KR20060127393A - 안티센스 ｉａｐ 올리고머 및 화학치료제를 이용한 증식성질환의 치료 방법 - Google Patents

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에릭 라카세
다니엘 맥마누스
존 피. 더킨
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에게라 쎄라퓨틱스 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은 증식성 질환의 치료를 위한 XIAP, HIAP-1 또는 HIAP-2에 대한 안티센스 올리고머 및 화학치료제의 용도, 조성물 및 키트에 관한 것이다.
증식성 질환

Description

안티센스 ＩＡＰ 올리고머 및 화학치료제를 이용한 증식성 질환의 치료 방법{TREATMENT OF PROLIFERATIVE DISEASES USING AN ANTISENSE IAP OLIGOMER AND CHEMOTHERAPEUTIC AGENT}
본 발명은 암과 그외 증식성 질환의 치료 방법에 관한 것이다.
세포 사멸의 한 방식을 세포자살(apoptosis) 또는 프로그램화된 세포사멸이라고 한다. 세포자살은 건강한 조직의 발생 및 유지에 있어서 정상적인 부분으로서 발생된다. 이러한 과정은 매우 신속하게 진행되어 검출하기 어렵다.
세포자살 경로는 현재 배아 발생, 바이러스 병인, 암, 자가면역 질환 및 신경퇴행성 질환 뿐만 아니라 그외 질환에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 세포자살에 대한 반응 실패는 암, 홍반성 루퍼스 및 다발성 경화증과 같은 자가면역 질환의 발병 및 헤르페스 바이러스, 폭스바이러스 및 아데노바이러스와 관련된 바이러스 감염에 관여하고 있다.
암에서의 세포자살의 중요성이 최근 몇년 사이에 명확해졌다. 1970년대 후반에 성장 촉진성 종양발생 유전자의 동정으로, 다년간 암 생물학에서 우위적으로 연구된 세포 증식에 모든 세계적인 관심이 집중되게 되었다. 항암 요법들이 "정상" 세포에 비해 빠르게 분열하는 암세포를 우선적으로 표적화한다는 것이 오랜 정 론이다. 이러한 설명은, 일부 서행 성장하는 종양은 쉽게 치료되지만 빠르게 분열하는 다수 종양 유형들이 항암 치료에 매우 내성적이라는 점에서, 완전히 만족스럽지는 않다. 암 분야에서의 진보는 종양을 프로그램화된 정상적인 세포사멸 경로의 수행 실패로 보는 암 생물학에 새로운 패러다임을 제시하고 있다. 정상 세포는 다양한 성장 인자를 통해 그의 이웃으로부터 계속적인 피드백을 받고 있으며, 만약 이러한 환경으로부터 벗어나게되면 "자살"로 넘어가게 된다. 암 세포는 어떻게든 이러한 명령을 뛰어넘어 부적절한 증식을 계속한다. 현재, 방사선 치료 및 여러가지 화학치료법들을 포함한 다수의 암 치료들은, 이전에는 세포 손상 초래에 의해 작용하는 것으로 여겨졌으나, 실제로는 세포자살 촉발에 의해 작용한다.
정상 세포종 및 암 세포종 모두는 세포자살 촉발자(apoptotic trigger)에 대해 광범위한 감수성을 나타내지만, 이들의 내성 결정원에 대해서는 현재 연구중에 있다. 다수의 정상 세포종들은 방사선 또는 세포독성 화합물의 치사량 이하의 용얄에 대해서는 일시적으로 성장이 중지되지만, 인근 암 세포는 세포자살로 진행된다. 특정 용량에 대한 이러한 사이한 효과는 성공적인 항암치료를 가능하게 하는 결정적인 치료 기회를 제공한다. 따라서, 종양 세포의 세포자살 내성이 암 치료의 실패에 중요한 원인으로 드러나는 것은 놀라운 일이 아니다.
포유류에서 Bcl-2 및 IAP 단백질 계열을 포함한 세포자살을 저해하는 몇 가지 강력한 내인성 단백질이 동정되었다. IAP 계열의 특정 일원은최종 작동기인 카스파제(caspase), 즉 세포사멸 진행에 작용하는 casp-3 및 casp-7와, 암 화학치료에 의한 세포사멸 매개에 중요한 주된 미토콘드리아 개시자 카스파제인 casp-9를 직접 저해한다. IAP는 유일하게 내인성 카스파제 저해제로만 공지되어 있으며, 따라서 세포자살 조절에 중추적인 역할을 수행한다.
IAP는 일부 암들의 발병에 기여하는 것으로 간주되고 있으며, 일 특정 IAP(cIAP2/HIAP1)가 참여하는 원인으로 추측되는 염색체의 전위가 MALT 림프종에서 확인되었다. 최근 XIAP 상승, 나쁜 예후 및 단기 생존성 사이의 관련성이 급성 골수종 백혈병 환자에게서 입증되었다. 또한, XIAP는 NCI 패널의 다수 종양 세포주들에서 매우 과다 발현되었다.
개선된 암 치료제, 특히 암세포를 세포자살로 진행시킬 수 있으며, 상기 세포에 제공된 항-세포자살 신호를 무효화시킬 수 있는 치료제가 요구된다.
본 발명의 개요
일반적으로, 본 발명은 세포를 세포자살로 유도하는데 이용가능한 방법에 관한 것이다. 본 발명의 상기 방법은 암 및 그외 증식성 질환의 치료에 유용하다.
본 발명은 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머 및 화학치료제의 투여에 의한 암과 같은 증식성 질환이 있는 환자를 치료하는 방법에 관한 것이다. 상기 화학치료제 및 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머는 동시에 또는 서로 28일 내에(예, 21내, 14일 이내, 7일 이내, 1일 이내 또는 1시간 이내) 환자 치료에 충분한 함량으로 투여된다. 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머는 IAP 단백질의 생산 함량을 감소시켜, IAP를 정상적으로 발현하는 세포가 세포자살로 진행되도록 한다. 이는 IAP를 코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드와 특이적으로 혼성화하는 뉴클레오베이스 올리고머를 제공함으로써 달성된다. 상기 뉴클레오베이스 올리고머와 IAP 폴리뉴클레오티드(예, RNA, DNA)의 특이적 혼성화는 IAP 폴리뉴클레오티드의 정상적인 기능을 방해하며, IAP 단백질의 생산 함량을 감소시킨다. 표적에 대해 특이적으로 혼성화됨으로써 표적 핵산의 기능을 조절하는 핵산 분자를 "안티센스 치료제"라고 한다.
IAP 발현율을 감소시키는 임의의 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머를 사용하는 경우, 일 측면에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머의 길이는 8개 내지 30개의 뉴클레오베이스이며, 서열번호 1-99, 143, 147, 151, 163-260, 287, 289 및 300-460으로부터 선택된 서열내의 8개 이상의 연속적인 뉴클레오베이스를 포함한다.
특정 예로, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 서열번호 1-99, 143, 147, 151, 163-260, 287, 289 및 300-460으로부터 선택된 서열을 포함한다. 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 전술한 서열번호들중 하나 이상으로(필수적으로) 이루어지는 것이 바람직하다. 예컨대, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 서열번호 97, 98, 99, 143, 147, 151, 287 및 289로부터, 서열번호 300-389로부터, 또는 서열번호 390-460으로부터 선택된 서열을 함유할 수 있다. 특히 바람직한 예로, 본 발명은 양 측에 4개의 2'-O-메틸 RNA 잔기가 측면으로 위치한 11개의 DNA 잔기를 가지는 뉴클레오베이스 올리고머에 관한 것으로, 이는 다음 서열들중 하나로 구성된다: 5'- AUUGGT TCCAATGTGUUCU-3'(서열번호 155); 5'-ACACGACCGCT AAGAAACA-3'(서열번호 16); 5'-ACAGGACTACCACTTGGAA-3'(서열번호 157); 5'-UGCC AGTGTTGATGCUGAA-3'(서열번호 27); 5'-GCUGAGTCTCCATATUGCC-3'(서열번호 141); 5'-UCGGGTATA TGGTGTCUGA-3'(서열번호 41); 5'-AAGC ACTGCACTTGGUCAC-3'(서열번호 47); 5'-CCGGCCCAAAACAAAGAAG-3'(서열번호 51); 5'-ACCCTGGATACCATTUAGC-3'(서열번호 63); 5'-UGUCAGTACA TGTTGGCUC-3'(서열번호 161); 및 5'-UGCACCCTGGATACCAUUU- 3'(서열번호 151).
다른 예로, 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머는 최대 30개의 뉴클레오베이스를 가지며, 서열번호 461-490으로부터 선택된 서열내 8개 이상의 연속 뉴클레오베이스를 포함한다.
화학치료제와 함께 투여될 수 있는 다른 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머로는, NAIP(Bircl), HIAP1(cIAP2, API2, MIHC, hITA), HIAP2(clAPI, MIHB), XIAP(hILP, hILP1, MIHA, API3), 서르비빈(survivin)(TIAP, MIHD, API4), 리빈(livin)(KIAP, ML-IAP, cIAP3, HIAP3) 및 hILP2(Ts-IAP, TIAP)로부터 선택된 IAP 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 매우 엄격한 조건에서 혼성화하는 것이다.
본 발명에 방법에 사용된 뉴클레오베이스 올리고머는 적어도 하나의 변형된 겨합(예, 포스포로티오에이트, 메틸포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포디티오에이트 또는 포스포셀레네이트 결합), 변형된 뉴클레오베이스(예, 5-메틸 시토신) 및/또는 변형된 당 모이어티(예, 2'-메톡시에틸기 또는 2'-O-메틸기)를 포함할 수 있다. 일예로, 상기 올리고머는 키메라 올리고머(예, 포스포로티오에이트 또는 포스포디에스테르 결합에 의해 서로 연결되며, 포스포로티오에이트 결합으로 결합된 1개 이상, 2개 이상, 3개 이상 또는 4개 이상의 2'-O-메틸 RNA 잔기가 양측에 위치된 DNA 잔기를 포함하는 올리고뉴클레오티드)이다.
다른 측면으로, 본 발명은 세포의 세포자살을 증강시키는 방법에 관한 것이다. 이 방법은, 세포에 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머 및 화학치료제를 동시에 또는 각각 28일 이내에 함께 세포자살을 증강시키기에 충분한 함량으로 투여하는 단계를 포함한다. 상기 세포는 생체외(ex vivo) 또는 생체내일 수 있다. 일예로, 상기 세포는 암세포(예, 인간 암 세포) 또는 림프계 또는 골수계 기원의 세포이다.
암은, 예컨대, 급성 백혈병, 급성 림프성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 골수모세포성 백혈병, 급성 전골수세포성 백혈병, 급성 골수단핵세포성 백혈병, 급성 단핵구성 백혈병, 급성 적백혈병, 만성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 골수형성이상 증후군, 만성 림프구성 백혈병, 진성 적혈구 증가증, 림프종, 호지킨병, 발덴스트롬씨 마크로글로블린혈증, 섬유 육종, 점액 육종(myxosarcoma), 지방 육종, 연골 육종, 골 육종, 척삭종, 혈관 육종, 내피 육종(endotheliosarcoma), 림프관 육종, 림프관내피종, 윤활막종(synovioma), 중피종, 유잉씨 종양, 평활근육종(leiomyosarcoma), 횡문근 육종, 결장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평표피 세포암, 기저 세포 암종, 선암종, 땀샘암, 피지선암, 유두 암종, 유두 선암종, 낭샘 암종, 수질 암종, 기관지원성 암종, 신장 세포 암종, 간암, 담관암, 융모막 암종, 정상피종, 배아 암종, 윌름씨 종양, 자궁경부암, 자궁암, 고환암, 폐암, 소세포 폐암, 방광암, 상피암, 신경아교종, 별아교 세포종, 속질모세포종, 두개인두종, 뇌실막 세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경초종, 희소돌기아교세포종(oligodendroglioma), 신경집종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종 또는 망막모세포종일 수 있다. 암 치료시, 하나 이상의 부가적인 화학치료제, 생물학적 반응 변형제, 및/또는 화학적감작제(chemosensitizer)를 또한 투여하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 물질 1종 이상은 상기 뉴클레오베이스 올리고머의 투여한 28일 이내에 투여하는 것이 바람직하다.
화학치료제 및 뉴클레오베이스 올리고머는 동일 경로로 또는 다른 경로로 투여될 수 있다. 적정 부위에 유효량을 투여하는 모든 경로를 사용할 수 있지만, 특히 정맥내 및 종양내(intratumoral) 투여가 바람직하다.
다른 측면으로, 본 발명은 화학치료제 및 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머를 함유하는 약학적 조성물에 관한 것으로, 상기 화학치료제 및 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머는 증식성 질환(예, 암)이 있는 환자를 치료하기에 충분한 총 양이다. 필요에 따라, 상기 약학적 조성물은 부가적인 성분들(예, 콜로이달 분산계)를 더 포함할 수도 있다.
또한, 본 발명은 환자에게 화학치료제 및 촉매성 RNA 분자, 또는 이러한 촉매성 RNA 분자를 코딩하는 발현벡터를 투여함에 의한, 암 또는 림프증식성 질병과 같은 증식성 질환이 있는 환자의 치료 방법에 관한 것으로, 상기 화학치료제 및 촉매성 RNA 분자는 환자를 치료하기에 충분한 총 양으로 동시에 또는 서로 28일 이내에 투여된다. 바람직한 예로서, 상기 촉매성 RNA 분자는 그것의 결합성 팔에 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머(예, 표 2, 3, 7, 8 및 9 중 어느 하나의 뉴클레오베이스 서열)에 해당되는 8개 이상의 연속적인 뉴클레오베이스들을 포함한다. 상기 RNA 분자는 바람직하기로는 헤머헤드 모티프(hammerhead motif)형이며, 또한 헤어핀, 델타형 간염 바이러스 그룹 1 인트론, VS RNA 또는 RNaseP RNA 모티프일 수도 있다.
또한, 본 발명은 환자에게 화학치료제 및 8개 이상의 연속적인 뉴클레오베이스들이 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머(예, 표 2, 3, 7, 8 및 9 중 어느 하나의 뉴클레오베이스 서열)에 해당되는 21 내지 29개의 뉴클레오베이스를 가지는 이중가닥 RNA 분자를 투여함에 의한, 암 또는 림프증식성 질환자의 치료 방법에 관한 것이다. 상기 화학치료제 및 이중가닥 RNA 분자는 환자를 치료하기에 충분한 총 양으로 동시에 또는 서로 28일 이내에 투여된다.
관련 측면으로, 또한, 본 발명은 환자에게 화학치료제 및 50 내지 70개의 뉴클레오베이스를 갖는 이중가닥 RNA 분자를 투여함에 의한, 암 또는 림프증식성 질환자의 치료 방법에 관한 것으로, 상기 RNA 분자는 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머(예, 표 2, 3, 7, 8 및 9 중 어느 하나의 뉴클레오베이스 서열)에 해당되는 8개 이상의 연속적인 뉴클레오베이스들을 포함하는 21 내지 29개의 뉴클레오베이스로 이루어진 제1 도메인; 상기 제1 도메인에 상보적인 제2 도메인; 및 상기 제1 및 제2 도메인들이 이중화되어 이중가닥 RNA 분자를 형성할 수 있도록 제1 및 2 도멘인 사이에 위치한 루프 도메인을 가진다. 상기 화학치료제 및 이중가닥 RNA 분자는 환자를 치료하기에 충분한 총 양으로 동시에 또는 서로 28일 이내에 투여된다.
또한, 본 발명은 여러가지 키트에 관한 것이다. 이러한 키트 중 하나는(i) 8 내지 30개의 뉴클레오베이스로 이루어진 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머;(ii) 화학치료제; 및 (iii) 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머 및 화학치료제를 증식성 질환자의 증식성 질환을 치료하기에 충분한 양으로 투여하기 위한 설명서를 포함한다.
본 발명의 다른 키트는(i) 8 내지 30개의 뉴클레오베이스로 이루어진 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머; 및 (ii) 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머 및 화학치료제를 증식성 질환자의 증식성 질환을 치료하기에 충분한 양으로 투여하기 위한 설명서를 포함한다.
본 발명의 또다른 키트는(i) 본 발명에 따른(전술한) 조성물; 및 (ii) 상기 조성물을 증식성 질환자의 증식성 질환을 치료하기에 충분한 양으로 투여하기 위한 설명서를 포함한다.
"뉴클레오베이스 올리고머"는 연결기(linkage group)에 의해 서로 접합된 8개 이상의 뉴클레오베이스 사슬을 함유하는 화합물을 의미한다. 상기 정의는 변형 및 비변형의 천연 및 비천연성 올리고뉴클레오티드 뿐만 아니라 펩티드 핵산(PNA), LNA(locked nucleic acid) 및 ANA(arabinonucleic acid)와 같은 올리교뉴클레오티드 모방체를 포함한다. 본 발명의 뉴클레오베이스에는 수많은 뉴클레오베이스 및 연결기를 사용할 수 있으며, 특히 표제 "올리고뉴클레오티드 및 그외 뉴클레오베이스 올리고머" 섹션에 기술된 것을 포함한다.
"단백질" 또는 "폴리펩티드" 또는 "폴리펩티드 단편"은 번역후 수식(예, 당화 또는 인산화)에 관계없이 2개 이상의 아미노산으로 이루어진 임의의 사슬을 의미하며, 천연 폴리펩티드 또는 펩티드의 일부 또는 모두로 구성되거나 또는 비천연 폴리펩티드 또는 펩티드로 구성된다.
"세포자살"은 사멸중인 세포가 세포막의 기포 형성(cell membrane blebbing), 세포체 수축, 염색사 응축 및 DNA 래더링(DNA laddering)을 포함한 일련의 특징화된 생화학적 특성을 나타내는 세포 사멸 과정을 의미한다.
"IAP 유전자"는 적어도 하나의 BIR 도메인을 가지는 폴리펩티드를 코딩하며, 다른 세포내 또는 세포외 전달 방법(예, 미국 특허 제 5,919,912호)들에 의해 제공시 세포 또는 조직에 세포자살을 조절(저해 또는 증강)할 수 있는 유전자를 의미한다. 바람직한 예로, IAP 유전자는 인간 또는 쥐과의 XIAP, HIAP1, 또는 HIAP1 중 적어도 어느 하나(각각은 미국 특허 제 6,156,535호에 기재되어 있음)와 약 50% 이상(예, 적어도 85%, 90% 또는 95% 이상)의 뉴클레오티드 서열 상동성을 가지는 유전자이다. 바람직하기로는, 상동성을 측정하는 서열 부위는 적어도 하나의 BIR 도메인 및 고리 아연 핑거 도메인을 코딩하는 부위이다. 포유류의 IAP 유전자는 임의의 포유류 기원으로부터 분리된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 바람직하기로는, 상기 포유류는 인간이다.
"IAP 단백질" 또는 "IAP 폴리펩티드"는 IAP 유전자에 의해 코딩되는 폴리펩티드 또는 그의 단편이다. IAP 폴리펩티드는 NAIP(Bircl), HIAP1(clAP2, API2, MIHC, hITA), HIAP2(clAPI, MIHB), XIAP(hILP, hILPl, MIHA, API3), 서르비빈(survivin)(TIAP, MIHD, API4), 리빈(livin)(KIAP, ML-IAP, cIAP3, HIAP3) 및 hILP2(Ts-IAP, TIAP)을 포함한다.
"IAP 생물학적 활성"은 IAP 폴리펩티드에 의해 생체내 또는 시험관내에서 발생된 임의의 활성을 의미한다.
"세포자살 증대"는 주어진 세포 집단(예, 암 세포, 림프구, 섬유모세포 또는 그외 모든 세포)에서의 세포자살하는 세포의 수적 증가를 의미한다. 일정 분석에서 세포자살-증강 화합물에 의한 세포자살 증대 정도는 다르지만, 당업자라면 IAP로 한정되지 않은 다른 방법으로 세포자살을 증강시키는 뉴클레오베이스 올리고머를 동정하는, 세포자살 수준상의 유의적인 변화를 통계적으로 분석할 수 있을 것으로 이해될 것이다. 바람직하기로는, "세포자살 증대"는 세포자살이 발생되는 세포의 수가, 본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머를 투여하지 않았으나, 다른 점은 실질적으로 동일한 방법으로 처리된 세포에 비해, 적어도 10%, 더 바람직하기로는 25% 또는 더더욱 50%, 및 가장 바람직하기로는 적어도 1배 이상으로 증가하는 것을 의미한다. 바람직하기로는, 모니터하는 샘플은 정상적으로 세포자살 발생이 불충분한 세포 샘플(즉, 암 세포)이다. 세포자살의 수준 변화(즉, 증강 또는 감소)를 측정하는 방법은 본 발명에 기재되어 있다.
표적 유전자(예, IAP)의 "발현을 저해하는" 뉴클레오베이스 올리고머는 표적 mRNA 또는 상기 mRNA에 의해 코딩된 단백질의 함량을 무처리 대조군에 비해, 적어도 약 5%, 더 바람직하기로는 적어도 약 10%, 25% 또는 50%로 감소시키는 뉴클레오베이스 올리고머를 의미한다. mRNA과 단백질의 수준을 모두 측정하는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예시적인 방법은 본원에 기술되어 있다.
"혼성화"는 상보적인 뉴클레오베이스 사이의 수소 결합을 의미하며, 이는 왓슨-크릭(Watson-Crick), 호그스턴(Hoogsteen) 또는 역위 호그스턴(reversed Hoogsteen) 수소 결합일 수 있다. 예로, 아데닌 및 티민은 수소 결합 형성을 통해 쌍을 이루는 상보적인 뉴클레오베이스이다.
"증식성 질환"은 부적절하게 높은 수준의 세포 분열, 부적절하게 낮은 수준의 세포자살 또는 이들 둘다에 의해 유발되거나 또는 그 결과로 발생되는 질환을 의미한다. 예컨대, 암은 증식성 질환의 일예이다. 암의 예로는, 백혈병(예, 급성 백혈병, 급성 림프성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 골수모세포성 백혈병, 급성 전골수세포성 백혈병, 급성 골수단핵세포성 백혈병, 급성 단핵구성 백혈병, 급성 적백혈병, 만성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병), 진성 적혈구 증가증, 림프종(호지킨병, 비-호지킨병), 발덴스트롬씨 마크로글로블린혈증, 중쇄 질환(heavy chain disease) 및 육종 및 암종(섬유 육종, 점액 육종(myxosarcoma), 지방 육종, 연골 육종, 골 육종, 척삭종, 혈관 육종, 내피 육종(endotheliosarcoma), 림프관 육종, 림프관내피종, 윤활막종(synovioma), 중피종, 유잉씨 종양, 평활근육종(leiomyosarcoma), 횡문근 육종, 결장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평표피 세포암, 기저 세포 암종, 선암종, 땀샘암, 피지선암, 유두 암종, 유두 선암종, 낭샘 암종, 수질 암종, 기관지원성 암종, 신장 세포 암종, 간암, 담관암, 융모막 암종, 정상피종, 배아 암종, 윌름씨 종양, 자궁경부암, 자궁암, 고환 암, 폐암, 소세포 폐암, 방광암, 상피암, 신경교종, 별아교 세포종, 속질모세포종, 두개인두종, 뇌실막 세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경초종, 희소돌기아교세포종(oligodendroglioma), 신경집종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종 또는 망막모세포종)과 같은 고형 종양을 포함할 수 있으나, 그것으로 한정되는 것은 아니다. 림프증식성 질환 역시 증식성 질환으로 간주된다.
본 발명에 따른 방법으로 사용된 뉴클레오베이스는 세포자살을 증가시킬 수 있거나/있으며, 정상적으로 충분하게 세포자살이 발생되지 않은 세포내에 존재하는 IAP mRNA 또는 단백질 수치를 감소시킬 수 있는 것이 바람직하다. 바람직하기로는, 상기 증가는 대조군에 비해 적어도 10%이며, 더 바람직하기로는 25%, 가장 바람직하기로는 1배 이상이다. 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 뉴클레오베이스 올리고머는 약 8 내지 30개의 뉴클레오베이스를 포함한다. 특정 예에서, 8개 이상의 연속적인 뉴클레오베이스는 서열번호 1-99, 143, 147, 151, 163-260, 287, 289, 300-490으로부터 선택된 서열로부터 유래된다. 본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머는 또한, 예컨대 IAP 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 상보적인 20, 40, 60, 85, 120 또는 그 이상의 연속적인 추가의 뉴클레오베이스를 포함할 수도 있다. 뉴클레오베이스 올리고머(또는 그것의 일부분)은 변형된 벡본을 함유할 수도 있다. 포스포로티오에이트, 포스포로디티오테이트 및 그외 변형된 벡본들이 당업계에 공지되어 있다. 또한, 뉴클레오베이스 올리고머는 하나 이상의 비천연적 결합을 함유할 수도 있다.
"환자"는 모든 동물(예, 인간)을 의미한다. 본 발명에 따른 방법, 조성물 및 키트를 이용하여 치료될 수 있는 인간을 제외한 환자로는, 말, 개, 고양이, 돼지, 염소, 토끼, 햄스터, 원숭이, 기니아 피그, 랫, 마우스, 도마뱀, 양, 소, 어류 및 조류가 있다.
"화학치료제"는 암 세포를 죽이거나 또는 그 성장을 서행시키기 위해 사용되는 물질을 의미한다. 따라서, 세포독성제 및 세포증식억제제 모두 화학치료제로 간주된다. 화학치료제의 예로는, 탁산류(예, 파클리탁셀, 도세탁셀, RPR 109881A, SB-T-1213, SB-T-1250, SB-T-101187, BMS-275183, BRT 216, DJ-927, MAC-321, IDN5109 및 IDN5390), 빈카 알칼로이드류(vinca alkaloids)(예, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 빈플루닌, 비노렐빈 및 안하이드로빈블라스틴), 돌라스타틴류(dolastatins)(돌라스타틴-10, 돌라스타틴-15, ILX651, TZT-1027, 심플로스타틴 1, 심플로스타틴 3 및 LU103793), 트립토피신류(cryptophycins((예, 크립토피신 1 및 크립토피신 52), 에포틸론류(epothilones)(예, 에포틸론 A, 에포틸론 B, 데옥시에포틸론 B 및 에포틸론 B 락탐), 일레우테로빈(eleutherobin), 디스코데르몰리드(discodermolide), 2-에피-디스코데르몰리드(2-epi-discodermolide), 2-데스-메틸디스코데르몰리드(2-des-methyldiscodermolide), 5-하이드록시메틸디스코데르몰리드(5-hydroxymethyldiscodermolide), 19-데스-아미노카르보닐디스코데르몰리드(19-des-aminocarbonyldiscodermolide), 9(13)-사이클로디스코데르몰리드(9(13)- cyclodiscodermolide) 및 라울리말리드(laulimalide)가 있다. 그외는 아래 표 1에 나열되어 있다.
"생물학적 반응-변형제"는 질병과 싸우는 면역계의 능력을 자극하거나 또는 회복시키는 물질을 의미한다. 전부는 아니지만, 일부 생물학적 반응-변형제는 암세포의 성장을 서행시킬 수 있으며 따라서, 화학치료제로 간주된다. 생물학적 반응-변형제의 예로는 인터페론(알파, 베타, 감마), 인터루킨-2, 리투시맵(rituximab) 및 트라스투주맴(trastuzumab)이 있다.
"화학적 감작제"는 종양 세포를 화학요법 효과에 더욱 민감하게 반응하도록 하는 물질이다.
"림프증식성 질환"은 림프계 세포(예, T-세포 및 B-세포)의 비정상적인 증식이 있는 질환이다.
"리보자임(ribozyme)"은 효소학적 활성을 가지는 RNA로, 부위 특이성 및 표적 RNA 분자에 대한 절단 능력을 가지고 있다. 리보자임을 사용하여 폴리펩티드의 발현을 감소시킬 수 있다. 리보자임을 이용한 폴리펩티드 발현 감소는 예컨대, Turner et al.,(Adv. Exp. Med. Biol. 465: 303-318, 2000) 및 Norris et al.,(Adv. Exp. Med. Biol. 465: 293-301, 2000)에 의해 기재되어 있다.
"리포터 유전자"는 그것의 발현이 분석될 수 있는 폴리펩티드를 코딩하는 유전자이며, 이러한 폴리펩티드로는 글루쿠로니다제(GUS), 루시퍼라제, 클로람페니콜 트랜스아세틸라지(CAT) 및 베타-갈락토시다제를 포함하나, 이것으로 한정되는 것은 아니다.
"프로모터"는 전사를 진행하기에 충분한 폴리뉴클레오티드를 의미한다.
"작동가능하도록 연결된"은 적정 분자가 제2 폴리뉴클레오티드에 결합하였을때, 제1 폴리뉴클레오티드가 제1 폴리뉴클레오티드의 전사를 지시하는 제2 폴리뉴클레오티드에 인접하여 위치된 것을 의미한다.
본 발명의 다른 특성 및 이점은 바람직한 실시예에 대한 아래 설명 및 청구 범위로부터 명백해질 것이다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 본 발명에 따른 뉴클레오베이스 올리고머를 세포독성제, 세포증식억제제 또는 생물학적 반응 변형제와 같은 화학치료제와 조합하여 투여하는, 세포에서 세포자살을 증대시키는 방법에 관한 것이다. 상기 두가지 물질은 동시에 또는 서로 28일 이내에 투여하는 것이 바람직하다. 특정 예로, 화학치료제는 미세관(microtubule)을 교란하거나 또는 안정화시키는 것이다. 화학치료제는 예컨대, 탁산 또는 빈카 알칼로이드이다. 필요한 경우, 화학적 감작제(즉, 증식성 세포가 화학요법에 더욱 민감하게 반응하도록 하는 물질) 역시 투여할 수도 있다. 또한, 전술한 물질의 모든 조합으로 약학적 조성물을 제조할 수도 있다. 이러한 약학적 조성물은 증식성 질환, 예컨대 암 또는 림프구 증식성 질환, 또는 증식성 질환의 증상 치료에 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머/화학치료제 조합은 암 또는 그외 증식성 질환의 치료를 위한 방사선치료와 병용할 수 있다.
암 세포에서의 세포자살 활성화는, 기존의 화학요법 또는 방사선치료에 대한 환자의 반응성을 향상시키기 위한 새로우면서도, 잠재적으로 유용한 접근방식을 제공한다. XIAP는 카스파제를 직접적으로 저해하고 세포자살을 억제하는 능력면에서, IAP 유전자 계열중 가장 강력한 일원이다. 본 발명자들은, 인간 비-소세포 폐암(NCI-H460)의 생체내 및 시험관내 시험으로 안티센스(AS) 올리고뉴클레오티드에 의한 XIAP의 하향 조절 효과를 입증하였다. 실시간 RT-PCR 및 웨스턴 블롯팅으로 측정한 바에 따르면, 배양한 H460 인간 폐암 세포에서, 올리고뉴클레오티드 G4 AS는 각각 XIAP mRNA를 55%로, 그리고 단백질 수준을 최대 60%로 효과적으로 하향 조절하며 1.2 μM 농도에서 60%의 세포 사멸을 유발하는, 가장 강력한 화합물로 확인되었다. 이와는 반대로, 스크램블형 대조군(scrambled control) G4 올리고뉴클레오티드는 극소량의 XIAP 감소와 10% 미만의 세포 사멸을 초래하였다. G4 AS로 처리시, 프로-카스파제-3 및 PARP 단백질의 분해로 확인된 바와 같이, 세포자살이 유발되었으며 1.2 μM 농도에서 현저한 핵의 DNA 응축 및 절편화가 나타났다. 또한, XIAP AS 올리고뉴클레오티드는 H460 세포를 독소루비신, 탁솔, 비노렐빈 및 에토포시드(etoposide)의 세포독성 작용에 민감하게 반응하도록 하였다. 동물 모델에서, G4 AS는 15 mg/kg의 수준에서 전신성 복막 투여시, 이종이식 모델인 SCID/RAG2-면역결핍 마우스의 인간 H460 종양에 대해 현저한 서열-특이적인 성장 저해 효과를 나타내었다. AS ODN의 전신 투여는 종양의 이종이식편에서의 XIAP 단백질의 85% 하향 조절과 관련있다. 15 mg/kg G4 AS와 5 mg/kg 비노렐빈의 병용은, 각각의 물질을 단독으로 사용하는 경우에 비해 보다 현저하게 종양 성장을 억제시켰다. 이러한 실험들은, XIAP의 하향 조절이 폐의 종양 세포에서의 중요한 사멸 시그널이며, 생체내에서 종양 성장을 억제할 뿐만 아니라 시험관내에서 세포자살을 유발할 수 있음을 나타낸다. 이러한 연구들은, IAP가 인간의 비소 세포성 폐암 및 다른 고형 종양의 암 치료법의 적합한 표적물이라는 주장을 뒷받침한다.
치료법
치료법은 암 치료가 정상적으로 수행되는 모든 곳에서 제공될 수 있다: 자택, 의사 집무실, 진료소, 병원 외래환자 병동 또는 병원. 치료는 의사가 치료법의 효과를 면밀히 관찰하여 모든 필요한 조정을 행할 수 있도록 일반적으로 병원에서 시작된한다. 치료 기간은 치료 대상인 암 종류, 환자의 나이 및 상태, 환자의 병증 단계 및 타입, 그리고 치료에 대한 환자 신체의 반응에 따라 결정된다. 약물 투여는 다양한 간격(예, 매일, 매주 또는 매월)으로 수행될 수 있다. 치료법은 환자의 신체가 건강한 신규 세포를 생성하고 그 능력을 유지하기 위한 기회를 가지도록 휴지기를 포함한, 온 & 오프 주기(on-and-off cycle)로 제공될 수 있다.
암 종류 및 발병 단계에 따라, 암 치료법을 사용하여 암 확산을 서행시키거나, 암 증식을 지연시키거나, 신체 다른 부분으로 시발 종양을 전이시킬 수 있는 암 세포를 저지 또는 죽이거나, 암으로 인한 증상을 완화시키거나, 또는 최초 발생 위치에서 암을 예방할 수 있다.
본원에서, 용어 "암" 또는 "신생물(neoplasm)" 또는 "신생 세포(neoplastic cell)"는 비정상적인 방식으로 복수화된 세포 집합을 나타낸다. 암 증식은 무통제의 진행성이며, 정상적으로는 정상세포의 복수화를 유도하지 않거나 중지시키는 조건하에서 발생된다.
기존의 약학적 실무를 적용하여 과잉의 세포 증식으로 인한 질병을 가진 환자에게 화합물을 투여하기 위한 적정 제형 또는 조성물을 제공할 수 있다. 투여는 환자가 징후를 나타내기 전에 시작될 수도 있다. 모든 적정 투여 경로를 적용할 수 있으며, 예컨대, 비경구, 정맥내, 동맥내, 피하, 종양내, 근육내, 두개내, 안와내, 눈내, 심실내, 간내, 낭내(intracapsular), 수막강내, 수조내(intracisternal), 복막내, 비내, 에어로졸, 좌제 또는 경구 투여일 수 있다. 예를 들어, 치료 제형은 액체 용액 또는 현탁제 형태일 수 있으며, 경구 투여의 경우 제형은 정제 또는 캡슐제 형태일 수 있으며, 비내 투여의 경우 제형은 분말, 점비제 또는 에어로졸제 형태일 수 있다.
제형 제조 분야에서 잘 알려진 방법은, 예컨대 "Remington: The Science and Practice of Pharmacy" Ed. A. R. Gennaro, Lippincourt Williams & Wilkins, Philadelphia, PA, 2000에서 확인된다. 비경구 투여용 제형은, 예컨대 부형제, 멸균수 또는 염수, 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리알킬렌 글리콜류, 식물성 오일 또는 수소화된 나프탈렌류를 함유할 수 있다. 생체적합한, 생분해성 락티드 폴리머, 락티드/글리콜리드 공중합체 또는 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체를 사용하여 화합물의 방출을 조절할 수도 있다. 그외 IAP 조절 화합물에 대한 잠재적으로 유용한 비경구 전달 시스템은 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체 입자, 삼투압 펌프, 이식성 주입 시스템 및 리포좀을 포함한다. 흡입용 제형은 부형제, 예컨대, 락토스를 포함할 수 있으며, 또는 예컨대 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르, 글리코콜레이트 및 데옥시콜레이트를 함유하는 수용액일 수 있으며, 또는 점비제 또는 젤 형태로 투여되기 위한 오일성 용액일 수도 있다.
제형은 질병 또는 질환 치료를 제공하기에 치료학적으로 유효한 함량(예, 병리 상태를 예방, 제거 또는 경감시키는 함량)으로 인간 환자들에게 투여될 수 있다. 본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머의 바람직한 투여량은, 질병의 종류 및 정도, 각 환자의 전반적인 건강 상태, 화합물 부형제의 제형 및 투여 경로와 다른 다양한 인자들에 의존적일 수 있다.
전술한 바와 같이, 필요한 경우, 본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머를 이용한 치료는, 증식성 질환의 치료법들(예, 방사선 치료, 수술 또는 화학요법)과 병용될 수도 있다.
전술한 모든 적용 방법에 있어서, 본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머는 정맥내로 적절히 투여되며, 또는 세포자살 발생이 필요한 부위에 적용된다(예, 주사에 의해).
올리고뉴클레오티드 및 그외 뉴클레오베이스 올리고머
2종 이상의 올리고뉴클레오티드는 RNase H에 의한 RNA 절단을 유도한다: 포스포디에스테르(PO) 또는 포스포로티오에이트(PS) 결합을 가진 폴리데옥시뉴클레오티드들. 2'-OMe-RNA 서열은 RNA 표적에 대해 높은 친화성을 나타내지만, 이 서열은 RNase H의 기질이 아니다. 적합한 올리고뉴클레오티드는, 뉴클레이즈 내성을 위해 포스포로티오에이티로 변형된 일부 또는 전체 인터뉴클레오티드 결합을 가지며 올리고데옥시뉴클레오티드 갭(gap)을 함유하는 2'-변형 올리고뉴클레오티드를 기본으로 한 것이다. 메틸포스포네이트 변형의 존재는 그것의 타겟 RNA에 대한 올리고뉴클레오티드의 친화성을 증가시키며, 따라서 IC50은 감소한다. 또한, 이러한 변형은 변형 올리고뉴클레오티드의 뉴클레이즈 내성을 증가시킨다. 본 발명의 방법 및 반응시약은, CMAS(covalently-closed multiple antisense) 올리고뉴클레오티드(Moon et al., Biochem J. 346: 295- 303,2000 ; PCT Publication No. WO 00/61595), 리본-타입 안티센스(RiAS) 올리고뉴클레오티드(Moon et al., J. Biol. Chem. 275: 4647-4653,2000 ; PCT Publication No. WO 00/61595) 및 거대 원형 안티센스 올리고뉴클레오티드(U. S. Patent Application Publication No. US 2002/0168631 Al)를 포함한, 개발될 수 있는 모든 기술과 함께 사용할 수 있는 것으로 이해된다.
당업계에 공지된 바와 같이, 뉴클레오시드는 뉴클레오베이스-당의 조합이다. 뉴클레오시드의 염기 부분은 정상적으로는 이종환형 염기(heterocyclic base)이다. 이러한 이종환형 염기의 가장 일반적인 두가지 종은 퓨린과 피리미딘이다. 뉴클레오티드는 뉴클레오시드의 당 부분에 공유결합으로 연결된 포스페이트기를 더욱 포함하는 뉴클레오시드이다. 펜토푸라노실 당을 포함하는 뉴클레오시드에서, 포스페이트기가 당의 2', 3' 또는 5' 하이드록시 모이어티중 어느 하나에 연결될 수 있다. 올리고뉴클레오티드 형성에서, 포스페이트기는 인접한 서로다른 뉴클레오시드와 공유결합하여 선형의 중합성 화합물을 형성한다. 이후, 상기 선형 중합 구조의 각 말단들이 추가적으로 연결되어 원형 구조를 형성할 수 있으나, 열린 선형 구조가 일반적으로 바람직하다. 올리고뉴클레오티드 구조내에, 포스페이트기는 일반적으로 올리고뉴클레오티드의 벡본을 형성하는 것으로 지칭된다. 정상적인 결합 또는 RNA 및 DNA 벡본은 3'에서 5' 방향의 포스포디에스테르 결합이다.
본 발명에 유용한 바람직한 뉴클레오베이스 올리고머의 구체적인 예로는, 변형 벡본 또는 비천연성 인터뉴클레오시드 결합을 포함하는 올리고뉴클레오티드이다. 본 발명에서 정의된 바와 같이, 변형 벡본을 가지는 뉴클레오베이스 올리고머는벡본에 인 원자를 가지는 것과 벡본에 인 원자를 가지지 않는 것을 포함한다. 본 발명에서, 그것의 인터뉴클레오시드 벡본내에 인 원자를 가지지 않는 변형 올리고뉴클레오티드 역시 뉴클레오베이스 올리고머인 것으로 간주된다.
변형 올리고뉴클레오티드 벡본을 가지는 뉴클레오베이스 올리고머는, 예컨대, 포스포로티오에이트, 키랄 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포로트리에스테르, 아미노알킬-포스포로트리에스테르, 3'-알킬렌 포스포네이트 및 키랄 포스포네이트를 포함하는 메틸 및 그외 알킬 포스포로네이트, 포스피네이트, 3'-아미노 포스포르아미데이트 및 아니모알킬포스포르아미데이트를 포함하는 포스포르아미데이트, 티오노포스포라미데이트, 티오노알킬포스포네이트, 티오노알킬포스포트리에스테르 및 정상적인 3'-5' 결합을 가지는 보라노포스페이트, 그것의 2'-5' 연결된 유사체, 및 뉴클레오시드 단위의 인접 쌍들이 3'-5'가 5'-3'와 또는 2'-5'가 5'-2'와 연결되는, 그것의 역방향성을 가지는 것이 있다. 다양한 염, 혼합 염 및 자유 산 형태 또한 포함된다. 전술한 인 함유 결합의 제조를 개시하고 있는 대표적인 미국 특허로는, 미국 특허번호 3,687,808; 4,469,863; 4,476,301; 5,023,243; 5,177,196; 5,188,897; 5,264,423; 5,276,019; 5,278,302; 5,286,717; 5,321,131; 5,399,676; 5,405,939; 5,453,496; 5,455,233; 5,466,677; 5,476,925; 5,519,126; 5,536,821; 5,541,306; 5,550,111; 5,563,253; 5,571,799; 5,587,361; 및 5,625,050를 들 수 있으나 이들로 한정되는 것은 아니며, 이들 각각은 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
인 원자를 포함하지 않는 변형 올리고뉴클레오티드 벡본을 가지는 뉴클레오베이스 올리고머는, 단쇄 알킬 또는 사이클로알킬 인터뉴클레오시드 결합, 혼성 이종원자 및 알킬 또는 사이클로알킬 인터뉴클레오시드 결합, 또는 하나 이상의 단쇄 이종 원자 또는 이종환형 인터뉴클레오시드 결합에 의해 형성된 벡본을 가진다. 이러한 것들로는, 모르폴리노 결합(뉴클레오시드의 당에 부분적으로 형성된 것); 실록산 벡본; 설파이드, 설폭사이드 및 설폰 벡본; 포름아세틸 및 티오포름아세틸 벡본; 메틸렌 포름아세틸 및 티오포름아세틸 벡본; 알켄 함유 벡본; 설파메이트 벡본; 메틸렌이미노 및 메틸렌하이드라지노 벡본; 설포네이트 및 설폰아미드 벡본; 아미드 벡본; 및 그외 혼성 N, O, S 및 CH2 구성을 가지는 것을 들 수 있다. 전술한 올리고뉴클레오티드의 제조를 개시한 대표적인 미국 특허로는, 미국 특허 번호 5,034,506; 5,166,315; 5,185,444; 5,214,134; 5,216,141; 5,235,033; 5,264,562; 5,264,564; 5,405,938; 5,434,257; 5,466,677; 5,470,967; 5,489,677; 5,521,063; 5,506,337; 5,541,307; 5,561,225; 5,596,086; 5,602,240; 5,610,289; 5,602,240; 5,608,046; 5,610,289; 5,618,704; 5,623,070; 5,663,312; 5,633,360; 5,677,437; 5,677,439; 5,698,685; 및 6,365,577가 있으며, 이들은 본 발명에 원용에 의해 포함된다.
다른 뉴클레오베이스 올리고머의 경우, 당과 인터뉴클레오시드 결합 모두는, 즉 벡본은 신규한 기로 치환된다. 뉴클레오베이스 단위는 IAP와의 혼성화시 유지된다. 이러한 뉴클레오베이스 올리고머는 펩티드 핵산(PNA)라고 한다. PNA 화합물에서, 올리고뉴클레오티드의 당-벡본은 아미드를 함유하는 벡본, 특히 아미노에틸글리신 벡본으로 치환된다. 뉴클레오베이스가 유지되며, 벡본의 아미드 부분의 아자 니트로겐 원자에 직접적으로 또는 간접적으로 결합되어 있다. 이들 뉴클레오베이스 올리고머의 제조 및 이용 방법은, 예컨대, "Peptide Nucleic Acids: Protocols and Applications"Ed. P. E. Nielsen, Horizon Press, Norfolk, United Kingdom, 1999에 기재되어 있다. PNA 제조를 개시한 대표적인 미국 특허로는, 미국 특허번호 5,539,082; 5,714,331; 및 5,719,262가 있으나, 이들로 한정되지 않으며, 본 발명에 원용에 의해 포함된다. PNA 화합물을 개시한 것으로는 또한 Nielsen et al., Science, 1991, 254,1497- 1500가 있다.
본 발명의 구체적인 예에서, 뉴클레오베이스 올리고머는 포스포로티오에이트 벡본과 이종원자 벡본을 가진 뉴클레오시드, 특히 -CH2-NH-O-CH2-, -CH2-N(CH3)-O-CH2-(메틸렌(메틸이미노) 또는 MMI 벡본이라 함), -CH2-O-N(CH3)-CH2-, -CH2-N(CH3) -N(CH3)-CH2-, 및 -O-N(CH3)-CH2-CH2-를 갖는다. 다른 예에서, 올리고뉴클레오티드는 미국특허 5,034,506에 기재된 모르폴리노 벡본 구조를 갖는다.
또한 뉴클레오베이스 올리고머는 하나 이상의 치환된 당 모이어티를 포함할 수도 있다. 뉴클레오베이스 올리고머는 2' 위치에 OH; F; O-, S-, 또는 N-알킬; O-, S-, 또는 N-알케닐; O-, S- 또는 N-알키닐; 또는 O-알킬-O-알킬 중 하나를 포함하며, 상기에서, 알킬, 알케닐 및 알키닐은 탄소수 1 내지 10의 알킬 또는 탄소수 2 내지 10의 알케닐 및 알키닐로 치환 또는 치환되지 않을 수 있다. 특히, O[(CH2)nO]mCH3, O(CH2)nOCH3, O(CH2)nNH2, O(CH2)nCH3, O(CH2)nONH2, 및 O(CH2)nON[(CH2)n(CH3)]2가 바람직하며, 상기에서 n과 m은 1 내지 10이다. 다른 바람직한 뉴클레오베이스 올리고머는 2' 위치에, 탄소수 1 내지 10의 저급 알킬, 치환된 저급 알킬, 알카릴, 아르알킬, O-알카릴, 또는 O-아르알킬, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, CF3, OCF3, SOCH3, S02CH3, ON02, NO2, NH2, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알카릴, 아미노알킬아미노, 폴리알킬아미노, 치환된 실릴, RNA 절단기, 리포터 군, 인터칼레이터, 뉴클레오베이스 올리고머의 약물 동력학적 특성을 향상시키는 기, 또는 뉴클레오베이스 올리고머의 약물 역학적 특성을 향상시키는 기, 및 그외 유사한 특성을 가지는 치환기중 어느 하나를 포함한다. 바람직한 변형기로는, 2'-O-메틸 및 2'-메톡시에톡시(2'-O-CH2CH20CH3, 또한 2'-0-(2-메톡시에틸) 또는 2'-MOE라 함)가 있다. 또다른 바람직한 변형기로는 2'-디메틸아미노옥시에톡시(즉, O(CH2)20N(CH3)2)가 있으며, 이는 2'-DMAOE라고도 한다. 그외 변형기로는, 2'-아미노프로폭시(2'-OCH2CH2CH2NH2)와 2'-플루오로(2'-F)가 있다. 또한, 올리고뉴클레오티드 또는 그외 뉴클레오베이스 올리고머의 다른 위치에, 특히 3'말단 뉴클레오티드 또는 2'-5' 결합의 올리고뉴클레오티드의 당의 3번 위치 및 5' 말단 뉴클레오티드의 5번 위치에, 유사한 변형이 이루어질 수도 있다. 또한, 뉴클레오베이스 올리고머는 펜토푸라노실 당 위치에 사이클로부틸 모이어티와 같은 당 모이어티를 가질 수도 있다. 이러한 변형 당 구조의 제조를 개시한 대표적인 미국 특허로는, 미국 특허 제 4,981,957; 5,118,800; 5,319,080; 5,359,044; 5,393,878; 5,446,137; 5,466,786; 5,514,785; 5,519,134; 5,567,811; 5,576,427; 5,591,722; 5,597,909; 5,610,300; 5,627,053; 5,639,873; 5,646,265; 5,658,873; 5,670,633; 및 5,700,920가 있으나 이로 한정되지 않으며, 이들은 원용에 의해 전체로서 본 발명에 포함된다.
또한, 뉴클레오베이스 올리고머는 뉴클레오베이스의 변형 또는 치환을 포함할 수 있다. 본원에서, "비변형된" 또는 "천연" 뉴클레오베이스는 퓨린 염기인 아데닌(A) 구아닌(G) 및 피리미딘 염기인 티민(T), 시토신(C) 및 우라실(U)을 포함한다. 변형된 뉴클레오베이스로는, 5-메틸시토신(5-me-C), 5-하이드록시메틸 시토신, 크산틴, 하이포크산틴, 2-아미노아데닌, 6-메틸 및 그외 아데닌 및 구아닌의 알킬 유도체들; 2-프로필 및 그외 아데닌 및 구아닌의 알킬 유도체들; 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신; 5-할로우라실 및 시토신; 5-프로피닐 우라실 및 시토신; 6-아조 우라실, 시토신 및 티민; 5-우라실(슈도우라실); 4-티오우라실; 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록실 및 그외 8-치환된 아데닌 및 구아닌; 5-할로(예, 5-브로모), 5-트리플루오로메틸 및 그외 5-치환된 우라실 및 시토신; 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌; 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌; 7-디아자구아닌 및 7-디아자아데닌; 및 3-디아자구아닌 및 3-디아자아데닌과 같은, 그외 합성 및 천연 뉴클레오베이스를 포함한다. 추가의 뉴클레오베이스로는 미국 특허 3,687,808에 개시된 것으로서, 이는 The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, pp. 858-859, Kroschwitz, J. 1., Ed., John Wiley & Sons, 1990; Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 6113; 및 Sanghvi, Y. S., Chapter 15, Antisense Research and Applications, pp. 289-302, Crooke, S. T. and Lebleu, B., Ed., CRC Press, 1993에 개시되어 있다. 이들 뉴클레오베이스 중 일부는 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 결합 친화성을 증가시키는데 이용가능하다. 그러한 것으로는 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미딘 및 2-아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐시토신을 포함한 N-2, N-6 및 O-6 치환된 퓨린을 들 수 있다. 5-메틸시토신 치환은 핵산 이중 구조의 안정성을 0.6 - 1.2.도(degree).C.로 증가시키는 것으로 확인되었으며(Sanghvi, Y. S., Crooke, S. T. and Lebleu, B., eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278), 염기의 치환에 적합하며, 2'-O-메톡시에틸 또는 2'-O-메틸 당 변형과 조합된 경우에 보다 바람직하다. 전술한 변형된 뉴클레오베이스 뿐만 아니라 그외 다른 변형 뉴클레오베이스를 개시하는 대표적인 미국 특허로는, 4,845,205; 5,130,302; 5,134,066; 5,175,273; 5,367,066; 5,432,272; 5,457,187; 5,459,255; 5,484,908; 5,502,177; 5,525,711; 5,552,540; 5,587,469; 5,594,121,5,596,091; 5,614,617; 5,681,941; 및 5,750,692가 있으며, 이는 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머의 다른 변형에는, 올리고뉴클레오티드의 활성, 세포 분포 또는 올리고뉴클레오티드의 세포 흡수를 증강시키는 하나 이상의 뉴클레오베이스 올리고머 모이어티 또는 접합체와의 화학적인 결합이 관여한다. 이러한 모이어티로는, 콜레스테롤 모이어티(Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86: 6553-6556, 1989), 콜릭산(Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let, 4: 1053-1060, 1994), 티오에테르, 예컨대 헥실-S-트리틸티올(Manoharan et al., Ann. N. Y. Acad. Sci., 660: 306-309, 1992 ; Manoharan et al., Bioorg. Med. <P>Chem. Let., 3: 2765-2770, 1993), 티오콜레스테롤(Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 20: 533-538: 1992), 지방쇄, 예컨대 도데칸디올 또는 운데실 잔기(Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 10: 1111-1118, 1991 ; Kabanov et al., FEBS Lett., 259: 327-330, 1990 ; Svinarchuk et al., Biochimie, 75: 49-54, 1993), 포스포리피드, 예컨대 디-헥사데실-락-글리세롤 또는 트리에틸암모늄 1,2-디-O-헥사데실-락-글리세로-3-H-포스포네이트(Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 36: 3651-3654, 1995 ; Shea et al., Nucl. Acids Res., 18: 3777- 3783, 1990), 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리콜 쇄(Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 14: 969-973, 1995), 또는 아다만탄 아세트산(Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 36: 3651-3654, 1995)과 같은 지질 모이어티, 팔미틸 모이어티(Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1264: 229-237, 1995), 또는 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카르보닐-옥시콜레스테롤 모이어티)가 있으나, 이것으로 한정되는 것은 아니다. 이러한 뉴클레오베이스 올리고머 접합의 제조를 개시한 대표적인 미국 특허로는, 미국 특허 4,587,044; 4,605,735; 4,667,025; 4,762,779; 4,789,737; 4,824,941; 4,828,979; 4,835,263; 4,876,335; 4,904,582; 4,948,882; 4,958,013; 5,082,830; 5,109,124 ; 5,112,963; 5,118,802; 5,138,045; 5,214,136; 5,218,105; 5,245,022; 5,254,469 ; 5,258,506; 5,262,536; 5,272,250; 5,292,873; 5,317,098; 5,371,241; 5,391,723 ; 5,414,077; 5,416,203; 5,451,463; 5,486,603; 5,510,475; 5,512,439; 5,512,667; 5,514,785; 5,525,465; 5,541,313; 5,545,730; 5,552,538; 5,565,552; 5,567,810; 5,574,142; 5,578,717; 5,578,718; 5,580,731; 5,585,481; 5,587,371; 5,591,584; 5,595,726; 5,597,696; 5,599,923; 5,599,928; 5,608,046; 및 5,688,941가 있으며, 이들은 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
또한, 본 발명은 키메라 화합물인 뉴클레오베이스 올리고머를 포함한다. "키메라" 뉴클레오베이스 올리고머는 뉴클레오베이스 올리고머이며, 구체적으로는 각각이 적어도 하나의 단량체 단위, 즉 올리고뉴클레오티드의 경우에는 뉴클레오티드로 이루어진, 2이상의 화학적으로 별개의 부위를 가지는 올리고뉴클레오티드이다. 이러한 뉴클레오베이스 올리고머는, 전형적으로 뉴클레아제 분해에 대한 내성 증가, 세포 흡수 증가 및/또는 표적 핵산에 대한 결합 친화성 증가를 부여하도록 뉴클레오베이스 올리고머가 변형된 하나 이상의 부위를 포함한다. 뉴클레오베이스 올리고머의 부가적인 부위는 RNA:DNA 또는 RNA:RNA 혼성을 절단할 수 있는 효소의 기질로서 제공할 수도 있다. 예를 들면, RNase H는 RNA:DNA 이중가닥의 RNA 가닥을 절단하는 세포성 엔도뉴클레아제이다. 따라서, RNase H의 활성화는 RNA 표적물의 절단으로 초래하여, 유전자 발현에 대한 뉴클레오베이스 올리고머 저해 효능을 크게 증강시킨다. 따라서, 키메라 뉴클레오베이스 올리고머를 사용하는 경우, 동일한 표적 부위에 혼성화하는 포스포로티오에이트 데옥솔리고뉴클레오티드(phosphorothioate deoxyoligonucleotide)에 비해 보다 짧은 뉴클레오베이스 올리고머로 유사한 결과를 얻을 수 있다.
본 발명의 키메라 뉴클레오베이스 올리고머는, 전술한 바와 같이, 2개 이상의 뉴클레오베이스 올리고머의 혼성 구조(composite structure)로서 형성될 수 있다. 이러한 뉴클레오베이스 올리고머는 올리고뉴클레오티드이며 당업계에서는 혼성체(hybrids) 또는 갭머(gapmer)라 한다. 이러한 혼성 구조의 제조를 개시한 대표적인 미국 특허로는, 미국 특허 제 5,013,830; 5,149,797; 5,220,007; 5,256,775; 5,366,878; 5,403,711; 5,491,133; 5,565,350; 5,623,065; 5,652,355; 5,652,356; 및 5,700,922가 있으며, 이들은 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
본 발명에 따라 사용된 뉴클레오베이스 올리고머는 공지된 고상 합성 기술을 통해 편리하고 통상적으로 제조될 수 있다. 이러한 합성을 위한 장비는, 몇몇 업체에서 판매하며, 예컨대 Applied Biosystems(Foster City, CA)이 있다. 당업계에 공지된 상기 합성을 위한 다른 수단들을 부가적으로 또는 대안적으로 적용시킬 수 있다. 포스포로티오에이트 및 알킬화된 유도체와 같은 올리고뉴클레오티드 제조하기 위한 유사한 기술의 사용이 잘 알려져 있다.
본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머는 섭취, 분배 및/또는 흡수 보조를 위하여, 다른 분자, 분자 구조체 또는 화합물들의 혼합, 예컨대 리포좀, 리셉터 표적화된 분자, 경구 제형, 직장 제형, 국소 제형, 그외 제형과의 혼합, 캡슐화, 접합 또는 조합될 수 있다. 이러한 섭취, 분배 및/또는 흡수를 보조하는 제형의 제조를 개시한 대표적인 미국 특허로는, 미국 특허 번호 5,108,921; 5,354,844; 5,416,016; 5,459,127; 5,521,291; 5,543,158; 5,547,932; 5,583,020; 5,591,721; 4,426,330; 4,534,899; 5,013,556; 5,108,921; 5,213,804; 5,227,170; 5,264,221; 5,356,633; 5,395,619; 5,416,016; 5,417,978; 5,462,854; 5,469,854; 5,512,295; 5,527,528; 5,534,259; 5,543,152; 5,556,948; 5,580,575; 및 5,595,756, 이들은 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머는 약학적으로 허용가능한 염, 에스테로 또는 이들 에스테르의 염, 또는 환자에게 투여시 생물학적으로 활성형의 대사산물 또는 그것이 잔류물을(직접적으로 또는 간접적으로) 제공할 수 있는 다른 화합물을 포함한다. 따라서, 예컨대, 상기 기재는 본 발명의 프로드럭 및 화합물들의 약학적으로 허용가능한 염, 이들 프로드럭의 약학적으로 허용가능한 염 및 그외 생물동급체(bioequivalent)를 나타낸다.
용어 "프로드럭"은 내인성 효소나 그외 화합물 및/또는 조건에 의해 체내 또는 체내 세포에서 활성 형태(즉, 약물)로 전환되는 불활성 형태로 준비된 치료제를 의미한다. 특히, 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 프로드럭 버전은 PCT 공개공보 WO 93/24510 또는 WO 94/26764에 개시된 방법에 따라, SATE[(S-아세틸-2-티오에틸)포스페이트]유도체로 제조될 수 있다.
용어 "약학적으로 허용가능한 염"은 모 화합물의 바람직한 생물학적 활성을 유지하며 그것에 부적절한 독성학적 효과를 부가하지 않는 염을 의미한다. 약학적으로 허용가능한 염기 부가 염은 알칼리 및 알칼리 토 금속 또는 유기 아민과 같은 금속류 또는 아민류와 함께 형성된다. 양이온으로서 사용될 수 있는 금속의 예로는, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 등이 있다. 적합한 아민의 예로는, N,N'-디벤질에틸렌디아민, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 디사이클로헥실아민, 에틸렌디아민, N-메틸글루카민 및 프로카인(예, Berge et al., J. Pharma Sci., 66: 1-19, 1977 참조)이 있다. 산성 화합물의 염기 부가 염은, 유리 산 형태를 충분한 양의 적합한 염기와 접촉시켜 기존 방법으로 염을 생산함으로써 제조된다. 상기 유리 산 형태는 상기 염 형태를 산과 접촉시키고 기존 방법으로 상기 유리 산을 분리함으로써 재생산될 수 있다. 상기 유리 산 형태는, 극성 용매에서의 가용성과 같은 특정한 물리학적 특성에 있어서 그것의 해당 염 형태와 차이가 있지만, 그외에는 상기 염은 본 발명의 목적에 따른 그것의 해당 유리 염과 등가이다. 본원에서, "약학적 부가 염"은 본 발명의 조성물을 구성하는 구성성분들중 하나의 산 형태의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 이러한 것으로는 아민의 유기 또는 무기 산 염가 있다. 바람직한 산 염으로는 하이드로클로라이드, 아세테이트, 살리실레이트, 니트레이트 및 포스페이트가 있다. 그외 적합한 약학적으로 허용가능한 염은 당업자에게 널리 공지되어 있으며, 다양한 무기 및 유기 산의 염기성 염을 포함하며, 그예로는, 무기산, 예컨대, 염산, 브롬화수소산, 황산 또는 인산; 유기산, 예컨대 카르복시산, 설폰산, 설포산, 포스포산, 또는 N-치환된 설팜산, 예컨대, 초산, 프로피온산, 글리콜산, 숙신산, 말레산, 하이드록시말레산, 메틸말레산, 푸마르산, 말산, 주석산, 락트산, 옥살산, 글루콘산, 글루카르산, 글루쿠론산, 시트르산, 벤조산, 신남산, 만델산, 살리실산, 4-아미노살리실산, 2-페녹시벤조산, 2-아세톡시벤조산, 엠본산, 니코틴산 또는 이소니코틴산; 및 천연에서 단백질 합성에 참여하는 20개의 알파-아미노산과 같은 아미노산, 예컨대 글루탐산 또는 아스파르트산, 및 페닐아세트산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 2-하이드록시에탄설폰산, 에탄-1,2-디설폰산, 벤젠설폰산, 4-메틸벤젠설폰산, 나프탈렌-2-설폰산, 나프탈렌-1,5-디설폰산, 2- 또는 3-포스포글리세레이트, 글루코스-6-포스페이트, N-사이클로헥실설팜산(사이클라메이트 형성을 이용한) 또는 다른 산의 유기 화합물, 예컨대, 아스코르브산이 있다. 화합물의 약학적으로 허용가능한 염 또한 약학적으로 허용가능한 양이온으로 제조될 수 있다. 적합한 약학적으로 허용가능한 양이온들은 당업자에게 공지되어 있으며, 알칼리, 알칼리 토류, 암모늄 및 4급 암모늄 양이온이 있다. 또한 탄산염 또는 탄산수소염 역시 가능하다.
올리고뉴클레오티드 및 그외 뉴클레오베이스 올리고머의 적합한 약학적으로 허용가능한 염으로는,(i) 나트륨, 칼륨, 암모늄, 마그네슘, 칼슘, 스페르민(spermine) 및 스페르미딘(spermidine) 등과 같은 폴리아민류 등의 양이온과 형성된 염;(ii) 무기산, 예컨대 염산, 수소화브롬산, 황산, 인산, 질산 등과 형성된 산 부가 염;(iii) 유기 산, 예컨대 초산, 옥살산, 주석산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 글루콘산, 시트르산, 말산, 아스코르브산, 벤조산, 탄산, 팔미트산, 알기닌산, 폴리글루타민산, 나프탈렌설폰산, 메탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 나프탈렌디설폰산, 폴리갈락투론산 등과 형성된 염; 및 (iv) 염소, 브롬 및 요오드와 같은 양이온 원소로부터 형성된 염을 포함한다.
또한, 본 발명은 본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머를 포함하는 약학적 조성물 및 제형을 포함한다. 본 발명의 약학적 조성물은 국소 또는 전신 처리가 적합한지에 따라 처리되는 부위에 여러가지 방식으로 투여될 수 있다. 처리는, 예컨대, 분무기에 의한 가루 또는 에어로졸의 흡입 또는 주입에 의한 국소(눈 및 질과 직장을 포함한 점막 전달을 포함) 처리, 폐 처리일 수 있으며, 기관내, 비내, 표피 및 경피를 포함하며, 경구 또는 비경구일 수 있다. 비경구 투여는, 정맥내, 동맥내, 피하, 복막내 또는 근육내 주사 또는 주입; 또는 두개내, 예컨대 척수강내 또는 심실내 투여를 포함한다.
LNA(Locked nucleic acid)
LNA는 본 발명에 사용할 수 있는 뉴클레오베이스 올리고머이다. LNA는 뉴클레오티드 유사체의 리보푸라노스 고리의 유연성(flexibility)을 제한하는 2'-O, 4'-C 메틸렌 가교를 포함하며, 그것을 견고한 이환성 N-타입 배위로 고정한다. LNA는 특정 엑소-엔도뉴클레아제 및 RNAse H 활성화에 대해 개선된 내성을 나타내며, 거의 모든 뉴클레오베이스 올리고머에 병합될 수 있다. 게다가, LNA-함유 뉴클레오베이스 올리고머는 표준적인 포스포르아미디트 합성 프로토콜을 이용하여 제조할 수 있다. LNA에 대한 구체적인 추가 사항들은 PCT 공개공보 WO 99/14226와 미국 특허 공개공보 US 2002/0094555 Al에서 확인할 수 있으며, 이들은 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
아라비노핵산(Arabinonucleic acid)
아라비노핵산(ANAs) 역시 본 발명의 방법 및 시약에 사용할 수 있다. ANA는 천연의 D-2'-데옥시리보스 당 대신 D-아라비노스 당을 기본으로하는 뉴클레오베이스 올리고머이다. 비유도체화된 ANA 유사체는 RNA에 대해 포스포로티오에이트와 유사한 결합 친화성을 가진다. 아라비노스 당이 플루오린(2'F-ANA)로 유도체화되는 경우, 결합 친화성이 증가되고 결합된 RNA의 선택적 가수분해가 효율적으로 이루어져 ANA/RNA 및 F-ANA/RNA 이중결합이 발생된다. 이러한 유사체들은 그 말단에 간단한 L 당을 이용한 유도체화에 의해 세포내 매질중에 안정시킬 수 있다. 치료법에서의 ANA의 사용은, 예컨대 Damha et al., Nucleosides Nucleotides & Nucleic Acids 20: 429- 440, 2001에 논의되어 있다.
뉴클레오베이스 올리고머의 전달
네이키드(naked) 올리고뉴클레오티드가 종양 세포로의 도입 및 IAP 발현 저해할 수 있음을 본원에서 입증한다. 그러나, 올리고뉴클레오티드나 다른 뉴클레오베이스 올리고머를 세포에 전달하는데 도움을 주는 제형을 활용하는 것이 바람직할 수도 있다(예, 미국 특허 5,656,611, 5,753,613, 5,785,992, 6,120,798, 6,221,959, 6,346,613, 및 6,353,055 참조, 이들은 원용에 의해 본 발명에 포함됨).
라이보자임
본 발명의 IAP 안티센스를 포함하는 촉매성 RNA 분자 또는 라이보자임을 사용하여 IAP 폴리뉴클레오티드의 생체내 발현을 저해할 수 있다. 안티센스 RNA내 라이보자임 서열 함유는 그것에 RNA 절단 활성을 부여하며, 따라서 구조체의 활성을 증가시킨다. 표적 RNA 특이 라이보자임의 제작 및 이용은 Haseloff et al., Nature 334: 585-591, 1988 및 미국 특허 공개공보 2003/0003469 Al에 기재되어 있으며, 이들은 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
따라서, 또한 본 발명은 결합성 팔에 표 1, 2, 6 및 7중 어느 하나의 서열에 해당하는 8 내지 19개의 연속적인 뉴클레오베이스를 가지는 안티센스 RNA를 포함하는 촉매성 RNA 분자에 관한 것이다. 본 발명의 바람직한 예에서, 촉매성 핵산 분자는 헤머헤드 또는 헤어핀 모티프로 형성되며, 또한 간염 델타 바이러스,(RNA 가이드 서열과 조합된) 그룹 I 인트론 또는 RNaseP RNA 또는 뉴로스포라 VS RNA 모티프로 형성될 수도 있다. 상기 헤머헤드 모티프의 예는 Rossi et al., AIDS Research and Human Retroviruses, 8: 183, 1992에 개시되어 있다. 헤어핀 모티프의 예는 미국 특허 5,527,895; 5,856,188 및 6,221,661와, Hampel and Tritz, Biochemistry, 28: 4929, 1989 및 Hampel et al., Nucleic Acids Research, 18: 299, 1990에 개시되어 있다. 간염 델타 바이러스 모티프의 예는 Perrotta and Been, Biochemistry, 31: 16, 1992에 개시되어 있다. RNaseP 모티프는 Guerrier-Takada et al., Cell, 35: 849, 1983에 개시되어 있다. 뉴로스포라 VS RNA 라이보자임 모티프는 Collins et al.(Saville and Collins, Cell 61: 685-696, 1990 ; Saville and Collins, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 8826-8830, 1991 ; Collins and Olive, Biochemistry 32: 2795-2799, 1993)에 개시되어 있다. 이들 특정 모티프들은 본 발명으로 한정되지 않으며, 본 발명의 효소학적 핵산 분자로 중요한 모든 것은, 한 곳 이상의 표적 유전자의 RNA 부위에 상보적인 특정한 기질 결합부를 가지며 RNA 절단 활성을 분자에 부여하는 상기 기질 결합부의 내부 또는 주위에 뉴클레오티드 서열을 가지는 것으로 당업자는 인식할 것이이다.
RNA 간섭
본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머는 IAP 발현의 RNA 간섭(RNAi)-매개성 낫 다운(knock-down)에서 이중가닥 RNA로 사용될 수 있다. RNAi는 원하는 특정 단백질의 세포내 발현을 감소시키는 방법이다(reviewed in Tuschl, Chembiochem 2: 239-245, 2001; Sharp, Genes & Devel. 15: 485-490,2000 ; Hutvagner and Zamore, Curr. Opin. Genet. Devel. 12: 225-232, 2002 ; 및 Hannon, Nature 418: 244-251, 2002). RNAi에서, 유전자 무활동(gene silencing)은 일반적으로 세포내 이중가닥 RNA(deRNA)의 존재에 의해서 전사후 촉발된다. 상기 dsRNA는 작은 간섭성 RNA(siRNA)라고하는 더욱 짧은 단편으로 세포내에서 진행된다. dsRNA의 형질감염 또는 플라스미드 발현 시스템을 이용하는 siRNA의 발현을 통한 siRNA의 세포내 도입은, 포유류 세포에서 기능 상실의 표현형을 형성하는데 주로 사용된다.
본 발명의 일예에서, 이중가닥 RNA(dRNA) 분자는 본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머의 8개 내지 19개의 보존적 뉴클레오베이스를 포함한다. dsRNA는 이중의 또는 자가 이중(작은 헤어핀(sh) RNA)을 가지는 두개의 각각의 RNA 가닥일 수 있다. 일반적으로, dsRNA는 약 21 또는 22 염기쌍이며, 필요에 따라 조금 더 짧거나 길(최대 약 29개의 뉴클레오베이스) 수 있다. dsRNA는 표준적인 기술(예, 화학 합성 또는 시험관내 전사)을 이용하여 제조할 수 있다. 예컨대 Ambion(Austin, TX) 및 Epicentre(Madison, WI)의 키트를 사용할 수 있다. 포유류 세포에서의 dsRNA 발현 방법은 Brummelkamp et al. Science 296: 550-553, 2002; Paddison et al. Genes & Devel. 16: 948-958,2002 ; Paul et al. Nature Biotechnol. 20: 505-508,2002 ; Sui et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99: 5515- 5520,2002 ; Yu et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99: 6047-6052,2002 ; Miyagishi et al. Nature Biotechnol. 20: 497-500,2002 ; 및 Lee et al. Nature Biotechnol. 20: 500-505, 2002에 기재되어 있으며, 이들은 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
작은 헤어핀 RNA는 선택적으로 3'UU-돌출부(overhang)를 가지는 스템-루프 구조(stem-loop structure)로 되어 있다. 다양할 수 있지만, 스템은 21 내지 31 bp(적합하게는 25 내지 29bp)일 수 있으며, 루프는 4 내지 30 bp(적합하게는 4 내지 23 bp)일 수 있다. shRNA를 세포내에서 발현하는 경우, 중합효소 III H1-RNA, tRNA 또는 U6 프로모터, 스템-루프형 RNA 삽입을 위한 클로닝 부위 및 4-5-티미딘 전사 종결신호를 포함하고 있는 플라스미드 벡터를 사용할 수 있다. 중합효소 III 프로모터는 일반적으로 매우 잘 규정된 개시 및 정지 부위를 가지며, 그것의 전사체에는 폴리(A) 꼬리부가 결핍되어 있다. 이러한 프로모터에 대한 종결 신호는 폴리티미딘 트랙(tract)으로 나타내며, 상기 전사체는 두번째 우리딘 다음에서 일반적으로 절단된다. 상기 위치에서의 절단은 발현된 shRNA에 3'UU 돌출부를 형성하며, 이것은 합성 siRNA의 3'돌출부와 유사하다. 포유류 세포에서의 shRNA를 발현시키기 위한 추가적인 방법은 전술한 인용문헌들에 개시되어 있다.
화학치료제
미세관을 교란하거나 안정화시키는 하나 이상의 화학치료제와 병용하여 뉴클레오베이스 올리고머를 사용하는 것은 암 또는 그외 종양 치료에 특히 유효하다. 미세관 교란제(예, 빈카 알칼로이드류(vinca alkaloids)) 및 미세관 안정화제(예, 탁센류)는 하기에 더욱 구체적으로 개시되어 있다.
빈카 알칼로이드류 및 관련 화합물들
암 및 그외 종양 치료를 위해 본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머와 병용하여 사용될 수 있는 빈카 알칼로이드류로는, 빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine), 빈데신(vindesine), 빈플루닌(vinflunine), 빈오르엘빈(vinorelbine) 및 안하이드로빈블라스틴(anhydrovinblastine)이 있다.
돌라스타틴(Dolastatin)은 빈카 알칼로이드 결합 도메인에서 튜블린을 일차적으로 방해하는 올리고펩티드이다. 이러한 화합물은 또한 암 및 그외 종양 치료를 위해 본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머와 병용하여 사용될 수 있다. 돌라스타틴으로는 돌라스타틴-10(NCS 376128), 돌라스타틴-15, ILX651, TZT-1027, 심플로스타틴1(symplostatin 1), 심플로스타틴 3 및 LU103793(cemadotin)이 있다.
크립토피신(Cryptophycin)(예, 크립토피신 1 및 크립토피신 52(LY355703))는 빈카 알칼로이드-결합 도멘인내에서 튜불린과 결합하며, G2/M 정지 및 세포자살을 유발한다. 이러한 화합물은 또한 암 및 그외 종양 치료를 위해 본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머와 병용하여 사용될 수 있다.
암 및 그외 종양 치료를 위해, 본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머와 병용하여 사용될 수 있는, 그외 미세관 교란성 화합물은 미국 특허 6,458,765; 6,433,187; 6,323,315; 6,258,841; 6,143,721; 6,127,377; 6,103,698; 6,023,626; 5,985,837; 5,965,537; 5,955,423; 5,952,298; 5,939,527; 5,886,025; 5,831,002; 5,741,892; 5,665,860; 5,654,399; 5,635,483; 5,599,902; 5,530,097; 5,521,284; 5,504,191; 4,879,278; 및 4,816,444와 미국 특허 공개공보 2003/0153505 Al ; 2003/0083263 Al ; 및 2003/0055002 Al에 개시되어 있으며. 이들은 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
탁산 및 그외 미세관 안정화 화합물
파클리탁셀, 도세탁셀, RPR 109881A, SB-T-1213, SB- T-1250, SB-T-101187, BMS-275183, BRT 216, DJ-927, MAC-321, IDN5109 및 IDN5390와 같은 탁산류는 암 및 그외 종양 치료를 위해 본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머와 병용하여 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 방법 및 조성물에, 탁산 유사체(예, BMS-184476, BMS-188797)와 기능적으로 연관된 비탁산류(예, 에포틸론류(예, 에포틸론 A, 에포틸론 B(EP0906), 데옥시에포틸론 B, 및 에포틸론 B 락탐(BMS-247550)), 엘루테로빈(eleutherobin), 디스토데르몰리드(discodermolide), 2-에피-디스코데르몰리드(2-epi-discodermolide), 2-데스-메틸디스코데르몰리드, 5-하이드록시메틸디스코데르몰리드, 19-데스-아미노카르보닐디스코데르몰리드, 9(13)-사이클로디스코데르몰리드 및 라울리말리드(laulimalide))가 사용될 수 있다.
암 및 그외 종양 치료를 위해 본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머와 병용하여 사용될 수 다른 미세관 안정화 화합물들은, 미국 특허 6,624,317; 6,610,736; 6,605,599; 6,589,968; 6,583,290; 6,576,658; 6,515,017; 6,531,497; 6,500,858; 6,498,257; 6,495,594; 6,489,314; 6,458,976; 6,441,186; 6,441,025; 6,414,015; 6,387,927; 6,380,395; 6,380,394; 6,362,217; 6,359,140; 6,306,893; 6,302,838; 6,300,355; 6,291,690; 6,291,684; 6,268,381; 6,262,107; 6,262,094; 6,147,234; 6,136,808; 6,127,406; 6,100,411; 6,096,909; 6,025,385; 6,011,056; 5,965,718; 5,955,489; 5,919,815; 5,912,263; 5,840,750; 5,821,263; 5,767,297; 5,728,725; 5,721,268; 5,719,177; 5,714,513; 5,587,489; 5,473,057; 5,407,674; 5,250,722; 5,010,099; 및 4,939,168; 및 미국 특허 공개공보 2003/0186965 Al ; 2003/0176710 Al ; 2003/0176473 Al ; 2003/0144523 Al ; 2003/0134883 Al ; 2003/0087888 Al ; 2003/0060623 Al ; 2003/0045711 Al ; 2003/0023082 Al ; 2002/0198256 Al ; 2002/0193361 Al ; 2002/0188014 Al ; 2002/0165257 Al ; 2002/0156110 Al ; 2002/0128471 Al ; 2002/0045609 Al ; 2002/0022651 Al ; 2002/0016356 Al ; 2002/0002292 Al에 기재되어 있으며, 이들은 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
안티센스 IAP 뉴클레오베이스 화합물과 함께 투여될 수 있는 다른 화학치료제를 표 1에 나열한다.
알킬화제 사이클로포스파미드(cyclophosphamide) 로무스틴(lomustine) 부설판(busulfan) 프로카르바진(procarbazine) 이포스파미드(ifosfamide) 알트레타민(altretamine) 멜팔란(melphalan) 에스트라무스틴 포스페이트(estramustine phosphate) 헥사메틸멜라민(hexamethylmelamine) 메클로레타민(mechlorethamine) 티오테파(thiotepa) 스트렙토조신(streptozocin) 클로람부실(chlorambucil) 테모졸로미드(temozolomide) 다카르바진(dacarbazine) 세무스틴(semustine) 카르무스틴(carmustine)
백금 약제 시스플라스틴(cisplatin) 카르보플라티늄(carboplatinum) 옥살리플라틴(oxaliplatin) ZD-0473(AnorMED) 스피로플라티늄(spiroplatinum) 로바플라틴(lobaplatin)(Aetema) 카르복시프탈라토플라티늄 사트라플라틴(satraplatin)(Johnson Matthey) 테트라플라틴(tetraplatin) BBR-3464(Hoffmann-La Roche) 오르미플라틴(ormiplatin) SM-11355(Sumitomo) 이프로플라틴(iproplatin) AP-5280(Access)
항대사제 아자시티딘(azacytidine) 토무덱스(tomudex) 겜시타빈(gemcitabine) 트리메트렉세이트(trimetrexate) 카펙시타빈(capecitabine) 데옥시코포르미신(deoxycoformycin) 5-플루오로우라실 플루다라빈(fludarabine) 플록스우리딘(floxuridine) 펜토스타틴(pentostatin) 2-클로로데옥시아데노신 랄티트렉세드(raltitrexed) 6-머캅토푸린 하이드록시우레아 6-티올구아닌 데시타빈(SuperGen) 시타라빈(cytarabin) 클로파라빈(clofarabine)(Bioenvision) 2-플루오로데옥시 시티딘(fluorodeoxy cytidine) 이로풀벤(irofulven)(MGI Pharma) 메토프렉세이트(methotrexate) DMDC(Hoffmann-La Roche) 이다트렉세이트(idatrexate) 에티닐사이티딘(Taiho)
토포이소머라제 저해제 암사크린(amsacrine), 루비테칸(rubitecan)(SuperGen), 에피루비신(epirubicin), 엑사테칸 메실레이트(exatecan mesylate)(Daiichi), 에토포시드(etoposide), 퀴나메드(quinamed)(ChemGenex), 테니포시(teniposide) 또는 미토산트론 기마테칸(gimatecan)(Sigma-Tau), 이리노테칸(irinotecan)(CPT-11), 디플로모테칸(diflomotecan)(Beaufour-lpsen), 7-에틸-10-하이드록시-캄프토테신, TAS-103(Taiho), 토포테칸(topotecan), 엘사미트루신(elsamitrucin)(Spectrum), 덱스라조사네트(dexrazoxanet)(TopoTarget), J-107088(Merck & Co), 피산트론(pixantrone)(Novuspharma), BNP-1350(BioNumerik), 레벡카마이신 유사체(rebeccamycin analogue)(Exelixis), CKD-602(Chong Kun Dang), BBR-3576(Novuspharma), KW-2170(Kyowa Hakko)
항종양 항생제 닥티노마이신(dactinomycin)(actinomycin D) 아모나피드(amonafide) 독소루비신(adriamycin), 아조나피드(azonafide), 데옥시루비신, 안트라피라졸 발루비신, 옥산트라졸 다우노루비신(다우노마이신), 로속산트론(losoxantrone) 에피루비신, 블레오마이신 설페이트(blenoxane) 테라루비신, 블레오마이신산 이다루비신, 블레오마이신A 루비다존, 블레오마이신B 플리카마이신프, 미토마이신C 포르피로마이신, MEN-10755(Menarini) 시아노모르폴리노도소루비신, GPX-100(Gem Pharmaceuticals) 미토산트론(novantrone)
항유사분열제 파클리탁셀 SB 408075(GlaxoSmithKline) 도세탁셀 E7010(Abbott) 콜치신 PG-TXL(Cell Therapeutics) 빈블라스틴 IDN 5109(Bayer) 빈크리스틴 A 105972(Abbott) 빈오렐빈 A 204197(Abbott) 빈데신 LU 223651(BASF) 돌라스타틴 10(NCI) D 24851(ASTAMedica) 리조신(Fujisawa) ER-86526(Eisai) 미보불린(Warner-Lambert) 컴브레타스타틴 A4(BMS) 세마도틴(BASF) 이소포모할리콘드린-B(PharmaMar) RPR 109881 A(Aventis) ZD 6126(AstraZeneca) TXD 258(Aventis) PEG-파클리탁셀(Enzon) 에포틸론 B(Novartis) AZ10992(Asahi) T 900607(Tularik) IDN-5109(Indena) T 138067(Tularik) AVLB(Prescient NeuroPharma) 트립토피신 52(Eli Lilly) 아자에포틸론 B(BMS) 빈플루닌(Fabre) BNP-7787(BioNumerik) 아우리스타틴 PE(Teikoku Hormone) CA-4 프로드럭(OXiGENE) BMS 247550(BMS) 돌라스타틴-10(NIH) BMS 184476(BMS) CA-4(OXiGENE) BMS 188797(BMS) 탁소프레신(Protarga)
아로마타제 저해제 아미노글루테티미드 엑세메스탄 레트로졸 아타메스탄(BioMedicines) 아나스트라졸 YM-511(Yamanouchi) 포르메스탄
티미딜레이트 합성효소 저해제 페메트렉시드(pemetrexed)(Eli Lilly) 놀라트렉시드(Eximias) ZD-9331(BTG) CoFactorTM(BioKeys)
DNA 길항제 트라벡테딘(trabectedin)(PharmaMar) 마포스파미드(Baxter International) 글루포스파미드(Baxter International)아파지퀀(Spectrum Pharmaceuticals) 알부민 + 32P(Isotope Solutions) 티멕타신(NewBiotics) 06 벤질 구아닌(Paligent) 에도트레오티드(Novartis)
파르네실트랜스퍼라제 저해제 아르글라빈(arglabin)(NuOncology Labs) 티피파르닙(Johnson & Johnson) 로나파르닙(Schering-Plough) 페릴릴 알콜(DOR BioPharma) BAY-43-9006(Bayer)
펌프 저해제 CBT-1(CBA Pharma) 조수퀴다르 트리하이드로클로라이드(Eli Lilly) 타리퀴이다르(Xenova) 비리코다르 디시트레이트(Vertex) MS-209(Schering AG)
히스톤 아세틸트랜스퍼라제 저해제 타세디날린(Pfizer) 피발로일옥시메틸 부티레이트(Titan) SAHA(Aton Pharma) 딥시펩티드(Fujisawa) MS-275(Schering AG)
메탈로프로테나제 저해제 네오바스타트(Aetema Laboratories) CMT-3(CollaGenex) 마리마스타트(British Biotech) BMS-275291(Celltech)
리보뉴클레오시드 리덕타제 저해제 갈리움 말톨레이트(Titan) 테자시타빈(Aventis) 트리아핀(Vion) 디독스(Molecules for Health)
TNF 알파 작용제/길항제 비룰리진(Lorus Therapeutics) 레비미드(Celgene) CDC-394(Celgene)
엔도텔린 A 리셉터 길항제 아트라센탄(Abbott) YM-598(Yamanouchi) ZD-4054(AstraZeneca)
레티노익산 리셉터 작용제 펜레티니드(Johnson & Johnson) 알리트레티노인(Ligand) LGD-1550 Ligand)
면역 조절제 인터페론 덱소좀 테라피(Anosys) 온코파지(Antigenics) 펜트릭스(Australian Cancer GMK(Progenies) Technology) 아데노카르시노마 백신(Biomira) ISF-154(Tragen) CTP-37(AVI BioPharma) 암 백신(Intercell) IRX-2(lmmuno-Rx) 노렐린(Biostar) PEP-005(Peplin Biotech) BLP-25(Biomira) 신크로백스 백신(CTL Immuno) MGV(Progenies) 멜라노마 백신(CTL Immuno) 베타-알레틴(Dovetail) p21 RAS 백신(GemVax) CLL 테라피(Vasogen)
호르몬제 및 항호르몬제 프레드니손 프레드니손 접합된 에스트로겐 메틸프레드니솔론 에티닐 에스트라디올 프레드니솔론 클로르트리아니센 아미노글루테티미드 이덴에스트롤 레우프롤리드 하이드록시프로게스테론 카프로에이트 고세렐린 메드록시프로게스테론 레우포렐린 테스토스테론 바이칼루타미드 테스토스테론 프로피오네이트 플루타미드 플루옥시메스테론 옥트레오티드 메틸테스토스테론 닐루타미드 디에틸스틸베스트롤 미토탄 메게스트롤 P-04(Novogen) 타목시펜 2-메톡시에스트라디올(EntreMed) 토레모핀 아르족시펜(Eli Lilly) 덱사메타손
광역학제 탈라포르핀(Light Sciences) Pd-박테리오페오포르비드(Yeda) 테라룩스(Theratechnologies) 루테튬 텍사피린(Pharmacyclics) 모텍사핀 가돌리늄(Pharmacyclics) 하이퍼리신
티로신 키나제 저해제 이마티닙(Novartis) 카할라이드 F(PharmaMar) 레플루노마이드(Sugen/Pharmacia) CEP-701(Cephalon) ZD1839(AstraZeneca) CEP-751(Cephalon) 에를로티닙(Oncogene Science) MLN518(Millenium) 캐네르티닙(Pfizer) PKC412(Novartis) 스쿠알라민(Genaera) 페녹소디올() SU5416(Phanmacia) 트라스투주맵(Genentech) SU6668(Pharmacia) C225(ImClone) ZD4] 90(AstraZeneca) rhu-Mab(Genentech) ZD6474(AstraZeneca) MDX-H210(Medarex) vatalanib(Novartis) 2C4(Genentech) PK1166(Novartis) MDX-447(Medarex) GW2016(GlaxoSmithKline) ABX-EGF(Abgenix) EKB-509(Wyeth) IMC-lCl l(ImClone) EKB-569(Wyeth)
각종 약제
SR-27897(CCK A 저해제, Sanofi-Synthelabo) BCX-1777(PNP 저해제, BioCryst) 톨글라데신(cyclic AMP 작용제, Ribapharm) 란피르나제(리보뉴클레아제 자극제, Alfacell) 알보시딥(CDK 저해제, Aventis) 갈라루비신(RNA 합성 저해제, Dong-A) CV-247(COX-2 저해제, Ivy Medical) 티라파자민(환원제, SRI International) P54(COX-2 저해제, Phytopharm) N-아세틸시스테인(환원제, Zambon) CapCelITM(CYP450 자극제, Bavarian Nordic) R-플루르비프로펜(NF-kappaB 저해제, Encore) GCS-100(gal3 길항제, GlycoGenesys) 3CPA(NF-kappaB 저해제, Active Biotech) G17DT immunogen(가스트린 저해제, Aphton) 세오칼시톨(비타민 D 리셉터 작용제, Leo) 에파프록시랄(산소공급자, Allos Therapeutics) 131-I-TM-601(DNA 길항제 TransMolecular) PI-88(헤파라나제 저해제, Progen) 에플로르니틴(ODC 저해제, ILEX Oncology) 테스밀리펜(히스타민 길항제, YM BioSciences) 미노드론산(osteoclast 저해제, Yamanouchi) 히스타민(히스타민 H2 리셉터 작용제, Maxim) 인디술람(p53 자극제, Eisai) 티아조푸린(IMPDH 저해제, Ribapharm) 아플리딘(PPT 저해제, PharmaMar) 실렌지티드(integrin antagonist, Merck KGaA) 리투시맵(CD20 항체, Genentech) SR-31747(IL-1 길항제, Sanofi-Synthelabo) 젬투주맵(CD33 항체, Wyeth Ayerst) CCI-779(mTOR 키나제 저해제, Wyeth) PG2(조혈 인핸서, Pharmagenesis) 엑시술린드(PDE V 저해제, Cell Pathways) 이뮤놀TM(트리클로산 경구 세척제, Endo) CP-461(PDE V 저해제, Cell Pathways) 트리아세틸우리딘(우리딘 프로드럭, Wellstat) AG-2037(GART 저해제, Pfizer) SN-4071(육종제, Signature BioScience) WX-UK1(플라스미노겐 활성자 저해제, Wilex) TransMID-107TM(면역독소, KS Biomedix) PBI-1402(PMN 자극제, ProMetic LifeSciences) PCK-3145(세포자살 프로모터, Procyon) 보르테조밉(proteasome 저해제, Millennium) 도라니다졸(세포자살 프로모터, Pola) SRL-172(T 세포 자극제, SR Pharma) CHS-828(세포독성제, Leo) TLK-286(글루타티온 S 트랜스퍼라제 저해제 트랜스-레티노익산(분화제, NIH) , Telik) PT-100(성장 인자 작용제, Point Therapeutics) MX6(세포자살 프로모터, MAXIA) 미도스타우린(PKC 저해제, Novartis) 아포민(세포자살 프로모터, ILEX Oncology) 브리오스타틴-l(PKC 자극제, GPC Biotech) 우로시딘(세포자살 프로모터, Bioniche) CDA-II(세포자살 프로모터, Everlife) Ro-31-7453(세포자살 프로모터, La Roche) SDX-101(세포자살 프로모터, Salmedix) 브로스탈리신(세포자살 프로모터, Pharmacia) 세플라토닌(세포자살 프로모터, ChemGenex)
도 1A-1B는 안티센스 XIAP 올리고뉴클레오티드의 XIAP 단백질 발현에 대한 효과를 총 단백질에 상대적으로 나타낸 그래프이다(도 1A, 1C, 1E, 1G, 1I 및 1K). 도 1B, 1D, 1F, 1H, 1J 및 1L은 전술한 XIAP 단백질 결과를 표준화하기 위해 이용된 모의 형질감염 결과와 비교한, 각 올리고뉴클레오티드의 형질감염에서의 총 단백질 농도이다.
도 2A-2C는 여러가지 안티센스 XIAP 올리고뉴클레오티드의 단독 또는 조합에 의한 XIAP RNA(도 2A) 및 단백질(도 2B)에 대한 효과를 나타내는 그래프이다. 도 2C는 도 2B에 나타낸 XIAP 단백질의 결과의 표준화에 사용된 모의 형질감염 결과와 비교한 각 올리고뉴클레오티드 형질감염의 총 단백질 값을 나타내는 그래프이다.
도 3 및 4는 31 nM(도 3) 또는 63 nM(도 4)에서의 4×4 혼성 벡본(MBO) FG8 또는 E12 올리고뉴클레오티드의 효과를 나타내는 그래프이다. H460 폐암 세포를 125 nM MBO 및 리포펙타민 2000을 이용하여 1, 2 또는 3일의 연이은 날에 18시간동안 형질감염하였다. 웨스턴 분석용 샘플은 지정된 시간에 회수하였다. 스캐닝 농도측정을 수행하였고, XIAP 단백질 수준을 GAPDH에 대하여 표준화하고, 100%로 설정한 모의 대조군과 비교하였다. 표시한 백분율은 특정한 스크램블형 대조군에 대한 XIAP 단백질의 낫-다운%이다.
도 5A-5D는 안티센스 XIAP 올리고뉴클레오티드의 세포생존도(도 5A, 5C 및 5D) 및 아드리아마이신의 존재하의 화학적 감작(도 5B)에 대한 효과를 나타내는 그래프이다.
도 6은 시험관내 H460 세포에서의 올리고뉴클레오티드에 의한 XIAP mRNA의 특이적 하향-조절을 나타낸 그래프이다. 리포펙타민 2000을 단독으로(LFA) 또는 리포펙타민과 1.2μM의 올리고뉴클레오티드 F3, G4, C5, AB6, DE4 또는 D7, 또는 각각의 역방향성(RP)의 또는 스크램블형의(SC) 올리고뉴클레오티드 대조군와 함께 처리한 H460 세포에서의 XIAP mRNA 수준을 나타낸다. 실시간 RT-PCR에 의한 XIAP mRNA의 상대적인 정량화를 형질감염 6시간후에 실시하였다. 데이터는 모두 대표적 인 실험을 3회 수행한 결과의 평균±표준편차(SD)로서 나타낸다. 동일 실험 조건하에서 유지시킨 미처리 세포군에서의 XIAP mRNA 수준을 1로 하였다.
도 7은 다양한 PS-XIAP 올리고뉴클레오티드로 형질감염시킨 후 H460 세포에서의 XIAP RNA 수준을 나타내는 그래프이다. H460 인간 폐암세포를 1μM PS-올리고뉴클레오티드 및 리포펙타민 2000으로 6시간 형질감염하였다. 그 후, Taqman 분석을 위해 세포를 회수하였다.
도 8은 4×4 MBO로 형질감염후 9시간 경과시 H460 세포에서의 XIAP RNA 수준을 나타내는 그래프이다. H460 세포를 62.5 nM - 1 μM의 4×4 MBO 및 리포펙타민 2000을 이용하여 9시간 형질감염하였다. 이후, Taqman 분석을 위해 세포를 회수하였다.
도 9는 4×4 MBO로 형질감염후 24시간 경과시 H460 세포에서의 XIAP 단백질 낫-다운을 나타내는 그래프이다. H460 세포에 1 μM의 4×4 MBO 및 리포펙타민2000을 이용하여 24시간 형질감염하였다. 이후, 웨스턴 블롯 분석을 위해 세포를 회수하였다. 스캐닝 농도측정을 수행하여, XIAP 단백질 수준을 액틴에 대하여 표준화한 다음 100%로 설정된 그것의 특이적인 스크램블형(sm, rm) 대조군과 비교하였다.
도 10A 및 10B는 시험관내에서의 H460 세포내 XIAP 단백질의 안티센스-매개성 특이적인 하향 조절을 나타낸 도면이다. 리포펙타민 2000을 단독으로(LFA) 또는 LFA + 1.2μM의 XIAP 올리고뉴클레오티드 F3, G4 또는 C5, 또는 그것의 해당 올리고뉴클레오티드 대조군(RP, SC)을 처리한 H460 세포에서의, XIAP 단백질 수준을 나타낸다. XIAP 단백질 수준을 웨스턴 블롯으로 분석하고(도 10A), 단백질 함량을 농도측정으로 정량화하였다(도 10B). XIAP 수준을 세포의 액틴 수준에 대하여 표준화하고, 미처리 대조군(CNT)수준과 비교하였다.
도 11A 및 11B는 XIAP 올리고뉴클레오티드에 의한 카스파제 활성화 효과를 나타내는 도면이다. XIAP 올리고뉴클레오티드 F3, G4 또는 C5, 또는 각각의 해당 RP 및 SC ODN 대조군의 1.2 μM에서의 형질감염된 H460 세포의, 프로-카스파제-3, PARP(전장(116kDa)과 프로세싱된 형태(85 kDa))의 발현(도 10A) 및 Bcl-2와 Bax 단백질 수준(도 10B)에 대한 효과를 대조군과 비교하여 나타낸다. 단백질 발현은 웨스턴 블롯으로 분석하였다. Bcl-2 및 Bax 단백질 수준은 세포의 액틴 수준에 대하여 표준화하고, 농도측정으로 정량하였다. Bcl-2/Bax의 비율을 2회 또는 3회의 독립 실험의 평균값으로 나타내고, 대조군(CNT) 세포에서의 비율은 1로 두었다.
도 12A 및 12B는 세포자살의 XIAP 올리고뉴클레오티드-특이적 유도를 나타내는 도면이다. 세포자살 유도는 1.2μM의 XIAP G4 AS 올리고뉴클레오티드, G4 SC 올리고뉴클레오티드 또는 미처리 대조군(CNT)으로 처리한 H460 세포에서 측정하였다. 도 12A는 프로피듐 요오드 염색과 유세포 측정으로 측정된 G0/G1하의(sub)(세포자살) DNA 함량을 가지는 세포 백분율을 나타낸다. 도 12B는 DAPI 염색한 올리고뉴클레오티드 처리된 H460 세포의 핵 형태를 나타낸다. 화살표는 핵 DNA의 응축 또는 단편화의 세포자살에 특징적인 형태를 가지는 세포를 나타낸다.
도 13A는 H460 세포의 생존율에 대한 XIAP G4 AS 올리고뉴클레오티드 처리 효과를 나타낸 그래프이다. 세포를 점차 증가시킨 농도의 LFA 단독으로 또는 G4 AS 올리고뉴클레오티드 또는 G4 SC 올리고뉴클레오티드와 LFA-올리고뉴클레오티드의 복합체로 처리하고, 처리 24시간후에 MTT 분석으로 세포생존율을 측정하였다. 데이터는 3번의 독립적인 실험의 평균±SD로 나타낸다.
도 13B는 MTT 분석으로 측정한, 독소루비신(DOX), 탁솔, 비노렐빈(VNB) 또는 에토포시드(Etop)의 존재하 또는 부재하에서, LFA, 및 G4 AS 올리고뉴클레오티드 또는 G4 SC 올리고뉴클레오티드의 복합체를 0.4 μM으로 처리한 후 죽은 H460 세포의 비율을 나타낸 그래프이다. 데이터는 3번의 독립적인 실험의 평균±SD로 나타낸다.
도 14는 XIAP AS 2×2 MBO 및 비노렐빈으로 처리한 마우스에서의 상대적인 H460 종양 증식을 나타내는 그래프이다. 피하 H460 세포의 이종이식편을 가지는 SCID-RAG2 마우스에, 올리고뉴클레오티드를 50μg/종양덩어리로 종양내 주사하였다. 이러한 처리는 비노렐빈의 투여와 병용하였다.
도 15는 XIAP AS PS-올리고뉴클레오티드를 전신에 처리한 마우스에서의 H460 세포의 종양 크기의 평균을 나타내는 그래프이다. 피하 H460 세포의 이종이식편을 이식한 SCID-RAG2 마우스로의 XIAP AS PS-올리고뉴클레오티드의 전신 투여(복강내)에 의해, 대조군에 비해 종양 크기가 감소되었다.
도 16은 XIAP AS PS-올리고뉴클레오티드로 전신 처리된 마우스에서의, MDA-MB-435/LCC6 인간 유방암세포(LCC세포)의 종양 크기를 나타내는 그래프이다. LCC6세포의 이종이식편을 이식한 암컷 SCID-RAG2 마우스에 XIAP AS PS-올리고뉴클레오티드의 전신 전달(복강내)에 의해, 대조군에 비해 종양 크기가 감소되었다.
도 17은 종양증식 및 종양의 XIAP 단백질 수준에 있어서의 G4 올리고뉴클레오티드의 생체내 효과를 나타내는 도면이다. 수컷 SCID-RAG2 마우스에서의 피하H460 세포 이종이식편의 증식에 있어서, 전신으로 전달된 네이키드(NAKED) XIAP G4 AS 올리고뉴클레오티드 또는 G4 SC 올리고뉴클레오티드의 항종양 효과. 데이터는 모두 평균 ± SEM(n = 6마리의 마우스/군)으로 표시한다.
도 18A 및 18B는 웨스턴 블롯으로 분석하고 농도측정으로 정량한, G4 AS 올리고뉴클레오티드, G4 SC 올리고뉴클레오티드 또는 비히클(대조군) 단독 처리 21일후, SCID-RAG2 마우스에 이식된 H460 세포의 이종이식편에서의 XIAP 단백질 발현 수준을 나타내는 도면이다. XIAP 수준은 세포의 액틴 수준에 대하여 표준화하였다. 데이터는 모두 평균 + SD으로 나타낸다(n=3).
도 19A 및 19B는 21일간 XIAP G4 AS 올리고뉴클레오티드 또는 G4 SC 올리고뉴클레오티드를 15 mg/kg으로 전신 투여한 후, SCID-RAG2 마우스에 이식된 H460 종양의 조직 병리학에 있어서의 G4 올리고뉴클레오티드의 생체 내 효과를 나타낸다. 도 19A는 헤마톡실린 및 에오신으로 염색한 종양 절편이다. 도 19B는 종양 절편에서의 유비퀴틴 발현의 면역조직화학을 나타낸다. 대표적인 종양 현미경 사진을 나타낸다. 내부 스케일 마커는 100μm이다.
도 20A 및 20B는 XIAP 올리고뉴클레오티드와의 병용에서의 비노렐빈(VNB)의 생체내 효능 증가를 나타낸 그래프이다. XIAP G4 AS 올리고뉴클레오티드 또는 G4 SC 올리고뉴클레오티드를 수반하는 또는 수반하지 않는 VNB의 H460 종양의 이종이식편에 대한 항종양 효과를 SCID-RAG2 마우스에서 측정하였다. 도 20A는 단일 약 제에 의한 항종양 활성을 나타내며, 도 20B는 VNB과 G4 올리고뉴클레오티드 병용에 의한 항종양 활성이다. 데이터는 모두 평균±SEM(n= 6마리의 마우스/군)으로 나타낸다.
도 21은 HIAP1 RNA 수준에 있어서의 HIAP1 올리고뉴클레오티드의 효능을 나타내는 그래프이다.
도 22A 및 22B는 HIAP1 단백질의 사이클로헥시미드 유도성 상향-조절을 차단할 수 있는 세포의 능력에 대한 HIAP1 올리고뉴클레오티드의 효과를 나타내는, 웨스턴 블롯의 농도측정 스캔이다.
도 23은 총 단백질로 측정한 세포독성에 있어서의 HIAP1 올리고뉴클레오티드의 효능을 나타내는 그래프이다.
도 24는 HIAP1 올리고뉴클레오티드 APO2에 대한 서열 특이성을 검증한 그래프이다.
도 25는 약제 내성이 있는 SF295 신경아교종의 화학감작에 대한 HIAP1 올리고뉴클레오티드의 효능을 나타내는 그래프이다.
아래 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것이다. 실시예는 어떠한 방식으로도 본 발명을 한정하고자 하는 것은 아니다.
실시예 1: 뉴클레오베이스 올리고머 선별
아래 나열된 선별 기준에 준하여 각각 인간 XIAP 및 HIAP1에 대해 거의 중복되지 않는 96 및 98개의 19 mer 뉴클레오베이스 서열을 선별하였다. XIAP의 경우, 개시 코돈의 약 1 kb 상위 부위에서부터 cDNA 서열의 정지코돈의 약 1 kb 하위 부위까지의 96개의 서열을 선택하였다(각각의 19개의 뉴클레오베이스 길이이며, 서열번호 1 에서 96번, 표 2). 이는 코딩 부위와 인접 5' 및 3' UTR 서열의 약 50%에 해당된다(즉, 96개의 19 mer가 1.8 kb 서열에 해당되지만, 표적 부위의 길이는 코딩 부위 1.5 kb에 양쪽 UTR 서열 각각 1 kb를 합하여 약 3.5 kb임)이다.
서열번호 코드 뉴클레오베이스 서열 XIAP 하향 조절 T24 RNA XIAP 하향 조절 T24 단백질 XIAP 하향 조절 H460 RNA
1 Al AAAATTCTAAGTACCTGCA - - 48%
2 Bl TCTAGAGGGTGGCTCAGGA - - 66%
3 C1 CAGATATATATGTAACACT - - 66%
4 D1 TGAGAGCCCTTTTTTTGTT - - 75%
5 E1 AGTATGAAATATTTCTGAT - - 69%
6 F1 ATTGGTTCCAATGTGTTCT - - 81%
7 G1 TTAGCAAAATATGTTTTAA - - 33%
8 H1 TGAATTAATTTTTAATATC - - 13%
9 A2 ATTCAAGGCATCAAAGTTG - - 58%
10 B2 GTCAAATCATTAATTAGGA - - 55%
11 C2 AATATGTAAACTGTGATGC 36% 45% 70%
12 D2 GCAGAATAAAACTAATAAT - - 39%
13 E2 GAAAGTAATATTTAAGCAG 54% 51% 60%
14 F2 TTACCACATCATTCAAGTC - - 34%
15 G2 CTAAATACTAGAGTTCGAC - - 55%
16 H2 ACACGACCGCTAAGAAACA - - 46%
17 A3 TATCCACTTATGACATAAA - - 27%
18 B3 GTTATAGGAGCTAACAAAT - - 34%
19 C3 AATGTGAAACACAAGCAAC - - 43%
20 D3 ACATTATATTAGGAAATCC - 30%
21 E3 CTTGTCCACCTTTTCTAAA 53% 64% 55%
22 F3 ATCTTCTCTTGAAAATAGG 44% 53% -
23 G3 CCTTCAAAACTGTTAAAAG - - -
24 H3 ATGTCTGCAGGTACACAAG - - -
25 A4 ATCTATTAAACTCTTCTAC - - -
26 B4 ACAGGACTACCACTTGGAA - - 76%
27 C4 TGCCAGTGTTGATGCTGAA 28% 56% 77%
28 D4 GTATAAAGAAACCCTGCTC 12% 43% 51%
29 E4 CGCACGGTATCTCCTTCAC 47% 34% 51%
30 F4 CTACAGCTGCATGACAACT 33% 43% -
31 G4 GCTGAGTCTCCATATTGCC 34% 48% 51%
32 H4 ATACTTTCCTGTGTCTTCC - - -
33 A5 GATAAATCTGCAATTTGGG - - -
34 B5 TTGTAGACTGCGTGGCACT - - 61%
35 C5 ACCATTCTGGATACCAGAA 71% 54% -
36 D5 AGTTTTCAACTTTGTACTG 39% 33% -
37 E5 ATGATCTCTGCTTCCCAGA - - 46%
38 F5 AGATGGCCTGTCTAAGGCA - - -
39 G5 AGTTCTCAAAAGATAGTCT - - 30%
40 H5 GTGTCTGATATATCTACAA - - 39%
41 A6 TCGGGTATATGGTGTCTGA - - 72%
42 B6 CAGGGTTCCTCGGGTATAT 51% 47% -
43 C6 GCTTCTTCACAATACATGG - - -
44 D6 GGCCAGTTCTGAAAGGACT - - 60%
45 E6 GCTAACTCTCTTGGGGTTA - - -
46 F6 GTGTAGTAGAGTCCAGCAC 34% 39% -
47 G6 AAGCACTGCACTTGGTCAC - - 69%
48 H6 TTCAGTTTTCCACCACAAC - - 68%
49 A7 ACGATCACAAGGTTCCCAA - - -
50 B7 TCGCCTGTGTTCTGACCAG - - -
서열번호 코드 뉴클레오베이스 서열 XIAP 하향 조절 T24 RNA XIAP 하향 조절T24 단백질 XIAP 하향 조절 H460 RNA
51 C7 CCGGCCCAAAACAAAGAAG - 72%
52 D7 GATTCACTTCGAATATTAA 56% 88% 46%
53 E7 TATCAGAACTCACAGCATC - - -
54 F7 GGAAGATTTGTTGAATTTG - - 69%
55 G7 TCTGCCATGGATGGATTTC - - 41%
56 H7 AAGTAAAGATCCGTGCTTC - - 63%
57 A8 CTGAGTATATCCATGTCCC - - -
58 B8 GCAAGCTGCTCCTTGTTAA - - -
59 C8 AAAGCATAAAATCCAGCTC - - 16%
60 D8 GAAAGCACTTTACTTTATC 38% 26% 49%
61 E8 ACTGGGCTTCCAATCAGTT - - -
62 F8 GTTGTTCCCAAGGGTCTTC 72% 56% 44%
63 G8 ACCCTGGATACCATTTAGC - - 47%
64 H8 TGTTCTAACAGATATTTGC - - 49%
65 A9 TATATATTCTTGTCCCTTC - - 62%
66 B9 AGTTAAATGAATATTGTTT - - 38%
67 C9 GACACTCCTCAAGTGAATG - - -
68 D9 TTTCTCAGTAGTTCTTACC - - 39%
69 E9 GTTAGTGATGGTGTTTTCT - - 43%
70 F9 AGATGGTATCATCAATTCT - - 19%
71 G9 TGTACCATAGGATTTTGGA - - -
72 H9 CCCCATTCGTATAGCTTCT - - -
73 A10 ATTATTTTCTTAATGTCCT - - 29%
74 B10 CAAGTGATTTATAGTTGCT - - -
75 C10 TAGATCTGCAACCAGAACC - - 53%
76 D10 CATCTTGCATACTGTCTTT - - 55%
77 E10 CCTTAGCTGCTCTTCAGTA - - -
78 F10 AAGCTTCTCCTCTTGCAGG - - 51%
79 G10 ATATTTCTATCCATACAGA - - 56%
80 H10 CTAGATGTCCACAAGGAAC - - -
81 A11 AGCACATTGTTTACAAGTG - - 68%
82 B11 AGCACATGGGACACTTGTC - - 63%
83 C11 CTTGAAAGTAATGACTGTG - - 52%
84 D11 CCTACTATAGAGTTAGATT - - -
85 E11 ATTCAATCAGGGTAATAAG - - 48%
86 F11 AAGTCAGTTCACATCACAC - - 64%
87 G11 CAGTAAAAAAAATGGATAA - - 33%
88 H11 TTCAGTTATAGTATGATGC - - -
89 A12 TACACTTAGAAATTAAATC - - 46%
90 B12 TCTCTATCTTTCCACCAGC - - -
91 C12 AGAATCCTAAAACACAACA - - -
92 D12 ATTCGCACAAGTACGTGTT - - 77%
93 E12 TGTCAGTACATGTTGGCTC - - 74%
94 F12 ACATAGTGTTTTGCCACTT - - 74%
95 G12 CTTTGATCTGGCTCAGACT - - 76%
96 H12 GAAACCACATTTAACAGTT - - 52%
상기 임의의 뉴클레오베이스 올리고머 또는 본원에 기재된 그외의 모든 뉴클레오베이스 올리고머에서, 각 뉴클레오베이스는 독립적으로 2'-O-메틸 또는 2'-O-메톡시에틸 RNA 잔기와 같은 DNA 잔기 또는 RNA 잔기일 수도 있음을 유념하여야 한다. 서열번호 3의 뉴클레오베이스 서열은, 예컨대, 5'-CAGATATATATGTA ACACT-3', 5'-CAGATATATATGTAA CACU-3', 또는 5'-mCmAGATATATATGTAACAmCmU-3'(상기에서 mX는 2'-O-메틸 X 잔기임)일 수 있다. 추가적으로 변형된 뉴클레오베이스들은 당업계에 공지되어 있다. 결합은 포스포디에스테르(PO), 포스포로티오에이트(PS), 또는 메틸포스포네이트(MP) 결합일 수 있거나, 또는 혼성 벡본(MB)을 가질 수도 있다. 벡본은 뉴클레오베이스 올리고머가 표적 IAP 폴리뉴클레오티드와의 혼성화를 허용하는 모든 적합한 벡본일 수 있다. 벡본은 본원에 예시되어 있다. 다른 예로, 뉴클레오베이스 올리고머는 아크리딘-보호된 결합, 콜레스테릴 또는 프소랄렌 성분, C5-프로피닐 피리미딘류 또는 C5-메틸 피리미딘류를 포함한다. 본 발명의 뉴클레오베이스 올리고머에 대한 적합한 변형은, 전술한 내용 및 미국 특허 공개공보 US 2002/0128216 Al에 기재되어 있으며, 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
뉴클레오베이스 올리고머의 예를 표 3에 나타낸다(mX는 2'-O-메틸 X RNA 잔기임)
Figure 112006038423527-PCT00001
Figure 112006038423527-PCT00002
Figure 112006038423527-PCT00003
페네트라틴과 뉴클레오베이스 올리고머의 세포내 도입을 매개하는데 있어서의 그것의 용도는 PCT 특허출원 FR 91/00444에 개시되어 있다.
HIAP1에 대한 뉴클레오베이스 올리고머를 설계하기 위하여 유사한 동정 방법을 실시하였다. 먼저, 98개의 19 mer 뉴클레오베이스 올리고머를 선택하였다(서열번호 163-260, 표 4). HIAP1 서열을 표적으로 한 이들 98개의 뉴클레오베이스 올리고머들중, 15개(서열번호 163-170, 173, 179, 202, 222, 223, 247 및 259)를 이후 분석을 위해 선택하였다. 이들 15개의 후보 뉴클레오베이스 올리고머는 코딩 부위를 표적으로하는 4개의 뉴클레오베이스 올리고머(서열번호 202, 222, 223, 247), 3'UTR을 표적으로하는 1개의 뉴클레오베이스 올리고머(서열번호 259), 5'UTR을 표적으로 하는 7개의 뉴클레오베이스 올리고머(서열번호 166-170, 173, 179, 7개의 뉴클레오베이스 올리고머들중 하나는 개시 코돈과 중첩됨), 그리고 5'UTR의 인트론 단편을 표적으로 하도록 설계된 3개의 올리고뉴클레오티드(서열번호 163-165)를 포함한다.
서열번호 코드 뉴클레오베이스 올리고머 서열
163 APO1 TCATTTGAGCCTGGGAGGT
164 APO2 CGGAGGCTGAGGCAGGAGA
165 APO3 GGTGTGGTGGTACGCGCCT
166 APO4 ACCCATGCACAAAACTACC
167 APO5 AGAATGTGCCAGTAGGAGA
168 APO6 TCTCACAGACGTTGGGCTT
169 APO7 CCAGTGGTTTGCAAGCATG
170 APO8 GAAATTTAGTGGCCAGGAA
171 AGAAATACACAATTGCACC
172 TACTGATACATTTTAAGGA
173 APO9 TTCAACATGGAGATTCTAA
174 ATTTCTATGCATTTAGAGT
175 AATACTAGGCTGAAAAGCC
176 GGCTTTGCTTTTATCAGTT
177 TCTAGGGAGGTAGTTTTGT
178 GGGAAGAAAAGGGACTAGC
179 APO10 GTTCATAATGAAATGAATG
180 ATAAGAATATGCTGTTTTC
181 TTCAAACGTGTTGGCGCTT
182 ATGACAAGTCGTATTTCAG
183 AAGTGGAATACGTAGACAT
184 AGACAGGAACCCCAGCAGG
185 CGAGCAAGACTCCTTTCTG
186 AGTGTAATAGAAACCAGCA
187 TGACCTTGTCATTCACACC
188 TTATCCAGCATCAGGCCAC
189 ACTGTCTCCTCTTTTCCAG
190 TTTTATGCTTTTCAGTAGG
191 ACGAATCTGCAGCTAGGAT
192 CAAGTTGTTAACGGAATTT
193 TAGGCTGAGAGGTAGCTTC
194 GTTACTGAAGAAGGAAAAG
195 GAATGAGTGTGTGGAATGT
196 TGTTTTCTGTACCCGGAAG
197 GAGCCACGGAAATATCCAC
198 TGATGGAGAGTTTGAATAA
199 GATTTGCTCTGGAGTTTAC
200 GGCAGAAAATTCTTGATTT
201 GGACAGGGGTAGGAACTTC
202 APO11 GCATTTTCGTTATTCATTG
203 CTGAAAAGTAAGTAATCTG
204 GGCGACAGAAAAGTCAATG
205 CCACTCTGTCTCCAGGTCC
206 CCACCACAGGCAAAGCAAG
207 TTCGGTTCCCAATTGCTCA
208 TTCTGACATAGCATTATCC
209 TGGGAAAATGTCTCAGGTG
210 TATAAATGGGCATTTGGGA
211 TGTCTTGAAGCTGATTTTC
서열번호 코드 뉴클레오베이스 올리고머 서열
212 GAAACTGTGTATCTTGAAG
213 TGTCTGCATGCTCAGATTA
214 GAATGTTTTAAAGCGGGCT
215 CACTAGAGGGCCAGTTAAA
216 CCGCACTTGCAAGCTGCTC
217 CATCATCACTGTTACCCAC
218 CCACCATCACAGCAAAAGC
219 TCCAGATTCCCAACACCTG
220 CCCATGGATCATCTCCAGA
221 AACCACTTGGCATGTTGAA
222 APO12 CAAGTACTCACACCTTGGA
223 APO13 CCTGTCCTTTAATTCTTAT
224 TGAACTTGACGGATGAACT
225 TAGATGAGGGTAACTGGCT
226 TGGATAGCAGCTGTTCAAG
227 CATTTTCATCTCCTGGGCT
228 TGGATAATTGATGACTCTG
229 GTCTTCTCCAGGTTCAAAA
230 TATTCATCATGATTGCATC
231 CATTTCCACGGCAGCATTA
232 CCAGGCTTCTACTAAAGCC
233 GCTAGGATTTTTCTCTGAA
234 TCTATAATTCTCTCCAGTT
235 ACACAAGATCATTGACTAG
236 TCTGCATTGAGTAAGTCTA
237 CTCTTCCCTTATTTCATCT
238 TCCTCAGTTGCTCTTTCTC
239 GCCATTCTATTCTTCCGGA
240 AGTCAAATGTTGAAAAAGT
241 CCAGGATTGGAATTACACA
242 ATTCCGGCAGTTAGTAGAC
243 TAACATCATGTTCTTGTTC
244 GTCTGTGTCTTCTGTTTAA
245 TTCTCTTGCTTGTAAAGAC
246 CTAAAATCGTATCAATCAG
247 APO14 GGCTGCAATATTTCCTTTT
248 GAGAGTTTCTGAATACAGT
249 ACAGCTTCAGCTTCTTGCA
250 AAATAAATGCTCATATAAC
251 GAAACATCTTCTGTGGGAA
252 GTTCTTCCACTGGTAGATC
253 CTTCTTGTAGTCTCCGCAA
254 TTGTCCATACACACTTTAC
255 AACCAAATTAGGATAAAAG
256 ATGTTCATATGGTTTAGAT
257 TAAGTTTTACTTCACTTAC
258 ATGTTCCCGGTATTAGTAC
259 APO15 GGGCTCAAGTAATTCTCTT
260 GCCCAGGATGGATTCAAAC
뉴클레오베이스 올리고머 선별 기준
컴퓨터 프로그램 OLIGO(National Biosciences Inc.)를 사용하여 아래 기준을 토대로 뉴클레오베이스 올리고머 후보를 선별하였다:
1) GC 비율 75% 이하, AT 비율 75% 이하
2)(보고된 독성 효과로 인해 하나는 독성 대조군으로 선별) 4개 이상의 연속적한 G 잔기를 가진 뉴클레오베이스 올리고머는 바람직하기 않으며;
3) 안정적인 이량체 또는 헤어핀 구조를 형성할 수 있는 능력을 가진 뉴클레오베이스 올리고머가 아니며; 및
4) 번역 개시 부위 주변 서열이 바람직한 부위이다.
또한, 표적 mRNA의 접근가능한 부위를 RNA 이차 구조 폴딩 프로그램인 MFOLD(M. Zuker, D. H. Mathews & D. H. Turner, Algorithms and Thermodynamics for RNA Secondary Structure Prediction: A Practical Guide. In: RNA Biochemistry and Biotechnology, J. Barciszewski & B. F. C. Clark, Ed., NATO ASI Series, Kluwer Academic Publishers,(1999))으로 예측하였다. 예측된 가장 안정한 mRNA 폴딩의 5%이내의 자유 에너지 수치를 가지는 차선 폴드를, 염기쌍 결합을 형성하기 위하여 상보적인 염기를 찾을 수 있는 잔기 범위내의 200개의 염기 윈도우를 이용하여 예측하였다. 염기쌍을 형성하지 않았던 오픈(open) 부위를, 오픈을 뉴클레오베이스 올리고머에 결합하기 보다 쉬운 것으로 일관되게 예측되는 각각의 차선 폴드 및 영역과 합하였다. 단지 상기 선별 기준중 일부만을 충족시키는 추가의 뉴클레오베이스 올리고머, 역시 표적 mRNA의 예측된 오픈 부위를 인식한다면 가능한 후보물질로 선별하였다.
실시예 2: 올리고뉴클레오티드 합성
뉴클레오베이스 올리고머의 IAP 발현을 저해하는 능력을 예시적인 뉴클레오베이스 올리고머로서 올리고뉴클레오티드를 이용하여 시험하였다. 상기 올리고뉴클레오티드는, 측면의 RNA 잔기 사이에 포스포로티오에이트 결합을 가지는 2개의 2'-O-메틸 RNA 잔기가 양 옆에 위치한 포스포디에스테르 DNA 잔기 코어로 구성된 키메라, 제2세대 올리고뉴클레오티드로서 IDT(Integrated DNA Technologies, USA)에서 합성하였다. 올리고뉴클레오티드를 96웰 플레이트에 넣고, 검출 방법이 TaqMan 정량 PCR 또는 ELISA와 같은 민감한 방법일때 형질감염을 위한 충분한 물질(96웰 포맷에서 백회 이상의 분석)을 제공하는 최소 12 OD의 뉴클레오베이스 올리고머가 있는 튜브와 매치시켰다. 먼저, 양성이 히트(hit)를 동정하였고(하기 참조), 올리고뉴클레오티드를 2개 대신 3개의 측면 RNA 잔기를 이용하여 재합성하여, 안정성/뉴클레아제 내성을 더욱 증가시켰다. 또한, 검증을 위해, 최상의 활성을 산출하는 일부 표적물에 대한 적절한(스크램블형의 4개의 염기가 미스매치되고 역방향성의 폴리고뉴클레오티드와 같은) 대조군을 합성하였다.
실시예 3: 스크리닝 분석 및 뉴클레오베이스 올리고머의 최적화
IAP 발현을 저해할 수 있는 뉴클레오베이스 올리고머를 동정하기 위한 방법은, 표적화된 특이적인 IAP 유전자에 대한 RNA 및/또는 단백질의 특이적 감소(낫-다운)를 위해, 전술한 올리고뉴클레오티드 라이브러리를 스크리닝하는 것이다. 임의의 다수 표준 분석을 이용하여 세포내 RNA 및 단백질 수치를 검출하였다. 예컨대, RNA 수준은 표준적인 노던 블롯 분석 또는 RT-PCR 기법을 이용하여 측정할 수 있다. 단백질 수치는, 예컨대 표준적인 웨스턴 블롯 분석 또는 면역침강 기법으로 측정할 수 있다. 대안적으로는, 안티센스 IAP 핵산이 투여된 세포를, 예컨대 미국 특허 5,919,912, 6,156,535 및 6,133,437에 개시된 방법에 따라 세포 생존율을 검사할 수 있으며, 상기 문헌은 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
TaqMan 정량 PCR(하기)를 이용하여 올리고뉴클레오티드 처리 후 mRNA 수준 변동을 분석하였다. XIAP 단백질 수치를 결정하기 위해 ELISA를, 그리고 HIAP1 단백질 수치를 결정하기 위해 웨스턴 블롯팅을 사용하였다. 형질감염 조건은 T24 방광 종양 세포 또는 H460 비-소세포 폐암 세포에서는 리포펙타민 플러스 또는 리포펙타민 2000(Life Technologies, Canada)으로, 또는 SF-295 아교모세포종에서는 리포펙틴으로, 대조군으로서 개시 코돈을 포함하는 XIAP 유래의 형광 표지된 센스 올리고뉴클레오티드(5'-mGmAGAAGATGACTGGTAAmCmA-3'; 서열번호 261)를 이용하여 최적화하였다. 결과는 에피-형광 현미경을 통해 가시화하였고, 평가하였다. T24 세포의 경우, 공지된 올리고뉴클레오티드의 서르비빈(survivin)의 발현 하향 조절 능력을 토대로 형질감염을 추가적으로 최적화하였다(Li et al., Nat. Cell Biol. 1: 461-466, 1999)(5'-U/TGTGCTATTCTGTGAAU/TU/T-3' 서열번호 262). PCR 프라이머 및 형광 프로브로 검출된 서르비빈 RNA 낫-다운 TaqMan 결과를 토대로 최적화된 형질감염 조건은 아래에 구체적으로 개시한다. 세포에 의한 올리고뉴클레오티드 흡수에 있어서의 최적 조건은 3시간동안 총 70 ㎕중의 940 nM 올리고뉴클레오티드, 4 ㎕의 PLUS 시약 및 0.8 ㎕의 리포펙타민인 것으로 확인되었다. 이후, 이러한 조건을 적용하여 T24 세포에 대한 올리고 라이브러리를 이용하여 XIAP 단백질 낫 다운을스크리닝하였다.
HIAP1 낫-다운은 SF-295 세포에서 실험하였는데, 이는 이들 세포가 쉽게 검출가능하며, 식별가능한 70 kDa의 HIAP1 단백질을 가지지만, 다수의 세포주들은 상기 단백질을 고발현하지 않거나 또는 유사한 크기의 다량의 68 kDa의 HIAP2 단백질과 구분되지 않기 때문이다.
실시간 PCR
RNA는 RLT 완충액(QIAGEN, Valencia, CA)중에서 세포 용해물로부터 추출하였고, QIAGEN RNeasy 컬럼/키트로 정제하였다. 실시간 정량 PCR를 Perkin-Elmer ABI 7700 Prism PCR 장치에서 수행하였다. RNA를 역전사하고, PE Biosystems의 TaqMan Universal PCR Master Mix 프로토콜에 따라, XIAP, HIAP1, 서비빈 또는 GAPDH를 특이적으로 인지하도록 설계된 프라이머 및 프로브를 이용하여 증폭시켰다. 인간 서비빈의 정방향 프라이머는 5'-TCTGCTTCAAG GAGCTGGAA-3'(서열번호 263)이고, 역방향 프라이머는 5'-GAAAGG AAAGCGCAACCG-3'(서열번호 264)이며, 프로브는 5'-(FAM) AGC CAGATGACGACCCCATAGAGGAACATA(TAMRA) -3'(서열번호 265)이다. 인간 HIAP1의 정방향 프라이머는 5'-TGGAGATGATCCATG GGTTCA-3'(서열번호 266)이고, 역방향 프라이머는 5'-GAACTCCTGTC CTTTAATTCTTATCAAGT-3'(서열번호 267)이며, 프로브는 5'-(FAM) CTCACACCTTGGAAACCACTTGGCATG(TAMRA)-3'(서열번호 268)이다. 인간 XIAP의 정방향 프라이머는 5'-GGTGATAAAGTA AAGTGCTTTCACTGT-3'(서열번호 269)이고, 역방향 프라이머는 5'-TCAGTAGTTCTTACCAGACACTCCTCAA-3'(서열번호 270)이며, 프로브는 5'-(FAM) CAACATGCTAAATGGTATCCAGGGTGCAAAT ATC(TAMRA) -3'(서열번호 271)이다. 인간 GAPDH의 정방향 프라이머는 5'-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3'(서열번호 272)이고, 역방향 프라이머는 5'-GAAGATGGTGATGGGATTC-3'(서열번호 273)이며, 프로브는 5'-(JOE) CAAGCTTCCCGTTCTCAGCC(TAMRA)-3'(서열번호 274)이다. FAM은 6-카르복시플루오로세인이고, JOE는 6-카르복시-4,5-디클로로-2,7-디메톡시플루오로세인이며, TAMRA는 6-카르복시-N, N, N', N'- 테트라메틸로다민이다. FAM과 JOE는 5'리포터 색소이지만, TAMRA는 3' 퀀처(quencher) 색소이다.
유전자 발현의 상대적인 정량화는 국내 표준방법에 따라 GAPDH를 이용하여 PE Biosystems 매뉴얼에 개시된 바에 따라 실시하였다. 비교 Ct(cycle threshold) 방법을 GAPDH mRNA 수치에 대한 IAP mRNA이 상대적인 수치 정량화에 사용하였다. 즉, 각 PCR 사이클에서 실시간 형광 측정을 실시하였고, 각 시료에 대한 Ct는 형광이 각 베이스라인 표준 편차 30배의 역치 한계를 초과하는 시점을 측정함으로써 계산하였다. 베이스라인 평균값 및 베이스라인 SD는, 3차 사이클의 베이스라인 수치에서부터 시작하여, 신호가 기하학적으로 상승하기 시작하기 전 사이클 3회의 베이스라인 수치에서 종료한다. 특이 IAP에 대한 PCR 프라이머 및/또는 프로브는 1 kb 또는 그 이상의 게놈 DNA 길이로 떨어져 있는 적어도 하나 이상의 엑손-인트론 경계부에 이르도록 제작하여, 게놈 DNA 오염물의 증폭 및 검출 가능성을 경감시켰다. 신호 특이성 및 DNA 오염 가능성은, 역전사 및 PCR 반응 단계 실시 전에 DNase 또는 RNase 중 어느하나를 일부 RNA 시료에 처리하여, 확인하였다.
XIAP ELISA 및 HIAP1 웨스턴 면역블롯
포획 항체로서 XIAP에 대한 친화성-정제된 토끼 다클론 항체를 이용하여 표준적인 색체계성 XIAP ELISA 분석을 수행하였고, XIAP 단일클론 항체(MBL, Japan), 비오틴화된 항-마우스 Ig 항체 및 호르세라디시 페록시다제-접합된 스트렙타비딘 및 TMB 기질을 이용하여 검출하였다. 대안적으로는, 다클론 XIAP 또는 HIAP1 항체를 이용하여 XAIP 또는 HIAP 단백질 수치를 각각 측정할 수 있다.
HIAP1은 일차 항체로 친화성-정제된 토끼 다클론 항체를 이용하여 웨스턴 면역블롯을 검출하였고, 이차 호르세라디쉬-페록시다제-접합된 항-토끼 Ig 항체 및 화학 발광 기질을 이용하여 X-레이 필름상에서 ECL(Amersham)로 검출하였다. 항-HIAP1 다클론 항체는 랫 HIAP1의 GST-융합물에 반응한다. 상기 항체는 인간 및 뮤라인 HIAP1 및 HIAP2 둘다와 교차 반응한다.
실시예 4: 안티센스 XIAP 올리고뉴클레오티드는 XIAP RNA 및 폴리펩티드의 발현을 감소시킨다.
96개의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 XIAP 합성 라이브러리를 XIAP 단백질 수준 감소에 대해 일차로 스크리닝하였다. 구체적으로, T24세포(1.5x104 세포/웰)을 1일째에 96웰 플레이트의 웰에 접종하여 24시간동안 항체가 없는 맥코이 배지에서 배양하였다. 2일째에, 세포에 전술한 바와 같이 XIAP 안티센스 올리고뉴클레오티드(올리고뉴클레오티드는 그것의 배양 위치에 따라 즉, A 내지 H12에 따라 표지되어 있으며, 실링막에 고착한 동결건조된 DNA 펠렛을 함유하는 두개의 반복부, A13 및 B13을 포함함)를 형질감염시켰다. 간략하게는, 뉴클레오베이스 올리고머를 혈청 및 항체 무첨가 맥코이 배지 10 ㎕/웰에 희석한 다음, PLUS 시약을 첨가하였다. 리포펙타민을 혈청 및 항체 무첨가 맥코이 배지 10 ㎕/웰에 희석한 다음 15분간 실온에 두었다. 이후, 혼합물을 합하여 실온에 15분간 두었다.
한편, 세포에서 컴플리트 배지를 제거하고, 세포에 혈청 및 항체 무첨가 배지 50 ㎕/웰을 첨가하였다. 형질감염용 혼합물을 웰에 가하고, 세포를 3시간 배양하였다. 이후 혈청 및 항체 무첨가 배지 30 ㎕/웰 및 20% 소태아 혈청이 함유된 항체 무첨가 컴플리트 배지 100 ㎕/웰을 각 웰에 가하였다.
3일째에, 실시간 정량 PCR 기법으로 전술한 바와 같이, XIAP RNA 수치를 측정하였다. 4일째에, ELISA로 XIAP 단백질 수치를 측정하였고(도 1A, 1C, 1E, 1G, 1I, 및 1K), 세포내 총 단백질을 생화학적으로 측정하였다(도 1B, 1D, 1F, 1H, 1J 및 1L, XIAP 단백질 수치 표준화에 사용). 결과를 (올리고뉴클레오티드 DNA가 첨가되지 않은 형질감염제로 처리한 후 다른 시료와 같이 처리된) 모의 형질감염 시료와 비교하였다. 시간 경과에 따른 실험으로, 단백질 낫-다운을 위한 최적 시간을 약 12 내지 24시간인 것으로 결정되었다.
또한, RNA 수치 감소 측정을 위해, TaqMan-특이 PCR 프라이머 및 형광 프로브를 적절한 최적 시간대로 사용하고, 전술한 프라이머 및 프로브를 이용하여 올리고뉴클레오티드 라이브러리를 스크리닝하였다. 시간 경과에 따른 실험으로 RNA가 6 내지 9시간에 최적으로 감소되는 것으로 결정되었다. 이러한 결과는 단백질 결과와 부합된다.
(XIAP 수준이 정상으로 복구되는 차선의 최적 시간대로 수행하였지만 비형질감염 세포의 성장으로 인해) 96개의 핵산염기 올리고머(표 1: C2, E2, E3, F3, C4, D4, E4, F4, G4, C5, D5, B6, F6, D7, D8, F8)중 16개의 안티센스 올리고뉴클레오티가 동정된 일차 스크리닝에서는, 모의 형질감염 수준과 비교와 비교하여 총 단백질에 상대적인 XIAP 단백질 수준에서의 일부 감소를 테스트하였다. 이들 16개의 뉴클레오베이스 올리고머 각각에서 총 단백질이 감소되었으며, 이는 뉴클레오베이스 올리고머의 독성 효과 또는 세포분열 정지 효과를 의미한다(도 1B, 1D, 1F, 1H, 1J, 1L). 뉴클레오베이스 올리고머 B9 및 C9는 총 단백질의 분명한 저하가 확인되었지만, XIAP 단백질 수준에서는 상대적인 저하가 확인되지 않았다.
모의 형질감염과 비교해서 상대적인 XIAP 단백질 수준의 일부 감소를 보인 16개의 안티센스 뉴클레오베이스 올리고머를, 단독으로 또는 1개의 대조 뉴클레오베이스 올리고머(D2)와의 조합으로, 각각의 전술한 경시 실험(도 2B)를 토대로한 보다 최적 시점(12시간)에서의 XIAP 단백질 낫-다운 능력을 재테스트하였다. 또한, 이들 뉴클레오베이스 올리고머를 12시간에서의 XIAP mRNA 수준을 저하시키는 능력에 대해서 조사하고, GAPDH 수준에 대하여 표준화하고, 모의 형질감염군과 비교하였다. 12시간에서의 총 단백질 농도도 측정하였다(도 2C).
뉴클레오베이스 올리고머의 XIAP 단백질 수준을 저하시키는 능력(도 2B)과 XIAP mRNA 수준을 저하시키는 능력(도 2A) 간에는 우수한 관련성이 있었다. 또한, 상기 시점보다 이른 시기에서는 총 단백질량이 크게 감소하지 않았고, XIAP mRNA 및 단백질의 감소는, 상기 시점보다 나중 시기에서 보여지는 총 단백질량의 감소 전에 이루어졌다. XIAP 단백질 또는 mRNA 수준의 50% 이상의 감소를 보인 뉴클레오베이스 올리고머가, 단독으로 또는 1:1 비율의 2개의 뉴클레오베이스 올리고머 조합으로, 최선의 뉴클레오베이스 올리고머인 것으로 확인되었고, 이후 검증되었다. 이들 16개의 올리고뉴클레오티드들 중, 10개(E2, E3, F3, E4, F4, G4, C5, B6, D7, F8)가 사용한 형질감염 조건에 따라, 또는 조합(C5이라고 G4) 사용시에 50% 이상으로 XIAP 단백질 또는 RNA 수준을 감소시키는 일관된 능력을 나타내었다.
또한, 안티센스 활성이 입증된 이들 16개의 올리고뉴클레오티드는, XIAP mRNA의 4곳의 다른 표적 부위에서 크러스터를 형성하였고, 인접 뉴클레오베이스 올리고머는 다소 낫-다운 활성을 나타내었다. 상기 부위들 또는 감수성의 섬들 사이의 서열을 표적으로 하는 뉴클레오베이스 올리고머에서의 안티센스 활성은 거의 또는 전혀 관찰되지 않았다. 아마, 이들 부위는 세포 내부의 뉴클레오베이스 올리고머에 접근가능한 mRNA 상의 오픈 영역이다. 2개의 뉴클레오베이스 올리고머, E3 및 F3은 IRES와 번역 개시 부위 사이의 개재 영역내의 개시 코돈 바로 상류의 XIAP을 표적으로 하며, IRES 요소의 말단과 부분적으로 겹친다. C2, D2 및 E2는 최소 IRES 요소의 상류 XIAP 부위를 표적으로 하고, 최소 IRES 부위는 생체내 뉴클레오베이스 올리고머에 쉽게 접근할 수 없는 고차구조화된 RNA 부위라는 증거를 또한 제시한다. 모든 다른 뉴클레오베이스 올리고머는 예컨대 뉴클레오베이스 올리고머 C5 및 D5으로 입증된 바와 같이, XIAP 서열(E4, F4 및 G4)의 856-916 위치의 활성 클러스터 및 작은 개별 영역을 포함한, 코딩 영역의 일부분과 상보적이다. 표 2의 96개의 뉴클레오베이스 올리고머의 일부를, 형질감염 9시간이후의 NCI-H460 세포에서의 XIAP mRNA를 낫-다운시키는 능력에 대해 재스크리닝하였다. 데이터를 아래 표 5에 나타낸다.
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또한, 발명자들은 4×4 MBO(모두 PS, DNA 잔기의 양측에 4개의 2'-O-메틸 RNA 잔기가 인접해 있음)가 H460 세포에서 XIAP 단백질을 낫-다운시킬 수 있는지를 조사하였다. 도 3 및 4에 도시한 바와 같이, E12 및 다른 올리고뉴클레오티드, FG8의 4×4 MB들은 31 nM 정도의 저농도에서 효과적이었다.
실시예 5: XIAP 안티센스 뉴클레오베이스 올리고머는 세포독성 및 화학적감작을 증가시킨다
XIAP 안티센스 뉴클레오베이스 올리고머가 전통적인 화학치료제, 예를 들면 아드리아마이신 또는 시스플라틴에 대하여 약제내성이 높은 T24세포를 화학적으로 감작시키는지를 조사하였다. 여러 XIAP 표적 부위에 해당하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 선별하고, 단독으로 또는 그외 올리고뉴클레오티드 또는 약제와 조합하여 그것의 세포독성 효과를 테스트하였다. 5개의 XIAP 안티센스 올리고뉴클레오티드를 T24 방광암 세포를 사멸시키는 또는 화학적으로 감작화하는 그것의 능력에 대해 테스트하였고, 스크램블형 대조군 올리고뉴클레오티드에 해당되는 3개 군과 효과를 비교하였다.
T24 세포를 XIAP 안티센스 올리고뉴클레오티드, 스크램블형 올리고뉴클레오티드, 올리고뉴클레오티드 없는 상태(모의 형질감염)로 형질감염시키거나 형질감염시키지 않았다. 형질감염후, WST-1 테토라졸리움 색소가 대사적으로 활성적인 세포에서 착색된 포르마잔 생성물로 환원되는, WST-1 테트라졸리움 색소 분석으로, 20시간의 세포 생존성을 테스트하였다(도 5A).
올리고뉴클레오티드 E4에 의해 유도된 세포독성 형성을, 미처리된, 모의 형질감염된 또는 E4, E4 스크램블, E4 역방향성 또는 E4 미스매치 올리고뉴클레오티드로 형질감염된 T24 세포를 육안검사함으로써, 조사하였다. 형질감염 20시간후, 세포 형태를 조사하였다(도 5D). 안티센스 E4 올리고뉴클레오티드로 형질감염된 세포에서만 독성 신호를 나타내었다.
시스플라틴 또는 아드리아마이신에 대한 T24 세포의 화학감작에서의 뉴클레오베이스 올리고머의 효과를 조사하기 위해, 일정 용량의 아드리아마이신(0.5 μg/ml)의 존재하에서, T24 세포를 추가적으로 사멸시키는 올리고뉴클레오티드의 능력에 대해 조사하였다. 세포에 먼저, 올리고뉴클레오티드를 형질감염시킨 다음 20시간동안 아드리아마이신을 첨가하였다. 20시간의 약물 처리 종료후, WST-1에 의해 생존율을 측정하였다(도 5B). 그 결과는 뉴클레오베이스 올리고머 단독 처리군과 비교한 생존율%로 도 5C에 나타낸다.
시험한 5개의 뉴클레오베이스 올리고머(F3, E4, G4, C5, D7) 모두와 E4+C5 및 G4+C5의 조합은, T24 세포를 사멸시켰으며, 모의(올리고뉴클레오티드 없음) 형질감염 세포 또는 F3(5'-mCmAmGAGATTTCATTTAAmCmGmU-3', 서열번호: 275), E4(5'-mCmUmACGCTCGCCATCGTmUmCmA-3', 서열번호 276) 및 C5(5'- mUmGmCCCAAGAATACTAGmUmCmA-3', 서열번호 277)에 해당되는 3개의 스크램블 대조군으로 형질감염시킨 세포와 비교하여, 24시간 이후의 생존율은 10-15%에 불과하였다(도 5A 및 5C). 따라서, 독성은 XIAP 수준을 저하시키는 뉴클레오베이스 올리고머에 대해 서열 특이적이며, 일반적으로 뉴클레오베이스 올리고머 화합물에 의해서는 비-서열 특이적 독성에 의한 것이다. 이러한 세포독성은 XIAP 단백질 낫-다운(및 XIAP에 의해 생기는 항-세포자살의 예상되는 예방율 감소)과 형질감염 자체의 세포독성의 조합에 의한 것일 수 있다.
3시간의 형질감염 단계의 말기에 일정 용량의 아드리아마이신 또는 시스플라틴의 첨가로, 테스트 올리고뉴클레오티드 일부에서 생존율이 더욱 감소되었으며, 뉴클레오베이스 올리고머 F3, D7 및 G4+C5 조합의 경우, 해당 올리고뉴클레오티드가 처리된 수치(도 5C)에 비해 20시간후의 생존율이 또 40% 낮아졌다(도 5B). 도 5B의 수치는(올리고뉴클레오티드 + 약제) 도 5C에서의 올리고뉴클레오티드 단독인 경우의 수치와 비교하였고, 이는 각 ODN에 대해 100%로 두었다. 아드리아마이신의 화학적감작 결과만 확인되었으며, 세포를 시스플라틴으로 화학적으로 감작하였을때와 유사한 결과가 얻어졌다. 일정 용량으로, 모의 형질감염군 및 스크램블 대조 형질감염군에 아드리아마이신을 처리하였을 경우, 생존율의 감소 증가는 전혀 나타나지 않았다(도 5B). 화학감작은 XIAP 수준이 특이적인 안티센스 올리고뉴클레오티드에 의해 저하된 경우에만 나타났다.
실시예 6: H460 세포에서의 XIAP mRNA 에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 하향-조절 효과
실시간 PCR을 이용하여, 안티센스 올리고뉴클레오티드(2×2 MBO, 양쪽 말단에 포스포로티오에이트 결합을 가지는 2개의 측면 2'-O-메틸 RNA 잔기 및 15개의 포스포디에스테르 DNA 잔기의 중심 코어로 구성됨)의 H460 세포에서, XIAP mRNA 효과를 조사하였다. 상기에서, 뉴클레오베이스 올리고머 F3, G4, C5, AB6 및 DE4는 미처리 대조군에 비해 mRNA 수준을 50-70%로 저하시키고, D7 AS 뉴클레오베이스 올리고머는 mRNA 수준을 30%로 저하시킨다(도 6). 이와는 반대로, 대조군 뉴클레오베이스 올리고머와 단독 형질감염제(LFA) 각각에서는 mRNA 수준이 미처리 대조군의 20%미만으로 감소되었다(도 6). 추가적인 시험관내 및 생체내 연구로 뉴클레오베이스 올리고머 F3, G4 및 C5를 선별하였다. TaqMan 분석에서 관찰된 XIAP mRNA의 추가적인 낫-다운을 도 7 및 8에 나타내었다
실시예 7: 안티센스 올리고뉴클레오티드의 XIAP 단백질에 대한 하향-조절 효과
웨스턴 분석으로, 올리고뉴클레오티드 구성에서의 뉴클레오베이스 올리고머F3, G4 및 C5의 XIAP 단백질 발현에 대한 효과를 분석하였다(도 9, 10A 및 10B). G4 AS 올리고뉴클레오티드는 XIAP 단백질에 대해 최대 하향-조절 효과를 나타내어, 1.2μM의 농도에서 형질감염 24시간 이후에는 XIAP 단백질 수준이 62%로 감소되었다(도 10A 및 10B). F3 AS 올리고뉴클레오티드는 1.2μM에서 XIAP 단백질 수준을 50%로 저하시켰으나, C5 AS 올리고뉴클레오티드는 대조군에 비해 서열 특이적인 효과를 나타내지 않았다(도 10B). 추가적인 연구에서, E12 및 FG8 AS 올리고뉴클레오티드는 XIAP 단백질 수준을 현저하게 저하시켰다(도 9).
실시예 8: XIAP AS 올리고뉴클레오티드에 의한 세포자살 유도
XIAP AS 뉴클레오베이스 올리고머가 H460 세포 및 T24 방광암 세포의 생존율을 감소시키는 것으로 입증되어, 관찰된 세포 죽음이 세포자살의 유도에 기인하는 것인지를 확인하였다. 도 11A에 도시한 바와 같이, 1.2μM의 F3 또는 G4 AS 올리고뉴클레오티드로 처리한 H460 세포는 프로-카스파제-3 단백질을 활성화 및 분해하고, 각각 미처리 대조군 세포와 비해 단백질 수준을 40% 또는 60%로 저하시켰다. PARP도 카스파제-3에 의해 생기는 그것의 예상된 단편이었다(도 11A). 반대로, 1.2 μM 농도에서, F3 및 G4 SC 올리고뉴클레오티드 대조군은 카스파제-3 또는 PARP 단백질 발현에 어떠한 효과도 나타내지 않았다(도 11A). Bcl-2: Bax의 비율은 F3 및 G4 AS 올리고뉴클레오티드로 처리된 H460 세포와 1.2μM 농도의 각 해당 대조군에서는 변화가 없었다. 유세포 측정기를 사용하여, G4 AS 올리고뉴클레오티드로 처리되고 PI로 염색한 H460 세포내의 하이포(hypo)-이배체 DNA 함량을 검사하였다(도 12A). H460 세포를 1.2μM의 G4 AS 올리고뉴클레오티드 또는 스크램블형 대조군 올리고뉴클레오티드로 처리하였을 경우, 세포의 하이포-함량은 각각 40.8 및 22.1%이었으며, 미처리의 대조군 세포의 16.6%와 비교되었다. DAPI 염색으로, 1.2μM의 G4 AS 올리고뉴클레오티드 또는 스크램블 대조 올리고뉴클레오티드로 처리한 H460 세포에서의 핵 형태 변화를 검사하였다. 도 12B에 도시한 바와 같이, G4 AS 올리고뉴클레오티드로 처리한 세포에서는 염색사 응축 및 핵 DNA 단편화를 비롯한 세포자살에 특징적인 형태상의 변화가 있었다. G4 SC로 처리한 대조 세포 에서는 대부분의 세포가 이들 형태상의 변화를 나타내지 않았다.
실시예 9: AS 올리고뉴클레오티드에 의한 H460 세포의 항암제에 대한 세포 증식 및 감작 저해
XIAP 발현의 하향 조절과 세포 자살과 관련된 뉴클레오베이스 올리고머의 생물학적 효과를 분석하기 위해, G4 AS 올리고뉴클레오티드로 처리한 H460 세포의 증식을 MTT 분석으로 조사하였다. 형질감염 48시간 지난 후, G4 AS 올리고뉴클레오티드는 H460 세포증식을 농도 의존적으로 감소시켰으며, 1.2μM 농도에서 미처리 대조군에 비해 55%의 감소를 나타내었다(도 13A). 반대로, G4 SC 올리고뉴클레오티드 또는 형질감염제 단독의 저해 효과는 비교적 낮아, 미처리 대조군의 10% 미만이었다.
XIAP 발현의 하향-조절이 H460 세포를 화학요법에 대하여 감작시킬 가능성이 있는지를 조사하기 위해, G4 AS 올리고뉴클레오티드와 이하의 항암제들 중 하나를 이용한 병용 처리를 실시하였다: 독소루비신(DOX), 탁솔, 비노렐빈(VNB) 및 에토포시드(Etop). 도 13B는 상기 각 병용이 항암제 단독 또는 G4 AS 올리고뉴클레오티드 어느 하나와의 처리에 비해 세포 사멸에 대해 부가적인 세포독성 효과 이상을 초래하는 것으로 나타내고 있다.
실시예 10: H460 및 LCC6 종양 이종이식편에 대한 G4 AS 올리고뉴클레오티드의 항종양 효과
먼저, 피하에 H460 인간 폐암 이종이식편이 있는 SCID-RAG2 마우스에 XIAP 안티센스 2×2-MBO를 종양내 주사하여, 종양 증식 정도의 감소 여부를 측정하였다. 종양 세포 접종(106 세포를 어깨에 피하 주사)의 14일후에, MBO(종양 1 g 당 50 μg의 2'-O-메틸 RNA 올리고뉴클레오티드)을 촉진가능한 간 덩어리에 2주일간 일주일에 3번씩 주사함으로써 치료를 개시하였다. 비노렐빈(VNB, 이명 나벨빈(NVB))(복강내 15 mg/kg)을 17일째 및 24일째에 주사하였다. 종양 사이즈를 노기스로 주 3회 측정하였다. 치료 기간이 종료된 후(24일째), C5+G4 AS MBO와 VNB를 병용 처리한 마우스에서의 평균 상대 종양 증식은 스크램블 대조군 MBO와 VNB로 처리한 것에 비해 -70% 작아졌다. C5 AS MBO 및 VNB로 처리한 경우에는, 스크램블 대조군에 비해 종양 크기가 -60% 축소되었다(도 14).
초기 전신성 PS-올리고뉴클레오티드 연구는 화학치료제를 일체 이용하지 않고 설정되었다. SCID-RAG2 마우스에 H460 인간 폐암세포를 접종(106 세포의 어깨피하 주사)하고, 종양접종의 3일후에 G4 및F3 AS PS-올리고뉴클레오티드 및 스크램블 대조군을 처리하였다. 뉴클레오베이스 올리고머를, 주 3회 3주일간, 12.5 mg/kg으로 복강내 주사하였다. 치료 기간 종료시에, G4 또는 F3 AS 올리고뉴클레오티드 중 어느 하나로 처치한 군에서의 평균 종양 크기 스크램블 대조군 올리고뉴클레오티드로 처치한 군보다도 ~ 50% 작았다(도 15). 동일 처치 프로토콜을, MDA-MB-435/LCC6 인간 유방암 세포를 같은 곳에 접종한 암컷 SCID-RAG2 마우스에 적용시켰다. 마지막 처리 2주일후(35일째), F3, C5 또는 G4 AS 올리고뉴클레오티드로 처리한 마우스의 종양 용적은 비히클 대조군에 비해 각각 70%, 60% 및 45% 작았다(도 16).
피하이식한 H460 인간 비-소세포 폐 종양의 이종이식편을 가진 SCID-RAG2 마우스에서의 G4 AS 올리고뉴클레오티드의 항종양 효과에 관한 추가 시험을 실시하였다. 생리식염수로 처리한 대조군 종양은 약 24일이내에 0.75 cm3 크기로 재현적으로 증식하였다(도 17). 올리고뉴클레오티드 처리는 종양 세포 접종 3일후에 시작하였다. G4 AS 올리고뉴클레오티드(5-15 mg/kg)를, 3-7일째, 10-14일째 및 17-21일째에 1일 1회 행하는 복강내 주사로 이루어진 치료 스케줄로, 투여하였다.
5 mg/kg 또는 15 mg/kg의 G4 AS 올리고뉴클레오티드에서의 처리시, 종양 증식이 크게 지연되었으며, 24일째에 대조군 5 mg/kg 및 15 mg/kg 처리시의 평균 종양 크기는 각각, 0.75 cm3, 0.45 cm3 및 0.29 cm3였다(도 18A). 종양 증식은 용량 의존적으로 저해되었다. 15 mg/kg의 G4 AS 올리고뉴클레오티드를 처리한 마우스의 종양 크기는 대조군에 비해 현저하게 작았으며, 대조군의 평균 종양 크기의 39%였다. 이와는 대조적으로, 15 mg/kg의 G4 SC 올리고뉴클레오티드를 투여한 경우 치료학적 활성은 없었다(도 17). 올리고뉴클레오티드로 처리한 마우스는 모두 독성의 징후를 전혀 나타내지 않았고, 올리고뉴클레오티드의 상기 2가지 용량은 모두 매우 관용적이었다. 이후의 항암제와의 병용 치료법에서는 15 mg/kg을 선택하였다.
실시예 11: G4 AS 올리고뉴클레오티드로 처리한 H460 종양에서의 XIAP 발현 감소
G4 AS 올리고뉴클레오티드의 종양 증식 저해 효과와 XIAP 단백질 발현과의 상관성 확인을 위해, 15 mg/kg의 G4 AS 및 SC 올리고뉴클레오티드를 이용하는 생체 내 처리의 종료 시점에서의 XIAP 발현 변화를 조사하였다. 종양 크기가 1 cm3가 되는 종양 접종후 21일 또는 24일이 경과된 시점에(도 17), 종양을 회수하고, 종양 호모게네이트로부터의 용해물을 웨스턴 블롯 분석에 이용하였다. 인간 단백질에 대한 XIAP 및 β-액틴 항체를 이용함으로써, 마우스 세포 유래의 XIAP의 혼입없이 종양 세포 검체로부터 수득한 인간 XIAP 수준의 측정이 가능하였다. G4 AS 올리고뉴클레오티드로 처리한 종양에서의 XIAP 단백질 수준은, 대조군 종양의 약 85%까지 유의적으로 감소되었다(P <0.005)(도 1 8A 및 18B). G4 SC 올리고뉴클레오티드로 처리한 종양은, 그 크기가 대조군 종양의 24%로 작아졌다. 이러한 결과는, G4 AS 올리고뉴클레오티드에 의한 H460 종양 증식의 저해가 XIAP 단백질 발현의 하향-조절과 관련있음을 나타낸다.
실시예 12: 종양 검체의 조직병리 검사
XIAP AS 올리고뉴클레오티드의 투여가 직접적으로 종양세포의 사멸을 초래하는지는 평가하기 위해, 처리후의 종양의 조직상을 형태 및 유비퀴틴 면역염색으로 조사하였다(도 19A 및 19B). 종양 접종후 21일 또는 24일 되었을때, 15 mg/kg의 G4 AS 올리고뉴클레오티드, SC 올리고뉴클레오티드 또는 생리식염수 대조군을 처리한 종양을 절제하고, 절편화하여, 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하였다. 그 결과, 소정의 XIAP AS 올리고뉴클레오티드 처리를 실시한 동물의 종양에서는 무정형 형태 및 응축된 핵물질에 의해 형태학적으로 확인되는 사멸 세포의 수가 증가하고 있음을 나타내었다(도 19A).
단백질의 분해는 대부분이 유비퀴틴-프로테아좀 의존적 분해이며, 세포자살중에 유비퀴틴 발현의 증가가 관찰되었다. 따라서, 헤마톡실린 및 에오신 염색에 이용한 종양 절편에서의 유비퀴틴 발현을 조사하였다. 도 19B에 도시한 바와 같이, XIAP AS 올리고뉴클레오티드를 투여한 마우스의 종양은 대조군 또는 SC ODN-처리 마우스의 종양에 비해 강한 면역조직화학적 염색을 나타내었다. 이러한 데이터는, XIAP AS 뉴클레오베이스 올리고뉴클레오티드로 처리한 종양 세포에서는 대조군 종양이 비해 유리 유비퀴틴 및/또는 유비퀴틴화된 단백질이 다량 존재하고 있음을 나타낸다.
실시예 13: G4 AS 올리고뉴클레오티드와 비노렐빈의 병용 처리
G4 AS 클레오베이스 올리고머와 폐암 치료에 이용된 화학치료제인 비노렐빈(VNB)과의 병용 처리가 어떠한 협동적 효과를 초래하는지 여부를 평가하기 위해, G4 AS 올리고뉴클레오티드 또는 G4 SC 올리고뉴클레오티드의 존재하 및 부재하에 VNB의 치료 효과를 비교하였다. 치료 계획은 종양 접종 3일 후부터 시작하였다. 도 20A는 H460 종양의 마우스에 투여한 5 mg/kg 및 10 mg/kg 용량의 VNB의 생체내 효능 결과와 생리식염수 대조군과 비교한 결과를 나타낸다. 2가지 치료법 각각은 바람직하지 않은 유의한 독성 징후(즉, 체중감소)를 나타내지 않았으며, 용량 의존적으로 유의한 종양 증식 억제를 유도하였다. G4 AS 올리고뉴클레오티드(15 mg/kg)의 투여에 H460 종양으로의 VNB(5 mg/kg) 투여를 조합하였을 경우, 어느 하나를 단독 투여한 처리에 비해 H460 종양 증식을 한층 더 현저하게 지연시켰다(도 20B). 이 경우도 역시, 마우스에서의 유의한 독성 징후(즉, 체중감소)는 전혀 나타내지 않았다. G4 AS 또는 SC 올리고뉴클레오티드의 존재하 또는 부재하에서 5 mg/kg VNB을 처리한 마우스에서의 평균 종양 사이즈를 29일째에 비교하였다(도 20A 및 20B). VNB 및 G4 AS 올리고뉴클레오티드 군의 평균 종양 크기는 0.22 ± 0.03 cm3이며, 이는 5 mg/kg의 VNB을 단독으로 또는 VNB과 G4 SC 올리고뉴클레오티드의 병용 투여시의 동물에서의 평균 종양 크기(각각, 0.59 ± 0.04 cm3 및 0.48 ± 0.05 cm3)보다도 유의적으로 작았다.
방법
이하의 방법으로 실시예 5-13의 결과를 획득하였다.
올리고뉴클레오티드 합성
96개 이상의 비-중첩 키메라 또는 혼성-벡본(MBO)의 16 mer의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 라이브러리를, 양쪽 말단에 포스포로티오에이트 결합을 가지는 2개의 인접하는 2'-O-메틸 RNA 잔기와, 15개의 포스포디에스테르 DNA 잔기로 이루어지는 중심 코어로 구성된, 2×2 MBO 올리고뉴클레오티드로 합성하였다. 각 최종 산물을 세파덱스 G-25 크로마토그래피(IDT사, 코럴 빌딩, IA)로 탈염하였다. 이 키메라의 윙머(wingmer) 배열 및 포스포로티오에이트와 포스포디에스테르 결합의 혼합체(2×2 PS/PO라고 불림)는, 적절한 안정성을 제공하며, 포스포로티오에이트 잔기와 관련된 비특이적 독성 저하를 제공한다. 생체내 및 시험관내 연구에 있어서, 충분히 포스포로티오에이트화된 비키메라의(DNA) 안티센스 올리고뉴클레오티드를 Trilink Biotech에서 합성하고, RP-HPLC로 정제하였다.
안티센스 올리고뉴클레오티드의 스크리닝
1-1.2μM 올리고뉴클레오티드-리포펙틴 복합체로 24-48시간동안 형질감염시킨 T24 방광암 세포를 조사하여, XIAP 단백질을 낫-다운시키는 각 올리고뉴클레오티드의 능력을 측정하였다. 양성 히트 수로, T24 방광암 세포 및 H460 폐암세포에서의(i) 웨스턴 분석에 의한 형질감염 후 12-18시간에서의 XIAP 단백질 수준을 낫-다운시키는 능력, 및 (ii) 정량 RT-PCR(하기참조)에 의한 형질감염후 6-9시간에서의 XIAP mRNA 수준을 낫-다운시키는 능력을 재확인하였다. 후보 올리고뉴클레오티드를 정하여, 이후의 테스트를 수행하였다. 정해진 2×2 PS/PO 키메라 올리고뉴클레오티드는 400-1200 nM의 농도 범위에서 6-9시간으로 XIAP mRNA 수준을 감소시키는 용량-의존적인 능력을 나타내었다. 올리고뉴클레오티드의 예를 표 6에 나타낸다.
Figure 112006038423527-PCT00005
굵은체의 잔기는 포스포로티오에이트 결합의 DAN 잔기이고, 밑줄친 잔기는 2'-O-메틸 RNA 염기이며, 일반 기재의 잔기는 포스포디에스테르 DNA 잔기이다.
종양 세포주 및 이종이식의 동물 모델
인간 비 소세포 폐암 세포주(거대 세포형) NCI-H460(H460)는 ATCC로부터 입수하였고, 10% FCS가 보충된 RPMI 1640에서 5% CO2가 함유된 습윤 대기상, 37 ℃에서 유지하였다. 최대 25대의 시험관내 계대 배양한, 대수증식기의 세포를 이용하였다. 수컷 SCID-RAG2 마우스(7-9주 나이, 23-26 g)는 브리티시컬럼비아 암연구소부속 동물실험 시설의 교배 콜로니로부터 입수하고, 무균환경에서 유지하였다. SCID-RAG2 마우스에서의 NCI-H460 세포의 종양 모델은, 마우스의 등에 1×106개의 NCI-H460 세포를 피하이식함으로써 확립하였다.
안티센스 및 항암제에 의한 세포의 처리
형질감염의 1일 전에, H460 세포를 6웰 또는 96웰 조직 배양 플레이트에 접종하였다. 포스포로티오에이트 안티센스 올리고뉴클레오티드를, 리포펙타민 2000(Life Technology)를 이용하여 리포솜-올리고뉴클레오티드 복합체 형태로 세포내로 전달하였다. 형질감염 후 4.5시간 또는 6시간되었을때, 형질감염 배지를 10% FBS를 함유하는 RPMI 배지로 교체한 다음 세포를 24시간 또는 48시간 더욱 배양하였다.
실시간 정량 RT - PCR
리포솜-올리고뉴클레오티드 복합체로 6시간 처리한 H460 세포의 총 RNA를, RNeasy 미니 스핀 컬럼 및 디옥시리보 뉴클레아제 처리(QIAGEN, Valencia, CA)로 즉시 분리하였다. 특이적인 XIAP mRNA는 실시간 정량 RT-PCR법으로 측정하였다. XIAP 정방향 및 역방향 프라이머(600 nM) 및 프로브(200 nM)(5'-GGTGATAAAGTAAAGTGCTTTCACTGT-3'(서열번호: 293), 6FAM-CAACATGCTAAATGGTTCCAGGGTGCAAATATC-TAMRA(서열번호: 294)및5'- TCAGTAGTTCTTACCAGACACTCCTCAA-3'(서열번호: 295)은, 엑속 3-4 및 4-5 접합부를 포괄하도록 제작되었다. 이들 프라이머들중 하나와 프로브는, 인트론-엑손 경계부를 중첩하도록 제작하여, 가능한 모든 게놈 DNA 혼입물의 검출을 차단하였다. ABI 프리즘 7700 서열 검출 시스템(PE/ABI)상에서, TaqMan EZ RT-PCR 키트(PE/ABI, 포스터 씨티, CA)를 사용하여 RNA를 역전사 및 PCR 증폭하였다. RT 단계의 열 주기 조건은 50 ℃에서 2분간, 60 ℃에서 30분간, 95 ℃에서 5분이며, PCR(한 사이클 당 94 ℃에서 20초간, 60 ℃에서 1분간)을 45회 수행하였다. 각 샘플의 XIAP mRNA 수준을 미처리 대조군 세포와 비교하여 산출하였다. XIAP mRNA 수준은 베이스라인 SD의 30배의 임계값을 이용한 사이클 임계법(Ct)으로 측정하였고, XIAP 수준은 PE/ABI 사의 프라이머 및 프로브를 이용하여 GAPDH 함유량에 대해 표준화하였다.
웨스턴 블롯 분석
세포 또는 종양조직 샘플을 단백질분해효소의 저해제(Complete-Mini protease inhibitor tablets; Boehringer Mannheim GmBH, Mannheim, Germany)가 함유된 차가운 세포용해 완충액(50 mM Tris, 150 mM NaCl, 2.5 mM EDTA, 0.1% SDS, 0.5% 데옥시콜산 나트륨, 1% NP-40, 0.02% 소듐 아지드)로 용해하였다. 얼음위에 30분간 둔 다음, 샘플을 10,000 rpm에서 15분간 원심분리한 다음 -20 ℃로 저장하였다. 세포용해 추출물내 단백질 함량은 계면활성제-상용가능한 Bio-Rad 분석(Bio-Rad Labs, Hercules, CA)으로 측정하였다. 동량의 단백질(40μg/래인)을 12% SDS-폴리아크릴아미드 젤 또는 4-15% 농도 구배의 SDS-폴리아크릴아미드 사전제작한 젤(Bio-Rad)상에서 분리한 다음, 니트로셀룰로오스 막으로 전이시켰다. XIAP, Bcl-2(DAKO, Glostrup, 덴마크), Bax(Sigma, St. Louis, MO), β-액틴(Sigma), 카스파제-3(BD PharMingen, San Diego, CA) 및 PARP(BD PharMingen)에 대한 1차 항체를 사용하였다. ２차 항체는 적합한 호르세리디시-접합된 항-마우스 또는 항-토끼 IgG(Promega, Madison, WI)이다. 단백질은 고감도 화학발광법(ECL, Amersham Pharmacia Biotech, Buckinghamshire, England)로 검출하고, 코닥 자동 필름에 노출시켜 가시화하였다. 스캐닝 농도측정(Molecular Dynamice, Sunnyvale, CA)를 수행하여 부피/면적에 의한 밴드 밀도를 측정하였다. 세포에서의 XIAP, 카스파아제-3, Bcl-2 및 Bax 함량은 스트립필 및 리프로빙으로 각각의 해당 β-액틴 수준으로 표준화하였다.
세포증식 및 세포생존율 또는 세포 사멸 측정
H460 세포의 증식 저해를 비색 정량 MTT 세포생존/증식 분석으로 측정하였다. 요컨대, 세포를 리포솜-올리고뉴클레오티드 복합체로 4.5시간 처리한 후, 항암제의 존재하 또는 부재하에 형질감염제 또는 올리고뉴클레오티드를 포함하지 않는 배지내에서 37 ℃로 48시간 배양하였다. MTT(25 μg/웰)을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 37 ℃에서 3시간 배양하였다. 배양후, 200 ㎕의 DMSO를 첨가하여, 착색된 포르마잔 생성물을 용해시켰다. 마이크로타이터 플레이터 판독기(Dynex Technologies Inc., Chantilly, VA)로 파장 570nm에서 플레이트를 판독하였다. 올리고뉴클레오티드를 처리한 웰에서의 생존 세포 비율을 미처리의 대조군에 대하여 표준화하였다. 모든 분석은 3회 행하였다.
세포자살의 유세포 측정 분석
세포를 리포솜-올리고뉴클레오티드 복합체로 4.5시간 처리하고, 형질감염 시약을 포함하지 않는 배지내에서 37 ℃로 48시간 배양하였다. 배양후, 세포를 회수하고, 샘플 완충액(Ca++ 및 Mg++ 무함유 PBS 중의 0.5% 글루코오스)으로 2회 세정하고, 70% 차가운 에탄올로 4 ℃에서 적어도 18시간이상 고정하였다. 샘플을 3000 rpm에서 10분간 원심분리하고, 50 μg/ml 프로피듐 요오드(PI) 및 400 U/ml RNase A가 함유된 샘플 완충액에 재현탁하였다. 샘플을 실온에서 30분간 및 얼음위에서 30분간 둔 다음, 유세포 분석을 실시하였다. EXPO 소프트웨어(Applied Cytometry Systems, Sacramento, CA)으로 히스토그램을 작성하고, 파편 제거 후 상기 히스토그램을 이용해서 세포 주기 위상 분포(cell cycle phase distribution)를 결정하였다. 섭 G1/G0 세포 분획은 세포자살 세포로 간주하였다.
핵 형태학
세포를 리포솜-올리고뉴클레오티드 복합체로 4.5시간 처리하고, 형질감염 시약 또는 올리고뉴클레오티드를 포함하지 않는 배지에서 37 ℃로 48시간 배양하였다. `세포를 회수하고, 0.10 μg/ml DAPI(4',6-디아미디노-2-2-페닐인돌)을 이용해서 실온에서 30분간 염색하였다. 세포를 슬라이드 글라스 위에 두고, 사이토스핀하고, UV 형광조명하에서 라이카 현미경 및 40배 대물 렌즈로 관찰하였다. 디지털 화상은 이미지데이타베이스 V.4.01 소프트웨어(Leica, 독일)로 획득하였다.
생체내 항종양 활성
NCI-H460 종양의 수컷 RAG2 면역결핍성 마우스 또는 LCC6 종양의 암컷 RAG2 마우스에서, 효과 실험을 실시하였다. 처리는 종양 접종 3일후에 시작하였다. 생리식염수(대조군), G4 AS 올리고뉴클레오티드(5 mg/kg 또는 15 mg/kg), G4 SC 올리고뉴클레오티드(5 mg/kg 또는 15 mg/kg)을, 3주일의 투여 계획으로 주에 5회 용량으로 매일 복강내에 투여하였다. 비노렐빈(VNB, 5 mg/kg 또는 10 mg/kg)을, 종양접종 3일후, 7일후, 11일후 및 17일후에 단독으로 또는 올리고뉴클레오티드와 병용으로 꼬리정맥을 통해 정맥투여하였다. 올리고뉴클레오티드를 VNB와 병용 투여시, 약물 처리는 ODN 처리 4시간후에 행하였다.
마우스는 매일 관찰하였다. 체중 측정 및 스트레스의 징후(예, 무기력, 털의 거꾸로 서는 정도, 운동 실조)를 이용하여, 가능한 독성을 검출하였다. 궤양화된 종양 또는 1 cm3 이상의 종양을 가진 세포는 치사시켰다. 디지털 노기스에 의한 종양의 측정값을, 식: 1/2[길이(cm)]× [폭(cm)]2으로 평균 종양 크기(cm3)로 변환하였다. 마우스 1 마리당 평균 종양 크기를 이용하여, 하나의 군당 최소한 2개의 독립 시험군으로부터 각 군의 평균 종양 크기 ± SE(n= 마우스 6마리)를 구하였다.
종양 및 조직의 처리
마우스 종양을 종양 접종 및 처리 21일후 또는 24일후에 회수하였다. 종양조직의 일부를 포르말린으로 고정하였다. 파라핀 포매 조직을 절편화하고, 헤마톡실린 및 에오신 염색으로 조직병리학을 실시하고 유비퀴틴 발현에 대한 면역조직화학을 수행하였다. 종양의 다른 부분은 웨스턴 블롯 분석을 위해 용해 완충액내에서 균질화하였다.
통계 분석
스튜던트의 t 검정에 의해 2개의 처리 군간의 통계적 유의성을 판정하였다. 다중비교는 일원 ANOVA 및 Shelle 검정 기준에 의한 다른 처리군을 비교하는 사후검정에 의해 수행하였다(Statistica release 4.5, StatSoft Inc., Tulsa, OK). 데이터는 P값 <0.05로 유의성을 검토하였다.
실시예 14: 안티센스 HIAP1 올리고뉴클레오티드에 의한 HIAP1 RNA 및 폴리펩티드 발현 감소
올리고뉴클레오티드로서의 15개의 HIAP1 안티센스 뉴클레오베이스 올리고머의 라이브러리를, 웨스턴 블롯 분석으로 단백질 낫-다운을, 2가지 다른 조건하에서 상기 실시예 3에 개시된 프라이머 및 프로브를 이용한 TaqMan에 의한 RNA 낫-다운을 스크리닝하였다. HIAP1 RNA 수준은 표준적인 노던 블로팅 분석 또는 RT-PCR 기술로 검출할 수 있다. 안티센스 올리고뉴클레오티드를 기본 조건하에서 또는 사이클로헥시미드 유도 조건하(독성 수준 이하의 용량으로 24시간 처리)에서 세포에 투여하였다. 사이클로헥시미드(CHX)는 처리된 세포주에 따라 HIAP1 mRNA의 10배 내지 200배의 유도를 유도할 수 있다. 이는 웨스턴 블롯에서 보여지는 것과 같이(70 kDa 밴드), HIAP1 단백질의 증가를 유도한다. 이러한 CHX 효과는 2가지 별개의 작용 기작을 통한 것이다. 첫째로, CHX는 NFκB의 저해제인 불안정한 단백질 IκB의 신규 합성을 차단함으로써 공지의 HIAP1 전사유도 물질인 NFκB을 활성화시킨다. 이러한 효과는 다른 단백질합성 저해제인 퓨로마이신이나 TNF-α에 의해서도 모방되며, TNF-α는 IκB의 인산화, 유비퀴틴화 및 분해를 유도하는 시그널 전달 캐스케이드를 유발한다. 엑티노마이신D와 퓨로마이신 또는 TNF-α과의 조합과는 대조적으로, 신규 전사를 차단하는 엑티노마이신D와 CHX의 존재하에서의 HIAP1 메시지의 소멸 감소율에 의해 확인된 바와 같이, CHX만이 HIAP1 mRNA를 더 안정화시킨다.
SF295 신경아교종 세포에 리포펙틴 및 올리고뉴클레오티드(스크램블형 서르비빈, 올리고뉴클레오티드 없음, 안티센스 APO1 - APO15)를 형질감염시키거나, 또는 미처리한 채로 두었다. 형질감염 6시간후, 세포로부터 RNA를 분리하고, HIAP1 mRNA의 수준을 정량 PCR(TaqMan 분석)로 측정하고, 스크램블형 서르비빈 올리고뉴클레오티드 형질감염체에 대한 값을 1.0이라고 설정하여, GAPDH mRNA에 대하여 표준화하였다. 이 시험의 결과는 3가지 독립적인 시험을 통합한 것으로서, 도 21에 나타낸다. 스크램블형 서르비빈 올리고뉴클레오티드, 모의 형질감염 및 미처리(미 형질감염) 세포에서 모두 유사한 HIAP1 mRNA 수준이 확인되었다. 15개의 안티센스 올리고뉴클레오티드들중, 7개(APO1, 2, 7, 8, 9, 12, 15)는, 모의 형질감염 또는 스크램블형 서르비빈 올리고뉴클레오티드 대조군 형질감염(5'-mUmAmAGCTGTTCTATGTGmUmUmC-3 ',서열번호: 296)에 비해, 거의 50% 감소하였다(도 21). 올리고뉴클레오티드 일부는, 비특이적 독성의 올리고뉴클레오티드에 대하여 스트레스 반응일 수 있는, HIAP1 mRNA의 유도를 도출하였다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는 올리고뉴클레오티드가 번역 프로세스를 방해할 경우의 메시지가 증가하더라도, HIAP1 단백질 수준의 낫-다운에도 여전히 효과적일 수 있다.
또한, HIAP1 단백질 및 mRNA 발현에 대한 HIAP1 안티센스 뉴클레오베이스 올리고머의 효과를 HIAP1 발현이 유도된 세포에서 조사하였다. SF295 세포에 올리고뉴클레오티드를 형질감염시키거나, 모의 형질감염시켰다. 형질감염 세포를 이후 10 μg/ml사이클로헥시미드로 24시간 처리하여, 70 kDa HIAP1 mRNA 및 단백질 발현을 유도하였다. 항-HIAP1 다클론성 항체를 이용한 웨스턴 블롯 분석에 의해 단백질 수준을 측정하였고, 동일 블롯의 리프로빙의 액틴 단백질에 대해 표준화하였다. 웨스턴 블롯 결과는 도 22A에 나타낸다. 도 22B으로 농도측정 결과를 모의 결과(100%)에 대해 도면화하였다. 가장 효과적인 안티센스 올리고뉴클레오티드를 용이하게 식별할 수 있게, 50%로 선을 그었다. 웨스턴 면역블롯에 나타난 바와 같이, 미처리의 샘플에 비해 형질감염 프로세스 그 자체(예, 모의 또는 스크램블형 서르비빈)가 HIAP1 단백질을 유도하였다.
15개의 테스트 뉴클레오베이스 올리고머들 중, 6개(APO1, 2, 7, 8, 12 및 15)는 단백질 및 mRNA 분석에서 우수한 활성을 보이거나 또는 현저한 활성을 가지고 있어, APO 4, 6, 11, 13, 14에서(도 21) 및 APO 2에 대한 대조군 올리고뉴클레오티드(미스매치 또는 반대 극성, 도 23및 도 24을 참조)에 의해 보여진 바와 같이, HIAP1 mRNA의 스트레스 유도성 증가를 일으키지 않았다. 또한, APO 6은 총 단백질의 전반적인 감소로 확인된 바와 같이, 독성의 증거를 보였다(도 23).
사이클로헥시미드 유도 조건하에서의 HIAP1 티센스 올리고뉴클레오티드의 효능을 추가적으로 조사하기 위해, HIAP1의 인트론내의 Alu 반복 서열을 표적으로 하고, HIAP1 mRNA 및 단백질의 CHX 유도성 상향 조절을 최대한으로 차단시키는, APO2을 이용하여 형질감염한 후 6시간 되었을때 HIAP1 mRNA의 변화를 TaqMan 실시간 PCR로 측정하였다. 상기 시험의 대조군은 APO 2에 대한 3개의 올리고뉴클레오티드: 1개의 스크램블형 서열(동일한 염기 조성이지만 순서가 랜덤, 5'-AAGGGCGGCGGAGTGAGAC-3', 서열번호: 297), 1개의 반대 극성의 서열(동일한 염기 조성이며, 동일한 서열 순서이지만 반대 방향임, 5'-AGAGGACGGAGTCGGAGGC-3', 서열번호: 298) 및 1개의 미스매치 서열(19개의 염기들 중 4개의 미스매치를 포함함, 5'-CGGAGCGTGAGGATGGAGA-3', 서열번호: 299)이다.
APO 2 안티센스를 세포에 형질감염한 결과 스크램블형의 서르비빈 대조군에 비해 mRNA가 50% 감소하였고, 이는 단백질 결과와 완전히 일치된 결과이지만, APO 2에 대한 스크램블형 대조군(도 24의 H1 sc apo2)에서는 HIAP1 mRNA 수준이 전혀 변화지 않았다(2회 다른 실험에서 2회 반복). 그러나, 미스매치 대조군 ODN(H1 mm apo2)과 반대 극성의 대조군 올리고뉴클레오티드(H1 RV apo2)은 6시간에 HIAP1 mRNA를 6-7배로 유도하였다. 이들 올리고뉴클레오티드는, 예상대로, HIAP1을 더이상 표적화하지 않지만, 그래도 여전히, 이들의 서열의 중축 및 반복 특성으로 인해 Alu 반복 서열을 표적으로 할 수도 있다. 따라서, 이들 2개의 대조군이 세포에 독성을 나타내며, HIAP1를 유도하는 스트레스 반응을 초래할 가능성이 있다. 또한 이러한 효과는, 안티센스 APO2 올리고뉴클레오티드에서도 발생될 수 있지만, 이 경우 APO2 역시 스크램블형의 대조군에 비해 HIAP1 mRNA의 상대적인 감소를 초래하는, 유발된 HIAP1 mRNA의 분해를 초래할 뿐만 아니라, 스크램블형의 서르비빈 대조군 올리고뉴클레오티드에 비해, 형질감염 및 CHX 처리후의 HIAP1 단백질의 상대적인 폴드 유발을 감소시킨다.
6개의 안티센스 HIAP1 뉴클레오베이스 올리고머는 인트론 서열에 대하여 매우 효과적인 2개의 올리고뉴클레오티드(APO1 및 APO2, APO2이 보다 우수한 활성을 나타냄)를 포함한다. 이들 올리고뉴클레오티드는 암 또는 자기면역질환의 치료에 치료학적으로 사용될 수 있다. 인트론 서열에 대한 상기 올리고뉴클레오티드는, 프리-mRNA(매우 단기의 표적물)만을 표적으로 하고 프로세싱 형태의 성숙형 HIAP1을 표적으로 하지 않을 것이다. 전형적으로, 인트론은 인트론-엑손 경계부 또는 분기점을 표적으로함으로써 스플라이싱을 변경시키길 원하는 경우를 제외하고는 안티센스의 표적이 되지 않는다. 이러한 일반적인 결과는, 메시지의 RNase-매개성 분해보다 오히려 엑손의 스키핑(skipping)을 초래한다. 스키핑은 HIAP1의 처음의 중요한 2개의 BIR 도메인을 코딩하는 엑손의 소실에 의한 것이므로, 두가지 기작은 세포자살 강화에 유리할 것이다. 또한, APO2 안티센스 ODN는 19개 중 연속한 18개의 염기에 있어서, 서르비빈의 인트론을 표적으로 하지만, 서르비빈 단백질의 어떠한 감소도 관찰되지 않았으며, HIAP1만이 올리고 처리후에 감소되었는데, 이는 HIAP1 안티센스 올리고뉴클레오티드의 특이성을 입증하는 것이다. 이들의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 HIAP1 인트론내 그리고 잠재적으로 다수의 다른 유전자내의 Alu 서열을 명중시키고, 암세포의 사멸을 유도하며, 이는 HIAP1와 일부 다른 중요한 유전자자들의 하향 조절 결과로 인한 것일 수 있으며, 따라서 정상 세포에 매우 유독하지 않는 경우의 치료 수치의 결과일 수 있다.
암 세포는 보다 많은 Alu-함유 전사체를 가지는 것으로 보고되며, 따라서, Alu를 표적으로 하는 뉴클레오베이스 올리고머를 이용한 세포자살 유도에 대해 보다 더 민감할 수 있다. 또한, 뉴클레오베이스 올리고머 APO1 및 APO2의 사멸 효과는, Alu 서열과 HIAP1 모두를 동시에 표적으로 하는 복합 효과에 의한 가능성이 있다. 이러한 이중효과는 세포가 특정한 독성 물질에 노출되었을 경우에, NFκB 경로를 통한 HIAP1 유도 반응의 정상적인 스트레스를 저지하기 위한 효과적인 방법을 초래한다. 이러한 스트레스 반응은 암 세포의 항-세포자살 프로그램의 일부일 가능성이 높다. HIAP1 발현을 차단함으로써, 상기 항-세포자살성 스트레스 반응을 측정하고, 암 세포의 사멸을 촉진시켰다.
실시예 15: HIAP1 안티센스 올리고뉴클레오티드에 의한 세포독성 및 화학적감작성 증가
HIAP1 안티센스 뉴클레오베이스 올리고머의 SF295 세포의 화학감작성에 대한 효과를 평가하였다. 세포를 다른 3개의 안티센스 올리고뉴클레오티드(APO7, APO15및 SC APO2(대조군))중 하나로 형질감염시켰다. 올리고뉴클레오티드의 형질감염의 24 시간후, 세포를 아드리아마이신과 함께 24시간 배양하고, 그 후, WST-1 분석으로 세포생존을 조사하였다.
상기 HIAP1 올리고뉴클레오티드로 형질감염시키고, 아드리아마이신 농도 증가에 따른 처리한 SF295 세포의 WST-1 생존 곡선을 도 25에 나타낸다. HIAP1 mRNA의 감소를 초래한 2개의 올리고뉴클레오티드는, HIAP1 mRNA 수준을 저하시키지 않는 올리고뉴클레오티드로 처리한 대조군 세포에 비해, 아드리아마이신으로 처리시 생존율 감소를 보였다. 따라서, 안티센스 또는 다른 수단에 의한 HIAP1 수준 저하는, 다수의 화학치료제의 세포독성 작용에 매우 내성적인 신경아교종 세포주를 화학적으로 감작시킬 수 있다.
본 발명의 방법에 이용할 수 있는 다른 89개의 HIAP1 안티센스 서열을 표 7에 나타낸다. 인간 HIAP1과 인간 HIAP2 간에 100% 동일한 서열 또는 하나 내지 2개의 미스매치가 있는 서열을 굵은체로 표시하였다.
Figure 112006038423527-PCT00006
또한, 안티센스 뉴클레오베이스 올리고머로 사용이 적합한 인간 HIAP2를 분석하였다. 표 8에 동정한 서열을 개시한다.
Figure 112006038423527-PCT00007
미국 특허 제 6,087,173호의 표 2에 기재된 것을 포함한, 다른 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머를 이하의 표 9에 나타낸다.
Figure 112006038423527-PCT00008
본 발명의 방법에 유용한 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머의 기타 서열은 예컨대, 미국 특허 제 6,355,194호, 6,165,788호, 6,077,709호, 5,958,772호, 5,958,771호, 미국 특허출원 공개 번호 2003/0125287 A1및 2002/0137708, Carter et al., "Regulation and targeting of antiapoptotic XIAP in acute myeloid leukemia"(Leukemia advance online publication 11 September 2003, doi:10.1038/sj.leu.2403113), 및 Bilim et al., Int. J. Cancer 103:29-37(2003)에 기재되어 있는다.
기타 실시예들
본 명세서에 기재되어 있는 모든 간행물 및 특허출원은, 각각의 간행물 또는 특허출원이 특이적으로 그리고 개별적으로 원용에 의해 포함되도록 표시된 바와 동일한 범위로, 원용에 의해 본 발명에 포함된다.
본 발명은 특정한 실시예와 관련지어 설명되지만, 추가적인 변형이 가능하며, 본 발명은 본 발명의 원칙에 따라 본 발명이 속하는 기술분야에서 공지된 또는 통상적인 실시의 범위로부터 이탈되지 않으며 본 발명에 기재된 필수적인 특징들에 적용될 수 있는, 모든 변형, 용도 또는 일반적인 본 발명의 활용을 포괄하기 위한 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> AEGERA Therapeutics, Inc. et al <120> Methods and Reagents for the Treatment of Proliferative Diseases <130> 07891/039WO2 <150> 60/516,263 <151> 2003-10-30 <160> 490 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 6, 8, 12, 16 <223> n = T or U <400> 1 aaaanncnaa gnaccngca 19 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 10, 14 <223> n = T or U <400> 2 ncnagagggn ggcncagga 19 <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 7, 9, 11, 13, 19 <223> n = T or U <400> 3 cagananana ngnaacacn 19 <210> 4 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 18, 19 <223> n = T or U <400> 4 ngagagcccn nnnnnngnn 19 <210> 5 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 10, 12, 13, 14, 16, 19 <223> n = T or U <400> 5 agnangaaan annncngan 19 <210> 6 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. 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Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 11, 17, 18 <223> n = T or U <400> 9 anncaaggca ncaaagnng 19 <210> 10 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 7, 10, 11, 14, 15 <223> n = T or U <400> 10 gncaaancan naannagga 19 <210> 11 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 7, 12, 14, 17 <223> n = T or U <400> 11 aanangnaaa cngngangc 19 <210> 12 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 13, 16, 19 <223> n = T or U <400> 12 gcagaanaaa acnaanaan 19 <210> 13 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 9, 11, 12, 13 <223> n = T or U <400> 13 gaaagnaana nnnaagcag 19 <210> 14 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 9, 12, 13, 18 <223> n = T or U <400> 14 nnaccacanc anncaagnc 19 <210> 15 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 6, 9, 14, 15 <223> n = T or U <400> 15 cnaaanacna gagnncgac 19 <210> 16 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 11 <223> n = T or U <400> 16 acacgaccgc naagaaaca 19 <210> 17 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 8, 9, 11, 16 <223> n = T or U <400> 17 nanccacnna ngacanaaa 19 <210> 18 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 5, 12, 19 <223> n = T or U <400> 18 gnnanaggag cnaacaaan 19 <210> 19 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5 <223> n = T or U <400> 19 aangngaaac acaagcaac 19 <210> 20 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 5, 7, 9, 10, 17 <223> n = T or U <400> 20 acannanann aggaaancc 19 <210> 21 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 5, 11, 12, 13, 14, 16 <223> n = T or U <400> 21 cnngnccacc nnnncnaaa 19 <210> 22 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 7, 9, 10, 16 <223> n = T or U <400> 22 ancnncncnn gaaaanagg 19 <210> 23 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 11, 13, 14 <223> n = T or U <400> 23 ccnncaaaac ngnnaaaag 19 <210> 24 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 6, 12 <223> n = T or U <400> 24 angncngcag gnacacaag 19 <210> 25 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 6, 7, 12, 14, 15, 17 <223> n = T or U <400> 25 ancnannaaa cncnncnac 19 <210> 26 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 8, 14, 15 <223> n = T or U <400> 26 acaggacnac cacnnggaa 19 <210> 27 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 7, 9, 10, 13, 16 <223> n = T or U <400> 27 ngccagngnn gangcngaa 19 <210> 28 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 15, 18 <223> n = T or U <400> 28 gnanaaagaa acccngcnc 19 <210> 29 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 8, 10, 12, 15, 16 <223> n = T or U <400> 29 cgcacggnan cnccnncac 19 <210> 30 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 8, 12, 19 <223> n = T or U <400> 30 cnacagcngc angacaacn 19 <210> 31 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 7, 9, 13, 15, 16 <223> n = T or U <400> 31 gcngagncnc cananngcc 19 <210> 32 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 5, 6, 7, 10, 12, 14, 16, 17 <223> n = T or U <400> 32 anacnnnccn gngncnncc 19 <210> 33 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 7, 9, 14, 15, 16 <223> n = T or U <400> 33 ganaaancng caannnggg 19 <210> 34 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 4, 9, 13, 19 <223> n = T or U <400> 34 nngnagacng cgnggcacn 19 <210> 35 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 6, 8, 12 <223> n = T or U <400> 35 accanncngg anaccagaa 19 <210> 36 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 5, 6, 11, 12, 13, 15, 18 <223> n = T or U <400> 36 agnnnncaac nnngnacng 19 <210> 37 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 5, 7, 9, 12, 13 <223> n = T or U <400> 37 angancncng cnncccaga 19 <210> 38 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 9, 11, 13 <223> n = T or U <400> 38 aganggccng ncnaaggca 19 <210> 39 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 6, 14, 17, 19 <223> n = T or U <400> 39 agnncncaaa aganagncn 19 <210> 40 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 6, 9, 11, 13, 15 <223> n = T or U <400> 40 gngncngana nancnacaa 19 <210> 41 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 6, 8, 10, 13, 15, 17 <223> n = T or U <400> 41 ncgggnanan ggngncnga 19 <210> 42 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 7, 10, 15, 17, 19 <223> n = T or U <400> 42 cagggnnccn cgggnanan 19 <210> 43 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 6, 7, 13, 17 <223> n = T or U <400> 43 gcnncnncac aanacangg 19 <210> 44 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 8, 10, 19 <223> n = T or U <400> 44 ggccagnncn gaaaggacn 19 <210> 45 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 7, 9, 11, 12, 17, 18 <223> n = T or U <400> 45 gcnaacncnc nnggggnna 19 <210> 46 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 7, 12 <223> n = T or U <400> 46 gngnagnaga gnccagcac 19 <210> 47 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 12, 13, 16 <223> n = T or U <400> 47 aagcacngca cnnggncac 19 <210> 48 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 6, 7, 8, 9 <223> n = T or U <400> 48 nncagnnnnc caccacaac 19 <210> 49 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 13, 14 <223> n = T or U <400> 49 acgancacaa ggnncccaa 19 <210> 50 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 6, 8, 10, 11, 13 <223> n = T or U <400> 50 ncgccngngn ncngaccag 19 <210> 51 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <400> 51 ccggcccaaa acaaagaag 19 <210> 52 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 8, 9, 14, 16, 17 <223> n = T or U <400> 52 ganncacnnc gaanannaa 19 <210> 53 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 10, 18 <223> n = T or U <400> 53 nancagaacn cacagcanc 19 <210> 54 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 8, 9, 11, 12, 16, 17, 18 <223> n = T or U <400> 54 ggaagannng nngaannng 19 <210> 55 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 8, 12, 16, 17, 18 <223> n = T or U <400> 55 ncngccangg anggannnc 19 <210> 56 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 10, 14, 17, 18 <223> n = T or U <400> 56 aagnaaagan ccgngcnnc 19 <210> 57 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 6, 8, 10, 14, 16 <223> n = T or U <400> 57 cngagnanan ccangnccc 19 <210> 58 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 10, 13, 14, 16, 17 <223> n = T or U <400> 58 gcaagcngcn ccnngnnaa 19 <210> 59 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 12, 18 <223> n = T or U <400> 59 aaagcanaaa anccagcnc 19 <210> 60 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 9, 10, 11, 14, 15, 16, 18 <223> n = T or U <400> 60 gaaagcacnn nacnnnanc 19 <210> 61 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 8, 9, 14, 18, 19 <223> n = T or U <400> 61 acngggcnnc caancagnn 19 <210> 62 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 5, 6, 15, 17, 18 <223> n = T or U <400> 62 gnngnnccca agggncnnc 19 <210> 63 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 9, 14, 15, 16 <223> n = T or U <400> 63 acccnggana ccannnagc 19 <210> 64 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 4, 6, 13, 15, 16, 17 <223> n = T or U <400> 64 ngnncnaaca ganannngc 19 <210> 65 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 5, 7, 8, 10, 11, 13, 17, 18 <223> n = T or U <400> 65 nanananncn ngncccnnc 19 <210> 66 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 8, 12, 14, 15, 17, 18, 19 <223> n = T or U <400> 66 agnnaaanga ananngnnn 19 <210> 67 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 9, 14, 18 <223> n = T or U <400> 67 gacacnccnc aagngaang 19 <210> 68 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 3, 5, 9, 12, 13, 15, 16 <223> n = T or U <400> 68 nnncncagna gnncnnacc 19 <210> 69 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 6, 9, 12, 14, 15, 16, 17, 19 <223> n = T or U <400> 69 gnnagngang gngnnnncn 19 <210> 70 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 7, 9, 12, 16, 17, 19 <223> n = T or U <400> 70 aganggnanc ancaanncn 19 <210> 71 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 8, 13, 14, 15, 16 <223> n = T or U <400> 71 ngnaccanag gannnngga 19 <210> 72 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 7, 10, 12, 16, 17, 19 <223> n = T or U <400> 72 ccccanncgn anagcnncn 19 <210> 73 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 5, 6, 7, 8, 10, 11, 14, 16, 19 <223> n = T or U <400> 73 annannnncn naangnccn 19 <210> 74 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 8, 9, 10, 12, 15, 16, 19 <223> n = T or U <400> 74 caagngannn anagnngcn 19 <210> 75 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 5, 7 <223> n = T or U <400> 75 nagancngca accagaacc 19 <210> 76 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 6, 10, 13, 15, 17, 18, 19 <223> n = T or U <400> 76 cancnngcan acngncnnn 19 <210> 77 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 8, 11, 13, 14, 18 <223> n = T or U <400> 77 ccnnagcngc ncnncagna 19 <210> 78 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 6, 8, 11, 13, 14 <223> n = T or U <400> 78 aagcnncncc ncnngcagg 19 <210> 79 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 6, 8, 10, 14 <223> n = T or U <400> 79 anannncnan ccanacaga 19 <210> 80 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 6, 8 <223> n = T or U <400> 80 cnagangncc acaaggaac 19 <210> 81 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 8, 10, 11, 12, 18 <223> n = T or U <400> 81 agcacanngn nnacaagng 19 <210> 82 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 15, 16, 18 <223> n = T or U <400> 82 agcacanggg acacnngnc 19 <210> 83 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 9, 12, 16, 18 <223> n = T or U <400> 83 cnngaaagna angacngng 19 <210> 84 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 6, 8, 13, 14, 18, 19 <223> n = T or U <400> 84 ccnacnanag agnnagann 19 <210> 85 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 7, 13, 16 <223> n = T or U <400> 85 anncaancag ggnaanaag 19 <210> 86 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 8, 9, 14 <223> n = T or U <400> 86 aagncagnnc acancacac 19 <210> 87 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 13, 17 <223> n = T or U <400> 87 cagnaaaaaa aangganaa 19 <210> 88 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 6, 7, 9, 12, 14, 17 <223> n = T or U <400> 88 nncagnnana gnangangc 19 <210> 89 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 6, 7, 13, 14, 18 <223> n = T or U <400> 89 nacacnnaga aannaaanc 19 <210> 90 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 5, 7, 9, 10, 11 <223> n = T or U <400> 90 ncncnancnn nccaccagc 19 <210> 91 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 8 <223> n = T or U <400> 91 agaanccnaa aacacaaca 19 <210> 92 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 12, 16, 18, 19 <223> n = T or U <400> 92 anncgcacaa gnacgngnn 19 <210> 93 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 7, 11, 13, 14, 18 <223> n = T or U <400> 93 ngncagnaca ngnnggcnc 19 <210> 94 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 7, 9, 10, 11, 12, 18, 19 <223> n = T or U <400> 94 acanagngnn nngccacnn 19 <210> 95 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 4, 7, 9, 13, 19 <223> n = T or U <400> 95 cnnngancng gcncagacn 19 <210> 96 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 10, 11, 12, 18, 19 <223> n = T or U <400> 96 gaaaccacan nnaacagnn 19 <210> 97 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 7, 10, 11, 18 <223> n = T or U <400> 97 ggnancnccn ncaccagna 19 <210> 98 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 9, 10, 13, 15, 17 <223> n = T or U <400> 98 angaccacnn ccncnangg 19 <210> 99 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 11, 12, 13, 15 <223> n = T or U <400> 99 ganaccagaa nnngn 15 <210> 100 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 4, 5, 13 <223> n = T or U <400> 100 ngnnnaagac canag 15 <210> 101 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 7, 9, 13, 16 <223> n = T or U <400> 101 gcngagncnc canacngcc 19 <210> 102 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 6, 8, 15, 19 <223> n = T or U <400> 102 ggcncncngc ccacngaan 19 <210> 103 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 7, 9, 10, 16 <223> n = T or U <400> 103 ancnncncnn gaaaanagg 19 <210> 104 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 8, 9, 12, 13, 14, 19 <223> n = T or U <400> 104 cagagannnc annnaacgn 19 <210> 105 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 9, 10, 13, 14, 16 <223> n = T or U <400> 105 ancnngacnn gannanagg 19 <210> 106 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 10, 11, 13, 15, 16, 18 <223> n = T or U <400> 106 gganaaaagn ncncnncna 19 <210> 107 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 8, 10, 12, 15, 16 <223> n = T or U <400> 107 cgcacggnan cnccnncac 19 <210> 108 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 7, 13, 16, 17 <223> n = T or U <400> 108 cnacgcncgc cancgnnca 19 <210> 109 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 5, 8, 10, 12 <223> n = T or U <400> 109 cacnnccncn anggcacgc 19 <210> 110 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 8, 10, 12, 15, 16 <223> n = T or U <400> 110 cgcacccnan cnggnncac 19 <210> 111 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 7, 9, 13, 15, 16 <223> n = T or U <400> 111 gcngagncnc cananngcc 19 <210> 112 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 6, 7, 8, 15, 19 <223> n = T or U <400> 112 ggcncnnncg ccacngaan 19 <210> 113 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 5, 7, 11, 13, 17 <223> n = T or U <400> 113 ccgnnanacc ncngagncg 19 <210> 114 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 9, 14, 15, 16 <223> n = T or U <400> 114 gcngacacnc caannngcc 19 <210> 115 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 6, 8, 11 <223> n = T or U <400> 115 accanncngg naaccagaa 19 <210> 116 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 11, 14, 17 <223> n = T or U <400> 116 ngcccaagaa nacnagnca 19 <210> 117 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 8, 12, 13 <223> n = T or U <400> 117 accanagngg anngcagaa 19 <210> 118 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 8, 12, 14, 15 <223> n = T or U <400> 118 aagaccanag gncnnacca 19 <210> 119 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 8, 9, 11, 12, 17, 19, 20 <223> n = T or U <400> 119 ganncacnnc nncgaanann aa 22 <210> 120 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 6, 8, 12, 15, 17, 18 <223> n = T or U <400> 120 ngaaangnaa ancancnnc 19 <210> 121 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 6, 8, 9, 13, 16, 17 <223> n = T or U <400> 121 ganncngnnc ganaannaa 19 <210> 122 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 6, 11, 12, 16, 17 <223> n = T or U <400> 122 aannanaagc nncacnnag 19 <210> 123 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 7, 9, 13, 15, 16 <223> n = T or U <400> 123 gcngagncnc cananngcc 19 <210> 124 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 6, 7, 8, 15, 19 <223> n = T or U <400> 124 ggcncnnngc ccacngaan 19 <210> 125 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 6, 8, 12 <223> n = T or U <400> 125 accanncngg anaccagaa 19 <210> 126 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 8, 12, 14, 15 <223> n = T or U <400> 126 aagaccanag gncnnacca 19 <210> 127 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 7, 9, 10, 16 <223> n = T or U <400> 127 ancnncncnn gaaaanagg 19 <210> 128 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 10, 11, 13, 15, 16, 18 <223> n = T or U <400> 128 gganaaaagn ncncnncna 19 <210> 129 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 7, 10, 11, 18 <223> n = T or U <400> 129 ggnancnccn ncaccagna 19 <210> 130 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 9, 10, 13, 15, 17 <223> n = T or U <400> 130 angaccacnn ccncnangg 19 <210> 131 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 7, 15, 16, 17, 19 <223> n = T or U <400> 131 ncngganacc agaannngn 19 <210> 132 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 4, 5, 13, 17, 19 <223> n = T or U <400> 132 ngnnnaagac canaggncn 19 <210> 133 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 5, 8, 13, 15, 17 <223> n = T or U <400> 133 gggnnccncg ggnanangg 19 <210> 134 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 7, 12, 15, 16 <223> n = T or U <400> 134 ggnananggc gnccnnggg 19 <210> 135 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 8, 9, 14, 16, 17 <223> n = T or U <400> 135 ganncacnnc gaanannaa 19 <210> 136 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 6, 11, 12, 16, 17 <223> n = T or U <400> 136 aannanaacg nncacnnag 19 <210> 137 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 7, 9, 10, 16 <223> n = T or U <400> 137 ancnncncnn gaaaanagg 19 <210> 138 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 7, 9, 13, 15, 16 <223> n = T or U <400> 138 gcngagncnc cananngcc 19 <210> 139 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 8, 9, 14, 16, 17 <223> n = T or U <400> 139 ganncacnnc gaanannaa 19 <210> 140 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 11, 14, 17 <223> n = T or U <400> 140 ngcccaagaa nacnagnca 19 <210> 141 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 7, 9, 13, 15, 16 <223> n = T or U <400> 141 gcngagncnc cananngcc 19 <210> 142 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 6, 7, 8, 15, 19 <223> n = T or U <400> 142 ggcncnnngc ccacngaan 19 <210> 143 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 7, 10, 11, 18 <223> n = T or U <400> 143 ggnancnccn ncaccagna 19 <210> 144 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 9, 10, 13, 15, 17 <223> n = T or U <400> 144 angaccacnn ccncnangg 19 <210> 145 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 9, 11, 12, 13 <223> n = T or U <400> 145 gaaagnaana nnnaagcag 19 <210> 146 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 8, 9, 11, 14 <223> n = T or U <400> 146 gagcaannna naangaaag 19 <210> 147 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 15, 16, 18 <223> n = T or U <400> 147 accgcnaaga aacanncna 19 <210> 148 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 14 <223> n = T or U <400> 148 ancnnacaaa gaanccgca 19 <210> 149 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 8, 9, 11, 16 <223> n = T or U <400> 149 nanccacnna ngacanaaa 19 <210> 150 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 9, 11, 12, 17, 19 <223> n = T or U <400> 150 aaanacagna nncaccnan 19 <210> 151 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 8, 12, 17, 18, 19 <223> n = T or U <400> 151 ngcacccngg anaccannn 19 <210> 152 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 3, 8, 12, 19 <223> n = T or U <400> 152 nnnaccanag gncccagcn 19 <210> 153 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 7, 9, 13, 16 <223> n = T or U <400> 153 gcngagncnc canacngcc 19 <210> 154 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 6, 8, 15, 19 <223> n = T or U <400> 154 ggcncncngc ccacngaan 19 <210> 155 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 6, 7, 12, 14, 16, 17, 19 <223> n = T or U <400> 155 annggnncca angngnncn 19 <210> 156 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 4, 6, 8, 13, 14, 17, 18 <223> n = T or U <400> 156 ncnngngnaa ccnnggnna 19 <210> 157 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 8, 14, 15 <223> n = T or U <400> 157 acaggacnac cacnnggaa 19 <210> 158 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 6, 12 <223> n = T or U <400> 158 aaggnncacc ancaggaca 19 <210> 159 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 12, 13, 16 <223> n = T or U <400> 159 aagcacngca cnnggncac 19 <210> 160 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 7, 8, 13 <223> n = T or U <400> 160 cacnggnnga ccncacaag 19 <210> 161 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 7, 11, 13, 14, 18 <223> n = T or U <400> 161 ngncagnaca ngnnggcnc 19 <210> 162 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 6, 7, 9, 13, 17, 19 <223> n = T or U <400> 162 cnaggnngnc cangacngn 19 <210> 163 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 4, 5, 6, 12, 19 <223> n = T or U <400> 163 ncannngagc cngggaggn 19 <210> 164 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 8 <223> n = T or U <400> 164 cggaggcnga ggcaggaga 19 <210> 165 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 8, 11, 19 <223> n = T or U <400> 165 ggngnggngg nacgcgccn 19 <210> 166 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 16 <223> n = T or U <400> 166 acccangcac aaaacnacc 19 <210> 167 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 7, 13 <223> n = T or U <400> 167 agaangngcc agnaggaga 19 <210> 168 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 12, 13, 18, 19 <223> n = T or U <400> 168 ncncacagac gnngggcnn 19 <210> 169 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 8, 9, 10, 18 <223> n = T or U <400> 169 ccagnggnnn gcaagcang 19 <210> 170 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 6, 7, 10 <223> n = T or U <400> 170 gaaannnagn ggccaggaa 19 <210> 171 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 13, 14 <223> n = T or U <400> 171 agaaanacac aanngcacc 19 <210> 172 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 4, 7, 11, 12, 13, 14 <223> n = T or U <400> 172 nacnganaca nnnnaagga 19 <210> 173 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 8, 14, 15, 17 <223> n = T or U <400> 173 nncaacangg aganncnaa 19 <210> 174 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 4, 6, 8, 12, 13, 14, 19 <223> n = T or U <400> 174 annncnangc annnagagn 19 <210> 175 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 6, 11 <223> n = T or U <400> 175 aanacnaggc ngaaaagcc 19 <210> 176 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 5, 6, 9, 10, 11, 12, 14, 18, 19 <223> n = T or U <400> 176 ggcnnngcnn nnancagnn 19 <210> 177 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 11, 14, 15, 16, 17, 19 <223> n = T or U <400> 177 ncnagggagg nagnnnngn 19 <210> 178 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 16 <223> n = T or U <400> 178 gggaagaaaa gggacnagc 19 <210> 179 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 6, 9, 14, 18 <223> n = T or U <400> 179 gnncanaang aaangaang 19 <210> 180 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 8, 10, 13, 15, 16, 17, 18 <223> n = T or U <400> 180 anaagaanan gcngnnnnc 19 <210> 181 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 9, 11, 12, 18, 19 <223> n = T or U <400> 181 nncaaacgng nnggcgcnn 19 <210> 182 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 9, 12, 14, 15, 16 <223> n = T or U <400> 182 angacaagnc gnannncag 19 <210> 183 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 9, 13, 19 <223> n = T or U <400> 183 aagnggaana cgnagacan 19 <210> 184 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <400> 184 agacaggaac cccagcagg 19 <210> 185 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 11, 14, 15, 16, 18 <223> n = T or U <400> 185 cgagcaagac nccnnncng 19 <210> 186 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 8 <223> n = T or U <400> 186 agngnaanag aaaccagca 19 <210> 187 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 6, 7, 9, 12, 13 <223> n = T or U <400> 187 ngaccnngnc anncacacc 19 <210> 188 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 4, 11 <223> n = T or U <400> 188 nnanccagca ncaggccac 19 <210> 189 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 7, 10, 12, 13, 14, 15 <223> n = T or U <400> 189 acngncnccn cnnnnccag 19 <210> 190 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 3, 4, 6, 9, 10, 11, 12, 16 <223> n = T or U <400> 190 nnnnangcnn nncagnagg 19 <210> 191 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 8, 14, 19 <223> n = T or U <400> 191 acgaancngc agcnaggan 19 <210> 192 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 6, 8, 9, 17, 18, 19 <223> n = T or U <400> 192 caagnngnna acggaannn 19 <210> 193 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 6, 13, 17, 18 <223> n = T or U <400> 193 naggcngaga ggnagcnnc 19 <210> 194 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 6 <223> n = T or U <400> 194 gnnacngaag aaggaaaag 19 <210> 195 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 8, 10, 12, 17, 19 <223> n = T or U <400> 195 gaangagngn gnggaangn 19 <210> 196 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 4, 5, 6, 8, 10 <223> n = T or U <400> 196 ngnnnncngn acccggaag 19 <210> 197 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 13, 15 <223> n = T or U <400> 197 gagccacgga aananccac 19 <210> 198 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 4, 11, 12, 13, 17 <223> n = T or U <400> 198 nganggagag nnngaanaa 19 <210> 199 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 5, 8, 10, 15, 16, 17 <223> n = T or U <400> 199 gannngcncn ggagnnnac 19 <210> 200 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19 <223> n = T or U <400> 200 ggcagaaaan ncnngannn 19 <210> 201 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 10, 17, 18 <223> n = T or U <400> 201 ggacaggggn aggaacnnc 19 <210> 202 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 5, 6, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18 <223> n = T or U <400> 202 gcannnncgn nanncanng 19 <210> 203 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 9, 13, 16, 18 <223> n = T or U <400> 203 cngaaaagna agnaancng 19 <210> 204 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 14, 18 <223> n = T or U <400> 204 ggcgacagaa aagncaang 19 <210> 205 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 7, 9, 11, 17 <223> n = T or U <400> 205 ccacncngnc nccaggncc 19 <210> 206 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <400> 206 ccaccacagg caaagcaag 19 <210> 207 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 6, 7, 13, 14, 17 <223> n = T or U <400> 207 nncggnnccc aanngcnca 19 <210> 208 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 4, 9, 14, 15, 17 <223> n = T or U <400> 208 nncngacana gcannancc 19 <210> 209 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 9, 11, 13, 18 <223> n = T or U <400> 209 ngggaaaang ncncaggng 19 <210> 210 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 7, 13, 14, 15 <223> n = T or U <400> 210 nanaaanggg cannnggga 19 <210> 211 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 5, 6, 12, 15, 16, 17, 18 <223> n = T or U <400> 211 ngncnngaag cngannnnc 19 <210> 212 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 8, 10, 12, 14, 15 <223> n = T or U <400> 212 gaaacngngn ancnngaag 19 <210> 213 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 5, 9, 12, 17, 18 <223> n = T or U <400> 213 ngncngcang cncaganna 19 <210> 214 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 6, 7, 8, 9, 19 <223> n = T or U <400> 214 gaangnnnna aagcgggcn 19 <210> 215 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 15, 16 <223> n = T or U <400> 215 cacnagaggg ccagnnaaa 19 <210> 216 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 8, 15, 18 <223> n = T or U <400> 216 ccgcacnngc aagcngcnc 19 <210> 217 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 6, 10, 12, 13 <223> n = T or U <400> 217 cancancacn gnnacccac 19 <210> 218 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7 <223> n = T or U <400> 218 ccaccancac agcaaaagc 19 <210> 219 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 7, 8, 18 <223> n = T or U <400> 219 nccaganncc caacaccng 19 <210> 220 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 9, 12, 14 <223> n = T or U <400> 220 cccangganc ancnccaga 19 <210> 221 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 8, 13, 15, 16 <223> n = T or U <400> 221 aaccacnngg cangnngaa 19 <210> 222 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 8, 15, 16 <223> n = T or U <400> 222 caagnacnca caccnngga 19 <210> 223 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 8, 9, 10, 13, 14, 16, 17, 19 <223> n = T or U <400> 223 ccngnccnnn aanncnnan 19 <210> 224 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 6, 7, 14, 19 <223> n = T or U <400> 224 ngaacnngac ggangaacn 19 <210> 225 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 5, 11, 15, 19 <223> n = T or U <400> 225 nagangaggg naacnggcn 19 <210> 226 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 5, 12, 14, 15 <223> n = T or U <400> 226 ngganagcag cngnncaag 19 <210> 227 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 5, 6, 9, 11, 14, 19 <223> n = T or U <400> 227 cannnncanc nccngggcn 19 <210> 228 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 5, 8, 9, 12, 16, 18 <223> n = T or U <400> 228 ngganaanng angacncng 19 <210> 229 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 7, 13, 14 <223> n = T or U <400> 229 gncnncncca ggnncaaaa 19 <210> 230 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 4, 7, 10, 13, 14, 18 <223> n = T or U <400> 230 nanncancan ganngcanc 19 <210> 231 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 5, 17, 18 <223> n = T or U <400> 231 cannnccacg gcagcanna 19 <210> 232 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 8, 10, 13 <223> n = T or U <400> 232 ccaggcnncn acnaaagcc 19 <210> 233 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 16 <223> n = T or U <400> 233 gcnaggannn nncncngaa 19 <210> 234 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 5, 8, 9, 11, 13, 18, 19 <223> n = T or U <400> 234 ncnanaannc ncnccagnn 19 <210> 235 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 9, 12, 13, 17 <223> n = T or U <400> 235 acacaaganc anngacnag 19 <210> 236 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 7, 8, 12, 16, 18 <223> n = T or U <400> 236 ncngcannga gnaagncna 19 <210> 237 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 9, 10, 12, 13, 14, 17, 19 <223> n = T or U <400> 237 cncnncccnn annncancn 19 <210> 238 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 4, 8, 9, 12, 14, 15, 16, 18 <223> n = T or U <400> 238 nccncagnng cncnnncnc 19 <210> 239 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 6, 8, 10, 11, 13, 14 <223> n = T or U <400> 239 gccanncnan ncnnccgga 19 <210> 240 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 8, 10, 11, 19 <223> n = T or U <400> 240 agncaaangn ngaaaaagn 19 <210> 241 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 8, 13, 14 <223> n = T or U <400> 241 ccagganngg aannacaca 19 <210> 242 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 11, 12, 15 <223> n = T or U <400> 242 annccggcag nnagnagac 19 <210> 243 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 6, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18 <223> n = T or U <400> 243 naacancang nncnngnnc 19 <210> 244 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 6, 8, 10, 11, 13, 15, 16, 17 <223> n = T or U <400> 244 gncngngncn ncngnnnaa 19 <210> 245 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 4, 6, 7, 10, 11, 13 <223> n = T or U <400> 245 nncncnngcn ngnaaagac 19 <210> 246 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 7, 10, 12, 16 <223> n = T or U <400> 246 cnaaaancgn ancaancag 19 <210> 247 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 9, 11, 12, 13, 16, 17, 18, 19 <223> n = T or U <400> 247 ggcngcaana nnnccnnnn 19 <210> 248 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 7, 8, 10, 14, 19 <223> n = T or U <400> 248 gagagnnncn gaanacagn 19 <210> 249 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 7, 12, 13, 15, 16 <223> n = T or U <400> 249 acagcnncag cnncnngca 19 <210> 250 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 8, 11, 14, 16 <223> n = T or U <400> 250 aaanaaangc ncananaac 19 <210> 251 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 9, 10, 12, 14 <223> n = T or U <400> 251 gaaacancnn cngngggaa 19 <210> 252 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 5, 6, 11, 14, 18 <223> n = T or U <400> 252 gnncnnccac nggnaganc 19 <210> 253 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 5, 6, 8, 11, 13 <223> n = T or U <400> 253 cnncnngnag ncnccgcaa 19 <210> 254 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 4, 8, 15, 16, 17 <223> n = T or U <400> 254 nngnccanac acacnnnac 19 <210> 255 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 8, 9, 14 <223> n = T or U <400> 255 aaccaaanna gganaaaag 19 <210> 256 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 8, 10, 13, 14, 15, 19 <223> n = T or U <400> 256 angnncanan ggnnnagan 19 <210> 257 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 5, 6, 7, 8, 11, 12, 16, 17 <223> n = T or U <400> 257 naagnnnnac nncacnnac 19 <210> 258 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 11, 13, 14, 17 <223> n = T or U <400> 258 angnncccgg nannagnac 19 <210> 259 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 10, 13, 14, 16, 18, 19 <223> n = T or U <400> 259 gggcncaagn aanncncnn 19 <210> 260 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 9, 13, 14 <223> n = T or U <400> 260 gcccaggang ganncaaac 19 <210> 261 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. DNA/RNA hybrid. <400> 261 gagaagatga ctggtaaca 19 <210> 262 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. DNA/RNA hybrid <221> misc_feature <222> 1, 17, 18 <223> n = T or U <400> 262 ngtgctattc tgtgaann 18 <210> 263 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 263 tctgcttcaa ggagctggaa 20 <210> 264 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 264 gaaaggaaag cgcaaccg 18 <210> 265 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 265 agccagatga cgaccccata gaggaacata 30 <210> 266 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 266 tggagatgat ccatgggttc a 21 <210> 267 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 267 gaactcctgt cctttaattc ttatcaagt 29 <210> 268 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 268 ctcacacctt ggaaaccact tggcatg 27 <210> 269 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 269 ggtgataaag taaagtgctt tcactgt 27 <210> 270 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 270 tcagtagttc ttaccagaca ctcctcaa 28 <210> 271 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 271 caacatgcta aatggtatcc agggtgcaaa tatc 34 <210> 272 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 272 gaaggtgaag gtcggagtc 19 <210> 273 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 273 gaagatggtg atgggattc 19 <210> 274 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 274 caagcttccc gttctcagcc 20 <210> 275 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase is part of a deoxyribonucleotide or ribonucleotide. <400> 275 cagagatttc atttaacgu 19 <210> 276 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a deoxyribonucleotide or ribonucleotide <400> 276 cuacgctcgc catcgtuca 19 <210> 277 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase is part of a deoxyribonucleotide or ribonucleotide <400> 277 ugcccaagaa tactaguca 19 <210> 278 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 7, 9, 10, 16 <223> n = T or U <400> 278 ancnncncnn gaaaanagg 19 <210> 279 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 7, 9, 10, 16 <223> n = T or U <400> 279 ancnncncnn gaaaanagg 19 <210> 280 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 10, 11, 13, 15, 16, 18 <223> n = T or U <400> 280 gganaaaagn ncncnncna 19 <210> 281 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 7, 9, 13, 15, 16 <223> n = T or U <400> 281 gcngagncnc cananngcc 19 <210> 282 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 7, 9, 13, 15, 16 <223> n = T or U <400> 282 gcngagncnc cananngcc 19 <210> 283 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 6, 7, 8, 15, 19 <223> n = T or U <400> 283 ggcncnnngc ccacngaan 19 <210> 284 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 6, 8, 12 <223> n = T or U <400> 284 accanncngg anaccagaa 19 <210> 285 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 6, 8, 12 <223> n = T or U <400> 285 accanncngg anaccagaa 19 <210> 286 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 8, 12, 14, 15 <223> n = T or U <400> 286 aagaccanag gncnnacca 19 <210> 287 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 5, 8, 13, 15, 17 <223> n = T or U <400> 287 gggnnccncg ggnanangg 19 <210> 288 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 7, 12, 15, 16 <223> n = T or U <400> 288 ggnananggc gnccnnggg 19 <210> 289 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 7, 10, 11, 18 <223> n = T or U <400> 289 ggnancnccn ncaccagna 19 <210> 290 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 9, 10, 13, 15, 17 <223> n = T or U <400> 290 angaccacnn ccncnangg 19 <210> 291 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 8, 9, 14, 16, 17 <223> n = T or U <400> 291 ganncacnnc gaanannaa 19 <210> 292 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 6, 11, 12, 16, 17 <223> n = T or U <400> 292 aannanaacg nncacnnag 19 <210> 293 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 293 ggtgataaag taaagtgctt tcactgt 27 <210> 294 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 294 caacatgcta aatggttcca gggtgcaaat atc 33 <210> 295 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 295 tcagtagttc ttaccagaca ctcctcaa 28 <210> 296 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. DNA/RNA hybrid. <400> 296 uaagctgttc tatgtguuc 19 <210> 297 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 297 aagggcggcg gagtgagac 19 <210> 298 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 298 agaggacgga gtcggaggc 19 <210> 299 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. <400> 299 cggagcgtga ggatggaga 19 <210> 300 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 18 <223> n = T or U <400> 300 agcaaggaca agcccagnc 19 <210> 301 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 9, 12 <223> n = T or U <400> 301 ngnaaaccng cngcccaga 19 <210> 302 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 9, 10, 11, 12, 15, 18, 19 <223> n = T or U <400> 302 agaagncgnn nnccnccnn 19 <210> 303 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 8, 13, 17 <223> n = T or U <400> 303 ccgagannag acnaagncc 19 <210> 304 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 5, 6, 9, 10, 11, 13, 14, 15 <223> n = T or U <400> 304 acnnnnccnn nannnccac 19 <210> 305 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 14, 17, 19 <223> n = T or U <400> 305 ncccaaacac aggnacnan 19 <210> 306 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 6, 13 <223> n = T or U <400> 306 canncncagc ggnaacagc 19 <210> 307 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 8, 9, 11, 14, 17 <223> n = T or U <400> 307 accancannc ncanccnca 19 <210> 308 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 10, 11, 18 <223> n = T or U <400> 308 aangnaaccn ncaaccanc 19 <210> 309 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 3, 5, 7, 8, 11, 15, 17 <223> n = T or U <400> 309 nnngnannca ncacngnc 18 <210> 310 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 6, 8, 11, 12 <223> n = T or U <400> 310 ncacancnca nnaccaac 18 <210> 311 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6 <223> n = T or U <400> 311 ccaggnggca ggagaaaca 19 <210> 312 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 8, 9, 13, 16, 17, 18 <223> n = T or U <400> 312 ngcagacnnc aangcnnng 19 <210> 313 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 9, 13, 15, 19 <223> n = T or U <400> 313 naagcaagnc acngnggcn 19 <210> 314 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 6, 10, 13, 16 <223> n = T or U <400> 314 cngagncgan aanacnagc 19 <210> 315 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 9, 10, 13 <223> n = T or U <400> 315 acnagccann agnaaagag 19 <210> 316 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 15, 16, 18 <223> n = T or U <400> 316 caacagcaga gaccnngnc 19 <210> 317 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 7, 11, 12 <223> n = T or U <400> 317 anagcanacc nngaaccag 19 <210> 318 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 7, 12, 17 <223> n = T or U <400> 318 cancngnagg cnaagangg 19 <210> 319 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 11, 16, 18 <223> n = T or U <400> 319 agnnaccaga ngccancng 19 <210> 320 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 8, 10, 13, 16 <223> n = T or U <400> 320 aancnacncn ganagngga 19 <210> 321 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 4, 6, 17 <223> n = T or U <400> 321 gnnncngaag ccaacanca 19 <210> 322 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 6, 7, 9, 14, 17 <223> n = T or U <400> 322 ncaacnnanc accnccnga 19 <210> 323 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 12, 13, 15 <223> n = T or U <400> 323 aagaacnaac anngnagag 19 <210> 324 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 13, 16 <223> n = T or U <400> 324 gnagacaaca ggngcngca 19 <210> 325 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 7, 9, 11, 14, 15, 17 <223> n = T or U <400> 325 angnccncng naannangg 19 <210> 326 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 4, 5, 9, 16 <223> n = T or U <400> 326 nacnnggcna gaacangga 19 <210> 327 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 9, 13, 15, 16 <223> n = T or U <400> 327 gaagcaacnc aangnnaag 19 <210> 328 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 3, 6, 8, 9, 10, 11, 16 <223> n = T or U <400> 328 nnnggncnnn nggacncag 19 <210> 329 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 8, 11, 18 <223> n = T or U <400> 329 ccanaganca ncaggaana 19 <210> 330 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 11, 18 <223> n = T or U <400> 330 caggacnggc naacacanc 19 <210> 331 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 3, 6, 15, 17 <223> n = T or U <400> 331 nnnaanggca ggcancncc 19 <210> 332 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 9, 15 <223> n = T or U <400> 332 nnaagccanc aggangcca 19 <210> 333 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 10, 15, 17, 19 <223> n = T or U <400> 333 gcnacagagn aagcngngn 19 <210> 334 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 12, 15, 16, 17, 18 <223> n = T or U <400> 334 cncnagggag gnagnnnng 19 <210> 335 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 13, 18, 19 <223> n = T or U <400> 335 aagaaaaggg acnagccnn 19 <210> 336 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 5, 10, 17 <223> n = T or U <400> 336 cagnncacan gacaagncg 19 <210> 337 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 7, 8, 9, 11 <223> n = T or U <400> 337 gacnccnnnc ngagacagg 19 <210> 338 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 12, 14, 17 <223> n = T or U <400> 338 anncacacca gngnaanag 19 <210> 339 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 9, 10, 11, 16, 17, 19 <223> n = T or U <400> 339 cagaagcann ngaccnngn 19 <210> 340 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7 <223> n = T or U <400> 340 ccagcancag gccacaaca 19 <210> 341 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 3, 7, 13, 15, 17 <223> n = T or U <400> 341 nnncagnagg acngncncc 19 <210> 342 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 7, 12, 18, 19 <223> n = T or U <400> 342 ngcagcnagg anacaacnn 19 <210> 343 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 10, 11, 17, 18 <223> n = T or U <400> 343 agaggnagcn nccaagnng 19 <210> 344 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 8, 12, 14, 16 <223> n = T or U <400> 344 gaagnaanga gngngngga 19 <210> 345 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 5, 6, 9, 16, 17, 18 <223> n = T or U <400> 345 ggannngang gagagnnng 19 <210> 346 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 6, 8, 11 <223> n = T or U <400> 346 gaacnncnca ncaaggcag 19 <210> 347 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 7, 9, 11, 14 <223> n = T or U <400> 347 aggnccnang nagnaaaag 19 <210> 348 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 5, 6, 7 <223> n = T or U <400> 348 caannnncca ccacaggca 19 <210> 349 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 6, 9, 10, 14, 15 <223> n = T or U <400> 349 cannanccnn cggnnccca 19 <210> 350 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 7, 9, 10, 12, 17 <223> n = T or U <400> 350 cncaggngnn cngacanag 19 <210> 351 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 8, 9, 16, 18 <223> n = T or U <400> 351 gcncaganna gaaacngng 19 <210> 352 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 6, 8, 10, 12, 16, 19 <223> n = T or U <400> 352 cngcangngn cngcangcn 19 <210> 353 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 6, 14 <223> n = T or U <400> 353 nnaacnagaa cacnagagg 19 <210> 354 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 6, 19 <223> n = T or U <400> 354 canaanaaaa acccgcacn 19 <210> 355 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6 <223> n = T or U <400> 355 caccancaca gcaaaagca 19 <210> 356 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 8, 9, 19 <223> n = T or U <400> 356 cnccagannc ccaacaccn 19 <210> 357 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 10, 11, 16, 18, 19 <223> n = T or U <400> 357 ggaaaccacn nggcangnn 19 <210> 358 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 8, 12, 18 <223> n = T or U <400> 358 gnncaagnag angagggna 19 <210> 359 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 6, 7, 10, 14, 16 <223> n = T or U <400> 359 ganaanngan gacncngca 19 <210> 360 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 5, 7, 8, 10, 16, 17 <223> n = T or U <400> 360 anggncnncn ccaggnnca 19 <210> 361 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 5, 8, 17, 19 <223> n = T or U <400> 361 gcannaanca caggggnan 19 <210> 362 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 10, 11, 12 <223> n = T or U <400> 362 naaagcccan nnccacggc 19 <210> 363 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 9, 15 <223> n = T or U <400> 363 nnaagccanc aggangcca 19 <210> 364 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 5, 6, 7, 9, 11, 16, 18 <223> n = T or U <400> 364 gannnnncnc ngaacngnc 19 <210> 365 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 7, 8, 10, 12, 17, 18 <223> n = T or U <400> 365 cnanaanncn cnccagnng 19 <210> 366 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 9, 12, 13, 17 <223> n = T or U <400> 366 acacaaganc anngacnag 19 <210> 367 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 7, 8, 12, 16, 18 <223> n = T or U <400> 367 ncngcannga gnaagncna 19 <210> 368 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 14, 15, 18 <223> n = T or U <400> 368 ncnnnnnccn cagnngcnc 19 <210> 369 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 7, 8, 10, 12, 13, 15, 16 <223> n = T or U <400> 369 gngccanncn anncnnccg 19 <210> 370 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 7, 9, 16, 17 <223> n = T or U <400> 370 gnagacnanc cagganngg 19 <210> 371 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 6, 8, 9, 12, 13, 15 <223> n = T or U <400> 371 agnncncnng cnngnaaag 19 <210> 372 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 4, 6, 10, 14, 15, 17, 19 <223> n = T or U <400> 372 ncgnancaan cagnncncn 19 <210> 373 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 9, 10, 11, 13, 17 <223> n = T or U <400> 373 gcagagagnn ncngaanac 19 <210> 374 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 7, 9, 10, 18 <223> n = T or U <400> 374 angnccngnn gcacaaana 19 <210> 375 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 9, 11, 12, 14, 16 <223> n = T or U <400> 375 cngaaacanc nncngnggg 19 <210> 376 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 11, 14, 16 <223> n = T or U <400> 376 nnncnncnng nagncnccg 19 <210> 377 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 5, 6, 7, 9, 13 <223> n = T or U <400> 377 cnncnnngnc canacacac 19 <210> 378 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 12, 14 <223> n = T or U <400> 378 ggaanaaaca cnanggaca 19 <210> 379 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 6, 9, 13 <223> n = T or U <400> 379 canacnacna gangaccac 19 <210> 380 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 8, 9, 12, 13, 15, 18 <223> n = T or U <400> 380 ngnacccnng anngnacnc 19 <210> 381 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 7, 14, 16 <223> n = T or U <400> 381 gaaangnacg aacngnacc 19 <210> 382 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 6, 7, 8, 11, 12, 14, 15, 17, 18 <223> n = T or U <400> 382 gangnnnngg nncnncnnc 19 <210> 383 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 7, 8, 10, 12, 13, 16, 17, 18 <223> n = T or U <400> 383 cnancanncn cnnagnnnc 19 <210> 384 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 10, 11, 14, 16, 17 <223> n = T or U <400> 384 acaccnggcn ncangnncc 19 <210> 385 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 14 <223> n = T or U <400> 385 gacnacaggc acanaccac 19 <210> 386 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 5, 11, 17 <223> n = T or U <400> 386 ngccncagcc ngggacnac 19 <210> 387 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 9, 10, 16, 19 <223> n = T or U <400> 387 agganggann caaacnccn 19 <210> 388 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 9, 11, 15, 18 <223> n = T or U <400> 388 gagaaangng ncccnggng 19 <210> 389 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 16, 17, 18 <223> n = T or U <400> 389 gccacaacag aagcannng 19 <210> 390 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 4, 11, 13, 14, 18 <223> n = T or U <400> 390 nncngaaaac ncnncaang 19 <210> 391 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 8, 13, 15, 19 <223> n = T or U <400> 391 cnnagcanaa agnancagn 19 <210> 392 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 9, 12, 15, 16 <223> n = T or U <400> 392 caaaaaagna cngcnnagc 19 <210> 393 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 12, 13, 15, 18, 19 <223> n = T or U <400> 393 caaganaaaa cnngnccnn 19 <210> 394 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 7, 10, 12, 13, 15 <223> n = T or U <400> 394 nancagncan gnngnaaac 19 <210> 395 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 6, 11, 13, 14, 17 <223> n = T or U <400> 395 cnaaanaacc ngnncanca 19 <210> 396 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 8, 9, 10, 11, 12, 17 <223> n = T or U <400> 396 agcacacnnn nnacacngc 19 <210> 397 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 18 <223> n = T or U <400> 397 accacnanna nncnnganc 19 <210> 398 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 3, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 15, 16, 17 <223> n = T or U <400> 398 ngnannngnn nccannncc 19 <210> 399 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 10, 12, 14, 16, 17, 18 <223> n = T or U <400> 399 acngnaaacn cnancnnng 19 <210> 400 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 7, 12, 16, 17 <223> n = T or U <400> 400 cnnaagnggg cnaaannac 19 <210> 401 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 7, 9, 12, 18 <223> n = T or U <400> 401 ccnncanang gncacacna 19 <210> 402 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 11, 13 <223> n = T or U <400> 402 ggnnacaagc nangaagcc 19 <210> 403 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 10, 12, 17 <223> n = T or U <400> 403 cnaagcaacn anagaanac 19 <210> 404 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 4, 5, 8, 9, 10, 11, 12 <223> n = T or U <400> 404 nccnngannn nncacagag 19 <210> 405 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 5, 9, 10, 18 <223> n = T or U <400> 405 anacnaacnn aaagcccng 19 <210> 406 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 5, 7, 10, 14, 16, 17, 18 <223> n = T or U <400> 406 gggnngnagn aacncnnnc 19 <210> 407 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 12, 14, 15, 16 <223> n = T or U <400> 407 nagaacacaa cncnnnggg 19 <210> 408 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 8, 9, 10, 17 <223> n = T or U <400> 408 cncngaannn ccaaganac 19 <210> 409 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 3, 6, 10, 11, 12, 14, 16 <223> n = T or U <400> 409 nnnacnggan nnancncag 19 <210> 410 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 5, 9, 15, 18 <223> n = T or U <400> 410 ngagnaggng acagngcng 19 <210> 411 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 9, 10, 11, 12, 14, 18 <223> n = T or U <400> 411 ggaggcagnn nngngcang 19 <210> 412 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 6, 7, 11, 12, 14, 17, 19 <223> n = T or U <400> 412 cnancnncca nnanacncn 19 <210> 413 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 4, 5, 6, 8, 9, 12, 14, 15, 16, 18 <223> n = T or U <400> 413 nngnnngnng cngnnngnc 19 <210> 414 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 4, 5, 6, 8 <223> n = T or U <400> 414 nccnnncnga gacaggcac 19 <210> 415 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 18 <223> n = T or U <400> 415 accagcacga gcaagacnc 19 <210> 416 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 5, 7, 10, 11 <223> n = T or U <400> 416 accnngncan ncacaccag 19 <210> 417 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 6, 7, 9, 16 <223> n = T or U <400> 417 nccagnnanc cagcancag 19 <210> 418 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 4, 5, 6, 10, 16, 18 <223> n = T or U <400> 418 gcnnnngaan aggacngnc 19 <210> 419 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 7, 9, 10, 15, 18 <223> n = T or U <400> 419 gagangncnn caacngcnc 19 <210> 420 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 6, 9, 12, 16 <223> n = T or U <400> 420 ggggnnagnc cncgangaa 19 <210> 421 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 4, 5, 9, 13, 15 <223> n = T or U <400> 421 ncanngcana acngnaggg 19 <210> 422 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 6, 12, 13, 15, 18 <223> n = T or U <400> 422 gcncnngcca anncngang 19 <210> 423 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 7, 9, 15, 18 <223> n = T or U <400> 423 acccnancnc caggnccna 19 <210> 424 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 16 <223> n = T or U <400> 424 acaggcaaag caggcnacc 19 <210> 425 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 3, 5, 10, 15, 18 <223> n = T or U <400> 425 gnncngacan agcancanc 19 <210> 426 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 8, 9, 10, 12, 19 <223> n = T or U <400> 426 cncagagnnn cnagagaan 19 <210> 427 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 5, 7, 10, 11, 17 <223> n = T or U <400> 427 angnncncan ncgagcngc 19 <210> 428 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 6, 14, 18 <223> n = T or U <400> 428 ngaacnggaa cacnagang 19 <210> 429 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 9, 14 <223> n = T or U <400> 429 gcncaggcng aacnggaac 19 <210> 430 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 7, 10, 13, 14 <223> n = T or U <400> 430 nngacancan canngcgac 19 <210> 431 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 19 <223> n = T or U <400> 431 accancacaa caaaagcan 19 <210> 432 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 6, 11, 13, 14, 16 <223> n = T or U <400> 432 ccacnnggca ngnncnacc 19 <210> 433 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 4, 6, 14 <223> n = T or U <400> 433 ncgnancaag aacncacac 19 <210> 434 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 7, 12, 13 <223> n = T or U <400> 434 ggnancngaa gnngacaac 19 <210> 435 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 3, 5, 6, 8, 13, 16, 18 <223> n = T or U <400> 435 nnncnncncc agnggnanc 19 <210> 436 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 4, 10, 17 <223> n = T or U <400> 436 nncnccaggn ccaaaanga 19 <210> 437 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 9, 10, 12 <223> n = T or U <400> 437 acagcancnn cngaagaac 19 <210> 438 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7, 9, 11, 12, 15, 18 <223> n = T or U <400> 438 cacaggngna nncancang 19 <210> 439 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 8, 10, 12, 13 <223> n = T or U <400> 439 ccaggncncn annaaagcc 19 <210> 440 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 4, 6, 11, 12, 14 <223> n = T or U <400> 440 nncncnccag nngncagga 19 <210> 441 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 8, 16, 18 <223> n = T or U <400> 441 gaagngcnga cacaananc 19 <210> 442 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 2, 3, 4, 7, 8, 10, 13, 16, 18 <223> n = T or U <400> 442 nnnnccnncn ccnccncnc 19 <210> 443 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 5, 8, 13, 14, 15, 17, 18 <223> n = T or U <400> 443 cancngangc cannncnnc 19 <210> 444 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 7, 9, 11, 12, 14, 15 <223> n = T or U <400> 444 agccanncng nncnnccga 19 <210> 445 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 7 <223> n = T or U <400> 445 ccagganagg aagcacaca 19 <210> 446 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 5, 7, 11, 15, 16, 18 <223> n = T or U <400> 446 anggnancaa ncagnncnc 19 <210> 447 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 9, 10, 11, 14, 15, 16 <223> n = T or U <400> 447 ccgcagcann nccnnnaac 19 <210> 448 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 5, 6, 7, 8, 14, 16, 17 <223> n = T or U <400> 448 cagnnnnnga agangnngg 19 <210> 449 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 11, 18 <223> n = T or U <400> 449 gngacagacc ngaaacanc 19 <210> 450 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 7, 8, 9, 11, 12 <223> n = T or U <400> 450 gggcannnnc nnagagaag 19 <210> 451 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 3, 8, 9, 12, 13, 15 <223> n = T or U <400> 451 agnacccnng annanaccc 19 <210> 452 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 5, 7, 16 <223> n = T or U <400> 452 gaaangnacg aacagnacc 19 <210> 453 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 1, 9, 12, 15, 16 <223> n = T or U <400> 453 ngaaaaacnc anaannccc 19 <210> 454 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 4, 6, 7, 8, 9 <223> n = T or U <400> 454 ccancnnnnc agaaacaag 19 <210> 455 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 4, 7, 8, 10, 12, 17, 18 <223> n = T or U <400> 455 cnanaanncn cnccagnng 19 <210> 456 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 6, 7, 11, 17 <223> n = T or U <400> 456 cncccnnagg nacacanac 19 <210> 457 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 9, 15, 18 <223> n = T or U <400> 457 acaagcagng acacnacnc 19 <210> 458 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 2, 6, 9, 14, 17 <223> n = T or U <400> 458 gnaacnccng aaangangc 19 <210> 459 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 8, 13, 17 <223> n = T or U <400> 459 caacaaancc agnaacncc 19 <210> 460 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens. Each nucleobase may be part of a ribonucleotide, deoxyribonucleotide, or nucleotide analog <221> misc_feature <222> 6, 10, 12, 15 <223> n = T or U <400> 460 caccanaacn cngangaac 19 <210> 461 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 1, 7, 8, 10, 16, 17, 18, 19 <223> n = A,T,C or G <400> 461 naggacnngn ccaccnnnnc 20 <210> 462 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 1, 2, 8, 14, 15, 17 <223> n = A,T,C or G <400> 462 nngaaaanag gacnngncca 20 <210> 463 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 1, 3, 4, 6, 8, 9, 15 <223> n = A,T,C or G <400> 463 ncnncncnng aaaanaggac 20 <210> 464 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 3, 5, 6, 8, 10, 11, 17 <223> n = A,T,C or G <400> 464 cancnncncn ngaaaanagg 20 <210> 465 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 2, 5, 7, 8, 10, 12, 13, 19 <223> n = A,T,C or G <400> 465 gncancnncn cnngaaaana 20 <210> 466 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 4, 7, 9, 10, 12, 14, 15 <223> n = A,T,C or G <400> 466 aagncancnn cncnngaaaa 20 <210> 467 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 6, 9, 11, 12, 14, 16, 17 <223> n = A,T,C or G <400> 467 aaaagncanc nncncnngaa 20 <210> 468 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 1, 2, 8, 11, 13, 14, 16, 18, 19 <223> n = A,T,C or G <400> 468 nnaaaagnca ncnncncnng 20 <210> 469 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 1, 3, 4, 10, 13, 15, 16, 18, 20 <223> n = A,T,C or G <400> 469 ngnnaaaagn cancnncncn 20 <210> 470 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 3, 5, 6, 12, 15, 17, 18, 20 <223> n = A,T,C or G <400> 470 acngnnaaaa gncancnncn 20 <210> 471 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 5, 7, 8, 14, 17, 19, 20 <223> n = A,T,C or G <400> 471 aaacngnnaa aagncancnn 20 <210> 472 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 7, 9, 10, 16, 19 <223> n = A,T,C or G <400> 472 caaaacngnn aaaagncanc 20 <210> 473 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 1, 2, 9, 11, 12, 18 <223> n = A,T,C or G <400> 473 nncaaaacng nnaaaagnca 20 <210> 474 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 3, 5, 7, 13 <223> n = A,T,C or G <400> 474 gangncngca ggnacacaag 20 <210> 475 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 1, 10, 11, 12, 13, 14, 17, 19 <223> n = A,T,C or G <400> 475 nagcaaaagn nnnnaancna 20 <210> 476 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 4, 11 <223> n = A,T,C or G <400> 476 gcangacaac naaagcaccg 20 <210> 477 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 3, 5, 10, 11, 12, 18 <223> n = A,T,C or G <400> 477 aancngcaan nngggganac 20 <210> 478 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 1, 2, 4, 7, 13, 14, 16, 20 <223> n = A,T,C or G <400> 478 nngnacngac canncnggan 20 <210> 479 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 1, 3, 7, 9, 11, 13, 18 <223> n = A,T,C or G <400> 479 ncngcangng ncncagangg 20 <210> 480 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 5, 9, 17, 18 <223> n = A,T,C or G <400> 480 acaanacang gcagggnncc 20 <210> 481 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 1, 5, 8, 10, 15, 16, 20 <223> n = A,T,C or G <400> 481 ngccnacnan agagnnagan 20 <210> 482 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 1, 4, 9, 10, 14, 17, 20 <223> n = A,T,C or G <400> 482 naanggaann caanccngan 20 <210> 483 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 5, 13, 18, 20 <223> n = A,T,C or G <400> 483 caacnaaaac acngccangn 20 <210> 484 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 1, 3, 6, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 18, 19 <223> n = A,T,C or G <400> 484 nangangcnn cnnanncnna 20 <210> 485 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 2, 3, 4, 6, 7, 13, 15, 17 <223> n = A,T,C or G <400> 485 annngnnaag ccnancngaa 20 <210> 486 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 1, 11, 19, 20 <223> n = A,T,C or G <400> 486 nccaccagca nggaacaann 20 <210> 487 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 7, 16, 19 <223> n = A,T,C or G <400> 487 agaaaangga cagaanccna 20 <210> 488 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 2, 4, 7, 8, 12, 17, 18, 19 <223> n = A,T,C or G <400> 488 cnancannaa anacgcnnnc 20 <210> 489 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 1, 3, 4, 12, 16, 19, 20 <223> n = A,T,C or G <400> 489 nannaacaac anacanacnn 20 <210> 490 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> based on Homo sapiens <221> misc_feature <222> 3, 4, 8, 9, 12, 15, 17, 18 <223> n = A,T,C or G <400> 490 ggnnaggnna cngangnnag 20

Claims (85)

  1. (i) 8 내지 30개의 뉴클레오베이스로 이루어진 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머 및 (ii) 화학치료제를 증식성 질환자를 치료하기에 충분한 총 양으로 투여하는 단계를 포함하는 증식성 질환자의 치료 방법.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머 및 상기 화학치료제는 서로 28일 이내에 투여되는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머 및 상기 화학치료제는 서로 24시간 이내에 투여되는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  4. 제 3항에 있어서, 상기 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머 및 상기 화학치료제는 서로 1시간 이내에 투여되는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  5. 제 4항에 있어서, 상기 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머 및 상기 화학치료제는 동시에 투여되는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  6. 제 1항 내지 5항중 어느 한항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 서열번호 1-99, 143, 147, 151, 163- 260, 287, 289 및 300-460으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 서열내의 8개 이상의 연속적인 뉴클레오베이스를 포함하는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  7. 제 6항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 서열번호 97, 98, 99, 143, 147, 151, 287, 289 및 300-460으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 서열내의 8개 이상의 연속적인 뉴클레오베이스를 포함하는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  8. 제 7항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 서열번호 97, 98, 99, 143, 147, 151, 287, 289 및 300-460으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 서열로 필수적으로 이루어진 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  9. 제 8항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 서열번호 97, 98, 99, 143, 147, 151, 287, 289 및 300-460으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  10. 제 1항 내지 9항중 어느 한항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 올 리고뉴클레오티드인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  11. 제 10항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 적어도 하나의 변형된 결합을 포함하는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  12. 제 11항에 있어서, 상기 변형된 결합은 포스포로티오에이트(phosphorothioate), 메틸포스포네이트(methylphosphonate), 포스포트리에스테르(phosphotriester), 포스포로디티오에이트(phosphorodithioate) 및 포스포셀레네이트(phosphoselenate) 결합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  13. 제 1항 내지 9항중 어느 한항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 적어도 하나의 변형된 당 모이어티를 포함하는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  14. 제 13항에 있어서, 상기 변형된 당 모이어티는 2'-O-메틸기 또는 2'-O-메톡시에틸기인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  15. 제 1항 내지 9항중 어느 한항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오베이스를 포함하는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환 자의 치료 방법.
  16. 제 15항에 있어서, 상기 변형된 뉴클레오베이스는 5-메틸 시토신인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  17. 제 1항 내지 9항중 어느 한항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 키메라 뉴클레오베이스 올리고머인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  18. 제 17항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 포스포로티오에이트 결합에 의해 서로 연결된 DNA 잔기들을 포함하며, 상기 DNA 잔기들의 양쪽에 적어도 하나의 2'-O-메틸 또는 2'-O-메톡시에틸 RNA 잔기가 측면으로 위치된 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  19. 제 18항에 있어서, 상기 DNA 잔기들의 양쪽에 적어도 3개의 2'-O-메틸 또는 2'-O-메톡시에틸 RNA 잔기가 측면으로 위치된 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  20. 제 19항에 있어서, 상기 DNA 잔기들의 양쪽에 적어도 4개의 2'-O-메틸 또는 2'-O-메톡시에틸 RNA 잔기가 측면으로 위치된 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  21. 제 18항에 있어서, 상기 RNA 잔기들이 포스포로티오에이트 결합들에 의해 서로 연결되며, 상기 RNA 잔기들은 포스포로티오에이트 결합들에 의해 DNA 잔기와 연결되는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  22. 제 18항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 포스포디에스테르 결합들에 의해 연결된 DNA 잔기들을 포함하며, 상기 DNA 잔기들의 양쪽에는 포스포로티오에이트 결합에 의해 서로 연결된 적어도 2개의 2'-O-메틸 또는 2'-O-메톡시에틸 RNA 잔기들이 측면으로 위치된 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  23. 제 22항에 있어서, 상기 DNA 잔기의 양쪽에는 적어도 3개의 2'-O-메틸 또는 2'-O-메톡시에틸 RNA 잔기들이 측면으로 위치된 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  24. 제 1항 내지 5항중 어느 한항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 양쪽에 4개의 2'-O-메틸 또는 2'-O-메톡시에틸 RNA 잔기들이 측면으로 위치한 11개의 DNA 잔기들을 포함하며, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 5'-AUUGGTTCCAATGTGUUCU-3'(서열번호 155); 5'-ACACGACCGCTAAGAAACA-3'(서열번호 16); 5'-ACAGGACTACCACTTGGAA-3'(서열번호 157); 5'-UGCCAGTGTTGATGCUGAA-3'(서열번호 27); 5'-GCUGAGTCTCCATATUGCC-3'(서열번호 141); 5'-UCGGGTATATGGTGTCUGA-3'(서열번호 41); 5'-AAGCACTGCACTTGGUCAC-3'(서열번호 47); 5'-CCGGCCCAAAACAAAGAAG-3'(서열번호 51); 5'-ACCCTGGATACCATTUAGC-3'(서열번호 63); 5'-UGUCAGTACATGTTGGCUC-3'(서열번호 161); 및 5'-UGCACCCTGGATACCAUUU-3'(서열번호 151)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나로 이루어지며, 상기 잔기들은 포스폴로티오에이트 결합에 의해 서로 연결된 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  25. 제 1항 내지 24항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 미세관(microtubule)을 교란하는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  26. 제 1항 내지 24항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 미세관을 안정화시키는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  27. 제 1항 내지 24항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 탁산(taxane)인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  28. 제 27항에 있어서, 상기 탁산은 파클리탁셀(paclitaxel), 도세탁셀(doxetaxel), RPR 109881A, SB-T-1213, SB-T-1250, SB-T-101187, BMS- 275183, BRT 216, DJ-927, MAC-321, IDN5109 또는 IDN5390인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  29. 제 1항 내지 24항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 빈카 알칼로이드(vinca alkaloid)인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  30. 제 29항에 있어서, 상기 빈카 알칼로이드는 빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine), 빈데신(vindesine), 빈플루닌(vinflunine), 비노르엘빈(vinorelbine) 또는 안하이드로빈블라스틴(anhydrovinblastine)인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  31. 제 1항 내지 24항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 돌라스타틴(dolastatin)인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  32. 제 31항에 있어서, 상기 돌라스타틴은 돌라스타틴-10, 돌라스타틴-15, ILX651, TZT-1027, 심플로스타틴 1(symplostatin 1), 심플로스타틴 3 또는 세마도틴(cemadotin)인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  33. 제 1항 내지 24항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 크립토피신(cryptophycin)인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  34. 제 33항에 있어서, 상기 크립토피신은 크립토피신 1 또는 크립토피신 52인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  35. 제 1항 내지 25항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 에포틸론(epothilone)인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  36. 제 35항에 있어서, 상기 에포틸론은 에포틸론 A, 에포틸론 B, 데옥시에포틸론 B 또는 에포틸론 B 락탐인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  37. 제 1항 내지 24항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 일레우테로빈(eleutherobin), 디스코테르몰리드(discodermolide), 2-에피-디스코데르몰리드(2-epi-discodermolide), 2-데스-메틸디스코데르몰리드(2-des-methyldiscodermolide), 5-하이드록시메틸디스코데르몰리드(5-hydroxymethyldiscodermolide), 19-데스-아미노카르보닐디스코데르몰리드(19-des-aminocarbonyldiscodermolide), 9(13)-사이클로디스코데르몰리드(9(13)-cyclodiscodermolide) 또는 라울리말리드(laulimalide)인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  38. 제 1항 내지 24항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 표 1에 나열된 것으로부터 선택된 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  39. 제 1항 내지 39항중 어느 한항에 있어서, 상기 증식성 질환은 암인 것을 특 징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  40. 제 39항에 있어서, 상기 암은 급성 백혈병, 급성 림프성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 골수모세포성 백혈병, 급성 전골수세포성 백혈병, 급성 골수단핵세포성 백혈병, 급성 단핵구성 백혈병, 급성 적백혈병, 만성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 골수형성이상 증후군, 만성 림프구성 백혈병, 진성 적혈구 증가증, 림프종, 호지킨병, 발덴스트롬씨 마크로글로블린혈증, 섬유 육종, 점액 육종(myxosarcoma), 지방 육종, 연골 육종, 골 육종, 척삭종, 혈관 육종, 내피 육종(endotheliosarcoma), 림프관 육종, 림프관내피종, 윤활막종(synovioma), 중피종, 유잉씨 종양, 평활근육종(leiomyosarcoma), 횡문근 육종, 결장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평표피 세포암, 기저 세포 암종, 선암종, 땀샘암, 피지선암, 유두 암종, 유두 선암종, 낭샘 암종, 수질 암종, 기관지원성 암종, 신장 세포 암종, 간암, 담관암, 융모막 암종, 정상피종, 배아 암종, 윌름씨 종양, 자궁경부암, 자궁암, 고환 암, 폐암, 소세포 폐암, 방광암, 표피암, 신경교종, 별아교 세포종, 속질모세포종, 두개인두종, 뇌실막 세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경초종, 희소돌기아교세포종(oligodendroglioma), 신경집종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종 또는 망막모세포종인 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  41. 제 1항 내지 40항중 어느 한항에 있어서, 상기 환자에게 화학적 감작제(chemosensitizer)를 투여하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  42. 제 1항 내지 41항중 어느 한항에 있어서, 상기 환자에게 생물학적 반응 변형제를 투여하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  43. 제 1항 내지 42항중 어느 한항에 있어서, 상기 환자에세 제2의 화학치료제를 투여하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 증식성 질환자의 치료 방법.
  44. (i) 8개 내지 30개의 뉴클레오베이스로 이루어진 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머 및 (ii) 화학치료제를 증식성 질환자를 치료하기에 충분한 총 양으로 포함하는 조성물.
  45. 제 44항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 서열번호 1-99, 143, 147, 151, 163- 260, 287, 289 및 300-460으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 서열내의 8개 이상의 연속적인 뉴클레오베이스를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  46. 제 45항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 서열번호 97, 98, 99, 143, 147, 151, 287, 289 및 300-460으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 서열 내의 8개 이상의 연속적인 뉴클레오베이스를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  47. 제 46항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 서열번호 97, 98, 99, 143, 147, 151, 287, 289 및 300-460으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 서열로 필수적으로 이루어진 것을 특징으로 하는, 조성물.
  48. 제 47항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 서열번호 97, 98, 99, 143, 147, 151, 287, 289 및 300-460으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는, 조성물.
  49. 제 44항 내지 48항중 어느 한항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 올리고뉴클레오티드인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  50. 제 49항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 적어도 하나의 변형된 결합을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  51. 제 50항에 있어서, 상기 변형된 결합은 포스포로티오에이트, 메틸포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로디티오에이트 및 포스포셀레네이트 결합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 조성물
  52. 제 44항 내지 48항중 어느 한항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 적어도 하나의 변형된 당 모이어티를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물
  53. 제 52항에 있어서, 상기 변형된 당 모이어티는 2'-O-메틸기 또는 2'-O-메톡시에틸기인 것을 특징으로 하는, 조성물
  54. 제 44항 내지 48항중 어느 한항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오베이스를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  55. 제 54항에 있어서, 상기 변형된 뉴클레오베이스는 5-메틸 시토신인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  56. 제 44항 내지 48항중 어느 한항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 키메라 뉴클레오베이스 올리고머인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  57. 제 56항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 포스포로티오에이트 결합에 의해 서로 연결된 DNA 잔기들을 포함하며, 상기 DNA 잔기들의 양쪽에 적어도 하나의 2'-O-메틸 또는 2'-O-메톡시에틸 RNA 잔기가 측면으로 위치된 것을 특징으로 하는, 조성물.
  58. 제 57항에 있어서, 상기 DNA 잔기들의 양쪽에 적어도 3개의 2'-O-메틸 또는 2'-O-메톡시에틸 RNA 잔기가 측면으로 위치된 것을 특징으로 하는, 조성물.
  59. 제 58항에 있어서, 상기 DNA 잔기들의 양쪽에 적어도 4개의 2'-O-메틸 또는 2'-O-메톡시에틸 RNA 잔기가 측면으로 위치된 것을 특징으로 하는, 조성물.
  60. 제 57항에 있어서, 상기 RNA 잔기들이 포스포로티오에이트 결합들에 의해 서로 연결되며, 상기 RNA 잔기들은 포스포로티오에이트 결합에 의해 DNA 잔기와 연결된 것을 특징으로 하는, 조성물.
  61. 제 57항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 포스포디에스테르 결합들에 의해 서로 연결된 DNA 잔기를 포함하며, 상기 DNA 잔기의 양쪽에는 포스포로티오에이트 결합들에 의해 서로 연결된 적어도 2개의 2'-O-메틸 또는 2'-O-메톡시에틸 RNA 잔기들이 측면으로 위치된 것을 특징으로 하는, 조성물.
  62. 제 61항에 있어서, 상기 DNA 잔기의 양쪽에는 적어도 3개의 2'-O-메틸 또는 2'-O-메톡시에틸 RNA 잔기들이 측면으로 위치된 것을 특징으로 하는, 조성물.
  63. 제 44항에 있어서, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 양쪽에 4개의 2'-O-메틸 또는 2'-O-메톡시에틸 RNA 잔기들이 측면으로 위치한 11개의 DNA 잔기들을 포함하며, 상기 뉴클레오베이스 올리고머는 5'-AUUGGTTCCAATGTGUUCU-3'(서열번호 155); 5'-ACACGACCGCTAAGAAACA-3'(서열번호 16); 5'-ACAGGACTACCACTTGGAA-3'(서열번호 157); 5'-UGCCAGTGTTGATGCUGAA-3'(서열번호 27); 5'-GCUGAGTCTCCATATUGCC-3'(서열번호 141); 5'-UCGGGTATATGGTGTCUGA-3'(서열번호 41); 5'-AAGCACTGCACTTGGUCAC-3'(서열번호 47); 5'-CCGGCCCAAAACAAAGAAG-3'(서열번호 51); 5'-ACCCTGGATACCATTUAGC-3'(서열번호 63); 5'-UGUCAGTACATGTTGGCUC-3'(서열번호 161); 및 5'-UGCACCCTGGATACCAUUU-3'(서열번호 151)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나로 이루어지며, 상기 잔기들은 포스포로티오에이트 결합에 의해 서로 연결된 것을 특징으로 하는, 조성물.
  64. 제 44항 내지 63항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 미세관(microtubule)을 교란하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  65. 제 44항 내지 63항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 미세관을 안정화시키는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  66. 제 44항 내지 63항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 탁산인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  67. 제 66항에 있어서, 상기 탁산은 파클리탁셀, 도세탁셀, RPR 109881A, SB-T-1213, SB-T-1250, SB-T-101187, BMS- 275183, BRT 216, DJ-927, MAC-321, IDN5109 또는 IDN5390인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  68. 제 44항 내지 63항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 빈카 알칼로이드인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  69. 제 68항에 있어서, 상기 빈카 알칼로이드는 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 빈플루닌, 비노르엘빈 또는 안하이드로빈블라스틴인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  70. 제 44항 내지 63항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 돌라스타틴인 것을 특징으로 하는,
  71. 제 70항에 있어서, 상기 돌라스타틴은 돌라스타틴-10, 돌라스타틴-15, ILX651, TZT-1027, 심플로스타틴 1, 심플로스타틴 3 또는 세마도틴(cemadotin)인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  72. 제 44항 내지 63항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 크립토피신인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  73. 제 72항에 있어서, 상기 크립토피신은 크립토피신 1 또는 크립토피신 52인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  74. 제 44항 내지 63항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 에포틸론인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  75. 제 74항에 있어서, 상기 에포틸론은 에포틸론 A, 에포틸론 B, 데옥시에포틸론 B 또는 에포틸론 B 락탐인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  76. 제 44항 내지 63항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 일레우테로빈, 디스코테르몰리드, 2-에피-디스코데르몰리드, 2-데스-메틸디스코데르몰리드, 5-하이드록시메틸디스코데르몰리드, 19-데스-아미노카르보닐디스코데르몰리드, 9(13)-사이클로디스코데르몰리드 또는 라울리말리드인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  77. 제 44항 내지 63항중 어느 한항에 있어서, 상기 화학치료제는 표 1에 나열된 것으로부터 선택된 것을 특징으로 하는, 조성물.
  78. 세포에 제 44항 내지 77항중 어느 한항에 따른 조성물을 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는 세포의 세포자살을 증강시키는 방법.
  79. 제 78항에 있어서, 상기 세포는 생체내에 존재하는 것을 특징으로 하는, 세포의 세포자살을 증강시키는 방법.
  80. 제 78항에 있어서, 상기 세포는 생체외에 존재하는 것을 특징으로 하는, 세포의 세포자살을 증강시키는 방법.
  81. 제 78항 내지 80항중 어느 한항에 있어서, 상기 세포는 암 세포인 것을 특징으로 하는, 세포의 세포자살을 증강시키는 방법.
  82. 제 81항에 있어서, 상기 암 세포는 인간 암 세포인 것을 특징으로 하는, 세포의 세포자살을 증강시키는 방법.
  83. (i) 8 내지 30개의 뉴클레오베이스로 이루어진 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머;
    (ii) 화학치료제; 및
    (iii) 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머 및 화학치료제를 증식성 질환자의 증식성 질환을 치료하기에 충분한 양으로 투여하기 위한 설명서를 포함하는 키트.
  84. (i) 8 내지 30개의 뉴클레오베이스로 이루어진 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머; 및
    (ii) 안티센스 IAP 뉴클레오베이스 올리고머 및 화학치료제를 증식성 질환자의 증식성 질환을 치료하기에 충분한 양으로 투여하기 위한 설명서를 포함하는 키트.
  85. (i) 제 44항 내지 77항중 어느 한항에 따른 조성물; 및
    (ii) 상기 조성물을 증식성 질환자의 증식성 질환을 치료하기에 충분한 양으로 투여하기 위한 설명서를 포함하는 키트.
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Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6156535A (en) 1995-08-04 2000-12-05 University Of Ottawa Mammalian IAP gene family, primers, probes, and detection methods
US7601497B2 (en) * 2000-06-15 2009-10-13 Qiagen Gaithersburg, Inc. Detection of nucleic acids by target-specific hybrid capture method
EP1490490B1 (en) 2002-03-27 2009-05-13 Aegera Therapeutics Inc. Antisense iap nucleobase oligomers and uses thereof
US8012944B2 (en) 2003-10-30 2011-09-06 Pharmascience Inc. Method for treating cancer using IAP antisense oligomer and chemotherapeutic agent
US20080293653A1 (en) * 2004-10-14 2008-11-27 Jon Durkin Method of treating autoimmune diseases
EA200800868A1 (ru) * 2005-09-19 2008-10-30 ДЖОНСОН ЭНД ДЖОНСОН ФАРМАСЬЮТИКАЛ РИСЕРЧ ЭНД ДИВЕЛОПМЕНТ, Эл. Эл. Си. Модуляция экспрессии глюкокортикоидного рецептора
EP2013344B1 (en) * 2006-05-03 2012-08-29 Baltic Technology Development, Ltd. Antisense agents combining strongly bound base - modified oligonucleotide and artificial nuclease
US20080293053A1 (en) * 2006-12-28 2008-11-27 The Regents Of The University Of Michigan shRNA Materials and Methods of Using Same for Inhibition of DKK-1
US7618992B2 (en) 2006-12-29 2009-11-17 Astellas Pharma Inc. Method of treating cancer by co-administration of anticancer agents
WO2009079066A2 (en) * 2007-09-26 2009-06-25 Aparna Biosciences Therapeutic and vaccine polyelectrolyte nanoparticle compositions
TWI419974B (zh) * 2008-10-27 2013-12-21 Qiagen Gaithersburg Inc 於自動平台上之快速結果雜交捕捉法
CA2750338C (en) * 2009-01-28 2019-06-25 Qiagen Gaithersburg, Inc. Sequence-specific large volume sample preparation method and assay
JP5738278B2 (ja) * 2009-05-01 2015-06-24 キアジェン ゲイサーズバーグ インコーポレイテッド 試料中のｒｎａスプライシング形態を検出するための非標的増幅法
US8491927B2 (en) * 2009-12-02 2013-07-23 Nimble Epitech, Llc Pharmaceutical composition containing a hypomethylating agent and a histone deacetylase inhibitor
AU2011210734B2 (en) * 2010-01-29 2017-02-09 Qiagen Gaithersburg, Inc. Methods and compositions for sequence-specific purification and multiplex analysis of nucleic acids
BR112012018545A2 (pt) 2010-01-29 2016-05-03 Qiagen Gaithersburg Inc método de determinação e confirmação da presença de um hpv em uma amostra
US9506057B2 (en) 2010-03-26 2016-11-29 Integrated Dna Technologies, Inc. Modifications for antisense compounds
WO2011146629A2 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Qiagen Gaithersburg Inc. Methods and compositions for sequence-specific purification and multiplex analysis of nucleic acids
AU2011258501B2 (en) 2010-05-25 2016-07-07 Qiagen Gaithersburg, Inc. Fast results hybrid capture assay and associated strategically-truncated probes
WO2012033848A1 (en) 2010-09-07 2012-03-15 Integrated Dna Technologies, Inc. Modifications for antisense compounds
US9885092B2 (en) 2011-02-24 2018-02-06 Qiagen Gaithersburg Inc. Materials and methods for detection of HPV nucleic acids
CN102731591B (zh) * 2011-03-30 2016-12-14 江苏中康药物科技有限公司 一种抗肿瘤、抗病毒的化合物、其制备方法及用途
BR112014009790A2 (pt) 2011-10-25 2018-05-15 Isis Pharmaceuticals Inc composto para modulação antisense da expressão de gccr, seu uso e composição
ES2807379T3 (es) * 2013-03-14 2021-02-22 Ionis Pharmaceuticals Inc Composiciones y métodos para regular la expresión de Tau
CN114191428A (zh) 2016-03-02 2022-03-18 卫材研究发展管理有限公司 基于艾日布林的抗体-药物偶联物和使用方法
US11130951B2 (en) 2016-06-09 2021-09-28 The General Hospital Corporation Modulating the cellular stress response
RU2664182C2 (ru) * 2016-12-05 2018-08-15 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Крымский федеральный университет имени В.И. Вернадского" Способ получения препарата для регуляции численности комара обыкновенного (Culex pipiens)
CN108794569A (zh) * 2018-06-27 2018-11-13 南开大学 天然产物Symplostatin4衍生物及其在制备抗癌症干细胞药物中的应用
CN112972684B (zh) * 2019-12-02 2024-05-31 苏州亚盛药业有限公司 Iap抑制剂与parp或mek抑制剂或其他化学治疗剂的组合
US20230066380A1 (en) * 2020-01-23 2023-03-02 University Of Southern California Antagonism as a therapy for tdp-43 proteinopathies
CN110982876B (zh) * 2020-03-04 2020-05-26 圣湘生物科技股份有限公司 病毒核酸检测的预处理方法、预处理液、试剂盒及其用途
CN117599041B (zh) * 2024-01-22 2024-05-03 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 去氢雌马酚及其衍生物作为新型辐射防护剂和细胞保护剂的医药用途

Family Cites Families (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5665550A (en) 1990-10-19 1997-09-09 Board Of Trustees Of The University Of Illinois-Urbana Genes and genetic elements associated with sensitivity to chemotherapeutic drugs
WO1994008003A1 (en) 1991-06-14 1994-04-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE INHIBITION OF THE ras GENE
US5594076A (en) 1991-09-24 1997-01-14 The Pennsylvania Research Foundation Hydrodegradable polyesters
US6265157B1 (en) 1991-12-03 2001-07-24 Allegheny University Of The Health Sciences Compositions and methods for detecting altered COL1A1 gene sequences
US20030073159A1 (en) 1992-05-11 2003-04-17 Human Genome Sciences, Inc. Human inhibitor of apoptosis gene 1
JP3562528B2 (ja) 1992-09-14 2004-09-08 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション Ｉｋａｒｏｓ：ｔ細胞経路調節遺伝子
US5958772A (en) 1998-12-03 1999-09-28 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense inhibition of cellular inhibitor of apoptosis-1 expression
US5958771A (en) 1998-12-03 1999-09-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of cellular inhibitor of Apoptosis-2 expression
US6087173A (en) 1999-09-09 2000-07-11 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of X-linked inhibitor of apoptosis expression
AU6586494A (en) 1993-04-14 1994-11-08 United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy, The Transgenic animal model for autoimmune diseases
US5691179A (en) 1993-08-26 1997-11-25 Washington University Cell death regulators
US5624803A (en) 1993-10-14 1997-04-29 The Regents Of The University Of California In vivo oligonucleotide generator, and methods of testing the binding affinity of triplex forming oligonucleotides derived therefrom
US5801154A (en) * 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
US5510239A (en) 1993-10-18 1996-04-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
CA2681922C (en) 1994-01-18 2012-05-15 The Scripps Research Institute Zinc finger protein derivatives and methods therefor
WO1995028497A1 (en) 1994-04-13 1995-10-26 La Jolla Cancer Research Foundation Interaction of proteins involved in a cell death pathway
CA2189990A1 (en) 1994-05-10 1995-11-16 Di-Hwei Hsu Compositions and treatment for multiple sclerosis
AU697985B2 (en) 1994-10-18 1998-10-22 Research Development Corporation Of Japan Neuronal apoptosis inhibitor protein, gene sequence and mutations causative of spinal muscular atrophy
HUT77047A (hu) 1994-10-25 1998-03-02 Immulogic Pharmaceutical Corporation Szklerózis multiplex kezelésére szolgáló készítmények és kezelések
AU4695296A (en) 1995-01-06 1996-07-24 Immulogic Pharmaceutical Corporation Compositions and methods for treating rheumatoid arthritis
EP0830375A4 (en) 1995-05-11 2001-11-21 Human Genome Sciences Inc HUMAN INHIBITOR OF THE APOPTOS Gene 1
US5770690A (en) 1995-06-27 1998-06-23 Neurex Corporation Bax omega protein and methods
US5877021A (en) 1995-07-07 1999-03-02 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. B7-1 targeted ribozymes
US6156535A (en) 1995-08-04 2000-12-05 University Of Ottawa Mammalian IAP gene family, primers, probes, and detection methods
US5919912A (en) 1995-08-04 1999-07-06 University Of Ottawa Mammalian IAP antibodies and diagnostic kits
US6187557B1 (en) 1995-08-08 2001-02-13 Tularik Inc. c-IAP1 and c-IAP2: inhibitors of apoptosis
AU6692996A (en) 1995-08-08 1997-03-05 Tularik Inc. Inhibitors of apoptosis
US5834216A (en) 1995-09-06 1998-11-10 Arch Development Corporation Screening methods for the identification of inducers and inhibitors of programmed cell death (apoptosis)
AUPN727595A0 (en) 1995-12-22 1996-01-18 Walter And Eliza Hall Institute Of Medical Research, The Therapeutic compositions
US5605022A (en) 1995-12-26 1997-02-25 Nci Building Systems, Inc. Vented closure
GB9601108D0 (en) 1996-01-19 1996-03-20 Univ Ottawa Neuronal apoptosis inhibitor protein (NAIP)
US6133437A (en) 1997-02-13 2000-10-17 Apoptogen, Inc. Modulation of IAPs for the treatment of proliferative diseases
WO1998022131A2 (en) 1996-11-15 1998-05-28 University Of Ottawa Modulators of ovarial apoptosis related to iap
US5994076A (en) 1997-05-21 1999-11-30 Clontech Laboratories, Inc. Methods of assaying differential expression
US6228603B1 (en) 1997-05-22 2001-05-08 The Burnham Institute Screening assays for agents that alter inhibitor of apoptosis (IAP) protein regulation of caspase activity
CA2225187A1 (en) 1997-07-14 1999-01-14 Universite D'ottawa/ University Of Ottawa Xaf genes and polypeptides: methods and reagents for modulating apoptosis
US6133246A (en) 1997-08-13 2000-10-17 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense oligonucleotide compositions and methods for the modulation of JNK proteins
US6417160B1 (en) 1997-10-14 2002-07-09 Nadine A. Tatton Methods for increasing schwann cell survival
US6506559B1 (en) * 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
US6171821B1 (en) 1998-07-24 2001-01-09 Apoptogen, Inc. XIAP IRES and uses thereof
US6077709A (en) 1998-09-29 2000-06-20 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of Survivin expression
AU1105800A (en) 1998-10-09 2000-05-01 L. Sai Latha Shankar Methods for treating multiple sclerosis
KR20000065690A (ko) 1999-04-08 2000-11-15 박종구 반응 특이성 및 안정성을 개선시킨 안티센스 올리고 뉴클레오타이드, 안티센스 ｄｎａ 및 그 제조방법
US5998148A (en) 1999-04-08 1999-12-07 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of microtubule-associated protein 4 expression
US6395771B1 (en) * 2000-05-31 2002-05-28 Dabur Research Foundation Paclitaxel derivatives for the treatment of cancer
US6673917B1 (en) * 2000-09-28 2004-01-06 University Of Ottawa Antisense IAP nucleic acids and uses thereof
US20020119168A1 (en) * 2001-02-20 2002-08-29 Rudnic Edward M. Therapeutic agent delivery
KR100397275B1 (ko) 2001-03-08 2003-09-17 주식회사 웰진 단방향성 안티센스 ｃＤＮＡ 라이브러리 구축을 통한 신규대규모 유전자 검색 및 기능 분석 시스템
EP1572923A4 (en) 2002-03-06 2007-10-31 Rigel Pharmaceuticals Inc NEW METHOD FOR THE INTRODUCTION AND INTRA-CELLULAR SYNTHESIS OF SIRNA MOLECULES
EP1490490B1 (en) 2002-03-27 2009-05-13 Aegera Therapeutics Inc. Antisense iap nucleobase oligomers and uses thereof
EP1469070A1 (en) 2003-04-15 2004-10-20 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Livin-specific siRNAs for the treatment of therapy-resistant tumors
AU2004275903B2 (en) 2003-09-29 2012-04-12 Topigen Pharmaceutique Inc. Oligonucleotide compositions and methods for treating disease including inflammatory conditions
US8012944B2 (en) 2003-10-30 2011-09-06 Pharmascience Inc. Method for treating cancer using IAP antisense oligomer and chemotherapeutic agent

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