KR20100126701A

KR20100126701A - 옥살리플라틴 리포솜 제제를 함유하는 항종양효과 증강제 및 상기 리포솜 제제를 함유하는 항종양제

Info

Publication number: KR20100126701A
Application number: KR1020107018745A
Authority: KR
Inventors: 다츠히로 이시다; 히로시 기와다
Original assignee: 토쿠시마 대학; 다이호야쿠힌고교 가부시키가이샤
Priority date: 2008-01-30
Filing date: 2009-01-29
Publication date: 2010-12-02
Also published as: RU2010136273A; TWI468188B; CN101925356B; CA2713673C; SG187515A1; US8940327B2; AU2009209938B2; WO2009096487A1; RU2492863C2; EP2246056A1; HK1146469A1; EP2246056A4; KR101309440B1; JPWO2009096487A1; JP5419716B2; TW200936182A; CA2713673A1; US20100330166A1; CN103271922A; ES2500590T3

Abstract

목적은 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨을 포함하는 혼합 제제와 옥살리플라틴을 병용하는 경우, 항종양 효과를 더욱 증강하는 것이다. 리포솜 제제의 형태인 옥살리플라틴을 이용함으로써, 리포솜 제제를 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨을 포함하는 혼합 제제와 병용시, 부작용의 증가없이 항종양 효과가 현저하게 증강될 수 있다.

Description

옥살리플라틴 리포솜 제제를 함유하는 항종양효과 증강제 및 상기 리포솜 제제를 함유하는 항종양제{AGENT FOR ENHANCING ANTI-TUMOR EFFECT COMPRISING OXALIPLATIN LIPOSOME PREPARATION, AND ANTI-TUMOR AGENT COMPRISING THE LIPOSOME PREPARATION}

본 발명은 옥살리플라틴 리포솜 제제를 함유하는 항종양효과 증강제에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 리포솜 제제를 함유하는 항종양제에 관한 것이다.

현재까지 암치료를 위해 많은 약물이 개발되어 의료 분야에 이용되고 있다. 예를 들어 테가푸르는, 생체내에서 활성화되고 활성 형태, 즉 5-플루오로우라실 (이하, "5-FU" 라고 함) 을 서서히 방출하는 약제이며, 그로써 5-FU 에 의해 제시되는 독성 또는 부작용을 경감시킨다. 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨의 3 가지 약제학적 제제를 함유하는 조합약물 (상품명: TS-1, 테가푸르/기메라실/오테라실칼륨의 몰비 = 1:0.4:1, Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. 제조, 이하, 본 조합약물을 TS-1 로 언급함) 은, 기메라실이 5-FU 의 분해를 저해하기 때문에, 더욱 강한 항종양 효과를 갖는다. 상기 제제에서, 두 약제학적 제제, 즉 테가푸르와 기메라실에 의해 수득되는 항종양효과의 강화에 동반되는 것으로 여겨지는 소화관 독성의 안착을 오테라실 칼륨이 특이적으로 저해하므로, 치료 효과는 개선된다. 따라서, TS-1 은 각종 악성 종양의 치료에 기여한다 (특허 문헌 1).

그러나, 암환자의 연명에 충분한 더욱 강력한 치료 효과를 가진 치료제 및 치료법이 여전히 필요하다. 치료 효과를 개선하기 위해, 항종양 작용 및/또는 부작용의 메커니즘이 상이한 각종 약제의 병용 화학요법을 투여하는 것 (병용 요법) 이 시도되고, 일부 병용 요법은 실질적으로 암 치료의 개선에 기여한다 (참고문헌은, 예를 들어 특허 문헌 2, 3 및 4). 예를 들어, 옥살리플라틴은 단독 사용시 항종양효과가 낮고, 따라서 다른 약제학적 제제와 병용된다. 5-플루오로우라실 및 폴리네이트 (이하, 폴리네이트는 LV 로 언급함) 를 이용하는 병용 요법 (FOLFOX) 이 세계적으로 범용되고 있다 (참고문헌은, 예를 들어 비특허 문헌 1, 2 및 3). 그러나, FOLFOX 의 적용은 번잡하고, 지속적인 정맥 주입을 동반하는 물리적인 제한성 때문에 주입식 5-FU 의 연장되는 기간은 환자의 삶의 질을 떨어뜨리고, 의료 비용이 높다. 따라서, 옥살리플라틴을 이용하는 더 나은 병용 요법의 개발이 전세계에서 검토되고 있다. 예시로서, 옥살리플라틴 및 경구용 불화 피리미딘인 카페시타빈 (상품명: Xeloda) 의 병용 요법 (XELOX) 은 FOLFOX 와 거의 동일한 항종양 효과를 제공하는 것으로 보고되었다 (참고문헌은, 예를 들어 비특허 문헌 4). 신규한 접근법은 TS-1 및 옥살리플라틴을 병용하는 것보다 현저한 항종양 효과를 제공한다는 것을 나타냈으므로, 그 경우의 항종양 효과는 카페시타빈과 병용하는 옥살리플라틴보다는 더 월등한 치료 효능을 갖는다 (특허 문헌 5). 그러나, 더욱 강력한 치료 효과가 여전히 필요하다.

상기에 기재된 바와 같이, 옥살리플라틴은 단독으로 사용시 낮은 항종양 효과를 나타내고, 그 이유들 중 하나는 종양 조직에서의 제제의 낮은 축적이다. 항암제가 투여되는 경우, 이는 혈액 순환으로부터 신속하게 사라지거나 또는 건강한 장기에 분포될 수 있고; 따라서 항암제는 종양 조직에 유효하게 축적되지 않는다. 따라서, 많은 항암제들이 언제나 충분한 항암 활성을 나타내는 것은 아니며, 이들은 종종 바람직하지 않게 정상적인 조직에 영향을 주고 (부작용), 치명적인 독성을 야기한다. 항암제의 효능 증가는 현재 암 화학요법에서 중요한 과제이며, 약물이 종양에 유효하게 축적될 수 있는 약물 전달 시스템 (DDS) 의 개발이 강력하게 요구된다.

리포솜은 생체 성분 유래의 인지질을 주성분으로 하는 폐쇄소포이다. 그러한 리포솜은 생체에 투여시 낮은 독성 및 항원성을 나타낸다. 더욱이, 일부 보고에서는 리포솜에 약물을 봉입함으로써, 그 약물의 혈중 안정성 및 생체분포를 제어해 표적 조직에 대한 도달 효율을 개선할 수 있는 것이 나타나 있다 (특허 문헌 6, 7, 8 및 비특허 문헌 5). 또한, 종양에 존재하는 신생혈관은 건강 조직 중의 혈관에 비해 비교적 더 높은 투과성을 나타내기 때문에, 입경 100 내지 200 nm 의 리포솜과 같은 소포는 종양에서 유효하게 축적된다는 것이 공지되어 있다 (비특허 문헌 6 참조)

특허 문헌 1: 일본 특허 제 2614164 호

특허 문헌 2: 일본 특허 제 2557303 호

특허 문헌 3: 일본 미심사 특허 공보 제 1996-169825 호

특허 문헌 4: 일본 미심사 특허 공보 제 2002-205945 호

특허 문헌 5: W0 2005/120480 호

특허 문헌 6: W0 95/24201호

특허 문헌 7: 일본 특허 제 3415131 호

특허 문헌 8: 일본 미심사 특허 공보 제 2006-248978 호

비특허 문헌 1: Journal of Clinical Oncology, Vol.22, 23-30, 2004

비특허 문헌 2: Journal of Clinical Oncology, Vol.21, 2059-2069, 2003

비특허 문헌 3: Journal of Clinical Oncology, Vol.18, 2938-2947, 2000

비특허 문헌 4: Journal of Clinical Oncology, Vol.22, 2084-2091, 2004

비특허 문헌 5: Journal of Liposome Research, Vol.4, 667-687, 1994

비특허 문헌 6: Drug Delivery System, Vol.14, 433-447, 1999

발명의 개시

발명이 해결하고자 하는 과제

본 발명의 1 차적인 목적은, 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨을 함유하는 조합약물의 독성을 상승시키지 않고, 항종양효과를 증강하는 것이다. 본 발명의 또다른 목적은, 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨을 옥살리플라틴과 조합하여 함유하는 항종양제보다 더 높은 항종양 효과를 나타내는 항종양제 및 키트를 제공하는 것이다.

과제를 해결하기 위한 수단

상기 기재된 당업계의 현 상황을 감안하여, 본 발명자들은 환자의 연명에 강력하게 기여하는 암치료법을 개발하기 위하여, 연구를 거듭했다. 그 결과, 안정적으로 백금 착물, 즉 시스-옥살레이트 (1R,2R-디아미노시클로헥산)백금(II) (일반명: 옥살리플라틴, 상품명: Eloxatin 또는 Elplat, 이하 1-OHP 로 함) 를 봉입하고 있으며, 적절히 조절된 입자 크기를 가진 1-OHP 포함 리포솜을 개발했다. 1-OHP-포함 리포좀과 조합함으로써, 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유하는 조합약물의 항종양 효과는, 부작용을 증강시키지 않고 항종양효과를 현저하게 개선시킬 수 있다. 본 발명은 상기 신규한 발견사실을 근거로 완성되었다.

특히, 본 발명은 하기에 기재된 바와 같이 항종양 효과 증강제, 항종양제, 항종양제 키트 등을 제공한다.

항목 1. 리포솜에 옥살리플라틴을 봉입하여 수득가능한 리포솜 제제 및 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물을 조합하여 포함하는 항종양제.

항목 2. 항목 1 에 있어서, 상기 리포솜을 구성하는 지질 성분의 적어도 1 종이 인지질인 항종양제.

항목 3. 항목 2 에 있어서, 리포솜의 막 표면이 폴리에틸렌 글리콜, 폴리글리세린 또는 양이온성 지질로 수식되어 있는 항종양제.

항목 4. 항목 1 내지 항목 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 테가푸르 1 몰에 대한 옥살리플라틴의 사용 비율이 0.1 내지 5 몰인 항종양제.

항목 5. 항목 1 에 있어서, 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물 중의, 테가푸르 1 몰에 대한 기메라실의 사용 비율이 0.1 내지 5 몰이고, 테가푸르 1 몰에 대한 오테라실칼륨의 사용 비율이 0.1 내지 5 몰인 항종양제.

항목 6. 항목 1 에 있어서, 항종양제가, 옥살리플라틴을 함유하는 리포솜 제제 및 테가푸르,기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물을 포함하는 키트로 형성되는 항종양제.

항목 7. 항목 1 에 있어서, 리포솜 제제가 정맥내, 복강내, 근육내 또는 피하로 투여되고, 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물이 경구투여되는 항종양제.

항목 8. 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물의 치료에 유효한 양의 항종양 활성을 증강시키기 위한, 리포솜 내에 옥살리플라틴의 유효한 양을 함유하는 리포솜 제제인 항종양 효과 증강제.

항목 9. 항목 8 에 있어서, 상기 리포솜을 구성하는 지질 성분의 적어도 1 종이 인지질인 항종양 효과 증강제.

항목 10. 항목 9 에 있어서, 리포솜의 막 표면이 폴리에틸렌 글리콜, 폴리글리세린 또는 양이온성 지질로 수식되어 있는 항종양 효과 증강제.

항목 11. 항목 8 내지 항목 10 중 어느 한 항에 있어서, 테가푸르 1 몰에 대한 옥살리플라틴의 사용 비율이 0.1 내지 5 몰인 항종양 효과 증강제.

항목 12. 항목 8 에 있어서, 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물 중의, 테가푸르 1 몰에 대한 기메라실의 사용 비율이 0.1 내지 5 몰이고, 테가푸르 1 몰에 대한 오테라실칼륨의 사용 비율이 0.1 내지 5 몰인 항종양 효과 증강제.

항목 13. 항종양제를 제조하기 위한, 리포솜에 옥살리플라틴을 봉입하여 수득가능한 리포솜 제제 및 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물의 용도.

항목 14. 항종양 효과 증강제를 제조하기 위한, 리포솜에 옥살리플라틴을 봉입하여 수득가능한 리포솜 제제의 용도.

항목 15. 리포솜에 봉입된 옥살리플라틴을 함유한 리포솜 제제 및 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물 각각의 유효 투여량을 암 환자에게 투여하는 것을 특징으로 하는 암의 치료 방법.

발명을 수행하는 최선의 양태

(1) 항종양 효과 증강제

본 발명은, 치료 유효량의 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨을 함유하는 치료 유효량의 조합약물의 항종양 활성을 증강시키기 위한 항종양 효과 증강제를 제공한다. 항종항 효과 증강제는 하나 이상의 지질 성분으로 이루어진 리포솜에서의 항종양 효과 개선을 위해 치료 유효량의 옥살리플라틴 (1-OHP) 을 봉입하여 수득할 수 있는 리포솜 제제로서 제조된다.

(1-1) 리포솜 제제

1- OHP

1-OHP 는 백금 착물인 공지된 화합물이다. 1-OHP는 암 세포의 DNA 에 결합고, 이어서 DNA 의 기능 방해 및 DNA 사슬의 절단을 일으켜, 결과적으로 상기 제제는 암 세포에 대한 세포독성을 발휘한다. 1-OHP 는, 공지된 방법, 예를 들어 일본 심사 특허 공보 제 1985-41077 호에 기재되어 있는 방법에 따라 제조할 수 있다.

리포솜

본 발명의 리포솜 제제에 사용되는 리포솜은, 세포막의 주된 성분인 인지질을 수중에 분산시켜 형성되는 폐쇄소포이며, 지질막에 의해 둘러싸인 내부 수성상을 갖는다. 리포솜은, 입자 크기 및 지질층의 갯수에 의해 3 가지 카테고리, 즉 멀티라멜라 폐쇄소포 (Multilamellar Vesicle: MLV), 대형 유니라멜라 폐쇄소포 (Large Unilamellar Vesicle: LUV) 및 소형 유니라멜라 폐쇄소포 (Small Unilamellar Vesicle: SUV) 로 분류될 수 있다. 본 발명에서는 임의의 리포솜이 사용 가능하다. 본 발명에 사용되는 리포솜은 생체내 투여전 및 투여 후에 안정한 형태를 가져야 한다. 리포솜을 형성하는 인지질의 예시에는, 수소첨가 정제 노른자 포스파티딜 콜린 (상전이 온도 50℃, 이하 HEPC 로 언급함), 수소첨가 정제 대두 포스파티딜 콜린 (상전이 온도 약 55℃, 이하 HSPC 로 언급함), 디팔미토일포스파티딜콜린 (상전이 온도 약 41℃, 이하 DPPC 로 언급함), 디스테아로일포스파티딜콜린 (상전이 온도 약 58℃, 이하 DSPC 로 언급함) 및 1-팔미토일-2-올레일포스파티딜콜린 (상전이 온도 -3℃, 이하 POPC 로 언급함) 이 포함된다. 이들 중에서 특히 HEPC, HSPC, DPPC 및 DSPC 가 바람직하다.

본 명세서에서, 수소첨가 정제 노른자 포스파티딜 콜린이란, 노른자 유래의 포스파티딜 콜린의 수소첨가로 수득되는 것을 의미한다. 바람직한 구현예에 사용되는 수소첨가 노른자 포스파티딜 콜린의 한 예는, 아실 부분이 포화 직쇄 지방산 유래의 C₁₆ _-18 아실기인 포스파티딜 콜린을 주성분으로 하는 것이다. 본 발명에서, 수소첨가 정제 노른자 포스파티딜 콜린은, 수소첨가 노른자 포스파티딜 콜린을 정제하여 수득되고; 예를 들어, 순도 80% 이상, 바람직하게는 순도 90% 이상의 것을 사용할 수 있다.

본 명세서에서, 수소첨가 대두 포스파티딜 콜린이란, 대두 유래의 포스파티딜 콜린의 수소첨가로 수득되는 것을 의미한다. 바람직한 실시형태에 사용되는, 수소첨가 대두 포스파티딜 콜린의 한 예는, 아실 부분이 포화 직쇄 지방산 유래의 C_16-18 아실기인 포스파티딜 콜린을 주성분으로 함유하는 것이다. 본 발명에서, 수소첨가 정제 대두 포스파티딜 콜린은, 수소첨가 대두 포스파티딜 콜린을 정제하여 수득되고; 예를 들어, 순도 80% 이상, 바람직하게는 순도 90% 이상의 것을 사용할 수 있다.

이들의 인지질은 단독으로 또는 2 가지 이상을 조합하여 사용할 수 있다. 상전이 온도가 상이한 인지질을 사용함으로써, 리포솜의 지질 2분자막의 유동성을 바꿀 수 있다. 이는, 약물의 봉입율, 약제학적 제제 내 안정성, 투여 후의 생체내 동태 등의 관점에서 최적인 인지질을 선별가능케 한다.

이들 인지질에 추가하여, 본 발명에 사용되는 리포솜은, 바람직하게는 리포솜의 안정성을 개선하는 것으로 보고되어 있는 콜레스테롤 또는 그 유도체와 같은 안정화제와 혼합된다. 더욱이, 리포솜의 막 표면을, 필요에 따라 폴리에틸렌글리콜, 폴리글리세린 등의 친수성 고분자 재료; 아미노기, 아미디노기, 구아디니노기 등의 염기성 관능기를 포함하는 지질 (이하, 카티온화 지질로 함); 또는 펩티드, 렉틴, 항체, 당질, 당단백, 당지질 등으로부터 선택되는 리간드로 수식함으로써, 리포솜의 혈중 안정성, 조직 분포, 종양 조직에 대한 이행성 등을 한층 더 개선할 수 있다.

본 발명에 있어서, "폴리에틸렌글리콜"에는, 비치환의 폴리에틸렌글리콜 뿐만 아니라, 친유성(소수성) 측쇄를 공유결합시킨 유도체도 포함한다. 친유성 측쇄의 구체적 예시에는, 알킬 사슬, 인지질, 콜레스테롤 등이 포함된다. 리포솜의 안정성 개선에 통상 사용되는 각종 폴리에틸렌글리콜 유도체가 본 발명에 사용될 수 있다. 유사하게, 본 발명의, "폴리글리세린" 은, 비치환의 폴리글리세린 뿐만이 아니라 친유성(소수성) 측쇄를 공유결합 시킨 유도체도 포함한다. 친유성 측쇄의 구체적 예시에는, 알킬 사슬, 인지질, 콜레스테롤 등이 포함된다. 리포솜의 안정성 개선에 통상 사용되는 각종 폴리글리세린 유도체가 본 발명에 사용될 수 있다. 더욱이, 글리세린, 포도당, 염화 나트륨 등이 등장화제로 첨가될 수 있다. 더욱이, 파라벤, 클로르부탄올, 벤질 알코올, 프로필렌글리콜 등의 방부제가 첨가될 수 있다.

리포솜 제제

본 발명의 리포솜 제제는 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 공지된 리포솜 제제의 제조 방법의 예시에는, 역상 증발법 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol.75, 4194, 1978, WO 97/48398호), 동결 융해법 (Arch. Biochem. Biophys, Vol.212, 186, 1981), pH 구배법 (Biochem. Biophys. Acta, Vol.816, 294, 1985, 일본 미심사 특허 공보 제 1995-165560 호) 등이 포함된다.

상기 방법들 중에서 특히, 역상 증발법이 채용된 경우, 본 발명의 리포솜 제제는 다음 프로세스로 제조된다. 예를 들어, 지질 성분을 클로로포름, 에테르, 에탄올 등의 용매에 용해 후, 수득한 용액을 배 모양의 플라스크에 넣는다. 상기 용매를 감압하 증발로 제거해 지질 박막을 형성한다. 후속하여, 클로로포름/디에틸 에테르 = 1/2 의 비율로 클로로포름 및 디에틸 에테르를 함유하는 혼액을 첨가해 박막을 용해한다. 여기에 활성제를 함유하는 수용액을 첨가하고, 25℃ 에서 15 분간 초음파처리해 에멀전을 수득한다. 수득한 에멀전의 유기상을 제거하고, 와류시키면서 회전증발기에서 1 시간 동안 증발시켜 w/o 에멀션으로부터 o/w 에멀션로 전이시킨다. 이로써, 리포솜이 형성되고, 약제학적 제제는 리포솜 내에 봉입된다. 상기 기재된 프로세스는 약제학적 제제가 리포솜 내부에 봉입되도록 한다.

리포솜의 입자 크기는 내포 약물의 생체분포, 종양 축적에 큰 영향을 주는 것으로 보고되었다 (Biol. Pharm. Bull., Vol.17, 935, 1994). 본 발명에서, 약제학적 제제를 포함하는 바람직하고 균일한 크기의 리포솜을 수득하기 위해, 바람직하게는 입자 크기조절이 수행된다. 예를 들어, 들어, 바이오디스럽터 (Nippon Seiki Co., Ltd. 등) 를 사용한 초음파 처리 또는 나노마이저 (Yoshida Kikai Co., Ltd.) 등을 사용한 고압 유화 처리를 실시하여, 리포솜의 입자 크기는, 약 100 내지 200 nm 의 평균 입경을 갖도록 조정될 수 있다. 대안적으로, 질소 가압하, 리포솜 포함 용액을 각종 폴리카보네이트 멤브레인 필터 (0.4μm, 0.2μm, 0.1μm 및 0.08μm) 를 이용한 크기 조절에 적용하여, 리포솜의 입자 크기를 약 100 내지 300 nm 의 평균 입경을 갖도록 조절할 수 있다.

본 발명에서, 용어 "평균 입경" 은, NICOMP 370 HPL 서브마이크론 입자 분석기 (Particle Sizing System, Inc. 제조) 를 이용해 광 산란법으로 측정되는 평균 입경을 의미한다.

리포솜의 막 표면을, 필요에 따라 폴리에틸렌글리콜, 폴리글리세린, 카티온화 지질 또는, 펩티드, 렉틴, 항체, 당질, 당단백 또는 당지질과 같은 리간드로 수식함으로써, 리포솜의 혈중 안정성, 조직 분포 및 종양 조직에 대한 이행성을 더욱더 개선시킬 수 있다.

본 발명의 리포솜 제제는 또한, 옥살리플라틴 (1-OHP) 리포솜 제제를 개시하는 특허문헌 7 (일본 특허 제 3415131 호) 또는 특허문헌 8 (일본 미심사 특허 공보 2006-248978 호) 의 방법으로 제조될 수 있다.

바람직한 구현예에서, 본 발명의 리포솜 제제는, 1-OHP 농도가 1 내지 20 mg/mL 가 되도록 1-OHP 를 1 내지 10% 글루코오스 용액에 용해하여 수득되는 용액을 이용해 1-OHP 용액으로 제조된다.

1-OHP 포함 리포솜 제제를, 필요에 따라 초원심분리, 겔 여과, 한외 여과 및 투석에 적용한다. 이들 처리는 단독으로 또는 적절히 조합하여 실시될 수 있고, 이로써 리포솜에 봉입되지 않았던 약제학적 제제를 제거할 수 있다.

상기 언급한 방법으로 수득되는 1-OHP 포함 리포솜 제제는 직접 사용될 수 있다. 그러나, 보존 기간, 보존 조건 등의 면에서, 만니톨, 트레할로스, 락토오스, 글리신과 같은 부형제를 첨가한 후 동결건조할 수 있다. 대안적으로, 1-OHP 포함 리포솜 제제는 글리세롤과 같은 동결 보존제를 더한 후 동결보존할 수 있다.

바람직한 구현예에서, 1-OHP 리포솜 제제는, 1 내지 50 μg/mg 지질, 더욱 바람직하게는 5 내지 40 μg/mg 지질의 양으로 옥살리플라틴을 함유한다.

본 발명의 1-OHP 포함 리포솜 제제는 바람직하게는 50 내지 300 nm, 더욱 바람직하게는 80 내지 200 nm 의 평균 입경을 갖는다.

1-OHP 포함 리포솜 제제는, 일반적으로는, 사용시에 생리적으로 허용되는 수용액으로 현탁 또는 희석하고, 주사제 (정맥내, 복강내, 근육내, 피하 투여 제제) 로서 사용된다; 그러나, 1-OHP 포함 리포솜 제제는 또한 경구제, 점비제, 흡입제, 좌제, 경피흡수제, 경점막 흡수제 등으로도 사용할 수 있다. 이 경우, 1-OHP 포함 리포솜 제제는 적당한 담체를 이용해, 통상적인 방법에 따라 제제 조성물로 제조된다. 여기서 사용가능한 담체는, 통상적인 약제에 범용되는 것이다. 그의 구체적인 예시에는, 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제, 교미제, 교취제, 계면활성제 등이 포함된다.

본 발명의 항종양 효과 증강제의 항종양 효과에 의해 항종양 효과가 증강되는, 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨을 함유하는 조합약물의 예시는 하기에 기재된다.

(1-2) 테가푸르 , 기메라실 및 오테라실칼륨을 함유하는 조합약물

테가푸르

테가푸르 (일반명, 화학명: 5-플루오로-1-(2-테트라히드로푸릴)-2,4-(1H,3H)-피리미딘디온) 은 공지된 화합물이며, 생체내에서 활성화되어 항종양 활성을 발휘하는 활성 형태인 5-FU 를 방출한다. 테가푸르는, 공지된 방법, 예를 들어 일본 심사 특허 공보 제 1974-10510 호에 개시된 방법에 따라 제조할 수 있다.

기메라실

기메라실 (일반명, 화학명: 2,4-디히드록시-5-클로로피리딘) 도 공지된 화합물이며, 자체로는 전혀 항종양 활성을 나타내지 않는다. 그러나, 5-FU 의 생체내 대사 불활성화를 저해할 수 있고, 그 결과로서 5-FU 의 항종양 효과를 증강시킨다.

오테라실칼륨

오테라실칼륨 (일반명, 화학명: 모노포타슘 1,2,3,4-테트라히드로-2,4-디옥소-1,3,5-트리아진-6-카르복실레이트) 도 공지된 화합물이다. 자체로는 항종양 활성을 나타내지 않으나, 주로 소화관에 잔류해 그 부위에서 5-FU 의 활성화를 억제 함으로써 5-FU 에 의해 야기되는 소화관 장해를 억제한다.

3 가지 성분, 즉 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨을 활성 성분으로 함유하는 조합약물에 대해, 각 활성 성분의 비율은, 예를 들어, 특허 공보 2614164 호에 기재되어 있는 공지된 약제학적 제제와 연관되어 기재된 범위일 수 있다. 상기 비율은 일반적으로, 테가푸르 1 몰에 대해, 기메라실을 약 0.1 내지 5 몰, 바람직하게는 약 0.2 내지 1.5 몰의 비율로 사용하고, 오테라실칼륨을 약 0.1 내지 5 몰, 바람직하게는 약 0.2 내지 2 몰의 비율로 사용한다. 3 가지 성분의 특별히 바람직한 배합 비율은, 몰비로 테가푸르:기메라실:오테라실칼륨 = 1:0.4:1 이다.

테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨을 활성 성분으로 함유하는 조합약물은, 각각 활성 성분들 중 하나를 포함하거나 또는 각각 임의의 조합의 활성 성분을 포함하는 두가지 이상의 약제학적 제제를 함유하는 약제학적 형태로 또는 활성 성분 전부를 포함하는 단독 약제학적 제제를 함유하는 약제학적 형태로 제조될 수 있다. 어느 경우라도, 상기 조합약물은 적당한 약제학적 담체를 이용하여, 통상적인 방법에 따라 약제학적 조성물로 제조된다. 여기서 사용가능한 담체는, 통상적인 약학적 제제에 범용되는 것, 예를 들어 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제, 교미제, 교취제, 계면활성제 등이다.

2 가지 이상의 약제학적 제제를 함유하는 약제학적 형태의 조합약물이 사용되는 경우, 각 약제학적 제제는 동시에 투여될 수 있거나, 또는 한가지 약제학적 제제를 나머지 약제학적 제제(들)의 투여 전후 임의의 시기에 투여할 수 있다. 바람직하게는, 약제학적 제제의 전부를 동시에 투여하거나, 또는 한가지 약제학적 제제를 나머지 약제학적 제제(들)의 투여 전후 4 시간 이내에, 더욱 바람직하게는 2 시간 이내에 투여한다.

(1-3) 투여 방법

전술한 항종양 효과 증강제는, 단위 투여량 형태로 제조되어, 3 가지 성분, 즉 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨을 활성 성분으로 포함하는 조합약물과 따로 또는 동시에 투여될 수 있다. 더 구체적으로는, 본 발명의 항종양 효과 증강제는, 3 가지 성분, 즉 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨을 활성 성분으로 함유하는 항종양제의 투여와 동시에 또는 그 전후로 임의의 시기에 투여할 수 있다. 바람직하게는, 항종양 효과 증강제는 항종양제의 투여와 동시에 또는 그 전후 4 시간 이내에 투여하고, 더욱 바람직하게는 항종양 제제의 투여 전후 2 시간 이내에 투여한다. 계속적으로 투여하는 경우에는, 항종양제 및 항종양 효과 증강제의 투여 빈도 및 투여 간격을 적절히 선택해야 한다.

1-OHP 포함 리포솜 제제를, 상기한 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨의 3 가지 활성 성분을 함유하는 항종양제와 따로 또는 동시에 투여하는 경우, 항종양 효과 증강제는 바람직하게는, 예를 들어, 테가푸르 1 몰 에 대해, 1-OHP 의 양이 약 0.1 내지 5 몰, 바람직하게는 약 0.1 내지 3 몰, 보다 바람직하게는, 약 0.2 내지 2 몰의 범위가 되도록 하는 양으로 투여한다.

(2) 항종양제

본 발명은, 항종양 효과 증강제 (1-OHP 포함-리포솜 제제) 와 조합하여 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨의 3 가지 활성 성분을 함유하는 조합약물을 함유하는 항종양제를 제공한다. 항종양제는, 각각 상기한 4 가지 성분, 즉 상기 기재한 3 가지 성분 및 1-OHP-포함 리포솜 중 하나를 포함하거나, 또는 각각 상기 성분들을 임의의 조합으로 포함하는 여러개의 약제학적 제제를 포함하는 약제학적 제제이거나, 또는 상기 성분 전부를 포함하는 단일 약제학적 제제를 함유하는 약제학적 형태일 수 있다. 더 구체적으로, 본 발명의 항종양제는 상기 언급한 4 가지 성분을 전부 포함하는 단독 투여 형태로 형성되거나, 또는 1 내지 3 가지 성분을 포함하는 약제학적 제제 및 나머지 성분들을 포함하는 하나 이상의 약제학적 제제를 포함하는 다중 투여 형태로 형성될 수 있다. 특히 바람직한 예시는, 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨의 3 가지 성분을 활성 성분으로 포함하는 약제학적 제제 및 리포솜 제제 내에 봉입된 1-OHP 를 포함하는 약제학적 제제가 별개의 제형물로 존재하는 2-부 제제이다.

항종양제와 관련하여, 성분들의 비율은 단독 약제학적 제제 또는 다중 약제학적 제제로 이루어지는지 여부와 상관없이 제한은 없다. 통상, 테가푸르 1 몰에 대해, 기메라실을 약 0.1 내지 5 몰, 바람직하게는 약 0.2 내지 1.5 몰 의 비율로 사용하고; 오테라실칼륨을 약 0.1 내지 5 몰, 바람직하게는 약 0.2 내지 2 몰의 비율로 사용하고; 1-OHP 를 약 0.1 내지 5 몰, 바람직하게는 약 0.1 내지 3 몰, 보다 바람직하게는 약 0.2 내지 약 2 몰의 비율로 사용한다. 특히, 성분들의 바람직한 몰비는, 테가푸르:기메라실:오테라실칼륨:1-OHP = 약 1:0.4:1:0.1 내지 5, 더욱 바람직하게는 약 1:0.4:1:0.1 내지 3; 특히 바람직하게는 약 1:0.4:1:0.2 내지 2 이다. 항종양 제제가, 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨의 3 가지 성분을 활성 성분으로 포함하는 약제학적 제제 및 1-OHP 포함 리포솜 제제가 상기 기재된 바와 같이 별개의 제형으로 존재하는 2 투여량 형태인 경우, 상기 항종양제는, 바람직하게는 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨을 몰비로 1:0.4:1 로 포함하는 조합약물 및 테가푸르 1 몰 당 1-OHP 를 약 0.1 내지 5 몰, 바람직하게는 약 0.1 내지 3 몰, 더욱 바람직하게는 약 0.2 내지 약 2 몰의 비율로 포함하는 약제학적 제제를 포함한다.

활성 성분은 적당한 약제학적 담체를 이용해 표준 방법에 따라 약제학적 조성물로 제조될 수 있다. 여기서 사용가능한 담체는, 통상적인 약제학적 제제에 범용되는 것, 예를 들어 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제, 교미제, 교취제, 계면활성제 등이다.

다중 투여량 형태이고, 상기한 2 개 이상의 약제학적 제제를 포함하는 항종양 제제를 사용하는 경우에는, 각 약제학적 제제는 동시에 투여될 수 있거나, 또는 각각의 약제학적 제제를 나머지 약제학적 제제(들)의 투여 전후의 임의의 시기에 투여할 수 있다. 바람직하게는, 모든 약제학적 제제를 통시에 투여하거나, 또는 하나의 약제학적 제제를 나머지 약제학적 제제의 투여 전후 4 시간 이내, 더욱 바람직하게는 2 시간 이내에 투여한다.

(3) 키트

본 발명은, 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨의 조합약물과 함께 1-OHP 포함 리포솜 제제를 포함하는 키트를 제공한다. 더 구체적으로는, 본 발명은 다음을 포함하는 포유류 암 치료용 키트를 제공한다:

(a) 치료 유효량의 테가푸르, 항암 효과 증강을 위한 유효량의 기메라실, 및 부작용 방지를 위한 유효량의 오테라실칼륨을 함유하는 항종양 조성물, 및

(b) 항종양 효과의 증강을 위한 유효량의 1-OHP 을 봉입한 리포솜 제제.

상기 키트에 포함되는 조성물은 공지된 임의의 약제학적 형태일 수 있다. 조성물은 일반적으로, 그의 약제학적 형태에 따라, 통상 사용되는 임의의 용기에 수납된다.

키트는 암 치료에 사용되고 다음을 포함한다,

(i) 치료 유효량의 테가푸르,

(ii) 항종양 효과 증강을 위한 유효량의 기메라실,

(iii) 부작용 억제를 위한 유효량의 오테라실칼륨; 이들은 전부 항종양 조성물의 일부분임,

(iv) 항종양 효과 증강을 위한 유효량의 1-OHP 를 포함하는 리포솜.

키트는 이들 성분을 위한 2 개 이상의 용기를 포함하고, 테가푸르 및 1-OHP 는 별개의 용기에 포장된다. 상기 언급한 성분 (i) 내지 (iv) 는 바람직하게는 약제학적으로 허용되는 담체와 조합하여 제조되는 약제학적 형태이다. 상기 언급한 키트와 관련하여, 성분 (i) 및 (iv) 가 별개의 용기에 저장되는 한, 성분 (ii) 및 (iii) 은 상기 언급한 두 성분이 저장된 것과는 별도인 용기에 독립적으로 저장될 수 있거나, 또는 성분 (ii) 및 (iii) 는, 동일 용기에 저장하기 위해 성분 (i) 또는 (iv) 와 독립적으로 혼합될 수 있다. 성분 (i) 내지 (iii) 을 포함하는 약제학적 제제가 1 개 용기에 저장되고, 성분 (iv) 를 포함하는 약제학적 제제가 또다른 용기에 포함되는 키트가 바람직하다.

본 발명의 항종양제의, 악성 종양을 앓는 인간을 포함하는 포유 동물의 치료를 위한 이용가능한 투여 단위 형태는 특별히 한정되지 않으며, 치료 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다. 구체적 예시는, 주사제, 좌제, 점안제, 연고제, 에어졸제 등의 비경구제; 정제, 피복 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 액제, 환약, 현탁제, 유제 등의 경구제이다. 항종양제는 당업계에 통상 공지된 방법에 따라 상기 투여 형태로 제조될 수 있다.

본 발명의 항종양 제제의 활성 성분인 테가푸르, 기메라실, 오테라실칼륨, 및 1-OHP 의 양은, 투여 형태, 투여 경로, 투여 계획 등에 따라 가변적이며, 한정되지 않고, 이에 따라 적절히 선택할 수 있다. 통상, 활성 성분의 비율은 약제학적 제제의 약 1 내지 약 70 중량% 인 것이 바람직하다.

본 발명의 약제학적 제제의 투여 방법은 특별히 제한되지 않고, 그의 형태, 환자의 연령, 성별 및 상태, 그 밖의 요인에 따라 결정될 수 있고; 따라서, 경장투여, 경구, 직장내, 구강내, 동맥내, 정맥내, 경피 등의 방식으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 정제, 필, 액체, 현탁제, 에멀전, 과립제, 캡슐제 등은 경구투여되고; 주사제는 동맥내 또는 정맥내 투여되고; 좌제는 직장내 투여되고; 연고제는, 피부, 구강내 점막 등에 도포된다. 본 발명의 약제학적 제제에 있어서, 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨을 포함하는 약제학적 제제는 경구투여되고, 리포솜에 봉입된 1-OHP 약제학적 제제는 정맥내 투여하는 것이 가능하다.

본 발명의 각 활성 성분의 투여량은, 용법, 환자의 연령, 성별, 질환의 정도, 그 밖의 조건 등에 의해 적절히 선택할 수 있다. 본 발명의 항종양 효과 증강제 및 항종양 제제는, 1 일에 1 내지 4 회 나누어 투여할 수 있다.

경구투여의 경우, 본 발명의 약제학적 제제는 바람직하게는 표준으로서의 하기 범위의 양으로 제공된다: 테가푸르의 양은 약 0.1 내지 100 mg/kg/일, 바람직하게는 약 0.2 내지 40 mg/kg/일, 더욱 바람직하게는 약 0.5 내지 20 mg/kg/일; 기메라실의 양은, 약 0.02 내지 30 mg/kg/일, 바람직하게는 약 0.05 내지 12 mg/kg/일, 더욱 바람직하게는 약 0.1 내지 6 mg/kg/일; 오테라실칼륨의 양은 약 0.1 내지 100 mg/kg/일, 바람직하게는 약 0.2 내지 40 mg/kg/일, 더욱 바람직하게는 약 0.5 내지 20 mg/kg/일; 1-OHP 의 양은 약 0.08 내지 200 mg/kg/일, 바람직하게는 약 0.15 내지 80 mg/kg/일, 더욱 바람직하게는 약 0.4 내지 40 mg/kg/일.

주사제의 형태인 경우, 성인에게, 통상, 약 0.1 내지 100 mg/kg 의 테가푸르, 약 0.08 내지 200 mg/kg 의 1-OHP 에 해당하는 양으로, 필요에 따라 글루코오스 수용액으로 희석해, 5 분 이상에 걸쳐 서서히 투여할 수 있다.

좌제의 경우, 성인에게, 통상, 약 0.1 내지 100 mg/kg 의 테가푸르, 약 0.08 내지 200 mg/kg 의 1-OHP 에 해당하는 양으로, 1 일 1 내지 2 회, 6 내지 12 시간의 간격을 두어 직장내에 삽입해 투여할 수 있다.

본 발명 제제를 투여하여 치료할 수 있는 악성 종양의 종류는, 활성 본체, 즉 5-FU 에 감수성을 나타내는 것이면 특별히 제한은 없다; 예를 들어 폐암, 위암, 결장암, 직장암, 식도암, 유방암, 두경부암, 간암, 담낭/담관암, 췌장암, 자궁암, 자궁경암, 난소암, 신암, 방광암, 전립선암, 인두암, 뇌종양, 백혈병, 흑색종, 악성 임파종 등. 특히 본 발명의 약제학적 제제로부터는 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 유방암, 두경부암 에 대해 높은 효과를 기대할 수 있다. 더욱이, 전형적 약물 내성 종양 및 약물 내성이 발생이 예상될 수 있는 종양에 대해서도 높은 효과를 기대할 수 있다.

본 발명의 항종양효과 증강제는, 1-OHP 와 비교해, 공지된 항종양제인 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨의 3 가지 약제를 포함하는 조합약물의 독성을 상승시키지 않고, 항종양효과를 높일 수 있다. 따라서, 본 발명의 항종양제 및 항종양제 키트는 독성을 상승시키지 않고 현격한 효과를 달성하며, 즉 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨의 3 가지 약제학적 제제를 포함하는 조합약물과 1-OHP 를 병용해 사용하는 병용 요법에 비해 월등한 항종양 효과를 나타낸다. 본 발명은 암 환자의 생존 기간을 더욱더 연장시키는 치료 방법에 적용될 것으로 기대된다.

도 1 은 시험예 1 의 상대적 종양 체적 증가를 나타내는 도면이다.
도 2 는 시험예 1 의 마우스의 체중 변화를 나타내는 도면이다.
도 3 은 시험예 2 의 상대적 종양 체적 증가를 나타내는 도면이다.
도 4 는 시험예 2 의 마우스의 체중 변화를 나타내는 도면이다.
도 5 는 시험예 3 의 세포 접종 후 마우스의 생존일을 나타내는 도면이다.
도 6 은 시험예 4 의 세포 접종 후 마우스의 생존일을 나타내는 도면이다.
도 7 은 시험예 5 의 상대적 종양 체적 증가를 나타내는 도면이다.
도 8 은 시험예 6 의 상대적 종양 체적 증가를 나타내는 도면이다.
도 9 는 시험예 6 의 마우스의 체중 변화를 나타내는 도면이다.
도 10 은 시험예 7 의 세포 접종 후 마우스의 생존일을 나타내는 도면이다.

실시예

이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명의 범위는 이들의 실시예 및 시험예로 한정되는 것은 아니다.

실시예 1

DPPC (L-α-디팔미토일 포스파티딜콜린, Coatsome MC-6060, NOF Corporation 제조), 콜레스테롤 (특급, Wako Pure Chemical Industries, Ltd. 제조) 및 mPEG₂₀₀₀-DSPE (1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-n-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000], Sunbright DSPE-020 CN, NOF Corporation 제조) 를 각각 20 mM, 50 mM, 및 5 mM 의 농도가 되도록 클로로포름에 용해했다. 후속하여, 20 mM DPPC 용액 5 mL, 50 mM 콜레스테롤 용액 0.5 mL, 및 5 mM mPEG₂₀₀₀-DSPE 용액 1 mL 를 배 모양의 플라스크에 넣었다. 증발기를 이용해 감압하면서, 클로로포름을 제거하여, 배 모양의 플라스크의 바닥에 지질 박막을 형성시켰다. 클로로포름/디에틸 에테르 (1:2 v/v) 6 mL 에 지질 박막을 용해했다. 1-OHP 를 5% 글루코오스 용액에 용해하여, 1-OHP 농도가 8 mg/mL 가 되도록 했다. 이렇게 제조된 1-OHP 용액 (2 mL) 을 지질 용액에 첨가하고 혼합했다. 결과로서 수득한 혼합물을 25℃ 에서 15 분간 초음파처리해 w/o 에멀전을 형성하고, 와류하면서 증발기를 이용해 감압 하 유기상을 제거하고; 이로써 1-OHP 를 리포솜에 봉입했다. 입자크기 조절을 위한 초음파처리는 바이오디스럽터 (Nippon Seiki Co., Ltd.) 를 사용해 실시하여, 약제학적 제제를 포함하는 리포솜의 평균 입경을 200 nm 보다 약간 미만이 되도록 했다. 리포솜 내에 봉입되지 않은 약제학적 제제를 제거하기 위해서, 투석 카세트 (Slide-A-Lyzer Dialysis Cassettes, 10000 MWCO, Thermo Scientific Inc. 제조) 를 이용하고, 외액으로 5% 글루코오스 용액을 사용해, 자석 교반기를 이용해 교반하면서 4℃ 에서 2 시간 동안 투석했다. 외액을 교환한 후, 재차 교반하면서 2 시간 투석해, 1-OHP 포함 리포솜 제제를 수득했다. 1-OHP 포함 리포솜 제제의 평균 입경은, 185.2±14.9 nm (n= 5)였다.

본 발명의 실시예에 있어서, 리포솜 제제의 평균 입경은, NICOMP 370 HPL 서브마이크론 입자 분석기 (Particle Sizing System 사 제조) 를 이용해 광 산란법으로 측정했다.

실시예 2

HSPC (수소첨가 대두 포스파티딜콜린, Coatsome NC-21, NOF Corporation 제조), 콜레스테롤(특급, Wako Pure Chemical Industries, Ltd. 제조), 및 mPEG₂₀₀₀-DSPE (1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-n-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000], Sunbright DSPE-020 CN, NOF Corporation 제조) 를 각각 20 mM, 50 mM, 및 5 mM 의 농도가 되도록 클로로포름에 용해했다. 후속하여, 20 mM HSPC 용액 5 mL, 50 mM 콜레스테롤 용액 1 mL, 및 5 mM mPEG₂₀₀₀-DSPE 용액 2 mL 를 배 모양 플라스크에 넣었다. 증발기를 이용해 감압하면서, 클로로포름을 제거하여, 배 모양의 플라스크의 바닥에 지질 박막을 형성시켰다. 클로로포름/디에틸 에테르 (1:2 v/v) 6 mL 에 지질 박막을 용해했다. 1-OHP 를 5% 글루코오스 용액에 용해해 1-OHP 농도가 8 mg/mL 가 되도록 했다. 이렇게 제조된 1-OHP 용액 (2 mL) 을 지질 용액에 첨가하고 혼합했다. 결과로서 수득한 혼합물을 35℃ 에서 15 분간 초음파처리해 w/o 에멀전을 형성하고, 와류하면서 증발기를 이용해 감압 하 유기상을 제거하고; 이로써 1-OHP 를 리포솜에 봉입했다. 이후, 실시예 1 와 같은 방법으로, 입경을 조절하고, 미봉입 약제학적 제제를 제거하여, 1-OHP 리포솜 제제를 수득했다. 1-OHP 봉입 리포솜 제제의 평균 입경은 197.9±22.0 nm (n= 5) 였다.

실시예 3

실시예 1 의 mPEG₂₀₀₀-DSPE 대신, PG-DSPE (Sunbright DSPE-PG10G, NOF Corporation 제조) 를 이용한 점을 제외하고, 실시예 1 과 동일한 방법으로 1-OHP-포함 리포솜 제제를 제조했다. 그렇게 제조한 1-OHP 포함 리포솜 제제의 평균 입경은 130.4±48.3 nm (n = 3) 였다.

실시예 4

HSPC (수소첨가 대두 포스파티딜콜린, Coatsome NC-21, NOF Corporation 제조), 콜레스테롤 (특급, Wako Pure Chemical Industries, Ltd. 제조), DC-6-14 (카티온화 지질, O,O＇-디테트라데카노일-N-(알파-트리메틸 암모니오 아세틸)디에탄올아민 클로라이드, Sogo Pharmaceutical Co., Ltd. 제조), 및 mPEG₂₀₀₀-DSPE (1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-n-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000], Sunbright DSPE-020 CN, NOF Corporation 제조) 를 각각 20 mM, 50 mM, 및 5 mM 의 농도가 되도록 클로로포름에 용해했다. 후속하여, 20 mM HSPC 클로로포름 용액 5 mL, 50 mM 콜레스테롤 용액 1 mL, 5 mM DC-6-14 및 5 mM mPEG₂₀₀₀-DSPE 클로로포름 용액 2 mL 를 배 모양플라스크에 넣었다. 증발기를 이용해 감압하면서, 클로로포름을 제거하여, 배 모양의 플라스크의 바닥에 지질 박막을 형성시켰다. 클로로포름/디에틸 에테르 (1:2 v/v) 6 mL 에 지질 박막을 용해했다. 1-OHP 를 5% 글루코오스 용액에 용해하여, 1-OHP 농도가 8 mg/mL 가 되도록 했다. 이렇게 제조된 1-OHP 용액 (2 mL) 을 지질 용액에 첨가하고 혼합했다. 결과로서 수득한 혼합물을 35℃ 에서 15 분간 초음파처리하고, 와류하면서 증발기를 이용해 약 1 시간 동안 감압 하 유기상을 제거하고; 이로써 1-OHP 를 리포솜에 봉입했다. 이후, 실시예 1 와 같은 방법으로, 입경을 조정하고, 미봉입 약제학적 제제를 제거하여, 1-OHP 리포솜 제제를 수득했다. 이렇게 제조한 1-OHP 봉입 리포솜 제제의 평균 입경은 202.4±14.7 nm (n= 5) 였다.

시험예 1

약제학적 제제의 제형화

실시예 1 에서 제조된 1-OHP 포함 리포솜 제제 (이하, DPPC 리포솜 1-OHP 로 한다) 를 사용했다.

1-OHP 를 5% 글루코오스 용액에 용해하여 1-OHP 제제 (이하, 유리된 1-OHP 로 한다) 를 제조했다.

TS-1 캡슐에 봉입된 내용물을 물에 용해하여 TS-1 제제 (이하, TS-1 으로 한다) 를 제조했다.

약제학적 제제의 항종양 효과 및 부작용

고폐전이성 종양 세포주, 즉 Lewis Lung carcinoma (LLC) 를 5% CO₂ 존재하, 37℃ 10% FBS-DMEM 에서 배양했다. 5×10⁶ 세포/mL 을 포함하는 LLC 세포 0.1 mL 를 수컷 C57BL/6 마우스 (5 주령, 체중 20 g) 의 등쪽에 피하주사하여, 고형암 담암마우스를 제작했다. LLC 세포 주입 6 일째에 하기 계산식으로 산출한 종양 체적이 50 mm³ 초과하는 것을 확인했다.

1-OHP 로서의 DPPC 리포솜 1-OHP 또는 유리된 1-OHP 를 4.2 mg/kg 의 투여량으로 정맥내에 투여했다. 테가푸르로서의 TS-1 을 6.9 mg/kg 의 투여량으로 경구 투여했다. DPPC 리포솜 1-OHP 및 유리된 1-OHP 는 세포 접종 13 일째 및 20 일째에 투여했고, TS-1 은 세포 접종 6 일 후부터 실험 종료까지 매일 투여했다.

세포 접종 6 일 후부터 종양 체적을 하기 식을 이용해 산출했다. 상대적 종양 체적 비율을 지표로 이용해 항종양 효과를 평가했다.

종양 체적 = 1/2×a×b²

(a: 종양 부위의 장경, b: 종양 부위의 단경)

부작용의 지표로서 마우스의 체중 변화를 조사했다.

도 1 의 결과로부터 분명하게, DPPC 리포솜 1-OHP 및 TS-1 의 병용 투여는, 유리된 1-OHP 및 TS-1 의 병용 투여와 비교해, 보다 높은 항종양 효과를 나타냈다. 그러나, 도 2 의 결과로부터 분명하게, TS-1 의 DPPC 리포솜 1-OHP 와의 병용과 유리된 1-OHP 와의 병용 사이에는, 체중 변화에 유의한 차이가 없음을 알 수 있다. 현저한 독성 증가는 관찰되지 않았다.

시험예 2

실시예 2 에서 수득한 1-OHP-포함 리포솜 제제 (이하, HSPC 리포솜 1-OHP로 한다) 를 사용한 것 외에는, 시험예 1 과 동일한 방법으로 항종양 효과 및 부작용을 평가했다.

도 3 의 결과로부터 분명하게, HSPC 리포솜 1-OHP 와 TS-1 의 병용 요법은, 유리된 1-OHP 와 TS-1 의 병용과 비교해, 보다 높은 항종양 효과를 나타냈다. 그러나, 도 4 의 결과로부터 분명하게, TS-1 의 HSPC 리포솜 1-OHP 과의 병용과 유리된 1-OHP 와의 병용 사이에는 체중 변화에 유의한 차이가 없다. 현저한 독성의 증가는 관찰되지 않았다.

시험예 3

시험예 1 과 동일한 방법으로 약제학적 제제를 제형화했다. 결과로서 수득한 약제학적 제제를 담암마우스에 투여해, 마우스의 생존일을 모니터링했다.

도 5 의 결과로부터 분명하게, TS-1 는 DPPC 리포솜 1-OHP 와 병용 투여시, 유리된 1-OHP 와의 병용에 비해, 생존율이 월등하다.

시험예 4

시험예 2 와 동일한 방법으로 약제학적 제제를 제형화했다. 결과로서 수득한 약제학적 제제를 담암마우스에 투여해, 마우스의 생존일을 모니터링했다.

도 6 의 결과로부터 분명하게, TS-1 는 HSPC 리포솜 1-OHP 와 병용 투여시, 유리된 1-OHP 와의 병용에 비해, 생존율이 월등하다.

시험예 5

실시예 3 에서 수득한 1-OHP-포함 리포솜 제제 (이하, PG10 리포솜 1-OHP 로 언급함) 를 사용한 것 외에는, 시험예 1 와 동일한 방법에 따라 항종양 효과를 평가했다.

도 7 의 결과로부터 분명하게, PG10 리포솜 1-OHP 와 TS-1 의 병용 요법은, 유리된 1-OHP 와 TS-1 의 병용과 비교해, 보다 높은 항종양 효과를 나타냈다.

시험예 6

약제학적 제제의 제형화

시험예 2 와 동일한 방법으로 약제학적 제제를 제형화했다.

제제의 항종양 효과 및 부작용

마우스 결장암 세포, 즉 Colon26 세포를 5% CO₂ 존재 하, 37℃ 10% FBS-DMEM 에서 배양했다. 2×10⁷ 세포/mL 를 포함하는 0.1 mL 의 Colon26 세포를 수컷 BALB/c마우스 (5 주령, 체중 20 g) 의 등쪽에 피하주사하여 고형암 담암마우스를 제작했다. Colon26 세포 이식 7 일째에 하기 계산식으로 산출한 종양 체적이 50 mm³를 초과하는 것을 확인했다.

1-OHP 로서의 HSPC 리포솜 1-OHP 또는 유리된 1-OHP 를 4.2 mg/kg 의 투여량으로 정맥내 투여했다. 동일하게 테가푸르로서의 TS-1 을 6.9 mg/kg 의 투여량으로 경구투여했다. 또한, HSPC 리포솜 1-OHP 및 유리된 1-OHP 는 세포 접종 후 14 일째, 21 일째에 투여하고, TS-1 은 세포 접종 7 일 후부터 실험 종료까지 매일 투여했다.

이외의 항종양 효과 및 부작용은, 시험예 2 와 동일한 방법으로 평가했다.

도 8 의 결과로부터 분명하게, HSPC 리포솜 1-OHP 및 TS-1 의 병용 요법의 항종양 효과는, 유리된 1-OHP 와 TS-1 의 병용에 비해 월등했다. 그러나, 도 9 의 결과로부터 분명하게, HSPC 리포솜 1-OHP 와 병용한 TS-1 처리와, 유리된 1-OHP 와의 병용 사이에는, 체중 변화에 유의한 차이가 없다. 현저한 독성의 증가는 관찰되지 않았다.

시험예 7

시험예 6 와 동일한 방법으로 약제학적 제제를 제형화했다. 결과로서 수득한 약제학적 제제를 담암마우스에 투여해, 마우스의 생존일을 모니터링했다.

도 10 의 결과로부터 분명하게, HSPC 리포솜 1-OHP 및 TS-1 의 병용 요법은, 유리된 1-OHP 및 TS-1 의 병용에 비해, 연장된 생존율을 나타낸다.

상기의 제시된 결과는, 1-OHP 를 리포솜 내에 봉입함으로써, 즉 1-OHP 포함 리포솜 제제로 하여, TS-1 병용시 1-OHP 포함 리포솜의 항종양 효과 및 생존율을 현저하게 증대시킬 수 있고, 또한 독성 수준은 1-OHP 을 TS-1 와 병용해 투여하는 경우와 거의 동등하다는 것을 시사한다. 항종양 활성의 증강의 원인은, 최적의 리포솜화의 결과로서, 1-OHP 의 개선된 생체분포 및 강화된 종양 편재성에 기인하는 것으로 생각된다.

본 발명은, 리포솜 제제에 1-OHP 를 봉입함으로써, 테가푸르, 기메라신 및 오테라실칼륨을 포함하는 조합약물과 1-OHP 의 병용 요법의 항종양 활성이 증강될 수 있고, 1-OHP 의 리포솜화에 기인하는 독성은 발견되지 않았음을 밝혀냈다. 이는, 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨을 포함하는 조합약물과 1-OHP 리포솜 제제를 이용하는 병용 요법이 유망한 암 치료가 될 것임을 시사한다.

Claims

리포솜에 옥살리플라틴을 봉입하여 수득가능한 리포솜 제제 및 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물을 조합하여 포함하는 항종양제.
제 1 항에 있어서,
상기 리포솜을 구성하는 지질 성분의 적어도 1 종이 인지질인 항종양제.
제 2 항에 있어서,
리포솜의 막 표면이 폴리에틸렌 글리콜, 폴리글리세린 또는 양이온성 지질로 수식되어 있는 항종양제.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
테가푸르 1 몰에 대한 옥살리플라틴의 사용 비율이 0.1 내지 5 몰인 항종양제.
제 1 항에 있어서,
테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물 중의, 테가푸르 1 몰에 대한 기메라실의 사용 비율이 0.1 내지 5 몰이고, 테가푸르 1 몰에 대한 오테라실칼륨의 사용 비율이 0.1 내지 5 몰인 항종양제.
제 1 항에 있어서,
항종양제가, 옥살리플라틴을 함유하는 리포솜 제제 및 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물을 포함하는 키트로 형성되는 항종양제.
제 1 항에 있어서,
리포솜 제제가 정맥내, 복강내, 근육내 또는 피하로 투여되고, 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물이 경구투여되는 항종양제.
테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물의 치료에 유효한 양의 항종양 활성을 증강시키기 위한, 리포솜 내에 옥살리플라틴의 유효한 양을 함유하는 리포솜 제제인 항종양 효과 증강제.
제 8 항에 있어서,
상기 리포솜을 구성하는 지질 성분의 적어도 1 종이 인지질인 항종양 효과 증강제.
제 9 항에 있어서,
리포솜의 막 표면이 폴리에틸렌 글리콜, 폴리글리세린 또는 양이온성 지질로 수식되어 있는 항종양 효과 증강제.
제 8 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
테가푸르 1 몰에 대한 옥살리플라틴의 사용 비율이 0.1 내지 5 몰인 항종양 효과 증강제.
제 8 항에 있어서,
테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물 중의, 테가푸르 1 몰에 대한 기메라실의 사용 비율이 0.1 내지 5 몰이고, 테가푸르 1 몰에 대한 오테라실칼륨의 사용 비율이 0.1 내지 5 몰인 항종양 효과 증강제.
항종양제를 제조하기 위한, 리포솜에 옥살리플라틴을 봉입하여 수득가능한 리포솜 제제 및 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물의 용도.
항종양 효과 증강제를 제조하기 위한, 리포솜에 옥살리플라틴을 봉입하여 수득가능한 리포솜 제제의 용도.
리포솜에 봉입된 옥살리플라틴을 함유한 리포솜 제제 및 테가푸르, 기메라실 및 오테라실칼륨 함유 조합약물 각각의 유효 투여량을 암 환자에게 투여하는 것을 특징으로 하는 암의 치료 방법.