KR20090125865A - 여성 외·내음부 질 청결제 및 여성 외·내음부질근세포(膣筋細胞)수축제 제조에 관한 여성 외·내음부세정제 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 식물 혼합 추출물 (1) 알로에 0.005~95(중량%),(2) 고삼 0.005~95(량%),(3) 쑥 0.005~95(중량%),(4) 녹차 0.005~95(중량%)의 생약을 구성하여 여성 외·내음부 질 청결제 및 여성 외·내음부 질근세포(膣筋細胞) 수축제 제조에 관한 여성 외·내음부 세정제 제조방법과 그 제조방법으로부터 얻어진 생약들로 여성 외·내음부를 세정하면 탁월한 향균작용으로 청결하게 해주며 또한 탄력이 부족한 외·내음부에 콜라겐 공급과 합성을 증가시켜서, 여성 외·내음부 질(膣)을 청결하게 할 뿐만 아니라 여성 외·내음부 질근세포(膣筋細胞) 수축으로 탄력을 주는 여성 외·내음부 세정제 제조방법에 특징이 있다.

여성 외·내음부, 질 청결제, 질 근세포, 질 수축제, 질 세정제

Description

여성 외·내음부 질 청결제 및 여성 외·내음부 질근세포(膣筋細胞)수축제 제조에 관한 여성 외·내음부 세정제 제조방법 {the vaginal opening cleanness and vaginal contraction making a method}

본 발명은 식물 혼합 추출물 (1) 알로에 0.005~95(중량%), (2) 고삼 0.005~95(중량%),(3) 쑥 0.005~95(중량%),(4) 녹차 0.005~95(중량%)의 생약을 구성하여 여성 외·내음부 질 청결제 및 여성 외·내음부 질근세포(膣筋細胞) 수축제 제조에 관한 여성 외·내음부 세정제 제조방법과, 그 제조방법으로부터 얻어진 생약들로 여성 외·내음부를 세정하면 탁월한 향균작용으로 여성 질 외·내음부 청결하게 할 뿐만 아니라 또한 탄력이 부족한 외·내음부에 콜라겐 공급과 합성을 증가시켜서, 여성 외·내음부 질근세포(膣筋細胞) 수축으로 탄력을 주는 여성 외·내음부 세정제 제조방법에 특징이 있다

본 발명은 여성 외·내음부 세정제 및 여성 외·내음부 질 청결제 및 여성 외·내음부 질근세포(膣筋細胞)수축제에 관한 생약 추출물의 제조방법으로 그 제조방법으로부터 추출물을 얻은 조성물로서, 여성 외·내음부 사용 했을 때 탁월한 향균작용으로 여성의 외·내음부를 청결하게 만들 뿐만 아니라 탄력이 부족한 외·내음부에 콜라겐 공급과 합성을 증가시켜서, 질(膣)탄력성과 질수렴작용을 촉진하여, 질(膣)수축과 탄력성을 회복 시키는 조성물에 관한 것이다

구체적으로는 건조된 (1) 알로에 0.005~95(중량%), (2) 고삼 0.005~95(중량%),(3) 쑥 0.005~95(중량%),(4) 녹차 0.005~95(중량%)등으로 추출하여 혼합한 다음 상기 생약 추출 여과 물을 다시 에탄올(ethanol, CH₃CH₂-OH)로 추출 여과한 조성물로서, 혼합생약 추출물의 각각의 생약추출물 0.005% - 95%(중량%)를 함유하는 여성 외·내음부 질 청결제 및 여성 외·내음부 질근세포(膣筋細胞)수축에 관한 여성 외내음부 세정제로서 탁월한 효과를 갖는 조성물에 관한 것이다. 여성의 질구(膣口)의 탄력성과 협착성을 저하시키는 것은 비위생적인 상태와 많은 출산 또는 이상 약물의 삽입으로 중독 그리고 콜라겐 등의 생체 내의 면역기능의 저하 등이 질 근세포(膣 筋細胞)가 탄력성을 잃게되는 원인으로 밝혀지고 있다.

생리적으로는 질 근육의 늘어지는 노화현상은 대부분 많은 출산을 시작으로 나타나기 시작하여 나이와 함께 이완현상은 점차 심해진다. 70~80세가 되어 전신노화로 인하여 질(膣) 이완된 것은 복원시키는 것은 힘들겠지만 그러나 중년과 장년층 여성에게는 수축작용이 될 수 있도록 외·내음부의 청결과 비례하여 외·내음부에 혈액 순환이 잘되게 하거나 외내음부의 충분한 콜라겐의 영양보충으로 질 근세포(膣 筋細胞)의 수축작용이 가능하다. 특히 요사이 젊은층의 이쁜이 수술의 성형수술을 하기도 하는 이유 중의 한가지는 젊을 때 수술하는 편이 지속적인 효과를 유지할 수 있고, 또한 예후도 좋다고 하는 것을 볼 때, 여성의 외·내음부의 청결과 노화에도 외·내음부와의 탄력성은 밀접한 관련이 있다고 본다 그리고 다출산(多出産) 의한 부작용 중 하나가 질 근세포(膣 筋細胞)의 노화와 이완성의 원인이 일어나고 있으며 이러한 작용이 결국 질 수축의 탄력성을 잃게 하여 질이 이완되거나 늘어 뿐만 아니라 유해한 균의 환경으로 냉대하의 원인이 될 수도 있다.

그러므로 부작용이 없는 순한 천연물을 이용한 여성 외·내음부 질 청결제 및 여성 외·내음부 질 근세포(膣 筋細胞) 수축제에 관한 여성 외·내음부 세정제 생약 추출물의 제조방법을 개발하게 되었다

(종래기술의 문헌정보)

1. 대한민국 특허등록번호 일자 10-0638558-0000(2006.10.19)[한약재를 이용한 세정제 조성물]

그러나 기존 기술을 사용하였을 때 어느 정도의 외·내음부 질세정로서의 효과는 기대할 수 있으나 아직도 기능은 미약하다는 문제점이 있어, 본 발명인은 천연식물들을 연구한 결과 가장 효과적인 생약 추출물 용이한 방법과 혼합 양방의 적당한 혼합비율로서 탁월한 효과가 있는, 여성 외·내음부 질 청결제 및 여성 외·내음부 질근세포(膣筋細胞) 수축제 제조에 관한 여성 외·내음부 세정제 제조방법으로 여성 외·내음부에 향균작용으로 청결을 유지할 수 있고 질 수축 및 탄력성을 회복하는 조성물을 발명하게 이르렀다.

본 발명의 혼합 식물 추출물은 상기 복합생약이 함유된 추출액으로서, 여성의 외·내음부 세정을 함으로써 부작용이 없이 항균 효과가 탁월하여 외·내음부의 여러 유해한 균을 예방하고 콜라겐 합성과 촉진 효과, 콜라겐 생합성에 있어서 콜라겐 합성을 유기적으로 증가 시켜 항균작용과 질근세포(膣筋細胞)에 탄력증가와 수축작용효과가 제공하는 여성 외·내음부 질 청결제 및 여성 외·내음부 질근세포(膣筋細胞) 수축제 제조에 관한 여성 외·내음부 세정제 제조방법조성물로 의약외품으로서 개발하여 소비자에게 제공하여야 할 것이다.

유효성분들을 추출해낼 수 있는 추출용매로는 특정의 용매법에 국한되는 것은 아니고, 에탄올(ethanol), 라우틸 황산나트륨, 붕사, 모노라우린산폴리옥시에칠렌소르비판(20.이.오), 하이드록시에칠셀롬로오스, 부틸렌글라이콜, 알란도인, 구연산, 등을 사용하는 것이 바람직할 뿐만 아니라, 본 발명의 상기 추출물은 통상의 추출 방법이라면, 특정의 방법에 국한되는 것은 아니고, 상기 건조 생약을 가온 추출이나, 추가로 감압 농축하여 액상으로 얻어지거나 동결건조, 분무 건조, 일정한 분자량 컷-로프 값을 갖는 한 외 여과 막을 이용한 분리 및 다양한 크로마토그래피에 의한 분리 등 추가로 실시된 다양한 정제 방법 등과 같은 추가적인 과정에 의해 고형분 및 분말 상태로 제조될 수도 있으며, 액상 추출물, 농축 액상 추출물, 동결건조 분말 및 분무 건조 분말, 정제삽입용, 휴지용, 크림용, 게용, 스프레이용, 착용 식페드용으로도 제조가 될 수 있으며 또한 본 발명의 생약추출물의 양은 제형 특성이나 용도에 따라 달라질 수 있다.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 전통 한방 생약과 식물을 이용하여 평소에 완만한 여성의 외·내음부 세정을 함으로써 향군작용으로 부작용이 없이 외·내음부의 여러 균을 예방하고 콜라겐 합성과 촉진효과 탁월하여 콜라겐 생합성에 있어서 콜라겐 합성을 유기적으로 증가시키서 질근세포(膣筋細胞)에 향균작용과 탄력성 증가와 수축작용효과로 제공하는 여성 외·내음부 질 청결제 및 여성 외·내음부 질근세포(膣筋細胞) 수축제 제조에 관한 여성 외·내음부 세정제 제조방법조성물로 제공하는 것을 목적으로 한다.

여성 외·내음부 질 청결제 및 여성 외·내음부 질 수축제 제조에 관한 여성 외·내음부 세정제 제조방법으로 상기 생약추출물을 유효성분으로 여성의 외·내음부에 탁월한 향균작용으로 외·내음부 청결과 질근세포(膣 筋細胞) 활성을 촉진하고, 탁월한 콜라겐 합성 촉진기능으로 외·내음부에 콜라겐의 합성을 촉진하여 질근세포(膣 筋細胞)에 탄력성을 주는 여성 외·내음부 질 청결제 및 여성 외·내음부 질근세포(膣 筋細胞) 수축제 제조에 관한 여성 외·내음부 세정제 제조방법의 조성물이다.

1. 발명의 생약에 대한 일반적인 성상, 약리효과

다음은 본 발명에서 사용된 생약에 대한 일반적인 성상, 약리 효과 등에 대하여 나 열하여 살펴보면 다음과 같다. [자료참조-농촌진흥청(농업과학기술원) 동의보감-본초]

(1) 알로에 0.005~95(중량%), (2) 고삼 0.005~95(중량%), (3) 쑥 0.005~95(중량%), (4) 녹차 0.005~95(중량%)

(1) 알로에는 외떡잎식물 백합목 백합과의 한 속으로 학명 Aloe(aloe pluridens)이며 분류는 백합과에 속한다. 그리고 원산지 아프리카 이다 이명은 노회, 또는 나무 노회라고도 하고, 알로에 속(Aloe)에 속하는 식물 전체를 가리키거나 그 한 종을 가리킨다. 아프리카가 원산지이고, 전세계에 약 300종이 있다. 관엽식물로 온실에서 재배하거나 약으로 쓰려고 가정에서 기르기도 한다.

잎은 뿌리와 줄기에 달리며 어긋나고 반원 기둥 모양이며 잎 가장자리에 날카로운 톱니 모양의 가시가 있고 밑 부분은 넓어서 줄기를 감싸며 로제트 모양으로 퍼진다. 잎 뒷면은 둥글고 앞면은 약간 들어간다.

꽃은 여름에 귤색으로 피고 총상꽃 차례를 이루며 밑을 향해 달린다. 화피 조각은 6개이고, 수술도 6개이며, 암술은 1개이다. 열매는 삭과이고 3개로 갈라진다. 알로에란 아라비아어로 ‘맛이 쓰다’는 뜻으로 붙여진 이름이고, 노회란 Aloe의‘로에’를 한자로 바꾼 이름이다.

제2차 세계대전 직후부터 알로에의 성분이 속속 밝혀지고 있다. 지금까지 밝혀진 결과의 의하면, 세균과 곰팡이에 대한 살균력이 있고 독소를 중화하는 알로에틴이 들어 있으며, 궤양에 효과가 있는 알로에우르신과 항암효과가 있는 알로미틴이 들어 있다.

이 밖에도 스테로이드·아미노산·사포닌·항생물질·상처치유 호르몬·무기질 등 다양한 성분이 들어 있다. 알로에는 과로로 인한 피로 회복과 과음으로 인한 숙취 해소 등에 효과가 있고, 알로에의 잎을 잘라두면 유난히 쓴 황색 물질이 흘러나오는데, 이것은 변비에 특히 효과가 있다.

민간에서는 알로에 잎의 액즙을 위장병에 내복하고 외상이나 화상 등에도 이용한다. 또한 건성 피부와 지성 피부를 중성화시키고 피부 보습 효과가 있어 화장품 원료로도 쓰인다.

(2) 고삼은 도둑놈의 지팡이 너삼·뱀의정자나무라고도 한다. 양지 바른 풀밭에서 자란다. 높이 80∼100cm로 녹색이지만 어릴 때는 검은빛을 띤다. 줄기는 곧고 잎은 어긋나며 홀수 깃 꼴 겹잎이다. 작은잎은 15∼40개이고 긴 타원형 또는 긴 달걀 모양이며 길이 2∼4cm, 나비 7∼15mm이다. 잎자루가 길며 가장자리는 밋밋하다.

6∼8월에 가지 끝에 20cm 정도의 꽃줄기가 나와 나비 모양의 연한 노란색 꽃이 총상꽃차례로 핀다. 꽃 길이는 15∼18mm이다. 꽃받침은 통처럼 생겼고 겉에 털이 나며 끝이 5개로 얕게 갈라진다. 열매는 협과로 염주 모양이다. 짧은 대가 있으며 길이 7∼8cm로 9∼10월에 익는다.

한방에서는 뿌리를 말린 것을 고삼이라 하는데, 맛이 쓰고 인삼의 효능이 있어 소화불량·신경통·간염·황달·치질 등에 처방한다. 민간에서는 줄기나 잎을 달여서 살충제로 쓰기도 한다. 같은 속의 식물로 산두근(山豆根)이 있는데 생김새가 매우 비슷하다. 한국·일본·중국·시베리아 등지에 분포한다. (3) 쑥의 학명은 Gnaphalium affine ㅣ Everlasting이며 초롱꽃목 국화과 속한다. 다른 이명은 괴 쑥, 솜쑥, 서국초(鼠麴草), 불이초(佛耳草), 모자초, 왜떡쑥, 송곳풀, 야국, 향모, 무심초로 불린다.

높이 15∼40cm. 두해살이풀. 전체가 흰색 솜털로 덮여 있어 흰빛을 띰. 줄기가 밑동에서 갈라져 곧게 자란다. 뿌리에서 나온 잎은 꽃이 필 때쯤 말라 죽음. 줄기에서 나온 잎은 주걱형으로 어긋나 있고 길이 2∼6cm. 너비 4∼12mm. 가장자리는 밋밋하고 끝부분은 둥글거나 뾰족하며 밑부분이 좁다. 5∼7월에 황백색 또는 황록색으로 줄기 끝에 산방꽃차례를 이룸. 총포는 종 모양이다.

총포의 갈라진 조각은 노란색으로 긴 타원형이고 3줄로 늘어섬. 또 식용, 약용으로 사용되고 옛날부터 떡을 만드는 재료로 많이 쓰여서 떡쑥이라고 부른다. 쑥에는 약쑥과 쑥이 있는데, 약쑥은 한방에서 많이 사용하는 약초로서 줄기의 윗부분이 약간 노란빛을 띤다. 쑥은 약쑥보다 솜털이 적고 음식으로 이용한다. 일반 쑥에는 떡쑥을 비롯해 물쑥, 뺑쑥 등이 있다.

꽃대 끝에 꽃자루가 없는 작은 꽃이 모여 피는데, 그 모습이 마치 머리처럼 보여서 두상화라고 부른다. 가운데에는 통처럼 생긴 양성화가 있고, 그 가장자리로 암꽃이 실처럼 빙 둘러 난다. 2.5mm의 황백색 관모가 있는데, 하위씨방의 윗부분에 붙어 있는 털 모양의 돌기로서 갓털이라고도 한다. 이는 국화과 식물의 일반적인 특징이기도 하다.

들이나 밭, 길가 등지에서 흔히 볼 수 있다. 봄과 여름에 어린 잎을 나물로 먹거나

쌀가루와 섞어 떡을 만들며, 말려서 먹기도 한다. 한방에서는 풀 전체를 서국초라고 하여 해수, 가래, 천식, 기관지염, 지혈 등에 처방하며 혈압을 낮추는 데에도 효과가 있다.

(4) 녹차는 푸른 빛이 그대로 나도록 말린 부드러운 찻잎으로 녹차(綠茶, 문화어: 푸른 차)란 발효시키지 않은, 푸른 빛이 그대로 나도록 말린 찻잎(茶葉), 또는 찻잎을 우린 물을 말한다. 녹차에는 50여 종이 넘는 유기화합물- 단백질, 아미노산, 카페인, 카테킨, 당질, 유기산, 비타민류-와 각종 미네랄 등이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다. 그 중에 녹차의 맛에 가장 깊게 관여하는

성분은 카테킨류와 아미노산류이다. 이들의 성분비율은 녹차의 종류, 그 재배조건, 그리고 차잎의 채엽시기에 의해 그 함량이 변화하게 된다. 녹차의 독특한 풍미는 카테킨과 아미노산의 함량 및 비율에 의해 좌우되는데, 카테킨이 많으면 주로 떫고 쓴맛이 강한 반면 테아닌을 포함한 아미노산은 감칠맛과 단맛을 제공한다. 잎이 어릴수록 테아닌의 함량이 많아서 감칠맛이 강하고 고급 차로 분류된다

2. 추출 여과 제조방법

(1) 상기 생약들을 건조하여 알로에는 1kg을 깨끗이 세척하여 정제수 4kg과 1.3부딜렌글리콜1.0kg을 넣어 60도C에서 24시간 추출하 여 추출물 약 4KG을 얻는다. 고삼는 1kg을 깨끗이 세척하여 정제수 4kg과 1.3부딜렌글리콜1.0kg을 넣어 60도C에서 24시간 추출하여 추출물 약 4KG을 얻는다 쑥은 1kg을 깨끗이 세척하여 정제수 4kg과 1.3부딜렌글리콜1.0kg을 넣어 60도C에서 24시간 추출하여 추출물 약 4KG을 얻는다 녹차는 1kg을 깨끗이 세척하여 정제수 4kg과 1.3부딜렌글리콜1.0kg을 넣어 60도C에서 24시간 추출하여 추출물 약 4KG을 얻어 추출물을 혼합하여 60도c의 온도로 열수 스팀 등의 가열을 통하여 유지를 용출 여과한다 다시 상기 생약들을 혼합하여 상기 추출물을 모두를 댜시 실온 60도~70도 정도 온도가 유지되는 저장고에 2일간 침전시킬 때에 길이 30센티 정도식 자른 건조한 대나무를 원료 안에 같이 넣고, 3~4일 동안 넣어두면 모든 대나무에 상기 추출물의 맑은 액상이 대나무에 스며들어 간다, 3~4일 후에 스며들어간 대나무를 꺼내어 한 쪽에 60도를 기울고 대나무 상부에 열을 가하면 대나무에 스며 있든 액체상의 물방울이 떨어지는데 이 물을 추출하여 여과하여 농축물을 얻어내는 단계를 포함하는 것으로 추출물 제조방법의 특징이다.(실시 예)

1. 콜라겐 합성

본 발명의 상기 생약 추출물이 인간 유래의 섬유아세포에 대해 콜라겐 합성 촉진 능력이 있는지를 시험 예를 통해 확인하였다. 콜라겐은 피부와 근육의 섬유아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질로서, 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포 접착의 지탱, 세포분할과 분화의 유도를 하며, 피부와 근세포 수축작용 과정에서 중요한 역할을 하는데, 이러한 콜라겐의 합성을 촉진하는 정도를 검사함으로써, 상기 생약 추출물이 수축작용 과정에 유효한 물질인지를 검증할 수 있다.

TEST#1 콜라겐 합성 촉진 효과 시험

본 시험 예는 제조예 1에서 얻은 상기 혼합생약 추출물의 콜라겐 합성 촉진 효과를 관찰하기 위해 상업적으로 구입한 인간의 섬유아세포에 처리하여 실험을 하였다.

96 평판배양기(96well plate, GENETIX사 제품 사용)에 우태아 혈청이 2.0% (검체량으로서 20 ㎕/ assay well) 함유된 동물 근세포 세포배양배지(DMEMD=ulbecco's Modified Eagle's Medium)와 인간의 섬유아세포(fibroblast)(5000세포/웰(cells/well))를 넣고, 80-90% 자랄 때까지 incubator에 배양하였다. 각 웰(well)에 배지 총 중량 대비 물 0.01(중량%)에 대비, 음성 대조군을 처리한 것이며, 비타민 C 0.005(중량%)에 대비, 양성 대조군을 처리한 것이다.

실험방법

상기혼합추출물을 각각 0.01 중량 % 및 0.001 중량 %의 농도로 처리한 것을 24시간 배양 후, 세포배양액을 추출하여 콜라겐 단백질 측정기구(MK101.TAKARA BIO INC.Japanese)를 이용하여 콜라겐 합성량을 측정하였는데, 측정방법은 우선 1차 콜라겐 항체가 동일하게 도포 된 96 평판배양기에 세포 배양액을 넣고 측정조작 3시간 30분 동안 항원/항체 반응을 실시하였다.

측정시간 3시간 30분 후, 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96 평판배양기에 넣고 20분간 반응시켰다. 20분 후 발색 유발물질을 넣어 실온에서 발색시키고, 반응정지액(1 N 황산)을 넣어 발색을 중지시키면, 노란색으로 반응이 나오며, 반응정지액(1 N 황산) 반응에 따라 색도 달라진다. 노란색을 띤 96공 평판배양기를 흡광광도계를 이용(측정범위: 10~640 ng/ml )하여 450nm에서 측정(검출감도 10 ng/ml)하였든 바, Collagen은 근세포내에서 procollagen으로 합성된 후 근세포외로 분비되어 collagen 섬유로 중합하였다. 이때 procollagen의 N-말단 및 C-말단의 propeptide가 endopeptidase에 의해 유리되는 것으로 밝혀졌다. 본 kit는 monoclonal 항체를 이용하여 Human procollagen I형의 C-말단 peptide(PIP)를 정량하는 EIA kit로 세포의 I형 collagen 검출에 유용할 뿐만아니라, Plate에 미리 항 체를 고정화시킨 precoated type으로 조작이 보다 간편하며 96 assay를 약 3시간 30분에 완료할 수 있다. 또 발생기질을 tetramethylbenzidine(TMBZ)으로 변경하므로써 폐액제한이 해소되고 발색감도도 보다 좋아졌다 이때 상기 추출물을 처리하지 않은 세포배양액의 반응 흡광도를 대조군으로 하였다. 콜라겐 합성 정도의 효과는 결과는 표 1과 같다.

표 1
시료	적용농도(중량%)	콜라겐 합성(%)
혼합생약추출물	0.01	215
혼합생약추출물	0.001	158
대조군
비타민 C	0.005	130.8
콜라겐 합성(%) = (추출물 처리 군의 반응 흡광도/대조군의 반응 흡광도) × 100

TEST#1에 나타난 바와 같이 상기 혼합생약추출물은 인간 근육의 섬유아세포에 대하여 우수한 콜라겐 생합성능이 있으며, 일반적으로 콜라겐 합성 능력이 있는 것으로 알려진 비타민 C를 적용한 경우보다 적은 농도로 더 우수한 콜라겐 합성 효과를 얻을 수 있음을 알 수 있었다.

TEST#2 콜라겐 생합성에 의한 세포활성 촉진 시험

본 시험 예에서는 5주령 수컷(웅성) 랫트(rat) 6마리를 2분류(도포하지 않은 시험 쥐 및 추출물을 도포한 시험 쥐)로 근육수축의 질과 양을 잘 반영하는 장력강도법을 사용하였다. 똑같이 6마리에 10일간 랫트(rat)의 식사량을 10분의1을 주고 난 다음에 6마리의 쥐(rat)에 질고 부분의 조직을 잘랐다. 3마리의 쥐(rat)는 상기 추출물을 도포하지 않고[제1분류] 또 다른 분류 3마리의 쥐(rat)는 질구의 조직을 수득한 상기 본 발명의 상기 추출물을 부틸렌글리콜에 1 중량 %로 함께 섞은 후, 매일 1회 0.5㎖/㎠씩 7일간 질고 조직에 도포하였다[제2분류].

7일 후 실험에 이용된 6마리의 랫트를 도살하고 랫트 질구조직에 상기 추출물을 도포하지 않은 피부[제1분류]와 피부에 상기 추출물을 도포한 랫트(rat)[제2분류] 피부를 적출하여 철창선에 직교하는 폭 1㎝의 피부편을 개체마다 3표본씩 만든 후 장력측정기(rheometer)로 파열장력을 측정하였다. 측정된 인장 강도(Tensil strength, g/㎝)를 재생된 콜라겐 섬유의 강도와 탄력성를 지표로 하여 하기 표2에 나타내었다. TEST#2의 인장 강도의 증가율은 시료를 첨가하지 않은 동량의 부틸렌글리콜만을 적용한 음성 대조군의 인장 강도를 100%로 하여 상대적 탄력성을 나타내었다.

표2 도포하지 않은 랫트(rat)의 상기추출물을 도포한 랫트(rat) 것과 대조군 표)
시료	인장강도(g/cm)	증가율(%)
대조군[제1분류]	400	100
혼합생약추출물[제2분류]	790	190
표2-1
시료	탄력성 100% 기준
대조군[제1분류]	100
혼합생약추출물[제2분류]	120

TEST#3근 세포 조직의 활성화 시험(10일 도포)

장비 명Universal Fluorescence Microscope 모텔Axioskop 2 Plus MOTFL 제작Carl Zeiss (Germany) 로 조사한 결과

표3		현미경(Axioskop 2 Plus MOT FL)	100%기준
(도포하지 않은 시험 쥐)	1군(3마리)	세막막이 늘어져 있다.	0
(도포한 시험 쥐)	1군(3마리)	세포막이 섬세하다	100

상기추출물은 추출물은 기존에 수렴효과가 좋다고 알려진 석류피나 탄닌산과 비교하여 우수한 수축 및 수렴효과가 탁월함을 알 수 있다. TEST#3의 결과는 본 발명에 사용되는 상기추출물이 랫트에 있어서 RM탄력성 및 피부 수렴작용의 우수함을 보여준다.

2. 항염효과

아래 시험 예에서는 마우스 귀의 상처 부위에 본 발명의 상기 생약 추출물을 처리하여 염증 반응을 저해하는 정도를 알아봄으로써, 상처 치유 과정에서 효과적인 항염작용을 할 수 있는지를 알아보았는데, 본 발명의 상기 혼합생약 추출물이 일반적인 항염제로 알려진 인도메타신을 처리한 것에 비해 적은 농도로도 비슷한 저해율을 가지는 것으로 확인됐다.

TEST#4 항염 효과 시험

먼저 자외선이나 외부환경적 요인에 의해 활성산소나 프리라디칼이 생성되며, 생성된 활성산소나, 프리라디칼에 의해 세포막이 공격을 당하게 되어 피부는 염증(inflammation)이 일어나며, 염증화된(inflammated) 조직은 생리학적 진행 구조에 의해 단백질이나 유전자 물질 등을 파괴. 피부와 근세포 등을 형성하는 노화가 일어난다. 이에 노화가 일어나기 전에 염증화(inflammated)을 방어하면, 피부와 근육노화 진행구조에 관여되는 단계를 모두 억제, 막아 주는 것이 노화를 근본적으로 방지할 수 있다.

본 시험 예는 (추출 여과 제조방법)에서 얻은 생약 추출물의 항염 효과를 확인하기 위해 헤어리스 레트(Rat)의 ear swelling test 방법으로 평가하였다. 6주령의 헤어리스 마우스를 이용하여 각각의 개체의 왼쪽 귀를 대조부위로 하고, 오른쪽 귀를 시험부위로 하여 시료를 적용하기 전 양쪽 귀를 3회 측정하였다. (2. 추출 여과 제조방법)으로 얻은 에탄올 추출 건고물을 부틸렌글리콜에 0.5 중량 % 및 1 중량 %로 녹인 상기 혼합생약 추출물(각각 다른 마우스를 이용하는 실험 군이며 상기 혼합생약 추출 건고물의 함량을 제외한 나머지 조건은 동일함)을 마우스의 오른쪽 귀에

20㎕/ear 발라주고, 왼쪽 귀에는 음성 대조군으로 부틸렌글리콜을 20㎕/ear를 발라주었다. 1시간 경과 후 양쪽 귀에 아라키돈산(arachidonic acid)을 2㎎/ear 발라주었다. 또다시 1시간 경과 후 귀 부종(ear edema)의 정도를 마이크로미터(micrometer)를 이용하여 3회씩 측정하였다. 또한, 항염효과의 비교를 위하여 일반적인 항균제로 알려진 인도메타신(indomethacine)을 동일 방법으로 처 리(양성 대조군)하여 측정을 하였다. 항균효과는 대조부위에 대한 시험부위의 귀 두께 측정치로써 저해율로 표4에 나타내었다.

표4
시료	적용농도(중량%)	저해율(%)
혼합생약추출물	1	45
혼합생약추출물	0.5	50
인도메타신	1	51
저해율 (%) = (시험부위 귀 두께/대조부위 귀 두께) × 100

상기 항균효과를 측정한 상기 생약추출물을 처리한 경우, 항균제인 인도메타신보다 적은 농도로도 비슷한 저해율을 가지는 것으로 나타내는 것으로 보아 우수한 항균작용을 하는 것을 알 수 있었다.

3. 피부 자극성 실험

피부 자극성 실험은 본 발명 상기 생약추출물의 피부 자극성 시험을 위하여 기니아 피그(Guinea Pig)를 이용한 첩포실험(Patch test)을 수행하였다. [참고문헌 : ①Draize, J.H.(1959) : Dermal toxicity. Assoc. Food and Drug officials, US. Appraisal of the safety of

chemicals in Food, Drugs and Cosmetics., pp46-59,

Texas State Dept of Health, Austin Texas. ②Federal

<77> Register(1973): Method of testing primary irritant substances 38(187): pp1500-1541].

TEST#5 피부첩포(primary irritation)의 피부자극성 실험.

상기 추출물1.0％, 소디움라우릴셀퍼이트1.0％ 및 에탄올 10％를 함유한 시료와 소디움라우릴셀퍼이트 1.0％, 에탄을 10％ 용액의 안전성을 알아보기 위하여, 하기와 같이 인체첩보시험(Human patch test)을 통하여 인체에 대한 자극시험을 행하였다. 건강한 성인 남녀 50명을 대상으로 2분류(1분류-남자 25명 와 2분류-여자 25명)로 나누어 CTFA가이드라인(The Cosmetic, Toility and Fragrance Association.Inc.Washington, D.C., 20O36, 1991)에 따라 실시하였다. 핀 쳄버(Finn Chamber)에 시료 및 용액 20ml를 적하시킨 후, 이것을 시험 부위인 인체의 등에 얹어 테이프로 고정시켰다.

이어서 24시간 동안 첩포한 후, 첩포를 제거하고 다시 4시간 지난 다음 시험 부위의 피부 반응을 다음 기준에 따라 판정하여 그 결과를 표5에 나타내었다.

표5 #1(홍반이나 특이한 현상 없음). #2(주위보다 약간 붉어짐). #3(주위보다 현저히 붉어짐). #4(자극Irritation score).
판정 기준	#1	#2	#3	#4
1분류	100%	--	--	0
2분류	100%	--	--	0

TEST#5에서 보는 바와 같이 상기 생약추출물 1.0％는 소디움라우릴설페이트 1.0％와 에탄을 10％의 자극을 크게 완화시켜 주었다. 이러한 결과는 실험 예들로부터 상기 추출물은 항염효과가 뛰어나고 염증완화 효과로 피부에 안전한 성분임을 알 수 있다.

4. 세포독성 시험.

질 수축에 사용되는 원료로서의 1차 안정성을 검증하고자 상기 생약추출물에 대하여 V79-4 세포(차이니스 햄스터, 폐 조직 섬유아세포의 연속 세포주)를 배양하여 MTT 시험을 하는 방법을 수행하여 세포독성을 시험한 결과[참고 문헌: Mossman T.(1983). Rapid colorimetric assay for cellular growth ＆ survinal : application to proliferation ＆ cytotoxicity assays. Journal of Immunolgical

Methods65, 55∼63]: 전부 생존한 동물의 부검에서 본 시험물질의 근육 장기적 접촉에 기인한다고 사료되어지는 어떠한 유의할만한 육안적인 이상 소견은 관찰되지 않았다.

TEST#6 세포독성 시험.

질 수축작용에 사용되는 원료로서의 1차 안정성을 검증하고자 STO에 대하여 V79-4 세포(차이니스 햄스터, 폐 조직 섬유아세포의 연속 세포주)를 배양하여 MTT 시험을 하는 방법을 수행하여 세포독성을 시험한 결과[참고 문헌: Mossman T.(1983). Rapid colorimetric assay for cellular growth ＆ survinal : application to proliferation ＆ cytotoxicity assays. Journal of Immunolgical

Methods65, 55∼63]

급성 또는 만성 독성실험. 세포독성 시험 1

실험동물 : SPF SD계 rat.

성별 및 주령: 암컷. 수컷. 5주령

구입 후 실험실에 1주일 두어 증상 관찰하여 건강한 동물만을 사용함.

사용동물 수: 암수 각각 6마리.

찰기간 사료: 실험동물용 고형사료와 광천수.

근육 도포물질: 실시 예에 의하여 제조된 생성물로서 STO-B와 STO-S.

도포방법: 삭모후 피부에 직접 도포

도포 후 10시간 후 세척과 건조 후 재도포

도포기간: 30일

시험군의 구성 : STO-B 3마리, STO-S 3마리.

시험방법 :

1). 일반상태 관찰과 폐사의 관찰

도포 당일 매시간 1회 일반 관찰하고, 도포 다음날부터 일반상태의 변화, 중독증상, 운동성, 외관, 자율신경 및 사망동물의 유무를 주의 깊게 관찰함.

2). 도포 후 10일마다 체중을 측정하여 확인함.

3). 시험 종료시 생존 동물을 에테르 마취로 방혈 치사시켜 눈으로 모든 장기를 검사하였다.

시험결과 임상증상: 사망에는 관찰되지 아니하였음. 도포 즉시 운동량 감소의 소견 이 관찰되었으나 즉시 회복되었고, 체중의 변화 없었다.

부검소견: 전부 생존한 동물의 부검에서 본 시험물질의 피부 장기적 접촉에 기인한다고 사료되어지는 어떠한 유의할만한 육안적인 이상 소견은 관찰되지 않았다.

이하 상기 혼합생약추출물을 함유하는 여성용 질 세정제 조성물의 제형 예를 들어 구성을 상세히 설명한다.

제형 예) 여성용 질 세정제

제형 예 표3의 조성에 따라 정제수에 제형 예 표3의 상기 혼합생약추출물이 포함된 1번~10번의 원료를 섞어 용해시켜 수상을 만든다. 제형 예 표의 11번~14번의 원료들을 에탄올을 섞어 용해시켜 알코올상을 만든 후, 수상에 알코올상을 첨가하여 골고루 섞이도록 하여 제조한다.

		(단위: 중량%)
1	에탄올(ethanol)	8.0
2	라우틸 황산나트륨	2.0
3	붕사	2.0
4	모노라우린산폴리옥시에칠렌소르비판(20.이.오)	1.0
5	하이드록시에칠셀롬로오스	0.005
6	부틸렌글라이콜	4.0
7	알란도인	0.001
8	구연산	0.001
9	파라옥시벤조산메틸	0.001
10	알로에추출물	1.0
11	고삼추출물	1.0
12	쑥추출물	1.0
13	녹차추출물	1.0
14	정제수(distilled water)	나머지 잔량
계		합100%

혼합 상기 추출물 모두를 댜시 실온 60도~70도 정도 온도가 유지되는 저장고에 2일간 침전시킬 때에 길이 30센티 정도 절단하여 건조한 대나무를 원료 안에 같이 넣고, 3~4일 동안 넣어두면 모든 대나무에 상기 추출물의 맑은 액상이 대나무에 스며들어 간다 3~4일 후에 스며들어 간 대나무를 꺼내어 대나무 한쪽 끝이 60도 정도 아래쪽으로 기우려 대나무 상부에 열을 가하면 대나무에 스며 있든 액상의 물방울이 떨어지는데 이 물을 추출하여 여과하여 추출물을 얻어내는 단계를 포함하는 것으로 추출물 제조방법의 특징이다. 대나무에 열기를 가해 대나무속에 들어 있는 추출물을 얻는 방법

Claims (4)

1. 본 발명의 상기 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 에탄올추출물로 (1) 알로에 0.005~95(중량%), (2) 고삼 0.005~95(중량%), (3) 쑥 0.005~95(중량%), (4) 녹차 0.005~95(중량%)의 추출물에 대나무를 침전시켜 대나무에 맑은 액상이 스며들어 가면 액상이 스며들어간 대나무를 얻어 열을 가해 추출여과을 하여 얻는 제조방법 포함하는 단계
2. 제 1항에 있어서, 상기 본 발명의 상기 생약추출물은, 에탄올(ethanol), 라우틸 황산나트륨, 붕사, 모노라우린산폴리옥시에칠렌소르비판(20.이.오) , 하이드록시에칠셀롬로오스, 부틸렌글라이콜, 알란도인, 구연산, 중에서 선택되는 용매를 단독 또는 병합하여 사용함으로써 추출되는 것을 특징으로 하는 단계
3. 제 1항에 있어서, 상기 본 발명의 상기 생약 추출물은, 액상 추출물, 농축 액상 추출물, 동결건조 분말 및 분무 건조 분말, 정제삽입용, 휴지용, 크림용, 겔용, 스프레이용, 착용식페드용 중 선택되는 어느 하나의 형태인 것을 특징으로 하는 단계
4. 제 1항에 있어서, 상기 본 발명의 상기 생약 추출물의 양은, 전체 중량에 대하여 0.005(중량%) ~ 95(중량%)인 것을 특징으로 하는 단계

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