KR20100049240A

KR20100049240A - 인돌알칼로이드계 화합물을 함유하는 피부 미백용 조성물

Info

Publication number: KR20100049240A
Application number: KR1020080108329A
Authority: KR
Inventors: 김철호; 서정우; 라련화
Original assignee: 한국생명공학연구원
Priority date: 2008-11-03
Filing date: 2008-11-03
Publication date: 2010-05-12
Also published as: KR101048477B1

Abstract

본 발명은 인돌알칼로이드(indole alkaloid)계 화합물을 함유하는 피부 미백용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는, 산초나무과인 오수유(Evodia rutaecarpa Benth.) 유래의 멜라닌 생성 억제 기능을 가지는 인돌알칼로이드계 화합물을 피부 미백용 제품에 유효성분으로 적용시킨 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따르면, 인돌알칼로이드(indole alkaloid)계 화합물은 멜라닌 생성 억제 효과가 탁월하여 피부 세포의 흑화 방지의 작용이 우수할 뿐 아니라, 물질 자체에 안정성이 매우 우수하여 그 효과가 장기간 유지되며, 피부 자극이 거의 없는 안전성이 매우 우수한 물질로서 이를 함유한 피부 미백용 조성물은 화장료 또는 피부외용제에 적절히 적용할 수 있다.

디하이드로에보디아민, 멜라닌, 미백, 피부외용제, 화장료

Description

인돌알칼로이드계 화합물을 함유하는 피부 미백용 조성물{Skin Whitening Composition Containing Indole Alkaloid Compound}

본 발명은 인돌알칼로이드(indole alkaloid)계 화합물의 신규 용도에 관한 것으로서, 보다 상세하게는, 멜라닌 생성 억제기능을 가지는 인돌알칼로이드(indole alkaloid)계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물 및 산초나무과인 오수유(Evodia rutaecarpa Benth.)로부터 멜라닌 생성 억제기능을 가지는 상기 인돌알칼로이드(indole alkaloid)계 화합물을 분리하는 방법에 관한 것이다.

오래전부터 동양인에 있어서 백옥같이 흰 피부는 미로 간주되며 여러가지 천연물을 비방으로 사용해왔다. 또한 오늘날 웰빙(well being)과 자연주의 트랜드에 따라 천연물로부터 기능성 화장품원료의 개발이 적극적으로 진행되고 있다.

사람의 피부색을 결정하는 데는 여러 요인들이 관여하는데, 그 중에서도 멜라닌 색소를 만드는 멜라노사이트(melano cyte)의 활동성, 혈관의 분포, 피부의 두 께 및 카로티노이드, 빌리루빈 등의 인체 내외의 색소 함유 유무 등의 요인들이 중요하다. 특히, 가장 중요한 요인은 인체내의 멜라노사이트에서 타이로시나제 등의 여러 효소가 작용하여 생성되는 멜라닌(melanin)이라는 흑색색소이다. 이 멜라닌 색소의 형성에는 유전적 요인, 호르몬 분비, 스트레스 등과 관련된 생리적 요인 및 자외선 조사 등과 같은 환경적 요인 등이 영향을 미친다.

이러한, 멜라닌은 피부 기저층에 존재하는 멜라노사이트 내에서 합성되며, 이 경로에서 가장 중요한 효소는 티로시네이즈(tyrosinase)이다. 생성된 멜라닌은 멜라노좀(melanosome) 상태로 주위의 케라티노사이트(keratinocyte)로 이동되며 각질화에 의해 제거된다. 하지만, 이런 과정이 호르몬이나 외적환경으로 인해 원활히 진행되지 못할 경우 기미 등 색소침착이 생기게 된다.

특히, 기미, 주근께, 색소침착 등과 같은 피부색소 이상침착 증상과 자외선 노출 등에 의해 발생된 과도한 멜라닌 색소 침착을 치료 또는 경감시켜주기 위해서 이전부터 아스코르빈산, 코지산, 알부틴, 하이드로퀴논, 글루타치온 또는 이들의 유도체, 타이로시나제 저해활성을 가진 물질들을 화장료나 의약품에 배합사용하여 왔는데, 불충분한 미백효과, 피부에 대한 안정성 문제, 화장료 배합시 제형 및 안정성 문제 등으로 인해 그 사용이 제한되고 있다.

한편, 현재 이들 기존 미백 효능 물질들 이외에 천연물 중에서 미백활성성분을 찾기 위한 연구가 계속 이루어지고 있는데, 그 중 상백피(일본공개특허 소55-44375, 소64-26507, 소64-83009, 평1-25687, 평5-139950, 한국공개특허 제92-002109호, 제97-021273호), 감초(일본공개특허 소60-214721, 소63-23809, 소64- 63506, 평1-149706, 한국공개특허 제92-002109호, 제97-025601호) 등 다수의 식물추출물이 타이로시나제에 작용하여 멜라닌 생성을 억제한다는 사실이 밝혀졌으나, 이들 역시 안전성, 안정성, 변색 가능성 등의 측면에서 화장품이나 의약품에 유효농도 이상으로 사용하는 데는 많은 문제점을 갖고 있으며, 만족할 만한 효과를 내지 못하는 실정이다.

또한, 한국등록특허 제0345225호에서는 오수유 추출물을 함유하는 미백용 화장료 조성물을 개시하고 있으나, 특정 활성성분이 규명되지 않아 안전성, 안정성, 변색 가능성 등의 측면에서 화장품이나 의약품에 유효농도 이상으로 사용하는 데는 많은 문제점을 가지고 있다.

이에, 본 발명자들은 상기 종래기술의 문제점을 개선하고자 예의 노력한 결과, 산초나무과인 오수유(Evodia rutaecarpa Benth.)로부터 미백효과가 있는 특정 활성성분인 인돌알칼로이드(indole alkaloid)계 화합물을 분리정제한 다음, 상기 분리정제된 인돌알칼로이드(indole alkaloid)계 화합물을 피부 미백용 조성물의 유효성분으로 사용한 경우, 저농도에서도 탁월한 멜라닌 생성 억제효과가 있다는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 저농도에서도 멜라닌 생성 억제 효과가 탁월한 인돌알칼로이드(indole alkaloid)계 화합물을 분리 및 정제하는 방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물을 제공하는데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.

[화학식 1]

상기 화학식에서, 상기 R은 수소원자, 알데히드기, 카르복실기, 치환 또는 비치환된 포화 또는 불포화 탄소수 1~13을 가지는 알킬기이고, R₁은 수소원자 또는 히드록실기이며, X는 NH 또는 N^- 이고, 3번 탄소위치와 14번 탄소위치 사이는 단일 또는 이중결합을 의미한다.

본 발명은 또한, (a) 오수유Evodia rutaecarpa Benth.) 분쇄물을 물로 열수 추출하는 단계; (b) 상기 열수추출액에 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올을 순차적으로 분획하여 부탄올 분획물을 수득하는 단계; (c) 상기 수득된 부탄올 분획물을 농축하는 단계; 및 (d) 상기 농축된 농축액을 크로마토그래피로 정제하는 단계를 포함하는 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물의 분리방법을 제공한다.

본 발명은 일 관점에서, 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.

[화학식 1]

상기 화학식에서, 상기 R은 수소원자, 알데히드기, 카르복실기, 치환 또는 비치환된 포화 또는 불포화 탄소수 1~13을 가지는 알킬기이되, 상기 알데히드기 또는 카르복실기는 탄소수가 1~20인 것을 특징으로 하고, R₁은 수소원자 또는 히드록실기이며, X는 NH 또는 N^-이고, 3번 탄소위치와 14번 탄소위치 사이는 단일 또는 이중결합을 의미한다. 단, 상기 화학식에서 3번 탄소위치와 14번 탄소위치 사이가 이중결합일 경우에는 R₁이 없는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물은 오수유(Evodia rutaecarpa Benth.)로부터 분리한 화합물로서, 세포독성작용, 체온유지작용, 강심작용, 작용수축작용, 대뇌혈류 증강작용 등 여러 가지 생물학적 효과가 있는 것으로 보고되어 있으나, 본 물질이 미백에 대한 효과는 본 발명자들에 의해 최초로 규명되었다.

본 발명에 있어서, 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물은 바람직하게는 오수유(Evodia rutaecarpa Benth.)로부터 분리된 것임을 특징으로 할 수 있다. 이러한, 오수유(Evodia rutaecarpa Benth.)로부터 분리한 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물은, 천연 추출물이 안정성 측면에서 높은 농도로 사용할 수 없음을 감안하여 낮은 농도에서도 미백효과를 발휘할 수 있고, 기미, 주근깨, 일광에 의한 흑화 등의 예방, 개선 및 치료제에 이용될 수 있다.

본 발명에 있어서, 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물은 미백효과를 피부 미백용 조성물에 부여하기 위해 첨가량은 사용목적, 제품의 제형이나 용도에 따라 상이하며, 이는 필요에 따라 적절히 선택될 수 있으나, 바람직하게는 0.0001~1중량%로 함유되는 것을 특징으로 할 수 있다. 만약, 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물이 0.0001 중량% 미만으로 첨가시킬 경우, 미백효과를 기대할 수 없고, 1중량%를 초과하여 첨가시킬 경우에는 안정성 또는 제형상의 제조에 어려움이 있다.

본 발명에 있어서,화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물을 유효성분으로 함유시킨 피부 미백용 조성물은 본 발명의 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않은 범위내에서 바람직하게는 주 효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 1종 이상 함유시킬 수 있다. 이와 같은 성분으로는 알부틴, 유용성 감초추출물, 아스코빌글루코사이드, 에칠아스코빌에텔 등을 들 수 있다.

본 발명에 있어서, 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물을 유효성분으로 함유시킨 피부 미백용 조성물은, 음용제, 건강식품 등에 사용할 수 있고, 바람직하게는 피부 미백용 화장료 조성물인 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 피부 미백용 조성물은 일반적인 유화제형 또는 가용화 제형 형태로 제조할 수 있다. 상 기 유화제형은 영양화장수, 크림 에센스 등이고, 가용화 제형은 유연화장수 등일 수 있다.

본 발명에 있어서, 피부 미백용 화장료 조성물은 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱(conceal stick)의 제형으로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 제형 형태로도 제조될 수 있다.

본 발명에 있어서, 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물을 유효성분으로 함유시킨 피부 미백용 조성물은 피부 미백용 화장료 조성물 이외에도 피부 과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유시켜 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 외용제 형태로 제조될 수 있다.

본 발명에 있어서, 피부 미백용 화장료 조성물은 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명에 있어서, 피부 미백용 화장료 조성물의 제형으로는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물은, 보다 바람직하게는 R이 메틸기이고, X는 N^-이며, 3번 탄소위치와 14번 탄소위치 사이는 이중결합을 가지는 화학식 2로 표시되는 디하이드로에보디아민(dehydroevodiamine)것을 특징으로 할 수 있다.

[화학식 2]

본 발명에 있어서, 디하이드로에보디아민은 여러 가지 생물학적 효과가 있는 것으로 보고되어 있는 바, 예를 들면, 혈압강하작용(Yang H. Y. et al., Asian Pac. J. Pharmacol., 3:191, 1988), 심박수강하작용(Yang M. C. et al., Eur. J. Pharmacol., 182:53, 1990), 이온채널억제 활성(Loh S. H. et al., Br. J. Pharmacol., 106:517, 1992), 뇌혈류증진 활성(Haji. A. et al., Nat. Prod., 57:387, 1994) 등에 효과가 있다고 알려져 있으나, 본 물질이 미백에 대한 효과는 본 발명자들에 의해 최초로 규명되었다.

본 발명에 있어서, 디하이드로에보디아민은 멜라닌 생성 억제효과가 매우 우수한 것으로, 디하이드로에보디아민은 공지의 멜라닌 생성저해제인 알부틴(arbutin)보다 저농도에서 멜라닌 생성 억제효과에 대한 높은 효과를 보이는 것으로 나타났으며, 세포 독성이 없어 멜라닌 생성을 억제하는 미백용 화장료 조성물로 효과적으로 사용될 수 있다.

또한, 본 발명은 다른 관점에서, (a) 오수유(Evodia rutaecarpa Benth.) 분쇄물을 물로 열수추출하는 단계; (b) 상기 열수추출액에 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올을 순차적으로 분획하여 부탄올 분획물을 수득하는 단계; (c) 상기 수득된 부탄올 분획물을 농축하는 단계; 및 (d) 상기 농축된 농축액을 크로마토그래피로 정제하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물의 분리방법에 관한 것이다.

본 발명에 있어서, 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물은 세절된 오수유에 물을 가하여 용해 시킨 후 동량의 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올을 순차적으로 분획하여 추출을 3회 실시한다. 이렇게 얻어진 부탄올 분획물을 농축한 다음, 실리카 충진 컬럼을 통해 분리할 수 있다. 여기서 사용된 용출용매는 제한적인 것은 아니나, 바람직하게는 클로로포름과 메탄올을 혼합하여 사용할 수 있는 것으로, 클로로포름:메탄올은 65~90:35~10의 농도 구배로 사용할 수 있다.

이하 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예 는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 인돌알칼로이드계 화합물의 분리 및 정제

1-1: 인돌알칼로이드계 화합물의 분리 및 정제

오수유(Evodia rutaecarpa Benth.) 열매 20g을 잘게 분쇄한 후에 물 400ml을 가하여 80℃ 항온조에서 10시간동안 증류냉각 하였다. 증류냉각된 상기 추출액을 실온으로 냉각시키고, 거름종이로 여과하여 오수유 추출액을 수득하였다. 이렇게 수득된 오수유 추출물 300ml에 동량의 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올을 순서대로 가하고, 분배하여 최종 부탄올 분획물을 얻었다. 이렇게 얻어진 상기 부탄올 분획물을 증발시켜 농축한 다음, 1g의 부탄올 분획물을 실리카 충진컬럼(silica gel 60(0.063-0.2mm)-merk)을 이용하여 크로마토그래피를 실시하여 디하이드로에보디아민 11mg을 수득하였다. 여기서 사용된 용출용매는 85:15 비율의 클로로포름과 메탄올의 혼합액을 사용하였다. 수득된 디하이드로에보디아민은 세포활성 테스트를 위해 DMSO(Dimethyl sulfoxide) 2mg에 50㎕을 녹여 일정한 농도로 희석하여 사용하였다.

1-2: 인돌알칼로이드계 화합물의 구조분석

실시예 1-1에서 수득된 디하이드로에보디아민의 구조를 규명하기 위하여 핵 자기공명(NMR)(VARIAN NEW 300, USA) 및 질량(MS) 분광기(FINNIGAM NAVIGATOR, UK)로 측정하였다.

그 결과, 상기 결정 화합물의 이화학적 특성 및 분광학적 특성은 도 1과 다음과 같다.

MS m/z: 302.5[M+1], 287.4

⁺¹H-NMR(300 MHz, DMSO-d6) δ : 3.326(2H, t, J=6.9Hz, H-6), 4.475(2H, t, J=6.7Hz, H-5), 4.363(3H, s, CH₃), 7.285(1H, J=7.6Hz, H-10), 7.539(1H, brt, J=7.6Hz, H-11), 7.688(1H, d, J=8.6Hz, H-12), 7.809(1H, t, J=7.8, 1.1Hz, H-18), 7.892(1H, d, J=7.5Hz, H-9), 8.139(1H, dt, J=7.8,1.1Hz, H-17), 8.197(1H, d, J=7.8Hz, H-16), 8.360(1H, d, J=7.8Hz, H-19), 12.452(1H, brs, NH)

¹³C-NMR(75.5 MHz, DMSO-d6) δ : 18.524(C-6), 40.827(CH₃), 42.089(C-5), 113.469(C-12), 118.566(C-16), 118.744(C-20), 120.127(C-2), 121.656(C-10), 123.338(C-8), 127.731(C-19), 128.685(C-18), 128.847(C-11), 130.336(C-7), 136.702(C-17), 139.703(C-15), 141.337(C-13), 150.050(C-3), 158.252(C=0)

실험예 1: 인돌알칼로이드계 화합물의 미백효과 측정

1-1: B16F1O 멜라노마 세포배양

B16F10세포는 인하대 바이오신소재연구실에서 분양받아 사용한 것으로, 상기 B16F10멜라노마 세포는 멜라닌을 생산하는 세포주로서 일반적으로 미백물질 효능검증에 사용된다. 상기 세포를 배양하기 위한 배지는 10% FBS, 1% 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)을 사용하였고, 세포는 37℃, 5% CO₂의 인큐베이터에서 배양하였다. B16F1O세포는 100mm 패트리 디쉬가 90% 정도 찼을 때 계대하였다.

1-2: 흡광도 측정을 통한 멜라닌 저해효과 측정

디하이드로에보디아민의 미백효과 측정을 위하여 B16F1O세포에 디하이드로에보디아민 또는 알부틴을 처리하여 생성된 멜라닌 양의 변화를 측정하였다. 6웰 플레이트에 상기 세포를 접종(seeding)하고, 실시예 1에서 정제된 디하이드로에보디아민 또는 일반 시중에서 판매하는 알부틴을 일정한 농도로 처리하여 사흘간 배양한 다음, 트립신-EDTA를 이용하여 세포를 회수하였다. 회수한 상기 세포에 10% DMSO(Dimethylsulfoxide)를 포함하는 1N NaOH를 가해 80℃에서 1 시간동안 반응시켜 멜라닌이 충분히 녹아나오도록 한 다음, ELISA 리더(reader)를 이용하여 파장 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 멜라닌 생성도는 하기 수학식 1을 이용하여 계산하였으며, 실험 결과는 도 4 및 표 1에 나타내었다.

멜라닌 생성도(%)=처리구 흡광도/무처리구 흡광도×100

그 결과, 표 1에서 나타난 바와 같이, 멜라닌 생성억제 물질로 알려진 알부틴의 경우 무처리구와 비교했을 때,740μM의 농도에서 멜라닌의 생성도는 79%였으며, 디하이드로에보디아민은 21μM에서 75%이고, 42μM에서 66%임을 나타내므로 훨씬 낮은 농도에서 멜라닌생성억제 효과를 보이는 것을 알 수 있었다.

시료명	멜라닌 생성도(%)
무처리구	100
알부틴(740μM)	79
디하이드로에보디아민(21μM)	75
디하이드로에보디아민(42μM)	66

실험예 2: 인돌알칼로이드계 화합물의 독성시험

디하이드로에보디아민을 미백 화장료 조성물로 사용할 수 있는지 여부를 판단하기 위하여, 세포 독성 실험을 실시하였다. 96웰 플레이트에 B16F10세포를 접종하고 실시예 1에서 정제된 디하이드로에보디아민을 각각 21μM, 42μM을 처리하여 3일 동안 37℃, 10% CO₂의 인큐베이터에서 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고, MTT(3-(4,5-dimethythiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliu, bromide) 용액 100㎕을 첨가하여 37℃에서 4시간 반응시켰다. 반응이 끝난 다음, 용액을 제거하고, DMSO 100㎕를 첨가하여 염색된 세포를 녹인 후에 ELISA 리더(reader)를 이용하여 파장 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 생존율은 하기 수학식 2를 이용하여 계산하였다.

세포생존율(%)=(처리구 흡광도/무처리구 흡광도)×100

그 결과, 도 2와 표 2에 나타난 바와 같이, 디하이드로에보디아민을 처리하지 않은 무처리구와 비교하였을 때, 21μM에서 109%, 42μM에서 95%의 생존율을 나타냄으로 독성이 없으면서 높은 멜라닌 생성억제작용을 나타냄을 알 수 있었다.

시료명	세포 생존도(%)
무처리구	100
알부틴(740μM)	99
디하이드로에보디아민(21μM)	109
디하이드로에보디아민(42μM)	95

제제예 1: 인돌알칼로이드계 화합물을 유효성분으로 함유하는 미백화장료의 제조

1-1: 유연화장수의 제조

실시예 1에서 수득된 디하이드로에보디아민을 유효성분으로 함유하는 유연 화장수의 제제예는 다음 표 3과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량부)
디하이드로에보디아민	0.002
1,3-부틸렌글리콜	1.00
디소듐이디티에이	0.05
알란토인	0.10
디포타슘글리시리제이트	0.05
시트릭애씨드	0.01
소듐시트레이트	0.02
글리세레스-26	1.00
알부틴	2.00
하이드로제네이티드캐스터오일	1.00
에탄올	30.00
보존제	미량
착색제	미량
착향제	미량
정제수	잔량

1-2: 영양크림의 제조

실시예 1에서 정제된 디하이드로에보디아민을 함유한 영양크림의 제제예는 다음 표 4의 조성과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량부)
디하이드로에보디아민	0.002
1,3-부틸렌 글리콜	7.0
글리세린	1.0
D-판테놀	0.1
식물 추출물	3.2
마그네슘알루미늄실리케이트	0.3
PEG-40 스테아레이트	1.2
스테아릭애씨드	2.0
폴리소르베이트 60	1.5
친유형글리세릴스테아레이트	2.0
소르비탄세스퀴올리에이트	1.5
세테아릴알코올	3.0
미네랄오일	4.0
스쿠알란	3.8
카르릴릭/카프릭트리글리세라이드	2.8
식물성 오일	1.8
디메치콘	0.4
디포타슘글리시리제이트	미량
알란토인	미량
소듐 히아루로네이트	미량
토코페릴아세테이트	적량
트리에탄올아민	적량
보존제	적량
착향제	적량
정제수	잔량

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

도 1은 본 발명에 따른 디하이드로에보디아민의 MS 스펙트럼이다.

도 2는 본 발명에 따른 디하이드로에보디아민의 멜라닌 생성도 및 세포 생존율을 나타내는 그래프이다.

Claims

화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물:

[화학식 1]

상기 화학식에서, 상기 R은 수소원자, 알데히드기, 카르복실기, 치환 또는 비치환된 포화 또는 불포화 탄소수 1~13을 가지는 알킬기이고, R₁은 수소원자 또는 히드록실기이며, X는 NH 또는 N^- 이고, 3번 탄소위치와 14번 탄소위치 사이는 단일 또는 이중결합을 의미함.
제1항에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물은 R이 메틸기(methyl group)이고, X는 N^-이며, 3번 탄소위치와 14번 탄소위치 사이는 이중결합인 디하이드로에보디아민(dehydroevodiamine)것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물의 함량은 0.0001~1중량%인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 피부 미백용 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물은 오수유(Evodia rutaecarpa Benth.)에서 분리된 것임을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
다음 단계를 포함하는, 상기 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물의 분리방법:

(a) 오수유(Evodia rutaecarpa Benth.) 분쇄물을 물로 열수추출하는 단계;

(b) 상기 열수추출액에 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올을 순차적으로 분획하여 부탄올 분획물을 수득하는 단계;

(c) 상기 수득된 부탄올 분획물을 농축하는 단계; 및

(d) 상기 농축된 농축액을 크로마토그래피로 정제하는 단계.
제6항에 있어서, 상기 (a) 단계의 오수유 분쇄물의 함량은 물 100중량부에 대하여, 5~10중량부인 것을 특징으로 하는 방법.
제6항에 있어서, 상기 (a) 단계의 열수추출은 60~100℃에서 5~15시간 동안 수행하는 것을 특징으로 하는 방법.
제6항에 있어서, 상기 (c) 단계의 크로마토그래피는 실리카겔 충진 컬럼 크로마토그래피인 것을 특징으로 하는 방법.
제6항에 있어서, 상기 (c) 단계의 크로마토그래피는 클로로포름:메탄올= 65~90:35~10의 농도구배를 이용하여 용출시키는 것을 특징으로 하는 방법.