BRPI0611103A2 - aumento da toleráncia ao estresse pela aplicação de neonicotinóides em plantas manipuladas para serem tolerantes ao estresse - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a métodos para aumentar a tolerância ao estresse em plantas e células de planta por meio dos quais compostos neonicotinóides, tais como mas não limitados a imidacloprida, clotianidina, tiametoxam, dinotefurano, nitenpirarn, acetamiprida ou tiacloprida, são aplicados a plantas ou células dessas, que compreendem um genoma que foi modificado para tornar as plantas ou suas células mais tolerantes ao estresse, isto é, plantas manipuladas para serem tolerantes ao estresse. Sinérgicos de tolerância ao estresse particularmente eficazes em combinação com plantas tolerantes ao estresse geneticamente modificadas ou suas células, os compostos neonicotinóides que compreendem uma cadeia lateral de cloropiridina, como por exemplo, imidacloprida, tiacloprida, acetamiprida, nitenpiram e ácido 6-cloronicotínico (6-CNA).

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "AUMENTODA TOLERÂNCIA AO ESTRESSE PELA APLICAÇÃO DE NEONICOTI-NÓIDES EM PLANTAS MANIPULADAS PARA SEREM TOLERANTES AOESTRESSE".

São fornecidos métodos para aumentar a tolerância ao estresseem plantas e células de planta por meio dos quais compostos neonicotinói-des tais como, mas não limitados a imidacloprida, clotianidina, tiametoxame,dinotefurano, nitenpiram, acetamiprida ou tiacloprida, são aplicados às plan-tas, ou células dessas, que compreendem um genoma que foi modificadopara tornar as plantas ou suas células mais tolerantes ao estresse, isto é,plantas manipuladas para serem tolerantes ao estresse. Sinérgicos de tole-rância ao estresse particularmente eficazes em combinação com plantas ousuas células tolerantes ao estresse modificadas geneticamente são os com-postos neonicotinóides que compreendem uma cadeia lateral de cloropiridi-na, como por exemplo, imidacloprida, tiacloprida, acetamiprida, nitenpiram eácido 6-cloronicotínico (6-CNA).

Técnica Anterior

Plantas manipuladas para serem tolerantes ao estresse são co-nhecidas na técnica. A tolerância ao estresse em células de planta e plantaspode, por exemplo, ser obtida pela redução da atividade ou do nível das poli-ADP-ribose polimerases (ParP) ou poli(ADP-ribose) glicohidrolases (ParG)endógenas como descrito em WO 00104173 A1 e PCT/EP2004/003995,respectivamente. Acredita-se que dessa maneira a depleção fatal de NAD eATP em células de planta submetidas às condições de estresse, que resul-tam em morte celular traumática, pode ser evitada ou suficientemente retar-dada para que as células estressadas sobrevivam e se adaptem às condi-ções de estresse.

O pedido de Patente Europeu Nq 04077624.7 descreve que atolerância ao estresse em plantas e células de plantas é obtida pelo uso deseqüências de nucleotídeos que codificam enzimas envolvidas na via de sín-tese de recuperação de NAD e/ou na via de síntese de novo de NAD, porexemplo, para super-expressão em plantas.A aplicação de compostos da classe de neonicotinóides emplantas com outros propósitos que não o controle de insetos também é co-nhecida da técnica (WO 01126468 A2, WO 03109681 1 Al).

WO 01126468 A2 descreve um método de melhorar o cresci-mento de plantas que compreende aplicar às plantas ou ao local dessas pelomenos um composto da classe dos neonicotinóides.

W003109681 1 A1 descreve que o rendimento e/ou o vigor deuma planta agronômica pode ser aumentado ou melhorado em localidadesonde o nível de infestação por insetos está abaixo daquele indicando a ne-cessidade de uso de um inseticida com propósitos de controle de insetos,pelo tratamento de uma semente da planta com um composto neonicotinói-de. O método é considerado útil para plantas não transgênicas e para plan-tas que tem um gene estranho que codifica para a produção de uma proteí-na delta-endotoxina modificada de Bacillus thuringiensis.

Entretanto, a técnica permanece silenciosa sobre a possibilidadede aumentar a saúde e o vigor de plantas tolerantes ao estresse tal comodescrito na técnica anterior e, além disso, aumentar adicionalmente a tole-rância ao estresse de plantas já manipuladas para serem tolerantes ao es-tresse pela aplicação de compostos químicos.

Sumário da Invenção

Resumidamente, portanto, a presente invenção está direcionadapara um novo método para aumentar a tolerância ao estresse de plantas ecélulas de planta que são manipuladas para serem tolerantes ao estresse,que compreende tratar a planta e/ou o habitat das ditas plantas ou as se-mentes a partir das quais as plantas são cultivadas com um composto neo-nicotinóide.

A presente invenção também está direcionada para um novométodo de aumentar a saúde e o vigor de plantas e células de planta quesão manipuladas para serem tolerantes ao estresse, que compreende tratara planta e/ou o habitat das ditas plantas ou as sementes a partir das quaisas plantas são cultivadas com um composto neonicotinóide.

A presente invenção também é direcionada para uma nova se-mente a partir da qual plantas tolerantes ao estresse são cultivadas e que étratada com um composto neonicotinóide.

Descrição Detalhada

Como usado aqui, "plantas manipuladas para serem tolerantesao estresse" ou "células de planta manipuladas para serem tolerantes aoestresse", se refere a plantas ou células e sementes dessas, que contêm umDNA estranho que compreende um gene intensificador de tolerância ao es-tresse exógeno ou uma variante de um gene endógeno que corresponde atal gene intensificador de tolerância ao estresse exógeno, cuja variante re-sulta em maior tolerância ao estresse das células de planta ou plantas quecarregam tal variante.

De acordo com a presente invenção, foi descoberto que a tole-rância ao estresse, a saúde e o vigor de uma planta que é manipulada paraser tolerante ao estresse podem ser aumentadas pelo tratamento das plan-tas ou da semente da planta e/ou do habitat das ditas plantas com umaquantidade eficaz de um composto neonicotinóide. Surpreendentemente,tais compostos neonicotinóides têm a capacidade de causar um aumento natolerância ao estresse e na saúde de plantas que já são mais tolerantes aoestresse do que as respectivas plantas selvagens. Esse efeito ainda excedeo efeito que poderia ser esperado contando apenas com os efeitos adiciona-dos das propriedades de intensificar o crescimento de neonicotinóides quan-do aplicados às plantas, tal como descrito na WO 01126468 A2 e dos efeitosderivados da tolerância ao estresse manipulada de uma dada planta. O efei-to é independente da presença de insetos que são os alvos dos neonicoti-nóides acima mencionados. Conseqüentemente, o efeito está conectadocom a melhora bioquímica da tolerância ao estresse de uma planta ou célulade planta ou semente a partir da qual ela é cultivada. Foi descoberto queesse efeito aumenta a tolerância ao estresse manipulada geneticamente detais plantas e células de planta manipuladas.

Como usado aqui, "tolerância ao estresse" se refere a uma me-lhor tolerância ao estresse, em comparação com a da planta não manipula-da, quando o estresse é aplicado a uma planta, por exemplo, pela aplicaçãode compostos químicos (por exemplo, herbicidas, fungicidas, inseticidas,reguladores do crescimento da planta, adjuvantes, fertilizantes), exposição àestresse abiótico (por exemplo, seca, condições de alta luminosidade, tem-peraturas extremas, ozônio e outros poluentes atmosféricos, salinidade dosolo ou metais pesados) ou estresse biótico (por exemplo, infecção por pa-tógeno ou praga incluindo infecção por fungos, vírus, bactérias, insetos, ne-matódeos, micoplasmas e organismos semelhantes aos micoplasmas, etc.)

Em uma modalidade da invenção, é descrito um método que éútil para aumentar a tolerância ao estresse e a saúde de uma planta ou célu-la de planta ou semente a partir da qual tal planta é cultivada e que é mani-pulada para ser tolerante ao estresse, que compreende aplicar à dita plantae/ou ao seu habitat, a uma célula de planta ou à semente a partir da qual asditas plantas são cultivadas uma quantidade eficaz de um composto neoni-cotinóide da fórmula (I)

<formula>formula see original document page 5</formula>

em que

Het representa um heterociclo que em cada caso é opcionalmentemono- ou polissubstituído por flúor, cloro, metila ou etila, cujo heterociclo éselecionado a partir do seguinte grupo de heterociclos:

pirid-3-ila, pirid-5-ila, 3-piridinio, 1 -óxido-5-piridinio, 1-óxido-5-piridinio, tetraidrofuran-3-ila, tiazol-5-ila,

A representa CrC6-alquila, -N(R1)(R2) ou S(R2)1

em que

R1 representa hidrogênio, CrC6-alquila, fenil-CrC4-alquila, C3-C6-cicloalquila, C2-C6-alquenila ou C2-C6-alquinila, e

R2 representa Ci-C6-alquila, C2-C6-alquenila, C2-C6-alquinila, -C(=0)-CH3 ou benzila,

R representa hidrogênio, Ci-C6-alquila, C2-C6-alquenila, C2-C6-alquinila, -C(=0)-CH3 ou benzila ou junto com R2 representa os grupos abai-5

χο:

-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-, -CH2 -O-CH2-, -CH2 -S-CH2TCH2 -

NH-CH2-,

-CH2-N(CH3)-CH2-, e

X representa N-NO2, N-CN ou CH-NO2.

Radicais de hidrocarbonetos saturados ou insaturados, tais co-mo alquila ou alquenila, podem em cada caso, ser de cadeia Iinear ou ramifi-cada na medida em que isso é possível, incluindo em combinação com hete-roátomos, tais como, por exemplo, em alcóxi.

Esses compostos são conhecidos por ter atividade inseticida(vide, por exemplo, EP-A1-192 606, EP-A2-580 533, EP-A2-376 279, EP-A2-235 725).

Compostos preferidos da fórmula (I) que podem ser menciona-dos são os neonicotinóides listados no "The Pesticide Manual", 13- Edição,2003 (British Crop Protection Council).

Um composto muito particularmente referido é imidacloprida dafórmula

<formula>formula see original document page 6</formula>

conhecido, por exemplo, a partir da EP A1 O 192 060.

Outro composto muito particularmente preferido é acetamiprida da fórmula

<formula>formula see original document page 6</formula>

conhecido, por exemplo a partir de WO A1 91104965.

Outro composto muito particularmente preferido é tiacloprida da fórmula

<formula>formula see original document page 6</formula>

conhecido, por exemplo, a partir de EP A2 0 235 725.Outro composto muito particularmente preferido é nitenpiram dafórmula

<formula>formula see original document page 0</formula>

conhecido, por exemplo, a partir de EP A2 0 302 389.

Outro composto preferido é clotianidina da fórmula

<formula>formula see original document page 7</formula>

conhecido, por exemplo, a partir de EP A2 O 376 279.

Outro composto preferido é tiametoxam da fórmula

<formula>formula see original document page 7</formula>

conhecido, por exemplo, a partir de EP A2 O 580 553.

Outro composto preferido é dinotefurano da fórmula

<formula>formula see original document page 7</formula>

conhecido, por exemplo, a partir de EP A1 O 649 845.

Imidacloprida é um composto especialmente preferido para usonos métodos de acordo com a invenção. Clotianidina também deve ser men-cionada como um composto preferido no contexto da presente invenção.

Em outra modalidade da invenção, é descrito um método que éútil para aumentar a tolerância ao estresse e a saúde de uma planta ou célu-la de planta ou semente a partir da qual tal planta é cultivada e que é mani-pulada para ser tolerante ao estresse, que compreende aplicar à dita plantae/ou ao seu habitat, a uma célula de planta ou a semente à partir da qual asditas plantas são cultivadas, uma quantidade eficaz de ácido 6-cloronicotínico (niacina, CAS NO: 5326-23-8) da fórmula

<formula>formula see original document page 7</formula>

Ácido 6-cloronicotínico pode ser liberado durante a degradaçãodos neonicotinóides acima mencionados que carregam esse grupo, tais co-mo imidacloprida, tiacloprida, acetamiprida, nitenpiram. Por exemplo, a imi-dacloprida é degradada gradativamente ao metabólito primário ácido 6-cloronicotínico, que eventualmente se quebra em dióxido de carbono. Foidescoberto que esse metabólito também aumenta a tolerância ao estresse ea saúde de uma planta ou célula de planta ou semente a partir da qual talplanta é cultivada e que foi manipulada para ser tolerante ao estresse.

Os compostos mencionados acima causam um aumento da tole-rância ao estresse de plantas ou células de plantas e sementes dessa, quecontêm DNA estranho que compreende um gene intensificador da tolerânciaao estresse exógeno ou uma variante de um gene endógeno que correspon-de a tal gene intensificador dé tolerância ao estresse exógeno, cuja varianteresulta em maior tolerância ao estresse das células da planta ou plantas quecarregam tal variante.

Como uma regra, um aumento na tolerância ao estresse signifi-ca pelo menos uma redução significativa de um parâmetro indicativo de es-tresse, que pode ser medido tanto como uma diferença morfológica, fisioló-gica ou bioquímica em uma comparação de plantas de referência não trans-gênicas, estressadas e não tratadas, ou células e sementes dessas versusplantas de referência transgênicas, tratadas ou células ou sementes dessas."Saúde" comoíé mencionado aqui se refere a um nível de infestação signifi-cativamente mais baixo de plantas, células ou semente dessas com pragase doenças, que por exemplo, podem ser contadas ou estimadas como umnúmero de espécies de praga individuais presentes ou como expressão desintomas macroscópicos (por exemplo, redução da área relativa da folha,infestação na área da folha, necrose da área da folha). A significância é pro-vada com a fórmula de Colby. Além disso, a resistência a condições de es-tresse também pode ser medida pela medida dos níveis de NAD(H) (quepermanecem mais elevados em plantas tolerantes estressadas do que emplantas de controle estressadas) e do nível de espécies reativas de oxigênio(mais baixos em plantas tolerantes estressadas do que nas plantas de con-trole estressadas) sob condições de estresse conforme descrito no pedidode Patente Europeu EP04077624.7 (incorporado aqui por referência).Uma das vantagens da presente invenção é que as proprieda-des sistêmicas particulares dos compostos de acordo com a invenção ecomposições que compreendem os ditos compostos significam que a se-mente de plantas que foram manipuladas para serem tolerantes ao estressecom essas composições aumenta a tolerância ao estresse da planta emgerminação e da planta resultante após a emergência. Dessa maneira, otratamento imediato da plantação no momento da semeadura ou logo apósisso pode ser dispensado.

Em outra modalidade da invenção, é descrito um método que éútil para aumentar a tolerância ao estresse e saúde de uma planta ou célulade planta ou semente a partir da qual é planta é cultivada e que é manipula-da para ser tolerante ao estresse, que compreende aplicar à dita planta e/ouao seu habitat, a uma célula de planta de à semente a partir da qual as ditasplantas são cultivadas uma quantidade eficaz de uma composição que com-preende os compostos da fórmula (I).

Conseqüentemente, a invenção também se refere a composi-ções que compreendem os compostos da fórmula (I) para o uso de taiscomposições dè acordo com a invenção.

Os compostos da fórmula (I) também podem ser usados em umamistura com outros compostos ativos, por exemplo, inseticidas, bactericidas,acaricidas, fungicidas, etc. na forma de suas formulações comercialmenteúteis ou nas formas de aplicação preparadas a partir das tais formulações.Isso pode ser feito para obter composições que além de melhorar a tolerân-cia ao estresse e a saúde das plantas de acordo com a invenção tambémcombatem pragas que podem estar presentes. Os inseticidas que podem serusados são, por exemplo, agentes organofosforados, agentes de carbamato,químicos do tipo carboxilato, químicos do tipo hidrocarbonetos clorados,substâncias inseticidas produzidas por micróbios, etc.

Em vários casos, isso resulta em efeitos sinérgicos, isto é, a ati-vidade da mistura excede a atividade dos componentes individuais. Taisformulações e formas de aplicação são especialmente úteis comercialmentee ecologicamente já que quantidades geralmente menores dos ingredientesativos podem ser usadas. Um sinérgico, entretanto, não precisa necessaria-mente ser ativo em si, contanto que ele aumente a ação do composto ativo.

O tratamento de acordo com a invenção das plantas e partes deplantas com os compostos ativos é realizado diretamente ou por permitir queos compostos ajam nas suas vizinhanças, ambiente ou espaço de armaze-namento pelos métodos de tratamento usuais, por exemplo, por imersão,pulverização, evaporação, termonebulização, dispersão, pintura e, no casode material de propagação, em particular no caso de semente, também pelaaplicação de um ou mais revestimentos.

Os compostos ativos podem ser convertidos nas formulaçõesusuais, tais como soluções, emulsões, pós-hidratáveis, suspensões, pós,poeiras, pastas, pós solúveis, grânulos, concentrados suspensão-emulsão,materiais naturais e sintéticos impregnados com o composto ativo, e micro-encapsulações em substâncias poliméricas.

O conteúdo dos compostos ativos da presente invenção em umaformulação ou forma de aplicação comercialmente útil pode ser diversificadoem uma grande extensão. O conteúdo de composto ativo das formas de usopreparadas a partir das formulações comerciais pode variar dentro de limitesamplos.

Essas formulações são produzidas de uma maneira conhecida,por exemplo, pela mistura dos compostos ativos com extensores, isto é, sol-ventes líquidos e/ou transportadores sólidos, opcionalmente com o uso detensoativos, isto é, emulsificantes e/ou dispersantes, e/ou formadores de espuma.

Se o extensor usado for água, também é possível empregar, porexemplo, solventes orgânicas como solventes auxiliares. Essencialmente,solventes líquidos adequados são: aromáticos tais como xileno, tolueno oualquil-naftalenos, aromáticos clorados ou hidrocarbonetos alifáticos cloradostais como clorobenzenos, cloroetilenos ou cloreto de metileno, hidrocarbone-tos alifáticos tais como cicloexano ou parafinas, por exemplo, frações de pe-tróleo, óleos minerais e vegetais, alcoóis tais como butanol ou glicol e aindaseus éteres e ésteres, cetonas tais como acetona, metil etil cetona, metil i-sobutil cetona ou cicloexanona, solventes fortemente polares tais como di-metilformamida e sulfóxido de dimetila, e ainda água.

Como transportadores sólidos são adequados: por exemplo, saisde amônio e minerais naturais triturados tais como caolinas, argilas, talco,giz, quartzo, atapulgita, montmorilonita ou terra diatomácea, e minerais sinté-ticos triturados, tais como sílica altamente dispersa, alumina e silicatos; co-mo transportadores sólidos para grânulos são adequados: por exemplo ro-chas naturais britadas e fracionadas, tais como calcita, mármore, pedra-pomes, sepiolita e dolomita, e ainda grânulos sintéticos de farinhas orgâni-cas e inorgânicas, e grânulos de material orgânico tais como serragem, cas-cas de coco, espigas de milho, caules de tabaco; como emulsificantes e/ouformadores de espuma são adequados: por exemplo, emulsificantes nãoiônicos e aniônicos, tais como ésteres de ácido graxo de polioxietileno, éte-res de álcool graxo de polioxietileno, por exemplo, éteres de poliglicol de al-quilarila, alquilsulfonatos, sulfatos de alquila, arilsulfonatos e ainda hidrolisa-dos de proteína; como dispersantes são adequados: por exemplo líquidos dedejetos de lignina-sulfito e metilcelulose.

Taquificantes tais como carboximetilcelulose e polímeros natu-rais e sintéticos na forma de pós, grânulos ou látexes, tais como goma arábi-ca, álcool polivinílico e acetato de polivinila, assim como fosfolipídeos natu-rais tais como cefalinas e lecitinas, e fosfolipídeos sintéticos, podem ser usadosnas formulações. Outros aditivos podem ser óleos minerais e vegetais.

É possível usar corantes tais como pigmentos inorgânicos, porexemplo, óxido de ferro, oxido de titânio, azul da Prússia, e corantes inorgâ-nicos, tais como corantes de alizarina, corantes azo e corantes de ftalociani-na de metal, e nutrientes traço tais como sais de ferro, manganês, boro, co-bre, cobalto, molibdênio, e zinco.

As formulações geralmente compreendem entre 0,1 e 98% empeso de composto ativo, preferivelmente entre 0,1 e 90% e particularmentepreferivelmente entre 0,5 e 70% em peso de composto ativo.

O efeito vantajoso de aumento da tolerância ao estresse doscompostos de neonicotinóide e 6-CNA é particularmente fortemente pronun-ciado em certas taxas de aplicação. Entretanto, as taxas de aplicação doscompostos ativos podem ser diversificadas dentro de extensões relativamen-te amplas. Em geral, as taxas de aplicação são de 1 g a 1600 g do compostoativo por hectare, preferivelmente de 10 g a 800 g do composto ativo por hecta-re, preferivelmente de 10 g a 800 g do composto ativo por hectare, e particu-larmente preferivelmente de 10 g a 600 g do composto ativo por hectare.

Como mencionado anteriormente, uma modalidade da invençãoé um método que é útil para aumentar a tolerância ao estresse e a saúde deuma planta que é manipulada para ser tolerante ao estresse, que compreen-de aplicar ao material de propagação da planta incluindo a semente a partirda qual a dita planta é cultivada, uma quantidade eficaz de uma composiçãoque compreende os compostos da fórmula (I). O material de propagação daplanta pode ser tratado antes do plantio, por exemplo, a semente pode sertratada antes da semeadura. Os compostos de acordo com a invenção tam-bém podem ser aplicados a grãos de semente tanto pela impregnação dosgrãos com uma formulação líquida ou pelo revestimento delas com uma for-mulação sólida. A composição também pode ser aplicada ao local de plantioquando o material de propagação esta sendo plantado, por exemplo, durantea semeadura.

Conseqüentemente, a invenção também se refere à semente deuma planta que é manipulada para ser tolerante ao estresse e que foi tratadacom um composto de acordo com a invenção. Em relação ao tratamento domaterial de propagação de planta, tal como sementes, taxas de aplicaçãofavoráveis são em geral 0,1 a 1000 g, em particular 1 a 800 g, preferivelmen-te 10 a 500 g de um dos compostos de neonicotinóide ou 6-CNA por 100 kgde material a ser tratado.

Plantações que podem ser melhoradas de acordo com o presen-te método incluem qualquer planta manipulada para ser resistente ao estres-se, sementes de dicotiledôneas e de monocotiledôneas, células de plantasespecialmente algodão, canola, colza, trigo, milho, cevada, arroz, aveia, cen-teio, trigo sarraceno, triticale, cana-de-açúcar, soja, girassóis, alfafa, feijão,linho, mostarda, ervilha, tabaco, batata, batata doce, beterraba, grama, sor-go, painço, brassicas vegetais, outros vegetais (incluindo alcachofra, aspar-go, cenoura, aipo, chicória, pepinos, berinjelas, alho-poró, alface, melão,quiabo, cebola, pimenta, abóbora, rabanete, nabo, cártamo, espinafre, abó-bora-moranga, tomate, melancias, inhame, abobrinha), amêndoa, maçã,damasco, banana, amoras, mirtilo, cacau, cítricos (incluindo toranja, limão,laranja, cumquat, lima, mandarina, tangerina, pomelo, mandarina Satsuma),cereja, coco, amora, tâmara, groselha, uva, goiaba, kiwi, manga, nectarina,mamão papaia, maracujá, pêssego, amendoim, pêra, abacaxi, noz-pecã,pistache, ameixa, framboesa, morango, planta do chá, noz, mas tambémplantas usadas em horticultura, floricultura ou silvicultura.

Todas as plantas e partes de planta podem ser tratadas de a -cordo com a invenção. Partes de planta devem ser entendidas como signifi-cando todas as partes e órgãos de plantas localizados acima ou abaixo dosolo, tais como galho/folha, flor e raiz, exemplos que podem ser menciona-dos são folhas, espinhos, caules, troncos, flores, corpos frutíferos, frutos,sementes, raízes, tubérculos, e rizomas. Partes de planta ainda incluem ma-terial colhido, e material de propagação vegetativo e produtivo, por exemplo,mudas, tubérculos, rizomas, brotos e sementes. Eles também incluem célu-las de planta, tal como pode ser usado ou resultado da transformação deuma célula de planta de acordo com a invenção. Também é possível aplicaros compostos mencionados acima sobre ou dentro do solo, por exemplo,antes do plantio ou semeadura para alcançar o efeito descrito, por exemplo,para aumentar a tolerância ao estresse das plantas após do plantio e daplanta em desenvolvimento que cresce a partir de uma semente que foi se-meada no solo tratado.

As plantas, células de planta e sementes às quais se refere nes-sa invenção são manipuladas para aumentar a tolerância ao estresse dasditas plantas de uma forma específica.

Em uma modalidade da invenção, um gene intensificador de to-lerância ao estresse exógeno é capaz de reduzir a expressão e/ou atividadedo gene de poli(ADP-ribose)polimerase nas células de plantas ou plantasconforme descrito em WO 00/04173 A1 ou EP 04077984.5 (aqui incorpora-dos por referência).

Poli(ADP-ribose)polimerase (PARP), também conhecida comopoli(ADP-ribose) transferase (ADPRT) (EC 2.4.2.30), é uma enzima nuclearencontrada na maioria dos eucariotos, incluindo vertebrados, artrópodes,moluscos, mixomicetos, dinoflagelados, fungos e outros eucariotos inferiorescom a exceção de leveduras. A atividade enzimática também foi demonstra-da em várias plantas (Payne et al, 1976; Willmitzer & Wagner, 1982; Chen etal, 1994; OTarreIIl 1995).

PARP catalisa a transferência de uma porção de ADP-ribosederivada de NAD+ principalmente para o grupo carboxila de um resíduo deácido glutâmico na proteína-alvo, e a subseqüente polimerização de ADP-ribose. A principal proteína-alvo é a própria PARP, mas também histonas,proteínas cromossômicas do grupo de alta mobilidade, topoisomerase, en-donucleases e DNA polimerases mostraram ser submetidas a essa modificação.

Como uma modalidade em particular, o gene intensificador detolerância ao estresse pode compreender os seguintes fragmentos de DNAoperativamente ligados:

a) um promotor exprimível em planta;

b) uma região de DNA que quando transcrita resulta em uma molé-cula de RNA capaz de reduzir a expressão dos genes codificantes de PARPendógenos de uma planta (uma molécula de RNA inibitória de PARP);

c) uma região de DNA envolvida na terminação de transcrição epoliadenilação.

A região do DNA mencionada pode resultar em uma assim cha-mada molécula de RNA anti-sentido que reduz de uma forma transcricionalou pós-transcricional a expressão de um gene codificante de PARP na plan-ta ou célula de planta-alvo, que compreende pelo menos 20 ou 21 nucleotí-deos consecutivos que têm pelo menos 95% a 100% de identidade de se-qüência ao complemento da seqüência de nucleotídeos de um gene codifi-cante de PARP presente na planta ou célula de planta.

A região de DNA mencionada também pode resultar em umaassim chamada molécula de RNA sentido que compreende reduzir de formatranscricional ou pós-transcricional a expressão de um gene codificante dePARP na planta ou célula de planta-alvo, que compreende pelo menos 20 ou21 nucleotídeos consecutivos que têm pelo menos 95% a 100% de identida-de de seqüência com a seqüência de nucleotídeos de um gene codificantede PARP presente na célula de planta ou planta.

Entretanto, a seqüência de nucleotídeo mínima da região deRNA anti-sentido ou sentido de cerca de 20 nt da região codificante dePARP pode estar compreendida dentro de uma molécula de RNA maior, quevaria em tamanho de 20 nt até uma extensão igual ao tamanho do gene-alvo. As regiões de nucleotídeo anti-sentido ou sentido mencionadas podemassim ser de cerca de 21 nt a cerca de 5000 nt de extensão, tal como 21 nt,40 nt, 50 nt, 100 nt, 200 nt, 300 nt, 500 nt, 1000 nt, 2000 nt ou até mesmocerca de 5000 nt ou mais de tamanho. Além disso, não é necessário para afinalidade da invenção que a seqüência de nucleotídeos da molécula deRNA inibitória de PARP usada ou que a região codificante do gene exógeno,seja completamente idêntica ou complementar ao gene de PARP endógeno,a expressão do qual é intencionada ser reduzida na célula de planta. Quantomais longa for a seqüência, menos severa será a necessidade por uma iden-tidade de seqüência total. Dessa forma, as regiões sentido ou anti-sentidopodem ter uma identidade de seqüência total de cerca de 40% ou 50% ou60% ou 70% ou 80% ou 90% ou 100% à seqüência de nucleotídeos do genede PARP endógeno ou o complemento desse. Entretanto, como menciona-do, as regiões anti-sentido ou sentido devem compreender uma seqüênciade nucleotídeo de 20 nucleotídeos consecutivos tendo cerca de 100% deidentidade de seqüência à seqüência de nucleotídeo do gene de PARP en-dógeno. Preferivelmente o trecho de cerca de 100% de identidade de se-qüência deve ser de cerca de 50, 75 ou 100 nt.

Para o propósito da invenção, a "identidade de seqüência" deduas seqüências de nucleotídeo relacionadas, expressa como porcentagem,refere-se ao número de posições nas duas seqüências otimamente alinha-das que têm resíduos idênticos (x100) dividido pelo número de posiçõescomparadas. Um intervalo, isto é, uma posição em um alinhamento onde umresíduo está presente em uma seqüência, mas não na outra, é consideradocomo uma posição com resíduos não idênticos. O alinhamento das duasseqüências é realizado pelo algoritmo de Needleman e Wunsch (Needleman& Wunsch 1970). Alinhamento auxiliado por computador pode ser realizadode forma conveniente usando programas usuais tal como GAP que é partedo Wisconsin Package Versão 10.1 (Genetics Computer Group, Madison,Wisconsin, USA) usando a matriz de pontuações padrão com uma penalida-de por criação de intervalo de 50 e uma penalidade por extensão de interva-lo de 3.

Será evidente que sempre que seqüências de nucleotídeo demoléculas de RNA forem definidas com relação à seqüência de nucleotídeosde moléculas de DNA correspondentes, a timina (T) na seqüência de nucleo-tídeos deve ser substituída por uracila (U). Se for feita referência a molécu-las de RNA ou DNA será evidente a partir do contexto do pedido.

A eficácia dos genes exógenos mencionados acima na reduçãoda expressão do gene de PARP endógeno pode ser ainda aumentada pelainclusão de elementos de DNA que resultam na expressão de moléculas deRNA inibitórias de PARP aberrantes, não-poliadeniladas. Um tal elemento deDNA adequado para este propósito é uma região de DNA que codifica umaribozima de auto -função conforme descrito em WO 00/01133 A1.

A eficácia dos genes exógenos mencionados acima na reduçãoda expressão do gene de PARP endógeno de uma célula de planta tambémpode ser ainda aumentada pela inclusão simultânea em uma célula de plan-ta de um gene exógeno conforme descrito aqui que codifica uma moléculade RNA anti-sentido inibitória de PARP, e um gene exógeno conforme des-crito aqui que codifica uma molécula de RNA sentido inibitória de PARP emque as ditas moléculas de RNA anti-sentido e sentido inibitórias de PARPsão capazes de formar uma região de RNA de fita dupla por pareamento debase entre os pelo menos 20 nucleotídeos consecutivos mencionados, con-forme descrito em WO 99/53050 A1.

Como ainda descrito em WO 99/53050 A1, as regiões de RNAsentido e anti-sentido inibitórias de PARP, capazes de formar uma região deRNA de dupla fita podem estar presentes em uma molécula de RNA, preferi-velmente separadas por uma região espaçadora. A região espaçadora podecompreende uma seqüência de íntron. Tal gene exógeno pode ser conveni-entemente construído ligando-se operativamente um fragmento de DNA quecompreende pelo menos 20 nucleotídeos do gene de PARP endógeno isola-do ou identificado, a expressão do qual é intencionada para ser reduzida, emuma repetição invertida, a um promotor de planta exprimível e uma região deformação de terminação 3' envolvida na terminação de transcrição e polia-denilação. Para obter a construção de tal gene exógeno, pode ser feito usode vetores descritos em WO 02/059294 A1.

A nomenclatura atual se refere às polimerases contendo dedosde Zn clássicas como proteínas PARP1 (e genes parpl correspondentes)enquanto que as proteínas PARP estruturalmente não clássicas são atual-mente referidas como PARP2 (e genes parp2 correspondentes) e genes quecodificam PARP como usado aqui, podem se referir a qualquer um dos tipos.

Os seguintes registros de base de dado (aqui incorporados porreferência) que identificam seqüências demonstradas experimentalmente esupostas de proteína poli ADP-ribose polimerase, partes dessas ou seqüên-cias homólogas, poderiam ser usados de acordo com a presente invenção:BAD53855 (Oryza sativa)·, BAD52929 {Oryza sativa)] XP_477671 (Oryzasativa)] BAC84104 (Oryza sativa)·, AAT25850 (Zea mays); AAT25849 (Zeamays)] NP I 97639 (Arabidopsis thaliana)] NP_850165 (Arabidopsis thaliana)]NP_188107 (Arabidopsis thaliana)·, NP 850586 (Arabidopsis thaliana)·,BAB09119 (Arabidopsis thaliana)·, AAD20677 (Arabidopsis thaliana)·, Q11207 (Arabidopsis thaliana)·, C84719 (Arabidopsis thaliana)·, T51353 (Arabi-dopsis thaliana)·, T01311 (Arabidopsis thaliana); AAN12901 (Arabidopsis tha-liana)·, AAM13882 (Arabidopsis thaliana)·, CAB80732 (Arabidopsis thaliana)·,CAAI 0482 (Arabidopsis thaliana)·, AAC79704 (Zea mays): AAC19283 (Ara-bidopsis thaliana)·, CAA10888 (Zea mays)·, CAA10889 (Zea mays)·, CA-A88288 (Arabidopsis thaliana).

Como uma modalidade particular da invenção, a expressão dogene redutor da expressão do gene de PARP pode compreender os seguin-tes fragmentos de DNA operativamente ligados:

a) um promotor exprimível em planta;

b) uma região de DNA que quando transcrita produz uma moléculade RNA, a molécula de RNA compreendendo:

a. uma seqüência de nucleotídeo anti-sentido que compreende pe-lo menos cerca de 20 nucleotídeos consecutivos que têm cerca de 96% deidentidade de seqüência a uma seqüência de nucleotídeo de cerca de 20nucleotídeos consecutivos selecionada a partir das seqüências de nucleotí-deo de SEQ ID 1 (região codificante de parpl de Arabidopsis), SEQ ID 2(região codificante de parp26e Arabidopsis), SEQ ID 3 (região codificante deparpl de Zea mays), SEQ ID 4 (outra região codificante de parpl de Zeamays), SEQ ID 5 (região codificante de parp2 de Zea mays) ou SEQ ID 6(cDNA parcial de parp2 de algodão) ou de seqüências de nucleotídeo quecodificam proteínas com seqüências de aminoácido similares ou idênticasconforme codificado pelas seqüências de nucleotídeo mencionadas.

b. Uma seqüência de nucleotídeo sentido que compreende pelomenos cerca de 20 nucleotídeos que são complementares à seqüência denucleotídeo anti-sentido. A seqüência de nucleotídeo sentido pode entãocompreender uma seqüência de pelo menos cerca de 20 nucleotídeos con-secutivos que tem cerca de 96% de identidade de seqüência a uma seqüên-cia de nucleotídeo de cerca de 20 nucleotídeos selecionada a partir das se-qüências de nucleotídeo de SEQ ID 1 (região codificante de parpl de Arabi-dopsis), SEQ ID 2 (região codificante de parp2 de Arabidopsis) SEQ ID 3(região codificante de parpl de Zea mays), SEQ ID 4 (outra região codifican-te de parpl de Zea mays,), SEQ ID 5 (região codificante de parp2 de Zeamays) ou SEQ ID 6 (cDNA parcial de parp2 de algodão) de seqüências denucleotídeo que codificam proteínas com seqüências e aminoácido similaresou idênticas conforme codificado pelas seqüências de nucleotídeo mencionadas;

por meio do que as seqüências de nucleotídeo sentido e anti-sentido sãocapazes de formar uma molécula de RNA de fita dupla (dsRNA)c) Uma região de DNA para terminação de transcrição e poliadenilação.

Entretanto, será evidente que outros genes codificantes dePARP conforme descrito em WO 00/04173 ou EP 04077984.5 podem ser usados.

Também será evidente que o objetivo da presente invenção deaumentar a tolerância ao estresse também pode ser alcançado pela aplica-ção dos compostos químicos mencionados em plantas ou células de plantaque compreendem no seu genoma um gene codificante de PARP variantepelo qual a expressão e/ou atividade de PARP é reduzida quando compara-da com a expressão e/ou atividade de PARP em uma planta similar, o quetambém poderia resultar em tolerância ao estresse aumentada da plantacom a PARP variante. Tais genes codificantes de PARP variantes podemser induzidos, por exemplo, por mutagênese, ou eles podem ser alelos deocorrência natural de genes codificantes de PARP, que estão correlaciona-dos com tolerância ao estresse aumentado das plantas que os carregam.

Em outra modalidade da invenção, os compostos mencionadossão aplicados sobre plantas ou células de planta que compreendem um ge-ne exógeno intensificador de tolerância ao estresse capaz de reduzir a ex-pressão e/ou atividade dos genes codificantes de ParG das plantas ou célu-las de planta, conforme descrito, por exemplo, em WO 2004/090140 (aquiincorporado por referência).

PARG (poli (ADP-ribose) glicohidrolase; E.C.3.2.1.143) convertepolímeros de poli (ADP-ribose) para ADP-ribose livre por sua atividade deexoglicosidase e endoglicosidase (PARG).

Em plantas, uma poli (ADP-ribose) glicohidrolase foi identificada,por clonagem baseada em mapeamento do gene selvagem inativado em ummutante afetado, na transcrição controlada pelo relógio biológico de genesem Arabidopsis e na transição dependente de fotoperíodo do crescimentovegetativo para a floração (tej). A seqüência de nucleotídeo do gene podeser obtida a partir de bases de dados de nucleotídeos sob o número de a-cesso AF394690 (Panda et al., 2002 Dev. Cell. 3, 51-61; SEQ ID No 7).As seqüências de nucleotídeo de outros genes codificantes dePARP de plantas podem ser encontradas em WO 2004/090140 A2, tal comoo gene de PARP de Solarium tuberosum (SEQ ID No 8); Oryza sativa (SEQID No 9) ou Zea mays (SEQ ID No 10) assim como métodos para isolar ge-nes codificantes de PARG adicionais e variantes desses de outras plantas.

Dessa forma, em uma modalidade, as plantas ou células deplanta manipuladas para serem tolerantes ao estresse podem compreenderos seguintes fragmentos de DNA operativamente ligados,

a) um promotor exprimível em planta;

b) uma região de DNA1 que quando transcrita produz uma molécu-las de RNA inibitória, a molécula de RNA compreendendo

i. uma região de nucleotídeo anti-sentido que compreende pelomenos 20 nucleotídeos consecutivos que tem pelo menos 96% de identida-de de seqüência a uma seqüência de nucleotídeo de cerca de 20 nucleotí-deos selecionados a partir do complemento de uma seqüência de nucleotí-deo que codifica uma proteína PARG de planta, tais como as seqüências denucleotídeo de SEQ ID 7, SEQ ID 8, SEQ ID 9 ou SEQ ID 10 ou seqüênciasde nucleotídeos que codificam proteínas com seqüências de aminoácidosimilares ou idênticas às seqüências de nucleotídeo mencionadas; ou

ii. uma região de nucleotídeo sentido que compreende pelo me-nos 20 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir de uma seqüênciade nucleotídeo que codifica uma proteína PARG de planta, tais como as se-qüências de nucleotídeo de SEQ ID 7, SEQ ID 8, SEQ ID 9 ou SEQ ID 10 ouseqüências de nucleotídeo que codificam proteínas com seqüências de ami-noácidos similares ou idênticas às seqüências de nucleotídeo mencionadas;ou

iii. seqüências de nucleotídeo sentido e anti-sentido conformemencionado sob i) ou ii) por meio do que as ditas seqüências de nucleotídeoanti-sentido e sentido são capazes de formar uma molécula de RNA de fitadupla;

c) Uma região de DNA envolvida na terminação de transcrição epoliadenilação.Será imediatamente evidente para o versado na técnica que pa-râmetros adicionais de extensão de seqüências de nucleotídeo sentido eanti-sentido ou moléculas de dsRNA, e identidade de seqüência para as mo-léculas de RNA inibitórias de ParG podem ser usados conforme mencionadoacima para as moléculas de RNA inibitórias de PARP.

Em ainda outra modalidade da invenção, o gene exógeno inten-sificador de tolerância ao estresse pode compreender as seguintes molécu-las de DNA operativamente ligadas:

a) um promotor exprimível em planta;

b) uma região de DNA que codifica uma enzima funcional em plan-tas da via da síntese de recuperação de nicotinamida adenina dinucleotídeoselecionada a partir de nicotinamidase, nicotinato fosforribosiltransferase,ácido nicotínico mononucleotídeo adenil transferase ou nicotinamida adeninadinucleotídeo sintetase; e

c) uma região de terminação 3' envolvida na terminação de trans-crição e poliadenilação.

conforme descrito em EP 04077624.7 (aqui incorporado por referência).

Como usado aqui, "uma enzima funcional em planta da via desíntese de recuperação de nicotinamida adenina dinucleotídeo" é uma enzi-ma que quando introduzida em plantas, ligada a elementos de controle a-propriados tais como promotor exprimível em planta e região de terminação,pode ser transcrita e traduzida para produzir uma enzima da via de recupe-ração de NAD funcional em células de planta. As enzimas que estão incluí-das (e genes codificantes) são as da síntese de recuperação de NAD, quesão obtidas a parir de uma fonte de planta, mas também as enzimas obtidasa partir de leveduras (Saccharomyces cerevisiae) ou de outras leveduras efungos. Acredita-se que as últimas proteínas podem ser ainda mais adequa-das para os métodos de acordo com a invenção, já que elas são menos pro-vavelmente sujeitas à regulação de retroalimentação enzimática etc. àsquais as enzimas similares derivadas de plantas podem ser submetidas.

Enzimas envolvidas na via de síntese de recuperação de NADcompreendem as seguintes:Nicotinamidase (EC 3.5.1.19) que catalisa a hidrolise do grupoamida da nicotinamida, assim liberando nicotinato e NH3. A enzima tambémé conhecida como nicotinamida desaminase, nicotinamida amidase, YNDaseou nicotinamida amido hidrolase.

Nicotinato fosforribosiltransferase (EC 2.4.2.11) também conhe-cida como niacina ribonucleotidase, ácido nicotínico mononucleotídeo glico-hidrolase; ácido nicotínico mononucleotídeo pirofosforilase; ácido nicotínicofosforribosiltransferase que catalisa a seguinte reaçãoNicotinato-D-ribonucleotídeo + difosfato = nicotinato + 5-fosfo-a-D ribose 1 -difosfato

Nicotinato-nucleotídeo adenililtransferase, (EC 2.7.7.18) tambémconhecida como desamido-NAD+ pirofosforilase; nicotinato mononucleotídeoadenililtransferase; desamindonicotinamida adenina dinucleotídeo pirofosfori-lase; NaMT-ATase; ácido nicotínico mononucleotídeo adenililtransferase quecatalisa a seguinte reação

ATP + nicotinato ribonucleotídeo = difosfato + desamido-NAD+NAD-sintase (EC 6.3.1.5) também conhecida como NAD sinteta-se; NAD+ sintase; nicotinamida adenina dinucleotídeo sintetase; difosfopiridi-na nucleotídeo sintetase, que catalisa a seguinte reação

Desamido-NAD++ATP+NH3 = AMP+ difosfato + NAD+

Em uma modalidade da invenção, as regiões de DNA que codifi-cam para uma enzima funcional de planta da via de recuperação de NADpodem compreender uma seqüência de nucleotídeo de SEQ ID Nos 11, 12,13, 14 ou 15 ou uma seqüência de nucleotídeos que codifica uma proteínacom seqüência de aminoácido similar ou idêntica às proteínas codificadaspelas seqüências de nucleotídeo mencionadas acima.

Como descrito por Hunt et ai, 2004 os "homólogos dé plantadessas enzimas foram identificados e essas seqüências de DNA podem serusadas para um efeito similar (Hunt et ai, 2004, New Phytologist 163(1): 31-44). As seqüências de DNA identificadas têm os seguintes números de A-cesso: para nicotinamidase: At5g23220 (SEQ ID No 16); At5g23230 (SEQ IDNo 17) e At3gl6190 (SEQ ID No 18); para nicotinato fosforribosiltransferase:At4g36940 (SEQ ID No 19), At2g23420 (SEQ ID No 20), para ácido nicotíni-co mononucleotídeo adeniltransferase: At5g55810 (SEQ ID No 21) e paraNAD sintetase: Atlg55090 (SEQ ID No 22).

Entretanto, será evidente que as plantas manipuladas para se-rem resistentes ao estresse também podem ser variantes dessas seqüên-cias de nucleotídeo, incluindo inserções, deleções e substituições desses.

Igualmente, homólogos das seqüências de nucleotídeo mencionadas de es-pécies diferentes de Saccharomyces cerevisea podem ser usados. Essesincluem, mas não estão limitados a seqüências de nucleotídeo de plantas, eseqüências de nucleotídeo que codificam proteínas com as mesmas se-qüências de aminoácido, assim como variantes das tais seqüências de nu-cleotídeo.

Variantes da seqüência de nucleotídeo descrita terão uma iden-tidade de seqüência que é de preferivelmente pelo menos cerca de 80% ou85% ou 90% ou 95% com seqüências de nucleotídeo identificadas que codi-ficam enzimas da via de recuperação de NAD, tal como aquelas identifica-das na listagem de seqüência. Preferivelmente, essas variantes codificarãoproteínas funcionais com a mesma atividade enzimática que as enzimas davia de recuperação de NAD.

Os métodos da invenção podem ser usados para aumentar atolerância de plantas ou células de planta a diferentes tipos de condiçõesindutoras de estresse, particularmente estresse abiótico incluindo submer-são, condições de alta luminosidade, altos níveis de radiação UV, níveis deperóxido de hidrogênio aumentados, condições de seca, temperaturas altasou baixas, condições de salinidade aumentada, aplicação de herbicidas,pesticidas, inseticidas etc. Os métodos da invenção também podem ser usa-dos para reduzir o nível de espécies reativas de oxigênio (ROS) ou aumentaro nível de NAD+, NADH+ ou ATP nas células de plantas que crescem sobcondições adversas, particularmente condições de estresse abiótico incluin-do submersão, condições de alta luminosidade, altos níveis de radiação UV,níveis de peróxido de hidrogênio aumentados, condições de seca, tempera-turas altas ou baixas, condições de salinidade aumentada etc. O nível deROS ou o nível de NADH pode ser determinado usando os métodos conhe-cidos na técnica, incluindo aqueles descritos nos Exemplos. Tolerância au-mentada de plantas ao estresse também pode ser analisada usando os mé-todos para determinar o fluxo de elétrons mitocondrial conforme descrito emWO 97/06267 ou WO 02/066972.

Embora não pretendendo limitar a invenção a um modo particu-lar de ação, espera-se que os metabólitos dos neonicotinóides, particular-mente de compostos de neonicotinóide que compreendem uma cadeia late-ral de cloropiridina, entrem na via de recuperação de NAD e resultem emrendimentos maiores dos níveis de NAD. Considerando isto, não foi espera-do que a aplicação de tais compostos em plantas manipuladas para seremresistentes ao estresse pudesse ter qualquer efeito, já que os níveis de NADsob condições de estresse em tais células de planta já eram significativa-mente maiores do que em células de planta não manipuladas para seremresistentes ao estresse.

O método da presente invenção para aumentar a resistência aoestresse pela aplicação de compostos de neonicotinóide em plantas ou célu-las de planta pode ser adequado para qualquer planta manipulada para serresistente ao estresse, tanto células de plantas e plantas dicotiledôneas co-mo monocotiledôneas que incluem, mas não são limitadas a algodão, vege-tais de Brassica, colza, trigo, milho, cevada, girassóis, arroz, aveia, cana-de-açúcar, soja, vegetais (incluindo chicória, alface, tomate), tabaco, batata,beterraba, mamão papaia, abacaxi, manga, Arabidopsis thaliana, mas tam-bém plantas usadas em horticultura, floricultura ou silvicultura, plantas decereais, incluindo plantas de trigo, aveia, cevada, centeio, arroz, grama, sor-go, painço ou cana-de-açúcar. Os métodos da invenção também podem seraplicados a qualquer planta incluindo, mas não limitada a algodão, tabaco,canola, semente de colza, soja, vegetais, batatas, Lemna spp., Nicotianaspp., batatas doces, Arabidopsis, alfafa, cevada, feijão, milho, algodão, linho,ervilha, colza arroz, centeio, cártamo, sorgo, soja, girassol, tabaco, trigo, as-pargo, beterraba, brócolis, repolho, cenoura, couve-flor, aipo, pepino, berin-jela, alface, cebola, colza, pimenta, batata, abobora, rabanete, espinafre,abóbora-moranga, tomate, abobrinha, amêndoa, maçã, damasco, banana,amora preta, mirtilo, cacau, cereja, coco, groselha, tâmara, uva, toranja, goi-aba, kiwi, limão, lima, manga, nectarina, laranja, mamão papaia, maracujá,pêssego, amendoim, mera, abacaxi, pistache, ameixa, framboesa, morango,tangerina, noz e melancia.

Conforme usado aqui "compreendendo" deve ser interpretadocomo especificando a presença de características, inteiros, etapas ou com-ponentes estabelecidos conforme foi referido, mas não elimina a presençaou adição de uma ou mais características, inteiros, etapas ou componentes,ou grupos desses. Dessa forma, por exemplo, um ácido nucléico ou proteínaque compreende uma seqüência de nucleotídeos ou aminoácidos, podecompreender mais nucleotídeos ou aminoácidos do que os citados de fato,isto é, estão incorporados em um ácido nucléico ou proteína maior. Um geneexógeno que compreende uma região de DNA que é definida funcionalmen-te ou estruturalmente pode compreender regiões de DNA adicionais etc.

A menos que seja estabelecido de outra maneira nos Exemplos,todas as técnicas de DNA recombinante são realizadas de acordo com pro-tocolos padronizados conforme descrito em Sambrook et ai, (1989) Molecu-lar Cloning: A Laboratory Manual, Segunda Edição, Cold Spring Harbor La-boratory Pressl NY e nos Volumes 1 e 2 de Ausubel et ai (1994) CurrentProtocols in Molecular Biology, Current Protocols, USA. Materiais e métodospadronizados para manipulação molecular de planta são descritos em PlantMolecular Biology Labfax (1993) por R.D.D. Croy publicado em conjunto porBIOS Scientific Publications Ltd (UK) e Blackwell Scientific Publications, UK.

Outras referências para técnicas de biologia molecular padronizadas incluemSambrook & Russell (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Tercei-ra Edição, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY1 Volumes I e Il deBrown (1998) Molecular Biology LabFax1 Segunda Edição, Academic Press(UK). Materiais e métodos padronizados para reações em cadeia da políme-rase podem ser encontrados em Dieffenbach & Dveksler (1995) PCR Primer:A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, e em McPher-son at al. (2000) PCR - Basics: From Background to Bench, Primeira Edição,Springer Verlag, Alemanha.

Ao longo de toda a descrição e Exemplos, é feita referência àsseguintes seqüências:

SEQ ID Ne 1: região codificante de parplde Arabidopsis thaliana.

SEQ ID N-2: região codificante de parp2 de Arabidopsis thaliana.

SEQ ID N9 3: região codificante 1 de parpl de Zea mays.

SEQ ID Nq 4: região codificante 2 de parpl de Zea mays.

SEQ ID N9 5: região codificante de parp2 de Zea mays.

SEQ ID N5 6: região codificante parcial de parp2 de algodão.

SEQ ID Ne 7: região codificante de parG de Arabidopsis thaliana.

SEQ ID N9 8: região codificante de parG de Solarium tuberosum.

SEQ ID Ng 9: região codificante de parG de Oryza sativa.

SEQ ID N5 10: região codificante de parG de Zea mays.

SEQ ID N911: seqüência de nucleotídeo da nicotinamidase de Saccharomyces cerevisiae (PNC1).

SEQ ID N9 12:. seqüência de nucleotídeo da nicotinato fosforribosiltransfera-se de Saccharomyces cerevisiae (NPT1) (complemento).

SEQ ID N9 13: seqüência de nucleotídeo do ácido nicotínico mononucleotí-deo adenil transferase 1 (NMA1) de Saccharomyees cerevisiae.

SEQ ID N9 14: seqüência de nucleotídeo de ácido nicotínico mononucleotí-deo adenil transferase 2 (NMA2) de Saccharomyces cerevisiae.

SEQ ID N9 15: seqüência de nucleotídeo da NAD sintetase (QNS1) de Sac-charomyces cerevisiae.

SEQ ID N9 16: seqüência de nucleotídeo da nicotinamidase de Arabidopsisthaliana {isoforma 1).

SEQ ID N9 17: seqüência de nucleotídeo da nicotinamidase de Arabidopsisthaliana (isoforma 2).

SEQ ID N9 18: seqüência de nucleotídeo da nicotinamidase de Arabidopsisthaliana (isoforma 3).

SEQ ID N9 19: seqüência de nucleotídeo da nicotinato fosforribosiltransfera-se de Arabidopsis thaliana (isoforma 1).

SEQ ID N9 20: seqüência de nucleotídeo da nicotinato fosforribosiltransfera-se de Arabidopsis thaliana (isoforma 2).

SEQ ID N9 21: seqüência de nucleotídeo da ácido nicotínico mononucleotí-deo adenil transferase de Arabidopsis thaliana.

SEQ ID Ne 22: η seqüência de nucleotídeo da NAD sintetase de Arabidopsisthaliana.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Protocolos para medição do conteúdo de NADH e do conteúdode superóxido

Quantificação de NAD(P)H intracelular usando um sal de tetra-zólio solúvel em água

Referência: Jun Nakamura, Shoji Asakura, Susan D. Hester, Gilbert de Mur-cia, Keith W. Caldecott & James A. Swenberg (2003): Quantitation of intra-cellular NAD(P)H can monitor an imbalance of DNA single strand break repa-ir in base excision repair deficient cells in real time. Nucleic Acids Research31(17), e104.

Material de Planta

A maioria dos materiais de planta pode ser usada, por exemplo,brotos de Arabidopsis cultivados in vitro de 14-18 dias de idade, mas NÃOexplantes de hipocótilo ou em floração de colza.Kit 8 para Corriagem Celular (CCK-8)

Sopachem n.v./Bélgica, 72A, Avenue du Laarbeeklaan, 1090Bruxelas, Bélgica

Conteúdos

Frascos de 5 mL contendo WST-8 5mMol/L (sal de tetrazólio), 1-Metóxi PMS 0,2 mMol/L, NaC1150 mMol/L;

Solução de reação: 10 mL de tampão de fosfato-K 25mM pH7.4;0,5mL de CCK-8; sulfato de 1 -Metóxi-5-metilfenazinio metil (= metossulfatode 1-metoxifenazina) 0,1 mM: 1 pL/mL de solução estoque a 100 mM (MW=336,4; 10Omg em 2,973mL de água); 1 gota de Tween20/25mL

Procedimento

Coletar material de planta e colocar em tampão fosfato-K 25 mMpH 7.4 (por exemplo 150 explantes de hipocótilos de colza ou 1 g de brotosde Arabidopsis (sem raízes). Substituir o tampão pela solução de reação (15mL para 1 g de brotos de Arabidopsis ou 15 mL para 150 explantes de hipo-cótilos de colza). Incubar a 26°C no escuro por cerca de 1/2 hora (após areação). Medir a absorbância da solução de reação em 450 nm.

Medida da produção de superóxido pela quantificação da redução de XTTReferência: De Block1 M., De Brouwer, D. (2002) A simple and robust in vitroassay to quantify the vigour of oilseed rape Iines and hybrids. Plant Physiol.Biochem. 40, 845-852.

A. Brassica napus

Meios e tampões de reação

Meio de semeadura (meio 201): Sais de Murashige e Skoog se-mi-concentrados; sacarose 2% pH 5.8; ágar 0,6% (Difco Bacto Agar); triacili-na 250 mg/l.

Meio de indução de cato A2S3: Meio MS, Mes 0,5 g/l (pH 5.8),sacarose 3%, adenina-S04 40 mg/l, agarose 0,5%, 2,4-D 1 mg/l, NAA 0,25mg/l, BAP 1 mg/l, triacilina 250 mg/l.

Tampão de reação: tampão de fosfato-K 250 mM pH 8; sódio,3 '-{1 -[fenilamino-carbonil-3,4-tetrazolio)-bis(4-metóxi-6-nitro) = XTT (BioVectra,Canadá) (MW 674.53). Dissolver o XTT pelo aquecimento cuidadoso da so-lução (± 37°C) (resfriar para temperatura ambiente antes do uso). 1 gota deTween 20 para 25 ml de tampão.

Esterilização das sementes - pré-germinação de sementes- cul-tivando as mudas

Sementes são embebidas em etanol 70% por 2 min, então este-rilizadas na superfície por 15 min em uma solução de hipoclorito de sódio(com cerca de 6% de cloro ativo) que contém Tween 20 0,1%. Finalmente,as sementes são enxaguadas com 11 de água estéril. Incubar as sementespor pelo menos uma hora em água estéril (para permitir a difusão das se-mentes de componentes que podem inibir a germinação). As sementes sãocolocadas em frascos de erlenmeyer de 250 ml que contêm 50 ml de águaestéril (+ 250 mg/l de triacilina). Agitar por cerca de 20 horas. As sementesnas quais a radícula está aparecendo são colocadas em recipientes VitroVent de Duchefa contendo cerca de 125 ml de meio de semeadura (10 se-mentes/vaso, não demais para reduzir a perda de semente por contamina-ção). As sementes são germinadas a ±24°C e 10-30MEinstein s"1m"2 com umfotoperíodo de 16 horas. Para calcular a quantidade de sementes que de-vem ser semeadas: 5 segmentos de hipocótilos/muda.

Pré-cultura de explantes de hipocótilos e indução de estresse12-14 dias após a semeadura, os hipocótilos são cortados emsegmentos de cerca de 7-10 mm. Os explantes de hipocótilos (25 hipocóti-los/Optilux Petridish, Falcon S1005, Dinamarca) são cultivados por 5 dias emmeio A2S3 a 25°C (em 10-30μEinstein s"1m"2). 150 explantes de hipocótilossão usados por condição.

Indução de estresse

Transferir os explantes de hipocótilos para meio A2S3 contendorespectivamente 0,25 e 50 mg/l de ácido acetilsalicílico. Incubar por cerca de24 horas a 25°C e 10-30MEinstein s"1m"2 com um fotoperíodo de 16 h.

Ensaio XTT

Transferir 150 explantes de hipocótilos para um tubo Falcon de50ml. Lavar com tampão de reação (sem XTT). Adicionar 20 mL de tampãode reação + XTT. Os explantes tem que ser submersos, mas não infiltradosà vácuo. Incubar no escuro a 26°C. Após a reação, meça a absorção domeio de reação a 470 nm.

B. Arabidopsis thaliana

Meio e tampões de reação

Meio de planta: Sais de Murashige e Skoog semi-concentrados;vitaminas B5; sacarose 1,5%; pH 5.8; ágar Difco 0,7%.

Meio de incubação: sais MS 1/2 concentrados; sacarose 1%;MES 0,5 g/L pH 5.8; 1 gota de Tween20 para 25 ml de meio.

Tampão de reação: tampão de fosfato-K 25 mM pH 8; sódio,3 '-{1 -[fenilamino-carbonil-3,4-tetrazolio)-bis(4-metóxi-6-nitro) = XTT (BioVectra,Canadá) (MW 674.53). Dissolver XTT pelo aquecimento cuidadoso da solu-ção (± 37°C) (resfriar a temperatura ambiente antes do uso). 1 gota de Twe-en 20 para 25 ml de tampão.Plantas de Arabidopsis

Linhagens de Arabidopsis: controle (linhagem-mãe a partir daqual as linhagens testadas foram derivadas); linhagens para testar.

Esterilização de sementes de Arabidopsis: 2 min etanol 70%; 10min alvejante (6% de cloro ativo) + 1 gota de Tween20 para 20 ml de solu-ção; lavar 5 vezes com água estéril; a esterilização é feita em tubos eppen-dorf de 2 ml. As sementes de Arabidopsis descem para o fundo do tubo,permitindo a remoção dos líquidos por meio de uma pipeta de 1 ml.

Pré-germinação de sementes: Em placas de petri Optilux de 9cm (FaIcon) que contém 12 ml de água estéril. Pouca luz durante a noite por24 horas.

Cultivo de plantas de Arabidopsis: Sementes são semeadas emdiscos Intergrid Tissue Culture de Falcon (nr. 3025) contendo ± 125 ml demeio de planta: 1 semente/crivo. As plantas são cultivadas a 24°C.30pEinstein s"1m"2. 16 horas de luz - 8 horas no escuro por cerca de 18 dias(antes da separação). 1 g de material de planta (brotos sem raízes)/linhagem/condição é necessário para realizar o ensaio. 1g de brotos corres-pondem a 40-60 plantas.Indução de estresse

Paraquat: Coletar brotos de Arabidopsis (sem raízes). Colocar 1g de brotos em meio de incubação (brotos tem que ser submersos, mas nãoinfiltre à vácuo) contendo respectivamente 0,5 e 10 μΜ de paraquat. Meio deincubação: ± 150 ml de discos Intergrid Tissue Culture de Falcon (nr. 3025).Incubar a 24°C no escuro por ± 24 horas e 10-30pEinstein s"1m"2 com umfotoperíodo de 16 horas.

Alta luminosidade: Transferir metade das placas para alta lumi-nosidade (250μΕίη8ίβϊη s"1m"2) e incubar por 4 a 20 horas.Ensaio de XTT

Coletar brotos (sem raízes) de placas de ágar (estresse por altaluminosidade) ou de meio de incubação líquido (estresse por paraquat) ecoloque-os em tubos Falcon de 50 ml contendo tampão de reação (semXTT). Substituir o tampão de reação por tampão contendo XTT (15 ml/g). Osbrotos devem estar submersos, mas não infiltre à vácuo. Incubar no escuro a26°C. Após a reação meça a absorção do meio de reação a 470 nm (cercade uma hora).

Exemplo 2: Análise de tolerância ao estresse após aplicação de compostosde neonicotinóide em plantas que compreendem um gene transgênico queaumenta a tolerância ao estresse.

Plantas de Brassica que compreendem um gene transgênicoque codifica uma molécula de dsRNA que é capaz de reduzir os genes dePARP endógenos, como descrito em WO 00/04173 A1 (por exemplo, no E-xemplo 8), são tratadas com várias concentrações de Imidacloprida, Clotia-nidina, Tiametoxam, Acetamiprida, Nitenpiram, Dinotefurano, ácido 6-cloronicotínico e Tiacloprida e submetidas a várias condições de estresse,particularmente temperatura alta-baixa, luminosidade de alta intensidade ouestresse por seca ou qualquer combinação desses.

Após o tratamento, as plantas são visualmente pontuadas quan-to a sobrevivência e dano quando comparadas a plantas transgênicas decontrole não tratadas e a plantas isogênicas não transgênicas tratadas comos compostos mencionados de uma maneira similar. Os níveis de espéciesde oxigênio reativo, NAD e ATP são determinados e comparados com asplantas de controle.

Plantas transgênicas de Brassica tratadas com os compostosquímicos sobrevivem a condições de estresse melhor do que as plantastransgênicas de controle não tratadas. O nível de ROS é mais baixo nasplantas de Brassica transgênicas tratadas do que nas plantas de Brassicatransgênicas não tratadas, enquanto que o nível de NAD ou ATP é maior.

Plantas de milho que compreendem um gene transgênico quecodifica uma molécula de dsRNA que é capaz de reduzir os genes de PARPendógenos, como descrito em WO 00/04173 A1, são tratadas com váriasconcentrações de Imidacloprida, Clotianidina, Tiametoxam, Acetamiprida,Nitenpiram, Dinotefurano, ácido 6-cloronicotínico e Tiacloprida e submetidasa várias condições de estresse, particularmente temperatura alta-baixa, lu-minosidade de alta intensidade ou estresse por seca ou qualquer combina-ção desses.

Após o tratamento, as plantas são visualmente pontuadas quan-to a sobrevivência e dano quando comparadas a plantas transgênicas decontrole não tratadas e a plantas isogênicas não transgênicas tratadas comos compostos mencionados de uma maneira similar. Os níveis de espéciesde oxigênio reativo, NAD e ATP são determinados e comparados com asplantas de controle.

Plantas transgênicas de milho tratadas com os compostos quí-micos sobrevivem a condições de estresse melhor do que as plantas trans-gênicas de controle não tratadas. O nível de ROS é mais baixo nas plantasde milho transgênicas tratadas do que nas plantas de milho transgênicasnão tratadas, enquanto que o nível de NAD ou ATP é maior.

Plantas de algodão que compreendem um gene transgênico quecodifica uma molécula de dsRNA que é capaz de reduzir os genes de PARPendógenos, como descrito em EP 04077984.5, são tratadas com várias con-centrações de Imidacloprida, Clotianidina, Tiametoxam, Acetamiprida, Niten-piram, Dinotefurano, ácido 6-cloronicotínico e Tiacloprida e submetidas avárias condições de estresse, particularmente temperatura alta-baixa, lumi-nosidade de alta intensidade ou estresse por seca ou qualquer combinaçãodesses.

Após o tratamento, as plantas são visualmente pontuadas quan-to a sobrevivência e dano quando comparadas a plantas transgênicas decontrole não tratadas e a plantas isogênicas não transgênicas tratadas comos compostos mencionados de uma maneira similar. Os níveis de espéciesde oxigênio reativo, NAD e ATP são determinados e comparados com asplantas de controle.

Plantas transgênicas de algodão tratadas com os compostosquímicos sobrevivem a condições de estresse melhor do que as plantastransgênicas de controle não tratadas. O nível de ROS é mais baixo nasplantas de algodão transgênicas tratadas do que nas plantas de algodãotransgênicas não tratadas, enquanto que o nível de NAD ou ATP é maior.

Plantas de Brassica e arroz que compreendem um gene trans-gênico que codifica uma molécula de dsRNA que é capaz de reduzir os ge-nes de PARP endógenos, como descrito em W02004/090140, são tratadascom várias concentrações de Imidacloprida, Clotianidina1 Tiametoxam, Ace-tamiprida, Nitenpiram, Dinotefurano, ácido 6-cloronicotínico e Tiacloprida esubmetidas a várias condições de estresse, particularmente temperaturaalta-baixa, luminosidade de alta intensidade ou estresse por seca ou qual-quer combinação desses.

Após o tratamento, as plantas são visualmente pontuadas quan-to a sobrevivência e dano quando comparadas a plantas transgênicas decontrole não tratadas e a plantas isogênicas não transgênicas tratadas comos compostos mencionados de uma maneira similar. Os níveis de espéciesde oxigênio reativo, NAD e ATP são determinados e comparados com asplantas de controle.

Plantas transgênicas de Brassica ou arroz tratadas com os com-postos químicos sobrevivem a condições de estresse melhor do que as plan-tas transgênicas de controle não tratadas. O nível de ROS é mais baixo nasplantas de milho transgênicas tratadas do que nas plantas de Brassica ouarroz transgênicas não tratadas, enquanto que o nível de NAD ou ATP émaior.

Plantas de Arabidopsis que compreendem um gene transgênicoque codifica uma enzima funcional de planta envolvida na via de recupera-ção de NAD, como descrito em EP0477624.7, são tratadas com várias con-centrações de Imidacloprida, Clotianidina, Tiametoxam, Acetamiprida, Niten-piram, Dinotefurano, ácido 6-cloronicotínico e Tiacloprida e submetidas avárias condições de estresse, particularmente temperatura alta-baixa, lumi-nosidade de alta intensidade ou estresse por seca ou qualquer combinaçãodesses.

Após o tratamento, as plantas são visualmente pontuadas quan-to a sobrevivência e dano quando comparadas a plantas de controle trans-gênicas não tratadas e a plantas isogênicas não transgênicas tratadas comos compostos mencionados de uma maneira similar. Os níveis de espéciesde oxigênio reativo, NAD e ATP são determinados e comparados com asplantas de controle.

Plantas transgênicas de Arabidopsis tratadas com os compostosquímicos sobrevivem a condições de estresse melhor do que as plantastransgênicas de controle não tratadas. O nível de ROS é mais baixo nasplantas de Arabidopsis transgênicas tratadas do que nas plantas de Arabi-dopsis transgênicas não tratadas, enquanto que o nível de NAD ou ATP émaior.LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA

<110> Bayet CropScience AG

<1 20> AUMENTO DA TOLERÂNCIA AO ESTRESSE PELA APLICAÇÃO DE NEONICOTINÓIDES EMPLANTAS MANIPULADAS PARA SEREM TOLERANTES AO ESTRESSE

<130> BCS. 04-3083

<160> 22

<170> PatentIn version 3.0

<210> 1

<211> 3187

<212> DNA

<213> Artificial<220>

<223> região de codificação parpl a partir de Arabidopsis tlialina<220>

<221> misc :_feature <222> (11) ..(2962) <223> leitura de molde aberta <400> 1 taccggagaa atggcaagcc cacataagcc gtggagggcg gagtatgcaa agtcgtcgag 60gtcttcatgt aaaacttgca agtccgtcat taacaaggag aactttcgtc ttggaaagtt 120ggttcaatct actcacttcg atggcatcat gcccatgtgg aaccatgctt cttgtatact 180gaagaagacg aagcagataa aatcagttga tgatgttgaa ggcatagaat cacttcgttg 240ggaagatcag caaaagatta gaaaatatgt cgaatctgga gcagggagta acacaagcac 300aagcacaggc acaagcacga gcagtaccgc taataatgcc aaactagaat atgggattga 360agtgtcacaa actjtcccgtg ccggttgcag aaagtgtagc gaaaagatct tgaaaggaga 420ggtacgtata ttctccaagc çtgaaggccc gggtaacaaa ggtttgatgt ggcatcacgc 480taaatgtttc cttgaaatgt cttcctctac tgaactggaa agtttgtctg gatggagaag . 540tataccagac tcagaccaag aagctcttct tcccttagtg aagaaagctc tgccggcagc 600caaaactgag acagcagaag cacgtcaaac aaattcaaga gcaggcacaa aacgaaaaaa 660tgattctgtt gataacgaga agtcgaaact agcaaaaagt agttttgaca tgtctacaag 720tggtgcttta caaccttgta gcaaagaaaa ggaaatggag gcccaaacta aggaattgtg 780ggacctgaag gatgatctga aaaaatatgt aacatcagct gagttgcggg aaatgcttga 840agtaaatgaa caaagtacaa gaggatctga acttgatctg cgtgataaat gtgctgatgg 900catgatgttt ggcccactcg ctctctgccc aatgtgctct gggcatcttt ctttctccgg 960

aggactttac cgatgccatg gatacatctc agaatggagc aaatgttctc attccacttt 1020

ggatccagac cgcatcaaag ggaagtggaa aatccctgac gaaacagaaa atcaattcct 1080

tctgaagtgg aataagtctc aaaagagtgt gaagccaaaa cgtattctgc gtcctgtatt 1140

gtctggcgag acatctcagg gtcaaggttc taaagatgca actgactcct caaggagtga 1200

aaggctagca gatcttaaag tttcaattgc tggaaatact aaggaaaggc aaccatggaa 1260

gaagagaatt gaggaagctg gtgcagagtt tcatgctaat gttaaaaaag gtacaagctg 1320

tttggttgtt tgtggactga cagatatcag agacgctgaa atgagaaagg caaggaggat 1380

gaaagtggca atcgtgagag aggattattt ggttgattgt tttaaaaaac agaggaaact 1440

tccatttgac aagtacaaaa ttgaagacac tagtgagagc cttgtcactg ttaaagtaaa 1500

aggacgaagc gctgtgcatg aagcgtctgg cctccaagag cactgtcaca ttcttgaaga 1560

tgggaacagt atctataaca caactctgag catgtctgat ctctctaccg gtatcaatag 1620

ttattacata ctccagataa tccaagaaga taaaggttca gattgttacg tatttcgtaa 1680

atggggccga gttggaaatg aaaagattgg tggtaacaaa gtggaggaaa tgtcaaagtc 1740

tgatgcggtt cacgaattca aacgtctatt tcttgaaaaa accggaaaca catgggaatc 1800

ttgggaacaa aaaacgaatt tccagaaaca acctggaaaa tttctcccgt tggacattga 18 60

ttatggagtt aataagcaag tágccaaaaa agagccattt cagaccagta gcaaccttgc 1920

tccatcatta atagaattga tgaagatgct ttttgatgtg gaaacttaca gatctgcaat 1980

gatggagttc gagataaata tgtcagagat gccacttggg aagctcagca aacataatat 2040

acagaagggt tttgaggcat tgacggagat acagaggcta ttgactgaaa gcgacçccca 2100

gcctactatg aaagaaagct tgcttgttga tgctagtaac agatttttta ccatgatccc 2160

ttctattcat cctcatatta tccgagatga agatgacttt aagtcaaagg tgaaaatgct 2220

cgaggctctg caggatatcg aaatagcttc aagaatagtt ggctttgatg ttgatagcac 2280

cgaatctctt gatgataagt ataagaagct gcattgcgat atctcaccac ttcctcatga 2340

tagcgaagat tatcgattaa tcgagaagta tcttaacaca actcatgccc caacgcatac 2400

agagtggagt cttgagctag aggaagtttt tgctcttgaa agagaaggag agtttgataa 2460

atatgctccc cacagagaaa aacttggcaa taagatgctc ctatggcatg gttctcgatt 2520

aacgaatttt gttggaatat tgaaccaagg actgagaatt gcacctccag aagctcctgc 2580

tactggttac atgtttggaa aagggatata ctttgctgac cttgtcagta aaagtgctca 2640

gtactgctac acttgtaaga aaaatccggt gggtctaatg cttctgagtg aagttgcatt 2700

gggagaaata catgagctaa caaaagctaa gtatatggat aaacctccga gagggaaaca 2760

ctcgaccaaa gggctcggca agaaagtgcc tcaagattcc gagtttgcca agtggagagg 2820

tgatgtgact gttccctgtg gaaaacctgt ttcatcaaag gtcaaggctt ctgagcttat 2880gtacaatgàg tatatcgtct acgatacagc ccaggtgaag ttgcagttct tgttgaaagt 2940aaggtttaag cacaagagat gagcctgaac caaacaagaa gacgtcactt ctgttaacta 3000aatgtttttt tgggaaatcg aatccaacac gaagacttaa cttttgtaac taaattgctt 3060ttgataaatt gaattcaaca tgtagtcaca gatttaactc tctggcgttg tagatgtttc 3120tggttttaaa agagcgtact ctacattttg ttatgctttt tctcagtaat gacacttctt 3180aagactt 3187

<210> 2<211> 2147<212> DNA<213> Artificial<220>

<223> região de codificação parpl a partir de Arabidopsis thaiina<220>

<221> característica misc<222> (129)..(2042)<223> open reading frame<400> 2

attgatgaag aagaaaacga agaagaagac tcttcaaatg ctcgcgcgaa ctcacttctg 60acgaaaacca tacttcctca gtctcattcc ctttccgacg aactattctc ctgaagaaga 120agacgaaaat ggcgaacaag ctcaaagtcg acgaactccg tttaaaactc gccgagcgtg 180gactcaatac tactggagtc aaagccgttc tggtggagag gcttgaagag gctatcgcag 240aagacactaa gaaggaagaa tcaaagagca agaggaaaag aaattcttct aatgatactt 300atgaatcgaa caaattgatt gcaattggcg aatttcgtgg gatgattgtg aaggaattgc 360gtgaggaagc tattaagaga ggcttagata caacaggaac caaaaaggat cttcttgaga 420ggctttgcaa tgatgctaat aacgtttcca atgcaccagt caaatccagt aatgggacag 4 80atgaagctga agatgacaac aatggctttg aagaagaaaa gaaagaagag aaaatcgtaa 540ccgcgacaaa gaagggtgca gcggtgctag atcagtggat tcctgatgag ataaagagtc 600agtaccatgt tctacaaagg ggtgatgatg tttatgatgc tatcttaaat cagacaaatg 660tcagggataa taataacaag ttctttgtcc tacaagtcct agagtcggat agtaaaaaga 720catacatggt ttacactaga tggggaagag ttggtgtgaa aggacaaagt aagctagatg 780ggccttatga ctcatgggat cgtgcgatag agatatttac caataagttc aatgacaaga 840caaagaatta ttggtctgac agaaaggagt ttatcccaca tcccaagtcc tatacatggc 900tcgaaatgga ttacggaaaa gaggaaaatg attcaccggt caataatgat attccgagtt 960catcttccga agttaaacct gaacaatcaa aactagatac tcgggttgcc aagttcatct 1020ctcttatatg taatgtcagc atgatggcac agcatatgat ggaaatagga tataacgcta 1080acaaattgcc actcggcaag ataagcaagt ccacaatttc aaagggttat gaagtgctga 1140agagaatatc ggaggtgatt gaccggtatg atagaacgag gcttgaggáa ctgagtggag 1200açttctacac agtgatacct catgattttg gttttaagaa aatgagtcag tttgttatag 1260ácactcctca aaagttgaaa cagaaaattg aaatgçttga agcattaggt gaaattgaac 1320tcgcaacaaa gttgttgtcc gtcgacccgg gattgcaçga tgatccttta tattatcact 1380accagcaact taattgtggt ttgacgccag taggaaatga ttcagaggag ttctctatgg 1440ttgctaatta catggagaac actcatgcaa agacgcattc gggatatacg gttgagattg 1500cccaactatt tagagcttcg agagctgttg aagctgatcg attccaacag ttttcaagtt 1560cgaagaacag gatgctactc tggcacggtt cacgtctcac taactgggct ggtattttat 1620ctcaaggtct gcgaatagct cctcctgaag cgcctgtaac tggttacatg tttggaaaag 1680gggtttactt tgcggatatg ttctccáaga gtgcgaacta ttgctatgcc aacactggcg 1740ctaatgatgg cgttctgctc ctctgcgagg ttgctttggg agacatgaat gaacttctgt 1800attcagatta taacgcggat aatctacccc cgggaaagct aagcacaaaa ggtgtgggga 1860aaacagcacc aaacccatca gaggctcaaa cactagaaga cggtgttgtt gttccacttg 1920gcaaaccagt ggaacgttca tgctccaagg ggatgttgtt gtacaacgaa tatatagtct 1980acaatgtgga acaaatcaag atgcgttatg tgatccaagt caaattcaac tacaagcact 2040aaaacttatg tatattagct tttgaacatc aactaattat ccaaaaatca gcgttttatt 2100gtatttcttt caaactcctt catctctgat tttgcacggt tcactcg 2147

<210> 3

<211> 3211

<212> DNA

<213> Artificial<220>

<223> parpl coding region 1 from Zea mays<220>

<221> misc_feature

<222> (113)..(3022)

<223> open reading frame<400> 3

acctacctga atacgtcatc cctaagtgtt ccgcttcctc tgtcgtccgg cctccaactc 60

catcgaaggg gctagggaga ggagggaacc cgaaccacag caggccggcg caatggcggc 120

gccgccaaag gcgtggaagg cggagtatgc câagtctggg cgggcctcgt gcaagtcatg 180

ccggtcccct atcgccaagg accagctccg tcttggcaag atggttcagg cgtcacagtt 240

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atgcagtggt aatgtgtcag agtggtccaa gtgtacatac tctgccacag aacctgtccg 1080

cgttaagaag aagtggcaaa ttccacatgg aacaaagaat gattacctta tgaagtggtt 1140

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gaaaagcata tacáatgcaa ccttaaacat gtctgacctg gcactaggtg tgaacagcta 1680

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<210> 4

<211> 3212

<212> DNA

<213> Artificial<220>

<223> paxpl coding region 2 from Zea mays<220>

<221> 7nisc_feature

<222> (Bl)..(3020)

<223> leitura de molde aberta<400> A

gcttcctctg tcgtccggcc tccaactcca tcgaaggggc tagggagagg agggaacccg 60

aaccacagca ggccggcgca atggcggcgc cgccaaaggc gtggaaggcg gagtatgcca 120

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ggtgcatctt cagcaagaag aaccagataa aatccgttga cgatgttgaa gggatagatg 300

cacttagatg ggatgatcaa gagaagatac gaaactacgt tgggagtgcc tcagctggta 360

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gttcagctga tatccaacta aagcttaagg agcaaagtga cacactttgg aagttaaagg 840

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aatgcagtgg taatgtgtca gagtggtcca agtgtacata ctctgccaca gaacctgtcc 1080 ·

gcgttaagaa gaagtggcaa attccacatg gaacaaagaa tgattacctt atgaagtggt 1140

tcaaatctca aaaggttaag aaaccagaga gggttcttcc accaatgtca cctgagaaat 1200

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5

2295DNA

Artificial

raisc_feature(107)..(2068)leitura de molde aberta

<210><211><212><213><220><223><220><221><222><223><400> 5

tgacctgttc catcccgcca gcccttccgc tcccácgacc caaccccact gcccggagcc 60

cccgagcctt ctcgaatctt gcgagaaccc caggggcgag gagcagatgt cggcgaggct 120

acgggtggcg gacgtccgcg cggagcttca gcgccgcggc ctcgatgtat ccggcaccaa 180

gcctgctctc gtgcggaggc tggacgccgc aatttgcgag gcggagaagg ccgtggtggc 240

tgctgcgcca accagtgtgg caaatgggta tgacgtagcc gtagatggca aaaggaactg 300

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tacagatgtg acaaaactag agggcatgag ctatcgtgag ctgcagggat tggccaaggc 420

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gggcgatatg aatgagctac tgaatgcaga ttacgatgct aataacctgc ccaaaggaaa 1860

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<210> 6

<211> 1384

<212> DNft

<213> Artificial<220>

<223> parp2 partial coding region from cotton<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(460)

<223> Ieiturademoldeaberta<400 6

gagaagatbg ttacagcgac gaggaagggg tggctgttct ggatcaaggg atcccagatg 60

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taagttcgga attttacacc gtgattccac atgattttgg atttagaaaa atgcgtgatt 720

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<2 X 0> 7<211> 1647<212> DNA

<213> Arabidopsis thaliana<400> 7

atggagaatc gcgaagatct taactcaatt cttccgtácc ttccacttgt aattcgttcg 60

tcgtcgctgt attggccgcc gcgtgtggtg gaggcgttaa aggcaatgtc tgaaggacca 120tctcacagcc aagttgactc aggagaggtt ctacggcaag ctattttcga tatgagacga , 180

tccttatctt tctctactct cgagccatct gcttctaatg gctacgcatt tctctttgac 240

gaattgattg atgagaaaga atcaaagaga tggttcgatg agattatccc agcattggcg 300

agcttacttc tacagtttcc atctctgtta gaagtgcatt tccaaaatgc tgataatatt 360

gttagtggaa tcaaaaccgg tcttcgtttg ttaaattccc aacaagctgg cattgttttc 420

ctcagccagg agttgattgg agctcttctt gcatgctctt tcttttgttt gtttccggat 480

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aggttttgct cctgcgtgcc tattggtatt gtttcatttg aacgcaagat taccgctgct 660

cctgatgctg atttctggag caagtctgac gtttctcttt gtgcatttaa ggttcactct 720

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ggtgagtaca ttgacaaaaa ggcaatggat cctttcaaaa ggcgaagaac cagaattgtt 1020

gcaattgatg cattatgtac accgaagatg agacacttta aagatatatg tcttttaagg 1080

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<210> 8<211> 598<212> DWA

<213> Solanum tuberosum<400> 8

gcaatggaga atagagaaga cgtgaagtca atccttccct ttttgccggt gtgtctccga 60

tcatcttctc ttttctggcc gccgctagtt gttgaagcac tgaaagccct ctctgaaggc 120

cctcattaca gcaatgttaa ctccggccaa gtcctcttcc tcgcaatctc cgacattcgg 180

aattcccttt cactacctga ttcttcaatt tcctcttctg cttcagacgg attttctctc 240

ttatttgatg atttaattcc tagggatgaa gctgttaaat ggttcaaaga agtggtgccg 300

aaaatggcgg atttgctatt gcggttgcct tccttattgg aggctcacta tgagaaggct 360

gatggtggaa ttgttaaagg agtcaacact ggtcttcgct tattggaatc acaacagcct 420

ggcattgttt tcctcagtca ggaattagtc ggtgctcttc ttgcatgttc cttcttttgc 480

tattccctac caatgataga ggtatctgta tgatcagtat gacgagaaat ttgaaaataa 540

attgaagtgc attcttcact attttgagag gattggctca ttgatacctg cgggctac 598

<210> 9<211> 1530<212> DNA<213> Oryza sativa<400> 9

atggaggcgc gcggcgacct gcgctcgatc ctgccctacc tccccgtcgt gctccgcggc 60ggcgcgctct tctggccgcc ggcggcgcag gaggcgctca aggcgctggc gctgggcccc 120gàcgtgagcc gcgtctcctc cggcgacgtc ctcgccgacg ccctcaccga cctccgcctc 180gcgctcaacc tcgacccact cccgcgccgc gccgccgagg gcttcgcgct cttcttcgac 240gacctcctgt cgcgggcgca ggcgcgggac tggttcgacc acgtcgcccc ctccctcgcc 300cgcctcctcc tccgcctccc cacgctgctc gagggccact accgcgccgc cggcgacgag 360gctcgcgggc tccgcatcct gagctcgcag gatgccgggc tcgtgctcct cagccaggag 420ctcgccgccg cgctgctcgc ctgcgcgctc ttctgcctgt tccccaccgc cgatagggcc 480gaggcgtgcc tcccggçgat caatttcgat agcctatttg cggcactgtg ttataattcg 540aggcaaagcc aggagcagaa ggtgaggtgc cttgttcact attttgacag ggtgaccgct 600tctacaccta ctggttccgt ttcgtttgag cgtaaggttc ttcctcgccg tcctgaatct 660gatggcatta cgtaccctga catggatact tggatgaaat ctggtgttcc cctttgcaca T20ttccgggtat tttcctcagg cttgatagaa gatgaggaac aagaagccct tgaagttgac 780tttgcaaata gatatttggg aggtggcgca ctttccagag gctgcgtgca ggaagaaatc 84 0cggttcatga taaacccaga attgatcgtg ggcatgctct tcatggtttc aatggaagat 900aatgaagcta tagaaattgt tggtgcagaa aggttctcac agtacatggg gtatggttcc 960tcattccgtt ttactggtga ctacttagat agcaaaccct ttgatgcgat gggtagacgg 1020aaaactagga tagtggcaat tgàtgctttg gactgtccaa ctaggttaca gtttgaatct 1080agtggtcttc taagggaagt gaacaaggct ttttgtggat ttttggatca atcaaatcat 1140cagctctgtg caaagcttgt ccaggattta aatacaaagg ataactgtcc aagtgtcatt 1200cctgatgaat gcataggagt ttcaactgga aactggggtt gcggggcttt tggtggaaac 1260cctgaaatca agagcatgat tcaatggatt gctgcatcac aggcactccg atcttttatt 1320aactactaca cttttgagtc cgaatcactg aaaagattag aagaggtgac ccagtggata 1380ttgcgccata ggtggacggt tggcgagttg tgagacatgc ttgtggagta ttcatcccag 1440aggctaagag gagacaccaa tgagggcttt ttaacatggc tacttcccaa ggacatcccc 1500aatggtgatg tagattacat gtgtgaatag 1530

<210> 10 s<211> 603<212> DNA<213> Zea mays<400> 10

tagggctgtg tgcaggagga aatccgcttc atgataaacc ccgaattgat tgtgggtatg 60ctattcttgt cttgtatgga agataacgag gctatagaaa tctttggtgc agaacggttc 120tcacagtata tgggttatgg ttcctccttt cgctttgttg gtgactattt agataccaaa 180ccctttgatt cgatgggcag acggagaact aggattgtgg ctatcgatgc tttggactgt 240ccagctaggt tacactatga atctggctgt ctcctaaggg aagtgaacaa ggcattttgt 300ggatttttcg atcaatcgaa acaccatctc tatgcgaagc ttttccagga tttgcacaac 360aaggatgact ttteaagcat caattccagt gagtacgtag gagtttcaac aggaaactgg 420

ggttgtggtg cttttggtgg aaaccctgaa atcaagagca tgattcagtg gattgctgca 480

tcacaggctc ttcgcccttt tgttaattac tacacttttg agaacgtgtc tctgcaaaga 540ttagaggagg tgatccagtg gatacggctt catggctgga ctgtcggcga gctgtggaac 600

ata 603

<210> 11<211> 651<212> DNA

<213> Saccharorayces cerevisiae<400> 11

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actgttccaa aaggtgagga attaatcaat cctatctcgg atttgatgca agatgctgat

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ggtagtcaat tggttgacca aataatggac caagtggtca ctaagcatat taagattgtc

gacaagggtt tcttgactga ccgtgaatac tactccgeet tccacgacat ctggaacttc

cataagaccg acatgaacaa gtacttagaa aagcatcata cagacgaggt ttacattgtc

ggtgtagctt tggagtattg tgtcaaagcc açcgccattt ccgctgcaga actàggttat

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<210> 12<211> 1290<212> DNA

<213> Saccharotnyces cerevisiae<400> 12

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ctettteaet ctcttcacag tggcaggatc teccatattt ttacctaagt tatcagaaat 120tttgatagcg tgattaccat ttacttctaa tagtttgata acgatgttta acggctcact 180tttaacctgg ggttctgact tcttaegaaa atcattagta aagtttgtge caataccgaa 240tgtggctagc attccattct ctttagctgc atgggagtaa gttattgcct tttegacgtt 300caaagaatcg gaataacaga taatcttcga gaatttaggc aatttcaaca cgtcatggta 360atggtgggaa atctttttgg tatacteaae tgggtctcca gaatcttgte taacaccgac 420

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<210> 13<211> 1206<212> DNA

<213> Saccharomyces cerevisiae<400> 13

atggatecea caagagctcc.ggatttcaaa ccgceatctg cagacgagga attgattcct 60

ccacccgacc cggaatctaa aattcccaaa tctattccaa ttattccata cgtcttagcc 120

gatgcgaatt íctctataga tgcacctttt aatattaaga ggaagaaaaa gcatcctaag 180

catcatcatc accatcatca cagtcgtaaa gaaggcaatg ataaaaaaca tcagcatatt 240

ccattgaacc aagacgactt tcaaccãctt tccgcagaag tgtcttccga agatgatgac 300

gcggatttta gatccaagga gagatacggt tcagattcaa ccacagaatc agaaactaga 360

ggtgttcaga aatatcagat tgctgattta gaagaagttc cacatggaat cgttcgtcaa 420

gcaagaacct tggaagacta cgaattcccc tcacacagat tatcgaaaaa attactggat 480

ccaaataaac tgccgttagt aatagtagca tgtgggtctt tttcaccaat caectacttg 540

catctaagaa tgtttgaaat ggctttagat gcaatctctg aacaaacaag gtttgaagtc 600

ataggtggat attactcccc tgttagtgat aactatcaaa agcaaggctt ggccccatcc 660taccatagag tacgtatgtg tçaattggcc tgcgaaagaa cctcatcttg gttgatggtg 720

gatgcatggg agtcattgca accttcatac acaagaactg ccaaggtctt ggatcatttc 780aatcacgaaa tcaatattaa gagaggtggtgtgaaaataa tgttgctggc tggtggtgactgggcggacg ccgatttaca tcacattctcactggttctg atgtaaggtc ttttttgttaaatattctta tcatcaagca actcatctattttatcagac gcgccatgtc tgtacaatatcaagaacata gactatatgt ggaccaaaccgaatga

<210> 14<211> 1188<212> DNA

<213> Saccharomyces cerevisiae<400> 14

atggatccca ccaaagcacc cgattttaaaccgccagatc caacacatac gataccaaaagattataatt cttcgatcga tgctcctttcaggaaaaaaa acgccaactc aagcaaccgattccagccac tatctcggga tgtatcatcgattgacgcta ctctacagga tgttacgatgattgctgatt tggaagaagt tcctcacacatacgaatttc ctgtacacag attgacgaaaatcatcgttg cttgtggatc attttctcccatggctttag atgatatcaa tgagcaaacgccagtaagtg ataactatca aaagcgagggtgcgaattag catgcgagcg gacatcatctcaatcaagtt atacaaggac agcaaaagtcaagagaggtg gaatcatgac tgtagatggtgcaggcggtg atcttatcga atccatgggccaccatattt tgggtaatta tggatgtttgtccttcttgc tttcccatga tatcatgtatcaacttattt acaatgatat ttcctctacgtcagttcaat atcttcttcc aaactctgtcattaatcaaa gtgaaccggt caagcaggtc

gtagctactg ttactggaga aaaaattggt 840

ctaatagagt caatgggtga accaaacgtt 900

ggtaattacg gttgtttgat tgtcgaacgt 960

tcccatgata ttatgtatga acatagaagg 1020

aatgatattt cttccacgaa agttcgtcta 1080

ttgttaccta attcggtcat caggtatatc 1140

gaacctgtta agcaagttct tggaaacaaà 1200

1206

ccgccacagc caaatgaaga actacaacca 60

tctggaccca tagttccata tgttttagct 120

aatctcgaca tttacaaaac cctgtcgtca 180

atggaccata ttccattaaa tactagtgac 240

gaggaggaaa gtgaagggca atcgaatgga 300

actgggaatt tgggggtact gaagagccaa 360

attgtaagac aagccagaac tattgaagat 420

aagttacaag atcctgaaaa actgcctctg 480

ataacatacc tacatttgag aatgtttgaa 540

cgttttgaag tggttggtgg ttatttttct 600

ttagccccag cttatcatcg tgtccgcatg 660

tggttaatgg ttgatgcctg ggaatcttta 720

ttggaccatt tcaatcatga aataaatatc 780

gaaaaaatgg gcgtaaaaat catgttattg 840

gagcctcatg tgtgggctga ttcagacctg 900

atcgtggaaa ggactggttc tgatgttagg 960

gaacacagaa gaaatatcct tattatcaaa 1020

aaagtgcggc ttttcatcag acgtggaatg 1080

atccgttaca tccaagagta taatctatac 1140

ttçgatagca aagagtga 1188<210> 15<211> 2145<212> DNA

<213> Saccharomyces cerevisiae<400> 15

atgtcacatc ttatcácttt agctacatgc aacttgaatc aatgggccct agattttgaa 60

ggtaatagag accgtatcct acagtccatt aagattgcca aagagagggg tgccaggtta 120

cgtgtcggcc cagaactgga aataactggc tacggatgtt tagatcattt tttagaaaat 180

gacgtttgcc ttcattcatg ggaaatgtat gctcaaatca ttaagaataa agaaacccat 240

ggattaatac ttgacattgg tatgcccgtt ctacacaaga atgttcgtta taattgtcgt 300

ttgttatcct tggatggtga gatattgttc ataagaccta agatttggtt agctaatgat 360

ggtaactata gggaaatgag atttttcaca ccttggatga aacctggcgt ggtggaggac 420

tttatccttc cacctgagat tcagaaagtt accggccaga gacttgtgcc atttggggac 480

gctgtgataa attcattgga tacatgcatt ggtacagaaa cttgtgaaga attgtttaca 540

cctcaatccc cccacatcgc catgtcttta gatggtgtgg aaatcatgac aaactcatct 600

ggttctcatc atgaactgcg taagttaaat aaaaggttag acctaatttt aaatgccact 660

aaacgttgtg gtggtgttta cttgtatgca aatcaaagag gttgtgatgg tgacagatta 720

tattatgatg gctgtgcact aattgccatc aatggtacaa ttgtagccca aggttcacaa 780

ttttcgctag atgatgtgga agtagttact gctactgtgg acctagaaga ggtgaggagt 840

tatcgtgcag ctgtcatgtc tcgtggccta caagcctcct tggcagaaat aaagttcaag 900

cgtattgata ttcctgtaga attggcttta atgacctcca gatttgatcc tacagtgtgt 960

ccaacaaaag tccgcgagcc tttctatcac tctcctgagg aagaaattgc actgggacct 1020

gcttgctgga Itgtgggatta tttaagacgt tgtaacggaa cagggttttt ccttccctta 1080

tctgggggca ttgactcttg tgcaactgca atgattgtcc actctatgtg ccgtttagtg 1140

accgacgctg ctcaaaatgg aaatgagcaa gttatcaaag acgttcgtaa gataacacgt 1200

agcggcgatg attggattcc agacagtcca caggatctag cctcaaaaat atttcactcc 1260

tgtttcatgg gtacggaaaa ttcatccaag gagacaagaa acagagcaaa ggacctttcc 1320

aatgcaattg gatcttacca cgtggattta aagatggact cattggtatc cagtgtggtg 1380

tccttattcg aagtagccac tggcaaaaaa ccaatataca aaatatttgg gggatctcaa 1440

atcgagaact tggctttaca aaacatccag gcgcgtctaa gaatggttct ttcttatctt 1500

tttgcgcaac tgttgccgtg ggttcgtggt atcccaaact cgggtggatt gttagtactt 1560

ggtagcgcaa atgttgatga. gtgcttacgt gggtatctaa caaaatatga ctgctcctcc 1620

gcagatatca accctattgg gggtatttca aaaactgact tgaaaagatt cattgcctac 1680gcatcaaaac aatataacat gccaatcttg aatgactttt taaacgctac accaactgca 1740gaattagaac ctatgactaa agattacgtt caatcggatg agatagatat ggggatgacg 1800tatgaagaat tgggcgtgtt tggttaccta agaaaggttg aaaaatgtgg tccttattct 1860atgttcttaa aacttcttca tcaatggtcc ccaaagttaa cacctcgtca aatatctgaa 1920aaggtgaaaa gatttttctt cttctatgcc atcaacagac acaagcaaac tgttttaact 1980cctagttatc atgctgaaca gtattcacca gaagacaaca gatttgactt acgtcctttc 2040ttaatcaacc caagatttcc atgggcttca agaaaaattg atgaagttgt cgagcagtgt 2100gaagcacata aaggctcaac gcttgacatt atgtctattg attag 2145

<210> 16<211> 597<212 > DNA

<213> Arabidopsis thaliana<400> 16

atggcttcct catcaacgag aaagtacgag acacgaaagc gagatccaaa ctctaaaatc 60

gcagctcttc tcgttatcga catgcagaat cacttctcct ccatggccaa acccatcctc 120

aacaacgttc tcaccaccat cgacatctgc cgacgcgcct cagtccccgt attctttacg 180

cgtcacaacc acaaatcccc gaccgaccac ggcatgctcg gcgagtggtg taacggcgat 240

gtaatccttg acggaaccac cgattctgaa atcatccagg agatacaagg ccaagtaacc 300

ggaccagacg agatggtgga gaagaacacg tacagtgcgt ttaacaaaac ccgcctccag 360

gaaaacctgg aaaagatcgg agtaaaggag gtgatcgtga tcggagtgat gacgaacttg 420

tgctgtgaga caacggcgcg tgaagcgttt attaagggtt ttagggtttt tttctcgacg 480

gacgcgactg cgacgtttaa tgaggagctt cacgaggcta cgctaatgaa tctcgctttt 540

ggcttcgctt atctcgtcga ttgcgataaa ctccggcgaa gtctactcgg taactaa 597

<210> 17<211> 597<212> DNA

<213> Arabidopsis thaliana<400> 17

atggcttctt catcatcgag aacgtacgag acacgaaagc gagagccaaa tcctaaaatc 60gcagctcttc tcgtcatcga tatgcagaat cacttctact ctatggctga accaatcctc 120caaaacgctc tcaccaccat cgacatctgc cgacgcgctt caatccccgt attcttcacg 180cgccacaacc acaaatcccc aaccgaccac ggcatgctcg gagagtggtg gaacggcgat 240ctaatcctcg acggaaccac tgattccgaa atcatcccgg aaatcaatcg ccaggtcacc 300ggaccagacg aaatcgtgga gaagagcacg tacagtgcgt ttaacaacac gcaccttcag 360

gagaagctgg acaagatcgg agtgaaggag gtgatcgtta tcggagtgat gacgaaccta 420

tgctgtgaga cgacggcgcg tgaagcgttt gtaaaggggt ttagggtttt tttctcgacg 480

gacgcgactg cgacggttaa tgaagagctt cacgaggcta ctctaatgaa tctcgcgtat 540

çgctttgctt atctcgtcga ttgcgataga ctccggcgag gtctactcag tagttaa 597

<210> 18<211> 591<212> DNA

<213> Arabidopsis thaliana<400> 16

atggccgaga gatggaggaa cacggctcta ctcgtcatcg acatgcagas cgatttcata 60

gaggaággtg ctgtgacgça agtgaaagga ggaaaatcta tagttcctaa tgttatcaga 120

gtcgtcgaac tcgcgaggca gcgtggtatt ctcgtaattt gggttgttcg agaacatgat 180

cgtcaaggaa gagatgttga attattcagg cgccataact acagttctga gaaagtcggg 240

ccagttatta aaggcaccgt aggagcagaa ttggttgatg gattgatgat caacgaagaa 300

gatgactata agattgtgaa aactcgtttc agtgctttct ttagtaccaa tcttcattcc 360

ttcttgcaaa cttcaggggt taccaagtta gtgattgctg gtgtgcaaac gccgaactgt 420

atccggcaaa cggtgtttga tgcagtggcg ctggattatc ccaatgtgac tgttattaca 480

gatgccacag ctgctgcaac accagagatc catactgcga atattcttga catgaagaat 540

attggagtca agactcctac attacacgag tggtccgaag aacttgcttg a 591

<210> 19<211> 1680<212> DNA

<213> Arabidopsis thaliana<400> 19

átggagaaga aagaaaatgg. tctcgatgga aagcaatcgg gtcgggtcat taacggaccc 60

actaacccga tggtcacacc tctgctcaac gatctttacc aattcaccat ggcttatgct 120

tattggaaag ctggcaaaca atctgagcga tctgtgtttg atctgtattt tcgtaagaat 180

ccttttggtg gagaatacac tatctttgct ggtttagaag aatgcatcaa atttctcgct 240

aatttcaatt tgactgatga agagatcgat ttcgttcgtg attcgttacc tggatgtgag 300

gaagctttct gtgattatct tcgagggctt gattgttctg acattgaagt gtatgccatt 360

tcggaaggat cagttgtttt tcctaaagtt cctttactca gaatcgaagg tcctgttgct 420

gtggtgcaat tgttggaaac tccattcctc aatctcatca attacgcatc tttggttgct 480acaaatgcag caagacatcg gtttgttgca ggaaaatcta agcttctgct tgagtttggt 540

gctagaagag ctcagggacc cgatggtgca ataagcgcat caaagtattg ctaccttgga 600

ggttttgatg caacaagtaa tgttgcagcg ggaaaactgt ttgggatacc cctccgtggt 660

actcattccc atgcttttgt tagctcattc atgagccttg atgaaattgt tgacaaagtg 720

cttcgaagtt ctgatgggaa aagcacttgt aaggatttta tatgtttggt ccaaacttgc 780

ctaacaaaga ttcagaattc atcttcatta caaggaattt tttccgagac aaatcaaagc 840

gagcttgcag cgttcatttc atatgcactg gcattcccaa actcctttct cgctcttgta 900

gacacttatg atgtgatgaa gagtggtatt ccaaacttct gtgctgttgc tctagcactt 960

aatgaattgg gatacaaagc agtaggcatt agactggatt caggtgactt agcctatctt 1020

tctactgagg tcaggaaatt cttttgtgcc atagagagag acctcàaagt tcctgatttc 1080

gggaagatga tcgtcactgc tagtaacgat ctaaacgaag agacagtcga tgctctaaat 1140

aaacagggtc atgaagtaga tgcatttgga attggaacca acttagtgac ttgctatgcg 1200

caagctgcgt taggttgtgt tttcaaactt gtggaaataa acaatcagcc tcggatcaaa 1260

ctttctgaag atgttactaa ggtatcgatt ccatgtaaaa agcgtactta cagattgttc 1320

ggaaaagagg gttaccctct tgttgatata atgactggag agaacgaacc acctccaaag 1380

gtcggtgaaa ggttactttg ccgtcatcca ttcaatgaat caaaaagggc ttatgtggtt 1440

ccacaacgcg ttgaagagct tctgaaatgt tattggcgtg gcaatgcaga tgaagctagg 1500

gaagagctag agccattgaa agagctaaga aatcgttgca tcaaacagct cgaaaatatg 1560

cgacccgatc atatgagaag attaaaccct actccttata aggttagtgt cagcgccaag 1620

ttgtatgact tcatccactt cctctggcte aacgaagctc ctgtcggtga actgcattga 1680

<210> 20<211> 1674<212> DNA

<213> Arabidopsis thaliana<400> 20

atggagccga aagagaacgg ctcagaattg ggtcagaaga tcattgacgg accaacgaat 60

ccaatggtca cacctttact caatgatctt tatcaattca ccatggctta tgcttattgg 120

aaagctggca aacacaacga acgatccgtt ttcgatctgt attttcgtaa gaacccattt 180

ggtggtgagt acactgtgtt tgctggatta gaagagtgtg ttaagttctt agccaatttc 240

aaattgactg atgaagaaat cgatttcgtt caagagtgtt tgcctggatc tgaggaagct 300

ttttgtgatt atcttagagg gcttgattgt tctgatgttg aagtttatgc aattccggâa 360

ggatcagttg tttttcctaa agtacctctc atgagagttg aaggacctgt tggtgttgtt 420

caattgttgg aaactccatt cctcaatctt gtcaattttg catctttggt agctactaac 480gcagctaggc atcgctttgt tgccggaaaa tctaagagtc tactcgagtt tggtgctcga 540

agggctcagg gtccggatgg tgcaataagc gcatcaaaat attgctacct tggaggtttt 600

gatgcaacaa gtaatgtagc agctggaaaa ctttttggga ttcctcttcg tggaacacac 660

tctcatgctt atgttagctc attcatgagt actgatgaga ttgttgacaa agtacttcgt 720

agtgctgatg ggaaaaccac gtgcgaggat tttgttagtc atgttcagac atggttaaaa 780

aagattcagt attcaccatc tctaagtggc attttctctg agacaaatca aagcgagcta 840

gcagctttca cctcatatgc actggcattc cccaaaactt ttcttgccct cgtagataca 900

tacgatgtga tgaagagtgg aatccçtaac ttctgtgcag ttgctttagc actcaatgac 960

tttggatata aagcattagg tattagactg gattcaggtg atttagctta tctatctaga 1020

gaggccagaa atttcttctg cacggtagag agagaactaa aagtgcctgg ttttgggaag 1080

atggtcgtca ctgctagtaa tgatctaaat gaagagacga ttgacgcttt aaataaacag 1140

ggacatgagg tggatgcttt tggcatcggg acctacttgg tcacttgcta ttcacaagcg 1200

gccttaggtt gçgttttcaa acttgtggag ataaacaatc agcctcggat .taaactttct 1260

gaagatgtta caaaggtatc aataccgtgt aaaaagcgaa gttacagatt átacggcaaa 1320

gaaggttacc ctctggtaga tataatgact ggagagaacg aaccacctcc aaaggttggt 1380

gagcgtttac tttgtcgtca cccattcaac gaatccaaaa gagcatatgt agtgccacaa 1440

cgtgtcgaag agctcctcaa atgttattçq cgtggaagtg cagatçaagc aagagaagta 1500

ttaccgcctt tgaaagagat aagagaccgt tgcatcaaac agctcgaaaa catgcgacct 1560

gatcatatga ggagattaaa cccaactcct tataaggtta gtgtaagcgc aaagctgtac 1620

gatttcatcc acttcttatg gctaaacgaa gcacctgttg gtgaattgca gtga 1674

<210> 21<211> 717<212> DNA=

<213> Arabidopsis thaliana<400> 21

atggatgtcc cgttaccagt cgagaaatta tcttatggat caaacactga ggacaaaact 60

tgtgtagtgc ttgtggcaac tgggagtttc aatcctccta ctttcatgca tttacgcatg 120

tttgagctgg cgagagatga attacgctca aaaggatttc atgttcttgg aggatatatg 180

tctcctgtta atgatgcata taagaagaag ggccttttat ctgcagaaca tcgtttagag 240

atgtgtaatg tatcatgtca aagctctgac tttgtaatgg ttgatccgtg ggaggcatct 300

caaagcaact accaacgaac tttgacggtt ttatcaaggg tcaagacttt cttaacaaca 360

aatcgacatg tacccgagga atctctcaaa gtcatgctac tatgtggctc ggatttactg 420

ctatctttct gcactcccgg tgtttggatc cctgadcagt taagaactat ttgcaaagat 480tatggcattg tgtgcatccg tagagaagga caagatgttg aaaatatgat ctctggtgac 540

gaaatct-taa acgaaaactg tgctaacgtc aaaatcgttg acaatactgt tcctaatcaa 600

atcagttcga gtagattaag gcaatgcatt tcgcgagggt tatcggttaa atacttgact 660

gaagatggag taatagatta tatcagacaa catcaactat acactgagct cacatga 717

<210> 22<211> 2178<212> DNA

<213> Arabidopsis thaliana<400> 22

atgaggctgt tgaaggttgc tacgtgtaac ttgaaccaat gggccatgga tttcgagagc 60

aacatgaaga acatcaaggc ttcgatcgct gaggcaaagg ctgctggtgc tgttatcagg 120

cttggacccg agctcgaggt cactggctat ggttgcgagg atcacttctt ggaactcgac 180

actgtcactc atgcgtggga gtgtttgaag gaattgctgc ttggtgattg gacggatgat 240

attttgtgca gcataggaat gcctgtgatt aaaggagcag agcgttataa ctgccaggtt 300

ctctgtatga acagaagaat catcatgatt cgaccgaaaa tgtggctcgc aaacgatgga 360

aactataggg agctacggtg gttcacagct tggaagcaga gagaagagct agaggaattt 420

cagctcccca ttgaaatttc agaggctttg gagcagaaat cagtcccttt tggttatggt 480

tacatccagt ttatcgacac ggctgttgca gctgaagtct gtgaggaact gtttagtcca 540

cttcctcctc atgccgagct cgcattgaat ggtgttgaag tatttatgaa tgcaagtggg 600

agtcatcacc aacttaggaa actagatatt cgtctgaatg cttttatggg ggctactcat 660

gctcgtggtg gggtgtatat gtacagtaat caacaaggat gcgatggtag ccgcttatac 720

tacgatgqat gtçcatgtat tgttgtaaac gggaatgttg ttgctcaagg ctcacaattc 780

tcgttgagag acgttgaggt catcatttca caagtggatc ttgatgcggt tgctagcctt 84 0

cgtggatcta taagtagctt tcaggaacaa gcaagctgca aggttaaagt atcttcagta 900

gctgtgccct gtagacttac acagtccttc aacctgaaaa tgacactaag cagtccgaag 960

aagatcattt accactctcc acaagaagaa atagcctttg gtcccgcttg ctggatgtgg 1020

gactátttga gaagaagtgg cgcttcagga tttttgcttc ctctttctgg cggagcagac 1080

agctcctccg tggcagctat tgttggctgc atgtgccaac ttgttgttaa agagattgca 1140

aagggagatg agcaagtaaa agctgatgcg aaccgaattg ggaattatgc taatgggcag 1200

tttcctactg atagcaaaga gtttgccaaa cgaatatttt acactgtctt tatgggttct 1260

gaaaacagtt çtgaggagac aaaaaggcgt tcaaagcagc tggcagacga gattggtgct 1320

tggcatcttg atgtttgcat agatggtgtt gtctctgcag ttttatcatt atttcaaaca 1380

gttacaggca agcgaccaag gtataaggtt gatggaggat caaatgctga gaaccttggg 1440ttgcagaaca ttcaagcccg gatgagaatg gtgttagcat ttatgttagc gtctctcttg 1500ccttgggttc atagcaaacc aggcttttac cttgttctag gcagctccaa cgttgatgaa 1560ggacttcgtg gttacctgac aaagtatgat tgcagctcag cagacataaa tcctatagga 1620agtatcagta aaatggattt gaggttgttc ttaaaatggg ctgcaacgaa tctcggatat 1680ccatccttgg cagagataga agctgctcca ccaacagctg agcttgagcc cattcgttct 1140gactattctc agctcgatga agtcgacatg ggaatgacat atgaagagct ttcagtctat 1800ggaaggatga ggaagatatt ccgttgtgga ccagtatcta tgttcaagaa tctatgttac 1860aagtggggaa caaagctaag cccagcagaa gtagctgaga aagtgaagta tttcttcaaa 1920tattattcga tcaatcgaca caaaatgact gtcctcacac cgtcttatca cgctgagagt 1980tactccccag aggacaacag attcgatctg aggcagtttc tgtacaacag caagtggcca 2040taccagttta agaagattga cgagattgtt gacagcttàa atggtgactc agttgctttc 2100ccggaagaag aagcaaactc caacaaagaa attggagttg tagcagcaaa ctccggagac 2160cçaagtgcgg gtctctga 2178

Claims (27)

1. Método para aumentar a tolerância ao estresse em uma plan-ta, que compreende aplicar uma quantidade eficaz de ácido 6-cloronicotínicoou um composto de fórmula (I)<formula>formula see original document page 58</formula>em queHet representa um heterociclo que em cada caso é opcio-nalmente mono ou polissubstituído por flúor, cloro, metila ou etila, cujo hete-rociclo é selecionado a partir do seguinte grupo de heterociclos:pirid-3-ila, pirid-5-ila, 3-piridinio, 1 -óxido-5-piridinio, 1 -oxido-5-piridinio, tetraidrofuran-3-ila, tiazol-5-ila,A representa Ci-C6-alquila,-N(R1)(R2) ou S(R2)1em queR1 representa hidrogênio, C-i-C6-alquila, fenil-CrC4-alquila, C3-Ce-cicloalquila, C2-C6-alquenila ou C2-C6-alquinila, eR2 representa CrC6-alquila, C2-C6-alquenila, C2-C6-alquinila,-C(=0)-CH3 ou.benzila,R representa hidrogênio, CrC6-alquila, C2-C6-alquenila, C2-C6-alquinila, - C(=0)-CH3 ou benzila ou junto com R2 representa os grupos a-baixo:-CH2-CH2-,-CH2-CH2-CH2-,-CH2-O-CH2-,-CH2-S-CH2-,-CH2-NH-CH2-, -CH2- N(CH3)-CH2-, eX representa N-NO2, N-CN ou CH-NO2.sobre a dita planta ou sobre seu local ou sobre as sementes dadita planta, caracterizado pelo fato de que a dita planta é uma planta mani-pulada para ser tolerante ao estresse.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a dita plantamanipulada para ser tolerante ao estresse é uma planta transgênica quecompreende um gene exógeno que aumenta a tolerância ao estresse.

3. Método de acordo com a reivindicação 2, em que o dito geneexógeno codifica uma molécula de RNA inibitória de PARP.

4. Método de acordo com a reivindicação 3, em que o dito geneexógeno compreende os seguintes fragmentos de DNA operativamente liga-dos:a. um promotor exprimível em planta;b. uma região de DNA que codifica uma molécula de RNA inibitóriade PARP que compreende pelo menos 19 de 20 nucleotídeos selecionadosa partir da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1, da seqüência denucleotídeos de SEQ ID NO: 2, da seqüência de nucleotídeos de SEQ IDNO: 3, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 4, da seqüência denucleotídeos de SEQ ID NO: 5 ou da seqüência de nucleotídeos de SEQ IDNO: 6; ec. uma região de DNA de terminação da transcrição e poliadenilação.

5. Método de acordo com a reivindicação 3, em que o dito geneexógeno compreende os seguintes fragmentos de DNA operativamente ligados:a. um promotor expressável em planta;b. uma região de DNA que codifica uma molécula de RNA inibitóriade PARP que compreende pelo menos 19 de 20 nucleotídeos selecionadosa partir do complemento da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No: 1, daseqüência de nucleotídeos de SEQ ID No: 2, da seqüência de nucleotídeosde SEQ ID No: 3, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No: 4, da se-qüência de nucleotídeos de SEQ ID No: 5 ou da seqüência de nucleotídeosde SEQ ID No: 6; ec. uma região de DNA de terminação de transcrição e poliadenilação.

6. Método de acordo com a reivindicação 3, em que o dito geneexógeno compreende os seguintes fragmentos de DNA operativamente Iigados:a. um promotor expressável em planta;b. uma região de DNA que codifica uma molécula de RNA inibitóriade PARP1 a dita molécula de RNA compreendendo:i. uma seqüência de nucleotídeo sentido que compreende pelomenos 19 de 20 nucleotídeos selecionados a partir da seqüência de nucleo-tídeos de SEQ ID No: 1, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No: 2, daseqüência de nucleotídeos de SEQ ID No: 3, da seqüência de nucleotídeosde SEQ ID No: 4, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No: 5 ou da se-qüência de nucleotídeos de SEQ ID No: 6; eii. uma seqüência de nucleotídeo anti-sentido que compreende aseqüência de nucleotídeos complementar aos ditos pelo menos 20 nucleotí-deos consecutivos na dita seqüência de nucleotídeo sentido.iii, em que as ditas seqüências de nucleotídeos sentido e anti-sentido são capazes de formar um região de DNA de dupla fita; ec. uma região de terminação da transcrição e poliadenilação de DNA.

7. Método de acordo com a reivindicação 6, em que a dita se-qüência de nucleotídeo anti-sentido tem cerca de 95% de identidade de se-qüência ou é idêntica à dita seqüência de nucleotídeo sentido.

8. Método de acordo com a reivindicação 2, em que o dito geneexógeno codifica uma molécula de RNA inibitória de ParG.

9. Método de acordo com a reivindicação 8, em que o dito geneexógeno compreende os seguintes fragmentos de DNA operativamente ligados:a. um promotor exprimível em planta;b. uma região de DNA que codifica uma molécula de RNA inibitóriade PARG que compreende pelo menos 19 de 20 nucleotídeos consecutivosselecionados a partir da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No: 7, da se-qüência de nucleotídeos de SEQ ID No: 8, da seqüência de nucleotídeos deSEQ ID No: 9 ou da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No: 10; ec. uma região de DNA de terminação de transcrição e poliadenilação.

10. Método de acordo com a reivindicação 3, em que o dito geneexógeno compreende os seguintes fragmentos de DNA operativamente liga-dos:b. um promotor exprimível em planta;c. uma região de DNA que codifica uma molécula de RNA inibitó-ria de PARG que compreende pelo menos 19 de 20 nucleotídeos consecuti-vos selecionados a partir da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No: 7, daseqüência de nucleotídeos de SEQ ID No: 8, da seqüência de nucleotídeosde SEQ ID No: 9 ou da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No: 10; ed. uma região de DNA de terminação de transcrição e poliadenilação.

11. Método de acordo com a reivindicação 3, em que o dito geneexógeno compreende os seguintes fragmentos de DNA operativamente ligados:a. um promotor exprimível em planta;b. uma região de DNA que codifica uma molécula de RNA inibitóriade PARP, a dita molécula de RNA compreendendo:i. uma seqüência de nucleotídeo sentido que compreende pelomenos 19 de 20 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir da seqüên-cia de nucleotídeo de SEQ ID No: 7, a seqüência de nucleotídeos de SEQ IDNo: 8, a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No: 9, a seqüência de nu-cleotídeosde SEQ ID No: 10; eii. uma seqüência nucleotídeo anti-sentido que compreende a se-qüência de nucleotídeo complementar aos ditos pelo menos 20 nucleotídeosconsecutivos na dita seqüência de nucleotídeo sentido.iii. em que as ditas seqüências de nucleotídeo sentido e anti-sentido são capazes de formar um região de RNA de dupla fita; ee. uma região de DNA de terminação de transcrição e poliadenilaão.

12. Método de acordo com a reivindicação 11, em que a dita se-qüência de nucleotídeo anti-sentido tem cerca de 95% de identidade de se-qüência ou é idêntica à dita seqüência de nucleotídeo sentido.

13. Método de acordo com a reivindicação 2, em que o dito geneexógeno codifica uma enzima funcional de planta da via de síntese de recu-peração dè nicotinamida adenina dinucleotídeo selecionada a partir de nico-tinamidase, nicotinato fosforribosiltransferase, ácido nicotínico mononucleo-tídeo adenil transferase ou nicotinamida adenina dinucleotídeo sintetase.

14. Método de acordo com a reivindicação 13, em que o dito ge-ne exógeno compreende uma seqüência de nucleotídeos selecionada a par-tir da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 11, da seqüência de nucleotí-deos de SEQ ID 12, a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 13, da seqüên-cia de nucleotídeos de SEQ ID 14, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 15, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 16, da seqüência de nucleotí-deos de SEQ ID 17, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 18, da se-qüência de nucleotídeos de SEQ ID 19, da seqüência de nucleotídeos deSEQ ID 20, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 21 ou da seqüência denucleotídeos de SEQ ID 22.

15. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 14, em que o dito composto selecionado da classe dos neonicotinóides éimidacloprida.

16. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 14, em que o dito composto selecionado da classe dos neonicotinóides éclotianidina.

17. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 14, em que o dito composto selecionado da classe dos neonicotinóides étiacloprida.

18. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 14, em que o dito composto selecionado da classe dos neonicotinóides énitenpiram.

19. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 14, em que o dito composto selecionado da classe dos neonicotinóides éacetamiprida.

20. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 14, em que o dito composto é ácido 6-cloronicotínico.

21. Uso de um composto como definido na reivindicação 1, paraaumentar a tolerância ao estresse de uma planta manipulada para ser tole-rante ao estresse de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 14.

22. Semente de uma planta manipulada para ser tolerante aoestresse como definido em qualquer uma das reivindicações 2 a 14 que te-nha sido tratada com um composto de acordo com a reivindicação 1.

23. Método para aumentar a tolerância ao estresse em umaplanta que compreende tratar o solo no qual a semente de uma planta mani-pulada para ser tolerante ao estresse de acordo com qualquer uma das rei-vindicações 2 a 14 é plantada com uma quantidade eficaz de ácido 6-cloronicotínico ou um composto de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1.

24. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a planta édita planta dicotiledônea ou monocotiledônea transgênica tolerante ao es-tresse, célula de planta ou semente dessa.

25. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a sementeé tratada com uma quantidade de um composto de acordo com a reivindica-ção 1 de 0,1 g/100 kg de semente a 1000 g/100 kg de semente.

26. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a planta étratada com uma taxa de aplicação de 10 g a 1600 g por hectare de um com-posto de acordo com a reivindicação 1.

27. Embalagem compreendendo pelo menosa. um composto químico como definido na reivindicação 1, eb. uma planta manipulada para ser tolerante ao estresse ou umasemente da dita planta como definido na qualquer uma das reivindicações 2a 14.