CZ200439A3 - Farmaceutický prostředek obsahující polypeptidy faktoru Vll a polypeptidy faktoru XI - Google Patents
Farmaceutický prostředek obsahující polypeptidy faktoru Vll a polypeptidy faktoru XI Download PDFInfo
- Publication number
- CZ200439A3 CZ200439A3 CZ200439A CZ200439A CZ200439A3 CZ 200439 A3 CZ200439 A3 CZ 200439A3 CZ 200439 A CZ200439 A CZ 200439A CZ 200439 A CZ200439 A CZ 200439A CZ 200439 A3 CZ200439 A3 CZ 200439A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- factor
- factor vii
- vii
- related polypeptide
- bleeding
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
- A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Diabetes (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
polypeptidy faktoru XI
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká farmaceutického prostředku obsahujícího faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid. Vynález se také týká použití kombinace faktoru VII nebo faktoru VII vtaženého polypeptidů a faktoru XI nebo faktoru
XI příbuzného polypeptidů pro výrobu léčiv pro ošetření objektů trpících krvácením nebo jeho prevence. Vynález se také týká způsobu ošetření krvácení u objektů a způsobu pro zvýšení srážlivosti krve u objektu. Předkládaný vynález se také týká souprav obsahujících tyto sloučeniny.
Dosavadní stav techniky
Zástava krvácení je vyvolána vytvořením komplexu mezi tkáňovým faktorem (TF) , který je vystaven při oběhu krve následně po poranění stěny cévy a FVIIa, který je přítomen v oběhu v množství odpovídajícímu 1 % celkové FVII bílkovinné hmoty. Tento komplex je ukotvený k TF-nosné buňce a aktivuje FX na FXa a FIX na FIXa na buněčném povrchu. FXa aktivuje protrombin na trombin, který aktivuje FVIII, FV, FXI a FXIII. Limitované množství trombinu, které je vytvořeno v počátečním kroku zástavy krvácení, také aktivuje krevní destičky. Následné působení trombinu na krevní destičky mění jejich tvar a vystavuje nabité fosfolipidy na jejich povrch. Aktivovaný povrch krevních destiček tvoří formu pro další FX aktivaci a plnou generaci trombinu. Další FX aktivace na aktivovaném povrchu krevních destiček se odehrává přes
Γ * · • · · ·
FIXa-FVIIa komplex, tvořený na povrchu aktivovaných krevních destiček a FXa poté převádí, stále na povrchu, protrombin na trombin. Trombin poté přeměňuje fibrinogen na fibrin, který je nerozpustný, a který stabilizuje počáteční ucpávání krevních destiček. Tento proces je rozčleněný, tj. lokalizován na místo TF exprese nebo vystavení, čímž se minimalizuje nebezpečí systémové aktivace koagulačního systému. Nerozpustný fibrin tvořící zátku je dále stabilizován FXIII-katalyzovaným zesítěním fibrinových vláken.
FVIIa existuje hlavně v plazmě, jako jednoduchý řetězec zymogenů, který je štěpen FXa na svou dvoj-řetězovitou, aktivovanou formu, FVIIa. Rekombinant aktivovaného faktoru Vila (rFVIIa) byl vyvinut jako pro-hemostatické činidlo. Podání rFVIIa nabízí rychlou a vysoce efektivní pro-hemostatickou odezvu v hemofilním objektu s krvácením, které nemůže být ošetřeno produkty se srážecím faktorem, vzhledem k tvorbě protilátky. Také krvácející objekty s nedostatkem faktoru VII nebo objekty s normálním koagulačním systémem, ale procházejícím nadměrným krvácením, mohou být úspěšně ošetřeny FVIIa. V těchto studiích nebyly nalezeny nepříznivé vedlejší efekty FVIIa (obzvláště výskytu tromboembolismu).
Další, exogenně podaný FVIIa zvyšuje vznik trombinu na aktivovaném povrchu krevních destiček. To způsobuje v hemofilních objektech nedostatek FIX nebo FVIII a tím je ztracena nej silnější dráha pro plnou tvorbu trombinu. Další FVIIa zvyšuje také vznik trombinu v přítomnosti nižšího počtu krevních destiček nebo krevních destiček s vadnou funkcí.
Komerční preparáty rekombinantu lidského FVIIa jsou prodávány jako NovoSeven® (Novo Nordisk A/S, Dánsko). NovoSeven® je udáván pro ošetření krvácení u hemofilních A a B τ
pacientů. NovoSeven® je jediný rekombinant FVIIa dostupný na trhu pro účinné a spolehlivé ošetření krvácení.
FXI je složkou vnitřní dráhy koagulace. Nedostatek FXI je spojen s lehkým až nevelkým krvácením, obzvláště ze tkání s vysokou místní fibrinolytickou aktivitou. V rozporu s tím se má zato, že vysoká úroveň FXI je nebezpečným faktorem pro žilní trombózu. FXI je zymogen, trypsinu podobná serinová proteáza, která je aktivována FXIIa, trombinem a FXIa. Aktivovaný FXI (FXIa) přispívá k aktivaci FIX, která postupně (v kombinaci s FVIII) dále aktivuje FX a tím dává vznik generaci trombinu.
Je velice dobře známo, že objekty, které nadměrně krvácí ve spojení s operativním zákrokem nebo vážnějším traumatem a potřebují transfúze krve, vyvíjejí více komplikací než ty objekty, které nemají s krvácením zkušenost. Také nevelké krvácení vyžaduje podání lidské krve nebo krevních produktů (krevních destiček, leukocytů, od plazmy odvozených koncentrátů pro ošetření vad při koagulaci) a může vést ke komplikacím spojeným s nebezpečím přenosu lidských virů (hepatitida, HIV, parvovirus, a ostatní, jiné v současnosti neznámé viry). Nadměrné krvácení vyžaduje vydatné krevní transfúze, které mohou vést k rozvinutí mnohonásobného selhání orgánů, zahrnující poškození plicní a ledvinové funkce. Jakmile jednou objekt rozvine tuto sérii komplikací, je nastartována kaskáda dějů, zahrnující množství imunoregulačních látek v buňkách imunitního systému a zánětlivých reakcí, které činí ošetření obzvláště těžkým a bohužel často neúspěšným. Hlavním cílem při operačním zákroku, stejně tak jako při ošetření velkých poškození tkání, je zabránit nebo minimalizovat krvácení. Pro zabránění nebo minimalizací takového krvácení je důležité zajistit tvorbu stabilní a pevné hemostatické zátky, která není snadno rozpustítelná fibrinolytickými enzymy. Dále je důležitá rychlá a účinná tvorba takových zátek nebo sraženin.
V současné době jsou objekty trpící krvácením, zahrnující trauma ve spojení se znásilněním nebo s operativním zákrokem, často ošetřeny několika injekcemi nebo infúzemí FVIIa, protože krátká poloviční doba existence FVIIa (2,5 hodiny) může vyžadovat více než jedno podání k zachování jisté úrovně hemostatické schopnosti. Rychlejší zastavení krvácení by mělo být důležitým prospěchem pro tyto objekty. Stejně tak by mělo být prospěchem snížení počtů podání, potřebných k zastavení krvácení a k zachování zástavy krvácení.
Japonská patentová přihláška číslo 59-116 213A se týká aerosolového prostředku použitelného jako tkáňového lepidla, zahrnujícího krevní koagulátor jako aktivní složku. Krevní koagulátor by měl být vybrán z krevních koagulačních faktorů I, II, III, IV, V, VII, VIII, IX, X, XI, XII a XIII, prekalikreinu, vysokého polymeru kininogenu a trombinu. Kombinace FXIII a trombinu je upřednostněno.
Evropský patent číslo 225 160 (Novo Nordisk) se týká prostředků FVIIa a způsobů ošetření krvácení, nezpůsobených poruchami srážecích faktorů nebo inhibitorů srážecích faktorů.
Evropský patent číslo 82 182 (Baxter Travenol Lab.) se týká prostředku faktoru Vila pro použití při působení proti nedostatku krevních srážecích faktorů nebo efektů inhibitorů proti krevním srážecím faktorům v objektu.
Mezinárodní patentová publikace číslo WO 93/06 855 (Novo Nordisk) se týká místních aplikací FVIIa.
• · · • · · • ·
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 • 0 0 ·· ······· 0 0 0 0 r ··· »♦····
J 00 0000 00 0 ·· 0
US patent číslo 5 252 217 se týká procesu přípravy koncentrátu lidského faktoru XI určenému pro terapeutické použití.
V tomto oboru je neustálá potřeba vylepšovat ošetření objektů trpících krvácením, zahrnující objekty, které krvácejí v důsledku operativního zákroku, traumatu nebo jiné formy poškození tkání; zahrnující koagulopatii u objektu s mnohočetnými transfúzemi; vrozené nebo získané poruchy krvácení, zahrnující sníženou funkci jater („zánět jater); vadnou funkci krevních destiček nebo snížené množství krevních destiček; nepřítomnost nebo abnormalitu nezbytných srážecích „sloučenin (například krevních destiček nebo proteinu von Willebrandova faktoru); zvýšenou fibrinolýzu; antikoagulační terapii nebo trombolytickou terapii; nebo transplantaci nespecializovaných buněk, které umožňují růst specializovaných buněk.
Stále zůstává v tomto oboru potřeba pro vylepšený, spolehlivý a široce použitelný způsob zvýšení koagulace, zvýšení nebo zaručení tvorby stabilních hemostatických sraženin, zvětšení přijatelnosti pro ošetřovaný objekt nebo k dosažení plné zástavy krvácení v objektu, obzvláště u objektů s narušenou tvorbou trombinu. Je také potřeba najít způsoby, kde je množství FVIIa potřebné pro dosažení plné zástavy krvácení sníženo a způsoby, ve kterých je doba zástavy krvácení co nej kratší.
Podstata vynálezu
Prvním předmětem předkládaného vynálezu je poskytnout prostředky, které mohou být účinně použity při ošetření nebo prevenci krvácení a poruchách koagulace.
• · · • ft • · ftftft • ftft ftftft · • · ftftftft ftftftft « · «· ······· ····· • ft ftftft ftftft • ftftft ftft ft ftft ·
Druhým předmětem předkládaného vynálezu je poskytnout prostředky v jednotné dávkovači formě, která může být účinně použita při ošetření nebo prevenci krvácení nebo jako pro-koagulátor. Dalším předmětem předkládaného vynálezu je poskytování prostředků, způsobů ošetření nebo souprav vykazujících vzájemně působící efekt.
Dalším předmětem předkládaného vynálezu je poskytnout prostředky, způsoby ošetření nebo soupravy nevykazujících podstatné vedlejší efekty, jako je vysoká úroveň systémové aktivace koagulačního systému.
Další předměty předkládaného vynálezu se stanou zjevnými po pročtení předkládaného následujícího popisu.
První hledisko předkládaného vynálezu farmaceutický prostředek obsahující faktor faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo příbuzný polypeptid.
poskytuj e VII nebo faktoru XI
Druhé hledisko předkládaného vynálezu poskytuje sadu pro způsob léčby krvácení obsahující:
1. účinné množství preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a farmaceuticky přijatelný nosič v první jednotce dávkovači formy;
2. účinné množství preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů a farmaceuticky přijatelný nosič v druhé jednotce dávkovači formy;
3. zásobní prostředky pro pojmutí první a druhé dávkovači formy.
V jiném provedení předkládaného vynálezu souprava dále obsahuje účinné množství TFPI-inhibitoru a/nebo faktoru VIII;
• 9 • 999 · 9 · 9 9 9
9 · · 9 · · · 9 9 · « · * 99 9999999 9999 *7 999 999999 / 999999 99 9 99 9
TFPI-inhibitor nebo faktor VIII (nebo kombinace obou) by měla být přítomna v oddělené dávkovači formě nebo by měla být přítomna v jedné z jednotek dávkovačích forem buď faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů nebo faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů.
Třetí hledisko předkládaného vynálezu poskytuje použití faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů v kombinaci s faktorem XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů pro výrobu léčiv, pro ošetření krvácení u objektu. Další hledisko předkládaného vynálezu poskytuje použití prostředku jak je popsáno podle kteréhokoliv z nároků 1 až 18, pro výrobu léčiv pro ošetření krvácení u objektu.
V dalším provedení předkládaný vynález poskytuje léčiva pro zkrácení doby srážení, prodloužení doby rozpouštění sraženiny a zvýšení pevnosti sraženiny.
V jiném provedení předkládaný poskytuje vynález léčivo, které je formulováno pro intravenózní podání, výhodně injekcí nebo infusí, obzvláště injekcí.
V jednom provedení poskytuje předkládaný vynález léčivo, které je formulováno v jednotné dávkovači formě; v jiném provedení je léčivo formulováno ve formě první jednotky dávkovači formy obsahující preparát faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a druhé jednotky dávkovači formy obsahující preparát faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů.
V dalším provedení předkládaný vynález poskytuje léčiva pro ošetření objektů, které prodělaly krvácení v důsledku operativního zákroku, traumatu nebo jiných forem poškození tkáně; koagulopatie, zahrnující koagulopatii u objektů
8 | 99 ·· ·· · ·· 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 | |||
• • • • I | • · 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 99 9999999 9999 | |||
9 9 9 9 » 9999 99 | • · 9 9 9 99 9 | |||
s mnohonásobnými transfúzemi; | vrozené | nebo | získané | poruchy |
krvácení, zahrnující sníženou | funkci | jater | („zánět | jater); |
vadné funkce krevních destiček | nebo snížené | množství | krevních |
destiček; nepřítomnosti nebo abnormalitě nezbytných srážecích „sloučenin (například krevních destiček nebo proteinu von Willebrandova faktoru); zvýšené fibrinolýzy; antikoagulační terapie nebo trombolytické terapie; nebo transplantace nespecializovaných buněk, které umožňují růst specializovaných buněk. V jedné sérii provedení předkládaného vynálezu se krvácení vyskytuje v orgánech jako je mozek, vnitřní část očí, oči, játra, plíce, nádorové tkáně, gastrointesfinální trakt; v další sérii provedení předkládaného vynálezu se jedná o rozšířené krvácení, jako je žaludeční katar a mohutné děložní krvácení. V jiné sérii provedení předkládaného vynálezu se vyskytuje krvácení ve spojitosti s operativním zákrokem nebo traumatem v objektech s hemartrózou (krvácení v kloubech), chronickou hemofilní artropatií, s hematomy (například svalové, za pobřišnicí, podjazykové a hltanové), krvácení z ostatních tkání (například ledvinového traktu), mozkové výrony krve, chirurgické zákroky (například hepatektomie), dentální extrakce a gastrointestinální krvácení (například UGI krvácení). Jedno provedení předkládaného vynálezu poskytuje léčivo pro ošetření krvácení v důsledku traumatu, operativního zákroku, nižšího množství nebo aktivity krevních destiček u obj ektu.
Další hledisko předkládaného vynálezu poskytuje způsob ošetření krvácení u objektu, způsob obsahující podání prvního množství preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a druhého množství preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů podle potřeby objektu, přičemž první a druhé množství dohromady je účinné pro ošetření krvácení.
• · • · · ···· · · · · • « · · · · ···· · · · ··· · · · ······ ··«··· ·· · ·· ·
Další hledisko předkládaného vynálezu poskytuje způsob pro zkrácení doby srážení u objektu, způsob obsahující podání prvního množství preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a druhého množství preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů podle potřeby objektu, přičemž první a druhé množství dohromady je účinné pro zkrácení doby srážení.
Další hledisko předkládaného vynálezu poskytuje způsob pro zvýšení zástavy krvácení u objektu, způsob obsahující podání prvního množství preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a druhého množství preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů objektu podle jeho potřeby, přičemž první a druhé množství dohromady je účinné pro zvýšení zástavy krvácení.
Další hledisko předkládaného vynálezu poskytuje způsob pro prodloužení doby rozpouštění sraženiny u objektu, způsob obsahující podání prvního množství preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a druhého množství preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů objektu podle jeho potřeby, přičemž první a druhé množství dohromady je účinné pro prodloužení doby rozpouštění sraženiny.
Další hledisko předkládaného vynálezu poskytuje způsob pro zvýšení pevnosti sraženiny u objektu, způsob obsahující podání prvního množství preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a druhého množství preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů objektu podle jeho potřeby, přičemž první a druhé množství dohromady je účinné pro zvýšení pevnosti srážení.
• · · · · ♦ · · · φ • Φ φ φφφφ φφφφ φ φ φφφφ φφφφ φ φ φ φφφφ Λ φφφ φφφφφφ
1θ φφ φφφφ φφ φ φφ φ
V jedné sérii provedení způsobů předkládaného vynálezu jsou faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid podávány v jednotné dávkovači formě.
V další sérii provedení způsobů předkládaného vynálezu jsou faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid podávány ve formě první jednotky dávkovači formy, obsahující preparát faktoru VII a faktoru VII příbuzného polypeptidů a druhé dávkovači formy, obsahující preparát faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů. V těchto sériích provedení předkládaného vynálezu jsou první dávka a druhá dávka podány s časovým odstupem ne více než 15 minut.
Další hledisko předkládaného vynálezu poskytuje soupravu pro způsob léčby krvácení obsahující:
4. účinné množství faktoru VII a faktoru VII příbuzného polypeptidů a účinné množství faktoru XI a faktoru XI příbuzného polypeptidů a farmaceuticky přijatelný nosič v jednotné dávkovači formě; a
5. zásobní prostředky pro pojmutí této jednotné dávkovači formy.
V jedné sérii provedení předkládaného vynálezu je faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid, faktor VII příbuzný polypeptid. V jedné sérii provedení předkládaného vynálezu je faktoru VII příbuzný polypeptid varianta aminokyselinové sekvence faktoru VII. V jednom provedení předkládaného vynálezu je poměr mezi aktivitou faktoru VII příbuzného polypeptidů a aktivitou přirozeného lidského faktoru Vila (nekultivovaný druh FVIIa) alespoň 1,25, pokud bylo testováno „Testem in Vitro hydrolýzy, jak je popsáno v předkládaném popisu.
·· ·
V jedné sérii provedení předkládaného vynálezu je faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid faktor VII. V jednom provedení předkládaného vynálezu je tento faktor VII lidský faktor VII. V jednom provedení předkládaného vynálezu je faktor VII hovězí, vepřový, koňský, myší nebo lososí faktor VII. V jiném provedení předkládaného vynálezu je faktor VII vytvořen rekombinačně. V dalším provedení předkládaného vynálezu je faktor VII odvozený od plazmy. V upřednostněném provedení předkládaného vynálezu je faktor VII rekombinant lidského faktoru VII. V jedné sérii provedení předkládaného vynálezu je faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid ve své aktivované formě. V jednom upřednostněném provedení předkládaného vynálezu je faktor VII rekombinant lidského faktoru Vila.
V jedné sérii provedení předkládaného vynálezu je faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid faktoru XI příbuzný polypeptid. V jednom provedení předkládaného vynálezu je faktor XI příbuzný polypeptid varianta aminokyselinové sekvence faktoru XI. V jednom provedení předkládaného vynálezu je poměr mezi aktivitou faktoru XI příbuzného polypeptidů a aktivitou lidského plazmového faktoru XI (nekultivovaný druh FXI) alespoň 1,25, pokud byl testován „FXI chromogenním testem, jak je popsáno v předkládaném popisu. V jednom provedení předkládaného vynálezu je faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid faktor XI. V jednom provedení předkládaného vynálezu je faktor XI lidský faktor XI. V jednom provedení předkládaného vynálezu je faktor XI hovězí, vepřový, koňský, myší nebo lososí faktor XI. V upřednostněném provedení předkládaného vynálezu je faktor XI vytvořen rekombinačně. V jiném provedení předkládaného vynálezu je faktor XI odvozen od plazmy. V jiném provedení předkládaného vynálezu je faktor XI odvozený od krevních destiček. V upřednostněném provedení
4 • 4
4
4 4
4444
•4 4 444
44444 · 4 předkládaného vynálezu je faktor XI rekombinant lidského plazmového faktoru XI. V jedné sérii provedení předkládaného vynálezu je faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid v jeho aktivované formě. V jednom provedení předkládaného vynálezu je faktoru XI příbuzný polypeptid fragment faktoru XI. V jednom provedení předkládaného vynálezu je faktoru XI příbuzný polypeptid hybrid faktoru XI polypeptidu, například lidský/vepřový hybrid. V jednom provedení předkládaného vynálezu je faktor XI aktivovaný lidský plazmatický faktor XI (FXIa).
V jednom provedení předkládaného vynálezu jsou faktor
VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid přítomny v poměru hmotností mezi 100:1 a 1:1 (hmotnostně faktor VII:faktor XI).
V jednom provedení předkládaného vynálezu jsou faktoru
VII příbuzné polypeptidy variace aminokyselinových sekvencí s ne více než 20 nahrazenými, vymazanými nebo zařazenými aminokyselinami ve srovnání s nekultivovaným druhem faktoru VII (například polypeptid obsahující aminokyselinovou sekvenci uvedenou ve známost v US patentu číslo 4 784 950). V jiném provedení předkládaného vynálezu neobsahují varianty faktoru VII více než 15 nahrazených, vymazaných nebo zařazených aminokyselin; v jiném provedení předkládaného vynálezu neobsahuje faktor VII více než 10 aminokyselin, jako je 8, 6, 5 nebo 3 nahrazené, vymazané nebo zařazené aminokyseliny ve srovnání s nekultivovaným druhem faktoru VII. V jiném provedení předkládaného vynálezu jsou varianty faktoru VII vybrány ze seznamu L305V-FVIIa, L305V/M306D/D309S-FVIIa, L305l-FVIIa, F374P-FVIIa, Vl58T/M298Q-FVIIa, Vl58D/E296V/M298Q-FVIIa, K337-FVIIa, M298Q-FVIIa,
Vl58D/M298Q-FVIIa,
L305V/K337A-FVIIa,
Vl58D/E296V/M298Q/L305V-FVIIa, Vl58D/E296V/M298Q/K337A-FVIIa, • φ
V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVIIa, K157A-FVII, E296V-FVII,
E296V/M298Q/-FVII, V158D/E296V-FVII, V158D/M298K-FVII a
S336G-FVII.
ΦΦ φφ φ φφ · φφφφ φφφ φφφ φφ φ φφφφ φφφφ φ φ φφφφ φφφφ φ φ φ φφφφ φφφ φφφ φφφ φφ φφφφ φφ φ φφ φ
V dalším provedení předkládaného vynálezu mají faktoru VII příbuzné polypeptidy zvýšenou tkáňovou faktor-nezávislou stabilitu ve srovnání s přirozeným lidským koagulačním faktorem Vila. V jiném provedení předkládaného vynálezu není zvýšená aktivita doprovázena změnami substrátové specifičnosti. V jiném provedení předkládaného vynálezu není vazba faktoru VII příbuzných polypeptidů ke tkáňovému faktoru narušena a faktoru VII příbuzné polypeptidy vykazují alespoň aktivitu nekultivovaného druhu faktoru Víla, pokud je vázán na tkáňový faktor.
V upřednostněném provedení předkládaného vynálezu je faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid rekombinant lidského faktoru Víla a rekombinant lidského plazmového faktoru XI nebo rekombinant lidského faktoru Vila a rekombinant lidského plazmového faktoru Xla.
V jednom provedení předkládaného vynálezu je doba srážení v savčí krvi zkrácena. V jiném provedení předkládaného vynálezu je zástava krvácení v savčí krvi zvětšena. V jiném provedení předkládaného vynálezu je doba rozpouštění sraženiny v savčí krvi prodloužena. V jiném provedení předkládaného vynálezu je pevnost sraženiny v savčí krvi zvětšena. V jednom provedení předkládaného vynálezu je savčí krev krev lidská. V dalším provedení předkládaného vynálezu je savčí krev normální krev lidská; v jednom provedení předkládaného vynálezu je krev krví z objektu trpícím narušenou tvorbou trombinu. V jednom provedení předkládaného vynálezu je krev krví z objektu, trpícím nedostatkem jednoho nebo více • 9 • 444 4 4 4 4 4 4 ·· 4 4449 4449
4444 4494 94 4 4449
444 494 444 ·· ··♦· 44 4 44 4 koagulačních faktorů; v jiném provedení předkládaného vynálezu je krev krví z objektu obsahující inhibitory proti jednomu nebo více koagulačním faktorům; v jednom provedení předkládaného vynálezu je krev krví z objektu trpícím sníženou koncentrací fibrinogenu; v jednom provedení předkládaného vynálezu je krev faktoru XI deficitní lidská krev. V jedné sérii provedení předkládaného vynálezu je krev plazma.
V jednom provedení předkládaného vynálezu prodlužuje faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid in vitro dobu rozpouštění sraženiny v normální krevní plazmě. V jiném provedení předkládaného vynálezu zvyšuje faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid maximální pevnost sraženiny během doby rozpouštění sraženiny v normální lidské plazmě in vitro. V jiném provedení předkládaného vynálezu zkracuje faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid dobu srážení v normální lidské plazmě in vitro.
V jednom provedení předkládaného vynálezu jsou faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid jediná hemostatická činidla obsažená v prostředku. V jiném provedení předkládaného vynálezu jsou faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid jediná aktivní hemostatická činidla obsažená v prostředku. V jiném provedení předkládaného vynálezu jsou faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid jediné koagulační faktory podané objektu. V jednom provedení předkládaného vynálezu jsou faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid jediná aktivní činidla podaná pacientovi. V jednom provedení předkládaného vynálezu prostředek v podstatě ·· 4 ·
4
4444 4 44 444
4 4444 4444
4 4 4 4 4 4444 4 4 4 4·4 • 44 444 444
44 ·444 44 4 44 4 neobsahuje protrombin; v jiném provedení předkládaného vynálezu prostředek v podstatě neobsahuje FX; v jiném provedení předkládaného vynálezu prostředek v podstatě neobsahuje FXa.
V jiném provedení předkládaného vynálezu je farmaceutický prostředek formulován pro intravenózní podání, výhodně injekcí nebo infusí, obzvláště injekcí. V jednom provedení předkládaného vynálezu se prostředek skládá z alespoň jedné farmaceuticky přijatelné složky k přenosu léčebné látky nebo nosiče.
V jednom provedení předkládaného vynálezu je prostředek ve formě jednotné dávkovači formy, přičemž jednotná dávka obsahuje oba koagulační faktory. V jednom provedení předkládaného vynálezu je prostředek ve formě soupravy částí obsahující preparát faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů jako první jednotku dávkovači formy a preparát faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů jako druhou jednotku dávkovači formy a dále obsahuje zásobní prostředky obsahující první a druhou jednotku dávkovači formy. V jednom provedení předkládaného vynálezu obsahuje prostředek nebo souprava, podle použitelnosti, dále pokyny pro podání prostředku nebo oddělených složek.
V jednom provedení předkládaného vynálezu jsou faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid podány v jednotné dávkovači formě. V jednom provedení předkládaného vynálezu jsou faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid podávány ve formě první jednotky dávkovači formy obsahující preparát faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a druhou jednotku dávkovači ·· • * • · • · faktoru XI nebo • · • · · • ···· · ·♦ · • · · formy obsahující preparát příbuzného polypeptidů.
faktoru XI
V jednom provedení předkládaného vynálezu jsou faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid podány současně. V jiném provedení předkládaného vynálezu jsou faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid podány následně. V jednom provedení předkládaného vynálezu jsou faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid podány s časovou prodlevou ne delší než 15 minut, výhodně 10 minut, výhodněji 5 minut a ještě více výhodněji 2 minuty. V jednom provedení předkládaného vynálezu jsou faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid podány s časovou prodlevou do 2 hodin, výhodně 1 až 2 hodiny, výhodněji 30 minut až 1 hodina, ještě více výhodněji do 30 minut a ještě více výhodněji 15 až 30 minut.
V jednom provedení předkládaného vynálezu je účinné množství faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů 0,05 až 500 mg/den (pro 70 kg objekt). V jednom provedení předkládaného vynálezu je účinné množství faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů 0,01 až 500 mg/den (pro 70 kg obj ekt) .
V jednom provedení předkládaného vynálezu jsou faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid přítomny v poměru hmotností 100:1 a 1:100 (hmotnostně faktor VII:faktor XI).
V jednom provedení předkládaného vynálezu je farmaceutický prostředek v jednotné dávkovači formě a skládá se v podstatě z preparátu faktoru VII nebo faktoru VII ·* ·♦ ·· * ·» · ··*· 0·· ·»· • · · · · · · · · · · • · · · · · ···· 0 · · ···♦ * · · · · · · · · ♦ 0 ·*·· ·<0 · ·· * příbuzného polypeptidu a preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidu a jedné nebo více složek vybraných ze seznamu farmaceuticky přijatelných látek k přenosu léčebné látky nebo nosičů, stabilizátorů, detergentů, neutrálních solí, antioxidantů, konzervačních prostředků a inhibitorů proteináz.
V dalším provedení předkládaného vynálezu je objektem člověk; v dalším provedení předkládaného vynálezu objekt trpí narušenou tvorbou trombinu; v jednom provedení předkládaného vynálezu má objekt sníženou plazmatickou koncentraci fibrinogenu (například u objektu s mnohočetnými transfúzemi); v jednom provedení předkládaného vynálezu má objekt sníženou plazmatickou koncentraci faktoru VIII.
Další hledisko předkládaného vynálezu se týká způsobu zvýšení zastavení krvácení v objektu trpícím faktorem VII odpovídajícím syndromem ve srovnání s objektem ošetřeným faktorem VII jako jediným koagulačním proteinem, způsobu obsahujícího podání prvního množství preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidu a druhého množství preparátu obsahujícího faktor XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidu podle potřeby objektu, přičemž první a druhé množství dohromady je účinné pro zvýšení zástavy krvácení.
Další hledisko předkládaného vynálezu se týká způsobu zvýšení tvorby trombinu v objektu, způsobu obsahujícího podání objektu prvního množství preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidu a druhého množství preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidu podle jeho potřeby, přičemž první a druhé množství dohromady je účinné pro zvýšení produkce trombinu.
Další hledisko předkládaného vynálezu se týká způsobu zvýšení tvorby trombinu v objektu trpícím faktorem VII odpovídajícím syndromem ve srovnání s objektem, který je ošetřen faktorem VII jako jediným koagulačním proteinem, způsobu obsahujícím podání prvního množství preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidu a druhého množství preparátu obsahujícího faktor XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidu podle potřeby objektu, přičemž první a druhé množství dohromady je účinné pro zvýšení tvorby trombinu.
Další hledisko předkládaného vynálezu se týká způsobu pro snížení počtu podání proteinu koagulačního faktoru potřebných pro uskutečnění zástavy krvácení v objektu trpícím odpovídajícím syndromem faktoru VII, ve srovnání s potřebným počtem podání, pokud je faktor VII podán objektu jako jediný protein koagulačního faktoru, způsobu obsahujícího podání prvního množství preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidu a druhého množství preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidu podle potřeb objektu, přičemž první a druhé množství dohromady je účinné ke snížení počtu podání proteinu koagulačního faktoru.
Další hledisko předkládaného vynálezu se týká způsobu ošetření krvácení u objektu trpícím syndromem faktoru VII, způsobu obsahujícího podání prvního množství preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidu a druhého množství preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidu podle potřeby objektu, přičemž první a druhé množství dohromady je účinné pro ošetření krvácení.
V jednom provedení předkládaného vynálezu je faktor VII lidský rekombinant faktoru Vila (rFVIIa). V jiném provedení předkládaného vynálezu je rFVIIa NovoSeven® (Novo Nordisk A/S, Bagsvaerd, Dánsko).
• · • · · • ····
V jednom provedení předkládaného vynálezu je farmaceutický prostředek formulován pro intravenózní podání.
V jednom provedení předkládaného vynálezu prostředek dále obsahuje inhibitor fibrinolytického systému, zahrnující bez omezení, aprotinin, ε-aminokapronovou kyselinu nebo tranexamovou kyselinu. V jednom provedení předkládaného vynálezu prostředek dále obsahuje TFPI inhibitor a/nebo FVIII.
V jednom provedení předkládaného vynálezu prostředek dále obsahuje faktor VIII. V jednom provedení předkládaného vynálezu je faktor VIII aktivovaný faktor VIII (faktor Vlila).
V dalším provedení předkládaného vynálezu je faktor VIII rekombinant faktoru VIII. V dalším provedení předkládaného vynálezu je faktor VIII rekombinant lidského faktoru Vlila.
Další hledisko předkládaného vynálezu se týká použití faktoru Vila v kombinaci s faktorem XI pro výrobu léčiv pro zvýšení tvorby fibrinové zátky v savčí plazmě.
Další hledisko předkládaného vynálezu se týká způsobu zvýšení tvorby fibrinové zátky u objektu, způsobu obsahujícího podání prvního množství preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a druhého množství preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů podle potřeby objektu, přičemž první a druhé množství dohromady je účinné pro ošetření krvácení.
V jednom provedení předkládaného vynálezu se farmaceutický prostředek (pokud je v jednotné dávkovači formě) skládá v podstatě z faktoru Vila a faktoru XI a případně farmaceuticky přijatelné interní substance k přenosu léčebné látky nebo nosiče a případně stabilizátoru a případně detergentu a případně neutrální soli a případně antioxidantu a
případně konzervačního prostředku a případně proteázového inhibitoru.
V jiném provedení předkládaného vynálezu se farmaceutický prostředek (pokud je v jednotné dávkovači formě) skládá v podstatě z faktoru Vila a faktoru XI a případně farmaceuticky přijatelné inertní substance k přenosu léčebné látky nebo nosiče a případně stabilizátoru a případně detergentu a případně neutrální soli a případně antioxidantu a případně konzervačního prostředku a případně proteázového inhibitoru a TFPI inhibitoru.
V jiném provedení předkládaného vynálezu se farmaceutický prostředek (pokud je v jednotné dávkovači formě) skládá v podstatě z faktoru Vila a faktoru XI a případně farmaceuticky přijatelné inertní substance k přenosu léčebné látky nebo nosiče a případně stabilizátoru a případně detergentu a případně neutrální soli a případně antioxidantu a případně konzervačního prostředku a případně proteázového inhibitoru a faktoru VIII a případně TFPI inhibitoru.
V dalším provedení předkládaného vynálezu se farmaceutický prostředek (ve formě soupravy) skládá z první jednotky dávkovači formy, skládající se v podstatě z faktoru Vila a případně farmaceuticky přijatelné inertní substance k přenosu léčebné látky nebo nosiče a případně stabilizátoru a případně detergentu a případně neutrální soli a případně antioxidantu a případně konzervačního prostředku a případně proteinázového inhibitoru; a druhé jednotky dávkovači formy, skládající se v podstatě z faktoru XI a případně farmaceuticky přijatelné inertní substance k přenosu léčebné látky nebo nosiče a případně stabilizátoru a případně detergentu a případně neutrální soli a případně antioxidantu a případně konzervačního prostředku a případně proteázového inhibitoru.
V jiném provedení předkládaného vynálezu se farmaceutický prostředek (ve formě soupravy) skládá z první jednotky dávkovači formy, skládající se v podstatě z faktoru Vila a případně farmaceuticky přijatelné inertní substance k přenosu léčebné látky nebo nosiče a případně stabilizátoru a případně detergentu a případně neutrální soli a případně antioxidantu a případně konzervačního prostředku a případně proteázového inhibitoru; a druhé jednotky dávkovači formy, skládající se v podstatě z faktoru XI a případně farmaceuticky přijatelné inertní substance k přenosu léčebné látky nebo nosiče a případně stabilizátoru a případně detergentu a případně neutrální soli a případně antioxidantu a případně konzervačního prostředku a případně proteázového inhibitoru, přičemž buď první jednotky dávkovači formy nebo druhá jednotky dávkovači formy nebo obě dávkovači formy dále obsahují faktor
VIII a/nebo TFPI inhibitor.
Seznam obrázků
Obr. 1: Přídavek FVIIa má za následek na dávce závislé prodloužení doby rozpouštění sraženiny. Tento efekt byl ideální při 10 nM FVIIa.
Obr. 2: V přítomnosti 10 nM FVIIa měl za následek přídavek FXI další prodloužení doby rozpouštění sraženiny. Efekt byl na dávce závislý a ideální při 30 nM FXI.
Obr. 3: Tromboelastografické (roTEG) měření bylo použito pro analýzu efektu FVIIa a FXI na Maximální pevnost sraženiny (MCF), stejně tak jako odolnosti sraženiny vůči t-PA zprostředkovanému rozpouštění.
Obr. 4: Tyto výsledky demonstrují, že FVIIa a FXI, pokud jsou součinně přidány do plazmy zkracují dobu srážení v NHP.
• ·
Detailní popis vynálezu
Objekty, které trpí krvácením v nadměrné míře ve spojení s operativním zákrokem nebo traumatem a vyžadují krevní transfúze, vyvíjejí více komplikací než objekty, které nadměrné krvácení nevykazují. Avšak také přiměřené krvácení může vést ke komplikacím, pokud vyžaduje podání lidské krve nebo krevních produktů (krevních destiček, leukocytů, od plazmy odvozených koncentrátů pro ošetření koagulačních defektů atd.), protože toto podání je spojeno s nebezpečím přenosu lidských virů (například hepatitidy, HIV, parvoviru nebo ostatních do současné doby neznámých virů), stejně tak jako nevirových patogenů. Nadměrné krvácení vyžaduje masivní transfúze krve, které mohou vést k vývinu hromadného selhání orgánů, což zahrnuje narušení funkce plic a ledvin. Jakmile objekt jednou vyvine tuto sérii komplikací je nastartována kaskáda dějů, zahrnujících množství cytokinetických a zánětlivých reakcí, které učiní jakékoliv ošetření extrémně těžkým a bohužel často neúspěšným. Pacient, který trpí velkou ztrátou krve je klinicky nestabilní. Takový pacient je vystaven riziku atriové fibrilace, která může vést k zástavě srdeční aktivity; narušení ledvinové funkce; nebo ke kapalnému výtoku v plicích (také nazýváno „mokré plíce nebo ARDS). Hlavním cílem při operativním zákroku, stejně tak jako při ošetření poškození hlavních tkání je zabránit nebo minimalizovat krvácení. K zabránění nebo minimalizaci takového nechtěného krvácení je důležité zajistit tvorbu stabilní a pevné hemostatické zátky, která není snadno rozpustítelná fibrinolytickými enzymy. Dále je důležité zajistit rychlou a účinnou tvorbu takových zátek nebo sraženin.
Objekty trpící trombocytopénií (nižší množství nebo aktivita krevních destiček) mají také narušenou generaci ·· · • · · • · · · • · · · · · ·
trombinu, stejně tak jako narušenou stabilizaci fibrinových zátek, což má za následek, že hemostatická sraženina má sklon k předčasnému rozpuštění. Objekty vystavené traumatu nebo poškození orgánu a objekty, které v důsledku traumatu nebo poškození orgánu dostávaly časté krevní infúze, mají často snížený počet krevních destiček stejně jako sníženou úroveň fibrinogenu, faktoru VIII a jiných koagulačních proteinů. Tyto objekty trpí sníženou nebo narušenou tvorbou trombinu. Tyto objekty mají tudíž poškozenou nebo méně účinnou zástavu krvácení vedoucí k tvorbě fibrinových sraženin, které jsou snadno a předčasně rozpustné proteolytickými enzymy. Tyto enzymy jsou ve velké míře uvolňovány v situacích charakterizovaných traumatem nebo poškozením orgánů.
Krvácení v tkáních také vede k tvorbě hematomů. Velikost (obzvláště lebečních a páteřních) hematomů je blízce vztažena k rozsahu ztráty neurologické funkce, těžkostech při rehabilitaci a/nebo počtu a stupni permanentního narušení neurologické funkce následované rehabilitací. Nejvážnější důsledky hematomů se objevují, pokud jsou hematomy umístěny v mozku, kde můžou vést až ke smrti pacienta.
Hlavním úkolem při ošetření krvácení je zajistit zástavu krvácení v minimálním čase, což zachová ztrátu krve na minimální úrovni.
Předkládaný vynález poskytuje prospěšné prostředky, použití a způsoby ošetření pro ošetření krvácení u objektů, které takové ošetření vyžadují. Prostředky, použití a způsoby by měly být spojeny s prospěšným efektem jako je menší ztráta krve před dosažením krevní zástavy, nižší potřeba krve během operativního zákroku, udržení krevního tlaku na přijatelné úrovni zatímco je dosažena krevní zástava, rychlejší stabilizace krevního tlaku, kratší doba regenerace ošetřeného • · • · · • ···· pacienta, kratší doba rehabilitace ošetřovaného pacienta, snížení tvorby hematomů nebo tvorba menších hematomů, zahrnující hematomy v mozku, rychlejší zachycení krvácení, • ···· · · snížení počtu podání potřebných zachování zástavy krvácení.
k zastavení krvácení
Podání preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů, například faktoru Vila v kombinaci s preparátem faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů poskytuje snížení doby srážení, zpevnění sraženiny a zvýšení odolnosti k fibrinolýze ve srovnání k době srážení, zpevnění sraženiny a odolnosti, pokud je buď faktor Vila nebo faktor XI podán samostatně.
s preparátem faktoru polypeptidů, poskytuje
Podání preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů, například faktoru Vila, v kombinaci XI nebo faktoru XI příbuzného také snížení doby vzniku zástavy krvácení a snížení počtu podání k zachování zástavy krvácení ve srovnání se situací, pokud je buď faktor Vila nebo faktor XI podán samostatně. Předkládaný vynález poskytuje prospěšný efekt současným nebo následným podáním preparátu faktoru XI nebo faktoru X příbuzného polypeptidů a preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů. Farmaceutický prostředek podle předkládaného vynálezu může být ve formě jednotného prostředku nebo může být ve formě vícesložkové soupravy (souprava z částí). Prostředek podle předkládaného vynálezu je použitelný jako terapeutický a profylaktický prokoagulátor u savců, což zahrnuje primáty jako je člověk. Předkládaný vynález dále poskytuje způsob pro ošetření (což zahrnuje profylaktické ošetření nebo prevenci) krvácení u objektů, zahrnujících člověka.
·· * Λ Λ
První, druhá, třetí nebo jednotná dávka j e uvedena v celém popisu a neměla by ukazovat upřednostněný způsob podání, ale je pouze použita pro vyhovující účely.
Kombinace preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů je výhodným produktem, zajišťujícím snížení doby srážení, rychlou tvorbu hemostatické zátky a tvorbu stabilní hemostatické zátky. Přihlašovateli bylo nalezeno, že kombinace faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů je výhodným produktem zajišťujícím tvorbu pevné, stabilní a rychle tvořené hemostatické zátky.
Bylo ukázáno, že kombinace faktoru Vila a faktoru XI může snížit dobu srážení normální lidské plazmy mnohem účinněji než samostatně buď faktor Vila nebo faktor XI. Bylo také ukázáno, že kombinace faktoru Vila a faktoru XI může zvýšit pevnost sraženiny mnohem účinněji než samostatně faktor Vila nebo faktor XI. Kombinací faktoru Vila při koncentraci, při které nebylo dále pozorováno zvýšení pevnosti s faktorem XI, také při koncentraci, při které nebylo dále pozorováno další zvýšení pevnosti sraženiny, došlo neočekávaně k dalšímu zvýšení pevnosti sraženiny. Bylo také ukázáno, že kombinace faktoru Vila a faktoru XI může prodloužit in vitro dobu rozpouštění sraženiny v normální lidské plazmě mnohem účinněji než samostatně faktor Vila nebo faktor XI. Také bylo ukázáno, že kombinace faktoru Vila a faktoru XI může prodloužit poločas doby rozpouštění sraženiny v normální lidské plazmě mnohem účinněji než buď faktor Vila nebo faktor XI samostatně. Také bylo ukázáno, že kombinace faktoru Vila a faktoru XI může ochránit sraženinu před fibrinolýzou, obzvláště tPAzprostředkovanou fibrinolýzou, v normální lidské plazmě mnohem účinněji než buď faktor Vila nebo faktor XI samostatně.
• ·
Zvýšením koagulace může být v krvácejícím objektu dosaženo mnohem účinnějšího ošetření.
Bez omezení podle literatury, je známo, že plná tvorba trombinu je nutná pro tvorbu pevné, stabilní hemostatické zátky, čímž je udržena zástava krvácení. Struktura fibrinu takové zátky je závislá na množství vytvořeného trombinu a na rychlosti počáteční tvorby trombinu. V přítomnosti narušené tvorby trombinu je tvořena porézní zátka, která je vysoce propustná. Fibrinolytické enzymy normálně přítomné na povrchu fibrinu rozpouští snadno takové fibrinové zátky. Tvorba stabilní fibrinové zátky je také závislá na přítomnosti faktoru XlIIa, který je aktivován trombinem a tím také závisí na plné tvorbě trombinu. Nedávno popsaný trombinový aktivovatelný fibrolitycký inhibitor TAFI, vyžaduje poměrně vysoká trombinová množství pro svou aktivaci. V přítomnosti neodpovídající tvorby trombinu není TAFI aktivován, což má za důsledek tvorbu hematostatické zátky, která je snadněji rozpustná normální fibrinolytickou aktivitou. V situacích, kde je nižší počet krevních destiček, trombocytopénie, je iniciována rychlejší tvorba trombinu podáním dalšího extragenního faktoru Vila. Celková tvorba trombinu je normalizována faktorem Vila ve vysokých koncentracích.
U objektů s nižší plazmatickou koncentrací fibrinogenu (objekty s mnohočetnými transfuzemi jako následek traumatu nebo operativního zákroku) se nevyskytuje plná aktivace trombinu. Účinnější zástava krvácení je poté získána podáním kombinace faktoru VII a faktoru XI.
Objekty trpící trombocytopénií vykazují narušenou generaci trombinu, stejně tak jako nedokonalou stabilizaci fibrinové zátky, což má za důsledek, že hemostatická zátka má sklony k předčasnému rozpuštění. Objekty trpící traumatem nebo poškozením orgánu a ty objekty, které jako jejich důsledek dostaly časté transfúze krve, vykazují často snížené množství krevních destiček, stejně tak jako snížené množství fibrinogenu, faktoru VIII a ostatních koagulačních proteinů. Tyto objekty trpí narušenou nebo sníženou generací trombinu. Jejích snížená úroveň fibrinogenu také negativně zasahuje do aktivace faktoru XIII. Tyto objekty trpí narušenou nebo méně účinnou zástavou krvácení vedoucí k tvorbě fibrinové zátky, která je snadněji a předčasně rozpuštěna proteolytickými enzymy. Tyto enzymy jsou ve velké míře uvolňovány při situacích, jako jsou trauma nebo poškození orgánu.
Ve smyslu usnadnit tvorbu plně stabilizované zátky s plnou kapacitou pro zachování zástavy krvácení u objektu, byl objektu podán prostředek podle předkládaného vynálezu. Tento prostředek je obzvláště prospěšný u objektů s nižším počtem krevních destiček a u objektů s nižší úrovní fibrinogenu a/nebo jiných koagulačních proteinů v plazmě.
Je známo, že v přítomnosti faktoru XI, mohou být nižší koncentrace faktoru Víla dostatečné k zajištění dostatečné zástavy krvácení.
Polypeptidy faktoru VII:
Pro vykonávání předkládaného vynálezu v praxi, může být použit jakýkoliv polypeptid faktoru VII, který je účinný v prevenci nebo ošetření krvácení. Polypeptid faktoru VII zahrnuje polypeptidy faktoru VII odvozené od krve nebo plazmy nebo polypeptidy produkované rekombinačně.
• · • 4
Předkládaný vynález zahrnuje polypeptidy faktoru VII obsahující aminokyselinovou v US patentu 4 784 950 faktoru VII). V některých jako je například polypeptid sekvenci uvedenou ve známost (nekultivovaný druh lidského provedeních předkládaného vynálezu je polypeptid faktoru VII lidský faktor Vila, jak je uvedeno v US patentu 4 784 950 (nekultivovaný druh lidského faktoru VII). V jedné sérii provedení předkládaného vynálezu faktor VII polypeptidů zahrnuje polypeptidy, které vykazují alespoň 10 %, výhodně alespoň 30 %, výhodněji alespoň 50 % a nejvýhodněji 70 % specifické biologické aktivity lidského faktoru Vila. V jedné sérii provedení předkládaného vynálezu polypeptidů faktoru VII zahrnuje polypeptidy, které vykazují alespoň 90 %, výhodně alespoň 100 %, výhodněji alespoň 120 %, ještě více výhodněji alespoň 140 % a nejvýhodněji 160 % specifické biologické aktivity lidského faktoru Vila. V jedné sérii provedení předkládaného vynálezu polypeptidy faktoru VII zahrnují polypeptidy, které vykazují alespoň 70 %, výhodně alespoň 80 %, výhodněji alespoň 90 % a nejvýhodněji 95 % identity se sekvencí nekultivovaného druhu faktoru VII, jak je uvedeno ve známost v US patentu 4 784 950.
Jak je zde použito „polypeptid faktoru VII zahrnuje, bez omezení, faktor VII, stejně tak jako faktoru VII příbuzné polypeptidy. Termín „faktor VII zahrnuje bez omezení polypeptidy obsahující aminokyselinovou sekvenci 1 až 406 nekultivovaného druhu lidského faktoru VII (jak je uvedeno ve známost v US patentu 4 784 950), stejně tak jako nekultivovaného druhu faktoru VII odvozeného od ostatních druhů, jako je například hovězí, vepřový, psí, myší, lososí faktor VII. Tento faktor VII je odvozený od krve nebo plazmy nebo je produkován rekombinačně. Dále zahrnuje přírodní alelické variace faktoru VII, které by měly existovat a měly by se vyskytovat od jednoho individua ke druhému. Také stupeň • 4
4
44·4 4 · a umístění glykosilace nebo jiných post-translačních modifikací se může lišit v závislosti na výběru hostitelských buněk a povaze buněčného okolí. Termín „faktor VII také zahrnuje polypeptidy faktoru VII v jejich nerozštěpené formě (zymogen), stejně tak jako polypeptidy, které jsou proteolyticky zpracovány za vzniku jejich bioaktivních forem, které jsou označeny jak faktor Víla. Obvykle je faktor VII štěpen mezi zbytky 152 a 153 za vzniku faktoru Vila.
Termín „faktoru VII příbuzné polypeptidy zahrnuje, bez omezení, polypeptidy faktoru VII, které byly buď chemicky modifikovány na příbuzné lidskému faktoru VII a/nebo obsahují jednu nebo více modifikací aminokyselinových sekvencí příbuzných lidskému faktoru VII (tj. varianty faktoru VII) a/nebo obsahují zkrácenou aminokyselinovou sekvenci příbuznou k lidskému faktoru VII (tj. fragmenty faktoru VII) . Takové faktoru VII příbuzné polypeptidy mohou vykazovat různé vlastnosti, vztaženo k lidskému faktoru VII, což zahrnuje stabilitu, fosfolipidickou vazbu, změněnou specifickou aktivitu apod. Termín „faktoru VII příbuzné polypeptidy zahrnuje polypeptidy v jejich neštěpené formě (zymogen), stejně tak jako polypeptidy, které byly zpracovány za vzniku jejich bioaktivních forem, které mohou být označeny jako „faktoru Vila příbuzné polypeptidy nebo „aktivované faktoru
VII příbuzné polypeptidy.
Jak je zde použito, „faktoru VII příbuzné polypeptidy zahrnuje bez omezení, polypeptidy vykazující v podstatě stejnou nebo vylepšenou biologickou aktivitu příbuznou k nekultivovanému druhu lidského faktoru VII, stejně tak jako polypeptidy, ve kterých byla faktoru Vila biologická aktivita v podstatě modifikována nebo snížena ve vztahu k aktivitě nekultivovaného druhu lidského faktoru Vila. Tyto polypeptidy zahrnují, bez omezení, faktor VII nebo faktor Vila, který byl • · ···· ··« · · · ·· · ···· · · · · • · · ·· ······· · · · · ··· ······ ·· ···· .· · .· « chemicky upraven a varianty faktoru VII, do kterých byly zavedeny změny specifické aminokyselinové sekvence, které mění nebo narušují bioaktivitu polypeptidů.
Dále termín zahrnuje polypeptidy s nepatrně pozměněnou sekvencí aminokyselin, například polypeptidy s modifikovaným N-koncem, což zahrnuje přidání nebo ubrání N-koncové aminokyseliny a/nebo polypeptidy, které byly chemicky upraveny vzhledem k lidskému faktoru Vila.
Faktoru VII příbuzné polypeptidy zahrnují varianty faktoru VII, pokud vykazují v podstatě stejnou nebo lepší bioaktivitu než nekultivovaný druh faktoru VII nebo případně vykazují změněnou nebo sníženou bioaktivitu příbuznou s nekultivovaným druhem faktoru VII, což zahrnuje, bez omezení, polypeptidy se sekvencí aminokyselin, lišící se od sekvence nekultivovaného druhu faktoru VII, insercí, vypuštěním nebo substitucí jedné nebo více aminokyselin.
Faktoru VII příbuzné polypeptidy zahrnují ty varianty,
které vykazují | alespoň | 10 | % | , alespoň | 20 | Q, Ό t | alespoň | 25 %, |
alespoň 30 %, | alespoň | 40 | %, | alespoň | 50 | %, | alespoň | 60 %, |
alespoň 70 %, | alespoň | 75 | %, | alespoň | 80 | Q, 'O i | alespoň | 90 %, |
alespoň 100 %, | alespoň | 110 | O, Ό , | alespoň 120 % | nebo alespoň | 130 % |
specifické aktivity nekultivovaného druhu faktoru Vila, která byla produkována stejným druhem buněk, testovaných jedním nebo více srážecími testy, proteolytickými testy nebo TF vazným testem, jak je popsáno výše.
Faktoru VII příbuzné polypeptidy, zahrnující varianty, obsahující v podstatě stejnou nebo vylepšenou biologickou příbuznou nekultivovanému druhu faktoru Vila, polypeptidy vykazující alespoň 25 %, výhodně aktivitu, zahrnující alespoň 50 výhodněji alespoň 75 ještě více výhodněji • · · · · · · ···· • · · · · ······· ···· • · · ··· · · ·
3i ······ ·· · ·· · alespoň 100 %, ještě více výhodněji alespoň 110 %, ještě více výhodněji alespoň 120 % a nejvýhodněji alespoň 130 % specifické aktivity nekultivovaného druhu faktoru Vila, která byla produkována stejným druhem buněk, testovaných jedním nebo více srážecími testy, proteolytickými testy nebo TF vazným testem, jak je popsáno výše.
Faktoru VII příbuzné polypeptidy, zahrnující varianty, vykazující v podstatě sníženou biologickou aktivitu vzhledem k nekultivovanému druhu faktoru Vila jsou polypeptidy vykazující méně než 2 5 %, výhodně méně než 10 %, výhodněji méně než 5 % a nej výhodně ji méně než 1 % specifické aktivity nekultivovaného druhu faktoru Vila, která byla produkována stejným druhem buněk, testovaných jedním nebo více srážecími testy, proteolytickými testy nebo TF vazným testem popsaným výše. Varianty faktoru VII mají v podstatě modifikovanou biologickou aktivitu vzhledem k nekultivovanému druhu faktoru Vila, zahrnující, bez omezení, faktor VII varianty vykazující TF-nezávislou faktor X proteolytickou aktivitu a polypeptidy vážící TF, ale neštěpící faktor X.
V některých provedeních předkládaného vynálezu jsou polypeptidy faktoru VII, faktoru VII příbuzné polypeptidy, obzvláště varianty, přičemž poměr mezi aktivitou polypeptidů faktoru VII a aktivitou přirozeného lidského faktoru Vila (nekultivovaného druhu Vila) je alespoň 1,25, pokud bylo testováno „Testem in vitro hydrolýzy (detailněji níže); v jiných provedeních je poměr alespoň 2,0; v dalších provedeních je poměr alespoň 4,0. V některých provedeních předkládaného vynálezu jsou polypeptidy faktoru VII, faktoru VII příbuzné polypeptidy, obzvláště varianty, přičemž poměr mezi aktivitou polypeptidů faktoru VII a aktivitou přirozeného lidského faktoru Vila (nekultivovaný druh FVIIa) je alespoň 1,25, pokud bylo testováno „Testem in vitro proteolýzy
• · · · · · (detailněji níže); v jiných provedeních předkládaného vynálezu je poměr alespoň 2,0; v dalších provedeních předkládaného vynálezu je poměr alespoň 4,0; v dalších provedeních je poměr alespoň 8,0.
V některých provedeních předkládaného vynálezu je polypeptid faktoru VII lidský faktor VII, jak je uvedeno ve známost například v US patentu 4 7 84 950 (nekultivovaný druh faktoru VII). V některých provedeních předkládaného vynálezu je polypeptid faktor VII lidský faktor Vila. V jedné sérii provedení předkládaného vynálezu jsou polypeptidy faktor VII, faktoru VII příbuzné polypeptidy, které vykazují alespoň 10 %, výhodně alespoň 30 %, výhodněji alespoň 50 % a nejvýhodněji 70 % specifické biologické aktivity lidského faktoru Vila. V některých provedeních předkládaného vynálezu mají polypeptidy faktoru VII aminokyselinovou sekvenci, lišící se od sekvence nekultivovaného druhu faktoru VII insercí, vypuštěním nebo substitucí jedné nebo více aminokyselin.
Nelimitující příklady variant faktoru VII, vykazují v podstatě stejnou nebo lepší biologickou aktivitu ve srovnání s nekultivováným druhem faktoru Vila, což zahrnuje, ale není omezeno, polypeptidy popsané v Dánské patentové přihlášce číslo DA 2000 00 734 a PA 2000 01 360 (odpovídající WO 01/83 725) a PA 2000 01361 (odpovídající WO 02/22 776). Nelimitující příklady variant faktoru VII, vykazující stejnou nebo vylepšenou biologickou aktivitu ve srovnání s nekultivovaným druhem faktoru VII zahrnují S52A-FVII, S60A-FVII (Iino a kol., Arch. Biochem. Biophys. 352: 182 až 192, 1998); L305V-FVII,
L305V/M306D/D309S-FVII, L305I-FVII, L305T-FVII, F374P-FVII, V158T/M298Q-FVII, V158D/E296V/M298Q-FVII, K337A-FVII,
M298Q-FVII, V158D/M298Q-FVII, L305V/K337A-FVII,
V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII, V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII,
V158D/E296V/M298Q/L305V/337A-FVII, K157A-FVII, E296V-FVII,
0 0
0
0
0« • · · • 0 0
0 0 0 • 0 00000
V158D/M298K-FVII
E2 9 6V/M29 8Q-FVII, V158D/E296-FVII,
S336G-FVII; FVIIa varianty vykazují zvýšenou proteolytickou stabilitu, jak je uvedeno ve známost v US patentu číslo 5 580 560; faktor Vila, který byl proteolyticky štěpen mezi zbytky 290 a 291 nebo mezi zbytky 315 a 316 (Mollerup a kol, Biotechnol. Bioeng. 48:501 až 505, 1995); a oxidované formy faktoru Vila (Kornfelt a kol., Arch. Biochem. Biophys. 363:43 až 54, 1999) . Nelimitující příklady variant faktoru VII se v podstatě sníženou nebo změněnou biologickou aktivitou vzhledem k nekultivovanému druhu faktoru VII zahrnují Rl52E-FVIIa (Wildgoose a kol., Biochem 29:3413 až 3420, 1990), S334A-FVIIa (Kazama a kol., J. Biol. Chem. 270:66 až 72, 1995, FFR-FVIIa (Holst a kol., Eur. J. Vasc. Endovasc. Surg až 520, 1998); a faktor Vila s nepřítomnou Gla (Nicolaisen a kol., FEBS Letts. 317:245 až
Nelimitující příklady chemicky modifikovaných faktoru VII a sekvence variant jsou popsány v US patentu číslo 5 997 864.
15:515 doménou 1993).
249, polypeptidů
Biologická aktivita faktoru Vila při srážení krve je odvozena od jeho schopnosti (i) vazby k tkáňovému faktoru (TF) a (ii) katalýze proteolytického štěpení faktoru IX nebo faktoru X za vzniku aktivovaného faktoru XI nebo X (faktoru IXa nebo Xa).
Pro účely předkládaného vynálezu by měla být biologická aktivita polypeptidů faktoru VII („biologická aktivita faktoru VII) kvantifikována měřením schopnosti preparátu podporovat srážení krve s použitím faktoru VII deficitní plazmy a tromboplastinu, jak je popsáno například v US patentu 5 997 864. V tomto testu je biologická aktivita vyjádřena jako snížení doby srážení vzhledem ke kontrolnímu vzorku a je převedena na „jednotky faktoru VII srovnáním s lidským standardním sérem obsahujícím 1 jednotku/ml faktoru VII • · • · · ·
9 9
9 9 • ·
9 9 • · 9
9 9 9 9 9 9
9999 99 9 999
9 9 9 9
99 9 aktivity. Případně může být biologická aktivita faktoru Vila kvantifikována:
I. měřením schopnosti faktoru Vila nebo faktoru Vila příbuzného polypeptidu produkovat aktivovaný faktor X (faktor Xa) v systému obsahujícím TF uložený v lipidické membráně a faktor X. (Persson a kol., J. Biol. Chem. 272:19 919 až 19 924, 1997);
II. měřením hydrolýzy faktoru X ve vodném systému („In vitro proteolytický test“, níže).
III. měřením fyzikální vazby faktoru Vila nebo faktoru Víla příbuzného polypeptidu k TF s použitím přístroje založeného na povrchové plasmonové rezonanci (Persson, FEBS Letts. 413:359 až 363, 1997); a
IV. měřením hydrolýzy syntetického substrátu faktoru Vila a/nebo faktoru Vila příbuzného polypeptidu („In vitro hydrolýzový test, níže) a
V. měřením tvorby trombinu v TF-nezávislém in vitro systému.
Termín „biologická aktivita faktoru VII nebo „aktivita faktoru VII zahrnuje schopnost tvorby trombinu; termín také zahrnuje schopnost tvorby trombinu na povrchu aktivovaných krevních destiček v nepřítomnosti tkáňového faktoru.
Preparát faktor Vila, který by mohl být použit podle předkládaného vynálezu je, bez omezení, NovoSeven® (Novo Nordisk A/S, Bagsvaerd, Dánsko).
·· · • · · · • · · ♦ ·
• · · «······
Polypeptidy faktoru XI:
Pro vykonávání předkládaného vynálezu v praxi, může být použit jakýkoliv polypeptid faktoru XI, který je účinný v prevenci nebo léčení krvácení. Což zahrnuje polypeptidy faktoru XI odvozené od krve nebo plazmy, nebo polypeptidy vytvořené rekombinačně. Krevní destičky mohou obsahovat strukturně odlišné formy FXI (možno kvůli případnému splétání FXI genu). Faktor XI krevních destiček je popsán v Lipscomb, M. S. & Walsh, P. N. (1979), Journal of Clinical Investigation, 63, 1006 až 1014.
Jak je zde použito „polypeptid faktoru XI zahrnuje, bez omezení, faktor XI, stejně tak jako faktoru XI příbuzný polypeptid. Termín „faktor XI zahrnuje, bez omezení, polypeptidy s aminokyselinovou sekvencí popsanou v Sun, Y. & Gailani, D. (1996), J. Biol. Chem. 271:29 023 až 19 028 (nekultivovaný druh lidského faktoru XI, plazma), stejně tak jako nekultivovaný druh faktoru XI odvozený od ostatních druhů, jako je například hovězí, vepřový, psí, myší a lososí faktor XI. V některých provedeních předkládaného vynálezu je faktor XI polypeptid nekultivovaný druh lidského faktoru XI, jak je uvedeno ve známost v Sun, Y. & Gailani, D. (1996), J. Biol. Chem. 271:29 023 až 19 028.
Dále jsou zahrnuty přírodní alelické variace faktoru
XI, které mohou existovat a vyskytovat se od jednoho jedince ke druhému. Také stupeň a umístění glykosilace nebo jiné posttranslační modifikace se mohou lišit v závislosti na vybraných hostitelských buňkách a povaze buněčného okolí. Termín „faktor XI také zahrnuje polypeptidy faktoru XI v jejich neštěpené formě (zymogen), stejně tak jako polypeptidy, které byly proteolyticky zpracovány za vzniku jejich bioaktivních forem, které mohou být označeny jako Xla.
• 9 • 9 9
9 9
9 9 9 99
Termín „faktoru XI příbuzné polypeptidy zahrnuje, bez omezení, polypeptidy faktoru XI, které byly buď chemicky pozměněny vzhledem k lidskému faktoru XI a/nebo obsahují jednu nebo více změn aminokyselinových sekvencí vzhledem k lidskému faktoru XI (tj. varianty faktoru XI) a/nebo obsahují zkrácenou sekvenci aminokyselin vzhledem k lidskému faktoru XI (tj. fragmenty faktoru XI). Takové polypeptidy faktor XI mohou vykazovat rozdílné vlastnosti vzhledem k lidskému faktoru XI, což zahrnuje stabilitu, fosfolipidickou vazbu, změněnou specifickou aktivitu apod.
Termín „faktoru XI příbuzné polypeptidy zahrnuje polypeptidy v jejich neštěpené formě (zymogen), stejně tak jako polypeptidy, které byly proteolyticky zpracovány za vzniku jejich bioaktivních forem, které mohou být označeny jako „faktor Xla příbuzné polypeptidy nebo „aktivované faktor XI příbuzné polypeptidy.
Jak je zahrnuje, bez stejnou nebo zde použito „faktoru XI příbuzné polypeptidy omezení, polypeptidy vykazující v podstatě vylepšenou biologickou k nekultivovanému druhu faktoru XI, aktivitu vzhledem stejně tak jako polypeptidy, ve kterých byla biologická aktivita faktoru XI v podstatě modifikována nebo snížena vzhledem k aktivitě nekultivovaného druhu lidského faktoru XI. Tyto polypeptidy zahrnují, bez omezení, faktor XI nebo faktor Xla, který byl chemicky modifikován a varianty faktoru XI, do kterých byly zavedeny změny v sekvenci aminokyselin, které modifikují nebo narušují bioaktivitu polypeptidů.
Dále jsou zahrnuty polypeptidy s nepatně modifikovanou aminokyselinovou sekvencí, například polypeptidy s pozměněným N-koncem, zahrnující vypuštění nebo přidání N-koncové ·· • · · · ··· · · · ·· · · · · · · · · ·
9 9999 9999 99 9 9999
-- 9 9 9 9 9 9 9 9 9 ·♦ ···· ·· · 99 9 aminokyseliny a/nebo polypeptidy, které byly chemicky modifikovány vzhledem k lidskému faktoru XI.
Faktoru XI příbuzné polypeptidy, zahrnující varianty faktoru XI, ať už vykazují v podstatě stejnou nebo lepší bioaktivitu než nekultivovaný druh faktoru XI nebo případně vykazují v podstatě modifikovanou nebo sníženou bioaktivitu vzhledem k nekultivovanému druhu faktoru XI, zahrnují, bez omezení, polypeptidy s aminokyselinovou sekvencí lišící se od sekvence nekultivovaného druhu faktoru XI insercí, vypuštěním nebo substitucí jedné nebo více aminokyselin.
Faktoru XI příbuzné polypeptidy, zahrnující varianty,
které vykazují | alespoň | 10 %, | alespoň | 20 %, | alespoň 30 % |
alespoň 40 %, | alespoň | 50 %, | alespoň | 60 %, | alespoň 70 % |
alespoň 80 %, | alespoň | 90 %, | alespoň | 100 %, | alespoň 110 % |
alespoň 120 % a alespoň 130 % specifické aktivity nekultivovaného druhu faktoru XI, která byla produkována stejným druhem buněk, testovaných testem aktivity faktoru XI, jak je popsáno v předkládaném popisu.
Faktoru XI příbuzné polypeptidy, zahrnující varianty, se stejnou nebo vylepšenou biologickou aktivitou vzhledem k nekultivovanému druhu faktoru XI, zahrnuje polypeptidy, které vykazují alespoň 25 %, výhodně alespoň 50 %, výhodněji alespoň 75 %, více výhodněji alespoň 100 %, ještě více výhodněji alespoň 110 %, ještě mnohem více výhodněji alespoň 120 % a nejvýhodněji alespoň 130 % specifické biologické aktivity nekultivovaného druhu lidského faktoru XI, která byla produkována stejným druhem buněk, testovaných faktorem XI testem aktivity, jak je popsáno v předkládaném popisu. Pro účely předkládaného vynálezu by měla být biologická aktivita faktoru XI kvantifikována, jak je popsáno v předkládaném popisu („část testy).
· • 0 • · · 0 0 · · 0 • · · 0000 0000 • · 0000 0000 00 0 0000
Faktoru XI příbuzné polypeptidy, zahrnující varianty, se sníženou biologickou aktivitou vzhledem k nekultivovanému faktoru XI jsou polypeptidy, vykazující méně než 25 %, výhodně méně než 10 %, výhodněji méně než 5 % a nej výhodně ji méně než 1 % specifické aktivity nekultivovaného druhu faktoru XI, která byla produkována stejným druhem buněk, testovaných jedním nebo více specifickými testy aktivity faktoru XI, jak je popsáno výše.
Nelimitující příklady polypeptidů faktoru XI zahrnují od plazmy odvozený lidský faktor XI, jak je například popsáno v Gailani & Bronze (1993), Blood Coagul. Fibrinolysis, 4:15 až 20 nebo Kerbiriou & Griffin (1979), J. Biol. Chem., 254:12 020 až 12 207.
V některých provedeních polypeptidy faktoru XI jsou příbuzné polypeptidy faktoru XI, přičemž poměr mezi aktivitou polypeptidu faktoru XI a aktivitou přirozeného lidského faktoru XI (nekultivovaný druh faktoru XI) je alespoň 1,25, pokud byly testovány „FXI chromogenním testem (níže); v jiných provedeních, je poměr alespoň 2,0; v dalších provedeních je poměr alespoň 4,0.
Faktoru XI příbuzné polypeptidy také zahrnují fragmenty faktoru XI nebo faktoru XI příbuzných polypeptidů se zachovanou vlastností aktivity, spojenou se zástavou krvácení. Aktivita polypeptidu faktoru XI, spojená se zástavou krvácení, může být měřena například s použitím testu aktivity faktoru XI, popsaného v předkládaném popisu.
V upřednostněných provedeních předkládaného vynálezu je faktor XI lidský plazmatický faktor XI nebo aktivovaný lidský faktor Xla. V jednom provedení předkládaného vynálezu je FXI faktor XI krevních destiček. V jiném provedení je FXI tvořen ·· ·· 44
4 4 4 4 4
4 4 4 4
4 4 4 4 4
4 4 4 4
4444 44 • * ····
9
4
4 4 • · · • 44 • 4 • ··· rekombinačně.
Definice
V předkládaném vynálezu bylo použito třípísmenné nebo jednopísmenné označení aminokyselin v jejich obvyklém znění, jak je uvedeno v tabulce 1. Pokud není uvedeno jinak, zde zmíněné aminokyseliny jsou míněny v jejich L formě. Pokud první písmeno v (například K337) označuje přirozenou aminokyselinu na označené pozici nekultivovaného druhu faktoru VII a pokud například, [K337A]-FVIIa označuje FVII variant, je aminokyselina označená jednopísmenným kódem K přirozeně přítomná na označené pozici nahrazena aminokyselinou označenou jednopísmenným kódem A.
Tabulka 1: Zkratky aminokyselin
Aminokyselina | Třípísmenná zkratka | Jednopí směnná zkratka |
Glycin | Gly | G |
Prolin | Pro | P |
Alanin | Ala | A |
Valin | Val | V |
Leucin | Leu | L |
Isoleucin | Ile | I |
Methionin | Met | M |
Cystein | Cys | C |
Fenylalanin | Phe | F |
Tyrosin | Tyr | Y |
Tryptofan | Trp | W |
Histidin | His | H |
Lysin | Lys | K |
Arginin | Arg | R |
Glutamin | Gin | Q |
Asparagin | Asn | N |
Kyselina glutamová | Glu | E |
Kyselina asparagová | Asp | D |
• · · · · · · • · · · · · · • · · · · · · ···· • · · · · · ···· · · · ··· /in ··· ······
4U ······ ·· · · · e
Termíny „faktor Vila nebo „FVIIa mohou být použity zaměnitelně. Termín faktor Vila zahrnuje zymogen faktoru VII (jednoduchý řetězec faktoru VII). Termíny „faktor XI nebo „FXI mohou být použity zaměnitelně. Termíny „faktor VIII nebo „FVIII mohou být použity zaměnitelně. Termín „faktor VIII nebo „FVIII zahrnuje aktivovanou formu faktoru VIII (FVIIIa), varianty a zkrácené formy se zachovanou charakteristikou FVIII vztažené hemostatické aktivity; termín zahrnuje rekombinanty FVIII a od plazmy odvozené FVIII. Lidský FVIII a lidský rekombinant FVIII jsou upřednostněny.
„Objekty s narušenou tvorbou trombinu jsou objekty, které nemohou plně generovat trombin na aktivovaném povrchu krevních destiček a zahrnují objekty s nižší generací trombinu, než je plná generace trombinu normálním hemostatickým systémem s normálním množstvím a funkcí koagulačních faktorů, krevních destiček a fibrinogenu (například v normální lidské plazmě) a zahrnuje, bez omezení, objekty s nedostatečným faktorem VIII; objekty s nižším množstvím krevních destiček nebo destiček s narušenou funkcí (například trombocytopénie nebo Glanzmannova tromboastenie nebo objekty s nadměrným krvácením); objekty s nižší úrovní protrombinu, FX nebo FVII; objekty s nižší úrovní některých koagulačních faktorů (například v důsledku nadměrného krvácení při traumatu nebo operativním zákroku); a objekty s nižší plazmatickou koncentrací fibrinogenu (například objekty s mnohočetnými transfúzemi).
„Úroveň tvorby trombinu” nebo „normální tvorba trombinu označuje hladinu pacientovy úrovně tvorby trombinu ve srovnání s úrovní ve zdravém objektu. Úroveň je označena jako procenta normální úrovně. Termín může být, pokud je to vhodné, použit zaměnitelně.
• ·
Termín „vylepšení hemostatického systému označuje posílení schopnosti tvořit trombin. Termín „vylepšení zástavy krvácení zahrnuje situace, kdy je měřená tvorba trombinu testovacího vzorku obsahujícího preparát faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a preparát faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů prodloužena vzhledem k individuelní tvorbě trombinu v kontrolním vzorku obsahujícím pouze faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid nebo faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid, pokud bylo testováno stejným testem tvorby trombinu. Tvorba trombinu by měla být analyzována, jak je popsáno, testem pro tvorbu trombinu v předkládaném popisu {část testy).
„Jediná činidla nebo faktory, jak je zde použito, odkazují na situace, ve kterých jsou společně faktor VII nebo faktor VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid jediná hemostatická činidla nebo aktivní hemostatická činidla nebo koagulační faktory obsažené ve farmaceutickém prostředku nebo soupravě, nebo jsou pouze jediná hemostatická činidla nebo aktivní hemostatická činidla nebo koagulační faktory podané pacientovi v průběhu konkrétního ošetření, jako je například, ošetření konkrétního krvácení. Tyto situace zahrnují případy, ve kterých nejsou jiná hemostatická činidla nebo koagulační faktory, jak je vhodné, přítomny v jejich účinné kvantitě nebo aktivitě, tak aby významně neovlivnily jeden nebo více koagulačních parametrů.
Doba rozpouštění sraženiny, pevnost sraženiny a doba srážení jsou klinicky používané parametry pro analýzu stavu pacientova hemostatického systému. Vzorky krve jsou odebrány pacientovi ve vhodných intervalech a jeden nebo více parametrů jsou poté analyzovány, například pomocí tromboelastografie jak je popsáno v Meh a kol., Blood Coagulation & fibrinolysis • « • · · · « · • ··· · ··· • · ····· · · ···· • · · · · · •9 9 99 9
2001; 12:627 až 637; Vig a kol., Hematology, Vol. 6 (3) strany 205 až 213 (2001); Vig a kol., Blood Coagulation & fibrinolysis, Vol. 12 (7), strany 555 až 561 (říjen 2001); Glidden a kol., Clinical and applied trombosis/hemostasis, Vol. 6 (4) strany 226 až 233 (říjen 2000); McKenzie a kol., Cardiology, Vol. 92 (4) strany 240 až 247 (duben 1999) nebo Davis akol., Journal of the Americal Society of Nephrology, Vol. 6 (4), strany 1250 až 1255 (1995).
Termín „prodloužení doby rozpouštění sraženiny” zahrnuje situace, kdy je měřená doba rozpouštění sraženiny pro testovaný vzorek obsahující preparát faktoru VII nebo faktoru VII příbuzných polypeptidů a preparát faktoru XI nebo faktoru XI příbuzných polypeptidů prodloužena vzhledem k individuální době rozpouštění sraženiny kontrolního vzorku obsahujícího pouze faktor VII nebo faktoru VII příbuzné polypeptidy nebo faktor XI nebo faktoru XI příbuzné polypeptidy, pokud byly testovány stejným testem rozpouštění sraženiny. Doba rozpouštění sraženiny byla analyzována jak je popsáno výše.
Termín „zvětšení pevnosti sraženiny zahrnuje situace, kdy je měřená pevnost sraženiny, například mechanická pevnost, pro testovaný vzorek obsahující preparát faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a preparát faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů zvětšena vzhledem k individuální době rozpouštění sraženiny kontrolního vzorku obsahujícího pouze faktor VII nebo faktoru VII příbuzné polypeptidy a faktor XI nebo faktoru XI příbuzné polypeptidy, pokud byly testovány stejným testem pevnosti sraženiny. Pevnost srážení by měla být analyzována jak je popsáno v Carr a kol., 1991 (Carr ME, Zekert SL. Measurement of platelet-mediated force developement during plasma clot formation. TÍM J MED SCI 1991; 302:13 až 8 nebo je popsáno výše, ve smyslu tromboelastografie.
• · • · • 4 • · · 4 4 4 4 4 4 4 4 • · 4 4 4 4 ···· 44 4 444 • · 4 444 444 ·· ···* ·· 4 44 4
Termín „posílení tvorby fibrinové zátky zahrnuje situace, kdy je měřená rychlost nebo stupeň tvorby fibrinové zátky pro testovaný vzorek obsahující preparát faktoru VII nebo faktoru VII příbuzných polypeptidů a preparát faktoru XI nebo faktoru XI příbuzných polypeptidů zvětšena vzhledem k individuální rychlosti nebo stupni tvorby zátky kontrolního vzorku obsahujícího pouze faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid, pokud byly testovány stejným testem srážení. Tvorba fibrinové zátky by měla být analyzována jak je popsáno výše.
Termín „zkrácení doby srážení zahrnuje situace, kdy je měřená doba tvorby sraženiny (srážecí doba) pro testovací vzorek obsahující preparát faktoru VII nebo faktoru VII příbuzných polypeptidů a preparát faktoru XI nebo faktoru XI příbuzných polypeptidů zvýšena vzhledem k individuální době srážení kontrolního vzorku obsahujícího pouze faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid, pokud byly testovány stejným srážecím testem. Doba srážení by měla být analyzována PT og aPTT testem, který je obecně znám odborníkovi.
Termín „snížené množství nebo aktivita krevních destiček odkazuje na počet krevních destiček (trombocytů) přítomných v plazmě objektu a k biologické, s koagulací spojené aktivitě těchto krevních destiček. Nižší množství by mělo být následkem například zvýšené destrukce krevních destiček, snížením tvorby krevních destiček a shromažďování většího než normálního množství krevních destiček ve slezině. Trombocytopénie například, je definována jako nižší počet krevních destiček, než je 150 000 krevních destiček na mikrolitr; spodní limit normálního počtu krevních destiček je obvykle mezi 350 000 až 450 000 krevních destiček na • ·
• · ·· · • · · • t> · · • · · · · · • · · • · · mikrolitr. Počet krevních destiček byl měřen automatickými počítači krevních destiček; velice známou metodou. Syndromy vznikající v důsledku nižšího počtu krevních destiček zahrnují bez omezení, trombocytopénii a koagulapatii. „Aktivita zahrnuje, bez omezení, agregaci, adhezi a koagulační aktivitu krevních destiček. Snížená aktivita může být důsledkem například glykoproteinových abnormalit, abnormální membránovécytoskeletové interakci, abnormalit částic krevních destiček, abnormalit v signální transdukci a sekreci. Aktivita krevních destiček, zahrnující agregaci, adhezi a koagulační aktivitu je měřena standardními metodami známými odborníkům, například v Platelets. A practical Approach, vydáno S.P. Watson & K. S. Authi: Clinical Aspects of Platelet Disorders (K. J.
Clemetson) 15:299 až 318, 1996, Oxford University Press;
Williams Hematology, šesté vydání, Beutler, Lichtman, Coller, Kipps & Seligsohn, 2001, McGraw-Hill. Syndromy vznikající v důsledku nižší aktivity krevních destiček zahrnují, bez omezení, Glanzmannovu trombathenii, Bernard-Soulierův syndrom, antikoagulační ošetření a trombolytické ošetření. „Snížení odkazuje na množství nebo aktivitu vzorku testované plazmy ve srovnání k množství nebo aktivitě ve vzorku normální sdružované plazmy pokud bylo měřeno stejným testem.
Jak je zde použito, termín „porucha krvácení odkazuje na jakýkoliv defekt, získaný nebo vrozený, buněčného nebo molekulového původu, který se projevuje krvácením. Příklady krvácení zahrnují, ale nejsou limitovány, nedostatek srážecího faktoru (například nedostatek koagulačního faktoru VIII, IX, nebo VII), inhibitorů srážecích faktorů, nedokonalou funkci krevních destiček (například Glanzmannova trombasthenie a Bernard-Soulierův syndrom), trombocytopénie, von Willebrandova nemoc a koagulopatie, která je způsobená zředěním koagulačních proteinů, zvýšenou fibrinolýzou a sníženým počtem krevních destiček v důsledku krvácení a/nebo transfuzí (například u
4 · objektů s mnohočetnými transfúzemi v důsledku operace nebo traumatu).
·· 4 · 4 • 44 « 444
94944 4 4 4499
4 4 4 4
Krvácením je míněno vypouštění krve z jakékoliv složky oběhového systému. Termín „krvácení je označeno jako nechtěné, nekontrolovatelné a často nadměrné krvácení ve spojení s operativním zákrokem, traumatem nebo jinou formou poškození tkáně, stejně tak, jako nechtěné krvácení u objektů, trpících poruchou krvácení. Krvácení se může vyskytovat u objektů s normálním základním koagulačním systémem, ale trpícím dočasnou koagulopatií, stejně tak, jako u objektů s vrozenou nebo získanou koagulací nebo krvácením. U objektů s defektní funkcí krevních destiček může být krvácení spojeno s krvácením způsobeným hemofilií, protože hemostatický systém při hemofilií postrádá nebo obsahuje abnormální srážecí „sloučeniny (například krevní destičky nebo protein von trpících nadměrným faktoru).
Willebrandova v podstatě normálního
U objektů poškozením tkáně, například ve spojení s operativním zákrokem nebo velkým traumatem, by mohl být normální hemostatický mechanismus převrácen na základě okamžité zástavy krvácení a mohl by vyvolat nadměrné krvácení navzdory (pre-trauma nebo pre-operační zákrok) hemostatického mechanismu. Takové objekty, kterým jsou dále podávány časté transfuze, vyvíjejí (dočasně) koagulopatií jako výsledek krvácení a/nebo transfúze (tj. zředěním koagulačních proteinů, zvýšenou fibrinolýzou a nižším počtem krevních destiček v důsledku krvácení a/nebo transfúze). Krvácení se může také vyskytovat v orgánech jako je mozek, vnitřní oblast oka a očí; to jsou oblasti s omezenými možnostmi chirurgické zástavy krvácení, a tím se vyskytuje problém s dosažením uspokojivé zástavy krvácení. Stejné problémy se mohou vynořit v procesu odebírání biopsie z různých orgánů (játra, plíce, nádorové tkáně, gastrointestinální trakt) stejně tak jako u laparoskopických operací a radikální prostatektomii. Hlavní • · • · · 4
4 4
4
4 4 4 · • · 4 4 · · • ·· 4······
4 4 · pro všechny tyto situace je obtížnost poskytnutí zástavy krvácení chirurgickými technikami (stehy, klipsy atd.), což je také platné pro rozšířené krvácení (například silné krvácení ze žaludku a nadměrné děložní krvácení). Krvácení se také může vyskytovat u objektů při antikoagulační terapii, u kterých je indukována defektní zástava krvácení danou terapií; tyto krvácení jsou obvykle akutní a mocné. Antikoagulační terapie je obvykle aplikována k prevenci tromboembolických onemocnění. Taková terapie může zahrnovat heparin, ostatní formy proteoglykanů, warfarin nebo jiné formy antagonistu vitamínu K, stejně tak jako aspirin a jiné agregační inhibitory krevních destiček jako jsou například, protilátky nebo jiné inhibitory GP Ilb/IIa aktivity. Krvácení může být také způsobeno v důsledku takzvané trombolytické terapie, která zahrnuje kombinaci ošetření s činidlem působícím proti krevním destičkám (například acetylsalicylová kyselina), anitikoagulačním činidlem (například heparinem) a fibrinolytickým činidlem (například tkáňovým plasminogenovým aktivátorem tPA) . Krvácení také zahrnuje, bez omezení, nekontrolované a nadměrné krvácení ve spojení s operativním zákrokem nebo traumatem v objektech trpících akutní hematickou artrózou (krvácení v kloubech) , chronickou hemofilní artropatií, hematomy (například svalové, podbřišnicové, podjazykové a hltanové), krvácení z ostatních tkání, hematurie (krvácení z renálního traktu), mozkové krvácení, operativní zákroky (hepatektomie), dentální extrakce a gastrointestinální krvácení (například UGI krvácení). Krvácení může být spojeno s inhibitory proti faktoru VIII; hemofilií A; hemofilií A s inhibitory, hemofilií B; nedostatkem faktoru VII; nedostatkem faktoru XI; trombocytopénií, nedostatkem Willebrandtova faktoru (Willebrandova nemoc); některé poškození tkání, operativní zákroky, laparoskopické zákroky; krvácející gastritida, provedení biopsie, antikoagulační terapie, horní gastrointestinální krvácení (UGI); nebo • · • · · • · · · ·· ·· ·· · transplantace nespecializovaných buněk umožňující růst specializovaných buněk. Krvácení může být také nadměrné děložní krvácení; vyskytující se v orgánech s omezenou možností pro mechanickou zástavu krvácení; vyskytující se v mozku; vyskytující se ve vnitřním očním regionu nebo vyskytující se v očích. Termíny „krvácející příhoda a „krvácení mohou být, pokud je vhodné, použity zaměnitelně.
Termín „ošetření zahrnuje jak prevenci očekávaného krvácení, jako je například operativní zákrok tak i regulaci již se vyskytujícího krvácení, jako je například krvácení při nervovém šoku, za účelem inhibice nebo minimalizace krvácení. Výše uvedené „nadměrné krvácení může být krvácení vyskytující se v konkrétní tkáni nebo orgánu, nebo to může být nespecifikované krvácení. Profylaktické podání preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů je v termínu „ošetření zahrnuto.
Termín „objekt jak je zde použit, zahrnuje obzvláště savce, jako je člověk a může, pokud je vhodné, být použit zaměnitelně s termínem „pacient.
Faktor VII nebo faktoru VII příbuzné polypeptidy a faktor XI nebo faktoru XI příbuzné polypeptidy, jak je definováno v předkládaném popisu, mohou být podány současně nebo následně. Faktory mohou být dodány v jednotné dávkovači formě, přičemž jednotná dávkovači forma obsahuje oba koagulační faktory nebo ve formě sady, obsahující preparát faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů jako první jednotku dávkovači formy a preparát faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů jako druhou jednotku dávkovači formy. První, druhá nebo třetí jednotka dávkovači formy je míněna
4« · ·
4 · ···
4 v popisu tak, že neukazuje upřednostněnou formu podání, ale je udána pouze pro obvyklé účely.
I « «
„Současné podání preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidu a preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidu je podání proteinů koagulačních faktorů v jednotné dávkovači formě nebo podání prvního proteinu koagulačního faktoru následováno podáním druhého proteinu koagulačního faktoru s časovou prodlevou ne větší než 15 minut, výhodně 10, výhodněji 5, ještě více výhodněji 2 minuty. Kterýkoliv faktor může být podán jako první.
„Následné podání označuje podání prvního koagulačního proteinu následované podáním druhého koagulačního faktoru s časovou prodlevou do 2 hodin, výhodně 1 až 2 hodiny, výhodněji do 1 hodiny, ještě více výhodněji 30 minut až 1 hodina, ještě více výhodněji do 30 minut a ještě mnohem více výhodněji 15 až 30 minut. Buď ve dvou dávkovačích formách nebo by měly být proteiny koagulačního faktoru podány jako první.
Výhodně vstupem | jsou oba | produkty | vstříknuty stejným | intravenózním |
„Úroveň faktoru XI | nebo „faktor XI úroveň označuje | |||
úroveň | pacientovy | srážecí | aktivity faktoru XI | ve srovnání |
s úrovní ve zdravém objektu. Úroveň je označení procentuelní úrovně vzhledem k normální úrovni. Termíny mohou být, pokud je vhodné, použity zaměnitelně.
„Snížená úroveň faktoru XI nebo „snížená faktor XI úroveň označuje pokles v přítomnosti nebo aktivitě faktoru XI v krevním toku ve srovnání s úrovní faktoru XI v populaci objektů s nepoškozeným srážecím faktorem XI nebo inhibitory koagulačního faktoru XI. Úroveň cirkulace faktoru XI může být měřena buď koagulačním nebo imunologickým testem.
• · ·
Pro-koagulační aktivita faktoru XI je stanovena schopností pacientovy plazmy napravit dobu srážení faktoru XI deficitní plazmy (například APTT test, níže; také v části „testy předkládaného popisu).
«9 99 99 • 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 • · · 9 9 9
999999 99 9 • · • 999 ·
Jedna jednotka faktoru XI byla definována jako množství faktoru XI přítomného v jednom mililitru normální lidské plazmy (odpovídající 100% úrovni faktoru XI).
Jedna jednotka faktoru VII je definována jako množství faktoru VII přítomného v 1 ml normální plazmy, odpovídající 0,5 pg proteinu. Po aktivaci 50 jednotek odpovídá 1 yg proteinu.
„Nedostatek označuje pokles přítomnosti nebo aktivity například faktoru XI v plazmě ve srovnání s normálním zdravým individuem. Termín může být, pokud je vhodné, použit zaměnitelně s termínem „snížená úroveň faktoru XI.
„APTT nebo „aPTT označuje aktivovanou parciální dobu tromboplastinu (popsána například v Proctor RR, Rapaport SI: The partial thromboplastin time with kaolin; a simple screening test for first-stage plasma clotting factor deficiences. Tím J Clin Pathol 36:212, 1961) .
„Faktoru XI odpovídající syndrom označuje syndrom, u kterého by měl exogenní faktor XI podaný objektu podle jeho potřeby působit preventivně, léčit nebo zlepšit jakýkoliv symptom, stav nebo onemocnění, očekávané nebo přítomné. Zahrnuje, bez omezení, syndromy způsobené sníženou úrovní faktoru XI, například krvácení způsobené inhibici faktoru XI. Faktoru XI odpovídající syndrom by měl být ošetřen prostředky podle předkládaného vynálezu.
• · · • · · · · »· ·· ·· ·· ·· · • · · • ···!
„Faktoru VII odpovídající syndrom označuje syndrom, u kterého by měl exogenní faktor VII, výhodně faktor Vila, podaný objektu podle jeho potřeby působit preventivně, léčit nebo zlepšit jakýkoliv symptom, stav nebo onemocnění, očekávané nebo přítomné a způsobené syndromem. Zahrnuje, bez omezení, syndromy způsobené sníženou úrovní srážecího faktoru VII, IX nebo VII, inhibitory srážecího faktoru, nedostatečnou funkcí krevních destiček například Glanmanova trombobastenie a Bernard-Soulierovým syndrom), trombocytopénií, von a koagulopatií, která je způsobena proteinů, zvýšenou fibrinolýzou a
Willebrandovou nemocí zředěním koagulačních sníženým počtem krevních destiček v důsledku krvácení a/nebo transfúze (například objektů s mnohočetnými transfúzemi v důsledku operativního zákroku nebo traumatu).
„Poloviční doba existence odkazuje na dobu, potřebnou pro snížení plazmatické koncentrace faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů nebo faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů hodnotu.
z konkrétní hodnoty na poloviční odkazuje na počáteční faktoru Vila, následnou „Primární zástava krvácení” tvorbu trombinu pomocí FXa a TF: aktivaci krevních destiček a tvorbu počáteční uvolněné sraženiny aktivovaných, spojených krevních destiček, které nejsou stabilizovány fibrinem a konečným zesítěním fibrinu. Pokud není fibrin během druhého kroku hemostatického procesu stabilizován, je sraženina snadněji rozpustná fibrinolytickým systémem.
„Sekundární zástava krvácení nebo „zachování zástavy krvácení označuje sekundární, plnou a hlavní tvorbu trombinu, probíhající na povrchu aktivovaných krevních destiček, katalyzovanou faktorem Vlila a faktorem Vlila, následnou
0 0 0 0
0· 0 0 0 0
0
0 0 0
0 tvorbu fibrinu a stabilizací počáteční sraženiny vedoucí k zachování hemostázy.
• · 0000
0000 „Plná zástava krvácení označuje tvorbu stabilní a pevné fibrinové zátky nebo sraženiny na straně poranění, která účinně zabraňuje krvácení a která není snadno rozpustítelná fibrinolytickým systémem. V souvislosti s tím bude termín zástava krvácení použit pro vyjádření plné zástavy krvácení, jak je uvedeno výše.
Celkové množství proteinu v preparátu může být obecně měřeno známými metodami, například měřením optické hustoty. Množství koagulace faktoru XI nebo proteinu faktoru VII („antigenu) může být měřeno obecně známými metodami jako je standardní Elisa imunologický test. Takový test je proveden uvedením do kontaktu například roztoku proteinu faktoru XI obsahujícího preparát s FXI protilátkou znehybněnou na Elisa desce a následným uvedením do kontaktu znehybněného komplexu protilátky faktoru XI s druhou anti FXI protilátkou označenou markérem, jejíž množství bylo ve třetím kroku měřeno. Množství každého koagulačního faktoru by mělo být měřeno stejně s použitím odpovídajících protilátek. Celkové množství proteinu koagulačního faktoru přítomného v preparátu bylo stanoveno přidáním jednotlivých množství proteinu koagulačního faktoru. V jednom provedení předkládaného vynálezu obsahuje preparát isolovaný koagulační faktor.
V jiném provedení předkládaného vynálezu preparát neobsahuje koagulační faktor II a koagulační faktor Ha (protrombin a trombin) a/nebo faktor X nebo Xa.
Jak je v předkládaném vynálezu použito, termín „izolovaný odkazuje na koagulační faktor, například faktor XI nebo faktoru XI příbuzné polypeptidy, které byly odděleny od buněk, ve kterých byly syntetizovány nebo od prostředí ve »· ···· ·· · ·· * > · · · · ·
I · · · · · · · » » ···· · · · ···· ·· kterém byly nalezeny v přírodě (plazma nebo krev). Oddělení polypeptidů od jejich původních buněk by mělo být dosaženo jakýmkoliv způsoben známým v literatuře, zahrnujícím, bez omezení, odstranění buněčného prostředí pro kultivaci, obsahujícího požadovaný produkt z přilnavé buněčné kultury; centrifugaci nebo filtraci pro odstranění nepřilnavých buněk apod. Oddělení polypeptidů z prostředí, ve kterém se v přírodě nacházely, může být dosaženo jakýmkoliv známým způsobem, zahrnujícím, bez omezení, afinitní chromatografií, jako je například chromatografie s kolonou na anti-faktor VII nebo anti-faktor XI protilátky; hydrofobní interakční chromatografie; iontová výměnná chromatografie; velikostní vylučující chromatografie; elektroforetické procedury (například preparativní isoelektrické zaostřování (IEF)), diferenciace rozpustnosti (například srážení amonium sulfátu) nebo extrakcí apod.
Termín „TFPI inhibitor označuje sloučeninu inhibující anti-koagulační aktivitu TFPI (inhibitor tkáňového dráhového sloučeniny uvedené ve známost 558 529, WO 96/28 153 a US 5 622 988. „TFPI a „EPI (vnější dráhový inhibitor) můžou být použity zaměnitelně.
faktoru). Termín zahrnuje v evropském patentu číslo „Účinné množství polypeptidů faktoru VII a polypeptidů faktoru XI je definováno jako množství faktoru VII polypeptidů, například FVIIa a polypeptidů faktoru XI, které je společně dostačující k prevenci nebo snížení krvácení nebo ztráty krve, stejně tak jako pro léčení, ulehčení nebo pro částečnou zástavu onemocnění nebo jeho komplikací.
Termín „aktivita faktoru Vila nebo „faktor Vila aktivita zahrnuje schopnost generovat trombin; termín také • · ···· zahrnuje schopnost generace trombinu na povrchu aktivovaných krevních destiček bez přítomnosti tkáňového faktoru.
* · · · · · • · · · · • · · · · · • · · · · ·· ···· ·· • · ···· • · • · • · • · · • · · • ··
Prostředky podle předkládaného vynálezu mohou dále obsahovat TFPI inhibitor. Prostředky podle předkládaného vynálezu mohou dále obsahovat faktor VIII. Prostředky podle předkládaného vynálezu by měly být výhodně podány objektům, které nemají inhibitory faktoru VIII.
Zkratky
TF tkáňový faktor
FVII faktor VII, jeho jednotlivý řetězec, neaktivovaná forma
FVIIa faktor VII v jeho aktivované formě rFVIIa rekombinant faktoru VII v jeho aktivované formě
FXI faktor XI v jeho zymogenní, neaktivované formě
FXIa faktor XI v jeho aktivované formě rFXI rekombinant FXI rFXIa rekombinant FXIa
FVIII faktor VIII v jeho zymogenní, neaktivované formě rFVIII rekombinant FVIII
FVIIIa faktor VIII v jeho aktivované formě rFVIIIa rekombinant FVIIIa
TFPI tkáňový faktor dráhový inhibitor
Příprava sloučenin
Lidský přečištěný faktor Vila vhodný pro použití v předkládaném vynálezu byl výhodně připraven DNA rekombinační technologií, například jak je popsáno v Hagen a kol., Proč. Nati. Acad. Sci . USA 83:2412 až 2416, 1986 nebo v Evropském patentu číslo 200 421 (ZymoGenetics, lne.).
Faktor VII může být také připraven způsoben popsaným v Brože a Majerus, J. Biol. Chem, 255 (4):1242 až 1247, 1980 a • · • · ···· · · · ··· ·· · · · · · · · · · • · · · · · ···· · · · ···
CA ··· ······ ·· ···· ·· « ·· ·
Hedner a Kisiel, J. Clin. Invest, 71:1836 až 1841, 1983. Tyto způsoby produkují faktor VII bez detekovatelného množství ostatních krevních koagulačních faktorů. Dokonce ještě více vyčištěný preparát faktoru VII může být získán po přídavné gelové filtraci, jako posledním čistícím kroku. Faktor VII byl poté přeměněn na aktivovaný faktor Víla známými prostředky, například několika různými plazmatickými proteiny, jako je faktor Xlla, IX nebo Xa. Případně, jak je popsáno Bjoern a kol., (Oznámení o výzkumu, 269, září 1986, strany 564 až 565), může být faktor VII aktivován průchodem přes chromatografickou kolonu s iontoměničem, jako je Mono Q® (Pharmacia fine Chemicals) nebo pod.
Faktoru VII příbuzné polypeptidy mohou být produkovány nekultivovaným druhem faktoru VII nebo rekombinační technologií. Faktoru VII příbuzné polypeptidy s pozměněnou sekvencí aminokyselin ve srovnání s nekultivovaným druhem faktoru VII, mohou být produkované modifikováním sekvence aminokyselin kódujících nekultivovaný druh faktoru VII buď změnou kodonů aminokyselin nebo odstraněním některých aminokyselinových kodonů v nukleové kyselině kódující přirozený faktor VII známými prostředky, například specifickou mutagenezí.
Odborníkovi je zřejmé, že záměny mohou být provedeny v regionu, který není kritický pro funkci faktoru Víla nebo faktoru XI a stále mají za následek aktivní polypeptid. Aminokyselinové zbytky nezbytné pro aktivitu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzných polypeptidů nebo faktoru XI nebo faktoru XI příbuzných polypeptidů nejsou výhodně předmětem záměny a mohou být identifikovány podle procedur známých odborníkovi, jako je specifická mutageneze nebo alaninskenovací mutageneze (například v Cunningham a Wells, 1989, Science 244:1081 až 1085. Ve druhé technice jsou mutace zavedeny do každého pozitivně nabitého zbytku molekuly. Výsledné mutující molekuly byly testovány na koagulant a na aktivitu pro zesítění pro identifikaci aminokyselinových zbytků, které jsou kritické pro aktivitu molekuly. Místa substrát-enzymové interakce mohou být také stanoveny analýzou tří dimenzionální struktury například technikami jako je nukleární magnetická rezonance, krystalografie nebo fotoafinitním značením (de Vos a kol., 1992, Science 255:306 až 312; Smith kol., 1992, Journal of Molecular Biology
224:899 až 904; Wlodaver a kol., 1992, FEBS Letters 309:59 až 64) .
Zavedení mutace do sekvence aminokyselin k záměně jednoho nukleotidu za jiný může být doprovázeno na místo řízenou mutagenezí v oboru.
s použitím jakéhokoliv způsobu známého Obzvláště použitelná je procedura, která používá šroubovitý, dvou vláknitý vektor DNA s vložkou našeho zájmu a dva syntetické primery obsahující požadovanou mutaci. Oligonukleotidové primery, každý komplementární k protilehlému vláknu vektoru, se rozpíná během cyklující teploty prostřednictvím Pfu DNA polymerázy. Při zavedení primerů je vytvořen mutovaný plasmid obsahující odstupňovaný zářez.
Následuje cyklování teploty a úprava produktu pomocí DpnI, který je specifický pro methylovanou a hemimethylovanou DNA pro vyrovnání rodičovského DNA templátu a pro výběr mutace obsahující syntetizované DNA. Ostatní procedury známé v oboru pro vytvoření, identifikaci a isolaci variantů mohou být také použity, jako je například, přemisťování genů nebo fagové vystavující techniky.
Oddělení polypeptidů z jejich původních buněk může být dosaženo jakýmkoliv způsobem známým v oboru, což zahrnuje, bez omezení, odstranění prostředí kultivace buněk obsahujícího požadovaný produkt z přilehlé buněčné kultury; centrifugací nebo filtraci pro odstranění nepřilnavých buněk apod.
Případně může být faktor VII a faktoru VII příbuzný polypeptid dále přečištěn. Přečištění může být dosaženo s použitím jakéhokoliv způsobu známého v oboru, což zahrnuje, bez omezení, afinitní chromatografii, jako je chromatografie na koloně obsahující anti-faktor VII protilátky (například v Wakabayashi a kol., J. Biol. Chem. 261:11097, 1986; a Thim a kol., Biochem. 27:7785, 1988); hydrofobní interakční chromatografii; chromatografii s výměnnou iontů; velikostní vylučovací chromatografii; elektroforecké procedury (například praparativní isoelektrická fokusace (IEF), rozdílnou rozpustnost (například srážení sulfátu amonného) nebo extrakcí apod. Obecně v Scopes, Protein Purification, Springer-Verlag, New York, 1982; a Protein Purif ication, J. C. Janson a Lars Ryden, VCH Publishers, New York, 1989. Po přečištění obsahuje preparát výhodně méně než 10 % hmotnostních, výhodněji méně než 5 % hmotnostních a nej výhodně ji méně než 1 % hmotnostní polypeptidů nepříbuzných k faktoru VII nebo faktoru VII, odvozených od hostitelských buněk.
Faktor VII nebo faktoru VII příbuzné polypeptidy mohou být aktivovány proteolytickým štěpením, s použitím faktoru Xlla nebo jiných proteáz obsahujících trypsinu podobnou specifitu, jako je, například faktor Xla, kalikrein, faktor Xa a trombin. V Osterud a kol., Biochem. 11:2853 (1972); Thomas,
US Patent číslo 4 456 591; a Hedner a kol., J. Clin. Ivest. 71:1836 (1983). Případně mohou být faktor VII nebo faktor VII příbuzné polypeptidy aktivovány průchodem přes chromatografickou kolonu s výměnnou iontů, jako je Mono Q® (Pharmacia) nebo pod. Výsledný aktivovaný faktor VII nebo faktor VII příbuzný polypeptid může být poté formulován a podán jak je popsáno níže.
·· · ·· · • · · · · • · · · · · · • ···· · · ···· ·· · · · ··· ······ · · · ·« ·
Faktor XI může být pro použití v předkládaném vynálezu připraven z plazmy podle známých způsobů, jako jsou způsoby uvedené ve známost v Koide a kol., (Biochemistry 16:2279 až 2286, 1977) a Bouma a kol., (J. Bilo. Chem. 252:6432 až 6437, 1977), zahrnuté do literatury. V předkládaném vynálezu je upřednostněno použití rekombinantu faktoru XI ve smyslu zabránit použití od krve nebo od tkáně odvozených produktů, které mohou mít za nebezpečí přenos onemocnění. Způsoby pro přípravu rekombinantů faktoru XI jsou známy v oboru. Například Kemball-Cook a kol., (Gene 139 (2):275 až 279, 1994), Fujikawa a kol., (Biochemistry 25:2417 až 2424, 1986), Meijers a kol., (Blood 79(6):1435 až 1440, 1992), publikace jsou zahrnuty do literatury v celém svém rozsahu.
Faktoru XI příbuzné polypeptidy by měly být produkovány modifikací nekultivovaného druhu faktoru XI nebo rekombinační technologií. Faktoru XI příbuzné polypeptidy se zaměněnou aminokyselinovou sekvencí ve srovnání s nekultivovaným druhem faktoru XI, mohou být připraveny modifikací sekvence nukleových kyselin kódující nekultivovaný druh faktoru XI, buď záměnou kodonů aminokyselin nebo odstraněním některých aminokyselinových kodonů v nukleové kyselině kódující přírodní faktor XI známými prostředky, například specifickou mutagenezí, jak je popsáno detailněji výše. Oddělení polypeptidů z jejich původních buněk může být dosaženo způsoby známými v oboru, což zahrnuje, bez omezení, odstranění buněčného kultivačního prostředí obsahujícího požadovaný produkt z přilehlé buněčné kultury; centrifugaci nebo filtraci pro odstranění nepřilehlých buněk apod. Případně může být faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid dále přečištěn. Přečištění může být dosaženo s použitím způsobů známých v oboru, zahrnujících, bez omezení, afinitní chromatografií, jako je například chromatografie na koloně s anti-faktor XI ·· 4 ·· · • 44 4 4 4 • 4 4 · φ 444 •4 4444444 4444 protilátkou; chromatografií chromatografií, preparativní chromatografií, vylučovací (například rozlišení hydrofobní interakční s výměnnou iontů, velikostní elektroforetické procedury isoelektrická fokusace (IEF), rozpustnosti (srážení sulfátu amonného), extrakce apod. jak je detailněji popsáno výše. Preparát po přečištění výhodně obsahuje méně než 10 %, výhodněji méně než 5 %, nej výhodně ji méně než 5 % hmotnostních polypeptidů nepříbuzných k faktoru XI nebo faktoru XI, odvozených od hostitelských buněk. Výsledný aktivovaný faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid může být poté formulován a podán, jak je popsáno výše.
Odborníkovi by mělo být zřejmé, že je upřednostněno použití proteinů faktoru XI a faktoru Xla imunologicky slučitelných s objektem ve smyslu snížení rizika vyvolání imunitní odpovědi. Příprava a charakteristika faktoru XI neodvozeného od lidského druhu byla uvedena ve známost například v Gailani (Blood 90(3): 1055 až 1064, 1997). Předkládaný vynález se také týká použití proteinů faktoru XI a faktoru Vila ve veterinárních procedurách.
Farmaceutické prostředky a metody použití
Preparáty podle předkládaného vynálezu mohou být použity k léčení jakéhokoliv faktoru VII odpovídajícího syndromu, jako je například krvácení, zahrnující bez omezení, syndromy způsobené sníženou úrovní srážecích faktorů VIII, IX nebo VII, inhibitorů srážecích faktorů, narušenou funkcí krevních destiček (například Glanzmanova trombasténie a Bernard-Soulierův syndrom), trombocytopéníí, von Willebrandovou nemocí a koagulopatií, která je způsobená zředěním koagulačních proteinů, zvýšenou fibrinolýzou a · 44 4 • · · · 4 4 4 4 4 · • 4 4 4444 4444
4 4 44 4444444 4444
444 444444
Jy 44 4444 44 4 44 · sníženým počtem krevních destiček v důsledku krvácení a/nebo transfúzí (například u objektů s mnohočetnými transfúzemi v důsledku operativního zákroku nebo traumatu).
Farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu, obsahující preparát faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidu a preparát faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidu byly především zamýšleny k mimostřevnímu podání pro preventivní a/nebo terapeutické ošetření. Výhodně jsou farmaceutické prostředky podány mimostřevně, tj . intravenozně, podkožně nebo intramuskulárně. Intravenózní podání je nejvíce upřednostněno. Také mohou být podány kontinuální nebo pulsační infusí.
Farmaceutické prostředky nebo formulace podle předkládaného vynálezu obsahují faktor VII nebo faktor VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktor XI příbuzný polypeptid, buď formulované v jednotné dávkovači formě nebo ve formě sady, výhodně rozpuštěný ve farmaceuticky přijatelném nosiči, výhodně ve vodném nosiči nebo ředidle. Farmaceutický prostředek vhodný pro použití podle předkládaného vynálezu je vytvořen smísením faktoru Vila, nebo faktoru XI, nebo faktoru Vila v kombinaci s faktorem XI, výhodně v přečištěné formě s vhodným adjuvantem a vhodným nosičem nebo ředidlem. Mohou být použity různé vodné nosiče jako je voda, voda-tlumený roztok, 0,4% šalin, 0,3% glycin apod. Preparáty podle předkládaného vynálezu mohou také být formulovány s použitím ne-vodných nosičů, jako je například forma gelu nebo liposomového preparátu pro dopravení nebo cílení na místo poranění. Liposomové preparáty jsou obecně uvedeny ve známost například v US patentu číslo 4 837 028, 4 501 728 a 4 975 282. Prostředky by měly být sterilizovány obvyklými, dobře známými technikami. Výsledné vodné roztoky by měly být zabaleny pro použití nebo filtrovány pod aseptickými podmínkami a «· · ·· · ·· · · ···· ··· · · « ·· · · · · · ···· • · · · · · ···· * · · ··· · · · ······ ·· ···· ·· · ·· · lyofilizovány. Lyofilizovaný preparát by měl být před podáním kombinován se sterilním vodným roztokem.
Prostředky by měly obsahovat farmaceuticky přijatelné pomocné složky nebo adjuvanty, zahrnující, bez omezení, pH upravující a tlumící činidla a/nebo činidla pro úpravu napětí, jako je například acetát sodný, laktát sodný, chlorid sodný, chlorid draselný, chlorid vápenatý apod.
Formulace by měly dále obsahovat jedno nebo více ředidel, emulgantů, konzervačních činidel, tlumičů, substancí k přenosu léčebné látky, atd. a měly by být poskytnuty ve formách jako jsou kapaliny, prášky, emulze s kontrolovatelným uvolňováním atd. Odborník by měl formulovat prostředky předkládaného vynálezu v odpovídajícím množství, v souladu se schválenou praxí, jako je uvedeno ve známost v Remingtonzs Pharmaceutical Sciences Gennaro, Mack Publishing Co., Easton,
PA, 1990. Typický farmaceutický prostředek pro intravenózní infúze by měl být připraven tak, aby obsahoval 250 ml sterilního Ringersova roztoku a 10 mg preparátu.
Prostředky obsahující preparáty podle předkládaného vynálezu mohou být podány pro preventivní a/nebo terapeutické ošetření. U terapeutických aplikací jsou prostředky podány objektu již trpícímu onemocněním, jak je popsáno výše, v množství dostatečném k léčení nebo částečnému zastavení klinických projevů onemocnění a jeho komplikací. Množství tomu odpovídající je definováno jako „terapeuticky účinné množství. Účinné množství pro každý účel bude záviset na vážnosti onemocnění, stejně tak jako na váze a obecném stavu objektu. Stanovení vhodné dávky by mělo být dosaženo s použitím rutinních pokusů, konstrukcí matrice hodnot a testování různých bodů v matrici.
• * • · • · · • · · · ·
Lokální podání preparátů předkládaného vynálezu, jako je například místní aplikace, může být provedeno například prostředky jako jsou spreje, perfúze, dvojité balónové katetry zabudované do svalového štěpu, hydrogely použité k potažení balónových katetrů nebo jinými dobře zavedenými způsoby. Farmaceutický prostředek by měl poskytnout množství preparátu, dostatečné a účinné k ošetření onemocnění.
Koncentrace faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů, faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů nebo faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů v kombinaci s faktorem XI nebo faktorem XI příbuzným polypeptidem v těchto formulacích se mohou široce lišit, tj . od méně než 0,5 % hmotnostních, obvykle nebo alespoň 1 % hmotnostní až k 15 nebo 2 0 % hmotnostním a budou vybrány především ze skupiny kapalných objemů, viskozit atd., v souladu s konkrétním způsobem podání. Podání injekcí nebo infusí, obzvláště injekcí, je upřednostněno. Faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid jsou připraveny ve formě vhodné pro intravenózní podání, jako je preparát s buď rozpustným lyofilizovaným práškem nebo jako kapalná formulace obsahující jak faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid tak i faktoru XI nebo faktor XI příbuzný polypeptid v jedné dávkovači formě, nebo jako rozpustný lyofilizovaný prášek nebo kapalná formulace obsahující faktor VII nebo faktoru VII příbuzné polypeptidy v jedné dávkovači formě a rozpustný lyofilizovaný prášek nebo kapalná formulace obsahující faktor XI nebo faktoru XI příbuzné polypeptidy v další dávkovači formě.
Množství faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a množství faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů společně obsahuje úhrnné účinné množství pro ošetření krvácení.
·· 99 ·· · ·· ·
9 9 9 9 9 9 9 9 9 • · · ···· 9 9 9 9
9 9999 9999 99 9 9999
9 9 9 9 9 9 9 9
999999 99 9 99 ·
Materiály předkládaného vynálezu mohou být obecně používány v sériích onemocnění nebo úrazových stavech, což jsou život ohrožující nebo potencionální život ohrožující situace. V takových případech je možné a mělo by být žádoucí ve smyslu minimalizace jiných vnějších substancí a obecného nedostatku imonogenicity faktoru Vila a faktoru XI v lidských objektech ošetření lékařem a podání značného přebytku těchto sloučenin.
Pro preventivní aplikace jsou podány prostředky obsahující preparát faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a preparát faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů objektu podléhajícímu onemocnění nebo jinak ohroženému onemocněním nebo úrazovým stavem ke zvýšení vlastní koagulační schopnosti. Takové množství je definováno jako „profylakticky účinná dávka. Množství faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a množství faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů společně obsahuje úhrnné účinné množství pro prevenci krvácení.
Může být provedeno jednotné nebo mnohonásobné podání prostředků podle předkládaného vynálezu, s úrovní dávek vybraných podle ošetřujícího lékaře. Prostředky mohou být podány jednou nebo vícekrát denně nebo týdně. Účinné množství takového farmaceutického prostředku je množství, které poskytuje klinicky významný efekt na krvácení. Takové množství bude částečně záviset na konkrétních stavech, které mají být ošetřeny, na věku, váze a obecné stavu objektu a dalších faktorech zřejmých odborníkovi.
• 4 • · · · 4 4 4 4 4 4 • 4 · 4 4 4 4 4 4 4 4 • · 4 4 4 4 4944 44 9 949 444 999944
OJ 44 4444 44 4 44 4
Prostředky podle předkládaného vynálezu jsou obvykle podány v jednotné dávkovači formě před očekávaným krvácením nebo během začátku krvácení. Také mohou být tyto prostředky podány opakovaně, v mnohonásobných dávkách, výhodně v intervalech 2 až 4 až 6 až 12 hodin, v závislosti na dané dávce a stavu objektu.
Pro ošetření ve spojení s promyšleným zásahem bude obvykle podán faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid v časovém intervalu do 24 hodin před provedením zásahu a až do 7 dnů po zákroku. Při podání prostředku předkládaného vynálezu jako koagulantu může být použito různých způsobů podání, jak je popsáno v předkládaném popisu.
Prostředky by měly být ve formě jednotného preparátu (jednotná dávkovači forma) obsahující oba preparáty faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidu a faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidu ve vhodných koncentracích. Prostředek může být také ve formě soupravy, obsahující první jednotku dávkovači formy, obsahující preparát faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidu a druhou jednotku dávkovači formy obsahující preparát faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidu. V tomto případě by měl být faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid podán jeden za druhým, výhodně do 15 minut, například do 10 minut nebo výhodně do 5 minut nebo výhodněji do 2 minut. Každý ze dvou preparátů může být podán jako první.
Souprava zahrnuje alespoň dva oddělené farmaceutické prostředky. Souprava zahrnuje zásobní prostředky obsahující oddělené prostředky, jako jsou oddělené lahvičky nebo oddělená foliová balení. Obvykle souprava obsahuje pokyny pro podání oddělených prostředků. Forma soupravy je výhodná, pokud jsou • 0 oddělené složky výhodně podány v různých dávkovačích formách, pokud jsou podány v různých intervalech nebo pokud odměrná analýza konkrétních složek požaduje předepsání lékařem.
· 00 0 ···« 000 000
0 0 0000 0000
0000 0000 00 0 «000 , . 000 0 0 0 0 0 0 64 ·· ···· 00 e 00 0
Množství faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a množství faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů podaného podle předkládaného vynálezu se může lišit v poměru 1:100 až 100:1 (hmotnostně). Poměr faktoru VII k faktoru XI může být, například 1:100 nebo 1:90 nebo 1:80 nebo 1:70 nebo 1:60 nebo 1:50 nebo 1:40 nebo 1:30 nebo 1:20 nebo 1:10 nebo 1:5 nebo 1:2 nebo 1:1 nebo 2:1 nebo 5:1 nebo 10:1 nebo 20:1 nebo 30:1 nebo 40:1 nebo 50:1 nebo 60:1 nebo 70:1 nebo 80:1 nebo 90:1 nebo 100:1 nebo mezi 1:90 až 1:1 nebo mezi 1:80 až 1:2 nebo mezi 1:70 až 1:5 nebo 1:60 nebo 1:10 nebo mezi 1:50 až 1:25 nebo mezi 1:40 až 1:30 nebo mezi 1:90 až 1:1 nebo mezi 80:1 až 2:1 nebo mezi 70:1 až 5:1 nebo mezi 60:1 až 10:1 nebo mezi 50:1 až 25:1 nebo mezi 40:1 až 30:1.
Dávka faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů je v oblasti odpovídající 0,05 až 500 mg/den nekultivovaného druhu faktoru VII, například 1 až 200 mg/den nebo například 5 až 175 mg/den pro 70 kg objekt jako dávkování a udržování dávek, v závislosti na váze objektu, stavu a vážnosti onemocnění.
Dávka faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů je v oblasti odpovídající 0,05 až 500 mg/den nekultivovaného druhu faktoru VII, například 1 až 200 mg/den nebo například 5 až 17 5 mg/den pro 7 0 kg objekt jako dávkování a udržování dávek, v závislosti na váze objektu, stavu a vážnosti onemocnění.
Kombinace faktoru Vila a faktoru XI vykazuje synergický efekt v in vitro časovém testu pevnosti sraženiny a v časovém testu fibrinolýzy. Kombinace faktoru Vila a faktoru XI vykazuje synergický efekt ve tvorbě stabilní fibrinové zátky, ve zvýšení poloviční doby rozpouštění sraženiny, ve zvýšení pevnosti sraženiny a ve zvýšení odolnosti vůči fibrinolýze.
• · ·
Prostředky mohou mít formu jednotného preparátu obsahujícího oba faktory Vila a XI ve vhodných koncentracích. Prostředek může být také ve formě soupravy skládající se z první jednotky dávkovači formy, obsahující faktor Vila a druhé jednotky dávkovači formy, obsahující faktor XI a případně jednu nebo více dalších dávkovačích forem, obsahujících faktor VIII a/nebo TFPI inhibitor. V tomto případě by měly být faktor Vila a faktor XI podány následně, výhodně jedna po druhé během 1 až 2 hodin, například během 30 minut nebo výhodně během 10 minut nebo výhodněji 5 minut. Jakákoliv ze dvou dávkovačích forem může být podána jako první.
Doposud se předkládaný vynález týkal pouze prevence nebo ošetření krvácení nebo ošetření koagulace, kombinací aktivních složek, které by měly být podány odděleně. Předkládaný vynález se také týká kombinování oddělených farmaceutických prostředků do souprav. Souprava obsahuje alespoň dva oddělené farmaceutické prostředky. Souprava obsahuje zásobní prostředky obsahující oddělené prostředky, jako jsou oddělené lahvičky nebo oddělené aluminiové sáčky. Souprava je obzvláště výhodná, pokud jsou oddělené složky výhodně podány v různých dávkovačích formách, pokud jsou podány v různých dávkovačích intervalech nebo pokud je požadováno předepsání odměrné analýzy kombinace jednotlivých složek lékařem.
0
00 00 0 0000 000 0 00 0 0000 0000 0 0 0 0 0 0 0000 0 0 0 0000 000 000 000
0000 00 00 0 00 0
Testy
Test aktivity faktoru Vila
Vhodný test pro testování aktivity faktoru Vila a pro výběr vhodných variant faktoru Vila může být proveden jako jednoduchý předběžný in vitro test:
Test in vitro hydrolýzy
Přírodní (nekultivovaný druh) faktor Vila a varianta faktoru Vila (oba jsou dále odkazovány jako „faktor Vila) byly testovány na specifickou aktivitu. Mely být také testovány paralelně pro přímé porovnání jejich specifických aktivit. Test byl proveden na mikrotitrační desce (MaxiSorp, Nunc, Dánsko). Chromogenní substrát D-Ile-Pro-Arg-pnitroanilid koncentrace (S-2288, Chromogenix, Švédsko) (konečná mM) byl přidán k faktoru Vila (konečná koncentrace 100 nM) v 50 mM Hepes, pH 7,4, obsahující 0,1 M
NaCl, 5 mM CaCl2 Absorbance byla a 1 mg/ml hovězího albuminového séra.
nm kontinuálně měřena při 405 pomocí SpectraMax™ 340 deskového čtecího zařízení (Molecular Devices, USA). Absorbance vyvinutá během 20 minutové inkubace, po odečtení absorbance ve slepé jamce neobsahující enzym, byla použita ke kalkulaci poměru mezi aktivitami variantu a nekultivovaného druhu faktoru Vila:
Poměr = (A405 nm varianta faktoru Vila) / (A40s nm nekultivovaný druh faktoru Vila)
Na základě tohoto výrazu by měla být identifikována varianta faktoru Vila s aktivitou srovnatelnou nebo vyšší než je aktivita přírodního faktoru Vila; jako je, například varianta, u které je poměr mezi aktivitou variantu a aktivitou ·· ·· · ·♦ · ···· »·· · v · • · · · · · · ···· • · · · · · ···· · · · »«·· ··· ······
6/ ·· ···· ·· · ·· « přírodního faktoru VII (nekultivovaný druh FVII) okolo, oproti výše uvedenému 1,0.
Aktivita faktoru Vila nebo varianty faktoru Vila může být také měřena s použitím fyziologického substrátu jako je faktor X, vhodně při koncentraci 100 až 1000 nM, přičemž generovaný faktor Xa byl měřen po přidání vhodného chromogenního substrátu (například S-2765). Test aktivity může probíhat při fyziologické teplotě.
Test in vitro proteolýzy
Přírodní (nekultivovaný druh) faktor Vila a varianta faktoru VII (oba jsou dále odkazovány jako „faktor Vila) byly paralelně testovány pro přímé srovnání jejich specifických aktivit. Test byl proveden na mikrotitrační desce (Maxisorp, Nunc, Dánsko) . Faktor Vila (10 nM) a faktor X (0,8 μΜ) v 100 μί 50 mM Hepes, pH 7,4, obsahující 0,1 M NaCl, 5 mM CaCl2 a 1 mg/ml hovězího albuminového séra byly inkubovány 10 minut. Štěpení faktoru X bylo poté zastaveno přídavkem 50 μί 50 mM Hepes, pH 7,4, obsahující 0,1 M NaCl, 2 0 mM EDTA a 1 mg/ml hovězího albuminového séra. Množství generovaného faktoru Xa bylo měřeno přídavkem chromogenního substrátu
Z-D-Arg-Gly-Arg-p-nitroanilidu (S-2765, Chromogenix, Švédsko), konečná koncentrace 0,5 mM. Absorbance byla měřena při 405 nm kontinuálně s pomocí čtecího zařízení SpectraMax™ 340 (Molecular Devices USA) . Absorbance vyvinutá během 10 minut, po odečtení absorbance slepého otvoru neobsahujícího FVIIa, byla použita k výpočtu poměru mezi proteolytickou aktivitou varianty a nekultivovaného druhu Vila:
Poměr = (A405 nm varianta faktoru Vila) / (A405 „ nekultivovaný druh faktoru Vila)
4
4 4
4 4 4
4 4 4444
4 4
4 ·· • 4 4 4
4 ·
4 4 4
4 4
4444
4
4 4 • 4 4 4 • 4 4444
4 4
4
Na základě tohoto výrazu by měla být identifikována varianta faktoru Vila s aktivitou srovnatelnou nebo vyšší než je aktivita přírodního faktoru Vila; jako je, například, varianta, kde je poměr mezi aktivitou varianty a aktivitou přírodního faktoru VII (nekultivovaný druh FVII), oproti výše uvedenému 1,0.
Test tvorby trombinu
Schopnost faktoru VII nebo faktoru VII příbuzných polypeptidů nebo faktoru XI nebo faktoru XI příbuzných polypeptidů (například variantů) tvořit trombin může být měřena testem obsahujícím všechny významné koagulační faktory a inhibitory ve fyziologických koncentracích a aktivovaných krevních destičkách (jak je popsáno na straně 543, v Monroe a kol., (1997) Brit. J. Haematol. 99, 542 až 547, který je zahrnut do literatury).
Test aktivity faktoru XI
Vhodný test pro testování amidolytické aktivity faktoru XI a pro výběr vhodných variant faktoru XI může být proveden jako jednoduchý in vitro test s použitím chromogenních substrátů jak je popsáno, například v Gailani a kol., (Blood 97(10):3117 až 3122, 2001) („FXI chromogenní test).
Test biologické aktivity faktoru XI může být vykonán jako jednoduchý in vitro test, měřící aktivaci faktoru IX na IXa jak je popsáno, například, v Gailani a kol., (Blood 97(10):3117 až 3122, 2001).
• · • · • · · • · · · 4
Test aktivity faktoru VIII
Vhodný test pro testování aktivity faktoru VIII a pro poskytnutí prostředků pro výběr vhodných variant faktoru VIII pro použití v předkládaném vynálezu, může být proveden jako jednoduchý in vitro test jak je popsáno, například v Kirkwood TBL, Rizza CR, Snape TJ, Rhymes IL, Austen DEG. Identification of sources of interlaboratory variation in factor VIII assay. B. J. Haematol 1981;37, 559 až 68; nebo v Kessels a kol., British Journal of Haemotology, Vol. 76 (Suppl. 1), strana 16 (1990)). Aktivita faktoru VIII může být také měřena dvoukrokovým chromogenním testem založeným na amidolytické aktivitě generovaného FXa (Wagenvoord akol., 1989, Haemostasis, 19(4):196 až 204).
Biologická aktivita faktoru VIII může být také kvantifikována měřením schopnosti preparátu napravit dobu srážení faktoru VIII deficitní plazmy, například jak je popsáno v Nilsson a kol., 1959. (Nilsson IM, Blombaeck M, Thilen A, von Francken I., Carriers of haemophillia A-A laboratory study, Acta Med Scan 1959; 165:357). V tomto testu je biologická aktivita vyjádřena jako jednotky/ml plazmy (1 jednotka odpovídá množství faktoru VIII přítomného v normální plazmě.
Hlediska předkládaného vynálezu
Hledisko 1: Farmaceutický prostředek obsahující faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid.
Provedení 2: Prostředek podle hlediska 1, přičemž faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid je faktoru VII příbuzný polypeptid.
• · · · · · · ···· • · · ·· ······· ····· ··· ······ /(J ······ ·· · ·· ·
Provedení 3: Prostředek podle hlediska 1, přičemž faktor Vila je lidský faktor Vila.
Provedení 4: Prostředek podle hlediska 1 nebo hlediska 3, přičemž faktor Vila a faktor XI je rekombinant lidského faktoru Vila a rekombinant lidského faktoru XI.
Provedení 5 : | Prostředek podle | kteréhokoliv | hlediska | 1 | ||
až | 4, | přičemž faktor | XI je faktor XI krevních destiček. | |||
Provedení 6: | Prostředek podle | kteréhokoliv | hlediska | 1 | ||
až | 5, | přičemž faktor | XI je aktivovaný | faktor XI. | ||
Provedení 7: | Prostředek podle | kteréhokoliv | hlediska | 1 | ||
v az | 6, | přičemž prostředek dále obsahuje | TFPI inhibitor. | |||
Provedení 8: | Prostředek podle | kteréhokoliv | hlediska | 1 | ||
až | 7, | přičemž prostředek dále obsahuje | faktor VIII. |
Hledisko 2: Souprava zahrnující ošetření krvácení, obsahuj ící
1) účinné množství faktoru Vila a farmaceuticky přijatelný nosič v první jednotce dávkovači formy;
2) účinné množství faktoru XI a farmaceuticky přijatelný nosič ve druhé jednotce dávkovači formy; a
3) zásobní prostředky obsahující první a druhou dávkovači formu.
Provedení 10: Prostředek podle hlediska 2, obsahující
1) účinné množství faktoru Vila a farmaceuticky přijatelný nosič v první jednotce dávkovači formy;
2) účinné množství faktoru XI a farmaceuticky přijatelný nosič ve druhé jednotce dávkovači formy;
3) účinné množství TFPI .inhibitoru a farmaceuticky přijatelný nosič ve třetí jednotce dávkovači formy; a
4) zásobní prostředky obsahující první, druhou a třetí dávkovači formu.
Hledisko 3: Souprava zahrnující ošetření krvácení, obsahuj ící ·· · • · • ·
1) účinné množství faktoru Vila a TFPI inhibitoru a farmaceuticky přijatelný nosič v první jednotce dávkovači formy;
2) účinné množství faktoru XI a farmaceuticky přijatelný nosič ve druhé jednotce dávkovači formy;
3) zásobní prostředky obsahující první a druhou dávkovači formu.
Hledisko 4: Souprava zahrnující ošetření krvácení obsahuj ící
1) účinné množství faktoru Vila a farmaceuticky přijatelný nosič v první jednotce dávkovači formy;
2) účinné množství faktoru XI a TFPI inhibitoru a farmaceuticky přijatelný nosič ve druhé jednotce dávkovači formy; a
3) zásobní prostředky obsahující první a druhou dávkovači formu.
Provedení 9: Souprava podle kteréhokoliv provedení 2 až 4, dále obsahující faktor VIII, buď formulovaný v oddělené dávkovači formě nebo již zahrnutý v jednotné dávkovači formě, také obsahující jednu nebo více sloučenin vybraných ze seznamu faktorů Víla, XI nebo TFPI inhibitor.
Hledisko 6: Použití faktoru Víla v kombinaci s faktorem XI pro výrobu léčiv pro ošetření krvácení u objektu.
Hledisko 7: Použití faktoru Vila v kombinaci s faktorem XI pro výrobu léčiv pro snížení doby srážení u objektu.
Hledisko 8: Použití faktoru Vila v kombinaci s faktorem XI pro výrobu léčiv pro prodloužení doby rozpouštění sraženiny v normální savčí plazmě.
Hledisko 9: Použití faktoru Víla v kombinaci s faktorem XI pro výrobu léčiv pro zvýšení pevnosti sraženiny v savčím obj ektu.
Hledisko 10: Použití faktoru Víla v kombinaci s faktorem XI pro výrobu léčiv pro posílení tvorby fibrinové zátky v normální savčí plazmě.
·· · • φ • · · · · · · · · · · • · · · · · ···· « · · ····
-7Ο ··· ······ /2 ······ · · · · · ·
Hledisko 11: Způsob posílení tvorby fibrinové zátky u objektu, obsahující podání účinného množství faktoru Vila v kombinací s účinným množstvím faktoru XI.
Hledisko 12: Způsob ošetření krvácení u objektu, obsahující podání účinného množství faktoru Vila v kombinaci s účinným množstvím faktoru XI.
Provedení | 10 : | Způsob podle hlediska 19 nebo 20, přičemž | |
faktor | Vila a | faktor XI jsou podány v jednotné dávkovači | |
formě. | Provedení | 11: | Způsob podle hlediska 19 nebo 20, přičemž |
faktor Vila a faktor XI jsou podány následně.
Předkládaný vynález je dále ilustrován následujícími příklady, které by neměly být chápány jako omezení rozsahu vynálezu. Charakteristiky uvedené ve známost v předcházejícím popisu a následujících příkladech mohou, i odděleně, a v jakékoliv jejich kombinaci být materiálem pro realizaci vynálezu v jeho odlišných formách.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Vylepšení hemostatické stability sraženiny kombinací koagulačních faktorů Vila a XI
Způsoby
Test rozpouštění sraženiny: Normální lidská plazma byla 10 x zředěna tlumivým roztokem (20 mM Hepes, 150 ml NaCl, 5 mM CaCl, pH 7,4) obsahujícím Innovin (Dade Behring, 2000 x zředěný) a poté byl rFVIIa (Novo Nordisk A/S, Bagsvaered, Dánsko; různé koncentrace) a t-PA (American Diagnostics, 8 nM) přidán do 96 otvorů ELISA desky a v časovém intervalu byl měřen zákal při 650 nm při teplotě místnosti. Bylo ukázáno, že byl obsažen přečištěný lidský FXI (Haematologic Technologies, různé koncentrace).
Rotační tromboelastografiie (roTEG): Měření bylo provedeno v citrátové lidské plazmě, ke které bylo přidáno bylo 5 nM t-PA. Byl analyzován efekt přídavku 1 nM FVIIa samotného nebo v kombinaci s 30 nM FXI (Haemostatic
Technologies). Srážení bylo iniciováno přídavkem Innovinu (konečná koncentrace 2000 x zředěná, Dade Behring # 526945) a vápníku (konečná koncentrace 15 mM) v 20 mM Hepes, 150 mM NaCI, pH 7,4 tlumívého roztoku.
Výsledky
Test rozpouštění sraženiny: Přídavek FVIIa vedl k na dávce závislém prodloužení doby rozpouštění sraženiny (Obr.
1) . Tento efekt byl optimální při 10 nM FVIIa. V přítomnosti 10 nM FVIIa vedl přídavek FXI k dalšímu prodloužení doby rozpouštění sraženiny (Obr. 2) . Efekt byl na dávce závislý a optimální při 30 nM FXI.
Tromboelastografie: roTEG měření byla použita k analýze efektu FVIIa a FXI na maximální pevnost sraženiny (MCF), stejně tak jako na odolnost srážení k t-PA zprostředkovanému rozpouštění. Před přidáním FVIIa/FXI byla MCF 25 mm a doba potřebná pro rozpuštění poloviny sraženiny byla 12,3 minut (Obr. 3). Přídavek FXI (30 nM) nezměnil MCF, ale prodloužil poločas doby rozpouštění sraženiny na 16,1 minut (Obr. 3). Obdobně, přídavek FVIIa (1 nM) vedl k ochraně sraženiny před t-PA zprostředkovanou fibrinolýzou (poločas doby rozpouštění sraženiny; 16,7 minut) bez jakéhokoliv efektu na MCF (Obr. 3). Ačkoli přidání FVIIa (1 nM) společně s FXI (30 nM) zvýšilo MCF (29 mm) , stejně tak jako poločas doby rozpouštění sraženiny (24,2 minut, Obr. 3).
• · ·» · · · · · * ···<· ··· · · · • · · · · · · ···· • · · · · · ···· · · · ···· ··· ··· · · · ······ ·· * ·· ·
Závěr
Tyto výsledky demonstrují, že přídavek FVIIa a FXI k plazmě v synergickém módu vylepšuje mechanickou pevnost sraženiny a odolnost vůči t-PA zprostředkované fibrinolýze.
Příklad 2: | Zkrácení doby srážení v ne | irmální lidské plazmě rů Vila a XI | ||
kombinací koagulačních fakto | ||||
Způsoby Test srážení: Podíl (55 μί) | rFVIIa | (1 | pg/ml) | |
samostatně, | FXI (25 nM) samostatně nebo | rFVIIa a | FXI | v 50 mM |
trubičce a | 100 mM NaCI, 2 mM EDTA, 1% | BSA pří | pH | 7,2 byly |
inkubovány | 5 minut a poté byl přidán | 55 μί podíl | normální |
lidské plazmy (NHP) a následovalo srážení po dobu 400 sekund v ACL srážecím přístrojí s použitím standardního APTT programu.
Výsledky
Test srážení: Před přidáním rFVIIa nebo FXI nedošlo ke srážení NHP během 400 sekund. Přídavek FVIIa (1 pg/ml) snížil· dobu srážení na 159,4 + 1,4 sekund (Obr. 4). Přídavek obou, jak FVIIa (1 pg/ml) tak i FXI (25 nM) snížil dobu srážení na 95,0 ± 1,4 sekund (Obr. 4).
Závěr
Tyto výsledky demonstrují, že přídavek FVIIa a FXI k plazmě v synergickém módu zkracuje dobu srážení v NHP.
Claims (9)
1) Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a polypeptid.
faktor XI nebo faktoru
XI příbuzný
2) Prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid je faktoru VII příbuzný polypeptid.
3) Prostředek podle nároku 2, vyznačující se tím, že faktoru VII příbuzný polypeptid je varianta sekvence aminokyselin faktoru Vila.
4 4 4 4 4 4 4444 4 4 4 444
444 444 444
444444 44 4 44 4
15) Prostředek podle nároku se tím, že faktor XI plazmatického faktoru XI.
vy znač rekombinantem u j í c í lidského
17) Prostředek podle kteréhokoliv nároků 1 až 16, vyznačující se tím, že faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid jsou přítomny v poměru hmotností mezi 100:1 a 1:100 (hmotnostně faktor VII:faktor XI).
18) Prostředek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 17, vyznačující se tím, že prostředek dále obsahuje farmaceuticky přijatelnou inertní substanci k přenosu léčebné látky vhodnou pro injekce nebo infuse, obzvláště injekce.
19) Souprava zahrnující ošetření krvácení, vyznačující se tím, že obsahuje
a) účinné množství preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidu a farmaceuticky přijatelný nosič v první jednotce dávkovači formy;
b) účinné množství preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidu a farmaceuticky přijatelný nosič ve druhé jednotce dávkovači formy; a
c) zásobník zahrnující první a druhou dávkovači formu.
20) Souprava podle nároku 19, vyznačující se tím, že faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid je faktoru VII příbuzný polypeptid.
• · ···· φφ • φ ·Φφ· φ φ ·· · • ♦ · • · · * • · · φ · · · φφφ
21) Souprava podle nároku 20, vyznačující se tím, že faktoru VII příbuzné polypeptidy jsou varianty aminokyselinových sekvencí faktoru Vila.
22) Souprava podle nároku 20 nebo 21, vyznačující se tím, že poměr mezi aktivitou faktoru VII příbuzného polypeptidů a aktivitou přirozeného lidského faktoru Víla (nekultivovaného druhu FVIIa) je alespoň 1,25, pokud bylo testováno „Testem in vitro hydrolýzy, jak je popsáno v předkládaném popisu.
23) Souprava podle nároku 19, vyznačující se tím, že faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid je faktor VII.
24) Souprava podle nároku 23, vyznačující se tím, že faktor VII je lidský faktor VII.
25) Souprava podle nároku 24, vyznačující se tím, že polypeptid faktoru VII je rekombinantem lidského faktoru VII.
26) Souprava podle kteréhokoliv z nároků 19 až 20, vyznačující se tím, že faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid je ve své aktivované formě.
27) Souprava podle nároku 26, vyznačující se tím, že faktor VII je rekombinantem lidského faktoru
Vila
28) Souprava podle kteréhokoliv nároků 19 až 27, vyznačující se tím, že faktor XI nebo
AA A
A A
A A
A A
AAA
A
A
A
A
A
A
A
A A
A A A
A AAA
A A A A A A AAA A A A faktoru XI příbuzný polypeptid je faktoru XI příbuzný polypeptid.
29) Souprava podle nároku 28, vyznačující se tím, že faktoru XI příbuzný polypeptid je varianta aminokyselinové sekvence faktoru XI.
30) Souprava podle nároku 28 nebo 29, vyznačuj ící se tím, že poměr mezi aktivitou faktoru XI příbuzného polypeptidů a aktivitou přirozeného lidského plazmatického faktoru XI (nekultivovaného druhu FVIIa) je alespoň 1,25, pokud bylo testováno „FXI chromogenním testem, jak je popsáno v předkládaném popisu.
31) Souprava podle kteréhokoliv z nároků 19 až 27, vyznačující se tím, že faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid je faktor XI.
32) Souprava podle nároku 31, vyznačující se tím, že faktor XI je lidský faktor XI.
33) Souprava podle nároku 32, vyznačující se tím, že faktor XI je rekombinantem lidského plazmatického faktoru XI.
34) Souprava podle nároku 32, vyznačující se tím, že faktor XI je rekombinantem krevních destiček lidského faktoru XI.
35) Souprava podle kteréhokoliv z nároků 19 až 34, vyznačující se tím, že faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid jsou přítomny v poměru hmotností mezi 100:1 a 1:100 (hmotnostně, faktor VII:faktor XI).
·* φφ φφ · φφ φ • ΦΦΦ · φ · · φ φ • · φ φ··· φφφφ • · φφφφ φφφφ φ φ φ φφφφ • ΦΦ φφφ φφφ
80 ·· ···· ·· · ·· ·
36) Použití faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů v kombinaci s faktorem XI nebo faktoru XI příbuzným polypeptidem pro výrobu léčiv pro ošetření krvácení u objektu.
37) Použití prostředku podle kteréhokoliv z nároků 1 až 18, pro výrobu léčiv pro ošetření krvácení u objektu.
38) Použití podle nároku 36 nebo 37, přičemž léčivo snižuje dobu srážení.
39) Použití podle nároku 36 nebo 37, přičemž léčivo prodlužuje dobu rozpouštění sraženiny.
40) Použití podle nároku 36 nebo 37, přičemž léčivo zvyšuje pevnost sraženiny.
41) Použití podle kteréhokoliv z nároků 36 až 40, přičemž léčivo je formulováno pro injekce nebo infuse, obzvláště inj ekce.
42) Použití podle kteréhokoliv z nároků 36 až 41, přičemž krvácení je důsledkem traumatu, operativního zákroku nebo nižšího počtu nebo aktivitou krevních destiček.
43) Použití podle kteréhokoliv z nároků 36 až 42, přičemž léčivo je ve formě jednotné dávky.
44) Použití podle kteréhokoliv z nároků 36 až 42, přičemž léčivo je připraveno ve formě první jednotky dávkovači formy, obsahující preparát faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a druhé jednotky dávkovači formy,
faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů podle potřeby objektu, přičemž první a druhé množství dohromady je účinné pro ošetření krvácení.
faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů podle
příbuzného polypeptidů a druhé množství preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů podle potřeby objektu, přičemž první a druhé množství dohromady je účinné pro zvýšení zástavy krvácení.
48) Způsob prodloužení doby rozpouštění sraženiny u objektu, vyznačující se tím, že se podá první množství preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a druhé množství preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů podle potřeby objektu, přičemž první a druhé množství *
·· φφ
99 9 ·· * • · 9 9 9
9 9 9 · · Φ · > ΦΦΦ· Φ Φ ΦΦΦΦΦ
Φ Φ 9 9 9
ΦΦ Φ ΦΦ · dohromady je účinné pro prodloužení doby sraženiny.
rozpouštění
49) Způsob zvýšení pevnosti sraženiny u objektu, vyznačující se tím, že se podá první množství preparátu faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a druhé množství preparátu faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů podle potřeby objektu, přičemž první a druhé množství dohromady je účinné pro zvýšení pevnosti sraženiny.
50) Způsob podle kteréhokoliv z nároků 45 až 49, vyznačující se tím, že se podá faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid v jednotné dávkovači formě.
51) Způsob podle kteréhokoliv z nároků 45 až 49, vyznačující se tím, že se podá faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid a faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid ve formě první dávkovači formy obsahující preparát faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a druhé dávkovači formy obsahující preparát faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů.
52) Způsob podle nároku 51, vyznačující se tím, že se podá první dávkovači forma a druhá dávkovači forma s časovou prodlevou ne větší než 15 minut.
Souprava vyzná zahrnuj ící čující se ošetření krvácení, tím, že obsahuje
53) ··
4 4
4) Prostředek podle nároku 2 nebo 3, vyznačuj ící se t í m, že poměr mezi aktivitou faktoru VII příbuzného polypeptidu a aktivitou přirozeného lidského faktoru Vila (nekultívovaného druhu FVIIa) je alespoň 1,25, pokud byl testován „Testem in vitro hydrolýzy, jak je popsáno v předkládaném popisu.
5) Prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že faktor VII polypeptid je faktor VII.
nebo faktoru VII příbuzný
6) Prostředek podle nároku 5, vyznačující se tím, že faktor VII je lidský faktor VII.
7) Prostředek podle nároku 6, vyznačující se tím, že faktor VII je rekombinant lidského faktoru
VII.
8) Prostředek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že faktor VII nebo faktoru VII příbuzný polypeptid je ve své aktivované formě.
9) Prostředek podle nároku 8, vyznačuj ící se tím, že faktor VII je rekombinant lidského faktoru Vila.
10) Prostředek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, vyznačující se tím, že faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid je faktoru XI příbuzný polypeptid.
11) Prostředek podle nároku 10, vyznačující se t í m, že faktoru XI příbuzný polypeptid je varianta sekvence aminokyselin faktoru XI.
12) Prostředek podle nároku 10 nebo 11, vyznačující se t í m, že poměr mezi aktivitou faktoru XI příbuzného polypeptidu a aktivitou přirozeného lidského plazmatického faktoru XI (nekultivovaného druhu FVIIa) je alespoň 1,25, pokud bylo testováno „FXI chromogenním testem, v předkládaném popisu.
jak je popsáno
13) Prostředek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, vyznačující se tím, že faktor XI nebo faktoru XI příbuzný polypeptid je polypeptid faktoru XI.
14) Prostředek podle nároku 13, vyznačující se t í m, že faktor XI je lidský faktor XI.
14, je • 4 44 44 4 44 4
4444 444 444 ·· 4 4444 4444
9 9 ·· • · · ···· · · · ···· • · · 9 9 · ·· · ·· ·
a) účinné množství faktoru VII nebo faktoru VII příbuzného polypeptidů a účinné množství faktoru XI nebo faktoru XI příbuzného polypeptidů a farmaceuticky přijatelný nosič v jednotné dávkovači formě; a
b) zásobník zahrnující jednotnou dávkovači formu.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DKPA200101127 | 2001-07-20 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ200439A3 true CZ200439A3 (cs) | 2005-03-16 |
Family
ID=8160632
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ200439A CZ200439A3 (cs) | 2001-07-20 | 2002-07-19 | Farmaceutický prostředek obsahující polypeptidy faktoru Vll a polypeptidy faktoru XI |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1411973A1 (cs) |
JP (1) | JP2004534855A (cs) |
KR (1) | KR20040015821A (cs) |
CN (1) | CN1304050C (cs) |
AU (1) | AU2002354846B2 (cs) |
BR (1) | BR0211256A (cs) |
CA (1) | CA2452677A1 (cs) |
CZ (1) | CZ200439A3 (cs) |
HU (1) | HUP0400976A3 (cs) |
IL (1) | IL159622A0 (cs) |
MX (1) | MXPA04000415A (cs) |
NO (1) | NO20040235L (cs) |
PL (1) | PL369077A1 (cs) |
RU (1) | RU2298416C2 (cs) |
WO (1) | WO2003007983A1 (cs) |
ZA (1) | ZA200400012B (cs) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ATE411041T1 (de) | 1999-07-14 | 2008-10-15 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Verwendung von fviia oder eines gewebefaktoragonisten zur regulierung der genexpression und zellmigration oder chemotaxis |
CN101870729A (zh) | 2003-09-09 | 2010-10-27 | 诺和诺德医疗保健公司 | 凝固因子ⅶ多肽 |
BRPI0416461A (pt) * | 2003-11-20 | 2007-03-06 | Novo Nordisk Healthcare Ag | método para o tratamento de episódios de sangramento, formulação farmacêutica, e, uso de um polipeptìdeo fxi |
EP1713496A1 (en) * | 2004-02-05 | 2006-10-25 | Novo Nordisk Health Care AG | Use of factor viia for treating trauma |
WO2006128497A1 (en) * | 2005-06-01 | 2006-12-07 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical formulation of factor xi |
CA2747721C (en) | 2008-12-19 | 2021-07-20 | Baxter International Inc. | Tfpi inhibitors and methods of use |
NZ603028A (en) | 2010-03-19 | 2014-11-28 | Baxter Healthcare Sa | Tfpi inhibitors and methods of use |
JP6000259B2 (ja) * | 2010-10-06 | 2016-09-28 | メドイミューン・リミテッドMedImmune Limited | 止血障害治療用第ii因子およびフィブリノーゲン |
JP2015514070A (ja) | 2012-03-21 | 2015-05-18 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドBaxter International Incorp0Rated | Tfpi阻害剤および使用方法 |
KR20160111520A (ko) * | 2014-01-31 | 2016-09-26 | 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. | 디히드로프테리디논 유도체 및 그의 용도 |
EP3307728A4 (en) | 2015-06-12 | 2019-07-17 | Dana Farber Cancer Institute, Inc. | ASSOCIATION THERAPY USING TRANSCRIPTION INHIBITORS AND KINASE INHIBITORS |
CR20180336A (es) | 2015-11-25 | 2018-08-06 | Dana Farber Cancer Inst Inc | Inhibidores de bromodominio bivalentes y usos de los mismos |
US11958911B2 (en) | 2017-02-10 | 2024-04-16 | Shanghai Benemae Pharmaceutical | Anti-coagulation factor XI antibody |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS59116213A (ja) * | 1982-12-24 | 1984-07-05 | Unitika Ltd | エアゾ−ル組成物 |
JPH0780783B2 (ja) * | 1985-11-26 | 1995-08-30 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 出血障害の治療のための第▲VII▼a因子を含有する治療組成物 |
US5580560A (en) * | 1989-11-13 | 1996-12-03 | Novo Nordisk A/S | Modified factor VII/VIIa |
FR2676231A1 (fr) * | 1991-05-07 | 1992-11-13 | Aetsrn | Concentre de facteur xi de la coagulation sanguine a haute activite specifique, approprie a usage therapeutique et son procede de preparation. |
AU2001287550B2 (en) * | 2000-09-13 | 2007-03-22 | Novo Nordisk Health Care Ag | Human coagulation factor VII variants |
-
2002
- 2002-07-19 PL PL02369077A patent/PL369077A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2002-07-19 BR BR0211256-6A patent/BR0211256A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-07-19 CN CNB028185390A patent/CN1304050C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-07-19 KR KR10-2004-7000911A patent/KR20040015821A/ko not_active Application Discontinuation
- 2002-07-19 RU RU2004105031/15A patent/RU2298416C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-07-19 MX MXPA04000415A patent/MXPA04000415A/es unknown
- 2002-07-19 CA CA002452677A patent/CA2452677A1/en not_active Abandoned
- 2002-07-19 WO PCT/DK2002/000505 patent/WO2003007983A1/en not_active Application Discontinuation
- 2002-07-19 IL IL15962202A patent/IL159622A0/xx unknown
- 2002-07-19 AU AU2002354846A patent/AU2002354846B2/en not_active Ceased
- 2002-07-19 CZ CZ200439A patent/CZ200439A3/cs unknown
- 2002-07-19 HU HU0400976A patent/HUP0400976A3/hu unknown
- 2002-07-19 EP EP02750844A patent/EP1411973A1/en not_active Withdrawn
- 2002-07-19 JP JP2003513588A patent/JP2004534855A/ja active Pending
-
2004
- 2004-01-05 ZA ZA200400012A patent/ZA200400012B/en unknown
- 2004-01-19 NO NO20040235A patent/NO20040235L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2003007983A1 (en) | 2003-01-30 |
CN1304050C (zh) | 2007-03-14 |
KR20040015821A (ko) | 2004-02-19 |
EP1411973A1 (en) | 2004-04-28 |
AU2002354846B2 (en) | 2007-08-02 |
HUP0400976A2 (hu) | 2004-08-30 |
ZA200400012B (en) | 2004-08-17 |
RU2298416C2 (ru) | 2007-05-10 |
PL369077A1 (en) | 2005-04-18 |
RU2004105031A (ru) | 2005-04-20 |
BR0211256A (pt) | 2004-07-27 |
NO20040235L (no) | 2004-03-17 |
CN1556710A (zh) | 2004-12-22 |
IL159622A0 (en) | 2004-06-01 |
CA2452677A1 (en) | 2003-01-30 |
MXPA04000415A (es) | 2004-11-22 |
JP2004534855A (ja) | 2004-11-18 |
HUP0400976A3 (en) | 2006-01-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7125846B2 (en) | Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and factor V polypeptides | |
US20080058266A1 (en) | Pharmaceutical Compositions Comprising Factor VII Polypeptides and Factor XI Polypeptides | |
EP1359936A2 (en) | Combined use of factor vii polypeptides and factor viii polypeptides | |
US20050266006A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and tissue plasminogen inhibitors | |
US7078479B2 (en) | Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and alpha2-antiplasmin polypeptides | |
US20080069810A1 (en) | Pharmaceutical Composition Comprising Factor VII Polypeptides and TAFI Polypeptides | |
AU2002354846B2 (en) | Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and factor XI polypeptides | |
US20070219135A1 (en) | Pharmaceutical Composition Comprising Factor VII Polypeptides and PAI-1 Polypeptide | |
AU2002354846A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and factor XI polypeptides | |
US20030119741A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and aprotinin polypeptides | |
US20080075709A1 (en) | Pharmaceutical Composition Comprising Factor VII Polypeptides And Thrombomodulin Polypeptides | |
US20060025336A1 (en) | Pharmaceutical compositions comprising combinations of factor VII polypeptides and aprotinin polypeptides | |
CZ2004543A3 (cs) | Farmaceutický prostředek obsahující polypeptidy faktoru VII a polypeptidy faktoru V | |
WO2003039590A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising factor vii polypeptides and aprotinin polypeptides | |
AU2002340779A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and factor V polypeptides | |
EP1446145A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising factor vii polypeptides and tafi polypeptides | |
EP1446146A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising factor vii polypeptides and pai-1 polypeptides | |
WO2003039588A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising factor vii polypeptides and tissue plasminogen inhibitors | |
AU2002340778A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and PAI-1 polypeptides | |
WO2003039589A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising factor vii polypeptides and alpha2 -antiplasmin polypeptides | |
WO2003039586A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising factor vii polypeptides and thrombomodulin polypeptides |