KR20090114459A - 가공된 항-ＩＬ-23ｐ19 항체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 사람 IL-23p19에 대한 가공된 항체, 및 예를 들면 염증, 자가면역 및 증식 질환의 치료시 이의 용도를 제공한다.
사람 IL-23p19에 대한 가공된 항체, 염증 반응, 면역 반응, 암, Th17 반응

Description

가공된 항-ＩＬ-23ｐ19 항체{Engineered Anti-IL-23p19 Antibodies}
본 발명은 일반적으로 인터루킨-23p19(IL-23p19)-특이적인 항체 및 이의 용도에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 사람 IL-23p19를 인지하고 특히, 염증, 자가면역 질환 및 증식 질환에서 이의 활성을 조절하는 사람화된 항체에 관한 것이다.
면역 시스템은 감염인자, 예를 들면, 세균, 다-세포 유기체, 및 바이러스, 및 암으로부터 개인을 보호하기 위해 작용한다. 당해 시스템은 단핵구, 대식구, 수지 세포(DC), 호산구, T 세포, B 세포 및 호중구와 같은 림프구 및 골수구 세포의 여러 유형을 포함한다. 이들 림프구 및 골수구 세포는 흔히 사이토킨으로 알려진 시그날링 단백질(signaling protein)을 생산한다. 면역 반응은 염증, 즉, 전신계적으로 또는 신체의 특수 위치내에 면역 세포의 축적을 포함한다. 감염인자 또는 외부 물질에 대한 반응시, 면역 세포는 사이토킨을 분비하며, 이는 최종적으로 면역 세포 증식, 발달, 분화 또는 이주를 조절한다. 면역 반응은, 예를 들면, 이것이 자가면역 질환에서와 같이 과도한 염증을 포함하는 경우, 병리학적 결과를 생 산할 수 있다[참조: Abbas et al. (eds.) (2000) Cellular and Molecular Immunology, W.B. Saunders Co., Philadelphia, PA; Oppenheim and Feldmann (eds.) (2001) Cytokine Reference, Academic Press, San Diego, CA; von Andrian 및 Mackay (2000) New Engl. J. Med. 343: 1020-1034; Davidson and Diamond (2001) New Engl. J. Med. 345:340-350].
인터루킨-12 (IL-12)는 p35 및 p40 소단위(subunit)로 구성된 이종이량체 분자이다. 연구들은, IL-12가 본래의 T 세포(naive T cell)를 IFΝγ를 분비하는 T-헬퍼 제1형(T-helper type 1) CD4+로 분화시키는데 있어 중요한 역활을 담당한다고 지적하였다. IL-12는 또한 생체내에서 T 세포 의존성 면역 반응 및 염증 반응에 필수적임이 밝혀졌다[참조: Cua et al. (2003) Nature 421 :744-748]. IL-12 수용체는 IL-12β1 및 IL-12β2 소단위로 구성되어 있다.
인터루킨-23(IL-23)은 2개의 소단위인, IL-23에 대해 유일한 p19, 및 IL-12와 공유하는 p40을 포함하는 이종이량체 사이토킨이다. p19 소단위는 구조적으로 IL-6, 과립구-콜로니 자극 인자(G-CSF), 및 IL-12의 p35 소단위와 관련되어 있다. IL-23은 IL-23R 및 IL-12 수용체에 의해 공유된 IL-12β1으로 구성된, 이종이량체 수용체에 결합함으로써 시그날링을 중재한다. 다수의 초기 연구들은, p40에서의 유전적 결핍(p40 녹아웃 마우스; p40KO 마우스)의 결과는 p35KO 마우스에서 발견된 것보다 더욱 심각함을 입증하였다. 이들 결과들 중 일부는 궁극적으로 IL-23의 발견, 및 p40KO가 IL-12뿐만 아니라, IL-23의 발현도 예방한다는 발견에 의해 설명되 었다[참조: Oppmann et al. (2000) Immunity 13:715-725; Wiekowski et al. (2001) J. Immunol. 166:7563-7570; Parham et al. (2002) J. Immunol. 168:5699-708; Frucht (2002) Sci STKE 2002, E1-E3; Elkins et al. (2002) Infection Immunity 70:1936-1948].
p40 KO 마우스의 사용을 통한 최근 연구는, IL-23 및 IL-12 둘다의 차단이 각종 염증 및 자가면역 질환에 대해 효과적인 치료임을 나타내고 있다. 그러나, p40을 통한 IL-12의 차단은 기회적 미생물 감염에 대한 증가된 감수성과 같은 다양한 전신계적 결과를 갖는 것으로 여겨진다[참조: Bowman et al. (2006) Curr. Opin. Infect. Dis. 19:245].
치료학적 항체는 사이토킨 활성을 차단하는데 사용될 수 있다. 생체내에서 치료제로서 항체를 사용하는데 있어서 가장 큰 제한은 항체의 면역원성이다. 대부분의 모노클로날 항체는 설치류로부터 기원하므로, 사람에서 반복된 사용은 치료학적 항체에 대한 면역 반응의 생성을 초래한다. 이러한 면역 반응은 치료학적 효능의 손실을 최소화하며 잠재적으로 치명적인 아나필락시 반응(anaphylactic response)을 최대화한다. 설치류 항체의 면역원성을 감소시키기 위한 초기 노력은 키메라 항체(chimeric antibody)의 생산을 포함하며, 여기서, 마우스 가변 영역은 사람 고정 영역과 융합되었다[참조: Liu et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3439-43]. 그러나, 사람 가변 영역과 마우스 고정 영역의 하이브리드를 주사한 마우스는 사람 가변 영역에 대하여 지시된 강력한 항-항체 반응으로 진행하며, 이는, 이러한 키메라 항체에서 전체 설치류 Fv 영역의 보유가 여전히 환자에서 원치않는 면역원성을 초래할 수 있음을 제안한다.
일반적으로 가변 도메인의 상보성 결정 영역(complementarity determining region: CDR) 루프는 항체 분자의 결합 부위를 포함하는 것으로 여겨진다. 따라서, 사람 골격위에 설치류 CDR 루프를 이식시키는 것(즉, 사람화)이 설치류 서열을 추가로 최소화하기 위해 시도되었다[참조: Jones et al. (1986) Nature 321:522; Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534]. 그러나, CDR 루프 교환은 여전히 원래의 항체와 동일한 결합 특성을 갖는 항체를 균일하게 생성하지 않는다. 사람화된 항체내에서 CDR 루프 지지체내 포함된 잔기인 골격 잔기(framework residues: FR)내 변화가 또한 항원 결합 친화성을 보존하는데 요구된다[참조: Kabat et al. (1991) J. Immunol. 147:1709]. 다수의 사람화된 항체 작제물에서 CDR 이식의 사용 및 골격 잔기 보존이 보고되었지만, 특수 서열이 바람직한 결합, 및 경우에 따라 생물학적 특성을 갖는 항체를 생성할지를 예측하기는 어렵다[참조: Queen et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci USA 86:10029, Gorman et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci USA 88:4181, 및 Hodgson (1991) Biotechnology (NY) 9:421-5]. 더우기, 대부분의 선행 연구는 동물 경쇄 및 중쇄 가변 서열에 대해 상이한 사람 서열을 사용하여 이러한 연구의 예측되는 특성이 의문시되고 있다. 공지된 항체의 서열, 또는 보다 통상적으로 공지된 X-선 구조, 항체 NEW 및 KOL을 갖는 항체의 서열이 사용되어 왔다[참조: Jones et al., 상기 참조; Verhoeyen et al., 상기 참조; 및 Gorman et al., 상기 참조]. 정확한 서열 정보는 약간의 사람화된 작제물에 대해서 보고되어 있다. IL-23p19에 대한 예시적인 가공된 항체는 일반적으로 미국 가특허원 제60/891,409호 및 제60/891,413호(이들 둘다는 2007년 2월 23일자로 출원되었다), 미국 공개특허공보 제2007/0009526호 및 제2007/0048315호, 및 국제 특허 공보 제WO 2007/076524호, 제WO 2007/024846호 및 제WO 2007/147019호에 기술되어 있다.
예를 들면, 염증, 자가면역 및 증식 질환의 치료시 사용하기 위한 항-huIL-23p19 항체가 요구되고 있다. 바람직하게는, 이러한 항체는 사람 배선(germline) 서열을 도입시킴으로써 사람 대상체내, 예를 들면, 골격 영역내 면역원성을 감소시키도록 가공되어 있다. 바람직하게는, 이러한 항체는 huIL-23p19에 대해 높은 친화성을 가질 것이며 huIL-23p19에 대해 높은 특이성으로 결합할 것이다.
발명의 요약
본 발명은 서열 32 내지 46으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 가지며, 항체 경쇄 가변 도메인, 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 사람 IL-23p19에 결합하는, 사람화된 또는 키메라 재조합체 항체를 포함하는, 항체 또는 이의 단편과 같은 결합 화합물을 제공한다. 하나의 양태에서, 본 발명의 결합 화합물은 서열 32 내지 36으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 CDRL1; 서열 37 내지 41로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 CDRL2; 및 서열 42 내지 46으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
하나의 양태에서, 결합 화합물은 서열 15 내지 31로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 1개, 2개 또는 3개의 CDR을 갖는, 항체 중쇄 가변 도메인, 또는 이 의 항원 결합 단편을 포함한다. 하나의 양태에서, 본 발명의 결합 화합물은 서열 15 내지 19로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 CDRH1; 서열 20 내지 26으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 CDRH2; 및 서열 27 내지 31로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명의 결합 화합물은 앞서의 2개 단락에서 기술한, 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인, 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 양태에서, 결합 화합물은 골격 영역을 포함하며, 여기서, 골격 영역의 아미노산 서열은 모든 또는 실질적으로 모든 사람 면역글로불린 아미노산 서열이다.
일부 양태에서, 경쇄 및/또는 중쇄 가변 도메인은 CDR의 하나 이상의 변이체를 포함한다. 각종 양태에서, 변이체 도메인은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 이상의 각각의 서열에 대해 보존적으로 변형된 아미노산 잔기를 포함한다. 보존적 아미노산 치환은 표 1에 제공된다.
일부 양태에서, 경쇄 가변 도메인은 서열 14의 1번 내지 108번 잔기 또는 이의 변이체를 포함한다. 일부 양태에서, 중쇄 가변 도메인은 서열 6, 서열 7 또는 서열 8과 같은 서열 6 내지 8의 1번 내지 116번 잔기로 이루어진 그룹 중에서 선택된 서열을 포함한다. 각종 양태에서, 변이체 가변 도메인은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40 또는 50개 이상의 각각의 서열에 대해 보존적으로 변형된 아미노산 잔기를 포함한다. 여전히 추가의 양태에서, 결합 화합물은 당해 단락 에서 기술된, 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인, 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
하나의 양태에서, 결합 화합물은 서열 14의 경쇄 서열 및/또는 서열 6 내지 8로 이루어진 그룹 중에서 선택된 중쇄 서열을 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명의 결합 화합물은 서열 14의 1번 내지 108번 잔기로 필수적으로 이루어진 경쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 및/또는 서열 6, 서열 7 또는 서열 8과 같은 서열 6 내지 8의 1번 내지 116번 잔기로 이루어진 그룹 중에서 선택된 서열로 필수적으로 이루어진 중쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명의 결합 화합물은 서열 14의 1번 내지 108번 잔기와 적어도 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 서열 상동성을 갖는 경쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편, 및/또는 서열 6, 서열 7 또는 서열 8과 같은 서열 6 내지 8의 1번 내지 116번 잔기로 이루어진 그룹 중에서 선택된 서열과 적어도 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 서열 상동성을 가진 중쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명의 결합 화합물은 20번 내지 30번 잔기 또는 82번 내지 11번 잔기, 또는 둘다를 포함하는 에피토프에서 사람 IL-23p19(서열 47)에 결합한다. 다른 양태에서, IL-23p19 결합 화합물은 잔기 K20, T23, W26, S27, P30, E82, S95, L96, L97, P98, D99, P1Ol, G103, Q104, H106, A107 및 L110 중 일부 또는 모두와, 임의로 잔기 L24, L85, T91, S1OO 및 V102를 포함하는 에피토프에 결합 한다. 각종 양태에서, 목적한 항체에 대한 에피토프는 항체:항원 복합체의 X-선 결정 구조를 수득하고 IL-23p19 상의 어느 잔기가 목적한 항체상의 잔기의 특정 거리내에 존재하는지를 측정함으로써 측정하며, 여기서, 특정 거리는 예를 들면, 4Å 또는 5Å이다. 일부 양태에서, 에피토프는 IL-23p19 서열을 따라 11개 이상의 연속된 아미노산 잔기의 길이로 정의되며, 여기서, 적어도 30%, 40%, 45%, 50% 또는 54%의 잔기는 항체의 정의된 거리내에 존재한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 교차-차단 검정시 사람 IL-23에 대한 본 발명의 결합 화합물의 결합을 차단할 수 있는 항체에 관한 것이다. 다른 양태에서, 본 발명은 수용체에 대한 결합 및 TH17 세포의 증식 또는 생존의 촉진을 포함하나, 이에 한정되지 않는 활성과 같은, IL-23-매개된 활성을 차단할 수 있는 결합 화합물에 과한 것이다.
일부 양태에서, 본 발명의 결합 화합물은 또한 중쇄 고정 영역을 포함하며, 여기서, 중쇄 고정 영역은 γ1, γ2, γ3, 또는 γ4 사람 중쇄 고정 영역 또는 이의 변이체를 포함한다. 각종 양태에서, 경쇄 고정 영역은 람다 또는 카파 사람 경쇄 고정 영역을 포함한다.
각종 양태에서, 본 발명의 결합 화합물은 폴리클로날, 모노클로날, 키메라, 사람화된 또는 완전한 사람 항체 또는 이의 단편이다. 본 발명은 또한, 항원 결합 단편이 예를 들면, Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, scFv, F(ab')2, 및 디아바디(diabody)로 이루어진 그룹 중에서 선택된 항체 단편이다.
본 발명은 면역 반응의 제어가 요구되는 사람 대상체에게 IL-23의 생물학적 활성을 차단시키는데 효과적인 양의 IL-23에 대해 특이적인 항체(또는 이의 항원 결합 단편)을 투여함을 포함하여, 상기 사람 대상체에서 면역 반응을 제어하는 방법을 포함한다. 일부 양태에서, IL-23에 대해 특이적인 항체는 사람화된 항체 또는 키메라 항체이다. 추가의 양태에서, 면역 반응은 관절염, 건선 및 염증성 창자병을 포함하는 염증 반응이다. 다른 양태에서, 면역 반응은 다발경화증, 포도막염, 전신홍반루푸스 및 당뇨병을 포함하는, 자가면역 반응이다. 다른 양태에서, 대상체는 암이고 면역 반응은 Th17 반응이다.
본 발명은 또한 추가의 면역제어 또는 소염제를 투여함을 포함한다. 본 발명의 결합 화합물은 결합 화합물 또는 이의 항원 결합 단편을 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제와 함께 포함하는 약제학적 조성물 속에 존재할 수 있다. 추가의 양태에서, 약제학적 조성물은 또한 면역제어제 또는 소염제를 포함한다.
본 발명은 본 발명의 결합 화합물의 항체 양태의 폴리펩타이드 서열을 암호화하는 분리된 핵산을 포함한다. 핵산은 벡터로 형질감염된 숙주 세포에 의해 인지된 대조군 서열에 작동적으로 연결된 발현 벡터내에 존재할 수 있다. 또한 벡터를 포함하는 숙주 세포, 및 숙주 세포를 핵산 서열이 발현되는 조건하에 배양함으로써 폴리펩타이드를 생산하고 당해 폴리펩타이드를 숙주 세포 또는 배지로부터 회수함을 포함하는 폴리펩타이드의 생산 방법이 포함된다.
각종 양태에서, 본 발명은 염증 질환, 자가면역 질환, 암, 감염병(예를 들면, 만성 감염을 포함하는, 세균, 마이코박테리아, 바이러스 또는 진균 감염), 관 절염, 건선, 염증성 창자병, 다발경화증, 포도막염, 전신홍반루푸스 및 당뇨병을 포함하나, 이에 한정되지 않는 질환을 치료하기 위한 의약의 제조시 본 발명의 결합 화합물의 용도에 관한 것이다.
다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 결합 화합물을 포함하는, 염증 질환, 자가면역 질환, 암, 감염병(예를 들면, 만성 감염을 포함하는, 세균, 마이코박테리아, 바이러스 또는 진균 감염), 관절염, 건선, 염증성 창자병, 다발경화증, 포도막염, 전신홍반루푸스 및 당뇨병을 포함하나, 이에 한정되지 않는 질환을 치료하기 위한 약제학적 조성물에 관한 것이다.
일부 양태에서, 본 발명의 결합 화합물 또는 약제학적 조성물은 대상체에서 질병 증상으로부터 장기간의 완화를 유도함으로써 투여 간격이 예를 들면, 재발-완화병(relapsing-remitting disease)의 치료시, 대상체에서 결합 화합물의 반감기보다 훨씬 길게 연장시킬 수 있다. 각종 양태에서, 하나의 투여 및 다른 투여사이의 간격은 6-, 8-, 10-, 12-, 16-, 20-, 24-, 30-주 또는 그 이상이다. 다른 양태에서, 단일 투여로도 재발을 영구적으로 방지하는데 충분하다.
도면의 간단한 설명
도 1은 마우스 항-사람 IL-23p19 항체 클론 중쇄 가변 도메인 서열의 비교를 나타낸다. 클론 m1A11, m11C1, m5F5, m21D1, m13B8, h13B8a, h13B8b 및 h13B8c에 대한 서열이 제공된다. CDR이 나타나 있다. 도면들에서, "m" 접두사는 쥐 항체를 함축하며 "h는 사람화된 항체를 함축한다. 어미 "a", "b" 및 "c"는 하기에 보다 상세히 논의한 바와 같이, 사람화된 13B8 중쇄 가변 도메인의 서열 변이체를 말 한다.
도 2는 마우스 항-사람 IL-23p19 항체 클론 경쇄 가변 도메인 서열의 비교를 나타낸다. 클론 m1A11, m11C1, m5F5, m21D1, m13B8, h13B8에 대한 서열이 제공된다. CDR이 나타나 있다.
첨부된 청구의 범위를 포함하는 본원에 사용된 것으로서, "하나(a)", "하나(an)" 및 "그(the)"와 같은 단수 형태의 단어는 내용이 달리 명확하게 지적하지 않는 한, 이들의 상응하는 복수 참조물을 포함한다. 하기 표 7은 본 출원에 사용된 서열 확인인자의 목록을 제공한다. 본원에 인용된 모든 참조는, 각각의 개개의 공보, 특허원 또는 특허가 특별하게 및 개별적으로 참조로 인용된 것으로 지적된 것과 동일한 정도로 참조에 의해 인용된다. 본원에서 참조의 인용은 앞서의 어떤 것도 적절한 선행 분야인 것으로, 또는 이것이 이러한 공보 또는 서류의 내용 또는 날짜로서 허용되는 것으로 의도되지는 않는다.
1. 정의
"증식 활성"은 예를 들면, 정상 세포 분열, 및 암, 종양, 이형성, 세포 형질전환, 전이 및 혈관형성을 촉진하거나, 이에 필수적이거나, 또는 이와 특이적으로 연관된 활성을 포함한다.
동물, 사람, 실험 대상체, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유액에 적용되는 경우 "투여" 및 "치료"는 외인성 약제, 치료제, 진단제 또는 조성물의 동물, 사람, 대상체, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유액에 대한 접촉을 말한다. "투여" 및 "치료"는 예를 들면, 치료학적, 약력학적, 진단학적, 연구적 및 실험적 방법을 언급할 수 있다. 세포의 치료는 세포에 대한 시약의 접촉, 및 유액에 대한 시약의 접촉을 포함하며, 여기서, 유액은 세포와 접촉되어 있다. "투여" 및 "치료"는 또한 예를 들면, 세포의 시약, 진단 조성물, 결합 조성물에 의한, 또는 다른 세포에 의한 실험관내 및 생체외 치료를 의미한다. 사람, 척추동물 또는 연구 대상체에 적용되는 경우 "치료"는 치료학적 치료, 예방 또는 방지 방법, 연구 및 진단학적 적용을 말한다. 사람, 척추동물, 또는 연구 대상체 또는 세포, 조직 또는 기관에 적용되는 경우 "치료"는 제제와 동물 대상체, 세포, 조직, 생리학적 구획, 또는 생리학적 유액의 접촉을 포함한다. "세포의 치료"는 또한, 제제가 예를 들면, 유액 상 또는 콜로이드 상 속에서 IL-23 수용체(IL-23R/IL-12R베타 이종이량체)와 접촉하는 상황 이외에, 효능제 또는 길항제가 세포 또는 수용체와 접촉하지 않는 상황을 포함한다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "항체"는 바람직한 생물학적 활성을 나타내는 특정 형태의 항체를 말한다. 따라서, 이는 광범위한 의미로 사용되며, 이들이 목적한 생물학적 활성을 나타내는 한, 특이적으로 모노클로날 항체(완전한 길이의 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 다특이적 항체(예: 이특이적 항체), 키메라 항체, 사람화된 항체, 완전한 사람 항체, 등을 포함한다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "IL-23p19 결합 단편", "이의 결합 단편" 또는 "이의 항원 결합 단편"은 IL-23p19 활성을 억제하는 자체의 생물학적 활성을 실질적으로 여전히 보유하고 있는 항체의 단편 또는 유도체를 포함한다. 따라서, 용어 "항체 단편" 또는 IL-23p19 결합 단편은 완전한 길이의 항체 중 일부, 일반적으로 이의 항원 결합 또는 가변 영역을 말한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체; 일본쇄 항체 분자, 예를 들면, sc-Fv; 및 항체 단편으로부터 형성된 다특이적 항체를 포함한다. 통상적으로 결합 단편 또는 유도체는 자체의 IL-23p19 억제 활성의 적어도 10%를 보유한다. 바람직하게는 결합 단편 또는 유도체는, 비록 목적한 생물학적 효과를 발휘하기 위해 충분한 친화성을 갖는 특정의 결합 단편이 유용할 것이라고 해도, 자체의 IL-23p19 억제 활성의 적어도 25%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 또는 100% (또는 그 이상)을 보유한다. IL-23p19 억제 단편은 자체의 생물학적 활성을 실질적으로 변경하지 않는 보존적 아미노산 치환을 갖는 변이체를 포함할 수 있음이 또한 의도된다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동종인 항체의 집단으로부터 수득된 항체, 즉 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연적으로 존재하는 돌연변이를 제외하고 동일한 집단을 포함하는 개개 항체를 말한다. 모노클로날 항체는 고도로 특이적이며, 단일의 항원 에피토프에 대해 지시된다. 대조적으로, 통상의 (폴리클로날) 항체 제제는 통상적으로 상이한 에피토프에 대해 지시된(또는 특이적인) 항체 다수를 포함한다. 수식어 "모노클로날"은 실질적으로 동종인 항체의 집단으로부터 수득된 항체의 특징을 나타내며 어떠한 특수 방법에 의한 항체의 생산을 요구하는 것으로서 간주되지 않는다. 예를 들면, 본 발명에 따라 사용될 모노클로날 항체는 문헌[참조: Kohler et al. (1975) Nature 256: 495]에 최초로 기술된 하이브리도마 방법으로 제조할 수 있거나, 재조합체 DNA 방법[참조: 미국 특허 제4,816,567호)에 의해 제조할 수 있다. "모노클로날 항체"는 또한 예를 들면, 문헌[참조: Clackson et al. (1991) Nature 352: 624-628 및 Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222: 581-597]에 기술된 기술을 사용하여 파아지 항체 라이브러리로부터 분리할 수 있다.
본원의 모노클로날 항체는 특이적으로 "키메라" 항체(면역글로불린)을 포함하며, 여기서, 중쇄 및/또는 경쇄의 부위는 특수 종으로부터 기원항 항체내 상응하는 서열과 동일하거나, 이와 동종이거나, 특수 항체 부류 또는 소부류에 속하는 반면, 쇄(들)의 나머지는 다른 종으로부터 기원한 항체내 상응하는 서열과 동일하거나, 이와 동종이거나, 다른 항체 부류 또는 소부류 및 바람직한 생물학적 활성을 나타내는 한, 이러한 항체의 단편에 속한다[참조: 미국 특허 제4,816,567호; Morrison et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855].
"도메인 항체"는 중쇄의 가변 영역 또는 경쇄의 가변 영역만을 함유하는 면역학적으로 작용성인 면역글로불린 단편이다. 일부 예에서, 2개 이상의 VH 영역은 펩타이드 링커와 공유적으로 연결되어 2가 도메인 항체를 생성한다. 2가 도메인 항체의 2개의 VH 영역은 동일하거나 상이한 항원을 표적할 수 있다.
"2가 항체"는 2개의 항원 결합 부위를 포함한다. 일부 예에서, 2개의 결합 부위는 동일한 항원 특이성을 갖는다. 그러나, 2가 항체는 이특이적일 수 있다(하기 참조).
본원에 사용된 것으로서, 용어 "일본쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체 단편을 말하며, 여기서, 이들 도메인은 일본쇄 폴리펩타이드 쇄내에 존재한다. 일반적으로, Fv 폴리펩타이드는 또한 sFv가 항원 결합에 바람직한 구조를 형성하도록 하는 VH 및 VL 도메인 사이의 폴리펩타이드 링커를 포함한다. sFv의 고찰을 위해서는, 문헌[참조: Pluckthun (1994) THE PHARMACOLOGY OF MONOCLONAL ANTIBODIES, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315]을 참조한다.
본원의 모노클로날 항체는 또한 카멜화된(camelized) 일본쇄 도메인 항체를 포함한다[참조: Muyldermans et al. (2001) Trends Biochem. Sci. 26:230; Reichmann et al. (1999) J. Immunol. Methods 231:25; WO 94/04678; 제WO 94/25591호; 미국 특허 제6,005,079호). 하나의 양태에서, 본 발명은, 단일 도메인 항체가 형성되도록 변형된 2개의 VH 도메인을 포함하는 단일의 도메인 항체를 제공한다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "디아바디"는 동일한 폴리펩타이드 쇄(VH-VL 또는 VL-VH)내에서 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 2개의 항원-결합 부위를 갖는 소 항체 단편을 말한다. 동일한 쇄상의 2개의 도메인사이에 쌍이 허용되도록 매우 짧은 링커를 사용함으로써, 도메인은 다른 쇄의 상보성 도메인과 쌍을 이루어 2개의 항원-결합 부위를 생성한다. 디아바디는 문헌[참조: 제EP 404,097호; 제WO 93/11161호; 및 Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448]에 보다 상세히 기술되어 있다. 가공된 항체 변이체의 고찰을 위해서는 일반적으로 문헌[참조: Holliger 및 Hudson (2005) Nat. Biotechnol. 23:1 126-1136]를 참조한다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "사람화된 항체"는 비-사람(예를 들면, 쥐) 항체 및 사람 항체로부터의 서열을 함유하는 항체의 형태를 말한다. 이러한 항체는 비-사람 면역글로불린으로부터 기원한 최소 서열을 함유한다. 일반적으로, 사람화된 항체는 적어도 하나, 및 통상적으로 2개의 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함할 것이며, 여기서, 초가변성 루프의 모두 또는 실질적으로 모두는 비-사람 면역글로불린의 것에 상응하며 FR 영역의 모두 또는 실질적으로 모두는 사람 면역글로불린 서열의 것들이다. 사람화된 항체는 임의로 또한 통상적으로 사람 면역글로불린인, 면역글로불린 고정 영역(Fc) 중 적어도 일부를 포함할 것이다. 접두어 "hum", "hu" 또는 "h"는 모 설치류 항체(예를 들면, 마우스 13B8, 또는 ml3B8)로부터 사람화된 항체(예를 들면, hum13B8)를 구별하기 위해 필요한 경우 항체 클론 지명에 가해진다. 설치류 항체의 사람화된 형태는, 비록 특정의 아미노산 치환이 사람화된 항체의 친화성을 증가시키거나, 안정성을 증가시키거나 또는 다른 이유로 포함될 수 있다고 해도, 모 설치류 항체의 동일한 CDR 서열을 일반적으로 포함할 것이다.
본 발명의 항체는 또한 변형된(또는 차단된) Fc 영역을 지닌 항체를 포함함으로써 변경된 효과기 작용을 제공한다[참조: 미국 특허 제5,624,821호; 제WO2003/086310호; 제WO2005/120571호; 제WO2006/0057702호; Presta (2006) Adv. Drug Delivery Rev. 58:640-656]. 이러한 변형은 면역계의 각종 반응을 향상시키거나 제어하면서 진단 및 치료요법에서 가능한 유리한 효과를 가지도록 하는데 사용할 수 있다. Fc 영역의 변형은 아미노산 변화(치환, 결실 및 삽입), 글리코실화 또는 탈글리코실화 및 다수 Fc의 첨가를 포함한다. Fc에 대한 변화는 또한 치료학적 항체에서 항체의 반감기를 변경시킬 수 있고, 보다 긴 반감기는, 동시에 물질의 증가된 편리성 및 감소된 사용과 함께 빈도가 적은 투여를 초래한다[참조: Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731 at 734-35].
용어 "완전한 사람 항체"는 사람 면역글로불린 단백질 서열만을 포함하는 항체를 말한다. 완전한 사람 항체는 마우스, 마우스 세포 또는 마우스 세포로부터 기원한 하이브리도마에서 생산되는 경우 쥐 탄수화물 쇄를 함유할 수 있다. 유사하게, "마우스 항체"는 마우스 면역글로불린 서열만을 포함하는 항체를 말한다. 완전한 사람 항체는 파아지 디스플레이 또는 다른 분자 생물학 방법에 의해, 사람 면역글로불린 배선 서열을 갖는 유전자삽입 동물인, 사람에서 생성될 수 있다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "초가변성 영역"은 항원-결합에 관여하는 항체의 아미노산 잔기를 말한다. 초가변성 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"[예를 들면, 경쇄 가변 도메인내 24번 내지 34번 잔기(CDRL1), 50번 내지 56번 잔기(CDRL2) 및 89번 내지 97번 잔기(CDRL3) 및 중쇄 가변 도메인내 31번 내지 35번 잔기(CDRH1), 50번 내지 65번 잔기(CDRH2) 및 95번 내지 102번 잔기(CDRH3)][참조: Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.) 및/또는 "초가변성 루프"로부터의 잔기[즉, 경쇄 가변 도메인내 26번 내지 32번 잔기(L1), 50번 내지 52번 잔기(L2) 및 91번 내지 96번 잔기(L3) 및 중쇄 가변 도메인내 26번 내지 32번 잔기(H1), 53번 내지 55번 잔기(H2) 및 96번 내지 101번 잔기(H3)][참조: Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917)로부터의 아미노산 잔기를 포함한다. 본원에 사용된 것으로서, 용어 "골격" 또는 "FR" 잔기는 CDR 잔기로서 본원에 정의된 초가변 영역 잔기외에 가변 도메인 잔기를 말한다. 상기 잔기 번호매김은 카바트 번호매김 시스템(Kabat numbering system)과 관련되며 첨부된 서열 목록내 서열 번호매김과 상세하게 필수적으로 상응하지 않는다.
"결합 화합물"은 표적에 결합할 수 있는, 분자, 소 분자, 거대분자, 폴리펩타이드, 항체 또는 이의 단편 또는 유사체 또는 가용성 수용체를 말한다. "결합 화합물"은 또한 표적에 결합할 수 있는, 이온화된 분자, 및 공유적으로 또는 비-공유적으로 변형된, 예를 들면, 포스포릴화, 아실화, 가교-결합, 폐환 또는 제한된 분해에 의해 변형된 분자에 대한 분자의 복합체, 예를 들면, 비-공유결합 복합체를 언급할 수 있다. 항체를 언급하여 사용되는 경우, 용어 "결합 화합물"은 항체 및 이의 항원 결합 단편 둘다를 말한다. "결합"은, 결합 조성물이 용액 속에 용해되거나 현탁되는 경우에, 결합 조성물의 정상적인 브라운 운동의 감소를 초래하는, 표적과 결합 조성물의 연합을 말한다. "결합 조성물"은 표적에 결합할 수 있는, 안정화제, 부형제, 염, 완충제, 용매 또는 첨가제와 배합된 분자, 예를 들면, 결합 화합물을 말한다.
"보존적으로 변형된 변이체" 또는 "보존적 치환"은 당해 분야의 숙련가에게 알려지고 심지어 폴리펩타이드의 필수적인 영역내에서도 수득되는 분자의 생물학적 활성을 변경시키지 않고 일반적으로 제조될 수 있는 아미노산의 치환을 말한다. 이러한 예시적인 치환은 바람직하게는 하기와 같은 표 1에 설정된 것에 따라 제조된다:
예시적인 보존적 아미노산 치환
원래의 잔기 보존적 치환
Ala(A) Gly; Ser
Arg(R) Lys; His
Asn(n) Gln; His
Asp(D) Glu; Asn
Cys(C) Ser; Ala
Gln(Q) Asn
Glu(e) Asp; Gln
Gly(G) Ala
His(H) Asn; Gln
Ile(I) Leu; Val
Leu(L) Ile; Val
Lys(K) Arg; His
Met(M) Leu; Ile; Tyr
Phe(F) Tyr; Met; Leu
Pro(P) Ala
Ser(S) Thr
Thr(T) Ser
Trp(W) Tyr; Phe
Tyr(Y) Trp; Phe
Val(V) Ile; Leu
또한, 당해 분야의 숙련가들은, 일반적으로 폴리펩타이드의 비-필수 영역내 단일 아미노산 치환이 실질적으로 생물학적 활성을 변경하지 않음을 인지하고 있다[참조: Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Edition)].
명세서 및 청구의 범위 전체에 걸쳐 사용된 것으로서, 어절 "으로 필수적으로 이루어진" 또는 "필수적으로 이루어진" 또는 "필수적으로 이루어지는"과 같은 변형은, 어떠한 인용된 성분 또는 성분의 그룹의 혼입, 및 정의된 용량 섭생, 방법 또는 조성물의 기본 또는 신규 특성을 물직적으로 변화시키지 않는, 인용된 성분외의 다른 성분, 및 에 유사하거나 상이한 특성의 임의의 혼입을 나타낸다. 비-제한적 예로서, 인용된 아미노산 서열로 필수적으로 이루어진 결합 화합물은 결합 화합물의 특성에 물질적으로 영향을 미치지 않는, 하나 이상의 아미노산 잔기의 치환을 포함하는, 하나 이상의 아미노산을 또한 포함할 수 있다.
"유효량"은 의학 상태의 증상 또는 신호를 완화시키거나 예방하는데 충분한 양을 포함한다. 유효량은 또한 진단을 허용하거나 촉진시키는데 충분한 양을 의미한다. 특수 환자 또는 가축 대상체에 대한 유효량은 치료하는 상태, 환자의 전체적인 건강, 방법 경로 및 투여량 및 부작용의 중증도와 같은 인자에 따라 변할 수 있다(참조: 미국 특허 제5,888,530호). 유효량은 현저한 부작용 또는 독성 효과를 피하는 최대 투여량 또는 투여 프로토콜일 수 있다. 당해 효과는 진단 척도 또는 매개변수의 적어도 5%, 일반적으로 적어도 10%, 보다 일반적으로 적어도 20%, 가장 일반적으로 적어도 30%, 바람직하게는 적어도 40%, 보다 바람직하게는 적어도 50%, 가장 바람직하게는 적어도 60%, 이상적으로 적어도 70%, 보다 이상적으로 적어도 80%, 및 가장 이상적으로 적어도 90% 까지의 증진을 초래할 것이며, 여기서, 100%는 정상 대상체에서 나타나는 진단 매개변수로 정의된다[참조: 예를 들면, Maynard et al. (1996) A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice, Interpharm Press, Boca Raton, FL; Dent (2001) Good Laboratory and Good Clinical Practice, Urch Publ., London, UK].
"면역 조건" 또는 "면역 질환"은 예를 들면, 병리학적 염증, 염증 질환, 및 자가면역 질환 또는 병을 포함한다. "면역 상태"는 또한 감염, 지속적인 감염, 및 면역계에 의한 제거(eradication)에 내성인 감염, 종양 및 암을 포함하는, 암, 종양, 및 혈관형성과 같은 증식성 상태를 말한다. "암 상태"는 예를 들면, 암, 암 세포, 종양, 혈관형성 및 이형성과 같은 전암 상태를 포함한다.
"염증 질환"은 질환 또는 병리학적 상태를 의미하며, 여기서, 병리학은 전체적으로 또는 부분적으로 예를 들면, 면역계의 세포의 수에 있어서의 변화, 이주율에 있어서의 변화, 또는 활성화에 있어서의 변화로부터 초래된다. 면역계의 세포는 예를 들면, T 세포, B 세포, 단핵세포 또는 대식세포, 항원 표시 세포(APC), 수지 세포, 마이크로글리아(microglia), NK 세포, NKT 세포, 호중구, 호산구(eosinophils), 유방 세포(mast cell), 또는 면역과 특이적으로 관련된 특정의 다른 세포, 예를 들면, 사이토킨-생산 내피 또는 상피 세포를 포함한다.
"IL-17-생산 세포"는 TH17 세포로서 언급된, 전통적인 TH1-유형 T 세포 또는 전통적인 TH2-유형 T 세포가 아닌 T 세포를 의미한다. TH17 세포는 문헌[참조: Cua and Kastelein (2006) Nat. Immunol. 7:557-559; Tato 및 O'Shea (2006) Nature 441 : 166-168; Iwakura 및 Ishigame (2006) J. Clin. Invest. 116: 1218-1222]에 보다 상세히 논의되어 있다. "IL-17-생산 세포"는 또한 미국 특허공보 제2004/0219150호의 표 10B의 유전자 또는 폴리펩타이드를 발현하는 T 세포(예를 들면, 유사분열물질 반응성 P-단백질; 케모킨 리간드 2; 인터루킨-17(IL-17); 관련된 전사 인자 RAR 및/또는 사이토킨 시그날링 3의 제어인자)를 의미하며, 여기서, IL-23 효능제에 의한 치료를 사용한 표현은 IL-12 효능제를 사용한 치료보다 크며, 여기서, "보다 크며"는 다음과 같이 정의된다. IL-23 효능제를 사용한 발현은 IL-12 치료보다 일반적으로 적어도 5배 이상 크며, 통상적으로 적어도 10배 이상 크고, 보다 통상적으로 적어도 15배 이상 크며, 가장 통상적으로 적어도 20배 이상 크고, 바람직하게는 25배 이상 크고, 가장 바람직하게는 적어도 30배 이상 크다. 발현은, 예를 들면, 실질적으로 순수한 IL-17 생산 세포의 집단의 치료로 측정될 수 있다. Th17 반응은, Th17 세포의 활성 및/또는 증식이 향상되고, 통상적으로 제어된 Th1 반응과 커플링되는 면역 반응이다.
또한, "IL-17-생산 세포"는 위에서 정의한 바와 같이, 세포 발달 또는 세포 분화의 경로에서 IL-17-생산 세포로 분화시키는데 관여하는 자손 또는 전구체 세포를 포함한다. IL-17 생산 세포에 대한 자손 또는 전구체 세포는 드레이닝 림프절(draining lymph mode: DLN)에서 찾을 수 있다. 또한, "IL-17-생산 세포"는 예를 들면, 포르볼 에스테르, 이오노포어, 및/또는 발암물질에 의해 예를 들면, 활성화되고, 추가로 분화되며, 저장되고, 동결되며, 탈수되고, 불활성화되며, 예를 들면, 세포자멸사, 단백질 분해 또는 지질 산화에 의해 부분적으로 하향조절되거나, 예를 들면, 재조합체 기술에 의해 변형된, 위에서 정의한 바와 같은, IL-17-생산 세포를 포함한다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "분리된 핵산 분자"는 항체 핵산의 천연 공급원에서 주로 연관된 적어도 하나의 오염된 핵산 분자로부터 확인되고 분리된 핵산 분자를 말한다. 분리된 핵산 분자는 천연에서 발견되는 형태 또는 세팅이외의 것이다. 따라서, 분리된 핵산 분자는 천연 세포내에 존재하므로 핵산 분자로부터 구별된다. 그러나, 분리된 핵산 분자는 예를 들면, 핵산 분자가 천연 세포의 것으로부터 상이한 염색체 위치에 존재하는 항체를 주로 발현하는 세포내에 함유된 핵산 분자를 포함한다.
표현 "대조군 서열"은 특수 숙주 유기체내에서 작동적으로 연결된 암호화 서열의 발현에 필수적인 DNA 서열을 말한다. 원핵 세포에 적합한 대조군 서열은 예를 들면, 프로모터, 임의로 오퍼레이터 서열, 및 리보소옴 결합 부위를 포함한다. 진핵 세포는 프로모터, 폴리아데닐화 신호 및 인핸서를 이용하는 것으로 공지되어 있다.
핵산은 다른 핵산 서열과 작용적 관계로 위치하는 경우 "작동적으로 연결되어 있다". 예를 들어, 전서열 또는 분비 리더용 DNA는 폴리펩타이드의 분비에 관여하는 전단백질로서 발현되는 경우 폴리펩타이드용 DNA에 작동적으로 연결되어 있거나; 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 미치는 경우 암호화 서열에 작동적으로 연결되어 있거나; 리보소옴 결합 부위는 해독을 촉진시키기 위해 위치하는 경우 암호화 서열에 작동적으로 연결되어 있다. 일반적으로, "작동적으로 연결된"은, 연결되는 DNA 서열이 연속되어 있으며, 분비 리더의 경우, 연속 및 판독 프레임내에 있음을 의미한다. 그러나, 인핸서는 연속이 되어서는 안된다. 연결은 통상의 제한 부위에서 연결에 의해 달성된다. 이러한 부위가 존재하지 않는 경우, 합성 올리고뉴클레오타이드 어댑터 또는 링커는 통상의 실시에 따라서 사용된다.
본원에 사용된 것으로서, 표현 "세포", "세포주" 및 "세포 배양"은 상호교환적으로 사용되며 모든 이러한 지명은 후손을 포함한다. 따라서, 단어, "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"는 주요 대상체 세포 및 전이의 수와 상관없이 이루부터 기원한 배양물을 포함한다. 모든 후손은 유리되거나 비가역적 돌연변이로 인하여 DNA 함량과 상세하게 동일하지 않을 수 있다. 원래 형질전환된 세포에 대해 스크리닝된 것과 동일한 작용 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이체 후손이 포함된다. 명백한 정의가 요구되는 경우, 이는 문맥으로부터 명백할 것이다.
본원에 사용된 것으로서, "폴리머라제 쇄 반응" 또는 "PCR"은, 규정된 종의 핵산, RNA 및/또는 DNA중 소량이 미국 특허 제4,683,195호에 기술된 바와 같이 증폭된 과정 또는 기술을 말한다. 일반적으로, 목적한 영역 또는 초과하는 영역의 말단으로부터의 서열 정보는, 올리고뉴클레오타이드 프라이머가 설계될 수 있도록 유용할 필요가 있으며; 이들 프라이머는 증폭될 주형의 반대 쇄에 대해 서열에 있어 동일하거나 유사할 것이다. 2개의 프라이머의 5' 말단 뉴클레오타이드는 증폭된 물질의 말단과 일치할 수 있다. PCR을 사용하여 특수 RNA 서열, 전체 게놈 DNA로부터의 특수 DNA 서열, 및 전체 세포 RNA, 박테리오파지 또는 플라스미드 서열 등으로부터 전사된 cDNA를 증폭시킬 수 있다[참조: Mullis et al. (1987) Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 51:263; Erlich, ed., (1989) PCR TECHNOLOGY (Stockton Press, N.Y.)]. 본원에 사용된 것으로서, PCR은 프라이머로서 공지된 핵산 및 특수 종의 핵산을 증폭시키거나 생성하기 위한 핵산 폴리머라제의 사용을 포함하는 핵산 시험 샘플을 증폭시키기 위한 핵산 폴리머라제 쇄 방법 중 하나이나, 단지 예는 아닌 것으로 고려된다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "배선 서열"은 설치류(예를 들면, 마우스) 및 사람 배선 서열을 포함하는, 재배열되지 않은 면역글로불린 DNA 서열의 서열을 말한다. 재배열되지않은 면역글로불린 DNA의 어떠한 적합한 공급원도 사용할 수 있다. 사람 배선 서열은 예를 들면, 미국 보건원의 관절염 및 근골격 및 피부병의 국가 기관(the National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and Skin Diseases of the United States National Institutes of Health)용 웹사이트상의 JOINSOLVER® 배선 데이타베이스로부터 입수할 수 있다. 마우스 배선 서열은 예를 들면, 문헌[참조: Giudicelli et al. (2005) Nucleic Acids Res. 33:D256-D261]에 기술된 바와 같이 수득할 수 있다.
IL-23 활성의 억제 정도를 시험하기 위해, 예를 들면, 제공된 예를 들면, 단백질, 유전자, 세포 또는 유기체를 포함하는 샘플 또는 검정을 잠재적인 활성화제 또는 억제제로 처리하고 제제의 부재하에 대조군 샘플과 비교한다. 대조군 샘플, 즉, 제제로 처리하지 않은 샘플을 100%의 상대적인 활성치로서 지정한다. 억제는, 대조군과 비교하여 활성치가 약 90% 이하, 통상적으로 85% 이하, 보다 통상적으로 80% 이하, 가장 통상적으로 75% 이하, 일반적으로 70% 이하, 보다 일반적으로 65% 이하, 가장 일반적으로 60% 이하, 통상적으로 55% 이하, 일반적으로 50% 이하, 보다 일반적으로 45% 이하, 가장 일반적으로 40% 이하, 바람직하게는 35% 이하, 보다 바람직하게는 30% 이하, 여전히 보다 바람직하게는 25% 이하, 및 가장 바람직하게는 25% 이하이다. 활성화는, 대조군과 비교한 활성치가 약 110%, 일반적으로 적어도 120%, 보다 일반적으로 적어도 140%, 보다 일반적으로 적어도 160%, 종종 적어도 180%, 보다 흔히 적어도 2-배, 가장 흔히 적어도 2.5-배, 일반적으로 적어도 5-배, 보다 일반적으로 적어도 10-배, 바람직하게는 적어도 20-배, 보다 바람직하게는 적어도 40-배, 및 가장 바람직하게는 40-배 이상인 경우 달성된다.
활성화 또는 억제에서 종점은 다음과 같이 모니터할 수 있다. 예를 들면, 세포, 생리학적 유액, 조직, 기관 및 동물 또는 사람 대상체의 처리에 대한 활성화, 억제 및 반응은 종점으로 모니터할 수 있다. 종점은 예를 들면 염증, 종양원성, 또는 세포 탈과립화 또는 분비, 예를 들면, 사이토킨, 독성 산소 또는 프로테아제의 방출의 지표의 예정된 양 또는 퍼센트를 포함할 수 있다. 종점은 예를 들면, 예정된 양의 이온 유출 또는 수송; 세포 이주; 세포 부착; 세포 증식; 전이에 대한 잠재능; 세포 분화; 및 표현형에 있어서의 변화, 예를 들면, 염증, 세포자멸사, 형질전환, 세포 주기 또는 전이와 관련된 유전자의 발현에 있어서의 변화를 포함할 수 있다[참조: 예를 들면, Knight (2000) Ann. Clin. Lab. Sci 30:145-158; Hood and Cheresh (2002) Nature Rev. Cancer 2:91-100; Timme et al. (2003) Curr. Drug Targets 4:251-261; Robbins and Itzkowitz (2002) Med. Clin. North Am. 86: 1467-1495; Grady and Markowitz (2002) Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. 3: 101-128; Bauer, et al. (2001) Glia 36:235-243; Stanimirovic and Satoh (2000) Brain Pathol. 10: 113-126].
억제의 종점은 일반적으로 대조군의 75% 이하, 바람직하게는 대조군의 50% 이하, 보다 바람직하게는 대조군의 25% 이하, 및 가장 바람직하게는 대조군의 10% 이하이다. 일반적으로, 활성화의 종점은 대조군의 적어도 150%, 바람직하게는 대조군의 적어도 2배, 보다 바람직하게는 대조군의 적어도 4배, 및 가장 바람직하게는 대조군의 적어도 10배이다.
"소분자"는 10 kDa 미만, 통상적으로 2 kDa 미만, 및 바람직하게는 1 kDa 미만인 분자량을 갖는 분자로서 정의된다. 소 분자는 무기 분자, 유기 분자, 무기 성분을 함유하는 유기 분자, 방사활성 원자, 합성 분자, 펩타이드 모사체 및 항체 모사체를 포함하는 분자를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 치료제로서, 소 분자는 세포에 대해 보다 허용될 수 있으며, 분해에 거의 민감하지 않고, 거대 분자보다 면역 반응을 거의 유발하지 않을 수 있다. 항체 및 사이토킨의 펩타이드 모사체와 같은 소 분자, 및 소 분자 독소는 문헌[참조: 예를 들면, Casset et al. (2003) Biochem. Biophys. Res. Commun. 307:198-205; Muyldermans (2001) J. Biotechnol. 74:277-302; Li (2000) Nat. Biotechnol. 18:1251-1256; Apostolopoulos et al. (2002) Curr. Med. Chem. 9:411-420; Monfardini et al. (2002) Curr. Pharm. Des. 8:2185-2199; Domingues et al. (1999) Nat. Struct. Biol. 6:652-656; Sato and Sone (2003) Biochem. J. 371:603-608; 미국 특허 제6,326,482호]에 기술되어 있다.
"특이적으로" 또는 "선택적으로" 결합하는은, 리간드/수용체, 항체/항원, 또는 다른 결합 쌍을 언급하는 경우, 단백질 및 다른 생물제의 이종 집단내 단백질의 존재의 결정인 결합 반응을 나타낸다. 따라서, 지정된 조건하에서, 규정된 리간드는 특수 수용체에 결합하며 샘플속에 존재하는 다른 단백질에 현저한 양으로 결합하지 않는다. 본원에 사용된 것으로서, 항체는 서열 IL-23p19의 서열을 포함하는 폴리펩타이드에 결합하지만 IL-23p19의 서열을 결여하는 단백질에 결합하지 않는 경우 제공된 서열(IL-23p19의 경우에)을 포함하는 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 것으로 일컬어진다. 예를 들어, IL-23p19를 포함하는 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 항체는 IL-23p19의 FLAG®-태그된 형태에 결합할 수 있으나, 다른 FLAG®-태그된 단백질에 결합하지 않을 것이다.
고려된 방법의 항체, 또는 항체의 항원-결합 부위로부터 기원한 결합 조성물은 관련되지 않은 항체와의 친화성보다 적어도 2배 높은, 바람직하게는 적어도 10배 높은, 보다 바람직하게는 적어도 20배 높은, 및 가장 바람직하게는 적어도 100 배 높은 친화성으로 자체의 항원에 결합한다. 바람직한 양태에서, 항체는 예를 들면 스캐챠드 분석(Scatchard analysis)에 의해 측정된 바와 같이, 약 109 리터/mol 보다 높은 친화성을 가질 것이다[참조: Munsen et al. (1980) Analyt. Biochem. 107:220-239].
본원에 사용된 것으로서, 용어 "면역조절제"는 면역 반응을 제어하거나 조절하는 천연 또는 합성제를 말한다. 면역 반응은 체액성 반응 또는 세포 반응일 수 있다. 면역조절제는 면역제어제 또는 소염제를 포함한다.
본원에 사용된 것으로서, "면역제어제", "면역제어 약물" 또는 "면역제어제"는 면역계의 활성을 억제하거나 예방하기 위한 면역제어 치료요법에서 사용되는 치료제이다. 임상적으로, 이들은 이식된 기관 및 조직(예를 들면, 골수, 심장, 신장, 간)의 이식을 예방하고/하거나 대부분 자가면역 기원인 자가면역병 또는 병들(예를 들면, 류마티스 관절염, 중증 근육무력증, 전신홍반루푸스, 궤양성 대장염, 다발경화증)의 치료시 사용된다. 면역제어 약물은 4개의 그룹으로 분류될 수 있다: 글루코코르티코이드 세포증식억제제; 항체(생물학적 반응 개질제 또는 DMARD); 임뮤노필린(immunophilin) 상에서 작용하는 약물; 증식성 질환의 치료에 사용된 공지된 화학치료제를 포함하는, 기타 약물. 다발경화증의 경우, 특히, 본 발명의 항체는 코팍손으로 공지된, 마이엘린 결합 단백질-유사 치료제의 신규 부류와 함께 투여될 수 있다.
"소염제" 또는 "소염 약물"은 스테로이드 및 비-스테로이드 치료제 둘다를 나타내는데 사용된다. 또한 코르티코스테로이드로서 공지된 스테로이드는 부신에 의해 천연적으로 생산된 호르몬인 코르티솔을 매우 닮은 약물이다. 스테로이드는 전신성 맥관염(혈관의 염증); 및 근육염(근육의 염증)과 같은 특정 염증 상태를 위한 주요 치료로서 사용된다. 스테로이드는 또한 류마티스 관절염(신체의 팔다리 둘다의 관절내에서 발생하는 만성 염증성 관절염); 전신홍반루푸스(비정상적인 면역계 기능에 의해 유발된 전신병); 소그렌 증후군(Sjogren's syndrome)(눈마름증 및 입마름증을 유발하는 만성 질환)과 같은 염증 상태를 치료하기 위해 선택적으로 사용될 수 있다.
일반적으로 NSAID로 약술된 비-스테로이드성 소염 약물은 진통, 항발열 및 소염 효과를 가진 약물이며 - 이들은 통증, 열 및 염증을 감소시킨다. 용어 "비-스테로이드성"은 광범위한 다른 효과들 중에서 유사한 에이코사노이드-저하, 소염 작용을 갖는, 스테로이드로부터의 이들 약물을 구별하는데 사용된다. NSAID는 일반적으로 다음 상태의 임상 완화용으로 처방된다: 류마티스 관절염; 골관절염; 염증성 관절병증[예를 들면, 강직척수염, 건선 관절염, 라이터 증후군(Reiter's syndrome)]; 급성 통풍; 월경통; 전이성 골 통증; 두통 및 편두통; 수술후 통증; 염증 및 조직 손상으로 인한 경증 내지 중간정도의 통증; 발열; 및 신산통. NSAID는 살리실레이트, 아릴알크노산, 2-아릴프로피온산(프로펜), N-아릴안트라닐산(페남산), 옥시캄, 콕시브 및 설폰아닐리드를 포함한다.
II. 개론
본 발명은 가공된 항-IL-23 항체 및 염증, 자가면역 및 증식성 질환을 치료하기 위한 이의 용도를 제공한다.
다수의 사이토킨은 병리학 또는 신경학적 질환의 보수에 있어서 역활을 지닌다. IL-6, IL-17, 인터페론-감마(IFN감마, IFN-γ), 및 과립구 콜로니-자극 인자(GM-CSF)는 다발경화증과 연관되어 있다[참조: Matusevicius et al. (1999) Multiple Sclerosis 5:101-104; Lock et al. (2002) Nature Med. 8:500-508]. IL-알파, IL-1베타, 및 형질전환 성장 인자-베타 1(TGF-베타1)은 ALS, 파킨슨병(Parkinson's disease), 및 알츠하이머병(Alzheimer's disease)에서 중요한 역활을 한다[참조: Hoozemans et al. (2001) Exp. Gerontol. 36:559-570; Griffin 및 Mrak (2002) J. Leukocyte Biol. 72:233-238; Ilzecka et al. (2002) Cytokine 20:239-243]. TNF-알파, IL-1베타, IL-6, IL-8, 인터페론-감마, 및 IL-17은 뇌 허혈에 대한 반응을 조절하는 것으로 여겨진다[참조: Kostulas et al. (1999) Stroke 30:2174-2179; Li et al. (2001) J. Neuroimmunol. 116:5-14]. 혈관 내피 성장 인자(VEGF)는 ALS와 관련되어 있다[참조: Cleveland and Rothstein (2001) Nature 2:806-819].
염증성 창자병, 예를 들어, 크론병, 궤양성 결장염, 만성소화장애증, 및 과민성 대장증후군은 면역계의 세포 및 사이토킨에 의해 중재된다. 예를 들어, 크론병은 증가된 IL-12 및 IFNγ와 관련되어 있는 한편, 궤양성 결장염은 증가된 IL-5, IL-13, 및 형질전환 성장 인자-베타(TGF베타)와 관련되어 있다. IL-17 발현은 또한 크론병 및 궤양성 결장염에서 증가될 수 있다[참조: 예를 들면, Podolsky (2002) New Engl. J. Med. 347:417-429; Bouma 및 Strober (2003) Nat. Rev. Immunol. 3:521-533; Bhan et al. (1999) Immunol. Rev. 169:195-207; Hanauer (1996) New Engl. J. Med. 334:841-848; Green (2003) The Lancet 362:383-391; McManus (2003) New Engl. J. Med. 348:2573-2574; Horwitz and Fisher (2001) New Engl. J. Med. 344:1846-1850; Andoh et al. (2002) Int. J. Mol. Med. 10:631-634; Nielsen et al. (2003) Scand. J. Gastroenterol. 38:180-185; Fujino et al. (2003) Gut 52:65-70].
IL-23 수용체는 IL-23R 및 IL-12Rβ1 소단위의 이종이량체 복합체이다[참조: Parham et al. (2000) J. Immunol. 168:5699]. IL-12 수용체는 IL-12Rβ1 및 IL-12Rβ2 소단위의 복합체이다[참조: Presky et al. (1996) Proc. Nat'l Acad. Sci USA 93:14002]. IL-23R은 염증성 창자병, 크론병 및 궤양성 창자병에서 중요한 유전적 인자로서 관련되어 있다[참조: Duerr et al. (2006) Sciencexpress 26-October-2006:1]. 게놈-확대 관련 연구는, IL-23R에 대한 유전자가 크론병에 대해 강력한 보호를 부여하는 특수한 암호화 변이체(Arg381Gln)와 함께 크론병과 고도로 관련되어 있음을 밝혔다. 이러한 유전적 관계는, IL-23 및 이의 수용체가 IBD를 치료하기 위해 시도된 새로운 치료제에 대한 촉망되는 표적임을 제안하는 선행의 생물학적 발견[참조: Yen et al. (2006) J. Clin. Investigation 116:1218]을 입증한다.
피부, 관절, CNS의 염증병, 및 증식성 질환은 유사한 면역 반응을 유발함으로써, IL-23은 전신계적 감염에 대항하는 숙주 능력을 포함하지 않으면서, 이들 면역 중재된 염증 질환의 억제를 제공하여야 한다. IL-23을 길항하는 것은 염증성 창자염, 크론병, 궤양성 결장염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 건선, 강직성 척수염 및 아토피성 피부염과 관련된 염증을 완화시켜야 한다. IL-23 억제제의 사용은 또한 증식성 질환, 예를 들면, 암 및 자가면역 질환, 예를 들면, 다발경화증, 제I형 당뇨병 및 SLE의 억제를 제공할 것이다. 이러한 다양한 질환에서 IL-23의 기술은 다음 공개된 PCT 특허원에서 찾을 수 있다: 제WO 04/081190호; 제WO 04/071517호; 제WO 00/53631호; 및 제WO 01/18051호. IL-23 억제제는 또한 세균, 마이코박테리아, 바이러스 및 진균 감염과 같은 만성 감염을 포함하는 감염의 치료에 있서 용도를 찾을 수 있다.
IL-23의 p19 소단위는 조혈 사이토킨의 장쇄 계열의 구성원이며[참조: Oppmann et al. (2000) 상기 참조] 상부-상부-하부-하부 국소 해부학(up-up-down-down topology)을 지닌 A, B, C 및 D로 명명된 4개의 패지징된 α-나선구조를 포함한다. 4개의 나선구조는 3개의 폴리펩타이드 루프에 의해 연결되어 있다. A-B 및 C-D 루프는, 이들이 평행한 나선구조를 연결하기 때문에 비교적 길게 모델링되어 있다. 짧은 B-C 루프는 평행하지 않은 B 및 C 나선구조를 연결한다. IL-23의 p19 소단위는 나선구조 사이토킨의 IL-6 계열의 구성원이다. 사이토킨의 당해 계열은 3개의 보존된 에피토프[부위 I, II 및 III; 참조: Bravo and Heath (2000) EMBO J. 19:2399-2411]을 통해 이들의 동족 수용체에 결합한다. p19 소단위는 3개의 사이토킨 수용체 소단위와 상호작용하여 충분한 시그날링 복합체를 형성한다. 세포내에서 발현되는 경우, p19 소단위는 우선 p40 소단위와 복합체를 형성하며, 이는 IL-12와 공유한다. 위에서 나타낸 바와 같이, p19p40 복합체는 세포로부터 이종이량체 단백질로서 분비되며 IL-23으로 명명된다(참조: 예를 들면, Oppmann et al, 상기 참조). IL-23 시그날을 형질유도(transduce)하는데 요구된 세포 수용체 복합체는 사이토킨의 IL-6/IL-12 계열의 톨 시그날링 수용체 소단위(tall signaling receptor subunit)의 2개의 구성원인, IL-23-특이적인 IL-23R(참조: 예를 들면, Parham et al., 상기 참조) 및 IL-12와 공유한 IL-12Rb1으로 이루어진다.
'장쇄' 사이토킨/수용체 인지의 구조적 기준으로의 고찰은, 비록 단백질 표면의 대부분의 부위가 사이토킨-수용체 복합체의 형성시 매장된다고 해도, 상호작용의 친화성은 결합 계면의 중심내 활동적인 '핫 스폿(hot spot)'을 형성하는 약간의, 흔히 강력하게 클러스터된 아미노산 잔기에 의해 좌우됨을 보여준다. 큰 단백질-단백질 계면의 결합 에너지를 좌우하는 잔기의 실체는 '작용성 에피토프'로 명명되어 왔다. 상호작용의 친화성(및 따라서 생물학적 특이성)은 후속적으로 리간드와 수용체의 작용적 에피토프의 구조적 상보성에 의해 정의된다. 상세한 돌연변이유발 연구는, 사이토킨과 수용체의 작용적 에피토프를 구성하는 가장 현저한 잔기가 트립토판과 같은 비-극성 측쇄, 비-극성 측쇄의 지방 성분 또는 폴리펩타이드 골격을 포함하는 소수성 접촉이다. 비-극성 '코어'는 결합 에너지에 덜 중요한 극성 잔기의 무리(halo)에 둘러싸여 있다. 역학적 연구는, 작용적 에피토프의 주요 역활이 복합체의 해리율을 감소시킴으로써 단백질-단백질 상호작용을 안정화시키는 것임을 나타낸다. 이는 사이토킨과 수용체간의 초기 접촉이 무작위적인 확산 또는 많은 불안정한 접촉을 생성하는 단백질 표면의 '롤링(rolling)'에 의해 좌우됨을 제안하고 있다. 이후에, 복합체는, 수용체와 리간드의 작용적 에피토프가 관여하는 경우 안정화된다(참조: 예를 들면, Bravo 및 Heath, 상기 참조).
III. IL-23 특이적인 항체의 생성
모노크로날 항체를 생성하는 특정의 적합한 방법이 사용될 수 있다. 예를 들면, 수용체를 IL-23 이종이량체의 연결되거나 연결되지 않은(예를 들면, 천연적으로 존재하는) 형태 또는 이의 단편으로 면역화시킬 수 있다. 면역화의 특정의 적합한 방법이 사용될 수 있다. 이러한 방법은 항원보강제, 기타 면역자극제, 반복된 부스터 면역화(booster immunization), 및 하나 이상의 면역화 경로의 사용을 포함할 수 있다.
IL-23의 어떠한 적합한 공급원도 본원에 기술된 조성물 및 방법의 p19 소단위에 대해 특이적인 비-사람 항체의 생성을 위한 면역원으로서 사용될 수 있다. 이러한 형태는 연결되고 천연적으로 존재하는 이종이량체, 당해 분야에 공지된 재조합체, 합성, 화학적 또는 효소적 분해 수단을 통해 생성된, 펩타이드(들) 및 에피토프를 포함하는 전체 단백질을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
항원의 특정 형태를 사용하여 생물학적으로 활성인 항체를 생성하기에 충분한 항체를 생성시킬 수 있다. 따라서, 유발될 항원은 단일 에피토프, 다수 에피토프, 또는 전체 단백질 단독 또는 당해 분야에 공지된 하나 이상의 면역원성 증강제의 조합일 수 있다. 유발된 항원은 분리된 완전한 길이의 단백질, 세포 표면 단백질(예를 들면, 항원의 적어도 하나의 부위로 형질감염된 세포를 사용한 면역화), 또는 가용성 단백질(예를 들면, 단백질의 세포외 도메인 부위만으로 면역화)일 수 있다. 항원은 유전적으로 변형된 세포내에서 생산될 수 있다. 항원을 암호화하는 DNA는 게놈성 또는 비-게놈성(예를 들면, cDNA)일 수 있고 세포외도메인 중 적어도 하나의 부위를 암호화한다. 본원에 사용된 것으로서, 용어 "부위"는 적절하게는 목적한 항원의 면역원성 에피토프를 구성하기 위한 최소 수의 아미노산 또는 핵산을 말한다. 아데노바이러스 벡터, 플라스미드, 및 양이온성 지질과 같은 비-바이러스 벡터를 포함하나, 이에 한정되지 않는, 목적한 세포의 형질전환에 적합한 어떠한 유전적 벡터도 사용할 수 있다.
어떠한 적합한 방법도 IL-23을 억제하기에 바람직한 생물학적 특성을 지닌 항체를 유발시키는데 사용될 수 있다. 마우스, 설치류, 영장류, 사람 등과 같은 각종 포유동물 숙주로부터 모노클로날 항체(mAb)를 제조하는 것이 바람직하다. 이러한 모노클로날 항체를 제조하기 위한 기술의 기재는 예를 들면, 문헌[참조: Stites et al. (eds.) BASIC 및 CLINICAL IMMUNOLOGY (4th ed.) Lange Medical Publications, Los Altos, CA, 및 여기에 인용된 문헌; Harlow 및 Lane (1988) ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL CSH Press; Goding (1986) MONOCLONAL ANTIBODIES: PRINCIPLES AND PRACTICE (2d ed.) Academic Press, New York, NY]에서 찾을 수 있다. 따라서, 모노클로날 항체는 당해 분야의 숙련가에게 친숙한 각종 기술로 수득할 수 있다. 통상적으로, 목적한 항원으로 면역화시킨 동물로부터의 비장 세포는 일반적으로 흑색종 세포와의 융합에 의해 무한증식된다[참조: Kohler and Milstein (1976) Eur. J. Immunol. 6:511-519]. 무한증식의 다른 방법은 엡슈타인 바르 바이러스(Epstein Barr Virus), 종양유전자(oncogene), 또는 레트로바이러스를 사용한 형질전환, 또는 당해 분야에 공지된 다른 방법을 포함한다[참조: 예를 들면, Doyle et al. (eds. 1994 및 periodic supplements) CELL 및 TISSUE CULTURE: LABORATORY PROCEDURES, John Wiley 및 Sons, New York, NY]. 단일의 무한증식된 세포로부터 발생한 콜로니는 항원에 대한 바람직한 특이성 및 친화성의 항체 생산에 대해 스크리닝되며 이러한 세포에 의해 생산된 모노클로날 항체의 수율은 척추 숙주의 복강내로의 주사를 포함하는 각종 기술에 의해 향상시킬 수 있다. 달리는, 예를 들면, 문헌[참조: Huse et al. (1989) 246:1275-1281]에 요약된 일반적인 프로토콜에 따라, 사람 B 세포로부터의 DNA 라이브러리를 스크리닝함으로써 모노클로날 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 DNA 서열을 분리할 수 있다.
다른 적합한 기술은 파아지 또는 유사한 벡터내 항체의 라이브러리의 선택을 포함한다[참조: 예를 들면, Huse et al. 상기 참조; 및 Ward et al. (1989) Nature 341:544-546]. 키메라 또는 사람화된 항체를 포함하는, 본 발명의 폴리펩타이드 및 항체는 키메라 또는 사람화된 항체를 포함하는, 변형 또는 변형없이 사용할 수 있다. 흔히, 폴리펩타이드 및 항체는 검출가능한 시그날을 제공하는 물질에 공유적으로 또는 비공유적으로 결합시킴에 의해 표지될 것이다. 광범위한 표지 및 접합 기술이 공지되어 있으며 과학 및 특허 문헌 둘다에 집중적으로 보고되어 있다. 적합한 표지는 방사핵, 효소, 기질, 공인자, 억제제, 형광성 잔기, 화학루미네센스 잔기, 자기 입자 등을 포함한다. 이러한 표지의 용도를 교시하는 특허는 미국 특허 제3,817,837호; 제3,850,752호; 제3,939,350호; 제3,996,345호; 제4,277,437호; 제4,275,149호; 및 제4,366,241호를 포함한다. 또한, 재조합체 면역글로불린이 생산될 수 있거나[참조: Cabilly의 미국 특허 제4,816,567호; 및 Queen et al. (1989) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033]; 유전자삽입 마우스에서 제조될 수 있다[참조: Mendez et al. (1997) Nature Genetics 15: 146-156]. 또한, 문헌[참조: Abgenix 및 Medarex technologies]을 참조한다.
IL-23의 예정된 단편에 대한 항체 또는 결합 조성물은 폴리펩타이드, 단편, 펩타이드 또는 에피토프와 담체 단백질의 접합체를 사용하여 동물을 면역화시킴으로써 생성시킬 수 있다. 모노클로날 항체는 바람직한 항체를 분비하는 세포로부터 제조된다. 이들 항체는 정상 또는 결핍성 IL-23에 대한 결합에 대해 스크리닝할 수 있다. 이들 모노클로날 항체는 ELISA로 측정하여, 일반적으로, 적어도 약 1μM, 보다 일반적으로 ELISA에 의해 측정하여, 적어도 약 300 nM, 30 nM, 10 nM, 3 nM, 1 nM, 300 pM, 100 pM, 30 pM 또는 그 이상의 Kd로 결합할 것이다. 적합한 비-사람 항체는 또한 하기 실시예 5 및 6에 기술된 생물학적 검정을 사용하여 확인할 수 있다.
항체 13B8를 발현하는 하이브리도마는 2006년 8월 17일자로 기탁 번호 제PTA-7803하에 부타페스트 조약에 따라 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection: ATCC-미국 버지니아주 마나사스 소재)에 기탁되었다.
IV. IL-23 특이적인 항체의 사람화
어떠한 적합한 비-사람 항체도 초가변성 영역에 대한 공급원으로서 사용할 수 있다. 비-사람 항체에 대한 공급원은 쥐, 토끼류[Lagomorphs: 토끼(rabbits) 포함], 소 및 영장류를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 대부분의 경우, 사람화된 항체는 사람 면역글로불린(수용체 항체)이며, 여기서, 수용체의 초가변성 영역 잔기는 바람직한 특이성, 친화성 및 능력을 갖는 마우스, 랫트, 토끼 또는 비사람 영장류와 같은 비-사람 종(공여자 항체)로부터의 초가변성 영역 잔기로 대체된다. 일부 예에서, 사람 면역글로불린의 Fv 골격 영역(FR) 잔기는 상응하는 비-사람 잔기로 대체된다. 또한, 사람화된 항체는 수용체 항체 또는 공여자 항체내에서는 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 바람직한 생물학적 활성의 항체 수행능을 추가로 정의하기 위해 제조된다. 추가의 세부사항에 대해서는 문헌[참조: Jones et al. (1986) Nature 321:522-525; Reichmann et al. (1988) Nature 332:323-329; 및 Presta (1992) Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596]을 참조한다.
항체를 재조합적으로 가공하는 방법은 예를 들면, 문헌[참조: Boss et al. (미국 특허 제4,816,397호), Cabilly et al. (미국 특허 제4,816,567호), Law et al. (유럽 공개특허공보 제EP43831OA1호) 및 Winter (유럽 특허 제EP239400B1호)]에 기술되어 있다.
사람화된 항-IL-23 항체의 아미노산 서열 변이체는 적절한 뉴클레오타이드 변화를 사람화된 항-IL-23 항체 DNA내로 도입시키거나, 펩타이드 합성으로 제조한다. 이러한 변이체는 예를 들면, 사람화된 항-IL-23 항체에 대해 나타낸 아미노산 서열내 잔기로부터의 결실 및/또는 잔기내로의 삽입, 및/또는 이의 치환을 포함한다. 결실, 삽입 및 치환의 어떠한 조합도 최종 작제물에 도달하기 위해 이루어지며, 단, 최종 작제물은 바람직한 특성을 지녀야 한다. 아미노산 변화는 또한 글리코실화 부위의 수 또는 위치의 변화와 같은, 사람화된 항-IL-23 항체의 해독 후 과정을 변경시킬 수 있다.
돌연변이유발용으로 바람직한 위치에 있는 사람화된 항-IL-23p19 항체 폴리펩타이드의 특정 잔기 또는 영역의 확인을 위해에 유용한 방법은 문헌[참조: Cunningham and Wells (1989) Science 244: 1081-1085]에 기술되어 있는 바와 같이, "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 불린다. 여기서, 표적 잔기들의 잔기 또는 그룹은 확인되어 있으며(예를 들면, Arg, Asp, His, Lys, 및 Glu와 같은 하전된 잔기) 아미노산과 IL-23 항체의 상호작용에 영향을 미치기 위해 중성 또는 음성으로 하전된 아미노산(가장 바람직하게는 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체된다. 이후에 치환에 대한 작용적 민감성을 입증하는 아미노산 잔기를 추가의 또는 다른 변이체를 도입시킴에 의해 또는 치환 부위에 대해 재정의한다. 따라서, 아미노산 서열 변이를 도입하기 위한 부위는 예정되어 있는 반면, 돌연변이 등의 특성은 예정할 필요가 없다. 예를 들어, 제공된 부위에서 돌연변이의 수행능을 분석하기 위해서는, Ala 스캐닝 또는 부작위 돌연변이유발이 표적 코돈 또는 영역에서 수행되며 발현된 사람화된 항-IL-23p19 항체 변이체는 바람직한 활성에 대해 스크리닝된다.
아미노산 서열 삽입은 하나의 잔기로부터 수백개의 잔기를 함유하는 폴리펩타이드까지 길이의 범위에 있어서 및 단일 또는 다수의 아미노산 잔기의 서열내 삽입에 있어서 아미노- 및/또는 카복실-말단 융합체를 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 지닌 사람화된 항-IL-23 항체 또는 에피토프 태그에 융합된 항체를 포함한다. 사람화된 항-IL-23 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩타이드 또는 효소의 사람화된 항-IL-23 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 융합체를 포함한다.
변이체의 다른 유형은 아미노산 치환 변이체이다. 이들 변이체는 자체 위치내에서 제거된 사람화된 항-IL-23p19 항체 분자내 적어도 하나의 아미노산 잔기 및 자체 위치내에서 삽입된 상이한 잔기를 갖는다. 친환 돌연변이유발을 위한 매우 관심있는 부위는 초가변 루프를 포함하나, FR 변형 또한 고려된다.
항체의 아미노산 변이체의 다른 유형은 항체의 원래의 글리코실화 패턴을 변경시킨다. 변경은 항체내에서 발견된 하나 이상의 탄수화물 잔기의 결실 및/또는 항체내에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위의 첨가를 의미한다. 항체의 글리코실화는 통상적으로 N-연결되거나 O-연결되어 있다. N-연결된은 아스파라긴 잔기의 측쇄에 탄수화물 잔기의 부착을 말한다. 트리펩타이드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌(여기서, X는 프롤린을 제외한 특정 아미노산이다)는 아스파라긴 측쇄에 대한 탄수화물 잔기의 효소적 부착을 위한 인지 서열이다. 따라서, 폴리펩타이드내 이들 트리펩타이드 서열의 존재는 강력한 글리코실화 부위를 생성한다. O-연결된 글리코실화는, 비록 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시라이신이 또한 사용될 수 있다고 해도, 당 N-아세틸갈락토스아민, 갈락토즈 또는 크실로즈 중 하나의 하이드록실아미노산으로의 부착을 말한다.
항체에 대한 글리코실화 부위의 부착은 편리하게는 아미노산 서열을 변경시킴으로써 항체가 상기-기술한 트리펩타이드 서열(N-연결된 글리코실화 부위에 대해) 중 하나 이상을 함유하도록 함으로써 달성된다. 변경은 또한 원래의 항체(O-연결된 글리코실화 부위에 대해)의 서열에 대해 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기에 의한 첨가 또는 치환에 의해 달성될 수 있다.
여전히 다른 유형의 아미노산 변이체는 최종의 사람화된 항체의 보다 큰 화학 안정성을 제공하기 위한 잔기의 치환이다. 예를 들면, 아스파라긴(N) 잔기는 설치류 CDR내 특정의 NG 서열에서 이소아스파르테이트의 형성을 위한 잠재능을 감소시키도록 변경시킬 수 있다. 유사한 문제가 DG 서열에서 일어날 수 있다[참조: Reissner and Aswad (2003) Cell. Mol. Life Sci 60:1281]. 이소아스파르테이트 형성은 이의 표적 항원에 대한 항체의 결합을 약화시키거나 완전히 파괴할 수 있다[참조: Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731 at 734]. 하나의 양태에서, 아스파라긴은 글루타민(Q)으로 변화된다. 또한, 설치류 CDR에서 메티오닌 잔기는, 메티오닌 황이 산화되어 항원 결합 친화성을 감소시키고 또한 최종 항체 제제내 분자 이질성에 기여할 수 있도록 변화될 수 있다. 하나의 양태에서, 메티오닌은 알라닌(A)으로 변화된다. 이러한 치환을 갖는 항체는, 치환이 후속적으로 허용되지 않는 수준으로 IL-23p19 결합 친화성을 감소시키지 않는 것을 보증하도록 후속적으로 스크리닝된다.
사람화된 IL-23 특이적인 항체의 아미노산 서열 변이체를 암호화하는 핵산 분자는 당해 분야에 공지된 각종의 방법으로 제조된다. 이러한 방법은 천연 공급원(천연적으로 존재하는 아미노산 서열 변이체의 경우)로부터의 분리 또는 올리고뉴클레오타이드-중재된(또는 부위-지시된) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발 및 사람화된 항-IL-23p19 항체의 앞서 제조된 변이체 또는 비-변이체 버젼의 카세트 돌연변이유발에 의한 제조를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일반적으로, 사람화된 항-IL-23 항체의 아미노산 서열 변이체는 중쇄 또는 경쇄의 원래의 사람화된 항체 아미노산 서열과 적어도 75% 아미노산 서열 상동성, 보다 바람직하게는 적어도 80%, 보다 바람직하게는 적어도 85%, 보다 바람직하게는 적어도 90%, 및 가장 바람직하게는 적어도 95, 98 또는 99%의 아미노선 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 가질 것이다. 당해 서열과 관련하여 동질성 또는 상동성은 본원에서 경우에 따라 최대 퍼센트 서열 상동성을 달성하기 위해 서열을 정렬시키고 갭을 도입하며, 서열 상동성의 일부로서 어떠한 보존적 치환을 고려하지 않은 후, 사람화된 항-IL-23 잔기와 동일한 후보 서열 중에서 아미노산 잔기의 퍼센트로서 정의된다. 항체 서열내로의 N-말단, C-말단 또는 내부 연장, 결실 또는 삽입 중 어느 것도 서열 동질성 또는 상동성에 영향을 미치는 것으로 고려되지 않을 것이다.
사람화된 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA, 및 IgE를 포함하는 특정 부류의 면역글로불린으로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는 항체는 IgG 항체이다. IgG의 특정의 동형, 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4가 사용될 수 있다. IgG 동형의 변이체가 또한 고려된다. 사람화된 항체는 하나 이상의 부류 또는 동형으로부터의 서열을 포함할 수 있다. 바람직한 생물학적 활성을 생성하기 위한 필수적인 고정 도메인 서열의 최적화는 하기 기술된 생물학적 검정에서 항체를 스크리닝함으로써 용이하게 달성된다.
유사하게, 경쇄의 어떤 부류도 본원의 조성물 및 방법에 사용될 수 있다. 상세하게는, 이의 카파, 람다 또는 변이체가 본 발명의 조성물 및 방법에서 유용하다.
비-사람 항체로부터의 CDR 서열의 어떠한 적합한 부위도 사용될 수 있다. CDR 서열은, CDR 서열이 사용된 사람 및 비-사람 항체 서열로부터 구별될 수 있도록 적어도 하나의 잔기의 치환, 결실 또는 삽입에 의해 돌연변이유발될 수 있다. 이러한 돌연변이는 최소인 것으로 고려된다. 통상적으로, 사람화된 항체 잔기 중 적어도 75%가 비-사람 CDR 잔기의 것, 보다 흔히 90%, 및 가장 바람직하게는 95% 이상에 상응할 것이다.
사람 항체로부터 FR 서열의 어떠한 적합한 부위도 사용될 수 있다. FR 서열은, FR 서열이 사용된 사람 및 비-사람 항체 서열로부터 구별되도록 적어도 하나의 잔기의 치환, 결실 또는 삽입에 의해 돌연변이유발될 수 있다. 이러한 돌연변이는 최소인 것으로 고려된다. 통상적으로 사람화된 항체 잔기의 적어도 75%, 보다 흔히 90%, 및 가장 바람직하게는 95, 98 또는 99% 이상이 사람 FR 잔기의 것에 상응할 것이다.
CDR 및 FR 잔기는 카바트(Kabat)의 문헌[참조: Kabat et al. (1987) Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda Md]의 표준 서열 정의에 따라 측정된다. 서열 1 내지 5는 각종 마우스 항-사람 IL-23p19 항체의 중쇄 가변 도메인 서열을 나타내며, 서열 9 내지 13은 경쇄 가변 도메인 서열을 묘사한다. 도 1 및 2는 본 발명의 각종 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 서열 라인업을 제공한다. CDR은 도면에 나타내며, 개개의 CDR 서열은 각각 표 7에 나타낸 바와 같이 유일한 서열 확인인자로 나타낸다.
항체 13B8의 사람화된 형태가 제공된다. 사람화된 경쇄 13B8 서열(카파 고정 영역을 지닌)은 서열 14에 제공되며, 경쇄 가변 도메인은 이 서열중 1번 내지 108번 잔기를 포함한다. 사람화된 중쇄 13B8 서열의 3개 버젼(γ1 고정 영역을 지닌)이 서열 6 내지 8에 제공되며, 중쇄 가변 영역은 이들 서열 중 1번 내지 116번 잔기를 포함한다. 13B8 중쇄 변이체는 표 2에 나타내며, 모 서열과는 굵은체로 나타낸 부분이 상이하다. Met(M)은 Lys(K)으로 변형됨으로써 잔기의 산화 및 항체의 불활성화를 위한 잠재능이 제거되어 있다. NEMFE를 AQKLQ로 치환하는 것은 쥐 CDR 서열을 항체를 사람화하기 위해 선택된 사람 골격으로부터의 사람 배선 서열로 교체하는 것이다.
Figure 112009056953562-PCT00001
본원에 기술된 다른 항체의 사람화된 형태는 모 설치류 항체 CDR을 서열 14 및 16에 제공된 사람화된 13B8에 대한 경쇄 및 중쇄 서열로 단순히 치환함으로서 생성시킬 수 있다. 이러한 시도는 주로 항체 13B8의 CDR과 높은 상동성을 지닌 CDR, 예를 들면, 중쇄상의 클론 11C1 및 경쇄상의 클론 11C1 및 21D1을 지닌 항체 쇄에 대해 가장 성공적이어야 한다. 달리는, 쥐 항체를 본원에 요약된, 예를 들면, 실시예 2에 요약된 시도를 사용하여 독립적으로 사람화시킬 수 있다.
하나의 양태에서, CDR은 본원에 기술된 특정의 단일 서열 CDR의 변이체(서열 15 내지 46)를 포함하며, 여기서, 변이체는 표 1의 데이타를 사용하여 측정된 것으로서 기술된 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 이상의 보존적 아미노산 치환을 포함한다.
또한 키메라 항체가 고려된다. 위에 나타낸 바와 같이, 대표적인 키메라 항체는 특수 종으로부터 기원하거나 특수 항체 부류 또는 소부류에 속하는 항체내 서열과 동일하거나, 동질이거나, 상동인 중쇄 및/또는 경쇄의 부위를 포함하는 반면, 쇄(들) 중 나머지는, 이들이 바람직한 생물학적 활성을 나타내는 한, 다른 종으로부터 기원하거나 다른 항체 부류 또는 소부류에 속하는 항체내 상응하는 서열, 및 이러한 항체의 단편과 동질이거나, 상동이다[참조: 미국 특허 제4,816,567호; 및 Morrison et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855].
이특이적인 항체가 또한 본 발명의 방법 및 조성물에 유용하다. 본원에 사용된 것으로서, 용어 "이특이적 항체"는 적어도 2개의 상이한 항원성 에피토프, 예를 들면, IL-23p19 및 IL-17에 대해 결합 특이성을 갖는 항체, 대표적으로 모노클로날 항체를 말한다. 하나의 양태에서, 에피토프는 동일한 항원으로부터 기원한다. 다른 양태에서, 에피토프는 2개의 상이한 항원으로부터 기원한다 이특이적 항체를 제조하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들면, 이특이적 항체는 2개의 면역글로불린 중쇄/경쇄 쌍의 공-발현을 사용하여 재조합적으로 생산할 수 있다[참조: 예를 들면, Milstein et al.(1983) Nature 305: 537-39]. 달리는, 이특이적 항체는 키메라 결합을 사용하여 제조할 수 있다[참조: 예를 들면, Brennan et al. (1985) Science 229:81]. 이특이적 항체는 이특이적 항체 단편을 포함한다[참조: 예를 들면, Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:6444-48, Gruber et al. (1994) J. Immunol. 152:5368].
여전히 다른 양태에서, 상이한 고정 도메인은 본원에 제공된 사람화된 VL, 및 VH 영역으로 연장될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체(또는 단편)의 특수하게 요구되는 용도가 변경된 효과기 작용에 대해 요청되는 경우, IgG1이외의 중쇄 고정 도메인이 사용될 수 있다. 비록 IgG1 항체가 상보체 활성화 및 항체-의존적 세포 세포독성과 같은 효과기 작용 및 긴 반감기를 제공한다고 해도, 이러한 활성은 항체의 모든 용도에 바람직하지 않을 수 있다. 이러한 예에서, 예를 들어, IgG4 고정 도메인이 사용될 수 있다.
V. 사람화된 항-IL-23의 생물학적 활성
사람화된 항-IL-23 항체에서 바람직한 것으로서 본원에 정의된 특성을 갖는 항체는 시험관내 억제 생물학적 활성 또는 적합한 결합 친화성에 대해 스크리닝할 수 있다. 목적한 항체(수용체에 대한 사이토킨의 결합을 차단하는 항체)에 의해 결합된 사람 IL-23(즉, p19 소단위) 상의 에피토프에 결합하는 항체를 스크리닝하기 위해, 문헌[참조: ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)]에 기술된 것과 같은 통상의 교차-차단 검정을 수행할 수 있다. 동일한 에피토프에 결합하는 항체는 이러한 검정에서 교차-차단하는 것으로 여겨지나, 모든 교차-차단 항체가 필수적으로 동일한 에피토프에 정확하게 결합하지 않을 것이며, 이는 교차-차단이 오우버래핑(overlapping) 에피토프 또는 심지어 근처의 비-오우버래핑(non-overlapping) 에피토프에서 결합한 항체에 의한 항체 결합의 입체 장애를 초래할 수 있기 때문이다.
달리는, 예를 들면, 문헌[참조: Champe et al. (1995) J. Biol. Chem. 270: 1388-1394]에 기술된 것으로서, 에피토프 맵핑을 수행하여 항체가 목적한 에피토프에 결합하는지를 측정할 수 있다. 문헌[참조: Cunningham and Wells (1989) Science 244: 1081-1085]에 기술된 바와 같은 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발" 또는 사람 IL-23에서 아미노산 잔기의 점 돌연변이유발 중 일부 다른 형태를 또한 사용하여 본 발명의 항-IL-23 항체에 대한 작용적 에피토프를 측정할 수 있다. 그러나, 돌연변이유발 연구는 또한 IL-23의 전체적인 3차원 구조에 중요하나 항체-항원 접촉에 직접적으로 관여하지 않는 아미노산 잔기를 나타낼 수 있으므로, 다른 방법이 당해 방법을 사용하여 측정된 작용적 에피토프를 확인하는데 요구될 수 있다.
특이 항체에 의해 결합된 에피토프는 또한 사람 IL-23p19의 단편(서열 47)을 포함하는 펩타이드에 대한 항체의 결합을 추정함으로써 측정할 수 있다. IL-12 및 IL-23의 p40 소단위의 서열은 진뱅크(GenBank) 수탁 번호 제P29460호에서 찾을 수 있다. IL-23p19의 서열을 포함하는 일련의 오우버래핑 펩타이드를 합성하고 예를 들면, 지시된 ELISA, 경쟁적 ELISA(여기서, 펩타이드는 미세역가 플레이트의 웰에 결합된 IL-23p19에 대한 항체의 결합을 방지하는 이의 능력에 대해 평가된다) 또는 칩상에서 결합에 대해 스크링할 수 있다. 이러한 펩타이드 스크리닝 방법은 일부 불연속적인 작용적 에피토프, 즉, IL-23p19 폴리펩타이드 쇄의 주요 서열을 따라 연속적이지 않은 아미노산 잔기를 포함하는 작용적 에피토프를 검출하지 못할 수 있다.
본 발명의 항체에 의해 결합된 에피토프는 또한 X-선 결정 구조 측정(예를 들면, 제WO2005/044853호), 분자 모델링(molecular modeling) 및 유리된 경우 및 목적한 항체와 복합체내에서 결합된 경우 IL-23내 불안정한 아미드 수소의 H-D 교환율의 NMR 측정을 포함하는, 핵 자기 공명(NMR) 분광법과 같은 구조적 방법으로 측정할 수 있다[참조: Zinn-Justin et al..(1992) Biochemistry 31:11335-11347; Zinn-Justin et al. (1993) Biochemistry 32:6884-6891).
X-선 결정학과 관련하여, 결정화는 마이크로배치(microbatch)[참조: 예를 들면, Chayen (1997) Structure 5:1269-1274), 행잉-드롭 증기 확산법(hanging-drop vapor diffusion)[참조; 예를 들면, McPherson (1976) J. Biol. Chem. 251 :6300-6303), 씨딩 및 투석을 포함하는, 당해 분야에 공지된 방법[참조: 예를 들면, Giege et al. (1994) Acta Crystallogr. D50:339-350; McPherson (1990) Eur. J. Biochem. 189:1-23] 중 어느 것을 사용하여서도 달성할 수 있다. 농도가 적어도 약 1mg/mL 및 바람직하게는 약 10 mg/mL 내지 약 20 mg/mL인 단백질 제제를 사용하는 것이 바람직하다. 결정화는, 농도가 약 10% 내지 약 30%(w/v)인 폴리에틸렌 글리콜 1000-20,000(PEG; 약 1000 내지 약 20,000 Da 범위의 평균 분자량), 바람직하게는 약 5000 내지 약 7000 Da, 보다 바람직하게는 약 6000 Da를 함유하는 침전 용액 속에서 가장 잘 달성될 수 있다. 또한 단백질 안정화제, 예를 들면, 약 0.5% 내지 약 20% (w/v) 범위 농도의 글리세롤을 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 염화나트륨, 염화리튬 또는 나트륨 시트레이트와 같은 적합한 염이 또한 침전 용액, 바람직하게는 농도가 약 1 mM 내지 약 1000 mM인 침전 용액 속에서 바람직할 수 있다. 침전물은 바람직하게는 약 4.0 내지 약 10.0, 흔히 약 7.0 내지 8.5의 pH, 예를 들면, pH 8.0로 완충된다. 침전물 용액 속에 유용한 특이적인 완충제는 다양할 수 있으며 당해 분야에 잘 공지되어 있다[참조: Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Third ed., (1994) Springer-Verlag, New York]. 유용한 완충제의 예는 HEPES, 트리스, MES 및 아세테이트를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 결정은 2℃, 4℃, 8℃ 및 26℃를 포함하는 광범위한 온도에서 성장할 수 있다.
항체:항원 결정은 잘-공지된 X-선 회절 기술을 사용하여 연구할 수 있으며 X-PLOR[참조: Yale University, 1992, distributed by Molecular Simulations, Inc.; 참조: 예를 들면, Blundell & Johnson (1985) Meth. Enzymol. 114 & 115, H. W. Wyckoff et al. eds., Academic Press; 미국 공개 특허공보 제2004/0014194호], 및 BUSTER[참조: Bricogne (1993) Acta Cryst. D49:37-60; Bricogne (1997) Meth. Enzymol. 276A:361-423, Carter & Sweet, eds.; Roversi et al. (2000) Acta Cryst. D56: 1313-1323]와 같은 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 정제할 수 있다.
본 발명의 항체와 동일한 에피토르에 결합하는 추가의 항체는 예를 들면, 에피토프에 결합하기 위한 IL-23에 대해 생성된 항체를 스크리닝하거나, 에피토프 서열을 포함하는 사람 IL-23의 단편을 포함하는 펩타이드로 동물을 면역화시킴으로써 수득할 수 있다. 동일한 작용적 에피토프에 결합하는 항체는 수용체 결합을 차단하는 것과 같은 유사한 생물학적 활성을 나타내는 것으로 예측될 수 있으며, 이러한 활성은 항체의 작용적 분석으로 확인할 수 있다.
항체 친화성(예를 들면, 사람 IL-23의 경우)은 표준 분석을 사용하여 측정할 수 있다. 바람직한 사람화된 항체는 약 1x1O-7 이상; 바람직하게는 약 1x1O-8; 보다 바람직하게는 약 1x10-9 이하; 및 가장 바람직하게는 약 1x10-10 이하 또는 심지어 1x1O-11 M 이하의 Kd 값을 갖는 사람 IL-23p19에 결합하는 것들이다.
본 발명의 조성물 및 방법에 유용한 항체 및 이의 단편은 생물학적으로 활성인 항체 및 단편이다. 본원에 사용된 것으로서, 용어 "생물학적으로 활성인"은 목적한 항원성 에피토프에 결합할 수 있고 적접 또는 간접적으로 생물학적 효과를 발휘하는 항체 또는 항체 단편을 말한다. 통상적으로, 이러한 효과는 수용체에 결합하기 위한 IL-23의 실패로부터 초래된다. 본원에 사용된 것으로서, 용어 "특이적인"은 표적 항원 에피토프에 대한 항체의 선택적인 결합을 말한다. 항체는 제공된 조건하에서 관련없는 항체 또는 항원 복합체에 대한 결합과 IL-23에 대한 결합을 비교함으로써 결합 특이성에 대해 시험할 수 있다. 항체가 관련없는 항원 또는 항원 혼합물에 비해 적어도 10배, 및 바람직하게는 50배 이상 결합하는 경우, 이를 특이적인 것으로 고려한다. IL-12에 결합하는 항체는 IL-23-특이적인 항체가 아니다. IL-23p19에 "특이적으로 결합하는" 항체는 IL-23p19-기원한 서열을 포함하지 않는 단백질에 결합하지 않는데, 즉, 본원에 정의된 것으로서 "특이성"은 IL-23p19 특이성과 관련되며, 문제의 단백질내 존재할 수 있는 어떠한 다른 서열과는 관련되지 않는다. 예를 들어, 본원에 사용된 것으로서, IL-23p19에 "특이적으로 결합하는" 항체는 통상적으로 IL-23p19와 FLAG® 펩타이드 태그를 포함하는 융합 단백질인 FLAG®-hIL-23p19에 결합하지만, IL-23p19이외의 단백질에 융합되는 경우 FLAG® 펩타이드 태그에 결합하지 않는다.
억제성 IL-23p19 특이적인 항체와 같은 본 발명의 IL-23-특이적인 결합 화합물은 복강 대식구에 의한 IL-1β 및 TNF의 생산 및 TH17 T 세포에 의한 IL-17의 생산을 포함하나, 이에 한정되지 않는 어떠한 방식으로 이의 생물학적 활성을 억제할 수 있다[참조: Langrish et al. (2004) Immunol. Rev. 202:96-105]. 항-IL- 23p19 항체는 또한 IL-17A, IL-17F, CCL7, CCL17, CCL20, CCL22, CCR1, 및 GM-CSF의 유전자 발현을 또한 억제할 수 있을 것이다[참조: Langrish et al. (2005) J. Exp. Med. 201:233-240]. 본 발명의 IL-23-특이적인 결합 화합물, 예를 들면, 항 IL-23p19 항체는 또한 TH17 세포의 증식 또는 생존을 향상시키는 IL-23의 능력을 차단할 것이다[참조: Cua 및 Kastelein (2006) Nat. Immunol. 7:557-559]. 가공된 항-IL-23p19의 억제 활성은 염증, 자가면역 및 증식 질환의 치료에 유용할 것이다. 이러한 질환의 예는 PCT 공개 특허공보 제WO 04/081190호; 제WO 04/071517호; 제WO 00/53631호; 및 제WO 01/18051호에 기술되어 있다.
VI. 약제학적 조성물
IL-23p19 항체를 포함하는 약제학적 또는 멸균 조성물을 제조하기 위해, 사이토킨 유사체 또는 뮤테인(mutein), 이에 대한 항체 또는 이의 핵산을 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 혼합한다[참조: 예를 들면, Remington's Pharmaceutical Sciences 및 U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984)].
치료제 및 진단제의 제형은 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제와 예를 들면, 동결건조된 분말, 슬러리, 수용액 또는 현탁액의 형태로 혼합시켜 제조할 수 있다[참조: 예를 들면, Hardman et al. (2001) Goodman and Gilman 's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw- Hill, New York, NY; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, NY; Avis et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, NY].
단독으로 또는 면역제어제와 함께 투여된 항체 조성물의 독성 및 치료학적 효능은 세포 배양물 또는 실험 동물에서, 예를 들면, LD50 (집단의 50%를 치사시키는 투여량) 및 ED50(집단의 50%에서 치료학적으로 효과적인 투여량)을 측정하기 위해 표준 약제학적 과정으로 측정할 수 있다. 독성 및 치료 효과간의 투여량 비는 치료학적 지표이며 이는 LD50 내지 ED50의 비로 표현할 수 있다. 높은 치료학적 지표를 나타내는 항체가 바람직하다. 이들 세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이타는 사람에서 사용하기 위한 용량 범위를 제형화하는데 사용할 수 있다. 이러한 화합물의 용량은 바람직하게는 약간의 독성 또는 독성이 없는 ED50을 포함하는 순환하는 농도 범위내에 있다. 용량은 사용된 용량형 및 이용된 투여 경로에 따라 당해 범위내에서 변할 수 있다.
투여 유형은 특히 중요하지 않다. 적합한 투여 경로는 예를 글면, 경구, 직장, 경점막 또는 장내 투여; 근육내, 경피내, 피하, 골수 주사, 및 수막공간내, 직접적인 뇌실내, 정맥내, 복강내, 비강내 또는 안구내 주사를 포함하는 비경구 전달일 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물에서 또는 본 발명의 방법을 실시하기 위해 사용된 항체의 투여는 경구 소화, 흡입, 국소 적용 또는 피부, 피하, 경피, 비경구, 동맥내 또는 정맥내 주사와 같은 각종의 통상적인 방법으로 수행할 수 있다.
달리는, 항체를 전신계 방식보다는 국소로, 예를 들면, 흔히 데포트(depot) 또는 지속된 방출 제형에서 관절 또는 면역병리학으로 특징화된 병원체-유도된 병변내로 직접 항체를 주입함을 통해 투여할 수 있다. 또한 항체를 표적화된 약물 전달 시스템으로, 예를 들면, 면역병리학으로 특징화된 관절 또는 병원체-유도된 병변을 표적화하는 조직-특이적인 항체로 피복된 리포좀내에 표적화된 약물 전달 시스템으로 투여할 수 있다. 리포좀은 고통을 겪는 조직에 대해 표적화되고 이에 의해 선택적으로 흡수될 것이다.
치료제에 대한 투여 섭생의 선택은 혈청 또는 전체의 조직 전환율, 증상의 수준, 전체의 면역원성, 및 생물학적 매트릭스내 표적 세포의 수용성을 포함하는 수개의 인자에 의존한다. 바람직하게는, 투여 섭생은 부작용의 허용되는 수준과 일치하여 환자로 전달된 치료제의 양을 최대화한다. 따라서, 전달된 생물제의 양은 치료되는 상태의 특정 실체 및 중증도에 일부 의존한다. 항체, 사이토킨 및 소 분자의 적절한 투여량을 선택하는데 있어서의 안내는 이용가능하다[참조: 예를 들면, Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines 및 Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:601-608; Milgrom et al. (1999) New Engl. J. Med. 341:1966-1973; Slamon ef al.. (2001) New Engl. J. Med. 344:783-792; Beniaminovitz et al. (2000) New Engl. J. Med. 342:613-619; Ghosh et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:24-32; Lipsky et al. (2000) New Engl. J. Med. 343:1594-1602].
적절한 투여량은 임상의에 의해, 예를 들면 치료에 영향을 미치는 것으로 공지되거나 당해분야에서 예측되거나 치료에 영향을 미치는 것으로 예측된 매개변수 또는 인자를 사용하여 측정된다. 일반적으로, 투여량은 어느 정도 최적 투여량 미만의 양으로 시작하여 바람직하거나 최적 효과가 어떠한 음성적인 부작용과 관련하여 달성될 때까지 이후 소량씩 증가시킴으로써 증가시킨다. 중요한 진단학적 측정은 예를 들면, 생산된 염증성 사이토킨의 수준 또는 염증의 증상의 것들을 포함한다. 바람직하게는, 사용될 생물제는 실질적으로 치료를 위해 표적화된 동물과 동일한 종(예를 들면, 사람 종의 치료를 위해 사람화된 항체)으로부터 기원함으로써 시약에 대한 어떠한 면역 반응도 최소화시킨다.
항체, 항체 단편, 및 사이토킨은 연속적인 주입에 의해, 또는 예를 들면, 매일, 주당 1 내지 7회, 1주, 2주, 매달, 2개월마다 등의 간격에서의 투여량에 의해 제공될 수 있다. 투여량은 정맥내, 피하내, 국소적으로, 경구, 비경구, 직장, 근육내, 뇌내, 척수내 또는 흡입에 의해 제공될 수 있다. 바람직한 투여량 프로토콜은 현저한 바람직하지 않은 부작용을 피하는 최대 투여량 또는 투여량 횟수를 포함하는 것이다. 총 주간 투여량은 일반적으로 적어도 0.05 μg/kg, 0.2 μg/kg, 0.5 μg/kg, 1 μg/kg, 10 μg/kg, 100 μg/kg, 0.2 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 10 mg/kg, 25 mg/kg, 50 mg/kg의 체중 이상이다[참조: 예를 들면, Yang et al. (2003) New Engl. J. Med. 349:427-434; Herold et al. (2002) New Engl. J. Med. 346: 1692-1698; Liu et al. (1999) J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67:451-456; Portielji et al. (20003) Cancer Immunol. Immunother. 52: 133-144]. 소 분자 치료제, 예를 들면, 펩타이드 모사체, 천연 생성물, 또는 유기 화합물의 바람직한 투여량은 몰/kg 기준의 항체 또는 폴리펩타이드와 거의 동일하다.
본원에 사용된 것으로서, "억제하다" 또는 "치료하다" 또는 "치료"는 자가면역 질환 또는 병원체-유도된 면역병리학과 관련된 증상의 발달의 지연 및/또는 발달할 것으로 또는 발달하는 것으로 예측되는 이러한 증상의 중증도에 있어서의 감소를 포함한다. 용어들은 또한 존재하는 조절되지 않거나 원치않는 자가면역-관련되거나 병원체-유도된 면역병리학 증상을 완화시키고, 추가의 증상을 예방하며, 이러한 증상의 주요 원인을 완화시키거나 예방하는 것을 포함한다. 따라서, 당해 용어는, 유리한 결과가 자가면역 또는 병원체-유발된 면역병리학 질병 또는 증상, 또는 이러한 질병 또는 증상으로 발전할 가능성이 있는 척추동물 대상체에서 부여됨을 의미한다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "치료학적 유효량" 또는 "유효량"은 세포, 조직 또는 대상체에 추가의 치료제와 함께 또는 단독으로 투여되는 경우, 자가면역질환 또는 병원체-유발된 면역병리학 관련 질병 또는 상태 또는 질병의 진행을 예방하거나 완화시키는데 효과적인, 예를 들면, IL-23p19 특이적인 결합 화합물, 및 항체의 양을 말한다. 치료학적 유효량은 또한 증상을 완화시키는데, 예를 들면, 관련 의학적 상태를 치료, 치유, 예방 또는 완화시키거나 이러한 상태의 치료, 치유, 예방 또는 완화의 율에 있어서의 증가를 초래하기에 충분한 화합물의 양을 말한다. 단독으로 투여된 개개의 활성 성분에 적용되는 경우, 치료학적 유효 투여량은 성분 단독을 말한다. 배합물에 적용되는 경우, 치료학적 유효 투여량은, 함께, 일련으로 또는 동시에 투여되는 것에 상관없이, 치료 효과를 초래하는 활성 성분의 조합된 양을 말한다. 치료제의 유효량은 증상을 대표적으로 적어도 10%까지; 일반적으로 적어도 20%까지; 바람직하게는 적어도 약 30%까지; 보다 바람직하게는 적어도 40%까지, 및 가장 바람직하게는 적어도 50%까지 감소시킬 것이다.
제2 치료제, 예를 들면, 사이토킨, 항체, 스테로이드, 화학치료제, 항생제 또는 방사선과의 공-투여 또는 치료 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다[참조: 예를 들면, Hardman et al. (eds.) (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed., McGraw-Hill, New York, NY; Poole and Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice: A Practical Approach, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA; Chabner and Longo (eds.) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA]. 본 발명의 약제학적 조성물은 다른 면역제어제 또는 면역조절제를 함유할 수 있다. 소염제, 코르티코스테로이드, 사이클로스포린, 타크롤리무스(예를 들면, FK-506), 시롤리무스, 인터페론, 가용성 사이토킨 수용체(예를 들면, sTNRF 및 sIL-1R), 사이토킨 활성을 중화시키는 제제(예를 들면, 인플릭스마브, 에타네르셉트), 마이코페놀레이트 모페틸, 15-데옥시스페르구알린, 탈리도미드, 글라티라머, 아자티오프린, 레플루노미드, 사이클로포스파미드, 메토트렉세이트 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는, 특정의 적합한 면역제어제도 사용할 수 있다. 약제학적 조성물은 또한 광치료요법 및 방사선과 같은 다른 치료 양식과 함께 사용될 수 있다.
대표적인 척추동물, 실험 또는 조사 대상체는 원숭이, 개, 고양이, 랫트, 마우스, 토끼, 기니아 피그, 말 및 사람을 포함한다.
VII. 항체 생산
하나의 양태에서, 본 발명의 항체의 재조합체 생산을 위해서는, 2개의 쇄를 암호화하는 핵산을 분리하여 추가의 클로닝(DNA의 증폭) 또는 발현을 위한 하나 이상의 복제가능한 벡터내로 삽입한다. 모노클로날 항체를 암호화하는 DNA는 용이하게 분리하여 통상의 과정(예를 들면 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용함으로써) 서열분석한다. 많은 벡터가 이용가능하다. 벡터 성분은 일반적으로 다음 중 하나 이상을 포함하나, 이에 한정되지 않는다: 시그날 서열, 복제 오리진, 하나 이상의 마커 유전자, 인핸서 성분, 프로모터 및 전사 종결 서열. 하나의 양태에서, 본 발명의 사람화된 항-IL23p19 항체의 경쇄 및 중쇄 둘다는 동일한 벡터, 예를 들면, 플라스미드 또는 아데노바이러스 벡터로부터 발현된다.
본 발명의 항체는 당해 분야에 공지된 어떠한 방법으로도 생산할 수 있다. 하나의 양태에서, 항체는 배양물 중 포유동물 또는 곤충 세포, 예를 들면, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, 사람 배아 신장(HEK) 293 세포, 마우스 흑색종 NSO 세포, 베이비 햄스터 신장(BHK) 세포, 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 난소(Sf9) 세포 속에서 발현된다. 하나의 양태에서, CHO 세포로부터 분비된 항체는 단백질 A, 양이온 교환, 음이온 교환, 소수성 상호작용, 및 하이드록시아파타이드 크로마토그래피와 같은 표준 크로마토그래피 방법에 의해 회수되고 정제된다. 수득되는 항체를 농축하고 20mM 나트륨 아세테이트, pH 5.5에서 저장한다.
다른 양태에서, 본 발명의 항체는 제WO2005/040395호에 기술된 방법에 따라 효모에서 생산된다. 요약하면, 목적한 항체의 개개의 경쇄 또는 중쇄를 암호화하는 벡터를 상이한 효모 단배체 세포, 예를 들면 효모 피키아 파스토리스(Pichia pastoris)의 상이한 교배 유형내로 도입하는데, 당해 효모 단배체 세포는 임의로 상보성인 자가영양주이다. 이후에, 형질전환된 단배체 효모 세포를 중쇄 및 경쇄 둘다를 생산할 수 있는 이배체 효모 세포를 수득하기 위해 교배하거나 융합시킬 수 있다. 이후에, 이배체 균주는 완전히 조립되고 생물학적으로 활성인 항체를 분비할 수 있다. 2개의 쇄의 상대적인 발현 수준은 예를 들면, 상이한 카피 수를 갖는 벡터를 사용하거나, 상이한 강도의 전사 프로모터를 사용하거나, 하나 또는 둘다의 쇄를 암호화하는 유전자의 전사를 구동하는 유도성 프로모터로부터 발현을 유도함으로써 최적화할 수 있다.
하나의 양태에서, 상이한 항-IL-23p19 항체("원래"의 항체) 중 다수의 각각의 중쇄 및 경쇄는 효모 단배체 세포내로 도입시킴으로써 다수의 경쇄를 발현하는 하나의 교배 유형의 단배체 효모 균주의 라이브러리와, 다수의 중쇄를 발현하는 상이한 교배 유형의 단배체 효모 균주의 라이브러리를 생성한다. 단배체 균주의 라이브러리는 교배시켜[또는 세포벽불완전제거균(spheroplasts)으로서 융합시켜] 경쇄 및 중쇄의 다양한 가능한 순열을 포함한 항체의 조합적 라이브러리를 발현하는 일련의 이배체 효모 세포를 생산할 수 있다. 이후에, 항체의 조합적 라이브러리는 스크리닝하여 특정의 항체가 원래의 항체의 것보다 우세한(예를 들면, IL-23에 대해 높은 친화성이 있는) 특성을 가지는지를 측정할 수 있다(참조: 예를 들면, 제WO2005/040395호).
다른 양태에서, 본 발명의 항체는 사람 도메인 항체이며, 여기서, 항체 가변 도메인의 부위는, 분자량이 대략 13kDa인 폴리펩타이드내에 연결된다(참조: 예를 들면, 미국 특허 공보 제2004/0110941호). 이러한 측쇄 도메인, 저 분자량 제제는 합성, 안정성, 및 투여 경로의 측면에서 다수의 잇점을 제공한다.
VIII. 용도
본 발명은 예를 들면, 중추 신경계, 말초 신경계, 및 위장관의 염증 질환 및 상태, 및 자가면역 및 증식 질환의 치료 및 진단을 위한 가공된 항-IL-23 항체 및 이의 단편을 사용하는 방법을 제공한다.
예를 들면, 릴랩싱-래미팅(relapsing-remitting) 다발경화증(MS) 및 원발 진행성 MS를 포함하는 다발경화증(MS), 알츠하이머병, 근육위축가쪽경화증(a.k.a. ALS; Lou Gehrig's disease), 허혈성 뇌 손상, 프리온 질환, 및 HIV-관련 치매의 치료를 위한 방법이 제공된다. 또한, 신경병적 통증, 외상후 신경병증, 길랑-바레 증후군[Guillain-Barre syndrome(GBS)], 말초 다발신경병증, 및 신경 재생을 치료하는 방법이 제공된다.
다발경화증 또는 다른 염증 질환의 다음 특징, 증상, 측면, 만연, 또는 신호, 또는 신경계의 상태를 치료하거나 완화시키기 위한 방법이 제공된다: 뇌 병변, 미엘린 병변, 말이집탈락(demyelination), 말이집탈락된 플라크(demyelinated plaque), 시각 장애, 균형 또는 조정의 상실, 강직, 감각 장애, 실금, 통증, 약화, 피로, 마비, 인지 손상, 지정완서(bradyphrenia), 복시(diplopia), 시신경염, 감각이상, 보행운동불능, 피로, 유토프 증후군(Uhtoff's symptom), 신경통, 언어상실증, 행위상실증, 발작, 기질시각상실, 치매, 추체외로 현상, 우울증, 웰-빙 감각(sense of well-being), 또는 다른 감정 증상, 만성 진행성 척수병증, 및 가돌리늄-향상 병변, 유발 전위 기록(evoked potential recordings), 또는 뇌척수액의 시험을 포함하는, 자기 공명 영상(MRI)으로 검출된 증상[참조: 예를 들면, Kenealy et al. (2003) J. Neuroimmunol. 143:7-12; Noseworthy et al. (2000) New Engl. J. Med. 343:938-952; Miller et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:15-23; Chang et al. (2002) New Engl. J. Med. 346:165-173; Bruck and Stadelmann (2003) Neurol. Sd. 24 Suppl.5:S265-S267].
또한, 본 발명은 염증성 창자병, 예를 들면, 크론병, 궤양성 결장염, 소화장애증, 및 자극성 장증후군을 치료하고 진단하는 방법을 제공한다. 염증성 창자병의 다음 증상, 측면, 만연 또는 신호들중 하나 이상을 치료 또는 완화시키기 위한 방법을 제공한다: 식품의 흡수장애, 변경된 장 운동성, 감염, 열, 복부 통증, 설사, 직장 출혈, 체중 감소, 영양실조의 증상, 항문주위병, 복부내 소괴(abdominal mass), 및 성장 장애, 및 협착(stricture), 피스툴라스(fistulas), 독성의 거대결장, 천공 및 암과 같은 장 합병증, 및 프리어빌리티(friability), 아프타(aphthous) 및 선형 궤양, 조약돌 외관, 거짓폴립, 및 직장 병발(rectal involvement)과 같은 내시경 발견, 및 또한 항-효모 항체[참조: 예를 들면, Podolsky, 상기 참조; Hanauer, 상기 참조; Horwitz and Fisher, 상기 참조].
또한, 건선, 아토피성 피부염, 류마티스 관절염, 골관절염 및 건선 관절염을 포함하는 관절염, 전신홍반루푸스 및 제I형 당뇨병과 같은 자가면역 질환, 및 암과 같은 증식성 질환과 같은 염증 질환의 치료가 고려된다(참조: 예를 들면, PCT 공개 특허 공보 제WO 04/081190호; 제WO 04/071517호; 제WO 00/53631호; 및 제WO 01/18051호).
본 발명의 IL-23p19 결합 화합물은 또한 IL-17A, IL-17F, IL-1β, IL-6 및 TGF-β를 포함하나, 이에 한정되지 않는 다른 사이토킨(예를 들면, 항체) 중 하나 이상의 길항제와 함께 사용될 수 있다[참조: 예를 들면, Veldhoen (2006) Immunity 24: 179-189; Dong (2006) Nat. Rev. Immunol. 6(4):329-333]. 각종 양태에서, 본 발명의 IL-23p19 결합 화합물은 항-IL-17A 항체와 같은 다른 길항제 또는 길항제들의 투여 전에, 이와 동시에 또는 이의 투여 후에 투여된다. 하나의 양태에서, IL-17A 결합 화합물은 역 면역 반응[예를 들면, MS, 크론병(Crohn's Disease)]의 급성 조기 상태의 치료시 단독으로 또는 본 발명의 IL-23 길항제 항체와 함께 사용된다. 후자의 경우, IL-17A 결합 화합물은 점진적으로 감소될 수 있으며 IL-23 단독의 길항제를 사용한 치료는 역 반응의 제어를 유지하기 위해 지속된다. 달리는, IL-1β, IL-6 및/또는 TGF-β에 대한 길항제는 본 발명의 IL-23p19 결합 화합물과 동시에, 전에 또는 후에 투여될 수 있다[참조: Cua and Kastelein (2006) Nat. Immunol. 7:557-559; Tato and O'Shea (2006) Nature 441:166-168; Iwakura and Ishigame (2006) J. Clin. Invest. 116: 1218-1222].
본 발명의 광범위한 영역은 본 발명을 특수 양태로 한정하는 것을 의도하지 않는 다음 실시예를 참조로 잘 이해된다. 본원에 기술된 특수 양태는 단지 실시예의 방식으로 제공되며, 본 발명은 각각의 청구항이 내포하는 완전한 범위의 등량체와 함께, 첨부된 청구의 범위 측면으로 제한되어야 한다.
실시예 1
일반적인 방법
분자 생물학에서의 표준 방법이 기술된다[참조: Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning, 3rd ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA]. 표준 방법은 또한 문헌[참조: Ausbel et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, VoIs.1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY]에 나타나 있는데, 당해 문헌은 세균 세포내에서의 클로닝 및 DNA 돌연변이유발(Vol. 1), 포유동물 세포 및 효모내에서의 클로닝(Vol. 2), 당접합체 및 단백질 발현(Vol. 3), 및 생물정보학(Vol. 4)]을 기술하고 있다.
면역침전, 크로마토그래피, 전기영동, 원심분리 및 결정화를 포함하는 단백질 정제를 위한 방법이 기술되어 있다[참조: Coligan et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York]. 화학분석, 화학적 변형, 해독후 변형, 융합 단백질의 생산 및 단백질의 글리코실화가 기술되어 있다[참조: 예를 들면, Coligan et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York; Ausubel et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, pp. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO; pp. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., pp. 384-391]. 플리클로날 및 모노클로 날 항체의 생산, 정제 및 단편화가 기술되어 있다[참조: Coligan et al. (2001) Current Protcols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow and Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow and Lane, 상기 참조]. 리간드/수용체 상호작용을 특성화하기 위한 표준 기술도 유용하다[참조: 예를 들면, Coligan et al. (2001) Current Protcols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York].
형광성 활성화된 세포 분류 검출 시스템(FACS®)을 포함하는 유동 세포측정을 위한 방법이 이용가능하다[참조: 예를 들면, Owens et al. (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001) Flow Cytometry, 2nd ed.; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ]. 예를 들면, 진단 시약으로서 사용하기 위한, 핵산 프라이머 및 프로브, 폴리펩타이드, 및 항체를 포함하는 핵산을 변형시키는데 적합한 형광성 시약이 이용가능하다[참조; Molecular Probes (2003) Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR; Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, MO].
면역 시스템의 조직학의 표준 방법이 기술되어 있다[참조: 예를 들면, Muller-Harmelink (ed.) (1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY; Hiatt, et al. (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, and Wilkins, Phila, PA; Louis, et al. (2002) Basic Histology : Text 및 Atlas, McGraw-Hill, New York, NY].
예를 들면, 항원성 단편, 리더 서열, 단백질 폴딩, 작용성 도메인, 글리코실화 부위, 및 서열 정렬을 측정하기 위한 소프트웨어 패키징(software packages) 및 데이타베이스가 이용가능하다[참조: 예를 들면, GenBank, Vector NTI® Suite (Informax, Inc, Bethesda, MD); GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA); DeCypher® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada); Menne et al. (2000) Bioinformatics 16: 741-742; Menne et al. (2000) Bioinformatics Applications Note 16:741-742; Wren et al. (2002) Comput. Methods Programs Biomed. 68: 177-181; von Heijne (1983) Eur. J. Biochem. 133: 17-21; von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14:4683-4690].
실시예 2
항-사람 IL-23p19 항체의 생성 및 사람화
항-사람 IL-23p19 항체는 IL-23p19 녹아웃 마우스(knockout mice)를 키메라 IL-23 (사람 p19:마우스 p40)으로 면역화시켜 생성시켰다. 모노클로날 항체를 표준 방법으로 제조하였다.
쥐 항체 13B8(마우스 IgG1/카파)의 가변 도메인의 사람화를 필수적으로 PCT 공개특허공보 제WO 2005/047324호 및 제WO 2005/047326호에 기술된 바와 같이 수행하였다.
요약하면, 항체 13B8의 비-사람 VH 도메인의 아미노산 서열을 5개의 사람 VH 배선 아미노산 서열의 그룹과 비교하였다: 하나는 소그룹 IGHV1 및 IGHV4로부터 대표적인 것이고 3개는 소그룹 IGHV3로부터 대표적인 것이다. VH 소그룹은 문헌[참조: M.-P. Lefranc (2001) "Nomenclature of the Human Immunoglobulin Heavy (IGH) Genes", Experimental and Clinical Immunogenetics 18:100-116]에 나열되어 있다. 항체 13B8은 소그룹 VH1에서 사람 중쇄 배선 DP-14에 대해 최대로 기록되었다.
항체 13B8의 VL 서열은 VL의 카파 소그룹의 것이다. 비-사람 VL 도메인의 아미노산 서열을 4개의 사람 VL 카파 배선 아미노산 서열의 그룹과 비교하였다. 4개의 그룹은 문헌[참조: V. Barbie & M.- P. Lefranc (1998) "The Human Immunoglobulin Kappa Variable (IGKV) Genes and Joining (IGKJ) Segments", Experimental and Clinical Immunogenetics 15: 171-183 및 M.-P. Lefranc (2001) "Nomenclature of the Human Immunoglobulin Kappa (IGK) Genes", Experimental and Clinical Immunogenetics 18:161-174]에 나열된 4개의 확립된 사람 VL 소그룹 각각으로부터 대표적인 것을 포함한다. 4개의 소그룹은 또한 문헌[참조: Kabat et al. (1991 - 5th Ed.) "Sequences of Proteins of Immunological Interest", U. S. Department of Health and Human Services, NIH Pub. 91-3242, pp. 103-130]에 나열된 4개의 소그룹에 상응한다. 항체 13B8는 소그룹 VLkI내 사람 경쇄 배선 Z-012에 대해 최대로 기록되었다.
추가의 아미노산 치환을 상기 논의된 바와 같이, 및 서열 24 내지 26에 기재된 바와 같이, CDRH2 속에서 제조하였다. 사람화된 13B8 중쇄 및 경쇄 가변 도메 인을 사람 γ1(IgG1) 중쇄 고정 도메인 및 카파 경쇄 고정 도메인 각각을 암호화하는 벡터내로 클로닝하였다. 수득되는 사람화된 13B8 항체(IgG1/카파)는 사람 및 시노몰구스 원숭이 IL-23에 결합하지만, 사람 IL-12, 사람 p40 또는 마우스 IL-23에 결합하지 않는다.
가변성 중쇄 및 경쇄의 표적 아미노산 서열이 측정되면, 완전한 길이의 사람화된 항체를 암호화하는 플라스미드를 생성할 수 있다. 플라스미드 서열은 쿤켈 돌연변이유발(Kunkel mutagenesis)[참조: Kunkel (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A 82:488-492]을 사용하여 DNA 서열이 표적 사람화된 항체 서열로 변화하도록 변경시킬 수 있다. 유사하게, 코돈 최적화를 수행하여 잠재적으로 최적 발현을 위해 제공할 수 있다.
본원에 기술된 다른 항체의 사람화된 형태는 사람화된 13B8 항체에 대해 기술된 사람 골격을 치환하거나, 또는 당해 실시예에 기술된 방법으로 가장 우수한 사람 골격의 선택을 위한 과정을 반복함으로써 작제할 수 있다. 사람화된 항체 13B8의 부분으로서 본원에 기술된 사람 골격의 치환은 13B8과 유사한 CDR 서열을 갖는 항체에 가장 적절하다.
실시예 3
KinExA 기술을 사용한 사람화된 항-사람 IL-23에 대한 평형 해리 상수(Kd)의 측정
항 사람 IL-23 항체에 대한 평형 해리 상수(Kd)를 KinExA 3000 장치[제조원: 사피다인 인스트루먼츠 인크.(Sapidyne Instruments Inc.), 미국 아이다호 보이세 소재]를 사용하여 측정한다. KinExA는 항체, 항원 및 항체-항원 복합체의 혼합물내 복합체화되지 않은 항체의 농도를 측정하는 것을 기초로 하는 역학적 배출 검정법(Kinetic Exclusion Assay method)의 원리를 사용한다. 유리된 항체의 농도는 혼합물을 매우 짧은 기간 동안 고체-상 고정화된 항원에 노출시켜 측정한다. 실제로, 이는 용액상 항원-항체 혼합물을 유동 세포내에 프랩핑된 항원-피복된 입자에 유동 통과시킴으로써 달성된다. 장치에 의해 생성된 데이타는 통상의 소프트웨어를 사용하여 분석한다. 평형 상수는 다음 전제를 기초로 한 수학적 이론을 사용하여 계산한다.
1. 결합은 평형에 대한 가역적 결합 상수를 따른다:
kon [Ab] [Ag] = koff[AbAg]
2. 항체 및 항원은 1:1로 결합하며 총 항체는 항원-항체 복합체 및 유리된 항체와 동등하다.
3. 장치 시그날은 유리된 항체 농도와 선형적으로 관련되어 있다.
98 마이크론 PMMA 입자[제조원: 사피다인(Sapidyne), 제품 번호 제440198호]를 사피다인의 지침("Protocol for coating PMMA particles with biotinylated ligands having short or nonexistent linker arms")에 따라 바이오티닐화된 IL-23으로 피복시킨다. 당해 시험에서, 바이오티닐화된 IL-23은 마우스 IL-12p40 및 사람 EL-23p19의 복합체를 포함한다. EZ-연결된 TFP PEO-바이오틴[제조원: 피어 스(Pierce), 제품 번호 제21219호]를 사용하여 제조업자의 추천(Pierce bulletin 0874)에 따라 바이오티닐화된 IL-23을 제조한다. 모든 시험 과정을 KinExA 3000 매뉴얼에 따라 수행한다.
항-IL-23p19 항체의 결합은 경쟁 결합 검정에서 평가하며, 여기서, 항체는 2개의 이황화물-연결된 쇄, 사람 p19(서열 47) 및 사람 p40(진뱅크 수탁 번호 제P29460호)를 일련의 농도로 포함하는 연결되지 않은(본래의) 사람 IL-23과 함께 예비-항온처리한다. 이후에, 결합되지 않은 항체 및 IL-23-결합된 항체의 혼합물을 포함하는 수득되는 샘플을 선행의 단락에 기술된 rhIL-23["엘라스티킨(elastikine)"] PMMA 입자위로 유동시킨다. 이후에, PMMA 입자에 의해 포획된 항체의 양을 형광적으로 표지된 제2 항체를 사용하여 검출한다.
표 3은 각각의 항체에 대한 반복된 측정을 포함하는, KinExA 분석의 결과를 나타낸다.
KinExA로 측정된 Kd 값
항체 Kd(pM)
m13B8 15, 52
hum13B8-a 64 ± 40, 110, 365, 447
hum13B8-b 47, 470, 520
hum13B8-c 47, 52, 470
실시예 4
BIAcore 기술을 사용한 사람화된 항-사람 IL-23p19 항체에 대한 평형 해리 상수(Kd)의 측정
BIAcore 측정은 필수적으로 공공 양도된 미국 공개특허공보 제2007/0048315호의 실시예 4에 기술된 바와 같이 수행한다. 요약하면, 리간드(항-IL-23 mAb)를 표준 아민-커플링 과정을 사용하여 BIAcore CM5 센서 칩상에 고정화한다. IL-23을 PBS 속에서 희석시켜 각종 농도를 생산한다. 각종 상호작용에 대한 역학 상수를BIA평가 소프트웨어 3.1을 사용하여 측정한다. Kd는 계산된 해리 및 연합율 상수를 사용하여 측정한다.
표 4는 중복 측정을 포함하는, BIAcore에 의해 측정된 것으로서 Kd 값을 제공한다.
BIAcore에 의한 Kd 측정
항체 Kd(pM)
m13B8 173, 228
hum13B8-a 72-104, 68-100, 81-129
hum13B8-b 77-129, 69-116
hum13B8-c 92-153
실시예 5
중화 항-IL-23 항체의 평가를 위한 증식 생검정
IL-23을 생물학적으로 중화시키는 모노클로날 항체의 능력을 재조합체 IL-23 수용체를 발현하는 세포를 사용하는 단-기간 증식 생검정의 적용으로 평가하였다. IL-23R 형질감염 세포주(Ba/F3-2.21o-hIL-23R)은 hIL-23R 및 hIL-12Rβ1 둘다를 발현하며, 사람 IL-23 및 시노몰구스 원숭이 IL-23 둘다에 대해 반응성이다. 형질감염체 Ba/F3-2.21o 세포는 사람 IL-23에 대해 반응하여 증식하며 당해 반응은 중화 항-IL-23 항체에 의해 억제될 수 있다. 항체를 투여량-반응 곡선의, 플래튜(plateau) 근처 및 EC50 초과의 선형 영역내에서 선택한 IL-23의 농도에 대해 적정한다. 이의 증식 또는 결손을 대사 활성의 검출을 기초로 하는 성장 지시 염료인, 알라마 블루(Alamar Blue)를 사용한 비색계 수단으로 측정한다. IL-23을 중화시키는 항체의 능력을 이의 IC50 값, 또는 IL-23 증식의 최대 1/2 억제를 유도하는 항체의 농도로 평가한다.
Ba/F3 형질감염체를 RPMI-1640 배지, 10% 태아 소 혈청, 50 μM 2-머캅토에탄올, 2 mM L-글루타민, 50 μg/mL 페니실린-스트렙토마이신, 및 10 ng/mL 마우스 IL-3 속에 유지시킨다. Ba/F3 증식 생검정을 RPMI-1640 배지, 10% 태아 소 혈청, 50 μM 2-머캅토에탄올, 2 mM L-글루타민, 및 50 μg/mL 페니실린-스트렙토마이신 속에서 수행한다.
검정을 웰당 150 μL 중 96-웰 평편 바닥 플레이트[팔콘(Falcon) 3072 또는 유사] 속에서 수행한다. 항-IL-23 항체를 IL-23과 함께 30 내지 60분 동안 예비-항온처리한 후, 세포를 첨가하여 40 내지 48시간 동안 항온처리한다. 알라마 블루[제조원: 바이오소스(Biosource) 제품 번호 #DAL1100]를 가하고 5 내지 12시간 동안 발색시켰다. 이후에, 흡광도를 570 nm 및 600 nm[VERSAmax Microplate Reader, 제조원: 몰레큘러 프로브스(Molecular Probes), 미국 오레곤 유진 소재]에서 판독하고, OD57O-6O0을 수득한다.
세포를 일반적으로 3-8 x 105/mL의 밀도에서 건강한 성장율로 사용하였다. 세포를 계수하고, 펠렛화하고, 생검정 배지 속에서 2회 세척하고 플레이팅을 위해 적절한 밀도로 현탁시켰다. IL-23 투여량 반응을 IL-23의 일련 1:3 희석(생검정 배지 중 25:50 μL)을 사용하여 수행한다. 3 ng/ml (50pM)의 IL-23 농도를 항체 검정에서 사용하기 위해 선택한다. 중화 항체 투여량 반응을 또한 일련의 1:3 희석(생검정 배지 중 25:50 μL)을 사용하여 수행한다.
IC50 값을 GraphPad Prism® 3.0 소프트웨어[제조원; 그라파드 소프트웨어 인크(Graphpad Software Inc.), 미국 캘리포니아 산 디에고 소재]를 사용하여 측정하며, 여기서, 흡광도는 사이토킨 또는 항체 농도에 대해 플롯팅하고 IC50 값은 S자 투여량-반응의 비-선형 회귀(곡선 적응)을 사용하여 측정한다.
표 5는 항-IL-23p19 항체에 의한 Ba/F3 세포 증식의 차단에 대한 IC50 값을 나타낸다. 다수 측정에 대한 값을 일부 항체에 포함시킨다.
항-IL-23 항체에 의한 Ba/F3 세포 증식의 차단에 대한 IC50 값
항체 IC50(pM)
m13B8 700
hum13B8-a 1100, 1100
hum13B8-b 1200, 1100
hum13B8-c 1100, 2200
실시예 6
IL-17 생산을 기초로 한 IL-23에 대한 마우스 비장세포 검정
본 발명의 항-IL-23p19 항체의 생물학적 활성을 문헌[참조: Aggarwal et al. (2003) J. Biol. Chem. 278:1910 및 Stumhofer et al. (2006) Nature Immunol. 7:937]에 기술된 바와 같이 필수적으로 비장세포 검정을 사용하여 평가한다. 마우스 비장세포 검정은 쥐 비장세포에 의한 IL-17 생산 수준으로서 샘플 중 IL-23의 활성을 측정한다. 이후에, 항-IL-23p19 항체의 억제 활성을 제공된 샘플 중 IL-23 활성을 50%(IC50) 까지 감소시키는데 요구되는 항체의 농도를 측정함으로써 평가한다. 당해 검정으로 측정된 것으로서 IC50은 평형 해리 결합 상수(Kd)보다 크거나 동일한데, 즉, Kd는 IC50과 동일하거나 낮을 수 있다. 통상적으로 보다 낮은 IC50 및 Kd 값은 보다 높은 활성 및 친화도를 반영한다.
요약하면, 비장을 8 내지 12주령의 암컷 C57BL/6J 마우스[제조원: 잭슨 래보러토리스(Jackson Laboratories), 미국 마인 바 하보 소재]로부터 입수한다. 비장을 분쇄하고, 2회 펠렛화하고 세포 염색기(70 μm 나일론)을 통해 여과한다. 회수된 세포를 96-웰 플레이트(4 X 105 세포/웰) 속에서 사람 IL-23 (10 ng/ml, ~170 pM) 및 마우스-항-CD3e 항체(1 μg/ml)[제조원: 비디 파밍겐(BD Pharmingen), 미국 뉴저지 프랭클린 레이크스 소재]의 존재하에서 검정될 항-IL-23p19 항체를 첨가하거나 첨가하지 않고 배양한다. 항 IL-23p19 항체를 10 μg/ml에서 및 일련의 3-배 희석으로 가한다. 세포를 72시간 동안 배양하고, 펠렛화하며 상층액을 샌드위치 ELISA에 의해 IL-17 수준에 대해 검정한다.
IL-17 ELISA를 다음과 같이 수행한다. 플레이트를 포획된 항 IL-17 항체(100 ng/웰)로 밤새 4℃에서 피복하고, 세척하며 차단한다. 샘플 및 표준물을 가하고 실온에서 진탕시키면서 2시간 동안 항온처리한다. 플레이트를 세척하고, 바이오티닐화된 항-IL-17 검출 항체(100 ng/웰)를 가하고 1시간 동안 실온에서 진탕하면서 항온처리한다. 포획 및 검출 항체는 둘다 마우스 IL-17에 결합하지만 교차-차단하지 않는 상이한 항체이다. 플레이트를 세척하고, 결합된 검출 항체를 스트렙트아비딘-HRP(서양고추냉이 퍼옥시다제) 및 TMB(3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘)을 사용하여 검출한다. 이후에, 플레이트를 450 내지 650 nm에서 판독하고 샘플중 IL-17의 농도를 표준물과 비교하여 계산한다.
일부 중복 측정을 포함한, 비장세포 검정 IC50 값은 표 6에서 제공한다.
비장세포 검정 IC50
항체 클론 IC50(pM)
m13B8 28, 54, 64
hum13B8-a 71-108
hum13B8-b 110, 221
hum13B8-c 515
실시예 7
항-IL-23p19 항체 13B8-b의 제제의 특성화
사람화된 항-IL-23p19 항체 13B8-b를 서열 49 및 50에 각각 제공한 것으로서, 13B8-b의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 DNA 서열을 지닌 벡터를 사용하여 포유동물 세포로부터 제조한다.
필수적으로 실시예 4(상기 참조)에 기술된 바와 같이, BIAcore 분석에 의해 검정하는 경우, Hum 13B8-b는 사람 IL-23에 대해 297 pM의 Kd를 갖는다.
hum13B8-b의 생물학적 활성을 필수적으로 실시예 5에 기술된 바와 같이, Ba/F3 증식 검정을 사용하여 평가하는데, 단, 50pM 대신 340 pM의 IL-23을 사용하여 증식을 자극시킨다. 항-IL-23p19 항체(IC50)의 억제 활성은 제공된 샘플 중 IL-23 활성을 50%까지 감소시키는데 요구되는 항체의 농도를 측정함으로써 평가한다. 통상적으로, 보다 낮은 IC50 값은 보다 높은 활성을 반영한다. Huml3B8-b는 Ba/F3 증식 검정에서 187pM의 IC50을 나타낸다.
hum13B8-b의 생물학적 활성을 또한 필수적으로 실시예 6(상기 참조)에 기술된 바와 같이, 사람 비장 검정을 사용하여 평가하는데, 단, 비장 세포는 마우스 보다는 사람 비장으로부터 수득하며, 항-CD3e 항체는 사용하지 않고, IFN-γ는 IL- 17이외의 정보판독이다. 당해 검정은 사람 원발성 비장세포에 의한 IFN-γ 생산의 수준을 측정함으로써 샘플내 IL-23의 활성을 측정한다. 사람 비장세포를 다양한 농도의 항-IL-23p19 항체 hum13B8-b의 존재하에, 또는 항체의 부재하에 사람 IL-23 (170 pM)에 노출시킨다. IFN-γ를 샌드위치 ELISA로 검출한다. Hum13B8-b은 사람 비장세포 검정에서 59 내지 144 pM의 IC50을 나타낸다.
hum13B8-b의 생물학적 활성은, 필수적으로 문헌[Parham et al. (2002) J. Immunol. 168:5699]에 기술된 바와 같이, KIT225STAT-3 포스포릴화 검정을 사용하여 평가한다. 사람 KIT225 세포, 백혈구 T 세포주를 다양한 농도의 항-IL-23p19 항체 hum13B8-b의 존재하에, 또는 항체의 부재하에 138 pM 사람 IL-23으로 자극시킨다. IL-23 활성은 STAT3 포스포릴화의 수준을 검출함으로써 평가한다. Hum13B8-b는 KIT225 검정에서 130 pM의 IC50을 나타낸다.
실시예 8
사람화된 항-IL-23p19 항체 13B8-b에 대한 에피토프
사람 IL-23p19(서열 47)에 대한 사람화된 항체 13B8-b의 결합에 대한 에피토프를 X-선 결정학으로 측정하였다. 배위를 사람화된 항-IL-23p19 항체 13B8-b 및 p19 및 p40 소단위를 포함하는 연결되지 않은 사람 IL-23의 Fab 단편의 복합체에 대해 측정한다. 결정 구조를 측정하기 위해 사용된 IL-23에서 p40 소단위는, Asn222이 Gln으로 치환된 N222Q 치환을 갖는다. 사람 IL-23p19의 서열은 서열 47에서 발견되며, 사람 IL-12/IL-23 p40의 성숙한 형태의 서열은 진뱅크 수탁번호 제P29460호의 23 내지 328번 잔기에서 발견된다. 사람화된 항-IL-23p19 항체 13B8-b는 사람화된 13B8-b 중쇄(서열 7) 사람화된 13B8-b 경쇄(서열 14)를 포함한다. 결정화 조건은 15% 폴리에틸렌 글리콜 4000, 60 mM 나트륨 아세테이트, 100 mM 트리스-HCl(pH 8)이다. 결정은 또한 pH 8에서 또는 주변에서 다른 완충액을 사용하여 수득할 수 있다.
항체 13B-b상의 잔기들의 4.0Å내 IL-23 아미노산 잔기는 K20, T23, W26, S27, P30, E82, S95, L96, L97, P98, D99, PlOl, G103, Q104, H106, A107 및 L110을 포함한다. 추가의 잔기 L24, L85, T91, S1OO 및 V102는 5.0Å내에 있었다. IL-23p19 상의 아미노산 잔기는, 잔기의 특정 원자의 배위가 항체의 특정 원자의 배위의 제공된 거리내에 존재하는 경우 항체의 제공된 거리(예를 들면, 4.0Å 또는 5.0Å)내에 존재하는 것으로 고려된다.
이들 접촉된 잔기의 대부분은 IL-23p19의 주요 구조를 따라 2개의 주요 군집내에 속하는데, 첫번째 군집은 20 내지 30개 잔기를 포함하며(여기서, 11개의 잔기중 6개는 항체의 5.0Å이내에 존재하고 11개 중 5개는 4.0Å 이내에 존재한다), 두번째 군집은 잔기 80 내지 110개를 포함한다(여기서, 29개의 잔기 중 16개는 항체의 5.0Å내에 존재하고 29개 중 12개는 4.0Å내에 존재한다). 이들 군집은 IL-23p19의 11개 이상 길이의 연속된 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프를 정의하며 여기서, 잔기중 30%, 40%, 45%, 50% 또는 54% 이상은 항체의 4.0Å 또는 5.0Å내에 존재한다.
이들 군집중 하나 또는 둘다에 대해 결합하는 항체는 항체 13B8-b의 결합을 차단하는 것으로 여겨지며, 유사한 생물학적 활성을 나타내는 것으로 여겨진다.
표 7은 서열 목록내 서열의 간략한 기술을 제공한다.
Figure 112009056953562-PCT00002
Figure 112009056953562-PCT00003
Figure 112009056953562-PCT00004
SEQUENCE LISTING <110> Schering Corporation <120> Engineered Anti-IL-23p19 Antibodies <130> BP06597 <150> 60/891,409 <151> 2007-02-23 <160> 50 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 117 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Thr Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Asn Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr 20 25 30 Tyr Ile Gln Trp Val Lys Gln Ser Arg Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Ser Cys Tyr Asn Gly Ala Thr Arg Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Arg Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gln Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 116 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 His Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Phe Pro Val Arg Gly Ser Ala Asp Tyr Asn Glu Ile Phe 50 55 60 Glu Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ala 115 <210> 3 <211> 124 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Asp Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Val Asn Ser Tyr Tyr Asn Glu Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Asn Tyr Tyr Gly Arg Asn Tyr Gly Asp Tyr Phe Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 4 <211> 116 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Leu Glu Leu Val Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Phe 20 25 30 Phe Ile His Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Phe Pro Gly Asn His Asp Val Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Asp 65 70 75 80 Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Gly Asn Leu Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ala 115 <210> 5 <211> 116 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 His Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Glu Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ile Thr Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Met Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Asp Tyr Asn Glu Met Phe 50 55 60 Glu Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ala 115 <210> 6 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human frameworks, rodent CDRs <220> <221> DOMAIN <222> (1)..(116) <223> Variable Domain <400> 6 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ile Thr Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Asp Tyr Asn Glu Met Phe 50 55 60 Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 7 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human frameworks, rodent CDRs <220> <221> DOMAIN <222> (1)..(116) <223> Variable Domain <400> 7 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ile Thr Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Asp Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 8 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human frameworks, rodent CDRs <220> <221> DOMAIN <222> (1)..(116) <223> Variable Domain <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ile Thr Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Asp Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 9 <211> 113 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 9 Asn Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 10 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 10 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Trp Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 11 <211> 111 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 11 Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Ile Thr 20 25 30 Ser Asn Asp Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Ser Phe Thr 35 40 45 Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg 50 55 60 Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly 65 70 75 80 Ala Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser 85 90 95 Asn His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 12 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 12 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Val Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Val Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Asp Leu Lys Arg 100 105 <210> 13 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 13 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Arg Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Arg Tyr Phe Cys Gln His His Tyr Gly Ile Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 14 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human frameworks, rodent CDRs <220> <221> DOMAIN <222> (1)..(108) <223> Variable Domain <400> 14 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Ile Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 15 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 15 Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr Tyr Ile Gln 1 5 10 <210> 16 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 16 Gly Tyr Ile Phe Ser Ala Tyr Trp Met Thr 1 5 10 <210> 17 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 17 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Gly Ile Ser 1 5 10 <210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 18 Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Phe Phe Ile His 1 5 10 <210> 19 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 19 Gly Tyr Ile Phe Ile Thr Tyr Trp Met Thr 1 5 10 <210> 20 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 20 Tyr Ile Ser Cys Tyr Asn Gly Ala Thr Arg Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 21 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 21 Gln Ile Phe Pro Val Arg Gly Ser Ala Asp Tyr Asn Glu Ile Phe Glu 1 5 10 15 Gly <210> 22 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 22 Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Val Asn Ser Tyr Tyr Asn Glu Arg Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 23 Trp Ile Phe Pro Gly Asn His Asp Val Glu Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 24 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 24 Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Asp Tyr Asn Glu Met Phe Glu 1 5 10 15 Gly <210> 25 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rodent CDR with one amino acid substitution <400> 25 Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Asp Tyr Asn Glu Lys Phe Glu 1 5 10 15 Gly <210> 26 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rodent CDR with four amino acid substitutions <400> 26 Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Asp Tyr Ala Gln Lys Leu Gln 1 5 10 15 Gly <210> 27 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 27 Gln Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 28 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 28 Gly Gly Gly Gly Phe Ala Tyr 1 5 <210> 29 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 29 Gly Gly Asn Tyr Tyr Gly Arg Asn Tyr Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 30 Gly Gly Gly Asn Leu Pro Tyr 1 5 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 31 Gly Gly Gly Gly Phe Ala Tyr 1 5 <210> 32 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 32 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn 1 5 10 15 <210> 33 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 33 Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 34 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 34 Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Ile Thr Ser Asn Asp Ala Asn 1 5 10 <210> 35 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 35 Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 36 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 36 Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 37 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 37 Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser 1 5 <210> 38 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 38 Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 39 Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro 1 5 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 40 Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 41 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 41 Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 42 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 42 Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 43 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 43 Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 44 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 44 Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val 1 5 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 45 Gln His His Tyr Gly Ile Pro Phe Thr 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 46 Gln His His Tyr Gly Ile Pro Phe Thr 1 5 <210> 47 <211> 170 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47 Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln Cys Gln Gln 1 5 10 15 Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His Pro Leu Val 20 25 30 Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr Thr Asn Asp 35 40 45 Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly Leu Arg 50 55 60 Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly Leu Ile Phe 65 70 75 80 Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu Pro Ser Leu 85 90 95 Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu Leu Gly Leu 100 105 110 Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr Gln Gln Ile 115 120 125 Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu Leu Arg Phe 130 135 140 Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala Ala Arg Val 145 150 155 160 Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro 165 170 <210> 48 <211> 175 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 48 Val Pro Arg Ser Ser Ser Pro Asp Trp Ala Gln Cys Gln Gln Leu Ser 1 5 10 15 Arg Asn Leu Cys Met Leu Ala Trp Asn Ala His Ala Pro Ala Gly His 20 25 30 Met Asn Leu Leu Arg Glu Glu Glu Asp Glu Glu Thr Lys Asn Asn Val 35 40 45 Pro Arg Ile Gln Cys Glu Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly Leu Lys Asp 50 55 60 Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile Arg Gln Gly Leu Ala Phe Tyr 65 70 75 80 Lys His Leu Leu Asp Ser Asp Ile Phe Lys Gly Glu Pro Ala Leu Leu 85 90 95 Pro Asp Ser Pro Met Glu Gln Leu His Thr Ser Leu Leu Gly Leu Ser 100 105 110 Gln Leu Leu Gln Pro Glu Asp His Pro Arg Glu Thr Gln Gln Met Pro 115 120 125 Ser Leu Ser Ser Ser Gln Gln Trp Gln Arg Pro Leu Leu Arg Ser Lys 130 135 140 Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Leu Ala Ile Ala Ala Arg Val Phe 145 150 155 160 Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Thr Glu Pro Leu Val Pro Thr Ala 165 170 175 <210> 49 <211> 1398 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Human constant and framework regions, rodent CDRs <400> 49 atggctgtgc tggggctgct gttctgcctg gtgacattcc caagctgtgt gctgtcccag 60 gtgcagctgg tgcagtctgg cgctgaggtg aagaagcctg gcgcctccgt gaaggtctcc 120 tgcaaggctt ctggctacat cttcatcacc tactggatga cctgggtgcg gcaggcccct 180 ggccaggggc tggagtggat gggccagatc ttccctgcca gcggctctgc agactacaac 240 gagaagttcg aaggcagagt caccatgacc acagacacat ccaccagcac agcctacatg 300 gagctgagga gcctgagatc tgacgacacc gccgtgtatt actgtgccag aggcggtggc 360 ggattcgctt actggggcca gggcaccctg gtcaccgtct ccagcgctag caccaagggc 420 ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 480 ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 540 ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 600 agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 660 aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 720 actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc 780 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 840 gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 900 gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 960 gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 1020 gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1080 ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag 1140 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1200 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1260 tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1320 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1380 ctgtctccgg gtaaatga 1398 <210> 50 <211> 702 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Human constant and framework regions, rodent CDRs <400> 50 atggctccag tgcagctgct ggggctgctg gtgctgttcc tgccagccat gagatgtgat 60 atccagatga cccagtctcc atcctccctg tctgcctctg tgggcgacag agtgaccatc 120 acctgcagga ccagcgagaa catctacagc tacctggcct ggtatcagca gaagccaggg 180 aaggccccta agctgctgat ctataacgcc aagaccctgg ctgaaggggt gccatccagg 240 ttcagcggca gcggctctgg gacagacttc accctgacca tcagcagcct gcagcctgag 300 gacttcgcca cctactactg tcagcaccac tacggaattc cattcacctt cggccagggc 360 accaaggtgg agatcaagcg tacggtggct gcaccatctg tgttcatctt ccctccatct 420 gatgagcagc tgaagtctgg aactgcctcc gtggtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 480 agagaggcca aggtgcagtg gaaggtggat aacgccctcc agagcggcaa ctcccaggag 540 agcgtgacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tgagcagcac cctgaccctg 600 agcaaagcag actacgagaa acacaaggtg tacgcctgcg aggtgaccca tcagggcctg 660 agcagccccg tgacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt aa 702

Claims (42)

  1. 서열 32 내지 46으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 CDR 서열을 포함하는, 항체 경쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 사람 IL-23p19에 결합하는 결합 화합물.
  2. 서열 15 내지 31로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 CDR 서열을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인, 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 사람 IL-23p19에 결합하는 결합 화합물.
  3. 제1항에서 정의한 바와 같은 항체 경쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편; 및
    제2항에서 정의한 바와 같은 항체 중쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 사람 IL-23p19에 결합하는 결합 화합물.
  4. 제1항에 있어서, 서열 32 내지 46으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 2개 이상의 CDR 서열을 포함하는, 항체 경쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 결합 화합물.
  5. 제2항에 있어서, 서열 15 내지 31로 이루어진 그룹 중에서 선택된 2개 이상 의 CDR 서열을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 결합 화합물.
  6. 제3항에 있어서, 제4항에서 정의한 바와 같은 항체 경쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편; 및
    제5항에서 정의한 바와 같은 항체 중쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 결합 화합물.
  7. 제4항에 있어서, 서열 32 내지 46으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 3개의 CDR 서열을 포함하는, 항체 경쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 결합 화합물.
  8. 제5항에 있어서, 서열 15 내지 31로 이루어진 그룹 중에서 선택된 3개의 CDR 서열을 포함하는, 항체 중쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 결합 화합물.
  9. 제6항에 있어서, 제7항에서 정의한 바와 같은 항체 경쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편; 및
    제8항에서 정의한 바와 같은 항체 중쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 결합 화합물.
  10. 서열 32 내지 36으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 CDRL1;
    서열 37 내지 41로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 CDRL2; 및
    서열 42 내지 46으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 CDRL3을 포함하는, 경쇄 가변 도메인 또는 이의 결합 단편을 포함하는 사람 IL-23p19에 결합하는 결합 화합물.
  11. 서열 15 내지 19로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 CDRH1;
    서열 20 내지 26으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 CDRH2; 및
    서열 27 내지 31로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 CDRH3을 포함하는, 중쇄 가변 도메인 또는 이의 결합 단편을 포함하는 사람 IL-23p19에 결합하는 결합 화합물.
  12. 제10항에서 정의한 바와 같은 항체 경쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편; 및
    제11항에서 정의한 바와 같은 항체 중쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 사람 IL-23p19에 결합하는 결합 화합물.
  13. 서열 36의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 CDRL1;
    서열 41의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 CDRL2; 및
    서열 46의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 CDRL3를 포함하고, 여기서, 각각의 변이체는 5개 이하의 보존적으로 변형된 아미노산 치환을 포함하는, 경쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 사람 IL-23에 결합하는 결합 화합물.
  14. 제13항에 있어서, 경쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편이 서열 14의 1번 내지 108번 잔기를 포함하는 결합 화합물.
  15. 서열 19의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 CDRH1;
    서열 24 내지 26으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 CDRH2; 및
    서열 31의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 CDRH3를 포함하고, 여기서, 각각의 변이체는 5개 이하의 보존적으로 변형된 아미노산 치환을 포함하는, 중쇄 가변 도메인 또는 이의 결합 단편을 포함하는, 사람 IL-23에 결합하는 결합 화합물.
  16. 제15항에 있어서, 중쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편이 서열 6 내지 8의 1번 내지 116번 잔기로 이루어진 그룹 중에서 선택된 서열을 포함하는 결합 화합물.
  17. 제13항에서 정의한 바와 같은 항체 경쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편; 및
    제15항에서 정의한 바와 같은 항체 중쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 사람 IL-23p19에 결합하는 결합 화합물.
  18. 제14항에서 정의한 바와 같은 항체 경쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편; 및
    제16항에서 정의한 바와 같은 항체 중쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 사람 IL-23p19에 결합하는 결합 화합물.
  19. 제18항에 있어서, 서열 14의 서열을 포함하는 경쇄; 및 서열 6 내지 8로 이루어진 그룹 중에서 선택된 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 결합 화합물.
  20. 서열 14의 1번 내지 108번 잔기의 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편; 및
    서열 6 내지 8의 1번 내지 116번 잔기로 이루어진 그룹 중에서 선택된 서열 또는 이의 변이체를 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고, 여기서, 각각의 변이체는 20개 이하의 보존적으로 변형된 아미노산 치환을 포함하는, 사람 IL-23에 결합하는 결합 화합물.
  21. 서열 14의 1번 내지 108번 잔기의 서열로 필수적으로 이루어진 항체 경쇄 가 변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편; 및
    서열 6 내지 8의 1번 내지 116번 잔기로 이루어진 그룹 중에서 선택된 서열로 필수적으로 이루어진 항체 중쇄 가변 도메인 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 사람 IL-23에 결합하는 결합 화합물.
  22. 서열 14의 1번 내지 108번 잔기와 적어도 90% 상동성을 갖는 경쇄 가변 도메인; 및
    서열 6 내지 8의 1번 내지 116번 잔기로 이루어진 그룹 중에서 선택된 서열과 적어도 90% 상동성을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 사람 IL-23에 결합하는 결합 화합물.
  23. 서열 47의 20번 내지 30번 잔기 또는 82번 내지 110번 잔기를 포함하는 에피토프에서 사람 IL-23에 결합하는 결합 화합물.
  24. 제23항에 있어서, 서열 47의 20번 내지 30번 잔기 또는 82번 내지 110번 잔기를 포함하는 에피토프에 결합하는 결합 화합물.
  25. 제24항에 있어서, 서열 47의 잔기 K20, T23, W26, S27, P30, E82, S95, L96, L97, P98, D99, PlOl, G103, Q104, H106, A107 및 L110을 포함하는 에피토프에 결합하는 결합 화합물.
  26. 제19항에 따른 결합 화합물이 교차-차단 검정에서 사람 IL-23에 결합하는 것을 차단할 수 있는 항체.
  27. 제17항에 따른 결합 화합물의 경쇄 가변 도메인 또는 중쇄 가변 도메인 중 적어도 하나를 암호화하는 분리된 핵산.
  28. 숙주 세포가 벡터로 형질감염되는 경우, 숙주 세포에 의해 인지된 조절 서열에 작동적으로 연결된 제27항에 따른 핵산을 포함하는 발현 벡터.
  29. 제28항에 따른 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  30. 제29항에 따른 숙주 세포를, 핵산 서열이 발현됨으로써 경쇄 및 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드를 생산하는 조건하에 배양 배지 속에서 배양하는 단계; 및
    숙주 세포 또는 배양 배지로부터 폴리펩타이드를 회수하는 단계를 포함하는, 폴리펩타이드의 생산 방법.
  31. 제17항에 있어서, γ1 사람 중쇄 고정 영역 또는 이의 변이체를 포함하는 중쇄 고정 영역을 추가로 포함하고, 여기서, 고정 영역 변이체는 20개 이하의 보존적 으로 변형된 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체를 추가로 포함하는 결합 화합물.
  32. 제17항에 있어서, γ4 사람 중쇄 고정 영역 또는 이의 변이체를 포함하는 중쇄 고정 영역을 추가로 포함하고, 여기서, 고정 영역 변이체는 20개 이하의 보존적으로 변형된 아미노산 치환을 포함하는 결합 화합물.
  33. 제17항에 있어서, Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, scFv, F(ab')2, 및 디아바디(diabody)로 이루어진 그룹 중에서 선택된 항체 단편인 결합 화합물.
  34. 면역 반응의 제어가 요구되는 사람 대상체에게 IL-23의 생물학적 활성을 차단시키는데 효과적인 양의 제17항에서 정의한 바와 같은 IL-23에 대해 특이적인 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여함을 포함하여, 사람 대상체에서 면역 반응을 제어하는 방법.
  35. 제34항에 있어서, 면역 반응이 염증 반응인 방법.
  36. 제35항에 있어서, 대상체가 관절염, 건선 및 염증성 창자병으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 방법.
  37. 제34항에 있어서, 면역 반응이 자가면역 반응인 방법.
  38. 제37항에 있어서, 대상체가 다발경화증, 전신홍반루푸스 및 당뇨병으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 질환을 갖는 방법.
  39. 제34항에 있어서, 대상체가 암을 가지며 면역 반응이 Th17 반응인 방법.
  40. 제34항에 있어서, 면역제어제 또는 소염제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  41. 제17항에 따른 결합 화합물과 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물.
  42. 제41항에 있어서, 면역제어제 또는 소염제를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
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