KR20020046675A - 바실러스 속 에이치에스비-21 균주가 생산하는키토산아제를 이용한 키토산 올리고당의 제조방법 - Google Patents

바실러스 속 에이치에스비-21 균주가 생산하는키토산아제를 이용한 키토산 올리고당의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 토양에서 분리한 새로운 바실러스 속 HSB-21 균주가 생산하는 키토산아제를 이용하여 키토산 올리고당을 대량생산하는 생산공정에 관한 것으로, (a) 2 내지 30 cps의 점도를 가지는 키토산을 묽은 산용액에 용해시켜 1 내지 10% 키토산 용액을 제조한 후, 키토산아제를 첨가하여 가수분해하고, 효소를 실활시키는 단계,
(b) 상기 (a)에서 얻어진 반응액을 세라믹 필터를 이용하여 미반응 잔사와 미생물을 제거하는 여과단계,
(c) 상기 (b)에서 얻은 여과액을 한외여과막 시스템을 이용하여 분자량별로 분획하거나 감압농축하는 단계,
(d) 상기 (c)에서 얻은 농축액을 열풍건조 또는 동결건조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하며,
본 발명의 제조방법은 단당이 생성되지 않으며, 키토산 올리고당 조성이 우수한 제품을 대량생산할 수 있는 장점이 있다.

Description

바실러스 속 에이치에스비-21 균주가 생산하는 키토산아제를 이용한 키토산 올리고당의 제조방법{Process for Producing Chitooligosaccharide by Chitosanase that Secreted from Bacillus sp HSB-21}
본 발명은 키토산아제를 이용하여 저분자/수용성 키토산 올리고당을 생산하는 제조공정에 관한 것으로, 보다 상세하게는 산용액을 이용하여 용해시킨 키토산 용액을 키토산아제로 처리하여 가수분해를 한 다음 여과, 분획, 농축, 건조, 분쇄공정을 거쳐 생리활성과 생산수율이 높은 고중합도의 저분자/수용성 키토산 올리고당을 제조하는 방법에 관한 것이다.
키토산은 D-글루코사민이 β-1,4 결합으로 연결된 무색, 무취의 천연고분자 다당체로서 젖산, 구연산, 초산 등의 유기산에 용해되어 천연 다당류 중 유일하게 양전하를 가지며, 키틴을 강알칼리나 효소 처리에 의한 방법으로 탈아세틸화 하여 생산된다. 1980년대 중반부터 키토산의 다양한 용도가 산업분야에서 밝혀지기 시작하면서 특정용도 및 응용분야에 부합되는 고유한 물성을 갖는 다양한 종류의 키토산 원료와 그 유도체의 개발이 활기를 띠기 시작하였다. 키토산의 주요 용도는 주로 응집제, 중금속 흡착제, 염료폐수 정화제 등의 폐수처리 분야와 토양개량제, 살충제, 식물항바이러스제, 농약 등의 농업분야에서 많이 이용되어 왔으나, 키토산의 장점과 다양한 특성이 밝혀지면서 그 용도는 식품과 음료 응용분야, 보건위생 응용분야, 화장품 응용분야, 섬유관련 응용분야, 의약품 응용분야 등으로 더욱 확대되고 고급화되어 가고 있다.
특히, 건강식품 분야, 식음료 분야, 화장품 분야, 보건위생 분야, 의약품 분야에서 키토산이 사용되는 경우에는 생리활성기능을 나타내는 특정 분자량 범위를 가지면서 중성의 물에 쉽게 용해되어 점도를 상승시키지 않는 저분자/수용성 키토산 올리고당의 개발이 절실히 요구되고 있다.
건강식품 분야의 경우 콜레스테롤 저하, 면역기능 강화, 간 기능 강화, 혈당 조절 작용, 혈압 상승 억제 등의 생리활성을 보여주는 경우가 대부분 저분자량 영역이며 소화기관내 흡수력을 증대시키기 위해서는 분자량이 적은 수용성 키토산 올리고당이 바람직하다고 평가되고 있다. 또한, 피부노폐물 제거, 탁월한 보온, 보습 효과, 항균성, 피부세포의 활성화등 화장품의 원료로서도 탁월한 기능이 밝혀지면서 샴푸, 린스, 헤어스프레이, 헤어젤, 크림, 입욕제, 팩, 세안제 등에 응용되고 있다. 따라서 피부 내부로의 침투를 용이하게 하고 분무용 화장품의 경우 점도를 상승시키지 않는 수용성 키토산 올리고당이 절실히 요구되고 있다.
마찬가지로 의약품 분야에서도 약물 전달 시스템(DDS)에서의 응용, 골다공증 및 류마치스 치료제, 체내 중금속 제거제 등의 주사제로 사용할 경우에도 대부분의생리활성기능을 보유하고 물에 쉽게 용해될 수 있는 저분자량의 수용성 키토산 올리고당이 바람직하다고 평가되고 있다.
수용성 키토산 올리고당의 제조방법으로는 산분해법과 효소분해법이 이용되고 있다. 일본국 특개소 60-186504호는 키토산을 염소기체와 반응시켜 저분자량의 수용성 키토산을 제조하는 방법을 제시하고 있으나 이는 제조공정상 지극히 위험한 염소 기체를 사용한다는 문제점을 가지고 있다.
일본국 특개소 62-184002호에서는 아질산나트륨과 초산을 사용하여 저분자량의 수용성 키토산을 제조하는 방법을 제시하고 있다. 그러나 아질산염 수용액이 흡수된 키토산에 초산을 가하면 격렬한 발열반응으로 인해 공정상의 위험성이 따르며 키토산 분자쇄의 불규칙한 절단이 발생할 우려가 있다.
일본국 특개소 63-60701에서는 아스코르빈산을 이용하여 저분자량의 수용성 키토산을 제조하는 방법을 제안하고 있으나, 얻어지는 수용성 키토산의 분자량이 10만 이상으로 너무 높고 고가의 아스코르빈산이 사용되고 있다는 점은 경제성에서 매우 불리한 것으로 판단된다.
일본국 특개평 2-22301호는 키토산을 수용액에 분산시킨 다음 과산화수소를 적가하고 일정 온도에서 일정시간 가열하여 수용성 키토산을 제조하나 반응온도가 90 내지 100oC까지 상승하므로 키토산 자체의 물성변화가 우려된다.
일본국 특개평 2-41307호와 일본국 특개평 5-65302호에서는 키토산, 초산의 혼합 수용액에 황산과 과산화수소를 첨가하여 저분자/수용성 키토산의 제조법을 제시하고 있는데 이는 반응시간이 너무 길고 키토산에 비하여 다량의 초산, 황산, 과산화수소를 사용하고 생성된 수용성 키토산의 회수 과정에서 다량의 에탄올이 소모되는 재결정 방법을 사용하는 단점을 가지고 있다.
비교적 최근에 공개된 일본국 특개평 5-230104호와 일본국 특개평 6-293801에서는 황산, 초산, 과산화수소의 양이 기존의 방법에 비하여 많이 줄었으며 반응온도도 비교적 저온인 40 내지 60oC에서 저분자/수용성 키토산을 제조하나 일본국 특개평 5-230104호에서는 얻어지는 저분자/수용성 키토산의 분자량이 10,000 이상이며, 일본국 특개평 6-293801에서는 반응시간이 18시간 이상으로 반응시간이 너무 길고 전체 제조공정 시간도 너무 긴 것이 문제점으로 지적되고 있다.
대한민국 특허출원 제 94-19406호, 대한민국 특허출원 제 94-19757호, 대한민국 특허출원 제 95-30569호에서는 초산, 과산화수소, 황산의 혼합액이 일정온도에 도달하면 키토산을 가하고, 이 혼합물을 또 일정온도까지 가열하여 저분자 수용성 키토산을 제조하고 있다. 그러나 혼합액에 비중이 낮은 키토산을 첨가하므로 첨가된 키토산이 용액과 잘 섞이지 못하고 용액 위에 분산되어 불균일 반응을 초래하며 또한 초기에 점도 상승으로 인해 교반의 어려움이 문제점으로 지적되고 있다.
또한, 키토산 첨가 후 온도를 다시 상승시키는데 이때 온도 상승시키는 시간이 너무 오래 걸리고 온도 상승시간이 짧으면 격렬한 발열반응이 일어나 원하는 온도 이상으로 온도가 급상승하게 되고 이로 인해 순식간에 격렬한 분자쇄의 절단으로 우리가 원하지 않는 1, 2 량체 올리고머의 다량 생성이 우려된다.
효소적 가수분해법으로는 일본국 특개평 1-56755호에서는 키토산 분해효소인 키토산아제를 이용하여 저분자/수용성 키토산을 제조하고, 일본국 특개평 4-99474호에서는 키토산을 아세트산 수용액에 용해시킨 다음 이 용액에 베르트실리움속 AF 9-V-156에서 얻은 키토산아제를 이용하여 저분자 수용성 키토산 올리고당을 제조하고 있으나, 위 두 경우 모두 효소의 활성이 매우 낮아 제조된 수용성 키토산의 분자량이 너무 크고 분자량 분포도 넓으며 수율이 매우 낮은 것이 가장 큰 문제점으로 지적되고 있다.
본 발명은 상기한 바와 같은 선행기술들의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 키토산을 분해하는 효소인 키토산아제를 이용하여 효과적으로 키토산 올리고당을 제조할 수 있는 공정을 제공하는 것을 목적으로 한다. 즉, 키토산아제를 이용하여 고농도의 키토산을 일정 온도에서 분해하여 고중합도를 가지는 고품질의 키토산 올리고당을 제조하며, 또한 한외여과막을 이용하여 생리활성이 높은 특정 분자량대의 키토산 올리고당만을 분획하는 공정을 개발함으로써 산업적으로 보다 유용하게 사용할 수 있는 수용성 키토산 올리고당을 수득할 수 있는 제조방법을 제공하는데 그 기술적 과제를 두고 있다.
본 발명의 제조방법은 키토산을 키토산아제를 이용하여 가수분해함으로써 단당을 포함하지 않는 키토산 올리고당을 대량생산하기 위한 공정으로, 효소 반응공정 단계, 효소 실활공정 단계, 여과공정 단계, 올리고당 분획공정 단계, 감압 농축공정 단계, 건조공정 단계 및 분쇄공정 단계를 포함한다.
본 발명에서는 키토산을 완전히 용해한 다음 키토산아제를 첨가하여 30 내지 60℃의 온도에서 반응시킨다. 반응온도가 낮을 경우 반응속도가 느려 적합하지 못하며, 너무 높을 경우 효소가 실활된다. 본 발명에서 사용되는 키토산아제는 바실러스 속 HSB-21 균주가 생산하는 효소로 엔도형의 효소이다(대한민국 출원번호 10-2000-0063333).
효소의 반응시간은 6 내지 24시간으로 조절되는 것이 적절하며, 만약 반응시간이 짧을 경우 키토산 올리고당의 함량이 낮아지게 되며, 장시간 반응의 경우 2당 및 3당의 함량이 높아져 제품의 성상에 불리하다. 효소반응이후 반응기의 온도를 상승시켜 효소를 실활시키고, 세라믹 필터를 이용한 미세여과로 미반응 잔사와 미생물을 제거한 다음 한외여과막으로 특정 분자량대의 올리고당을 분획하고, 농축 및 건조 공정을 통해 물을 제거하여 고체상의 키토산 올리고당을 얻는다.
이하, 고중합도의 키토산 올리고당을 제조하는 공정을 단계별로 상세히 설명한다.
*제 1공정 : 효소반응 공정
2 내지 30 cps의 점도를 가지는 키토산과 0.1 내지 6% 젖산용액 또는 0.1 내지 5% 초산용액 또는 0.1 내지 5% 염산용액을 효소반응기에 주입한 다음 30 내지 60℃에서 100 내지 300 rpm으로 교반하면서 혼합하여 키토산을 완전히 용해시켜 1 내지 10%의 고농도 키토산 용액을 제조한다. 상기 키토산 용액에 바실러스 속 HSB-21 균주가 생산하는 키토산아제를 키토산 g당 1 내지 5 unit를 첨가한 다음 30 내지 60℃에서 100 내지 300 rpm으로 교반하면서 효소반응을 진행시킨다.
*제 2공정 : 효소 실활공정
6 내지 24시간의 효소반응을 진행시킨 다음 효소반응기의 온도를 65 내지 90℃로 상승시켜 5 내지 30분동안 유지시켜 효소반응을 종료시킨다.
*제 3공정 : 여과공정
효소 반응액을 pore size 0.1 ㎛의 세라믹 필터를 이용하는 미세여과기를 이용하여 불용분과 미반응 잔사를 제거하고, 미생물 오염원을 완전히 제거한다.
여과공정 이후 제품의 종류에 따라 특정 분자량대의 키토산 올리고당을 제조할 경우 제 4-1공정으로 진행시키며, 분획하지 않은 키토산 올리고당을 생산할 경우 제 4-2공정으로 진행시킨다.
*제 4-1공정 : 올리고당 분획 공정
키토산 올리고당을 분자량대별로 한외여과막 시스템(한계 분자량 : 1,000 내지30,000)을 이용하여 특정 분자량대 키토산 올리고당을 제조한다.
*제 4-2공정 : 감압농축공정
반응 여과액을 10 내지 100 mmHg의 압력에서 35 내지 60℃의 온도를 유지시켜 감압농축을 실시하여 20 내지 50%의 농도를 가지는 키토산 올리고당 용액을 만든다.
*제 5공정 : 건조공정
40 내지 60℃의 온도에서 6 내지 12시간 동안 열풍건조하거나, 동결건조를 실시하여 고체 형태의 제품을 만든다.
*제 6공정 : 분쇄공정
열풍건조나 동결건조를 실시한 다음 분쇄하여 분말상의 제품을 만든다.
이하, 본 발명을 실시예에 의하여 상세히 설명하고자 하나, 본 발명이 이들 실시예에 의하여 한정되는 것으로 간주 되어서는 안된다.
<실시예 1>
점도가 10 cps인 키토산 40 kg과 증류수 1,000 L, 염산(식품첨가용) 14 L를 1.5 톤의 효소반응기에 주입하고 45℃에서 2시간 동안 200 rpm으로 교반하여 키토산을 완전히 용해시켰다. 용해시킨 키토산 용액에 140,000 U의 키토산아제를 첨가하여 45℃에서 200 rpm으로 교반시키면서 12시간 동안 반응시킨 다음 85℃에서 10분동안 반응하여 효소반응을 정지시켰다.
반응액을 pore size 0.1 ㎛의 세라믹 필터를 이용하여 여과한 다음 감압농축기에서 10 mmHg, 37℃의 조건으로 감압농축을 실시하여 수분을 제거시켰다. 농축액을 -70℃에서 동결한 다음 동결건조를 실시하여 고체상의 키토산 올리고당을 얻었으며, 분쇄기를 이용하여 100 mesh로 분쇄하여 분말상의 제품을 생산하였다. 최종 생산된 키토산 올리고당의 수율은 95%였으며, 올리고당 조성은 고속액체크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 분석하여 그 결과를 아래의 (표 1)에 나타내었다.
<실시예 2>
* 키토산의 점도
20 cps의 점도를 가지는 키토산을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 키토산 올리고당을 제조하였다. 최종 수율은 94%였으며, 분석한 키토산 올리고당의 조성을 아래의 (표 1)에 나타내었다.
<실시예 3>
* 젖산의 농도
키토산을 용해시키기 위한 또 다른 산용액으로 젖산을 이용하였다. 젖산 17 L를 사용하였으며, 다른 공정조건은 실시예 1과 동일하였다. 생산수율은 95%였으며,
생산된 키토산 올리고당의 조성을 아래의 (표 1)에 나타내었다.
<실시예 4>
* 키토산의 농도
반응에 이용되는 키토산의 양을 100 kg으로 증가시켜 실시예 1과 동일한 조건에서 공정을 진행시켜 95%의 수율로 키토산 올리고당을 생산하였으며, 생산된 키토산 올리고당의 조성을 분석하여 (표 1)에 나타내었다.
<실시예 5>
* 효소 반응온도
효소반응 온도를 55℃에서 12시간 동안 실시하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하여 키토산 올리고당을 제조하였으며, 그 결과를 (표 1)에 나타내었다.
<실시예 6>
* 키토산 올리고당 분획
실시예 1과 동일한 조건에서 반응시킨 반응액을 세라믹 필터(pore size : 0.1 ㎛)를 이용하여 미반응 잔사를 제거한 다음 한외여과막 시스템을 이용하여 특정 분자량대의 키토산 올리고당을 분획하였다. 한계분자량 1,000인 system을 이용하여 2.5 ml/min/cm2의 유출속도로 분획한 키토산 올리고당의 조성 분석 결과는 아래의 (표 2)와 같았다.
<실시예 7>
* 열풍건조
실시예 1의 조건으로 감압농축까지 진행한 농축액을 50℃에서 8시간동안 열풍건조한 다음 분쇄기를 이용하여 100 mesh로 분쇄하였다. 최종 수율은 95%였으며, 제조된 키토산 올리고당의 조성은 (표 1)에 나타내었다.
실시예 1 실시예 2 실시예 3 실시예 4 실시예 5 실시예 7
키토산 점도(cps) 10 20 10 10 10 10
키토산 첨가량(kg) 40 40 40 100 40 40
증류수 첨가량(L) 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000
산 종류 염산 염산 젖산 염산 염산 염산
산 첨가량(L) 14 14 17 35 14 14
키토산아제첨가량 (U) 140,000 140,000 140,000 245,000 140,000 14,000
효소 반응조건 45℃12시간 45℃12시간 45℃12시간 45℃12시간 55℃12시간 45℃12시간
효소 실활조건 85℃10분 85℃10분 85℃10분 85℃10분 85℃10분 85℃10분
건조방법 동결건조 동결건조 동결건조 동결건조 동결건조 열풍건조
생산수율 (%) 95 94 95 95 96 95
키토산올리고당조성(%) 2∼8당 64.6 60.2 62.9 64.4 75.2 63.9
1당 - - - - - -
2당 3.6 3.1 3.2 3.7 6.0 3.9
3당 8.8 8.1 8.4 8.6 14.4 8.7
4당 14.0 13.3 13.8 14.2 20.4 13.6
5당 14.1 13.6 14.0 13.9 16.2 13.8
6당 9.9 9.0 9.7 10.0 7.5 9.7
7당 6.0 5.5 5.9 6.1 4.8 6.2
8당 8.2 7.6 7.9 7.9 5.9 8.0
(단위 : %)
1당 2당 3당 4당 5당 6당 7당 8당
분획이전 - 3.4 18.5 22.3 20.1 13.1 9.5 13.1
분획이후 - 0.3 1.1 3.3 34.4 22.3 16.3 22.2
분획 이전과 이후 2∼8당 내의 키토산 올리고당 함량 변화
본 발명에 의한 키토산 올리고당의 제조공정은 바실러스 속 HSB-21 균주가 생산하는 키토산아제를 이용하는 효소적 가수분해 방법에 의하여 생산함으로써 단당이 생성되지 않으며, 키토산 올리고당 조성이 우수한 제품을 대량생산할 수 있는 장점이 있다. 또한 종래에 기질 키토산용액의 농도보다 더 높은 고농도의 키토산용액을 이용함으로써 경제성이 높고, pore size 0.1 ㎛의 세라믹 필터를 사용하여 효소반응 후 불용성 미반응 잔사와 미생물을 완전히 제거하여 제품의 균일성 및 안전성을 확보하였으며, 동결건조를 통해 천연물 상태의 물성을 가지는 키토산 올리고당을 생산할 수 있다.
또한 한외여과막을 이용하여 생리활성이 높은 특정 분자량대의 키토산 올리고당만을 분획할 수 있는 기술을 제공할 수 있다. 이와 같은 키토산 올리고당은 건강식품 분야, 식음료 분야, 보건위생 분야, 의약품 분야 등에 다양하게 응용될 수 있다.

Claims (5)

  1. 키토산을 키토산아제로 가수분해하여 키토산 올리고당을 제조함에 있어서,
    (a) 2 내지 30 cps의 점도를 가지는 키토산을 묽은 산용액에 용해시켜 1 내지 10% 키토산 용액을 제조한 후, 키토산아제를 첨가하여 가수분해하고, 효소를 실활시키는 단계,
    (b) 상기 (a)에서 얻어진 반응액을 세라믹 필터를 이용하여 미반응 잔사와 미생물을 제거하는 여과단계,
    (c) 상기 (b)에서 얻은 여과액을 한외여과막 시스템을 이용하여 분자량별로 분획하거나 감압농축하는 단계,
    (d) 상기 (c)에서 얻은 농축액을 열풍건조 또는 동결건조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 키토산 올리고당의 제조방법.
  2. 제 1항에 있어서, (a)단계는 산용액의 농도가 각각 젖산 0.1 내지 6%, 초산 0.1 내지 5%, 염산 0.1 내지 5%이며, 바실러스 속 HSB-21 균주가 생산하는 키토산아제를 이용하고, 효소 반응온도가 30 내지 60℃임을 특징으로 하는 키토산 올리고당의 제조방법.
  3. 제 1항에 있어서, (c)단계에서 한외여과막 시스템을 이용한 유출속도가 1 내지 5 ml/min/cm2임을 특징으로 하는 키토산 올리고당의 제조방법.
  4. 제 1항 또는 제 3항에 있어서, (c) 단계에서 10 내지 100 mmHg의 압력에서 35 내지 60℃의 온도로 감압농축하는 것을 특징으로 하는 키토산 올리고당의 제조방법.
  5. 제 1항에 있어서, (d) 단계에서 40 내지 60℃의 온도에서 6 내지 12시간 열풍건조하거나 동결된 시료를 동결건조하는 것을 특징으로 하는 키토산 올리고당의 제조방법.
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20030061127A (ko) * 2002-01-10 2003-07-18 주식회사 구푸 고혈압 억제능이 강화된 키토올리고당 제조방법과 상기키토올리고당을 함유한 식품
KR100460339B1 (ko) * 2002-01-04 2004-12-04 주식회사 효성 바실러스 속 에이치에스비-21 균주를 이용한 미생물제제 및 그 제조방법, 그리고 이를 이용한 방제방법
CN1332984C (zh) * 2004-03-17 2007-08-22 海南大学 一种制备窄分子量分布壳聚寡糖的方法
CN100447161C (zh) * 2005-05-16 2008-12-31 海南大学 一种微波辅助降解制备窄分子量分布壳聚寡糖的方法
CN100447162C (zh) * 2005-05-16 2008-12-31 海南大学 PACu-AS吸附微波辅助降解制备窄分子量分布壳聚寡糖的方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3181337B2 (ja) * 1991-09-13 2001-07-03 ピアス株式会社 キトサンオリゴ糖混合物の製造方法、及びキチンオリゴ糖混合物の製造方法
JP2000060591A (ja) * 1998-08-26 2000-02-29 Meiji Seika Kaisha Ltd キトサンオリゴ糖の製造方法
JP2000312583A (ja) * 1999-03-01 2000-11-14 Sankyo Co Ltd キトサン分解酵素
KR20020032260A (ko) * 2000-10-26 2002-05-03 조 정 래 토양에서 분리한 바실러스속 에이치에스비-21 균주 및키토산아제

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100460339B1 (ko) * 2002-01-04 2004-12-04 주식회사 효성 바실러스 속 에이치에스비-21 균주를 이용한 미생물제제 및 그 제조방법, 그리고 이를 이용한 방제방법
KR20030061127A (ko) * 2002-01-10 2003-07-18 주식회사 구푸 고혈압 억제능이 강화된 키토올리고당 제조방법과 상기키토올리고당을 함유한 식품
CN1332984C (zh) * 2004-03-17 2007-08-22 海南大学 一种制备窄分子量分布壳聚寡糖的方法
CN100447161C (zh) * 2005-05-16 2008-12-31 海南大学 一种微波辅助降解制备窄分子量分布壳聚寡糖的方法
CN100447162C (zh) * 2005-05-16 2008-12-31 海南大学 PACu-AS吸附微波辅助降解制备窄分子量分布壳聚寡糖的方法

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