KR20080036170A - 내스트레스성이 되도록 조작된 식물에서네오니코티노이드의 적용으로 내스트레스성을 증가시키는방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 네오니코티노이드 화합물, 이를 테면 비제한적으로 이미다클로프리드, 클로티아니딘, 티아메톡삼, 디노테푸란, 니텐피람, 아세트아미프리드 또는 티아클로프리드를 적용하여 식물 및 식물 세포에서 내스트레스성을 증가시키기 위한 방법이 제공되며, 이는 식물 또는 그들의 세포가 더욱 내스트레스성이 되도록, 예를 들어, 내스트레스성이 되도록 조작된 식물을 만들기 위하여 변형된 게놈을 포함한다. 특히, 유전적으로 변형된 내스트레스성 식물 또는 그들의 세포와 배합된 효율적인 내스트레스성 상승제는 예를 들어, 클로로피리딘 측쇄, 이를 테면 이미다클로프리드, 티아클로프리드, 아세트아미프리드, 니텐피람 및 6-클로로니코틴산(6-CNA)를 포함하는 네오니코티노이드 화합물이다.

Description

내스트레스성이 되도록 조작된 식물에서 네오니코티노이드의 적용으로 내스트레스성을 증가시키는 방법{Increase of stress tolerance by application of neonicotinoids on plants engineered to be stress tolerant}

네오니코티노이드 화합물, 이를 테면 비제한적으로 이미다클로프리드, 클로티아니딘, 티아메톡삼, 디노테푸란, 니텐피람, 아세트아미프리드 또는 티아클로프리드를 적용하여 식물 및 식물 세포에서 내스트레스성을 증가시키기 위한 방법이 제공되며, 이는 식물 또는 그들의 세포가 더욱 내스트레스성이 되도록, 예를 들어, 내스트레스성이 되도록 조작된 식물을 만들기 위하여 변형된 게놈을 포함한다. 특히, 유전적으로 변형된 내스트레스성 식물 또는 그들의 세포와 배합된 효율적인 내스트레스성 상승제는 예를 들어, 클로로피리딘 측쇄, 이를 테면 이미다클로프리드, 티아클로프리드, 아세트아미프리드, 니텐피람 및 6-클로로니코틴산(6-CNA)를 포함하는 네오니코티노이드 화합물이다.

내스트레스성이 되도록 조작된 식물은 본 분야에 공지이다. 식물 세포 및 식물에서 내스트레스성은 예를 들어 각각 WO 00/04173 A1 및 PCT/EP2004/003995에 개시된 바와 같이 내인성 폴리-ADP-리보오스 폴리머라제(ParP) 또는 폴리(ADP-리보오스) 글리코하이드롤라제(ParG)의 레벨 또는 활성을 감소시킴으로써 성취될 수 있 다. 이러한 방식으로, 스트레스 환경에 놓인 식물 세포에서 태아 NAD 및 ATP 고갈은 외상 세포 사멸을 유발하며, 스트레스 환경에 순응시키고 생존하기 위하여 스트레스를 받은 세포를 위해 이는 회피되거나 충분히 연기될 수 있다고 생각된다.

유럽 특허 출원 제 04077624.7호는 식물 및 식물 세포에서 내스트레스성이 예를 들어, 식물에서 과발현을 위하여 NAD 드 노보(de novo) 합성 경로 및/또는 NAD 셀비지(salvage) 합성 경로에 관여하는 효소를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 이용하여 성취될 수 있다는 것을 개시하였다.

곤충 구제가 아닌 다른 목적으로 네오니코티노이드 부류의 화합물을 식물에 사용하는 것도 본 분야에 알려져 있다(WO 01/26468 A2, WO 03/096811 A1).

WO 01/26468 A2는 네오니코티노이드의 부류에서 선택된 적어도 하나의 화합물을 식물 또는 이의 부위에 적용하는 것을 포함하여 식물의 성장을 향상시키는 방법을 개시하였다.

WO 03/096811 A1은 식물의 종자를 네오니코티노이드 화합물로 처리하여 곤충 감염 정도가 곤충 구제 목적으로 살충제를 이용할 필요에 있는 정도보다 낮을 때, 농작 식물의 수율 및/또는 활력이 증가되거나 개선될 수 있다는 것을 개시하였다. 상기 방법은 트랜스제닉 식물이 아닌 식물과 변형된 바실루스 투린지엔시스(Bacillus Thuringiensis) 델타-내독소 단백질의 생산을 암호화하는 외부 유전자를 갖는 식물에 유용하다고 생각된다.

그러나, 본 분야에서는 종래 기술에서 개시된 바와 같은 내스트레스성 식물의 건강 및 활력을 증가시키고, 화학 물질을 적용하여 이미 내스트레스성이 되도록 조작된 식물의 내스트레스성을 증가시킬 가능성에 대해서는 아직 밝혀지지 않았다.

본 발명의 요약

간단하게, 본 발명은 내스트레스성이 되도록 조작된 식물 및/또는 이들 식물의 서식지, 이들 식물이 성장하는 내스트레스성이 되도록 조작된 식물 세포 또는 종자를 네오니코티노이드 화합물로 처리하는 것을 포함하여, 상기 식물 및 식물 세포의 내스트레스성을 증가시키는 신규한 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한, 내스트레스성이 되도록 조작된 식물 및/또는 이들 식물의 서식지, 이들 식물이 성장하는 내스트레스성이 되도록 조작된 식물 세포 또는 종자를 네오니코티노이드 화합물로 처리하는 것을 포함하여, 상기 식물 및 식물 세포의 건강 및 활력을 증가시키는 신규한 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 네오니코티노이드 화합물로 처리되며, 내스트레스성 식물이 성장하는 신규하는 종자에 관한 것이다.

본원에서 이용된 바와 같은, "내스트레스성이 되도록 조작된 식물" 또는 "내스트레스성이 되도록 조작된 식물 세포"는 외인의 내스트레스성 증진 유전자나 그러한 외인의 내스트레스성 증진 유전자에 상응하는 내인성 유전자의 변이체를 포함하는 외부 DNA를 함유하는 식물 또는 이의 세포 및 종자를 의미하며, 여기서 변이체는 그러한 변이체가 있는 식물 세포 또는 식물에서 더 높은 내스트레스성을 유발한다.

본 발명에 따르면, 내스트레스성이 되도록 조작된 식물 또는 식물의 종자 및/또는 상기 식물의 서식지를 유효량의 네오니코티노이드 화합물로 처리하여 상기 식물의 내스트레스성, 건강 및 활력을 증가시킬 수 있다는 것을 발견하였다. 놀랍게도, 그러한 네오니코티노이드 화합물은 이미 각각의 야생형 식물보다 더욱 내스트레스성인 식물의 내스트레스성 및 건강의 증진을 유발할 수 있다. 이러한 효과는 주어진 식물의 조작된 내스트레스성으로부터 유래된 효과와 WO 01/26468 A2에 개시된 바와 같은, 식물에 적용될 때 네오니코티노이드의 성장을 증진시키는 특성의 부가된 효과에 단순히 의존하여 예상될 수 있는 효과를 넘어선다. 상기 효과는 상기 언급된 네오니코티노이드의 표적인 곤충의 존재와 상관없다. 이에 따라 상기 효과는 식물 또는 이 식물이 성장하는 식물 세포 또는 종자의 내스트레스성의 생화학적 개선과 연결된다. 이러한 효과가 유전적으로 조작된 식물 및 식물 세포에서 상기와 같이 조작된 내스트레스성을 증진시키는 것이 발견되었다.

본원에서 이용된 바, "내스트레스성"은 예를 들어, 화학 물질(예를 들어, 제초제, 진균제, 살충제, 식물 성장 조절제, 어쥬번트, 비료)의 적용, 비생물학적 스트레스에 노출(예를 들어, 가뭄, 강한 빛의 환경, 극한 온도, 오존 및 다른 대기 오염물질, 토양 염도 또는 중금속) 또는 생물학적 스트레스(예를 들어, 곰팡이, 바이러스, 박테리아, 곤충, 선충류, 마이코플라즈마 및 마이코플라즈마 유사 유기체 등에 의한 감염을 포함하는 병원균 또는 해충 감염)에 의하여 스트레스가 식물에 적용될 때, 조작되지 않은 식물과 비교하여 스트레스에 대한 더 나은 내성을 의미한다.

본 발명의 일구체예에서, 내스트레스성이 되도록 조작된 식물 및/또는 그것의 서식지, 이들 식물이 자라는 식물 세포 또는 종자에, 화학식 (I)의 네오니코티노이드 화합물의 유효량을 적용하는 것을 포함하여, 상기 식물 또는 이들 식물이 자라는 식물 세포 또는 종자의 내스트레스성 및 건강을 증진시키기에 유용한 방법이 개시된다:

상기 식에서,

Het는 각 경우에 불소, 염소, 메틸 또는 에틸에 의해 임의로 일- 또는 다치환되고 피리드-3-일, 피리드-5-일, 3-피리디니오, 1-옥시도-5-피리디니오, 1-옥시도-5-피리디니오, 테트라하이드로푸란-3-일 및 티아졸-5-일의 그룹 중에서 선택되는 헤테로사이클을 나타내고,

A는 C₁-C₆-알킬, -N(R¹)(R²) 또는 S(R²)를 나타내며,

여기에서, R¹은 수소, C₁-C₆-알킬, 페닐-C₁-C₄-알킬, C₃-C₆-사이클로알킬, C₂-C₆-알케닐 또는 C₂-C₆-알키닐을 나타내고,

R²는 C₁-C₆-알킬, C₂-C₆-알케닐, C₂-C₆-알키닐, -C(=O)-CH₃ 또는 벤질을 나타내며,

R은 수소, C₁-C₆-알킬, C₂-C₆-알케닐, C₂-C₆-알키닐, -C(=O)-CH₃ 또는 벤질을 나타내거나, R²와 함께, -CH₂-CH₂-, -CH₂-CH₂-CH₂-, -CH₂-0-CH₂-, -CH₂-S-CH₂-, -CH₂-NH-CH₂- 및 -CH₂-N(CH₃)-CH₂- 그룹을 나타내고,

X는 N-N0₂, N-CN 또는 CH-N0₂를 나타낸다.

알콕시에서와 같이 헤테로원자와 배합된 것을 포함하여 알킬 또는 알케닐과 같은 포화 또는 불포화 탄화수소 라디칼은 각 경우에 직쇄 또는 측쇄일 수 있다.

이들 화합물은 살충 활성을 갖는 것으로 알려져 있다(참조 예, EP-A 1-192 606, EP-A2-580 533, EP-A2-376 279, EP-A2-235 725).

화학식 (I)의 바람직한 화합물로서 ["The Pesticide Manual", 13^th Edition, 2003(British Crop Protection Council)]에 기술된 네오니코티노이드가 언급될 수 있다.

매우 특히 바람직한 화합물은, 예를 들어 EP A1 0 192 060으로부터 공지된 하기 화학식의 이미다클로프리드이다:

추가의 매우 특히 바람직한 화합물은, 예를 들어 WO A1 91/04965로부터 공지된 하기 화학식의 아세트아미프리드이다:

다른 매우 특히 바람직한 화합물은, 예를 들어 EP A2 0 235 725로부터 공지된 하기 화학식의 티아클로프리드이다:

또 다른 매우 특히 바람직한 화합물은, 예를 들어 EP A2 0 302 389로부터 공지된 하기 화학식의 니텐피람이다:

그밖의 다른 매우 특히 바람직한 화합물은, 예를 들어 EP A2 0 376 279로부터 공지된 하기 화학식의 클로티아니딘이다:

그밖의 또 다른 매우 특히 바람직한 화합물은, 예를 들어 EP A2 0 580 553으로부터 공지된 하기 화학식의 티아메톡삼이다:

그밖의 또 다른 추가의 매우 특히 바람직한 화합물은, 예를 들어 EP A1 0 649 845로부터 공지된 하기 화학식의 디노테푸란이다:

이미다클로프리드는 본 발명에 따른 방법에 이용하기에 특히 바람직한 화합물이다. 클로티아니딘은 또한 본 발명의 범위에서 바람직한 화합물로 언급될 것이다.

본 발명의 또다른 구체예에서, 내스트레스성이 되도록 조작된 식물 및/또는 그것의 서식지, 상기 식물이 자라는 식물 세포 또는 종자에, 하기 화학식의 6-클로로니코틴산(니아신, CAS NO: 5326-23-8)의 유효량을 적용하는 것을 포함하여, 상기 식물 또는 이러한 식물이 자라는 식물 세포 또는 종자의 내스트레스성 및 건강을 증진시키기에 유용한 방법이 기술된다:

6-클로로니코틴산은 이들 그룹을 가지는 상기 언급된 네오니코티노이드, 이를 테면, 이미다클로프리드, 티아클로프리드, 아세트아미프리드, 니텐피람이 분해하는 동안 유리될 수 있다. 예를 들어, 이미다클로프리드는 일차 대사물 6-클로로니코틴산으로 순차적으로 분해되며, 이는 결국 이산화 탄소로 분해된다. 이러한 대사산물이 내스트레스성이 되도록 조작된 식물 또는 식물 세포 또는 이 식물이 자라는 식물 세포 또는 종자의 내스트레스성과 건강을 증진시키는 것도 발견되었다.

상기 언급된 화합물은 외인의 내스트레스성 증진 유전자 또는 이러한 외인의 내스트레스성 증진 유전자에 상응하는 내인성 유전자의 변이체를 포함하는 외부 DNA를 함유하는 식물 또는 이의 세포 및 종자의 내스트레스성 증가를 유발하며, 여기서 변이체는 그러한 변이체가 있는 식물 세포 또는 식물의 더 높은 내스트레스성을 유발한다.

일반적으로, 내스트레스성의 증가는 적어도 스트레스를 지시하는 파라미터의 유의적인 감소를 의미하며, 이는 스트레스를 받은, 처리되지 않은, 비트랜스제닉인 참조 식물 또는 이의 세포 및 종자 대 처리된, 트랜스제닉인 참조 식물 또는 이의 세포 및 종자를 비교하여 형태적, 물리학적 또는 생화학적 차이로 측정될 수 있다.

본원에 언급된 바와 같은 "건강"은 식물, 이의 세포 또는 종자가 유의적으로 더 낮은 레벨로 해충 및 질병으로 감염되는 것을 의미하며, 이는 예를 들어, 해충 종이 나타나는 개체의 수나, 육안으로 보이는 징후의 발현(예를 들어, 상대적인 잎 영역 감소, 잎 영역 감염, 잎 영역 괴사)으로 측정되거나 평가될 수 있다. 유의성은 Colby 식으로 입증된다. 또한, 유럽 특허 출원 제 EP04077624.7호(본원에 참조로 삽입)에 개시된 바와 같은 스트레스 환경 하에서 NAD(H) 레벨(스트레스를 받은 대조 식물에서보다 스트레스를 받은, 내성 식물에서 더 높이 유지된다)과 반응성 산소 종 레벨(스트레스를 받은 대조 식물에서보다 스트레스를 받은 내성 식물에서 더 낮다)을 측정하여 스트레스 환경에 대한 내성을 측정할 수 있다.

본 발명의 장점들 중 하나는 본 발명에 따른 화합물과 상기 화합물을 포함하는 조성물의 특정 신성이며, 내스트레스성이 되도록 조작된 식물의 종자를 이들 조성물로 처리하면, 발아 식물 및 발생 후 만들어진 식물의 내스트레스성이 증가되는 것이다. 이러한 방식으로 파종시 또는 그 이후 즉시 농작물을 즉시 처리하는 것이 생략될 수 있다.

본 발명의 또다른 구체예에서, 내스트레스성이 되도록 조작된 식물 및/또는 그것의 서식지, 상기 식물이 자라는 식물 세포 또는 종자에, 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 조성물의 유효량을 적용하는 것을 포함하여, 상기 식물 또는 이러한 식물이 자라는 식물 세포 또는 종자의 내스트레스성 및 건강을 증진시키기에 유용한 방법이 기술된다.

이에 따라, 본 발명은 또한 본 발명에 따른 조성물의 용도를 위한 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 조성물에 관한 것이다.

화학식 (I)의 화합물은 다른 활성 화합물, 예를 들면, 살충제, 살균제, 진드기 구제제, 진균제 등과의 배합물, 그것들의 상업적으로 유용한 제형의 형태 또는 그러한 제형으로부터 제조된 적용 형태로 이용될 수 있다. 이는 본 발명에 따른 식물의 내스트레스성 및 건강을 개선하는 것과 동시에, 존재할 수 있는 해충을 박멸할 수도 있는 조성물을 수득하기 위하여 수행될 수 있다. 이용될 수 있는 살충제는 예를 들어, 유기인 제제, 카르바메이트 제제, 카르복실레이트 형 화학 물질, 염화 탄화수소 형 화학 물질, 미생물에 의해 생성된 살충 물질 등이 이용될 수 있다.

많은 경우에, 이는 상승적 효과, 예를 들어, 배합물의 활성이 각각 성분의 활성을 초과되도록 한다. 일반적으로 더 적은 양의 활성 성분이 이용될 수 있는 그러한 제형 및 적용 형태는 상업적으로 그리고 생태학적으로 특히 유용하다. 그러나 상승제는 그 자신이 반드시 활성일 필요 없이, 활성 화합물의 활성을 증진시키는 것이다.

다른 공지된 활성 화합물, 이를 테면, 제초제 또는 약해완화제(safener), 비료 및 성장 조절제와의 배합물도 가능하다.

식물 및 식물 부분을 본 발명에 따라 활성 화합물로 처리하는 것은 직접적으로 또는 통상의 처리 방법으로, 그들의 주변, 환경 또는 저장 공간에 화합물을 작용시킴으로써 예를 들어, 침지, 스프레이, 증발, 포깅(fogging), 스캐터링, 페인팅에 의하여, 그리고 번식 물질의 경우, 특히 종자의 경우, 한번 이상의 코팅을 적용하여 수행된다.

활성 화합물은 통상의 제형, 이를 테면, 용액, 에멀젼, 습윤 파우더, 현탁액, 파우더, 먼지, 페이스트, 가용성 파우더, 과립, 현탁액-에멀젼 농축물, 활성 화합물을 함유하는 천연 및 합성 물질 및 중합 물질 중 마이크로캡슐화로 전환될 수 있다.

상업적으로 유용한 제형 또는 적용 형태에서 본 발명의 활성 화합물의 함량은 광범위하게 다양할 수 있다. 상업적 제형에서 제조되는 이용 형태의 활성 화합물 함량은 넓은 제한 범위 내에서 다양할 수 있다.

이들 제형은 공지된 방식으로, 예를 들어, 활성 화합물을 유화제 및/또는 분산제 및/또는 거품 형성제인 계면 활성제를 임의로 이용되는 액체 용매 및/또는 고형 담체인 증량제와 혼합하여 제조된다.

이용되는 증량제가 물이라면, 보조 용매로 예를 들어 유기 용매를 채용하는 것이 가능하다. 필수적으로, 적합한 액체 용매는: 방향족, 이를 테면, 자일렌, 톨루엔 또는 알킬-나프탈렌, 염소화 방향족 또는 염소화 지방족 탄화 수소, 이를 테면, 클로로벤젠, 클로로에틸렌 또는 염소화 메틸렌, 지방족 탄화수소, 이를 테면 사이클로헥산 또는 파라핀, 예를 들어, 석유 부류, 미네랄 및 식물 오일, 알코올, 이를 테면, 부탄올 또는 글리콜 및 또한 그들의 에테르 및 에스테르, 케톤, 이를 테면, 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 메틸 이소부틸 케톤 또는 사이클로헥사논, 높은 극성 용매, 이를 테면, 디메틸포름아미드와 디메틸 설폭시드 및 또한 물이다.

고형 담체로서, 예를 들어, 암모늄 염 및 토양 천연 미네랄, 이를 테면, 고령토, 점토, 탈크, 백악, 석영, 아타팔자이트, 몬트릴로나이트 또는 규조토 및 토양 합성 미네랄, 이를 테면, 고 분산 실리카, 알루미나 및 실리케이트가 적합하며; 과립을 위한 고형 담체로서 예를 들어, 분쇄 및 부류된 천연 암석, 이를 테면, 방해석, 대리석, 경석, 해포석 및 백운석과 또는 무기 및 유기 가루의 합성과립, 및 톱밥, 코코넛 껍질, 옥수수 속대 및 담배줄기와 같은 유기물질의 과립이 적합하고; 유화제 및/또는 거품 형성제로서 예를 들어 비이온성 및 음이온성 유화제, 이를 테면 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 지방 알콜 에테르, 예를 들어 알킬아릴 폴리글리콜 에테르, 알킬설포네이트, 알킬 설페이트, 아릴설포네이트 또는 단백질 가수분해물이 적합하며; 적합한 분산제로서 예를 들어 리그닌설파이트 폐액 및 메틸셀룰로오즈가 적합하다.

점착부여제, 이를 테면 카복시메틸셀룰로오즈, 및 아라비아고무, 폴리비닐 알콜 및 폴리비닐 아세테이트와 같은 분말, 과립 또는 라텍스 형태의 천연 및 합성 중합체, 또는 세팔린 및 레시틴과 같은 천연 인지질 및 합성 인지질이 제형에 사용될 수 있다. 다른 가능한 첨가제는 광유 및 식물 오일이다.

착색제, 예를 들어 산화철, 산화티타늄 및 프루시안 블루와 같은 무기안료, 및 알리자린 염료, 아조염료 및 금속 프탈로시아닌 염료와 같은 유기 안료, 및 철, 망간, 붕소, 구리, 코발트, 몰리브덴 및 아연의 염과 같은 미량 영양소가 사용될 수도 있다.

제형은 일반적으로 0.1 내지 98 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 90 중량% 및 특히 바람직하게는 0.5 내지 70 중량%의 활성 화합물을 포함한다.

네오티코티노이드 화합물 및 6-CNA의 유리한 내스트레스성 증진 효과는 특정 적용율에서 특히 강하다고 생각된다. 그러나 활성 화합물의 적용율은 상대적으로 넓은 범위에서 다양할 수 있다. 일반적으로, 적용율은 헥타르당 1g 내지 1600g, 바람직하게는 10g 내지 800g 및 특히 바람직하게는 10g 내지 600g의 활성 화합물이다.

상기에서 언급된 바와 같이, 본 발명의 일구체예는 화학식 (Ⅰ)의 화합물을 포함하는 조성물의 유효량을 내스트레스성이 되도록 조작된 식물이 자라는 종자를 포함하는 식물 번식 물질에 적용하는 것을 포함하여, 상기 식물의 내스트레스성 및 건강을 증진시키기에 유용한 방법이다. 식물 번식 물질은 심기 전에, 예를 들어, 종자는 파종 전에 처리될 수 있다. 또한 액체 조성으로 곡물에 스며들게 하거나 고형 제형으로 그것들을 코팅하여, 본 발명에 따른 화합물을 종자 곡물에 적용시킬 수 있다. 또한, 번식 물질을 심을 때, 예를 들어 파종 시에 심는 위치에 조성물이 적용될 수 있다

이에 따라, 본 발명은 또한 내스트레스성이 되도록 조작되고, 본 발명에 따른 화합물로 처리된 식물의 종자에 관한 것이다.

식물 번식 물질, 이를 테면, 종자의 처리와 관련하여, 바람직한 적용율은 처리될 100kg의 물질 당 네오니코티노이드 화합물 또는 6-CNA 중 하나가 일반적으로 0.1 내지 1000g, 특히 1 내지 800g, 바람직하게 10 내지 500g이다.

본 방법에 따라 개선될 수 있는 농작물은 내스트레스성이 되도록 조작된 임의의 식물, 쌍자엽 및 외자엽 종자 둘다, 식물 세포, 특히 목화, 캐놀라, 평지기름, 밀, 옥수수 또는 메이즈(maize), 보리, 쌀, 귀리, 호밀, 메밀, 라이밀, 사탕수수, 대두, 해바라기, 알파파, 콩, 아마, 겨자, 완두, 담배, 감자, 고구마, 사탕무, 잔디, 수수, 조, 배추과 채소, 다른 채소(아티초크, 아스파라거스, 당근, 셀러리, 치커리, 오이, 가지, 부추, 상추, 멜론, 오크라, 양파, 후추, 호박, 무, 순무, 홍화, 시금치, 스쿼시, 토마토, 수박, 마류, 주키니), 아몬드, 사과, 살구, 바나나, 검은 딸기, 블루베리, 카카오, 감귤류 (그레이프프루트, 레몬, 오렌지, 금감류, 라임, 만다린, 탄제린, 포멜로 및 Satsuma 만다린 포함), 체리, 코코넛, 넌출월귤, 데이트, 구스베리, 포도, 구아바, 키위, 망고, 승도 복숭아, 파파야, 시계풀 열매, 복숭아, 땅콩, 배, 파인애플, 피칸, 피스타치오, 자두, 나무딸기, 딸기, 차나무, 호두나무 또한, 원예, 화초 원예 또는 임업에서 이용되는 식물을 포함한다.

모든 식물 및 식물 부분은 본 발명에 따라 처리될 수 있다. 식물 부분은 모든 땅위 및 땅아래 부분과 식물의 기관, 이를 테면, 줄기, 잎, 꽃 및 뿌리를 의미하는 것으로 이해될 것이며, 이의 예는 잎, 바늘잎, 줄기대, 줄기, 꽃, 자실체, 과실, 종자, 뿌리, 덩이줄기 및 뿌리줄기로 언급될 수 있다. 식물 부분은 또한 수확된 물질과 식물 및 생산 증식 물질, 예를 들어, 자른 가지, 덩이줄기, 뿌리줄기, 오프셋 및 종자를 포함한다. 그것들은 또한 이를 테면 본 발명에 따른 식물 세포의 형질전환으로부터 얻거나 이용될 수 있는 식물 세포를 포함한다. 또한 상기 언급된 화합물을 예를 들어, 심거나 파종하기 전에, 원하는 효과를 얻기 위하여 예를 들어, 심은 후 식물의 내스트레스성을 증진시키고, 파종된 종자로부터 처리된 토양으로 자란 식물을 얻기 위하여 토양 위에 또는 그 내에 적용하는 것이 가능하다.

본 발명에 언급된 식물, 식물 세포 및 종자는 특별한 방법으로 상기 식물의 내스트레스성을 증가시키기 위하여 조작된다.

본 발명의 일 구체예에서, 외인의 내스트레스성 증진 유전자는 WO 00/04173 A1 또는 EP 04077984.5 (참조로 본원에 삽입)에 개시된 바와 같이 식물 세포 또는 식물에서 폴리(ADP-리보오스)폴리머라제(PARP) 유전자의 발현 및/또는 활성을 줄일 수 있다.

폴리(ADP-리보오스)트랜스퍼라제(ADPRT)(EC 2.4.2.30)로도 알려진 폴리(ADP-리보오스)폴리머라제(PARP)는 대부분의 진핵 생물, 예컨대 척추동물, 절지 동물, 연체 동물, 변형균문, 와편모충, 곰팡이 및 효모가 제외된 다른 저급 진핵 생물에서 발견되는 핵 효소이다. 또한 수많은 식물에서 효소 활성이 나타났다(Payne et al, 1976; Willmitzer and Wagner, 1982; Chen et al, 1994; OTarrell, 1995).

PARP는 NAD+에서 유래된 ADP-리보오스 부분이 표적 단백질에서 글루탐산 잔기의 카복실기에 주로 전이되는 것과 적절한 ADP-리보오스 중합화를 촉매한다. 주요 표적 단백질은 PARP 그 자신일 뿐 아니라, 히스톤, 고 이동성 그룹 염색체 단백질, 토포아이소모라제, 엔도뉴클레아제 및 DNA 폴리머라제도 이러한 변형이 될 것이라 보인다.

특정 구체예로서, 내스트레스성 증진 유전자는 다음의 기능적으로 연결된 DNA 단편을 포함할 수 있다:

a) 식물-발현가능한 프로모터;

b) 전사되어 식물의 내인성 PARP 암호화 유전자의 발현을 줄일 수 있는 RNA 분자가 되는 DNA 영역(PARP 억제 RNA 분자);

c) 전사 종결 및 폴리아데닐화에 관여하는 DNA 영역.

상기 언급된 DNA 영역은 표적 식물 또는 식물 세포에서 전사 또는 전사-후 방식으로 PARP 암호화 유전자의 발현을 감소시키는 소위 안티센스 RNA 분자를 유발할 수 있으며, 이는 식물 세포 또는 식물에 존재하는 PARP 암호화 유전자의 상보적 뉴클레오티드 서열에 적어도 95% 내지 100% 서열 상동성을 갖는 적어도 20개 또는 21개 연속 뉴클레오티드를 포함한다.

언급된 DNA 영역은 또한 표적 식물 또는 식물 세포에서 전사 또는 전사-후 방식으로 PARP 암호화 유전자의 발현을 감소시키는 것을 포함하는 소위 센스 RNA 분자를 유발할 수 있으며, 이는 식물 세포 또는 식물에 존재하는 PARP 암호화 유전자의 뉴클레오티드 서열에 적어도 95% 내지 100% 서열 상동성을 갖는 적어도 20개 또는 21개 연속 뉴클레오티드를 포함한다.

그러나 약 20nt의 PARP 암호화 영역의 안티센스 및 센스 RNA 영역의 최소 뉴클레오티드 서열은 약 20nt 내지 표적 유전자의 크기와 동일한 크기로 다양한 더 큰 RNA 분자 내에 포함될 수 있다. 이에 따라 상기 언급된 안티센스 또는 센스 뉴클레오티드 영역은 약 21 nt 내지 약 5000 nt 길이, 이를 테면 21 nt, 40 nt, 50 nt, 100 nt, 200 nt, 300 nt, 500 nt, 1000 nt, 2000 nt 또는 약 5000 nt 이상 길이일 수 있다. 더욱이, 본 발명의 목적을 위하여 이용된 억제 PARP RNA 분자 또는 외인성 유전자의 암호화 영역의 뉴클레오티드 서열은 식물 세포에서 감소되도록 표적화되는 내인성 PARP 유전자와 완전히 동일하거나 상보적일 필요는 없다. 더 큰 서열은 전체 서열 상동성의 필요가 덜 엄격하다. 이에 따라, 센스 또는 안티센스 영역은 내인성 PARP 유전자 또는 이의 상보적인 뉴클레오티드 서열에 대하여 약 40% 또는 50% 또는 60% 또는 70% 또는 80% 또는 90% 또는 100%의 전체적 서열 상동성을 가질 수 있다. 그러나 언급된 바와 같이 안티센스 또는 센스 영역이 내인성 PARP 유전자의 뉴클레오티드 서열에 약 100% 서열 상동성을 갖는 20개 연속 뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열을 포함할 것이다. 바람직하게 약 100% 서열 상동성의 범위는 약 50, 75 또는 100 nt 일 것이다.

본 발명의 목적을 위하여, 두개의 관련된 뉴클레오티드 서열의 "서열 상동성"은 퍼센트로 표현되며, 동일한 잔기를 갖는 두개의 최적화 정렬된 서열을(xlOO) 비교된 위치의 수로 나눈 위치의 수를 언급한다. 갭, 예를 들어, 하나의 서열에 존재하며, 다른 것에 존재하지 않는 잔기의 정렬 위치는 동일하지 않은 잔기를 갖는 위치로서 간주된다. 두 서열의 정렬은 Needleman and Wunsch 알고리즘(Needleman and Wunsch 1970)에 의해 수행된다. 컴퓨터-보조된 서열 정렬은 50의 갭 생성 페널티 및 3의 갭 연장 페널티를 갖는 디폴트 점수 매트릭스를 이용한 Wisconsin Package Version 10.1 (Genetics Computer Group, Madison, Wisconsin, USA)의 부분인 GAP과 같은 표준 소프트웨어 프로그램을 이용하여 간편하게 수행될 수 있다.

RNA 분자의 뉴클레오티드 서열이 상응하는 DNA 분자의 뉴클레오티드 서열에 참조하여 정의될 때마다, 뉴클레오티드 서열에서 티민(T)은 우라실(U)로 치환될 것이다. RNA 또는 DNA 분자로 만들어지는 참조는 본 출원의 범위에서 명확할 것이다.

내인성 PARP 유전자의 발현을 줄이는 데에서 상기 언급된 외인성 유전자의 효능은 비정상의, 폴리아데닐화되지 않은 PARP 억제 RNA 분자의 발현을 유발하는 DNA 인자의 함유물(inclusion)에 의해 더 증진될 수 있다. 그러한 목적에 적합한 하나의 DNA 인자는 WO 00/01133 A1에 개시된 바와 같이 자기-스플라이싱 리보자임을 암호화하는 DNA 영역이다.

식물 세포의 내인성 PARP 유전자의 발현을 줄이는 데 상기 언급된 외인성 유전자의 효능은 안티센스 PARP 억제 RNA 분자를 암호화하는 본원에 개시된 바와 같은 외인성 유전자와 센스 PARP 억제 RNA 분자를 암호화하는 본원에 개시된 바와 같은 외인성 유전자를 동시에 식물 세포로 포함시키는 것에 의해서도 더욱 증진될 수 있으며, 여기서 상기 안티센스 및 센스 PARP 억제 RNA 분자는 WO 99/53050 A1에 개시된 바와 같이 언급된 적어도 20개의 연속 뉴클레오티드 사이의 염기 쌍에 의하여 이중 나선 RNA 영역을 형성할 수 있다.

WO 99/53050 A1에 더욱 개시된 바와 같이 이중 나선 RNA 영역을 형성할 수 있는 센스 및 안티센스 PARP 억제 RNA 영역은 하나의 RNA 분자에, 바람직하게는 스페이서 영역에 의하여 분리되어 존재할 수 있다. 스페이서 영역은 인트론 서열을 포함할 수 있다. 그러한 외인성 유전자는 분리되거나 확인된 내인성 PARP 유전자의 적어도 20 뉴클레오티드를 포함하는 DNA 단편을 기능적으로 연결시켜 간편하게 작제할 수 있으며, 전자 종결 및 폴리아데닐화에 관여하는 3' 말단 형성 영역과 식물 발현가능한 프로모터에 역반복(inverted repeat)으로 이의 발현이 감소되도록 표적화된다. 상기와 같은 외인성 유전자의 작제물을 얻기 위하여, WO 02/059294 A1에 개시된 바와 같은 벡터를 이용할 수 있다.

본 명명법은 PARP1 단백질(및 상응하는 parp1 유전자)로서 통상의 Zn-핑거-함유 폴리머라제로 언급되는 반면, 구조적으로 비-통상의 PARP 단백질은 PARP2(및 상응하는 parp2 유전자)로 언급되며, 본원에 이용된 바와 같은 PARP 암호화 유전자는 둘 다의 타입을 언급할 수 있다.

실험적으로 설명된, 잠재적 폴리 ADP-리보오스 폴리머라제 단백질 서열, 이의 부분 또는 상동 서열을 확인하기 위한 다음 데이터베이스 (본원에 참조로 도입) 도입은 본 발명에 따라 이용될 수 있다: BAD53855 (벼, Oryza sativa); BAD52929 (벼); XP_477671 (벼); BAC84104 (벼); AAT25850 (지 메이즈, Zea mays); AAT25849 (지 메이즈); NP_197639 (아라비도프시스 탈리아나); NP_850165 (아라비도프시스 탈리아나); NP_188107 (아라비도프시스 탈리아나); NP 850586 (아라비도프시스 탈리아나); BAB09119 (아라비도프시스 탈리아나); AAD20677 (아라비도프시스 탈리아나); Q11207 (아라비도프시스 탈리아나); C84719 (아라비도프시스 탈리아나); T51353 (아라비도프시스 탈리아나); T01311 (아라비도프시스 탈리아나); AAN12901 (아라비도프시스 탈리아나); AAM13882 (아라비도프시스 탈리아나); CAB80732 (아라비도프시스 탈리아나); CAAl 0482 (아라비도프시스 탈리아나); AAC79704 (지 메이즈): AAC19283 (아라비도프시스 탈리아나); CAA10888 (지 메이즈); CAA10889 (지 메이즈); CAA88288 (아라비도프시스 탈리아나).

본 발명의 특정 구체예로서, PARP 유전자 발현 감소 유전자는 다음의 기능적으로 연결된 DNA 단편을 포함할 수 있다:

a) 식물-발현가능한 프로모터;

b) 전사되어 다음을 포함하는 RNA 분자가 되는 DNA 영역:

a. 서열 번호 1 (아라비도프시스 parp1 코딩 영역) 서열 번호 2 (아라비도프시스 parp 2 코딩 영역) 서열 번호 3 (지 메이즈(Zea mays) parp1 코딩 영역), 서열 번호 4 (또다른 지 메이즈 parp1 코딩 영역), 서열 번호 5 (지 메이즈 parp2 코딩 영역) 또는 서열 번호 6 (목화 parp2 부분 cDNA)에서 선택된 뉴클레오티드 서열 또는 언급된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 바와 유사하거나 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열에서 선택된 약 20개의 연속 뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열에 약 96% 서열 상동성을 갖는 적어도 약 20개의 연속 뉴클레오티드를 포함하는 안티센스 뉴클레오티드 서열.

b. 안티센스 뉴클레오티드 서열에 상보적인 적어도 약 20개 뉴클레오티드를 포함하는 센스 뉴클레오티드 서열. 상기 센스 뉴클레오티드 서열은 서열 번호 1 (아라비도프시스 parp1 코딩 영역) 서열 번호 2 (아라비도프시스 parp 2 코딩 영역) 서열 번호 3 (지 메이즈 parp1 코딩 영역), 서열 번호 4 (또다른 지 메이즈 parp1 코딩 영역), 서열 번호 5 (지 메이즈 parp2 코딩 영역) 또는 서열 번호 6 (목화 parp2 부분 cDNA)에서 선택된 뉴클레오티드 서열 또는 언급된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 바와 유사하거나 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열에서의 뉴클레오티드 서열에서 선택된 약 20개의 연속 뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열에 약 96% 서열 상동성을 갖는 적어도 약 20개의 연속 뉴클레오티드를 포함할 수 있다;

여기서 센스 및 안티센스 뉴클레오티드 서열은 이중 나선 RNA 분자(dsRNA)를형성할 수 있다;

c) 전사 종결 및 폴리아데닐화를 위한 DNA 영역.

그러나 WO00/04173 또는 EP 04077984.5에 개시된 바와 같은 다른 PARP 암호화 유전자가 이용될 수 있는 것이 명확할 것이다.

내스트레스성을 증가시키기 위한 본 발명의 목적이 유사한 식물에서 PARP 발현 및/또는 활성과 비교하여 PARP 발현 및/또는 활성이 감소되는 변이체 PARP 암호화 유전자를 그들의 게놈에 포함하는 식물 또는 식물 세포에 상기 언급된 화학 물질을 적용하여 성취될 수 있다는 것 또한 명확할 것이며, 여기서 또한 변이체 PARP를 지닌 식물의 내스트레스성이 증가될 것이다. 그러한 변이체 PARP 암호화 유전자가 예를 들어, 돌연변이 형성에 의하여 유도될 수 있거나, PARP 암호화 유전자의 대립형질을 자연적으로 발생할 수 있으며, 이는 함유하는 식물의 증가된 내스트레스성과 관련된다.

본 발명의 또다른 구체예에서, 상기 언급된 화합물은 예를 들어 WO 2004/090140 (본원에 참조로 도입)에 개시된 바와 같이 식물 또는 식물 세포의 ParG 암호화 유전자의 발현 및/또는 활성을 줄일 수 있는 외인의 내스트레스성 증진 유전자를 포함하는 식물 또는 식물 세포에 적용된다.

PARG (폴리 (ADP-리보오스) 글리코하이드롤라제; E.C.3.2.1.143)은 그것의 엑소글리코시다제 및 엔도글리코시다제 활성(PARG)으로 폴리(ADP-리보오스) 폴리머를 유리 ADP-리보오스로 전환시킨다.

아라비도프시스에서 시간-조절된 유전자의 전사와 식물 성장 내지 개화(tej)의 광기간 의존적 전이에 영향을 미치는 돌연변이에서 불활성화된 야생형 유전자의 map-based 클로닝으로 식물에서 폴리 (ADP-리보오스) 글리코하이드롤라제를 확인하였다. 유전자의 뉴클레오티드 서열은 수탁 번호 AF394690 (Panda et al., 2002 Dev. Cell. 3, 51-61; 서열 번호 7) 하에서의 뉴클레오티드 데이터베이스에서 수득될 수 있다.

식물에서 다른 식물 PARG 암호화 유전자의 뉴클레오티드 서열은 WO 2004/090140 A2, 이를 테면, 솔라륨 투버로섬(Solarium tuberosum) (서열 번호 8); 벼 (서열 번호 9) 또는 지 메이즈 (서열 번호 10)에서의 PARG 유전자에서 발견될 수 있으며, 다른 식물에서 추가의 PARG 암호화 유전자 및 이의 변이체를 분리하는 방법을 발견할 수 있다.

이에 따라, 일 구체예에서, 내스트레스성이 되도록 조작된 식물 또는 식물 세포는 다음의 기능적으로 연결된 DNA 단편을 포함할 수 있다:

a) 식물-발현가능한 프로모터;

b) 전사되어 다음을 포함하는 억제 RNA 분자가 되는 DNA 영역;

i. 서열 번호 7, 서열 번호 8, 서열 번호 9 또는 서열 번호 10 또는 언급된 뉴클레오티드 서열과 유사하거나 동일한 아미노산 서열을 지닌 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열과 같은 식물 PARG 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열에 상보적인 것으로부터 선택된 약 20개 뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열에 대하여 적어도 96% 서열 상동성을 갖는 적어도 20개의 연속 뉴클레오티드를 포함하는 안티센스 뉴클레오티드 영역; 또는

ii. 서열 번호 7, 서열 번호 8, 서열 번호 9 또는 서열 번호 10 또는 언급된 뉴클레오티드 서열과 유사하거나 동일한 아미노산 서열을 지닌 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열과 같은 식물 PARG 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열에서 선택된 적어도 20개의 연속 뉴클레오티드를 포함하는 센스 뉴클레오티드 영역; 또는

iii. 이중 나선 RNA 분자를 형성할 수 있는 상기 언급된 i) 또는 ii)와 같은 안티센스 및 센스 뉴클레오티드 서열;

c) 전사 종결 및 폴리아데닐화에 관여하는 DNA 영역.

센스 및 안티센스 뉴클레오티드 서열 또는 dsRNA 분자의 길이의 부가적 기준은 당업자에게 이미 명백할 것이며, ParG 억제 RNA 분자에 대한 서열 상동성은 RARP 억제 RNA 분자를 위해 상기에서 언급된 바와 같이 이용될 수 있다.

본 발명의 또다른 구체예에서, 외인의 내스트레스성 증진 유전자는 EP 04077624.7 (본원에 참조로 삽입)에 개시된 바와 같은 다음의 기능적으로 연결된 DNA 분자를 포함할 수 있다:

a) 식물-발현가능한 프로모터;

b) 니코틴아미다제, 니코티네이트, 포스포리보실트랜스퍼라제, 니코틴산 모노뉴클레오티드 아데닐 트랜스퍼라제 또는 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 합성효소에서 선택된 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 셀비지 합성 경로의 식물-기능성 효소를 암호화하는 DNA 영역; 및

c) 전사 종결 및 폴리아데닐화에 관여하는 3'말단 영역.

본원에 이용된 바와 같은 "니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 셀비지 합성 경로의 식물-기능성 효소"는 식물에 도입될 때, 적절한 조절 인자, 이를 테면 식물 발현가능한 프로모터 및 종결 영역에 연결되며, 전사 및 번역되어 식물 세포에서 기능적인 NAD 셀비지 합성 경로의 효소를 만들 수 있는 효소이다. 식물 소스에서 수득될 뿐 아니라, 사카로마이세스 세레비시아 또는 다른 효모 또는 곰팡이로부터 수득되는 NAD 셀비지 합성에서의 효소(및 암호화 유전자)가 포함된다. 유사한 식물-유래 효소가 영향받을 수 있는 것과 비교하여 이들이 효소적 피드백 조절 등에 덜 영향을 받을 것이기 때문에, 후자 단백질이 본 발명에 따른 방법에 더욱 적합할 수 있다고 생각된다.

NAD 셀비지 합성 경로에 관여하는 효소는 다음을 포함한다

-니코틴아미드의 아미드기의 가수분해를 촉매하며, 니코티네이트 및 NH₃를 방출하는 니코틴아미다제(EC 3.5.1.19). 상기 효소는 니코틴아미드 디아미다제, 니코틴아미드 아미다제, YNDase 또는 니코틴아미드 아미도하이드롤라제로도 알려져 있다.

-니코틴아미드 포스포리보시트랜스퍼라제(EC 2.4.2.11)는 또한 니아신 리보뉴클레오티다제,니코틴산 모노뉴클레오티드 글리코하이드롤라제; 니코틴산 모노뉴클레오티드 피로-포스포릴라제; 니코틴산 포스포리보실트랜스퍼라제로도 알려져 있으며, 다음 반응을 촉매한다

니코티네이트-D-리보뉴클레오티드 + 디포스페이트 = 니코티네이트 + 5-포스포-α-D 리보오스 1-디포스페이트

-니코티네이트-뉴클레오티드 아데닐릴트랜스퍼라제(EC 2.7.7.18)는 디아미도-NAD+ 포스포릴라제; 니코티네이트 모노뉴클레오티드 아데닐트랜스퍼라제; 디아민도니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 피로포스포릴라제; NaMT-ATase; 니코틴산 모노뉴클레오티드 아데닐릴트랜스퍼라제로도 알려져 있으며, 다음 반응을 촉매한다

ATP + 니코티네이트 리보뉴클레오티드 = 디포스페이트 + 디아미도-NAD⁺

-NAD-합성 효소(EC 6.3.1.5)는 NAD 합성 효소; NAD⁺ 합성 효소; 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 합성 효소; 디포스포피리딘 뉴클레오티드 합성 효소로도 알려져 있으며, 다음 반응을 촉매한다

디아미도- NAD⁺ + ATP + NH₃ = AMP+ 디포스페이트 + NAD⁺

본 발명의 일 구체예에서, NAD 셀비지 경로의 식물 기능성 효소를 암호화하는 DNA 영역은 서열 번호 11, 12, 13, 14 또는 15에서의 뉴클레오티드 서열 또는 상기 언급된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 단백질과 유사하거나 동일한 아미노산 서열을 지닌 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.

Hunt et al., 2004에 개시된 바와 같이, 이러한 효소의 식물 동족체가 확인되었으며, 이러한 DNA 서열은 유사한 효과를 위해 이용될 수 있다(Hunt et al., 2004, New Phytologistl63(1):31-44). 확인된 DNA 서열은 다음 수탁 번호를 갖는다: 니코틴아미다제를 위하여: At5g23220 (서열 번호 16); At5g23230 (서열 번호 17) 및 At3g16190 (서열 번호 18); 니코티네이트 포스포리보실트랜스퍼라제를 위하여: At4g36940 (서열 번호 19), At2g23420 (서열 번호 20), 니코틴산 모노뉴클레오티드 아데닐트랜스퍼라제를 위하여: At5g55810 (서열 번호 21) 및 NAD 합성 효소를 위하여: Atlg55090 (서열 번호 22).

그러나 내스트레스성이 되도록 조작된 식물이 이러한 뉴클레오티드 서열의 이의 삽입, 결실 및 치환을 포함하는 변이체도 포함할 수 있다는 것이 명백할 것이다. 이와 같이, 사카로마이세스 세레비시아와 다른 종에서 상기 언급된 뉴클레오티드 서열에 대한 동족체가 이용될 수 있다. 이들은 식물으로부터의 뉴클레오티드 서열, 동일한 아미노산 서열을 지닌 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열, 뿐 아니라 뉴클레오티드 서열의 변이체를 포함하나 이에 한정되지 않는다.

개시된 뉴클레오티드 서열의 변이체는 서열 리스트에서 확인된 것과 같이 NAD 셀비지 경로에서의 효소를 암호화하는 확인된 뉴클레오티드 서열과 바람직하게 적어도 약 80% 또는 85% 또는 90% 또는 95%의 서열 상동성을 가질 것이다. 바람직하게, 이들 변이체는 NAD 셀비지 경로에서의 효소와 동일한 효소 활성을 같는 기능 단백질을 암호화할 것이다.

본 발명의 방법은 식물 또는 식물 세포의 내성을 증가시키기 위하여 다른 종류의 스트레스-유도 환경, 특히 비생물학적 스트레스 환경, 이를 테면 침수, 강한 빛의 환경, 강한 자외선 조사 레벨, 증가된 과산화수소 레벨, 가뭄 환경, 높거나 낮은 온도, 증가된 염도 환경, 제초제, 구충제, 살충제 등의 적용에 이용될 수 있다. 본 발명의 방법은 불리한 환경, 특히 비생물학적 스트레스 환경, 이를 테면, 침수, 강한 빛의 환경, 강한 자외선 조사 레벨, 증가된 과산화수소 레벨, 가뭄 환경, 높거나 낮은 온도, 증가된 염도 환경 등에서 자라는 식물의 세포에서 반응성 산소 종(ROS)의 레벨을 감소하기 위하여 또는 NAD+, NADH+ 또는 ATP의 레벨을 증가시키기 위하여 이용될 수 있다. ROS 레벨 또는 NADH 레벨은 실시예에서 개시된 것을 포함하여 본 분야에 공지된 방법을 이용하여 결정될 수 있다. 식물의 증가된 내스트레스성은 또한 WO97/06267 또는 WO02/066972에 개시된 바와 같은 미토콘드리아 전자 흐름을 결정하기 위한 방법을 이용하여 분석될 수 있다.

본 발명을 특정 모드의 활성으로 제한하려는 의도가 없을 지라도, 네오니코티노이드, 특히 클로로피리딘 측쇄를 포함하는 네오니코티노이드 화합물의 대사산물이 NAD 셀비지 경로로 공급되고, 더 높은 NAD 레벨의 수율을 유발할 수 있으리라 기대된다. 이러한 관점에서, 스트레스 환경 하에서 그러한 식물 세포 중 NAD 레벨이 내스트레스성이 되도록 조작되지 않은 식물 세포에서보다 이미 유의적으로 더 높은 것과 같이, 내스트레스성이 되도록 조작된 식물에서 그러한 화합물의 적용이 어떤 효과를 가질 것이라 기대되지 않는다.

식물 또는 식물 세포에 네오니코티노이드 화합물을 적용하여 내스트레스성을 증가시키기 위한 본 발명의 방법은 내스트레스성이 되도록 조작된 임의의 식물, 쌍자엽 및 외자엽 식물 세포 모두 및 비제한적으로 목화, 배추과 채소, 평지기름, 밀, 옥수수 또는 메이즈, 보리, 해바라기, 벼, 귀리, 사탕수수, 대두, 채소 ( 치커리, 상추, 토마토 포함), 담배, 감자, 사탕무, 파파야, 파인애플, 망고, 아라비도프시스 탈리아나, 또한 원예, 화초 원예 또는 임업에 이용되는 식물, 곡류 식물, 이를 테면 밀, 귀리, 보리, 호밀, 벼, 잔디, 수수, 조 또는 사탕수수 식물을 포함하는 식물에서 적합할 수 있다.

본 발명의 방법은 목화, 담배, 캐놀라, 평지기름, 대두, 야채, 감자, 미동정 개구리밥, 미동정 담배, 고구마, 아라비도프시스, 알파파, 보리, 콩, 옥수수, 목화, 아마, 완두, 레이프(rape), 쌀, 호밀, 홍화, 수수, 대두, 해바라기, 담배, 밀, 아스파라거스, 비트, 브로콜리, 양배추, 당근, 콜리플라워, 셀러리, 오이, 가지, 상추, 양파, 평지기름, 후추, 감자, 호박, 무, 시금치, 스쿼시, 토마토, 주키니, 아몬드, 사과, 살구, 바나나, 검은 딸기, 블루베리, 카카오, 체리, 코코넛, 넌출월귤, 데이트, 포도, 그레이프프루트, 구아바, 키위, 레몬, 라임, 망고, 멜론, 승도 복숭아, 오렌지, 파파야, 시계풀 열매, 복숭아, 땅콩, 배, 파인애플, 피스타치오, 자두, 나무딸기, 딸기, 탄제린, 호두나무 및 수박을 포함하나 이에 한정되지 않는 임의의 식물에도 적용될 수 있다.

본원에 이용된 바와 같은 "포함하는"은 언급된 특성, 정수, 단계 또는 성분의 존재를 설명하나, 하나 이상의 특성, 정수, 단계 또는 성분 또는 이의 그룹의 존재 또는 부가를 제외하지 않는 것으로 해석될 것이다. 이에 따라, 예를 들어, 뉴클레오티드 또는 아미노산의 서열을 포함하는 핵산 또는 단백질은 실제로 언급된 것보다 더 뉴클레오티드 또는 아미노산을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 더 큰 핵산 또는 단백질에 포함된다. 기능적으로 또는 구조적으로 정의된 DNA 영역을 포함하는 외인성 유전자는 부가의 DNA 영역 등을 포함할 수 있다.

실시예에서 달리 언급되지 않는 한, 모든 재배합 DNA 기술은 Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY and in Volumes 1 and 2 of Ausubel et al. (1994) Current Protocols in Molecular Biology, Current Protocols, USA에 개시된 바와 같은 표준 프로토콜에 따라 수행하였다. 식물 분자 조작을 위한 표준 물질 및 방법은 Plant Molecular Biology Labfax (1993) by R.D.D. Croy, jointly published by BIOS Scientific Publications Ltd (UK) 및 Blackwell Scientific Publications, UK에 개시되어 있다. 표준 분자 생물 기술을 위한 다른 참조는 Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY, Volumes I and II of Brown (1998) Molecular Biology LabFax, Second Edition, Academic Press (UK)를 포함한다. 폴리머라제 연쇄 반응을 위한 표준 물질 및 방법은 Dieffenbach and Dveksler (1995) PCR Primer: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, and in McPherson at al. (2000) PCR - Basics: From Background to Bench, First Edition, Springer Verlag, Germany에 발견될 수 있다.

상세한 설명 및 실시예를 통하여 다음 서열을 위해 참조를 만들었다.

서열 번호 1: 아라비도프시스 탈리아나의 parp1 코딩 영역.

서열 번호 2: 아라비도프시스 탈리아나의 parp2 코딩 영역.

서열 번호 3: 지 메이즈(Zea mays)의 parp1 코딩 영역 1.

서열 번호 4: 지 메이즈의 parp1 코딩 영역 2.

서열 번호 5: 지 메이즈의 parp2 코딩 영역.

서열 번호 6: 목화의 parp2 부분 코딩 영역.

서열 번호 7: 아라비도프시스 탈리아나의 parG 코딩 영역.

서열 번호 8: 솔라륨 투버로섬(Solarium tuberosum)의 parG 코딩 영역.

서열 번호 9: 벼(Oryza sativa)의 parG 코딩 영역.

서열 번호 10: 지 메이즈의 parG 코딩 영역.

서열 번호 11: 사카로마이세스 세레비시아(Saccharomyces cereviseae) 니코틴아미다제의 뉴클레오티드 서열(PNC1).

서열 번호 12: 사카로마이세스 세레비시아 니코티네이트 포스포리보실트랜스퍼라제의 뉴클레오티드 서열(NPT1) (상보적).

서열 번호 13 : 사카로마이세스 세레비시아 니코틴산 모노뉴클레오티드 아데닐 트랜스퍼라제 1(NMA1)의 뉴클레오티드 서열.

서열 번호 14: 사카로마이세스 세레비시아 니코틴산 모노뉴클레오티드 아데닐 트랜스퍼라제 2(NMA2)의 뉴클레오티드 서열.

서열 번호 15: 사카로마이세스 세레비시아 NAD 합성 효소 (QNS1)의 뉴클레오티드 서열.

서열 번호 16: 아라비도프시스 탈리아나 (아형 1) 니코틴아미다제의 뉴클레오티드 서열.

서열 번호 17:. 아라비도프시스 탈리아나 (아형 2) 니코틴아미다제의 뉴클레오티드 서열.

서열 번호 18:. 아라비도프시스 탈리아나 (아형 3) 니코틴아미다제의 뉴클레오티드 서열.

서열 번호 19: 아라비도프시스 탈리아나 (아형 1) 니코티네이트 포스포리보실트랜스퍼라제의 뉴클레오티드 서열.

서열 번호 20: 아라비도프시스 탈리아나 (아형 2) 니코티네이트 포스포리보실트랜스퍼라제의 뉴클레오티드 서열.

서열 번호 21: 아라비도프시스 탈리아나 니코틴산 모노뉴클레오티드 아데닐 트랜스퍼라제의 뉴클레오티드 서열.

서열 번호 22: 아라비도프시스 탈리아나 NAD 합성 효소의 뉴클레오티드 서열.

실시예 1: NADH 함량 및 초과산화물 함량 측정을 위한 프로토콜.

수용성 테트라졸륨 염을 이용한 세포내 NAD (P)H 정량화

참고문헌; Jun Nakamura, Shoji Asakura, Susan D. Hester, Gilbert de Murcia, Keith W. Caldecott and James A. Swenberg (2003): 실시간으로 세포내 NAD(P)H 정량화는 염기 절단 수선 결함 세포에서 DNA 단일 나선 파손 수선의 불균형을 모니터할 수 있다. Nucleic Acids Research 31(17), e104.

식물 재료

대부분의 식물 물질을 사용할 수 있다:

-생체 외 증식된 아라비도프시스 새싹 14 내지 18일 된 것, 그러나 개화하지는 않음 -평지 유지종자의 배축 외식편

세포 계수 키트 -8 ( CCK -8)

Sopachem n.v./Belgium, 72A, Avenue du Laarbeeklaan, 1090 Brussels, Belgium

내용물

5mMol/L WST-8 (테트라졸륨 염), 0.2mMol/L 1-메톡시 PMS, 150mMol/L NaCl를 함유하는 5mL 병;

반응 용액:

-25 mM K-포스페이트 완충액(pH 7.4) 10 ㎖

-CCK-8 0.5 ㎖

-0.1 mM 1-메톡시-5-메틸펜아지늄 메틸 설페이트(=1-메톡시펜아진 메토설페이트): 1 ㎕/㎖의 100 mM 모액(MW = 336.4; 물 2.973 ㎖ 중의 100 ㎎)

-1 방울의 트윈20/25 ㎖

과정

식물 물질을 수확하고 25 mM K-포스페이트 완충액(pH 7.4) 중에 넣는다(예를 들어: 150 평지 유지종자의 배축 외식편 또는 1 gr 아라비도프시스 새싹(뿌리 없음)). 완충액을 반응 용액으로 대체한다(1 gr의 아라비도프시스 새싹에 대해 15 ㎖ 또는 150 평지 유지종자의 배축 외식편에 대해 15 ㎖). 암실에서 26 ℃에서 약 1/2 시간 배양한다(반응에 이어서). 450 ㎚에서 반응 용액의 흡광도를 측정한다.

XTT 의 환원을 정량분석함으로써 초과산화물 생성 측정

참고문헌: De Block, M., De Brouwer, D.(2002) 평지 유지종자 주 및 하이브리드의 활력을 정량분석하기 위한 간단하고 확실한 생체 외 분석. Plant Physiol. Biochem. 40, 845-852

A. 브라시카 나푸스

배지 및 반응 완충액

파종 배지(배지 201): 절반 농축된 무라쉬게와 스쿠그 염; 2% 슈크로스 pH 5.8; 0.6% 아가(Difco Bacto Agar); 250 ㎎/ℓ 트라이아실린

캘러스 유도 배지 A2S3: MS 배지, 0.5 g/ℓ Mes(pH 5.8), 3% 수크로오스, 40 ㎎/ℓ 아데닌-SO₄, 0.5% 아가로스, 1 ㎎/ℓ 2,4-D, 0.25 ㎎/ℓ NAA, 1 ㎎/ℓ BAP, 250 ㎎/ℓ 트라이아실린.

반응 완충액: 25 mM K-포스페이트 완충액 pH 8; 1 mM 나트륨, 3'-{1-[페닐아미노-카보닐]-3,4-테트라졸륨}-비스(4-메톡시-6-니트로) = XTT(BioVectra, Canada)(MW 674.53). XTT를 조심스럽게 가온한 용액(±37 ℃)으로 용해시킨다(사용 전에 실온으로 냉각시킨다). 완충액 25 ㎖에 대해 1 방울의 Tween 20.

종자의 살균-종자의 사전 발아-묘목의 증식

종자를 2 분간 70% 에탄올에 담그고, 이어서 15 분간 0.1% Tween20을 함유하는 차아염소산 나트륨 용액(약 6% 활성 염소 함유) 중에 담근다. 최종적으로, 상기 종자를 1 ℓ의 멸균 수로 세정한다. 종자를 멸균 수중에서 1 시간 이상 배양한다(발아를 억제할 수 있는 성분들의 종자로부터의 확산을 허용한다). 종자를 50 ㎖의 멸균수(+250 ㎎/ℓ 트라이아실린)를 함유하는 250 ㎖ 삼각 플라스크에 넣는다. 약 20 시간 동안 진탕시킨다. 유근이 돌출된 종자를 약 125 ㎖의 파종 배지(10 종자/용기, 오염에 의한 종자 손실을 감소시키기 위해 너무 많지 않아야 한다)를 함유하는 듀체파(Duchefa)의 비트로 벤트(Vitro Vent) 용기에 넣는다. 상기 종자를 16 시간의 광주기로 ±24 ℃ 및 10 내지 30 μ 아인슈타인 s^-1m^-1에서 발아시킨다. 파종해야할 종자 량의 계산: 5 배축 조각/묘목.

상기 배축 외식편의 사전 배양 및 스트레스의 유도

파종 후 12 내지 14일째에, 상기 배축을 약 7 내지 10 ㎜ 조각으로 절단한다. 상기 배축 외식편(25 배축/Optilux Petridish, Falcon S1005, Denmark)을 25 ℃(10 내지 30 μ 아인슈타인 s^-1m^-1)에서 배지 A2S3 상에서 5일간 배양한다. 조건당 150 개의 배축 외식편을 사용한다.

스트레스의 유도

배축 외식편을 각각 0, 25 및 50 ㎎/ℓ의 아세틸살리실산을 함유하는 A2S3 배지로 옮긴다. 16 시간의 광 주기로 25 ℃ 및 10 내지 30 μ 아인슈타인 s^-1m^-1에서 약 24 시간 동안 배양한다.

XTT -분석

150 개 배축 외식편을 50 ㎖ 팔콘 튜브로 옮긴다. 반응 완충액(XTT 없음)으로 세척한다. 반응 완충액 + XTT 20 ㎖을 가한다. 외식편이 잠겨야 하지만 진공 침투되지는 않는다. 26 ℃에서 암실에서 배양한다. 상기 반응에 이어서 470 ㎚에서 반응 배지의 흡수를 측정한다.

B. 아라비도프시스 탈리아나

배지 및 반응 완충액

식물 배지: 절반 농축된 무라쉬게와 스쿠그 염; B5 비타민; 1.5% 수크로오스; pH 5.8; 0.7% 디프코 아가.

배양 배지: 1/2 농축된 MS-염; 1% 수크로오스; 0.5 g/ℓ MES pH 5.8; 25 ㎖ 배지에 대해 1 방울의 Tween 20.

반응 완충액: 25 mM K-포스페이트 완충액 pH 8; 1 mM 나트륨, 3'-{1-[페닐아미노-카보닐]-3,4-테트라졸륨}-비스(4-메톡시-6-니트로) = XTT(BioVectra, Canada)(MW 674.53). XTT를 조심스럽게 가온한 용액(±37 ℃)으로 용해시킨다(사용 전에 실온으로 냉각시킨다). 완충액 25 ㎖에 대해 1 방울의 Tween 20.

아라비도프시스 식물

아라비도프시스 주: 시험하기 위한 대조용 주(시험된 주들이 유래된 모 주)

아라비도프시스 종자의 살균: 2 분 70% 에탄올; 10 분 표백(6% 활성 염소) + 20 ㎖의 용액에 대해 1 방울의 Tween 20; 멸균 수로 5 회 세척; 살균을 2 ㎖의 에펜도르프 튜브에서 수행한다. 아라비도프시스 종자는 상기 튜브의 바닥에 가라앉으며 1 ㎖ 피펫맨에 의해 상기 액체를 제거한다.

종자의 사전 발아: 멸균 수 12 ㎖을 함유하는 9 ㎝ 옵틸룩스 페트리디쉬(Falcon)에서 24 시간까지 밤새 약한 광-아라비도프시스 식물의 증식 종자를 ±125 ㎖의 식물 배지를 함유하는 팔콘의 인터그리드 티슈 컬쳐(Intergrid Tissue Culture, nr. 3025) 디스크에 파종한다: 1 종자/격자. 식물을 24 ℃, 30 μ 아인슈타인 s^-1m^-1, 16 시간 명-8 시간 암으로 약 18 일간(너무 자라기 전에) 증식시킨다. 상기 분석을 수행하기 위해서 식물 물질(뿌리가 없는 새싹)/주/조건이 필요하다. 1 g 새싹은 40 내지 60 개의 식물에 상응한다.

스트레스 유도

패러콰트: 아라비도프시스 새싹(뿌리 없음)을 수확한다. 각각 0, 5 및 10 μM의 패러콰트를 함유하는 배양 배지(새싹은 잠겨야하지만 진공 침투되지는 않는다)에 새싹 1 g을 넣는다. 배양 배지: 팔콘의 인터그리드 티슈 컬쳐 디스크(nr. 3025) 중의 ±150 ㎖. 16 시간의 광 주기로 ±24 시간 및 30 내지 50 μ 아인슈타인 s^-1m^-1에서 암실에서 24 ℃에서 배양한다.

강한 광: 상기 플레이트의 절반을 강한 광(250 μ 아인슈타인 s^-1m^-1)으로 옮기고 4 내지 20 시간 동안 배양한다.

XTT -분석

아가 플레이트(강한 광 스트레스) 또는 액체 배양 배지(패러콰트 스트레스)로부터 새싹(뿌리 없음)을 수확하고 상기를 반응 완충액(XTT 없음)을 함유하는 50 ㎖ 팔콘 튜브에 넣는다. 반응 완충액을 XTT(15 ㎖/gr)를 함유하는 완충액으로 대체한다. 새싹은 잠겨야하지만, 진공 침투되지는 않는다. 26 ℃에서 암실에서 배양한다. 상기 반응에 이어서 470 ㎚에서 상기 반응 배지의 흡수를 측정한다(약 1 시간).

실시예 2: 내스트레스성을 증가시키는 트랜스제닉 유전자를 함유하는 식물에 네오니코티노이드 화합물의 적용 후 내스트레스성 분석

WO 00/04173 A1에 개시된 바와 같이(예를 들어 실시예 8에서) 내인성 PARP 유전자를 환원시킬 수 있는 dsRNA 분자를 암호화하는 트랜스제닉 유전자를 함유하는 배추과 식물을 다양한 농도의 이미다클로프리드, 클로티아니딘, 티아메톡삼, 아세트아미프리드, 니텐피람, 디노테푸란, 6-클로로니코틴산 및 티아클로프리드로 처리하고, 다양한 스트레스 환경, 특히 높은-낮은 온도, 강한 빛 강도 또는 가뭄 스 트레스 또는 임의의 배합에 적용하였다.

처리한 다음, 처리되지 않은 트랜스제닉 대조군 식물 및 유사한 방식으로 상기 언급된 화합물로 처리된 비-트랜스제닉 동질 유전자형 식물과 비교하여 시각적인 생존 및 손상을 점수화하였다. 반응 산소 종의 레벨, NAD 및 ATP를 결정하고 대조군 식물과 비교하였다.

화학 물질로 처리한 트랜스제닉 배추과 식물은 스트레스 환경에서 처리되지 않은 트랜스제닉 대조군 식물보다 더 생존한다. 처리되지 않은 트랜스제닉 배추과 식물에서보다 처리된 트랜스제닉 배추과 식물에서 ROS의 레벨이 더 낮으나, NAD 또는 ATP의 레벨이 더 높다.

WO 00/04173 A1에 개시된 바와 같이 내인성 PARP 유전자를 줄일 수 있는 dsRNA를 암호화하는 트랜스제닉 유전자를 포함하는 옥수수 식물을 다양한 농도의 이미다클로프리드, 클로티아니딘, 티아메톡삼, 아세트아미프리드, 니텐피람, 디노테푸란, 6-클로로니코틴산 및 티아클로프리드로 처리하고, 다양한 스트레스 환경, 특히 높은-낮은 온도, 강한 빛 강도 또는 가뭄 스트레스 또는 임의의 배합에 적용하였다.

처리한 다음, 처리되지 않은 트랜스제닉 대조군 식물 및 유사한 방식으로 상기 언급된 화합물로 처리된 비-트랜스제닉 동질 유전자형 식물과 비교하여 시각적인 생존 및 손상을 점수화하였다. 반응 산소 종의 레벨, NAD 및 ATP를 결정하고 대조군 식물과 비교하였다.

화학 물질로 처리한 트랜스제닉 옥수수 식물은 스트레스 환경에서 처리되지 않은 트랜스제닉 대조군 식물보다 더 생존한다. 처리되지 않은 트랜스제닉 옥수수 식물에서보다 처리된 트랜스제닉 옥수수 식물에서 ROS의 레벨이 더 낮으나, NAD 또는 ATP의 레벨이 더 높다.

EP 04077984.5에 개시된 바와 같이 내인성 PARP 유전자를 줄일 수 있는 dsRNA를 암호화하는 트랜스제닉 유전자를 포함하는 목화 식물을 다양한 농도의 이미다클로프리드, 클로티아니딘, 티아메톡삼, 아세트아미프리드, 니텐피람, 디노테푸란, 6-클로로니코틴산 및 티아클로프리드로 처리하고, 다양한 스트레스 환경, 특히 높은-낮은 온도, 강한 빛 강도 또는 가뭄 스트레스 또는 임의의 배합에 적용하였다.

처리한 다음, 처리되지 않은 트랜스제닉 대조군 식물 및 유사한 방식으로 상기 언급된 화합물로 처리된 비-트랜스제닉 동질 유전자형 식물과 비교하여 시각적인 생존 및 손상을 점수화하였다. 반응 산소 종의 레벨, NAD 및 ATP를 결정하고 대조군 식물과 비교하였다.

화학 물질로 처리한 트랜스제닉 목화 식물은 스트레스 환경에서 처리되지 않은 트랜스제닉 대조군 식물보다 더 생존한다. 처리되지 않은 트랜스제닉 목화 식물에서보다 처리된 트랜스제닉 목화 식물에서 ROS의 레벨이 더 낮으나, NAD 또는 ATP의 레벨이 더 높다.

WO2004/090140에 개시된 바와 같이 내인성 PARG 유전자를 감소시킬 수 있는 dsRNA 분자를 암호화하는 트랜스제닉 유전자를 포함하는 배추과 식물 또는 벼를 다양한 농도의 이미다클로프리드, 클로티아니딘, 티아메톡삼, 아세트아미프리드, 니 텐피람, 디노테푸란, 6-클로로니코틴산 및 티아클로프리드로 처리하고, 다양한 스트레스 환경, 특히 높은-낮은 온도, 강한 빛 강도 또는 가뭄 스트레스 또는 임의의 배합에 적용하였다.

처리한 다음, 처리되지 않은 트랜스제닉 대조군 식물 및 유사한 방식으로 상기 언급된 화합물로 처리된 비-트랜스제닉 동질 유전자형 식물과 비교하여 시각적인 생존 및 손상을 점수화하였다. 반응 산소 종의 레벨, NAD 및 ATP를 결정하고 대조군 식물과 비교하였다.

화학 물질로 처리한 트랜스제닉 배추과 식물 또는 벼는 스트레스 환경에서 처리되지 않은 트랜스제닉 대조군 식물보다 더 생존한다. 처리되지 않은 트랜스제닉 배추과 식물 또는 벼에서보다 처리된 트랜스제닉 배추과 식물 또는 벼에서 ROS의 레벨이 더 낮으나, NAD 또는 ATP의 레벨이 더 높다.

EP0477624.7에서 개시된 바와 같이 NAD 셀비지 경로에 관여하는 식물 기능 효소를 암호화하는 트랜스제닉 유전자를 함유하는 아라비도프시스 식물을 다양한 농도의 이미다클로프리드, 클로티아니딘, 티아메톡삼, 아세트아미프리드, 니텐피람, 디노테푸란, 6-클로로니코틴산 및 티아클로프리드로 처리하고, 다양한 스트레스 환경, 특히 높은-낮은 온도, 강한 빛 강도 또는 가뭄 스트레스 또는 임의의 배합에 적용하였다.

처리한 다음, 처리되지 않은 트랜스제닉 대조군 식물 및 유사한 방식으로 상기 언급된 화합물로 처리된 비-트랜스제닉 동질 유전자형 식물과 비교하여 시각적인 생존 및 손상을 점수화하였다. 반응 산소 종의 레벨, NAD 및 ATP를 결정하고 대 조군 식물과 비교하였다.

화학 물질로 처리한 트랜스제닉 아라비도프시스 식물은 스트레스 환경에서 처리되지 않은 트랜스제닉 대조군 식물보다 더 생존한다. 처리되지 않은 트랜스제닉 아라비도프시스 식물에서보다 처리된 트랜스제닉 아라비도프시스 식물에서 ROS의 레벨이 더 낮으나, NAD 또는 ATP의 레벨이 더 높다.

SEQUENCE LISTING <110> Bayer CropScience AG <120> INCREASE OF STRESS TOLERANCE BY APPLICATION OF NEONICOTINOIDS ON PLANTS ENGINEERED TO BE STRESS TOLERANT <130> BCS 04-3083 <160> 22 <170> PatentIn version 3.0 <210> 1 <211> 3187 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> parp1 coding region from Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (11)..(2962) <223> open reading frame <400> 1 taccggagaa atggcaagcc cacataagcc gtggagggcg gagtatgcaa agtcgtcgag 60 gtcttcatgt aaaacttgca agtccgtcat taacaaggag aactttcgtc ttggaaagtt 120 ggttcaatct actcacttcg atggcatcat gcccatgtgg aaccatgctt cttgtatact 180 gaagaagacg aagcagataa aatcagttga tgatgttgaa ggcatagaat cacttcgttg 240 ggaagatcag caaaagatta gaaaatatgt cgaatctgga gcagggagta acacaagcac 300 aagcacaggc acaagcacga gcagtaccgc taataatgcc aaactagaat atgggattga 360 agtgtcacaa acttcccgtg ccggttgcag aaagtgtagc gaaaagatct tgaaaggaga 420 ggtacgtata ttctccaagc ctgaaggccc gggtaacaaa ggtttgatgt ggcatcacgc 480 taaatgtttc cttgaaatgt cttcctctac tgaactggaa agtttgtctg gatggagaag 540 tataccagac tcagaccaag aagctcttct tcccttagtg aagaaagctc tgccggcagc 600 caaaactgag acagcagaag cacgtcaaac aaattcaaga gcaggcacaa aacgaaaaaa 660 tgattctgtt gataacgaga agtcgaaact agcaaaaagt agttttgaca tgtctacaag 720 tggtgcttta caaccttgta gcaaagaaaa ggaaatggag gcccaaacta aggaattgtg 780 ggacctgaag gatgatctga aaaaatatgt aacatcagct gagttgcggg aaatgcttga 840 agtaaatgaa caaagtacaa gaggatctga acttgatctg cgtgataaat gtgctgatgg 900 catgatgttt ggcccactcg ctctctgccc aatgtgctct gggcatcttt ctttctccgg 960 aggactttac cgatgccatg gatacatctc agaatggagc aaatgttctc attccacttt 1020 ggatccagac cgcatcaaag ggaagtggaa aatccctgac gaaacagaaa atcaattcct 1080 tctgaagtgg aataagtctc aaaagagtgt gaagccaaaa cgtattctgc gtcctgtatt 1140 gtctggcgag acatctcagg gtcaaggttc taaagatgca actgactcct caaggagtga 1200 aaggctagca gatcttaaag tttcaattgc tggaaatact aaggaaaggc aaccatggaa 1260 gaagagaatt gaggaagctg gtgcagagtt tcatgctaat gttaaaaaag gtacaagctg 1320 tttggttgtt tgtggactga cagatatcag agacgctgaa atgagaaagg caaggaggat 1380 gaaagtggca atcgtgagag aggattattt ggttgattgt tttaaaaaac agaggaaact 1440 tccatttgac aagtacaaaa ttgaagacac tagtgagagc cttgtcactg ttaaagtaaa 1500 aggacgaagc gctgtgcatg aagcgtctgg cctccaagag cactgtcaca ttcttgaaga 1560 tgggaacagt atctataaca caactctgag catgtctgat ctctctaccg gtatcaatag 1620 ttattacata ctccagataa tccaagaaga taaaggttca gattgttacg tatttcgtaa 1680 atggggccga gttggaaatg aaaagattgg tggtaacaaa gtggaggaaa tgtcaaagtc 1740 tgatgcggtt cacgaattca aacgtctatt tcttgaaaaa accggaaaca catgggaatc 1800 ttgggaacaa aaaacgaatt tccagaaaca acctggaaaa tttctcccgt tggacattga 1860 ttatggagtt aataagcaag tagccaaaaa agagccattt cagaccagta gcaaccttgc 1920 tccatcatta atagaattga tgaagatgct ttttgatgtg gaaacttaca gatctgcaat 1980 gatggagttc gagataaata tgtcagagat gccacttggg aagctcagca aacataatat 2040 acagaagggt tttgaggcat tgacggagat acagaggcta ttgactgaaa gcgaccccca 2100 gcctactatg aaagaaagct tgcttgttga tgctagtaac agatttttta ccatgatccc 2160 ttctattcat cctcatatta tccgagatga agatgacttt aagtcaaagg tgaaaatgct 2220 cgaggctctg caggatatcg aaatagcttc aagaatagtt ggctttgatg ttgatagcac 2280 cgaatctctt gatgataagt ataagaagct gcattgcgat atctcaccac ttcctcatga 2340 tagcgaagat tatcgattaa tcgagaagta tcttaacaca actcatgccc caacgcatac 2400 agagtggagt cttgagctag aggaagtttt tgctcttgaa agagaaggag agtttgataa 2460 atatgctccc cacagagaaa aacttggcaa taagatgctc ctatggcatg gttctcgatt 2520 aacgaatttt gttggaatat tgaaccaagg actgagaatt gcacctccag aagctcctgc 2580 tactggttac atgtttggaa aagggatata ctttgctgac cttgtcagta aaagtgctca 2640 gtactgctac acttgtaaga aaaatccggt gggtctaatg cttctgagtg aagttgcatt 2700 gggagaaata catgagctaa caaaagctaa gtatatggat aaacctccga gagggaaaca 2760 ctcgaccaaa gggctcggca agaaagtgcc tcaagattcc gagtttgcca agtggagagg 2820 tgatgtgact gttccctgtg gaaaacctgt ttcatcaaag gtcaaggctt ctgagcttat 2880 gtacaatgag tatatcgtct acgatacagc ccaggtgaag ttgcagttct tgttgaaagt 2940 aaggtttaag cacaagagat gagcctgaac caaacaagaa gacgtcactt ctgttaacta 3000 aatgtttttt tgggaaatcg aatccaacac gaagacttaa cttttgtaac taaattgctt 3060 ttgataaatt gaattcaaca tgtagtcaca gatttaactc tctggcgttg tagatgtttc 3120 tggttttaaa agagcgtact ctacattttg ttatgctttt tctcagtaat gacacttctt 3180 aagactt 3187 <210> 2 <211> 2147 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> parp2 coding region from Arabidopsis thaliana <220> <221> misc_feature <222> (129)..(2042) <223> open reading frame <400> 2 attgatgaag aagaaaacga agaagaagac tcttcaaatg ctcgcgcgaa ctcacttctg 60 acgaaaacca tacttcctca gtctcattcc ctttccgacg aactattctc ctgaagaaga 120 agacgaaaat ggcgaacaag ctcaaagtcg acgaactccg tttaaaactc gccgagcgtg 180 gactcagtac tactggagtc aaagccgttc tggtggagag gcttgaagag gctatcgcag 240 aagacactaa gaaggaagaa tcaaagagca agaggaaaag aaattcttct aatgatactt 300 atgaatcgaa caaattgatt gcaattggcg aatttcgtgg gatgattgtg aaggaattgc 360 gtgaggaagc tattaagaga ggcttagata caacaggaac caaaaaggat cttcttgaga 420 ggctttgcaa tgatgctaat aacgtttcca atgcaccagt caaatccagt aatgggacag 480 atgaagctga agatgacaac aatggctttg aagaagaaaa gaaagaagag aaaatcgtaa 540 ccgcgacaaa gaagggtgca gcggtgctag atcagtggat tcctgatgag ataaagagtc 600 agtaccatgt tctacaaagg ggtgatgatg tttatgatgc tatcttaaat cagacaaatg 660 tcagggataa taataacaag ttctttgtcc tacaagtcct agagtcggat agtaaaaaga 720 catacatggt ttacactaga tggggaagag ttggtgtgaa aggacaaagt aagctagatg 780 ggccttatga ctcatgggat cgtgcgatag agatatttac caataagttc aatgacaaga 840 caaagaatta ttggtctgac agaaaggagt ttatcccaca tcccaagtcc tatacatggc 900 tcgaaatgga ttacggaaaa gaggaaaatg attcaccggt caataatgat attccgagtt 960 catcttccga agttaaacct gaacaatcaa aactagatac tcgggttgcc aagttcatct 1020 ctcttatatg taatgtcagc atgatggcac agcatatgat ggaaatagga tataacgcta 1080 acaaattgcc actcggcaag ataagcaagt ccacaatttc aaagggttat gaagtgctga 1140 agagaatatc ggaggtgatt gaccggtatg atagaacgag gcttgaggaa ctgagtggag 1200 agttctacac agtgatacct catgattttg gttttaagaa aatgagtcag tttgttatag 1260 acactcctca aaagttgaaa cagaaaattg aaatggttga agcattaggt gaaattgaac 1320 tcgcaacaaa gttgttgtcc gtcgacccgg gattgcagga tgatccttta tattatcact 1380 accagcaact taattgtggt ttgacgccag taggaaatga ttcagaggag ttctctatgg 1440 ttgctaatta catggagaac actcatgcaa agacgcattc gggatatacg gttgagattg 1500 cccaactatt tagagcttcg agagctgttg aagctgatcg attccaacag ttttcaagtt 1560 cgaagaacag gatgctactc tggcacggtt cacgtctcac taactgggct ggtattttat 1620 ctcaaggtct gcgaatagct cctcctgaag cgcctgtaac tggttacatg tttggaaaag 1680 gggtttactt tgcggatatg ttctccaaga gtgcgaacta ttgctatgcc aacactggcg 1740 ctaatgatgg cgttctgctc ctctgcgagg ttgctttggg agacatgaat gaacttctgt 1800 attcagatta taacgcggat aatctacccc cgggaaagct aagcacaaaa ggtgtgggga 1860 aaacagcacc aaacccatca gaggctcaaa cactagaaga cggtgttgtt gttccacttg 1920 gcaaaccagt ggaacgttca tgctccaagg ggatgttgtt gtacaacgaa tatatagtct 1980 acaatgtgga acaaatcaag atgcgttatg tgatccaagt caaattcaac tacaagcact 2040 aaaacttatg tatattagct tttgaacatc aactaattat ccaaaaatca gcgttttatt 2100 gtatttcttt caaactcctt catctctgat tttgcacggt tcactcg 2147 <210> 3 <211> 3211 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> parp1 coding region 1 from Zea mays <220> <221> misc_feature <222> (113)..(3022) <223> open reading frame <400> 3 acctacctga atacgtcatc cctaagtgtt ccgcttcctc tgtcgtccgg cctccaactc 60 catcgaaggg gctagggaga ggagggaacc cgaaccacag caggccggcg caatggcggc 120 gccgccaaag gcgtggaagg cggagtatgc caagtctggg cgggcctcgt gcaagtcatg 180 ccggtcccct atcgccaagg accagctccg tcttggcaag atggttcagg cgtcacagtt 240 cgacggcttc atgccgatgt ggaaccatgc cagcgttgac gatgttgaag ggatagatgc 300 acttagatgg gatgatcaag agaagatacg aaactacgtt gggagtgcct cagctggtac 360 aagttctaca gctgctcctc ctgagaaatg tacaattgag attgctccat ctgcccgtac 420 ttcatgtaga cgatgcagtg aaaagattac aaaaggatcg gtccgtcttt cagctaagct 480 tgagagtgaa ggtcccaagg gtataccatg gtatcatgcc aactgtttct ttgaggtatc 540 cccgtctgca actgttgaga agttctcagg ctgggatact ttgtccgatg aggataagag 600 aaccatgctc gatcttgtta aaaaagatgt tggcaacaat gaacaaaata agggttccaa 660 gcgcaagaaa agtgaaaatg atattgatag ctacaaatcc gccaggttag atgaaagtac 720 atctgaaggt acagtgcgaa acaaagggca acttgtagac ccacgtggtt ccaatactag 780 ttcagctgat atccaactaa agcttaagga gcaaagtgac acactttgga agttaaagga 840 tggacttaag actcatgtat cggctgctga attaagggat atgcttgagg ctaatgggca 900 ggatacatca ggaccagaaa ggcacctatt ggatcgctgt gcggatggaa tgatatttgg 960 agcgctgggt ccttgcccag tctgtgctaa tggcatgtac tattataatg gtcagtacca 1020 atgcagtggt aatgtgtcag agtggtccaa gtgtacatac tctgccacag aacctgtccg 1080 cgttaagaag aagtggcaaa ttccacatgg aacaaagaat gattacctta tgaagtggtt 1140 caaatctcaa aaggttaaga aaccagagag ggttcttcca ccaatgtcac ctgagaaatc 1200 tggaagtaaa gcaactcaga gaacatcatt gctgtcttct aaagggttgg ataaattaag 1260 gttttctgtt gtaggacaat caaaagaagc agcaaatgag tggattgaga agctcaaact 1320 tgctggtgcc aacttctatg ccagggttgt caaagatatt gattgtttaa ttgcatgtgg 1380 tgagctcgac aatgaaaatg ctgaagtcag gaaagcaagg aggctgaaga taccaattgt 1440 aagggagggt tacattggag aatgtgttaa aaagaacaaa atgctgccat ttgatttgta 1500 taaactagag aatgccttag agtcctcaaa aggcagtact gtcactgtta aagttaaggg 1560 ccgaagtgct gttcatgagt cctctggttt gcaagatact gctcacattc ttgaagatgg 1620 gaaaagcata tacaatgcaa ccttaaacat gtctgacctg gcactaggtg tgaacagcta 1680 ctatgtactc cagatcattg aacaggatga tgggtctgag tgctacgtat ttcgtaagtg 1740 gggacgggtt gggagtgaga aaattggagg gcaaaaactg gaggagatgt caaaaactga 1800 ggcaatcaag gaattcaaaa gattatttct tgagaagact ggaaactcat gggaagcttg 1860 ggaatgtaaa accaattttc ggaagcagcc tgggagattt tacccacttg atgttgatta 1920 tggtgttaag aaagcaccaa aacggaaaga tatcagtgaa atgaaaagtt ctcttgctcc 1980 tcaattgcta gaactcatga agatgctttt caatgtggag acatatagag ctgctatgat 2040 ggaatttgaa attaatatgt cagaaatgcc tcttgggaag ctaagcaagg aaaatattga 2100 gaaaggattt gaagcattaa ctgagataca gaatttattg aaggacaccg ctgatcaagc 2160 actggctgtt agagaaagct taattgttgc tgcgagcaat cgctttttca ctcttatccc 2220 ttctattcat cctcatatta tacgggatga ggatgatttg atgatcaaag cgaaaatgct 2280 tgaagctctg caggatattg aaattgcttc aaagatagtt ggcttcgata gcgacagtga 2340 tgaatctctt gatgataaat atatgaaact tcactgtgac atcaccccgc tggctcacga 2400 tagtgaagat tacaagttaa ttgagcagta tctcctcaac acacatgctc ctactcacaa 2460 ggactggtcg ctggaactgg aggaagtttt ttcacttgat cgagatggag aacttaataa 2520 gtactcaaga tataaaaata atctgcataa caagatgcta ttatggcacg gttcaaggtt 2580 gacgaatttt gtgggaattc ttagtcaagg gctaagaatt gcacctcctg aggcacctgt 2640 tactggctat atgttcggca aaggcctcta ctttgcagat ctagtaagca agagcgcaca 2700 atactgttat gtggatagga ataatcctgt aggtttgatg cttctttctg aggttgcttt 2760 aggagacatg tatgaactaa agaaagccac gtccatggac aaacctccaa gagggaagca 2820 ttcgaccaag ggattaggca aaaccgtgcc actggagtca gagtttgtga agtggaggga 2880 tgatgtcgta gttccctgcg gcaagccggt gccatcatca attaggagct ctgaactcat 2940 gtacaatgag tacatcgtct acaacacatc ccaggtgaag atgcagttct tgctgaaggt 3000 gcgtttccat cacaagaggt agctgggaga ctaggcaagt agagttggaa ggtagagaag 3060 cagagttagg cgatgcctct tttggtatta ttagtaagcc tggcatgtat ttatgggtgc 3120 tcgcgcttga tccattttgg taagtgttgc ttgggcatca gcgcgaatag caccaatcac 3180 acacttttac ctaatgacgt tttactgtat a 3211 <210> 4 <211> 3212 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> parp1 coding region 2 from Zea mays <220> <221> misc_feature <222> (81)..(3020) <223> open reading frame <400> 4 gcttcctctg tcgtccggcc tccaactcca tcgaaggggc tagggagagg agggaacccg 60 aaccacagca ggccggcgca atggcggcgc cgccaaaggc gtggaaggcg gagtatgcca 120 agtctgggcg ggcctcgtgc aagtcatgcc ggtcccctat cgccaaggac cagctccgtc 180 ttggcaagat ggttcaggcg tcacagttcg acggcttcat gccgatgtgg aaccatgcca 240 ggtgcatctt cagcaagaag aaccagataa aatccgttga cgatgttgaa gggatagatg 300 cacttagatg ggatgatcaa gagaagatac gaaactacgt tgggagtgcc tcagctggta 360 caagttctac agctgctcct cctgagaaat gtacaattga gattgctcca tctgcccgta 420 cttcatgtag acgatgcagt gaaaagatta caaaaggatc ggtccgtctt tcagctaagc 480 ttgagagtga aggtcccaag ggtataccat ggtatcatgc caactgtttc tttgaggtat 540 ccccgtctgc aactgttgag aagttctcag gctgggatac tttgtccgat gaggataaga 600 gaaccatgct cgatcttgtt aaaaaagatg ttggcaacaa tgaacaaaat aagggttcca 660 agcgcaagaa aagtgaaaat gatattgata gctacaaatc cgccaggtta gatgaaagta 720 catctgaagg tacagtgcga aacaaagggc aacttgtaga cccacgtggt tccaatacta 780 gttcagctga tatccaacta aagcttaagg agcaaagtga cacactttgg aagttaaagg 840 atggacttaa gactcatgta tcggctgctg aattaaggga tatgcttgag gctaatgggc 900 aggatacatc aggaccagaa aggcacctat tggatcgctg tgcggatgga atgatatttg 960 gagcgctggg tccttgccca gtctgtgcta atggcatgta ctattataat ggtcagtacc 1020 aatgcagtgg taatgtgtca gagtggtcca agtgtacata ctctgccaca gaacctgtcc 1080 gcgttaagaa gaagtggcaa attccacatg gaacaaagaa tgattacctt atgaagtggt 1140 tcaaatctca aaaggttaag aaaccagaga gggttcttcc accaatgtca cctgagaaat 1200 ctggaagtaa agcaactcag agaacatcat tgctgtcttc taaagggttg gataaattaa 1260 ggttttctgt tgtaggacaa tcaaaagaag cagcaaatga gtggattgag aagctcaaac 1320 ttgctggtgc caacttctat gccagggttg tcaaagatat tgattgttta attgcatgtg 1380 gtgagctcga caatgaaaat gctgaagtca ggaaagcaag gaggctgaag ataccaattg 1440 taagggaggg ttacattgga gaatgtgtta aaaagaacaa aatgctgcca tttgatttgt 1500 ataaactaga gaatgcctta gagtcctcaa aaggcagtac tgtcactgtt aaagttaagg 1560 gccgaagtgc tgttcatgag tcctctggtt tgcaagatac tgctcacatt cttgaagatg 1620 ggaaaagcat atacaatgca accttaaaca tgtctgacct ggcactaggt gtgaacagct 1680 actatgtact ccagatcatt gaacaggatg atgggtctga gtgctacgta tttcgtaagt 1740 ggggacgggt tgggagtgag aaaattggag ggcaaaaact ggaggagatg tcaaaaactg 1800 aggcaatcaa ggaattcaaa agattatttc ttgagaagac tggaaactca tgggaagctt 1860 gggaatgtaa aaccaatttt cggaagcagc ctgggagatt ttacccactt gatgttgatt 1920 atggtgttaa gaaagcacca aaacggaaag atatcagtga aatgaaaagt tctcttgctc 1980 ctcaattgct agaactcatg aagatgcttt tcaatgtgga gacatataga gctgctatga 2040 tggaatttga aattaatatg tcagaaatgc ctcttgggaa gctaagcaag gaaaatattg 2100 agaaaggatt tgaagcatta actgagatac agaatttatt gaaggacacc gctgatcaag 2160 cactggctgt tagagaaagc ttaattgttg ctgcgagcaa tcgctttttc actcttatcc 2220 cttctattca tcctcatatt atacgggatg aggatgattt gatgatcaaa gcgaaaatgc 2280 ttgaagctct gcaggatatt gaaattgctt caaagatagt tggcttcgat agcgacagtg 2340 atgaatctct tgatgataaa tatatgaaac ttcactgtga catcaccccg ctggctcacg 2400 atagtgaaga ttacaagtta attgagcagt atctcctcaa cacacatgct cctactcaca 2460 aggactggtc gctggaactg gaggaagttt tttcacttga tcgagatgga gaacttaata 2520 agtactcaag atataaaaat aatctgcata acaagatgct attatggcac ggttcaaggt 2580 tgacgaattt tgtgggaatt cttagtcaag ggctaagaat tgcacctcct gaggcacctg 2640 ttactggcta tatgttcggc aaaggcctct actttgcaga tctagtaagc aagagcgcac 2700 aatactgtta tgtggatagg aataatcctg taggtttgat gcttctttct gaggttgctt 2760 taggagacat gtatgaacta aagaaagcca cgtccatgga caaacctcca agagggaagc 2820 attcgaccaa gggattaggc aaaaccgtgc cactggagtc agagtttgtg aagtggaggg 2880 atgatgtcgt agttccctgc ggcaagccgg tgccatcatc aattaggagc tctgaactca 2940 tgtacaatga gtacatcgtc tacaacacat cccaggtgaa gatgcagttc ttgctgaagg 3000 tgcgtttcca tcacaagagg tagctgggag actaggcaag tagagttgga aggtagagaa 3060 gcagagttag gcgatgcctc ttttggtatt attagtaagc ctggcatgta tttatgggtg 3120 ctcgcgcttg atccattttg gtaagtgttg cttgggcatc agcgcgaata gcaccaatca 3180 cacactttta cctaatgacg ttttactgta ta 3212 <210> 5 <211> 2295 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> parp2 coding region fro Zea mays <220> <221> misc_feature <222> (107)..(2068) <223> open reading frame <400> 5 tgacctgttc catcccgcca gcccttccgc tcccacgacc caaccccact gcccggagcc 60 cccgagcctt ctcgaatctt gcgagaaccc caggggcgag gagcagatgt cggcgaggct 120 acgggtggcg gacgtccgcg cggagcttca gcgccgcggc ctcgatgtat ccggcaccaa 180 gcctgctctc gtgcggaggc tggacgccgc aatttgcgag gcggagaagg ccgtggtggc 240 tgctgcgcca accagtgtgg caaatgggta tgacgtagcc gtagatggca aaaggaactg 300 cgggaataat aagaggaaaa ggtccgggga tgggggtgaa gagggaaacg gcgatacgtg 360 tacagatgtg acaaaactag agggcatgag ctatcgtgag ctgcagggat tggccaaggc 420 acgtggagtt gcggcaaatg ggggcaagaa agatgttatc cagaggttgc tctcggcgac 480 tgctggtcct gctgcagttg cagatggtgg tcctctgggc gccaaggaag tcataaaagg 540 tggtgatgag gaggttgagg tgaaaaagga gaagatggtt actgccacga agaagggagc 600 tgcagtgctg gatcagcaca ttcccgatca cataaaagtg aactatcatg tcttgcaagt 660 gggcgatgaa atctatgatg ccaccttgaa ccagactaat gttggagaca acaacaataa 720 gttctatatc attcaagttt tagaatctga tgctggtgga agctttatgg tttacaatag 780 atggggaaga gttggggtac gaggtcaaga taaactacat ggtccctccc caacacgaga 840 ccaagcaata tatgaatttg aggggaagtt ccacaacaaa accaataatc attggtctga 900 tcgcaagaac ttcaaatgtt atgcaaagaa atacacttgg cttgaaatgg attatggtga 960 aactgagaaa gaaatagaga aaggttccat tactgatcag ataaaagaga caaaacttga 1020 aactagaatt gcgcagttca tatccctgat ctgcaatatt agcatgatga agcaaagaat 1080 ggtggaaata ggttataatg ctgaaaagct tccccttgga aagctaagga aagctacaat 1140 acttaagggt tatcatgttt tgaaaaggat atccgatgtt atttcaaagg cggacaggag 1200 acatcttgag caattgactg gggaattcta caccgtgatt cctcatgact ttggtttcag 1260 aaagatgcgt gaatttatta tcgatactcc tcagaaacta aaagctaagc tggagatggt 1320 tgaagccctt ggtgagattg aaattgcaac taaacttttg gaggatgatt caagtgacca 1380 ggatgatccg ttgtatgctc gatacaagca acttcattgt gatttcacac ctcttgaagc 1440 tgattcagat gagtactcta tgataaaatc atatttgaga aatacacatg gaaaaacaca 1500 ctctggttat acggtggaca tagtgcaaat atttaaggtt tcaaggcatg gtgaaacaga 1560 gcgatttcaa aaatttgcta gtacaagaaa taggatgctt ttgtggcatg gttctcggtt 1620 gagcaactgg gctgggatcc tttctcaggg tctgcgaatc gctcctcctg aagcacctgt 1680 tactggttac atgtttggca agggtgttta ctttgctgac atgttttcaa agagtgcaaa 1740 ctattgctac gcctctgaag catgtagatc tggagtactg cttttatgtg aggttgcatt 1800 gggcgatatg aatgagctac tgaatgcaga ttacgatgct aataacctgc ccaaaggaaa 1860 attaagatcc aagggagttg gtcaaacagc acctaacatg gtcgagtcta aggtcgctga 1920 cgatggtgtt gttgttcccc ttggcgaacc caaacaggaa ccttccaaaa ggggtggctt 1980 gctttataat gagtacatag tgtacaacgt agaccagata agaatgcggt atgtcttaca 2040 tgttaacttc aatttcaaga gacggtagat gttgcaaaga gctgaaactg ttgctgagat 2100 cttagcagaa catatgtgga cttatagcac caggtgccct cagcctcatt ttctgagcaa 2160 atttggtagc ctttgcattt cgattttggt ttcagcttct agccccattg atgattgata 2220 ctgagtgtat atatgaacca ttgatatcca ccttccatgt acttaagttt ttttaacatg 2280 tcccatgcat aataa 2295 <210> 6 <211> 1384 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> parp2 partial coding region from cotton <220> <221> misc_feature <222> (3)..(460) <223> Open reading frame <400> 6 gagaagatbg ttacagcgac gaggaagggg tggctgttct ggatcaaggg atcccagatg 60 acataaaggc tcattatcat gttctacaaa agggtgatga tatctatgat gccatgttaa 120 atcagacgaa tgttgggcaa aacaataaca aattctttgt gatccagctt ctagaatctg 180 atgactcgaa gacatacatg gttcataaca gatggggtag agttggtgtg aagggtcaaa 240 ttaagttaca tggccccttt acttcacgac aagccgcaat tgatgagttt caaaccaaat 300 tctttaacaa gaccaaaaac tattggtaca acagaaaaga ctttgtttgt cacccaaagt 360 gctacacctt gctggagatg gactatgatg aaaaagaaaa ggaatctgat gtcaaaagaa 420 aggctaactc ttccattggt gctcaattgc gggagacaaa gcttgaacaa cgtgttgcta 480 agtttatctc tattatatgc aatatcagca tgatgaagca acaaatgatg gaaataggat 540 acaatgctga caagttgcct cttggtaagc taagcaaatc cacaatttta aaggggtatg 600 atgtcttaaa gaaaattgct gatgtgattg accagtcaaa caggagcaag cttgagcaat 660 taagttcgga attttacacc gtgattccac atgattttgg atttagaaaa atgcgtgatt 720 ttgtcatcga cacacctcag aagttgaaaa agaagttgga aatggttgaa gccctgggag 780 aaatagaggt cgcatcaaaa ttattaatgg atgacattac gatggaggaa gatcctttat 840 attatcggta ccaacagctt cactgtgaac tgtttcctct tgacaatgat actgaggagt 900 tcgctttgat tgtaaagtat attcagaata ctcatgctca gacacattca aattatacag 960 ttgatgttgt tcaaatattc aaggtgacaa gagacggtga aagtgaacgc tttaaaaagt 1020 tttctggaac aaaaaataga atgctgttgt ggcatggttc tcggcttact aactggactg 1080 gcattctgtc ccaaggtttg cgcattgctc cacctgaagc gcctgccacg ggttatatgt 1140 ttgggaaggg ggtttacttt gctgatatgt tctccaaaag tgcaaattat tgctatacta 1200 attctgcctt cacaacaggg gtgttgcttc tatgtgaggt tgccctgggt gacatggctg 1260 agcttctaca agctaaaagc gatgctgata agctgccgga tgggaagttg agcacaaaag 1320 gtgttggtgc aactgcaccg gatccttctg aagcccagtc acttgatgat ggtgttgttg 1380 ttcc 1384 <210> 7 <211> 1647 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 7 atggagaatc gcgaagatct taactcaatt cttccgtacc ttccacttgt aattcgttcg 60 tcgtcgctgt attggccgcc gcgtgtggtg gaggcgttaa aggcaatgtc tgaaggacca 120 tctcacagcc aagttgactc aggagaggtt ctacggcaag ctattttcga tatgagacga 180 tccttatctt tctctactct cgagccatct gcttctaatg gctacgcatt tctctttgac 240 gaattgattg atgagaaaga atcaaagaga tggttcgatg agattatccc agcattggcg 300 agcttacttc tacagtttcc atctctgtta gaagtgcatt tccaaaatgc tgataatatt 360 gttagtggaa tcaaaaccgg tcttcgtttg ttaaattccc aacaagctgg cattgttttc 420 ctcagccagg agttgattgg agctcttctt gcatgctctt tcttttgttt gtttccggat 480 gataatagag gtgcaaaaca ccttccagtc atcaactttg atcatttgtt tgcaagcctt 540 tatataagtt atagtcaaag tcaagaaagc aagataagat gtattatgca ttactttgaa 600 aggttttgct cctgcgtgcc tattggtatt gtttcatttg aacgcaagat taccgctgct 660 cctgatgctg atttctggag caagtctgac gtttctcttt gtgcatttaa ggttcactct 720 tttgggttaa ttgaagatca acctgacaat gctctcgaag tggactttgc aaacaagtat 780 ctcggaggtg gttccctaag tagagggtgc gtgcaggaag agatacgctt catgattaac 840 cctgaattaa tcgctggcat gcttttcttg cctcggatgg atgacaatga agctatagaa 900 atagttggtg cggaaagatt ttcatgttac acagggtatg catcttcgtt tcggtttgct 960 ggtgagtaca ttgacaaaaa ggcaatggat cctttcaaaa ggcgaagaac cagaattgtt 1020 gcaattgatg cattatgtac accgaagatg agacacttta aagatatatg tcttttaagg 1080 gaaattaata aggcactatg tggcttttta aattgtagca aggcttggga gcaccagaat 1140 atattcatgg atgaaggaga taatgaaatt cagcttgtcc gaaacggcag agattctggt 1200 cttctgcgta cagaaactac tgcgtcacac cgaactccac taaatgatgt tgagatgaat 1260 agagaaaagc ctgctaacaa tcttatcaga gatttttatg tggaaggagt tgataacgag 1320 gatcatgaag atgatggtgt cgcgacaggg aattggggat gtggtgtttt tggaggagac 1380 ccagagctaa aggctacgat acaatggctt gctgcttccc agactcgaag accatttata 1440 tcatattaca cctttggagt agaggcactc cgaaacctag atcaggtgac gaagtggatt 1500 ctttcccata aatggactgt tggagatctg tggaacatga tgttagaata ttctgctcaa 1560 aggctctaca agcaaaccag tgttggcttc ttttcttggc tacttccatc tctagctacc 1620 accaacaaag ctatccagcc gccttga 1647 <210> 8 <211> 598 <212> DNA <213> Solanum tuberosum <400> 8 gcaatggaga atagagaaga cgtgaagtca atccttccct ttttgccggt gtgtctccga 60 tcatcttctc ttttctggcc gccgctagtt gttgaagcac tgaaagccct ctctgaaggc 120 cctcattaca gcaatgttaa ctccggccaa gtcctcttcc tcgcaatctc cgacattcgg 180 aattcccttt cactacctga ttcttcaatt tcctcttctg cttcagacgg attttctctc 240 ttatttgatg atttaattcc tagggatgaa gctgttaaat ggttcaaaga agtggtgccg 300 aaaatggcgg atttgctatt gcggttgcct tccttattgg aggctcacta tgagaaggct 360 gatggtggaa ttgttaaagg agtcaacact ggtcttcgct tattggaatc acaacagcct 420 ggcattgttt tcctcagtca ggaattagtc ggtgctcttc ttgcatgttc cttcttttgc 480 tattccctac caatgataga ggtatctgta tgatcagtat gacgagaaat ttgaaaataa 540 attgaagtgc attcttcact attttgagag gattggctca ttgatacctg cgggctac 598 <210> 9 <211> 1530 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 9 atggaggcgc gcggcgacct gcgctcgatc ctgccctacc tccccgtcgt gctccgcggc 60 ggcgcgctct tctggccgcc ggcggcgcag gaggcgctca aggcgctggc gctgggcccc 120 gacgtgagcc gcgtctcctc cggcgacgtc ctcgccgacg ccctcaccga cctccgcctc 180 gcgctcaacc tcgacccact cccgcgccgc gccgccgagg gcttcgcgct cttcttcgac 240 gacctcctgt cgcgggcgca ggcgcgggac tggttcgacc acgtcgcccc ctccctcgcc 300 cgcctcctcc tccgcctccc cacgctgctc gagggccact accgcgccgc cggcgacgag 360 gctcgcgggc tccgcatcct gagctcgcag gatgccgggc tcgtgctcct cagccaggag 420 ctcgccgccg cgctgctcgc ctgcgcgctc ttctgcctgt tccccaccgc cgatagggcc 480 gaggcgtgcc tcccggcgat caatttcgat agcctatttg cggcactgtg ttataattcg 540 aggcaaagcc aggagcagaa ggtgaggtgc cttgttcact attttgacag ggtgaccgct 600 tctacaccta ctggttccgt ttcgtttgag cgtaaggttc ttcctcgccg tcctgaatct 660 gatggcatta cgtaccctga catggatact tggatgaaat ctggtgttcc cctttgcaca 720 ttccgggtat tttcctcagg cttgatagaa gatgaggaac aagaagccct tgaagttgac 780 tttgcaaata gatatttggg aggtggcgca ctttccagag gctgcgtgca ggaagaaatc 840 cggttcatga taaacccaga attgatcgtg ggcatgctct tcatggtttc aatggaagat 900 aatgaagcta tagaaattgt tggtgcagaa aggttctcac agtacatggg gtatggttcc 960 tcattccgtt ttactggtga ctacttagat agcaaaccct ttgatgcgat gggtagacgg 1020 aaaactagga tagtggcaat tgatgctttg gactgtccaa ctaggttaca gtttgaatct 1080 agtggtcttc taagggaagt gaacaaggct ttttgtggat ttttggatca atcaaatcat 1140 cagctctgtg caaagcttgt ccaggattta aatacaaagg ataactgtcc aagtgtcatt 1200 cctgatgaat gcataggagt ttcaactgga aactggggtt gcggggcttt tggtggaaac 1260 cctgaaatca agagcatgat tcaatggatt gctgcatcac aggcactccg atcttttatt 1320 aactactaca cttttgagtc cgaatcactg aaaagattag aagaggtgac ccagtggata 1380 ttgcgccata ggtggacggt tggcgagttg tgggacatgc ttgtggagta ttcatcccag 1440 aggctaagag gagacaccaa tgagggcttt ttaacatggc tacttcccaa ggacatcccc 1500 aatggtgatg tagattacat gtgtgaatag 1530 <210> 10 <211> 603 <212> DNA <213> Zea mays <400> 10 tagggctgtg tgcaggagga aatccgcttc atgataaacc ccgaattgat tgtgggtatg 60 ctattcttgt cttgtatgga agataacgag gctatagaaa tctttggtgc agaacggttc 120 tcacagtata tgggttatgg ttcctccttt cgctttgttg gtgactattt agataccaaa 180 ccctttgatt cgatgggcag acggagaact aggattgtgg ctatcgatgc tttggactgt 240 ccagctaggt tacactatga atctggctgt ctcctaaggg aagtgaacaa ggcattttgt 300 ggatttttcg atcaatcgaa acaccatctc tatgcgaagc ttttccagga tttgcacaac 360 aaggatgact tttcaagcat caattccagt gagtacgtag gagtttcaac aggaaactgg 420 ggttgtggtg cttttggtgg aaaccctgaa atcaagagca tgattcagtg gattgctgca 480 tcacaggctc ttcgcccttt tgttaattac tacacttttg agaacgtgtc tctgcaaaga 540 ttagaggagg tgatccagtg gatacggctt catggctgga ctgtcggcga gctgtggaac 600 ata 603 <210> 11 <211> 651 <212> DNA <213> Saccharomyces cerevisiae <400> 11 atgaagactt taattgttgt tgatatgcaa aatgatttta tttcaccttt aggttccttg 60 actgttccaa aaggtgagga attaatcaat cctatctcgg atttgatgca agatgctgat 120 agagactggc acaggattgt ggtcaccaga gattggcacc cttccagaca tatttcgttc 180 gcaaagaacc ataaagataa agaaccctat tcaacataca cctaccactc tccaaggcca 240 ggcgatgatt ccacgcaaga gggtattttg tggcccgtac actgtgtgaa aaacacctgg 300 ggtagtcaat tggttgacca aataatggac caagtggtca ctaagcatat taagattgtc 360 gacaagggtt tcttgactga ccgtgaatac tactccgcct tccacgacat ctggaacttc 420 cataagaccg acatgaacaa gtacttagaa aagcatcata cagacgaggt ttacattgtc 480 ggtgtagctt tggagtattg tgtcaaagcc accgccattt ccgctgcaga actaggttat 540 aagaccactg tcctgctgga ttacacaaga cccatcagcg atgatcccga agtcatcaat 600 aaggttaagg aagagttgaa ggcccacaac atcaatgtcg tggataaata a 651 <210> 12 <211> 1290 <212> DNA <213> Saccharomyces cerevisiae <400> 12 ttaggtccat ctgtgcgctt cgttatcacc actccaactt cgttcagtat atcccaattc 60 ctctttcact ctcttcacag tggcaggatc tcccatattt ttacctaagt tatcagaaat 120 tttgatagcg tgattaccat ttacttctaa tagtttgata acgatgttta acggctcact 180 tttaacctgg ggttctgact tcttacgaaa atcattagta aagtttgtgc caataccgaa 240 tgtggctagc attccattct ctttagctgc atgggagtaa gttattgcct tttcgacgtt 300 caaagaatcg gaataacaga taatcttcga gaatttaggc aatttcaaca cgtcatggta 360 atggtgggaa atctttttgg tatactcaac tgggtctcca gaatcttgtc taacaccgac 420 gtaagcatca gaatatggtg gacggaatga ttttaaaaag tcatcagttc caaaagtatc 480 cgttaatgct aaaccagcat tttttgcacc aaaagtattg atccaacaat ccattgcatt 540 tttattggca tgcaaataat cttcactaat agaagcgact cccataaccc actcgtgagc 600 cacagtaccg attggcttga ctccatattt cttggcaaat aaaatatttg atgtgcctaa 660 taatagcgat ttgtttctgt ctgggttacc gttcacagct ttcatgattc cttgcataat 720 tagatcttga gccttcagag atctacgacg tcttgtacca aattcactga atctaatacc 780 attatcaaac aaagtttccg ccttcttctc agcttgttct aattggtttt cgtagtccca 840 gtcgatgtca acaaatttaa aatacgcttc tgatattagg gacagtaagg ggatctcata 900 aaggatagta tccttccaac taccactgac taaaattttc aatttgtagt gggtgggctt 960 gccctcgatt tcttctgaag tgaaggaaat ctgctcttca gggtgtagtt tgtaattaga 1020 actgctaata tacttaatat atgccgatgg caaatatggg atttcctgtt ttaagtattc 1080 aatttcctct tctgtgaacc tcaaatttcc caaatacgaa aattgctctt tcaaccaatt 1140 aatggcttcc ttattgaagg tcaattggga cgacctgttg gtatatttat aagtaactgt 1200 aacatctgga aaattagtga agacagcagc atgcatcgta atcttgtaca tgtctgtgtc 1260 caaaagagac tttatcactg gttctgacat 1290 <210> 13 <211> 1206 <212> DNA <213> Saccharomyces cerevisiae <400> 13 atggatccca caagagctcc ggatttcaaa ccgccatctg cagacgagga attgattcct 60 ccacccgacc cggaatctaa aattcccaaa tctattccaa ttattccata cgtcttagcc 120 gatgcgaatt cctctataga tgcacctttt aatattaaga ggaagaaaaa gcatcctaag 180 catcatcatc accatcatca cagtcgtaaa gaaggcaatg ataaaaaaca tcagcatatt 240 ccattgaacc aagacgactt tcaaccactt tccgcagaag tgtcttccga agatgatgac 300 gcggatttta gatccaagga gagatacggt tcagattcaa ccacagaatc agaaactaga 360 ggtgttcaga aatatcagat tgctgattta gaagaagttc cacatggaat cgttcgtcaa 420 gcaagaacct tggaagacta cgaattcccc tcacacagat tatcgaaaaa attactggat 480 ccaaataaac tgccgttagt aatagtagca tgtgggtctt tttcaccaat cacctacttg 540 catctaagaa tgtttgaaat ggctttagat gcaatctctg aacaaacaag gtttgaagtc 600 ataggtggat attactcccc tgttagtgat aactatcaaa agcaaggctt ggccccatcc 660 taccatagag tacgtatgtg tgaattggcc tgcgaaagaa cctcatcttg gttgatggtg 720 gatgcatggg agtcattgca accttcatac acaagaactg ccaaggtctt ggatcatttc 780 aatcacgaaa tcaatattaa gagaggtggt gtagctactg ttactggaga aaaaattggt 840 gtgaaaataa tgttgctggc tggtggtgac ctaatagagt caatgggtga accaaacgtt 900 tgggcggacg ccgatttaca tcacattctc ggtaattacg gttgtttgat tgtcgaacgt 960 actggttctg atgtaaggtc ttttttgtta tcccatgata ttatgtatga acatagaagg 1020 aatattctta tcatcaagca actcatctat aatgatattt cttccacgaa agttcgtcta 1080 tttatcagac gcgccatgtc tgtacaatat ttgttaccta attcggtcat caggtatatc 1140 caagaacata gactatatgt ggaccaaacc gaacctgtta agcaagttct tggaaacaaa 1200 gaatga 1206 <210> 14 <211> 1188 <212> DNA <213> Saccharomyces cerevisiae <400> 14 atggatccca ccaaagcacc cgattttaaa ccgccacagc caaatgaaga actacaacca 60 ccgccagatc caacacatac gataccaaaa tctggaccca tagttccata tgttttagct 120 gattataatt cttcgatcga tgctcctttc aatctcgaca tttacaaaac cctgtcgtca 180 aggaaaaaaa acgccaactc aagcaaccga atggaccata ttccattaaa tactagtgac 240 ttccagccac tatctcggga tgtatcatcg gaggaggaaa gtgaagggca atcgaatgga 300 attgacgcta ctctacagga tgttacgatg actgggaatt tgggggtact gaagagccaa 360 attgctgatt tggaagaagt tcctcacaca attgtaagac aagccagaac tattgaagat 420 tacgaatttc ctgtacacag attgacgaaa aagttacaag atcctgaaaa actgcctctg 480 atcatcgttg cttgtggatc attttctccc ataacatacc tacatttgag aatgtttgaa 540 atggctttag atgatatcaa tgagcaaacg cgttttgaag tggttggtgg ttatttttct 600 ccagtaagtg ataactatca aaagcgaggg ttagccccag cttatcatcg tgtccgcatg 660 tgcgaattag catgcgagcg gacatcatct tggttaatgg ttgatgcctg ggaatcttta 720 caatcaagtt atacaaggac agcaaaagtc ttggaccatt tcaatcatga aataaatatc 780 aagagaggtg gaatcatgac tgtagatggt gaaaaaatgg gcgtaaaaat catgttattg 840 gcaggcggtg atcttatcga atccatgggc gagcctcatg tgtgggctga ttcagacctg 900 caccatattt tgggtaatta tggatgtttg atcgtggaaa ggactggttc tgatgttagg 960 tccttcttgc tttcccatga tatcatgtat gaacacagaa gaaatatcct tattatcaaa 1020 caacttattt acaatgatat ttcctctacg aaagtgcggc ttttcatcag acgtggaatg 1080 tcagttcaat atcttcttcc aaactctgtc atccgttaca tccaagagta taatctatac 1140 attaatcaaa gtgaaccggt caagcaggtc ttggatagca aagagtga 1188 <210> 15 <211> 2145 <212> DNA <213> Saccharomyces cerevisiae <400> 15 atgtcacatc ttatcacttt agctacatgc aacttgaatc aatgggccct agattttgaa 60 ggtaatagag accgtatcct acagtccatt aagattgcca aagagagggg tgccaggtta 120 cgtgtcggcc cagaactgga aataactggc tacggatgtt tagatcattt tttagaaaat 180 gacgtttgcc ttcattcatg ggaaatgtat gctcaaatca ttaagaataa agaaacccat 240 ggattaatac ttgacattgg tatgcccgtt ctacacaaga atgttcgtta taattgtcgt 300 ttgttatcct tggatggtga gatattgttc ataagaccta agatttggtt agctaatgat 360 ggtaactata gggaaatgag atttttcaca ccttggatga aacctggcgt ggtggaggac 420 tttatccttc cacctgagat tcagaaagtt accggccaga gacttgtgcc atttggggac 480 gctgtgataa attcattgga tacatgcatt ggtacagaaa cttgtgaaga attgtttaca 540 cctcaatccc cccacatcgc catgtcttta gatggtgtgg aaatcatgac aaactcatct 600 ggttctcatc atgaactgcg taagttaaat aaaaggttag acctaatttt aaatgccact 660 aaacgttgtg gtggtgttta cttgtatgca aatcaaagag gttgtgatgg tgacagatta 720 tattatgatg gctgtgcact aattgccatc aatggtacaa ttgtagccca aggttcacaa 780 ttttcgctag atgatgtgga agtagttact gctactgtgg acctagaaga ggtgaggagt 840 tatcgtgcag ctgtcatgtc tcgtggccta caagcctcct tggcagaaat aaagttcaag 900 cgtattgata ttcctgtaga attggcttta atgacctcca gatttgatcc tacagtgtgt 960 ccaacaaaag tccgcgagcc tttctatcac tctcctgagg aagaaattgc actgggacct 1020 gcttgctgga tgtgggatta tttaagacgt tgtaacggaa cagggttttt ccttccctta 1080 tctgggggca ttgactcttg tgcaactgca atgattgtcc actctatgtg ccgtttagtg 1140 accgacgctg ctcaaaatgg aaatgagcaa gttatcaaag acgttcgtaa gataacacgt 1200 agcggcgatg attggattcc agacagtcca caggatctag cctcaaaaat atttcactcc 1260 tgtttcatgg gtacggaaaa ttcatccaag gagacaagaa acagagcaaa ggacctttcc 1320 aatgcaattg gatcttacca cgtggattta aagatggact cattggtatc cagtgtggtg 1380 tccttattcg aagtagccac tggcaaaaaa ccaatataca aaatatttgg gggatctcaa 1440 atcgagaact tggctttaca aaacatccag gcgcgtctaa gaatggttct ttcttatctt 1500 tttgcgcaac tgttgccgtg ggttcgtggt atcccaaact cgggtggatt gttagtactt 1560 ggtagcgcaa atgttgatga gtgcttacgt gggtatctaa caaaatatga ctgctcctcc 1620 gcagatatca accctattgg gggtatttca aaaactgact tgaaaagatt cattgcctac 1680 gcatcaaaac aatataacat gccaatcttg aatgactttt taaacgctac accaactgca 1740 gaattagaac ctatgactaa agattacgtt caatcggatg agatagatat ggggatgacg 1800 tatgaagaat tgggcgtgtt tggttaccta agaaaggttg aaaaatgtgg tccttattct 1860 atgttcttaa aacttcttca tcaatggtcc ccaaagttaa cacctcgtca aatatctgaa 1920 aaggtgaaaa gatttttctt cttctatgcc atcaacagac acaagcaaac tgttttaact 1980 cctagttatc atgctgaaca gtattcacca gaagacaaca gatttgactt acgtcctttc 2040 ttaatcaacc caagatttcc atgggcttca agaaaaattg atgaagttgt cgagcagtgt 2100 gaagcacata aaggctcaac gcttgacatt atgtctattg attag 2145 <210> 16 <211> 597 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 16 atggcttcct catcaacgag aaagtacgag acacgaaagc gagatccaaa ctctaaaatc 60 gcagctcttc tcgttatcga catgcagaat cacttctcct ccatggccaa acccatcctc 120 aacaacgttc tcaccaccat cgacatctgc cgacgcgcct cagtccccgt attctttacg 180 cgtcacaacc acaaatcccc gaccgaccac ggcatgctcg gcgagtggtg taacggcgat 240 gtaatccttg acggaaccac cgattctgaa atcatccagg agatacaagg ccaagtaacc 300 ggaccagacg agatggtgga gaagaacacg tacagtgcgt ttaacaaaac ccgcctccag 360 gaaaacctgg aaaagatcgg agtaaaggag gtgatcgtga tcggagtgat gacgaacttg 420 tgctgtgaga caacggcgcg tgaagcgttt attaagggtt ttagggtttt tttctcgacg 480 gacgcgactg cgacgtttaa tgaggagctt cacgaggcta cgctaatgaa tctcgctttt 540 ggcttcgctt atctcgtcga ttgcgataaa ctccggcgaa gtctactcgg taactaa 597 <210> 17 <211> 597 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 17 atggcttctt catcatcgag aacgtacgag acacgaaagc gagagccaaa tcctaaaatc 60 gcagctcttc tcgtcatcga tatgcagaat cacttctact ctatggctga accaatcctc 120 caaaacgctc tcaccaccat cgacatctgc cgacgcgctt caatccccgt attcttcacg 180 cgccacaacc acaaatcccc aaccgaccac ggcatgctcg gagagtggtg gaacggcgat 240 ctaatcctcg acggaaccac tgattccgaa atcatcccgg aaatcaatcg ccaggtcacc 300 ggaccagacg aaatcgtgga gaagagcacg tacagtgcgt ttaacaacac gcaccttcag 360 gagaagctgg acaagatcgg agtgaaggag gtgatcgtta tcggagtgat gacgaaccta 420 tgctgtgaga cgacggcgcg tgaagcgttt gtaaaggggt ttagggtttt tttctcgacg 480 gacgcgactg cgacggttaa tgaagagctt cacgaggcta ctctaatgaa tctcgcgtat 540 ggctttgctt atctcgtcga ttgcgataga ctccggcgag gtctactcag tagttaa 597 <210> 18 <211> 591 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 18 atggccgaga gatggaggaa cacggctcta ctcgtcatcg acatgcagaa cgatttcata 60 gaggaaggtg ctgtgacgca agtgaaagga ggaaaatcta tagttcctaa tgttatcaga 120 gtcgtcgaac tcgcgaggca gcgtggtatt ctcgtaattt gggttgttcg agaacatgat 180 cgtcaaggaa gagatgttga attattcagg cgccataact acagttctga gaaagtcggg 240 ccagttatta aaggcaccgt aggagcagaa ttggttgatg gattgatgat caacgaagaa 300 gatgactata agattgtgaa aactcgtttc agtgctttct ttagtaccaa tcttcattcc 360 ttcttgcaaa cttcaggggt taccaagtta gtgattgctg gtgtgcaaac gccgaactgt 420 atccggcaaa cggtgtttga tgcagtggcg ctggattatc ccaatgtgac tgttattaca 480 gatgccacag ctgctgcaac accagagatc catactgcga atattcttga catgaagaat 540 attggagtca agactcctac attacacgag tggtccgaag aacttgcttg a 591 <210> 19 <211> 1680 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 19 atggagaaga aagaaaatgg tctcgatgga aagcaatcgg gtcgggtcat taacggaccc 60 actaacccga tggtcacacc tctgctcaac gatctttacc aattcaccat ggcttatgct 120 tattggaaag ctggcaaaca atctgagcga tctgtgtttg atctgtattt tcgtaagaat 180 ccttttggtg gagaatacac tatctttgct ggtttagaag aatgcatcaa atttctcgct 240 aatttcaatt tgactgatga agagatcgat ttcgttcgtg attcgttacc tggatgtgag 300 gaagctttct gtgattatct tcgagggctt gattgttctg acattgaagt gtatgccatt 360 tcggaaggat cagttgtttt tcctaaagtt cctttactca gaatcgaagg tcctgttgct 420 gtggtgcaat tgttggaaac tccattcctc aatctcatca attacgcatc tttggttgct 480 acaaatgcag caagacatcg gtttgttgca ggaaaatcta agcttctgct tgagtttggt 540 gctagaagag ctcagggacc cgatggtgca ataagcgcat caaagtattg ctaccttgga 600 ggttttgatg caacaagtaa tgttgcagcg ggaaaactgt ttgggatacc cctccgtggt 660 actcattccc atgcttttgt tagctcattc atgagccttg atgaaattgt tgacaaagtg 720 cttcgaagtt ctgatgggaa aagcacttgt aaggatttta tatgtttggt ccaaacttgc 780 ctaacaaaga ttcagaattc atcttcatta caaggaattt tttccgagac aaatcaaagc 840 gagcttgcag cgttcatttc atatgcactg gcattcccaa actcctttct cgctcttgta 900 gacacttatg atgtgatgaa gagtggtatt ccaaacttct gtgctgttgc tctagcactt 960 aatgaattgg gatacaaagc agtaggcatt agactggatt caggtgactt agcctatctt 1020 tctactgagg tcaggaaatt cttttgtgcc atagagagag acctcaaagt tcctgatttc 1080 gggaagatga tcgtcactgc tagtaacgat ctaaacgaag agacagtcga tgctctaaat 1140 aaacagggtc atgaagtaga tgcatttgga attggaacca acttagtgac ttgctatgcg 1200 caagctgcgt taggttgtgt tttcaaactt gtggaaataa acaatcagcc tcggatcaaa 1260 ctttctgaag atgttactaa ggtatcgatt ccatgtaaaa agcgtactta cagattgttc 1320 ggaaaagagg gttaccctct tgttgatata atgactggag agaacgaacc acctccaaag 1380 gtcggtgaaa ggttactttg ccgtcatcca ttcaatgaat caaaaagggc ttatgtggtt 1440 ccacaacgcg ttgaagagct tctgaaatgt tattggcgtg gcaatgcaga tgaagctagg 1500 gaagagctag agccattgaa agagctaaga aatcgttgca tcaaacagct cgaaaatatg 1560 cgacccgatc atatgagaag attaaaccct actccttata aggttagtgt cagcgccaag 1620 ttgtatgact tcatccactt cctctggctc aacgaagctc ctgtcggtga actgcattga 1680 <210> 20 <211> 1674 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 20 atggagccga aagagaacgg ctcagaattg ggtcagaaga tcattgacgg accaacgaat 60 ccaatggtca cacctttact caatgatctt tatcaattca ccatggctta tgcttattgg 120 aaagctggca aacacaacga acgatccgtt ttcgatctgt attttcgtaa gaacccattt 180 ggtggtgagt acactgtgtt tgctggatta gaagagtgtg ttaagttctt agccaatttc 240 aaattgactg atgaagaaat cgatttcgtt caagagtgtt tgcctggatc tgaggaagct 300 ttttgtgatt atcttagagg gcttgattgt tctgatgttg aagtttatgc aattccggaa 360 ggatcagttg tttttcctaa agtacctctc atgagagttg aaggacctgt tggtgttgtt 420 caattgttgg aaactccatt cctcaatctt gtcaattttg catctttggt agctactaac 480 gcagctaggc atcgctttgt tgccggaaaa tctaagagtc tactcgagtt tggtgctcga 540 agggctcagg gtccggatgg tgcaataagc gcatcaaaat attgctacct tggaggtttt 600 gatgcaacaa gtaatgtagc agctggaaaa ctttttggga ttcctcttcg tggaacacac 660 tctcatgctt atgttagctc attcatgagt actgatgaga ttgttgacaa agtacttcgt 720 agtgctgatg ggaaaaccac gtgcgaggat tttgttagtc atgttcagac atggttaaaa 780 aagattcagt attcaccatc tctaagtggc attttctctg agacaaatca aagcgagcta 840 gcagctttca cctcatatgc actggcattc cccaaaactt ttcttgccct cgtagataca 900 tacgatgtga tgaagagtgg aatccctaac ttctgtgcag ttgctttagc actcaatgac 960 tttggatata aagcattagg tattagactg gattcaggtg atttagctta tctatctaga 1020 gaggccagaa atttcttctg cacggtagag agagaactaa aagtgcctgg ttttgggaag 1080 atggtcgtca ctgctagtaa tgatctaaat gaagagacga ttgacgcttt aaataaacag 1140 ggacatgagg tggatgcttt tggcatcggg acctacttgg tcacttgcta ttcacaagcg 1200 gccttaggtt gcgttttcaa acttgtggag ataaacaatc agcctcggat taaactttct 1260 gaagatgtta caaaggtatc aataccgtgt aaaaagcgaa gttacagatt atacggcaaa 1320 gaaggttacc ctctggtaga tataatgact ggagagaacg aaccacctcc aaaggttggt 1380 gagcgtttac tttgtcgtca cccattcaac gaatccaaaa gagcatatgt agtgccacaa 1440 cgtgtcgaag agctcctcaa atgttattgg cgtggaagtg cagatgaagc aagagaagta 1500 ttaccgcctt tgaaagagat aagagaccgt tgcatcaaac agctcgaaaa catgcgacct 1560 gatcatatga ggagattaaa cccaactcct tataaggtta gtgtaagcgc aaagctgtac 1620 gatttcatcc acttcttatg gctaaacgaa gcacctgttg gtgaattgca gtga 1674 <210> 21 <211> 717 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 21 atggatgtcc cgttaccagt cgagaaatta tcttatggat caaacactga ggacaaaact 60 tgtgtagtgc ttgtggcaac tgggagtttc aatcctccta ctttcatgca tttacgcatg 120 tttgagctgg cgagagatga attacgctca aaaggatttc atgttcttgg aggatatatg 180 tctcctgtta atgatgcata taagaagaag ggccttttat ctgcagaaca tcgtttagag 240 atgtgtaatg tatcatgtca aagctctgac tttgtaatgg ttgatccgtg ggaggcatct 300 caaagcaact accaacgaac tttgacggtt ttatcaaggg tcaagacttt cttaacaaca 360 aatcgacatg tacccgagga atctctcaaa gtcatgctac tatgtggctc ggatttactg 420 ctatctttct gcactcccgg tgtttggatc cctgaacagt taagaactat ttgcaaagat 480 tatggcattg tgtgcatccg tagagaagga caagatgttg aaaatatgat ctctggtgac 540 gaaatcttaa acgaaaactg tgctaacgtc aaaatcgttg acaatactgt tcctaatcaa 600 atcagttcga gtagattaag gcaatgcatt tcgcgagggt tatcggttaa atacttgact 660 gaagatggag taatagatta tatcagacaa catcaactat acactgagct cacatga 717 <210> 22 <211> 2178 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 22 atgaggctgt tgaaggttgc tacgtgtaac ttgaaccaat gggccatgga tttcgagagc 60 aacatgaaga acatcaaggc ttcgatcgct gaggcaaagg ctgctggtgc tgttatcagg 120 cttggacccg agctcgaggt cactggctat ggttgcgagg atcacttctt ggaactcgac 180 actgtcactc atgcgtggga gtgtttgaag gaattgctgc ttggtgattg gacggatgat 240 attttgtgca gcataggaat gcctgtgatt aaaggagcag agcgttataa ctgccaggtt 300 ctctgtatga acagaagaat catcatgatt cgaccgaaaa tgtggctcgc aaacgatgga 360 aactataggg agctacggtg gttcacagct tggaagcaga gagaagagct agaggaattt 420 cagctcccca ttgaaatttc agaggctttg gagcagaaat cagtcccttt tggttatggt 480 tacatccagt ttatcgacac ggctgttgca gctgaagtct gtgaggaact gtttagtcca 540 cttcctcctc atgccgagct cgcattgaat ggtgttgaag tatttatgaa tgcaagtggg 600 agtcatcacc aacttaggaa actagatatt cgtctgaatg cttttatggg ggctactcat 660 gctcgtggtg gggtgtatat gtacagtaat caacaaggat gcgatggtag ccgcttatac 720 tacgatggat gtgcatgtat tgttgtaaac gggaatgttg ttgctcaagg ctcacaattc 780 tcgttgagag acgttgaggt catcatttca caagtggatc ttgatgcggt tgctagcctt 840 cgtggatcta taagtagctt tcaggaacaa gcaagctgca aggttaaagt atcttcagta 900 gctgtgccct gtagacttac acagtccttc aacctgaaaa tgacactaag cagtccgaag 960 aagatcattt accactctcc acaagaagaa atagcctttg gtcccgcttg ctggatgtgg 1020 gactatttga gaagaagtgg cgcttcagga tttttgcttc ctctttctgg cggagcagac 1080 agctcctccg tggcagctat tgttggctgc atgtgccaac ttgttgttaa agagattgca 1140 aagggagatg agcaagtaaa agctgatgcg aaccgaattg ggaattatgc taatgggcag 1200 tttcctactg atagcaaaga gtttgccaaa cgaatatttt acactgtctt tatgggttct 1260 gaaaacagtt ctgaggagac aaaaaggcgt tcaaagcagc tggcagacga gattggtgct 1320 tggcatcttg atgtttgcat agatggtgtt gtctctgcag ttttatcatt atttcaaaca 1380 gttacaggca agcgaccaag gtataaggtt gatggaggat caaatgctga gaaccttggg 1440 ttgcagaaca ttcaagcccg gatgagaatg gtgttagcat ttatgttagc gtctctcttg 1500 ccttgggttc atagcaaacc aggcttttac cttgttctag gcagctccaa cgttgatgaa 1560 ggacttcgtg gttacctgac aaagtatgat tgcagctcag cagacataaa tcctatagga 1620 agtatcagta aaatggattt gaggttgttc ttaaaatggg ctgcaacgaa tctcggatat 1680 ccatccttgg cagagataga agctgctcca ccaacagctg agcttgagcc cattcgttct 1740 gactattctc agctcgatga agtcgacatg ggaatgacat atgaagagct ttcagtctat 1800 ggaaggatga ggaagatatt ccgttgtgga ccagtatcta tgttcaagaa tctatgttac 1860 aagtggggaa caaagctaag cccagcagaa gtagctgaga aagtgaagta tttcttcaaa 1920 tattattcga tcaatcgaca caaaatgact gtcctcacac cgtcttatca cgctgagagt 1980 tactccccag aggacaacag attcgatctg aggcagtttc tgtacaacag caagtggcca 2040 taccagttta agaagattga cgagattgtt gacagcttaa atggtgactc agttgctttc 2100 ccggaagaag aagcaaactc caacaaagaa attggagttg tagcagcaaa ctccggagac 2160 ccaagtgcgg gtctctga 2178 BCS 04-3083-Foreign Countries - 17 - BCS 04-3083-Foreign Countries THS/li/XP - 1 -

Claims (27)

1. 6-클로로니코틴산 또는 화학식 (I)의 화합물의 유효량을 식물 또는 그 영역 또는 식물의 종자에 적용하는 것을 포함하여 식물에서 내스트레스성을 증가시키는 방법으로서, 상기 식물은 내스트레스성이 되도록 조작된 식물인 것을 특징으로 하는 방법:

   

   상기 식에서,

   Het는 각 경우에 불소, 염소, 메틸 또는 에틸에 의해 임의로 일- 또는 다치환되고 피리드-3-일, 피리드-5-일, 3-피리디니오, 1-옥시도-5-피리디니오, 1-옥시도-5-피리디니오, 테트라하이드로푸란-3-일 및 티아졸-5-일의 그룹 중에서 선택되는 헤테로사이클을 나타내고,

   A는 C₁-C₆-알킬, -N(R¹)(R²) 또는 S(R²)를 나타내며,

   여기에서, R¹은 수소, C₁-C₆-알킬, 페닐-C₁-C₄-알킬, C₃-C₆-사이클로알킬, C₂-C₆-알케닐 또는 C₂-C₆-알키닐을 나타내고,

   R²는 C₁-C₆-알킬, C₂-C₆-알케닐, C₂-C₆-알키닐, -C(=O)-CH₃ 또는 벤질을 나타내 며,

   R은 수소, C₁-C₆-알킬, C₂-C₆-알케닐, C₂-C₆-알키닐, -C(=O)-CH₃ 또는 벤질을 나타내거나, R²와 함께, -CH₂-CH₂-, -CH₂-CH₂-CH₂-, -CH₂-0-CH₂-, -CH₂-S-CH₂-, -CH₂-NH-CH₂- 및 -CH₂-N(CH₃)-CH₂- 그룹을 나타내고,

   X는 N-N0₂, N-CN 또는 CH-N0₂를 나타낸다.
2. 제 1항에 있어서, 내스트레스성이 되도록 조작된 식물이 내스트레스성을 증가시키는 외인성 유전자를 포함하는 트랜스제닉 식물인 방법.
3. 제 2항에 있어서, 외인성 유전자가 PARP 억제 RNA 분자를 암호화하는 방법.
4. 제 3항에 있어서, 외인성 유전자가 하기의 기능적으로 연결된 DNA 단편을 포함하는 방법:

   a. 식물 발현가능한 프로모터;

   b. 서열 번호 1의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 2의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 3의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 4의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 5의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열 번호 6의 뉴클레오티드 서열에서 선택된 20개의 연속 뉴클레오티드 서열 중 적어도 19개를 포함하는 PARP 억제 RNA 분자를 암호화하 는 DNA 영역; 및

   c. 전사 종결 및 폴리아데닐화 DNA 영역.
5. 제 3항에 있어서, 외인성 유전자가 하기의 기능적으로 연결된 DNA 단편을 포함하는 방법:

   a. 식물 발현가능한 프로모터;

   b. 서열 번호 1의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 2의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 3의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 4의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 5의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열 번호 6의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 서열에서 선택된 20개의 연속 뉴클레오티드 서열 중 적어도 19개를 포함하는 PARP 억제 RNA 분자를 암호화하는 DNA 영역; 및

   c. 전사 종결 및 폴리아데닐화 DNA 영역.
6. 제 3항에 있어서, 외인성 유전자가 다음의 기능적으로 연결된 DNA 단편을 포함하는 방법:

   a. 식물 발현가능한 프로모터;

   b. 다음을 포함하는 PARG 억제 RNA 분자를 암호화하는 DNA 영역:

   i. 서열 번호 1의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 2의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 3의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 4의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 5의 뉴클레오티드 서열, 또는 서열 번호 6의 뉴클레오티드 서열에서 선택된 20개의 연 속 뉴클레오티드 서열 중 적어도 19개를 포함하는 센스 뉴클레오티드 서열; 및

   ii. 상기 센스 뉴클레오티드 서열에서 상기 적어도 20개 연속 뉴클레오티드에 상보적인 뉴클레오티드를 포함하는 안티센스 뉴클레오티드 서열

   iii. 이중 나선 RNA 영역을 형성할 수 있는 상기 센스 및 안티센스 뉴클레오티드 서열; 및

   c. 전사 종결 및 폴리아데닐화 DNA 영역.
7. 제 6항에 있어서, 안티센스 뉴클레오티드 서열이 센스 뉴클레오티드 서열과 동일하거나 약 95% 서열 상동성을 갖는 방법.
8. 제 2항에 있어서, 외인성 유전자가 ParG 억제 RNA 분자를 암호화하는 방법.
9. 제 8항에 있어서, 외인성 유전자가 다음의 기능적으로 연결된 DNA 단편을 포함하는 방법:

   a. 식물 발현가능한 프로모터;

   b. 서열 번호 7의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 8의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 9의 뉴클레오티드 서열 또는 서열 번호 10의 뉴클레오티드 서열에서 선택된 20개 연속 뉴클레오티드 서열 중 적어도 19개를 포함하는 PARG 억제 RNA 분자를 암호화하는 DNA 영역; 및

   c. 전사 종결 및 폴리아데닐화 DNA 영역.
10. 제 3항에 있어서, 외인성 유전자가 다음의 기능적으로 연결된 DNA 단편을 포함하는 방법:

    a. 식물 발현가능한 프로모터;

    b. 서열 번호 7의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 8의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 9의 뉴클레오티드 서열 또는 서열 번호 10의 뉴클레오티드 서열에서 선택된 20개의 연속 뉴클레오티드 서열 중 적어도 19개를 포함하는 PARG 억제 RNA 분자를 암호화하는 DNA 영역; 및

    c. 전사 종결 및 폴리아데닐화 DNA 영역.
11. 제 3항에 있어서, 외인성 유전자가 다음의 기능적으로 연결된 DNA 단편을 포함하는 방법:

    a. 식물 발현가능한 프로모터;

    b. 다음을 포함하는 PARG 억제 RNA 분자를 암호화하는 DNA 영역:

    i. 서열 번호 7의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 8의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 9의 뉴클레오티드 서열 또는 서열 번호 10의 뉴클레오티드 서열에서 선택된 20개의 연속 뉴클레오티드 서열 중 적어도 19개를 포함하는 센스 뉴클레오티드 서열;

    ii. 상기 센스 뉴클레오티드 서열에서 상기 적어도 20개 연속 뉴클레오티드에 상보적인 뉴클레오티드를 포함하는 안티센스 뉴클레오티드 서열 및

    iii. 이중 나선 RNA 영역을 형성할 수 있는 상기 센스 및 안티센스 뉴클레오티드 서열; 및

    c. 전사 종결 및 폴리아데닐화 DNA 영역.
12. 제 11항에 있어서, 안티센스 뉴클레오티드 서열이 센스 뉴클레오티드 서열과 동일하거나 약 95% 서열 상동성을 갖는 방법.
13. 제 2항에 있어서, 외인성 유전자가 니코틴아미다제, 니코티네이트 포스포리보실트랜스퍼라제, 니코틴산 모노뉴클레오티드 아데닐 트랜스퍼라제 또는 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 합성 효소에서 선택된 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 셀비지(salvage) 합성 경로의 식물-기능성 효소를 암호화하는 방법.
14. 제 13항에 있어서, 외인성 유전자가 서열 번호 11의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 12의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 13의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 14의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 15의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 16의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 17의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 18의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 19의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 20의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 21의 뉴클레오티드 서열, 서열 번호 22의 뉴클레오티드 서열에서 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
15. 제 1항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 네오니코티노이드의 부류에서 선택되는 화합물이 이미다클로프리드인 방법.
16. 제 1항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 네오니코티노이드의 부류에서 선택되는 화합물이 클로티아니딘인 방법.
17. 제 1항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 네오니코티노이드의 부류에서 선택되는 화합물이 티아클로프리드인 방법.
18. 제 1항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 네오니코티노이드의 부류에서 선택되는 화합물이 니텐피람인 방법.
19. 제 1항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 네오니코티노이드의 부류에서 선택되는 화합물이 아세트아미프리드인 방법.
20. 제 1항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물이 6-클로로니코틴산인 방법.
21. 제 2항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 따라 내스트레스성이 되도록 조작된 식물의 내스트레스성을 증가시키기 위한 제 1항에 따른 화합물의 용도.
22. 제 1항에 따른 화합물로 처리된, 제 2항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 따라 내스트레스성이 되도록 조작된 식물의 종자.
23. 제 2항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 따라 내스트레스성이 되도록 조작된 식물의 종자가 심어진 토양을 6-클로로니코틴산 또는 제 1항에 따른 화학식 (I)의 화합물의 유효량으로 처리하는 것을 포함하여 식물에서 내스트레스성을 증가시키기 위한 방법.
24. 제 1항에 있어서, 식물이 트랜스제닉 내스트레스성 쌍자엽 또는 외자엽 식물, 이의 식물 세포 또는 종자인 방법.
25. 제 1항에 있어서, lOOkg 종자 당 0.1 g 내지 lOOkg 종자 당 1000 g 양의 제 1항에 따른 화합물로 종자를 처리하는 방법.
26. 제 1항에 있어서, 헥타르 당 10 g 내지 1600 g의 적용률의 제 1항에 따른 화합물로 식물을 처리하는 방법.
27. 적어도, a. 제 1항에 따른 화학 물질, 및

    b. 제 2항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 따른 내스트레스성이 되도록 조작 된 식물 또는 상기 식물의 종자를 포함하는 패키지.