KR20050072094A

KR20050072094A - 테모졸로마이드 함유 제어방출 시스템

Info

Publication number: KR20050072094A
Application number: KR1020057005432A
Authority: KR
Inventors: 용펭 왕; 단 페이
Original assignee: 탄진 탈시 그룹 컴퍼니 리미티드
Priority date: 2002-09-29
Filing date: 2003-09-29
Publication date: 2005-07-08
Also published as: AU2003272857A1; JP2006504698A; WO2004028534A1; ZA200502858B; US20050244494A1; PL218200B1; CA2500387A1; AU2003272857B2; BR0314838A; PL376130A1; EP1550444A1; NZ539527A; MXPA05003315A; RU2322979C2; CN1600307A; KR100979217B1; JP4879488B2; UA87813C2; EP1550444A4; US8821913B2

Abstract

본 발명은 제어 방출 시스템에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 테모졸로마이드(Temozolomide)를 함유한 제어방출 약물 수송 시스템에 관한 것이다.

Description

테모졸로마이드 함유 제어방출 시스템 {CONTROLLED RELEASES SYSTEM CONTAINING TEMOZOLOMIDE}

본 발명은 제어방출 시스템에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 테모졸로마이드를 함유한 제어방출 시스템에 관한 것이다.

테모졸로마이드(Temozolomide:TMZ)는 항암 약물의 일종으로서, 마우스 종양 연구에 있어서 넓은 범위의 생물활성의 항암 작용을 구비하고 있다. 테모졸로마이드는 임상 항암 작용 연구를 통해 악성 흑색종, 균상 식육종(mycosis fungoides) 및 진행 신경 아교종(advanced glioma)에 대하여 효과를 나타내는 것이 증명되었다. 또한, 테모졸로마이드는 마우스에 이종 이식된 뇌종양 및 폐종양의 피하 치료에 효과가 있다. 시험관 내 항종양 시험을 통해, 테모졸로마이드는, 뇌 종양, 난소암, 흑색종과, 다카바진(dacarbazine), 카르머스틴(carmustine), 시스플라틴(cisplatin), 독소루비신(doxorubicin), 5-플루오로라실(5-fluorouracil), 에토포시드(etoposide) 및 빈블라스틴(vinblastine)과 같은 종래 약물을 사용한 화학요법에 내성이 있는 종양 등 광범위한 종양에 대하여 항-종양 활성을 구비하고 있음이 증명되었다.

마우스 모델의 테모졸로마이드의 약물 동력학(Phamacokinetics)적 연구결과, 생체 내 테모졸로마이드의 흡수는 아주 빨랐으며, 반감기는 1.13h(i.p) 또는 1.29h (p.o)이었다. 테모졸로마이드 1기 임상시험에서, 테모졸로마이드는 신속하게 흡수되어, 0.7h 내에 최대 혈장 농도에 도달하였으며, 반감기가 1.8h였다. 테모졸로마이드는 조직 중 아주 양호한 분포를 나타내었으며 신장, 폐, 간을 경유하여 혈관-뇌 장벽(blood-brain barrier, BBB)을 통과할 수 있다 (참조: Brindley et al. 1986; Newland et al., 1997). 그러나, 약물 투여 후, 테모졸로마이드의 혈장내 약물농도가 너무 빨리 감소되기 때문에 유효한 혈장약물 농도를 유지하기 위해서는 반복된 약물 투여가 필요하여 환자에게 불편과 고통을 주는 문제가 있다.

약물의 제어방출에 의하면 일정한 시간 내에 체내에서 일정한 속도로 약물을 방출할 수 있다. 현재 제어 방출 시스템의 예로서는 생분해 가능한 이식형 정제(implantable tablet) 및 비-생분해성의 이식형 정제를 들 수 있으며, 양자는 모두 일부분 약물에 이용되고 있다. 그러나 테모졸로마이드 제어 방출 시스템에 관해서는 성공사례가 아직 개시된 바 없다.

도 1은 생체 내에서 테모졸로마이드 이식편의 약물 방출 곡선을 보여준 도면이다. 상기 도에서, "■" 는 3wt%의 테모졸로마이드 이식편을 나타내고, "●"는 5wt% 테모졸로마이드 이식편을 나타내며, "▲"는 10wt%의 테모졸로마이드 이식편을 나타낸다. 세로 좌표는 누계 방출량(%)을 나타내고, 가로 좌표는 시간(시)을 나타낸다.

도 2는 시간의 제곱근에 대한 테모졸로마이드 이식편의 그래프를 나타내는 도면이다. 상기 도에서, "■" 는 3wt%의 테모졸로마이드 이식편을 나타내고, "●"는 5wt% 테모졸로마이드 이식편을 나타내며, "▲"는 10wt%의 테모졸로마이드 이식편을 나타낸다. 세로 좌표는 누계 방출량(%)을 나타내고, 가로 좌표는 시간의 제곱근을 나타낸다.

따라서, 본 발명의 주된 목적은 종래 기술에서 테모졸로마이드를 반복적으로 투여함에 따르는 불편을 극복하고 지속적인 치료량을 유지할 수 있도록 테모졸로마이드 제어방출 시스템을 제공하고자 하는 것이다.

본 발명의 한 측면은 3wt% 내지 10wt%의 테모졸로마이드 및 생분해성 고분자 재료를 포함한 제어방출 시스템에 관한 것이다.

본 발명의 다른 한 측면은 테모졸로마이드 제어 방출시스템을 제조하는 방법에 관한 것이다. 상기 공정은, 3wt% 내지 10wt%의 테모졸로마이드와 생물분해 고분자재료를 혼합하는 공정을 포함한다.

본 발명에 따르면, 상기 제어방출 시스템은 테모졸로마이드의 제어방출에 적절한 다양한 제형을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 이식형 정제(implantable tablet)와 같은 이식성 제형을 선택할 수 있다.

본 발명의 한 실시예로서 테모졸로마이드를 함유한 이식성 정제는 하기 단계를 포함하는 공정에 의해 제조할 수 있다:

(a) 고분자 재료를 용매에 용해시켜 고분자 재료 용액을 형성하는 단계;

(b) 테모졸로마이드를 상기 고분자 재료 용액속에 혼합 또는 분산시켜 고분자재료 및 테모졸로마이드의 혼합물을 형성하는 단계

(c) 고분자 재료 및 테모졸로마이드의 상기 혼합물을 분무 건조시켜 미립체(microsphere)를 형성하는 단계

(d) 상기 미립체를 압축하여 이식형 정제를 형성하는 단계.

상기 (a) 단계에서 고분자 재료는 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌테레프탈레이트, 가소화된 폴리비닐클로라이드(plasticized PVC), 가교된 폴리에스테르, 폴리카보네이트, 폴리설폰, 폴리스티렌, 폴리(2-펜텐), 폴리메틸메타크릴레이트(PMMA), 폴리(1,4-페닐렌), 폴리테트라플루오로에틸렌 및 폴리(안하이드라이드)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, 고분자 재료는, 3,4-비스(p-카르복시페녹시)프로판(CPP) 및 세바신산(sebacic acid: SA)이 20:80, 50:50, 80:20, 70:30 또는 30:70의 비, 바람직하게는 20:80의 비로 축합된 폴리(안하이드라이드)이다. 고분자 재료의 용해에 이용되는 용매는 고분자 재료만 용해시키고, 테모졸로마이드는 용해시키지 않으며 테모졸로마이드와 반응하지 않는 물질이다. 고분자 재료의 적절한 용매는, 예를 들면 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸아세테이트 또는 아세톤이며, 바람직하게는, 디클로로메탄이다.

상기 (c) 단계에서, 분무 건조시, 제어 방출 물질인 테모졸로마이드는 기타 부형제 또는 완충액 등과 같은 별도의 안정제와 혼합할 수 있다. 바람직하게는, 상기 담체는 비독성이고 비면역성인 재료로서, 거부 반응을 일으키지 않는 재료이다.이식편(implant)을 위해 적절한 재료는 모든 종류의 폴리(안하이드라이드)류를 포함된다.

본 발명에 따른 다른 하나의 실시예로서 테모졸로마이드를 함유한 이식형 정제는 하기를 포함하는 방법에 의해 제조된다:

A. 고분자 재료를 용매 내에 용해시켜 고분자 재료의 용액을 형성하는 단계;

B. 상기 고분자 재료 용액에 테모졸로마이드 수용액을 첨가한 후, 수득된 용액을 초음파로 에멀젼화시켜 제1 에멀젼을 수득하는 단계;

C. 상기 제1 에멀젼을 폴리비닐알코올(PVA)와 혼합하고, 용매를 휘발시켜 단단한 미립자를 수득하는 단계;

D. 수세에 의해 PVA와 잔류 용매를 제거하고 미립체를 수득하는 단계; 및,

E. 상기 미립체를 타정하여 이식형 정제를 수득하는 단계.

상기 A 단계에서 고분자 재료는 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌테레프탈레이트, 가소화된 폴리비닐클로라이드, 가교된 폴리에스테르, 폴리카보네이트, 폴리설폰, 폴리스티렌, 폴리(2-펜텐), 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리(1,4-페닐렌), 폴리테트라플루오로에틸렌 및 폴리(안하이드라이드)로 이루어진 군으로부터 선택되며, 바람직하게는 폴리(안하이드라이드)가 선택된다. 상기 폴리안하이드라이드는, CPP 및 SA로부터 축합에 의해 형성되며, CPP와 SA의 비는 20:80, 50:50, 80:20, 70:30 또는 30:70이며, 바람직하게는 20:80이다. 고분자 재료의 용해에 이용되는 용매는 고분자 재료만 용해시키고 테모졸로마이드를 용해시키지 않으며 테모졸로마이드와 반응하지 않는 물질이다. 적절한 고분자 재료의 용매는 예를 들면 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸아세테이트 또는 아세톤이고, 바람직하게는, 디클로로메탄이다. CPP 와 SA로 형성된 고분자는 디클로로메탄 내에 1 내지 5%, 바람직하게는 2% 로 존재한다.

상기 B 단계에서, 상기 유기 용매에 대한 테모졸로마이드 수용액의 체적비는 1:100 내지 1:400, 바람직하게는 1:100이다.

본 발명에서 이용되는 생분해성 고분자 재료, 예를 들어, 폴리(안하이드라이드)는 공지된 것, 시판되는 것, 혹은 공지방법으로 제조할 수 있는 것이다.

전술한 공정으로 수득한 테모졸로마이드 제어방출 시스템은 시트, 미립체, 실린더, 플레이크(flake) 등의 형태일 수 있다.

본 발명에 따른 테모졸로마이드 이식편 정제는, 질병 치료를 위한 치료적 유효량의 약물을 전달하기 위해, 외과수술을 통하여 인체 또는 기타 동물의 신체 내에 삽입하거나, 예를 들어, 피하, 두개골내, 질내, 근육내, 피부내(sub-skin)의 비 전신성 투여를 경유해 삽입될 수 있다. 이식편의 투여량은 상기 질병의 경중도와 환자의 몸무게, 연령, 성별 등에 따라 정할 수 있다.

본 발명에 따른 테모졸로마이드 제어방출 시스템은 필요한 치료학적 유효량의 테모졸로마이드를 일정하게 제어 방출할 수 있다. 따라서, 상기 이식편은 1시간 내지 4주의 장시간 동안 생체 내에서 제어된 방식으로 방출되어, 약물의 치료 효과를 가져올 수 있다. 본 발명이 제어방출 시스템을 통하여 테모졸로마이드의 치료효과를 달성하는 것은 아주 큰 의의를 갖고 있으며, 테모졸로마이드의 생물학적 작용을 충분히 발휘한다.

본 발명에 따른 테모졸로마이드 이식편은 다양한 캐리어를 이용하여 제조할 수 있다. 이식편은 이식 후 약 30일이 지난 뒤 분해되며, 고분자(안하이드라이드)재료는 이식 후 약 6 내지 8주 경과 뒤 분해된다.

이하, 실시예는 단지 본 발명을 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

실시예 1: 3% 테모졸로마이드를 함유한 이식편

3,4-비스(p-카르복시페녹시)프로판 (CPP) 및 세바신산 (SA)을 20:80의 비로 혼합하여 97g의 생분해성 폴리안하이드라이드를 합성하였다. 수득한 상기 폴리안하이드라이드에 테모졸로마이드 3g을 첨가하였다. 양자를 염화메틸렌 내에서 실온에서 혼합하고, 분무하여 함량이 3wt%인 테모졸로마이드 서방형(sustained release) 미립체를 형성하였다. 잔류 염화 메틸렌은 진공 증발시켰다.

분무-건조 조건은, 입구 온도는 70℃이고, 출구온도는 65℃이며, 분무압은 15p.s.i 로 하였다.

소망하는 이식편의 직경과 테모졸로마이드 사용량에 따라, 적당한 양의 상기 미립체를 몰드에서 8000p.s.i 압력 조건하에 5초간 타정하여 3wt% 테모졸로마이드를 함유하고, 직경 1.4cm 및 두께 1.0mm의 이식편 정제를 제조하였다. 상기 이식편을 질소 분위기에서 알루미늄 적층 플라스틱 내로 밀봉하고 2.2*10Gy 감마선을 이용하여 살균하였다.

실시예 2

3,4-비스(p-카르복시페녹시)프로판 (CPP) 및 세바신산 (SA)을 80:20의 비로 혼합하여 99g의 생분해성 폴리안하이드라이드를 합성하였다. 수득한 상기 폴리안하이드라이드에 테모졸로마이드 1g을 첨가하였다. 양자를 클로로포름 내에서 실온에서 혼합하고, 분무하여 1wt%의 테모졸로마이드를 함유한 서방형 미립체를 형성하였다. 잔류 염화메틸렌은 진공 증발시켰다.

분무건조 조건은, 입구 온도는 75℃이고, 출구온도는 70℃이며, 분무압은 15p.s.i 로 하였다.

소망하는 이식편의 직경과 테모졸로마이드 사용량에 따라, 적당한 양의 상기 미립체를 몰드에서 8000p.s.i 압력 조건하에 5초간 타정하여 1wt% 테모졸로마이드를 함유하고, 직경 1.4cm 및 두께 1.0mm의 이식편 정제를 제조하였다. 상기 이식편을 질소 분위기에서 알루미늄 적층 플라스틱내로 밀봉하고 2.2*10Gy 감마선을 이용하여 살균하였다.

실시예 3

3,4-비스(p-카르복시페녹시)프로판 (CPP) 및 세바신산 (SA)을 30:70의 비로 혼합하여 90g의 생분해성 폴리안하이드라이드를 합성하였다. 수득한 상기 폴리안하이드라이드에 테모졸로마이드 10g을 첨가하였다. 양자를 에틸 아세테이트 내에서 실온에서 혼합하고, 분무하여 10wt%의 테모졸로마이드를 함유한 서방형 미립체를 형성하였다. 잔류 에틸 아세테이트는 진공 증발시켰다.

분무건조 조건은, 입구온도는 70℃이고, 출구온도는 65℃이며, 분무압은 15p.s.i 로 하였다.

소망하는 이식편의 직경과 테모졸로마이드 사용량에 따라, 적당한 양의 상기 미립체를 몰드에서 8000p.s.i 압력 조건하에 5초간 타정하여 10wt% 테모졸로마이드를 함유하고, 직경은 1.4cm이고 두께는 1.0mm인 이식편 정제를 제조하였다. 상기 이식편을 질소 분위기에서 알루미늄 적층 플라스틱내에 밀봉하고 2.2*10Gy 감마선을 이용하여 살균하였다.

실시예 4

3,4-비스(p-카르복시페녹시)프로판 (CPP) 및 세바신산 (SA)을 70:30의 비로 혼합하여 95g의 생분해성 폴리안하이드라이드를 합성하였다. 수득한 상기 폴리안하이드라이드에 테모졸로마이드 5g을 첨가하였다. 양자를 염화 메틸렌 내에서 실온에서 혼합하고, 분무하여 5wt%의 테모졸로마이드를 함유한 서방형 미립체를 형성하였다. 잔류 염화메틸렌은 진공 건조하였다.

분무건조 조건은, 입구 온도는 75℃이고, 출구온도는 70℃이며, 분무압은 15 p.s.i 로 하였다.

소망하는 이식편의 직경과 테모졸로마이드 사용량에 따라, 적당한 양의 상기 미립체를 몰드에서 8000p.s.i 압력 조건하에 5초간 타정하여 5wt% 테모졸로마이드를 함유하고, 직경은 1.4cm이고 두께는 1.0mm인 이식편 정제를 제조하였다. 상기 이식편을 질소 분위기에서 알루미늄 적층 플라스틱내에 밀봉하고 2.2*10Gy 감마선을 이용하여 살균하였다.

실시예 5

3,4-비스(p-카르복시페녹시)프로판 (CPP) 및 세바신산 (SA)을 50:50의 비로 혼합하여 95g의 생분해성 폴리안하이드라이드를 합성하였다. 수득한 상기 폴리안하이드라이드에 테모졸로마이드 5g을 첨가하였다. 양자를 염화 메틸렌 내에서 실온에서 혼합하고, 분무하여 1wt%의 테모졸로마이드를 함유한 서방형 미립체를 형성하였다. 잔류 염화메틸렌은 진공 증발시켰다.

분무건조 조건은, 입구 온도는 65℃이고, 출구온도는 60℃이며, 분무압은 15p.s.i 로 하였다.

소망하는 이식편의 직경과 테모졸로마이드 사용량에 따라, 적당한 양의 상기 미립체를 몰드에서 8000p.s.i 압력 조건하에 5초간 타정하여 5wt% 테모졸로마이드를 함유하는, 직경 1.4cm 및 두께 1.0mm의 이식편 정제를 제조하였다. 상기 이식편정제를 질소 분위기에서 알루미늄 적층 플라스틱내에 밀봉하고 2.2*10Gy 감마선을 이용하여 살균하였다.

실시예 6

3,4-비스(p-카르복시페녹시)프로판 (CPP) 및 세바신산 (SA)의 20:80 비의 그 공중합체를 염화 메틸렌 내에 실온에서 용해시켜 2% (w/v)의 용액을 제조하고, 상기에 적당량의 테모졸로마이드 수용액을 첨가하였다. 상기를 잘 혼합하고, 상기 혼합물을 초음파 에멀젼화하여 w/o 제1 에멀젼을 형성하였다. 상기 제1 에멀젼을 2% 폴리 비닐 알코올(PVA) 수용액 내에서 고속 혼합하여 에멀젼을 형성하고, 상기 에멀젼을 0.1% PVA 수용액 속에 부어 넣고, 실온에서 4시간 교반하였다. 염화 메틸렌을 실온에서 증발시키자, 단단한 미립체가 PVA 수용액 속에서 나타났다. di-증류수로 상기 미립체를 3회 세정하여 잔여 염화메틸렌과 PVA를 제거하고, 냉동 건조를 거쳐 테모졸로마이드 함량이 4wt%인 미립체를 수득하였다. 상기 미립체는 직경이 약 20㎛인 유동성 분말이다.

소망하는 이식편의 직경과 테모졸로마이드 사용량에 따라, 적당한 양의 상기 미립체를 몰드에서 8000p.s.i 압력 조건하에 5초간 타정하여 4wt% 테모졸로마이드를 함유하고, 직경 1.4cm 및 두께 1.0mm인 이식편 정제를 제조하였다. 상기 이식편정제를 질소 분위기에서 알루미늄 적층 플라스틱 내에 밀봉하고 2.2*10Gy 감마선을 이용하여 살균하였다.

실시예 7

3,4-비스(p-카르복시페녹시)프로판 (CPP) 및 세바신산 (SA)의 20:80 비의 그 공중합체를 에틸 아세테이트 내에 실온에서 용해시켜 1% (w/v)의 용액을 제조하고, 상기에 적당량의 테모졸로마이드 수용액을 첨가하였다. 상기를 잘 혼합하고, 상기 혼합물을 초음파 에멀젼화하여 w/o 제1 에멀젼을 형성하였다. 상기 제1 에멀젼을 2% 폴리 비닐 알코올(PVA) 수용액 내에서 고속 혼합하여 에멀젼을 형성하고, 상기 에멀젼을 0.1% PVA 수용액 속에 부어 넣고, 실온에서 4시간 교반하였다. 용매인 에틸 아세테이트를 실온에서 증발시키자, 단단한 미립체가 PVA 수용액 속에서 나타났다. di-증류수로 상기 미립체를 3회 세정하여 잔여 에틸 아세테이트와 PVA를 제거하고, 냉동 건조하여 테모졸로마이드 함량이 6wt%인 미립체를 수득하였다. 상기 미립체는 직경이 약 20㎛인 유동성 분말이다.

소망하는 이식편의 직경과 테모졸로마이드 사용량에 따라, 적당한 양의 상기 미립체를 몰드에서 8000p.s.i 압력 조건하에 5초간 타정하여 6 wt% 테모졸로마이드를 함유하고, 직경 1.4cm 및 두께 1.0mm인 이식편 정제를 제조하였다. 상기 이식편정제를 질소 분위기에서 알루미늄 적층 플라스틱 내에 밀봉하고 2.2*10Gy 감마선을 이용하여 살균하였다.

실시예 8

3,4-비스(p-카르복시페녹시)프로판 (CPP) 및 세바신산 (SA)의 50:50 비의 공중합체를 클로로포름 내에 실온에서 용해시켜 5% (w/v)의 용액을 제조하고, 상기에 적당량의 테모졸로마이드 수용액을 첨가하였다. 상기를 잘 혼합하고, 상기 혼합물을 초음파 에멀젼화하여 w/o 제1 에멀젼을 형성하였다. 상기 제1 에멀젼을 2% 폴리 비닐 알코올(PVA) 수용액 내에서 고속 혼합하여 에멀젼을 형성하고, 상기 에멀젼을 0.1% PVA 수용액 속에 부어 넣고, 실온에서 4시간 교반하였다. 용매인 클로로포름을 실온에서 증발시키자, 단단한 미립체가 PVA 수용액 속에서 나타났다. di-증류수로 상기 미립체를 3회 세정하여 잔여 클로로포름과 PVA를 제거하고, 냉동 건조하여 테모졸로마이드 함량이 6wt%인 미립체를 수득하였다. 상기 미립체는 직경이 약 20㎛인 유동성 분말이다.

시험예: 동물 체내에서 이식형 정제로부터 테모졸로마이드 방출 동력학

본 시험에서 동물 체내에서의 테모졸로마이드 이식편의 동적 변화 규칙과 특성을 측정하였다. 이는, 약물을 임상에서 합리하게 이용하는데 기준을 제공한다.

시험 재료

1. 기기 및 시제

Agilent 1100 고기능 액체 크로마토그래프(HPLC) ODS 역상 컬럼(Supelcolc-C18 컬럼, 250mm×4.6mm, 5um) 및, DAD 검측기를 사용하였다. (실시예 1과 동일한 방법으로 제조된) 테모졸로마이드 표준품과 테모졸로마이드 이식편은 타이진 타슬리 그룹으로부터 제공받았다. 메틸알코올, 아세트산, 에틸 아세테이트는 모두 크로마토그래피급 순도를 가진 것이다.

2. 동물

몸무게 200-250g의 수컷 위스터 래트(Wister rat)를 탠찐 의과대학 시험동물센터에서 제공받았다.

시험 방법:

1. 래트 대뇌 속에서의 테모졸로마이드 이식편의 용식(erosion)과 방출

래트 70마리를 임의로 4조로 구분하여, 3개의 조에서는 매조 21 마리씩이고, 제4의 조에서는 7마리로 하였다. 각각의 래트는 수술 전에 마취시키고, 털을 깍고, 에탄올 및 요오드 팅크로 소독하였다. 중선(midline)을 따라 2cm 절개부를 만들고, 이어서, 후방 봉합(coronal suture)으로부터 5-6mm떨어진 부분과 편측성 시상봉합(sagittal suture)으로부터 3mm 떨어진 부분에서 치과용 드릴(bur)로 구멍을 내었다. 정밀 외과용 수술칼을 이용하여 피질상 한 곳에 약 4mm 정도 깊이의 구멍을 내었다. 앞의 3조에는 각각 3%, 5% 및 10% 테모졸로마이드가 함유된 이식편 정제를 이식하고, 제4조는 블랭크 폴리머 정제를 이식한다. 완전히 지혈한 다음, 골왁스(bone wax)로 구멍을 밀봉하고 생리염수로 상처를 씻은 다음 두피상의 상처를 수술집게로 막아준다.

이식 수술후 제2, 6, 12시간과 제1, 3, 6, 10일에 각각의 조로부터 각각 3마리를 죽이고(제4의 조에서는 한마리를 죽임) 뇌속에서 이식편 정제를 다시 꺼내어 드라이아이스 (dry ice)로 냉동 건조시킨다. 고기능 액체크라마토그래프를 이용하여 이식편내의 테모졸로마이드 함량을 측정한다.

2. 테모졸로마이드의 추출

예정된 시점에서 함량이 다른 세가지 테모졸로마이드 이식편 및 공백 이식편을 마우스 뇌속으로부터 회수하고 냉동건조처리를 거친 후 잔여 이식편을 2ml 이동상 (mobile phase)에 넣고 초음파로 5min 충분히 용해시키고 4000rpm에서 5min 원심운동을 시킨 다음 10㎕의 상청액을 취하여 바로 측정하였다.

3. 테모졸로마이드 함량의 측정

ODS 역상 컬럼 (Supelcolc-C18 250mm×4.6mm, 5um)을 구비한 Agilent 1100 HPLC 및 0.1mg/ml의 최소 검출한계를 가진 DAD 검측기를 사용하였다. 크로마토그래피 조건은 다음과 같다: 이동상으로서, 메틸알코올:0.5% 초산 (10:90), 유속 1ml/min, 측정파장 330nm. 테모졸로마이드 이식편은 에틸 아세테이트로 추출하였다.

4. 테모졸로마이드의 생체내 방출량 표시:

누계 방출량(%)= [(이식편 정제 내의 테모졸로마이드 평균 농도 - 회수된 이식편 내의 테모졸로마이드 평균농도)÷이식편 정제 내 테모졸로마이드 평균 농도]×100

5. 표준곡선의 제작

5, 10, 30, 100, 200, 300, 400㎕ 양의 100㎍/ml인 TMZ 표준용액을 각각 원심관에 배분하고, 질소기류 하에서 건조하였다. 블랭크 정제를 넣고 TMZ 정제 추출방법과 동일하게 처리하여 농도가 각각 0.25, 0.5, 1.5, 2.5, 3.5, 5.0, 10.0, 15.0, 20.0㎍/ml인 TMZ 표준용액 시리즈를 수득하였다. 10㎕의 상청액을 HPLC에 투입하여 봉우리 면적을 측정하였다. 농도(C)와 봉우리 면적(A)의 관계로 작도하고 선형 회귀 방정식을 연산하였다.

시험결과

1. 래트 뇌속에서의 테모졸로마이드 이식편의 용식과 방출은 도 1에 나타내었다.

래트 뇌 속에서의 테모졸로마이드 평균 방출 백분율 누계 (X±S, n=3)

2. HPLC 측정결과, 표준곡선은 0.4 내지 20㎍/ml 범위내에서 양호한 선형 관계를 나타낸다: Y=79.4810+14182.0760x, r=0.9999

분석

상기 시험 결과로부터 테모졸로마이드가 이식편에서 완만히 방출됨을 알 수 있다. 시간의 제곱근에 대한 약물 방출량 관계도로부터, 테모졸로마이드 이식편을 이식한 초기에는 분명한 선형 관계가 존재하는 것이 명백하며, 이는 테모졸로마이드 이식편이 마우스 체내에서 분해될 때 유도기와 용식기의 구별되는 두 단계를 가지는 것을 나타낸다. 이식 후 약 1시간 정도의 시간 내에 유리상태의 테모졸로마이드가 방출되기 시작한다. 이식편이 마우스 뇌속에서 테모졸로마이드를 지속적으로 방출하는 시간은 10일을 초과한다.

Claims

3 내지 10wt%의 테모졸로마이드 및 생분해성 고분자 재료를 포함하는 것을 특징으로 하는 제어 방출 시스템.
제1항에 있어서,

상기 제어 방출 시스템은 이식형 정제(implantable tablet)인 것을 특징으로 하는 제어 방출 시스템.
제1항 또는 제2항에 있어서,

상기 생분해성 고분자 재료는 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌테레프탈레이트, 가소화된 폴리비닐클로라이드 (plasticized PVC), 가교된 폴리에스테르, 폴리카아보네이트, 폴리설폰, 폴리스티렌, 폴리(2-펜텐), 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리(1,4-페닐렌), 폴리테트라플루오로에틸렌 및 폴리(안하이드라이드)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제어 방출 시스템.
제3항에 있어서,

상기 생분해성 고분자 재료는 폴리(안하이드라이드)인 것을 특징으로 하는 제어 방출 시스템.
제4항에 있어서,

상기 폴리(안하이드라이드)는 3,4-비스(p-카르복시페녹시 프로판) (CPP) 및 세바신산(sebacic acid: SA)로부터 축합된 것임을 특징으로 하는 제어 방출 시스템.
제5항에 있어서,

상기 3,4-비스(p-카르복시페녹시 프로판)(CPP) 및 세바신산(SA)은 20 대 80의 비인 것을 특징으로 하는 제어 방출 시스템.
하기 단계를 포함하는 테모졸로마이드 제어 방출 정제의 제조방법:

(a) 고분자 재료를 용매에 용해시켜 고분자 재료 용액을 형성하는 단계;

(b) 테모졸로마이드를 상기 고분자 재료 용액속에 혼합 또는 분산시켜 고분자재료 및 테모졸로마이드의 혼합물을 형성하는 단계

(c) 고분자 재료 및 테모졸로마이드의 상기 혼합물을 분무-건조시켜 미립체(microsphere)를 형성하는 단계

(d) 상기 미립체를 압축하여 이식형 정제를 형성하는 단계.
제7항에 있어서,

상기 고분자 재료는 3,4-비스(p-카르복시페녹시 프로판)(CPP) 및 세바신산(SA)으로부터 축합된 것임을 특징으로 하는 방법.
제7항 또는 제8항에 있어서,

상기 3,4-비스(p-카르복시페녹시 프로판)(CPP) 및 세바신산(SA)의 비는 20 대 80 인 것을 특징으로 하는 방법.
제7항에 있어서,

단계 (a)에서 상기 용매는 염화 메틸렌(methylene chloride)인 것을 특징으로 하는 방법.
하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 테모졸로마이드 제어방출 정제의 제조방법:

(a) 고분자 재료를 용매 내에 용해시켜 고분자 재료의 용액을 형성하는 단계;

(b) 상기 고분자 재료 용액에 테모졸로마이드를 첨가하고 수득한 용액을 초음파-에멀젼화시켜 제1 에멀젼을 수득하는 단계;

(c) 상기 제1 에멀젼을 폴리비닐알코올(PVA)과 혼합하고, 용매를 증발시켜 단단한 미립자를 수득하는 단계;

(d) 수세에 의해 PVA와 잔류 용매를 제거하여 미립체를 수득하는 단계; 및,

(e) 상기 미립체를 타정하여 이식형 정제를 수득하는 단계.
제11항에 있어서,

상기 고분자 재료는 3,4-비스(p-카르복시페녹시 프로판) (CPP) 및 세바신산 (SA)으로부터 축합된 것임을 특징으로 하는 방법.
제11항 또는 제12항에 있어서,

상기 3,4-비스(p-카르복시페녹시 프로판)(CPP) 및 세바신산(SA)의 비는 20 대 80 인 것을 특징으로 하는 방법.
제11항에 있어서,

단계 (a)의 상기 용매는 염화 메틸렌인 것을 특징으로 하는 방법.