KR20080021659A - 백신 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 HIV 폴리펩티드를 엔코딩하는 올리고누클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터에 관한 것이며, 여기서 바이러스 벡터는 아데노바이러스 벡터이다. 특히, 이러한 아데노바이러스는 인간외 영장류 아데노바이러스 예컨대, 원숭이 아데노바이러스, 더욱 특히 침팬지 아데노바이러스이다. 특히, 본 발명은 다양한 상이한 HIV 항원 예를 들어, 2개 또는 3개 또는 이 보다 많은 HIV 항원을 엔코딩하는 HIV 폴리누클레오티드 서열을 포함하는 아데노바이러스 벡터에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 바이러스 벡터를 제조하는 방법, 이러한 방법에 의해 생성된 바이러스 벡터, 및 특히, 의학적 예방학적 또는 치료학적 백신접종에서 벡터의 용도에 관한 것이다.

Description

백신 조성물 {VACCINE COMPOSITION}
본 발명은 HIV 폴리펩티드를 엔코딩하는 올리고누클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터에 관한 것이며, 더욱 특히, 상기 바이러스 벡터는 아데노바이러스이다. 특히, 이러한 아데노바이러스는 사람외 영장류 아데노바이러스 예컨대, 원숭이 아데노바이러스, 더욱 특히 챔팬지 아데노바이러스이다. 특히, 본 발명은 다중의 상이한 HIV 항원 예를 들어, 2개, 또는 3개, 또는 더 많은 HIV 항원을 엔코딩하는 HIV 폴리누클레오티드 서열을 포함하는 아데노바이러스 벡터에 관한 것이다. 본 발명은 추가로, 바이러스 벡터를 제조하는 방법, 이러한 방법에 의해 생성된 바이러스 벡터, 의약 특히, 예방학적 또는 치료학적 백신화에서 벡터의 용도에 관한 것이다.
HIV-1은 세계의 주요 보건 문제중 하나에 속하는 후천성 면역 결핍증 (AIDS)의 근원적 원인이다. 세계에 걸쳐 광대한 연구가 수행되고 있지만, 백신을 생성하기 위한 노력은 아직 성공을 거두지 못하였다.
HIV-1은 레트로바이러스과의 RNA 바이러스이다. HIV 게놈은 9개 이상의 단백질을 엔코딩하며, 이는 3 부류로 나누어진다: 주요 구조 단백질 Gag, Pol 및 Env, 조절 단백질 Tat 및 Rev, 및 액세서리 단백질 Vpu, Vpr, Vif 및 Nef. HIV 게놈은 모든 레트로바이러스의 5'LTR-gag-pol-env-LTR3' 구성을 나타낸다.
아데노바이러스는 약 36kb의 게놈 크기를 갖는 이중가닥 DNA 바이러스이며, 이는 다양한 표적 조직에서 높은 유전자 전이 효율을 달성하는 이의 능력 및 큰 트랜스젠 능력으로 인해 유전자 트랜스퍼 적용에 널리 사용되었다. 전형적으로, 아데노바이러스의 E1 유전자가 결실되어, 선택된 프로모터, 대상 유전자의 cDNA 서열 및 폴리A 시그널로 이루어진 트랜스젠 카세트로 대체되어, 복제 결실 재조합 바이러스를 생성시킨다.
아데노바이러스는 3개의 주 단백질, 즉 헥손 (II), 펜톤 베이스 (III) 및 혹모양 파이버 (knobbed fibre) (IV)와 다른 많은 부 단백질, VI, VIII, IX, IIIa 및 IVa2로 이루어진 20면체 캡시드의 특징적 형태를 갖는다 (Russell W.C. 2000, Gen Virol, 81:2573-2604). 바이러스 게놈은 5' 말단에 공유적으로 부착된 말단 단백질을 갖는 선형의 이중-가닥 DNA이며, 반전말단 반복부 (ITR)을 갖는다. 바이러스 DNA는 고도의 염기성 단백질 VII 및 작은 펩티드 mu와 초기에 결합된다. 또 다른 단백질 V는 이러한 DNA-단백질 착물과 패키징되어, 단백질 VI를 통해 캡시드로 구조적으로 결합되게 한다. 바이러스는 또한, 바이러스-엔코딩된 프로테아제를 함유하며, 이는 구조 단백질 일부를 프로세싱하여 성숙한 감염 바이러스를 생성시키는데 필수적이다.
다양한 포유동물 종을 감염시키는 100개가 넘는 별개의 혈청형의 아데노바이러스가 분리되었으며, 이중 51개가 인간으로부터 분리된 것이다. 인간 기원의 이러한 아데노바이러스의 예로는 Ad1, Ad2, Ad4, Ad5, Ad6, Ad11, Ad24, Ad34, Ad35가 있다. 인간 혈청형은 다양한 생물학적, 화학적, 면역학적 및 구조적 기준에 따 라 6개의 아속 (subgenera) (A-F)로 분류되었다 [page1, WO04018627].
Ad5-기재 벡터가 많은 유전자 치료 시도에서 광범위하게 사용되었지만, 천연 감염으로 인한 유전자 군집에서 이미 존재하는 면역성으로 인해 Ad5 및 기타 그룹 C 아데노바이러스 벡터의 사용에는 한계가 있다. Ad5 및 기타 그룹 C 멤버는 가장 양성 혈청형에 속하는 경향이 있다. 존재하는 벡터에 대한 면역성은 처리 동안 벡터에 노출됨으로써 발생할 수 있다. 양성 벡터에 대한 이러한 이미 존재하는 또는 발생된 면역성은 유전자 치료 또는 백신화 노력의 효력을 제한할 수 있다. 이와 같이, 대안적인 아데노바이러스 혈청형은 숙주 면역 반응을 벗어날 수 있는 유전자 전달 시스템을 추구하는데 있어서 매우 중요한 표적을 구성한다.
이러한 영역의 대안적인 한 혈청형은 사람외 영장류 특히, 침팬지 아데노바이러스의 혈청형이다. 두개의 침팬지 아데노바이러스의 게놈을 기술하고 있는 US 특허 6,083,716 참조.
챔팬지 ("Pan" 또는 "C") 아데노바이러스 벡터는 인간 아데노바이러스 벡터만큼 효과적인 트랜스젠 생성물에 대한 강한 면역 반응을 유도한다 (Fitzgerald et al. J. Immunol. 170:1416).
HIV Tat 및 Nef 단백질은 초기 단백질이며, 즉 이들은 구조 단백질의 부재시 감염 초기에 발현된다.
Nef 유전자는 여러 활성을 갖는 것으로 나타난 초기 액세사리 HIV 단백질을 엔코딩한다. 예를 들어, Nef 단백질은 세포 표면으로부터 CD4, HIV 수용체의 제거를 초래하는 것으로 공지되어 있으며, 물론 이러한 작용의 생물학적 중요성이 검토 되고 있다. 또한, Nef는 T 세포의 시그널 경로와 상호작용하며, 활성 상태를 유도하며, 이는 이어서 더욱 유효한 유전자 발현을 조장할 수 있다. 일부 HIV 분리물은 이러한 영역이 변이되며, 이는 이들이 작용성 단백질을 엔코딩하지 않게 하며, 생체내에서 이들의 복제 및 병원성을 심각하게 손상시킬 수 있다.
Gag 유전자는 전장 RNA로부터 번역되어 전구체 폴리단백질을 생성시키며, 이는 후속적으로 3 - 5개 캡시드 단백질로 절단된다: 매트릭스 단백질, 캡시드 단백질 및 핵산 결합 단백질 및 프로테아제 (Fundamental Virology, Fields BN, Knipe DM and Howley M 1996 2. Fields Virology vol 2 1996).
Gag 유전자는 55-킬로달톤 (kD) Gag 전구체 단백질 소위, p55를 발생시키며, 이는 비스플라이싱된 바이러스 mRNA로부터 발현된다. 번역 동안, p55의 N 말단은 미리스토일화되어, 세포막의 세포질 외관과의 결합을 촉발시킨다. 막-결합된 Gag 폴리단백질은 바이러스 게놈 RNA와 다른 바이러스 및 세포 단백질의 두개의 복사체를 보충하여, 감염된 세포 표면으로부터 바이러스 입자의 발아를 촉발시킨다. 발아 후, p55는 바이러스 변이동안 4개의 더 작은 단백질 즉, MA (매트릭스 [p17]), CA (캡시드[p24]), NC (누클레오캡시드[p9]) 및 p6(4)로 바이러스 엔코딩된 프로테아제 (Pol 유전자의 생성물)에 의해 절단된다.
3개의 주 Gag 단백질 (p17, p24 및 p9)이외에, 모든 Gag 전구체는 수개의 다른 영역을 함유하며, 이는 다양한 크기의 펩티드로서 절단되어 비리온내에 유지된다. 이들 단백질은 다양한 역할을 갖는다. 예를 들어, p2 단백질은 프로테아제의 활성을 조절하고, 단백질 분해 프로세싱의 정확한 타이밍을 부여하는 계획된 역할 을 갖는다.
MA 폴리펩티드는 p55의 N-말단 미리스토일화된 말단부로부터 유래된다. 대부분의 MA 분자는 비리온 리피드 이중층의 내면에 부착된채 유지되어 입자를 안정화시킨다. MA의 서브셋이 비리온의 심층 내부에 보충되며, 여기서 바이러스 DNA를 핵으로 인도하는 착물의 일부가 된다. 이러한 MA 분자는, MA상의 캐리오필릭 시그널(karyophilic signal)이 세포 핵 부여 기관에 의해 인지되기 때문에 바이러스 게놈으로의 핵 이송을 촉진한다. 이러한 현상이 HIV가 비분화 세포를 감염시키게 하며, 이는 레트로바이러스의 일반적이지 않은 특성이다.
p24 (CA) 단백질은 바이러스 입자의 원뿔형 코어를 형성한다. 시클로필린 A는 p55의 p24 영역과 상호작용하여 HIV 입자로의 혼입을 유도하는 것으로 입증되었다. Gag와 시클로필린 A와의 상호작용은 필수적인데, 그 이유는 시클로스포린 A에 의한 이러한 상호작용의 붕괴는 바이러스 복제를 억제하기 때문이다.
Gag의 NC 영역은 소위 HIV의 패키징 시그널을 특이적으로 인지하는데 기여한다. 패키징 시그널은 바이러스 RNA의 5'말단 근처에 위치한 4개의 스템 루프 구조로 이루어지며, HIV-1 비리온으로의 이종성 RNA의 혼입을 매개하는데 충분하다. NC는 두개의 아연-핑거 모티프에 의해 매개되는 상호작용을 통해 패키징 시그널에 결합한다. NC는 또한, 역전사를 조장한다.
p6 폴리펩티드 영역은 p55 Gag 및 액세서리 단백질 Vpr 간의 상호작용을 매개하며, 이는 조립 비리온으로의 Vpr의 혼입을 유도한다. p6 영역은 또한, 감염된 세포로부터 발아 비리온의 효과적인 배출에 필요한 소위, 후기 도메인 (late domain)을 함유한다.
Pol 유전자는 초기 감염시 바이러스에 의해 요구된 활성을 갖는 세 단백질인 역전사효소 RT, 프로테아제 및 바이러스 DNA를 세포 DNA로 삽입시키는데 요구되는 인터그라아제 단백질을 엔코딩한다. Pol의 주 생성물은 비리온 프로테아제에 의해 절단되어, DNA 합성에 필요한 활성을 갖는 아미노 말단 RT 펩티드(RNA 및 DNA 유도된 DNA 폴리머라아제, 리보누클레아제 H) 및 카르복시 말단 인테그라아제 단백질을 생성시킨다. HIV RT는 카르복시 말단 Rnase 인터그라아제 도메인이 결손된 절단 생성물 (p51)과 전장 RT (p66)의 헤테로다이머이다.
RT는 레트로바이러스 게놈에 의해 엔코딩된 가장 고도로 보존된 단배질중 하나이다. RT의 두 주요 활성은 DNA Pol 및 리보누클레아제 H이다. RT의 DNA Pol 활성은 주형으로서 RNA와 DNA를 상호교환적으로 사용하며, 공지된 거의 모든 DNA 폴리머라아제는 새로운 DNA 합성을 개시할 수 없으며, 프라이머 (RNA)로서 작용하는 이미 존재하는 분자가 요구된다.
모든 RT 단백질중의 본래의 Rnase H 활성은 DNA 합성이 진행됨에 따라 RNA 게놈을 제거하는 복제 초기에 필수적인 역할을 수행한다. 이는 모든 RNA-DNA 하이브리드 분자로부터 RNA를 선택적으로 분해한다. 구조적으로, 폴리머라아제 및 리보 H는 Pol의 2/3 아미노를 커버링하는 Pol내의 별개의 비중복 도메인을 차지한다.
p66 촉매 서브유닛은 5개의 별개의 서브도메인으로 폴딩된다. 이들의 아미노 말단 23은 RT 활성부를 갖는다. 이들에 대한 카르복시 말단은 Rnase H 도메인이다.
숙주 세포의 감염 후, 레트로바이러스 RNA 게놈은 감염 입자중에 존재하는 역전사효소에 의해 선형의 ds DNA로 복사된다. 인터그라아제 (Skalka AM'99 Adv in Virus Res 52 271-273)는 바이러스 DNA의 말단을 인지하여, 이들을 트리밍시키고, 숙주 크로모좀 부위로 바이러스 DNA를 동반하여 삽입을 촉매한다. 숙주 DNA에서의 많은 부위가 삽입에 대한 표적이 될 수 있다. 인터그라아제가 실험관내 삽입을 촉매하는데 충분하지만, 생체내에서 바이러스 DNA와 결합된 유일한 단백질은 아니며 - 감염된 세포로부터 분리된 큰 단백질 - 바이러스 DNA 착물은 삽입전 착물을 나타낸다. 이는 후대 바이러스 게놈에 의한 숙주 세포 유전자의 포착을 촉진한다.
인터그라아제는 3개의 별개의 도메인 즉, N 말단 도메인, 촉매 코어 및 C 말단 도메인으로 이루어진다. 촉매 코어 도메인은 폴리누클레오티딜 트랜스퍼의 화학작용에 대한 모든 요건을 함유한다.
다중 이종 유전자를 함유하는 바이러스 벡터 및 특히, 아데노바이러스 벡터는 항상 생성하기 용이한 것은 아니다. 벡터의 안정도와 관련된 문제점, 및 삽입된 유전자의 효과적인 발현을 달성하는데 있어서의 어려움이 있을 수 있다. 특히, 백신에 사용될 수 있는 하나 초과 또는 2개 초과의 HIV 폴리누클레오티드를 함유하는 아데노바이러스는 성공적으로 생성되지 못하였다.
비인간 영장류 아데노바이러스가 침팬지의 장간막 림프 노드로부터 분리될 수 있다. 침팬지 아데노바이러스는 인간 아데노바이러스 서브타입 C와 충분히 유사하여 HEK 293 세포에서 E1 결실된 바이러스의 복제를 가능하게 한다. 그러나, 침팬지 아데노바이러스는 더욱 공통인 인간 혈청형 (Ad2 및 Ad5)와는 계통발생적으 로 별개이다. Pan 6은 Pan 5, 7 및 9와 덜 밀접하게 관련되며, 혈청학적으로 이들과 별개이다.
아데노바이러스로 이종성 DNA를 삽입하는 것과 관련하여 특정 크기 제한이 있다. 인간 아데노바이러스는 야생형 게놈 길이 또는 105% 이하로 패키징될 수 있는 능력을 갖고 있다 (Bett et al 1993, J Virol 67 (10), 5911-21). 인간 아데노바이러스에 대한 더 낮은 패키징 한계는 야생형 게놈 길이의 75%인 것으로 나타났다 (Parks et al 1995, J Virol 71(4), 3293-8).
HIV에 대한 효과적인 백신을 발견할 필요성이 있다.
본 발명은 하나 이상의 영역이 결실된 아데노바이러스 벡터를 제공하며, 이러한 벡터는 3개 이상의 HIV 항원 또는 이의 면역원성 유도체 또는 이의 면역원성 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 또는 폴리누클레오티드들을 포함하며, 여기서 벡터는 포유동물 숙주에서 상기 항원 또는 이의 단편 또는 유도제를 발현할 수 있으며, HIV 폴리누클레오티드 또는 폴리누클레오티드들의 결실 크기 및 크기는 벡터 게놈의 전체 크기가 야생형 바이러스 게놈의 길이의 85% 내지 105%가 되게하는 길이이다.
본 발명의 일 구체예에서, 폴리누클레오티드 또는 폴리누클레오티드들에 의해 엔코딩된 HIV 항원은 Gag, Nef 및 Pol일 수 있다. 추가의 구체예에서, Pol은 단지 RT 부분만 포함할 수 있다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, HIV 항원을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 또는 폴리누클레오티드들은 Gat, RT, Nef의 순서로 전사되도록, 즉, Gap 부분이 생성된 융합 단백질의 N-말단에 오도록 배열될 수 있다.
전체적 벡터 게놈의 크기는 예를 들어,야생형 바이러스 게놈 크기의 90 내지 100%, 또는 95 내지 100%일 수 있다. 일 구체예에서, 벡터의 전체적 크기는 야생형 바이러스 게놈의 크기의 약 96%일 수 있다.
본 발명에 따른 아데노바이러스 벡터에서 봉입을 위한 특정 HIV 항원은 Pol, Nef 및 Gag 또는 이의 면역원성 유도체 또는 면역원성 단편이다.
이러한 아데노바이러스 벡터는 약제학적으로 허용되는 부형제, 담체, 희석제 또는 애쥬번트와 함께 제형화되어 HIV 감염 및 AIDS의 치료 및/또는 예방에 적합한 약제 또는 백신 조성물을 포함하는 면역원성 조성물을 생성할 수 있다.
인간 군집에서 널리 자연적으로 발생하는 혈청형 예컨대, Ad2 및 Ad5와 구별되는 아데노바이러스가 본 발명에 사용된다. 이는 항체 중화 및 독성 영향을 통해 벡터 흡수를 차단함으로써 동일한 혈청형의 후속 투여 효과를 제한하는 벡터에 대한 잠재적인 면역 반응의 유도를 회피하게 하다.
이와 같이, 아데노바이러스는 널리 자연적으로 발생하는 인간 바이러스 혈청형이 아닌 아데노바이러스일 수 있다. 동물로부터 분리된 아데노바이러스는 면역학적으로 별개의 캡시드, 헥손, 펜톤 및 파이버 성분을 가지나, 계통발생적으로 밀접하게 관련이 있다. 특히, 바이러스는 인간외 아데노바이러스, 예컨대, 원숭이 아데노바이러스, 특히 침팬지 아데노바이러스 예컨대, Pan 5, 6, 7 또는 9일 수 있다. 이러한 종족의 예는 WO03/000283에 기술되어 있으며, [American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110-2209] 및 다른 공급원으로부터 입수가능하다. 바람직한 침팬지 아데노바이러스 균주로는 Pan 5[ATCC VR-591], Pan 6 [ATCC VR-592], 및 Pan 7 [ATCC VR-593]이 있다. 기타 적합한 아데노바이러스는 비제한적으로, US 특허 6,083,716에 기술된 침팬지 아데노바이러스 C1 및 C68(Pan9); 비제한적으로, SV1 [VR-195]; SV25[SV-201]; SV35; SV15; SV-34; SV-36; SV-37를 포함하는 원숭이 아데노바이러스 및 비비 아데노바이러스 [VR-275]를 포함한다. Pan5 (또한, C5), Pan6 (또한, C6), Pan7 (또한, C7), SV1, SV25 및 SV39의 서열이 기술되어 있다 [WO 03/046124, published 5 June 2003]. 또한, 원숭이 아데노바이러스 SA18로부터 작제된 벡터 및 하이브리드 아데노바이러스 벡터가 기술된 문헌 [International Patent Publication No. WO 04/16614]을 참조하시오.
침팬지 아데노바이러스는 표적 군집에서 아데노바이러스에 대한 이미 존재하는 면역성의 부재 특히, 교차-중화 항체의 부재로 인해 인간 아데노바이러스 혈청형에 걸쳐 유리한 것으로 여겨진다. 침팬지 아데노바이러스와 이미 존재하는 중화 항체 반응의 가교 반응은 특정 후보 인간 아데노바이러스 벡터의 경우의 35%와 비교하여 2%의 표적 군집에 존재한다. 침팬지 아데노바이러스는 더욱 공통인 인간 서브타입 Ad2 및 Ad5와는 구별되나, 서브그룹 E의 인간 Ad4와 더욱 밀접하게 관련이 있으며, 이는 널리 보급된 서브타입이 아니다. Pan 6은 Pan 5, 7 및 9에 덜 밀접하게 관련있다.
본 발명의 아데노바이러스는 복제 결함일 수 있다. 이는 야생형 바이러스와 비교하여 비-상보적 세포에서 감소된 복제 능력을 가짐을 뜻한다. 이는 바이러스를 변이시켜, 예를 들어, 복제와 관련된 유전자, 예를 들어, E1a, E1b, E3 또는 E4 유전자를 결실시킴으로써 유도될 수 있다.
본 발명에 따른 아데노바이러스 벡터는 작용성 E1 결실을 포함하는 복제 결함 아데노바이러스일 수 있다. 이와 같이, 본 발명에 따른 아데노바이러스 벡터는 아데노바이러스 E1a 및 E1b를 발현할 수 있는 능력의 부재로 인해 즉, E1a 및 E1b에서 작용적으로 결실되기 때문에 복제 결함을 가질 수 있다. 재조합 아데노바이러스는 또한, 다른 유전자에서의 작용적 결함 예를 들어, E3 또는 E4 유전자에서의 결함을 포함할 수 있다 [Wo 03/000283 참조]. 아데노바이러스 지연된 초기 유전자(delayed early gene) E3는 재조합 바이러스의 일부를 형성하는 원숭이 아데노바이러스 서열로부터 제거될 수 있다. E3의 작용은 재조합 아데노바이러스 입자의 생성에 불필요하다. 따라서, 본 발명에 유용한 재조합 원숭이 아데노바이러스를 패키징하기 위해 이러한 유전자 생성물의 작용이 대체될 필요가 없다. 특정 구체예에서, 재조합 (원숭이) 아데노바이러스는 작용적으로 E1 및 E3 유전자 결실된 것이다. 이러한 벡터의 작제는 문헌 [Roy et al., Human Gene Therapy 15:519-530, 2004]에 기술되어 있다.
E4 유전자가 작용적 결실되나, E4 ORF6 작용은 보유하는 것이 바람직할 수 있는 재조합 아데노바이러스가 또한, 작제될 수 있다. 본 발명에 따른 아데노바이러스 벡터는 또한, 지연된 초기 유전자 E2a가 결실될 수 있다. 결실은 또한, 원숭아 아데노바이러스 게놈의 임의의 후기 유전자 L1 내지 L5에서 발생할 수 있다. 유사하게는, 중간 유전자 IX 및 IVa의 결실이 유용할 수 있다.
기타 결실이 다른 구조적 또는 비구조적 아데노바이러스 유전자에서 발생할 수 있다. 상기 결실은 개별적으로 이용될 수 있다. 즉, 본 발명에 사용하기 위한 아데노바이러스 서열은 단지 E1만 결실될 수 있다. 대안적으로, 이의 생물학적 활성을 파괴하는데 효과적인 전체 유전자 또는 이의 일부의 결실이 조합적으로 이용될 수 있다. 예를 들어, 한 예시적 벡터에서, 아데노바이러스 서열은 E1 유전자 및 E4 유전자의 결실, E1, E2a 및 E3 유전자의 결실, E1 및 E3 유전자의 결실 (E1a 및 E1b의 작용 결실, 및 E3의 적어도 일부의 결실과 같은), 또는 E3 유전자가 결실되거나 결실되지 않은 E1, E2a 및 E4의 유전자의 결실 등이 일어날 수 있다. 이러한 결실은 이러한 유전자의 부분적 또는 전체적 결실일 수 있으며, 목적하는 결과를 달성하기 위해 다른 변이 예컨대, 온도 민감성 변이와 함께 이용될 수 있다.
아데노바이러스 벡터는 바이러스가 복제될 수 있는 적합한 세포주에서 생성될 수 있다. 특히, 손상된 복제 특징을 유도하는 바이러스 벡터로부터 요소의 손실을 제공하는 상보적 세포주가 이용될 수 있다. 예를 들어, 상보적 세포주는 E1, 또는 E1 및 E3, 또는 E1, E3 및 E4를 발혈할 수 있다. 비제한적으로, 이러한 세포주로는 특히, HeLa [ATCC 수탁 번호 CCL 2], A549 [ATCC 수탁 번호 CCL 185], HEK 293, KB [CCL 17], Detroit [예를 들어, Detroit 510, CCL 72] 및 WI-38 [CCL 75] 세포일 수 있다. 이들 세포주는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (the American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Virginai 20110-2209)으로부터 모두 입수가능하다. 기타 적합한 어미 세포주는 기타 공급원으로부터 수득될 수 있으며, 예컨대, 유럽 콜렉션 오브 에니몰 셀 컬쳐 (ECACC) (the Centre for Applied Microbiology and Research : CAMR, UK)에서 ECACC no. 96022940으로 수탁된 세포를 나타내는 PER.C6ⓒ 세포가 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 적어도 HIV 항원 RT, Nef 및 Gagf를 엔코딩하는 폴리누클레오티드 또는 폴리누클레오티드들, 또는 이의 면역원성 유도체 또는 면역원성 단편을 Gag, RT, Nef의 순서로 포함하는 아데노바이러스 벡터를 제공하며, 즉, 아데노바이러스 벡터는 Gag, RT, Nef의 순서로 전사되도록 배열된 HIV 항원 RT, Nef 및 Gag 또는 이의 면역원성 유도체 또는 면역원성 단편을 포함한다.
예를 들어, 본 발명에 따른 아데노바이러스 벡터는 단일 이종성 프로모터의 존재하의 RT 또는 이의 면역원성 유도체 또는 면역원성 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 융합되고, Nef 또는 이의 면역원성 유도체 또는 면역원성 단편에 융합된 Gag를 엔코딩하는 폴리누클레오티드, 또는 이의 면역원성 유도체 또는 면역원성 단편을 포함할 수 있으며, 여기서 유전자의 Gag 부분은 폴리누클레오티드의 5' 말단에 존재한다.
본 발명의 대안적 구체예에서, 3개 항원 각각은 이의 자체 프로모터를 통해 발현되며, 상기 프로모터 각각은 동일하거나 상이할 수 있다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 3개의 항원중 2개는 단일 프로모터에 연결된 융합물을 형성하며, 제 3 항원은 제 2 프로모터에 연결되며, 이러한 제 2 프로모터는 제 1 프로모터와 동일하거나 상이할 수 있다. 예를 들어, Gag 및 RT는 제 1 프로모터에 연결될 수 있으며, Nef는 제 2 프로모터에 연결될 수 있다.
적어도 3개의 HIV 항원 또는 이의 면역원성 유도체 또는 면역원성 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 또는 폴리누클레오티드들이 임의의 아데노 결실된 영역 예를 들어, E1 결실된 영역으로 삽입될 수 있다.
항원을 엔코딩하는 2개 또는 2개 초과의 폴리누클레오티드가 융합물로서 연결될 수 있지만, 생서된 단백질은 융합 단백질로서 발현되거나, 분리된 단백질 생성물로서 발현될 수 있거나, 융합 단백질로서 발현된 후, 후속하여 더 작은 서브유닛으로 분해될 수 있다.
한 양태에서, 본 발명은 본 발명에 따른 벡터에 의해 발현된 융합 단백질, 예를 들어, 인체내에 생성된 융합 단백질을 제공한다.
예를 들어, Nef, Gag 또는 RT를 엔코딩하는 본 발명에 따른 벡터에 포함된 하나 또는 하나 초과의 HIV 서열은 포유동물 세포에 최적화된 코돈일 수 있으며, 예를 들어, 이는 이의 코돈 사용에서 고도로 발현된 인간 유전자와 유사하다. 이러한 HIV 서열의 코돈 최적화는 WO 03/025003에 기술되어 있다.
예를 들어, 본 발명에 따른 아데노바이러스 벡터에서 Gag 및/또는 RT를 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 상기 논의된 바와 같이 최적화된 코돈일 수 있다.
본 발명에 따른 아데노바이러스 벡터중의 Gag 서열은 Gag p6 폴리펩티드 엔코딩 서열이 배제될 수 있다. 본 발명에 사용하기 위한 Gag 서열의 특정 예로는 p17 및/또는 p24 엔코딩 서열을 포함한다.
RT 서열은 임의의 역 전사효소 활성을 실질적으로 불활성화시키기 위한 변이체를 엔코딩할 수 있다. 한 특정 불활성 변이는 K (리신) 대신 W 트립토판 229로 치환하는 것을 포함한다 (WO 03/025003 참조).
RT 유전자는 상기 기술된 바와 같은 HIV 게놈에서 더 큰 Pol 유전자의 성분 이다. 본 발명에 따른 아데노바이러스 벡터에 포함된 RT 엔코딩 서열은 Pol, 또는 적어도 RT를 엔코딩하는 Pol 단편에 존재할 수 있다. Pol의 이러한 단편은 Pol의 주요 CTL 에피토프를 보유한다. 한 특이적 예에서, RT는 RT의 단지 p51 또는 단지 p66 단편으로서 포함된다.
선택적으로, 본 발명에 사용하기 위한 Nef 서열은 절두되어 N 말단 영역을 엔코딩하는 서열을 제거한다. 즉, 30 내지 85개 아미노산, 예를 들어, 60개 내지 85개 아미노산, 특히 N 말단 65개 아미노산이 제거된다 (이러한 후자의 절두는 trNef로서 본원에 나타내었음). 대안적으로 또는 추가적으로, Nef는 하나 이상의 미리스틸화 부위를 제거하도록 변형될 수 있다. 예를 들어, Gly 2 미리스틸화 부위는 결실 또는 치환에 의해 제거될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, Nef는 Leu 174 및 Leu 175의 디류신 모티프를 하나 또는 양 류신의 결실 또는 치환에 의해 변형시킴으로써 변화될 수 있다. CD4 하향조절에서 이류신 모티프의 중요성은 예를 들어, 문헌 [Bresnahan P.A. et al. (1998) Current Biology, 8(22): 1235-8]에 기술되어 있다.
본 발명에 따른 작제물은 Gag, Pol 및 Nef를 포함할 수 있으며, 여기서 이러한 천연 항원의 CTL 에피토프의 75% 이상, 또는 90% 이상, 또는 95% 이상, 예를 들어, 96%가 존재한다.
상기 기술된 바와 같이 p17/p24 Gag, p66 RT 및 절두된 Nef를 포함하는 본 발명에 따른 작제물에서, 천연 Gag Pol 및 Nef 항원의 CTL 에피토프의 96%가 존재한다.
본 발명의 일 구체예는 p17, p24 (최적화된) Gag, p66 RT (최적화된), 절두된 Nef (말단 아미노산 1-85를 엔코딩하는 누클레오티드 결실됨 - "trNef")를 Gag, RT, Nef의 순서로 포함하는 아데노바이러스 벡터를 제공한다.
본 발명에 따른 작제물은 하기를 포함한다:
1. p17, p24 (최적화된 코돈) Gag - p66 RT (최적화된 코돈) - 절두된 Nef;
2. 절두된 Nef - p66 RT (최적화된 코돈) - p17, p24 (최적화된 코돈) Gag;
3. 절두된 Nef - p17, p24 (최적화된 코돈) Gag - p66 RT (최적화된 코돈);
4. p66 RT (최적화된 코돈) - p17, p24 (최적화된 코돈) Gag - 절두된 Nef;
5. p66 RT (최적화된 코돈) - 절두된 Nef - p17, p24 (최적화된 코돈) Gag;
6. p17, p24 (최적화된 코돈) Gag - 절두된 Nef - p66 RT (최적화된 코돈).
본 발명의 폴리누클레오티드 또는 폴리누클레오티드들은 Gag, RT 및 Nef를 엔코딩하는 서열들 간에 존재하는 링커 서열을 가질 수 있다. 이러한 링커 서열은 예를 들어, 20개 이하의 아미노산 길이일 수 있다. 특정 예에서, 이들은 1 내지 10개 아미노산, 또는 1 내지 6개 아미노산 예를 들어, 2 내지 4개 아미노산일 수 있다.
본 발명의 폴리누클레오티드는 추가로, HIV 서열을 함유할 수 있다. 특히, 이들은 HIV env 단백질 또는 이의 면역원성 유도체 또는 면역원성 단편을 포함할 수 있다. 적합한 형태의 env는 gp120, gp140 및 gp160이다. 기타 적합한 HIV 서열은 비제한적으로, Tat, Rev, Vpu, Vpr 및 Vif를 포함한다. 이와 같이, 본 발명은 추가로, HIV 항원 RT, Nef 및 Gag 또는 이의 면역원성 유도체 또는 면역원성 단 편을 Gag, RT, Nef 순서로 엔코딩하는 폴리누클레오티드 또는 폴리누클레오티드들을 HIV env 단백질 또는 이의 면역원성 유도체 또는 면역원성 단편을 함께 포함하는 아데노바이러스 벡터를 제공한다.
또한, 본 발명은 하나 이상의 HIV 항원을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 또는 폴리누클레오티드들을 포함하는 제 2 아데노바이러스 벡터와 함께 본 발명에 따른 아데노바이러스 벡터를 포함하는 면역원성 조성물을 포함한다.
본 발명에 포함된 모든 HIV 서열에 있어서, 전장 길이 또는 천연 달백질을 엔코딩하는 서열을 나타낼 필요는 없음이 이해될 것이다. 면역원성 유도체 예컨대, 절두되거나 다르게 변형된 예를 들어, 변이된 단백질이 하나 이상의 HIV 에피토프 예를 들어, CTL 에피토프, 전형적으로 8개 이상의 아미노산의 펩티드를 엔코딩하는 단편으로서 또한, 고려된다. 8개 이상, 예를 들어, 8-10개 아미노산 길이 또는 20, 50, 60, 70, 100, 150 또는 200개 이하의 아미노산 길이의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는, 엔코딩된 올리고 또는 폴리펩티드가 HIV 항원성을 나타내는 한, 즉 주요 CTL 에피토프가 올리고 또는 폴리펩티드에 의해 보유되는 한 본 발명의 범위내에 속하는 것으로 간주된다. 주요 CTL 에피토프는 생체내에서 면역 반응을 유도할 수 있는 것으로서 본원에 정의되어 있다. 본 발명에 따른 폴리누클레오티드 서열에 의해 엔코딩된 HIV 폴리펩티드 분자는 천연 단백질 길이의 50% 이상의 단편을 나타낼 수 있으며, 이러한 단편은 변이부를 함유할 수 있으나, 하나 이상의 HIV 에피토프를 보유하여, HIV 항원성을 나타낸다. 이러한 HIV 항원성은 예를 들어, 항체 또는 세포-매개된 반응을 측정함으로써 측정될 수 있다. 유사하 게는, 본 발명에 따른 면역원성 유도체는 HIV 항원성을 나타내야 한다. 면역원성 유도체는 천연 단백질에 걸쳐 일부 잠재적 이점을 제공할 수 있으며 예컨대, 백신 항원에서 바람직하지 않은 천연 단백질의 작용 예컨대, 효소 활성 (RT) 또는 CD4 하향조절 (Nef)이 감소되거나 제거될 수 있다. 본원에 기술된 바와 같은 본 발명의 코돈 최적화 양태에 조화되어, 폴리누클레오티드 서열은 포유동물 세포에 대해 최적화된 코돈일 수 있다.
본 발명은 추가로, 하기 단계를 포함하여 본 발명에 따른 벡터를 제조하는 방법을 제공한다:
a) 아데노바이러스 벡터를 제공하는 단계;
b) 적합한 프로모터에 작동적으로 연결된 HIV 항원 서열을 수반하는 플라스미드를 제공하는 단계;
c) 플라스미드와 벡터 둘 모두로 세포를 트랜스펙션시키는 단계;
d) 재조합이 발생하기에 충분한 시간을 허용하는 단계; 및
e) HIV 항원 서열을 수반하는 재조합 바이러스 벡터를 회수하는 단계.
또 다른 양태에서, 본 발명은 적당량의 본 발명에 따른 면역원성 조성물을 포유동물에 투여하는 것을 포함하여, 포유동물에서 면역 반응을 유발시키는 방법을 제공한다.
본 발명은 특히, HIV-1에 관한 것일 수 있다. 본원에 기술된 작제물은 HIV 클레이드 예를 들어, 클레이드 B 또는 클레이드 C, 특히 클레이드 B로부터 유래될 수 있다.
본 발명에 따른 아데노바이러스 벡터에 사용하기 위한 프로모터는 HCMV IE 유전자로부터의 프로모터일 수 있으며, 예를 들어, WO 02/36792에 기술된 바와 같이 엑손 1을 포함하는 HCMV IE 유전자의 5' 비번역된 영역이 포함된다.
약제 조성물이 표적 세포를 형질도입시키는데 충분한 양으로 투여되어, 충분한 수준으로 유전자 트랜스퍼 및 발현이 일어나서, 과도한 부작용 없이 또는 의약적으로 허용되는 생리학적 효과를 갖는 치료학적 이점을 제공할 수 있으며, 상기 부작용 또는 효과는 의약 분야의 당업자에 의해 결정될 수 있다. 통상적이고 약제학적으로 허용되는 투여 경로는 비제한적으로, 망막으로의 적접 전달, 및 기타 안구 전달 방법, 간으로의 직접 전달, 흡입, 비내, 정맥내, 근내, 호흡관내, 피하내, 피부내, 직장, 경구 및 기타 비경구 투여 경로를 포함한다. 투여 경로는 필요에 따라, 복합될 수 있거나, 유전자 생성물 또는 조건에 따라 조절될 수 있다. 투여 경로는 주로 치료중인 질환의 특성에 의존적일 것이다.
바이러스 벡터의 투여량은 주로 치료중인 질환, 환자의 연령, 체중 및 건강 상태와 같은 인자에 의존적일 거싱며, 따라서 환자마다 다를 수 있다. 예를 들어, 성인 인간 또는 가축에 대한 바이러스 벡터의 치료학적 유효량은 일반적으로, 약 1 x 106 내지 약 1 x 1015 입자, 약 1 x 1011 내지 1 x 1013 입자, 또는 약 1 x 109 내지 1 x 1012 농도의 입자 바이러스를 함유하는 약 100㎕ 내지 약 100ml의 담체일 수 있다. 투여량은 동물의 크기 및 투여 경로에 따라 변화될 것이다. 예를 들어, 근내 주입에 적합한 인간 또는 가축 (예를 들어, 80kg 동물) 투여량은 단일 부위에 있어서, 약 1 x 109 내지 약 5 x 1012 입자의 범위이다. 선택적으로, 다중 투여 부위로 전달될 수 있다. 또 다른 예에서, 적합한 인간 또는 가축 투여량은 특히, 경구 제형에 있어서 약 1 x 1011 내지 약 1 x 1015의 범위일 수 있다. 당업자는 투여 경로, 및 재조합 벡터가 사용되는 치료학적 또는 백신 적용에 따라 이러한 투여량을 조절할 수 있다. 치료학적 생성물의 발현 수준, 또는 면역원에 있어서, 순환 항체의 수준을 모니터링하여 투여량 투여 빈도를 결정할 수 있다. 투여 빈도 시기를 결정하는 방법은 당업자에게 자명한 것일 것이다.
약제 조성물의 투여는 하나 또는 하나 초과의 개별 투여량 형태를 취할 수 있으며, 예를 들어, 동일한 폴리누클레오티드 함유 아데노바이러스의 반복 투여, 또는 이종의 "프라임-부스트 (prime-boost)" 백신접종 요법을 취할 수 있다. 이종성 프라임-부스트 요법은 프라임 및 부스트에서 상이한 형태의 백신 투여를 이용하며, 이들 각각 자체가 2회 또는 2회 초과의 투여를 포함한다. 프라이밍 조성물 및 부스팅 조성물은 공통의 하나 이상의 항원을 가질 것이며, 항원이 동일한 형태일 필요는 없으며, 다른 형태의 동일한 항원일 수 있다.
본 발명의 벡터를 사용한 프라임 부스트 요법은 이종성 DNA 및 아데노바이러스 벡터 프라임 부스트의 형태를 취할 수 있으며, 예를 들어, 네이키드 DNA 프라이밍 후 아데노바이러스 벡터 부스트, 또는 예를 들어, 아데노바이러스 벡터 프라임 후 하나 이상의 네이키드 DNA 부스트의 형태를 취할 수 있다. 이러한 DNA 부스트는 DNA의 근내 또는 피부내 투여, 또는 입자 가속 기법에 의해 전달될 수 있다. 대안적으로, 이러한 프라임 부스트 요법은 예를 들어, 단백질을 포함하는 프라임 용량 및 아데노바이러스 벡터를 포함하는 부스트 용량, 또는 아데노바이러스를 포함하는 프라임 용량 및 단백질을 포함하는 부스트 용량으로 본 발명에 따른 아데노바이러스 벡터 및 단백질을 포함할 수 있다.
실시예 1
E1/E3 결실된 Pan 6 및 7 아데노바이러스의 작제
1. 재조합 E1-결실된 SV-25 벡터의 생성
E1 결실되도록 조작된 것을 제외하고는 완전 SV-25를 함유하는 플라스미드를 작제하였다. E1 결실 부위에, 셔틀 플라스미드로부터 트랜스젠의 삽입을 허용하는 제한 효소 I-Ceul 및 PI-Scel에 대한 인지 부위를 삽입하였으며, 상기 플라스미드에서는 삽입된 상기 두 효소 인지 부위에 트랜스젠 발현 카세트가 플랭킹된다.
제한 부위 Swal-SanBl-Spel-Aflll-EcoRV-Swal를 함유하는 합성 링커를 pBR322로 클로닝하고, 이를 EcoRl 및 Ndel로 절단하였다. 이는 두개의 합성 올리고머 SV25T (5'-AAT TTA AAT ACG TAG CGC ACT AGT CGC GCT AAG CGC GGA TAT CAT TTA AA-3") 및 SV25B (5'-TAT TTA AAT GAT ATC CGC GCT TAA GCG CGA CTA GTG CGC TAC GTA TTT A-3')를 함께 어닐링시키고, 이를 EcoRl 및 Ndel 설계된 pBR322로 삽입하였다. Ad SV25의 왼쪽 말단 (bp1 내지 1057)을 SnaBl과 Spel 부위 사이의 상기 링커로 클로닝하였다. Ad SV25의 오른쪽 말단 (bp28059 내지 31042)은 Aflll 내지 EcoRV 부위 사이의 링커로 클로닝하였다. 그 후, 아데노바이러스 E1의 하기 와 같이 클로닝된 왼쪽 말단으로부터 EcoRl 부위 (bp 547) 내지 Xhol (bp 2031) 사이를 절제하였다. pShuttle (Clontech)로부터의 PCR 생성된 l-Ceul-Pl-Scel 카세트를 EcoRl 및 Spel 부위 사이에 삽입하였다. Ad SV-25 (bp 2031 내지 12185)의 10154 bp Xhol 단편을 Sepl 부위로 삽입하였다. 생성된 플라스미드를 Hindlll로 분해하고, 18344bp Ad SV-25 Hindlll 단편 (bp 11984 내지 30328)을 삽입하여 재조합 아데노바이러스의 생성에 적합한 E1 결실된 아데노바이러스 SV25의 완전 분자 클론을 생성시킴으로써 작제물 (pSV25)을 완성시켰다. 선택적으로, 목적하는 트랜스젠을 새로 생성된 pSV25 벡터 플라스미드의 l-Ceul과 PI-Scel 부위로 삽입하였다.
마커 유전자를 수반하는 AdSV25를 생성시키기 위해, 플라스미드 pShuttle (Clontech)에 이미 클로닝된 GFP (그린 형광 단백질) 발현 카세트를 제한 효소 l-Ceul 및 Pl-Scel로 절제하고, 이를 동일한 효소로 분해된 pSV25 (또는 본원에 기술된 또 다른 Ad chimp 플라스미드)에 결찰시켰다. 생성된 플라스미드 (pSV25GFP)를 Swal로 분해하여 박테리아 플라스미드 백본을 분리하고, E1 상보적 세포주 HEK 293으로 트랜스펙션시켰다. 약 10일 후, 복제 바이러스의 존재를 나타내는 세포병변 효과를 관찰하였다. GFP를 발현하는 Ad SV25 기재 아데노바이러스 벡터의 성공적 생성은 트랜스펙션된 배양물로부터의 상청액을 새로운 세포 배양물에 적용시킴으로써 확인하였다. 이차 감염된 세포의 존재는 세포 군집에서 그린 형광을 관찰함으로써 측정되었다.
2. E3 결실된 Pan-6 및 Pan-7 벡터의 작제
아데노바이러스 벡터의 클로닝 능력을 향상시키기 위해, E3 영역이 결실될 수 있는데, 이러한 영역은 배양시 바이러스의 증식에 불필요한 유전자를 엔코딩하기 때문이다. 이를 위해, Pan-5, Pan-6, Pan-7 및 C68의 E3-결실된 버젼을 제조하였다 (E31-9를 함유하는 3.5kb Nru-Avrll 단편이 결실됨).
Pan6 기재 벡터에서 E3 결실
E1-결실된 pPan6-pkGFP 분자 클론을 Sbf I 및 Not I로 분해하여 19.3kg 단편을 분리하여 Sbf I 부위로 다시 결찰시켰다. 생성된 작제물 pPan6-Sbf I-E3을 Eco47 III 및 Swa I로 처리하여, pPan6-E3을 생성시켰다. 최종적으로, pPan6-pkGFP의 Sbf I 분해로부터 21kb Sbf I 단편을 pPan6-E3으로 서브클로닝시켜 E3에서 4kb가 결실된 pPan6-E3-pkGFP를 생성시켰다.
E3 결실된 Pan7 벡터
동일한 방법을 이용하여 Pan7에서 E3을 결실시켰다. 먼저, E3 영역을 스패닝하는 5.8kb Avr II 단편을 pSL-1180에 서브클로닝하고, Nru I 분해에 의해 E3을 결실시켰다. 생성된 플라스미드를 Spe I 및 Avr II로 처리하여, 4.4kb 단편을 수득하고, Avr II 부위에서 pPan7-pkGFP로 클로닝하여, 각각 원래의 E3 함유 Avr II 단편을 대체하였다. 최종 pPan7-E3-pkGFP 작제물은 3.5kb E3-결실되었다.
이러한 및 기타 Pan 아데노바이러스 혈청형에서 E1, E3 및 E4 결실 작제물에 대한 전체적인 설명은 WO03/0046124에 제공되어 있다. 추가적인 정보는 또한, [Human Gene Therapy 15:519-530 (WO 03/046124)]에서 입수가능하다.
실시예 2
Gag, RT, Nef 서열의 작제
이는 WO03/025003에 전체적으로 기술되어 있다.
플라스미드 p73i-Tgrn
1. 플라스미드: p73i-GRN2 클론 #19 (p17/p24(opt)/RT(opt)trNef) - 복구됨
대상 유전자:
래빗 β-글로빈 폴리-아데닐화 시그널의 업스트림 및 Iowa 길이 HCMV 프로모터 + 엑손 1의 다운스트림의 HIV-1 클레이드 B 균주 HXB2로부터의 코돈 최적화된 Gag의 p17/p24 부분, 코돈 최적화된 RT 및 절두된 Nef 유전자.
플라스미드 p17/24trNef1으로부터 유래된 trNef 유전자를 함유하는 플라스미드는 Nef 말단으로부터 19번째 아미노산에서 R로부터 H로의 아미노산 변화를 제공하는 PCR 에러를 함유한다. 이는 PCR 변이유발에 의해 수정되며, 수정된 Nef PCR은 p7077-RT3으로부터 코돈 최적화된 RT로 스티치되며, 스티치된 단편은 Apal 및 BamHI로 절단되어, Apal/BamHl 절단 p73i-GRN으로 클로닝된다.
프라이머:
프라이머를 사용한 p7077-RT3으로부터의 PCR coRT:
(폴리머라아제 = PWO (Roche) 전반.
센스: U1
GAATTCGCGGCCGCGATGGGCCCCATCAGTCCCATCGAGACCGTGCCGGTGA
AGCTGAAACCCGGGAT
AScoRT-Nef
GGTGTGACTGGAAAACCCACCATCAGCACCTTTCTAATCCCCGC
사이클: 95℃(30s) 이어서, 20회 95℃(30s), 55℃(30s), 72℃(180s), 이어서 72℃(120s), 4℃ 유지.
1.7kb PCR 생성물을 겔 정제하였다.
프라이머를 사용한 p17/24trNef1로부터의 PCR 5' Nef
센스: S-Nef
ATGGTGGGTTTTCCAGTCACACC
안티센스: ASNef-G:
GATGAAATGCTAGGCGGCTGTCAAACCTC
사이클: 95℃(30s) 이어서, 15회 95℃(30s), 55℃(30s), 72℃(60s), 이어서 72℃(120s), 4℃ 유지.
프라이머를 사용한 p17/24trNef1로부터의 PCR 3' Nef:
센스: SNEF-G
GAGGTTTGACAGCCGCCTAGCATTTCATC
안티센스:
AStrNef (안티센스)
CGCGGATCCTCAGCAGTTCTTGAAGTACTCC
사이클: 95℃(30s) 이어서, 15회 95℃(30s), 55℃(30s), 72℃(60s), 이어서, 72℃(120s), 4℃ 유지.
PCR 생성물을 겔 정제하였다. 먼저, 두개의 Nef 생성물을 5' (S-Nef) 및 3' (AstrNef) 프라이머를 사용하여 스티치하였다.
사이클: 95℃(30s) 이어서, 15회 95℃(30s), 55℃(30s), 72℃(60s), 이어서 72℃(180s), 4℃ 유지.
PCR 생성물을 PCR 세정하고, U1 및 AstrNef 프라이머를 사용하여 RT 생성물로 스티치하였다:
사이클: 95℃(30s) 이어서, 20회 95℃(30s), 55℃(30s), 72℃(180s), 이어서 72℃(180s), 4℃ 유지.
2.1kb 생성물을 겔 정제하고, Apal 및 BamHl로 절단하였다. 플라스미드 p731-GRN을 Apa1 및 BamHl로 절단하고, 겔 정제하여, Apal-Bam RT3trNef로 결찰시켜 p17/p24(opt)/RT(opt)trNef 유전자를 재생성시켰다.
2. 플라스미드: p73l-RT w229k (불활성화된 RT)
대상 유전자:
래빗 β-글로빈 폴리-아데닐화 시그널의 업스트림, 및 Iowa 길이 HCMV 프로모터 + 엑손 1의 다운스트림의 불활성화된 RT 유전자 생성.
치료학적 백신에서 활성 HIV RT 종의 사용에 대한 우려로 인해, 유전자의 불활성화가 바람직하다. 이는 아미노산 위치 229번에서 Trp의 Lys로의 RT의 PCR 돌연변이에 의해 달성되었다 (R7271 p1-28).
프라이머:
프라이머를 사용한 변이 + PCR 5' RT:
(폴리머라아제 = PWO (Roche) 전체)
센스: RT3-u:1
GAATTCGCGGCCGCGATGGGCCCCATCAGTCCCATCGAGACCGTGCCGGTGA
AGCTGAAACCCGGGAT
안티센스: AScoRT-Trp229Lys
GGAGCTCGTAGCCCATCTTCAGGAATGGCGGCTCCTTCT
사이클:
1 x [94℃ (3Os)]
15 x [94℃ (30s)/55℃ (30s)/72℃ (60s)]
1 x [72℃ (18Os)]
PCR 겔 정제
프라이머를 사용한 변이 + PCR 3' RT:
안티센스: RT3- 1:1
GAATTCGGATCCTTACAGCACCTTTCTAATCCCCGCACTCACCAGCTTGTCGAC
CTGCTCGTTGCCGC
센스: ScoRT-Trp229Lys
CCTGAAGATGGGCTACGAGCTCCATG
사이클:
1 x [94℃ (3Os)]
15 x [94℃ (30s)/55℃ (30s)/72℃ (60s)]
1 x [72℃ (18Os)]
PCR 겔 정제
PCR 생성물을 겔 정제하고, 5' (RT3-U1) 및 3' (RT3-L1) 프라이머를 사용하여 RT의 5' 및 3' 말단을 스티칭하였다.
사이클:
1 x [94℃ (3Os)]
15 x [94℃ (30s)/55℃ (30s)/72℃ (12Os)]
1 x [72℃ (18Os)]
PCR 생성물을 겔 정제하고, Notl 및 BamHI 제한 부위를 이용하여 p7313ie로 클로닝시켜 p731-RT w229k을 생성시켰다. (도 13 참조)
3. 플라스미드: p73i-Tgrn
대상 유전자:
래빗 β-글로빈 폴리-아데닐화 시그널의 업스트림 및 Iowa 길이 HCMV 프로모터 + 엑손 1의 다운스트림의 HIV-1 클레이드 B 균주 HXB2로부터의 코돈 최적화된 gag의 p17/p24 부분, 코돈 최적화된 RT 및 절두된 Nef 유전자.
활성 형태의 RT를 함유하는 삼중 융합 작제물은 인간에 대한 사용 규제에 맞지 않을 수 있으며, 따라서, RT의 불활성화가 p73i-RT w229k로부터 Nhel 및 Apal 절단 단편의 Nhel/Apal 절단 p73i-GRN2#19로의 삽입에 의해 달성되었다 (도 14). 이는 RT의 위치 229번에서 W →K 변화를 유도한다.
Tgrn 플라스미드 삽입물의 전체 서열이 도 7에 도시되어 있다. 이는 p17 p24 (opt) Gag, p66 RT (opt 및 불활성화됨) 및 절두된 Nef를 함유한다.
Gag, RT 및 Nef의 대안적 작제물은 다음과 같다:
trNef - p66 RT (opt) - p17, p24 (opt) Gag,
trNef - p17, p24 (opt) Gag - p66 RT (opt),
p66 RT (opt) - p 17, p24 (opt) Gag - trNef,
p66 RT (opt) - trNef - p17, p24 (opt) Gag,
p17 , p24 (opt) Gag - trNef - p66 RT (opt).
이들 작제물에 대한 전체 서열은 각각 도 8 내지 12에 제공되었다.
실시예 3
아데노바이러스로의 Gag, RT, Nef 서열의 삽입
GRN 발현 카세트의 pShuttle 플라스미드로의 서브클로닝.
프로모터, cDNA 및 폴리아데닐화 시그널로 이루어진 전체 발현 카세트를 SphI 및 EcoR1 이중 분해에 의해 pT-GRN 작제물로부터 분리하였다. Sph I/EcoR I 단편의 Sph I 말단을 클레노우 (Klenow)로 충전시키고, Mlu I 말단이 블런팅된 EcoR I 및 Mlu I 부위에서 pShuttle 플라스미드로 클로닝시켰다.
클로닝 과정 동안, 추가적인 플랭킹 서열은 HIV 발현 카세트와 결합된다. 이러한 서열은 Cer 서열로서 공지되어 있으며, 기능은 밝혀지지 않았다.
GRN 발현 카세트의 Pan6 및 Pan7 벡터의 E1/E3-결실된 분자 클론으로의 트랜스퍼
발현 카세트를 I-Ceu I 및 Pl-Sce I 분해에 의해 pShuttle로부터 복구시키고, Pan6 및 Pan7 벡터의 분자 클론의 동일한 부위로 클로닝하였다. 재조합 클론 을 그린/화이트 선택을 통해 확인하고, 광범위한 제한 효소 검정에 의해 확인하였다.
재조합 바이러스의 보호 및 증식
C6 및 C7 벡터의 분자 클론을 적합한 제한 엔도누클레아제 (각각 Pmel 및 Pacl)로 처리하여 완전한 선형 벡터 게놈을 방출시키고, 인산칼슘 방법을 이용하여 293 세포로 트랜스펙션시켰다. 전체 세포병변 효과가 트랜스펙션된 세포에서 관찰되는 경우, 미가공 바이러스 용해물을 채취하고, 점차적으로 293 세포에서 큰 스케일 감염으로 확장시켰다 (1x10e9 세포). 큰 스케일 감염물로부터의 바이러스를 표준 CsCl 침강법에 의해 정제하였다.
또한, pShuttle 플라스미드는 EcoRI 및 Xmnl으로 절단되어 추가로 트리밍되어 3' 링커 서열을 제거하고, 플라스미드 크기를 감소시켜 pShuttleGRNc를 생성시킬 수 있다. 이러한 변형된 플라스미드를 사용하여 상기 기술된 방법을 이용하여 추가적인 Pan7 바이러스 (C7-GRNc)를 생성시킬 수 있다.
기타 작제물이 유사하게, Pan 6 및 Pan 7 아데노바이러스 모두에 삽입되었다. 그러나, p66 RT (opt) - trNef - p17, p24 (opt) Gag 삽입물을 갖는 Pan 6은 성공적으로 생성되지 않았다.
실시예 4.
마우스 면역원성 모델
HIV 항원 RT, Nef 및 Gag (RGN, NRG, NGR, GRN, 및 GNR)의 재배열된 삽입물을 함유하는 일련의 Pan6 및 Pan7 벡터를 생체내 일차 면역 반응에 시험하였다. 3 번 실험을 수행하여 Pan6 바이러스 및 Pan7에 대한 두개 바이러스를 시험하였다. 각각의 아데노바이러스를 50㎕ 부피로 Balb/c (K2d) 마우스의 한쪽 뒷다리에 1x108 입자의 용량으로 근내 투여하였다. 종래에 우수한 수준의 세포 면역 반응을 유도하는 것으로 입증된 것이므로 (비공개) 이러한 용량이 선택되었다.
표 1은 이들 실험에서 비교한 아데노바이러스의 개요이다.
표 1
Figure 112007089432737-PCT00001
Gag, Nef 및 RT에서의 특이적 에피토프에 대한 펩티드 또는 단백질로의 실험관내 자극 후, CD8 및 CD4 반응의 생성을 프라임 후 14일 및 28일에 ELIspot에의해 측정하였다. 결과는, 빈 벡터 대조군(데이타 미도시됨)과 비교하여, 모든 변이체 가 IFNγ 및 IL-2 모두를 생성시킴으로써 측정된 바와 같이 잠재적인 일차 면역 반응을 유도할 수 있음을 입증한다.
이러한 연구로부터의 데이타를 통계학적으로 분석하여 (변형된 혼합된 검정을 이용, (ANOVA) in Proc Mixed in SAS (version 9.1.3 Servie Pack2)), 별도의 시점에서 Pan6 및 Pan7에서 RNG 변이체의 랭킹을 측정하였다. IFNγ 생성에 대한 CD8 펩티드에 대한 전체 반응을 Gag 및 RT에 대해 정량화하고, IL-2 ELIspot 데이타를 Gag, Nef 및 RT에 대한 CD4 펩티드에 대한 전체적인 반응에 대해 평가하였다.
변이체 패널의 랭킹을 베이시안 모델 (Bayesian model (performed using the Prior statement in Proc Mixed with a flat prior generating 100,000 posterior samples; see Tierney, L. (1994), "Markov Chains for Exploring Posterior Distributions" (with discussion), and Annals of Statistics, 22, 1701 - 1762. Gelfand, A.E., Hills, S.E., Racine-Poon, A., and Smith, A.F.M. (1990), "Illustration of Bayesian Inference in Normal Data Models Using Gibbs Sampling," Journal of the American Statistical Association, 85, 972 - 985)을 이용하여 계산하여, 조사된 실험 조건에 의해 제공된 데이타에 기초하여 "최고"로서의 변이체 각각의 확율을 예측하였다.
도 1은 베이시안 방법에 의해 예측된 바와 같은 14일 및 28일에 각각의 펩티드로의 IFNγ 및 IL-2에 대한 전체 Pan6 CD4 및 CD8 반응을 나타낸다.
도 2는 베이시안 방법에 의해 예측된 바와 같은 1일 및 28일에 각각의 펩티드로의 IFNγ 및 IL-2에 대한 전체 Pan7 CD4 및 CD8 반응을 나타낸다.
모든 삽입물은 빈 벡터 대조군과 비교하여 면역 반응에서 현저한 증가를 보여준다. 통계학적 검정은, 상이한 바이러스 간에 현저한 차이는 없는 것으로 나타냈다.
실시예 5
피그 면역원성 모델
여러 연구로부터의 결과는, 피그가 후보 백신의 면역원성을 시험하는데 우수한 모델이라는 것을 나타낸다. 4개의 후보 NHP 아데노바이러스의 면역원성을 미니피그에서 조사하기 위해 연구에 착수하였다. 5마리 미니피그 군을 PAN6GRN, PAN6NGR, PAN7GRN 또는 PAN7NGR (사용된 배치의 더욱 상세한 내역은 표 2 참조)로 프라이밍시켰다. 각각의 동물에 아데노바이러스의 3 x 1010 바이러스 입자를 근내 투여하였다 (중앙 넓적다리 근육의 동일하게 나눈 부분에 1.0ml 부피 이용).
표 2. 미니피그 실험에 사용된 NHP 아데노바이러스의 배치
Figure 112007089432737-PCT00002
혈액 샘플을 매 동물마다 면역화전에 수집하고, 면역 후 간격을 두고 수집하였다. 말초혈액 단핵 세포를 분리하고, 실험관내에서 RT, Nef 및 Gag 펩티드 라이브러리 풀 및 단백질로 재자극하였다. 펩티드 라이브러리 풀은 전체 RT, Nef 및 Gag 서열에 걸친 11개 아미노산에 의해 중복되는 15-mer 펩티드로 이루어지며, 생체내 마우스 실험에 사용된 것과 동일하다.
이러한 포르신 세포 (porcine cell)에 의한 인터페론-감마의 생성은 ELIspot 검정을 이용하여 측정되었다. 도 3은 4개의 샘플링 시점에서 RT, Nef 및 Gag 펩티드 라이브러리 풀에 대한 반응을 보여준다.
반응을 면역화 후 7일에 모든 4개 바이러스에 대해 검출하였다. 모든 4개의 NHP 바이러스에 대한 세포 반응은 일차 면역화 후 적어도 5주까지 유지된다. PAN6-GRN은 IFN-감마 ELIspot에 의해 일차 면역화 후 7일에 가장 강한 반응을 나타낸 것으로 확인되었다.
실시예 6
영장류 면역원성 모델
영장류 파일롯 연구로부터의 결과는, RT, Nef 및 Gag를 발현하는 NHP 아데노바이러스의 근내 주입은 키노몰구스 원숭이에서 세포 면역 반응을 유도하였다.
키노몰구스 원숭이에서 4개 후보의 NHP 아데노바이러스의 면역원성을 평가하기 위한 연구에 착수하였다. 동물 군을 PAN6-GRN, PAN6-NGR, PAN7-GRN 또는 PAN7-NGR로 프라이밍시켰다 (바이러스 배치에 대한 더욱 상세한 내역은 표 3 참조). 각 각 동물에 근내 경로를 통해 아데노바이러스의 전체 1011 바이러스 입자를 주입하였다 (각 중앙 넓적다리 근육의 균일하게 나눈 부위에 1.0ml 부피 사용).
표 3. 영장류 실험에 사용된 NHP 아데노바이러스의 배치
Figure 112007089432737-PCT00003
혈액 샘플을 면역화전 및 그 후 주마다 간격을 두고 수집하였다. 말초혈액 단핵 세포를 분리하고, RT, Nef 및 Gag 펩티드 라이브러리 풀로 실험관내에서 재자극하였다. 이러한 영장류 세포에 의한 인터페론-감마의 생성을 ELIspot 검정법을 사용하여 측정하였다. 도 4는 3개의 샘플링 시점에서 각 군의 반응을 나타낸다.
결과는, 모든 군이 일차 면역화 후 일주에 강하게 반응하였으며, 면역화 후 적어도 7주까지 반응이 유지되었음을 보여준다. 결과는, 이러한 용량 (즉, 1011 입자)으로 영장류에서 사용할 경우 벡터간에 차이가 거의 없다.
실시예 7
근내 전달(i.m.)된 HIV GRN을 엔코딩하는 다양한 투여량의 NHP 아데노바이러스에 대한 일차 면역화 후 면역 반응.
일차 면역화 후 아데노바이러스 투여량 영향을 측정하기 위해, 마우스 군 (n=5)을 NHP 아데노바이러스의 투여량을 증가시키면서 근내 (i.m.) 면역화시켰다 (107로부터 1010 입자). 파지티브 대조군으로서, 동물 군을 입자 매개된 상피 전달 (ND5)을 이용하여 DNA (2㎍)에 의해 면역화시켰다. 면역화 후 6일 및 19일에, 동물을 비장을 제거하였다. 비장세포를 밤새 자극하는 항원 (GAG 및 RT) 각각에 대한 펩티드 라이브러리 풀을 사용하여 IFN-γ ELISPOT 검정에 의해 면역반응을 모니터링하였다. 도 5는 두 샘플링 시점에서 각 군의 반응을 나타낸다.
실시예 8
피부내 (i.d.) 전달된 HIV GRN 항원을 엔코딩하는 투여량 범위의 NHP 아데노바이러스의 일차 면역화후의 면역 반응.
일차 면역화에서 아데노바이러스의 투여량 효과를 평가하기 위해, 마우스 군 (n=5)을 NHP 아데노바이러스의 투여량을 증가시키면서 피부내 (i.d.) 면역화시켰다 (107로부터 1010 입자). 파지티브 대조군으로서, 동물 군을 입자 매개된 상피 전달 (PMED)을 이용하여 DNA (1㎍)에 의해 면역화시켰다. 면역화 후 7일 및 14일에, 동물을 비장을 제거하였다. 면역 반응을 IFN-γ ELISPOT 검정에 의해 모니터링하였다. 비장세포를 CD 또는 CD8 T-세포를 특이적으로 자극하는 항원 (GAG 및 RT) 각각에 대한 널리 규정된 펩티드를 사용하여 밤새 자극하였다. 도 6은 두 샘플링 시점에서 각 군의 반응을 나타낸다.
이러한 결과는, i-m 및 i-d가 본 발명의 조성물의 효과적인 투여 경로임을 시사한다.
도면의 설명
도 1. Pan6 HIV 아데노바이러스의 랭킹. 이는 베이시안 방법에 의해 예측된 바와 같은 14일 및 28일에 각각의 펩티드를 갖는 IFNν 및 IL-2에 대한 전체적인 Pan6 CD4 및 CD8 반응을 나타낸다.
도 2. Pan7 HIV 아데노바이러스의 랭킹. 이는 베이시안 방법에 의해 예측된 바와 같은 14일 및 28일에 각각의 펩티드를 갖는 IFNν 및 IL-2에 대한 전체적인 Pan7 CD4 및 CD8 반응을 나타낸다.
도 3. 일차 면역화 후 0, 1, 3 및 5주에 RT, Nef 및 Gag 펩티드 라이브러리 풀에 대한 미니피그의 반응. 결과는 각 동물에 있어서 각 펩티드 라이브러리 풀에 대한 전체 반응의 평균 ± 표준 편차이다. 데이타는 펜실버니아 대학으로부터 수득하였다.
도 4. 일차 면역화 후 0, 1 및 2주에 RT, Nef 및 Gag 펩티드 라이브러리 풀에 대한 영장류의 반응. 결과는 각 동물에 있어서 각 펩티드 라이브러리 풀에 대한 전체 반응의 평균 ± 표준 편차이다.
도 5. 근내(i.m.) 전달된 HIV GRN 항원을 엔코딩하는 다양한 투여량 범위의 NHP 아데노바이러스에 대한 일차 면역화 후의 면역 반응. 마우스 군 (n=5)을 다양한 투여량의 NHP 아데노바이러스 (107 내지 1010 입자)로 면역화시키고, 각 항원에 대한 펩티드 라이브러리 풀에 대한 세포 면역 반응을 IFN-ν ELISPOT 검정을 이용 하여 모니터링하였다 (6일 및 19일).
도 6. 피부내(i.d.) 전달된 HIV GRN 항원을 엔코딩하는 다양한 투여량 범위의 NHP 아데노바이러스에 대한 일차 면역화 후의 면역 반응. 마우스 군 (n=3)을 다양한 투여량의 NHP 아데노바이러스 (107 내지 1010 입자)로 면역화시키고, 특정 펩티드에 대한 세포 면역 반응을 IFN-ν ELISPOT 검정을 이용하여 모니터링하였다 (7일 및 14일).
도 7 내지 12. 실시예 2에 기술된 작제물에 대한 폴리누클레오티드 서열, 아미노산 서열 및 제한 맵.
서열에 대한 더욱 상세한 내역은 표 4에 기재되어 있다.
표 4
아미노산 또는 폴리누클레오티드 설명 서열 (SEQ ID NO)
Tgrn 폴리누클레오티드 1
Tgrn 아미노산 2
Tnrg 폴리누클레오티드 3
Tnrg 아미노산 4
Tngr 폴리누클레오티드 5
Tngr 아미노산 6
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SEQUENCE LISTING <110> ERTL, Peter Franz TITE, John Philip VAN WELY, Catherine Ann <120> Vaccine Composition <130> VB61409 <160> 12 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 3204 <212> DNA <213> Homo Sapiens <400> 1 atgggtgccc gagcttcggt actgtctggt ggagagctgg acagatggga gaaaattagg 60 ctgcgcccgg gaggcaaaaa gaaatacaag ctcaagcata tcgtgtgggc ctcgagggag 120 cttgaacggt ttgccgtgaa cccaggcctg ctggaaacat ctgagggatg tcgccagatc 180 ctggggcaat tgcagccatc cctccagacc gggagtgaag agctgaggtc cttgtataac 240 acagtggcta ccctctactg cgtacaccag aggatcgaga ttaaggatac caaggaggcc 300 ttggacaaaa ttgaggagga gcaaaacaag agcaagaaga aggcccagca ggcagctgct 360 gacactgggc atagcaacca ggtatcacag aactatccta ttgtccaaaa cattcagggc 420 cagatggttc atcaggccat cagcccccgg acgctcaatg cctgggtgaa ggttgtcgaa 480 gagaaggcct tttctcctga ggttatcccc atgttctccg ctttgagtga gggggccact 540 cctcaggacc tcaatacaat gcttaatacc gtgggcggcc atcaggccgc catgcaaatg 600 ttgaaggaga ctatcaacga ggaggcagcc gagtgggaca gagtgcatcc cgtccacgct 660 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Thr Gln 580 585 590 Asp Phe Trp Glu Val Gln Leu Gly Ile Pro His Pro Ala Gly Leu Lys 595 600 605 Lys Lys Lys Ser Val Thr Val Leu Asp Val Gly Asp Ala Tyr Phe Ser 610 615 620 Val Pro Leu Asp Glu Asp Phe Arg Lys Tyr Thr Ala Phe Thr Ile Pro 625 630 635 640 Ser Ile Asn Asn Glu Thr Pro Gly Ile Arg Tyr Gln Tyr Asn Val Leu 645 650 655 Pro Gln Gly Trp Lys Gly Ser Pro Ala Ile Phe Gln Ser Ser Met Thr 660 665 670 Lys Ile Leu Glu Pro Phe Arg Lys Gln Asn Pro Asp Ile Val Ile Tyr 675 680 685 Gln Tyr Met Asp Asp Leu Tyr Val Gly Ser Asp Leu Glu Ile Gly Gln 690 695 700 His Arg Thr Lys Ile Glu Glu Leu Arg Gln His Leu Leu Arg Trp Gly 705 710 715 720 Leu Thr Thr Pro Asp Lys Lys His Gln Lys Glu Pro Pro Phe Leu Lys 725 730 735 Met Gly Tyr Glu Leu His Pro Asp Lys Trp Thr Val Gln Pro Ile Val 740 745 750 Leu Pro Glu Lys Asp Ser Trp Thr Val Asn Asp Ile Gln Lys Leu Val 755 760 765 Gly Lys Leu Asn Trp Ala Ser Gln Ile Tyr Pro Gly Ile Lys Val Arg 770 775 780 Gln Leu Cys Lys Leu Leu Arg Gly Thr Lys Ala Leu Thr Glu Val Ile 785 790 795 800 Pro Leu Thr Glu Glu Ala Glu Leu Glu Leu Ala Glu Asn Arg Glu Ile 805 810 815 Leu Lys Glu Pro Val His Gly Val Tyr Tyr Asp Pro Ser Lys Asp Leu 820 825 830 Ile Ala Glu Ile Gln Lys Gln Gly Gln Gly Gln Trp Thr Tyr Gln Ile 835 840 845 Tyr Gln Glu Pro Phe Lys Asn Leu Lys Thr Gly Lys Tyr Ala Arg Met 850 855 860 Arg Gly Ala His Thr Asn Asp Val Lys Gln Leu Thr Glu Ala Val Gln 865 870 875 880 Lys Ile Thr Thr Glu Ser Ile Val Ile Trp Gly Lys Thr Pro Lys Phe 885 890 895 Lys Leu Pro Ile Gln Lys Glu Thr Trp Glu Thr Trp Trp Thr Glu Tyr 900 905 910 Trp Gln Ala Thr Trp Ile Pro Glu Trp Glu Phe Val Asn Thr Pro Pro 915 920 925 Leu Val Lys Leu Trp Tyr Gln Leu Glu Lys Glu Pro Ile Val Gly Ala 930 935 940 Glu Thr Phe Tyr Val Asp Gly Ala Ala Asn Arg Glu Thr Lys Leu Gly 945 950 955 960 Lys Ala Gly Tyr Val Thr Asn Arg Gly Arg Gln Lys Val Val Thr Leu 965 970 975 Thr Asp Thr Thr Asn Gln Lys Thr Glu Leu Gln Ala Ile Tyr Leu Ala 980 985 990 Leu Gln Asp Ser Gly Leu Glu Val Asn Ile Val Thr Asp Ser Gln Tyr 995 1000 1005 Ala Leu Gly Ile Ile Gln Ala Gln Pro Asp Gln Ser Glu Ser Glu Leu 1010 1015 1020 Val Asn Gln Ile Ile Glu Gln Leu Ile Lys Lys Glu Lys Val Tyr Leu 1025 1030 1035 1040 Ala Trp Val Pro Ala His Lys Gly Ile Gly Gly Asn Glu Gln Val Asp 1045 1050 1055 Lys Leu Val Ser Ala Gly Ile Arg Lys Val Leu 1060 1065

Claims (21)

  1. Gag, RT, Nef 순서로 전사되도록 배열된, 적어도 HIV 항원 RT, Nef 및 Gag 또는 이의 면역원성 유도체 또는 면역원성 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 또는 폴리누클레오티드들을 포함하는 아데노바이러스 벡터.
  2. 제 1항에 있어서, RT가 절두된 아데노바이러스 벡터.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, Nef가 절두된 아데노바이러스 벡터.
  4. 제 1항 내지 제 3항중의 어느 한 항에 있어서, Gag가 단지 p17 및 p24인 아데노바이러스 벡터.
  5. 제 1항 내지 제 4항중의 어느 한 항에 있어서, HIV 폴리누클레오티드 또는 폴리누클레오티드들의 크기가, 벡터의 전체 크기가 바이러스 크기의 90 내지 100%가 되게 하는 크기인 아데노바이러스 벡터.
  6. 제 1항 내지 제 5항중의 어느 한 항에 있어서, 바이러스가 인간외 영장류 아데노바이러스인 아데노바이러스 벡터.
  7. 제 6항에 있어서, 바이러스가 침팬지 아데노바이러스인 아데노바이러스 벡터.
  8. 제 7항에 있어서, 아데노바이러스가 pan 5, 6, 7 및 9로부터 선택된 아데노바이러스 벡터.
  9. 제 8항에 있어서, 아데노바이러스가 pan 6인 아데노바이러스 벡터.
  10. 제 8항에 있어서, 아데노바이러스가 pan 7인 아데노바이러스 벡터.
  11. 제 1항 내지 제 10항중의 어느 한 항에 있어서, 바이러스가 복제 결함인 아데노바이러스 벡터.
  12. 제 1항 내지 제 11항중의 어느 한 항에 있어서, 바이러스가 E1 및 E3 영역 결여된 아데노바이러스 벡터.
  13. 제 1항 내지 제 12항중의 어느 한 항에 있어서, HIV 항원을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열이 융합물로서 배열된 아데노바이러스 벡터.
  14. 하기 폴리누클레오티드 작제물중 하나를 포함하는 침팬지 아데노바이러스 벡 터:
    p17, p24 (코돈 최적화됨) Gag - p66 RT (코돈 최적화됨) - 절두된Nef; 절두된Nef - p66 RT (코돈 최적화됨) - p17, p24 (코돈 최적화됨) Gag; 절두된Nef - p17, p24 (코돈 최적화됨) Gag - p66 RT (코돈 최적화됨); p66 RT (코돈 최적화됨) - p17, p24 (코돈 최적화됨) Gag - 절두된Nef; p66 RT (코돈 최적화됨) - 절두된Nef - p17, p24 (코돈 최적화됨) Gag; p17 , p24 (코돈 최적화됨) Gag - 절두된Nef - p66 RT (코돈 최적화됨).
  15. 제 14항에 있어서, 아데노바이러스가 Pan 6 또는 Pan 7이며, 단 아데노바이러스가 Pan 6인 경우, 작제물은 p66 RT (opt) - trNef - p17, p24 (opt) Gag가 아닌 아데노바이러스 벡터.
  16. 제 1항 내지 제 15항중의 어느 한 항에 따른 바이러스 벡터 및 약제학적으로 허용되는 담체 또는 애쥬번트를 포함하는 면역원성 조성물.
  17. HIV 감염의 치료 또는 예방을 위한 약물 제조시 제 1항 내지 제 15항중의 어느 한 항에 따른 아데노바이러스 벡터의 용도.
  18. a) 아데노바이러스 벡터를 제공하는 단계;
    b) 적합한 프로모터에 작동적으로 연결된 HIV 항원 서열을 수반하는 플라스 미드를 제공하는 단계;
    c) 플라스미드와 벡터 둘 모두로 세포를 트랜스펙션시키는 단계;
    d) 재조합이 발생하기에 충분한 시간을 허용하는 단계; 및
    e) HIV 항원 서열을 수반하는 재조합 바이러스 벡터를 회수하는 단계를 포함하여, 제 1항 내지 제 15항중의 어느 한 항에 따른 벡터를 제조하는 방법.
  19. 충분량의 제 16항에 따른 면역원성 조성물을 포유동물에 투여하는 것을 포함하여, 포유동물에서 면역 반응을 증강시키는 방법.
  20. 제 1항 내지 제 15항중의 어느 한 항에 따른 벡터에 의해 발현된 융합 단백질.
  21. 제 20항에 있어서, 인체내에서 생성되는 융합 단백질.
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Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG2013034475A (en) 2001-11-21 2016-10-28 Univ Pennsylvania Simian adenovirus nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use
WO2008027394A2 (en) 2006-08-28 2008-03-06 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Constructs for enhancing immune responses
EP2137210B1 (en) 2007-03-02 2016-10-19 GlaxoSmithKline Biologicals SA Novel method and compositions
US9717788B2 (en) 2007-03-02 2017-08-01 Glaxosmithkline Biologicals Sa Method of inducing an immune response against HIV employing HIV immunogens, adenoviral vectors encoding said immunogens, and adjuvant
BRPI0822651A2 (pt) 2007-11-28 2014-10-14 Univ Pennsylvania Subfamília b de adenovírus sadv-28, -27, 29, -32, -33 e -35 de símio e seus usos
MX347246B (es) 2007-11-28 2017-04-19 Univ Pennsylvania Adenovirus e simianos sadv-39, sadv-25.2, sadv-26, sadv-30, sadv-37 y sadv-38.
US8470310B2 (en) 2008-03-04 2013-06-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Simian adenoviruses SAdV-36, -42.1, -42.2, and -44 and uses thereof
EP3173096A1 (en) 2011-04-06 2017-05-31 Biovaxim Limited Pharmaceutical compositions for preventing and/or treating an hiv disease in humans
DK2825640T3 (en) 2012-03-12 2016-08-01 Crucell Holland Bv BATCHES OF RECOMBINANT ADENOVIRUS WITH CHANGED TERMINAL END
US8932607B2 (en) 2012-03-12 2015-01-13 Crucell Holland B.V. Batches of recombinant adenovirus with altered terminal ends
KR20150014505A (ko) 2012-05-18 2015-02-06 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 아과 e 원숭이 아데노바이러스 a1302, a1320, a1331 및 a1337 및 이것들의 사용
US9624510B2 (en) 2013-03-01 2017-04-18 The Wistar Institute Adenoviral vectors comprising partial deletions of E3
CN111499733A (zh) * 2013-03-14 2020-08-07 美国安进公司 三型金属蛋白酶（timp-3）组织抑制剂的变体、组合物和方法
US20180052173A1 (en) 2015-03-18 2018-02-22 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Assays for recombinant expression systems
AU2016249798B2 (en) 2015-04-14 2022-05-26 Janssen Vaccines And Prevention B.V. Recombinant adenovirus expressing two transgenes with a bidirectional promoter
MX2017016105A (es) * 2015-06-12 2018-05-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa Polinucleotidos y polipeptidos de adenovirus.
WO2017011336A1 (en) 2015-07-10 2017-01-19 E.&J. Gallo Winery System and method for dispensing a beverage
AU2017264562B2 (en) 2016-05-12 2023-03-09 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Potent and balanced bidirectional promoter
EP3472327B1 (en) 2016-06-20 2020-08-19 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Potent and balanced bidirectional promoter
AU2017305176B2 (en) 2016-08-01 2021-05-27 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Compositions and methods of replication deficient adenoviral vectors for vaccine applications
JP6721797B2 (ja) 2017-02-09 2020-07-15 ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェーＪａｎｓｓｅｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ＆ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ Ｂ．Ｖ． 異種遺伝子発現のための強力で短いプロモーター

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6083716A (en) * 1996-09-06 2000-07-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Chimpanzee adenovirus vectors
CA2422882A1 (en) * 2000-09-15 2002-03-21 Merck & Co., Inc. Enhanced first generation adenovirus vaccines expressing codon optimized hiv1-gag, pol, nef and modifications
US6733993B2 (en) * 2000-09-15 2004-05-11 Merck & Co., Inc. Enhanced first generation adenovirus vaccines expressing codon optimized HIV1-gag, pol, nef and modifications
US20040241181A1 (en) * 2001-06-22 2004-12-02 Ertl Hildeghund C. J. Methods of inducing a cytotoxic immune response and recormbinant simian adenovirus compositions useful therein
AU2002362368B2 (en) * 2001-09-20 2006-09-21 Glaxo Group Limited HIV-gag codon-optimised DNA vaccines
GB0225786D0 (en) * 2002-11-05 2002-12-11 Glaxo Group Ltd Vaccine
GB0225788D0 (en) * 2002-11-05 2002-12-11 Glaxo Group Ltd Vaccine
EP1682666B1 (en) * 2003-09-24 2008-12-31 Oxxon Therapeutics Limited HIV Pharmaceutical vaccines
GB2406336A (en) * 2003-09-24 2005-03-30 Oxxon Pharmaccines Ltd HIV Pharmaccines
GB0417494D0 (en) * 2004-08-05 2004-09-08 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine

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