KR20070089980A

KR20070089980A - 염증성 장 질환의 치료를 위한 치료용 안티센스올리고뉴클레오티드 조성물

Info

Publication number: KR20070089980A
Application number: KR1020077014999A
Authority: KR
Inventors: 마크 케이. 웨델
Original assignee: 아이시스 파마수티컬즈 인코포레이티드
Priority date: 2004-12-02
Filing date: 2005-12-02
Publication date: 2007-09-04
Also published as: US20150231169A1; US20130090368A1; US9050354B2; AU2005311769A1; US20090275631A1; EP1827459A2; CA2589650A1; EP1827459A4; MX2007006591A; JP2008521927A; WO2006060649A3; WO2006060649A2

Abstract

본 발명은 서열 5'-GCCCAAGCTGGCATCCGTCA-3' (ISIS 2302)를 갖는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물의 직장 투여를 포함하는, 궤양성 결장염의 지속적인 개선 및/또는 치료를 위한 방법을 개시한다. 상기 방법은 조성물 투여의 종결 후에 장기간 (90일 초과) 동안 궤양성 결장염 지표를 감소시킨다. 상기 조성물은 내약성이 좋고, 전신 노출은 최소이다.

안티센스 올리고뉴클레오티드 조성물, 염증성 장 질환, 직장 투여

Description

염증성 장 질환의 치료를 위한 치료용 안티센스 올리고뉴클레오티드 조성물 {THERAPEUTIC ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITION FOR THE TREATMENT OF INFLAMMATORY BOWEL DISEASE}

<관련 출원>

본 출원은 2개의 미국 가특허 출원 제60/632,826호 (2004년 12월 2일 출원) 및 제60/716,355호 (2005년 9월 12일 출원)에 관한 것이며 이들을 우선권으로 청구한다. 상기 2개의 문헌은 그 전문이 본원에 포함된다.

<서열 목록>

서열 목록은 37 CFR 1.821 하에 본 출원과 함께 제출되고, 본원에 참고로 포함된다.

본 발명은 크론병(Crohn's disease), 궤양성 결장염 및 낭염을 비롯한 염증성 장 질환의 개선 및/또는 치료를 위해 세포내 접합 분자-1 (ICAM-1)의 발현을 조절하기 위한 안티센스 올리고뉴클레오티드 치료 화합물에 관한 것이다.

ICAM-1 (면역글로불린 (Ig) 슈퍼패밀리의 구성원)은 혈관 내피 세포 및 백혈구 서브세트 상에서 낮은 수준으로 구성적으로 발현되는 유도성 막횡단(transmembrane) 당단백질이다 (Dustin et al., J. Immunol, 137:245-54, 1986; Rothlein et al,. J. Immunol., 137:1270-4, 1986; Simmons et al, Nature, 331:624-7, 1988). ICAM-1 결합을 위한 1차 리간드는 β₂ 인테그린인 LFA-1 및 Mac-1이고, 이들 둘다는 백혈구에서 발현된다 (Marlin and Springer, Cell, 51:813-9, 1987; Diamond et al, J. Cell Biol, 111:3129-39, 1990). ICAM-1은 염증성 과정의 확대에 있어 다각적인 기능을 수행하고, 염증 부위에서 혈관내 구획으로부터 혈관외 공간까지의 백혈구 이동을 용이하게 하는 것을 가장 큰 특징으로 한다 (Butcher, Cell, 67:1033-6, 1991; Furie et al, Blood, 78:2089-97, 1991; Oppenheimer-Marks et a.l., J. Immunol, 147:2913-21, 1991). 추가로, ICAM-1은 또한 항원 제시 동안 T-림프구에 중요한 제2 신호를 제공하는 것으로 나타난다 (Altmann et al., Nature, 338:5l2-4, 1989; Van Seventer et al., J. Immunol. 144:4579-86, 1990; Kuhlman et al., J. Immunol, 146: 1773-82, 1991). 또한, 표적 세포에 대한, 세포독성 T-세포 (Makgoba et al., Eur. J. Immunol, 18:637-40, 1988), 천연 살해 세포 (Allavena et al., Blood, 84:2261-8, 1994) 및 호중구-매개 (Ding et al., J. Immunol, 163:5029-38, 1999) 손상에서 중요한 촉진 작용을 수행한다.

종양 괴사 인자-알파 (TNF-α)를 비롯한 초기-염증 자극제에 대한 반응에서 (To et al., Arthritis Rheum., 39:467-77, 1996; Beutler, Arthritis Rheum., 26:16-21, 1999), 많은 세포 유형은 이들의 표면 상에서 ICAM-1 발현을 조절한다. ICAM-1를 비롯한 세포 접합 분자는 백혈구 및 내피 세포의 이동에 요구된다. 수많 은 연구는 염증성 장 질환 (IBD) (Jones et al., Gut, 36:724-30, 1995), 류마티스 관절염 (To et al., Arthritis Rheum., 39:467-77, 1996), 셀리악병(celiac disease) (Sturgess et al., Clin, Exp. Immunol. 2 :489-92, 1990), IgA 신경병증 (Nguyen et al., Am. J. Nephrol 19:495-9,1999), 전신 루푸스 (Papa et al., Lupus, 8 :423-9, 1999; Egerer et al., Lupus, 9 :614-21, 2000), 염증성 피부병 (Ackermann et al., Arch Dermatol Res., 290:353-9, 1998) 및 다발성 경화증 (Bo et al., J. Neuropathol Exp. Neurol., 55: 060-72, 1996)을 비롯한 광범위한 염증성 질환을 앓고 있는 환자들로부터의 포함된 조직 내에서 ICAM-1 발현 증가를 입증한 바 있다.

항-ICAM-1 모노클로날 항체는 폐 염증 및 천식 (Barton et al., J. Immunol., 43:1278-82, 1989; Wegener et al., Science, 247:456-9, 1990), 동종이식 거부 (Cosimi et al., J. Immunol, 144:4604-12, 1990; Isobe et al., Science, 255:1125-7, 1993), 신염 (Harning et al., Clin. Immunol. Immunopath., 64:129-34, 1992; Kawasaki et al., J. Immunol, 150:1074-83, 1993), 허혈성 손상 (Ma et al., Circulation, 86:937-46, 1992; Kelly et al., Proc. Natl. Acad. Sci, USA. 91:812-6, 1994), 염증성 관절염 (Iigo et al., J. Immunol, 147:4167-71, 1991), 접촉 피부염 (Scheynius et al., J. Immunol. 150:655-63, 1993) 및 결장염 (Hamamoto et al., Clin. Exp. Immunol.,ll7:462-8, 1999)을 비롯한 질환의 다양한 동물 모델에서 유리한 효과가 입증된 바 있다. 이러한 동물 모델은 인간 질환에서 ICAM-1의 기능 또는 발현 억제제에 대한 시험에 사용된다.

ICAM-1 발현은 염증성 장 질환 (IBD)의 진행 과정에서 입증된 바 있다. 덱스트란 술페이트에 의해 유도된 결장염의 마우스 모델에서, ICAM-1 발현은 결장 점막하 및 근육층 정맥의 내피에서 증가된다 (Bennett, J. Pharm. Exp. Ther., 280:988-1000,1997). 크론병에서 인간 ICAM-1 발현은 고유판 미세혈관계 (결장 및 공장(jejunal) 둘다) (Sousa et al., Gut, 45:856-63, 1999), 소화관 단핵 세포 (Bernstein et al., Clin. Immunopathol., 86:147 -60, 1998) 및 결장 상피의 정점 부분 (Vanier et al., Am. J. Surg. Pathol, 24:1115-24, 2000)에서 증가된다. ICAM-1의 조직 발현은 질환 활성과 관련된다 (Vanier et al., Clin. Exp. Immunol, 121 :242-7, 2000).

염증성 장 질환 (IBD)은 크론병 및 궤양성 결장염 둘다를 포함하는 질환 군을 지칭한다. 상기 2가지 질환은 종종 이들의 유사한 병인 및 임상 징후 때문에 함께 군을 이룬다. 침해성 이미지화 연구가 없는 경우, 상기 2가지 질환을 구분하는 것이 불가능하여, 이들은 다수의 문헌 및 연구에서 종종 단일 질환으로서 여겨진다. 2가지 중 한 질환의 결정적인 진단에는, 상승된 백혈구 수준, 적혈구 침강 속도 및 혈청 알부민 농도를 검출하기 위해 완전혈 카운트를 포함하는 실험 시험과 병용되는, 내시경 검사 (직장경검사 또는 결장내시경), 이중 조영 바륨 관장 및 컴퓨터 단층촬영 (CT) 스캔과 같은 이미지화 연구가 요구된다.

상기 2가지 질환은 위장 (GI) 관의 만성, 재발/완화 염증성 질환이다. 크론병에 의해 가장 자주 영향을 받는 GI 관의 영역은 소장 및 대장, 또한 직장을 포함하는 소위 결장이지만, 입부터 항문까지의 전체 GI 관에 영향을 미칠 수도 있다. 단일 또는 다중 염증 반점이 존재할 수 있다. 궤양성 결장염은 단지 대장에만 영향을 미친다. 궤양성 결장염에서의 염증 및 궤양은 대장의 4개 층 중 가장 안쪽에 있는 2개의 층인 점막층 및 점막하층에 제한된다. 크론병에서 염증 및 궤양은 소장 및 대장 둘다에서 장벽의 모든 층을 통해 확장할 수 있다. 질환의 일반적인 증상에는, 설사, 복통, 직장 출혈 및 체중 감소가 포함된다. 크론병의 합병증에는 장 습종, 누관, 비정상 통과 (장의 한 부분으로부터 다른 한 부분까지 유도되고, 유체 또는 분비물의 통과를 허용함), 및 장 폐색이 포함된다. 전형적으로, 양 질환의 과정은 질환 악화 후 완화 기간을 갖는 간헐적 과정이다. 그러나, 궤양성 결장염은 단일 사건일 수 있거나, 증상이 꾸준히 계속될 수 있다.

병리 및 임상 징후에서의 공통점을 근거하면, 크론병 및 궤양성 결장염에 사용가능한 치료법이 실질적으로 공통적이라는 것이 놀라운 것은 아니다. 주의해야 하는 차이점은, 궤양성 결장염의 치료를 위한 관장제는 직장에 가까운 질환 영역에만 사용가능하다는 것이다. 이것은 치료제를 국소 투여하게 한다. 크론병에는 전형적으로 소장이 관여하기 때문에, 전형적으로 전신 치료가 요구된다. IBD에서의 치료적 개입을 위한 많은 선택이 존재하지만, 많은 치료적 개입이 만성 질환의 치료를 이상적이지 못하게 하는, 목적하지 않은 부작용을 갖는다.

경증 궤양성 결장염에 대해, 경구적으로 또는 국소적으로 (즉, 관장제) 전달되는 아미노살리실레이트는 전형적으로 치료의 첫번째 선상에 있다. 아미노살리실레이트 부류는 5-아미노살리실산 (5-ASA)을 함유한 제제로 구성되고, IBD에 사용되는 가장 오래된 항-염증성 화합물 중 하나이다. 예를 들어, 5-ASA 술파살라진은 1930년 대에 류마티스 관절염의 치료를 위해 개발되었고, IBD 치료에 있어서 그의 유용성은 1970년 대에 확립되었다 (Anthonisen et al., Scan. J. Gastroenterol, 9:549-554, 1974). 고용량으로 사용하면, 5-ASA는 급성 발병의 완화를 유도할 수 있다. 일반적으로 유지 요법에 사용되지만, 5-ASA는 완화를 유지하는 데 효과적인 것으로 입증되지는 않았다.

일반적으로 사용되는 5-ASA 제제에는 술파살라진, 경구 및 국소용 메살라민, 올살라진 및 발살라지드가 포함된다. 다양한 제제는 관심 부위 (예를 들어, 소장 또는 대장)에 사용가능한 활성 약물을 제공하기 위해 변형된다. 5-ASA의 사용에서 부작용은 일반적이다. 술파살라진은 술파기와 연관된, 비교적 높은 독성을 가지며 (대략 환자의 3분의 1), 두통, 오심, 소화불량 및 식욕감퇴를 포함한다. 덜 일반적인 부작용으로는 열, 발진, 관절통, 용혈, 호중구감소증, 결장염 악화, 과민증 반응 및 신독성이 포함된다. 술파 기를 함유하지 않은 메살라민, 올살라진 및 발살라지드는 실질적으로 부작용이 더 적기는 하지만, 여전히 발진, 두통 및 열을 야기할 수 있다. 다른 더 심각한 부작용이 또한 보고되어 있다.

메살라민 관장제는 경련, 급성 복통 및 혈성 설사, 때때로 두통, 열 및 발진을 특징으로 하는 급성 과민 증후군의 발생에 영향을 미친다. 메살라민 관장제를 사용하는 동안, 일부 환자에서는 전격성 결장염(pancolitis)이 발병하지만, 그 빈도는 플라시보 처라군보다 더 낮다. 관장제로부터의 메살라민의 흡수 정도는 지속 시간에 따라 매우 의존적이고, 따라서 다양하다. 경구 투여와 비교하여, 관장제 투여에 의해서는 전신 노출이 실질적으로 감소되지만, 일일 투여량의 10 내지 30％ 가 24-시간 소변 채취에서 회수될 수 있고, 이는 실질적으로 전신 노출로 제안된다. 임상 조건 하에, 환자에서 혈장 수준이 2 ug/ml인 것으로 입증되며, 이러한 혈장 수준의 약 3분의 2가 투여 후 10 내지 1 2시간에 N-아세틸 대사물질이 되었다. (Physicians Desk Reference, 53^rd Edition. 1999. Medical Economics Data, Montvale, NJ, pp 3126-7)

코르티코스테로이드는 IBD 발병을 완화시키는 가장 효과적인 제제 중 하나이고, 전형적으로 5-ASA를 사용한 치료 실패에 따른 2차적인 치료 선택이다. 상기 화합물은 5-ASA의 투여를 수반하거나 수반하지 않으며서 경구적으로 또는 직장으로 먼저 전달된다. 경구 전달의 실패에 따라, 화합물은 정맥내 투여된다. 이상적으로, 코르티코스테로이드는 짧은 치료 과정에만 사용되고 질환 완화에 따라 양을 줄여간다.

IBD 치료에 일반적으로 사용되는 코르티코스테로이드로는 프레드니손, 부데소니드 및 히드로코르티손이 포함된다. 코르티코스테로이드의 사용과 연관된 심각하고 유의한 다수의 부작용 때문에, 코르티코스테로이드의 사용은 제한된다. 단기간 사용에 따른 일반적인 부작용으로는 불면증, 야간 발한, 기분 변화 및 변경된 글루코스 대사가 포함된다. 장기간의 유지 요법은 전형적으로 중증 난치성 경우에만 지정된다. 장기간 치료는 부신 위축을 야기할 수 있지만, 갑작스러운 중단은 부신 부전, 저혈압, 및 심지어 사망을 일으킬 수 있다. 다른 부작용으로는 좌창, 비정상적 지방 축적, 다모증 및 골다공증이 포함된다. 크론병에서, 코르티코스테 로이드는 누관 치유를 저해하여, 질환 상태를 악화시킬 수 있다.

경구 또는 직장 코르티코스테로이드에 반응하는 개체는 종종 5-ASA의 투여량을 유지한다. 그러나, 일부 의사들은 완화 기간 동안 약리학적 개입을 제공하지 않는다. 정맥내 코르티코스테로이드로의 치료를 요구하는 개체는 전형적으로 5-ASA와 병용되는 6-머캅토퓨린 및/또는 아자티오프린과 같은 면역저해제에 대해 유지된다. 비경구 영양소는 전형적으로 이러한 심각한 질환과 함께 고려된다. 환자가 상기 치료법에 대해 반응하지 않는 경우, 면역저해제인 시클로스포린은 질환에 걸린 장의 부분을 제거하는 수술을 피하기 위한 시도에서 투여될 수 있다.

면역저해제 개입에 따른 바람직하지 않은 부작용이 없지는 않다. 6-머캅토퓨린 및 아자티오프린은 백혈구 감소증, 췌장염, 중증 감염 및 골수 저해를 비롯한 보다 심각한 부작용과 함께, 열, 발진, 오심 및 두통을 일으킬 수 있다. 시클로스포린은 감각이상 (화상통 또는 자통과 같은 이상 감각), 다모증, 고혈압, 진전, 신부전, 두통 및 기회 감염을 비롯한, 보다 심각한 부작용을 가질 수 있다.

항생제, 전형적으로 시프로플록사신 또는 메트로니다졸은 5-ASA 또는 코르티코스테로이드에 대한 요법에 부가제로서, 특히 누공 또는 결장 질환에 걸린 환자에게 사용된다. 다른 모든 치료법에서와 같이, 항생제를 사용한 장기 치료에도 부작용이 존재한다.

인플릭시마브는 현재 IBD에서 최후 수단으로서의 약물요법이다. 이것은 75％ 인간 및 25％ 마우스 단백질로 구성된 키메라성 모노클로날 항체이다. 인플릭시마브는 종양 괴사 인자-알파 (TNF-α)의 억제제, 효능있는 염증성 사이토킨이다. 상 기 약물은 가용성 TNF-α 및 막 결합 TNF-α 둘다와 결합함으로써 싱크(sink)로서 작용한다. 염증성 캐스케이드(cascade)에서 활성제를 매우 억제함으로써, 다수의 염증성 경로를 억제할 수 있다. 치료를 위해 약물을 먼저 정맥내 투여하고, 이후 제품 라벨에 나타낸 바와 같이 매 8주마다 유지 약물로서 투여한다. 그러나, 이는 생물학적 제제이기 때문에, 면역 반응은 약물의 유용성을 제한할 수 있다. 따라서, 면역저해제는 전형적으로 인플릭시마브 유지 요법과 함께 제공된다. IBD에 대한 다른 모든 요법과 마찬가지로, 인플릭시마브는 실질적인 부작용이 존재한다. TNF-α는 신생물 세포의 근절에 중요한 역할을 수행하기 때문에, TNF-α를 저해하는 것은 기회 감염, 악성종양 및 다른 합병증을, 특히 장기간 전략으로서 유도할 수 있다 (Brown et al., Arthritis Rheum., 46:3151-8, 2002; Lee et al., Arthritis Rheum., 46:2565-70, 2002; Nahar et al., Ann. Pharmacotherapy, 37:1256-65, 2003).

수술 개입은 IBD의 치료 방법이지만, 완치(cure) 방법은 아니다. IBD의 만성적인 본성 및 상대적으로 초년기에 발병한다는 것 때문에, 약리학적 개입에 반응하지 않는 환자의 일생에 걸쳐 여러번의 수술이 요구될 수 있다. 짧은 부분의 장의 제거는 실질적인 부작용 없이 가능하다. 그러나, 장의 더 큰 분절 또는 다수개의 분절을 제거하는 것은 단장 증후군을 발병시켜 개체가 영양소를 흡수할 수 없게 할 수 있다. 대장 부분의 제거는 결장 절개술 또는 다른 추가 수술 절차를 필요로 할 수 있다. 따라서, 수술은 IBD 치료의 바람직한 방법이 아니다.

IBD 치료를 위한 수술 개입은 추가 질환을 일으킬 수 있다. 결장을 완전히 제거함에 따라, 영구적인 장루를 요구하는 것보다 항문을 통해 배설물을 제거하도록 하기 위해, 외과의사가 소장으로부터 회장낭을 구성할 수 있다. 낭염은 재건 후 처음 2년 내에 전형적으로 발생하는, 회장낭의 비특이적인 염증이다. 그 증상으로는, 실금, 출혈, 열 및/또는 긴박감에 의해 수반될 수 있는 배변 빈도의 꾸준한 증가가 포함된다. 궤양성 결장염을 앓는 사람 중, 대략 20 내지 30％는 적어도 한가지 증상을 경험한다. 항생제는 낭염 치료에는 충분할 수 있지만, IBD에 사용되는 것과 유사한 다른 더 공격적인 치료법이 요구된다.

안티센스 올리고뉴클레오티드는 종래 기술 접근법에서 직면하는 문제에 대한 이상적인 해결책을 제공한다. 이들은, 소정 핵산 또는 단백질의 발현을 선택적으로 억제하고, 구조 또는 활성이 유사한 단백질 패밀리의 특이적인 이소형태의 억제를 허용하는 뉴클레오티드 서열에 근거하여 핵산 표적과 상호작용함으로써 작용의 비특이적인 메카니즘을 피하도록 고안될 수 있다. 표적 메카니즘 또는 거대분자 상호작용의 완전한 이해가 특이적 억제제를 고안하는 데 필요하지는 않는다.

인간 ICAM-1은 55,219 달톤 단백질을 합성하는 3.3-kb mRNA (서열 1)에 의해 코딩된다. ICAM-1은 N-연결 글루코실화 부위를 통해 대량으로 글루코실화된다. 성숙한 단백질은 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동에 의해 측정되는 바와 같이 90 kDa의 명확한 분자 질량을 갖는다 (Staunton et al., Cell, 52:925-933, 1988). ICAM-1은 면역글로불린 (Ig) 슈퍼패밀리의 구성원이다. 이는 아미노 말단의 5개의 면역글로불린-유사 도메인에 이어 막횡단 도메인 및 세포질 도메인을 함유한다. LFA-1 및 리노바이러스에 대한 1차적인 결합 부위는 첫번째 면역글로불린-유사 도 메인에서 발견된다. 그러나, 결합 부위는 구별되어 나타난다 (Staunton et al., Cell, 61:243- 354, 1990).

ICAM-1은 넓은 조직 및 세포 분포를 나타내고, 백혈구, 내피 세포, 섬유아세포, 케라틴 형성세포 및 기타 상피 세포 상에서 발견될 수 있다. ICAM-1의 발현은, 인터루킨-1, 종양 괴사 인자, 감마-인터페론 및 림포톡신(lymphotoxin)과 같은 세균성 리포다당류 및 사이토킨으로 처리함으로써 혈관 내피 세포, 섬유아세포, 케라틴 형성세포, 성상세포 및 여러 세포주 상에서 조절될 수 있다 (예를 들어, Frohman et al., J. Neuroimmunol., 23:117-124, 1989 참조).

시험관내 및 생체내 실험 둘다를 이용하여 인간 ICAM-1 (서열 1)의 발현을 억제하는 능력에 대해 일련의 올리고뉴클레오티드를 시험하였다 (예를 들어, 미국 특허 제5,514,788호 참조). 이러한 실험으로부터, 인간 ICAM-1의 뉴클레오티드 2114 내지 2133을 표적으로 하는 올리고뉴클레오티드 ISIS 2302 (서열 2)를 추가 개발을 위해 선택하였다.

ISIS 2302는 인간 ICAM-1 mRNA의 3'-비번역 영역에서 서열에 특이적으로 혼성화되도록 고안된 20-염기 포스포로티오에이트 올리고데옥시뉴클레오티드이다. 연구는, ISIS 2302가 효소 RNaseHI (RNaseH 뉴클레아제의 편재하는 패밀리 중 하나)에 의해 mRNA가 절단되는 ICAM-1 mRNA에 특이적으로 결합함으로써 기능함을 강력하게 제안한다 (Crooke, Biochim. Biophys. Acta., 1489:31-44, 1999). 그러나, 본 발명의 방법은 ISIS 2302의 작용 메카니즘에 의해 제한되지 않는다.

올리고데옥시뉴클레오티드의 포스포로티오에이트 변형물 (각각의 포스포디에 스테르 연결에서 비-가교 산소 분자에 대해 황 분자를 치환함으로써 변형시킴)은 비변형 DNA와 관련된 엑소뉴클레아제 내성을 유의하게 증가시키고, 약물 반감기를 연장시킨다 (Geary et al., Anti-Cancer Drug Design,12:383-94, 1997). 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드는 항원성, 비-세포독성 및 양호한 내약성이 단지 최소이고, 이들의 약동학 및 약력학 성질은 잘 특징화되어 있다 (예를 들어, Butler et al., Lab.Invest, 77:379-88, 1997; Mirabelli et al., Anti-Cancer Drug Des., 6:647-61, 1991 참조)

포스포로티오에이트 주쇄 변형물 이외에도, 다수의 다른 가능한 주쇄, 당 및 다른 변형물이 당업자들에게 공지되어 있으며, 본 출원이 기초로 하는 모 출원에 논의된 바 있다.

ICAM을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드는 피하 또는 복막내 주사에 의해 전신 투여되는 경우 염증성 장 질환의 마우스 및 래트 모델에서 효과적인 것으로 나타났다 (예를 들어, 각각 USP 제5,514,788호 (Bennett), 실시예 20; 및 USP 제6,096,722호, 실시예 29 참조). 이러한 데이타는 인간에서 크론병, 낭염 및 궤양성 결장염의 치료를 위한 임상 시험을 위한 기초가 되었다. 크론병 시험에서, ISIS 2302 (알리카포르센(Alicaforsen))를 플라시보 대조 연구의 개체에게 전신 투여하였다. II기 연구는 환자의 일부 서브세트에서 정맥내 투여된 ISIS 2302의 효율을 제안하였다 (Yacshyn et al., Gut, 51:30-36. 2002; Yacyshyn et al., Aliment. Pharmacol. Ther., 16:1761-70. 2002). 추후 2개의 III기 시험에서, 정맥내 투여된 ISIS 2302는, 임상 완화 및 질환 활성 지수 스코어를 기초로 하여, 중 등증 내지 중증 크론병 환자를 치료하는 데 비효과적임이 밝혀졌다 (Chey et al., Gastroenterology, 128:A-112, abst 724. 2002).

ISIS 2302의 관장 제제는 낭염 치료를 위한 임상 시험에 사용되었다 (미국 특허 출원 제20040162259호, 실시예 17 참조, Miner et al., Alimnet. Pharmacol. Ther., 19:281-6.2004). 만성의 지속적인 낭염에 걸리고 낭염 질환 활성 지수 (PDAI)가 7 이상인 12명의 환자가 연구에 포함되었다. PDAI는 배변 빈도, 직장 출혈, 절박변, 복통, 100℉ 초과의 열, 내시경 및 조직 스코어를 비롯한 인자의 조합을 기초로 하는 임상 스코어이다. 전통적으로, 활성 낭염은 PDAI 스코어가 7 이상인 것으로 정의된다. 240 mg의 ISIS 2302를 함유한 히드록시프로필 메틸셀룰로스 관장제를 환자에게 6주 코스로 밤마다 투여하였다. 기준선 및 3, 6 및 10주에 평가하였다. 제3주 만큼 초기에 나타나는 내시경 검사 및 증상 스코어에서 유의하게 감소하면서, 제6주에 PDAI 감소의 1차적인 종점에 도달하였고 (p = 0.001), 10주에 걸쳐 내시경 검사 요소 각각에서 개선되면서 6주에 걸쳐 계속되었다. 임상 증상 스코어는 또한 기준선부터 제6주까지 감소하였다. 관장제는 내약성이 좋았고, 연구에서 심각한 악영향은 없었다. 10주를 넘어 장기간이 아닌 후속 평가를 수행하였다.

랜덤 통제 이중맹 소량 상승 투여량 연구는 경증 내지 중등증 궤양성 결장염의 치료를 위해 직장 전달되는 ISIS 2302에 대한 연구이다 (SJH van Deventer et al., Gut, 53:1646-51). 환자들을 28일 동안 ISIS 2302의 일일 투여량 4가지 (6, 30, 120 및 240 mg) 중 하나로 치료하고, 질환 활성 지수 (DAI)의 개선을 위해 1, 3 및 6개월 후 치료의 안전성 및 효율을 모니터링하였다. DAI는 배변 빈도, 직장 출혈, 내시경 양상 및 관찰자의 총괄 평가를 기초로 하는 임상학적 스코어이다. 240 mg/일 군에 있거나 또는 플라시보군에 있는 환자의 50％와 비교되는 어떠한 환자도 6개월의 연구 동안 기준선 이상으로 추가 수술 또는 의약 개입을 요구하지 않았다. 급성 및 장기간 이익이 유망할 것이라는 결과를 보였으나, 그 결과는 결론을 내기 위해 더 큰 임상 시험에서 검증될 필요가 있었다.

IBD의 치료를 위한 가능한 다수의 개입에도 불구하고, 이들 중 어떠한 것도 제한된 효율, 바람직하지 않은 부작용, 또는 둘다로 인해 완전히 만족스럽지는 못하다. IBD의 효과적인 치료법, 바람직하게는 만성적이라는 질환의 본질 때문에 지속적인 효과를 생성하는 치료법에 대한 채워지지 않은 필요가 남아 있음이 명백하다.

<발명의 요약>

본 발명은, 서열 1의 뉴클레오티드 2114 내지 2133과 특이적으로 혼성화하는 8개 이상의 핵염기 부분을 포함하고 길이가 8 내지 80개 핵염기인 안티센스 올리고뉴클레오티드 화합물을 포함하는 조성물, 바람직하게는 히드록실프로필 메틸셀룰로스 중에 제제화된 조성물의 치료량을 개체에게 직장 투여하고, 질환 개선을 위해 상기 개체를 모니터링하는 것을 포함하는, 궤양성 결장염의 지속적인 개선 방법 또는 치료 방법을 개시하고 있다. 추가로 본 발명은 상기 조성물의 투여를 포함하는, 점막 치유를 촉진하는 방법 및 영속적(durable) 반응을 개시한다. 또한, 본 발명은 상기 조성물의 투여를 포함하는, 질환을 변형시키는 방법을 개시한다. 이 러한 방법은 조성물의 활성 성분에 대한 최소 전신 노출과 함께 실질적인 부작용 없이 이들의 치료 목적을 달성한다. 바람직한 실시양태에서, 상기 방법은 중등증 내지 중증 궤양성 결장염을 앓는 개체에 대해 사용된다.

본 발명은, ICAM-1 단백질의 발현을 억제하는, 히드록시프로필 메틸셀룰로스 중 하기 서열 (서열 2)의 안티센스 올리고뉴클레오티드 화합물을 포함하는 조성물의 치료량을 직장 투여하고, 질환의 개선을 위해 개체를 모니터링하는 것을 포함하는, 궤양성 결장염의 지속적인 개선 또는 치료 방법을 개시한다.

5'-GCCCAAGCTGGCATCCGTCA-3'

추가로 본 발명은 상기 조성물의 투여를 포함하는, 점막 치유를 촉진하는 방법 및 영속성 반응을 개시한다. 또한, 본 발명은 상기 조성물의 투여를 포함하는, 질환을 변형시키는 방법을 개시한다. 이러한 방법은 조성물의 활성 성분에 대한 최소 전신 노출과 함께 실질적인 부작용 없이 이들의 치료 목적을 달성한다. 바람직한 실시양태에서, 상기 방법은 중등증 내지 중증 궤양성 결장염을 앓는 개체에 대해 사용된다.

본 발명은, 궤양성 결장염을 앓고 있는 개체에서 점막 치유 및 영속성 반응을 촉진하기 위해 상기 개체에게 직장 투여하기 위한 의약 제조를 위한, 서열 1의 뉴클레오티드 2114 내지 2133과 특이적으로 혼성화하는 8개 이상의 핵염기 부분을 포함하고 길이가 8 내지 80개 핵염기인 안티센스 올리고뉴클레오티드 화합물을 포함하는 조성물의 용도를 개시한다. 의약을 위한 추가 용도는 질환을 변형시키는 것이다. 이러한 용도는 조성물의 활성 성분에 대한 최소 전신 노출을 달성하고, 바람직하지 않은 부작용이 실질적으로 없을 수 있다. 추가로, 올리고뉴클레오티드는 서열 2의 서열을 가질 수 있고, 직장 투여용 의약은 히드록시프로필 메틸셀룰로스를 사용하여 제조될 수 있음이 개시되어 있다. 바람직한 실시양태에서, 조성물은 중등증 내지 중증 궤양성 결장염에 걸린 개체의 치료를 위한 의약 제조를 위해 사용된다.

안티센스 올리고뉴클레오티드는 많은 인간 질환의 치료를 위해 치료제로서 매우 유망하다. 올리고뉴클레오티드는 왓슨-클릭(Watson-Crick) 염기 짝짓기에 의해 정의된 바와 같이 전-mRNA 또는 성숙 mRNA의 상보적인 서열에 특이적으로 결합하여, DNA로부터 단백질로의 유전 정보의 흐름을 억제한다. 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이들의 표적 서열에 특이적으로 만드는 그의 성질은 또한 이들을 매우 다용도로 만든다. 안티센스 올리고뉴클레오티드가 4개의 단지양 단위(monomelic unit) 중 장쇄이기 때문에, 이들은 임의의 표적 RNA 서열에 대해 용이하게 합성될 수 있다.

본 발명의 제약 조성물 (예를 들어, 올리고뉴클레오티드)과 같은 제약 조성물의 전달 방법은 공지되어 있다. 본 발명에서, 올리고뉴클레오티드는 히드록시프로필 메틸셀룰로스 중 올리고뉴클레오티드를 포함하는 관장 제제로 직장 투여에 의해 전달된다. 투여 경로와 관련된 상세한 사항은 본 발명에 참고로 포함하는 모 특허출원의 후속 실시예에 제공된다.

제약 조성물의 전달을 위한 제제는 당업자들에게 잘 공지되어 있다. 특정 제제의 선택은, 이에 제한되지 않지만, 투여 경로, 투여하고자 하는 화합물의 용해도, 및 투여하고자 하는 화합물의 양에 대한 고려를 기초로 하여 당업자들에게 공지되어 있다. 상세한 제제는 본 발명의 실시예, 및 미국 특허 제6,096,722호 및 제6,747,014호 (둘다 본원에 참고로 포함됨)에 제시되어 있다.

하기 실시예에 논의되는 연구는 궤양성 결장염의 개선 및 치료에 있어서 ISIS 2302의 효율 및 안전성을 입증한다. ISIS 2302은 관리(care) 기준인 메살라민으로보다 더 지속적인 영속성 반응을 생성한다. 이러한 반응 영속성은 질환으로부터 고통받는 개체의 삶의 질에 대해 의미있는 효과를 가지므로, 궤양성 결장염과 같은 질환에서 중요하다. 플레어(flare)의 빈도를 감소시킴으로써, 환자의 삶의 질을 개선한다. 추가로, ISIS 2302는 궤양성 결장염을 위한 임의의 사전 요법으로는 관찰되지 않는 질환 변형 활성을 갖는 것으로 나타났다.

본원에 개시된 실험에서 시험된 올리고뉴클레오티드는 완전 포스포로티오에이트 변형된 주쇄를 갖는다. 기타 가능한 주쇄, 변형당, 또는 동일 뉴클레오티드 서열의 다른 형태가 본 발명에 사용될 수 있다.

<정의>

본 발명의 내용에서, 용어 "올리고뉴클레오티드"는 리보핵산 또는 데옥시리보핵산의 올리고머 또는 중합체를 지칭한다. 이 용어는 천연 유래의 염기, 당 및 내부당 (주쇄) 연결로 이루어진 올리고머 뿐만 아니라, 유사하게 기능하는 비-천연 유래 부분을 갖는 올리고머를 포함한다. 이렇게 변형 또는 치환된 올리고뉴클레오티드는 이들의 성질, 예를 들어 이들의 증가된 세포 흡수성, 뉴클레아제 존재시 증가된 안정성, 및 증가된 혼성화 친화성 때문에 종종 천연 형태보다 더 바람직하다. 혼합 올리고머 또는 키메라성 올리고머를 비롯한, 올리고뉴클레오티드 주쇄 및 당의 가능한 변형과 관련된 상세 사항은 특허 및 비-특허 문헌에서 광범위하게 논의되었고 당업자들에게 공지되어 있다. 올리고뉴클레오티드의 그의 표적에 대한 친화성을 증가시키고 표적 서열의 미스매치(mismatch)에 대한 내성을 제공하는, 올리고머 모방체, 예를 들어 펩티드 핵산 (PNA) 및 고정(locked) 핵산 (LNA)의 용도는 당업자들에게 공지되어 있다. 비변형 및 변형된 올리고뉴클레오티드의 합성 방법이 또한 제공된다. 본 발명의 바람직한 방법에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스포로티오에이트 및/또는 헤테로원자 뉴클레오시드내 연결을 함유하며, 이때 포스포로티오에이트 연결이 가장 바람직하다.

본 발명에 따른 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 약 8 내지 약 80개의 핵산 염기 단위를 포함한다. 보다 바람직하게는, 상기 올리고뉴클레오티드는 약 12 내지 50개의 핵산 염기 단위, 보다 더 바람직하게는 약 15 내지 30개의 핵산 염기 단위, 가장 바람직하게는 약 18 내지 22개의 핵산 염기 단위를 포함한다. 나타낼 바와 같이, 핵산 염기 단위는 포스포디에스테르 또는 다른 결합을 통해 인접 핵산 단위에 적합하게 결합된 염기-당 조합물이다. 당업자는 약 8 내지 약 80개의 핵산 염기 단위가 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 또는 80개의 핵염기 단위를 포함한다는 것을 이해할 것이다.

본 발명의 올리고뉴클레오티드 화합물은, 서열 1의 뉴클레오티드 2114 내지 2133와 특이적으로 혼성화하는, 바람직하게는 8개 이상의 핵염기 부분, 보다 바람직하게는 12개 이상의 핵염기 부분, 보다 더 바람직하게는 15개 이상의 핵염기 부분, 추가로 보다 바람직하게는 18개 핵염기 부분, 가장 바람직하게는 20개 핵염기 부분을 포함한다.

본 발명의 내용에서 "염증성 장 질환" (IBD)은 장관에서 과민증 및 궤양을 발병시키는 질환을 의미하며, IBD의 가장 일반적인 형태는 크론병 및 궤양성 결장염이다. 기타 염증성 장 질환에는, 낭염, 과민성 장 증후군, 국한성 장염 및 국한성 회장염이 포함되나 이에 제한되지 않는다.

"전령 RNA"는 DNA의 오픈 리딩 프레임(open reading frame) (ORF)이 되는 것으로서 당업자에 의해 이해되며 (이들로부터 DNA가 전사됨), DNA의 ORF로부터의 정보 뿐만 아니라, 5'-비번역 영역, 3'-비번역 영역 및 개재 서열 리보뉴클레오티드로서 당업자들에게 공지된 영역을 형성하는 연관된 리보뉴클레오티드를 포함한다. 따라서, 올리고뉴클레오티드는 본 발명에 따라 형성될 수 있으며, 이는 이러한 연관된 리보뉴클레오티드 뿐만 아니라 정보 리보뉴클레오티드를 전적으로 또는 부분적으로 표적으로 한다. 바람직한 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 3'-비번역 영역의 서열, 특히 서열 1의 뉴클레오티드 2114 내지 2133과 특이적으로 혼성화가능하다.

본 발명의 내용에서 "혼성화"는 왓슨-클릭 (후그스틴(Hoogsteen)), 또는 역후그스틴 수소 결합일 수 있는, 상보적인 염기 사이의 수소 결합을 의미하며, 일반적으로 마주보는 핵산 가닥, 또는 한 핵산 가닥의 2개의 영역에서 이루어진다. 구아닌 및 시토신은 이들 사이에 수소 결합이 형성되는 것으로 공지된 상보적인 염기의 예이다. 아데닌과 티민은 이들 사이에 수소 결합이 형성되는 것으로 공지된 상보적인 염기의 예이다.

"특이적으로 혼성화가능한" 및 "상보적인"은, 안정하고 특이적인 결합이 DNA 또는 RNA 표적과 올리고뉴클레오티드 사이에 발생하도록 하는 충분한 상보성의 정도를 나타내는 데 사용되는 용어이다. 올리고뉴클레오티드가 표적에 결합하는 것이 활성 손실을 야기하는 표적 분자의 정상 기능을 방해하는 경우, 올리고뉴클레오티드는 특이적으로 혼성가능한 것이며, 검사가 수행되는 조건에서, 특이적인 결합이 요구되는 조건하, 즉 생체내 검사 또는 치료 처치의 경우 또는 시험관내 검사의 경우의 생리적 조건하에서 올리고뉴클레오티드가 비-표적 핵산 서열에 비-특이적으로 결합하는 것을 피하기에 충분한 정도의 상보성이 존재한다.

"제약 조성물"은 약리학적 활성제를 전달하기 위해 임으로는 비히클을 추가로 함유한 약리학적 활성제를 포함하는 조성물로서, 상기 조성물은 동물, 바람직하게는 인간 동물에 투여하기에 적합하다. 상기 비히클은 일반적인 염수 또는 제제와 같은 비활성의 것일 수 있고, 경구 투여용 조성물의 경우에 보다 더 맛이 좋은 조성물을 만든다. 비히클은 다르게는 약리학적 활성제의의 생체이용율을 증가 또는 변형시키기 위한 활성제일 수 있다. 이러한 활성 비히클은 위에서 약리학적 활성을 보호해서 약리학적 활성제가 장에서 흡수되도록 허용하는 화합물 또는 흡수 촉진제(penetration enhancer)를 포함한다. 이러한 활성 비히클은 당업자들에게 공지되어 있다.

"치료량"은 상기 조성물에 의해 치료하고자 하는 질환의 개선 또는 치료를 제공하기 위해 요구되는 조성물의 양을 의미한다. 질환 모니터링 방법은 당업자들에게 공지되어 있다. 지시에는 치료량과 관련된 예 및 질환, 특히 IBD 심각도를 모니터링 방법과 관련된 예가 제공된다.

"지속적인"이란, 치료 기준 또는 플라시보와의 비교 시, 다른 약리학적 개입 또는 수술 개입을 사용하는 치료를 증가시킬 필요없이, 본 발명에 개시된 조성물의 투여 종료 후에, 궤양성 결장염의 임상 징후의 실질적인 감소 및/또는 점막 치유의 유지 수준이 장기간인 것을 지칭한다. "지속적인"은, 본원에 개시된 조성물의 마지막 투여 후, 감소된 질환 지표 또는 점막 치유 수준이 약 60일 이상, 바람직하게는 약 90일 이상, 보다 더욱 바람직하게는 약 120일 이상, 가장 바람직하게는 약 180일 이상인 것으로서 정의된다. 임상 징후의 지속적인 감소는 개입에 대한 보다 영속성인 반응의 지표이다.

본원에서 사용되는 바와 같이 "질환 변형 활성"을 갖는 약물이란, 표준 질환 모니터링 수단 (예를 들어, DAI)에 의해 정의되는 질환 진행 속도를 저하시키는 능력, 및/또는 약물 제거 후에 연장된 기간 동안 효과가 있는 능력을 갖는 조성물을 의미한다.

"궤양성 결장염의 지표"는 질환 궤양성 결장염의 존재와 관련된 증상 또는 상태이다. 상기 지표는 객관적 (예를 들어, 배변 횟수, 직장 출혈, 점막 유약성), 주관적 (예를 들어, 의사의 평가) 또는 다양한 관찰의 조합 (예를 들어, DAI 또는 임상 활성 지수)일 수 있다.

궤양성 결장염에 대한 "질환 활성 지수 (DAI)"는 문헌 [Schroeder et al., 1987. N. Engl. J. Med. 317:1625-9]에서 정의되고, 배변 빈도, 직장 출혈, 내시경 양상 및 관찰자의 총괄 평가 (환자의 증상, 직장경검사 및 신체 검사에서의 발견, 실험실 연구 및 환자의 총괄적인 상태를 포함함)를 기초로 하는 총 스코어이다. 지수의 4개 측면 각각은 가장 경증인 0 및 가장 중증인 3으로 0 내지 3의 등급이 매겨진다.

본원에 사용되는 "치료 기간"이란, 상대적으로 빈번한 기준으로, 적어도 주 1회로 조성물이 투여되는 시간을 의미한다. 치료 기간은 약 2주 이상 동안, 바람직하게는 약 3주 이상 동안, 보다 바람직하게는 약 4주 이상 동안, 바람직하게는 주 2회 이상, 보다 바람직하게는 2일에 1회, 가장 바람직하게는 매일 1회이다.

본원에 사용되는 "최소 전신 노출"이란, 전신 사용가능한 용량이 투여 용량의 약 5％ 미만, 바람직하게는 약 4％ 미만, 보다 바람직하게는 약 3％ 미만, 보다 더 바람직하게는 약 2％ 미만, 가장 바람직하게는 약 1％ 미만인 것을 의미한다.

실시예 1

제제의 공장내 ( intrajejunal ) 및 직장 투여 후 ISIS 2302의 생체이용율 분석

ISIS 2302의 완전 생체이용율을 여러 제제로 공장내 점적주입한 후에 평가하였다. 얻어진 데이타로부터 하기 식에 따라 생체이용율 백분율을 계산하였다.

％ 생체이용율=(AUC_po/D_o)/(AUC_iv/D_o) x 100％,

상기 식 중, AUC_po는 경구 투여용으로 제제화된 올리고뉴클레오티드 정제에 대한 혈장 농도 곡선 아래의 영역이고, AUC_iv는 정맥내 용액제 (대조군)로서 투여되는 올리고뉴클레오티드에 대한 혈장 농도 곡선 아래의 영역이고, D_o는 이러한 2가지 섭생에 대한 대표적인 투여량이다.

올리고뉴클레오티드 약물 제제의 생체이용율을 측정하기 위해, 2가지 상이한 투여 모드를 연구하였다. 올리고뉴클레오티드를 하기에 따라 제조되는 유중수 에멀젼으로 제제화하였다. 먼저, 2개의 상을 제조하였다. ISIS 2302 용액 2 ml (100 mg/ml)와 물 2 ml를 혼합하여 수성상을 제조하였다. 1 g의 그릴(Grill) 3 (소르비탄 모노스테아레이트) (Croda, US), 3 ml 캅텍스(Captex) 355 (Abitec Corp., Janesville, Wis.) 및 3 ml 라브라솔(Labrasol) (Gattefosse, France)을 약 7O℃로 부드럽게 가열함으로써 오일상을 제조하였다. 격렬하게 혼합하면서, 상기 수용액을 상기 오일상에 서서히 부었다.

공장내 점적주입을 위해, 체중 250 내지 300 g의 스파구에-다울레이(Sprague-Dawley) 래트를 사용하였다. 밤새 단식시킨 후에, 5％ 펜토바르비탈 (50 mg/kg)을 복막내 주사하여 래트를 마취시켰다. 정중선 복부 절개를 한 후에, 소장을 꺼내서, 주사 부위를 정하였다 (트라이츠(Treitz) 인대 뒤 2 cm). 이어서, 약물 제제 1.0 mL 분취액을 27 게이지 니들을 통해 주사하였다. 어어서, 근육을 수술 봉합하고, 주사 후에 피부를 클립 고정시켰다.

직장 투여를 위해, 시험 래트에 먼저 세정용 관장제를 투여한 후에 밤샘 기간 단식시키고, 이어서 시험 제제의 샘플을 투여하였다. 카테터(catheter)를 통해 관장 제제를 투여하고, 1 시간 동안 유지하였다.

올리고뉴클레오티드의 생체이용율을 평가하기 위해, 샘플을 가공하고, 올리고뉴클레오티드 존재량을 모세관 겔 전기영동 (CGE) 및 HPLC 분석에 의해 평가하였다.

스파구에-다울레이 래트 5마리에 공장내 점적주입한 후에, 그리고 래트 7마리에 직장 투여한 후에 ISIS 2302의 완전 생체이용율을 측정하였다. 공장내 투여된 ISIS 2302에 대해, 완전 생체이용율은 20.3％ (n=5)였다. 직장 투여된 ISIS 2302에 대해, 완전 생체이용율은 24.5％ (n=7)였다.

실시예 2

올리고뉴클레오티드의 조직 흡수 분석을 위한 관장 제제의 제조

결장 내로의 올리고뉴클레오티드의 전달 및 점막 관통 이후의 직장 전달을 평가하기 위해, 하기 제제를 제조하였다 (표 1). ISIS 2302의 용액제 및 에멀젼 제제를 제조하였다. 제제 중 사용된 부가제로는, 염수, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (HPMC), 카라기난, 비타민 E a-토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 1000 숙시네이트 (TPGS), 트윈(Tween) 80 및 소르비톨이 포함된다.

제제 1a: ISIS 2302의 용액을 멸균 염수 중에 원하는 농도로 제조하고, 생체내 평가를 위해 사용하였다.

제제 1b: ISIS 2302와 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (HPMC)의 용액을 ISIS 2302 최종 농도가 제제 1a 중의 ISIS 2302 최종 농도와 동일하고 HPMC 농도가 1.5％이도록 제조하였다.

제제 1c: 제제 1a에 대해서와 같이, ISIS 2302의 용액을 1.0％ 카라기난 및 2.5％ 비타민 E TPGS를 함유하도록 제조하였다.

제제 1d: ISIS 2302의 유중수 에멀젼을 상기 예에서의 일반적인 방법에 따라 제조하였다.

제제 1e: 이 제제는 ISIS 2302, 트윈 80 및 HPMC를 적절한 양으로 혼합함으로써 제조하여 원하는 농도의 ISIS 2302, 0.5％ 트윈 80 및 0.75％ HPMC를 갖는 혼합물을 수득하였다.

제제 1f: 이 제제는 ISIS 2302, 소르비톨 및 HPMC를 적절한 양으로 혼합함으로써 제조하여 원하는 농도의 ISIS 2302, 5％ 소르비톨 80 및 0.75％ HPMC를 갖는 혼합물을 수득하였다.

국소/관장 투여를 위한 ISIS 2302 제제
제제	조성
1a	염수 중 ISIS 2302
1b	ISIS 2302 + 1.5％ 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (HPMC)
1c	ISIS 2302 + 1.0％ 카라기난 + 2.5％ 비타민 E a-토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 1000 숙시네이트 TPGS
1d	유중수 에멀젼 중 ISIS 2302
1e	ISIS 2302 + 0.5％ 트윈 80 + 0.75％ HPMC
1f	ISIS 2302 + 5％ 소르비톨 + 0.75％ HPMC

올리고뉴클레오티드의 제제를 실험용 비글 도그(beagle dog)에게 관장제로서 직장 투여함으로써 평가하였다. 밤새 단식시킨 후에, 시험 도그에게 세정용 관장제를 먼저 투여한 다음, 시험 제제의 샘플을 투여하였다. 폴레이 카테터(Foley catheter)를 통해 관장 제제를 투여하고 1 시간 동안 유지하였다. 결장 조직 전달 및 올리고뉴클레오티드 흡수를 평가하기 위해, 투여 후 3 시간 및 24 시간에 시험 동물에서 결장 조직 생검을 수행하였다. 조직 샘플을 가공하고, 조직에 존재하는 올리고뉴클레오티드양을 모세관 전기영동 (CGE) 및 면역화학적 (DHC) 분석으로 평가하였다.

상기 실시에에서 제조된 ISIS 2302의 6가지 제제 (제제 1a 내지 1f)를 직장 관장을 통해 상기 도그에게 투여하고, 투여 후 3 시간 및 24 시간에 결장 조직 중 ISIS 2302의 국소 분포를 CGE 및 IHC로 측정하였다. 결과를 표 2에 나타냈다. 히드록시프로필 메틸셀룰로스 (1b)가 상기 실시예 1의 방법으로 제조된 유중수 에멀젼 (1d)보다 더 높은 조직 흡수를 나타냈음에 주의할만 하다.

도그에서 직장 관장 후에 ISIS 2302의 국소 결장 조직 분포
제제	면역화학		CGE ( mg /g) ± SD
	3 시간	24 시간	3 시간	24 시간
1a	++++	-	782.2 ± 664.2	NA
1b	++++	-	660.4 ± 439.6	6.8 ± 5.0
1c	++++	-	557.8 ± 212.2	2.5 ± 1.4
1d	++++	-	224.1 ± 78.3	1.2 ± 0.7
1e	++++	-	620.7 ± 368.1	6.0 ± 5.9
1f	++++	-

"++++"은 ISIS 2302에 대한 1차 항체를 사용 시 강한 면역 화학적 염색을 나타내고; "-"은 백그라운드 수준과 비교하여 의미없는 염색을 나타낸다.

실시예 3

I기 임상 시험 시 인간에서 정맥내 투여된 ISIS 2302의 독성 및 약동학의 분석

ISIS 2302를 사용한 첫번째 임상 시험은, 표적 질환 상태에서 예비 치료 시험을 시작하기 전에, 건강한 대상체에서 항-ICAM-1 안티센스 올리고데옥시뉴클레오티드의 정맥내 투여에 대한 안정성 및 약동학을 평가하기 위한 것이다. 이것은 이중맹 플라시보-통제의 랜덤 (3:1, 약물:플라시보) 연구였다. 4명의 건강한 남성 지원자를 각각 7개의 단일 투여량 군 (0.06, 0.12, 0.24, 0.5, 1.0, 1.5 및 2.0 mg/kg) 및 다중 투여 군 (4회 투여 동안 2일에 한번씩 0.2, 0.5, 1.0 및 2.0 mg/kg)에 등록하였다. 상기 군들에 대해, 처음 5개의 단일 투여 군의 실험을 완결한 후에 다중 투여를 시작하여, 투여량-상승 방법으로 연구하였다. ISIS 2302 (또는 플라시보로서 멸균 정상 염수) 80 ml 부피를 2 시간에 걸쳐 정맥내 주입으로 투여하였다. 대상체는 누워있는 상태로 있고, 각 주입 개시 후 4 시간 동안 계속 ECG 모니터링하였다. 각각의 주입 후 간격 전에 및 주입 후 간격에서, 앙와위 혈압(supine blood pressure) 및 맥박, aPTT를 포함하는 응고 스크리닝, 트롬빈 시간, 프로트롬빈 시간, 혈장 보충 분리 산물 C3a 및 C5a, 호중구 수, 소변 미세단백질, 및 표준 실험 안전성 스크리닝 (혈액학, 혈액 생화학 및 소변검사)을 측정하였다. 마지막 주입 후 14일 및 21일에 다중 투여 군에서 혈청 샘플을 수집하고, 이를 ISIS 2302에 대한 항체 존재하에 분석하였다. 주입 시작 전 및 주입 시작 후 24 시간까지 ISIS 2302의 혈장 농도를 측정하기 위해 혈액 샘플을 채취하였다.

시판 사용가능한 C3a 및 C5a 검사 키트 (Amersham)에 의해 보충 분리 산물을 측정하였다. 종래 기재된 ELISA 방법 (Lacy and Voss, J. Immunol. Methods, 116:87-98, 1989)의 변형법을 이용하여, 항-ISIS 2302 항체의 존재하에 혈장을 시험하였다. ISIS 2302를 인식하는 모노클로날 항체를 생성하는 하이브리도마 세포주로부터의 배지를 양성 대조군으로 사용하였다. ISIS 2302가 마우스에서 면역원성으로 나타나지 않기 때문에, 키홀 림펫 헤모시아닌(keyhole limpet hemocyanin)에 접합된 ISIS 2302로 마우스를 면역화시킴으로써 상기 세포주를 생성하였다.

모세관 겔 전기영동 (CGE) (Leeds et al., Anal. Biochem., 235:36-43, 1996)에 의해 약물 분석을 수행하였다. 27개의 티미딘 뉴클레오티드 (T27)로 구성된 포스포로티오에이트 기준 올리고뉴클레오티드를 내부 기준으로서 혈장 및 소변에 첨가하였다. 이 방법을 사용하여 혈장 내에서 검출가능한 올리고뉴클레오티드의 선형 범위 농도는 10 nM 내지 20 μM (대략 0.07 내지 140 ㎍/ml)였다.

ISIS 2302의 2 시간 단일 주입 동안, 주입 30분 후 전체 올리고뉴클레오티드의 20％를 구성하는, 원형 약물(intact drug)의 합성된 n-1, n-2 및 n-3 쇄-단축 형태와 함께 공동-이동하는 대사물질이 혈장 중에 빠르게 나타났다. 흥미롭게는, 전체 올리고뉴클레오티드의 상대적인 비율은 전장의 약물, n-1, n-2 및 n-3 형태로 구성되고, 이러한 비율은 대사물질이 측정될 수 있는 동안인 주입 2 시간 동안 및 주입-후 추가 4 시간 이상 동안 상대적으로 일정하게 유지되었다. 따라서, 약물 또는 대사물질이 검출가능한 모든 시기에, 올리고뉴클레오티드의 대부분을 구성하는 원형 약물이 존재한다.

1.0 및 2.0 mg/kg 다중 투여 군으로부터의 소변 샘플에서 원형 약물 및 대사물질 농도를 분석하였다. 매우 낮은 농도의 약물 또는 대사물질이 소변에 배설되었지만 (투여된 전체 약물의 0.5％ 미만이 처음 6 시간에 배설되었음), 원형 약물, 및 n-1, n-2 및 n-3 형태를 측정할 수 있고, 더 짧은 형태의 양을 전기영동도로부터 평가할 수 있다. 주입 개시 후 6 시간에 걸쳐 배설된 원형 약물의 양은 평균적으로 투여량의 대략 0.05％였고, 이 시기의 모 약물 및 대사물질의 평가된 전체 배설량은 전체 투여량의 0.5％ 미만이었다.

실시예 4

I기 시험 시 인간에서 피하 투여된 ISIS 2302의 독성 및 약동학의 분석

피하 투여된 ISIS 2302의 I기 연구를 정상 지원자에서 수행하였다. 연구의 첫번째 시기에, 농도 범위가 50 내지 200 mg/ml인 ISIS 2302의 단일 1 ml 피하 주사의 내약성 및 약동학을 대상체의 4개 코호트(cohort)에 대해 이중맹 플라시보 통제 랜덤 (3:1; 연구 약물:플라시보) 방식으로 투여하였다. 모든 농도는, 수일 동안 지속되는 경증 주사 부위 홍반, 부종 및 경결을 생성하였다. 이것은 환자의 불평이기보다 대부분 임상 관찰이었고, 모든 투여량이 적절히 내약성이었음이 나타났다. 예비 분석은 시간 대 1 내지 3 시간의 최대 농도로 혈장 생체이용율이 약 50％를 나타냄을 나타냈다. 상기 기재된 경증 주사 부위 반응 이외에도 매우 저분화의 상보적 활성화 (C3a 만, C5a는 아님) 및 저분화 림프절염의 증거와 함께, 4주 동안 4회 투여량에 대해 2일에 1회 또는 4주 동안 매주 1회 1 mg/kg의 섭생이 최저로 내약성이었다). 2 mg/kg 볼루스 섭생은 내약성이 아니었다.

실시예 5

공개 임상 연구 시 경증 내지 중등증 궤양성 결장염의 치료에서 ISIS 2302 관장제의 상대적인 흡수 및 약리학적 활성의 분석 (CS-28)

ISIS 2302 관장제의 상대적인 흡수 (국소 및 전신 약동학) 및 약리학적 활성을 공개 임상 연구에서 평가하였다.

점막 유약성을 갖는, 경증 내지 중등증 활성 좌측 궤양성 결장염 (DIA 3-10)에 걸린 15명의 환자 인구를 연구하였다.

환자에게 240 mg ISIS 2302 관장제를 6주 동안 밤마다 제공하였다. 내시경 점막 생검 샘플을 기준선 및 치료 종료시 취하였다. 정량적 약물 분석을 위해 최초 및 최후 관장제 투여 후 모든 환자에 대해서 집중적인 24-시간 혈장 약동학 (PK) 샘플링을 수행하였다. 국소 정량적 PK 평가를 위해, 치료 말기 결장 생검 샘플을 하향 결장으로부터 수집하였다. 민감성이고 선택적인 혼성화 ELISA 생체분석 방법을 이용하여, 결장 조직 생검 및 시간에 따른 혈장 샘플을 약물 농도에 대해 분석하였다.

초기 12명의 환자로부터의 PK 및 임상 데이타를 분석하였다. 제1 관장 후 최대 혈장 농도에 대한 1.8 시간의 평균 시간에서, 최대 혈장 농도 (C_max)는 2.2 ng/mL 내지 38 ng/mL의 범위였다. 평균 AUC는 0.124 ㎍*hr/mL였다 (투여량의 1％ 미만이 전신 사용가능하였음을 나타냄). 단일 투여 후 혈장 PK 값은 연구 종결시 정류 상태 투여량과 비교 시 차이가 없었다. 반대로, 모 올리고뉴클레오티드의 결장 점막 조직 농도는 평균 4300 ng/습성 조직 g이었다. 국부 조직 노출을 혈장에서 관찰되는 최대 약물보다 100-배 더 높게 하였다. 장 염증, 위약성 및 잠재적인 자발적 출혈이 있는 인구에서, 이러한 낮은 전신 노출은 놀라운 것이었다. 치료하고자 하는 특정 지역에 약물을 제한하는 것은 화합물의 안정성 및 효율을 잠재적으로 증가시킨다.

질환 활성 지수 (DAI)는 12명의 환자 중 9명의 환자에서 기준선으로부터 제6주까지 유의하게 개선되었다. 연구에 참여한 모든 환자는 기준선에서 중등증 내지 중증 점막 질환을 가졌다 (변형된 마요(Mayo) 스코어, DAI의 내시경 양상 요소: 기준선에서 2 이상). 12명의 환자 중 7명은 연구 완료 시 점막 치유 및 위약성 해결이 입증되었다 (변형된 마요 스코어 0 또는 1). 이것은 실질적으로 기대한 것보다 더 높았다. 점막 약물 농도와 임상 반응의 관계는 입증되지 않았지만, 임상 반응은 맹점 시험의 효율에 필적하였다.

ISIS 2302 관장제의 정류 상태 및 단일 투여량 전신 유용성은 활성 결장 염증에 걸린 환자에서 최소이다. 알리카포르센의 효과적인 조직 농도를 달성하였다. 알리카포르센의 점막 조직 농도와 임상 반응의 관계는 환자의 적은 코호트에서는 성립되지 않았다.

실시예 6

경증 내지 중등증 궤양성 결장염 치료에서 ISIS 2302 관장제의 안전성 및 효율의 분석

ISIS 2302 관장제의 4가지 상이한 투여 섭생의 안전성 및 효율을 궤양성 결장염 치료에 대해 평가하고 플라시보-통제된 이중맹 2기 연구에서 분석하였다.

기준 방문 이전 30일 동안 경구 메살라민의 안정한 백그라운드 투여량, 및/또는 기준 방문 이전 60일 동안 안정한 백그라운드 6-머캅토퓨린에 대한 경증 내지 중등증 활성 말초 궤양성 결장염에 걸린 112명의 환자 집단 (DIA 4-10)에서, 기준 방문 90일 내 TNF-α 억제제, 메토트렉세이트, 시클로스포린 또는 탈리도미드의 부재를 확인하였다. 기준선에 있는 환자의 특징은 하기와 같다: 평균 연령 47.1세, 성별 M/F:67/45, 평균 질환 지속기간 7.5년, 평균 기준선 DAI 6.9. 기준선 특징은 연구군 간에 유사하였다. 하기의 5개 연구군 중 하나에 환자를 동일하게 랜덤화시켰다.

1. 240 mg ISIS 2302 (6주 동안 밤마다 투여).

2. 240 mg ISIS 2302 (10일 연속 밤마다 투여)에 이어 240 mg ISIS 2302 (남은 32일 밤동안 매 2일 밤마다 투여).

3. 240 mg ISIS 2302 (6주 동안 매 2일 밤마다 투여).

4. 120 mg ISIS 2302 (10일 연속 밤마다 투여)에 이어 120 mg ISIS 2302 (남은 32일 밤동안 매 2일 밤마다 투여).

5. 플라시보 관장제 (6주 동안 밤마다 투여).

모든 환자에게 플라시보 관장제 또는 ISIS 2302 관장제를 6주 동안 밤마다 투여하였다. ISIS 2302를 매 2일 마다 투여하는 경우, 플라시보 관장제를 다른 2일 밤에 교대로 2군 및 4군 환자에 투여하였다.

1차적인 반응 종점은 6주에서 DAI가 감소하고, 2차적인 반응은 급성 반응, 개선/점막 치유, 완화 및 재발이 있었다.

최종 투약으로부터 30일 동안 안정성에 대해 환자를 모니터링한 경우, 재발, 새로운 의약 또는 수술 개입, 또는 연구 투약 중지가 발생하지 않는 한, 환자는 30주 동안 안전성 및 효율에 대해 유지되었다.

밤마다 투여된 240 mg ISIS 2302 (알리카포르센)는 18주 및 30주 (p=0.04 및 0.03)에 플라시보보다, 유의하게 더 양호한 반응 속도를 갖는 것으로 입증되었다. 알리카포르센의 3개의 더 낮은 투여량 군은 플라시보에 대해 통계적인 개선을 입증하는 데 실패했다. 단지 중등증 질환군 (DAI 8-10)을 포함하는 서브세트를 분석하거나, "진성" 좌측 질환 (15-40 cm)에 걸린 대상체를 분석하는 경우, 통계적인 차이는 다른 시점에서 더욱 언급되고 심지어 의미가 있었다 (실시예 8 참조).

DAI의 개별 요소를 또한 분석하였다. 배변 빈도 및 직장 출혈의 영속적인 감소가 ISIS 2302로의 치료를 위한 반응에서 관찰되었다.

치료를 위한 반응의 영속성은 실질적이었다. 치료 6주 후에 처음으로 완화가 이루어진 대상체 중, 240 mg ISIS 2302 군에서 13명의 대상체 중 10명은 30주 (연구 종결)에 완화를 유지하였고, 반면 플라시보 군에서는 9명 중 4명이 완화를 유지하였다(p=0.12). 따라서, 240 mg ISIS 2302 군에 대한 반응의 중앙 지속기간은 유의하게 연장되었다 (처리군에 대해 ≥ 6 개월 대 플라시보에 대해 < 3).

6주 동안 매일 밤마다 투여된 240 mg ISIS 2302은 통계적으로 유의한 활성 및 반응 영속성, 질환 변형 활성을 입증하였고, 일반적으로 내약성이었다.

실시예 7

경증 내지 중등증 궤양성 결장염의 치료에서 ISIS 2302 관장제의 안전성 및 효율의 분석

히드록시프로필메틸셀룰로스 제제 중 ISIS 2302의 안전성 및 효율을 다중심 랜덤 이중맹 플라시보 통제된 투여량 범위 2기 연구에서 좌측 질환 플레어를 갖는 활성 경증 내지 중등증 활성 궤양성 결장염, 좌측 결장염 또는 전격성 결장염에 걸린 환자의 치료를 위해 평가하였다.

좌측 질환 플레어 및 DAI 스코어 4-10을 갖는 활성의 말초 궤양성 결장염 또는 전격성 결장염에 걸린 191명의 환자 집단은, 기준 방문 이전 30일 동안 경구 메살라민의 안정한 백그라운드 투여량, 및/또는 기준 방문 이전 60일 동안 안정한 백그라운드 6-머캅토퓨린, 기준 방문 90일 내에 TNF-α 억제제, 메토트렉세이트, 시클로스포린 또는 탈리도미드의 부재를 확인하였다. 기준선 환자의 특징은 하기와 같았다: 평균 연령 45.3세, 성별 M/F:86/73, 질환 평균 지속시간 9.3년, 평균 기준선 DAI 7.3. 기준선 특징은 연구군 사이에서 유사하였다. 관장 제제 중, 경증 내지 중등증의 궤양성 결장염을 위한 일반적인 치료제인, 120 mg ISIS 2302, 240 mg ISIS 2302 또는 4.0 g 메살라민으로 치료하기 위해 환자를 3개 군으로 동등하게 랜덤화하였다. 제제를 6주 동안 밤마다 투여하였다.

ISIS 2302 투여량은 이들이 개시 2기 투여량 범위 연구에서 통계적으로 유의한 효율을 나타내기 때문에 선택되었다. 동물 연구를 근거로 상기 투여량을 예측하여 염증성 장 질환에 대한 동물 약리학 모델에서 효과적인 것으로 나타나는 국부 조직 농도를 수득하였다. 1차적인 반응 종점은 6주에서 DAI가 감소하고, 2차적인 반응은 급성 반응, 개선/점막 치유, 완화 및 재발이 있다.

최종 투약으로부터 30일 동안 안정성에 대해 환자를 모니터링한 경우, 재발, 새로운 의약 또는 수술 개입, 또는 연구 투약 중지가 발생하지 않는 한, 환자는 30주 동안 안전성 및 효율에 대해 유지되었다. 30주까지 추가 또는 별도의 의약 또는 수술 개입을 요구하지 않는 이러한 환자는 24주에 걸쳐 안전성 및 효율에 대해 유지되었다. 혈액 샘플을 혈장에서 채취하여, 처리군 당 환자 10명의 하위집단에서 최초 관장제 투여 후 24 시간, 3주 및 6주 동안 특정 간격으로 약물 농도를 측정하였다.

240 mg ISIS 2302 및 메살라민 관장제 간의 임상 반응 속도는 연구에서 유사하였고, 상기 두가지는 ISIS 2302 120 mg 관장제보다 우수하였다. 하기 표 3에서 볼 수 있는 바와 같이, ISIS 2302 및 메살라민에 대한 급성 반응은 유사하지만, ISIS 2302에 대한 반응이 실질적으로 더 영속적이고, DAI, 의사 평가, 임상 완화 및 점막 치유에 있어서 ％ 감소로 측정된 바와 같이 지속되었다.

ISIS 2302 대 메살라민을 사용한 치료에 대한 반응
기저선으로부터의 DAI에서 평균 ％ Δ	6주	12주	18주	30주	54주
메살라민 (4 g)	-49.6	-40.0	-39.3	-33.1	-75.0
ISIS 2302 (240 mg)	-47.1	-56.3	-61.5	-46.9	-85.7

투여 6주 후에 최초로 반응하는 대상체 중, 240 mg ISIS 2302에 대한 반응의 중앙 지속시간은 6 개월에 근접하고, 메살라민 관장제로서 3 개월 미만이었다 (p=0.20). 240 mg ISIS 2302 군에서 제18주의 임상 완화 속도는 20％이고, 메살라민 처리군에서 5.6％였다 (p=0.03). 이러한 경향은 연구를 통틀어 모든 다른 시점에서 증명되었다. 심각한 악영향과 관련된 어떠한 치료도 임의의 연구군에서 보고되지 않았다. SAE 및 AE는 연구군 간에 유사하였다.

240 mg ISIS 2302 관장제는 급성 좌측 UC에서 메살라민 관장제과 유사한 활성을 갖는 것으로 입증되었다. 그러나, 240 mg ISIS 2302로 처리된 대상체는 메살라민보다 더 높은 완화 속도 및 더 긴 지속시간을 향하는 경향이 있었다. ISIS 2302가 일반적으로 더 내약성이었다.

실시예 8

중등증 내지 중증 궤양성 결장염 치료에서 ISIS 2302 관장제의 안전성 및 효율의 분석

중등증 내지 중증 질환에 대한 연구 집단의 서브세트 (n=26)를 분석하였다. 중등증 내지 중증 질환은 DAI 기준을 이용한 하기 스코어를 갖는 환자로서 정의되었다: 기준선 배변 빈도 ≥ 2, 직장 출혈 ≥ 2, 내시경 검사 ≥ 2, 및 관찰자 평가 ≥ 1. 이러한 서브세트 집단은 일부 처리군에서 기준선 및 플라시보 둘다에 대해 필적하는 유의한 DAI 감소를 나타냈다. 밤마다 ISIS 2302를 투여한 개체들에서는 연구 18주에 걸쳐 DAI가 유의하게 감소하였고 (p ≤ 0.05), 나머지 연구에 걸쳐 DAI 감소에 대하여 강한 경향성을 보였다 (p ≤ 0.09). 유사하게, 이틀 밤마다 ISIS 2302를 투여한 개체에서는 6주에 걸쳐 DAI가 유의하게 감소하였고 (p ≤ 0.05), 18주 및 30주에 DAI 감소에 대하여 강한 경향성을 보였다 (p ≤ 0.11). 이러한 서브세트 분석은 중등증 내지 중증 궤양성 결장염 치료에서 ISIS 2302의 효율을 입증한다. 또한, 분석은 보다 중증 질환에 걸린 개체에서 지속적인 임상 완화를 촉진함으로써 ISIS 2302의 질환 변형 활성을 입증한다.

SEQUENCE LISTING <110> Mark K. Wedel <120> OLIGONUCLEOTIDE MODULATION OF CELL ADHESION <130> BIOL0051WO <150> 60/632,826 <151> 2004-12-02 <150> 60/716,355 <151> 2005-09-12 <160> 2 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 3025 <212> DNA <213> H. sapien <220> <400> 1 gctataaagg atcacgcgcc ccagtcgacg ctgagctcct ctgctactca gagttgcaac 60 ctcagcctcg ctatggctcc cagcagcccc cggcccgcgc tgcccgcact cctggtcctg 120 ctcggggctc tgttcccagg acctggcaat gcccagacat ctgtgtcccc ctcaaaagtc 180 atcctgcccc ggggaggctc cgtgctggtg acatgcagca cctcctgtga ccagcccaag 240 ttgttgggca tagagacccc gttgcctaaa aaggagttgc tcctgcctgg gaacaaccgg 300 aaggtgtatg aactgagcaa tgtgcaagaa gatagccaac caatgtgcta ttcaaactgc 360 cctgatgggc agtcaacagc taaaaccttc ctcaccgtgt actggactcc agaacgggtg 420 gaactggcac ccctcccctc ttggcagcca gtgggcaaga accttaccct acgctgccag 480 gtggagggtg gggcaccccg ggccaacctc accgtggtgc tgctccgtgg ggagaaggag 540 ctgaaacggg agccagctgt gggggagccc gctgaggtca cgaccacggt gctggtgagg 600 agagatcacc atggagccaa tttctcgtgc cgcactgaac tggacctgcg gccccaaggg 660 ctggagctgt ttgagaacac ctcggccccc taccagctcc agacctttgt cctgccagcg 720 actcccccac aacttgtcag cccccgggtc ctagaggtgg acacgcaggg gaccgtggtc 780 tgttccctgg acgggctgtt cccagtctcg gaggcccagg tccacctggc actgggggac 840 cagaggttga accccacagt cacctatggc aacgactcct tctcggccaa ggcctcagtc 900 agtgtgaccg cagaggacga gggcacccag cggctgacgt gtgcagtaat actggggaac 960 cagagccagg agacactgca gacagtgacc atctacagct ttccggcgcc caacgtgatt 1020 ctgacgaagc cagaggtctc agaagggacc gaggtgacag tgaagtgtga ggcccaccct 1080 agagccaagg tgacgctgaa tggggttcca gcccagccac tgggcccgag ggcccagctc 1140 ctgctgaagg ccaccccaga ggacaacggg cgcagcttct cctgctctgc aaccctggag 1200 gtggccggcc agcttataca caagaaccag acccgggagc ttcgtgtcct gtatggcccc 1260 cgactggacg agagggattg tccgggaaac tggacgtggc cagaaaattc ccagcagact 1320 ccaatgtgcc aggcttgggg gaacccattg cccgagctca agtgtctaaa ggatggcact 1380 ttcccactgc ccatcgggga atcagtgact gtcactcgag atcttgaggg cacctacctc 1440 tgtcgggcca ggagcactca aggggaggtc acccgcaagg tgaccgtgaa tgtgctctcc 1500 ccccggtatg agattgtcat catcactgtg gtagcagccg cagtcataat gggcactgca 1560 ggcctcagca cgtacctcta taaccgccag cggaagatca agaaatacag actacaacag 1620 gcccaaaaag ggacccccat gaaaccgaac acacaagcca cgcctccctg aacctatccc 1680 gggacagggc ctcttcctcg gccttcccat attggtggca gtggtgccac actgaacaga 1740 gtggaagaca tatgccatgc agctacacct accggccctg ggacgccgga ggacagggca 1800 ttgtcctcag tcagatacaa cagcatttgg ggccatggta cctgcacacc taaaacacta 1860 ggccacgcat ctgatctgta gtcacatgac taagccaaga ggaaggagca agactcaaga 1920 catgattgat ggatgttaaa gtctagcctg atgagagggg aagtggtggg ggagacatag 1980 ccccaccatg aggacataca actgggaaat actgaaactt gctgcctatt gggtatgctg 2040 aggccccaca gacttacaga agaagtggcc ctccatagac atgtgtagca tcaaaacaca 2100 aaggcccaca cttcctgacg gatgccagct tgggcactgc tgtctactga ccccaaccct 2160 tgatgatatg tatttattca tttgttattt taccagctat ttattgagtg tcttttatgt 2220 aggctaaatg aacataggtc tctggcctca cggagctccc agtcctaatc acattcaagg 2280 tcaccaggta cagttgtaca ggttgtacac tgcaggagag tgcctggcaa aaagatcaaa 2340 tggggctggg acttctcatt ggccaacctg cctttcccca gaaggagtga tttttctatc 2400 ggcacaaaag cactatatgg actggtaatg gttacaggtt cagagattac ccagtgaggc 2460 cttattcctc ccttcccccc aaaactgaca cctttgttag ccacctcccc acccacatac 2520 atttctgcca gtgttcacaa tgacactcag cggtcatgtc tggacatgag tgcccaggga 2580 atatgcccaa gctatgcctt gtcctcttgt cctgtttgca tttcactggg agcttgcact 2640 atgcagctcc agtttcctgc agtgatcagg gtcctgcaag cagtggggaa gggggccaag 2700 gtattggagg actccctccc agctttggaa gcctcatccg cgtgtgtgtg tgtgtgtatg 2760 tgtagacaag ctctcgctct gtcacccagg ctggagtgca gtggtgcaat catggttcac 2820 tgcagtcttg accttttgag ctcaagtgat cctcccacct cagcctcctg agtagctggg 2880 accataggct cacaacacca cacctggcaa atttgatttt tttttttttt ccagagacgg 2940 ggtcttgcaa cattgcccag acttcctttg tgttagttaa taaagctttc tcaactgcca 3000 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 3025 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense Compound <400> 2 gcccaagctg gcatccgtca 20

Claims

직장 투여용 의약의 제조를 위한, 서열 2를 포함한 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드 및 히드록시프로필 메틸셀룰로스를 포함하며 올리고뉴클레오티드에 대해 최소 전신 노출을 생성하는 조성물의 용도.
제1항에 있어서, 최소 전신 노출이 직장 투여 용량의 약 5％ 미만의 전신 유용성을 포함하는 것인 용도.
제1항에 있어서, 의약이 궤양성 결장염의 하나 이상의 지표를 개선하는 것인 용도.
제1항에 있어서, 의약이 점막 유약성, 배변 빈도, 직장 출혈 또는 질환 활성 지수 중 하나 이상을 개선하는 것인 용도.
제1항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 하나 이상의 포스포로티오에이트 연결을 포함하는 것인 용도.
제1항에 있어서, 의약이 지속적인 점막 치유를 생성하는 것인 용도.
제6항에 있어서, 지속적인 점막 치유가 약 90일 이상 동안 유지되는 것인 용도.
제6항에 있어서, 지속적인 점막 치유가 약 120일 이상 동안 유지되는 것인 용도.
제1항에 있어서, 의약이 질환 변형 활성을 갖는 것인 용도.
제2항에 있어서, 궤양성 결장염이 중등증 내지 중증 궤양성 결장염인 용도.
서열 1의 뉴클레오티드 2114 내지 2133과 특이적으로 혼성화하고 길이가 약 15 내지 30개의 핵산 염기 단위인 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물의 치료량을 개체에게 직장 투여하는 단계, 및

궤양성 결장염의 하나 이상의 지표의 개선에 대해 상기 개체를 모니터링하는 단계

를 포함하는, 상기 개체에서 궤양성 결장염의 하나 이상의 지표의 지속적인 개선을 위한 방법.
제11항에 있어서, 궤양성 결장염의 지표가 점막 유약성을 포함하는 것인 방법.
제11항에 있어서, 궤양성 결장염의 지표가 배변 빈도를 포함하는 것인 방법.
제11항에 있어서, 궤양성 결장염의 지표가 직장 출혈을 포함하는 것인 방법.
제11항에 있어서, 궤양성 결장염의 지표가 질환 활성 지수를 포함하는 것인 방법.
제11항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가 변형된 것인 방법.
제16항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가 하나 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 연결을 포함하는 것인 방법.
제16항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가 전적으로 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 연결만을 포함하는 것인 방법.
제11항에 있어서, 궤양성 결장염의 지속적인 개선이, 60일 이상 동안 개체에게 상기 조성물을 투여하는 치료 기간의 종료 후에 궤양성 결장염의 하나 이상의 지표의 개선을 포함하는 것인 방법.
제11항에 있어서, 궤양성 결장염의 지속적인 개선이, 90일 이상 동안 개체에게 상기 조성물을 투여하는 치료 기간의 종료 후에 궤양성 결장염의 하나 이상의 지표의 개선을 포함하는 것인 방법.
제11항에 있어서, 직장 투여된 조성물이 관장제인 방법.
제11항에 있어서, 치료량이 하루에 약 240 mg 이상의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 것인 방법.
제11항에 있어서, 조성물에 대한 전신 노출이 투여량의 5％ 미만인 방법.
제11항에 있어서, 올리고뉴클레오티드의 길이가 약 18 내지 22개의 핵산 염기 단위인 방법.
서열 2를 포함한 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물의 치료량을 직장 투여하는 단계, 및

궤양성 결장염의 하나 이상의 지표의 개선에 대해 개체를 모니터링하는 단계

를 포함하는, 상기 개체에서 궤양성 결장염의 하나 이상의 지표의 지속적인 개선을 위한 방법.
제25항에 있어서, 궤양성 결장염의 지표가 점막 유약성을 포함하는 것인 방법.
제25항에 있어서, 궤양성 결장염의 지표가 배변 빈도를 포함하는 것인 방법.
제25항에 있어서, 궤양성 결장염의 지표가 직장 출혈을 포함하는 것인 방법.
제25항에 있어서, 궤양성 결장염의 지표가 질환 활성 지수를 포함하는 것인 방법.
제25항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가 변형된 것인 방법.
제30항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가 하나 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 연결을 포함하는 것인 방법.
제30항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가 전적으로 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 연결만을 포함하는 것인 방법.
제25항에 있어서, 궤양성 결장염의 지속적인 개선이, 60일 이상 동안 개체에게 상기 조성물을 투여하는 치료 기간의 종료 후에 궤양성 결장염의 하나 이상의 지표의 개선을 포함하는 것인 방법.
제25항에 있어서, 궤양성 결장염의 지속적인 개선이, 90일 이상 동안 개체에게 상기 조성물을 투여하는 치료 기간의 종료 후에 궤양성 결장염의 하나 이상의 지표의 개선을 포함하는 것인 방법.
제25항에 있어서, 직장 투여된 조성물이 관장제인 방법.
제25항에 있어서, 치료량이 하루에 약 240 mg 이상의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 것인 방법.
제25항에 있어서, 조성물에 대한 전신 노출이 투여량의 5％ 미만인 방법.