KR20090115070A

KR20090115070A - 식물체 다니엘리아 올리베리의 삼출물의 추출물의 화장품 분야, 특히 항주름제로서의 용도

Info

Publication number: KR20090115070A
Application number: KR1020090037541A
Authority: KR
Inventors: 라미 세실; 소반 낸시; 레니멜 이사벨; 온드레 파트리스; 다르누 실비
Original assignee: 엘브이엠에이취 러쉐르쉐
Priority date: 2008-04-30
Filing date: 2009-04-29
Publication date: 2009-11-04
Also published as: FR2930728B1; JP5610505B2; JP2009269916A; FR2930728A1; US20090274779A1; KR101730166B1; US7776367B2

Abstract

본 발명은 식물체 다니엘리아 올리베리의 올레오레진으로 적어도 일부분 구성된 삼출물의 추출물의 화장품 조성물에서의 및 화장품 조성물의 생산에 사용되는 용도에 관한 것이다.

특히, 본 발명은 주름 및/또는 잔주름의 정도를 감소시키는 것을 통해 피부에 더 매끈한 외관을 부여함으로써 및/또는 피부에 다시 부풀게 하는 효과를 제공함으로써 피부의 표면을 개질하는 화장품 제제로서, 이러한 추출물을 사용하는 용도에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 주름 및/또는 잔주름의 정도를 감소시키는 것을 통해 피부에 더 매끈한 외관을 부여함으로써 및/또는 피부에 다시 부풀게 하는 효과를 제공함으로써 피부의 표면을 개질하는 미용 관리 방법으로서, 이러한 추출물을 함유하는 화장품 조성물을 문제의 피부 부위에 적용하는 것을 포함한다.

다니엘리아 올리베리, 올레오레진, 항주름제

Description

식물체 다니엘리아 올리베리의 삼출물의 추출물의 화장품 분야, 특히 항주름제로서의 용도{Use in the cosmetics field of an extract of an exsudate of the plant Daniellia oliveri, in particular as an antiwrinkle agent}

본 발명은 화장품 분야에 관한 것이다.

더 상세하게는, 본 발명은 식물체 다니엘리아 올리베리(Daniellia oliveri)의 화장품 분야에서의 용도, 더욱 상세하게는 이러한 식물체의 천연 삼출물로부터 얻든 추출물의 화장품 분야에서의 용도에 관한 것이다.

특히, 본 발명은 그러한 삼출물의 화장품 조성물로의 화장품 분야에서의 용도 및 피부에 부푼 효과를 제공하여 깊은 주름 및/또는 잔주름의 정도를 감소시키는 것을 통해 매끈한 표면을 제공함으로써 피부의 표면을 개질하는 것으로 의도된 화장품 조성물의 제조용으로 사용되는 용도에 관한 것이다.

다니엘리아(Daniellia)속의 나무는 지형학적으로 열대 아프리카에 분포되어 있다. 다니엘리아 올리베리는 주로 서부 아프리카 (부르키나 파소, 아이보리 코스트, 나이제리아, 등)에서 발견된다. 이것은 수단 및 기니 초원에 있는 종의 한 종류이다.

다니엘리아 속은 콩과(Fabaceae 또는 Leguminosae)에 속해 있는 데, 시아노티르서스 함스 (Cyanothyrsus Harms) 또는 파라다니엘리아 롤페(Paradaniellia Rolfe)와 같이 다른 식물적 명칭으로도 알려져 있다.

다니엘리아 올리베리 종은 또한 다니엘리아 올리베리 (롤페) 허치 & 달지엘 (Hutch & Dalziel)의 식물 명칭으로도 알려져 있다.

이러한 종은 또한 다른 식물 명칭, 특히, 파라다니엘리아 올리베리 롤페로 알려져 있다.

이러한 식물은 또한, 열대 특성인 것으로 생각되는, 다니엘리아 속을 가지는 종의 나무의 특성을 언급하는 것이 바람직한 경우는, 파로 (Faro) 또는 다니엘리아로도 알려져 있다.

다니엘리아 올리베리는 상부에서 벌어져 있고, 높이가 15 내지 20 m인 상대적으로 크고, 날씬한 나무이다. 이의 잎들은 개화 시기에는 분홍색 내지 붉은 색이고, 이의 비늘성 수피는 흰줄무늬가 있는 심홍색 빗금을 가진 회색이다. 줄기는 삼출물을 올레오레진의 형태로 분비한다. 이러한 생산은, 자연적 현상, 예를 들어, 수피를 훼손시키는 애벌레 공격으로, 또는 다르게는, 관목 발생으로 증폭될 수 있다. 톱밥 형태의 수피와 올레오레진의 혼합물은 일반적으로 나무 밑둥에서 발견되고 있다.

다니엘리아 올리베리 종은 전통적으로 다양한 의료 적용에 사용되고 있다:

부르키나 파소에서는, 그 잎은 말라리아 및 간 문제에 의한 황달 치료에 사용된다. 수피는 이질을 치료하는 데 사용된다. 이파리 줄기는 피로 회복 및 임신중 통증 치료에 사용된다. 씨앗으로부터 추출된 오일은 피부 상태를 치료하는 데 사용된다. 포엽이라고 불리우는, 잎의 기부로부터 꽃이 피며, 잎을 씹어서 이로부터 나오는 즙을 삼키게 하여 기침을 치료하는 데 사용된다.

잎 (탕제로서) 및 수피 (우려낸 것)를 이뇨제 및 최음제로서 사용된다: 이러한 약물을 로션처럼 몸체 바른다. 말린 잎의 분말을 먹어서, 황열병, 심한 배통 및 두통을 치료하며 상처에 적용할 수 있다.

결론적으로, 이러한 식물이 화장품 분야에서 사용된 것이 문헌에서 나타난 바가 없고, 다시 부풀리는 효과로 인한 항주름 제제로서는 더욱 그러하다.

이러한 유형의 용도가 본 발명의 주제를 나타내는 것이다.

사실, 본 발명의 발명자들은 식물 다니엘리아 올리베리의 삼출물의 추출물, 및 더 상세하게는 이러한 식물체로부터 나오는 올레오레진을 함유하는 추출물이 항주름 활성을 가지며 피부의 표면 모습을 향상시키는, 특히 주름의 깊이를 감소시키고 잔주름을 없애는 화장품 제제로서 사용될 수 있다는 것을, 놀랍게도 그리로 예상치 못하게 발견하였다.

이것들은 이러한 활성이, 적어도 부분적으로는, 지방세포 또는 전지방세포의 내부 지질생성에 대한 자극 활성과 연계되어 있다는 것을 증명하였다. 이것은 후자의 세포 부피에서의 증가로 반영되어, 세포외 단백질 망(network)과 더 나은 접촉 을 하게 한다. 따라서, 표피는 약하게 팽창하는 것으로 인하여 다시 부풀게 되고, 이는 주름의 깊이를 감소시키고 잔주름을 없애는 것을 가능하게 하고, 결론적으로 이러한 것들이 덜 나타나게 한다.

이러한 활성을 발견함에 따라, 본 발명자들은 피부의 표면 외관을 향상시키키 위한 특별한 기초적인 해답을 제안할 수 있었다. 이러한 해답은 처리될 피부의 부분에, 식물 다니엘리아 올리베리의 삼출물로부터 얻은 추출물의 효과적인 양을 바르는 것으로 구성된다.

연구를 계속하던 중, 본 발명자들은 상기 삼출물이 카달렌(cadalene), 즉 식 C₁₅H₁₈의 1,6-디메틸-4-(1-메틸에틸)나프탈렌 유도체를 포함하는 것과 이러한 카달렌이 적어도 부분적으로 상기 추출물의 활성에 관여한다는 것을 밝혔다.

이들은 또한 추출물에 카달렌을 풍부하게 하기 위해, 추출 방법을 개선하였다.

따라서, 제 1 본질적 특징에 따라서, 본 발명은 다니엘리아 올리베리의 올레오레진으로 최소한 부분적으로 구성되는, 상기 식물체의 삼출물의 추출물을 화장품 조성물에 또는 화장품 조성물의 제조에 사용하는 용도에 관한 것이다.

제 2 본질적 특징에 따라서, 본 발명은 주름 및 잔주름의 정도의 감소를 통해 피부에 더 부드러운 외관을 부여함으로써 및/또는 피부에 다시 부푸는 효과를 제공함으로써 피부의 표면을 개질시키는 미용 관리 방법으로서, 문제의 피부 영역에 삼출물의 추출액을 함유한 화장품 조성물을 적용하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 다른 특징 및 장점들은 후술하는 상세한 설명 및 예증적 구체예에서 명백하게 될 것이다.

본 발명의 상기 및 기타 목적은 주름 및 잔주름의 정도의 감소를 통해 피부에 더 부드러운 외관을 부여함으로써 및/또는 피부에 다시 부푸는 효과를 제공함으로써 피부의 표면을 개질시키는 미용 관리 방법으로서, 문제의 피부 영역에 삼출물의 추출액을 함유한 화장품 조성물을 적용하는 것을 포함하는 방법 및 다니엘리아 올리베리의 올레오레진으로 최소한 부분적으로 구성되는, 상기 식물체의 삼출물의 추출물을 화장품 조성물에 또는 화장품 조성물의 제조에 의하여 달성된다.

본 발명은 식물체 다니엘리아 올리베리의 올레오레진으로 적어도 일부분 구성된 삼출물의 추출물의 화장품 조성물에서의 및 화장품 조성물의 생산에 사용되는 용도에 관한 것으로써, 주름 및/또는 잔주름의 정도를 감소시키는 것을 통해 피부에 더 매끈한 외관을 부여함으로써 및/또는 피부에 다시 부풀게 하는 효과를 제공함으로써 피부의 표면을 개질하는 화장품 제제로서, 이러한 추출물을 사용하는 용도 및 미용 관리 방법으로서, 이러한 추출물을 함유하는 화장품 조성물을 문제의 피부 부위에 적용하는 것을 포함한다.

하기 명세서에서, 용어 “본 발명의 추출물”은 그 자체가 적어도 부분적으로 상기 식물체의 올레오레진으로 구성된 삼출물로부터 얻은 추출물을 지칭하고, 및 용어 “본 발명의 조성물”은 본 발명의 추출물을 포함하는 화장품 조성물을 뜻한다.

상술한 것으로부터 나타나는 바와 같이, 삼출물은 나무의 줄기로부터 자연스럽게 분비되는 것이고 및 이의 생성은 자연 현상, 즉 기생충, 특히 표면을 갉아먹는 애벌레의 공격에 의해 증가된다는 것이 알려져 있다.

따라서, 올레오레진 및 나무 및/또는 수피로부터의 톱밥을 둘 다 함유하는 혼합물은 일반적으로 줄기를 따라 흘러내린다. 그러한 혼합물은 본 발명의 추출물을 제조하는 방법을 실행하는 데 특히 바람직한 삼출물을 구성하고 있다.

본 발명의 삼출물의 추출물은, 하기 실시예로부터 나타난 바와 같이, 주름 및/또는 잔주름의 정도를 감소시키는 것을 통해서 피부에 더 매끈한 외관을 부여함으로써 및/또는 피부에 다시 부풀게 하는 효과를 부여함으로써, 본 발명의 조성물에 항주름 특성을 부여하는, 피부 표면 개질용 화장품 제제로서 사용될 수 있다.

본 발명의 추출물은, 특히 바람직하게는, 적어도 하나의 추출 단계를 포함하는 방법의 수단에 의해 삼출물을 비극성 용매로 처리하여 얻어진다.

넓은 범위의 용매가 사용될 수 있다. 하지만, Veronika R. Meyer의 Practical High-Performance Liquid Chromatography (1988), John Wiley and Sons, p. 120~121에 설명된 바와 같이, 극성으로 용매를 분류하는 것을 참조한다면, 극성 계수 P’가 -2와 0.2 사이의 용매 또는 용매의 혼합물이 바람직하게 선택될 수 있다.

이러한 비극성 용매는 메톡시노나플루오로부탄, 에톡시노나플루오로부탄, 또는 1,1,1,3,3-펜타플루오로부탄과 같은 플루오로알칸류 및 이의 유도체, 시클로헥산, 시클로펜탄, 헵탄, 이소펩탄, 헥산, 및 펜탄, 및 이의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.

본 발명의 특히 바람직한 예에 따라서, 초임계 상태의 CO₂를 비극성 용매로 사용한다.

상기 비극성 용매, 특히 초임계 상태의 CO₂ 를 상기 비극성용매의 극성을 개질시키는 제제의 존재하에서 사용하는 것이 특히 바람직하다는 것이 발견되었다. 이러한 극성 개질 제제는 극성 용매로부터 바람직하게 선택된다. 메탄올, 에탄올 또는 에탄올/물 혼합물이 바람직하게 사용될 것이다.

일반적으로, 극성 개질제로 사용된 용매는 주된 용매 매체를 구성하는 비극성 추출제에 비하여 적은 비율로 존재할 것이다. 이러한 개질제는 일반적으로 비극성 용매에 대하여, 0 내지 10%, 바람직하게는 0 내지 3%의 비율로 포함될 것이다.

전술한 바와 같이, 본 발명의 발명자들에 의해 수행된 시험에서, 카달렌이 본 발명의 추출물의 활성에 주된 역할을 하는 것임을 증명하였다.

이러한 새로운 발견은, 본 발명자들이 카달렌의 완전히 예상치 못한 특성임을 증명하였기 때문에, 그 자체로 본 발명을 구성한다. 사실 카탈렌은 지방세포 또 는 전 지방세포 지질생성을 자극하는 것이 가능하여, 이들의 세포부피를 증가시키고 및, 전술한 바대로, 주름 및 잔주름의 정도를 감소하여, 결론적으로 이들이 덜 보이게 하는 것이 가능하다.

따라서, 본 발명자들은 카달렌 및 카달렌을 함유하는 식물체의 추출물을 항 피부노화제로서, 특히 주름과 잔주름의 정도를 감소시키기 위한 새로운 적용을 개발하였다.

본 발명의 추출물 중에서, 카달렌을 함유하는 것들이 바람직하게 선택될 수 있다.

카달렌의 최종 추출물을 풍성하게 하는 추출 방법이 바람직하게 사용될 것이다. 이것은 특히, 삼출물을 비극성 용매로 처리 후, 적절하다면, 극성 개질 용매의 존재하에서 플래시 크로마토그래피 기술 및/또는 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 기술로써 추출물을 처리하여 가능할 수 있다.

본 발명의 화장품 조성물은 상기 건조 추출물을 0.01 중량 % 내지 5 중량 %, 더 바람직하게는 0.1 중량 % 내지 1 중량 % 포함한다.

본 발명의 화장품 조성물은 국소 적용에 부합되는 다양한 형태로 제형될 수 있고, 특히 로션, 밀크, 젤, 크림 또는 스틱의 형태, 특히 입술 주위에 적용되는 형태로 있을 수 있다.

마지막으로, 본 발명의 화장품 조성물은 갈락토리피드, 특히 갈랄토실글리세라이드와 같이, 피브로넥틴 합성에 작용하는 생성물, 및/또는 콜라겐과 이의 전구체, 프로콜라겐 타입 I, 엘라스틴, 하알루론 산, 비타민 C, 알파-리포 산과 같이, 콜라겐과 이의 전구체의 합성에 작용하는 생성물, 및 이들의 화장품학적으로 허용 유도체를 포함할 수 있다.

피브로넥틴 합성에 작용하는 생성물의 예로서, 갈락토리피드류, 특히 모노갈락토실모노글리세라이드류 (MGMGs), 모노갈락토실디글리세라이드류 (MGDGs), 디갈락토실모노글리세라이드류 (DGMGs) 및 디갈락토실디글리세라이드류 (DGDGs)를 언급할 수 있다. 모노 또는 디갈락토실디글리세라이드류가 바람직하게 선택된다.

엘라스틴 합성에 작용하는 생성물을 예로서, 비타민 C가 언급될 수 있다.

상기 조성물은 또한 미세순환에 작용하는 생성물, 특히 계피의 추출물, 은행 (Ginkgo biloba)의 추출물 또는 듀 그래스 (dew grass)의 추출물을 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 주름 및 잔주름의 정도를 감소시키는 것을 통해 피부에 더 매끈한 외관을 부여함으로써, 및/또는 피부에 다시 부풀게하는 효과를 제공함으로써 피부의 표면을 개질한 미용 관리 방법에 관한 것이다. 이러한 방법은, 문제의 피부 영역에, 전술한 바와 같은 화장품 조성물을 적용하는 것을 포함한다.

본 발명의 다른 특징 및 장점은 후술하는 오로지 예증적 방식으로 주어진 실시예에서 더 분명하게 될 것이다.

실시예

실시예 I: 본 발명에 따른 추출물의 제조

1a.3% 에탄올 존재 하에서 초임계 CO ₂ 로 추출

절반이 수지이고 절반이 톱밥으로 구성된 삼출물 60 g을 에탄올 2.8%가 존재하는 중에, 초임계 CO₂로 60℃에서, 290 bar의 압력하에서 적절한 기구, 세파렉스 모델 (Separex model) SF500를 사용하여 추출하였다. CO₂가 초임계 상태로부터 가스 상태로 감압된 후, 에탄올성 추출물을 얻고 후속적으로 이를 진공 증발 단계로 처리하여 에탄올을 제거하였다.

결과적으로 얻은 추출물은 오렌지색 풀의 형태로 존재하였다.

이 혼합물을 추출물 I로 명명하고, 후속적으로 DMSO에 5 부피%로 용해하여 생물학적 시험용 원액을 제조하였다.

1b. 메톡시노나플루오로부탄으로 추출함으로써 추출물 제조

실시예 1a와 동일한 출발물질 100 g을 환류 하에서(67℃) 자기 교반하면서 메톡시노나플루오로부탄 (HFE 7100) 500 ml로 처리한다. 추출시간은 3시간이고, 얻은 현탁액을 감압하에서 여과한다. 여과물을 회전 증발기를 사용하여 40℃에서 증발시켰다.

이 추출물을 II로 명명하고, DMSO에 5 부피%로 용해하여 생물학적 시험용 원액을 제조한다.

1c. 추출 용매로서 에톡시노나플루오로부탄을 사용하는 추출물 제조

다른 불소화 용매, 에톡시노나플루오로부탄을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1.b와 같이 실시한다.

출발 물질 100 g을 76℃에서 환류하 자기 교반하면서, 용매 (HFE 7200) 500 ml로 추출한다.

추출시간은 3 시간이다. 얻어진 현탁액을 감압하에서 여과한다.

여과물을 회전 증발기를 사용하여 40℃에서 증발시킨다.

이러한 추출물을 III으로 명명하고 DMSO에 5 부피%로 용해하여 생물학적 시험용 원액을 제조한다.

1d. 추출 용매로서 1,1,1,3,3- 펜타플루오로부탄를 사용하는 추출물 제조

전술 실시예에서와 동일한 출발 물질 100 g을 환류 (40℃) 하에서 자기 교반하면서 용매 500 ml로 처리한다.

추출시간은 3 시간이다.

얻어진 현탁액을 감압하에서 여과한다.

여과물을 회전 증발기를 사용하여 주위 온도에서 증발시킨다.

이러한 추출물을 IV로 명명하고 DMSO에 5 부피%로 용해하여 생물학적 시험용 원액을 제조한다.

1e. 카달렌이 풍부한 정제 추출물 제조

첫 번째 단계에서, 동일한 수지와 톱밥의 출발 혼합물 76 g을 실시예 1.a에서 설명한 조건하에서 처리한다.

여전히 오렌지색 풀과 같은 형태로 있는 첫 번째 추출물 약 10 g을 얻었다.

두 번째 단계에서, 상기 첫 번째 추출물 8.81 g을 헵탄과 실리카로 구성되는 실리카 젤 상에서 플래시 크로마토그래피로 분별한다 (극성 정지상은 70 - 230 메쉬 공극을 가짐).

헵탄과 디에틸에테르의 다양한 혼합물로 극성이 증가되는 용매 구배를 만들고, 이들을 사용하여 다양한 분별물을 얻고 이를 질소류를 사용하여 배출하였다.

표 1은 상기 분별화의 결과를 나타낸다

용출	용매	사용 부피 (ml)	분별물	환수 중량(g)
1	헵탄	730	F1	0.005
			F2	0.00104
2	헵탄/에테르 90/10 (v/v)	730	F3	0.01556
			F4	0
3	헵탄/에테르 80/20 (v/v)	730	F5	0.45627
			F6	1.71078
4	헵탄/에테르 70/30 (v/v)	730	F7	1.6124
			F8	0.9976
5	MeOH	730	F9	3.4556

결과로 얻은 각 분별물을 210 nm 및 230 nm에서 이중 UV 검출하면서 HPLC로 분석하였다.

분별물 F5는 원하는 카달렌을 포함하고 있다. 따라서 이것을 세 번째 단계로, 하기 조건하에서, 고성능 액체 크로마토그래피 (Shimadzu 장비)로 정제하였다:

역-극성 정지상: Lichrospher 100 RP 18 컬럼 (LXI: 250x25 mm, 직경: 5 μm).

물/아세토니트릴 혼합물로 구성되는 용출 구배액을 사용한 이동상 (하기 표 2 참조),

시간 (분)	% 아세토니트릴
0	70
25	95

유동 속도: 20 ml/분.

UV 검출 230 nm.

주입: 아세토 니트릴 2 ml에 용해된 분별물 5의 124 mg.

카달렌 피크가 20.1 분에서 나타난다. 회수된 상을 회전 증발기에서 감압하에서 증발시킨다. 95% 순도의 (210 nm에서 HPLC로 측정) 카달렌 (오일 형태로 있는) 7.7 mg을 회수한다.

이러한 추출물을 V로 명명하고 DMSO에 2.75% (w/v)로 용해하여 생물학적 시험용 원액을 제조한다.

실시예 2: 지질생성에 대한 본 발명의 추출물의 활성의 증례

사용된 세포는 정상적인 인간 전-지방세포 (source R&D biotech)이다.

밀집된 세포는 분열하는 것을 멈추고 초기 분화 단계로 들어간다. 이러한 분화는 세포 콜로니를 형성하게 되고 이들은 지방세포로 전환된다.

이러한 분화는 몇 가지 단백질의 생합성에서의 변화 및 G₃PDH로 알려진 글리세롤-3-포스페이트 디하이드로게나제를 위시한 다양한 효소 활성에서의 증가를 동반한다.

기억하여야 할 것은 G₃PDH는 세포내 지질 (트리글리세라이드)의 신규 합성에 참여하는 분자인, 글리세롤-3-포스페이트를 형성하게 한다는 것이다. 따라서, G₃PDH의 활성에서의 증가는 이러한 합성을 강화하는 것과 직접적으로 연계되어 있다.

이러한 모델에서, 본 발명의 다니엘리아 올리베리의 추출물에 효과를 시험하였다.

1 - 사용된 생성물

지질생성을 증가시키는 데 사용된 양성 대조군은 Silab 회사에서 판매하는 Pulpactyl^®이다. 이것은 부틸렌 글리콜 및 아르테미시아 아브로타넘 (Artemisia abrotanum)의 멸균 수성액이다. Pulpactyl^®은 배양 배지에 직접적으로 0.5% 농도로 사용한다.

본 발명에 따른 다니엘리아 올리베리의 추출물 I 내지 V를 25 mg/ml의 동일한 농도에서 전부 시험하는 방식으로, DMSO에 용해하였다. 본 발명에 따른 추출물을 0.1% v/v에서, 즉, 25 μg/ml의 활성제제의 최종 농도에서 배양 배지에 첨가하였다. 병행하여, 최종 농도 0.1% v/v의 부형제 대조군 (DMSO)를 제조하였다.

2- 배양 방식

상기 전-지방세포를 전지방세포 성장 배지를 담은 12-웰 배양 마이크로플레이트의 바닥에 분배하고 밀집될 때까지 배양하였다. 분화 단계 동안, 상기 세포를 소인슐린 (0.5 μg/ml), 덱사메타손 (400 ng/ml) 및 A.G. Scientific Inc.에서 판매하는 IBMX (44 μg/ml) 또는 3-이소부틸-1 메틸트산틴이 보충된 전지방세포 분화 배지 (R&D biotech에서 공급)에서 배양한다.

본 발명에 따른 추출물로 처리하는 단계 중에, 인슐린을 더 이상 함유하지 않으나 3% 우태아혈청 (FCS)을 함유하는 지방세포 영양 배지를 사용한다.

본 발명에 따른 추출물들을 3 중으로 시험하였다.

하기 방식으로 배양한다:

당일 D=0:전지방세포 성장 배지에서 5000 세포/cm² 율로 분배.

D=2 및 D=4에서: 배지 교환.

D=6에서: 전지방세포 분화 배지로 3일간 배양.

D=9 에서 D=18까지: 지방세포 영양 배지로 배양.

D=18에서: 배지를 본 발명에 따른 시험 추출물 25 μg/ml을 함유한 지방세포 영양 배지로 교환.

24 시간 후에 반복 처리.

48 시간 처리후, 배양 배지를 제거하고 세포를 갈아서, G₃PDH 활성을 측정.

3 - G₃PDH 활성 분석

3 1 세포 용해물의 회수

배양배지를 흡인 제거한 후, 용해 완충액 (25 mM Tris, 1 mM EDTA, pH 7.5)을 웰당 500 μl 첨가한다. 세포를 긁어서 에펜도르프 튜브에 담고, 5 분간 6000 g에서 원심분리시키고, 상등액을 제거하였다. 이를 -20℃에서 냉동하여 후속으로 G₃PDH 활성 및 이러한 단백질을 분석한다.

3 2 G₃PDH 활성의 분석

3 2.1 원리

긁어서 세포 단층을 회수하고 이를 EDTA를 함유하는 TRIS-HCl 완충액 (25 mM, pH 7.4)에 담아 4℃에서 심하게 균질화하였다. G₃PDH 활성의 분석은, 원심분리 직후 갉은 세포 물질의 상등액으로 실시한다.

G₃PDH는 하기 반응을 촉매한다:

디아히드록시아세톤포스페이트

글리세롤-3-포스페이트

NADH NAD⁺

시험된 각 생성물에 대해서, 조효소 NADH (수소화된 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오타이드)의 NAD로의 전환은 상기 효소의 반응 속도, 즉 따라서, G₃PDH 효소의 활성을 반영하는 것으로 1 분 후 340 nm에서 분광분석으로 측정한다.

t=0 및 t=1 분 사이의 처음 효소 반응 속도에 해당하는 것인 흡광차(△Abs)/min은 계산될 수 있다.

세포 단백질의 총량은 BCA-PIERCE 방법: 단백질 분석 시약으로 측정된다.

3-2.2 반응 매체

1.5 mM NADH (Sigma, N7410): 분석 완충액 (50mM 트리에탄올아민, 1mM EDTA, pH 7.5)의 2 mg/1.925 ml 농도로 있는 용액 50 μl.

1 mM 디하이드로아세톤 (Sigma, D 7137): 분석 완충액 (50mM 트리에탄올아민, 1mM EDTA, pH 7.5)의 3.6 mg/2 ml 농도로 있는 용액 50 μl.

분석 완충액: 350 μl

마쇄된 세포성 물질: 50 μl.

3-2.3 결과 - G₃PDH 활성

결과는 하기 표 4에 나타나 있고, 여기서, G₃PDH 활성은 백분율로 표시되어 있다. 이러한 값은 본 발명에 따른 추출물의 △흡광도의 값을 세포의 기본 활성 (즉, 100% 활성)을 표시하는 것으로 의도된 부형제 대조군의 것과 비교하여 얻어진다.

추출물	투여량 μg/μL	% 활성
I	25	240
II	25	169
III	25	242
IV	25	213
V	25 5 0.5	119 207 278

상기 표로부터, 본 발명에 따른 생성물은 대조군 배양액에서의 이러한 효소의 활성과 비교하여, 정상적인 인간 지방세포 배양물에서의 G₃PDH 효소의 활성을 매우 크게 증가시킨다는 것이 나타난다. 따라서, 본 발명에 따른 생성물은 세포내 지질 (트리글리세라이드류)의 합성을 실질적으로 증가시키는 데 기여한다는 것이 증명된다.

실시예 3:본 발명에 따른 화장품 조성물

하기 구성물의 비율은 최종 조성물에 대한 중량비로서 표시된다.

겔 l

글리콜 3

AMPS 폴리머 (Sepigel 305) 3

수소화된 피마자유 (Cremophor CO-60) 2

폴리에틸렌 글리콜 1.5

방부제 0.5

농축 방향제 0.3

물 83.7

추출물 I 5

벤조페논 4 1

크림

스테아레스(Steareth)-21 (Brij 721) 2.5

글리세릴 스테아레이트 (Tegin) 1.1

스테아릴 알콜 5

글리세롤 트리카프레이트/카프릴레이트 11.5

부틸렌 글리콜 3

글리세린 2

방부제 0.5

농축 방향제 0.5

물 64.4

추출물 III 2

옥틸메톡시시나메이트 7.5

로션

부틸렌 글리콜 3

EDTA 0.1

용해제 1

농축 방향제 0.3

알콜 5

물 qs

추출물 IV 0.05

벤조페논 4 0.13

부풀리는 립스틱

라놀린 8

폴리부텐 10

팔리암(Parleam) 12

이소스에아릴 이소스테아레이트 15

펜타에릴트리틸 테트라이소스테아레이트 15

칸델릴라 왁스(Candelilla wax) 5

지랍(Ozokerite) 1.5

밀랍 2

폴리에틸렌 6

색소 5

진주광택제 3

추출물 V 0.5

피마자유 qs

Claims

식물체 다니엘리아 올리베리의, 적어도 부분적으로 올레오레진으로 구성된 삼출물의 추출물을 포함하는 화장품 제제.
제 1 항에 있어서, 상기 삼출물은 올레오레닌과 나무 및/또는 수피로부터 나온 톱밥의 혼합물을 함유하는 식물체 다니엘리아 올리베리의 자연적 삼출물인 것을 특징으로하는 제제.
제 1 항 또는 2 항에 있어서, 상기 제제는 주름 및/또는 잔주름의 정도를 감소시키는 것을 통해 피부에 더 매끈한 외관을 부여함으로써 및/또는 피부에 다시 부풀게하는 효과를 제공함으로써 피부의 표면을 개질하는 것을 특징으로하는 제제.
제 1 항 내지 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 비극성 용매를 사용하는 적어도 하나의 단계를 포함하는 방법으로써 상기 삼출물을 처리하여 얻는 것을 특징으로하는 제제.
제 4 항에 있어서, 상기 비극성 용매는 -2와 0.2 사이의 극성 계수를 가지는 것을 특징으로 하는 제제.
제 4 항 또는 5 항에 따라서, 상기 비극성 용매는 메톡시노나플루오로부탄, 에톡시노나플루오로부탄 또는 1,1,1,3,3-펜타플루오로부탄과 같은 플루오로알칸류, 시클로알칸, 시클로헵탄, 헵탄, 이소헵탄, 헥산 및 펜탄 및 이의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제제.
제 1 항 내지 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 비극성 용매로서 작용하는, 초임계 상태의 CO₂로 추출하는 적어도 하나의 단게를 포함하는 방법으로 얻어지는 것을 특징으로 하는 제제.
제 4 항 내지 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비극성 용매는 메탄올, 에탄올 또는 에탄올/물 혼합물과 같은, 상기 비극성 용매의 극성도를 개질하는 제제의 존재 하에서 사용되는 것을 특징으로 하는 제제.
제 1 항 내지 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 카달렌 또는 1,6-디메틸-4-(1-메틸에틸)나프탈렌인 것을 특징으로 하는 제제.
제 9 항에 있어서, 상기 추출물은 적어도 하나의 정제 단계의 방법으로써, 특히 플래시 크로마토그래피 기술 및/또는 고성능 액체 크로마토그래피 기술로써 카달렌이 풍부하게 되는 것을 특징으로 하는 제제.
전술한 항 중 임의의 한 항에서 정의한 바와 같은 화장품 제제를 포함하는 화장품 조성물.
제 11 항에 있어서, 상기 조성물은 상기 건조 추출물을 0.01 중량% 내지 5 중량%, 더 바람직하게는 0.1 중량% 내지 1 중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 11 항 또는 12 항에 있어서, 국소 적용용으로 제형되고 로션, 밀크, 젤, 크림 또는 스틱 형태로 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 11 항 내지 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 주름 및 잔주름의 정도를 감소시키는 것을 통해 피부에 더 매끈한 외관을 부여함으로써 및/또는 피부에 다시 부풀게하는 효과를 제공함으로써 피부의 표면을 개질시키는 미용관리 조성물.