KR20080072635A - 에쿠올 농도 조절제 - Google Patents

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Abstract

체내의 에쿠올 농도를 조절하는 작용을 가지며, 또한 장기간에 걸쳐 섭취가능한 안전성 높은 의약, 음식품 및 에쿠올 변환능을 가진 미생물의 선택배지와 검출방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
각종 당류를 유효성분으로 하는 에쿠올 농도 상승 또는 저하제; 당해 농도상승 또는 저하제 제조를 위한 각종 당류의 사용; 각종 당류를 유효량 투여하는 것을 특징으로 하는 에쿠올 농도 상승 또는 저하방법; 각종 당류를 함유하는 것을 특징으로 하는 에쿠올 변환능을 갖는 미생물의 선택배지; 및 당해 배지를 이용하는 에쿠올 변환능을 가진 미생물의 검출방법.

Description

에쿠올 농도 조절제 {EQUOL LEVEL REGULATOR}
발명은 에쿠올 농도 조절제에 관한 것으로, 상세하게는 에쿠올 변환능을 갖는 미생물의 선택배지 및 검출방법에 관한 것이다.
대두식품에 많이 함유된 이소플라본은 부정수소 등의 갱년기장애와 골조송증의 예방, 고지혈증과 동맥경화의 예방, 유방암과 전립선암의 예방 등에 효과가 있는 기능성 성분으로 알려져 있다. 최근의 연구에 의해 이소플라본의 하나인 다이제인은 체내의 장내 세균에 의해 에스트로겐 작용과 항산화작용이 보다 강력한 에쿠올(Equol)로 대사되는 것으로 밝혀지고, 에쿠올은 체내에서 상기 작용을 나타내는 주요한 유효성분의 하나로 주목되고 있다.
체내에서 다이제인으로부터 에쿠올로의 산생은 모든 사람에게서 일률적으로 이루어지는 것이 아니라, 그의 생산능에는 개인차가 있으며, 30∼50%의 사람이 에쿠올 생산능을 가진 것으로 보고되어 있다(비특허문헌 1). 따라서 에쿠올 생산능을 가진 장내 세균이나 에쿠올 생산을 촉진하는 물질의 탐색이 정력적으로 이루어지고 있으며, 에쿠올 생산능을 갖는 미생물로서 박테로이데스 오바터스, 스트렙토코카스 인터메디어스, 스트렙토코카스 콘스테라터스가 보고되어 있다(특허문헌 1). 또한, 다이제인 등과 함께 대두 올리고당을 배합한 사료를 가축에 투여하여 에쿠올 함유 계란을 얻는 것(특허문헌 2), 프락토올리고당(비특허문헌 2)과 트윈토오즈(R)(비특허문헌 3)가 에쿠올 생산을 촉진하는 것으로 보고되어 있다. 또한 특허문헌 1에서는 에쿠올 생산능을 가진 미생물의 유지, 증식성분으로서 유과올리고당, 대두올리고당, 락투로오즈, 락티톨, 프락토올리고당, 갈락토올리고당 등의 올리고당을 들 수 있으나, 이들 당류는 모두 미생물의 유지, 증식에 기여하는 일반적으로 알려져 있는 영양성분으로서 들 수 있는 것으로, 이들 당류가 에쿠올 생산에 대하여 어떻게 작용하는지는 전혀 나타나 있지 않다.
한편, 체내에서 에스트로겐 작용을 하는 물질은, 소위 환경호르몬(내분비 교란 화학물질)이라 하며, 인간에 있어서 정자의 감소와 생식능력의 저하, 유방암의 증가 등과 관여하는 것으로 추측되고 있다. 이소플라본이나 에쿠올도 식물성 에스트로겐 물질의 하나로 알려지고, 그의 과잉섭취나 체내에서의 과잉생산은 인간에게 악영향을 미칠 가능성이 있다. 특히, 에스트로겐 작용이 이소플라본에 비해 수십배 높은 에쿠올이 체내에서 과잉 생산되는 경우는 그의 생산을 억제할 필요가 있다. 그러나 에쿠올의 생산을 억제하는 미생물이나 물질로는 락토바실루스 가세리(비특허문헌 4), 이눌린(비특허문헌 5), 프락토올리고당(비특허문헌 6)만이 보고되어 있을 뿐이다,
따라서, 체내의 에쿠올 농도를 적절한 상태로 조절하는 것은 상기에 나타낸 각종 질환의 치료와 개선, 또는 그의 예방이라는 관점이나, 에쿠올의 환경호르몬과 유사한 작용에 의해 일어나는 악영향을 회피하는 관점에서 매우 중요하며, 체내의 에쿠올 농도를 조절하는 작용을 가지며, 또한 장기간에 걸쳐 섭취가능한 안전성 높은 물질이 요망되고 있다.
그러나 체내의 에쿠올 농도를 조절하는 미생물이나 물질은 상기에 보고된 것만으로, 그의 선택폭이 매우 좁고, 그의 효과도 충분하지 않았다. 또한, 에쿠올 변환능을 갖는 미생물의 선택배지도 보고되어 있지 않고, 에큐올 변환능을 갖는 미생물을 간편하고도 신속하게 스크리닝하거나 검체 내의 에쿠올 변환능을 가진 미생물을 검출하기 위한 선택배지의 확립이 절실히 요망되고 있다.
특허문헌 1: 국제공개99/7392 팜플렛
특허문호 2: 일본국 특허공개2003-310177호 공보
비특허문헌 1: Proc Soc Exp BioI Med, Vol. 217, No.3, p335-339(1998)
비특허문헌 2: J Nutr, Vol. 132, p2048-2054(2003)
비특허문헌 3: 2005년도 일본농예화학회대회 강연요지록, p27(2005)
비특허문헌 4: 식품연구결과정보, No.17, p18-19(2005)
비특허문헌 5: J Agric Food Chem, Vol. 52, No. 10, p2827-2831(2004)
비특허문헌 6: Arch Microbiol, Vol.183, No.1, p45-55(2005)
따라서, 본 발명은 체내의 에쿠올 농도를 조절하는 작용을 가지며, 장기간에 걸쳐 섭취 가능한 안전성이 높은 의약, 음식품, 아울러 에쿠올 변환능을 갖는 미생물의 선택배지 및 검출방법을 제공하는 것을 과제로 한다.
[과제를 해결하기 위한 수단]
본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위하여 예의 검토한 결과, 식경험이 풍부하고, 안전한 물질인 각종 당류가 에쿠올 농도를 상승 또는 저하시키는 작용을 가지는 것을 발견하고, 또한 에쿠올 농도를 상승시키는 작용을 갖는 당류를 함유하는 배지를 사용하면 에쿠올 변환능을 갖는 미생물을 선택적으로 증식시킬 수 있는 것을 발견하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
즉, 본 발명은 아도니톨, 아라비노오즈, 에리스리톨, 갈락토오즈, 락티톨, 멜레지토오즈, 트레할로오즈, 리보오즈, 소르보오즈, 크실로오즈, 이노시톨 및 솔비톨로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 유효성분으로 하는 에쿠올 농도 상승제; 에쿠올 농도 상승제를 제조하기 위한 이들 당류에서 선택되는 1종 이상의 사용; 및 이들 이들 당류에서 선택되는 1종 이상을 유효량으로 투여하는 것을 특징으로 하는 에쿠올 농도 상승 방법을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명은 글루코오즈, 락토오즈, 락투로오즈, 메리비오스, 라피노오즈, 수크로오즈 및 갈락토올리고당에서 선택되는 1종 이상을 유효성분으로 하는 에쿠올 농도 저하제; 에쿠올 농도 저하제를 제조하기 위한 이들 당류에서 선택되는 1종 이상의 사용; 및 이들 당류에서 선택되는 1종 이상을 유효량으로 투여하는 것을 특징으로 하는 에쿠올 농도 저하 방법을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명은 아도니톨, 아라비노오즈, 에리스리톨, 갈락토오즈, 락티톨, 멜레지토오즈, 트레할로오즈, 리보오즈, 소르보오즈, 크실로오즈, 이노시톨 및 솔비톨에서 선택되는 1종 이상을 함유하는 것을 특징으로 하는 에쿠올 변환능을 가진 미생물의 선택배지를 제공하는 것이다.
더욱이, 본 발명은 아도니톨, 아라비노오즈, 에리스리톨, 갈락토오즈, 락티톨, 멜레지토오즈, 트레할로오즈, 리보오즈, 소르보오즈, 크실로오즈, 이노시톨 및 솔비톨에서 선택되는 1종 이상을 함유하는 선택배지를 이용하여, 검체에 함유된 에쿠올 변환능을 가진 미생물을 배양하는 것을 특징으로 하는 검체 내의 에쿠올 변환능을 가진 미생물의 검출방법을 제공하는 것이다.
[발명의 효과]
본 발명에서 이용되는 각종 다당류는 우수한 에쿠올 농도의 상승 또는 저하작용을 가지며, 이들 당류는 식경험도 풍부하고 안전성이 높아, 본 발명의 에쿠올 농도 상승제 및 저하제는 체내의 에쿠올 농도를 적절한 상태로 조절하기 위해 일상적으로 안전하게 이용할 수가 있다. 또, 본 발명의 선택배지를 이용함으로써, 에쿠올 변환능을 가진 미생물을 간편, 신속하게 스크리닝하거나, 검체 내의 에쿠올 변환능을 가진 미생물을 검출할 수가 있다.
도 1은 에쿠올 변환에 미치는 각종 당류의 영향을 나타내는 그래프이다.
도 2는 선택배지에 의해 에쿠올 프로듀서의 분변을 계대 배양했을 때의 다이제인으로부터의 에쿠올 변환능의 변화를 나타낸 그래프이다.
발명을 실시하기 위한 최량의 형태 본 발명에 이용되는 다당류는 아도니톨(Adonitol), 아라비노오즈(Arabinose), 에리스리톨(Erythritol), 갈락토오즈(Galactose), 락티톨(Lactitol), 멜레지토오즈(Melezitose), 트레할로오 즈(Trehalose), 리보오즈(Ribose), 소르보오즈(Sorbose), 크실로오즈(Xylose), 이노시톨(Inositol), 솔비톨(Sorbitol), 글루코오즈(Glucose), 락토오즈(Lactose), 락투로오즈(Lacturose), 메리비오스(Melibiose), 라피노오즈(Raffinose), 수크로오즈(Sucrose), 갈락토올리고당(Galacto-oligosaccharide)이다. 이들 당류는 D체와 L체 중 어느 것을 사용해도 좋으나, 바람직하게는 D체이다. 또한 무수물, 5수화물 등의 수화물을 이용할 수도 있다.
트레할로오즈에는 2분자의 글루코오즈 결합양식의 상이에 의해 α,α체, α,β체 및 β,β체의 이성체가 존재하며, 본 발명에서는 이들 모두 이성체도 이용할 수 있지만 바람직하게는 α,α체이다.
본 발명에 이용되는 이노시톨에는 9종류의 입체이성체(myo-이노시톨 D(+)-이노시톨, L-(-)이노시톨, muco-이노시톨, scyll-이노시톨, cis-이노시톨, epi-이노시톨, allo-이노시톨, neo-이노시톨)이 존재한다. 천연에는 myo-이노시톨, D(+)-이노시톨, L-(-)이노시톨, muco-이노시톨, sxyll-이노시톨이 존재하나, 입수하기 용이함의 관점에서 myo-이노시톨을 사용하는 것이 바람직하다. 또, 이 이노시톨은 2종 이상의 입체 이성체를 병용할 수 있다.
본 발명에서 이용되는 갈락토올리고당이란, 분자 내에 적어도 1종 이상의 갈락토오즈 잔기가 있는 올리고당의 총칭으로서, 예를 들면 단당이 2개∼9개 결합한 당을 들 수 있다. 또한, 갈락토 올리고당으로서는 갈락토오즈가 β1-2 결합한 것, β1-3 결합한 것, β1-4 결합한 것, β1-6 결합한 것을 들 수 있는데, β1-4 결합한 것, β-1-6 결합한 것을 가진 갈락토 올리고당이 특히 바람직하다. 본 발명에서 는 이 갈락토 올리고당들의 혼합물을 이용할 수도 있다.
본 발명의 당류는 합성품이나 천연추출물 등의 시판품을 사용해도 좋고, 이들 당류를 많이 함유하는 천연 유래 소재로서 사용해도 좋다. 구체적으로 아도니톨을 많이 함유하는 소재로는 식물의 뿌리나 리보플라빈 함유 소재를 들 수 있고, 소르보오즈를 많이 함유하는 소재로는 식물의 과실 등을 들 수 있고, 멜레지토오즈를 많이 함유하는 소재로는 식물의 꿀이나 분비액을 들 수 있고, 트레할로오즈를 많이 함유하는 소재로는 버섯류를 들 수 있다.
각종 당류의 에쿠올 농도조절 활성은 에쿠올 생산능을 가진 인간(에쿠올 프로듀서)에게 분변을 채취하여, 채취한 분변에 에쿠올의 기질이 되는 다이제인(Daidzein)과 대상으로 하는 당류를 첨가하여 배양하고, 배양액 중의 에쿠올 농도를 측정하여 당류를 함유하지 않은 배양액 내의 에쿠올 농도와 비교하여, 다음 식에 삽입하여 조사할 수 있다.
에쿠올 농도조절활성(5)=(대상으로 하는 당류를 함유하는 배양액 내의 에쿠올농도)/(당류를 함유하지 않은 배양액 내의 에쿠올 농도)× 100
여기서 에쿠올 프로듀서에서 채취한 분변은 원심 세정처리한 것을 이용하는 것이 바람직하며, 배양은 인간의 장 관내의 상태를 재현하기 위하여 혐기배양에서 행하는 것이 바람직하다. 에쿠올 농도는 통상의 방법에 따라 측정할 수 있다. 즉, 액체크로마토그래프 또는 LC-MS로 측정하면 좋다. 본 발명의 에쿠올 농도 상승작용을 갖는 당류는 에쿠올 농도 조절 활성이 200% 이상의 당류이며, 특히 400% 이상인 당류가 더욱 바람직하다. 또한, 본 발명의 에쿠올 농도 저하 작용을 갖는 당류는 에쿠올 농도 조절 활성이 50% 이하인 당류이며, 특히 10% 이하인 당류가 보다 바람직하다.
에쿠올 프로듀서에서 채취한 분변에 다이제인과 항생물질을 첨가하여 혐기배양하면 다이제인으로부터의 에쿠올 생산이 저해되기 때문에 각종 당류에 의한 에쿠올 농도 조절작용은 분변 중에 존재하는 미생물을 통한 작용인 것으로 생각된다. 즉, 에쿠올 농도 상승 작용을 갖는 당류는 에쿠올 변환능을 가진 미생물을 선택적으로 증식시키거나 또는 미생물의 에쿠올 변환능을 항진하고 있는 것으로 추측되며, 에쿠올 농도 저하작용을 갖는 당류는 에쿠올 변환능을 가진 미생물의 증식을 선택적으로 저해하거나 또는 미생물의 에쿠올 변환능을 저해하고 있는 것으로 추측된다.
또한, 에쿠올 농도 상승 작용을 갖는 당류를 함유하는 배지는 에쿠올 변환능을 가진 미생물의 선택배지로 이용할 수 있다. 이 선택배지는 아도니톨, 아라비노오즈, 에리스리톨, 갈락토오즈, 락티톨, 멜레지토오즈, 트레할로오즈, 리보오즈, 소르보오즈, 크실로오즈, 이노시톨 및 솔비톨에서 선택되는 1종 이상을 함유하는데, 이들 당류 외에 에쿠올의 기질인 다이제인을 첨가하는 것이 바람직하다. 배지에 있어서, 예를 들면, 사용할 수 있는 상태로 했을 때의 전체량에 대하여 당류는 0.3∼3질량%, 다이제인은 0.0025∼0.25 질량%의 범위에서 사용 가능하다. 여기서 배지란, 배양에 곧바로 사용할 수 있는 상태에 있는 것 이외에, 물에 용해되어 멸균한 후에 배양에 제공하기 위한 것, 물 이외의 배지구성성분의 혼합물도 포함한다. 배지는 액체배지로서, 또는 한천 등을 가하여 고형배지로도 사용할 수 있다. 선택배지에는 목적으로 하는 미생물의 선택성을 높일 목적으로 항생물질을 첨가해도 좋고, 콜리스틴(Colistin)이나 클로람페니콜(Chloramphenicol) 등이, 사용할 수 있는 상태로 했을 때의 전체량에 대하여 1∼100㎍/ml의 범위에서 사용할 수 있다. 또한, 그 밖에 질소원 등의 적당한 성분을 가하여 사용해도 좋으나, 에쿠올 변환능을 가진 미생물의 증식을 저해하거나 미생물의 에쿠올 변환능을 저해하는 성분을 사용하는 것은 바람직하지 않다. 가할 수 있는 성분으로는 펩톤, 트립티케이스 펩톤(Trypticase peptone), 이스트엑기스, 헤민, 비타민 K1 등의 비타민, L-시스테인 염산염, KH2PO4, K2HPO4, NaCl, (NH4)2SO4, CaCl2, MgSO4 등을 들 수 있다. 본 발명의 배지중에 함유되는 성분 중, 에쿠올 농도 상승 작용을 갖는 당류와 다이제인 이외의 성분 조성은 PY배지, GAM 배지, BHI 배지 등의 조성으로 할 수가 있다.
이 선택배지를 이용하여 다이제인으로부터의 에쿠올 생산능(변환능)을 확인하면서 분변 등의 검체를 계대 배양해가면서 에쿠올 변환능을 가진 미생물을 스크리닝하는 것이 가능하게 되어 에쿠올 변환능을 가진 미생물을 얻을 수 있다. 이 선택배지에 의해 검체 내의 에쿠올 변환능을 가진 미생물도 검출도 가능하게 된다. 에쿠올 변환능을 가진 미생물의 검출은 본 발명의 배지를 이용하여 검체를 배양한 후, 배지중의 에쿠올 농도를 측정하여 에쿠올 농도 상승이 관찰된 경우에, 검체 중에는 에쿠올 변환능을 가진 미생물이 있는 것으로 판단함으로서 행할 수 있다. 여기서, 에쿠올 농도 상승에 대한 대조로는 본 발명에 이용되는 당류가 첨가하지 않은 것 이외는 공통 조성의 배지를 이용한 것을 사용하면 좋다.
본 발명의 검출방법의 검체에 특별한 제한은 없으나, 에쿠올 변환능을 가진 미생물을 스크리닝하는 경우는 에쿠올 변환능을 가진 미생물이 존재할 가능성이 있는 검체를 이용하는 것이 바람직하고, 특히 분변이나 소화관 내용물 등이 바람직하게 이용될 수 있다.
본 발명의 에쿠올 농도 상승 작용을 갖는 당류(아도니톨, 아라비노오즈, 에리스리톨, 갈락토오즈, 락티톨, 멜레지토오즈, 트레할로오즈, 리보오즈, 소르보오즈, 크실로오즈, 이노시톨, 솔비톨)는 체내, 혈중, 대장 내 등의 장내에서의 에쿠올 농도상승제로 이용할 수 있으며, 이들 당류를 유효성분으로 하는 에쿠올 농도 상승제는 부정수소 등의 갱년기장애, 골조송증, 고지혈증, 동맥경화, 유방암, 전립선암, 월경전증후군 등의 이소플라본이 관련된 각종 질병의 치료와 개선, 또는 그 예방 등의 목적에 이용할 수 있다. 여기서 본 발명의 에쿠올 농도 상승 작용을 갖는 당류는 단독으로 사용해도 좋고, 또한 2종류 이상 조합하여켜 사용해도 좋다.
또한, 본 발명의 당류는 에쿠올의 기질인 다이제인과 함께 사용하는 것이 바람직하다. 다이제인은 합성품이나 천연추출물 등의 시판품을 사용해도 좋고 다이제인을 많이 함유하는 천연소재나 그의 가공품으로 사용해도 좋다. 구체적으로 다이제인을 많이 함유하는 소재로는 대두, 완두콩, 칡, 클로버 등을 들 수 있는데, 이들의 가공품으로는 두부, 두유, 튀김, 낫도, 간장, 된장, 템페이(tempeh) 등을 들 수 있다. 또한, 일반적으로 이소플라본 배당체는 체내의 장내세균의 작용에 의해 어글리콘화되기 때문에 다이제인은 그 배당체 화합물인 다이진, 말로닐다이진, 아세틸다이진 등의 형태로 사용할 수도 있다.
또한, 본 발명의 당류는 본 발명의 선택배지로 얻어진 에쿠올 변환능을 가진 미생물과 함께 사용해도 좋다. 미생물을 사용할 경우 미생물의 형태가 특별히 제한되지 않아, 생균 또는 가열균체(사균체) 모두 사용해도 좋고, 또한 동결 건조시킨 것이어도 좋고, 또한 이들 미생물을 함유하는 배양물로서 이용할 수도 있다.
본 발명의 에쿠올 농도 저하 작용을 갖는 당류(글루코오즈, 락토오즈, 락투로오즈, 멜리비오스, 라피노오즈, 수크로오즈, 갈락토올리고당)는 체내, 혈중, 대장 내 등의 장내 등에서의 에쿠올 농도 저하제로 이용할 수 있으며, 이들 당류를 유효성분으로 하는 에쿠올 농도저하제는 에쿠올 환경호르몬과 유사한 작용에 의해 일어나는 정자의 감소와 생식능력 저하 등의 악영향을 예방할 목적으로 이용할 수 있다. 여기서, 본 발명의 에쿠올 농조 저하작용을 갖는 당류는 단독으로 사용해도 좋고, 또는 2종류 이상 조합하여 사용해도 좋다.
본 발명의 에쿠올 농조 상승제와 에쿠올 농조 저하제를 적절히 사용함으로써, 체내의 에쿠올 농도를 적절한 상태로 조절할 수 있다. 예를 들면, 환경호르몬에 대한 감수성이 높은 것으로 지적되고 있는 유소아나 소아 또는 임산부에게는 에쿠올 폭로 위험을 경감시키기 위해 본 발명의 에쿠올 농도 저하제를 사용한다. 반대로 부정수소 등의 갱년기 장애나 골다공증, 발암의 위험이 높아지는 중년기나 노년기에는 본 발명의 에쿠올 농도 상승제를 사용한다. 특히, 에쿠올 생산능을 갖지 않은 사람(에쿠올 비프로듀서)이나 에쿠올 생산능이 낮은 사람에게 에쿠올 농도 상승제를 사용하는 것은 이소플라본이 관련된 각종 질병을 일상적으로 예방하는 차원에서 매우 중요하다. 여기서, 체내에서의 에쿠올 생산능의 파악은 대상자의 소변이 나 혈중의 에쿠올 농도를 HPLC 등의 통상의 방법에 의해 측정하여 행할 수 있다.
본 발명의 에쿠올 농도 상승제와 에쿠올 농도 저하제의 유효성분인 각종 당류는 식경험도 풍부하고 안전성이 높은 것이므로, 이들을 에쿠올 농도 상승제 또는 에쿠올 농도 저하제로 사용할 경우, 그의 투여량의 엄격한 제한은 없다. 또한, 대상자나 적용 질환 등의 각종 사용 양태에 따라 얻어지는 효과가 다르기 때문에, 적절한 투여량을 설정하는 것이 바람직하며, 그의 투여량은 1일당 0.1mg∼100g이며, 특히 50mg∼50g이 바람직하다.
본 발명의 에쿠올 농도 상승제, 에쿠올 농도 저하제는 경구 투여 또는 비경구투여 어느 것에도 사용할 수 있으나, 경구 투여가 바람직하다. 투여시에는 유효성분인 각종 당류를 경구투여, 직장내 투여, 주사 등의 투여방법에 적합한 고체 또는 액체의 의약용 무독성 담체와 혼합하여 관용의 의약품 제제형태로 투여할 수 있다.
이와 같은 제제로는 정제, 과립제, 산제, 캅셀제 등의 고형제, 용액제, 현탁제, 유제 등의 액제, 동결건조제 등을 들 수 있다. 이 제제들은 제제상의 통상의 방법으로 제조할 수 있다. 상기의 의약용 무독성 담체로는 전분, 덱스트린, 지방산글리세리드, 폴리에틸렌글리콜, 히드록시에틸렌전분, 에틸렌글리콜, 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산에스테르, 아미노산, 젤라틴, 알부민, 물, 생리식염수 등을 들 있다. 또, 필요에 따라 안정화제, 습윤제, 유화제, 결합제, 등장화제, 부형제 등의 일반 첨가제를 적절히 첨가할 수 있다.
또한, 본 발명의 당류는 상기와 같은 의약품 제제로서 사용할 수 있을 뿐 아 니라, 음식품 등으로 사용할 수 있다. 이 경우에는 본 발명의 당류를 그대로 또는 각종 영양성분을 가하여 음식품 중에 함유시키면 좋다. 에쿠올 농도 상승작용을 갖는 당류를 이용한 경우는 체내의 에쿠올 농도를 상승시킬 목적 또는 부정수소 둥의 갱년기 장애, 골조송증, 고지혈증, 동맥경화, 유방암, 전립선암, 월경전증후군 등의 개선 및 예방 등에 유용한 보건용 식품 또는 식품소재로 이용할 수 있으며, 이 음식품 또는 그의 용기에는 상기 효과를 갖는다는 취지의 표시를 붙여도 좋다. 에쿠올 농도 저하작용을 갖는 당류를 이용한 경우에는 체내의 에쿠올 농도를 저하시킬 목적 또는 에쿠올의 환경호르몬과 유사한 작용에 의해 일어나는 정자의 감소와 생식능력 저하 등의 예방에 유용한 보건용 식품 또는 식품소재로 이용할 수 있으며, 이 음식품 또는 그의 용기에는 상기 효과를 갖는다는 취지의 표시를 붙여도 좋다. 구체적으로, 본 발명+의 당류를 음식품에 배합하는 경우는, 음식품으로 사용할 수 있는 첨가제를 적의 사용하여 관용 수단을 사용하여 식용에 적합한 형태, 즉 과립상, 입상, 정제, 캅셀, 페이스트 등으로 성형해도 좋고, 또한 각종 식품, 예를 들면 햄, 소시지 등의 식육가공식품, 어묵, 오뎅 등의 수산가공식품, 빵, 과자, 버터, 분유, 발효유 제품에 첨가하여 사용하거나, 물, 과즙, 우유, 청량음료, 차음료 등의 음료에 첨가하여 사용해도 좋다. 또, 음식품에는 동물의 사료도 포함된다.
실시예
이하, 시험예 및 실시예를 들어 본 발명의 내용을 더 상세히 설명하나, 본 발명은 이들에 의해 하등 제약되는 것은 아니다.
시험예 1 에쿠올 생산에 미치는 각종 당류의 영향
에쿠올 프로듀서의 신선 배설변에 대하여 유리 비드(ø3mm)를 사용하여 10배의 혐기상태의 희석액(KH2PO4 0.00255%, K2HPO4 0.00255%, NaCl 0.006%(NH4)2SO4 0.00255%, CaCl2 0.000255%, MgSO4 0.000255%, 0.1% 레사주린(resazurin) 용액 0.1%, 8% Na2CO3용액 2.2%, L-시스테인 염산염 0.05%)으로 현탁하고, 멸균 거즈를 이용하여 고형분을 제거하였다. 8,000rpm에서 10분간 원심분리하고, 침전을 등량의 희석액으로 현탁하였다. 이 상태에서 -30℃에서 동결 보존했다.
동결한 분변 희석액에 대하여 다시 원심분리하고, 침전을 100배의 PY 배지(펩톤 0.5%, 트립티케이스 펩톤 0.5%, 이스트 엑기스 1%, 헤민 0.00005%, 비타민 K1 0.0001%, L-시스테인 염산염 0.05%, KH2PO4 0.0006%, K2HPO4 0.0006%, NaCl 0.0012%(NH4)2SO4 0.0006%, CaCl2 0.00006%, MgSO4 0.00006%)에 재현탁하였다. 이 때 최종농도 1%가 되도록 아도니톨, 아라비노오즈, 셀로비오스, 에리스리톨, 갈락토올리고당, 프락토오즈, 갈락토오즈, 글루코오즈, 글리코겐, 이노시톨, 이눌린, 락티톨, 락토오즈, 락투로오즈, 말토오즈, 만니톨, 만노오즈, 멜레지토오즈, 메리비오스, 라피노오즈, 람노오즈, 리보오즈, 소르비톨, 수크로오즈, 트레할로오즈, 갈락토올리고당을 가했다. 동시에 당을 첨가하지 않은 계열도 만들었다. 그것들에 최종농도 100μM이 되도록 다이제인을 첨가하고, 37℃에서 16시간 완전 혐기배양을 했다. 또한 배양은 모두 독립된 4계열로 행했다. 얻어진 배양액에서 다이제인과 에쿠올의 추출 및 HPLC 분석을 했다. 그리고 여기서 이용한 이노시톨은 SIGMA사 제품인 myo-이노시톨이다. 글리코겐은 SIGMA사제품의 글리코겐이며, 그 유래는 굴조개이다. 트레할로오즈는 SIGMA사 제품인 D(+)트레할로오즈이며, α,α체이다. 갈락토올리고당은 야쿠르트야쿠힝고교샤 제품인 TOS-S이며, 4'-갈락토실락토오즈와 6'-갈락토실락토오즈의 혼합물이다. 갈락토올리고당은 와코준야쿠샤제이며, 1-케스토오즈, 니스토오즈, 1-프락토실-D-니스토오즈와의 혼합물이다.
다이제인 및 에쿠올 추출은 아래와 같이 행하였다. 배양약 500㎕에 250㎕의 디에틸에테르를 첨가하여 충분히 교반하였다. 이 혼합액을 2,000rpm으로 10분간 원심분리하여 디에틸에테르층을 얻었다. 남은 수층에 대하여 동일하게 디에틸에테르를 다시 추출하고, 2회 추출하여 얻어진 에테르층을 합하여 질소가스 분사하, 40℃에서 농축 건고하였다. 이를 250㎕의 80% 메탄올로 용해하여 필터로 여과한 통과물을 측정검체로 하였다.
또, HPLC 조건은 다음의 조건으로 하였다.
장치: LC 모듈 1(Waters)
컬럼: YMC-Pack CN(Y.M.C제)
검출: 자외흡광광도계(측정파장 280nm)
컬럼온도: 40℃
이동상: 0.1% 포름산용액/아세토니트릴/메탄올(87:3:10)혼합액
유량: 2.5mL/min
샘플주입량: 10㎕
상기 조건에서 다이제인과 에쿠올의 표준품을 각각 주입하고, 검량선을 작성 하여 시료 중의 다이제인과 에쿠올 농도를 측정하였다. 얻어진 농도로 전술한 수식을 이용하여 에쿠올 농도조절 활성을 산출하였다.
그 결과를 표 1 및 도 1에 나타냈다. 당의 무첨가를 100%로 했을 경우, 프락토올리고당, 글루코오즈, 이눌린, 락토오즈, 락투로오즈, 메리비오스, 라피노오즈, 수크로오즈, 갈락토올리고당에서는 에쿠올 변환이 50%이하로 억제되어 있는 것으로부터 음(-)의 에쿠올 농도조절 활성이 있음을 알았다. 특히, 프락토올리고당, 글루코오즈, 이눌린, 락토오즈, 라피노오즈, 수크로오즈, 갈락토올리당에서는 생성된 에쿠올은 전혀 보이지 않고, 배지에 첨가한 100μM의 다이제인이 거의 잔존하고 있었다. 그리고, 이눌린에는 랫트의 혈청 중의 에쿠올 농도를 저하시키는 작용이 알려져 있으나(비특허문헌 5), 금회의 시험계에서도 이눌린에 다이제인으로부터의 에쿠올 변환능을 현저히 저하시키는 작용을 볼 수 있었다. 또한, 프락토올리고당에는 에쿠올 생산을 촉진시킨다는 보고(비특허문호 5), 및 인간분변 배양물의 에쿠올 생산활성을 저하시킨다는 보고(비특허문헌 6)가 있으나, 이 시험계에서는 프락토올리고당에 다이제인으로부터의 에쿠올 변환능을 현저히 저하시키는 작용을 볼 수 있었다. 한편, 아도니톨, 아라비노오즈, 에리스리톨, 갈락토오즈, 락티톨, 멜레지토오즈, 트레할로오즈, 리보오즈, 소르보오즈, 크실로오즈, 이노시톨, 솔비톨에서는 에쿠올 변환이 200% 이상으로 촉진되어 있었기 때문에 플러스의 에쿠올 농도 조절활성이 있음을 알았다. 특히 락티톨, 멜레지토오즈, 트레할로오즈, 소르보오즈, 크실로오즈, 이노시톨에서는 배지에 첨가한 100μM의 다이제인의 70% 이상이 에쿠올로 변환되어 있으며 에쿠올 농도 조절 활성도 400% 이상이었다.
[표1]
다이제인-에쿠올 변환에 미치는 각종 당류의 영향
당의 종류 배지중의 에쿠올 농도 (μM) 에쿠올 농도 조절활성 (%)
아도니톨 아라비노오즈 셀로비오스 에리스리톨 프락토올리고당 프락토오즈 갈락토오즈 글루코오즈 글리코겐 이눌린 락티톨 락토오즈 락투로오즈 이노시톨 말토오즈 만니톨 만노오즈 멜레지토오즈 메리비오스 라피노오즈 람노오즈 리보오즈 소르비톨 소르보오즈 수크로오즈 갈락토올리고당 트레할로오즈 크실로오즈 당 무첨가 47.0 70.6 29.0 38.7 0.0 9.3 65.0 0.0 33.4 0.0 82.9 0.0 1.5 75.2 10.6 32.9 15.0 74.3 4.5 0.0 21.0 59.5 67.3 84.5 0.0 0.0 72.9 79.9 18.1 260.0 391.1 160.6 214.2 0.0 51.5 240.1 0.0 184.8 0.0 459.1 0.0 8.1 416.2 58.5 182.2 83.0 411.6 24.8 0.0 116.4 329.6 372.5 467.7 0.0 0.0 403.5 442.6 100.0
시험예 2 에쿠올 변환능을 가진 미생물의 배양
시험예 1에 기재된 방법으로 보존한 분변 현탁액을 500㎕의 PY배지(PY 배지에 최종 1%가 되도록 아도니톨 또는 소르보오즈를 첨가하여, 아도니톨 또는 소르보오즈 대신에 멸균증류수를 첨가한 것을 대조함)에 1/10이 되도록 현탁하여 최종농도 100μM이 되도록 다이제인을 첨가하였다, 그것을 16시간, 37℃에서 완전 혐기배 양하였다. 배양후 액 50㎕을 새로운 500μ의 동일한 배지에 계속 심고, 나머지는 다이제인 및 에쿠올 추출에 이용하였다. 이식 후의 조작을 순서대로 반복하여 계대를 거듭하였다. 그 때에 적절한 균액을 그램 염색하여 현미경으로 관찰하였다. 다이제인 및 에쿠올의 추출 및 HPLC에 의한 정량은 시험예 1에 기재된 방법으로 하였다. 얻어진 다이제인 및 에쿠올 농도를 다음 식에 적용함으로써 다이제인-에쿠올 변환율을 구했다. 그리고 배양은 모두 독립된 3계열로 하여 평균값과 표준편차를 구했다.
다이제인-에쿠올 변환율(%)=100×(배양액속의 에쿠올 농도)/배양액 중의 에쿠올 농도 + 다이제인 농도)
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이 아도니톨, 소르보오즈를 당원으로 했을 경우, 각각 8대째 및 11대째까지 다이제인-에쿠올 변환능을 유지할 수 있었다. 또한, 11대째의 배양액 내에는 원래의 분변 유래물은 1012분의 1밖에 포함되어 있지 않기 때문에 소르보오즈를 당원으로 한 PY 배지에서 11대 배양했을 때의 그램 염색상을 관찰한 바, 3∼5종류의 세균이 관찰되었다. 이 것으로부터, 11대의 계대배양에 의해 에쿠올 변환균이 선택적으로 증식하고 있음을 알아냈다.
처방예 1 정제의 제조
하기의 처방으로 각종 성분을 혼합하여 조립, 건조, 정립한 후에 타정하여 정제를 제조하였다.
(처방) (mg)
미결정 셀룰로오스 100
트레할로오즈 80
스테아린산 마그네슘 0.5
메틸셀룰로오스 12
처방예 2 청량음료의 제조
하기 처방에 의해 일반적인 방법으로 각 성분을 배합하고 균질화하여 청량음료를 얻었다. 얻어진 청량음료는 갈색병에 충진 후, 알루미늄 캡으로 봉인하고, 가열처리를 하였다.
(처방) (g)
향료 0.8
시트르산 0.2
과당 4
갈락토올리고당 1.5
물 93.5
처방예 3 배지의 제조
하기 조성으로 각종 성분을 혼합하고, 물을 이용하여 1L로 조정한 후, 멸균하여 에쿠올 변환능을 가진 미생물의 선택배지를 제조하였다.
(조성) (g)
펩톤 5
트립티케이스 펩톤 5
이스트엑기스 10
아도니톨 10
소르보오즈 10
헤민 0.0005
비타민 K1 0.001
L-시스테인 염산염 0.5
KH2PO4 0.006
K2HPO4 0.006
NaCl 0.012
(NH4)2SO4 0.006
CaCl2 0.0006
MgSO4 0.0006
10mM 다이제인 용액 10

Claims (15)

  1. 아도니톨, 아라비노오즈, 에리스리톨, 갈락토오즈, 락티톨, 멜레지토오즈, 트레할로오즈, 리보오즈, 소르보오즈, 크실로오즈, 이노시톨 및 솔비톨에서 선택되는 1종 이상을 유효성분으로 하는 에쿠올 농도 상승제.
  2. 제 1항에 있어서, 에쿠올 변환능을 가진 미생물을 선택적으로 증식 및/또는 미생물의 에쿠올 변환능을 항진하는 것인 에쿠올 농도 상승제.
  3. 에쿠올 농도 상승제를 제조하기 위한, 아도니톨, 아라비노오즈, 에리스리톨, 갈락토오즈, 락티톨, 멜레지토오즈, 트레할로오즈, 리보오즈, 소르보오즈, 크실로오즈, 이노시톨 및 솔비톨에서 선택되는 1종 이상의 사용.
  4. 제 3항에 있어서, 에쿠올 변환능을 가진 미생물을 선택적으로 증식 및/또는 미생물의 에쿠올 변환능을 항진하는 것인 에쿠올 농도 상승제.
  5. 아도니톨, 아라비노오즈, 에리스리톨, 갈락토오즈, 락티톨, 멜레지토오즈, 트레할로오즈, 리보오즈, 소르보오즈, 크실로오즈, 이노시톨 및 솔비톨에서 선택되는 1종 이상을 유효량 투여함을 특징으로 하는 에쿠올 농도 상승방법.
  6. 제 5항에 있어서, 에쿠올 변환능을 가진 미생물을 선택적으로 증식 및/또는 미생물의 에쿠올 변환을 항진하는 것인 에쿠올의 농도 상승 방법.
  7. 글루코오즈, 락토오즈, 락투로오즈, 메리비오스, 라피노오즈, 수크로오즈 및 갈락토올리고당에서 선택되는 1종 이상을 유효성분으로 하는 에쿠올 농도 저하제.
  8. 제 7항에 있어서, 에쿠올 변환능을 가진 미생물의 증식을 선택적으로 저해 및/또는 미생물의 에쿠올 변환능을 저해하는 것인 에쿠올 농도 저하제.
  9. 에쿠올 농도저하제를 제조하기 위한, 글루코오즈, 락토오즈, 락투로오즈, 메리비오스, 라피노오즈, 수크로오즈 및 갈락토올리고당에서 선택되는 1종 이상의 사용.
  10. 제 9항에 있어서, 에쿠올 농도 저하제가 에쿠올 변환능을 가진 미생물의 증식을 선택적으로 저해 및/또는 미생물의 에쿠올 변환능을 저해하는 것인 에쿠올 농도 저하제.
  11. 글루코오즈, 락토오즈, 락투로오즈, 메리비오스, 라피노오즈, 수크로오즈 및 갈락토올리고당에서 선택되는 1종 이상을 유효량 투여함을 특징으로 하는 에쿠올 농도 저하방법.
  12. 제 11항에 있어서, 에쿠올 변환능을 가진 미생물의 증식을 선택적으로 저해 및/또는 미생물의 에쿠올 변환능을 저해하는 것인 에쿠올 농도 저하방법.
  13. 아도니톨, 아라비노오즈, 에리스리톨, 갈락토오즈, 락티톨, 멜레지토오즈, 트레할로오즈, 리보오즈, 소르보오즈, 크실로오즈, 이노시톨 및 솔비톨에서 선택되는 1종 이상을 함유함을 특징으로 하는 에쿠올 변환능을 가진 미생물의 선택배지.
  14. 제 13항에 있어서, 다이제인을 더 함유함을 특징으로 하는 선택배지.
  15. 제 13항 또는 제 14항에 있어서, 선택배지를 이용하여 검체에 포함되는 에쿠올 변환능을 가진 미생물을 배양함을 특징으로 하는 검체 내의 에쿠올 변환능을 가진 미생물의 검출방법.
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