KR20020003349A

KR20020003349A - 세포독성물질을 이용한 종양의 치료에 사용되는플라보노이드류를 기초로한 치료 조성물

Info

Publication number: KR20020003349A
Application number: KR1020017000478A
Authority: KR
Inventors: 프랜시스 다로; 로버트 키스; 아맨드 프리드만
Original assignee: 파.세 라퐁; 라보라뜨와르 엘르 라퐁
Priority date: 1998-07-15
Filing date: 1999-07-13
Publication date: 2002-01-12
Also published as: EA200100140A1; CN1139384C; JP2002520356A; FR2781153A1; FR2781153B1; EP1096930A1; ZA200100239B; CN1313765A; WO2000003706A1; CA2337179A1; IL140588A0; BR9912816A; AU4789099A

Abstract

본 발명은 치료적으로 유효한 양의 플라보노이드, 특히 구조식(I)의 화합물들중에서 선택되는 화합물을 포함하는, 종양내 클론원성(clonogenic) 세포들의 증식에 대한 활성을 갖는 조성물에 관한 것으로, 구조식 (I)에서 R₁, R₂, R₃와 R₄, R₅및 R₆는 청구항 2에 정의된 바와 같다. 상기 조성물은 종양의 세포독성물질 처리에 사용되는 것을 목적으로 한다.

Description

세포독성물질을 이용한 종양의 치료에 사용되는 플라보노이드류를 기초로한 치료 조성물{THERAPEUTIC COMPOSITION BASED ON FLAVONOIDS FOR USE IN THE TREATMENT OF TUMORS WITH CYTOTOXIC AGENTS}

본 발명은 암 종양들을 세포독성물질로 처리하는데 플라보노이드류의 화합물을 사용하는 것에 관한 것이다.

암은 종양이 전암성(precancerous) 병변상태에서 악성 변형 상태로 진행됨에 따라 유전성 기능장애가 확대되어지는 체세포 유전자들의 질환으로, 상기 암 종양은 전이성(metastatic)으로 되어 종종 세포독성 약제에 대한 내성을 지니게 된다.

모든 선진국들에서 이루어진 많은 노력, 특히 실험 및 임상 연구에도 불구하고, 다양한 암종들(고형 종양들 및 혈액성 종양들)로 인한 사망율은 여전히 높다. 여러 국가들에서, 암으로 인한 사망은 심장혈관계 질환으로 인한 사망율에 이어 2위를 차지하고 있다.

새롭게 진단되는 암의 경우, 고형 종양들과 혈액성 종양들간의 분포(척수, 혈액, 림프계)는 10개중 9개의 암들이 고형 종양들이라는 것을 나타낸다. 혈액 종양학에서 관찰되는 것(혈액 세포 암의 40~90%가 치유에 성공)과는 반대로, 단지 적은 수의 진행된 또는 산포된 고형 종양들이 단독의 화학요법 처리에 반응한다. 1973년~1992년 사이에 미국에서 암으로 인한 전체 사망율이 증가된 것은 부분적으로는 상기와 같은 이유이다.

불행히도, 수립된 화학요법들 외에 미세관들의 형성을 방해하는(W.P. McGuire 등, Am. Intern. Med. 1989) 탁산류(taxanes)(파클리탁셀(paclitaxel) 및 도세탁셀(docetaxel)), 캄프토테신(camptothecin)-유도된 토포아이소머라아제(topoisomerases) I 억제제들(토포테칸(topotecan) 및 이리노테칸(irinotecan)), 비노렐바인(vinorelbine)(빙카(periwinkle)로부터 유도된 신규한 알칼로이드), 젬시타바인(gemcitabine)(신규한 세포독성 항대사제), 랄티트렉스드(raltitrexed)(티미딜레이트 합성제 억제제) 및 밀테포신(miltefosine)(알킬포스포콜린 족의 대표적인 예)과 같은 단지 신규한 항종양 약제들의 출현에 의해 이러한 경향이 역전될 수는 없다는 것이 분명하다. 또한, 이러한 치료제들은 특이적인 활성이 잘 알려진 독소루비신(doxorubicin), 시스플라틴(cisplatin), 빈크리스틴(vincristine), 메토트렉세이트(methotrexate), 5-플루오로우라실과 같은 약제들 외의 최우선 치료제로서 또는 차선책의 치료제로서 사용된다.

현재 항암제 화학요법의 가장 어려운 문제들 중 하나는 악성 세포들의 다수가 수립된 세포독성물질들에 상당히 내성이라는 사실에 기인한다. 가장 흔하게는, 이러한 상황은 다중저항성 유전자들의 존재 또는 특정 유형의 종양들에서 잦은 유전자적 변이들에 기인한다. 따라서, 암종들의 치료에는 현재 사용되고 있는 방법들을 보완하고, 종양 양(load)의 확장 및 이종성(heterogeneity)에 보다 잘 대적하며 "다중-세포독성 약물" 저항성의 획득을 위한 새로운 시도들이 요구된다.

새로운 시도들 중, 어떤 것들은 이미 확실한 것들이다. 그러한 것들은 유전자 요법이나 면역요법 외에 세포자멸사(apoptosis)의 유도와 종양 맥관형성 (angiogenesis) 억제 및 전이 진행의 억제의 경우들이다.

본 발명자들은 다른 접근방식에 관심을 가졌다. 원하는 목적은 두가지의 유익한 효과:

1) 세포독성 활성을 증가시켜 효능을 증가시키는 효과 및,

2) 이후 항종양 효능의 증대 유도가 일어날 수 있어, 투여량을 감소시켜 특정 부작용들의 빈도 및 심각성을 감소시키는 효과를 달성하기 위하여 종양 세포군이 대조 항암제 처리에 보다 민감하도록 만드는 것이었다.

이러한 전략은 항종양 능력이 약하거나 또는 항종양 능력은 없지만, 확증된 항암 약제들의 세포독성 활성에 있어서 매우 현저한 증가를 유도할 수 있는 물질들로 인한 독창적인 메카니즘의 발견에 기인한다. 이러한 독창적인 메카니즘은 이러한 물질들이 종양 내부에 존재하는 클론원성(clogenic) 세포들의 점증현상(recruitment)을 자극하여 기존의 세포독성물질 처리에 보다 더 민감하도록 하거나 또는 클론원성 세포들의 증식을 억제하여 종양의 경감에 기여하도록 하는 가능성으로 인한 것이다.

본 발명은 따라서, 세포독성물질로부터 선택된 적어도 하나의 항종양제를 사용하는 암의 치료에, 플라보노이드류와 특히 다음 구조식의 화합물로부터 선택되는 클론원성 세포들의 증식에 활성을 가지는 화합물을 사용하는 것이다.

(I)

상기 식에서:

- R₁, R₂, R₃및 R₄는 각각 독립적으로 H, OH, C₁~C₄알콕시기, -OCOR₇기로부터 선택되며, R₇은 C₁~C₄알콕시기이고, R₁, R₂, R₃및 R₄치환기들 중 적어도 하나는 H가 아니며, R₂와 R₃는 함께 메틸렌디옥시기를 형성할 수 있고,

- R₅는 H, OH, C₁~C₄알콕시기 및 O-글리코실기로부터 선택되며,

- R₆는 시클로헥실기, 페닐기 및 H, OH 및 C₁~C₄알콕시기로부터 선택된 기로 1~3회 치환된 페닐기로부터 선택되고,

- 또한,은 이중결합 또는 단일결합을 나타낸다.

세포독성물질들은 통상적인 사용량으로 사용될 수 있으며, 이 경우 이들의 효능은 개선되고, 원하는 목적이 먼저 이러한 치료에 대한 환자의 적응력을 개선시키는 것이라면 세포독성물질들의 항종양 효능에서의 증가를 고려하여, 적은 투여량을 사용할 수 있다.

본 발명은 또한 증식 및 점증현상을 자극하거나 또는 증식을 억제하므로써 클론원성 세포들의 발생을 간섭하여, 클론원성 세포들의 증식에 대한 활성을 가지는, 치료적으로 유효한 양의 플라보노이드 및 특히 다음 구조식의 화합물로부터 선택되는 화합물을 포함하는 조성물에 관한 것이다:

(I)

상기 식에서:

- R₁, R₂, R₃및 R₄는 각각 독립적으로 H, OH, C₁~C₄알콕시기, -OCOR₇기로부터 선택되며, R₇은 C₁~C₄알킬기이고, R₁, R₂, R₃및 R₄치환기들 중 적어도 하나는 H가 아니며, R₂와 R₃는 함께 메틸렌디옥시기를 형성할 수 있고,

- 또한,은 이중결합 또는 단일결합을 나타낸다.

본 발명은 또한 종양을 적어도 하나의 세포독성물질로 처리하는 동안 종양들 내의 클론원성 세포들의 발생을 간섭하기 위한(유도 또는 억제에 의해) 약제의 제조에 플라보노이드, 특히 상기 정의된 것과 같은 구조식 I의 화합물을 사용하는 것에 관한 것이다.

세포독성물질들을 사용하는 암종들의 화학요법적 치료에 있어서, 상기 플라보노이드류, 특히 구조식 I의 화합물들은 1회 투여량으로 또는 이러한 치료들의 초기 며칠(예로서, 5~7일)에 걸쳐서, 그리고 화학요법 프로토콜에 따라 다른, 각 치료동안의 각 치료주기(예로서 2~5일간)의 초기에 적용될 수 있다.

상기 구조식 I의 화합물들은 5~50mg/kg/일 또는 200~2000mg/㎡/일의 투여량으로 주입(infusion)(일반적으로 1~3시간 내)에 의해 투여되는 것이 유리하다.

클론원성 세포들의 생산에 대해 최대의 효과를 얻기 위하여, 상기 플라보노이드류는 얻은 조직 농도들이 가능한한 최대의 높은 농도가 되도록 적용되어야 한다.

치료의 급성기에서의 치료 프로토콜은, 다음을 사용하는 정맥경로가 바람직하다:

- 바람직한 유속으로, 주입선을 사용하여 정맥 주입됨에 따라 변형없이 투여될 수 있는, 바로 사용가능한 주사용질들(주머니, 유리병 등):

- 본 기술분야의 당업자들에게 알려진 약제학적 용액을 보조로 사용하여 정맥 주입을 위해 재현탁되어질 수 있는 동결건조체들;

- 유지 치료의 경우, 화학요법 치료에서 세포독성물질들의 경구 투여가 바람직한 경우에는 경구 경로를 고려하는 것도 가능하다. 이러한 목적으로, 경구용 동결건조체들(경구용 또는 설하(perlingual) 흡수용), 즉각 방출성 또는 서방성 정제, 경구 용액, 현탁액, 입자, 캡슐 등이 사용될 수 있다.

구조식 (I)의 화합물들은 대부분이 천연 화합물들이거나 또는 천연 화합물의유도체들이다. 예로서, 다음과 같은 것들이 언급될 수 있다:

1) 다음과 같은 플라본류(flavones):

- 케르세틴(quercetin),

- 4-히드록시플라본,

- 6-히드록시플라본,

- 7-히드록시플라본,

- 5-메톡시플라본,

- 6-메톡시플라본,

- 7-메톡시플라본,

- 2-시클로헥실-5-히드록시크로몬(hydroxychromone),

- 2-시클로헥실-6-히드록시크로몬,

- 2-시클로헥실-7-히드록시크로몬,

- 와고닌(wogonin) 또는 5,7-디히드록시-8-메톡시플라본,

- 아카세틴(acacetin) 또는 5,7-디히드록시-4'-메톡시플라본,

- 페달리틴(pedalitin) 또는 5,6,3',4'-테트라히드록시-7-메톡시플라본,

- 아피제닌(apigenin) 또는 5,7,4'-트리히드록시플라본,

- 루테올린(luteolin) 또는 5,7,3',4'-테트라히드록시플라본,

- 배칼레인(baicalein) 또는 5,6,7-트리히드록시플라본,

- 스쿠텔라레인(scutellarein) 또는 5,6,7,4'-테트라히드록시플라본,

- 피세틴(fisetin) 또는 7,3',4'-트리히드록시플라보놀,

- 로비네틴(robinetin) 또는 7,3',4',5'-테트라히드록시플라보놀,

- 캠프페롤(kaempferol) 또는 5,7,4'-트리히드록시플라보놀,

- 캠프페라이드(kaempferide) 또는 5,7,-디히드록시-4'-메톡시플라보놀,

- 모린(morin) 또는 5,7,2',4'-테트라히드록시플라보놀,

- 미리세틴(myricetin) 또는 5,7,3',4',5'-펜타히드록시플라보놀,

2) 다음과 같은 플라보놀올류(flavonolols):

- 아로마덴드린(aromadendrin) 또는 5,7,4'-트리히드록시플라보놀올,

- 푸스틴(fustin) 또는 7,3',4'-트리히드록시플라보놀올,

- 히드록시로비네틴(hydroxyrobinetin) 또는 7,3,',4',5'-테트라히드록시플라보놀올,

- 탁시폴린(taxifolin) 또는 5,7,3',4'-트리히드록시플라보놀올,

3) 다음과 같은 플라보논류:

- 나린제닌(naringenin) 또는 5,6,4'-트리히드록시플라바논,

- 7,4'-디히드록시플라바논,

- 에리오딕티올(eriodictyol) 또는 5,7,3',4'-테트라히드록시플라바논,

- 헤스페레틴(hesperetin) 또는 5,7,3'-트리히드록시플라바논.

플라본류들이 바람직한 화합물들이다.

세포독성물질들은 다음 화합물로부터 선택될 수 있다:

i) 삽입(intercalating) 제제들, 특히 다우노루비신(daunorubicin), 에피루비신(epirubicin), 이다루비신(idarubicin), 조루비신(zorubicin),아클라루비신(aclarubicin), 피라루비신(pirarubicin), 아크리딘(acridine), 미토크산트론(mitoxanthrone), 악티노마이신 D, 엡틸리늄(eptilinium) 아세테이트;

ⅱ) 플라티늄 유도체들(시스플라틴(cisplatin), 카보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin))로부터 선택된 알킬화제들;

ⅲ) 다른군의 알킬화제들로부터 선택된 화합물:

- 시클로포스파미드(cyclophosphamide), 이포스파미드(ifosfamide), 클로르메트린(chlormetrin), 멜팔란(melphalan), 클로람부실(chlorambucil), 에스트라무스틴(estramustine),

- 부설판(busulfan), 미토마이신 C

- 니트로소우레아(nitrosourea): BCNU(카무스틴(carmustine)), CCNU(로무스틴(lomustine)), 포테무스틴(fotemustine), 스트렙토조토신(streptozotocin)

- 트리아진류 또는 유도체들, 프로카바진(procarbazine), 다카바진(dacarbazine),

- 피포브로만(pipobroman),

- 에틸렌이민류: 알트레타민(altretamine), 트리에틸렌티오포스포아미드,

ⅳ) 다른 군의 항대사 물질로부터 선택된 화합물:

- 항엽산제(antifolic agent)들: 메토트렉세이트, 랄티트렉스드,

- 항피리미딘류: 5-플루오로우라실(5-FU), 시타라빈(cytarabine)(Ara-C),

- 히드록시우레아,

- 항퓨린류: 퓨린톨(purinethol), 티오구아닌(thioguanine),펜토스타틴(pentostatin), 클라드리빈(cladribine),

- 세포독성 뉴클레오사이드 합성의 억제제들: 젬시타바인.

ⅴ) 세관(tuble)들에 대한 높은 친화력을 갖는 다른군들의 물질들로부터 선택된 화합물:

- 유사분열 방추체(mitotic spindle)를 파괴하는 빈카(vinca) 알칼로이드류: 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신(vindesine), 네이블빈(navelbine)

- 유사분열 방추체의 탈중합화를 억제하는 물질들: 파클리탁셀(paclitaxel), 도세탁셀(docetaxel),

- 토포아이소머라아제 Ⅱ의 억제에 의해 DNA내에서 파괴를 유도하는 물질들: 에토포사이드(etoposide), 테니포사이드(teniposide)

- DNA의 분열을 유도하는 토포아이소머라아제 Ⅰ 억제제들: 토포테칸, 이리노테칸

ⅵ) 블레오마이신(bleomycin)과 같이 DNA를 단편화하는 분할(splitting) 물질,

ⅶ) 다음 화합물들 중 한 화합물: 플리카마이신(plicamycin), L 아스파라기나아제, 미토구아존(mitoguazone), 다카바진(dacarbazine),

ⅷ) 항암제 황체호르몬성 스테로이드: 메드록시프로제스테론(medroxyprogesterone), 메제스트롤(megestrol),

ⅸ) 항암제 에스트로겐성 스테로이드: 디에틸스틸베스트롤(diethylstilbestrol); 테트라소듐 포스페스트롤(tetrasodiumfosfestrol),

ⅹ) 항에스트로겐: 타목시펜(tamoxifen), 드롤옥시펜(droloxifen), 랄옥시펜(raloxifen), 아미노글루테티미드(aminogluthetimide),

xi) 스테로이드성 항안드로겐(예, 시프로테론(cyproterone) 또는 비스테로이드성 항안드로겐(플루타미드, 닐루타미드(nilutamide)).

특히, 구조식 I의 화합물들은 다음과 같은 고체 종양들의 다중화학요법에 사용되는 주요 세포독성물질들을 이용한 모든 치료들과 결합되어 사용될 수 있다:

- 알킬화제들: 옥사조포린류(oxazophorines)(시클로포스파미드, 이포스파미드, 클로람부실, 멜팔란)

- 니트로소우레아류

- 미토마이신 C

- 메토트렉세이트, 5-FU, Ara-C, 카파시타빈(capacitabine)과 같은 항대사산물들

- 튜불린(tubulin) 간섭 물질들: 빈카 알칼로이드류(빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 네이블빈), 탁소이드류(파클리탁셀, 도세탁셀), 에피포도필로톡신류(epipodophyllotoxins)(에토포사이드, 테니포사이드)

- 블레오마이신

- 토포아이소머라아제 I의 억제제들: 토포테칸, 이리노테칸.

유사하게, 구조식 I의 화합물들은 혈액암들의 치료를 위해 종양혈액학에서 사용되는 주요 세포독성물질들을 사용하는 치료와 결합되어 사용될 수 있다:

- 호지킨(Hodgkin) 병: 시클로포스파미드, 메클로레타민(mechlorethamine), 클로람부실, 멜팔란, 이포스파미드, 에토포사이드, 독소루비신, 다우노루비신;

- 급성 백혈병들: 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 시타라빈, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 독소루비신, 다우노루비신, L-아스파라기나아제;

- 비호지킨성 악성 림프종들: 메클로레타민, 클로람부실, 사이클로포스파미드, 멜팔란, 이포스파미드, 메토트렉세이트, 시타라빈, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 에토포사이드, 독소루비신, 다우노루비신, 카무스틴, 로무스틴, 시스플라틴;

- 만성 림프 백혈병들: 메클로레타민, 클로람부실, 시클로포스파미드, 멜팔란, 이포스파미드.

단독으로 또는 세포독성물질들과 조합하여 사용된 상기 구조식 (I)의 화합물들의 성질을 증명하는 약제학적 실험의 결과들은 아래 나타낼 것이다.

1. - 클론원성 세포들과의 상호작용(증식의 자극 또는 억제)(클론원성 테스트)

사용된 테스트는 Hamburger 등(Science, 1977; 197, 461~463) 및 Salmon 등(New England J. Med., 298, 1321~1327)에 설명되어있는 것이다. 세포가 증식 능력 및 세포 콜로니를 형성하는 능력을 가지는 경우 클론원성인 것으로 간주한다. 인간 종양 간(stem)세포들은 일정 종양을 구성하는 종양세포들을 배경으로 하는 세포들이다. 이러한 종양 간세포들은 최초 종양들을 수술로 절제한 후에 관찰될 수 있는 재발 진행의 원인이 되며, 또한 전이들(metastases)을 형성하는 원인이 된다. 종양 또는 종양 세포주에서, 이러한 클론원성 간세포들은, 어떤 고형 지지체 없이증식하는 능력을 보전하고 있다는 사실로써, 종양 또는 고려되는 종양성 세포주의 다른 세포들과 구분될 수 있다.

본 테스트에서, 종양 세포들은 한천을 포함하는 반고체의 지지체상에서 배양되었다. 성장에 고체 지지체를 필요로하지 않는 세포들(즉, M.I. Dawson 등, Cancer Res. 1995; 55: 4446~4451에서 "고정체-독립적인 세포들"; 또한 "클론의 성장"에 관련된 클론원성 세포들로 명명되는 고도의 종양형성성 세포들)만이 이러한 한천-베이스의 지지체상에서 발육할 수 있다. 실제로, 예로서 섬유모세포(fibroblast)들과 같은 -"부착 방식"으로 성장하는(M.I. Dawson의 명명법에 따르면 고정체-의존 세포들)- 일반 세포들은 이러한 배지상에서 살아남을 수 없다. 배양된 종양세포 개체군 내에서, 이러한 지지체상에서 배양되어 성장할 수 있는 세포들은 (무한한 횟수의 세포분열에 관련되고, 이들의 증식은 M.I. Dawson에 따라 "고정체-독립적인 [클론] 성장"으로 명명됨) 클론원성 세포들이다. 종양 또는 세포주내에 존재하는 이러한 클론원성 세포들의 백분율은 0.1~0.001% 사이에서 변화한다. (제한된 횟수의 세포분열에 관련된) 비클론원성 세포들은 "부착 방법"("고정-의존 [고정] 성장", M.I. Dawson 등, Cancer Res. 1995; 55: 4446~51)으로 일어나야만 하는 이들의 성장을 위해 고체 지지체를 필요로하기 때문에 본 테스트에서 성장되지 않는다.

예로서, "연성 한천"으로 명명되는 반액체 배양배지상에서 포유류의 종양 주들 MCF7과 MXT 및 직장결장주 HT-29를 배양하여 얻은 세포 콜로니의 성장에 대한 구조식 (I)의 화합물들의 영향을 측정하였다. 이러한 배지상에서는, M.I. Dawson에의한 "고정체-독립적인 (클론) 세포들"로 명명되는 클론원성 세포들만이 살아남아 성장한다. 이들 세포들의 이러한 "비부착" 방식 성장은 이들의 종양형성성 정도를 반영하는 것이다. 보다 많은 수의 클론원성 세포들이 성장한 종양 크기의 성장억제는, 강화된 세포독성 활성에 대한 대조수단(control)이 된다.

반면에, 본 테스트는 또한, 화합물이 클론원성 세포들의 발생/증식을 억제할 수 있어 종양의 성장능력을 저하시키고, 따라서 종양 세포들의 개체군들을 감소시키게 된다는 사실을 밝힐 수 있다.

연구된 종양 세포주들은 25㎠ 팔콘(falcon) 접시들 내에서 배양되었다. 그 후, 이들은 트립신화되고 상기 세포들은 서로 각각 잘 분리되었다. 트립판 블루 염색 후 생세포들의 백분율을 결정하였다. 5×10⁴~15×10⁴세포들/㎖(고려되는 세포유형에 따라 다름) 농도의 세포 현탁액을 0.3% 한천 용액내에서 제조하였다. 그 후, 이 현탁액 200㎕를 지름 35㎜의, 0.5% 한천 용액을 포함하는 바닥층 3㎖가 퇴적된 페트리 접시내에 접종하였다. 이어서, 상기 200㎕의 세포 현탁액은 0.3% 한천 용액을 포함하는 상부층 1.8㎖로 커버된다. 그 후, 상기 접시들을 치료에 사용되기 전까지 37℃, 5% CO₂및 70% 습도조건의 인큐베이터내에 넣었다. 이는 접종한지 약 1~2시간 후에 수행되었다. 테스트되어질 화합물들은 원하는 농도보다 100배 높은 농도로 제조되었으며, 이들 처리용액들 50㎕를 해당 접시들의 한천 상부층에 놓았다. 본 연구에서, 테스트된 생성물의 최종농도는 10^-5, 10^-7및 10^-9M이었다. 그 후, 상기 접시들은 인큐베이터내에서 21일동안 보관되었다. 21번째 날에, 37℃에서 3시간동안 RPMI 1640 배지를 사용하여 제조된 1㎎/㎖ 농도의 MTT(2-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리늄 브로마이드)용액 100㎕를 상부층에 가하여 상기 접시들을 처리하였다. 이 기간의 경과 후, 접시당 2㎖의 포르몰(formol)을 첨가하여 상기 세포 콜로니들을 고정시켰다. 24시간동안 고정한 후, 포르몰을 증발시키고, 대사적으로 활성인 세포들을 포함하며, 그 표면적이 100㎛²보다 큰 염색된 세포 콜로니들의 수를 도립(inverted)현미경을 사용하여 측정하였다.

연구된 각 실험 조건들에서 결정된 클론원성 세포 클론들의 평균 수는, 대조군 조건하에서 측정된 클론원성 세포 클론들의 평균수를 100%로 놓고 이에 대한 백분율로서 나타내었다. 케르세닌의 경우, 대조군 조건에 대해 백분율로서 표시된 이 값들을 표 1에 나타내었다.

- 상기 표에 주어진 결과들은 평균값 ±적어도 6개 큐풀(cupule)들에 대해 수립된 평균의 표준오차(SEM)를 나타낸다.

- 대조군 = 100%

- (NS: p>0.05; *: p<0.05; **: p<0.01; ***: p<0.001).

세개의 세포주들 MCF7, HT-29 및 MXT에서, 케르세틴은 부분적으로 종양내의 클론원성 세포들의 증식을 억제 즉, 대조군에서 얻은 콜로니의 수들에 대해 이들 세포들의 콜로니의 수에 현저한 감소(20%에서 50%)를 유도할 수 있어, 종양들을 세포독성물질을 이용한 기존의 치료에 보다 민감하게 되도록 하는데 기여한다.

2. - 비클론원성 세포들에 대한 세포독성 활성: "MTT 분석"

구조식 (I)의 화합물들의 비클론원성 세포들에 대한 영향을 MTT 비색 분석을 사용하여 측정하였다.

MTT 테스트의 원리는 대사적으로 활성을 갖는 생세포들에 의해 노란색 MTT (3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드) 물질이 푸른색 생성물인 포마잔(formazan)으로 되는 미토콘드리아성 환원에 근거한 것이다. 이렇게 얻은 포마잔의 양은 그 배양 웰(들) 내에 존재하는 생세포들의 양에 직접적으로 비례한다. 포마잔의 양은 분광광도계로 측정하였다.

세포주들은 기초 배지 MEM 25MM HEPES(최소필수영양배지)를 포함한 스토퍼로 막은 배양 접시들 내에서 37℃에서 단일층 배양물내에 유지되었다. 이 배지는 다양한 범위의 포유류의 이배체 또는 일차 세포들의 성장에 매우 적합하다. 상기 배지는 그 후 다음 물질들로 보충하였다:

- 56℃에서 1시간에 걸쳐 탈보체화된 5% FCS(소태반 혈청),

- 0.6㎎/㎖의 L-글루타민,

- 200IU/㎖의 페니실린,

- 200㎍/㎖의 스트렙토마이신,

- 0.1㎎/㎖의 젠타마이신.

사용된 12개의 인간 암세포주들은 미국세포표본보관소(ATCC, Rockvill, MD, USA)로부터 얻었다. 이들 12개의 세포주들은:

- 두개의 교아종(glioblastoma)들인 U-373MG (ATCC 번호: HTB-17) 및 U-87MG (ATCC 번호; HTB-14),

- 신경교종(astrocytoma)인 SW1088(ATCC 번호: CCL-185),

- 두개의 비-소(small)세포 폐암종들인 A549(ATCC 번호: CCL-185) 및 A-427(ATCC 번호: HTB-53),

- 두개의 직장결장 암종들인 HCT-15(ATCC 번호: CCL-225) 및 LoVo(ATCC 번호: CCL-229),

- 두개의 유방암종들인 T-47D(ATCC 번호: HTB-133) 및 MCF7(ATCC 번호: HTB-22)

- 두개의 방광암종들인 J82(ATCC 번호: HTB-1) 및 T24(ATCC 번호: HTB-4)

- 전립선암인 PC-3(ATCC 번호: CRL-1435).

실험측면에서, (사용된 세포 유형에 따라) 20,000~50,000세포들/㎖의 배양배지를 포함하는 세포 현탁액 100㎕를 96-웰의 다중-웰 플레이트에 접종하고 5% CO₂를 포함하는 대기 및 70% 습도하 37℃에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션한지 24시간후, 10^-5~10^-10M의 범위에서 변화될 수 있는 농도의 테스트될 다양한 화합물들을 포함하거나, 테스트될 생성물의 용해를 위해 제공되는 용매를 포함하는(대조조건) 신선배지 100㎕로 상기 배양 배지를 교체하였다. 상기 조건하에서 인큐베이션한지 72시간 후, 상기 배양 배지를 RPMI 1640내에 1㎎/㎖의 비율로 녹인 노르스름한 색의 MTT 용액 100㎕로 교체하였다. 상기 미세플레이트(microplate)들을 37℃에서 3시간동안 재인큐베이션한 후 400g으로 10분동안 원심분리시켰다. 상기 노르스름한 MTT 용액을 제거하고 세포 수준으로 형성된 청색의 포마잔 결정들을 DMSO 100㎕내에 용해시켰다. 상기 미세플레이트들을 그 후 5분동안 교반하였다. 결과의 청색의 강도, 즉 실험 마지막까지 살아남은 세포들에 의한 노란색 MTT 생성물의 청색 포마잔으로의 전환의 정도를 DYNATECH IMMUNOASSAY SYSTEM 유형의 장치를 사용하여 포마잔의 최대 흡수 파장 및 기본 노이즈에 각각 해당하는 570nm와 630nm의 파장에서 분광광도법으로 정성 분석하였다. 상기 분광광도계 내에 통합된 소프트웨어는 평균 광학밀도값들과 표준편차(Std. Dev.) 및 평균의 표준오차(SEM)들을 계산한다.

제한적이지 않은 예로서, 플라보노이드: 5개의 종양 세포주들 U-373MG, T24, LoVo, MCF7 및 A549상에 케르세틴을 사용하여 얻은 평균 광학 밀도의 결과들은, 대조조건하에서 측정된 평균 광학 밀도(100%로 함)에 대한 백분율로서 표시하여 표Ⅱ에 나타내었다.

- 농도는 몰/리터로 나타냄

- xx ±yy = 평균값 ±평균의 표준오차

- 대조군 조건 = 100%

- (NS: p > 0.05; *: p < 0.05; **; p < 0.01; ***:p < 0.001).

이러한 결과들은 케르세틴이 약한 항종양 능력을 갖는다는 것을 나타낸다. 비-세포독성인 이 물질은, 단지 10^-5M 농도에서만 이들 세포주들의 전체적인 세포 증식의 억제를 유도하고, 상기 억제는 20%를 초과하지 않는다. 테스트된 다른 농도들에서는, 단지 약간의 적은 효과들만이 나타났다.

3. - 최대 허용 투여량(MTD)의 결정:

4주~6주 된 B6D2F1/Jico 쥐들을 사용하여 최대 허용 투여량의 측정을 수행하였다. 화합물들을 복강경로를 통해 2.5~160㎎/㎏의 범위에서 투여량을 증가시키면서 투여하였다. MTD 값(㎎/㎏로 나타냄)은 고려되는 물질의 단일 투여후 14일의 기간에 걸쳐 동물들의 생존율을 관찰하여 결정하였다. 또한 상기 동물들의 중량의 증가도 상기 기간에 걸쳐 관찰하였다. MTD 값이 160㎎/㎏보다 큰 경우, MTD 값은 디폴트값으로써 160㎎/㎏에 해당한다.

케르세틴은 디폴트값으로서 160㎎/㎏에 해당하는 MTD와 관련된다. 이러한 결과는 상기 플라보노이드 군에 속하는 물질들이 직접적인 독성을 나타내지 않으며, 높은 조직농도들, 즉 높은 투여량으로 사용될 수 있다는 것을 강조한다.

상기 구조식 I의 화합물을 단일- 사용 프로토콜 또는 세포독성물질들과의 다중 화학요법 프로토콜에서 사용하는 방법들을 아래 제시할 것이다.

A. 고형 종양들

1/ 폐암종들

1.1. 비-소세포 폐암종들(진행된 단계):

- 구조식 I의 화합물의 정맥 주입들을 바람직한 프로토콜(T. Le Chevalier등, J. Clin. Oncol. 1994; 12. 360~367)에 첨가하였다:

상기 치료를 8회 반복하였다.

1.2. 소세포 폐암종들(진행된 단계):

- 플라보노이드 주입들을 바람직한 CAV 또는 VAC 프로토콜(B.J. Roth 등, J. Clin. Oncol. 1992; 10: 282~291)에 첨가하였다:

상기 치료를 매 21일마다 6회 반복하였다.

- 플라보노이드 주입들을 바람직한 Pt-E 프로토콜(B.J. Roth 등, J.Clin.Oncol. 1992; 10: 282~291)에 첨가하였다.

각 주기를 매 21일마다 반복하였으며, 상기 치료는 6회의 주기를 포함한다.

1.3. 국부적으로 진행된 또는 전이성 비-소세포 기관지암:

ㆍ 단일화학요법:

상기 치료는 4주의 주기반복을 포함하는 것이 가능하다.

ㆍ 젬시타바인/시스플라틴 조합:

상기 치료는 매 21일의 주기반복을 포함한다.

2/ 유방암종들

- 수술가능한 유방암종에 대한 보조치료로서의 CMF 프로토콜(G. Bonnadonna 등, N. Engl. J. Med.; 1976; 294; 405~410):

각 주기는 매 28일마다 반복되며, 상기 치료는 6회의 주기를 포함한다.

- 보조치료로서의 AC 프로토콜(B. Fisher 등, J. Clin. Oncol; 1990; 8:1483~1496):

각 주기는 매 21일마다 반복되며, 상기 치료는 4회의 주기를 포함한다.

- 전이들을 지닌 유방암종들:

- FAC 프로토콜(A.U. Buzdar 등, Cancer 1981; 47: 2537~2542) 및 이의 다양한 변형들에서, 이소플라빈 주입들을 다음 표에 따라 첨가하였다(이에 제한되지 않음):

병에 있어서 새로운 진전이 진단될 때까지 각 주기는 매 3주마다 반복되었다.

- CAF 프로토콜에서(G. Falkson 등, Cancer 1985; 56: 219~224):

병에 있어서 새로운 진전이 진단될 때까지 각 주기는 매 28일마다 반복되었다.

- CMF 프로토콜에서:

이 주기는 매 3~5주마다 반복되며, 상기 치료는 6회의 주기를 포함한다.

- CMF-VP 프로토콜에서:

상기 치료는 매 4주마다 반복되었다.

- FEC 프로토콜에서:

상기 치료는 매 3주마다 반복되었다.

- MMC-VBC 프로토콜(C. Brambilla 등, Tumori, 1989; 75: 141~144)에서:

- NFL 프로토콜에서(S.E. Jones 등, J. Clin. Oncol. 1991; 9:1736~1739):

상기 치료는 21일 간격의 2회의 주기들을 포함하며, 그 후 평가가 요구된다.

상기 플라보노이드 주입들은 또한, 예로서:

- 안트라시클린류(anthracyclines)에 내성일 수 있는 전이들을 가진 형태의 것들의 치료에서 파클리탁셀(F.A. Holmes 등, J. Natl Cancer Inst. 1991; 83; 1797~1805)과 함께 탁소이드가 사용되는 경우, 전이를 포함하는 유방암종들의 치료와 조합될 수 있다.

병에 있어서 새로운 진전이 진단될 때까지 각 주기는 매 21일마다 반복되었다.

- 국부적으로 진행된 또는 전이성 상태의 유방암에서 또는 (안트라시클린이 포함된) 세포독성 화학요법후의 재발 또는 보조치료 동안의 재발시 내성인 도세탁셀(C.A. Hudis 등, J. Clin. Oncol.1996; 14: 58~65)을 사용:

상기 주기는 치료의 2회주기를 위해 매 21일마다 또는 병의 진전이 나타날때까지 반복된다.

- 최우선 치료의 강화로써 자가 골수세포들 및 말초혈관계 세포들의 이식과조합된 투여량 증가 프로토콜들에서, 예로서:

- CPB 프로토콜(W.P. Peters 등, J. Clin. Oncol. 1993; 11:132~1143), 여기에서 간세포들의 정맥 주입은 D_-1, D₀및 D₁에 수행되었다:

- CTCb 프로토콜(K. Antman 등, J. Clin. Oncol. 1992; 10: 102~110), 여기에서 간세포의 정맥 주입은 D₀에 수행되었다:

- CTM 프로토콜(L.E. Damon 등, J. Clin. Oncol. 1989; 7: 560~571 및 I.C. Henderson 등, J. Cellular Biochem. 1994(Suppl 18B):95) 여기에서 조혈성 간세포들의 정맥 주입은 D₀에 수행되었다:

3/ 부인과 암종들

3.1. 난소암:

- 특히 전이성 난소암종들의 치료를 위한:

i) PAC 프로토콜(G.A. Omura 등, J. Clin. Oncol. 1989; 7:457~465): 플라보노이드의 주입들은 다음 표에 따라 투여되었다:

이 주기는 매 21~28일동안 반복되었으며 치료는 8회의 주기를 포함하였다.

ⅱ)A. Marietta 등에 따른알트레타민 프로토콜(Gynecol. Oncol. 1990; 36: 93~96):

이 치료는 28일 간격의 2회 주기를 포함한다.

ⅲ) 파클리탁셀 프로토콜: W.P. McGuire 등에 의해 설명된 바와 같이 플라보노이드류가 파클리탁셀 프로토콜에 첨가될 수 있다(Ann. Intern. Med. 1989; 111: 273~279):

치료는 28일 간격의 주기(말기에는 평가)들을 2회 포함한다.

- 전이성이고 저항성인 난소 암종들의 치료를 위해, 플라보노이드류는 토포테칸에 기초한 이차적인 수준의 프로토콜에 첨가될 수 있다:

A.P. Kudelka 등에 따라(J. Clin. Oncol. 1996: 14: 1552~1557) 치료는 2회의 주기를 포함하며, 주기는 21일 간격이다(말기에는 평가).

3.2 영양막 종양:

- 위험이 낮은 환자들에서, 플라보노이드류는 H. Takamizawa 등(Semin. Surg. Oncol. 1987; 3:36~44)에 설명된 프로토콜과 조합하여 사용될 수 있다:

(MTX-DATC 프로토콜).

3.3 자궁암종들:

- 상기 플라보노이드류는 또한 아래 표에 따라 CAV (또는 VAC) 프로토콜과 조합하여 사용될 수 있다.

치료는 매 21일 주기의 반복을 포함한다.

- FAP 프로토콜에서:

상기 치료는 매 21일 또는 28일 주기의 반복을 포함한다.

4/ 고환 및 전립선 암종들

- 상기 플라보노이드류는 고환암 프로토콜들과 조합하여 사용될 수 있다:

BEP 프로토콜:

상기 치료는 매 21일이 1주기인 주기를 3회 포함한다.

5/ 방광암종들

- 상기 플라보노이드류는 CISCA2(PAC라고도 함) 프로토콜과 조합되어 사용될 수 있다.

상기 주기는 매 3주마다 반복된다.

- MVAC 프로토콜에서(CN Sternberg 등, I., J. Urol. 1988; 139: 461~469):

상기 주기는 매 4주~5주마다, 적어도 2회주기 반복된다.

6/ 비인강암(Nasopharyngeal) 암종들/머리 및 목 암종들

- 상기 플라보노이드류는 상기 암종들의 치료에 사용되는 다중화학요법 프로토콜들과 합법적으로 조합되어 사용될 수 있다:

6.1 비인강 암종들:

-ABVD 프로토콜:

상기 치료는 1주기가 매 4주의 비율로, 1~6회 주기 반복되는 것을 포함한다.

6.2 전이부들을 가진 머리 및 목 암종들:

- DVAL 연구그룹(New Engl. J.M. 1991; 324: 1685~1690)에 따른: (예: 인두 암을 위한) Pt-FU 프로토콜:

상기 치료는 매 3주가 1주기인 비율로, 2회 주기를 포함한다.

7/ 연조직 암종들

- 상기 플라보노이드류는 CYVADIC 프로토콜과 같은 프로토콜에 도입될 수 있다:

- H.M. Pinedo 등에 따름(Cancer 1984; 53:1825):

상기 치료는 처음 2주기에 대해, 매 4주의 주기를 반복하는 것을 포함한다.

8/ 전이부들을 가진 호르몬-불응성(refractory) 전립선암

- G.R. Hudis 등(J. Clin. Oncol. 1992; 10: 1754:1761)에 따른 VBL-에스트라무스틴에서:

치료주기는 6주동안 지속된 후 2주동안 간격을 두었다.

9/ 배(germ)세포 암종들

i)바람직한 예후를 가진 종양들을 위하여:

- G.J. Bosl 등에 따른(J. Clin. Oncol. 1988: 6: 1231~1238) Pt-E 프로토콜

상기 치료는 매 21일 또는 28일이 1주기인 비율로 4회주기를 포함한다.

ii)전이부들을 갖는 종양들을 위하여:

- S.D. Williams 등에 따른(N. Eng. J. Med. 1987; 316: 1435~1440) PEB 프로토콜:

상기 치료는 매 21일이 1주기인 비율로, 4회주기를 포함한다.

10/ 신장암종들

-전이성 신장부 암종들:상기 플라보노이드류는 M.J. Wilkinson 등에 의해설명된 프로토콜에 도입될 수 있다(Cancer 1993; 71: 3601~3604):

상기 치료는 28일 간격의 2회 주기를 포함한다.

-신모세포종(nephroblastoma):상기 플라보노이드류는 매 3주~4주가 1 주기인 비율로, DAVE 프로토콜에 도입될 수 있다:

11/ 소화관 암종들

11.1 식도암종들:

- 상기 플라보노이드류는 다음에 따른 FAP 프로토콜에 도입될 수 있다:

상기 주기는 매 3주~4주 반복된다.

11.2 위암종들

- 진행된 그리고/또는 전이부들을 가진 위 암종들:

- EAP 프로토콜(P. Preusser 등, J. Clin. Oncol. 1989; 7: 1310에 따름):

매 28일이 1주기인 비율로 수행.

- FAMtx 프로토콜: J.A. Wils 등에 따름(J. Clin. Oncol. 1991; 89; 827):

상기 치료는 28일 간격으로, 2회 주기를 포함한다.

- 특정 환자들에서, 상기 프로토콜 또는 이의 변형(독소루비신을 에피루비신으로 대체)들은 다음 표에 따라 사용될 수 있다:

12/ 직장결장 암종들

- 상기 플라보노이드류는 직장결장암의 FU-레바미솔(Levamisole) 보조치료에 대한 프로토콜에 도입될 수 있다(C.G. Moertel 등, N. Eng. J. Med. 1990;322: 352에 따름):

5-FU가 환제 처리는 D₁~D₅의 도입기 후 52주동안 반복된다; 상기 처리는 5-FU 환제를 사용한 날과 그 후 연이은 이틀에 같은 비율로 반복되는 플라보노이드를 사용한다.

- 5-플루오로우라실(5-FU) 및 전이들을 가진, 치료에 저항력이 있는 직장결장암의 치료를 위해:

- M.L. Rothenberg 등에 따라(J. Clin. Oncol. 1996; 14: 1128~1135):

상기 치료는 42일의 간격인 2회주기를 포함한다.

13/ 카포시(Kaposi's) 육종

- 상기 플라보노이드류는 리포좀의 형태로 제제화된 안트라사이클린류(antracyclines)를 사용하는 2개의 프로토콜들과 조합되어 사용될 수 있다:

i) P.S. Gill 등(J. Clin. Oncol. 1995; 13: 996~1003)과 C.A. Presant 등(Lancet 1993; 341: 1242~1243)에 의해 설명된 프로토콜:

상기 치료는 효과를 평가하기 전 28일의 간격으로 반복되는 2주기를 포함한다.

ii) M. Harrison 등(J. Clin. Oncol. 1995; 13:914~920)의 프로토콜:

14/ 전이성 흑색종들(melanomas)

- 또한 상기 플라보노이드류는 전이성 악성 흑색종들의 치료를 위해 조합된 프로토콜들내로 포함될 수 있다:

- DTIC/TAM 프로토콜: G. Cocconi 등(N. Eng. J. Med. 1992; 327: 516)에 따르며, 상기 치료는 아래 표에 따라 매 21일을 1주기로, 4회주기의 반복을 포함한다:

상기 치료는 매 21일이 1주기인 비율로, 4회의 주기 반복을 포함한다.

15/ 신경 내분비성 암

- 상기 플라보노이드류는 C.G. Moertel 등(Cancer 1991; 68:227)에 의해 설명된 프로토콜과 조합되어 사용될 수 있다:

- Pt-E 프로토콜:

상기 치료는 매 28일마다 반복되는, 2회의 주기를 포함한다.

16/ 췌장암

-진행된-단계의 췌장선암: 상기 플라보노이드류는 M. Moore 등(Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 1995; 14: 473)의 프로토콜에 따라 젬시타바인 치료와 조합되어사용될 수 있다:

B. 혈액종양

1/ 급성 성인 백혈병

1.1 급성 림프아구성(lymphoblastic) 백혈병:

1.1.1. 링커(Linker) 프로토콜

상기 플라보노이드류는 링커 프로토콜들- 다음 표에 따른 유도 화학요법 및 강화 화학요법(C.A. Linker 등, Blood 1987; 69: 1242~1248 및 C.A. Linker 등, Blood 1991; 78: 2814~2822 참조): 에 첨가될 수 있다.

i) 유도 화학요법:

ii) 강화 화학요법(요법 A):

상기 강화치료 A는 상기 설명된 것과 같이 4개의 연속된 주기를 포함한다 = 1, 3, 5 및 7주기들.

iii) 강화 화학요법(요법 B와 C):

아래 설명된 요법들은 C.A. Linker 등에 의해 설명된, 강화 주기들 2, 4, 6 및 8(요법 B)와 9(요법 C)에 해당한다:

요법 B:

요법 C:

1.1.2. 헬저(Hoelzer) 프로토콜

상기 플라보노이드류는 생성물들은 다음 표에 따른 다중화학요법 프로토콜(D. Hoelzer 등, Blood 1984; 64: 38~47, D. Hoelzer 등, Blood 1988; 71; 123~131)의 세포독성물질들에 첨가될 수 있다:

i)유도 화학요법/1단계:

ii)유도 화학요법/2단계:

유도의 2단계는 다음과 같이 수행된다:

iii) 재유도 화학요법/1단계:

iv) 재유도 화학요법/2단계:

1.2. 급성 골수성 백혈병:

1.2.1 어떠한 연령의 성인들의 치료

플라보노이드류들은 아래 표에 따라 R.O. Dilleman 등(Blood, 1991; 78; 2520~2526), Z.A. Arlin 등(Leukemia 1990; 4: 177~183) 및 P.H. Wiernik 등(Blood 1992; 79: 313~319)에 의해 이전에 설명된 시타라빈의 표준 투여량을 포함하는 치료에 첨가될 수 있다:

1.2.2. 60미만의 나이인 성인의 치료

i)유도 화학요법:

이 유도 주기는 다음 표에 따른 높은 투여량의 시타라빈의 투여를 포함한다:

(S.N.S. 독성의 위험을 감소시키기 위하여, 신장 무력의 경우, 크레아티닌 제거를 위해 시타라빈의 투여량을 조절한다) L.E. Damon 등(Leukemia 1994; 8: 535~541), G.L. Phillips 등(Blood 1991; 77: 1429~1435) 및 G. Smith 등(J. Clin. Oncol. 1997; 15:833~839)에 따름.

ii) 강화 화학요법:

아래 설명되는 주기는 매 4~6주가 1주기인 비율로, 8회 반복될 것이다(R.J.Mayer 등, N. Engl J. Med. 1994; 331: 896~903에 따름):

iii)강화 화학요법(높은 투여량의 시타라빈):

아래 설명되는 주기는 2회 반복되어야 하며, 이는 G.L. Phillips 등(Blood 1991; 77: 1429~1435); S.N. Wolff 등(J. Clin. Oncol. 1989; 7: 1260~1267); R.J.Mayer 등(N. Engl J. Med. 1994; 331:896~903)에 따라 조절된다:

1.2.3. 60 또는 그 이상 연령의 성인의 치료

상기 플라보노이드류는 아래의 강화 화학요법 프로토콜들에 첨가될 수 있다:

i) R.O. Dilman 등(Blood 1991; 78; 2520~2526), Z.A. Arlin 등(Leukemia1990; 4: 177~183), P.H. Wiernik 등(Blood 1992; 79:313~319)에 따라:

ii) R.J. Mayer 등(N. Engl. J. Med. 194; 331:896~903)에 따라:

iii) C.A. Linker 등(Blood, 1993; 81: 311~318), N. Chao 등(Blood 1993; 81:319~323) 및 A.M. Yeager 등(N. Eng. J. Med. 1986; 315: 145~147)에 따라:

이 프로토콜은 자가 골수이식을 포함한다(D₀일에 수행됨):

또는

iv) 다음에 따른 HLA-적합성 동종 골수이식의 경우:

P.J. Tutscha 등. Blood 1987; 70: 1382~1388,

F.R. Applebaum 등, Ann. Int. Med. 1984; 101: 581~588:

2/ 만성 성인 백혈병들

2.1 만성 골수성 백혈병

골수아구성(myeloblastic) 단계에서, 플라보노이드류는 C.A. Koller 등(N. Engl. J. med. 1986; 315: 1433~1438)에 의해 설명된 HU-Mith 치료에 첨가될 수 있다:

2.2 만성 림프구성 백혈병

2.2.1 FCG-CLL 프로토콜

상기 플라보노이드류는 E. Kimby 등(Leuk. Lymphoma 1991; 5 (Suppl.) 93~96)과 FCGCLL(Blood 1990; 75:1422~1425)에 의해 설명된 "펄스된(pulsed) 클로람부실"에 첨가될 수 있다:

2.2.2 플루다라빈-CdA 프로토콜

H.G. Chun 등(J. Clin. Oncol. 1991; 9: 175~188), M. J. Keating 등(Blood 1989; 74: 19~25/ J. Clin. Oncol. 1991; 9: 44~49) 및 A. Saven 등(J. Clin.Oncol. 1995; 13: 570~574)에 따라:

3/ 림프세포 증식성 질환들

3.1 호지킨 병

상기 플라보노이드류는 호지킨 림프종의 치료에 통상적으로 사용되는 다중화학요법 프로토콜들에 포함될 수 있다:

3.1.1 AVDB 프로토콜

G. Bonnadonna 등(Cancer Clin. Trials 1979; 2: 217~226) 및 G.P. Canellos등(N. Engl. J. Med. 1993; 327: 1478~1484)등에 따름:

상기 치료는 매 28일이 1주기인 비율로, 6~8주기들을 포함한다.

3.1.2 MOPP/ABVD 프로토콜

G. Bonnadonna 등(Ann. Intern. Med. 1986; 104: 739~746) 및 G.P. Canellos 등(N. Engl. J. Med. 1993; 327: 1478~1484)에 따름:

MOPP 프로토콜은 매 28일마다 ABVD 프로토콜(§3.3.1 참조)로 교대될 수 있어야만 하며 상기 치료는 6회 주기를 포함한다:

MOPP 프로토콜:

3.1.3 스탠포드(Stanford) V 프로토콜

N.L. Bartlett 등 (J. Clin. Oncol. 1995; 13: 1080~1088)에 따름:

상기 치료는 매 28일이 1주기인 비율로, 3 주기들을 포함한다.

3.1.4. EVA 프로토콜

G.P. Canellos 등(Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 1991; 10: 273)에 따름:

상기 치료는 매 28일을 1주기의 비율로, 6주기들을 포함한다.

3.1.5. B-CAVe 프로토콜

W.G. Harker 등(Ann. Intern. Med. 1984;101: 440~446)에 따라:

상기 치료는 매 28일이 1주기인 비율로, 8 주기들을 포함한다.

3.2. 비-호지킨성 림프종들

3.2.1. 낮은 등급의 악성 비-호지킨성 림프종들

i) - CVP 프로토콜

- C.M. Bagley 등(Ann. Intern. Med. 1972; 76: 227~234) 및 C.S. Portlock 등(Blood 1976; 47: 747~756)에 따름

상기 주기는 최대 반응까지 매 21일마다 반복된다.

ii) - I-COPA 프로토콜

- RV Smalley 등(N. Eng. J. Med. 1992; 327: 1336~1341)에 따름

상기 치료는 매 28일이 1주기인 비율로, 8~10주기들을 포함한다.

iii) - 플루다라빈-CdA 프로토콜

- P. Solol-Celigny 등(Blood 1994; 84(Supp. 1): 383a), H. Hoeschster 등;(Blood 1994;84(Supple.1): 564a 및 A.C. Kay(J. Clin. Oncol. 1992; 10:371~377)에 따름.

플루다라빈의 경우, 각 주기는 매 28일마다 반복되며; 클라드리빈의 경우, 각 주기는 매 35일마다 반복된다.

3.2.2. 중간 등급의 악성 비-호지킨성 림프종들

i) - CHOP 또는 CNOP 프로토콜

- EM Mckelvey 등(Cancer 1976; 38: 1484~1493), J.O. Armitage 등(J. Clin. Oncol. 1984; 2: 898~902), S. Paulovsky 등(Ann. Oncol. 1992; 3: 205~209)에 따름

CHOP 프로토콜의 경우,

미토크산트론(N)은 60세가 넘는 환자에서 독소루비신에 대체되어(CNOP 프로토콜) 사용될 수 있다(투여량: 각 주기의 D1 일에 정맥주사 환제로서 12 mg/㎡).

CHOP 또는 CNOP 프로토콜을 사용한 상기 치료는 매 21일이 1주기인 6~8주기들을 포함한다.

ii) - MACOP-B 프로토콜

- P. Klimo 등(Ann. Intern. Med. 1985; 102: 596~602) 및 I. A. Cooper등(J. Clin. Oncol. 1994; 12: 769~778)에 따름

이 치료 프로토콜은 12주에 걸쳐 진행되며 이는 1 주기에 해당한다.

iii) - VACOP-B 프로토콜

- J.M. Connors 등(Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 1990; 9:254)에 따름

각 주기는 12주간 지속된다.

ⅳ) - m-BACOD/M-BACOD 프로토콜

- M.A. Shipp 등(Ann. Int. Med. 1986; 140: 757~765)에 따름

상기 치료는 매 21일이 1 주기인 비율로, 10 주기를 포함한다.

v) - ProMACE/CytaBOM 프로토콜

- D.L. Longo 등(J. Clin. Oncol. 1991; 9: 25~38)에 따름

상기 치료는 매 14일이 1주기인 비율로, 6~8주기들을 포함한다.

3.2.3. 낮거나 또는 중간 등급의 악성 비-호지킨성 림프종들

i) - ESHAP 구제 프로토콜

- 재발의 경우 또는 최우선 치료의 실패의 경우, W.S. Velasquez 등(J.Clin. Oncol. 1994; 12: 1169~1176)에 따름

상기 치료는 매 28일이 1주기인 비율로, 6주기들을 포함한다.

ii) - MINE 구제 프로토콜

- 재발의 경우 또는 최우선 치료의 실패의 경우, F. Cabanillas 등(Semin.Oncol. 1990; 17(Suppl. 10): 28~33)에 따름

상기 주기는 매 21일마다 반복된다.

3.3. 비호지킨성 림프종들; 버킷(Burkitt's) 림프종, 소세포 림프종, 림프아구성 림프종

3.3.1 마그레스(Magrath) 프로토콜

- 상기 플라보노이드류는 다음 표에 따라 마그레스 프로토콜과 조합될 수 있다:

i) - 주기 1

- I. T. 마그레스 등(Blood 1984; 63: 1102~1111)에 따름

ii) - 주기 2~15

- I. T. 마그레스 등(1984)에 따름

상기 치료는 매 28일이 1주기인 비율로, 14 주기를 포함한다.

3.4 발덴스트롬(Waldenstrom) 거대글로불린혈증(macroglobulinaemia)

3.4.1 CVP 프로토콜

M.A. Dimopoulous 등(Blood 1994; 83: 1452~1459) 및 C.S. Portlock 등(Blood 1976; 47: 747~756)에 의해 설명된 CVP 프로토콜에 따라:

상기 치료는 비제한적으로 계속된다(매 21일이 1주기).

3.4.2 플루다라빈-CdA 프로토콜

H.M. Kantarjian 등(Blood 1990; 75: 1928~1931) 및 M.A. Dinopoulous등(Ann. Intern. Med. 1993; 118: 195~198)에 따라:

또는

상기 치료는 플루다라빈의 경우 28일 간격의 6~12주기들을 포함하며, 또한 클라드리빈의 경우, 28일 간격의 2~28주기들을 포함한다.

3.5 방사 다발성 골수종(multiple myeloma)

3.5.1 MP 프로토콜

R. Alexanian 등(JAMA 1969; 208: 1680~1685), A. Belch 등(Br. J. Cancer 1988; 57: 94~99) 및 F. Mandelli 등(N. Engl. J. med. 1990; 322: 1430~1434)에따라:

또는

상기 치료는 매 4~6주가 1주기인 비율로, 적어도 12주기를 포함한다.

3.5.2 VAD 프로토콜

B. Barlogie 등(N. Engl. J. Med. 1984; 310: 1353~1356)에 따라:

3.5.3. MP-인터페론 α-프로토콜

O. Osterborg 등(Blood 1993; 81: 1428~1434)에 따라:

상기 치료는 매 42일이 1주기인 비율로, 이러한 주기의 비제한적인 반복을포함한다.

3.5.4 VCAP 또는 VBAP 프로토콜

S.E. Salmon 등(J. Clin. Oncol. 1983; 1: 453~461)에 따라:

VCAP 프로토콜:

VBAP 프로토콜: 시클로포스파미드가 카무스틴(BCNU)으로 대체되고, 나머지는 동일:

C. 어린이 종양들 - 소아 종양학

플라보노이드류는 또한 클론원성 세포들의 점증 및 가동화에 대한 활성으로 인한 부작용의 심각성을 감소시키고, 유효 투여량을 감소시킬 수 있는 반면 항종양효능을 개선하기 위하여, 소아 종양들을 처리하기 위한 다중화학요법 프로토콜들 내에 포함될 수 있다.

1/ 유잉육종(Ewing sarcoma)/원시신경외배엽 종양(primative neuroectodermal tumour)

상기 플라보노이드류는 VCR-Doxo-CY-Ifos-Mesna-E(E.D. Bergert 등, J. Clin. Oncol. 1990; 8: 1514~1524; W.H. Meyer 등, J. Clin. Oncol. 1992; 10:1737~1742)에 도입될 수 있다:

상기 치료는 육종의 초기 심각성 및 반응의 범위에 따라 6~10의 주기들을 포함한다.

2/ 어린이 급성 림프아구성 백혈병

2.1 유도 화학요법(D₁~D₃₀일)

상기 플라보노이드류는 바람직한 프로토콜들(P.S. Gaynon, J. Clin. Oncol., 1993, 11, 2234~2242; J. Pullen 등, J. Clin. Oncol. 1993; 11: 2234~2242; J. Pullen 등, J. Clin. Oncol. 1993; 11: 839~849; VJ Land 등, J. Clin. Oncol. 1994; 12: 1939~1945)에 첨가될 수 있다:

골수 실험의 결과에 따라, 강화단계로의 도입은 치료 프로토콜의 D₂₈일에 수행되었다.

2.2. 강화/유지 화학요법

상기 플라보노이드류는 다음 표에 따라 유지 프로토콜(P.S. Gaynon 등, J. Clin. Oncol. 1993; 11: 2234~2242; J. Pullen 등, J. Clin. Oncol. 1993; 11: 839~849; V.J. Land 등, J. Clin. Oncol. 1994; 12: 1939~1945) 에 도입될 수 있다.

3/ 어린이 급성 골수성 백혈병

상기 플라보노이드류는 다음 표들에 따라서 유도 및 강화/유지 프로토콜에첨가될 수 있다:

3.1. 유도 화학요법

Y. Ravindranath 등, J. Clin. Oncol. 1991; 9: 572~580; M.E. Nesbit 등, J. Clin. Oncol. 1994; 12: 127~135; R. J. Wells 등, J. Clin. Oncol. 1994; 12: 2367~2377)에 따름:

상기 주기는 D₂₈일부터 반복된다.

3.2. 강화/유지 화학요법

4/ 어린이 호지킨 병

상기 플라보노이드류는 EA Gehan 등(Cancer 1990; 65: 1429~1437), SP Hunger 등(J. Clin. Oncol. 1994; 12: 2160~2166) 및 MM Hudson 등(J. Clin.Oncol. 1993; 11: 100~108)에 따른 MOPP-ABVD 프로토콜에 첨가될 수 있다:

상기 주기는 매 8주가 1주기인 비율로 6회 반복되어야 하며, 상기 치료는 6주기를 포함한다.

자가 골수 이식(자가이식)이 처방된 경우, R. Chopra 등(Blood 1993; 81: 1137~1145), C. Wheeler 등(J. Clin. Oncol. 1990; 8: 648~656) 및 RJ Jones 등(J. Clin. Oncol. 1990, 8, 527~537)에 의해 설명된 CVB 프로토콜은 다음 표에 따라 사용된다(자가이식은 D₀일에 수행됨):

5/ 어린이 림프아구성 림프종

상기 플라보노이드류는 또한 유도 화학요법 프로토콜들(A.T. Meadows 등, J. Clin. Oncol. 1989; 7: 92~99 - C. Patte 등, Med. Ped. Oncol. 1992; 20: 105~113 및 A. Reiter 등, J. Clin. Oncol. 1995; 13: 359~372) 및 유지 화학요법 프로토콜들과 조합될 수 있다:

5.1 유도 화학요법

5.2 유지 화학요법

다음 표에 따라:

상기 치료는 10주기를 포함한다.

6/ 소아 신경모세포종(neuroblastoma)

바람직한 다중 화학요법 Doxo-E-Cy-Pt 프로토콜은 R.P. Castleberry 등(J. Clin. Oncol. 1992; 10: 1299~1304), A. Garaventa 등(J. Clin. Oncol. 1993; 11: 1770~1779) 및 D.C. West 등(J. Clin. Oncol. 1992; 11: 84~90)으로부터 조절되어진다:

상기 치료반응의 평가는 앞으로의 치료방향: 외과적 절제, 방사선 요법 또는 새로운 화학요법을 결정하기 위하여, 9주 후에 수행된다.

7/ 소아 골육종

상기 플라보노이드류는 M. Hudson 등(J. Clin. Oncol. 1990; 8: 1988~1997), PA Meyers(J. Clin, Oncol. 1992; 10: 5~15) 및 V.H.C. Bramwell 등(J. Clin. Oncol. 1992; 19: 1579~1591)에 의해 설명된 것과 같은 Doxo-Pt-Mtx-Lcv 프로토콜에 첨가될 수 있다:

8/ 어린이 횡문근육종(rhabdomyosarcoma)

상기 Vcr-Dact-CY-Mesna 프로토콜(H. Maurer 등, Cancer 1993; 71: 1904~1922 및 LR Mandell 등, Oncology 1993; 7: 71~83)은 다음 표에 따라 플라보노이드류의 정맥 주입을 포함할 수 있다:

앞으로의 치료방법(수술, 방사선 치료, 화학요법의 유지)를 결정하기 위하여 치료의 9주째 말기에, 효능이 평가되어야 한다.

9/ 어린이 윌름스(Wilms) 종양

GJ D'Angio 등(Cancer, 1989; 64: 349~360) 및 DM Green 등(J. Clin. Oncol.1993; 11: 91~95)에 의해 설명된 것과 같은 Vcr-Dact 프로토콜에서:

상기 프로토콜은 외과적 절제후에 시작되었다.

A. Garaventar 등(Med. Pediatr. Oncol. 1994; 22: 11~14)에 따른 자가 골수이식(자가이식)의 경우, E-Thio-Cy 프로토콜은 다음에 따라 변형될 수 있으며,

골수 이식은 D₀일에 수행되었다.

Claims

치료적으로 유효한 양의 플라보노이드를 포함하는, 종양내의 클론원성 세포들의 증식에 대한 활성을 가지는 조성물.
다음 구조식의 화합물들로부터 선택된 화합물을 치료적으로 유효한 양으로 포함하는, 종양내의 클론원성 세포들의 증식에 대한 활성을 가지는 조성물:

(I)

상기 식에서:

- R₁, R₂, R₃및 R₄는 각각 독립적으로 H, OH, C₁~C₄알콕시기, -OCOR₇기로부터 선택되며, R₇은 C₁~C₄알콕시기이고, R₁, R₂, R₃및 R₄치환기들 중 적어도 하나는 H가 아니며, R₂와 R₃는 함께 메틸렌디옥시기를 형성할 수 있고,

- R₅는 H, OH, C₁~C₄알콕시기 및 O-글리코실기로부터 선택되며,

- R₆는 시클로헥실기, 페닐기 및 H, OH 및 C₁~C₄알콕시기로부터 선택된 기로 1~3회 치환된 페닐기로부터 선택되고,

- 또한,은 이중결합 또는 단일결합을 나타낸다.
제 2항에 있어서, 상기 플라보노이드는 플라본인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 플라보노이드는 케르세틴인 것을 특징으로 하는 조성물.
플라보노이드를 사용하여 제조되는, 종양들을 적어도 하나의 세포독성물질로 치료하는 동안 상기 종양들 내의 클론원성 세포들의 발생을 억제하기 위한 약제.
다음 구조식의 화합물들로부터 선택된 화합물을 사용하여 제조되는, 종양들을 적어도 하나의 세포독성물질로 치료하는 동안 상기 종양들 내에서 클론원성 세포들의 발생을 억제하기 위한 약제:

(I)

상기 식에서:

- R₁, R₂, R₃및 R₄는 각각 독립적으로 H, OH, C₁~C₄알콕시기, -OCOR₇기로부터 선택되며, R₇은 C₁~C₄알킬기이고, R₁, R₂, R₃및 R₄치환기들 중 적어도 하나는 H가 아니며, R₂와 R₃는 함께 메틸렌디옥시기를 형성할 수 있고,

- R₅는 H, OH, C₁~C₄알콕시기 및 O-글리코실기로부터 선택되며,

- R₆는 시클로헥실기, 페닐기 및 H, OH 및 C₁~C₄알콕시기로부터 선택된 기로 1~3회 치환된 페닐기로부터 선택되고,

- 또한,은 이중결합 또는 단일결합을 나타낸다.
제 5항에 있어서, 상기 플라보노이드는 플라본인 것을 특징으로 하는 약제.
제 6항에 있어서, 상기 구조식 I의 화합물은 케르세틴인 것을 특징으로 하는 약제.
세포독성물질로 치료하는 동안 치료적으로 유효한 양의 플라보노이드를 투여하는 것을 포함하는, 환자의 종양을 적어도 하나의 세포독성물질을 사용하여 화학요법적으로 치료하는 방법.
제 9항에 있어서, 상기 플라보노이드는 화학요법 처리의 시작 및 각 화학요법 주기의 처음에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.