KR20050116046A - 벼멸구 저항성 유전자를 갖는 개체나 계통을 선발하기위한 디엔에이 프라이머 - Google Patents

Abstract

본 발명은 벼멸구 저항성 유전자를 갖는 계체나 계통을 선발하기 위한 DNA 프라이머에 관한 것으로서, 벼멸구 저항성 특이 프라이머를 이용하면 벼멸구 저항성 유전자 Bph1을 보유하는 품종인 Mudgo, TKM6, 청청벼, 남풍벼, 영풍벼, 밀양30호, 한강찰벼, 칠성벼, 삼강벼 남풍벼, 삼강벼, 백운찰벼, 장성벼 가야벼 등으로부터 다른 저항성 유전자형(bph2)을 갖는 저항성 품종 및 감수성 품종에서와는 다른 크기의 PCR 산물을 증폭되기 때문에 품종 내 저항성 유전자 Bph1의 유무를 쉽게 구별할 수 있도록 함으로서, 저항성 유전자 Bph1을 다른 품종에 전이시킬 때 저항성 유전자를 갖는 개체나 계통은 쉽고 간편하게 그리고 안정되게 PCR 결과를 통해 선발될 수 있도록 하기위한 것이다.

Description

벼멸구 저항성 유전자를 갖는 개체나 계통을 선발하기 위한 디엔에이 프라이머{PRIMERS FOR SELECTING INDIVIDUALS OR LINE RESISTANT TO BROWN PLANTHOPPER}

본 발명은 벼 품종중 Mudgo나 TKM6가 갖는 벼멸구 저항성 유전자인 Bphl을 특이적으로 확인할 수 있는 DNA 프라이머에 관한 것이다.

일반적으로 벼멸구는 벼의 주요 해충 중 하나로 방제 적기를 놓치면 상당한 피해를 주는 것으로 알려져 있다. 현재의 방제는 주로 화학적 방제를 사용하고 있으나 저항성 품종을 이용하여 그 피해를 줄이기 위해 다수의 저항성 품종을 육성하고 있다. 그러나 저항성 품종을 육성하고자 할 때 저항성 유전자를 보유하고 있는 계통이나 개체를 선발하는 과정이 용이한 것은 아니다.

한편, 최근에는 분자 생물학의 발전과 함께 DNA 마커를 이용한 고밀도 분자 유전 지도가 작성되어 DNA 마커로 식물의 어떤 형질을 선발할 수 있게 되었다(gene tagging). 이 때 생물 개체의 특이적 DNA 구조의 다형성 (polymorphism)을 이용한 핵산지문법(DNA finger printing)이 이용되며, 이 방법은 환경에 의해 거의 영향받지 않으며, DNA의 변이율도 년 1/109 정도로 낮아 매우 안정되게 유전자형을 판별하는데 사용할 수 있다. 그 중 PCR (Polymerase Chain Reaction) 방법은 10 ~20 여 개의 뉴클레오타이드로 구성된 작은 핵산 단편(이하 프라이머)을 생물체의 핵산과 결합(annealing)시킨 후, 내열성 DNA 중합 효소(Tag DNA Polymerase)를 첨가하여 합성반응이 반복적으로 이루어지게 하는 방법이다. 이것은 다른 방법에 비해 소량의 DNA (1~50ng)만을 요구하며, 간편하고 빠르게 결과를 확인할 수 있다는 장점을 갖고 있다.

벼멸구 저항성 유전자는 현재까지 17종류가 알려져 있다. 대부분의 저항성 품종은 Bph1과 bph2을 보유하고 있고, 이들은 벼의 12번 염색체 상에서 서로 30cM의 유전거리(Murata 등, 1997)를 두고 연관되어 있는 것으로 보고되었다.

한국에서 개발한 벼멸구 저항성 품종 중 한강찰벼, 삼강벼, 가야벼, 장성벼, 청청벼, 남풍벼, 칠성벼, 밀양30, 영풍벼 등 다수가 Mudgo나 TKM6으로부터 유래된 저항성 유전자 Bph1을 갖고 있으며, 1995년에 Hirabayashi 등에 의해 Xnpb248과 10.7%의 조환가를 보인다고 보고된 바 있고, 그 후 Murata(1997) 등에 의해 다시 C1069와 가까이 연관되어 있다고 하는 결과가 보고 된 바 있으나, 아직까지 완전히 공분리하는 마커에 대해선 보도 된 바가 없다.

따라서 실제로 육종 과정에서는 저항성 품종이나 계통을 직접 벼멸구를 식물체에 접종한 다음 1-2주 후에 식물체의 생존 여부로 선발하고 있으며, 이 과정을 위해 충의 대량 사육 및 그를 위한 시설 관리를 필요로 하고있는 실정이다.

또한, 검정 과정의 미숙으로 좋은 형질을 갖추고 있는 우량 계통이 소실될 수도 있는 문제점이 있었다.

이에 본 발명은 벼멸구 저항성 계통이나 개체의 선발 과정에 저항성 유전자 Bph1에 대한 특이 프라이머를 사용함으로써 직접적인 생물 검정을 통해 선발하던 과정을 상당량 줄일 수 있으며, 초기 육성 집단에 적용했을 때 차후에 취급해야 하는 계통수도 상당히 줄일 수 있도록 하기위한 것이다.

또한, PCR 방법으로 이루어지기 때문에 빠른 시간 내 개체나 계통을 선발할 수 있어, 결과적으로 육종 과정의 노동력이나 검정 시설 유지 및 관리에 따른 경비 등을 감소시킬 수 있도록 하는데 목적이 있다.

상기한 종래 기술에서 언급된 바와같이 현재까지 벼멸구 저항성 유전자는 17종류가 알려져 있으나, 유전자 지도를 근거로 하여 벼멸구 저항성 표현형과 DNA 마커와 연관 관계를 분석하여 벼멸구 저항성 유전자의 존재와 대략적인 위치만 알려졌을 뿐 유전자 자체가 분리되고 그 유전자의 기능이 분석된 것은 아니다.

본 발명에서는 벼멸구 저항성 유전자를 분리하고 기능을 분석하는 중에 일부 단편들이 벼멸구 저항성 유전자 Bph1과 밀접하게 연관되어 공분리를 하는 것을 발견하였고, 이 단편들의 염기서열을 근거로 벼멸구 저항성 유전자 Bph1 특이 프라이머를 제작하게 되었다.

즉, 벼멸구 저항성 유전자 Bph1을 갖고 있는 Mudgo로부터 이 유전자와 관련 있는 유전자 단편을 분리하였고, 그 단편을 근거로 해 종래의 RFLP나 AFLP 방법보다 더 간편한 방법인 PCR 방법으로 시간, 비용 및 다량의 개체나 계통을 선발할 수 있는 몇 종의 프라이머를 제작한다. 이 프라이머들은 21mer 이상의 크기의 DNA 단편으로 GC 함량이 50% 이상으로 상당히 고온(60℃)에 PCR 반응을 진행시킬 수 있기 때문에 재현성이 높다. 따라서 본 발명의 프라이머는 벼멸구 저항성 유전자 Bph1을 갖고 있는 품종이나 계통을 PCR 방법으로 쉽게 선발할 수 있게한다.

그리고, 본 발명을 이용하면 벼멸구 저항성 품종 및 그로부터 파생된 계통이 벼멸구 저항성 유전자 Bph1을 갖고 있는 지를 확인할 수 있기 때문에 본 발명이 직접 충을 식물체에 접종하는 검정방법을 대신할 수 있다. 또한 20mer 이상의 뉴클레오타이드의 중합된 DNA 단편이므로 60℃ 이상의 고온에서 접촉 반응(annealing)을 실시할 수 있기 때문에 안정되게 그 저항성 유전자 존재의 유무를 확인할 수 있다.

이 프라이머들을 이용하면 벼멸구 저항성 품종을 육성하는 과정에서의 저항성 계통을 선발하고 자 할 때 벼멸구 사육실 관리 및 비용, 벼멸구에 대한 식물체의 반응을 조사하는데 요구되는 실험자의 숙련도 등에 의존하지 않고 PCR 방법에 대한 기본과 시설만 갖추고 있으면 누구나 쉽게 판별할 수 있다

이하 본 발명의 구체적인 실시예로서, 프라이머 염기 서열 및 프라이머 제작의 근본이 되는 DNA 단편의 분리, 그 단편들의 염기 서열 분석 그리고 다양한 품종에 적용된 경우에 대해 살펴보기로 한다.

<실시예 1단계. 프라이머 제작>

벼 인디카 품종 Mudgo나 TKM6로부터 유래된 벼멸구 저항성 유전자 Bph1은 현재 대부분 저항성 품종이 저항성원으로 갖고 있는 유전자이다. Mudgo로부터 저항성 유전자 Bph1과 관련이 있는 것으로 추정되는 단편을 PCR 방법으로 여러 작은 단편으로 분리한 다음 염기서열을 분석하였다. Mudgo로 부터 얻은 프라이머를 서열목록 1로 하였으며, 그 정보는 다음과 같다.

1) 기원

- 생물명(Organism) : 벼(Oryza sativa L.)

- 주명(Strain) : 벼품종(Indica)

- 개체, 단리클론명(Individual isolate) : Mudgo

- 분화의 정도(Developmental stage) : 유묘기(Seedling)

- 하플로 타입(Haplotype) : 2n(2배체)

- 조직의 종류(Cell line) : 벼 종자로부터 발아시킨 식물체

- 세포의 종류(Cell type) : 벼 잎

- 세포주(Cell line) : 벼

- 세포 내 소기관(Organelle) : 핵

2) 직접적인 기원

- 라이브러리명 : pCR2.1 TOPO vector에 삽입된 것

- 클론명 : pBPH

3) 게놈 내의 위치

- 염색체/세그먼트명(Chromosome/Segment) : 염색체 12번

- 염색체 지도상의 위치 : 염색체 12번

상기 두 염기 서열 간에 상당한 정도의 차이가 있었으며, 그 차이나는 부위를 근거로 서열목록 2부터 9까지의 프라이머들을 만들었다.

그중, 서열목록 2 및 3은 각각 pBPH9F과 pBPH9R이고, 서열목록 4 및 5는 각각 pBPH21F와 pBPH21R이며, 서열목록 6 및 7은 pBPH19F와 pBPH19R 이고, 서열목록 8 및 9는 pBPH20F와 pBPH20R로 칭하였다.

<실시예 2단계. 특이 프라이머들을 이용한 PCR 실시 >

벼멸구에 대해 저항성을 보이는 16개의 품종과 감수성을 보이는 16개의 품종에 서열목록 2부터 9까지의 프라이머들을 적용하여 PCR을 수행한 결과 크기가 다른 PCR 산물이 증폭되었는데, 그 경향은 식물의 벼멸구 반응과 거의 일치했다. PCR은 총 반응액 20ul에 각 품종이나 계통으로부터 분리한 게놈 DNA(50~100ng), dNTP mixture (각각 5mM), I-STAR Taq^TM DNA Polymerase (2.5u, iNtRON)와 10X buffer (300mM Tris-HCl(pH9.0), 300mM salts consisting of K+ and NH4+, 20mM Mg2+)을 넣고 다음과 같은 과정으로 수행하였다.

먼저 94℃에서 3분 동안 DNA denaturation 과정을 거친 다음, 기본적인 과정으로 들어갔다. DNA denaturation 과정은 94℃에서 1분, annealing 과정은 60~65℃(프라이머에 따라 조금씩 다름)에서 1분, extension 과정은 72℃에서 1분 동안 실시하였고, 이러한 과정이 35번 반복되었다. 그리고 DNA extension 과정이 72℃, 10분 동안 추가되었다. PCR이 끝난 다음 2% agarose gel에서 전기영동을 실시하고 Ethidium bromide 용액에서 염색하여 PCR 산물을 확인하였다.

<실시예 3단계. 벼멸구 저항성 특이 프라이머의 다양한 품종에 적용>

대부분의 벼멸구 저항성 품종의 저항성 유전자는 Bph1의 공여 품종으로써 Mudgo와 TKM6가, 또 다른 저항성 유전자 bph2의 공여 품종인 ASD7으로부터 유래되었다. 본 실시예에 사용한 대부분의 벼멸구 저항성 품종(청청벼, 남풍벼, 영풍벼, 밀양30호, 한강찰벼, 칠성벼, 삼강벼, 장성벼, 가야벼, 백운찰벼, 안다벼, 남영벼, 남천벼(중도저항성))은 Bph1을 유전자원으로 갖고 있으며, 화청벼(중도 저항성)는 ASD7으로부터 유래된 유전자원 bph2를 갖는 것으로 보고되었다. 그리고 벼멸구에 대해 감수성을 갖는 있는 품종으로 화영벼, 낙동벼, 금호2호, 남천벼, 다산벼, 밀양23호, 용문벼, 용주벼, 중원벼, 태백벼, 풍산벼, IR71190, 수원 452호 등을 실험에 사용했다.

첨부된 서열목록 2(pBPH9F) 및 3(pBPH9R)의 pBPH9 프라이머(도 1 참조)를 이용하여 PCR을 실시할 경우 저항성품종과 감수성 품종으로부터 크기가 다른 PCR 산물이 증폭됨을 볼 수 있다. Mudgo로부터 유래된 저항성 유전자를 갖고 있는 품종들에서는 536 base 크기의 DNA 단편이, 감수성 품종들에서는 773 base 크기의 DNA 단편이 증폭되었다. 그러나 저항성 유전자 bph2의 공여 품종인 ASD7에서는 PCR 산물이 증폭되지 않았으며, 그로부터 유래된 저항성 유전자를 갖는 화청벼에서는 감수성 품종에서 볼 수 있는 단편이 관찰되었다. 또한 육성 계보를 근거로 할 때 Bph1 유전자를 갖고 있는 것으로 알려진 남영벼 또한 감수성 품종에서와 마찬가지의 PCR 산물을 볼 수 있다. 중도 저항성을 보이는 남천벼도 화청벼와 남영벼의 경우와 같았다. 따라서 이프라이머는 ASD7, 남천벼, 화청벼, 남영벼를 제외한 저항성 품종에서 감수성 품종에서와는 다른 크기의 PCR 산물을 증폭했다.

서열목록 4(pBPH21F) 및 5(pBPH21R)의 pBPH21 프라이머(도 3 참조)를 여러 품종에 적용한 결과는 pBPH9 프라이머의 경우에서와 같았다. 실험에 사용된 대부분의 저항성과 감수성 품종들로부터 각각 885 base, 734 base 크기의 PCR 단편이 증폭되어 식물의 반응성과 일치했다. 그러나 bph2를 보유하고 있는 ASD7에서는 Bph1 을 갖고 있는 저항성 품종과 같은 크기의 PCR 산물이 증폭되었고, pBPH9 프라이머를 사용한 경우에서와 마찬가지로 남영벼 그리고 중도 저항성을 보이는 화청벼와 남천벼에서는 감수성 품종들에서와 같은 PCR 산물이 증폭되었다.

서열목록 6(pBPH19F) 및 7(pBPH19R)의 pBPH19 프라이머(도 5 참조)를 각종 품종에 적용한 결과는 pBPH21과 같았다. 저항성과 감수성 품종들로부터 각각 610과 587 base 크기의 PCR 단편들이 증폭되었다. 저항성 품종에서는 모두 똑 같은 크기의 PCR 단편이 증폭된 반면 감수성 품종 중 다산벼에서는 다른 감수성 품종 경우와는 다른 조금 작은 PCR 산물이 증폭되었다.

서열목록 8(pBPH20F) 및 9(pBPH20R)의 pBPH20 프라이머(도 7 참조)에 있어서는 pBPH9, pBPH21, pBPH19 프라이머의 경우와는 달리 좀 더 다양한 크기의 PCR 산물이 저항성 품종들로부터 증폭되었다. 감수성 품종에서는 모두 똑 같은 크기(678 bases)의 PCR 산물이 증폭된 반면 저항성 품종에서는 4개 종류의 PCR 증폭 패턴을 볼 수 있었다. Mudgo를 비롯한 청청벼, 남풍벼, 밀양30호, 칠성벼와 안다벼 등으로부터는 535 base의 PCR 산물이, TKM6으로부터는 2개의 PCR 산물이, ASD7과 한강찰벼로부터는 Mudgo에서 보다 조금 큰 크기의 PCR 산물이, 영풍벼, 삼강벼와 가야벼 등에서는 Mudgo에서보다도 큰 2개의 PCR 산물이 증폭되었다. 따라서 이 프라이머는 감수성 품종에서와는 다른 크기의 PCR 산물이 저항성 품종으로부터 증폭되기 때문에 교배 육종시 조합에 따라 적용 가능하다.

열악한 품종에 있는 유용한 유전자를 우량 품종으로 도입하고자 할 때 일반적으로 교배 육종 방법을 사용하여 후대에서 벼멸구 저항성 유전자를 갖고 있으며 , 우량한 특성을 보이는 개체나 계통을 선발한다. 현재 벼멸구 저항성 품종을 개발하기 위해 사용할 수 있는 저항성 유전자원은 인디카 계열의 품종이 이용되고 있다. 우리가 주로 식용으로 쓰고 있는 품종(자포니카 계열)을 개발 육성하기 위해선 다른 품종들의 개발 방법과 마찬가지로 교배 육종 방법이 사용된다.

따라서 교배 후대에서 필수적으로 저항성 유전자를 보유하고 있는 개체나 계통을 선발하여야만 한다. 이 때 벼멸구 저항성 특이 선발 마커(pBPH9, 21, 19, 20)이 유용하게 쓰일 수 있다.

도 3, 4, 6, 8 에서는 이들 프라이머를 교배 후대 집단에 적용하여 MAS (Marker-Assisted Selection)를 실시한 결과이다. 분석집단으로 안다벼와 IR71190 간의 교배 집단 (F6 세대)과 그리고 안다벼와 수원452호 간의 교배집단 (F5 세대) 각각으로부터 32 계통씩 (각각 저항성과 감수성 특성을 보인 16 계통)을 표현형을 근거로 선발한 다음 그들의 DNA를 이용하여 4종류의 프라이머를 이용하여PCR를 실시하였다. 그 결과 선발된 모든 계통의 벼멸구 반응성에 따라 분명하게 저항성과 감수성으로 분리가 되었는데, PCR 산물의 증폭 결과와 100% 일치했다. 또한 저항성의 표현형을 보여 준 계통에서는 일부 이형의 유전자형이 섞여 있는 것까지 구별할 수 있었다.

이상에서 살펴본 바와같은 본 발명의 벼멸구 저항성 특이 프라이머를 이용하면 벼멸구 저항성 유전자 Bph1을 보유하는 품종인 Mudgo, TKM6, 청청벼, 남풍벼, 영풍벼, 밀양30호, 한강찰벼, 칠성벼, 삼강벼 남풍벼, 삼강벼, 백운찰벼, 장성벼 가야벼 등으로부터 다른 저항성 유전자형(bph2)을 갖는 저항성 품종 및 감수성 품종에서와는 다른 크기의 PCR 산물을 증폭되기 때문에 품종 내 저항성 유전자 Bph1의 유무를 쉽게 구별할 수 있게 한다. 따라서 저항성 유전자 Bph1을 다른 품종에 전이시킬 때 저항성 유전자를 갖는 개체나 계통은 쉽고 간편하게 그리고 안정되게 PCR 결과를 통해 선발될 수 있다.

도 1은 본 발명 서열목록 2 및 3의 프라이머를 벼멸구 저항성 품종과 감수성 품종들에 적용하여 유전자 증폭을 실시한 사진.

도 2는 본 발명 서열목록 2 및 3의 프라이머를 벼멸구 저항성 품종과 감수성 품종간에 교배를 통해 육성된 후대 계통들에 적용하여 유전자 증폭을 실시한 사진.

도 3은 본 발명 서열목록 4 및 5의 프라이머를 벼멸구 저항성 품종과 감수성 품종들에 적용하여 유전자 증폭을 실시한 사진.

도 4는 본 발명 서열목록 4 및 5의 프라이머를 벼멸구 저항성 품종과 감수성 품종간에 교배를 통해 육성된 후대 계통들에 적용하여 유전자 증폭을 실시한 사진.

도 5는 본 발명 서열목록 6 및 7의 프라이머를 벼멸구 저항성 품종과 감수성 품종들에 적용하여 유전자 증폭을 실시한 사진.

도 6은 본 발명 서열목록 6 및 7의 프라이머를 벼멸구 저항성 품종과 감수성 품종간에 교배를 통해 육성된 후대 계통들에 적용하여 유전자 증폭을 실시한 사진.

도 7은 본 발명 서열목록 8 및 9의 프라이머를 벼멸구 저항성 훔종과 감수성 품종들에 적용하여 유전자 증폭을 실시한 사진.

도 8은 본 발명 서열목록 8 및 9의 프라이머를 벼멸구 저항성 품종과 감수성 품종간에 교배를 통해 육성된 후대 계통들에 적용하여 유전자 증폭을 실시한 사진.

<110> Republic of Korea(Management:Rural Development Administration) <120> PRIMERS FOR SELECTING INDIVIDUALS OR LINE RESISTANT TO BROWN PLANTHOPPER <130> bphl <160> 9 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 6865 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 1 gcaagcagca aagaaacaat gacaaaaaaa aggggtgggg ggaaatggta accaaccgga 60 actgccgtta ccatccttag tgttgaaata accgggacta aagatggata tatttagtcc 120 tggattcgta gtaccggttt gcaacccggg agcaaagggg ttgcaaaccg ggactaaata 180 agggttttcc aggagttaca gaaattaaat gtatatagta tttgctatat ttactatttt 240 tgccactatg tttgtcggag tgtgtacata gatagcggcc attcgacggg accgcttcct 300 atgagttcgg ggggtgtcac acgtgaggga gcgctcgggt tcccattgag gacggagaca 360 aatgaacaaa cagtaattat attagtttaa gacattccga ggtgtaacac tctactcctg 420 ttgtatcggt gttttctctc ttgccagtga aggatcttac aaagtttatg tcagactcaa 480 agtagttagt aaccatgaca agcaagttga attggttccg ctcgcgggct attctccgga 540 aagtcaattt gctatgttct atcatttggc ttgtcaaaaa ttgaagcaaa tggccaaaga 600 gttttctacc ctgactcatc agtggtgatg gatagagcgt tccttagttc 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gctggcggcc atcgacgcgc tgtacgagga cgggtacaag aaccggccgt cgtcgtcgca 4080 gcaggaggcg gacaacctcg aaggctactt cagggaggtg ctccagaagc aggtgaagct 4140 gctgctcaag ggcgagaagg aggagttcaa ggaggagcta cgctaagtgt tcaaattcca 4200 aacgcccgag attcacgaca gtaaattact actactatat attattctac gttatagcaa 4260 atactctccg ttctaagata taagaatcta gaattggata gaacattttt agtactataa 4320 atttggacag gctgcctgtc tagatttata gctctagata tccaatccga tcctaggttt 4380 tatattttag gacagatgag tatataccag cttaataatt atgagctcaa attaatcgca 4440 gaggacaagc ttgcatggtt cagagacgag gagttcgcgc ggcaaacgct ggcagggatg 4500 aaccctctca gcatccaact tgtcagggac acggcacgtt cctcatcctg tcgatcgtta 4560 attcattgac taattgtctt tttttaatcc aaatcgatta gtaatattca atttcctcat 4620 caaataattg ctcaacacca acatgaaacg tatgtacgtg caggacttcc ctatattcag 4680 caagctggac gaggaaacct acggcccagg ggactccctc atcaccaaag agctgattga 4740 agagcagatt aatggggtca tgacagcaga ggaggtgaat taaaaggcac ataaaaaaag 4800 agaatatata tatatatata tacacacata tatatattta acttgctttt aaaagataga 4860 gaatacactg tacaggccgt ggagaagaag aagctgttca tgctggacta ccacgacgtg 4920 ctcctgccgt tcgtgcacgc ggtgcgcgag ctggacgaca ccacgctgta cgcctcgcgg 4980 acgctcttct tcctgacgga ggacggcacg ctgaggccga tcgccatcga gctgacgagg 5040 cccaagtccc ccaacacgcc gcagtggcgc caggtcttca cgccgggcac cagcgtcgcg 5100 gcgtcctggc tgtggcagct cgccaaaacg cacgtcctcg cccacgacac cggctaccac 5160 cagctcgtca gccactggta atttacgaga aattttacca tccttgagag gtactaatta 5220 aaacgtttaa aaaaaattgc aagttttcgt agagtacttg aggcaacggg agataccaag 5280 ttttacattg aaaactatga tatcttctcg agtaccgtaa aatcactctc aattaattga 5340 taattaattt catcatatgt tgcatgcacc tgcattgcta cgaatcatgt ttgggtgtta 5400 caggctgagg acgcactgct gcgtggaacc gtacgtgatc gcggcgaacc ggcggctgag 5460 ccagatgcac cccatctacc ggctgctgca cccgcacttc cgcttcacca tggagatcaa 5520 cgcccaggcg cgcgggatgc tcatcaacgc caatggaatc atcgagagcg ccttcgcgcc 5580 ggggaagcac tgcatggagc tcagctcggc ggtttacgac aagttttggc gattcgacat 5640 ggaggctctg cccgtcgatc tcatccggag gtaataacca acagctgatc gatgcatgta 5700 atttgttcct tcctatataa atataggatt gatgtatata agatggtttt ttgttggaca 5760 ttgataaagg ggcatggcga tcgaatgcga ggatggcgag ctggagctga cgatagagga 5820 ctacccgtac gccaacgacg gtctactcat ctgggactcc atcaaggagt gggtgtcaga 5880 ctacgtgaac cattactacc agttggcttc ggacatccac atggacaagg agctccaggg 5940 ttggtggaac gaggtgcgaa ccaagggcca cccggacaag gaggaagggt ggccagagct 6000 gaactgccac gggagcctcg tcgaggttct gaccaccatc atctgggtcg cgtcggggca 6060 ccatgcggcg gtgaacttcg gccagtaccc ctacgccggc tacttcccca atcgccccac 6120 catcgcccgg cggaacatgc cgacggaggg gcaggcgtgc agtcacgacg gcatgcagcc 6180 aacgttcgtt gaggatcccg tcagggtgct actagacacg ttcccatcgc agtaccagac 6240 caccctcgtc ctgccggtgc tcaacctgct atcgtcacac tcgcccggcg aggagtacat 6300 gggcacgcac gcggagtcag cgtggatggc ggacagggag gtcagggcgg cgttcgggag 6360 gttcaacgag aggatgatga gcatcgcgga gatgatcgac tgccggaaca aggatccgga 6420 gcgaaagaac cggcagggcc ccggcgtggt gccgtacgtg ctgctcaagc cgtcctacgg 6480 tgaccctaag gacatgacgt ccgtgatgga gatgggtatc cccaacagca tctcaatttg 6540 agttgtgcca atgagcttgc atatctgttt ggcgtgctca tcgtgacatt atatatgaaa 6600 taaaatggat taaaaatccg gcctcgtcaa ggaatggcta acacagcgag cctgcatctg 6660 tttggagtgc tcatcgtgcg attatgaaat aaaatgacct ggcatctgtt tcccactgtt 6720 ttcttgtaac tactgcactg tagtaagtac aggacaccgt atatacgtaa cgccctgcat 6780 tatttccttg tcggtataga tggctatcga tcagagtgta gcgtgctagt actacataaa 6840 ggtcattcct attatacaac cccta 6865 <210> 2 <211> 24 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 2 agcgctggtc gttggggttg tagt 24 <210> 3 <211> 24 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 3 attaaaagtg atcgcagccg ttcg 24 <210> 4 <211> 24 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 4 gctccgtgtg catcccctct gtag 24 <210> 5 <211> 23 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 5 gactggcttt tccttgattt ctt 23 <210> 6 <211> 23 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 6 ggggtcgccg aggtcgttgt aga 23 <210> 7 <211> 24 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 7 tggctgaagc tgcatgggag ttgg 24 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 8 ggctgcctta tccccaactc c 21 <210> 9 <211> 21 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 9 gtcggcgccg tgcaggtcgt g 21

Claims (3)

1. 6,865 base의 크기를 갖는 서열목록 1의 DNA 단편.
2. 서열목록 1의 일부나 전체를 증폭하는 프라이머군.
3. DNA 변성 단계, 프라이머 부착 단계 및 DNA 합성 단계로 이루어진 PCR 반응에 적용되어, 벼멸구 저항성 품종인 Mudgo, TKM6, 청청벼, 남풍벼, 영풍벼, 밀양30호, 한강찰벼, 칠성벼, 삼강벼, 남풍벼, 삼강벼, 백운찰벼, 장성벼, 가야벼 등과 이들과 감수성 품종 간의 교배로부터 파생된 후대 집단 내에서 저항성 개체나 계통을 선발하기 위해 사용한 서열목록 2 부터 9까지의 프라이머군.