JP5918988B2 - 染色キット及び染色方法 - Google Patents
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Description
本実施形態にかかる染色キットは、生物組織の割面を染色する染色キットである。生物組織学的診断において、生物組織の割面を染色することは新規であり、本実施形態にかかる染色キットは、この新規染色方法に使用される。ここで生物組織は例えば病理組織であり、生物組織の割面とは、生物組織(例えば腫瘍)の所定部(例えば中心部)を通るラインに沿って切断刃による割を入れて形成される切断面である。生物組織の割面と一緒にその表面を染色することも可能である。染色対象となる生物組織は、生体から単離された生物組織又は手術中の生物組織のいずれとすることも可能であり、固定又は未固定のいずれの生物組織でも可能である。
本実施形態にかかる染色方法は、生物組織の割面を染色する。生物組織の割面と一緒にその表面を染色することも可能である。本実施形態にかかる染色方法は、生物組織をメチレンブルーにて染色する第1の染色工程と、メチレンブルーにて染色された生物組織における過剰な染色を還元剤にて脱色する脱色工程と、生物組織を更にヘマトキシリンにて染色する第2の染色工程と、メチレンブルーにて染色された生物組織における色素の退色を酸化剤にて防止する退色防止工程と、を有する。
メチレンブルーのみによる生物組織の割面の染色を説明する。この染色方法は、生物組織をメチレンブルーにて染色する染色工程と、メチレンブルーにて染色された生物組織における組織の過剰な染色を還元剤にて脱色する脱色工程と、メチレンブルーにて染色された生物組織における色素の退色を酸化剤にて防止する退色防止工程と、を有する。このメチレンブルーのみによる生物組織の染色では、上皮細胞核の染色は染色ムラがあるものの、上皮細胞質は迅速且つ安定して染色され、マクロ観察及びマクロ像撮影の場合に好適である。メチレンブルーのみによる生物組織の染色では、上述したメチレンブルー及びヘマトキシリンを使用する染色と比較して、メチレンブルーの濃度は低くしてもよく、例えば0.5g/L〜5g/Lである。
生物組織として外科材料甲状腺腫瘍組織を使用した。外科材料甲状腺腫瘍組織をホルマリンにて固定し、垂直断にて5mm間隔で平行に切断刃による割を入れて割面を形成した。次に、腫瘍を含む外科材料甲状腺腫瘍組織切片を1mm厚にスライスした。次にメチレンブルー(和光純薬工業株式会社製の販売元コード275-07895のメチレンブルー原液を30倍希釈したもの)を割面全体に行き渡るに十分量(1ml程度)滴下し、2秒間染色した。次に、水槽中で組織を上下させた。次に、0.001規定シュウ酸水槽中で、観察しながら割面が適当な色合いになるまで、組織切片を上下させた。次に、水槽中で組織を上下させた。次に、2xカラッチヘマトキシリン液(和光純薬工業株式会社 販売元コード039-17705)を割面全体に行き渡るに十分量(1ml程度)滴下し、10秒間染色した。なお、2xカラッチヘマトキシリン液の組成は、ヘマトキシリン2.0g、カリウムミョウバン50g、ヨウ素酸ナトリウム0.4g、グリセリン200mL、蒸留水800mLからなるものであった。次に、水槽中で組織を上下させた。次に、この組織切片につき0.001規定硝酸水を割面全体に行き渡るに十分量(1ml程度)滴下した。観察する染色した割面を上にして組織をスライドガラスに載せ、更に同割面に十分量のOCTコンパウンド(Tissue-Tek(登録商標):SAKURA(登録商標))を被覆させた。その上にカバーガラス(0.17mm)を被せ、透過光式生物顕微鏡で観察した。結果を図1に示す。図1に示されるように、甲状腺乳頭癌細胞核、核溝、核内封入体が視認できた。
生物組織としてホルマリン固定外科材料胃腫瘍組織を使用した以外は、実施例1と同様にして染色を行い透過光式生物顕微鏡にて観察した。結果を図2に示す。図2に示されるように、低分化腺癌細胞、印環細胞が視認できた。
生物組織としてホルマリン固定外科材料皮膚腫瘍組織を使用した以外は、実施例1と同様にして染色を行い透過光式生物顕微鏡にて観察した。結果を図3に示す。図3に示されるように、表皮細胞核、真皮内毛細血管、真皮内炎症細胞、青色母斑細胞が視認できた。
生物組織としてホルマリン固定外科材料唾液腺腫瘍組織を使用した以外は、実施例1と同様にして染色を行い透過光式生物顕微鏡にて観察した。結果を図4に示す。図4に示されるように、唾液腺腺様嚢胞癌組織の篩状構造、癌細胞核が視認できた。
生物組織として鶏砂嚢組織を使用し、未固定の組織を使用した以外は、実施例1と同様にして染色を行い透過光式生物顕微鏡にて観察した。結果を図5に示す。図5に示されるように、腺上皮構造、腺上皮細胞核、粘膜下組織線維芽細胞が視認できた。
生物組織として鶏骨組織を使用した。未固定の組織を使用し、スライス厚を10mmにし、実体顕微鏡の試料台の上で観察した以外は、実施例1と同様にして染色を行い実体顕微鏡にて観察した。結果を図6に示す。図6に示されるように、骨細胞、骨髄細胞が視認できた。
生物組織として豚舌組織を使用し、未固定の組織を使用した以外は、実施例1と同様にして染色を行い透過光式生物顕微鏡にて観察した。結果を図7に示す。図7に示されるように、重層扁平上皮細胞核、細胞壁が視認できた。
生物組織として外科材料大腸腫瘍組織を使用した。大腸腫瘍組織をホルマリンにて固定し、腫瘍成分を垂直断にて5mm間隔で平行に切断刃による割を入れて割面を形成した。次にメチレンブルー(和光純薬工業株式会社製の販売元コード275-07895のメチレンブルー原液を30倍希釈したもの)を割面全体に行き渡るに十分量(2ml程度)滴下し、3秒間染色した。次に、水槽中で組織を上下させた。次に、0.001規定シュウ酸水槽中で、観察しながら割面が適当な色合いになるまで、組織切片を上下させた。次に、水槽中で組織を上下させた。次に、この組織切片につき0.001規定硝酸水を割面全体に行き渡るに十分量(2ml程度)滴下した。観察する染色した割面を上にして組織を実体顕微鏡の試料台に載せ、更に同割面に十分量のOCTコンパウンド(Tissue-Tek(登録商標):SAKURA(登録商標))を被覆させた後、実体顕微鏡で観察した。結果を図8に示す。図8に示されるように、腫瘍細胞核、線維芽細胞核、毛細血管が視認できた。
Claims (4)
- 生物組織の表面及び割面を染色する染色キットであって、
前記生物組織の上皮細胞の細胞質を染色するメチレンブルーと、
前記生物組織の細胞の細胞核を染色するヘマトキシリンと、
前記メチレンブルーにて染色された生物組織の間質の過剰な染色を脱色させる還元剤と、
細胞質を染色しているメチレンブルーが還元されることを防止する酸化剤と、を備える染色キット。 - 前記メチレンブルーの濃度が、0.5g/L〜10g/Lである請求項1記載の染色キット。
- 前記ヘマトキシリンは、カラッチヘマトキシリンである請求項1又は2記載の染色キット。
- 生物組織の表面及び割面を染色する染色方法であって、
前記生物組織の上皮細胞の細胞質をメチレンブルーにて染色する第1の染色工程と、
前記メチレンブルーにて染色された生物組織の間質の過剰な染色を還元剤にて脱色する脱色工程と、
前記生物組織の細胞の細胞核を更にヘマトキシリンにて染色する第2の染色工程と、
前記メチレンブルーにて染色された生物組織の上皮細胞の細胞質における色素の退色を酸化剤にて防止する退色防止工程と、を有する染色方法。
Priority Applications (2)
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