CN103002895A - 治疗血液癌症的方法 - Google Patents

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Abstract

公开了治疗血液系统癌症(包括复发性或抵抗性的血液癌症)的化合物和方法。

Description

治疗血液癌症的方法
技术领域
本发明总体上涉及用于治疗癌症的药物成分和方法，特别地涉及三(8-羟基喹啉)镓(III)，及其用于治疗血液癌症的使用方法。
发明背景
血液恶性肿瘤或血癌是起源于骨髓或淋巴组织的多样化的但又相互关联影响血液功能的癌症，。每年，新增的白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和骨髓瘤的病例占美国所有新诊断癌症病例的近10％。虽然已开发出利用抗体和激酶抑制剂(如伊马替尼-BCR-ABL抑制剂)的靶向治疗，但治疗血液癌症仍然在很大程度上依赖于化疗和放疗，它们通常表现出低效且有明显的副作用。目前仍需要不同作用机制的新型药物治疗血液癌症。美国专利公开第2009/0137620号中披露三(8-羟基喹啉)镓(III)能够有效地导致黑色素瘤细胞系中的细胞凋亡和细胞死亡。然而，一直不知道这化合物在治疗血液癌症上是否有用，特别是那些对其它抗癌药物成呈抵抗性的血液肿瘤。
发明概述
本发明提供治疗各种血液癌症的方法。一方面，本发明提供了一种对于血液癌症的治疗、预防或延缓发病的方法，尤其是导致病人的血液肿瘤细胞凋亡和细胞死亡，其中包括给血液癌症患者摄入有效治疗或预防剂量的符合下述通式(I)的化合物或其在药学上可接受的盐(例如，三(8-羟基喹啉)镓(III))。
另一方面，提供了一种对于抵抗性血液癌症的治疗、预防或延缓发病方法，包括给患者摄入有效治疗或预防剂量的符合下述通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐(例如，三(8-羟基喹啉)镓(III))，其中所述患者对选自包括长春花生物碱类、蒽环类(例如，多柔比星)、蒽二酮、表鬼臼毒素、喜树碱、来那度胺、沙利度胺、氨甲喋呤、环磷酰胺、阿霉素、泼尼松、阿糖胞苷(cytarabine)、Ara-C和氟达拉滨中的一种或多种药物有抵抗性。
还提供了根据下面通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐(例如，三(8-羟基喹啉)镓(III))在制备用于本发明的方法的药物的应用。
本发明的以上所述及其它优点和特征以及实现这些特征和优势的方式，在考虑下面有关本发明的详细描述以及所附的表现优选范例性实施方案的例子之后将会更加明了。
附图概述
图1显示的三(8-羟基喹啉)合镓(III)抑制BJAB淋巴瘤细胞的细胞活力和增殖，其能剂量依赖性低抑制增殖达100％(给药时间为24小时)；
图2显示用不同浓度的三(8-羟基喹啉)镓(III)处理BJAB细胞48小时并用与阳离子染料JC-1(5，5’，6，6’-四氯-1，1，3，3’-四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物染色细胞之后，用流式细胞仪所测得的线粒体膜电位损伤。细胞线粒体通透性转换值以低□Ψm±SD(n＝3)细胞的百分比来表示；
图3显示用三(8-羟基喹啉)镓(III)处理72小时后，通过流式细胞仪测定BJAB细胞的亚二倍体DNA测得的细胞凋亡的图标。数据以亚二倍体百分比(subG1)±ESD(n＝3)的形式给出，与凋亡细胞数量一致。
图4A和图4B显示三(8-羟基喹啉)镓(III)分别诱导耐长春新碱(图4A)和耐柔红霉素(图4B)NALM-6细胞凋亡。用不同浓度药剂处理72小时后，通过流式细胞仪扫描分析测定DNA片段化程度。结果清楚地显示了三(8-羟基喹啉)镓(III)能够克服相对于长春新碱和柔红霉素的抗性。用具亚二倍体DNA的细胞±s.d.(n＝3)的百分比形式给出DNA片段化的值。
图5显示了用不同浓度的三(8-羟基喹啉)镓(III)处理载体转染(模拟BJAB)或FADD-dn-转染的BJAB细胞(BJAB FADDdn)72小时后通过流式细胞仪测得的DNA片段化。DNA片段化用具亚二倍体DNA的细胞的百分比+s.d.(n＝3)表示
图6是色谱图，显示了对经过三(8-羟基喹啉)镓(III)处理过的BJAB细胞的免疫印迹分析。表柔比星是作为阳性对照使用。经过24小时处理后，蛋白提取物在变性的4-20％聚丙烯酰胺凝胶电泳中分馏，转移到硝酸纤维素膜上，用抗细胞凋亡蛋白酶-3/-9和抗β-肌动蛋白抗体检测。A：细胞凋亡蛋白酶-9(procaspase：47kDa；裂解产品：37kDa)，B：细胞凋亡蛋白酶-3(procaspase：32kDa；裂解产品：18和17kDa)，C：β-肌动蛋白(42kDa)；
图7是一个曲线图，显示了三(8-羟基喹啉)镓(III)(MTT法)在DoHH2细胞中剂量依赖性地抑制生长。X轴：三(8-羟基喹啉)镓(III)的浓度(μM)，Y轴：对照％；
图8是一个曲线图，显示了三(8-羟基喹啉)镓(III)(MTT法)在Granta 519细胞中剂量依赖性地抑制生长。X轴：三(8-羟基喹啉)镓(III)浓度(μM)，Y轴：对照％；
图9是一个曲线图，显示三(8-羟基喹啉)镓(III)(MTT法)在WSU-DLCL2细胞中剂量依赖性地抑制生长。X轴：三(8-羟基喹啉)镓(III)浓度(μM)，Y轴：对照％。
发明详述
本发明至少部分基于化合物三(8-羟基喹啉)镓(III)在治疗各种血液系统癌症包括白血病和淋巴瘤特别有效这一发现。因此，本发明的第一个方面，提供治疗血液癌症的方法。该方法包括用有效治疗剂量的通式(I)所示的镓络合物或其药学上可接受的盐对需要治疗的患者进行治疗：
Figure BDA00002249773700031
其中R1代表氢，一种卤族元素或磺酸基SO3M，M是一种金属离子，并且R2代表氢，或者R1是C l且R2是I。在一个实施例中，用于治疗血液癌症的方法包括用有效治疗剂量的通式(I)表示的镓络合物或者它的一种药学上可接受的盐来对需要治疗的血液癌症患者进行治疗，其中所述的血液癌症不能是急性早幼粒细胞白血病。即，本发明使用有效剂量的通式(I)表示的一种镓络合物或者它的一种药学上可接受的盐来制备治疗血液癌症的药物用于治疗被诊断为具有血液癌症的患者。优选地，上述所选血液肿瘤不包括急性早幼粒细胞性白血病。在优选方案中，镓络合物是三(8-羟基喹啉)镓(III)或其药学上可接受的盐。
恶性血液病通常来自两个主要的血细胞谱系：髓性细胞和淋系细胞。淋巴瘤和淋巴性白血病或淋巴细胞性白血病来自淋巴样细胞。这些包括急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞白血病(HCL)、T细胞或B细胞幼淋巴细胞白血病(T-PLL或B-PLL)和骨髓瘤。髓细胞性白血病或骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征(MDS)和骨髓增生性疾病(MPD)来自髓系细胞。这些包括急性髓性白血病(AML)、慢性粒性白血病(CML)、慢性粒细胞性白血病(CGL)，急性单核/单核细胞性白血病(AMOL)和骨髓纤维瘤。
用不同的实验模型来测试三(8-羟基喹啉)镓(III)，令人惊讶地发现，该化合物对不同种血液癌症具有广谱活性。
因此，在一个实施方案中，在根据本发明来治疗血液癌症，选择一种源于髓性的血液癌症，即来自髓性细胞，优选地，上述所选血液癌症不包括急性早幼粒细胞性白血病。在具体的实施方案中，本发明的方法用于治疗髓性白血病。在一些具体的实施例中，本发明的方法用于治疗髓性白血病，其中所述髓性白血病不是急性早幼粒细胞白血病。在一些具体的实施例中，本发明的方法是用于治疗急性髓细胞性白血病(AML)，慢性粒细胞性白血病(CGL)，急性单核/单核细胞白血病(AMOL)，慢性粒性白血病(CML)，骨髓增生异常综合征(MDS)，骨髓增生性疾病(MPD)和骨髓纤维瘤，优选地，所述血液肿瘤不包括急性早幼粒细胞白血病。
在另一个实施方案中，血液癌症是源于淋巴细胞的(例如，淋巴瘤、淋巴细胞性白血病和骨髓瘤)。在具体的实施方案中，本发明的方法是用于治疗B细胞白血病或T细胞白血病。在具体的实施方案中，本发明的方法被应用到治疗淋巴母细胞或淋巴细胞性白血病，例如，急性淋巴细胞白血病(ALL)(包括，例如，前体B急性淋巴细胞白血病，前体T急性淋巴细胞白血病和急性双表型白血病)，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)(例如，B-细胞幼淋巴细胞白血病)，T-细胞幼淋巴细胞白血病(T-PLL)。在另一实施例中，血液癌症是多发性骨髓瘤。
在一个实施方案中，本方法用于治疗淋巴瘤(例如，霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤)。对于非霍奇金淋巴瘤，该方法可用于治疗T细胞淋巴瘤或自然杀伤(NK)细胞淋巴瘤。在具体的实施方案中，该方法被用于治疗多发性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(BL)、边缘区淋巴瘤(MZL)、移植后淋巴增殖性疾病(PTLD)、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)，或Waldenstr
Figure BDA00002249773700051
m’s巨球蛋白血症或毛细胞白血病。
本发明的这一方面的各种实施方案中，治疗方法还可选地包括一个诊断或鉴别患者是否患有血液癌症的步骤，然后对被诊断的患者施用本发明有效剂量的化合物，例如三(8-羟基喹啉)镓(III)。各种血液癌症可以用任何已知的传统方法诊断，这些方法包括全血计数、血片、淋巴结活检、骨髓穿刺检查、细胞遗传学分析、或者免疫表型分析(例如，淋巴瘤、多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病)。
此外，还惊人地发现，三(8-羟基喹啉)镓(III)对于对一种或多种其它药物有抗性的血癌细胞同样有效，这些药物包括长春花属生物碱、、蒽二酮、表鬼臼毒素、喜树碱、来那度胺、沙利度胺、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、氟达拉滨、环磷酰胺、阿霉素和强的松。因此，在本发明的另一个方面，提供了一种治疗抵抗性血液癌症的方法，包括用有效治疗剂量的通式(I)表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如，三(8-羟基喹啉)-镓(III))来治疗诊断为具有抵抗性血液癌症的患者。在一个实施方案中，患者带有对下列药物中的一种或多种具有抵抗性的血液癌症，这些药物包括长春花生物碱类、蒽环类、蒽二酮、表鬼臼毒素、喜树碱、来那度胺、沙利度胺、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、氟达拉滨、环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和强的松。也就是说，本发明还涉及到使用通式(I)表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如三(8-羟基喹啉)-镓(III))来制备用于治疗抵抗性血液肿瘤的药物，例如，治疗对一个或多个选自长春花生物碱类药物(例如，长春新碱、长春花碱、长春瑞滨)，蒽环类(例如，多柔比星，柔红霉素，表柔比星)，蒽二酮(例如，米托蒽醌和pixantrone)，表鬼臼毒素(例如，依托泊苷和替尼泊苷)，喜树碱(例如，拓扑替康，伊立替康)，来那度胺，沙利度胺，甲氨蝶呤，Ara-C(阿糖腺苷)，氟达拉滨，环磷酰胺，阿霉素，长春新碱，强的松，紫杉烷类药物(如紫杉醇、多西他赛)有抵抗性或抗药性的血液肿瘤。
此处使用的“抵抗性血液癌症”这个术语，指的是对一种抗肿瘤治疗(不含通式(I)所表示的化合物在内)没有有效反应、或对一种抗肿瘤治疗(不含通式(I)所表示的化合物在内)有效反应后又发生复发、重返的血液癌症。因此，此处使用的“对一种治疗方案有抵抗性的血液癌症”，是指这种血液癌症对这种治疗方案没有应答或有抗性，或者对这种治疗有应答之后又发生复发。
因此，在一些实施方案中，在本发明的方法中，通式(I)所代表的化合物或其药学上可接受的盐(例如，三(8-羟基喹啉)镓(III))用于治疗血液癌症患者，其带有的肿瘤对一种或多种选自长春花生物碱(例如，长春新碱，长春花碱，长春瑞滨)，蒽环类(例如，多柔比星，柔红霉素，表柔比星)，蒽二酮(例如，米托蒽醌和pixantrone)表鬼臼毒素(例如，足叶乙甙和替尼泊苷)，喜树碱(例如，拓扑替康，伊立替康)，来那度胺，沙利度胺，甲氨蝶呤，阿糖胞苷(Ara-C)，氟达拉滨，环磷酰胺，阿霉素，长春新碱，强的松，紫杉烷类药物(如紫杉醇和多西他赛)的治疗具有抗性。换言之，所述方法是用于治疗先前经受过包括一种或多种选自长春花生物碱(例如，长春新碱，长春花碱，长春瑞滨)，蒽环类(如多柔比星，柔红霉素，表阿霉素)，蒽二酮(例如，米托蒽醌和匹杉琼)，表鬼臼毒素(例如，足叶乙甙和替尼泊苷)，喜树碱(例如，拓扑替康，伊立替康)，来那度胺，沙利度胺，甲氨蝶呤，Ara-C(阿糖胞苷)，氟达拉滨，环磷酰胺，阿霉素，长春新碱，强的松，紫杉烷(例如，紫杉醇和多西紫杉醇)的药物治疗但是发现对这种治疗没有反应或出现抗性的血癌。在其它实施方案中，该方法是用于治疗先前已经经受过包括一种或多种选自长春花生物碱(例如，长春新碱，长春花碱，长春瑞滨)，蒽环类(例如，多柔比星，柔红霉素表阿霉素)，蒽二酮(例如，米托蒽醌和匹杉琼)，表鬼臼毒素(例如，足叶乙甙和替尼泊苷)，喜树碱(例如，拓扑替康，伊立替康)，来那度胺，沙利度胺，甲氨蝶呤，Ara-C(阿糖胞苷)，氟达拉滨，环磷酰胺，阿霉素，长春新碱，强的松和紫杉烷(例如，紫杉醇和多西紫杉醇)的治疗但却反复或复发的血液癌症患者，也就是说，先前已经用一个或多个这样的药物治疗的血液癌症患者，最初这种一个或多个药物对其癌症有效果，但随后被发现复发了。
在特定的实施方案中，通式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如三(8-羟基喹啉)镓(III))用于治疗先前经受过长春花生物碱类药物(如长春新碱，长春花碱，或长春瑞滨)治疗的血液癌症(例如，非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、或急性淋巴细胞白血病)患者，例如那些经过包括长春花生物碱类(长春新碱，长春花碱，或长春瑞滨)的治疗方案的治疗而后复发的病人。
在另一些特定的实施方案中，通式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如，三(8-羟基喹啉)镓(III))用于治疗先前经受过蒽环类药物(如阿霉素，柔红霉素，伊达比星或表柔比星)治疗的血液癌症患者(例如，患有白血病、霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤的患者)，例如那些经过包含蒽环类(如阿霉素，柔红霉素，伊达比星或表柔比星)的治疗方案治疗但表现出抗药性或随后复发的病人。
在另一些特定的实施方案中，通式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如三(8-羟基喹啉)镓(III))用于治疗先前经受过蒽二酮(例如，米托蒽醌或匹杉琼)药物治疗的血液癌症(例如，非霍奇金淋巴瘤)的患者，例如那些经过包含米托蒽醌或匹杉琼的治疗方案治疗但表现出抗药性或随后复发的病人。
在另一些特定的实施方案中，通式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如，三(8-羟基喹啉)镓(III))用于治疗先前经受过喜树碱药物(例如，拓扑替康，伊立替康)治疗的血液癌症患者，例如那些经过包含拓扑替康或伊立替康的治疗方案治疗但表现出抗药性或随后复发的血癌病人。
在另一些特定的实施方案中，通式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如，三(8-羟基喹啉)镓(III))用于治疗先前经受过PDGF-Rβ抑制剂(例如，伊马替尼)药物治疗的血液癌症(例如，慢性髓细胞性白血病(CML))患者，例如那些经过包含伊马替尼的治疗方案治疗但表现出抗药性或随后复发的血癌(如慢性髓细胞性白血病(CML))患者。
在另一些特定的实施方案中，通式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如，三(8-羟基喹啉)镓(III))用于治疗先前经受过来那度胺或沙利度胺药物治疗的血液癌症(例如，多发性骨髓瘤)患者，例如那些对包含来那度胺或沙利度胺的治疗表现出抗性或经包含来那度胺或沙利度胺的治疗后复发的患者的血癌(例如，多发性骨髓瘤)。
在另一些特定的实施方案中，通式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如，三(8-羟基喹啉)镓(III))用于治疗先前经受过来那度胺或沙利度胺药物治疗的血液癌症(例如，骨髓纤维瘤)患者，例如那些对包含来那度胺或沙利度胺的治疗表现出抗性或经包含来那度胺或沙利度胺的治疗后复发的患者的血癌(例如，骨髓纤维瘤)。
在另一些特定的实施方案中，通式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如，三(8-羟基喹啉)镓(III))用于治疗先前接受过阿糖胞苷药物治疗的血液癌症患者(例如，患者具有急性髓细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病(ALL)或淋巴瘤)，例如那些对包含阿糖胞苷的治疗表现出抗性或经包含阿糖胞苷的治疗后复发的患者的血癌(例如，急性髓细胞性白血病，急性淋巴细胞性白血病(ALL)或淋巴瘤)。
在另一些特定的实施方案中，通式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如，三(8-羟基喹啉)镓(III))用于治疗先前接受过氨甲喋呤药物治疗的血液癌症患者(例如患有急性淋巴细胞白血病(ALL)或非霍奇金淋巴瘤患者)，例如那些对包含氨甲喋呤的治疗表现出抗性或经包含氨甲喋呤的治疗后复发的患者的血癌(例如，急性淋巴细胞白血病(ALL)和非霍奇金淋巴瘤)。
在另一些特定的实施方案中，通式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如，三(8-羟基喹啉)镓(III))用于治疗先前接受过氟达拉滨药物治疗的血液癌症患者(例如，慢性淋巴细胞白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤、或急性髓性白血病(AML)患者)，例如那些对包含氟达拉滨的治疗表现出抗性或经包含氟达拉滨的治疗后复发的患者的血癌(例如，慢性淋巴细胞白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤或急性髓性白血病(AML))。
在另一个特定的实施方案中，通式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如，三(8-羟基喹啉)镓(III))用于治疗先前接受过阿扎胞苷或地西他滨治疗的血液癌症患者(例如，骨髓增生异常综合征(MDS)的患者)，例如那些对包含来那度胺、阿扎胞苷或地西他滨的治疗表现出抗性或经包含来那度胺、阿扎胞苷或地西他滨的治疗后复发的患者的血癌(例如，骨髓增生异常综合征(MDS)的患者)。
在另一个特定的实施方案中，通式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如，三(8-羟基喹啉)镓(III))用于治疗先前经过一个或多个选自环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松的药物治疗的血液癌症患者(例如非霍奇金淋巴瘤患者)，例如那些经受过包含一个或多个选自环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松的药物的治疗方案治疗但表现出抗药性或随后复发的病人血液癌症(例如，非霍奇金淋巴瘤的患者)。
为了检测耐药性血液癌症，可以通过仔细监控经历过初始治疗的患者的抗性、无应答性、或复发性的征兆。这可以通过监测患者的恶性肿瘤对初始治疗的反应，例如，治疗可以包括长春花生物碱类、蒽环类、蒽二酮、表鬼臼毒素、喜树碱、来那度胺、沙利度胺、阿糖胞苷、氟达拉滨、环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松中的一种或几种。癌症对初始治疗的反应、无反应、或复发可以由任何合适的已普遍应用方法来检测确定。例如，可以通过评估肿瘤的大小和数目来确定，肿瘤大小或数目的增加表明肿瘤对化疗没有反应，或说明发生复发，做出确定的依据可以是Therasse et al，J.Natl.Cancer Inst.92：205-216(2000)详细描述的实体瘤疗效评价标准(“RECIST”)。
依照本发明的另一方面，提供了一种预防或延迟血液癌症发病，或预防或延迟血液癌症复发的方法，包括给需要预防或延迟的患者摄入有效预防剂量的适合药用的一种通式(I)表示的化合物或者此化合物的一种药学上可接受的盐(例如三(8-羟基喹啉)-镓(III))。
为了预防或延迟血液癌症的复发，已经接受过治疗并且得到缓解、或病情稳定、或处于无进展状态的血液癌症患者，可以用有效预防剂量的、适合药用的一种通式(I)表示的化合物或者此化合物的一种药学上可接受的盐(例如三(8-羟基喹啉)-镓(III))进行治疗，能够有效预防或延迟血液癌症的复发。
此处用到的短语“用......治疗......”或它的改述，意思是给患者摄入一种化合物或引起患者体内一种化合物的形成。
依照本发明提供的方法，血液癌症可以用一种有效治疗剂量的适合药用的通式(I)表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如三(8-羟基喹啉)-镓(III))治疗，这类药物可以单独使用，也可以与一种或几种其它抗癌药物联合使用。作为药学上可接受盐的例子有碱金属盐(例如，钠盐或钾盐)、铵盐等。
通式(I)表示的化合物可以通过静脉注射或口服或其它合适的方法，按患者每千克的体重0.1-1000mg的剂量给予病人。活性成分可以在预定的间隔摄入，比如一天3次。应该了解的是，上面提到的剂量范围只是示范性的，而并不是想限制本发明的范围。活性化合物的有效治疗剂量可能根据各种因素而不同，这些因素包括但不仅限于，所使用化合物的活性、患者体内活性化合物的稳定性、所要缓解的病症的严重程度、所治疗患者的总体重、给药的途径、活性化合物在患者体内吸收的容易程度、分布、排泄，所治疗患者的年龄和敏感性等等，这些对技术人员来说都是显而易见的。摄入量可因各种因素随着时间变化而调整。根据本发明，提供了一种通式(I)表示的化合物或者此化合物的一种药学上可接受的盐(例如三(8-羟基喹啉)-镓(III))在制备一种可以用于治疗血液癌症的药物中的应用。
这种药物可以是口服或注射剂型，例如适合于静脉注射、皮下注射或肌肉注射给药。注射剂型比如缓冲溶液或悬浮液在本技术领域内众所周知。
依据本发明的另一个方面，提供了一种医药试剂盒，包括一个容器里的一个单位剂型的通式(I)表示的化合物或其一种药学上可接受的盐(如，三(8-羟基喹啉)-镓(III))；也可以还包括根据本发明方法的试剂盒使用说明书，例如治疗、预防血液癌症或延迟血液癌症的发作，或者是预防或延缓血液癌症，或治疗抵抗性血液癌症。对技术人员来说显而易见，单元剂型的治疗化合物的剂量由本发明方法中使用于患者的剂量决定的。在试剂盒中，例如，通式(I)表示的化合物或其药学上可接受的盐(例如三(8-羟基喹啉)-镓(III))可以是以片剂的形式，每片按1mg单位的剂量。
实施例1
细胞在合适的培养条件下进行繁殖，直到有足够的细胞用于试验。吸附的细胞用胰蛋白酶处理，测定细胞的数量和存活率(Casy TT，
Figure BDA00002249773700111
系统)。这些细胞(存活率＞95％)在100μl的细胞培养液中，以适当密度把活细胞接种到96孔的组织培养板中。将细胞在37℃和5％CO2下培养24小时。
每个稀释浓度的100μl的三(8-羟基喹啉)镓(III)(“药物”)被分为三份添加到细胞中。作为阴性对照，100ul的细胞培养基被添加到三个加样孔中(100％值)。作为阳性对照，将细胞用苯酚杀死(0％值)，将经药物处理的细胞在37℃和5％CO2下进一步培养48小时。
对上面经过治疗的细胞进行XTT试验。XTT是一个四唑盐，可以被“琥珀酸-四唑还原酶”裂解，此为只活跃在活细胞中的一个线粒体氧化还原反应。裂解后产生可溶性formazan，可以用比色法在450nm定量测量，橙色的强度与存活的代谢活跃的细胞的数量直接相关。制备一个浓缩原液(1mg/ml PBS)XTT(Sigma-Aldrich)，分装，过滤，在-20℃下储存。在测定板的各孔中加入40ul的XTT溶液，然后将细胞在37℃和5％CO2下在XTT溶液中培养8小时。产生的formazan在微孔板吸光度测读仪(Genios，Tecan)上定量检测，它的测定波长为450nm，参考波长为690nm。
测试的肿瘤细胞系总结在下面的表1中。在所有细胞系中三(8-羟基喹啉)镓(III)能有效的抑制细胞生长和增值，IC50值全部低于3.5μM。
表1
例2
要测试三(8-羟基喹啉)镓(III)(“药物”)的活性，使用选定的血液肿瘤细胞株进行MTT试验。细胞被接种在96孔板上(每孔2x103细胞，100μl/孔)，被允许恢复24小时。每孔加入含该药物的100μl生长培养液，培养细胞3小时后，更换不含药物的培养液。在从开始培养计时72小时后，用MTT法按照制造商的建议(EZ4U，Biomedica，维也纳，奥地利)检测死亡细胞。下面的表2总结了测试的细胞系。在所有细胞系中三(8-羟基喹啉)镓(III)能有效的诱导细胞死亡，IC50值在约在1.8μM至3.5μM之间。用过度表达MRP-1或者Pgp蛋白的细胞和非过度表达此类MDR蛋白的细胞分别进行测试，它们在IC50值上没有统计学上差异。即，过度表达MRP-1或者Pgp蛋白的细胞对三(8-羟基喹啉)镓(III)没有抗性。PGP/MRP-1过度表达对下列药物的抗性，比如长春新碱、长春花碱、长春瑞滨、多西他赛、紫杉醇、依托泊苷、米托蒽醌、多柔比星、表柔比星、托泊替康、伊立替康、氨甲喋呤、和伊马替尼等。参阅Fojo & Menefee，Ann.Oncol.，18(Supplement5)：v3v8(2007)。因此，三(8-羟基喹啉)镓(III)对于对这些药物有抗性的血液肿瘤细胞应该会有效。
表2
Figure BDA00002249773700121
例3
要确定三(8-羟基喹啉)镓(III)和来那度胺(lenalidomide)的生长抑制活性，用一组具有代表性的人类多发性骨髓瘤细胞系(OPM-2，RPMI-8226，NCI-H929和ARH-77)进行这些化合物的抗增殖试验。具体地说，人的肿瘤细胞以适当的密度被放置在一个96孔微培养板中，总共生长96小时。在37℃，5％CO2和95％空气条件下在增湿培养箱中培养24小时后，用生长培养液连续稀释待测试化合物后加入到各孔。在CO2培养箱中培养96小时后，根据制造商的说明将这些板用细胞Titer-Glo处理(Promega#G7571)。使用Tecan公司的GENios测读仪读取发光值。计算细胞生长相对于未处理的对照孔细胞生长的抑制百分比。所有的测试在每个浓度都做重复试验。
用Prism3.03通过使用以下四参数逻辑方程曲线拟合数据来估算待测化合物的IC50值：
Y = Top - Bottom 1 + ( X / IC 50 ) n + Bottom
其中Top是相对于对照吸光度的最大百分比，Bottom是在化合物浓度最高时相对于对照吸光度的最小百分比，Y是相对于对照吸光度的百分比，X是药剂浓度，IC50是化合物抑制细胞生长达到对照细胞的50％时的浓度，n是曲线的斜率。表3是IC50数据总结。
表3
Figure BDA00002249773700132
例4
三(8-羟基喹啉)镓(III)在人类白血病细胞中的活性
人类白血病细胞系MV4-11细胞以90μL/孔被接种在96孔微培养板(Costar white，，平底#3917)上。在37℃、5％CO2和95％空气下在增湿培养箱中培养24小时后，将10μL10X的在生长培养液稀释成一系列浓度的三(8-羟基喹啉)镓(III)加入到每个孔中。在CO2培养器中培养96小时后，将这些板上的细胞和Titer-Glo处理试剂(Promega#G7571)带到室温下平衡30分钟。向每孔中加入100μL细胞Titer-
Figure BDA00002249773700141
试剂。将该板振摇2分钟，10分钟平衡，然后使用Tecan公司的GENios测读仪读取发光值。计算细胞生长相对于未处理的对照孔细胞生长的抑制百分比。所有的测试在每个浓度都做重复试验。用Prism3.03通过使用以下四参数逻辑方程曲线拟合数据来估算待测化合物的IC50值：
Y = Top - Bottom 1 + ( X / IC 50 ) n + Bottom
其中Top是相对于对照吸光度的最大百分比，Bottom是在化合物浓度最高时相对于对照吸光度的最小百分比，Y是相对于对照吸光度的百分比，X是药剂浓度，IC50是化合物抑制细胞生长达到对照细胞的50％时的浓度，n是曲线的斜率。化合物三(8-羟基喹啉)镓(III)在MV4-11中的IC50值是1.44μM。已经知道，MV4-11细胞对氟达拉滨，阿糖胞苷，阿霉素有抗性。见Colado et al.，Haematologica.，93(1)：57-66(2008)；Scatena et al.，Cancer Chemother.Pharmacol.，66(5)：881-8(2010)。因此，三(8-羟基喹啉)镓(III)可以有效地对抗耐阿糖胞苷，氟达拉滨，和阿霉素的白血病细胞。
范例5
为了进一步探索三(8-羟基喹啉)镓(III)临床前活性特征，对其在人类恶性淋巴瘤和白血病细胞系中的抗增殖作用和细胞毒性潜力进行了研究。本研究的进一步目的是研究三(8-羟基喹啉)镓(III)克服对常规癌症治疗药物多重耐药性的能力，并评估通过这一新的药剂触发的主要细胞凋亡通路。
A.方法和材料
高纯度的三(8-羟基喹啉)镓(III)是在奥地利维也纳大学无机化学研究所按照已经建立的方法合成的，。该化合物被溶于从Serva(Heidelberg，德国)取得的DMSO中，得到40mM母液。
使用下列细胞：BJAB(伯基特样淋巴瘤细胞)，模拟和FADD转染的BJAB细胞(BJAB FADD的细胞不表达能激活依赖于CD95受体的凋亡路径的FADD蛋白)；NALM-6(人B细胞前体白血病)细胞；以及具有长春新碱和柔红霉素抗药性NALM-6细胞。细胞每3-4天进行传代培养，通过稀释使浓度为1x105/ml。所有实验均在补充有10％热灭活小牛胎血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素和0.56g/1L-谷氨酰胺的RPMI 1640培养基(GIBCO，Invitrogen公司)中进行。试验前24小时，培养细胞的浓度为3×105/ml达到标准化的生长条件，为了细胞凋亡分析，在加入不同的药物之前将细胞稀释至浓度为1×105/ml。
通过乳酸脱氢酶(LDH)的释放来测定不同药物的细胞毒性。用不同浓度的三(8-羟基喹啉)镓(III)进行1小时温育后，用从Boehringer(曼海姆，德国)购得的CytotoxicityDetection Kit在细胞培养上清液中测定BJAB细胞释放的乳酸脱氢酶(LDH)活性。将上清液1500rpm离心5分钟。用80μl磷酸盐缓冲盐水(PBS)稀释20μl的无细胞上清液，然后加入含有2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基氯化四唑(INT)，乳酸钠，NAD+和心肌黄酶的100μl反应混合物，然后，对时间依赖性的反应产物在490nm进行光度定量。用在培养液中0.1％的Triton X-100将细胞裂解后测定细胞释放的最大数量的LDH活性，并设为代表100％的细胞死亡。
使用
Figure BDA00002249773700152
细胞计数+Innovatis分析系统(比勒费尔德，德国)来测定细胞的活性。为使用的细胞要求具体地定义设置。使用这个系统可以同时分析三种不同大小范围的细胞的浓度：因此细胞碎片、死细胞、活细胞可以一次性测量确定。细胞按1×105ce11s/ml的密度接种，并用不同浓度的[FeIII(salophene)Cl]处理；未处理的细胞作为对照。在24小时保温培养后，细胞彻底重新悬浮，每孔取100μl稀释于10ml CASYton(即用型的等渗盐水溶液)中，立即自动计数。
细胞凋亡通过经修饰的在单细胞水平上检测DNA碎片化的细胞周期分析来测定。细胞按1×105ce11s/ml的密度接种，并用不同浓度的三(8-羟基喹啉)镓(III)处理，37℃下恒温培养72小时后，通过1500rpm离心5分钟收集细胞，在4℃用PBS洗涤并在冰上用PBS/2％(v/v)甲醛固定在30分钟。固定后，将细胞沉淀，用乙醇/PBS(2∶1，v/v)孵育15分钟，沉淀并重新悬浮在含有40μg/ml RNA酶的PBS中。在37℃温度下降解RNA 30分钟，之后再次沉淀细胞，最后重新悬浮在含有50μM/ml碘化丙啶的PBS中。通过流式细胞仪测定亚二倍体DNA来测定核DNA断裂化程度。通过使用配备上CELL Quest软件的FACScan仪(Becton Dickinson公司，德国海德堡)来收集和分析数据。数据以亚二倍体(subG1)百分比的形式给出，这反映了调亡细胞的数量。
在蛋白质印记分析中，细胞质蛋白(15mg)上样到每个泳道并通过十二烷基硫酸钠(SDS)PAGE分离开。在蛋白质印迹到硝酸纤维素膜(Schleicher和Schue11，达瑟尔，德国)上后，将膜在含有3％脱脂牛奶的PBST(含有0.05％Tween-20的PBS)中封闭1小时，然后在4℃下与第一抗体孵育过夜。膜在PBST内洗涤三次后，在PBST中的第二抗体孵育1小时。最后将膜用PBST再次洗涤，并且以Amersham Buchler(不伦瑞克，德国)的ECL(增强化学发光)系统来显现蛋白条带。
对参与到不同凋亡途径中的多个基因的差异表达分析，根据制造商的说明来使用特定细胞凋亡RT2分析器(聚合酶链反应)PCR表达阵列(SuperArray PAHS-012；SABiosciences公司，Frederick，马里兰州，美国)。从Titanocene Y(30μM)处理8小时后的BJAB细胞中提取总RNA，然后用DNaseI(2U/μl)处理RNAs，来消除可能的基因组DNA污染。总RNA(700ng/μl)随后被用来作为模板，合成cDNA探针，按制造商的说明使用LightCycler480(Roche Diagnostics公司)实时定量PCR SuperArray分析。9个管家基因被用来校正杂交信号。使用SuperArray分析仪软件分析结果，所得数据以每个基因相对于以载体培养8小时的对照细胞中的表达相比得倍数的形式给出。
B.结果
1、三(8-羟基喹啉)镓(III)抗恶性细胞增生的效果
通过ELISA检测来测定细胞外的乳酸脱氢酶(LDH)可以排除药物的非特异性的细胞毒性如坏死。淋巴瘤细胞(BJAB)接触药物1小时后，没有明显的LDH释放，显示细胞死亡不是由非特异性效果引起的。
为了评估三(8-羟基喹啉)镓(III)抗恶性细胞增生的效果，BJAB淋巴瘤细胞放置于不同浓度的药物24小时。用
Figure BDA00002249773700161
细胞计时器和分析器系统来测定细胞活力和细胞计数。如图1所示，三(8-羟基喹啉)镓(III)以剂量依赖性的方式抑制肿瘤细胞的增殖，具有高效力，产生陡峭的浓度-效应曲线，IC50稍低于1μM，当≥2μM时完全阻止细胞增殖。
2、通过一个递减的线粒体膜电位调节三(8-羟基喹啉)镓(III) 诱导的细胞凋亡。
通过流式细胞方法测定线粒体通透性转换，反映了细胞的线粒体膜电位下降，从而表明这些细胞通过线粒体内在途径发生凋亡。根据图2可测得，三(8-羟基喹啉)镓(III)剂量依赖性地增加线粒体渗透性转换受损的淋巴瘤细胞(BJAB)。
3、体外诱导细胞凋亡
为了量化三(8-羟基喹啉)镓(III)触发的诱导细胞凋亡，我们测定了DNA断裂化(亚二倍体)作为凋亡性细胞死亡的特征性效果。用药物处理培养淋巴瘤细胞(BJAB)72小时后，通过流式细胞仪测量亚二倍体DNA。即使在低浓度的药物下也可达到广泛的细胞凋亡诱导。
4、三(8-羟基喹啉)镓(III)克服了对长春新碱的抵抗
多重药物抗性(MDR)是指同时抵抗不相关的化疗药物的现象。P-糖蛋白是ATP结合盒(ABC)转运蛋白家族的成员，并且已知其过度表达会导致MDR和介导主动运输有毒化合物出细胞。肿瘤细胞可能使用各种ABC转运蛋白，建立多重抗药性，这意味着一个治疗恶性疾病的直接障碍。参见Fojo & Menefee，Ann.Oncol.，18Suppl 5：v 38(2007)。蒽环类药物如柔红霉素和长春花生物碱如长春新碱是用于细胞毒性化疗强有力的药物。然而，这两类化合物是能够诱导多重抗药性的。耐长春新碱和柔红霉素的NALM-6细胞中显著P-gp过表达可以通过流式细胞仪分析验证，另外其还耐氟达拉滨和紫杉醇。用三(8-羟基喹啉)镓(III)处理两个抗性细胞系72小时后，测定DNA片段化。图4表明，与对照细胞相比，三(8-羟基喹啉)镓(III)能够在抗性细胞中诱导更大数量的凋亡，从而克服多重抗药性。
5、三(8-羟基喹啉)镓(III)通过内在途径诱导细胞凋亡
内在途径是以通过线粒体膜电位的损失为特点的，这一点在图2可见。CD95/Fas死亡受体介导的细胞凋亡的参与可以被排除，以佐证三(8-羟基喹啉)镓(III)通过内在途径诱导细胞凋亡这一结论。为了这一目的，应用了由过表达主导-阴性FADD突变型(BJAB FADDdn)的BJAB细胞和BJAB对照细胞(BJAB模拟)组成的细胞模型系统。通过DNA片段化程度来测定凋亡细胞，得到近似的细胞凋亡率(图5)。因此，我们得出这样的结论：三(8-羟基喹啉)镓(III)诱导的BJAB细胞细胞凋亡独立于CD95/Fas和FADD信号。
通过细胞蛋白印记分析，来调查连续激活细胞凋亡蛋白酶9和3，得到细胞凋亡通过内源性途径的进一步证据，两者都是细胞凋亡信号的转导和执行的至关重要的效应蛋白。用三(8-羟基喹啉)镓(III)处理BJAB细胞之后，通过蛋白裂解导致两个凋亡蛋白酶的激活都是在用三(8-羟基喹啉)镓(III)处理BJAB细胞之后测定的。如在图6所示，三(8-羟基喹啉)镓(III)诱导蛋白酶原3(p32)和蛋白酶原9(p47)的加工，产生两个凋亡蛋白酶的活性亚基(p17，p18；p37)。同等蛋白上样量用β-肌动蛋白来确认。
6、三(8-羟基喹啉)镓(III)诱导的细胞凋亡导致凋亡蛋白酶5和Harakiri的上调。
在用2.5μM三(8-羟基喹啉)镓(III)处理8小时的BJAB细胞中分离出的RNA中分析细胞凋亡相关基因转录水平的变化。我们通过实时PCR检测到显著升高的凋亡蛋白酶5(118倍上调)和Harakiri(29倍的上调)基因表达。Harakiri(H rk)是Bc1-2家族中一个促凋亡的仅有Bc1-2同源结构域3的蛋白质。这些结果表明，三(8-羟基喹啉)镓(III)处理对两个促凋亡的基因的转录起到很大影响。
C.讨论
细胞凋亡是程序性细胞死亡的一个形态上特殊的形式，这在发育、稳态以及包括癌症的各种疾病中起着重要的作用。既然恶性肿瘤的出现是由于失控的增殖和细胞无能力凋亡，迫切需要具有抑制增殖和诱导肿瘤细胞凋亡能力的潜在的抗癌药物。长春新碱-一种长春花生物碱和有丝分裂抑制剂，以及柔红霉素-一个对具有损伤DNA损伤功效的蒽环类药物，是现有最重要的抗肿瘤药物，并专门用于治疗白血病。
这里的结果有力证明正在开发的新药三(8-羟基喹啉)镓(III)强烈抑制淋巴瘤细胞(BJAB)增殖高达100％，并导致浓度依赖性地在淋巴瘤(BJAB)细胞中诱导细胞凋亡。对三(8-羟基喹啉)镓(III)诱导的细胞凋亡的定量分析，是通过在72小时后应用FACS分析测定了DNA片段化，并显示在微摩尔浓度的高凋亡效率(LC50在BJAB细胞：～1μM)。以有早期释放细胞内的乳酸脱氢酶(LDH)为特点的坏死性细胞死亡，可以被排除，因为培养1小时后在LDH试验中观察到的效果可以忽略不计。三(8-羟基喹啉)镓(III)作为细胞毒性剂有相当大的潜力，通过实时PCR获得的各种细胞凋亡相关基因的表达图谱数据给予进一步佐证，这些数据显示凋亡蛋白酶5(118倍)和Harakiri(29倍)的上调。此外，已被证明，三(8-羟基喹啉)镓(III)是以依赖细胞凋亡酶的方式通过内在线粒体途径显著诱导细胞凋亡。这些发现可以在BJAB细胞中分别通过线粒体膜电位的损失，FADD的独立性和检测细胞凋亡酶3的和细胞凋亡酶9显示。使用细胞毒性药物的抗癌治疗被认为是通过激活细胞凋亡酶介导细胞死亡的，这些细胞凋亡酶是是作为细胞凋亡程序中的主要效应子和关键因子的蛋白水解酶。
治疗的失败可能是由于多重抗药性(MDR)的形成，即一种机制能够上调膜转运蛋白如参与从肿瘤细胞排出细胞毒性药物的P-糖蛋白(P-gp)。由于治疗儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)是基于依赖P-糖蛋白的细胞生长抑制剂药物，并且P-gp表达与不良预后和高复发率相关，研究了对长春新碱或柔红霉素有抗性的NALM-6细胞，这些细胞分别还耐氟达拉滨和紫杉醇，并且过度表达P-gp。与对照细胞相比，这两种抗性细胞对三(8-羟基喹啉)镓(III)处理都具有更高的敏感性。这一发现清楚地表明，这一药物能够克服细胞中的多重抗药性。这些数据表明，三(8-羟基喹啉)镓(III)是一种很有潜力的新型抗肿瘤药物，具有能在由于P-糖蛋白过度表达而对常规化疗具有抗性的细胞模型中保持抗白血病的特性。
例6
要确定三(8-羟基喹啉)镓(III)在人淋巴瘤细胞系中的抗恶性增殖的活性，在DoHH2、Granta 519、WSU-DLCL2细胞株进行抗增殖实验。DoHH2人EBV阴性B细胞淋巴瘤细胞以5,000细胞/孔接种并且生长在含20％FBS和2mM L-谷氨酰胺的RPMI 1640培养基中。Granta519人类套细胞淋巴瘤细胞以10,000细胞/孔接种且生长在含10％FBS和2mM L-谷氨酰胺的DMEM培养基中。WSU-DLCL2人B细胞淋巴瘤细胞按5,000细胞/孔接种且生长在含10％FBS和2mM L-谷氨酰胺的RPMI1640培养基中。具体而言，人的肿瘤细胞被放置在一个96-孔微培养板中，以适当的密度给96小时的总生长时间。在37℃与％CO2和95％空气中，在增湿培养箱中培养24小时后，将以生长培养液系列稀释的待测药物加入到各孔。在CO2培养箱中经过96小时的培养后，按照制造商的说明将这些板用细胞Titer-Glo(Promega#G7571)处理。使用Tecan公司GENios进行荧光检测。计算相对于未处理的对照组的细胞生长抑制百分率。所有的测试在每个浓度都做重复试验。用Prism3.03通过使用四参数逻辑方程曲线拟合数据来估算待测化合物的IC50值，如上述例4所示的。化合物三(8-羟基喹啉)镓(III)的IC50值在DoHH2(Figure 7)为0.213μM，在Granta 519(Figure 8)为0.9μM，在WSU-DLCL2(Figure 9)为0.47μM。已知WSU-DLCL2细胞耐CHOP(环磷酰胺，阿霉素，长春新碱，强的松)治疗方案。见Leviet al.，Cancer Chemother.Pharmacol.，(2010年8月31日网上发表)。因此，三(8-羟基喹啉)镓(III)在对如环磷酰胺，阿霉素，长春新碱，强的松的药物具有抗性的淋巴瘤细胞中也有活性。
说明书中提及的所有论文和专利申请书是领域内技术人员对本发明相关的认识水平的体现。所有的论文和专利申请书在此通过相同程度的引用结合到文中，好像每篇单个的论文或专利申请书都是特定的和单独的提及而通过引用结合到文中。论文和专利申请书的仅仅提及不一定表示承认它们是相对于本申请的在先技术。
尽管前述的发明为了清楚的理解通过图示和例子的方式而描述的相当详细，但显然一些改变和修正可能在附加的权利要求范围内实行。

Claims (24)

1.通式(I)表示的化合物
Figure FDA00002249773600011
或其在医学上可接受的盐在制备治疗血液癌症的药物中的应用，其中R1代表氢，卤素或磺酸基SO3M，M是一种金属离子，并且R2代表氢，或者R1是Cl且R2是I。
2.权利要求1之应用，其中所述化合物是三(8-羟基喹啉)镓(III)。
3.权利要求1或2之应用，其中所述血液癌症是来源于骨髓的。
4.权利要求1-3中任一应用，其中所述血液癌症是骨髓性白血病。
5.权利要求1-4中任一应用，其中所述血液癌症不是急性早幼粒细胞白血病。
6.权利要求1-4中任一应用，其中所述血液癌症是急性髓细胞白血病、急性巨核细胞白血病、慢性粒细胞性白血病、急性单核细胞白血病、骨髓增生异常综合征(MDS)或者骨髓增生性疾病。
7.权利要求1或2中任一应用，其中所述血液癌症是起源于淋巴系统。
8.权利要求7中的应用，其中所述血液癌症是B细胞白血病或T细胞白血病。
9.权利要求7中的应用，其中所述血液癌症是淋巴母细胞或淋巴细胞性白血病。
10.权利要求7中的应用，其中所述血液癌症是急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)或T细胞幼淋巴细胞白血病(T-PLL)。
11.权利要求7中的应用，其中所述血液癌症是多发性骨髓瘤。
12.权利要求7中的应用，其中所述血液癌症是霍奇金淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤。
13.权利要求1-12中任何一应用，其中所述血液癌症是一种抵抗性血液癌症。
14.权利要求13中的应用，其中所述抵抗性血液癌症对于包含选自长春花生物碱类、蒽环类、蒽二酮、表鬼臼毒素、喜树碱、来那度胺、沙利度胺、阿糖胞苷和氟达拉滨中的一种或多种药物的治疗有抵抗性：。
15.权利要求13中的应用，其中所述血液癌症是经长春新碱、长春花碱或长春瑞滨治疗过的非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤或急性淋巴细胞白血病。
16.权利要求13中的应用，其中所述血液癌症是以前用阿霉素，柔红霉素，表柔比星治疗过的白血病、霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
17.权利要求13中的应用，其中所述血液癌症是以前用蒽醌(如，米托蒽醌或匹衫琼)治疗过的非霍奇金淋巴瘤。
18.权利要求13中的应用，其中所述血液癌症以前用喜树碱药物(如，托泊替康)治疗过。
19.权利要求13中的应用，其中所述血液癌症是用PDGF-Rβ抑制剂(如伊马替尼)治疗过的慢性粒细胞性白血病(CML)。
20.权利要求13中的应用，其中所述血液癌症是经过来那度胺或沙利度胺治疗的多发性骨髓瘤。
21.权利要求13中的应用，其中所述血液癌症是急性髓细胞白血病，急性淋巴细胞性白血病(ALL)或淋巴瘤，以前用阿糖胞苷治疗的。
22.权利要求13中的应用，其中所述血液肿瘤是经氟达拉滨治疗的慢性淋巴细胞白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤或急性髓系白血病(AML)。
23.权利要求13中的应用，其中所述血液癌症是经过选自环磷酰胺，阿霉素，长春新碱和强的松中的一种或多种治疗过的恶性淋巴瘤。
24.权利要求13中的应用，其中所述血液肿瘤是经来那度胺治疗过的MDS。
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