KR20010071205A

KR20010071205A - 이성질체가 강화된 공액 리놀레산 조성물

Info

Publication number: KR20010071205A
Application number: KR1020007012280A
Authority: KR
Inventors: 다리아 제롬; 칼 스카리; 애스가이 세보
Original assignee: 추후제출; 콘린코 인크.
Priority date: 1998-05-04
Filing date: 1999-03-17
Publication date: 2001-07-28
Also published as: JP2001508812A; NO20005565L; DE69936484D1; MXPA00010793A; WO1999056780A8; MX228618B; US20010025113A1; KR20010078711A; WO1999056780A1; EP0954983B1; DK0954983T3; MX234917B; ATE313274T1; NO20005566L; AU3095399A; DE69928986D1; JP2003047439A; AU3008399A; JP2002223722A; ATE366521T1

Abstract

t10,c12 및 c9,t11 이성질체들이 강화된 공액 리놀레산 제제를 사용하는 방법과 조성물을 개시한다. t10,c12:c9,t11를 약 1.2:1보다 큰 비로 함유하는 공액 리놀레산의 제제는 광범위한 영양, 치료 및 약물 용도에 바람직한 것으로 밝혀졌다.

Description

이성질체가 강화된 공액 리놀레산 조성물 {Isomer Enriched Conjugated Linoleic Acid Compositions}

공액 리놀레산(CLA)은 그의 영양, 치료 및 약물 특성을 이용하려고 하는 수많은 연구 프로그램의 초점이 되고 있다.

리놀레산의 이중 결합이 공액 위치로 재배열되는 것은 고온에서 니켈 또는 알칼리와 같은 촉매로 처리하는 동안 및 자동산화하는 동안 일어나는 것으로 나타났다. 이론적으로, 9,11과 10,12 옥타데카디엔산의 8종의 가능한 기하 이성질체들 (c9,c11; c9,t11; t9,c11; t9,t11; c10,c12; c10,t12; t10,c12 및 t10,t12)이 c9,c12-옥타데카디엔산의 이성체화로부터 형성될 것이다. 리놀레산의 이성체화에 대한 일반적인 기전은 문헌[J.C. Cowan,JAOCS72:492-99 (1950)]에 기재되어 있다. 이중 결합이 활성화 촉매와의 충돌에 의한 결과로 분극되는 것으로 생각된다. 이어서, 분극된 탄소 원자와 그에 인접한 탄소는 자유롭게 회전하며, 그 힘은 불충분 탄소 원자를 본질적으로 평면으로 만들기에 충분하다. 이어서, 이 계가 충돌의 결과로서 생긴 이러한 힘을 없애기 위해 움직일 때, 시스 및 트랜스 이성질체가 모두 형성된다. CLA의 특정 이성질체들의 형성이 열역학적으로 우세하다. 이는 공액 이중 결합 주위의 5개의 탄소 원자의 공동평면 특성과 공명 라디칼의 공간적 충돌 때문이다. 9,11 및 10,12 이성질체들이 비교적 더 많이 분포하는 것은 명백하게 c9,t11 또는 t10,c12 기하 이성질체들의 추가적인 안정화로 인한 것이다.

가스 크로마토그래피의 발전으로 연구자들은 CLA 샘플의 이성질체 조성을 정확하게 결정할 수 있게 되었다. 문헌[Christie 등,JAOCS74(11): 1231 (1997)]에는 CLA의 시판 샘플의 이성질체 분포가 8,10(14%); 9,11(30%); 10,12(31%) 및 11,13(24%)인 것으로 보고되어 있다. 크리스티(Christie) 등에 의해 간행된 다른 연구 문헌[Lipids33(2): 217-21(1998)]에는 시판 CLA 제제의 CLA 이성질체 조성이 t11,t13(0.74%); t10,t12(1.23%); t9,t11(1.18%); t8,t10(0.46%); c11,t13 및 t11,c13(21.7%); c10,t12 및 t10,c12(29.0%); c9,t11 및 t9,c11(29.5%); c8,t10 및 t8,c10(12.3%); c11,c13(0.96%); c10,c12(0.88%); c9,c11(0.88%); 및 c8,c10(0.20%)인 것으로 보고되어 있다. 이들 연구에서 알 수 있는 바와 같이, 특정 이성질체들의 형성이 선호되는 경우에도, CLA의 다른 이성질체들이 알칼리 이성체화된 CLA 제제의 조성에 크게 기여할 수 있다.

1978년에 위스콘신 대학(University of Wisconsin)의 연구자들은 돌연변이를 억제하는 것으로 보이는, 구워진 소고기에 함유된 물질의 정체를 발견하였다. 이 물질은 CLA인 것으로 밝혀졌다. 공액 불포화도를 갖는 지방산은 일반적으로 소 사료의 구성 성분이 아니다. 그러나, 문헌[Kepler 등,J. Biol. Chem.241: 1350-54 (1966)]에 보고된 바와 같이, c9,t11 옥타데카디엔산이 반추위에서 혐기성 박테리아인 부티리비브리오 피브리솔벤스(Butyrivibrio fibrisolvens)로부터의 리놀레산 이소머라제에 의한 리놀레산의 생체수소화에서 제1 중간체로서 형성된다.

CLA의 개별 이성질체들의 생물 활성은 몇몇 고찰의 대상이 되었다. 문헌에는 일반적으로 생물 활성 이성질체가 부티리비브리오 피브리솔벤스에 의해 생산되는 c9,t11 이성질체인 것으로 제시되어 있다 (이러한 입장을 채택한 리뷰로는 문헌[P.W. Parodi,J. Nutr. 127(6): 1055-60 (1997); M.A. Belury,Nutrition Reviews53(4): 83-9 (1995)]을 참조하시오). 이러한 가설을 지지하는 추가의 자료는 문헌[Ha 등,Cancer Res., 50: 1097 (1991)]에 기재되어 있다. 여기서, 연구자들은 표지 업테이크 연구를 수행하였으며, 이는 9,11 이성질체가 다소 우선적으로 흡수되어 동물 조직의 인지질 분획 내에 도입되며, 10,12 이성질체는 그 보다 덜한 것을 보여준다

CLA와 관련된 생물 활성은 다양하고 복잡하다. 현재, 진행되고 있는 몇몇 전임상 연구와 임상 연구에서 생리학적 및 생화학적 작용 방식에 대해 새로운 실마리를 주는 것 같지만, CLA의 작용 기전에 대해서는 거의 알려져 있지 않다. CLA의 항암성은 잘 증명되어 있다. CLA를 투여하면 문헌[Ha 등,Cancer Res., 52: 2035-s (1992)]에서 증명된 바와 같이 래트의 유방암 종양형성을 억제한다. 문헌[Ha 등,Cancer Res., 50: 1097 (1990)]에는 래트의 전위 신생물질 모델에서 유사한 결과가 보고되어 있다. CLA는 또한 시험관 내에서 표적 인간 흑색종, 직장결장암과 유방암 세포에 대한 강한 세포독성제인 것으로 확인되었다. 최근의 많은 리뷰 논문에서는 개별적인 연구들로부터 이끌어 낸 결론을 확정하였다 [Ip,Am. J. Clin.Nutr. 66(6): 1523s (1997)].

CLA의 작용 기전은 여전히 불명확하지만, 적어도 생체내에서 면역계의 일부 구성성분(들)이 관여될 수 있음을 보여주는 증거가 있다. 미국 특허 제5,585,400호(Cook 등)에는 CLA를 함유하는 음식물을 투여함으로써, 동물에서 타입 I에 의해 매개되는 알레르기 반응 또는 TgE 과민반응을 감약시키는 방법이 개시되어 있다. CLA는 약 0.1 내지 1.0% 농도에서 또한 백혈구를 보존하는데 있어서 효과적인 보조제인 것으로 나타났다. 미국 특허 제5,674,901호(Cook 등)에는 CLA를 유리 산 또는 염 형태로 경구 또는 비경구 투여하면 세포 매개성 면역과 관련된 CD-4와 CD-8 림프구 하위군을 상승시키는 것으로 개시되어 있다. 외인성 종양 괴사 인자를 사용하는 예비처리에서 일어난 부작용은 CLA를 투여한 동물에서 CD-4 및 CD-8 세포 수준을 간접적으로 상승 또는 유지함으로써 경감시킬 수 있다. 마지막으로, 미국 특허 제5,430,066호에는 면역 자극에 의한 체중 감소와 식욕 감퇴를 방지하는데 있어서의 CLA의 효과가 기재되어 있다.

상기한 바와 같은 CLA의 잠재적인 치료 및 약물 용도 이외에, CLA를 식이 조제로서 영양학적으로 사용하는 것에 관하여 많이 시도되었다. CLA는 신체 조성에 대해 상당한 전반적인 영향을 끼치는 것으로, 특히 비만 및 결핍 조직 질량을 재분배시키는 것으로 밝혀졌다. 미국 특허 제5,554,646호(Cook 등)에는 0.5%의 CLA가 함유된 음식물을 사람 및 돼지와 마우스에게 공급하는, 식이 조제로서 CLA를 사용하는 방법이 기재되어 있다. 각각의 종에서 지방 함량이 유의하게 감소된 것이 관찰되었고, 동시에 단백질 질량이 증가하였다. 이들 동물에 있어서 CLA의 첨가에의한 음식물의 지방산 함량 증가가 체중을 증가시키는 것이 아니라, 체내에서 지방 및 결핍의 재분배와 관련된다는 점이 흥미롭다. 또다른 흥미로운 식이 현상은 CLA 보충이 사료 전환율에 영향을 끼친다는 것이다. 미국 특허 제5,428,072호(Cook 등)에서는 CLA를 동물 사료(조류와 포유류)에 혼입시키면 사료 전환율이 증가하여 CLA를 보충한 동물에서 체중 증가가 더 많다는 것을 보여주는 자료를 제공한다.

식용 동물 사육자에게 있어서 CLA 보충이 가져올 수 있는 유익한 효과가 있음은 명백하다. 실제 생물 활성이 있는 이성질체가 어떤 것인지와 이들 이성질체가 이용될 적절한 비를 결정하는 것이 요구된다.

<발명의 개요>

학술 문헌에는 활성 CLA 이성질체가 c9,t11 이성질체인 것으로 제시되어 있다. 그러나, 본 명세서에서 나타낸 바와 같이, 9,11 이성질체에 대한 10,12 이성질체의 비를 증가시키면 CLA 제제의 생물 활성에 대한 효과가 강화된다. 따라서, 본 발명의 목적은 CLA 이성질체들을 생물학적으로 유리한 비로 함유하는 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 목적은 또한 CLA 이성질체들을 생물학적으로 유리한 비로, 및 생물 활성 이성질체를 원하는 생물학적 효과를 최적화시키기 위해 강화된 함량으로 함유하는 조성물을 사용하는 방법을 제공하는 것이다.

따라서, 일부 실시태양에서, 본 발명은 10,12-리놀레산과 9,11-리놀레산, 가장 바람직하게는 t10,c12 공액 리놀레산과 c9,t11 공액 리놀레산을 1.2:1 이상, 가장 바람직하게는 약 1.2:1 내지 3:1 범위의 비로 포함하는 공액 리놀레산 조성물을 제공한다. 다른 실시태양에서, 제공되는 공액 리놀레산 조성물은 또한 사람 또는동물의 식이에서 1일 규정식(ration)의 일부일 수 있다. 1일 규정식은 지질 성분을 갖는 비히클을 포함한다. 지질 성분은 10,12 공액 리놀레산, 바람직하게는 t10,c12 공액 리놀렌산을 0.01 내지 10 g 당량으로 함유하거나 포함한다. 별법으로, 다른 실시태양에서, 본 발명은 t10,c12 CLA 이성질체와 c9,t11 CLA 이성질체의 혼합물을 90% 이상 함유하거나 포함하는 것을 특징으로 하는 리놀레산 이성질체들을 함유하거나 포함하는 조성물을 제공한다. 일부 실시태양에서, 이성질체들은 t10,c12가 우세하게 약 1.2:1 이상의 비로 존재한다.

다른 실시태양에서, 본 발명은 또한 공액 리놀레산 이성질체들을 50% 이상 함유하거나 포함하는 공액 리놀레산 조성물을 제공한다. CLA 이성질체들은 t10,c12 이성질체와 c9,t11 이성질체의 혼합물을 90% 이상 함유하는 것을 특징으로 할 수 있다. 바람직하게는, 이들 이성질체의 비는 t10,c12 이성질체가 우세하게 1.2:1 이상이다.

다른 실시태양에서, 본 발명은 t10,c12 CLA가 강화된 또 다른 조성물 및 제제를 제공한다. 일부 실시태양에서 t10,c12 CLA는 순도가 약 80% 이상이고, 다른 실시태양에서 t10,c12 CLA는 순도가 약 90% 이상이며, 또 다른 실시태양에서 t10,c12 CLA는 순도가 약 92% 이상이다.

다른 실시태양에서, 본 발명은 사람과 다른 동물에 공급하기 위한 c9,t11 CLA가 강화된 조성물을 제공한다. 일부 실시태양에서 c9,t11 CLA:t10,c12 CLA의 비는 약 1.4:1 내지 3.0:1이다. 다른 실시태양에서 c9,t11 CLA:t10,c12 CLA의 비는 약 1.8:1 내지 2.2:1이다. 또 다른 실시태양에서 c9,t11 CLA:t10,c12 CLA의 비는 약 2.0:1이다.

상기 조성물은 아실글리세리드 또는 알킬에스테르에 혼입될 수 있다. 일부 실시태양에서, 아실글리세롤 조성물은 하기 화학식을 갖는 아실글리세롤 분자를 다수 포함하며, 이 조성물은 R₁, R₂및 R₃위치에서 t10,c12 옥타데카디엔산을 약 80% 이상 포함하는 것을 특징으로 한다.

상기 식에서, R₁, R₂및R₃은 히드록실기 및 옥타데카디엔산으로 이루어진 군 중에서 선택된다. 다른 실시태양에서, 아실글리세롤 조성물은 R₁, R₂및 R₃위치에서 t10,c12 옥타데카디엔산을 약 90% 이상 포함하는 것을 특징으로 한다. 또 다른 실시태양에서, 아실글리세롤 조성물은 R₁, R₂및 R₃위치에서 t10,c12 옥타데카디엔산을 약 92% 이상 포함하는 것을 특징으로 한다. 다른 실시태양에서는, c9,t11이 강화된 CLA가 상기한 비와 퍼센티지에 따라 아실글리세롤에서 R₁, R₂및 R₃위치로 혼입될 수 있다.

추가의 실시태양에서, t10,c12이 강화된 조성물과 c9,t11이 강화된 조성물은 동물 사료와 사람이 소비하는 음식물을 포함한 식품에 혼입시킬 수 있거나, 또는 부형제 또는 경구 전달 비히클과 함께 제형화할 수 있다.

다른 실시태양에서, 본 발명의 조성물은 광범위한 영양, 치료 및 약물 용도로 사용할 수 있다. c9,t11을 함유하는 조성물은 성장, 음식 효율 및 체중 증가율을 증가시키기 위해 사용할 수 있다. 따라서, 일부 실시태양에서는, c9,t11 CLA가 강화된 조성물을 제공한다. 일부 실시태양에서 c9,t11 CLA:t10,c12 CLA의 비는 약 1.4:1 내지 3.0:1이다. 다른 실시태양에서 c9,t11 CLA:t10,c12 CLA의 비는 약 1.8:1 내지 2.2:1이다. 또 다른 실시태양에서 c9,t11 CLA:t10,c12 CLA의 비는 약 2.0:1이다. 다른 실시태양에서, c9,t11 CLA가 강화된 조성물은 약 40-60%의 c9,t11 CLA와 약 20-30%의 t10,c12 CLA을 포함한다. 다른 실시태양에서, c9,t11이 강화된 제제는 동물에게 사료 전환율, 성장 또는 체중 증가율을 증가시키기 위한 목적으로 투여된다. t10,c12 CLA를 함유하는 조성물은 사람 및 다른 동물에서 체지방을 감소시키기 위해 사용할 수 있다. 따라서, 일부 실시태양에서 t10,c12 CLA 조성물을 제공한다. 일부 실시태양에서 t10,c12 CLA는 순도가 약 80% 이상이고, 다른 실시태양에서 t10,c12 CLA는 순도가 약 90% 이상이며, 또 다른 실시태양에서 t10,c12 CLA는 순도가 약 92% 이상이다. 또 다른 실시태양에서, t10,c12 제제는 인간을 포함한 동물에게 체지방을 감소시킬 목적으로 투여된다. 이들 조성물의 다른 용도로는 동물에서 근육질을 증가시키고; 동물에서 알레르기 반응을 감약시키며; 동물에서 면역 자극으로 인한 체중 감소를 방지하며; 동물에서 CD-4 및 CD-8 세포수를 증가시키며; 동물에서 뼈의 무기질 함량을 증가시키며; 동물에서 골격 이상을 예방하며; 동물의 혈중 콜레스테롤 양을 감소시키는 것을 포함한다.

다른 실시태양에서, 본 발명은 해바라기 오일, 홍화유, 대두유 및 옥수수 오일을 포함하는(이들로 제한되지는 않음) 시판 종자유로부터 t10,c12 CLA를 제조하는 방법을 제공한다. 일부 실시태양에서는, 시판 종자유와 이 종자유의 처리 방법을 제공한다. 다른 실시태양에서, 종자유는 t10,c12 CLA를 포함하는 제제가 생산되도록 하는 조건 하에 처리한다. 일부 실시태양에서 CLA는 약 80% 이상의 t10,c12이고, 다른 실시태양에서 CLA는 약 90% 이상의 t10,c12이며, 또 다른 실시태양에서 CLA는 약 92% 이상의 t10,c12이다. 다른 실시태양에서는, 알킬에스테르들의 혼합물을 시판 종자유로부터 형성한다. 또 다른 실시태양에서는, 알킬에스테르를 이어서 공액화시킨다. 일부 실시태양에서, 공액 알킬에스테르를 용매 중에 희석하고 온도를 약 -56℃ 내지 -57℃로 낮추어 침전시킨다. 다른 실시태양에서, 포화 지방산은 제제로부터 온도를 약 -30℃로 낮추어 제거한다. 또 다른 실시태양에서, 포화 지방산을 요소 분류법으로 제거할 수 있다. 다른 실시태양에서는, 본 발명에서는 상기한 방법으로 제조된 t10,c12 CLA를 제공한다.

본 발명은 사람과 동물의 영양학 분야, 특히 공액 리놀레산(CLA)을 함유하는 조성물에 관한 것이다.

도 1은 CLA의 10,12 및 9,11 이성질체의 비를 돼지의 등부위 지방 감소%에 대하여 비교한 3가지 별개의 연구의 대수 회귀 분석의 플롯도이다.

도 2는 돼지 사료 중 CLA의 10,12 이성질체의 총%를 등부위 지방 감소%에 대하여 비교한 3가지 별개의 연구의 선 회귀 분석의 플롯도이다.

정의 :

본 명세서에서 사용하는 용어 "공액 리놀레산" 또는 "CLA"는 임의의 공액 리놀레산 또는 옥타데카디엔 유리 지방산을 나타낸다. 이 용어는 분자 내에 임의의 위치에서 2개의 공액 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 리놀레산의 모든 위치 및 기하 이성질체들을 포함하여 나타내도록 의도된다. 보통의 리놀레산은 9 및 12 위치의 탄소 원자에 이중 결합을 갖는다는 점에서 CLA는 보통의 리놀레산과 다르다. CLA의 예로는 다음 위치 이성질체들의 시스- 및 트란스 이성질체("E/Z 이성질체")를 들 수 있다: 2,4-옥타데카디엔산, 4,6-옥타데카디엔산, 6,8-옥타데카디엔산, 7,9-옥타데카디엔산, 8,10-옥타데카디엔산, 9,11-옥타데카디엔산, 10,12-옥타데카디엔산 및 11,13-옥타데카디엔산. 본 명세서에서 사용하는 용어 "CLA"는 단일 이성질체, 2종 이상의 이성질체들의 선택된 혼합물, 천연 공급원으로부터 얻은 이성질체들의 비선택적 혼합물 뿐만 아니라 합성 및 반합성 CLA를 모두 포함한다.

본 명세서에서 사용하는 용어 CLA의 "트리글리세리드"는 트리글리세리드 주쇄 상의 3개의 위치들 중 임의의 위치 또는 모든 위치에서 CLA를 포함하는 것을 의도한다. 따라서, CLA를 함유하는 트리글리세리드는 CLA의 위치 및 기하 이성질체들 중 임의의 것을 포함할 수 있다.

본 명세서에서 사용하는 용어 CLA의 "에스테르"는 CLA의 위치 및 기하 이성질체들 중 임의의 것 또는 모두가 에스테르 연결기를 통해 생리학적으로 허용되는 천연 알코올 (예, 메탄올, 에탄올, 프로판올)을 포함하는(이들에 제한되지는 않음) 알코올 또는 임의의 다른 화학기에 결합되어 있는 것을 포함하는 것을 의도한다. 따라서, CLA의 에스테르 또는 에스테르화 CLA는 CLA의 위치 및 기하 이성질체들 중 임의의 것을 포함할 수 있다.

CLA의 "비천연 이성질체"는 옥타데카디엔산의 c11,t13; t11,c13; t11,t13; c11,c13; c8,t10; t8,c10; t8,t10; c8,c10; 및 트란스-트란스 이성질체들을 포함하지만(이들에 제한되지는 않음), 옥타데카디엔산의 t10,c12 및 c9,t11 이성질체들을 포함하지 않는 것으로 의도된다. "비천연 이성질체"는 또한 CLA를 알칼리 이성체화에 의해 합성하는 경우 이들 이성질체가 일반적으로 소량으로 생산되기 때문에 CLA의 "소량 이성질체"로 부를 수도 있다.

"제조 식품"은 사람이 소비하도록 승인된 임의의 예비포장된 음식물을 의미한다.

본 명세서에서 사용하는 용어 "c"는 시스 방향의 화학 결합을 나타내고, "t"는 트란스 방향의 화학 결합을 나타낸다. CLA의 위치 이성질체를 "c" 또는 "t" 없이 표시하면, 이 표시는 4가지 가능한 이성질체를 모두 포함하는 것이다. 예를 들어, 10,12 옥타데카디엔산은 c10,t12; t10,c12; t10,t12 및 c10,c12 옥타데타디엔산을 포함하는 반면, t10,c12 옥타데카디엔산 또는 CLA는 단일 이성질체만을 나타낸다.

본 명세서에서 사용하는 용어 "오일"은 장쇄 지방산(CLA 포함) 또는 다른 장쇄 탄화수소기를 함유하는 자유 유동액을 나타낸다. 장쇄 지방산은 CLA의 각종 이성질체들을 포함하지만 이들에 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에서 사용하는 용어 "생리학적으로 허용되는 담체"는 오일성 약제에 일반적으로 사용되는 임의의 담체 또는 부형제를 나타낸다. 이러한 담체 또는 부형제로는 오일, 전분, 수크로즈 및 락토오즈를 포함하지만 이들에 제한되는 것은아니다.

본 명세서에서 사용하는 용어 "경구 전달 비히클"은 캡슐제, 환제, 정제 및 시럽제를 포함하지만 이들에 제한되지 않는, 약제를 경구 전달하는 임의의 수단을 나타낸다.

본 명세서에서 사용하는 용어 "식품"은 사람, 비반추 동물 또는 반추 동물이 소비하기에 적합한 임의의 음식물 또는 사료를 나타낸다. "식품"은 제조 포장된 음식 (예, 마요네즈, 샐러드 드레싱, 빵 또는 치즈 음식) 또는 동물 사료 (예, 압출 펠렛화된 동물 사료 또는 조 혼합 사료)일 수 있다. CLA의 다양한 용도는 특허 문헌과 학술 문헌에 잘 기재되어 있다. 이들 용도는 2가지 일반적인 카테고리로 분류할 수 있다. 첫번째 카테고리는 CLA를 식이 조제로서 영양학적으로 사용하는 것이다. 두번째 카테고리는 치료 및 약물 용도이다.

본 명세서에 참고로 인용하는 미국 특허 제5,554,646호(Cook 등)에는 동물의 체지방을 감소시키기 위한 CLA의 용도가 개시되어 있다. 이 방법에서, 체중을 감소시키기에 충분한 효과적이고 안전한 양의 CLA를 동물에게 공급한다. 0.5% CLA를 함유하는 사료를 먹인 마우스는 사육 말기에 총 지방 함량이 0.5% 옥수수 오일을 함유하는 사료를 먹인 대조군 마우스의 지방 함량보다 유의하게 더 낮았다. 체지방을 감소시키기 위해 투여되는 CLA의 정확한 양은 동물, 사용된 CLA 형태 및 투여 경로에 따른다. 이러한 양은 일반적으로 약 0.001 내지 약 1 g/㎏(동물 체중)이다. 제약학적 양은 일반적으로 사람의 음식물 중 CLA 약 1,000 ppm(백만부) 내지 약 10,000 ppm이다. 그러나, CLA는 비교적 무독성이므로, 사용량의 상한은 중요하지 않다. 이들 용도 및 다른 용도를 위해 CLA는 또한 다양한 형태로 제조할 수 있다. 이러한 형태로는 제약학적 희석제 및 활성 에스테르와 조합한 CLA의 무독성 나트륨염 또는 칼륨염을 포함한다. CLA는 또한 동물 사료 또는 사람에게 공급할 음식 내에 CLA가 동물 사료 또는 사람의 음식물 중량의 약 0.01% 내지 2.0% 또는 그 이상을 이루도록 직접 혼입시킬 수 있다. 본 명세서에서는 또한 CLA를 동물 사료에 보충하면 동물의 체내 단백질을 비축시키고 동물의 근육 단백질을 증가시키는 작용을 할 수 있는 것으로 개시한다.

CLA의 다른 영양학적 용도가 본 명세서에 참고로 인용하는 미국 특허 제5,428,072호(Cook 등)에 개시되었다. 여기서, 동물에게 안전하고 효과적인 양의 CLA를 공급하면 동물에서 체중 증가와 사료 효율을 증진시키는 것으로 나타났다. 0.5% CLA를 보충한 사료를 먹인 병아리의 군은 CLA를 먹인 병아리들이 사료를 더 적게 소비하더라도 0.5% 리놀레산을 먹인 대조군 병아리와 동일한 체중 증가를 나타냈다. 더욱이, 0.5% CLA를 먹이고 이어서 엔도톡신을 주사한 병아리는 체중 증가를 나타낸 반면, 대조 사료를 먹인 병아리는 체중이 감소되거나 체중이 매우 적게 증가하였다. 0.5% CLA를 함유하는 사료를 먹인 래트와 0.5% 또는 1% CLA를 먹인 토끼에서도 유사한 결과가 나타났다. 사료에 포함되거나 공급되는 CLA의 양에 대한 지침은 미국 특허 제5,554,646호에 개시된 것과 동일하다.

연구에 의해 CLA가 실제로 사람의 체중을 감소시킬 수 있다는 것이 증명되었다. 1997년에 에링 톰(Erling Thom)에 의해 노르웨이에서 수행된 이중 맹검 연구에서, 20명의 건강한 개인들의 음식물에 CLA 혼합물 3 g 또는 위약 3 g을 보충하였다. CLA를 공급한 군에서는 체중과 체지방%가 모두 감소한 반면, 위약을 공급한 군에서는 체중과 체지방%가 증가하였다. PCT 공개 제WO 97/46230호에는 기존 체지방 및(또는) 체중 수준을 유지시키는 방법을 개시되어 있다. 이 출원의 청구항들은 CLA를 총 3명의 개인들이 소비하는 일화적이고 비제어적인 연구에 의존한다.

CLA 용도에 대한 다른 특허들에서는 면역 반응에 있어서의 CLA 역할에 주목하였다. 본 명세서에 참고로 인용하는 미국 특허 제5,585,400호(Cook 등)에는 CLA를 함유하는 음식을 투여함으로써 타입 I에 의해 매개되는 동물의 알레르기 반응 또는 TgE 과민반응을 감약시키는 방법이 개시되어 있다. 이 특허에는 또한 백혈구의 수를 유지시키기 위해 CLA를 약 0.1 내지 1.0% 농도로 투여하는 것이 개시되어 있다. 이 특허에 개시된 연구에서는 기니아 피그 기관 알레르기 모델을 이용하였다. 기니아 피그에게 0.25% CLA 또는 대조 음식을 2주간 먹인 다음, 과면역화를 위해 2주 및 3주째에 난알부민으로 면역화시켰다. 과융합(superfusion) 모델계를 이용하여 CLA를 공급하면 알레르겐에 의해 유발된 기관 수축에 어떠한 영향을 미치는지를 측정하였다. CLA를 먹인 기니아 피그로부터의 기관은 과융합계에서 대조 음식을 먹인 기니아 피그의 기관보다 더 안정하였다. 알레르겐을 기니아 피그 기관 상에 주입하면, CLA를 먹인 동물의 조직에서는 기관이 덜 수축되는 것으로 관찰되었다. CLA를 먹인 동물의 백혈구 수는 대조군 동물에 비해 상승하였으며, 이때, 대조군 동물의 백혈구 수는 2.4×10⁶±0.3인데 비해 CLA를 먹인 동물의 백혈구 수는 3.5×10⁶±0.6이었다.

성장을 강화하고, 면역 자극(예를 들어, 엔도톡신 노출)으로 인한 식욕감퇴와 체중손실 및 이화작용 호르몬(예를 들어, IL-1)의 부작용을 예방하기 위한 CLA의 용도는 본 명세서에 참고로 인용하는 미국 특허 제5,430,066호(Cook 등)에 개시되어 있다. 0.5% CLA의 사료를 먹이고 이어서 엔도톡신을 챌린지한 병아리는 체중 증가를 나타낸 반면, 대조 사료를 먹인 병아리는 엔도톡신 노출 이후 체중 증가가 나타나지 않았다. 0.5% 옥수수 오일의 대조 사료를 먹인 동물과 비교하면, 0.5% CLA를 함유한 사료를 먹인 래트에서도 유사한 결과를 얻었다. 개시된 제법과 투여량 범위는 미국 특허 제5,554,646호에 개시된 것과 동일하다.

CD-4 및 CD-8 세포 수준을 유지시키거나 상승시키고, 종양 괴사 인자(TNF)의 생산 또는 외인성 투여에 의해 또는 바이러스에 의해 야기되는 동물에서의 부작용을 예방하거나 경감시키기 위해 동물에게 안전하고 효과적인 양의 CLA를 투여하는 것을 포함하는 동물 치료 방법이 본 명세서에 참고로 인용하는 미국 특허 제5,674,901호(Cook 등)에 개시되어 있다. 마우스에게 대조 사료 또는 0.5% CLA를 먹이고, 이어서 TNF를 주사하여 챌린지하였다. CLA를 먹인 마우스는 대조군 마우스보다 체중 손실이 적었다. 유사하게, 0.5% CLA 사료를 먹이고 이어서 약독화 계두(鷄痘) 생바이러스를 우판(羽板)에 주사하여 챌린지한 병아리는 대조 사료를 먹인 병아리에 비해 체중이 더 많이 증가하였다. 0.5% CLA 사료를 먹인 병아리는 대조 사료를 먹인 병아리에 비해 CD-4 및 CD-8 세포의 증가%가 현저하게 나타났다.

본 명세서에 참고로 인용하는 유럽 특허 출원 제779,033 A1호(Lievense 등)에는 혈지질 프로필을 개선시키기 위한 CLA의 용도가 개시되어 있다. 간략히, 햄스터에게 트리글리세리드에 혼입된 CLA를 사료의 총 칼로리의 1.5% 비율로 지방 스프레드(spread) 형태로 함유하는 사료를 먹였다. CLA를 먹인 햄스터는 총 콜레스테롤 감소, HDL 콜레스테롤 감소 및 LDL 콜레스테롤 감소를 나타냈다.

본 명세서에 둘 모두 참고로 인용하는 PCT 공개 제WO 98/05318호(Cook 등)과 동 제WO 98/05319호(Cook 등)에 보고된 바와 같이, CLA는 또한 뼈 퇴적에 영향을 끼치는 것으로 나타났다. CLA를 사료의 0.1875%, 0.375% 또는 0.75%로 함유하는 사료를 먹인 병아리는 사료 중 CLA를 먹이지 않은 병아리에 비해 골격 이상이 실질적으로 감소된 것으로 나타났다. 더욱이, 0.5% CLA를 함유하는 사료를 먹인 병아리는 뼈의 무기질 함량이 증가한 것으로 나타났다.

다른 특허 문헌에는 CLA의 다양한 제제가 기재되어 있다. 유럽 특허 출원 제EP779033 Al호에는 공액 리놀레산 잔기를 0.05 내지 20 중량% 함유하는 식용 지방 스프레드가 개시되어 있다. 여기서, 리놀레산 함량이 95.3%인 유리 지방산의 시판 혼합물을 에틸렌 글리콜 중에서 NaOH로 알칼리 이성체화시켰다. 유리 지방산은 10부의 야자유 및 리파제와 혼합함으로써 트리글리세리드 내에 혼입시켰다. 혼합물을 45℃에서 48시간 교반하고, 리파제 및 유리 지방산을 제거하였다. 이 조성물 70부와 물 29부, 유청 단백질 분말 0.5부, 염 0.1부와 소량의 향미료와 시트르산 (pH 4.5를 얻기 위해)을 혼합하고 처리하여 지방 스프레드를 제조하였다.

안전하고 효과적인 양의 CLA를 함유하는 다른 음식물은 본 명세서에 참고로 인용하는 PCT 공개 제WO 97/46118호(Cook 등)에 개시되어 있다. 여기서, 직경이 약 0.33-0.5 ㎛인 유화 지방 입자를 함유하는 사람에게 비경구 투여하기 위한 액상식이성 음식물이 개시되어 있다. 에멀젼은 CLA를 0.5 ㎎/g 내지 10 ㎎/g으로 함유하거나, 별법으로 음식물 지질을 기준으로 CLA를 0.3% 내지 100%로, 또는 100 칼로리의 음식 당 CLA를 0.03 g 내지 0.3 g으로 함유한다. 이 출원에는 또한 유사한 양의 CLA를 단백질 2.66 g, 지방 5.46 g, 탄수화물 10.1 g, 물 133 g 및 일일 권장량(RDA amount)의 비타민과 무기질과 함께 함유하는 유아용 유동식이 개시되어 있다. 고단백질, 비타민 및 무기질 보충제로서 유용한 저잔류성 액상의 내복용 식이 제품의 다른 예가 개시되어 있다. 이 보충제는 CLA를 식품의 0.05 중량% 내지 약 5 중량%로, 또는 존재하는 지질의 0.3% 내지 약 100%로, 또는 100 칼로리 당 CLA를 약 0.03 내지 0.3 g으로 함유한다. 또한, 140 칼로리의 대표적인 유동식은 달걀 흰자위 고형분 7.5 g, CLA .1 g, 수크로즈 또는 가수분해된 옥수수 전분과 같은 탄수화물 27.3 g, 물 1.9 g, 및 일일 권장량의 비타민과 무기질을 함유한다.

본 발명에서, 10.12 이성질체 또는 9,11 이성질체 중 어느 하나를 강화시킨 제제는 상기한 각각의 용도에 바람직하게 사용된다. 9,11 이성질체 강화 제제는 마트레야(Matreya, 펠실베니아주 스테이트 칼리지)로부터 시판된다. t10,c12 이성질체를 강화시킨 CLA 제제는 바람직하게는 예비 단계 가스 크로마토그래피 또는 실시예 4에 나타낸 침전법에 의해 제조할 수 있다.

본 발명자들은 가장 최근의 과학적 견해와는 반대로, 특히 활성인 CLA 이성질체가 실제로는 CLA의 t10,c12 이성질체일 수 있음을 발견하게 되었다. 본 발명에서, 사람의 식이 조제 및 동물 사료에 첨가되는 9,11 이성질체에 대한 10,12 이성질체의 비, 가장 바람직하게는 c9,t11 이성질체에 대한 t10,c12의 비를 조절하여원하는 영양, 치료 및 약물 효과를 제공한다. 이용된 10,12 이성질체:9,11 이성질체의 비, 가장 바람직하게는 t10,c12 이성질체:c9,t11 이성질체의 비는 약 1.2:1 이상, 가장 바람직하게는 약 1.2:1 내지 3:1이다. CLA는 무독성이므로, 10,12:9,11 이성질체의 비의 상한은 중요하지 않다. 그러나, 3:1 비의 역치를 초과하면 추가의 이점이 비교적 적을 것으로 예측된다; 그러나, 10,12 강화된 CLA의 전달은 그의 최대 관찰 효과를 초과하는 수준에서 효과적일 것이다.

본 발명의 조성물은 바람직하게는 t10,c12 이성질체의 강화 제제를 9,11 이성질체의 강화 제제 또는 알칼리 이성체화에 의해 제조된 일반 CLA 제제와 합하여 제형화한다. 각 경우에, 10,12 이성질체가 강화된 제제는 원하는 10,12:9,11 이성질체의 비를 얻도록 첨가한다. 각종 CLA 제제의 이성질체 조성은 바람직하게는 당업계에 공지된 바와 같이 가스 크로마토그래피에 의해 확인할 수 있다.

별법으로, 10,12 이성질체는 10,12 이성질체 0.01 내지 10 g 당량, 가장 바람직하게는 t10,c12 이성질체 0.01 내지 10 g 당량을 함유하거나 포함하는 지질 성분을 갖는 비히클 중의 1일 규정식으로서 제공할 수 있다. 그램(g) 당량은 존재하는 다른 이성질체들과 무관하게, 제공된 10,12 이성질체의 총량이 0.01 내지 10 g인 것을 의미한다. 존재하는 10,12 이성질체의 양은 10,12:9,11의 비가 약 1.2:1 이상이 되도록 하는 양일 수 있다. 10,12 이성질체가 1일 규정식의 일부로서 제공되는 경우, 섭취량은 1회 투여량에, 또는 하루 동안 소비된 사료 또는 각종 식품 중의 연속적인 투여량으로서 존재할 수 있다.

본 발명의 조성물은 또한 시판되는 벌크 제품 형태를 취할 수 있다. 벌크CLA 제품은 공액 리놀레산 이성질체들을 약 50% 이상 함유하거나 포함한다. 이 리놀레산 이성질체들은 t10,c12 이성질체와 c9,t11 이성질체의 혼합물을 90% 이상 함유하는 것을 특징으로 할 수 있다. 바람직하게는, 이들 이성질체는 t10,c12가 우세하게 약 1.2:1 이상의 비로, 가장 바람직하게는 약 1.2:1 내지 3:1 범위의 비로 제공된다. 이러한 벌크 제품은 동물 사료, 사람의 식이 조제 및 사람의 식품과 같은 영양학적 제품 내에 희석시킬 수 있다. 이들 제품은 t10,c12 이성질체와 c9,t11 이성질체의 혼합물을 90% 이상 함유하는 것을 특징으로 하는 리놀레산 이성질체들을 함유하거나 포함하는 조성물일 것이다. 바람직하게는, 이들 이성질체는 t10,c12가 우세하게 약 1.2:1 이상의 비로, 가장 바람직하게는 약 1.2:1 내지 3:1 범위의 비로 제공된다.

본 발명의 조성물은 다양하게 사용될 것이다. 이러한 용도로는 동물에서 체지방의 감소; 동물에서 근육 지량의 증가; 동물에서 사료 효율의 증가; 사람에서 체중 감소; 동물에서 알레르기 반응의 감약; 동물에서 면역 자극에 기인하는 체중 손실의 예방; 동물에서 CD-4 및 CD-8 세포 수의 상승; 동물에서 뼈의 무기질 함량의 증가; 동물에서 골격 이상의 예방; 및 동물의 혈중 콜레스테롤 양의 감소를 포함한다. 각 경우에, 동물이라는 용어는 사람을 포함한 모든 포유동물을 포함한다. 각각의 용도에 사용되는 10,12 이성질체, 가장 바람직하게는 t10,c12 이성질체의 바람직한 투여량과 비는 상기한 바와 동일하다.

본 발명의 바람직한 실시태양에서, 안전하고 효과적인 영양학 또는 치료적 양의 t10,c12 CLA를 체중 또는 지방을 감소시키기 위해 동물(사람 포함)에게 경구투여한다. 일부 실시태양에서 t10,c12 CLA는 순도가 약 80% 이상이고, 다른 실시태양에서 t10,c12 CLA는 순도가 약 90% 이상이며, 또 다른 실시태양에서 t10,c12 CLA는 순도가 약 92% 이상이다. t10,c12 CLA는 비만인 사람과 비만이 아닌 사람에게 모두 투여할 수 있다. t10,c12 CLA가 약물이 아니라 무독성의 천연 식품 성분이기 때문에, t10,c12 CLA가 일상식의 일부로서 소비될 수 있으며, 비만이 아닌 사람에서 매일의 영양의 일부로서 사용할 수 있다. 영양학적 유효량은 순수한 형태로 또는 식이 조제로서 섭취될 때 적절한 영양을 손상하거나 저해하지 않으면서 체중 또는 지방을 감소시키는 t10,c12 CLA의 양이다. 따라서, t10,c12 CLA를 영양학적 유효량으로 투여하면 음식 섭취량 감소와 관련된 부족감 없이 체중을 감량시킬 수 있다. 또한, t10,c12 CLA는 임상적으로 약간 내지 많이 비만인 사람을 치료하기 위해 사용할 수 있다. 임상적으로 비만인 사람을 치료할 때, 치료적 유효량의 t10,c12 CLA를 투여한다. 치료적 유효량은 임상적으로 비만인 사람의 체중 또는 체지방을 감소시키는 양이다. 본 발명에서는, CLA를 일일 약 0.1 내지 15 g으로 투여할 수 있고, 바람직하게는 일일 약 0.1 내지 5 g으로 투여할 수 있으며, 가장 바람직하게는 일일 약 1.8 g으로 투여할 수 있다. 일반적으로, CLA 투여량은 영양학적으로 또는 치료적으로 충분히 효과적인 한 중요하지 않다. 영양학적으로 또는 치료적으로 효과적인 것으로 생각되는 CLA의 양은 4주 또는 그 이상의 기간에 걸쳐 투여할 때 측정가능한 정도로 체중 또는 지방을 손실시키는 양이다.

체중, 기초 대사, 운동 및 식이의 다른 측면과 같은 파라미터에서 개체 상이의 차이 때문에 효과면에서 다소 차이가 있을 것으로 예상된다. 개체는 처음 2주동안에는 바람직하게 1.8 g 투여량으로 시작하여, 이어서 체중 감량이 없으면 CLA 투여량을 일일 약 10-15 g까지 점차 증가시켜야 한다.

본 발명에서는 또한 이성질체를 강화한 CLA 제제의 유도체의 용도에 대해 생각하였다. 예를 들어, CLA는 유리 상태 또는 에스테르 연결기를 통해 결합된 상태일 수 있거나, 실시예 5에 기재된 바와 같이, 이성질체 강화 CLA 트리글리세리드를 함유하는 오일 형태로 제공할 수 있다. 이들 실시태양에서, 트리글리세리드는 일부 또는 전체가, 글리세롤 주쇄에 부착된 이성질체 강화 CLA로 이루어질 수 있다. 이성질체 강화 CLA는 또한 실시예들에 기재된 바와 같이 메틸에스테르 또는 에틸에스테르로서 제공할 수 있다. 더욱이, 이성질체 강화 CLA는 칼륨염 또는 나트륨염과 같은 무독성염 (예를 들어, 화학적 등가량의 유리산을 알칼리 수산화물과 pH 약 8 내지 9에서 반응시켜 형성된 염) 형태일 수 있다.

일부 바람직한 실시태양에서 투여 방식은 경구 투여이다. 이성질체 강화 CLA는 전분, 수크로스 또는 락토오스와 같은 적합한 담체와 함께 정제, 환제, 당의정, 캡슐제, 용액제, 액제, 슬러리제, 현탁제 및 에멀젼제 형태로 제형화할 수 있다. 이성질체 강화 CLA는 수용액, 유성 용액으로서, 또는 상기 논의한 임의의 다른 형태로 제공할 수 있다. 본 발명의 정제 또는 캡슐제는 pH 약 6.0 내지 7.0에서 용해되는 장용피로 피복할 수 있다. 소장에서는 용해되지만 위에서는 용해되지 않는 적합한 장용피는 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트이다. 바람직한 제형에서, 이성질체 강화 CLA는 연질 젤라틴 캡슐로서 제공한다. 이성질체 강화 CLA는 또한 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 포막내, 심실내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장, 국소, 설하 또는 직장내 수단을 포함한 다수의 다른 경로로 제공할 수 있지만, 이를 경로에 제한되는 것은 아니다. 제형화 및 투여를 위한 기술에 대한 추가의 상세한 사항은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(Maack Publishing Co., 펜실베니아주 이스톤)]의 최신판에서 찾을 수 있다.

이성질체 강화 CLA는 또한 다양한 제조 식품과 음료에 보충제로서 제공할 수 있다. 이러한 사용의 목적에서, 제조 식품은 이성질체 강화 CLA를 첨가한 임의의 천연, 가공, 식이 또는 비식이 식품을 의미한다. 이성질체 강화 CLA는 유리 지방산 형태로, 또는 이성질체 강화 CLA의 부분 또는 전체 트리글리세리드를 함유하는 오일로서 첨가할 수 있다. 따라서, 이성질체 강화 CLA는 다이어트 음료, 다이어트 바(diet bar), 보충제, 제조 냉동식, 캔디, 스낵 제품(예, 칩), 제조 육류품, 우유, 치즈, 요구르트 및 다른 지방 또는 오일 함유 식품을 포함하지만 여기에 제한되지 않는 다양한 제조 식품에 직접 혼입시킬 수 있다.

CLA는 또한 산화 반응에 감수성이다. 따라서, 사람이 사용하기 위해서는 이성질체 강화 CLA를 적합한 항산화제, 예를 들면, 레시틴, 토코페롤, 아스코르베이트, 아스코르빌 팔미테이트, 또는 로즈마리 추출물과 같은 향신료 추출물과 함께 포장하는 것이 바람직하다.

현재, 대부분의 CLA는 알칼리 이성체화 공정으로 제조한다. 리놀레산을 다량 함유하는 오일, 예를 들면, 해바라기 오일, 달맞이꽃 오일 또는 홍화유를 불활성 질소 환경에서 수산화칼륨 및 프로필렌 글리콜과 같은 용매와 약 180℃에서 약 2.5시간 동안 반응시킨다. 반응 생성물을 산성화시키고, 산성 물로 수회 세척하고, 마지막으로 진공 하에 건조시킨다. CLA를 알칼리 이성질화에 의해 실험실 규모로 제조하는데 대한 완전한 설명에 대해서는 본 명세서에 참고로 인용하는 미국 특허 제5,554,646호를 참조한다. CLA는 또한 본 명세서에 참고로 인용하는 미국 특허 제4,164,505호에 기재된 연속 유동 알칼리 이성체화 공정으로 생산할 수 있다. 이들 방법으로 얻은 반응 생성물은 CLA, 리놀레산 및 원료 오일 중에 존재하는 다른 지방산들의 혼합물이다. 일반적으로, 해바라기 기름을 알칼리 이성체화시켜 유도된 CLA양은 총 유리 지방산 생성물의 약 60%이고, c9,t11 및 t10,c12 이성질체를 거의 동량으로 함유한다.

주로 시스-9,트란스-11 CLA로 이루어진 제제를 제조하기 위한 다른 방법은 본원에 참고로 인용하는 미국 특허 제5,674,901호에 개시되어 있다. 이 방법에서는, 리놀레산 함유 오일을 미생물 부티리비브리오 피브리솔벤스와 함께 배양한다. 부티리비브리오 피브리솔벤스는 리놀레산을 시스-9,트란스-11 CLA로 전환시키는 △¹²-시스,△¹¹-이소머라제를 함유하고 있다.

실시예 1:

사료 중 CLA 함량과 돼지의 등부위 지방량 사이의 관계를 검토하는 3가지 상이한 연구를 수행하였다. 아이오와 주립 대학(Iowa State University)에서 수행되어 Midwest Animal Science meeting에서 보고된 연구에서, 틸(R.L. Thiel) 등은 CLA를 먹인 돼지가 등부위 지방이 감소한 것을 보고하였다. 간단히 설명하면, 초기 평균 체중이 26.3 ㎏인 한배에서 나온 거세 수퇘지 5마리의 8마리 복제동물들을 개별 축사에 무작위로 배당하였다. 돼지들을 평균 93일 동안 사육하였고, 도축시 평균 체중은 116 ㎏이었다. 0.5% CLA의 사료를 먹인 군에서는 등부위 지방이 10.3% 감소하였다. 처음에 발표되지는 않았지만 사료 중에 사용된 CLA는 CLA의 10,12:9,11 이성질체를 1.05:1 비로 함유하였다.

캔사스 주립 대학(Kansas State University)에서 연구자들에 의해 수행되어 Midwest Animal Science Meetings에서 보고된 다른 연구에서는 초기 평균 체중이 37.35 ㎏(83 lbs)인 36마리의 잡종 거세 수퇘지에게 0.50% CLA를 함유하는 사료를 먹였다. 평균 최종 체중은 약 103.5 ㎏(약 230 lbs)이었다. CLA를 함유하는 사료를 먹인 수퇘지에서는 등부위 지방이 7.2% 감소하였다. 이 실험에 사용된 CLA 중에서 CLA의 10,12:9,11 이성질체의 비는 0.487:1이었다.

아직 발행되지 않은 다른 연구에서는, 초기 체중이 26 ㎏인 24마리의 거세 수퇘지에게 0.48% CLA를 함유하는 사료 또는 대조 사료를 먹였다. 돼지를 최종 체중 118 ㎏까지 사육하였다. CLA를 먹인 돼지에서는 등부위 지방이 13.7% 감소하였다. 이 실험에서 CLA의 10,12:9,11 이성질체의 비는 1.16:1이었다.

이들 각 연구에서 사요된 CLA의 10,12:9,11 이성질체의 비를 등부위 지방 감소%에 대해 플로팅하여 대수 회귀법으로 분석하였다. 결과를 도 1에 나타냈다. 이들 결과는 CLA의 10,12:9,11 이성질체의 비가 증가함에 따라 등부위 지방 감소%도 또한 증가하는 것을 보여준다. 따라서, 10,12:9,11를 약 1.2:1 이상의 비로 함유하는 CLA의 제제가 바람직하다.

사료 중 10,12 이성질체의 총량이 또한 등부위 지방 축적에 영향을 끼칠 수 있다. 사료 중 10,12 이성질체%를 등부위 지방 감소%에 대해 플로팅하여 선 회귀법으로 분석하였다. 결과를 도 2에 나타냈다. 이들 결과는 사료 중 10,12 이성질체의 총량이 증가함에 따라 등부위 지방이 감소하는 것을 증명한다. 보이는 영향은 이성질체 비에 대한 것만큼 크지는 않다. 그러나, 이들 결과는 비에 대한 결과와 일치할 수 있다. 신뢰되는 연구들에서는 이성질체들 사이를 구별짓지 않았다. 존재하는 9,11 및 다른 이성질체들의 양과 비가 사료 중 10,12의 증가%에 관련한 임의의 영향을 차폐시켰을 수도 있다. 10,12 이성질체가 강화된 CLA의 제제를 사용하면, 그 결과가 비에 대한 결과에 필적할 것으로 예상된다.

실시예 2:

학술 문헌에서는 CLA의 생물 활성 이성질체들이 확인되지 않았거나, 또는 c9,t11 CLA이 생물 활성 이성질체인 것으로 나타낸다. 본 발명자들은 실시예 1의 결과에 기초하여, t10,c12 이성질체가 활성 이성질체인 것으로 믿는다. 따라서, CLA 이성질체들을 상이한 비와 양으로 마우스에 먹인 효과를 검토하여, t10,c12 이성질체가 생물 활성 이성질체이며 t10,c12:c9,t11의 비를 조정하여 원하는 생물학적 효과를 나타내도록 할 수 있음을 증명한다.

시험은 할란 스프라그 돌리(Harlan Sprague Dawley, 위스콘신주 매디슨)에서 입수한 ICR 마우스 84마리를 이용하여 수행하였다. 기초 사료, 설탕, 옥수수 오일과 공액 리놀레산의 이성질체들 중 하나 또는 이성질체들의 배합물을 사용하여 사료를 배합하였다. 각 처리군은 3마리 마우스의 축사 2개로 이루어졌다. 마우스가사료와 물에 자유롭게 접근하도록 하였다. 사료 소비량을 매일 모니터하고 마우스를 깔깃을 교체할 때 격주로 체중을 재었다. 사료를 먹인 지 3주째에, 마우스를 CO₂에 의해 안락사시키고 최종 체중을 재었다. 이어서, 마우스를 부검하여 지방층의 무게를 재었다. 또한 마우스를 총 체지방에 대해 분석하였다. 마우스를 동결건조시키고 갈았다. 2개씩의 샘플을 근성 분석(proximate analysis)(에테르 추출, 회분, 킬달(Kjeldahl) 및 수분)으로 분석하였다. 결과를 하기 표 1에 기록하였다.

처리9,11:10,12	체중 증가 (g)	사료 소비량0-3주 (g)	사료 전환율0-3주	지방%
0.0:0.0	9.88	85.75	8.75	13.995
0.0:0.1	9.38	87.67	9.34	8.806
0.0:0.2	8.88	81.72	9.73	6.439
0.0:0.4	9.35	83.27	8.97	3.003
0.1:0.0	9.77	86.58	8.87	9.880
0.2:0.0	11.38	92.83	7.02	10.346
0.4:0.0	11.55	88.62	7.86	13.403
0.1:0.1	10.49	92.38	8.89	9.560
0.1:0.2	8.17	82.98	10.28	7.306
0.2:0.0	11.38	92.83	7.02	10.346
0.2:0.1	11.23	89.43	8.49	7.922
0.2:0.2	8.75	79.82	9.15	7.115
0.2:0.4	10.23	88.20	8.64	3.088
0.4:0.0	11.55	88.62	7.86	13.403
0.4:0.2	9.50	85.27	8.98	7.508
0.4:0.4	9.97	81.57	8.19	0.476

c9,t11 CLA만을 먹인 마우스는 t10,c12이 존재하지 않을 때 성장에서 직선형 개선(16%)을 보였다. t10,c12 이성질체를 사용한 경우에는 반대로 되었고, 이 때 성장이 10% 감소하였다. 결과적으로, c9,t11은 0.2%:0% 비에서 또한 사료 소비량을 8% 증가시켰다. 이들 데이타는 또한 사료 중 t10,c12 이성질체양을 증가시키면 체지방을 감소시킨다는 것을 보여준다. 사료 중에 CLA를 제공하지 않은 대조군 마우스와 비교하면, t10,c12 CLA만을 먹인 마우스에서는 체지방이 감소하였고 성장도감소하였다. 반대로, c9,t11 CLA만을 제공한 마우스에서는 성장, 체중 증가율과 사료 전환율이 모두 증가한 것으로 나타났다. 마우스에게 t10,c12와 c9,t11 CLA를 모두 먹였을 때에는, t10,c12가 증가함에 따라 체지방이 감소하였다. 성장과 사료 전환율을 개선시키면서 지방을 감소시키는 최적 비는 약 2:1의 c9,t11:t10,c12인 것으로 밝혀졌다. 이들 데이타는 상이한 CLA 이성질체들이 상이한 생물학적 효과를 갖는다는 것을 나타낸다.

실시예 3:

10,12 이성질체가 강화된 CLA의 제제를 예비 단계 가스 크로마토그래피에 의해 제조하였다. 결과의 생성물을 가스 크로마토그래피로 분석하였다. CLA 이성질체를 동정하기 위한 가스 크로마토그래피 방법의 최근의 설명에 대해서는 문헌[Christie 등, JAOCS 74(11): 1231 (1997); Christie 등, Lipids 33(2): 217-21 (1998); Sehat 등, Lipids 33(2): 217-21 (1998); 및 Marcel S.F. Lie Ken Jie 및 J. Mustafa, Lipids 32(10): 1019-34 (1997)]을 참조하시오. 상기 문헌들은 본원에 참고로 인용한다. 가스 크로마토그래피 조건은 다음과 같았다:

시스템: 퍼킨-엘머 오토 시스템(Perkin-Elmer Auto System)

주입기: splitless, 240℃

검출기: 화염 이온화 검출기, 280℃

캐리어: 헬륨

칼럼: WCOT 융합 실리카 0.25 ㎜×100M, FAME에 대해 CP-SL 88, DF 0.2

오븐 프로그램: 80℃(0분), 10℃/분으로 220℃로 승온, 220℃에서 10분 유지

모든 결과를 상대 피크 면적%로 표시하였다. 분석 결과는 다음과 같았다:

이성질체	면적(%)
C16:0	2.01
C18:0	0.57
C18:1	0.26
c9,t11	1.61
t10,c12	92.75
t9,t11; t10,t12	1.16
미확인	1.64
전체	100.0

실시예 4:

별도의 방법으로 t10,c12 CLA를 대량 생산할 수 있다. 완전 정제된 해바라기 기름 (홍화유로 대체할 수 있다)를 원료로 사용하였다. 오일에 1% 나트륨-에틸레이트를 촉매로서 함유하는 순수 에탄올 과량을 첨가함으로써 에틸에스테르를 형성하였다. 혼합물을 교반하면서 30분간 60℃로 가열하고, 분리시켰다. 하층을 배수시키고, 상층을 약산성 물을 사용하여 세척하고 진공 하에 건조시켰다.

이어서, 에틸에스테르 혼합물을 160℃ 및 10^-2mbar 압력에서 분자 증류하여 정제하고, 잔류물을 폐기하였다. 에틸 에스테르에 에탄올 0.5-1%와 칼륨 에틸레이트 0.5-1%를 첨가하고 혼합물을 120℃에서 1시간 동안 진탕시켜 공액화를 수행하였다. 묽은 시트르산을 첨가하여 반응을 중단시켰다. 이어서, 오일을 세척하고 건조시켰다.

이어서, 공액 에틸에스테르를 아세톤 중에 희석시키고 -30℃로 냉각시키고 여과하여 대부분의 포화 지방산을 제거하였다. 이어서, 여액을 -56 내지 -57℃로 더욱 냉각시켜 t10,c12 에틸에스테르를 침전시켰다. 약간 가온하면서 진공을 인가하여 침전물로부터 아세톤을 제거함으로써 에틸에스테르를 수득하였다. 이렇게 수득한 t10,c12 에틸에스테르는 약 90% 이상 순수하였다. 보다 고순도가 요구되면, 공액화하기 전에 에틸에스테르로부터 추가로 포화 지방을 제거할 수도 있다. 이는 요소 분류법으로 수행할 수 있다. 결과의 생성물은 최종 침전 이후에 약 97% 이상의 t10,c12이다.

유리 지방산은 에틸에스테르로부터 비누화시킨 후 중화시킴으로써 생산하였다. 비누화시키기 위해, 용해도를 증가시키기 위해 10%량의 물을 함유하는 에탄올과 100% 과량의 NaOH를 알킬에스테르에 첨가하여 비누를 형성시켰다. 반응은 70℃에서 수행하였다. 이어서, 비누를 물로 희석하고, HCl을 잘 교반하면서 첨가하여 전체 혼합물을 산성으로 만들었다. 유리 지방산이 분리되어 상층을 형성하며, 이를 묽은 시트르산으로 세척하고 마지막으로 건조시켰다. 결과를 상기한 가스 크로마토그래피로 분석하였다. 요소 분류법을 수행한 결과는 다음과 같았다:

이성질체	면적 (%)
c9,t11	1.80
t10,c12	97.49
t9,t11; t10,t12	0.71
전체	100.0

요소 분류법을 수행하지 않은 결과는 다음과 같았다:

이성질체	면적 (%)
C16:0	1.75
C18:2, c9,c12	0.16
C18:1, c9	2.22
c9,t11	6.36
t10,c12	88.84
t9,t11; t10,t12	0.23
c9,c11; c10,c12	0.15
미확인	1.64
전체	100.0

실시예 5:

CLA의 트리아실글리세롤은 직접 에스테르화에 의해 제조할 수 있다. 고정칸디다 안타르크티카(Candida antarctica) 리파제 (1.25 g)을 글리세롤 (1.22 g, 13.3 밀리몰)과 유리 지방산(분자량 280.3 g/mol; 11.6 g, 41.5 밀리몰)으로서 이성질체가 강화된 (t10,c12 또는 c9,t11이 강화된) CLA와의 혼합물에 첨가하였다. 이 혼합물을 65℃에서 0.01 내지 0.5 토르의 연속 진공 하에 자기 교반기 열판 상에서 부드럽게 교반하였다. 반응이 진행하는 동안 생성되는 휘발성 물은 액체 질소로 냉각시킨 트랩 내로 연속적으로 응축시켰다. 48시간 후 반응을 중단시키고, n-헥산을 첨가하고, 효소를 여과하여 분리 제거하였다. 유기상을 탄산나트륨의 알칼리성 수용액으로 처리하여 과다한 유리 지방산을 제거하였다 (요구될 때). 유기 용매 (적절한 경우 무수 황산마그네슘 상에서 건조시킨 후)를 진공 하에서 회전 증발기 상에서 제거한 후 고진공 처리하여 실질적으로 순수한 생성물을 약간 황색을 띤 오일로서 수득하였다. 화학량론적인 양의 유리 지방산을 사용한 경우, 표정한 수산화나트륨으로 적정하여 조 반응 생성물의 유리 지방산 함량을 측정하였다 (에스테르기의 몰 수에 기초한 유리 지방산 함량 1% 미만, 99% 이상의 포함량에 상응함, 이는 97%의 트리글리세리드 함량의 최소치와 동일하다). 조 생성물을 n-헥산 중 10% 디에틸에테르로 용출시키는 HPLC 내에 직접 도입하여, 100% 순수한 트리글리세리드를 무색 오일로서 수득하였다.

반응의 진행을 모니터하고 개별 글리세리드들의 조성을 보다 상세히 하기 위해, 샘플을 반응이 진행함에 따라 규칙적으로 수집하였다. 이들을 H-NMR 분광법으로 분석하여, 반응이 진행하는 동안 모노-, 디- 및 트리아실글리세롤의 조성을 충분히 통찰하였다.

실시예 6

본 실시예는 공액 홍화 FAME(지방산 메틸 에스테르)의 대규모 배치식 생산을 설명한다. 홍화의 공액 FAME의 생산은 2 단계, 즉, 가메탄올분해와 공액화로 나눌 수 있다. 가메탄올분해를 위해, 홍화유 6,000 ㎏를 밀폐 반응기에 넣었다. 반응기를 대기압에서 질소로 퍼징시키고, 메탄올 1150 ℓ와 NaOCH₃(30% 용액) 160 ㎏를 첨가하였다. 혼합물을 교반하면서 65℃로 가열하고, 65℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응기를 질소 기체로 퍼징시키면서, 생성된 하층을 따루어 냈다. 이어서, 물 (40-50℃, 시트르산 일수화물 50 ㎏를 용해시킴) 1000 ℓ를 교반하면서 첨가하였다. 층들을 분리시키고 (약 60분), 반응기를 질소 기체로 퍼징시키면서 하층을 따루어 냈다. 결과의 홍화 FAME 생성물을 80℃에서 진공 하에 1시간 동안 건조시켰다. 결과의 홍화 FAME 생성물을 상기한 바와 같이 공액화시키고 t10,c12 CLA 또는 c9,t11 CLA에 대해 풍부하게 할 수 있다.

Claims

10,12-공액 리놀레산과 9,11-공액 리놀레산을 1.2:1 내지 3:1의 비로 포함하는(comprising), 공액 리놀레산 함유 조성물.

10,12-공액 리놀레산과 9,11-공액 리놀레산을 1.2:1 이상의 비로 포함하는, 사람의 식품과 동물의 사료에서 식이 조제로서 사용하기 위한 공액 리놀레산 함유 조성물.

10,12-공액 리놀레산을 0.01 내지 10 g 당량으로 함유하는 지질 성분을 갖는 비히클을 포함하는, 인간 또는 동물의 식이용 1일 규정식.

제3항에 있어서, 상기 지질 성분이 알킬에스테르로서 제공되는 것인 규정식.

제3항에 있어서, 상기 지질 성분이 트리글리세리드로서 제공되는 것인 규정식.

제3항에 있어서, 상기 지질 성분이 유리 지방산으로서 제공되는 것인 규정식.

50 중량% 이상의 공액 리놀레산 이성질체들을 함유하고, 이 공액 리놀레산 이성질체들은 t10,c12 이성질체와 c9,t11 이성질체의 1.2:1 이상의 비의 혼합물을 90% 이상 함유하는 것을 특징으로 하는 것인 조성물.

리놀레산 이성질체들을 함유하고, 이 리놀레산 이성질체들은 t10,c12 이성질체와 c9,t11 이성질체의 1.2:1 이상의 비의 혼합물을 90% 이상 함유하는 것을 특징으로 하는 것인 조성물.

유리 지방산 공액 리놀레산 이성질체들의 혼합물을 포함하고, 이 혼합물은 약 80% 이상의 t10,c12 옥타데카디엔산을 함유하는 것인 공액 리놀레산 조성물.

제9항에 있어서, 상기 t10,c12 옥타데카디엔산을 혼입시킨 식품을 추가로 포함하는 조성물.

제10항에 있어서, 상기 식품이 사람이 소비하는 것인 조성물.

제10항에 있어서, 상기 식품이 동물이 소비하도록 조성된 사료인 조성물.

유리 지방산 공액 리놀레산 이성질체들의 혼합물을 포함하고, 이 혼합물은 약 92% 이상의 t10,c12 옥타데카디엔산을 함유하는 것인 공액 리놀레산 조성물.

제13항에 있어서, 상기 t10,c12 옥타데카디엔산을 혼입시킨 식품을 추가로 포함하는 조성물.

제14항에 있어서, 상기 식품이 사람이 소비하는 것인 조성물.

제14항에 있어서, 상기 식품이 동물이 소비하도록 조성된 사료인 조성물.

하기 화학식의 아실글리세롤 분자를 다수 포함하며, R₁, R₂및 R₃위치에서 약 80% 이상의 t10,c12 옥타데카디엔산을 포함하는 것을 특징으로 하는 아실글리세롤 조성물.

상기 식에서, R₁, R₂및R₃은 히드록실기 및 옥타데카디엔산으로 이루어진 군 중에서 선택된다.

제17항에 있어서, 상기 아실글리세롤 조성물을 혼입시킨 식품을 추가로 포함하는 조성물.

제18항에 있어서, 상기 식품이 사람이 소비하는 것인 조성물.

제18항에 있어서, 상기 식품이 동물이 소비하도록 조성된 사료인 조성물.

하기 화학식의 아실글리세롤 분자를 다수 포함하며, R₁, R₂및 R₃위치에서 약 92% 이상의 t10,c12 옥타데카디엔산을 포함하는 것을 특징으로 하는 아실글리세롤 조성물.

제21항에 있어서, 상기 아실글리세롤 조성물을 혼입시킨 식품을 추가로 포함하는 조성물.

제22항에 있어서, 상기 식품이 사람이 소비하는 것인 조성물.

제22항에 있어서, 상기 식품이 동물이 소비하도록 조성된 사료인 조성물.

a) 시판 종자유와 이 종자유를 처리하는 방법을 제공하는 단계; 및

b) 상기 종자유를, 약 80% 이상의 t10,c12 CLA인 t10,c12 옥타데카디엔산을 포함하는 제제가 생산되도록 하는 조건 하에서 처리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 공액 리놀레산 조성물.

제25항에 있어서, 상기 t10,c12 옥타데카디엔산을 혼입시킨 식품을 추가로 포함하는 조성물.

제26항에 있어서, 상기 식품이 동물이 소비하도록 조성된 사료인 조성물.

a) 시판 종자유를 제공하는 단계;

b) 상기 종자유로부터 지방산 알킬에스테르의 혼합물을 형성하는 단계;

c) 상기 지방산 알킬에스테르를 공액화시켜, t10,c12 알킬에스테르를 포함하는 것을 특징으로 하는 공액 지방산 알킬에스테르를 형성하는 단계,

d) 상기 공액 지방산 알킬에스테르를 용매 중에 희석시켜 용액을 형성하는 단계;

e) 상기 용액으로부터 t10,c12 알킬에스테르를 침전시키는 단계; 및

f) 상기 t10,c12 알킬에스테르를 비누화시켜 t10,c12 옥타데카디엔산을 생산하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 공액 리놀레산 조성물.

제28항에 있어서, 상기 t10,c12 옥타데카디엔산을 혼입시킨 식품을 추가로 포함하는 조성물.

제29항에 있어서, 상기 식품이 동물이 소비하도록 조성된 사료인 조성물.

약 80% 이상의 t10,c12 알킬에스테르를 함유하는 공액 리놀레산의 알킬에스테르들의 혼합물을 포함하는, 동물 사료에서 식이 조제로서 사용하기 위한 공액 리놀레산 조성물.

제31항에 있어서, 상기 t10,c12 알킬에스테르를 혼입시킨 식품을 추가로 포함하는 조성물.

약 92% 이상의 t10,c12 알킬에스테르를 함유하는 공액 리놀레산의 알킬에스테르들의 혼합물을 포함하는, 동물 사료에서 식이 조제로서 사용하기 위한 공액 리놀레산 조성물.

제33항에 있어서, 상기 t10,c12 알킬에스테르를 혼입시킨 식품을 추가로 포함하는 조성물.

c9,t11 옥타데카디엔산 약 30 내지 60%와 t10,c12 옥타데카디엔산 약 15 내지 30%를, c9,t11 옥타데카디엔산:t10,c12 옥타데카디엔산의 비가 약 2:1이 되도록 포함하는 공액 리놀레산 조성물.

제35항에 있어서, 상기 공액 리놀레산 조성물이 유리 지방산, 트리글리세리드 및 알킬에스테르로 이루어진 군 중에서 선택되는 조성물.