KR20070063548A

KR20070063548A - Ａ2ｂ 아데노신 수용체 길항제를 사용하는, 기도 개형 및폐 염증의 예방 및 치료 방법

Info

Publication number: KR20070063548A
Application number: KR1020077008536A
Authority: KR
Inventors: 디완 쩡; 마이클 알 블랙번; 루이즈 벨라디넬리
Original assignee: 씨브이 쎄러퓨틱스, 인코포레이티드
Priority date: 2004-10-15
Filing date: 2005-10-14
Publication date: 2007-06-19
Also published as: JP2012056965A; CA2583986A1; IL182493A0; RU2007117907A; MX2007004373A; NZ589657A; WO2006044610A1; AU2005295654A1; NZ554485A; RU2391103C2; EP1799221A1; AU2005295654B2; CN101039677A; EP2311462A1; US8466129B2; JP2008516969A; NO20072466L; US20100105706A1; US20060159627A1

Abstract

본 발명은 A_2B 아데노신 수용체 길항제를 사용하는, 기도 개형 예방 방법에 관한 것이다. 본 발명은 천식, COPD, 폐 섬유증, 폐기종, 및 기타 폐 질환의 치료 및 예방에 유용하다. 본 발명은 또한 그 방법에 사용하기 위한 약학 조성물에 관한 것이다.

Description

Ａ2Ｂ 아데노신 수용체 길항제를 사용하는, 기도 개형 및 폐 염증의 예방 및 치료 방법 {METHOD OF PREVENTING AND TREATING AIRWAY REMODELING AND PULMONARY INFLAMMATION USING A2B ADENOSINE RECEPTOR ANTAGONISTS}

본 발명은 A_2B 아데노신 수용체 길항제를 사용하는, 기도 개형 및/또는 폐 염증의 예방 방법에 관한 것이다. 본 발명은 천식, COPD, 폐 섬유증, 폐기종, 및 기타 폐 질환의 치료 및 예방에 유용하다. 본 발명은 또한 그 방법에 사용하기 위한 약학 조성물에 관한 것이다.

미국 천식 및 알레르기 재단 (Asthma and Allergy Foundation of America) 및 국립 제약 협회 (National Pharmaceutical Council) 에 따르면, 어림잡아 1700 만 미국인들이 현재 천식을 앓고 있다. 그것은 가장 흔한 만성 유년기 질환이며, 20 명 중 한 명이 넘는 어린이에게, 전부해서 거의 5 백만 명의 어린이에게 영향을 미치고, AIDS 및 결핵 이외에, 사망률이 증가하고 있는 유일한 만성 질환이다. 매년 5,000 명이 넘는 미국인들이 천식으로 인하여 사망한다.

1998 년에 천식의 연간 비용은 $113 억으로 추산되었다. 직접 비용이 $75 억을 차지하고, 간접 비용은 $38 억이었다. 상기 비용 중 입원이 단일로는 가장 큰 비율을 차지하고, 거의 50 만 입원에 달하며, 160 억이 응급실을 찾고, 천만이 넘게 진료실을 찾는다. 분명히, 상기 질병의 신규의 치료 방법이 상당히 요구된다.

[Elias 등 (1999), J. Clin . Inv ., 104(8):1001-1006] 에서 검토한 바와 같이, 상기 질병은 완전히 가역적인 장애라고 생각되었기 때문에, 이전에는 천식의 발병에 있어서 기도 개형의 효과는 알려져 있지 않았다. 그러나, 더욱 최근의 연구로 인하여, 천식 도중 유의한 기도 개형이 일어나며, 이 개형의 정도는 증상의 심각성에 보통 비례함이 밝혀졌다. 개형은 전형적으로는 기도 벽 비대, 상피하 섬유증의 발생, 근육세포 근질량 증가, 근육섬유모세포 증식, 및 점액 화생의 형태를 취한다. 기도 개형은 또한 만성 폐색성 폐 장애 (COPD), 및 폐 섬유증의 공통 진행 인자이다. 폐 염증은 또한 기도 개형 발생의 일반 요소이고, 세기관지염, 치조염, 및/또는 맥관염을 예로 들 수 있다.

기도 개형과 천식의 상관관계는 천식 연구의 새로운 방법을 나타낸다. 최근 부신피질 스테로이드 및 류코트린 수용체 길항제의, 기도 개형의 예방 또는 치료능이 보고되었다 (Hoshino (2004) Clin Rev Allergy Immunol. 27(1):59-64 참조). 장기간의 부신피질 스테로이드 치료의 잠재적인 부정적 부작용 및 류코트린 수용체 길항제 효능에 관한 불특정성으로 인하여, 기도 개형을 저해하는 다른 방법이 강력하게 요구된다.

아데노신은 천식 및 COPD 에서 일익을 담당한다고 알려져 있다 (Spicuzza 등 (2003) TiPS 24(8):409-4130; Mann 등 (1986) J Appl Physiol 61:1667-1676; 및 Feoktistov 등 (1998) Trends Pharmacol Sci 19:148-153 참조). 아데노신의 연관을 지지하는 임상적인 증거에는 다음이 포함된다:

1) 천식 환자에서 알레르겐 공격에 의해서 아데노신의 혈장 농도가 증가하고, 천식 및 COPD 환자에서 기관지 폐포 세척액 중 아데노신 수치가 상승함 (Driver 등 (1993). Am Rev Respir Dis 148:91-97)

2) (AMP 로서의) 아데노신은 천식 환자에서는 기관지수축을 유도하지만, 정상 대상체에서는 그렇지 않고 (Cushley 등 (1983) Br J Clin Pharmacol 15:161-165), 비만 세포로부터 방출되는 매개체, 예컨대 히스타민, 트립타아제, LTC4 및 PDG2 의 농도를 증가시킴 (Crimi 등 (1997) Allergy 52:48-54). 아데노신-유도 기관지수축은 비만 세포 활성화를 저해하거나 비만 세포로부터 방출되는 매개체에 길항제로서 작용하는 약물에 의해서 약화된다. 따라서, 아데노신-유도 기관지수축의 잠재적 기작은 비만 세포 활성화에 대한 그것의 효과에 기인할 것이다 (Polosa 등 (2002) Thorax 57:649-654 및 Polosa (2002) Eur Respir J 20:488-496.).

3) 아데노신은 또한 호산구증가증 및 염증을 유도한다고 알려졌다. AMP-공격의 전체 효과 및 잠재적인 임상적 효용이 최근의 리뷰 논문 [Spicuzza and Polosa, (2003) Curr Opin Allergy Clin Immunol 3:65-69] 에 요약되어 있다.

아데노신은 A₁, A_2A, A_2B, 및 A₃ (모두가 중요한 생리학적 과정을 조절함) 로서 공지된 아데노신 수용체류와 상호작용함으로써 그의 생물학적 효과를 발휘하는 자연발생적 뉴클레오시드이다. 여러 수용체 중, A_2B 아데노신 수용체는 비만 세포 활성화, 혈관확장, 및 세포 성장의 조절에 대한 그들의 연관을 통해서 천식과 가장 두드러지게 관련된다고 여겨진다 (Adenosine A_2B Receptors as Therapeutic Targets, Drug Dev Res 45:198; Feoktistov 등, Trends Pharmacol Sci 19:148-153 참조). 구체적으로, 아데노신 A_2B 수용체 길항제는 비만 세포의 활성화에 영향을 미친다고 알려졌으며, 따라서 급성 기도 과민증의 저해와 관련된다. 놀랍게도, 이제 A_2B 아데노신 수용체 길항제가 또한 기도 개형 및 폐 염증의 예방에 유용하다는 것을 알게 되었다.

따라서, 완전히 또는 부분적으로 선택적인 강력한 A_2B 길항제인 화합물, 즉, A_2B 아데노신 수용체를 저해하는 화합물의 투여에 의한 기도 개형 및/또는 폐 염증의 예방 방법을 제공하는 것이 요구된다.

발명의 개요

본 발명의 한 구현예에서, 유전적으로 및/또는 환경적으로 기도 개형 및/또는 폐 염증에 걸리기 쉬운 포유류에게 치료적 유효량의 A_2B 수용체 길항제를 투여하여 기도 개형 및/또는 폐 염증을 치료 및 예방하는 방법이 제공된다.

본 발명의 또다른 구현예에서, 유전적으로 및/또는 환경적으로 기도 개형에 걸리기 쉬운 포유류에게, 화학식 I 또는 화학식 II 의 구조를 갖는 치료적 유효량의 A_2B 수용체 길항제를 투여하여 기도 개형 및/또는 폐 염증을 치료 및 예방하는 방법이 제공된다:

[식 중:

R¹ 및 R² 는 독립적으로는 수소, 임의치환 알킬, 또는 -D-E 기 (식 중, D 는 공유 결합 또는 알킬렌이고, E 는 임의치환 알콕시, 임의치환 시클로알킬, 임의치환 아릴, 임의치환 헤테로아릴, 임의치환 헤테로시클릴, 임의치환 알케닐 또는 임의치환 알키닐이고, 단, D 가 공유 결합일 때, E 가 알콕시일 수 없음) 로부터 선택되고;

R³ 는 수소, 임의치환 알킬 또는 임의치환 시클로알킬이고;

X 는 임의치환 아릴렌 또는 임의치환 헤테로아릴렌이고;

Y 는 공유 결합이거나 하나의 탄소 원자가 임의로 -O-, -S-, 또는 -NH- 로 대체될 수 있고, 히드록시, 알콕시, 임의치환 아미노, 또는 -COR (식 중, R 은 히드록시, 알콕시 또는 아미노임) 로 임의치환되는 알킬렌이고;

Z 는 임의치환 단환식 아릴 또는 임의치환 단환식 헤테로아릴이고; 또는

X 가 임의치환 헤테로아릴렌이고, Y 가 공유 결합일 때, Z 는 수소임].

본 발명의 더욱 또다른 구현예에서, 치료적 유효량의 A_2B 수용체 길항제, 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체를 함유하는 약학적 제형물이 제공된다. 상기 제형물은 바람직하게는 경구 투여용이다.

화학식 I 및 II 의 화합물의 한 가지 바람직한 군은 R¹ 및 R² 가 독립적으로는 수소, 임의치환 저급 알킬, 또는 -D-E 기 (식 중, D 는 공유 결합 또는 알킬렌이고, E 는 임의치환 페닐, 임의치환 시클로알킬, 임의치환 알케닐, 또는 임의치환 알키닐임) 인 것들, 특히 R³ 가 수소인 것들이다.

이 군 내에서, 첫 번째로 바람직한 화합물 부류에는 R¹ 및 R² 가 독립적으로는 시클로알킬로 임의치환되는 저급 알킬, 바람직하게는 n-프로필이고, X 가 임의치환 페닐렌인 것들이 포함된다. 이 부류 내에서, 바람직한 하위 부류의 화합물은 Y 가, 탄소 원자가 산소로 대체되는 알킬렌, 바람직하게는 -O-CH₂- (더욱 특히 여기서 산소는 페닐렌에 대한 결합점임) 를 포함하는 알킬렌인 것들이다. 이 하위 부류 내에서, Z 는 임의치환 옥사디아졸, 특히 임의치환 [1,2,4]-옥사디아졸-3-일, 특히 임의치환 페닐 또는 임의치환 피리딜로 치환된 [1,2,4]-옥사디아졸-3-일인 것이 바람직하다.

두 번째로 바람직한 화합물 부류에는 X 가 임의치환 1,4-피라졸렌인 것들이 포함된다. 이 부류 내에서, 바람직한 하위 부류의 화합물은 Y 가 공유 결합 또는 알킬렌, 특히 저급 알킬렌이고, Z 가 수소, 임의치환 페닐, 임의치환 피리딜, 또는 임의치환 옥사디아졸인 것들이다. 이 하위 부류 내에서, 한 가지 바람직한 구현예에는 R¹ 이 시클로알킬로 임의치환되는 저급 알킬이고, R² 가 수소인 화합물이 포함된다. 더욱 바람직한 구현예에는 Y 가 -(CH₂)- 또는 -CH(CH₃)- 이고, Z 가 임의치환 페닐인, 또는 Y 가 -(CH₂)- 또는 -CH(CH₃)- 이고, Z 가 임의치환 옥사디아졸, 특히 3,5-[1,2,4]-옥사디아졸인, 또는 Y 가 -(CH₂)- 또는 -CH(CH₃)- 이고, Z 가 임의치환 피리딜인 화합물이 포함된다. 이 하위 부류 내에서, R¹ 및 R² 가 독립적으로는 시클로알킬로 임의치환되는 저급 알킬, 특히 n-프로필인 화합물이 역시 바람직하다. Y 가 공유 결합, -(CH₂)- 또는 -CH(CH₃)- 이고, Z 가 수소, 임의치환 페닐, 또는 임의치환 피리딜이고, 특히 Y 가 공유 결합이고, Z 가 수소인 화합물이 더욱 바람직하다.

오늘날, 본 발명에 사용하기에 바람직한 화합물에는 하기가 포함되지만, 여기에 한정되지는 않는다:

1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]-메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-프로필-8-[1-벤질피라졸-4-일]-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-부틸-8-(1-{[3-플루오로페닐]메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-프로필-8-[1-(페닐에틸)피라졸-4-일]-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

8-(1-{[5-(4-클로로페닐)(1,2,4-옥사디아졸-3-일)]메틸}피라졸-4-일)-1-프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

8-(1-{[5-(4-클로로페닐)(1,2,4-옥사디아졸-3-일)]메틸}피라졸-4-일)-1-부틸-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1,3-디프로필-8-피라졸-4-일-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-메틸-3-sec-부틸-8-피라졸-4-일-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-시클로프로필메틸-3-메틸-8-{1-[(3-트리플루오로메틸페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1,3-디메틸-8-{1-[(3-플루오로페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

3-메틸-1-프로필-8-{1-[(3-트리플루오로메틸페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

3-에틸-1-프로필-8-{1-[(3-트리플루오로메틸페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1,3-디프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1,3-디프로필-8-{1-[(3-플루오로페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-에틸-3-메틸-8-{1-[(3-플루오로페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1,3-디프로필-8-{1-[(2-메톡시페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1,3-디프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)-페닐]에틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1,3-디프로필-8-{1-[(4-카르복시페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

2-[4-(2,6-디옥소-1,3-디프로필(1,3,7-트리히드로퓨린-8-일))피라졸릴]-2-페닐아세트산;

8-{4-[5-(2-메톡시페닐)-[1,2,4]옥사디아졸-3-일메톡시]페닐}-1,3-디프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

8-{4-[5-(3-메톡시페닐)-[1,2,4]옥사디아졸-3-일메톡시]페닐}-1,3-디프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

8-{4-[5-(4-플루오로페닐)-[1,2,4]옥사디아졸-3-일메톡시]페닐}-1,3-디프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온.

1-(시클로프로필메틸)-8-[1-(2-피리딜메틸)피라졸-4-일]-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-n-부틸-8-[1-(6-트리플루오로메틸피리딘-3-일메틸)피라졸-4-일]-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

8-(1-{[3-(4-클로로페닐)(1,2,4-옥사디아졸-5-일)]메틸}피라졸-4-일)-1,3-디프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1,3-디프로필-8-[1-({5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]이속사졸-3-일}메틸)피라졸-4-일]-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1,3-디프로필-8-[1-(2-피리딜메틸)피라졸-4-일]-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

3-{[4-(2,6-디옥소-1,3-디프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-8-일)피라졸릴]메틸}벤조산;

1,3-디프로필-8-(1-{[6-(트리플루오로메틸)(3-피리딜)]메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1,3-디프로필-8-{1-[(3-(1H-1,2,3,4-테트라졸-5-일)페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

6-{[4-(2,6-디옥소-1,3-디프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-8-일)피라졸릴]메틸}피리딘-2-카르복실산;

3-에틸-1-프로필-8-[1-(2-피리딜메틸)피라졸-4-일]-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

8-(1-{[5-(4-클로로페닐)이속사졸-3-일]메틸}피라졸-4-일)-3-에틸-1-프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

8-(1-{[3-(4-클로로페닐)(1,2,4-옥사디아졸-5-일)]메틸}피라졸-4-일)-3-에틸-1-프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

3-에틸-1-프로필-8-(1-{[6-(트리플루오로메틸)(3-피리딜)]메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-(시클로프로필메틸)-3-에틸-8-(1-{[6-(트리플루오로메틸)(3-피리딜)]메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온; 및

3-에틸-1-(2-메틸프로필)-8-(1-{[6-(트리플루오로메틸)(3-피리딜)]메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온.

도 1 은 아데노신 데아미나아제 (ADA)-/- 마우스에서, 실시예 21 에 설명하는 바와 같이 아데노신 A_2B 수용체 길항제로 처리한 후, 폐 조직병리학적 변화에서의 차를 묘사한다. 폐를 모으고, H&E 염색을 사용하여 조직학적 분석을 위해서 처리하였다. (A) ADA+ 운반체 처리 마우스로부터의 폐. (B) ADA-/- 운반체 처리 마우스로부터의 폐. (C) ADA-/- 아데노신 A_2B 수용체 길항제 처리 마우스로부터의 폐. (D) ADA+ 운반체 처리 마우스의 폐 속 고배율 단편. (E) ADA-/- 운반체 처리 마우스의 폐 속 고배율 단편. (F) ADA-/- 아데노신 A_2B 수용체 길항제 처리 마우스의 폐의 고배율 단편. 화살표는 폐포 대식세포를 가리 킨다. A-C 에서의 축척 막대 = 100 ㎛, D-F 에서의 축척 막대 = 10 ㎛. 단편들은 각 처리로부터의 6 개의 상이한 샘플을 대표한다.

도 2 는 실시예 21 에 설명하는 바와 같이, 기도 세포충실성에 대한 아데노신 A_2B 수용체 길항제 (A_2B-A) 의 효과를 보여준다. (A) 마우스를 PBS 로 세척하고 전체 세포수를 측정하였다. (B 및 C) 세포를 현미경 슬라이드 위에 사이토스핀 (cytospin) 시키고, DiffQuick 으로 염색하고, 샘플 당 최소 200 개의 세포를 세어 세포 특이형태를 측정하였다. 값은 평균 전체 세포 × 10⁴ ± SEM 으로 나타낸다. *, 스튜던트 T 테스트 (students T test) 를 사용하여 ADA⁺ 동물과 비교하여 p<0.05 유의, n=8; #, 스튜던트 T 테스트를 사용하여 운반체-처리 ADA^-/- 마우스와 비교하여 p<0.05 유의, n=6-8.

도 3 은 실시예 21 에 설명하는 바와 같이 아데노신 A_2B 수용체 길항제로 처리한 ADA-/- 마우스에서 BAL 세포충실성의 결과를 나타낸다. 마우스의 폐들로부터 BAL 액을 모으고, 세포를 현미경 슬라이드 위에 사이토스핀시키고, DiffQuick 으로 염색하였다. (A) ADA+ 운반체 처리, (B) ADA+ 아데노신 A_2B 수용체 길항제 처리, (C) ADA-/- 운반체 처리, (D) ADA-/- 아데노신 A_2B 수용체 길항제 처리. 사진은 각 조건의 6 개의 별도의 샘플을 대표한다. 축척 막대 = 10 ㎛.

도 4 는 실시예 21 에 설명하는 바와 같이 정량적 RT-PCR 을 사용하여 전폐 추출물 중 측정한 각종 전-염증 (pro-inflammatory) 사이토킨의 전사 수준을 예시한다. (A) IL-6 (B) 에오탁신 (Eotaxin) 1 (C) TARC. 결과는 평균 pg 전사물 ± SEM 으로 나타낸다. *, 스튜던트 T 테스트를 사용하여 ADA⁺ 동물과 비교하여 p<0.05 유의; #, 스튜던트 T 테스트를 사용하여 운반체-처리 ADA^-/- 마우스와 비교하여 p<0.05 유의, ADA⁺ 마우스에서는 n=4, ADA^-/- 마우스에서는 n=8, n = 비검출.

도 5 는 α-평활근 액틴 면역염색의 결과를 보여준다. 폐 단편들을 α-평활근 액틴에 대한 항혈청으로 염색하여 근육섬유모세포를 시각화하였다 (갈색). (A) ADA⁺ 운반체 처리 마우스로부터의 폐. (B) ADA^-/- 운반체 처리 마우스로부터의 폐. (C) ADA^-/- 아데노신 A_2B 수용체 길항제 처리 마우스로부터의 폐. 단편들은 각 처리로부터의 6 마리의 상이한 마우스를 대표한다. 축척 막대 = 100 ㎛.

도 6 은 실시예 21 에 설명하는 바와 같이 아데노신 A_2B 수용체 길항제-처리 ADA-/- 마우스의 폐에서 콜라겐 침착을 묘사한다. 폐 단편을 Masson 의 트리크롬 (Trichrome) 으로 염색하여 콜라겐 침착을 시각화하였다 (청색). (A) ADA⁺ 운반체 처리 마우스로부터의 폐. (B) ADA⁺ 아데노신 A_2B 수용체 길항제 처리 마 우스로부터의 폐. (C) ADA^-/- 운반체 처리 마우스로부터의 폐. (D) ADA^-/- 아데노신 A_2B 수용체 길항제 처리 마우스로부터의 폐. 단편들은 각 처리로부터의 6 마리의 상이한 마우스를 대표한다. 축척 막대 =100 ㎛. (E) α-1 프로콜라겐 전사 수준을 평균 pg 전사물/㎍ RNA ± SEM 으로 나타낸다. *, 스튜던트 T 테스트를 사용하여 ADA⁺ 동물과 비교하여 p<0.05 유의; #, 스튜던트 T 테스트를 사용하여 운반체-처리 ADA^-/- 마우스와 비교하여 p<0.05 유의, ADA⁺ 마우스에서는 n=4, ADA^-/- 마우스에서는 n=8. (F) 가용성 콜라겐 단백질 수준을 BAL 액 ㎖ 당 평균 ㎍ 콜라겐 ± SEM 으로 나타낸다. *, 스튜던트 T 테스트를 사용하여 ADA⁺ 동물과 비교하여 p<0.05 유의; #, 스튜던트 T 테스트를 사용하여 운반체-처리 ADA^-/- 마우스와 비교하여 p<0.05 유의, ADA⁺ 마우스에서는 n=4, ADA^-/- 마우스에서는 n=8.

도 7 은 섬유증 관련 유전자의 발현을 보여준다. RNA 를 각종 섬유증 관련 전사물에 있어서 정량적 RT-PCR 을 사용하여 분석하기 위해서 전폐로부터 추출하였다. 결과는, 아데노신 A_2B 수용체 길항제 처리 ADA^-/- 마우스로부터의 폐가 TGF-β1 (A), 오스테오폰틴 (OPN) (B), 및 플라스미노겐 활성자 저해제-1 (Pai(Plasminogen activator inhibitor)-1) (C) 에 있어서, 운반체 처리 ADA^-/- 마 우스의 폐에서 보이는 것과 비교하여, 더 낮은 수준의 전사물을 나타낸다는 것을 입증한다. *, 스튜던트 T 테스트를 사용하여 ADA⁺ 마우스와 비교하여 p<0.05 유의, #, 스튜던트 T 테스트를 사용하여 운반체-처리 ADA^-/- 마우스와 비교하여 p<0.05 유의, ADA+ 마우스에서는 n=4, ADA⁺ 마우스에서는 n=8.

도 8 은 폐포 기도 파열과 관련된 유전자의 상승을 보여준다. TIMP-1, MMP-9, 및 MMP-12 의 전사 수준을 정량적 RT-PCR 을 사용하여 전폐 RNA 추출물에서 측정하였다. (A) TIMP-1. (B) MMP-9. (C) MMP-12. 데이터는 전사물의 평균 pg/㎍ RNA ± SEM 으로 나타낸다. *, 스튜던트 T 테스트를 사용하여 ADA⁺ 마우스와 비교하여 p<0.05 유의, 튜던트 T 테스트를 사용하여 운반체-처리 ADA^-/- 마우스와 비교하여 p<0.05 유의, ADA⁺ 마우스에서는 n=4, ADA^-/- 마우스에서는 n=8.

도 9 는 실시예 21 에 설명하는 바와 같이 아데노신 A_2B 수용체 길항제로 처리한 ADA-/- 마우스에서의 폐포 파열을 나타낸다. 폐를 모으고, H&E 염색을 사용하여 조직학적 분석을 위해서 처리하였다. (A) ADA+ 운반체 처리 마우스로부터의 폐, (B) ADA-/- 운반체 처리 마우스로부터의 폐, 및 (C) 아데노신 A_2B 수용체 길항제로 처리한 ADA-/- 마우스로부터의 폐. 사진들은 모두 동배율 (10 ×) 이며, 각 처리군에 있어서 6 마리의 상이한 동물로부터의 결과를 나타낸다. (D) 폐포 기도 크기를 ImagePro 를 사용하여 계산하고, 데이터는 평균 코드 길이 ± SEM 으로 나타낸다, n = 6. (D) 에서, * 는, 결과가 ADA+ 마우스와는 상당히 다름을 나타내고, ** 는, 결과가 ADA-/- 운반체 처리 마우스와는 상당히 다름을 나타낸다.

정의 및 일반 변수

본 명세서에서 사용할 때, 하기의 단어 및 어구는 일반적으로 아래에 나타내는 바와 같은 의미를 가지고자 하며, 단, 그것들을 사용하는 문맥이 달리 나타내는 한은 예외이다.

"알킬" 이라는 용어는 탄소 원자가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 개인 1라디칼 분지형 또는 비분지형 포화 탄화수소 사슬을 가리킨다. 이 용어는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, t-부틸, n-헥실, n-데실, 테트라데실 등과 같은 기로 예시된다.

"치환 알킬" 이라는 용어는 하기를 가리킨다:

1) 알케닐, 알키닐, 알콕시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 아미노카르보닐, 알콕시카르보닐아미노, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록시, 케토, 티오카르보닐, 카르복시, 카르복시알킬, 아릴티오, 헤테로아릴티오, 헤테로시클릴티오, 티올, 알킬티오, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 아미노설포닐, 아미노카르보닐아미노, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO₂-알킬, SO₂-아릴 및 -SO₂-헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 치환기가 1, 2, 3, 4 또는 5 개, 바람직하게는 치환기가 1 내지 3 개인, 앞서 정의한 바와 같은 알킬기. 정의에 의해서 달리 강제하지 않는다면, 모든 치환기는 알킬, 카르복시, 카르복시알킬, 아미노카르보닐, 히드록시, 알콕시, 할로겐, CF₃, 아미노, 치환 아미노, 시아노, 및 -S(O)_nR (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고, n 은 0, 1 또는 2 임) 로부터 선택되는 1, 2, 또는 3 개의 치환기로 추가로 임의치환될 수 있다; 또는

2) 산소, 황 및 NR_a- (식 중, R_a 는 수소, 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 시클로알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로시클릴로부터 선택됨) 로부터 독립적으로 선택되는 1-10 개의 원자가 삽입되는, 앞서 언급한 바와 같은 알킬기. 모든 치환기는 알킬, 알콕시, 할로겐, CF₃, 아미노, 치환 아미노, 시아노, 또는 -S(O)_nR (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고, n 은 0, 1 또는 2 임) 로 추가로 임의치환될 수 있다; 또는

3) 앞서 정의한 바와 같은 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 치환기도 가지며, 또한 앞서 정의한 바와 같은 1-10 개의 원자가 삽입되는, 앞서 정의한 바와 같은 알킬기.

"저급 알킬" 이라는 용어는 탄소 원자가 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6 개인 1라디칼 분지형 또는 비분지형 포화 탄화수소 사슬을 가리킨다. 이 용어는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, t-부틸, n-헥실 등과 같은 기로 예시된다.

"치환 저급 알킬" 이라는 용어는 치환 알킬에 대하여 정의한 바와 같은 치환기가 1 내지 5 개인, 바람직하게는 치환기가 1, 2, 또는 3 개인 앞서 정의한 바와 같은 저급 알킬, 또는 치환 알킬에 대하여 정의한 바와 같은 1, 2, 3, 4, 또는 5 개의 원자가 삽입된 앞서 정의한 바와 같은 저급 알킬기, 또는 앞서 정의한 바와 같은 1, 2, 3, 4, 또는 5 개의 치환기도 가지며, 또한 앞서 정의한 바와 같은 1, 2, 3, 4, 또는 5 개의 원자가 삽입된 앞서 정의한 바와 같은 저급 알킬기를 가리킨다.

"알킬렌" 이라는 용어는 탄소 원자가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 개, 바람직하게는 탄소 원자가 1-10 개, 더욱 바람직하게는 탄소 원자가 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 개인 분지형 또는 비분지형 포화 탄화수소 사슬의 2라디칼을 가리킨다. 이 용어는 메틸렌 (-CH₂-), 에틸렌 (-CH₂CH₂-), 프로필렌 이성질체 (예를 들어, -CH₂CH₂CH₂- 및 -CH(CH₃)CH₂-) 등과 같은 기로 예시된다.

"저급 알킬렌" 이라는 용어는, 바람직하게는 탄소 원자가 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6 개인, 분지형 또는 비분지형 포화 탄화수소 사슬의 2라디칼을 가리킨다.

"치환 알킬렌" 이라는 용어는 하기를 가리킨다:

(1) 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 아미노카르보닐, 알콕시카르보닐아미노, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록시, 케토, 티오카르보닐, 카르복시, 카르복시알킬, 아릴티오, 헤테로아릴티오, 헤테로시클릴티오, 티올, 알킬티오, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 아미노설포닐, 아미노카르보닐아미노, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO₂-알킬, SO₂-아릴 및 -SO₂-헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 치환기가 1, 2, 3, 4, 또는 5 개인 앞서 정의한 바와 같은 알킬렌기. 정의에 의해서 달리 강제하지 않는다면, 모든 치환기는 알킬, 카르복시, 카르복시알킬, 아미노카르보닐, 히드록시, 알콕시, 할로겐, CF₃, 아미노, 치환 아미노, 시아노, 및 -S(O)_nR (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고, n 은 0, 1 또는 2 임) 로부터 선택되는 1, 2, 또는 3 개의 치환기로 추가로 임의치환될 수 있다; 또는

(2) 산소, 황 및 NR_a- (식 중, R_a 는 수소, 임의치환 알킬, 시클로알킬, 시클로알케닐, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로시클릴로부터 선택됨) 로부터 독립적으로 선택되는 원자, 또는 카르보닐, 카르복시에스테르, 카르복시아미드 및 설포닐로부터 선택되는 기 1-20 개가 삽입된 앞서 정의한 바와 같은 알킬렌기; 또는

(3) 앞서 정의한 바와 같은 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 치환기도 가지며, 또한 앞서 정의한 바와 같은 1-20 개의 원자가 삽입된 앞서 정의한 바와 같은 알킬렌기. 치환 알킬렌의 예는 클로로메틸렌 (-CH(Cl)-), 아미노에틸렌 (-CH(NH₂)CH₂-), 메틸아미노에틸렌 (-CH(NHMe)CH₂-), 2-카르복시프로필렌 이성질체 (-CH₂CH(CO₂H)CH₂-), 에톡시에틸 (-CH₂CH₂O-CH₂CH₂-), 에틸메틸아미노에틸 (-CH₂CH₂N(CH₃)CH₂CH₂-), 1-에톡시-2-(2-에톡시-에톡시)에탄 (-CH₂CH₂O-CH₂CH₂-OCH₂CH₂-OCH₂CH₂-) 등이다.

"아르알킬" 이라는 용어는 알킬렌기에 공유결합된 아릴기 (여기서 아릴 및 알킬렌은 본원에 정의되어 있음) 를 가리킨다. "임의치환 아르알킬" 은 임의치환 알킬렌기에 공유결합된 임의치환 아릴기를 가리킨다. 그러한 아르알킬기는 벤질, 페닐에틸, 3-(4-메톡시페닐)프로필 등으로 예시된다.

"알콕시" 라는 용어는 R-O- 기 {식 중, R 은 임의치환 알킬 또는 임의치환 시클로알킬이고, 또는 R 은 -Y-Z 기 [식 중, Y 는 임의치환 알킬렌이고, Z 는 임의치환 알케닐, 임의치환 알키닐; 또는 임의치환 시클로알케닐임] 임 (여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬 및 시클로알케닐은 본원에 정의한 바와 같음)} 를 가리킨다. 바람직한 알콕시기는 임의치환 알킬-O- 이고, 예로서, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소-프로폭시, n-부톡시, tert-부톡시, sec-부톡시, n-펜톡시, n-헥속시, 1,2-디메틸부톡시, 트리플루오로메톡시 등을 포함한다.

"알킬티오" 라는 용어는 R-S- 기 (식 중, R 은 알콕시에 대하여 정의한 바와 같음) 를 가리킨다.

"알케닐" 이라는 용어는 바람직하게는 탄소 원자가 2 내지 20 개, 더욱 바람직하게는 탄소 원자가 2 내지 10 개, 더 더욱 바람직하게는 탄소 원자가 2 내지 6 개이고, 이중 결합 (비닐) 이 1-6, 바람직하게는 1 개인 분지형 또는 비분지형 불포화 탄화수소기의 1라디칼을 가리킨다. 바람직한 알케닐기에는 에테닐 또는 비닐 (-CH=CH₂), 1-프로필렌 또는 알릴 (-CH₂CH=CH₂), 이소프로필렌 (-C(CH₃)=CH₂), 비시클로[2.2.1]헵텐 등이 포함된다. 알케닐이 질소에 결합되는 경우, 이중 결합은 질소에 대하여 알파일 수 없다.

"저급 알케닐" 이라는 용어는 탄소 원자가 2 내지 6 개인 앞서 정의한 바와 같은 알케닐을 가리킨다.

"치환 알케닐" 이라는 용어는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 아미노카르보닐, 알콕시카르보닐아미노, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록시, 케토, 티오카르보닐, 카르복시, 카르복시알킬, 아릴티오, 헤테로아릴티오, 헤테로시클릴티오, 티올, 알킬티오, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 아미노설포닐, 아미노카르보닐아미노, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO₂-알킬, SO₂-아릴 및 -SO₂-헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택된 치환기가 1, 2, 3, 4 또는 5 개, 바람직하게는 치환기가 1, 2, 또는 3 개인 앞서 정의한 바와 같은 알케닐기를 가리킨다. 정의에 의해서 달리 강제하지 않는다면, 모든 치환기는 알킬, 카르복시, 카르복시알킬, 아미노카르보닐, 히드록시, 알콕시, 할로겐, CF₃, 아미노, 치환 아미노, 시아노, 및 -S(O)_nR (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고, n 은 0, 1 또는 2 임) 로부터 선택되는 1, 2, 또는 3 개의 치환기로 추가로 임의치환될 수 있다.

"알키닐" 이라는 용어는 바람직하게는 탄소 원자가 2 내지 20 개, 더욱 바람직하게는 탄소 원자가 2 내지 10 개, 더 더욱 바람직하게는 탄소 원자가 2 내지 6 개이고, 아세틸렌 (삼중 결합) 불포화가 1 개 이상, 바람직하게는 1-6 개 부위인 불포화 탄화수소의 1라디칼을 가리킨다. 바람직한 알키닐기에는 에티닐 (-C≡CH), 프로파르길 (또는 프로프-1-인-3-일, -CH₂C≡CH) 등이 포함된다. 알키닐이 질소에 결합되는 경우, 삼중 결합은 질소에 대하여 알파일 수 없다.

"치환 알키닐" 이라는 용어는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 아미노카르보닐, 알콕시카르보닐아미노, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록시, 케토, 티오카르보닐, 카르복시, 카르복시알킬, 아릴티오, 헤테로아릴티오, 헤테로시클릴티오, 티올, 알킬티오, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 아미노설포닐, 아미노카르보닐아미노, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO₂-알킬, SO₂-아릴 및 -SO₂-헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 치환기가 1, 2, 3, 4 또는 5 개, 바람직하게는 치환기가 1, 2, 또는 3 개인 앞서 정의한 바와 같은 알키닐기를 가리킨다. 정의에 의해서 달리 강제하지 않는다면, 모든 치환기는 알킬, 카르복시, 카르복시알킬, 아미노카르보닐, 히드록시, 알콕시, 할로겐, CF₃, 아미노, 치환 아미노, 시아노, 및 -S(O)_nR (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고, n 은 0, 1 또는 2 임) 로부터 선택되는 1, 2, 또는 3 개의 치환기로 추가로 임의치환될 수 있다.

"아미노카르보닐" 이라는 용어는 -C(O)NRR 기 [식 중, 각각의 R 은 독립적으로는 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클릴이고, 두 R 기가 연결되는 경우 헤테로시클릭기 (예를 들어, 모르폴리노) 를 형성함] 를 가리킨다. 정의에 의해서 달리 강제하지 않는다면, 모든 치환기는 알킬, 카르복시, 카르복시알킬, 아미노카르보닐, 히드록시, 알콕시, 할로겐, CF₃, 아미노, 치환 아미노, 시아노, 및 -S(O)_nR (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고, n 은 0, 1 또는 2 임) 로부터 선택되는 1-3 개의 치환기로 추가로 임의치환될 수 있다.

"아실아미노" 라는 용어는 -NRC(O)R 기 (식 중, 각각의 R 은 독립적으로는 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴임) 를 가리킨다. 정의에 의해서 달리 강제하지 않는다면, 모든 치환기는 알킬, 카르복시, 카르복시알킬, 아미노카르보닐, 히드록시, 알콕시, 할로겐, CF₃, 아미노, 치환 아미노, 시아노, 및 -S(O)_nR (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고, n 은 0, 1 또는 2 임) 로부터 선택되는 1-3 개의 치환기로 추가로 임의치환될 수 있다.

"아실옥시" 라는 용어는 -O(O)C-알킬, -O(O)C-시클로알킬, -O(O)C-아릴, -O(O)C-헤테로아릴, 및 -O(O)C-헤테로시클릴 기를 가리킨다. 정의에 의해서 달리 강제하지 않는다면, 모든 치환기는 알킬, 카르복시, 카르복시알킬, 아미노카르보닐, 히드록시, 알콕시, 할로겐, CF₃, 아미노, 치환 아미노, 시아노, 또는 -S(O)_nR (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고, n 은 0, 1 또는 2 임) 로 추가로 임의치환될 수 있다.

"아릴" 이라는 용어는 단일 고리 (예를 들어, 페닐) 또는 다중 고리 (예를 들어, 비페닐), 또는 다중 축합 (융합) 고리 (예를 들어, 나프틸 또는 안트릴) 를 갖는, 탄소 원자가 6 내지 20 개인 방향족 탄소환기를 가리킨다. 바람직한 아릴에는 페닐, 나프틸 등이 포함된다.

"아릴렌" 이라는 용어는 앞서 정의한 바와 같은 아릴기의 2라디칼을 가리킨다. 이 용어는 1,4-페닐렌, 1,3-페닐렌, 1,2-페닐렌, 1,4'-비페닐렌 등과 같은 기로 예시된다.

아릴 또는 아릴렌 치환기에 대한 정의에 의해서 달리 강제하지 않는다면, 그와 같은 아릴 또는 아릴렌기는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 아미노카르보닐, 알콕시카르보닐아미노, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록시, 케토, 티오카르보닐, 카르복시, 카르복시알킬, 아릴티오, 헤테로아릴티오, 헤테로시클릴티오, 티올, 알킬티오, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 아미노설포닐, 아미노카르보닐아미노, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO₂-알킬, SO₂-아릴 및 -SO₂-헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 내지 5 개의 치환기, 바람직하게는 1 내지 3 개의 치환기로 임의치환될 수 있다. 정의에 의해서 달리 강제하지 않는다면, 모든 치환기는 알킬, 카르복시, 카르복시알킬, 아미노카르보닐, 히드록시, 알콕시, 할로겐, CF₃, 아미노, 치환 아미노, 시아노, 및 -S(O)_nR (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고, n 은 0, 1 또는 2 임) 로부터 선택되는 1-3 개의 치환기로 추가로 임의치환될 수 있다.

"아릴옥시" 라는 용어는 아릴-O- 기 (식 중, 아릴기는 앞서 정의한 바와 같고, 또한 앞서 정의한 바와 같은 임의치환 아릴기를 포함함) 를 가리킨다. "아릴티오" 라는 용어는 R-S- 기 (식 중, R 은 아릴에 대하여 정의한 바와 같음) 를 가리킨다.

"아미노" 라는 용어는 -NH₂ 기를 가리킨다.

"치환 아미노" 라는 용어는 -NRR 기 [식 중, 각각의 R 은 독립적으로는 수소, 알킬, 시클로알킬, 카르복시알킬 (예를 들어, 벤질옥시카르보닐), 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로시클릴, 단, 두 R 기 모두가 수소는 아님), 또는 -Y-Z 기 (식 중, Y 는 임의치환 알킬렌이고, Z 는 알케닐, 시클로알케닐, 또는 알키닐임) 로 이루어지는 군으로부터 선택됨] 를 가리킨다. 정의에 의해서 달리 강제하지 않는다면, 모든 치환기는 알킬, 카르복시, 카르복시알킬, 아미노카르보닐, 히드록시, 알콕시, 할로겐, CF₃, 아미노, 치환 아미노, 시아노, 및 -S(O)_nR (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고, n 은 0, 1 또는 2 임) 로부터 선택된 1-3 개의 치환기로 추가로 임의치환될 수 있다.

"카르복시알킬" 이라는 용어는 -C(O)O-알킬 또는 -C(O)O-시클로알킬 기 [여기서, 알킬 및 시클로알킬은 본원에 정의한 바와 같으며, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 할로겐, CF₃, 아미노, 치환 아미노, 시아노, 또는 -S(O)_nR (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고, n 은 0, 1 또는 2 임) 로 추가로 임의치환될 수 있음] 를 가리킨다.

"시클로알킬" 이라는 용어는 단일 환식 고리 또는 다중 축합 고리를 갖는, 탄소 원자가 3 내지 20 개인 탄소환기를 가리킨다. 그러한 시클로알킬기에는, 예로서, 단일 고리 구조 예컨대 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로옥틸 등, 또는 다중 고리 구조 예컨대 아다만타닐, 비시클로[2.2.1]헵탄, 1,3,3-트리메틸비시클로[2.2.1]헵트-2-일, (2,3,3-트리메틸비시클로[2.2.1]헵트-2-일), 또는 아릴기가 융합된 탄소환기, 예를 들어, 인단 등이 포함된다.

"치환 시클로알킬" 이라는 용어는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 아미노카르보닐, 알콕시카르보닐아미노, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록시, 케토, 티오카르보닐, 카르복시, 카르복시알킬, 아릴티오, 헤테로아릴티오, 헤테로시클릴티오, 티올, 알킬티오, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 아미노설포닐, 아미노카르보닐아미노, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO₂-알킬, SO₂-아릴 및 -SO₂-헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 치환기가 1, 2, 3, 4 또는 5 개인, 바람직하게는 치환기가 1, 2, 또는 3 개인 시클로알킬기를 가리킨다. 정의에 의해서 달리 강제하지 않는다면, 모든 치환기는 알킬, 카르복시, 카르복시알킬, 아미노카르보닐, 히드록시, 알콕시, 할로겐, CF₃, 아미노, 치환 아미노, 시아노, 및 -S(O)_nR (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고, n 은 0, 1 또는 2 임) 로부터 선택된 1, 2, 또는 3 개의 치환기로 추가로 임의치환될 수 있다.

"할로겐" 또는 "할로" 라는 용어는 플루오로, 브로모, 클로로, 및 아이오도를 가리킨다.

"아실" 이라는 용어는 -C(O)R 기 (식 중, R 은 수소, 임의치환 알킬, 임의치환 시클로알킬, 임의치환 헤테로시클릴, 임의치환 아릴, 및 임의치환 헤테로아릴임) 를 가리킨다.

"헤테로아릴" 이라는 용어는 하나 이상의 고리 내에 탄소 원자가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15 개이고, 산소, 질소 및 황으로부터 선택된 헤테로원자가 1, 2, 3 또는 4 개인, 방향족 시클릭기 (즉, 완전 불포화) 로부터 유도된 라디칼을 가리킨다. 그러한 헤테로아릴기는 단일 고리 (예를 들어, 피리딜 또는 푸릴) 또는 다중 축합 고리 (예를 들어, 인돌리지닐, 벤조티아졸릴, 또는 벤조티에닐) 를 가질 수 있다. 헤테로아릴의 예에는 [1,2,4]옥사디아졸, [1,3,4]옥사디아졸, [1,2,4]티아디아졸, [1,3,4]티아디아졸, 피롤, 이미다졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 인돌리진, 이소인돌, 인돌, 인다졸, 퓨린, 퀴놀리진, 이소퀴놀린, 퀴놀린, 프탈라진, 나프틸피리딘, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 신놀린, 프테리딘, 카르바졸, 카르볼린, 페난트리딘, 아크리딘, 페난트롤린, 이소티아졸, 페나진, 이속사졸, 페녹사진, 페노티아진, 이미다졸리딘, 이미다졸린 등뿐만 아니라 헤테로아릴 화합물을 함유하는 질소의 N-산화물 및 N-알콕시 유도체, 예를 들어 피리딘-N-산화물 유도체가 포함되지만, 여기에 한정되지는 않는다.

"헤테로아릴렌" 이라는 용어는 앞서 정의한 바와 같은 헤테로아릴기의 2라디칼을 가리킨다. 이 용어는 2,5-이미다졸렌, 3,5-[1,2,4]옥사디아졸렌, 2,4-옥사졸렌, 1,4-피라졸렌 등과 같은 기로 예시된다. 예를 들어, 1,4-피라졸렌은 하기이다:

(식 중, A 는 결합점을 나타냄).

헤테로아릴 또는 헤테로아릴렌 치환기에 대한 정의에 의해서 달리 강제하지 않는다면, 그러한 헤테로아릴 또는 헤테로아릴렌 기는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 아미노카르보닐, 알콕시카르보닐아미노, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록시, 케토, 티오카르보닐, 카르복시, 카르복시알킬, 아릴티오, 헤테로아릴티오, 헤테로시클릴티오, 티올, 알킬티오, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 아미노설포닐, 아미노카르보닐아미노, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO₂-알킬, SO₂-아릴 및 -SO₂-헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 내지 5 개의 치환기, 바람직하게는 1 내지 3 개의 치환기로 임의치환될 수 있다. 정의에 의해서 달리 강제하지 않는다면, 모든 치환기는 알킬, 카르복시, 카르복시알킬, 아미노카르보닐, 히드록시, 알콕시, 할로겐, CF₃, 아미노, 치환 아미노, 시아노, 및 -S(O)_nR (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고, n 은 0, 1 또는 2 임) 로부터 선택된 1-3 개의 치환기로 추가로 임의치환될 수 있다.

"헤테로아르알킬" 이라는 용어는 알킬렌기에 공유결합된 헤테로아릴기 (여기서 헤테로아릴 및 알킬렌은 본원에 정의되어 있음) 를 가리킨다. "임의치환 헤테로아르알킬" 은 임의치환 알킬렌기에 공유결합된 임의치환 헤테로아릴기를 가리킨다. 그러한 헤테로아르알킬기는 3-피리딜메틸, 퀴놀린-8-일에틸, 4-메톡시티아졸-2-일프로필 등으로 예시된다.

"헤테로아릴옥시" 라는 용어는 헤테로아릴-O- 기를 가리킨다.

"헤테로시클릴" 이라는 용어는 고리 내에 탄소 원자가 1 내지 40 개이고, 질소, 황, 인, 및/또는 산소로부터 선택된 헤테로 원자가 1 내지 10 개, 바람직하게는 헤테로원자가 1, 2, 3 또는 4 개인, 단일 고리 또는 다중 축합 고리를 갖는 1라디칼 포화 또는 부분적 불포화기를 가리킨다. 헤테로시클릭기는 단일 고리 또는 다중 축합 고리를 가질 수 있고, 테트라히드로푸라닐, 모르폴리노, 피페리디닐, 피페라지노, 디히드로피리디노 등이 포함된다.

헤테로시클릭 치환기에 대한 정의에 의해서 달리 강제하지 않는다면, 그러한 헤테로시클릭기는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 시클로알킬, 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 아미노카르보닐, 알콕시카르보닐아미노, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록시, 케토, 티오카르보닐, 카르복시, 카르복시알킬, 아릴티오, 헤테로아릴티오, 헤테로시클릴티오, 티올, 알킬티오, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 아미노설포닐, 아미노카르보닐아미노, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO₂-알킬, SO₂-아릴 및 -SO₂-헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1, 2, 3, 4 또는 5, 바람직하게는 1, 2 또는 3 개의 치환기로 임의치환될 수 있다. 정의에 의해서 달리 강제하지 않는다면, 모든 치환기는 알킬, 카르복시, 카르복시알킬, 아미노카르보닐, 히드록시, 알콕시, 할로겐, CF₃, 아미노, 치환 아미노, 시아노, 및 -S(O)_nR (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고, n 은 0, 1 또는 2 임) 로부터 선택되는 1-3 개의 치환기로 추가로 임의치환될 수 있다.

"티올" 이라는 용어는 -SH 기를 가리킨다.

"치환 알킬티오" 라는 용어는 -S-치환 알킬기를 가리킨다.

"헤테로아릴티올" 이라는 용어는 -S-헤테로아릴 기 (여기서 헤테로아릴기는 앞서 정의한 바와 같으며, 또한 앞서 정의한 바와 같은 임의치환 헤테로아릴기를 포함함) 를 가리킨다.

"설폭시드" 라는 용어는 -S(O)R 기 (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴임) 를 가리킨다. "치환 설폭시드" 는 R 이 본원에 정의한 바와 같은 치환 알킬, 치환 아릴, 또는 치환 헤테로아릴인 -S(O)R 기를 가리킨다.

"설폰" 이라는 용어는 -S(O)₂R 기 (식 중, R 은 알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴임) 를 가리킨다. "치환 설폰" 은 R 이 본원에 정의한 바와 같은 치환 알킬, 치환 아릴, 또는 치환 헤테로아릴인 -S(O)₂R 기를 가리킨다

"케토" 라는 용어는 -C(O)- 기를 가리킨다.

"티오카르보닐" 이라는 용어는 -C(S)- 기를 가리킨다.

"카르복시" 라는 용어는 -C(O)-OH 기를 가리킨다.

"임의의" 또는 "임의로" 는, 후술하는 사건 또는 상황이 일어날 수도 있고 또는 그렇지 않을 수도 있음, 그리고 그 기술은 상기의 사건 또는 상황이 일어난 경우와 그렇지 않은 경우를 포함함을 의미한다.

"화학식 I 및 화학식 II 의 화합물" 이라는 용어는 나와 있는 대로의 본 발명의 화합물, 및 그러한 화합물의 약학적으로 허용가능한 염, 약학적으로 허용가능한 에스테르, 프로드러그, 수화물 및 다형체를 포함하려는 의도이다. 부가적으로, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심을 보유할 수 있으며, 라세믹 혼합물로서 또는 개별 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체로서 생성될 수 있다. 임의의 주어진 화학식 I 의 화합물에 존재하는 입체이성질체의 개수는 존재하는 비대칭 중심의 개수에 달려 있다 (n 이 비대칭 중심의 개수일 때, 2ⁿ 개의 입체이성질체가 가능함). 개별 입체이성질체는 합성의 다소 적당한 단계에서 중간체의 라세믹 또는 비-라세믹 혼합물을 분리하여, 또는 통상의 수단으로 화학식 I 의 화합물을 분리하여 수득할 수 있다. 개별 입체이성질체 (개별 거울상이성질체 및 부분입체이성질체 포함) 뿐만 아니라 입체 이성질체의 라세믹 및 비-라세믹 혼합물은 본 발명의 범주에 포함되며, 그들 모두를, 달리 구체적으로 지시하지 않는다면, 본 명세서의 구조로 묘사하려 한다.

"이성질체" 는 분자식이 동일한 상이한 화합물이다.

"입체이성질체" 는 원자가 공간상 배열된 방식만이 다른 이성질체이다.

"거울상이성질체" 는 서로 포갤 수 없는 거울상인 한 쌍의 입체이성질체이다. 한 쌍의 거울상이성질체의 1:1 혼합물이 "라세믹" 혼합물이다. "(±)" 라는 용어는 적절한 라세믹 혼합물을 지명하는데 사용한다.

"부분입체이성질체" 는 비대칭 원자가 둘 이상이지만, 서로 거울상이 아닌 입체이성질체이다.

절대 입체화학은 Cahn-Ingold-Prelog R-S 시스템에 따라 상술된다. 화합물이 순수한 거울상이성질체인 경우, 각 키랄 탄소에서의 입체화학을 R 또는 S 로 상술할 수 있다. 절대 구조를 모르는 분리된 화합물을, 나트륨 D 선의 파장에서 편광면을 회전시키는 방향에 따라 (+) 또는 (-) (우- 또는 좌회전성) 로 지명한다.

"국소 투여" 는 상처 표면 및 인접 상피로의 치료제의 전단로서 정의할 수 있다.

"비경구 투여" 는 환자로의 주사를 통한 치료제의 전신 전달이다.

"치료적 유효량" 이라는 용어는, 아래에 정의하는 바와 같이, 치료를 필요로 하는 포유류에 투여하였을 때, 치료 효과를 내기에 충분한 화학식 I 의 화합물의 양을 가리킨다. 치료적 유효량은 사용하는 치료제의 특이적 활성, 및 환자의 연령, 신체 조건, 기타 질환 상태의 존재, 및 영양 상태에 따라 바뀔 것이다. 부가적으로, 그 환자가 수령할 수도 있는 기타 의약이 투여자가 치료제의 치료적 유효량을 결정하는데 영향을 줄 것이다.

"치료" 또는 "치료하는" 이라는 용어는 하기를 포함하는, 포유류에서 질환의 임의의 처리를 의미한다:

(i) 질환을 예방하는 것, 즉, 질환의 임상적 증상이 발생하지 않도록 하는 것;

(ii) 질환을 억제하는 것, 즉, 임상적 증상의 진전을 저지하는 것; 및/또는

(iii) 질환을 완화시키는 것, 즉, 임상적 증상을 퇴행시키는 것.

"유전적으로 및/또는 환경적으로 기도 개형 및/또는 폐 염증에 걸리기 쉬운" 이라는 말은, 걸리기 쉬운 포유류를 가리킨다. 그러한 환경적 조건의 예에는 담배 연기 및 기타 오염물에의 노출, 작업장에서, 집에서, 또는 취미에 의해서 스프레이 또는 약품에의 노출, 먼지, 풀, 곰팡이, 잡초, 나무, 및 동물의 비듬과 같은 통상의 알레르겐에의 노출, 및 석면, 실리카 및 금속 가루와 같은 자극물에의 노출이 포함되지만, 여기에 한정되지는 않는다. 유전적 경향의 예는 가족력 또는 ADAM33 유전자, TLR4 다형체, IL-3 다형체, CD14 C-159T 다형체 등에서 의심되는 돌연변이에 대한 유전적 분석에 의해서 증명될 수 있다. 유전적 경향에 있어서 생물정보학적 선별 방법이 [Tomita 등 (2004) BMC Bioinformatics. 5(1):120] 에 나와 있다. 기도 개형 및/또는 폐 염증을 야기한다고 알려진 기타 질병 및 질환 상태에는 낭창, 경피증, 결핵, 및 류머티스성 관절염이 포함되지만, 여기에 한정되지는 않는다.

많은 경우, 본 발명의 화합물은 아미노 및/또는 카르복실기 또는 거기에 유사한 기의 존재로 인하여 산 및/또는 염기 염을 형성할 수 있다. "약학적으로 허용가능한 염" 이라는 용어는 화학식 I 의 화합물의 생물학적 효과 및 성질을 보유하고, 생물학적으로 또는 그 밖으로 바람직하지 않지 않은 염을 가리킨다. 약학적으로 허용가능한 염기 부가 염은 무기 및 유기 염기로부터 제조할 수 있다. 무기 염기로부터 유도된 염은, 단지 예로서, 나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 칼슘 및 마그네슘 염을 포함한다. 유기 염기로부터 유도된 염은 일차, 이차 및 삼차 아민, 예컨대 알킬 아민, 디알킬 아민, 트리알킬 아민, 치환 알킬 아민, 디(치환 알킬) 아민, 트리(치환 알킬) 아민, 알케닐 아민, 디알케닐 아민, 트리알케닐 아민, 치환 알케닐 아민, 디(치환 알케닐) 아민, 트리(치환 알케닐) 아민, 시클로알킬 아민, 디(시클로알킬) 아민, 트리(시클로알킬) 아민, 치환 시클로알킬 아민, 2치환 시클로알킬 아민, 3치환 시클로알킬 아민, 시클로알케닐 아민, 디(시클로알케닐) 아민, 트리(시클로알케닐) 아민, 치환 시클로알케닐 아민, 2치환 시클로알케닐 아민, 3치환 시클로알케닐 아민, 아릴 아민, 디아릴 아민, 트리아릴 아민, 헤테로아릴 아민, 디헤테로아릴 아민, 트리헤테로아릴 아민, 헤테로시클릭 아민, 디헤테로시클릭 아민, 트리헤테로시클릭 아민, 혼합 디- 및 트리-아민 (아민에서의 치환기 중 둘 이상이 상이하고, 알킬, 치환 알킬, 알케닐, 치환 알케닐, 시클로알킬, 치환 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환 시클로알케닐, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클릭 등으로 이루어지는 군으로부터 선택됨) 의 염을 포함하지만, 여기에 한정되지는 않는다. 2 또는 3 개의 치환기가, 아미노 질소와 함께, 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴기를 형성하는 아민 또한 포함된다.

적합한 아민의 구체적인 예에는, 단지 예로서, 이소프로필아민, 트리메틸 아민, 디에틸 아민, 트리(이소-프로필) 아민, 트리(n-프로필) 아민, 에탄올아민, 2-디메틸아미노에탄올, 트로메타민, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 카페인, 프로카인, 히드라바민, 콜린, 베타인, 에틸렌디아민, 글루코사민, N-알킬글루카민, 테오브로민, 퓨린, 피페라진, 피페리딘, 모르폴린, N-에틸피페리딘 등이 포함된다.

약학적으로 허용가능한 산 부가 염은 무기 및 유기산으로부터 제조할 수 있다. 무기산으로부터 유도된 염은 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등을 포함한다. 유기산으로부터 유도된 염은 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말산, 말론산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔-설폰산, 살리실산 등을 포함한다.

본원에서 사용할 때, "약학적으로 허용가능한 담체" 는 임의의 그리고 모든 용매, 분산 매질, 코팅물, 항균제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 약학적으로 활성인 물질에 그러한 매질 및 작용제를 사용하는 것은 업계에 주지되어 있다. 임의의 통상의 매질 또는 작용제가 활성 성분과 비상용성인 한을 제외하고는, 치료 조성물에서의 그것의 사용이 고려된다. 추가적 활성 성분을 또한 조성물 속에 합칠 수 있다.

명명법

본 발명의 명명 및 번호 매김을 R¹ 이 n-프로필이고, R² 가 n-프로필이고, R³ 가 수소이고, X 가 페닐렌이고, Y 가 -0-(CH₂) 이고, Z 가 5-(2-메톡시페닐)-[1,2,4]-옥사디아졸-3-일인 화학식 I 의 대표적인 화합물로 예시한다:

이는 다음과 같이 명명함:

8-{4-[5-(2-메톡시페닐)-[1,2,4]-옥사디아졸-3-일메톡시]-페닐}-1,3-디프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온.

본 발명의 방법

본 발명은 기도 개형을 일으키거나 기도 개형에 의해 발생하는 질병이 있는 포유류에 A_2B 아데노신 수용체 길항제의 치료적 유효량을 투여함으로써 기도 개형 및/또는 폐 염증을 예방하는 방법에 관한 것이다. 기도 개형 및 폐 염증이 천식, 폐 섬유증 및 COPD 의 중요한 요소이므로, 본 발명의 방법에는 일반적으로 A_2B 아데노신 수용체 길항제를 천식, 폐 섬유증 및/또는 COPD 를 앓는 환자에게 투여하는 것이 포함된다.

상기 A_2B 아데노신 수용체 길항제는 경구 제형물로서 전신 투여될 뿐만 아니라 흡입기를 통해 폐 조직에 직접 투여될 수 있다. 이러한 투여는 단일 복용, 또는 복수 지정 간격으로의 반복 복용일 수 있다. 바람직한 복용 요법은 환자 및 치료할 질병의 심각성에 따라 바뀐다는 것을 당업자는 쉽게 인식할 것이다.

약학 조성물

아데노신 A_2B 수용체 길항제로서 선택되는 경우, 화학식 I 의 화합물은 일반적으로 약학 조성물 형태로 투여된다. 따라서, 본 발명은 활성 성분으로서 하나 이상의 화학식 I 의 화합물, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 또는 에스테르, 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제, 담체 (비활성 고체 희석제 및 충전제 포함), 희석제 (멸균 수용액 및 각종 유기 용매 포함), 가용화제 및 보조제를 함유하는 약학 조성물을 제공한다. 화학식 I 의 화합물은 단독으로 또는 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 그러한 조성물은 제약 분야에 주지된 방식으로 제조된다 (예를 들면, [Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Co., Philadelphia, PA 17^th Ed. (1985)] 및 ["Modern Pharmaceutics", Marcel Dekker, Inc. 3^rd Ed. (G.S. Banker & C.T. Rhodes, Eds.)] 참조).

A _2B 아데노신 수용체 길항제

임의의 A_2B 아데노신 수용체 길항제를 본 발명의 방법에 이용할 수 있다. A_2B 수용체에 길항 작용하는 다수의 화합물뿐만 아니라, 특정 화합물이 그러한 활성이 있는지 결정하는 방법이 당업계에 알려져 있다. 예를 들면, Feoktistov 및 Baggioni 의 리뷰 논문인 [(1997) Pharmacological Reviews 49:381-402] 에는 아데노신 수용체의 4 가지 하부유형 모두에 대한 8 가지 아데노신 수용체 작동제 및 8 가지 길항제의 결합 친화도가 기록되어 있다. 그 안에 언급된 참고 문헌은 사용된 방법에 대한 상세한 설명을 제공한다 ([Robeva 등, (1996) J. Drug Dev. Res 39:243-252]; [Jacobson 등 (1996) Drug Dev. Res. 39:289-300]; [Feoktistov 및 Baggioni (1993) Molecular Pharmacology 43:909-914]). 수용체에 대한 화합물의 결합 친화도를 측정하는 효과적인 방법은, 방사선 표지된 작동제 또는 길항제, 및 상기 수용체를 함유한 것으로 알려진 막 부분에 대한 그 화합물의 결합의 상관관계를 이용한다; 예를 들면, 화합물이 A_2B 길항제인지를 결정하기 위하여, 상기 막 부분은 A_2B 아데노신 수용체를 함유할 것이다. 화합물이 A_2B 길항제인지를 결정하는데 특히 효과적인 또다른 방법이 미국 특허 제 5,854,081 호에 기록되어 있다.

따라서, A_2B 수용체 하부유형에 대해 선택적인 화합물이 본 방법에 바람직하다. 그러한 화합물의 비제한적 예는 3-n-프로필잔틴 (엔프로필린) 이다. 적합한 화합물이 미국 특허 제 6,545,002 호에 또한 개시되어 있다. A_2B 수용체 외에 다른 수용체에 길항 작용하는 화합물이 또한 본 발명에 사용하기에 적합하다. 그러한 화합물의 하나의 예는 1,3-디프로필-8-(p-아크릴릭)페닐잔틴이다.

A_2B 아데노신 수용체 길항제의 특히 바람직한 하나의 부류는 공동 계속중 (copending) 이며 공유 (commonly assigned) 된 미국 특허 일련번호 제 6,825,349 호, 및 공동 계속 중이며 공유된 미국 특허출원 일련번호 제 10/719,102 호 (이는 미국 특허출원 공개공보 제 20040176399 호로 공개됨) 에 개시된 것들이다. 상기 출원에 개시된 화합물은 상기 본 발명의 개요에 제시된 바와 같은 화학식 I 및 화학식 II 의 구조를 가지며, 참고 문헌에 기재된 바와 같이 또는 하기에 설명되는 바와 같이 합성될 수 있다.

합성 반응 변수

"용매", "비활성 유기 용매" 또는 "비활성 용매" 라는 용어는 그와 관련하여 기술되는 반응 조건 하에서 비활성인 용매를 의미한다 [예를 들면, 벤젠, 톨루엔, 아세토니트릴, 테트라히드로푸란 ("THF"), 디메틸포름아미드 ("DMF"), 클로로포름, 염화메틸렌 (또는 디클로로메탄), 디에틸 에테르, 메탄올, 피리딘 등을 포함함]. 반대로 명시되지 않는 한, 본 발명의 반응에 사용되는 용매는 비활성 유기 용매가고, 상기 반응은 비활성 기체, 바람직하게는 질소 하에서 실행된다.

"q.s." 라는 용어는 진술된 기능을 달성하는데, 예를 들면, 용액이 목적된 부피 (즉, 100 %) 가 되도록 하는데 충분한 양을 첨가하는 것을 의미한다.

화학식 I 및 II 의 화합물의 합성

R³ 가 수소인 화학식 I 또는 II 의 화합물을 제조하는 하나의 바람직한 방법을 하기 반응식 I 에 제시한다.

반응식 I

단계 1 - 화학식 (2) 의 제조

화학식 (2) 의 화합물은 환원 단계를 통해 화학식 (1) 의 화합물로부터 제조된다. 예를 들면, 암모니아 수용액 중 나트륨 디티오나이트를 사용하는 종래의 환원 기술을 사용할 수 있고; 바람직하게는, 수소 및 금속 촉매를 사용하여 환원시킨다. 상기 반응을 약 2 시간 동안, 수소 대기 하에서, 바람직하게는 가압 하에, 예를 들면 약 30 psi 에서, 촉매, 예를 들면 탄소상 10% 팔라듐 촉매의 존재 하에, 비활성 용매, 예를 들면 메탄올 내에서 실행한다. 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 통상의 기술을 통해 화학식 (2) 의 생성물을 단리하여, 화학식 (2) 의 화합물을 수득한다.

단계 2 - 화학식 (3) 의 제조

이어서, 화학식 (2) 의 화합물을 카르보디이미드, 예를 들면 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드의 존재 하에서 화학식 Z-Y-X-CO₂H 의 카르복실산과 반응시킨다. 상기 반응을 약 12-48 시간, 바람직하게는 약 16 시간 동안 약 20-30 ℃ 의 온도, 바람직하게는 대략 실온에서 양성자성 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 프로판올 등, 바람직하게는 메탄올 내에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되는 경우, 예를 들면, 감압 하에서 용매를 제거하고 생성물을 세척하여, 화학식 (3) 의 생성물을 통상적으로 단리한다. 대안적으로는, 임의의 추가 정제 없이 다음 단계를 실행할 수 있다.

화학식 (3) 의 화합물의 대안적 제조

대안적으로는, 화학식 Z-Y-X-CO₂H 의 카르복실산을 먼저 할로겐화제, 예를 들면 염화티오닐 또는 브롬화티오닐, 바람직하게는 염화티오닐과 반응시켜 화학식 Z-Y-X-C(O)L (식 중, L 은 클로로 또는 브로모임) 의 산 할라이드로 전환시킨다. 대안적으로는, 염화옥살릴, 오염화인 또는 옥시염화인을 사용할 수 있다. 바람직하게는, 예를 들면, 약 1-8 시간, 바람직하게는 약 4 시간 동안 약 60-80 ℃, 바람직하게는 약 70 ℃ 의 온도에서 과량의 할로겐화제를 사용하여 상기 반응을 용매 없이 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 예를 들면 감압 하에서 상기 잉여의 할로겐화제를 제거하여, 화학식 Z-Y-X-C(O)L 의 생성물을 통상적으로 단리한다.

이어서, 상기 생성물을, 3차 염기, 예를 들면, 트리에틸아민의 존재 하에, 비활성 용매, 예를 들면 아세토니트릴 내에서 화학식 (2) 의 화합물과 반응시킨다. 상기 반응을 약 0 ℃ 의 초기 온도에서 실행한 후, 약 12-48 시간, 바람직하게는 약 16 시간 동안 20-30 ℃, 바람직하게는 대략 실온으로 가온한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 예를 들면, 반응 혼합물을 물로 희석하고, 생성물을 여과하고, 물에 이어서 에테르로 생성물을 세척하여, 화학식 (3) 의 생성물을 통상적으로 단리한다.

단계 3 - 화학식 I 의 제조

이어서, 고리화 반응을 통해 화학식 (3) 의 화합물을 화학식 I 의 화합물로 전환시킨다. 상기 반응을 약 1-8 시간, 바람직하게는 약 3 시간 동안, 약 50-80 ℃, 바람직하게는 약 80 ℃ 의 온도에서, 염기, 예를 들면, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 나트륨 메톡시드, 나트륨 에톡시드, 칼륨 t-부톡시드, 바람직하게는 수성 수산화나트륨의 존재 하에, 양성자성 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 프로판올 등, 바람직하게는 메탄올 내에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 예를 들면 감압 하에서 용매를 제거하고, 수성 산으로 잔류물을 산성화하고, 생성물을 여과한 후, 생성물을 세척 및 건조시켜, 화학식 I 의 생성물을 통상적으로 단리한다.

화학식 (1) 의 화합물을 다양한 방법으로 제조할 수 있다. 하나의 바람직한 방법을 하기 반응식 II 에 제시한다.

반응식 II

단계 1 - 화학식 (5) 의 제조

화학식 (4) 의 화합물은 시판되거나 당업계에 주지된 방법으로 제조된다. 이를, 강염기, 예를 들면 나트륨 에톡시드의 존재 하에, 양성자성 용매, 예를 들면 에탄올 내에서 에틸 시아노아세테이트와 반응시킨다. 상기 반응을 약 4 내지 약 24 시간 동안 대략 환류 온도에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 그렇게 생성된 화학식 (5) 의 화합물을 통상적으로 단리한다.

단계 2 및 3 - 화학식 (7) 의 제조

화학식 (5) 의 화합물을 극성 용매, 예를 들면 N,N-디메틸포름아미드 내에서 N,N-디메틸포름아미드의 디메틸아세탈과 반응시킨다. 상기 반응을 약 1 시간 동안 약 40 ℃ 에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 그렇게 생성된 화학식 (6) 의 화합물을, 염기, 예를 들면 탄산칼륨의 존재 하에, 화학식 R¹Hal (식 중, Hal 은 클로로, 브로모 또는 아이오도임) 의 화합물과 반응시킨다. 상기 반응은 약 4-24 시간 동안 약 80 ℃ 에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 예를 들면 감압하에 용매를 증발시켜, 화학식 (7) 의 화합물을 통상적으로 단리하고, 잔류물을 추가 정제 없이 다음 반응에 이용한다.

단계 4 - 화학식 (8) 의 제조

화학식 (7) 의 화합물을 극성 용매 내, 예를 들면 메탄올 내에 현탁된 암모니아수와 반응시킨다. 상기 반응을 약 1-3 일 동안 대략 실온에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 예를 들면 디클로로메탄/메탄올의 혼합물로 용출시키는 실리카 겔 컬럼에서의 크로마토그래피로 화학식 (8) 의 생성물을 통상적으로 단리한다.

단계 5 - 화학식 (1) 의 제조

이어서, 상기 화학식 (8) 의 화합물을 산성 수용매, 바람직하게는 아세트산과 물, 예를 들면 50% 아세트산/물 내에서 아질산나트륨과 혼합한다. 상기 반응을 약 1 시간 동안 약 50-90 ℃, 바람직하게는 약 70 ℃ 의 온도에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 화학식 (1) 의 생성물을 통상적인 방법으로 단리한다.

대안적으로, 상기 반응을 수용매, 예를 들면 디메틸포름아미드와 물에서 실행하고, 강산, 예를 들면 염산과 반응시킬 수 있다.

화학식 (8) 의 화합물을, 하기 반응식 IIA 에 제시된 바와 같이, 유사한 방법을 사용하여 화학식 (10) 의 화합물로부터 제조할 수 있다.

반응식 IIA

단계 2 및 3 - 화학식 (7) 의 제조

화학식 (10) 의 화합물을 극성 용매, 예를 들면 N,N-디메틸포름아미드 내에서 N,N-디메틸포름아미드의 디메틸아세탈과 반응시킨다. 상기 반응을 약 1 시간 동안 약 40 ℃ 에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 그렇게 생성된 화학식 (6a) 의 화합물을, 염기, 예를 들면 탄산칼륨의 존재 하에, 화학식 R²Hal (식 중, Hal 은 클로로, 브로모, 또는 아이오도임) 의 화합물과 반응시킨다. 상기 반응을 약 4-24 시간 동안 약 80 ℃ 에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 예를 들면 감압 하에서 용매를 증발시켜, 화학식 (7) 의 생성물을 통상적으로 단리하고, 잔류물을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용한다.

단계 4 - 화학식 (8) 의 제조

화학식 (3) 의 화합물을 다양한 방법을 통해 또한 제조할 수 있다. 하나의 바람직한 방법을 하기 반응식 III 에 제시한다.

반응식 III

단계 1 - 화학식 (10) 의 제조

먼저, 시판되는 화합물 6-아미노우라실을, 예를 들면, 촉매, 예를 들면 황산암모늄의 존재 하에, 용매로서 과량의 헥사메틸디실라잔과 반응시켜 실릴화시킨다. 상기 반응을 약 1-10 시간 동안 대략 환류 온도에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 그렇게 생성된 실릴화 화합물을 통상적으로 단리한 후, 바람직하게는 용매 부재 하에, 화학식 R¹Hal (식 중, Hal 은 클로로, 브로모, 또는 아이오도임) 의 화합물과 반응시킨다. 상기 반응은 약 4-48 시간, 바람직하게는 약 12-16 시간 동안 대략 환류에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 화학식 (10) 의 생성물을 통상적인 방법으로 단리한다.

단계 2 - 화학식 (11) 의 제조

이어서, 화학식 (10) 의 화합물을 수성 산, 예를 들면 수성 아세트산에 용해시키고, 아질산나트륨과 반응시킨다. 상기 반응을 약 30 분에 걸쳐 약 20-50 ℃, 바람직하게는 약 30 ℃ 의 온도에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 화학식 (11) 의 화합물을 통상적인 방식, 예를 들면 여과를 통해 단리한다.

단계 3 - 화학식 (12) 의 제조

이어서, 화학식 (11) 의 화합물을 디아미노 유도체로 환원시킨다. 일반적으로, 화학식 (11) 의 화합물을 암모니아수에 용해시킨 후, 환원제, 예를 들면 아황산수소나트륨을 첨가한다. 상기 반응을 약 70 ℃ 의 온도에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 예를 들면 냉각된 반응 혼합물을 여과시켜, 화학식 (12) 의 생성물을 통상적으로 단리한다.

단계 4 - 화학식 (13) 의 제조

이어서, 화학식 (12) 의 화합물을, 카르보디이미드, 예를 들면 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드의 존재 하에, 화학식 Z-Y-X-CO₂H 의 카르복실산과 반응시킨다. 상기 반응을 약 12-48 시간 동안 약 20-30 ℃ 의 온도에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 예를 들면 냉각된 반응 혼합물을 여과시켜, 화학식 (13) 의 생성물을 통상적으로 단리한다.

대안적으로, 화학식 Z-Y-X-CO₂H 의 카르복실산을 할로겐화제, 예를 들면 염화티오닐 또는 브롬화티오닐과 반응시켜, 화학식 Z-Y-X-C(O)L (식 중, L 은 클로로 또는 브로모임) 의 산 할라이드로 전환시키고; 대안적으로는, 오염화인 또는 옥시염화인을 사용할 수 있다. 바람직하게는, 상기 반응을, 예를 들면, 약 1-8 시간, 바람직하게는 약 4 시간 동안 약 60-80 ℃, 바람직하게는 약 70 ℃ 의 온도에서 과량의 할로겐화제를 사용하여 용매 없이 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 예를 들면 감압 하에 잉여의 할로겐화제를 제거하여, 화학식 Z-Y-X-C(O)L 의 생성물을 통상적으로 단리한다.

이어서, 화학식 Z-Y-X-C(O)L 의 생성물을, 3차 염기, 예를 들면 트리에틸아민의 존재 하에, 비활성 용매, 예를 들면 아세토니트릴 내에서 화학식 (12) 의 화합물과 반응시킨다. 상기 반응을 약 0 ℃ 의 개시 온도에서 실행한 후, 약 12-48 시간, 바람직하게는 약 16 시간 동안 20-30 ℃, 바람직하게는 대략 실온으로 가온한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 예를 들면, 물로 반응 혼합물을 희석하고, 생성물을 여과하고, 상기 생성물을 물에 이어서 에테르로 세척하여, 화학식 (13) 의 화합물을 통상적으로 단리한다.

단계 5 - 화학식 (3) 의 제조

화학식 (13) 의 화합물을, 염기, 예를 들면 탄산칼륨의 존재 하에, 화학식 R²Hal (식 중, Hal 은 클로로, 브로모, 또는 아이오도임) 의 화합물과 반응시킨다. 상기 반응을 약 4-24 시간, 바람직하게는 약 16 시간 동안 대략 실온에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 예를 들면 감압 하에서 용매를 증발시켜, 화학식 (3) 의 생성물을 통상적으로 단리하고, 잔류물을 통상적으로 정제하거나 추가 정제 없이 다음 반응에 이용할 수 있다.

화학식 (3) 의 화합물의 또다른 제조 방법을 하기 반응식 IV 에 제시한다.

반응식 IV

단계 1 - 화학식 (14) 의 제조

이어서, 화학식 (5) 의 화합물을 산성 수용매, 바람직하게는 아세트산과 물, 예를 들면 50 % 아세트산/물 내에서 아질산나트륨과 혼합한다. 상기 반응을 약 1 시간 동안 약 50-90 ℃, 바람직하게는 약 70 ℃ 의 온도에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 화학식 (14) 의 생성물을 통상적인 방식으로 단리한다.

대안적으로, 상기 반응을 수용매, 예를 들면 디메틸포름아미드와 물에서 실행할 수 있고, 강산, 예를 들면 염산과 반응시킬 수 있다.

단계 3 - 화학식 (15) 의 제조

이어서, 화학식 (14) 의 화합물을 디아미노 유도체로 환원시킨다. 일반적으로, 화학식 (14) 의 화합물을 암모니아수에 용해시킨 후, 환원제, 예를 들면 아황산수소나트륨을 첨가한다. 상기 반응을 약 70 ℃ 의 온도에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 예를 들면 냉각된 반응 혼합물을 여과시켜, 화학식 (15) 의 생성물을 통상적으로 단리한다.

단계 4 - 화학식 (16) 의 제조

이어서, 화학식 (15) 의 화합물을, 카르보디이미드, 예를 들면 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드의 존재 하에, 화학식 Z-Y-X-CO₂H 의 카르복실산과 반응시킨다. 상기 반응을 비활성 용매, 예를 들면 메탄올 내에서 약 12-48 시간 동안 약 20-30 ℃ 의 온도에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 예를 들면 냉각된 반응 혼합물을 여과시켜, 화학식 (16) 의 생성물을 통상적으로 단리한다.

이어서, 화학식 Z-Y-X-C(O)L 의 생성물을, 3차 염기, 예를 들면 트리에틸아민의 존재 하에, 비활성 용매, 예를 들면 아세토니트릴 내에서 화학식 (15) 의 화합물과 반응시킨다. 상기 반응을 약 0 ℃ 의 개시 온도에서 실행한 후, 약 12-48 시간, 바람직하게는 약 16 시간 동안 20-30 ℃, 바람직하게는 대략 실온으로 가온한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 예를 들면, 물로 반응 혼합물을 희석하고, 생성물을 여과하고, 상기 생성물을 물에 이어서 에테르로 세척하여, 화학식 (16) 의 생성물을 통상적으로 단리한다.

단계 5 - 화학식 (3) 의 제조

화학식 (16) 의 화합물을, 염기, 예를 들면 탄산칼륨의 존재 하에, 화학식 R¹Hal (식 중, Hal 은 클로로, 브로모, 또는 아이오도임) 의 화합물과 반응시킨다. 상기 반응을 약 4-24 시간, 바람직하게는 약 16 시간 동안 약 80 ℃ 에서 실행한다. 상기 반응이 실질적으로 완료되었을 때, 예를 들면 감압 하에서 용매를 증발시켜, 화학식 (3) 의 생성물을 통상적으로 단리하고, 상기 잔류물을 통상적으로 정제하거나 추가 정제 없이 다음 반응에 이용할 수 있다.

Z-Y-X-CO₂H (식 중, X 는 피라졸-1,4-일이고, Y 는 메틸렌이고, Z 는 3-트리플루오로메틸페닐임) 의 화합물의 합성 예를 하기 반응식 V 에 제시한다.

반응식 V

에틸 피라졸-4-카르복실레이트를, 탄산칼륨의 존재 하에, 아세톤 내에서 1-(브로모메틸)-3-(트리플루오로메틸)벤젠과 반응시킨다. 이어서, 생성물인 에틸 1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-카르복실레이트를 메탄올 내에서 수산화칼륨으로 가수분해시켜, 1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-카르복실산을 수득한다.

효용 시험 및 투여

일반 효용

본 발명의 방법 및 약학 조성물은 기도 개형 및/또는 폐 염증에 걸리기 쉬운 포유류에서 기도 개형 및/또는 폐 염증을 예방하는데 효과적이다. 상기 경향은 기도 개형 및/또는 폐 염증을 유발하는 것으로 보여지는 유전적 이상, 질환 상태 및/또는 환경 조건에 기인할 수 있다.

시험

활성 시험은 위에서 참고된 특허 및 특허출원, 및 하기의 실시예에 기재된 바와 같이, 그리고 당업자에게 자명한 방법을 통해 실행된다.

투여

화학식 I 의 화합물은, 예를 들면 참고로 포함되는 상기 특허 및 특허출원에 기재된 바와 같이, 유사한 효용을 갖는 작용제의 임의의 허용된 투여 방식 (이는 구강, 비내, 동맥내 주사, 정맥내, 복막내, 비경구적, 근육내, 피하, 경구적 또는 흡입제로서를 포함) 으로 단일 또는 복수 복용으로 투여될 수 있다.

경구 투여가 화학식 I 화합물의 바람직한 투여 경로이다. 캡슐 또는 장용 피복정 등을 통해 투여될 수 있다. 화학식 I 의 화합물을 하나 이상 포함하는 약학 조성물의 제조에 있어서, 통상적으로, 활성 성분을 부형제로 희석하고/하거나 캡슐, 향낭, 종이 또는 다른 용기 형태일 수 있는 담체 내에 넣는다. 부형제가 희석제 역할을 하는 경우, 이는 활성 성분에 대한 운반체, 담체 또는 매질로 작용하는 (상기와 같은) 고체, 반고체 또는 액체 물질일 수 있다. 즉, 조성물은 정제, 알약, 분말, 마름모꼴 정제, 향낭, 교갑, 엘릭시르, 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, (고체로서 또는 액체 매질 중의) 에어로졸, 예를 들어, 10 중량% 이하의 활성 화합물을 함유하는 연고, 연질 및 경질 젤라틴 캡슐, 멸균 주사액, 및 멸균 포장된 분말 형태일 수 있다.

적합한 부형제의 몇몇 예에는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 검, 인산칼슘, 알기네이트, 트라가칸트, 젤라틴, 칼슘 실리케이트, 미세결정질 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스, 멸균수, 시럽 및 메틸 셀룰로오스가 포함된다. 상기 제형물에는 추가로 하기가 포함될 수 있다: 윤활제, 예컨대 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광유; 습윤제; 유화제 및 현탁제; 보존제, 예컨대 메틸- 및 프로필히드록시-벤조에이트; 감미제; 및 방향제.

본 발명의 조성물은, 당업계에 공지된 방법을 사용하여, 환자에게 투여 후 활성 성분의 신속, 서방성 또는 지연 방출을 제공하도록 제형화할 수 있다. 경구 투여를 위한 제어 방출 약물 전달 시스템에는 중합체-피복 저장소 또는 약물-중합체 매트릭스 제형물을 함유하는 용해 시스템 및 삼투압 펌프 시스템이 포함된다. 제어 방출 시스템의 예는 미국 특허 제 3,845,770 호; 제 4,326,525 호; 제 4,902,514 호; 및 제 5,616,345 호에서 제시된다. 본 발명의 방법에 이용하기 위한 또다른 제형은 경피 전달 장치 ("패치") 를 사용한다. 그러한 경피 패치를 사용하여 본 발명의 화합물을 제어된 양으로 연속적으로 또는 불연속적으로 주입할 수 있다. 약제 전달용 경피 패치의 구성 및 용도는 당업계에 주지되어 있다. 예를 들면, 미국 특허 제 5,023,252 호, 제 4,992,445 호 및 제 5,001,139 호를 참조하라. 그러한 패치는 약제의 연속적, 박동성 또는 수요성 전달용으로 구성될 수 있다.

화학식 I 화합물과 같은 아데노신 A_2B 수용체 길항제는 넓은 복용 범위에 걸쳐 효과적이고, 일반적으로 약학적 유효량으로 투여된다. 전형적으로는, 각 복용 단위는 경구 투여를 위해서는 1 ㎎ 내지 2 g, 더욱 통상적으로는 1 내지 700 ㎎ 의 아데노신 A_2B 수용체 길항제를 함유하고, 비경구 투여를 위해서는 1 내지 700 ㎎, 더욱 통상적으로는 약 2 내지 200 ㎎ 의 아데노신 A_2B 수용체 길항제를 함유한다. 그러나, 실제 투여되는 아데노신 A_2B 수용체 길항제의 양은, 치료할 질병, 선택된 투여 경로, 투여된 실제 화합물 및 그의 상대적 활성, 개별 환자의 연령, 체중 및 반응, 환자 증상의 심각성 등을 포함하는 관련 상황을 고려하여, 의사가 결정한다.

정제와 같은 고체 조성물의 제조를 위해, 주요 활성 성분을 약학적 부형제와 혼합하여, 본 발명 화합물의 균질 혼합물을 함유하는 고체 예비제형 조성물을 형성한다. 이러한 예비제형 조성물을 균질성이라고 칭하는 경우, 이는 활성 성분이 조성물 전체에 결쳐 균일하게 분산되어 상기 조성물이 정제, 알약 및 캡슐과 같은 균등 유효 단위 투약량으로 용이하게 세분될 수 있음을 의미한다.

본 발명의 정제 또는 알약을 피복하거나 다르게는 화합하여, 작용이 연장되는 장점이 있는 투약 형태를 제공하거나, 위의 산성 상태로부터 보호할 수 있다. 예를 들면, 상기 정제 또는 알약은 내부 투약 및 외부 투약 성분을 포함할 수 있고, 후자는 전자를 둘러싼 형태일 수 있다. 상기 두 성분은, 위에서의 분해에 저항하고 내부 성분이 그대로 십이지장 내로 전달되도록 하거나 방출을 지연하는 역할을 하는 장층 (enteric layer) 으로 분리될 수 있다. 다양한 물질이 그러한 장층 또는 피복에 사용될 수 있고, 그러한 물질에는 다수의 중합체성 산, 및 쉘락, 세틸 알코올 및 셀룰로오스 아세테이트와 같은 물질과 중합체성 산의 혼합물이 포함된다.

흡입 또는 통기법용 조성물에는 약학적으로 허용가능한 수성 또는 유기 용매, 또는 이들의 혼합물 중 용액 및 현탁액, 및 분말이 포함된다. 액체 또는 고체 조성물은 전술한 바와 같은 적합한 약학적으로 허용가능한 부형제를 함유할 수 있다. 바람직하게는, 상기 조성물은 국부 또는 전신 효과를 위해 경구 또는 경비 호흡 경로를 통해 투여된다. 바람직하게는 약학적으로 허용가능한 용매 중 조성물은 비활성 기체를 사용하여 분무할 수 있다. 분무 장치로부터 분무 용액을 직접 흡입하거나, 상기 분무 장치를 안면 마스크 텐트 또는 간헐적 양압 호흡기에 부착할 수 있다. 용액, 현탁액, 또는 분말 조성물이 적당한 방식으로 제형물을 전달하는 장치로부터, 바람직하게는, 경구적 또는 경비적으로 투여될 수 있다.

하기 실시예는 본 발명의 바람직한 구현예를 입증하는데 포함된다. 당업자는, 하기 실시예에 개시된 기술이, 본 발명자들에 의해서 본 발명의 실시에 양호하게 기능한다고 밝혀진 기술을 나타내므로 본 발명의 실시를 위한 바람직한 방식을 구성하는 것으로 간주될 수 있다는 것을 인식해야 한다. 그러나, 본 개시물에 관하여 당업자는, 개시되는 특정 구현예에 있어서 많은 변형이 이루어질 수 있고, 본 발명의 취지 및 범주를 벗어나지 않으면서 동일하거나 유사한 결과를 역시 수득할 수 있다는 것을 인식하여야 한다.

실시예 1

화학식 (5) 의 화합물의 제조

A. R ² 가 에틸인 화학식 (5) 의 화합물의 제조

나트륨 (4.8 g, 226 mmol) 및 건조 에탄올 (150 ㎖) 로부터 나트륨 에톡시드 용액을 제조하였다. 상기 용액에 아미노-N-에틸아미드 (10 g, 113 mmol) 및 에틸 시아노아세테이트 (12.8 g, 113 mmol) 를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 환류 하에 6 시간 동안 교반하고, 냉각하고, 감압 하에서 반응 혼합물로부터 용매를 제거하였다. 잔류물을 물 (50 ㎖) 에 용해하고, 염산으로 pH 를 7 로 조절하였다. 혼합물을 0 ℃ 에서 밤새 방치하고, 침전물을 여과해 내고, 물로 세척 하고, 공기-건조하여, 화학식 (5) 의 화합물인 6-아미노-1-에틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 얻었다.

B. R ² 가 메틸인 화학식 (5) 의 화합물의 제조

유사하게, 아미노-N-에틸아미드를 아미노-N-메틸아미드로 대체한 것을 제외하고는 실시예 1A 의 절차에 따라, 6-아미노-1-메틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 제조하였다.

C. R ² 를 바꾼 화학식 (5) 의 화합물의 제조

유사하게, 아미노-N-에틸아미드를 화학식 (4) 의 기타 화합물로 대체한 것을 제외하고는 실시예 1A 의 절차에 따라, 화학식 (5) 의 기타 화합물을 제조하였다.

실시예 2

화학식 (6) 의 화합물의 제조

A. R ² 가 에틸인 화학식 (6) 의 화합물의 제조

무수 N,N-디메틸아세트아미드 (25 ㎖) 및 N,N-디메틸포름아미드 디메틸아세탈 (2.7 ㎖, 20 mmol) 중의 6-아미노-1-에틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온 (0.77 g, 5 mmol) 의 현탁액을 40 ℃ 로 90 분 동안 가온시켰다. 그 다음 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔류물을 에탄올로 저작하고, 여과하고, 에탄올로 세척하여, 화학식 (6) 의 화합물인 6-[2-(디메틸아미노)-1-아자비닐]-1-에틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 얻었다.

B. R ² 가 메틸인 화학식 (6) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-아미노-1-에틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 6-아미노-1-메틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온으로 대체한 것을 제외하고는 실시예 2A 의 절차에 따라, 6-[2-(디메틸아미노)-1-아자비닐]-1-메틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 제조하였다.

C. R ² 를 바꾼 화학식 (6) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-아미노-1-에틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (5) 의 기타 화합물로 대체한 것을 제외하고는 실시예 2A 의 절차에 따라, 화학식 (6) 의 기타 화합물을 제조하였다.

실시예 3

화학식 (7) 의 화합물의 제조

A. R ¹ 이 n-프로필이고, R ² 가 에틸인 화학식 (7) 의 화합물의 제조

디메틸포름아미드 (25 ㎖) 중의 6-[2-(디메틸아미노)-1-아자비닐]-1-에틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온 (1.5 g, 7.1 mmol) 의 용액, 탄산칼륨 (1.5 g, 11 mmol) 및 n-프로필 아이오다이드 (1.54 g, 11 mmol) 의 혼합물을 80 ℃ 에서 5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰고, 화학식 (7) 의 생성물인 6-[2-(디메틸아미노)-1-아자비닐]-1-에틸-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 다음 반응에 그대로 사용하였다.

B. R ¹ 및 R ² 를 바꾼 화학식 (7) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-[2-(디메틸아미노)-1-아자비닐]-1-에틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (6) 의 기타 화합물로 대체한 것을 제외하고는 실시예 3A 의 절차에 따라, 하기 화학식 (7) 의 화합물을 제조하였다:

6-[2-(디메틸아미노)-1-아자비닐]-1-메틸-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온;

6-[2-(디메틸아미노)-1-아자비닐]-1-메틸-3-시클로프로필메틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온;

6-[2-(디메틸아미노)-1-아자비닐]-1-에틸-3-시클로프로필메틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온;

6-[2-(디메틸아미노)-1-아자비닐]-1-메틸-3-(2-메틸프로필)-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온; 및

6-[2-(디메틸아미노)-1-아자비닐]-1-에틸-3-(2-메틸프로필)-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온.

C. R ¹ 및 R ² 를 바꾼 화학식 (7) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-[2-(디메틸아미노)-1-아자비닐]-1-에틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (6) 의 기타 화합물로 대체한 것을 제외하고는 실시예 3A 의 절차에 따라, 화학식 (7) 의 기타 화합물을 제조하였다.

실시예 4

화학식 (8) 의 화합물의 제조

A. R ¹ 이 n-프로필이고, R ² 가 에틸인 화학식 (8) 의 화합물의 제조

6-[2-(디메틸아미노)-1-아자비닐]-1-에틸-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온 (2.1 g) 의 용액을 메탄올 (10 ㎖) 및 28% 암모니아 수용액 (20 ㎖) 의 혼합물에 용해하고, 72 시간 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔류물을 디클로로메탄/메탄올 (15/1) 의 혼합물로 용출시키는 실리카 겔 컬럼에서의 크로마토그래피에 의해 정제하여, 화학식 (8) 의 화합물인 6-아미노-1-에틸-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 얻었다.

B. R ¹ 및 R ² 를 바꾼 화학식 (8) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-[2-(디메틸아미노)-1-아자비닐]-1-에틸-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (7) 의 기타 화합물로 대체한 것을 제외하고는 실시예 4A 의 절차에 따라, 하기 화학식 (8) 의 화합물을 제조하였다:

6-아미노-1-메틸-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온;

6-아미노-1-메틸-3-시클로프로필메틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온;

6-아미노-1-에틸-3-시클로프로필메틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온;

6-아미노-1-메틸-3-(2-메틸프로필)-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온; 및

6-아미노-1-에틸-3-(2-메틸프로필)-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온.

C. R ¹ 및 R ² 를 바꾼 화학식 (7) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-[2-(디메틸아미노)-1-아자비닐]-1-에틸-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (7) 의 기타 화합물로 대체한 것을 제외하고는 실시예 4A 의 절차에 따라, 화학식 (8) 의 기타 화합물을 제조하였다.

실시예 5

화학식 (1) 의 화합물의 제조

A. R ¹ 이 n-프로필이고, R ² 가 에틸인 화학식 (1) 의 화합물의 제조

50% 아세트산/물 (35 ㎖) 의 혼합물 중의 6-아미노-1-에틸-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온 (1.4 g, 7.1 mmol) 의 용액에 아질산나트륨 (2 g, 28.4 mmol) 을 10 분에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 70 ℃ 에서 1 시간 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 감압 하에서 적은 부피로 농축하였다. 고체를 여과해 내고, 물로 세척하여, 화학식 (1) 의 화합물인 6-아미노-1-에틸-5-니트로소-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 얻었다.

MS m/z 227.05 (M⁺), 249.08 (M⁺ + Na)

B. R ¹ 및 R ² 를 바꾼 화학식 (1) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-아미노-1-에틸-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (8) 의 기타 화합물로 대체한 것을 제외하고는 실시예 5A 의 절차에 따라, 하기 화학식 (1) 의 화합물을 제조하였다:

6-아미노-1-메틸-5-니트로소-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온;

6-아미노-1-메틸-3-시클로프로필메틸-5-니트로소-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온;

6-아미노-1-에틸-3-시클로프로필메틸-5-니트로소-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온;

6-아미노-1-메틸-3-(2-메틸프로필)-5-니트로소-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온; 및

6-아미노-1-에틸-3-(2-메틸프로필)-5-니트로소-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온.

C. R ¹ 및 R ² 를 바꾼 화학식 (1) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-아미노-1-에틸-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (8) 의 기타 화합물로 대체한 것을 제외하고는 실시예 5A 의 절차에 따라, 화학식 (1) 의 기타 화합물을 제조하였다.

실시예 6

화학식 (2) 의 화합물의 제조

A. R ¹ 이 n-프로필이고, R ² 가 에틸인 화학식 (2) 의 화합물의 제조

메탄올 (10 ㎖) 중의 6-아미노-1-에틸-5-니트로소-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온 (300 ㎎) 의 용액에 탄소상 10% 팔라듐 촉매 (50 ㎎) 를 첨가하고, 혼합물을 30 psi 에서 2 시간 동안 수소 하에서 수소화하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 용매를 감압 하에서 여과액으로부터 제거하여, 화학식 (2) 의 화합물인 5,6-디아미노-1-에틸-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 얻었다.

MS m/z 213.03 (M⁺), 235.06 (M⁺ + Na)

B. R ¹ 및 R ² 를 바꾼 화학식 (2) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-아미노-1-에틸-5-니트로소-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (1) 의 기타 화합물로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6A 의 절차에 따라, 하기 화학식 (2) 의 화합물을 제조하였다:

5,6-디아미노-1-메틸-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온;

5,6-디아미노-1-메틸-3-시클로프로필메틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온;

5,6-디아미노-1-에틸-3-시클로프로필메틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온;

5,6-아미노-1-메틸-3-(2-메틸프로필)-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온; 및

5,6-디아미노-1-에틸-3-(2-메틸프로필)-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온.

C. R ¹ 및 R ² 를 바꾼 화학식 (2) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-아미노-1-에틸-5-니트로소-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (1) 의 기타 화합물로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6A 의 절차에 따라, 화학식 (2) 의 기타 화합물을 제조하였다.

실시예 7

화학식 (3) 의 화합물의 제조

A. R ¹ 이 n-프로필이고, R ² 가 에틸이고, X 가 1,4- 피라졸릴이고 , Y 가 메틸렌이고, Z 가 3- 트리플루오로메틸페닐인 화학식 (3) 의 화합물의 제조

메탄올 (10 ㎖) 중의 5,6-디아미노-1-에틸-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온 (100 ㎎, 0.47 mmol) 및 1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-카르복실산 (0.151 g, 0.56 mmol) 의 혼합물에 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (0.135 g, 0.7 mmol) 를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 감압 하에서 용매를 제거하고, 10% 메탄올/염화메틸렌으로 융출시키는 Bistag 를 사용하여 잔류물을 정제하여, N-(6-아미노-1-에틸-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}-피라졸-4-일)카르복스아미드를 얻었다.

B. R ¹ , R ² , X, Y, 및 Z 를 바꾼 화학식 (3) 의 화합물의 제조

유사하게, 임의로 5,6-디아미노-1-에틸-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (2) 의 기타 화합물로 대체하고, 임의로 1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-카르복실산을 화학식 Z-Y-X-CO₂H 의 기타 화합물로 대체한 것을 제외하고는 실시예 7A 또는 7B 의 절차에 따라, 하기 화학식 (3) 의 화합물을 제조하였다:

N-(6-아미노-1-메틸-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1- {[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}-피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-1-메틸-2,4-디옥소-3-시클로프로필메틸(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}-피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-1-에틸-2,4-디옥소-3-시클로프로필메틸(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}-피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-1-메틸-2,4-디옥소-3-에틸(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3- 플루오로페닐]메틸}-피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-1-메틸-2,4-디옥소-3-시클로프로필메틸(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-플루오로페닐]메틸}-피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-1-에틸-2,4-디옥소-3-시클로프로필메틸(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-플루오로페닐]메틸}-피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-[6-아미노-3-(시클로프로필메틸)-1-메틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘 -5-일)][1-벤질피라졸-4-일]카르복스아미드;

N-(6-아미노-1-메틸-2,4-디옥소-3-시클로프로필메틸(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-시아노페닐]메틸}-피라졸-4-일)카르복스아미드;

[1-(2-(1H-1,2,3,4-테트라아졸-5-일)에틸)피라졸-4-일]-N-[6-아미노-3-(시클로프로필메틸)-1-메틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5-일)]카르복스아미드;

N-[6-아미노-3-(시클로프로필메틸)-1-에틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5-일)](1-{[6-(트리플루오로메틸)(3-피리딜)]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-[6-아미노-3-프로필)-1-에틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5-일)](1-{(2-피리딜)]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-[6-아미노-3-(2-메틸프로필)-1-메틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5-일)][1-벤질피라졸-4-일]카르복스아미드;

N-[6-아미노-3-(2-메틸프로필)-1-메틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5-일)][1-{[3-플루오로페닐]메틸}피라졸-4-일]카르복스아미드;

N-[6-아미노-3-(2-메틸프로필)-1-에틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5-일)][1-{[3-플루오로페닐]메틸}피라졸-4-일]카르복스아미드;

N-[6-아미노-3-(2-메틸프로필)-1-메틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5-일)][1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-일]카르복스아미드; 및

N-[6-아미노-3-(2-메틸프로필)-1-에틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5-일)](1-{[6-(트리플루오로메틸)(3-피리딜)]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드.

C. R ¹ 및 R ² 를 바꾼 화학식 (2) 의 화합물의 제조

유사하게, 임의로 5,6-디아미노-1-에틸-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (2) 의 기타 화합물로 대체하고, 임의로 1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-카르복실산을 화학식 Z-Y-X-CO₂H 의 기타 화합물로 대체한 것을 제외하고는 실시예 7A 의 절차에 따라, 화학식 (3) 의 기타 화합물을 제조하였다.

실시예 8

화학식 I 의 화합물의 제조

A. R ¹ 이 n-프로필이고, R ² 가 에틸이고, X 가 1,4- 피라졸릴이고 , Y 가 메틸렌이고, Z 가 3- 트리플루오로메틸페닐인 화학식 I 의 화합물의 제조

N-(6-아미노-1-에틸-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-3-일)카르복스아미드 (80 ㎎, 0.17 mmol), 10% 수성 수산화나트륨 (5 ㎖), 및 메탄올 (5 ㎖) 의 혼합물을 100 ℃ 에서 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각하고, 감압 하에서 메탄올을 제거하고, 잔류물을 물로 희석하고 염산으로 산성화하였다. 침전물을 여과해 내고, 물, 그 다음 메탄올로 세척하여, 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메 틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온, 화학식 I 의 화합물을 얻었다.

B. R ¹ , R ² , X, Y, 및 Z 를 바꾼 화학식 I 의 화합물의 제조

유사하게, N-(6-아미노-1-에틸-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-3-일)카르복스아미드를 화학식 (3) 의 기타 화합물로 대체한 것을 제외하고는 실시예 8A 의 절차에 따라, 하기 화학식 I 의 화합물을 제조하였다:

1-시클로프로필메틸-3-메틸-8-[1-(페닐메틸)피라졸-4-일]-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-시클로프로필메틸-3-에틸-8-{1-[(3-트리플루오로메틸페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-시클로프로필메틸-3-메틸-8-{1-[(3-플루오로페닐)메틸]피라졸-4-일}-1, 3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-시클로프로필메틸-3-에틸-8-{1-[(3-플루오로페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-시클로프로필메틸-3-에틸-8-(1-{[6-(트리플루오로메틸)(3-피리딜)]메틸}피 라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

3-({4-[1-(시클로프로필메틸)-3-메틸-2,6-디옥소-1,3,7-트리히드로퓨린-8-일]피라졸릴}메틸)벤젠카르보니트릴;

8-[1-(2-(1H-l,2,3,4-테트라아졸-5-일)에틸)피라졸-4-일]-3-메틸-1-시클로프로필메틸-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-(2-메틸프로필)-3-메틸-8-[1-벤질피라졸-4-일]-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6- 디온;

1-(2-메틸프로필)-3-에틸-8-{1-[(3-플루오로페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7- 트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-(2-메틸프로필)-3-메틸-8-{1-[(3-트리플루오로메틸페닐)메틸]피라졸-4-일} -1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-(2-메틸프로필)-3-메틸-8-{1-[(3-플루오로페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7- 트리히드로퓨린-2,6-디온;

3-에틸-1-(2-메틸프로필)-8-(1-{[6-(트리플루오로메틸)(3-피리딜)]메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온;

1-에틸-3-메틸-8-{1-[(3-플루오로페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온; 및

3-에틸-1-프로필-8-[1-(2-피리딜메틸)피라졸-4-일]-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온.

C. R ¹ , R ² , X, Y, 및 Z 를 바꾼 화학식 I 의 화합물의 제조

유사하게, N-(6-아미노-1-에틸-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-3-일)카르복스아미드를 화학식 (3) 의 기타 화합물로 대체한 것을 제외하고는 실시예 8A 의 절차에 따라, 화학식 I 의 기타 화합물을 제조하였다.

실시예 9

화학식 (10) 의 화합물의 제조

A. R ¹ 이 n-프로필인 화학식 (10) 의 화합물의 제조

6-아미노우라실 (5.08 g, 40 mmol), 헥사메틸디실라잔 (50 ㎖), 및 황산암모늄 (260 ㎎, 1.96 mmol) 의 혼합물을 12 시간 동안 환류하였다. 냉각 후, 고체를 여과해 내고, 감압 하에서 여과액으로부터 용매를 제거하여, 6-아미노우라실의 트리메틸실릴화된 유도체를 얻었다.

생성물을 톨루엔 (1.5 ㎖) 및 아이오도프로판 (7.8 ㎖, 80 mmol) 에 용해하고, 120 ℃ 의 오일 배쓰에서 2 시간 동안 가열하였다. 그 다음 반응 혼합물을 0 ℃ 로 냉각시키고, 포화 수성 중탄산나트륨을 천천히 첨가하였다. 수득된 침 전물을 여과해 내고, 물, 톨루엔, 및 에테르로 연속해서 세척하여, 화학식 (10) 의 화합물인 6-아미노-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 얻었고, 이것을 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.

B. R ¹ 을 바꾼 화학식 (10) 의 화합물의 제조

유사하게, 아이오도프로판을 화학식 R¹Hal 의 기타 알킬 할라이드로 대체한 것을 제외하고는 실시예 9A 의 절차에 따라, 하기를 포함하는 화학식 (10) 의 기타 화합물을 제조하였다:

6-아미노-3-시클로프로필메틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온; 및

6-아미노-3-(2-메틸프로필)-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온.

실시예 10

화학식 (11) 의 화합물의 제조

A. R ¹ 이 n-프로필인 화학식 (1O) 의 화합물의 제조

7O ℃ 의 50% 아세트산/물 (160 ㎖) 의 혼합물 중 6-아미노-3-프로필-1,3-디 히드로피리미딘-2,4-디온 (5.6 g) 의 용액에 아질산나트륨 (4.5 g) 을 15 분의 시간에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 상기 혼합물을 70 ℃ 에서 45 분 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 감압 하에 적은 부피로 농축시켰다. 고체를 여과해 내고, 물로 세척하여, 화학식 (11) 의 화합물인 6-아미노-5-니트로소-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 수득하였다.

B. R ¹ 을 바꾼 화학식 (11) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-아미노-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (10) 의 기타 화합물로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 1OA 의 절차에 따라, 하기를 포함하는 화학식 (11) 의 기타 화합물을 제조하였다:

6-아미노-5-니트로소-3-시클로프로필메틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온; 및

6-아미노-5-니트로소-3-(2-메틸프로필)-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온.

실시예 11

화학식 (12) 의 화합물의 제조

A. R ¹ 이 n-프로필인 화학식 (12) 의 화합물의 제조

70 ℃ 의 12.5% 암모니아수 (135 ㎖) 중 6-아미노-5-니트로소-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온 (5.4 g, 27 mmol) 의 용액에 나트륨 디티오나이트 (Na₂S₂O₄, 9.45 g, 54 mmol) 를 15 분에 걸쳐 조금씩 첨가하고, 혼합물을 20 분 동안 교반하였다. 상기 용액을 감압 하에 농축시키고, 5 ℃ 까지 냉각시키고, 침전물을 여과해 내고, 냉수로 세척하여, 화학식 (12) 의 화합물인 5,6-디아미노-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 얻었다.

B. R ¹ 을 바꾼 화학식 (12) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-아미노-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (11) 의 기타 화합물로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 11A 의 절차에 따라, 하기를 포함하는 화학식 (12) 의 기타 화합물을 제조하였다:

5,6-디아미노-3-시클로프로필메틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온; 및

5,6-디아미노-3-(2-메틸프로필)-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온.

실시예 12

화학식 (13) 의 화합물의 제조

A. R ¹ 이 n-프로필이고, X 가 1,4- 피라졸릴이고 , Y 가 메틸렌이고, Z 가 3-트리플루오로메틸페닐인 화학식 (13) 의 화합물의 제조

메탄올 (50 ㎖) 중 5,6-디아미노-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온 (2.3 g, 126 mmol) 및 1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-카르복실산 (3.79 g, 14 mmol) 의 혼합물에 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (2.67 g, 14 mmol) 를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3 일 (더 짧은 시간도 허용가능함) 동안 교반하였다. 침전물을 여과해 내고, 물, 및 메탄올로 연속해서 세척하였다. 생성물을 진공 하에 건조시켜, 화학식 (13) 의 화합물인 N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드를 얻었다.

B. R ¹ 이 n-프로필이고, X 가 1,4- 피라졸릴이고 , Y 가 메틸렌이고, Z 가 3- 트리플루오로메틸페닐인 화학식 (3) 의 화합물의 대안적인 제조

염화티오닐 (1 ㎖) 중 1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-카르복실산 (1 g, 3.7 mmol) 의 용액을 70 ℃ 에서 4 시간 동안 가열하였다. 잉여의 염화티오닐을 증류제거하고, 잔류물을 염화메틸렌/헥산으로 처리하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 아세토니트릴에 용해시켰다. 상기 용액을 0 ℃ 의 아세토니트릴 (20 ㎖) 중 5,6-디아미노-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온 (2.3 g, 126 mmol) 및 트리에틸아민 (1 ㎖) 의 현탁액에 첨가하고, 16 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (5 ㎖) 로 식히고, 염산으로 산성화시키고, 30 분 동안 교반하고, 침전물을 여과해 내었다. 생성물을 에테르로 세척하여, 화학식 (13) 의 화합물인 N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드를 얻었다.

C. R ¹ , X, Y, 및 Z 를 바꾼 화학식 (13) 의 화합물의 제조

유사하게, 임의로 6-아미노-3-프로필-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (12) 의 기타 화합물로 대체하고, 임의로 1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-카르복실산을 화학식 Z-Y-X-CO₂H 의 기타 화합물로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 12A 또는 12B 의 절차에 따라, 하기를 포함하는 화학식 (13) 의 기타 화합물을 제조하였다:

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-시클로프로필메틸(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1 -{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-(2-메틸프로필)(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-플루오로페닐]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-시클로프로필메틸(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-플루오로페닐]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-(2-메틸프로필)(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-플루오로페닐]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-[1-벤질]피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-시클로프로필메틸(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-[1-벤질]피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-(2-메틸프로필)(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-[1-벤질]피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-시아노페닐]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-시클로프로필메틸(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-시아노페닐]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-(2-메틸프로필)(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1- {[3-시아노페닐]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[1-(2-(1H-1,2,3,4-테트라아졸-5-일)에틸)피라졸-4-일}카르복스아미드;

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-시클로프로필메틸(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[1-(2-(1H-1,2,3,4-테트라아졸-5-일)에틸)피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-(2-메틸프로필)(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[1-(2-(1H-1,2,3,4-테트라아졸-5-일)에틸)피라졸-4-일]카르복스아미드;

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[6-(트리플루오로메틸)(3-피리딜)]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-시클로프로필메틸(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[6-(트리플루오로메틸)(3-피리딜)]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드; 및

N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-(2-메틸프로필)(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[6-(트리플루오로메틸)(3-피리딜)]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드.

실시예 13

화학식 (3) 의 화합물의 제조

디메틸포름아미드 (10 ㎖) 중의 N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)-페닐]메틸}피라졸-3-일)카르복스아미드 (872 ㎎, 2 mmol) 의 용액, 탄산칼륨 (552 ㎎, 4 mmol) 및 에틸 아이오다이드 (0.24 ㎖, 3 mmol) 의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 용매를 감압 하에 여과액으로부터 증발시켰다. 잔류물을 실온에서 물로 2 시간 동안 교반하고, 침전물을 여과해 내고, 물로 세척한 다음, 메탄올 중에 용해시켰다. 이어서, 용매를 감압 하에 제거하여, 화학식 (3) 의 화합물인 N-(6-아미노-1-에틸-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드를 얻었다.

B. R ¹ , X, Y, 및 Z 를 바꾼 화학식 (13) 의 화합물의 제조

유사하게, N-(6-아미노-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)-페닐]메틸}피라졸-3-일)카르복스아미드를 화학식 (13) 의 기타 화합물로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 13A 의 절차에 따라, 하기를 포함하는 화학식 (3) 의 기타 화합물을 제조하였다:

N-(6-아미노-1-메틸-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}-피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-1-메틸-2,4-디옥소-3-시클로프로필메틸(1,3-디히드로피리미딘-5 -일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}-피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-(6-아미노-1-메틸-2,4-디옥소-3-에틸(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{ [3-플루오로페닐]메틸}-피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-[6-아미노-3-(시클로프로필메틸)-1-메틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5-일)][1-벤질피라졸-4-일]카르복스아미드;

N-(6-아미노-1-메틸-2,4-디옥소-3-시클로프로필메틸(1,3-디히드로피리미딘-5 -일))(1-{[3-시아노페닐]메틸}-피라졸-4-일)카르복스아미드;

N-[6-아미노-3-프로필]-1-에틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5-일)](1-{(2-피리딜)]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드;

실시예 14

화학식 I 의 화합물의 제조

N-(6-아미노-1-에틸-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-3-일)카르복스아미드 (850 ㎎, 2.34 mmol), 10% 수성 수산화나트륨 (10 ㎖), 및 메탄올 (10 ㎖) 의 혼합물을 100 ℃ 에서 18 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고, 감압 하에 메탄올을 제거하고, 남은 혼합물을 염산으로 산성화시켜 pH 가 2 가 되게 하였다. 침전물을 여과해 내고, 물/메탄올 혼합물로 세척하여, 화학식 I 의 화합물인 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온을 얻었다.

B. R ¹ , R ² , X, Y, 및 Z 를 바꾼 화학식 I 의 화합물의 제조

유사하게, N-(6-아미노-1-에틸-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-3-일)카르복스아미드를 화학식 (13) 의 기타 화합물로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 14A 의 절차에 따라, 실시예 8 에 열거된 것들을 포함하는 화학식 I 의 기타 화합물을 제조하였다.

실시예 15

화학식 (14) 의 화합물의 제조

A. R ² 가 에틸인 화학식 (14) 의 화합물의 제조

70 ℃ 의 50% 아세트산/물 (50 ㎖) 의 혼합물 중 6-아미노-1-에틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온 (5.0 g, 32.3 mmol) 의 용액에 아질산나트륨 (4.45 g, 64.5 mmol) 을 30 분의 시간에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 상기 혼합물을 70 ℃ 에서 추가로 30 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 침전물을 여과해 내고, 물에 이어서 메탄올로 세척하여, 화학식 (14) 의 화합물인 6-아미노-1-에틸-5-니트로소-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 얻었다.

B. R ² 를 바꾼 화학식 (14) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-아미노-1-에틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 6-아미노-1-메틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온으로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 15A 의 절차에 따라 6-아미노-1-메틸-5-니트로소-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 제조하였다.

C. R ² 를 바꾼 화학식 (14) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-아미노-1-에틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (5) 의 기타 화합물로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 15A 의 절차에 따라 화학식 (14) 의 기타 화합물을 제조하였다.

실시예 16

화학식 (15) 의 화합물의 제조

A. R ² 가 에틸인 화학식 (15) 의 화합물의 제조

50 ℃ 의 14.5% 암모니아수 (50 ㎖) 중 6-아미노-1-에틸-5-니트로소-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온 (3.9 g, 21.2 mmol) 의 용액에 나트륨 디티오나이트 (Na₂S₂O₄, 7.37 g, 42.4 mmol) 를 15 분에 걸쳐 조금씩 첨가하고, 혼합물을 20 분 동안 교반하였다. 용액을 감압 하에 농축시켜 부피가 30 ㎖ 가 되게 하고, 5 ℃ 로 냉각시키고, 침전물을 여과해 내고, 냉수로 세척하여, 화학식 (15) 의 화합물인 5,6-디아미노-1-에틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 얻었다.

B. R ² 를 바꾼 화학식 (15) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-아미노-1-에틸-5-니트로소-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 6-아미노-1-메틸-5-니트로소-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온으로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 16A 의 절차에 따라 5,6-디아미노-1-메틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 제조하였다.

C. R ² 를 바꾼 화학식 (15) 의 화합물의 제조

유사하게, 6-아미노-1-에틸-5-니트로소-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (14) 의 기타 화합물로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 16A 의 절차에 따라 화학식 (15) 의 기타 화합물을 제조하였다.

실시예 17

화학식 (16) 의 화합물의 제조

A. R ² 가 에틸이고, X 가 1,4- 피라졸릴이고 , Y 가 메틸렌이고, Z 가 3- 트리플루오로메틸페닐인 화학식 (16) 의 화합물의 제조

메탄올 (50 ㎖) 중 5,6-디아미노-1-에틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온 (2 g, 11.76 mmol) 및 1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-카르복실산 (3.5 g, 12.94 mmol) 의 혼합물에 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (2.47 g, 12.94 mmol) 를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 물 및 메탄올로 세척하였다. 생성물을 진공 하에 건조시켜, 화학식 (16) 의 화합물인 N-(6-아미노-1-에틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드를 얻었다.

B. R ² , X, Y, 및 Z 를 바꾼 화학식 (16) 의 화합물의 제조

유사하게, 5,6-디아미노-1-에틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 5,6-디아미노-1-메틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온으로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 17A 의 절차에 따라 N-(6-아미노-1-메틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5- 일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드를 제조하였다.

C. R ² , X, Y, 및 Z 를 바꾼 화학식 (16) 의 화합물의 제조

유사하게, 5,6-디아미노-1-에틸-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온을 화학식 (14) 의 기타 화합물로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 16A 의 절차에 따라 화학식 (15) 의 기타 화합물을 제조하였다.

실시예 18

화학식 (3) 의 화합물의 제조

디메틸포름아미드 (30 ㎖) 중 N-(6-아미노-1-에틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-3-일)카르복스아미드 (1.5 g, 3.55 mmol) 의 용액, 탄산칼륨 (980 ㎎, 7.1 mmol) 및 프로필 아이오다이드 (724 ㎎, 4.26 mmol) 의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 첨가하 고, 침전물을 여과해 내어, 화학식 (3) 의 화합물인 N-(6-아미노-1-에틸-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드를 얻었고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.

B. R ¹ , R ² , X, Y 및 Z 를 바꾼 화학식 (3) 의 화합물의 제조

유사하게, N-(6-아미노-1-에틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-3-일)카르복스아미드를 N-(6-아미노-1-메틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5-일)) 로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 18A 의 절차에 따라 N-(6-아미노-1-메틸-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-일)카르복스아미드를 제조하였다.

C. R ¹ , R ² , X, Y, 및 Z 를 바꾼 화학식 (3) 의 화합물의 제조

유사하게, 임의로 N-(6-아미노-1-에틸-2,4-디옥소(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-3-일)카르복스아미드를 화학식 (15) 의 기타 화합물로 대체하고, 임의로 프로필 아이오다이드를 화학식 R¹Hal 의 기타 화합물로 대체하는 것을 제외하고는, 실시예 18A 의 절차에 따라 화학식 (3) 의 기타 화합물을 제조하였다.

실시예 19

화학식 I 의 화합물의 제조

N-(6-아미노-1-에틸-2,4-디옥소-3-프로필(1,3-디히드로피리미딘-5-일))(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-3-일)카르복스아미드 (300 ㎎, 464 mmol), 20% 수성 수산화나트륨 (5 ㎖), 및 메탄올 (10 ㎖) 의 혼합물을 80 ℃ 에서 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고, 감압 하에 메탄올을 제거하며, 염산으로 잔류 혼합물의 pH 를 2 로 산성화하였다. 침전물을 여과해 내고, 물 및 메탄올로 세척하여 화학식 I 의 화합물인 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온을 얻었다.

실시예 20

A _2B 길항제의 특성규명

A _2B 아데노신 수용체에 대한 방사리간드 결합

인간 A_2B아데노신 수용체 cDNA 를 HEK-293 세포 (HEK-A2B 세포로도 불림) 로 안정되게 트랜스펙션하였다. HEK-A2B 세포의 단층을 PBS 로 1 회 세척하고, 10 mM HEPES (pH 7.4), 10 mM EDTA 및 프로테아제 저해제를 함유하는 완충제 중 수집하였다. 상기 세포를 4 로 설정한 폴리트론에서 1 분 동안 균질화하고, 29000 ｇ 로 15 분 동안 4 ℃ 에서 원심분리하였다. 세포 펠렛을 10 mM HEPES (pH 7.4), 1 mM EDTA 및 프로테아제 저해제를 함유하는 완충제로 1 회 세척하고, 10% 수크로오스가 보충된 동일 완충제에 재현탁하였다. 동결된 분액을 -80 ℃ 로 유지하였다.

10 nM ³H-ZM241385 (Tocris Cookson) 를 1 유닛/㎖ 의 아데노신 데아미나아제가 보충된 TE 완충제 (50 mM Tris 및 1 mM EDTA) 중의 50 ㎍ 막 단백질 및 각종 농도의 시험 화합물과 혼합함으로써 경쟁 분석을 시작하였다. 분석물을 90 분 동안 항온배양하고, Packard Harvester 를 사용하여 여과함으로써 중단하며, 빙냉 TM 완충제 (10 mM Tris, 1 mM MgCl₂, pH 7.4) 로 4 회 세척하였다. 10 μM ZM241385 의 존재 하에 비특이적 결합을 측정하였다. 화합물의 친화도 (즉 Ki 값) 는 GraphPad 소프트웨어를 사용하여 계산하였다.

기타 아데노신 수용체에 대한 방사리간드 결합

인간 A_1, A_2A, A₃ 아데노신 수용체 cDNA 를 CHO 또는 HEK-293 세포 (CHO-A₁, HEK-A_2A, CHO-A₃로 일컬어짐) 로 안정되게 트랜스펙션하였다. 상기 기재한 것과 동일한 프로토콜을 사용하여 상기 세포로부터 막을 제조하였다. 0.5 nM ³H-CPX (CHO-A₁에 대해), 2 nM ³H-ZM214385 (HEK-A_2A) 또는 0.1 nM ¹²⁵I-AB-MECA (CHO-A₃) 를 1 유닛/㎖ 의 아데노신 데아미나아제가 보충된 TE 완충제 (CHO-A₁ 및 HEK-A_2A 에 대한50 mM Tris 및 1 mM EDTA) 또는 TEM 완충제 (CHO-A₃에 대한 50 mM Tris, 1 mM EDTA 및 10 mM MgCl₂) 중 투시 막 (perspective membrane) 및 각종 농도의 시험 화합물과 혼합함으로써 경쟁 분석을 시작하였다. 분석물을 90 분 동안 항온배양하고, Packard Harvester 를 사용하여 여과함으로써 중단하며, 빙냉 TM 완충제 (10 mM Tris, 1 mM MgCl₂, pH 7.4) 로 4 회 세척하였다. 1 μM CPX (CHO-A₁), 1 μM ZM241385 (HEK-A_2A) 및 1 μM IB-MECA (CHO-A₃) 의 존재 하에 비특이적 결합을 측정하였다. 화합물의 친화도 (즉 Ki 값) 를 GraphPad^TM 소프트웨어를 사용하여 계산하였다.

cAMP 측정

트랜스펙션된 세포의 단층을 5 mM EDTA 함유 PBS 중에 모았다. 세포를 DMEM 으로 1 회 세척하고, 1 유닛/㎖ 의 아데노신 데아미나아제를 함유하는 DMEM 에 100,000-500,000 세포/㎖ 의 밀도로 재현탁하였다. 100 ㎕ 의 세포 현탁액을 각종 작동제 및/또는 길항제를 함유하는 25 ㎕ 와 혼합하고, 반응을 37 ℃ 에서 15 분 동안 유지하였다. 15 분 후, 125 ㎕ 의 0.2N HCl 을 첨가하여 반응을 중단하였다. 세포를 1000 rpm 으로 10 분 동안 원심분리하였다. 100 ㎕ 의 상청액을 제거하고 아세틸화하였다. Assay Design 으로부터의 직접 cAMP 분석법을 사용하여 상청액 중 cAMP 의 농도를 측정하였다. A_2A 및 A_2B 아데노신 수용체는 Gs 단백질과 커플링되고, 이에 따라 A_2A 아데노신 수용체 (예컨대 CGS21680) 또는 A_2B 아데노신 수용체 (예컨대 NECA) 에 대한 작동제는 cAMP 축적을 증가시키는 반면 이들 수용체에 대한 길항제는 작동제에 의해 유도된 cAMP 축적의 증가를 막는다. A₁ 및 A₃ 아데노신 수용체는 Gi 단백질과 커플링되고, 이에 따라 A₁ 아데노신 수용체 (예컨대 CPA) 또는 A₃ 아데노신 수용체 (예컨대 IB-MECA) 에 대한 작동제는 포스콜린에 의해 유도된 cAMP 축적의 증가를 저해한다. A₁ 및 A₃ 수용체에 대한 길항제는 cAMP 축적의 저해를 막는다.

실시예 21

마우스 모델에 있어서 기도 개형에 대한 A _2B 길항제의 효과

사용된 모델 시스템은 아데노신 의존성 폐 손상의 아데노신 데아미나아제 (ADA)-결핍 마우스 모델이다. 상기 모델에서, 아데노신의 상승은 폐 염증 및 기도 개형 증가와 관련된다. 이들 마우스에서 관측되는 많은 특징은 심각한 천 식, COPD 및 폐 섬유증을 포함하는 각종 형태의 만성 폐 질환을 앓는 환자에서 관측되는 것과 비슷하다. 상기 접근법은 ADA-결핍 마우스에 있어서 폐 염증 및 손상에 대한 A_2BAR 의 기여를 조사하기 위한 수단으로서 A_2B AR 길항제 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}(4-히드로피라졸-4-일))-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온으로 상기 마우스를 처리하는 것이며, 이는 만성 폐 질환의 치료를 위한 상기 약물의 효능에 대한 통찰을 제공할 것이다.

마우스에게 1 ㎎/㎏ 의 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}(4-히드로피라졸-4-일))-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온을 1일 2 회 복막내 (ip) 주사에 의해 처리하였다. 구체적 프로토콜은 하기와 같다: ADA-결핍 (ADA-/-) 또는 ADA 함유 (ADA+) 마우스를 혈중 ADA 효소 활성을 차단함으로써 출생시 동정 (identify) 하였다. ADA-/- 마우스는 생후 2일부터 생후 21일까지 ADA 효소 치료를 지속하였다. 상기 단계에서, 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[3-(트리플로오로메틸)페닐]메틸}(4-히드로피라졸-4-일))-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온 또는 운반체 대조군 (옥수수유/에탄올/DMSO) 에 의한 처리를 개시하였다. 처리는 아침 (8-9 AM) 및 저녁 (5-6 pm) 에 ip 주사하는 것으로 이루어졌다. 매일 17 일 동안 처리하였고, 생후 38 일째 실험을 종결하였다. 처리군은 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}(4-히드로피라졸-4-일))-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온, 운반체를 수령하거나, 처리하지 않은 ADA-/- 또는 ADA+ 마우스를 포함하였다. 모든 마우스는 한배의 새끼였고, 따라서 계통이 일치하였다. 수컷 및 암컷 모두 상기 실험에 포함되었다. 실험의 종료시, 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}(4-히드로피라졸-4-일))-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온 수준의 약동학 (PK) 분석을 위해 혈청을 수집하였고, 각종 폐 종점을 검사하였다.

상기 연구 결과는 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸} (4-히드로피라졸-4-일))-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온으로 ADA-/- 마우스를 처리하면 폐 염증 및 기도 파열이 유의하게 감소된다는 것을 나타내었다. 상기 연구로부터의 아마 가장 극적인 관측 결과는 처리 프로토콜의 말기에서의 동물의 일반적인 건강 상태였다. 운반체로 처리되거나 비처리된 ADA-/- 마우스는 가쁜 호흡 및 구부러진 자세를 비롯한 심각한 호흡 곤란의 외적 징후를 나타내었다. 상기 특징은 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}(4-히드로피라졸-4-일))-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온으로 처리한 ADA-/- 마우스에게서는 관측되지 않았다.

방법:

마우스

기재된 바와 같이 ADA-결핍 마우스를 생성하고 유전자형을 조사하였다 (Blackburn 등 (1998) J Biol Chem 273:5093-5100 및 Young 등 (2004) J. Immunol . 173:1380-1389). Ada 대립유전자 결손 동종접합 마우스는 ADA-결핍 (ADA^-/-) 으로 명시한 반면, Ada 대립유전자 결손 이종접합 마우스는 ADA 대조군 마우스 (ADA⁺) 로 명시하였다. 모든 마우스는 혼합 129sv/C57BL/6J 백그라운드 상에 두고, 한배 새끼간 모든 표현형 비교를 수행하였다. 동물 관리는 협회 및 NIH 지침에 따랐다. 마우스는 미세분리기 덮개가 장착된 통풍 우리 안에 넣고 엄중한 억제 프로토콜 하에 유지시켰다. 세균, 기생충, 또는 진균 감염의 어떠한 증거도 관측되지 않았고, 우리의 한배 새끼에 대한 혈청학은 가장 일반적인 쥐과 바이러스 중 12 가지에 대하여 음성이었다.

세포 감별 및 조직학

마우스를 아버틴으로 마취시키고, 폐를 0.3 ㎖ PBS 로 4 회 세척하며, 고여 있는 0.95 ∼ 1 ㎖ 의 세척액을 회수하였다. 총 세포수를 혈구 계산기를 사용하여 측정하고, 분액은 현미경 슬라이드에 사이토스핀시키고, 세포 감별을 위하여 Diff-Quick (Dade Nehring) 으로 염색하였다. 그 후, 폐에 25 ㎝ 의 압력에서 PBS 중 4% 파라포름알데히드를 주입한 후, 4 ℃ 에서 밤새 고정하였다. 고정된 폐 샘플을 PBS 로 세정하고, 탈수하며, 파라핀에 포매하였다. 단편 (5 ㎛) 을 현미경 슬라이드에 모으고, 제조업체의 지시에 따라 헤마톡실린 및 에오신 (H&E; Shandon-Lipshaw) 또는 Mason 의 트리크롬 (EM Science) 으로 염색하였다.

mRNA 의 분석

마우스를 마취시키고, 폐를 신속히 제거하고, 액체 질소 중에서 동결시켰다. TRIzol 시약 (Life Technologies Inc., Grand Island, New York, USA) 을 사용하여 동결된 폐 조직으로부터 RNA 를 단리하였다. 그 후, RNA 샘플을 DNase 로 처리하고 정량적 실시간 RT-PCR 을 실시하였다. 실시간 RT-PCR 에 대한 프라이 머, 프로브 및 절차는 [Sun 등 (2005) J Clin Invest 115:35-43] 에 앞서 기재되어 있다. 반응은 Smart Cycler 급속 열 사이클러 시스템 (Cepheid, Sunnyvale, CA) 상에서 수행하였다. Smart Cycler 분석 소프트웨어를 사용하여, 표준 곡선 비교를 통해 주형 희석액의 PCR 증폭으로부터 생성된 특정 전사물 수준을 측정하였다.

콜라겐 정량

Sircol 콜라겐 분석 (Biocolor Ltd., Belfast N. Ireland) 을 급동결된 전폐에 수행하였다. 폐를 0.5M 의 아세트산 5 ㎖ 중에서 20 ㎎ 의 펩신으로 균질화하고, 24 시간 동안 4 ℃ 에서 진탕하면서 항온배양하였다. 균질액을 4000 rpm 으로 회전시키고, 제조업체의 지시에 따라 상청액을 펩신 가용성 콜라겐에 대해 분석하였다.

α- SMA 및 TGF -β1 면역조직화학

면역조직화학을 포르말린 고정된, 파라핀 포매된 폐로부터 절단된 5 ㎛ 의 단편에 수행하였다. 등급화 에탄올로부터 물로 단편을 재수화시키고, 내인성 퍼옥시다아제를 3% 과산화수소로 켄칭하며, 항원 복구를 수행하였고 (DAKO Corp., Carpenteria, CA), 내인성 아비딘 및 비오틴을 비오틴 차단 시스템 (Biotin Blocking System, DAKO Corp.) 으로 차단하였다. α-평활근 액틴 (sma) 염색을 위하여, 슬라이드를 Mouse on Mouse Kit, 및 ABC Elite 스트렙타비딘 시약 (Vector Laboratories, Burlingame, CA) 으로 처리하고, α-sma 단클론 항체 (Sigma, 단클론 1 A-4) 의 1:500 희석액과 함께 4 ℃ 에서 밤새 항온배양하였다. DAB (Sigma) 로 단편을 현상 (develop) 하고 메틸 그린으로 반대 염색하였다.

폐포 공간 크기의 측정

폐포 기도의 크기를 H&E-염색된 폐 단편 상의 평균 코드 (chord) 길이를 측정함으로써 압력 주입된 폐 내에서 측정하였다 (Blackburn 등 (2000) J Exp Med 192:159-170). 대표적 이미지를 디지털화하고, 10.5 ㎛ 간격의 53 개의 검은 라인으로 이루어진 격자를 이미지에 포개었다. Image-Pro^®Plus (Media Cybernetics) 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 상기 라인 격자를 폐 이미지에서 공제하고, 그 결과 라인을 측정하고 평균하여 폐포 기도의 평균 코드 길이를 얻었다. 최종 평균 코드 길이는 각 폐 견본의 10 개의 중첩되지 않는 이미지로부터의 평균을 나타낸다. 모든 정량적 연구는 동물 유전자형을 모르는 상태에서 수행하였다.

결과

조직학적 분석

폐의 조직학적 분석 결과는 도 1 에 도시되어 있다. 운반체로 처리된 ADA-/- 마우스의 폐는 유의한 폐포 기도 간이화 (도 1B) 및 주로 말단 기도의 활성화된 대식 세포의 축적으로 이루어진 폐 염증의 증가 (도 1E) 를 나타내었다. 그러나, 기관지주위/혈관주위 염증도 또한 명백하였다 (도시되어 있지 않음). 폐포 기도 간이화 및 폐 염증은 ADA+ 운반체 처리되거나 (도 1A 및 D) 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}(4-히드로피라졸-4-일))-1,3,7-트리히 드로퓨린-2,6-디온 또는 비처리된 마우스 (도시되어 있지 않음) 에서는 명백하지 않았다. 아데노신 A_2B 수용체 길항제로 ADA-/- 마우스를 처리하면 폐포 기도 간이화의 유의한 감소 (도 1C) 및 폐 염증의 감소 (도 1F) 가 나타났다. 상기 발견은 A_2B 아데노신 수용체 길항제에 의한 처리가 ADA-/- 마우스에 있어서 폐 염증 및 기도 파열의 진행을 방지할 수 있음을 나타낸다.

세기관지폐포 세척 분석

세기관지폐포 세척 (BAL) 을 수행하고, 기도 세포 개수 및 감별을 수행하였다 (도 2). 그 결과, 운반체 처리된 ADA-/- 마우스와 비교시 A_2B 아데노신 수용체 길항제 처리된 ADA-/- 마우스의 BAL 로부터 회수된 총 세포수가 유의하게 감소한 것으로 나타났다 (도 2A). BAL 로부터의 세포 감별 분석 결과 A_2B 아데노신 수용체 길항제로 처리된 ADA-/- 마우스에서 시험된, 림프구, 호중구, 호산구 (도 2C) 및 폐포 대식 세포 (도 2B) 를 포함하는 모든 세포 유형이 감소되는 것으로 나타났다.

A_2B 아데노신 수용체 길항제 처리 유무 하의 ADA-/- 마우스의 폐 내부의 폐포 대식 세포의 검사는, 폐포 대식 세포 활성화 정도에 있어서 차이가 있음을 나타내었다 (도 1E 및 F 비교). 상기 관측 사실은 BAL 로부터 회수된 활성화된 대식 세포의 수를 정량함으로써 확인하였다 (도 2C). 또한, 폐포 대식 세포 활성화의 감소는 현미경 슬라이드에 사이토스핀시킨 BAL 세포를 직접 검사함으로써 확 인할 수 있다 (도 3). 상기 데이터는, A_2B 아데노신 수용체 길항제로 처리된 ADA-/- 마우스에서 기도 염증이 유의하게 감소함을 나타내고, 이는 A_2BAR 길항 작용이 유전적으로 및/또는 환경적으로 기도 개형에 걸리기 쉬운 포유류에서 기도 염증을 방지할 수 있음을 보여준다.

염증 마커에 대한 효과

아데노신 A_2B 길항제 처리가 ADA^-/- 마우스에 있어서 폐 염증의 정도를 완충시키는 능력이 있음은 핵심 사이토카인 및 케모카인의 수준에 대한 실험을 촉발하였다. 운반체 또는 A_2B 아데노신 수용체 길항제로 처리된 ADA⁺ 및 ADA^-/- 마우스로부터의 전폐 RNA 추출물을 분석하였다. IL-5, IL-4, TNFα, RANTES 및 각종 단핵구 화학유인물질 단백질 (MCP) 은 운반체로 처리된 ADA^-/- 마우스의 폐 중에서 증가되는 것으로 관측되었으나; 이의 수준은 A_2B 아데노신 수용체 길항제 처리로는 변하지 않았다. 반대로, IL-6, 에오탁신 I 및 TARC 는 운반체 처리된 ADA^-/- 마우스에서 증가하였고, 이의 수준은 A_2B 아데노신 수용체 길항제로 처리된 ADA^-/- 마우스에서 유의하게 감소하였다. 도 4 에 도시되어 있는 바와 같이, 상기 발견은 ADA^-/- 마우스에서의 A_2BAR 길항작용은 모든 전-염증성 사이토카인 및 케모카인이 아닌 일부의 발현을 막을수 있다는 점을 증명한다.

근섬유모세포 축적에 대한 효과

앞선 연구는 ADA^-/- 마우스에서 아데노신 증가와 함께 폐 섬유증이 발병한다는 것을 증명하였다. 아데노신 A_2B 수용체 길항제 처리가 ADA^-/- 마우스의 폐 섬유증에 미치는 효과를 측정하기 위하여, α-평활근 액틴 (α-sma) 을 염색함으로써 폐 근섬유모세포의 상태를 검사하였다 (도 5). ADA⁺ 운반체 처리된 마우스의 말단 기도에서는 α-sma 양성 세포가 관측되지 않은 반면 (도 5A), 운반체 처리된 ADA^-/- 마우스의 말단 기도에서는 α-sma 염색이 현저하였다 (도 5B). 아데노신 A_2B 수용체 길항제로 처리된 ADA^-/- 마우스의 말단 기도에서는 α-sma 양성 세포가 거의 없거나 전혀 없었고 (도 5C), 이는 A_2BAR 길항작용이 ADA^-/- 마우스의 폐 중 근섬유모세포의 축적을 방지할 수 있다는 점을 암시하는 것이다.

콜라겐 침착에 대한 효과

ADA-/- 모델에 대한 앞선 연구는, ADA-/- 마우스에서 아데노신 증가와 함께 심각한 폐 섬유증이 발병한다는 점을 증명하였다. ADA-/- 마우스에 있어서 A_2B 아데노신 수용체 길항제 처리가 섬유증에 미치는 효과를 측정하기 위하여, Mason 의 트리크롬 염색을 사용하여 콜라겐 침착의 정도를 검사하였다 (도 6). 콜라겐 침착 검사 결과, ADA⁺ 운반체 또는 아데노신 A_2B 수용체 길항제 처리된 마우스의 폐 에서는 콜라겐 침착이 거의 없거나 전혀 없었던 반면 (도 6A 및 B), 운반체 처리된 ADA^-/- 마우스에 있어서는 말단 기도 콜라겐 침착이 현저하였다 (도 6C). ADA^-/- 마우스를 아데노신 A_2B 수용체 길항제 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}(4-히드로피라졸-4-일))-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온으로 처리하면, 기도의 콜라겐 침착이 감소하였다 (도 6D). 전폐 α1-프로콜라겐 전사물 수준 (도 6E) 및 BAL 액 중 콜라겐 단백질 수준 (도 6F) 을 정량함으로써 콜라겐 생성을 측정하였다. 운반체로 처리된 ADA^-/- 마우스의 폐에서 콜라겐 생성의 유의한 증가가 관측되었으며, 상기 증가는 CVT-6883 처리에 의해 크게 방지되었다. 상기 발견은, 아데노신 A_2B 수용체 길항제가 ADA^-/- 마우스에 있어서 섬유증의 발병을 막을 수 있다는 점을 증명하는 것이고, 이는 A_2BAR 신호전달이 폐 섬유증을 조절함을 나타내는 것이다.

전섬유성 매개체의 감소

TGF-β1, 오스테오폰틴 (OPN) 및 플라스미노겐 활성자 저해제-1 (PAI-1) 는 ADA^-/- 마우스의 폐에서 증가하는 것으로 나타난 전섬유성 매개체이다 (Chunn 등 (2005) J Immunol 175:1937-1946). 운반체로 처리된 ADA^-/- 마우스의 폐에 있어서 상기 섬유성 조절자의 수준이 증가된 반면, 아데노신 A_2B 수용체 길항제 처리는 상기 분자의 발현을 감소시켰다 (도 7). 상기 결과는, A_2BAR 길항 작용이 ADA^-/- 마우스의 폐에서 섬유증의 핵심 조절자의 발현을 막을수 있음을 나타내는 것이다.

프로테아제/항-프로테아제 수준의 정상화

메탈로프로테이나제 (MMP) 및 프로테아제 저해제의 증가된 수준은 ADA^-/- 마우스를 비롯한 다수의 모델에서 말단 기도 확장의 특징이다 (Sun 등 (2005) J Clin Invest 115:35-43, Hautamaki 등 (1997) Science 277:2002-2004, Lanone 등 (2002) J Clin Invest 110:463-474). 운반체로 처리한 ADA^-/- 마우스의 폐의 항-프로테아제 및 프로테아제의 검사 결과, TIMP-1, MMP-9 및 MMP-12 의 발현이 증가되는 것으로 증명되었다 (도 8). 아데노신 A_2B 수용체 길항제로 ADA^-/- 마우스를 처리하면 3 가지 폐포 통합성 조절자 모두의 발현이 감소하였고, 이는 A_2BAR 신호전달이 ADA^-/- 마우스의 폐에서 아데노신-유도 프로테아제 및 항-프로테아제의 발현 조절에 관계됨을 암시하는 것이다.

폐포 파열에 대한 효과

ADA-/-마우스는 폐 아데노신 수준의 증가에 의해 매개되는 폐기종의 말단 기도 확장의 특징을 나타낸다. 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}(4-히드로피라졸-4-일))-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온이 ADA-/- 마우스에서 관측되는 말단 기도 확장에 미치는 효과를 시험하기 위하여, 말단 기도의 평균 코드 길이 측정에 의해 조직학적으로 폐포 파열을 평가하였다 (도 9). ADA+ 동물의 기도는 잘 정돈되어 있고 조직학적으로 관측시 작았다 (도 9A). ADA-/- 기도는 확장되었고 (도 9B), ADA-/- 마우스를 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}(4-히드로피라졸-4-일))-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온으로 처리하면 상기 확장이 방지되었다 (도 9C). 말단 기도 크기의 측량 결과는 조직학적 관측 결과와 일치하였다 (도 9D). 상기 데이터는 ADA-/- 마우스를 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}(4-히드로피라졸-4-일))-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온으로 처리하는 것이 ADA-/- 마우스에서 관측되는 폐포 기도 파열을 방지할 수 있다는 점을 증명하는 것이다.

Claims

유전적으로 및/또는 환경적으로 기도 개형 및/또는 폐 염증에 걸리기 쉬운 포유류에게 치료적 유효량의 A_2B 수용체 길항제를 투여하여 기도 개형 및/또는 폐 염증을 치료 및 예방하는 방법.
제 1 항에 있어서, 기도 개형의 치료 및 예방을 위한 방법.
제 1 항에 있어서, 폐 염증의 치료 및 예방을 위한 방법.
제 1 항에 있어서, 포유류가 인간인 방법.
제 1 항에 있어서, 전신 투여인 방법.
제 5 항에 있어서, 경구 투여인 방법.
제 5 항에 있어서, 정맥내 투여인 방법.
제 5 항에 있어서, 근육내 투여인 방법.
제 5 항에 있어서, 복막내 투여인 방법.
제 1 항에 있어서, A_2B 수용체 작동제를 흡입에 의해서 투여하는 방법.
제 1 항에 있어서, 포유류가 천식, 폐 섬유증, 및 COPD 로부터 선택되는 질환 상태를 앓는 방법.
제 11 항에 있어서, 질환 상태가 천식인 방법.
제 11 항에 있어서, 질환 상태가 폐 섬유증인 방법.
제 11 항에 있어서, 질환 상태가 COPD 인 방법.
제 1 항에 있어서, A_2B 수용체 길항제의 구조가 화학식 I 또는 화학식 II 인 방법:

[화학식 I]

[화학식 II]

[식 중:

R¹ 및 R² 는 독립적으로는 수소, 임의치환 알킬, 또는 -D-E 기 (식 중, D 는 공유 결합 또는 알킬렌이고, E 는 임의치환 알콕시, 임의치환 시클로알킬, 임의치환 아릴, 임의치환 헤테로아릴, 임의치환 헤테로시클릴, 임의치환 알케닐, 또는 임의치환 알키닐이고, 단, D 가 공유 결합일 때, E 가 알콕시일 수 없음) 로부터 선택되고;

R³ 는 수소, 임의치환 알킬 또는 임의치환 시클로알킬이고;

X 는 임의치환 아릴렌 또는 헤테로아릴렌이고;

Y 는 공유 결합이거나 하나의 탄소 원자가 임의로 -O-, -S-, 또는 -NH- 로 대체될 수 있고, 히드록시, 알콕시, 임의치환 아미노, 또는 -COR (식 중, R 은 히 드록시, 알콕시 또는 아미노임) 로 임의치환되는 알킬렌이고;

단, 임의치환이 히드록시 또는 아미노일 때, 상기 치환은 헤테로원자에 인접한 탄소 원자에 존재할 수는 없고;

Z 는 수소, 임의치환 단환식 아릴 또는 임의치환 단환식 헤테로아릴이고; 단,

(a) Y 가 공유 결합이고 X 가 탄소 원자에 의해서 퓨린 고리에 결합된 임의치환 1,4-피라졸렌일 경우에만, Z 가 수소이고;

(b) X 가 임의치환 아릴렌일 때, Z 는 임의치환 이미다졸 이외의 임의치환 단환식 헤테로아릴임].
제 15 항에 있어서,

R¹ 및 R² 가 독립적으로는 수소, 임의치환 저급 알킬, 또는 -D-E 기 (식 중, D 는 공유 결합 또는 알킬렌이고, E 는 임의치환 페닐, 임의치환 시클로알킬, 임의치환 알케닐, 또는 임의치환 알키닐임) 이고,

R³ 가 수소인 방법.
제 16 항에 있어서,

X 가 임의치환 페닐렌이고;

Y 가 공유 결합이거나 하나의 탄소 원자가 임의로 -O-, -S-, 또는 -NH- 로 대체될 수 있는 저급 알킬렌인 방법.
제 17 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 독립적으로는 시클로알킬로 임의치환되는 저급 알킬인 방법.
제 18 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 n-프로필이고, Y 가 -OCH₂- 이고, Z 가 임의치환 옥사디아졸인 방법.
제 19 항에 있어서, Z 가 5-(2-메톡시페닐)-(1,2,4-옥사디아졸-3-일)인, 즉 8-{4-[5-(2-메톡시페닐)-[1,2,4]옥사디아졸-3-일메톡시]페닐}-1,3-디프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 19 항에 있어서, Z 가 5-(3-메톡시페닐)-(1,2,4-옥사디아졸-3-일)인, 즉 8-{4-[5-(3-메톡시페닐)-[1,2,4]옥사디아졸-3-일메톡시]페닐}-1,3-디프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 19 항에 있어서, Z 가 5-(4-플루오로페닐)-(1,2,4-옥사디아졸-3-일)인, 즉 8-{4-[5-(4-플루오로페닐)-[1,2,4]옥사디아졸-3-일메톡시]페닐}-1,3-디프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 16 항에 있어서,

X 가 임의치환 피라졸렌이고,

Y 가 공유 결합, 히드록시, 알콕시, 임의치환 아미노, 또는 -COR (식 중, R 은 히드록시, 알콕시 또는 아미노임) 로 임의치환되는 저급 알킬렌이고;

Z 가 수소, 임의치환 페닐, 임의치환 옥사디아졸릴, 임의치환 이속사졸릴, 또는 임의치환 피리딜인 방법.
제 23 항에 있어서, X 가 임의치환 1,4-피라졸렌인 방법.
제 24 항에 있어서, Z 가 임의치환 페닐인 방법.
제 25 항에 있어서, R¹ 이 시클로알킬로 임의치환되는 저급 알킬이고, R² 가 수소이고, Y 가 -CH₂- 또는 -CH(CH₃) 인 방법.
제 26 항에 있어서, R¹ 이 n-프로필이고, X 가 1,4-피라졸렌이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 3-트리플루오로메틸페닐인, 즉 1-프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 26 항에 있어서, R¹ 이 n-프로필이고, X 가 1,4-피라졸렌이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 페닐인, 즉 1-프로필-8-[1-벤질피라졸-4-일]-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 26 항에 있어서, R¹ 이 n-부틸이고, X 가 1,4-피라졸렌이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 3-플루오로페닐인, 즉 1-부틸-8-(1-{[3-플루오로페닐]메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 26 항에 있어서, R¹ 이 n-프로필이고, X 가 1,4-피라졸렌이고, Y 가 -CH(CH₃)- 이고, Z 가 페닐인, 즉 1-프로필-8-[1-(페닐에틸)피라졸-4-일]-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 25 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 독립적으로는 메틸, 에틸, n-프로필, 또는 시클로프로필메틸이고, Y 가 히드록시, 알콕시, 임의치환 아미노, 또는 -COR (식 중, R 은 히드록시, 알콕시 또는 아미노임) 로 임의치환될 수 있는 메틸렌 또는 에틸렌인 방법.
제 31 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 n-프로필이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 3-(1,2,3,4-테트라졸-5-일)페닐인, 즉 1,3-디프로필-8-{1-[(3-(1H-1,2,3,4-테트라아졸-5-일)페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 31 항에 있어서, R¹ 이 n-프로필이고, R² 가 에틸이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 3-트리플루오로메틸페닐인, 즉 3-에틸-1-프로필-8-{1-[(3-트리플루오로메틸페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 31 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 n-프로필이고, Y 가 -CH(CH₃)- 이고, Z 가 3-트리플루오로메틸페닐인, 즉 1,3-디프로필-8-(1-{[3-(트리플루오로메틸)페닐]에틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 31 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 n-프로필이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 4-카르복시페닐인, 즉 1,3-디프로필-8-{1-[(4-카르복시페닐)메틸]피라졸-4-일}-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 31 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 n-프로필이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 3-카르복시페닐인, 즉 3-{[4-(2,6-디옥소-1,3-디프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-8-일)피라졸릴]메틸}벤조산인 방법.
제 31 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 n-프로필이고, Y 가 -CH(CO₂H)- 이고, Z 가 페닐인, 즉 2-[4-(2,6-디옥소-1,3-디프로필(1,3,7-트리히드로퓨린-8-일))피라졸릴]-2-페닐아세트산인 방법.
제 24 항에 있어서, Z 가 임의치환 옥사디아졸인 방법.
제 38 항에 있어서, R¹ 이 시클로알킬로 임의치환되는 저급 알킬이고, R² 가 H 이고, Y 가 -CH₂- 또는 -CH(CH₃)- 인 방법.
제 31 항에 있어서, R¹ 이 n-프로필이고, X 가 1,4-피라졸렌이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 5-(4-클로로페닐)-[1,2,4]-옥사디아졸-3-일인, 즉 8-(1-{[5-(4-클로로페닐)(1,2,4-옥사디아졸-3-일)]메틸}피라졸-4-일)-1-프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 31 항에 있어서, R¹ 이 n-부틸이고, X 가 1,4-피라졸렌이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 5-(4-클로로페닐)-[1,2,4]-옥사디아졸-3-일인, 즉 8-(1-{[5-(4-클로로페닐)(1,2,4-옥사디아졸-3-일)]메틸}피라졸-4-일)-1-부틸-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 38 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 독립적으로는 시클로알킬로 임의치환되는 저급 알킬이고, Y 가 -CH₂- 또는 -CH(CH₃)- 인 방법.
제 42 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 n-프로필이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 3-(4-클로로페닐)[1,2,4]옥사디아졸-5-일인, 즉 8-(1-{[3-(4-클로로페닐)(1,2,4-옥사디아졸-5-일)]메틸}피라졸-4-일)-1,3-디프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 42 항에 있어서, R¹ 이 n-프로필이고, R² 가 에틸이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 3-(4-클로로페닐)-[1,2,4]-옥사디아졸-5-일인, 즉 8-(1-{[3-(4-클로로페닐)(1,2,4-옥사디아졸-5-일)]메틸}피라졸-4-일)-3-에틸-1-프로필-1,3,7-트리히드로퓨 린-2,6-디온인 방법.
제 24 항에 있어서, Z 가 수소인 방법.
제 44 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 독립적으로는 시클로알킬로 임의치환되는 저급 알킬이고, Y 가 -CH₂-, -CH(CH₃)- 또는 공유 결합인 방법.
제 46 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 n-프로필이고, Y 가 공유 결합이고, Z 가 수소인, 즉 1,3-디프로필-8-피라졸-4-일-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 46 항에 있어서, R¹ 이 sec-부틸이고, R² 가 메틸이고, Y 가 공유 결합이고, Z 가 수소인, 즉 1-메틸-3-sec-부틸-8-피라졸-4-일-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 24 항에 있어서, Z 가 임의치환 이속사졸릴인 방법.
제 49 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 독립적으로는 시클로알킬로 임의치환되는 저급 알킬이고, Y 가 -CH₂-, -CH(CH₃)-, 또는 공유 결합인 방법.
제 50 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 n-프로필이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 5-(4-트리플루오로메틸페닐)이속사졸-3-일인, 즉 1,3-디프로필-8-[1-({5-[4-(트리플루오로메틸)페닐]이속사졸-3-일}메틸)피라졸-4-일]-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 50 항에 있어서, R¹ 이 n-프로필이고, R² 가 에틸이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 5-(4-클로로페닐)-이속사졸-3-일인, 즉 8-(1-{[5-(4-클로로페닐)이속사졸-3-일]메틸}피라졸-4-일)-3-에틸-1-프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 24 항에 있어서, Z 가 임의치환 피리딜인 방법.
제 52 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 독립적으로는 시클로알킬로 임의치환되는 저급 알킬이고, Y 가 -CH₂-, -CH(CH₃)-, 또는 공유 결합인 방법.
제 54 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 n-프로필이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 피리드-2-일인, 즉 1,3-디프로필-8-[1-(2-피리딜메틸)피라졸-4-일]-1,3,7-트리히드로퓨 린-2,6-디온인 방법.
제 54 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 n-프로필이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 2-트리플루오로메틸피리드-3-일인, 즉 1,3-디프로필-8-(1-{[6-(트리플루오로메틸)(3- 피리딜)]메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 54 항에 있어서, R¹ 및 R² 가 n-프로필이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 6-카르복시-피리드-2-일인, 즉 6-{[4-(2,6-디옥소-1,3-디프로필-1,3,7-트리히드로퓨린-8-일)피라졸릴]메틸}피리딘-2-카르복실산인 방법.
제 54 항에 있어서, R¹ 이 n-프로필이고, R² 가 에틸이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 2-피리딜인, 즉 3-에틸-1-프로필-8-[1-(2-피리딜메틸)피라졸-4-일]-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 54 항에 있어서, R¹ 이 n-프로필이고, R² 가 에틸이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 6-(트리플루오로메틸)-피리드-3-일인, 즉 3-에틸-1-프로필-8-(1-{[6-(트리플루오로메틸)(3-피리딜)]메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 54 항에 있어서, R¹ 이 시클로프로필메틸이고, R² 가 에틸이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 6-(트리플루오로메틸)-피리드-3-일인, 즉 1-(시클로프로필메틸)-3-에틸-8-(1-{[6-(트리플루오로메틸)(3-피리딜)]메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.
제 54 항에 있어서, R¹ 이 2-메틸프로필이고, R² 가 에틸이고, Y 가 -CH₂- 이고, Z 가 6-(트리플루오로메틸)-피리드-3-일인, 즉 3-에틸-1-(2-메틸프로필)-8-(1-{[6-(트리플루오로메틸)(3-피리딜)]메틸}피라졸-4-일)-1,3,7-트리히드로퓨린-2,6-디온인 방법.