KR102636204B1 - 참배암차즈기 추출물을 함유하는 항염 또는 항알레르기용 조성물 - Google Patents
참배암차즈기 추출물을 함유하는 항염 또는 항알레르기용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 참배암차즈기(Salvia chanryoenica Nakai) 추출물을 포함하는 항염 또는 항알레르기용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 IL-4(interleukin-4) 분비 및 히스타민 분비를 억제하는 기능이 우수하고, 아질산염과 산화질소의 생성을 효과적으로 저해하여 염증 질환과 알레르기 질환의 예방, 개선 및 치료용 약학조성물이나 건강기능식품, 화장료 조성물로서 용이하게 이용가능하다.
Description
본 발명은 참배암차즈기(Salvia chanryoenica Nakai) 추출물을 포함하는 항염 또는 항알레르기용 조성물에 관한 것이다.
염증반응은 물리적 자극, 화학적 자극, 세균감염 등의 원인에 대한 생체의 방어기전 중 하나로, 외부 물질을 제거하고 손상부위를 수복 재생하려는 기전 중 하나이다. 단구세포는 세균감염 등으로 인해 활성화되어 식세포작용을 하는 대식세포로 변화되며, 대식세포는 NO, 프로스타글란딘 E2, 전구염증성 사이토카인 등을 분비함으로써 염증을 유발하고, 염증, 면역반응 모두에서 중요한 조절세포로 작용하는데, 대식세포가 이렇게 작용하기 위해서는 반드시 활성화 과정을 거쳐야 한다. 그람 음성균의 세포벽 구성성분 중의 하나이며 내독소로 잘 알려진 LPS(lipopolysaccharide)는 대식 세포의 활성화에 관여하는 가장 잘 알려진 외부인자이다. 특히, RAW 264.7 세포와 같은 단구세포나 대식세포에서는 TNF-α(tumor necrosis factor-alpha), IL-6(interleukin-6), IL-1β(interleukin-1 beta)와 같은 전구염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)을 분비하여 염증부위에서 LPS(lipopolysaccharide)가 증가된다. LPS가 대식세포를 자극하게 되면 iNOS(inducible nitric oxide synthase)라는 효소에 의해 L-아르지닌(L-arginine)이 L-시트룰린(L-citrulline)으로 변하는 과정에서 NO(nitrogen monoxide)가 생성됨으로써 대식세포가 NO를 생성한다.
포유동물에서 NO는 세 가지 종류의 NO 합성효소(NOS, nitric oxide synthease), 즉 nNOS(neuronal NOS), eNOS(endothelial NOS) 및 iNOS(inducible NOS)에 의해 합성된다. 이 중에서 nNOS와 eNOS에 의해 생성되는 NO는, 정상적인 생체기능을 위해 생성되며, 조직 내에서의 농도는 일정수준으로 낮게 유지된다. 그러나, iNOS에 의해 생성된 NO는 그 양이 과도하여 병리적인 혈관확장, 세포독성, 조직 손상 등과 같은 생체에 유해한 작용을 나타낸다. 또한, 염증인자인 프로스타글란딘 E2(PGE2)는 세포막의 구성성분인 인지질이 LPS에 의해 자극을 받아 포스포리파제 A2(phospholipase A2)라는 효소에 의해 유리된 아라키돈산이 COXs(cyclooxygenase)라고 불리는 효소의 촉매작용을 받아 형성되어 염증반응을 유도하게 된다. COX는 COX-1과 COX-2로 분류되는데, COX-1은 체내에서 혈소판의 형성, 위벽보호, 신장 기능의 유지 등 정상적인 생체기능에 작용하며 COX-2는 염증성 매개물질인 PHE2를 합성한다. PHE2는 염증반응(통증, 발열 등), 면역반응, 그리고 혈관신생(angiogenesis)을 촉진하는 등 암 발생에도 깊이 관여하고 있는 것으로 알려져 있다. iNOS의 억제 약물은 그 작용기전이 COXs의 억제 물질과 연계되어 있어 경우가 대부분이다. 따라서 비교적 검색이 용이한 iNOS의 억제소재를 발굴하여 항염증 소재로 개발하는 경우가 많다.
또한, 선택성 COX-2 억제제(selective COX-2 inhibitors)를 포함하는 비스테로이드성 항염증제(non-steroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDs)는 항염증, 해열 및 진통 효과를 나타낸다. 하지만, 이러한 약들의 장기간 복용은 때로 심각한 부작용을 초래할 수 있다. 예를 들어, 위장관계의 소화성 궤양출혈로 인한 이차적 빈혈 초래, 혈소판 기능 억제, 분만 유도 억제, 신장에 대한 부작용, 간장 손상, 과민 반응 등이 있다.
이러한 약물의 부작용을 극복하기 위해서 보다 안전한 소재로 식물과 같은 천연에서 유래한 제품은 선호도가 높으며, 이와 관련하여 천연물에서 그 항염증 소재를 찾아 활용하려는 연구들이 활발히 진행되고 있다.
일반적으로 알레르기란 어떤 외래성 물질과 접한 생체가 그 물질에 대하여 정상과는 다른 반응을 나타내는 현상 또는 과민반응을 의미하고 알러지라고도 한다. 또한, 생물체가 어떤 외래성 물질과 접하게 되면 항원항체반응에 의하여 생체 내에 급격한 반응 능력의 변화가 생기는 것을 의미하기도 한다.
생체는 이종물질에 대해서는 그 항원에 특이적으로 반응하는 항체와 림프구를 생산하고 재차 항원과 접하면 여러 가지 면역반응을 일으킨다. 상기 면역반응은 생체의 자기 보존을 위한 중요한 방어메커니즘의 하나인데, 보통 생체에 대해 보호적으로 작용하지만 때로는 이 메커니즘이 생체에 불리하게 작용하여 장애를 일으키는 경우가 있다.
상기 알레르기 반응을 유발하는 항원은 알레르겐(allergen)이라고 하며, 전형적인 알레르겐은 꽃가루, 약물, 식물성 섬유, 세균, 음식물, 염색약, 화학물질 등이 있다. 면역계에는 항원에 대항하여 신체를 지키기 위한 몇 가지 방어메커니즘이 있다. 이들 중 가장 많은 종류는 림프구로, 특정 항원에 반응하기 위해 특이화되어 있으며, B세포(B-cell)와 T세포(T-cell)가 이에 해당한다. 알레르기 반응은 즉시형 알레르기 또는 지연형 알레르기로 나타나는데, 항원이 B세포나 T세포 중 어느 세포와 반응하는지에 따라 결정된다.
상기 알레르기로 인한 질환 즉, 알레르기성 질환은 광범위하고 복잡한 병리적 현상의 총화로 면역반응에 근거한 생체의 전신적 또는 국소적인 장해이다. 일 예로, 알레르기로 인한 질환에는 자가면역질환, 교원병, 아토피성 질환, 알레르기성비염, 화분증, 기관지천식, 두드러기, 습진 또는 알레르기성 접촉성 피부염 등이 있다.
상기 다양한 알레르기성 질환은 면역 기전에 따른 크게 4가지 유형, 즉, I형, Ⅱ형, Ⅲ형 및 Ⅳ형으로 분류된다. 상기 알레르기성 질환 중에 가장 대표적인 질환은 I형 알레르기 또는 제1형 알레르기이다.
상기 제1형 알레르기는 일정한 항원에 대하여 이미 감작된 개체에 부착되어 있는 항체에 항원이 결합한 후 수분 내에 일어나는 즉시형 반응으로, 상기 제1형 알레르기성 질환은 알레르기성 비염, 아토피성 피부염 및 기관지 천식 등이 포함된다. 상기 제1형 알레르기는 비만세포(Mast cell)의 활성화에 의해 일어나며, 비만세포의 과립에 다량 포함되어 있는 염증의 매개체인 히스타민(Histamine)이 방출되는 경우 제1형 알레르기성 질환을 포함한 즉시형 알레르기 반응이 유도되는 것으로 알려져 있다.
보다 구체적으로, 비만세포 표면에 발현하고 있는 고친화성 IgE수용체인 FceRI이 IgE 및 특이적 알레르겐과 결합함으로써, 세포질 내 칼슘 농도가 상승하고 탈과립이 일어나 염증 매개인자, 구체적으로 히스타민이나 헤파린, 가수분해효소 그리고 면역반응의 조절인자로 알려진 interleukin-4(IL-4), interleukin-6(IL-6), interleukin-13(IL-13) 및 TNF-α와 같은 여러 가지 사이토카인이 분비되게 되며, 상기 분비된 염증 매개인자들은 혈관을 이완시키고, 혈관투과도를 증가시키며, 기관지를 수축시키게 된다.
상기 비만세포의 활성화는 이러한 알레르겐과 IgE를 통한 면역학적 자극 이외에 비면역학적 자극 물질인 compound 48/80, protein kinase C(PKC) activator인 phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA), calcium ionophore(A23187) 등에 의해서도 야기되는 것으로 보고되어 있다.
상기와 같은 이론에 근거하여, 막의 표면에 수십만 개의 IgE 수용체를 포함하고, IgE로 감작된 후에 항체에 반응하여 히스타민을 유리하는 Rat 유래의 RBL-2H3 세포는 항알레르기 효능검색을 위한 모델세포주로 많이 이용되고 있다.
한편, 현대의 환경오염, 식생활의 변화와 유전적 영향 등의 복합적인 영향으로 급증하고 있으며, 우리나라를 포함한 전세계의 알레르기 질환 환자의 수가 꾸준히 증가하고 있는 실정이다. 일 예로, 알레르기성 천식 환자는 세계인구의 약 10%를 차지하는 것으로 알려져 있으며(1995년 기준 약 27,500만 명), 미국에만 1,700만 명이 천식으로 고생하고 있고, 이 중 약 500만 명이 청소년인 것으로 보고되어 있다. 또한, 2000년도에 알레르기성 천식 치료제의 미국 시장 규모는 약 64억 달러이었으며, 한국 시장도 약 10억 달러로 전체 한국 의약품 시장의 약 20% 정도를 차지한다는 보고도 있었다.
상기 알레르기성 질환을 치료하기 위하여, 항히스타민 약물과 같은 항알레르기제가 투여되고 있다. 그러나, 면역학적 또는 비면역학적 과민반응은 항히스타민 약물에 의해 증상이 일시적으로 경감되지만 완전히 치료되지는 않는다. 따라서 알레르기 매개물질인 히스타민이 방출되는 것을 예방하는 소재의 개발이 요구되고 있는 실정이다.
참배암차즈기(Salvia chanryoenica Nakai)는 쌍떡잎식물 합판화군 통화식물목 꿀풀과의 여러해살이풀로서 숲속에서 자란다. 높이 50cm 내외이고 줄기는 네모지고 연한 털이 다소 있다. 굵은 뿌리가 옆으로 길게 벋으면서 마디에서 새싹이 돋아나기도 한다. 잎은 마주나고 뿌리잎과 비슷하지만 잎자루가 짧으며 달걀 모양의 긴 타원형 또는 타원형이다. 잎 끝이 둔하거나 짧게 뾰족하고 밑은 아심장저로 가장자리에 둔한 톱니가 있으며 밑부분에 치우쳐서 달리고 털이 다소 있다. 꽃은 8월에 피고 노란색이며 각 마디에 입술 모양의 꽃이 2~6개씩 수상으로 달린다. 꽃받침은 겉에 줄 모양의 털이 있다. 화관의 통부는 꽃받침보다 2배 정도 길고 겉에 선모가 다소 있으며 화관의 갈래조각 끝이 둥글다. 수술은 2개가 있고 암술대는 두 갈래로 갈라져 꽃 밖으로 길게 나온다. 열매는 9~10월에 익으며 종자는 다소 편평해 달걀을 거꾸로 세운 모양이다. 한국 특산 식물로 경상북도, 경기도, 강원도 등지에 분포한다. 현재까지는 약리학적 효능이 크게 알려져 있지는 않다.
이에 본 발명자들은 독성 및 부작용이 없는 천연물 유래의 염증성 질환 또는 알레르기성 질환 약제를 개발하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, 참배암차즈기(Salvia chanryoenica Nakai) 추출물이 IL-4 분비를 억제하고 히스타민을 억제하는 효과를 확인하였으며 이에 본 발명을 완성하였다.
MASASHI HISAMOTO 외 4인, Protective effects and active ingredients of Salvia miltiorrhiza Bunge extracts on airway responsiveness, inflammation and remodeling in mice with ovalbumin-induced allergic asthma, Phytomedicine. 2019 52:168-177.
본 발명의 목적은 참배암차즈기(Salvia chanryoenica Nakai) 추출물을 포함하는 알레르기 예방 및 치료용 약학조성물을 제공하는 데에 있다.
본 발명은 참배암차즈기(Salvia chanryoenica Nakai) 추출물을 함유하는 항염 또는 항알레르기용 조성물에 관한 것이다.
상기 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것일 수 있다.
상기 추출물은 아질산염의 소거능 또는 산화질소의 소거능이 있는 것을 특징으로 한다.
상기 추출물은 IL-4(interleukin-4) 분비 억제 기능 또는 히스타민 분비 억제 기능이 있는 것일 수 있다.
이에 본 발명은 상기 참배암차즈기 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물에 관한 것이며, 상기 추출물을 함유하는 알레르기 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다.
또한 본 발명은 상기 참배암차즈기 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물에 관한 것이며, 상기 추출물을 함유하는 염증 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다.
이에, 본 발명은 상기 참배암차즈기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 또는 항알레르기용 화장료 조성물을 제공할 수 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 참배암차즈기(Salvia chanryoenica Nakai)을 유효성분으로 포함하는 항염 또는 항알레르기용 조성물에 관한 것이다.
상기 참배암차즈기 추출물의 제조시 사용되는 물, C1~C4 알코올 또는 이들의 혼합용액은 참배암차즈기 추출물 사용 중량 기준 1~50배 부피(1kg 기준 1~50ℓ)를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 5~50배 부피를 사용할 수 있다. 상기 참배암차즈기 추출물의 추출조건은 20~100℃에서 1분~48시간일 수 있고, 바람직하게는 20~40℃에서 2~24시간일 수 있다. 상기 과정은 1~4번까지 반복할 수 있다. 또한 필요에 따라 추출과정에서 초음파 처리를 수행할 수 있다.
또한, 당분야의 통상적인 방법으로서 상기 참배암차즈기의 물, C1~C4 알코올 또는 이들의 혼합용액 추출물을 물에 녹인 후에 n-헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 n-부탄올로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종 이상의 용매를 사용하여 추가적으로 분획하여 분획물로 제조할 수 있다.
보다 자세하게는, 참배암차즈기를 물, C1~C4 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출 농축하여 얻은 참배암차즈기 추출물에, 물을 가하여 현탁한 후, 바람직하게는 참배암차즈기 추출물의 중량의 1~1000배, 더 바람직하게는 5~500배, 가장 바람직하게는 10~50배의 물을 가하여 현탁한 후, 상기 현탁물에 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 n-부탄올로 이루어진 군에서 선택되는 용매를 가하여 얻은 참배암차즈기 분획물로 제조할 수 있다.
상기 참배암차즈기 분획물은 보다 더 바람직하게는, 참배암차즈기를 물, C1~C4 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출 농축하여 얻은 참배암차즈기 추출물을 물에 현탁한 후 n-헥산과 혼합하여 얻은 n-헥산층의 농축물, 상기 n-헥산층을 제거하고 남은 물층에 메틸렌클로라이드를 혼합하여 얻은 메틸렌클로라이드층의 농축물, 또는 상기메틸렌클로라이드층을 제거하고 남은 물층에 에틸아세테이트를 혼합하여 얻은 에틸아세테이트층의 농축물, 상기 에틸아세테이트층을 제거하고 남은 물층에 n-부탄올을 혼합하여 얻은 n-부탄올층의 농축물, 또는 상기 부탄올층을 제거하고 남은 물층의 농축물일 수 있다.
상기 추출물 또는 이의 분획물의 추출용 기기로는 통상의 추출기기, 초음파분쇄추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다. 이렇게 제조된 참배암차즈기 추출물 또는 분획물은 감압건조 또는 동결건조하여 용매를 제거할 수 있다. 또한, 상기 참배암차즈기 추출물 또는 분획물은 칼럼크로마토그래피를 이용하여 정제하여 사용할 수 있다.
상기 참배암차즈기 추출물은 상법에 따라, 유기용매(알코올, 에테르, 아세톤 등)에 의한 추출, 헥산과 물의 분배, 칼럼크로마토그래피에 의한 방법 등, 식물체 성분의 분리 추출에 이용되는 공지의 방법을 단독 또는 적합하게 조합한 방법을 이용하여 분획 또는 정제하여 사용할 수 있다.
상기 크로마토그래피는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 엘에이취-20 컬럼 크로마토그래피(LH-20 column chromatography), 이온교환수지 크로마토그래피(ion exchange resin chromatography), 중압 액체 크로마토그래피(medium pressure liquid chromatography), 박층 크로마토그래피(TLC; thin layer chromatography), 실리카겔 진공 액체 크로마토그래피(silica gel vacuum liquid chromatography) 및 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 중에서 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 참배암차즈기 추출물을 포함하는 항염 또는 항알레르기용 약학 조성물, 염증질환 또는 알레르기 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공한다. 상기 참배암차즈기 추출물은 본 발명의 약학조성물에 0.01~100 중량%로 하여 첨가될 수 있다.
상기 참배암차즈기 추출물이 효과를 나타내는 알레르기 질환의 예로는 과민증, 알러지성 비염, 천식, 알레르기성 결막염, 알레르기성 피부염, 아토피성 피부염, 알레르기성 접촉성 피부염, 아낙필락시스 쇼크, 두드러기, 곤충 알레르기, 식품 알레르기 또는 약품 알레르기를 포함한다.
상기 참배암차즈기 추출물이 효과를 나타내는 염증 질환의 예로는 염증성 장질환, 염증성 콜라겐 혈관질환, 사구체신염, 유육종증, 망막염, 위염, 간염, 장염, 관절염, 편도선염, 인후염, 기관지염, 폐렴, 췌장염, 방광염, 신경염, 패혈증 및 신장염으로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다.
상기 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제 및 좌제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 약학조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학조성물의 투여량은 치료받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.01㎎/㎏/일 내지 대략 2000㎎/㎏/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 1㎎/㎏/일 내지 500㎎/㎏/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 약학조성물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 추출물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.
본 발명은 상기 참배암차즈기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 또는 항알레르기용 건강기능식품, 염증질환 또는 알레르기 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공할 수 있다.
상기 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제가 포함될 수 있다. 본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를들어, 각종 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 캔디류, 스넥류, 면류, 아이스크림, 유제품, 스프, 이온음료, 음료수, 알코올 음료, 껌, 차 및 비타민 복합제 등이 있다.
또한, 본 발명의 참배암차즈기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 또는 항알레르기용 화장료 조성물의 제형에는 피부외용연고, 에센스, 미백크림, 로션, 에멀젼, 팩, 일반화장수, 스킨밀크, 스킨, 크림, 세럼, 미용비누, 유연화장수, 약용화장수, 전신세정제, 클렌징 오일, 클렌징 크림, 클렌징 티슈 및 클렌징 워터에서 선택되는 것을 제공할 수 있다.
본 발명의 화장료 제형에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연, 락토스, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트, 폴리아미드 파우더, 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르, 에톡실화이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트, 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명은 참배암차즈기(Salvia chanryoenica Nakai) 추출물을 포함하는 항염 또는 항알레르기용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 IL-4(interleukin-4) 분비 및 히스타민 분비를 억제하는 기능이 우수하고, 아질산염과 산화질소의 생성을 효과적으로 저해하여 염증 질환과 알레르기 질환의 예방, 개선 및 치료용 약학조성물이나 건강기능식품, 화장료 조성물로서 용이하게 이용가능하다.
도 1은 본 발명의 따른 참배암차즈기 추출물의 NO 소거능을 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 따른 참배암차즈기 추출물의 아질산염 소거능을 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 따른 참배암차즈기 추출물의 IL-4 분비 억제 활성을 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 참배암차즈기 추출물의 히스타민 분비 억제 활성을 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 따른 참배암차즈기 추출물의 아질산염 소거능을 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 따른 참배암차즈기 추출물의 IL-4 분비 억제 활성을 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 참배암차즈기 추출물의 히스타민 분비 억제 활성을 나타낸 그래프이다.
이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지도록, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.
<실시예 1. 참배암차즈기 추출물의 제조>
참배암차즈기(Salvia chanryoenica Nakai) 지상부 1 kg을 70%(v/v) 에탄올 수용액 10 L에 넣고 시료가 충분히 잠기도록 한 후, 상온(25℃)에서 24 시간 교반하면서 초음파를 가하여 추출을 진행하였다. 이 과정은 3 회 반복하여 유용성분이 충분히 추출되도록 하였다. 1차로 멸균 거즈를 이용하여 여과한 후 여과액을 다시 여과지(Whatman No. 2; Watman Ltd., Maidstone, Kent, UK)를 이용하여 분쇄 시료 등을 걸러내었다. 다음 여과지를 이용하여 잔사를 제거하여 추출여액을 얻었다. 이 조작을 3회 반복하여 추출여액을 모두 합한 다음 회전 농축기를 이용하여 감압 농축하여 추출물을 얻었고, 동결건조로 남은 용매를 최대한 제거하였다. 실험에 사용할 때까지 동결건조한 시료는 -20℃에서 보관하였다.
<실시예 2. 세포독성 확인실험>
항염 또는 항알레르기 활성 분석 수행 전, 참배암차즈기 추출물이 세포독성을 유발하지 않는지에 대한 여부를 확인하기 위해 MTT assay를 이용하여 세포독성 실험을 실시하였다.
RBL-2H3 세포를 한국세포주은행(Korea Cell Line Bank, KCLB)에서 분양받아 10%(v/v) heat-inactivated FBS(fetal bovine serum)와 1%(v/v) streptomycin/penicillin이 함유된 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium)배지에서 배양하였다.
RBL-2H3을 DMEM 배지에 현탁한 후 48 well plate의 각 well 당 1.5×105 cells/well의 세포수가 되도록 분주하여 37℃, 5% CO2 incubator에서 4시간 배양하였다. 이후, 배양액을 제거하고 0.2㎎/㎖의 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 용액 100㎕를 첨가하였다. 4시간 배양 후 MTT 용액을 제거한 후 DMSO(dimethyl sulfoxide)에 농도별 실시예 1의 추출물을 처리하였다. 이후 30분 동안 반응(shaking)한 후 microplate reader(Tecan, Switzerland)를 사용하여 545㎚ 파장에서 흡광도를 측정하였다. 이때 세포 생존율은 다음과 같이 계산하였다.
* 세포 생존율(cell viability)(%)
= 100-{(대조군의 흡광도-시료처리군의 흡광도)/대조군의 흡광도)×100}
실험 결과, 참배암차즈기 추출물이나 알레르기 유발물질인 PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate)와 125nM 이오노마이신(ionomycin, Io)에 대해 세포독성이 나타나지 않아 항염 또는 항알레르기 실험을 하기에 적합한 조건인 것으로 확인되었다(결과 그래프 미기재).
<실시예 3. NO 소거능 확인 실험>
실시예 1의 참배암차즈기 추출물에 대한 NO 소거능 측정을 다음의 방법을 통해 확인하였다. 한국세포주은행에서 분양받은 BV2 세포주 세포를 10%(v/v) FBS 1%(v/v) penicillin-streptomycin을 첨가한 DMEM에 37℃, 95% air, 5% CO2의 환경 하에서 배양하였다. 96 well plate에 5×104 cells/well로 seeding하였다. 시료 및 양성대조군(quercetin 50 μM)을 처리한 후 2시간 동안 incubator에서 배양하고, 각 well에 LPS를 1 ㎍/㎖의 농도로 처리한 후 incubator에서 24시간 배양하였다. 시료와 LPS를 처리한 plate에서 상등액 50 ㎕를 따서 새 plate에 넣고, NO의 생성을 위해 nitrite (NO2 -)의 농도를 측정하여 산정하였다. Nitrite의 농도는 Griess reagent (1% sulfanilamide 0.1% napthyl-ethylenediamine dihydrochloride / 2.5% H3PO4)를 이용하여 colorimetric assay법으로 측정하였다. 50 ㎕의 배양액을 96 well plate에 넣고, Griess reagent 50 ㎕와 차광 상태에서 실온에서 10분간 반응한 후, 520 nm의 흡광도에서 microplate reader (Molecular Device, USA)를 이용하여 측정하였다. 표준도표(standard curve)는 이미 알려진 sodium nitrite의 농도를 이용하였다. 배양액만 넣은 well은 대조군으로 사용하였다. 각 실험수치는 최소 3차례 반복하여 평균을 구하였다.
도 1을 참고하면, 농도 의존적으로 참배암차즈기 추출물이 NO 농도를 현저하게 낮추는 것을 확인할 수 있었다.
<실시예 4. 아질산염 소거능 확인 실험>
실시예 1의 참배암차즈기 추출물에 대한 아질산염 소거능을 측정하였다.
측정방법은 NaNO2를 1차 증류수에 녹인 1mM의 NaNO2 용액에 1N HCl 용액을 첨가하여 pH 1.2로 조절한 후 전체 부피를 1차 증류수로 1mM 용액의 9배로 정용하여 반응액을 제조하였다. 반응액 630μl, 추출물 시료와 대조군으로 사용할 시료 용매 그리고 양성대조군으로 1mM 퀘르세틴(quercetin) 70μl를 첨가한 후 3초간 볼텍싱(vortexing)하여 혼합용액을 제조하였다.
혼합용액을 37℃에서 1시간 동안 반응시킨 후 그리스 시약(A:B=1:1, A: 1% sulfanilic acid in 30% acetic acid, B: 1% naphthylamine in 30% acetic acid) 을 첨가하였다.
반응액 100μl, 2% acetic acid 500μl, 그리스 시약 40μl를 넣고 3초간 볼텍싱한 후 25℃에서 15분간 반응시켰다. 반응이 끝난 후 아조 화합물의 흡광도를 520nm에서 분광기로 측정하여 잔존하는 아질산염의 양을 비교하였다. 대조군으로는 증류수 40μl를 첨가하여 상기와 동일한 방법으로 실험을 진행하였으며 하기 산출식에 근거하여 흡광도 차이에 의한 백분율로 산출하였다. 각 실험값은 3차례 반복하여 평균값을 대입하였고 그 결과를 표 5와 도 4에 나타내었다.
아질산염 소거능(%) = {1-(A-C)/B} × 100
A : NaNO2 용액에 추출물 시료와 그리스 시약을 첨가했을 때 흡광도
B : NaNO2 용액에 그리스 시약을 첨가했을 때 흡광도
C : NaNO2 용액에 추출물 시료와 증류수를 첨가한 흡광도
도 2를 참조하면, 참배암차즈기 추출물이 농도 의존적으로 아질산염 농도를 낮추는 것을 확인할 수 있다.
<실시예 5. IL-4 분비 억제 활성 측정>
참배암차즈기 추출물에 대한 항알레르기에 대한 효과를 확인할 수 있는 IL-4 분비 억제 활성을 측정하는 실험을 실시하였다.
비만세포가 활성화되면 비만세포는 탈과립을 통하여 아라키돈산 대사물질과 염증반응을 유발하는 다양한 사이토카인(cytokine)이 분비되는데, 그 중 IL-4(interleukin-4)는 B-cell을 활성화하여 Immunoglobulin E (IgE) 항체를 생성하며, Th2 세포의 분화를 촉진시키므로 천식과 같은 알레르기 질환에서 중요한 역할을 하는 것으로 보고되어 있다. TNF-α는 비만세포와 대식세포 등에서 생성되어 많은 염증반응을 유발하는 인자로, 알레르기 염증반응에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 사이토카인이다.
따라서 본 실험에서는 비만세포에서 분비되는 염증성 사이토카인 IL-4(interleukin-4)의 양을 측정하기 위해 IL-4 production assay를 이용하였으며, 이를 통해 참배암차즈기 추출물이 IL-4의 생성을 얼마나 억제하는지 확인하였다. 상세하게는 1차 사이토카인 항체가 코팅되어 있는 plate에 세포배양액을 넣고 검정용 항체를 첨가하면 발색 반응을 일으키는 흡광도 측정을 통해 IL-4의 농도를 확인할 수 있었다.
먼저 RBL-2H3 세포에 12.5㎍/㎖의 PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate)와 125nM 이오노마이신(ionomycin, Io)을 처리후 여기에 실시예 1의 참배암차즈기 추출물을 농도별로 처리하였으며, 이에 대한 IL-4의 농도변화 결과를 도 3에 나타내었다.
실험방법을 자세히 설명하면 하기와 같다. RBL-2H3 cells를 10% FBS를 포함한 DMEM에 현탁하였다. 48 well plate (Corning, NY, USA)에 각 well 당 1.5×105 cells/ well의 세포 수가 되도록 분주하여 37℃ 5% CO2 incubator에서 4시간 배양하였다. Plate 내 media를 제거하고 시료를 농도별로 처리한 후 5시간 동안 배양하였다. 배양액을 제거 한 후 12.5 μg/ml의 PMA와 125 nM의 ionomysin을 처리한 후 5시간 동안 incubator에서 incubation하였다. Plate를 ice에 두고 well에 있는 배지를 수집하여 ELISA kit(Histamine ELISA kit, Enzo #ENZ-KIT140)를 이용하여 측정하였다. 대조군(용매 대조군-DMSO), 음성대조군(PMA, ionomysin 동시 처리군), 시료군으로 측정. 각 실험수치는 최소 3차례 반복하여 평균을 구하였다.
도 3을 참고하면, 실시예 1의 참배암차즈기 추출물은 IL-4의 분비를 현저하게 억제하는 것을 확인할 수 있으며, 이는 참배암차즈기 추출물이 항알레르기 효과를 갖는다는 것을 알 수 있다.
실시예 6. Histamine release 측정 실험
Histamine release assay는 비만세포에서 분비되는 히스타민의 양을 측정하는 방법으로 히스타민 생성 억제 능력을 확인할 수 있다. 알레르기 즉시 반응의 지표인 탈과립에 대한 억제 효과를 확인하기 위하여 히스타민의 분비를 측정하였다. 보다 상세하게는 Histamine release assay는 전기공여체인 WST-1을 포함한 Colorimetric Probe mix와 히스타민이 반응하면 formazan 형태로 변하는 원리를 이용하여 측정하는 실험이며, 측정한 흡광도는 히스타민의 농도를 반영한 것이다.
이러한 원리를 이용하여 rat 유래 호염기구성 백혈병 세포(Rat basophilic leukemia cell)의 히스타민 방출 억제 능력을 측정하였다.
RBL-2H3 cells를 10%(v/v) FBS를 포함한 DMEM에 현탁하고, 48 well plate (Corning, NY, USA)에 각 well 당 1.5×105 cells/ well의 세포 수가 되도록 분주하여 37℃ 5% CO2 incubator에서 4시간 배양하였다. Plate 내 media를 제거하고 시료를 처리한 후 5시간 동안 배양하였다. 배양액을 제거 한 후 12.5 μg/ml의 PMA와 125 nM의 ionomysin을 처리한 후 5시간 동안 incubator에서 incubation하였다. Plate를 ice에 두고 well에 있는 배지를 수집하여 ELISA kit(Histamine ELISA kit, Enzo #ENZ-KIT140)를 이용하여 측정하였다. ※ 대조군(용매 대조군-DMSO), 음성대조군(PMA, ionomysin 동시 처리군), 시료군으로 측정. 각 실험수치는 최소 3차례 반복하여 평균을 구하였다.
도 4를 참고하면, RBL-2H3 세포에 12.5㎍/㎖의 PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate)와 125nM의 이오노마이신(ionomycin)을 처리하였을 때 히스타민 분비량이 증가한 것으로 보아 비만세포 활성화에 의한 히스타민 분비가 증가한다는 사실을 확인할 수 있으며, 실시예 1의 참배암차즈기 추출물이 히스타민의 농도를 현저하게 낮추는 것을 확인할 수 있어 항알레르기 효과가 뛰어나다는 것을 알 수 있다.
<제제예 1. 화장료 제조>
제제예 1-1. 스킨의 제조
본 발명의 참배암차즈기 추출물 5.0 중량%, 프로필렌글리콜 5.2 중량%, 올레일알코올 1.5 중량%, 에탄올 3.2 중량%, 폴리솔베이트 20 3.2 중량%, 벤조페논-9 2.0 중량%, 카르복실비닐폴리머 1.0 중량%, 글리세린 3.5 중량% 향 미량, 방부제 미량, 정제수 잔량의 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 스킨을 제조하였다.
제제예 1-2. 로션의 제조
본 발명의 참배암차즈기 추출물 5.0 중량%, 세토스테아릴 알코올 1.0 중량%, 글리세릴모노스테아레이트 0.8 중량%, 소르비탄모노스테아레이트 0.3 중량%, 폴리솔베이트 60 1.0 중량%, 미네랄오일 5.0 중량%, 사이크로메치콘 3.0 중량%, 디메치콘 0.5 중량%, 알란토인 0.1 중량%, 글리세린 5.0 중량%, 알코올 2 중량%, 프로필렌글리콜 3.0 중량%, 향 미량, 방부제 미량, 정제수 잔량의 함량으로 통상적인 방법을 사용하여 로션을 제조하였다.
제제예 1-3. 에센스의 제조
본 발명의 참배암차즈기 추출물 5.0 중량%, 프로필렌글리콜 4.0 중량%, 글리세린 3.0 중량%, 알란토인 0.5 중량%, EDTA-2Na 0.01 중량%, 에탄올 5.0 중량%, 트리에탄올아민 1.5 중량%, 스쿠알란 2.0 중량%, 밀랍 2.5 중량%, 폴리솔베이트60 중량%, 카르복실비닐폴리머 1.0 중량%, 솔비탄세스퀴올레이트 2.5 중량%, 향 미량, 방부제 미량, 정제수 잔량의 함량으로 통상적인 방법을 사용하여 에센스를 제조하였다.
제제예 1-4. 크림의 제조
본 발명의 참배암차즈기 추출물 10.0%, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트 0.7%, 솔비탄세스퀴올레이트 0.5%, 세틸알코올 0.6%, 스테아린산 0.75%, 글리세릴모노스테아레이트 0.6%, 유동파라핀 15.0%, 카르복시비닐폴리머 10.0%, 트리에탄올아민 0.2%, 향 미량, 방부제 미량, 정제수 잔량의 함량으로 통상적인 방법을 사용하여 크림을 제조하였다.
<제제예 2. 식품 제조>
제제예 2-1. 조리용 양념의 제조
본 발명의 참배암차즈기 추출물을 조리용 양념에 1 중량%로 첨가하여 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.
제제예 2-2. 밀가루 식품의 제조
본 발명의 참배암차즈기 추출물을 밀가루에 0.1 중량%로 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
제제예 2-3. 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명의 참배암차즈기 추출물을 스프 및 육즙에 0.1 중량%로 첨가하여 건강 증진용 수프 및 육즙을 제조하였다.
제제예 2-4. 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 참배암차즈기 추출물을 우유에 0.1 중량%로 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
제제예 2-5. 야채주스의 제조
본 발명의 참배암차즈기 추출물 0.5g을 토마토주스 또는 당근주스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채주스를 제조하였다.
제제예 2-6. 과일주스의 제조
본 발명의 참배암차즈기 추출물 0.1g을 사과주스 또는 포도주스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일주스를 제조하였다.
<제제예 3. 약학적 제제>
제제예 3-1. 정제의 제조
본 발명의 참배암차즈기 추출물 200g을 락토오스 175.9g, 감자전분 180g 및 콜로이드성 규산 32g과 혼합하였다. 이 혼합물에 10% 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄해서 14 메쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조시키고 여기에 감자전분 160g, 활석 50g 및 스테아린산 마그네슘 5g을 첨가해서 얻은 혼합물을 정제로 만들었다.
제제예 3-2. 주사액제의 제조
본 발명의 참배암차즈기 추출물 1g, 염화나트륨 0.6g 및 아스코르브산 0.1g을 증류수에 용해시켜서 100㎖를 만들었다. 이 용액을 병에 넣고 20℃에서 30분간 가열하여 멸균시켰다.
Claims (9)
- 참배암차즈기(Salvia chanryoenica Nakai) 추출물을 함유하는 항알레르기 조성물로서,
상기 추출물이 참배암차즈기 중량 대비 10배 부피의 70(v/v)% 에탄올 수용액을 가하여 20~40℃에서 24시간 동안 추출하고 초음파 처리하여 얻은 추출물이고,
히스타민 분비 억제 효능이 있으며,
알레르기 유발물질로 인해 비만 세포(mast cell)에서 증가된 IL-4(interleukin-4) 분비가, 상기 추출물 50ppm 처리로 인해, 알레르기 유발물질 비처리군 수준으로 억제된 것을 특징으로 하는 항알레르기용 조성물. - 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 추출물은 아질산염의 소거능 또는 산화질소의 소거능이 있는 것을 특징으로 하는 항알레르기용 조성물. - 삭제
- 참배암차즈기(Salvia chanryoenica Nakai) 추출물을 함유하는 알레르기 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물로서,
상기 추출물이 참배암차즈기 중량 대비 10배 부피의 70(v/v)% 에탄올 수용액을 가하여 20~40℃에서 24시간 동안 추출하고 초음파 처리하여 얻은 추출물이고,
히스타민 분비 억제 효능이 있으며,
알레르기 유발물질로 인해 비만 세포(mast cell)에서 증가된 IL-4(interleukin-4) 분비가, 상기 추출물 50ppm 처리로 인해, 알레르기 유발물질 비처리군 수준으로 억제된 것을 특징으로 하는 알레르기 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물. - 참배암차즈기(Salvia chanryoenica Nakai) 추출물을 함유하는 알레르기 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품으로서,
상기 추출물이 참배암차즈기 중량 대비 10배 부피의 70(v/v)% 에탄올 수용액을 가하여 20~40℃에서 24시간동안 추출하고 초음파 처리하여 얻은 추출물이고,
히스타민 분비 억제 효능이 있으며,
알레르기 유발물질로 인해 비만 세포(mast cell)에서 증가된 IL-4(interleukin-4) 분비가, 상기 추출물 50ppm 처리로 인해, 알레르기 유발물질 비처리군 수준으로 억제된 것을 특징으로 하는 알레르기 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품. - 삭제
- 삭제
- 참배암차즈기(Salvia chanryoenica Nakai) 추출물을 함유하는 알레르기 질환의 예방 및 개선용 화장료 조성물로서,
상기 추출물이 참배암차즈기 중량 대비 10배 부피의 70(v/v)% 에탄올 수용액을 가하여 20~40℃에서 24시간 동안 추출하고 초음파 처리하여 얻은 추출물이고,
히스타민 분비 억제 효능이 있으며,
알레르기 유발물질로 인해 비만 세포(mast cell)에서 증가된 IL-4(interleukin-4) 분비가, 상기 추출물 50ppm 처리로 인해, 알레르기 유발물질 비처리군 수준으로 억제된 것을 특징으로 하는 알레르기 질환의 예방 및 개선용 화장료 조성물.
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|---|---|---|---|---|
| KR101940042B1 (ko) | 2017-05-11 | 2019-01-21 | 주식회사 케이티앤지 | 곰보배추 및 홍삼으로 구성된 조합 추출물을 유효성분으로 함유하는 호흡기염증 질환의 예방 및 치료용 조성물 |
-
2020
- 2020-12-04 KR KR1020200167961A patent/KR102636204B1/ko active IP Right Grant
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|---|
| 한국약용작물학회지, 24(5), 2016, pp.401-407* |
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