410 415
Arg Leu Gly Ala Asn Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Asp Gly Trp Phe
420 425 430
Thr Leu Pro Phe Thr Ile Pro Asn Tyr Leu Gly Pro Leu Leu Gly Ser
435 440 445
Glu Arg Leu Ser Glu Asp Ala Pro Glu Ala Gln Ala Ala Ile Ala Arg
450 455 460
Ala Gln Ala Arg Ile Asp Arg Leu Met Gly Asn Arg Pro Glu Trp Val
465 470 475 480
Gly Asp Asn Val His Gly Pro Glu Tyr Tyr His Arg Gln Leu Gly Asp
485 490 495
Ile Leu Tyr Phe Ser Cys Gly Val Ser Arg Asn Val Glu Asp Leu Gln
500 505 510
Asp Gly Ile Asn Lys Ile Arg Ala Leu Arg Asp Asp Phe Trp Lys Asn
515 520 525
Met Arg Ile Thr Gly Ser Thr Asp Glu Met Asn Gln Val Leu Glu Tyr
530 535 540
Ala Ala Arg Val Ala Asp Tyr Ile Asp Leu Gly Glu Leu Met Cys Val
545 550 555 560
Asp Ala Leu Asp Arg Asp Glu Ser Cys Gly Ala His Phe Arg Asp Asp
565 570 575
His Leu Ser Glu Asp Gly Glu Ala Glu Arg Asp Asp Glu Asn Trp Cys
580 585 590
Phe Val Ser Ala Trp Glu Pro Gly Glu Asn Gly Thr Phe Val Arg His
595 600 605
Ala Glu Pro Leu Phe Phe Glu Ser Val Pro Leu Gln Thr Arg Asn Tyr
610 615 620
Lys
625
<210> 119
<211> 1107
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 119
ttggggcaat tcgggggtaa ttttgcagta tcgtcaagat cacccaaaac tggtggctgt 60
tctcttttaa gcgggatagc atgggttctt agaggacccc ctacaaggat tgaggattgt 120
ttaatgaatt ccccgcagaa cgtctccacc aagaaggtca ccgtcaccgg cgcagctggt 180
caaatctctt attcactgtt gtggcgcatc gccaacggtg aagtattcgg caccgacacc 240
cctgtagaac tgaaacttct ggagatccct caggctcttg gcggggcaga gggtgtggct 300
atggaacttc tggattctgc cttccccctc ctgcgaaaca tcaccatcac cgcggatgcc 360
aatgaggcat tcgacggcgc taatgcggcg tttttggtcg gtgcgaagcc tcgcggaaaa 420
ggcgaagagc gcgcagattt gctggctaac aacggcaaga ttttcggacc tcaaggtaaa 480
gctatcaatg acaacgccgc agatgacatt cgtgtcctag ttgttggaaa cccagcgaac 540
accaacgcgt tgattgcttc agctgcggcc ccagatgttc cagcatcccg cttcaacgca 600
atgatgcgcc ttgatcacaa ccgtgcgatc tcccagctgg ccaccaagct tggccgtgga 660
tctgcggaat ttaacaacat tgtggtctgg ggaaatcact ccgcaaccca gttcccagac 720
atcacctacg caaccgttgg tggagaaaag gtcactgacc tggttgatca cgattggtat 780
gtggaggagt tcattcctcg cgtggctaac cgtggcgctg aaatcattga ggtccgtgga 840
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<210> 120
<211> 369
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 120
Met Gly Gln Phe Gly Gly Asn Phe Ala Val Ser Ser Arg Ser Pro Lys
1 5 10 15
Thr Gly Gly Cys Ser Leu Leu Ser Gly Ile Ala Trp Val Leu Arg Gly
20 25 30
Pro Pro Thr Arg Ile Glu Asp Cys Leu Met Asn Ser Pro Gln Asn Val
35 40 45
Ser Thr Lys Lys Val Thr Val Thr Gly Ala Ala Gly Gln Ile Ser Tyr
50 55 60
Ser Leu Leu Trp Arg Ile Ala Asn Gly Glu Val Phe Gly Thr Asp Thr
65 70 75 80
Pro Val Glu Leu Lys Leu Leu Glu Ile Pro Gln Ala Leu Gly Gly Ala
85 90 95
Glu Gly Val Ala Met Glu Leu Leu Asp Ser Ala Phe Pro Leu Leu Arg
100 105 110
Asn Ile Thr Ile Thr Ala Asp Ala Asn Glu Ala Phe Asp Gly Ala Asn
115 120 125
Ala Ala Phe Leu Val Gly Ala Lys Pro Arg Gly Lys Gly Glu Glu Arg
130 135 140
Ala Asp Leu Leu Ala Asn Asn Gly Lys Ile Phe Gly Pro Gln Gly Lys
145 150 155 160
Ala Ile Asn Asp Asn Ala Ala Asp Asp Ile Arg Val Leu Val Val Gly
165 170 175
Asn Pro Ala Asn Thr Asn Ala Leu Ile Ala Ser Ala Ala Ala Pro Asp
180 185 190
Val Pro Ala Ser Arg Phe Asn Ala Met Met Arg Leu Asp His Asn Arg
195 200 205
Ala Ile Ser Gln Leu Ala Thr Lys Leu Gly Arg Gly Ser Ala Glu Phe
210 215 220
Asn Asn Ile Val Val Trp Gly Asn His Ser Ala Thr Gln Phe Pro Asp
225 230 235 240
Ile Thr Tyr Ala Thr Val Gly Gly Glu Lys Val Thr Asp Leu Val Asp
245 250 255
His Asp Trp Tyr Val Glu Glu Phe Ile Pro Arg Val Ala Asn Arg Gly
260 265 270
Ala Glu Ile Ile Glu Val Arg Gly Lys Ser Ser Ala Ala Ser Ala Ala
275 280 285
Ser Ser Ala Ile Asp His Met Arg Asp Trp Val Gln Gly Thr Glu Ala
290 295 300
Trp Ser Ser Ala Ala Ile Pro Ser Thr Gly Ala Tyr Gly Ile Pro Glu
305 310 315 320
Gly Ile Phe Val Gly Leu Pro Thr Val Ser Arg Asn Gly Glu Trp Glu
325 330 335
Ile Val Glu Gly Leu Glu Ile Ser Asp Phe Gln Arg Ala Arg Ile Asp
340 345 350
Ala Asn Ala Gln Glu Leu Gln Ala Glu Arg Glu Ala Val Arg Asp Leu
355 360 365
Leu
<210> 121
<211> 984
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 121
atgaattccc cgcagaacgt ctccaccaag aaggtcaccg tcaccggcgc agctggtcaa 60
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cgcgaggcag tgcgcgactt gctc 984
<210> 122
<211> 328
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 122
Met Asn Ser Pro Gln Asn Val Ser Thr Lys Lys Val Thr Val Thr Gly
1 5 10 15
Ala Ala Gly Gln Ile Ser Tyr Ser Leu Leu Trp Arg Ile Ala Asn Gly
20 25 30
Glu Val Phe Gly Thr Asp Thr Pro Val Glu Leu Lys Leu Leu Glu Ile
35 40 45
Pro Gln Ala Leu Gly Gly Ala Glu Gly Val Ala Met Glu Leu Leu Asp
50 55 60
Ser Ala Phe Pro Leu Leu Arg Asn Ile Thr Ile Thr Ala Asp Ala Asn
65 70 75 80
Glu Ala Phe Asp Gly Ala Asn Ala Ala Phe Leu Val Gly Ala Lys Pro
85 90 95
Arg Gly Lys Gly Glu Glu Arg Ala Asp Leu Leu Ala Asn Asn Gly Lys
100 105 110
Ile Phe Gly Pro Gln Gly Lys Ala Ile Asn Asp Asn Ala Ala Asp Asp
115 120 125
Ile Arg Val Leu Val Val Gly Asn Pro Ala Asn Thr Asn Ala Leu Ile
130 135 140
Ala Ser Ala Ala Ala Pro Asp Val Pro Ala Ser Arg Phe Asn Ala Met
145 150 155 160
Met Arg Leu Asp His Asn Arg Ala Ile Ser Gln Leu Ala Thr Lys Leu
165 170 175
Gly Arg Gly Ser Ala Glu Phe Asn Asn Ile Val Val Trp Gly Asn His
180 185 190
Ser Ala Thr Gln Phe Pro Asp Ile Thr Tyr Ala Thr Val Gly Gly Glu
195 200 205
Lys Val Thr Asp Leu Val Asp His Asp Trp Tyr Val Glu Glu Phe Ile
210 215 220
Pro Arg Val Ala Asn Arg Gly Ala Glu Ile Ile Glu Val Arg Gly Lys
225 230 235 240
Ser Ser Ala Ala Ser Ala Ala Ser Ser Ala Ile Asp His Met Arg Asp
245 250 255
Trp Val Gln Gly Thr Glu Ala Trp Ser Ser Ala Ala Ile Pro Ser Thr
260 265 270
Gly Ala Tyr Gly Ile Pro Glu Gly Ile Phe Val Gly Leu Pro Thr Val
275 280 285
Ser Arg Asn Gly Glu Trp Glu Ile Val Glu Gly Leu Glu Ile Ser Asp
290 295 300
Phe Gln Arg Ala Arg Ile Asp Ala Asn Ala Gln Glu Leu Gln Ala Glu
305 310 315 320
Arg Glu Ala Val Arg Asp Leu Leu
325
<210> 123
<211> 870
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 123
atgaacccca ttcaactgga cactttgctc tcaatcattg atgaaggcag cttcgaaggc 60
gcctccttag ccctttccat ttccccctcg gcggtgagtc agcgcgttaa agctctcgag 120
catcacgtgg gtcgagtgtt ggtatcgcgc acccaaccgg ccaaagcaac cgaagcgggt 180
gaagtccttg tgcaagcagc gcggaaaatg gtgttgctgc aagcagaaac taaagcgcaa 240
ctatctggac gccttgctga aatcccgtta accatcgcca tcaacgcaga ttcgctatcc 300
acatggtttc ctcccgtgtt caacgaggta gcttcttggg gtggagcaac gctcacgctg 360
cgcttggaag atgaagcgca cacattatcc ttgctgcggc gtggagatgt tttaggagcg 420
gtaacccgtg aagctaatcc cgtggcggga tgtgaagtag tagaacttgg aaccatgcgc 480
cacttggcca ttgcaacccc ctcattgcgg gatgcctaca tggttgatgg gaaactagat 540
tgggctgcga tgcccgtctt acgcttcggt cccaaagatg tgcttcaaga ccgtgacctg 600
gacgggcgcg tcgatggtcc tgtggggcgc aggcgcgtat ccattgtccc gtcggcggaa 660
ggttttggtg aggcaattcg ccgaggcctt ggttggggac ttcttcccga aacccaagct 720
gctcccatgc taaaagcagg agaagtgatc ctcctcgatg agatacccat tgacacaccg 780
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gttgatgcag caatcgaggg attgcggcct 870
<210> 124
<211> 290
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 124
Met Asn Pro Ile Gln Leu Asp Thr Leu Leu Ser Ile Ile Asp Glu Gly
1 5 10 15
Ser Phe Glu Gly Ala Ser Leu Ala Leu Ser Ile Ser Pro Ser Ala Val
20 25 30
Ser Gln Arg Val Lys Ala Leu Glu His His Val Gly Arg Val Leu Val
35 40 45
Ser Arg Thr Gln Pro Ala Lys Ala Thr Glu Ala Gly Glu Val Leu Val
50 55 60
Gln Ala Ala Arg Lys Met Val Leu Leu Gln Ala Glu Thr Lys Ala Gln
65 70 75 80
Leu Ser Gly Arg Leu Ala Glu Ile Pro Leu Thr Ile Ala Ile Asn Ala
85 90 95
Asp Ser Leu Ser Thr Trp Phe Pro Pro Val Phe Asn Glu Val Ala Ser
100 105 110
Trp Gly Gly Ala Thr Leu Thr Leu Arg Leu Glu Asp Glu Ala His Thr
115 120 125
Leu Ser Leu Leu Arg Arg Gly Asp Val Leu Gly Ala Val Thr Arg Glu
130 135 140
Ala Asn Pro Val Ala Gly Cys Glu Val Val Glu Leu Gly Thr Met Arg
145 150 155 160
His Leu Ala Ile Ala Thr Pro Ser Leu Arg Asp Ala Tyr Met Val Asp
165 170 175
Gly Lys Leu Asp Trp Ala Ala Met Pro Val Leu Arg Phe Gly Pro Lys
180 185 190
Asp Val Leu Gln Asp Arg Asp Leu Asp Gly Arg Val Asp Gly Pro Val
195 200 205
Gly Arg Arg Arg Val Ser Ile Val Pro Ser Ala Glu Gly Phe Gly Glu
210 215 220
Ala Ile Arg Arg Gly Leu Gly Trp Gly Leu Leu Pro Glu Thr Gln Ala
225 230 235 240
Ala Pro Met Leu Lys Ala Gly Glu Val Ile Leu Leu Asp Glu Ile Pro
245 250 255
Ile Asp Thr Pro Met Tyr Trp Gln Arg Trp Arg Leu Glu Ser Arg Ser
260 265 270
Leu Ala Arg Leu Thr Asp Ala Val Val Asp Ala Ala Ile Glu Gly Leu
275 280 285
Arg Pro
290
<210> 125
<211> 948
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 125
atgagtgaaa acattcgcgg agcccaagca gttggaatcg caaatatcgc catggacggg 60
accatcctgg acacgtggta cccagaaccc caaattttca acccggatca gtgggctgaa 120
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tccgacgtgg tgtggacaaa caagggccct tgccttcctg aaaactttga gtgggtgcgt 420
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gtcgactatg tggttccccc tggagtccgc atctccgaag cagaacgcgt gcgcctaggt 540
gcataccttg ctccgggtac ctctgtgctg cgtgaaggtt tcgtgtcttt caactccggc 600
accttgggtg ccgcaaaggt ggaaggccgc ctgagttccg gtgtggtcat cggtgaaggt 660
tccgagattg gactgtcttc tactattcag tccccgagag atgaacagcg ccgccgtttg 720
ccgttgagca tcggccaaaa ctgcaacttt ggtgtcagct ccggaatcat cggagtcagt 780
ctgggagaca attgcgacat cggaaataac attgtcttgg atggagatac ccccatttgg 840
ttcgcagccg atgaggagtt acgcactatc gactccatcg aaggccaagc aaattggtca 900
atcaagcgtg aatccggctt ccatgagcca gttgcccgcc tcaaagct 948
<210> 126
<211> 316
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 126
Met Ser Glu Asn Ile Arg Gly Ala Gln Ala Val Gly Ile Ala Asn Ile
1 5 10 15
Ala Met Asp Gly Thr Ile Leu Asp Thr Trp Tyr Pro Glu Pro Gln Ile
20 25 30
Phe Asn Pro Asp Gln Trp Ala Glu Arg Tyr Pro Leu Glu Val Gly Thr
35 40 45
Thr Arg Leu Gly Ala Asn Glu Leu Thr Pro Arg Met Leu Gln Leu Val
50 55 60
Lys Leu Asp Gln Asp Arg Leu Val Glu Gln Val Ala Val Arg Thr Val
65 70 75 80
Ile Pro Asp Leu Ser Gln Pro Pro Val Asp Ala His Asp Val Tyr Leu
85 90 95
Arg Leu His Leu Leu Ser His Arg Leu Val Arg Pro His Glu Met His
100 105 110
Met Gln Asn Thr Leu Glu Leu Leu Ser Asp Val Val Trp Thr Asn Lys
115 120 125
Gly Pro Cys Leu Pro Glu Asn Phe Glu Trp Val Arg Gly Ala Leu Arg
130 135 140
Ser Arg Gly Leu Ile His Val Tyr Cys Val Asp Arg Leu Pro Arg Met
145 150 155 160
Val Asp Tyr Val Val Pro Pro Gly Val Arg Ile Ser Glu Ala Glu Arg
165 170 175
Val Arg Leu Gly Ala Tyr Leu Ala Pro Gly Thr Ser Val Leu Arg Glu
180 185 190
Gly Phe Val Ser Phe Asn Ser Gly Thr Leu Gly Ala Ala Lys Val Glu
195 200 205
Gly Arg Leu Ser Ser Gly Val Val Ile Gly Glu Gly Ser Glu Ile Gly
210 215 220
Leu Ser Ser Thr Ile Gln Ser Pro Arg Asp Glu Gln Arg Arg Arg Leu
225 230 235 240
Pro Leu Ser Ile Gly Gln Asn Cys Asn Phe Gly Val Ser Ser Gly Ile
245 250 255
Ile Gly Val Ser Leu Gly Asp Asn Cys Asp Ile Gly Asn Asn Ile Val
260 265 270
Leu Asp Gly Asp Thr Pro Ile Trp Phe Ala Ala Asp Glu Glu Leu Arg
275 280 285
Thr Ile Asp Ser Ile Glu Gly Gln Ala Asn Trp Ser Ile Lys Arg Glu
290 295 300
Ser Gly Phe His Glu Pro Val Ala Arg Leu Lys Ala
305 310 315
<210> 127
<211> 1188
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 127
ttgggctccg cgaatgtttt cactcatttt ttaatcgacc gcttccatca tgttttaact 60
aaggtttgta ggcttaaacc tgtgaactct gaactcaaac caggattaga tctcctcggc 120
gacccaattg tccttactca acgtttggta gatataccga gtccgtcggg tcaggaaaag 180
cagattgctg atgaaattga agatgccctt cggaacctta atctacctgg tgtagaggtc 240
ttccgcttca acaacaacgt tcttgctcgc acgaacaggg gattggcctc gagggtcatg 300
cttgctggtc atatcgatac agtgccgatc gcggacaatc tgccaagccg tgtggaagac 360
ggcatcatgt atggctgtgg caccgtcgat atgaaatctg ggttggcggt gtatttgcat 420
acttttgcca ccttggccac gtcgactgag cttaaacatg atctgacgct gattgcgtat 480
gagtgcgagg aagttgctga tcacctcaat ggtttgggcc acattcgcga tgagcatccg 540
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gcgtataagg ccgcagaagt caacattgat ggcttgacct accgtgaagg cctcaacatc 780
gttttctgcg aatcgggcgt ggcaaacaac gtcattccag acctcgcgtg gatgaacctc 840
aacttccgtt tcgcgccgaa tcgcgatctc aacgaggcga tcgagcatgt cgtcgaaacg 900
cttgagcttg acggtcaaga cggcatcgaa tgggccgtag aagacggggc aggcggtgcc 960
cttccaggct tggggcagca ggtgacaagc gggcttatcg acgccgtcgg ccgcgaaaaa 1020
atccgcgcaa aattcggctg gaccgatgtc tcacgttttt cagccatggg aattccagcc 1080
ctaaactttg gcgctggtga tccaagtttc gcgcataaac gcgacgagca gtgcccagtg 1140
gagcaaatca cggatgtggc agcaattttg aagcagtacc tgagcgag 1188
<210> 128
<211> 396
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 128
Met Gly Ser Ala Asn Val Phe Thr His Phe Leu Ile Asp Arg Phe His
1 5 10 15
His Val Leu Thr Lys Val Cys Arg Leu Lys Pro Val Asn Ser Glu Leu
20 25 30
Lys Pro Gly Leu Asp Leu Leu Gly Asp Pro Ile Val Leu Thr Gln Arg
35 40 45
Leu Val Asp Ile Pro Ser Pro Ser Gly Gln Glu Lys Gln Ile Ala Asp
50 55 60
Glu Ile Glu Asp Ala Leu Arg Asn Leu Asn Leu Pro Gly Val Glu Val
65 70 75 80
Phe Arg Phe Asn Asn Asn Val Leu Ala Arg Thr Asn Arg Gly Leu Ala
85 90 95
Ser Arg Val Met Leu Ala Gly His Ile Asp Thr Val Pro Ile Ala Asp
100 105 110
Asn Leu Pro Ser Arg Val Glu Asp Gly Ile Met Tyr Gly Cys Gly Thr
115 120 125
Val Asp Met Lys Ser Gly Leu Ala Val Tyr Leu His Thr Phe Ala Thr
130 135 140
Leu Ala Thr Ser Thr Glu Leu Lys His Asp Leu Thr Leu Ile Ala Tyr
145 150 155 160
Glu Cys Glu Glu Val Ala Asp His Leu Asn Gly Leu Gly His Ile Arg
165 170 175
Asp Glu His Pro Glu Trp Leu Ala Ala Asp Leu Ala Leu Leu Gly Glu
180 185 190
Pro Thr Gly Gly Trp Ile Glu Ala Gly Cys Gln Gly Asn Leu Arg Ile
195 200 205
Lys Val Thr Ala His Gly Val Arg Ala His Ser Ala Arg Ser Trp Leu
210 215 220
Gly Asp Asn Ala Met His Lys Leu Ser Pro Ile Ile Ser Lys Val Ala
225 230 235 240
Ala Tyr Lys Ala Ala Glu Val Asn Ile Asp Gly Leu Thr Tyr Arg Glu
245 250 255
Gly Leu Asn Ile Val Phe Cys Glu Ser Gly Val Ala Asn Asn Val Ile
260 265 270
Pro Asp Leu Ala Trp Met Asn Leu Asn Phe Arg Phe Ala Pro Asn Arg
275 280 285
Asp Leu Asn Glu Ala Ile Glu His Val Val Glu Thr Leu Glu Leu Asp
290 295 300
Gly Gln Asp Gly Ile Glu Trp Ala Val Glu Asp Gly Ala Gly Gly Ala
305 310 315 320
Leu Pro Gly Leu Gly Gln Gln Val Thr Ser Gly Leu Ile Asp Ala Val
325 330 335
Gly Arg Glu Lys Ile Arg Ala Lys Phe Gly Trp Thr Asp Val Ser Arg
340 345 350
Phe Ser Ala Met Gly Ile Pro Ala Leu Asn Phe Gly Ala Gly Asp Pro
355 360 365
Ser Phe Ala His Lys Arg Asp Glu Gln Cys Pro Val Glu Gln Ile Thr
370 375 380
Asp Val Ala Ala Ile Leu Lys Gln Tyr Leu Ser Glu
385 390 395
<210> 129
<211> 1107
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 129
gtgaactctg aactcaaacc aggattagat ctcctcggcg acccaattgt ccttactcaa 60
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gtgccgatcg cggacaatct gccaagccgt gtggaagacg gcatcatgta tggctgtggc 300
accgtcgata tgaaatctgg gttggcggtg tatttgcata cttttgccac cttggccacg 360
tcgactgagc ttaaacatga tctgacgctg attgcgtatg agtgcgagga agttgctgat 420
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gcaattttga agcagtacct gagcgag 1107
<210> 130
<211> 369
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 130
Met Asn Ser Glu Leu Lys Pro Gly Leu Asp Leu Leu Gly Asp Pro Ile
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Lys Gln Ile Ala Asp Glu Ile Glu Asp Ala Leu Arg Asn Leu Asn Leu
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50 55 60
Asn Arg Gly Leu Ala Ser Arg Val Met Leu Ala Gly His Ile Asp Thr
65 70 75 80
Val Pro Ile Ala Asp Asn Leu Pro Ser Arg Val Glu Asp Gly Ile Met
85 90 95
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His Thr Phe Ala Thr Leu Ala Thr Ser Thr Glu Leu Lys His Asp Leu
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130 135 140
Leu Gly His Ile Arg Asp Glu His Pro Glu Trp Leu Ala Ala Asp Leu
145 150 155 160
Ala Leu Leu Gly Glu Pro Thr Gly Gly Trp Ile Glu Ala Gly Cys Gln
165 170 175
Gly Asn Leu Arg Ile Lys Val Thr Ala His Gly Val Arg Ala His Ser
180 185 190
Ala Arg Ser Trp Leu Gly Asp Asn Ala Met His Lys Leu Ser Pro Ile
195 200 205
Ile Ser Lys Val Ala Ala Tyr Lys Ala Ala Glu Val Asn Ile Asp Gly
210 215 220
Leu Thr Tyr Arg Glu Gly Leu Asn Ile Val Phe Cys Glu Ser Gly Val
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Ala Asn Asn Val Ile Pro Asp Leu Ala Trp Met Asn Leu Asn Phe Arg
245 250 255
Phe Ala Pro Asn Arg Asp Leu Asn Glu Ala Ile Glu His Val Val Glu
260 265 270
Thr Leu Glu Leu Asp Gly Gln Asp Gly Ile Glu Trp Ala Val Glu Asp
275 280 285
Gly Ala Gly Gly Ala Leu Pro Gly Leu Gly Gln Gln Val Thr Ser Gly
290 295 300
Leu Ile Asp Ala Val Gly Arg Glu Lys Ile Arg Ala Lys Phe Gly Trp
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Thr Asp Val Ser Arg Phe Ser Ala Met Gly Ile Pro Ala Leu Asn Phe
325 330 335
Gly Ala Gly Asp Pro Ser Phe Ala His Lys Arg Asp Glu Gln Cys Pro
340 345 350
Val Glu Gln Ile Thr Asp Val Ala Ala Ile Leu Lys Gln Tyr Leu Ser
355 360 365
Glu
<210> 131
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<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 131
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1920
<210> 132
<211> 640
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 132
Met Cys Gly Leu Leu Gly Ile Leu Thr Ala Asn Gly Asn Ala Glu Ala
1 5 10 15
Phe Val Pro Ala Leu Glu Arg Ala Leu Pro Cys Met Arg His Arg Gly
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Pro Asp Asp Ala Gly Thr Trp His Asp Ala Asp Ala Ala Phe Gly Phe
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65 70 75 80
Glu Ile Tyr Asn Tyr Val Glu Leu Arg Lys Glu Leu Ser Asp Leu Gly
85 90 95
Tyr Ala Phe Asn Thr Ser Gly Asp Gly Glu Pro Ile Val Val Gly Phe
100 105 110
His His Trp Gly Glu Ser Val Val Glu His Leu Arg Gly Met Phe Gly
115 120 125
Ile Ala Ile Trp Asp Thr Lys Glu Lys Ser Leu Phe Leu Ala Arg Asp
130 135 140
Gln Phe Gly Ile Lys Pro Leu Phe Tyr Ala Thr Thr Glu His Gly Thr
145 150 155 160
Val Phe Ser Ser Glu Lys Lys Thr Ile Leu Glu Met Ala Glu Glu Met
165 170 175
Asn Leu Asp Leu Gly Leu Asp Lys Arg Thr Ile Glu His Tyr Val Asp
180 185 190
Leu Gln Tyr Val Pro Glu Pro Asp Thr Leu His Ala Gln Ile Ser Arg
195 200 205
Leu Glu Ser Gly Cys Thr Ala Thr Val Arg Pro Gly Gly Lys Leu Glu
210 215 220
Gln Lys Arg Tyr Phe Lys Pro Gln Phe Pro Val Gln Lys Val Val Lys
225 230 235 240
Gly Lys Glu Gln Asp Leu Phe Asp Arg Ile Ala Gln Val Leu Glu Asp
245 250 255
Ser Val Glu Lys His Met Arg Ala Asp Val Thr Val Gly Ser Phe Leu
260 265 270
Ser Gly Gly Ile Asp Ser Thr Ala Ile Ala Ala Leu Ala Lys Arg His
275 280 285
Asn Pro Asp Leu Leu Thr Phe Thr Thr Gly Phe Glu Arg Glu Gly Tyr
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Ser Glu Val Asp Val Ala Ala Glu Ser Ala Ala Ala Ile Gly Ala Glu
305 310 315 320
His Ile Val Lys Ile Val Ser Pro Glu Glu Tyr Ala Asn Ala Ile Pro
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Pro Leu Tyr Phe Val Ala Ala Glu Ala Arg Lys His Val Lys Val Val
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<210> 133
<211> 1173
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 133
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<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
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<210> 135
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<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 135
gtgaatttga ccatcccctt tgccaaaggc cacgccaccg aaaacgactt catcatcatc 60
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<211> 277
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 136
Met Asn Leu Thr Ile Pro Phe Ala Lys Gly His Ala Thr Glu Asn Asp
1 5 10 15
Phe Ile Ile Ile Pro Asp Glu Asp Ala Arg Leu Asp Leu Thr Pro Glu
20 25 30
Met Val Val Thr Leu Cys Asp Arg Arg Ala Gly Ile Gly Ala Asp Gly
35 40 45
Ile Leu Arg Val Val Lys Ala Ala Asp Val Glu Gly Ser Thr Val Asp
50 55 60
Pro Ser Leu Trp Phe Met Asp Tyr Arg Asn Ala Asp Gly Ser Leu Ala
65 70 75 80
Glu Met Cys Gly Asn Gly Val Arg Leu Phe Ala His Trp Leu Tyr Ser
85 90 95
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100 105 110
Val Arg His Val Asp Ile Leu Gln Ala Asp Gln His Ser Ala Gln Val
115 120 125
Arg Val Asp Met Gly Ile Pro Asp Val Thr Gly Leu Ser Thr Cys Asp
130 135 140
Ile Asn Gly Gln Val Phe Ala Gly Leu Gly Val Asp Met Gly Asn Pro
145 150 155 160
His Leu Ala Cys Val Val Pro Gly Leu Ser Ala Ser Ala Leu Ala Asp
165 170 175
Met Glu Leu Arg Ala Pro Thr Phe Asp Gln Glu Phe Phe Pro His Gly
180 185 190
Val Asn Val Glu Ile Val Thr Glu Leu Glu Asp Asp Ala Val Ser Met
195 200 205
Arg Val Trp Glu Arg Gly Val Gly Glu Thr Arg Ser Cys Gly Thr Gly
210 215 220
Thr Val Ala Ala Ala Cys Ala Ala Leu Ala Asp Ala Gly Leu Gly Glu
225 230 235 240
Gly Thr Val Lys Val Cys Val Pro Gly Gly Glu Val Glu Val Gln Ile
245 250 255
Phe Asp Asp Gly Ser Thr Leu Thr Gly Pro Ser Ala Ile Ile Ala Leu
260 265 270
Gly Glu Val Gln Ile
275
<210> 137
<211> 2823
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 137
ttgctgggtg attttttatc tcatgcacgc caacaccctc aatgtgaaag agtgtttaaa 60
gtagttatga ctgatttttt acgcgatgac atcaggttcc tcggtcaaat cctcggtgag 120
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tcttttgata tcgccaaggg caacgccgaa atggatagcc tggttcaggt tttcgacggc 240
attactccag ccaaggcaac accgattgct cgcgcatttt cccacttcgc tctgctggct 300
aacctggcgg aagacctcta cgatgaagag cttcgtgaac aggctctcga tgcaggcgac 360
acccctccgg acagcactct tgatgccacc tggctgaaac tcaatgaggg caatgttggc 420
gcagaagctg tggccgatgt gctgcgcaat gctgaggtgg cgccggttct gactgcgcac 480
ccaactgaga ctcgccgccg cactgttttt gatgcgcaaa agtggatcac cacccacatg 540
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cttttggaag agattccacg tatcaaccgt gatgtggctg ttgagcttcg tgagcgtttc 780
ggcgagggtg ttcctttgaa gcccgtggtc aagccaggtt cctggattgg tggagaccac 840
gacggtaacc cttatgtcac cgcggaaaca gttgagtatt ccactcaccg cgctgcggaa 900
accgtgctca agtactatgc acgccagctg cattccctcg agcatgagct cagcctgtcg 960
gaccgcatga ataaggtcac cccgcagctg cttgcgctgg cagatgcagg gcacaacgac 1020
gtgccaagcc gcgtggatga gccttatcga cgcgccgtcc atggcgttcg cggacgtatc 1080
ctcgcgacga cggccgagct gatcggcgag gacgccgttg agggcgtgtg gttcaaggtc 1140
tttactccat acgcatctcc ggaagaattc ttaaacgatg cgttgaccat tgatcattct 1200
ctgcgtgaat ccaaggacgt tctcattgcc gatgatcgtt tgtctgtgct gatttctgcc 1260
atcgagagct ttggattcaa cctttacgca ctggatctgc gccaaaactc cgaaagctac 1320
gaggacgtcc tcaccgagct tttcgaacgc gcccaagtca ccgcaaacta ccgcgagctg 1380
tctgaagcag agaagcttga ggtgctgctg aaggaactgc gcagccctcg tccgctgatc 1440
ccgcacggtt cagatgaata cagcgaggtc accgaccgcg agctcggcat cttccgcacc 1500
gcgtcggagg ctgttaagaa attcgggcca cggatggtgc ctcactgcat catctccatg 1560
gcatcatcgg tcaccgatgt gctcgagccg atggtgttgc tcaaggaatt cggactcatc 1620
gcagccaacg gcgacaaccc acgcggcacc gtcgatgtca tcccactgtt cgaaaccatc 1680
gaagatctcc aggccggcgc cggaatcctc gacgaactgt ggaaaattga tctctaccgc 1740
aactacctcc tgcagcgcga caacgtccag gaagtcatgc tcggttactc cgattccaac 1800
aaggatggcg gatatttctc cgcaaactgg gcgctttacg acgcggaact gcagctcgtc 1860
gaactatgcc gatcagccgg ggtcaagctt cgcctgttcc acggccgtgg tggcaccgtc 1920
ggccgcggtg gcggaccttc ctacgacgcg attcttgccc agcccagggg ggctgtccaa 1980
ggttccgtgc gcatcaccga gcagggcgag atcatctccg ctaagtacgg caaccccgaa 2040
accgcgcgcc gaaacctcga agccctggtc tcagccacgc ttgaggcatc gcttctcgac 2100
gtctccgaac tcaccgatca ccaacgcgcg tacgacatca tgagtgagat ctctgagctc 2160
agcttgaaga agtacgcctc cttggtgcac gaggatcaag gcttcatcga ttacttcacc 2220
cagtccacgc cgctgcagga gattggatcc ctcaacatcg gatccaggcc ttcctcacgc 2280
aagcagacct cctcggtgga agatttgcga gccatcccat gggtgctcag ctggtcacag 2340
tctcgtgtca tgctgccagg ctggtttggt gtcggaaccg cattagagca gtggattggc 2400
gaaggggagc aggccaccca acgcattgcc gagctgcaaa cactcaatga gtcctggcca 2460
tttttcacct cagtgttgga taacatggct caggtgatgt ccaaggcaga gctgcgtttg 2520
gcaaagctct acgcagacct gatcccagat acggaagtag ccgagcgagt ctattccgtc 2580
atccgcgagg agtacttcct gaccaagaag atgttctgcg taatcaccgg ctctgatgat 2640
ctgcttgatg acaacccact tctcgcacgc tctgtccagc gccgataccc ctacctgctt 2700
ccactcaacg tgatccaggt agagatgatg cgacgctacc gaaaaggcga ccaaagcgag 2760
caagtgtccc gcaacattca gctgaccatg aacggtcttt ccactgcgct gcgcaactcc 2820
ggc 2823
<210> 138
<211> 941
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 138
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Arg Val Phe Lys Val Val Met Thr Asp Phe Leu Arg Asp Asp Ile Arg
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Phe Leu Gly Gln Ile Leu Gly Glu Val Ile Ala Glu Gln Glu Gly Gln
35 40 45
Glu Val Tyr Glu Leu Val Glu Gln Ala Arg Leu Thr Ser Phe Asp Ile
50 55 60
Ala Lys Gly Asn Ala Glu Met Asp Ser Leu Val Gln Val Phe Asp Gly
65 70 75 80
Ile Thr Pro Ala Lys Ala Thr Pro Ile Ala Arg Ala Phe Ser His Phe
85 90 95
Ala Leu Leu Ala Asn Leu Ala Glu Asp Leu Tyr Asp Glu Glu Leu Arg
100 105 110
Glu Gln Ala Leu Asp Ala Gly Asp Thr Pro Pro Asp Ser Thr Leu Asp
115 120 125
Ala Thr Trp Leu Lys Leu Asn Glu Gly Asn Val Gly Ala Glu Ala Val
130 135 140
Ala Asp Val Leu Arg Asn Ala Glu Val Ala Pro Val Leu Thr Ala His
145 150 155 160
Pro Thr Glu Thr Arg Arg Arg Thr Val Phe Asp Ala Gln Lys Trp Ile
165 170 175
Thr Thr His Met Arg Glu Arg His Ala Leu Gln Ser Ala Glu Pro Thr
180 185 190
Ala Arg Thr Gln Ser Lys Leu Asp Glu Ile Glu Lys Asn Ile Arg Arg
195 200 205
Arg Ile Thr Ile Leu Trp Gln Thr Ala Leu Ile Arg Val Ala Arg Pro
210 215 220
Arg Ile Glu Asp Glu Ile Glu Val Gly Leu Arg Tyr Tyr Lys Leu Ser
225 230 235 240
Leu Leu Glu Glu Ile Pro Arg Ile Asn Arg Asp Val Ala Val Glu Leu
245 250 255
Arg Glu Arg Phe Gly Glu Gly Val Pro Leu Lys Pro Val Val Lys Pro
260 265 270
Gly Ser Trp Ile Gly Gly Asp His Asp Gly Asn Pro Tyr Val Thr Ala
275 280 285
Glu Thr Val Glu Tyr Ser Thr His Arg Ala Ala Glu Thr Val Leu Lys
290 295 300
Tyr Tyr Ala Arg Gln Leu His Ser Leu Glu His Glu Leu Ser Leu Ser
305 310 315 320
Asp Arg Met Asn Lys Val Thr Pro Gln Leu Leu Ala Leu Ala Asp Ala
325 330 335
Gly His Asn Asp Val Pro Ser Arg Val Asp Glu Pro Tyr Arg Arg Ala
340 345 350
Val His Gly Val Arg Gly Arg Ile Leu Ala Thr Thr Ala Glu Leu Ile
355 360 365
Gly Glu Asp Ala Val Glu Gly Val Trp Phe Lys Val Phe Thr Pro Tyr
370 375 380
Ala Ser Pro Glu Glu Phe Leu Asn Asp Ala Leu Thr Ile Asp His Ser
385 390 395 400
Leu Arg Glu Ser Lys Asp Val Leu Ile Ala Asp Asp Arg Leu Ser Val
405 410 415
Leu Ile Ser Ala Ile Glu Ser Phe Gly Phe Asn Leu Tyr Ala Leu Asp
420 425 430
Leu Arg Gln Asn Ser Glu Ser Tyr Glu Asp Val Leu Thr Glu Leu Phe
435 440 445
Glu Arg Ala Gln Val Thr Ala Asn Tyr Arg Glu Leu Ser Glu Ala Glu
450 455 460
Lys Leu Glu Val Leu Leu Lys Glu Leu Arg Ser Pro Arg Pro Leu Ile
465 470 475 480
Pro His Gly Ser Asp Glu Tyr Ser Glu Val Thr Asp Arg Glu Leu Gly
485 490 495
Ile Phe Arg Thr Ala Ser Glu Ala Val Lys Lys Phe Gly Pro Arg Met
500 505 510
Val Pro His Cys Ile Ile Ser Met Ala Ser Ser Val Thr Asp Val Leu
515 520 525
Glu Pro Met Val Leu Leu Lys Glu Phe Gly Leu Ile Ala Ala Asn Gly
530 535 540
Asp Asn Pro Arg Gly Thr Val Asp Val Ile Pro Leu Phe Glu Thr Ile
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Glu Asp Leu Gln Ala Gly Ala Gly Ile Leu Asp Glu Leu Trp Lys Ile
565 570 575
Asp Leu Tyr Arg Asn Tyr Leu Leu Gln Arg Asp Asn Val Gln Glu Val
580 585 590
Met Leu Gly Tyr Ser Asp Ser Asn Lys Asp Gly Gly Tyr Phe Ser Ala
595 600 605
Asn Trp Ala Leu Tyr Asp Ala Glu Leu Gln Leu Val Glu Leu Cys Arg
610 615 620
Ser Ala Gly Val Lys Leu Arg Leu Phe His Gly Arg Gly Gly Thr Val
625 630 635 640
Gly Arg Gly Gly Gly Pro Ser Tyr Asp Ala Ile Leu Ala Gln Pro Arg
645 650 655
Gly Ala Val Gln Gly Ser Val Arg Ile Thr Glu Gln Gly Glu Ile Ile
660 665 670
Ser Ala Lys Tyr Gly Asn Pro Glu Thr Ala Arg Arg Asn Leu Glu Ala
675 680 685
Leu Val Ser Ala Thr Leu Glu Ala Ser Leu Leu Asp Val Ser Glu Leu
690 695 700
Thr Asp His Gln Arg Ala Tyr Asp Ile Met Ser Glu Ile Ser Glu Leu
705 710 715 720
Ser Leu Lys Lys Tyr Ala Ser Leu Val His Glu Asp Gln Gly Phe Ile
725 730 735
Asp Tyr Phe Thr Gln Ser Thr Pro Leu Gln Glu Ile Gly Ser Leu Asn
740 745 750
Ile Gly Ser Arg Pro Ser Ser Arg Lys Gln Thr Ser Ser Val Glu Asp
755 760 765
Leu Arg Ala Ile Pro Trp Val Leu Ser Trp Ser Gln Ser Arg Val Met
770 775 780
Leu Pro Gly Trp Phe Gly Val Gly Thr Ala Leu Glu Gln Trp Ile Gly
785 790 795 800
Glu Gly Glu Gln Ala Thr Gln Arg Ile Ala Glu Leu Gln Thr Leu Asn
805 810 815
Glu Ser Trp Pro Phe Phe Thr Ser Val Leu Asp Asn Met Ala Gln Val
820 825 830
Met Ser Lys Ala Glu Leu Arg Leu Ala Lys Leu Tyr Ala Asp Leu Ile
835 840 845
Pro Asp Thr Glu Val Ala Glu Arg Val Tyr Ser Val Ile Arg Glu Glu
850 855 860
Tyr Phe Leu Thr Lys Lys Met Phe Cys Val Ile Thr Gly Ser Asp Asp
865 870 875 880
Leu Leu Asp Asp Asn Pro Leu Leu Ala Arg Ser Val Gln Arg Arg Tyr
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Pro Tyr Leu Leu Pro Leu Asn Val Ile Gln Val Glu Met Met Arg Arg
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Tyr Arg Lys Gly Asp Gln Ser Glu Gln Val Ser Arg Asn Ile Gln Leu
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Thr Met Asn Gly Leu Ser Thr Ala Leu Arg Asn Ser Gly
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<210> 139
<211> 2757
<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 139
atgactgatt ttttacgcga tgacatcagg ttcctcggtc aaatcctcgg tgaggtaatt 60
gcggaacaag aaggccagga ggtttatgaa ctggtcgaac aagcgcgcct gacttctttt 120
gatatcgcca agggcaacgc cgaaatggat agcctggttc aggttttcga cggcattact 180
ccagccaagg caacaccgat tgctcgcgca ttttcccact tcgctctgct ggctaacctg 240
gcggaagacc tctacgatga agagcttcgt gaacaggctc tcgatgcagg cgacacccct 300
ccggacagca ctcttgatgc cacctggctg aaactcaatg agggcaatgt tggcgcagaa 360
gctgtggccg atgtgctgcg caatgctgag gtggcgccgg ttctgactgc gcacccaact 420
gagactcgcc gccgcactgt ttttgatgcg caaaagtgga tcaccaccca catgcgtgaa 480
cgccacgctt tgcagtctgc ggagcctacc gctcgtacgc aaagcaagtt ggatgagatc 540
gagaagaaca tccgccgtcg catcaccatt ttgtggcaga ccgcgttgat tcgtgtggcc 600
cgcccacgta tcgaggacga gatcgaagta gggctgcgct actacaagct gagccttttg 660
gaagagattc cacgtatcaa ccgtgatgtg gctgttgagc ttcgtgagcg tttcggcgag 720
ggtgttcctt tgaagcccgt ggtcaagcca ggttcctgga ttggtggaga ccacgacggt 780
aacccttatg tcaccgcgga aacagttgag tattccactc accgcgctgc ggaaaccgtg 840
ctcaagtact atgcacgcca gctgcattcc ctcgagcatg agctcagcct gtcggaccgc 900
atgaataagg tcaccccgca gctgcttgcg ctggcagatg cagggcacaa cgacgtgcca 960
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acgacggccg agctgatcgg cgaggacgcc gttgagggcg tgtggttcaa ggtctttact 1080
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gaatccaagg acgttctcat tgccgatgat cgtttgtctg tgctgatttc tgccatcgag 1200
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gtgcgcatca ccgagcaggg cgagatcatc tccgctaagt acggcaaccc cgaaaccgcg 1980
cgccgaaacc tcgaagccct ggtctcagcc acgcttgagg catcgcttct cgacgtctcc 2040
gaactcaccg atcaccaacg cgcgtacgac atcatgagtg agatctctga gctcagcttg 2100
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<211> 919
<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 140
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Gly Glu Val Ile Ala Glu Gln Glu Gly Gln Glu Val Tyr Glu Leu Val
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Glu Gln Ala Arg Leu Thr Ser Phe Asp Ile Ala Lys Gly Asn Ala Glu
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Met Asp Ser Leu Val Gln Val Phe Asp Gly Ile Thr Pro Ala Lys Ala
50 55 60
Thr Pro Ile Ala Arg Ala Phe Ser His Phe Ala Leu Leu Ala Asn Leu
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Ala Glu Asp Leu Tyr Asp Glu Glu Leu Arg Glu Gln Ala Leu Asp Ala
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Gly Asp Thr Pro Pro Asp Ser Thr Leu Asp Ala Thr Trp Leu Lys Leu
100 105 110
Asn Glu Gly Asn Val Gly Ala Glu Ala Val Ala Asp Val Leu Arg Asn
115 120 125
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Arg His Ala Leu Gln Ser Ala Glu Pro Thr Ala Arg Thr Gln Ser Lys
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Leu Asp Glu Ile Glu Lys Asn Ile Arg Arg Arg Ile Thr Ile Leu Trp
180 185 190
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Glu Val Gly Leu Arg Tyr Tyr Lys Leu Ser Leu Leu Glu Glu Ile Pro
210 215 220
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Gly Val Pro Leu Lys Pro Val Val Lys Pro Gly Ser Trp Ile Gly Gly
245 250 255
Asp His Asp Gly Asn Pro Tyr Val Thr Ala Glu Thr Val Glu Tyr Ser
260 265 270
Thr His Arg Ala Ala Glu Thr Val Leu Lys Tyr Tyr Ala Arg Gln Leu
275 280 285
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290 295 300
Thr Pro Gln Leu Leu Ala Leu Ala Asp Ala Gly His Asn Asp Val Pro
305 310 315 320
Ser Arg Val Asp Glu Pro Tyr Arg Arg Ala Val His Gly Val Arg Gly
325 330 335
Arg Ile Leu Ala Thr Thr Ala Glu Leu Ile Gly Glu Asp Ala Val Glu
340 345 350
Gly Val Trp Phe Lys Val Phe Thr Pro Tyr Ala Ser Pro Glu Glu Phe
355 360 365
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Ser Tyr Glu Asp Val Leu Thr Glu Leu Phe Glu Arg Ala Gln Val Thr
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515 520 525
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580 585 590
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675 680 685
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690 695 700
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Val Gly Thr Ala Leu Glu Gln Trp Ile Gly Glu Gly Glu Gln Ala Thr
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Leu Leu Ala Arg Ser Val Gln Arg Arg Tyr Pro Tyr Leu Leu Pro Leu
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915
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<212> DNA
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 141
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<212> PRT
<213> Corynebacterium glutamicum
<400> 142
Met Ala Ile Glu Leu Asn Val Gly Arg Lys Val Thr Val Thr Val Pro
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Gly Ser Ser Ala Asn Leu Gly Pro Gly Phe Asp Thr Leu Gly Leu Ala
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Leu Ser Val Tyr Asp Thr Val Glu Val Glu Ile Ile Pro Ser Gly Leu
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180 185 190
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195 200 205
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Asp Leu Leu Trp Glu Gly Thr Arg Asp Arg Leu His Gln Pro Tyr Arg
225 230 235 240
Ala Glu Val Leu Pro Ile Thr Ser Glu Trp Val Asn Arg Leu Arg Asn
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
Ser Gly Ile Lys Val Leu Glu Leu Glu Val Ala Gly Pro Val Lys Val
290 295 300
Glu Val Asn Gln Pro
305
Claims (23)
- 트레오닌 신타제의 생리적 기능을 보유하고, 서열번호 8의 아미노산 서열을 가지며, 상기 아미노산 서열의 69번째 아미노산 위치에서 아르기닌을 갖는 단백질.
- 제1항의 단백질을 코딩하는 단리된 핵산.
- 제2항의 핵산 하나 이상을 포함하는 단리된 핵산 작제물.
- 제3항에 있어서, 프로모터 및 종결자를 기능적으로 연결된 형태로 포함하는 핵산 작제물.
- (a) 제2항의 핵산 하나 이상, 또는
(b) 제3항의 핵산 작제물 하나 이상, 또는
(c) 제2항의 내인성 핵산에 대하여 이종이고 유기체에서 제2항의 내인성 핵산이 발현되도록 할 수 있는 프로모터
를 비-인간 모체 유기체에 도입시켜서 상기 모체 유기체를 형질전환시킴으로써 유전적으로 변형된 비-인간 유기체를 제조하는 방법. - 제5항에 있어서, 제5항의 실시양태 (a)의 핵산 또는 제5항의 실시양태 (b)의 핵산 작제물을 복제 플라스미드로서 도입하거나 염색체에 통합시키는 것인 방법.
- 제5항에 있어서, 제5항의 실시양태 (c)의 프로모터가 유기체에서 제2항의 내인성 핵산에 기능적으로 연결된 것인 방법.
- 제5항의 방법에 의해 수득될 수 있는, 유전적으로 변형된 유기체.
- (a) 제2항의 핵산 하나 이상, 또는
(b) 제3항의 핵산 작제물 하나 이상, 또는
(c) 제2항의 내인성 핵산에 대하여 이종이고 유기체에서 제2항의 내인성 핵산이 발현되도록 할 수 있는 프로모터
로 형질전환된, 유전적으로 변형된 비-인간 유기체. - 제8항에 있어서, 사용되는 모체 유기체가 이미 정밀 화학물질을 생산할 수 있는 유기체인 유전적으로 변형된 유기체.
- 제8항에 있어서, 모체 유기체와 비교할 때, 상기 핵산의 발현으로 인해 정밀 화학물질 생산이 조정되는 유전적으로 변형된 유기체.
- 제8항의 유전적으로 변형된 유기체를 배양함으로써 정밀 화학물질을 제조하는 방법.
- A) 비-인간 모체 유기체를
(a) 제2항의 핵산 하나 이상, 또는
(b) 제3항의 핵산 작제물 하나 이상, 또는
(c) 제2항의 내인성 핵산에 대하여 이종이고 유기체에서 제2항의 내인성 핵산이 발현되도록 할 수 있는 프로모터
로 형질전환시키는 단계, 및
B) 상기 단계 A)에 따라 제조된 유전적으로 변형된 유기체를 배양하는 단계
에 의해서 정밀 화학물질을 제조하는 방법. - 제12항에 있어서, 배양 후에 상기한 유전적으로 변형된 유기체 및(또는) 배양 배지로부터 1종 이상의 정밀 화학물질을 단리하는 것인 방법.
- 제12항에 있어서, 유전적으로 변형된 유기체가 미생물인 방법.
- 제15항에 있어서, 미생물이 코리네박테리움(Corynebacterium) 속의 박테리아 또는 브레비박테리움(Brevibacterium) 속의 박테리아로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법.
- 제12항에 있어서, 정밀 화학물질이 아미노산인 방법.
- 제17항에 있어서, 아미노산이 L-리신, L-트레오닌 및 L-메티오닌으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법.
- 제13항에 있어서, 배양 후에 상기한 유전적으로 변형된 유기체 및(또는) 배양 배지로부터 1종 이상의 정밀 화학물질을 단리하는 것인 방법.
- 제13항에 있어서, 유전적으로 변형된 유기체가 미생물인 방법.
- 제20항에 있어서, 미생물이 코리네박테리움(Corynebacterium) 속의 박테리아 또는 브레비박테리움(Brevibacterium) 속의 박테리아로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법.
- 제13항에 있어서, 정밀 화학물질이 아미노산인 방법.
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