KR20060117930A - 인간 ｅｐｏ 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 조성물, 방법및 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 코딩하는 분리된 핵산을 포함하는 신규 인간 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체, 벡터, 숙주 세포, 트랜스제닉 동물 또는 식물, 및 치료 조성물, 방법 및 장치를 포함하는 그를 제조하는 방법 및 이용하는 방법에 관한 것이다.

없음

Description

인간 ＥＰＯ 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 조성물, 방법 및 용도 {HUMAN EPO MIMETIC HINGE CORE MIMETIBODIES, COMPOSITIONS, METHODS AND USES}

본 발명은 생물학적 활성 단백질, 단편 또는 리간드에 특이적인 포유동물 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 특정 부분 및 변이체, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디(mimetic hinge core mimetibody)를 코딩하는 핵산 및 그에 상보적인 핵산, 숙주 세포, 및 치료 제제, 투여 및 장치를 포함하는 그의 제조 방법 및 용도에 관한 것이다.

재조합 단백질은 떠오르는 치료제 분야이다. 이러한 재조합 치료는 단백질 제제 및 화학적 변형을 발전시켰다. 이러한 변형은 반감기 증가 (예컨대, 단백질 분해 효소에 대한 노출을 차단), 생물학적 활성 증가, 또는 원치않는 부작용 감소 등에 의해 치료 단백질의 치료 유용성을 증대시켰다. 이러한 변형 중 하나는 엔테라셉트(enteracept)와 같은 수용체 단백질에 융합된 이뮤노글로불린 단편을 사용하는 것이다. 치료 단백질은 또한 보다 긴 반감기를 제공하거나 Fc 수용체 결합, 단백질 결합, 및 보체 결합과 같은 기능을 도입하기 위해 Fc 도메인을 이용하여 제조될 수 있다. 포유동물 조혈기관 계통의 특징적이고 중요한 역할 중 하나는 산소를 동물체의 다양한 조직에 전달하는 적혈구(erythropoiet) 또는 적혈세포(red blood cell)를 제조하는 것이다. 적혈구를 생성하는 과정 ("적혈구 생성")은 적혈구 파괴를 보상하기 위해 동물의 삶동안 계속적으로 발생한다. 전형적인 적혈구 세포는 상대적으로 짧은 수명 (보통 100 내지 120일)을 가진다. 적혈구 생성은 정교하게 조절된 생리 메카니즘이고, 이에 의해 적절한 조직 산화를 가능하게 할 정도로 충분한 적혈구가 생산되지만, 혈액 순환을 방해할 정도로 많이 생산되지는 않는다.

현재, 적혈구 생성은 산성 당단백질인 폴리펩티드 에리쓰로포이에틴 (EPO)에 의해 주로 조절되는 것으로 알려져 있다. 에리쓰로포이에틴은 포유동물의 크로모좀 내에 위치한 단일 카피 유전자 (single copy gene)dml 발현 결과로서 제조된다. 재조합 인간 EPO ("rHuEPO")의 아미노산 서열은 인간 소변으로부터 얻은 EPO의 아미노산 서열과 실질적으로 동일하다. 그러나, rHuEPO의 글리코실화는 소변 EPO 및 인간 혈청 EPO와 다르다.

건강한 포유동물에서, 조직이 순환하는 적혈구의 현존 수에 의해 충분히 산화될 수 있는 경우에 EPO는 혈장에 매우 낮은 농도로 존재한다. EPO의 존재는 노화 과정에서 상실되는 적혈구를 대체하기 위해 새로운 적혈구 생성을 자극한다. 또한, EPO 생성은 체조직에 대한 산소 공급이 혈액에 의한 조직의 적절한 관류에도 불구하고 정상적인 생리 수준 밑으로 감소하는 저산소증 조건하에 자극된다. 저산소증은 출혈, 방사선-유발 적혈구 파괴, 다양한 빈혈, 고소, 또는 장기간의 무의식에 의해 유발될 수 있다. 대조적으로, 순환 내의 적혈구 수가 정상 조직에서 필요로 하는 양보다 많은 경우에는 EPO 생산은 감소한다.

그러나, 어떤 질병은 비정상 적혈구 생성을 포함한다. 재조합 인간 EPO (rHuEPO)는 수많은 나라에서 치료용으로 사용되고 있다. 미국에서, U.S. 식품 의약청 (FDA)은 말기 콩팥병과 관련된 빈혈을 치료하기 위한 rHuEPO의 사용을 허가하였다. 상기 질병을 치료하기 위해 혈액투석을 하는 환자는 전형적으로 투석 치료의 결과로서 발생하는 적혈구의 파괴 및 조기 사멸에 의해 야기되는 심각한 빈혈로 고통받는다. EPO는 또한 다른 유형의 빈혈을 치료하는데 유용하다. 예를 들어, 화학치료-유발 빈혈, 척수형성이상과 관련된 빈혈, 다양한 선천성 질병과 관련된 빈혈, AIDS-관련 빈혈 및 조숙-관련 빈혈이 EPO에 의해 치료될 수 있다. 또한, EPO는 골수 이식 환자, 자가 수혈을 준비하는 환자 및 철분 과다 질병으로 고통받는 환자의 정상 적혈구 용적률을 보다 빠른 회복을 보조하는 것과 같은 다른 영역에서도 역할을 할 수 있다.

에리쓰로포이에틴 (EPO)은 적혈구 전구 세포 표면 상의 특정 수용체에 결합하여 적혈구 생성의 일차 조절자로 기능하는 165 아미노산 및 4개의 탄수화물 사슬로 구성된 당단백질 호르몬이다. 상기 결합은 이들의 증식 및 성숙 적혈구 세포로 분화하도록 신호한다. 에리쓰로포이에틴 수용체는 에리쓰로포이에틴에 대해 높은 친화력 가지는 484-아미노산 당단백질이다. 에리쓰로포이에틴 수용체에 대해, 리간드-유발 동종이량체화(homodimerization)는 활성을 조절하는 핵심 사건으 하나일 수 있다.

에리쓰로포이에틴은 상대적으로 짧은 반감기를 가진다. 정맥내 투여된 에리쓰로포이에틴은 CRF 환자에서 순환 중 약 3 내지 4 시간의 반감기를 가지고 1차 속 도로 제거된다. 치료 투여량 범위에서, 혈장 에리쓰로포이에틴의 검출 가능 수준은 적어도 24 시간 유지된다. 에리쓰로포이에틴의 피하 투여 후, 최고 혈청 수준은 5-24 시간 이내에 얻어졌고, 그 후 천천히 감소하였다.

에리쓰로포이에틴의 소 펩티도미메틱(peptidomimetic)은 에피트로포이에틴 수용체에 대한 친화력에 관한 랜덤 파지 디스플레이 펩티드 라이브러리(random phage display peptide liabrary)를 스크리닝함으로써 수개 그룹이 동정되었다. 이들 서열은 에리쓰로포이에틴과 상동성이 없었다. 기능 분석에서, 이들 펩티드 중 여러개가 활성을 나타냈지만, 재조합 에리쓰로포이에틴의 1/100,000에 불과했다. 펩티도미메틱의 공유 이량체 또는 중합체(multimer)를 제조함으로써 이들 펩티드의 효능을 증가시키려는 많은 시도가 있었지만, 이들 화합물은 몰에 기초하여 에리쓰로포이에틴 보다 여전히 1,000-10,000 배 활성이 낮고, 반감기가 매우 짧아 치료제 용도로 사용하기에 적합하지 않았다.

따라서, 당업계에 알려진 상기 문제점의 하나 이상 및 다른 문제점을 극복한 EPO 치료 단백질의 개선 및/또는 변형물을 제공하는 것이 요구되고 있다.

발명의 요약

본 발명은 여기에 기재되거나 및/또는 가능한 변형된 이뮤노글로불린을 포함하는 인간 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 그의 절단 생성물 및 다른 특정 부분 및 변이체, 및 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 조성물, 코딩 또는 상보적 핵산, 벡터, 숙주 세포, 조성물, 제제, 장치, 트랜스제닉 동물, 트랜스제닉 식물, 및 그의 제조 및 이용 방법을 제공하고, 이는 당업계의 공지 기술과 조합될 수 있다.

본 발명은 또한 여기에 기재된 및/또는 당업계에 공지된 적어도 하나의 분리된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 제공한다. EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 적어도 하나의 힌지 영역 또는 그의 단편 (H)의 적어도 한 부분에 직접 연결된 적어도 하나의 CH2 영역에 직접 연결된 적어도 하나의 CH3 영역을 임의로 포함할 수 있고, 힌지 영역 또는 그의 단편 (H)의 적어도 한 부분은 임의의 링커 서열 (L)에 직접 연결되며, 링커 서열 (L)은 적어도 하나의 EPO 미메틱 치료 펩티드 (P)에 직접 연결되고, 치료 펩티드 (P)는 임의로 적어도 하나의 가변 항체 서열 (V)의 적어도 한 부분에 추가로 직접 연결된다. CH3-CH2-힌지-링커-치료 펩티드와 임의의 N-말단 항체 서열 쌍에 관한 바람직한 구체예에서, 상기 쌍은 연합 또는 공유 결합 (예컨대, 이로 제한되는 것은 아니나 적어도 하나의 Cys-Cys 이황화 결합) 또는 적어도 하나의 CH4 또는 다른 이뮤노글로불린 서열에 의해 임의로 연결된다. 한 구체예에서, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 하기 화학식 (I)을 포함하고:

상기 식에서, V는 이뮤노글로불린 가변 영역의 N-말단의 적어도 한 부분이고, P는 적어도 하나의 생활성 EPO 미메틱 폴리펩티드이며, L은 적어도 하나의 링커 서열이고, H는 이뮤노글로불린 가변 영역의 한 부분이며, CH2는 이뮤노글로불린 CH2 불변 영역의 적어도 한 부분이고, CH3은 이뮤노글로불린 CH3 불변 영역의 적어도 한 부분이며, m, n, o p, q, r, 및 s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수일 수 있고, 이뮤노글로불린 분자의 다른 유형, 예컨대, 이로 제한되지는 않으나 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgM, IgD, IgE, 또는 그의 임의의 서브클래스 등, 또는 그의 임의의 조합을 모방한다.

따라서, 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 치료 펩티드 및 그의 고유의 또는 획득한 시험관내(in vitro), 생체내(in vivo) 또는 동일계(in situ) 성질 또는 활성을 제공하면서, 고유의 성질 및 기능을 가진 항체 또는 이뮤노글로불린 구조 또는 기능의 적어도 한 부분을 모방한다. 본 발명의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디의 항체 및 치료 펩티드 부분의 다양한 부분은 공지된 것과 조합되어 여기에 기재된 것과 같이 다양해질 수 있다.

본 발명은 한 측면으로 적어도 하나의 특정 서열, 도메인, 그의 부분 또는 변이체를 포함하는 특정 미메티바디 또는 그의 특정 부분 또는 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 동일하거나 혼성화하는 상보적 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자를 제공한다. 본 발명은 또한 적어도 하나의 분리된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 상기 핵산 및/또는 재조합 벡터를 함유하는 숙주 세포, 및 상기 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 핵산, 벡터 및/또는 숙주 세포를 제조 및/또는 이용하는 방법을 제공한다.

본 발명의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 적어도 하나의 리간드에 대한 미메티바디의 P 부분의 결합을 모방하거나, 적어도 하나의 단백질, 서브유니트, 단편, 부분 또는 그의 임의의 조합의 적어도 하나의 생물학적 활성을 가진다.

본 발명은 또한 여기에 기재된 및/또는 당업계에 공지된 적어도 하나의 분리된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 제공하고, 여기에서 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 이로 제한되지는 않으나 화학식 (I)의 P 부분에 대응하는 적어도 하나의 생활성 펩티드 또는 폴리펩티드의 생물학적 활성과 같은 적어도 하나의 활성을 가진다. 따라서, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 단백질 또는 그의 단편에 대한 적어도 하나의 중화 활성과 같은 공지 방법에 따른 대응 활성으로 스크리닝할 수 있다.

본 발명은 또한 (a) 여기에 기재된 핵산 및/또는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 코딩하는 적어도 하나의 분리된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체; 및 (b) 적당한 담체 또는 희석제를 포함하는 적어도 하나의 조성물을 제공한다. 담체 또는 희석제는 임의로 공지된 방법에 따른 약제학적으로 허용되는 것일 수 있다. 조성물은 임의로 적어도 하나의 추가 화합물, 단백질 또는 조성물을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체가 검출 및/또는 회수 가능 양으로 발현되도록 하는 조건하에 여기에 기재된 및/또는 공지된 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는, 숙주 세포에서 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 발현시키는 적어도 하나의 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 뼈 및 관절 질병, 심혈관 질병, 치아 또는 구강 질병, 피부 질병, 귀, 코 또는 인후 질병, 내분비 또는 대사 질병, 위장관 질병, 부인 질병, 간 또는 쓸개 질병, 산과 질병, 혈액 질병, 면역 또는 알레르기 질병, 감염병, 근골격 질병, 종양 질병, 신경 질병, 영양 질병, 눈 질병, 소아 질병, 중독 질병, 정신 질병, 콩팥 질병, 폐 질병, 또는 다른 공지 질병 중의 적어도 하나의 증상을 치료학적 유효량으로 투여되는 때의 방법 또는 조성물로서의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 특정 부분 또는 변이체를 추가로 제공한다 (예컨대, The Merck Manual, 17th ed., Merck Research Laboratories, Merck and Co., Whitehouse Station, NJ(1999)를 참조, 여기에 참고로 포함됨). 이로 제한되는 것은 아니나, 당업계에 공지된 바와 같이 관련된 질병의 치료 증상 이전에, 치료 후에 또는 치료 동안에 투여하는 방법이 가능하다.

본 발명은 많은 상이한 다른 증상에서 필요한, 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에서의 적어도 하나의 면역, 심혈관, 감염, 악성, 및/또는 신경 질병의 증상을 조절, 치료 또는 감소하기 위한 치료학적 유효량으로 투여할 때, 방법 또는 조성물로서의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 특정 부분 부분 또는 변이체를 추가로 제공한다. 이로 제한되는 것은 아니나, 당업계에 공지된 바와 같이 관련된 질병의 치료 증상 이전에, 치료 후에 또는 치료 동안에 투여하는 방법이 가능하다.

본 발명은 또한 치료 또는 예방 유효량의 본 발명에 따른 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 적어도 하나의 조성물, 장치 및/또는 전달 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 어느 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디에 대한 적어도 하나의 항-이디오타입 항체를 제공한다. 항-이디오타입 항체는 본 발명의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디의 EPO 수용체 결합 영역과 경쟁적으로 결합하는, 이로 한정되지는 않으나 적어도 하나의 중쇄 또는 경쇄 또는 그의 리간드 결합 부분의 상보성 결정 영역 (CDR), 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 중쇄 또는 경쇄 불변 영역, 골격 영역, 또는 그의 부분과 같은 이뮤노글로불린 분자의 적어도 한 부분을 포함하는 분자를 함유하는 단백질 또는 펩티드를 포함한다. 이러한 본 발명의 이디오타입 항체는 이로 한정되지는 않으나 인간, 마우스, 토끼, 래트, 설치류, 영장류 등과 같은 임의의 포유동물에서 유래된 것을 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 적어도 하나의 특정 서열, 도메인, 그의 부분 또는 변이체를 포함하는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 항-이디오타입 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 상보적이거나 혼성화하는 적어도 하나의 분리된 핵산 분자를 제공한다. 본 발명은 또한 상기 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 항-이디오타입 항체를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 재조합 벡터를 함유하는 숙제 세포, 상기 항-이디오타입 항체 핵산를 제조 및/또는 이용하는 방법, 벡터 및/또는 숙주 세포를 제공한다

본 발명은 또한 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 항-이디오타입 항체가 검출 및/또는 회수 가능 양으로 발현되도록 하는 조건하에서 여기에 기재된 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는, 숙주에서 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 또는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 항-이디오타입 항체를 발현시키는 적어도 하나의 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 (a) 여기에 기재된 분리된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 코딩하는 핵산 및/또는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디; 및 (b) 적합한 담체 또는 희석제를 포함하는 적어도 하나의 조성물을 제공한다. 담체 또는 희석제는 공지된 담체 또는 희석제와 같은 약제학적으로 허용되는 것일 수 있다. 조성물은 임의로 적어도 하나의 추가 화합물, 단백질 또는 조성물을 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에서의 적어도 하나의 단백질 관련 증상의 조절 또는 치료를 위한 치료학적 유효량의 투여를 위한 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 방법 또는 조성물을 추가로 제공한다. 이로 제한되는 것은 아니나, 당업계에 공지된 바와 같이 관련된 질병의 치료 증상 이전에, 치료 후에 또는 치료 동안에 투여하는 방법이 가능하다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 치료 또는 예방 유효량의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디의 적어도 하나의 조성물, 장치 및/또는 전달 방법을 제공한다.

본 발명은 당업계에 공지되고/거나 여기에서 기술된 바와 같은, 관련된 증상의 이전, 이후, 또는 동안에 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에서의 적어도 하나의 EPO 관련된 증상을 진단하기 위한 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 방법 또는 조성물을 또한 제공한다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 진단하기 위한 적어도 하나의 조성물, 장치 및/또는 전달 방법을 제공하는 것이다.

한 측면으로, 본 발명은 임의로 여기에 기재되거나 당업계에 공지된 하나 이상의 치환, 결손 또는 삽입을 가지는 서열번호: 1-30 중의 적어도 하나의 적어도 한 부분 (예컨대, 표 1에 나타낸 바와 같은)을 함유하는 적어도 하나의 P(n) 영역을 포함하는 적어도 하나의 분리된 인간 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 제공한다. 다른 측면으로, 본 발명은 적어도 하나의 분리된 인간 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 제공하고, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 여기에 기재되거나 당업계 공지된 하나 이상의 치환, 결손 또는 삽입을 임의로 가지는 표 1에 기재된 서열번호: 1-30 중의 적어도 하나의 적어도 한 부분에 대해 리간드가 결합하는 적어도 하나의 리간드 또는 결합 영역 중의 적어도 1-3을 함유하는 적어도 하나의 에피토프에 대해 특이적으로 결합한다.

적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 임의로 적어도 10^-9 M, 적어도 10^-10 M, 적어도 10^-11 M, 또는 적어도 10^-12 M로부터 선택된 적어도 하나의 친화력을 가지고 단백질에 결합; 적어도 하나의 단백질 또는 그의 부분의 적어도 하나의 활성을 실질적으로 중화시키는 것 중의 적어도 하나를 할 수 있다. 또한, 적어도 하나의 분리된 인간 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 코딩하는 분리된 핵산; 분리된 핵산을 코딩하는 적어도 하나의 분리된 인간 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디; 분리된 핵산을 함유하는 분리된 핵산 벡터, 및/또는 분리된 핵산을 함유하는 원핵 또는 진핵 숙주 세포을 제공한다. 숙주 세포는 임의로 COS-1, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-1, Hep G2, 653, SP2/0, 293, HeLa, 골수종, 또는 림프종 세포, 또는 그의 임의의 유도체, 불멸화 또는 형질전환 세포로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 또한, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디이 검출 또는 회수 가능 양으로 발현되도록 하는 시험관내, 생체내 또는 동일계 조건 하에서 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 코딩 핵산을 해독하는 것을 포함하는, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 제조하는 방법을 제공한다.

또한, 적어도 하나의 분리된 인간 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 조성물이 제공된다. 조성물은 임의로 검출 가능 표지 또는 리포터, 항-감염 약물, 심혈관계 (CV) 약물, 중추 신경계 (CNS) 약물, 자율 신경계 (ANS) 약물, 기도 약물, 위장관 (GI) 약물, 호르몬 약물, 체액 또는 전해질 평형 약물, 혈액 약물, 안티네오플락틱(antineoplactic), 면역 제어 약물, 눈, 귀 또는 코 약물, 국소 약물, 영양제, TNF 길항제, 항류마티스제, 근육 이완제, 마약, 비-스테로이드 항-염증 약물 (NTHE), 진통제, 마취제, 진정제, 국소 마취제, 신경 근육 차단제, 항미생물제, 건선 치료제, 코르티코스테로이드, 동화대사 스테로이드, 에리쓰로포이에틴, 면역화, 이뮤노글로불린, 면역 억제제, 성장 호르몬, 호르몬 대체 약물, 방사성 의약품, 항우울제, 항정신병제, 흥분제, 천식 약, 베타 작용제, 흡입 스테로이드, 에피네프린 또는 유사체, 사이토카인, 또는 사이토카인 길항제로부터 선택된 적어도 하나의 화합물 또는 단백질의 유효량을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 본 발명의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디에 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체 또는 단편을 제공한다.

또한, (a) 유효량의 본 발명의 적어도 하나의 분리된 인간 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 함유하는 조성물을 세포, 조직, 기관 또는 동물에 투여하거나 접촉시키는 것을 포함하는 세포, 조직, 기관 또는 동물에서 질병 상태를 진단하거나 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 임의로 유효량으로 0.001-50 mg/(세포, 조직, 기관 또는 동물 1 kg)을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 임의로 비경구, 피하, 근육내, 정맥내, 관절내, 기관지내, 복강내, 낭내, 연골내, 강내, 복내, 소뇌내, 뇌실내, 결장내, 경관내, 위내, 간내, 심근내, 골내, 골반내, 심장막내, 복막내, 흉막내, 전립샘내, 폐내, 직장내, 콩팥내, 망막내, 척수내, 윤활막내, 흉부내, 자궁내, 방광내, 볼루스, 질, 직장, 볼, 설하, 비강내, 또는 경피로부터 선택된 적어도 하나의 방식에 의해 접촉 또는 투여를 이용하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 임의로 (a) 접촉 또는 투여 전, 중 또는 후에, 검출 가능 표지 또는 리포터, 항-감염 약물, 심혈관계 (CV) 약물, 중추 신경계 (CNS) 약물, 자율 신경계 (ANS) 약물, 기도 약물, 위장관 (GI) 약물, 호르몬 약물, 체액 또는 전해질 평형 약물, 혈액 약물, 안티네오플락틱(antineoplactic), 면역 제어 약물, 눈, 귀 또는 코 약물, 국소 약물, 영양제, TNF 길항제, 항류마티스제, 근육 이완제, 마약, 비-스테로이드 항-염증 약물 (NSAID), 진통제, 마취제, 진정제, 국소 마취제, 신경 근육 차단제, 항미생물제, 건선 치료제, 코르티코스테로이드, 동화대사 스테로이드, 에리쓰로포이에틴, 면역화, 이뮤노글로불린, 면역 억제제, 성장 호르몬, 호르몬 대체 약물, 방사성 의약품, 항우울제, 항정신병제, 흥분제, 천식 약, 베타 작용제, 흡입 스테로이드, 에피네프린 또는 유사체, 사이토카인, 또는 사이토카인 길항제 중의 적어도 하나로부터 선택된 유효량의 적어도 하나의 화합물 또는 단백질을 함유하는 적어도 하나의 조성물을 추가로 투여하는 것을 포함할 수 있다.

또한, 비경구, 피하, 근육내, 정맥내, 관절내, 기관지내, 복강내, 낭내, 연골내, 강내, 복내, 소뇌내, 뇌실내, 결장내, 경관내, 위내, 간내, 심근내, 골내, 골반내, 심장막내, 복막내, 흉막내, 전립샘내, 폐내, 직장내, 콩팥내, 망막내, 척수내, 윤활막내, 흉부내, 자궁내, 방광내, 볼루스, 질, 직장, 볼, 설하, 비강내, 또는 경피로부터 선택된 적어도 방식에 의해 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 접촉 또는 투여하기에 적합한, 적어도 하나의 본 발명의 분리된 인간 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 의학 장치가 제공된다..

또한, 포장재 및 본 발명의 적어도 하나의 분리된 인간 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디의 용액 또는 동결 건조 형태를 함유하는 용기를 포함하는 인간 약제학적 또는 진단 용도를 위한 제조 물품이 제공된다. 상기 제조 물품은 임의로 용기를 비경구, 피하, 근육내, 정맥내, 관절내, 기관지내, 복강내, 낭내, 연골내, 강내, 복내, 소뇌내, 뇌실내, 결장내, 경관내, 위내, 간내, 심근내, 골내, 골반내, 심장막내, 복막내, 흉막내, 전립샘내, 폐내, 직장내, 콩팥내, 망막내, 척수내, 윤활막내, 흉부내, 자궁내, 방광내, 볼루스, 질, 직장, 볼, 설하, 비강내, 또는 경피 전달 장치 또는 시스템의 성분으로서 포함할 수 있다.

또한, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 회수 가능 양으로 발현시킬 수 있는 숙주 세포 또는 트랜스제닉 동물 또는 트랜스제닉 식물 또는 식물 세포를 제공하는 것을 포함하는, 본 발명의 적어도 하나의 분리된 인간 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 제조하는 방법이 제공된다. 또한, 상기 방법에 의해 제조된 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디가 본 발명에 포함된다.

본 발명은 또한 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 검출 및/또는 회수 가능 양으로으로 발현시키는 조건 하에서 여기에 기재된 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는, 숙주 세포에서 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 또는 항-이디오타입 항체를 발현시키는 적어도 하나의 방법을 제공한다.

본 발명은 여기에 기재된 임의의 발명을 추가로 제공한다.

발명의 상세한 설명

본 발명은 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 코딩하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 분리된, 재조합 및/또는 합성 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체, 조성물 및 코딩 핵산 분자를 제공한다. 이러한 본 발명의 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 특정 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 서열, 도메인s, 그의 단편s 및 특정 변이체, 및 치료 조성물, 방법 및 장치를 포함하는 상기 핵산 및 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 제조 및 이용 방법을 포함한다.

본 발명은 또한 여기에 기재되거나 및/또는 공지된 적어도 하나의 분리된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 제공한다. EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 적어도 하나의 힌지 영역 또는 그의 단편 (H)에 직접 연결된 적어도 하나의 CH2 영역에 직접 연결된 적어도 하나의 CH3 영역을 임의로 포함할 수 있고, 힌지 영역 또는 그의 단편 (H)의 적어도 한 부분은 임의의 링커 서열 (L)에 직접 연결되며, 링커 서열 (L)은 적어도 하나의 EPO 미메틱 치료 펩티드 (P)에 직접 연결되고, 치료 펩티드 (P)는 임의로 적어도 하나의 가변 항체 서열 (V)의 적어도 한 부분에 추가로 직접 연결된다.

바람직한 구체예에서, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 하기 화학식 (I)을 포함하고:

상기 식에서, V는 이뮤노글로불린 가변 영역의 N-말단의 적어도 한 부분이고, P는 적어도 하나의 생활성 폴리펩티드이며, L은 미메티바디가 다른 배향 및 결합 성질을 가지는 것을 허용함으로써 구조적 유연성을 제공하는 폴리펩티드이고, H는 이뮤노글로불린 가변 영역의 한 부분이며, CH2는 이뮤노글로불린 CH2 불변 영역의 적어도 한 부분이고, CH3은 이뮤노글로불린 CH3 불변 영역의 적어도 한 부분이며, m, n, o p, q, r, 및 s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수일 수 있고, 이뮤노글로불린 분자의 다른 유형, 예컨대, 이로 제한되지는 않으나 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgM, IgD, IgE 등, 또는 그의 임의의 조합을 모방한다. m=1인 모노머는 이로 제한되는 것은 아니나 Cys-Cys 이황화 결합 또는 다른 이뮤노글로불린 서열과 같은 연합(association) 또는공유 결합에 의해 다른 모노머에 연결될 수 있다. 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 치료 펩티드 및 그의 고유의 또는 획득한 시험관내(in vitro), 생체내(in vivo) 또는 동일계(in situ) 성질 또는 활성을 제공하면서, 고유의 성질 및 기능을 가진 항체 구조를 모방한다. 본 발명의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디의 항체 및 치료 펩티드 부분의 다양한 부분은 공지된 것과 조합되어 여기에 기재된 것과 같이 다양해질 수 있다.

여기에 사용된, "EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디", "EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디부분" 또는 "EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 단편" 및/또는 "EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 변이체" 등은 이로 제한되는 것은 아니나 서열번호: 1-30 중의 적어도 하나와 같이 시험관내(in vitro), 동일계(in situ) 및/또는 바람직하게는 생체내(in vivo) 리간드 결합 또는 활성과 같은 적어도 하나의 단백질의 적어도 하나의 리간드 결합 또는 적어도 하나의 생물학적 활성을 모방하거나 가지거나 자극한다. 예컨대, 본 발명의 적합한 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 특정 부분 또는 변이체는 적어도 하나의 단백질 리간드에 결합하고, 적어도 하나의 단백질 리간드, 수용체, 가용성 수용체 등을 포함한다. 적합한 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 특정 부분, 또는 변이체는 또한 적어도 하나의 활성 단백질 수용체 신호(signaling) 또는 다른 측정 또는 검출 가능 활성을 조절, 증가, 변형 또는 활성화시킬 수 있다.

본 발명의 방법 및 조성물에 유용한 미메티바디는 단백질 리간드 또는 수용체에 대한 적합한 친화력 결합 및 임의로 낮은 독성을 가지는 것을 특징으로 한다. 구체적으로, 가변 영역 부분, 불변 영역 (CH1 부분 없음) 및 골격, 또는 그의 임의의 부분 (예컨대, 가변 중쇄 또는 경쇄의 J, D 또는 V 영역의 부분; 적어도 하나의 힌지 영역의 적어도 한 부분, 불변 중쇄 또는 경쇄 등)과 같은 개별 성분은 개별적 및/또는 집합적으로 임의 및 바람직하게 저 면역원성을 가지는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디가 본 발명에 유용하다. 본 발명에 이용될 수 있는 미메티바디는 임의로 연장된 기간 동안 좋은 내지 뛰어난 증상 완화 및 낮은 독성을 가지고 환자를 치료할 수 있는 그의 능력을 특징으로 한다. 저 면역원성 및/또는 높은 친화력 및 다른 미확인 성질은 얻어지는 치료 결과에 기여할 수 있다. 여기에서 "저 면역원성"은 치료 환자의 약 75% 미만, 또는 바람직하게는 50, 45, 40, 35, 30, 35, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 및/또는 1 % 미만으로 상당한 HAMA, HACA 또는 HAHA 반응의 증가, 및 또는 치료 환자에서 낮은 역가 증가 (이중 항원 효소면역분석법(double 항원 enzymeimmunoassay)으로 측정하여 약 300 미만, 바람직하게는 약 100 미만)로 정의될 수 있다 (예컨대, Elliott et al., Lancet 344: 1125-1127(1994)).

유용성

본 발명의 분리된 핵산은 세포, 조직, 기관 또는 동물 (포유동물 및 인간을 포함)에서 이로 제한되는 것은 아니나 면역 질병 또는 질환, 심혈관 질병 또는 질환, 감염, 악성, 및/또는 신경 질병 또는 질환, 빈혈; 면역/자가면역; 및/또는 암/감염, 및 다른 공지 또는 특정 단백질 관련 증상 중의 적어도 하나로부터 선택된 적어도 하나의 단백질 관련 증상의 상태를 조절, 치료, 완화, 발병 예방을 보조, 또는 감소시키는데 사용될 수 있는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 그의 단편 또는 특정 변이체를 제조하는데 사용될 수 있다.

이런 방법은 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 함유하는 유효량의 조성물 또는 약제학적 조성물을 증상, 효과 또는 메카니즘에서 이런 조절, 치료, 완화, 예방 또는 감소가 필요한 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 여기에 기재거나 관련 기술에서 공지된 바와 같이, 유효량은 단일 또는 다중 투여 당 약 0.0001 내지 500 mg/kg의 양, 또는 단일 또는 다중 투여당 0.0001-5000 μg/ml 혈청 농도를 얻을 수 있는 양, 또는 공지 방법을 이용해서 결정된 임의의 유효 범위 또는 그 안의 값을 포함할 수 있다.

인용

여기에 인용된 모든 문헌 및 특허는 본 발명의 출원시의 종래 기술 및 본 발명의 기재 및 실시 가능성을 제공하는 참조로서 여기에 전체가 포함되어 있다. 문헌은 임의의 과학, 특허 문헌, 또는 녹음, 전자 또는 인쇄 형태를 포함하는 임의의 매체 형태로 얻을 수 있는 정보를 지칭한다. 다음의 참고자료는 참조로서 여기에 전체가 포함되어 있다: Ausubel, et al., ed., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (1987-2003); Sambrook, et al., Molecular Cloning: Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow and Lane, Antibodies, Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan, et al., eds., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2003); Colligan et al., Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2003).

본 발명의 미메티바디

EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 적어도 하나의 적어도 하나의 코어 힌지 영역을 포함하는 힌지 영역 단편 (H)의 적어도 한 부분에 직접 연결된 적어도 하나의 CH2 영역에 직접 연결된 적어도 하나의 CH3 영역을 임의로 포함할 수 있고, 힌지 영역 또는 그의 단편 (H)의 적어도 한 부분은 임의의 링커 서열 (L)에 직접 연결되며, 링커 서열 (L)은 적어도 하나의 치료 펩티드 (P)에 직접 연결되고, 치료 펩티드 (P)는 임의로 적어도 하나의 가변 항체 서열 (V)의 적어도 한 부분에 추가로 직접 연결된다. CH3-CH2-H-L-V의 쌍에 관한 바람직한 구체예에서, 상기 쌍은 연합 또는 공유 결합에 의해 연결된다. 따라서, 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 치료 펩티드 및 그의 고유의 또는 획득한 시험관내(in vitro), 생체내(in vivo) 또는 동일계(in situ) 성질 또는 활성을 제공하면서, 고유의 성질 및 기능을 가진 항체 구조를 모방한다. 본 발명의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디의 항체 및 치료 펩티드 부분의 다양한 부분은 공지된 것과 조합되어 여기에 기재된 것과 같이 다양해질 수 있다.

따라서, 본 발명의 미메티바디는 공지의 단백질과 비교하여 적어도 하나의 바람직한 성질을 가진다 (예컨대, 이로 제한되는 것은 아니나 적어도 하나의 증가된 반감기, 증가된 활성, 보다 특이적 활성, 증가된 화합력(avidity), 증가 또는 감소된 오프 레이트(off rate), 활성의 선택된 또는 보다 바람직한 서브세트, 감소된 면역원성, 적어도 하나의 바람직한 치료 효과의 증가된 질(quality) 또는 듀레이션(duration), 더 적은 부작용 등).

화학식 (I)의 미메티바디의 단편은 당업계에 공지된 및/또는 여기에 기재된 효소적 절단, 합성 또는 재조합 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 또한, 미메티바디는 천연 종결 사이트의 상류에 하나 이상의 종결 코돈이 도입된 항체 유전자를 이용하여 다양한 절단 형태로 제조될 수 있다. 미메티바디의 다양한 부분은 통상의 기술을 이용해서 화학적으로 함께 연결될 수 있거나, 유전 공학 기술을 이용해서 인접 단백질(contiguous protein)으로 제조될 수 있다. 예컨대, 인간 항체 사슬의 불변영역의 적어도 하나를 코딩하는 핵산은 발현되어 본 발명의 미메티바디에 사용되는 인접 단백질을 생산할 수 있다. 예컨대, Ladner et al., U. S. Patent No. 4,946,778 및 Bird, R. E. et al., Science, 242: 423-426 (1988), regarding single chain 항체을 참조.

여기에 사용된, "인간 미메티바디"는 단지 주요하지 않은 서열 변화 또는 변이를 가지며 단백질 (예컨대, EPO 미메틱 펩티드, 골격, C_L, C_H 도메인 (예컨대, C_H2, C_H3), 힌지, (V_L, V_H))의 실질적 모든 부분이 인간에서 실질적으로 비-면역원을 나타낼 것으로 기재되는 항체를 지칭한다. 이런 변화 또는 변이는 임의 및 바람직하게 비-변형된 인간 항체, 또는 본 발명의 미메티바디에 대해 상대적으로 인간에서 면역원성을 유지하거나 감소시킨다. 따라서, 인간 항체 및 대응하는 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 키메라 또는 인간화 항체와 다르다. 인간 항체 및 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 인간 이뮤노글로불린 (예컨대, 중쇄 및/또는 경쇄) 유전자을 발현시킬 수 있는 비-인간 동물 또는 세포에 의해 제조될 수 있다.

적어도 하나의 단백질 리간드 또는 그의 수용체에 대해 특이적인 인간 미메티바디가 분리된 및/또는 EPO 단백질 수용체 또는 리간드, 또는 그의 부분 (합성 펩티드와 같은 합성 분자를 포함)과 같은 적합한 리간드에 대해 설계될 수 있다. 이런 미메티바디의 제조는 적어도 하나의 활성 단백질 또는 그의 부분의 리간드 결합 영역 또는 서열을 동정하고 특성화하는 공지의 기술을 이용하여 수행된다.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 적어도 하나의 세포주, 혼합된 세포주, 불멸화 세포 또는 불멸화 및/또는 배양된 세포의 클론 집단에 의해 제조된다. 불멸화 단백질 생산 세포는 적당한 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 바람직하게, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 기능적으로 재배열되었거나 재배열될 수 있고, 추가로 여기에 기재된 미메티바디 구조, 예컨대 이로 제한되는 것은 아니나 화학식 (I) (여기에서 공지된 바와 같이 C- 및 N- 말단 가변 영역의 부분은 V로 사용될 수 있고, 힌지 영역은 H로 사용될 수 있으며, CH2는 CH2로, CH3는 CH3로 사용될 수 있다)을 추가로 포함하는 적어도 하나의 인간 이뮤노글로불린 로커스로부터 유래된 또는 그에 실질적으로 유사한 서열을 가지는 DNA를 포함하는 핵산 또는 벡터를 제공함으로써 제조될 수 있다.

여기에 사용된, "기능적으로 재배열된"은 V(D)J 재조합이 일어남으로써, 이뮤노글로불린 사슬 (예컨대, 중쇄), 또는 그의 임의의 부분을 코딩하는 이뮤노글로불린 유전자를 생산하는 이뮤노글로불린 로커스 유래의 핵산 세그멘트를 지칭한다. 기능적으로 재배열된 이뮤노글로불린 유전자는 예컨대, 뉴클레오티드 시퀀싱, 유전자 세그멘트 사이의 조인트를 코딩하는 유전자에 어닐링할 수 있는 프로브를 이용한 혼성화 (예컨대, 서던 블롯팅, 노던 블롯팅) 또는 유전자 세그멘트 사이의 조인트를 코딩하는 유전자에 어닐링할 수 있는 프라이머를 이용한 이뮤노글로불린 유전자의 효소적 증폭 (예컨대, 폴리머라제 체인 리액션)와 같은 바람직한 방법을 이용해서 직·간접적으로 확인될 수 있다. 세포가 특정 가변 영역 또는 특정 서열(예컨대, 적어도 하나의 P 서열)을 포함하는 가변 영역을 가지는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 부분 또는 변이체를 생산하는지 여부는 또한 적당한 방법을 이용하여 결정될 수 있다.

본 발명의 미메티바디, 특정 부분 및 변이체는 또한 우유로 이러한 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 생산하는 염소, 소, 말, 양 등과 같은 트랜스제닉 동물 또는 포유동물을 제공하기 위해 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 코딩하는 핵산을 이용함으로써 제조될 수 있다. 이런 동물은 항체 코딩 서열에 대해 적용된 공지 방법을 이용하여 제공될 수 있다. 예컨대, 이로 한정되는 것은 아니나 US 특허 번호 5,827,690; 5,849,992; 4,873,316; 5,849,992; 5,994,616; 5,565,362; 5,304,489 등을 참조, 각각은 참고로서 여기에 포함되어 있다.

본 발명의 미메티바디, 특정 부분 및 변이체는 이런 미메티바디, 특정 부분 또는 변이체를 식물 부분 또는 그로부터 배양된 세포 내에 제조하는 트랜스제닉 식물 및 배양된 식물 세포 (예컨대, 이로 제한되는 것은 아니나 담백 및 옥수수)를 제공하기 위해 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 코딩 핵산을 이용함으로써 제조될 수 있다. 비제한적인 예로서, 재조합 단백질을 발현하는 트랜스제닉 담배 잎은 예컨대 유도 프로모터를 이용하여 다량의 재조합 단백질을 제공하는데 이용될 수 있다. 예컨대, Cramer et al., Curr. Top. Microbol. Immunol. 240: 95-118 (1999) 및 여기에 인용된 문헌. 또한 트랜스제닉 옥수수 및 콘(corn)은 다른 재조합 시스템에서 제조된 또는 천연원으로부터 정제한 것과 동등한 생물학적 솰성을 가지고 상업적 생산 수준으로 포유동물 단백질을 발현시키는데 사용되어 왔다. 예컨대, Hood et al., Adv. Exp. Med. Biol. 464: 127-147 (1999) 및 여기에 인용된 문헌을 참조. 항체는 또한 단일 사슬 미메티바디 (scFv's)와 같은 항체 단편를 포함하는 트랜스제닉 식물 씨앗 (담배 씨앗 및 감자 덩이줄기를 포함)으로부터 상당한 양으로 제조될 수 있다. 예컨대, Conrad et al., Plant Mol. Biol. 38: 101- 109 (1998) 및 여기에 인용된 문헌을 참조. 따라서, 본 발명의 미메티바디, 특정 부분 및 변이체는 또한 공지된 방법에 따라 트랜스제닉 식물로부터 제조될 수 있다. 예컨대, Fischer et al., Biotechnol. Appl. Biochem. 30: 99-108 (Oct., 1999), Ma et al., Trends Biotechnol. 13: 522-7 (1995); Ma et al., Plant Physio. 109: 341-6 (1995); Whitelam et al., Biochem. Soc. Trans. 22: 940-944 (1994); 및 여기에 인용된 문헌을 참조. 상기 문헌은 전체로서 여기에 참고로 포함되어 있다.

본 발명의 미메티바디는 인간 단백질 리간드와 넓은 범위의 친화력(K_D)을 가지고 결합한다. 바람직한 구체예에서, 본 발명의 적어도 하나의 인간 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 임의로 적어도 하나의 단백질 리간드와 높은 친화력으로 결합할 수 있다. 예컨대, 적어도 하나의 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 적어도 하나의 단백질 리간드와 약 10^-7M 이하의 K_D, 보다 바람직하게는 약 0.1-9.9(또는 그안의 임의의 범위 또는 수치) X 10^-7, 10^-8, 10^-9, 10^-10, 10^-11, 10^-12, 또는 10^-13M 이하의 K_D, 또는 그안의 임의의 범위 또는 수치를 가지고 결합할 수 있다.

적어도 하나의 단백질 리간드에 대한 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디의 친화력 또는 화합력은 예컨대 항체-항원 결합 친화력 또는 화합력을 결정하기 위해 사용되는 임의의 적당한 방법을 이용하여 실험적으로 결정될 수 있다 (예컨대, Berzofsky, et al., "Antibody-Antigen Interactions," In Fundanzental Immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press: New York, NY(1984); Kuby, Janis Immuzlology, W.H. Freeman 및 Company: New York, NY (1992); 및 여기에 기재된 방법 참조). 특정 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디-리간드 상호작용의 측정된 친화력은 다른 조건(예컨대, 염 농도, pH)하에 측정된다면 달라질 수 있다. 따라서, 친화력 및 다른 리간드-결합 파라미터 (예컨대, K_D, K_a, K_d)의 측정은 바람직하게는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 및 리간드의 표준화된 용액, 및 여기에 기재된 것과 같은 표준화된 버퍼를 이용하는 것이 바람직하다.

핵산 분자

서열번호: 1-30 및 항체의 적어도 한부분의 적어도 하나의 인접 아미노산의 적어도 90-100%를 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 같은 여기에 제공된 정보를 이용해서(여기에서, 상기 서열은 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 제공하는 화학식 (I)의 P 서열로 삽입되고, 추가로 그의 특정 단편, 변이체 또는 공통 서열을 포함하거나 이들 서열의 적어도 하나를 포함한다), 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 코딩하는 본 발명의 핵산 분자를 여기에 기재되거나 공지의 방법을 이용해서 얻을 수 있다.

본 발명의 핵산 분자는 mRNA, hnRNA, tRNA 또는 다른 형태와 같은 RNA 형태, 또는 이로 제한되는 것을 아니나 클로닝 또는 합성 제조 또는 그의 임의의 조합에 의해 얻은 cDNA 및 게놈 DNA를 포함하는 DNA 형태일 수 있다. DNA는 삼중 나선, 이중 나선, 단일 나선 또는 그의 임의의 조합일 수 있다. DNA 또는 RNA 스트랜드의 적어도 하나의 임의의 부분은 코딩 스트랜드(센스 스트랜드로도 알려짐)일 수 있고, 비-코딩 스트랜드 (안티-센트 스트랜드로도 알려짐)일 수 있다.

본 발명의 분리된 핵산 분자는 오픈 리딩 프레임 (ORF), 임의로 하나 이상의 인트론, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체에 대한 코딩 서열을 함유하는 핵산 분자를 포함하는 핵산 분자; 및 상술한 것과 뉴클레오티드 서열이 실질적으로 다르지만, 이러한 것이 유전자 코드에 기인한 것으로서 여전히 여기에 기재된 및/또는 당업계에 공지된 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 코딩하는 핵산 분자를 포함한다. 따라서, 당업자에게 있어 본 발명의 특정 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 코딩하는 이러한 축퇴 핵산 변이체를 생성하는 것은 루틴(routine)할 것이다. 예컨대, Ausubel, et al., supra,를 참조. 이러한 핵산 변이체도 본 발명에 포함된다.

여기에 기재된, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 코딩 핵산을 포함하는 본 발명의 핵산 분자는 이로 제한되는 것은 아니나 그 자체로 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 단편의 아미노산 서열을 코딩하는 것; 전체 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 그의 부분에 대한 코딩 서열; EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 단편 또는 부분에 대한 코딩 서열, 및 이로 제한되는 것은 아니나 전사, 스플라이싱 및 폴리아데닐화 시그날 (예컨대-리보솜 결합 및 mRNA의 안정성)을 포함하는 mRNA 가공에서 역할을 하는 전사된 비-해독 서열과 같은 비-코딩 5' 및 3'서열을 포함하는 추가적 비-코딩 서열과 함께 적어도 하나의 인트론과 같은 전술한 추가적 코딩 서열의 존재 또는 부재하의 적어도 하나의 싱글 리더 또는 융합 펩티드의 코딩 서열과 같은 추가서열; 추가 기능을 제공하는 것과 같은 추가 아미노산을 코딩하는 추가 코딩 서열을 포함할 수 있다. 따라서, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 코딩 서열은 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 단편 또는 부분을 포함하는 융합된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 정제를 촉진시키는 펩티드를 코딩하는 서열과 같은 마커 서열과 융합될 수 있다.

여기에 기재된 폴리뉴클레오티드에 대해 선택적으로 혼성화하는 폴리뉴클레오티드

본 발명은 여기에 개시된 폴리뉴클레오티드 또는 그의 특정 변이체 또는 부분을 포함하는 여기에 개시된 다른 것에 대해 선택적 혼성화 조건하에서 혼성화하는 분리된 핵산을 제공한다. 따라서, 본 구체예의 폴리뉴클레오티드는 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산을 분리, 검출 및/또는 정량하는데 사용될 수 있다.

낮은 또는 보통의 엄밀한 혼성화 조건이 전형적이지만, 상보적 서열에 대해 상대적으로 감소된 서열 동일성을 가지는 서열을 배제하는 것은 아니다. 보통 및 높은 엄밀한 조건은 보다 높은 동일성의 서열에 대해 임의로 사용될 수 있다. 낮은 엄밀한 조건은 약 40-99% 서열 동일성을 가지는 서열의 선택적 혼성화를 허용하고, 오르토로구스(orthologous) 또는 파라로구스(paralogous) 서열을 동정하는데 사용될 수 있다.

임의로, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 여기에 기재된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 적어도 한 부분을 코딩할 것이다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 대한 선택적 혼성화에 사용될 수 있는 핵산 서열을 포함한다. 예컨대, Ausubel, supra; Colligan, supra을 참조. 각각은 여기에 참고로 포함되었다.

핵산의 제조

본 발명의 분리된 핵산은 (a) 재조합 방법, (b) 합성 기술, (c) 정제 기술, 또는 이들의 조합 및, 공지 기술을 이용해서 제조될 수 있다.

상기 핵산은 본 발명의 폴리뉴클레오티드외의 서열을 편의상 포함할 수 있다. 예컨대, 하나 이상의 엔도뉴클라제 제한 자리를 포함하는 다중-클로닝 부위가 폴리뉴클레오티드의 분리를 돕기 위해 핵산에 삽입될 수 있다. 또한, 본 발명의 해독된 폴리뉴클레오티드의 분리를 돕기 위해 해독 가능 서열이 삽입될 수 있다. 예컨대, 헥사-히스티딘 마커 서열은 본 발명의 단백질을 정제하는 편리한 수단을 제공한다. 코딩 서열을 제외한 본 발명의 핵산은 임의로 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 클로닝 및/또는 발현을 위한 벡터, 아답터, 또는 링커일 수 있다.

폴리뉴클레오티드의 분리를 돕기 위해 클로닝 및/또는 발현 기능을 최적화하기 위해, 또는 폴리뉴클레오티드의 세포로의 도입을 개선하기 위해 추가 서열이 클로닝 및/또는 발현 서열에 부가될 수 있다. 클로닝 벡터, 발현 벡터, 아답터 및 링커의 이용은 당업계에 잘 알려져 있다. 예컨대, Ausubel, supra; 또는 Sambrook, supra를 참조.

핵산 제조를 위한 재조합 방법

RNA, cDNA, 게놈 DNA, 또는 그의 임의의 조합과 같은 본 발명의 분리된 핵산 조성물은 당업자에게 알려진 임의의 클로닝 방법을 이용하여 생물원으로부터 얻을 수 있다. 한 구체예에서, 적절히 엄밀한 조건하에서 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 선택적으로 혼성화하는 올리고뉴클레오티드 프로브는 cDNA 또는 게놈 DNA 도서관에서 원하는 서열을 동정하는데 사용된다. RNA의 분리 및 cDNA 및 게놈 라이브러리의 제조는 당업자에게 잘 알려져 있다 (예컨대, Ausubel, supra; 또는 Sambrook, supra).

핵산 제조를 위한 합성법

또한, 본 발명의 분리된 핵산은 공지 방법에 의해 직접 화학적으로 합성될 수 있다(예컨대, Ausubel, et al., supra을 참조). 화학 합성 유전자는 일반적으로 단일-나선 올리로뉴클레오티드를 제조되고, 상보 서열과의 혼성화에 의해 또는 단일 나선을 주형으로 이용한 DNA 중합효소와의 중합에 의해 이중-나선 DNA으로 전환될 수 있다. 당업자는 DNA의 화학 합성이 약 100 또는 그 이상의 염기 서열에 한정되지만, 더 긴 서열이 짧은 서열들의 리게이션에 의해 얻을 수 있다는 것을 인식할 것이다.

재조합 발현 카세트

본 발명은 또한 본 발명의 핵산을 포함하는 재조합 발현 카세트를 제공한다. 본 발명의 핵산 서열, 예컨대 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 코딩하는 cDNA 또는 게놈 서열,은 적어도 하나의 바람직한 숙주 세포로 도입될 수 있는 재조합 발현 카세트를 제조하는데 사용될 수 있다. 재조합 발현 카세트는 전형적으로 의도된 숙주 세포 내에서 폴리뉴클레오티드의 전사를 지시하는 전사 개시 조절 서열에 작동 가능하게 연결된 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 헤테로로구스(heterologous) 및 비-헤테로로구스(non-heterologous) (즉, 내인(endogenous)) 프로모터가 본 발명의 핵산의 발현을 지시하기 위해 사용될 수 있다.

다른 구체예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 발현을 상향 또는 하향 조절하기 위해, 프로모터, 인핸서, 또는 다른 요소로 작용하는 분리된 핵산이 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 비-헤테로로구스 형태의 적절한 위치 (업스트림, 다운스트림 또는 인트론 내)에 도입될 수 있다. 예컨대, 내인 프로모터는 공지 방법에 따라 돌연변이, 결손 및/또는 치환에 의해 생체내 또는 시험관내 변경될 수 있다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 바람직하게는 센스 또는 안티-센스 배향으로 발현될 수 있다. 센스 또는 안티-센스 배향에서의 유전자 발현의 조절은 관찰 가능 특성에 직접 영향을 줄 것으로 예상된다. 억제하는 다른 방법은 센스 억제이다. 센스 배향에 맞춰진 핵산의 도입은 표적 유전자의 전사를 차단하는 유효한 수단이다.

벡터 및 숙주 세포

본 발명은 또한 본 발명의 분리된 핵산 분자를 포함하는 벡터, 재조합 벡터에 의해 유전학적으로 가공된 숙주세포, 및 당업계에 공지된 재조합 기술에 의한 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 제조에 관한 것이다. 예컨대, Sambrook, et al., supra; Ausubel, et al., supra,를 참조, 각각은 여기에 참고로 전체가 포함되어 있다.

폴리뉴클레오티드는 숙주에서의 증식에 대한 선택적 표지를 함유하는 벡터에 임의로 연결될 수 있다. 유전적으로, 플라스미드 벡터는 일렉트로포레이션 등과 같은 바람직한 공지 방법을 이용하여 세포에 도입된다 (다른 공지 방법은 칼슘 포스페이트 침전과 같은 벡터를 침전물로 사용하는 것을 포함하고, 전하를 가진 리피드와 복합체로 사용하는 것을 포함한다). 벡터가 바이러스이면, 적당한 패키지 세포주를 이용해서 시험관내 패키지되어 숙주세포로 도입될 수 있다.

DNA 삽입은 적당한 프로모터에 작동가능하게 연결되어야 한다. 발현 구조물은 추가로 전사 개시, 종결 및 전사 영역에서 해독을 위한 리보솜 결합 부위의 적어도 하나를 위한 부위를 임의로 함유할 것이다. 구조물에 의해 발현된 성숙 전사물의 코딩 부분은 바람직하게는 시작에 위치한 해독 개시 코돈 및 해독되는 mRNA의 끝에 적절히 위치한 종결 코돈 (예컨대, UAA, UGA 또는 UAG)을 포함할 것이고, UAA 및 UAG가 포유동물 또는 진핵 세포 발현에 대해 바람직하다.

발현 벡터는 바람직하지만 임의로 적어도 하나의 선택 마커를 포함한다. 이러한 마커는, 예컨대, 이로 제한되는 것은 아니나, 메토트렉세이트 (MTX), 디하이드로폴레이트 환원효소 (DHFR, 미국 특허 번호 4,399,216; 4,634,665; 4,656,134; 4,956,288; 5,149,636; 5,179,017, 앰피실린, 네오마이신 (G418), 마이코페놀산, 또는 글루타민합성효소 (GS, US 특허 번호 5,122,464; 5,770,359; 5,827,739) 진핵 세포 배양에 대한 내성, 및 E. coli 및 다른 세균 또는 원핵생물 배양에 대한 테트라사이클린 또는 앰피실린 내성 유전자 (상기 특허는 참고로 여기에 포함되어 있다). 상술한 숙주 세포를 위한 적절한 배양 매질 및 조건은 당업계에 알려져 있다. 바람직한 벡터는 당업자에게 용이하게 명백하다. 벡터 구조물의 숙주 세포로의 도입은 칼슘 포스페이트 트랜스펙션, DEAE-덱스트란 매개 트랜스펙션, 양이온 리피드-매개 트랜스펙션, 일렉트로포레이션, 트랜스덕션, 인펙션 또는 다른 공지 방법의 의해 달성할 수 있다. 이런 방법은 Sambrook, supra, Chapters 1-4 및 16-18; Ausubel, supra, Chapters 1, 9, 13,15, 16과 같이 당업계에 알려져 있다.

본 발명의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 융합 단백질과 같은 변형된 형태로 발현될 수 있고, 분비 신호 및 추가적 헤테로로구스 기능 영역을 포함할 수 있다. 예컨대, 추가적 아미노산 영역, 특히 하전된 아미노산,은 정제 과정 중 숙주세포에서, 또는 그 뒤의 취급 및 저장에서 안정성 및 지속성을 개선시키기 위해 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 N-말단에 부가될 수 있다. 또한, 펩티드 모이어티는 정제를 촉진시키기 위해 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체에 부가될 수 있다. 이런 영역은 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 적어도 하나의 그의 단편의 최종 제조 전에 제거될 수 있다. 이런 방법은 Sambrook, supra, Chapters 17.29-17. 42 및 18.1-18. 74; Ausubel, supra, Chapters 16,17 및 18과 같은 많은 표준 실험 메뉴얼에 기재되어 있다.

당업자는 본 발명의 단백질을 코딩하는 핵산을 발현시키기 위해 이용 가능한 수많은 발현 시스템에 대해 알고 있을 것이다.

미메티바디, 그의 특정 부분 또는 변이체의 제조에 유용한 예시적인 세포 배양은 포유동물 세포이다. 포유동물 세포 시스템은 포유동물 현탁액 또는 생물반응기가 또한 사용될 수 있지만 종종 세포의 단층 형태일 것이다. 온전한 글리코실화 단백질을 발현시킬 수 있는 많은 바람직한 숙주 세포주가 당업계에 개발되었고, COS-1 (예컨대, ATCC CRL 1650), COS-7 (예컨대, ATCC CRL-1651), HEK293, BHK21 (예컨대, ATCC CRL-10), CHO (예컨대, ATCC CRL 1610, DG-44) 및 BSC-1 (예컨대, ATCC CRL-26) 세포주, hepG2 세포, P3X63Ag8.653, SP2/0-Agl4,293 세포, HeL세포 등을 포함하고, 예컨대, American Type Culture Collection, Manassas, Va로부터 용이하게 입수할 수 있다. 바람직한 숙주 세포는 골수종 및 림프종 세포와 같은 림프종 유래 세포를 포함한다. 특히 바람직한 숙주 세포는 P3X63Ag8.653 세포 (ATCC Accession Number CRL-1580) 및 SP2/0-Agl4 세포 (ATCC Accession Number CRL-1851)이다.

이들 세포를 위한 발현 벡터는 이로 제한되는 것은 아니나 복제원점; 프로모터 (예컨대, 레이트(late) 또는 어얼리(early) SV40 프로모터, CMV 프로모터 (예컨대, US 특허 번호 5,168,062; 5,385,839), HSV tk 프로모터, pgk (포스포글리세레이트 키나아제) 프로모터, EF-1 알파 프로모터 (예컨대, US 특허 번호 5,266,491), 적어도 하나의 인간 이뮤노글로불린 프로모터; 인핸서, 및/또는 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이싱 부위, 폴리아데닐화 부위 (예컨대, SV40 large T Ag 폴리 부가 부위)와 같은 가공 정보 부위(processing information site), 및 전사 종결 서열과 같은 발현 조절 서열의 하나 이상을 포함할 수 있다. 예컨대, Ausubel et al., supra; Sambrook, et al., supra를 참조. 본 발명의 핵산 또는 활성 단백질을 생산하는데 유용한 다른 세포는 공지되었거나 및/또는 예컨대 American Type Culture Collection Catalogue of Cell liness and Hybridomas (www.atcc. org) 또는 다른 공지 시판원으로부터 입수할 수 있다.

진핵 숙주 세포를 사용하는 경우, 폴리아데닐화 또는 전사 종결 서열이 전형적으로 벡터에 도입된다. 종결 서열의 예는 보바인 성장 호르몬 유전자 유래의 폴리아데닐화 서열이다. 전사물의 정확한 스플라이싱을 위한 서열이 또한 도입될 수 있다. 스플라이싱 서열의 예는 SV40 (Sprague, et al., J. Virol. 45: 773-781(1983)) 유래의 VP1 인트론이다. 추가적으로, 숙주 세포에서 복제를 조절하는 유전자 서열이 당업계에 공지된 바에 따라 벡터에 도입될 수 있다.

EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 그의 특정 부분 또는 변이체 의 정제

EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 이로 제한되는 것은 아니나 단백질 정제, 암모늄 설페이트 또는 에탄올 침전, 산 추출, 음이온 또는 양이온 교환 크로마토그래피, 포스포셀룰로오스 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피 및 레시틴 크로마토그래피를 포함하는 공지 방법에 의해 재조합 세포로부터 회수 및 정제될 수 있다. 고 성능 액체 크로마토그래피 ("HPLC")가 또한 정제에 사용될 수 있다. 예컨대, Colligan, Current Protocols in Immunology, 또는 Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2003), Chapters 1, 4, 6, 8, 9, 10를 참조, 각각은 여기에 참고로 포함되었다.

본 발명의 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 천연 정제된 산물, 화학 합성 방법에 의한 산물, 및 예컨대 효모, 고등 식물, 곤충 및 포유동물세포를 포함하는 진핵 숙주로부터 재조합 기술에 의해 제조된 산물을 포함한다. 재조합 재조 방법에 사용된 숙주에 따라, 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 글리코실화되거나 비-글리코실화될 수 있지만, 글리코실화되는 것이 바람직하다. 이런 방법은 Sambrook, supra, Sections 17.37-17. 42; Ausubel, supra, Chapters 10,12, 13,16, 18 및 20, Colligan, Protein Science, supra, Chapters 12-14과 같은 많은 표준 실험 메뉴열에 기재되어 있고, 여기에 참고로서 전체가 포함되어 있다.

미메티바디 , 특정 단편 및/또는 변이체

분리된 본 발명의 미메티바디는 보다 자세히 논의될 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 어느 하나에 의해 코딩되는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체, 또는 어느 분리된 또는 제조된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 그의 특정 부분 또는 변이체를 포함한다.

바람직하게, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 리간드-결합 부분 또는 변이체는 적어도 하나의 EPO 단백질 리간드 또는 수용체와 결합함으로써, 대응 단백질 또는 그의 단편의 적어도 하나의 EPO 생물학적 활성을 제공한다. 다른 치료 또는 진단상 중요한 단백질이 당업계에 알려져 있고, 그런 단백질의 적절한 분석법 또는 생물학절 활성이 당업계에 잘 알려져 있다.

본 발명의 바람직한 EPO 미메틱 펩티드의 비-제한적인 예를 표 1에 나타냈다. 이들 펩티드는 당업계에 개시된 및/또는 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 한 글자 아미노산 약칭이 대부분 사용된다. 이들 서열 중 X는 (본 명세서를 통해서, 특정 사안에서 다르게 특정되지 않는 한) 20 개의 천연 또는 공지 아미노산 잔기 또는 존재할 수 있는 그의 공지 유도체, 또는 그의 공지의 변형된 아미노산을 의미한다. 이러한 펩티드는 링커의 존재 또는 부재하에 탠덤(tandem) (즉, 순차적으로) 연결될 수 있고, 몇개의 탠덤 연결된 예가 표에 제공된다. 링커는 "△"로 표시되었고, 여기에 기재된 임의의 링커일 수 있다. 탬던 반복 및 링커는 명료성을 위해 대쉬로 분리하여 표시하였다. 시스테이닐 잔기를 함유하는 펩티드는 임의로 다른 Cys-함유 펩티드와 가교될 수 있고, 이들 중 하나 또는 모두는 담체에 연결될 수 있다. 가교된 몇개의 예가 표에 제공된다. 하나 이상의 Cys 잔기를 가지는 펩티드는 인트라펩티드 이황화 결합을 또한 형성할 수 있다; 예컨대, 표 1의 EPO-미메틱 펩티드를 참조. 인트라펩티드 이황화 결합 펩티드의 몇개 예가 표에 기재되어 있다. 이들 펩티드는 여기에 기재된 것처럼 유도체화될 수 있고, 유도체화된 예가 표에 제공된다. 카복실 말단이 아미노기로 캡핑(capped)될 수 있는 유도체에 대해, 캡핑 아미노 그룹은 -NH₂로 표시된다. 아미노산 잔기가 아미노산 잔기가 아닌 다른 잔기에 의해 치환되는 유도체에 대해, 치환은 δ로 표시되고, 예컨대, Bhatnagar et al. (1996), J. Med. Chem. 39: 3814- 9 및 Cuthbertson et al. (1997), J. Med. Chem.40: 2876-82(여기에 참고로서 전체가 포함됨)에 기재된 것과 같은 당업계에 공지된 임의의 모이어티를 나타낸다. J 치환체 및 Z 치환체 (Z₅, Z₆,... Z₄₀)은 미국 특허 번호 5,608,035, 5,786,331, 및 5,880,096에 정의된 바와 같고, 여기에 참고로 전체가 포함되어 있다. EPO-미메틱 서열 (표 1)에서, 치환체 X₂ 내지 X₁₁ 및 정수 "n"은 WO 96/40772에 정의된 바와 같고, 참고로서 전체가 포함되었다. 볼드체로 표시한 잔기는 D-아미노산이지만, 임의로 L-아미노산일 수 있다. 모든 펩티드는 다르게 나타내지 않는 한 펩티드 결합으로 연결되어 있다. 약어는 본 명세서의 뒤에 기재하였다. "서열번호." 컬럼에서, "NR"은 주어진 서열에 대해 서열 리스트가 필요하지 않다는 것을 나타낸다.

[표 1] EPO-미메틱 펩티드 서열

EPO 생물학적 활성은 당업계에 잘 알려져 있다. 예컨대, Anagnostou et al Erythropoietin has amitogenic and positive chemotactic effect on endothelial cells. Proceedings of the National Academy of Science (USA) 87: 5978-82 (1990); Fandrey J and Jelkman WE Interleukin 1 and tumor necrosis factor-alpha inhibit Erythropoietin production in vitro. Annals of the New York Academy of Science628: 250-5 (1991); Geissler K et al Recommbinant human Erythropoietin: multipotentialhemopoietic growth factor in vivo and in vitro. Contrib. Nephrol. 87: 1-10 (1990); Gregory CJ Erythropoietin sensitivity as differentiation marker in thehemopoietic system. Studies of three erythropoietic colony responses in culture. Journal of Cellular Physiology 89: 289-301 (1976); Jelkman W et al Monokines inhibiting Erythropoietin production in human hepatoma cultures and in isolated perfused rat kidneys. Life Sci. 50: 301-8 (1992); Kimata H et al Human recommbinant erythropoietin directly stimulates B cell immunoglobulin production and proliferation in serum-free medium. Clinical and Experimental Immunology 85: 151-6(1991); Kimata H et al Erythropoietin enhances immunoglobulin production and proliferation by human plasma cells in serum-free medium. Clin. Immunology Immunopathol. 59: 495-501(1991); Kimata H et al Effect of recommbinant human erythropoietin on human IgE production in vitro Clinical and Experimental Immunology 83:483-7 (1991); Koury MJ and Bondurant MC erythropoietin retards DNA breakdown and prevents programmed cell death in erythroid progenitor cells. Science 248: 378-81 (1990); Lim VS et al Effect of recommbinant human erythropoietin on renal function in humans. Kidney International 37: 131-6 (1990); Mitjavila MT et al Autocrine stimulation by erythropoietin and autonomous growth of human erythroid leukemic cells in vitro. Journal of Clinical Investigation 88: 789-97 (1991); Andre M et al Performance of immunoradiometric assay of erythropoietin and results for specimens from anemic and polycythemic patients. Clinical Chemistry 38: 758-63 (1992); Hankins WD et al Erythropoietin-depending and erythropoietin-producing cell lines. Implications for research and for leukemia therapy. Annals of the New York Academy of Science 554: 21-8 (1989); Kendall RGT et al Storage and preparation of samples for erythropoietin radioimmunoassay. Clin. Lab. Haematology 13: 189-96 (1991);Krumvieh D et al Comparison of relevant biological assays for the determination of biological active erythropoietin. Dev. Biol. Stand. 69: 15-22 (1988); Ma DD et al Assessment of EIA for measuring human serum erythropoietin as compared with RIA and in-vitro bioassay. British Journal of Haematology 80: 431-6 (1992); Noe G et al sensitive sandwich ELISA for measuring erythropoietin in human serum British Journal of Haematology 80: 285-92 (1992); Pauly JU et al Highly specific and highly sensitive enzyme immunoassays for antibody to human interleukin 3 (IL3) and human erythropoietin (EPO) in serum. Behring Institut Mitteilungen 90: 112-25 (1991); Sakata S andEnoki Y Improved microbioassay for plasma erythropoietin based on CFU-E colony formation. Ann. Hematology 64: 224-30 (1992); Sanengen T et al Immunoreactive erythropoietin and erythropoiesis stimulating factor(s) in plasma from hypertransfused neonatal and adult mice. Studies with radioimmunoassay and cell culture assay for erythropoietin. Acta Physio. Scand. 135: 11-6(1989); Widness JA et al sensitive and specific erythropoietin immunoprecipitation assay: application topharmacokinetic studies. Journal of Lab. Clin. Med. 119: 285-94 (1992); for further information see also individual cell lines used in individual bioassays. 상기 각각의 문헌은 참고로 여기에 전체로서 포함되어 있다. EPO는 상기 인자에 대해 반응하는 HCD57, NFS-60, TF-1 및 UT-7와 같은 세포주를 이용해서 분석할 수 있다. EPO 활성은 또한 골수 세포 유래의 CFU-E의 수를 측정함으로써 콜로니 형성 분석법으로 분석할 수 있다. 별도의 다른 검출법은 사이토카인의 RT-PCR 정량이다.

적어도 하나의 활성 단백질 또는 단편의 적어도 하나의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 바람직하게는 상당히 제공하는 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 또는 그의 특정 부분 또는 변이체는 활성 단백질 또는 단편 리간드에 결합함으로써, 그렇지 않으면 단백질의 적어도 하나의 단백질 리간드 또는 수용체와의 결합을 통해, 또는 다른 활성 단백질-의존 또는 매개 메카니즘을 통해 매개되는 적어도 하나의 활성을 제공한다. 여기에 사용된, "EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 활성"은 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디가 분석법에 따라 적어도 하나의 활성 단백질-의존 활성을 약 20-10,000%, 바람직하게는 적어도 약 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000% 이상 조절하거나 야기할 수 있는 것을 지칭한다.

적어도 하나의 활성 단백질-의존 활성을 제공하는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 용량(capacity)은 여기에 기재된 및/또는 공지 방법에 따라 적어도 하나의 바람직한 단백질 생물학적 분석법에 의해 바람직하게 분석될 수 있다. 본 발명의 인간 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 어떤 클래스 (IgG, IgA, IgM, 등) 또는 아시오타입과도 유사할 수 있고, 카파 또는 람다 경쇄의 적어도 한 부분을 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 인간 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 IgG 중쇄 가변 단편, 힌지 영역, CH2 및 CH3, 예컨대, 적어도 하나의 아이소타입, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4를 포함한다.

본 발명의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 적어도 하나의 단백질, 서브유니트, 단편, 부분 또는 그의 임의의 조합에 특이적인 적어도 하나의 특정 리간드에 결합한다. 본 발명의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 특정 부분 또는 변이체의 적어도 하나의 EPO 미메틱 펩티드는 임의로 상기 리간드의 적어도 하나의 특정 리간드 에피토프에 결합할 수 있다. 상기 결합 에피토프는 EPO 수용체 또는 그의 부분과 같은 단백질 리간드로 구성된 그룹에서 선택된 서열의 인접 아미노산의 전체 특정 부분에의 적어도 1-3 아미노산의 적어도 하나의 아미노산 서열의 조합을 포함할 수 있다.

이런 미메티바디는 공지의 재조합 DNA 기술을 이용하여 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 코딩하는 적어도 하나의 (즉, 하나 이상) 핵산 분자를 제조 및 발현시키는, 또는 화학 합성과 같은 다른 바람직한 방법을 이용함으로써 공지 기술을 사용하여 화학식 (I)의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디의 다양한 부분을 함께 연결함으로써 제조될 수 있다.

인간 EPO 리간드 또는 수용체에 결합하고, 정의된 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 적어도 한 부분을 포함하는 미메티바디는 파지 디스플레이 (Katsube, Y., et al., Int JMol. Med, 1 (5): 863-868 (1998)) 또는 당업계에 공지된 및/또는 여기에 기재된 트랜스제닉 동물을 이용하는 방법과 같은 적절한 방법을 사용하여 제조될 수 있다. EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 특정 부분 또는 변이체는 적합한 숙주 세포에서 인코딩 핵산 또는 그의 부분을 이용해서 발현될 수 있다.

바람직하게, 이런 미메티바디 또는 그의 리간드-결합 단편은 인간 EPO 리간드 또는 수용체에 높은 친화력을 가지고 결합할 수 있다 (예컨대, 약 10^-7 M 이하의 K_D). 여기에 기재된 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열은 보존성 아미노산 치환, 및 아미노산 결손 및/또는 삽입을 가지는 서열을 포함한다. 보존성 아미노산 치환은 첫번째 아미노산이 화학적 및/또는 물리적 성질 (예컨대, 전하, 구조, 극성, 소수성/친수성)이 첫번째 아미노산의 것과 유사한 것으로 치환되는 것을 지칭한다. 보존성 치환은 다음 그룹 내의 한 아미노산이 다른 아미노산으로 대체되는 것을 포함한다: 리신 (K), 아르기닌 (R) 및 히스티딘 (H); 아스파테이트 (D) 및 글루타메이트 (E); 아스파라진 (N), 글루타민 (Q), 세린 (S), 트레오닌 (T), 티로신 (Y), K, R, H, D 및 E; 알라닌 (A), 발린 (V), 루이신 (L), 이소루이신 (I), 프롤린 (P), 페날알라닌 (F), 트립토판 (W), 메티오닌 (M), 시스테인 (C) 및 글리신 (G); F, W 및 Y; C, S 및 T.

아미노산 코드

본 발명의 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 구성하는 아미노산은 종종 약칭된다. 아미노산 명명은 상기 아미노산은 그의 한글자 코드, 세글자 코드, 이름, 또는 삼 뉴클레오티드 코돈(들)으로 지정하는 것에 의해 지시될 수 있고, 이는 당업계에 잘 알려져 있다 (Alberts, B., et al., Molecular Biology of The Cell, Third Ed., Garland Publishing, Inc., New York, 1994). 이를 표에 표시하였다.

[표 2]

본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 여기에 기재한 바와 같이 천연 돌연변이 또는 인간 조작으로부터 하나 이상의 아미노산 치환, 결손 또는 부가를 포함할 수 있다. 본 발명에 사용될 수 있는 이런 또는 다른 서열은 이로 제한되는 것은 아니나 표 3에 기재된 다음의 서열을 포함하고, 2004년 6월 17일에 출원한 PCT 출원 번호 US04/19783의 도 1-41에 대응하는 2003년 9월 30일에 출원한 미국 가출원 60/507,349의 도 1-42 (서열번호: 31-72에 대응)에 추가로 기재되어 있고, 상기 문헌은 참고로 여기에 전체로서 포함되어 있다. 참조된 도 1-42 (서열번호: 31-72), 또는 PCT US04/19783의 도 1-41은 중쇄/경쇄 가변/불변 영역 서열, 골격/서브도메인 및 치환을 예시하고 있고, 그 중 일부는 여기에 교시된 바와 같이 본 발명의 Ig 유도 단백질에 사용될 수 있다.

[도 3]

물론, 당업자가 만드는 아미노산 치환의 수는 상술한 것을 포함하는 많은 인자에 의존할 것이다. 일반적으로, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디의 적어도 하나에 대한 아미노산 치환, 삽입 또는 결손의 수는 40, 30, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 아미노산 이하이고, 예컨대 1-30 또는 여기에 기재한 바와 같이 그안의 임의의 범위 또는 값이다.

본 발명의 EPO 힌지 코어 미메티바디의 성분에 관한 이하의 설명은 본 발명의 화학식 (I)의 사용에 기초한다,

상기 식에서, V는 이뮤노글로불린 가변 영역의 N-말단의 적어도 한 부분이고, P는 적어도 하나의 생활성 펩티드이며, L은 적어도 하나의 링커 폴리펩티드이고, H는 적어도 하나의 이뮤노글로불린 힌지 영역의 적어도 한 부분이며, CH2는 이뮤노글로불린 CH2 불변 영역의 적어도 한 부분이고, CH3은 이뮤노글로불린 CH3 불변 영역의 적어도 한 부분이며, m, n, o, p, q, r 및 s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수이고, 다른 유형의 이뮤노글로불린 분자, 예컨대, 이로 제한되는 것은 아니나 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgM, IgD, IgE 등 또는 그의 임의의 서브클래스, 또는 그의 임의의 조합을 모방한다.

본 발명의 힌지 코어 미메티바디에서, 임의의 N-말단 V 부분은 2004년 6월 17일에 출원한 PCT 출원 번호 US04/19783(참고로 여기에 전체로서 포함됨)의 도 1-41에 대응하는, 치환, 결손 또는 삽입을 도에 나타낸 바와 같이 포함하는 2003년 9월 30일에 출원한 미국 가출원 60/507,349(참고로 여기에 전체로서 포함됨)의 적어도 하나의 중쇄 가변 골격 1 (FR1) 영역 (예컨대, 도 1-9 (서열번호: 31-39)에 기재됨) 또는 적어도 하나의 LC 가변 영역 (예컨대, 도 10-31 (서열번호: 40-61)에 기재됨)의 1-20 아미노산을 포함할 수 있다 (도 5, 6 및 8의 것이 바람직하다). 또한, 서열 Q-X-Q를 포함하는 가변 서열이 바람직하다.

P 부분은 이로 제한되는 것은 아니나 표 1에 기재한 것, 서열번호: 1-3, 또는 당업계에 공지된 것, 그의 임의의 조합, 또는 그의 공통 서열 또는 그의 임의의 융합 단백질과 같은 공지되거나 여기에 기재된 적어도 하나의 치료 펩티드를 포함할 수 있다.

임의의 링커 서열은 당업계에 알려진 임의의 바람직한 펩티드 링커일 수 있다. 바람직한 서열은 G 및 S의 임의의 조합을 포함하고, 예컨대, Xl-X2-X3-X4-Xn, 여기에서 X는 G 또는 S이고, n은 5-30일 수 있다. 비제한적인 예는 GS, GGGS, GSGGGS, GSGGGSGG 등을 포함한다.

본 발명에서, CH1 부분은 사용되지 않고, 힌지 영역의 N-말단으로부터 다양한 수의 아미노산이 예컨대 2004년 6월 17일에 출원한 PCT 출원 번호 US04/19783(참고로 여기에 전체로서 포함됨)의 도 1-41에 대응하는, 2003년 9월 30일에 출원한 미국 가출원 60/507,349(참고로 여기에 전체로서 포함됨)의 도 1-42 및 표 3에 기재된 것처럼 결손되었다. 본 발명의 미메티바디의 힌지 코어 부분에 사용되는 아미노산의 다양한 수는 이로 제한되는 것은 아니나 2004년 6월 17일에 출원한 PCT 출원 번호 US04/19783(여기에 참고로 전체가 포함)의 도 1-41에 대응하는 2003년 9월 30일에 출원한 미국 가출원 60/507,349(여기에 참고로 전체가 포함)의 도 32-40, 상기 표 3에 기재된 것과 같은 적어도 하나의 힌지 영역의 N-말단 아미노산의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 또는 1-3, 2-5, 2-7, 2-8, 3-9, 4-10, 5-9, 5-10, 5-15, 10-20, 2-30, 20-40, 10-50, 또는 그 안의 임의의 범위 또는 값의 결손, 예컨대 이로 제한되는 것은 아니나 2004년 6월 17일에 출원한 PCT 출원 번호 US04/19783(여기에 참고로 전체가 포함)의 도 1-41에 대응하는 2003년 9월 30일에 출원한 미국 가출원 60/507,349(여기에 참고로 전체가 포함)의 도 32-40에 기재된 치환, 삽입 또는 결손을 포함하는 서열번호: 62-70에 대응하는, 2004년 6월 17일에 출원한 PCT 출원 번호 US04/19783(여기에 참고로 전체가 포함)의 도 1-41에 대응하는 2003년 9월 30일에 출원한 미국 가출원 60/507,349(여기에 참고로 전체가 포함)의 도 32-40의 아미노산 99-105, 99-108, 99-111, 99-112, 99-113, 99-114, 99-115, 99-119, 99-125, 99-128, 99-134, 99-140, 99-143, 99-149, 99-155 및 99-158의 아미노산 99-101 내지 105-157 모두에 대한 임의의 결손을 포함한다. 바람직한 구체예에서, 본 발명의 힌지 코어 영영은 서열 Cys-Pro-Xaa-Cys를 포함하는 힌지 코어 영역을 제공하는 힌지 영역의 N-말단의 결손을 포함한다. 다른 바람직한 구체예에서, 본 발명의 미메티바디의 히지 코어에 사용된 힌지 코어 서열은 도 36 (서열번호: 66)(IgG1)의 아미노산 109-113 또는 112-113; 도 37 (서열번호: 67) (IgG2)의 105-110 또는 109-110; 도 38 (서열번호: 68) (IgG3)의 111-160, 114-160, 120-160, 126-160, 129-160, 135-160, 141-160, 144-160, 150-160, 156-160 및 159-160; 또는 도 39 (서열번호: 69) (IgG4)의 106-110 또는 109-110을 포함한다.

CH2, CH3 및 임의의 CH4 서열은 2004년 6월 17일에 출원한 PCT 출원 번호 US04/19783(여기에 참고로 전체가 포함)의 도 1-41에 대응하는 2003년 9월 30일에 출원한 미국 가출원 60/507,349(여기에 참고로 전체가 포함)의 도 1-42, 및 표 3에 제시된 것, 또는 당업계에 공지된, 또는 그의 임의의 조합 또는 공통 서열, 또는 그의 융합 단백질과 같은 임의의 바람직한 인간 또는 인간 호환성 서열일 수 있다.

기능에 필수적인 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 아미노산은 위치-지정 돌연변이(site-directed mutagenesis) 또는 알라닌-스캐닝 뮤타제네시스 (예컨대, Ausubel, supra, Chapters 8,15; Cunningham and Wells, Science 244: 1081-1085 (1989))와 같은 공지 방법에 의해 동정될 수 있다. 후자의 방법은 분자 내의 각 잔기에 싱글 알라민 돌연변이를 도입한다. 얻은 돌연변이 분자를 그 후 이로 제한되는 것은 아니나 여기에 기재되거나 공지된 적어도 하나의 단백질 관련 활성과 같은 생물학적 활성에 대해 시험한다. EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 결합에 중요한 부위는 결정화, 핵 자기 공명, 또는 포토어피니티 라벨링 (Smith, et al., J. Mol. Biol. 224: 899-904 (1992) and de Vos, et al., Science 255: 306-312 (1992))와 같은 구조 분석에 의해 또한 확인할 수 있다.

본 발명의 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 화학식 (I)의 P 부분으로서 이로 제한되는 것은 아니나 서열번호:1-30의 적어도 하나의 3개 내지 전부로부터 선택된 적어도 한 부분, 서열 또는 조합을 포함할 수 있다. 전술한 활성 중의 적어도 하나를 개선하거나 유지할 수 있는 비-제한적인 변이체는 이로 제한되는 것은 아니나 상기 폴리펩티드를 임의로 포함할 수 있고, 추가로 상기 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디의 바람직한 생물학적 활성 또는 기능에 유의한 영향을 주지 않는 적어도 하나의 치환, 삽입 또는 결손에 대응하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.

임의로 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 화학식 (I)의 P 부분으로서 적어도 하나의 폴리펩티드의 적어도 하나의 기능성 부분, 서열번호: 1-30의 90-100%의 적어도 하나를 추가로 포함할 수 있다. 임의로 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 화학식 (I)의 P 부분에 대한 아미노산 서열로 서열번호: 1-30 중의 하나 이상으로부터 선택된 것을 추가로 포함할 수 있다.

한 구체예에서, P 아미노산 서열, 또는 그의 부분은 서열번호: 1-30의 적어도 하나의 대응 부분의 대응 아미노산 서열에 대해 약 90-100% 동일성 (즉, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 또는 그 안의 임의의 범위 또는 값)을 가진다. 바람직하게, 90-100% 아미노산 동일성 (즉, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 또는 그 안의 임의의 범위 또는 값)은 공지된 적합한 컴퓨터 알로리즘을 이용해서 결정된다.

본 발명의 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체로부터 인접 아미노산 잔기의 임의의 수를 포함할 수 있고, 여기에서 상기 수는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 내의 인접 잔기 수의 10-100%ㄹ 구성된 정수 그룹에서 선택된다. 임의로, 인접 아미노산의 서브서열은 길이가 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250 이상의 아미노산, 또는 그 안의 임의의 범위 또는 값이다. 또한, 상기 서브서열의 수는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 이상과 같이 1 내지 20으로 구성된 그룹에서 선택된 임의의 정수 일 수 있다.

당업자가 예측하듯이, 본 발명은 적어도 하나의 생물학적 활성인 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 포함한다. 생물학적 활성인 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 천연 (비-합성), 내인성 또는 관련 및 공지의 삽입된 또는 융합 단백질 또는 특정 부분 또는 변이체의 활성에 비해 적어도 20%, 30%, 또는 40%, 바람직하게는 적어도 50%,60%, 또는 70%, 및 가장 바람직하게는 적어도 80%, 90%, 또는 95%-1000%의 특정 활성을 가진다. 효소 활성 및 기질 특이성을 분석 및 정량 측정하는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다.

다른 측면으로, 본 발명은 여기에 기재한 바와 같이 유기 모이어티의 공유 결합에 의해 변형된 인간 미메티바디 및 리간드-결합 단편에 관한 것이다. 이런 변형은 개선된 약동학적 성질 (예컨대, 증가된 생체내 혈청 반감기)을 가진 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 리간드-결합 단편을 제조할 수 있다. 유기 모이어티는 선형 또는 분지된 친수성 폴리머 그룹, 지방산 그룹 또는 지방산 에스테르 그룹일 수 있다. 바람직한 구체예에서, 친수성 폴리머 그룹은 약 800 내지 약 120,000 달톤의 분자량을 가질 수 있고, 폴리알칼 글리콜 (예컨대, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리프로필렌 글리콜 (PPG) ), 탄수화물 폴리머, 아미노산 폴리머 또는 폴리비닐 피롤리돈일 수 있으며, 지방산 또는 지방산 에스테르 그룹은 약 8 내지 40 탄소원자를 함유할 수 있다.

본 발명의 변형된 미메티바디 및 리간드-결합 단편은 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체에 직·간접적으로 공유 결합된 하나 이상의 유기 모이어티를 포함할 수 있다. 본 발명의 미메티바디 및 리간드-결합 단편은 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 리간드-결합 단편에 결합된 각 유기 모이어티는 독립적으로 친수성 폴리머 그룹, 지방산 그룹 또는 지방산 에스테르 그룹일 수 있다. 여기에 사용된, "지방산"은 모노-카복실산 및 디-카복실산을 포함한다. 여기에 사용된, "친수성 폴리머 그룹"은 옥탄보다 물에서 더 가용성인 유기 폴리머를 지칭한다. 예컨대, 폴리리신은 옥탄보다 물에서 더 가용성이다. 따라서, 폴리리신의 공유 결합에 의해 변형된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 본 발명에 포함된다. 본 발명의 미메티바디를 변형하는데 적합한 친수성 폴리머는 선형 또는 분지된 것일 수 있고, 예컨대, 폴리알칸 글리콜 (예컨대, PEG, 모노메톡시-폴리에틸렌 글리콜 (mPEG), PPG 등), 탄수화물 (예컨대, 덱스트란, 셀룰로스, 올리고사카라이드, 폴리사카라이드 등), 친수성 아미노산 (예컨대, 폴리리신, 폴리아르기닌, 폴리아스파테이트 등)의 폴리머, 폴리알칸 옥사이드 (예컨대, 폴리에틸렌 옥사이드, 폴리프로필렌 옥사이드 등) 및 폴리비닐 피롤리돈을 포함한다. 바람직하게, 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디을 변형시키는 친수성 폴리머는 약 800 내지 약 150,000 달톤의 분자량을 분리된 분자 엔터티(entity)로서 가진다. 예컨대, PEG₂₅₀₀,PEG₅₀₀₀, PEG₇₅₀₀, PEG₁₀₀₀₀, PEG₁₂₅₀₀, PEG₁₅₀₀₀, 및 PEG₂₀₀₀₀ (하첨자는 달톤으로 표시한 폴리머의 평균 분자량이다)이 사용될 수 있다.

친수성 폴리머 그룹은 1 내지 약 6개의 알킬, 지방산 또는 지방산 에스테르 그룹에 의해 치환될 수 있다. 지방산 또는 지방산 에스테르 그룹으로 치환되는 친수성 폴리머는 바람직한 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 예컨대, 아민 그룹을 함유하는 폴리머가 지방산 또는 지방산 에스테르, 및 지방산 상의 활성화된 카복실레이트 (예컨대, N,N-카보닐 디이미다졸로 활성화)의 카복실레이트에 커플링되거나, 지방산 에스테르가 폴리머상의 하이드록실 그룹에 커플링될 수 있다.

본 발명의 미메티바디를 변형시키는데 적합한 지방산 및 지방산 에스테르는 포화일 수 있고, 또는 하나 이상의 불포화 유니트를 함유할 수 있다. 본 발명의 미메티바디를 변형시키는데 적합한 지방산은 예컨대 n-도데카노에이트(C₁₂, 라우레이트), n-테트라데카노에이트(C₁₄, 미리스테이트), n-옥타데카노에이트(C₁₈, 스테아레이트), n-에이코사노에이트 (C₂₀, 아라키데이트), n-도코사노에이트 (C₂₂, 베헤네이트), n-트리아콘타노에이트 (C₃₀), n-테트라콘타노에이트 (C₄₀), 시스-△9-옥타데카노에이트 (C₁₈, 올레에이트), 모두 시스-△5,8,11,14-에이코사테트라에노에이트 (C₂₀, 아라키도네이트), 옥탄디오익 애시드, 테트라데칸디오익 애시드, 옥탄데칸디오익 애시드, 도코사네디오익 애시드 등을 포함한다. 바람직한 지방산 에스테르는 선형 또는 분지된 저급 알킬 그룹을 가지는 디카복실산의 모노-에스테르를 포함한다. 저급 알킬 그룹은 1 내지 약 12개, 바람직하게는 1 내지 약 6개의 탄소 원자를 포함한다.

변형된 인간 미메티바디 및 리간드-결합 단편은 하나 이상의 변형제와 반응시키는 것과 같은 적합한 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 여기에 사용된, "변형제"는 활성화 그룹을 포함하는 적합한 유기 그룹(예컨대, 친수성 폴리머, 지방산, 지방산 에스테르)을 지칭한다. "활성화 그룹"은 적당한 조건하에 두번재 화학 그룹과 반응할 수 있는 화학 모이어티 또는 기능성 그룹이고, 이에 의해 변형제 및 두번째 화학 그룹 사이에 공유 결합을 형성한다. 예컨대, 아민-반응성 활성화 그룹은 토실레이트, 메실레이트, 할로(클로로, 브로모, 플루오로, 아이오도), N-하이드록시숙신이미딜 에스테르 (NHS) 등과 같은 친전자성 그룹을 포함한다. 티올과 반응할 수 있는 활성화 그룹은 예컨대, 말레이미드, 아이오도아세틸, 아크릴로릴, 피리딜 디설피드, 5-티올-2-니트로벤조산 티올 (TNB-티올)등을 포함한다. 알데하이드 기능기는 아민- 또는 하이드라지드-함유 분자와 커플링될 수 있고, 아지드 그룹 can react with 3가 포스포러스 그룹과 반응하여 포스포르아미데이트 또는 포스포르이미드 결합을 형성한다. 활성화 그룹을 분자 내에 도입하는 바람직한 방법은 당업계에 알려져 있다 (예컨대, Hermanson, G.T., Bioconjugate Techtaiques, Academic Press: San Diego, CA (1996)). 활성화 그룹은 유기 그룹(예컨대, 친수성 폴리머, 지방산, 지방산 에스테르)에 직접 연결될 수 있거나, 예컨대 2가 C₁-C₁₂ 그룹 (여기에서, 하나 이상의 탄소원자는 산소, 질소 또는 황과 같은 헤테로원자에 의해 대체될 수 있다)과 같은 링커 모이어티를 통해 연결될 수 있다. 바람직한 링커 모이어티는, 예컨대, 테트라에틸렌글리콜, -(CH₂)₃-, -NH-(CH₂)₆-NH-, -(CH₂)₂-NH- 및 -CH₂-O-CH₂-CH₂-O-CH₂-CH₂-O-CH-NH-를 포함한다. 링커 모이어티를 포함하는 변형제는 예컨대, 모노-Boc-알킬디아민 (예컨대, 모노-Boc-에틸렌디아민, 모노-Boc-디아미노헥산)과 지방산을 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 (EDC)의 존재하에 반응시켜 유리 아민 및 지방상 카복실레이트 사이에 아미드 결합을 형성시킴으로써 제조될 수 있다. Boc 보호기는 트리플루오로아세트산 (TFA)로 처리하여 생성물로부터 제거되어 여기에 기재된 다른 카복실레이트와 커플링하거나 말레익 안하이드리드 및 환화된 얻은 생성물과 반응하여 지방산의 활성화된 말레이미도 유도체를 생성할 수 있는 1차 아민을 노출시킨다 (예컨대, Thompson, et al., WO 92/16221, 참고로 여기에 전체로서 포함됨).

본 발명의 변형된 미메티바디는 인간 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 리간드-결합 단편을 변형제와 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 예컨대, 유기 모이어티는 예컨대, PEG의 NHS 에스테르와 같은 아민-반응성 변형제를 이용함으로써 비-위치 특이적 방식으로 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디에 결합될 수 있다. 변형된 인간 미메티바디 또는 리간드-결합 단편은 또한 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 리간드-결합 단편의 이황화 결합 (예컨대, 인트라-체인 이황화 결합)을 환원시킴으로써 제조될 수 있다. 환원된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 리간드-결합 단편은 그 후 티올-반응성 변형제와 반응하여 본 발명의 변형된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디를 형성할 수 있다. 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 특정 부위에 결합하는 유기 모이어티에 포함하는 변형된 인간 미메티바디 및 리간드-결합 단편은 리버스 프로테올리시스 (Fischet al., Bioconjugate Chem., 3: 147-153 (1992); Werlenet al., Bioconjugate Chem., 5: 411-417 (1994); Kumaranet al., Protein Sci. 6(10): 2233-2241 (1997); Itoh et al.,Bioorg. Clzem., 24(1): 59-68 (1996); Capellaset al., Biotechnol. Bioeng., 56(4): 456-463 (1997)), 및 Hermanson, G. T.,Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996)에 기재된 방법과 같은 적합한 방법을 이용해서 제조될 수 있다.

EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 조성물

본 발명은 또한 여기에 기재된 및/또는 공지된 바와 같이 비-천연 발생 조성물, 혼합물 또는 형태로 제공되는 적어도 하나의, 적어도 두개의, 적어도 세개의, 적어도 네개의, 적어도 다섯개의, 적어도 여섯개 이상의 미메티바디 또는 그의 특정 부분 또는 변이체을 포함하는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물을 제공한다. 상기 조성물 퍼센트는 공지되거나 여기에 기재된 바와 같이 액체 또는 드라이 용액, 혼합물, 현탁액, 에멀젼 또는 콜로이드로서 중량, 부피, 농도, 몰 또는 몰랄이다.

상기 조성물은 공지되거나 여기에 기재된 바와 같이 액체, 가스, 또는 드라이 용액, 혼합물, 현탁액, 에멀젼 또는 콜로이드로서 0.00001-99.9999 (중량, 부피, 농도, 몰, 또는 몰랄)%를 포함할 수 있고, 이로 제한되지는 않으나 0.00001, 0.00003, 0.00005, 0.00009, 0.0001, 0.0003, 0.0005, 0.0009, 0.001, 0.003, 0.005, 0.009, 0.01, 0.02, 0.03, 0.05, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.3, 4.5, 4.6, 4.7, 4. 8, 4.9, 5,6, 7,8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99.1, 99.2, 99.3, 99.4, 99.5, 99.6, 99.7, 99.8, 99.9 %과 같이 상기 범위의 임의의 범위 또는 값을 가질 수 있다. 따라서, 본 발명의 상기 조성물은 이로 제한되지는 않으나, 0.00001-100 mg/ml 및/또는 0.00001-100 mg/g을 포함한다.

조성물은 임의로 적어도 하나의 of 항-감염 약물, 심혈관계 (CV) 약물, 중추 신경계 (CNS) 약물, 자율 신경계 (ANS) 약물, 기도 약물, 위장관 (GI) 약물, 호르몬 약물, 체액 또는 전해질 평형 약물, 혈액 약물, 안티네오플락틱(antineoplactic), 면역 제어 약물, 눈, 귀 또는 코 약물, 국소 약물, 영양제 등으로부터 선택된 유효량의 적어도 하나의 화합물 또는 단백질을 추가로 포함한다. 이런 약물은 당업계에 잘 알려져 있고, 각각에 대한 제제, 지시, 투여량 및 투여가 여기에 제시되어 있다 (예컨대, Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21^st edition, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; Health Professional's Drug Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ; Pharmcotherapy Handbook, Wells et al., ed., Appleton & Lange, Stamford, CT, 각각은 참고로 여기에 전체로서 포함됨).

항-감염 약물은 아메바구제제 또는 적어도 하나의 항원충제, 구충제, 항진균제, 항말라리아제, 항결핵제 또는 적어도 하나의 항나병제, 아미노글리코시드, 페니실린, 세팔로스포린, 테트라사이클린, 설폰아미드, 플루오로퀴놀론, 항바이러스제, 마크로라이드 항-감염제, 기타 항-감염제로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. CV 약물은 수축 촉진제, 항부정맥약, 항협심증제, 항고혈압제, 항지혈증제, 기타 심혈관 약물로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. CNS 약물은 비마약 진통제 또는 해열제, 비스테로이드 항-염증 약물, 마약 또는 적어도 하나의 오피오이드 진통제, 진정-수면제, 항경련제, 항우울제, 항불안제, 항정신병제, 중추 신경계 흥분제, 항파킨슨병약, 기타 중추신경계 약물로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. ANS 약물은 콜린성 제제 (부교감 흥분제), 항콜린성 제제, 아드레날린성 약 (교감신경 흥분제), 아드레날린 차단제 (부교감 신경 억제제), 골격근 이완제, 신경 근육 차단제로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 기도 약물은 항히스타민제, 기관지 확장제, 거담제 또는 적어도 하나의 진해제, 기타 호흡 약물로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. GI 관 약물은 제산제 또는 적어도 하나의 흡착제 또는 적어도 하나의 고창 방지제, 소화 효소 또는 적어도 하나의 담석 가용화제, 지사제, 설사제, 항구토제, 항궤양제 약물로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 호르몬 약물은 코르티코스테로이드, 안드로겐 또는 적어도 하나의 동화대사 스테로이드, 에스트로겐 또는 적어도 하나의 프로게스틴, 고나도트로핀, 당뇨병약 또는 적어도 하나의 글루카곤, 티로이드 호르몬, 티로이드 호르몬 길항제, 뇌하수체 호르몬, 파라티로이드-유사 약물로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 체액 및 전해질 평형을 위한 약물은 이뇨제, 전해질 또는 적어도 하나의 대체 용액, 산성화제 또는 적어도 하나의 알카릴화제로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 혈액 약물은 조혈제, 항응고제, 혈액 유도체, 혈전 효소로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 항종양제는 알킬화제, 항대사제, 항생 항종양제, 호르몬 균형을 바꾸는 항종양제, 기타 항종양제로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 면역조절 약물은 면역억제제, 백신 또는 적어도 하나의 변성독소, 항독소 또는 적어도 하나의 항뱀독소, 면역 혈청, 생물학적 반응 조절자로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 눈, 귀, 및 코 약물은 눈 항-감염제, 눈 항-염증제, 축동제, 동공확대제, 눈 혈관 수축제, 기타 눈, 귀, 코 약물로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 국소 약물은 국소 항-감염제, 옴약 또는 적어도 하나의 이살충제, 국소 코르티코스테로이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 영양제은 비타민, 미네랄, 또는 칼로릭스(calorics)로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook, supra의 내용을 참조.

적어도 하나의 아메바구제제 또는 항원충제는 아토바쿠온, 클로로퀸 하이드로클로라이드, 클로로퀸 포스페이트, 메트로니다졸, 메트로니다졸 하이드로클로라이드, 펜타미딘 이세티오네이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 구충제는 메벤다졸, 피란텔 파모에이트, 티아벤다졸로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항진균제는 암포테리신 B, 암포테리신 B 콜레스테릴 설페이트 복합체, 암포테리신 B 지질 복합체, 암포테리신 B 리포소말, 플루코나졸, 플루시토신, 그리세오풀빈 마이크로사이즈, 그리세오풀빈울트라마이크로사이즈, 이트라코나졸, 케토코나졸, 니스나틴, 테르비나핀 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항말라리아제는 클로로퀸 하이드로클로라이드, 클로로퀸 포스페이트, 독시사이클린, 하이드록시클로로퀸 설페이트, 메플로퀸 하이드로클로라이드, 프리마퀸 포스페이트, 피리메타민, 설파독신과의 피리메타민으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항결핵제 또는 항나병약은 클로파지민, 사이클로세린, 다프손, 에탐부톨 하이드로클로라이드, 이소니아지드, 피라지나미드, 리파부틴, 리팜핀, 리파펜틴, 스트렙토마이신 설페이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 아미노글리코시드는 아미카신 설페이트, 젠타미신 설페이트, 네오마이신 설페이트, 스트렙토마이신 설페이트, 토브라마이신 설페이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 페니실린은 아목실린/클라불라네이트 포타슘, 아목시실린 트리하이드레이트, 앰피실린, 앰피실린 소듐, 앰피실린 트리하이드레이트, 앰피실린 소듐/술박탐 소듐, 클록사실린 소듐, 디클록사실린 소듐, 메즐로실린 소듐, 나프실린 소듐, 옥사실린 소듐, 페니실린 G 벤자틴, 페니실린 G 포타슘, 페니실린 G 프로카인, 페니실린 G 소듐, 페니실린 V 포타슘, 피페라실린 소듐, 피페라실린 소듐/타조박탐 소듐, 티카르실린 디소듐,티카르실린 디소듐/클라불라네이트 포타슘로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 세팔로스포린은 적어도 하나의 세파클로르, 세파드록실, 세파졸린 소듐, 세프디니르, 세페핌 하이드로클로라이드, 세픽심, 세프메타졸 소듐, 세포니시드 소듐, 세포페라존 소듐, 세포탁심 소듐, 세포테탄 디소듐, 세폭시틴 소듐, 세프포독심 프로세틱, 세프프로질, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심 소듐, 세프트리악손 소듐, 세푸록심 아젝틸, 세푸록심 소듐, 세팔렉신 하이드로클로라이드, 세팔렉신 모노하이드레이트, 세프라딘, 로라카르베프로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 테트라사이클린은 데메클로사이클린 하이드로클로라이드, 독시사이클린 칼슘, 독시사이클린 하이클레이트, 독시사이클린 하이드로클로라이드, 독시사이클린모노하이드레이트, 미노사이클린 하이드로클로라이드, 테트라사이클린 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 설폰아미드는 코-트리목사졸, 설파디아진, 설파메톡사졸, 설피속사졸, 설피속사졸 아세틸로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 플루오로퀴놀론으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다 알라트로플록사신 메실레이트, 시프로플록사신, 에녹사신, 레포플록사신, 로메플록사신 하이드로클로라이드, 날리딕식 애시드, 노르플록사신, 오플록사신, 스파르플록사신, 트로바플록사신 메실레이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 플루오로퀴놀론은 알라트로플록사신 메실레이트, 시프로플록사신, 에녹사신, 레포플록사신, 로메플록사신 하이드로클로라이드, 날리딕식 애시드, 노르플록사신, 오플록사신, 스파르플록사신, 트로바플록사신 메실레이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항바이러스제는 아바카비르 설페이트, 아시클로비르 소듐, 아만타딘 하이드로클로라이드, 암프레나비르, 시도포비르, 델라비르딘 메실레이트, 디나노신, 에파비렌즈, 팜시클로비르, 포미비르센 소듐, 포스카르네트 소듐, 간시클로비르, 인디나비르 설페이트, 라미부딘, 라미부딘/지도부딘, 넬피나비르 메실레이트, 네비라핀, 오세타미비르 포스페이트, 리바비린, 리마타딘 하이드로클로라이드, 리토나비르, 사퀴나비르, 사퀴나비르 메실레이트, 스타부딘, 발라시클로비르 하이드로클로라이드, 잘시타빈, 자나미비르, 지도부딘으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 마크로라인 항-감염제는 프롬지트로마이신, 클라리트로마이신, 디리트로마이신, 에리쓰로마이신 염기, 에리쓰로마이신 에스톨레이트, 에리쓰로마이신에틸숙시네이트, 에리쓰로마이신 락토비오네이트, 에피트로마이신 스테아레이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 기타 항-감염제는 아즈트레오남, 바시트라신, 클로람페니콜 소듐 숙시네이트, 클리다마이신 하이드로클로라이드, 클린다마이신팔미테이트 하이드로클로라이드, 클리단마이신 포스페이트, 이미페남 및 실라스타틴 소듐, 메로페넴, 니트로푸란토인 마크로크리스탈, 니트로푸란토인 마이크로크리스탈, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 스펙티노마이신 하이드로클로라이드, 트리메토프림, 반코마이신 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. (예컨대, Nursing 2001 약물 Handbook의 pp. 24-214 참조)

적어도 하나의 수축제는 암리논 락테이트, 디곡신, 밀리논 락테이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항부정맥제는 아데노신, 아미오다론 하이드로클로라이드, 아트로핀 설페이트, 브레틸륨 토실레이트, 딜티아젬 하이드로클로라이드, 디소피라미드, 디소피라미드 포스페이트, 에스몰롤 하이드로클로라이드, 플레카이니드 아세테이트, 이부틸리드 푸마레이트, 리도카인 하이드로클로라이드, 멕실레틴 하이드로클로라이드, 모리시진 하이드로클로라이드, 페티토인, 페티토인 소듐, 프로카인아미드 하이드로클로라이드, 프로파페논 하이드로클로라이드, 프로프라놀롤 하이드로클로라이드, 퀴니딘 비설페이트, 퀴니딘 글루코네이트, 퀴니딘 폴리갈락투로네이트, 퀴니딘 설페이트, 소탈롤, 토카이니드 하이드로클로라이드, 베라파밀 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항협심증제는 암로디핀 베실레이트, 아밀 니트리트, 베프리딜 하이드로클로라이드, 딜티아젬 하이드로클로라이드, 이소소르비드 디니트레이트, 이소소르비드 모노니트레이트, 나돌롤, 니카르디핀 하이드로클로라이드, 니페디핀, 니트로글리세린, 프로프라놀롤 하이드로클로라이드, 베라파밀, 베라파밀 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항고혈압제는 아세부톨롤 하이드로클로라이드, 암로디핀 베실레이트, 아테놀롤, 베나제프릴 하이드로클로라이드, 베탁솔롤 하이드로클로라이드, 비소프롤롤 푸마레이트, 칸데사르탄 실레섹틸, 캅토프릴, 카르테올롤 하이드로클로라이드, 카르베딜롤, 클로니딘, 클로니딘 하이드로클로라이드, 디아족사이드, 딜티아젬 하이드로클로라이드, 독사조신 메실레이트, 에날프릴라트, 에날프릴 말레이트, 에프로사르탄 메실레이트, 펠로디핀, 페놀도팜 메실레이트, 포시노프릴 소듐, 구아나벤즈 아세테이트, 구아나드렐 설페이트, 구안파신 하이드로클로라이드, 하이드랄진 하이드로클로라이드, 이르베사르탄, 이스라디핀, 라베탈로 하이드로클로라이드, 리시노프릴, 로사르탄 포타슘, 메틸도파, 메틸도페이트 하이드로클로라이드, 메토프롤롤 숙시네이트, 메토프롤롤 타르트레이트, 미녹시딜, 모엑시프릴 하이드로클로라이드, 나돌롤, 니카르디핀 하이드로클로라이드, 니페디핀, 니솔디핀, 니트로푸르시드 소듐, 펜부톨롤 설페이트, 페린도프릴 에르부민, 펜톨라민 메실레이트, 핀돌롤, 프라조신 하이드로클로라이드, 프로파노익 하이드로클로라이드, 퀴나프릴 하이드로클로라이드, 라미프릴, 텔미사르탄, 테라조신 하이드로클로라이드, 팀몰롤 말레이트, 트란톨라프릴, 발사르탄, 베라파밀 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항지혈증제는 아토바스타틴 칼슘, 세리바스타틴 소듐, 콜레스티라민, 콜레스티톨 하이드로클로라이드, 페노비브레이트 (마이크로나이즈드), 플루바스타틴 소듐, 겜피브로질, 로바스타틴, 니아신, 프라바스타틴 소듐, 심바스타틴으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 기타 CV 약물은 아브식시마브, 알프로스타틸, 아르부타민 하이드로클로라이드, 실로스타졸, 클로피도그렐 비설페이트, 디피리다몰, 엡티피바티드, 미도드린 하이드로클로라이드, 펜톡시필린, 티클로피딘 하이드로클로라이드, 티로피반 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. (예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook의 pp. 215-336 참조)

적어도 하나의 비마약 진통제 또는 해열제는 아세트아미노펜, 아스피린, 콜린 마그네슘 트리살리실레이트, 디플루니살, 마그네슘 살리실레이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 비스테로이드 항-염증 약물은 셀레콕시브, 디클로페낙 포타슘, 디클로페낙 소듐, 에토돌락, 페노프로펜 칼슘, 플루비프로펜, 이부프로펜, 인도메타신, 인도메타신 소듐 트리하이드레이트, 케토프로펜, 케토ㄹ락 트로메타민, 나부메톤, 나프록센, 나프록센 소듐, 옥사프로진, 피록시캄, 로페콕시브, 설린닥으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 마약 또는 오피오이드 진통제는 알펜타닐 하이드로클로라이드, 부프레노르핀 하이드로클로라이드, 부토르파놀 타르트레이트, 코데인 포스페이트, 코데인 설페이트, 펜타닐 시트레이트, 펜타닐 경피 시스템, 펜타닐 점막 관통, 하이드로모르폰 하이드로클로라이드, 메페리딘 하이드로클로라이드, 메타돈 하이드로클로라이드, 모르핀 하이드로클로라이드, 모르핀 설페이트, 모르핀 타르트레이트, 날부핀 하이드로클로라이드, 옥시코돈 하이드로클로라이드, 옥시코돈 펙티네이트, 옥시모르폰 하이드로클로라이드, 펜타조신 하이드로클로라이드, 펜타조신 하이드로클로라이드 및 날록손 하이드로클로라이드, 펜타조신 락테이트, 프로폭시펜 하이드로클로라이드, 프로폭시펜 납실레이트, 레미펜타닐 하이드로클로라이드, 설펜타닐 시트레이트, 트라마돌 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 진정-수면제는 클로랄 하이드레이트, 에스타졸람, 플루라제팜 하이드로클로라이드, 펜토바르비탈, 펜토바르비탈 소듐, 페노바르비탈 소듐, 세코바르비탈 소듐, 테마제팜, 트리아졸람, 잘레플론, 졸피뎀 타르트레이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항경련제는 아세트아졸아미드 소듐, 카르밤아제핀, 클로나제팜, 클로라제페이트 디포타슘, 디아제팜, 디발프로엑스 소듐, 에토숙시미드, 포스페니토인 소듐, 가바펜틴, 라모트리진, 마그네슘 설페이트, 페노바르비탈, 페노바르비탈 소듐, 페니토인, 페니토인 소듐, 페니토인 소듐 (익스텐디드), 프리미돈, 티아가빈e 하이드로클로라이드, 토피라메이트, 발프로에이트 소듐, 발프로익 애시드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항우울제는 아미트립틸린 하이드로클로라이드, 아미트립틸린 파모에이트, 아목사핀, 부프로피온 하이드로클로라이드, 시탈로프람 하이드로브로마이드, 클로미프라민 하이드로클로라이드, 데시프라민 하이드로클로라이드, 독세핀 하이드로클로라이드, 플루옥세틴 하이드로클로라이드, 이미프라민 하이드로클로라이드, 이미프라민 파모에이트, 미르타자핀, 네파조돈 하이드로클로라이드, 노르트립틸린 하이드로클로라이드, 파록세틴 하이드로클로라이드, 페넬진 설페이트, 세르트랄린 하이드로클로라이드, 트라닐시프로민 설페이트, 트리미프라민 말레이트, 벤라팍신 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항불안제는 알프라졸람, 부스피론 하이드로클로라이드, 클로르디아제폭사이드, 클로르디아제폭사이드 하이드로클로라이드, 클로르아제페이트 디포타슘, 디아제팜, 독세핀 하이드로클로라이드, 하이드록시진 엠보네이트, 하이드록시진 하이드로클로라이드, 하이드록시진 파모에이트, 로라제팜, 메프로바메이트, 미다졸람 하이드로클로라이드, 옥사제팜으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항정신병제 약물은 클로로프로마진 하이드로클로라이드, 클로자핀, 플루페나진 데카노에이트, 플루에페나진 에탄테이트, 플루페나진 하이드로클로라이드, 할로페리돌, 할로페리돌 데카노에이트, 할로페리돌 락테이트, 록사핀 하이드로클로라이드, 록사핀 숙시네이트, 메소리다진 베실레이트, 몰린돈 하이드로클로라이드, 올란자핀, 퍼페나진, 피모지드, 프로클로페라진, 쿠에티아핀 푸마레이트, 리스페리돈, 티오리다진 하이드로클로라이드, 티오틱센, 티오틱센 하이드로클로라이드, 트리플루오페라진 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 중추 신경계 흥분제는 암페타민 설페이트, 카페인, 덱스트로암페타민 설페이트, 독사프람 하이드로클로라이드, 메탐페타민 하이드로클로라이드, 메틸페니데이트 하이드로클로라이드, 모다피닐, 페몰린, 펜테르민 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항파킨슨병약은 아만타딘 하이드로클로라이드, 벤즈트로핀 메실레이트, 비페리덴 하이드로클로라이드, 비페리덴 락테이트, 브로모크립틴 메실레이트, 카르비도파-레보도파, 엔타카폰, 레보도파, 페르골리드 메실레이트, 프라미펙솔 디하이드로클로라이드, 로피니롤 하이드로클로라이드, 셀레길린 하이드로클로라이드, 톨카폰, 트리헥시페니딜 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 기타 중추 신경계 약물은 부푸로피온 하이드로클로라이드, 도네페질 하이드로클로라이드, 드로페리돌, 플루복사민 말레이트, 리튬 카보네이트, 리튬 시트레이트, 나라트립탄 하이드로클로라이드, 니코틴 폴라크릴렉스, 니코틴 경피 시스템, 프로포폴, 리자트립탄 벤조에이트, 시부트라민 하이드로클로라이드 모노하이드레이트, 수마트립탄 숙시네이트, 타크린 하이드로클로라이드, 졸미트립탄으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다 (예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook의 pp. 337-530 참조).

적어도 하나의 콜린성 약물 (예를 들어, 부교감흥분제)은 베타네콜 클로라이드, 에드로포늄 클로라이드, 네오스티그민 브로마이드, 네오스티그민 메틸설페이트, 피소스티그민 살리실레이트, 피리도스티그민 브로마이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항 콜린성 약물은 아트로핀 설페이트, 디시클로민 하이드로클로라이드, 글리코피롤레이트, 히오시아민, 히오시아민 설페이트, 프로판텔린 브로마이드, 스코폴아민, 스코폴아민 부틸브로마이드, 스코폴아민 하이드로브로마이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 아드레날린성 약물(교감 신경 흥분제)은 도부타민 하이드로클로라이드, 도파민 하이드로클로라이드, 메타라미놀 비타르트레이트, 노르에피네프린 비타르트레이트, 페닐에프린 하이드로클로라이드, 수도에페드린 하이드로클로라이드, 수도에페드린 설페이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 아드레날린성 차단제(교감 신경 차단제)는 디하이드로에르고타민 메실레이트, 에르고타민 타르트레이트, 메티세르기드 말레이트, 프로프라놀롤 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 골격근 이완제는 바클로펜, 카리소프로돌, 클로르족사존, 시클로벤자프린 하이드로클로라이드, 단트롤렌 소듐, 메토카르바몰, 티자니딘 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 신경근 차단제는 아트라쿠리움 베실레이트, 시사트라쿠리움(cisatracurium) 베실레이트, 독사쿠리움 클로라이드, 미바쿠리움 클로라이드, 판쿠로니움 브로마이드, 피페쿠로니움 브로마이드, 라파쿠로니움 브로마이드, 로쿠로니움 브로마이드, 숙시닐콜린 클로라이드, 튜보쿠라린 클로라이드, 베쿠로니움 브로마이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다(Nursing 2001 Drug Handbook의 pp. 531-84 참조).

적어도 하나의 항 히스타민제는 브롬페니라민 말레이트, 세티리진 하이드로클로라이드, 클로르페니라민 말레이트, 클레마스틴 퓨마레이트, 시프로헵타딘 하이드로클로라이드, 디펜히드라민 하이드로클로라이드, 펙소페나딘 하이드로클로라이드, 로라타딘, 프로페타진 하이드로클로라이드, 프로메타진 테오클레이트, 트리프롤리딘 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 브론코딜레이터는 알부테롤, 알부테롤 설페이트, 아미노필린, 아트로핀 설페이트, 에페드린 설페이트, 에피네프린, 에피네프린 비타르트레이트, 에피네프린 하이드로클로라이드, 이프라트로피움 브로마이드, 이소프로테레놀, 이소프로테레놀 하이드로클로라이드, 이소프로테레놀 설페이트, 레발부테롤 하이드로클로라이드, 메타프로테레놀 설페이트, 옥스트리필린, 피르부테롤 아세테이트, 살메테롤 시나포에이트, 테르부탈린 설페이트, 테오필린으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 거담제 또는 진해제는 벤조나테이트, 코데인 포스페이트, 코데인 설페이트, 덱스트라메토르판 하이드로브로마이드, 디펜하이드라민 하이드로클로라이드, 구아이페네신, 하이드로모르폰 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 기타 호흡기 약물은 아세틸시스테인, 베클로메타손 디프로피오네이트, 베락탄트, 부데소니드, 칼팍탄트(calfactant), 크로몰린 소듐, 도르나아제 알파, 에포프로스테놀 소듐, 플루니솔리드, 플럭티카손 프로피오네이트, 몬테루카스트 소듐, 네도크로밀 소듐, 팔리비즈맵, 트리암시놀론, 아세토니드, 자피루카스트, 질류톤으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다 (예컨대, Nursing 2001 Drug Handbook의 pp. 585-642 참조).

적어도 하나의 제산제, 흡착제, 항고창제는 알루미늄 카르보네이트, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 카르보네이트, 마갈드레이트, 마그네슘 히드록사이드, 마그네슘 옥사이드, 시메티콘, 소듐 디카르보네이트의 적어도 하나가 선택될 수 있다. 적어도 하나의 소화 효소 또는 담석 가용화제는 판크레아틴, 판크레리파아제, 우르소디올의 적어도 하나가 선택될 수 있다. 적어도 하나의 지사제는 에타풀자이트, 비스무스 서브살리실레이트, 칼슘 폴리카르보필, 디페녹실레이트 하이드로클로라이드 또는 아트로핀 설페이트, 로페라미드, 옥트레오타이드 아세테이트, 오피움 틴크튜어, 오피움 티크튜어(캄포레이트 처리됨)의 적어도 하나가 선택될 수 있다. 적어도 하나의 설사제는 비소코딜, 칼슘 폴리카르보필, 카스카라 사그라다, 카스카라 사그라다 아로마틱프루이덱스트랙트, 카스토르 오일, 도쿠세이트 칼슘, 도쿠세이트 소듐, 글리세린, 락툴로오스, 마그네슘 시트레이트, 마그네슘 히드록시드, 마그네슘 설페이트, 메틸셀룰로오스, 미네랄 오일, 폴리에틸렌 글리콜 또는 일렉트로라이트 솔루션, 살리움, 세나, 소듐 포스파이트의 적어도 하나가 선택될 수 있다. 적어도 하나의 항구토제는 클로르프로마진 하이드로클로라이드, 디멘히드리네이트, 돌라세트론 메실레이트, 드로나비놀, 그라니세트론 하이드로클로라이드, 메크리진 하이드로클로라이드, 메토클로프로아미드 하이드로클로라이드, 온단세트론 하이드로클로라이드, 페르페나진, 프로클로르페라진, 프로클로르페라진 에디실레이트, 프로클로르파라진 말레이트, 프로메타진 하이드로클로라이드, 스토폴아민, 치에틸페라진 말리에트, 트레메토벤자미드 하이드로클로라이드의 적어도 하나가 선택될 수 있다. 적어도 하나의 항궤양제는 시메티딘, 시메티딘 하이드로클로라이드, 파모티딘, 란소프라졸, 미소프로스톨, 니자티딘, 오페프라졸, 라베프라졸 소듐, 란티딘 비스무스 시트레이트, 란티딘 하이드로클로라이드, 수크랄페이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다 (Nursing 2001 Drug Handbook의 pp. 643-95 참조). 적어도 하나의 코르티코스테로이드는 베타메타손, 베타메타손 아세테이트 또는 베타메타손 소듐 포스페이트, 베타메타손 소듐 포스페이트, 플루드로코르티손 아세테이트, 하이드로코르티손, 하이드로코르티손 아세테이트, 하이트로코르티손 시피오네이트, 하이드로크로티손 소듐 포스페이트, 하이드로코르티손 소듐 숙시네이트, 메틸프레드니솔론, 메틸프레드니솔론 아세테이트, 메틸프레드니솔론 소듐 숙시네이트, 프레드니솔론, 프레드니솔론 아세테이트, 프레드니솔론 소듐 포스페이트, 프레드니솔론 테부테이트, 프레드니손, 트리암시놀론, 트리암시놀론 아세토니드, 트리암시놀론 디아세테이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 안드로겐 또는 아나볼릭 스테로이드는 다나졸, 플루옥시메스테론, 메틸테스토스테론, 만드롤론 데카노에이트, 난드롤론 펜프로피오네이트, 테스토스테론, 테스토스테론 시피오네이트, 테스토스테론 에탄테이트, 테스토스테론 프로티오네이트, 테스토스테론 트랜서더멀 시스템의 적어도 하나가 선택될 수 있다. 적어도 하나의 에스트로겐 또는 프로게스틴은 에스테르화된 에스트로겐, 에스트라디올, 에스트라디올 시피오네이트, 에스트라디올/노르에틴드론 아세테이트 트랜스더멀 시스템, 에스트라디올 발레레이트, 에스트로겐(접합), 에스트로피페이트, 에티닐 에스트라디올, 에티닐 에스트라디올 및 데소게스트렐, 에티닐 에스트라디올 및 에티노디올 디아세테이트, 에티닐 에스트라디올 및 데소게스트렐, 에티닐 에스트라디올 및 에티노디올 디아세테이트, 에티닐 에스트라디올 및 네보노르게스트렐, 에티닐 에스트라디올 및 노르에틴드론, 에티닐 에스트라디올 및 노르에틴드론 아세테이트, 에티닐 에스트라디올 및 노르게스티메이트, 에티닐 에스타르디올 및 노르게스트렐, 에티닐 에스트라디올 및 노르에틴드론 및 아세테이트 및 페로우스 퓨마레이트, 레보노르게스트렐, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메스트라놀 및 노르에틴드론, 노르에틴드론, 노르에틴드론 아세테이트, 노르게스트렐, 프로게스트론의 적어도 하나가 선택될 수 있다. 적어도 하나의 고나도트로핀(gonadroptropin)은 가니렐릭스 아세테이트, 고나도렐린 아세테이트, 히스트렐린 아세테이트, 메노트로핀의 적어도 하나가 선택될 수 있다. 적어도 하나의 항당뇨제 또는 글루카곤은 아카르보스, 클로르프로파미드, 글리메피리드, 글리피지드, 글루카곤, 글리부리드, 인슐린, 메트포르민 하이드로클로라이드, 미그리톨, 피오글리타존 하이드로클로라이드, 레파글리나이드, 로시글리타존 말레이트, 트로글리타존으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 티로이드 호르몬은 레보티록신 소듐, 리오티로닌 소듐, 리오트릭스, 티로이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 티로이드 호르몬 길항제는 메티마졸, 포타슘 요오디드, 포타슘 아이오다이드(포화 용액), 프로필티오우라실, 방사성 아이오딘 (소듐아이오다이드 ¹³¹I), 강한 요오딘 용액으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 뇌하수체 호르몬은 코르티코트로핀, 코신트로핀, 데스모프레신 아세테이트, 류프로리드 아세테이트, 레포지토리 크로티코트로핀, 소마트렘, 소마트로핀, 바소프레신으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 부갑상선-유사 약물은 칼시페디올, 칼시토닌(인간), 칼시토닌(연어), 칼시트리올, 디하이드로타키스테롤, 에티드로네이트 디소듐으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다(예를 들어, Nursing 2001 Drug Handbook의 pp.696-796 참조).

적어도 하나의 이뇨제는 아세타졸아미드, 아세타졸아미드 소듐, 아밀로리드 하이드로클로라이드, 부메타니드, 클로르탈리돈, 에타크리네이트 소듐, 에타크리닉 산, 퓨로세미드, 하이드로클로로치아지드, 인다파미드, 만니톨, 메토라존, 스피로노락톤, 토르세미드, 트리암테렌, 우레아로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 일렉트로라이트 또는 대체 용액은 칼슘 아세테이트, 칼슘 카르보네이트, 칼슘 클로라이드, 칼슘 시트레이트, 칼슘 글루비오네이트, 칼슘 글루셉테이트, 칼슘 글루코네이트, 칼슘 락테이트, 칼슘 포스페이트(디베이직), 칼슘 포스페이트(트리베이직), 덱스트란(고분자량), 덱스트란(저분자량), 헤타스타치, 마그네슘 클로라이드, 마그네슘 설페이트, 포타슘 아세테이트, 포타슘 비카르보네이트, 포타슘 클로라이드, 포타슘 글루코네이트, 린저 주사, 린저 주사(락테이트), 소듐 클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 산화제 또는 알칼리화제는 소듐 비카르보네이트, 소듐 락테이트, 트로메타민으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다(예를 들어, Nursing 2001 Drug Handbook의 pp.797-833 참조).

적어도 하나의 조혈제는 철 함유 퓨마레이트, 철 함유 글루코네이트, 철 함유 설페이트, 철 함유 설페이트(건조), 철 덱스트란, 철 솔비톨, 다당-철 복합체, 소듐 철 글루코네이트 복합체로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 혈액 응고 방지제는 아드레파린 소듐, 달테파린 소듐, 다나파로이드 소듐, 에녹사파린 소듐, 헤파린 칼슘, 헤파린 소듐, 와파린 소듐으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 혈액 유도체는 알부민 5%, 알부민 25%, 항헤모필릭 인자, 항 저해제 코아굴란트 복합체, 항트롬빈 Ⅲ(인간), 인자 Ⅸ(인간), 인자 Ⅸ 복합체, 플라즈마 단백질 분획으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 혈전용해 효소는 알테플라세, 아니스트레플라세, 레테플라세(재조합), 스트렙토키나아제, 유로키나아제로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다(예를 들어, Nursing 2001 Drug Handbook의 pp. 834-66 참조).

적어도 하나의 알킬화제는 부설판, 카르보플라틴, 카르무스틴, 클로람부실, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 로무스틴, 메클로레타민 하이드로클로라이드, 멜파란, 멜파란 하이드로클로라이드, 스트렙토조신, 테모조로미드, 티오테파로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항대사제는 카페시타빈, 클라드리빈, 시타라빈, 플록스우리딘, 플루다라빈 포스페이트, 플로로우라실, 하이드로우레아, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 메토트렉세이트 소듐, 치오구아닌으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항생 항종양제는 블레오마이신 설페이트, 닥티노마이신, 다우노르비신 하이드로클로라이드 리포조멀, 에피루비신 하이드로클로라이드, 이다루비신 하이드로클로라이드, 미토마이신, 펜토스타틴, 플리카마이신, 발루비신으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 호르몬 균형을 바꾸는 적어도 하나의 항종양제는 아나스트로졸, 비카루타미드, 에스트라뮤스틴 포르페이트 소듐, 엑세메스탄, 플루타미드, 고세렐린 아세테이트, 레트로졸, 유프롤리드 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 니루타미드, 타목시펜 시트레이트, 테스토락톤, 토레미펜 시트레이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 기타 항종양제는 아스파라기나아제, 바실루스 칼메테-구에린 (BCG)(살아있는 방광), 다카르바진, 도세탁셀, 에토포시드, 에토포시드 포스페이트, 젬시타빈 하이드로클로라이드, 이리노테칸 하이드로클로라이드, 미토탄, 미톡산트론 하이드로클로라이드, 파실리탁셀, 페가스파르가아제, 포르피머 소듐, 프로카르바진 하이드로클로라이드, 리툭시맵, 테니포시트, 토포테칸 하이드로클로라이드, 트라스트주맵, 트레티노인, 빈블라스틴 설페이트, 빈크리스틴 설페이트, 비노렐빈 타르트레이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다 (예를 들어, Nursing 2001 Drug Handbook의 867-963 참조).

적어도 하나의 면역 억제제는 아자치오프린, 바실릭시맵, 시클로스포린, 다클리주맵, 림포사이트 면역 글로불린, 뮤로모나브-CD3, 미코페놀레이트 모페틸, 미코페놀레이트 모페틸 하이드로클로라이드, 시로리무스, 타크로리무스로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 백신 또는 톡소이드는 BCG 백신, 콜레라 백신, 디프테리아 및 테타누스 톡소이드(흡수), 디프테리아 및 테타누스 톡소이드 및 흡수된 무세포 백일해 백신, 디프테리아 및 테타누스 톡소이드 및 전체 세포 백일헤 백신, 헤모필루스 b 접합 백신, 헤파티티스 백신(불활성), 헤파티티스 B 백신(재조합), 인플루엔자 바이러스 백신 1999-2000 3가형 A&B(정제된 표면 항원), 인플루엔자 바이러스 백신 1999-2000 3가형 A&B(서브비리온 또는 정제된 서브비리온), 인플루엔자 바이러스 백신 1999-2000 3가형 A&B(전체 비리온), 일본 뇌염 바이러스 백신 (불활성화된), 라임병 백신 (재조합 OspA), 홍역 및 볼거리 및 풍진 바이러스 백신 (살아있는), 홍역 및 볼거리 및 풍진 바이러스 백신 (약화되어 살아있는), 홍역 바이러스 백신 (약화되어 살아있는), 수막구균 폴리사카라이드 백신, 볼거리 바이러스 백신 (살아있는), 플라그 백신, 폐렴구균 백신 (다가), 폴리오바이러스 백신 (불활성화된), 폴리오바이러스 백신 (살아있는, 경구, 3가), 광견병 백신 (흡착된), 광견병 백신 (인간 이배체 세포), 풍진 및 볼거리 바이러스 백신 (살아있는), 풍진 바이러스 백신 (약화되어 살아있는), 파상풍 변성독소 (흡착된), 파상풍 변성독소 (액체), 장티푸스 백신 (경구), 장티푸스 백신 (비경구), 장티푸스 Vi 폴리사카라이드 백신, 수두 바이러스 백신, 황열병 백신으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 항독소 또는 항뱀독소는 검은 과부 거미 항뱀독소, 크로탈리데 안티베놈(Crotalidae antivenom) (다가), 디프테리아 항독소 (말), 미그루루스 플루비우스(Micrurus fulvius) 항뱀독소로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 면역 혈청은 사이토메갈로바이러스 면역 글로불린 (정맥내), 간염 B 면역 글로불린 (인간), 근육내 면역 글로불린, 정맥내 면역 글로불린, 광견병 면역 글로불린 (인간), 정맥내 호흡기 합포체 바이러스 면역 글로불린 (인간), Rh₀ (D) 면역 글로불린 (인간), 정맥내 Rh₀ (D) 면역 글로불린 (인간), 파상풍 면역 글로불린 (인간), 수두-대상포진 면역 글로불린으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 생물학적 반응 수정자는 아델스류킨, 에오에틴 알파, 필그라스팀(filgrastim), 주사용 글라티라머 아세테이트, 인터페론 알파콘-1, 인터페론 알파-2a(재조합), 인터페론 알파-2b(재조합), 인터페론 베타-1a, 인터페론 베타-1b(재조합), 인터페론 감마-1b, 레바미솔 하이드로클로라이드, 오프렐베킨, 사르그라모스팀으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다(예를 들어, Nursing 2001 Drug Handbook의 pp. 964-1040 참조).

적어도 하나의 눈 항 감염제는 바시트라신, 클로람페티콜, 시프로플록사신 하이드로클로라이드, 에리쓰로마이신, 젠타마이신 설페이트, 오플록사신 0.3%, 폴리믹신 B 설페이트, 설프아세타미드 소듐 10%, 설프아세타미드 소듐 15%, 설프아세타미드 소듐 30%, 토브라마이신, 비다라민으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 눈 항염제는 덱사메타손, 덱사메타손 소듐 포스페이트, 디클로페나크 소듐 0.1%, 플로로메토론, 플루르비프로펜 소듐, 케토로라크 트로메타민, 프레드니솔론 아세테이트(서스펜션) 프레드니솔론 소듐 포스페이트(용액)으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 미오틱은 아세틸콜린 클로라이드, 카르바콜(안구 내), 카르바콜(국소), 에코치오페이트 요디드, 필로카르핀, 필로카르핀 하이드로클로라이드, 필로카르핀 니트레이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 산동제는 아트로핀 설페이트, 시클로펜톨레이트 하이드로클로라이드, 에피네트린 하이드로클로라이드, 에피네프릴 보레이트, 호마트로핀 하이드로브로마이드, 페닐에프린 하이드로클로라이드, 스코폴라민 하이드로브로마이드, 트로피카미드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 눈 혈관 수축 신경제는 나파졸린 하이드로클로라이드, 옥시메타졸린 하이드로클로라이드, 테트라하이드로졸린 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 기타 눈 약물은 아프라클로니딘 하이드로사이클로라이드, 베탁솔올 하이드로클로라이드, 브리모니딘 타르트레이트, 카르테오롤 하이드로클로라이드, 디피베프린 하이드로클로라이드, 도르졸아미드 하이드로클로라이드, 에메다스틴 디퓨마레이트, 플루오레세인 소듐, 케토티펜 퓨마레이트, 락타노프로스트, 레보부놀올 하이드로클로라이드, 메티프로판오롤 하이드로클로라이드, 소듐 클로라이드(하이퍼토닉), 티모롤 말레이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 귀 약제는 브로익산, 카르바미드 페록사이드, 클로람페니콜, 트리에탄올아민 폴리펩티드 올레이트-콘덴세이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 코 약제는 베클로메타손 디프로피오네이트, 부데소니드, 에페드린 설페이트, 에피네프린 하이드로클로라이드, 플루니솔리드, 플루티카손 프로피오네이트, 나파졸린 하이드로클로라이드, 옥시메타졸린 하이드로클로라이드, 페닐에피린 하이드로클로라이드, 테트라히드라졸린 하이드로클로라이드, 트리암시놀론 아세토니드, 자일로메타졸린 하이드로클로라이드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다(예를 들어, Nursing 2001 Drug Handbook의 pp. 1041-97 참조).

적어도 하나의 국소 항-감염제는는 아시클로비어, 암포테리신 B, 아제라익산 크림, 바시트라신, 부토코나졸 니트레이트, 클린다마이신 포스페이트, 클로트리마졸, 에코나졸 니트레이트, 에리쓰로마이신, 젠타마이신 설페이트, 케토코나졸, 마페니드 아세테이트, 메트로니다졸(토피칼), 미코나졸 니트레이트, 뮤피로신, 나프티핀 하이드로클로라이드, 네오마이신 설페이트, 니트로퓨라존, 니스타틴, 실버 설파디아진, 테르비나핀 하이드로클로라이드, 테르코나졸, 테트라시클린 하이드로클로라이드, 티오코나졸, 톨나프테이트로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 옴약 또는 이살충제는 크로타미톤, 린단, 퍼메트린, 피레쓰린스로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 트로피칼 코르티코스테로이드는 베타메타손 디프로피오네이트, 베타메타손 발레레이트, 클로베타솔 프로피오네이트, 데소니드, 데속시메타손, 덱사메타손, 덱사메타손 소듐 포스페이트, 디플로라손 디아세테이트, 플로로시놀론 아세토니드, 플루오시노니드, 플루란드레놀리드, 플루티카손 프로피오네이트, 할시오니드, 하이드로코르티손, 하이드로코르티손 아세테이트, 하이드로코르티손 부티레이트, 하이드로코리손 발레레이트, 모메타손 류로에이트, 트리암시놀렌 아세토니드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다(예를 들어, Nursing 2001 Drug Handbook의 pp. 1098-1136 참조).

적어도 하나의 비타민 또는 미네랄은 비타민 A, 비타민 B 복합체, 시아노코발아민, 폴릭산, 하이드록소코발아민, 류코보린 칼슘, 니아신, 니아신아미드, 피리독신 하이드로클로라이드, 리보플라빈, 티아민 하이드로클로라이드, 비타민 C, 비타민 D, 콜레칼시페롤, 에르고칼시페롤, 비타민 D 유사체, 독세르칼세페롤, 파리칼리톨, 비타민 E, 비타민 K 유도체, 피톤아디온, 소듐 플로라이드, 소듐 플로라이드(국소), 트레이스 요소(trace elements), 크로뮴, 구리, 아이오딘, 망간, 셀레니움, 아연으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다. 적어도 하나의 칼로리는 아미노산 인퓨전(결정), 덱스트로스 내의 아미노산 인퓨전, 일렉트로사이트와 아미노산 인퓨전, 덱스트로스 내의 엘렉트로사이드와 아미노산 인퓨전, 간 기능 이상을 위한 아미노산 인퓨전, 높은 대사 스트레스에 대한 아미노산 인퓨전, 신장 이상에 대한 아미노산 인퓨전, 덱스트로스, 지방 에멀전, 중간 사슬 트리글리세리드로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다(예를 들어, Nursing 2001 Drug Handbook의 pp.1137-63 참조).

본 발명은 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 항체 또는 폴리펩타이드 조성물은 조절, 치료 및 요법의 필요로 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 활성 단백질 또는 항체를 포함하는 적절한 및/또는 유효량의 조성물 또는 약제학적 조성물을 더 포함할 수 있고, 부가적으로 적어도 하나의 TNF 길항제 (예컨대, TNF 케미칼 또는 활성 단백질 길항제, TNF 모노클로날 또는 폴리클로날 항체 또는 단편, 용해 TNF 수용체(예컨대, p55, p70 또는 p85) 또는 단편, 그들의 융합 폴리펩티드, 또는 작은 분자 TNF 길항제, 예컨대, TNF 결합 활성 단백질 I 또는 II (TBP-1 또는 TBP-II), 네레리몬맵, 인플릭시맵, 엔테라셉트, CDP-571, CDP-870, 아페리모맵, 레네르셉트등, 그러나 이로 한정되지는 않는다), 항류마티스제 (예컨대, 메토트레세이트, 아우라노핀, 아우로치오글루코오스, 아자치오프린, 에타네르셉트, 골드 소듐 치아말레이트, 하이드록시클로로퀸 설페이트, 레플루노미드, 설파살진), 근육 이완제, 마약, 비-스테로이드 염증성 약물 (NSAID), 진통제, 마취제, 진정제, 국소 마취제, 신경 근육 차단제, 항미생물제 (예컨대, 아미노글리코시드, 항진균제, 항기생충제, 항바이러스제, 카르바페넴, 세팔로스포린, 플루오르퀴놀렌, 마크롤라이드, 페니실린, 설포아미드, 테트라시클린, 다른 항미생물제), 건선 치료제, 코르티코스테로이드, 동화대사 스테로이드, 당뇨병 관련 제제, 미네랄, 영양, 티로이드 제제, 비타민, 칼슘 관련, 지사제, 진해제, 항구토제, 항궤양제, 설사제, 항응고제, 에리쓰로포이에틴 (예컨대, 에포에틴 알파), 필그라스팀(예컨대, G-CSF, 뉴포젠), 사그라모스팀 (GM-CSF, 류킨), 면역화, 이뮤노글로불린, 면역 억제제 (예컨대, 바실릭시맵, 시클로스포린, 다클리주맵), 성장 호르몬, 호르몬 대체 약물, 에스트로겐 수용체 조절자, 동공확대제, 조절마비제, 알킬화제, 항대사제, 미토틱 저해제, 방사성 의약품, 항우울제, 항조증제, 항정신병제, 항불안제, 수면제, 교감신경흥분제, 흥분제, 도네페질, 타크린, 천식 약, 베타 작용제, 흡입 스테로이드, 류코트리엔 저해제, 메틸잔틴, 크로몰린, 에피네프린 또는 유사체, 도르나아제 알파(풀모자임), 사이토카인 또는 사이토카인 길항제를 더 포함한다. 사이토카인은 IL-1에서 IL-23을 포함하지만 이로 한정되지는 않는다. 적절한 투양약은 당업계에서 잘 알려져 있다. 예컨대, Wells et al., eds.,Pharmacotherapy Handbook,2nd Edition, Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000)을 참조. 이들 문헌은 참조로 여기에 전체적으로 통합된다.

그러한 조성물은 또한 본 발명의 적어도 하나의 항체 또는 폴리펩티드와 관련되거나, 결합되거나 공-제제화되거나, 공-투여되는 독소 분자를 포함할 수 있다. 독소는 병적 세포 또는 조직을 선택적으로 죽이는 작용을 부가적으로 할 수 있다. 병적 세포는 암 또는 다른 세포일 수 있다. 이러한 독소는 예를 들어, 리신, 디프테리아 톡신, 베놈 톡신, 또는 박테리아성 톡신으로부터 선택된 적어도 하나의 도소의 기능성 사이토톡신성 도메인을 포함하는 정제 또는 재조합 톡신 또는 톡신 단폄일 수 있으나, 이로 한정되지는 않는다. 톡신이라는 용어는 죽음을 초래할 수 있는 톡신 쇼크를 포함하는 인간 또는 다른 포유류에 병적 환경을 유발할 수 있는 자연 발생, 돌연 변이 또는 재조합 박테리아 또는 바이러스에 의하여 만들어질 수 있는 엔도톡신 또는 엑소톡신을 포함할 수 있다. 이러한 독소는 엔테로톡시제닉 E. coli 열민감 엔테로톡신 (LT), 열안정 엔테로톡신(ST), 시겔라 세포독소, 에어로조나스 엔테로톡신, 독소 쇼크 신드롬-1 (TSST-1), 스타필로코컬 엔테로톡신 (SEA), B(SEB), 또는 C (SEC), 스트렙토코컬 엔테로톡신 및 그 유사체를 포함할 수 있으나 이로 한정되지 않는다. 그러한 박테리아는 엔테로톡시제닉 E. coli (ETEC) 종의 스트레인, 엔테로헤모라직 E. coli (예컨대, 세로타입 0157: H7의 균주)의 종의 균주, 스타필로코쿠스 종 (예컨대, 스타필로코쿠스 아루레스, 스타필로코쿠스 피로젠스), 시겔라 종 (예컨대, 시겔라 디센테리에, 시겔라 플렉네리, 시겔라 보이디, 및 시겔라 소네이), 살모넬라 종 (예컨대, 살모넬라 티피, 살모넬라 콜레라-수이스, 살모넬라 엔테리티디스), 클로스트리듐 종 (예컨대, 클로스트리듐 퍼프린젠스, 클로스트리듐 디피실, 클로스트리듐 보툴리늄), 캄플로박터 종 (예컨대, 클로스트리듐종클로스트리듐 디피클, 클로스트리듐 보툴리늄), 캄플로박터 종 (예컨대,캄플로박터 제주니, 캄플로박터 페투스), 헬리코박터 종, (예컨대, 헬리코박터 파일로리),에로모나스 종 (예컨대, 에로모나스 소브리아, 에로모나스 하이드로필라, 에로모나스 카비에), 플레이소니오나스 시겔로이데스, 예르시나 엔테로콜리티카, 비브리오스 종 (예컨대, 비브리오스 콜레라, 비브리오스 파라헤모리티쿠스), 클레브시엘라 종, 슈도모나스 에루기노사, 및 스트렙토코키를 포함하나 이로 한정되지 않는다. 예컨대, Stein, ed., INTERNAL MEDICINE, 3rd ed., pp 1-13, Little, Brown and Co., Boston, (1990); Evans et al.,eds., Bacterial Infections of humans: Epidemiology and Control, 2d. Ed., pp 239-254, Plenum Medical Book Co., New York (1991);Mandell et al, Principles and Practice of Infectious diseases, 3d. Ed., Churchill Livingstone, New York (1990); Berkow et al, eds., The Merck Manual,16th edition, Merck and Co., Rahway, N. J., 1992; Wood et al, FEMS Microbiology Immunology, 76: 121-134 (1991); Marrack et al, Science,248: 705-711 (1990)를 참조한다. 문헌의 내용은 참고로서 여기에서 전체적으로 포함된다.

본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물은 희석제, 결합제, 안정화제, 완충제, 염, 친유성 용매, 보존제, 보조제 또는 그 유사체와 같은 어떠한 적절한 보조제를 더 포함하나 이로 한정되지는 않는다. 약제학적으로 허용되는 보조제가 선호된다. 이러한 살균 용액을 제조하는 방법과 비한정 예시들은 Gennaro, Ed., Remington'sPha. rnaceutical Sciences, 8'h Edition, Mack Publishing Co. (Easton, PA) 1990와 같이 당업계에서 잘 알려져 있다. 약제학적으로 허용되는 담체들은 투여 방법, 용해성 및 /또는 여기에서 기술된 것과 같이 또는 당업계에서 잘 알려진 것과 같이 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 조성물의 안정성에 대하여 적절하게 일상적으로 선택될 수 있다.

본 조성물에 유용한 약제학적 첨가제들은 단백질, 펩티드, 아미노산, 지질, 및 탄수화물 (예컨대, 단당류, 이-, 삼-, 사- 올리고당을 포함하는 당; 알디톨, 알도닉산, 에스테르화된 당 및 그 유사체와 같은 유도된 당; 및 다당류 또는 당 폴리머)를 포함하나 이로 한정되지는 않고, 이는 무게 또는 부피로 1-99.99%의 혼합 또는 단독으로 포함하는 단일 또는 배합물로 존재할 수 있다. 예시적인 단백질 첨가제는 인간 혈청 알부민(HSA), 재조합 인간 알부민(rHA), 젤라틴, 카제인 및 그 유사체와 같은 혈청 알부민을 포함한다. 완충 작용을 할 수 있는 대표 아미노산/EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 요소는 알라닌, 글리신, 아르기닌, 베타인, 히스티딘, 글루탐산, 아스파틱산, 시스테인, 라이신, 류신, 이소류신, 발린, 메티오닌, 페닐알라닌, 아스파탐, 및 그 유사체를 포함한다. 하나의 바람직한 아미노산은 글리신이다.

본 발명의 사용에 적절한 탄수화물 첨가제는 예를 들어 프락토오스, 말토오스, 갈락토오스, 글루코오스, D-만노오스, 소르보오스, 및 그 유사체와 같은 단당류; 락토오스, 슈크로오스, 트레할로스, 셀로비오스 및 그 유사체와 같은 이당류; 라피노오스, 멜레지토오스, 말토덱스트린, 덱스트란, 스타치, 및 그 유사체와 같은 다당류; 만니톨, 자일리톨, 말티톨, 락티톨, 자일리톨 솔비톨(글루시톨), 미오이노시톨 및 그 유사체와 같은 알디톨을 포함한다. 본 발명에서 사용하기 위한 바람직한 탄수화물 첨가제는 만니톨, 트레할로오스, 및 라피노오스이다.

EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 조성물은 완충제 또는 pH 조정제를 포함할 수도 있고; 전형적으로 완충제는 유기산 또는 염기로부터 제조된 염이다. 대표적인 완충제는 시트르산, 아스코르브산, 글루콘산, 카르본산, 타르타르산, 숙신산, 아세트산, 또는 프탈산의 염과 같은 유기산; 트리스, 트로메타민 하이드로클로라이드 또는 포스페이트 완충제를 포함한다. 본 조성물에 사용되는 바람직한 완충제는 시트레이트와 같은 유기산이다.

부가적으로, 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물은 폴리비닐피롤리돈, 피콜(중합 당), 덱스트레이트(예를 들어, 2-히드록시프로필-베타-시클로덱스트린과 같은 시클로덱스트린), 폴리에틸렌 글리콜, 향제제, 항균제, 감미료, 항산화제, 대전방지제, 계면활성제(예를 들어, "Tween 20" 및"Tween 80"과 같은 폴리솔베이트), 지질(예를 들어, 포스포리피트, 지방산), 스테로이드(예를 들어, 콜레스테롤) 및 킬레이트제(예를 들어, EDTA)와 같은 중합 첨가제/첨가제를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 조성물에 사용하기에 적절한 이들 및 부가적인 공지된 약제학적 첨가물 및/또는 첨가제는 예를 들어, in "Remington: The Science & Practice of Pharmacy",19'h ed., Williams & Williams, (1995), and in the"Physician's Desk Reference",52 ded., Medical Economics, Montvale, NJ (1998)에 공지되어 있으며, 참고로 여기에서 포함되어 있다. 바람직한 담체 또는 첨가 물질은 탄수화물 (예컨대, 당류 및 알디톨) 및 완충제 (예컨대, 시트레이트) 또는 중합제제를 포함한다.

제제

상기에서 나타난 바와 같이 본 발명은 부가적으로 보존된 용액 뿐만 아니라 바람직하게는 살린 또는 선택된 염과 적절한 완충제를 포함할 수 있는 안정한 제형 및 약제학적으로 허용되는 제형에서 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특이 부분 또는 변이체를 포함하는, 약제학적 또는 수의학적 용도를 위하여 적절한 다용도 보존 제형 뿐만 아니라 보존제를 포함하는 제형을 위하여 제공한다. 보존된 제형은 적어도 하나의 보존제 또는 적어도 하나의 페놀, m-크레솔, p-크레솔, o-크레솔, 클로로크레솔, 벤질 알콜, 페닐머큐릭 니트레이트, 페녹시에탄올, 포름알데하이드, 클로로부탄올, 마그네슘 클로라이드(예를 들어, 헥사하이드이트), 알킬파라벤(메틸, 에틸 프로필, 부틸 및 그 유사체), 벤잘코니움 클로라이드, 벤제토니움 클로라이드, 소듐 디하이드로아세테이트 및 치메로잘, 또는 수용성 희석제에서의 그들의 혼합물을 포함하는 그룹으로부터 부가적으로 선택된 것을 포함할 수 있다. 어떠한 적절한 농도 또는 혼합물은 0.001-5% 또는 그 안 범위 또는 값으로, 0.001, 0.003, 0.005, 0.009, 0.01, 0.02, 0.03, 0.05, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4., 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3. 3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.3, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 또는 그 안의 어떠한 값 또는 범위로 당업계에서 알려진 것과 같이 사용될 수 있다. 비제한적인 예는 보존제 없이, 0.1-2% m-크레솔 (예컨대, 0.2, 0.3. 0.4, 0.5, 0.9, 1.0%), 0.1-3% 벤질 알콜 (예컨대, 0.5, 0.9, 1.1, 1.5, 1.9, 2.0, 2.5%), 0.001-0.5% 치메로살 (예컨대, 0.005, 0.01), 0.001-2.0% 페놀 (예컨대, 0.05, 0.25, 0.28, 0.5, 0.9, 1.0%), 0.0005-1.0% 알킬파라벤 (예컨대, 0.00075, 0.0009, 0.001, 0.002, 0.005, 0.0075, 0.009, 0.01, 0.02, 0.05, 0.075, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.5, 0.75, 0.9, 1.0%)등을 포함한다.

상기 나타낸 바과 같이, 본 발명은 임의로 수성 희석제 중에서, 전술한 완충액 및/또는 보존제를 갖는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 용액을 포함하는 적어도 하나의 바이알 및 패키징 물질을 포함하는 제조물을 제공하며, 상기 패키징 물질은 상기 용액이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 20, 24, 30, 36, 40, 48, 54, 60, 66, 72 시간 이상에 걸쳐 지속될 수 있음을 표지한 라벨을 포함한다. 본 발명은 또한 패키징 물질, 동결건조된 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 포함하는 제 1 바이얼 및 전술한 완충액 또는 보존제의 수성 희석제를 포함하는 제 2 바이얼을 포함하는 제조물을 제공하는 것으로서, 상기 패키징 물질은 환자에게 적어도 하나의 EPO 모방 CH1 결실된 미메티바디 또는 특별화된 부분 또는 변이체를 수성 희석제에 재구성하여 24 시간 이상 지속될 수 있는 용액을 형성하도록 지시하는 라벨을 포함한다.

본 발명에 따라 사용되는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특별화된 부분 또는 변이체는 본원에 기술되었거나 당업계에 공지된 바와 같이 포유동물 세포 또는 유전자이식 표본으로부터 재조합 기술에 의해 형성될 수 있거나 다른 생물학적 소스로부터 정제될 수 있다.

농도의 고저는 조작가능하고, 목적하는 전달 비히클에 따라 달라지며, 예를 들어 용액 제제는 경피 패취, 폐, 경점막, 또는 삼투압 또는 마이크로 펌프 방법에 따라 다를 것이지만, 본 발명에 따른 생성물중의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 양의 범위는 재구성시 수득되는 양, 습식/건식 시스템일 경우 약 1.0 ㎍/㎖ 내지 약 1000 ㎎/㎖의 농도를 포함한다.

바람직하게는, 수용성 희석액은 약제학적으로 허용되는 보존제를 부가적으로 더 포함할 수 있다. 바람직한 보존제들은 페놀, m-크레솔, p-크레솔, o-크레솔, 클로로크레솔, 벤질 알콜, 알킬파라벤(메틸, 에틸, 프로필, 부틸 및 유사체), 벤잘코니움 클로라이드, 벤제토니움 클로라이드, 소듐 디하이드로아세테이트 및 치메로잘, 또는 그들의 혼합물을 구성하는 그룹으로부터 선택된 것을 포함한다. 제제에 사용되는 보존체의 농도는 당업자에 의하여 선택되고 쉽게 결정되는 보존제에 의존한다.

다른 부형제, 예를 들어, 등장성 제제, 완충제, 항산화제, 보존 강화제는 희석액에 부가적으로 그리고 바람직하게 첨가될 수 있다. 글리세린과 같은 등장성 제제는 공지된 농도에서 흔히 사용된다. 생리적으로 허용된 완충액은 바람직하게는 첨가되어 pH 조절능을 향상시킨다. 제형은 약 pH 4 에서 약 pH 10, 바람직하게는 pH 5 에서 약 pH 9, 더욱 바람직하게는 6.0에서 8.0과 같은 넓은 범위의 pH를 커버할 수 있다. 바람직하게는 본 발명의 제형은 약 6.8에서 약 7.8사이의 pH를 가진다. 바람직한 완충제는 포스페이트 완충제, 가장 바람직하게는 소듐 포스페이트, 특히 포스페이트 완충 살린(PBS)를 포함한다.

Tween 20(폴리옥시에틸렌 (20) 솔비탄 모노라우레이트), Tween 40(폴리옥시에틸렌 (20) 솔비탄 모노팔미테이트), Tween 80(폴리옥시에틸렌 (20) 솔비탄 모노올레이트), 플루노릭 F68(폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 차단 코폴리머), 및 PEG(폴리에틸렌 글리콜), 또는 폴리소르베이트 20 또는 80 또는 폴록사머 184 또는 188과 같은 비이온계 계면활성제, 플루로닉^® 폴릴스, 다른 차단 코폴리머, 및 EDTA 및 EGTA와 같은 킬레이터와 같은 약제학적으로 허용되는 용해제와 같은 다른 첨가제들이 뭉침을 줄이기 위하여 제제 또는 조성물에 부가적으로 첨가될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 계면 활성제의 존재는 단백질이 뭉치려는 성질을 완화한다.

본 발명의 제제는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변형체와 페놀, m-크레솔, p-크레솔, o-크레솔, 클로로크레솔, 벤질 알콜, 알킬파라벤(메틸, 에틸, 프로필, 부틸 및 그 유사체), 벤잘코니움 클로라이드, 벤테토니움 클로라이드, 소듐 디하이드로아세테이트 및 치메로잘 또는 수용성 희석액에서의 그들의 혼합액으로 구성된 그룹으로부터 선택된 보존체를 혼합하는 것을 포함하는 방법에 의하여 제조될 수 있다. 수용성 희석액에 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변형체를 보존제와 혼합하는 것은 전통적인 용해 및 혼합 과정을 사용하여 수행된다. 예컨대, 적절한 제제를 제조하기 위하여 완충 용액에 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변형체의 측정된 양은 단백질과 보존제를 바람직한 농도로 제공하기 위하여 충분한 양으로 완충 용액에 바람직한 보존제와 결합하는 것이다. 이 방법의 변형은 당업자에 의하여 인식될 것이다. 예컨데, 구성 물질이 첨가되는 순서, 부가적인 첨가제의 사용 여부, 제형이 제조되는 온도 및 pH는 사용되는 투여 수단 및 농도를 위하여 적합할 수 있는 모든 인자이다.

청구되는 제제는 수성 희석제중에서 물, 보존제 및/또는 부형제, 바람직하게는 인산 완충액 및/또는 식염수 및 선택된 염을 포함하는 제 2 바이얼과 함께 재구성되는 동결건조된 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 제 1 바이얼을 포함하는 이중 바이얼로서 환자에게 제공될 수 있다. 재구성을 요하는 이중 바이얼이나 단일 용액 바이얼은 다수회 재사용될 수 있고, 환자 치료에 단일 또는 복수의 주기동안 사용될 수 있으므로, 통상적으로 이용가능한 것보다 더욱 편리한 치료법을 제공한다.

본 발명에서 청구된 제조 물품은 24시간 이상으로 즉시의 기간을 넘어서 투여하기 위하여 사용된다. 따라서, 여기에서 청구된 제조 물품은 환자에게 현저히 유리한 점을 제공한다. 본 발명의 제제는 약 2 내지 40℃의 온도에서 안전하게 보존될 수 있고 연장된 기간동안 단백질의 생물학적 활성을 유지하여 용액이 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72 또는 96 시간 이상의 시간에 걸쳐 유지되고 사용될 수 있는 용액을 나타내는 포장 라벨을 허용한다. 보존된 희석액이 사용된다면, 그러한 라벨은 적어도 1-12개월, 반년, 일년반, 및/또는 2년까지 사용하는 것을 포함할 수 있다.

본 발명에서 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변형체의 용액은 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변형체를 수용성 희석액에 혼합하는 것을 포함하는 과정에 의하여 제조될 수 있다. 혼합은 전통적인 용해 및 혼합 과정을 사용하여 수행된다. 예컨대,적절한 희석액을 만들기 위하여, 물 또는 완충제에 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변형체의 측정된 양은 단백질 및 바람직한 농도로 부가적으로 보존제 또는 완충제를 제공하기 충분한 양으로 결합된다. 이 방법의 변형은 당업자에 의하여 인식될 것이다. 예컨대, 구성 성분이 첨가되는 순서, 부가적인 첨가제가 사용되는지 여부, 제형이 제조되는 온도 및 pH는 사용되는 투여 수단 및 농도를 위하여 최적화될 수 있는 모든 인자이다.

청구되는 생성물은 수성 희석제를 함유하는 제 2 바이얼과 함께 재구성되는 동결건조된 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 제 1 바이얼을 포함하는 이중 바이얼로서 환자에게 제공될 수 있다. 재구성을 요하는 이중 바이얼이나 단일 용액 바이얼은 다수회 재사용될 수 있고, 환자 치료에 단일 또는 복수의 주기동안 사용될 수 있으므로, 통상적으로 이용가능한 것보다 더욱 편리한 치료법을 제공할 수 있다.

청구된 생성물은 약국, 진료소 또는 기타 요양소 및 시설에 투명한 용액으로서 또는 수성 희석제를 함유하는 제 2 바이얼과 함께 재구성되는 동결건조된 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 제 1 바이얼을 포함하는 이중 바이얼로 환자에게 직접 제공될 수 있다. 더 작은 바이얼로 옮기기 위해 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 용액을 일회 또는 다수회 회수할 수 있는 큰 용기를 제공하고, 약국 또는 진료소에 의해 고객 및/또는 환자에게 제공되는 경우에 투명 용액의 크기는 1 리터 또는 더 클 수 있다.

이들 단일 바이얼 시스템을 포함하는 용인된 장치로는 Humaject^®, NovoPen^®, B-D^® Pen, AutoPen^®, 및 OptiPen^®과 같은 용액 전달용 펜-주입기 장치가 포함되고, 이중 바이얼 시스템을 포함하는 용인된 장치로는 HumatroPen^®과 같이 재구성 용액 전달용 카트리지에서 동결건조된 약물을 재구성하는 펜-주입기 시스템이 포함된다.

본 발명에 청구된 생성물로는 포장 물질이 포함된다. 포장 물질은 관리기관이 요구하는 정보 이외에, 생성물이 사용되는 조건을 제공한다. 본 발명의 포장 물질은 환자에게 수성 희석제에서 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 재구성하여 용액을 형성하도록 하거나 이 용액을 2 개의 바이얼, 습식/건식 생성물에 대해 2-24 시간 이상의 기간에 사용하도록 하는 설명서를 제공한다. 단일 바이얼 용액 생성물의 경우, 라벨은 상기 용액이 2-24 시간 이상에 걸쳐 사용될 수 있음을 나타낸다. 본 발명의 청구된 생성물은 인간의 약제학적 생성물 사용에 유용하다.

본 발명의 제제는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변형체와 선택된 완충제, 바람직하게는 살린 또는 선택된 염을 포함하는 포스페이트 완충제를 혼합하는 것을 포함하는 방법에 의하여 만들어질 수 있다. 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변형체와 완충제를 수용액에서 혼합하는 것은 통상의 용해 및 혼합 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 적합한 제제를 제조하기 위해, 예를 들어, 측정량의 물 또는 완충액중의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 목적하는 농도의 단백질 및 완충액을 제공하는데 충분한 양으로 수중에서 목적하는 완충제와 혼합한다. 이 방법의 변형은 당업자에 의하여 인식될 것이다. 예를 들어, 구성 성분의 첨가 순서, 부가되는 첨가제의 사용 여부, 제형이 제조되는 온도 및 pH는 사용되는 투여 수단 및 농도를 위하여 최적화될 수 있는 모든 인자이다.

청구되는 안정 또는 보존 제제는 투명 용액으로서, 또는 수성 희석제중의 보존제 또는 완충액 및 부형제를 함유하는 제 2 바이얼과 함께 재구성된 동결건조된 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 제 1 바이얼을 포함하는 이중 바이얼로서 환자에게 제공될 수 있다. 재구성을 요하는 이중 바이얼이나 단일 용액 바이얼은 다수회 재사용될 수 있고, 환자 치료에 단일 또는 복수의 주기동안 사용될 수 있으므로, 통상적으로 이용가능한 것보다 더욱 편리한 치료법을 제공할 수 있다.

여기에서 기술된 안정 또는 보존 제제 또는 용액에서 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분은 SC 또는 IM 주사; 경피, 폐, 경점막, 이식, 삼투 펌프, 카트리지, 마이크로 펌프, 또는 당업계에서 알려진 것과 같이 당업자에 의하여 적용되는 다른 수단을 포함하는 각종 전달 방법을 통해 본 발명에 따라 환자에게 투여될 수 있다.

치료상의 적용

또한, 미메틱바디를 위한 본 발명은 이로 제한되는 것은 아니나 빈혈, 암 관련 빈혈 치료, 빈혈에 대한 방사선 요법 또는 화학 요법, 바이러스 또는 박테리아 감염 관련 빈혈 치료, 콩팥 빈혈, 미성숙 빈혈, 소아 및/또는 성인 암, 림프종 관련 빈혈, 골수종, 다수 골수종, AIDS 관련 빈혈, 예정 수술을 기다리는 자가 수혈이 있는 또는 없는 환자에 대한 동시 치료, 수술에 대한 수술전 및 수술후, 자가 헌혈 또는 수혈, 주기적 관리, 사이클릭 호중성 백혈구 감소증 또는 코스트만 증후군 (선천성 과립구 결핍증), 말기 콩팥 질병, 투석과 관련된 빈혈, 만성 콩팥 기능장애, 선천성 저항성 빈혈과 같은 일차 조혈 질병, 중증성 지중해 빈혈, 또는 낫 세포 질병, 낫 세포 질병의 혈과 막힘 복합증을 포함하는 빈혈을 세포, 조직, 기관, 동물, 또는 환자에서 조절 또는 치료하는 방법을 제공한다. Furman et al., Pediatrics 1992; 90: 716-728, Goldberg Science. 1988; 242: 1412-1415; Paul et al., Exp Hematol. 1984; 12: 825-830; Erslev et al., Arch Intern Med. 1968; 122: 230-235; Ersley et al., Ann Clin Lab Sci. 1980; 10: 250-257; Jacobs et al., Nature. 1985; 313: 806-810; Lin et al., ProcNatl Acad Sci USA. 1985; 82:7580-7584; Law et al., ProcNatl Acad Sci USA. 1986; 83: 6920-6924; Goldwasser et al., J Biol Chem. 1974; 249: 4202-4206; Eaves et a., Blood. 1978; 52: 1196-1210; Sawyer et al., Blood. 1989; 74: 103-109; Winearls et al., Lancet. 1986; 2: 1175-1178; Eschbach et al.,N Engl J Med. 1987; 316: 73-78; Eschbach et al., Ann Intern Med. 1989; 111:992-1000, 각각은 참고로 여기에 전체로서 포함되어 있다.

본 발명의 미메티바디는 또한 예컨대, 만성 감염, 염증 과정, 방사선 치료, 및 세포증식억제 약물 치료, 및 환자에서 비-콩팥 빈혈을 일으키는 것으로 보고된 것에 의해 야기된 비-콩팥 형태의 빈혈을 치료하는데 사용될 수 있다. 예컨대, Abels RI and Rudnick SA etrythropoietin: evolving clinical applications를 참조. Experimental Hematology 19: 842-50 (1991); Graber SE and Krantz SB etrythropoietin: biology and clinical use.Hematology/Oncol. Clin. North Amer. 3: 369-400 (1989); Jelkman W and Gross AJ (eds) Etrythropoietin. Springer, Berlin 1989; Koury MJ 및 Bondurant MC The molecular mechanism of etrythropoietin action. European Journal of Biochemistry 210: 649-63 (1992); Krantz SB Erythropoietin. Blood 77: 419-34(1991); Tabbara IA Etrythropoietin. Biology and clinical applications. Archives of Internal Medicine 153: 298-304 (1993), 각각은 참고로 여기에 전체로서 포함되어 있다.

본 발명은 또한 세포, 조직, 기관, 동물, 또는 환자에서 빈혈 또는 혈액 세포 관련 증상을 조절 또는 치료하는 방법을 제공하고, 여기에서 상기 빈혈 또는 혈액 세포 관련 증상은 이로 제한되는 것은 아니나 적어도 하나의 면역 관련 질병, 심혈관 질병, 감염, 악성 및/또는 신경 질병을 포함하는 적어도 하나와 관련되어 있다. 상기 방법은 임의로 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 함유하는 유효량의 적어도 하나의 조성물 또는 약제학적 조성물을 조절, 처리 또는 치료가 필요한 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 이로 제한되는 것은 아니나 적어도 하나의 세균, 바이러스 및 곰팡이 감염을 포함하는 급성 또는 만성 세균 감염, 급성 및 만성 기생충 또는 감염 과정, HIV 감염/HIV 신경병증, 수막염, 간염, 화농성 관절염, 복막염, 폐렴, 후두개염, e.coli 0157:h7, 용혈 요독 증후군/혈전성 혈소판감소자반증, 말라리아, 뎅기 출혈열, 리슈만편모충, 나병, 독소충격증후군, 연쇄구균성 근육염, 가스 괴저, 결핵균, 조류형결핵균 인트라셀룰라(mycobacterium avium intracellular), 폐포자충폐염, 골반염 질병, 고환염/부고환염, 레기오넬라, 라임 질병, 인플루엔자 a, 엡스타인바 바이러스, 바이탈-관련된 헤마파고사이틱 신드롬(vital-associated hemaphagocytic syndrome), 비탈렌세팔리티스(vitalencephalitis)/무균수막염 등; (ii) 백혈병, 급성 백혈병, 급성 림프모구 백혈병 (ALL), B-세포, T-세포 또는 FAB ALL, 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성골수(성) 백혈병 (CML), 만성 만성림프성 백혈병 (CLL), 털세포 백혈병, 마이엘로디프라스틱 신드롬(myelodyplastic syndrome) (MDS), 림프종, 호지킨스병, 악성 림프종, 비-호지킨스 림프종, 부르키트 림프종, 다발 골수종, 카포시 육종, 결장 직장암, 췌장암종, 코인두 암종, 악성조직구증, 종양부수 증후군/암의 고칼슘 혈증, 고형종양, 샘암종, 육종, 악성 흑색종 등; 또는 (iii) 신경퇴행성 질병, 다발 경화증, 편두통, AIDS 치매 복합체, 다발 경화증 및 급성 횡단 척수염과 같은 탈수초성 질병; 피질척수 시스템 손상과 같은 추체외로 및 소뇌 질병; 바닥핵 또는 소뇌 질병의 질병; 헌팅톤 무도병 및 노인 무도병과 같은 운동과다 운동 질병; CNS 도파민 수용체를 차단하는 약물에 의해 유발되는 것과 같은 약물-유발 운동 질병; 파킨슨병과 같은 운동감소 운동 질병; 진행성 수프라뉴클레오 팔시(Progressive supranucleo Palsy); 소뇌의 구조적 손상; 척수성 운동실조와 같은 척수 퇴행, 프리이드라이히 운동실조, 소뇌 피질 퇴행, 멀티플 시스템(multiple system) 퇴행 (Mencel, Dejerine-Thomas, Shi-Drager, and Machado-Joseph); 전신병 (렙숨 질환, 아베탈리포프로테미아(abetalipoprotemia), 화운동못함증, 모세혈관확장증, 및 미토콘드리아 멀티 시스템 질병); 다발 경화증, 급성 횡단 척수염과 같은 탈수초성 코어 질병; 및 신경성 근위축 (근육위축가쪽 경화증, 영아 척수근육위축 및 소아 척수근육위축과 같은 앞뿔 세포 퇴행)과 같은 운동 단위 질병; 알쯔하이머 질병; 중년의 다운증후군; 디푸즈 레비소체(Diffuse Lewy body) 질병; 노인성 레비소체치매; 베르니케-코르사코프증후군; 만성 알콜중독; 크로이츠펠트야콥병; 아급성 경화 범뇌염, 할레로르덴-스파쯔(Hallerrorden-Spatz) 질병; 및 권투선수 치매 등을 포함하는 암/감염 질병을 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에서 조절 또는 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 임의로 적어도 하나의 TNF 항체 또는 특정 부분 또는 변이체를 함유하는 유효량의 조성물 또는 약제학적 조성물을 조절, 처리 또는 치료가 필요한 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 예컨대, the Merck Manual,16 Edition, Merck & Company, Rahway, NJ (1992)를 참조.

상기 방법은 임의로 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분을 함유하는 유효량의 적어도 하나의 조성물 또는 약제학적 조성물을 조절, 처리 또는 치료가 필요한 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 이로 제한되는 것은 아니나 적어도 하나의 심장 스턴(stun) 신드롬, 심근경색증, 울혈성 심장 기능상실, 뇌졸중(stroke), 허혈 발작, 출혈, 동맥경화증, 죽상동맥경화증, 당뇨병 아테리오스클레루틱(ateriosclerutic) 질병, 고혈압, 동맥(성) 고혈압, 콩팥혈관 고혈압, 실신, 쇼크, 심혈관 시스템의 매독, 심장기능상실, 폐심장, 일차 폐 고혈압, 심장 부정맥, 심방 에크토픽 비트(atrial ectopic beat), 심방조동, 심방세동 (지속 또는 발작), 카오틱(chaotic) 또는 다소성 심방 빈맥, 레귤라 내로우(regular narrow) QRS 빈맥, 특정 부정맥, 심실세동, His 번들 부정맥, 방실차단, 다발 갈래차단, 심근허혈 질병, 심장동맥 질병, 협심증, 심근경색증, 심근병증, 확장 울혈심장근육병증, 제한 심장근육병증, 판막심장병, 심내막염, 심장막 질병, 심장종양, 대동맥 및 말초동맥류, 대동맥박리, 대동맥 염증, 복부 대동맥 및 그의 분비 폐색, 말초혈관 질병, 동맥 폐색 질병, 페리페랄 아테를로스클레로틱(peripheral atherlosclerotic) 질병, 폐쇄성 혈전혈관염, 기능성 말초 동맥(functional peripheral arterial) 질병, 레이노 현상 및 질병, 말단 청색증, 홍색사지통증, 정맥 질병, 정맥 혈전증, 정맥류 성정맥, 동정맥루, 림프부종, 지방부종, 불안정 협심증, 재관류 손상, 포스트 펌프 신드롬(post pump syndrome), 허혈-재관류 손상 등을 포함하는 적어도 하나의 심혈관 질병을 세포, 조직, 기관, 동물, 또는 환자에서 조절 또는 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 임의로 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 함유하는 유효량의 조성물 또는 약제학적 조성물을 조절, 처리 또는 치료가 필요한 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 방법은 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 함유하는 유효량의 조성물 또는 약제학적 조성물을 이러한 조절, 처리 또는 치료가 피료한 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 임의로 상기 면역 질병을 치료하기 위한 공-투여 또는 병용 치료를 추가로 포함할 수 있고, 여기에서 상기 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디, 그의 특정 부분 또는 변이체의 투여는 전, 중 및/또는 후에 적어도 하나의 TNF 길항제 (예컨대, 이로 제한되는 것은 아니나 TNF 항체 또는 단편, 가용성 TNF 수용체 또는 단편, 그의 융합 단백질, 또는 소분자 TNF 길항제), 항류마티스제, 근육 이완제, 마약, 비-스테로이드 항-염증 약물 (NSAID), 진통제, 마취제, 진정제, 국소 마취제, 신경 근육 차단제, 항미생물제 (예컨대, 아미노글리코시드, 항진균제, 항기생충제, 항바이러스제, 카르바페넴, 세팔로스포린, 플루오르퀴놀론, 마크롤라이드, 페니실린, 설폰아미드, 테트라사이클린, 다른 항미생물제), 건선 치료제, 코르티코스테로이드, 동화대사 스테로이드, 당뇨병 관련 약물, 미네랄, 영양, 티로이드제, 비타민, 칼슘 관련 호르몬, 설사약, 진해제, 항구토제, 항궤양제, 설사제, 항응고제, 에리쓰로포이에틴 (예컨대, 에포에틴 알파), 과립구집락자극인자 (예컨대, G-CSF, 뉴포젠), 사르그라모스팀(sargramostim) (GM-CSF, 류킨), 면역화, 이뮤노글로불린, 면역 억제제 (예컨대, 바실릭시마브, 사이클로스포린, 다클리주마브), 성장 호르몬, 호르몬 대체 약물, 에스트로겐 수용체 조절자, 동공확대제, 조절마비제, 알킬화제, 항대사물질, 핵분열억제제, 방사성 의약품, 항우울제, 안티마닉 약물, 항정신병제, 항불안제, 수면제, 교감신경흥분제, 흥분제, 도네페질, 타크린, 천식 약, 베타 작용제, 흡입 스테로이드, 류코트리엔 저해제, 메틸잔틴, 크로몰린, 에피네프린 또는 유사체, 도르나세 알파 (Pulmozyme), 사이토카인 또는 사이토카인 길항제로부터 선택된 적어도 하나를 포함하는 것을 추가로 포함한다. 바람직한 투여량은 당업계에 잘 알려져 있다. 예컨대, Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2nd Edition, Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000)를 참조, 각각은 참고로 여기에 전체로서 포함되어 있다.

미메티바디는 또한 자가골수 배양에서와 같이 생체외에서 사용될 수 있다. 요약하자면, 화학요법이전에 환자로부터 골수를 빼내어 임의로 미메티바디와 함께, 임의로 하나 이상의 추가의 사이토카인과 함께 TPO 및/또는 EPO로 처리한다. 그 후, 처리한 골수를 화학요법 후 환자에게 되돌려 골수의 회복을 촉진한다. 또한, TPO 단독 및 EPO 미메티바디 및/또는 EPO와의 병용은 또한 골수 또는 말초혈액전구(PBPC) 세포의 생체외 확장에 대해 사용될 수 있다. 말초순환으로 전구세포를 조기에 방출하도록, 골수는 화학요법 처치 전에 줄기세포인자(SCF) 또는 G-CSF에 의해 자극될 수 있다. 이들 전구세포는 말초혈액으로부터 임의로 수집되어 농축된 다음, 임의로 SCF, G-CSF, IL-3, GM-CSF, IL-6 또는 IL-11을 포함하나 이로 한정되지 않는 하나 이상의 다를 사이토카인과 병용하여 TPO 및 미메티바디로 배지에서 처리되어, 고밀도 거대핵세포 배양물로 분화 및 증식된 다음, 임의로 고용량 화학요법이후에 환자에게 다시 보낸다. 골수의 생체외 처치를 위한 TPO의 용량은 100 pg/ml 내지 10 ng/ml, 바람직하게는 500 pg/ml 내지 3 ng/ml의 범위일 것이다. 미메티바디의 용량은 0.1 단위/ml 내지 20 단위/ml, 바람직하게는 0.5 단위/ml 내지 2 단위/ml, 또는 그 안의 임의의 범위 또는 수치로 사용될 수 있는 EPO에 대한 활성과 동등량일 것이다.

(본 발명에 따른 항체, 특별화된 부분 및 그의 변이체를 적어도 하나 추가로 포함하는) 본 발명에 따른 조성물, 병용 요법, 공투여, 장치 및/또는 방법에 적합한 TNF 길항제로는 항-TNF 항체, 그의 리간드-결합 단편, 및 특히 TNF에 결합하는 수용체 분자; TNF 합성, TNF 방출 또는 표적 세포에 대한 그의 작용을 방지 및/또는 억제하는 화합물, 예컨대 탈리도마이드, 테니답, 포스포디에스테라제 억제제 (예컨대, 펜톡시필린 침 롤리프람), A2b 아데노신 수용체 작용제 및 A2b 아데노신 수용체 인핸서; TNF 수용체 시그널링을 방해 및/또는 억제하는 화합물, 예컨대 미토겐 활성단백질(MAP) 키나아제 억제제; 멤브레인 TNF 결절(cleavage)을 차단 및/또는 억제하는 화합물, 예컨데 금속단백분해효소 억제제; TNF 활성을 차단 및/또는 억제하는 화합물, 예컨대 안지오텐신 전환 효소 (ACE) 억제제 (예컨대, 캅토프릴); 및 TNF 생성 및/또는 합성을 차단 및/또는 억제하는 화합물, 예컨대 MAP 키나아제 억제제가 포함되나 이들에 한정되지 않는다.

여기에 사용된, "종양 괴사 인자 항체", "TNF 항체", "TNFα 항체" 또는 단편 등은 인비트로, 인시츄 및/또는 바람직하게는 인비보에서 TNFα활성을 감소, 차단, 억제, 폐지 또는 방해한다. 예를 들어, 본 발명의 적합한 TNF 인간 항체는 TNFα와 결합할 수 있고, 항-TNF 항체, 그의 항원-결합 단편 및 TNFα에 구체적으로 결합하는 그의 특별화된 변이체 또는 도메인을 포함한다. 적합한 TNF 항체 또는 단편은 또한 TNF RNA, DNA 또는 단백질 합성, TNF 방출, TNF 수용체 시그널링, 멤브레인 TNF 결절, TNF 활성, TNF 생성 및/또는 합성을 감소, 차단, 폐지, 방해, 방지 및/또는 억제할 수 있다.

키메라 항체 cA2는 고친화력 중화 마우스 항-인간 TNFα IgG1 항체의 항원 결합 가변 영역 A2 및 카파 면역글로불린인 인간 IgG1의 불변 영역으로 구성된다. 인간 IgG1 Fc 부위는 동종이형 항체 작동 기능을 향상시키고, 순환 혈청 반감기를 증가시키고 항체의 면역원성을 감소시킨다. 키메라 항체 cA2의 항원항체결합력 및 에피토프 특이성은 뮤린 항체 A2의 가변 영역로부터 유도된다. 특정 구체예에서, 뮤린 항체 A2의 가변 영역를 코딩하는 핵산에 대한 바람직한 소스는 A2 하이브리도마 세포주이다.

키메라 A2 (cA2)는 천연 및 재조합 인간 TNFα 는 모두 용량 의존 방식으로 세포독성 효과를 중화한다. 키메라 항체 cA2 및 재조합 인간 TNFα의 결합 분석으로부터, 키메라 항체 cA2의 친화력 상수는 1.04×10¹⁰ M^-1로 측정되었다. 경쟁억제에 의해 모노클로날 항체 특이성 및 친화력을 결정하는 바람직한 방법은 문헌[Harlow, et al., Antibodies : Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1988; Colligan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, New York, (1992-2003); Kozbor et al., Immunol. Today, 4:72-79 (1983); Ausubel et al., eds. Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, New York (1987-2003); and Muller, Meth. Eneymol., 92: 589-601 (1983), 이들 참고문헌은 모두 본원에 참고로 포함된다]에서 찾아볼 수 있다.

특정 구체예에서, 뮤린 모노클로날 항체 A2는 세포주 c134A에 의해 생성된다. 키메라 항체 cA2는 세포주 c168A에 의해 생성된다.

본 발명에 사용될 수 있는 모노클로날 항-TNF 항체의 추가 예가 문헌에 개시되어 있다 (참조예. 미국특허 제5,231,024호; Moeller, A. et al., Cytokine 2 (3): 162-169 (1990); 미국출원 제 07/943,852호 (1992년 9월 11일 출원됨); Rathjen et al., 국제출원공개 WO 91/02078 (1991년 2월 21일 공개됨); Rubin et al., EPO 특허 공개 제 0 218 868호 (1987년 4월 22일 공개); Yone et al., EPO 특허 공개 제 0 288 088호 (1988년 10월 26일 공개); Liang, et al., Biochem. Biophys. Res. Coma. 137: 847-854 (1986); Meager, et al., Hybridoma 6: 305-311 (1987); Fendly et al., Hybridoma 6: 359-369 (1987); Bringman, et al., Hybridoma 6: 489-507 (1987); 및 Hirai, et al., J. Immunol. Meth. 96: 57-62 (1987), 이들 문헌은 모두 참고로서 본원에 포함된다).

TNF 수용체 분자

본 발명에 유용한 바람직한 TNF 수용체 분자는 TNFα와 고친화력으로 결합하는 것들이고(참조예. Feldmann et al., 국제출원공개WO 92/07076(1992년 4월 30일 공개); Schall et al., Cell 61: 361-370 (1990); 및 Loetscher et al., Cell 61: 351-359 (1990), 이들 참고문헌은 모두 본원에 포함된다) 임의로 낮은 면역원성을 지닌다. 특히, 55 kDa(p55 TNF-R) 및 75 kDa(p75 TNF-R) TNF 세포 표면 수용체가 본 발명에 유용하다. 수용체의 세포외 도메인(ECD) 또는 그의 작용성 부분을 포함하는 이들 수용체의 절두형(참조예. Corcoran et al., Eur. J. Biochem. 223: 831-840 (1994))이 또한 본 발명에 유용하다. ECD를 포함하는 TNF 수용체의 절두형은 소변 및 혈청에서 30 kDa 및 40 kDa TNFα 억제 결합 단백질로서 검출된다(Engelmann, H. et al., J. Biol. Chem. 265 : 1531-1536 (1990)). TNF 수용체 중합체 분자 및 TNF 면역수용체 융합 분자 및 그의 유도체 및 단편 또는 부분이 본 발명의 방법 및 조성물에 유용한 TNF 수용체 분자의 추가적인 예이다. 본 발명에 사용될 수 있는 TNF 수용체 분자는 증상의 뛰어난 완화 및 저독성으로 양호하게 연장된 기간동안 환자를 치료하는 그의 능력에 의해 특징지워진다. 낮은 면역원성 및/또는 고친화력 및 다른 정의되지 않은 특성이 달성되는 치료 결과에 기여할 수 있다.

본 발명에 유용한 TNF 수용체 중합체 분자는 하나 이상의 폴리펩티드 링커(linker) 또는 다른 비펩티드 링커, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 통해 연결된 둘 이상의 TNF 수용체의 ECD의 전체 또는 작용기 부분을 포함한다. 중합체 분자는 중합체 분자의 발현을 지시하는 분비된 단백질의 시그널 펩티드를 추가로 포함할 수 있다. 이들 중합체 분자 및 그의 제조방법이 그 내용이 모두 본원에 참고로 포함되는 미국 특허출원 제 08/437,533호(1995년 5월 9일 출원됨)에 개시되어 있다.

본 발명의 방법 및 조성물에 유용한 TNF 면역수용체 융합 분자는 하나 이상의 TNF 수용체의 전체 또는 작용성 부분 및 하나 이상의 면역글로불린 분자의 적어도 한 부분을 포함한다. 이들 면역수용체 융합 분자는 모노머, 또는 헤테로- 또는 호모-멀티머로서 조합될 수 있다. 면역수용체 융합 분자는 또한 일가 또는 다가일 수 있다. 이러한 TNF 면역수용체 융합 분자의 예는 TNF 수용체/IgG 융합 단백질이다. TNF 면역수용체 융합 분자 및 그의 제조방법이 문헌에 개시되어 있다[Lesslauer et al., Eur. J. Immunol. 21 : 2883-2886 (1991); Ashkenazi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88 : 10535-10539 (1991); Peppel et al., J. Exp. Med. 174 : 1483-1489 (1991); Kolls et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91 : 215-219 (1994); Butler et al., Cytokine 6(6): 616-623 (1994); Baker et al., Eur. J. Immunol. 24:2040-2048 (1994); Beutler et al., 미국특허 제 5,447, 851호; 및 미국특허출원 제08/442,133호(1995년 5월 16일 출원), 이들 참고문헌은 모두 본원에 참고로서 포함된다]. 면역수용체 융합 분자의 제조방법을 문헌[Capon et al., 미국특허 제5,116,964호; Capon et al., 미국특허 제5,225,538호; 및 Capon et al., Nature 337: 525-531 (1989), 이들 참고문헌은 모두 참고로서 본원에 포함된다]에서 찾아볼 수 있다.

TNF 수용체 분자의 작용성 동등물, 유도체, 단편 또는 부위는 TNF 수용체 분자의 부분, 또는 TNF 수용체 분자를 코딩하는 TNF 수용체 분자 서열의 부분, 즉 본 발명에 사용될 수 있는 TNF 수용체 분자와 기능적으로 닮은 충분한 크기 및 서열의 부분을 의미한다. TNF 수용체 분자의 작용성 동등물로는 또한 본 발명에 사용될 수 있는 TNF 수용체 분자와 기능적으로 유사한 변형 TNF 수용체 분자가 포함된다(예. TNF와 고친화력으로 결합하고 낮은 면역원성을 가짐). 예를 들어, TNF 수용체 분자의 작용성 동등물은 "SILENT" 코돈 또는 하나 이상의 아미노산 치환, 결손 또는 부가를 가질 수 있다(예, 다른 산성 아미노산에 대한 하나의 산성 아미노산의 치환; 또는 소수성 아미노산을 코딩하는 다른 코돈에 대한 동일 또는 상이한 소수성 아미노산을 코딩하는 하나의 코돈의 치환). (참조. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Assoc. and Wiley-Interscience, New York (1987-2003)).

사이토카인으로는 모든 공지된 사이토카인이 포함되나 이들에 한정되지 않는다 (참조, CopewithCytokines.com), 사이코카인 길항제로는 임의의 항체, 단편 또는 미메티바디, 임의의 가용성 수용체, 단편 또는 미메티바디, 임의의 소분자 길항제, 및 이들의 임의의 조합이 포함되나 이들에 한정되지 않는다.

본 발명에 따른 어떠한 방법이든 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 포함하는 유효량의 조성물 또는 약제학적 조성물을 조절, 처치 또는 치료가 필요한 세포, 조직, 기관, 동물 또는 환자에 투여하는 것을 포함하는, 단백질 매개 질환을 치료하는 방법을 포함할 수 있다. 이 방법은 면역 질환을 치료하기 위한 공투여 또는 병용 요법을 임의로 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 투여는 IL-3, -6 및 -11; 줄기 세포 인자; G-CSF 및 GM-CSF와 같은 적어도 하나의 다른 사이토카인중에서 선택된 적어도 하나를 전, 중 및/또는 후에 투여하는 것을 추가로 포함한다.

전형적으로, 병리학적 증상의 치료는 유효량 또는 투여량의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 조성물을 투여하는 것에 의해 달성되며, 그 유효량 또는 투여량은 총, 평균적으로 적어도 약 0.01 내지 500 밀리그램의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체/투여량당 환자의 킬로그램, 및 바람직하게는 적어도 약 0.1 내지 100 밀리그램의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체/단일 또는 다중 투여당 환자의 킬로그램이며, 이것은 조성물이 지니는 특정 활성에 따라 다르다. 다르게는, 효과적인 혈청 농도는 단일 또는 다중 투여량당 0.1-5000 ㎍/ml 혈청농도를 포함할 수 있다. 적합한 용량이 의사들에게 공지되어 있으며, 물론 특정 질환 상태, 투여되는 조성물의 특정 활성 및 치료할 특정 환자에 따라 달라질 것이다. 일부의 경우, 목적하는 치료학적 양을 달성하기 위해, 반복 투여하는 것, 즉 특정의 모니터링 또는 계량 용량을 목적하는 일일 용량 또는 효과가 달성될 때까지 개별적인 투여를 반복하는 것이 필요할 수 있다.

바람직한 용량은 임의로 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05. 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 및/또는 30 mg/kg/투여, 또는 그의 범위, 수치 또는 분획을 포함할 수 있거나, 단일 또는 다중 투여당 혈청 농도 0.1, 0.5, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.5, 1.9, 2.0, 2.5, 2.9, 3.0, 3.5, 3.9, 4.0, 4.5, 4.9, 5.0, 5.5, 5.9, 6.0, 6.5, 6.9, 7.0, 7.5, 7.9, 8.0, 8.5, 8.9, 9.0, 9.5, 9.9, 10, 10.5, 10.9, 11, 11.5, 11.9, 20, 12.5, 12.9, 13.0, 13.5, 13.9, 14.0, 14.5, 4.9, 5.0, 5.5, 5.9, 6.0, 6.5, 6.9, 7.0, 7.5, 7.9, 8.0, 8.5, 8.9, 9.0, 9.5, 9.9, 10, 10.5, 10.9, 11, 11.5, 11.9, 12, 12.5, 12.9, 13.0, 13.5, 13.9, 14, 14.5, 15, 15.5, 15.9, 16, 16.5, 16.9, 17, 17.5, 17.9, 18, 18.5, 18.9, 19, 19.5, 19.9, 20, 20.5, 20.9, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 96, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 및/또는 5000 ㎍/ml, 또는 그의 임의의 범위, 수치 또는 분획의 혈청 농도를 달성하도록 포함할 수 있다.

다르게는, 투여되는 용량은 공지된 인자, 예컨대 특정 제제의 약물동태학적 성질 및 그의 투여 모드 및 경로; 환자의 연령, 건강 및 체중; 증상의 성질 및 정도, 동시 치료의 종류, 치료의 빈도, 및 목적하는 효과에 따라 달라질 수 있다. 통상, 활성 성분의 용량은 체중 1 킬로그램당 약 0.1 내지 100 밀리그램일 수 있다. 대체로, 0.1 내지 50, 바람직하게는 0.1 내지 10 밀리그램/킬로그램/투여 또는 지효성 형태가 목적하는 결과를 얻는데 효과적이다.

비한정적인 예로서, 인간 또는 동물의 치료는 일회 또는 기간 투여로 본 발명의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 0.01 내지 100 mg/kg, 예컨대 일일 0.5, 0.9, 1.0, 1.1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100 mg/kg을 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40일중 적어도 하루, 또는 다르게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20주중 적어도 한주, 또는 그의 임의의 조합으로 단일, 융합 또는 반복 용량을 사용하여 제공될 수 있다.

체내 투여에 적합한 투여형(조성물)은 일반적으로 유닛 또는 용기당 약 0.0001 밀리그램 내지 약 500 밀리그램의 활성 성분을 함유한다. 이들 약제학적 조성물에서, 활성 성분은 대체로 조성물의 총 중량을 기준으로 하여 약 0.5 내지 95 중량%의 양으로 존재할 것이다.

비경구 투여의 경우, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 약제학적으로 허용되는 비경구 비히클과 함께 또는 별도로, 제공되는 동결건조 분말, 에멀젼, 현탁액 또는 용액으로서 제형화될 수 있다. 비히클의 예로는 물, 식염수, 링거액, 덱스트로스 용액, 및 5% 인간 혈청 알부민이 있다. 리포좀 및 비수성 비히클, 예컨대 고정유가 또한 사용될 수 있다. 비히클 또는 동결 분말은 등장성(예, 염화나트륨, 만니톨) 및 화학적 안정성(예, 완충액 및 보존제)을 유지하는 첨가제를 함유할 수 있다. 제형을 공지되었거나 적합한 기술에 의해 멸균시킨다.

적합한 약제학적 담체가 이 분야에 있어서 표준 참고서인 레밍톤(Remington)의 Pharmaceutical Sciences, A. Osol의 최신판에 개시되어 있다.

치료학적 투여

본 발명에 따른 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 약제학적 유효량을 투여하는 것에 대해 많은 공지되고 개발된 방식이 본 발명에 따라 이용될 수 있다. 폐 투여가 하기 설명에서 이용되며, 투여의 다른 방식이 적합한 결과를 가지며 본 발명에 따라 이용될 수 있다.

본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디는 흡입 또는 여기에서 기재되거나 당업계에 공지된 다른 방식에 의해 투여에 적합한 다양한 장치 및 방법 중 임의의 것을 이용하여, 용액, 유액, 콜로이드 또는 현탁액으로서 담체 중에서 운반될 수 있다.

비경구 제제 및 투여

비경구 투여를 위한 제제는 통상적인 부형제로서 멸균수 또는 식염수, 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리알킬렌 글리콜, 식물성 원천의 오일, 수소화된 나프탈렌 등을 함유할 수 있다. 주사를 위한 수성 또는 유성 현탁액은 공지된 방법에 따라 적당한 유화제 또는 습윤화제 및 현탁제제를 이용하여 제조될 수 있다. 주사를 위한 제제는 용매 중의 수성 용액 또는 멸균 주사용 용액 또는 현탁액과 같은 비-독성, 비-경구적 투여 희석제일 수 있다. 비히클 또는 용매로서, 물, 링거액, 등장성 식염수 등이 허용되며; 보통 용매 또는 현탁 용매로서, 멸균 비휘발성유가 이용될 수 있다. 이 목적을 위해 천연 또는 합성 또는 준합성 지방 오일 또는 지방산을 포함하는 비휘발성 오일; 천연 또는 준합성의 모노- 또는 디- 또는 트리-글리세리드의 임의의 종류가 이용될 수 있다. 비경구 투여는 당업계에 공지되어 있으며, 이로 제한되는 것은 아니나, 여기에서 전체로서 참고문헌으로서 포함되어 있는, 주사, 미국 특허 제5,851,198호에 기술된 가스 압력 무-바늘 주사 장치, 및 미국특허 제5,839,446호에 기술된 레이저 천공기 장치를 포함한다.

대안적 전달

본 발명은 추가로, 비경구, 피하, 근육내, 정맥내, 볼루스, 질, 직장, 볼, 설하, 비강내, 또는 경피 수단에 의한 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 투여에 관한 것이다. 단백질, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물은 비경구 (피하, 근육내 또는 정맥내) 투여를 위해 특히 액제 또는 현탁액의 형태로; 질 또는 직장 투여에서의 사용을 위해 특히 크림제 및 좌제와 같은 반고체 형태로; 볼, 또는 설하 투여를 위해 특히 정제 또는 캡슐제의 형태로; 또는 비강내 사용을 위해 특히 분말, 또는 비점적제 또는 에어로졸 또는 특정 제제의 형태로 또는 경피적 사용을 위해 특히 겔, 연고, 로션, 현탁액 또는 피부 구조를 변경시키거나 경피 패치에서의 약물 농도를 증가시키기 위한 디메틸 설폭사이드와 같은 화학적 증진제를 갖거나(Junginger, et al. In"Drug Permeation Enhancement"; Hsieh, D. S. , Eds. , pp. 59-90 (Marcel Dekker, Inc. New York 1994, 여기에서 참고문헌으로서 전체로서 포함됨), 또는 단백질 및 펩티드를 함유하는 제제의 피부에의 적용을 가능하게 하는 산화 제제를 갖거나 (WO 98/53847), 또는 일렉트로포레이션과 같은 일시적 운송 경로를 형성하는 전기적 분야의 적용을 갖거나, 또는 이온영동법과 같이 피부를 통해 차전된 약물의 움직임을 증가시키거나, 또는 초음파 치료와 같은 초음파의 적용을 갖는(미국 특허 제 4,309,989 및 4,767,402)(상기 문헌 및 특허는 여기에서 참고문헌으로서 전체로서 포함됨) 패치 전달 시스템의 형태로 제조될 수 있다.

폐/비 투여

폐 투여에 대해, 바람직하게는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물은 폐 또는 공동의 더 작은 기도에 도달하기에 효과적인 입자 크기로 전달된다. 본 발명에 따라, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 흡입에 의한 치료학적 제제의 투여를 위해 당업계에 공지된 다양한 흡입 또는 비용 장치 중 임의의 것에 의해 전달될 수 있다. 이러한 장치는 환자의 공강 또는 꽈리 내에 에어로졸화된 제제를 두는 것이 가능한 이러한 장치는 계량 투여량 흡입기, 분무기, 건조 분말 생성기, 스프레이어 등을 포함한다. EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 폐 또는 비용 투여에 직결되는 적합한 기타 장치는 당업계에 공지되어 있다. 그러한 모든 장치는 에어로졸로 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체을 투약하기 위해 투여에 적합한 제제를 이용할 수 있다. 그러한 에어로졸은 용액 (수성 및 비수성 모두) 또는 고체 입자로 구성될 수 있다. 벤톨린^® 계량 투여량 흡입기와 같은 계량 투여량 흡입기는 일반적으로 추진 가스를 이용하며, 흡기 동안의 발동을 요구한다(예컨대, WO 94/16970, WO 98/35888 참조). Turbuhaler^TM (Astra), Rotahaler^®(Glaxo), Diskus^® (Glaxo), Spiros^TM 흡입기(Dura), Inhale Therapuetics에 의해 판매되는 장치, 및 Spinhaler^® 분말 흡입기(Fisons)와 같은 건조 분말 흡입기는 혼합된 분말의 호흡-발동을 이용한다(US 4668218 Astra, EP 237507 Astra, WO97/25086 Glaxo, WO 94/08552 Dura, US 5458135 Inhale, WO 94/06498 Fisons, 여기에서 참고문헌으로서 전체로서 포함됨). AERx^TM Aradigm, Ultravent^® 분무기 (Mallinckrodt), 및 AcornII^® 분무기(Marquest Medical Products)(US 5404871 Aradigm, WO 97/22376)과 같은 분무기는 용액으로부터 에어로졸을 만들어내며, 반면 계량 투여량 흡입기, 건조 분말 흡입기 등은 소입자 에어로졸을 생성한다(상기 참고 문헌들은 여기에서 참고문헌으로서 전체로서 포함됨). 상업적으로 이용가능한 흡입 장치의 이러한 특별한 예는 본 발명의 실시를 위해 적합한 특이적 장치의 대표적인 것으로 의도되며, 본 발명의 범위가 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 포함하는 조성물은 건조분말 흡입기 또는 스프레이어에 의해 전달된다. 본 발명의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 투여하기 위한 흡입 장치의 수 개의 바람직한 특성이 있다. 예를 들어, 흡입 장치에 의한 전달은 이롭게는 신뢰가능하고, 재생산가능하고 정확하다. 흡입 장치는 임의로 좋은 흡입가능성을 위해 예컨대, 약 10 ㎛ 미만, 바람직하게는 약 1-5㎛ 미만의 소 건조 입자를 전달할 수 있다.

스프레이로서 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물의 투여

EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질을 포함하는 스프레이는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 현탁액 또는 용액을 압력하에서 노즐을 통해 밀어내어 생산될 수 있다. 노즐 크기 및 배열, 적용되는 압력 및 액체 공급 속도는 원하는 결과 및 입자 크기를 달성하기 위해 선택될 수 있다. 예를 들어, 일렉트로스프레이는 모세관 또는 노즐 공급과 연결된 전기적 부분에 의해 생산될 수 있다. 이롭게는, 스프레이에 의해 전달되는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질의 입자는 약 10㎛ 미만, 바람직하게는 약 1㎛ 내지 약 5㎛, 그리고 가장 바람직하게는 약 2㎛ 내지 약 3㎛의 범위의 입자 크기를 갖는다.

스프레이와 함께 사용을 위한 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질의 제제는 일반적으로 용액 ml 당 약 1mg 내지 약 20mg의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질의 농도의 수용액 중의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질을 포함한다. 제제는 부형제로서, 완충액, 등장성 제제, 보존제, 계면활성제 및 바람직하게는 아연을 포함할 수 있다. 제제는 또한 완충액, 환원제, 벌크 단백질, 또는 카보하이드레이트와 같은, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질의 안정화를 위한 부형제 또는 시약을 포함할 수 있다. EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질을 제제화함에 있어서 유용한 벌크 단백질은 알부민, 프로타민 등을 포함한다. EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질을 제제화함에 있어서 유용한 전형적인 카보하이드레이트는 수크로스, 만니톨, 락토오스, 트레할로스, 글루코스 등을 포함한다. EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질 제제는 또한 에어로졸을 형성함에 있어서 용액의 원자화에 의해 야기되는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질의 표면-유도된 응집을 감소하거나 방해할 수 있는 계면활성제를 포함할 수 있다. 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르 및 알콜, 그리고 폴리옥시에틸렌 소르비톨 지방산 에스테르와 같은 다양한 통상적인 계면활성제가 이용될 수 있다. 양은 일반적으로 제제의 중량의 0.001 내지 14%의 범위일 것이다. 본 발명의 목적을 위해 특히 바람직한 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트, 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 20 등 이다. 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 제제화를 위해 당업계에 공지된 추가적인 제제가 또한 제제 중에 포함될 수 있다.

분무기에 의한 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물의 투여

EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 분출 분무기 또는 초음파 분무기와 같은 분무기에 의해 투여될 수 있다. 일반적으로, 분출 분무기에서는, 압축된 공기 원료가 구멍을 통해 고속 공기 분출을 형성하기 위해 이용된다. 노즐 너머로 가스를 확장시켜, 낮은 압력 영역이 형성되고, 이는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질 용액을 액체 저장소와 연결된 모세관을 통해 끌어내게된다. 모세관으로부터의 액체 흐름은 관을 나감으로써 불안정한 필라멘트 및 소적으로 잘리게 되어, 에어로졸을 형성한다. 배열, 유속 및 조절 장치 유형의 범위는 주어진 분출 분무기로부터 원하는 수행 특성을 달성하기 위해 사용될 수 있다. 초음파 분무기에서는, 고주파 전기에너지가 일반적으로 압전 변환기를 사용하여, 진동성, 기계적 에너지를 형성하기 위해 이용된다. 이 에너지는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질을 포함하는 에어로졸을 형성하는, 직접적으로 또는 커플링된 용액을 통해 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질의 제제로 전달된다. 이롭게는 분무기에 의해 전달되는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질의 입자는 약 10㎛ 미만, 바람직하게는 약 1㎛ 내지 약 5㎛, 가장 바람직하게는 약 2㎛ 내지 약 3㎛의 입자 크기를 갖는다.

분출 또는 초음파 분무기로의 사용을 위해 적합한 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 제제는,일반적으로 용액 ml 당 약 1 mg 내지 약 20 mg의 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 단백질의 농도의 수용액 중의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질을 포함한다. 제제는 부형제로서, 완충액, 등장성 제제, 보존제, 계면활성제 및 바람직하게는 아연을 포함할 수 있다. 제제는 또한 완충액, 환원제, 벌크 단백질, 또는 카보하이드레이트와 같은, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질의 안정화를 위한 부형제 또는 시약을 포함할 수 있다. EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질을 제제화함에 있어서 유용한 벌크 단백질은 알부민, 프로타민 등을 포함한다. EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질을 제제화함에 있어서 유용한 전형적인 카보하이드레이트는 수크로스, 만니톨, 락토오스, 트레할로스, 글루코스 등을 포함한다. CH1-결실된 미메티바디 또는 특별화된 부분 또는 변이체 조성물 단백질 제제는 또한 에어로졸을 형성함에 있어서 용액의 원자화에 의해 야기되는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질의 표면-유도된 응집을 감소하거나 방해할 수 있는 계면활성제를 포함할 수 이다. 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르 및 알콜, 그리고 폴리옥시에틸렌 소르비톨 지방산 에스테르와 같은 다양한 통상적인 계면활성제가 이용될 수 있다. 양은 일반적으로 제제의 중량의 0.001 내지 4%의 범위일 것이다. 본 발명의 목적을 위해 특히 바람직한 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트, 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 20 등 이다. 미메티바디 또는 특별화된 부분 또는 변이체의 제제화를 위해 당업계에 공지된 추가적인 제제가 또한 제제 중에 포함될 수 있다.

계량 투여량 흡입기에 의한 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물의 투여

계량 투여량 흡입기 (MDI)에서는, 추진체, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체, 및 임의의 부형제 또는 기타 첨가제가 액화 압축 가스를 포함하는 혼합물로서 캐니스터 내에 함유된다. 계량 판의 작동은 바람직하게는, 약 10㎛ 미만, 바람직하게는 약 1㎛ 내지 약 5㎛, 가장 바람직하게는 약 2㎛ 내지 약 3㎛의 크기 범위 내의 입자를 함유하는 에어로졸로서 혼합물을 방출한다. 원하는 에어로졸 입자 크기는 분출-연마, 스프레이 건조, 임계점 응축 등을 포함하는, 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 생산된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물 단백질의 제제를 사용하여 얻을 수 있다. 바람직한 계량된 투여량 흡입기는 3M 또는 Glaxo에 의해 제작된 것들 및 하이드로플루오로카본 추진체를 이용하는 것들을 포함한다.

계량-투여량 흡입기 장치로의 사용을 위한 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 제제는 일반적으로, 예를 들어 계면 활성제의 도움을 받는 추진체 중에 분산된 비수성 매질 중의 현탁액으로서 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 함유하는 정밀하게 나누어진 분말을 포함할 것이다. 추진체는 트리클로로플루오로메탄, 디클로로디플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄올 및 1,1,1,2-테트라플루오로에탄, HFA-134a (하이드로플루오로알칸-134a), HFA-227 (하이드로플루오로알칸-227) 등을 포함하는 클로로플루오로카본, 하이드로클로로플루오로카본, 하이드로플루오로카본, 또는 하이드로카본과 같은 추진체가 이 목적을 위해 사용되는 임의의 통상적인 물질일 수 있다. 바람직하게는 추진체는 하이드로플루오로카본이다. 계면활성제는 화학적 분해 등에 대해 활성 제제를 보호하기 위한 추진체 중의 현탁액으로서 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 안정화할 수 있도록 선택된다. 적합한 계면활성제는 소르비탄 트리올레이트, 소야 레시틴, 올레산 드를 포함한다. 일부 경우에서, 용액 에어로졸은 에탄올과 같은 용매를 이용하는 것이 바람직하다. 단백질과 같은 단백질의 제제화를 위해 당업계에 공지된 추가적인 제제가 또한 제제 중에 포함될 수 있다.

당업자는 본 발명의 방법이 여기에서 기술되지 않은 장치를 통한 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체 조성물의 폐 투여에 의해 달성될 수 있음을 인지할 것이다.

점막용 제제 및 투여

점막 표면을 통한 흡수를 위한, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 투여하는 조성물 및 방법은 다수의 서브마이크론 입자, 점막부착 마크로분자, 생활성 펩티드, 및 점막 표면을 통한 흡수를 증진시켜, 유액 입자의 점막부착을 달성하는 수성 연속상을 포함하는 유액을 포함한다 (미국 특허 제 5,514,670호). 본 발명의 유액의 적용을 위해 적합한 점막 표면은 각막, 결막, 볼, 설하, 코용, 질, 폐, 위, 장, 및 직장 투여 경로를 포함할 수 있다. 질 또는 직장 투여를 위한 제제, 예컨대 좌약은 부형제로서, 예를 들어, 폴리알킬렌글리콜, 바셀린, 코코아버터 등을 포함할 수 있다. 비강내 투여를 위한 제제는 고체일 수 있으며, 부형제로서, 예를 들어 락토오스를 포함할 수 있거나, 또는 수성 또는 비용 점적제의 유성 용액일 수 있다. 볼 투여에 대한 부형제는 당, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 프리젤리네이틴된 녹말(pregelinatined starch) 등을 포함한다 (미국 특허 제 5,849,695호).

경구 제제 및 투여

경구에 대한 제제는 장벽의 투과성을 인공적으로 증가시키기 위한 애주번트(예컨대, 레소르시놀 및 폴리옥시에틸렌 올레일 에테르 및 n-헥사데실폴리에틸렌 에테르와 같은 비이온성 계면활성제)의 공-투여 및 효소적 분해를 저해하기 위한 효소적 저해제(예컨대, 이자 트립신 저해제, 디이소프로필플루오로포스페이트 (DFF) 및 트라실롤)의 공-투여에 달려있다. 경구 투여에 대한 고체형 투여량 형태의 활성 구성 화합물은 수크로스, 락토오스, 셀룰로스, 만니톨, 트레할로스, 라피노스, 말티톨, 덱스트란, 녹말, 아가, 아르기네이트, 키틴, 키토산, 펙틴, 트래거캔스 고무, 아라비아 고무, 젤라틴, 콜라겐, 카세인, 알부민, 합성 또는 반합성 폴리머, 및 글리세리드를 포함하는 적어도 하나의 부가물과 함꼐 혼합될 수 있다. 이들 투여량 형태는 또한 다른 유형의 부가물, 예컨대, 불활성 희석제, 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제, 파라벤, 소르브산, 아소코브산과 같은 보존제, 알파-토코페롤, 시스테인과 같은 항산화제, 붕해제, 결합제, 농축제(thickener), 완충제, 감미제, 향미제, 방향제 등을 함유할 수 있다.

정제 및 환제는 장용 코팅된 제제로 추가로 가공될 수 있다. 경구 투여를 위한 액체 제제는 의학적 용도에 대해 허용가능한 유액, 시럽, 엘릭시르제, 현탁액 및 용액 제제를 포함한다. 이러한 제제는 상기 분야에서 통상적으로 사용되는 불활성 희석 제제, 예컨대 물을 함유할 수 있다. 리포좀은 또한 인슐린 및 헤파린에 대한 약물 전달 시스템으로서 기술된 바 있다(미국 특허 제4,239,754호). 보다 최근에는, 혼합된 아미노산(프로테노이드)의 인공적인 폴리머의 마이크로스피어가 약물을 전달하기 위해 사용된 바 있다(미국 특허 제 4,925,673호). 또한, 미국 특허 제 5,879,681호 및 미국 특허 제 5,871,753호에서 기술된 생물학적 활성 제제를 경구적으로 전달하기 위해 이용된 담체 화합물이 당업계에 공지되어 있다.

경피 제제 및 투여

경피 투여를 위해, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체는 리포좀 또는 폴리머 나노입자, 마이크로입자, 마이크로캡슐, 또는 마이크로스피어(다르게 언급하지않는 한 마이크로입자와 같이 집합적인 것을 말함)와 같은 전달 장치 중에 캡슐화된다. 폴리락트산, 폴리글리콜산 및 그의 공중합체와 같은 폴리하이드록시산과 같은 합성 폴리머, 폴리오르토에스테르, 폴리언하이드라이드, 및 폴리포스파진, 및 콜라겐, 폴리아미노산, 알부민 및 기타 단백질, 아르기네이트와 같은 천연 폴리머 및 기타 폴리사카라이드, 및 그의 배합로 만들어진 마이크로입자를 포함하는 많은 수의 적합한 장치가 공지되어 있다(U.S. Pat. Nos. 5,814,599).

연장된 투여 및 제제

연장된 기간 동안, 예를 들어, 단일 투여로부터 1 주 내지 1년의 기간 동안에 걸쳐 대상체에게 본 발명의 화합물을 전달하는 것이 종종 필요할 수 있다. 다양한 서방제, 데포제, 임플란트 형태가 이용될 수 있다. 예를 들어, 투여량 형태는 예를 들어, (a) 인산, 황산, 시트르산, 타르타르산, 탄닌산, 파모산, 알긴산, 폴리글루탐산, 나프탈렌 모노- 또는 디- 설폰산, 폴리갈락투론산 등과 같은 폴리염기산을 갖는 산 부가염, (b) 아연, 칼슘, 비스무트, 바륨, 마그네슘, 알루미늄, 구리, 코발트, 니켈, 카드뮴 등과 같은 다가 금속 양이온을 갖거나, 예컨대, N,N'-디벤질-에틸렌디아민 또는 에틸렌디아민으로부터 형성된 유기 양이온을 갖는 염; 또는 (c) 예컨대, 아연 탄네이트 염과 같은 (a) 및 (b)의 결합과 같은 체액 중에서 낮은 정도의 용해성을 갖는 화합물의 약제학적으로 허용가능한 무독성염을 함유할 수 있다. 추가적으로, 본 발명의 화합물, 또는 바람직하게는 상기 기술된 것과 같은 상대적으로 불용성인 염은 겔로, 예를 들어, 주사에 적합한, 예를 들어, 참깨유를 갖는 알루미늄 모노스테아레이트 겔로 제제화될 수 있다. 특히 바람직한 염은 아연 염, 아연 탄네이트 염, 파모에이트 염 등이다. 주사를 위한 서방성 데포 제제의 또다른 유형은 예를 들어 미국 특허 제 3,773,919호에서 기술된 폴리락트산/폴리글리콜산 폴리머와 같은 느리게 분해되는, 무독성, 비항원성 폴리머 중에 캡슐화되는 분산된 화합물 또는 염을 함유한다. 본 발명의 화합물, 또는 바람직하게는 상기 기술된 것과 같은 상대적으로 불용성인 염은 또한 특히 동물에서, 콜레스테롤 기질 실라스틱(silastic) 펠렛 중에 제제화될 수 있다. 추가적인 서방제, 데포제 또는 임플란트 제제, 예컨대, 가스 또는 액체 리포좀은 문헌에 공지되어 있다(미국 특허 제 5,770,222호 및 "Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems", J. R. Robinsoned., Marcel Dekker, Inc. , N. Y. , 1978).

본 발명에서 일반적으로 기술된 것을 가지고, 동일한 것은 설명의 방식으로 제공되며, 제한으로서 간주되지 않는, 하기 실시예에 참고로서 보다 쉽게 이해될 것이다.

실시예 1: 포유동물 세포에서 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디의 클로닝 및 발현

일반적인 포유동물 발현 벡터는 mRNA의 전사의 개시, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 코딩하는 서열, 및 전사의 종결 및 전사물의 폴리아데닐화에 필요한 신호를 매개하는 적어도 하나의 프로모터 요소를 함유한다. 추가적인 요소는 인핸서, Kozak 서열 및 RNA 스플라이싱에 대한 도너 및 어셉터 부위에 의해 측면에 위치하는 끼어드는 서열을 포함한다. 고 효율 전사는 SV40로부터의 어얼리 및 레이트 프로모터, 레트로바이러스, 예컨대, RSV, HTLVI, HIVI로부터의 긴 말단 반복(LTRS), 및 사이토메갈로바이러스(CMV)의 어얼리 프로모터로 달성될 수 있다. 그러나, 세포적 요소가 또한 이용될 수 있다(예컨대, 인간 액틴 프로모터). 본 발명의 실시에 이용을 위한 적합한 발현 벡터는 예를 들어, pIRES1neo, pRetro-Off, pRetro-On, PLXSN, 또는 pLNCx(Clonetech Labs, Palo Alto, CA), pcDNA3.1(+/-), pcDNA/Zeo(+/-) 또는 pcDNA3.1/Hygro (+/-)(Invitrogen), PSVL 및 PMSG(Pharmacia, Uppsala, Sweden), pRSVcat (ATCC 37152), pSV2dhfr (ATCC 37146) 및 pBC12MI (ATCC 67109)과 같은 벡터를 포함한다. 사용될 수 있는 포유동물 숙주 세포는 인간 Hela 293, H9 및 Jurkat 세포, 마우스 NIH3T3 및 C127 세포, Cos 1, Cos 7 및 CV1, 메추라기 QC1-3 세포, 마우스 L 세포 및 차이니스 햄스터 난소(CHO) 세포를 포함한다.

다르게는, 유전자는 염색체로 통합된 유전자를 함유하는 적합한 세포주 내에서 발현될 수 있다. dhfr, gpt, 네오마이신, 또는 히그로마이신과 같은 선택적 마커와의 공-트랜스펙션은 트랜스펙션된 세포의 동정 및 분리를 허용한다.

트랜스펙션된 유전자는 또한 증폭되어 코딩된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 많은 양을 발현할 수 있다. DHFR (디하이드로폴레이트 환원효소) 마커는 흥미있는 유전자의 수백 또는 수천 카피를 운반하는 세포주를 개발하는데 유용하다. 또다른 유용한 선택 마커는 효소 글루타민 합성효소이다(GS)(Murphy, et al., Biochem. J. 227: 277-279(1991); Bebbington, et al. , Bio/Technology 10: 169-175 (1992)). 이들 마커를 이용하여, 포유동물 세포를 선택적인 배지 내에서 키우고, 가장 높은 내성을 가진 세포를 선택한다. 이들 세포주는 염색체 내로 통합되는 증폭된 유전자를 포함한다. 차이니스 햄스터 난소(CHO) 및 NSO 세포가 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 생산에 종종 이용된다.

발현 벡터 pCl 및 pC4는 로우스 사르코마 바이러스 (Rous Sarcoma Virus) (Cullen, et al., Molec. 세포. Biol. 5: 438-447 (1985))의 강력한 프로모터 (LTR)에 더해진 CMV-인핸서의 단편 (Boshart, et al., 세포 41: 521-530 (1985))을 함유한다. 예컨대, 제한 효소 절단 부위 BamHI, XbaI 및 Asp718를 갖는 다중 클로 닝 부위는 흥미있는 유전자의 클로닝을 용이하게 한다. 벡터는 추가로 3' 인트론, 래트 프리프로인슐린 유전자의 폴리아데닐화 및 종결 신호를 함유한다.

CHO 세포에서의 클로닝 및 발현

벡터 pC4가 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체의 발현을 위해 이용된다. 플라스미드 pC4는 플라스미드 pSV2-dhfr (ATCC Accession No. 37146)의 유도체이다. 그 플라스미드는 SV40 어얼리 프로모터의 제어하의 마우스 DHFR를 함유한다. 이러한 플라스미드로 트랜스펙션된 디하이드로폴레이트 활성결실 차이니스 햄스터 난소- 또는 다른 세포는 화학치료학적 제제 메토트렉사에이트가 보충된 선택적인 배지 중에서 세포를 성장시킴으로써 선택될 수 있다(예컨대, 알파 마이너스 MEM, Life Technologies, Gaithersburg, MD). 메토트렉사에이트 (MTX)에 내성을 갖는 세포 중에서의 DHFR 유전자의 증폭은 잘 보고되어 있다 (예컨대, F. W. Alt, et al. , J. Biol. Chem. 253: 1357-1370 (1978); J. L. Hamlin and C. Ma, Biochem. et Biophys. Acta 1097: 107-143(1990); and M. J. Page and M. A. Sydenham, Biotechnology 9: 64-68 (1991) 참조). MTX의 증가하는 농도 중에서 자란 세포는 DHFR 유전자 증폭의 결과로서 표적 효소, DHFR을 과잉생산함으로써 약물에의 저항성을 발전시킨다. 만일 제 2의 유전자가 DHFR 유전자에 연결된다면, 이는 대개 공-증폭되고 과-발현된다. 이러한 접근이 1,000 카피 이상의 증폭된 유전자를 운반하는 세포주를 개발하기 위해 이용될 수 있음이 당업계에 공지되어 있다. 결과적으로, 메토트렉사에이트가 회수될 때, 숙주 세포의 하나 이상의 염색체 내로 통합된 증폭된 유전자를 함유하는 세포주가 얻 어진다.

흥미있는 유전자의 발현을 위해 플라스미드 pC4는 로우스 사르코마 바이러스의 긴 말단 반복(LTR)의 강한 프로모터 (Cullen, et al. , Molec. 세포. Biol. 5: 438-447 (1985))에 더해진 인간 사이토메갈로바이러스 (CMV)의 이메디에이트 어얼리 유전자의 인핸서로부터 분리된 단편(Boshart, etal., 세포 41: 521-530 (1985)) 을 함유한다. 프로모터의 하류는 유전자의 통합을 허용하는 BamHI, XbaI, 및 Asp718 제한 효소 절단 부위이다. 이들 클로닝 부위 뒤에 플라스미드는 래트 프리프로인슐린 유전자의 3'인트론 및 폴리아데닐화 부위를 함유한다. 예컨대, 인간 b-액틴 프로모터, SV40 어얼리 또는 레이트 프로모터 또는 다른 레트로바이러스, 예컨대, HIV 및 HTLVI로부터의 긴 말단 반복과 같은 기타 고효율 프로모터가 또한 발현을 위해 이용될 수 있다. 클론테크사의 Tet-Off 및 Tet-On 유전자 발현 시스템 및 유사한 시스템이 포유동물 세포에서의 조절된 방식으로 EPO를 발현시키기 위해 사용될 수 있다 (M. Gossen, and H. Bujard, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 5547-5551(1992)). mRNA의 폴리아데닐화를 위해 예컨대, 인간 성장호르몬 또는 글로빈 유전자로부터의 다른 신호가 또한 잘 이용될 수 있다. 염색체 내로 통합되는 흥미있는 유전자를 운반하는 안정한 세포주는 또한 gpt, G418 또는 히그로마이신과 같은 선택적인 마커로의 공-트랜스펙션 상에서 선택될 수 있다. 시작에 있어서 하나 이상의 선택적 마커, 예컨대, G418과 메토트렉사에이트를 함께 이용하는 것이 유리하다.

플라스미드 pC4는 제한효소로 분해된 후, 당업계에 공지된 방법에 의해 송아 지 장 포스파타제를 이용하여 탈인산화된다. 이후 벡터는 1 % 아가로스 겔 로부터 분리된다.

EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 특정 부분 또는 변이체를 코딩하는 DNA 서열이 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디의 HC 및 LC 가변 영역에 상응하여 이용된다. 적합한 인간 불변 영역 (즉, HC 및 LC 영역)을 코딩하는 분리된 핵산이 또한 이 구성물 중에 이용된다.

분리된 가변 및 불변 영역을 코딩하는 DNA 및 탈인산화된 벡터는 이후 T4 DNA 리가아제로 결찰된다. E. coli HB101 또는 XL-1 블루 세포가 이후 형질전환되며, 예를 들어, 제한효소 분석을 이용하여 플라스미드 pC4 내로 삽입된 단편을 함유하는 박테리아가 동정된다.

활성 DHFR 유전자를 결실한 차이니스 햄스터 난소 (CHO) 세포가 트랜스펙션을 위해 사용된다. 5 ㎍의 발현 플라스미드 pC4를 리포펙틴을 이용하여 0.5㎍의 플라스미드 pSV2-neo와 함께 공형질전환시킨다. 플라스미드 pSV2neo는 우세한 선택적 마커, G418를 포함하는 항생물질 그룹에 내성을 주는 효소를 코딩하는 Tn5로부터의 neo 유전자를 함유한다. 세포는 1㎍/ml G418로 보충된 알파 마이너스 MEM 중에 씨딩된다. 2일 후, 10, 25, 또는 50 ng/ml의 메토트렉사에이트에 더해진 1㎍/ml G418로 보충된 알파 마이너스 MEM 중에서 하이브리도마 클로닝 플레이트(Greiner, Germany) 중에서 세포는 트립신화되고(trypsinized) 씨딩되었다. 약 10-14 일 후,단일 클론이 트립신화된 후, 상이한 농도의 메토트렉사에이트 (50 nM, 100nM, 200 nM, 400 nM, 800 nM)를 이용하여 6-웰 페트리디쉬 또는 10 ml 플라스 크 내에 씨딩되었다. 이후 메토트렉사에이트의 고농도에서 자란 클론을 보다 더 높은 농도의 메토트렉사에이트 (1 mM, 2 mM, 5 mM, 10 mM, 20mM)를 함유하는 6-웰 플레이트로 옮겼다. 100-200mM의 농도에서 자라는 클론을 얻을 때까지 동일한 과정을 반복했다. 예를 들어, SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯 또는 역상 HPLC 분석에 의해, 원하는 유전자 산물의 발현을 분석했다.

실시예 2: 본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디의 비제한적인 예

Background: EMP-1(EPO 미메틱 펩티드-1)는 인간 에리쓰로포이에틴 (HuEPO)에 서열 상동성을 갖지는 않으나, EPO 수용체를 활성화시키는 능력(이량체로서)을 갖는 20개의 아미노산 펩티드이다(Wrighton et al, 1996, Science, vol. 273,458-463). 그러나, 그것의 상대적으로 낮은 활성 (HuEPO에 비해 10,000 내지 100,000 배 낮음) 및 짧은 반감기 (50% 혈청 중에서 8시간의 엑스-비보 반감기, 인비보 반감기는 알려지지 않음)는 그것의 치료학적 유용성을 손상시킨다. 그러므로, 불안함 없이 더 긴 반감기 및 가능하게는 개선된 그것의 효능을 펩티드 상에 줄 방법이 필요했다. 이러한 점에, 펩티드의 이량체화의 안정화 또는 반감기를 증가시키기 위한 더 큰 구조로 펩티드를 함입시켜 EMP-1의 활성을 증가시키고자 하는 많은 시도가 이루어졌다. Wrighten 등(1997, Nature Biotechnology, vol. 15,1261-65)은 이량체화를 안정화시키기 위해 비오틴 표지된 EMP-1를 스트렙타비딘과 결합시켰다. 그들은 인비트로 세포 증식 분석에서 활성이 100 배 증가함을 보였다. 그들은 또한 펩티드 이량체를 안정화시키기 위해 항-비오틴 항체를 이용했으나, 활성에서 10 배 증가를 보였을 뿐이다. 동일한 저자들이 EMP-1의 화학적으로 정의된 이량체 형 태를 제조했다. 이 경우, 인비보 활성에서 100-배 증가를 보였다. 또다른 그룹은 폴리에틸렌글리콜(PEG)과의 공유 결합이 EMP-1의 활성을 개선시키는 것을 찾았다(Johnson et al. , 1997, Chem. & Bio. , vol. 4 (12), 939-50). 그들은 1000 배에 이르는 효능에서의 증가를 보고했으나, 구성체는 마우스에서 면역원성이 있는 것이 발견되었다(항체가 펩티드와 직접 연결됨)(Dana Johnson, Personal communications). Kuai 등은 (2000, J. 펩티드 Res. , vol. 56,59-62) 플라스미노겐 활성제 저해제-1, (PAI-1)의 서열 내로 EMP-1 펩티드를 삽입했다. 이 골격 내로의 EMP-1의 삽입은 이량체화를 안정화시키고 반감기를 증가시키는 것으로 생각되었다. 인비보 분석에서 이 구성물의 효능은 EMP-1 단독보다 2500 배 더 높은 것으로 보여졌다. 이들 분석에서는 상이한 인비트로 분석 및 인비보 모델이 사용되었으며, 보고된 효능은 각각 다른 것들 또는 여기에서 나타낸 결과와 비교할 수 없음을 주지해야할 것이다.

본 발명의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디

본 발명의 특이적, 비제한적 예는 V가 천연적으로 발생하는 HC 또는 LC 항체의 첫번째 몇개의 N-말단 아미노산이고, P는 생활성 EMP-1 펩티드의 단일한 카피이며, L은 Gly-Ser 또는 Gly-Gly-Gly-Ser 유연한 링커의 나란한 반복이고, H는 힌지 코어 영역이며, CH2 & CH3은 IgG1 또는 IgG4 아이소타입 서브클래스인 EMP-힌지 코어 미메티바디 구성물이다. 이 구조물은 EMP-1 펩티드를 속박하지만, 충분한 유연성을 허용하여 집합된 동종이량체의 일부로서 펩티드의 이량체화를 안정화시킬 것이다. 이의 지지로, 인비트로 세포 증식 분석에서 EMP-힌지 코어 미메티바디의 활 성은 EMP-1 펩티드 보다 500 배 높고, 재조합 HuEPO (rHuEPO)과 실질적으로 유사하였다. 또한, 이 구성물의 반감기는 rHuEPO 또는 EMP-1 펩티드 단독의 것의 수 배이며, IgG의 것과 유사할 것으로 예상된다. 일관적으로, EMP-힌지 코어 미메티바디로 처리된 보통의 마우스는 동일환 활성 단위가 주어졌을 때, rHuEPO로 처리된 마우스와 비교하여 유의하게 더 높은 최대 적혈구 용적률을 얻으며, 증가된 수준이 더 긴 기간 동안 유지된다. 이 구성물은 제1세대 미메티바이와 관련된 문제점을 극복하여, 세포로부터 효율적으로 분비되며, 올바르게 접히는 것으로 나타난다.

여기에서 기술된 기본 구성에 덧붙여, 강력하게 이로운 생물학적 특성을 갖는 변이체가 기술된다. 이들은 감소된 경향의 자가-연합, 감소된 면역 작동체 기능 또는 감소된 면역원성을 가질 수 있는 구성물을 포함한다. 생물학적 활성 펩티드의 개선된 구조와 같은 원하는 특성을 제공하고, 혈액-뇌 장벽을 통과시키는 다른 변형이 계획된다. 제시된 변이체 및 변형은 원하는 활성을 갖는 구성물을 획득하기 위해 임의의 양식으로 결합될 수 있다.

재조합 DNA 방법을 이용하여, EMP-1 펩티드는 이뮤노글로불린 신호 펩티드 및 인간 J 서열 사이의 매개 벡터로 삽입되었다. 이는 벡터 중에 존재하는 제한 부위와 호환되는 말단을 갖는 상보적 합성 올리고뉴클레오티드를 이용하여 행해졌다. 이들 올리고뉴클레오티드는 시그날 펩티다아제 공통 부위 (QIQ)에 대한 코딩 서열, EMP-1 펩티드 (서열번호: 2), 및 GS 또는 GGGS로 구성된 유연한 링커를 포함한다. 상술한 기능 요소를 함유하는 제한 단편은 그 후 발현벡터로 옮겨된다. 이 벡터는 항-CD4 이뮤노글로불린 프로모터 및 인핸서, 인간 IgG1 힌지 코어 서열에 대한 코딩 서열, IgG1 힌지 코어 영역의 부분, CPPCP (서열번호: 66의 109-113, 도 36C에 나타냄), HC 불변 영역 2 (CH2) 및 불변 영역 3 (CH3) 및 세균에서 플라스미드 복제 및 선택 및 포유동물 세포에서의 안정적인 발현자를 위한 선택을 위한 필요한 요소를 함유했다.

이 플라스미드를 선형화하고, 일렉트로포레이션을 통해 NSO 마우스 골수종 세포주 내로 도입했다. 내성 세포를 선택하고, EMP-힌지 코어 미메티바디의 고발현자를 배양 상청액의 ELISA 분석에 의해 동정했다. 세포 배양 상청액으로부터의 구성물의 정제는 표준 단백질A 친화성 크로마토그래피에 의해 수행되었다. 변성되고 감소된 조건 하에서의 SDS-함유 폴리아크릴아미드 겔을 통한 정제된 산물의 통과는 기대된 크기의 정제된 산물을 확인했다. 정제된 단백질의 상동성을 질량 분석기 및 N-말단 시퀀싱에 의해 추가로 확인했다.

EMP-힌지 코어 미메티바디의 아미노산 서열이 하기에서 보여진다. 기능적 도메인은 상기 펩티드를 코딩하는 서열에 주석을 달았다. 세 개의 아미노산 시그날 펩티드 공통 서열은 천연적으로 발생하는 이뮤노글로불린의 첫번째 세 개의 아미노산에 상응한다. 이들 아미노산은 소포체 내의 신호 펩티다제에 의해 신호 펩티드의 효과적인 제거에 공헌하는 것으로 여겨진다. 이 서열은 EMP-1 코딩 서열에 즉시 뒤따른다. EMP-1 서열의 두 개의 C-말단 아미노산이 Gly-Gly-Gly-Ser 반복에 특징을 갖는 유연한 링커를 형성하는 다음 6 개의 아미노산과 결합된다. 인간 결합(joining) (J) 영역 서열이 뒤따른다. J 서열은 적당한 삼차구조를 가정하는 EMP-1 이량체를 허용하고, 이뮤노글로불린의 구형 구조로부터 튀어나온 이량체를 허용하며, 두 개의 EPO 수용체 간의 틈으로의 통과를 허용하는 보다 나은 유연성을 제공할 것으로 여겨진다. HC 힌지 영역 또한 J 영역을 즉시 뒤따르는 구성물 내에 포함된다. IgG1 힌지 영역 (하이라이트된) 내에는 세 개의 시스테인이 있다. 첫번째는 이뮤노글로불린 경쇄 (LC)와 짝을 지을 것이고, 두개의 두번째는 2개의 HC 간의 쇄간 결합에 참여할 것이다. 서열의 나머지는 CH2 & CH3 영역으로 구성되며, 이는 단백질의 벌크를 구성한다. 이뮤노글로불린이 긴 혈청 반감기를 갖는 것으로 믿어지는 이유 중 하나는 피노사이토시스된 이뮤노글로불린을 세포외 공간으로 되돌림으로써 혈청 반감기를 확장시키는 FcRn에 결합하는 그들의 능력이다. FcRn 결합부위는 CH2 및 CH3 영역의 접합점과 중복된다 (Sheilds et al, 2001, J. Biol.Chem., vol. 276 (9), 6591-6604).

중요한 기능 도메인을 나타내는 EMP-힌지 코어 미메티바디의 펩티드 서열.

동종이량체를 형성하는 힌지 영역 내에 위치하는 시스테인 간의 이황화 결합을 통한 세포적 프로세싱 동안 두 개의 IgG 중쇄가 집합된다는 것은 잘 알려져 있다. 이는 또한 집합된 EMP-힌지 코어 미메티바디 구성물을 형성하는 변형된 펩티드 사이에서도 발생할 것이라는 것이 기대된다. 또한, EMP-1 펩티드 내의 두 개의 시스테인 간의 사슬 내 이황화 결합이 또한 형성될 것이라는 것이 기대된다. 예상 된 EMP-힌지 코어 미메티바디는 2개의 EMP-1 펩티드를 함유한다. 인접하는 서열의 유연성에 따르는 N-말단에서의 펩티드의 공간 배열은 펩티드가 생활성 이량체를 형성하도록 해야할 것이다.

EMP-힌지 코어 미메티바디의 활성은 먼저 인비트로 생활성 분석으로 시험하었다. 이 분석에 대해, 급성 거대모구성 백혈병을 갖는 환자로부터 유도된, EPO 의존성 UT-7/EPO 세포주가 이용되었다(Komatsu et al. , 1993, Blood, vol. 82(2), 456-464). 이들 세포는 rHuEPO가 보충된 배지로부터 회수한지 48 내지 72 시간 후 계획된 세포 사멸을 겪는다. 24시간 동안 rHuEPO의 부재 중에서 배양된 세포는 rHuEPO 또는 EPO 작용제로 처리된다면 살릴 수 있다. EMP-힌지 코어 미메티바디를 rHuEPO 없이 결핍된 세포에 가하고, 살아있는 세포에 의해 대사되어 측정할 수 있는 흡광도를 갖는 산물을 제공하는 테트라졸륨 화합물 MTS (CellTiter 96 Aq_ueous One Solution, Promega)을 이용하여 처리한 지 48시간 후 세포 생활력을 측정하였다. 일반적인 분석의 결과는 몰 기초 상에서 EMP-힌지 코어 미메티바디의 효능이 EMP-1 펩티드 보다 500 배 이상 크며, rHuEPO 보다 5배 작음을 보여주였다. 또한 이러한 동일한 세포는 EMP-힌지 코어 미메티바디로 자극되었으며, 티로신 인산화 패턴은 폴리아크릴아미드 겔을 통한 세포 용해를 진행시켜 시각화되었다. EMP-힌지 코어 미메티바디에 의해 나타난 패턴은 rHuEPO의 패턴과 유사하므로, EMP-힌지 코어 미메티바디의 이들 세포에 대한 메커니즘이 rHuEPO의 것과 유사하다는 것을 나타낸다.

인비보 연구는 EMP-힌지 코어 미메티바디의 반감기를 rHuEPO의 것과 비교하여, 그리고 적혈구 생성에 대한 그들의 영향을 비교하여, 보통의 마우스에서 행해졌다. 마우스에 동일하게 투여될 때, EMP-힌지 코어 미메티바디는 더 높은 최대 반응을 주며, 반응은 rHuEPO에 비해 연장되었다.

rHuEPO 및 EMP-힌지 코어 미메티바디 모두의 혈청 농도는 ELISA에 의해 측정되었다. EMP-힌지 코어 미메티바디의 대략적인 반감기는 rHuEPO의 적어도 수 배였다.

두 개의 리신 (L) 잔기, L234 & L235의 IgG1 더 낮은 힌지 영역에서의 알라닌 (A)으로의 돌연변이가 보체 의존성 세포독성 (CDC) 및 항체 의존성 세포매개 세포독성 (ADCC)을 매개하는 이뮤노글로불린의 능력을 폐기할 것이다 (Hezereh et al., 2001, J. Virol., vol. 75 (24), 12161-68). 예비적 연구는 EMP-힌지 코어 미메티바디가 EPO 수용체를 발현하는 세포의 보체 용해를 매개하지 않음을 보여주었다. 이는 적혈구 전구 세포 상에서 발견되는 적은 수의 수용체에 기인하는 것일 것이다. 또한 적혈구 용적률에서의 유의한 증가에 의해 증명되는 바와 같이 적혈구 전구세포의 인비보에서의 확장은 면역 작동자 기능의 가능한 기능적 부적절성을 지지한다. 그러나, 작동자 기능 관련된 영향은 관찰되지 않은 반면, 예방 단계로서의 이들 돌연변이를 도입하는 것에 대한 관심은 남아있다.

면역 작동자 기능의 매개를 감소시키는 또다른 변형은 글리코실화 부착 부위의 제거이다. 이는 297 위치에서 아스파라긴 (N297)을 글루타민 (Q)으로 돌연변이시켜 수행될 수 있다. 추가적 변화는 임의로 트레오닌 (T)를 대체 아미노산으로 변경시키는 것을 포함할 수 있고, O-글리코실화를 감소시키거나 변형시키다. 예컨대, IgG1 서브클래스의 아글리코실화 형태를 가지는 T34 또는 T47은 면역 작동자 기능의 낮은 매개자로 알려져 있다 (Jefferis et al. 1998, Immol. Rev., vol. 163, 50-76).

이점: 여기에서 기술된 신규한 구성물, EMP-힌지 코어 미메티바디는 생활성 펩티드 EMP-1를 나타내는 대안적인 방식을 제공한다. 이 구성물의 활성은 rHuEPO의 범위 내에 있으며, 인비보 반감기는 IgG의 것과 유사하다. 또한, 제시된 변형은, EMP-힌지 코어 미메티바디의 신규한 특성과 배합하고 부가하여, EMP-힌지 코어 미메티바디 구성물의 유용성을 증가시킨다.

상기 발명의 상세한 설명 및 실시예에서 특정하게 기술된 바 이외에 다른 방식으로 본 발명을 실시할 수 있음은 명백할 것이다.

상기 교시에 의해 본 발명의 수많은 변형 및 변이가 가능하므로, 이러한 변형 및 변이는 본 발명의 범위내에 속한다.

SEQUENCE LISTING <110> HEAVNER, George A.; KNIGHT, David; GHRAYEB, John; SCALLON, Bernard; NESSPOR, Thomas; HUANG, Chichang; Centocor, Inc. <120> HUMAN EPO MIMETIC HINGE CORE MIMETIBODIES, <130> CEN5039 <160> 89 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> peptide <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (4)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 1 Tyr Xaa Cys Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Cys Xaa Pro 1 5 10 <210> 2 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> peptide <400> 2 Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro Gln Gly Gly 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amino acid <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (5)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (14)..(16) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 21 Xaa Tyr Xaa Cys Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Cys Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Leu Leu <210> 22 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> peptide <400> 22 Gly Gly Leu Tyr Leu Cys Arg Phe Gly Pro Val Thr Trp Asp Cys Gly 1 5 10 15 Tyr Lys Gly Gly 20 <210> 23 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> peptide <400> 23 Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys 1 5 10 15 Pro Gln Gly Gly 20 <210> 24 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> peptide <400> 24 Val Gly Asn Tyr Met Cys 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Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (11)..(12) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 30 Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Xaa 1 5 10 <210> 31 <211> 125 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(125) <223> Vh1 heavy chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(31) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 3-20 (5) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(46) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(47) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 10-30 (17) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(79) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (80)..(80) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 25-55 (42) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (81)..(125) <223> framework 4 <400> 31 Gln Val Gln Leu Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly 1 5 10 15 Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Xaa 20 25 30 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Xaa Arg 35 40 45 Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu 50 55 60 Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Xaa 65 70 75 80 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Lys Gly 85 90 95 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 100 105 110 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 115 120 125 <210> 32 <211> 124 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(124) <223> Vh2 heavy chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(30) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(45) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 10-30 (16) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(78) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (79)..(79) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 15-40 (16) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (80)..(124) <223> framework 4 <400> 32 Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Xaa Trp 20 25 30 Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala Xaa Arg Leu 35 40 45 Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr Met Thr 50 55 60 Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Xaa Trp 65 70 75 80 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Pro Thr Ser Pro 85 90 95 Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 100 105 110 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 115 120 <210> 33 <211> 100 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(100) <223> Vh3a heavy chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(31) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 3-20 (5) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(46) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(47) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 10-30 (18) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(79) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (80)..(80) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 20-40 (31) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (81)..(100) <223> framework 4 <400> 33 Glu Val Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Xaa 20 25 30 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Xaa Arg 35 40 45 Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met 50 55 60 Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Xaa 65 70 75 80 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Lys Ala 85 90 95 Pro Ser Val Phe 100 <210> 34 <211> 102 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(102) <223> Vh3b heavy chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(30) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 3-20 (5) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(45) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 5-25 (11) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(78) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (79)..(79) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 15-40 (23) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (80)..(102) <223> framework 4 <400> 34 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Xaa Trp 20 25 30 Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Xaa Arg Phe 35 40 45 Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn 50 55 60 Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Xaa Trp 65 70 75 80 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 85 90 95 Ser Val Phe Pro Leu Ala 100 <210> 35 <211> 101 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(101) <223> Vh3c heavy chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(30) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 3-20 (5) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(45) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 10-30 (19) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(79) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (80)..(80) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 15-40 (25) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (81)..(101) <223> framework 4 <400> 35 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Xaa Trp 20 25 30 Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Xaa Arg Phe 35 40 45 Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile Ala Tyr Leu Gln Met Asn 50 55 60 Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asn Xaa 65 70 75 80 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Lys Gly 85 90 95 Pro Ser Val Leu Pro 100 <210> 36 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(108) <223> Vh4 heavy chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(33) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(48) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (49)..(49) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 10-30 (16) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (50)..(81) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (82)..(82) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 20-45 (32) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (83)..(108) <223> framework 4 <400> 36 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ser Ile Ser Ser 20 25 30 Ser Xaa Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Xaa Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 50 55 60 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 65 70 75 80 Arg Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Pro Thr 85 90 95 Lys Ala Pro Asp Val Phe Pro Ile Ile Ser Gly Cys 100 105 <210> 37 <211> 132 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(132) <223> Vh5 heavy chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(31) <223> MISC_FEATURE <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 3-20 (5) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(46) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(47) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 10-30 (17) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(79) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (80)..(80) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 15-40 (23) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (81)..(132) <223> framework 4 <400> 37 Glu Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly 1 5 10 15 Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Xaa 20 25 30 Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly Xaa Gln 35 40 45 Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp 50 55 60 Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Xaa 65 70 75 80 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Ala 85 90 95 Pro Ser Val Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn Ser Pro Ser Asp Thr 100 105 110 Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp Phe Leu Pro Asp Ser 115 120 125 Ile Thr Phe Ser 130 <210> 38 <211> 125 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(125) <223> Vh6 heavy chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(30) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(45) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 10-30 (18) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(78) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (79)..(79) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 5-30 (13) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (80)..(125) <223> framework 4 <400> 38 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Xaa Trp 20 25 30 Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu Gly Xaa Arg Ile 35 40 45 Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn 50 55 60 Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Xaa Trp 65 70 75 80 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Ala Ser Ala Pro 85 90 95 Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn Ser Pro Ser Asp Thr Ser 100 105 110 Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp Phe Leu Pro 115 120 125 <210> 39 <211> 91 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(91) <223> Vh7 heavy chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(30) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 3-20 (5) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(45) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 10-30 (17) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(78) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (79)..(79) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 5-30 (13) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (80)..(91) <223> framework 4 <400> 39 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Xaa Trp 20 25 30 Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Xaa Arg Phe 35 40 45 Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Ser 50 55 60 Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Xaa Trp 65 70 75 80 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ser 85 90 <210> 40 <211> 93 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(93) <223> Kappa 1_4 light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(24) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 10-30 (17) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(40) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (42)..(73) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (74)..(74) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 20-40 (30) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (75)..(93) <223> framework 4 <400> 40 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Arg Val Thr Ile Thr Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 20 25 30 Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Xaa Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 35 40 45 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 50 55 60 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys 65 70 75 80 Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 85 90 <210> 41 <211> 92 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(92) <223> Kappa2 light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(23) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 10-30 (17) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(39) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(72) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (73)..(73) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 20-40 (29) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (74)..(92) <223> framework 4 <400> 41 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln 20 25 30 Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Xaa Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 35 40 45 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala 50 55 60 Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val 65 70 75 80 Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 85 90 <210> 42 <211> 91 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(91) <223> Kappa3 light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(23) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 5-30 (13) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(39) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(72) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (73)..(73) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 20-40 (30) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (74)..(91) <223> framework 4 <400> 42 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 20 25 30 Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Xaa Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly 35 40 45 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro 50 55 60 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val 65 70 75 80 Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val 85 90 <210> 43 <211> 85 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(85) <223> Kappa5 light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(23) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 5-20 (11) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(39) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(72) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (73)..(73) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 10-30 (19) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (74)..(85) <223> framework 4 <400> 43 Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Ala Phe Met Ser Ala Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Lys Val Asn Ile Ser Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu 20 25 30 Ala Ala Ile Phe Ile Ile Gln Xaa Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly 35 40 45 Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser 50 55 60 Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Xaa Leu Arg His Phe Trp Pro Gly 65 70 75 80 Asp Gln Ala Ala Gly 85 <210> 44 <211> 79 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(67) <223> KappaNew1 light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(17) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 10-30 (17) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(33) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(66) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (67)..(67) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 10-30 (21) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (68)..(79) <223> framework 4 <400> 44 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Val Asn Leu Ser Met Ser Ala Gly 1 5 10 15 Glu Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Phe Ile 20 25 30 Tyr Xaa Gly Ile Ser Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 35 40 45 Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr 50 55 60 Tyr Cys Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys Arg Thr 65 70 75 <210> 45 <211> 77 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(65) <223> KappaNew2 light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(15) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 10-30 (18) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(31) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(64) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (65)..(65) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 10-30 (21) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (66)..(77) <223> framework 4 <400> 45 Glu Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Xaa 1 5 10 15 Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile His Xaa 20 25 30 Gly Ile Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 35 40 45 Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Leu Tyr Tyr Cys 50 55 60 Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Phe Lys Arg Thr 65 70 75 <210> 46 <211> 95 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(95) <223> KappaNew3 light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(24) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 10-30 (17) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(40) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (42)..(73) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (74)..(74) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 3-30 (9) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (75)..(95) <223> framework 4 <400> 46 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gly Arg Arg Ala Thr Ile Asn Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 20 25 30 Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Xaa Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 35 40 45 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 50 55 60 Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys 65 70 75 80 Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Lys Phe 85 90 95 <210> 47 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(98) <223> Lambda1a light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(22) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1). X is 5-25 (14) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(38) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2). X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(71) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (72)..(72) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3). X is 30-50 (39) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (73)..(98) <223> framework 4 <400> 47 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala 20 25 30 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Xaa Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 35 40 45 Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu 50 55 60 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 65 70 75 80 Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro 85 90 95 Ser Ser <210> 48 <211> 99 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(99) <223> Lambda1b light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(23) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 3-25 (13) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(39) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(72) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (73)..(73) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 30-50 (41) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (74)..(99) <223> framework 4 <400> 48 Ala Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly 1 5 10 15 Gln Lys Val Thr Ile Ser Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr 20 25 30 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Xaa Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly 35 40 45 Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln Thr 50 55 60 Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 65 70 75 80 Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro 85 90 95 Pro Ser Ser <210> 49 <211> 99 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(72) <223> Lambda2 light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(22) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 8-25 (14) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(38) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(71) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (72)..(72) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 25-50 (38) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (73)..(99) <223> framework 4 <400> 49 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala 20 25 30 Pro Lys Leu Met Ile Tyr Xaa Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser 35 40 45 Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu 50 55 60 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Thr Lys Leu 65 70 75 80 Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro 85 90 95 Pro Ser Ser <210> 50 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(107) <223> Lambda3a light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(22) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 5-20 (11) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(38) <223> framework 2vv <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(71) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (72)..(72) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 15-40 (26) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (73)..(107) <223> framework 4 <400> 50 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala 20 25 30 Pro Val Leu Val Ile Tyr Xaa Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 35 40 45 Ser Ser Gly Thr Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu 50 55 60 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 65 70 75 80 Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro 85 90 95 Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr 100 105 <210> 51 <211> 93 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(93) <223> Lambda3b light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(22) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 5-20 (11) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(39) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(72) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (73)..(73) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 15-40 (27) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (74)..(93) <223> framework 4 <400> 51 Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala 20 25 30 Pro Val Leu Val Val Tyr Asp Xaa Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly 35 40 45 Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala 50 55 60 Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 65 70 75 80 Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Thr Val Thr 85 90 <210> 52 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(98) <223> Lambda3c light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(22) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 5-20 (11) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(38) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(71) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (72)..(72) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 25-50 (37) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (73)..(98) <223> framework 4 <400> 52 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser 20 25 30 Pro Val Leu Val Ile Tyr Xaa Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 35 40 45 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 50 55 60 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 65 70 75 80 Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Arg Ser Leu Cys Pro Pro 85 90 95 Pro Pro <210> 53 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(98) <223> Lambda3e light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(22) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 5-20 (11) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(38) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 3-20 (7) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(71) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (72)..(72) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 15-40 (26) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (73)..(98) <223> framework 4 <400> 53 Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala 20 25 30 Pro Val Leu Val Ile Tyr Xaa Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 35 40 45 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 50 55 60 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 65 70 75 80 Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro 85 90 95 Ser Ser <210> 54 <211> 94 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(94) <223> Lambda4a light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(22) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 5-25 (12) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(38) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 5-25 (11) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(71) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (72)..(72) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 10-40 (23) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (73)..(94) <223> framework 4 <400> 54 Gln Pro Val Leu Thr Gln Ser Ser Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Thr Cys Xaa Trp His Gln Gln Gln Pro Gly Lys Ala 20 25 30 Pro Arg Tyr Leu Met Lys Xaa Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 35 40 45 Ser Ser Gly Ala Asp Arg Tyr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Ser Glu 50 55 60 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 65 70 75 80 Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe 85 90 <210> 55 <211> 95 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(95) <223> Lambda4b light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(22) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 5-25 (12) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(38) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 5-25 (11) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(71) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (72)..(72) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 15-40 (25) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (73)..(95) <223> framework 4 <400> 55 Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Thr Cys Xaa Trp His Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly 20 25 30 Pro Arg Tyr Leu Met Lys Xaa Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 35 40 45 Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu 50 55 60 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Ile Gly Gly Gly Thr 65 70 75 80 Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Ser 85 90 95 <210> 56 <211> 88 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(75) <223> Lambda5 light chain variable region <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(22) <223> framework 1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> complementarity determinng region 1 (CDR1), X is 5-25 (14) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(39) <223> framework 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> complementarity determinng region 2 (CDR2), X is 5-20 (10) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(74) <223> framework 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (75)..(75) <223> complementarity determinng region 3 (CDR3), X is 10-35 (22) of any amino acids. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (76)..(88) 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Ala Pro 20 25 30 Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 35 40 45 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 50 55 60 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 65 70 75 80 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 85 90 95 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 100 105 110 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 115 120 125 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 130 135 140 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 145 150 155 160 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 165 170 175 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 180 185 190 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 195 200 205 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 210 215 220 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 225 230 235 240 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 245 <210> 86 <211> 249 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> peptide <400> 86 Gln Ile Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Gly Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro 20 25 30 Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 35 40 45 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 50 55 60 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 65 70 75 80 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 85 90 95 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 100 105 110 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 115 120 125 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 130 135 140 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 145 150 155 160 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 165 170 175 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 180 185 190 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 195 200 205 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 210 215 220 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 225 230 235 240 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 245 <210> 87 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> peptide <400> 87 Gln Ile Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 20 25 30 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 35 40 45 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 50 55 60 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 65 70 75 80 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 85 90 95 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 100 105 110 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 115 120 125 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 130 135 140 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 145 150 155 160 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 165 170 175 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 180 185 190 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 195 200 205 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 210 215 220 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 225 230 235 240 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 245 <210> 88 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> peptide <400> 88 Gln Ile Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 20 25 30 Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 35 40 45 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 50 55 60 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 65 70 75 80 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 85 90 95 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 100 105 110 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 115 120 125 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 130 135 140 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 145 150 155 160 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 165 170 175 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 180 185 190 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 195 200 205 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 210 215 220 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 225 230 235 240 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 245 <210> 89 <211> 249 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> peptide <400> 89 Gln Ile Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Gly Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro 20 25 30 Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 35 40 45 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 50 55 60 Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 65 70 75 80 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 85 90 95 Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 100 105 110 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 115 120 125 Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 130 135 140 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met 145 150 155 160 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 165 170 175 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 180 185 190 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 195 200 205 Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val 210 215 220 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 225 230 235 240 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 245

Claims (40)

1. 서열번호: 82 및 84 중 적어도 하나의 아미노산 서열을 코딩하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드, 또는 그에 상보적인 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 핵산(mimetic hinge core mimetibody).
2. 서열번호: 83 및 85-89 중 적어도 하나의 아미노산 서열을 코딩하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드, 또는 그에 상보적인 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 핵산.
3. 서열번호: 1-30 중 적어도 하나의 아미노산 서열을 코딩하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드, 또는 그에 상보적인 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 핵산.
4. 하기 화학식 (I)의 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 핵산:

   

   상기 식에서, V는 이뮤노글로불린 가변 영역의 N-말단의 적어도 한 부분이고, P는 적어도 하나의 생활성 EPO 미메틱 펩티드이며, L은 링커 서열이고, H는 이뮤노글로불린 가변 힌지 코어 영역의 적어도 한 부분이며, CH2는 이뮤노글로불린 CH2 불변 영역의 적어도 한 부분이고, CH3은 이뮤노글로불린 CH3 불변 영역의 적어도 한 부분이며, m, n, o, p, q, r, 및 s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수일 수 있다.
5. 적어도 하나의 서열번호: 82 및 84의 인접 아미노산을 모두 포함하는, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드.
6. 적어도 하나의 서열번호: 83 및 85-89의 인접 아미노산을 모두 포함하는, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드.
7. 적어도 하나의 서열번호: 1-30의 인접 아미노산을 모두 포함하는, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드.
8. 하기 화학식 (I)의 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드:

   

   상기 식에서, V는 QIQ이고, P는 서열번호: 1-30으로부터 선택된 적어도 하나의 생활성 펩티드이며, L은 GS, GGGS (서열번호: 73) 또는 GSGGGS (서열번호: 74)을 포함하고, H는 CPPCP(서열번호: 75)이며, CH2는

   

   이고, CH3은

   

   이며, m, n, o, p, q, r, s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수이다.
9. 하기 화학식 (I)의 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드:

   

   상기 식에서, V는 QIQ이고, P는 서열번호: 1-30으로부터 선택된 적어도 하나의 생활성 펩티드이며, L은 GS, GGGS (서열번호: 73) 또는 GSGGGS (서열번호: 74)을 포함하고, H는 CPPCP(서열번호: 75)이며, CH2는

   

   이고, CH3은

   

   이며, m, n, o, p, q, r, s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수이다.
10. 하기 화학식 (I)의 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드:

    

    상기 식에서, V는 QIQ이고, P는 서열번호: 1-30으로부터 선택된 적어도 하나의 생활성 펩티드이며, L은 GS, GGGS (서열번호: 73) 또는 GSGGGS (서열번호: 74)을 포함하고, H는 CPPCP(서열번호: 75)이며, CH2는

    

    이고, CH3은

    

    이며, m, n, o, p, q, r, s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수이다.
11. 하기 화학식 (I)의 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드:

    

    상기 식에서, V는 QIQ이고, P는 서열번호: 1-30으로부터 선택된 적어도 하나의 생활성 펩티드이며, L은 GS, GGGS (서열번호: 73) 또는 GSGGGS (서열번호: 74)를 포함하고, H는 CPPCP(서열번호: 75)이며, CH2는

    

    이고, CH3는

    

    이며, m, n, o, p, q, r, s은 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수이다.
12. 하기 화학식 (I)의 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드:

    

    상기 식에서, V는 인간 가변 영역의 N-말단 부분이고, P는 서열번호: 1-30으로부터 선택된 적어도 하나의 생활성 펩티드이며, L은 링커 폴리펩티드이고, H는 이뮤노글로불린 가변 힌지 코어 영역의 적어도 한 부분이며, CH2는

    

    이고, CH3는

    

    이며, m, n, o, p, q, r, s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수이다.
13. 하기 화학식 (I)의 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드:

    

    상기 식에서, V는 인간 가변 영역의 N-말단 부분이고, P는 서열번호: 1-30으로부터 선택된 적어도 하나의 생활성 펩티드이며, L은 링커 폴리펩티드이고, H는 이뮤노글로불린 가변 힌지 코어 영역의 적어도 한 부분이며, CH2는

    

    이고, CH3은

    

    이며, m, n, o, p, q, r, s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수이다.
14. 하기 화학식 (I)의 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드:

    

    상기 식에서, V는 인간 가변 영역의 N-말단 부분이고, P는 서열번호: 1-30으로부터 선택된 적어도 하나의 생활성 펩티드이며, L은 링커 폴리펩티드이고, H는 이뮤노글로불린 가변 힌지 코어 영역의 적어도 한 부분이며, CH2는

    

    이고, CH3은

    

    이며, m, n, o, p, q, r, s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수이다.
15. 하기 화학식 (I)의 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드:

    

    상기 식에서, V는 인간 가변 영역의 N-말단 부분이고, P는 서열번호: 1-30으로부터 선택된 적어도 하나의 생활성 펩티드이며, L은 링커 폴리펩티드이고, H는 이뮤노글로불린 가변 힌지 코어 영역의 적어도 한 부분이며, CH2는

    

    이고, CH3은

    

    이며, m, n, o, p, q, r, s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수이다.
16. 하기 화학식 (I)의 폴리펩티드를 포함하는 화학식 (I)의 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드:

    

    상기 식에서, V는 QIQ이고, P는 서열번호: 1-30으로부터 선택된 적어도 하나의 생활성 펩티드이며, L은 링커 폴리펩티드이고, H는 이뮤노글로불린 가변 힌지 코어 영역의 적어도 한 부분이며, CH2는 이뮤노글로불린 CH2 불변 영역의 적어도 한 부분이고, CH3은 이뮤노글로불린 CH3 불변 영역의 적어도 한 부분이며, m, n, o, p, q, r, s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수이다.
17. 하기 화학식 (I)의 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드:

    

    상기 식에서, V는 이뮤노글로불린 가변 영역의 N-말단의 적어도 한 부분이고, P는 적어도 하나의 생활성 EPO 미메틱 펩티드이며, L은 GS, GGGS (서열번호: 73) 또는 GSGGGS (서열번호: 74)을 포함하고, H는 이뮤노글로불린 가변 힌지 코어 영역의 적어도 한 부분이며, CH2는 이뮤노글로불린 CH2 불변 영역의 적어도 한 부분이고, CH3은 이뮤노글로불린 CH3 불변 영역의 적어도 한 부분이고, m, n, o, p, q, r, s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수이다.
18. 하기 화학식 (I)의 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드:

    

    상기 식에서, V는 이뮤노글로불린 가변 영역의 N-말단의 적어도 한 부분이고, P는 적어도 하나의 생활성 EPO 미메틱 펩티드이며, L은 링커 폴리펩티드이고, H는 이뮤노글로불린 가변 힌지 코어 영역의 적어도 한 부분이며, CH2는 이뮤노글로불린 CH2 불변 영역의 적어도 한 부분이고, CH3은 이뮤노글로불린 CH3 불변 영역의 적어도 한 부분이고, m, n, o, p, q, r, s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수이다.
19. 하기 화학식 (I)의 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드:

    

    상기 식에서, V는 이뮤노글로불린 가변 영역의 N-말단의 적어도 한 부분이고, P는 적어도 하나의 생활성 EPO 미메틱 펩티드이며, L은 링커 폴리펩티드이고, H는 CPPCP(서열번호: 75)이며, CH2는 이뮤노글로불린 CH2 불변 영역의 적어도 한 부분이고, CH3는 이뮤노글로불린 CH3 불변 영역의 적어도 한 부분이며, m, n, o, p, q, r, s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수이다.
20. 하기 화학식 (I)의 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드:

    

    상기 식에서, V는 이뮤노글로불린 가변 영역의 N-말의 적어도 한 부분이고, P는 서열번호: 1-30으로부터 선택된 적어도 하나의 생활성 펩티드이며, L은 링커 폴리펩티드이고, H는 이뮤노글로불린 가변 힌지 코어 영역의 적어도 한 부분이며, CH2는 이뮤노글로불린 CH2 불변 영역의 적어도 한 부분이고, CH3는 이뮤노글로불린 CH3 불변 영역의 적어도 한 부분이며, m, n, o, p, q, r, s는 독립적으로 0, 1 또는 2 내지 10의 정수이다.
21. 제1항 내지 제20항 중 적어도 한 항에 있어서, 적어도 하나의 P 폴리펩티드의 적어도 하나의 활성을 가지는, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 핵산 또는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드.
22. 제5항 내지 제20항 중 적어도 한 항에 따른 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 모노클로날 또는 폴리클로날 항체, 융합 단백질, 또는 그의 단편.
23. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코 어 미메티바디 폴리펩티드 또는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 항체를 코딩하는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 핵산.
24. 적어도 하나의 분리된 제23항의 핵산을 포함하는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 벡터.
25. 분리된 제23항의 핵산을 포함하는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 숙주 세포.
26. 제23항에 있어서, 숙주세포가 COS-1, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-1, Hep G2, 653, SP2/0, 293, NSO, DG44 CHO, CHO K1, HeLa, 골수종, 또는 림프종 세포, 또는 그의 임의의 유도체, 불멸화 또는 형질전환 세포로부터 선택된 적어도 하나인 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 숙주 세포.
27. EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 또는 항체를 검출 또는 회수 가능 양으로 발현하도록 하는 시험관내 (in vitro), 생체내 (in vivo) 또는 동일계 (in situ) 조건하에 제23항의 핵산을 해독하는 것을 포함하는, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드 또는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 항체의 제조 방법.
28. 제1항 내지 제20항 중 적어도 한 항에 따른 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 핵산, EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드, 또는 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 항체를 포함하는 조성물.
29. 제28항에 있어서, 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 추가로 포함하는 조성물.
30. 제28항에 있어서, 검출 가능 표지 또는 리포터, TNF 길항제, 항-감염 약물, 심혈관계 (CV) 약물, 중추 신경계 (CNS) 약물, 자율 신경계 (ANS) 약물, 기도 약물, 위장관 (GI) 약물, 호르몬 약물, 체액 또는 전해질 평형 약물, 혈액 약물, 안티네오플락틱(antineoplactic), 면역 제어 약물, 눈, 귀 또는 코 약물, 국소 약물, 영양제, 사이토카인, 또는 사이토카인 길항제로부터 선택된 치료 유효량의 적어도 하나의 화합물, 조성물 또는 폴리펩티드를 가지는 적어도 하나의 조성물을 추가로 포함하는 조성물.
31. 제28항에 있어서, 액체, 가스, 또는 드라이 용액, 혼합물, 현탁액, 에멀젼 또는 콜로이드, 동결건조 제제, 또는 분말로부터 선택된 적어도 하나의 형태인 조성물.
32. (a) 제1항 내지 제20항 중 적어도 한 항에 따른 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 핵산, 폴리펩티드 또는 항체의 유효량을 가지는 조성물을 세포, 조직, 기관 또는 동물에 접촉시키거나 투여하는 것을 포함하는, 세포, 조직, 기관 또는 동물에서 EPO 리간드 관련 증상을 진단하거나 치료하는 방법.
33. 제32항에 있어서, 유효량이 상기 세포, 조직, 기관 또는 동물 1 kg 당 0.001-50 mg의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 항체; 0.000001-500 mg의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디; 또는 0.0001-100 μg의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 핵산인 방법.
34. 제32항에 있어서, 접촉 또는 투여가 비경구, 피하, 근육내, 정맥내, 관절내, 기관지내, 복강내, 낭내, 연골내, 강내, 복내, 소뇌내, 뇌실내, 결장내, 경관내, 위내, 간내, 심근내, 골내, 골반내, 심장막내, 복막내, 흉막내, 전립샘내, 폐내, 직장내, 콩팥내, 망막내, 척수내, 윤활막내, 흉부내, 자궁내, 방광내, 병변내, 볼루스, 질, 직장, 볼, 설하, 비강내, 또는 경피로부터 선택된 적어도 하나의 방식에 의한 방법.
35. 제32항에 있어서, 상기 (a) 접촉 또는 투여 전, 중 또는 후에 검출 가능 표지 또는 리포터, TNF 길항제, 항-감염 약물, 심혈관계 (CV) 약물, 중추 신경계 (CNS) 약물, 자율 신경계 (ANS) 약물, 기도 약물, 위장관 (GI) 약물, 호르몬 약물, 체액 또는 전해질 평형 약물, 혈액 약물, 안티네오플락틱(antineoplactic), 면역 제어 약물, 눈, 귀 또는 코 약물, 국소 약물, 영양제, 사이토카인, 또는 사이토카인 길항제로부터 선택된 적어도 하나의 화합물 또는 폴리펩티드의 유효량을 가지는 적어도 하나의 조성물을 추가로 투여하는 것을 포함하는 방법.
36. 제1항 내지 제20항 중 적어도 한 항에 따른 적어도 하나의 분리된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드, 항체 또는 핵산을 비경구, 피하, 근육내, 정맥내, 관절내, 기관지내, 복강내, 낭내, 연골내, 강내, 복내, 소뇌내, 뇌실내, 결장내, 경관내, 위내, 간내, 심근내, 골내, 골반내, 심장막내, 복막내, 흉막내, 전립샘내, 폐내, 직장내, 콩팥내, 망막내, 척수내, 윤활막내, 흉부내, 자궁내, 방광내, 병변내, 볼루스, 질, 직장, 볼, 설하, 비강내, 또는 경피로부터 선택된 적어도 하나의 방식에 의해 접촉시키거나 투여하는데 적합한, 제1항 내지 제20항 중 적어도 한 항에 따른 적어도 하나의 분리된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드, 항체 또는 핵산을 포함하는 장치
37. 포장재 및 제1항 내지 제20항 중 적어도 한항에 따른 적어도 하나의 분리된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드, 항체 또는 핵산을 가지는 용기를 포함하는 인간의 약제학적 또는 진단 용도를 위한 제조 물품.
38. 제32항에 있어서, 용기가 경구, 피하, 근육내, 정맥내, 관절내, 기관지내, 복강내, 낭내, 연골내, 강내, 복내, 소뇌내, 뇌실내, 결장내, 경관내, 위내, 간내, 심근내, 골내, 골반내, 심장막내, 복막내, 흉막내, 전립샘내, 폐내, 직장내, 콩팥내, 망막내, 척수내, 윤활막내, 흉부내, 자궁내, 방광내, 병변내, 볼루스, 질, 직장, 볼, 설하, 비강내, 또는 경피 전달 장치 또는 시스템의 요소인 물품.
39. 제1항 내지 제20항 중 적어도 한 항에 따른 폴리펩티드, 항체 또는 핵산을 검출 또는 회수할 수 있는 양으로 발현시킬 수 있는 적어도 하나의 숙주 세포, 트랜스제닉 동물, 트랜스제닉 식물, 식물 세포를 포함하는, 제1항 내지 제20항 중 적어도 한 항에 따른 적어도 하나의 분리된 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드, 항체 또는 핵산을 제조하는 방법.
40. 제39항의 방법에 의해 제조된, 적어도 하나의 EPO 미메틱 힌지 코어 미메티바디 폴리펩티드, 항체 또는 핵산.