KR20040077884A - （3-｛〔（4-3급-뷰틸-벤질）-（피리딘-3-설폰일）-아미노〕-메틸｝-페녹시）-아세트산의 대사산물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 대사산물에 관한 것이다.

Description

（3-｛〔（4-3급-뷰틸-벤질）-（피리딘-3-설폰일）-아미노〕-메틸｝-페녹시）-아세트산의 대사산물{METABOLITES OF （3-｛〔(4-TERT-BUTYL-BENZYL）-（PYRIDINE-3-SULFONYL）-AMINO〕-METHYL｝-PHENOXY）-ACETIC AICD}
화합물 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산은 골다공증을 치료하고 골절 치유를 보조하며 골 손실을 나타내는 다른 상태를 치료하는데 사용될 수 있는 선택적인 EP2작용제이다. 화합물 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산은 제 WO 99/19300호(제 PCT/IB98/01540 호)에 개시되어 있다. 이 화합물은 또한 골절, 소아기 특발성 골 손실, 치주염에 수반되는 골 손실, 글루코코르티코이드-유도된 골다공증, 갑상선 과다증-유도된 골다공증, 운동 억제-유도된 골다공증, 헤파린-유도된 골다공증, 면역억제-유도된 골다공증을 치료하기 위해, 또한 골량의 증가 및 유지, 얼굴 재건술 후의 골 치유, 상악 재건술 후의 골 치유, 하악 재건술 후의 골 치유, 척추 골유합의 유도, 장골 신전(extension) 향상, 골 이식편의 치유 속도 향상 및 보철물 내증식 향상을 위해 사용될 수 있다.
본 발명은 3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 대사산물, 이 대사산물의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구약물, 또는 전구약물의 염을 제공한다. 이 대사산물은 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트과 동일한 상태를 치료하는데 사용될 수 있거나, 또는 화합물 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산이 환자에게 투여되었는지의 여부를 결정하는데 사용될 수 있다.
발명의 개요
본 발명은 화합물 2-(4-{[(3-카복시메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (5-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-하이드록시-페녹시)-아세트산; 2-{4-[(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-2-메틸-프로피온산; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 글루쿠로나이드; 피리딘-N-옥사이드-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체(sulfate conjugate); (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 황산화물 공액체; 피리딘-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체; 2-메틸-2-{4-[(피리딘-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-프로피온산; (3-{[[4-(1,2-다이하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1-하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1,1-다이메틸-2-옥소-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; 및 (3-{[(4-아이소프로펜일-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
또한, 환자로부터 수득된 혈장, 뇨, 담즙 또는 대변 샘플이, 2-(4-{[(3-카복시메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; 2-{4-[(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-2-메틸-프로피온산; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 글루쿠로나이드; 피리딘-N-옥사이드-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 황산화물 공액체; 피리딘-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체; 2-메틸-2-{4-[(피리딘-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-프로피온산; (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (5-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-하이드록시-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1,2-다이하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1-하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1,1-다이메틸-2-옥소-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; 및 (3-{[(4-아이소프로펜일-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물의 존재를 나타내는지를 결정하는 단계를 포함하는, 환자가 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산을 투여받았는지의 여부를 결정하는 방법이 제공된다.
또한, 골다공증의 치료 또는 골절의 치유가 필요한 환자에게 치료 효과량의 2-(4-{[(3-카복시메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (5-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-하이드록시-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1,2-다이하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1-하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1,1-다이메틸-2-옥소-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; 또는 (3-{[(4-아이소프로펜일-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산으로부터 선택되는 화합물 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 투여함을 포함하는, 골다공증을 치료하거나 골절 치유를 보조하는 방법이 제공된다.
또한, 2-(4-{[(3-카복시메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; 2-{4-[(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-2-메틸-프로피온산; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 글루쿠로나이드; 피리딘-N-옥사이드-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 황산화물 공액체; 피리딘-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체; 2-메틸-2-{4-[(피리딘-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-프로피온산; (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (5-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-하이드록시-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1,2-다이하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1-하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1,1-다이메틸-2-옥소-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; 또는 (3-{[(4-아이소프로펜일-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
본 발명은 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 대사산물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 대사산물을 사용하여 골다공증을 치료하고 골절 치유를 보조하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 환자가 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산을 투여받았는지의 여부를 결정하는 방법에 관한 것이다.
도 1은 래트, 개, 원숭이 및 인간의 간 미세소체(microsome)에서의 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 대사산물의 대표적인 HPLC 방사성 크로마토그램(radiochromatogram)이다.
도 2는 래트, 개, 원숭이 및 인간의 간세포에서의 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 대사산물의 대표적인 HPLC 방사성 크로마토그램이다.
도 3은 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산(m/z 469)의 CID 생성물 이온 스펙트럼이다.
도 4는 대사산물 M21(m/z 321)의 CID 생성물 이온 스펙트럼이다.
도 5는 대사산물 M11(m/z 335)의 CID 생성물 이온 스펙트럼이다.
도 6은 대사산물 M2(m/z 501)의 CID 생성물 이온 스펙트럼이다.
도 7은 대사산물 M3(m/z 499)의 CID 생성물 이온 스펙트럼이다.
도 8은 대사산물 M4(m/z 485)의 CID 생성물 이온 스펙트럼이다.
도 9는 대사산물 M19(m/z 321)의 CID 생성물 이온 스펙트럼이다.
도 10은 대사산물 M6(m/z 565)의 CID 생성물 이온 스펙트럼이다.
도 11은 대사산물 M5(m/z 485)의 CID 생성물 이온 스펙트럼이다.
도 12는 대사산물 M12(m/z 485)의 CID 생성물 이온 스펙트럼이다.
도 13은 대사산물 M20(m/z 305)의 CID 생성물 이온 스펙트럼이다.
도 14는 대사산물 M22(m/z 487)의 CID 생성물 이온 스펙트럼 및 1H NMR이다.
도 15는 대사산물 M23(m/z 471)의 CID 생성물 이온 스펙트럼 및 1H NMR이다.
도 16은 대사산물 M24(m/z 483)의 CID 생성물 이온 스펙트럼 및 1H NMR이다.
도 17은 대사산물 M26(m/z 453)의 CID 생성물 이온 스펙트럼 및 1H NMR이다.
화합물 2-(4-{[(3-카복시메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; 2-{4-[(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-2-메틸-프로피온산; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 글루쿠로나이드; 피리딘-N-옥사이드-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 황산화물 공액체; 피리딘-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체; 2-메틸-2-{4-[(피리딘-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-프로피온산; (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (5-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-하이드록시-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1,2-다이하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1-하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1,1-다이메틸-2-옥소-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; 및 (3-{[(4-아이소프로펜일-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산은 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 대사산물이다.
이러한 대사산물 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구약물, 또는 전구약물의 염은 다른 EP2작용제, 구체적으로는 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산과 동일한 질환 및 상태를 치료하는데 사용될 수 있다. EP2작용제로 치료될 수 있는 질환 및 상태의 예는 국제 특허 공개 제 WO 99/19300 호에 개시되어 있으며, 골절, 유아기 특발성 골 손실, 치주염에 수반되는 골 손실, 글루코코르티코이드-유도된 골다공증, 갑상선 과다증-유도된 골다공증, 운동 억제-유도된 골다공증, 헤파린-유도된 골다공증, 면역억제-유도된 골다공증, 또한 골량의 증가 및 유지, 얼굴 재건술 후의 골 치유, 상악 재건술 후의 골 치유, 하악 재건술 후의 골 치유, 척추 골유합의 유도, 장골 신전 향상, 골 이식편의 치유 속도 향상 및 보철물 내증식 향상을 포함한다. 바람직한 치료는 골다공증을 치료하고 골절 치유를 돕는 것이다.
당해 분야의 숙련자는 골 재흡수 억제제, 예컨대 프로게스틴, 폴리포스포네이트, 비스포스포네이트(들), 에스트로겐 작용제/길항제[SERM(선택적인 에스트로겐 수용체 조정제)으로도 알려져 있음], 에스트로겐, 에스트로겐/프로게스틴 조합, Premarin(등록상표)(공액된 에스트로겐), 에스트론, 에스트리올 또는 17α- 또는 17β-에틴일 에스트라디올을 본 발명의 화합물과 함께 사용할 수 있음을 알게 될 것이다.
예시적인 프로게스틴은 여러 제조업체에서 시판중이며, 알게스톤 아세토페나이드, 알트레노게스트, 아마딘온 아세테이트, 아나게스톤 아세테이트, 클로르마딘온 아세테이트, 신게스톨, 클로게스톤 아세테이트, 클로메게스톤 아세테이트, 델마딘온 아세테이트, 데소게스트렐, 다이메티스테론, 다이드로게스테론, 에티네론, 에티노다이올 다이아세테이트, 에토노게스트렐, 플루로게스톤 아세테이트, 게스타클론, 게스토덴, 게스토노론 카프로에이트, 게스트린온, 할로프로게스테론, 하이드록시프로게스테론 카프로에이트, 레보노게스트렐, 린에스트렌올, 메드로게스톤, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 멜렌게스트롤 아세테이트, 메티노다이올 다이아세테이트, 노레틴드론, 노레틴드론 아세테이트, 노레티노드렐, 노게스티메이트, 노게스토메트, 노게스트렐, 옥소게스톤 펜프로피오네이트, 프로게스테론, 퀸게스탄올 아세테이트, 퀸게스트론 및 티게스톨을 포함한다. 바람직한 프로게스틴은 메드록시프로게스트론, 노레틴드론 및 노레티노드렐이다.
예시적인 골 재흡수 억제 폴리포스포네이트는 미국 특허 제 3,683,080 호에개시되어 있는 유형의 폴리포스포네이트를 포함한다. 바람직한 폴리포스포네이트는 이중(geminal) 다이포스포네이트(또한 비스-포스포네이트라고도 함)이다. 틸루드로네이트 다이소듐이 특히 바람직한 폴리포스포네이트이다. 이반드론산이 특히 바람직한 폴리포스포네이트이다. 알렌드로네이트가 특히 바람직한 폴리포스포네이트이다. 졸레드론산이 특히 바람직한 폴리포스포네이트이다. 다른 바람직한 폴리포스포네이트는 6-아미노-1-하이드록시-헥실리덴-비스포스폰산 및 1-하이드록시-3-(메틸펜틸아미노)-프로필리덴-비스포스폰산이다. 폴리포스포네이트는 산, 또는 가용성 알칼리금속 염 또는 알칼리토금속 염의 형태로 투여될 수 있다. 폴리포스포네이트의 가수분해성 에스터가 마찬가지로 포함된다. 구체적인 예는 에테인-1-하이드록시 1,1-다이포스폰산, 메테인 다이포스폰산, 펜테인-1-하이드록시-1,1-다이포스폰산, 메테인 다이클로로 다이포스폰산, 메테인 하이드록시 다이포스폰산, 에테인-1-아미노-1,1-다이포스폰산, 에테인-2-아미노-1,1-다이포스폰산, 프로페인-3-아미노-1-하이드록시-1,1-다이포스폰산, 프로페인-N,N-다이메틸-3-아미노-1-하이드록시-1,1-다이포스폰산, 프로페인-3,3-다이메틸-3-아미노-1-하이드록시-1,1-다이포스폰산, 페닐 아미노 메테인 다이포스폰산, N,N-다이메틸아미노 메테인 다이포스폰산, N-(2-하이드록시에틸)아미노 메테인 다이포스폰산, 뷰테인-4-아미노-1-하이드록시-1,1-다이포스폰산, 펜테인-5-아미노-1-하이드록시-1,1-다이포스폰산, 헥세인-6-아미노-1-하이드록시-1,1-다이포스폰산 및 이들의 약학적으로 허용가능한 에스터 및 염을 포함한다.
다른 실시태양에서는, 본 발명의 화합물을 에스트로겐 작용제/길항제와 혼합할 수 있다. 바람직한 에스트로겐 작용제/길항제는 드롤록시펜, 즉 미국 특허 제 5,047,431 호에 개시되어 있는 (페놀, 3-(1-(4-(2-다이메틸아미노)에톡시)페닐)-2-페닐-1-뷰텐일)-, (E)-) 및 관련 화합물이다.
다른 바람직한 에스트로겐 작용제/길항제는 윌슨(Willson) 등의 문헌[Endocrinology, 1997, 138, 3901-3911]에 개시되어 있는 3-(4-(1,2-다이페닐-뷰트-1-엔일)-페닐)-아크릴산이다.
다른 바람직한 에스트로겐 작용제/길항제는 타목시펜, 즉 미국 특허 제 4,536,516 호에 개시되어 있는 (에테인아민, 2-(4-(1,2-다이페닐-1-뷰텐일)페녹시)-N,N-다이메틸, (Z)-2-, 2-하이드록시-1,2,3-프로페인트라이카복실레이트(1:1)) 및 관련 화합물이다.
다른 관련 화합물은 미국 특허 제 4,623,660 호에 개시되어 있는 4-하이드록시 타목시펜이다.
바람직한 에스트로겐 작용제/길항제는 랄록시펜, 즉 미국 특허 제 4,418,068 호에 개시되어 있는 (메탄온, (6-하이드록시-2-(4-하이드록시페닐)벤조[b]티엔-3-일)(4-(2-(1-피페리딘일)에톡시)페닐)-하이드로클로라이드)이다.
다른 바람직한 에스트로겐 작용제/길항제는 토레미펜, 즉 미국 특허 제 4,996,225 호에 개시되어 있는 (에테인아민, 2-(4-(4-클로로-1,2-다이페닐-1-뷰텐일)페녹시)-N,N-다이메틸-, (Z)-, 2-하이드록시-1,2,3-프로페인트라이카복실레이트(1:1))이다.
다른 바람직한 에스트로겐 작용제/길항제는 센트크로만, 즉 미국 특허 제3,822,287 호에 개시되어 있는 1-(2-((4-(메톡시-2,2, 다이메틸-3-페닐-크로만-4-일)-페녹시)-에틸)-피롤리딘이다. 또한 레보멜록시펜도 바람직하다.
또 다른 바람직한 에스트로겐 작용제/길항제는 이독시펜, 즉 미국 특허 제 4,839,155 호에 개시되어 있는 (E)-1-(2-(4-(1-(4-아이오도-페닐)-2-페닐-뷰트-1-엔일)-페녹시)-에틸)-피롤리딘온이다.
다른 바람직한 에스트로겐 작용제/길항제는 미국 특허 제 5,488,058 호에 개시되어 있는 2-(4-메톡시-페닐)-3-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페녹시]-벤조[b]티오펜-6-올이다.
다른 바람직한 에스트로겐 작용제/길항제는 미국 특허 제 5,484,795 호에 개시되어 있는 6-(4-하이드록시-페닐)-5-(4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-벤질)-나프탈렌-2-올이다.
또 다른 바람직한 에스트로겐 작용제/길항제는 그의 제조 방법과 함께 PCT 공개 공보 제 WO 95/10513 호에 개시되어 있는 (4-(2-(2-아자-바이사이클로[2.2.1]헵트-2-일)-에톡시)-페닐)-(6-하이드록시-2-(4-하이드록시-페닐)-벤조[b]티오펜-3-일)-메탄온이다.
다른 바람직한 에스트로겐 작용제/길항제는 통상적으로 양도된 미국 특허 제 5,552,412 호에 기재되어 있는 화합물을 포함한다. 상기 특허에 기재되어 있는 특히 바람직한 화합물은 아래 화합물이다:
시스-6-(4-플루오로-페닐)-5-(4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-올;
(-)-시스-6-페닐-5-(4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-올;
시스-6-페닐-5-(4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-올;
시스-1-(6'-피롤리디노에톡시-3'-피리딜)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀린;
시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-(4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-올; 및
1-(4'-피롤리딘올에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀린.
특히 바람직한 화합물은 미국 특허 제 5,948,809 호에 개시되어 있는 (-)-시스-6-페닐-5-(4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-올, D-타르트레이트이다.
다른 에스트로겐 작용제/길항제는 미국 특허 제 4,133,814 호에 기재되어 있다. 미국 특허 제 4,133,814 호에서는 2-페닐-3-아로일-벤조티오펜 및 2-페닐-3-아로일벤조티오펜-1-옥사이드의 유도체를 개시하고 있다.
다른 바람직한 에스트로겐 작용제/길항제는 TSE-424(미국 특허 제 5,998,402 호), 아로족시펜(미국 특허 제 5,723,474 호), EM-652, EM-800, GW 5638 및 GW7604, 또는 이들의 광학 이성질체 또는 기하 이성질체; 이들의 약학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 에스터, 4급 암모늄 염, 또는 전구약물을 포함한다.
다른 바람직한 에스트로겐 작용제/길항제는 하기 화학식 V 또는 VI의 화합물; 또는 이들의 광학 이성질체 또는 기하 이성질체; 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 에스터, 4급 암모늄 염 또는 전구약물을 포함한다:
상기 식에서,
R1B는 H, OH, -O-C(O)-C1-C12알킬(직쇄 또는 분지쇄), -O-C1-C12알킬(직쇄 또는 분지쇄 또는 환상), 또는 할로겐 또는 C1-C4할로겐화 에터로부터 선택되고;
R2B, R3B, R4B, R5B및 R6B는 H, OH, -O-C(O)-C1-C12(직쇄 또는 분지쇄), -O-C1-C12(직쇄 또는 분지쇄 또는 환상), 할로겐, 또는 C1-C4할로겐화 에터, 사이아노, C1-C6알킬(직쇄 또는 분지쇄), 또는 트라이플루오로메틸로부터 독립적으로 선택되며;
XA는 H, C1-C6알킬, 사이아노, 나이트로, 트라이플루오로메틸 및 할로겐으로부터 선택되며;
s는 2 또는 3이고;
YA는 잔기이고;
a) R7B및 R8B는 H, C1-C6알킬, 또는 CN, C1-C6알킬(직쇄 또는 분지쇄), C1-C6알콕시(직쇄 또는 분지쇄), 할로겐, -OH, -CF3또는 -OCF3에 의해 임의적으로 치환되는 페닐로부터 독립적으로 선택되거나; 또는
b) R7B및 R8B는 연결되어, 질소 헤테로원자 1개를 함유하는 5원 포화 헤테로환을 형성하되, 이 헤테로환은 수소, 하이드록실, 할로, C1-C4알킬, 트라이할로메틸, C1-C4알콕시, 트라이할로메톡시, C1-C4아실옥시, C1-C4알킬티오, C1-C4알킬설핀일, C1-C4알킬설폰일, 하이드록시 (C1-C4)알킬, -CO2H, -CN, -CONHR1B, -NH2, -NH(C1-C4알킬), -N(C1-C4알킬)2, -NHSO2R1B, -NHCOR1B, -NO2, 또는 1 내지 3개의 (C1-C4)알킬로 임의적으로 치환되는 페닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 치환기로 임의적으로 치환되거나; 또는
c) R7B및 R8B는 연결되어, 질소 헤테로원자 1개를 함유하는 6원 포화 헤테로환을 형성하되, 이 헤테로환은 수소, 하이드록실, 할로, C1-C4알킬, 트라이할로메틸, C1-C4알콕시, 트라이할로메톡시, C1-C4아실옥시, C1-C4알킬티오, C1-C4알킬설핀일, C1-C4알킬설폰일, 하이드록시 (C1-C4)알킬, -CO2H, -CN, -CONHR1B, -NH2, -NH(C1-C4알킬), -N(C1-C4알킬)2, -NHSO2R1B, -NHCOR1B, -NO2, 또는 1 내지 3개의 (C1-C4)알킬로 임의적으로 치환되는 페닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 치환기로 임의적으로 치환되거나; 또는
d) R7B및 R8B는 연결되어, 질소 헤테로원자 1개를 함유하는 7원 포화 헤테로환을 형성하되, 이 헤테로환은 수소, 하이드록실, 할로, C1-C4알킬, 트라이할로메틸, C1-C4알콕시, 트라이할로메톡시, C1-C4아실옥시, C1-C4알킬티오, C1-C4알킬설핀일, C1-C4알킬설폰일, 하이드록시 (C1-C4)알킬, -CO2H, -CN, -CONHR1B, -NH2, -NH(C1-C4알킬), -N(C1-C4알킬)2, -NHSO2R1B, -NHCOR1B, -NO2, 또는 1 내지 3개의 (C1-C4)알킬로 임의적으로 치환되는 페닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 치환기로 임의적으로 치환되거나; 또는
e) R7B및 R8B는 연결되어, 질소 헤테로원자 1개를 함유하는 8원 포화 헤테로환을 형성하되, 이 헤테로환은 수소, 하이드록실, 할로, C1-C4알킬, 트라이할로메틸, C1-C4알콕시, 트라이할로메톡시, C1-C4아실옥시, C1-C4알킬티오, C1-C4알킬설핀일, C1-C4알킬설폰일, 하이드록시 (C1-C4)알킬, -CO2H, -CN, -CONHR1B, -NH2, -NH(C1-C4알킬), -N(C1-C4알킬)2, -NHSO2R1B, -NHCOR1B, -NO2, 또는 1 내지 3개의 (C1-C4)알킬로 임의적으로 치환되는 페닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 치환기로 임의적으로 치환되거나; 또는
f) R7B및 R8B는 연결되어, 6 내지 12개의 탄소원자를 함유하고 질소 헤테로원자 1개를 함유하는 가교되거나 융합된 포화 이환상 헤테로환을 형성하되, 이 헤테로환은 수소, 하이드록실, 할로, C1-C4알킬, 트라이할로메틸, C1-C4알콕시, 트라이할로메톡시, C1-C4아실옥시, C1-C4알킬티오, C1-C4알킬설핀일, C1-C4알킬설폰일, 하이드록시 (C1-C4)알킬, -CO2H, -CN, -CONHR1B, -NH2, -NH(C1-C4알킬), -N(C1-C4알킬)2, -NHSO2R1B, -NHCOR1B, -NO2, 또는 1 내지 3개의 (C1-C4)알킬로 임의적으로 치환되는 페닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 치환기로 임의적으로 치환된다.
추가의 바람직한 에스트로겐 작용제/길항제는 하기 화학식 Va의 화합물; 또는 그의 광학 이성질체 또는 기하 이성질체; 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염,N-옥사이드, 에스터, 4급 암모늄 염 또는 전구약물이다:
다른 바람직한 에스트로겐 작용제/길항제는 하기 화학식 III의 화합물(EM-652) 또는 하기 화학식 IV의 화합물(EM-800); 또는 이들의 광학 이성질체 또는 기하 이성질체; 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 에스터, 4급 암모늄 염 또는 전구약물을 포함한다:
당해 분야의 숙련자는 다른 골 동화제(골량 증가제라고도 함)를 본 발명의 화합물과 함께 사용할 수 있음을 알게 될 것이다. 골량 증가제는 세계 보건 기구의 연구["Assessment of Fracture Risk and Its Application to Screening for Postmenopausal Osteoporosis" (1994), WHO 스터디 그룹의 리포트, 세계 보건 기구 테크니컬 씨리즈 843]에 상세하게 기재되어 있는 골절 역치보다 높은 수준으로 골량을 증가시키는 화합물이다.
다른 EP2작용제와 함께 본 발명의 화합물을 사용할 수도 있다. 바람직한 EP2작용제는 미국 특허 제 6,288,120 호에 개시되어 있는 7-[(4-뷰틸-벤질)-메테인설폰일-아미노]-헵탄산, 모노소듐 염 또는 다른 화합물을 포함한다.
당해 분야의 숙련자는 또한 IGF-1, 플루오르화나트륨, 부갑상선 호르몬(PTH), 부갑상선 호르몬의 활성 분절, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비촉진제를 본 발명의 화합물과 함께 사용할 수 있음을 알 것이다.
본 발명의 화합물은 또한 프로스타글란딘과 함께 사용될 수 있다. 다양한 프로스타글란딘이 아래에 기재 및 참조되어 있다. 그러나, 당해 분야의 숙련자는 다른 프로스타글란딘도 알 것이다. 예시적인 프로스타글란딘은 미국 특허 제 4,171,331 호 및 제 3,927,197 호에 개시되어 있다. 노딘(Norrdin) 등의 문헌[The Role of Prostaglandins in Bone In Vivo, Prostaglandins Leukotriene Essential Fatty Acids 41, 139-150, 1990]은 골 동화성 프로스타글란딘의 개설이다.
본 발명의 화합물과 함께 사용될 수 있는 다른 화합물은 골 형성 활성에 유용한 2-데스카복시-2-(테트라졸-5-일)-11-데스옥시-15-치환된-오메가-펜타노프로스타글란딘을 개시하는 미국 특허 제 3,932,389 호; 골 형성 활성에 유용한 16-아릴-13,14-다이하이드로-PGE2p-비페닐 에스터를 개시하는 미국 특허 제 4,018,892 호; 골 형성 활성에 유용한 2,3,6-치환된-4-피론을 개시하는 미국 특허 제 4,219,483 호; 골 형성 활성에 유용한 2,3,6-치환된-4-피론을 개시하는 미국 특허 제 4,132,847 호; 골 형성 활성에 유용한 16-아릴-13,14-다이하이드로-PGE2p-비페닐 에스터를 개시하는 미국 특허 제 4,000,309 호; 골 형성 활성에 유용한 16-아릴-13,14-다이하이드로-PGE2p-비페닐 에스터를 개시하는 미국 특허 제 3,982,016 호; 골 형성 활성에 유용한 치환된 사이클로펜테인을 개시하는 미국 특허 제 4,621,100 호; 및 골 형성 활성에 유용한 사이클로펜탄온을 개시하는 미국 특허 제 5,216,183 호에 개시되어 있는 화합물을 포함한다.
플루오르화나트륨도 본 발명의 화합물과 함께 사용될 수 있다. 용어 "플루오르화나트륨"은 모든 형태의 플루오르화나트륨(예를 들어, 서서히 방출되는 플루오르화나트륨, 지속적으로 방출되는 플루오르화나트륨)을 일컫는다. 지속적으로 방출되는 플루오르화나트륨은 본원에 참고로 인용되어 있는 미국 특허 제 4,904,478 호에 개시되어 있다. 생물학적 프로토콜 분야의 숙련자는 플루오르화나트륨의 활성을 용이하게 결정할 수 있다(예를 들어, 에릭슨(Eriksen E.F.) 등,Bone Histomorphometry, Raven Press, 뉴욕, 1994, 페이지 1-74; 그라이어(Grier S.J.) 등, The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Animals, Inv. Radiol., 1996, 31(1):50-62; 워너(Wahner H.W.) 및 포겔맨(Fogelman I.), The Evaluation of Osteoporosis: Dual Energy X-Ray Absorptiometry in Clinical Practice, Martin Dunitz Ltd., 런던 1994, 페이지 1-296 참조).
골 형태형성 단백질도 본 발명의 화합물과 함께 사용할 수 있다(예를 들어, 오노(Ono) 등의 문헌[Promotion of the Osteogenetic Activity of Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein by Prostaglandin E1,Bone, 1996, 19(6), 581-588] 참조).
임의의 부갑상선 호르몬(PTH)도 본 발명의 화합물과 함께 사용할 수 있다. 용어 "부갑상선 호르몬"은 부갑상선 호르몬, 그의 분절 또는 대사산물 및 골 형성을 촉진시키고 골량을 증가시킬 수 있는 이들의 구조적 유사체를 일컫는다. 또한, 부갑상선 호르몬 관련 펩타이드 및 부갑상선 관련 펩타이드의 활성 분절 및 유사체도 포함된다(PCT 공개 공보 제 WO 94/01460 호 참조). 이러한 골 동화 작용 활성은 표준 분석법 분야의 숙련자에 의해 용이하게 결정된다(예를 들어, 에릭슨 등,Bone Histomorphometry, Raven Press, 뉴욕, 1994, 페이지 1-74; 그라이어 등, The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Animals, Inv. Radiol., 1996, 31(1):50-62; 워너 및 포겔맨, The Evaluation of Osteoporosis: Dual Energy X-Ray Absorptiometry in Clinical Practice, Martin Dunitz Ltd., 런던 1994, 페이지 1-296 참조). 이러한 다양한 화합물은 아래에 기재 및 참조되어 있다. 그러나, 당해 분야의 숙련자는 다른 부갑상선 호르몬도 알 것이다. 예시적인 부갑상선 호르몬은 하기 참조문헌에 개시되어 있다:
"Human Parathyroid Peptide Treatment of Vertebral Osteoporosis", Osteoporosis Int., 3, (부록 1):199-203;
"PTH 1-34 Treatment of Osteoporosis with Added Hormone Replacement Therapy: Biochemical, Kinetic and Histological Responses", Osteoporosis Int., 1:162-170.
임의의 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비촉진제도 본 발명의 화합물과 함께 사용할 수 있다. 성장 호르몬 분비촉진제라는 용어는 성장 호르몬의 방출을 촉진시키거나 성장 호르몬의 작용을 모방하는(예를 들어, 골 형성을 증가시켜 골량을 증가시키는) 화합물을 일컫는다. 이러한 작용은 당해 분야의 숙련자에게 널리 공지되어 있는 표준 분석법 분야의 숙련자에 의해 쉽게 결정된다. 다양한 이들 화합물이 하기 PCT 공개 공보에 개시되어 있다: 제 WO 95/14666 호; 제 WO 95/13069 호; 제 WO 94/19367 호; 제 WO 94/13696 호; 및 제 WO 95/34311 호. 그러나, 당해 분야의 숙련자는 다른 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비촉진제를 알 것이다.
구체적으로, 바람직한 성장 호르몬 분비촉진제는 N-[1(R)-[1,2-다이하이드로-1-메테인설폰일스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카본일]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로페인아마이드:MK-677이다.
다른 바람직한 성장 호르몬 분비촉진제는 하기 화합물을 포함한다:
2-아미노-N-(2-(3a-(R)-벤질-2-메틸-3-옥소-2,3,3a,4,6,7-헥사하이드로-피라졸로-[4,3-c]피리딘-5-일)-1-(R)-벤질옥시메틸-2-옥소-에틸)-아이소뷰틸아마이드(미국 특허 제 6,107,306 호) 또는 그의 L-락트산 염;
2-아미노-N-{1(R)-벤질옥시메틸-2-[1,3-다이옥소-8a-(S)-피리딘-2-일메틸-2-(2,2,2-트라이플루오로-에틸)-헥사하이드로-이미다조-[1,5a]피라진-7-일]-2-옥소-에틸}-2-메틸-프로피온아마이드(미국 특허 제 6,251,902 호) 또는 그의 하이드로클로라이드 염;
2-아미노-N-(1-(R)-벤질옥시메틸-2-(3a-(R)-(4-플루오로-벤질)-2-메틸-3-옥소-2,3,3a,4,6,7-헥사하이드로-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-일)-2-옥소-에틸)아이소뷰티르아마이드;
2-아미노-N-(2-(3a-(R)-벤질-3-옥소-2,3,3a,4,6,7-헥사하이드로-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-일)-1-(R)벤질옥시메틸-2-옥소-에틸)아이소뷰티르아마이드; 및
2-아미노-N-(1-(2,4-다이플루오로-벤질옥시메틸)-2-옥소-2-(3-옥소-3a-피리딘-2-일메틸-2-(2,2,2-트라이플루오로-에틸)-2,3,3a,4,6,7-헥사하이드로-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-일)-에틸)-2-메틸-프로피온아마이드(미국 특허 제 6,110,932 호) 또는 그의 L-타르타르산 염.
본 발명의 화합물은 약학적으로 허용가능한 비히클 또는 희석제와 함께 하나 이상의 본 발명 화합물을 포함하는 약학 조성물의 형태로 통상적으로 투여된다. 경구 투여를 위해, 약학 조성물은 용액, 현탁액, 정제, 환약, 캡슐, 분말 등의 형태를 취할 수 있다. 전분, 바람직하게는 감자 전분 또는 타피오카 전분 및 특정 복합 실리케이트 같은 다양한 붕해제 및 폴리비닐피롤리돈, 슈크로즈, 젤라틴 및 아라비아 검 같은 결합제와 함께 시트르산나트륨, 탄산칼슘 및 인산칼슘 같은 다양한 부형제를 함유하는 정제를 사용한다. 또한, 스테아르산마그네슘, 소듐 라우릴 설페이트 및 활석 같은 윤활제가 종종 정제화 목적에 매우 유용하다. 유사한 유형의 고체 조성물은 또한 연질-충전된 젤라틴 캡슐 및 경질-충전된 젤라틴 캡슐의 충전제로서도 사용되는데, 이와 관련하여 바람직한 물질은 또한 락토즈 또는 유당 및 고분자량 폴리에틸렌 글라이콜을 포함한다. 경구 투여를 위해 수성 현탁액 및/또는 엘릭시르가 요구되는 경우에는, 본 발명의 화합물을 다양한 감미제, 향미제, 착색제, 유화제 및/또는 현탁제 및 희석제(예: 물, 에탄올, 프로필렌 글라이콜, 글리세린 및 이들의 다양한 유사한 혼합물)와 혼합할 수 있다.
비경구 투여를 위해서는, 참깨유 또는 땅콩유중의 용액 또는 수성 프로필렌 글라이콜중의 용액, 및 상응하는 수용성 염의 멸균 수용액을 사용할 수 있다. 이러한 수용액은 필요한 경우 적합하게 완충되며, 액체 희석제를 먼저 충분한 염수 또는 글루코즈로 등장성으로 만든다. 이들 수용액은 정맥내, 근육내, 피하 및 복강내 주사 목적에 특히 적합하다. 이와 관련하여, 사용되는 멸균 수성 매질은 모두 당해 분야의 숙련자에게 널리 공지되어 있는 표준 기법에 의해 용이하게 수득될수 있다.
경피(예컨대, 국부) 투여를 위해서는, 다른 점에 있어서는 상기 비경구 용액과 유사한 묽은 멸균 수용액 또는 부분 수용액(통상, 약 0.1% 내지 5% 농도)이 바람직하다.
화합물을 적합한 희석제와 혼합하고, 이 혼합물의 적절한 양을 캡슐에 충전시킴으로써 캡슐을 제조한다. 통상적인 희석제는 여러 상이한 종류의 전분; 분말화된 셀룰로즈, 특히 결정질 및 미정질 셀룰로즈; 프럭토즈, 만니톨 및 슈크로즈 같은 당; 곡물 분말 및 유사한 식용 분말 등의 분말화된 불활성 성분을 포함한다.
직접 압축, 습식 과립화 또는 건식 과립화에 의해 정제를 제조한다. 이들의 배합물은 통상 화합물 뿐만 아니라 희석제, 결합제, 윤활제 및 붕해제를 포함한다. 전형적인 희석제는 예컨대 다양한 유형의 전분, 락토즈, 만니톨, 카올린, 인산칼슘 또는 황산칼슘, 무기 염(예: 염화나트륨) 및 분말화된 당을 포함한다. 분말화된 셀룰로즈 유도체도 유용하다. 전형적인 정제 결합제는 전분, 젤라틴 및 당(예: 락토즈, 프럭토즈, 글루코즈 등) 같은 성분이다. 아라비아 검, 알기네이트, 메틸셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈 등을 비롯한 천연 검 및 합성 검도 편리하다. 폴리에틸렌 글라이콜, 에틸셀룰로즈 및 왁스도 결합제로서 작용할 수 있다.
윤활제는 정제 및 펀치가 다이에 들러붙는 것을 방지하기 위하여 정제 배합물에 필요할 수 있다. 윤활제는 활석, 스테아르산마그네슘, 스테아르산칼슘, 스테아르산 및 수소화된 식물유 같은 미끄러운 고체로부터 선택된다.
정제 붕해제는 정제가 습윤될 때 화합물을 방출시키기 위하여 정제의 붕해를용이하게 하는 성분이다. 이들은 예컨대 전분, 점토, 셀룰로즈, 알긴 및 검, 옥수수 전분, 감자 전분, 메틸셀룰로즈, 한천, 벤토나이트, 목재 셀룰로즈, 분말화된 천연 스폰지, 양이온-교환 수지, 알긴산, 구아 검, 감귤류 과육 및 카복시메틸셀룰로즈를 포함하고, 예컨대 소듐 라우릴 설페이트와 함께 사용될 수 있다.
정제는 종종 향료 및 밀봉제로서의 당으로, 또는 정제의 용해 특성을 변화시키기 위해 필름-형성 보호제로 코팅될 수 있다. 화합물은 현재 당해 분야에 잘 확립되어 있는 바와 같이 배합물에 만니톨 같은 맛있는 성분을 다량 사용함으로써 씹을 수 있는 정제로 배합될 수도 있다.
화합물을 좌약으로서 투여하고자 할 때, 전형적인 기제를 사용할 수 있다. 코코아 버터가 전통적인 좌약 기제이며, 왁스를 첨가함으로써 융점을 약간 높이도록 개질될 수 있다. 특히, 다양한 분자량의 폴리에틸렌 글라이콜을 포함하는 수-혼화성 좌약 기제가 널리 사용된다.
적절한 배합물에 의해 화합물의 효과가 지연되거나 연장될 수 있다. 예를 들어, 화합물의 서서히 용해되는 펠렛을 제조하여 정제 또는 캡슐에 혼입시킬 수 있다. 몇 가지 상이한 용해 속도를 갖는 펠렛을 제조하고 펠렛의 혼합물로 캡슐을 충전시킴으로써 이 기법을 개선시킬 수 있다. 예측가능한 기간동안 용해되지 않도록 하는 필름으로 정제 또는 캡슐을 코팅할 수 있다. 화합물이 혈청 중에 서서히 분산되도록 하는 오일성 비히클 또는 유화된 비히클에 화합물을 용해 또는 현탁시킴으로써, 비경구 제제조차도 장기-작용성으로 만들 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 본 발명의 화합물(들)을 0.1% 내지 95%, 바람직하게는 1% 내지 70% 함유할 수 있다. 어느 경우에나, 투여될 조성물 또는 배합물은 질환/상태를 치료하는데 효과적인 양의 본 발명 화합물을 함유한다.
하기 단락에서는 인간이 아닌 동물에 유용한 예시적인 배합물 및 투여형을 기재한다. 본 발명의 화합물을 경구 또는 비경구(예컨대, 주사) 투여할 수 있다. 효과적인 투여량, 일반적으로는 동물에 경구 투여될 때 통상 체중 1kg당 0.01 내지 100mg, 바람직하게는 0.1 내지 50mg인 1일 투여량이 섭취되도록 하는 양의 본 발명 화합물을 투여한다. 1일에 1회보다 많은 투여가 필요할 수도 있고, 수의사가 특정 환경을 고려하여 효과적인 투여량을 결정할 수 있음에 주목한다.
편리하게는, 매일 공급되는 물과 함께 치료 투여량의 화합물이 섭취되도록, 화합물을 음용수에 포함시킬 수 있다. 화합물을 바람직하게는 수용성 농축액의 형태(예컨대, 수용성 염의 수용액)로 바로 음용수에 칭량해 넣을 수 있다. 편리하게는, 화합물을 그 자체로, 또는 프리믹스 또는 농축물로도 일컬어지는 동물 사료 보충물의 형태로 사료에 직접 첨가할 수도 있다. 약제를 사료에 포함시키기 위하여, 담체중 화합물의 프리믹스 또는 농축물을 더욱 통상적으로 사용한다. 적합한 담체는 필요한 경우 액체 또는 고체, 예를 들어 물, 다양한 밀(meal)(예: 알팔파 밀, 대두 밀, 면실유 밀, 아마인유 밀, 옥수수 속대 밀 및 옥수수 밀), 당밀, 유레아, 골 밀 및 가금류 사료에 통상적으로 사용되는 것과 같음 미네랄 믹스이다. 특히 효과적인 담체는 개별적인 동물 사료 자체, 즉 소량의 이들 사료이다. 담체는 프리믹스가 블렌딩되는 최종 사료중의 화합물의 균일한 분포를 용이하게 한다. 화합물을 프리믹스 내로 완전히 블렌딩시킨 후, 이어 사료 내로 완전히 블렌딩시키는것이 중요하다. 이와 관련하여, 대두유, 옥수수유, 면실유 등과 같은 적합한 오일성 비히클, 또는 휘발성 유기 용매에 화합물을 분산 또는 용해시킨 다음, 담체와 블렌딩시킬 수 있다. 농축액중 화합물의 비율은, 적절한 비율의 프리믹스를 사료와 블렌딩시켜 화합물의 목적하는 수준을 수득함으로써 최종 사료중 활성 화합물의 양을 조정할 수 있기 때문에, 광범위하게 변할 수 있다.
사료 제조업자에 의해 고성능 농축액을 단백질 담체(예컨대, 상기 기재된 바와 같은 대두유 밀 및 다른 밀)와 블렌딩시켜, 동물에게 직접 먹이기에 적합한 농축 보충물을 제조할 수 있다. 이 경우, 동물들은 통상적인 식사를 소비하도록 한다. 다르게는, 이러한 농축 보충물을 사료에 직접 첨가하여, 치료 효과량의 본 발명 화합물을 함유하는 영양 면에서 균형잡힌 최종 사료를 제조할 수 있다. 혼합물을 트윈 쉘 블렌더 같은 표준 절차에 의해 완전히 블렌딩시켜 확실히 균질하게 만든다.
보충물이 사료용 상부 드레싱(top dressing)으로서 사용되는 경우에는, 마찬가지로 드레싱된 사료의 상부를 가로질러 화합물이 균질하게 분포되도록 돕는다.
동물에서의 비경투 투여를 위해서는, 본 발명의 화합물을 페이스트 또는 펠렛의 형태로 제조하고 통상 동물의 머리 또는 귀 피부 아래에 이식물로서 투여할 수 있다.
본 발명의 화합물을 땅콩유, 참깨유, 옥수수유 등과 같은 약학적으로 허용가능한 오일에 분산시킴으로써 페이스트 배합물을 제조할 수 있다.
본 발명의 화합물을 카보왁스, 카르나우바 왁스 등의 희석제와 혼합함으로써, 효과량의 본 발명의 화합물을 함유하는 펠렛을 제조할 수 있다. 스테아르산마그네슘 또는 스테아르산칼슘 같은 윤활제를 첨가하여 펠렛화 공정을 개선시킬 수 있다.
물론, 목적하는 투여 수준을 달성하기 위하여 하나보다 많은 펠렛을 동물에게 투여할 수 있는 것으로 인식된다. 또한, 동물 체내에 적절한 활성 약제 수준을 유지하기 위하여, 동물 치료 기간동안 주기적으로 이식시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다.
본원에 사용되는 "치료"는 방지(예컨대, 예방) 및 완화 처리를 포함하고, 본원에 사용되는 "치료하다"는 방지 및/또는 완화 처리를 제공하는 행동을 일컫는다.
용어 "치료 효과량"은 질환 또는 상태의 하나 이상의 증상을 개선시키거나 하나 이상의 증상의 개시를 방지 또는 지연시키는, 본 발명의 화합물 또는 본 발명의 화합물과 추가적인 화합물의 혼합물의 양을 의미한다.
본원에 사용되는 "환자"는 포유동물, 특히 인간을 의미한다.
"글루쿠론산"은 글루쿠로나이드화의 단계 II 공액 반응으로부터 대사산물로 변형되거나 또는 상기 대사산물을 형성하는 모화합물로 변형되는 치환체이다. 글루쿠론산은 대사산물 또는 모화합물상의 산 또는 알콜 또는 페놀 잔기와 반응하여 "글루쿠로나이드"를 형성한다. 글루쿠로나이드 치환체는 본원에서 "Glu" 또는 "글루쿠로나이드"로 약칭한다.
"황산"은 황화의 공액 반응으로부터 대사산물로 변형되거나 또는 상기 대사산물을 형성하는 모화합물로 변형되는 치환체이다. 황산은 대사산물 또는 모화합물상의 알콜 또는 페놀 잔기와 반응하여 "설페이트" 또는 "황산화물 공액체"를 형성한다.
본 발명의 화합물과 추가적인 화합물 또는 추가적인 화합물들의 조합을 투여한다는 것은 이들 화합물을 조성물로서 함께, 또는 동일하거나 상이한 시점에 투여되는 동일한 단일 투여형의 일부로서 또는 별도의 투여형으로서 투여할 수 있음을 의미한다.
통상적인 화학자는 본 발명의 특정 화합물이 특정 입체 화학적 배위, 호변이성질체 배위 또는 기하학적 배위로 존재할 수 있는 하나 이상의 원자를 함유하여, 입체 이성질체, 호변이성질체, 위치 이성질체 및 배위 이성질체를 제공할 수 있음을 알 것이다. 이러한 이성질체 및 이들의 혼합물은 모두 본 발명에 포함된다. 본 발명의 화합물의 수화물 및 용매화물도 포함된다.
본 발명은 또한 동위원소-라벨링된 화합물, 즉 본 발명의 화합물과 동일하지만 하나 이상의 원자가 천연에서 통상적으로 발견되는 원자 질량 또는 질량수와는 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체된 화합물도 포함한다. 본 발명의 화합물 내로 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 각각2H,3H,13C,14C,15N,18O,17O,31P,32P,35S,18F 및36Cl 같은 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 플루오르 및 염소의 동위원소를 포함한다. 상기 동위원소 및/또는 다른 원자의 다른 동위원소를 함유하는 본 발명의 화합물, 그의 전구약물 및 상기 화합물 또는 상기 전구약물의 약학적으로 허용가능한 염은 본 발명의 영역 내에 속한다. 동위원소로 라벨링된 본 발명의 특정 화합물, 예를 들어3H 및14C 같은 방사성 동위원소가 혼입된 화합물은 약물 및/또는 기재(substrate) 조직 분포 분석에 유용하다. 삼중수소(즉,3H) 및 탄소-14(즉,14C) 동위원소가 제조 및 검출의 용이성 때문에 특히 바람직하다. 또한, 중수소(즉,2H) 같은 보다 중질의 동위원소로 치환되면, 보다 큰 대사 안정성, 예를 들면 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여 요구량에 기인하는 특정 치료 이점을 제공할 수 있으며, 따라서 몇몇 상황에서 바람직할 수 있다. 하기 예시된 절차 또는 당해 분야에 공지되어 있는 절차를 수행함으로써, 동위원소로 라벨링된 본 발명의 화합물 및 이들의 전구약물을 통상적으로 제조할 수 있다.
본 발명의 화합물은 시험관내 또는 생체내 대사 연구의 분석 기준물로서, 또는 신규 화합물의 화학적 합성 또는 생합성을 위한 중간체로서 사용될 수 있다. 대사산물은 고체로서 또는 용액으로 단리될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구약물, 또는 전구약물의 염을 투여받은 환자를 식별하는데 사용될 수 있다. (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구약물, 또는 전구약물의 염을 투여받은 환자를 식별하기 위하여, 환자로부터 혈청, 뇨, 대변 또는 담즙 샘플을 채취하고, 하나 이상의 본 발명의 화합물의 존재에 대해 샘플을 분석한다. 본 발명의 화합물을 분석하는 한 가지 방법은 크로마토그래피 및 질량 분광분석법을 이용하는 것이다. 다른 분석 방법은 당해 분야의 숙련자에게 널리 공지되어 있다. 혈청, 뇨, 대변 또는 담즙 샘플 중에 하나 이상의 본 발명 화합물이 존재한다는 것은, 환자가 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 전구약물, 또는 전구약물의 염을 투여받았음을 나타낸다.
본 발명의 치료 방법에서, 본 발명의 화합물은 예컨대 정제로서 환자에게 직접 투여될 수 있거나 또는 대사를 통해 환자의 체내에서 생성됨으로써 투여될 수 있다. 뿐만 아니라, 대사에 의해 본 발명의 화합물을 생성시킬 수 있는 화합물의 투여 경로 및 투여량은 목적하는 바대로 변화되어, 본 발명의 화합물의 목적하는 생체내 농도 및 생성 속도를 수득할 수 있다.
본 발명의 화합물의 약학적으로 허용가능한 산부가염은 화합물 자체의 산부가염 또는 화합물의 임의의 에스터의 산부가염으로 형성될 수 있으며, 약학에서 종종 사용되는 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 예를 들어, 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 설폰산(나프탈렌설폰산, 메테인설폰산 및 톨루엔설폰산 같은 약제 포함), 황산, 질산, 인산, 타르타르산, 피로황산, 메타인산, 석신산, 폼산, 프탈산, 락트산 등과 같은 무기산 또는 유기산을 사용하여 염을 형성할 수 있으며, 가장 바람직하게는 염산, 시트르산, 벤조산, 말레산, 아세트산 및 프로피온산으로 염을 형성할 수 있다.
약(medicine)으로서 사용될 때, 인간 또는 다른 환자에게 투여될 본 발명의 화합물의 투여량은 한층 광범위하게 변할 수 있으며, 담당 의사 또는 수의사의 판단에 맡겨진다. 화합물이 염(예: 라우리에이트)(이의 염 형성 잔기는 인지될만한분자량을 가짐)의 형태로 투여될 때 화합물의 투여량을 조정할 필요가 있을 수 있음을 알아야 한다. 화합물의 효과적인 투여량의 일반적인 범위는 약 0.001mg/일 내지 약 200mg/일이다. 바람직한 범위는 약 0.01mg/일 내지 100mg/일이다. 물론, 화합물의 1일 투여량을 하루중 수시간째에 소량씩 투여하는 것이 종종 실용적이다. 그러나, 임의의 주어진 경우에서, 투여되는 화합물의 양은 활성 성분의 용해도, 사용되는 배합물 및 투여 경로 같은 인자에 따라 달라질 것이다.
전구약물은 생체내에서 변형되어 본 발명의 화합물을 생성시키는 화합물이다. 혈액중에서의 가수분해 같은 다양한 메카니즘에 의해 변형이 이루어질 수 있다. 전구약물의 사용에 대한 논의는 히구치(T. Higuchi) 및 스텔라(W. Stella)의 문헌["Pro-drugs as Novel Delivery Systems",A.C.S Symposium Series의 Vol. 14 및Bioreversible Carriers in Drug Design, 로슈(Edward B. Roche) 편집, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987]에 기재되어 있다.
예를 들어, 본 발명의 화합물이 카복실산 작용기를 함유하는 경우, 전구약물은 산 기의 수소원자가 (C1-C8)알킬, (C2-C12)알칸오일옥시메틸, 4 내지 9개의 탄소원자를 갖는 1-(알칸오일옥시)에틸, 5 내지 10개의 탄소원자를 갖는 1-메틸-1-(알칸오일옥시)-에틸, 3 내지 6개의 탄소원자를 갖는 알콕시카본일옥시메틸, 4 내지 7개의 탄소원자를 갖는 1-(알콕시카본일옥시)에틸, 5 내지 8개의 탄소원자를 갖는 1-메틸-1-(알콕시카본일옥시)에틸, 3 내지 9개의 탄소원자를 갖는 N-(알콕시카본일)아미노메틸, 4 내지 10개의 탄소원자를 갖는 1-(N-(알콕시카본일)아미노)에틸, 3-프탈리딜, 4-크로토노락톤일, 감마-뷰티로락톤-4-일, 다이-N,N-(C1-C2)알킬아미노(C2-C3)알킬(예: α-다이메틸아미노에틸), 카밤오일-(C1-C2)알킬, N,N-다이(C1-C2)알킬카밤오일-(C1-C2)알킬 및 피페리디노-, 피롤리디노- 또는 모폴리노(C2-C3)알킬 같은 기로 치환됨으로써 형성되는 에스터를 포함할 수 있다.
유사하게, 본 발명의 화합물이 알콜 작용기를 포함하는 경우, 전구약물은 알콜기의 수소원자가 (C1-C6)알칸오일옥시메틸, 1-((C1-C6)알칸오일옥시)에틸, 1-메틸-1-((C1-C6)알칸오일옥시)에틸, (C1-C6)알콕시카본일옥시메틸, N-(C1-C6)알콕시카본일아미노메틸, 석신오일, (C1-C6)알칸오일, α-아미노(C1-C4)알칸오일, 아릴아실 및 α-아미노아실, 또는 α-아미노아실-α-아미노아실(각 α-아미노아실기는 천연 발생 L-아미노산, P(O)(OH)2, -P(O)(O(C1-C6)알킬)2또는 글라이코실(이 라디칼은 탄수화물의 헤미아세탈 형태의 하이드록실기를 제거함으로써 생성됨)로부터 독립적으로 선택됨) 같은 기로 치환됨으로써 형성될 수 있다.
본 발명의 화합물이 아민 작용기를 포함하는 경우, 전구약물은 아민기의 수소원자가 Rx-카본일, RxO-카본일, NRxRx'-카본일(여기에서, Rx및 Rx'은 각각 독립적으로 (C1-C10)알킬, (C3-C7)사이클로알킬, 벤질이거나, 또는 Rx-카본일은 천연 α-아미노아실 또는 천연 α-아미노아실-천연 α-아미노아실임), -C(OH)C(O)OYx(여기에서, Yx는 H, (C1-C6)알킬 또는 벤질임), -C(OYx0)Yx1(여기에서, Yx0은 (C1-C4)알킬이고, Yx1은 (C1-C6)알킬, 카복시(C1-C6)알킬, 아미노(C1-C4)알킬 또는 모노-N- 또는 다이-N,N-(C1-C6)알킬아미노알킬임), -C(Yx2)Yx3(여기에서, Yx2는 H 또는 메틸이고, Yx3는 모노-N- 또는 다이-N,N-(C1-C6)알킬아미노임), 모폴리노, 피페리딘-1-일 또는 피롤리딘-1-일 같은 기로 치환됨으로써 형성될 수 있다.
유리하게는, 본 발명은 또한 질환을 치료하기 위해 소비자가 사용하기 위한 키트를 제공한다. 키트는 a) 본 발명의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 담체, 비히클 또는 희석제를 포함하는 약학 조성물, 및 b) 특정 질환을 치료하기 위해 약학 조성물을 사용하는 방법을 적은 지침서를 포함한다.
본원에 사용되는 "키트"는 나뉘어진 병 또는 나뉘어진 호일 패킷(packet) 같은 별도의 단위 투여형을 함유하기 위한 용기를 포함한다. 용기는 당해 분야에 공지되어 있는 임의의 편리한 형상 또는 형태일 수 있고, 약학적으로 허용가능한 물질, 예를 들어 종이 또는 판지 상자, 유리 또는 플라스틱 병 또는 단지, 재밀봉가능한 백(예컨대, 다른 용기에 넣기 위해 정제를 "재충전"하기 위하여), 또는 치료 스케줄에 따라 팩으로부터 눌러 빼내기 위한, 개별 투여형을 갖는 블리스터 팩으로 제조된다. 사용되는 용기는 관련된 정확한 투여형에 따라 달라질 수 있는데, 예를들어 일반적으로 액체 현탁액을 보유하는 데에는 통상 종래의 판지 상자가 사용되지 않는다. 단일 투여형을 팔기 위하여 단일 패키지 내에 하나보다 많은 용기를 함께 사용할 수 있다. 예를 들어, 정제를 병에 담고, 이를 다시 상자에 담을 수 있다.
이러한 키트의 예는 소위 블리스터 팩이다. 블리스터 팩은 포장 산업에서 널리 공지되어 있으며, 약학 단위 투여형(정제, 캡슐 등)을 포장하는데 널리 사용된다. 블리스터 팩은 일반적으로 바람직하게 투명한 플라스틱 물질의 호일로 덮인 비교적 빳빳한 물질의 시이트로 구성된다. 포장 과정 동안, 플라스틱 호일에 오목부를 만든다. 이 오목부는 포장될 개별 정제 또는 캡슐의 크기 및 형상을 가질 수 있거나, 또는 포장될 정제 및/또는 캡슐 여러개를 수용할만한 크기 및 형상을 가질 수 있다. 이어, 정제 또는 캡슐을 이 오목부에 넣고, 비교적 빳빳한 물질의 시이트를 플라스틱 호일 쪽으로(오목부가 형성된 방향 반대쪽의 호일 면에) 밀봉시킨다. 그 결과, 정제 또는 캡슐은 목적하는 바와 같이 플라스틱 호일과 시이트 사이의 오목부에 개별적으로 밀봉되거나 집단적으로 밀봉된다. 바람직하게는, 시이트의 강도는 손으로 오목부에 압력을 가함으로써 오목부 위치의 시이트에 구멍이 생겨서 정제 또는 캡슐을 블리스터 팩으로부터 제거할 수 있도록 하는 강도이다. 이어, 정제 또는 캡슐을 상기 구멍을 통해 제거할 수 있다.
메모리 에이드(memory aid)가 제공되는 것이 바람직할 수 있다. 이 때, 기재된 메모리 에이드는 예컨대 정제 또는 캡슐 뒤의 숫자(이는 그 숫자가 씌어진 정제 또는 캡슐을 섭취해야 하는 치료 날짜에 상응함) 형태, 또는 동일한 유형의 정보가 씌어진 카드 형태의, 의사, 약사 또는 환자를 위한 정보 및/또는 지시를 함유하는 유형일 수 있다. 이러한 메모리 에이드의 다른 예는 예컨대 "제 1 주, 월요일, 화요일"...등..."제 2 주, 월요일, 화요일..." 등과 같이 카드에 인쇄된 달력이다. 메모리 에이드의 다른 변형을 쉽게 알 수 있다. "1일 투여량"은 주어진 날에 섭취해야 하는 하나의 정제 또는 캡슐, 또는 수개의 정제 또는 캡슐일 수 있다.
키트의 다른 구체적인 실시태양은 한번에 1일 투여량을 분배하도록 디자인된 디스펜서(dispenser)이다. 바람직하게는, 디스펜서에는 메모리 에이드가 장치되어 있어서 치료법에 더욱 용이하게 순응하도록 한다. 이러한 메모리 에이드의 예는 기계적 계수기이며, 이는 분배된 1일 투여량의 수를 나타낸다. 이러한 메모리 에이드의 또 다른 예는 액정 표시(readout)와 결합된 배터리-구동 마이크로칩 메모리, 또는 예컨대 최종 1일 투여량이 섭취된 날짜를 나타내고/나타내거나 다음 투여량을 섭취해야 할 때 환자에게 알려주는 소리나는 리마인더 신호(audible reminder signal)이다.
키트의 또 다른 실시태양에서는, 약학 조성물이 또한 본 발명의 화합물과 함께 사용될 수 있는 추가적인 화합물을 포함할 수 있거나, 또는 키트가 2개의 약학 조성물, 즉 본 발명의 화합물을 함유하는 약학 조성물 및 본 발명의 화합물과 함께 사용될 수 있는 추가적인 화합물을 함유하는 다른 조성물을 포함할 수 있다.
임의의 특허 및 특허원을 비롯하여 본원에 인용된 문헌은 본원에 참고로 인용되어 있다.
본원에 제공되는 실시예는 본 발명의 특정 실시태양을 예시하고자 하는 것이며, 어떤 방식으로는 본 명세서 또는 청구의 범위를 한정하고자 하는 것은 아니다.
스프라그 돌리(Sprague Dawley) 래트에서의 14 C-(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 방사성 라벨링된 질량 수지 및 대사 프로파일
목적
14C-(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 15mg/kg 투여량을 1회 정맥내 투여한 후 스프라그-돌리 래트의 뇨, 대변, 담즙 및 혈장에서의 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 방사성 라벨링된 질량 수지 및 대사 프로파일을 결정함.
물질 및 방법
방사성 라벨링된 화합물
14C-(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산(비활성 4.36mCi/밀리몰)은 >99%의 방사성 순도를 나타내었다.
*14C-라벨의 부위
14C-(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산은 아래 기재된 반응식에 따라 제조될 수 있다:
방사성 라벨링된 알데하이드(켄사스주 레텍사 소재의 켐신 래보러토리즈(ChemSyn Laboratories)) 및 아민 A를 메틸렌 클로라이드 중에서 실온에서 하룻밤동안 교반하고(NaBH4중으로의 분취량 급랭 및 HPLC 분석에 의해 이민 형성을 모니터링하면서) NaBH4로 처리하여, 화합물 B를 수득하고, 이를 메틸렌 클로라이드 중에서 과량의 피리딘-3-설폰일 클로라이드 및 후니히(Hunig's) 염기(다이아이소프로필 에틸아민)로 처리하여 화합물 C를 수득한 다음, 이를 메틸렌 클로라이드 중에서 트라이플루오로아세트산과 반응시켜14C-(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산을 형성시켰다.
화합물 A는 다음과 같이 제조할 수 있다:
단계 1
·아세톤중 1당량 알데하이드, 1당량 카보네이트, 1.25당량 3급-뷰틸브로모아세테이트
·20 내지 24시간동안 환류
·물로 급랭
·에틸 아세테이트 중으로 추출, 다음 단계를 위해 2-프로판올(IPO)로 대체
단계 2
·IPO중 1당량 화합물 D, 2당량 하이드록실아민·HCl, 2당량 피리딘(Py)
·환류온도에서 3 내지 4시간동안 가열
·에틸 아세테이트 및 HCl 수용액으로 후처리(work-up)
·다음 단계를 위해 2B 에탄올(톨루엔으로 변성시킴)로 대체
단계 3
·2B 에탄올중 화합물 E, 30% RaNi(라니 니켈), 28% 암모늄
·아이소프로필 에터 추출; 오일로 농축
·오일을 IPO에 용해시키고 IPO에 말레산 첨가
·아이소프로필 에터를 첨가하여 염 석출
동물 모델
목 정맥에 캐뉼러를 삽입한 스프라그-돌리 래트(230 내지 240g) 수컷 3마리 및 암컷 3마리의 군을 뇨 및 대변을 모으도록 디자인된 스테인레스 강 대사용(metabolic) 우리에 넣고,14C-(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 15mg/kg 투여량을 1회 정맥내 투여하였다.
약동학 및 혈장 확인을 위하여, 두 군의 동물(약동학을 위해 수컷 3마리 및 암컷 3마리, 또한 혈장 확인을 위해 수컷 2마리 및 암컷 2마리)에게14C-(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 15mg/kg 투여량을 정맥내 투여하였다.
네번째 동물 군(담관 및 목 정맥에 캐뉼러를 삽입함, 성별당 2마리)에게는 담즙 및 뇨를 모아서 분비 경로 및 담즙 대사산물을 평가하기 위하여 투여하였다.
샘플 채취
투여한지 0 내지 24시간, 24 내지 48시간, 48 내지 72시간, 72 내지 96시간, 96 내지 120시간, 120 내지 144 시간 및 144 내지 168 시간 후에 7일동안 제 I 군의 동물로부터 뇨 및 대변을 수거하였다. 약동학 분석을 위해 투여한지 5분, 15분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 8시간, 24시간 및 48시간 후에, 또한 순환하는 대사산물의 확인을 위하여 투여한지 1시간 및 4시간 후에 전혈을 채취하였다. 원심분리에 의해 전혈로부터 혈장을 분리하였다. 투여한지 0 내지 8시간, 8 내지 24시간 및 24 내지 48시간 후에, 담관에 캐뉼러를 삽입한 동물로부터 담즙 및 뇨를 수거하였다.
샘플 분석
방사능의 결정
액체 섬광 계수에 의해 뇨, 담즙 및 혈장의 방사능을 결정하였다. 뇨 분취량(0.1g), 담즙 분취량(0.025g) 또는 혈장 분취량(0.025g)을 Ecolite(+) 섬광 칵테일 5ml와 혼합하고, Wallac #1409 액체 섬광 계수기(메릴랜드주 게이터스버그)에서 계수하였다. 각 시점의 대변 샘플을 물로 균질화시키고, 대변 균질화물의 총 중량을 기록하였다. 섬광 계수 전에, 균질화물의 분취량(0.1 내지 0.3g)을 패커드(Packard) 산화기(일리노이주 다우너즈 글러브 소재의 패커드 인스트루먼트 캄파니(Packard Instrument Co.))로 산화시켰다.
총 방사능을 100%로 하여 투여량중의 방사능을 확정하였다. 뇨 및 대변의 각 샘플 채취 시점에서의 방사능은 개별 매트릭스내로 분비된 투여량의 백분율로서 정의되었다.
투여 비히클의 비활성 19.75dpm/ng을 기준으로 하여, 혈장에서 측정된 방사능을 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 ng 당량으로 전환시켰다.
대사산물 분비의 정량 평가
βRAM(IN/US, 윈-플로우(Win-flow))을 사용하여 개별적으로 분리된 HPLC 피크의 면적을 측정함으로써 대사산물을 정량화시켰다. β-RAM은 CPM으로 적분된 피크 표시 출력정보 및 방사성 라벨링된 물질의 백분율을 제공하였다. 고체 섬광 셀을 사용하여 β-RAM을 작동시켰다.
생물학적 샘플로부터의 대사산물의 추출
뇨 샘플(약 10ml)을 질소하에서 하룻밤동안 증발시켰다. 샘플 잔류물을 0.1% 폼산/아세토나이트릴(50:50) 1ml에 첨가하여 액체로 만들었다. 이들 용액을 약 1분간 와동시키고(vortex) 1.5ml들이 에펜도르프관에 옮겨 넣은 다음, 14,000rpm에서 약 2분동안 원심분리시켰다. 상청액의 분취량(10 내지 20㎕)을 추가로 정제하지 않고 HPLC 칼럼에 주입하였다.
분비된 방사능의 최고 수준을 함유하는 대변 균질화물(0 내지 48시간)을 모았다. 모아진 샘플(약 80 내지 135g)로부터, 분취량(약 5g)을 아세토나이트릴15ml에 현탁시켰다. 현탁액을 초음파 처리하고(약 30분) 와동시킨 다음 3200rpm에서 10분간 원심분리시켰다. 상청액을 깨끗한 15ml들이 원뿔형 관에 옮긴 다음, 잔류물을 상기 기재된 바와 같이 아세토나이트릴 15ml로 2회 더 추출하였다. 각 추출시 분취량(200㎕)을 액체 섬광 계수기에서 계수하였다. 추출된 방사능의 회수율은 92 내지 96%였다. Turbo Vap LV 증발기(매사추세츠주 홉킨턴 소재의 자이마크(Zymark))에서 질소하에 상청액을 건조할 때까지 증발시키고, 잔류물을 이동상 2ml중에 첨가하여 액체로 만들었다. 농축된 대변 추출물의 분취량(10 내지 20㎕)을 HPLC 칼럼에 주입하였다.
순환하는 대사산물을 확인하기 위한 혈장을, 아세토나이트릴 2부피를 사용하여 침전시켰다. 현탁액을 초음파 처리하고(약 30분) 와동시킨 다음, 3200rpm에서 10분간 원심분리시켰다. 상청액을 깨끗한 15ml들이 원뿔형 관으로 옮긴 다음, 잔류물을 상기 기재된 바와 같이 아세토나이트릴 15ml로 2회 더 추출하였다. 상청액을 모으고, Turbo Vap LV 증발기에서 질소하에 건조할 때까지 증발시킨 후, 잔류물을 이동상 0.5ml중에 첨가하여 액체로 만들었다. 농축된 혈장 추출물의 분취량(50 내지 100㎕)을 HPLC 칼럼에 주입하였다.
분석하기 위하여, 담즙을 추가로 정제하지 않고 바로 HPLC/MS 시스템 내로 주입하였다.
고성능 액체 크로마토그래피
HPLC 시스템은 HP-1100 용매 전달 시스템, HP-1100 막 탈기장치, HP-1100 자동 주입기(휴렛 팩커드(Hewlett Packard)) 및 IN/US 방사능 모니터(β-RAM)로 구성되었다. YMC AQ(C-18) 칼럼(4.6mm×150mm, 3㎛)(메릴랜드주 밀포드 소재의 워터스(Waters)) 상에서 크로마토그래피를 수행하였다. 이동상은 처음에 10mM 폼산암모늄 pH 5.0(용매 A) 및 아세토나이트릴(용매 B)로 구성되었다. 용매 전달 단계 구배 프로그램은 다음과 같았다:
다음에 주입하기 전에 시스템을 10분간 평형화시켰다. 분석하는 동안 내내 1.0ml/분의 유속을 유지하였다. 혈장 대사산물을 정량하기 위하여, HPLC 유출물을 β-ram 방사능 검출기의 유동 셀로 유도하였다. 낮은 수준의 방사능을 계수하기 위하여, ARC(정밀 방사성 동위원소 계수) 시스템을 이용하여 β-ram 및 HPLC를 외부에서 제어하였다.
질량 분광분석법
API-2 전기 분무 사이틀(interface)이 장치된 Finnigan TSQ 7000 3부분 4중극 질량 분광분석기(캘리포니아주 산 호세 소재의 피니간(Finnigan))를 이용하여 대사산물을 확인하였다. HPLC 칼럼 유출물을 쪼개어서 약 50㎕/분이 API 사이틀 내로 도입되도록 하였다. 나머지 유출물은 β-RAM의 유동 셀로 유도하였다. β-RAM 반응을 MS 데이터 수집 시스템에 의해 실시간 아날로그 신호로서 기록하였다.방사능 검출기 및 MS 검출기로부터 수집된 데이터를, MS로부터 방사능 검출기까지의 유동의 체류 부피(약 0.2분의 체류 시간에 상응함)에 의해 분리하였다. 질량 분광분석기가 양이온 방식으로 데이터를 수집할 때 전기 분무 전압은 -4.5eV에서 작동하였다. 30 내지 35eV의 충돌 에너지 및 약 2.1mTorr의 충돌 기체 두께를 사용하여 Q2(Q2는 두번째 4중극임)에서 아르곤 기체로 충돌 유도된 해리(CID) 연구를 수행하였다.
결과 및 논의
대사산물의 확인
대사산물 M8
대사산물 M8은 10:26 내지 11:35(분:초)의 체류 시간을 가졌고, m/z 351에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다. 이는 뇨(수컷) 및 담즙에서 검출되었다. M8의 CID 분절화(fragmentation) 패턴은 m/z 305, 146 및 131에서 두드러진 분절을 가졌다. m/z 305(분자 이온으로부터 46amu 손실)에서의 이온은 카복실산 잔기의 존재를 암시하였다. m/z 131 및 146에서의 이온은 폼산의 손실과 동시에 각각 카복시 아이소프로필 벤질 잔기 및 카복시 아이소프로필 벤질아민 잔기로부터 생성될 수 있었다. 분절화 패턴 및 분자 이온에 기초하여, M8이 페녹시 아세트산 잔기의 N-탈벤질화에 이어 3급-뷰틸의 카복실산으로의 산화 및 피리딘 고리의 하이드록실화에 의해 생성되었음이 암시된다. 이 대사산물과 삼염화티탄(인산중 20% 용액)의 반응으로 인해 이 대사산물의 체류 시간이 약 1분 증가되었고 M+H+이온이 16amu 감소되어, 이 대사산물이 N-옥사이드임을 암시하였다. 이 데이터에 기초하여, M8은 2-{4-[(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-2-메틸-프로피온산인 것으로 확인되었다.
대사산물 M13
대사산물 M13은 HPLC에서 약 10:47(분:초)의 체류 시간을 가졌고, 담즙(수컷)에서만 검출되었다. 이는 모화합물보다 192amu 더 높은 m/z 661에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다. 그의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 485,467, 342, 324, 165 및 145에서 두드러진 분절 이온을 나타내었다. m/z 485에서의 이온은 분자 이온으로부터의 글루쿠론산의 손실에 기인한 것이었다. m/z 467의 이온은 m/z 485의 이온으로부터 물의 손실에 의해 발생되었다. m/z 342 및 324에서의 이온은 설폰일 피리딘 잔기 및 물의 후속 손실로부터 발생된 것이었다. 모화합물과 유사한 m/z 165에서의 이온은 양성자화 메틸 페녹시 아세트산 잔기에 기인하였다. m/z 145에서의 이온은 하이드록시 3급-뷰틸 벤질 잔기로부터의 물의 손실을 나타내었다. 이들 데이터에 기초하여, M13은 (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 글루쿠로나이드인 것으로 확인되었다.
대사산물 M9
대사산물 M9는 m/z 417에서 양성자화 분자 이온을 가졌으며, 암컷 래트의 뇨에서만 검출되었다. 이는 HPLC에서 약 11:35(분:초)의 체류 시간을 가졌다. 모화합물보다 52amu 더 낮은 m/z 417의 양성자화 분자 이온은 M9가 분할된 생성물임을 암시하였다. M9의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 319, 160 및 145에서 두드러진 이온을 나타내었다. 양성자화 분자 이온보다 98amu 더 낮은 m/z 319에서의 이온은 분자로부터 물 및 설페이트 분자의 손실을 암시하였다. m/z 147에서의 모화합물보다 2amu 더 낮은 m/z 145의 이온은 3급-뷰틸 벤질이 하이드록실화되었고 분절화되는 동안 물 분자가 손실되었음을 암시한다. 또한, 이 대사산물과 삼염화티탄(인산중 20% 용액)의 반응으로 인해 이 대사산물의 체류 시간이 약 2분 증가되었고, 생성된 M+H+이온은 16amu 감소되어, 이 대사산물이 N-옥사이드임을 암시하였다. 이들 데이터에 기초하여, M9의 구조는 피리딘-N-옥사이드-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체인 것으로 제안되었다.
대사산물 M6
대사산물 M6는 HPLC에서 약 11:23 내지 12:37(분:초)의 체류 시간을 가졌으며, 대변, 담즙 및 혈장에서 발견되었다. 이는 m/z 565(모화합물보다 96amu 더 높음)에서 양성자화 분자 이온을 나타내어, 산소 원자 및 설페이트기의 첨가를 암시하였다. M6의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 485, 467, 342, 324, 165 및 145에서 두드러진 분절을 나타내었다. m/z 485 및 467의 이온은 양성자화 분자 이온으로부터의 설페이트 및 물의 후속 손실에 기인한 것이었다. m/z 165에서의 이온은 모화합물과 유사하여, 메틸 페녹시 아세트산 잔기가 변화되지 않았음을 나타내었다. m/z 342(모화합물에서 관찰된 것보다 16amu 더 높음)에서의 이온은 3급-뷰틸 벤질 잔기에 산소원자가 첨가되었음을 나타내었다. m/z 324 및 145에서의 이온은 모화합물의 스펙트럼에서 상응하는 것보다 2amu 더 낮아서, 다시 한 번 3급-뷰틸 벤질 잔기에 산소가 첨가되었고, 분절화될 때 물 분자가 손실되었음을 암시하였다. 이 데이터에 기초하여, M6는 (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 황산화물 공액체인 것으로 확인되었다.
대사산물 M10
대사산물 M10은 m/z 401에서 양성자화 분자 이온을 가졌고 대변 및 암컷 뇨에서만 발견되었다. 이는 HPLC에서 약 13:26(분:초)의 체류 시간을 가졌다. 모화합물보다 68달톤 더 낮은 m/z 401에서의 분자 이온은 이것이 분할된 생성물임을 암시하였다. M10의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 303, 160 및 145에서 두드러진 이온을 나타내었다. 양성자화 분자 이온보다 98amu 더 낮은 m/z 303에서의 이온은 분자로부터의 황산의 손실을 암시하였다. m/z 147의 모화합물보다 2amu 더 낮은 m/z 145의 이온은 분절화되는 동안 3급-뷰틸 벤질이 하이드록실화되고 물 분자가 손실되었음을 암시하였다. 이들 데이터에 기초하여, M10의 구조는 피리딘-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체인 것으로제안되었다.
대사산물 M11
대사산물 M11은 약 12:04 내지 14:20(분:초)의 체류 시간을 가졌고, 뇨 및 담즙에서 발견되었으며, m/z 335에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다. 모화합물보다 134달톤 더 낮은 m/z 335의 분자 이온은 이것이 분할된 생성물임을 암시하였다. M11의 CID 분절화 패턴은 m/z 289, 146 및 131에서 두드러진 분절을 가졌다. 분자 이온으로부터 46amu 손실된 m/z 289의 이온은 카복실산 잔기의 존재를 암시하였다. m/z 131 및 146에서의 이온은 폼산을 동시에 손실하면서 각각 카복시 아이소프로필 벤질 잔기 및 카복시 아이소프로필 벤질아민 잔기로부터 생성된 것일 수 있다. 이들 데이터에 기초하여, M11의 구조는 2-메틸-2-{4-[(피리딘-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-프로피온산으로서 제안되었다.
대사산물 M3
대사산물 M3는 HPLC에서 약 12:33 내지 14:21(분:초)의 체류 시간을 가졌으며, 담즙(수컷) 및 대변에서 발견되었다. 이는 m/z 499(모화합물보다 30amu 더 높음)에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다. CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 453, 356, 310, 165 및 131에서 두드러진 분절을 나타내었다. m/z 165에서의 이온은 모화합물과 유사하여, 메틸페녹시 아세트산 잔기가 변화되지 않았음을 암시하였다. m/z 356의 이온은 모화합물에서 관찰된 것보다 30amu 더 높아서, 2개의 산소원자가 첨가되고 2개의 수소원자가 손실되었음을 암시하였다. m/z 310 및 131의 이온은 각각 m/z 356 및 177에서의 이온으로부터 46amu가 손실되어 생성된 것으로, 카복실산 잔기의 존재를 암시하였다. 이들 데이터에 기초하여, 대사산물 M3는 2-(4-{[(3-카복시메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산으로서 확인되었다.
대사산물 M4
대사산물 M4는 HPLC에서 약 13:20 내지 15:00(분:초)의 체류 시간을 가졌고, 대변, 담즙, 혈장 및 암컷의 뇨에서 발견되었다. 이는 m/z 485(모화합물보다16amu 더 높음)에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다. m/z 485의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 467, 342, 324, 165 및 145에서 두드러진 분절 이온을 보여주었다. m/z 467의 이온은 분자로부터의 물의 손실에 의해 발생되었다. m/z 342에서의 이온은 설폰일 피리딘 잔기의 손실에 기인한 것이었고, 뒤이어 물을 손실함으로써 m/z 324의 이온을 형성하였다. 모화합물과 유사한 m/z 165의 이온은 양성자화 메틸 페녹시 아세트산 잔기에 기인한 것이었다. m/z 145에서의 이온은 하이드록시 3급-뷰틸 벤질 잔기로부터의 물의 손실을 나타내었다. 이들 데이터에 기초하여, M4는 (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산인 것으로 확인되었다.
대사산물 M5
대사산물 M5는 HPLC에서 약 15:23(분:초)의 체류 시간을 가졌고 혈장 및 담즙에서 발견되었다. 이는 m/z 485(모화합물보다 16amu 더 높음)에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다. M5의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 439, 326, 165 및 147에서 두드러진 분절 이온을 보여주었다. m/z 439의 이온은 분자로부터 폼산의 손실에 의해 발생되었다. m/z 326, 165 및 147에서의 이온은 모화합물과 유사하여, 메틸페녹시 아세트산 잔기 및 3급-뷰틸 벤질 잔기가 변화되지 않았음을 암시하였다. 이들 데이터에 기초하여, M5는 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산으로 확인되었다.
대사산물 M14
대사산물 M14는 HPLC에서 약 16:90분의 체류 시간을 가졌고 담즙에서만 발견되었다. 이는 m/z 645(모화합물보다 176달톤 더 높음)에서 양성자화 분자 이온을 나타내어, 이것이 글루쿠로나이드 공액체임을 암시하였다. m/z 645의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 469, 423, 413, 326, 165 및 147에서 두드러진 분절 이온을 나타내었다. m/z 469에서의 이온은 분자로부터 글루쿠론산의 손실에 의해 발생된 것이었다. m/z 423에서의 이온은 분자로부터의 폼산의 손실에 의해 발생되었다. 3급-뷰틸기가 손실되어 m/z 413의 이온이 생겼다. m/z 326에서의 이온은 설폰일 피리딘 잔기의 손실에 의한 것이었다. m/z 165에서의 이온은 양성자화 메틸 페녹시 아세트산 잔기에 기인한 것이었다. 이들 데이터에 기초하여, 이 대사산물은 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 글루쿠로나이드인 것으로 확인되었다.
대사산물 M12
대사산물 M12는 HPLC에서 15:50 내지 17:50(분:초)의 체류 시간을 가졌고 대변 및 담즙에서 발견되었다. 이는 m/z 485(모화합물보다 16amu 더 높음)에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다. 대사산물 M12의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 485, 342, 305, 181, 162 및 147에서 두드러진 분절을 나타내었다. m/z 162 및 147의 이온은 모화합물에서 발견되는 것과 유사하여, 3급-뷰틸 벤질 잔기가 변화되지 않았음을 암시하였다. m/z 181 및 342에서의 이온은 모화합물에서 발견된 것(각각 m/z 165 및 m/z 326)보다 16amu 더 높아서, 산소원자가 메틸페녹시 아세트산 잔기에 첨가되었음을 나타내었다. m/z 305에서의 이온은 하이드록시 페녹시 아세트산 잔기의 손실에 기인한 것이었다. 이러한 데이터에 기초하여, M12는 (5-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-하이드록시-페녹시)-아세트산으로 확인되었다. 이 화합물 명칭이 본원에 사용되는 경우에는, 페닐 고리상의 하이드록실기의 위치가 규정되지 않고, 이 명칭이 하이드록실기의 가능한 위치 각각을 포괄하고자 하는 것임에 주의한다.
M12
(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 대사 경로의 개요가 반응식 1에 도시되어 있다. 주요 산화 경로는 하이드록시 메틸 대사산물, 즉 M4(수컷 19.7%; 암컷 6.5%)를 형성하기 위한 3급-뷰틸 잔기의 산화에 기인한 것이었다. M4를 추가로 산화시켜 카복실산 대사산물 M3(수컷 32.8%; 암컷 1.66%)를 형성시키거나, 또는 황산과 공액시켜 대사산물 M6(수컷 12.7%; 암컷 36.2%)를 형성시켰다. 다른 소량의 대사산물은 피리딘 고리의 N-산화(M5) 및 메틸-페녹시아세트산 잔기의 하이드록실화 및 N-탈알킬화에 이은 단계 II 공액에 기인하였다. 모화합물에 덧붙여, 순환되는 대사산물은 M4, M5 및 M6를 포함하였다.
14C-(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 15mg/kg의 1회 정맥내 투여에 따른, 스프라그-돌리 래트에서의 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 대사 경로
래트, 개, 원숭이 및 인간의 간 미세소체 및 간세포에서의 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 시험관내 대사산물의 확인
(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산은 래트, 개, 원숭이 및 인간의 간 미세소체 및 간세포에서 광범위하게 대사되었다. 주요 대사 경로는 알콜을 형성시키기 위한 3급-뷰틸 잔기의 산화, 피리딘 잔기의 산화 및/또는 메틸페녹시 아세트산 잔기의 N-탈알킬화에 기인한 것이었다. 알콜 대사산물 M4는 추가로 산화되어 상응하는 카복실산 M3이 되었다. 간세포에서, M4는 황산과 공액되었다. 개의 간세포에서, 대사산물 M12중 하나는 메틸페녹시 아세트산 잔기의 방향족 산화에 기인하였다.
목적
인간, 래트, 개 및 원숭이의 간 미세소체 및 간세포에서 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 대사 경로를 결정함.
물질
방사성 라벨링된 화합물
14C-(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산(비활성 4.36mCi/밀리몰)은 >99%의 방사성 순도를 나타내었고 상기 기재된 바와 같이 합성되었다.
미세소체 배양
표준 절차를 이용하여 시차 원심분리에 의해 인간(HL-mix 12), 래트, 원숭이 및 개의 간 미세소체를 준비하였다. 사용하기 전에, 간 미세소체를 얼음상에서 해동시키고 pH 7.4의 100mM 인산칼륨을 사용하여 다시 용액으로 만들었다. [14C]-(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산을 pH 7.4의 100mM 인산칼륨에 최종 농도 20μM로 용해시켰다. 샘플을 진탕되는 수욕 중에서 37℃에서 미세소체(CYP 450; 0.5μM)와 함께 3분간 예비-배양하였다. 배양 혼합물 1ml당 보조인자(1.1mM NADPH, 10mM MgCl2) 100㎕를 첨가하여 배양을 개시하였다. 같은 부피의 차가운 아세토나이트릴을 첨가함으로써 30분 후에 배양을 중지시켰다.
간세포 배양
간 3개의 혼합물로부터 인간의 간세포를 준비하였다. 스프라그 돌리 래트(간 12개), 사이노몰구스(Cynomolgus) 원숭이(간 1개) 및 비글(Beagle) 개(간 2개)를 이용하여 래트와 원숭이 간세포를 준비하였다. 냉동보존된 간세포를 10% FBS를 갖는 윌리암(William's) E 배지에 1ml당 세포 2백만개의 가시 계수로 현탁시키고, 처음에 또한 배양 1시간마다 95/5 O2/CO2를 공급하였다. (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 20μM을 25ml들이 얼렌마이어 플라스크에 첨가한 다음, 간세포 현탁액 2.5ml를 첨가하고 진탕되는 수욕에서 37℃에서 4시간동안 배양하였다.
샘플 분석
정량 평가
β-RAM(IN/US, 윈-플로우)을 사용하여 개별적으로 분리된 HPLC 피크의 면적을 측정함으로써 대사산물을 정량하였다. β-RAM은 CPM으로 적분된 피크 표시 출력정보 및 방사성 라벨링된 물질의 백분율을 제공하였다. 고체 섬광 셀을 사용하여 β-RAM을 작동시켰다.
시험관내 매트릭스로부터의 대사산물의 추출
같은 부피의 차가운 아세토나이트릴을 첨가함으로써 배양을 중지시키고 초음파 처리한 다음 3000rpm에서 10분간 원심분리시켰다. 상청액을 제거하고 질소하에 건조해질 때까지 증발시켰다. 50:50 (아세토나이트릴:물)에 잔류물을 첨가하여 용액으로 만들고, 분석하기 위하여 분취량(50 내지 90㎕)을 HPLC 시스템에 주입하였다.
고성능 액체 크로마토그래피
HPLC 시스템은 HP-1100 용매 전달 시스템, HP-1100 막 탈기장치, HP-1100 자동 주입기(휴렛 팩커드) 및 IN/US 방사능 모니터(β-RAM)로 구성되었다. YMC AQ(C-18) 칼럼(4.6mm×150mm, 3㎛)(메릴랜드주 밀포드 소재의 워터스) 상에서 크로마토그래피를 수행하였다. 이동상은 처음에 10mM 아세트산암모늄 pH 3.5와 폼산(용매 A) 및 아세토나이트릴(용매 B)로 구성되었다. 용매 전달 단계 구배 프로그램은 다음과 같았다:
다음에 주입하기 전에 시스템을 10분간 평형화시켰다. 분석하는 동안 내내 1.0ml/분의 유속을 유지하였다.
질량 분광분석법
API-2 전기 분무 사이틀이 장치된 Finnigan TSQ 7000 3부분 4중극 질량 분광분석기를 이용하여 대사산물을 확인하였다. HPLC 칼럼 유출물을 쪼개어서 약 50㎕/분이 API 사이틀 내로 도입되도록 하였다. 나머지 유출물은 β-RAM의 유동 셀로 유도하였다. β-RAM 반응을 MS 데이터 수집 시스템에 의해 실시간 아날로그 신호로서 기록하였다. 방사능 검출기 및 MS 검출기로부터 수집된 데이터를, MS로부터 방사능 검출기까지의 유동의 체류 부피(약 0.2분의 체류 시간에 상응함)에 의해 분리하였다. 질량 분광분석기가 양이온 방식으로 데이터를 수집할 때 전기 분무 전압은 -4.5eV에서 작동하였다. 30 내지 35eV의 충돌 에너지 및 약 2.1mTorr의 충돌 기체 두께를 사용하여 Q2에서 아르곤 기체로 충돌 유도된 해리(CID) 연구를 수행하였다.
결과 및 논의
미세소체에서의 전환율(turnover)
간 미세소체에서의 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 전환율은 래트(94.3%)에서 가장 컸고, 그 뒤로 인간(92.8%), 원숭이(74.9%) 및 개(41.6%)의 순서였다. 미세소체 배양액의 대표적인 HPLC 방사성 크로마토그램이 도 1에 도시되어 있다. 인-라인 방사성 계수에 의해 대사산물을 정량하였고, 상대적인 백분율이 표 1에 기재되어 있다.
간세포에서의 전환율
(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산을 래트, 개, 원숭이 및 인간의 간세포와 함께 배양하였다. 4가지 종의 상대적인 전환율은 래트=원숭이>인간>개의 순서였다. 간세포 배양액중 대사산물의 상대적인 백분율이 표 2에 기재되어 있다. 간세포 배양액의 대표적인 HPLC 방사성 크로마토그램이 도 2에 도시되어 있다.
LC/MS/MS에 의한 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 분절화
(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산은 HPLC에서 17 내지 17:28(분:초)의 체류 시간을 가졌고, m/z 469에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다. m/z 469의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 423, 413, 326, 165 및 147에서 두드러진 분절 이온을 나타내었다(도 3). m/z 423에서의 이온은 분자로부터의 폼산의 손실에 의해 발생되었다. 3급-뷰틸기의 손실로 인해 m/z 413에 이온이 발생되었다. m/z 326에서의 이온은 설폰일 피리딘 잔기의 손실에 의해 생성되었다. m/z 165에서의 이온은 양성자화 메틸 페녹시아세트산 잔기에 기인한 것이었고, m/z 147의 이온은 3급-뷰틸 트로폴륨 이온에 기인한 것이었다. (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 제안된 분절화는 아래에 도시되어 있다:
대사산물의 확인
대사산물 M21
대사산물 M21은 m/z 321에서 양성자화 분자 이온을 가졌고, HPLC에서 10:58(분:초)의 체류 시간을 가졌다. 이는 래트, 개 및 원숭이의 간세포에서 발견되었다. m/z 321에서의 분자 이온은 모화합물이 N-탈벤질화 및 하이드록실화되었음을 암시하였다. M21의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 178, 160, 145, 133 및 78에서 두드러진 이온을 보여주었다(도 4). m/z 178에서의 이온은 설폰아마이드 결합의 절단에 의해 생성되었다. m/z 178에서의 이온으로부터 물이 손실됨으로써 m/z 160의 이온이 생성되었다. m/z 147의 모화합물보다 2amu 더 낮은 m/z 145의 이온은 분자가 3급-뷰틸 잔기에서 하이드록실화되었음을 암시하였다. m/z 78의 이온은 피리딘 고리에서의 전하 안정화에 기인한 것이었다. 이러한 데이터에 기초하여, M21의 구조는 피리딘-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드로 확인되었다.
대사산물 M11
대사산물 M11은 HPLC에서 9:48 내지 10:48(분:초)의 체류시간을 가졌고, m/z 335에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다. 이는 래트 및 원숭이의 간 미세소체에서 발견되었다. 모화합물보다 134달톤이 낮은 m/z 335에서의 분자 이온은 이것이 분할된 생성물임을 암시하였다. M11의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 289, 146 및 131에서 분절을 나타내었다(도 5). m/z 289(분자 이온으로부터 46amu가 손실됨)에서의 이온은 카복실산 잔기의 존재를 암시하였다. m/z 131 및 146의 이온은 폼산의 동시 손실과 함께 개질된 3급-뷰틸 벤질 잔기 및 3급-뷰틸벤질아민 잔기로부터 발생될 수 있다. 이의 분절화 패턴 및 분자 이온에 기초하여, M11이 페녹시아세트산 잔기의 N-탈벤질화에 이은 3급-뷰틸 잔기의 산화에 의한 카복실산의 형성으로부터 생성된 것으로 암시되었다. 따라서, 이는 2-메틸-2-{4-[(피리딘-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-프로피온산으로서 확인되었다.
대사산물 M2
대사산물 M2는 HPLC에서 12:24(분:초)의 체류 시간을 가졌으며, m/z 501(모화합물보다 32amu 더 높음)에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다. M2는 래트 및 개의 간세포에서 발견되었다. 이는 m/z 483, 342, 324, 165 및 145에서 두드러진 분절 이온을 나타내었다(도 6). m/z 483의 이온은 분자로부터의 물의 손실에 의해 발생되었다. m/z 342에서의 이온은 설폰일 피리딘 잔기의 손실로 인해 발생되었고, 뒤이어 물을 손실함으로써 m/z 324의 이온을 형성시켰다. 모화합물과 유사한 m/z 165에서의 이온은 메틸 페녹시아세트산 잔기에 기인한 것이었다. m/z 145의 이온은 개질된 3급-뷰틸벤질 잔기로부터의 물의 손실을 나타내었다. 이러한 데이터에 기초하여, M2는 다이하이드록시 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산으로 확인되었다. 이 화합물 명칭이 명세서에 사용되는 경우에는, 피리딜 고리상의 하이드록실기의 위치가 규정되지 않고, 이 명칭이 하이드록실기의 가능한 위치 각각을 포괄하고자 하는 것임에 주목한다.
대사산물 M3
대사산물 M3는 HPLC에서 11:55 내지 13:54(분:초)의 체류시간을 갖고, m/z 499(모화합물보다 30amu 더 높음)에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다. 이는 래트, 원숭이 및 인간의 간 미세소체 및 모든 종의 간세포에서 발견되었다. M3의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 453, 356, 310, 177, 165 및 131에서 두드러진 분절을 나타내었다(도 7). m/z 165에서의 이온은 모화합물과 유사하여, 메틸페녹시 아세트산 잔기가 변화하지 않았음을 암시하였다. m/z 356에서의 이온은 모화합물에서 관찰된 것보다 30amu 더 높아서, 2개의 산소원자가 첨가되었고 2개의 수소원자가 손실되었음을 암시하였다. m/z 310 및 131의 이온은 각각 m/z 356 및 177의 이온으로부터 46amu가 손실됨에 기인된 것으로, 카복실산 잔기의 존재를 암시하였다. 이들 데이터에 기초하여, 대사산물 M3는 카복시 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산으로서 확인되었다.
대사산물 M4
대사산물 M4는 HPLC에서 13:29(분:초)의 체류 시간을 가졌고, m/z 485에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다(모화합물보다 16amu 더 높음). 이는 래트, 원숭이, 개 및 인간의 간 미세소체, 및 인간의 간세포에서 발견되었다. 이의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 467, 342, 335, 324, 165 및 145에서 두드러진 분절 이온을 나타내었다(도 8). m/z 467의 이온은 분자로부터 물 이온이 손실됨으로써 발생하였다. m/z 342의 이온은 설폰일 피리딘 잔기의 손실로 인해 발생되었고, 뒤이어 물이 손실됨으로써 m/z 324의 이온이 형성되었다. 모화합물과 유사한 m/z 165의 이온은 양성자화 메틸페녹시 아세트산 잔기에 기인한 것이었다. m/z 145의 이온은 개질된 3급-뷰틸 벤질 잔기로부터의 물 손실을 나타내었다. 이들 데이터에 기초하여, M4는 하이드록시 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산으로서 확인되었다.
대사산물 M19
대사산물 M19는 HPLC에서 14:40의 체류 시간을 가졌고, m/z 321(모화합물보다 148amu 더 낮음)에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다. 이는 분석된 모든 종의 미세소체에서 발견되었다. M19의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 321, 265,162 및 147에서 두드러진 분절 이온을 나타내었다(도 9). m/z 162 및 147에서의 이온은 모화합물의 CID 생성물 이온 스펙트럼에서 관찰되어, 페닐 3급-뷰틸기가 변화되지 않고 분자가 N-탈알킬화되었음을 암시하였다. m/z 265에서의 이온은 3급-뷰틸 잔기의 손실로부터 발생되어, 피리딘 잔기상에서 산화가 이루어졌음을 암시하였다. 이 데이터에 기초하여, M19는 5-하이드록시-피리딘-3-설폰산-4-3급-뷰틸-벤질아마이드로서 확인되었다. 이 화합물 명칭이 명세서에 사용되는 경우에는, 피리딜 고리상의 하이드록실기의 위치가 규정되지 않고, 이 명칭은 하이드록실기의 가능한 위치 각각을 포괄하고자 함에 주목한다.
대사산물 M6
대사산물 M6는 HPLC에서 11:52(분:초)의 체류시산을 갖고 m/z 565(모화합물보다 96amu 더 높음)에서 양성자화 분자 이온을 나타내어, 산소원자 및 설페이트기의 첨가를 암시하였다. M6는 래트, 원숭이 및 인간의 간세포에서 발견되었다. M6의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 485, 467, 342, 324, 165 및 145에서 두드러진 분절을 나타내었다(도 10). m/z 485 및 467에서의 이온은 양성자화 분자 이온으로부터의 설페이트 및 물의 손실에 기인한 것이었다. m/z 165에서의 이온은 모화합물과 유사하여, 메틸페녹시 아세트산 잔기가 변화되지 않았음을 나타내었다. m/z 342(모화합물에서 관찰된 것보다 16amu 더 높음)에서의 이온은 3급-뷰틸 벤질 잔기 상에서 산소 첨가가 이루어졌음을 나타내었다. m/z 324 및 145에서의 이온은 모화합물의 스펙트럼에 상응하는 것보다 2amu 더 낮아서, 3급-뷰틸 벤질 잔기에 산소가 첨가되었고 분절화되는 동안 물 분자가 손실되었음을 다시 한번 암시하였다. 이러한 데이터에 기초하여, M6는 하이드록시-(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 황산화물 공액체인 것으로 확인되었다.
대사산물 M5
대사산물 M5는 HPLC 상에서 약 15:29분의 체류시간을 가졌고 m/z 485(모화합물보다 16amu 더 높음)에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다. M5는 래트, 개, 원숭이 및 인간의 간 미세소체에 존재하였다. m/z 485의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 439, 326, 165 및 147에서 두드러진 분절 이온을 나타내었다(도 11). m/z 326, 147 및 165에서의 이온은 모두 모화합물의 CID 스펙트럼에서 보이는 것과 유사하였고, 페닐 3급-뷰틸 잔기 및 페녹시 아세트산 잔기가 개질되지 않았음을 암시하였다. m/z 439에서의 이온은 모화합물에서 관찰된 것보다 16amu 더 높았다. 이 데이터는 피리딘 잔기가 하이드록실화되었음을 암시하였다. 또한, 이 대사산물을삼염화티탄으로 처리하면 15.3분에 피크가 없어지고, 크로마토그램에서 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 상대적인 면적이 증가하여, M5가 모화합물의 N-옥사이드임을 암시하였다. 이들 데이터에 기초하여, M5는 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 N-옥사이드로서 확인되었다.
대사산물 M12
대사산물 M12는 HPLC에서 약 16:01(분:초)의 체류시간을 가졌고 개의 간 미세소체에서만 발견되었다. 이는 m/z 485(모화합물보다 16amu 더 높음)에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다. 대사산물 M12의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 485, 342, 305, 181, 162 및 147에서 두드러진 분절을 나타내었다(도 12). m/z 162 및 147에서의 이온은 모화합물에서 보여지는 것과 유사하여, 3급-뷰틸 벤질 잔기가 변화하지 않았음을 암시하였다. m/z 181 및 342에서의 이온은 모화합물에서 관찰된 것(각각 m/z 165 및 326)보다 16amu 더 높아서, 메틸-페녹시 아세트산 잔기에 산소원자가 첨가되었음을 나타내었다. m/z 305의 이온은 페녹시 아세트산 잔기의 손실에 기인한 것이었다. 이들 데이터에 기초하여, M12는 하이드록시 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산으로서 확인되었다. 또 다시, 이 화합물 명칭이 명세서에 사용되는 경우에는, 페닐 고리상의 하이드록실기의 위치가 규정되지 않고, 이 명칭이 하이드록실기의 가능한 위치 각각을 포괄하고자 함에 주목한다.
대사산물 M20
대사산물 M20은 HPLC에서 약 19:45분의 체류시간을 갖고 m/z 305에서 양성자화 분자 이온을 나타내었다(모화합물보다 164amu 더 낮음). M20의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 162 및 147에서 두드러진 분절 이온을 나타내었다(도 13). 이들 이온은 모화합물의 CID 생성물 이온 스펙트럼에서 관찰되었으며, 따라서 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산이 N-탈알킬화 되어 m/z 305에서 분할된 대사산물을 생성시켰음을 암시하였다. 이들 데이터에 기초하여, M20은 피리딘-3-설폰산 4-3급-뷰틸-벤질아마이드로서 확인되었다.
(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산은 래트, 개, 원숭이 및 인간의 간 미세소체 및 간세포에서 광범위하게 대사되었다. 제시된 대사 경로는 반응식 2에 도시되어 있다. 주요한 대사 경로는 알콜을 형성하는 3급-뷰틸 잔기의 산화, 피리딘 잔기의 산화 및/또는 메틸페녹시 아세트산 잔기의 N-탈알킬화를 통한 것이었다. 알콜 대사산물 M4는 추가로 산화되어 상응하는 카복실산 M3를 생성시켰다. 간세포에서는, M4가 황산과 공액되었다. 개의 간세포에서, 대사산물 M12중 하나는 메틸페녹시 아세트산 잔기의 방향족 산화에 기인하였다.
간 미세소체 및 간세포에서의, 시험관내 배양에 따른14C-(3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 제안된 대사 경로
재조합 인간 P-450을 사용한 대사산물의 생성
재조합 인간 사이토크롬 P-450 아이소형 rCYP3A4, rCYP3A5 및 rCYP2C8을 젠테스트(Gentest, 매사추세츠주 워번 소재)에서 구입하였다. 각 배양시 사용된 발현된 rCYP의 양은 배양액 1ml당 단백질 약 1mg이었다. 사용하기 전에, 미세소체를 얼음상에서 해동시키고 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산(50μM)을 함유하는 100mM 인산칼륨 pH 7.4를 사용하여 다시 용액으로 만들었다. 샘플을 진탕되는 수욕에서 37℃에서 재조합 CYP와 함께 3분간 예비 배양시켰다. 보조인자(1.1mM NADPH, 10mM MgCl2) 100㎕를 첨가하여 배양을 개시시켰다. 배양한지 60분 후, 샘플을 아세트산으로 pH 3.0으로 산성화시키고, 동일한 부피의 메틸-3급-뷰틸 에터(MTBE)에 대해 추출시켰다. 질소 기체하에 건조할 때까지 MTBE 층을 증발시키고, LC/MS로 분석하기 위해 10mM 아세트산암모늄:아세토나이트릴(1:1) 중에서 다시 용액으로 만들었다.
P-450 대사산물의 LC/MS 구조 특징 결정
HPLC 시스템은 HP-1100 용매 전달 시스템, HP-1100 막 탈기장치, HP-1100 자동 주입기(휴렛 팩커드) 및 IN/US 방사능 모니터(β-RAM)로 구성되었다. YMC ODS AQ(C-18) 칼럼(4.6mm×150mm, 3㎛) 상에서 크로마토그래피를 수행하였다. 이동상은 처음에 10mM 아세트산암모늄 pH 5.0과 아세트산(용매 A) 및 아세토나이트릴(용매 B)로 구성되었다. 전기 분무 사이틀이 장치된 Micromass Q-Tof 2(매사추세츠주 비벌리 소재) 질량 분광분석기를 이용하여 대사산물을 확인하였다. HPLC 칼럼 유출물을 쪼개어서 약 50㎕/분이 API 사이틀 내로 도입되도록 하였다. 나머지 유출물은 β-RAM의 유동 셀로 유도하였다. β-RAM 반응을 MS 데이터 수집 시스템에 의해 실시간 아날로그 신호로서 기록하였다. 방사능 검출기 및 MS 검출기로부터 수집된 데이터를, MS로부터 방사능 검출기까지의 유동의 체류 부피(0.1분 이하의 체류 시간에 상응함)에 의해 분리하였다. 질량 분광분석기가 양이온 방식으로 데이터를 수집할 때 전기 분무 전압은 -3eV에서 작동하였다. 20 내지 30eV의 충돌 에너지 및 ~5×10-5torr의 감금 압력(penning pressure)을 사용하여 Q2에서 아르곤 기체로 충돌 유도된 해리(CID) 연구를 수행하였다. 보정물질(calibrant)이 매 5초마다 질량 분광분석기 내로 도입되도록 하는 표시된 락스프레이(Lockspray)를 통해, 분석하는 내내 내부 잠금(lock) 질량(퀴니딘, m/z 325.1916)을 사용하였다.
대사산물 M22: (3-{[[4-(1,2-다이하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산
대사산물 M22는 HPLC상에서 14분의 체류시간 및 m/z 487(모화합물보다 18amu 더 높음)에서 양성자화 분자 이온을 가졌다. M22의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 469, 451, 423, 395, 335, 326, 165 및 147에서 두드러진 분절 이온을 보여주었다(도 14). m/z 165에서의 이온은 모약물에서 관찰된 것과 유사하여, 페녹시 아세트산 잔기가 변화되지 않았음을 암시하였다. 양성자화 분자 이온으로부터 각각 일관되게 18amu 손실된 m/z 469 및 451에서의 이온은 물 분자 2개가 손실되었음을 암시하였다. 고해상도 질량 스펙트럼(Q-Tof)으로부터 실험식 정보를 수득하여, C24H27N2O7S의 실험식을 시사하였다. 이러한 데이터 및 뒷받침되는 LC-NMR 데이터에 기초하여, M22는 (3-{[[4-(1,2-다이하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산으로 확인되었다.
대사산물 M23: (3-{[[4-(1-하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산
대사산물 M23은 HPLC 상에서 16.9의 체류시간 및 m/z 471(모화합물보다 2amu 더 높음)에 양성자화 분자 이온을 가졌다. M23의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 453, 335, 310, 165 및 131에서 두드러진 분절 이온을 나타내었다(도 15). m/z 165에서의 이온은 모화합물에서 관찰된 것과 유사하여, 페녹시 아세트산 잔기가 변화되지 않았음을 암시하였다. m/z 453(양성자화 분자 이온으로부터 18amu 손실)에서의 이온은 물 분자가 손실되었음을 암시하였다. m/z 310 및 131(모화합물에서 관찰된 것보다 16amu 더 낮음)에서의 이온은 메틸기가 물 분자로 대체된 후 분절화되는 동안 손실되었음을 암시하였다. 이들 데이터 및 뒷받침하는 LC-NMR 데이터에 기초하여, M23은 (3-{[[4-(1-하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산인 것으로 확인되었다.
대사산물 M24: (3-{[[4-(1,1-다이메틸-2-옥소-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산
대사산물 M24는 HPLC 상에서 18.6분의 체류시간 및 m/z 483(모화합물보다 14amu 더 낮음)에서 양성자화 분자 이온을 가졌다. M24의 CID 생성물 이온 스펙트럼은 m/z 483, 437, 409, 340, 165 및 161에서 두드러진 분절 이온을 보여주었다(도 16). m/z 423, 340 및 161에서의 이온은 모약물의 스펙트럼에서 관찰된 것보다 14amu 더 높아서, 산소원자가 첨가된 동시에 수소원자 2개가 손실되었음을 암시하였다. 이 대사산물에 대해 수득된 고해상도 질량 스펙트럼은 분자량 483.1590 및 실험식 C25H27N2O6S를 나타내었다. 이들 데이터 및 뒷받침하는 LC-NMR 데이터에 기초하여, M24는 (3-{[[4-(1,1-다이메틸-2-옥소-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산으로서 확인되었다.
대사산물 M26: (3-{[(4-아이소프로펜일-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산
대사산물 M26은 HPLC 상에서 22분의 체류 시간 및 m/z 453(모화합물보다 16amu 더 낮음)에서 양성자화 분자 이온을 가졌다. CID 생성물 이온은 m/z 453, 407, 310, 165 및 131에서 두드러진 분절 이온을 나타내었다(도 17). m/z 165에서의 이온은 모화합물에서 관찰된 것과 유사하여, 페녹시 아세트산 잔기가 변화되지 않았음을 암시하였다. 407, 310 및 131에서의 이온은 모화합물의 스펙트럼에서 관찰된 이온보다 16amu 더 낮아서, 3급-뷰틸 잔기로부터 16 질량단위가 손실되었음을암시하였다. 이 대사산물에 대해 수득된 고해상도 질량 스펙트럼은 분자량 453.1487을 나타내었고 실험식 C24H25N2O5S를 제안하였다. 이 대사산물에 대한 LC-NMR과 조합된 이들 데이터는 (3-{[(4-아이소프로펜일-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산으로서 말단 올레핀기의 형성에 일치한다.
합성 프로토콜
하기 제조예는 실시예 1 및 2의 화합물의 합성에 사용되는 중간체의 합성에 관한 것이다.
제조예 1
{3-[(피리딘-3-설폰일아미노)-메틸]-페녹시}-아세트산 3급-뷰틸 에스터
단계 A
(3-폼일-페녹시)-아세트산 3급-뷰틸 에스터
DMF(40mL)중 3-하이드록시벤즈알데하이드(5.00g, 40.9밀리몰)의 용액에 3급-뷰탄올(40.9mL, 40.9밀리몰)중 1M 3급-뷰톡시화칼륨을 첨가하였다. 반응물을 2분간 교반하고, 3급-뷰틸 브로모아세테이트(6.61mL, 40.9밀리몰)를 첨가하였다. 반응물을 1시간동안 교반한 다음 물 200mL로 급랭시켰다. 생성물을 EtOAc 중으로 추출하고 유기 용액을 물로 세척한 다음, MgSO4상에서 건조시키고 여과한 후 진공에서 농축시켰다. 실리카겔(9:1 헥세인:EtOAc) 상에서의 플래시 크로마토그래피를 통해 정제시킴으로써, 표제 화합물을 투명한 오일(3.53g)로서 수득하였다.1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 9.94 (s, 1H), 7.48 (m, 2H), 7.32 (s, 1H), 7.21 (m, 1H), 4.56 (s, 2H), 1.45 (s, 9H).
단계 B
[3-(하이드록시이미노-메틸)-페녹시]-아세트산 3급-뷰틸 에스터
MeOH(30mL)중 (3-폼일-페녹시)-아세트산 3급-뷰틸 에스터(2.05g, 8.68밀리몰)의 용액에 NH2OH·HCl(0.66g, 9.54밀리몰) 및 피리딘(3.5mL, 43.4밀리몰)을 첨가하고, 반응물을 2시간동안 교반하였다. MeOH를 진공에서 제거하고 잔류물을 EtOAc 및 1N HCl로 희석시켰다. 층을 분리시키고 수용액을 EtOAc로 세척하였다. 모아진 유기 상을 MgSO4상에서 건조시키고 여과 및 진공에서 농축시켜, 표제 화합물(1.99g)을 생성시켰다.1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.07 (s, 1H), 7.23-7.28 (m, 2H), 7.12 (m, 1H), 6.93 (d, 1H), 4.51 (s, 2H), 1.46 (s, 9H).
단계 C
(3-아미노메틸-페녹시)-아세트산 3급-뷰틸 에스터
EtOH(10mL)중 [3-(하이드록시이미노-메틸)-페녹시]-아세트산 3급-뷰틸 에스터(2.25g, 5.96밀리몰)의 용액에 에탄올 100mL중 라니 니켈(약 1g, 물로 세척한 후EtOH로 세척함)을 첨가하였다. 옮기는데 추가의 EtOH(90mL)가 필요하였다. 수산화암모늄(10mL)을 첨가하고 혼합물을 H245psi하에 4시간동안 진탕시켰다. Celite(등록상표)(규조토)를 통해 여과함으로써 촉매를 제거하고, 용액을 농축시켜 투명한 오일로 만들었다. 실리카겔(96.5/3.5/0.1 내지 9/1/0.1의 CH2Cl2/MeOH/NH4OH) 상에서의 플래시 크로마토그래피를 통해 정제함으로써, 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다.1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.23 (m, 1H), 6.92 (m, 2H), 6.72 (d, 1H), 4.50 (s, 2H), 3.82 (s, 2H), 1.96 (m, 2H), 1.46 (s, 9H); MS 238 (M+1).
단계 D
{3-[(피리딘-3-설폰일아미노)-메틸]-페녹시}-아세트산 3급-뷰틸 에스터
0℃에서 CH2Cl2중 (3-아미노메틸-페녹시)-아세트산 3급-뷰틸 에스터(296mg, 1.25밀리몰)의 용액에 피리딘-3-설폰일 클로라이드 하이드로클로라이드(279mg, 1.31밀리몰)를 첨가한 후 Et3N(0.36mL, 2.6밀리몰)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 24시간동안 교반하고, 물과 포화 NaHCO3수용액의 1:1 용액으로 급랭시켰다. 이 수용액을 CH2Cl2로 세척하였다(3회). 모아진 유기 용액을 건조시키고(MgSO4), 여과 및 농축시켰다. 중간압 크로마토그래피(1:1 헥세인:EtOAc)에 의해 표제 화합물을 백색 고체(369.5mg)로서 수득하였다.1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 9.04 (s, 1H), 8.75 (m, 1H), 8.09 (d, 1H), 7.44 (m, 1H), 7.15 (m, 1H), 6.76 (m, 3H), 5.23(bs, 1H), 4.44 (s, 2H), 4.16 (d, 2H), 1.47 (s, 9H); MS 379 (M+1).
제조예 2
2-(4-브로모메틸-페닐)-2-메틸-프로피온산 에틸 에스터
단계 A
2-메틸-2-p-톨릴-프로피온산 에틸 에스터
NaH(오일중 60중량%, 3.9g, 98.2밀리몰)를 DMF로 세척하고, 새로운 DMF(175mL)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고 MeI(6.1mL, 98.2밀리몰), 이어 DMF(15mL)중 p-톨릴-아세트산 에틸 에스터(5.0g, 28.05밀리몰)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 48시간동안 교반하였다. 물을 첨가하고 수용액을 EtOAc로 세척하였다(3회). 모아진 유기 용액을 물로 세척하고(4회) 포화 NaHCO3수용액으로 세척하였다(1회). 유기 용액을 건조시키고(MgSO4), 여과 및 농축시켰다. 중간압 크로마토그래피(95:5 헥세인:EtOAc)에 의해 2-메틸-2-p-톨릴-프로피온산 에틸 에스터(1.2g)를 수득하였다.1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.21 (d, 2H), 7.11 (d, 2H), 4.10 (q, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.54 (s, 6H), 1.17 (t, 3H).
단계 B
2-(4-브로모메틸-페닐)-2-메틸-프로피온산 에틸 에스터
CCl4(15mL)중 2-메틸-2-p-톨릴-프로피온산 에틸 에스터(263mg, 1.27밀리몰) 및 N-브로모석신이미드(272mg, 1.53밀리몰)의 용액에 1,1'-아조비스(사이클로헥세인카보나이트릴)(15.5mg, 0.06밀리몰)을 첨가하였다. 반응물을 환류온도에서 1시간동안 가열하고 물 및 CH2Cl2로 희석시켰다. 층을 분리시키고, 수성 층을 CH2Cl2로 세척하였다(3회). 모아진 유기 용액을 건조시키고(MgSO4), 여과 및 농축시켰다. 중간압 크로마토그래피(95:5 헥세인:EtOAc)에 의해 2-(4-브로모메틸-페닐)-2-메틸-프로피온산 에틸 에스터(354mg)를 수득하였다.1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.31 (m, 4H), 4.47 (s, 2H), 4.10 (q, 2H), 1.54 (s, 6H), 1.17 (t, 3H).
제조예 3
[2-(4-브로모메틸-페닐)-2-메틸-프로폭시]-3급-뷰틸-다이메틸-실레인
단계 A
2-메틸-2-p-톨릴-프로판-1-올
0℃에서 THF(10mL)중 2-메틸-2-p-톨릴-프로피온산 에틸 에스터(510mg, 2.47밀리몰)의 용액에 수소화알루미늄리튬(Et2O중 1M, 2.6mL, 2.6밀리몰)을 첨가하였다. 반응물을 0.5시간동안 교반하고, 물(0.1mL), 15% NaOH(0.1mL) 및 물(0.3mL)을 연속적으로 첨가함으로써 반응물을 급랭시켰다. 반응물을 EtOAc로 희석시키고 건조시킨(MgSO4) 다음, 여과 및 농축시켜, 2-메틸-2-p-톨릴-프로판-1-올(405mg)을 수득하였다.1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.27 (d, 2H), 7.15 (d, 2H), 3.58 (s, 2H), 2.32 (s, 3H), 1.31 (s, 6H); MS 165 (M+1).
단계 B
3급-뷰틸-다이메틸-(2-메틸-2-p-톨릴-프로폭시)-실레인
DMF(5mL)중 2-메틸-2-p-톨릴-프로판-1-올(405mg, 2.46밀리몰)의 용액에 이미다졸(335mg, 4.92밀리몰) 및 3급-뷰틸다이메틸실릴 클로라이드(465mg, 3.08밀리몰)를 첨가하였다. 반응물을 24시간동안 교반하고 물을 첨가하였다. 수용액을 EtOAc로 3회 세척하였다. 모아진 유기 용액을 물로 4회 세척하였다. 유기 용액을 건조시키고(MgSO4) 여과 및 농축시켰다. 중간압 크로마토그래피(헥세인)에 의해 3급-뷰틸-다이메틸-(2-메틸-2-p-톨릴-프로폭시)-실레인(619mg)을 수득하였다.1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.26 (d, 2H), 7.10 (d, 2H), 3.49 (s, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.27 (s, 6H), 0.85 (s, 9H), -0.06 (s, 6H).
단계 C
[2-(4-브로모메틸-페닐)-2-메틸-프로폭시]-3급-뷰틸-다이메틸-실레인
출발물질로서 3급-뷰틸-다이메틸-(2-메틸-2-p-톨릴-프로폭시)-실레인(398mg, 1.42밀리몰)을 사용하여, 제조예 2의 단계 B에 기재되어 있는 절차에 따라, 표제 화합물을 제조하였다. 반응시간은 24시간이었고, 용리제로서 헥세인을 사용하여 중간압 크로마토그래피시킴으로써 화합물을 정제시켰다.1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.31 (m, 4H), 4.46 (s, 2H), 3.48 (s, 2H), 1.26 (s, 6H), 0.81 (s, 9H), -0.10 (s, 6H).
실시예 1
2-(4-{[(3-카복시메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산
단계 A
2-(4-{[(3-3급-뷰톡시카본일메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산 에틸 에스터
NaH(오일중 60중량%, 23mg, 0.55밀리몰)를 DMF(5mL)로 세척하고, 새로운 DMF(5mL)를 첨가하였다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, DMF(1mL)중 {3-[(피리딘-3-설폰일아미노)-메틸]-페녹시}-아세트산 3급-뷰틸 에스터(184mg, 0.486밀리몰)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 1시간동안 교반하고, DMF(1mL)중 2-(4-브로모메틸-페닐)-2-메틸-프로피온산 에틸 에스터(145mg, 0.51밀리몰)를 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고 100℃에서 2시간동안 가열하였다. 물을 첨가하고 수용액을 EtOAc로 3회 세척하였다. 모아진 유기 용액을 물로 5회 세척하고 건조시킨(MgSO4) 다음 여과 및 농축시켰다. 플래시 크로마토그래피(2:1 헥세인:EtOAc)에 의해 2-(4-{[(3-3급-뷰톡시카본일메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산 에틸 에스터(138mg)를 수득하였다.1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 9.01 (s, 1H), 8.76 (m, 1H), 7.97 (m, 1H), 7.40 (m, 1H), 7.19 (d, 2H), 7.13 (m, 1H), 7.02 (d, 2H), 6.76 (m, 1H), 6.67 (m, 2H), 4.41 (s, 2H), 4.33 (s, 4H), 4.10 (q, 2H), 1.52 (s, 6H), 1.49 (s, 9H), 1.17 (t, 3H).
단계 B
2-(4-{[(3-카복시메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산 에틸 에스터
MeOH(5mL)중 2-(4-{[(3-3급-뷰톡시카본일메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산 에틸 에스터(138mg, 0.237밀리몰)의 용액에 NaOH 수용액(2N, 0.36mL, 0.72밀리몰)을 첨가하였다. 반응물을 100℃에서 1시간동안 가열하고 실온으로 냉각시켰다. 반응물을 진공에서 농축시키고 물 및 EtOAc로 희석시켰다. pH를 1N HCl로 약 5로 조정하였다. 수용액을 EtOAc로 3회 세척하였다. 모아진 유기 용액을 건조시키고(MgSO4), 여과 및 농축시켰다. 염화나트륨을 수용액에 첨가하고, 용액을 EtOAc로 3회 세척하였다. 모아진 유기 용액을 건조시키고(MgSO4) 여과 및 농축시켰다. 모아진 표제 화합물(104mg)을 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. MS 527 (M+1).
단계 C
2-(4-{[(3-카복시메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산
THF(10mL)중 2-(4-{[(3-카복시메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산 에틸 에스터(83mg, 0.157밀리몰)의 용액에 물(1mL) 및 LiOH·H2O(66mg, 1.58밀리몰)를 첨가하였다. 반응물을 환류온도에서 24시간동안 가열하였다. 물(2mL)중 추가의 LiOH·H2O(66mg, 1.58밀리몰)를 첨가하고, 반응물을환류온도에서 30시간동안 가열하였다. 혼합물을 진공에서 농축시키고, 잔류물에 THF(3mL) 및 물(1.5mL)을 첨가하였다. 반응물을 환류온도에서 24시간동안 가열하고 실온으로 냉각시켰다. 용액을 물로 희석시키고 1N HCl을 첨가함으로써 pH를 약 5로 조정하였다. 염화나트륨을 첨가하고 수용액을 EtOAc로 3회 세척하였다. 모아진 유기 용액을 건조시키고(MgSO4) 여과 및 농축시켜, 표제 화합물(74mg)을 수득하였다.1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.94 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.13 (d, 1H), 7.55 (m, 1H), 7.23 (d, 2H), 7.11 (m, 3H), 6.78 (d, 1H), 6.73 (d, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.90 (s, 2H), 4.39 (s, 2H), 3.30 (s, 2H), 1.50 (s, 6H); MS 497 (M-1).
실시예 2
3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산
단계 A
(3-{[{4-[2-(3급-뷰틸-다이메틸-실란일옥시)-1,1-다이메틸-에틸]-벤질}-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 3급-뷰틸 에스터
실시예 1의 단계 A에 기재되어 있는 절차에 따라 [2-(4-브로모메틸-페닐)-2-메틸-프로폭시]-3급-뷰틸-다이메틸-실레인(121mg, 0.339밀리몰)을 사용하여 {3-[(피리딘-3-설폰일아미노)-메틸]-페녹시}-아세트산 3급-뷰틸 에스터(122mg, 0.322밀리몰)를 알킬화시킴으로써 표제 화합물을 제조하였다. 반응시간은 1시간이었다.조질 생성물(238mg)을 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. MS 655 (M+1).
단계 B
(3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 3급-뷰틸 에스터
THF(2mL)중 (3-{[{4-[2-(3급-뷰틸-다이메틸-실란일옥시)-1,1-다이메틸-에틸]-벤질}-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 3급-뷰틸 에스터(210mg, 0.321밀리몰)의 용액에 테트라뷰틸암모늄 플루오라이드(THF중 1M, 0.34mL, 0.34밀리몰)를 첨가하였다. 반응물을 환류온도에서 1시간동안 가열하고, 추가의 테트라뷰틸암모늄 플루오라이드(THF중 1M, 0.34mL, 0.34밀리몰)를 첨가하였다. 반응물을 환류온도에서 24시간동안 가열하고, 추가적인 테트라뷰틸암모늄 플루오라이드(THF중 1M, 0.34mL, 0.34밀리몰)를 첨가하였다. 반응물을 45분간 가열하고 실온으로 냉각시켰다. 물 및 CH2Cl2를 첨가하고 층을 분리시켰다. 수용액을 CH2Cl2로 3회 세척하였다. 모아진 유기 층을 건조시키고(MgSO4), 여과 및 농축시켰다. 중간압 크로마토그래피(1:1 헥세인:EtOAc 내지 3:2 EtOAc:헥세인)에 의해 (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 3급-뷰틸 에스터(108mg)를 수득하였다. MS 541 (M+1).
단계 C
(3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산
CH2Cl2(2mL)중 (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 3급-뷰틸 에스터(108mg, 0.19밀리몰)의 용액을 0℃로 냉각시키고, 트리플루오로아세트산(1mL)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간동안 교반하였다. CH2Cl2로 3회 공비 제거함으로써, 용액을 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 THF에 용해시키고 1N HCl(0.4mL)을 첨가하였다. CH2Cl2로 3회 공비 제거하면서 용액을 진공에서 농축시켰다. 용매 구배를 이용하여 래디알(radial) 크로마토그래피시킴으로써 정제하여, 표제 화합물(34mg)을 수득하였다.1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.79 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.52 (m, 1H), 7.21(d, 2H), 7.09 (m, 1H), 7.02 (d, 2H), 6.76 (d, 1H), 6.70 (m, 2H), 4.86 (s, 2H), 4.32 (m, 4H), 3.48 (s, 2H), 1.22 (s, 6H); MS 485.2 (M+1), 483.4 (M-1).
약 23℃에서 양성자 핵에 대해 약 400MHz에서 Varian Unity 400 분광분석기(배리안 캄파니(Varian Co.), 캘리포니아주 팔로 알토 소재) 상에서 NMR 스펙트럼을 기록하였다. 화학적 시프트는 ppm으로 표현된다. 피트 형상은 아래와 같이 표시된다: s, 단일선; d, 이중선; t, 삼중선; q , 사중선; m, 다중선; bs, 넓은 단일선. Fisons Platform II 분광분석기(마이크로매스 인코포레이티드(Micromass Inc.), 매사추세츠주 비벌리 소재) 상에서 대기압 화학적 이온화(APCI) 질량 스펙트럼을 수득하였다. 염소 또는 브롬-함유 이온의 강도가 기재되는 경우, 예측된강도 비가 관찰되었으며(35Cl/37Cl-함유 이온의 경우 약 3:1,79Br/81Br-함유 이온의 경우 1:1), 질량이 보다 낮은 이온의 강도가 기재된다.
질소 압력하에 Biotage 정제 시스템(바이오티지, 다이액스 코포레이션(Biotage, Dyax Corporation), 버지니아주 샬롯츠빌 소재)을 이용하여 중간압 크로마토그래피를 수행하였다. 낮은 질소 압력하에 유리 칼럼중의 Baker 실리카겔(40㎛)(제이.티. 베이커(J. T. Baker), 뉴저지주 필립스버그 소재) 또는 실리카겔 60(이엠 싸이언씨즈(EM Sciences), 뉴저지주 깁스타운 소재)을 사용하여 플래시 크로마토그래피를 수행하였다. Chromatotron(모델 7924T, 해리슨 리써치(Harrison Research), 캘리포니아주 팔로 알토 소재)을 사용하여 래디알 크로마토그래피를 수행하였다. 반응 용매로서 사용된 다이메틸포름아마이드(DMF), 테트라하이드로퓨란(THF) 및 다이클로로메테인(CH2Cl2)은 알드리치 케미칼 캄파니(Aldrich Chemical Company)(위스콘신주 밀워키 소재)에서 공급된 무수 등급이었다. 용어 "농축된"은 회전 증발기에서 수 흡입기 압력에서 용매를 제거함을 의미한다. 용어 "EtOAc"는 에틸 아세테이트를 의미한다. 용어 "다이클로로메테인" 및 "메틸렌 클로라이드"는 동의어의며, 발명의 상세한 설명, 실시예 및 제조예에서 서로 호환성있게 사용된다.
래트 EP 2 수용체 결합 분석
프로스타글란딘 E 2 수용체로의 결합 분석
네모토(Nemoto) 등의 문헌[Prostaglandins and other Lipid Mediators,1997, 54, 713-725]에 개시된 바와 같이 전체 길이의 EP2수용체를 제조한다. 이 전체 길이의 수용체를 사용하여, EP2수용체를 발현하는 293S 세포를 준비한다.
래트의 EP2프로스타글란딘 E2수용체를 발현하는 293S 세포는 당해 분야의 숙련자에게 공지되어 있는 방법에 따라 생성시킨다. 전형적으로는, 상기 개시된 널리 공지된 방법에 따라, 공개된 전체 길이의 수용체의 5' 말단 및 3' 말단에 상응하는 PCR(폴리머라제 연쇄 반응) 프라이머를 제조하고, 공급원으로서의 래트 신장으로부터 공급되는 전체 RNA를 사용하는 RT-PCR 반응에 사용한다. PCR 생성물을 TA 돌출(overhang) 방법에 의해 pCR2.1(인비트로젠(Invitrogen), 캘리포니아주 칼스배드 소재) 내로 클로닝하고, DNA 서열 결정에 의해 클로닝된 수용체의 정체를 확인한다. 발현시키기 위하여, 확인된 cDNA를 포유동물의 발현 벡터인 PURpCl 내로 부차 클로닝시키는데, 상기 벡터는 퓨로마이신 내성에 대해 선택가능한 마커를 포유동물의 발현 벡터 pCl(프로메가(Promega), 위스콘신주 매디슨 소재) 내로 부차 클로닝시킴으로써 생성된 벡터이다.
지질 매개되는 형질감염에 의해, PURpCi중의 클로닝된 수용체로 293S 세포를 형질감염시킨다. 형질감염된 세포를 퓨로마이신으로 선택함으로써, 수용체를 발현하는 안정한 세포주를 확립한다.
라벨링되지 않은 PGE2를 경쟁자로서 사용하는 전세포(whole cell)3H-PGE2결합 분석을 수행하여, 최다수의 수용체를 발현하는 클론 세포주를 선택한다.
막 준비: 모든 조작은 4℃에서 수행한다. 프로스타글란딘 E2유형 2(EP2) 수용체를 발현하는 형질감염된 세포를 수확하고, 완충액 A[50mM Tris-HCl(pH 7.4), 10mM MgCl2, 1mM EDTA, 1mM Pefabloc 펩타이드(베링거 만하임 코포레이션(Boehringer Mannheim Corp.), 인디애나주 인디애나폴리스 소재), 10uM Phosporamidon 펩타이드(시그마(Sigma), 미주리주 세인트 루이스 소재), 1uM 펩스타틴 A 펩타이드(시그마, 미주리주 세인트 루이스 소재), 10uM 엘라스타티널(elastatinal) 펩타이드(시그마, 미주리주 세인트 루이스 소재), 100uM 안티페인(antipain) 펩타이드(시그마, 미주리주 세인트 루이스 소재)] 1ml당 2백만개의 세포로 현탁시킨다. Branson 초음파 처리기(브랜슨 올트라소닉스 코포레이션(Branson Ultrasonics Corporation), 코넥티컷주 댄버리 소재)를 사용하여 2회의 15초 발사로 초음파 처리함으로써 세포를 용해시켰다. 100×g에서 10분간 원심분리시킴으로써, 용해되지 않은 세포 및 찌꺼기를 제거한다. 이어, 45,000×g에서 30분간 원심분리시킴으로써 막을 수확한다. 펠렛화된 막을 1ml당 단백질 3 내지 10mg으로 재현탁시키며, 이 때 단백질 농도는 브래드포드의 방법[브래드포드(Bradford M.), Anal. Biochem. 72, 248 (1976)]에 따라 결정한다. 재현탁된 막을 사용할 때까지 -80℃에서 저장한다.
결합 분석: 상기와 같이 제조된 동결된 막을 해동시키고, 상기 완충액 A에 1ml당 단백질 1mg으로 희석시킨다. 1부피의 막 제제를 완충액 A 중에서 0.05부피의 시험 화합물 또는 완충액 및 1부피의 3nM3H-프로스타글란딘 E2(애머샴(Amersham), 일리노이주 알링턴 하이츠 소재)와 혼합한다. 혼합물(205μL의 총 부피)을 25℃에서 1시간동안 배양한다. 이어, Tomtec 수확기(톰텍(Tomtec), 코넥티컷주 오렌지 소재)를 사용하여 GF/C 유리 섬유 필터(월락, 메릴랜드주 게이터스버그 소재)를 통해 여과함으로써, 막을 회수한다. 막과 결합된3H-프로스타글란딘 E2는 필터에 포획되는 반면, 완충액과 결합되지 않은3H-프로스타글란딘 E2는 필터를 통과하여 폐기된다. 이어, 각 샘플을 [50mM Tris-HCl(pH 7.4), 10mM MgCl2, 1mM EDTA] 3ml로 3회 세척하였다. 필터를 마이크로파 오븐에서 가열함으로써 건조시킨다. 막에 결합된3H-프로스타글란딘의 양을 결정하기 위하여, 섬광 유체가 든 플라스틱 백에 넣고 LKB 1205 Betaplate 판독기(월락, 메릴랜드주 게이터스버그 소재)에서 계수한다. 특이적으로 결합된3H-프로스타글란딘 E2의 50%를 치환시키는데 필요한 시험 화합물의 농도로부터 IC50을 결정한다.
실시예 1 래트 EP2결합 IC50=750nM
실시예 2 래트 EP2결합 IC50=170nM
본원에서는 하기 약어가 사용된다:
I.V.: 정맥내
HPLC: 고압 액체 크로마토그래피
CPM: 분당 계수
min: 분
MS: 질량 분광분석법
CID: 충돌 유도된 해리
AMU: 원자 질량 단위
FBS: 태아 송아지 혈청
LC: 액체 크로마토그래피
DMF: 다이메틸포름아마이드
EtOAc: 에틸 아세테이트
MeOH: 메탄올
NMR: 핵자기공명
Et3N: 트라이에틸아민
THF: 테트라하이드로퓨란
H: 시간

Claims (8)

  1. 화합물 2-(4-{[(3-카복시메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염.
  2. 화합물 (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염.
  3. 화합물 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염.
  4. 화합물 (5-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-하이드록시-페녹시)-아세트산, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염.
  5. 화합물 2-{4-[(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-2-메틸-프로피온산;
    (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 글루쿠로나이드;
    피리딘-N-옥사이드-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체(sulfate conjugate);
    (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 황산화물 공액체;
    피리딘-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체;
    2-메틸-2-{4-[(피리딘-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-프로피온산;
    (3-{[[4-(1,2-다이하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산;
    (3-{[[4-(1-하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산;
    (3-{[[4-(1,1-다이메틸-2-옥소-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; 또는
    (3-{[(4-아이소프로펜일-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산;
    또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염.
  6. 환자로부터 수득된 혈장, 뇨, 담즙 또는 대변 샘플이, 2-(4-{[(3-카복시메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; 2-{4-[(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-2-메틸-프로피온산; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 글루쿠로나이드; 피리딘-N-옥사이드-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 황산화물 공액체; 피리딘-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체; 2-메틸-2-{4-[(피리딘-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-프로피온산; (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (5-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-하이드록시-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1,2-다이하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1-하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1,1-다이메틸-2-옥소-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; 및 (3-{[(4-아이소프로펜일-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물의 존재를 나타내는지를 결정하는 단계를 포함하는,
    환자가 (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산을 투여받았는지의 여부를 결정하는 방법.
  7. 골다공증의 치료 또는 골절의 치유가 필요한 환자에게 2-(4-{[(3-카복시메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (5-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-하이드록시-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1,2-다이하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1-하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; (3-{[[4-(1,1-다이메틸-2-옥소-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; 또는 (3-{[(4-아이소프로펜일-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산으로부터 선택되는 화합물 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 치료 효과량으로 투여함을 포함하는,
    골다공증을 치료하거나 골절 치유를 보조하는 방법.
  8. 2-(4-{[(3-카복시메톡시-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페닐)-2-메틸-프로피온산;
    (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산;
    2-{4-[(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-2-메틸-프로피온산; (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산 글루쿠로나이드;
    피리딘-N-옥사이드-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체;
    (3-{[[4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산의 황산화물 공액체;
    피리딘-3-설폰산 4-(2-하이드록시-1,1-다이메틸-에틸)-벤질아마이드의 황산화물 공액체;
    2-메틸-2-{4-[(피리딘-3-설폰일아미노)-메틸]-페닐}-프로피온산;
    (3-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-N-옥사이드-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산;
    (5-{[(4-3급-뷰틸-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-하이드록시-페녹시)-아세트산;
    (3-{[[4-(1,2-다이하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산;
    (3-{[[4-(1-하이드록시-1-메틸-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산;
    (3-{[[4-(1,1-다이메틸-2-옥소-에틸)-벤질]-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산; 또는
    (3-{[(4-아이소프로펜일-벤질)-(피리딘-3-설폰일)-아미노]-메틸}-페녹시)-아세트산으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물.
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Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA67754C2 (uk) * 1997-10-10 2004-07-15 Пфайзер, Інк. Агоністи простагландину, фармацевтична композиція на їх основі (варіанти), спосіб нарощення та збереження кісткової маси у хребетних та спосіб лікування (варіанти)
US7666330B2 (en) * 2005-04-20 2010-02-23 Lg Chem, Ltd. Additive for non-aqueous electrolyte and secondary battery using the same
EP2059507B1 (en) * 2006-07-28 2013-03-20 Pfizer Products Inc. Ep2 agonist
CN101669030B (zh) 2007-03-08 2016-01-13 小利兰·斯坦福大学托管委员会 线粒体醛脱氢酶2调节剂和其使用方法
EP2002834A1 (de) * 2007-06-13 2008-12-17 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Aryl/Hetarylamide als Modulatoren des EP2-Rezeptors
WO2009113600A1 (ja) * 2008-03-12 2009-09-17 宇部興産株式会社 ピリジルアミノ酢酸化合物
EP2149554A1 (de) 2008-07-30 2010-02-03 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Indolylamide als Modulatoren des EP2-Rezeptors
EP2149552A1 (de) 2008-07-30 2010-02-03 Bayer Schering Pharma AG 5,6 substituierte Benzamid-Derivate als Modulatoren des EP2-Rezeptors
EP2149551A1 (de) 2008-07-30 2010-02-03 Bayer Schering Pharma AG N-(Indol-3-ylalkyl)-(hetero)arylamidderivate als Modulatoren des EP2-Rezeptors
WO2010028175A1 (en) * 2008-09-08 2010-03-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Modulators of aldehyde dehydrogenase activity and methods of use thereof
EP2349279A4 (en) 2008-10-28 2013-12-25 Univ Leland Stanford Junior ALDEHYDE DEHYDROGENASE MODULATORS AND METHOD OF USE THEREOF
DK2415763T3 (en) 2009-03-30 2016-03-07 Ube Industries A pharmaceutical composition for the treatment or prevention of glaucoma
DE102009049662A1 (de) 2009-10-13 2011-04-14 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft 2,5-Disubstituierte 2H-Indazole als EP2-Rezeptor-Antagonisten
US10457659B2 (en) 2011-04-29 2019-10-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Compositions and methods for increasing proliferation of adult salivary stem cells
TW201326154A (zh) 2011-11-28 2013-07-01 拜耳知識產權公司 作為ｅｐ２受體拮抗劑之新穎２ｈ－吲唑
EP2970124B1 (en) 2013-03-14 2019-05-22 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University Mitochondrial aldehyde dehydrogenase-2 modulators and methods of use thereof

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA67754C2 (uk) * 1997-10-10 2004-07-15 Пфайзер, Інк. Агоністи простагландину, фармацевтична композиція на їх основі (варіанти), спосіб нарощення та збереження кісткової маси у хребетних та спосіб лікування (варіанти)

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