KR20100023910A

KR20100023910A - 신규한 로열 젤리 분획물과 그의 제조 방법 및 용도

Info

Publication number: KR20100023910A
Application number: KR1020097027169A
Authority: KR
Inventors: 마사키 미야케; 미츠키요 후지이; 간소 이와키
Original assignee: 가부시끼가이샤 하야시바라 세이부쓰 가가꾸 겐꾸조
Priority date: 2007-06-04
Filing date: 2008-06-02
Publication date: 2010-03-04
Also published as: WO2008149838A1; JP5479891B2; JPWO2008149838A1

Abstract

로열 젤리의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고 알레르기 증상을 일으킬 염려가 적은 로열 젤리 분획물을 제공하는 것을 제1 과제로 하고, 그의 제조 방법의 확립을 제2 과제로 하며, 이 분획물을 배합해서 이루어지는 음식물, 사료, 모이, 애완 동물 먹이 또는 화장품을 비롯한 피부 외용제 등의 각종 조성물에서의 용도를 제공하는 것을 제3 과제로 한다. 10-히드록시―2-데센산 1 질량부에 대하여 로열 젤리 유래의 단백질을 0.05 질량부 미만의 비율로 함유하고, 로열 젤리의 유용한 생리 활성을 가지며, 10-히드록시―2-데센산을 45㎍ 함유하는 양의 로열 젤리 분획물로 면역한 마우스(mouse) 혈청을, 래트(rat)를 사용한 수신 피부 아나필락시(anaphylaxis)에 의해 판정하였을 때 상기 로열 젤리 분획물에 대한 알레르겐성이 검출되지 않는 로열 젤리 분획물과 그의 제조 방법 및 용도에 의해 해결한다.

Description

신규한 로열 젤리 분획물과 그의 제조 방법 및 용도{NOVEL FRACTIONATION PRODUCT OF ROYAL JELLY, METHOD FOR PRODUCTION OF THE SAME, AND USE OF THE SAME}

본 발명은, 로열 젤리가 갖는 생리 활성, 예를 들면, 콜라겐 산생(産生) 증강 작용, IL-4 산생 억제 작용이나 정소(精巢) 기능 활성화 작용 등의 로열 젤리의 유용한 생리 활성을 갖고 생(生) 로열 젤리 중의 알레르겐(allergen)성을 저감시킨 신규한 로열 젤리 분획물과 그의 제조 방법 및 용도에 관한 것으로, 상세하게는, 10-히드록시―2-데센산(이하, 본 명세서에서는 간단히 「히드록시데센산」이라고 약기할 경우가 있다) 1 질량부에 대하여 로열 젤리 유래의 단백질을 0.05 질량부 미만의 비율로 함유하는 로열 젤리 분획물로서, 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용, IL-4 산생 억제 작용, 정소 기능 활성화 작용 등의 유용한 생리 활성을 갖고, 또한, 히드록시데센산을 45㎍ 함유하는 양의 로열 젤리 분획물로 면역시킨 마우스(mouse) 혈청을, 래트(rat)를 사용한 수동 피부 아나필락시(passive cutaneous anaphylaxis: 이하, 「PCA」라고 한다)에 의해 판정하였을 때에 로열 젤리 분획물에 대한 알레르겐성이 검출되지 않는 로열 젤리 분획물과 그의 제조 방법 및 용도에 관한 것이다.

로열 젤리란 일벌의 외분비선으로부터 분비되어 꿀벌 벌집의 왕 자리(여왕벌 방)에 축적된 유백색 분비물이며, 여왕벌이 될 유충에게 먹이로 제공되는 젤리 상태의 물질이다. 그 화학적 조성은 산지나 계절 등에 의해 다소 차이를 갖지만, 수분 65 내지 75 질량％, 단백질 15 내지 20 질량％, 탄수화물 10 내지 15 질량％, 지방질 1.7 내지 6 질량％, 회분 0.7 내지 2 질량％(이하, 본 명세서에서는 특별히 명시되지 않는 한, 질량％를 간단히 「％」로 약기한다)로 되어 있으며, 히드록시데센산을 비롯한 유기산류, 각종 비타민류, 각종 미네랄류도 함유한다.

로열 젤리는 예로부터 인간의 건강 식품으로서 널리 이용되고 있으며, 최근에는 인체에 대한 유용한 생리 활성, 예를 들면 항균 작용, 면역 증강 작용, 항종양 작용, 항염증 작용, 수명 연장 작용 등을 갖는다는 보고가 수많이 이루어져 있다. 그러나, 로열 젤리에는 알레르겐성을 나타내는 물질이 포함되어 있기 때문에, 개인차는 있지만 섭취에 의해 알레르기 증상이 일어나는 경우가 있으며, 경우에 따라서는 심각한 아나필락시 쇼크(anaphylaxis shock)를 일으키기도 한다. 이러한 로열 젤리의 문제점을 해소할 목적으로, 일본국 특개 2002-112715호 공보에는 로열 젤리에 당 분해 효소 처리 및 단백질 분해 효소 처리를 시행해서 저(低) 알레르겐화하는 방법이 개시되어 있다. 또한, 국제 공개WO2004/21803호 명세서에는, 수용성 단백질 양이 총 단백질 양에 대하여 50％ 미만으로 저감된 로열 젤리가 개시되어 있다. 그러나, 이러한 로열 젤리에는 알레르겐성을 나타내는 수용성 단백질이 잔존 하거나, 당 분해 효소 처리 및 단백질 분해 효소 처리를 시행한 로열 젤리에는 알레르겐성 물질의 분해가 불충분하거나 첨가한 효소 자체가 새로운 알레르겐성을 나타내는 물질로 될 가능성도 있어, 건강 유지를 목적으로 섭취하는 로열 젤리로서 바람직하지 못하다는 문제점이 여전히 있었다. 또한, 일본국 특개평 4-311357호 공보 등에 기재한 바와 같이, 로열 젤리 추출물중 히드록시데센산 양을 증가시키기 위해서 에탄올 등의 소수성 용매를 함유하는 용매로 추출하는 경우에는 단백질을 제거하였더라도 조성물에 따라 그 배합량이 제한되는 등의 문제가 있었다.

본 발명은 이와 같은 상황을 감안하여 이루어진 것으로, 로열 젤리의 유용한 생리 활성이 유지되고 알레르겐성이 저감되어 알레르기 증상을 일으킬 염려가 적은 로열 젤리 분획물을 제공하는 것을 제1 과제로 하고, 그의 제조 방법을 확립하는 것을 제2 과제로 하며, 이 분획물을 배합해서 이루어지는 음식물, 사료, 모이, 애완 동물 먹이 또는 화장품을 비롯한 피부 외용제 등의 각종 조성물에서의 용도를 제공하는 것을 제3 과제로 한다.

본 발명자들은, 상기의 과제를 해결하기 위해서, 알레르겐성이 저감되고 로열 젤리 본래의 유용한 생리 활성이 유지되어 알레르기 증상을 일으킬 염려가 적은 고품질의 로열 젤리 분획물과 그의 제조 방법에 대해서 예의 연구를 거듭해 왔다. 그 결과, 꿀벌의 여왕 자리에 축적된 것을 채취한 로열 젤리(이하, 본 명세서에서는 간단히 「생 로열 젤리」라고 할 경우가 있다)를 원료로 해서, 그의 pH를 조사한 바, 보통, pH 3.5 내지 4.5의 범위에 있음이 판명되었다. 한편, 생 로열 젤리에 포함된 히드록시데센산은 pH를 변화시킴으로써 용해도가 변화되고, pH를 높임으로써 용해도가 향상하는 것과 아울러, 고분자 획분을 저감하기 위한 정제 공정에서 pH를 높여 처리함으로써 히드록시데센산의 수율을 향상시킬 수 있음을 발견하였다. 구체적으로, 생 로열 젤리에 물을 더해서 희석하고, 바람직하게는, 추가로 알칼리제를 더해서 pH를 5.0 이상, 바람직하게는 5.5 이상, 더욱 바람직하게는 5.5 내지 12.0, 더욱 바람직하게는 6.0 내지 9.5, 특히 바람직하게는 6.0 내지 8.5로 조정한 후, 한외(限外) 여과 막에 의한 여과나 겔 여과 등의 방법에 의해 고분자 획분을 제거하여, 바람직하게는 분자량 30,000달톤 이상의 획분, 더 바람직하게는 분자량 10,000달톤 이상의 획분, 특히 바람직하게는 분자량 6,000달톤 이상의 획분을 제거하여 얻어지는, 히드록시데센산 1 질량부에 대하여 로열 젤리 유래의 단백질이 0.05 질량부 미만의 비율로 함유된 로열 젤리 분획물(이하, 간단히 「로열 젤리 분획물」이라고 한다)이, 생 로열 젤리 혹은 국제 공개 WO2004/21803호 명세서에 개시된 수용성 단백질이 총 단백질 양에 대하여 50％ 이하로 저감된 기존의 정제 로열 젤리(이하, 본 명세서에서는 간단히 「기존 정제 로열 젤리」라고 할 경우가 있다) 등에 비해 알레르겐성이 현저하게 감소되는 것을 발견하였다. 또한, 상기 로열 젤리 분획물은, 생 로열 젤리가 원래 갖는 유용한 생리 활성을 유지하고, 또한, 음료 등에 배합해도 탁해지거나 침전이 발생하기 어렵다는 효과도 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다. 즉, 본 발명은, 로열 젤리 분획물 중의 히드록시데센산 1 질량부에 대하여, 로열 젤리 유래의 단백질을 0.05 질량부 미만의 비율로 함유하는 로열 젤리 분획물이며, 로열 젤리가 원래 갖는 유용한 생리 활성을 갖고 알레르겐성이 저감된 로열 젤리 분획물, 그 외에, 이 분획물을 배합해서 이루어지는 음식물, 사료, 모이, 애완 동물 먹이, 화장품, 의약품, 의약 부외품, 또한 잡화 조성물 등에서의 용도를 제공함으로써 상기의 과제를 해결하는 것이다.

본 발명의 로열 젤리 분획물은 로열 젤리 본래의 유용한 생리 작용이 유지되고 생 로열 젤리나 기존의 정제 로열 젤리에 비해 알레르겐성이 감소되므로, 상기 로열 젤리 분획물 및 이것을 함유하는 음식물, 사료, 모이, 애완 동물 먹이, 화장품, 의약품, 의약 부외품 또는 잡화 등의 조성물은 생 로열 젤리와 마찬가지의 건강 유지 증진 효과나 미용 효과를 가지며, 또한, 생 로열 젤리나 기존의 정제 로열 젤리에 비교해서 알레르기 증상을 발생시키는 위험도가 감소되므로 안심하게 사용할 수 있다. 또한, 이 로열 젤리 분획물은 음료 등의 액상 조성물에 배합해도 탁해지거나 침전되는 현상이 생 로열 젤리에 비해 발생하기 어렵다는 특징을 갖는다.

본 발명의 로열 젤리 분획물을 조제하기 위한 원료로서 이용하는 생 로열 젤리는 분비하는 벌의 종류나 그 산지 및 공급 형태(생 또는 냉동)에 특별히 한정되지 않는다. 분비하는 벌의 종(種)으로는 양봉꿀벌(Apis mellifera), 동양종꿀벌(Apis cerana), 자이언트꿀벌(Apis dorsata), 최소종꿀벌(Apis florea) 등을 들 수 있다. 산지로는 일본, 남미, 북미, 호주, 중국을 비롯한 아시아 지역, 유럽 등을 들 수 있다. 이들의 로열 젤리는 모두 본 발명의 로열 젤리 분획물의 원료로 유 리하게 이용할 수 있으며, 가능한 한 신선하거나 저온 보존된 생 로열 젤리를 이용하는 것이 더욱 바람직하다.

본 발명의 로열 젤리 분획물의 조제에는 원료가 되는 생 로열 젤리를 그대로 사용해도 좋지만, 한외 막 여과나 겔 여과를 실행할 경우에는 히드록시데센산의 용해성이나 여과 효율 등의 측면에서 미리 희석해서 사용하는 것이 바람직하다. 희석 배율에 대해서는 본 발명의 기대 효과를 달성할 수 있는 배율이면 제한되지 않고, 보통, 등량 이상, 바람직하게는 2배 이상, 특히 바람직하게는 4배량 이상의 물로 희석하면 좋다. 희석에 사용되는 물은 특별히 한정되지 않고, 필요에 따라서, 예를 들면, 초순수(超純水), 이온 교환수, 증류수, 자화수(磁化水), 클러스터(cluster)수, 미네랄워터, 수돗물, 해양 심층수를 모두 유리하게 이용할 수 있다. 이들 물에 생 로열 젤리를 현탁, 용해한 수용액은 그대로, 후술하는 고분자 획분을 저감하기 위한 막 여과 등의 정제 공정에 제공할 수 있다. 또한, 생 로열 젤리에 알칼리제 등을 첨가하여 pH를 보통 5.0 이상, 바람직하게는 5.5 이상, 더욱 바람직하게는 5.5 내지 12.0, 더욱 바람직하게는 6.0 내지 9.5, 특히 바람직하게는 6.0 내지 8.5의 범위로 조정함으로써 로열 젤리 분획물 중의 히드록시데센산의 용해성을 향상시켜서 정제하는 것도 유리하게 실시할 수 있다. 이 pH는 후술하는 막 여과 공정 후에도 거의 동일하게 유지되므로, pH가 5.0보다도 낮을 경우에는, 예를 들면, 막 여과시의 히드록시데센산의 회수율이 저하하거나, 냉수로 희석하였을 때에 탁해지거나 침전이 발생하는 경우가 있다. 또한, pH 6.0 이상의 경우에는 히드록시데센산의 회수율은 안정화되지만, pH의 상승에 비례하여 로열 젤리 분획물의 착색도(갈색도) 가 상승하기 때문에, 착색을 기대하지 않는 백색계나 무색계의 조성물 제조에 사용할 경우 혹은 여과 막의 내성 등을 감안하면 pH를 12.0 이하로 조정하는 것이 바람직하고, 9.5 이하로 조정하는 것이 더욱 바람직하며, 8.5 이하가 특히 바람직하다. 또한, 본 발명의 로열 젤리 분획물을 조제할 때에 물에 의한 희석과 알칼리 처리는 어느 쪽을 먼저 실행해도 좋으며, 보통, 조작성 및 pH 유지성 측면에서 희석을 먼저 실행하는 쪽이 바람직하다. 필요에 따라 알칼리수로 희석하는 것도 마음대로이다. 또한, 이와는 달리, 필요에 따라, 정제 공정동안 혹은 정제 후에 pH를 조정해도 좋다.

생 로열 젤리의 pH의 조정에 사용하는 알칼리제(pH 조정제)는 음료, 식품이나 화장품 등, 상기 분획물의 용도 분야에서 사용되고 조성물 제조에 사용 가능한 성분이라면 특별히 제한되지 않는다. 또한, 용액의 pH를 안정적으로 유지할 목적으로 상기 조성물이 사용되는 분야에서 사용 가능한 완충제를 사용하는 것도 마음대로이다. 구체적으로, 예를 들면, 알칼리제로는 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화 칼슘 등을 들 수 있고, 화장품의 경우에는 상기에 더해서 에탄올 아민류 등을 사용할 수도 있다. 또한, 완충제로서, 예를 들면, 인산 완충액, 아세트산 완충액 등을 사용하는 것도 마음대로이다. 또한, 이들의 알칼리제나 완충제의 첨가는 한번에 실행해도 좋고, 수회에 나누어 실행해도 좋으며, 희석과 번갈아 실행해도 좋다.

이들의 pH 조정에 사용하는 알칼리제나 완충제의 첨가량에 대해서는, 본 발명의 로열 젤리 분획물에서 기대 pH를 유지할 수 있는 양이면 특별히 제한되지 않지만, 음료, 식품으로서 이용할 때에 미각 질의 저하나, 조성물에 배합하였을 때에 그 물성에 영향을 초래하지 않는 범위에서 사용하는 것이 바람직하다. 구체적으로, 본 발명의 로열 젤리 분획물에 포함되는 히드록시데센산이 0.05mg/mL가 되도록 탈 이온수로 희석하거나 또는 이온수에 용해해서 pH를 측정하였을 때, 그 pH가 5.0 이상, 바람직하게는 5.5 이상, 더욱 바람직하게는 5.5 내지 12.0, 더욱 바람직하게는 6.0 내지 9.5, 특히 바람직하게는 6.0 내지 8.5로 조정할 수 있는 첨가량이 바람직하다. 이러한 조건으로 pH를 조정한 생 로열 젤리로부터 조제되는 로열 젤리 분획물은 알레르겐성이 감소되는 동시에, pH를 조정하지 않은 경우에 비해 로열 젤리의 유용한 생리 활성에 관여하는 성분인 히드록시데센산의 수 용해도가 향상하므로, 이 분획물을 25℃의 탈 이온수에 히드록시데센산 농도가 5mg/mL로 되도록 용해해서 4℃로 냉각해도, 생 로열 젤리나 정제 로열 젤리의 경우에 발생하는 탁함이나 침전이 발생하기 어렵고, 용액의 청정성도 향상되는 특징을 갖는다.

본 발명의 로열 젤리 분획물을 조제하기 위한 정제 방법은 로열 젤리가 원래 갖는 유용한 생리 활성(이하, 간단히 「유용한 생리 활성」이라고 할 경우가 있다)을 실질적으로 잃지 않고 알레르겐성을 제거할 수 있는 방법이라면 좋으며, 구체적으로는, 단백질 양을 기대 양 이하로 저감할 수 있는 것이라면 좋다. 구체적인 정제 방법으로서는, 예를 들면, 물 희석, 원심 분리, 막 여과, 여과, 농축, 분별 침전, 염석(鹽析), 투석, 이온 교환 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피, 흡착 크로마토그래피, 등전점 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 겔 전기영동, 등전점 전기영동 등 단백질 함유 물질을 정제하기 위해서 당업계에서 범용되는 방법의 하나 또는 복수개를 적당히 이용 할 수 있다. 특히, 한외 여과 막에 의한 분획은 고분자 획분을 거의 완전히 제거할 수 있을 뿐만 아니라, 유용한 생리 활성을 갖는 저분자 획분의 손실(loss)이 거의 없기 때문에 특히 바람직하다. 또한, 본 발명에서 말하는 로열 젤리의 유용한 생리 활성이라고 함은, 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용, IL-4 산생 억제 작용, 정소 기능 활성화 작용 등으로 대표되는 건강의 유지·증진이나 아름다운 피부, 알레르기나 그것에 수반하는 염증 억제, 면역 증강 작용, 세포의 부활 작용 등에 관련된 인간이나 동물에서의 유용한 생리 활성 모두를 의미하고, 상기 이외에도, 예를 들면, TNF-α 산생 억제 작용, IgE 산생 억제 작용, 항 아토피 작용, 접촉 과민성 억제 작용, 수명 연장 작용, 자양·강장 작용, 작용 등을 예시할 수 있으며, 본 발명의 로열 젤리 분획물은 이들의 유용한 생리 활성의 1종 이상을 구비하고 있으면 좋고, 2종 이상이 바람직하고, 3종 이상이 특히 바람직하다.

상기 생 로열 젤리의 물 희석액 혹은 그 pH 조정을 실행한 물 희석액의 고분자 획분의 제거에 이용하기 위해서 매우 적합한 한외 여과 막의 기공 크기는, 막 분리에 의해 더욱 고분자 획분, 바람직하게는 분자량 30,000달톤 이상의 획분, 더욱 바람직하게는 분자량 10,000달톤 이상의 획분, 특히 바람직하게는 분자량 6,000달톤 이상의 획분을 효과적으로 제거할 수 있는 것이라면 특별히 제한되지 않고, 예를 들면, 분획 분자량이 1,000 내지 30,000달톤, 바람직하게 2,000 내지 10,000달톤, 또한 바람직하게는 분획 분자량이 2,000 내지 6,000달톤으로부터 선택되는 한외 여과 막을 사용하는 것이 바람직하다. 한외 여과 막의 분획 분자량이 2,000달톤 미만에서는 유용한 저분자 물질까지 제거될 염려가 있으며, 분획 분자량이 30,000달톤보다도 큰 막에서는 여과액에, 알레르겐성을 갖는 단백질의 혼입율이 상승해서 알레르겐성이 높아지는 경우가 있다. 이 고분자 획분의 제거는 겔 여과 크로마토그래피 등에 의해서도 가능하며, 이러한 방법을 본 발명의 로열 젤리 분획물을 조제하기 위한 고분자 획분의 제거에 이용해도 좋지만, 작업의 효율이나 산업상 이용가능성을 고려하면 한외 여과 막을 이용하는 것이 바람직하다.

상기 한외 여과 등에 의해 얻어진, 고분자를 제거한 획분을 그대로 본 발명의 로열 젤리 분획물로 사용해도 좋다. 보통, 한외 여과 또는 겔 여과에 의해 얻어진 저분자 물질은 원료 중의 본래 농도보다 상당히 희석될 경우가 많고, 그러한 경우에는 필요에 따라 농축해서 사용할 수도 있다. 농축은 필요에 따라서 가열 농축, 감압 농축(동결 건조를 포함한다) 등의 농축 방법이 적절하게 채용된다. 이들 중에서 비교적 저온으로 실행되는 감압 농축이 로열 젤리에 함유되는 유용한 생리 활성에 관여하는 성분의 열 변성 등의 염려가 적어서 바람직하다.

이상의 방법으로 얻어지는 본 발명의 로열 젤리 분획물은 생 로열 젤리에 함유된 히드록시데센산을 실질적으로 잃지 않고 유지하고 있으며, 히드록시데센산 1 질량부에 대하여 로열 젤리 유래의 단백질을 0.05 질량부 미만의 비율로 함유하는 로열 젤리 분획물로서, 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용이나 IL-4 산생 억제 작용 등의 생리 활성을 가지며, 또한, 히드록시데센산을 45㎍ 함유하는 양의 이 로열 젤리 분획물을 이용해서 마우스를 면역한 마우스 혈청을, 래트를 사용한 수신 피부 아나필락시법으로 판정하였을 때에 상기 로열 젤리 분획물에 대한 알레르겐성이 검출되지 않는다.

본 발명의 로열 젤리 분획물은 알레르겐성의 원인이 되는 고분자 물질인 단백질을 저감시킨 것이며, 그 이화학적 지표로서 히드록시데센산과 단백질의 질량비를 들 수 있고, 본 발명의 로열 젤리 분획물은 이 비가 1:0.05보다 단백질 양이 적은 것이 바람직하고, 1:0.02 혹은 이보다 단백질 양이 적은 것이 더욱 바람직하다. 이 히드록시데센산과 단백질의 질량비는 생 로열 젤리의 경우, 보통, 1:2 내지 10의 범위에 있으며, 국제 공개 W02004/21803호 명세서에 기재한 기존 정제 로열 젤리에서는 1:0.3 내지 1의 범위에 있으므로, 본 발명의 로열 젤리 분획물은 더욱 정제된 것으로서, 그것과 명료하게 구별될 수 있다. 또한, 히드록시데센산과 단백질의 질량비가 1:0.05 이상이 되어서 단백질의 비율이 증가한 경우에는, 그 섭취량에도 따르지만, 이 분획물 혹은 그것을 함유하는 조성물을 로열 젤리로서 보통 섭취하는 정도와 동일한 양 정도를 경구 섭취하였을 경우에 알레르기를 일으킬 경우가 있다.

본 발명의 로열 젤리 분획물에 함유되는 히드록시데센산의 양은, 이 로열 젤리 분획물을 그대로 섭취할 경우가 있다는 점과 히드록시데센산이 유용한 생리 활성을 갖는 점을 감안하면 보통 1mg/g 이상이 바람직하고, 5mg/g 이상이 더욱 바람직하며, 20mg/g 이상이 특히 바람직하다. 히드록시데센산 양이 1mg/g보다 적을 경우에는, 히드록시데센산을 로열 젤리로서 보통 섭취하는 정도와 동일한 양 정도를 경구 섭취하기 위한 섭취량이 지나치게 많아져서 이용에 지장을 초래할 경우가 있다.

본 발명에 있어서의 단백질의 정량은 브래드포드(Bradford)법에 의해 인간 또는 소 혈청 알부민을 표준 단백질로서 이용해서 측정하고, 질소량의 측정은 알카리성 페리옥소 이황산 칼륨 분해-자외선 흡광광도법으로 측정한다. 또한, 로열 젤리가 갖는 유용한 생리 활성, 히드록시데센산 양 및 알레르겐성은 이후 실험예에서 나타내는 측정법에 의해 측정·확인할 수 있다. 또한, 본 명세서에서 생 로열 젤리 환산이라고 할 경우는, 해당하는 기존의 정제 로열 젤리 및 로열 젤리 분획물의 양을 그 제조에 필요로 한 시발 원료의 생 로열 젤리의 질량으로 환산하는 것을 의미하고, 그들의 양이, 생 로열 젤리(수분을 함유하는 총 질량) 1g을 시발 원료로서 이용하여 이것을 정제해서 조제한 것이라면 생 로열 젤리 환산으로 1g이라고 표기한다.

본 발명의 로열 젤리 분획물에는 고분자 단백질이 저감되어 있으므로 고형분 중의 질소량이 감소하고, 히드록시데센산과 질소의 질량 비율이 1:0.3 혹은 이보다도 질소의 함유 비율이 낮아지므로, 히드록시데센산과 질소의 질량비가 거의 1:1의 생 로열 젤리나 그것을 효소 처리한 로열 젤리, 그 질량비가 1:0.5 이상이 되는 기존 정제 로열 젤리도 용이하게 구별할 수 있다. 또한, 본 발명의 로열 젤리 분획물은 히드록시데센산을 30㎍ 함유하는 양의 이 로열 젤리 분획물을 SDS-PAGE에 제공하였을 때 쿠마시 브릴리언트 블루(Coomassie Brilliant Blue)(이하, 「CBB」라고 약기할 경우가 있다) 염색에 의한 육안 관찰시에 단백질 밴드(band)가 검출되지 않는다.

상기와 같은 특장(特長)을 갖는 본 발명의 로열 젤리 분획물은, 로열 젤리가 원래 가진 콜라겐 산생 증강 작용, 항염증 작용, 정소 기능 활성화 작용으로 대표 되는 세포 부활 작용, 수명 연장 작용 등의 유용한 생리 활성을 실질적으로 유지하고, 미백 작용도 증강되어 있으므로, 건강의 유지, 증진, 미백, 미용, 아름다운 피부, 주름 방지, 노화 방지 등을 목적으로 한 건강 보조 식품을 비롯한 음료, 식품이나, 화장품, 의약 부외품, 의약품, 피부 외용 잡화 등의 피부 외용제로서 유리하게 이용할 수 있다.

또한, 본 발명의 로열 젤리 분획물은 그 자체로 유용한 한편, 다른 성분에 배합해서 이루어지는 조성물 형태로도 유리하게 이용할 수 있다. 본 발명은 이와 같은 조성물을 제공하는 것이기도 하다. 본 발명에 의한 조성물은, 보통, 인간을 포함하는 포유류에의 경구적 또는 경피적 적용 내지는 피부 외용이 허용되는 성분 1종 또는 2종 이상을 이 로열 젤리 분획물과 함께 포함해서 이루어지고, 예를 들면, 식품 분야, 음료 분야, 사료·모이·애완 동물 먹이 분야, 화장품 분야를 비롯한 피부 외용제 분야, 의약품 분야 등에서 유리하게 이용할 수 있다. 본 발명에서 이용하는, 인간을 포함하는 포유류에의 경구적 또는 경피적 적용이 허용되는 성분으로는 본 발명의 조성물의 각 이용 분야에서 보통 사용되는, 예를 들면, 물, 알코올, 전분질, 단백질, 아미노산, 섬유질, 당질, 지방질, 지방산, 비타민, 미네랄, 착향료, 착색료, 감미료, 조미료, 향신료, 방부제, 유화제, 계면 활성제, 생리 활성 물질 등을 들 수 있다. 이상과 같은 성분을 포함하는 본 발명의 조성물의 형태에는 특별한 제한이 없으며, 분말, 과립(顆粒), 정제(錠劑), 페이스트, 유액(乳液), 크림, 용액 등의 원하는 형태로 제공된다.

본 발명의 로열 젤리 분획물을 배합해서 이루어지는 조성물은 로열 젤리 분 획물과 사이클로 덱스트린류, 무수 당질 혹은 덱스트린을 배합하여 건조시킴으로써 고체 형상의 형태로 만들 수도 있고, 또한, 분말, 과립, 정제 등으로 만들 수도 있다. 사이클로 덱스트린류로는 α-사이클로 덱스트린, β-사이클로 덱스트린, γ-사이클로 덱스트린 등을 들 수 있다. 또한, 무수 당질로는 예를 들면, 무수 α, α-트레할로오스, 무수 말토오스, 무수 환상(環狀) 4당 등을 들 수 있다. 특히, 무수 α, α-트레할로오스는 일본국 특허 제3168550호에 개시되어 있는 방법으로 시판되는 트레할로오스 2 함수 결정(예를 들면, 주식회사 하야시바라(林原) 상사 판매, 상품명 「Treha」)으로부터 용이하게 조제할 수 있고, 상기 목적으로 이용할 수 있으므로 바람직하다. 또한, 무수 말토오스로는 시판되는 무수 결정 말토오스(예를 들면, 주식회사 하야시바라 상사 판매, 상품명 「파인토스」)를 유리하게 이용할 수 있다. 또한, 국제 공개 W002/10361호 명세서 등에서 개시한 사이클로{→6)-α-D-글루코피라노실―(1→3)-α-D-글루코피라노실―(1→6)-α-D-글루코피라노실―(1-3)-α-D-글루코피라노실―(1→}의 구조를 갖는 환상 4당(시클로니게로실니겔로오스: Cyclonigerosylnigelose), 일본국 특개평 2005-95148호 공보 등에 기재된 사이클로{→6)-α-D-글루코피라노실―(1→4)-α-D-글루코피라노실―(1→6)-α-D-글루코피라노실―(1-4)-α-D-글루코피라노실―(1→}의 구조를 갖는 환상 4당(시클로말토실말토오스: Cyclomaltosylmaltose), 일본국 특개 2005-95148호 공보에 개시된 사이클로{→6)-[α-D-글루코피라노실―(1→4)]n-α-D-글루코피라노실―(1→}(n은 4 또는 5를 의미한다)의 구조를 갖는 환상 5당이나 환상 6당 등의 무수 환상 당질을 이용하는 것도 마음대로이다. 그 중에서도, 비환원성 당질이나 덱스트린은 로열 젤 리 유래의 성분과 갈변 반응 등을 일으키기 어려우므로 바람직하고, 특히, α, α-트레할로오스, 환상 4당류 및 이들의 당질 유도체는 로열 젤리 분획 조성물의 생리 활성을 증강하는 작용도 가지므로, 그 점에서도 병용이 바람직하다. 또한, 덱스트린으로는 비교적 저 DE(덱스트로오스 당량(dextrose equivalent))의 것이 로열 젤리 분획물의 갈변을 억제하는 작용이 강하기 때문에 바람직하고, 덱스트린 자체의 수 용해성도 고려하면, 보통, DE가 6.1 내지 16.7 정도의 것이 사용되며, 7.1 내지 11.5의 것이 바람직하다. 특히, 동일 출원인이 국제 특허 출원 번호 PCT/JP2008/57879호 팜플릿에서 개시한, 전분 부분 분해물에 바실러스 서큘란스(Bacillus circulans) PP710(독립 행정 법인 산업기술 연구소 미생물 기탁 센터, 기탁 번호 FERM BP-10771) 등의 산생하는 α-글루코실 전이 효소류를 작용시켜서 α-1, 6 결합이나 α-1, 3 결합 등의 α-1, 4 결합 이외의 결합으로부터 이루어지는 분기(分岐) 구조의 점유 비율을 증가시킨 다분기 글루칸류가 특히 바람직하다. 구체적으로는, 글루코오스를 구성 당으로 하는 α-글루칸으로서, 메틸화 분석에 있어서, 2, 3, 6-트리메틸―1, 4, 5-트리아세틸 글루시톨과 2, 3, 4-트리메틸―1, 5, 6-트리아세틸 글루시톨의 비(比)가 1:0.6 내지 1:4의 범위에 있고, 2, 3, 6-트리메틸―1, 4, 5-트리아세틸 글루시톨과 2, 3, 4-트리메틸―1, 5, 6-트리아세틸 글루시톨의 합계가 부분 메틸화 글루시톨 아세테이트의 60％ 이상을 차지하고, 2, 4, 6-트리메틸―1, 3, 5-트리아세틸 글루시톨이 부분 메틸화 글루시톨 아세테이트의 0.5％ 이상 10％ 미만으로, 또한, 2, 4-디메틸―1, 3, 5, 6-테트라아세틸 글루시톨이 부분 메틸화 글루시톨 아세테이트의 0.5％ 이상의 구조를 갖는 분기α-글루칸이 식 물 섬유 성분도 풍부하고 수용성이 높은 측면에서 특히 바람직하다.

본 발명의 로열 젤리 분획물에 무수(無水) 당질을 배합해서 이루어지는 조성물은, 예를 들면, 로열 젤리 분획물과 무수 당질을 혼합하여, 필요에 따라서 다른 성분을 더 혼합한 후, 그 혼합물을 탈수 건조하든가, 필요에 따라서, 추가로 감압 건조, 진공 건조, 동결 건조, 유동(流動) 건조, 가열 건조 등의 통상적인 건조 공정을 실시함으로써 얻을 수 있다. 더욱 구체적으로는, 무수 당질을 사용할 경우, 이 무수 당질이 물을 받아들여서 함수 결정으로 변환하는 성질을 가질 경우, 결정 또는 비결정의 무수 당질을 로열 젤리 분획물에, 로열 젤리 분획물의 질량(물을 함유한다)에 대하여 보통 4배량 이상, 또한 바람직하게는 8배량 이상 혼합하고, 필요에 따라서 다른 성분을 추가로 혼합한 후, 이 혼합물을 60℃ 이하, 바람직하게는 40℃ 이하로, 보통 4시간 이상, 바람직하게는 8시간 이상, 더욱 바람직하게는 12시간 이상 정치(靜置)하고, 탈수 건조해서 고체 상태의 로열 젤리 분획물을 조제하면 좋다. 또한, 본 발명의 로열 젤리 분획물에 상기 당질, 그 함수물(含水物) 혹은 덱스트린을 보통 로열 젤리 분획물의 고형분 질량에 대하여 무수물 환산으로 등배량(等倍量) 이상, 바람직하게는 2배량 이상 혼합하여, 60℃ 이하, 바람직하게는 40℃ 이하, 더욱 바람직하게는 30℃ 이하로 감압 건조, 진공 건조, 동결 건조, 유동 건조, 분무 건조 등의 방법에 의해, 고체 상태의 로열 젤리 분획물을 조제하는 것도 마음대로이다. 이와 같이 하여 조제되는 고체 형태의 이 로열 젤리 분획물은 필요에 따라 추가의 건조 공정을 거친 후, 분쇄기, 분급기(分級機), 조립기(造粒機), 타정기(打錠機) 등을 이용하여, 분말, 과립, 정제 등 원하는 형태로 하거나, 또한 필요에 따라서, 예를 들면, 그 분말 또는 그 과립을 캡슐에 충전해서 이용하는 것도 유리하게 실시할 수 있다.

이상과 같은 본 발명의 조성물에, 또한, 필요에 따라, 시판되는 당 전이(轉移) 비타민 C(L－아스코르브산 2-글루코시드)를 배합할 수도 있다. L-아스코르브산이 생체 내에서 콜라겐 산생을 증강시키는 작용을 갖는 것은 잘 알려져 있지만, L-아스코르브산은 불안정해서 산화 분해되기 쉬운 결점이 있다. 한편, 당 전이 비타민 C는 화학적으로 안정적인 물질이며, 또한, 생체 내에서 처음으로 분해되어서 L-아스코르브산을 유리(遊離)하여, 로열 젤리 분획물이 갖는 유용한 생리 활성을 효과적으로 증강할 수 있다. 이 당 전이 비타민 C를 본 발명의 조성물에 배합하는 시기는 원료 배합부터 제품이 완성될 때까지 또는 완성된 제품에 배합하면 좋다.

또한, 본 발명의 조성물에, 더욱, 필요에 따라, 항산화 성분을 첨가하면, 로열 젤리 분획물에 함유되는 유용한 생리 활성에 관여하는 성분의 새로운 안정화를 달성할 수 있으며, 또한, 이것들의 생리 활성을 상가적(相加的) 혹은 상승적으로 증강할 수 있다. 따라서, 이 조성물의 적용 대상이나 적용 지역 등에 따라서, 예를 들면, 온도 제어없이 선박 등으로 이 조성물을 수송하거나, 고온의 지역에서 이용할 경우 등에 유리하게 실시할 수 있다. 본 발명에서 이용하는 항산화제는 특정한 종류에 한정되지 않지만, 이 조성물을, 인간을 포함하는 포유류를 위한 식용으로서 이용할 경우에는 식품 분야에서 보통 이용되는 것으로부터 적절하게 선택하는 것이 바람직하다. 식품 분야에서 보통 이용되는 항산화 성분으로는 구체적으로, 플라보노이드, 폴리페놀, 비타민 E, 카로틴, 비타민 C나 이들의 유도체 등을 들 수 있다. 플라보노이드로는 더욱 상세하게는 루틴(rutin), 헤스페리진, 나린진, 켈세틴이나, 이들 각각에 글루코오스 또는 그 중합체 등의 당류가 결합해서 이루어지는 당 전이 루틴, 당 전이 헤스페리진, 당 전이 나린진, 당 전이 켈세틴 등을 들 수 있다. 폴리페놀로는 더욱 상세하게는 카테킨, 몰식자산, 레즈베라트롤(resveratrol) 등을 들 수 있다. 또한, 식물 추출물인 회화 나무 추출물, 로즈메리 추출물, 유칼립투스 추출물, 포도 종자 추출물 등도 본 발명에 서 항산화 성분으로서 유리하게 이용할 수 있다. 이들 항산화 성분의 이 조성물에 있어서의 함량은 특별히 제한되지 않지만, 이 조성물을 식용으로 이용할 경우에는 맛을 내는 영향을 고려하여, 식품 분야에서 보통 이용되는 배합 비율을 따르든가 또는 그 이하로 이용하는 것이 바람직하다. 또한, 이들 성분을 강화할 목적으로 사용하는 경우에는, 소기의 효과를 기대할 수 있는 양을 첨가하는 것도 마음대로이다.

상기에 추가해서, 중국 파슬리, 파피아, 과라나(guarana), 쪽 추출물, 차조기 추출물, 프로폴리스 엑기스, 코타라힘 엑기스, 소나무 엑기스, 조릿대 엑기스, 바이닉 엑기스, 녹각 영지 추출물, 콜라겐, 히알루론산, 글로코사민, 콘드로이틴, 콜라겐, 락토수크로오스, 코엔자임 Q₁₀, α-리보산, 카르니틴(carnitine), 풀룰란, 동일 출원인이 일본국 특원 2008-107313호 명세서나 국제 공개W0 2008/ 047758호 팜플릿(국제 출원 번호 PCT/JP2007/70077호)에 개시한 2-아미노 페놀 및 그 유도체 등의 생리 활성을 갖는 성분을 병용하는 것도 유리하게 실시할 수 있다.

본 발명의 조성물의 바람직한 식품 형태로는 예를 들면, 아이스크림, 아이스 캔디, 셔벗(sherbet) 등의 빙과, 꿀 얼음 등의 시럽, 버터 크림, 카스터드 크림, 플라워 페이스트, 땅콩 페이스트, 후루츠 페이스트 등의 스프레드(spread) 및 페이스트, 초콜릿, 젤리, 캔디, 구미 젤리, 캐러멜, 추잉검, 푸린, 슈크림, 스펀지 케이크 등의 양과자, 잼, 마머레이드, 시럽 즙, 당과(糖菓) 등의 가공 과실 또는 가공 야채, 만두, 찐 과자, 팥소, 양갱, 물양갱, 카스텔러, 눈깔 사탕 등의 일본식 과자, 간장, 분말 간장, 된장, 분말 된장, 마요네즈, 드레싱, 식초, 초간장, 테이블 슈거(table sugar), 커피 슈거 등의 조미료 등을 들 수 있다. 바람직한 음료의 형태로는 예를 들면, 합성주, 양조주, 과실주, 양주 등의 주류, 주스, 미네랄 음료, 탄산 음료, 락트산 음료, 유산균 음료, 스포츠 드링크, 드링크제, 차, 홍차, 우롱차, 커피, 코코아 등의 청량 음료 등을 들 수 있다.

본 발명의 로열 젤리 분획물은, 그 자체로 또는 다른 성분을 배합한 조성물의 형태로 예를 들면, 가축, 가금(家禽), 애완 동물, 기타 꿀벌, 누에, 곤충, 물고기 등의 사육 동물을 위한 사료, 모이, 애완 동물 먹이 등으로도 유리하게 이용할 수 있다. 이러한 형태를 갖는 조성물에 배합할 수 있는 다른 성분으로는 각각의 분야에서 보통 이용되는, 예를 들면, 곡류, 전분류, 조당류, 당류, 유지류, 종실(種實)류, 콩류, 어패류, 육류, 난류(卵類), 유류(乳類), 식물 단백 엑기스, 과실류, 버섯류, 해초류, 비타민류, 미네랄류, 아미노산류, 기타로서 효모, 목초, 바가스(bagass), 콘코부, 벼 지푸라기, 건초, 유박(油粕)류, 밀기울, 대두조(大豆糟), 각종 발효조 등, 사료·모이·애완 동물 먹이 성분의 1종 또는 2종 이상을 들 수 있다. 조성물 형태로는 분말, 과립, 정제, 페이스트, 구미 등의 고체 형상, 또는 유액, 드링크제, 청량 음료 등의 액상 형태로 유리하게 이용할 수 있다. 또한, 이 로열 젤리 또는 이 조성물을 동물에게 섭취시킬 경우에는 그대로 섭취시켜도 좋고, 농후 사료, 조 사료, 애완 동물 먹이 등의 사료·모이에 첨가하거나, 음료수에 용해해서 섭취시키는 것도 마음대로이다.

본 발명의 조성물의 바람직한 피부 외용 조성물(화장품, 의약품, 의약 부외품을 포함한다)의 형태로는 예를 들면 수용액계, 가용화계(可溶化系), 유화계, 분말 분산계, 고형 스틱(stick)계, 수(水)-유(油) 2층계, 수-유-분말 3층계 등 여러 가지 제형으로 본 발명을 적용하는 것이 가능하다. 또한, 그 구체적인 형태에도 특별한 한정은 없으며, 기초 화장품, 세정용 화장품, 입욕용 화장품, 두발 화장품, 선탠·선탠 방지 화장품, 메이크업 화장품, 치약 등의 구강용 화장품, 발모제, 육모제, 비누 등으로서 피부, 입술이나 두피 등의 외피 및 구내(口內)에 적용되는 것으로, 이들 형태를 갖는 의약 부외품, 의약품, 피부 외용 잡화를 포함한다. 더욱 구체적으로는, 연고, 클렌징 크림을 포함한 크림, 유액, 로션, 에센스, 젤리, 젤(gel), 팩, 샴푸, 린스, 헤어 트리트먼트, 마스크, 마스카라, 아이 라이너, 육모제, 립스틱(입술 연지), 립 그로스, 파운데이션, 볼 연지, 아이 샤도우, 파우더, 매니큐어, 비누, 보디 소프(body soap), 목욕 용제, 가루 치약, 윤성(潤性) 치약, 연 치약, 물 치약, 약용 치약, 구내 청량제, 구내 청량 필름, 마우스 와셔, 양치질약 등을 예시할 있다.

또한, 본 발명의 로열 젤리 분획물을 함유하는 피부 외용 조성물에는 그 구체적인 형태에 따라 공지 성분을 배합하는 것이 가능하다. 즉, 피부 외용제 형태의 경우에는, 보통, 피부 외용제에 이용될 수 있는 성분이나 상기 식품에 사용할 수 있는 성분의 1종 또는 2종 이상을, 본 발명의 소기의 효과를 손상하지 않는 범위에서 배합할 수 있다. 예를 들면, 유성분, 계면 활성제, 방부제(항균제), 향료, 미백제, 보습제, 증점제(增粘劑), 항산화제, 킬레이트제, 자외선 흡수·산란제, 비타민류, 아미노산류, 항염증제, 혈행 촉진제, 해초 추출물, 수렴제, 주름 방지제, 세포 부활제, 항노화 방지제, 육모·발모제, 경피 흡수 촉진제, 물, 알코올류, 수용성 고분자, pH 조정제, 발포제, 분체, 의약품·의약 부외품·화장품·식품용 첨가제, 의약용·의약 부외품 용의 유효 성분 등을 적절하게 배합하여, 목적하는 제형에 따라서 통상적인 방법에 의해 제조하면 좋다.

구체적으로, 유(油) 성분으로는 마카데미아넛 오일, 피마자유, 올리브유, 카카오유, 동백유, 야자유, 나무 밀납, 호호바 기름, 그레이프 시드 오일, 아보카도유 등의 식물 유지류, 밍크 기름, 난황유 등의 동물 유지류, 꿀벌 밀납, 고래 기름, 라놀린, 칼나우바 기름, 칸데릴라 기름 등의 기름류, 유동 파라핀, 스쿠알렌, 미정질 왁스, 세레신(ceresin) 왁스, 파라핀 왁스, 바셀린 등의 탄화 수소류, 카프리산, 미리스틴산, 팔미트산, 스테아르산, 베헤닌산, 라놀린 지방산, 리놀산, 리놀렌산, 라우린산, 미리스트산, 올레산, 이소스테아르산 등의 천연 및 합성 지방산류, 세타놀, 스테아릴 알코올, 헥실데칸올, 옥틸 도데칸올, 라우릴 알코올, 카프릴 알코올, 미리스틸 알코올, 세틸 알코올, 콜레스테롤, 피토스테롤(phytosterol) 등의 천연 및 합성 고급 알코올류, 미리스틴산(myristic acid) 이소프로필, 팔미트산 이소프로필, 미리스틴산 옥틸 도데실, 올레인산 옥틸 도데실, 콜레스테롤 올레이트 등의 에스테르류 등을 예시할 수 있다.

계면 활성제로는 모노 라우린산 솔비탄, 모노 팔미트산 솔비탄, 세스키올레인산 솔비탄, 트리올레인산 솔비탄, 모노 라우린산 폴리옥시에틸렌 솔비탄, 모노 스테아르산 폴리옥세틸렌 솔비탄, 폴리에틸렌 글리콜 모노올레이트, 폴리에틸렌 글리콜 알킬레이트, 폴리옥시에틸렌 알킬에테르, 폴리글리콜디에테르, 라우로일디 에탄올 아마이드, 지방산 이소프로판올 아마이드, 말티톨 히드록시 지방산 에테르, 알킬화 다당(多糖), 알킬 글루코시드, 슈거 에스테르 등의 비이온성 계면 활성제, 친유형 글리세린 모노스테아레이트, 자기유화형(self emulsifying) 글리세린 모노스테아레이트, 폴리글리세린 모노스테아레이트, 폴리글리세린 알킬레이트, 솔비탄모노올레이트, 폴리에틸렌글리콜 모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노올레이트, 폴리옥시에틸렌 세틸에테르, 폴리옥시에틸렌화 스테롤, 폴리옥시에틸렌화 라놀린, 폴리옥시에틸렌화 밀납유, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 등의 비이온성 계면 활성제, 스테아르산 나트륨, 팔미트산 칼륨, 세틸 황산 나트륨, 라우릴린산 나트륨, 팔미트산 트리에탄올아민, 폴리옥시에틸렌 라우릴린산 나트륨, N-아실 글루탐산 나트륨, 팔미트산 나트륨, 라우린산 나트륨, 라우릴산 나트륨, 라우릴 황산 칼륨, 알킬 황산 트리에탄올아민 에테르, 로오드유, 리니아도데실 벤젠 황산, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 말레산, 아실메틸타우린 등의 음이온성 계면 활성제, 염화 스테아릴 디메틸 벤질 암모늄, 염화 스테아릴 트리메틸 암모늄, 스테아릴 트리메틸 암모늄 클로라이드, 염화 벤잘코니움, 라우릴아민옥사이드 등의 양이온성 계면 활성제, 염산 알킬아미노 에틸글리신액, 레시틴 등의 양성 계면 활성제 등을 예 시할 수 있다.

방부제(항균제)로는 벤조산 및 그 염류, 살리실산 및 그 염류, 솔빈산 및 그 염류, 디히드로아세트산 및 그 염류, 파라옥시 벤조산 알킬 에스테르를 비롯한 파라옥시 벤조산 에스테르, 2, 4, 4′－트리클로로-2′－히드록시 디페닐 에테르, 3, 4, 4′-트리클로로칼바니리드, 헥사클로로펜(hexachlorophene), 염화 벤잘코니움, 페녹시에탄올, 노송나무 티올(thiol), 레조르신(Resorcin), 에탄올, 1, 3-부틸렌글리콜, 감광소(感光素) 201호 등을 예시할 수 있다.

향료로는 벤즈알데히드, 벤질벤조에이트, 페닐아세트산, 산다롤, 오이게놀(Eugenol), 리리알, 리랄, 리날롤(linalool), 2-메틸―3-(4-메틸페닐)-프로판알, 무스크 케톤(musk ketone), 신나믹알데히드, 베르토픽스(Vertofix), 메틸이오논, 개미산게라닐(Geranyl Formate), 아이소 E 슈퍼(Iso E Super), γ-운데카락톤, 헥실 살리실레이트, 시스-3-헥세닐 살리실레이트, 메틸 디히드로쟈스모네이트, 테트라히드로 푸르푸릴 3-메르캅토 프로피오네이트, 코바놀(일본국 고사(高砂) 향료 공업 주식회사제 상품명), 바닐린, 바니랄, 제라늄 오일(geranium oil), 페니로열 오일, 버치 오일(birch oil), 아루모이제 오일(arumoize oil) 등을 예시할 수 있다.

미백제로는 L-아스코르브산이나 그 유도체 및 이들의 염류, 알콕시 살리실산류 및 그 염류, 하이드로퀴논이나 그 배당체 등의 하이드로퀴논 유도체, 트라넥삼산이나 그 유도체 및 이들의 염류, 레조르신(resorcin)의 유도체, 코지산이나 그 유도체 및 이들의 염류, 에라그산이나 리놀레산 및 이들의 염류, 카밀레(kamille) 추출물, 테트라히드로 쿠르쿠미노이드, 쪽풀 추출물, 2-아미노 페놀 및 그 유도체 등을 들 수 있다.

보습제로는 에리트리톨, 키시리톨, 솔비톨(sorbitol), 말티톨, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 1, 3-부틸렌 글리콜, 폴리글리세린, 폴리에틸렌 글리콜, 디프로필렌 글리콜, 1, 2-펜탄디올, 아이소프렌 글리콜 등의 다가 알코올류, 글루코오스, 말토오스, 트레할로오스, 트레할로오스 당질 유도체, 덱스트린, 사이클로 덱스트린, 국제 공개 WO O2/10361호 팜플릿에 개시한 사이클로{→6)-α-D-글루코피라노실―(1→3)-α-D-글루코피라노실―(1→6)-α-D-글루코피라노실―(1→3)-α-D-글루코피라노실―(1→}의 구조를 갖는 환상 4당(시클로니게로실니겔로오스: Cyclonigerosylnigelose), 일본국 특개평 2005-95148호 공보에 기재한 사이클로{→6)-α-D-글루코피라노실―(1→4)-α-D-글루코피라노실―(1→6)-α-D-글루코피라노실―(1→4)-α-D-글루코피라노실―(1→}의 구조를 갖는 환상 4당(시클로말토실말토오스: Cyclomaltosylmaltose) 등의 당류, 아미노산, 락트산 나트륨, 피롤리돈 카본산 나트륨 등의 NMF 성분(천연 보습 성분), 글리코겐, 로커스트빈 검, 크실로글루칸, 퀸스 시드, 카라기난, 펙틴, 만난(mannan), 카들란(curdlan), 삭시노글루칸, 가락탄, 데르마탄 황산, 케라탄 황산, 콘드로이틴, 콘드로이틴 황산, 무코이틴 황산, 케라토 황산, 키틴, 헤파란 황산, 히알루론산 등의 무코 다당류나 이들 무코 다당류의 가수 분해물, 실크나 콜라겐 등의 단백질 펩티드나 이들의 가수 분해물 등의 수용성 고분자 물질, 이들의 염류, 디메틸 폴리실록산, 메틸 페닐실록산 등의 실리콘류, 유산균·비피더스균 등의 배양 상청 등을 예시할 수 있다. 그 중에서도, 보습 효과 등이 강한, 트레할로오스, 트레할로오스 당질 유도체, 환상 4당, 히알루 론산이나 콘드로이틴 황산, 그 염류나 가수 분해물로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상을 조합해서 사용하는 것이 바람직하다.

증점제로는 아르긴산 나트륨, 크산탄감, 규산 알루미늄, 마르멜로(marmelo) 종자 추출물, 아라비아 검, 히드록시에틸 구아검, 카복시메틸구아검, 구아검, 덱스트란, 트라간트검, 전분, 풀룰란, 키틴, 키토산, 한천, 셀룰로오스 등의 천연 고분자 물질, 히드록시프로필셀룰로오스, 메틸히드록시프로필 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 카복시메틸 셀룰로오스, 히드록시에틸 셀룰로오스, 가용성 전분, 양이온화 셀룰로오스, 카복시메틸키틴 등의 반합성(半合性) 고분자 물질, 카복시비닐폴리머, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 비닐 알코올·아세트산 비닐 공중합체 등의 합성 고분자 물질 등을 예시할 수 있다.

항산화제로는 디부틸히드록시 톨루엔, 부틸히드록시 아니솔, 몰식자산 프로필, L-아스코르브산, 비타민 E, 카테킨류, 플라보노이드류나 이들의 유도체 등을 예시할 수 있다.

킬레이트제로는 에디트산 2나트륨, 에틸렌디아민 4아세트산염, 피롤린산염, 헥사메타 인산염, 시트르산, 타르타르산, 글루콘산 등을 예시할 수 있다.

pH 조정제로는 수산화나트륨, 트리에탄올아민, 니트릴로트리에탄올, 시트르산, 시트르산 나트륨, 붕산, 붕사(硼砂), 인산 수소 칼륨 등을 예시할 수 있다.

자외선 흡수 산란제로는 파라 아미노벤조산계 자외선 흡수제, 안트라닐산계 자외선 흡수제, 살리실산계 자외선 흡수제, 신남산계 자외선 흡수제, 벤조페논계 자외선 흡수제, 당계 자외선 흡수제, 3-(4'－메틸벤질리덴)-d-칸파, 3-벤질리덴-d, 1-칸파, 우로칸산, 우로칸산 에틸 에스테르, 2-페닐-5-메틸벤족사졸, 2, 2'-히드록시―5-메틸페닐벤조트리아졸, 2-(2'－히드록시―5'-t-옥틸페닐)벤조트리아졸, 2-(2'-히드록시―5'-메틸페닐 벤조트리아졸, 디벤잘라진(dibenzalazine), 디아니소일 메탄(dianisoyl methane), 4-메톡시―4'-t-부틸디벤조일메탄, 5-(3, 3-디메틸―2-노르보르니리덴-3-펜탄-2-온, 2-히드록시-4-메톡시벤조페논, 옥틸디메틸파라아미노벤조에이트, 에틸헥실파라메톡시신나메이트, 산화 티탄, 카올린, 탈크 등을 예시할 수 있다.

비타민류로는 비타민 A 및 그 유도체, 비타민 B 및 그 유도체, 비타민 B₂ 및 그 유도체, 비타민 B₆염산염, 비타민 B₆ 트리팔미테이트, 비타민 B₆디옥타노에이트, 비타민 B₁₂, 비타민 B₁₅ 및 그 유도체 등의 비타민 B류, L-아스코르브산 및 그 유도체, α-토코페롤, β-토코페롤, γ-토코페롤, 비타민 E 아세테이트 등의 비타민 E류, 비타민 D류, 비타민 H, 판토텐산(pantothenic acid), 판테틴, 비타민 F, 비타민 K, 비타민 P 등의 플라보노이드류나 그 유도체, 비타민 U, 펠라산, γ-오리자놀, α-리보산, 오로트산, 코엔자임 Q1O 등이나 그들의 유도체 등을 예시할 수 있고, 그들의 염류이어도 좋다. 그 중에서도, L-아스코르브산이나 그 유도체는 로열 젤리 분획물이 갖는 생리 작용을 증강하는 작용이나, 피부 주름의 발생 억제에 강하게 관여하는 콜라겐 산생을 증강하는 작용이 강하므로 바람직하고, 효과 강도 측면에서는 L-아스코르브산의 배당체가 바람직하며, L-아스코르브산-2-글루코시드가 특히 바람직하다.

아미노산류로는 글라이신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 세린, 트레오닌, 페닐알라닌, 티로신, 아스파라긴, 글루타민, 타우린, 트립토판, 시스테인, 메티오닌, 프롤린, 히드록시 프롤린, 아스파라긴산, 글루탐산, 아르기닌, 히스티딘, 리신, 카르니틴 및 그들의 유도체 등을 예시할 수 있고, 그들의 염류이어도 좋다.

항염증제로는 알란토인 또는 그 유도체인 알란토인, 알란토인아세틸-dl－메티오닌, 알란토인클로로히드록시알루미늄, 알란토인디히드록시알루미늄, 알란토인폴리가락시론산 등, 글리틸리틴 또는 그 유도체인 글리틸리틴산, 글리틸리틴산, 글리틸리틴산 알란토인, 글리틸리틴산 글리세린, 글리틸리틴산 스테아릴, 스테아린산 글리틸레티닐, 3－삭시닐옥시글리틸리틴산 2나트륨, 글리틸리틴산 디칼륨, 글리틸리틴산 모노 암모늄 등, 판토텐산, 판토테닐 알코올, 판토테닐 에틸에테르, 아세틸판토테닐 에틸에테르, 벤조일 판토테닐 에틸에테르, 판토텐산 칼슘, 판토텐산나트륨, 아세틸판토테닐 에틸에테르, 안식향산판토테닐 에틸에테르에스테르, 판테틴 등의 판토텐산의 유도체, 비타민 E, d－δ－토코페롤, dl－α－토코페롤, 초산 dl－α－토코페롤, 리놀산 dl－α－토코페롤, 니코틴산 dl－α－토코페롤, 코학산 dl－α－토코페롤 등의 비타민 E 유도체, L－아스코르브산, L－아스코르브산-2－글루코시드 등의 L－아스코르브산 글루코시드, L－아스코르브산 글루코시드의 아실화 유도체, 테트라헥실데칸산 아스코르브산, L－아스코르브산과 토코페롤이 인산기를 통해 결합된 아스코르브산－토코페롤 인산 디에스테르 L－아스코르브산 황산 에스테르, 디팔미틴산 아스코르빌, 팔미틴산 아스코르빌, L－아스코르브산 스테아릴, 인산 L－아스코르빌, L－아스코르브산 에틸이나 그들의 아실화 유도체 등의 L－아스 코르브산의 유도체 및/또는 그들의 알카리 금속 혹은 알카리 토류 금속염, 2－아미노페놀 및 그 유도체, 염산 피리독신, 멘톨, 비오틴, 칸훌, 테레핀유, 산화 아연, 아즐렌, 구아이아즐렌 및 그 유도체, 메페남산 및 그 유도체, 페닐부타존 및 그 유도체, 인도메타신 및 그 유도체, 이부프로펜 및 그 유도체, 케토프로펜 및 그 유도체, ε-아미노카프론산, 디클로페낙나트륨, 디펜히드라민, 트라넥삼산 및 그 유도체, 덱사메타손, 코르티손 및 그 에스테르, 히드로코르티손 및 그 에스테르, 프레드니존, 프레드니존 등의 부신 피질 호르몬, 항히스타민제, 쪽풀, 아센야크, 아마 차, 알테아, 알니카, 알로에, 이부트라노오, 이라쿠사, 영실(營實), 에치나시(Echinacea), 연명초(延命草), 황금(黃芩), 황벽(黃蘗), 대맥, 고추나물, 오렌지, 쥐오줌풀, 카밀레, 당근, 사철쑥, 감초, 오이, 인동, 치자나무, 얼룩조릿대, 크레송(cresson), 겐티아나(Gentiana), 이질풀, 우엉, 캄프리(comfrey), 오가피, 살비아(salvia), 산초, 향채(香菜), 자근(紫根), 자소(紫蘇), 작약(芍藥), 자작나무, 세이지(sage), 세인트존스워드(St.Jons Wort/Hypericum perforatum), 적설초(Ground ivy), 서양 노간주 나무(Juniper), 서양톱풀(yarrow), 서양 박하(Mentha piperita), 천궁(川芎), 천진(千振), 상백피(桑白皮), 대추, 타임(thyme), 챠이니즈 파세리, 동과자(冬瓜子), 당귀, 금잔화(金盞花), 도인(桃仁), 삼백초(三白草), 토르멘틸(tormentil), 다데아이, 차, 당귀, 금잔화, 덧나무, 당근, 파세리, 박하, 백단향, 비파(枇杷), 붓챠스 브룸(butcher's broom), 포도, 브로콜리, 잇꽃, 포황(蒲黃), 보리수, 모란, 마로니에, 무환자(無患子) 나무, 복숭아, 도깨비 부채, 유칼리, 쑥, 소귀나무, 라벤더, 로마 캐모마일, 로즈마리 등의 식물 또는 식물에 유 래하는 추출물 등의 성분을 예시할 수 있다,

해초 추출물로는 갈조(褐藻), 홍조, 녹조, 남조(藍藻) 등으로부터의 추출액이 있으며, 구체적으로는 곤포(昆布), 마곤포, 미역, 녹미채, 우뭇가사리, 석회조, 팔마리어(Palmaria), 쯔노마다, 김, 파래, 구멍 파래, 아스코피람, 히바마타(푸크스속 녹갈색 갈조), 큰실말, 오키나와 큰실말, 히만탈리아(Himanthalia) 등으로부터의 추출물을 예시할 수 있다. 아마모 등의 수성 식물로부터의 추출물도 이것에 포함된다.

상기 이외에도, 프로폴리스, 허브류 등의 식물 또는 동물의 성분이나, 그것들에 유래하는 추출물 등의 성분, 해양 심층수, 간수, 간수 성분 등의 미네랄류, 항생 물질, 인산 수소 칼슘, 유기 변성 몬모릴로나이트(montmorillonite), 규산, 무수 규산, 규산 마그네슘, 운모, 벤토나이트(Bentonite), 티탄 피복 운모, 옥시 염화 비스무트, 산화 지르코늄, 산화 마그네슘, 산화 아연, 탄산 칼슘, 탄산 마그네슘, 산화 철, 군청(群靑), 감청(紺靑), 산화 크롬, 카라민(Carhamin), 제올라이트 및 카본 블랙 등의 무기 분말, 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐 수지, 요소 수지, 페놀 수지, 불소 수지(ETFE), 규소 수지, 아크릴산 수지, 멜라민 수지, 에폭시 수지, 폴리카보네이트 수지, 디비닐벤젠·스티렌 공중합체, 상기 화합물의 단량체 2종 이상으로 이루어진 공중합체, 셀룰로오스 등의 유기 분말, 베니바나 색소, 치자나무 색소, 시콘 색소, 코치닐(cochineal) 색소를 비롯한, 안트라퀴논계, 안토시아닌계, 칼콘계, 카로티노이드계 색소 등의 천연 착색료, 감광소 101호, 감광소 201호, 감광소 301호, 감광 소 401호 등의 감광소, 적색 201호, 적색 202호, 적색 204호, 적색 205호, 적색 220호, 적색 226호, 적색 228호, 적색 405호, 귤색 203호, 귤색 204호, 황색 204호, 황색 401호 및 청색 404호 등의 유기 안료 분말, 적색 3호, 적색 104호, 적색 106호, 적색 227호, 적색 230호, 적색 401호, 적색 505호, 귤색 205호, 황색 4호, 황색 5호, 황색 202호, 황색 203호, 녹색 3호 및 청색 1호의 지르코늄, 바륨 또는 알루미늄 레이크 등의 유기 안료 분말, 상기 유기 분말에 시콘 색소, 베니바나 색소 등의 천연 착색료나 유기 합성 색소 등의 착색료, 비타민류나 그 유도체, 당 전이 글리틸리틴, 글리틸리틴 등의 기능성 성분을 담지시킨 분체 등을 들 수 있다.

본 발명의 로열 젤리 분획물을 배합해서 이루어지는 조성물을 제조하기 위해서는, 이상에서 나타낸 바와 같은 성분과 각각의 함량에 근거하여, 본 발명의 로열 젤리 분획물을 그 목적에 따라서, 즉, 대상으로 삼는 포유류의 종류나 그 섭취 방법 등에 따라서 선택되는 적당한 조성을 따라, 원하는 조성물이 완성될 때까지의 공정에서 혹은 완성품에 대하여 함유시키면 좋다. 그 처리 방법으로는 예를 들면, 희석, 농축, 건조, 여과, 원심 분리, 혼화, 혼날(混捏), 용해, 융해, 분산, 현탁, 유화, 역 미셸(micelle)화, 침투, 결정 석출, 산포(散布), 도포, 부착, 분무, 피복(코팅), 주입, 침지(浸漬), 고화(固化), 담지(擔持), 봉입 등의 공지된 처리 방법을 적절하게 선택하고, 또한, 필요에 따라 원하는 형상으로 성형하면 좋다. 각각의 성분을 배합하는 순서나 여러 가지 처리를 실시하는 시기는 로열 젤리 분획물의 품질 열화를 초래하지 않는 것이면 어느 것이라도 좋으며, 예를 들면, 될 수 있는 한 조제 직후의, 또는, 조제 후 저온 보존된 로열 젤리 분획물을 사용하고, 그 후, 필요에 따라서 여러 가지의 처리를 적절하게 실시하면 좋다. 또한, 제조 과정에서 로열 젤리 분획물의 품질 열화를 막기 위해서 상기 공정은 모두 60℃ 이하, 바람직하게 40℃ 이하, 특히 바람직하게는 30℃ 이하의 조건하에서 실행함으로써 제조 공정에서의 유용한 생리 활성의 감쇠를 막을 수 있다. 이상과 같은 본 발명의 로열 젤리 분획물을 함유하는 조성물은 상기 로열 젤리 분획물을 제품 질량당, 보통, 고형물 환산으로 0.0001％ 내지 20％, 바람직하게는, 0.001％ 내지 10％ 함유한다. 또한, 로열 젤리의 섭취 목적과 건강 보조 식품 등의 경우에는 조성물 중의 함유량을 더욱 늘리는 것도 마음대로이다.

이상과 같은 본 발명에 의한 조성물은 생 로열 젤리가 갖는 각종 유용한 생리 활성이 안정적으로 유지되고 있으므로, 이용한 생체에 있어서 유용한 생리 활성이 효과적으로 발휘되어, 그 생체의 저항력 증강이나 생체 상태 불량 개선의 조기화, 건강한 상태의 유지·증진, 미용, 아름다운 피부 등이 달성된다. 또한, 특히, 번식용 동물 수컷의 정소 기능 증진에도 현저한 효과를 발휘할 수 있다. 게다가, 본 발명의 로열 젤리 분획물은 알레르겐성이 저감되어 있으므로 안심하고 사용할 수 있다. 따라서, 본 발명의 로열 젤리 분획물을 함유하는 조성물은 건강의 유지·증진이나, 미백, 미용을 위한 식품, 음료, 사료, 모이, 애완 동물 먹이, 피부 외용 조성물 등으로 매우 유용하다.

본 발명의 로열 젤리 분획물 혹은 이 분획물을 배합해서 이루어지는 조성물의 섭취량과 섭취 방법은 상기 로열 젤리의 유용한 생리 활성을 발휘할 수 있는 양 및 방법이라면 제한되지 않으며, 통상적으로는, 히드록시데센산으로서 1일 체중 1kg당 0.001 내지 100mg, 바람직하게는 0.01 내지 1Omg, 특히 바람직하게는 0.1 내지 2mg이면 좋다. 또한, 섭취 방법으로는 1일당 소요량을 한번에 섭취해도 좋고, 수회에 나누어서 섭취해도 좋다. 또한, 2 내지 3일마다 섭취해도 좋다.

이하에, 실험에 근거해서, 더욱 상세하게 본 발명을 설명한다.

<실험 1: 로열 젤리의 알레르겐성에 끼치는 한외(限外) 여과의 영향 1>

후술하는 바와 같이, 국제 공개 W02004/21803호 명세서의 방법에 의해 조제한 기존 정제 로열 젤리에는, 생 로열 젤리보다는 약하지만, 여전히, 알레르겐성이 잔존하고 있는 것이 확인되었으므로, 히드록시데센산 등의 유용한 생리 활성에 관여하는 성분을 저감하는 일 없이, 알레르기 원인으로 생각되는 단백질을 추가로 제거하기 위해서, 생 로열 젤리의 알레르겐성에 끼치는 한외 여과의 영향을 조사하는 시험을 아래와 같이 실행하였다. 즉, 생 로열 젤리(대만산, 히드록시데센산 30mg/g, 단백질 113mg/g을 함유) 50g을 정제수 200g에 현탁하였다. 이 물 희석 용액을, 표 1에 나타내는 각종 분획 분자량을 갖는 한외 여과 막(일본 제네틱스 주식회사 혹은 아드반틱 동양 주식회사 판매)을 이용한 한외 여과에 제공하고, 한외 여과액을 회수해서 시험 시료로 하여, 그 알레르겐성을 측정한 결과를 표 1에 아울러 나타낸다. 또한, 여과액의 알레르겐성은, 그 평가에 즈음하여, 이것들의 시험 시료(한외 여과액)는, 모두 등량(等量)의 히드록시데센산을 함유하는 양을 사용하였다. 각 시험 시료의 알레르겐성 시험, 콜라겐 산생 증강 작용 및 IL-4 산생 억제 작용의 유무를 하기 방법에 의해 측정하고, 그 결과를 표 1에 아울러 나타낸다.

<알레르겐성 시험의 방법>

알레르겐성 시험은 마우스를 사용한 항원성 시험을 하기다((萩田)들의 방법(하기다 다다아쯔(萩田忠厚), 미즈시마 유타카(水島裕), 「의학의 아유미」, 제100권, 814페이지, 서기 1977년)에 따라서 실행하였다. 즉, 각 시험 군당 5마리의 암컷 성질 BALB/c 마우스(9 주령, 일본 찰스리버 주식회사 판매)를 사용하고, 1주일 걸러 3회, 각 히드록시데센산을 45㎍ 함유하는 양의 시험 시료 및 아쥬반트(adjuvant)로서 수산화 알루미늄 겔(Alum, 이하, 「앨럼아쥬반트(alum adjuvant)」라고 한다) 2.5mg/마리를 복강 내 투여하고, 면역을 실행하였다. 3회째의 면역으로부터 1주일 후에 각각의 마우스 꼬리 동맥으로부터 채혈하고, 마이크로테이너(microtainer)를 이용해서 혈청을 채취하여, 래트(rat)를 이용한 PCA에 제공하였다. 즉, 정상 SD 래트(11주령, 일본 챨스리바 주식회사 판매)의 털을 제거한 등에, 생리 식염수를 이용해서 희석(10배)한 각각의 마우스의 혈청을 0.1mL씩 피내 주사하고, 24시간 경과 후에 마우스에 면역한 시험 시료와 동일한 것의 5배량을, 1mL의 0.5％ 에번즈 블루(Evans blue) 색소 용액과 함께 정맥내 투여하였다.

<알레르겐성의 유무 판정 방법>

마우스 혈청 투여 부위에서 관찰되는 푸른 스폿의 크기를 측정하고, 평균 직경 5mm 이상의 스폿을 나타내는 것을 양성으로 판정하고, 평균 직경 5mm 미만의 스폿을 나타내는 것을 음성으로 판정하였다. 시험 군 5마리 모두 양성이었던 것을 5플러스(plus)(+++++) 내지 5마리 모두 음성이었던 것을 마이너스(minus)(-)로서 알레르겐성의 강도를 6단계로 평가하였다.

<콜라겐 산생 증강 작용의 측정 방법>

콜라겐 산생 증강 작용의 측정은 국제 공개 WO 2005/034938호 명세서에 기재한 방법에 준하여, 인간 선유(線維) 싹 세포를 사용한 콜라겐 산생량의 측정 방법을 이용해 실행하였다. 즉, 인간 선유 싹 세포(구라시키 방적(倉敷紡績) 주식회사 판매, 세포명 「NHDF 세포」)를 세포 농도 2.5×10⁴개/웰이 되도록 10％(v/v) 소 태아 혈청과 적정량(適量)의 페니실린을 첨가한 둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's modified eagle medium, DMEM)(주식회사 닛스이(日水) 판매, 이하, 소 태아 혈청과 적정량의 페니실린을 첨가한 둘베코 변형 이글 배지를 「DMEM 배지」라고 약기한다)(pH 7.1∼7.4)를 포함하는 96웰 마이크로플레이트(벡톤·딕킨슨사 판매)에 파종하고, 5％(v/v) CO₂ 조건 하에서 37℃로 24시간 배양하였다. 그 후, 배양 상청을 제거하고, 각각의 시험 시료를 히드록시데센산 농도가 100㎍/mL가 되도록 첨가한 50μM의 L-아스코르브산을 함유하는 DMEM 배지 200μL에서 교환해서 5일간 배양하였다. 그 후, 상기 마이크로플레이트에서 각각의 웰당 세포에 의한 콜라겐 산생량을 사콜·콜라겐·어쎄이·키트(바이오 컬러사 판매)로 정량하였다. 측정에는 각각의 시험 표품(標品)에 대해서 3웰을 사용하였다.

<콜라겐 산생 증강 작용의 유무 판정 방법>

콜라겐 산생 증강 작용의 유무 판정은, 이 세포를 50μM의 L-아스코르브산을 함유하는 DMEM 배지만으로 배양하였을 경우에 비하여, 콜라겐량이 20％ 이상 증가하였을 경우를 활성이 있다(O), 또는, 20％ 미만밖에 증가가 없을 경우를 활성이 없다(×)라고 하였다.

<IL-4 산생 억제 작용의 측정 방법>

IL-4 산생 억제 작용의 측정은 국제 공개 W0 2004/019971호 명세서의 실험 2에 기재된, 앨럼아쥬반트를 함유하는 흰자위 알부민으로 면역한 BALB/c 마우스의 비장(脾臟) 세포를 사용한 IL-4 산생계를 사용해서 실행하였다. 즉, 0VA를 항원으로 하고, 앨럼아쥬반트와 함께 3회 면역한 BALB/c 마우스로부터, 통상적인 방법에 의해 비장 세포를 채취하여, 5×10⁶개/mL가 되도록 배지 부유시켰다. 이 세포 부유액을 미리 항 CD3 항체(5㎍/mL)를 고상화(固相化)한 96웰의 마이크로플레이트에 100μL씩 뿌려 혼잡하였다. 이어서, 시험 시료를 히드록시데센산 농도가 400㎍/mL가 되도록 인산 완충 생리 식염수로 희석하고, 이것을 50μL씩 첨가하였다. 또한, 각각의 웰에 배지를 50μL 첨가하고, 총액량을 200μL로 하였다. 40시간 배양한 후에 배양 상청액을 회수하고, IL-4의 양을 고상 효소 면역 측정법(ELISA법)으로 측정하였다. 시험 시료 대신에 인산 완충 생리 식염수를 첨가해서 마찬가지로 배양한 것을 대조로 하였다.

<IL-4 산생 억제 작용의 유무 판정 방법>

IL-4 산생 억제 작용의 유무 판정은 대조와 비교해서 IL-4의 산생량이 20％ 이상 억제되었을 경우를 활성이 있다(0)라고 하고, 또는, 20％ 미만밖에 억제되지 않았을 경우를 활성이 없다(×)라고 하였다.

표 1로부터 명확한 바와 같이, 한외 여과에 사용한 막의 분획 분자량이 작아지는 것에 비례하여, 시험 시료(한외 여과액)의 알레르겐성이 저감하고, 분획 분자량이 30,000달톤 이하에서 현저하게 저감하여, 10,000달톤 혹은 그 이하의 한외 여과 막으로 분획한 시험 시료에서는, 알레르겐성이 확인되지 않았다. 또한, 콜라겐 산생 증강 작용은 어느 분획 분자량의 한외 여과 막을 사용한 시험 시료의 경우에도 확인되었다. 이 결과는, 분획 분자량이 30,000달톤 이하, 바람직하게는 10,000달톤 이하로부터 선택되는 한외 여과 막으로 생 로열 젤리의 물 희석 용액을 분획해서 고분자 획분을 제거함으로써, 로열 젤리가 갖는 생리 활성을 유지하면서, 알레르겐성을 저감한 로열 젤리 분획물을 조제할 수 있는 것을 나타낸다. 또한, 콜라겐 증강 작용 등에 관여하는 저분자 성분의 수율이나 처리의 용이성을 감안하면, 본 발명의 로열 젤리 분획물의 조제에 사용하는 한외 여과 막은, 분획 분자량이 2,000 내지 10,000달톤으로부터 선택되는 것의 사용이 더욱 바람직하고, 2,000 내지 6,000달톤으로부터 선택되는 것이 특히 바람직하다고 판단하였다. 또한, 분획 분자량이 30,000달톤 이하의 한외 여과 막으로 분획한 시험 시료로 면역한 마우스의 혈청은 어느 경우도 200배 희석한 경우에는 PCA 반응은 확인되지 않았다.

<실험 2: 로열 젤리의 알레르겐성에 끼치는 한외 여과의 영향 2>

실험 1에 의해, 로열 젤리를 분획 분자량 2,000 내지 10,000달톤으로부터 선택되는 한외 여과 막으로 제거함으로써 알레르겐성이 효과적으로 저감되는 것이 확인되었으므로, 이 방법으로 조제한 로열 젤리 분획물의 특성을 조사하는 시험을 아래와 같이 실행하였다. 즉, 생 로열 젤리(대만산, 히드록시데센산 30mg／g, 단백질 113mg/g을 함유) 500g을 정제수 2,000g으로 현탁하고, 한외 여과 막(아사히가세이(旭化成) 주식회사 판매, 상품명 「마이크로저 AIPlO13」, 분획 분자량 6,000)을 이용한 한외 여과에 제공하였다. 한외 여과는 한외 여과 농축액(내액: 생 로열 젤리 물 희석물)에 정제수를 첨가하면서 통액(通液)하여 한외 여과액(여액) 4,000mL를 회수해 시험 시료 1을 조제하였다. 또한, 국제 공개 W0 2004/21803호 명세서의 실험 예 3의 방법에 근거하여, 상기 생 로열 젤리 60g을 원료로 하고, 이것에 4℃의 탈 이온수를 240g 가해서 교반하여 균일하게 분산시켰다. 이어서, 이 현탁액을 원심 분리(5,000×g, 10분간)하여, 상청과 침전으로 분리하였다. 얻어진 침전에 다시 4℃의 탈 이온수를 240g 첨가해서 마찬가지로 처리하고, 침전을 얻었다. 수(水) 분획 1회째와 2회째의 상청을 아울러서 수 분획 상청액으로 하고, 상기 한외 여과 막을 이용한 한외 여과에 제공하였다. 소량의 물로 씻어내, 한외 여과액(여액)과 한외 여과 농축액(내액)으로 분리하였다. 한외 여과로 얻어진 여액을 증발기에서 2배로 농축하여, 최종적으로 전술한 침전과 아울러 기존 정제 로열 젤리를 조제해 시험 시료 2로 하였다. 또한, 상기 생 로열 젤리 12g에 탈 이온수를 48g 더해서 60g으로 하여, 상기와 마찬가지로 교반 분산시켜서 생 로열 젤리 물 희석 용액을 조제하고, 시험 시료 3으로 하였다. 이들 시험 시료 1 내지 3의 유용한 생리 활성에 관여하는 성분의 지표로서, 로열 젤리 특유의 성분이며 당 대사나 노화 방지에 관여한다는 히드록시데센산의 질량, 단백질 양 및 질소 질량을 측정하고, 단백질과 히드록시데센산의 질량비, 히드록시데센산과 질소의 질량비 및 단백질 양의 지표로서 SDS-PAGE의 결과를 표 2에 나타낸다. 또한, 이들 시험 시료에 대해서, 실험 1과 동일한 방법으로, 알레르겐성, 콜라겐 산생 증강 작용 및 IL-4 산생 억제 작용의 유무에 대해서 측정한 결과를 아울러 표 2에 나타낸다. 또한, 단백질 양은 인간 혈청 알부민을 표준 단백질로 한 브래드포드법으로 측정하여, 시발(始發)의 생 로열 젤리에 함유되는 단백질 양을 100으로 하고, 각각의 시료 중에 함유되는 단백질 양의 상대 값(％)을 구해 단백질 양(％)으로서 표 2에 나타낸다. 또한, 히드록시데센산은 하기 조건에 의한 HPLC법으로 측정하여, 미리 조제한 히드록시데센산 표준 용액(20㎍/mL, 50㎍/mL, 100㎍/mL)을 이용해서 작성한 검량선에 의해 정량하여, 시발의 생 로열 젤리에 함유되는 히드록시데센산 양을 100으로 하고, 각각의 시료 중에 함유되는 히드록시데센산 양의 상대 값(％)을 구하여, 히드록시데센산 양(％)으로서 표 2에 나타낸다. 질소 질량은 알카리성 페리옥소 이황산 칼륨 분해-자외선 흡광광도법에 의해 구하였다. SDS-PAGE는 히드록시데센산 30㎍을 함유하는 양의 각각의 시험 시료를 각각 시판되는 SDS-PAGE용 겔(제1화학 약품 주식회사 판매, 상품명 「pAG미니 『제1』10/20」)에 충전하고, 통상적인 방법에 의해 전기 영동한 후에 쿠마시 브릴리언트 블루(CBB)로 염색하고, 육안 관찰에 의해 염색 밴드의 유무를 확인하여, 복수의 밴드가 명료하게 확인되는 (++++), 복수의 밴드가 확인되고 52.8킬로달톤 부근의 로열 젤리 주요 단백 1의 밴드만이 명료하게 확인되는 (+++), 52.8킬로달톤 부근의 로열 젤리 주요 단백 1의 밴드만이 명료하게 확인되는 (++), 얇으면서 52.8킬로달톤 부근의 로열 젤리 주요 단백 1의 밴드만이 확인되는 (+), 밴드가 확인되지 않는 (-)의 5단계로 평가하였다.

<히드록시데센산의 HPLC 분석 조건>

표준액: 시판되는 히드록시데센산(알프렛사파마 주식회사 판매)을 희석해서 사용

칼럼: 역상(逆相)계 칼럼(YMC-Pack AQ303-ODS(φ4.6mm×250mm, 주식회사 와이엠씨 판매))

칼럼 온도: 40℃

검출기: UV210nm 이동상: 60％ 메탄올(인산에 의해 pH 2.2로 조정한 것)

유속: 0.7mL/분, 샘플량: 20μL

표 2로부터 명확한 바와 같이, 시험 시료 1(로열 젤리 분획물)에서는, 정제의 시발 원료로서 사용한 시험 시료 3(생 로열 젤리 물 희석 용액)과 비교해서, 히드록시데센산 양은 약 70％ 회수되고, 단백질 양은 0.03％까지 감소하였다. 이것에 대하여, 시험 시료 2(기존 정제 로열 젤리)에서는, 시험 시료 3(생 로열 젤리 물 희석 용액)과 비교해서, 히드록시데센산 양이 약 60％로 감소하는 동시에, 단백질 양은 8％까지 감소하였다. 또한, SDS-PAGE의 결과는 단백질 양의 측정 결과와 상관하여, 시험 시료 2(기존 정제 로열 젤리)에서는 단백질 밴드는 (+)로 판정되고, 52.8킬로달톤 부근에서 로열 젤리 주요 단백 1의 밴드만이 조금 확인되었다. 시험 시료 1(로열 젤리 분획물)에서는, 단백질의 밴드는 확인되지 않고 (-)로 판정되었다. 히드록시데센산과 질소의 질량비는 시험 시료 1에서는 1:0.15이었던 것에 대해, 시험 시료 2에서는 1:0.56, 시험 시료 3에서는 1:0.91이었다. 또한, 시험 시료 1에서는 알레르겐성이 확인되지 않고 마이너스 (-)로 판정된 것에 대해, 시험 시료 2에서는 3 플러스 (+++), 시험 시료 3에서는 5 플러스 (+++++)로 판정되었다. 또한, 콜라겐 산생 증강 작용 및 IL-4 산생 억제 작용은, 어느 시험 시료에서도 확인되었다.

이러한 결과는, 시험 시료 1에서는 알레르겐성이 확인되지 않고 생 로열 젤리의 유용한 생리 활성에 관여하는 성분인 히드록시데센산 양이 그다지 감소하지 않고 단백질 양이 저감되어 있음을 나타낸다. 또한, 히드록시데센산에 대한 질소의 질량률은 시험 시료중 단백질 양의 감소에 비례해서 저하하고, 시험 시료 1에서 가장 낮아졌다. 또한, 생 로열 젤리 물 희석 용액을 분획 분자량이 6,000의 한외 여과 막으로 여과한 한외 여과액(시험 시료 1: 로열 젤리 분획물)은 콜라겐 산생 증강 작용 및 IL-4 산생 억제 작용을 갖고 있기 때문에, 생 로열 젤리가 갖는 생리 활성은 유지되고 있다고 판단하였다.

<실험 3: pH 조정 로열 젤리 분획물중 히드록시데센산의 용해성과 착색>

<히드록시데센산의 용해성에 끼치는 pH의 영향>

로열 젤리에 함유되는 유기산의 하나인 히드록시데센산을 지표로 해서, pH가 끼치는 영향을 조사하는 시험을 아래와 같이 실행하였다. 즉, 실험 2에서 사용한 시험 시료 1(로열 젤리 분획물)을 통상적인 방법에 의해 동결 건조해서, 그 분말품을 조제하였다. 이 분말품을 과잉량(물에 용해해서 pH 처리한 후에도 히드록시데센산이 완전히 용해되지 않는 양), 정량의 탈 이온수(25℃)에 더해서, 30분간 스터러(stirrer)로 교반 용해한 후, 6N 수산화나트륨 용액을 더해서, 표 3에 나타내는 pH로 조정하고, 또한, 30분간 스터러로 교반하고, 15,000rpm, 30분간 원심해서, 상청을 회수하고, 그 상청의 pH를 측정한 후, 상청 중의 히드록시데센산 양을 측정하여, 이 로열 젤리 분획물에서의 히드록시데센산의 용해도로 표 3에 나타낸다. 또한, 회수한 상청의 착색(갈변 정도)의 유무를, 육안으로 확인한 결과를 표 3에 아울러 나타낸다. 또한 히드록시데센산 양은 실험 1과 마찬가지의 방법으로 측정하였다. 상청의 착색 정도는 직경이 12mm의 원기둥형의 캡(cap) 부착 유리병에 넣고, 바로 옆에서의 육안 관찰에 의해, 착색이 없는 (-), 엷은 착색이 확인되는 (+), 용액의 갈변이 확실하게 확인될 수 있는 (++), 착색이 현저한 (+++)의 4단계로 평가하였다. 또한, 히드록시데센산의 용해도 측정에 사용한 pH 5.0 혹은 이보다 높은 pH의 시료(회수한 상청)를 25℃에서 가온하고, 히드록시데센산 농도가 5mg/mL가 되도록 25℃의 탈 이온수로 각각 희석하고, 이들을 유리제 캡 부착 유리병에 넣은 것을 4℃로 냉각한 상태에서 2시간 정치 후, 침전 발생 유무를 육안 관찰에 의해 확인하였다. 그 결과도 아울러 표 3에 나타낸다. 또한, 실험 1과 마찬가지의 방법으로 그 알레르겐성 및 콜라겐 산생 증강 작용의 유무를 측정하고, 아울러 표 3에 나타낸다.

표 3으로부터 명확한 바와 같이, 25℃에서 로열 젤리 분획물의 히드록시데센산의 용해도는 pH 5.0 이상에서 상승하고, pH 5.5 이상에서 급격하게 상승하며 pH 6.0 이상에서 현저한 상승이 확인되었다. 또한, 로열 젤리 분획물은 pH 9.0 이상에서 착색이 확인되었다. 착색 정도는 로열 젤리 분획물이 pH 1O.0 내지 12.0에서 ++로 판정되고, pH 13.0에서는 +++로 판정되었다. 또한, 용액을 냉각하였을 때의 침전 발생은 시험 시료의 pH를 5.0 이상, 바람직하게는 5.5 이상으로 조정하면 억제되고, 그 효과는 pH 6.0 이상에서 현저하게 되었다. 이 결과는 로열 젤리 분획물은 그 pH를 5.0 이상, 바람직하게는 5.5 이상, 더욱 바람직하게는 6.0 이상으로 함으로써 히드록시데센산의 용해도를 현저하게 높일 수 있음을 나타낸다. 또한, 착색 측면에서는, pH 1O.0 내지 12.0에서는 착색을 확실하게 확인할 수 있고, pH 13.0에서는 특히 현저하게 되었으므로, 백색계나 무색계 조성물의 조제에 사용하기 위해서는, 로열 젤리 분획물의 pH가 5.0 내지 9.5가 바람직하고, 6.0 내지 8.5가 특히 바람직하다고 판단하였다. 또한, 착색을 제외하면, 로열 젤리 분획물의 pH의 상한에 특별한 제한은 없지만, 한외 여과 막의 내성 측면을 고려하면, 보통, pH는 12.0 이하가 바람직하다. 또한, 이 결과는 한외 여과 전에 미리 생 로열 젤리의 pH를 조정함으로써 한외 여과액 중의 히드록시데센산의 용해도를 높일 수 있으므로 로열 젤리 분획물을 조제할 때에 생 로열 젤리로부터의 히드록시데센산 등의 용해도가 낮은 유기산의 회수율을 개선할 수 있음을 나타낸다.

<실험 4: 로열 젤리 분획물의 알레르겐성 시험>

실험 3에서, 생 로열 젤리의 pH를 조정하면 히드록시데센산 등의 회수율이 개선된다고 나타난 것으로부터, 미리 pH 조정한 생 로열 젤리를 한외 여과해서 조제한 로열 젤리 분획물의 알레르겐성을 조사하는 시험을 아래와 같이 실행하였다. 즉, 실험 2에서 사용한 것과 같은 생 로열 젤리를 물로 5배 희석하고, 6N의 수산화나트륨으로 pH를 7.2로 조정한 후, 실험 2의 시험 시료 1과 동일한 조제 방법으로 한외 여과 막을 사용해서 분획한 시험 시료(이하, 「pH 조정 시험 시료」라고 한다)(pH 조정 로열 젤리 분획물)를 조제하고, 이 pH 조정 시험 시료에 더해, 실험 2에서 조제한 시험 시료 1(pH 미조정 로열 젤리 분획물), 시험 시료 2(기존 정제 로열 젤리) 및 시험 시료 3(생 로열 젤리 물 희석 용액)을 이용하여, 히드록시데센산이 표 4에 나타낸 양의 시료를 사용하는 것 이외에는 실험 1과 동일한 방법으로 조사하였다. 또한, 래트를 사용한 PCA에는, 이들의 시료를 면역한 마우스의 혈청을 10배, 20배, 100배 및 200배로 희석해서 평가를 실행하고, 그 결과를 표 4에 나타낸다. pH 조정 시험 시료 또는 시험 시료 1로 면역한 마우스의 혈청에 대해서는 알레르겐성이 확인되지 않았으므로 10배 희석 및 20배 희석한 경우의 결과만을, 시험 시료 2 또는 시험 시료 3으로 면역한 마우스 혈청에 대해서는 강한 알레르겐성이 확인되었으므로 100배 희석 및 200배 희석한 경우의 결과만을 나타낸다. 또한, 면역에 사용한 각각의 시험 시료 중의 히드록시데센산 양 및 히드록시데센산과 단백질의 질량비를 표 4에 아울러 나타낸다.

표 4로부터 명확한 바와 같이, 로열 젤리의 알레르겐성은, 45㎍의 히드록시데센산을 함유하는 양의 pH 조정 시험 시료(pH 조정 로열 젤리 분획물) 또는 30㎍의 히드록시데센산을 함유하는 양의 시험 시료 1(pH 미조정 로열 젤리 분획물)로 면역한 마우스에서는 그 10배 희석 및 20배 희석한 혈청을 사용한 경우에도, PCA 반응 양성을 나타내는 혈청을 갖는 마우스 개체는 1마리도 확인되지 않았다. 이들에 대하여, 30㎍의 히드록시데센산을 함유하는 양의 시험 시료 2(기존 정제 로열 젤리)로 면역한 경우에는 45㎍의 히드록시데센산을 함유하는 양의 100배 희석 및 200배 희석한 혈청에서 각각 3 플러스 (+++), 1 플러스 (+)로 판정되고, 시험 시료 3(생 로열 젤리 물 희석 용액)으로 면역한 경우에는 100배 희석 및 200배 희석한 혈청에서 각각 4 플러스 (++++), 3 플러스 (+++)로 판정되었다. 이 결과는, 생 로열 젤리(시험 시료 3)와 비교해서, 국제 공개 W02004/21803호의 명세서에 기재된 기존 정제 로열 젤리(시험 시료 2)의 알레르겐성은 저하되었지만, 여전히 상당히 강한 알레르겐성을 가짐을 나타낸다. 이에 대하여, 미리 pH를 조정해서 한외 여과를 실행한 생 로열 젤리의 한외 여과액(pH 조정 시험 시료)은 pH 미조정 로열 젤리 분획물(시험 시료 1)과 마찬가지로 알레르겐성이 저감된 것으로 판명되었다.

<실험 5: 로열 젤리 중의 단백질 농도가 알레르겐에 끼치는 영향>

실험 2 및 실험 4의 결과로부터, 로열 젤리에 함유되는 단백질에 알레르겐성이 있음을 알 수 있으므로, 생 로열 젤리 중의 단백질 농도가 알레르겐에 끼치는 영향을 조사하는 실험을 아래와 같이 실행하였다. 즉, 실험 4로 조제한 pH 조정 시험 시료에, 조제시에 생성된 한외 여과 막의 내액을 가하고, 생 로열 젤리 유래의 히드록시데센산과 단백질이 표 5에 기재된 질량 비율이 되도록 시험 시료를 조제하였다. 이들 시험 시료의 알레르겐성을, 실험 1과 마찬가지의 방법으로, 45㎍의 히드록시데센산을 함유하는 양의 각각의 시험 시료를 마우스에 면역하고, 래트를 사용한 PCA에 의해 평가하여 그 결과를 표 5에 아울러 나타낸다. 또한, 래트를 사용한 PCA에서는 히드록시데센산과 단백질의 질량비가 1:0.05 혹은 그보다 단백질 양이 적은 시험 시료로 면역한 마우스의 혈청에 대해서는 모두 100배 또는 200배 희석한 혈청에서는 PCA 양성 반응은 확인되지 않았으므로, 10배 희석 및 20배 희석한 경우의 결과만을 나타낸다. 또한, 히드록시데센산과 단백질의 질량비가 1:0.2 혹은 그보다 단백질 양이 많은 시험 시료로 면역한 마우스 혈청에 대해서는 모두 10배 희석 및 20배 희석의 혈청에서 3 플러스 (+++) 이상의 강한 PCA 양성 반응이 확인되었으므로, 100배 희석 및 200배 희석한 것을 사용하였을 경우의 결과만을 나타낸다.

표 5로부터 명확한 바와 같이, 45㎍의 히드록시데센산을 함유하는 시험 시료로 면역하였을 때, 이 시험 시료의 히드록시데센산과 단백질의 질량비가 1:0.2 혹은 그보다 단백질 양이 많은 비율의 시험 시료로 면역한 마우스의 혈청에서는, 200배 희석한 혈청이라도 PCA 양성이 되어 시험 시료에 강한 알레르겐성이 확인되고, 1:0.05의 시험 시료로 면역한 마우스의 혈청에서는, 10배 희석한 혈청에서만 PCA 양성이 되어 약하면서 시험 시료에 알레르겐성이 확인되었다. 이들 시험 시료에 대하여, 히드록시데센산과 단백질의 질량비가 1:0.02 혹은 그보다 단백질 양이 적은 비율의 시험 시료로 면역한 마우스의 혈청에서는, 10배 희석한 혈청이라도 PCA 음성이 되어 알레르겐성은 전혀 확인되지 않았다. 이 결과는, 생 로열 젤리에 함유된 히드록시데센산과 단백질의 비율을, 히드록시데센산 1 질량부에 대하여 단백질을 0.05 질량부 미만, 바람직하게는 히드록시데센산 1 질량부에 대하여 단백질을 0.02 질량부 이하로 함유할 때까지 저감시킴으로써, 로열 젤리의 알레르겐성을 효과적으로 저감시킬 수 있음을 나타낸다.

<실험 6: 로열 젤리 분획물, 기존 정제 로열 젤리 및 생 로열 젤리가 갖는 생리 활성의 비교>

실험 1 내지 3에 있어서, 한외 여과 막으로 분획한 로열 젤리 분획물에서 생 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용이 유지되고 있는 것이 확인되었으므로, 생 로열 젤리가 갖는 그 밖의 생리 활성에 대해서도 유지되고 있는지 여부를 확인하는 시험을 아래와 같이 실행하였다. 즉, 실험 4에서 사용한 pH 조정 시험 시료 및 시험 시료 1 내지 3의 생리 활성에 대해서, 표 6에 나타내는 생리 활성의 유무와 그 정도에 대해서 조사하고, 그 결과를 표 6에 아울러 나타냈다. 또한, 각 시험의 모든 시험 시료에서, 그 시험 시료의 조제에 사용한, 생 로열 젤리로 환산해서 등량(等量)이 되는 양을 사용하였다. 각 생리 활성의 유무는 시험 시료 3(생 로열 젤리 물 희석 용액)의 경우의 활성(0), 이것과 동등한 활성(0), 활성은 있지만 시험 시료 3보다 약한 활성(△), 활성이 없는 것(×)의 3단계로 평가하였다. 또한, 표 6에 나타내는 생리 활성의 측정 방법은, 콜라겐 산생 증강 작용 및 IL-4 산생 억제 작용의 측정에서, 시험 시료로서, 그 시험 시료의 조제에 사용한, 생 로열 젤리로 환산해서 등량이 되는 양을 사용하는 것 이외에는 실험 1과 마찬가지의 방법으로 실시하였다. 또한, TNF-α는, 국제 공개 W02004/019971호 명세서의 실험 5-2에 기재된 IFN-γ 및 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide: LPS)로 자극한 BALB/c 마우스 복강내 세포에 의한 TNF-α 산생계를 사용한 방법으로, 혈청 IgE 억제 작용은 [Natural Medicines, 제55권, 제174 내지 180페이지(2001년)의 제175 내지 176페이지]의 재료와 방법의 항에 기재한 방법에 근거하여, 알레르겐으로서 흰자위 알부민에 대신해서 삼나무 화분(花粉) 알레르겐(주식회사 하야시바라 생물 화학 연구소 조제)을 사용해서 실행하였다. 또한, 항아토피 작용은, [International Immunopharmacology, 제3권, 제1313 내지 1324 페이지(2003년)의 제1314 내지 1318페이지의 재료와 방법(Materials and Methods)]의 항에 기재된 방법으로, 접촉 과민증 억제 작용은 [European Journal of Pharmacology, 제410권, 제93 내지 100페이지(2000년)의 제94 내지 95페이지]의 재료와 방법(Materials and Methods)의 항에 기재된 방법으로 판정하였다. 또한, 정소 기능 활성화 작용의 유무는 국제 공개 WO01/060388호 명세서의 실험 3에 기재된 방법에 준하여 햄스터를 사용해서 하기에 나타낸 방법으로 실행하였다.

<정소 기능 활성화 작용의 측정 방법>

생 로열 젤리로의 질량 환산으로 사료의 총 질량당 첨가량이 50ppm이 되도록, pH 조정한 시험 시료 또는 시험 시료 1 내지 3을 첨가해서 분말 사료를 조제하였다. 또한, pH 조정한 시험 시료에 대신하여, 동일 질량의, 무수 트레할로오스(후술하는 실시예 5에 기재한 방법으로 조제)를 첨가한 대조(對照) 분말 사료를 조제하였다. 50마리의 26주령의 웅성(雄性) 햄스터를 대조 분말 사료로 1주간 사육한 후, 무작위로 10마리씩 5군으로 나누고, 각 군에 시험 시료의 임의의 것을 첨가한 분말 사료 혹은 대조 분말 사료를 시판되는 분말 사료용 모이 공급기를 통해서 자유 섭취시키면서 12주간 사육하였다. 이 사육 기간 종료 후에 각 개체의 정소 기능을 이하와 같이 정소 표본을 해석함으로써 조사하였다. 즉, 우선, 모든 개체로부터 1개의 정소(우측)를 적출하고, 통상적인 방법에 따라 15％ 중성 완충 포르말린액으로 고정해서 정소 조직 표본을 만들었다. 이 표본의 절편을 만들고, 헤마톡시린-에오신(hematoxylin-eosin)(이오신)으로 염색한 후, 현미경 관찰 하에서, 정세관(精細管)을 조직학적으로 해석하였다. 각 표본에 있어서, 임의의 5개소를 100배의 배율로 목시(目視)하여, 1 시야(視野) 내의 정세관의 수를 계측하는 동시에, 계측된 정세관을, 퇴행성 변화를 나타내는 것(정세포의 변성·소실, 정세관의 공동 등)과, 조직 구조가 견지(堅持)되어 조정(造精)이 활발한 것으로 분류하였다. 각각의 군에 대해서, 모든 정세관에 대한 조정이 활발한 정세관의 점유율(％)을 계산하여, 그 점유율이 대조 분말 사료로 사육한 경우에 비해, 시험 시료 3을 함유하는 모이를 섭취시켰을 경우의 상승(0), 이것과 동등한 상승(0), 상승은 있지만 시험 시료 3을 함유하는 모이를 섭취시켰을 경우보다도 낮은 상승(△) 또는 상승이 없는 것(×)의 3단계로 판정하였다.

표 6으로부터 명확한 바와 같이, pH 조정 시험 시료(pH 조정 로열 젤리 분획물)는 표 6에 나타낸 모든 생리 활성에 대해서 시험 시료 3(생 로열 젤리 물 희석 용액)과 동등한 활성이 유지되었다. 또한, 시험 시료 1(pH 미조정 로열 젤리 분획물)은 측정된 7종류의 생리 활성중 TNF-α 산생 억제 작용, 항 아토피 작용 및 햄스터 정소 기능 활성화 작용에서는 시험 시료 3(생 로열 젤리 물 희석 용액)보다 활성이 저하되었지만 다른 4종류의 활성은 시험 시료 3과 동등한 활성이 유지되었다. 이것에 대하여, 시험 시료 2(기존 정제 로열 젤리)를 사용하였을 경우에는, 표 6에 나타낸 모든 생리 활성에 대해서 시험 시료 3(생 로열 젤리 물 희석 용액)보다 약한 활성밖에 유지되지 않았다. 이 결과는, 생 로열 젤리를 한외 여과 막으로 분획한 한외 여과액(pH 조정 시험 시료 및 시험 시료 1)은 시험 시료 2(기존 정제량 로열 젤리)에 비해 생 로열 젤리가 갖는 생리 활성 유지 측면에서 우수하며, 그 유지성의 높음으로부터 생 로열 젤리를 미리 pH를 조정해서 한외 여과한 한외 여과액(pH 조정 시험 시료)이 특히 우수한 것으로 판명되었다.

<실험 7: 로열 젤리 분획물, 기존 정제 로열 젤리 및 생 로열 젤리가 갖는 미백 작용의 비교>

로열 젤리에 함유되어 있는 히드록시데센산 등의 카르본산에는 티로시나아제(tyrosinase) 활성 저해 작용이 있다고 말해지고 있다(예를 들면, 일본국 특개평 9-315928호 공보 참조). 그래서, 로열 젤리 분획물 및 생 로열 젤리가 갖는 미백 작용을 비교하는 시험을 아래와 같이 실행하였다. 즉, 6웰 플레이트(벡톤·디킨슨사 판매)에, 10％ FCS(v/v) 함유하는 RPMI-1640 배지(시그마 알드리츠사 판매)에 부유시킨 B16 흑색종 세포를 4.0×10⁴개/2mL/웰이 되도록 파종해서 세포를 플레이트에 부착시켰다. 배양 상청을 제거한 후, 실험 4에서 사용한 pH 조정 시험 시료 및 시험 시료 1 내지 3을 10％ FCS(v/v)-함유 RPMI-1640 배지에서 희석하고, 이들 시료에 함유된 히드록시데센산의 최종 농도가 표 7에 나타낸 농도가 되도록 희석해서 4mL/웰에 첨가하였다. 또한, 양성 대조로서, B16 멜라노마 세포의 멜라닌 산생을 억제하는 것으로 알려져 있는 코지산, L-아스코르브산 2-글루코시드(주식회사 하야시바라 생물 화학 연구소 판매, 상품명 「AA2G」, 이하 「AA-2G」라고 약기한다) 및 히드록시데센산(알프레서파머 주식회사 판매)을 10％ FCS(v/v)-함유 RPMI-1640 배지에서 최종 농도가 표 7에 나타낸 농도가 되도록 희석하여 4mL/웰에 첨가하였다. 음성 대조로서 10％ FCS(v/v)-함유 RPMl-1640 배지를 더해서 배양하였다. 배양은 37℃, 5％(v/v) CO₂ 하에서 4일간 배양하고, 모든 웰에서 배양 2일째에 최초로 첨가한 시료 또는 양성 대조와 동일한 농도의 배지에서 배지 교환을 실행하였다. 배양 개시 4일 후에, 트립신―EDTA(트립신 농도 0.05％, 깁코 인비트로겐사 판매)을 500μL/웰에 첨가해서 B16 흑색종 세포를 거둔 후, 1.5mL용의 에펜도르프(eppendorf) 튜브로 회수하였다. 이 세포를 회수한 튜브를 5분간 원심(6000rpm) 처리해서, 상청을 제거하고, 둘베코의 생리 식염수(PBS(-))를 더해서, 세포를 1회 세정하였다. 다시, 5분간 원심(6000rpm) 처리한 후, 상청을 제거하고, 1N의 NaOH를 250μL/튜브에 첨가하여, 세포를 가용화해서, 실험 2와 마찬가지로 브래드포드법으로 단백질 양을 정량하여, 각 웰중 총 단백질 양을 구하였다. 상기 NaOH 가용화물 중, 단백질 정량에 사용한 잔부를, 30분간 펄펄 끓여, 450nm 흡광도를 측정하였다(Reference 650nm). 기지(旣知) 농도의 멜라닌(시그마사)을 적절하게 희석하고, 마찬가지로 알칼리 처리하여, 흡광도를 측정해서 검량선을 작성하고, 시험 시료, 양성 대조 또는 음성 대조를 더해서 배양한 B16 멜라노마 세포중 총 멜라닌 양을 구하였다. 시험 시료 또는 양성 대조를 첨가해서 배양하였을 때의 총 단백질 양 또는 총 멜라닌 양을, 각각, 음성 대조를 첨가해서 배양하였을 때의 총 단백질 양 또는 총 멜라닌 양으로 나누고, 100배로 하여, 음성 대조를 첨가해서 배양하였을 때의 총 단백질 양 또는 총 멜라닌 양을 100％로 하는 상대 값을 구해서 표 7에 아울러 나타낸다.

표 7로부터 명확한 바와 같이, 시험 시료 및 양성 대조를 첨가한 배지에서 배양하였을 경우에는 모두 그 농도에 의존한 멜라닌 생성의 억제가 확인되었다. 멜라닌 생성 억제의 강도 측면에서 pH 조정 시험 시료 및 시험 시료 1이 가장 강하고, 양성 대조로서 사용한 코지산에서도 강한 활성이 확인되었다. 히드록시데센산이나 AA-2G는 시험에 사용된 농도에서는 약한 멜라닌 생성 억제 작용밖에 나타내지 않았다. 또한, 시험 시료 2 및 시험 시료 3을 첨가한 경우에는, pH 조정 시험 시료 및 시험 시료 1을 첨가한 경우보다 멜라닌 생성의 억제 작용이 약하고, 게다가, 총 단백질 양도 낮은 것으로 판명되었다. 이 결과는, 로열 젤리 분획물의 멜라닌 생성 억제 작용이 히드록시데센산 이외의 성분에 유래함을 나타낸다. 또한, 시험 시료 1과 2는, 히드록시데센산 농도가 동일한 경우에 시험 시료 1 쪽이 시험 시료 2보다 강한 멜라닌 생성 억제 활성을 나타내고, 반대로, 총 단백질 양은 높기 때문에 한외 여과 등에 의해 고분자 획분을 제거함으로써 생 로열 젤리 중의 멜라닌 생성 억제 활성을 억제하는 성분이나 세포 대사를 저해하는 성분이 제거 내지 저감되어서, 로열 젤리가 갖는 멜라닌 생성 억제 활성이 증강되는 동시에 대사 저해가 저감함을 나타낸다. 또한, AA-2G와 pH 조정 시험 시료를 배지에 동시에 첨가하였을 경우에는 각각을 단독으로 첨가한 경우보다 강하게 멜라닌의 생성이 억제되기 때문에, 본 발명의 로열 젤리 분획물과 AA-2G는 상가적(相加的)으로 멜라닌 생성을 억제할 수 있다고 판단하였다.

<실험 8: 로열 젤리 분획물의 분말화에 끼치는 분말화 기제(基劑)의 영향>

로열 젤리 분획물에는 당질 및 아미노산류가 다량으로 포함되어 있으므로, 그 수용액을 그대로 분무 건조 등에 의해 건조하면, 갈변이 현저하고 흡습성에도 문제가 있어서 이러한 문제를 해결하기 위해서 로열 젤리 분획물의 분말화에 끼치는 분말화 기제의 영향을 조사하는 시험을 아래와 같이 실행하였다. 즉, 표 8에 나타낸, 덱스트로오스 당량(DE)이 다른 7종류의 덱스트린 및 글루코오스 37 질량부(고형물 환산)와, 실험 2로 조제한 로열 젤리 분획물 3 질량(고형분 환산)을 혼합하여, 통상적인 방법에 의해 동결 건조해서, 로열 젤리 분획물의 분말 표품을 각각 조제하였다. 이 분말 0.5g을 5mL의 정제수에 용해하고, 420nm 흡광도를 측정하였다. 또한, 나머지의 로열 젤리 분획물의 분말을, 분말화에 사용한 각각의 분말 기제마다 각각 4개의 알루미늄 필로우 용기에 봉입하고, 60℃, 상대 습도 85％의 조건으로 4주간 보존하였다. 보존 개시 1주간으로부터 1주간마다, 각각의 분말화 기제에 대해서, 각각 1개의 용기를 개봉해서, 보존 시작 시와 마찬가지로 정제수에 용해해서 420nm 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 표 8에 아울러 나타낸다. 또한, 별도로, 분말화 기제로서 사용한 각각의 덱스트린 및 글루코오스 자체의 수 용해도도 아울러 확인하였다. 즉, 20mL 비이커(직경 30mm)에 표 8에 나타낸 덱스트린 또는 글루코오스 10g과 이온 교환수 5g을 넣고, 스터러로 교반해서, 육안에 의해 덱스트린이 완전히 용해하였는지 여부를 확인하였다. 불용물이 남은 경우에는 육안으로 확인하면서, 추가로 이온 교환수를 조금씩 첨가해서 교반을 계속하여, 덱스트린이 완전히 용해하는데 필요한 최소의 이온 교환수 양을 계측하고, 그 결과를 표 8에 아울러 나타낸다. 또한, 시험에는 시판되는 덱스트린(마츠타니(松谷) 화학 주식회사 판매, 상품명 「파인덱스 #1」, 산와(三和) 전분 주식회사 판매, 상품명 「산덱 #70, #100, #150, #250 및 #300」: 각각 표 8의 시료 1 내지 6에 대응)을 사용하였다.

표 8로부터 명확한 바와 같이, 글루코오스를 분말화 기제로 사용한 경우에는 보존 1주간에서 갈변이 발생하였다. 또한, DE 28.2 또는 DE 21.3의 덱스트린을 사용한 경우에는 보존 2주간에서 흡광도가 0.3 이상이 되어 강한 갈변이 발생하였다. 이에 대하여, DE가 16.7 이하의 덱스트린을 사용한 경우에는 보존 4주간에서도 DE O.3 이하로 낮고, DE가 21.3 이상의 덱스트린이나 글루코오스를 분말화 기제로서 사용한 경우에 비해 갈변 진행이 억제되었다. 또한, 분말화 기제 자체의 수 용해도는 DE가 작아짐에 따라 저하하였다. 이 결과는, 본 발명의 로열 젤리 분획물의 분말화에는 분말화 기제로서 DE가 16.7 이하인 덱스트린이 바람직하고, 11.5 이하인 덱스트린이 특히 바람직함을 나타낸다. 또한, 본 발명의 로열 젤리 분획물의 분말의 수 용해도를 고려하면, DE가 6.1인 덱스트린보다 DE가 7.1 이상인 덱스트린이 바람직하다고 판단하였다.

이하, 구체적인 실시예를 들어 본 발명을 더욱 자세하게 설명하지만, 본 발명은 이러한 실시예에 의해 전혀 한정되지 않는다.

(실시예 1)

<로열 젤리 분획물의 조제>

생 로열 젤리(브라질산) 10kg에 4℃의 탈 이온수 40kg을 가해서 교반하여 균일하게 분산시켰다. 이어서, 이 현탁액을 연속 원심 분리기(주식회사 쿠보타(久保田) 제작소제, 모델 KT-2000G)를 이용해서 10,000×g, 유속 10L/hr의 조건으로 원심 분리하여 상청과 침전으로 분리하였다. 얻어진 상청에 6N의 수산화나트륨을 첨가하여, pH를 7.2로 조정한 후, 분획 분자량 6,000달톤의 한외 여과 막(아사히 화성 판매, 상품명 「AIP 2013」)으로 여과하였다. 소량의 탈 이온수로 물로 씻어내서, 한외 여과액과 한외 여과 농축액으로 분리하였다. 이 한외 여과액 약 40L를 감압 농축법에 의해 약 5kg까지 농축해서 로열 젤리 분획물을 조제하였다. 본 품은, 생 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용, IL-4 산생 억제 작용, 정소 기능 활성화 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되는 것 이외에, 용해성이 생 로열 젤리에 비해서 향상되었다. 또한, 본 품은 로열 젤리의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 알레르겐성이 생 로열 젤리나 기존 정제 로열 젤리의 경우에 비해 저감되어 있으므로, 그대로 분말화하여, 혹은, 이 분말을 조립(造粒) 또는 타정해서, 건강 보조 식품으로 사용할 수 있다. 또한, 본 품은 음식물, 사료, 모이, 애완 동물 먹이, 화장품, 의약품, 의약 부외품 또한 잡화 조성물 등의 조성물의 조제에 유리하게 이용할 수 있다.

본 품을 실험 2의 방법에 의해 분석한 바, pH 7.0, 단백질의 회수율 0.003％가 되어, SDS-PAGE에 의한 단백질 밴드는 확인되지 않았고, 알레르겐성(본 품으로 면역한 마우스 혈청을 10배 희석해서 분석)은 확인되지 않았다. 히드록시데센산과 단백질의 질량비는 1:0.0001, 히드록시데센산과 질소량의 질량비는 1:0.15이었다.

(실시예 2)

<로열 젤리 분획물의 조제>

생 로열 젤리(중국산, 히드록시데센산 22.8mg/g, 단백질 120mg/g을 함유) 20kg에 4℃의 탈 이온수 80kg을 가해서 교반하여 균일하게 분산시켰다. 이어서, 이 현탁액에 6N 수산화나트륨을 더해서 pH를 7.5로 조정하고, 분획 분자량 6,000달톤의 한외 여과 막(아사히카세히 판매, 상품명 「AIP 2013」)으로 여과하였다. 소량의 탈 이온수에 의해 수압(水押)하여, 한외 여과액과 한외 여과 농축액으로 분리하였다. 이 한외 여과액 약 160L를 감압 농축법에 의해 40℃에서 약 40kg까지 농축해서 로열 젤리 분획물을 조제하였다. 본 품은 생 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용, IL-4 산생 억제 작용, 정소 기능 활성화 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되는 것 이외에, 생 로열 젤리에 함유된 히드록시데센산의 회수율이 96％로 거의 손실도 없고, 게다가, 히드록시데센산 용해성이 생 로열 젤리에 비해 향상되었다. 또한, 본 품은 로열 젤리의 유용한 생리 활성이 유지되고 알레르겐성이 생 로열 젤리나 기존 정제 로열 젤리의 경우에 비해서 저감되어 있으므로, 그대로 분말화하거나 혹은 이 분말을 조립 또는 타정하여 건강 보조 식품으로 사용할 수 있다. 또한, 본 품은 음식물, 사료, 모이, 애완 동물 먹이, 화장품, 의약품, 의약 부외품 또한 잡화 조성물 등의 조성물의 조제에 유리하게 이용할 수 있다. 또한, 본 품 또는 본 품을 함유하는 조성물은 그대로 혹은 농후(濃厚) 사료, 조(粗)사료, 애완 동물 먹이 등의 사료·모이에 첨가하거나, 음료수에 용해해서 종마, 종우, 종돈 등의 번식용 동물의 수컷에게 경구 섭취시킴으로써, 이들 동물의 정소 기능을 활성화하여 번식률을 향상시킬 수 있다.

본 품을 실험 2의 방법에 의해 분석한 바, pH 7.0, 단백질의 회수율이 0.005％가 되어, SDS-PAGE에 의한 단백질 밴드는 확인되지 않고, 알레르겐성(본 품으로 면역한 마우스 혈청을 10배 희석해서 분석)은 확인되지 않았다. 히드록시데센산과 단백질의 질량비는 1:0.0001, 히드록시데센산과 질소량의 질량비는 1:0.11이었다.

(실시예 3)

<로열 젤리 분획물의 조제>

생 로열 젤리(중국산) 0.5kg에 4℃의 탈 이온수 2kg을 더해서 교반하여 균일하게 분산시켰다. 이어서, 이 현탁액에 6N의 수산화나트륨을 더해서 pH를 6.5로 조정한 후, 10,000×g로 원심 분리하여 상청과 침전으로 분리하였다. 얻어진 상청 2.4L를 감압 농축법에 의해 약 0.5kg까지 농축해서, 이것을 도요 펄 HW-40F 겔(주식회사 토소 판매)을 이용한 겔 여과 크로마토그래피에 제공하였다. 탈 이온수로 용출하여 분자량 6,000 이하의 저분자 획분을 회수하고, 감압 증발기(시바타(柴田) 과학 주식회사제, RE-10E-100형)를 이용해서 40℃에서 0.25까지 농축하여 로열 젤리 분획물(pH 6.7)을 조제하였다. 본 품은, 히드록시데센산의 용해성이 생 로열 젤리에 비해 향상되어 있다. 또한, 본 품은, 생 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용, IL-4 산생 억제 작용, 정소 기능 활성화 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되고 알레르겐성이 생 로열 젤리나 기존 정제 로열 젤리의 경우에 비해 저감되어 있으므로, 그대로, 분말화하여 혹은 이 분말을 조립 또는 타정해서 건강 보조 식품으로 사용할 수 있다. 또한, 본 품은 음식물, 사료, 모이, 애완 동물 먹이, 화장품, 의약품, 의약 부외품 또한 잡화 조성물 등의 조성물의 조제에 유리하게 이용할 수 있다. 또한, 본 품 또는 본 품을 함유하는 조성물은 그대로 혹은 농후 사료, 조사료, 애완 동물 먹이 등의 사료·모이에 첨가하거나, 음료수에 용해해서 경구적으로, 종마, 종우, 종돈 등의 번식용 동물의 수컷에게 섭취시킴으로써 이들 동물의 정소 기능을 활성화하여 번식률을 향상시킬 수 있다.

(실시예 4)

<로열 젤리 분획물의 조제>

생 로열 젤리(대만산) 0.5kg에 4℃의 탈 이온수 4kg을 더해서 교반하여 균일하게 분산시켰다. 이어서, 10,000×g로 원심 분리하여 상청과 침전으로 분리하였다. 얻어진 상청 약 4.4L를 감압 농축법에 의해 약 0.5kg까지 농축하고, 10,000×g로 원심 분리하여 상청과 침전으로 분리하였다. 이 상청을 도요 펄 HW-40F 겔(주식회사 토소 판매)을 이용한 겔 여과 크로마토그래피에 제공하였다. 탈 이온수로 용출하여, 분자량 6,000 이하의 저분자 획분을 회수하고, 감압 증발기(시바타 과학 주식회사제, RE-10E-100형)를 이용해서 40℃에서 0.5kg까지 농축하여, 로열 젤리 분획물(pH 6.7)을 조제하였다. 본 품은 생 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용, IL-4 산생 억제 작용, 정소 기능 활성화 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되고 있으며, 또한, 알레르겐성이 생 로열 젤리나 기존의 정제 로열 젤리에 비해 저감되어 있으므로, 그대로, 분말화하여 혹은 이 분말을 조립 또는 타정하여 건강 보조 식품으로 사용할 수 있다. 또한, 본 품은 음식물, 사료, 모이, 애완 동물 먹이, 화장품, 의약품, 의약 부외품, 또한 잡화 조성물 등의 조성물의 조제에 유리하게 이용할 수 있다.

(실시예 5)

<로열 젤리 분획물 분말의 제조>

시판되는 α, α-트레할로오스의 함수 결정(주식회사 하야시바라 상사 판매, 상품명 「Treha」)을, 재킷(jacket)부 회전식 진공 건조기를 이용하여, 온도 90℃, 기압 300 내지 350mmHg의 조건으로 약 7시간 감압 건조하였다. 그 후, 온도를 상온으로, 기압을 상압(常壓)으로 되돌리고, 제품을 회수하여, 무수 α, α-트레할로오스를 얻었다. 이 무수 α, α-트레할로오스 8kg을 유동층 조립기(후지 파우덜 주식회사 판매, 형식 번호 「20F(G)」)에 넣고, 실시예 2의 방법으로 조제한 로열 젤리 분획물 9kg을 분무해서, 로열 젤리 분획물의 건조물 9kg을 조제하였다. 또한, 이것을 만능 혼합기(달톤사 판매, 형식 번호 「60MD-rrs」)로 분쇄하여, 로열 젤리 분획물 함유 분말을 조제하였다. 본 품은, 생 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용, IL-4 산생 억제 작용, 정소 기능 활성화 작용 등의 생리 활성이 유지되고 알레르겐성이 생 로열 젤리나 기존의 정제 로열 젤리에 비해 저감되어 있으므로, 그대로, 조립해서 혹은 타정해서 건강 보조 식품으로 사용할 수 있다. 또한, 본 품은, 음식물, 사료, 모이, 애완 동물 먹이, 화장품, 의약품, 의약 부외품 또한 잡화 조성물 등의 조성물의 조제에 유리하게 이용할 수 있다. 또한, 본 품 또는 본 품을 함유하는 조성물은 그대로 혹은 농후 사료, 조사료, 애완 동물 먹이 등의 사료·모이에 첨가하거나, 음료수에 용해해서 경구적으로, 종마, 종우, 종돈 등의 번식용 동물 수컷에게 섭취시킴으로써 이들 동물의 정소 기능을 활성화하여 번식률을 향상시킬 수 있다.

(실시예 6)

<로열 젤리 분획물 분말의 제조>

α, α-트레할로오스의 함수 결정(주식회사 하야시바라 상사 판매, 상품명 「Treha」) 8kg을 유동층 조립기(후지 파우덜 주식회사 판매, 형식 번호 「20F(G)」)에 넣어, 실시예 2의 방법으로 조제한 로열 젤리 분획물 9kg을 분무해서, 로열 젤리 분획물의 건조물 9kg을 조제하였다. 또한, 이것을 만능 혼합기(달톤사 판매, 형식 번호 「60MD-rrs」)로 분쇄하여, 로열 젤리 분획물-함유 분말을 조제하였다. 본 품은, 생 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용, IL-4 산생 억제 작용, 정소 기능 활성화 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되고 알레르겐성이 생 로열 젤리나 기존의 정제 로열 젤리에 비해 저감되어 있으므로, 그대로, 조립해서 혹은 타정해서 건강 보조 식품으로 사용할 수 있다. 또한, 본 품은, 음식물, 사료, 모이, 애완 동물 먹이, 화장품, 의약품, 의약 부외품 또한 잡화 조성물 등의 조성물의 조제에 유리하게 이용할 수 있다. 또한, 본 품 또는 본 품을 함유한 조성물은, 그대로 혹은 농후 사료, 조사료, 애완 동물 먹이 등의 사료·모이에 첨가하거나, 음료수에 용해해서 종마, 종우, 종돈 등의 번식용 동물의 수컷에게 경구 섭취시킴으로써 이들 동물의 정소 기능을 활성화하여 번식률을 향상시킬 수 있다.

(실시예 7)

<로열 젤리 분획물 분말의 제조>

고형물 환산으로, 실시예 2의 방법으로 조제한 로열 젤리 분획물 1 질량부에 대하여, α, α-트레할로오스의 당질 유도체 함유 당질(주식회사 하야시바라 생물 화학 연구소 판매, 상품명 「톨나레」) 5 질량부를 첨가하고, 통상적인 방법에 의해 분무 건조하여 로열 젤리 분획물 분말을 조제하였다. 본 품은 생 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용, IL-4 산생 억제 작용, 정소 기능 활성화 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되고 알레르겐성이 생 로열 젤리나 기존의 정제 로열 젤리에 비해 저감되어 있으므로, 그대로, 조립해서 혹은 타정해서 건강 보조 식품으로서 사용할 수 있다. 또한, 본 품은 음식물, 사료, 모이, 애완 동물 먹이, 화장품, 의약품, 의약 부외품 또한 잡화 조성물 등의 조성물의 조제에 유리하게 이용할 수 있다. 또한, 본 품 또는 본 품을 함유한 조성물은 그대로 혹은 농후 사료, 조사료, 애완 동물 먹이 등의 사료·모이에 첨가하거나, 음료수에 용해해서 경구적으로, 종마, 종우, 종돈 등의 번식용 동물의 수컷에게 섭취시킴으로써, 이것들 동물의 정소 기능을 활성화하여, 번식률을 향상시킬 수 있다.

(실시예 8)

<로열 젤리 분획물 분말의 제조>

실시예 1에서 조제한 로열 젤리 분획물 1 질량부(고형물 환산)에, 시판되는 덱스트린(주식회사 산와 전분 공업 주식회사 판매, 상품명 「산덱 #100」) 12 질량부를 더해서 교반 용해하고, 통상적인 방법에 의해 동결 건조하여 로열 젤리 분획물 분말을 조제하였다. 본 품은, 생 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용, IL-4 산생 억제 작용, 정소 기능 활성화 작용 등의 생리 활성이 유지되고 알레르겐성이 생 로열 젤리나 기존의 정제 로열 젤리에 비해 저감되어 있으므로, 그대로, 조립해서 혹은 타정해서 건강 보조 식품으로 사용할 수 있다. 또한, 본 품은 음식물, 사료, 모이, 애완 동물 먹이, 화장품, 의약품, 의약 부외품 또한 잡화 조성물 등의 조성물의 조제에 유리하게 이용할 수 있다. 또한, 본 품 또는 본 품을 함유한 조성물은 그대로 혹은 농후 사료, 조사료, 애완 동물 먹이 등의 사료·모이에 첨가하거나, 음료수에 용해해서 종마, 종우, 종돈 등의 번식용 동물의 수컷에게 경구 섭취시킴으로써 이들 동물의 정소 기능을 활성화하여 번식률을 향상시킬 수 있다.

(실시예 9)

<건강 보조 식품>

실시예 8에서 조제한 로열 젤리 분획물 분말 98 질량부에 수크로오스 당 지방산 에스테르 2 질량부를 가해서 균질하게 혼합하고, 타정기를 이용해서 1정당 약 200mg의 정제로 성형하였다. 본 품은 간편하게 이용할 수 있으며, 또한 저효율을 나타내는 조성물이다. 본 품은 생 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용, IL-4 산생 억제 작용, 정소 기능 활성화 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되고 미백 작용도 증강되어 있다. 또한, 본 품은 알레르겐성이 생 로열 젤리나 기존의 정제 로열 젤리에 비해 저감되어 있고, 부드러운 단맛을 나타내므로, 일상적으로 이용하는, 건강의 유지, 증진, 미백, 아름다운 피부, 미용, 주름 방지, 노화 방지 등을 위한 건강 보조 식품으로서 유용하다.

(실시예 10)

<건강 보조 식품>

실시예 5의 방법에 준해서, 무수 α, α-트레할로오스 8.5 질량부에 대하여 실시예 2의 방법으로 얻은 로열 젤리 분획물 0.5 질량부를 더해, 실온에서 교반·혼합해서 로열 젤리 분획물 분말을 조제하였다. 이 분말 9 질량부, 당 전이 헤스페리진(하야시바라 상사 판매, 상품명 「하야시바라 헤스페리진 S」) 0.5 질량부, 풀룰란(주식회사 하야시바라 상사 판매, 상품명 식품 첨가물 「풀룰란」) 0.5 질량부를 균질하게 혼합해서 로열 젤리 분획물 배합 조성물을 조제하였다. 이 로열 젤리 분획물 배합 조성물을, 타정기를 이용해서 1정당 약 300mg의 정제로 성형하였다. 본 품은 로열 젤리의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 미백 작용도 증강되어 있다. 또한, 본 품은, 알레르겐성이 저감하고 있으며, 간편하게 이용할 수 있고, 또한 저효율을 나타내는 조성물이다. 본 품은 부드러운 단맛과 적당한 산미에 의해 양호한 정미(呈味)를 나타내므로, 건강의 유지, 증진, 미백, 아름다운 피부, 미용, 주름 방지, 노화 방지 등을 위해 일상적으로 이용하는 건강 보조 식품으로서 유용하다.

(실시예 11)

<건강 보조 식품>

실시예 6의 방법에 준하여, 함수 결정α, α-트레할로오스 7.5 질량부에 대하여 실험 1의 방법으로 얻은 로열 젤리 분획물 1 질량부를 함유하는 로열 젤리 분획물 분말을 조제하였다. 이 분말 8.5 질량부, 말티톨 1.3 질량부, L-트립토판 0.2 질량부를 균질하게 혼합해서 로열 젤리 분획물 배합 조성물을 조제하였다. 본 품은 로열 젤리의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 미백 작용도 증강되어 있다. 또한, 본 품은 알레르겐성이 저감되어 있으며, 간편하게 이용할 수 있고, 또한 저효율을 나타내는 로열 젤리 분획물 조성물이다. 본 품은 부드러운 단맛과 적당한 산미에 의해 양호한 정미를 나타내므로, 건강의 유지, 증진, 미백, 아름다운 피부, 미용, 주름 방지, 노화 방지 등을 위해 일상적으로 이용하는 건강 보조 식품으로서 유용하다.

(실시예 12)

<아이스크림>

생 크림(유지 함량 약 46 질량％）18 질량부, 탈지 분유 7 질량부, 전유(全乳) 51 질량부, 설탕 10 질량부, 락토수크로오스 함유 분말(상품명 「유과 올리고」) 4 질량부, 풀룰란 2 질량부 및 아라비아 검 2 질량부의 혼합물을 용해하여, 70℃에서 30분간 유지해서 살균한 후, 균질기로 유화 분산시키고, 이어서 3 내지 4℃까지 급냉하고, 이것에, 실시예 2의 방법으로 얻은 로열 젤리 분획물 4 질량부를 더해서 더 혼합하고, 하룻밤 숙성한 후, 냉동기로 동결시켜서 아이스크림을 얻었다. 본 품은, 적당한 단맛과 고상한 풍미를 나타내는 동시에, 로열 젤리의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 미백 작용도 증강되어 있다. 또한, 본 품에는 알레르겐성이 저감된 로열 젤리 분획물이 배합되어 있으므로 건강의 유지·증진, 미백, 아름다운 피부, 미용, 주름 방지, 노화 방지 등에 주효한 아이스크림이다.

(실시예 13)

<감주>

백미 10 질량부를 통상적인 방법에 따라 물을 더해서 밥을 짓고, 이어서, 얻어진 밥을 냉각해서 55℃로 하여, 통상적인 방법에 의해 조제한 누룩 30 질량부와 식염 0.1 질량부를 혼합해서 50 내지 55℃에서 8시간 유지, 이것을 믹서에 넣어, 약 25℃까지 더 냉각한 시점에서, 실시예 1의 방법으로 얻은 로열 젤리 분획물 2 질량부를 가해서 혼합한 후에 소포(小包)에 충전하여 감주를 얻었다. 본 품은 색조도 좋고, 풍미가 풍부한 고품질 감주인 동시에, 건강의 유지·증진, 미백, 아름다운 피부, 미용, 주름 방지, 노화 방지를 위한 음료로서 유용하다.

(실시예 14)

<건강 보조 음료>

무수 결정 말토오스(하야시바라 상사 판매, 상품명 「파인토스」) 500 질량부, 실시예 1의 방법으로 얻은 로열 젤리 분획물 100 질량부, 분말 난황 190 질량부, 탈지 분유 200 질량부, 당 전이 비타민 C(주식회사 하야시바라 상사 판매, 상품명 「아스코 프레시」) 2 질량부, 염화 나트륨 4.4 질량부, 염화 칼륨 1.85 질량부, 황산 마그네슘 4 질량부, 티아민 0.01 질량부, 아스코르브산 나트륨 0.1 질량부, 비타민 E 아세테이트 0.6 질량부 및 니코틴산 아미드 0.04 질량부로 이루어진 배합물을 조제하였다. 이 배합물 25 질량부를 정제수 150 질량부에 균일하게 분산·용해시켜서, 150g씩 갈색 유리병에 봉입하였다. 본 품은 로열 젤리의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 알레르겐성이 저감되어 있는 동시에, 영양원이 보충되어 있으므로, 건강 유지, 성장 촉진, 병의 예방, 치료의 촉진, 스포츠 후의 피로 회복 촉진, 미백, 아름다운 피부, 미용, 주름 방지, 노화 방지 등을 목적으로 하는 건강 보조 음료로서 유리하게 이용할 수 있다. 또한, 본 품은, 인간뿐만 아니라, 가축 등의 동물을 위한 경구 섭취 또는 경관(經管) 투여용 조성물로도 유리하게 이용할 수 있다.

(실시예 15)

<건강 보조 식품>

하기 성분을 연혼합(練混合)하고, 압출 조립하여, 유동층 건조해서, 바스켓(basket) 과립을 조제하였다. 이 과립을 1.5그램씩 분포(分包)하였다.

실시예 8에서 조제한 로열 젤리 분획물 함유 분말 30 질량부

에리트리톨 50 질량부

아스코르브산2-글루코시드 7.5 질량부

수크로오스(프로스트(frost) 슈거) 6 질량부

코엔자임 Q₁₀ 5 질량부

비타민 B₁ 0.1 질량부

비타민 B₂ 0.1 질량부

비타민 B₆ 0.1 질량부

파인애플 파우더 0.5 질량부

오렌지 파우더 0.2 질량부

복숭아 향료 0.5 질량부

본 품은, 로열 젤리의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 알레르겐성이 저감되어 있는 동시에, 비타민류가 보충되어 있으므로, 건강 유지, 성장 촉진, 질병 예방, 치료 촉진, 운동후 피로 회복 촉진, 미백, 아름다운 피부, 미용, 주름 방지, 노화 방지 등을 목적으로 하는 건강 보조 식품으로서 유리하게 이용할 수 있다. 또한, 본 품은, 인간뿐만 아니라, 가축 등의 동물에게도 유리하게 이용할 수 있다.

(실시예 16)

<애완 동물 먹이(구미(gummy))>

설탕 30 질량부에 물 8 질량부를 가해 가열 용해하고, 이것에 물엿 50 질량부를 가해 브릭스 당도 85 내지 90°로 바짝 조린 후, 80℃ 이하까지 냉각하였다. 이어서, 이 당액에, 물 10 질량부의 물에 젤라틴 7 질량부를 가열 용해한 것을 가하고, 추가로 비프(beef) 엑기스 2 질량부, 50 질량％ 시트르산 용액 3 질량부, 실시예 1의 방법으로 얻은 로열 젤리 분획물 1 질량부, 향료를 적정량 더해서 균일하게 혼합하였다. 얻어진 배합물을 스타치 몰드(starch mold)에 나누어 붓고, 밤새 방치해서 구미 형상의 애완 동물 먹이를 조제하였다. 본 품은, 로열 젤리의 유용한 생리 활성이 유지되고 알레르겐성이 저감된 로열 젤리 분획물을 배합한 동시에, 영양원이 보충되어 있으므로, 애완 동물의 건강 유지, 성장 촉진, 질병 예방, 치료 촉진 등을 목적으로 하는 애완 동물 먹이로서 유리하게 이용할 수 있다. 또한, 본 품은, 개, 고양이뿐만 아니라, 각종 애완 동물 및 가축 등의 동물을 위한 경구 섭취용 조성물로도 유리하게 이용할 수 있다. 또한, 본 품은 종마, 종우, 종돈 등의 번식용 동물의 수컷에게 경구 섭취시킴으로써 이들 동물의 정소 기능을 활성화하여 번식률을 향상시킬 수 있다.

(실시예 17)

<피부 외용 크림>

이하의 배합 처방에 근거하여 통상적인 방법으로 피부 외용 크림을 조제하였다.

(처방） (％)

모노 스테아르산 폴리옥시에틸렌 글리세린 2

자기 유화형(self emulsifying) 모노 스테아르산 글리세린 5

베헤닌산 에이코사닐(eicosanyl) 1

유동 파라핀 1.9

트리옥탄산 트리메티롤 프로판 1

1, 3-부틸렌 글리콜 5

락트산 나트륨액 10

파라옥시 벤조산 메틸 0.1

복숭아 잎 엑기스 1.5

정제수 62.2

실시예 1의 방법으로 조제한 로열 젤리 분획물 2

본 품은 우수한 보습성을 나타내는 동시에, 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용이나 IL-4 산생 억제 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 미백 작용도 증강되고, 알레르겐성도 저감되어 있으므로, 알레르기 증상을 발생시킬 염려 없이 피부의 싱싱함을 유지하는 미백, 미용, 주름 방지, 노화 방지 등을 목적으로 하는 기초 화장품으로서 유용하다.

(실시예 18)

<유액>

이하의 배합 처방에 근거하여 통상적인 방법으로 유액을 조제하였다.

(처방） (％)

폴리옥시에틸렌(20 E.0)폴리옥시

프로필렌(2 E.0) 세틸 알코올 1

실리콘 KF96(20cs)(신에츠 화학 공업(信越化學工業)

주식회사 판매) 2

유동 파라핀(중(中) 점도) 3

1, 3-부틸렌 글리콜 5

4-n-부틸 레조르시놀 0.3

글리세린 2

에틸 알코올 1

카복시비닐 폴리머 0.3

히드록시프로필 셀룰로오스 0.1

2-아미노 메틸 프로판올 0.1

당 전이 나린진(주식회사 하야시바라 생물 화학

연구소 제조, 글루코실나린진의 순도 96％） 0.5

L-아스코르브산-2-글루코시드(주식회사 하야시바라

생물 화학 연구소 판매, 상품명 「AA2G」) 1

실험 2의 방법으로 조제한 로열 젤리 분획물 1

산화 방지제 적정량

방부제 적정량

pH 조정용 완충제 적정량

정제수를 더해서 전량을 100％로 한다.

본 품은 우수한 보습성을 나타내는 동시에, 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용이나 IL-4 산생 억제 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 미백 작용도 증강되고, 알레르겐성도 저감되어 있으므로, 알레르기 증상을 발생시킬 염려 없이 피부의 싱싱함을 유지하는, 미백, 미용, 주름 방지, 노화 방지 등을 목적으로 하는 기초 화장품으로서 유용하다.

(실시예 19)

<로션>

이하의 배합 처방에 근거하여 통상적인 방법으로 로션을 조제하였다.

(처방） (％)

히알루론산 나트륨(1％ 수용액) 20

α, α-트레할로오스의 당질 유도체 2

솔비톨액(60％ 수용액) 2.1

실험 4의 방법으로 조제한 pH 조정 로열 젤리 분획물 1

감초 엑기스 0.5

카밀레 엑기스 0.05

세이지 엑기스 1

알로에 액즙말 0.001

시트르산 0.02

시트르산 나트륨 0.18

파라옥시 벤조산 메틸 0.05

몰식자산 프로필 0.02

정제수를 더해서, 전량을 100％로 한다.

(실시예 20)

<화장수>

이하의 배합 처방에 근거하여 통상적인 방법으로 화장수를 조제하였다.

(처방） (％)

글리틸리틴산 디칼륨 0.2

시트르산 0.1

시트르산 나트륨 0.3

α, α-트레할로오스의 당질 유도체 함유 시럽(주식회사

하야시바라 생물 화학 연구소 판매, 상품명 「톨나레」) 2

에탄올 5

실험 4의 방법으로 조제한 pH 조제 로열 젤리 분획물 2

감광소 201호 0.0001

에틸 파라벤 0.1

정제수를 더해서 전량을 100％로 한다.

본 품은 우수한 보습성을 나타내는 동시에, 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용이나 IL-4 산생 억제 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 미백 작용도 증강되며, 알레르겐성도 저감되어 있으므로, 알레르기 증상을 발생시킬 염려 없이 피부의 싱싱함을 유지하는, 미백, 미용, 주름 방지, 노화 방지 등을 목적으로 하는 기초 화장품으로서 유용하다.

(실시예 21)

<육모제(育毛劑)>

이하의 배합 처방에 근거하여 통상적인 방법으로 육모제를 조제하였다.

(처방） (％)

글리틸리틴산 디칼륨 0.1

감광소 301호 0.005

함수 결정 α, α-트레할로오스 0.25

글리세린 2

α, α-트레할로오스의 당질 유도체 함유 당질, 주식회사

하야시바라 생물 화학 연구소 판매, 상품명 「톨나레」) 0.01

실시예 2의 방법으로 조제한 로열 젤리 분획물 0.5

당 전이 헤스페리진(주식회사 하야시바라 생물 화학

연구소 판매, 상품명 「알파글루코실헤스페리진」) 0.01

당 전이 나린진(주식회사 하야시바라 생물 화학 연구소

판매 상품명 글루코실나린진의 순도 65％） 0.1

당 전이 루틴(주식회사 하야시바라 생물 화학 연구소 판매,

상품명 「알파글루코실루틴」) 0.01

쪽풀 추출물(주식회사 하야시바라 생물 화학 연구소 판매,

상품명 「쪽 루 로스」) 0.5

해초 엑기스 0.02

용담과 월년초 엑기스 3

모란 엑기스 0.1

에탄올 45

정제수를 더해서 전량을 100％로 한다.

본 품은 우수한 보습성을 나타내는 동시에, 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용이나 IL-4 산생 억제 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 알레르겐성도 저감되어 있으므로, 알레르기 증상을 발생시킬 염려 없이, 두피의 염증이나 노화 방지 효과를 갖고, 항균성도 강함으로, 육모 효과가 우수하고, 비듬 발생이나 탈모를 억제하여, 두피를 청결하게 유지할 수 있는 헤어 토닉 형태의 피부 외용제로서 유용하다.

(실시예 22)

<샴푸>

이하의 배합 처방에 근거하여 통상적인 방법으로 샴푸를 조제하였다.

(처방） (％)

피록톤 올라민 0.5

에데트산 2나트륨 0.3

감광소 201호 0.002

시트르산 0.3

살리실산 나트륨 0.2

1, 3-부틸렌 글리콜 3

폴리옥시에틸렌 라우릴에테르 황산 나트륨 6.75

야자유 지방산 디에탄올 아미드 2

라우릴 황산 트리에탄올 아민 10

폴리옥시에틸렌 라노린산(80 E.0) 0.5

2-알킬―N-카복시메틸-N-히드록시에틸

이미다졸리니움 베타인 10

히드록시에틸셀룰로오스히드록시프로필트리메틸

암모늄클로리드에테르 0.8

실시예 2의 방법으로 조제한 로열 젤리 분획물 3

쪽풀 추출물(주식회사 하야시바라 생물 화학 연구소

판매, 상품명 「쪽 루 로스」, 1, 3-부틸렌글리콜을 30％

함유하는 쪽풀의 물 추출물) 2

향료 0.2

정제수를 더해서 전량을 100％로 한다.

본 품은 우수한 보습성을 나타내는 동시에, 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용이나 IL-4 산생 억제 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 미백 작용도 증강되고, 알레르겐성도 저감되어 있으므로, 알레르기 증상을 발생시킬 염려 없이 피부의 싱싱함을 유지하는, 미백, 미용, 주름 방지, 노화 방지 등의 효과를 갖는 샴푸이다.

(실시예 23)

<린스>

이하의 배합 처방에 근거하여 A 성분을 열 혼합한 것에, B 성분을 가열 혼합한 것을 혼합하여, 통상적인 방법으로 유화하여 린스를 조제하였다.

(처방） (％)

유동 파라핀 2.5

미리스틴산 0.5

세탄올 1.5

모노 스테아르산 글리세린 3

라우로릴글루타민산 폴리옥시 에틸렌 옥틸도데실

에테르 디에스테르 1

피로글루타민산 아이소스테아르산 폴리옥시 에틸렌

글리세릴 0.5

α, α-트레할로오스의 당질 유도체 함유 시럽(주식회사

하야시바라 생물 화학 연구소 판매, 상품명 「톨나레」) 3

1, 3-부틸렌 글리콜 3

실시예 1의 방법으로 조제한 로열 젤리 분획물 3

감광 색소 301호 0.01

라우로일-L-리진(lysine) 2.5

지방산-아르기닌에틸피롤리돈 카본산염 0.5

염화스테아릴 트리메틸 암모늄 0.5

당 전이 루틴(하야시바라 생물 화학 연구소 주식회사 판매,

상품명 「αG 루틴」) 0.1

피롤리돈카본산 나트륨 1

용담과의 월년초 엑기스 1

A 성분과 B 성분의 합계가 100％가 되도록 정제수를 더한다.

본 품은 우수한 보습성을 나타내는 동시에, 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용이나 IL-4 산생 억제 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 미백 작용도 증강되며, 알레르겐성도 저감되어 있으므로, 알레르기 증상을 발생시킬 염려 없이 두피의 싱싱함을 유지하는, 미백, 미용, 주름 방지, 노화 방지 등의 효과를 갖는 린스이다.

(실시예 24)

<화장용 비누>

이하의 배합 처방에 근거하여 통상적인 방법으로 화장용 비누를 조제하였다.

(처방） (％)

질량비 4:1의 우지 및 야자유를 통상적인 비누화·염석법

으로 제공하여 얻어지는 물비누(neat soap) 94.5

실시예 8의 방법으로 조제한 로열 젤리 분획물 분말 2

말티톨 1

함수 결정 α, α-트레할로오스 0.5

L-아스코르브산 2-글루코시드(하야시바라 생물 화학

연구소 주식회사 판매, 상표 「AA2G」) 0.5

백당(白糖) 0.5

당 전이 루틴(하야시바라 생물 화학 연구소 주식회사

판매, 상품명 「αG 루틴」) 0.5

감광소 201호 0.0001

향료 적정량

전량을 100％로 한다.

본 품은 우수한 보습성을 나타내는 동시에, 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용이나 IL-4 산생 억제 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 알레르겐성도 저감되어 있으므로, 알레르기 증상을 발생시킬 염려 없이 피부의 싱싱함을 유지하는, 미백, 미용, 주름 방지, 노화 방지 등의 효과를 갖는 비누이다.

(실시예 25)

<목욕용제>

이하의 배합 처방에 근거하여 통상적인 방법으로 목욕용제를 조제하였다.

(처방） (％)

함수 결정 α, α-트레할로오스(주식회사 하야시바라

생물 화학 연구소 판매, 화장품용) 74.4

탄산 수소 나트륨 12.5

쪽풀 추출물(주식회사 하야시바라 생물 화학 연구소 판매,

1, 3-부틸렌 글리콜을 함유하지 않음) 4

실시예 2의 방법으로 조제한 로열 젤리 분획물 3.5

국제 공개 W0 2003/016325호 명세서의 실시예 9에 기재한

방법에 의해 조제한 α, α-트레할로오스와 간수를

질량비 144:202의 비율로 함유하는 분말 5.5

감광소 201호 0.0015

향료 적정량

색소 적정량

전량을 100％로 한다.

본 품은 우수한 보습성을 나타내는 동시에, 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용이나 IL-4 산생 억제 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 알레르겐성도 저감되어 있으므로, 알레르기 증상을 발생시킬 염려 없이 피부의 싱싱함을 유지하는, 미백, 미용, 주름 방지, 노화 방지 등의 효과를 갖는 목욕용제이다.

(실시예 26)

<치약>

이하의 배합 처방에 근거하여 통상적인 방법으로 크림 치약을 조제하였다.

(처방） (％)

제2인산 칼슘 30

하이드록시아파타이트 10

탄산 칼슘 5

α, α-트레할로오스의 당질 유도체 함유 시럽(주식회사

하야시바라 생물 화학 연구소 판매, 상품명 「톨나레」) 28

실시예 1의 방법으로 조제한 로열 젤리 분획물 3

라우릴 황산 나트륨 1.5

모노 플루오르 인산 나트륨 0.7

폴리옥시에틸렌 솔비탄 라우레이트 0.5

염산 디펜히드라민 0.5

방부제 0.05

정제수를 더해서 전량을 100％로 한다.

본 품은, 로열 젤리가 갖는 콜라겐 산생 증강 작용이나 IL-4 산생 억제 작용 등의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 알레르겐성도 저감되어 있으므로, 알레르기 증상을 발생시킬 염려 없이, 구강 내의 염증이나 미각 장해, 치조 농루 등에 의한 잇몸의 부음, 염증, 출혈 등의 예방이나 치료에 매우 적당하고, 게다가, 사용 감촉이 좋은 치약이다.

(실시예 27)

<미용 티슈>

실시예 7의 방법으로 조제한 로열 젤리 분획물 분말 3 질량부, 글리세린 1 질량부에 물 6 질량부를 혼합한 용액을 조제하여 처리제를 조제하였다. 이 처리제를, 고형분 환산으로 티슈 총 질량의 1％가 되도록 유연(柔軟) 처리를 실시하지 않은 페이셜 티슈에 균일하게 분무하고 건조하였다. 본 품은 로열 젤리의 유용한 생리 활성이 유지되어 있고, 알레르겐성이 저감된 로열 젤리 분획물이 배합되어 있으므로, 피부 염증을 억제하는 동시에, α, α-트레할로오스의 당질 유도체로 유연 처리를 실시하지 않은 것에 비해 티슈의 유연성, 흡수성이 각별히 향상되기 때문에, 피부에 좋고 사용 감촉이 우수하다. 또한, 이 처리제를 사용해서 페이셜 티슈의 경우와 마찬가지로 페이퍼 타올, 화장지, 티슈지, 부직포 등을 처리함으로써 이들 종이류를 사용하였을 때에 피부 자극을 저감하고, 흡수성, 유연성을 향상시킬 수 있으므로 이들 종이류의 사용 감촉을 좋게 하기 위해서 이용하는 것도 마음대로이다.

이상 설명한 바와 같이, 본 발명은 히드록시데센산 1 질량부에 대하여 로열 젤리 유래의 단백질을 0.05 질량부 혹은 그 미만의 비율로 함유하는 로열 젤리 분획물이며, 콜라겐 산생 증강 작용, IL-4 산생 억제 작용, 정소 기능 활성화 작용 등의 로열 젤리의 유용한 생리 활성을 갖고, 또한, 히드록시데센산을 45μg 함유하는 양의 이 로열 젤리 분획물을 이용해서 마우스를 면역한 마우스 혈청을, 래트를 사용한 PCA에 의해 판정하였을 때 이 로열 젤리 분획물에 대한 알레르겐성이 검출되지 않는 로열 젤리 분획물이, 인간을 포함하는 포유류에 대한 알레르겐성이 현저하게 저감되고 있는 것 외에, 수 용해도가 높고, 게다가, 로열 젤리 본래의 유용한 생리 활성을 유지하고 있는 것에 더해서 미백 작용도 증강된다고 하는 전혀 독자적 인 발견에 근거한 것이다. 또한, 이 로열 젤리 분획물은 매우 심한 알레르기 증상을 발생시킬 염려가 없으므로, 인간을 비롯한 포유류가 간편하고, 쾌적하게, 건강의 유지·증진, 미백·아름다운 피부를 위해 이용할 수 있다. 또한, 이상과 같은 특장(特長)을 갖는 본 발명의 로열 젤리 분획물은 다른 성분과 배합함으로써 음식물, 사료, 모이, 애완 동물 먹이, 화장품, 의약품, 의약 부외품, 또한 잡화 등 각종 조성물로서 이용하는 것도 유리하게 실시할 수 있다. 본 발명은, 이렇게 현저한 작용 효과를 나타내는 발명이며, 당업계에 공헌하는 큰 의의가 있는 발명이다.

Claims

로열 젤리 분획물로서, 10-히드록시―2-데센산 1 질량부에 대하여 로열 젤리 유래의 단백질을 0.05 질량부 미만의 비율로 함유하고 로열 젤리가 갖는 유용한 생리 활성을 가지며 10-히드록시―2-데센산을 45㎍ 함유하는 양의 상기 로열 젤리 분획물로 면역한 마우스(mouse)의 혈청을, 래트(rat)를 사용한 수신 피부 아나필락시(anaphylaxis)에 의해 판정하였을 때 상기 로열 젤리 분획물에 대한 알레르겐성(allergen)이 검출되지 않는 로열 젤리 분획물.
제1항에 있어서,

로열 젤리가 갖는 생리 활성이 콜라겐 산생 증강 작용, IL-4 산생 억제 활성 및/또는 정소(精巢) 기능 활성화 작용인 로열 젤리 분획물.
제1항 또는 제2항에 있어서,

10-히드록시―2-데센산을 고형물 환산으로 5mg/g 이상 함유하는 로열 젤리 분획물.
제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 있어서,

10-히드록시―2-데센산 1 질량부에 대하여 질소량이 0.3 질량부 이하의 비율인 로열 젤리 분획물.
제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서,

10-히드록시―2-데센산을 30㎍ 함유하는 양의 로열 젤리 분획물을 SDS-PAGE에 제공하였을 때, 쿠마시 브릴리언트 블루 염색에 의한 육안 관찰에서 단백질 밴드(band)가 검출되지 않는 로열 젤리 분획물.
제1항 내지 제5항 중의 어느 한 항에 있어서,

로열 젤리 분획물을 그에 포함된 10-히드록시―2-데센산이 0.05mg/mL 이상이 되도록 탈 이온수에 용해하거나 또는 탈 이온수로 희석하였을 때의 pH가 5.0 이상인 로열 젤리 분획물.
제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 있어서,

생 로열 젤리를 물로 희석한 후에 생 로열 젤리 유래의 분자량 10,000달톤 이상의 고분자 획분을 저감시키고, 이것을 농축하는 것을 특징으로 하는, 로열 젤리 분획물의 제조 방법.
제7항에 있어서,

생 로열 젤리 유래의 분자량 10,000달톤 이상의 고분자 획분을 저감시키기 전에, 생 로열 젤리를 물로 희석한 용액의 pH를 5.0 이상으로 조정하는 로열 젤리 분획물의 제조 방법.
제7항 또는 제8항의 방법에 의해 제조된 로열 젤리 분획물에 당질을 첨가해서 건조하고, 분말화하는 로열 젤리 분획물 분말의 제조 방법.
제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 기재한 로열 젤리 분획물 혹은 제7항 내지 제9항 중의 어느 한 항에 기재한 제조 방법으로 얻은 로열 젤리 분획물을 함유하여 이루어진 조성물.
제10항에 있어서,

조성물이 음식물, 사료, 모이, 애완 동물 먹이, 화장품, 의약품, 의약 부외품 또는 잡화 조성물의 어느 하나인 조성물.
알레르겐성이 저감된 것을 표방하여 이루어지는 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 기재한 로열 젤리 분획물 혹은 제10항 또는 제11항에 기재한 조성물.
제10항 내지 제12항 중의 어느 한 항에 있어서,

조성물이 고체 형상인 조성물.
제13항에 있어서,

로열 젤리 분획물과 함께 비환원성 당질을 함유하는 조성물.
제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 기재한 로열 젤리 분획물의 미백제로서의 용도.