KR20040015821A - 인자 ⅶ 폴리펩티드와 인자 ⅹⅰ폴리펩티드를 포함하는약학적 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드을 포함하는 조성물과 출혈 우발증를 치료하기 위한 사용과 관련된다.

Description

인자 Ⅶ 폴리펩티드와 인자 ⅩⅠ폴리펩티드를 포함하는 약학적 조성물{PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING FACTOR VII POLYPEPTIDES AND FACTOR XI POLYPEPTIDES}

지혈은 혈관벽에 손상후에 순환하는 피에 노출된 조직 인자(TF)와 전체 FVII 단백질 양의 1 %에 해당하는 양으로 혈액에 존재하는 FVlla사이의 복합체의 형성으로 시작된다. 이 복합체는 TF-보유 세포에 정착하고 세포 표면에서 FX를 FXa로 그리고 FIX 를 FIXa로 활성화시킨다. FXa는 프로트롬빈을 트롬빈으로 활성화시키고 이는 FVIII, FV, FXI와 FXIII를 활성화시킨다. 게다가, 지혈의 이 초기 단계에 형성된 트롬빈의 제한된 양은 혈소판을 활성화시킨다. 혈소판에서 트롬빈의 활동후에, 이는 형태를 변경시키고 전기를 띠는 인지질을 표면에서 노출시킨다. 이 활성화된 혈소판 표면은 FX 활성화에 대한 혈소판과 완전한 트롬빈 세대를 형성한다. 활성화된 혈소판 표면에서 FX 활성화는 활성화된 혈소판의 표면에 형성된 FIXa-FVllla를 통해서 발생하고 FXa는 그 다음에 표면에 정지해 있는 동안 프로트롬빈을 트롬빈으로 전환시킨다. 다음에 트롬빈은 피브리노겐을, 녹지 않고 초기 혈소판 플럭을 안정화시키는 피브린으로 전환시킨다. 이 과정은 구획화 즉 TF 발현 또는 노출 위치에 제한되고 응고체계의 체계적 활성화의 위험을 최소화시킨다. 플럭을 형성하는 비용해적 피브린 형태는 FXIII-촉매된 피브린 섬유의 교차 결합에 의해 더 안정화된다.

FVlla는 혈장에서 단일 사슬 지모겐으로 존재하고 단일 사슬 지모겐은 FXa에 의해 두개의 체인, 활성화된 형태, FVlla로 절단된다. 재조합체 활성화된 인자 Vlla (rFVlla)는 전구지혈제로 발전되어 왔다. rFVlla를 투여하면 항체 형성 때문에 응고인자 생성물으로 치료할 수 없는 출혈이 있는 해모필리아 시험체에서 빠르고 매우 효과적인 전지혈 반응이 나타난다. 또한 인자 VII가 부족한 출혈 시험체 또는 과다 출혈이 있지만 보통 응고체계를 갖는 시험체를 FVlla으로 성공적으로 치료할 수 있다. 이러한 연구에서, rFVll의 바람직하지 않은 부작용(특히 혈전색전증의 발생)이 발생하였다.

외부에서 투여된 FVlla는 활성화된 혈소판 표면에서 트롬빈의 형성을 증가시킨다. 이는 FIX 또는 FVIII가 결여된 해모필리아 시험체에서 발생하고 완전한 트롬빈 형성의 가장 가능한 경로가 손실된다. 또한 혈소판또는 기능이 손실된 혈소판의 적은 수가 존재할 때. 잉여 FVlla는 트롬빈 형성을 증가시킨다.

상업적으로 제조된 재조합체 인간 FVlla는 NovoSeven® (Novo Nordisk A/S, Denmark)로 팔린다. Novoseven®는 해모필리아 A와 B 환자에서 출혈 우발증의 치료를 나타낸다. Novoseven® 은 시장에서 유용한 유일한 재조합체 FVlla이고 출혈 우발증의 효과적이고 신뢰가능한 치료이다.

FXI는 응고의 고유 경로의 구성분이다. FXI의 결핍은 지역적 피브린 활성이 높은 조직 유래의 약한 출혈 질병과 관련이 있다. 반면에, FXI 의 수준이 높은 것은 정맥 혈전증에 대한 위험 인자라고 믿어진다. FXI는 트립신과 유사하고 FXlla, 트롬빈, FXla에 의하여 활성화되는 세린 프로테아제의 지모겐이다. 활성화된 FXI (FXla)는 FIX의 활성화에 참여하고 FIX는 (FVIII와 조합하여) FX를 더 활성화시켜서 트롬빈을 생성한다.

수술 또는 주된 외상과 관련하여 과도하게 출혈하는 시험체는 수혈이 더 필요하고 출혈이 없는 이들보다 복합병이 더 발생한다는 것이 공지되어 있다. 하지만, 인간 혈액 또는 혈액 생성물 (혈소판, 백혈구, 응고 결손의 치료를 위한 혈장-유도된 농축액)의 투여가 필요로 하는 중간정도의 출혈은 인간 바이러스를 전파시키는 위험과 관련된 합병증에 이른다. 하지만 또한 인간 혈액 또는 혈액 생성물(혈소판, 백혈구,응고 결실의 치료를 위한 혈장-유도된 농축액 등)의 투여가 필요로 하는 중간정도의 출혈로 인간 바이러스 (간염, HIV, 파르보바이러스,그리고 다른 바이러스, 지금까지 알려지지 않은 바이러스)를 전파시키는 위험과 관련된 합병증이 나타날 수 있다. 대량의 혈액 수혈이 필요로 하는 과다 출혈로 손상된 장과 신장 기능을 포함한 다중 기관 손상이 발달할 수 있다. 일단 시험체가 이러한 심각한 합병증이 생기면 많은 시토카인과 염증 반응와 관련된 일련의 반응이 시작되어 치료가 매우 힘들게 되고 불운하게도 성공하지 못할 수 있다. 따라서 주된 조직 손상의 치료와 수술에서 주된 목적은 출혈을 피하거나 최소화하는 것이다. 피브린 분해성 효소로 쉽게 용해되지 않는 안정하고 고체의 혈안정 플럭의 형성되는 것을 보장하는 것이 중요하다. 게다가, 그러한 플럭 또는 응고물이 빠르고 효과적으로 형성되도록 보장하는 것도 중요하다.

오늘날, 외상 환자와 수술과 관련된 출혈을 겪는 시험체를 포함한 출혈 우발증을 경험하는 시험체는 FVlla의 반감기가 짧기 때문에 혈안정성 능력의 특정 수준을 유지하기 위해서 한 번 이상의 투여가 필요하기 때문에 FVlla의 주사 또는 주입으로 여러 번 치료했다. 출혈이 빨리 중단되는 것은 시험체에게 중요한 이득이다. 출혈을 중단시키고 지혈을 유지하기에 필요로 하는 투여의 수도 감소하였다.

일본 특허 출원 No. 59-116213A는 활성적 구성분으로서 혈액 응고제를 함유하는 조직 아교로서 사용하기 위한 에어로졸 조성물과 관련된다. 혈액 응고제는 혈액 응고인자 Ⅰ, Ⅱ, III, IV, V, VlI, VIII, IX, X, Xl, XII, XIII, 프리칼리크레인, 고중합체 키니노겐, 트롬빈에서 선택된다. F XlIl과 트롬빈을 조합한 것이 바람직하다.

유럽 특허 No. 225.160 (Novo Nordisk)는 FVlla의 조성물 그리고 응고 인자 결실 또는 응고 인자 저해제에 의해 야기되지 않은 출혈 질병을 치료하기 위한 방법과 관련된다.

유럽 특허 No. 82.182 (Baxter Travenol Lab.)는 혈액 응고 인자의 결핍 또는 시험체에서 혈액 응고 인자에 대한 저해제의 효과를 중화하는 데 사용하기 위한 인자 Vlla의 조성물과 관련된다.

국제특허 출원 No. WO 93/06855 (Novo Nordisk)는 FVlla를 국부 응용하는 것과 관련된다.

US 특허 No. 5, 252, 217 는 치료용 인간 인자 XI 농축액을 제조하기 위한 방법과 관련된다.

당업계에서 출혈 우발증이 수술, 외상, 또는 조직 손상의 다른 형태; 유도된 응고병증, 복합 수혈된 시험체에서 응고병증을 포함하여; 선천적인 또는 획득한 응고 또는 출혈 질병, 감소된 간 기능 ("간 질병")을 포함하여; 결손된 혈소판 기능 또는 감소된 혈소판 수; 필수적 응고 "화합물" (즉, 혈소판 또는 von WIllebrand 인자 단백질)이 결손 되거나 증후군적인; 증가된 피브린 용해 ; 항응고제 치료 또는 혈전용해치료; 또는 줄기 세포 이식때문에 나타나는 시험체를 포함한 출혈 우발증를 겪는 시험체의 개선된 치료가 필요하다.

당업계에서 응고를 향상, 안정한 플럭 형성을 향상 또는 보장, 또는 치료받은 시험체의 편의를 향상, 또는 시험체 특히 손상된 트롬빈이 생성되는 시험체에서 완전한 지혈을 달성, 완전한 지혈을 달성하는데 필요로 하는 FVlla을 감소시키고 출혈을 정지시키는 데 필요로 하는 시간을 단축시키기 위한 향상된, 신뢰할만한 널리 응용가능한 방법이 필요하다.

발명의 개요

본 발명의 한 목적은 출혈 우발증와 응고질병을 치료 또는 예방하는데 효과적으로 사용될 수 있는 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 두번째 목적은 전응고제로서 출혈 우발증의 치료 또는 예방에 효과적으로 사용될 수 있는 1회-단위 투여량 형태의 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 상승 효과를 나타내는 조성물, 치료 방법 또는 키트를 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 응고체계의 체계적인 활성의 높은 수준과 같은 실질적 부작용을 보이지 않는 조성물, 치료 방법 또는 키트를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 본 명세서를 읽으면 명백해진다.

발명의 첫번째 양태에서 발명은 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드,와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드를 포함하는 약제적 조성물을 제공한다.

두번째 양태에서, 발명은

a) 인자 VIl 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 제제의 효과적인 양과 첫번째 단위 투여량 형태의 약제적 수용가능한 담체;

b) 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드 제제의 효과적인 양과 두번째 단위 투여량 형태의 약제적 수용가능한 담체 ;

c) 상기 첫번째 그리고 두번째 투여량 형태를 포함하는 용기 수단을 포함하는 출혈 우발증의 치료를 포함한 부분의 키트를 제공한다.

다른 실시예에서, 키트는 TFPI-억제제 및/또는 인자 VlIl의 효과적인 양을 더 포함한다; TFPI-억제제 또는 인자 VIII (또는 두 개의 조합)가 분리된 단위 투여량 형태로 존재하거나 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드, 또는 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드를 포함하는 단위 투여량 형태의 하나에 존재한다.

세번째 양태에서, 본 발명은 시험체에서 출혈 우발증의 치료를 위한 약제의 제조를 위해서 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드와 조합하여 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 사용을 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 시험체에서 출혈 우발증의 치료를 위한 약제의 제조를 위해서 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 기술된 조성물의 사용을 제공한다.

다른 실시예에서, 약제는 응고 시간을 감소, 응고 용해 시간을 연장, 응고 강도를 증가시키기 위한 것이다.

또다른 실시예에서, 약제는 정맥 투여, 바람직하게 주사 또는 주입, 특히 주사용으로 제조한다.

한 실시예에서, 약제는 1회 단위 투여량 형태로 제조한다; 또다른 실시예에서, 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 첫번째 단위 투여량 형태와 두번째 단위 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 투여량 형태로 제조한다.

다른 실시예에서, 약제는 수술, 외상, 또는 여러번 수혈받은 시험체에서 응고병증을 포함한 응고병증; 감소된 간 기능 ("간 질병")을 포함한 선천적인 또는 획득한 응고또는 출혈 질병; 결손된 혈소판 기능 또는 감소된 혈소판 수 ; 필수적 응고"화합물"이 부족 또는 비정상적 (즉, 혈소판 또는 von WIllebrand 인자 단백질); 증가된 피브린용해 ; 항응고제 치료 또는 혈전용해 치료; 줄기 세포 이식 등의 조직 손상의 다른 형태 때문에 출혈 우발증를 겪는 시험체의 치료를 위한 것이다. 일련의 실시예에서, 출혈은 뇌, 내이 지역, 눈, 간, 폐, 종양 조직, 위창자경로와 같은 기관에서 발생한다; 또다른 일련의 실시예에서, 출혈 위염와 자궁 출혈과 같은 발산 출혈이다. 또다른 일련의 실시예에서, 출혈 우발증는 급성 헤마루트로시스 (관절에서 출혈), 임상적 혈친화적 관절병증, 헤마토마스, (즉, 근육, 복막뒤, 혀 밑과 뒤인두),다른 조직에서 출혈, 헤마투리아(신장 경로에서의 출혈), 뇌 출혈, 수술 (즉, 첫번째), 이를 뽑아냄과 위창자출혈 (즉, UGI 출혈)이 있는 시험체에서 수술 또는 외상과 관련된 출혈이다. 한 실시예에서, 약제는 시험체에서 외상, 또는 수술, 또는 혈소판의 수 또는 활성이 낮아서 생기는 출혈을 치료하기 위한 것이다.

다른 양태에서, 발명은 첫번째와 두번째 양이 함께 출혈을 치료하는 데 효과적일 때 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 제제의 첫번째 양과 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제의 두번째 양이 필요로 하는 시험체에게 투여하는 것을 포함하는 방법으로 시험체에서 출혈 우발증를 치료하기 위한 방법을 제공한다.

다른 양태에서, 발명은 발명은 첫번째와 두번째 양이 함께 응고시간을 감소하는 데 효과적일 때 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드 제제의 첫번째 양과 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제의 두번째 양이 필요로 하는 시험체에게 투여하는 것을 포함하는 방법으로 시험체에서 응고 시간을 감소하기 위한방법을 제공한다.

다른 양태에서, 발명은 발명은 첫번째와 두번째 양이 함께 지혈을 향상하는 데 효과적일 때 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드 제제의 첫번째 양과 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제의 두번째 양이 필요로 하는 시험체에게 투여하는 것을 포함하는 방법으로 시험체에서 지혈을 향상하기 위한 방법을 제공한다.

다른 양태에서, 발명은 첫번째와 두번째 양이 함께 응고 용해 시간을 연장하는 데 효과적일 때 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드 제제의 첫번째 양과 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제의 두번째 양이 필요로 하는 시험체에게 투여하는 것을 포함하는 방법으로 시험체에서 응고 용해 시간을 연장하기 위한 방법을 제공한다.

다른 양태에서, 발명은 첫번째와 두번째 양이 함께 응고 강도를 증가시키는 데 효과적일 때 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드 제제의 첫번째 양과 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제의 두번째 양이 필요로 하는 시험체에게 투여하는 것을 포함하는 방법으로 시험체에서 응고 강도를 증가시키기 위한 방법을 제공한다.

방법의 일련의 실시예에서, 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 1회-단위 투여량 형태로 투여된다.

또다른 일련의 실시예에서 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의제제를 포함하는 첫번째-단위 투여량 형태와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 두번째-단위 투여량 형태로 투여된다.

일련의 실시예에서, 첫번째-단위 투여량 형태와 두번째-단위 투여량 형태는 15 분의 이하의 시간 간격으로 투여된다.

다른 양태에서, 발명은

d) 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 효과적인 양과 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 효과적인 양과 단위 투여량 형태의 약제적 수용가능한 담체;와

e) 한 단위 투여량 형태를 포함하는 용기 수단을 포함하는 출혈 우발증의 치료를 포함하는 키트를 제공한다.

발명의 일련의 실시예에서, 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드는 인자 VII관련된 폴리펩티드이다. 발명의 일련의 실시예에서, 인자 VII관련된 폴리펩티드는 인자 VII 아미노산 서열 변이체이다. 한 실시예에서 인자 VII관련된 폴리펩티드의 활성과 본래 인간 인자 Vlla (야생형 FVlla)의 활성간의 비율은 본 명세서에 기술된 "시험관 내 가수분해 검정"에서 시험하였을 때 적어도 약 1.25 이다.

발명의 일련의 실시예에서, 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드는 인자 VII이다. 한 실시예에서 상기 인자 VII 는 인간 인자 VII이다. 한 실시예에서 인자 VII 는 소, 돼지, 고양이, 말, 쥐 또는 연어 인자 VII이다. 또다른 실시예에서 인자 VIl 는 재조합체적으로 만들어졌다. 또다른 실시예에서 인자 VIl 는 혈장에서 유도되었다. 바람직한 실시예에서 인자 VIl 는 재조합체 인간 인자 Vll이다.

발명의 일련의 실시예에서 인자 VIl 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드는 활성화된 형태이다. 발명의 한 바람직한 실시예에서 인자 VIl 는 재조합체 인간 인자 Vlla이다. 일련의 실시예에서 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 인자 XI관련된 폴리펩티드이다. 한 실시예에서 인자 XI관련된 폴리펩티드는 인자 XI 아미노산 서열 변이체이다. 한 실시예에서 상기 인자 XI관련된 폴리펩티드의 활성과 본래 인간 혈장 인자 XI (야생형 FXI)의 활성 간의 비율은 본 명세서에서 기술된 "FXI 발색성 검정"으로 시험하였을 때 적어도 약 1.25이다. 한 실시예에서 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 인자 XI 폴리펩티드이다. 한 실시예에서 인자 XI 는 인간 인자 XI이다. 한 실시예에서 인자 XI는 소, 돼지, 고양이, 말, 쥐 또는 연어 인자 XI이다. 바람직한 실시예에서 인자 XI 는 재조합체적으로 만들어졌다. 또다른 실시예에서 인자 XI는 혈장에서 유도되었다. 또다른 실시예에서 인자 XI 는 혈소판-유도된 인자 XI이다. 바람직한 실시예에서 인자 XI는 재조합체 인간 혈장 인자 XI이다. 발명의 일련의 실시예에서 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 활성화된 형태이다. 한 실시예에서 인자 XI관련된 폴리펩티드는 인자 XI의 단편이다. 한 실시예에서 인자 XI관련된 폴리펩티드는 인자 XI 폴리펩티드의 혼성체, 즉, 돼지/인간 혼성체. 한 실시예에서, 인자 XI 는 인간 혈장 활성화된 인자 XI (FXla)이다.

한 실시예에서 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자XI 관련된 폴리펩티드는 약 100:1와 약 1:100 (w/w 인자 Vll : 인자 XI)의 질량비로 존재한다.

한 실시예에서, 인자 VII관련된 폴리펩티드는 야생형 인자 VII과 비교하여 20 개 아미노산이 치환,삭제,삽입된 아미노산 서열 변이체(즉 ,미국 특허 No. 4,784, 950에 개시된 아미노산 서열을 가진 폴리펩티드)이다. 또다른 실시예에서, 인자 Vll 변이체는 15개 아미노산이 치환, 삭제, 삽입된다; 다른 실시예에서, 인자 VII 변이체은 야생형 인자 VIIa와 비교하여 10 아미노산보다 적은 8,6,5 또는 3 아미노산이 치환, 삭제, 삽입된다. 한 실시예에서, 인자 VII 변이체는 L305V FVlla, L305V/M306D/D309S-FVlla, L3051-FVlla, L305T-FVlla, F374P-FVlla, V158T/M298Q-FVlla, V158D/E296WM298Q-FVlla, K337A-FVlla, M298Q-FVlla, V158D/M298Q-FVlla, L305V/K337A-FVlla,V1 58D/E296V/M298Q/L305V-FVlla, V1 58D/E296WM298Q/K337A-FVlla,V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVlla, K157A-FVII,

E296V-FVII, E296V/M298Q-FVII, V158D/E296V-FVII, V158D/M298K-FVII, S336G-FVII의 목록에서 선택된다.

또다른 실시예에서, 인자 VIl관련된 폴리펩티드는 본래 인간 응고인자 Vlla와 비교하여 조직 인자 독립적 활성이 증가되었다. 또다른 실시예에서, 증가된 활성은 기질 특이성에서의 변화를 수반하지 않는다. 발명의 또다른 실시예에서, 조직 인자에 인자 VIl관련된 폴리펩티드의 결합은 손상되지 않고 인자 VIl관련된 폴리펩티드는 조직 인자에 결합되었을 때 적어도 야생형 인자 Vlla의 활성을 가진다.

바람직한 실시예에서, 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 인자 XI또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 재조합체 인간 인자 Vlla이고 재조합체 인간 혈장 인자 Xl 또는 재조합체 인간 인자 Vlla 그리고 재조합체 인간 혈장 인자 Xla이다.

한 실시예에서, 응고 시간은 포유동물 혈액에서 감소되었다. 또다른 실시예에서 포유동물 혈액에서 지혈이 향상되었다. 또 다른 실시예에서 포유동물 혈액에서 응고 용해 시간은 연장되었다. 또 다른 실시예에서, 포유동물 혈액 응고 강도는 증가되었다 . 한 실시예에서, 포유동물 혈액은 인간 혈액. 또다른 실시예에서, 포유동물 혈액은 보통 인간 혈액; 한 실시예에서, 혈액은 트롬빈 생성이 손상된 시험체에서 유래한 혈액이다.

한 실시예에서, 혈액은 하나 또는 그 이상의 응고인자가 부족한 시험체 유래의 혈액이다; 또다른 실시예에서, 혈액은 하나 또는 그 이상의 응고인자에 대한 저해제를 갖는 시험체유래의 혈액이다 ; 한 실시예에서, 혈액은 피브리노겐의 농도가 낮은 시험체 유래이다; 한 실시예에서, 혈액은 인자 XI결핍된 인간 혈액이다. 일련의 실시예에서, 혈액은 혈장이다.

한 실시예에서, 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 보통 인간 혈장에서 시험관 내 응고 용해 시간을 연장시킨다. 또다른 실시예에서, 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 시험관 내 보통 인간 혈장에서 증가시킨다. 최대 응고 강도 응고 용해 시간을 증가시킨다. 또 다른 실시예에서, 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 보통 인간혈장 시험관 내에서 응고시간을 단축시킨다.

본 발명의 실시예에서, 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 조성물에 포함된 유일한 혈안정제이다. 또다른 실시예에서, 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 조성물에 포함된 유일한 혈안정제이다. 또다른 실시예에서, 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 시험체에 투여된 유일한 응고인자이다. 본 발명의 실시예에서, 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 환자에 투여된 유일한 활성제이다. 한 실시예에서, 조성물은 실질적으로 프로트롬빈이 없다.; 또다른 실시예에서, 조성물은 실질적으로 FX가 없다; 또다른 실시예에서, 조성물은 실질적으로 FXa가 없다.

또 다른 실시예에서, 약제적 조성물은 정맥내투여, 바람직하게 주사 또는 주입, 특히 주사용으로 제조한다. 한 실시예에서, 조성물은 적어도 하나의 약제적 수용가능한 첨가제 또는 담체를 포함한다.

본 발명의 한 실시예에서, 조성물은 응고인자를 포함하는 1회-단위 투여량 형태이다. 본 발명의 실시예에서, 조성물은 첫번째-단위 투여량 형태로서 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 제제와 두번째-단위 투여량 형태로서 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제와 상기 첫번째와 두번째 단위 투여량 형태를 포함하는 용기수단을 포함하는 키트의 부분 형태이다. 한 실시예에서 응용가능한 조성물 또는 키트는 조성물 또는 각 구성분의 투여를 위한 지침서를 더 포함한다.

본 발명의 실시예에서, 인자 VIl 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 1회-투여량 형태로 투여된다. 본 발명의 실시예에서, 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 인자 VIl 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 첫번째 단위 투여량 형태와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 두번째 단위 투여량 형태로 투여된다.

본 발명의 한 실시예에서, 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 동시에 투여된다. 또다른 실시예에서, 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 Xl- 관련된 폴리펩티드는 연속적으로 투여된다. 한 실시예에서 , 인자 VIl 또는 인자VIl관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 15 분, 바람직하게 10분, 더 바람직하게 5분, 더 바람직하게 2 분 시간 간격으로 투여된다.

한 실시예에서, 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 2 시간까지, 바람직하게 1 내지 2 시간, 더바람직하게 1시간 , 더바람직하게 30 분 내지 1 시간, 더바람직하게 30 분까지, 더바람직하게 15 내지 30 분 까지의 시간 간격으로 투여된다.

한 실시예에서, 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 효과적인 양은 약 0.05 mg/day 에서 약 500 mg/day (70kg 시험체)사이의 양이다. 한 실시예에서, 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드 제제의 효과적인양은 약 0.01 mg/day 에서약 500 mg/day (70kg 시험체)까지이다.

한 실시예에서, 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 약 100: 1와 약 1: 100 (w/w 인자 Vll : 인자 XI)사이의 질량비로 존재한다.

본 발명의 한 실시예에서, 약제적 조성물은은 1회-투여량 형태이고 본질적으로 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 제제, 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제, 약제적 수용가능한 첨가제 또는 담체, 안정제, 계면활성제, 중성염, 항산화제, 방부제, 프로테아제 저해제의 목록에서 선택된 하나 또는 그 이상의 구성분으로 구성되어 있다.

또 다른 실시예에서, 시험체는 인간이다; 또다른 실시예에서, 시험체는 트롬빈 생성이 손상되었다.; 한 실시예에서, 시험체의 피브리노겐의 혈장 농도가 낮다 (즉, 복합 수혈된 시험체).; 한 실시예에서, 시험체는 인자VIII의 혈장 농도가 낮다.

또다른 양태에서, 시험체가 유일한 응고단백질로서 인자 VII로 치료되었을 때와 비교하여 인자 VII 반응 증후군을 겪고 있는 시험체에서 혈안정성을 향상하기 위한 방법과 관련된다. 발명은 첫번째와 두번째 양은 함께 지혈을 향상하는 데 효과적일 때, 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드의 제제의 첫번째 양과 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드 제제의 두번째 양이 필요로 하는 시험체에게 투여하는 것을 포함하는 방법으로 지혈을 향상하기 위한 방법과 관련된다.

또 다른 양태에서, 발명은 첫번째와 두번째 양은 함께 지혈을 향상하는 데효과적일 때, 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드의 제제의 첫번째 양과 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드 제제의 두번째 양이 필요로 하는 시험체에게 투여하는 것을 포함하는 방법으로 시험체에서 트롬빈 형성을 향상하는 방법과 관련된다.

또 다른 양태에서, 발명은 첫번째와 두번째 양은 함께 지혈을 향상하는 데 효과적일 때, 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드의 제제의 첫번째 양과 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제의 두번째 양이 필요로 하는 시험체에게 투여하는 것을 포함하는 방법으로 시험체에서 트롬빈 형성을 향상하는 방법과 관련된다.

또다른 양태에서, 발명은 시험체를 유일한 응고단백질로서 인자 VIl로 치료할 때와 비교하여 인자 VII 반응 증후군을 겪고 있는 시험체에서 트롬빈 형성을 향상하기 위한 방법과 관련된다.

또다른 양태에서, 발명은 첫번째와 두번째 양은 함께 지혈을 향상하는 데 효과적일 때, 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 제제의 첫번째 양과 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제의 두번째 양이 필요로 하는 시험체에게 투여하는 것을 포함하는 방법으로 본 발명은 유일한 응고인자 단백질로서 인자 VII을 시험체에 투여할 때, 필요로 하는 투여수와 비교하여 인자 Vll 반응 증후군을 겪고 있는 시험체에서 지혈을 달성하기 위해 필요로 하는 응고인자 단백질의 투여 횟수를 감소하기 위한 방법과 관련된다.

또 다른 양태에서, 발명은 첫번째와 두번째 양은 함께 지혈을 향상하는 데효과적일 때, 인자 VIl 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드의 제제의 첫번째 양과 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제의 두번째 양이 필요로 하는 시험체에게 투여하는 것을 포함하는 방법으로 인자 VII 반응 증후군을 겪고 있는 시험체에서 출혈을 치료하기 위한 방법과 관련된다

한 실시예에서, 인자 VIl는 인간 재조합체 인자 Vlla (rFVlla)이다. 또다른 실시예에서, rFVlla는 NovoSeven (Novo Nordis Bagsvaerd, Denmark)이다.

한 실시예에서, 약제적 조성물은 정맥내 투여를 위해 제조한다.

한 실시예에서, 조성물은 제한없이, 아프로티닌, s-아미노카프론산 또는 트란세믹산을 포함한 피브린 분해성 체계의 억제제를 더 포함한다. 한 실시예, 조성물은 TFPI 억제제및/또는 FVIII을 더 포함한다.

한 실시예에서, 조성물은 인자 VIII을 더 포함한다. 한 실시예에서, 인자 VIII 는 활성화된 인자 VIII (인자 VIIIa)이다. 또다른 실시예에서 인자 VIII 는 재조합체 인자 VIIIa이다. 또다른 실시예에서 인자 VIII는 재조합체 인간 인자 Vllla이다.

또 다른 양태에서, 발명은 포유동물 혈장에서 피브린 응고 형성을 향상하기 위한 약제를 제조하기 위해서 인자 XI와 인자 Vlla을 조합하여 사용하는 것과 관련된다.

또 다른 양태에서, 발명은 첫번째와 두번째 양은 함께 출혈을 치료하는 데 효과적일 때, 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 제제의 첫번째 양과 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제의 두번째 양이 필요로 하는 시험체에게 투여하는 것을 포함하는 방법으로 시험체에서 피브린 응고를 향상하기 위한 방법과 관련된다.

본 발명의 한 실시예에서,약제적 조성물은 (1회-제제 형태에서) 필수적으로 인자 Vlla와 인자 XI와 선택적으로,약제적 수용가능한 첨가제 또는 담체와, 선택적으로, 안정제, 선택적으로, 계면활성제, 선택적으로, 중성염과 선택적으로, 항산화제와 선택적으로 방부제와 선택적으로, 프로테아제 억제제로 구성된다.

또 다른 본 발명의 실시예에서 ,약제적 조성물은 (1회-제제 형태에서) 필수적으로 인자 Vlla와 인자 XI, 선택적으로, 약제적 수용가능한 첨가제 또는 담체, 선택적으로, 안정제와 선택적으로 계면활성제, 선택적으로, 중성염,선택적으로, 항산화제와 선택적으로, 방부제와, 선택적으로, 프로테아제 억제제와 TFPI-억제제로 구성된다.

또다른 실시예에서 본 발명의 약제적 조성물은 (1회-제제 형태에서) 필수적으로 인자 Vlla와 인자 XI, 선택적으로,약제적 수용가능한 첨가제 또는 담체와, 선택적으로 안정제, 선택적으로, 계면활성제, 선택적으로, 중성염, 선택적으로, 항산화제,선택적으로, 방부제,선택적으로, 프로테아제 억제제와 인자 VIII와, 선택적으로, a TFPI-억제제로 구성된다.

또 다른 실시예에서, 약제적 조성물은 (키트의 형태로) 필수적으로 인자 Vlla로 구성된 첫번째 단위 투여량 형태, 선택적으로, 약제적 수용가능한 첨가제 또는 담체와 선택적으로, 안정제와, 선택적으로, 계면활성제와, 선택적으로, 중성염, 선택적으로, 항산화제, 선택적으로, 방부제, 선택적으로, 프로테아제 억제제 ;필수적으로 인자 XI로 구성된 두번째 단위 투여량 형태, 선택적으로, 약제적 수용가능한 첨가제 또는 담체, 선택적으로, 안정제,선택적으로,계면활성제, 선택적으로, 중성염, 선택적으로,항산화제, 선택적으로, 방부제, 선택적으로, 프로테아제 억제제로 구성된다.

또 다른 실시예에서, 약제적 조성물은 (키트의 형태로) 첫번째 단위 투여량 형태 또는 두번째 단위 투여량 형태로 필수적으로 인자 VIIa로 구성된 첫번째 단위 투여량 형태, 선택적으로, 약제적 수용가능한 첨가제 또는 담체, 선택적으로, 안정제, 선택적으로, 계면활성제, 선택적으로, 중성염, 선택적으로, 항산화제, 선택적으로, 방부제, 선택적으로, 프로테아제 억제제; 두번째 단위 투여량 형태는 필수적으로 인자 XI, 선택적으로, 약제적으로 수용가능한 첨가제 또는 담체, 선택적으로, 안정제, 선택적으로, 계면활성제, 선택적으로, 중성염, 선택적으로, 항산화제, 선택적으로, 방부제, 선택적으로, 프로테아제 억제제; 또는 양 투여량 형태는 인자 VlIl및/또는 a TFPI-억제제로 구성된다.

도의 목록

도 1: FVlla를 첨가하면 응고 용해 시간이 투여량-의존적으로 연장된다. 이 효과는 10 nM FVlla에서 최적이다.

도 2: 10 nM FVlla이 존재할 때, FXI를 첨가하면 응고 용해 시간이 더 연장된다. 이 효과는 투여량-의존적이고 30 nM FXI에서 최적이다.

도 3: 트롬보엘라스토그래피 (roTEG) 측정은 Maximal Clot 강도 (MCF)에서 FVlla 와 FXI의 효과 그리고, t-PA 중재된 용해에 대한 응고 저항를 분석하는 데사용된다.

도 4: 이러한 결과에 의하면 FVIIa와 FXI가 상승적인 양식으로 혈장에 첨가하면 NHP에서 응고 시간을 단축시킨다.

본 발명은 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드를 포함하는 약제적 조성물과 관련된다. 본 발명은 또한 출혈 우발증를 겪고 있는 시험체를 치료 또는 방지하기 위한 약제의 제조를 위한 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 조합하여 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드를 사용하는 것과 관련된다. 본 발명 또한 시험체에서 출혈 우발증의 치료를 위한 방법과 시험체에서 응고 형성을 향상하기 위한 방법과 관련된다. 본 발명은 또한 이러한 화합물을 포함하는 키트와 관련된다.

수술 또는 주된 외상으로 과다하게 출혈되어서 혈액 수혈이 필요로 하는 시험체는 출혈을 겪지 않은 이들보다 합병증이 더 나타난다. 하지만 또한 인간 혈액 또는 혈액 생성물(응고결실의 치료를 위해서 혈소판, 백혈구, 혈장-유도된 농축액)를 투여해야 하면 이는 바이러스가 아닌 병원체와 인간 바이러스 (즉, 간염, HIV, 파르보바이러스, 또는 다른, 지금까지 알려지지 않은 바이러스)를 전파시키는 위험과 관련되어 있기 때문에, 중간정도의 출혈이 나면 합병증이 발생한다. 대량의 혈액 수혈이 필요로 하는 과도한 출혈로 손상된 폐와 신장 기능을 포함하여 다중 기관 손상으로 발전한다. 일단 시험체에 합병증이 발생하면 많은 사이토카인과 염증반응과 관련된 일련의 반응이 시작되어 치료를 매우 힘들게 하고 종종 불행하게도 성공하지 못한다. 혈액이 손실된 환자는 임상적으로 불안정하게 된다. 그러한 환자는 심방 세동을 겪을 위험에 있고 이는 심장 활성이 치명적으로 멈추거나; 손상된 신장 기능; 또는 폐에서 체액 혈관밖유출 ("젖은 폐"또는 ARDS)에 이르게 한다. 따라서, 주된 조직 손상의 치료와 수술에서 주된 목적은 출혈을 피하거나 최소화하는 것이다. 출혈을 피하거나 최소화하기 위해서 피브린 분해성 효소로 쉽게 분해되지 않는 안정하고 고체인 혈안정성 플럭이 형성되도록 하는 것이 중요하다. 게다가, 그러한 플럭 또는 응고가 빠르고 효과적으로 형성되도록 하는 것이 중요하다.

저혈소판증(혈소판이 수가 작거나 활성이 낮은)이 있는 시험체는 또한 혈안정성 플럭을 형성하는 피브린 플럭을 안정화시키는 데 결실이 있고 또한 손상된 트롬빈이 형성되며 조숙한 분해 되기 쉽다. 게다가, 주된 외상 또는 기관손상이 되어 따라서 수혈을 종종 받은 시험체는 피브리노겐, 인자 VIII, 응고 단백질의 수준이 낮고 혈소판 수가 적다. 이러한 시험체에서 손상된(또는 적은) 트롬빈이 생성된다. 따라서, 이러한 시험체는 결실이 있거나 덜 효과적으로 지혈되어, 과도한 외상과 기관손상이 된 상황에 더하여 과다하게 방출된 효소와 같은 단백질 분해 효소로 쉽게 그리고 미숙하게 용해되는 피브린 플럭을 형성한다.

조직에서 출혈되면 또한 헤마토마스가 형성된다. 헤마토마스의 크기는 (특히 두개 사이와 척수)신경계 기능 손실의 정도, 회복의 어려움 및/또는 심각성와 회복 후 신경계 기능의 영원한 손상 정도와 긴밀하게 상호관련된다. 헤마토마스의 가장 심각한 결과는 환자의 죽음에 이르게 하는 뇌에 위치할 때 나타난다.

따라서, 출혈을 치료하는 주된 목적은 최소 시간 내에 지혈되도록 하여 혈액 손실을 최소로 유지하는 것이다.

본 발명은 따라서 그러한 치료가 필요로 하는 시험체에서 출혈 우발증를 치료하기 위한 유익한 조성물, 치료 사용과 방법을 제공한다. 조성물, 사용과 방법은 지혈되기 전에 적은 혈액 손실, 수술 동안에 필요로 하는 적은 혈액, 지혈될 때까지 수용가능한 수준으로 유지되는 혈압, 혈압의 빠른 안정화, 환자가 회복하는 데 걸리는 짧은 시간, 환자를 치료하기 위한 짧은 회복 시간 ,헤마토마스 형성이감소 또는 헤마토마스가 적게 형성, 뇌에서 헤마토마스를 포함하여, 출혈이 빨리 정지, 출혈을 멈추고 지혈을 유지하는 데 필요로 하는 투여의 수가 감소와 같은 유익한 효과와 관련되어 있다.

인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제와 인자 Vll 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드, 즉, 인자 Vlla의 제제를 조합하여 투여하면 인자 Vlla 또는 인자 XI이 단독투여될 때의 응고 시간, 응고 강도, 저항성과 비교하여 응고 시간이 단축되고 응고가 단단해지고 피브린용해에 대한 저항성이 증가한다.

인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제와 조합하여 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드, 즉, 인자 Vlla의 제제를 투여하는 것은 인자 Vlla 또는 인자 XI이 단독으로 투여되는 상황과 비교하여 출혈을 멈추는 데 시간이 적게 걸리고 지혈을 유지하는 데 필요로 하는 투여의 수가 감소하는 것을 제공한다. 본 발명은 인자 XI 또는 인자 X-관련된 폴리펩티드의 제제와 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드의 제제를 동시적 또는 연속적으로 복용하면 유익한 효과를 제공한다. 본 발명에 따른 약제적 조성물은 1회 조성물 형태이거나 복합 구성분(부분의 키트)의 형태이다. 본 발명에 따른 조성물은 인간과 같은 영장류를 포함한 포유류에서 치료와 예방용 전응고제로서 유용하다. 본 발명은 사람을 포함한 시험체에서 출혈 우발증를 치료(약제적으로 치료 또는 방지)하기 위한 방법을 더 제공한다.

언제나, 이 명세서에서 언급된 첫번째 또는 두번째 또는 세번째 등 단위투여량은 투여의 바람직한 정도를 나타내지 않지만 단지 편의를 위해서 수행된다. 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드의 제제와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드 제제의 조합은 짧은 응고 시간, 혈안정성 플럭이 빨리 형성, 안정한 혈안정성 플럭이 형성되는 것을 보장하는 이로운 생성물이다. 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드의 제제와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드 제제의 조합은 고체, 안정한 혈안정성 플럭이 빨리 형성되는 것을 보장하는 이로운 생성물임을 본 발명자가 발견하였다.

인자 Vlla와 인자 XI를 조합하면 인자 VIIa 또는 인자 XI 단독보다 더 효과적으로 보통 인간 혈장의 응고 시간을 감소시킬 수 있음을 본 발명자가 제시하였다. 인자 Vlla와 인자 XI를 조합하면 인자 VIIa 또는 인자 XI 단독보다 효과적으로 응고의 강도를 증가시킬 수 있음이 제시되었다. 조합하여 응고 강도가 더 증가하지 않는 농도에서 인자 XI와 함께 인자 VIIa가 관찰되었고 또한 응고 강도가 더 증가하지 않는 농도에서도 관찰되었다. 응고 강도가 더 증가하였음을 뜻하지 않게 제시되었다. 인자 Vll와 인자 XI을 조합하면 인자 VIIa 또는 인자 XI 단독보다 더 효과적으로 보통 인간 혈장에서 시험관 내 응고 용해 시간을 연장시킬 수 있음이 제시되었다. 인자 Vlla와 인자 XI을 조합하면 인자 VIIa 또는 인자 XI 단독보다 더 효과적으로 보통 인간 혈장에서 반 응고 용해 시간을 연장시킬 수 있음이 제시되었다. 인자 Vlla 와 인자 XI을 조합하면 인자 VIIa 또는 인자 XI 단독보다 보통 인간 혈장에서 더 효과적으로 응고물이 피브린용해 특히 tPA-중재된 피브린용해되지 않도록 할 수 있음이 도시되어 있다.

응고를 향상하여 시험체에서 출혈을 더 효과적으로 치료할 수 있다.

이론에 한정되지 않고, 고체, 안정적 혈안정성 플럭이 형성 그리고 지혈이 유지되기 위해서는 완전한 트롬빈 생성이 필요하다고 믿어진다. 그러한 플럭의 피브린 구조는 형성된 트롬빈의 양과 초기 트롬빈 생성의 비율에 의존한다. 손상된 트롬빈이 생성될 때, 고도로 투과적인 다공성 피브린 플럭이 형성된다. 피브린 표면에 존재하는 피브린 분해성 효소는 그러한 피브린 플럭을 쉽게 분해한다. 안정한 피브린 플럭이 형성되는 것은 트롬빈에 의해 활성화되는 인자 Xllla가 있는지에 따라 달라지고 따라서 트롬빈이 완전히 생성되는 지에 따라 달라진다. 게다가, 최근에 기술된 트롬빈 활성가능한 피브린 분해성 억제제, TAFI는 활성화되기 위해서는 트롬빈 양이 많이 필요하다. 적절하지 않은 트롬빈이 형성되면 TAFI 활성화되지 않아서 보통 피브린 분해성 활성에 의해 더 쉽게 용해되는 혈안정성 플럭이 형성된다. 혈소판 수가 적은 상황에서, 즉 저혈소판증에서, 외부 인자 Vlla를 투여하면 트롬빈 형성이 더 빨라진다. 하지만 전체 트롬빈 생성은 높은 농도에서도 인자 Vlla에 의해 정상화되지 않는다.

피브리노겐의 혈장 최종농도가 낮은 시험체(복합 외상 또는 과도한 수술을 받아 여러번 수혈된 시험체 )에서 트롬빈이 완전히 활성화되지 않는다. 인자 VIl 와 인자 XI을 조합하여 투여하면 더 효과적으로 지혈된다.

저혈소판증이 있는 시험체는 피브린 플럭의 안정화에 결손이 있어 혈안정성 플럭이 형성되고 손상된 트롬빈이 생성되어 조숙한 용해되는 경향이 있다. 게다가, 주된 외상 또는 기관손상되어 결과적으로 혈액 수혈을 자주 받는 시험체는 피브리노겐, 인자 VIII, 다른 응고단백질의 수준이 낮고 혈소판도 적다. 이러한 시험체는 손상된(또는 적은) 트롬빈이 생성된다. 추가로, 이들의 피브리노겐이 적기 때문에 인자 XIII의 활성화를 방해한다. 이러한 시험체는 손상되거나 덜 효과적으로 지혈되어 단백질 분해 효소, 즉 과도한 외상과 기관손상이 특징인 상황에서 추가로 과도하게 방출된 효소에 의해 쉽게 그리고 조숙하게 용해되는 피브린 플럭이 형성된다.

시험체에서 지혈을 유지하기 위한 완전한 능력이 있는 완전하게 안정된 플럭 형성을 촉진하기 위해서, 발명에 따른 조성물이 투여된다. 이 조성물은 혈소판 수가 적은 시험체와 피브리노겐 및/또는 다른 응고 단백질의 혈장 수준이 낮은 시험체에서 특히 유익하다.

인자 XI가 있을 때 인자 Vlla의 농도가 낮아도 지혈이 충분히 되도록 보장할 수 있다.

인자 VII 폴리펩티드:

본 발명을 실행할 때, 인자 VII 폴리펩티드가 치료 출혈을 억제 또는 치료하는 데 효과적으로 사용된다. 혈액 또는 혈장에서 유도된, 또는 재조합체 수단에 의해 생산된 인자 VIl 폴리펩티드를 포함한다.

본 발명은 인자 V 폴리펩티드 즉, 미국 특허 No. 4,784, 950 (야생형 인간 인자 VII)에 개시된 아미노산 서열이 있는 것들을 포함한다. 특정 실시예에서, 인자 VII 폴리펩티드는 미국 특허 No. 4,784, 950 (야생형 인자 Vll)에 개시된 인간 인자 Vlla이다. 일련의 실시예에서, 인자 VII 폴리펩티드는 인간 인자 Vlla의 특이적 생물학적 활성의 적어도 약 10%, 바람직하게 적어도 약 30%, 더 바람직하게적어도 약 50%, 가장 바람직하게 적어도 약 70%을 나타내는 폴리펩티드를 포함한다. 일련의 실시예에서, 인자 Vll 폴리펩티드는 인간 인자 Vlla의 특이적 생물학적 활성의 적어도 약 90%, 바람직하게 적어도 약 100%, 바람직하게 적어도 약 120%, 더 바람직하게 적어도 약 140%, 가장 바람직하게 적어도 약 160%을 나타내는 폴리펩티드를 포함한다. 일련의 실시예에서, 인자 VIl 폴리펩티드는 미국 특허 No. 4,784, 950에 개시된 야생형 인자 VIl의 서열과 적어도 약 70 %, 바람직하게 적어도 약 80 %, 더 바람직하게 적어도 약 90 %, 가장 바람직하게 적어도 약 95 %의 동일성을 나타내는 폴리펩티드를 포함한다.

여기에서 사용되었듯이, "인자 Vll 폴리펩티드"는 제한없이 인자 VII관련된 폴리펩티드와 인자 VIl을 포함한다. "인자 VII"는 제한없이 즉, 소, 돼지, 고양이, 쥐,연어 인자 VIl과 같은 다른 종에서 유도된 야생형 인자 VII와, 혈액 또는 혈장에서 유도되었거나 재조합체 수단으로 생산된 상기 인자 VII와 야생형 인간 인자 VII의 아미노산 서열 1-406 (미국 특허 No. 4,784, 950에 개시된)을 가진 폴리펩티드를 포함한다. 개인마다 존재하고 발생하는 인자 VIl의 자연적 대립 변이체을 포함한다. 또한, 글리코실레이션 또는다른 번역후 변경의 정도와 위치는 선택된 숙주 세포와 숙주 세포 환경의 성질에 따라 달라진다. 용어 "인자 Vll관련된 폴리펩티드"는 제한없이 단백질 분해적으로 공정되어 "인자 Vlla-관련된 폴리펩티드" 또는 "활성화된 인자 Vlla-관련된 폴리펩티드"로 지정된 각 생체활성적 형태를 생성하는 것들과 절단되지 않은 (지모겐) 형태의 폴리펩티드를 포함한다. 전형적으로, 인자 VIl는 잔기 152와 153 사이에서 절단되어 인자 Vlla을 생성한다.

"인자 VII관련된 폴리펩티드"는 제한없이, 인간 인자 VII와 상대적으로 화학적으로 변경된 인자 Vll 폴리펩티드를 포함하고 인간 인자 Vll (즉, 인자 VIl 변이체)에 상대적으로 하나 또는 그 이상의 아미노산 서열 변경을 포함하며 인간 인자 VIl (즉 , 인자 VIl 단편)에 상대적으로 절단된 아미노산 서열을 포함한다.

그러한 인자 VII관련된 폴리펩티드는 안정성, 인지질 결합, 변경된 특이적활성 등을 포함한 인간 인자 VII에 상대적인 다른 성질을 나타낸다. 인자 Vll관련된 폴리펩티드는 ("인자 Vlla-관련된 폴리펩티드" 또는 "활성화된 인자 VIl관련된 폴리펩티드"로 지정된 각 생체활성적 형태를 생성하도록 단백질 분해적으로 공정된 것들과 절단되지 않은 (지모겐) 형태의 폴리펩티드를 포함한다.

여기서 사용된 바와 같이, "인자 Vll관련된 폴리펩티드"는 제한없이 인자 Vlla 생물학적 활성이 야생형 인간 인자 Vlla의 활성에 상대적으로 변경되거나 감소된 폴리펩티드와 야생형 인간 인자 VII에 상대적으로 같거나 향상된 생물학적 활성을 보이는 폴리펩티드를 포함한다. 이러한 폴리펩티드는 제한없이, 화학적으로 변경된 인자 VIl 또는 인자 Vlla 와 폴리펩티드의 생체활성을 변경 또는 파괴하는 특이적 아미노산 서열 변경이 도입된 인자 VIl 변이체을 포함한다. 이는 또한 아미노산 서열이 약간 변경된 폴리펩티드, 예를 들어, N-말단 아미노산이 치환 또는 첨가된 것을 포함한 N-말단이 변경된 폴리펩티드 및/또는 인간 인자 Vlla에 상대적으로 화학적으로 변경된 폴리펩티드를 포함한다.

야생형 인자 VIl보다 같거나 더 좋은 생체활성을 나타내거나 또는, 대안적으로, 야생형 인자 VIl에 상대적으로 실질적으로 변경되거나 감소된 생체활성을 나타내는, 인자 VII의 변이체을 포함한 인자 VIl관련된 폴리펩티드는 제한없이, 하나 또는 그 이상의 아미노산이 삽입, 삭제 또는 치환되어 야생형 인자 VII의 서열과 다른 아미노산 서열이 있는 폴리펩티드를 포함한다.

변이체을 포함한 인자 VII관련된 폴리펩티드는 상기 기술된 바와 같은 하나 또는 그 이상의 응고 검정, 단백질 용해 검정, 또는 TF 결합 검정 에서 시험되었을 때 같은 세포 형태에서 생산된 야생형 인자 Vlla의 특이적 활성의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 100%, 적어도 약 110%, 적어도 약 120%, 또는 적어도 약 130%을 보이는 것들을 포함한다.

야생형 인자 Vlla에 상대적으로 같거나 향상된 생물학적 활성이 있는, 변이체을 포함한 인자 VIl관련된 폴리펩티드는 상기 기술된 바와 같은 하나 또는 그 이상의 응고 검정, 단백질 용해 검정, 또는 TF 결합 검정 에서 시험되었을 때 같은 세포 형태에서 생산된 야생형 인자 Vlla의 특이적 활성의 적어도 약 25%, 바람직하게적어도 약 50%, 더 바람직하게 적어도 약 75%, 더 바람직하게 적어도 약 100%, 더 바람직하게 적어도 약 110%, 더 바람직하게 적어도 약 120%,와 가장 바람직하게 적어도 약 130% 을 보이는 것들을 포함한다.

야생형 인자 Vlla에 상대적으로 실질적으로 감소된 생물학적 활성이 있는 변이체을 포함한 인자 VII관련된 폴리펩티드는 상기 기술된 바와 같은 하나 또는 그 이상의 응고 검정, 단백질 용해 검정, 또는 TF 결합 검정 에서 시험되었을 때 같은세포 형태에서 생산된 야생형 인자 Vlla의 특이적 활성의 약 25% 이하, 바람직하게 약 10% 이하 , 더 바람직하게 약 5% 이하, 가장 바람직하게 약 1 % 이하인 것들이다. 야생형 인자 VII에 상대적으로 실질적으로 변경된 생물학적 활성이 있는 인자 VIl 변이체은 제한 없이 TF 독립적 인자 X 단백질 분해 활성을 보이는 인자 VII 변이체과 인자 X을 절단하지 않지만 TF에 결합하는 것들을 포함한다.

어떤 실시예에서 인자 VIl 폴리펩티드는 인자 VII관련된 폴리펩티드 특히

"시험관 내 가수분해적 검정" (하기 "검정" 참조)에서 테스트하였을 때 상기 인자 VIl 폴리펩티드의 활성과 본래 인간 인자 Vlla (야생형 FVlla)의 활성 간의 비율이 적어도 약 1.25 인 변이체이다. 다른 실시예에서, 비율은 적어도 약 2.0 ; 다른 실시예에서, 비율은 적어도 약 4.0 이다. 본 발명의 어느 실시예에서, 인자 VII 폴리펩티드는 인자 VII관련된 폴리펩티드, 특히 "시험관 내 가수분해적 검정" (하기 "검정" 참조)에서 테스트하였을 때 상기 인자 VIl 폴리펩티드의 활성과 본래 인간 인자 Vlla (야생형 FVlla)의 활성 간의 비율이 적어도 약 1.25 인 변이체이다. 다른 실시예에서, 비율은 적어도 약 4.0 ; 다른 실시예에서, 비율은 적어도 약 8. 0 이다.

어느 실시예에서, 인자 VIl 폴리펩티드는 즉 미국 특허 No. 4,784, 950 (야생형 인자 VII)에 개시된 바와 같은 인간 인자 VII이다. 어느 실시예에서, 인자 VIl 폴리펩티드는 인간 인자 Vlla이다. 일련의 실시예에서, 인자 VIl 폴리펩티드는 인간 인자 Vlla의 특이적생물학적 활성의 적어도 약 10%, 바람직하게적어도 약 30%, 더바람직하게적어도 약 50%, 가장 바람직하게 적어도 약 70% 을 나타내는 인자 VIl관련된 폴리펩티드이다. 다른 실시예에서, 인자 VIl 폴리펩티드는 하나 또는 그 이상의 아미노산이 삽입, 삭제 또는 치환된 야생형 인자 VIl의 서열과 다른 아미노산 서열을 가진다.

야생형 인자 Vlla와 비교하여 같거나 더 좋은 생물학적 활성이 있는 인자 VIl 변이체의 제한되지 않은 실시예는 덴마크 특허 출원 Nos. PA 2000 00734, PA 2000 01360 (WO 01/83725에 대응하는), PA 2000 01361 (WO 02/22776 에 대응하는)에서 기술된 것을 포함한다. 야생형 인자 VIl와 비교하여 같거나 더 좋은 생물학적 활성이 있는 인자 VII 변이체의 실시예는 S52A-FVII, S60A-FVII (lIno et al., Arch. Biochem. Biophys. 352: 182-192,1998) ; L305V-FVII, L305V/M306D/D309S-FVII, L3051-FVII, L305T-FVII, F374P-FVII, V158T/M298Q-FVII, V158D/E296WM298Q-FVII, K337A-FVII, M298Q-FVII, V158D/M298Q-FVII, L305V/K337A-FVII, V1 58D/E296V/M298Q/L305V-FVII, V1 58D/E296V/M298Q/K337A-FVII, V158D/E296V/M298Q/

L305V/K337A-FVII, K157A-FVII, E296V-FVII, E296V/M298Q-FVII, V158D/E296V-FVII, V158D/M298K-FVII,와 S336G-FVII ; 미국 특허 No. 5,580, 560에 개시된 바와 같이 단백질 분해안정성이 증가된 FVlla 변이체; 잔기 290 와 291 또는 잔기 315 외 316 사이에서 단백질 분해적으로 절단된 인자 Vlla(Mollerup et al., Biotechnol. Bioeng. 48: 501-505,1995) ; 인자 Vlla 의 산화된 형태(Kornfelt et al., Arch. Biochem. Biophys. 363: 43-54,1999)을 포함한다. 야생형 인자 Ill와 비교하여 감소 또는 변경된 생물학적 활성이 있는 인자 VII 변이체의 제한되지 않은 실시예는 R152E-FVlla (WIldgoose et al., Biochem 29: 3413-3420,1990), S344A-FVlla(Kazama et al., J. Biol.Chem. 270: 66-72,1995), FFR-FVlla (Holst et al., Eur. J. Vasc. Endovasc. Surg. 15: 515-520, 1998), Gla 영역이 부족한 인자 Vlla (㎕cola는en et al., FEBS Letts. 317: 245-Z49, 1993)을 포함한다. 화학적으로 변경된 인자 Vll 폴리펩티드와 서열 변이체의 제한되지 않은 실시예는 미국 특허 No. 5,997, 864에 기술되어 있다. 혈액 응고에서 인자 Vlla의 생물학적 활성은 조직 인자 (TF)에 결합하는 능력과 활성화된 인자 IX 또는 X(각각 인자 IXa 또는 Xa)을 생산하기 위한 인자 IX 또는 인자 X의 단백질 분해 절단을 촉매하는 능력에서 유래한다. 본 발명의 목적을 위해서, 인자 Vll 폴리펩티드 ("인자 VII 생물학적 활성")의 생물학적 활성은 미국 특허 No. 5,997, 864.에 기술된 바와 같이 인자 VII 결핍된 혈장과 트롬보플라스틴을 이용하여 혈액 응고를 촉매하기 위한 제제의 능력을 측정하여 정량화된다.

이 검정에서, 생물학적 활성은 대조군 샘플과 상대적으로 응고 시간의 감소로 표현되고 1 단위/ml 인자 VIl 활성을 포함하는 집단화된 인간 혈청 표준과 비교하여 "인자 VIl 단위"로 전환된다. 대안적으로, 인자 Vlla 생물학적 활성은

(i) 지질막에 끼워진 TF와 인자 X를 포함하는 체계에서 활성화된 인자 X (인자 Xa)을 생산하는 인자 Vlla 또는 인자 Vlla-관련된 폴리펩티드의 능력을 측정 (Persson et al., J. Biol. Chem. 272: 19919-19924,1997) ;

(ii) 수용액 체계에서 인자 X 가수분해를 측정 ("시험관 내 단백질 용해 검정", 하기 참조) ;

(iii)표면 플라스몬 공명 인자에 근거한 도구를 이용하여 Vlla 또는 인자Vlla-관련된 폴리펩티드가 TF의 물리적 결합을 측정 (Persson, FEBS Lettes.413: 359-363,1997);

(iv) 인자 Vlla 및/또는 인자 Vlla-관련된 폴리펩티드에 의한 합성 기질의 가수분해를 측정 ("시험관 내 가수분해 검정", 하기 참조) ;

(v) TF-독립적 시험관 내 체계에서 트롬빈 생성을 측정하여 정량화한다.

용어 "인자 VIl 생물학적 활성"또는"인자 VIl 활성"은 트롬빈을 생성하는 능력을 포함한다; 이 용어는 또한 조직 인자가 없을 때 활성화된 혈소판의 표면에서 트롬빈을 생성하는 능력을 포함한다.

본 발명에 따라 사용된 인자 Vlla 제제는 제한 없이 NovoSeven® (Novo Nordisk A/S, Bagsvaerd, Denmark)이다.

인자 XI 폴리펩티드:

본 발명을 수행할 때, 출혈을 방지 또는 치료하는 데 효과적인 인자 XI 폴리펩티드가 사용된다. 이는 혈액 또는 혈장에서 유도된 인자 XI 폴리펩티드, 재조합체 수단에 의해 생산된 것을 포함한다. 게다가, 혈소판은 FXI의 구조적으로 다른 형태를 포함한다. (FXI 유전자의 대안적인 스플라이싱 때문에 가능). 혈소판 인자 XI는 기술된 Lipscomb, M. S. & WA/Sh, P. N. (1979), Journal of clinical Investigation, 63, 1006-1014에 기술되어 있다.

여기에서 사용된 바와 같이,"인자 XI 폴리펩티드"는 제한없이 인자 XI 관련된 폴리펩티드와 인자 XI를 포함한다. 용어 "인자 XI"는 제한없이 즉, 소, 돼지, 고양이, 쥐, 연어 인자 XI와 같은 다른 종에서 유도된 야생형 인자 XI와 Sun, Y. &Gailani, D. (1996), J. Biol. Chem. 271: 29023-29028 (야생형 인간 인자 XI, 혈장)에 기술된 바와 같은 아미노산 서열을 가진 폴리펩티드를 포함한다. 어느 실시예에서, 인자 XI 폴리펩티드는 Sun, Y. & Gailani, D. (1996), J. Biol. Chem. 271: 29023-29028에 기술된 바와 같은 야생형 인간 인자 XI이다.

이는 개인마다 존재하고 발생하는 인자 XI의 자연적 대립 변이체을 포함한다. 또한, 글리코실레이션의 정도와 위치 또는 다른 번역 후 변경은 선택된 숙주 세포와 숙주 세포 환경의 성질에 따라서 달라진다. 용어 "인자 XI"는 인자 Xla로 지정된 각 생물 활성적 형태를 생성하도록 단백질 분해적으로 공정된 것과 절단되지 않은 (지모겐) 형태에서 인자 XI 폴리펩티드를 포함한다.

"인자 XI관련된 폴리펩티드"는 제한없이, 인간 인자 XI 에 상대적으로 화학적으로변경된 인자 XI 폴리펩티드 및/또는 인간 인자 XI에 상대적으로 하나 또는 그 이상의 아미노산 서열 변경 (즉,인자 XI 변이체)을 포함하고 또는 인간 인자 XI에 상대적으로 절단된 아미노산 서열(즉 , 인자 XI 단편)을 포함한다.

여기서 사용된 바와 같이 ,"인자 XI관련된 폴리펩티드"는 제한없이 인자 XI 생물학적 활성이 야생형 인간 인자 XI의 활성에 상대적으로 변경되거나 감소된 폴리펩티드와 야생형 인간 인자 XI에 상대적으로 같거나 향상된 생물학적 활성을 보이는 폴리펩티드를 포함한다.

이러한 폴리펩티드는 제한없이, 화학적으로 변경된 인자 XI 또는 인자 Xla 와 폴리펩티드의 생체활성을 변경 또는 파괴하는 특이적 아미노산 서열 변경이 도입된 인자 XI 변이체을 포함한다. 이는 또한 아미노산 서열이 약간 변경된 폴리펩티드, 예를 들어, N-말단 아미노산이 치환 또는 첨가된 것을 포함한 N-말단이 변경된 폴리펩티드 및/또는 인간 인자 XI에 상대적으로 화학적으로 변경된 폴리펩티드를 포함한다. "인자 Vll관련된 폴리펩티드"는 제한없이 인자 Vlla 생물학적 활성이 야생형 인간 인자 Vlla의 활성에 상대적으로 변경되거나 감소된 폴리펩티드와 야생형 인간 인자 VII에 상대적으로 같거나 향상된 생물학적 활성을 보이는 폴리펩티드를 포함한다.

야생형 인자 XI과 실질적으로 같거나 좋은 생체활성을 나타내거나 대안적으로, 야생형 인자 XI에 상대적으로 실질적으로 변경된 또는 감소된 생체활성을 보이는 인자 XI의 변이체을 포함한 인자 XI관련된 폴리펩티드는 제한없이, 하나 또는 그 이상의 아미노산이 삽입, 삭제 또는 치환된 야생형 인자 XI의 서열과 다른 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다.

변이체을 포함한 인자 XI관련된 폴리펩티드는 본 명세서에 기술된 바와 같은 인자 XI 활성 검정에서 시험하였을 때 같은 세포 형태에서 생산된 야생형 인자 XIa의 특이적 활성의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 100%, 적어도 약 110%, 적어도 약 120% 와 적어도 약 130% 을 보이는 것들을 포함한다.

야생형 인자 XI에 상대적으로 같거나 향상된 생물학적 활성이 있는, 변이체을 포함한 인자 XI관련된 폴리펩티드는 상기 기술된 바와 같은 하나 또는 그 이상의 특이적인자 XI 활성 검정에서 시험되었을 때 같은 세포 형태에서 생산된 야생형 인자 XI의 특이적 활성의 적어도 약 25%, 바람직하게적어도 약 50%, 더 바람직하게 적어도 약 75%, 더 바람직하게 적어도 약 100%, 더 바람직하게 적어도 약 110%, 더 바람직하게 적어도 약 120%, 가장 바람직하게 적어도 약 130% 을 보이는 것들을 포함한다. 본 발명의 목적을 위해서, 인자 XI 생물학적 활성은 본 명세서에서 후에 기술된 바와 같이 정량화한다. ("검정 부분").

야생형 인자 XI에 상대적으로 실질적으로 감소된 생물학적 활성이 있는 변이체을 포함한 인자 XI관련된 폴리펩티드는 상기 기술된 바와 같은 하나 또는 그 이상의 응고 검정, 단백질 용해 검정, 또는 TF 결합 검정 에서 시험되었을 때 같은 세포 형태에서 생산된 야생형 인자 Vlla의 특이적 활성의 약 25% 이하, 바람직하게 약 10% 이하 , 더 바람직하게 약 5% 이하, 가장 바람직하게 약 1 % 이하인 것들이다.

인자 XI 폴리펩티드의 제한되지 않은 실시예는 Gailani & Broze (1993), 혈액 Coagul. 피브린용해, 4: 15-20, 또는 Kerbiriou & Griffin (1979), J. Biol. Chem., 254: 12020-12207 에 기술된 바와 같은 혈장-유도된 인간 인자 XI을 포함한다.

어느 실시예에서 "FXI 발색검정"에서 시험하여 상기 인자 XI 폴리펩티드의 활성과 본래 인간 인자 XI (야생형 인자 XI)의 활성 비율이 적어도 약 1.25일 때 인자 XI는 인자 XI관련된 폴리펩티드이다(하기 참조) ; 다른 실시예에서, 비율은 적어도 약 2.0 ; 다른 실시예에서, 비율은 적어도 약 4.0이다.

인자 XI관련된 폴리펩티드 또한 인자 XI 또는 지혈-관련된 활성을 가지는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 단편을 포함한다. 예를 들어, 본 명세서에 기술된 인자 XI 폴리펩티드의 지혈-관련된 활성은 인자 XI활성 검정을 사용하여 측정한다.

바람직한 실시예에서, 인자 XI는 인간 혈장 인자 XI 또는 활성화된 인간 혈장 인자 Xla이다. 하나의 실시예에서, FXI는 혈소판 인자 XI이다. 다른 실시예에서, FXI는 재조합체적으로 만들어졌다.

정의

본문에서 아미노산을 세문자 또는 한 문자로 나타내는 것이 표 1에 제시된 통상적인 의미에서 사용된다. 뚜렷히 명시되지 않으면, 여기에서 언급된 아미노산은 L-아미노산이다. 예를 들어, K337에서 첫번째 글자는 제시된 위치 야생형 인자 VIl에 자연적으로 존재하는 아미노산을 나타내고 예를 들어, [K337A]-FVlla는 제시된위치에 자연적으로 존재하는 한 문자 코드K로 나타낸 아미노산이 한 문자 코드A로 나타낸 아미노산으로 치환된 FVII변이체를 지정한다.

용어 "인자 Vlla" 또는 "FVlla"는 교환적으로 사용된다. 용어 인자 Vlla는 지모겐 인자 VIl (단일 사슬 인자 VII)을 포함한다. 용어"인자 XI"또는"FXI"는 교환적으로 사용된다. 용어 "인자 Vlll" 또는 "FVIII"는 교환적으로 사용된다. 용어 "인자 Vlll" 또는 "FVIII"는 활성화된 인자 VlIl (FVlIla), 특징적인 FVIII-관련된 혈안정성 활성이 있는 변이체와 절단된 형태을 포함한다; 용어는 재조합체적으로 만들어진 FVIII와 혈장-유도된 FVIII을 포함한다. 인간 FVIII와 인간 재조합체 FVIII가 선호된다.

본문에서, " 트롬빈 생성이 손상된 시험체"는 활성화된 혈소판 표면에서 완전한 트롬빈 파열을 생성하지 못하는 시험체를 의미하고 응고인자, 혈소판, 피브리노겐(즉,보통 인간 혈장에서처럼)의 보통 양과 기능을 포함한 완전히 기능하고 보통 혈안정성 체계를 가진 시험체보다 트롬빈을 적게 생성하는 시험체를 포함하며 제한없이, 인자 VIII가 없는 시험체를 포함한다. ; 기능이 결손된 혈소판 또는 혈소판의 수가 적은 시험체(즉, 저혈소판증 또는 트롬바스테니아 글란즈맨 또는 과다하게 출혈한 시험체) ; 프로트롬빈, FX 또는 FVII의 수준이 낮은 시험체 ; 여러 응고인자의 수준이 낮은 시험체(외상 또는 과도한 수술로 과다한 출혈 때문에); 피브리노겐의 혈장 농도가 적은 시험체(즉, 여러번 수혈된 시험체).

" 트롬빈 생성 수준" 또는 "보통 트롬빈 생성"은 건강한 시험체와 비교한 시험체의 트롬빈 생성 수준을 의미한다. 수준은 보통 수준의 비율로 정의된다. 용어는 적절하게 교환적으로 사용된다. 용어 "혈안정성 체계의 향상"는 트롬빈을 생성하는 능력이 향상됨을 의미한다.

용어 "지혈을 향상"는 각각 같은트롬빈 생성 검정에서 시험하였을 때 인자 VII 단독 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드 또는 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드를 포함하는 대조군샘플의 각 트롬빈 생성에 상대적으로 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드의 제제와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 시험 샘플에 대해 측정된 트롬빈 생성이 연장된 상황을 포함한다. 트롬빈 생성은 본 명세서의 트롬빈 생성 검정에 기술된 것처럼 검정된다.("검정 부분"참조).

여기에서 사용된 것처럼 "단독"제 또는 인자는 약제적 조성물 또는 키트에 포함된 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 함께 유일한 혈안정제, 또는 활성적인 혈안정제, 또는 응고인자인 상황 또는 즉 특정 출혈 우발증 과정에서 특정 치료 과정에서 환자에 투여된 유일한혈안정제, 또는 활성적인 혈안정제, 또는 응고인자인 상황을 말한다. 이러한 상황은 응용 가능한 다른 혈안정제 또는 응고인자가 하나 또는 그 이상의 응고인자에 영향을 주도록 충분한 양 또는 활성으로 존재하지 않는 것을 포함한다는 것이 이해된다.

응고 용해 시간, 응고 강도, 피브린 응고 형성, 응고 시간은 임상의 인자 환자의 혈안정성 체계 상황에서 검정용으로 사용되는 임상 인자이다. 혈액샘플은 적절한 간격으로 환자에서 추출하고 하나 또는 그 이상의 인자를 즉, Meh et al.,혈액 응고 & 피브린용해 2001 ; 12: 627- 637; VIg et al., Hematology, Vol. 6 (3) pp. 205-213 (2001); Vig et al., 혈액 응고& 피브린용해, Vol. 12 (7) pp. 555-561 (2001) Oct ; Glidden et al.,clinical and applied thrombosis/hemostasis, Vol. 6 (4) pp. 226-233 (2000) Oct; McKenzie et al., Cardiology, Vol. 92 (4) pp. 240-247 (1999) Apr ; or Davis et al., Journal of the American Society of Nephrology, Vol. 6 (4) pp. 1250-1255 (1995)에 기술된 트롬보엘라스토그래피로 검정하였다.

용어 "응고 용해 시간을 연장"은 각각 같은 응고 용해 검정에서 시험하였을 때 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드의 제제와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 시험 샘플에 대한 측정된 응고 용해 시간이, 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드 또는 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드를 포함하는 대조군샘플의 각 응고 용해 시간에 상대적으로 연장된 상황을 포함한다. 응고 용해 시간은 상기 기술된 바와 같이 검정된다.

용어" 지혈을 향상"은 각각 같은트롬빈 생성 검정에서 시험하였을 때 인자 VII 단독 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드 또는 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드를 포함하는 대조군샘플의 각 트롬빈 생성에 상대적으로 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드의 제제와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 시험 샘플에 대해 측정된 트롬빈 생성이 연장된 상황을 포함한다. 트롬빈 생성은 본 명세서의 트롬빈 생성 검정에 기술된 것처럼 검정된다.("검정 부분"참조).

용어" 응고 강도를 증가"는 같은 응고 강도 검정에서 시험하였을 때 인자 VIl 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 시험 샘플에 대한 측정된 응고 강도, 즉, 기계적 강도와 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드 또는 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드을 포함하는 대조군샘플의 각 응고 용해 시간에 상대적으로 증가하는 상황을 포함한다. 응고 강도는 즉 Carr et al, 1991. (Carr ME, Zekert SL. Measurement of platelet-mediated force development during plasma clot formation. AM J MED Sci 1991; 302: 13-8)에 기술된 바와 같이 또는 트롬보엘라스토그래피를 수단으로 상기 기술된 바와 같이 검정한다.

용어" 피브린 응고 형성의 향상"은 같은 응고 강도 검정에서 시험하였을 때 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드 또는 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드를 포함하는 대조군 샘플의 피브린 응고 형성의 각 비율 또는 정도에 상대적으로 인자 VIl 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 제제와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 시험 샘플에 대한 피브린 응고 형성의 정도가 증가하는 상황을 포함한다. 피브린 응고 형성은 상기 기술된 바와 같이 검정한다.

용어 "응고 시간을 단축"은 같은 응고 강도 검정에서 시험되었을 때 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드 또는 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드을 포함하는 대조군샘플의 각 응고 시간에 상대적으로 인자 VIl 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 제제와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 시험 샘플에 대한 응고 형성(응고 시간)에 대해 측정된 시간이 증가하는 상황을포함한다. 능숙한 사람에게 공지된 표준 PT 또는 aPTT 검정을 수단으로 응고 시간을 검정한다.

용어" 혈소판의 수가 작거나 활성이 낮음"은 시험체의 혈장에 존재하는 혈소판(트롬보사이트)의 수, 그러한 혈소판의 생물학적, 응고-관련된 활성을 말한다. 증가된 혈소판 파괴, 감소된 혈소판 생산, 지라에 있는 혈소판의 보통 부분 보다 큰 저류때문에 수가 적어진다. 예를 들어, 저혈소판증은 마이크로리터당 150,000이하의 혈소판 수로 정의된다; 보통 혈소판 수의 상위 한계는 마이크로리터당 350,000 와 450,000 사이의 혈소판으로 간주된다. 혈소판 수는 자동화된 혈소판 카운터로 측정한다. ; 이는 능숙한 이들에게 잘 알려진 방법이다. 혈소판 수가 적어서 생기는 증후군은 제한없이, 저혈소판증, 응고병증을 포함한다. "활성"은 제한없이, 혈소판의 응고, 부착, 응고제 활성을 포함한다. 비정상적 당단백질, 비정상적 막 -세포골격 상호작용, 비정상적 혈소판 입자, 비정상적 of 혈소판 응고제활성, 비정상적 신호 전달과 분비때문에 활성이 감소한다. 응고, 부착, 응고제 활성을 포함한 혈소판 활성은 능숙한 이들에게 공지된 표준 방법을 사용하여 측정한다. 즉, Platelets. A Practical Approach, Ed. S. P.Watson & K. S. Authi: clinical aspects of platelet Disorders (K. J. Clemetson) 15: 299-318,1996, Oxford UniversIty Press; Williams Hematology, Sixth Edition, Eds. Butler, Lichtman, Coller, Kipps & SeiIg- sohn, 2001, McGraw-Hill 참조. 혈소판 활성이 낮아서 발생하는 증후군은 제한없이 Glanzmann thrombathensis, Bernard-SoulIer 증후군, 항응고제치료, 혈전용해치료를 포함한다. "낮은"은 같은 검정에서 측정하였을 때 보통 혼주혈장의 샘플에서의 수 또는 활성과 비교하여 시험 혈장 샘플의 수 또는 활성을 말한다.

여기에서 사용된 것처럼 용어 "출혈 질병"은 출혈 우발증에서 명백한 세포 또는 분자 공급원의 선천적인, 획득한 또는 유도된 결함을 말한다. 출혈 질병의 실시예는 제한없이, 응고 인자 부족 (즉 응고인자 VlIl, IX, XI 또는 VIl의 부족), 응고 인자 저해제, 결손된 혈소판 기능 (즉,Glanzmann thombasthenia와 Bernard-SoulIer 증후군), 저혈소판증, von WIllebrand's disease, 응고단백질의 희석, 증가된 피브린용해, 출혈 및 /또는 수혈(즉, 수술 또는 외상때문에 수혈받은 시험체)때문에 혈소판의 적은 수가 적은 응고병증을 포함한다.

출혈은 순환 체계 구성분에서 유래한 혈액의 분출을 말한다. 용어 "출혈 우발증"는 출혈 질병이 있는 시험체에서 원하지 않는 출혈과 수술, 외상, 또는 조직 손상의 다른 형태와 관련된 원하지 않는 , 제어되지 않는와 종종 과도한 출혈을 포함하는 것을 의미한다. 선천적인 또는 획득한 응고또는 출혈 질병이 있는 시험체와 기본적으로 보통 응고체계가 있지만 (일시적) 응고병증을 겪는 시험체에서 출혈 우발증는 발생한다. 해모필리아에서 처럼 혈안정성 체계는 정상적 필수적 응고 "화합물" (즉, 혈소판 또는 von WIllebrand 인자 단백질)이 부족하거나 비정상적이기 때문에 혈소판 기능이 결손된 시험체에서 출혈은 해모필리아에 의해 야기된 출혈과 관련되어 있다. 예를 들어 수술 또는 vast 외상과 관련하여 과도한 조직 손상이 있는 시험체에서 기본적으로 (외상전 또는 수술전) 보통 혈안정성 체계에도 불구하고 보통 혈안정성 체계는 즉각적 지혈이 필요하고 과다한 출혈이 나타난다.여러번 수혈된 그러한 시험체는 출혈로 인하여 (일시적) 응고병증이 나타나고 /또는 수혈(즉 , 응고 단백질의 희석, 피브린 용해가 증가, 출혈 및/또는 수혈)때문에 혈소판의 수가 적다. 출혈은 또한 뇌, 내이 지역과 눈과 같은 기관에서 발생한다; 이들은 외과적 지혈 가능성이 제한되고 성공적 지혈을 달성하기에 문제가 있는 지역이다. 복강경 수술과 극단적 치골뒤 전립선 절제술과 다양한 기관 (간, 폐, 종양 조직, 위창자 경로)유래의 생검을 다루는 공정에서 비슷한 문제가 발생한다. 이러한 상황에 보편적인 것은 출혈이 발산된(즉, 출혈 위염와 과다 자궁 출혈) 경우인 외과적 기술(봉합, 결찰 등)으로 인한 혈안정성을 제공하는 어려움이다. 출혈은 주어진 치료에 의해 결손된 혈안정성이 유도된 항응고제치료에서의 시험체에서도 발생한다; 이러한 출혈은 종종 급성이고 과다이다. 혈전색전증을 방지하기 위해 항응고제치료를 한다. 그러한 치료는 GP IIb/Illa 활성의 항체 또는 다른 저해제와 같은 다른 혈소판 응고 저해제와 헤파린,프로테오글리칸의 다른 형태, 와파린 또는 비타민 K-대항제의 다른 형태를 포함한다. 출혈은 항혈소판제 (즉, 아세틸살리실릭산), 항응고제(즉, 헤파린), 피브린 분해제(즉,조직 플라스미노겐 활성제, tPA)과 관련된 치료를 포함하는 혈전용해치료 때문이다. 출혈 우발증는 급성 헤마루트로시스 (관절에서 출혈), 임상적 친혈적 관절병증, (즉, 근육, 복막뒤, 혀밑과 인두뒤), 다른 조직에서 출혈, 헤마투리아 (신장 경로에서 출혈), 뇌출혈, 수술 (즉, 첫번째), 이를 뽑는 것과 위창자출혈 (즉, UGI 출혈)이 있는 시험체에서 수술 또는 외상 때문에 제어되지 않은 과다한 출혈을 포함한다. 출혈 우발증는 인자 VIII에 대한 저해제; 해모필리아 A ; 저해제가 있는 해모필리아 A ; 해모필리아 B;인자 VII의 결핍 ; 인자 XI의 결핍 ; 저혈소판증; von WIllebrand 인자의 결핍 (von WIllebrand's disease); 심한 조직 손상; 심한 외상; 수술; 복강경 수술; 출혈 위염; 생검 실시; 항응고제치료; 상부 위내장 출혈 (UGI) ; 또는 줄기 세포 이식과 관련이 있다. 출혈 우발증는 기계적지혈 가능성이 제한적인 기관 ; 뇌에서 발생; 내이 지역에서 발생; 또는 눈에서 발생에서 발생하는 과다한 자궁 출혈이다. 용어 "출혈 우발증"와 "출혈"은 적절하게 교환적으로 사용된다.

본문에서, 용어 "치료"는 예상된 출혈의 방지와 예를 들어, 수술에서 이미 발생한 출혈의 조절과 예를 들어, 외상에서,출혈을 억제 또는 최소화할 목적의 조절을 의미한다. 상기 인용된 "예상된 출혈"은 특정 조직 또는 기관에서 발생할 것으로 예상되는 출혈 또는 구체적이지 않은 출혈이다. 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드 제제와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드 제제의 치료용 투여는 용어 "치료"에 포함된다.

용어"시험체"는 여기에서 사용된 것처럼 는 인간과 같은 동물 특히 포유동물을 포함하고 적절하게 용어"환자"와 교환적으로 사용된다.

본 명세서에서 정의된 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 동시에 또는 연속적으로 투여된다. 인자는 1회-투여량 형태는 제공되고 여기서 양 응고인자을 포함하는 1회-투여량 형태로 제공되고 또는,첫번째 단위 투여량 형태로서 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드의 제제와 두번째 단위 투여량 형태로서 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 키트의 부분의 형태로 제공된다. 명세서에서 첫번째 또는두번째 또는 세번째, 단위투여량이 본 명세서에서 언급되면 이는 투여의 바람직한 정도를 나타내지 않으며 편의를 위해서 수행된다.

인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드 제제와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제의 "동시 투여"는 15 분, 바람직하게 10분 , 더바람직하게 5분, 더바람직하게 2 분의 시간 간격으로 1회-투여량 형태로 응고인자 단백질의 투여 또는 첫번째 응고인자 단백질 투여 후 두번째 응고인자 단백질의 투여를 의미한다. 양 인자는 첫번째로 투여된다.

"연속적" 투여는 첫번째 응고인자 단백질의 투여한 후 두번째 응고인자 단백질을 2 시간, 바람직하게 1 에서 2 시간, 더바람직하게 1 시간, 더바람직하게 30 분 내지 1 시간, 더 바람직하게 30 분, 더 바람직하게 15 내지 30 분의 시간 간격으로 두번째 응고인자 단백질의 투여를 의미한다. 두 단위 투여량 형태, 또는 응고인자 단백질은 첫번째로 투여된다. 바람직하게, 양 생성물은 같은 정맥내 접근을 통해 주사된다.

"인자 XI의 수준 "또는 "인자 XI 수준"은 시험체에서의 수준과 비교하여 환자'의 응고 인자 XI 활성의 수준을 의미한다. 수준은 보통 수준의 비율로 지정된다. 용어는 적절하게 교환적으로 사용도니다.

"인자 XI의 감소된 수준" 또는 "감소된 인자 XI 수준"은 응고인자 XI 결핍이 없는 또는 응고인자 XI의 저해제 시험체 집단에서 평균 인자 XI 수준과 비교하여 혈액 흐름에서 인자 XI의 존재 또는 활성이 감소하는 것을 의미한다. 인자 XI 순환수준은 응고제 또는 면역 검정으로 측정할 수 있다. 인자 XI 전응고제활성은 인자 XI 결핍 혈장의 응고 시간을 고치는 환자의 혈장 능력으로 결정한다. (즉, APTT 검정, 하기 참조 ; 또한 본 명세서의 "검정 부분" 참조).

인자 XI의 한 단위는 보통 (혼주) 인간 혈장의 밀리리터에 존재하는 인자 XI 의 양으로 정의된다. (인자 XI 수준 100 %에 대응).

인자 VIl의 한 단위는 약 0.5 pg 단백질에 대응하는 또는 활성화 50 단위 후에 1 g 단백질에 대응하는 보통 혈장 1 ml에 존재하는 인자 VII의 양으로 정의된다.

"부족"은 보통 건강한 개인에서의 존재 또는 활성과 비교하여 혈장에서 인자 XI의 존재 또는 활성에서 감소를 의미한다. 용어는 적절하게 "감소된 인자 XI 수준"과 교환적으로 사용될 수 있다.

"APTT" 또는 "aPTT"는 활성화된 부분적 트롬보플라스틴 시간 ( 즉, proctor RR, Rapaport SI : The partial thromboplastin time with kaolin ; a simple screening test for first-stage plasma clotting factor deficencies. Am J Clin Pathol 36: 212, 1961에 기술된 것처럼)을 의미한다.

"인자 XI반응 증후군"은 필요에 의하여 시험체에 투여된 외부 인자 XI가 증후군에 의해 야기된, 예측 혹은 존재하는 증상, 조건 또는 질병을 방지, 치료, 개선하는 것을 의미한다. 포함된 것은 제한없이, 인자 XI의 감소된 수준에 의해 야기된 증후군 즉, 인자 XI에 대한 저해제에 의해 야기된 출혈 질병이다. 인자 XI반응 증후군은 또한 본 발명에 따른 조성물로 치료한다.

"인자 VIl반응 증후군"은 필요에 의햐여 시험체에 투여된 외부 인자 VIl, 바람직하게 인자 Vlla가 증후군에 의해 야기된 증상, 조건 또는 병을 방지, 치료 또는 개선하는 것을 의미한다. 포함된 것은 제한없이, 응고 인자 VlIl, IX, XI 또는 VIl의 감소된 수준, 응고 인자 저해제, 결손된 혈소판 기능 (즉, Glanzmann thombasthemia와 Bernard-SoulIer증후군), 저혈소판증, von WIllebrand's disease에 의해 야기된 증후군과 응고단백질의 희석, 출혈 및/또는 수혈(즉, 수술 또는 외상 때문에 여러번 수혈된 시험체) 때문에 피브린용해의 증가, 혈소판의 적은 수에 의한 응고병증이다.

"반감기"는 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드 또는 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 혈장 농도의 특정값을 그 값의 반으로 감소시키는 데 필요로 하는 시간을 말한다.

"일차 지혈"은 FXa와 TF에 의한 트롬빈의 초기 생성을 의미한다: 인자 Vlla, 혈소판의 연속적 활성화와 피브린 최종적으로, 교차결합된 피브린에 의해 아직 안정화되지 않은 활성화된, 부착된 혈소판의 초기 느슨한 플락의 형성을 의미하다. 혈안정성 공정의 두번째 단계동안에 형성된 피브린에 의해 안정화되지 않으면 (유지된 지혈), 플럭은 피브린 분해성 체계에 의해 쉽게 용해된다.

"이차 지혈" 또는"유지된 지혈"는 활성화된 혈소판의 표면에서 발생하고 인자 VIlla와 인자 Vllla, 피브린의 연속적 형성과 초기 혈소판 플럭의 안정화에 의해 촉매된 트롬빈의 두번째 완전한 주된 파열 또는 생성을 의미한다. 피브린에 의해 플럭이 안정화되면 지혈이 완전히 된다.

"완전한 지혈"는 출혈을 효과적으로 멈추고 피브린 분해성 체계에 의해 쉽게 분해되지 않는 상처의 위치에서 안정한 고체 피브린 응고 또는 플럭의 형성을 의미한다. 본문에서, 용어 지혈은 상기 기술된 바와 같이 완전한 지혈을 나타내는 데 사용된다.

인자 XI 응고 또는 인자 VIl 단백질 ("항원")의 양은 제제의 단백질 전체 양은 광도를 측정하여, 표준 엘리자 면역 검정과 같은 일반적으로 알려진 방법으로 측정한다. 일반적 용어에서, 인자 XI 단백질-포함하는 제제의 용액과 엘리자에서 부동적인 항-FXI 항체를 접촉하고 부동적인 항체-인자 XI 복합체와 마커를 가지는 두번째 항을 연속적으로 접촉시켜 그러한 검정을 수행하고 세번째 단계에서 양을 측정한다. 각 응고인자의 양은 적절한 항체를 사용하여 비슷한 방식으로 측정한다. 제제에 존재하는 응고인자 단백질의 전체 양은 각 응고인자 단백질의 양을 첨가하여 결정한다. 한 실시예에서, 제제는 분리된 응고인자를 포함한다. 또다른 실시예에서 제제는 응고인자 II와 응고인자 IIa (프로트롬빈와 트롬빈) 및/또는 인자 X 또는 Xa가 없다.

여기에서 사용된 것처럼, 용어 "분리된"은 즉, 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드가 합성되고 세포에서 분리되는 응고인자 또는 자연적으로 (즉, 혈장 또는 혈액)발견되는 매체를 말한다. 공급원의 세포 유래의 폴리펩티드를 분리하는 것은 제한없이, 부착 세포 배양물 유래의 바람직한 생성물을 포함하는 세포 배양 매체를 제거; 비부착 세포를 제거하기 위한 원심분리 또는 여과;등을 포함한 당업계에 공지된 방법으로 수행한다. 자연적으로 발생하는 매체에서 폴리펩티드의 분리는 제한없이, 항-인자 Vll 또는 항-인자 XI 항체 칼럼과 같은 친화 크로마토그래피, 각각 ; 소수성상호작용 크로마토그래피; 이온-교환 크로마토그래피; 크기 배제 크로마토그래피; 전기영동 과정 (즉, 제제적 등전점 분리법 (IEF)), 우선적 용해성 (즉, 암모늄 설페이트 침전), 또는 추출을 포함한 당업계에 공지된 방법으로 수행한다.

용어 "TFPI 억제제"는 TFPI(조직 인자 경로 억제제)의 항응고 활성을 억제하는 화합물을 의미한다. 용어는 유럽 특허 No. 558 529, WO 96/28153와 US 5,622, 988에 개시된 화합물들을 포함한다. "TFPI" 와 "EPI" (외부 경로 억제제)는 교환적으로 사용된다.

본 발명 내에서 인자 VII 폴리펩티드와 인자 XI 폴리펩티드의 "효과적인 양"은 병과 합병증을 치료, 개선, 부분적으로 정지하기 위해서 출혈 또는 혈액 손실을 방지 또는 감소하기에 충분한 인자 VII 폴리펩티드의 양 즉 FVlla와 인자 XI 폴리펩티드의 양으로 정의된다.

용어 "인자 Vlla의 활성" 또는 "인자 Vlla-활성"은 트롬빈을 생성하는 능력을 포함한다; 용어는 또한 조직 인자가 없을 때 활성화된 혈소판의 표면에서 트롬빈을 생성하는 능력을 포함한다,

본 발명에 따른 조성물은 TFPI-억제제를 더 포함한다. 본 발명에 따른 조성물은 인자 VIII을 더 포함한다. 그러한 조성물은 인자 VIll에 대한 저해제가 없는 시험체에 바람직하게 투여되어야 한다.

축약

TF 조직 인자

FVII 단일 사슬, 비활성화된 형태의 인자 VIl

FVlla 활성화된 형태의 인자 VII

rFVlla 활성화된 형태의 재조합체 인자 Vll

FXI 지모겐, 비활성화된 형태의 인자 XI

FXIa 활성화된 형태의 인자 XI

rFXI 재조합체 FXI

rFXla 재조합체 FXIa

FVIII 지모겐, 비활성화된 형태의 인자 VIII

RFVIII, 재조합체 FVIII

FVllla 활성화된 형태의 인자 FVIII

rFVllla 재조합체 FVllla

TFPI조직 인자 pathway 억제제

화합물의 제제 :

본 발명에서 사용하기에 적절한 인간 정제된 인자 Vlla는 바람직하게 Hagen et al.,proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 24122416,1986, 또는 특허 No. 200.421 (ZymoGenetics, Inc.)에 기술된 바와 같은 DNA 재조합체 기술로 제조한다.

인자 VII는 또한 Broze와 Majerus,J. Biol. Chem. 255(4): 1242-1247, 1980와 Hednerand Kisiel,J. Clin. lnvest.71: 1836-1841,1983.에 기술된 방법으로 생산한다. 이러한 방법으로 다른 혈액 응고인자의 검출가능한 양이 없는 인자 VII을 생성한다. 최종 정제 단계로서 추가 젤 여과를 포함한 방법으로 더 정제된인자 VII 제제를 획득한다. 인자 VIl는 공지된 수단, 즉 인자 Xlla, IX a 또는 Xa와 같은 여러가지 다른 혈장 단백질에 의해 활성화된 인자 Vlla로 전환된다. 대안적으로, Bjoern et al. (Research Disclosure, 269 September 1986, pp. 564-565)에 기술된 바와 같이, 인자 VII는 Mono QE (Pharmacia fine Chemical) 등과 같은 이온-교환 크로마토그래피 칼럼을 통과하여 활성화된다.

인자 VII관련된 폴리펩티드는 야생형 인자 VIl의 변이체 또는 재조합체 기술로 생산된다. 야생형 인자 VIl 와 비교하여 아미노산 서열이 변경된 인자 Vll관련된 폴리펩티드는 야생형 인자 VII를 암호화하는 핵산 서열을 변경하여 또는 위치 특이적 변이체과 같은 공지된 수단으로 자연 인자 VII을 암호화하는 핵산에서 아미노산 코돈의 일부를 제거하여 생산한다.

당업계에서 능숙한 사람에게 인자 Vlla 또는 인자 XI분자의 기능에 중대한 지역 외부에서 치환될 수 있고 활성적인 폴리펩티드를 형성하는 것이 분명하다. 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 활성 또는 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 활성에 필수적이고 치환되지 않은 아미노산 잔기는 위치 특이적 변이체 또는 알라닌 스캐닝 변이체 (참조, 즉, Cunningham and Wells, 1989,Science244: 1081-1085)과 같은 당업계에 공지된 방법에 따라 확인한다. 후 기술에서, 분자에서 모든 양으로 전하된 잔기에서 변이체이 도입되고 형성된 변이체 분자는 분자의 활성에 중대한 아미노산 잔기를 확인하기 위한 응고 교차 결합 활성에 대해서 시험된다. 기질-효소 상호작용의 위치는 핵 자기 공명 분석, 크리스탈로그래피 또는 광친화 라벨링과 같은 3차원적 구조의 분석으로 결정될 수 있다(참조,즉, de Vos et al., 1992, Science 255 : 306-312; Smith et al., 1992, Journal of Molecular biology 224 : 899-904; Wlodaver et al., 1992, FEBS Letters 309: 59-64).

하나의 뉴클레오티드를 다른 뉴클레오티드로 교환하기 위해서 변이체을 핵산 서열에 도입하는 것은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 위치-특이적 변이체을 수행한다. 해당 인서트가 있는 고도로 꼬아진 이중 가닥 DNA 벡터와 바람직한 변이체을 포함하는 2개의 합성 프라이머를 공정하는 것이 특정하게 유용하다. 벡터의 양 가닥에 상보적인 올리고뉴클레오티드프라이머는 Pfu DNA 폴리머라아제를 수단으로 온도 싸이클동안에 확장한다. 프라이머를 결합하자마자, 엇갈린 닉을 포함하는 변이체된 플라스미드가 생성된다. 온도 싸이클 다음에, 생성물은 모DNA 템플레이트를 소화하고, 변이체을 포함하는 합성된 DNA을 선택하기 위한 메틸화된 그리고 헤미메틸화된 DNA에 특이적인 Dpnl로 처리한다. 변이체을 생성, 확인하고 분리하기 위한 당업계에 공지된 다른 방법은 예를 들어 유전자 셔플링 또는 파지 전시 기술등에서 사용될 수 있다.

공급원의 세포에서 폴리펩티드를 분리하는 것은 부착 세포 배양물 유래의 바람직한 생성물을 포함하는 세포 배양 매체의 제거; 부착되지 않은 세포를 제거하기 위한 원심분리 또는 여과 ;등을 포함하는 당업계에 공지된 방법으로 수행한다.

선택적으로, 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드를 더 정제될 수 있다. 정제는 제한없이, 항-인자 Vll 항체 칼럼과 같은 친화 크로마토그래피를 포함한 당업계에 공지된 방법 (참조, 즉, WakabayashI et al., J. Biol. Chem. 261:11097,1986 ;and Thim et al., Biochem. 27: 7785,1988) ; 소수성 상호작용 크로마토그래피; 이온-교환 크로마토그래피; 크기 배제 크로마토그래피; 전기영동 과정 (즉, 제제적 등전점 분리법 (IEF), 우선적 용해성 (즉, 암모늄 설페이트 침전), 또는 추출 등으로 수행한다. 일반적으로, Scopes, protein purification, Springer-Verlag, New York, 1982;and protein purification, J. C. Janson and Lars Ryden, edItors, VCH Publishers, New York, 1989. 참조. 다음 정제, 제제는 바람직하게 숙주 세포에서 유도된 비인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드의 중량 약 10% 미만, 더바람직하게 약 5% 미만과 가장 바람직하게 약 1 % 미만을 포함한다.

인자 VIl 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드는 인자 IXa, kallikrein, 인자 Xa와 트롬빈. 참조, 즉, Osterud et al., biochem. 11: 2853 (1972); Thomas, 미국특허 No. 4,456, 591;and Hedner et al., J. Clin. Invest. 71: 1836 (1983)과 같은 트립신 유사 특이성이 있는 인자 Xlla 또는 다른 프로테아제를 사용하여 단백질 분해 절단으로 활성화된다. 대안적으로, 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드는 Mono QE (Pharmacia) 또는 유사물과 같은 이온-교환 크로마토그래피 칼럼을 통과시켜서 활성화된다. 형성된 활성화된 인자 Vll 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드는 하기 기술된 바와 같이 제제되고 투여된다.

본 발명내에서 사용하기 위한 인자 XI 을 참고문헌으로 통합된 Koide et al. (Biochemistry 16: 2279-2286, 1977)와 Bouma et al. (J. Biol. Chem. 252: 6432-6437,1977)에 공지된 것과 같은 공지된 방법에 따라서 혈장에서 제제한다. 병 감염 위험이 있는 혈액-또는 조직유도된 생성물을 사용하는 것을 회피하기 위해서 재조합체 인자 XI을 사용하는 것이 바람직하다. 재조합체 인자 XI을 제제하기 위한 방법이 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 전체 참고문헌으로 통합된 Kemball-Cook et al. (Gene 139 (2): 275-279, 1994), FujIkawa et al. (Biochemistry 25: 2417-2424,1986), MeIjers et al. (혈액 79 (6): 1435-1440, 1992), 참조.

인자 XI관련된 폴리펩티드를 야생형 인자 XI의 변경 또는 재조합체 기술로 생산한다. 야생형 인자 XI와 비교하여 아미노산 서열이 변경된 인자 XI관련된 폴리펩티드를 상기 더 구체적으로 기술된 것과 같이 위치-특이적 변이체과 같은 공지된 수단으로 자연 인자 XI을 암호화하는 핵산에서 아미노산 코돈을 변경 또는 아미노산 코돈의 일부를 제거하여 야생형 인자 XI을 암호화하는 핵산 서열을 변경하여 생산한다. 공급원의 세포에서 폴리펩티드의 분리는 부착 세포 배양물 유래의 바람직한 생성물을 포함하는 세포 배양 매체의 제거 ;부착하지 않은 세포를 제거하기 위한 원심분리 또는 여과 ;등을 포함한 당업계에 공지된 방법으로 달성한다. 물인자 XI 항체 칼럼에서 ; 소수성 상호작용 크로마토그래피; 이온-교환 크로마토그래피; 크기 배제 크로마토그래피; 상기 기술된 바와 같은 추출 등과 같은 전기영동 과정 (즉, 제제적 등전점 분리법 (IEF), 우선적 용해성 (즉, 암모늄 설페이트 침전)과 같은 친화크로마토그래피를 포함한 당업계에 공지된 방법을 사용하여 정제한다. 다음 정제, 제제는 바람직하게 숙주 세포에서 유도된 비-인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 약 10중량 % , 더바람직하게 약 5% 미만 가장 바람직하게 약 1 % 미만을 포함한다. 생성된 활성화된 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 하기 기술된 바와 같이 제제되거나 투여된다.

당업계에서 능숙한 이들이 평가한 바와 같이, 면역 반응을 유도하는 위험을 감소시키기 위해서 시험체와 공통유전자인 인자 XI와 인자 VIIa 단백질을 사용하는 것이 바람직하다. 비인간 인자 XI의 제제와 특성 규명은 예를 들어, Gailani (혈액 90 (3): 1055-1064,1997)에 개시되어 있다. 본 발명은 또한 수의학 방법내에서 XI와 인자 Vlla 단백질을 사용하는 것을 포함한다.

약제적 조성물과 사용 방법

본 발명의 제제는 제한없이, 응고 인자 VIII, IX, XI 또는 VII의 수준이 감소하여 생긴 증후군을 포함하여, 응고 인자 저해제, 결손된 혈소판 기능 (즉, Glanzmann thombasthemia와 Bernard-SoulIer 증후군), 저혈소판증, von WIllebrand's disease, 응고단백질이 희석, 피브린용해가 증가, 출혈 및/또는 수혈때문에 혈소판 수가 적어서(즉, 수술 또는 외상 때문에 여러 번 수혈된 시험체에서)에 의해 야기된 응고병증과 같은 인자 VII 반응 증후군을 치료하는 데 사용된다. 본 발명에 따른 인자 VIl 또는 인자 VIl 관련된 폴리펩티드의 제제와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드 제제를 포함하는 약제적 조성물은 치료 및/또는 건강유지에 도움이 되는 치료용으로 비경구 투여용이다. 바람직하게, 약제적 조성물은 장관외적으로, 즉 ,정맥내로, 피하로 , 또는 근육내부 ; 가장 바람직하게 정맥내로 투여된다. 이는 지속적 또는 박동성 주입으로 투여된다.

본 발명에 따른 약제적 조성물 또는 형태는 인자VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드를 포함하고 ,1회-단위 투여량 형태 또는 약제적 수용가능한 담체로, 바람직하게수용성 담체 또는 희석제에 희석된 키트의 일부의 형태로 제조한다. 간략하게, 본 발명에 따라 사용하기에 적절한 약제적 조성물은 적절한 보조제와 적절한 담체 또는 희석제를 인자 XI와 조합하여 바람직하게 정제된 형태로 인자 Vlla 또는 인자 XI, 또는 인자 Vlla을 혼합하여 만든다. 물, 버퍼된 물, 0.4% 염용액, 0.3% 글리신과 유사물과 같은 다양한 수용성 담체가 사용된다. 발명의 제제는 상처 위치에 전달 또는 표적인 젤 또는 리포좀 제제의 형태로 비수용성 담체를 사용하여 제조한다. 리포좀 제제는 일반적으로 즉, 미국 특허s Nos. 4,837, 028, 4,501, 728,와 4,975, 282.에 기술되어 있다. 조성물은 통상적, 공지된 멸균 기술로 멸균된다. 형성된 수용액은 사용하기 위해 포장 또는 무균 조건에서 여과하고 동결건조하며 동결건조된 제제는 투여 전에 살균된 수용액과 결합된다.

조성물은 예를 들어, 나트륨 아세테이드, 나트륨 락테이트, 염화 나트륨, 염화 칼륨, 염화 칼슘등과 같은 pH 조정제와 버퍼제 및/또는 탄력성 조정제 등을 포함한 약제적 수용가능한 보조물 또는 보조제를 포함한다.

제제는 하나 또는 그 이상의 희석제, 유화제, 방부제, 버퍼, 첨가제를 더 포함하고 액, 가루, 유제, 제어되지 않은 방출 등을 포함한다. 당업계에서 능숙한 사람은Remington's pharmaceutical Sciences.Gennaro, ed. , Mack PublishIng Co. , Easton, PA, 1990 에 개시된 것과 같은 수용가능한 관행에 따라 적절한 방식으로 본 발명의 조성물을 제제한다. 따라서, 정맥내주입에 전형적 약제적 조성물은 멸균 Ringer 용액 250 ml와 제제의 10 mg을 포함하도록 만든다.

본 발명의 제제를 포함하는 조성물은 예방용 및/또는 치료용으로 투여될 수있다. 치료용 출원에서, 상기 기술된 바와 같이 병을 이미 겪은 시험체에 병과 이의 합병증의 임상적 명시를 치료, 완화 또는 부분적으로 정지시키기에 충분한 양의 조성물을 투여한다. 이를 달성하기에 적절한 양은 "치료적으로 효과적인양"으로 정의된다. 각 목적에 효과적인 양은 시험체의 무게와 일반적인 상태와 병 또는 상처의 심각성에 따라 달라진다. 적절한 투여량을 결정하는 것은 값의 기질을 조제하고 기질의 다른 위치를 시험하여 통상적 시험을 사용하여 달성할 수 있음이 이해된다.

국부적 응용과 같은 본 발명의 제제의 국부적 전달은 관접목 또는 스턴트로 통합된 스프리이, 살포, 이중 풍선 도뇨관, 스턴트, 풍선 도뇨관을 코팅하기 위해 사용되는 하이드로젤 또는 다른 설정된 방법을 사용하여 수행한다. 어떠한 경우에도, 약제적 조성물은 조건을 치료하기에 충분히 효과적인 제제의 양을 제공해야 한다.

이러한 형태로 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드와 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드, 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드, 또는 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드의 농도는 널리 변할 수 있다, 즉 약 0.5 중량% 미만, 또는 적어도 약 1중량 % 에서 15 또는 20 중량 % 까지 체액 부피, 점성등으로 선택할 수 있다. 투여의 특정 방식에 따라서 주사에 의한 투여 또는 주입, 바람직하게 특히 주사에서 선택할 수 있다. 따라서, 인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드는 정맥내투여에 적절한 형태로 제조한다. 동결건조된 가루 또는 액체 제제에 인자 VII 또는 인자VII관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 한 투여량 형태와 액체 제제 인자 VIl 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드 한 투여량 형태을 포함하는 용해된 동결건조된 가루 또는 액체 제제 그리고 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드 또다른 투여량 형태을 포함하는 용해된 동결 건조된 가루 또는 액체 제제이다.

인자 VIl 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 양과 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 양은 함께 출혈 우발증를 치료하는 데 효과적인 양을 포함한다.

본 발명의 물질은 심각한 질병 또는 상처 상태 즉 생명을 위협하거나 잠정적으로 생명을 위협하는 상황에서 일반적으로 사용됨을 명심해야 한다. 그러한 경우에, 인간에서 외부 물질의 감소와 인자 Vlla와 인자 XI의 면역성이 일반적으로 감소하는 관점에서 이러한 조성물을 외과 의사가 투여하는 것이 바람직하다.

치료용으로 응용하는 것에서, 인자 VIl 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 제제와 치료용 응용에서, 인자 VIl 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드 제제와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드 제제를 포함하는 조성물은 시험체의 응고 능력을 향상하기 위해서 질병 상태 또는 상처의 위험에 민감한 시험체에 투여한다. 그러한 양은 "치료용으로 효과적인 양"으로 정의된다. 인자 VIl 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 양과 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 양은 함께 출혈 우발증를 방지하기에 효과적인 양의 응고물을 포함함이 이해된다.

조성물의 1회 또는 복합 투여는 외과 의사가 선택한 투여량 수준과 패턴으로 수행할 수 있다. 조성물은 일 또는 주마다 하나 또는 그 이상의 시간으로 투여된다. 그러한 약제적 조성물의 효과적인 양은 출혈 우발증에 대해 임상적으로 중요한 효과를 제공한다. 그러한 양은 부분적으로 치료되는 특정 조건, 나이, 무게, 시험체의 일반적 건강, 당업계에 능숙한 이들에게 명백한 다른 인자에 의존한다.

발명의 조성물은 일반적으로 예상된 출혈 전 또는 출혈의 시작에 1회투여량 형태로 투여된다. 또한 주어진 투여량과 시험체의 조건에 따라 바람직하게 2-4-6-12 시간 간격으로 반복적으로(복합투여량 형태로) 투여한다.

고의적으로 개입된 치료를 하기 위해서, 인자 VII 또는 인자 Vll관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 개입을 수행하기 전에 약 24 시간 내에 7일동안 투여된다. 응고제로서 투여는 여기에서 기술된 바와 같이 다양한 경로가 될 수 있다.

적절한 농도에서 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드의 제제와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 1회 제제 (1회-투여량 형태)이다. 조성물은 또한 인자 VIl 또는 인자 VIl 관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 첫번째 단위 투여량 형태와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 두번째 단위 투여량 형태로 구성된 키트의 일부 형태이다. 이 경우에, 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 바람직하게 약 15 분 내에, 예를 들어 10 분 내 또는, 바람직하게 5 분 내 또는 더 바람직하게, 2 분 내로 차례차례 투여되어야 한다. 단위 투여량 형태중 하나는 첫번째로 투여될 수 있다.

키트는 적어도 2개의 별개 약제적 조성물을 포함한다. 키트는 분리된 병 또는 분리된 포일 파켓과 같은 별개 조성물을 포함하는 용기 수단을 포함한다. 전형적으로 키트는 별개 구성분의 투여를 위한 지침서를 포함한다. 키트 형태는 별개 구성분이 다른 투여량 형태로 바람직하게 투여될 때, 다른 투여량 간격으로 도입될 때, 조합의 각 구성분의 적정이 바람직할 때 특히 유용하다.

본 발명에 따른 인자 VIl 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드의 양과 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 투여된 양은 비율에서 약 1: 100 내지 약 100: 1 (w/w)로 변할 수 있다. 인자 XI에 대한 인자 VII의 비율은, 즉, 약 1 : 100, 또는 1 : 90, 또는 1 : 80, 또는 1 : 70 또는 1 : 60, 또는 1 : 50, 또는 1 : 40, 또는 1 : 30, 또는 1 : 20, 또는 1 : 10, 또는 1 : 5, 또는 1 : 2, 또는 1: 1, 또는 2: 1, 또는 5: 1, 또는 10: 1, 또는 20: 1, 또는 30.1, 또는 40: 1, 또는 50: 1, 또는 60: 1, 또는 70: 1, 또는 80: 1, 또는 90: 1, 또는 100: 1; 또는 약 1: 90 내지 약 1: 1, 또는 약 1: 80 내지 약 1: 2, 또는 약 1: 70 내지 약 1: 5, 또는 약 1: 60 내지 약 1: 10, 또는 약 1: 50 내지 약 1 : 25, 또는 약 1: 40 내지 약 1: 30, 또는 약 90: 1 내지 약 1: 1, 또는 약 80: 1 내지 약 2: 1, 또는 약 70: 1 내지 약 5: 1, 또는 약 60: 1 내지 약 10: 1, 또는 약 50: 1 내지 약 25: 1, 또는 약 40: 1 내지 약 30: 1이다.

인자 VII 또는 인자 VIl관련된 폴리펩티드의 투여량은 야생형 인자 VII의 약 0.05 mg 내지 약 500 mg/day 범위이다. 즉, 시험체의 무게, 조건의 심각성에 따라서 부하와 유지양으로서 70 kg 시험체에 대해 약 1 mg 내지 약 200 mg/day까지, 또는, 즉, 약 5 mg 내지 약 175 mg/day이다.

인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 투여량은 야생형 인자 VII의 약 0.05 mg 내지 약 500 mg/day 범위이다. 즉, 시험체의 무게, 조건의 심각성에 따라서 부하와 유지양으로서 70kg 시험체에 대해 약 1 mg 내지 약 200 mg/day까지, 또는, 즉, 약 1 mg 내지 약 175 mg/day이다.

인자 Vlla와 인자 XI을 조합하면 시험관 내 응고 강도-와 피브린용해 시간-검정에서 상승 효과를 보인다. 게다가 인자 Vlla와 인자XI 을 조합하면, 안정한 피브린 응고을 형성할 때 반-응고 용해 시간을 증가, 응고 강도을 증가, 피브린 용해에 대한 저항성을 증가시키는 상승 효과를 보인다.

조성물은 적절한 농도에서 인자 Vlla와 인자 XI을 포함하는 1회 제제의 형태이다. 조성물은 또한 인자 Vlla와 두번째 단위 투여량 형태를 포함하는 첫번째 단위 투여량 형태, 인자 XI 와 선택적으로, 인자 VlIl 및/또는 TFPI억제제를 포함하는 하나 또는 그 이상의 단위 투여량 형태로 구성된 키트의 형태이다.

이 경우에, 바람직하게 약 1-2 시간 내에, 예를 들어 30 분 내 또는, 바람직하게, 10 분 내 또는, 더 바람직하게, 5 분 내로 인자 Vlla와 인자 XI는 연속적으로 투여되어야 한다. 단위 투여량 형태중 하나는 첫번째로 투여되어야 한다.

개별적으로 투여되는 활성적인 성분을 조합하여 출혈 우발증 또는 응고 치료하는 것과 관련있고 발명은 또한 키트 형태의 개별적 약제적 조성물을 조합하는 것과 관련된다. 키트는 적어도 두개의 개별적 약제적 조성물을 포함한다. 키트는 분리된 병 또는 분리된 포일 파켓과 같은 개별적 조성물을 포함하는 용기 수단을 포함한다. 전형적으로 키트는 개별 구성분의 투여를 위한 지침서를 포함한다. 키트 형태는 별개 구성분이 다른 투여량 형태로 바람직하게 투여될 때, 다른 투여량 간격으로 도입될 때, 조합의 각 구성분의 적정이 바람직할 때 특히 유용하다.

검정 :

인자 Vlla 활성 시험:

인자 Vlla 활성을 시험하고 적절한 인자를 선택하기 위한 적절한 검정

Vlla 변이체 단순한 예비 시험관 내 시험으로 검정될 수 있다:

시험관 내 가수분해 검정

본래 (야생형) 인자 Vlla와 인자 Vlla 변이체는 ("인자 Vlla"로 언급됨) 특이적 활성에 대해 검정된다. 특이적활성과 직접적으로 비교하기 위해 평행하게 검정될 수 있다. 검정은 마이크로리터 플레이트(MaxiSorp, Nunc,Denmark)에서 수행된다. 발색성 기질 D-lle-Pro-Arg-p-nitroanilide (S-2288, Chromogenix, Sweden), 최종 농도 1 mM은 인자 Vlla 0.1 M NaCl, 5 mM CaCl₂와 1 mg/ml 소 혈청 알부민을 포함하는 50 mM Hepes, pH 7.4에서 (최종 농도 100 nM)에 첨가된다. 405 nm에서 흡수도는 SpectraMax 340 plate reader (Molecular Devices, USA)와 연속적으로 측정된다. 20분 배양하는 동안, 효소를 포함하지 않는 블랭크 웰에서 흡수도를 추출한 후에 발생한 흡수도는 변이체과 야생형 인자 Vlla의 활성 간의 비율을 계산하는 데 사용된다 :

비율= (A_{405 nm}인자 Vlla 변이체)/ (A_{405 nm}인자 Vlla 야생형).

이에 근거하여, 본래 인자 Vlla와 비교할 만한 또는 더 높은 활성이 있는 인자 Vlla 변이체, 예를 들어, 변이체의 활성과 본래 인자 VIl의 활성 (야생형 FVII) 비율이 약 1.0.이상인 변이체을 확인할 수 있다.

인자 Vlla 또는 인자 Vlla 변이체의 활성은 인자 X와 같은 생리적 기질을 사용하여 적절한 발색성 기질 (즉 S-2765)을 첨가한 후에 형성된 인자Xa가 측정되는 100-1000 nM 농도에서 측정한다. 추가로, 활성 검정은 생리적 온도에서 수행된다.

시험관 내 단백질용해 검정

본래 (야생형) 인자 Vlla와 인자 Vlla 변이체 ("인자 Vlla"로 언급된)은 특이적활성을 직접적으로 비교하기 위해서 평행하게 검정된다. 검정은 미세적정 플레이트 (MaxiSorp, Nunc, Denmark)에서 수행한다. 0.1 M NaCl, 5 mM CaCl₂와 1 ㎎/ml 소 혈청 알부민을 포함하는 인자 Vlla(10 nM)와 인자 X (0.8 microM)을 100 마이크로 50 mM Hepes, pH 7.4, 에서 15분 동안 배양한다. 인자 X 절단은 0.1 M NaCl, 20 mM EDTA와 1 mg/ml 소 혈청 알부민을 포함하는 50 microl 50 mM Hepes, pH 7.4을 첨가하면 중단된다. 생성된 인자 Xa의 양은 발색성 기질 Z-D-Arg-Gly-Arg-p-nitroanilide (S-2765, Chromogenix, Sweden), 최종 농도 0.5 mM.을 첨가하여 측정한다. 405 nm 에서 흡광도는 SpectraMax^TM340 plate reader (Molecular Devices, USA)로 연속적으로 측정한다. 10 분 동안, FVlla을 포함하지 않는 블랭크 웰에서 흡광도를 추출한 후에 발생한 흡광도는 변이체의 단백질 분해 활성과 야생형 인자 Vlla의 비율을 계산하는데 사용된다 :

비율= (A405 nm 인자 Vlla 변이체)/ (A405 nm 인자 Vlla 야생형).

이에 근거하여, 변이체의 활성과 본래 인자 Vll의 활성사이의 비율이 (야생형 FVII) 약 1.0 이상인 변이체과 같은 본래 인자 Vlla 과 비교할만하거나 더 높은 활성이 있는 인자 Vlla 변이체을 확인할 수 있다.

트롬빈 생성 검정:

인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드 또는 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드 (즉, 변이체)의 트롬빈을 생성하는 능력은 생리적 농도와 활성화된 혈소판에서 모든 적절한 응고 인자와 저해제를 포함하는 검정에서 측정될 수 있다. (여기에 참고문헌으로 통합된 p. 543 in Monroe et al. (1997) Brit. J. Haematol. 99,542-547 에서 기술된 바와 같이).

인자 XI 활성에 대한 시험:

예를 들어, Gailani et al. (혈액 97 (10): 3117-3122,2001) (" FXI 발색성 검정'2)에 기술된 바와 같이 발색성 기질을 사용하여 시험실 내 시험으로서 인자 XI 아미노분해 활성을 시험하고 적절한 인자 XI 변이체을 선택하는 적절한 검정이 수행될 수 있다.

예를 들어, Gailani et al. (혈액 97 (10): 31173122,2001)에 기술된 바와 같이 IXa에 대한 인자 IX 의 활성을 측정하는 단순한 시험관 내 시험으로서 인자 XI 생물학적 활성 검정이 수행된다.

인자 VIII 활성의 시험:

인자 VIII 활성을 시험하고, 본 발명에서 사용하기 위한 적절한 인자 VIII변이체을 선택하는 수단을 제공하는 적절한 검정을 예를 들어, Kirkwood TBL, RIzza CR, Snape TJ, Rhymes IL, Austen DEG Identification of sources of Interlaboratory variation in factro VIII assay. B J Haematol 1981; 37; 559-68.; 또는 Kessels et al., British Journal of Haematology, Vol. 76 (Suppl. 1) pp. 16 (1990))에 기술된 바와 같이 단순 시험관 내 시험으로 수행될 수 있다. 생성된 FXa의 아미노분해 활성에 근거하여 인자 VIII 활성 또한 두단계 발색성 검정으로 측정한다 (Wagenvoord et al, 1989, 지혈, 19 (4): 196-204). 인자 VIII 생물학적 활성은 Nilsson et al., 1959. (Nilsson IM, Blombaeck M, Thilen A, von Francken I., Carriers of haemophilia A-A laboratory study, Acta Med Scan 1959; 165: 357)에 기술된 바와 같이 인자 VIII-부족한 혈장의 응고 시간을 교정하기 위한 제제 능력을 평가하여 정량화할 수 있다. 이 검정에서, 생물학적 활성은 유닛/ml 혈장으로 표현된다 (1 유닛은 보통 혼주혈장에 존재하는 FVIII의 양에 대응한다)

발명의 양태:

양태 1: 인자 VIl 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드 그리고 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드를 포함하는 약제적 조성물.

실시예 2: 상기 인자 VIl 또는 인자 Vll관련된 폴리펩티드는 인자 VII관련된 폴리펩티드인 양태 1의 조성물.

실시예 3: 인자 Vlla는 인간 인자 Vlla인 양태 1의 조성물.

실시예 4: 양태 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서 인자 Vlla 와 인자 XI 는재조합체 인간 인자 Vlla 와 재조합체 인간 인자 XI인 조성물.

실시예 5: 양태 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서 인자 XI는 혈소판 인자 XI인 조성물.

실시예 6: 양태 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서 인자 XI는 활성화된 인자 XI인 조성물

실시예 7: 양태 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서 TFPI억제제을 더 포함하는 조성물.

실시예 8: 양태 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서 인자 VIll을 더 포함하는 조성물.

양태 2:

a) 첫번째 단위 투여량 형태에서 인자 Vlla의 효과적인 양과 약제적 수용가능한 담체 ;

b)두번째 단위 투여량 형태에서 인자 XI의 효과적인 양과 약제적으로 수용가능한 담체 ;

c) 상기 첫번째와 두번째 투여량 형태을 포함하는 용기 수단을 포함하는 출혈 우발증의 치료를 포함하는 키트

실시예 10:

a) 첫번째 단위 투여량 형태로 인자 Vlla의 효과적인 양과 약제적 수용가능한 담체 ;

b)두번째 단위 투여량 형태에서 인자 XI의 효과적인 양과 약제적으로 수용가능한 담체;

c)세번째 단위 투여량 형태에서 TFPI억제제의 효과적인 양과 약제적으로 수용가능한 담체;

d)상기 첫번째, 두번째, 세번째 투여량 형태를 포함하는 양태2에서의 조성물

양태 3:

a) 첫번째 단위 투여량 형태에서 인자 Vlla의 효과적인 양과 TFPI억제제와약제적 수용가능한 담체 ;

b)두번째 단위 투여량 형태에서 인자 XI의 효과적인 양과 약제적으로 수용가능한 담체 ;

c) 상기 첫번째와 두번째 투여량 형태을 포함하는 용기 수단을 포함하는 출혈 우발증의 치료를 포함하는 키트를 포함하는 출혈 우발증의 치료제를 포함하는 키트.

양태 4:

a) 첫번째 단위 투여량 형태에서 인자 Vlla의 효과적인 양과 약제적 수용가능한 담체 ;

b)두번째 단위 투여량 형태에서 인자 XI의 효과적인 양과 TFPI억제제와 약제적으로 수용가능한 담체;

c)상기 첫번째, 두번째 투여량 형태를 포함하는 용기 수단을 포함하는 출혈 우발증의 치료제를 포함하는 키트.

실시예 9: 실시예 2 내지 4 중 어느 하나에 있어서 각각의 단위 투여량 형태로 제제되거나 단위 투여량 형태내에 포함되는 인자 VIII을 더 포함하고 인자 Vlla, 인자 XI 또는 TFPI억제제의 목록에서 선택된 하나 또는 그 이상의 화합물을 포함하는 키트.

양태 6: 시험체에서 출혈 우발증을 치료하기 위한 약제를 제조하기 위해서 인자 Vlla 와 인자 XI을 조합하여 사용.

양태 7: 시험체에서 응고 시간을 감소하기 위한 약제를 제조하기 위하여 인자 XI와 조합하여 인자 Vlla의 사용.

양태 8: 보통 포유동물 혈장에서 응고 용해 시간을 연장하기 위한 약제를 제조하기 위하여 인자 XI와 조합하여 인자 Vlla의 사용.

양태 9: 보통 포유동물 혈장에서 응고 강도를 증가시키기 위한 약제를 제조하기 위하여 인자 XI와 조합하여 인자 Vlla의 사용.

양태 10: 보통 인간 혈장에서 피브린 응고 형성을 향상하기 위한 약제를 제조하기 위하여 인자 XI와 조합하여 인자 Vlla의 사용.

양태 11: 인자 XI의 효과적인 양과 조합하여 인자 Vlla의 효과적인양을 시험체에 투여하는 방법으로 시험체에서 피브린 응고 형성을 향상하기 위한 방법.

양태 12 :인자 XI의 효과적인 양과 조합하여 인자 Vlla의 효과적인 양을 시험체에 투여하는 방법으로 시험체에서 출혈 우발증를 치료하기 위한 방법.

실시예 10: 인자 Vlla 과 인자 XI 는 1회 투여량 형태로 투여되는 양태 19 또는 20 에 있어서 방법.

실시예 11: 인자 Vlla 과 인자 XI 는 연속적으로 투여되는 양태 19 또는 20에 있어서 방법.

본 발명은 다음 실시예로 예시되지만 보호의 범위를 제한하도록 구성되지 않았다. 앞서 말한 명세서와 다음 실시예에 기술된 특징은 개별적으로 그리고 조합하여 다양한 형태의 발명을 인지하기 위한 재료이다.

실시예 1

응고인자 Vlla와 Xl을 조합하여 혈안정적 응고안정성을 향상

방법 :

응고 용해 검정: Innovin (Dade BehrIng, 2000-배 희석), rFVlla (Novo Nordisk A/S, Bagsvaerd, Denmark; 다양한 농도)와 t-PA (American Diagnostics, 8 nM)을 포함하는 버퍼(20 mM HEPES, 150 mM NaCl, 5 mM CaCl, pH 7.4)로 10-배 희석된 보통 인간 혈장을 96-웰 엘리자 플레이트에 첨가하고 상온에서 650 nm에서 혼탁도를 측정한다. 지시되면, 정제된 인간 FXI (혈액학 기술, 다양한 농도)가 포함된다.

회전 트롬보엘라스토그래피 (roTEG): 인용된 보통 인간 혈장이 첨가된 5 nM t-PA 에서 측정하고 1 nM FVlla 단독 또는 30 nM FXI (혈액학 기술)와 조합하여 효과를 분석하였다. 20 mM HEPES, 150 mM NaCl, pH 7.4 버퍼에서 Innovin(최종 농도 2000-배 희석된, Dade BehrIng # 526945)과 칼슘(최종 농도 15 mM)을 첨가하면 응고가 시작된다.

결과 :

응고 용해 검정: FVlla을 첨가하면 응고 용해 시간이 투여량-의존적으로 연장된다. (Fig. 1). 이 효과는 10 nM FVlla에서 최적이었다. 10 nM FVlla이 있을 때 , FXI을 첨가하면 응고 용해 시간이 더 연장된다(Fig. 2). 효과는 투여량-의존적이고 30 nM FXI에서 최적이었다.

트롬보엘라스토그래피 : roTEG 측정은 Maximal Clot 강도 (MCF)에서 FVlla 와 FXI의 효과와, t-PA 중재된 용해에 대한 응고 저항를 분석하는 데 사용된다. FVllalFXI 첨가 전에, MCF은 25 mm 이고 반정도 응고 용해되는 데 필요로 하는 시간은 12.3 분(Fig. 3)이었다. FXI (30 nM)을 첨가하면 MCF를 바꾸지 않았지만 반정도 응고 용해 시간은 16.1분으로 연장되었다(Fig. 3). 유사하게, FVIIa (1 nM)을 첨가하면 MCF에 영향을 주지 않고 t-PA중재된 피브린 용해 (반응고 용해 시간; 16.7 분)으로부터 응고 보호되었다(Fig. 3). 하지만 FXI (30 nM)와 함께 FVIIa (1 nM)을 첨가하면 반정도 응고 용해 시간(24.2 분, Fig. 3)과 MCF (29 mm)을 증가시켰다.

결론 :

이러한 결과에 의하면 FVlla와 FXI를 공동으로 혈장에 첨가하면 응고 기계적 강도와 t-PA 중재된 피브린 용해에 대한 저항성을 향상시켰다.

실시예 2

응고인자 Vlla 와 XI을 결합하여 보통 인간 혈장에서 응고 시간을 단축

방법 :

응고 검정: 50 mM 파이프, 100 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1 % BSA, pH 7.2에서rFVlla (1 ㎍/ml) 단독, FXI (25 nM) 단독, 또는 rFVlla와 FXI의 일정부분(55 ㎕)을 100 ㎛ PC/PS 소포를 포함하는 55 ㎕ 일정부분과 50 mM CaCl₂와 함께 5분동안 같은 버퍼에서 배양한다. 보통 인간 혈장(NHP)의 55 ㎕ 일정부분을 첨가하면 표준 APTT 프로그램을 사용한 ACL 응고 기계에서 400 초동안 응고되었다.

결과:

응고 검정: rFVlla 또는 FXI을 첨가하기 전에, NHP는 400 초 조정 시간 내에 응고하지 않았다. FXI (25 nM)을 첨가한 후에, 응고 시간은 여전히 400 초보다 길었다. FVlla(1 ㎍/ml)을 첨가하면 응고 시간을 159.4 ± 1.4 초로 감소시켰다.(Fig 4). FVlla (1 ㎍/ml)와 FXI (25 nM)을 첨가하면 응고 시간을 95.0 ± 1.4 초로 감소시켰다(Fig 4).

결론:

이러한 결과에 의하면 FVlla와 FXI을 공동으로 혈장에 첨가하면 NHP에서 응고 시간을 단축시킨다.

Claims (53)

1. 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드를 포함하는 약제적 조성물.
2. 제 1 항에 있어서, 상기 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드는 인자 VII 관련된 폴리펩티드인 것을 특징으로 하는 조성물.
3. 제 2 항에 있어서, 상기 인자 VII 관련된 폴리펩티드는 인자 VII 아미노산 서열 변이체인 것을 특징으로 하는 조성물.
4. 제 2 항 또는 제 3 항에 있어서, 본 명세서에 기술된 바와 같이 "시험관내 가수분해 검정"에서 시험하였을 때 상기 인자 VII 관련된 폴리펩티드의 활성과 본래의 인간 인자 VIIa (야생형 FVlla)의 활성간의 비율은 적어도 약 1.25인 것을 특징으로 하는 조성물.
5. 제 1 항에 있어서, 상기 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드는 인자 VII인 것을 특징으로 하는 조성물.
6. 제 5 항에 있어서, 상기 인자 VII는 인간 인자 VII인 것을 특징으로 하는 조성물.
7. 제 6항에 있어서, 상기 인자 VII는 재조합체 인간 인자 VII인 것을 특징으로 하는 조성물.
8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 VII 또는 인자 VIl 관련된 폴리펩티드는 활성화된 형태인 것을 특징으로 하는 조성물.
9. 제 8 항에 있어서, 상기 인자 VII는 재조합체 인간 인자 Vlla인 것을 특징으로 하는 조성물.
10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드는 인자 XI 관련된 폴리펩티드인 것을 특징으로 하는 조성물.
11. 제 10 항에 있어서, 상기 인자 XI 관련된 폴리펩티드는 인자 XI 아미노산 서열 변이체인 것을 특징으로 하는 조성물.
12. 제 10 항 또는 제 11 항에 있어서, 본 명세서에 기술된 바와 같이 "FXI 발색 검정"에서 시험하였을 때 상기 인자 XI 관련된 폴리펩티드의 활성과 본래의 인간 혈장 인자 XI(야생형 FXI)의 활성간의 비율은 적어도 약 1.25인 것을 특징으로 하는 조성물.
13. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드는 인자 XI 폴리펩티드인 것을 특징으로 하는 조성물.
14. 제 13 항에 있어서, 상기 인자 XI는 인간 인자 XI인 것을 특징으로 하는 조성물.
15. 제 14 항에 있어서, 상기 인자 XI는 재조합체 혈장 인간 인자 XI인 것을 특징으로 하는 조성물.
16. 제 14 항에 있어서, 상기 인자 XI는 재조합체 혈소판 인간 인자 XI인 것을 특징으로 하는 조성물.
17. 제 1 항 내지 제16 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 VII 또는 인자 VlI 관련된 폴리펩티드와 상기 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드는 약 100: 1 과 약 1: 100 (w/w 인자 VII : 인자 XI) 사이의 질량비로 존재하는 것을 특징으로 하는 조성물.
18. 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 주사 또는 주입, 특히 주사에 적절한 약제적으로 수용가능한 첨가제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
19. f) 첫번째 단위 투여량 형태의 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드와 약제적으로 수용가능한 담체의 제제의 효과적인 양 ;

    g) 두번째 단위 투여량 형태의 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드와

    약제적 수용가능한 담체의 제제의 효과적인 양 ;

    h) 상기 첫번째와 두번째 투여량 형태를 함유하는 용기 수단을 함유하는 출혈 우발증의 치료제를 함유하는 부분들의 키트.
20. 제 19 항에 있어서, 상기 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드는 인자 VII관련된 폴리펩티드인 것을 특징으로 하는 키트.
21. 제 20 항에 있어서, 상기 인자 VII 관련된 폴리펩티드는 인자 VII 아미노산 서열 변이체인 것을 특징으로 하는 키트.
22. 제 20 항 또는 제 21 항에 있어서, 본 명세서에 기술된 바와 같이 "시험관내 가수분해 검정"에서 시험하였을 때 상기 인자 VII 관련된 폴리펩티드의 활성과 본래의 인간 인자 VIIa (야생형 FVlla)의 활성간의 비율은 적어도 약 1.25인 것을 특징으로 하는 키트.
23. 제 19 항에 있어서, 상기 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드는 인자 VII인 것을 특징으로 하는 키트.
24. 제 23 항에 있어서, 상기 인자 VII 는 인간 인자 VII인 것을 특징으로 하는 키트.
25. 제 24 항에 있어서, 상기 인자 VII 폴리펩티드는 재조합체 인간 인자 VII인 것을 특징으로 하는 키트.
26. 제 19 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드는 활성화된 형태인 것을 특징으로 하는 키트.
27. 제 26 항에 있어서, 상기 인자 VII는 재조합체 인간 인자 Vlla인 것을 특징으로 하는 키트.
28. 제 19 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드는 인자 XI 관련된 폴리펩티드인 것을 특징으로 하는 키트.
29. 제 28 항에 있어서, 상기 인자 XI 관련된 폴리펩티드는 인자 XI 아미노산 서열 변이체인 것을 특징으로 하는 키트.
30. 제 28 항 또는 제 29 항에 있어서, 본 명세서에 기술된 바와 같이 "FXI 발색 검정"에서 시험하였을 때 상기 인자 XI 관련된 폴리펩티드의 활성과 본래의 인간 혈장 인자 XI(야생형 FXI)의 활성간의 비율은 적어도 약 1.25인 것을 특징으로 하는 키트.
31. 제 19 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드는 인자 XI인 것을 특징으로 하는 키트.
32. 제 31 항에 있어서, 상기 인자 XI는 인간 인자 XI인 것을 특징으로 하는 키트.
33. 제 32 항에 있어서, 상기 인자 XI는 재조합체 혈장 인간 인자 XI인 것을 특징으로 하는 키트.
34. 제 32 항에 있어서, 상기 인자 XI는 재조합체 혈소판 인간 인자 XI인 것을 특징으로 하는 키트.
35. 제 19 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 VII 또는 인자VII 관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드는 약 100: 1 과 약 1: 100 (w/w 인자 VII : 인자 XI) 사이의 질량비로 존재하는 것을 특징으로 하는 키트.
36. 시험체에서 출혈 우발증의 치료를 위한 약제를 제조하기 위해서 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드와 조합하여 인자 VII 또는 인자 VIl 관련된 폴리펩티드의 사용.
37. 시험체에서 출혈 우발증을 치료하기 위한 약제를 제조하기 위한 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 따르는 조성물의 사용.
38. 제 36 항 또는 제 37 항에 있어서, 약제는 응고 시간을 줄이기 위한 것임을 특징으로 하는 사용.
39. 제 36 항 또는 제 37 항에 있어서, 약제는 응고 분해 시간을 연장시키기 위한 것임을 특징으로 하는 사용.
40. 제 36 항 또는 제 37 항에 있어서, 약제는 응고 강도를 증가시키기 위한 것임을 특징으로 하는 사용.
41. 제 36 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항에 있어서, 약제는 주사 또는 주입, 특히 주사용으로 제제된 것임을 특징으로 하는 사용.
42. 제 36 항 내지 제 41 항 중 어느 한 항에 있어서, 출혈 우발증은 외상, 또는 수술, 또는 혈소판의 수나 활성이 낮기 때문인 것을 특징으로 하는 사용.
43. 제 36 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항에 있어서, 약제는 1회 투여량 형태인 것을 특징으로 하는 사용.
44. 제 36 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항에 있어서, 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 첫번째 단위 투여량 형태와 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 두번째 단위 투여량 형태로 제조되는 것을 특징으로 하는 사용.
45. 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드의 제제의 첫번째 양과 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드의 제제의 두번째 양을 필요로 하는 시험체에 투여하는 것을 포함하며, 첫번째와 두번째 양은 출혈을 치료하는 데 효과적인 것을 특징으로 하는 시험체에서 출혈 우발증를 치료하는 방법.
46. 인자 VIl 또는 인자 VIl 관련된 폴리펩티드의 제제의 첫번째 양과 인자 XI또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드의 제제의 두번째 양을 필요로 하는 시험체에 투여하는 것을 포함하며, 첫번째와 두번째 양은 응고 시간을 감소시키는 데 효과적인 것을 특징으로 하는 시험체에서 응고시간을 감소시키는 방법.
47. 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드의 제제의 첫번째 양과 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드의 제제의 두번째 양을 필요로 하는 시험체에 투여하는 것을 포함하며, 첫번째와 두번째 양은 지혈을 향상시키는 데 효과적인 것을 특징으로 하는 시험체에서 지혈을 향상시키는 방법.
48. 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드의 제제의 첫번째 양과 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드의 제제의 두번째 양을 필요로 하는 시험체에 투여하는 것을 포함하며, 첫번째와 두번째 양은 응고 용해 시간을 연장시키는 데 효과적인 것을 특징으로 하는 시험체에서 응고 용해 시간을 연장시키는 방법.
49. 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드의 제제의 첫번째 양과 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드의 제제의 두번째 양을 필요로 하는 시험체에 투여하는 것을 포함하며, 첫번째와 두번째 양은 응고 강도를 증가시키는 데 효과적인 것을 특징으로 하는 방법.
50. 제 45 항 내지 제 49 항 중 어느 한 항에 있어서, 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드는 1회 투여량 형태로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
51. 제 45 항 내지 제 49 항 중 어느 한 항에 있어서, 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드와 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드를 인자 VII 또는 인자 VII관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 첫번째 투여량 형태 그리고 인자 XI 또는 인자 XI관련된 폴리펩티드의 제제를 포함하는 두번째 투여량 형태로 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
52. 제 51 항에 있어서, 첫번째 투여량 형태와 두번째 투여량 형태는 15분 이하의 시간 간격으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
53. a) 한 단위 투여량 형태로, 인자 VII 또는 인자 VII 관련된 폴리펩티드의 효과적인 양과 인자 XI 또는 인자 XI 관련된 폴리펩티드의 효과적인 양과 약제적으로 수용가능한 담체;

    b) 상기 한 단위 투여량 형태를 함유하는 용기 수단을 포함하는 출혈 우발증 치료제를 함유하는 키트.