KR20010101131A - 폼페병의 치료 방법 - Google Patents
폼페병의 치료 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20010101131A KR20010101131A KR1020017007040A KR20017007040A KR20010101131A KR 20010101131 A KR20010101131 A KR 20010101131A KR 1020017007040 A KR1020017007040 A KR 1020017007040A KR 20017007040 A KR20017007040 A KR 20017007040A KR 20010101131 A KR20010101131 A KR 20010101131A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- glucosidase
- hour
- pompe disease
- alpha
- patient
- Prior art date
Links
- 206010053185 Glycogen storage disease type II Diseases 0.000 title claims abstract description 37
- 201000004502 glycogen storage disease II Diseases 0.000 title claims abstract description 35
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 97
- 101001018026 Homo sapiens Lysosomal alpha-glucosidase Proteins 0.000 claims abstract description 48
- 102000045921 human GAA Human genes 0.000 claims abstract description 45
- 208000032007 Glycogen storage disease due to acid maltase deficiency Diseases 0.000 claims abstract description 33
- 102100033448 Lysosomal alpha-glucosidase Human genes 0.000 claims abstract description 32
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims abstract description 10
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 claims description 85
- 102000016679 alpha-Glucosidases Human genes 0.000 claims description 79
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 36
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 36
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 35
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 35
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 32
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 28
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 26
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 26
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 26
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 25
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 25
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 25
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 25
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 25
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 19
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 18
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 18
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 17
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 11
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 10
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 8
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 claims description 7
- 239000012267 brine Substances 0.000 claims description 5
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 5
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 4
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 claims description 2
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 claims description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 claims 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 103
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 63
- 108010045758 lysosomal proteins Proteins 0.000 description 56
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 46
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 46
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 46
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 33
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 33
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 28
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 22
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 22
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 22
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 21
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 21
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 20
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 19
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 19
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 18
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 18
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 18
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 241000894007 species Species 0.000 description 15
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 14
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 14
- 101000910039 Bos taurus Alpha-S1-casein Proteins 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 12
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 12
- NBSCHQHZLSJFNQ-QTVWNMPRSA-N D-Mannose-6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 11
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 11
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 102000009366 Alpha-s1 casein Human genes 0.000 description 10
- 108050000244 Alpha-s1 casein Proteins 0.000 description 10
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 10
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 10
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 10
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 10
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 10
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 10
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 9
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 description 8
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 8
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical group NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 8
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 8
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 7
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 7
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 7
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 7
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 7
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 7
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 7
- 208000015439 Lysosomal storage disease Diseases 0.000 description 6
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 6
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 6
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 6
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 6
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 6
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 5
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 5
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 238000002565 electrocardiography Methods 0.000 description 5
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 5
- 125000000311 mannosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 4
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 4
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 4
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 4
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 4
- 235000021241 α-lactalbumin Nutrition 0.000 description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 3
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 3
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 3
- 108091058545 Secretory proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000040739 Secretory proteins Human genes 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 3
- 238000002641 enzyme replacement therapy Methods 0.000 description 3
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 3
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 3
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 3
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 3
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 3
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 3
- 210000002976 pectoralis muscle Anatomy 0.000 description 3
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 3
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 3
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 3
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 206010018852 Haematoma Diseases 0.000 description 2
- 206010020565 Hyperaemia Diseases 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 108010053927 Iduronate Sulfatase Proteins 0.000 description 2
- 102000008192 Lactoglobulins Human genes 0.000 description 2
- 108010060630 Lactoglobulins Proteins 0.000 description 2
- 208000033868 Lysosomal disease Diseases 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 102000019218 Mannose-6-phosphate receptors Human genes 0.000 description 2
- 108050006616 Mannose-6-phosphate receptors Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010041349 Somnolence Diseases 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 2
- 206010047571 Visual impairment Diseases 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- UYJXRRSPUVSSMN-UHFFFAOYSA-P ammonium sulfide Chemical compound [NH4+].[NH4+].[S-2] UYJXRRSPUVSSMN-UHFFFAOYSA-P 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007891 compressed tablet Substances 0.000 description 2
- 239000013601 cosmid vector Substances 0.000 description 2
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 208000007345 glycogen storage disease Diseases 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000005414 inactive ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 2
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 230000004199 lung function Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000001095 motoneuron effect Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 231100000279 safety data Toxicity 0.000 description 2
- 231100000817 safety factor Toxicity 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003412 trans-golgi network Anatomy 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 2
- -1 α-L-eduronidase Proteins 0.000 description 2
- 235000021247 β-casein Nutrition 0.000 description 2
- 235000021246 κ-casein Nutrition 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108050001786 Alpha-s2 casein Proteins 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 102100022146 Arylsulfatase A Human genes 0.000 description 1
- 102100031491 Arylsulfatase B Human genes 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 102100032487 Beta-mannosidase Human genes 0.000 description 1
- 101000741059 Bos taurus Alpha-S2-casein Proteins 0.000 description 1
- 101000946377 Bos taurus Alpha-lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 101000741065 Bos taurus Beta-casein Proteins 0.000 description 1
- 101001008231 Bos taurus Beta-lactoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010051093 Cardiopulmonary failure Diseases 0.000 description 1
- 102000004201 Ceramidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000751 Ceramidases Proteins 0.000 description 1
- 108010036867 Cerebroside-Sulfatase Proteins 0.000 description 1
- 241000715004 Chryseobacterium bernardetii Species 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010062344 Congenital musculoskeletal anomaly Diseases 0.000 description 1
- 208000006069 Corneal Opacity Diseases 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 208000027219 Deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 206010013883 Dwarfism Diseases 0.000 description 1
- 241001539473 Euphoria Species 0.000 description 1
- 206010015535 Euphoric mood Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- KUYCTNQKTFGPMI-SXHURMOUSA-N Glc(a1-2)Glc(a1-3)Glc(a1-3)Man(a1-2)Man(a1-2)Man(a1-3)[Man(a1-2)Man(a1-3)[Man(a1-2)Man(a1-6)]Man(a1-6)]Man(b1-4)GlcNAc(b1-4)GlcNAc Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC(=O)C)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O[C@@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O[C@@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]3[C@H]([C@@H](O[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)O3)O)O2)O)[C@@H](CO)O1 KUYCTNQKTFGPMI-SXHURMOUSA-N 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- 206010019842 Hepatomegaly Diseases 0.000 description 1
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- 102000016871 Hexosaminidase A Human genes 0.000 description 1
- 108010053317 Hexosaminidase A Proteins 0.000 description 1
- 102000016870 Hexosaminidase B Human genes 0.000 description 1
- 108010053345 Hexosaminidase B Proteins 0.000 description 1
- 208000015178 Hurler syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 208000008454 Hyperhidrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 1
- AYRXSINWFIIFAE-SCLMCMATSA-N Isomaltose Natural products OC[C@H]1O[C@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O AYRXSINWFIIFAE-SCLMCMATSA-N 0.000 description 1
- 206010023230 Joint stiffness Diseases 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- 238000012773 Laboratory assay Methods 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 208000032376 Lung infection Diseases 0.000 description 1
- 208000027933 Mannosidase Deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 1
- 208000036626 Mental retardation Diseases 0.000 description 1
- 206010056886 Mucopolysaccharidosis I Diseases 0.000 description 1
- 206010028095 Mucopolysaccharidosis IV Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000289692 Myrmecophagidae Species 0.000 description 1
- 108010027520 N-Acetylgalactosamine-4-Sulfatase Proteins 0.000 description 1
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 1
- FZLJPEPAYPUMMR-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-alpha-D-glucosamine 1-phosphate Chemical group CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OP(O)(O)=O FZLJPEPAYPUMMR-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 241000289371 Ornithorhynchus anatinus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000009097 Phosphorylases Human genes 0.000 description 1
- 108010073135 Phosphorylases Proteins 0.000 description 1
- 206010034960 Photophobia Diseases 0.000 description 1
- 241000220324 Pyrus Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 101000895752 Rattus norvegicus Alpha-S2-casein-like A Proteins 0.000 description 1
- 101000947125 Rattus norvegicus Beta-casein Proteins 0.000 description 1
- 101000667278 Rattus norvegicus Whey acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 102000005262 Sulfatase Human genes 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 101710087237 Whey acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- WJFVEEAIYIOATH-PVFLNQBWSA-N [(2r,3s,4r,5r,6s)-5-acetamido-3,4,6-trihydroxyoxan-2-yl]methyl hydrogen sulfate Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O WJFVEEAIYIOATH-PVFLNQBWSA-N 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-DVKNGEFBSA-N alpha-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-DVKNGEFBSA-N 0.000 description 1
- 108010030291 alpha-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000005840 alpha-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010012864 alpha-Mannosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000019199 alpha-Mannosidase Human genes 0.000 description 1
- 102000002014 alpha-N-Acetylgalactosaminidase Human genes 0.000 description 1
- 108010015684 alpha-N-Acetylgalactosaminidase Proteins 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 206010003549 asthenia Diseases 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010055059 beta-Mannosidase Proteins 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004903 cardiac system Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 230000009194 climbing Effects 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 150000002031 dolichols Chemical class 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000001780 epistaxis Diseases 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 201000008049 fucosidosis Diseases 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 210000003709 heart valve Anatomy 0.000 description 1
- 206010019847 hepatosplenomegaly Diseases 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 206010020871 hypertrophic cardiomyopathy Diseases 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N isomaltose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 239000003041 laboratory chemical Substances 0.000 description 1
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 1
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014380 magnesium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000007257 malfunction Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005399 mechanical ventilation Methods 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000472 morula Anatomy 0.000 description 1
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 1
- 201000002273 mucopolysaccharidosis II Diseases 0.000 description 1
- 208000005340 mucopolysaccharidosis III Diseases 0.000 description 1
- 208000022018 mucopolysaccharidosis type 2 Diseases 0.000 description 1
- 230000004220 muscle function Effects 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 235000021017 pears Nutrition 0.000 description 1
- 238000009521 phase II clinical trial Methods 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000718 qrs complex Methods 0.000 description 1
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 210000003019 respiratory muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000036387 respiratory rate Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000008684 selective degradation Effects 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 235000019615 sensations Nutrition 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 108060007951 sulfatase Proteins 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000035900 sweating Effects 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000004304 visual acuity Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
- A01K67/0276—Knock-out vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
- A01K67/0278—Knock-in vertebrates, e.g. humanised vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/0102—Alpha-glucosidase (3.2.1.20)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2207/00—Modified animals
- A01K2207/15—Humanized animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
- A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/107—Rabbit
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/01—Animal expressing industrially exogenous proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/0306—Animal model for genetic diseases
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Obesity (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
Abstract
본 발명은 인간 산 알파 글루코시다아제를 사용하여 폼페병을 치료하는 방법을 제공한다. 바람직한 치료 요법은 환자에 주당 10㎎/㎏체중 이상을 주입하는 것을 포함한다.
Description
관련된 출원의 참조
본 출원은 모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된 1998년 7월 12일에 제출된 USSN 60/111291로부터 우선권을 얻는다. 본 출원은 1995년 8월 2일에 제출된 USSN 60/001,796으로부터 우선권을 얻는 1996S년 7월 29일에 제출된 USSN 08/700,760에 관한 것이고, 둘 다 모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된다.
다른 분비성 단백질과 같이, 리소좀 단백질은 소포체에서 합성되고 골지체로 보내진다. 그러나, 대부분의 다른 분비성 단백질과 달리, 리소좀 단백질은 세포외 유동체가 아니라 세포내 기관에 분비된다. 골지안에서, 리소좀 단백질은 세포내 목적지에 도달하기 위해 그들에 장치하는 특별한 과정을 겪는다. 대부분의 모든 리소좀 단백질은 글리코실화 및 말단 만노오스 기의 6' 위치를 통해 포스포릴화를 포함하는 번역 후 다양한 변형을 겪는다. 포스포릴화된 만노오스 잔류물은 트랜스 골지 네트워크(Trans Golgi Network)의 내부 표면에 특별한 수용기로 인해 인식된다. 리소좀 단백질은 상기 수용기를 통해 결합하고, 그러므로 다른 분비성 단백질로부터 분리된다. 그 후, 수용기-결합된 단백질을 포함하는 작은 운반체가 트랜스 골지 네트워크로부터 떨어져 세포내 목적지에 목표된다. 일반적으로 Kornfeld, Biochem. Soc. Trans. 18,367-374(1990)을 참조하라.
특별한 리소좀 단백질의 결핍의 각 결과인 30개 이상의 리소좀 질병이 있고, 흔히 유전적 돌연변이의 결과이다. 예를 들면, Cotran외, Robbins Pathologic Basis of Disease(4판, 1989)(모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된)를 참조하라. 리소좀 단백질의 결핍은 대사물질의 해로운 축적을 일으킨다. 예를 들면, 헐러(Hurler), 헌터(Hunter), 모르키오(Morquio) 및 산필리포(Sanfilippo) 증후군에서, 뮤코폴리사카라이드 (mucopolysaccharide)의 축적이 있다; 테이삭스(Tay-Sachs), 고셔(Gaucher), 크라베(Krabbe), 니만-피크(Niemann-Pick) 및 파브리(Fabry) 증후군에서, 스핀고리피드(sphingolipid)의 축적이 있고; 및 푸코시도시스(fucosidosis) 및 만노시도시스(mannosidosis)에서, 푸코제-포함하는 스핀고리피드 및 글리코단백질 단편 및 만노제-포함하는 올리고사카라이드의 축적이 각각 있다.
글리코겐 저장 질병 타입 Ⅱ(GSD Ⅱ; 폼페병;산 말타제(maltase) 결핍)는 리소좀 효소 산 α-글루코시다아제(산 말타제)의 결핍에 의해 일어난다. 두개의 임상 형태는 구별된다: 유아의 빠른 발병 및 소년 및 성인의 늦은 발병. 유아 GSD Ⅱ는 생후 짧은 시간에 발병하고 점진적으로 근육 약화 및 심장 기능 부전을 나타낸다. 상기 임상 변이(변이)는 흔히 생후 첫 2년내에 치명적이다. 성인 및 소년환자에게서 늦은 발병의 증후는 생애에 더 늦게 일어나고, 골격근만이 포함된다. 환자들은 결국 호흡 기능 부전으로 죽는다. 환자들은 예외적으로 60년 이상 살 수도 있다. 병의 가혹함과 잔류 산 α-글루코시다아제 활성 사이의 상호 밀접한 관계가 있고, 활성은 늦은 발병에서 정상의 10-20% 및 병의 빠른 발병 형태에서 2%이하이다(Hirshhorn, The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease (Scriver외, 7판, McGraw-Hill, 1995), 2443-2464쪽).
리소좀 저장 질병의 1차 원인으로 리소좀 효소 결핍의 발견(예를 들면, Hers, Biochem. J. 86, 11-16(1963)를 참조하라) 때문에, 효소를 뺀 투여(정맥주사) 즉, 효소 치료법에 의해 리소좀 저장 질병의 환자를 치료하는 시도가 있어왔다. 폼페병에 대한 효소 대체 요법의 이 시험은 성공하지 못했다. 면역 반응을 주는, 아스퍼질러스(Aspergillus) 니거(niger)로부터 인간 아닌 α-글루코시다아제, 또는 세포에 의해 충분히 흡수되지 않는 효소의 형태(낮은 흡수 형태, 인간 태반으로부터 성숙한 효소; 하기를 참조하라)가 사용되었다. 또한, 치료하는 동안 둘다, 및/또는 투여된 효소의 양이 불충분하다(3-5). 천연 공급원 가령 인간 소변 및 소의 고환으로부터 리소좀 효소의 생산은 이론상 가능하지만 수득량이 낮고, 정제된 효소가 필수적으로 받아들이는 환자의 조직에 의해 흡수될 수 있는 형태는 아니다.
상기 불확실성 및 어려움에도 불구하고, 본 발명은 인간 산 알파 글루코시다아제를 사용하여 폼페병 환자를 치료하는 방법을 제공한다.
청구된 발명의 요약
한 측면에서, 본 발명은 폼페병 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 인간 산 알파 글루코시다아제를 치료에 효과적인 양을 환자에게 투여하는 것을 수반한다. 투여량은 바람직하게는 적어도 주당 10㎎/㎏체중 이다. 일부 방법에서, 투여량은 적어도 주당 60㎎/㎏ 체중 및 적어도 주당 120㎎/㎏ 체중이다. 일부 방법에서, 상기 투여는 주당 1회 및 다른 방법에서는 주당 3회 이루어진다. 일부 방법에서, 치료는 적어도 24주동안 지속된다. 투여방법은 바람직하게는 정맥주사이다. 인간 산 알파 글루코시다아제는 바람직하게는 인간 아닌 유전자 변형 포유류의 젖에서 얻고, 바람직하게는 주로 110kD 형태이다.
본 방법은 유아, 소년 또는 성인 폼페병 환자 치료에 사용될 수 있다. 유아 폼페병 치료의 일부 방법에서 효력은 적어도 1살이 되기까지 살아남은 환자에 의해 나타난다.
일부 방법에서, 인간 산 알파 글루코시다아제의 수준은 레쿠오우엡트 (recuouebt) 환자에게서 모니터된다. 선택적으로, 만약 알파-글루코시다아제의 수준이 환자에게서 역치 값 이하로 떨어진다면 인간 산 알파 글루코시다아제의 두번째 투여량이 투여된다.
일부 방법에서, 인간 알파 글루코시다아제는 정맥주사로 투여되고 투여속도는 투여되는 기간 동안 증가한다. 일부 방법에서, 투여 속도는 적어도 투여되는 기간 동안 10배로 증가한다. 일부 방법에서, 투여 속도는 적어도 5시간 내에 10배로 증가한다. 일부 방법에서, 환자는 일련의 적어도 네번 투여되고, 각 투여량은 전 투여량보다 더 강하다. 일부 방법에서, 투여량은 1차가 0.03-3㎎/㎏/시, 2차가0.3-12㎎/㎏/시, 3차가 1-30㎎/㎏/시 및 4차가 2-60㎎/㎏/시이다. 일부 방법에서, 투여량은 1차가 0.1-1㎎/㎏/시, 2차가 1-4㎎/㎏/시, 3차가 3-10㎎/㎏/시 및 4차가 6-20㎎/㎏/시이다. 일부 방법에서, 투여량은 1차가 0.25-4㎎/㎏/시, 2차가 0.9-1.4㎎/㎏/시, 3차가 3.6-5.7㎎/㎏/시 및 4차가 7.2-11.3㎎/㎏/시이다. 일부 방법에서, 투여량은 1차가 0.3㎎/㎏/시, 2차가 1㎎/㎏/시, 3차가 4㎎/㎏/시 및 4차가 12㎎/㎏/시이다. 일부 방법에서, 1차, 2차, 3차 및 4차 투여가 각각 15분 내지 8시간동안 투여된다.
일부 방법에서, 1차, 2차, 3차 및 4차 투여가 각각 1시간, 1시간, 0.5시간 및 3시간 동안 이루어진다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 멸균 형태에서 생리적으로 조건에 맞는 완충용액에 인간 산 알파 글루코시다아제, 인간 혈청 알부민 및 당을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 일부 상기 조성물은 인산 나트륨 완충용액에 인간 산 알파 글루코시다아제, 인간 혈청 알부민 및 글루코즈를 포함한다. 일부 조성물은 수용액에 알파 글루코시다아제, 만니톨(mannitol) 및 수크로즈를 포함한다. 일부 조성물에서 당은 만니톨과 수크로즈를 포함하고 만니톨의 농도는 수용액의 1-3%w/w이고 수크로즈의 농도는 수용액의 0.1 내지 1%w/w이다. 일부 조성물에서, 만니톨의 농도는 2%w/w이고 수크로즈의 농도는 0.5%w/w이다.
본 발명은 추가로 수용액에서 인간 산 글루코시다아제, 만니톨 및 수크로즈를 포함하는 약학 조성물을 냉동건조하여 냉동건조된 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 2차 조성물을 생성하기 위해 인간 산 알파-글루코시다아제, 만니톨, 수크로즈 및 수용액을 포함하는 1차 조성물을 냉동건조; 및 3차 조성물을 생성하기 위해 염수에서 냉동 건조된 조성물을 재구성하여 제조될 수 있다. 일부 상기 조성물에서, 인간 산 알파-글루코시다아제는 1차 및 3차 조성물 모두에서 5㎎/㎖이고, 만니톨은 1차 조성물에서 2㎎/㎖이고, 수크로즈는 1차 조성물에서 0.5㎎/㎖이고, 재구성 단계에 사용된 염수는 0.9%w/w이다.
본 발명은 재조합 유전학 및 의학의 분야이고, 폼페병 환자의 효소-대체 치료에 관한 것이다.
도 1: 산 α-글루코시다아제 cDNA를 포함하는 변형유전자. αs1-카세인 엑손은 열린 상자에 의해 표시되고; α-글루코시다아제 cDNA는 음영 상자에 의해 표시된다. αs1-카세인 인트론(intron) 및 서열 측면은 굵은 선으로 표시된다. 점선은 IgG 수용기 사이트를 표시한다. 전사 개시 사이트는 (), 번역 개시 사이트(ATG), 종결 코돈(TAG) 및 폴리아데닐화(polyadenylation) 사이트(pA)로 표시된다.
도 2(패널 A, B, C): 산 α-글루코시다아제 게놈 DNA를 포함하는 세개의 변형 유전자. 어두운 음영 영역은 αs1 카세인 서열이고, 열린 상자는 산 α-글루코시다아제 엑손을 표시하고, 열린 상자 사이의 점선은 α-글루코시다아제 인트론을 표시한다. 다른 표시는 도 1과 같다.
도 3(패널 A, B, C): 게놈 변형 유전자의 구조. α-글루코시다아제 엑손은 열린 상자에 의해 표시되고; α-글루코시다아제 인트론 및 번역되지 않은 서열은 점선으로 표시된다. pKUN 수용기 서열은 굵은 선으로 표시된다.
도 4. 웨스턴 블롯팅(Western blotting)에 의해 유전자 변형 마우스의 젖에서 산 α-글루코시다아제의 검출.
정의
용어 "실제 동일" 또는 "실제 상동"은 최적값으로 배열할 때, 가령 디폴트 간격 중량(default gap weight)을 사용하여 프로그램 GAP 또는 BESTFIT에 의해 두개의 펩티드 서열이 적어도 65 퍼센트 서열 동일, 바람직하게는 적어도 80 또는 90 퍼센트 서열 동일, 더욱 바람직하게는 적어도 95 퍼센트 이상 서열 동일(예를 들면, 99 퍼센트 서열 동일)을 공유하는 것을 의미한다. 바람직하게는, 동일하지 않는 잔류 위치는 보존적인 아미노산 치환에 의해 다르다.
용어 "실제 순수한" 또는 "분리된"은 목적 종(species)이 자연 환경의 구성요소로부터 확인되고 분리되고 및/또는 회복되는 것을 의미한다. 보통, 목적 종은 존재하는 주종이고(즉, 질량 기초에 조성물에 다른 개별적 종보다 더 풍부하다), 바람직하게는 실제로 순수한 분획은 상기 목적 종은 모든 존재하는 거대분자 종의 적어도 약 50퍼센트(질량 기초에)이상을 차지한다. 일반적으로, 실제로 순수한 조성물은 조성물에 존재하는 모든 거대 분자 종의 약 80 내지 90 중량 퍼센트 이상을 차지하는 것이다. 가장 바람직하게는 목적 종이 본질적 정제(오염물질 종은 종래의 검출 방법에 의해 조성물에서 검출될 수 없다)되고 여기서 조성물은 본질적으로 단일 거대분자 종의 유도체로 구성된다.
DNA 단편(segment)은 또 다른 DNA 단편과 기능적 관계에 놓일 때 실시 가능하게 연결된다. 예를 들면, 만약 폴리펩티드의 분비에 관여하는 프리단백질로 발현된다면 신호 서열에 대한 DNA는 실시 가능하게 폴리펩티드를 인코딩하는 DNA에연결된다; 만약 서열의 전사를 자극한다면, 프로모터(promotor) 또는 인핸서(enhancer)가 실시 가능하게 코딩 서열에 연결된다. 일반적으로, 실시 가능하게 연결된 DNA 서열이 연속되고, 신호 서열의 경우 및 읽기 상 모두에서 연속된다. 그러나, 인핸서가 조절하는 전사의 코딩 서열은 연속될 필요는 없다. 연결은 편리한 제한 사이트 또는 어댑터에서 결찰 또는 그것에 삽입된 링커(linker)로 이루어진다.
외부 원인에 의한 DNA 단편은 세포에 이질적이거나, 일치하더라도 숙주 세포 게놈에서 자연스럽지 않은 위치에 있다. 외부 원인에 의한 DNA 단편은 외부 원인에 의한 폴리펩티드를 발현한다.
유전자 변형(transgenic) 포유류에서, 모든, 또는 실제로 모든 생식세포라인(germline) 및 체세포는 빠른 태아 단계에서 포유류 또는 포유류의 조상에 도입된 변형 유전자를 포함한다.
본 발명은 유전자 변형 인간이 아닌 포유류가 분비하는 그들의 젖에서 리소좀 단백질을 제공한다. 분비물은 리소좀 단백질을 인코딩하는 변형 유전자 및 젖샘에 유전자의 목표화 발현할 수 있는 조절 서열을 혼합함으로 이루어진다. 변형 유전자는 발현되고, 발현 생성물은 번역 후에 젖샘 내에서 수정되고, 그 후 젖에 분비된다. 번역후 수정은 리소좀 단백질을 포함하는 만노오스-6 인산염을 생성하기 위해 글리코실화 및 포스포릴화의 단계를 포함할 수 있다.
A. 리소좀 유전자
본 발명은 리소좀 효소를 인코딩하는 30개 이상의 알려진 유전자 및 α-글루코시다아제, α-L-이듀로니다아제, 이듀로네이트-황산염 술퍼타아제, 헥소사미니다아제 A 및 B, 강글리오시드 활성제 단백질, 아릴술퍼타아제 A 및 B, 이듀로네이트 술퍼타아제, 헤파란 N-술퍼타아제, 갈락토-세라미다아제, α-갈락토실세라미다아제 A, 스핀고미엘리나제, α-푸코시다아제, α-만노시다아제, 아스팔틸글리코사민 아미드 히드롤라제, 산 리파제, N-아세틸-α-D-글루코사민-6-황산염 술퍼타아제, α-및 β-갈락토시다아제, β-글루큐로니다아제, β-만노시다아제, 세라미다아제, 갈락토-세레-브로시다아제, α-N-아세틸갈락토사미니다아제 및 보호하는 단백질 및 다른 것들을 포함하는 리소좀 단백질의 다른 형태를 포함하는 유전자 변형의 인간 아닌 포유류가 발현하는 DNA 단편을 제공한다. 대립, 동종 및 알려진 리소좀 단백질 유전자 서열의 유도된 변이형을 발현하는 유전자 변형의 포유류가 또한 포함된다. 상기 변이형은 보통 알려진 리소좀 단백질 유전자의 아미노산 수준에서 실제 서열 동일을 보인다. 상기 변이형은 보통 엄중한 조건(stringent conditon)하의 알려진 유전자에 하이브리다즈되거나 또는 알려진 유전자 하나로 인코딩한 폴리펩티드에 항체와 교차 반응한다.
리소좀 단백질을 인코딩하는 많은 알려진 유전자의 게놈 또는 cDNA 서열을 포함하는 DNA 클론을 이용할 수 있다. (Scott외, Am.J.Hum.Genet. 47,802-807(1990); Wilson외, PNAS 87,8531-8535(1990); Stein외, J.Biol.Chem.264,1252-1259(1989); Ginns외, Biochem.Biophys.Res.Comm. 123,574-580(1984); Hoefsloot외, EMBO J. 7,1697-1704(1988); Hoefsloot외, Biochem. J. 272,473-479(1990);Meyerowitz & Proia, PNAS 81,5394-5398(1984); Scriver외, 상기 12부, 2427-2882쪽 및 그 속에 인용된 참조) 게놈 및 cDNA 서열의 다른 예는 GenBank로부터 이용할 수 있다. 리소좀 유전자의 첨가된 클론 서열이 필요한 범위에, 탐색자로써 알려진 리소좀 단백질 DNA 서열 또는 알려진 리소좀 단백질에 항체를 사용하여 게놈 및 cDNA 라이브러리 (바람직하게는 인간)로부터 얻을 수 있다.
B. 리소좀 단백질의 구조
재조합 리소좀 단백질은 바람직하게 자연적으로 일어나는 리소좀 단백질과 같거나 유사한 구조를 갖기 위해 처리된다. 리소좀 단백질은 소포체(RER)에 결합된 리보솜에서 합성된 글리코단백질이다. N-말단 신호 펩티드(Ng외, Current Opinion in Cell Biology 6,510-516(1994))에 의해 공-번역으로 상기 기관에 들어간다. N-연결된 글리코실화 과정은 돌리콜(dolichol) 운반체로부터 높은-만노오스 올리고사카라이드 선구물질 Glc3Man9GlcNAc2를 총괄하는 전이의 RER에서 시작한다. 탄수화물 체인 수정은 RER에서 시작하고 글리코시다아제 Ⅰ 및 Ⅱ에 의해 세개의 가장 바깥쪽 글루코즈 잔류물을 제거하는 골지체에서 계속된다. 포스포릴화는 두-단계 과정으로 1차는 리소좀 단백질 특정 전이효소에 의해 만노오스 기를 선택하기 위해 N-아세틸-글루코-사민-1-포스페이트가 결합되고, 2차에서, 디에스테라제에 의해 N-아세틸-글루코-사민이 분해된다(Goldberg외, Lysosomes; Their Role in Protein Breakdown (Academic Press Inc., London, 1987), 163-191쪽). 분열은 인식 표시 및 리소좀에 대부분의 리소좀 단백질의 운반을 매개하는 만노오스 6-포스페이트 수용기에 대한 리간드로써 만노오스 6-포스페이트를 노출한다(Kornfeld,Biochem.Soc.Trans. 18,367-374(1992))
탄수화물 체인 수정에 추가로, 대부분의 리소좀 단백질은 단백질 분해 과정을 겪는데, 1차 경우에서 신호 펩티드가 제거된다. 대부분의 리소좀 단백질의 신호 펩티드는 단백질이 녹은 후 신호 펩티다아제에 의해 전위된 후 잘라진다. 효소가 RER을 남긴 후, 그러나 리소좀 또는 분비 경로에 들어가기 전에 산 α-글루코시다아제의 신호 펩티드가 잘라진다는 증거가 있다(Wisselaar외, J.Biol.Chem. 268,2223-2231(1993)). 산 α-글루코시다아제의 단백질 분해 과정은 복잡하고 다양한 부세포 위치에서 일어나는 신호 펩티드의 잘라짐에 추가로 일련의 단계가 포함된다. 특정 촉매 활성이 증가되는 N 및 C 말단 둘 다에서 폴리펩티드는 잘라진다. 인식된 주된 종은 110/100kD 선구물질, 95kD 중간체 및 76kD 및 70kD 성숙한 형태이다. (Hasilik외, J.Biol.Chem. 255,4937-4945(1980); Oude Elferink외, Eur.J.Biochem. 139,489-495(1984); Reuser외, J.Biol.Chem. 260,8336-8341(1985); Hoefsloot외, EMBO J. 7,1697-1704(1988)). COS세포, BHK세포 및 CHO세포와 같은 배양된 포유류 세포에서 발현되는 것과 같이 천연 인간 산 α-글루코시다아제 및 인간 산 α-글루코시다아제의 재조합 형태의 번역 후 과정은 유사하다(Hoefsloot외, (1990) 상기; Wisselaar외, (1993) 상기).
만노오스 기의 6' 위치에서 포스포릴화된 리소좀 단백질을 제조하기 위한 확실한 과정이 만노오스 6-포스페이트에 대한 수용기를 지탱하는 세포에 의해 기질의 흡수를 측정하여 시험될 수 있다. 옳게 수정된 기질은 수정되지 않은 기질보다 더 빠르게 흡수하고, 이 방법에서 수정된 기질의 흡수는 만노오스 6-포스페이트의 첨가에 의해 길항적으로 억제될 수 있다.
C. 변형 유전자 디자인
변형 유전자를 잠복하는 유전자 변형의 인간 아닌 포유류의 젖샘에 재조합 리소좀 단백질의 발현을 목표로 하게끔 유전자 변형은 디자인된다. 기초적인 방법은 실시 가능하게 신호 서열, 프로모터 및 인핸서의 단백질을 인코딩하는 외부 원인에 의한 DNA 단편을 연결하는 것을 수반한다. DNA 단편은 게놈, 미니 유전자(하나 이상의 인트론이 생략된 게놈), cDNA, YAC 단편, 두개의 다른 리소좀 단백질 유전자의 키메라(chimera) 또는 상기의 하이브리드일 수 있다. 게놈 서열의 포함은 일반적으로 더 높은 수준의 발현을 이끈다. 매우 높은 수준의 발현은 번역 후 변이 및 리소좀 단백질 분비를 형성하기 위해 젖샘의 용량에 지나치게 부하를 건다. 그러나, 하기에 나타낸 데이타는 실제 번역 후 변이가 ㎎/㎖ 범위에서 높은 발현 수준에도 불구하고, 만노오스 6-포스페이트 기의 형태를 포함하여 일어나는 것을 나타낸다. 실제 변이는 분비된 분자의 적어도 약 10, 25, 50, 75 또는 90%가 적어도 하나의 만노오스 6-포스페이트 기를 지탱하는 것을 의미한다. 따라서, 게놈 구조 또는 하이브리드 cDNA-게놈 구조는 일반적으로 바람직하다.
게놈 구조에서, 모든 인트론 서열을 보유할 필요는 없다. 예를 들면, 일부 인트론 서열은 DNA 촉진 및 이후 현미주사(microinjection)를 쉽게 하기 위한 더 작은 변형 유전자를 얻기 위해 제거될 수 있다. Archibald외, WO 90/05188 (모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된)를 참조하라. 일부 인트론의 제거는 발현 수준을 감소하고 그것에 의해 번역 후 변이가 실제로 완벽하다는 것을 확인하는 일부예에서 또한 유용하다. 산 α-글루코시다아제의 게놈 서열의 인트론 같은 인트론을 제외한 다른 예에서 성숙한 효소의 더 높은 발현을 이끈다. 코딩하지 않은 엑손의 일부 또는 모두를 지우는 것이 또한 가능하다. 일부 변형 유전자에서, 서열을 인코딩하는 리소좀 단백질에서 선택된 뉴클레오티드는 단백질을 분해하는 분열 사이트를 제거하기 위해 변화된다.
변형 유전자 포유류에 의해 생성된 리소좀 단백질의 의도된 용도가 보통 인간에게 적용되기 때문에, 리소좀 단백질 서열을 인코딩하는 DNA 단편이 얻어지는 종이 바람직하게는 인간이다. 유사하게 만약 의도된 용도가 수의학 치료라면(예를 들면, 말, 개 또는 고양이), DNA 단편을 같은 종에서 얻는 것이 바람직하다.
프로모터 및 인핸서는 배타적으로 또는 적어도 우선적으로 젖샘(즉, 젖샘 특정 유전자)에서 발현된 유전자로부터이다. 프로모터 및 인핸서의 공급원으로 바람직한 유전자는 β-카세인, κ-카세인, αS1-카세인, αS2-카세인, β-락토글로불린, 유장 산 단백질 및 α-락탈부민을 포함한다. 프로모터 및 인핸서는 보통 같은 젖샘 특정 유전자로부터 얻지만 항상 얻지는 못한다. 상기 유전자는 때때로 변형 유전자가 발현되는 같은 종의 포유류에서 얻지만 필수적으로는 아니다. 인간 유전자로부터 얻는 것과 같은 다른 종의 발현 조절 서열이 또한 사용될 수 있다. 신호 서열은 젖샘으로부터 얻은 리소좀 단백질의 분비를 이끌 수 있어야만 한다. 적당한 신호 서열은 분비된 단백질을 인코딩하는 포유류 유전자로부터 유도될 수 있다. 놀랍게도, 상기 단백질이 보통 세포내 기관에 분비되지 않으나 목표됨에도 불구하고, 리소좀 단백질의 자연 신호 서열이 적당하다. 상기 신호 서열에 추가로, 신호서열의 바람직한 공급원은 얻어진 프로모터 및 인핸서과 같은 유전자로부터 얻는 신호 서열이다. 선택적으로, 추가 규정의 서열은 발현 수준을 최대화하기 위한 변형 유전자에 포함된다. 상기 서열은 5' 측면 영역, 번역되지 않은 것을 제외한 5' 전사 영역, 인트론 서열, 번역되지 않은 것을 제외한 3' 전사 영역, 폴리아데닐화 사이트 및 3' 측면 영역을 포함한다. 상기 서열은 흔히 프로모터 및 인핸서가 얻어지는 또는 리소좀 단백질이 발현되는 젖샘 특정 유전자로부터 얻어진다. 상기 서열의 포함은 믿을 만한 젖샘 특정 유전자 및/또는 믿을 만한 리소좀 단백질 유전자의 서열을 촉진하는 유전적 환경을 만든다. 상기 유전적 환경은 일부 경우에서 (예를 들면, 소 αS1-카세인) 전사된 유전자의 더 높은 발현을 일으킨다. 선택적으로, 3' 측면 영역 및 번역되지 않은 영역은 β-글로빈 유전자 또는 바이러스성 유전자와 같은 다른 이종 구조의 유전자로부터 얻는다. 리소좀 단백질 유전자의 3' 및 5' 번역되지 않은 영역 또는 이종 구조의 유전자의 포함이 또한 전사의 안정성을 증가시킨다.
일부 구체예에서, 5' 측면 서열의 약 0.5, 1, 5, 10, 15, 20 또는 30kb가 리소좀 단백질 유전자가 발현하는 약 1, 5, 10, 15, 20 또는 30kb 또는 3' 측면 서열의 조합에 포유류 특정 유전자로부터 포함된다. 만약 단백질이 cDNA 서열로부터 발현된다면, 프로모터와 코딩 서열 사이의 인트론 서열을 포함하는 것이 우월하다. 인트론 서열은 바람직하게는 프로모터가 얻어지는 젖샘 특정 영역의 첫번째 인트론으로부터 조정하는 서열로부터 5' 부분으로부터 형성된 하이브리드 서열 및 IgG 조정하는 서열 또는 리소좀 단백질 유전자의 조정하는 서열로부터 3' 부분이다.DeBoer외, WO 91/08216 (모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된)을 참조하라.
리소좀 단백질을 발현하는 바람직한 변형 유전자는 카세인 프로모터 및 인핸서에 5'를 연결한 cDNA-게놈 하이브리드 리소좀 단백질 유전자를 포함한다. 하이브리드 유전자는 리소좀 단백질 유전자로부터 신호 서열, 코딩 영역 및 3' 측면 영역을 포함한다. 선택적으로, cDNA 단편은 리소좀 단백질을 인코딩하는 유전자의 5' 카세인과 번역되지 않은 영역 사이의 인트론 서열을 포함한다. 물론, 대응하는 cDNA 및 게놈 단편이 또한 결과의 융해물로부터 발현될 수 있는 연속되는 단백질을 제공하는 유전자 내에 다른 위치에서 녹는다.
다른 바람직한 변형 유전자는 카세인 조절 서열에 5'를 연결한 게놈 리소좀 단백질 단편을 갖는다. 게놈 단편은 보통 유전자의 5' 번역되지 않은 영역 내지 3' 측면 영역에 연속된다. 따라서, 게놈 단편은 리소좀 단백질 5' 번역되지 않은 서열, 신호 서열, 선택하는 인트론 및 코딩 엑손, 3' 번역되지 않은 영역, 및 3' 측면 영역의 일부를 포함한다. 게놈 단편은 프로모터 및 인핸서를 포함하는 카세인 단편에 5' 번역되지 않은 영역을 통해 및 흔히 5' 번역되지 않은 영역에 연결된다.
DNA 서열 정보는 상기 목록된 젖샘 특정 유전자의 모두, 적어도 하나 및 가끔 일부 유기체에 유용하다. 예를 들면, Richards외, J.Biol.Chem. 256,526-532(1981)(α-락탈부민 쥐(rat)); Campbell외, Nucleic Acids Res. 12,8685-8697(1984)(쥐 WAP); Jones외, J.Biol.Chem. 260,7042-7050(1985)(쥐 β-카세인); Yu-Lee & Rosen, J.Biol.Chem. 258,10794-10804(1983)(쥐 γ-카세인); Hall,Biochem.J. 242,735-742(1987)(α-락탈부민 인간); Stewart, Nucleic Acids Res. 12, 389(1984)(소 αs1 및 κ카세인 cDNAs); Gorodetsky외, Gene 66,87-96(1988)(소 β카세인); Alexander외, Eur.J.Biochem. 178,395-401(1988)(소 κ카세인); Brignon외, FEBS Lett. 188,48-55(1977)(소 αS2 카세인); Jamieson외, Gene 61,85-90(1987), Ivanov외, Biol.Chem.Hoppe-Seyler 369,425-429(1988), Alexander외, Nucleic Acids Res. 17,6739(1989)(소 β락토글로불린); Viotte외, Biochimie 69, 609-620(1987)(소 α-락탈부민)(모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된)을 참조하라. 다양한 젖 단백질 유전자의 구조 및 기능은 Mercier & Vilotte, J.Dairy Sci. 76,3079-3098(1993)(모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된)에 의해 재검토된다. 추가의 서열 데이타가 필요한 범위에, 이미 얻어진 서열 측면 영역은 탐색자로 존재하는 서열을 사용하여 쉽게 클론될 수 있다. 다른 유기체로부터 젖샘 특정 조절 서열은 똑같이 알려진 동족의 뉴클레오티드 서열 또는 탐색자로 동족 단백질에 항체를 사용하여 상기 유기체로부터 라이브러리를 스크리닝하여 얻는다.
젖샘에 재조합 단백질의 발현을 목표화하는 αS1-카세인 조절 서열을 사용하는 일반적인 전략 및 전형적인 변형 유전자는 DeBoer외, WO 91/08216 및 WO 93/25567 (모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된)에서 더 자세히 기술된다. 다른 젖샘 특정 유전자로부터 조절 서열을 사용하는 변형 유전자의 예는 또한 기술되어왔다. 예를 들면, Simon외, Bio/Technology 6,179-183(1988) 및 WO 88/00239 (1988)(양에서 발현하는 β-락토글로불린 조절 서열); Rosen, EP 279,582 및 Lee외, Nucleic Acids Res. 16, 1027-1041(1998)(마우스에서 발현하는 β-카세인 조절서열); Gordon, Biotechnology 5, 1183(1987)(마우스에서 발현하는 WAP 조절 서열); WO 88/01648(1988) 및 Eur.J.Biochem. 186,43-48(1989)(마우스에서 발현하는 α-락탈부민 조절 서열)(모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된)를 참조하라.
변형 유전자로부터 젖의 리소좀 단백질의 발현이 번역 후 변이 및 리소좀 단백질의 목표화를 포함하는 유전자의 공-발현 또는 기능적 비활성(즉, 녹아웃 (knock-out))에 의해 영향받을 수 있다. 실시예에서 데이타는 놀랍게도 젖샘이 이미 높은 수준에서 단백질을 포함하는 만노오스 6-포스페이트의 조합 및 분비를 얻기 위해 충분한 양에서 변이 하는 효소를 발현하는 것을 나타낸다. 그러나, 높은 수준에서 상기 단백질을 발현하는 일부 변형 유전자 포유류에서, 때때로 변형 유전자 발현으로부터 얻는 추가의 효소의 과정 효소가 내적 원인에 의한 수준을 보충하는 것이 바람직하다. 상기 변형 유전자는 변형 유전자에서 리소좀 단백질 코딩 서열을 대체하는 효소 코딩 서열 과정의 상기 언급된 것에 유사한 원칙을 적용하여 구조화된다. 일반적으로 번역 후 과정의 효소가 분비될 필요는 없다. 따라서, 리소좀 단백질 코딩 서열에 연결된 분비 신호 서열은 분비 없이 소포체에 과정 효소를 목표화하는 신호 서열로 대체된다. 예를 들면, 자연적으로 상기 효소와 연관된 신호 서열은 적당하다.
D. 유전자 변형
상기 기술된 변형 유전자는 인간 아닌 포유류로 받아들여진다. 마우스 및 쥐, 토끼 같은 설치류, 양(sheep) 및 염소와 같은 오바인(ovine), 돼지 같은 포신(porcine), 및 소 및 퍼팔로와 같은 보바인(bovine)을 포함하는 대부분의 인간아닌 포유류가 적당하다. 마우스가 , 유전자 변형 및 기르기가 쉬운 장점을 제공하는 반면, 보바인은 많은 양의 젖을 제공하는 장점이 있다. 토끼는 상기 장점의 절충을 제공한다. 토끼는 약 14%의 단백질 함량의 하루 100㎖ 젖을 만들 수 있고(Buhler외, Bio/Technology 8,140(1990))(모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된), 마우스처럼 같은 원칙 및 유사한 시설을 사용하여 조정될 수 있고 기를 수 있다. 뾰족한 개미핥기 또는 오리너구리(duckbill platypus)와 같은 난태생 포유류가 전형적으로 사용되지 않는다.
유전자 변형 방법에서, 변형 유전자는 수정된 난모세포의 난핵에 주입된다. 마우스 및 토끼와 같은 몇 동물에 대해, 수정은 생체내에서 이루어지고 수정된 난자는 수술로 제거된다. 다른 동물, 특히 소에서, 살아있거나 도살장 동물에서 난자를 제거하는 것 및 시험관에서 난자를 수정하는 것이 바람직하다. DeBoer외, WO 91/08216을 참조하라. 시험관에서 수정은 변형 유전자가 완성에 대해 세포 순환의 최적한 상(S-상보다 더 늦지 않은)에서 동시에 발생하는 세포를 충분히 주입할 수 있게 한다. 변형 유전자는 보통 현미주사로 주입된다. US 4,873,292를 참조하라. 그 후 약 16-150 세포를 포함하는 프리-이식 태아가 얻어질 때까지 수정된 난모세포는 시험관에서 배양된다. 배(embryo)의 16-32 세포 단계는 상실배(morula)로 기술된다. 32 이상의 세포를 포함하는 프리-이식 배를 배반포라 불린다. 상기 배는 전형적으로 64 세포 단계에서 배반포 구멍이 커지는 것을 보인다. 프리-이식 단계에 수정된 난모세포를 배양하는 방법이 Gordon외, Methods Enzymol. 101,414(1984); Hogan외, Manipulation of the Mouse Embryo: A LaboratoryManual, C.S.H.L. N.Y.(1986)(마우스 배(mouse embryo)); 및 Hammer외, Nature 315,680(1985)(토끼 및 돼지의 배); Gandolfi외 J.Reprod.Fert. 81,23-28(1987); Rexroad외, J.Anim.Sci. 66,947-953(1988)(양의 배) 및 Eyestone외 J.Reprod.Fert. 85,715-720(1989); Camous외, J.Reprod.Fert. 72,779-785(1984); 및 Heyman외 Theriogenology 27,5968(1987)(소의 배)(모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된)에 의해 기술된다. 때때로 프리-이식 배는 이식이 미정인 기간동안 동결 저장된다. 프리-이식 배는 변형 유전자가 완성될 때 성장 단계에 기초한 변형 유전자 또는 괴물의 태생을 낳는 의사 임신한 암컷의 나팔관으로 이동한다. 진짜 생식세포 유전자 변형 동물을 만들기 위해 괴물 포유류가 키워질 수 있다.
선택적으로, 변형 유전자는 배 줄기 세포(ES)에 주입될 수 있다. 상기 세포들은 시험관에서 배양된 프리이식 배로부터 얻는다. Bradley외, Nature 309,255-258(1984)(모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된). 변형 유전자들은 일렉트로포레이션(electoporation) 또는 현미주사로 상기 세포에 주입될 수 있다. 이동한 ES 세포들은 인간-아닌 동물로부터 배반포에 결합된다. ES 세포들은 배를 복제하고 일부 배에서 공사의 동물을 일으키는 생식세포라인을 형성한다. Jaenisch, Science, 240,1468-1474(1988)(모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된)를 참조하라. 선택적으로, ES 세포가 유전자 변형 포유류를 일으키는 탈핵 수정된 난모세포 이식에 대해 핵의 공급원으로 사용될 수 있다.
두개 이상의 변형 유전자를 포함하는 유전자 변형 동물의 생산에 대해, 변형 유전자는 단일 변형 유전자에 대한 같은 방법으로 동시에 도입될 수 있다. 선택적으로, 변형 유전자들은 격리된 동물에 처음에 주입될 수 있고 그 후 동물을 번식함으로 같은 게놈에 결합된다. 선택적으로, 첫번째 유전자 변형 동물이 하나의 변형 유전자를 가지고 생성된다. 그 후 두번째 변형 유전자는 상기 동물로부터의 수정된 난자 또는 배의 줄기 세포에 도입된다. 일부 구체예에서, 반대로 약 50kb의 길이가 과한 변형 유전자들은 겹치는 단편으로 조립된다. 상기 겹치는 단편들은 수정된 난모세포 또는 배의 줄기 세포에 동시에 도입되고 생체내에서 상동 재조합을 겪는다. Kay외, WO 92/03917(모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된)를 참조하라.
E. 유전자 변형 포유류의 특징
본 발명의 유전자 변형 포유류는 상기 기술된 바와 같이 게놈에 적어도 하나의 변형 유전자를 가지고 있다. 변형 유전자는 젖샘에 적어도 주로 리소좀 단백질을 인코딩하는 DNA 단편의 발현을 목표화한다. 놀랍게도, 젖샘이 올리고사카라이드 및 포스포릴화의 단계를 포함하는 믿을 만한 번역 후 과정에 필요한 단백질을 발현할 수 있다. 젖샘에서 효소에 의한 과정이 만노오스 기의 6' 위치의 포스포릴화를 일으킨다.
리소좀 단백질은 적어도 10, 50, 100, 500, 1000, 2000, 5000 또는 10,000㎍/㎖의 높은 수준에 분비될 수 있다. 놀랍게도, 본 발명의 유전자 변형 포유류는 충분히 보통의 건강상태를 보인다. 젖샘 외의 다른 조직에서 리소좀 단백질의 두번째 발현은 유해한 영향을 일으키는 충분한 범위에서 일어나지 않는다. 또한, 젖샘에서 생성된 외부 원인에 의한 리소좀 단백질은 분비기를 방해하는 것을억제함으로 중대한 문제가 일어나지 않는 충분한 효율로 분비된다.
물론, 젖을 생산할 수 있는 유전자 변형 동물의 나이는 동물의 성질에 따라 다양하다. 유전자 변형 마우스의 경우, 약 5-6주임에 반하여, 유전자 변형 소의 경우, 자연적으로 약 2년 반 또는 호르몬 자극으로 6개월이다. 물론, 종의 암컷만이 젖 생산에 유용하다. 그러나, 유전자 변형 수컷이 또한 암컷 자손을 번식하는데 중요하다. 유전자 변형 수컷의 정자는 차후 시험관에서 암컷 자손의 수정 및 생산을 위해 동결 저장할 수 있다.
F. 젖으로부터 단백질의 회복
유전자 변형 성숙한 암컷 포유류는 외부 원인에 의한 리소좀 단백질의 높은 농도를 포함하는 젖을 생산한다. 만약 요구된다면, 구별되는 물리 화학적 특성 및 침전, 이온 교환, 분자 축출 또는 친화력 크로마토그래피와 같은 기본적인 정제 방법으로 단백질을 젖으로부터 정제할 수 있다. 일반적으로 Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, N.Y., 1982)를 참조하라.
젖으로부터 인간 산 α-글루코시다아제의 정제는 원심분리로 유전자 변형 젖의 지방을 제거 및 데드-엔드(dead-end) 여과에 의한 빠른 속도의 원심분리로 카세인의 제거에 의한 지방 제거(즉, 연속적으로 감소하는 여과기 크기를 사용하는 데드-엔드 여과) 또는 교차-흐름 여과, 또는; 교차-흐름 여과에 의해 직접 카세인을 제거함으로 실시될 수 있다. 인간 산 α-글루코시다아제는 Q Sepharose FF (또는 다른 음이온-교환 물질), 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC), 금속-킬레이트 Sepharose, 또는 Sepharose에 결합된 렉틴(lectin)(또는 다른 물질)을 포함한 크로마토그래피에 의해 정제된다.
Q Sepharose 빠른 흐름 크로마토그래피는 하기의 여과된 유장 또는 유장 단편에 존재하는 인간 산 α-글루코시다아제를 정제하는데 사용될 수 있다: Q Sepharose 빠른 흐름(QFF; Pharmacia) 크로마토그래피(Pharmacia XK-50 컬럼, 15㎝ 층 높이; 250㎝/시 흐림 속도) 컬럼은 20mM 인산 나트륨 완충용액, pH 7.0(완충용액 A)에서 평형을 이루었다; S/D-배양된 유장 단편(약 500내지 600㎖)이 축적되고 컬럼을 완충용액 A(20mM 인산 나트륨 완충용액, pH 7.0)의 4-6 컬럼 부피(cv)로 씻는다. 인간 산 α-글루코시다아제 단편은 100mM NaCl을 포함하는 2-3cv 완충용액 A의 Q FF 컬럼으로부터 추출된다.
단편을 포함하는 Q FF Sepharose 인간 산 α-글루코시다아제는 추가로 페닐 세파로즈 고기능 크로마토그래피(Phenyl Sepharose High Performance chromatography)를 사용하여 정제될 수 있다. 예를 들면, 계속해서 교반하는 동안 황화 암모늄 1M의 1부피를 Q FF Sepharose 인간 산 α-글루코시다아제 추출물에 넣는다. 0.5M 황화 암모늄, 50mM 인산 나트륨 완충용액 pH 6.0 (완충용액 C)을 평형시키고 0.5M 황화 암모늄-배양된 인간 산 α-글루코시다아제 추출물(Q FF Sepharose로부터)을 넣고, 완충용액 C의 2-4cv로 컬럼을 씻고, 인산 산 α-글루코시다아제를 추출함으로 실온에서 행해진 페닐 HP(Pharmacia) 컬럼 크로마토그래피(Pharmacia XK-50 컬럼, 15㎝ 층 높이; 150㎝/시 유속)가 완충용액 D의 3-5cv(pH 6.0에서 50mM 인산 나트륨 완충용액)로 페닐 HP 컬럼으로부터 추출된다. 추가로 인산 산 α-글루코시다아제를 정제하는 선택적인 방법 및 추가의 방법은 기술자에게 명백할 것이다. 예를 들면, 영국 특허 출원 998 07464.4(모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된)를 참고하라.
G. 재조합 리소좀 단백질의 용도
본 발명에 따라 제조된 재조합 리소좀 단백질은 효소 대체 치료 과정에서 용도가 발견된다. 유전자 또는 기능적 리소좀 효소의 부족에 의한 다른 결핍의 환자에게 외부 원인에 의한 효소를 투입함으로 치료될 수 있다. 상기 치료가 필요한 환자들은 증상(예를 들면, 헐러 증후군 증상은 왜소 발육증, 각막 흐림, 헤파토스플레노메칼리(hepatosplenomegaly), 심장판막 손상, 관상동맥 손상, 골격 기형, 관절 경직 및 점진적인 정신지체)로 확인될 수 있다. 선택적으로, 또는 추가로, 환자들은 특별한 리소좀 효소 활성의 결핍을 나타내는 인공 또는 자연 기질을 사용하는 특별한 리소좀 효소 또는 효소 검사에 의해 진행된 특징적인 대사물의 과도한 축적을 보이는 조직 샘플의 생화학적 분석으로 진단될 수 있다. 대부분의 병에 대해, 진단은 증상 발생 전 또는 대사물의 과도한 축적 전에 특별한 효소 결핍 측정 또는 DNA 분석에 의해 이루어진다(Scriver외, 상기에서, 리소좀 저장 장애에 대한 부분). 모든 리소좀 저장 질병은 유전적이다. 따라서, 리소좀 질병을 앓는 가족이 있는 것으로 알려진 가족의 자녀들에게서, 명확한 진단이 이루어질 수 있기 전에 예방 치료를 시작하는 것이 때때로 적당하다.
약학 조성물
일부 방법에서, 리소좀 효소는 약학 조성물로써 약학 운반체와 함께 정제된 형태로 투여된다. 바람직한 형태는 투여 및 치료 적용의 예정된 방법에 따른다.약학 운반체는 환자에게 폴리펩티드를 운반하기에 적당한 융화성, 비독성 물질일 수 있다. 중성 물, 알콜, 지방, 왁스 및 비활성 고체가 운반체로 사용될 수 있다. 약학적으로-조건에 맞는 보조제, 완충제, 분산제등이 또한 약학 조성물로 혼합될 수 있다.
약학 조성물의 효소 농도는 넓게 즉, 약 0.1 중량%이하부터, 보통 적어도 약 1 중량%내지 20 중량%이상 다양할 수 있다.
경구 투입에 대해, 활성 성분이 고체 투여 형태, 가령 캡슐, 정제 및 가루, 또는 액체 투여 형태, 가령 엘릭시르(elixir), 시럽 및 현탁액으로 투여될 수 있다. 활성 성분(들)이 비활성 성분 및 분말 운반체, 가령 글루코즈, 락토즈, 수크로즈, 만니톨, 녹말, 셀룰로즈 또는 셀룰로즈 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테르산, 나트륨 사카린, 탈쿰(talcum), 탄산 마그네슘등과 함께 젤라틴 캡슐 안에 쌓일 수 있다. 요구된 색, 맛, 안정성, 완충 용량, 분산 또는 다른 알려진 요구하는 형태를 제공하기 위해 추가될 수 있는 추가의 비활성 성분의 예들은 붉은 철 산화물, 실리카겔, 나트륨 라우릴 황산염, 티타늄 이산화물, 식용 흰 잉크등이다. 유사한 희석제가 압축된 정제를 만들기 위해 사용될 수 있다. 정제 및 캡슐 둘다 장시간 약물이 지속적인 방출을 제공하기 위해 유지된 방출 생성물로 제조될 수 있다. 압축된 정제는 불쾌한 맛을 덮고 대기로부터 정제를 보호하기 위해 코팅된 당 또는 코팅된 필름일 수 있고, 또는 위장에서 선택적인 분해에 대해 장용 코팅될 수 있다. 경구 투여에 대한 액체 투여 형태는 환자 수용을 증가하기 위한 색 및 맛을 포함할 수 있다.
정맥 주입에 대한 전형적인 조성물은 선택적으로 20% 알부민 용액 및 100 내지 500㎎의 효소로 보충된 100 내지 500㎖ 중성 0.9% NaCl 또는 5% 글루코즈를 포함하도록 제조될 수 있다. 근육내 주입에 대한 전형적인 약학 조성물은 예를 들면, 1㎖ 중성 완충처리된 물 및 1 내지 10㎎ 정제된 본 발명의 알파 글루코시다아제를 포함하도록 만든다. 비경구로 투여할 수 있는 조성물을 제조하는 방법은 당분야에 잘 공지되어 있고 다양한 문헌 예를 들면, Remington's Pharmaceutical Science(15판, Mack Publishing, Easton, PA, 1980)(모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된)에서 더 자세히 기술된다.
AGLU는 10mM 인산 나트륨 완충용액 pH 7.0에서 형성될 수 있다. 적은 양의 황산 암모늄이 선택적으로 존재한다(<10mM). 효소는 전형적으로 약 -70℃에서 동결 유지되고 사용 전에 녹인다. 선택적으로, 효소는 용액내에서 차갑게(예를 들면, 약 4℃ 내지 8℃) 저장될 수 있다. 일부 구체예에서, AGLU 용액은 완충용액 (예를 들면, 인산 나트륨, 인산 칼륨 또는 다른 생리학적으로 받아들여지는 완충용액), 간단한 탄수화물 (예를 들면, 수크로즈, 글루코즈, 말토즈, 만니톨등), 단백질 (예를 들면, 인간 시럽 알부민) 및/또는 표면 활성제 (예를 들면, 폴리소베이트(polysorbate) 80 (Tween-80), 크레모포르(cremophore)-EL, 크레모포르-R, 라브로필(labrofil)등)을 포함한다.
AGLU는 또한 냉동 건조된 형태로 저장될 수 있다. 냉동 건조에 대해, AGLU는 만니톨 및 인산염 완충용액내의 수크로즈를 포함하는 용액에서 제조될 수 있다. 수크로즈의 농도는 재구성에 AGLU의 집합을 막기에 충분하다. 만니톨의 농도는 반대로 냉동건조에 필요한 시간을 실질적으로 줄이는데 충분하다. 그러나, 만니톨 및 수크로즈의 농도는 재구성에서 받아들이기 어려운 고혈압을 일으키는데 불충분하다. 1-3㎎/㎖ 및 0.1-1.0㎎/㎖의 만니톨 및 수크로즈의 농도 각각은 적합하다. 바람직한 농도는 2㎎/㎖ 만니톨 및 0.5㎎/㎖ 수크로즈이다. AGLU는 바람직하게는 냉동건조 전 및 재구성 후 5㎎/㎖이다. 0.9%에서 염수가 재구성에 바람직한 용액이다.
토끼 젖으로부터 정제된 AGLU에 대해, 적은 양의 불순물 (예를 들면, 약 5%이상)은 허용될 수 있다. 가능한 불순물은 토끼 유장 단백질의 형태에서 존재할 수 있다. 다른 가능한 불순물은 구조적으로 유사체 (예를 들면, 올리고머 및 집합체) 및 AGLU의 끊기이다. 현재 배치(batch)는 변형 유전자 토끼에서 생성된 AGLU가 >95% 순수하다고 나타낸다. 비록 겔 전기 이동법에서, 분자량이 다른 AGLU 밴드(band)가 또한 보이지만, 가장 큰 불순물은 토끼 유장 단백질이다.
주입 용액은 층류 후드(laminar air flow hood)내에서 무균으로 제조된다. AGLU의 적당한 양은 냉장고에서 꺼내어 실온에서 녹인다. 주입 용액은 인간 시럽 알부민(HSA) 및 글루코즈를 포함하는 적당량의 용액에 생성물 용액을 끝낸 적당량의 AGLU를 혼합함으로 유리 주입 병에서 제조될 수 있다. 마지막 농도는 1% HSA 및 25-200㎎ 투여량에 대해 4% 글루코즈 및 1% HSA 및 400-800㎎ 투여량에 대해 4% 글루코즈일 수 있다. HSA 및 AGLU는 5% 글루코즈를 포함하는 주입 병에 옮기기 전에 0.2㎛ 시린지 여과기로 여과될 수 있다. 선택적으로, AGLU가 염수용액에서, 바람직하게는 주입에 대해 0.9%에서 재구성될 수 있다. 주입에 대한 AGLU 용액은 실온에서 7시간 이상 안정하게 보여진다. 그러므로 AGLU 용액은 바람직하게는 제조 7시간 이내에 주입된다.
치료 방법
본 발명은 효과적인 폼페병 치료 방법을 제공한다. 상기 방법은 형태 촉매로 활성된 형태 및 치료되는 환자의 조직, 특히, 간, 심장 및 근육 (예를 들면, 민무늬근, 가로무늬근 및 심근)에서 떼어낼 수 있는 형태에서 많은 양의 인간 산 알파 글루코시다아제의 유효성에서 부분적으로 제안된다. 상기 인간 산 알파-글루코시다아제는 예를 들면, 실시예에서 기술된 유전자 변형 동물로부터 제공된다. 알파-글루코시다아제는 바람직하게는 주로 (즉, >50%) 약 100-110kD의 선구물질 형태에서이다. (명백한 분자량 또는 100-110kD 선구물질의 상대적인 이동성은 사용된 분석 방법에 따라 다소 다양할 수 있지만 특별하게 95kD 내지 120kD 범위내에서다.) 유전자 변형 동물에서 인간 산 알파-글루코시다아제의 주어진 성공적인 결과는 실시예에 기술되었고, 인간 알파-글루코시다아제의 다른 공급원은 가령 세포 발현 시스템에서 얻는 것이 또한 사용될 수 있는 것이 가능하다. 예를 들면, 인간 산 α-글루코시다아제를 생산하는 선택적인 방법은 cDNA 또는 적당한 프로모터에 실시 가능하게 연결된 게놈 구조물로써 적당한 진핵 세포 라인(예를 들면, CHO)에 산 α-글루코시다아제 유전자를 트랜스펙션하는 것이다. 그러나, 상기 방법으로 임상 치료에 필요한 많은 양의 인간 산 알파 글루코시다아제를 제조하는 것은 더 많은 힘이 든다.
본 발명의 약학 조성물은 보통 정맥주사로 투여된다. 피부내, 근육내 또는경구 투여는 또한 일부 환경에서 가능하다. 조성물은 리소좀 효소 결핍 질병을 겪거나 또는 겪을 위험이 있는 개인들의 예방 치료를 위해 투여될 수 있다. 치료 적용에 대해, 약학 조성물은 축적된 대사물의 농도를 줄이기 위해 및/또는 대사물 추가의 축적을 방지 또는 저지하기 위한 충분한 양이 질병을 겪는 환자에게 투여된다. 리소좀 효소 결핍 질병의 위험에 있는 개인을 위해, 약학 조성물은 예방적으로 대사물의 축적을 방지하거나 억제하기에 충분한 양을 투여된다. 상기를 이루기 위한 적당한 양은 "치료에-" 또는 "예방에-효과적인 투여"로 정의된다. 상기 효과적인 투여는 주위 환경의 엄격함 및 환자의 일반적인 건강 상태에 따를 것이다.
본 방법에서, 인간 산 알파 글루코시다아제는 보통 환자에게 주당 10㎎/㎏ 환자 체중 이상이 투여된다. 종종 투여량은 주당 10㎎/㎏ 이상이다. 투여량은 주당 10㎎/㎏ 내지 적어도 주당 1000㎎/㎏의 범위일 수 있다. 전형적으로 투여량은 주당 10㎎/㎏, 주당 15㎎/㎏, 주당 20㎎/㎏, 주당 25㎎/㎏, 주당 30㎎/㎏, 주당 35㎎/㎏, 주당 40㎎/㎏, 주당 45㎎/㎏, 주당 60㎎/㎏, 주당 80㎎/㎏ 및 주당 120㎎/㎏의 범위이다. 바람직한 범위에서, 주당 10㎎/㎏, 주당 15㎎/㎏, 주당 20㎎/㎏, 주당 30㎎/㎏, 주당 40㎎/㎏이 주당 한번, 두 번 또는 세 번 투여된다. 치료는 전형적으로 적어도 4주 때때로 24주 및 때때로 환자 일생 동안 지속된다. 치료는 바람직하게는 정맥주사로 투여된다. 선택적으로, 인간 알파-글루코시다아제의 수준은 하기 처리 (예를 들면, 플라즈마(plasma) 또는 근육에서)를 모니터링하고 추가의 투여는 검출된 수준이 일반인의 값 이하(예를 들면, 20%이하)로 충분히 떨어질 때 투여된다.
일부 방법에서, 인간 산 알파 글루코시다아제는 개시로 "높은" 투여량 (즉, 쌓은 투여량")이 투여되고, 더 낮은 투여량 (즉, "유지 투여량")의 투여에 의해 허용된다. 쌓은 투여량의 예는 적어도 약 40㎎/㎏ 환자 체중을 주당 1 내지 3회(예를 들면, 1,2 또는 3주 동안)이다. 유지 투여량의 예는 주당 적어도 약 5 내지 적어도 약 10㎎/㎏ 환자 체중 이상, 가령, 주당 20㎎/㎏, 주당 30㎎/㎏, 주당 40㎎/㎏이다.
일부 방법에서, 투여량은 투여 기간동안 속도를 증가하여 투여된다. 상기는 흐름 피부내 주입 속도를 증가하여 또는 일정한 속도에서 투여된 알파-글루코시다아제의 농도를 증가시키는 성분을 사용함으로 이룰 수 있다. 상기 방법에서 투여는 면역 반응의 위험을 감소시킨다. 어떤 투여량에서는, 단위 시간당 알파 글루코시다아제의 단위에서 측정된 투여 속도는 적어도 10배로 증가한다. 전형적으로, 피부내 주입은 7시간(예를 들면, 1-10시간 및 바람직하게는 2-8시간, 더욱 바람직하게는 3-6시간) 이상을 일으키고, 주입 속도는 투여기간동안 간헐적으로 증가된다.
증가하는 속도에서 주입에 대한 적당한 투여량(모두 ㎎/㎏/시)은 하기 표 1에서 개시된다. 표의 첫번째 컬럼은 투여 일정에서 시간 기간을 나타낸다. 예를 들면, 0-1시에 참고는 투여 1차 시간으로 나타난다. 표의 다섯번째 컬럼은 각 시간 기간에 사용될 수 있는 이상의 투여량 범위를 개시한다. 네번째 컬럼은 바람직한 투여량 범위를 포함하는 더 좁은 범위를 개시한다. 세번째 컬럼은 본보기의 임상 시험에서 투여된 투여량의 더 높은 및 더 낮은 값을 나타낸다. 두번째 컬럼은특히 바람직한 투여량을 보이고, 이는 표 1의 세번째 컬럼에서 보인 범위의 평균을 나타낸다.
| 시간 | 평균 투여량(l) | 더 낮은 & 더 높은 값 | 바람직한 범위 | 범위 |
| 0-1시 | 0.3㎎/㎏/시 | 0.25-0.4 | 0.1-1 | 0.03-3 |
| 1-2시 | 1㎎/㎏/시 | 0.9-1.4 | 1-4 | 0.3-12 |
| 2-2.5시 | 4㎎/㎏/시 | 3.6-5.7 | 3-10 | 1-30 |
| 2.5-5.6시 | 12㎎/㎏/시 | 7.2-11.3 | 6-20 | 2-60 |
방법은 빠른 발병 (유아) 및 늦은 발병 (소년 및 성인) 폼페병 환자 모두에게 효과적이다. 유아 환자에 폼페병 증상의 형태는 생후 첫 4 개월 이내에 명확하다. 대부분, 낡은 모터 증가 및 번영의 실패가 우선 알려진다. 임상 시험에서, 소모하는 근육, 흉부 수축의 증가된 호흡작용 속도, 간의 보통의 확대 및 혀의 융기의 일반화된 저장이 있다. 심장의 초음파 검사는 점진적인 비대성 심근증, 실제로 불충분한 심장 배출을 이끄는 것을 보여준다. ECG는 표시된 왼쪽 축 일탈, 짧은 PR 간격, 큰 QRS 콤플렉스, 전환한 T 파(wave) 및 ST 기능저하에 의해 특징지워진다. 질병은 생후 1년내에 심폐의 실패를 이끄는 빠르게 진행되는 과정을 보인다. 검시에서 조직구조 검사에서 리소좀 글리코겐 저장은 다양한 조직에서 관찰되고, 심근 및 골격근에서 대부분 공표된다. 본 방법에서 인간 산 알파 글루코시다아제의 처리는 상기 환자의 생명(예를 들면, 보통 수명에 1, 2, 5년 이상)을 연장시킨다. 치료는 또한 상기에 언급된 바와 같이 폼페병의 임상 및 생화학 특징의 제거 또는 감소를 일으킬 수 있다. 생후 곧, 또는 임신중에 만약 부모가 위험한 상태로 그들의 자손에 변이형 알파 클루코시다아제 대립 유전자를 가지고 있다는 것을 안다면 치료는 이루어진다.
폼페병의 늦은 발병 성인 형태의 환자들은 생후 첫 20년내에 증상을 나타내지 않을 수도 있다. 이런 임상 특이형에서, 주로 골격근이 수족 환상골(limb girdle), 몸통 및 횡격막의 증상의 편애에 포함된다. 계단 오르기의 어려움이 종종 병의 시작이다. 호흡 장애는 상당히 다양하다. 임상도(clinical picture)를 좌우할 수 있고, 또는 생의 후반까지 환자가 겪지 않는다. 대부분의 상기 환자들은 호흡 부족으로 죽는다. 유아 특이형의 환자에서, 증상은 보통 생후 첫 10년에 분명해진다. 성인 폼페병에서처럼, 골격근 약화는 주된 문제이고; 심장계, 간비대(hepatomegaly) 및 대설증(macroglossia)이 보여질 수 있지만 흔하지 않다. 많은 경우에서, 밤에 환기 장치가 있는 지원이 최후에 필요하다. 호흡 근육의 소모와 조합에서 폐 감염은 생명을 위협하고 대부분 30년전에 죽게된다. 본 방법의 치료가 늦은 발병 소년 또는 성인 폼페병 환자의 생명을 보통 수명까지 연장한다. 치료는 또한 병의 임상 및 생화학 증상을 제거하거나 또는 상당히 감소시킨다.
다른 용도
유전자 변형 동물의 젖에서 생성한 리소좀 단백질은 많은 다른 용도가 있다. 예를 들면, 다른 α-아밀라제와 같은 α-글루코시다아제는 녹말, 맥주 및 약의 제조에 중요한 도구이다. Vihinen & Mantsala, Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 24, 329-401(1989)(모든 목적에 대해 전체에 참조로 포함된)를 참조하라. 리소좀 단백질은 또한 실험실 화학제품 또는 음식 생성물을 제조하는데 유용하다. 예를 들면, 산 α-글루코시다아제는 1,4 및 1,6 α-글루시딕 결합을 없애고 글루코즈를 얻는 상기 결합, 가령 말토즈, 이소말토즈, 녹말 및 글리코겐을 포함하는 다양한 탄수화물의 감소에 사용될 수 있다. 상기 출원에서, 효소는 젖으로부터 사전 분할 없이, 상기 젖으로부터 유도된 음식 생성물(예를 들면, 아이스크림 또는 치즈) 또는 약학 조성물처럼 투여될 수 있다. 정제된 재조합 리소좀 효소는 또한 조직 샘플에서 상기 효소의 모르는 양의 분석을 위해 진단 키트에서 제어되는 것처럼 포함되어 유용하다.
실시예 1: 변형 유전자의 구조
(a)cDNA 구조
cDNA 인코딩 인간 산 α-글루코시다아제를 포함하는 발현 벡터의 구조는 플라스미드 p16,8hlf3으로 시작했다(DeBoer외.(1991)&(1993),상기를 참고하라). 상기 플라스미드는 소 αS1-카세인 조절 서열을 포함한다. 모(parent) 플라스미드의 락토페린 cDNA 삽입물은 도 1에서 보여지는 바와 같이 발현 카세트(cassette)의 ClaⅠ 사이트 및 SalⅠ 사이트에서 인간 산 α-글루코시다아제 cDNA(Hoefsloot외 EMBO J. 7,1697-1704(1988))로 교환되었다. α-글루코시다아제 cDNA 단편의 말단에서 융화성 제한 사이트를 얻기 위해, 완벽한 cDNA 인코딩 인간 α-글루코시다아제를 포함하는 플라스미드 pSHAG2(id.)는 EcoRI 및 SphI와 정리되고 3.3kb cDNA-단편은 pKUN7ΔC에서 pKUN1 유도체 (Konings외, Gene 46, 269-276(1986)를 벡터 뉴클레오티드 서열내 파괴된 ClaI 사이트 및 새롭게 디자인된 폴리링커(polylinker); HindⅢ ClaI EcoRI SphI XhoI EcoRI SfiI SfiI/SmaI NotI EcoRI*(*=파괴된 사이트)로 서브클론(subclone)되었다. 플라스미드 pαgluCESX를 일으키는 것으로부터, 3.3-kb cDNA-단편이 ClaI 및 XhoI에 의해 잘릴 수 있다. 상기 단편은 ClaI 사이트 및 XhoI-융화성 SalI 사이트에서 도 1에 보여진 발현 카세트에 삽입되었다. 결과로, 발현 플라스미드 p16,8αglu는 도 1에서 보여진 것과 같이 소 αS1-카세인 서열에 의해 접한 인간 산 α-글루코시다아제를 인코딩하는 cDNA 서열로 구성된다. 완벽한 발현 카세트를 포함하는 27.3-kb 단편은 NotI의 분열에 의해 잘릴 수 있다(도 1을 참조하라).
(b) 게놈 구조
구조 c8αgluex1은 인간 산 α-글루코시다아제 유전자를 포함하고(Hoefsloot외, Biochem. J. 272,493-497(1990); 엑손 1에서 전사 개시 사이트의 단지 다운스트림(downstream)을 시작한다(도 2, 패널 A를 참조하라). 그러므로, 구조는 대부분 인간 산 α-글루코시다아제 유전자의 완벽한 5'UTR을 인코딩한다. 상기 단편은 소 αS1-카세인 유전자의 프로모터 서열에 융합된다. αS1-카세인 개시 사이트는 αS1-카세인/산 α-글루코시다아제 접합의 22 bp 업스트림(upstream)이 존재한다. 구조는 인간 산 α-글루코시다아제 폴리아데닐화 신호 및 3' 측면 서열을 갖는다. 구조 c8αgluex2는 인간 산 α-글루코시다아제 유전자의 엑손 2에서 번역 개시 사이트에 즉시 융해된 소 αS1-카세인 프로모터를 포함한다(도 2, 패널 B를 참조하라).
따라서, αS1-카세인 전사 개시 사이트 및 α-글루코시다아제 번역 개시 사이트는 상기 구조에서 떨어진 22-bp이다. 그러므로 α-글루코시다아제 5'UTR은 보존되지 않는다. 상기 구조는 또한 도 2, 패널 B에서 보여지는 것과 같이 인간 산 α-글루코시다아제 폴리아데닐화 신호 및 3' 측면 서열을 포함한다.
구조 c8,8αgluex2-20은 구조 c8αgluex2와 단지 3' 영역에서 다르다. 엑손 20에서 SphI 사이트는 인간 산 α-글루코시다아제 구조에 소 αS1-카세인 3' 서열을 융해하는데 사용되었다. 폴리아데닐화 신호는 상기 3'αS1-카세인 서열에 위치된다(도2, 패널 C).
구조 c8,8αgluex2-20은 구조 c8αgluex2와 단지 3' 영역에서 다르다. 엑손 20에서 SphI 사이트는 인간 산 α-글루코시다아제 구조에 소 αS1-카세인 3' 서열을 융해하는데 사용되었다. 폴리아데닐화 신호는 상기 3'αS1-카세인 서열에 위치된다(도2, 패널 C).
게놈 구조의 구조화 방법
인간 산 α-글루코시다아제 유전자를 포함하는 세개의 지속되는 BglII 단편은 Hoefsloot외, 상기에 의해 분리되었다. 상기 단편은 pKUN8ΔC의 BglII-사이트, 주문해서 만들어진 폴리링커: HindIII ClaI StuI SstI BglII PvnI NcoI EcoRI SphI XhoI EcoRI*SmaI/SfiI NotI EcoRI*(*=파괴된 사이트)의 pKUN7ΔC 유도체에서 결찰되었다. 상기 결찰은 플라스미드 p7.3αgluBES, p7.3αgluBSE, p8.5αgluBSE, p8.5αgluBES, p10αagluBSE 및 p10αgluBES를 제조하는 단편의 두 방향을 일으켰다.
발현 카세트의 말단에서 유일한 NotI-사이트가 충분히 현미주사를 위해 사용된 단편의 분리에 사용되기 때문에, 인간 산 α-글루코시다아제의 인트론 17에서유전자내의 NotI 사이트는 파괴되어야했다. 그러므로, p10αgluBES는 ClaI 및 XhoI로 정리되었다; 3' α-글루코시다아제 말단을 포함하는 단편이 분리되었다. 상기 단편은 p10αgluΔNV를 일으키는 pKUN10ΔC의 ClaI 및 XhoI 사이트에 삽입되었다. 먼저 pKUN10ΔC(즉, pKUN8ΔC의 유도체)가 Klenow와 접착성의 말단에 채워지는 및 계속해서, 무딘-가장자리 결찰에 의해 플라스미드를 단련하는 Noti의 pKUN8ΔC를 정리함으로 얻어졌다. 마지막으로, p10αgluΔNV는 NotI로 정리되었다. 상기 접착성 말단은 또한 Klenow로 채워졌고 단편은 결찰되었고, 플라스미드 p10αgluΔNotI를 일으킨다.
c8αgluex 1의 구조
α-글루코시다아제 유전자의 첫번째 엑손에 SstI 사이트가 소 αS1-카세인 서열에 용해에 대해 선택되었기 때문에, p8.5αgluBSE는 SstI로 부분적 정리로 허용된 BglII로 정리되었다. 엑손 1-3을 포함하는 단편은 분리되었고 pKUN8ΔC의 BglII 및 SstI 사이트에 결찰되었다. 결과의 플라스미드는 이름지어졌다: p5'αgluex1(도 3, 패널 A를 참조하라)
다음 단계 (도 3, 패널 B)는 p5'αgluex1에 3' 부분의 결찰이었다. 우선, p10αgluΔN이 BglII 및 BamHI로 정리되었다. 엑손 16-20을 포함하는 상기 단편이 분리되었다. 두번째, p5'αgluex1은 BglII로 정리되었고 자기-결찰을 막기 위해, 및 접착성 BglII 말단을 탈인하기 위해 포스포릴라아제(BAP)로 처리되었다. BamHI 접착성 말단이 BglII 접착성 말단과 융화성이기 때문에, 상기 말단은 서로에게 결찰한다. 결과의 플라스미드, 즉, p5'3'αgluex1는 선택되었다. 상기 플라스미드는 마지막 구조화 단계에 대해 유용한 유일한 BglII 사이트를 갖는다(도 3, 패널 B 및 C를 참조하라).
α-글루코시다아제 유전자의 중간 부분이 후자 구조에 삽입되었다. 상기 단계에 대해, p7.3αgluBSE가 BglII로 정리되었고, 8.5-kb 단편은 분리되었고 정리된 BglII 및 탈인산염의 p5'3'αgluex1 플라스미드에 결찰되었다. 결과의 플라스미드는 pαgluex1(도 3, 패널 C)이다.
소 αS1-카세인 프로모터 서열은 세개의 단편을 포함하는 결찰에 의해 다음 단계에서 만들어졌다. pWE15 코스미드 벡터는 NotI로 정리되었고 탈인산염되었다. 소 αS1-카세인 프로모터는 8 Rb NotI-ClaI 단편으로 분리되었다(de Boer외, 1991,상기를 참조하라). 인간 산 α-글루코시다아제 단편은 같은 효소를 사용하여 pαgluex1로부터 분리되었다. 상기 세개의 단편들은 결찰되었고 1046 E.coli 숙주 세포에 Stratagene GigapackII 키트를 사용하여 포장된다. 결과의 코스미드 c8αgluex1은 E.coli 균주 DH5α에서 번식되었다. 벡터는 현미주사 전에 NotI와 실모양을 이룬다.
c8αgluex2 및 c8,8αgluex2-20
다른 두개의 발현 플라스미드의 구조(도2, 패널 B 및 C)는 c8αgluex1의 그것에 유사한 전략을 허용했다. 플라스미드 p5'αgluStuI는 StuI와 플라스미드의 정리에 의해 p8,5αgluBSE로부터 유도되었고, 벡터 서열에 더해서 엑손 2-3을 포함하는 분리된 단편의 자기-결찰에 의해 허용되었다. 플라스미드 p5'αgluStuI는 일부 단편을 일으키는 NcoI와 선형 단편의 부분적 정리에 의해 허용된 PglII와 정리되었다. 엑손 2 및 3을 포함하는 2.4kb 단편은 분리되었고 p5'αgluex2를 일으키는 벡터 pKUN12ΔC의 NcoI 및 BglII 사이트에 결찰되었다. pKUN12ΔC가 폴리링커: ClaI NcoI BglII HindIII EcoRI SphI XhoI SmaI/SfiI NotI를 포함하는 pKUN8ΔC의 유도체임을 주의하라.
플라스미드 p10αgluΔNotI는 BglII 및 HindIII로 정리되었다. 엑손 16-20을 포함하는 단편이 분리되었고 BglIII 및 HindIII로 정리된 p5'αgluex2에 결찰되었다. p5'3'αgluex2에 중간 단편은 pαgluex1처럼 삽입되었다. 이에 대해, p7.3αglu는 BglII로 정리되었다. 단편은 분리되었고 BglII-정리된 및 탈인산염 p5'3'αgluex2에 결찰되었다. 결과의 플라즈마 pαgluex2는 c8αgluex-20 및 c8,8αgluex2-20의 구조화에 사용되었다(도 2, 패널 B 및 C).
세번째 발현 플라스미드 c8,8αgluex2-20의 구조화에 대해(도 2, 패널 C) α-글루코시다아제의 3' 측면 영역이 삭제되었다. 이를 이루기 위해, pαgluex2가 SphI로 정리되었다. 엑손 2-20을 포함하는 단편은 분리되었고 pαgluex2-20을 일으키는 자기-결찰되었다. 그 후, 소 αs1-카세인 유전자의 3'측면 영역을 포함하는 단편은 SphI 및 NotI로 정리하여 pl6,8αglu로부터 분리되었다. 상기 단편은 pαgluex2-20-3αS1를 일으키는 폴리링커 서열에서 SphI 사이트 및 NotI 사이트를 사용하여 pαgluex2-20에 삽입되었다.
c8,8αgluex2-20을 제조하는 마지막 단계는 c8αgluex1을 이끄는 구조화의 마지막 단계에서처럼 세개의 단편의 결찰이었다. pαgluex2-20-3'αS1 및 pαgluex2에서 ClaI 사이트가 메틸화에 분열하지 않고 나타났기 때문에 플라즈마는E.coli DAM(-) 균주 ECO343에서 번식되어야했다. 상기 균주로부터 분리된 pαgluex2-20-3'αS1은 ClaI 및 NotI로 정리되었다. 3'αS1-카세인 측면 영역에 더해서 엑손 2-20을 포함하는 단편이 벡터 서열로부터 정제되었다. 소 αs1 프로모터(DeBoer(1991)&(1993), 상기를 참조하라) 및 NotI-정리된, 탈인산염 pWE15를 포함하는 상기 단편, 8 kb NotI-ClaI 단편이 결찰되었고 포장되었다. 결과의 코스미드는 c8,8αgluex2-20이다.
코스미드 c8αgluex2(도 2, 패널 B)가 다른 단계의 결합을 통해 구조화되었다. 첫째로, 코스미드 c8,8αgluex2-20이 SalI 및 NotI로 정리되었다. αS1-촉매제 및 산 α-글루코시다아제 유전자의 엑손 2-6 부분을 포함하는 10.5-kb 단편이 분리되었다. 두번째로, 플라스미드 pαgluex2가 산 α-글루코시다아제 유전자의 3'부분을 포함하는 단편을 얻기 위해 ShlI 및 Notl로 정리되었다. 마지막으로, 코스미드 벡터 pWEl5가 NotI로 정리되었고 탈인산염화되었다. 상기 세개의 단편은 결찰되었고 포장되었다. 결과의 코스미드는 c8αgluex2이다.
실시예 2:유전자 변형(Transgenesis)
cDNA 및 게놈 구조는 NotI와 선형이었고 그 후 의사 임신한 마우스 수양 어미의 자궁에 주입된 수정된 마우스 난모세포의 난핵에 주입되었다. 자손은 짧게 자른 꼬리로부터 분리된 DNA의 서든 블롯팅(Southern blotting)에 의해 인간 α-글루코시다아제 cDNA 또는 게놈 DNA 유전자 구조의 삽입이 분석되었다. 유전자 변형 마우스는 선택되었고 사육되었다.
NotI로 선형인 게놈 구조는 또한 의사 임신한 토끼 수양 어미의 자궁에 주입된 임신한 토끼 난모세포의 난핵에 주입되었다. 자손은 서든 블롯팅에 의해 알파-글루코시다아제 DNA의 삽입이 분석되었다. 유전자 변형 토끼는 선택되었고 사육되었다.
실시예 3:유전자 변형 마우스의 젖에서 산 α-글루코시다아제의 분석
유전자 변형 마우스와 유전자 변형하지 않은 대조군의 젖을 웨스턴 블롯팅(Western Blotting)으로 분석하였다. 탐색자는 인간 산 α-글루코시다아제에 대한 마우스 항체 특이성(즉, 마우스 효소에 결합하지 않는)이다. 변형 유전자 1672 및 1673이 젖에 인간 산 α-글루코시다아제의 발현을 보였다(도 4). 100-110kD 및 76kD에서 큰 띠와 적은 띠는 α-글루코시다아제에 대해 기대된 것처럼 관찰되었다. 유전자 변형 없는 마우스의 젖에서 띠는 관찰되지 않는다.
인간 산 α-글루코시다아제의 활성이 유전자 변형 마우스 라인의 젖에서 인공 기질 4-메틸움벨리페릴-α-D-글루코피라노시드로 측정되었다(Galiaard, Genetic Metabolic Disease, Early Diagnosis and Prenatal Analysis, Elsevier/North Holland, Amsterdam, 809-827쪽 (1980)을 참조하라). cDNA 구조를 포함하는 마우스(도 1)는 시간당 0.2 sowl 2μmol/㎖로 다양하다. 게놈 구조를 포함하는 마우스 라인(도 2, 패널 A)은 시간당 10 내지 610μmol/㎖ 수준에서 발현하였다. 상기 형태는 180μmol/㎖의 재조합 효소의 추정된 특이 활성에 기초하여 1.3 내지 11.3㎎/ℓ(cDNA 구조) 및 0.05 내지 3.3g/ℓ(게놈 구조)의 생산에 등가이다(Van der Ploeg외, J.Neurol. 235:392-396(1988)).
재조합 산 α-글루코시다아제가 ConA-SepharoseTM및 SephadexTMG200에서 젖의 연속적인 크로마토그래피에 의해 유전자 변형 마우스의 젖에서 분리되었다. 7㎖ 젖을 10mM 황산 나트륨, pH 6.6 및 100mM NaCl로 구성된 3㎖ Con A 완충용액으로 10㎖로 희석하였다. 그 후 Con A 완충용액에 Con A 세파로즈(sepharose)의 1:1 현탁액이 첨가되었고 젖은 가볍게 흔들면서 4℃에서 밤새 남겨놓았다. 그 후 Con A 세파로즈 비드가 원심분리에 의해 수집되었고 Con A 완충용액으로 5번, 100mM 대신 1M NaCl을 포함하는 Con A 완충용액으로 3번, 100mM 대신 0.5M NaCl을 포함하는 Con A 완충용액으로 한번 씻겼고 그후 0.5M NaCl 및 0.1M 메틸-α-D-매노피라노시드를 포함하는 Con A 완충용액으로 배치크기로 추출되었다. 추출된 샘플에서 산 α-글루코시다아제 활성은 인공 4-메틸-움벨리페릴-α-d-글리코피라노시드 기질을 사용하여 측정되었다(상기를 참조하라). 산 α-글루코시다아제 활성을 포함하는 단편들은 함께하고 농축되고 20mM Na 아세테이트, pH 4.5 및 25mM NaCl로 구성된 Sephadex 완충용액에 투석되었고 SephadexTM200 컬럼에 적용되었다. 상기 컬럼은 같은 완충용액으로 실시되었고 단편들은 산 α-글루코시다아제 활성 및 단백질 함량에 대해 분석되었다. 산 α-글루코시다아제 활성 및 실제 다른 단백질의 유리된 단편들은 함께하고 농축되었다. 기술된 바와 같은 방법은 충분히 Reuser외, Exp. Cell Res. 155:178-179*1984)공고된 것과 같다. 방법의 일부 수정이 정확한 조성물 및 완충 시스템의 pH 및 수와 컬럼 재료에서 정제 단계의 선택에 따라서 가능하다.
그 후 젖으로부터 정제된 산 α-글루코시다아제는 GSD Π(내부 원인에 의한 산 α-글루코시다아제)의 환자로부터 배양된 결합 조직 형성 세포에 효소를 투입함으로 포스포릴화하여 시험되었다. 상기 시험에서 단백질을 포함하는 만노오스 6-포스페이트는 결합 조직 형성 세포의 세포 표면에 만노오스 6-포스페이트 수용기에 의해 결합된다. 결합이 유리 만노오스 6-포스페이트에 의해 억제된다(Reuser외, Exp. Cell Res. 155:178-189(1984)). 유전자 변형 마우스의 젖에서 분리된 산 α-글루코시다아제의 포스포릴화에 대한 전형적인 시험에서, 산 α-글루코시다아제는 20시간동안 매시간 1㎛ole 4-메틸-움벨리페릴-α-D-글루코피라노시드를 대사시키기에 충분한 양에 50㎕ 배양기(Ham F10, 10% 태아 송아지 혈청 및 3mM 기관(pipe)으로 공급된)에 104-106 결합 조직 형성 세포에 첨가되었다. 시험은 경쟁물질로써 5mM 만노오스 6-포스페이트로 또는 없이 실제로 Reuser외, 상기(1984)에 기술된 바와 같이 시행되었다. 상기 조건하에서 환자 결합 조직 형성 세포의 산 α-글루코시다아제가 건강한 일반으로부터 결합 조직 형성 세포에서 측정된 수준까지 회복되었다. 마우스 젖에서 분리된 산 α-글루코시다아제에 의한 내부 원인에 의한 산 α-글루코시다아제 활성의 회복은 소 고환, 인간 소변 및 트랜스펙션된 CHO 세포의 배양기로부터 정제된 산 α-글루코시다아제에 의한 회복만큼 효율적이다. α-글루코시다아제 형태 젖에 의한 회복은 다른 문헌으로부터 α-글루코시다아제에 대해 관찰된 바와 같이 5mM 만노오스 6-포스페이트에 의해 억제되었다. (Reuser외, 상기; Van der Ploeg외, (1988), 상기; Van der Ploeg외, Ped. Res. 24:90-94(1988)).
젖에서 생산된 α-글루코시다아제의 확실한 추가의 증거로는 마우스의 젖에서 생산된 재조합 α-글루코시다아제의 N-말단 아미노산 서열이 AHPGRP로 시작하는 Hoefsloot외, EMBO J. 7:1697-1704(1988)에 의해 공개된 바와 같이 인간 소변으로부터 α-글루코시다아제 선구물질의 그것과 같다는 것을 보여졌다.
실시예 4:알파-글루코시다아제의 동물 시험
최근, 폼페병에 대한 녹아웃 마우스 모델은 (25) 이용되어왔다. 상기 모델은 뮤린(murine) 알파-글루코시다아제 유전자의 목표된 분열에 의해 생산되었다. 글리코겐-포함하는 리소좀은 간, 심장 및 골격근에서 생후 곧 검출된다. 분명한 임상 증후는 상대적으로 늦은 나이(>9개월)에 분명해지지만 심장은 전형적으로 커지고 심전도는 이상이 있다.
시험은 유전자 변형 토끼 젖에서 정제된 AGLU의 생체내 효과를 연구하기 위해 녹아웃(KO) 마우스 모델을 사용하여 실시되어왔다. 상기 시험에서 재조합 효소는 유전자 변형 마우스로부터 정제에 대한 상기 기술된 바와 같이 충분히 유전자 변형 토끼의 젖으로부터 정제되었다.
1.KO 마우스 모델에서 짧은 기간 연구
6일 간격으로 단일 또는 멀티 주입이 꼬리 정맥을 통해 KO 마우스에 이루어졌다. 마지막 효소 주입 후 이틀 후 동물을 죽이고, 기관에 인산염 완충된 염수(PBS)를 살포했다. 조직 균질화액은 GLU 효소 활성 검사 및 조직 글리코겐 함량으로 만들어졌고, 다양한 기관의 극박 부분은 축적(전자 현미경을 통해) 리소좀 글리코겐 함량을 절개하여 보여졌다. 또한 내화된 AGLU의 위치 측정은 인간 태반성숙한 α-글루코시다아제에 대한 토끼 다 복제 항체를 사용하여 결정되었다.
결과는 0.7 및 1.7㎎ AGLU(시험 C 및 A 각각)의 1회 투여량이 정맥주사로 주입될 때 두개의 녹아웃 마우스의 그룹의 다양한 기관에서 생체내 효율적으로 흡수되는 것을 보였다. 시험 A는 또한 두개의 개별 토끼 젖으로부터 정제된 AGLU의 흡수 및 분배에 차이가 없음을 보였다.
AGLU 활성의 증가는 기관 가령, 간, 비장, 심장 및 골격근에서 보여졌지만 뇌에서는 아니다. 두마리의 KO 동물에 1.7㎎ AGLU의 1회 주입 후 이틀, 두마리의 PBS-주입된 보통 대조군 마우스 또는 두마리의 이형 KO 마우스의 기관에서 관찰된 내부 원인에 의한 알파-글루코시다아제 활성 수준과 가까운 수준 또는 훨씬 이상을 얻었다(시험 A). 시험된 기관중 간 및 비장은 양적으로 흡수에 포함된 주된 기관이지만 또한 심장 및 가슴 및 대퇴부 근육은 효소를 충분히 흡수한다. 뇌 조직에서 중대한 증가의 결여는 AGLU가 혈액-뇌 장애를 통과하지 못 하는 것을 시사한다. 결과는 표 2에서 요약된다.
| 그룹 | 간 | 비장 | 심장 | 흉근 | 대퇴부 근육 | 혀 | 뇌 | |||||||
| Act | Glc | Act | Glc | Act | Glc | Act | Glc | Act | Glc | Act | Glc | Act | Glc | |
| 시험 A 1.7㎎ AGLU의 1회 투여 처리된 동물(2 공급원으로부터) | ||||||||||||||
| 처리된 KO마우스 공급원 1 | 674410 | - | - | - | 26317 | - | - | - | 243.1 | - | - | - | 0.80.4 | - |
| 처리된 KO마우스 공급원 2 | 454604 | - | - | - | 7648 | - | - | - | 1210 | - | - | - | 0.80.4 | - |
| 처리되지 않은 KO마우스 | 3.1 | - | - | - | 0.2 | - | - | - | 0.2 | - | - | - | 0.2 | - |
| 처리되지 않은보통 마우스 | 5837 | - | - | - | 2317 | - | - | - | 118.2 | - | - | - | 5757 | - |
| 시험 B 6일 후 AGLU의 4 투여(1.0, 2.0, 1.0 및 1.4㎎)처리된 동물 | ||||||||||||||
| 처리된 KO마우스(13주된) | 1132944 | 7013 | - | - | 2410 | 12591082 | 12546 | 87116 | - | -- | 8935 | - | 0.40.2 | 163163 |
| 처리된 KO마우스 (34주된) | 3375 | 23 | - | - | 60 | 1971 | 49 | 90 | - | - | 207 | - | 0.7 | 374 |
| 처리되지 않은 KO마우스 (13주와34주된) | 2.02.0 | 406147 | - | - | 0.20.3 | 32331748 | 1.01.0 | 8687 | - | - | 1.01.0 | - | 0.20.2 | 487168 |
| 처리되지 않은보통 마우스(34주된) | 35 | 6 | - | - | 8.2 | 0 | 6.0 | 1.0 | - | - | 14 | - | 18 | 0 |
| 시험 C 0.7㎎의 1회 투여 처리된 동물 | ||||||||||||||
| 처리된 KO마우스 | 582558 | - | 462313 | - | 4650 | - | - | - | 5.13.6 | - | - | - | 0.40.4 | - |
| 처리되지 않은 KO마우스 | 1.11.6 | - | 0.80.7 | - | 0.30.3 | - | - | - | 0.20.3 | - | - | - | 0.20.2 | - |
KO 마우스 모델에서 짧은 기간 처리를 따르는 AGLU 및 글리코겐 함량의 조직 흡수
표의 숫자는 각 동물에 관한 것이다
Act: AGLU 활성(시간당 ㎎ 단백질 당 nmoles 4MU)
Glc: 글리코겐 함량(㎍/㎎ 단백질)
n.d 미검출
- 이용할 수 없는 데이타
두개의 KO 마우스가 매 6일에 4번 주입되었을 때(시험 B), 전체 세포 글리코겐의 뚜렷한 감소가 심장과 간 모두에서 관찰되었다. 전체 글리코겐에 관련해서 골격근 조직에서는 영향이 관찰되지 않았다. 그러나, 일반적으로 상기 조직에서 AGLU의 흡수는 시험된 다른 조직에서보다 더 낮았다.
4번 주입된 KO 마우스의 트랜스미션 전자 현미경은 간세포 및 심근 세포 모두에서 리소좀 글리코겐의 뚜렷한 감소를 보인다. 심장의 일부 영역에서 리소좀 글리코겐의 감소가 상기 짧은 기간 투여 후에 관찰되지 않기 때문에 심근에서 관찰된 효과는 국한된다.
인간 태반 성숙한 알파-글리코시다아제에 대한 토끼 다복제 항체를 사용하는 웨스턴 블롯 분석이 목표 조직에 강하게 제안하는 흡수를 시험한 모든 기관에서 성숙한 효소에 대한 주입된 AGLU의 완벽한 과정 및 리소좀 국한 및 과정을 나타낸다. 독성 효과는 세개 시험에서 관찰되지 않는다.
AGLU의 면역조직화학적 스테인은 인간 알파-글루코시다아제에 대한 다복제 토끼 항체를 사용하여 간세포의 리소좀에 분명하였다. 심장 및 골격 조직에서 AGLU의 존재는 상기 기술로 더 낮은 흡수에 분명하게 보이는 것이 더 어렵다.
2.KO 마우스 모델로 긴-기간 시험
긴 기간 시험에서, 효소는 둘 또는 셋 KO 마우스의 그룹의 꼬리 정맥에 25주 이상의 기간동안 매주 한번씩 주입된다. 개시 투여량은 12주 동안0.5㎎(17㎎/㎏)/마우스를 따르는 2㎎(68㎎/㎏)이었다. 마우스의 두 그룹에서, 상기는 2㎎/마우스의 처리의 4 또는 11 추가 주에 의해 따랐다. 마우스의 나이가 6-7개월일 때 주입을 시작했다. 상기 나이에서, 분명한 조직병리는 KO 모델에서 발전되었다. 마지막 효소 투여후 이틀 후 동물을 죽이고 기관에 인산염 완충된 염수(PBS)를 살포했다. 조직 동질성은 AGLU 효소 활성 분석 및 조직 글리코겐으로 만들었고, 다양한 기관의 영역이 리소좀 글리코겐 축적을 보였다(빛 현미경을 통해).
결과는 0.5㎎/마우스(그룹 A, 3 동물/그룹)의 13주 처리된 마우스가 간 및 비장에서 활성이 증가하고 간과 아마 심장의 글리코겐 수준이 감소되었다는 것을 보였다. 비록 근육에서 글리코겐의 뚜렷한 감소가 없었지만, 하나의 동물이 근육에서 증가된 활성을 보였다.
2㎎/마우스(그룹 B, 3 동물/그룹)의 4주에 따른 0.5㎎/마우스의 14주 처리된 마우스가 증가된 활성이 심장 및 골격근에서 측정되고 글리코겐 수준의 감소가 또한 비장에서 보이는 것을 제외하고 13주 동안 처리된 마우스와 유사한 결과를 보였다.
2㎎/마우스(그룹 C 2 동물/그룹)의 11주에 따른 0.5㎎/마우스의 14주 처리된 마우스가 처리된 마우스가 간, 비장, 심장 및 골격근에서 글리코겐 수준에 명확한 감소를 보인 것을 제외하고 다른 두 그룹과 유사한 결과를 보였다. 가장 높은 투여량에서조차 뇌에서는 활성이 검출되지 않았다.
각 그룹 (그룹 평균)에서 처리된 동물과 처리되지 않은 동물의 결과는 표 3에 요약된다.
| 그룹 | 간 | 비장 | 심장 | 흉근 | 대퇴부근육 | 뇌 | ||||||||
| Act | Glc | Act | Glc | Act | Glc | Act | Glc | Act | Glc | Act | Glc | Act | Glc | |
| 그룹 A 13주 동안 0.5㎎/마우스/주 로 처리된 동물 | ||||||||||||||
| 처리한 | 713 | 2 | 463 | n.d | 3 | 86 | 9 | 81 | 6 | 40 | 14 | 66 | - | - |
| 처리하지 않은 | 2 | 24 | 1 | n.d | 1 | 111 | 1 | 66 | 1 | 50 | 1 | 61 | - | - |
| 그룹 B 4주 동안 2㎎/마우스/주를 따르는 14주 동안 0.5㎎/마우스/주 로 처리된 동물 | ||||||||||||||
| 처리한 | 2705 | 1 | 1628 | 0 | 59 | 288 | 49 | 120 | 30 | 128 | 44 | 132 | - | - |
| 처리하지 않은 | 3 | 11 | 31 | 6 | 1 | 472 | 1 | 113 | 1 | 162 | 1 | 142 | - | - |
| 그룹 C 11주 동안 2㎎/마우스/주를 따르는 14주 동안 0.5㎎/마우스/주 로 처리된 동물 | ||||||||||||||
| 처리한 | 1762 | 1 | 1073 | 2 | 66 | 211 | 99 | 113 | 37 | 18 | 109 | 32 | 1 | 32 |
| 처리하지 않은 | 2 | 45 | 1 | 21 | 1 | 729 | 1 | 291 | 0 | 104 | 0 | 224 | 0 | 44 |
KO 마우스 모델에서 긴 기간 처리를 따르는 AGLU 및 글리코겐 함량의 조직 흡수
표의 숫자는 3 동물(그룹 A 및 B)의 평균 또는 2 동물(그룹 C)의 평균이다.
Act AGLU 활성(시간당 ㎎단백질당 nmoles 4MU)
Glc: 글리코겐 함량(㎍/㎎단백질)
n.d. 미검출
- 이용할 수 없는 데이타
추가로, 조직병리 조건에서 매우 설득력 있는 향상이 그룹 C의 마우스(2㎎/마우스에서 11주를 따라 0.5㎎/마우스에서 첫 14주 동안 처리한)에서 관찰되었다. 병리의 분명한 반전은 다양한 조직, 가령 심근 및 흉근에서 보여졌다.
잔류 리소좀 α-글루코시다아제 활성이 평균 대조군 값(14)의 >20%일 때 폼페병이 일어나지 않는다고 보고되어왔다. KO 마우스 모델로 얻어진 데이타는 상기수준이 재조합 선구물질 효소를 사용하여 매우 잘 이루어진다는 것을 나타낸다.
실시예 5:인간 임상 시험
단일 임상 Ⅰ 연구(AGLU1101-01)는 15명의 건강한 남자 지원자들에게 실시되어왔다. AGLU의 투여량은 25 내지 800㎎이고, 건강한 성인 남자 지원자들에게 정맥 주입으로 투여된다. 알레르기 및 과민성의 병력이 있는 피실험자는 연구에 배제되었다. 피실험자들은 5 투여 그룹에서 임의로 뽑히고 각 투여 그룹은 각 투여 수준에서 AGLU(4 피실험자) 또는 위약(placebo)(1 피실험자)을 받았다. 모든 피실험자들은 연구 약의 두개의 투여량을 받았고, 개별로 2주 투여되었다. 투여 견본은 다음과 같다:
A
25㎎: 그룹 1, 처리 기간 1
B
50㎎: 그룹 1, 처리 기간 2
C
100㎎: 그룹 2, 처리 기간 1
D
200㎎: 그룹 3, 처리 기간 1
E
400㎎: 그룹 2, 처리 기간 2
F
800㎎: 그룹 3, 처리 기간 2
P
위약 (그룹당 1 피험자 및 처리 기간)
피실험자들은 각 처리 기간의 Day 1에서 주입으로 AGLU 또는 위약이 투여되었다. 주입은 30분 이상 이루어졌고 피실험자들은 주입이 끝난 후 적어도 2시간 동안 반쯤 가로누운 상태로 있어야한다.
반대의 결과가 주입 시작, 30분(주입 끝) 및 3, 12, 24, 36 및 48시간 그후 뿐만 아니라 5일 및 8일(첫번째 기간) 및 5, 8 및 15일(두번째 기간) 전에 기록되었다. 생명 신호, ECG 및 물리적 검사가 또한 처리기간 동안 정기적으로 모니터되었다.
혈액 샘플은 임상 실험실 시험 및 약물 동력학 분석의 표준 범위에 대해 취해졌다. 피실험자의 소변을 수집하였고 실험실 분석의 표준 범위(AGLU의 결정을 포함하는)가 실시되었다.
(a) 실험실 안전 및 반대 사건
투여 그룹의 피실험자에서 실험실 요인, 임상 신호 및 ECG 측정에 임상적으로 중요한 변화는 없었다. 모든 투여량의 모든 피실험자들을 모니터하는 반대 사건의 결과는 표 4에서 요약된다.
| 투여량(㎎) | 반대 사건 |
| 25 | 기록된 사건은 근육 약화, 비정상 시력 및 피로이었다. 모든 사건은 가벼웠고 연구자에 의해 시험 항목과 관련없는 것으로 간주되었다. |
| 50 | 기록된 사건은 두통, 비염, 코피 및 둔감각증이었다. 모든 사건은 가벼웠고 연구자에 의해 보통으로 구분되고 시험 항목에 가능하게 관련 있다고 간주하는 둔감각증을 제외하고 시험 항목에 관련 없거나 희미한 관계라 있는 것으로 간주되었다. |
| 100 | 기록된 사건은 비염, 두통, 피로, 혈종 및 충혈 사이트 반응이었다. 모든 사건은 가볍게 구분되었다. 혈종, 충혈 사이트 반응 및 간헐적인 두통의 경우는 연구자에 의해 시험 항목으로 가능하게 또는 대개 관련 있는 것으로 간주하였다. 다른 사건들은 관련 없는 것으로 간주되었다. |
| 200 | 기록된 사건은 메스꺼움, 두통, 현기증, 피로, 비염, 광선 공포증, 시력 비정상 및 도취증이었다. 모든 사건은 강도에서 가볍거나 보통으로 구분되었다. 7 사건(현기증, 메스꺼움 및 비정상 시력의 경우를 포함하여)은 시험 항목에 가능하게 또는 대개 관련 있다고 간주되었다. |
| 400 | 기록된 사건은 피로 및 둔감각증이었다. 피로의 기록이 시험 항목에 관련 없는 것으로 간주되었고 둔감각증이 가능하게 관련 되어있다 |
| 800 | 기록된 사건은 메스꺼움, 졸음, 현기증, 증가한 발한, 무력증, 전율 및 간헐적인 두통이었다. 모든 사건은 강도에서 가볍거나 보통으로 구분되었다. 8 사건(졸음, 메스꺼움 및 무력증의 경우를 포함하여)은 시험 항목에 가능하게 관련 있다고 간주되었다. |
반대 사건 기록
글리코겐 저장 병 타입 Ⅱ의 유아 및 소년 환자에 효소 대체 치료로 재조합 산 α-글루코시다아제의 안전 및 효험 시험이 실시된다. 유아 환자 4명 및 소년 환자 3명이 회복되었다. 유아는 40㎎/㎏에 적정된 15-20㎎/㎏의 투여량으로 시작하고 소년은 10㎎/㎏으로 투여하였다. 환자들은 24주 동안 치료된다.
환자들은 하기 요인에 의해 평가된다.
·의심된 반대 사건을 포함하여 기록하는 표준 반대 사건
·혈액학, 임상 화학 및 항체 검출을 포함하는 실험실 요인
·근육에서 α-글루코시다아제 활성
·근육 조직병리
·12-리드(lead) ECG
·신경 검사를 포함하는 임상 조건
·요인이 아닌 PK 요인
·구명 간섭
유아 환자는 하기의 추가 요인에 의해 평가된다.
·남겨진 뒤의 비대한 벽 두께 및 남겨진 비대한 부피 지수
·신경운동(neuromotor) 증가
·생존
·근육에서 글리코겐 함량
소년 환자는 하기의 추가 요인에 의해 평가된다.
·폐 기능
·근육 강도/시간 시험 및 근육 기능
·PEDI/Rotterdam 9-항목 규모
그 후 같은 환자들은 알파 글루코시다아제의 추가 투여의 피실험자이고 유아는 15, 20, 30 또는 40㎎/㎏ 및 소년은 추가의 24주 기간동안 10㎎/㎏을 받고 상기 나타난 요인에 의해 평가된다.
추가의 Ⅱ기 임상 시험은 40㎎/㎏의 투여량 진단 후 2개월 이내에 나이 6개월 미만의 환자 8명에 실시되었다. 환자는 24주 동안 처리되고 하기 기준에 의해 평가된다.
안전 요인
실험실 안전 데이타
반대 사건 기록
1차 효험 요인: 정상 또는 가볍게 연기된 운동 기능(BSID Ⅱ)과 조합에 진단 후 6개월 구명 간섭(즉, 기계적 환기>24시간) 없이 생존.
2차 효험 요인: 신경 운동 증가에 변화; 남겨진 부피 지수에 변화; 골격근 산 α-글루코시다아제 활성 및 글리코겐 함량에 변화.
효험은 정상 또는 가볍게 연기된 것과 같이 구분된 BSID Ⅱ와 조합에 역사적 대조군에 10% 생존에 비교된 α-글루코시다아제 그룹에 구명 간섭 없이 진단 후 6개월에 50% 생존에 의해 보여질 수 있다.
추가의 임상 시험은 소년 환자에 실시된다. 환자들은 GSD 타입 Ⅱb의 소년 발병의 나이 1세 이상 35세 이하이다. 환자들은 24주 치료 기간 동안 10㎎/㎏ 또는 20㎎/㎏이 투여된다. 치료는 하기 요인으로 모니터된다.
안전 요인 실험실 안전 데이타
반대 사건 기록
1차 효험 폐 기능 요인 (예를 들면, FVC, 환기장치에 시간)
근육 강도
2차 효험 구명 간섭 요인:
삶의 질
골격근 산 α-글루코시다아제 활성
양적인 목적 베이스라인 위의 1차 효험 요인에서 20% 상대적 향상
효험에 관련된 모든 양적인 측정은 바람직하게는 동시 또는 역사적 대조에상대적 통계학적으로 중요하고, 바람직하게는 p < 0.05이다.
실시예 6 약학 형성
알파-글루코시다아제는 하기와 같이 형성된다:5㎎/㎖ ?-Glu, 15mM 인산 나트륨, pH 6.5, 2%(w/w)만니톨, 및 0.5%(w/w)수크로즈. 상기 형성을 20cc 관 유리병에 10.5㎖의 마지막 부피로 채우고 냉동 건조한다. 시험동안, 방출 및 임상 용도, 각 유리병은 환자 특이 목표 투여량 농도에 직접 투여되거나 중성 염수로 중분히 희석된 5㎎/㎖ ?-Glu의 10.5㎖를 얻기 위해 주입(USP 또는 등가)에 대해 중성 염수(9%)의 10.3㎖*로 재구성된다. 10.5㎖ 양(유리병 안에 52.5㎎ 알파 글루코시다아제 전체)은 10mls(50㎎)의 추출 및 운반(또는 이동)이 허용되는 과잉 권고된 USP를 포함한다. 만니톨은 냉동 건조 순환(수크로즈 혼자에 상대적)을 줄이는 적당한 증량제(bulking agent)로 이용된다. 수크로즈는 하기 재구성 집합에 중대한 증가를 일으키지 않는 저온/리오(lyo) 예방보호제로 이용된다. 만니톨 형성의 재구성은 반복적으로 집합에 약간의 증가를 일으켜왔다. 하기 냉동건조, 케이크 질은 받아들여질 수 있고 차후 재구성 시간은 충분히 줄어든다. 염수는 바람직하게 주입 용액에 대해 HSA/포도당이다. 염수가 2% 매티톨/0.5% 수크로즈에 냉동 건조로 조합에 사용될 때, 용액은 정맥 투여로 적당한 건강을 갖는다. 2% 만니톨/0.5% 수크로즈 형성을 포함하는 냉동 건조된 유리병은 0.9% 중성 염수(주입에 대해)로 5㎎/㎖ ?-Glu를 얻기 위해 재구성되었다.
실시예 7: 주입 계획
용액은 내재하는 정맥 캐뉼라를 통해 공급된다. 환자들은 주입되는 동안 가까이서 모니터되고 적당한 임상 간섭은 반대의 사건 또는 의심된 반대 사건의 사건에 취해진다. 48시간의 창이 각 주입에 따른다. 주입 속도가 시간에 증가하는 주입 계획은 감소하거나 또는 반대 사건을 제거한다.
유아에 대한 주입은 하기 계획에 따라 공급될 수 있다:
·60분 동안 5cc/시
·60분 동안 10cc/시
·30분 동안 ≥40cc/시
·주입의 생각나게 하는 것에 대해 ≥80cc/시
소년에 대해 주입은 하기 계획에 따라 공급될 수 있다:
·60분 동안 0.5cc/㎏/시
·60분 동안 1cc/㎏/시
·30분 동안 5cc/㎏/시
·주입의 생각나게 하는 것에 대해 7.5cc/㎏/시
앞의 발명이 명료함 및 이해의 목적에 일부 상세함에 기술되어왔는한, 형태 및 세부에 다양한 변화가 본 발명의 진짜 범위로부터 벗어나지 않고 만들어질 수 있다는 것이 당분야의 기술자가 상기 명세서를 읽으면 명백할 것이다. 본 출원에 인용된 모든 공개 및 특허 문헌이 각 개별 공개 또는 특허 문헌이 개별적으로 표시되듯이 같은 범위에 모든 목적에 전체가 참고로 포함된다.
Claims (34)
- 인간 산 알파 글루코시다아제를 치료에 효과적인 양을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 1 항에 있어서,상기 환자가 적어도 주당 10㎎/㎏체중이 투여되는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 1 항에 있어서,상기 환자가 적어도 주당 60㎎/㎏체중이 투여되는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 1 항에 있어서,상기 환자가 적어도 주당 120㎎/㎏체중이 투여되는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,상기 환자에 주당 알파-글루코시다아제가 한번 투여되는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,상기 환자에 주당 알파-글루코시다아제가 세번 투여되는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,상기 투여량이 적어도 24주 동안 매주 투여되는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 1 항에 있어서,상기 알파-글루코시다아제가 정맥주사로 투여되는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 1 항에 있어서,상기 알파-글루코시다아제가 유전자 변형 포유류의 젖에서 생산되는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 1 항에 있어서,상기 환자가 유아 폼페병을 갖는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 10 항에 있어서,상기 환자가 적어도 1살이 되기까지 살아남는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 1 항에 있어서,상기 환자가 소년 폼페병을 갖는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 1 항에 있어서,상기 환자가 성인 폼페병을 갖는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 1 항에 있어서,상기 알파-글루코시다아제가 주로 110kD 형태인 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 1 항에 있어서,환자에게 인간 산 알파 글루코시다아제의 수준을 모니터링을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 15 항에 있어서,만약 알파-글루코시다아제의 수준이 환자에게 역치 값 이하로 떨어진다면, 인간 산 알파 글루코시다아제의 2차 투여를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 1 항에 있어서,상기 인간 알파 글루코시다아제가 정맥주사로 주입되고 주입 속도는 주입되는 동안 증가하는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 17 항에 있어서,상기 주입 속도가 주입되는 동안 적어도 10배로 증가하는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 17 항에 있어서,상기 주입 속도가 5시간내에 적어도 10배로 증가하는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 17 항에 있어서,상기 환자는 적어도 4번 투여되고, 각 투여량은 이전 투여량보다 더 높은 강도인 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 20 항에 있어서,상기 투여량은 1차가 0.03-3㎎/㎏/시, 2차가 0.3-12㎎/㎏/시, 3차가 1-30㎎/㎏/시 및 4차가 2-60㎎/㎏/시 인 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 21 항에 있어서,상기 투여량은 1차가 0.1-1㎎/㎏/시, 2차가 1-4㎎/㎏/시, 3차가 3-10㎎/㎏/시 및 4차가 6-20㎎/㎏/시 인 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 22 항에 있어서,상기 투여량은 1차가 0.25-4㎎/㎏/시, 2차가 0.9-1.4㎎/㎏/시, 3차가 3.6-5.7㎎/㎏/시 및 4차가 7.2-11.3㎎/㎏/시 인 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 23 항에 있어서,상기 투여량은 1차가 0.3㎎/㎏/시, 2차가 1㎎/㎏/시, 3차가 4㎎/㎏/시 및 4차가 12㎎/㎏/시 인 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 20 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,상기 1, 2, 3 및 4차 투여가 각각 15분 내지 8시간의 기간 동안 투여되는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 제 20 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,상기 1, 2, 3 및 4차 투여가 1시간, 1시간, 0.5시간 및 3시간 동안 개별적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 폼페병 환자 치료 방법.
- 무균의 생리적으로 적당한 완충용액에서 인간 산 알파 글루코시다아제, 인간 혈청 알부민 및 당을 포함하는 약학 조성물.
- 제 17 항에 있어서,인산 나트륨 완충용액에서 인간 산 알파 글루코시다아제, 인간 혈청 알부민 및 글루코즈를 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
- 수용액에서 알파 글루코시다아제, 만니톨 및 수크로즈를 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
- 제 27 항에 있어서,상기 당에는 만니톨 및 수크로즈를 포함하고 만니톨의 농도가 수용액의 1-3%w/w이고 수크로즈의 농도가 수용액의 0.1 내지 1%w/w인 것을 특징으로 하는 약학조성물.
- 제 27 항에 있어서,만니톨의 농도가 2%w/w이고 수크로즈의 농도가 0.5%w/w인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
- 수용액의 인간 산 글루코시다아제, 만니톨 및 수크로즈를 포함하는 약학 조성물을 냉동 건조하여 제조한 냉동 건조 조성물.
- 2차 조성물을 제조하기 위해 인간 산 알파-글루코시다아제, 만니톨, 수크로즈 및 수용액을 포함하는 1차 조성물을 냉동 건조하고; 3차 조성물을 제조하기 위해 염수에서 냉동 건조한 조성물을 재구성하여 제조한 약학 조성물.
- 제 33 항에 있어서,상기 인간 산 알파-글루코시다아제는 1차 및 3차 조성물 둘다에서 5㎎/㎖이고, 만니톨은 1차 조성물에서 2㎎/㎖이고, 수크로즈는 1차 조성물에서 0.5㎎/㎖이고 재구성 단계에서 사용된 염수는 0.9%w/w인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US11129198P | 1998-12-07 | 1998-12-07 | |
| US60/111,291 | 1998-12-07 | ||
| PCT/US1999/029042 WO2000034451A1 (en) | 1998-12-07 | 1999-12-06 | Treatment of pompe's disease |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20010101131A true KR20010101131A (ko) | 2001-11-14 |
Family
ID=22337648
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020017007040A KR20010101131A (ko) | 1998-12-07 | 1999-12-06 | 폼페병의 치료 방법 |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (7) | US20030007963A1 (ko) |
| EP (2) | EP2020438B1 (ko) |
| JP (7) | JP4990434B2 (ko) |
| KR (1) | KR20010101131A (ko) |
| AT (1) | ATE410506T1 (ko) |
| AU (1) | AU3113700A (ko) |
| BE (1) | BE2018C038I2 (ko) |
| CA (1) | CA2353522A1 (ko) |
| CY (2) | CY1121113T1 (ko) |
| DE (2) | DE122009000018I1 (ko) |
| DK (2) | DK1137762T3 (ko) |
| ES (2) | ES2677343T3 (ko) |
| LU (1) | LU91544I2 (ko) |
| NL (1) | NL300382I2 (ko) |
| PT (2) | PT2020438T (ko) |
| WO (1) | WO2000034451A1 (ko) |
Families Citing this family (49)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE410506T1 (de) * | 1998-12-07 | 2008-10-15 | Genzyme Corp | Behandlung der pompeschen krankheit |
| BR0108077A (pt) * | 2000-02-04 | 2002-10-22 | Children S Hospital Res Founda | Processo para reduzir placas ateroscleróticas em um mamìfero, método para tratamento da aterosclerose em um mamìfero, composição, métodos para prover proteìna ou polipeptìdeo hidrolisante de lipìdeo biologicamente ativo ou mistura deles, para células de um mamìfero tendo deficiência na proteìna ou polipeptìdeo hidrolisante de lipìdeo biologicamente ativo , para prover lipase de ácido lisossomal biologicamente ativa para células de um mamìfero tendo deficiência de lipase de ácido lisossomal biologicamente ativa, para prover lipase de ácido lisossoal biologicamente ativa para células de um mamìfero com aterosclerose, para tratamento da doença de wolman em um mamìfero, para tratamento de doença de armazenagem de colesteril éster em um mamìfero, e, para tratamento da aterosclerose em um mamìfero |
| EP1782825B1 (en) * | 2000-07-18 | 2014-09-10 | Duke University | Treatment of glycogen storage diseases type II |
| DK3108895T3 (en) * | 2000-07-18 | 2018-11-26 | Univ Duke | Treatment of glycogen storage disease type II |
| AU2016256663A1 (en) * | 2000-07-18 | 2016-11-24 | Duke University | Treatment of clycogen storage disease type II |
| US7723296B2 (en) * | 2001-01-18 | 2010-05-25 | Genzyme Corporation | Methods for introducing mannose-6-phosphate and other oligosaccharides onto glycoproteins and its application thereof |
| US20040005309A1 (en) * | 2002-05-29 | 2004-01-08 | Symbiontics, Inc. | Targeted therapeutic proteins |
| US7629309B2 (en) * | 2002-05-29 | 2009-12-08 | Zystor Therapeutics, Inc. | Targeted therapeutic proteins |
| EP1974752B1 (en) * | 2001-04-30 | 2012-09-26 | BioMarin Pharmaceutical Inc. | Subcellular targeting of therapeutic proteins |
| US7560424B2 (en) * | 2001-04-30 | 2009-07-14 | Zystor Therapeutics, Inc. | Targeted therapeutic proteins |
| US20030072761A1 (en) * | 2001-10-16 | 2003-04-17 | Lebowitz Jonathan | Methods and compositions for targeting proteins across the blood brain barrier |
| US7658916B2 (en) | 2002-04-05 | 2010-02-09 | Genzyme Corporation | Methods of enhancing lysosomal storage disease therapy by modulation of cell surface receptor density |
| JP5433133B2 (ja) * | 2003-01-22 | 2014-03-05 | デューク・ユニヴァーシティ | リソソームポリペプチドを発現するための改善された構築物 |
| CA2814774C (en) | 2003-01-31 | 2016-03-22 | Mount Sinai School Of Medicine Of New York University | Combination therapy for treating protein deficiency disorders |
| ATE465250T1 (de) * | 2004-02-10 | 2010-05-15 | Zystor Therapeutics Inc | Saure alpha-glukosidase und fragmente davon |
| KR100697270B1 (ko) * | 2004-12-10 | 2007-03-21 | 삼성전자주식회사 | 저전력 멀티칩 반도체 메모리 장치 및 그것의 칩 인에이블방법 |
| EP3782655A1 (en) | 2005-05-17 | 2021-02-24 | Amicus Therapeutics, Inc. | A method for the treatment of pompe disease using 1-deoxynojirimycin and derivatives |
| US20090297496A1 (en) * | 2005-09-08 | 2009-12-03 | Childrens Hospital Medical Center | Lysosomal Acid Lipase Therapy for NAFLD and Related Diseases |
| AU2007322123A1 (en) * | 2006-11-13 | 2008-05-29 | Biomarin Pharmaceutical Inc. | Methods for treating Pompe disease |
| EP2279210B1 (en) | 2008-05-07 | 2017-04-12 | BioMarin Pharmaceutical Inc. | Lysosomal targeting peptides and uses thereof |
| SI2318037T1 (sl) | 2008-07-08 | 2015-07-31 | Duke University | Metoda za zdravljenje bolezni glikogenoze |
| ES2569514T3 (es) | 2009-06-17 | 2016-05-11 | Biomarin Pharmaceutical Inc. | Formulaciones para enzimas lisosómicas |
| WO2011028941A2 (en) | 2009-09-04 | 2011-03-10 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services | Disabling autophagy as a treatment for lysosomal storage diseases |
| SI2561069T1 (sl) | 2010-04-23 | 2017-07-31 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Encim za bolezen lizosomskega shranjevanja |
| MX2013000320A (es) | 2010-06-25 | 2013-06-05 | Shire Human Genetic Therapies | Composiciones y metodos para suministro al sistema nervioso central de heparan n-sulfatasa. |
| NZ702808A (en) | 2010-06-25 | 2016-08-26 | Shire Human Genetic Therapies | Methods and compositions for cns delivery of iduronate-2-sulfatase |
| EP3964230A1 (en) | 2010-06-25 | 2022-03-09 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | Methods and compositions for cns delivery of arylsulfatase a |
| PT3626257T (pt) | 2010-06-25 | 2021-11-12 | Shire Human Genetic Therapies | Métodos e composições de arilsulfatase a para a administração no snc |
| NZ702801A (en) | 2010-06-25 | 2016-08-26 | Shire Human Genetic Therapies | Treatment of sanfilippo syndrome type b |
| RU2626514C2 (ru) | 2010-06-25 | 2017-07-28 | Шир Хьюман Дженетик Терапис, Инк. | Доставка к цнс лечебных агентов |
| KR20150038636A (ko) | 2010-09-09 | 2015-04-08 | 시나게바 바이오파르마, 코포레이션 | 환자에서 리소좀 산 리파제 결핍증의 치료를 위한 리소좀 산 리파제의 용도 |
| EP2675472A4 (en) | 2011-02-15 | 2014-09-17 | Synageva Biopharma Corp | METHOD FOR THE TREATMENT OF LACK OF LYSOSOMAL SAURER LIPASE |
| JP5992902B2 (ja) * | 2011-03-16 | 2016-09-14 | 天野エンザイム株式会社 | 改変型α−グルコシダーゼ及びその用途 |
| US20140186326A1 (en) | 2011-04-22 | 2014-07-03 | William Canfield | Modified acid alpha glucosidase with accelerated processing |
| WO2013096899A2 (en) | 2011-12-23 | 2013-06-27 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | Stable formulations for cns delivery of arylsulfatase a |
| KR20140135222A (ko) | 2012-03-07 | 2014-11-25 | 아미쿠스 세라퓨틱스, 인코포레이티드 | 폼페병의 치료를 위한 고농도 알파-글루코시다제 조성물 |
| AU2014218854B2 (en) | 2013-02-20 | 2019-01-24 | Valerion Therapeutics, Llc | Methods and compositions for treatment of Pompe disease |
| MA40460A (fr) | 2014-08-11 | 2016-02-18 | Shire Human Genetic Therapies | Ciblage lysosomial et utilisation correspondante |
| PT3201320T (pt) | 2014-09-30 | 2024-01-12 | Amicus Therapeutics Inc | Alfa-glucosidase ácida altamente potente com hidratos de carbono intensificados |
| MA41022A (fr) | 2014-11-24 | 2017-10-03 | Shire Human Genetic Therapies | Ciblage lysosomial et utilisations correspondantes |
| WO2017040647A1 (en) * | 2015-08-31 | 2017-03-09 | Duke University | Methods and compositions for the treatment of cytopplasmic glycogen storage disorders |
| WO2017049157A1 (en) | 2015-09-18 | 2017-03-23 | Duke University | Methods and compositions for the treatment of steatosis-associated disorders |
| KR102510941B1 (ko) | 2015-12-30 | 2023-03-20 | 아미쿠스 세라퓨틱스, 인코포레이티드 | 폼페병 치료용의 강화된 산 알파-글루코시다제 |
| MX2018011951A (es) | 2016-03-30 | 2019-02-13 | Amicus Therapeutics Inc | Metodo para seleccionar proteinas recombinantes ricas en m6p. |
| KR102444612B1 (ko) | 2016-03-30 | 2022-09-21 | 아미쿠스 세라퓨틱스, 인코포레이티드 | 재조합 산 알파-글루코시다제를 포함하는 제형 |
| KR20240001721A (ko) | 2016-09-12 | 2024-01-03 | 제네똥 | 산-알파 글루코시다제 변이체 및 이의 용도 |
| EP3293260A1 (en) | 2016-09-12 | 2018-03-14 | Genethon | Acid-alpha glucosidase variants and uses thereof |
| EP3293203A1 (en) | 2016-09-12 | 2018-03-14 | Genethon | Acid-alpha glucosidase variants and uses thereof |
| JP2022540632A (ja) | 2019-07-09 | 2022-09-16 | ジェネトン | 糖原病（ｇｓｄ）の処置 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0832981A1 (en) * | 1987-02-17 | 1998-04-01 | Pharming B.V. | DNA sequences to target proteins to the mammary gland for efficient secretion |
| EP0502976B1 (en) | 1989-12-01 | 1996-07-03 | Pharming B.V. | Production of recombinant polypeptides by bovine species and transgenic methods |
| ATE352612T1 (de) | 1990-08-29 | 2007-02-15 | Pharming Intellectual Pty Bv | Homologe rekombination in säugetier-zellen |
| US5356804A (en) | 1990-10-24 | 1994-10-18 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City Of New York | Cloning and expression of biologically active human α-galactosidase A |
| AU4537393A (en) * | 1992-06-15 | 1994-01-04 | Gene Pharming Europe Bv | Production of recombinant polypeptides by bovine species and transgenic methods |
| EP0625530A1 (en) * | 1993-05-17 | 1994-11-23 | Nippon Paint Co., Ltd. | Oxazolidone ring-containing modified epoxy resins and cathodic electrodeposition paints containing same |
| AT1470U1 (de) | 1995-08-01 | 1997-05-26 | Austria Card | Laminierte karte und verfahren zu ihrer herstellung |
| US6118045A (en) * | 1995-08-02 | 2000-09-12 | Pharming B.V. | Lysosomal proteins produced in the milk of transgenic animals |
| ATE410506T1 (de) * | 1998-12-07 | 2008-10-15 | Genzyme Corp | Behandlung der pompeschen krankheit |
-
1999
- 1999-12-06 AT AT99965162T patent/ATE410506T1/de active
- 1999-12-06 EP EP08164825.5A patent/EP2020438B1/en not_active Revoked
- 1999-12-06 PT PT81648255T patent/PT2020438T/pt unknown
- 1999-12-06 DE DE122009000018C patent/DE122009000018I1/de active Pending
- 1999-12-06 US US09/454,711 patent/US20030007963A1/en not_active Abandoned
- 1999-12-06 JP JP2000586885A patent/JP4990434B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-06 PT PT99965162T patent/PT1137762E/pt unknown
- 1999-12-06 WO PCT/US1999/029042 patent/WO2000034451A1/en not_active Application Discontinuation
- 1999-12-06 DK DK99965162T patent/DK1137762T3/da active
- 1999-12-06 ES ES08164825.5T patent/ES2677343T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-06 DE DE69939705T patent/DE69939705D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-06 KR KR1020017007040A patent/KR20010101131A/ko not_active Application Discontinuation
- 1999-12-06 ES ES99965162T patent/ES2312222T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-06 CA CA002353522A patent/CA2353522A1/en not_active Abandoned
- 1999-12-06 DK DK08164825.5T patent/DK2020438T3/en active
- 1999-12-06 AU AU31137/00A patent/AU3113700A/en not_active Abandoned
- 1999-12-06 EP EP99965162A patent/EP1137762B1/en not_active Revoked
-
2003
- 2003-06-30 US US10/611,598 patent/US7351410B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2008
- 2008-01-30 US US12/012,003 patent/US7655226B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-03-24 NL NL300382C patent/NL300382I2/nl unknown
- 2009-03-25 LU LU91544C patent/LU91544I2/fr unknown
- 2009-04-20 JP JP2009102515A patent/JP2009161562A/ja not_active Withdrawn
- 2009-12-09 US US12/633,932 patent/US20100092449A1/en not_active Abandoned
-
2011
- 2011-12-21 US US13/333,052 patent/US20130039901A1/en not_active Abandoned
-
2012
- 2012-08-17 JP JP2012181032A patent/JP2012224643A/ja not_active Withdrawn
-
2013
- 2013-05-03 US US13/886,573 patent/US20140037611A1/en not_active Abandoned
-
2015
- 2015-05-05 JP JP2015094511A patent/JP2015134836A/ja not_active Withdrawn
- 2015-09-23 US US14/863,333 patent/US20160243203A1/en not_active Abandoned
-
2017
- 2017-01-04 JP JP2017000155A patent/JP2017066160A/ja not_active Withdrawn
-
2018
- 2018-03-28 JP JP2018061663A patent/JP2018115200A/ja not_active Withdrawn
- 2018-07-10 CY CY20181100718T patent/CY1121113T1/el unknown
- 2018-07-25 CY CY2018020C patent/CY2018020I2/el unknown
- 2018-09-28 BE BE2018C038C patent/BE2018C038I2/fr unknown
-
2019
- 2019-06-05 JP JP2019105319A patent/JP2019172685A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7655226B2 (en) | Treatment of Pompe's disease | |
| US6118045A (en) | Lysosomal proteins produced in the milk of transgenic animals | |
| US20020157123A1 (en) | Compositions and methods for treating enzyme deficiency | |
| US20020073438A1 (en) | Methods of purifying human acid alpha-glucosidase | |
| US20040161837A1 (en) | Methods of purifying human acid alpha-glucosidase | |
| AU2005200636B2 (en) | Lysosomal proteins produced in the milk of transgenic animals | |
| EP1262191A1 (en) | Pharmaceutical compositions comprising recombinant human acid alpha-glucosidase containing mannose 6-phosphate |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| WITN | Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid |