KR20080003337A - 백혈구 부피 측정 계산를 위한 방법, 장치 및 시스템 - Google Patents

백혈구 부피 측정 계산를 위한 방법, 장치 및 시스템 Download PDF

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Abstract

혈액 샘플 내에서 백혈구 부피 측정 계산를 위한 샘플 획득 장치를 제공한다. 샘플 획득 장치는 혈액 샘플을 수용하기 위한 측정 캐비티를 포함한다. 측정 캐비티는 미리 정해진 고정된 두께를 갖는다. 샘플 획득 장치는 시약을 더 포함하며, 이는 측정 캐비티를 한정하는 표면 상에서 건조된 형태로 이루어지며, 상기 시약은 혈액 샘플 내에서 적혈구를 용해하기 위한 용혈제 및 혈액 샘플 내에서 백혈구를 선택적으로 염색하기 위한 염색제를 포함한다. 시스템은 샘플 획득 장치 및 측정 기기를 포함한다. 측정 기기는 샘플 획득 장치 홀더, 광공급원 및 샘플의 확대된 디지털 이미지를 획득하기 위한 이미징 시스템을 포함한다. 측정 기기는 이미지 분석기를 더 포함하며, 이는 혈액 샘플 내의 백혈구 개수를 결정하도록 획득된 디지털 이미지를 분석하도록 이루어진다.

Description

백혈구 부피 측정 계산를 위한 방법, 장치 및 시스템{A METHOD, DEVICE AND SYSTEM FOR VOLUMETRIC ENUMERATION OF WHITE BLOOD CELLS}
본 발명은 혈액 샘플 내에서 백혈구 부피 측정 계산(volumetric enumeration)를 위한 샘플 획득 장치, 방법 및 시스템에 관한 것이다.
백혈구 개수를 결정하는 것은 환자 치료를 위해 종종 중요하다. 이러한 분석은, 예를 들어 백혈병 또는 전염성이나 염증성 질병 여부의 분석 또는 치료 모니터링에 필요할 수 있다. 의사가 환자의 첫 진찰시 직접 분석하고 치료를 결정하게 하고 환자의 대기 시간을 최소화하도록 가능한 빠르게 분석 결과를 획득하는 것이 바람직하다. 따라서, 멀리 연구실에 테스트를 보낼 필요 없이 의사 또는 간호사에 의해 빠르게 수행될 수 있는 분석 방법을 제공하는 것이 바람직하다.
오늘날, 일반적으로 혈액 샘플을 염색하고 예를 들어 뷰커 챔버(Burker chamber)와 같은 특별한 계수 챔버(counting chamber) 내에서 샘플을 현미경 관찰하는 수작업 프로시져를 통해 백혈구의 개수를 획득한다. 계수 챔버에는, 정의된 작은 부피 내에서 챔버를 나누는 격자(gird)가 제공된다. 챔버 내에서 모든 세포 에 현미경 포커싱이 가능하고 이에 따라 계수가 용이하도록 계수 챔버의 바닥부에 백혈구가 안착(settle)한다. 따라서, 샘플은 계수를 수행하기 전에 몇 분 동안 안착할 필요가 있다. 다음, 격자의 박스 당 혈액 세포의 개수를 계수함으로써 백혈구 개수가 결정된다. 백혈구 개수는 분석자의 수작업으로 획득되며, 신뢰성있는 분석을 위해 분석자는 분석 수행 경험이 있어야만 한다.
이러한 분석은 시간 낭비이다. 더욱이, 수작업으로 수행되므로 분석 결과는 분석을 수행하는 사람에 따라 다를 수 있다.
백혈구 개수를 결정하는 소정의 자동화 분석 방법이 있다. 백혈구 개수가 콜터 원리(Coulter principle)에 의해 결정될 수 있으며, 이는 세포 크기를 결정하고 이에 따라 임피던스를 감지함으로써 세포 타입을 결정하는 것을 기초로 한다. 콜터 원리에 의한 백혈구 계수 방법은 미국 특허 제 5,262,302에 개시된다.
콜터 원리는 현재 널리 사용되는 자동화 분석 방법이다. 그러나 개시되었던 소정의 다른 방법이 있다. 백혈구 개수를 결정하는 하나의 방법이 미국 특허 제 5,585,246호에 개시된다. 여기에서는, 혈액 샘플은 형광 염료 및 리간드(ligand) 혼합체와 혼합되어 준비되며, 이는 백혈구 샘플을 표시(tag)한다. 샘플은 모세관에 진입하고 모세관 내의 샘플에 걸쳐 스캔하는 레이저 공급원에 의해 방사된다. 형광은 백혈구 개수를 결정하도록 측정된다. 유사한 방법이 WO 97/02482에 개시되며, 여기에서 형광 염료 및 모세관을 스캔하는 레이저 공급원이 사용된다. 이러한 방법은 적은 개수의 백혈구를 포함하는 성분 채집술(apheresis)로서 백혈구 계수에 적합하다. 여기에서 모세관은 두꺼우며, 모세관이 스캐닝되기 전에 모세관 바닥에 백혈구가 안착되도록 기다릴 필요가 있다.
WO 99/45384에서는, 다양한 두께를 갖는 샘플 포함 챔버가 도시된다. 다양한 두께는 상이한 혈액 구성물을 구분한다. 혈액 샘플은, 혈액 샘플 내의 적어도 3개의 상이한 백혈구 타입을 상이하게 하이라이트하도록 염색된다. 백혈구는, 챔버의 일부를 관찰하는 광학 스캐닝 장비를 통해 계수된다.
백혈구 개수를 결정하는 자동화된 방법을 가속화하고 단순하게 하여 치료 관점에서 분석이 제공되도록 할 필요성은 여전히 있다. 더욱이, 백혈구 계수는 매우 일반적으로 수행되는 분석이기 때문에, 분석 방법 상의 어떠한 증진도 환자 치료에 매우 큰 효과를 준다. 치료 관점에서 결과를 획득하는 가능성을 제공하는 분석 방법이 특히 바람직할 것이다.
본 발명의 목적은 백혈구 부피 측정 계산를 결정하는 간단한 분석을 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은, 복잡한 기기 또는 과도한 샘플 준비의 필요 없이 빠른 분석을 제공하는 것이다.
이러한 목적들은, 독립항에 따른 샘플 획득 장치, 방법 및 시스템에 의해 부분적으로 또는 전체적으로 이루어진다. 바람직한 실시예들은 종속항에 개시된다.
따라서, 혈액 샘플 내에서 백혈구 부피 측정 계산를 위한 샘플 획득 장치를 제공한다. 샘플 획득 장치는 혈액 샘플을 수용하기 위한 측정 캐비티를 포함한다. 측정 캐비티는 미리 정해진 고정된 두께를 갖는다. 샘플 획득 장치는 시약을 더 포함하며, 이는 측정 캐비티를 한정하는 표면 상에서 건조된 형태로 이루어지며, 상기 시약은 혈액 샘플 내에서 적혈구를 용해하기 위한 용혈제 및 혈액 샘플 내에서 백혈구를 선택적으로 염색하기 위한 염색제를 포함한다.
샘플 획득 장치는 측정 캐비티 내의 전체 혈액 샘플을 직접 획득하고 분석을 위해 제공할 수 있다. 샘플 준비가 필요하지 않다. 사실, 혈액 샘플은 환자의 손가락으로부터 직접 측정 캐비티 내에 흡입될 수 있다. 시약을 구비한 샘플 획득 장치를 제공하는 것은, 샘플이 분석을 위해 준비되도록 하는 샘플 획득 장치 내에서 반응을 일으킬 수 있다. 반응은, 혈액 샘플이 시약과 접촉하면서 시작된다. 따라서, 수동으로 샘플을 준비할 필요가 없으며, 이는 환자가 대기하는 조사실에서 분석이 직접적으로 특히 적합하게 이루어지도록 한다.
시약은 건조된 형태로 제공되기 때문에, 샘플 획득 장치는 샘플 획득 장치의 사용 가능성에 영향을 주지 않고 전달되어 장기간 보관될 수 있다. 따라서, 시약을 구비한 샘플 획득 장치는 혈액 샘플의 분석 이전에 제조되고 준비될 수 있다.
많은 현존하는 방법들이 상이한 혈액 세포 및 혈액 세포의 서브그룹을 계수하지만, 본 발명에 따른 샘플 획득 장치는 특히 백혈구 부피 측정 계산에 적합하다. 시약은 혈액 샘플 내의 적혈구를 용해하는 용혈제를 포함한다. 이는 샘플 내의 적혈구를 계산할 가능성을 방지한다. 반면에, 적혈구의 용해는 혈액 샘플 내의 백혈구의 구분을 용이하게 한다.
염색제는 각각의 백혈구를 표시한다. 이는 백혈구가 개별적으로 보이거나 탐지되도록 한다. 백혈구는 예를 들어 측정 캐비티를 스캐닝하거나 또는 측정 캐비티의 이미지를 획득함으로써 탐지될 수 있다. 따라서, 백혈구 개수는 한정된 부피 내의 개별적으로 탐지된 백혈구의 개수를 합산함으로써 획득될 수 있다.
또한, 본 발명은 혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 방법을 제공한다. 본 방법은, 샘플 획득 장치의 측정 캐비티 내의 혈액 샘플을 획득하는 단계를 포함하며, 상기 측정 캐비티는 샘플과 반응하는 염색제 및 용혈제를 포함하는 시약을 유지하며, 이에 따라 백혈구가 염색되며, 또한 본 방법은 염색된 백혈구를 구비한 샘플을 방사하는 단계, 측정 캐비티 내의 방사된 샘플의 확대된 디지털 이미지를 획득하는 단계를 포함하고, 백혈구가 염색제의 선택적인 염색에 의해 구분되며, 그리고 백혈구를 구분하도록 디지털 이미지를 디지털적으로 분석하고 샘플 내의 백혈구 개수를 결정하는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명은 혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 시스템을 제공한다. 본 시스템은 전술한 샘플 획득 장치를 포함한다. 또한, 본 시스템은 측정 캐비티 내의 혈액 샘플을 유지하며 샘플 획득 장치를 수용하도록 이루어진 샘플 획득 장치 홀더 및 혈액 샘플을 방사하도록 이루어진 광공급원을 포함하는 측정 기기를 포함한다. 측정 기기는 이미징 시스템을 더 포함하며, 이는 측정 캐비티 내의 방사된 샘플의 확대된 디지털 이미지를 획득하기 위한 디지털 이미지 획득 수단 및 확대 시스템을 포함하고, 백혈구가 염색제의 선택적인 염색에 의해 디지털 이미지 내에서 구분된다. 측정 기기는 획득된 디지털 이미지를 분석하도록 이루어진 이미지 분석기를 더 포함하여, 백혈구를 구분하고 혈액 샘플 내의 백혈구 개수를 결정한다.
본 발명의 방법 및 시스템은 백혈구 개수를 결정하기 위한 매우 간단한 혈액 샘플 분석을 제공한다. 분석은, 복잡한 측정 기기 또는 작동자에 의해 수행되는 고급 단계를 필요로 하지 않는다. 따라서, 능숙한 기술자 없이도 환자 진찰에 직접 연계되어 사용될 수 있다. 측정 기기는, 측정 캐비티 내에 직접 획득되었던 오염되지 않은 전체 혈액의 샘플 상에서 분석을 수행하기 위한 샘플 획득 장치의 특성을 활용한다. 측정 기기는, 하나의 이미지로부터 백혈구 부피 측정 계산를 이루기 위한 샘플의 부피를 이미징하도록 이루어진다.
혈액 샘플은 측정 캐비티 내의 시약과 혼합될 수 있다. 수 분 또는 그 이하의 시간 이후, 시약과 혈액 샘플의 반응이 적혈구를 용혈시키고 백혈구를 염색시켜서 샘플이 광학적 측정될 준비가 될 것이다. 혈액 샘플은 예를 들어 혈액 샘플 내로 시약의 분산 또는 확산에 의해 또는 샘플 획득 장치의 상대적 진동 또는 이동에 의해 시약과 혼합되며, 그 결과 측정 캐비티 내에서 혼합된다.
샘플 획득 장치는 2개의 평평한 표면을 갖는 바디 부재를 포함할 수 있어서, 측정 캐비티를 한정한다. 평평한 표면은 미리 정해진 거리만큼 상호 이격될 수 있어서 광학적 측정을 위한 시약 두께를 결정한다. 이는, 샘플 획득 장치가 광학적 측정을 위해 정의된 두께를 제공함을 의미하며, 이는 혈액 샘플의 부피 유닛 당 백혈구 개수를 정확하게 결정하도록 사용될 수 있다. 분석되는 샘플 부피는, 이미징되는 샘플 영역 및 측정 캐비티의 두께에 의해 명확하다. 따라서 정의된 부피는, 관련된 백혈구 개수를 위해 혈액 샘플의 부피에 사용되어 부피 백혈구 개수가 결정된다.
측정 캐비티는 바람직하게는 50~170마이크로미터의 균등한 두께를 갖는다. 적어도 50마이크로미터의 두께는, 측정 캐비티가 혈액 샘플을 가압하여 단분자층(monolayer) 내에 스며들어 보다 큰 부피의 혈액이 작은 단면적에 걸쳐 분석되지 않음을 뜻한다. 따라서, 충분히 큰 부피의 혈액 샘플이 신뢰할만한 수준의 백혈구 개수를 주면서 비교적 작은 혈액 샘플 이미지를 사용하여 분석되도록 한다. 두께는 적어도 100마이크로미터인 것이 보다 바람직하며, 이는 매우 작은 단면적 영역조차도 분석되거나 또는 보다 큰 샘플 부피가 분석되도록 한다. 더욱이, 적어도 50마이크로미터의 두께 및 보다 바람직하게 100마이크로미터의 두께는 2개의 평평한 표면 사이의 정의된 두께를 갖는 측정 캐비티의 제조를 간단하게 한다.
170마이크로미터 이상의 두께를 갖는 캐비티 내에 이루어진 최적의 샘플을 위해, 백혈구 개수가 적어서 배열된 백혈구가 상호 겹치면서 오직 작은 변동만이 일어날 수 있다. 그러나 이러한 변동의 효과는 백혈구 계수와 관련될 수 있으며, 따라서 적어도 백혈구 계수의 큰 값을 위해서는 적어도 어느 정도는 통계적인 결과 정정 수단에 의해 취급되어야 한다. 이러한 통계적 정정은 측정 기기의 검정(calibration)에 의할 수 있다. 변동은 150마이크로미터보다 작은 두께를 갖는 측정 캐비티에서 적을 수 있으며, 이에 따라 보다 간단한 검정이 사용될 수 있다. 이러한 두께는 혈액 세포가 겹치는 것에 대한 어떠한 검정도 필요로 하지 않는다.
더욱이, 측정 캐비티의 두께는 측정 기기가 디지털 이미지를 획득하도록 충분히 작을 수 있어서, 측정 캐비티의 전체 깊이가 동시에 분석될 수 있다. 확대 시스템이 측정 기기에서 사용될 수 있어서, 큰 심도(depth of field)를 획득하는 것이 간단하지 않다. 따라서, 측정 캐비티의 두께는 전체 두께가 디지털 이미지에서 동시에 분석되도록 150마이크로미터를 넘지 않는 것이 바람직하다. 심도는 170마이크로미터의 측정 캐비티 두께를 취급하도록 이루어질 수 있다.
디지털 이미지는 측정 캐비티의 두께에 적어도 상응하는 심도를 구비하여 획득될 수 있다. 이는, 충분한 포커싱이 전체 샘플 두께에서 획득되어 측정 캐비티의 전체 두께가 동시에 샘플의 디지털 이미지에서 분석됨을 의미한다. 따라서, 백혈구가 측정 캐비티 내에 안착되는 것을 기다릴 필요가 없어서 분석 시간이 감소한다. 샘플의 특정 부분에 매우 정교하게 포커싱되지 않는 것을 선택함으로써, 충분한 포커싱은 전체 샘플 두께에서 획득되어 샘플 내의 백혈구 개수를 구분한다. 이는, 백혈구가 다소 흐릿할 수 있지만 여전히 심도의 포커싱에서 고려됨을 의미한다.
샘플 획득 장치에 시약이 제공될 수 있는데, 이는 휘발성 액체 내에서 용해된 표면에 적용되었다가 증발하면서 건조된 형태의 시약으로 남은 것이다.
시약은, 측정 캐비티 내에 주입되기 전에 휘발성 액체 내에 용해되는 것이 바람직하다. 이는, 샘플 획득 장치의 제조 및 준비 동안 액체가 효과적 방법으로 측정 캐비티의 좁은 공간으로부터 증발될 수 있음을 의미한다.
시약은 유기 용매 내에 용해되는 것이 바람직하며, 메탄올에 용해되는 것이 보다 바람직하다. 이러한 용매는 휘발성이며, 측정 캐비티의 표면 상에 시약을 건조하도록 사용되는데 적합하다.
염색제는 선택적으로 백혈구의 핵을 염색하도록 이루어질 수 있다. 이는 백혈구가 채색된 점으로 구분될 수 있으며 이에 따라 디지털 이미지로 용이하게 계수될 수 있음을 의미한다.
염색제는 헤마톡실린(Hematoxylin), 메틸렌 블루(Methylene blue), 메틸렌 그린(Methylene green), 메틸렌 아주르(Methylene azure), 크레실 바이올릿 아세트산(cresyl violet acetate), 톨루딘 블루(Toluidine blue), 젠티안 바이올릿(Gentian violet), 수단 아날로그(Sudan analogues), 갈로시아닌(Gallocyanine), 및 푸쉰 아날로그로(Fuchsin analogues)로 이루어진 그룹 중 어느 하나 또는 그 조합일 수 있다. 그러나, 염색제는 이러한 그룹에 한정되지 않으며 다른 많은 물질이 고려될 수 있음을 주지하여야 한다.
용혈제는 제4급암모늄염(quaternary ammonium salt), 사포닌(saponin), 담즙산(bile acid), 디기톡신(digitoxin), 뱀독(snake venom), 글루코다노시드(glucopyranoside), 또는 트리톤(Triton) 타입의 비이온화 침투제(non-ionic detergent)일 수 있다. 그러나, 용혈제는 이러한 그룹에 한정되지 않으며 다른 많은 물질이 고려될 수 있음을 주지하여야 한다.
샘플 획득 장치는, 샘플 획득 장치의 외부에서 측정 캐비티와 소통하는 샘플 입구를 더 포함할 수 있으며, 이러한 입구는 혈액 샘플을 획득하도록 이루어질 수 있다. 샘플 입구는 모세관힘에 의해 혈액 샘플을 이끌도록 이루어질 수 있으며, 측정 캐비티는 캐비티 내에서 입구로부터 혈액을 이끌 수 있다. 그 결과, 혈액 샘플은, 샘플 입구를 혈액과 접촉하도록 간단히 이동시킴으로써 측정 캐비티 내에 용이하게 획득될 수 있다. 그 다음, 샘플 입구 및 측정 캐비티의 모세관힘이 정의된 양의 혈액을 측정 캐비티 내에 이끌 것이다. 대안적으로, 혈액 샘플은 외부의 펌핑력을 샘플 획득 장치에 적용함으로써 측정 캐비티 내에 흡수되거나 이끌릴 수 있다. 다른 대안에 따라서, 혈액 샘플은 피펫에 의해 획득될 수 있으며 다음 피펫에 의해 측정 캐비티 내에 주입될 수 있다.
샘플 획득 장치는 일회용일 수 있으며, 즉 오직 한 번만 사용되도록 이루어질 수 있다. 샘플 획득 장치가 혈액 샘플을 수용할 수 있고 세포 계수를 위해 샘플이 존재되도록 모든 시약이 유지되어야 하기 때문에 샘플 획득 장치는 백혈구 계수를 수행하기 위한 키트(kit)를 제공한다. 이는, 샘플 획득 장치가 오직 한번 사용에 적합하며 샘플 획득 장치를 세정하여 다시 시약을 적용할 필요성을 제거하도록 형성될 수 있기 때문에 특히 가능하다. 또한, 샘플 획득 장치는 플라스틱 물질로 성형될 수 있어서, 저렴한 비용으로 제조될 수 있다. 따라서, 이는 일회용 샘플 획득 장치를 사용하면서도 여전히 비용을 절감할 수 있다.
샘플은 염색제의 흡수 피크에 상응하는 파장의 빛에 의해 방사된다. 결론적으로, 염색제의 축적으로 염색된 백혈구는 작은 빛의 투과율에서도 탐지될 것이다.
방사는 레이저 공급원에 의해 이루어질 수 있다. 레이저 공급원은 염색제의 흡수에 적합한 정의된 파장의 빛을 제공한다. 더욱이, 레이저 공급원은 빛을 시준하고 미광의 섭동을 최소화하여, 작은 빛의 투과율이 정교하게 구분될 것이다.
방사는 대안적으로 발광 다이오드(LED; light emission diode)에 의해 이루어질 수 있다. 광공급원은 샘플 내에서 백혈구를 다른 물질과 적합하게 구분하는데 충분한 방사 조건을 제공한다.
디지털 이미지는 3~200x, 보다 바람직하게는 3~10x의 확대 파워를 사용하여 획득될 수 있다. 이러한 확대 파워에서 백혈구는 탐지되기에 충분히 확대되며, 심도는 샘플 두께를 커버하도록 이루어질 수 있다. 작은 확대 파워는, 큰 심도가 획득됨을 의미한다. 그러나 작은 확대 파워가 사용되는 경우 백혈구 탐지가 어려울 수 있다. 보다 작은 확대 파워가 획득되는 이미지의 픽셀 개수의 증가에 의해 사용된다면, 디지털 이미지의 해상도를 증진시킨다. 이러한 방식으로, 3~4x의 확대 파워를 사용하는 것이 가능하며, 여전히 백혈구는 탐지 가능하다.
분석 단계는 디지털 이미지의 높은 광흡 영역(high light absorption area)을 구분하는 단계를 포함한다. 분석 단계는 디지털 이미지 내의 흑점(black dot) 또는 암점(dark dot)을 구분하는 단계를 포함한다. 염색제가 백혈구의 핵에 축적되기 때문에, 광흡은 구분된 포인트의 피크를 가질 수 있다. 이러한 포인트는 디지털 이미지 내의 흑점을 형성할 것이다.
분석 단계는 획득된 디지털 이미지를 전기적으로 확대하는 단계를 더 포함할 수 있다. 샘플의 확대된 디지털 이미지를 획득하도록 샘플이 확대되는 동안, 획득된 디지털 이미지 그 자체는 전기적으로 확대되어 획득된 디지털 이미지 내에서 상호 매우 밀접한 이미지의 오브젝트 사이에서의 구분을 간단하게 한다.
본 발명은 첨부된 도면을 참조하여 예시적인 방법으로 기술될 것이다.
도 1은, 본 발명의 실시예에 따른 샘플 획득 장치의 개략적 도면이다.
도 2는, 본 발명의 다른 실시예에 따른 샘플 획득 장치의 개략적 도면이다.
도 3은, 본 발명의 실시예에 따른 측정 기기의 개략적 도면이다.
도 4는, 본 발명의 실시예에 따른 방법의 순서도이다.
도 5는, 백혈구 부피 측정 계산를 위해 사용되는 혈액 샘플의 디지털 이미지이다.
도 1을 참조하여, 본 발명의 실시예에 따른 샘플 획득 장치(10)를 기술한다. 샘플 획득 장치(10)는 일회용이며 분석에 사용된 이후 버려진다. 이는, 샘플 획득 장치(10)가 복잡한 처리를 필요로 하지 않음을 뜻한다. 샘플 획득 장치(10)는 플라스틱 재료로 이루어지는 것이 바람직하며, 사출-성형에 의해 제조될 수 있다. 샘플 획득 장치(10)의 제조가 간단하고 저렴하게 이루어지며, 따라서 샘플 획득 장치(10)의 비용은 낮게 유지될 수 있다.
샘플 획득 장치(10)는 바디 부재(12)를 포함하며, 이는 베이스(14)를 갖고, 이는 분석 결과에 영향 없이 작동자에 의해 터치될 수 있다. 베이스(14)는 분석 기기 내의 홀더에 맞추어질 수 있는 돌출부(16)를 더 가질 수 있다. 돌출부(16)는, 샘플 획득 장치(10)가 분석 기기 내에서 정확하게 위치하도록 이루어질 수 있다.
샘플 획득 장치(10)는 샘플 입구(18)를 더 포함한다. 샘플 입구(18)는 샘플 획득 장치(10) 내의 대향 벽체들 사이에서 한정되며, 상기 벽체들은 상호 근접하게 배열되어 모세관힘이 샘플 입구(18) 내에 생성될 수 있다. 샘플 입구(18)는 샘플 획득 장치(10)의 회부와 소통하여 혈액이 샘플 획득 장치(10)에 들어오도록 한다. 샘플 획득 장치(10)는, 샘플 획득 장치(10) 내측의 대향 벽체들 사이에 이루어진 측정 캐비티(20) 형태로서 백혈구를 계수하기 위한 챔버를 더 포함한다. 측정 캐비티(20)는 샘플 입구(18)와 소통하도록 이루어진다. 측정 캐비티(20)는 샘플 입구(18)의 벽체들보다 상호 근접하게 배열되어, 모세관힘이 샘플 입구로부터 측정 캐비티(20) 내측으로 혈액이 들어오도록 한다.
측정 캐비티(20)의 벽체들은 50~170마이크로미터로 상호 이격된다. 측정 캐비티(20) 두께는 적어도 100마이크로미터인 것이 보다 바람직하다. 또한, 측정 캐비티(20) 두께는 150마이크로미터보다 작은 것이 보다 바람직하다. 간격은 전체 측정 케비티(20)에 걸쳐 균등하다. 측정 캐비티(20)의 두께는 계산되는 혈액의 부피를 한정한다. 측정 결과는 계산되는 혈액 샘플의 부피에 비교되기 때문에, 측정 캐비티(20)의 두께는 매우 정교할 필요가 있으며, 즉 두께 상의 오직 작은 변동만이 측정 캐비티(20) 내에서 그리고 다른 샘플 획득 장치(10)의 측정 캐비티(20)들 사이에서 허용된다. 두께는 비교적 큰 샘플 부피가 캐비티의 작은 영역 내에서 분석되도록 한다. 이론적으로, 두께는 백혈구가 측정 캐비티(20) 내에서 상호 최상부에 배열되도록 한다. 그러나 혈액 내의 백혈구 양이 너무 작으면 이러한 현상은 거의 일어나지 않을 것이다.
샘플 획득 장치(10)는 혈액 리터당 0.5 x 109 이상의 백혈구 개수 측정에 적 합한 것이 전형적이다. 저 백혈구 개수에서, 샘플 부피는 너무 적어서 계수될 백혈구의 양이 통계적으로 많지 않다. 더욱이, 백혈구 개수가 혈액 리터당 12 x 109를 초과하는 경우, 상호 겹치게 이루어지는 백혈구 효과가 백혈구 개수 측정에 큰 영향을 주기 시작한다. 이러한 백혈구 계수에서, 측정 캐비티 두께가 140마이크로미터라면, 백혈구는 방사되는 샘플의 단면적의 약 8%를 커버한다. 따라서, 정확한 백혈구 개수를 획득하도록, 이러한 효과가 계산될 필요가 있다. 그러므로 혈액 리터당 약 12 x 109의 백혈구 통계적인 값의 정정이 사용될 수 있다. 보다 많은 백혈구 개수에서 백혈구 겹침 효과가 보다 클 것이므로, 이러한 통계적인 정정이 백혈구 계수를 증진시키는 데에 도움을 줄 것이다. 통계적인 정정은 측정 기기의 검정에 의해 결정될 수 있다. 대안적으로, 통계적 정정은 샘플 획득 장치(10)와 연계되어 사용되는 측정 기기 설정에 일반적인 레벨을 결정할 수 있다. 이러한 통계적인 정정은 콜터 원리를 사용하는 분석 기기에서 현재 수행되는 통계적 정정와 유사한 크기이다. 샘플 획득 장치(10)가 혈액 리터당 50 x 109의 개수의 백혈구 개수 분석에 사용될 수 있음을 주지하여야 한다.
측정 캐비티(20)의 벽체 표면은 적어도 부분적으로 시약(22)에 의해 코팅된다. 시약(22)은 냉동-건조, 가열-건조 또는 진공-건조될 수 있으며, 측정 캐비티(20)의 표면에 적용될 수 있다. 혈액 샘플이 측정 캐비티(20) 내에서 획득되면, 혈액은 건조된 시약(22)과 접촉하여 시약(22)과 혈액 사이의 반응을 시작시킨다.
시약(22)은 피펫 또는 디스펜서를 사용하여 시약(22)을 측정 캐비티(20) 내 에 주입함으로써 적용된다. 시약(22)은 측정 캐비티(20)에 주입되는 경우 예를 들어 메탄올과 같은 유기 용매인 휘발성 액체 내에서 용해된다. 시약(22)을 구비한 용매가 측정 캐비티(20)에 채워질 수 있다. 다음, 건조 단계가 이루어져서, 용매가 증발되고 시약(22)은 측정 캐비티(20)의 표면에 부착될 것이다.
시약이 좁은 공간의 표면 상에서 건조되기 때문에, 액체가 대기와 접촉하는 표면은 매우 적을 것이며, 이에 따라 액체의 증발은 보다 어려울 것이다. 따라서, 메탄올과 같은 휘발성 액체를 사용하는 것이 바람직하며, 이는 액체가 측정 캐비티의 좁은 공간으로부터 효과적인 방법으로 증발되도록 한다.
대안적인 제조 방법에 따르면, 샘플 획득 장치(10)는 2개의 부품을 상호 부착함으로써 형성되는데, 하나의 부품이 측정 캐비티(20)의 바닥 벽체를 형성하고, 다른 부품이 측정 캐비티(20)의 상부 벽체를 형성한다. 이는 2개의 부품이 상호 부착되기 전에 시약(22)이 개방된 표면 상에서 건조되도록 한다. 따라서, 용매가 휘발성일 필요가 없으며, 시약(22)은 물에서 용해될 수 있다.
시약(22)은 용혈제와 염색제를 포함한다. 용혈제는 제4급암모늄염, 사포닌, 담즙산, 디기톡신, 뱀독, 글루코다노시드, 또는 트리톤 타입의 비이온화 침투제일 수 있다. 염색제는, 헤마톡실린, 메틸렌 블루, 메틸렌 그린, 메틸렌 아주르, 크레실 바이올릿 아세트산, 톨루딘 블루, 젠티안 바이올릿, 수단 아날로그, 갈로시아닌, 및 푸쉰 아날로그로로 이루어진 그룹 중 어느 하나 또는 그 조합일 수 있다. 혈액 샘플이 시약(22)과 접촉하면, 용혈제는 적혈구를 용해하도록 작동할 것이며, 그 결과 용해된 적혈구가 혈액 플라스마 내에 혼합된다. 더욱이, 염색제는 백혈구 의 핵에 축절될 것이다. 시약(22)은 충분한 양의 염색제를 포함하여, 모든 백혈구 핵을 구분하도록 염색한다. 따라서 나머지 염색제는 혈액 플라스마에 혼합될 것이다. 나머지 염색제는 혈액 플라스마에 동일하고 낮은 배경 레벨의 염색제를 줄 것이다. 백혈구에 축적된 염색제는 염색제 배경 레벨에서 구분될 것이다.
시약(22)은 다른 구성 요소를 포함할 수 있는데, 이는 반응적일 수 있으며 즉 혈액 샘플과 화학 반응할 수 있으며, 또는 비반응적일 수 있어서 즉 혈액 샘플과 화학 반응을 하지 않을 수 있다. 반응적 구성 요소는 예를 들어 용혈 반응 또는 염색 반응을 촉매할 수 있다. 비반응적 구성 요소는 예를 들어 시약(22)이 측정 캐비티(20)의 벽체 표면에 잘 부착되도록 할 수 있다.
수 분 내에, 혈액 샘플은 시약(22)과 반응할 것이며, 그 결과 적혈구가 분리되도 염색제가 백혈구 핵에 축적된다.
도 2를 참조하여, 샘플 획득 장치의 다른 실시예를 기술한다. 샘플 획득 장치(110)는 측정 캐비티를 형성하는 챔버(120)를 포함한다. 샘플 획득 장치(110)는 챔버(120)에 혈액을 전달하도록 챔버(120) 내에 입구(118)를 갖는다. 챔버(120)는 흡입 튜브(121)를 통해 (도시되지 않은) 펌프와 연결된다. 펌프는 흡입 튜브(121)를 통해 챔버(120)에 흡입력을 적용할 수 있어서, 혈액이 입구(118)를 통해 챔버(120) 내에 흡입될 수 있다. 샘플 획득 장치(110)는 측정이 수행되기 전에 펌프와 분리된다. 제 1 실시예의 샘플 획득 장치(10)의 측정 캐비티(20)와 유사하게, 챔버(120)는 측정되는 샘플의 두께를 한정하는 정의된 두께를 갖는다. 더욱이, 시 약(122)이 혈액 샘플과 반응하도록 챔버(120)의 벽체에 적용된다.
이제, 도 3을 참조하여, 백혈구 부피 측정 계산를 위한 기기(30)를 기술한다. 기기(30)는 혈액 샘플을 구비한 샘플 획득 장치(10)를 수용하기 위한 샘플 홀더(32)를 포함한다. 샘플 홀더(32)는 샘플 획득 장치(10)를 수용하도록 이루어져서, 샘플 획득 장치(10)의 측정 캐비티(20)가 기기(30) 내에 정확하게 이루어진다. 기기(30)는 샘플 획득 장치(10) 내의 혈액 샘플을 조명하도록 광공급원(34)을 포함한다. 광공급원(34)은 백열 램프일 수 있으며, 이는 전체 가시 스펙트럼에 걸친 빛을 방사한다. 백혈구의 핵에 축적된 염색제가 특정 파장의 빛을 흡수할 것이며, 그 결과 백혈구의 핵이 샘플의 디지털 이미지를 구현한다. 색채 이미지가 획득되면, 백혈구는 특정 색채의 점으로서 구현될 것이다. 흑백 이미지가 획득되면, 백혈구는 보다 밝은 배경에 대한 암점으로서 구현될 것이다.
대안적으로, 광공급원(34)은 레이저 또는 발광 다이오드일 수 있다. 이는 이미지에 대비를 증가시키도록 사용될 수 있어서, 백혈구가 보다 잘 탐지될 수 있다. 이 경우, 광공급원(34)은 염색제의 흡수 피크에 상응하는 파장의 전자기적 방사선을 방사한다. 더욱이, 파장은 혈액 구성 요소의 흡수가 상대적으로 낮도록 선택되어야 한다. 샘플 획득 장치(10)의 벽체는 그 파장에 대하여 본질적으로 투명하여야 한다. 예를 들어, 메틸렌 블루가 염색제로 사용된 경우, 광공급원(34)은 667nm의 파장을 갖는 빛을 방사하도록 이루어질 수 있다.
기기(30)는 이미징 시스템(36)을 더 포함하며, 이는 광공급원(34)에 상대적 으로 샘플 홀더(32)의 반대측에 배열된다. 따라서, 이미징 시스템(36)은 혈액 샘플을 통해 전달된 방사선을 수용하도록 이루어진다. 이미징 시스템(36)은 확대 시스템(38) 및 이미지 획득 수단(40)을 포함한다. 확대 시스템(38)은 3~200x, 보다 바람직하게는 3~100x, 가장 바람직하게는 3~4x 확대된 파워를 제공하도록 이루어져서, 이는 백혈구 구분을 가능하게 한다. 이미지는, 낮은 파워의 사용을 허용하여 증진된 해상도로서 획득된다. 더욱이, 확대 시스템(38)의 심도는, 측정 캐비티(20)의 두께에 적어도 상응하도록 이루어질 수 있다.
확대 시스템(38)은 대물 렌즈 또는 렌즈 시스템(42)을 포함할 수 있으며, 이는 샘플 홀더(32)에 근접하여 배열되며, 접안 렌즈 또는 렌즈 시스템(44)은 대물 렌즈(42)로부터 이격되어 이루어진다. 대물 렌즈(42)는 샘플의 제 1 확대를 제공하고, 이는 접안 렌즈(44)에 의해 더 확대된다. 확대 시스템(38)은 적합한 확대를 완성하고 샘플의 이미징을 위한 다른 렌즈를 더 포함할 수 있다. 확대 시스템(38)은 측정 캐비티(20) 내의 샘플이 샘플 홀더(32) 내에 위치하는 경우 이미지 획득 수단(40)의 이미지 평면 상에서 포커싱되도록 이루어진다.
이미지 획득 수단(40)은 샘플의 디지털 이미지를 획득하도록 이루어진다. 이미지 획득 수단(40)은 CCD-카메라와 같은 일종의 디지털 카메라일 수 있다. 디지털 카메라의 픽셀 크기는 이미징 시스템(36)의 한정으로 설정되어, 이미지 평면 상의 원추점(circle of confusion)이 심도의 픽셀 크기를 넘지 않도록 한다. 그러나 백혈구가 다소 흐려진 경우에도 탐지될 수 있으며, 따라서 원추점이 심도 내에 있는 한 픽셀 크기를 넘는 것이 가능하다. 디지털 카메라(40)는 측정 캐비티(20) 내의 샘플의 디지털 이미지를 획득할 것이며, 전체 샘플 두께는 백혈구 계수를 위해 디지털 이미지 내에서 충분히 포커싱된다. 이미징 시스템(36)은 측정 캐비티(20) 영역을 한정할 것이며, 이는 디지털 이미지를 이미징한다. 측정 캐비티(20)의 두께에서 함께 이미지 한정되는 영역은 이미징되는 샘플 부피를 한정한다. 이미징 시스템(36)은 샘플 획득 장치(10) 내의 혈액 샘플을 이미징하는데 적합하도록 설정된다. 이미징 시스템(36)의 설정을 변경할 필요는 없다. 바람직하게는, 이미징 시스템(36)은 하우징 내에 배열되어 설정이 갑작스럽게 변경되지 않도록 한다.
기기(30)는 이미지 분석기(46)를 더 포함한다. 이미지 분석기(46)는 디지털 카메라(40)에 연결되어 디지털 카메라(40)로부터 획득된 디지털 이미지를 수용한다. 이미지 분석기(46)는 백혈구에 상응하는 디지털 이미지 내의 패턴을 구분하여 디지털 이미지 내에 존재하는 백혈구 개수를 계수한다. 따라서, 이미지 분석기(46)는 보다 밝은 배경 내의 암점을 구분하도록 이루어진다. 이미지 분석기(46)는 디지털 이미지를 분석하지 전에 디지털 이미지를 전기적으로 먼저 확대하도록 이루어질 수 있다. 이는, 디지털 이미지의 전기적 확대가 디지털 이미지를 다소 흐릿하게 한 경우에도 이미지 분석기(46)가 상호 근접하게 이미징된 백혈구를 보다 용이하게 구분하도록 함을 의미한다.
이미지 분석기(46)는, 디지털 이미지 내에서 구분된 백혈구 개수를 혈액 샘플의 부피와 비교함으로써 혈액 부피 당 백혈구 개수를 계수하며, 이는 전술한 바와 같이 정의된 것이다. 부피 백혈구 개수는 기기(30)의 디스플레이 상에 표시될 수 있다.
이미지 분석기(46)는 프로세싱 유닛으로서 인식될 수 있으며, 이는 이미지 분석을 수행하기 위한 코드를 포함한다.
도 4를 참조하여, 백혈구 부피 측정 계산 방법을 기술한다. 방법은, 단계(102)로서 샘플 획득 장치 내에 혈액 샘플을 획득하는 단계를 포함한다. 오염되지 않은 혈액 샘플이 샘플 획득 장치 내에 획득된다. 샘플은 모세혈관 또는 정맥으로부터 획득될 수 있다. 모세혈관 혈액 샘플은 환자의 손가락으로부터 직접 측정 캐비티로 이끌릴 수 있다. 혈액 샘플은 샘플 획득 장치 내의 시약과 접촉하여 반응을 시작한다. 적혈구는 분리되고 염색제는 백혈구 핵에 축적된다. 혈액 샘플을 획득한 수분 후에, 샘플이 분석 준비된다. 단계(104)에서, 샘플 획득 장치는 분석 기기 내에 위치한다. 분석은, 분석 기기의 버튼을 누름으로써 시작될 수 있다. 대안적으로, 분석은 샘플 획득 장치의 존재를 기기가 탐지함으로써 자동으로 시작될 수 있다.
단계(106)에서 샘플이 방사되어, 단계(108)에서 샘플의 확대된 이미지가 획득된다. 샘플은 염색제의 흡수 피크에 상응하는 파장의 전자기적 방사로서 방사된다. 이는, 디지털 이미지가 백혈구 핵의 위치에서 흑점 또는 보다 암점을 포함한다는 것을 의미한다.
단계(110)에서, 획득된 디지털 이미지는 이미지 분석기에 전달되어 이미지 분석을 시작하여, 디지털 이미지 내의 흑점의 개수를 계수한다.
도 5에서, 디지털 이미지의 실시예를 도시하며, 이는 용혈되고 염색된 혈액 샘플 내의 백혈구를 구분하는 가능성을 지시한다. 이러한 디지털 이미지는 140㎛ 두께의 캐비티를 갖고 50회 확대를 사용한 샘플 획득 장치로부터 획득된 것이다. 광공급원은 백열광을 방사하고 방사가 염색제 흡수 피크에 특별히 적합하지 않더라도 백혈구가 구분되는 것을 지시한다. 사용된 염색제는 메틸렌 블루이다. 구분되는 흑점은 도 5에 나타나며 백혈구를 지시한다. 도 5에 도시된 이미지는 칼라 이미지의 흑백 버전이다. 백혈구와 배경과의 대비가 여기에서의 흑백 이미지보다 칼라 이미지에서 보다 선명하다. 흑점은 이미지 분석기에 의해 용이하게 계수될 수 있다.
백혈구의 수동 계수 방법에서는, 약 200개의 세포가 혈액 샘플 내의 백혈구 개수 결정을 위해 전형적으로 계수된다. 여기에서의 방법 및 기기는 약 2000 세포의 계수에 적합하며, 이는 획득된 결과의 보다 양호한 통계적 정확성을 제공한다. 일반적으로 건강한 성인은 혈액 리터당 4~5 x 109개의 백혈구를 갖는다. 이는 2000개의 세포가 0.4~0.5㎕의 부피를 갖는 샘플에서 발견되는 것을 의미한다. 예를 들어, 140㎛의 두께의 측정 캐비티 내에서 1.5 x 1.5㎜의 영역이 이미징된다면, 이미징되는 부피는 0.315㎕이다. 획득되는 이미지의 일부가 분석을 위해 선택된다. 따라서, 획득되는 이미지는 먼저 조악하게 분석될 수 있으며, 이에 따라 백혈구 개수 결정에 사용되는 일부 내에서 어떠한 예외도 허용되지 않는다. 분석을 위해 선 택되는 획득 이미지 일부는 적합한 크기를 갖도록 선택될 수 있으며, 그 결과 혈액 샘플의 충분한 부피가 분석될 것이다.
개시된 바람직한 실시예는 어떠한 제한도 없으며, 많은 다양한 실시예들이 첨부된 청구 범위에 의해 한정되는 본 발명의 보호 범위 내에서 가능함을 주지하여야 한다.

Claims (33)

  1. 혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산(volumetric enumeration)를 위한 샘플 획득 장치로서,
    상기 샘플 획득 장치는,
    혈액 샘플을 수용하는 측정 캐비티로서, 상기 측정 캐비티는 미리 정해진 고정된 두께를 갖는, 측정 캐비티;
    상기 측정 캐비티를 한정하는 표면 상에 건조된 형태로 이루어지는 시약으로서, 상기 시약은 혈액 샘플 내의 적혈구를 용해하기 위한 용혈제 및 선택적으로 혈액 샘플 내의 백혈구를 염색하기 위한 염색제를 포함하는, 시약
    을 포함하는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 샘플 획득 장치.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 샘플 획득 장치는 상기 측정 캐비티를 한정하는 2개의 평평한 표면을 갖는 바디 부재를 포함하는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 샘플 획득 장치.
  3. 제 2 항에 있어서,
    상기 평평한 표면은 미리 정해진 거리만큼 상호 이격되어 광학적 측정을 위한 샘플 두께를 한정하는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 샘플 획득 장치.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 측정 캐비티는 50~170마이크로미터의 균등한 두께를 갖는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 샘플 획득 장치.
  5. 제 4 항에 있어서,
    상기 측정 캐비티는 100마이크로미터 이상의 균등한 두께를 갖는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 샘플 획득 장치.
  6. 제 4 항 또는 제 5 항에 있어서,
    상기 측정 캐비티는 150마이크로미터 이하의 균등한 두께를 갖는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 샘플 획득 장치.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 시약은, 휘발성 액체 내에 용해된 표면에 적용되었던 것으로 상기 휘발성 액체가 증발되어 건조된 형태로 남은 것인,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 샘플 획득 장치.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 염색제는 선택적으로 백혈구 핵을 염색하도록 이루어지는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 샘플 획득 장치.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 염색제는 헤마톡실린(Hematoxylin), 메틸렌 블루(Methylene blue), 메틸렌 그린(Methylene green), 메틸렌 아주르(Methylene azure), 크레실 바이올릿 아세트산(cresyl violet acetate), 톨루딘 블루(Toluidine blue), 젠티안 바이올릿(Gentian violet), 수단 아날로그(Sudan analogues), 갈로시아닌(Gallocyanine), 및 푸쉰 아날로그로(Fuchsin analogues)로 이루어진 그룹 중 어느 하나 또는 그 조합을 포함하는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 샘플 획득 장치.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용혈제는 제4급암모늄염(quaternary ammonium salt), 사포닌(saponin), 담즙산(bile acid), 디기톡신(digitoxin), 뱀독(snake venom), 글루코다노시드(glucopyranoside), 또는 트리톤(Triton) 타입의 비이온화 침투제(non-ionic detergent)인,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 샘플 획득 장치.
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 샘플 획득 장치는, 상기 샘플 획득 장의 외측에서 상기 측정 캐비티와 소통하는 샘플 입구를 더 포함하며, 상기 입구는 혈액 샘플을 획득하도록 이루어지는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 샘플 획득 장치.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 샘플 획득 장치는 일회용인,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 샘플 획득 장치.
  13. 혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산 방법에 있어서,
    샘플 획득 장치의 측정 캐비티 내에 혈액 샘플을 획득하는 단계로서, 상기 측정 캐비티는 샘플과 반응하는 염색제 및 용혈제를 포함하는 시약을 유지하여 백혈구가 염색되는, 혈액 샘플 획득 단계;
    상기 염색된 백혈구를 구비한 샘플을 방사하는 단계;
    상기 측정 캐비티 내에 방사된 샘플의 확대된 디지털 이미지를 획득하는 단계로서, 백혈구는 염색제의 선택적인 염색으로 구분되는, 디지털 이미지 획득 단계; 및
    백혈구를 구분하고 샘플 내의 백혈구 개수를 결정하도록 디지털 이미지를 디지털 분석하는 단계를 포함하는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산 방법.
  14. 제 13 항에 있어서,
    상기 측정 캐비티 내의 상기 시약과 혈액 샘플이 혼합되는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산 방법.
  15. 제 13 항 또는 제 14 항에 있어서,
    상기 측정 캐비티의 두께는 50~170마이크로미터이며, 상기 디지털 이미지는 상기 측정 캐비티의 두께에 적어도 상응하는 심도(depth of field)로 획득되는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산 방법.
  16. 제 15 항에 있어서,
    상기 분석되는 샘플의 부피는 측정 캐비티의 두께 및 이미징되는 샘플의 영역에 의해 정의되는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산 방법.
  17. 제 13 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 샘플은 상기 염색제의 흡수 피크에 상응하는 파장의 빛에 의해 방사되는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산 방법.
  18. 제 13 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방사는 레이저 공급원에 의해 이루어지는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산 방법.
  19. 제 13 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방사는 발광 다이오드(LED)에 의해 이루어지는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산 방법.
  20. 제 13 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 디지털 이미지는 3~200x, 보다 바람직하게는 3~10x 확대 파워를 사용하여 획득되는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산 방법.
  21. 제 13 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 분석 단계는, 상기 디지털 이미지 내의 높은 광흡 영역(high light absorption area)을 구분하는 단계를 포함하는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산 방법.
  22. 제 21 항에 있어서,
    상기 분석 단계는 상기 디지털 이미지 내의 흑점(black dot)을 구분하는 단계를 포함하는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산 방법.
  23. 제 13 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 분석 단계는 상기 획득된 디지털 이미지를 전기적으로 확대하는 단계를 포함하는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산 방법.
  24. 혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 시스템으로서, 상기 시스템은,
    제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 따른 샘플 획득 장치, 및
    측정 기기로서, 상기 측정 기기는,
    상기 측정 캐비티 내에 혈액 샘플을 유지하며, 상기 샘플 획득 장치를 수용하도록 이루어진 샘플 획득 장치 홀더,
    혈액 샘플을 방사하도록 이루어진 광공급원,
    이미징 시스템으로서, 상기 이미징 시스템은 상기 측정 캐비티 내에 방사된 상기 샘플의 확대된 디지털 이미지를 획득하기 위한 디지털 이미지 획득 수단 및 확대 시스템을 포함하며, 상기 염색제의 선택적 염색에 의해 상기 디지털 이미지 내에서 백혈구가 구분되는, 이미징 시스템, 및
    백혈구를 구분하고 혈액 샘플 내의 백혈구 개수를 결정하기 위하여 상기 획득된 디지털 이미지를 분석하도록 이루어진 이미지 분석기를 포함하는, 측정 기기
    를 포함하는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 시스템.
  25. 제 24 항에 있어서,
    상기 확대 시스템이, 상기 샘플 획득 장치의 상기 측정 캐비티의 적어도 두께의 심도로 이루어지는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 시스템.
  26. 제 24 항 또는 제 25 항에 있어서,
    상기 분석된 부피는 상기 이미징되는 샘플의 영역 및 측정 케비티의 두께에 의해 정의되는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 시스템.
  27. 제 24 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 광공급원은 상기 염색제의 흡수 피크에 상응하는 파장의 빛을 방사하는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 시스템.
  28. 제 24 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 광공급원은 레이저 공급원을 포함하는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 시스템.
  29. 제 24 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 광공급원은 발광 다이오드를 포함하는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 시스템.
  30. 제 24 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 확대 시스템은 3~200x, 보다 바람직하게는 3~10x의 확대 파워를 갖는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 시스템.
  31. 제 24 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 이미지 분석기는, 상기 디지털 이미지 내의 높은 광흡 영역을 구분하도록 이루어지는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 시스템.
  32. 제 31 항에 있어서,
    상기 이미지 분석기는 상기 디지털 이미지 내의 흑점을 구분하도록 이루어지는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 시스템.
  33. 제 24 항 내지 제 32 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 이미지 분석기는 상기 획득된 디지털 이미지를 전기적으로 정정하도록 이루어지는,
    혈액 샘플 내의 백혈구 부피 측정 계산를 위한 시스템.
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Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2548567T3 (es) 2004-04-07 2015-10-19 Levine, Robert Aaron Cámara desechable para analizar fluidos biológicos
SE528697C2 (sv) * 2005-03-11 2007-01-30 Hemocue Ab Volymetrisk bestämning av antalet vita blodkroppar i ett blodprov
US7796797B2 (en) * 2005-09-28 2010-09-14 Sysmex Corporation Apparatus for obtaining an image of a blood cell and method for obtaining an image of a blood cell
US7731901B2 (en) 2005-10-19 2010-06-08 Abbott Laboratories Apparatus and method for performing counts within a biologic fluid sample
SE531041C2 (sv) * 2006-07-17 2008-11-25 Hemocue Ab Räkning av trombocyter
SE530750C2 (sv) * 2006-07-19 2008-09-02 Hemocue Ab En mätapparat, en metod och ett datorprogram
SE530192C2 (sv) 2006-07-19 2008-03-25 Hemocue Ab Apparat för avbildning av prov där provhållaren är flyttbar medelst magnetisk växelverkan
US7738094B2 (en) * 2007-01-26 2010-06-15 Becton, Dickinson And Company Method, system, and compositions for cell counting and analysis
MY161825A (en) 2007-04-20 2017-05-15 Massachusetts Gen Hospital Methods for counting cells
SE532499C2 (sv) * 2008-01-18 2010-02-09 Hemocue Ab Metod och apparat för analys av partiklar i ett vätskeformigt prov
US8114580B2 (en) * 2009-01-13 2012-02-14 Bio-Rad Laboratories, Inc. Simulation of normal fresh blood platelets for reference control
AU2010330825B2 (en) 2009-12-18 2014-03-06 Abbott Point Of Care, Inc. Biologic fluid analysis cartridge
SE535918C2 (sv) * 2010-06-10 2013-02-19 Hemocue Ab Detektion av magnetiskt inmärkta biologiska komponenter
JP5058320B2 (ja) * 2010-09-16 2012-10-24 シスメックス株式会社 血液撮像装置および血液撮像方法
US10114020B2 (en) 2010-10-11 2018-10-30 Mbio Diagnostics, Inc. System and device for analyzing a fluidic sample
US9873118B2 (en) 2010-12-30 2018-01-23 Abbott Point Of Care, Inc. Biologic fluid analysis cartridge with sample handling portion and analysis chamber portion
EP2748618A1 (en) 2011-08-24 2014-07-02 Abbott Point of Care Inc. Biologic fluid sample analysis cartridge
WO2013041951A1 (en) * 2011-09-22 2013-03-28 Foce Technology International Bv Optical platelet counter method
CN103917870B (zh) 2011-11-16 2016-04-13 贝克顿·迪金森公司 用于检测样品中的分析物的方法和系统
JP5918988B2 (ja) * 2011-12-14 2016-05-18 公益財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 染色キット及び染色方法
US9739714B2 (en) 2012-10-29 2017-08-22 Mbio Diagnostics, Inc. Particle identification system, cartridge and associated methods
CN104797925B (zh) * 2012-11-09 2018-11-06 弗劳恩霍夫应用研究促进协会 用于不需要光学透镜而光学分析样品的容器及系统
BR112015010695B1 (pt) 2013-01-11 2023-03-07 Becton, Dickinson And Company Dispositivo microfluídico e método para realizar um ensaio de uma amostra líquida, método para formar um dispositivo microfluídico, sistema e kit
IL227276A0 (en) * 2013-07-01 2014-03-06 Parasight Ltd A method and system for obtaining a monolayer of cells, for use specifically for diagnosis
ES2856191T3 (es) 2013-11-06 2021-09-27 Becton Dickinson Co Dispositivos microfluídicos y métodos de uso de los mismos
JP6518245B2 (ja) 2013-11-13 2019-05-22 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーＢｅｃｔｏｎ， Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ 光学撮像システム及びそれを用いた方法
EP3364341B1 (en) 2014-06-16 2024-07-24 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Analyzing digital holographic microscopy data for hematology applications
US10614287B2 (en) 2014-06-16 2020-04-07 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Virtual staining of cells in digital holographic microscopy images using general adversarial networks
US11298061B2 (en) 2014-10-14 2022-04-12 Becton, Dickinson And Company Blood sample management using open cell foam
WO2016060793A1 (en) 2014-10-14 2016-04-21 Becton, Dickinson And Company Blood sample management using open cell foam
JP6426832B2 (ja) 2015-03-10 2018-11-21 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーＢｅｃｔｏｎ， Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ 生物体液の極微標本管理装置
CN113791203B (zh) 2015-06-12 2024-05-17 芯易诊有限公司 用于分析生物样品的方法
US10634602B2 (en) 2015-06-12 2020-04-28 Cytochip Inc. Fluidic cartridge for cytometry and additional analysis
EP3322968B1 (en) 2015-07-14 2024-02-21 Cytochip Inc. Volume sensing in a fluidic cartridge
EP3344390B1 (en) 2015-09-01 2021-01-20 Becton, Dickinson and Company Depth filtration device for separating specimen phases
CN105728069B (zh) * 2016-01-30 2021-01-19 深圳市安测健康信息技术有限公司 用于快速自检血液的多通道微流控芯片
CN107058455B (zh) * 2016-08-10 2021-09-17 黑龙江省农业科学院畜牧研究所 猪2细胞胚胎体积的测量方法
FR3060746B1 (fr) * 2016-12-21 2019-05-24 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Procede de numeration de particules dans un echantillon par imagerie sans lentille
US20190056304A1 (en) * 2017-08-17 2019-02-21 Abbott Point Of Care Inc. Method of imaging blood cells
US11067526B2 (en) 2017-08-17 2021-07-20 Abbott Point Of Care Inc. Devices, systems, and methods for performing optical and electrochemical assays
WO2019083844A1 (en) 2017-10-23 2019-05-02 Cytochip Inc. DEVICES AND METHOD FOR MEASURING TARGET ANALYTES AND PARTICLES
CN107817259B (zh) * 2017-10-30 2020-05-08 中国水产科学研究院黄海水产研究所 一种海水蚶科贝类血细胞采集和超微结构观察的方法
US11327084B2 (en) 2019-09-19 2022-05-10 Invidx Corp. Joint hematology and biochemistry point-of-care testing system
US11161109B2 (en) 2019-09-19 2021-11-02 Invidx Corp. Point-of-care testing cartridge with sliding cap
US20210199682A1 (en) * 2019-12-27 2021-07-01 Beckman Coulter, Inc. Sample preparation instrument
GB2616840A (en) * 2022-03-18 2023-09-27 Entia Ltd A cuvette for analysing biological samples
CN114813522B (zh) * 2022-06-29 2022-10-21 深圳安侣医学科技有限公司 基于显微放大数字图像的血液细胞分析方法及系统
CN116046647B (zh) * 2023-01-28 2023-06-09 深圳安侣医学科技有限公司 血液成像分析系统和方法

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3906120A (en) * 1970-10-30 1975-09-16 Gen Electric Method for preparing slides for blood evaluation
US3824393A (en) * 1971-08-25 1974-07-16 American Express Invest System for differential particle counting
SE399768B (sv) * 1975-09-29 1978-02-27 Lilja Jan E Kyvett for provtagning, blandning av, provet med ett reagensmedel och direkt utforande av, serskilt optisk, analys av det med reagensmedlet blandade provet
US4156570A (en) * 1977-04-18 1979-05-29 Robert A. Levine Apparatus and method for measuring white blood cell and platelet concentrations in blood
US4581223A (en) * 1980-03-12 1986-04-08 Lawrence Kass Individual leukocyte determination by means of differential metachromatic dye sorption
US4420558A (en) * 1981-02-12 1983-12-13 Janssen Pharmaceutica N.V. Bright field light microscopic method of enumerating and characterizing subtypes of white blood cells and their precursors
FR2555754A1 (fr) 1983-11-28 1985-05-31 Inter Inf Procede et dispositif d'analyse automatique d'echantillons biologiques
US5188935A (en) * 1984-05-31 1993-02-23 Coulter Electronics, Inc. Reagent system and method for identification, enumeration and examination of classes and subclasses of blood leukocytes
US5262302A (en) * 1987-03-13 1993-11-16 Coulter Corporation Method for screening white blood cells
US4950455A (en) 1987-12-22 1990-08-21 Board Of Regents, University Of Texas System Apparatus for quantifying components in liquid samples
US5472671A (en) * 1989-04-26 1995-12-05 Nilsson; Sven-Erik Cuvette
US5585246A (en) * 1993-02-17 1996-12-17 Biometric Imaging, Inc. Method for preparing a sample in a scan capillary for immunofluorescent interrogation
ES2284160T3 (es) * 1993-02-25 2007-11-01 Abbott Laboratories Sistema reactivo multiuso capaz de lisar rapidamente muestras de sangre completa.
SE504193C2 (sv) * 1995-04-21 1996-12-02 Hemocue Ab Kapillär mikrokyvett
WO1997002482A1 (en) 1995-06-30 1997-01-23 Biometric Imaging, Inc. Volumetric cell quantification method and system
EP1947442A3 (en) * 1997-05-05 2008-07-30 ChemoMetec A/S A method and a system for determination of biological particles in a liquid sample
US5874310A (en) * 1997-11-21 1999-02-23 Coulter International Corp. Method for differentiation of nucleated red blood cells
SE9800070D0 (sv) * 1998-01-14 1998-01-14 Hemocue Ab Blandningsmetod
US6350613B1 (en) 1998-03-07 2002-02-26 Belton Dickinson & Co. Determination of white blood cell differential and reticulocyte counts
US5948686A (en) * 1998-03-07 1999-09-07 Robert A. Leuine Method for performing blood cell counts
US6828429B1 (en) * 1999-03-26 2004-12-07 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Prostate-specific gene, PCGEM1, and the methods of using PCGEM1 to detect, treat, and prevent prostate cancer
WO2000065329A1 (en) * 1999-04-23 2000-11-02 Surromed, Inc. Disposable optical cuvette cartridge
CN1370278A (zh) 1999-08-11 2002-09-18 旭化成株式会社 分析盒和液体输送控制装置
JP2001349825A (ja) * 2000-06-06 2001-12-21 Kowa Co キュベット・スタンド及びキュベット付きスタンド
JP2002148261A (ja) 2000-11-09 2002-05-22 Sysmex Corp 異常細胞分類計数方法
WO2002057997A1 (en) 2001-01-18 2002-07-25 Cellavision Ab Method and arrangement for segmenting white blood cells in a digital colour image
US20030133119A1 (en) * 2002-01-17 2003-07-17 Bachur Nicholas R. Rapid imaging of particles in a large fluid volume through flow cell imaging
EP1474772A4 (en) * 2002-02-14 2005-11-09 Immunivest Corp METHOD AND ALGORITHMS FOR CELL DETERMINATION IN A COST-EFFECTIVE CYTOMETER
AU2003232169B8 (en) 2002-06-11 2008-05-08 Koninklijke Philips Electronics N.V. A disposable cartridge for characterizing particles suspended in a liquid
DE60326603D1 (de) 2002-06-24 2009-04-23 Sysmex Corp Verfahren zur klassifizierung und zählung von leukozyten
US7411680B2 (en) 2003-07-19 2008-08-12 Digital Bio Technology Device for counting micro particles
US7745219B2 (en) 2003-07-21 2010-06-29 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Reagent composition for the analysis of residual white blood cells in leuko-reduced blood banking products
SE528697C2 (sv) * 2005-03-11 2007-01-30 Hemocue Ab Volymetrisk bestämning av antalet vita blodkroppar i ett blodprov
US7067365B1 (en) * 2005-05-26 2006-06-27 United Microelectronics Corp. High-voltage metal-oxide-semiconductor devices and method of making the same
SE531233C2 (sv) * 2006-03-28 2009-01-27 Hemocue Ab Anordning och förfarande för detektion av fluorecensmärkta biologiska komponenter
SE530750C2 (sv) * 2006-07-19 2008-09-02 Hemocue Ab En mätapparat, en metod och ett datorprogram

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