KR20000009494A - 골다공증 예방 및 치료제로서의 디히드로에피안드로스테론 유도체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 신규한 디히드로에피안드로스테론 유도체 및 그들의 제조방법과 이러한 신규 화합물을 유효성분으로 함유하는 골다공증 예방 및 치료제에 관한 것이다. 골다공증은 가장 흔한 골의 대사성 질환으로 총골량이 감소한 상태로서 다양한 원인에 의하여 발생한다. 골다공증 예방 및 치료제로서 사용되는 칼슘 보강제제는 유의하지 못한 것으로 알려지고 있고, 호르몬요법 약물들은 장기투여로 인해 간, 난소, 유방등에 종양을 일으킬 가능성이 높고 간장비대와 성선비후 현상을 일으키는 부작용이 심각하다. 이러한 현상들은 산화적 손상에 의한 산화적 스트레스가 높아져 일어나는 것으로 알려지고 있다. 따라서 이러한 산화적 손상에 의한 산화적 스트레스에 의한 부작용을 억제하는 신규 디히드로에피안드로스테론 유도체를 발명하였다. 신규 디히드로에피안드로스테론 유도체는 공지의 디히드로에피안드로스테론의 3번위치에 L-아스파르테이트, L-아스파라긴 혹은 피루베이트기와 에스테르결합으로 제조하고 이들의 화학구조 및 물성과 안정성시험, 골다공증 효능시험을 실시하였다. 시험결과 본 발명화합물은 안정성이 우수하고 공지의 호르몬요법 치료제과 유사한 효능을 가지면서도 간장비대등 부작용이 매우 경감된 우수한 골다공증 치료약물임이 확인 되었다. 이와같은 발명은 장기투여로인한 부작용이 경감된 신규 디히드로에피안드로스테론 유도체를 함유하는 골다공증 예방 및 치료용 약제로 이용될 수 있다.

Description

골다공증 예방 및 치료제로서의 디히드로에피안드로스테론 유도체

본 발명은 3번 위치에서 특정 화합물의 카르복실기와 에스테르결합을 갖는 신규 디히드로에피안드로스테론(Dehydroepiandrosterone)유도체 및 이를 함유하는 골다공증 예방 및 치료제에 관한 것이다. 본 발명은 하기 일반식(1)으로 표시되는 화합물 및 그의 염에 관한 것으로, 하기식에서 R는 L-아스파르테이트, L-아스파라긴 혹은 피루베이트기를 나타낸다.

(I)

본 발명은 일반식(I)의 염형성 가능한 화합물의 산과의 부가염, 예를들면, 염산, 브롬화수소산, 질산, 황산, 인산, 아세트산, 포름산, 프로피온산, 벤조산, 말레산, 푸마르산, 숙신산, 타르타르산, 시트르산, 옥살산, 글리옥실산, 아스파트산, 알칸술폰산(예, 메탄 또는 에탄술폰산), 아릴술폰산(예, 벤젠 또는 파라톨루엔술폰산) 및 아릴카르복실산중 어느 하나와 함께 형성된 염도 포함된다. 또한 본 발명은 상기 디히드로에피안드로스테론로 부터 디히드로에피안드로스테론-L-아스파르테이트, 디히드로에피안드로스테론-L-아스파라긴, 디히드로에피안드로스테론-피루베이트의 제조방법과 이러한 신규 화합물을 유효성분으로하는 골다공증 예방 및 치료제에 관한 것이다.

골다공증(osteoporosis)은 가장 흔한 골의 대사성 질환으로 같은 성별 및 연령층에 비하여 총골량(total bone mass)이 감소한 상태로서, 선천성, 폐경기 후, 갑상선기능 항진증, 부갑상선기능 항진증, 만성신부전증, 부신피질호르몬 투여등에 따라 다양한 원인에 의하여 발생한다. 골다공증의 가장 중요한 특성은 골질 약화에 따른 골절의 빈도가 크게 증가되는데 있다. 특히 노인층에서 흔한 골다공증은 노인들에게 대퇴골 골절, 척추골절 등과 같은 심각한 골절을 유발하여, 활동을 제한하고 결과적으로 노인층 사망원인의 15%에 이르고 있다. 골다공증의 원인들이 여러가지 알려져 있으나, 그 치료방법이나 예방방법은 주로 골의 무기물 즉 칼슘과 인의 대사이상에만 초점을 맞추어 개발되어 왔으나 질병 예방 및 치료에 큰 진전을 보지 못하고 있다. 따라서 골형성에 중요한 무기물뿐 아니라 골기질단백질의 대사에 대한 중요성이 새로이 부각되고 있다. 지금까지 골다공증 치료제로서 대표적인 약물로는 에스트로겐(estrogen)이나 칼시토닌을 이용한 호르몬 요법과 칼슘 보강을 통한 영양요법과 그리고 비타민D 와 그의 유사체(Vitamin analogues), 비스포스포네이트(bisphosphonate)를 이용한 치료제가 임상적으로 공지되어 사용되고 있다.(Scrip's osteoporosis report, PJB Publications Ltd, 1994), 한편 최근 디히드로에피안드로스테론이 항암인자, 항당뇨인자, 항비만인자, 항심근경색 인자, 항 동맥경화인자, 항우울증인자 등으로 알려지게되어 각종 성인병 및 노화관련 질환들에 대한 예방 또는 치료제로서 가능성이 보고된(Labrie, et al., N.Y. Academy of Science, 774, 1995)이후 새로운 골다공증 예방 및 치료제로서 공개되었다.(미국특허 5,776,923, 5,728,688, 5,780,460). 그러나 이러한 치료법들은 효과 뿐 아니라 안전성에 있어서 모두 많은 문제점을 안고있다. 특히 폐경기후성 골다공증에 사용되는 에스트로겐 요법은 간, 난소, 유방등에 종양을 일으킬 가능성이 높다고 알려지고 있으며, 디히드로에피안드로스테론 장기투여는 간장비대와 성선비후 현상응 일으키고, 칼슘 보강제제의 효과에 대해서는 유의하지 못함이 차차 보고됨에 따라 그 문제가 매우 심각하다.

골다공증 유도에 대한 분자생물학적 기전은 최근 비교적 활발하게 추구되고 있으며, 골형성 억제와 파골 촉진의 과정으로 나누어 설명되어지고 있다. 골형성 촉진 인자들로는 불소제재, 부갑상선 호르몬, 티지에프-베타(TGF-β), 골형성 단백질(Bone morphogenetic protein), 인슐린유사 성장호르몬(insulin like growth factor) 들이 알려지고 있으며, 파골억제 인자들로는 에스트로겐, 칼시토닌, 비타민D 와 그의 유사체(Vitamin analogues), 비스포스포네이트(bisphosphonate)들이 보고되었다. 그러나 이들 대부분의 펩타이드(peptide)성 인자들은 강력한 작용을 가지고 있으나, 기능 반감기가 짧고 경구투여하기 곤란하다는 점에서 실용화가 어려울 뿐아니라, 그러한 인자들이 다양한 여러 조직에서 생성되고, 작용기전도 선택성이 적어 많은 부작용을 초래할 위험성이 크다. 따라서 골다공증과 같이 장기간 치료가 필요한 경우에는 사용방법도 간편할 뿐 아니라, 기능도 중요하지만 장기복용에 의한 부작용이 없는 약제의 개발이 가장 중요한 요인이 된다. 또한 최근 각광을 받고 있는 디히드로에피안드로스테론은 장기투여시 간장비대와 성선비후 현상이 일어난다. 이러한 현상은 산화적 손상에 의한 산화적 스트레스(oxidative stress)가 높아져 일어나는 것으로 알려지고 있다.

따라서 본 발명이 이루고자 하는 기술적 주요과제는 공지의 골다공증 예방 및 치료제들이 가지고 있는 단점들이 해결되고, 특히 디히드로에피안드로스테론 사용할 때 일어나는 간장비대와 성선비후 현상을 일으키지 않는 신규 디히드로에피안드로스테론 유도체를 제공하는데 있다. 이들 신규 화합물들이 산화적 손상에 의한 산화적 스트레스(oxidative stress)를 억제시키는 물질로 기대되는 것은 본 발명자의 선행특허(한국특허출원번호 94-012769, 98-16349)에 근거한 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은 상기 구조식(Ⅰ)의 신규 디히드로에피안드로스테론 유도체를 제조하는 방법을 제공하는 것이다.

도 1 은 본 발명의 골다공증 예방 및 치료제로서의 신규 디히드로에피안드로스테론 유도체에 대한 제조경로를 도식으로 나타낸 것이다.

본 발명의 구조식(Ⅰ)화합물은 하기 디히드로에피안드로스테론와 L-아스파르테이트, L-아스파라긴 및 피루베이트와 반응시켜 3번위치에 에스테르결합으로 연결된 신규 화합물(Ⅰa-c)을 제조한다. 상기 일반식(Ⅰ)로 표시되는 신규 디히드로에피안드로스테론 유도체 물질에 대한 제조경로는 도 1과 같다.

본 발명에 따르는 제조방법은 공지의 제조기술을 활용하였고(Lajoie. G. A. Syn. Comn. 20,3157,1990, Hakimelahi. G. H. Tet. Lett. 37, 2035, 1996, Hardy. P. M. J. Chem, Soc, Perkin I, 1954,1977 등), 구체적으로 제조하는 실시예는 디히드로에피안드로스테론으로부터 디히드로에피안드로스테론-L-아스파르테이트, 디히드로에피안드로스테론-L-아스파라긴, 디히드로에피안드로스테론-피루베이트를 상세히 설명할 것이나 이들 실시예에 의해서 본 발명의 기술적 범위를 제한하는 것은 아니다.

< 실시예 1> 디히드로에피안드로스테론-L-아스파르테이트(Ⅰa) 의 합성

1) L-아스파틱산 알릴에스테르 염산염(L-aspartic acid -allylester hydrochloride) 의 합성

L-아스파틱산(8 g, 0.06mol)을 알릴알코홀(allyl alcohol) 300 ml에 녹인 후 질소기체 내에서 트리메틸실릴클로라이드(19 ml, 0.15 mol)를 천천히 가한 후 16시간 동안 저었다. 반응액에 에틸에테르(2 L)를 부어 침천을 떨어뜨리고 침전을 걸렀다. 생성된 고체를 에테르로 씻어 주고 건조하여 흰색의 고체를 얻었다. 수득률 : 9.5 g (76%)

1H NMR스펙트럼(200MHz, D2O)

3.20(d, 2H, CH2), 4.30(t, 1H, CH), 4.72(m, 2H, CH2CH=CH2), 5.40(m, 2H, CH2CH=CH2), 5.96(m, 1H, CH2CH=CH2)

2) N-t-부톡시카르보닐L-아스파틱산 알릴에스테 (N-(t-buthoxycarbonyl)-L- asparticacid -allyl ester)의 합성

상온에서 디-t-부틸디카르보네이트(4.31 g, 0.0197 mol)을 다이옥산에 녹이고 L-아스파틱산 알릴에스테르 염산염(3.45 g, 0.0165 mol)는 물에 녹인 다음 두 용액을 섞었다. 용액을 저어주면서 트리에틸아민(4.82 ml, 0.0346 mol)을 2시간에 걸쳐서 천천히 가했다. 반응용액을 12시간 동안 저어준다음 헥산(50X2 ml)로 추출하고 수층을 1N 염산로 pH 2정도로 맞춘다음 다시 아세트산 에틸(50X2 ml)로 추출하고 유기층을 소금물로 씻어 주었다. 황산마그네슘을로 유기층을 건조하고 진공증말기에서 용매를 제거하여 무색의 기름모양의 액체를 얻었다.

수득률 : 3.84 g(85%)

1H NMR스펙트럼(200MHz, CDCl3)

1.45(s, 9H, C(CH3)3), 3.0(dd, 2H, CH2), 4.55(m, 3H, CH, CH2CH=CH2), 5.40(m, 2H, CH2CH=CH2), 5.6(d, 1H, CONH), 5.90(m, 1H, CH2CH=CH2), 8.2(br, 1H, COOH)

3) N-t-부톡시카르보닐L-아스파틱산 알릴에스테르-디히드로에피안드로스테론(1)의 합성

N-t-부톡시카르보닐L-아스파틱산 알릴에스테르(2.09 g, 7.65 mmol), 디히드로에피안드로스테론(2.16 g, 7.49 mmol), 디메틸아미노피리딘(1.40 g, 11.47 mmol)을 염화 메틸렌에 녹였다. 이 용액에 디시클로헥실카르보디이미드(5.52 g, 26.77 mmol)을 천천히 가하고 상온에서 24시간 저어 주었다. 반응액을 걸러 거른액을 아세트산 에틸로 추출하고 유기층을 황산 마그네슘을로 건조한후 진공증발기에서 용매를 제거한후 탁한 색의 기름을 얻었다. 이 기름을 실리카겔 관 크로마토그래피법으로 분리하여 흰색의 고체를 얻었다. 수득률 : 2.8 g(67.3%)

1H NMR스펙트럼(200MHz, CDCl3)

1.5~2.6(m, 34H), 2.90(dd, 2H, CH2), 4.65(m, 3H, CH, CH2CH=CH2), 5.35(m, 3H, CH2CH=CH2, CONH), 5.92(m 1H, CH2CH=CH2)

4) 디히드로에피안드로스테론-L-아스파르테이트(Ⅰa) 의 합성

N-t-부톡시카르보닐L-아스파틱산 알릴에스테르-디히드로에피안드로스테론(1)(1.5 g, 2.75 mmol)을 50% 트리불소아세트산 용액에 녹인 후 2시간 동안 저어 주었다. 진공증발기에서 용매를 제거하고 생성된 무색의 액체를 아세트산 에틸(30 ml), 물(30 ml)에 녹이고 1N 염산로 pH 2로 맞춘 후 유기층을 뽑아내어 소금물로 씻어주고 황산 마그네슘으로 건조하였다. 진공증발기에서 용매를 제거하여 무색의 액체를 얻었다. 이 액체를 염화메틸렌에 녹이고 테트라키스페닐포스핀 팔라디움(palladium tetrakistriphenyphosphine, 50 mg), 트리페닐포스핀(triphenyphosphine,50 mg)을 가하고 저어주었다. 용액을 10분 가량 저어준 후 2-에틸헥산노에이트 나트륨염(sodium 2-ethylhexanoate, 457 mg, 0.00275 mol)을 아세트산 에틸에 녹인 후 반응 용액에 가하였다. 2시간 동안 반응액을 저어준 후 에틸에테르를 부어 침천을 떨어뜨리고 원심 분리하여 연 노란색의 고체를 얻었다. 고체를 아세트산 에틸과 에틸에테르로 씻어준 후 진공 건조기에서 건조하여 흰색의 고체를 얻었다. (수득율: 50%)

1H NMR스펙트럼(200MHz, CD3OD)

0.5~2.2(m, 24H), 2.40(m, 2H, CH2), 3.6(m, 1H, CH), 4.6(m, 1H, CH), 5.40(d, 1H, =CH)

<실시예 2> 디히드로에피안드로스테론-L-아스파라긴(Ⅰb) 의 합성

1) N-t-부톡시카르보닐-L-아스파라긴의 합성

L-아스파라긴(4.14 g, 31.33 mmol)을 물(50 ml)에 녹이고 용액에 수산화나트륨(1.25 g, 31.33 mmol)을 넣고 용액이 맑아질 때까지 저어주었다. 반응온도를 0 C로 유지시키면서 디-t-부틸디카르보네이트(8.20 g, 37.59 mmol)의 디옥산 용액을 조금씩 첨가하였다. 온도를 서서히 상온으로 올리면서 4시간 동안 저어주었다. 반응용액으로부터 진공증발기를 이용하여 디옥산을 제거하고 용액에 아세트산 에틸(50 ml)을 붓고 1N 염산 수용액으로 pH 2를 맞추어 주었다. 생성된 고체를 거르고 물과 에테르로 씻어준 후 건조시켜 흰색의 고체를 얻었다.

수득률 : 6.3 g (86 %)

1H NMR스펙트럼(200MHz, DMSO-d6)

1.44(s, 9H, C(CH3)3), 2.54(m, 2H, CH2), 4.29(m, 1H, CH), 6.8~7.5(m, 1H, CONH)

2) 디히드로에피안드로스테론-L-아스파라긴(Ⅰb) 의 합성

N-t-부톡시카르보닐-L-아스파라긴(3.5 g, 15.0 mmol), 디히드로에피안드로스테론(3.9 g, 13.56 mmol), 디메틸아미노피리딘(3.11 g, 25.5 mmol)를 디메틸 포르마이드( 35 ml)에 녹인 후 디시클로헥실카르보디이미드 (10.8 g, 52.5 mmol)의 디메틸 포르마이드(10 ml) 용액을 천천히 실온에서 첨가하였다. 반응액을 48시간 동안 저어준 후 생성된 고체를 거른 후 디메틸 포르마이드를 진공증발기에서 제거하였다. 생성된 액체를 물과 아세트산 에틸에 녹이고 유기층을 추출하고 황산 마그네슘으로 건조한 후 진공증발기에서 용매를 제거하여 무색의 액체를 얻었다. 이 액체를 실리카겔 관 크로마토그래피법으로 분리하여 흰색의 고체를 얻었다. 이 고체를 50% 트리불소아세트산 용액에 녹인 후 2시간 동안 저어주었다. 반응액으로부터 용매를 제거하고 생성된 액체를 아세트산 에틸과 물에 녹이고 포화 중탄산소다 용액으로 용액을 중화 시켰다. 유기층을 분리하여 황산 마그네슘으로 건조시키고 용매제거 후 실리카겔 관 크로마토그래피법으로 분리하여 흰색의 고체를 얻었다.

수득률 : 0.7 g (11.6%)

1H NMR스펙트럼(200MHz, DMSO-d6)

0.5~2.4(m, 25H), 2.8(m, 2H, CH2), 4.2(m, 1H, CH), 4.4(m, 1H, CH), 5.4(d, 1H, =CH)

<실시예 3> 디히드로에피안드로스테론-피루베이트(Ⅰc) 의 합성

디히드로에피안드로스테론(5.0g), 디메틸아미노피리딘(3.15g)을 건조된 메틸렌클로라이드(250ml)에 녹인 다음 피루빅산 (3.0g,2.0eq)를 메틸렌클로라이드 소량에 녹여 넣어준다. 디시클로헥실카르보디이미드(12.5g)을 메틸렌클로라이드(250ml)에 녹여 주사기로 30분 동안 상온에서 천천히 주입하였다. 2시간동안 상온에서 교반한후 생성된 고체는 여과하여 제거하였다. 물과 에틸아세테이트로 추출하고 황산 마그네슘으로 건조한후 용매를 제거하여 무색의 오일을 얻었다. 재결정법으로 결정화하여 흰색의 고체를 얻었다.(수득율: 75%)

1H NMR스펙트럼(200MHz, DMSO-d6)

0.5~2.7(m, 28H), 4.4(m, 1H, CH), 5.4(d, 1H, =CH)

<실시예 4> 동물실험을 대상으로 생물학적 효능 시험

골다공증과 같이 장기간 치료가 필요한 경우에는 사용방법도 간편할 뿐 아니라, 기능도 중요하지만 장기복용에 의한 부작용이 없는 약제의 개발이 가장 중요한 요인이 된다. 또한 최근 각광을 받고 있는 디히드로에피안드로스테론은 장기투여시 간장비대와 성선비후 현상이 일어난다. 이러한 현상은 산화적 손상에 의한 산화적 스트레스(oxidative stress)가 높아져 일어나는 것으로 알려지고 있다.

신규 디히드로에피안드로스테론 유도체(Ia-c)가 디히드로에피안드로스테론에 의하여 초래되는 산화적 손상에 의한 스트레스(oxidative stress) 결과인 간장비대를 억제하는 효과와 난소적출로 유도되는 골다공증을 억제하는가를 알아보기 위해 하기와 같이 시험을 실시하였다. 실험설계에 따라 일정기간 처치 후 희생시켜 위장, 심장, 신장등 여러 장기 의 손상 여부를 검사하고 혈액과 간을 시료로 얻어 분석에 사용하였다.

시험 1. 산화적 손상에 의한 간의 비대를 억제하는 효능 평가시험

1) 실험동물

실험동물은 생후 약 3개월된 암컷 흰쥐(Sprague Dawley rat)를 사용하였으며, 쥐의 체중은 200-240g정도였다. 사육은 동물 실험실에서 40×25×17cm 크기의 사육장(cage)에 각각 2-3마리씩 이루어졌다. 사육 환경은 기온 22℃, 습도 50%로 유지되었다.

2) 실험동물의 골다공증 유도 및 실험군 설정

실험동물은 각 군당 10마리씩 나누고 각 실험쥐를 골다공증을 유도하기 위해 난소를 적출하고, 1주일동안 쥐를 안정시킨 후부터 8주동안 그 군에 해당하는 처치를 하였다. 난소 적출술은 다음과 같은 방법으로 시행하였다. 전신 마취 후 무균 조작하에서 양측의 배부 바깥측에서 3cm 정도로 피부, 복근 및 복막을 절개하고, 난소를 노출시켜, 난관을 견사로 결찰 후 난소를 절제하고 견사 및 나이론사로 복막, 복근 및 피부를 봉합하였다.

제1군(SC)은 복막 절개까지만 난소절제 수술과 같은 방법으로 시행한 난소를 제거하지 않는 대조 수술(sham operation)을 시행하였고, 제2군(OC)은 난소절제 수술(oophorectomy operation)을 시행하였다. 제3군(OE)은 난소절제 수술을 시행한 후 1주 동안 쥐를 안정시킨 후 8주간에 걸쳐 주3회씩 복강내로 에스트라디올(estradiol, 5mg/kg)을 주사하였다. 제4군(DH)은 난소절제 수술을 시행한 후 1주 동안 쥐를 안정시킨 후 12주간에 걸쳐 주3회씩 복강내로 디히드로에피안드로스테론를 주사하였고, 제5군(DA), 제6군(DN)과 제7군(DP)은 난소절제 수술을 시행한 후 1주 동안 쥐를 안정시킨 후 12주간에 걸쳐 주3회씩 복강내로 디히드로에피안드로스테론-L-아스파르테이트(Ⅰa), 디히드로에피안드로스테론-L-아스파라긴(Ⅰb)과 디히드로에피안드로스테론-피루베이트(Ⅰc)를 난소절제후 각각 0.34mmole/Kg씩 주사하였다. 수술 시행 후 13주에 흰쥐들을 희생시켜 좌측 경골 및 간장을 적출하였다.

3) 시험결과

난소적출 흰쥐에 디히드로에피안드로스테론 및 유도체를 12주간동안 장기 주사한 경우, 디히드로에피안드로스테론(대조군)는 난소적출 흰쥐의 간에 비해 간의 무게를 증가시켰으나 디히드로에피안드로스테론-L-아스파르테이트(Ⅰa), 디히드로에피안드로스테론-L-아스파라긴(Ⅰb), 디히드로에피안드로스테론-피루베이트(Ⅰc)는 간의 비대화를 억제시켰다(표1).

표 1. 기존 에스트라디올과 디히드로에피안드로스테론 약물 대비 신규 물질의 산화적 손상에 의한 간의 비대를 억제효과

실험군	간의 평균무게(g)±표준편차
제1군(SC)	7.1±0.439
제2군(OC)	8.3±0.741
제3군(OE)	8.5±0.314
제4군(DH)	11.3±0.987
제5군(DA)	8.3±0.959
제6군(DN)	8.7±0.872
제7군(DP)	8.4±0.695

시험 2. 난소적출유도 골다공증 모델 쥐를 이용하여 골다공증 효능 평가시험.

1) 실험동물의 골다공증 유도 및 실험군 설정

시험 1에서 얻은 쥐의 골을 대상으로 실험을 시행하였다.

2) 경골조직 형태 계측학적 관찰

조직 형태 계측학적 검사로서, 각군에서 근위 경골 부위(tibia)의 조직 소견 사진을 만든 후, 정량적 영상 분석 체계(quantitative image analysis system, WILD LEITZ사, 독일)를 이용하여 골소주 면적(trabecular bone area)을 구하였다. 각각의 경골의 근위부에서 성장판의 직하부의 부분중 가로변의 길이가 성장판 길이의 약 2/3 정도되는 길이로 하는 기준면적 1.75329 ㎟인 직사각형의 내부에 있는 골소주들의 면적을 컴퓨터를 이용하여 각 경골 표본의 골소주 면적을 구하였다.

3) 시험결과

난소절제후 12주가 지나면 난소적출군은 골소조의 양이 급격히 감소하여 골다공증이 유발된다. 난소절제후 12주동안 디히드로에피안드로스테론, 디히드로에피안드로스테론-L-아스파르테이트(Ⅰa), 디히드로에피안드로스테론-L-아스파라긴(Ⅰb)과 디히드로에피안드로스테론-피루베이트(Ⅰc)는 공히 난소적출로 유도되는 골다공증을 억제하였으며, 효과는 현재 골다공증 예방 및 치료제로 사용되고 있는 에스트라디올의 효과와 유사한 좋은 치료제임을 나타내었다 (표2).

표 2. 기존 에스트라디올과 디히드로에피안드로스테론 약물 대비 신규 물질의 골다공증치료 효과

실험군	골소주 평균면적(㎟) ± 표준편차
제1군 (SC)	0.71 ± 0.095
제2군 (OC)	0.27 ± 0.053
제3군 (OE)	0.56 ± 0.094
제4군 (DH)	0.53 ± 0.087
제5군 (DA)	0.51 ± 0.059
제6군 (DN)	0.50 ± 0.076
제7군 (DP)	0.52 ± 0.069

실험 3. 장기 및 혈액 검사

시험 1에서 얻은 쥐을 희생시켜 위장, 심장, 신장등 여러 장기 의 손상 여

부를 검사하고, 혈액을 취하여 혈액 검사를 하였다.

1) 실험동물의 장기 손상여부 검사

시험 1에서 얻은 실험군의 쥐를 대상으로 실험을 시행하였다.

2) 혈액 검사

혈청을 분리하여 총단백질, 알부민, 총빌리루빈, 직접빌리루빈, 혈중요소질(blood urea nitrogen), 총콜레스테롤, 중성지질의 농도를 측정하였다.

3) 시험 결과

심장, 신장, 위장등 여러 다른 장기의 손상여부 검사 결과 실험군간에 조직의 손상 정도가 유의하게 차이가 나타나지 않았다.

또한 혈액 분석 결과도 실험군간 측정농도들의 차이의 유의성이 없었다.

일반식(Ⅰ)으로 표시되는 본 발명의 신규 디히드로에피안드로스테론 유도체 화합물의 골다공증 효능은 공지의 골다공증 약물인 에스트라디올 및 최근 특허물질인 디히드로에피안드로스테론과 유사하면서도 간장비대와 성선비후등 부작용이 경감된 우수한 약물로 평가되어, 임상에서 실용화 할 수 있는 골다공증 치료제로서 공지의 약물과 같이 치료 및 예방에 유용하다. 또한 본 발명의 디히드로에피안드로스테론 유도체 화합물은 염상태로도 존재할 수 있기때문에 물에 대한 용해도도 좋고 안정성도 높기 때문에 사용방법도 간편할 뿐 아니라 화학적으로 취급이 용이하다.

본 발명에 의하여 제공된 상기 일반식 (Ⅰ)의 화합물은 골다공증과 같이 장기간 치료가 필요한 질병의 경우 일어나는 간장비대와 성선비후등과 같은 부작용이 적으면서도 매우 우수한 골다공증 효능이 있는 것으로 포유 동물 실험을 통해 확인되었다. 따라서 일반식(Ⅰ)의 화합물은 골다공증 약물로서 예방 및 치료의 처치를 위하여 사용될 수 있다. 본 발명 화합물을 실제로 투여하는 경우에는 일반으로 비 경구적으로 투여할 수있지만 의약제제 분야에서 사용된 통상의 담체와 혼합하여 정제 또는 제제형을 경구적으로 투여할 수 있다. 일반적인 투여 방법으로서는 동물의 경우, 복강내 주사, 피하주사, 정맥 또는 동맥의 혈관내 주사 및 국소 투여등의 주사제로서, 사람의 경우는 정맥 또는 동맥의 혈관내 주사 또는 국소 투여등의 주사제로서 투여되고, 이러한 투여량은 투여방법, 환자 또는 피처리 동물의 상황, 예를 들면, 연령, 체중, 성별, 감수성, 식이, 투여시간, 병용하는 약제, 환자 또는 그 병의 정도에 따라서 적당하게 변화시켜 투여하여도 좋다.

Claims (5)

1. 다음 구조식(I)의 신규 디히드로에피안드로스테론 유도체.

   (I)

   상기식에서 R은 L-아스파르테이트, L-아스파라긴 혹은 피루베이트기를 나타낸다.
2. 제 1 항에 있어서, 약제학적으로 사용가능한 산부가염임을 특징으로 하는 구조식(I)의 신규 디히드로에피안드로스테론 유도체.
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 골다공증 약물로서 예방 및 치료에 사용하는 것을 특징으로 하는 구조식(I)의 신규 디히드로에피안드로스테론 유도체.
4. 디히드로에피안드로스테론을 L-아스파르테이트, L-아스파라긴 혹은 피루베이트기와 에스테르결합으로 제조하는데 선택적으로 아미노기를 보호하고 이를 제거하여 구조식 (I)의 신규 디히드로에피안드로스테론 유도체 제조방법.
5. 일반 구조식(I)의 신규 디히드로에피안드로스테론 유도체를 염형성시키는 방법.