KR20040091015A - 면역사이토카인을 포함하는 동결건조화된 제제 - Google Patents

면역사이토카인을 포함하는 동결건조화된 제제 Download PDF

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KR20040091015A
KR20040091015A KR10-2004-7012214A KR20047012214A KR20040091015A KR 20040091015 A KR20040091015 A KR 20040091015A KR 20047012214 A KR20047012214 A KR 20047012214A KR 20040091015 A KR20040091015 A KR 20040091015A
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immunocytokine
lyophilized pharmaceutical
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KR10-2004-7012214A
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쪼벨한스-페터
안트스벤올리버
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메르크 파텐트 게엠베하
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Abstract

본 발명은 면역사이토카인을 포함하는 동결건조화된 약제학적 제제에 관한 것이다. 상기 제제는 상승된 온도에서조차도 증가된 저장 수명을 가지며, 재구성 후에 의약으로서 비경구적으로 투여될 수 있다.

Description

면역사이토카인을 포함하는 동결건조화된 제제{LYOPHILISED PREPARATION COMPRISING IMMUNOCYTOKINES}
면역사이토카인은 항체 및 사이토카인으로 이루어지는 접합체(conjugate)로서, 항체의 2개의 면역글로불린 중쇄의 카르복실 말단이 사이토카인의 N-말단에 각각 연결되어 있다.
항체는 항체에 의한 면역화의 결과로서 혈액, 림프 및 신체 분비물 내에서 발생하는 보호 작용을 하는 특정한 당단백질로서, 항원-항체 반응을 수행한다. 항체는 면역글로불린(Ig)에 속하며, 5 개의 종류로 나누어질 수 있다: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM으로, 그 중 일부는 다시 하위 종류(이소타입), 예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2로 세부 분류될 수 있다. 면역사이토카인은 모든 IgG 항체를 포함한다. 그들은 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 및 다중 특이적 항체 예컨대 이중 특이적 항체까지 포함한다.
사이토카인은 세포에 의하여 내분비적, 또는 측분비적으로, 즉 혈액 또는 주변 조직으로 분비되고, 특이적 수용체에 결합한 후, 다른 세포의 기능(통상, 분열및 성장 뿐만 아니라 예컨대 이동)에 영향을 미치는 폴리펩티드이다. 일부의 경우, 사이토카인 생산 세포는 스스로 이 조절의 대상이다(이하 자분비라고 함). 사이토카인은 특히 면역 시스템의 세포간의 복합적인 상호작용을 조절한다.
사이토카인의 예로서는 림포카인, 모노카인 및 통상의 폴리펩티드 호르몬을 들 수 있다. 사이토카인은 성장 호르몬, 예컨대 인간 성장 호르몬, 인간 N-메티오닐 성장 호르몬, 소 성장 호르몬, 파라토르몬, 티록신, 인슐린, 프로인슐린, 레락신, 프로레락신, 당단백질 호르몬 예컨대 여포 자극 호르몬(FSH), 티로트로핀(TSH), 및 루트로핀(LH), 간 성장인자, 섬유아세포 성장인자, 프로락틴, 태반 락토겐, 마우스 고나도트로핀 관련 펩티드, 인히빈, 액티빈, 혈관 내피세포 성장인자(VEGF), 인테그린, 트롬보포이에틴(TPO), 신경 성장인자 예컨대 NGFβ, 혈소판 성장인자, 전이 성장 인자(TGF) 예컨대 TGFα및 TGFβ, 에리트로포이에틴(EPO), 인터페론 예컨대 IFNα, IFNβ, 및 IFNγ, 헤마토포이에틴 성장 인자 예컨대 M-CSF, GM-CSF, 및 G-CSF, 인터류킨(IL) 예컨대 IL-1, IL-1a, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, 및 종양 괴사인자(TNF) 예컨대 TNFα, 또는 TNFβ를 포함한다.
상기 항체 및 사이토카인과 마찬가지로, 면역사이토카인은 펩티드 활성 성분이며, 따라서 소화관으로 흡수될 수 없다. 따라서, 치료적 응용을 위하여 그들은 통상 용액 형태로 비경구 투여되어야 한다.
펩티드 활성 성분을 포함하는 용액 제제에서의 하나의 문제점은 그들이 응집되고, 단백질 다중체를 형성하는 경향이 있다는 것이다. 그러한 이 문제는 관련되는 특정 활성 성분의 물리화학적 특성에 따라서 정도가 변화된다. 친수성 특성을 갖는 단백질은 수용액 중에서 응집체를 형성하는 경향이 비교적 낮은 반면, 소수성 특성을 갖는 단백질은 응집하는 경향이 증가한다.
항체는 서로 샌드위치-유사 방식으로 정렬된, 2 개의 반-수평적으로 폴딩된 쉬트(보존된 도메인)로 이루어진다. 소수성 및 친수성 아미노산은 폴딩된 쉬트 상에서 번갈아 나타나며, 상기에서 각 경우 두개의 폴딩된 쉬트의 소수성 면측 사슬은 서로를 향하므로 샌드위치 구조의 안쪽을 가리키며, 각 경우 친수성 아미노산은 바깥쪽을 가리킨다(J. Klein, Immunologie[Immunology], Verlag Chemie, Weinheim, 1991). 바깥쪽을 향하는 친수성 아미노산은 수용액 상의 항체의 용해화로 나타나므로, 다른 항체 간의 상호작용을 방해한다. 따라서 항체는 단지 표면 소수성 및 응집 경향이 낮다.
상기 특성들 때문에, 항체의 용액은 비교적 안정된 방식으로 간단히 제조된다. 시판 제품의 하나의 예는 Rituxan으로서, 모노클로날 항체 리툭시마브, 무기 완충액 및 폴리소르베이트를 포함하는 수용성 제제이다. 동결 건조에 의하여 물을 제거하면 이미 비교적 안정되어 있는 항체 수용액의 안정성을 더욱더 증대시킬 수 있다. 투여 전에, 수득된 동결건조물은 물을 첨가함으로서 그 후 수용액으로 재구성된다. 상기 타입의 제품의 한 예는 Remicade이며, 이는 모노클로날 항체인 인플릭시마브 외에, 무기 완충액 및 폴리소르베이트, 추가적으로 동결보호제 또는 구조 형성제로서의 당을 포함한다.
WO 98/22136 A2는 항체, 당 또는 아미노 당, 아미노산 및 계면활성제를 포함하는 동결건조화 제제를 개시한다. 상기 제제가 일반적으로 항체에 대하여 특허 청구되기는 하지만, 단지 B 형 간염 바이러스(AK HBV)에 대한 모노클로날 항체를 포함하는 제제들만이 그리고 각 경우 L-셀렉신에 대한 항체(항-L-셀렉신)와 항-L 신경 성장인자 수용체(항-L-NGFR)에 대한 항체를 포함하는 제제가 작업예로서 개시되어 있다.
사이토카인은 항체의 경우와 같이 수용성을 양호하게 할 수 있는 보존된 도메인을 포함하지 않는다. 따라서, 그들은 수용액 중에서 응집 경향이 심해진다. 이것은 특히 구조의 통상적 특성으로서 4 개의 α-나선 다발(소위, 4개의 α-나선 다발 사이토카인)을 포함하고 이 구조적 특성에 기인하여 뚜렷한 소수성을 갖는 사이토카인에 적용된다. 소수성을 수반하는 소수성 상호작용은 또한 종종 응집의 원인/메카니즘이다(Hora-MS 및 Chen-B, (1999), Biopharm. Ind. Perspect., 217-248). 통상의 구조적 특성으로서 4 개의 α-나선 다발을 포함하는 사이토카인은 다수의 인터류킨 특히 IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL-11, 및 IL-12, 인터페론 특히 IFNβ 및 IFNγ, 헤마토포이에틴 성장인자, 예컨대 M-CSF, GM-CSF, G-CSF, 에리트로포이에틴(EPO) 및 줄기 세포 인자(SCF)이다. 문헌에서 소수성이라고 명시적으로 기술된 사이토카인은, 예를 들어 IL-2 (Robb-RJ et al. (1983) PNAS 80:5990-4; US 5,580,856), IL-4 (Sharma-S et al. (1987) 235:1489-92), IL-5 (Takatsu-K et al. (1985) JI 134:382-9), GSF (US 5,104,65)이다.
사이토카인, 특히 4 개의 α-나선 다발 사이토카인은 그들의 안정화를 위하여 구체적인 수단을 요구하는 경향이 강하다. 예를 들어, 활성 성분 인터류킨-2를 포함하는 동결건조물인 Proleukin제품은, 보조제로서의 당, 무기 완충액 및 음이온성 계면활성제(소듐 라우릴설페이트)를 포함한다. 그러나 음이온성 계면활성제는 특히 의약이 비경구 투여되어야 한다면, 독물학적 관점에서 극히 의심스럽다. 사이토카인 함유 제제의 안정화에 특히 어려움을 보이는 추가적 예에는, 인터페론β을 포함하는 시판 제품(Avonex, Betaferon, Rebif)이 있다. 이들 모든 제품은 알부민에 의하여 안정화되었고, 마찬가지로 독물학적 관점에서 특히 원치않는 면역 반응에 대하여 극히 치명적인 것으로 분류되어야 할 것이다.
사이토카인과 항체와의 상기 차이에 기인하여, 하나의 항체와 두 개의 사이토카인으로 구성되는 면역사이토카인은, 또한 항체와 그들의 물리화학적 성질이 매우 상이하다. 특히, 4 개의 α-나선 다발을 갖는 사이토카인을 포함하는 면역사이토카인은, 관련된 현저한 소수성에 기인하여 수용액 내에서 응집을 형성하는 경향이 강하고, 안정화되기 어렵다.
본 발명은 면역사이토카인을 포함하는 안정된 동결건조화된 약제학적 제제 및 동결건조화된 약제학적 제제의 제조법에 관한 것이다.
도 1은 40 ℃/75 % 상대 대기 습도에서, 실시예 3에 의한 본 발명의 제제(배치 8431) 및 상응하는 비교 제제의 안정성을 나타낸다.
도 2는 본 발명에 의한 제제의 안정성에 대한 Tween 80의 영향을 나타낸다.
본 발명의 목적은, 면역사이토카인의 안정화된 제제를 제공하는 것이다. 상기 제제는 독물학적으로 허용될 수 없는 임의의 보조제를 포함해서는 안되며, 증대된 스트레스, 예컨대 온도 및 대기 습도의 증가의 환경하에서 장기간 동안 안정해야 하며, 수성 용매로 재구성함으로서 고함량의 활성 성분을 갖는 즉시 투여 용액(ready-to-administer solution)을 얻을 수 있어야 한다.
놀랍게도, 면역사이토카인 외에도 당 또는 아미노 당, 아미노산 및 계면활성제를 포함하는 완충 수용액을 동결건조함으로서, 이들 요구 사항을 만족시키는 제제를 제공할 수 있다. 따라서, 본 발명은 면역사이토카인, 당 또는 아미노 당, 아미노산 및 계면활성제를 포함하는 안정된 동결건조화 제제에 관한 것이다.
제제는 바람직하게는, 면역사이토카인을 특히 포함하며, 상기에서 사이토카인 성분으로서 사이토카인이, 통상의 구조적 특성으로서 4 개의 α-나선 다발을 갖는 사이토카인, 특히 인터류킨, 바람직하게는 IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL-11 및/또는 IL-12, 인터페론, 바람직하게는 IFNβ 및/또는 IFNγ, 및/또는 헤마토포이에틴 성장 인자, 바람직하게는 M-CSF, GM-CSF, G-CSF, EPO 또는 SCF로 이루어진 군에서 선택된다. 조성물은 특히 바람직하게는 인터류킨-2 (IL-2)를 함유하는 면역사이토카인을 포함한다.
본 발명에 의한 제제는 생리학적으로 잘 허용되며, 쉽게 제조될 수 있으며, 정확히 분배될 수 있으며, 저장 기간 동안 및 심지어 반복된 동결과 해동 공정 후의 분해 산물 및 응집물을 검정하는데 안정하다. 냉장 온도(2 - 8 ℃), 및 실온(23 - 27 ℃), 60 %의 상대 대기 습도(r.h.)에서, 3 개월 이상 2 년 이하의 기간동안 저장에 안정하다. 놀랍게도, 본 발명에 의한 제제는 또한 온도 상승, 및 높은 수준의 대기 습도, 예컨대 40 ℃의 온도, 및 75 % r.h.에 대하여 상기 기간 동안 저장에도 안정하다.
동결건조화 제제는 수성 용매 예컨대 주입 목적으로의 물 또는 등장 수용액의 첨가에 의하여 단순한 방식으로 재구성되어, 즉시 투여 무입자 용액을 얻을 수 있다. 상기 재구성된 용액은 약 5 일 동안 안정하지만, 특히 바람직하게는 24시간 내에 투여된다.
본 발명에 의한 제제의 수성 용매에 의한 재구성은, 유리하게는 pH가 5 내지 8, 바람직하게는 5.6 내지 7.4, 특히 바람직하게는 6 내지 7이고, 삼투압이 250 내지 350 mOsmol/kg인 면역 사이토카인 포함 용액의 제제를 만들 수 있다. 재구성된 제제는 따라서 실질적으로 고통없이 직접 정맥내, 동맥내, 및 또한 피하 투여될 수 있다. 그 외에, 제제는 또한 주입 용액, 예컨대 글루코오스 용액, 등장 식염수 용액 또는 링거 용액 등에 첨가될 수도 있으며, 상기에서 이는 또한 활성 성분을 추가로 포함할 수 있으므로 비교적 다량의 활성 성분이 투여될 수 있도록 한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 의하면, 동결건조화된 약제학적 제제는 필수적으로 면역사이토카인, 당 또는 아미노 당, 아미노산, 완충액 및 계면활성제로 이루어진다.
본 발명에 의한 제제는, 임상적 필요에 따라 그들의 농도를 맞출 수 있는 면역사이토카인 용액의 제제를 가능하게 한다. 바람직하게는 약 0.1 내지 25 mg/ml, 특히 바람직하게는 1 내지 10 mg/ml, 더욱 바람직하게는 1 내지 5 mg/ml 농도의 면역사이토카인 용액을 얻을 수 있다.
본 발명에 의한 제제에 사용되는 당은 단당류, 이당류, 또는 삼당류 일 수 있다. 이들 당은 단독으로 또는 당 알콜(예컨대 만니톨)과의 혼합물로서 사용될 수 있다. 상기 단당류의 예로서는 글루코오스, 만노오스, 갈락토오스, 프룩토오스, 및 소르보오스가 있고, 상기 이당류의 예로서는 수크로오스, 락토오스, 말토오스, 또는 트레할로오스가 있고, 상기 삼당류의 예로서는 라피노오스가 있다. 바람직하게는 수크로오스, 락토오스, 말토오스, 트레할로오스, 특히 바람직하게는 수크로오스, 및 말토오스가 있다.
또한 아미노 당, 즉 히드록실기 대신에 1차, 2차, 또는 3차 아미노기 또는 아실화 아미노기(-NH-CO-R-)를 포함하는 단당류가 존재하는 것이 가능하다. 본 명세서에서는 본 발명의 목적을 위하여, 글루코사민, N-메틸 글루코사민, 갈락토사민, 및 뉴라민 산이 특히 바람직하다.
존재하는 당/아미노 당이, 소정 부피의 용매로 재구성 된 후에 생성되는 용액 중에서 약 1 내지 200 mg/ml 농도로 존재하는 양으로 본 발명에 의한 제제에 존재한다. 당은 바람직하게는 15 내지 30 mg/ml 농도로 재구성 용액 중에 존재한다.
본 발명에 의하여 사용되는 적합한 아미노산은 염기성, 산성 또는 중성의 아미노산, 예컨대 특히 아르기닌, 히스티딘, 오르니틴, 리신, 글리신이다. 아미노산은 바람직하게는 그들의 무기염의 형태(유리하게는 염산 염, 즉 아미노산 염산화물의 형태)로 사용된다. 유리 아미노산이 사용되는 경우에, 바람직한 pH는 생리학적으로 허용되는 완충액 기질, 예컨대 시트르산 및 인산, 황산, 아세트산, 포르믹산 등의 유기산 또는 무기산, 또는 그들의 염 등의 첨가에 의하여 맞춰진다. 바람직하게는 시트레이트, 및 포스페이트이며, 이 경우 특히 안정된 동결건조물이 수득된다.
바람직한 아미노산은 아르기닌, 리신 및 오르니틴이다. 그 외에, 산성의아미노산 예컨대 글루탐산, 및 아스파르트산, 또는 중성의 아미노산, 예컨대 이소류이신, 류이신, 및 알라닌, 또는 방향족의 아미노산 예컨대 페닐알라닌, 티로신 또는 트립토판을 또한 사용할 수 있다. 본 발명에 의한 제제에서의 아미노산 함량은 1 내지 200 mmol/ℓ, 바람직하게는 40 내지 100 mmol/ℓ, 특히 바람직하게는 40 내지 80 mmol/ℓ이다 (각 경우 재구성 용액을 기초로 함).
사용될 수 있는 계면활성제는 약제학적 제제에서 통상 사용되는 모든 계면활성제, 바람직하게는 비이온성 계면활성제, 특히 폴리소르베이트 및 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 중합체이다. 특히 바람직하게는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 특히 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노라우레이트 및 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노올레에이트 이다. 본 발명에 의하면, 상기 제제는 0.001 내지 1 중량%, 바람직하게는 0.5 내지 0.05 중량%, 특히 바람직하게는 0.01 내지 0.15 중량%를 포함한다 (각 경우 재구성 용액을 기초로 함).
본 발명에 의한 제제가 완충액을 포함한다면, 이들은 원칙적으로 생리학적으로 허용되며 원하는 pH를 조절하는데 적합한 임의의 기질일 수 있다. 완충 기질의 양은, 예컨대 동결건조화 제제를 주입 목적으로 물로 재구성한 후에 생성되는 수용액이 5 mmol/ℓ 내지 50 mmol/ℓ, 바람직하게는 10 내지 20 mmol/ℓ의 완충액 농도를 갖도록 하는 방식으로 선택된다. 바람직한 완충액은 시트레이트 완충액 또는 포스페이트 완충액이다. 적합한 포스페이트 완충액은, 인산의 모노- 및/또는 디소듐염 및 포타슘 염, 예컨대 디소듐 히드로겐포스페이트 또는 포타슘 디히드로겐포스페이트, 뿐만 아니라 소듐염과 포타슘 염의 혼합물, 예컨대 디소듐 히드로겐포스페이트와 포타슘 디히드로겐포스페이트의 혼합물 용액이다.
재구성 용액이 면역사이토카인의 삼투압 특성 및 안정화에 사용되는 보조제에 의하여 이미 등장 상태가 아니라면, 추가적으로 등장화제, 바람직하게는 생리학적으로 허용되는 염, 예컨대 소듐 클로라이드, 또는 포타슘 클로라이드, 또는 생리학적으로 허용되는 폴리올 또는 당, 예컨대 글루코오스, 글리세롤 또는 만니톨 등이 등장 상태를 확립하는데 필요한 양으로 존재할 수 있다.
그 외에, 본 발명에 의한 동결건조물이 생리학적으로 허용되는 보조제, 예컨대 아스코르브산 또는 글루타티온 등의 항산화제, 페놀, m-크레놀, 메틸- 또는 프로필파라벤, 클로로부타놀, 티오메르살 또는 벤즈알코늄클로라이드 등의 방부제, 또는 추가적으로 안정화제, 구조 형성제 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 예컨대 PEG 3000, 3350, 4000 또는 6000 등 용해화제, 또는 히드록시프로필-β-시클로덱스트린, 술포부틸에틸-β-시클로덱스트린 또는 γ-시클로덱스트린 등의 시클로덱스트린, 또는 덱스트란을 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명에 의한 제제는 활성 성분으로서 면역사이토카인 및 당 또는 아미노당, 아미노산 및 계면활성제, 원한다면 추가로 약제학적 보조제를 포함하는 수성 제제를 제조하고, 이어서 그 용액을 동결건조화함으로서 제조될 수 있다.
수성 제제는 상기 보조제를 면역사이토카인을 포함하는 용액에 첨가함으로서 제조될 수 있다. 이를 위하여, 소정 농도로 상기 추가적 보조제를 포함하는 소정 부피의 스톡 용액을, 유리하게는 소정 농도의 면역사이토카인을 갖는 그들 제제로부터 수득된 용액에 첨가하고, 그 혼합물은 원한다면 미리 계산된 농도로 물로서희석한다. 다른 방법으로는, 보조제도 또한 면역사이토카인을 포함하는 개시 용액에 고체로서 첨가될 수 있다. 면역사이토카인이 고체, 예컨대 동결건조물의 형태라면, 본 발명에 의한 제제는 먼저 면역사이토카인을 하나 이상의 추가적 보조제를 포함하는 물 또는 수용액에 각각 이를 용해시키고, 이어서 추가적 보조제를 포함하는, 각 경우에 요구되는 양의 스톡 용액을 첨가함으로서 제조될 수 있으며, 상기에서 추가적 보조제는 고체 및/또는 물이다. 면역사이토카인은 또한 유리하게는 모든 추가적 보조제를 포함하는 용액 중에 직접 용해될 수도 있다. 본 발명에 의한 제제에 존재하는 하나 이상의 보조제는, 유리하게는 특정한 면역사이토카인의 전체 제조 공정 동안 또는 그 마지막에 이미 첨가되었을 수 있다. 이것은 바람직하게는 면역사이토카인을 하나의, 하나 초과의, 또는 모든 추가적 보조제를 포함하는 수용액 중에 직접 용해하거나, 또는 적당한 방법, 예컨대 평행류 여과(tangential flow filtration)에 의하여 재완충함으로서, 그의 제조 후에 실시되는 정제의 마지막 단계에서 실시될 수 있다. 상기 제제를 제조하기 위하여, 그 후 각각의 추가적 성분을 각 경우에 단지 더 소량만 첨가하거나 및/또는 전혀 첨가할 필요가 없다. 특히 바람직하게는 각 성분을 그 제조 후에 실시되는 정제의 마지막 단계에서 모든 추가적 보조제를 포함하는 수용액 중에 직접 용해하고, 그 용액을 직접 동결건조한다.
각 면역사이토카인 및 보조제를 포함하는 용액은 5 내지 8의 pH로 맞춰지고, 멸균 여과되고 동결건조된다.
수득되는 동결건조화 제제는 수성 용매를 첨가하여 재구성함으로서 직접, 특히 비경구적으로 투여될 수 있는 수성 제제를 얻을 수 있다. 따라서 본 발명은 또한 본 발명에 의한 동결건조물을 수성 용매로 재구성함으로서 수득될 수 있는, 면역사이토카인의 약제학적 수성 제제에 관한 것이다.
재구성된 약제학적 수성 제제는 바람직하게는 pH 5 내지 8, 더욱 바람직하게는 pH 5.6 내지 7.4, 특히 바람직하게는 pH 6.0 내지 7.0을 갖는다.
하기 실시예는 본 발명을 설명하며, 한정되지 않는다.
실시예 1 (배치 8020)
하기의 것들을 포함하는 수용액으로부터의 동결건조물:
0.7 mg/ml의 EMD 273066(huKS-IL2)
5 mmol/ℓ의 시트르산
100 mmol/ℓ의 아르기닌 HCl
1.5 중량%의 수크로오스
0.01 중량%의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트(Tween 80)
상기 제조는 소정 농도의 각 보조제를 포함하는 소정 부피의 수용액들을 혼합함으로서 실시하였다. 하기의 용액을 사용하였다:
하기의 것들을 포함하는 용액 A (활성 성분 용액):
5 mg/ml의 EMD 273066
5 mmol/ℓ의 시트르산
100 mmol/ℓ의 아르기닌 HCl
0.01 중량%의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트(Tween 80)
NaOH로 pH 7.0으로 적정.
용액 B (보조제 용액):
1.744 중량%의 수크로오스
5 mmol/ℓ의 시트르산
100 mmol/ℓ의 아르기닌 HCl
0.01 중량%의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트(Tween 80)
NaOH로 pH 7.0으로 적정.
본 발명에 의한 제제를 제조하기 위하여, 100 ml의 용액 A 및 614 ml의 용액 B를 서로 혼합하였다.
제조된 용액을 포장하기 전에 멸균 여과하였다. 6 ml 바이알에 각각 4 ml의 용액을 채웠다. 그 후 상기 바이알을 스탑퍼(stopper)로 예비 밀봉하고,동결건조하였다. 동결 건조 후에, 바이알들을 밀봉하고, 크림프하였다(crimp).
실시예 2 (배치 8021)
하기의 것들을 포함하는 수용액으로부터의 동결건조물:
0.7 mg/ml의 EMD 273066 (huKS-IL2)
5 mmol/ℓ의 시트르산
100 mmol/ℓ의 아르기닌 HCl
1.5 중량%의 말토오스
0.01 중량%의 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노올레에이트(Tween 80)
상기 제조는 소정 농도로 각 보조제를 포함하는 소정 부피의 수용액들을 혼합함으로서 실시하였다. 하기의 용액을 사용하였다:
하기의 것들을 포함하는 용액 A(활성-성분 용액):
5 mg/ml의 EMD 273066
5 mmol/ℓ의 시트르산
100 mmol/ℓ의 아르기닌 HCl
0.01 중량%의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트(Tween 80)
NaOH로 pH 7.0으로 적정.
용액 B (보조제 용액):
1.744 중량%의 말토오스
5 mmol/ℓ의 시트르산
100 mmol/ℓ의 아르기닌 HCl
0.01 중량%의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트(Tween 80)
NaOH로 pH 7.0으로 적정.
본 발명에 의한 제제를 제조하기 위하여, 100 ml의 용액 A 및 614 ml의 용액 B를 서로 혼합하였다.
제조된 용액을 포장하기 전에 멸균 여과하였다. 6 ml 바이알에 각각 4 ml의 용액을 채웠다. 상기 바이알을 이어서 스탑퍼로 예비 밀봉하고 동결건조화하였다. 동결 건조 후에, 상기 바이알들을 밀봉하고, 크림프하였다.
실시예 3 (배치 8431)
하기의 것들을 포함하는 수용액으로부터의 동결건조물:
1 mg/ml의 EMD 273066(huKS-IL2)
5 mmol/ℓ의 시트르산
100 mmol/ℓ의 아르기닌 HCl
1.5 중량%의 수크로오스
0.01 중량%의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트(Tween 80)
상기 제조는 소정 농도로 각 보조제를 포함하는 소정 부피의 용액들을 혼합함으로서 실시하였다. 하기의 용액이 사용되었다:
하기의 것들을 포함하는 용액 A(활성 성분 용액):
1.45 mg/ml의 EMD 273066
1.5 중량%의 수크로오스
5 mmol/ℓ의 시트르산
NaOH로 pH 7.0으로 적정
용액 B (보조제):
1.5 중량%의 수크로오스
5 mmol/ℓ의 시트르산
287 mmol/ℓ의 아르기닌 HCl
0.0283 중량%의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트(Tween 80)
NaOH로 pH 7.0으로 적정.
본 발명에 의한 제제를 제조하기 위하여, 46.9 ml의 용액 A 및 25.1 ml의 용액 B를 서로 혼합하였다.
제조된 용액을 포장하기 전에 멸균 여과하였다. 6 ml 바이알에 2 ml의 용액을 각각 채웠다. 다음으로 상기 바이알을 스탑퍼로 예비 밀봉하고 동결건조하였다. 동결 건조 후에, 바이알들을 밀봉하고 크림프하였다.
실시예 4 (배치 8591)
하기의 것들을 포함하는 수용액으로부터의 동결건조물:
4 mg/ml의 EMD 273066 (huKS-IL2)
12.5 mmol/ℓ의 시트르산
80 mmol/ℓ의 아르기닌 HCl
1.8 중량%의 수크로오스
0.008 중량%의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트(Tween 80)
제조는 소정 농도로 각 보조제를 포함하는 소정 부피의 수용액을 혼합함으로서 실시되었다. 하기의 용액을 사용하였다:
하기의 것들을 포함하는 용액 A (활성 성분 용액):
5 mg/ml의 EMD 273066
5 mmol/ℓ의 시트르산
100 mmol/ℓ의 아르기닌 HCl
0.01 중량%의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트(Tween 80)
NaOH로 pH 6.0으로 적정
용액 B (보조제 용액):
8.7 중량%의 수크로오스
41 mmol/ℓ의 시트르산
NaOH로 pH 6.0으로 적정
본 발명에 의한 제제를 제조하기 위하여, 4 ml의 용액 A 및 15.5 ml의 용액 B를 서로 혼합하였다.
제조된 용액을 포장하기 전에 멸균 여과하였다. 2 ml 바이알에 1 ml의 용액을 각각 채웠다. 다음으로 상기 바이알을 스탑퍼로 예비 밀봉하고 동결건조하였다. 동결건조 후에, 바이알들을 밀봉하고 크림프하였다.
실시예 5 (수크로오스 대신에 만니톨을 사용한 비교 제제 1, 배치 8008)
하기의 것들을 포함하는 수용액으로부터의 동결건조물:
0.7 mg/ml의 EMD 273066 (huKS-IL2)
5 mmol/ℓ의 시트르산
100 mmol/ℓ의 아르기닌 HCl
4 중량%의 만니톨
0.01 중량%의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트(Tween 80)
NaOH로 pH 7.0으로 적정
상기 조성물을 갖는 활성 성분 용액을 직접 동결건조함으로서 제조를 실시하였다.
제조된 용액을 포장하기 전에 멸균 필터를 사용하여 멸균하였다. 6 ml 바이알에 각각 4 ml의 용액을 채웠다. 다음으로 상기 바이알들을 스탑퍼로 예비 밀봉하고, 동결건조하였다. 동결건조 후에, 바이알들을 밀봉하고, 크림프하였다.
실시예 6 (비교 제제 2 (배치 8434)는 아르기닌이 첨가되지 않은 배치 8431의 조성물에 해당)
하기의 것들을 포함하는 수용액으로부터의 동결건조물:
1 mg/ml의 EMD 273066 (huKS-IL2)
5 mmol/ℓ의 시트르산
1 중량%의 수크로오스
0.01 중량%의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트(Tween 80)
제조는 소정 농도로 각 보조제를 포함하는 소정 부피의 수용액들을 혼합함으로서 실시되었다. 하기의 용액을 사용하였다:
하기의 것들을 포함하는 용액 A (활성 성분 용액):
1.45 mg/ml의 EMD 273066
1.5 중량%의 수크로오스
5 mmol/ℓ의 시트르산
NaOH로 pH 7.0으로 적정
용액 B (보조제 용액):
1.5 중량%의 수크로오스
5 mmol/ℓ의 시트르산
0.0283 중량%의 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트(Tween 80)
NaOH로 pH 7.0으로 적정
본 발명에 의한 제제를 제조하기 위하여, 46.9 ml의 용액 A 및 25.1 ml의 용액 B를 서로 혼합하였다.
제조된 용액을 포장하기 전에 멸균 여과하였다. 6 ml 바이알에 각각 2 ml의 용액을 채웠다. 다음으로 상기 바이알을 스탑퍼로 예비 밀봉하여 동결건조하였다. 동결건조 후에, 바이알들을 밀봉하고, 크림프하였다.
실시예 7 (비교 제제 3(배치 8430)은 Tween 80이 첨가되지 않은 배치 8431의 조성물에 해당)
하기의 것들을 포함하는 수용액으로부터의 동결건조물:
1 mg/ml의 EMD 273066 (huKS-IL2)
5 mmol/ℓ의 시트르산
100 mmol의 아르기닌 HCl
1.5 중량%의 수크로오스
제조는 소정 농도의 각 보조제를 포함하는 소정 부피의 수용액들을 혼합함으로서 실시되었다. 하기의 용액을 사용하였다:
하기의 것들을 포함하는 용액 A (활성 성분 용액):
1.45 mg/ml의 EMD 273066
1.5 중량%의 수크로오스
5 mmol/ℓ의 시트르산
NaOH로 pH 7.0으로 적정
용액 B (보조제 용액):
1.5 중량%의 수크로오스
5 mmol/ℓ의 시트르산
287 mmol의 아르기닌 HCl
NaOH로 pH 7.0으로 적정
본 발명에 의한 제제를 제조하기 위하여, 46.9 ml의 용액 A 및 25.1 ml의 용액 B를 서로 혼합하였다.
제조된 용액을 포장하기 전에 멸균 여과하였다. 6 ml 바이알에 각각 2 ml의 용액을 채웠다. 다음으로 상기 바이알을 스탑퍼로 예비 밀봉하여 동결건조하였다. 동결건조 후에, 바이알들을 밀봉하고, 크림프하였다.
실시예 8 (비교 제제 4(배치 8429)은 Tween 80 및 아르기닌이 첨가되지 않은 배치 8431의 조성물에 해당)
하기의 것들을 포함하는 수용액으로부터의 동결건조물:
1 mg/ml의 EMD 273066 (huKS-IL2)
5 mmol/ℓ의 시트르산
1.5 중량%의 수크로오스
제조는 소정 농도로 각 보조제를 포함하는 소정 부피의 용액들을 혼합함으로서 실시되었다. 하기의 용액을 사용하였다:
하기의 것들을 포함하는 용액 A (활성 성분 용액):
1.45 mg/ml의 EMD 273066
1.5 중량%의 수크로오스
5 mmol/ℓ의 시트르산
NaOH로 pH 7.0으로 적정
용액 B (보조제 용액):
1.5 중량%의 수크로오스
5 mmol/ℓ의 시트르산
NaOH로 pH 7.0으로 적정
본 발명에 의한 제제를 제조하기 위하여, 46.9 ml의 용액 A 및 25.1 ml의 용액 B를 서로 혼합하였다.
제조된 용액을 포장하기 전에 멸균 여과하였다. 6 ml 바이알에 각각 2ml의 용액을 채웠다. 다음으로 상기 바이알을 스탑퍼로 예비 밀봉하여 동결건조하였다. 동결건조 후에, 바이알들을 밀봉하고, 크림프하였다.
제제의 안정성 조사
본 발명에 의한 제제의 안정성을 안정성 연구에서 시험해보았다. 이 목적으로, 제조된 동결건조물을 특정 시간 동안 다양한 온도에서 저장하고, 적합한 분석법을 사용하여 조사하였다. 75 %의 상대 대기 습도(r.h.) 및 40 ℃의 기후 조건을 스트레스 조건으로 선택하여, 각종 제제에서 안정성의 차이를 신속하게 알아낼 수 있다. 응집물의 형성 및 분해 산물의 형성에서 볼 때, 면역사이토카인에서 원칙적으로 불안정성이 발생할 가능성은 명백하다. 분해 산물 및 용해 응집물이 바람직하게는 크기 배제 크로마토그래피 (HPLC-SEC)에 의하여 결정되는 반면, 시각적 관찰 및 탁도 측정은 시각적 응집물의 탐지를 가능하게 하는 역할을 한다. 마찬가지로 제제의 평가에 사용되는 ELISA 시험은, 무결성 및 수용체에 결합 능력을 시험하는 역할을 한다. 이는 파장 280 nm에서의 UV 광측정기와 더불어, 추가적으로 함량을 측정하는 역할을 한다.
분석 시험 방법:
외관
제조된 제제를 냉광원을 통하여 입자 및 가능한 혼탁도의 발생에 대하여 시각적으로 조사하였다.
단백질 농도: A 280nm
생성된 단백질 용액의 파장 280 nm에서의 흡광도를 사용하여, 제조된 제제의 농도를 결정하였다. 아미노산 정량 분석에 의하여 활성 성분 huKS-IL2(EMD 273066)에 대한 흡광상수를 1.41로 측정하였다. 실질적 측정을 위하여, 단백질용액을 시험 용액의 흡광도가 0.1 내지 1.0 흡광 단위(0.5 mg/ml의 단백질 농도에 해당)가 될 때까지 3 번 희석하였다. 활성 성분 함유 시험 용액의 흡광도를 상응하는 활성 성분 비함유의 참고 용액과 비교하여 측정하였다.
순도: 크기 배제 크로마토그래피, SEC-HPLC
크기 배제 크로마토그래피 (SEC)는 제조되는 제제의 순도 및 단량체/응집물의 비율을 결정할 수 있는 분석법이다. 시험 용액의 구성 성분을 특이적 다공성 HPLC 칼럼을 통하여 그들의 분자 크기에 기초하여 분리하였다. 비교적 큰 분자가 배제 부피와 함께 용출되는 반면에, 비교적 작은 분자는 정지상(stationary phase)의 세공을 다양한 정도로 투과하므로 다소 오래 잔류한다. 따라서, 비교적 작은 분자 예컨대 huKS-IL2의 분해 산물은, huKS-IL2의 단량체 및 특히 가장 먼저 칼럼으로부터 용출되는 huKS-IL2 응집물보다 더 늦은 잔류 시간에 나타난다.
활성 성분 분자의 농도 및 무결성(integrity): KSA-ELISA
이 분석법 (ELISA, 효소 결합 면역흡착 검정법)에서, 마이크로역가 플레이트를 huKS-IL2에 대한 특이적 항체(EPCAM 또는 KSA 항체)로 코팅하였다. 측정된 시험 용액에서의 huKS-IL2 분자는 그들의 항체 성분을 통하여 항원에 결합되고, 이에 의하여 마이크로역가 플레이트에 결합된다. 바이오틴화 항-IL2 항혈청의 첨가 후에, 항-IL2 항체는 결합된 huKS-IL2 분자의 IL2 부분과 반응한다. 과잉의 항-IL2 분자를 마이크로역가 플레이트를 세정함으로서 제거한다. 첨가된 스트렙타비딘 페록시다제 접합물이 바이오틴에 의하여 결합되고, 추후의 단계에서 첨가된 류코체(leuko form)의 테트라메틸벤지딘(TMB) 염료를 산화시켜서 파란색 염료를 생성시킨다. 산화 반응은 소정 시간 후에 인산의 첨가에 의하여 종결된다. 용액에서 노란색의 발색이 생기며, 이는 파장 450 nm에서 정량할 수 있다. 본 명세서에서 단백질 시험 용액의 농도는 이 파장에서 측정되는 흡광도에 비례한다.
결과
표 1 및 2(배치 8020 및 8021)에서의 결과는 제조된 제제의 품질 및 안정성을 확실히 하였다. 75 %의 상대 대기 습도(r.h.) 및 40 ℃의 기후 조건을 스트레스 환경으로 선택하여, 다양한 제제에서 안정성의 차이를 신속하게 알아내었다. 놀랍게도, 상기 제제는 심지어 상승된 저장 온도 및 상승된 상대 대기 습도(40 ℃/75 % r.h.)에서도 6개월을 초과하는 기간 동안 안정하였다. 상응하는 비교 제제 1(표 3, 배치 8008, 실시예 5)은, 이당류 대신에 당 알콜 만니톨이 구조형성제로 사용되는데, 상응하는 스트레스 환경 하에서 4 주 후에는 이미 응집되었다. 실온(25 ℃/60 % r.h.)에서 26 주간 저장 후, 마찬가지로 가시적인 응집물이 상응하는 기후 패턴에서 많이 보인다. 비교 제제 1은 따라서 본 발명에 의한 제제와는 반대로 냉각 하에서만 저장할 수 있다.
실시예 제제 4(배치 8591)은 본 발명에 의한 탁월한 안정성을 갖는 제제의 추가적 예이며, 또한 상기 제제는 증가된 단백질 농도에 대해서도 적용될 수 있다는 것을 보여준다(표 4를 참고). 상기 제제는 14 주 동안 지속하여, 40 ℃(75 % r.h.)의 온도에서 저장되었다. 추가적인 일련의 연구에서, 본 발명에 의한 제제 중의 모든 보조제가 안정화를 위하여 실제로 필요한지 시험하였다. 본 명세서에서의 실험 배치 8431이 본 발명에 의한 제제의 모든 내용물을 포함하는 반면, 비교 제제는 각각의 성분이 결핍되었다:
- 실시예 3에 의한 제제(배치 8431): 모든 구성 요소가 존재함
- 비교 제제 2(실시예 6, 배치 8434): 아르기닌의 첨가가 없음
- 비교 제제 3(실시예 7, 배치 8430): Tween 80의 첨가가 없음
- 비교 제제 4(실시예 8, 배치 8429): Tween 80 및 아르기닌의 첨가가 없음
도 1에 나타난 결과는, 아미노산의 첨가가 본 발명에 의한 제제의 안정화에 절대적으로 필요하다는 것을 확실하게 한다. 상기 도면에 의하면, Tween 80의 첨가가 필수적인 것 같지는 않으나, 이것이 전적으로 진실인 것은 아니다. Tween 80은 활성 성분 용액의 제조 동안 단백질 정제시 일찍 첨가되어, 특히 가시적인 응집물의 형성을 방지할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 Tween 80의 농도는 마이셀 임계 농도(Tween 80에 대한 CMC가 0.001 %임)를 초과한다. 일련의 실험의 경우, 아르기닌과 Tween 모두를 소위 평형류 여과법에 의하여 제거하려고시도하였다. 이 경우 완충액 교환은 50 kD 막을 통하여 투석여과에 의하여 실시되었다. 그러나, Tween 80 마이셀은 일부의 경우, 막 배제 한계를 넘어서며, 따라서 완전히 제거되지 않는다.
본 발명에 의한 제제에 Tween 80을 첨가하는 것은, 추가적 연구에서 확인된 바와 같이, 동결건조물의 재용해 및 재구성 후에 수득된 용액의 안정성을 위하여 절대적으로 필요하다. Tween 80을 포함하는 EMD 273066(huKS-IL2) 활성 성분 용액으로부터 시작하여, 본 명세서에서 보조제 Tween 80은 단백질 A 칼럼에 의하여 친화성 크로마토그라피에 의하여 분리 제거하였다. 수득된 Tween 80 불포함 용액에 Tween 80을 점점 증가되는 양으로 첨가하였다. 수득된 제제에 대하여, 21 일의 기간 동안 25 ℃의 온도에서 2 ml 바이알 내에서, 실험용 진탕기를 사용하여 스트레스를 가하였다. 스트레스를 받은 제제는 시각적으로 매일 체크되어, 소정 시간에 그들의 단백질 함량에 대하여 광측정기로 분석하였다. 이 연구의 결과를 도 2에 나타내었다. Tween 80이 첨가되지 않은 제제의 경우, 단지 하루 후에 약한 탁도가 관찰되었고, 시간이 경과함에 따라서 점점 눈으로 관찰가능하게 되었다. 도면에 나타나듯이, 21일 기간 후에는, 함량에서 큰 감소를 또한 보였다.
실시예 1에 의한 제제 8020의 안정성
실시예 1
저장 시간(주) 단백질 측정 HPLC-SEC KSA-ELISA 4.0 ml의2차 증류수에 용해한 후동결건조물의외관 광도측정기에 의한 탁도A550
[주] [mg/ml] [%] [mg/ml] 용해
시작 용액 0.798 96.83 0.870 - 0.0036
제조 후의동결건조물 0.849 96.68 0.857 약한 유백광을 내는맑은 용액 0.0033
-20 ℃에서의 냉동 저장
4 - 96.72 - 무색의맑은 용액 0.0019
8 - 96.89 - - -
13 - 97.02 - 무색의맑은 용액 -
26 0.808 97.38 0.685 무색의맑은 용액 0.0021
2 내지 8 ℃에서의 냉장 저장
4 - 96.70 무색의맑은 용액 0.0015
8 - 97.01 - -
13 - 97.01 무색의맑은 용액 -
26 0.806 97.25 0.735 무색의맑은 용액 0.0011
25 ℃/60 % r.h.에서의 저장
4 - 96.66 - 무색의맑은 용액 0.0011
8 - 97.06 0.757 - -
13 - 96.93 - 무색의맑은 용액 -
26 0.809 97.23 0.720 무색의맑은 용액 0.0017
40 ℃/75 % r.h.에서의 저장
4 - 96.62 - 무색의맑은 용액 0.0013
8 - 97.00 0.827 - -
13 - 96.99 - 무색의맑은 용액 -
26 0.816 97.19 0.775 무색의맑은 용액 0.0007
실시예 2에 의한 제제 8021의 안정성
실시예 2
저장 시간(주) 단백질 측정 HPLC-SEC KSA-ELISA 4.0 ml의2차 증류수에 용해한 후동결건조물의 외관 광도측정기에 의한 탁도A550
[주] [mg/ml] [%] [mg/ml] 용해
시작 용액 0.810 96.87 0.865 - 0.0042
제조 후의 동결건조화물 0.868 96.70 0.817 맑은 용액 0.0034
-20 ℃에서의 냉동 저장
4 - 97.12 - 무색의맑은 용액 0.0013
8 - 97.19 - - -
13 - 97.11 - 무색의맑은 용액 -
26 - - - -
2 - 8 ℃에서의 냉장 저장
4 - 97.27 무색의맑은 용액 0.0018
8 - 97.07 - -
13 - 97.07 무색의맑은 용액 -
26 - - - -
25 ℃/60 % r.h.에서의 저장
4 - 97.27 - 무색의맑은 용액 0.0015
8 - 97.14 0.753 - -
13 - 96.96 - 무색의맑은 용액 -
26 - - - - -
40 ℃/75 % r.h.에서의 저장
4 - 97.17 - 무색의맑은 용액 0.0013
8 - 97.21 0.820 - -
13 - 96.91 - 무색의맑은 용액 -
26 -
비교 제제 1의 안정성(실시예 5에 의한 배치 8008)
배치: 008008
저장 시간(주) 단백질 측정 HPLC-SEC KSA-ELISA 4.0 ml의2차 증류수에 용해한 후동결건조물의 외관 광도측정기에 의한 탁도A550
[주] [mg/ml] [%] [mg/ml] 용해
제조 후의 동결건조화물 0.763 94.79 0.667 맑은 용액 0.0033
-20 ℃에서의 냉동 저장
4 - - - - -
8 - - - - -
21 - 96.63 - 무색의맑은 용액 0.0035
26 0.766 96.16 - 무색의맑은 용액 0.0040
2 - 8 ℃에서의 냉장 저장
4 - - - 무색의맑은 용액 -
8 - - - - -
21 - 96.42 무색의맑은 용액 0.0037
26 0.806 95.74 - 무색의맑은 용액 0.0043
25 ℃/60 % r.h.에서의 저장
4 - - - 무색의맑은 용액 -
8 - - 무색의맑은 용액 -
21 - 91.34 - 약한 유백광을 내는 무색의 용액 0.0064
26 - 81.33 - 약간 탁한우유빛 용액 0.0209
40 ℃/75 % r.h.에서의 저장
4 - - - 탁한 용액 -
8 - - - 탁한 용액 -
13 - - - 탁한 용액 -
26 - - - 탁한 용액 -
실시예 4에 의한 제제(배치 8591)의 안정성
실시예 4
저장 시간(주) 단백질 측정 HPLC-SECEMD 273066 KSA-ELISA 4.0 ml의2차 증류수에용해한 후동결건조물의 외관 광도측정기에 의한탁도A550
[주] [mg/ml] [%] [mg/ml] 용해
제조 후의 동결건조화물 0.849 96.14 - 무색의맑은 용액 -
40 ℃/75 % r.h.에서의 저장
14 - 94.42 4.13 무색의맑은 용액 -
본 발명에 의한 제제는 생리학적으로 잘 허용되며, 쉽게 제조될 수 있고, 명확히 분배될 수 있으며, 저장 기간 동안 및 심지어 반복된 동결 및 해동 공정 후의 분해 산물 및 응집물을 검정하는데 안정하다.

Claims (16)

  1. 면역사이토카인, 당 또는 아미노 당, 아미노산, 및 계면활성제를 포함하는 면역사이토카인의 동결건조화된 약제학적 제제.
  2. 제 1 항에 있어서, 존재하는 면역사이토카인이 통상의 구조적 특성으로서 4 개의 α-나선 다발을 갖는 사이토카인으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 사이토카인을, 사이토카인 성분으로서 포함하는 면역사이토카인인 것을 특징으로 하는 동결건조화된 약제학적 제제.
  3. 제 2 항에 있어서, 상기에서 면역사이토카인이 사이토카인 성분으로서, 인터류킨, 인터페론 및/또는 헤마토포이에틴 성장 인자를 포함하는 것을 특징으로 하는 동결건조화된 약제학적 제제.
  4. 제 3 항에 있어서, 면역사이토카인이 사이토카인 성분으로서 인터류킨-2(IL-2)를 포함하는 것을 특징으로 하는 동결건조화된 약제학적 제제.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 필수적으로 면역사이토카인, 당 또는 아미노 당, 아미노산, 완충액, 및 계면활성제로 이루어지는 것을 특징으로 하는 동결건조화된 약제학적 제제.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 당이 단당류, 이당류, 또는 삼당류, 바람직하게는 수크로오스, 락토오스, 말토오스 또는 트레할로오스인 것을 특징으로 하는 동결건조화된 약제학적 제제.
  7. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 아미노 당이 글루코사민, N-메틸 글루코사민, 갈락토사민 또는 뉴라민산인 것을 특징으로 하는 동결건조화된 약제학적 제제.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 아미노산이 염기성, 산성 또는 중성의 아미노산, 바람직하게는 아르기닌, 리신 또는 오르니틴인 것을 특징으로 하는 동결건조화된 약제학적 제제.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 계면활성제가 비이온성 계면활성제인 것을 특징으로 하는 동결건조화된 약제학적 제제.
  10. 제 9 항에 있어서, 계면활성제가 폴리소르베이트 또는 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 중합체인 것을 특징으로 하는 동결건조화된 약제학적 제제.
  11. 제 10 항에 있어서, 상기 계면활성제가 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트 또는 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노라우레이트인 것을 특징으로 하는 동결건조화된 약제학적 제제.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 등장화제가 등장성을 유지하는데 필요한 양으로 추가로 존재하는 것을 특징으로 하는 동결건조화된 약제학적 제제.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 하나의 항에 기재된 동결건조화물을 수성 용매로 재구성함으로서 수득할 수 있는 면역사이토카인의 약제학적 수성 제제.
  14. 제 13 항에 있어서, 상기 용액이 5 내지 8, 바람직하게는 5.6 내지 7.4의 pH 를 갖는 것을 특징으로 하는 약제학적 수성 제제.
  15. 제 14 항에 있어서, 상기 용액이 6 내지 7의 pH를 갖는 것을 특징으로 하는 약제학적 수성 제제.
  16. 면역사이토카인, 당 또는 아미노 당, 아미노산, 계면활성제 및 원한다면 추가로 약제학적 보조제를 포함하는 수성 제제를 제조하고, 이어서 상기 용액을 동결건조화시키는 것을 특징으로 하는, 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 하나의 항에 기재된 동결건조화된 약제학적 제제의 제조 방법.
KR10-2004-7012214A 2002-02-06 2003-01-14 면역사이토카인을 포함하는 동결건조화된 제제 KR20040091015A (ko)

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