KR20100105550A - 7 인자 발현 조절 - Google Patents

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수잔 엠. 프라이어
브렛 피. 모니아
홍 장
제프리 알. 크로스비
쳉쾅 자오
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아이시스 파마수티컬즈 인코포레이티드
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Abstract

7 인자를 감소시키기 위한 안티센스 화합물 및 방법, 및 이를 필요로 하는 개체에서 혈전색전성 합병증, 과잉증식 질환 또는 염증성 병태를 치료하거나 예방하는 방법이 개시된다. 7 인자에 표적화된 안티센스 화합물을 투여하여 개선될 수 있는 질환 상태의 예로는 혈전증, 색전증 및 혈전색전증, 예컨대 심부정맥 혈전증, 폐색전증, 심근경색, 뇌졸중, 암, 류마티스 관절염 및 섬유증을 들 수 있다.

Description

7 인자 발현 조절{Modulation of factor 7 expression}
서열목록
본 출원은 전자 형식의 서열목록과 함께 제출되었다. 서열목록은 2008년 11월 5일에 180 Kb 크기로 생성되어 BIOL0099WOSEQ.txt 파일명으로 제공되었다. 전자 형식의 서열목록에 있는 정보는 그의 전체가 본 원에 참고로 포함된다.
발명의 분야
본 발명의 구체예는 동물에서 7 인자 mRNA 및 단백질의 발현을 감소시키기 위한 방법, 화합물 및 조성물을 제공한다. 이러한 방법, 화합물 및 조성물은 혈전색전성 합병증, 과잉증식 질환 및 염증성 병태를 치료, 예방 또는 개선하는데 유용하다.
순환계는 실혈을 예방하는 메카니즘 및 부적절한 혈관내 폐쇄에 대응하는 메카니즘을 필요로 한다. 일반적으로, 응고는 가용성 피브리노겐이 불용성 피브린 겔로 전환되는 반응 케스케이드를 포함한다. 케스케이드 단계는 불활성 효소원이 활성화 효소로 전환되는 단계를 포함한다. 이어서, 활성 효소가 케스케이드의 다음 단계를 촉매화한다.
응고 케스케이드
응고 케스케이드는 주요 경로인 조직 인자 경로(또한 "외인적 경로")와 접촉 활성화 경로(또한 "고유 경로")로 이루어진 두 경로를 통해 개시될 수 있다.
조직 인자 경로는 혈관외 세포(혈관주위세포, 심근세포, 평활근 세포 및 각질세포)에 의해 구조적으로 발현되고, 염증성 사이토카인 또는 내독소로 유도시에 혈관 단핵세포 및 내피 세포에 의해 발현되는 세포 표면 수용체 조직 인자(TF, 또한 III 인자로도 칭해짐)에 의해 개시된다(Drake et al., Am J Pathol 1989, 134: 1087-1097). TF는 VIIa 응고 인자인 세린 프로테아제에 대한 고친화성 세포 수용체이다. TF 부재시, VIIa는 매우 낮은 촉매 활성을 지니며, VIIa가 알로스테리(allosteric) 메카니즘을 통해 기능하도록 TF로의 결합이 필요하다(Drake et al., Am J Pathol 1989, 134:1087-1097). TF-VIIa 복합체는 인자 X를 Xa로 활성화한다. 이어서, Xa는 그의 공인자인 Va 인자와 조합하여 프로트롬비나제 복합체를 형성한 후, 프로트롬빈(II 인자 또는 2 인자로도 알려져 있음)을 트롬빈(IIa 인자 또는 2a 인자로도 알려져 있음)으로 활성화한다. 트롬빈은 혈소판을 활성화하여, 피브리노겐을 피브린으로 전환시키고, XIII 인자를 활성화시킴으로써 피브린 가교결합을 촉진하고, 그에 따라 혈관외 세포상에 TF가 발현되는 부위에 안정한 플러그를 형성하게 된다. 또한, 트롬빈은 V 및 VIII 인자를 활성화시켜 응고 케스케이드 반응을 강화시킨다.
접촉 활성화 경로는 XII 인자가 XIIa로 활성화됨으로써 촉발된다. XIIa 인자는 XI를 XIa로 전환시키고, XIa는 IX를 IXa로 전환시킨다. IXa는 그의 공인자 VIIa 와 조합하여 X를 Xa로 전환시킨다. 이 시점에 Xa 인자가 Va 인자와 조합하여 프로트롬빈(II 인자)을 트롬빈(IIa 인자)으로 활성화시킴으로써 두 경로가 합류하게 된다.
응고 저해
적어도 3개의 메카니즘, 즉, 활성화 단백질 C, 항트롬빈 및 조직 인자 경로 저해제의 작용이 응고 케스케이드를 억제한다. 활성화 단백질 C는 공인자 Va 및 VIIa를 분해시키는 세린 프로테아제이다. 단백질 C는 트롬보듈린과 함께 트롬빈에 의해 활성화되며, 기능상 보조효소 단백질 S를 필요로 한다. 항트롬빈은 세린 프로테아제: 트롬빈, Xa, XIIa, XIa 및 IXa를 저해하는 세린 프로테아제 저해제(세르핀)이다. 조직 인자 경로 저해제는 Xa 및 TF-VIIa 복합체의 작용을 저해한다(Schwartz AL et al, Trends Cardiovasc Med. 1997; 7:234-239).
질환
혈전증은 병리적인 혈병 발생이며, 혈병이 신체의 다른 부위로 옮겨가 기관의 기능을 방해하게 되면 색전증이 일어난다. 혈전색전증은 심부정맥 혈전증, 폐색전증, 심근경색 및 뇌졸중과 같은 병태를 야기할 수 있다. 중요하게도, 혈전색전증은 매년 미국인의 이백만명 이상에 영향을 주는 이환율의 주 요인이다(Adcock et al. American Journal of Clinical Pathology. 1997; 108:434-9). 대부분의 혈전증 사례는 후천적인 외인적 문제, 예를 들어, 수술, 암, 부동에 의하지만, 일부 사례는 유전적 소인, 예를 들어, 항인지질 증후군 및 상염색체 우성 상태, V 인자 라이덴(Leiden)에 의한다(Bertina RM et al. Nature 1994; 369:64-67).
치료
가장 흔히 사용되는 항응고제인 와파린, 헤파린 및 저분자량 헤파린(LMWH)은 모두 심각한 결점을 갖고 있다.
와파린은 전형적으로 심방 세동으로 고통받는 환자를 치료하기 위해 사용된다. 약물은 인자 II, VII, IX 및 X를 포함하는 비타민 K-의존성 응고 인자와 상호반응한다. 항응고 단백질 C 및 S가 또한 와파린에 의해 저해된다. 와파린을 이용한 약물 요법은, 와파린이 아미오다론과 같은 심방 세동 치료를 위해 사용되는 약물을 포함하는 다른 약제와 상호반응한다는 사실 때문에 더 복잡하다. 와파린을 사용한 요법은 예측이 어려워, 환자는 이상 출혈의 임의의 징후를 포착하기 위해 주의하여 모니터링하여야 한다.
헤파린은 트롬빈 및 X 인자 둘 다를 저해하는 항트롬빈의 활성화에 따라 기능한다(Bjork I, Lindahl U. Mol Cell Biochem. 1982 48: 161-182). 헤파린을 사용한 치료는 혈관내 혈소판을 응집시켜 혈전증을 일으킬 수 있는 면역 반응을 불러올 수 있다. 이러한 부작용은 헤파린-유도 저혈소판증(HIT)으로 알려져 있으며, 환자의 모니터링을 요한다. 헤파린에 의한 장기 치료는 또한 골다공증을 불러 올 수 있다. LMWH가 또한 2 인자를 저해할 수 있으나, 비분획 헤파린(UFH) 보다는 그 정도가 덜하다. LMWH가 HIT 발생에 연루된다.
요컨대, 현재의 항응고제는 예측성 및 특이성이 결여되어 있어서, 출혈 합병증과 같은 불리한 부작용을 예방하기 위해서는 환자를 주의하여 모니터링할 것을 필요로 한다. 고유 또는 외인성 경로만을 표적으로 하는 항응고제는 현재 없다.
발명의 개요
본 발명에 따라 응고 장애를 치료 및 예방하기 위한 안티센스 화합물, 조성물 및 방법이 제공된다.
본 원에 기재된 안티센스 화합물은 7 인자 핵산에 표적화된 12 내지 30개의 뉴클레오시드로 구성된 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산은 GENBANK® 등록번호 NT_027140.6, GENBANK® 등록번호 NM_019616.2 및 GENBANK® 등록번호 DB 184141.1의 뉴클레오티드 1255000 내지 1273000에 기재된 임의의 서열일 수 있다.
안티센스 화합물은 단일 가닥 또는 이중 가닥 올리고뉴클레오티드일 수 있다. 안티센스 화합물은 7 인자 핵산에 100, 95, 90, 85, 80, 75 또는 70% 상보적일 수 있다.
안티센스 올리고뉴클레오티드는 변형될 수 있으며, 여기에서 적어도 하나의 뉴클레오시드간 연결은 변형된 뉴클레오시드간 연결이다. 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결일 수 있다.
안티센스 올리고뉴클레오티드는 변형될 수 있으며, 여기에서 적어도 하나의 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함한다. 변형된 당은 바이사이클릭 당일 수 있다. 변형된 당은 2'-O-메톡시에틸을 포함할 수 있다.
안티센스 올리고뉴클레오티드가 변형될 수 있으며, 여기에서 적어도 하나의 뉴클레오시드는 변형된 핵산염기(nucleobase)를 포함한다. 변형된 핵산염기는 5-메틸사이토신일 수 있다.
안티센스 올리고뉴클레오티드는 5-10-5 MOE 갭머(gapmer)일 수 있다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는 20개의 연결된 뉴클레오시드로 구성될 수 있다.
본 원에 기재된 조성물은 7 인자 핵산에 표적화된 12 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 올리고뉴클레오티드 또는 그의 염 및 약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함할 수 있다.
조성물은 단일 가닥 또는 이중 가닥 올리고뉴클레오티드일 수 있다.
본 원에 기재된 방법은 7 인자 핵산에 표적화된 12 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 동물에 투여하는 것을 포함할 수 있다.
화합물 투여는 응고를 느리게 하거나, 중단시킬 수 있다. 화합물은 임의의 아스피린, 클로피도그렐, 디피리다몰, 헤파린, 레피루딘, 티클로피딘 및 와파린과 공동 투여될 수 있다. 화합물 및 제2 약물의 투여는 동반될 수 있다.
화합물 및/또는 제2 약물 투여는 비경구 투여에 의할 수 있다. 비경구 투여는 피하 또는 정맥내 투여중 어떤 것일 수 있다.
또 다른 구체예에 있어서, 본 원에 기재된 방법은 또한 응고 장애가 있는 사람을 식별하고, 이 사람에게 7 인자 핵산에 표적화된 12 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함할 수 있다.
7 인자 핵산을 코딩하는 서열번호 1의 핵산염기 1147 내지 1227, 9169 내지 9278, 10982 내지 11058, 11075 내지 11117, 12084 내지 12117, 12387 내지 13796, 13847 내지 13907, 14017 내지 14051, 14093 내지 14134, 14172 내지 14287, 14331 내지 14402, 14664 내지 14746, 15098 내지 15570, 15609 내지 15819, 15899 내지 15905 또는 15957 내지 15982 범위내에서 결합하게 될 12 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물이 또한 개시된다.
안티센스 올리고뉴클레오티드는 7 인자 핵산을 코딩하는 서열번호 1에 90, 95 또는 100% 상보성일 수 있다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1에 완전 상보적일 수 있다.
안티센스 올리고뉴클레오티드는 7 인자 핵산을 코딩하는 서열번호 1의 핵산염기 1147 내지 1227, 9169 내지 9278, 10982 내지 11058, 11075 내지 11117, 12084 내지 12117, 12387 내지 13796, 13847 내지 13907, 14017 내지 14051, 14093 내지 14134, 14172 내지 14287, 14331 내지 14402, 14664 내지 14746, 15098 내지 15570, 15609 내지 15819, 15899 내지 15905 또는 15957 내지 15982 범위내에서만 혼성화할 수 있다.
또한 7 인자 핵산을 코딩하는 서열번호 2의 핵산염기 102 내지 131 또는 652 내지 682 범위내에서 결합하게 될 12 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물이 개시된다.
안티센스 올리고뉴클레오티드는 7 인자 핵산을 코딩하는 서열번호 2에 90, 95 또는 100% 상보적일 수 있다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는 서열번호 2에 완전 상보적일 수 있다.
화합물은 7 인자 핵산을 코딩하는 서열번호 2의 핵산염기 102 내지 131 또는 652 내지 682 범위내에서만 혼성화할 수 있다.
본 발명의 구체예는 서열번호 4 내지 159 및 168 내지 611의 핵산염기 서열의 적어도 12개의 인접 핵산염기를 가지는 핵산염기 서열을 함유한 12 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다.
특정 구체예에 있어서, 핵산염기 서열은 서열번호 53이다.
특정 구체예에 있어서, 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵산염기 서열은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 167중 임의의 핵산염기 서열에 적어도 80% 상보적이다.
특정 구체예에 있어서, 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵산염기 서열은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 167중 임의의 핵산염기 서열에 적어도 90% 상보적이다.
특정 구체예에 있어서, 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵산염기 서열은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 167중 임의의 핵산염기 서열에 100% 상보적이다.
특정 구체예에 있어서, 변형된 올리고뉴클레오티드는
(i) 연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
(ii) 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
(iii) 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하고,
여기에서, 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 직접 인접해 위치하며, 각 윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함한다.
특정 구체예에 있어서, 변형된 올리고뉴클레오티드는
(i) 10개의 연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
(ii) 5 개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
(iii) 5개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하고,
여기에서, 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 직접 인접해 위치하며, 각 윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고; 각 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
특정 구체예에 있어서, 변형된 올리고뉴클레오티드는
(i) 14개의 연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
(ii) 3개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
(iii) 3개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하고,
여기에서, 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 직접 인접해 위치하며, 각 윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고; 각 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
특정 구체예에 있어서, 변형된 올리고뉴클레오티드는
(i) 13개의 연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
(ii) 2개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
(iii) 5개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하고,
여기에서, 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 위치하며, 각 윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고; 각 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
특정 구체예에 있어서, 변형된 올리고뉴클레오티드는
(i) 12개의 연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
(ii) 2개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
(iii) 2개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하고,
여기에서, 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 위치하며, 각 윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고; 각 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
본 발명의 구체예는 서열번호 4 내지 159 및 168 내지 611의 임의의 핵산염기 서열의 적어도 12개의 인접 핵산염기를 포함하는 핵산염기 서열을 가지는 12 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드 또는 그의 염 및 약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 조성물을 제공한다.
특정 구체예에 있어서, 핵산염기 서열은 서열번호 53이다.
본 발명의 구체예는 서열번호 4 내지 159 및 168 내지 611의 임의의 핵산염기 서열의 적어도 12개의 인접 핵산염기를 포함하는 핵산염기 서열을 가지는 12 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
특정 구체예에 있어서, 핵산염기 서열은 서열번호 53이다.
특정 구체예에 있어서, 동물은 인간이다.
특정 구체예에 있어서, 투여는 심부정맥 혈전증을 예방한다.
특정 구체예에 있어서, 투여는 예방 폐색전증을 예방한다.
특정 구체예에 있어서, 투여는 과잉증식 질환을 치료한다.
특정 구체예에 있어서, 투여는 염증성 병태를 치료한다.
본 발명의 구체예는 혈전색전성 합병증의 위험이 있는 동물을 식별하고, 상기 위험이 있는 동물에 12 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드로 구성되고 7 인자 핵산에 상보적인 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
특정 구체예에 있어서, 혈전색전성 합병증은 심부정맥 혈전증, 폐색전증 또는 이들의 조합이다.
본 발명의 구체예는 12 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드로 구성되고 서열번호 1의 뉴클레오티드 15128 내지 15223중 동일한 수의 염기서열에 상보적인 적어도 12개의 연속 핵산염기 부분을 포함하는 핵산염기 서열을 가지며, 서열번호 1에 적어도 80% 상보적인 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다.
특정 구체예에 있어서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 서열번호 53의 핵산염기 서열을 가진다.
발명의 상세한 설명
상술한 개괄적인 설명 및 하기 상세한 설명은 예시적인 것으로서 설명만을 목적으로 하는 것이며, 청구된 발명을 제한하는 것으로 이해하여서는 안된다. 본 원에서 사용된 단수는 달리 특별한 언급이 없으면 복수의 개념도 포함한다. 본 원에 사용된 "또는"은 달리 특별한 언급이 없으면 "및/또는"을 의미한다. 또한, 사용된 용어 "포함하는"과 이의 다른 형태, 예컨대 "포함하다" 및 "포함된"은 제한이 없다. 또한, "요소" 또는 "성분"과 같은 용어들은 달리 특별한 언급이 없으면 하나의 유닛을 포함하는 요소 및 성분과 복수개의 서브유닛을 포함하는 요소 및 성분을 모두 포괄한다.
본 원에 사용된 섹션 표제는 구성적인 목적으로만 이용된 것이며, 내용을 한정하는 것으로 해석하여서는 안된다. 특허, 특허 출원, 기사, 책 및 논문을 비롯하여, 본 출원에서 인용된 모든 서류 또는 서류의 일부는 명백히 본 원에서 논의한 서류의 일부와 그의 전체내용을 참고할 목적으로 원용되었다.
정의
특정한 정의가 제공되지 않으면, 본 원에 기재된 분석 화학, 합성 유기화학, 의학 및 약학 화학과 관련되어 사용된 명명, 및 그의 절차와 기술은 당업계에 주지의 것이며, 통상적으로 이용되는 것이다. 화학적 합성 및 화학적 분석에 표준 기술이 이용될 수 있다. 허용되는 한, 모든 특허, 출원 및 공개된 출원, 다른 공개, 유전자은행 등록번호 및 미국 국립 생명 공학 정보 센터(National Center for Biotechnology Information, NCBI)와 같은 데이터베이스로부터 입수할 수 있는 관련 서열 정보 및 본 원에 기술되는 내용과 관련된 다른 데이터는 본 원에서 논의한 서류의 일부와 그의 전체내용에 대한 것이 참고로 원용되었다.
달리 제시되지 않으면, 하기 용어들은 다음과 같은 의미를 지닌다:
"2'-O-메톡시에틸"(또한 2'-MOE 및 2'-O(CH2)2-OCH3)은 푸로실 환의 2' 위치의 O-메톡시에틸 변형을 의미한다. 2'-O-메톡시에틸 변형된 당은 변형된 당이다.
"2'-O-메톡시에틸 뉴클레오티드"는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당 부분을 포함하는 뉴클레오티드를 의미한다.
"5-메틸사이토신"은 5' 위치에 부착된 메틸기로 변형된 사이토신을 의미한다. 5-메틸사이토신은 변형된 핵산염기이다.
"활성 안티센스 화합물"은 표적 핵산 수준 또는 단백질 수준을 감소시키는 안티센스 화합물을 의미한다.
"동시 투여되는"이란 두 약제가 양 약제의 약리학적 효과가 환자에서 동일 시기에 발현되는 임의의 방식으로 공동 투여됨을 가리킨다. 동시 투여에서 두 약제는 단일 약학 조성물, 동일 제형 또는 동일 투여 경로로 투여될 필요는 없다. 양 약제의 효과가 동일 시기에 자체 발현될 필요는 없다. 효과는 일정 시간만 겹치면 되고, 동일한 시간에 걸쳐져 있을 필요는 없다.
"투여하는"이란 개체에 약제를 제공하는 것을 의미하며, 의료 전문인에 의한 투여 및 자가 투여를 포함하나, 이들에 제한되지는 않는다.
"개선"은 관련 질환, 장애 또는 병태의 적어도 하나의 지표, 징후 또는 증상을 완화시키는 것을 의미한다. 지표 경중도는 당업자들에게 알려진 주관적 또는 객관적 척도로 결정될 수 있다.
"동물"은 인간 또는 인간 이외의 동물, 예를 들면 마우스, 래트, 토끼, 개, 고양이, 돼지 및 원숭이 및 침팬지가 예시되나 이들에 한정되지 않는 인간 이외의 영장류를 의미하나, 이들에 한정되지 않는다.
"해독 화합물"은 임의의 안티센스 활성의 강도나 기간을 감소시킬 수 있는 화합물을 의미한다.
"해독 올리고뉴클레오티드"는 안티센스 화합물과 혼성화할 수 있고, 이에 상보적인 올리고뉴클레오티드를 포함하는 해독 화합물을 의미한다.
"해독 단백질"은 펩티드를 포함하는 해독 화합물을 의미한다.
"항체"는 항원과 특정의 방식으로 특이적으로 반응하는 것을 특징으로 하는 분자를 말하며, 여기에서, 항체 및 항원은 각각 다른 면으로 정의된다. 항체는 완전 항체 분자 또는 그의 임의의 단편 또는 영역, 예컨대 중쇄, 경쇄, Fab 영역 및 Fc 영역을 의미할 수 있다.
"안티센스 활성"은 안티센스 화합물이 그의 표적 핵산으로 혼성화하는데 기여할 수 있는 임의의 검출가능하거나 측정가능한 활성을 의미할 수 있다. 특정 구체예에 있어서, 안티센스 활성은 이러한 표적 핵산으로 코딩되는 표적 핵산 또는 단백질의 양 또는 발현을 감소시킨다.
"안티센스 화합물"은 수소 결합을 통해 표적 핵산으로 혼성화할 수 있는 올리고머 화합물을 의미한다.
"안티센스 저해"는 표적 핵산에 상보적인 안티센스 화합물의 존재하에서 표적 핵산 수준 또는 표적 단백질 수준이 안티센스 화합물의 부재하에서의 표적 핵산 수준 또는 표적 단백질 수준에 비해 감소됨을 의미한다.
"안티센스 올리고뉴클레오티드"는 표적 핵산의 상응하는 영역 또는 세그먼트로의 혼성화를 허용하는 핵산염기 서열을 가지는 단일 가닥 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
"바이사이클릭 당"은 2개의 비제미널(non-geminal) 환 원자의 브릿징으로 변형된 푸로실 환을 의미한다. 바이사이클릭 당은 변형된 당이다.
"바이사이클릭 핵산" 또는 "BNA" 또는 "바이사이클릭 뉴클레오시드" 또는 바이사이클릭 뉴클레오티드"란 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 푸라노스 부분이 푸라노스 환상의 두 탄소 원자를 연결하는 브릿지를 포함함으로써 바이사이클릭 환 시스템을 형성하는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드를 가리킨다. 본 원에 사용된 용어 "메틸렌옥시 BNA"는 단독으로 달리 언급이 없으면, β-D-메틸렌옥시 BNA를 의미한다.
"캡 구조" 또는 "말단 캡 부분"은 안티센스 화합물의 양 말단에 편입되어 있는 화학적 변형을 의미한다.
"화학적으로 상이한 영역"이란 동일한 안티센스 화합물의 다른 영역과 특정의 방식으로 화학적으로 상이한 안티센스 화합물의 영역을 가리킨다. 예를 들어, 2'-O-메톡시에틸 뉴클레오티드를 가지는 영역은 2'-0-메톡시에틸 변형이 없는 뉴클레오티드를 가지는 영역과 화학적으로 상이하다.
"키메라 안티센스 화합물"은 적어도 2개의 화학적으로 상이한 영역을 포함하며, 각 위치는 다수의 서브유닛을 가지는 안티센스 화합물을 의미한다.
"공동 투여"는 2 이상의 약제를 개체에 투여하는 것을 의미한다. 2 이상의 약제는 단일 약학 조성물로 존재할 수 있거나, 상이한 약학 조성물로 존재할 수 있다. 2 이상의 각 약제는 동일하거나 상이한 투여 경로를 통해 투여될 수 있다. 공동 투여는 병행 또는 순차적 투여를 포함한다.
"응고 인자"는 혈액 응고 케스케이드에 있는 인자 I, II, III, IV, V, VII, VIII, IX, X, XI, XII 또는 XIII중 임의의 것을 의미한다. "응고 인자 핵산"은 응고 인자를 코딩하는 임의의 핵산을 의미한다. 예를 들어, 특정 구체예에 있어서, 응고 인자 핵산은 응고 인자를 코딩하는 DNA 서열(인트론 및 엑손을 포함하는 게놈 DNA 포함), 응고 인자를 코딩하는 DNA로부터 전사된 RNA 서열 및 응고 인자를 코딩하는 mRNA 서열을 포함하나, 이들에 한정되지는 않는다. "응고 인자 mRNA"는 응고 인자 단백질을 코딩하는 mRNA를 의미한다.
"상보성"은 제1 핵산 및 제2 핵산의 핵산염기 간에 쌍을 이루는 능력을 의미한다.
"인접 핵산염기"는 상호 직접 인접한 핵산염기를 의미한다.
"희석제"는 약리학적 활성을 갖지는 않지만, 약학적으로 필수적이거나 요망되는 조성물중의 성분을 의미한다. 예를 들어, 주사 약물에서, 희석제는 액체, 이를테면 식염수일 수 있디.
"용량"은 단일 투여로 제공되거나, 특정 시간에 제공되는 약제의 특정량을 의미한다. 특정 구체예에 있어서, 용량은 1, 2 또는 그 이상의 볼루스, 정제 또는 주사로 투여될 수 있다. 예를 들어, 피하 투여를 원하는 특정 구체예에 있어서, 소정 용량은 단일 주사에 의해 용이하게 수용되지 않는 부피를 요하며, 따라서, 2 이상의 주사가 의도하는 용량을 달성하기 위해 사용될 수 있다. 특정 구체예에서, 약제는 장기간에 걸쳐 또는 연속적으로 주입에 의해 투여된다. 용량은 시간 단위, 일 단위, 주 단위 또는 월 단위의 약제의 양으로서 제시될 수 있다.
"효능"은 의도된 효과를 생성하는 능력을 가리킨다. "유효량"은 약제를 필요로 하는 개체에서 목적하는 생리적 결과를 유도하기에 충분한 활성 약제의 양을 의미한다. 유효량은 치료할 개체의 건강 및 물리적 상태, 치료할 개체의 분류 집단, 조성물 제제, 개체의 의학적 상태 평가 및 다른 관련 인자에 따라 개체마다 달라질 수 있다.
"7 인자 핵산" 또는 "VII 인자 핵산"은 7 인자를 코딩하는 임의의 핵산을 의미한다. 예를 들어, 특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산은 7 인자를 코딩하는 DNA 서열, 7 인자를 코딩하는 DNA로부터 전사된 RNA 서열(인트론 및 엑손을 포함하는 게놈 DNA 포함) 및 7 인자를 코딩하는 mRNA 서열을 포함하나, 이들에만 한정되지 않는다. "7 인자 mRNA"는 7 인자 단백질을 코딩하는 mRNA를 의미한다.
"7 인자 특이적 저해제"란 7 인자 mRNA 및/또는 7 인자 단백질의 발현을 분자 수준으로 특이적으로 저해할 수 있는 임의의 약제를 가리킨다. 예를 들어, 7 인자 특이적 저해제는 핵산(안티센스 화합물 포함), 펩티드, 항체, 소형 분자 및 7 인자 mRNA 및/또는 7 인자 단백질의 발현을 저해할 수 있는 그밖의 다른 약제를 포함한다. 특정 구체예에 있어서, 7 인자 특이적 저해제는 7 인자 mRNA 발현 및/또는 7 인자 단백질 발현을 특이적으로 조절함으로써, 하류 성분을 포함하는 응고 케스케이드의 다른 성분에 영향을 미칠 수 있다. 유사하게, 특정 구체예에 있어서, 7 인자 특이적 저해제는 동물에서 다른 분자 과정에 영향을 미칠 수 있다.
"7 인자 특이적 저해제 해독제"는 7 인자 특이적 저해제의 효과를 감소시킬 수 있는 화합물을 의미한다. 특정 구체예에 있어서, 7 인자 특이적 저해제 해독제는 7 인자 펩티드; 7 인자 해독 올리고뉴클레오티드; 7 인자 안티센스 화합물에 상보적인 7 인자 해독 화합물; 및 고유 또는 외인적 응고 경로에 영향을 미치는 임의의 화합물 또는 단백질로부터 선택된다.
"완전 상보적" 또는 "100% 상보적"은 제1 핵산의 각 핵산염기가 제2 핵산에 상보적인 핵산염기를 가짐을 의미한다. 특정 구체예에 있어서, 제1 핵산은 안티센스 화합물이고, 표적 핵산은 제2 핵산이다. 이러한 특정 구체예에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드는 제1 핵산이고, 표적 핵산은 제2 핵산이다.
"갭머"는 RNaseH 절단을 지원하는 다수의 뉴클레오티드를 가지는 내부 위치가 내부 영역의 뉴클레오시드와 화학적으로 상이한 하나 이상의 뉴클레오티드를 가지는 외부 영역 사이에 위치해 있는 안티센스 화합물을 의미한다. "갭 세그먼트"는 갭머의 내부 영역을 구성하는 다수의 뉴클레오티드를 의미한다. "윙 세그먼트"는 갭머의 외부 영역을 의미한다.
"갭-확장"은 1 내지 6개의 뉴클레오시드를 가지는 5' 및 3' 윙 세그먼트 사이에 직접 인접해 위치한 12 이상의 인접 2'-데옥시리보뉴클레오시드의 갭 세그먼트를 가지는 키메라 안티센스 화합물을 의미한다.
"혼성화"는 상보적 핵산 분자의 어닐링을 의미한다. 특정 구체예에 있어서, 상보적 핵산 분자는 안티센스 화합물 및 표적 핵산을 포함하나 이들에 한정되지는 않는다. 이러한 특정 구체예에 있어서, 상보적 핵산 분자는 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 핵산 표적을 포함하나 이들에 한정되지는 않는다.
"과잉증식 질환"이란 세포의 이상 증식 또는 병리적 증식을 특징으로 하는 질환, 예를 들어, 암, 건선, 과다형성 등을 가리킨다.
"혈전색전성 합병증의 위험이 있는 동물의 식별"이란 혈전색전성 합병증으로 진단된 동물을 식별하거나, 혈전색전성 합병증으로 발전할 경향이 있는 동물을 식별하는 것을 가리킨다. 혈전색전성 합병증으로 발전할 경향이 있는 동물로는 부동, 수술(특히 정형외과 수술), 악성 종양, 임신, 고령, 경구 피임약 사용 및 선천적 또는 후천적 혈전 생성 촉진 응고 장애를 비롯하여, 혈전색전성 합병증에 대한 위험 인자를 하나 이상 가지는 동물을 들 수 있다. 이와 같은 식별은 개체의 병력 평가 및 표준 임상 시험 또는 평가를 포함하는 임의의 방법으로 이루어질 수 있다.
"직접 인접한"이란 직접 인접한 요소 사이에 개입 요소가 존재하지 않음을 의미한다.
"개체"는 치료 또는 요법을 위하여 선택된 인간 또는 인간 이외의 동물을 가리킨다.
"치료를 필요로 하는 개체"란 치료 또는 요법을 필요로 하는 치료 또는 요법을 위하여 선택된 인간 또는 인간 이외의 동물을 가리킨다.
"염증성 병태"란 염증을 초래하는 질환, 질환 상태, 증후군 또는 다른 증상을 가리킨다. 예를 들어, 류마티스 관절염 및 간 섬유증이 염증성 병태이다. 염증성 병태의 다른 예로는 패혈증, 심근 허혈/재관류 손상, 성인성 호흡 곤란 증후군, 신장염, 이식편거부, 염증성 장 질환, 다발경화증, 동맥경화증 및 혈관염을 들 수 있다.
"뉴클레오시드간 연결"은 뉴클레오시드들 사이의 화학 결합을 가리킨다.
"연결된 뉴클레오시드"는 함께 결합된 인접 뉴클레오시드를 의미한다.
"미스매치" 또는 "비상보적 핵산염기"는 제2 또는 표적 핵산의 상응하는 핵산염기와 쌍을 이룰 수 없는 제1 핵산의 핵산염기를 의미한다.
"변형된 뉴클레오시드간 연결"이란 자연 발생 뉴클레오시드간 연결(즉, 포스포디에스테르 뉴클레오시드간 연결)로부터 치환 및/또는 임의의 변화가 일어난 것을 가리킨다.
"변형된 핵산염기"란 아데닌, 사이토신, 구아닌, 티미딘 또는 우라실 외의 임의의 핵산염기를 가리킨다. "비변형된 핵산염기"는 퓨린 기반 아데닌(A) 및 구아닌(G) 및 피리미딘 기반 티민(T), 사이토신(C) 및 우라실(U)을 의미한다.
"변형된 뉴클레오티드"는 독립적으로, 변형된 당 부분, 변형된 뉴클레오시드간 연결 또는 변형된 핵산염기를 가지는 뉴클레오티드를 의미한다. "변형된 뉴클레오시드"는 독립적으로, 변형된 당 부분 또는 변형된 핵산염기를 가지는 뉴클레오시드를 의미한다.
"변형된 올리고뉴클레오티드"는 변형된 뉴클레오시드간 연결, 변형된 당 및/또는 변형된 핵산염기를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
"변형된 당"이란 천연 당에서 치환 및/또는 임의의 변화가 일어난 것을 의미한다.
"변형된 당 부분"은 천연 당에서 임의의 치환 및/또는 변화가 있는 당 부분을 의미한다.
"모티프"는 안티센스 화합물에서 비변형 및 변형된 뉴클레오시드의 패턴, 즉, 안티센스 화합물에서 화학적으로 상이한 영역의 패턴을 의미한다.
"자연 발생 뉴클레오시드간 연결"은 3'에서 5'의 포스포디에스테르 연결을 의미한다.
"천연 당 부분"은 DNA(2'-H) 또는 RNA(2'-OH)에서 발견되는 당을 의미한다.
"핵산"은 모노머 뉴클레오티드로 구성된 분자를 가리킨다. 핵산은 리보핵산(RNA), 데옥시리보핵산(DNA), 단일 가닥 핵산, 이중 가닥 핵산, 소 간섭 리보핵산(siRNA) 및 마이크로RNAs(miRNA)를 포함한다.
"핵산염기"는 다른 핵산의 염기와 쌍을 이룰 수 있는 헤테로사이클릭 부분을 의미한다.
"핵산염기 서열"은 임의의 당, 연결 및/또는 핵산염기 변형과 독립적인 인접 핵산염기의 순서를 의미한다.
"뉴클레오시드"는 당에 연결된 핵산염기를 의미한다.
"뉴클레오티드"는 뉴클레오시드의 당 부분에 공유적으로 연결된 포스페이트 그룹을 가지는 뉴클레오시드를 의미한다.
"올리고머 화합물" 또는 "올리고머"는 적어도 핵산 분자 영역에 혼성화할 수 있는 연결 모노머 서브유닛을 포함하는 폴리머를 의미한다.
"올리고뉴클레오티드"는 상호 독립적으로 각각 변형되거나 비변형될 수 있는 연결된 뉴클레오시드의 폴리머를 의미한다.
"비경구 투여"는 주사 또는 주입을 통한 투여를 의미한다. 비경구 투여는 피하 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 동맥내 투여, 복막내 투여 또는 두개내 투여, 예를 들면 수막공간내 또는 뇌실내 투여를 포함하나 이들에 한정되지는 않는다. "피하 투여"는 피부 바로 밑에 투여하는 것을 가리킨다. "정맥내 투여"는 정맥으로 투여하는 것을 가리킨다.
"펩티드"는 적어도 2개의 아미노산이 아미드 결합에 의해 연결됨으로써 형성된 분자를 의미한다. 펩티드란 폴리펩티드 및 단백질을 가리킨다.
"약제"는 개체에 투여되는 경우 치료적 유용성을 제공하는 물질을 의미한다. 예를 들어, 특정 구체예에 있어서, 7 인자에 표적화된 안티센스 올리고뉴클레오티드가 약제이다. "활성 약제"는 소정 효과를 제공하는 약학 조성물중의 물질(들)을 의미한다.
"약학 조성물"은 개체에 투여하기에 적합한 물질의 혼합물을 가리킨다. 예를 들어, 약학적 조성물은 하나 이상의 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 멸균 수용액을 포함할 수 있다.
"약학적으로 허용되는 염"은 안티센스 화합물의 생리적 및 약학적으로 허용되는 염, 즉, 모 올리고뉴클레오티드의 소기의 생물학적 활성을 보유하고, 바람직하지 않은 독성 효과를 부여하지 않는 염을 의미한다.
"포스포로티오에이트 연결"은 비브릿지 산소 원자중 하나가 황 원자로 대체되어 포스포디에스테르 결합이 변형된 뉴클레오시드간 연결을 의미한다. 포스포로티오에이트 연결은 변형된 뉴클레오시드간 연결이다.
"부분"은 핵산의 한정된 수의 인접(즉, 연결) 핵산염기를 의미한다. 특정 구체예에 있어서, 부분은 표적 핵산의 한정된 수의 인접 핵산염기이다. 특정 구체예에 있어서, 부분은 안티센스 화합물의 한정된 수의 인접 핵산염기이다.
"예방"은 질환, 장애 또는 병태의 개시 또는 발생을 수 분 내지 무한정 기간 동안 지연시키거나 미리 막는 것을 가리킨다. "예방"은 또한 질환, 장애 또는 병태가 발생할 위험을 감소시키는 것도 또한 의미한다.
"프로드럭"은 불활성 형태로 제조되어, 내인성 효소 또는 다른 화학물질 또는 조건의 작용으로 체내 또는 그의 세포내에서 활성 형태(즉, 약물)로 전환되는 치료제를 의미한다.
"부작용"은 치료에 기인하는, 의도된 효과가 아닌 생리적 반응을 의미한다. 특정 구체예에서 부작용은 주사 부위 반응, 간 기능 검사 이상, 신 기능 이상, 간 독성, 신 독성, 중추 신경계 이상, 근육병증 및 권태감을 포함하나 이들에 한정되지 않는다. 예를 들면, 혈청에서 증가된 아미노트랜스퍼라제 수준은 간 독성 또는 간 기능 이상을 가리킬 수 있다. 예를 들어, 빌리루빈 증가는 간 독성 또는 간 기능 이상을 가리킬 수 있다.
"단일 가닥 올리고뉴클레오티드"는 상보적 가닥에 혼성화되지 않은 올리고뉴클레오티드를 의미한다. "단일 가닥의 변형된 올리고뉴클레오티드"는 상보적 가닥에 혼성화되지 않은 변형된 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
"특이적으로 혼성화가능한"이란 표적 핵산에 혼성화하여 소정 효과를 유도하는 동시에, 비표적 핵산에는 최소의 효과를 나타내거나, 효과를 나타내지 않는 안티센스 화합물을 의미한다. 예를 들어, 특이적으로 혼성화가능한이란 특이적 결합을 목적으로 하는 조건, 즉, 생체내 어세이 경우에서의 생리적인 조건 및 치료적 치료하에서 안티센스 올리고뉴클레오티드와 표적 핵산 사이에서 소정 효과를 유도하도록 충분한 정도의 상보성을 가지면서 비표적 핵산에는 최소의 효과를 나타내거나, 효과를 나타내지 않는 안티센스 화합물에 대해 적용된다.
"엄격한 혼성화 상태"는 안티센스 화합물과 같은 핵산 분자가 표적 핵산 서열에 혼성화되나, 다른 서열에는 최소한의 수로 혼성화되는 상태를 의미한다. 엄격한 상태는 서열-의존성이고 상이한 환경에서 달라질 것이다. 본 발명과 관련하여, 올리고머 화합물이 표적 서열에 혼성화하는 "엄격한 상태"는 올리고머 화합물의 본래 성질 및 조성과 그들을 조사한 어세이에 의하여 결정된다.
"표적하는" 또는 "~에 표적된"은 소정 효과를 유도하도록 표적 핵산 분자에 안티센스 화합물을 특정하게 혼성화시킬 핵산염기 서열을 가짐을 의미한다. 특정 구체예에 있어서, 소정 효과는 표적 핵산의 감소이다. 특정 구체예에 있어서, 소정 효과는 7 인자 mRNA의 감소이다.
"표적화"는 표적 핵산에 특이적으로 혼성화하여 소정 효과를 유도할 수 있는 안티센스 화합물을 설계하고 선별하는 과정을 의미한다.
"표적 핵산," "표적 RNA," "표적 RNA 전사체" 및 "핵산 표적"은 모두 안티센스 화합물에 의해 표적화될 수 있는 핵산을 의미한다.
"표적 세그먼트"는 안티센스 화합물이 표적으로 하는 표적 핵산의 뉴클레오티드 서열을 의미한다. "5' 표적 부위"는 표적 세그먼트의 5'-대부분의(most) 뉴클레오티드를 가리킨다. "3' 표적 부위"는 표적 세그먼트의 3'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다.
"표적 영역" 또는 "활성 표적 영역"은 하나 이상의 안티센스 화합물이 표적으로 하는 표적 핵산 부분을 의미한다.
"치료적 유효량"은 개체에 치료적 유용성을 제공하는 약제의 양을 의미한다.
"혈전색전성 합병증"은 혈전에 의해 야기된 색전증을 포함하는 임의의 질환, 장애 또는 병태를 의미한다. 이러한 질환, 장애 및 병태의 예에는 혈전증, 색전증 및 혈전색전증 범주가 포함된다. 특정 구체예에 있어서, 이러한 질환, 장애 및 병태는 심부정맥 혈전증, 폐색전증, 심근경색 및 뇌졸중을 포함한다.
"치료"는 질환, 장애 또는 병태를 변경 또는 개선시키기 위해 본 발명의 조성물을 투여하는 것을 가리킨다.
"비변형된 뉴클레오티드"는 자연 발생 핵산염기, 당 부분 및 뉴클레오시드간 연결로 구성된 뉴클레오티드를 의미한다. 특정 구체예에 있어서, 비변형된 뉴클레오티드는 RNA 뉴클레오티드(즉, β-D-리보뉴클레오시드) 또는 DNA 뉴클레오티드(즉, β-D-데옥시리보뉴클레오시드)이다.
특정 구체예
본 발명의 구체예는 7 인자 mRNA 및 단백질의 발현을 조절하기 위한 방법, 화합물 및 조성물을 제공한다. 특정 구체예에 있어서, 7 인자 mRNA 및 단백질의 발현이 감소된다. 특정 구체예에 있어서, 7 인자 특이적 저해제는 7 인자 mRNA 및 단백질의 발현을 조절한다. 특정 구체예에 있어서, 7 인자 특이적 저해제는 핵산, 단백질 또는 소형 분자이다.
특정 구체예에 있어서, 조절은 세포 또는 조직에서 발생할 수 있다. 특정 구체예에 있어서, 세포 또는 조직은 동물의 것이다. 특정 구체예에 있어서, 동물은 인간이다. 특정 구체예에 있어서, 7 인자 mRNA 수준이 감소된다. 특정 구체예에 있어서, 7 인자 단백질 수준이 감소된다. 이러한 감소는 시간-의존적 방식 또는 용량-의존적 방식으로 일어날 수 있다.
본 발명의 구체예는 치료를 필요로 하는 개체에서 7 인자와 관련된 질환, 장애 및 병태를 치료, 예방 또는 개선하기 위한 방법, 화합물 및 조성물을 제공한다. 특정 구체예에 있어서, 이러한 질환, 장애 및 병태는 혈전색전성 합병증이다. 이러한 혈전색전성 합병증에는 혈전증, 색전증 및 혈전색전증의 범주가 포함된다. 특정 구체예로, 이러한 혈전색전성 합병증은 심부정맥 혈전증, 폐색전증, 심근경색 및 뇌졸중을 포함한다.
상기 질환, 장애 및 병태는 공동으로 하나 이상의 위험 인자, 요인 또는 결과를 가질 수 있다. 혈전색전성 합병증의 발생을 위한 특정 위험 인자 및 요인에는 부동, 수술(특히 정형외과 수술), 악성 종양, 임신, 고령, 경구 피임약 사용, 심방 세동, 기존 혈전색전성 합병증, 만성 염증성 질환 및 고유 또는 후천적 혈전 생성 촉진 응고 장애가 포함된다. 혈전색전성 합병증 발생과 연관된 특정 결과는 감염 혈관을 통한 혈류 감소, 조직사 및 개체 사망을 포함한다. 과잉증식 질환의 발생을 위한 특정 위험 인자 및 요인에는 유전적이거나 유전적이지 않을 수 있는 유전자 돌연변이 및 염색체 이상과 같은 같은 유전 인자; 및 방사성 원소, X-선, 감마선, 마이크로파 및 자외선으로부터의 고 에너지 방사선과 같은 알려진 돌연변이원 노출이 포함되나 이들에 한정되지는 않는 환경 인자; 특정 공업 약품; 담배 연기와 같은 오염물질; 특정 살충제; 약물 및 바이러스가 포함된다. 과잉증식 질환 발생과 관련된 특정 결과는 개체의 비악성 종양, 악성전 종양 및 악성 조직을 들 수 있다. 염증성 병태의 발생을 위한 특정 위험 인자 및 요인에는 박테리아 및 바이러스 감염 및 알레르기 항원이 예시되나 이들에 한정되지 않는, 선행 병태 생리학적 상태에 세포 반응을 야기하는 임의의 비독성 자극이 포함된다. 염증은 숙주 대식세포, T-림프구, 내피 세포에 의해 분비되는 사이토카인에 의해 매개된다. 염증성 병태의 발생과 연관된 특정 결과는 발적, 통증, 감염 부위에 부기, 기능 상실, 개체 이환 및 사망을 들 수 있다.
특정 구체예에 있어서, 치료 방법은 치료를 필요로 하는 개체에 7 인자 특이적 저해제를 투여하는 것을 포함한다.
특정 구체예에 있어서, 본 발명은 7 인자와 관련된 질환, 장애 또는 병태의 치료, 예방 또는 개선용 약제를 제조하기 위한 방법 및 화합물을 제공한다. 7 인자 관련 질환, 장애 및 병태에는 혈전색전성 합병증, 과잉증식 질환 및 염증성 병태가 포함된다. 혈전색전성 합병증은 혈전증, 색전증, 혈전색전증, 심부정맥 혈전증, 폐색전증, 심근경색 및 뇌졸중을 포함한다. 과잉증식 질환은 암을 포함한다. 염증성 병태는 류마티스 관절염 및 섬유증을 포함한다.
본 발명의 구체예는 7 인자 관련 질환을 치료, 예방 또는 개선하기 위한 7 인자 특이적 저해제를 제공한다. 특정 구체예에 있어서, 7 인자 특이적 저해제는 핵산(안티센스 화합물 포함), 펩티드, 항체, 소형 분자 및 7 인자 mRNA 및/또는 7 인자 단백질의 발현을 저해할 수 있는 다른 제제를 포함한다.
본 발명의 구체예는 혈전증, 색전증, 혈전색전증, 심부정맥 혈전증, 폐색전증, 심근경색 및 뇌졸중과 같은 혈전색전성 합병증을 치료, 예방 또는 개선하기 위한 본 원에 기재된 바와 같은 7 인자 특이적 저해제를 제공한다.
본 발명의 구체예는 본 원에 기재된 바와 같은 추가의 약제 또는 치료제와의 배합 요법에 의해 본 원에 기재된 바와 같은 혈전색전성 합병증을 치료, 예방 또는 개선하기 위한 본 원에 기재된 바와 같은 7 인자 특이적 저해제를 제공한다. 약제 또는 치료제는 공동 투여되거나 동시 투여될 수 있다.
본 발명의 구체예는 본 원에 기재된 바와 같은 추가의 약제 또는 치료제와의 배합 요법에 의해 본 원에 기재된 바와 같은 혈전색전성 합병증을 치료, 예방 또는 개선하기 위한 약제를 제조하는데 있어서 본 원에 기재된 바와 같은 7 인자 특이적 저해제의 용도를 제공한다.
본 발명의 구체예는 본 원에 기재된 바와 같은 추가의 약제 또는 치료제가 후속 투여되는 환자에서 본 원에 기재된 바와 같은 혈전색전성 합병증을 치료, 예방 또는 개선하기 위한 약제를 제조하는데 있어서 본 원에 기재된 바와 같은 7 인자 특이적 저해제의 용도를 제공한다.
본 발명의 구체예는 (i) 본 원에 기재된 바와 같은 7 인자 특이적 저해제; 및 대안적으로 (ii) 본 원에 기재된 바와 같은 추가의 약제 또는 치료제를 포함하는, 본 원에 기재된 바와 같은 혈전색전성 합병증을 치료, 예방 또는 개선하기 위한 키트를 제공한다.
본 발명의 키트는 본 원에 기재된 바와 같은 배합 요법에 의해 본 원에 기재된 바와 같은 혈전색전성 합병증을 치료, 예방 또는 개선하는데 키트를 사용하도록 지시한 설명서를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 구체예는 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물을 제공한다. 특정 구체예에 있어서, 인간 7 인자 핵산은 유전자은행 등록번호 NT_027140.6 (1255000-1273000에서 절단된 것, 서열번호 1로서 본 원에 포함됨), 유전자은행 등록번호 NM_O19616.2(서열번호 2로서 본 원에 포함됨), 유전자은행 등록번호 DB184141.1(서열번호 3으로서 본 원에 포함됨) 및 GENBANK® 등록번호 NM_000131.3 (서열번호 167로서 본 원에 포함됨)에 기재된 임의의 서열을 가진다. 특정 구체예에 있어서, 붉은털 원숭이 7 인자 핵산은 유전자은행 등록번호 NW_001104507.1(뉴클레오티드 691000-706000에서 절단된 것, 서열번호 162로서 본 원에 포함됨) 및 유전자은행 등록번호 3360_061_B(서열번호 163으로서 본 원에 포함됨)에 기재된 임의의 서열을 가진다. 특정 구체예에 있어서, 뮤린 7 인자 핵산은 뉴클레오티드 10024000-10037000에서 절단된 유전자은행 등록번호 NT_039455.6(서열번호 160으로서 본 원에 포함됨)에 기재된 서열을 가진다.
안티센스 화합물
올리고머 화합물에는 올리고뉴클레오티드, 올리고뉴클레오시드, 올리고뉴클레오티드 유사체, 올리고뉴클레오티드 모방체, 안티센스 화합물, 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 siRNAs가 포함되나 이들에 한정되지는 않는다. 올리고머 화합물은 표적 핵산에 "안티센스"일 수 있으며, 이는 수소 결합을 통해 표적 핵산에 혼성화할 수 있음을 의미한다.
특정 구체예에 있어서, 안티센스 화합물은 5'에서 3' 방향으로 씌여진 경우, 표적으로 하는 표적 핵산의 표적 세그먼트의 역상보를 포함하는 핵산염기 서열을 가진다. 이러한 특정 구체예에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드는 5'에서 3' 방향으로 씌여진 경우, 표적으로 하는 표적 핵산의 표적 세그먼트의 역상보를 포함하는 핵산염기 서열을 가진다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 12 내지 30의 서브유닛 길이를 가진다. 달리 표현하면, 안티센스 화합물은 12 내지 30 연결 서브유닛이다. 다른 구체예에 있어서, 안티센스 화합물은 8 내지 80, 12 내지 50, 15 내지 30, 18 내지 24, 19 내지 22 또는 20 연결 서브유닛이다. 이러한 특정 구체예에 있어서, 안티센스 화합물은 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 또는 80 연결 서브유닛 길이 또는 상기 임의의 두 값으로 한정되는 범위이다. 일부 구체예에서, 안티센스 화합물은 안티센스 올리고뉴클레오티드이고, 연결 서브유닛은 뉴클레오티드이다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 단축 또는 절단 안티센스 화합물은 5' 말단이 결실(5' 절단)되거나, 3' 말단이 결실된(3' 절단) 단일 서브유닛을 가진다. 7 인자 핵산에 표적화된 단축 또는 절단 안티센스 화합물은 안티센스 화합물의 5' 말단으로부터 2개의 서브유닛이 결실될 수 있거나, 또는 3' 말단으로부터 임의의 2개의 서브유닛이 결실될 수 있다. 다른 한편으로, 결실된 뉴클레오시드는 예를 들어 5' 말단으로부터 결실된 하나의 뉴클레오시드 및 3' 말단으로부터 결실된 하나의 뉴클레오시드를 가지는 안티센스 화합물에서 안티센스 화합물을 통해 분산될 수 있다.
추가의 단일 서브유닛이 연장된 안티센스 화합물에 존재하는 경우, 추가의 서브유닛은 안티센스 화합물의 5' 또는 3' 말단에 위치할 수 있다. 2 이상의 추가의 서브유닛이 존재하는 경우, 첨가된 서브유닛은 예를 들어, 안티센스 화합물의 5' 말단에 첨가되거나(5' 첨가) 3' 말단에 첨가된(3' 첨가) 2개의 서브유닛을 가지는 안티센스 화합물에서 상호 인접할 수 있다. 다른 한편으로, 첨가된 서브유닛 은, 예를 들어, 5' 말단에 첨가된 하나의 서브유닛 및 3' 말단에 첨가된 하나의 서브유닛을 가지는 안티센스 화합물에서 안티센스 화합물을 통해 분산될 수 있다.
안티센스 올리고뉴클레오티드와 같은 안티센스 화합물의 길이를 증가 또는 감소시키고/시키거나, 활성 손실없이 미스매치 염기를 도입시키는 것이 가능하다. 예를 들면, 문헌[Woolf et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992)]에서는, 난모 세포 주사 모델에서 13-25 핵산염기 길이의 일련의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 표적 RNA의 절단 유도능에 대해 시험하였다. 안티센스 올리고뉴클레오티드의 말단 부근에 8 또는 11개의 미스매치 염기를 가지는 25 핵산염기 길이의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 비록 그 정도는 미스매치를 함유하지 않는 안티센스 올리고뉴클레오티드 보다 약하지만 표적 mRNA의 특이적 절단을 지시할 수 있다. 유사하게, 표적 특이적 절단은 1 또는 3개의 미스매치를 가지는 것을 비롯하여, 13 핵산염기 안티센스 올리고뉴클레오티드를 사용하여 이뤄졌다.
가우트쉬(Gautschi) 등은 문헌[J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, March 2001]에서 bcl-2 mRNA에 100% 상보적이고, bcl-xL mRNA에 대해 3개의 미스매치를 가지는 올리고뉴클레오티드가 시험관내 및 생체내에서 bcl-2 및 bcl-xL 모두의 발현을 감소시킬 수 있는 능력이 있음을 입증하였다. 또한, 이러한 올리고뉴클레오티드는 생체내에서 강력한 항종양 활성을 가지는 것으로 증명되었다.
마허(Maher) 및 돌닉(Dolnick)은 문헌[Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358, 1988]에서 일련의 텐뎀(tandem) 14 핵산염기 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 각각 2 또는 3개의 텐뎀 안티센스 올리고뉴클레오티드 서열로 구성된 28 및 42개의 핵산염기 안티센스 올리고뉴클레오티드를 사용하여 토끼 세망세포 어세이에서 인간 DHFR의 번역 저지능이 있는지에 대한 시험을 실시하였다. 3개의 14 핵산염기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 각각 단독으로 번역을 억제하였으나, 그 수준은 28 또는 42 핵산염기 안티센스 올리고뉴클레오티드에서 크게 벗어나지 않았다.
안티센스 화합물 모티프
특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 안티센스 화합물에 저해 활성 증가, 표적 핵산에 대한 결합 친화성 증가 또는 생체내 뉴클레아제에 의한 내분해성과 같은 특성을 부여하도록 패턴 또는 모티프로 배열된 화학적으로 변형된 서브유닛을 가진다.
키메라 안티센스 화합물은 전형적으로 뉴클레아제 내분해성 증가, 세포 흡수 증가, 표적 핵산에 대한 결합 친화성 증가 및/또는 저해 활성 증가를 부여하도록 변형된 적어도 하나의 영역을 함유한다. 키메라 안티센스 화합물의 제2 영역은 임의로 RNA:DNA 듀플렉스의 RNA 가닥을 절단하는 세포 엔도뉴클레아제 RNaseH에 대한 기질로서 제공될 수 있다.
갭머 모티프를 가지는 안티센스 화합물이 키메라 안티센스 화합물로 간주된다. 갭머에서, RNaseH 절단을 지원하는 다수의 뉴클레오티드를 가지는 내부 영역은 내부 영역의 뉴클레오시드와 화학적으로 상이한 다수의 뉴클레오티드를 가지는 외부 영역 사이에 위치한다. 갭머 모티프를 가지는 안티센스 올리고뉴클레오티드의 경우, 갭 세그먼트는 표적 핵산의 절단을 지원하는 반면, 윙 세그먼트는 안정성, 친화성 및 엑소뉴클레아제 내성을 향상시키기 위한 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구체예에 있어서, 갭머 영역은 각각 상이한 영역을 포함하는 타입의 당 부분으로 구분된다. 갭머 영역을 구분하기 위해 사용되는 타입의 당 부분은 일부 구체예에 있어서, β-D-리보뉴클레오시드, β-D-데옥시리보뉴클레오시드, 2'-변형된 뉴클레오시드(여기에서 2'-변형된 뉴클레오시드는 특히 2'-MOE 및 2'-0-CH3일 수 있다) 및 바이사이클릭 당 변형된 뉴클레오시드(이러한 바이사이클릭 당 변형된 뉴클레오시드는 4'-(CH2)n-O-2' 브릿지(여기에서, n은 1 또는 2임)를 가지는 것을 포함할 수 있다)를 포함할 수 있다. 바람직하게, 상이한 각 영역은 균일한 당 부분을 포함한다. 윙-갭-윙 모티프는 종종 "X-Y-Z"(여기에서, "X"는 5' 윙 영역의 길이를 나타내고, "Y"는 갭 영역의 길이를 나타내며, "Z"는 3' 윙 영역의 길이를 나타냄)로 나타내어진다. 본 원에서 사용되는 "X-Y-Z"로서 나타내어지는 갭머는 갭 세그먼트가 5' 윙 세그먼트 및 3' 윙 세그먼트 각각에 직접 인접하여 위치한 구조를 가진다. 따라서, 5' 윙 세그먼트와 갭 세그먼트 또는 갭 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에는 뉴클레오티드가 개입되어 있지 않다. 본 원에 기재된 임의의 안티센스 화합물은 갭머 모티프를 가질 수 있다. 일부 구체예에 있어서, X 및 Z는 동일하고, 다른 구체예에 있어서 이들은 상이하다. 바람직한 구체예에 있어서, Y는 8 내지 15 뉴클레오티드이다. X, Y 또는 Z는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30 또는 그 이상의 뉴클레오티드의 임의의 것일 수 있다. 요컨대, 본 발명의 갭머는 예를 들어, 5-10-5, 4-8-4, 4-12-3, 4-12-4, 3-14-3, 2-13-5, 2-16-2, 1-18-1, 3-10-3, 2-10-2, 1-10-1 또는 2-8-2를 포함하나 이들에 한정되지는 않는다.
특정 구체예에 있어서, 안티센스 화합물은 윙-갭 또는 갭-윙 구조, 즉, 갭머 구조에 대해 상술된 바와 같은 X-Y 또는 Y-Z 배열의 "윙머(wingmer)" 모티프를 가진다. 요컨대 본 발명의 윙머 구조는 예를 들어, 5-10, 8-4, 4-12, 12-4, 3-14, 16-2, 18-1, 10-3, 2-10, 1-10, 8-2, 2-13 또는 5-13을 포함하나 이들에 한정되지는 않는다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 5-10-5 갭머 모티프를 지닌다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 3-14-3 갭머 모티프를 지닌다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 2-13-5 갭머 모티프를 지닌다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 2-12-2 갭머 모티프를 지닌다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 갭-확대 모티프를 지닌다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 갭-확대 안티센스 올리고뉴클레오티드는 3개의 화학적으로 변형된 뉴클레오시드의 윙 세그먼트 사이에 직접 인접하여 위치한 14개의 2'-데옥시리보뉴클레오티드의 갭 세그먼트를 가진다. 특정 구체예에 있어서, 화학적 변형은 2'-당 변형을 포함한다. 또 다른 구체예에 있어서, 화학적 변형은 2'-MOE 당 변형을 포함한다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 갭-확대 안티센스 올리고뉴클레오티드는 2개의 화학적으로 변형된 뉴클레오시드의 5' 윙 세그먼트와 5개의 화학적으로 변형된 뉴클레오시드의 3' 윙 세그먼트 사이에 직접 인접하여 위치한 13개의 2'-데옥시리보뉴클레오티드의 갭 세그먼트를 가진다. 특정 구체예에 있어서, 화학적 변형은 2'-당 변형을 포함한다. 또 다른 구체예에 있어서, 화학적 변형은 2'-MOE 당 변형을 포함한다.
표적 핵산, 표적 영역 및 뉴클레오티드 서열
7 인자 유전자 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 GENBANK® 등록번호 NT_027140.6[1255000-1273000에서 절단, 2001년 7월 17일에 GENBANK®에 최초 기탁되고, 서열번호 1로서 본 원에 포함됨]; 유전자은행 등록번호 NM_O19616.2[2000년 10월 3일에 GENBANK®에 최초 기탁되고, 서열번호 2로서 본 원에 포함됨]; GENBANK® 등록번호 DB184141.1[2005년 12월 11일에 GENBANK®에 최초 기탁되고, 서열번호 3으로서 본 원에 포함됨]; 유전자은행 등록번호 NM_000131.3[1999년 3월 24일에 GENBANK®에 최초 기탁되고, 서열번호 167로서 본 원에 포함됨]; 유전자은행 등록번호 NT_039455.6[뉴클레오티드 10024000-10037000에서 절단, 2003년 2월 24일에 GENBANK®에 최초 기탁되고, 서열번호 160으로서 본 원에 포함됨]; 유전자은행 등록번호 NW_00104507.1[서열번호 162로서 본 원에 포함됨]; 및 유전자은행 등록번호 3360_061_B[서열번호 163으로서 본 원에 포함됨]을 포함하나, 이들에 제한되지는 않는다.
본 원에 포함된 실시예에서 각 서열번호에 기재된 서열은 당 부분, 뉴클레오시드간 연결 또는 핵산염기의 임의 변형에 독립적인 것으로 이해하여야 한다. 그에 따라, 하나의 서열번호에 의하여 정의된 안티센스 화합물은, 당 부분, 뉴클레오시드간 연결 또는 핵산염기에 대한 하나의 변형을 독립적으로 포함할 수 있다. Isis 번호(Isis NO.)로 기재된 안티센스 화합물은 핵산염기 서열과 모티프의 조합을 가리킨다.
특정 구체예에 있어서, 표적 영역은 표적 핵산의 구조적으로 정의된 영역이다. 예를 들면, 표적 영역은 3' UTR, 5' UTR, 엑손, 인트론, 엑손/인트론 연결부, 코딩 영역, 번역 시작 영역, 번역 종결 영역, 또는 다른 정의된 핵산 영역을 포함할 수 있다. 7 인자 유전자 서열의 구조적으로 정의된 영역은 NCBI와 같은 서열 데이터로부터 등록번호로 입수할 수 있으며, 이러한 정보는 본 원에 참고로 원용된다. 특정 구체예에 있어서, 표적 영역은 표적 영역내 한 표적 세그먼트의 5' 표적 부위 내지 표적 영역내 다른 표적 세그먼트의 3' 표적 부위의 서열을 포함할 수 있다.
표적화는 소정 효과를 일으키도록 안티센스 화합물이 혼성화하는 적어도 하나의 표적 세그먼트의 결정을 포함한다. 특정 구체예에 있어서, 소정 효과는 mRNA 표적 핵산의 수준 감소이다. 특정 구체예에 있어서, 소정 효과는 표적 핵산과 관련된 표현형 변화 또는 표적 핵산에 의해 코딩되는 단백질의 수준 감소이다.
표적 영역은 하나 이상의 표적 세그먼트를 함유할 수 있다. 표적 영역내 다수의 표적 세그먼트가 중첩될 수 있다. 다른 한편으로, 이들은 중첩되지 않을 수 있다. 특정 구체예에 있어서, 표적 영역내 표적 세그먼트는 약 300개 이하의 뉴클레오티드에 의해 분리된다. 특정 구체예에 있어서, 표적 영역내 표적 세그먼트는 표적 핵산상에 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 또는 10이거나, 대략 상기 수이거나, 상기 수 이하이거나, 대략 상기 수 이하인 뉴클레오티드이거나, 또는 상기 임의의 두 값으로 한정되는 범위의 다수의 뉴클레오티드에 의해 분리된다. 특정 구체예에 있어서, 표적 영역내 표적 세그먼트는 표적 핵산상에 5 이하의 뉴클레오티드 또는 약 5 이하의 뉴클레오티드에 의해 분리된다. 특정 구체예에 있어서, 표적 세그먼트는 인접해 있다. 출발 핵산이 본 원에 나열된 임의의 5' 표적 부위 또는 3' 표적 부위인 범위로 한정된 표적 영역이 고려된다.
적합한 표적 세그먼트는 5' UTR, 코딩 영역, 3' UTR, 인트론, 엑손 또는 엑손/인트론 연결부내에서 발견될 수 있다. 개시 코돈 또는 정지 코돈을 함유한 표적 세그먼트가 또한 적합한 표적 세그먼트이다. 적합한 표적 세그먼트는 개시 코돈 또는 정지 코돈과 같은 구조적으로 한정된 영역을 특이적으로 배제할 수 있다.
적합한 표적 세그먼트의 결정은 표적 핵산의 서열을 게놈을 통해 다른 서열과 비교하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상이한 핵산에서 유사성 영역을 확인하는데 BLAST 알고리듬이 이용될 수 있다. 이러한 비교는 비특이적 방식으로 선택된 표적 핵산 이외의 서열(즉, 비표적 또는 표적을 벗어난 서열)에 혼성화할 수 있는 안티센스 화합물의 서열이 선택되는 것을 방지할 수 있다.
활성 표적 영역내에서 안티센스 화합물의 활성(예를 들면 표적 핵산 수준의 감소 퍼센트로 정의됨)이 변경될 수 있다. 특정 구체예에 있어서, 7 인자 mRNA 수준 감소가 7 인자 발현 저해의 지표이다. 7 인자 단백질 수준 감소가 또한 표적 mRNA 발현 저해의 지표이다. 그밖에, 표현형 변화가 7 인자 발현 저해의 지표이다. 예를 들어, 장기 PT 시간이 7 인자 발현 저해의 지표가 될 수 있다. 또 다른 예로서, 장기 PT 시간과 함께, 장기 aPTT 시간이 7 인자 발현 저해의 지표가 될 수 있다. 또 다른 예로서, 혈소판 4 인자(PF-4) 발현 수준 감소가 7 인자 발현 저해의 지표가 될 수 있다. 또 다른 예로서, 혈전 형성 감소 또는 혈전 형성 시간 증가가 7 인자 발현 저해의 지표가 될 수 있다.
혼성화
일부 구체예에 있어서, 본 원에 기재된 안티센스 화합물과 7 인자 핵산 사이에서 혼성화가 일어난다. 가장 보편적인 혼성화 메카니즘은 핵산 분자의 상보적 핵산염기 간 수소 결합(예: 왓슨-크릭, 훅스틴 또는 역 훅스틴 수소 결합)을 포함한다.
혼성화는 다양한 환경 하에서 일어날 수 있다. 엄격한 상태는 서열-의존성이고, 핵산의 본래 성질 및 조성과 혼성화하는 핵산 분자에 의해서 결정된다.
서열이 표적 핵산에 특이적으로 혼성화할 수 있는지를 결정하는 방법은 당업계에 주지되어 있다. 특정 구체예에 있어서, 본 원에서 제공되는 안티센스 화합물은 7 인자 핵산과 특이적으로 혼성화가능하다.
상보성
안티센스 화합물 및 표적 핵산은 소정 효과(예: 7 인자 핵산과 같은 표적 핵산의 안티센스 저해)가 일어나도록, 안티센스 화합물의 충분한 수의 핵산염기가 표적 핵산의 상응하는 핵산염기와 수소 결합을 이룰 수 있는 경우에, 상호 상보적이다.
안티센스 화합물과 7 인자 핵산 사이의 비상보적 핵산염기도 허용될 수 있으나, 단, 안티센스 화합물이 표적 핵산에 특이적으로 혼성화가능하도록 존재하여야 한다. 또한, 안티센스 화합물은 개입 또는 인접 세그먼트가 혼성화 이벤트에 연루되지 않도록 7 인자 핵산의 하나 이상의 세그먼트와 혼성화할 수 있다(예: 루프 구조, 미스매치 또는 헤어핀 구조).
특정 구체예에 있어서, 본 원에서 제공되는 안티센스 화합물 또는 그의 특정 부분은 7 인자 핵산, 표적 영역, 표적 세그먼트 또는 그의 특정 부분에 적어도, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적이다. 안티센스 화합물과 표적 핵산의 상보성 퍼센트는 일상적인 방법을 이용하여 결정될 수 있다.
예를 들어, 안티센스 화합물의 20 핵산염기중 18개가 표적 영역에 상보적이고, 따라서 특이적으로 혼성화할 수 있는 안티센스 화합물은 90% 상보성을 나타낸다. 이 예에서, 나머지 비상보적 핵산염기는 상보적 핵산염기와 군집을 이루거나, 이에 산재할 수 있으며, 상호간에 또는 상보적 핵산염기에 인접할 필요는 없다. 그에 따라, 표적 핵산과 완전 상보적인 두 영역으로 플랭킹된 4(네)개의 비상보적 핵산염기를 가지는 18 핵산염기 길이의 안티센스 화합물은 표적 핵산과 총 77.8% 상보적일 수 있으며, 따라서 본 발명의 영역내에 포함된다. 표적 핵산의 영역을 가지는 안티센스 화합물의 상보성 퍼센트는 당업계에 알려진 BLAST 프로그램(기본적인 국소 정렬 도구) 및 PowerBLAST 프로그램(Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656)에 따라 기계적으로 결정될 수 있다. 상동성, 서열 동일성 또는 상보성 퍼센트는, 예를 들어, Smith 및 Waterman(Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482 489)의 알고리듬을 이용하는 디폴트 설정(default setting)을 활용함으로써, 갭 프로그램(Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison Wis)으로 결정될 수 있다.
특정 구체예에 있어서, 본 원에서 제공되는 안티센스 화합물 또는 그의 특정 부분은 표적 핵산 또는 그의 특정 부분에 완전 상보적(즉, 100% 상보적)이다. 예를 들어, 안티센스 화합물은 7 인자 핵산 또는 표적 영역 또는 그의 표적 세그먼트 또는 표적 서열에 완전 상보적일 수 있다. 본 원에 사용된 "완전 상보적"은 안티센스 화합물의 각 핵산염기가 표적 핵산의 상응하는 핵산염기와 정확한 염기쌍을 이룰 수 있음을 의미한다. 예를 들어, 20 핵산염기 안티센스 화합물의 경우, 안티센스 화합물에 완전 상보적인 표적 핵산의 상응하는 20 핵산염기 부분이 존재한다면, 400 핵산염기 길이의 표적 서열에 완전 상보적이다. 완전 상보적은 또한 제1 및/또는 제2 핵산의 특정 부분과 관련하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 30 핵산염기 안티센스 화합물의 20 핵산염기 부분은 400 핵산염기 길이의 표적 서열에 "완전 상보적"일 수 있다. 30 핵산염기 올리고뉴클레오티드의 20 핵산염기 부분은 표적 서열이 각각 안티센스 화합물의 20 핵산염기 부분의 각 핵산염기에 상보적인 상응하는 20 핵산염기 부분을 가지는 경우, 표적 서열에 완전 상보적이다. 동시에, 전체 30 핵산염기 안티센스 화합물은 안티센스 화합물의 나머지 10개의 핵산염기가 표적 서열에 또한 상보적인지 아닌지에 따라서, 표적 서열에 완전 상보적이거나, 그렇치 않을 수 있다.
비상보적 핵산염기의 위치는 안티센스 화합물의 5' 말단 또는 3' 말단일 수 있다. 다른 한편으로, 비상보적 핵산염기(들)는 안티센스 화합물의 내부 위치에 존재할 수 있다. 2 이상의 비상보적 핵산염기가 존재하는 경우, 이들은 인접(즉, 연결)해 있을 수 있거나, 인접하지 않을 수 있다. 일 구체예에 있어서, 비상보적 핵산염기는 갭머 안티센스 올리고뉴클레오티드의 윙 세그먼트에 위치한다.
특정 구체예에 있어서, 핵산염기 길이가 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 이하인 안티센스 화합물은 7 인자 핵산 또는 그의 특정 부분과 같은 표적 핵산에 대해 4 이하, 3 이하, 2 이하, 1 이하의 비상보적 핵산염기(들)를 포함한다.
특정 구체예에 있어서, 핵산염기 길이가 2, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 이하인 안티센스 화합물은 7 인자 핵산 또는 그의 특정 부분과 같은 표적 핵산에 대해 6 이하, 5 이하, 4 이하, 3 이하, 2 이하 또는 1 이하의 비상보적 핵산염기(들)를 포함한다.
본 원에서 제공되는 안티센스 화합물은 또한 표적 핵산의 일부에 상보적인 것을 포함한다. 본 원에 사용된 "부분"은 표적 핵산의 영역 또는 세그먼트내에 지정된 수의 인접(즉, 연결) 핵산염기를 가리킬 수 있다. "부분"은 또한 안티센스 화합물의 지정된 수의 인접 핵산염기를 가리킨다. 특정 구체예에 있어서, 안티센스 화합물은 표적 세그먼트의 적어도 8 핵산염기 부분에 상보적이다. 특정 구체예에 있어서, 안티센스 화합물은 표적 세그먼트의 적어도 12 핵산염기 부분에 상보적이다. 특정 구체예에 있어서, 안티센스 화합물은 표적 세그먼트의 적어도 15 핵산염기 부분에 상보적이다. 또한, 표적 세그먼트의 적어도 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 그 이상의 핵산염기 부분 또는 상기 임의의 두 값으로 한정되는 범위에 상보적인 안티센스 화합물이 고려 대상이다.
동일성
본 원에서 제공되는 안티센스 화합물은 또한 특정 뉴클레오티드 서열, 서열번호, 또는 특정 Isis 번호로 표시되는 화합물 또는 그의 부분에 대해 정의된 동일성 퍼센트를 가질 수 있다. 본 원에서 사용된 안티센스 화합물은 동일한 핵산염기와 쌍을 이루는 능력을 가진다면, 본 원에 기재된 서열과 동일하다. 예를 들면, 기재된 DNA 서열에서 티미딘 대신 우라실을 함유하는 RNA는 아데닌과의 우라실 및 티미딘 쌍을 모두 가지기 때문에 DNA 서열과 동일한 것으로 간주될 수 있다. 본 원에 기재된 안티센스 화합물의 단축 및 확장 변형체 및 본 원에서 제공되는 안티센스 화합물에 대해 동일하지 않은 염기를 가지는 화합물도 또한 구상된다. 동일하지 않은 염기는 상호 인접해 있을 수 있거나, 또는 안티센스 화합물을 통해 산재해 있을 수 있다. 안티센스 화합물의 동일성 퍼센트는 비교되는 서열에 대해 동일한 염기 쌍을 가지는 염기의 수에 따라 계산된다.
특정 구체예에 있어서, 안티센스 화합물 또는 그의 부분은 본 원에 기재된 하나 이상의 안티센스 화합물 또는 서열번호 또는 그의 부분에 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성이다.
변형
뉴클레오시드는 염기-당 조합이다. 뉴클레오시드의 핵산염기(또한 염기로도 공지) 부분은 보통 헤테로사이클릭 염기 부분이다. 뉴클레오티드는 뉴클레오시드의 당 부분에 공유적으로 연결된 포스페이트기를 추가로 포함하는 뉴클레오시드이다. 펜토푸라노실 당을 포함하는 뉴클레오시드의 경우, 포스페이트기는 당의 2', 3' 또는 5' 하이드록실 부분에 연결될 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 인접 뉴클레오시드의 상호 공유 결합에 의해 선형 중합 올리고뉴클레오티드를 형성함으로써 생성된다. 올리고뉴클레오티드 구조내에서, 포스페이트기는 일반적으로 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오시드간 연결을 형성하는 것으로 평해진다.
안티센스 화합물에 대한 변형은 뉴클레오시드간 연결, 당 부분 또는 핵산염기에 대한 치환 또는 변화를 포함한다. 변형된 안티센스 화합물은, 예를 들어, 세포 흡수성 향상, 핵산 표적에 대한 친화성 증가, 뉴클레아제 존재하에 안정성 증가 또는 저해 활성 증가 등과 같은 소기 특성 때문에, 자연 형태보다 바람직하다.
화학적으로 변형된 뉴클레오시드는 또한 그의 표적 핵산에 대한 단축 또는 절단 안티센스 올리고뉴클레오티드의 결합 친화성을 증가시키는데 이용될 수도 있다. 따라서, 이렇게 화학적으로 변형된 뉴클레오시드를 가지는 더 짧은 안티센스 화합물로 유사한 결과를 얻을 수 있다.
변형된 뉴클레오시드간 연결
RNA 및 DNA의 자연 발생 뉴클레오시드간 연결은 3'에서 5' 포스포디에스테르 연결이다. 예를 들어, 세포 흡수성 향상, 핵산 표적에 대한 친화성 증가, 뉴클레아제 존재하에 안정성 증가 등과 같은 소기 특성 때문에, 하나 이상의 변형, 즉 비자연 발생 뉴클레오시드간 연결을 가지는 안티센스 화합물이 자연 발생 뉴클레오시드간 연결을 가지는 안티센스 화합물에 비해 우위적으로 선택된다.
변형된 뉴클레오시드간 연결을 가지는 올리고뉴클레오티드는 인 원자를 가지는 뉴클레오시드간 연결뿐 아니라 인 원자를 갖지 않는 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 대표적인 인 함유 뉴클레오시드간 연결은 포스포디에스테르, 포스포트리에스테르, 메틸포스포네이트, 포스포르아미데이트 및 포스포로티오에이트를 포함하나 이들에 한정되지는 않는다. 인을 함유하는 연결 및 인을 함유하지 않는 연결의 제조방법은 익히 알려졌다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 하나 이상의 변형된 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 특정 구체예에 있어서, 변형된 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 특정 구체예에 있어서, 안티센스 화합물의 각 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결이다.
변형된 당 부분
본 발명의 안티센스 화합물은 임의로 당 그룹이 변형된 하나 이상의 뉴클레오시드를 함유할 수 있다. 이러한 당 변형된 뉴클레오시드는 안티센스 화합물에 뉴클레아제 안정성 향상, 결합 친화성 증가 또는 그밖의 다른 특정의 유익한 생물학적 성질을 부여할 수 있다. 특정 구체예에 있어서, 뉴클레오시드는 화학적으로 변형된 리보푸라노스 환 부분을 포함한다. 화학적으로 변형된 리보푸라노스 환의 예는 치환기(5' 및 2' 치환기 포함, 비제미널 환 원자의 브릿징으로 바이사이클릭 핵산(BNA) 형성)가 첨가된 것, S, N(R) 또는 C(R1)(R)2(R은 H, C1-C12 알킬 또는 보호기임)로 리보실 환 산소 원자가 대체된 것 및 이들의 조합을 포함하나 이들에 한정되지는 않는다. 화학적으로 변형된 당의 예는 2'-F-5'-메틸 치환된 뉴클레오시드(다른 5',2'-비스 치환된 뉴클레오티드에 대해서는 8/21/08일 공개된 PCT 국제 출원 제WO 2008/101157호를 참조바람) 또는 리보실 환 산소 원자가 'S' 및 추가로 2'-위치에서 치환(2005년 6월 16일 공개된 미국 특허 출원 제US2005-0130923호 참조)된 것 또는 대안적으로 BNA의 5'-치환된 것(11/22/07일 공개된 PCT 국제 출원 제WO 2007/134181호를 참조바람, 여기에서는 LNA가 예를 들어, 5'-메틸 또는 5'-비닐기로 치환됨)을 포함한다.
변형된 당 부분을 가지는 뉴클레오시드의 예로는 5'-비닐, 5'-메틸(R 또는 S), 4'-S, 2'-F, 2'-OCH3 및 2'-O(CH2)2OCH3 치환기를 가지는 뉴클레오시드를 포함하나 이들에 한정되지는 않는다. 2' 위치에서의 치환체는 또한 알릴, 아미노, 아지도, 티오, O-알릴, O-C1-C10 알킬, OCF3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn) 및 0-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn)[여기에서, 각 Rm 및 Rn은 독립적으로, H 또는 치환되거나 비치환된 C1-C10 알킬임]으로부터 선택될 수 있다.
바이사이클릭 핵산(BNA)의 예로는 4' 및 2' 리보실 환 원자 사이에 브릿지를 포함하는 뉴클레오시드를 들 수 있으나 이들에 한정되지는 않는다. 특정 구체예에 있어서, 본 원에서 제공되는 안티센스 화합물은 하나 이상의 BNA 뉴클레오시드를 포함하며, 여기에서, 브릿지는 식 4'-(CH2)-O-2'(LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)-O-2'(LNA); 4'-(CH2)2-O-2'(ENA); 4'-C(CH3)2-O-2'(PCT/US2008/068922호 참조); 4'-CH(CH3)-O-2' 및 4'-C-H(CH2OCH3)-O-2'(2008년 7월 15일 허여된 미국 특허 제7,399,845호 참조); 4'-CH2-N(OCH3)-2'(PCT/US2008/064591호 참조); 4'-CH2-O-N(CH3)-2'(2004년 9월 2일 공개된 미국 특허 출원 US2004-0171570호 참조); 4'-CH2-N(R)-O-2'(2008년 9월 23일 허여된 미국 특허 제7,427,672호 참조); 4'-CH2-C(CH3)-2' 및 4'-CH2-C-(=CH2)-2'(PCT/US2008/066154호 참조)[여기에서, R은 독립적으로 H, C1-C12 알킬 또는 보호기임]중 하나를 포함한다. 상기 각 BNA는, 예를 들어, α-L-리보푸라노스 및 β-D-리보푸라노스를 비롯하여, 다양한 입체화학적 당 구조를 포함한다(1999년 3월 25일에 WO 99/14226호로 공개된 PCT/DK98/00393호 참조).
특정 구체예에 있어서, 뉴클레오시드는 리보실 환을 당 대용체로 대체함으로써 변형된다. 이러한 변형에는 상기 식중 하나를 가지는 것과 같은 모르폴리노 환, 사이클로헥세닐 환, 사이클로헥실 환 또는 테트라하이드로피라닐 환 등의 대용 환 시스템(때때로 DNA 유사체로 언급됨)으로 리보실 환이 대체되는 것이 포함되나, 이들에 한정되지는 않는다.
안티센스 화합물로의 도입을 위해 뉴클레오시드를 변경시키고자 사용될 수 있는 많은 다른 바이사이클로 및 트리사이클로 당 대용 환 시스템이 또한 당업계에 공지되었다(참조예: Leumann, Christian J.에 의한 기사 참조). 이러한 환 시스템은 활성 증가를 위해 다양하게 추가로 치환될 수 있다.
변형된 당의 제조 방법은 당업자들에게 주지되었다.
변형된 당 부분을 가지는 뉴클레오티드에서, 핵산염기 부분(천연, 변형 또는 이들의 조합)은 적절한 핵산 표적과 혼성화되도록 유지된다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 변형된 당 부분을 가지는 하나 이상의 뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구체예에 있어서, 변형된 당 부분은 2'-MOE이다. 특정 구체예에 있어서, 2'-MOE 변형된 뉴클레오티드는 갭머 모티프에 배열된다.
변형된 핵산염기
핵산염기(또는 염기) 변형 또는 치환은 자연 발생 또는 합성 비변형 핵산염기와 구조적으로는 상이하나, 기능적으로는 상호교환이 가능하다. 천연 및 변형된 핵산염기 모두가 수소 결합에 참여할 수 있다. 이러한 핵산염기 변형은 안티센스 화합물에 뉴클레아제 안정성, 결합 친화성 또는 일부 다른 유익한 생물학적 성질을 부여할 수 있다. 변형된 핵산염기는 예를 들어, 5-메틸사이토신(5-me-C) 등과 같은 합성 및 천연 핵산염기를 포함한다. 5-메틸사이토신 치환을 포함한 특정 핵산염기 치환이 표적 핵산에 대해 안티센스 화합물의 결합 친화성을 증진시키는데 특히 유용하다. 예를 들어, 5-메틸사이토신 치환은 핵산 듀플렉스 안정성을 0.6-1.2℃로 향상시키는 것으로 입증되었다(Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. and Lebleu, B., eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278).
추가의 비변형된 핵산염기는 5-하이드록시메틸 사이토신, 크산틴, 하이포크산틴, 2-아미노아데닌, 아데닌 및 구아닌의 6-메틸 및 기타 알킬 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-프로필 및 기타 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오사이토신, 5-할로우라실 및 사이토신, 5-프로피닐(-C≡C-CH3) 우라실 및 사이토신 및 피리미딘 염기의 다른 알키닐 유도체, 6-아조우라실, 사이토신 및 티민, 5-우라실(슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록실 및 다른 8-치환된 아데닌 및 구아닌, 5-할로 특히, 5-브로모, 5-트리플루오로메틸 및 기타 5-치환된 우라실 및 사이토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 2-F-아데닌, 2-아미노아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌 및 7-데아자아데닌 및 3-데아자구아닌 및 3-데아자아데닌을 포함한다.
헤테로사이클릭 염기 부분은 또한 퓨린 또는 피리미딘 염기가 다른 헤테로사이클, 예를 들어 7-데아자아데닌, 7-데아자구아노신, 2-아미노피리딘 및 2-피리돈으로 대체된 것을 포함할 수 있다. 안티센스 화합물의 결합 친화성을 증가시키기 위해 특히 유용한 핵산염기는 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미딘 및 N-2, N-6 및 O-6 치환된 퓨린, 예를 들어 2 아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐사이토신 등을 포함한다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 하나 이상의 변형된 핵산염기를 포함한다. 특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 갭-확대 안티센스 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 변형된 핵산염기를 포함한다. 특정 구체예에 있어서, 변형된 핵산염기는 5-메틸사이토신이다. 특정 구체예에 있어서, 각 사이토신은 5-메틸사이토신이다.
조성물 및 약학 조성물의 제제화 방법
안티센스 올리고뉴클레오티드는 약학 조성물 제제 또는 제형을 제조하기 위해 약학적으로 허용되는 활성 또는 불활성 물질과 혼합될 수 있다. 약학 조성물의 제제화를 위한 조성물 및 방법은 투여 경로, 질환 정도 또는 투여 용량이 포함되나 이들에 한정되지 않는 다수의 기준에 따라 달라진다.
7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 안티센스 화합물을 적합한 약학적으로 허용되는 희석제 또는 담체와 배합함으로써 약학 조성물에 사용될 수 있다. 약학적으로 허용되는 희석제는 포스페이트-완충 염수(PBS)를 포함한다. PBS는 비경구적으로 전달되는 조성물에 사용하기에 적합한 희석제이다. 따라서, 본 원에 기재된 방법에 사용된 일 구체예는 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물 및 약학적으로 허용되는 희석제를 포함하는 약학 조성물이다. 특정 구체예에 있어서, 약학적으로 허용되는 희석제는 PBS이다. 특정 구체예에 있어서, 안티센스 화합물은 안티센스 올리고뉴클레오티드이다.
안티센스 화합물을 포함하는 약학 조성물은 인간을 포함한 동물에 투여시 (직접 또는 간접적으로) 생물학적으로 활성인 대사물 또는 그의 잔사를 제공할 수 있는 임의의 약학적으로 허용되는 염, 에스테르 또는 이러한 에스테르의 염 또는 임의의 다른 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 따라서, 예를 들어, 안티센스 화합물의 약학적으로 허용되는 염, 프로드럭, 이러한 프로드럭의 약학적으로 허용되는 염 및 다른 생물학적 등가물과 관련한 개시가 도출된다. 약학적으로 허용되는 적합한 염은 나트륨 및 칼륨 염을 포함하나 이들에 한정되지 않는다.
프로드럭은 체내에서 내인성 뉴클레아제에 의해 절단되어 활성 안티센스 화합물을 형성하는, 안티센스 화합물의 한쪽 말단 또는 양 말단에 도입된 추가의 뉴클레오시드를 포함할 수 있다.
접합 안티센스 화합물
안티센스 화합물은 생성되는 안티센스 올리고뉴클레오티드의 활성, 세포 분포 또는 세포 흡수를 향상시키는 하나 이상의 부분 또는 접합체에 공유적으로 결합될 수 있다. 전형적인 접합체 그룹은 콜레스테롤 부분 및 지질 부분을 포함한다. 추가의 접합체 그룹은 탄수화물, 인지질, 비오틴, 페나진, 폴레이트, 페난트리딘, 안트라퀴논, 아크리딘, 플루오레세인, 로다민, 쿠마린 및 염료를 포함한다.
안티센스 화합물은 또한 일반적으로 예를 들어, 뉴클레아제 안정성 등과 같은 성질을 향상시키기 위하여 안티센스 화합물의 한쪽 또는 양 말단에 부착된 하나 이상의 안정화기를 가지도록 변형될 수 있다. 안정화기에 캡 구조가 포함된다. 이들 말단 변형은 말단 핵산을 가지는 안티센스 화합물을 엑소뉴클레아제 분해로부터 보호하고, 세포내 전달 및/또는 국소화를 도울 수 있다. 캡은 5'-말단(5'-캡) 또는 3'-말단(3'-캡)에 존재할 수 있거나, 양 말단에 존재할 수 있다. 캡 구조는 당업자들에게 주지되었으며, 예를 들어, 역전 데옥시 탈염기 캡을 포함한다. 뉴클레아제 안정성을 부여하도록 안티센스 화합물의 한쪽 말단 또는 양 말단을 캡핑하기 위해 사용될 수 있는 추가의 3' 및 5'-안정화기는 2003년 1월 16일에 공개된 WO 03/004602호에 기재된 것을 포함한다.
세포 배양 및 안티센스 화합물 처리
7 인자 핵산의 수준, 활성 또는 발현에 미치는 안티센스 화합물의 효과를 다양한 세포 타입에서 시험관내로 시험할 수 있다. 이러한 분석에 사용되는 세포 타입은 상업적 공급자로부터 입수할 수 있으며(예: ATCC(American Type Culture Collection), Manassus, VA; Zen-Bio, Inc., Research Triangle Park, NC; Clonetics Corporation, Walkersville, MD), 세포는 상업적으로 이용가능한 시약(예: Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA)을 사용하여 공급자 지시에 따라 배양된다. 예시적인 세포 타입은 HepG2 세포, HepB3 세포 및 초대 간세포를 포함한다.
안티센스 올리고뉴클레오티드의 시험관내 시험
다른 안티센스 화합물로 처리하기 위해 적절히 변형될 수 있는, 안티센스 올리고뉴클레오티드로 세포를 처리하는 방법이 본 원에 기재된다.
일반적으로, 세포는 배양중에 약 60 내지 80%의 컨플루언시(confluency)가 되면 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리된다.
안티센스 올리고뉴클레오티드를 배양 세포에 도입하기 위해 일반적으로 사용되는 한가지 시약은 양이온성 지질 형질감염 시약인 LIPOFECTIN®(Invitrogen, Carlsbad, CA)이다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는, 전형적으로 100 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드당 2 내지 12 ug/mL 범위인 LIPOFECTIN® 농도 및 목적하는 최종 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이루기 위해 OPTI-MEM® 1(Invitrogen, Carlsbad, CA)에서 리포펙틴®과 혼합된다.
안티센스 올리고뉴클레오티드를 배양 세포에 도입하기 위해 사용되는 다른 시약은 LIPOFECTAMINE®(Invitrogen, Carlsbad, CA)이다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는 전형적으로 100 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드당 2 내지 12 ug/mL 범위인 LIPOFECTAMINE® 농도 및 목적하는 안티센스 올리고뉴클레오티드 농도를 이루기 위해, OPTI-MEM® 1 혈청 감소 배지(Invitrogen, Carlsbad, CA)에서 LIPOFECTAMINE®과 혼합된다.
안티센스 올리고뉴클레오티드를 배양 세포에 도입하기 위해 사용되는 다른 기술은 전기천공이다.
세포는 일상적인 방법에 의해 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리된다. 세포는 전형적으로 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리 16 내지 24 시간 후에 수거되며, 이때 표적 핵산의 RNA 또는 단백질 수준이 당업계에 공지된 방법 및 본 원에 기재된 방법으로 측정된다. 일반적으로, 처리가 다중 반복으로 수행되는 경우, 데이터는 반복 처리 평균으로 제시된다.
사용된 안티센스 올리고뉴클레오티드의 농도는 세포주마다 다르다. 특정 세포주를 위하여 최적의 안티센스 올리고뉴클레오티드 농도를 결정하는 방법은 당업계에 널리 알려져 있다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는 LIPOFECTIN®로 형질감염되는 경우, 전형적으로 1 nM 내지 300 nM 범위의 농도로 사용된다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는 전기천공을 이용하여 형질감염되는 경우, 625 내지 20,000 nM 범위의 더 높은 농도로 사용된다.
RNA 분리
RNA 분석이 총 세포 RNA 또는 폴리(A)+mRNA에 대해 수행될 수 있다. RNA 분리 방법은 당업계에 주지되었다. RNA는 당업계에 주지된 방법에 의해, 예를 들면, TRIZOL® 시약(Invitrogen, Carlsbad, CA)을 이용하여 제조업자의 추천 프로토콜에 따라 제조된다.
표적 수준 또는 발현 저해 분석
7 인자 핵산의 수준 또는 발현 저해는 당업계에 공지된 각종 방법으로 어세이될 수 있다. 예를 들어, 표적 핵산 수준은 노던 블롯 분석, 경쟁적 역 전사 중합효소 연쇄 반응(RT-PCR) 또는 정량적 실시간 RT-PCR에 의해 정량화될 수 있다. RNA 분석은 총 세포 RNA 또는 폴리(A)+mRNA에 대해 수행될 수 있다. RNA 분리 방법은 당업계에 주지되었다. 노던 블롯 분석 또한 당업계에 전형적인 분석이다. 실시간 RT-PCR은 PE-Applied Biosystems(Foster City, CA)로부터 구입할 수 있는 상업적으로 이용가능한 ABI PRISM® 7600, 7700 또는 7900 서열 검출 시스템을 사용하여 제조업자의 지시에 따라 편리하게 수행될 수 있다.
표적 RNA 수준의 정량적 실시간 RT-PCR 분석
표적 RNA 수준의 정량화는 ABI PRISM® 7600, 7700 또는 7900 서열 검출 시스템(PE-Applied Biosystems, Foster City, CA)을 사용하여 제조업자의 지시에 따라 정량적 실시간 RT- PCR에 의해 수행될 수 있다. 실시간 RT-PCR 방법은 당업계에 주지되었다.
실시간 PCR 전에, 분리된 RNA를 역전사(RT) 반응에 적용하고, 이후 실시간 PCR 증폭 기질로 사용되는 상보적 DNA(cDNA)를 생성하였다. RT 및 실시간 PCR 반응은 동일 샘플 웰에서 일련적으로 수행된다. RT 및 실시간 PCR 시약은 Invitrogen(Carlsbad, CA)으로부터 구입한 것이다. RT 및 실시간-PCR 반응은 당업자들에게 주지된 방법으로 수행된다.
사이클로필린 A와 같이, 발현이 일정한 유전자의 발현 수준을 이용하거나, RIBOGREEN®(Invitrogen, Inc. Carlsbad, CA)을 사용해 총 RNA를 정량화함으로써, 실시간 RT-PCR로 수득한 유전자(또는 RNA) 표적 정량물들을 정규화한다. 사이클로필린 A 발현은 실시간 RT-PCR에 의해, 표적과 동시에 복합적으로 실시하거나, 별도로 실시함으로써 정량화된다. 총 RNA는 RIBOGREEN® RNA 정량화 시약(Invetrogen, Inc. Eugene, OR)을 사용하여 정량화된다. RIBOGREEN®에 의한 RNA 정량화 방법은 존스 엘.제이.(Jones, L.J.) 등에 의해 문헌[Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374]에 교시되었다. CYTOFLUOR® 4000 장비(PE Applied Biosystems)가 RIBOGREEN® 형광 측정에 이용된다.
7 인자 핵산을 혼성화하도록 프로브 및 프라이머가 설계된다. 실시간 RT-PCR 프로브 및 프라이머 설계 방법은 당업계에 주지되었으며, PRIMER EXPRESS® 소프트웨어(Applied Biosystems, Foster City, CA)와 같은 소프트웨어의 이용을 포함할 수 있다.
단백질 수준 분석
7 인자 핵산의 안티센스 저해는 7 인자 단백질 수준을 측정함으로서 평가할 수 있다. 7 인자의 단백질 수준은 면역침전, 웨스턴 블롯 분석(면역블롯팅), 효소 면역 측정법(ELISA), 정량적 단백질 어세이, 단백질 활성 어세이(예를 들어, 캐스파제 활성 어세이), 면역조직화학, 면역세포화학 또는 형광-활성화 세포 분류(FACS)와 같이 당업계에 주지되어 있는 다양한 방식으로 평가 또는 정량화될 수 있다. 표적에 대한 항체는 MSRS 항체 카탈로그(Aerie Corporation, Birmingham, MI)와 같은 각종 출처로부터 확인 및 입수할 수 있거나, 당업계에 주지되어 있는 통상적인 모노클로날 또는 폴리클로날 항체 발생 방법을 통해 제조할 수 있다. 인간 및 마우스 7 인자 검출에 유용한 항체는 상업적으로 입수할 수 있다.
안티센스 화합물의 생체내 시험
안티센스 화합물, 예를 들어, 안티센스 올리고뉴클레오티드가 7 인자의 발현 저해능 및 표현형 변화 생성능, 예를 들어, 장기 PT, 장기 aPTT 시간, 혈소판 4 인자(PF-4)의 양 감소, 혈전 형성 감소 또는 혈전 형성 시간 증가 및 세포 증식 감소를 평가하고자 동물에서 시험된다. 시험은 정상적인 동물 또는 실험 질환 모델에서 수행될 수 있다. 동물 투여를 위해, 안티센스 올리고뉴클레오티드는 포스페이트-완충 염수와 같은 약학적으로 허용되는 희석제중에 제제화된다. 투여는 복막내, 정맥내 및 피하와 같은 비경구 투여 경로를 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오티드의 용량 및 투여 빈도는 당업자들의 능력내에 있으며, 투여 경로 및 동물 체중과 같은 인자에 따른다. 안티센스 올리고뉴클레오티드의 처리 기간 후, RNA를 간 조직으로부터 분리하여 7 인자 핵산 발현에 대한 변화를 측정한다. 7 인자 단백질 수준의 변화는 또한 트롬빈 발생 어세이를 이용하여 측정된다. 또한, 혈병 시간, 예를 들면 PT 및 aPTT에 대한 효과를 치료 동물의 혈장을 사용하여 결정한다.
특정 지침
특정 구체예에 있어서, 본 발명은 본 발명의 하나 이상의 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체의 치료 방법을 제공한다. 특정 구체예에 있어서, 개체는 혈전색전성 합병증을 지니고 있다. 특정 구체예에 있어서, 개체는 경색증, 혈전증, 색전증, 혈전색전증, 예컨대 심부정맥 혈전증, 폐색전증, 심근경색 및 뇌졸중을 포함하나 이들에 한정되지 않는 혈액 응고 장애의 위험이 있다. 이는 유전적 소인, 예를 들어, 항인지질 증후군 및 상염색체 우성 상태, V 인자 라이덴뿐 아니라, 예를 들어, 수술, 암, 부동, 패혈증, 죽상동맥경화증, 심방 세동과 같이 혈전증의 위험을 야기하는 후천적 문제, 질환 또는 장애가 있는 개체를 포함한다. 특정 구체예에 있어서, 개체는 항응고 요법이 필요한 것으로 확인되었다. 이러한 개체의 예에는 정형외과 대수술(예를 들면, 엉덩이/무릎 대치술 또는 엉덩이 골절술)을 받은 자 및 심방 세동을 앓고 있는 자와 같이 뇌졸중 예방을 위해 만성 치료를 필요로 하는 환자가 포함되나 이들에 한정되지는 않는다. 특정 구체예에 있어서, 본 발명은 개체에서 7 인자 발현을 예방적으로 감소시키기 위한 방법을 제공한다. 특정 구체예는 개체에 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물을 치료적 유효량으로 투여하는 것을 포함하여, 치료를 필요로 하는 개체를 치료하는 것을 포함한다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자에 표적화된 안티센스 화합물을 포함하는 약학 조성물은 혈전색전성 합병증을 앓고 있거나 이러한 혈전색전성 합병증이 발생하기 쉬운 환자를 치료하기 위한 약제를 제조하는데 사용된다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자가 조직 인자와 결합하여 조직 인자-7a 인자 복합체를 형성하게 되면, 염증성 병태, 예칸대 간 섬유증, 류마티스 관절염, 종양 증식 및 전이 상태에 이를 수 있다.
특정 구체예에 있어서, 개체는 섬유증 합병증에 이르는 염증성 병태를 지니고 있다. 특정 구체예에 있어서, 개체는 간 섬유증, 세동맥경화증, 만성 사구체신염, 피부 켈로이드 형성, 진행성 전신 경화증(PSS), 간 섬유증, 폐 섬유증, 낭성 섬유증, 만성 이식편대 숙주 질환, 공피증(국소 및 전신), 페로니병, 음경 섬유증, 방광경을 사용한 검사후 요도협착증, 수술후 내부 유착, 골수섬유증, 특발성 복막뒤 섬유증을 들 수 있으나 이들에 한정되지 않는 섬유증 장애 및 과다 콜라겐 침착의 위험에 있다. 특정 구체예에 있어서, 개체는 항섬유화 요법이 필요한 것으로 확인되었다. 이에는, 예를 들어, α1 -항트립신 결핍, 구리저장병(윌슨병), 과다혈증, 갈락토스혈증, 글리코겐 저장병(예컨대, 타입 II, IV, VI, IX 및 X), 철 과다부하 증후군(예컨대 혈색소침착증), 지질이상(예컨대 고쉐병), 퍼옥시좀 장애(예컨대 젤베거 증후군), 티로신혈증, 선천성 간 섬유증, 세균 감염(예컨대 브루셀라증), 기생충 감염(예컨대 포충증), 바이러스 감염(예컨대 만성 B, C형 간염), 간 혈류에 영향을 주는 장애(예컨대 바드-키아리 증후군, 심부전, 간정맥 폐색성 질환 및 간 정맥 혈전증), 알콜 및 약물(예컨대 아미오다론, 클로르프로마진, 이소니아지드, 메토트렉세이트, 메틸도파, 옥시페니사틴 및 톨부타미드)과 같이 섬유증 위험에 이르는 유전 또는 후천적 문제, 질환 또는 장애를 지니고 있는 개체가 포함된다. 특정 구체예에 있어서, 개체는 항섬유화 요법이 필요한 것으로 확인되었다. 이러한 구체예에 있어서, 조직 인자-7a 인자(TF/F7a) 복합체가 섬유증에서 주요 응고 촉진 활성을 가지는 것으로 확인되었다. 특정 구체예에 있어서, 본 발명은 개체에서 7 인자 발현을 예방적으로 감소시키는 방법을 제공한다. 특정 구체예는 치료를 필요로 하는 개체에 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물을 치료적 유효량으로 투여하는 것을 포함하여, 개체를 치료하는 것을 포함한다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자에 표적화된 안티센스 화합물을 포함하는 약학 조성물은 섬유성 합병증을 앓고 있거나 이러한 섬유성 합병증이 발생하기 쉬운 환자를 치료하기 위한 약제를 제조하는데 사용된다.
특정 구체예에 있어서, 개체는 염증성 류마티스 관절염 합병증을 지니고 있다. 특정 구체예에 있어서, 개체는 관절 염증 및 류마티스 관절염의 위험에 있다.이러한 구체예에 있어서, 개체는 관절에서 고통, 부기 및 압통, 피로, 식욕 부진, 미열, 근육통 및 경직으로 고통을 받는다. 특정 구체예에 있어서, 개체는 항염증성 관절염 요법이 필요한 것으로 확인되었다. 이에는 류마티스 관절염, 재활동 관절염, 라이터 증후군, 건선성 관절염, 강직 척추염 및 염증성 장 질환과 관련된 관절염으로 고통받는 개체가 포함된다. 특정 구체예에 있어서, 개체는 항염증성 요법이 필요한 것으로 확인되었다. 이러한 구체예에 있어서, 조직 인자-7a 인자(TF/F7a) 복합체는 관절염을 유도하는데 주요 응고 촉진 활성을 가지는 것으로 확인되었다. 특정 구체예에 있어서, 본 발명은 개체에서 7 인자 발현을 예방적으로 감소시키는 방법을 제공한다. 특정 구체예는 치료를 필요로 하는 개체에 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물을 치료적 유효량으로 투여하는 것을 포함하여, 개체를 치료하는 것을 포함한다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자에 표적화된 안티센스 화합물을 포함하는 약학 조성물은 염증성 관절염 합병증을 앓고 있거나 이러한 염증성 관절염 합병증이 발생하기 쉬운 환자를 치료하기 위한 약제를 제조하는데 사용된다.
특정 구체예에 있어서, 개체는 악성 합병증을 지니고 있다. 특정 구체예에 있어서, 개체는 종양 증식, 혈관신생 및 전이의 위험에 있다. 이러한 구체예에 있어서, 파종 혈관내 응고 및 정맥 혈전색전증과 같이 지혈 이상으로 고통받는 개체는 원발성 및 전이성 종양 증식과 같은 추가의 합병증으로 고통받을 수 있다. 이러한 구체예에 있어서, 종양 전이 파종은 응고-의존성 과정이다. 이러한 구체예에 있어서, 조직 인자-7a 인자(TF/F7a) 복합체는 암에서 주요 응고 촉진 활성을 가지는 것으로 확인되었다. 특정 구체예에 있어서, 개체는 항-TF/F7a 요법이 필요한 것으로 확인되었다. 특정 구체예에 있어서, 본 발명은 개체에서 7 인자 발현을 예방적으로 감소시키는 방법을 제공한다. 특정 구체예는 치료를 필요로 하는 개체에 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물을 치료적 유효량으로 투여하는 것을 포함하여, 개체를 치료하는 것을 포함한다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자에 표적화된 안티센스 화합물을 포함하는 약학 조성물은 악성 합병증을 앓고 있거나 이러한 악성 합병증이 발생하기 쉬운 환자를 치료하기 위한 약제를 제조하는데 사용된다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물의 치료적 유효량 투여는 안티센스 화합물 투여에 대한 개체의 반응을 결정하기 위하여, 개체 혈청에서 7 인자 수준의 모니터링을 수반한다. 치료적 개입의 양 및 기간 결정을 위해 안티센스 화합물 투여에 대한 개체 반응이 의사에 의해 활용된다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물의 투여로 7 인자 발현이 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 99% 또는 상기 임의의 두 값으로 한정되는 범위로 감소된다. 특정 구체예에 있어서, 7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 화합물의 투여로, 예를 들어, 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간(aPTT) 검사, 프로트롬빈 시간(PT) 검사, 트롬빈 시간(TCT), 출혈 시간 또는 D-다이머를 들 수 있으나, 이들에 한정되지 않는 표준 검사로 측정한 바, 혈액 응고 측정에 변화가 일어난다. 특정 구체예에 있어서, 7 인자 안티센스 화합물의 투여로, 측정값이 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 99% 또는 상기 임의의 두 값으로 한정되는 범위로 증가된다. 일부 구체예에 있어서, 7 인자 안티센스 화합물의 투여로, 측정값이 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 99% 또는 상기 임의의 두 값으로 한정되는 범위로 감소된다.
특정 구체예에 있어서, 7 인자에 표적화된 안티센스 화합물을 포함하는 약학 조성물은 혈전색전성 합병증을 앓고 있거나 이러한 혈전색전성 합병증이 발생하기 쉬운 환자를 치료하기 위한 약제를 제조하는데 사용된다.
특정 배합 요법
특정 구체예에 있어서, 본 발명의 하나 이상의 약학 조성물은 하나 이상의 다른 약제와 공동 투여된다. 특정 구체예에 있어서, 이러한 하나 이상의 다른 약제는 본 발명의 하나 이상의 약학 조성물과 동일한 질환, 장애 또는 병태를 치료하도록 설계된다. 특정 구체예에 있어서, 이러한 하나 이상의 다른 약제는 본 발명의 하나 이상의 약학 조성물과 상이한 질환, 장애 또는 병태를 치료하도록 설계된다. 특정 구체예에 있어서, 이러한 하나 이상의 다른 약제는 본 발명의 하나 이상의 약학 조성물의 바람직하지 않은 부작용을 치료하도록 설계된다. 특정 구체예에 있어서, 본 발명의 하나 이상의 약학 조성물은 다른 약제의 바람직하지 않은 효과를 치료하도록 또 다른 약제와 공동 투여된다. 특정 구체예에 있어서, 본 발명의 하나 이상의 약학 조성물은 조합 효과를 제공하도록 다른 약제와 공동 투여된다. 특정 구체예에 있어서, 본 발명의 하나 이상의 약학 조성물은 상승 효과를 제공하도록 다른 약제와 공동 투여된다.
특정 구체예에 있어서, 본 발명의 하나 이상의 약학 조성물 및 하나 이상의 다른 약제는 동시에 투여된다. 특정 구체예에 있어서, 본 발명의 하나 이상의 약학 조성물 및 하나 이상의 다른 약제는 상이한 시기에 투여된다. 특정 구체예에 있어서, 본 발명의 하나 이상의 약학 조성물 및 하나 이상의 다른 약제는 단일 제제로 함께 제조된다. 특정 구체예에 있어서, 본 발명의 하나 이상의 약학 조성물 및 하나 이상의 다른 약제는 별도로 제조된다.
특정 구체예에 있어서, 본 발명의 약학 조성물과 공동 투여될 수 있는 약제는 항응고제 또는 항혈소판제를 포함한다. 특정 구체예에 있어서, 본 발명의 약학 조성물과 공동 투여될 수 있는 약제로는 아스피린, 클로피도그렐, 디피리다몰, 티클로피딘, 와파린(및 관련 쿠마린), 헤파린, 직접 트롬빈 저해제(예컨대 레피루딘, 비발리루딘), 아픽사반, 로베녹스 및 특정 응고 인자의 효소 작용을 직접 방해하는 소형 분자 화합물(예를 들면, Xa 인자를 방해하는 리바록사반)을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 특정 구체예에 있어서, 항응고제 또는 항혈소판제는 본 발명의 약학 조성물을 투여하기 전에 투여된다. 특정 구체예에 있어서, 항응고제 또는 항혈소판제는 본 발명의 약학 조성물을 투여한 후에 투여된다. 특정 구체예에 있어서, 항응고제 또는 항혈소판제는 본 발명의 약학 조성물과 동시에 투여된다. 특정 구체예로, 공동 투여되는 항응고제 또는 항혈소판제의 용량은 항응고제 또는 항혈소판제가 단독 투여되는 경우 투여될 수 있는 용량과 동일하다. 특정 구체예로, 공동 투여되는 항응고제 또는 항혈소판제의 용량은 항응고제 또는 항혈소판제가 단독 투여되는 경우 투여될 수 있는 용량보다 더 작다. 특정 구체예로, 공동 투여되는 항응고제 또는 항혈소판제의 용량은 항응고제 또는 항혈소판제가 단독 투여되는 경우 투여될 수 있는 용량보다 더 많다.
특정 구체예에 있어서, 제2 화합물의 공동 투여는 제1 화합물의 항응고 효과를 증대시킴으로써, 화합물을 공동 투여하게 되면, 제1 화합물을 단독으로 투여한 경우 보다 항응고 효과가 더 커진다. 다른 구체예에 있어서, 공동 투여하면 항응고 효과가 화합물을 단독으로 투여한 경우 보다 상가적으로 된다. 특정 구체예에 있어서, 공동 투여하면 항응고 효과가 화합물을 단독으로 투여한 경우 보다 초상가적으로 된다. 특정 구체예에 있어서, 제1 화합물은 안티센스 화합물이다. 특정 구체예에 있어서, 제2 화합물이 안티센스 화합물이다.
특정 구체예에 있어서, 해독제는 7 인자 특이적 저해제를 투여한 후 언제든 투여된다. 특정 구체예에 있어서, 해독제는 7 인자를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 투여한 후 언제든 투여된다. 특정 구체예에 있어서, 해독제는 7 인자를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 투여하고 수 분, 수 시간, 수 일, 수 주 또는 수 개월후에 투여된다. 특정 구체예에 있어서, 해독제는 7 인자를 표적으로 하는 안티센스 화합물에 상보적(예: 센스 가닥)이다. 특정 구체예에 있어서, 해독제는 7 인자 또는 7a 인자 단백질이다. 특정 구체예에 있어서, 7 인자 또는 7a 인자 단백질은 인간 7 인자 또는 인간 7a 인자 단백질이다.
실시예
비제한적 기재 및 참고문헌 원용
본 원에 기재된 특정 화합물, 조성물 및 방법이 특정 구체예에 따라 특정적으로 기술되었으나, 하기 실시예를 제한의 의도없이 본 원에 기재된 화합물을 단지 설명할 목적으로 제공하고자 한다. 본 원에 인용된 각 참고문헌들은 그의 전체가 본 원에 참고로 원용되었다.
실시예 1: HepB3 세포에서 인간 7 인자 mRNA의 안티센스 저해
7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 시험관내에서 7 인자 mRNA에 미치는 효과에 대해 시험하였다. 웰당 4,000 세포 밀도로 배양된 HepB3 세포를 50 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드와 함께 리포펙틴 시약을 사용하여 형질감염시켰다. 약 24 시간의 처리 기간 후, RNA를 세포로부터 분리하고, 7 인자 mRNA의 수준을 본 원에 기재된 바와 같이 실시간 RT-PCR로 측정하였다. 7 인자 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과를 비처리 대조 세포에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다.
표 1에 있는 키메라 안티센스 올리고뉴클레오티드를 5-10-5 MOE 갭머로 설계하였다. 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 10개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 5' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드 및 3' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드는 2'-MOE 변형을 가진다. 각 갭머를 통한 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트(P=S) 연결이다. 각 갭머를 통한 모든 사이티딘 잔기는 5-메틸사이티딘이다. 표 1에 수록된 각 갭머는 인간 유전자 서열, 서열번호 1(유전자은행 등록번호 NT_027140.6의 뉴클레오티드 1255000-1273000), 서열번호 2(유전자은행 등록번호 NM_019616.2) 또는 서열번호 3(유전자은행 등록번호 DB184141.1)에 표적화되었다. "인간 표적 개시 부위"는 지정된 인간 유전자 서열에서 갭머가 표적으로 하는 5'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. "인간 표적 종결 부위"는 지정된 인간 유전자 서열에서 갭머가 표적으로 하는 3'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다.
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표 1에 있는 특정 갭머는 붉은털 원숭이 게놈 서열(유전자은행 등록번호 NW_00104507.1의 뉴클레오티드 691000-706000; 서열번호 162로서 본 원에 포함됨) 또는 붉은털 원숭이 mRNA 서열(유전자은행 등록번호 3360_061_B; 서열번호 163으로서 본 원에 포함됨)에 100% 상동성이다. 표 2에는 붉은털 원숭이와 상동성인 표 1의 키메라 안티센스 올리고뉴클레오티드가 예시되었다. 갭머는 인간 표적 개시 부위에 의해 배열된다.
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실시예 2: HepB3 세포에서 인간 7 인자의 용량-의존적 안티센스 저해
시험관내에서 인간 7 인자를 적어도 80% 저해하는 것으로 나타난 실시예 1의 수개의 안티센스 올리고뉴클레오티드(표 1 참조)를 HepB3 세포에서 다양한 용량으로 시험하였다. 세포를 웰당 4,000 세포의 밀도로 플레이팅하고, 표 3에 예시된 바와 같이, 3.125 nM, 6.25 nM, 12.5 nM, 25 nM, 50 nM 및 100 nM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드와 함께 리포펙틴 시약으로 처리하였다. 약 16 시간의 처리 기간 후, RNA를 세포로부터 분리하고, 7 인자 mRNA 수준을 본 원에 기재된 바와 같이 실시간 RT-PCR로 측정하였다. 인간 7 인자 프라이머 프로브 세트 RTS 2927(정방향 서열: GGGACCCTGATCAACACCAT, 서열번호 164로서 본 원에 포함됨; 역방향 서열: CCAGTTCTTGATTTTGTCGAAACA, 서열번호 165로서 본 원에 포함됨; 프로브 서열: TGGGTGGTCTCCGCGGCCX, 서열번호 166으로서 본 원에 포함됨)을 사용하여 mRNA 수준을 측정하였다. 7 인자 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과를 비처리 대조 세포에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다. 표 3에 예시된 바와 같이, 7 인자 mRNA 수준은 용량-의존적 방식으로 감소되었다.
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실시예 3: HepB3 세포에서 인간 7 인자의 안티센스 저해
7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 설계하고, 시험관내 7 인자 mRNA에 대한 그의 효과를 시험하였다. 표 3의 특정 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대해서도 시험관내 7 인자 mRNA에 대한 효과를 시험하였다. 웰당 4,000 세포 밀도로 배양된 HepB3 세포를 50 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드와 함께 리포펙틴 시약을 사용하여 형질감염시켰다. 약 24 시간의 처리 기간 후, RNA를 세포로부터 분리하고, 7 인자 mRNA의 수준을 본 원에 기재된 바와 같이 실시간 RT-PCR로 측정하였다. 인간 7 인자 프라이머 프로브 세트 RTS 2927을 사용하여 mRNA 수준을 측정하였다. 7 인자 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과를 비처리 대조군에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다.
표 4에 있는 키메라 안티센스 올리고뉴클레오티드를 5-10-5 MOE 갭머로 설계하였다. 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 10개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 5' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드 및 3' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드는 2'-MOE 변형을 가진다. 각 갭머를 통한 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트(P=S) 연결이다. 각 갭머를 통한 모든 사이티딘 잔기는 5-메틸사이티딘이다. 표 4에 수록된 처음 7개의 갭머는 표 3의 것이고, 별표(*)로 표시하였다. "인간 표적 개시 부위"는 지정된 인간 유전자 서열에서 갭머가 표적으로 하는 5'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. "인간 표적 종결 부위"는 지정된 인간 유전자 서열에서 갭머가 표적으로 하는 3'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. 표 4에 수록된 각 갭머는 서열번호 1(GENBANK® 등록번호 NT_027140.6의 뉴클레오티드 1255000-1273000), 서열번호 2(GENBANK® 등록번호 NM_019616.2) 또는 서열번호 167 (GENBANK® 등록번호 NM_000131.3)에 표적화되었다.
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Figure pct00013

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표 4에 있는 특정 갭머는 붉은털 원숭이 게놈 서열(유전자은행 등록번호 NW_00104507.1의 뉴클레오티드 691000-706000; 서열번호 162로서 본 원에 포함됨) 또는 붉은털 원숭이 mRNA 서열(유전자은행 등록번호 3360_061_B; 서열번호 163으로서 본 원에 포함됨)에 100% 상동성이다. 표 5에는 붉은털 원숭이와 상동성인 표 4의 키메라 안티센스 올리고뉴클레오티드가 예시되었다.
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실시예 4: HepB3 세포에서 인간 7 인자의 안티센스 저해
7 인자 핵산에 표적화된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 설계하고, 시험관내 7 인자 mRNA에 대한 그의 효과를 시험하였다. 웰당 4,000 세포 밀도로 배양된 HepB3 세포를 50 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드와 함께 리포펙틴 시약을 사용하여 형질감염시켰다. 약 24 시간의 처리 기간 후, RNA를 세포로부터 분리하고, 7 인자 mRNA의 수준을 본 원에 기재된 바와 같이 실시간 RT-PCR로 측정하였다. 인간 7 인자 프라이머 프로브 세트 RTS 2927을 사용하여 mRNA 수준을 측정하였다. 7 인자 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과를 비처리 대조군에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다.
표 6에 있는 키메라 안티센스 올리고뉴클레오티드를 5-10-5 MOE, 3-14-3 MOE 및 2-13-5 MOE 갭머로 설계하였다. 5-10-5 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 10개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 3-14-3 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 14개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 3개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 2-13-5 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 13개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되었다. 중앙 갭은 2개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 5' 말단 및 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 3' 말단상에 플랭킹되었다. 각 모티프(5-10-5, 3-14-3 및 2-13-5)에서, 5' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드 및 3' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드는 2'-MOE 변형을 가진다. 각 갭머를 통한 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트(P=S) 연결이다. 각 갭머를 통한 모든 사이티딘 잔기는 5-메틸사이티딘이다. "표적 개시 부위"는 갭머가 표적으로 하는 5'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. "표적 종결 부위"는 갭머가 표적으로 하는 3'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. 표 6에 수록된 각 갭머는 서열번호 1(유전자은행 등록번호 NT_027140.6의 뉴클레오티드 1255000-1273000)에 표적화되었다.
Figure pct00020
Figure pct00021

실시예 5: HepB3 세포에서 인간 응고 7 인자의 용량-의존적 안티센스 저해
시험관내에서 7 인자를 저해하는 것으로 나타난 갭머(상기 표 1 내지 6에서 선택)를 선택하고, HepB3 세포에서 다양한 용량으로 시험하였다. 세포를 웰당 4,000 세포의 밀도로 플레이팅하고, 표 7에 예시된 바와 같이, 6.25 nM, 12.5 nM, 25 nM, 50 nM 및 100 nM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드와 함께 리포펙틴 시약으로 형질감염시켰다. 약 16 시간의 처리 기간 후, RNA를 세포로부터 분리하고, 7 인자 mRNA 수준을 본 원에 기재된 바와 같이 실시간 RT-PCR로 측정하였다. 인간 7 인자 프라이머 프로브 세트 RTS 2927을 사용하여 mRNA 수준을 측정하였다. 7 인자 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과를 비처리 대조 세포에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다. 표 7에 예시된 바와 같이, 7 인자 mRNA 수준은 용량-의존적 방식으로 감소되었다.
Figure pct00022
실시예 6: HepB3 세포에서 마이크로워크로 설계된 올리고뉴클레오티드에 의한 인간 7 인자의 안티센스 저해
추가의 갭머를 표 7에 예시된 갭머에 기초해 설계하였다. 이들 갭머는 표 7의 원 갭머에서 다소 상류 및 하류로 이동되도록(즉, "마이크로워크(microwalk")) 갭머를 생성함으로써 설계되었다. 다양한 모티프, 예를 들면, 5-10-5 MOE, 3-14-3 MOE 및 2-13-5 MOE를 갖는 갭머가 또한 생성되었다. 이들 갭머를 시험관내에서 시험하였다. 웰당 4,000 세포 밀도로 배양된 HepB3 세포를 50 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드와 함께 리포펙틴 시약을 사용하여 형질감염시켰다. 약 24 시간의 처리 기간 후, RNA를 세포로부터 분리하고, 7 인자 mRNA의 수준을 실시간 RT-PCR로 측정하였다. 7 인자 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과를 비처리 대조 세포에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다.
이어서, 마이크로워크로 설계된 갭머에 대한 시험관내 저해 데이터를 표 8, 9, 10, 11, 12 및 13에 예시된 바와 같이, 표 7의 갭머에 대한 시험관내 저해 데이터와 비교하였다. 올리고뉴클레오티드는 이들이 맵핑되는 인간 유전자 서열상의 영역에 따라 디스플레이된다.
표 8에 있는 키메라 안티센스 올리고뉴클레오티드를 5-10-5 MOE, 3-14-3 MOE 및 2-13-5 MOE 갭머로 설계하였다. 표 8에서 처음에 기술된 갭머는 원 갭머(표 7 참조)[이로부터 나머지 갭머가 마이크로워크를 통해 설계됨]로서, 별표(*)로 표시되었다. 5-10-5 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 10개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 3-14-3 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 14개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 3개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 2-13-5 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 13개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되었다. 중앙 갭은 2개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 5' 말단 및 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 3' 말단상에 플랭킹된다. 각 모티프(5-10-5, 3-14-3 및 2-13-5)에서, 5' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드 및 3' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드는 2'-MOE 변형을 가진다. 각 갭머를 통한 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트(P=S) 연결이다. 각 갭머를 통한 모든 사이티딘 잔기는 5-메틸사이티딘이다. "표적 개시 부위"는 갭머가 표적으로 하는 5'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. "표적 종결 부위"는 갭머가 표적으로 하는 3'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. 표 8에 수록된 각 갭머는 서열번호 1(유전자은행 등록번호 NT_027140.6의 뉴클레오티드 1255000-1273000)에 표적화된다.
표 8에 예시된 바와 같이, 서열번호 1의 표적 개시 부위 4868에서 시작하고 표적 종결 부위 4899에서 종결되는 표적 영역(즉, 핵산염기 4868-4899)에 표적화된 모든 5-10-5 MOE 갭머, 3-14-3 MOE 갭머 및 2-13-5 MOE 갭머는 7 인자 mRNA를 적어도 48% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 4868-4899)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 416508, 422138, 422213, 422290, 422139, 422214, 422291, 422140, 422215, 422292, 422141, 422216, 422293, 422142, 422217, 422294, 422218, 422295, 422143, 422219, 422296, 422144, 422220, 422297, 422145, 422221, 422298, 422146, 422222, 422299, 422147, 422223, 422300, 422148, 422224, 422301, 416509, 422225 및 422302는 7 인자 mRNA 발현을 적어도 40% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 4868-4899)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 416508, 422138, 422213, 422290, 422139, 422214, 422291, 422140, 422215, 422292, 422141, 422216, 422293, 422142, 422217, 422294, 422218, 422295, 422143, 422219, 422296, 422144, 422220, 422297, 422145, 422221, 422298, 422146, 422222, 422299, 422147, 422300, 422148, 422224, 422301, 416509, 422225 및 422302는 7 인자 mRNA 발현을 적어도 50% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 4868-4899)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 416508, 422138, 422213, 422139, 422140, 422215, 422292, 422141, 422216, 422293, 422142, 422217, 422294, 422218, 422295, 422143, 422219, 422296, 422297, 422298, 422299, 422147, 422300, 422224, 422301, 416509 및 422302는 7 인자 mRNA 발현을 적어도 60% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 4868-4899)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 422138, 422140, 422215, 422292, 422142, 422217, 422294, 422218, 422295, 422143 및 422296은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 70% 저해하였다.
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Figure pct00024

표 9에 있는 키메라 안티센스 올리고뉴클레오티드를 5-10-5 MOE, 3-14-3 MOE 및 2-13-5 MOE 갭머로 설계하였다. 표 9에서 처음에 기술된 갭머는 원 갭머(표 7 참조)로서 이로부터 나머지 갭머가 마이크로워크를 통해 설계되며, 별표(*)로 표시되었다. 5-10-5 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 10개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 3-14-3 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 14개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 3개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 2-13-5 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 13개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되었다. 중앙 갭은 2개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 5' 말단 및 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 3' 말단상에 플랭킹된다. 각 모티프(5-10-5, 3-14-3 및 2-13-5)에서, 5' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드 및 3' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드는 2'-MOE 변형을 가진다. 각 갭머를 통한 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트(P=S) 연결이다. 각 갭머를 통한 모든 사이티딘 잔기는 5-메틸사이티딘이다. "표적 개시 부위"는 갭머가 표적으로 하는 5'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. "표적 종결 부위"는 갭머가 표적으로 하는 3'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. 표 7에 수록된 각 갭머는 서열번호 1(유전자은행 등록번호 NT_027140.6의 뉴클레오티드 1255000-1273000)에 표적화된다.
표 9에 예시된 바와 같이, 서열번호 1의 표적 개시 부위 11830에서 시작하고 표적 종결 부위 11869에서 종결되는 표적 영역(즉, 핵산염기 11830-11869)에 표적화된 대부분의 5-10-5 MOE 갭머, 3-14-3 MOE 갭머 및 2-13-5 MOE 갭머는 7 인자 mRNA를 적어도 40% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 11830-11869)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 416549, 422154, 422231, 422089, 422155, 422232, 422090, 422156, 422233, 422091, 422157, 422234, 422092, 422158, 422235, 422093, 422159, 422236, 422094, 422160, 422237, 422095, 422161, 422238, 422162, 422239, 422096, 422163, 422240, 422097, 422164, 422241, 422098, 422165, 422242, 422099, 422166, 422243, 422100, 422167, 422244, 422101, 422168, 422245, 422102, 422169, 422246, 422103, 422170, 422247, 422104, 422171, 422248, 422105, 422172, 422249, 422106, 422173, 422250, 422107, 422174 및 422251은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 20% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 11830-11869)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 416549, 422154, 422155, 422232, 422090, 422156, 422233, 422091, 422157, 422234, 422092, 422158, 422235, 422093, 422159, 422236, 422094, 422160, 422237, 422095, 422161, 422238, 422162, 422239, 422096, 422163, 422240, 422097, 422164, 422241, 422098, 422165, 422242, 422099, 422166, 422243, 422100, 422167, 422244, 422101, 422168, 422102, 422169, 422246, 422103, 422247, 422104, 422171, 422248, 422105, 422172, 422249, 422106, 422173, 422250, 422107, 422174 및 422251은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 30% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 11830-11869)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 416549, 422232, 422090, 422233, 422091, 422157, 422234, 422158, 422235, 422093, 422159, 422236, 422094, 422160, 422237, 422095, 422161, 422238, 422162, 422239, 422096, 422163, 422240, 422097, 422164, 422241, 422098, 422165, 422242, 422099, 422166, 422243, 422100, 422167, 422244, 422101, 422102, 422169, 422246, 422104, 422171, 422248, 422105, 422249, 422173, 422250 및 422174는 7 인자 mRNA 발현을 적어도 40% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 11830-11869)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 416549, 422234, 422235, 422237, 422095, 422161, 422238, 422162, 422239, 422096, 422163, 422240, 422097, 422164, 422241, 422098, 422165, 422242, 422166, 422243, 422100, 422167, 422244, 422102, 422169, 422104, 422171, 422248, 422105, 422249, 422173, 422250 및 422174는 7 인자 mRNA 발현을 적어도 50% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 11830-11869)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 416549, 422234, 422095, 422238, 422239, 422096, 422240, 422164, 422241, 422242, 422166, 422243, 422102, 422171, 422248 및 422105는 7 인자 mRNA 발현을 적어도 60% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 11830-11869)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS number 422096은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 70% 저해하였다.
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
표 10에 있는 키메라 안티센스 올리고뉴클레오티드를 5-10-5 MOE, 3-14-3 MOE 및 2-13-5 MOE 갭머로 설계하였다. 표 10에서 처음에 기술된 갭머는 원 갭머(표 7 참조)로서 이로부터 나머지 갭머가 마이크로워크를 통해 설계되며, 별표(*)로 표시되었다. 5-10-5 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 10개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 3-14-3 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 14개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 3개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 2-13-5 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 13개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되었다. 중앙 갭은 2개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 5' 말단 및 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 3' 말단상에 플랭킹된다. 각 모티프(5-10-5, 3-14-3 및 2-13-5)에서, 5' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드 및 3' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드는 2'-MOE 변형을 가진다. 각 갭머를 통한 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트(P=S) 연결이다. 각 갭머를 통한 모든 사이티딘 잔기는 5-메틸사이티딘이다. "표적 개시 부위"는 갭머가 표적으로 하는 5'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. "표적 종결 부위"는 갭머가 표적으로 하는 3'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. 표 10에 수록된 각 갭머는 서열번호 1(유전자은행 등록번호 NT_027140.6의 뉴클레오티드 1255000-1273000)에 표적화된다.
표 10에 예시된 바와 같이, 서열번호 1의 표적 개시 부위 13760에서 시작하고 표적 종결 부위 13789에서 종결되는 표적 영역(즉, 핵산염기 13760-13789)에 표적화된 대부분의 5-10-5 MOE 갭머, 3-14-3 MOE 갭머 및 2-13-5 MOE 갭머는 7 인자 mRNA를 적어도 30% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 13760-13789)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호416455, 422175, 422252, 422108, 422176, 422253, 422109, 422177, 422254, 422110, 422178, 422255, 422111, 422179, 422256, 4221 12, 422180, 422257, 422113, 422181, 422258, 422114, 422259, 422115, 422183, 422260, 422116, 422184, 422261, 416456 및 422185는 7 인자 mRNA 발현을 적어도 20% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 13760-13789)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 416455, 422175, 422252, 422108, 422176, 422253, 422109, 422177, 422254, 422110, 422178, 422255, 422111, 422179, 422112, 422180, 422257, 422113, 422181, 422258, 422114, 422259, 422115, 422183, 422260, 422116, 422184, 422261, 416456 및 422185는 7 인자 mRNA 발현을 적어도 30% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 13760-13789)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 416455, 422175, 422252, 422108, 422176, 422253, 422109, 422177, 422254, 422110, 422179, 422112, 422180, 422257, 4221 13, 422181, 422258, 4221 14, 422259, 422115, 422183, 422260, 422116, 422184, 422261, 416456 및 422185는 7 인자 mRNA 발현을 적어도 40% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 13760-13789)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 416455, 422175, 422252, 422108, 422176, 422253, 422109, 422177, 422110, 422112, 422180, 422257, 422113, 422181, 422258, 422114, 422259, 422115, 422183, 422260, 422116, 422184, 422261 및 416456은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 50% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 13760-13789)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 422175, 422252, 422108, 422253, 422109, 422177, 422112, 422257, 422113, 422181, 422258, 422259, 422115, 422183 및 422261은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 60% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 13760-13789)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 422252, 422177, 422183 및 422261은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 70% 저해하였다.
Figure pct00028
표 11에 있는 키메라 안티센스 올리고뉴클레오티드를 5-10-5 MOE, 3-14-3 MOE 및 2-13-5 MOE 갭머로 설계하였다. 표 11에서 처음에 기술된 갭머는 원 갭머(표 7 참조)로서 이로부터 나머지 갭머가 마이크로워크를 통해 설계되며, 별표(*)로 표시되었다. 5-10-5 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 10개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 3-14-3 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 14개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 3개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 2-13-5 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 13개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되었다. 중앙 갭은 2개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 5' 말단 및 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 3' 말단상에 플랭킹된다. 각 모티프(5-10-5, 3-14-3 및 2-13-5)에서, 5' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드 및 3' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드는 2'-MOE 변형을 가진다. 각 갭머를 통한 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트(P=S) 연결이다. 각 갭머를 통한 모든 사이티딘 잔기는 5-메틸사이티딘이다. "표적 개시 부위"는 갭머가 표적으로 하는 5'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. "표적 종결 부위"는 갭머가 표적으로 하는 3'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. 표 11에 수록된 각 갭머는 서열번호 1(유전자은행 등록번호 NT_027140.6의 뉴클레오티드 1255000-1273000)에 표적화되었다.
표 11에 예시된 바와 같이, 서열번호 1의 표적 개시 부위 14707에서 시작하고 표적 종결 부위 14732에서 종결되는 표적 영역(즉, 핵산염기 14707-14732)에 표적화된 모든 5-10-5 MOE 갭머, 3-14-3 MOE 갭머 및 2-13-5 MOE 갭머는 7 인자 mRNA를 적어도 48% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 14707-14732)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 416477, 407641, 422200, 422277, 422130, 422201, 422278, 422131, 422202, 422279, 422203, 422280, 422132, 422204, 422281, 422133, 422205, 422282, 407642, 422206 및 422283은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 40% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 14707-14732)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 416477, 407641, 422200, 422277, 422130, 422201, 422278, 422131, 422279, 422203, 422280, 422132, 422204, 422281, 422133, 422205, 407642, 422206 및 422283은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 50% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 14707-14732)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 416477, 407641, 422130, 422201, 422278, 422131, 422204, 422133, 422205, 407642 및 422206은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 60% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 14707-14732)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 416477, 422130, 422201 및 422204는 7 인자 mRNA 발현을 적어도 70% 저해하였다.
Figure pct00029
표 12에 있는 키메라 안티센스 올리고뉴클레오티드를 5-10-5 MOE, 3-14-3 MOE 및 2-13-5 MOE 갭머로 설계하였다. 표 12에서 처음에 기술된 갭머는 원 갭머(표 7 참조)로서 이로부터 나머지 갭머가 마이크로워크를 통해 설계되며, 별표(*)로 표시되었다. 5-10-5 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 10개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 3-14-3 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 14개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 3개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 2-13-5 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 13개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되었다. 중앙 갭은 2개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 5' 말단 및 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 3' 말단상에 플랭킹된다. 각 모티프(5-10-5, 3-14-3 및 2-13-5)에서, 5' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드 및 3' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드는 2'-MOE 변형을 가진다. 각 갭머를 통한 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트(P=S) 연결이다. 각 갭머를 통한 모든 사이티딘 잔기는 5-메틸사이티딘이다. "표적 개시 부위"는 갭머가 표적으로 하는 5'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. "표적 종결 부위"는 갭머가 표적으로 하는 3'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. 표 10에 수록된 각 갭머는 서열번호 1(유전자은행 등록번호 NT_027140.6의 뉴클레오티드 1255000-1273000)에 표적화된다.
표 12에 예시된 바와 같이, 서열번호 1의 표적 개시 부위 15098에서 시작하고 표적 종결 부위 15122에서 종결되는 표적 영역(즉, 핵산염기 15098-15122)에 표적화된 모든 5-10-5 MOE 갭머, 3-14-3 MOE 갭머 및 2-13-5 MOE 갭머는 7 인자 mRNA를 적어도 25% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 15098-15122)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 407643, 422207, 422284, 422134, 422208, 422285, 422135, 422209, 422286, 422136, 422210, 422287, 422137, 422211, 422288, 416479, 422212 및 422289는 7 인자 mRNA 발현을 적어도 20% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 15098-15122)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 407643, 422207, 422284, 422134, 422208, 422285, 422135, 422209, 422286, 422136, 422287, 422137, 422211, 422288, 416479, 422212 및 422289는 7 인자 mRNA 발현을 적어도 30% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 15098-15122)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 407643, 422207, 422284, 422134, 422208, 422135, 422209, 422286, 422136, 422287, 422137, 422211, 422288 및 416479는 7 인자 mRNA 발현을 적어도 40% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 15098-15122)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 407643, 422134, 422208, 422135, 422286 및 422136은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 50% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 15098-15122)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 407643 및 422134는 7 인자 mRNA 발현을 적어도 60% 저해하였다.
Figure pct00030
표 13에 있는 키메라 안티센스 올리고뉴클레오티드를 5-10-5 MOE, 3-14-3 MOE 및 2-13-5 MOE 갭머로 설계하였다. 표 13에서 처음에 기술된 갭머는 원 갭머(표 7 참조)로서 이로부터 나머지 갭머가 마이크로워크를 통해 설계되며, 별표(*)로 표시되었다. 5-10-5 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 10개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 3-14-3 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 14개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 3개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 2-13-5 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 13개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되었다. 중앙 갭은 2개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 5' 말단 및 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 3' 말단상에 플랭킹된다. 각 모티프(5-10-5, 3-14-3 및 2-13-5)에서, 5' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드 및 3' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드는 2'-MOE 변형을 가진다. 각 갭머를 통한 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트(P=S) 연결이다. 각 갭머를 통한 모든 사이티딘 잔기는 5-메틸사이티딘이다. "표적 개시 부위"는 갭머가 표적으로 하는 5'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. "표적 종결 부위"는 갭머가 표적으로 하는 3'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. 표 11에 수록된 각 갭머는 서열번호 1(유전자은행 등록번호 NT_027140.6의 뉴클레오티드 1255000-1273000)에 표적화된다.
표 13에 예시된 바와 같이, 서열번호 1의 표적 개시 부위 15188에서 시작하고 표적 종결 부위 15211에서 종결되는 표적 영역(즉, 핵산염기 15188-15211)에 표적화된 모든 5-10-5 MOE 갭머, 3-14-3 MOE 갭머 및 2-13-5 MOE 갭머는 7 인자 mRNA를 적어도 41% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 15188-15211)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 407935, 416482, 422149, 422226, 422085, 422150, 422227, 422086, 422151, 422228, 422152, 422229, 422087, 422153 및 422230은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 40% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 15188-15211)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 407935, 416482, 422149, 422085, 422150, 422227, 422086, 422151, 422228, 422152, 422229, 422087, 422153 및 422230은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 50% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 15188-15211)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 407935, 416482, 422149, 422085, 422150, 422227, 422086, 422151, 422228, 422152, 422229, 422087, 422153 및 422230은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 60% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 15188-15211)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 407935, 422085, 422150, 422086, 422228, 422152, 422229 및 422087은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 70% 저해하였다.
표적 영역(즉, 핵산염기 15188-15211)내 특정 갭머, 예를 들어, ISIS 번호 422086 및 422087은 7 인자 mRNA 발현을 적어도 80% 저해하였다.
Figure pct00031
실시예 7: HepB3 세포에서 인간 7 인자의 용량 반응 안티센스 저해
인간 7 인자를 시험관내에서 저해하는 것으로 나타난 실시예 5 및 6의 갭머(표 7, 8, 9, 10, 11, 12 및 13 참조)를 HepB3 세포에서 다양한 용량으로 시험하였다. 세포를 웰당 4,000 세포의 밀도로 플레이팅하고, 표 14에 예시된 바와 같이, 3.125 nM, 6.25 nM, 12.5 nM, 25 nM, 50 nM 및 100 nM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드와 함께 리포펙틴 시약으로 형질감염시켰다. 약 16 시간의 처리 기간 후, RNA를 세포로부터 분리하고, 7 인자 mRNA 수준을 정량적 실시간 RT-PCR로 측정하였다. 인간 7 인자 프라이머 프로브 세트 RTS 2927을 사용하여 mRNA 수준을 측정하였다. 7 인자 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과를 비처리 대조 세포에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다. 표 14에 예시된 바와 같이, 7 인자 mRNA 수준은 용량-의존적 방식으로 감소되었다.
Figure pct00032
갭머를 또한 전기천공으로 형질감염시키고, 인간 7 인자 mRNA의 용량-의존성 저해에 대해 측정하였다. 세포를 웰당 20,000 세포의 밀도로 플레이팅하고, 표 15에 예시된 바와 같이, 3.125 μM, 6.25 μM, 12.5 μM, 25 μM, 50 μM 및 100 μM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 사용하여 전기천공으로 형질감염시켰다. 약 16 시간의 처리 기간 후, RNA를 세포로부터 분리하고, 7 인자 mRNA 수준을 정량적 실시간 RT-PCR로 측정하였다. 인간 7 인자 프라이머 프로브 세트 RTS 2927을 사용하여 mRNA 수준을 측정하였다. 7 인자 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과를 비처리 대조 세포에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다. 표 15에 예시된 바와 같이, 7 인자 mRNA 수준은 용량-의존적 방식으로 감소되었다.
Figure pct00033
실시예 8: HepB3 세포에서 인간 7 인자의 유효한 용량-의존적 안티센스 저해의 선별 및 확인
실시예 7에서 인간 7 인자를 시험관내에서 저해하는 것으로 나타난 갭머를 선택하고 HepB3 세포에서 다양한 용량으로 시험하였다. 세포를 웰당 20,000 세포의 밀도로 플레이팅하고, 표 16에 예시된 바와 같이, 3.125 μM, 6.25 μM, 12.5 μM, 25 μM, 50 μM 및 100 μM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 사용하여 전기천공으로 형질감염시켰다. 약 16 시간의 처리 기간 후, RNA를 세포로부터 분리하고, 7 인자 mRNA 수준을 정량적 실시간 RT-PCR로 측정하였다. 인간 7 인자 프라이머 프로브 세트 RTS 2927을 사용하여 mRNA 수준을 측정하였다. 7 인자 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과를 비처리 대조 세포에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다. 표 16에 예시된 바와 같이, 7 인자 mRNA 수준은 용량-의존적 방식으로 감소되었다.
Figure pct00034
실시예 9: 짧은(14-머) 올리고뉴클레오티드에 의한 인간 7 인자의 안티센스 저해
짧은 안티센스 올리고뉴클레오티드(숏머(shortmer))를 인간 7 인자 mRNA를 표적하도록 설계하였다. 표 17에 있는 숏머를 2-10-2 MOM 갭머로 설계하였다. 갭머는 14 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 10개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 2개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 5' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드 및 3' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드는 2'-MOE 변형을 가진다. 각 갭머를 통한 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트(P=S) 연결이다. 각 갭머를 통한 모든 사이티딘 잔기는 5-메틸사이티딘이다.
숏머를 HepB3 세포에서 인간 7 인자 mRNA를 감소시키는 능력에 대해 평가하고, 표 16에 있는 하나의 5-10-5 키메라 올리고뉴클레오티드, ISIS 407939와 비교하였다. 96-웰 플레이트에 웰당 20,000 세포 밀도의 HepB3 세포를 1,000 nM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드로 전기천공을 이용하여 형질감염시켰다. 약 24 시간 후, RNA를 세포로부터 분리하고, 7 인자 mRNA 수준을 본 원에 기재된 바와 같이 실시간 RT-PCR로 측정하였다. 7 인자 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과를 표 17에 비처리 대조 세포에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다. ISIS 407939는 표 18의 첫번째 올리고뉴클레오티드로서, 숏머와 비교되었고, 별표(*)로 표시되었다.
표 17에 수록된 각 갭머는 인간 유전자 서열, 서열번호 1(유전자은행 등록번호 NT_027140.6 뉴클레오티드 1255000-1273000) 또는 서열번호 2(유전자은행 등록번호 NM_019616.2)에 표적화되었다. "표적 개시 부위"는 인간 유전자 서열에서 갭머가 표적으로 하는 5'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다. "표적 종결 부위"는 인간 유전자 서열에서 갭머가 표적으로 하는 3'-대부분의 뉴클레오티드를 가리킨다.
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037

Figure pct00038

Figure pct00039

Figure pct00040

Figure pct00041

실시예 10: 시험관내 뮤린 7 인자의 안티센스 저해
키메라 안티센스 올리고뉴클레오티드를 5-10-5 MOE 윙으로 설계하고, 데옥시 갭을 표적 뮤린 7 인자(유전자은행 등록번호 NT_039455.6의 뉴클레오티드 10024000-10037000; 서열번호 160으로서 본 원에 포함됨)에 표적화되도록 설계하였다. 갭머는 20 뉴클레오티드 길이로서, 중앙 갭 세그먼트는 10개의 2'-데옥시뉴클레오티드로 구성되고, 각각 5개의 뉴클레오티드를 포함하는 윙에 의해 양 측상에 플랭킹(5' 및 3' 방향으로)되었다. 5' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드 및 3' 윙 세그먼트의 각 뉴클레오티드는 2'-MOE 변형을 가진다. 각 갭머를 통한 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트(P=S) 연결이다. 각 갭머를 통한 모든 사이티딘 잔기는 5-메틸사이티딘이다. 안티센스 올리고뉴클레오티드를 일차 마우스 간세포에서 뮤린 7 인자 mRNA 감소능에 대해 평가하였다. 안티센스 올리고뉴클레오티드를 일차 마우스 간세포에서 7 인자 mRNA 감소능에 대해 평가하였다.
일차 마우스 간세포를 6.25 nM, 12.5 nM, 25 nM, 50 nM, 100 nM 및 200 nM의 안티센스 올리고뉴클레오티드로 약 24 시간 처리하였다. RNA를 세포로부터 분리하고, 7 인자 mRNA의 수준을 본 원에 기재된 바와 같이 정량적 실시간 RT-PCR로 측정하였다. 뮤린 7 인자 프라이머 프로브 세트 RTS 2855(정방향 서열 AATGAGGAACAGTGCTCCTTTGA, 서열번호 612; 역방향 서열 TGTAAACAATCCAGAACTGCTTGGT, 서열번호 613; 프로브 서열 CCCGGGAGATCTTCAAGAGCCCX, 서열번호 614)를 사용하여 mRNA 수준을 측정하였다. 7 인자 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정하였다. 특정 뮤린 안티센스 올리고뉴클레오티드는 7 인자 mRNA 수준을 용량-의존적 방식으로 감소시켰다.
실시예 11: 생체내 뮤린 7 인자의 안티센스 저해
시험관내 연구로부터 상당한 용량-의존성 저해를 나타내는 것으로 입증된 네개의 안티센스 올리고뉴클레오티드(실시예 10 참조)를 생체내 7 인자 mRNA의 감소능에 대해 평가하였다 . 안티센스 올리고뉴클레오티드는 뮤린 7 인자 mRNA(유전자은행 등록번호 NT_039455.6의 뉴클레오티드 10024000-10037000; 서열번호 160)에 표적화되었다. 네개의 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 표적 개시 부위는 11326, 11336, 11613 및 11766이다.
처리
BALB/c 마우스를 ISIS 403102(CCATAGAACAGCTTCACAGG, 표적 부위 11336, 서열번호 161로서 본 원에 포함됨)로 처리하였다. BALB/c 마우스에 ISIS 403102를 5 mg/kg, 10 mg/kg, 25 mg/kg 또는 50 mg/kg으로 3주동안 1주 2회 피하 주사하였다. 대조 마우스군에는 PBS를 3주동안 1주 2회 피하 주사하였다. 처리기간 후, RNA 및 단백질 분석을 위해 전체의 간을 수집하고, 응고 분석(PT/aPTT)을 위해 혈장을 수집하였다.
RNA 분석
간 조직으로부터 RNA를 추출하여 7 인자의 실시간 RT-PCR 분석을 수행하였다. 표 18에 예시된 바와 같이, ISIS 403102는 뮤린 7 인자를 PBS 대조군에 비해 용량-의존적으로 감소시켰다. 결과를 대조군에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다.
Figure pct00042
단백질 분석
7 인자 비색법(Hyphen BioMed)으로 혈장 7 인자 단백질을 측정하였다. 표 19에 예시된 바와 같이, ISIS 403102는 뮤린 7 인자 단백질을 PBS 대조군에 비해 용량-의존적으로 감소시킨 것으로 나타났다. 결과를 대조군에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다.
Figure pct00043
응고 분석
ISIS 403102로 처리된 마우스로부터 얻은 혈소판이 거의 없는 혈장(PPP)을 이용하여 프로트롬빈 시간(PT) 및 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간(aPTT)을 측정하였다. 표 20에 제공된 PT 및 aPTT 값은 국제 표준 단위(INR) 값으로 보고된 것이다. 실험군에 대한 PT 또는 aPTT 값을 PBS 처리군에 대한 PT 또는 aPTT 값으로 나누어 PT 및 aPTT에 대한 INR 값을 결정하였다. 이 비에 사용한 조직 인자의 국제 민감 지수(International Sensitivity Index, ISI)를 제곱하였다. 표 20에 예시된 바와 같이, ISIS 40310로 처리된 마우스에서의 PT가 대조군에 비해 유의적으로 연장되었다. aPTT는 ISIS 40310로 처리된 마우스에서 다소 연장되었다. 이들 데이터는 ISIS 403102가 혈액 응고의 고유 경로보다 혈액 응고의 외인적 경로에 더 큰 영향을 준다는 것을 제시한다.
Figure pct00044
실시예 12: ISIS 403102의 단회 투여 약물동태 검사
처리
마우스에서 ISIS 403102의 작용 반감기 및 기간을 평가하였다. 27 BALB/c 마우스군에 ISIS 403102을 50 mg/kg으로 주사하였다. 이 군에서 선택한 마우스 세마리에 ISIS 403102를 단회 투여하고 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 24 및 56일 후에 희생시켰다. 마우스 세마리로 이루어진 대조군에는 PBS를 단회 투여하고, 이 군의 마우스를 1일째에 희생시켰다. 모든 군의 마우스를 10 mg/kg 크실라진과 혼합된 150 mg/kg 케타민을 복막내 주사로 투여하여 마취시킨 다음, 경추 탈골시켜 희생시켰다. RNA 분석을 위해 간을 수거하고, 응고 분석(PT 및 aPTT)을 위해 혈장을 수집하였다.
RNA 분석
간 조직으로부터 RNA를 추출하여 7 인자의 실시간 RT-PCR 분석을 수행하였다. 결과를 PBS 대조군에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다. 표 21에 예시된 바와 같이, ISIS 403102로 처리함으로써 7 인자 mRNA가 4일째에 92% 저해되었으며, 그 후, ISIS 403102 효과는 점차 저하되어 24일째에는 11%로 감소되었다. 56일째, ISIS 403102 처리된 마우스에서 7 인자 mRNA 수준은 PBS 대조군과 동일하였다. 결과를 대조군에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다. 이들 데이터는 ISIS 403102를 50 mg/kg으로 단회 투여하는 경우, 피크 효과가 대략 4일째에 발생하고, 작용 기간이 적어도 24일간 지속됨을 나타낸다.
Figure pct00045
PT 및 aPTT 분석
ISIS 403102로 처리된 마우스로부터 얻은 혈소판이 거의 없는 혈장(PPP)을 이용하여 프로트롬빈 시간(PT) 및 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간(aPTT)을 측정하였다. 표 22에 제공된 PT 및 aPTT 값은 국제 표준 단위(INR) 값으로 보고된 것이다. 실험군(즉, ISIS 403102를 50 mg/kg으로 처리)에 대한 PT 또는 aPTT 값을 PBS 처리군에 대한 PT 또는 aPTT 값으로 나누어 PT 및 aPTT에 대한 INR 값을 결정하였다. 이 비에 사용한 조직 인자의 국제 민감 지수(ISI)를 제곱하였다.
표 22에 예시된 바와 같이, PT는 1일째 1.11에서 4일째 1.97로 증가하였다. 4일후에 PT는 56일째 1.10에 도달할 때까지 점차적으로 감소하였다. aPTT는 4일째 1.00에서 1.24로 증가하였다. 4일후에 aPTT는 56일째 0.97에 도달할 때까지 점차적으로 감소하였다. mRNA 발현 데이터(상기의 것)와 마찬가지로, 이들 데이터로부터 ISIS 403102를 50 mg/kg으로 단회 투여하는 경우, 피크 효과가 대략 4일째에 발생하고, 작용 기간이 적어도 24일간 지속됨을 알 수 있다.
Figure pct00046
실시예 13: ISIS 403102의 다회 투여 약물동태 검사
처리
응고 시간 및 뮤린 7 인자의 안티센스 저해에 대한 다회 투여 ISIS 403102의 작용 기간을 평가하였다. 제1 마우스군에 ISIS 403102를 25 mg/kg으로 단회 피하 주사하였다. 제1 마우스군을 단회 투여후 1 및 3일째에 희생시켰다. 제2 마우스군에는, ISIS 403102를 25 mg/kg으로 1주동안 주 2회 피하 주사하였다. 제2 마우스군을 ISIS 403102 최종 투여후 3일째에 희생시켰다. 제3 마우스군에게는, ISIS 403102를 25 mg/kg으로 2주동안 주 2회 피하 주사하였다. 제3 마우스군을 ISIS 403102 최종 투여후 3일째에 희생시켰다. 제4 마우스군에게는, ISIS 403102를 25 mg/kg으로 3주동안 주 2회 피하 주사하였다. 제4 마우스군을 ISIS 403102 최종 투여후 2, 7, 14, 28, 42 및 56일째에 희생시켰다. 세마리 대조군 마우스에는 PBS를 단회 주사하였다. 하루 후에 대조군 마우스를 희생시켰다. 모든 군의 마우스를 10 mg/kg 크실라진과 혼합된 150 mg/kg 케타민을 복막내 주사로 투여하여 마취시킨 다음, 경추 탈골시켜 희생시켰다. 모든 마우스군으로부터 RNA 분석을 위해 간을 수거하고, 응고 분석(PT 및 aPTT)을 위해 혈장을 수집하였다.
RNA 분석
간 조직으로부터 RNA를 추출하여 7 인자의 정량적 실시간 RT-PCR 분석을 수행하였다. 결과를 PBS 대조군에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다. 표 23에 예시된 바와 같이, ISIS 403102로 단회 처리함으로써 7 인자가 이미 1일째에 저해되었다. 단회 투여군에서 저해는 3일간 증가하였다. ISIS 403102가 2회 투여된 경우 3일째 저해가 ISIS 403102 단회 투여에 비해 증가되었다. 2회 투여군에서 저해는 3일간 증가하였다. ISIS 403102가 4회 투여된 경우 저해가 3일째 2회 투여군에 비해 증가되었다.
ISIS 403102가 6회 투여된 경우에는 7일째에 저해가 2일째 6회 투여된 ISIS 403102에 비해 증가되었다. 6회 투여되는 ISIS 403102로 처리된 마우스에서, 7 인자 저해는 14, 28, 42 및 56일에 점진적으로 감소하였다.
Figure pct00047
PT 및 aPTT 분석
ISIS 403102로 처리된 마우스로부터 얻은 혈소판이 거의 없는 혈장(PPP)을 이용하여 프로트롬빈 시간(PT) 및 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간(aPTT)을 측정하였다. 표 24에 제공된 PT 및 aPTT 값은 국제 표준 단위(INR) 값으로 보고된 것이다. 실험군(즉, ISIS 403102를 50 mg/kg으로 처리)에 대한 PT 또는 aPTT 값을 PBS 처리군에 대한 PT 또는 aPTT 값으로 나누어 PT 및 aPTT에 대한 INR 값을 결정하였다. 이 비에 사용한 조직 인자의 국제 민감 지수(ISI)를 제곱하였다.
표 24에 예시된 바와 같이, 3일째 단회 ISIS 403102로 처리된 마우스에서의 PT가 1일째 단회 ISIS 403102로 처리된 마우스에 비해 증가하였다. 3일째, 2회 ISIS 403102로 처리된 마우스에서의 PT가 단회 ISIS 403102로 처리된 마우스에 비해 증가되었다. 3일째에 4회 ISIS 403102로 처리된 마우스에서의 PT가 2회 ISIS 403102로 처리된 마우스에 비해 증가되었다. 6회 ISIS 403102를 투여받은 마우스에서 PT는 7일에서 56일까지 감소하였다.
aPTT는 3일째 단회 ISIS 403102로 처리된 마우스에 비해 3일째에 단회 ISIS 403102로 처리된 마우스에서 다소 증가되었다. 3일째, 2회 ISIS 403102로 처리된 마우스에서 aPTT는 단회 ISIS 403102로 처리된 마우스에 비해 증가되었다. 3일째에 4회 ISIS 403102로 처리된 마우스에서 aPTT가 2회 ISIS 403102로 처리된 마우스에 비해 증가되었다. 6회 ISIS 403102를 투여받은 마우스에서 aPTT는 7일에서 56일까지 감소하였다.
Figure pct00048
실시예 14: FeCl 3 으로 유발된 정맥 혈전증(VT) 모델에서 ISIS 403102에 의한 7 인자의 생체내 안티센스 저해 효과
처리
세 BALB/c 마우스군에 ISIS 403102를 25 mg/kg, 37.5 mg/kg 또는 50 mg/kg으로 3주동안 주 2회 피하 투여로 주사하였다. 두 BALB/c 대조 마우스군에는 PBS를 3주동안 주 2회 피하 투여하여 처리하였다. 마우스 반을 FeCl3으로 혈전 형성을 유발시키고, 나머지 마우스는 꼬리 출혈에 대해 평가하였다. ISIS 403102 또는 PBS를 최종 투여하고 2일 후, 마우스를 10 mg/kg 크실라진과 혼합된 150 mg/kg 케타민을 복막내 주사로 투여하여 마취시켰다. 제1 대조군을 제외한 모든 VT 마우스군에서 FeCl3으로 혈전 형성을 유발시켰다.
FeCl3으로 처리한 마우스에, 10% FeCl3 용액으로 사전포화된 여과지 조각(2×4 mm)을 대정맥에 직접 도포하여 혈전 형성을 유발하였다. 3분간 노출 후, 여과지를 제거하였다. 여과지를 도포하고 30분후, 혈전이 있는 고정 길이 정맥을 혈소판 분석을 위해 절개하였다. RNA 분석을 위해 간을 수집하였다.
RNA 분석
간 조직으로부터 RNA를 추출하여 7 인자의 실시간 RT-PCR 분석을 수행하였다. 결과를 PBS 대조군에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다. 표 25에 예시된 바와 같이, ISIS 403102로 처리된 경우 7 인자 mRNA가 PBS 대조군에 비해 용량-의존적으로 유의적으로 감소된 것으로 나타났다. 이들 데이터는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 사용하여 7 인자 발현을 저해할 수 있음을 나타낸다.
Figure pct00049
혈소판 조성물의 정량화
혈전 형성 척도로서 대정맥내 혈소판을 정량화하는데 혈소판 인자-4(PF-4)의 실시간 RT-PCR 정량화를 이용하였다. 결과를 두 PBS-처리된 대조군에 대한 ISIS 403102에서의 PF-4 퍼센트로 나타내었다. 표 26에 예시된 바와 같이, ISIS 403102로 처리한 경우 PF-4가 PBS 대조군에 비해 감소되었다. 따라서, 안티센스 올리고뉴클레오티드는 혈전 및 혈병 형성을 저해하는데 유용하다.
Figure pct00050
꼬리 출혈 검사
FeCl3 용액으로 처리되지 않은 마우스를 꼬리 출혈 챔버에서 평가하였다. 마우스를 ISIS 403102 또는 PBS로 최종 처리하고 이틀 후에 출혈 챔버에 놓았다. 마우스를 챔버에서 이소플루오란으로 마취시키고, 꼬리 소편(끝에서 약 4 mm)을 멸균 가위로 절단하였다. 절단된 꼬리를 즉시 37 ℃로 가온시킨 약 10 mL의 0.9% NaCl 완충 용액을 채운 15 mL 팔콘 튜브(Falcon tube)에 놓았다. 혈액을 40분간 모았다. 출혈 전 후, 염수가 채워진 튜브의 무게를 달았다. 결과를 표 27에 나타내었다.
25 mg/kg 및 37.5 mg/kg의 ISIS 403102로 처리된 경우 출혈량이 PBS 처리된 마우스에 비해 다소 감소되었다. 출혈은 50 mg/kg ISIS 40310로 처리된 마우스 및 PBS로 처리된 마우스에서 동일하였다. 이들 데이터는 ISIS 403102 처리가 출혈 가능성을 증가시키지 않음을 제시한다.
Figure pct00051
실시예 15: 와파린과 비교한 ISIS 403102에 의한 뮤린 7 인자의 생체내 안티센스 저해
처리
ISIS 403102 및 와파린(Coumadin®)을 BALB/c 마우스에서 평가하였다. 네 BALB/c 마우스군에 5 mg/kg, 10 mg/kg, 20 mg/kg 또는 40 mg/kg의 ISIS 403102를 3주동안 주 2회 피하 투여하여 처리하였다. ISIS 403102를 최종 투여하고 이틀 후, 마우스를 10 mg/kg 크실라진과 혼합된 150 mg/kg 케타민을 복막내 주사로 투여하여 마취시켰다. 제5 BALB/c 마우스군은 3 mg/kg의 와파린을 6일동안 매일 복막내 투여하여 처리하였다. 와파린을 최종 투여하고 4 시간 후에, 마우스를 희생시켰다. BALB/c 대조 마우스군에 PBS를 3주동안 주 2회 피하 투여하여 처리하였다. PBS를 최종 투여하고 이틀 후, 마우스를 10 mg/kg 크실라진과 혼합된 150 mg/kg 케타민을 복막내 주사하여 마취시켰다. 제1 대조군을 제외한 군에 FeCl3으로 혈전 형성을 유발시켰다.
FeCl3으로 처리한 마우스에, 10% FeCl3 용액으로 사전포화된 여과지 조각(2×4 mm)을 대정맥에 직접 도포하여 혈전 형성을 유발하였다. 3분간 노출 후, 여과지를 제거하였다. 여과지를 도포하고 30분후, 혈전이 있는 고정 길이 정맥을 혈소판 분석을 위해 절개하였다. RNA 분석을 위해 간을 수집하였다.
RNA 분석
간 조직으로부터 RNA를 추출하여 7 인자의 실시간 RT-PCR 분석을 수행하였다. 결과를 PBS 대조군에 대한 7 인자의 저해 퍼센트로 나타내었다. 표 28에 예시된 바와 같이, ISIS 403102로 처리된 경우 7 인자 mRNA가 PBS 대조군에 비해 용량-의존적으로 유의적으로 감소된 것으로 나타났다. 반대로, 와파린으로 처리시에는 PBS 대조군에 비해 7 인자의 유의적인 감소가 없었다.
Figure pct00052
실시예 16: FeCl 3 으로 유발된 정맥 혈전증(VT) 모델에서 와파린과 비교한 뮤린 7 인자의 용량-의존적 안티센스 저해 효과
처리
ISIS 403102 및 와파린(Coumadin®)을 BALB/c 마우스에서 평가하였다. 네 BALB/c 마우스군에 5 mg/kg, 10 mg/kg, 20 mg/kg 또는 40 mg/kg의 ISIS 403102를 3주동안 주 2회 피하 투여하여 처리하였다. ISIS 403102를 최종 투여하고 이틀 후, 마우스를 10 mg/kg 크실라진과 혼합된 150 mg/kg 케타민을 복막내 주사로 투여하여 마취시켰다. 여섯개의 추가의 BALB/c 마우스군을 0.5 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg 또는 5 mg/kg의 와파린을 6일동안 매일 복막내 투여하여 처리하였다. 와파린을 최종 투여하고 4 시간 후에, 마우스를 희생시켰다. BALB/c 대조 마우스군에 PBS를 3주동안 주 2회 피하 투여하여 처리하였다. PBS를 최종 투여하고 이틀 후, 마우스를 10 mg/kg 크실라진과 혼합된 150 mg/kg 케타민을 복막내 주사로 투여하여 마취시켰다. 제1 대조군을 제외한 마우스군에 FeCl3으로 혈전 형성을 유발시켰다.
FeCl3으로 처리한 마우스에, 10% FeCl3 용액으로 사전포화된 여과지 조각(2×4 mm)을 대정맥에 직접 도포하여 혈전 형성을 유발하였다. 3분간 노출 후, 여과지를 제거하였다. 여과지를 도포하고 30분후, 혈전이 있는 고정 길이 정맥을 혈소판 분석을 위해 절개하였다. RNA 분석을 위해 간을 수집하였다.
혈소판 조성물의 정량화
혈전 형성 척도로서 대정맥내 혈소판을 정량화하는데 혈소판 인자-4(PF-4)의 실시간 RT-PCR 정량화를 이용하였다. 결과를 두 PBS-처리된 대조군에 대한 ISIS 403102 또는 와파린 처리된 마우스에서의 PF-4 퍼센트로 나타내었다. 표 29에 예시된 바와 같이, ISIS 403102로 처리한 경우, 5 mg/kg 이상의 용량에서 PF-4가 PBS 대조군에 비해 용량-의존적으로 감소되었다. 와파린으로 처리한 경우에는, 1 mg/kg 이상의 용량에서 PF-4가 PBS 대조군에 비해 감소되었다. 따라서, ISIS 안티센스 올리고뉴클레오티드는 혈전 및 혈병 형성을 저해하는데 유용하다.
Figure pct00053
실시예 17: 꼬리 출혈 검사에서 와파린과 비교한 뮤린 7 인자의 안티센스 저해 효과
처리
ISIS 403102 또는 와파린에 의한 처리가 마우스에서 내부 출혈을 일으키는지를 알아보기 위하여 꼬리-출혈을 측정하였다. ISIS 403102 및 와파린(Coumadin®)을 꼬리 출혈 검사로 평가하였다. 여섯 BALB/c 마우스군을 1.25 mg/kg, 2.5 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg, 20 mg/kg 또는 40 mg/kg의 ISIS 403102를 3주동안 주 2회 피하 투여하여 처리하였다. 여섯개의 추가의 BALB/c 마우스군을 0.5 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg.kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg 또는 5 mg/kg의 와파린을 6일동안 매일 복막내 투여하여 처리하였다. 별도의 BALB/c 대조 마우스군에 PBS를 3주동안 주 2회 피하 투여하여 처리하였다.
꼬리 출혈 검사
ISIS 403102, 와파린 또는 PBS로 최종 처리하고 이틀 후에 마우스를 꼬리 출혈 챔버에 놓았다. 마우스를 챔버에서 이소플루오란으로 마취시키고, 꼬리 소편(끝에서 약 4 mm)을 멸균 가위로 절단하였다. 절단된 꼬리를 즉시 37 ℃로 가온시킨 약 10 mL의 0.9% NaCl 완충 용액을 채운 15 mL 팔콘 튜브에 놓았다. 혈액을 40분간 모았다. 출혈 전 후, 염수가 채워진 튜브의 무게를 달았다. 결과를 표 30에 나타내었다.
ISIS 403102로 처리하는 것은 PBS 대조군 마우스에 비해 출혈에 유의적인 영향을 주지 않는 것으로 나타났다. 그러나, 와파린은 마우스에서 PBS 대조군에 비해 출혈을 증가시켰다. 와파린 용량 증가는 실혈 증가와 확실한 상관관계에 있다. 이들 데이터는 ISIS 403102의 출혈 가능성이 특히 와파린에 비해 낮다는 것을 제시한다.
Figure pct00054
실시예 18: 꼬리 출혈 검사에서 아픽사반과 비교한 뮤린 7 인자의 안티센스 저해 효과
처리
ISIS 403102 및 아픽사반을 BALB/c 마우스군에서 평가하였다. 제1 BALB/c 마우스군에 ISIS 403102를 40 mg/kg으로 3주동안 주 2회 피하 투여하였다. 3개의 추가의 BALB/c 마우스군을 단회 복막내 투여되는 5 mg/kg 및 10 mg/kg의 아픽사반 및 단회 피하 투여되는 10 mg/kg의 아픽사반으로 처리하였다. BALB/c 대조 마우스군에 PBS를 3주동안 주 2회 피하 투여하여 처리하였다.
꼬리 출혈 검사
ISIS 403102 또는 PBS로 최종 처리하고 이틀 후에 마우스를 꼬리 출혈 챔버에 놓았다. 아픽사반으로 처리된 군의 마우스를 단회 투여후 30분동안 분석하였다. 마우스를 챔버에서 이소플루오란으로 마취시키고, 꼬리 소편(끝에서 약 4 mm)을 멸균 가위로 절단하였다. 절단된 꼬리를 즉시 37 ℃로 가온시킨 약 10 mL의 0.9% NaCl 완충 용액을 채운 15 mL 팔콘 튜브에 놓았다. 혈액을 40분간 모았다. 출혈 전 후, 염수가 채워진 튜브의 무게를 달았다. 결과를 표 31에 나타내었다.
ISIS 403102로 처리된 마우스는 PBS로 처리된 마우스에 비해 출혈이 덜 하였다. 5 mg/kg의 아픽사반을 복막내 주사하여 처리된 마우스는 출혈량이 PBS로 처리된 마우스와 같았다. 10 mg/kg의 아픽사반을 복막내 주사하여 처리된 마우스는 PBS로 처리된 마우스에 비해 출혈이 증가하였다. 10 mg/kg의 아픽사반을 피하 주사하여 처리된 마우스는 PBS로 처리된 마우스에 비해 출혈이 덜 하였다. 이들 데이터는 ISIS 403102의 출혈 가능성이 낮다는 것을 제시한다.
Figure pct00055
실시예 19: 암 전이에 대한 뮤린 7 인자의 생체내 안티센스 저해 효과
조직 인자-7 인자 복합체 형성에 대한 ISIS 403102의 7 인자 저해 효과 및 전이동안 암 세포의 유출에 대한 그의 역할을 평가하였다. 두 중증 복합 면역 결핍증(SCID) 마우스군에 ISIS 403102를 20 mg/kg의 용량으로 3주동안 주 2회 주사하여 처리하였다. 대조 마우스군에는 PBS를 3주동안 주 2회 주사하였다. ISIS 403102 또는 PBS를 최종 투여하고 이틀 후에, ISIS 403102 처리군 및 대조군중 하나에 5O×1O6 MDA-MB-231 유방암종 세포를 정맥내 주사하였다.
MDA-MB-231 유방암종 세포를 주사하고 2주 후에 마우스를 희생시켰다. 폐를 수거하고, 실시간 RT-PCR로 인간 GAPDH mRNA 수준을 분석하였다. 결과를 마우스 사이클로필린 A mRNA 수준으로 정규화하였다. ISIS 403102로 처리된 군 및 MDA-MB-231 유방암종 세포군에서의 인간 GAPDH 수준을 다른 두 마우스군의 인간 GAPDH 수준과 비교하였다. 이러한 실험은 폐에서 전이가 발생하는 동안 7 인자 저해 효과를 평가하기 위해 설계된다.
실시예 20: 간 섬유증에 대한 뮤린 7 인자의 생체내 안티센스 저해 효과
실험 간 섬유증에 대한 ISIS 403102의 7 인자 저해 효과를 사염화탄소 간 손상 모델에서 평가하였다.
처리
제1 BALB/c 마우스군에 ISIS 403102를 20 mg/kg으로 8주동안 주 2회 피하 주사하였다. 제2 마우스군에는 PBS를 8주동안 주 2회 피하 주사하였다. ISIS 403102 또는 PBS로 처리하고 2주 후에 양 마우스군에 광유 95 μl에 용해시킨 사염화탄소(CCl4) 5 μl를 5주동안 주 2회 복막내 투여하였다. 제3 마우스군에는 광유 100 μl만을 주사하였다. 마우스를 이소플루오란으로 마취시킨 다음에 경추 탈골시켜 희생시켰다. 모든 마우스로부터 간 조직을 수거하였다. 실시간 RT-PCR을 이용하여 1형 콜라겐, α-평활근 액틴, 기질 금속 단백 분해효소(MMP) 3, TGF-β, Timp1 및 Timp2(MMP 저해제)를 포함한 섬유증 관련 유전자 발현에 대해 결정하였다. 실험군 수준을 대조 마우스의 수준과 비교하여 간 섬유증 발생에 대한 7 인자 저해 효과를 평가하였다.
실시예 21: 콜라겐-유발 관절염에 대한 뮤린 7 인자의 생체내 안티센스 저해 효과
조직 인자-7 인자 복합체 형성에 대한 ISIS 403102의 7 인자 저해 효과 및 관절 염증 및 류마티스 관절염을 유발하는 관절내 피브린 축적에 있어서 그의 역할을 평가하였다.
처리
제1 DBA/1J 마우스군에 ISIS 403102를 20 mg/kg으로 8주동안 주 2회 피하 주사하였다. 두 마우스군에 PBS를 8주동안 주 2회 주사하였다. ISIS 403102로 최초 처리하고 2주후, II형 소 콜라겐(콘드렉스)을 완전 프로인트(Freund) 보조제와 혼합하고, 얼음상에서 균질화한 후, 콜라겐 100 μg을 함유하는 에멀젼을 실험군 및 제1 대조군에 피하 주사하였다. 이들 양 군에 콜라겐을 최초 주사하고 7일후에 완전 프로인트 보조제중에 II형 콜라겐 100 μg을 함유하는 추가의 주사량을 피하 주사하였다.
모든 군의 마우스에 대해서 콜라겐을 최초 주사한 후 18일부터 말초 관절에서의 외관상 관절염을 매일 조사하였다. 관절염의 임상적 중증도에 대해 다음과 같이 점수를 매겼다: 엄지를 제외한 부은 각 발가락(최대 4)에 대해 1 점, 발목 또는 손목 관절에 대해 1 점, 및 중족 또는 중수 관절에 대해 1 점[최대 점수 - 뒷발 6 점 및 앞발 5 점]. 각 발에 대해 개별적으로 점수를 매기는데, 마우스당 임상적 관절염 누계 점수는 최대 22점에 이른다. 실험군에 대한 관절염을 대조군과 비교하여 관절에서 관절염 발생에 대한 7 인자 저해 효과를 평가하였다.
콜라겐을 최초 주사하고 6주후에 관절염이 최대 수준에 이르렀다. 마우스를 이소플루오란으로 마취시키고, 혈장을 수집한 뒤, 마우스를 경추 탈골시켜 희생시켰다. 7 인자 mRNA를 RNA 분석하기 위해 간을 수거하였다. 3개의 모든 군에서 수집한 혈장에 대해 응고 시간(PT 및 aPTT)을 분석하였다. 또한, 혈장내 트롬빈-항트롬빈(TAT) 복합체를 ELISA로 측정하였다. 실험군의 결과를 대조군과 비교하여 TAT 복합체 형성 및 응고 시간에 대한 7 인자 저해 효과를 평가하였다.
SEQUENCE LISTING <110> Isis Pharmaceuticals, Inc. <120> MODULATION OF FACTOR 7 EXPRESSION <130> IPA100274 <150> 60/986,928 <151> 2007-11-09 <160> 614 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 18001 <212> DNA <213> H. Sapiens <400> 1 gaagtcatca gcaatgcaac tgttcacatg gaggatactc cctgcttgag gggtcagaca 60 ggcctgctgg gcaacccagg aggcttggat gaccgtctac cccagtgttt ttgggatgga 120 aagttccaca ttctgagaac cctcagtccc tgggcaacct ggggtggtta gtcaccacag 180 cttgtggctt gggcccatga cagcaggtag aaatgacgtg gactgccgcc agccgggcac 240 agtggctcac gcctgtaatc ccagcacttt gggaggctga ggcatgtgga tcacttgagg 300 tcaggagttc gaaaccagcc tggtcaacac ggtgaaaccc catctctgct aaaaaaaaaa 360 aatatatata tataaattag ccaggcatgg tgacgtgcac ctgtggtccc agctactcag 420 gaggctgagg cacaagaatc acttgaaccc gggaggtgga ggttgcagtg agattgcacc 480 agtgcactct ccagcctggc aacagagcaa gactctgtct caaacaaaca aaacaaaaca 540 aacaaaaaga cgtaagatgt ggaccgctgg agaatggggg tgctgcctgc agtcaaaacg 600 gagtgggggt gcccagctca gggccagaat gatcctattc ccggcacttc tcagtgaggc 660 tctgtggctc acctaagaaa ccagcctccc ttgcaggcaa cggcctagct ggcctggtct 720 ggaggctctc ttcaaatatt tacatccaca cccaagatac agtcttgaga tttgactcgc 780 atgattgcta tgggacaagt tttcatctgc agtttaaatc tgtttcccaa cttacattag 840 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Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 575 agggttcatt tcag 14 <210> 576 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 576 atgtgagggt tcat 14 <210> 577 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 577 gcctcaaaca tcta 14 <210> 578 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 578 ctacagcctc aaac 14 <210> 579 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 579 gggagctaca gcct 14 <210> 580 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 580 attgacaagg gctg 14 <210> 581 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 581 atatcattga caag 14 <210> 582 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 582 tcccagggtc tctg 14 <210> 583 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 583 cagccagggc ctgg 14 <210> 584 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 584 cactgcagcc aggg 14 <210> 585 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 585 cttgccaggt cctc 14 <210> 586 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 586 tgcagcttgc cagg 14 <210> 587 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 587 aagagtgcag cttg 14 <210> 588 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 588 tcagcaagag tgca 14 <210> 589 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 589 gggactcagc aaga 14 <210> 590 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 590 tgcccaggac ggcc 14 <210> 591 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 591 tgcctgagtg cccc 14 <210> 592 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 592 tccatggaca ctaa 14 <210> 593 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 593 ggtcagctgg tctg 14 <210> 594 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 594 gggcccgcca ctgg 14 <210> 595 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 595 ctcggacaaa agag 14 <210> 596 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 596 atttcccatt ggca 14 <210> 597 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 597 gctggagctg agcc 14 <210> 598 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 598 tggccagtgg cctc 14 <210> 599 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 599 gctcatggca gaca 14 <210> 600 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 600 tggagagacc aatg 14 <210> 601 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 601 tggtgtgcac acat 14 <210> 602 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 602 tggccactgc ctca 14 <210> 603 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 603 tgccgtagtg gccg 14 <210> 604 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 604 cttggccagt gtgg 14 <210> 605 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 605 acaggccagg ctgg 14 <210> 606 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 606 aggtgacccg tgag 14 <210> 607 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 607 cctgtgagtg tgag 14 <210> 608 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 608 ggtccccatc actg 14 <210> 609 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 609 ggacctgcca tgga 14 <210> 610 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 610 caacaggacc tgcc 14 <210> 611 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Oligonucleotide <400> 611 gtgctcgccc agca 14 <210> 612 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 612 aatgaggaac agtgctcctt tga 23 <210> 613 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 613 tgtaaacaat ccagaactgc ttggt 25 <210> 614 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Probe <400> 614 cccgggagat cttcaagagc cc 22

Claims (33)

12 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드로 구성되고 핵산염기 서열을 가지는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물로서, 상기 핵산염기 서열은 서열번호 1의 뉴클레오티드 15128 내지 15223중 동일한 수의 핵산염기에 상보적인 적어도 12 연속 핵산염기 부분을 포함하고, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1에 적어도 80% 상보적인 화합물.
제 1 항에 있어서, 단일 가닥의 변형된 올리고뉴클레오티드로 구성된 화합물.
제 2 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드가 서열번호 53의 핵산염기 서열을 가지는 화합물.
제 2 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵산염기 서열이 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 또는 서열번호 167중 임의의 핵산염기 서열에 적어도 80% 상보적인 화합물.
제 2 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵산염기 서열이 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 또는 서열번호 167중 임의의 핵산염기 서열에 적어도 90% 상보적인 화합물.
제 2 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵산염기 서열이 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 또는 서열번호 167중 임의의 핵산염기 서열에 100% 상보적인 화합물.
제 2 항에 있어서, 적어도 하나의 뉴클레오시드간 연결이 변형된 뉴클레오시드간 연결인 화합물.
제 7 항에 있어서, 각 뉴클레오시드간 연결이 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결인 화합물.
제 2 항에 있어서, 적어도 하나의 뉴클레오시드가 변형된 당을 포함하는 화합물.
제 9 항에 있어서, 적어도 하나의 변형된 당이 바이사이클릭 당인 화합물.
제 9 항에 있어서, 적어도 하나의 변형된 당이 2'-O-메톡시에틸을 포함하는 화합물.
제 2 항에 있어서, 적어도 하나의 뉴클레오시드가 변형된 핵산염기를 포함하는 화합물.
제 12 항에 있어서, 상기 변형된 핵산염기가 5-메틸사이토신인 화합물.
제 2 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드가
연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하고,
상기 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 직접 인접하여 위치하며, 각 윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함하는 화합물.
제 14 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드가
10개의 연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
5개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
5개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하고,
상기 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 직접 인접하여 위치하며, 각 윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고; 각 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트 연결인 화합물.
제 14 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드가
14개의 연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
3개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
3개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하고,
상기 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 직접 인접하여 위치하며, 각 윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고; 각 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트 연결인 화합물.
제 14 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드가
13개의 연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
2개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
5개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하고,
상기 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 위치하며, 각 윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고; 각 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트 연결인 화합물.
제 13 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드가
12개의 연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
2개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
2개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하고,
상기 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 위치하며, 각 윙 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고; 각 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트 연결인 화합물.
서열번호 53의 핵산염기 서열의 적어도 12개의 인접 핵산염기들을 포함하는 핵산염기 서열을 포함하는 12 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드 또는 그의 염 및 약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 조성물.
제 19 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드가 단일 가닥의 변형된 올리고뉴클레오티드로 구성된 조성물.
제 19 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드가 20개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 조성물.
서열번호 53의 핵산염기 서열의 적어도 12개의 인접 핵산염기들을 포함하는 핵산염기 서열을 포함하는 12 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법.
제 22 항에 있어서, 상기 동물이 인간인 방법.
제 23 항에 있어서, 상기 투여에 의해 심부정맥 혈전증을 예방하는 것인 방법.
제 23 항에 있어서, 상기 투여에 의해 폐색전증을 예방하는 것인 방법.
제 23 항에 있어서, 상기 투여에 의해 과잉증식 질환을 치료하는 것인 방법.
제 23 항에 있어서, 상기 투여에 의해 염증성 병태를 치료하는 것인 방법.
제 23 항에 있어서, 화합물과, 아스피린, 클로피도그렐, 디피리다몰, 헤파린, 레피루딘, 티클로피딘, 와파린, 아픽사반, 리바록사반 및 로베녹스로 구성된 군으로부터 선택된 임의의 성분을 공동 투여하는 것을 포함하는 방법.
제 23 항에 있어서, 화합물과, 아스피린, 클로피도그렐, 디피리다몰, 헤파린, 레피루딘, 티클로피딘, 와파린, 아픽사반, 리바록사반 및 로베녹스로 구성된 군으로부터 선택된 임의의 성분이 동시 투여되는 방법.
제 23 항에 있어서, 상기 투여가 비경구 투여인 방법.
제 30 항에 있어서, 상기 비경구 투여가 피하 투여 또는 정맥내 투여중 어느 하나인 방법.
혈전색전성 합병증의 위험이 있는 동물을 식별하고; 또한
상기 위험이 있는 동물에 12 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드로 구성되고 9 인자 핵산에 상보적인 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
제 32 항에 있어서, 상기 혈전색전성 합병증이 심부정맥 혈전증, 폐색전증 또는 이들의 조합인 방법.
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Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2454369A4 (en) * 2009-07-16 2013-07-03 Isis Pharmaceuticals Inc MODULATION OF FACTOR 7 EXPRESSION
WO2011123394A1 (en) * 2010-03-31 2011-10-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of matrix metalloproteinase 13 (mmp-13) expression
US9920317B2 (en) 2010-11-12 2018-03-20 The General Hospital Corporation Polycomb-associated non-coding RNAs
JP6336755B2 (ja) 2010-11-12 2018-06-06 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション ポリコームに関連する非コードｒｎａ
CA2822462A1 (en) * 2010-12-20 2012-06-28 The General Hospital Corporation Polycomb-associated non-coding rnas
AU2011349464B2 (en) * 2010-12-20 2016-07-07 The General Hospital Corporation Polycomb-associated non-coding RNAS
US10017764B2 (en) 2011-02-08 2018-07-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
WO2012174154A1 (en) * 2011-06-13 2012-12-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of inflammatory responses by factor vii
EP2742136B1 (en) 2011-08-11 2017-09-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligomeric compounds comprising 5'-modified deoxyribonucleosides in the gap and uses thereof
AU2012312433B2 (en) * 2011-09-20 2017-07-06 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of GCGR expression
EP3330278A1 (en) * 2012-02-08 2018-06-06 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of rna by repeat targeting
WO2013119979A1 (en) * 2012-02-08 2013-08-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating factor vii expression
WO2013148260A1 (en) 2012-03-30 2013-10-03 Washington University Methods for modulating tau expression for reducing seizure and modifying a neurodegenerative syndrome
EP2839006B1 (en) 2012-04-20 2018-01-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
AP2014008100A0 (en) 2012-05-16 2014-12-31 Gen Hospital Corp Compositions and methods for modulating hemoglobingene family expression
CA2873797A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Rana Therapeutics Inc. Compositions and methods for modulating utrn expression
EA201492123A1 (ru) 2012-05-16 2015-10-30 Рана Терапьютикс, Инк. Композиции и способы для модулирования экспрессии семейства генов smn
AU2013262699A1 (en) 2012-05-16 2015-01-22 Rana Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating ATP2A2 expression
CA2873779A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Rana Therapeutics Inc. Compositions and methods for modulating mecp2 expression
US10837014B2 (en) 2012-05-16 2020-11-17 Translate Bio Ma, Inc. Compositions and methods for modulating SMN gene family expression
WO2014059353A2 (en) 2012-10-11 2014-04-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleosides and uses thereof
CA2887884A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Selective antisense compounds and uses thereof
RU2730677C2 (ru) * 2012-10-15 2020-08-24 Ионис Фармасьютикалз, Инк. Соединение для модуляции экспрессии гена c9orf72 и его применение
CN104955952A (zh) 2013-01-30 2015-09-30 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 Lna寡核苷酸碳水化合物缀合物
EP2992009B1 (en) 2013-05-01 2020-06-24 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating apolipoprotein (a) expression
TWI657819B (zh) * 2013-07-19 2019-05-01 美商Ionis製藥公司 用於調節τ蛋白表現之組合物
EP3058098A4 (en) * 2013-10-18 2017-03-22 Institut de Cardiologie de Montréal Genotyping tests and methods for evaluating plasma creatine kinase levels
CN110903337A (zh) 2014-05-01 2020-03-24 Ionis制药公司 用于调节生长激素受体表达的组合物和方法
WO2015179693A1 (en) 2014-05-22 2015-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
WO2016070060A1 (en) 2014-10-30 2016-05-06 The General Hospital Corporation Methods for modulating atrx-dependent gene repression
BR112017017178A2 (pt) * 2015-02-26 2018-04-03 Ionis Pharmaceuticals Inc moduladores específicos de alelo de rodopsina de p23h
US10900036B2 (en) 2015-03-17 2021-01-26 The General Hospital Corporation RNA interactome of polycomb repressive complex 1 (PRC1)
US11400161B2 (en) 2016-10-06 2022-08-02 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Method of conjugating oligomeric compounds
EP4035659A1 (en) 2016-11-29 2022-08-03 PureTech LYT, Inc. Exosomes for delivery of therapeutic agents

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6582908B2 (en) 1990-12-06 2003-06-24 Affymetrix, Inc. Oligonucleotides
US6001992A (en) 1999-01-07 1999-12-14 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of novel anti-apoptotic bcl-2-related proteins
US6180403B1 (en) * 1999-10-28 2001-01-30 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense inhibition of tumor necrosis factor alpha converting enzyme (TACE) expression
US5801154A (en) 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
EP2341058A3 (en) 1997-09-12 2011-11-23 Exiqon A/S Oligonucleotide Analogues
US20030228597A1 (en) 1998-04-13 2003-12-11 Cowsert Lex M. Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation
JP2005504020A (ja) 2001-07-03 2005-02-10 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド ヌクレアーゼ耐性キメラオリゴヌクレオチド
US20030087244A1 (en) * 2001-10-09 2003-05-08 Vitivity, Inc Diagnosis and treatment of vascular disease
ES2226533B1 (es) * 2002-07-25 2005-12-16 Fundacio Privada I Institut De Recerca De L'hospital De La Santa Creu I Sant Pau Nuevas variantes alelicas en el gen del factor vii.
CA2495398A1 (en) 2002-08-14 2004-02-26 Pharmacia Corporation Antisense modulation of nav1.3 expression
WO2004041889A2 (en) 2002-11-05 2004-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
US7250496B2 (en) * 2002-11-14 2007-07-31 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof
JP2006507841A (ja) 2002-11-14 2006-03-09 ダーマコン， インコーポレイテッド 機能的ｓｉＲＮＡおよび超機能的ｓｉＲＮＡ
AU2003303742A1 (en) * 2002-12-24 2004-11-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Screening methods using zebrafish to identify thrombotic and anti-thrombotic compounds and genes
US7202264B2 (en) * 2003-01-31 2007-04-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Supports for oligomer synthesis
WO2004094636A1 (en) * 2003-04-24 2004-11-04 Galapagos Genomics N.V. Effective sirna knock-down constructs
ATE555118T1 (de) 2003-08-28 2012-05-15 Takeshi Imanishi Neue synthetische nukleidsäuren vom typ mit quervernetzter n-o-bindung
JP5379347B2 (ja) 2003-09-18 2013-12-25 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド ４’−チオヌクレオシドおよびオリゴマー化合物
US20050191653A1 (en) * 2003-11-03 2005-09-01 Freier Susan M. Modulation of SGLT2 expression
EP1791567B1 (en) * 2004-08-10 2015-07-29 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chemically modified oligonucleotides
KR101239579B1 (ko) 2005-01-14 2013-03-05 다우 글로벌 테크놀로지스 엘엘씨 티타노실리케이트의 재생 및 활성 산화 촉매의 재구성
JP5342881B2 (ja) 2006-01-27 2013-11-13 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド ６−修飾された二環式核酸類似体
AU2007249349B2 (en) 2006-05-11 2012-03-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-Modified bicyclic nucleic acid analogs
US20080068922A1 (en) 2006-09-12 2008-03-20 Voss Klaus-W Device for blending a binder component and a hardener component for producing a ready-made filler
JP2008068470A (ja) 2006-09-13 2008-03-27 Kyocera Mita Corp 電子機器、ジョブデータ認証受信プログラム
US20100190837A1 (en) 2007-02-15 2010-07-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-Substituted-2-F' Modified Nucleosides and Oligomeric Compounds Prepared Therefrom
US8389488B2 (en) * 2007-11-05 2013-03-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antidotes to antisense compounds
EP2848688A1 (en) * 2007-12-10 2015-03-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of factor VII gene
SG171737A1 (en) * 2008-11-17 2011-07-28 Hoffmann La Roche Compositions and methods for inhibiting expression of factor vii genes

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