KR102272420B1

KR102272420B1 - 황기 및 형개의 복합 추출물을 포함하는 피부염의 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR102272420B1
Application number: KR1020190111946A
Authority: KR
Inventors: 양웅모; 김미혜
Original assignee: 경희대학교 산학협력단
Priority date: 2019-09-10
Filing date: 2019-09-10
Publication date: 2021-07-02
Also published as: KR20210030616A

Abstract

본 발명은 황기 및 형개의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부염의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로서, 상기 조성물은 피부조직에 침투된 비만세포의 수를 감소시키고, NGF(nerve growth factor) 및 TrkA(tropomyosin receptor kinase A)의 발현을 감소시키며, Raf, MEK(mitogen-activated protein kinase kinase) 및 ERK(mitogen-activated protein kinase)의 인산화를 감소시키고, 상기 조성물은 전-염증성 사이토카인의 발현을 감소시키고, 항-염증성 사이토카인의 발현을 증가시키며, Th2 특이적 사이토카인의 발현을 감소시키는 효과가 있어, 피부염의 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

황기 및 형개의 복합 추출물을 포함하는 피부염의 예방 또는 치료용 조성물{Composition for preventing or treating dermatitis comprising mixed extracts of Astragalus membranaceus and Schizonepeta tenuifolia}

본 발명은 황기 및 형개의 복합 추출물을 포함하는 피부염의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

아토피성 피부염은 만성적인 재발성 피부 질환으로서, 관련 증상으로는 소양증 및 홍반성 구진, 알레르기 질환, 건조증 등이 있다. 아토피성 피부염의 발생원인은 환경적 원인과 유전적 원인으로 나뉠 수 있으며, 현재까지 명확한 소인은 밝혀지지 않았으나, 외부 항원의 작용으로 인해 면역 관련 인자들이 과민하게 반응하는 것으로 보고되고 있다. 최근 연구에 의하면, 아토피성 피부염의 병인으로 피부의 표면 장벽 이상 징후에 대한 근거가 보고된 바 있으며, 이에 각질층 구성 인자의 면역학적 기전에 대한 연구가 활발히 수행되고 있다.

피부 표피의 수분 보유량은 정상인의 경우 약 15% 정도이며, 수분 보유량이 10% 이하로 떨어지는 경우에는 각질층의 세라마이드 농도가 감소되어 건조증 및 소양증을 유발하는 것으로 알려져 있다. 또한, 이러한 손상은 2차적인 피부질환의 원인으로 알려진 알레르기 항원과 병원균의 침투로 인해 세포 매개성 염증에 관여하는 것으로 알려져 있다.

아토피성 피부염은 영유아기에서 주로 관찰되며, 성인기까지 지속되거나 발병할 수 있다. 현재 산업화가 진행 중인 중진국 및 선진국에서 아토피성 피부염의 유병률이 빠르게 증가하고 있으며, 난치성 피부질환으로 보고되고 있다. 아토피성 피부염에는 면역 병리학적 관련 인자들이 상호작용하여 피부 염증에 관여하며, 대표적인 관련 인자로 T 림프구(T lymphocyte), 면역글로불린 E(Immunoglobulin E; IgE), Th1 및 Th2 세포에서 발현되는 사이토카인(cytokines) 등이 있다.

아토피성 피부염은 혈청 IgE의 비정상적인 항진으로 인한 외인성과, 정상적인 IgE의 수준에도 불구하고 아토피성 피부염과 유사한 병리학적 증상의 내인성으로 구분된다. IgE는 대응하는 항원과 반응하여 랑게르한스 세포(Langerhans cells)에서 T 림프구로 항원의 전달을 촉진시키며, T 림프구는 세포 매개 면역반응으로 병변의 유발과 면역반응의 지속성을 유지시킨다. T 세포에서 생성되는 사이토카인에 의해 Th1 및 Th2 세포 유형으로 분화되며, Th1 세포는 TNF, IL-2, IFN-γ 등의 사이토카인을 발현하여 대식세포를 활성화시켜 아급성 피부 염증을 유도한다. Th2 세포는 IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 등의 사이토카인을 발현하여 과민반응을 유발하며, 호산구(eosinophil) 및 비만세포(mast cell)의 분화를 유도하고 IgE 생성 작용을 더욱 증가시키는 경향이 있다. 일반적으로 세포 간의 상호작용으로 면역반응의 균형을 유도하지만, 아토피성 피부염에는 Th2 세포의 분화와 관련된 사이토카인의 증가로 인해 아토피성 피부염의 염증 반응이 유발 및 촉진된다. Th1 세포의 유형에서 생성되는 사이토카인 중 하나인 인터페론-감마(interferon-gamma; IFN-γ)는 지연형 면역반응을 유도하고, Th2 세포의 유형에서 생성되는 사이토카인 중 하나인 IL-4는 IgE의 합성과 비만세포의 분화를 유도함으로써, 염증반응과 면역 병리학적 증상을 유발하게 된다. 따라서, 아토피성 피부염의 면역 기전에서는 Th2 세포의 상대적 촉진으로 Th1 세포의 발현이 억제된다. 이러한 체액성 면역반응이 피부의 아토피성 염증반응에 영향을 미치게 된다. 결국, 아토피성 피부염은 IgE 농도 변화와 IL-4와 같은 사이토카인의 발현 기전이 치료 및 완화에 중요한 지표로 볼 수 있다.

아토피성 피부염에 사용되는 약물은 주로 면역 억제제, 국소 스테로이드 제제, 항히스타민제 등이 있다. 면역 억제제는 간과 신장에 독성을 유발하며, 세포 전해질 균형 양상에 부작용을 유발하기도 한다. 국소 스테로이드 제제는 단기성 처방 약물 제제로 피부 위축, 피부 경화 등의 부작용이 보고된 바 있으며, 특히 피부의 질환 발병과 만성적인 피부 질환의 위험으로 장기간 사용을 제한하는 추세이다. 항히스타민제는 아토피성 피부염의 체액성 면역반응에서 비만세포와 관련된 약물로서 아토피성 피부염의 개선에는 그 한계성이 보고된 바 있다. 따라서, 아토피성 피부염의 개선을 위한 안전성이 확보된 새로운 약물 제제의 필요성이 요구되고 있는 실정이다.

황기(Astragalus membranaceus BUNGE)는 높이가 1m에 달하고 전체에 잔털이 있으며, 잎은 6∼11쌍의 소엽으로 구성된 기수1회우상복엽이다. 꽃은 7, 8월에 피고, 길이 15 ∼ 18 ㎜로서 연한 황색이며, 긴 꽃대에 여러 개의 꽃이 어긋나며 피는 꽃차례를 이룬다. 주로 뿌리를 약재로 사용하며, 동물실험에서는 중추신경계통의 흥분작용과 이뇨작용도 현저하였으며, 흰쥐에게 대량의 분말을 투여하였을 때에는 신염의 발생을 억제 시키고, 단백뇨와 콜레스테롤혈증의 발생도 지연시켰으며, 혈압강하작용도 인정되었다. 또한, 자궁하수·위하수·탈홍·자궁출혈에도 널리 이용되며, 체력을 항진시켜 주고 전신 근육의 긴장도를 높여주는 것으로 보고되고 있다.

형개(Schizonepeta tenuifolia var. japonica)는 꿀풀과의 한해살이풀로서, 키는 60~100 cm 까지 자라고, 줄기는 녹자색이며 털이 있다. 잎은 마주나고, 3~5갈래로 갈라지며, 잎맥이 뚜렷하지 않다. 꽃은 8~9월에 자백색으로 피고, 줄기 위쪽에 길이 5~25 cm의 층으로 달린다. 열매는 길이 1.5 mm, 지름 0.8 mm로서 흑갈색으로 익는 특징이 있다. 약재로 사용되는 형개는 형개의 지상부를 말린 것으로서, 여름철 꽃대가 올라와 개화가 끝날 무렵 전초를 베어 바람이 잘 통하는 그늘에서 말린다. 줄기나 잎이 적고 꽃대 부분이 많은 것이 약재로서 양호한 것으로 알려져 있다. 형개는 향이 강렬하고 맛은 매우며 성질은 따뜻하고, 폐경, 간경에 작용하는 것으로 알려져 있다.

한국등록특허 제10-1892865호

본 발명의 목적은 황기 및 형개의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 황기 및 형개의 복합 추출물를 유효성분으로 포함하는 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 황기 및 형개의 복합 추출물를 유효성분으로 포함하는 피부염의 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 황기 및 형개의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 복합 추출물은 물, 유기 용매 또는 이들의 혼합물에 의해 추출된 것일 수 있고, 상기 유기 용매는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 아세톤, 에테르, 벤젠, 클로로포름, 에틸아세테이트, 메틸렌클로라이드, 헥산 및 시클로헥산으로 이루어진 그룹에서 선택되는 어느 하나 이상인 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 복합 추출물은 황기 및 형개의 추출물을 1:100 내지 100:1의 중량비로 혼합한 것일 수 있고, 바람직하게는 1:50 내지 50:1 중량비로 혼합한 것일 수 있고, 더욱 바람직하게는 1:10 내지 10:1의 중량비로 혼합한 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 피부염은 아토피성 피부염(atopic dermatitis), 접촉성 피부염(contact dermatitis), 지루성 피부염(seborrhoic dermatitis) 및 알러지성 접촉피부염(allergic contact dermatitis)으로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 피부조직에 침투된 비만세포의 수를 감소시키는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 NGF(nerve growth factor) 및 TrkA(tropomyosin receptor kinase A)의 발현을 감소시키는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 Raf, MEK(mitogen-activated protein kinase kinase) 및 ERK(mitogen-activated protein kinase)의 인산화를 감소시키는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 전-염증성 사이토카인의 발현을 감소시키고, 항-염증성 사이토카인의 발현을 증가시키며, Th2 특이적 사이토카인의 발현을 감소시키는 것일 수 있다.

또한, 본 발명은 황기 및 형개의 복합 추출물를 유효성분으로 포함하는 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

또한, 본 발명은 황기 및 형개의 복합 추출물를 유효성분으로 포함하는 피부염의 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 조성물은 피부조직에 침투된 비만세포의 수를 감소시키고, NGF(nerve growth factor) 및 TrkA(tropomyosin receptor kinase A)의 발현을 감소시키며, Raf, MEK(mitogen-activated protein kinase kinase) 및 ERK(mitogen-activated protein kinase)의 인산화를 감소시키고, 상기 조성물은 전-염증성 사이토카인의 발현을 감소시키고, 항-염증성 사이토카인의 발현을 증가시키며, Th2 특이적 사이토카인의 발현을 감소시키는 효과가 있어, 피부염의 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 DNCB에 의해 유발된 알러지성 접촉피부염의 병소(lesion)를 가진 쥐(아토피성 피부염 동물모델)에 덱사메타손(DEX, 양성 대조군), 황기(AM), 형개(ST) 또는 복합물(AM+ST)을 처리한 후, 피부염 지수(dermatitis score)를 측정한 결과이다 (데이터는 평균 ± SEM으로 나타냄 (n=5); ^### p < 0.001: 정상 대조군(NOR)과 비교한 경우; 및 ^* p < 0.05, ^** p < 0.01 및 ^*** p < 0.001: 질병 대조군(DNCB)와 비교한 경우).
도 2는 DNCB에 의해 유발된 알러지성 접촉피부염의 병소(lesion)를 가진 쥐(아토피성 피부염 동물모델)에 덱사메타손(DEX, 양성 대조군), 황기(AM), 형개(ST) 또는 복합물(AM+ST)을 처리한 후, 피부조직을 H&E로 염색하여 표피(epidermis) 및 진피(dermis)의 두께를 측정한 결과이다 (x100; ^### p < 0.001: 정상 대조군(NOR)과 비교한 경우; 및 ^* p < 0.05 및 ^*** p < 0.001: 질병 대조군(DNCB)와 비교한 경우).
도 3은 DNCB에 의해 유발된 알러지성 접촉피부염의 병소(lesion)를 가진 쥐(아토피성 피부염 동물모델)에 덱사메타손(DEX, 양성 대조군), 황기(AM), 형개(ST) 또는 복합물(AM+ST)을 처리한 후, 피부조직을 Toluidine blue로 염색하여 비만세포의 수를 측정한 결과이다 (x200, scale bar: 100 μm; ^### p < 0.001: 정상 대조군(NOR)과 비교한 경우; 및 ^*** p < 0.001: 질병 대조군(DNCB)와 비교한 경우).
도 4는 DNCB에 의해 유발된 알러지성 접촉피부염의 병소(lesion)를 가진 쥐(아토피성 피부염 동물모델)에 덱사메타손(DEX, 양성 대조군), 황기(AM), 형개(ST) 또는 복합물(AM+ST)을 처리한 후, 쥐의 등(dorsal)에서 NGF(nerve growth factor)의 발현량을 웨스턴블럿을 통해 측정한 결과이다 (^### p < 0.001: 정상 대조군(NOR)과 비교한 경우; 및 ^** p < 0.01 및 ^*** p < 0.001: 질병 대조군(DNCB)와 비교한 경우).
도 5는 DNCB에 의해 유발된 알러지성 접촉피부염의 병소(lesion)를 가진 쥐(아토피성 피부염 동물모델)에 덱사메타손(DEX, 양성 대조군), 황기(AM), 형개(ST) 또는 복합물(AM+ST)을 처리한 후, 쥐의 등(dorsal)에서 TrKA 발현량, Raf, MEK 및 ERK 인산화 정도를 웨스턴블럿을 통해 측정한 결과이다 (^### p < 0.001: 정상 대조군(NOR)과 비교한 경우; 및 ^** p < 0.01 및 ^*** p < 0.001: 질병 대조군(DNCB)와 비교한 경우).
도 6은 DNCB에 의해 유발된 알러지성 접촉피부염의 병소(lesion)를 가진 쥐(아토피성 피부염 동물모델)에 덱사메타손(DEX, 양성 대조군), 황기(AM), 형개(ST) 또는 복합물(AM+ST)을 처리한 후, 전-염증성 사이토카인인 IL-6 및 TNF-α (A); 항-염증성 사이토카인인 IL-10 및 TGF-β (B); 및 Th2 특이적 사이토카인인 IL-4, IL-13 및 IL-31 (C)의 발현량을 웨스턴블럿을 통해 측정한 결과이다 (^### p < 0.001: 정상 대조군(NOR)과 비교한 경우; 및 ^* p < 0.05, ^** p < 0.01 및 ^*** p < 0.001: 질병 대조군(DNCB)와 비교한 경우).

본 발명에 따른 복합물은 당업계에 공지된 추출 및 분리하는 방법을 사용하여 천연으로부터 추출 및 분리하여 수득한 것을 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의된 "복합 추출물" 또는 "복합물(Formula)"은 적절한 용매를 이용하여 황기(Astragalus membranaceus BUNGE) 및 형개(Schizonepeta tenuifolia var. japonica)로부터 추출한 추출물이며, 예를 들어, 황기 및 형개의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함한다.

상기 황기 및 형개의 복합물을 추출하기 위한 적절한 용매로는 약학적으로 허용되는 유기용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있으며, 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어, 정제수, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있다.

추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다. 본 발명의 복합물의 제조 방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다.

예를 들면, 본 발명의 조성물에 포함되는 복합물은 상기한 열수 추출 또는 용매 추출법으로 추출된 1차 추출물을 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조할 수 있다. 또한, 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있다.

따라서, 본 발명에 있어서 복합물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획물 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.

본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명에서 용어, "약학적으로 허용가능한"이란 상기 조성물에 노출되는 세포나 인간에게 독성이 없는 특성을 나타내는 것을 의미한다. 상기 담체는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제, 기제, 부형제, 윤활제 등 당업계에 공지된 것이라면 제한없이 사용할 수 있다.

또한, 본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 나아가, 연고제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 크림제, 산제, 현탁제, 겔제 또는 젤의 형태의 피부 외용제의 형태로 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 싸이코트리아 루브라 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명의 용어 "투여"란 적절한 방법으로 개체에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며 상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다.

상기 용어, "개체"란 인간을 포함한 쥐, 생쥐, 가축 등의 모든 동물을 의미한다. 바람직하게는, 인간을 포함한 포유동물일 수 있다.

상기 용어, "약학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 성별, 연령, 체중, 건강 상태, 질병의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로, 및 배출 비율, 치료 기간, 배합 또는 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 투여는 상기 권장 투여량을 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.

본 발명의 식품 조성물은 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있으며, 기능성 식품, 건강기능식품 등 당업계에 알려진 용어와 혼용 가능하다.

본 발명의 용어, "기능성 식품"은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.

본 발명의 용어, "건강기능식품"은 건강보조의 목적으로 특정성분을 원료로 하거나 식품 원료에 들어있는 특정성분을 추출, 농축, 정제, 혼합 등의 방법으로 제조, 가공한 식품을 말하며, 상기 성분에 의해 생체방어, 생체리듬의 조절, 질병의 방지와 회복 등 생체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발휘할 수 있도록 설계되고 가공된 식품을 말하는 것으로서, 상기 건강식품용 조성물은 질병의 예방 및 질병의 회복 등과 관련된 기능을 수행할 수 있다.

본 발명의 조성물이 사용될 수 있는 식품의 종류에는 제한이 없다. 아울러 본 발명의 조성물은 당업자의 선택에 따라 식품에 포함될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림 류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 추출물 및 이의 분획물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다.

또한, 본 발명에 적용될 수 있는 식품에는 예컨대, 특수영양식품(예: 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예: 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예: 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예:스낵류), 유가공품(예: 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예: 과실, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등) 등 모든 식품을 포함할 수 있다.

본 발명의 건강기능식품 조성물이 음료의 형태로 사용될 경우에는 통상의 음료와 같이 여러 가지 감미제, 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 외에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 통상적으로 사용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 실험재료 및 방법

1.1. 복합물(formula)의 준비

본 발명에 사용된 황기 및 형개는 정도생약국(Seoul, Korea)에서 구입하였다. 상기 황기 및 형개는 10배수 증류수로 각각 추출한 후, 그 액을 여과 및 농축 후 동결건조하여 사용하였다. 황기 및 형개의 복합 추출물(이하, 복합물(formula))은 황기 추출물과 형개 추출물을 3:2의 중량비로 혼합하여 준비하였다. 얻어진 황기, 형개 및 복합물의 동결건조품 표본(Voucher specimen: #AM-W100-2018, #ST-W100-2018, #Derma-H-2018)은 -20℃로 보관하였다.

1.2. 아토피성 피부염 동물모델 및 피부염 지수(dermatitis score) 측정방법

본 발명자들은 아토피성 피부염 동물모델을 준비하기 위하여, 체중 19~21 g인 5 주령 수컷 마우스 C57BL/6J를 구매하여, 12시간의 주기의 낮과 밤이 교대되며 22 ± 2℃의 실내온도와 50 ± 5%의 습도의 환경에서 사육하였다. 먹이와 물은 자유롭게 먹도록 하였고, 1 주일간 사육하며 7 일간의 적응기를 거친 후 제모기로 등 부위를 제모하고, 미세상처가 자연 치유되도록 24 시간 동안 방치하였다. 상기 마우스의 아토피성 피부염을 유도를 위해 1% DNCB (2,4-dinitrochlorobenzene) 용액을 200 μL씩 3 일 동안 하루에 한 번씩 동일한 등 부위에 감작(sensitization) 시켰고, 정상 대조군에는 vehicle (acetone : olive oil = 4 : 1)을 처리하였다. 4 일 동안의 잠복기 후, 정상 대조군을 제외한 모든 군에 0.5% DNCB 용액 200 μL를 도포하여 2 번째 감작을 유도하였다. 4% SDS 용액을 처리하여 피부 흡수를 용이하게 한 후, 30 mg/mL 황기 추출물(AM), 20 mg/mL 형개 추출물(ST) 또는 50 mg/mL 복합물(AM+ST)를 200 μL씩 도포하였다. 양성대조군인 덱사메타손(dexamethasone)은 10 μM 농도로 도포하였다. 0.5% DNCB 용액은 추출물 처리 3시간 후 처리되었다. Sample 처리 및 2 차 감작은 1 일 1 회 11 일 동안 처리되었으며, 실험 과정은 총 18 일 동안 진행되었다. 12 시간 단식 후인 19 일째 되는 날 실험 목적에 따라 생쥐를 희생하였다.

피부염 지수(dermatitis score)는 (1) 홍반 / 출혈, (2) 건조 / 흉터 (3) 부종 및 (4) 침식 / 탈진의 정도를 0 (정상), 1 (경증), 2 (보통) 또는 3 (심각)으로 평가하였다. 피부염 지수는 그룹에 대한 정보의 제공 없이 3 명의 연구원에 의해 측정되었다. 별개의 점수의 합을 피부염 점수로 기재하였다.

1.3. 피부조직의 조직학적 측정방법

피부조직 표본을 10% formalin에서 24 시간 동안 고정하고, 충분한 수세(washing) 과정을 통해 조직에 침투된 고정액을 충분히 제거하였다. 이후, 알코올 70%, 90%, 95%, 100% 농도 순으로 탈수(dehydration) 과정을 거쳐 조직의 수분을 제거 한 후, xylene을 투명제로 하여 파라핀 블록(paraffin block)을 제작하였다. 완성된 파라핀 블록은 4 μm 간격으로 박절(microtome cutting)하여 절편을 만든 후, 탈 파라핀(deparaffinization)과 함수(hydration) 과정을 거친 후, H&E (hematoxylin & eosin) 용액으로 염색을 시행하였다. 염색된 슬라이드는 광학현미경으로 400 배율에서 관찰되었으며, 표피와 진피 두께 분석을 위하여 Image J program을 사용하였다.

1.4. 비만세포(mast cell)의 침투 측정방법

상기 준비된 피부조직 절편을 toluidine blue 염색을 통하여 진피 내의 비만세포(Mast cell) 침윤을 관찰하여 비만세포의 수를 카운팅하였다. 무작위로 선정된 5장의 측정 이미지는 광학현미경에서 100 배율에서 관찰되었다.

1.5. Western blot analysis

Protease inhibitors cocktail이 포함된 RIPA assay buffer (50 mM Tris-HCl (pH 7.6), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% sodium deoxycholate, 0.1% SDS, 2 mM EDTA)를 사용하여 피부조직으로부터 단백질을 추출하였다. 생쥐 등 피부 조직(n=5/group)은 buffer와 함께 분쇄되었으며 추출한 단백질은 Dc Protein assay kit를 이용하여 30 μg씩 같은 양을 정량하여 실험에 사용하였고, SDS 12%-polyacrylamide 겔을 이용하여 전기영동을 통해 단백질을 분리하였다. 분리한 단백질은 Nitrocellulose 막으로 이동시킨 후, 5% BSA (in TBS-T)를 이용하여 blocking시키고 TBS-T로 15분간 3번 세척 하였다. 1차 항체인 Anti-β-actin, -NGF, -TrKA, -Raf, -MEK, -ERK (in TBS-T, 1:1000)를 처리하여 4 ℃에서 overnight binding시켰다. TBS-T로 15분간 3번 세척하고 HRP (horseradish-peroxidase)가 붙어있는 goat-anti-rabbit 혹은 goat-anti-mouse 2차 항체를 TBS-T에 1:2000으로 희석하여 넣고 실온에서 1 시간 동안 처리한 후 ECL kit를 이용하였다. LAS Image Gauge 프로그램을 이용하여 각 밴드의 밀도를 측정하였다.

실시예 2. 피부염 지수 완화 효과

본 발명자들은 복합물의 피부염에 대한 치료 효과를 확인하기 위하여, 피부염이 유발된 쥐의 피부조직에 복합물을 투여한 후, 피부염 지수(dermatitis score)를 측정하는 실험을 수행하였다.

그 결과, DNCB에 의해 피부염이 유발된 쥐에서는 피부염 지수가 6.07 ± 2.35 로 나타났고, DCNB에 의해 피부염이 유발된 쥐에 황기를 처리한 경우 4.93 ± 1.39, 형개를 처리한 경우 4.53 ± 1.09, 복합물을 처리한 경우 4.40 ± 0.80 로 나타났다 (도 1). 즉, 복합물을 처리한 경우 단일 추출물에 비해 DCNB에 의해 유발된 피부염이 완화되는 효과가 있음을 확인하였다. 다만, 양성 대조군인 덱사메타손(DEX)을 처리한 경우는 2.67 ± 0.78 로서, 복합물의 효능이 양성대조군의 효능보다는 피부염의 완화 효과가 크지는 않았다.

실시예 3. 피부조직에서 염증 완화 효과

피부염은 피부조직에 염증이 일어나는 것으로서 염증반응에 의해 피부조직을 이루는 표피(epidermis) 및 진피(dermis)의 두께가 두꺼워지는 특성이 있다. 이에 본 발명자들은 피부염이 유발된 쥐의 피부조직을 H&E로 염색하여 피부조직에 대한 조직학적 특징을 관찰하였다.

그 결과, DNCB에 의해 피부염이 유발된 쥐에서는 피부조직 중 표피의 두께가 155.2 ± 22.3 μm 로 나타났고, DNCB에 의해 피부염이 유발된 쥐에 황기, 형개 또는 복합물을 처리한 경우 각각 77.48 ± 19.2, 70.34 ± 13.5, 69.5 ± 11.6 μm 으로 나타났다 (도 2 왼쪽아래 패널). 즉, 복합물을 처리한 경우 DNCB에 의해 두꺼워진 표피가 다시 회복되는 효과가 있음을 확인하였다. 이는 양성 대조군인 덱사메타손을 처리한 경우(55.27 ± 7.1 μm)와 유사한 회복 효과가 있었다.

또한, 진피의 두께의 경우 DCNB가 처리된 쥐에서는 384.2 ± 57.3 μm 로서 정상 대조군 쥐에 비해 2배 정도 진피가 두꺼워졌고, 양성대조군을 처리한 경우 272.1 ± 56.4 μm 로 감소되었다. 황기, 형개 또는 복합물을 처리한 경우 각각 진피의 두께가 322.8 ± 73.1, 296.4 ± 88.8, 274.0 ± 53.9 μm 로서 복합물을 처리한 군에서 양성 대조군과 유사한 정도로 회복되는 효과가 있음을 확인하였다 (도 2 오른쪽아래 패널).

따라서, 본 발명자들은 복합물을 피부염이 유발된 피부조직에 투여한 경우 단일 추출물에 비해 피부조직의 두께가 정상 수준으로 회복되는 효과가 있음을 확인하였다.

실시예 4. 비만세포 침투 감소 효과

본 발명자들은 피부염이 유발된 쥐의 피부조직에서 비만세포의 침투 여부를 확인하고, 복합물이 침투한 비만세포의 수를 감소시키는 효과가 있는지 확인하는 실험을 수행하였다.

그 결과, DNCB에 의해 피부염이 유발된 쥐의 피부조직에서는 비만세포의 수가 정상 대조군에 비해 8.7배 증가되었으나, DNCB에 의해 피부염이 유발된 쥐에 황기, 형개 또는 복합물을 처리한 경우 비만세포의 수가 각각 38.4%, 43.0%, 49.1% 로 감소되는 효과가 있음을 확인하였다 (도 3).

따라서, 본 발명자들은 복합물을 피부염이 유발된 피부조직에 투여한 경우 단일 추출물에 비해 피부조직에 침투된 비만세포의 수를 감소시키는 효과가 있음을 확인하였다.

실시예 5. NGF(nerve growth factor)의 발현량에 대한 효과

피부염에서는 NGF(nerve growth factor)가 과발현되는 것으로 보고되고 있다. 이에 본 발명자들은 복합물이 NGF의 발현량에 변화를 주는지 여부를 확인하기 위하여 웨스턴블럿을 수행하였다.

그 결과, DNCB에 의해 피부염이 유발된 쥐의 피부조직에서는 NGF의 발현량이 정상 대조군에 비해 2배 정도 증가되는 것으로 확인되었고, DNCB에 의해 피부염이 유발된 쥐에 황기, 형개 또는 복합물을 처리한 경우 NFG의 발현량이 각각 11.8%, 22.1%, 32.5% 로 감소되는 효과가 있음을 확인하였다 (도 4). 특히, 복합물을 처리한 경우에는 양성 대조군인 덱사메타손을 처리한 경우(41.9% 감소)와 유사한 정도로 NFG의 발현량이 감소되는 효과가 있었다.

따라서, 본 발명자들은 복합물을 피부염이 유발된 피부조직에 투여한 경우 단일 추출물에 비해 피부염에서 증가되었던 NGF의 발현량을 감소시키는 효과가 있음을 확인하였다.

실시예 6. 피부염 관련 단백질의 발현량 또는 인산화에 대한 효과

본 발명자들은 피부염와 관련된 TrkA(tropomyosin receptor kinase A) 단백질의 발현량, Raf, MEK(mitogen-activated protein kinase kinase) 및 ERK(mitogen-activated protein kinase) 단백질의 인산화 정도를 확인하기 위하여 웨스턴블럿을 수행하였다.

그 결과, DNCB에 의해 피부염이 유발된 쥐에서는 TrkA의 발현량, Raf, MEK 및 ERK의 인산화가 크게 증가되었고, DNCB에 의해 피부염이 유발된 쥐에 황기, 형개 또는 복합물을 처리한 경우 TrkA 발현량에 있어서는 복합물을 처리한 경우에만 정상 대조군 또는 양성 대조군과 유사한 수준으로 발현량이 감소되는 효과가 있었다 (도 5). Raf 및 MEK에 있어서, 황기, 형개 또는 복합물을 처리한 경우 정상 대조군 또는 양성 대조군과 유사한 수준으로 인산화가 감소되는 효과가 있었다 (도 5). 또한, ERK에 있어서, 황기를 처리한 경우 약간 인산화가 감소되었고, 복합물을 처리한 경우 양성 대조군과 유사한 수준으로 인산화가 감소되는 효과가 있었다 (도 5).

따라서, 본 발명자들은 복합물을 피부염이 유발된 피부조직에 투여한 경우 신호전달 경로에서 증가되었던 TrkA의 발현량, Raf, MEK 및 ERK의 인산화를 감소시키는 효과가 있음을 확인하였다.

실시예 7. 사이토카인의 발현량에 대한 효과

본 발명자들은 복합물의 염증성 사이토카인에 대한 효과를 확인하기 위하여 웨스턴블럿을 통해 사이토카인의 발현량을 측정하는 실험을 수행하였다.

그 결과, DNCB에 의해 피부염이 유발된 쥐에서는 전-염증성 사이토카인으로 알려진 IL(interleukin)-6 및 TNF-α의 발현량이 정상 대조군에 비해 현저하게 증가되었고, DNCB에 의해 피부염이 유발된 쥐에 황기, 형개 또는 복합물을 처리한 경우 IL-6 및 TNF-α가 현저하게 감소되는 효과가 있음을 확인하였다 (도 6A). 특히, 복합물을 처리한 경우에는 양성 대조군인 덱사메타손을 처리한 경우보다 감소되었고, 정상 대조군과 유사한 수준인 것으로 확인되었다.

또한, DNCB에 의해 피부염이 유발된 쥐에서는 항-염증성 사이토카인으로 알려진 IL-10 및 TGF-β의 발현량이 정상 대조군에 비해 현저하게 감소되었고, DNCB에 의해 피부염이 유발된 쥐에 황기, 형개 또는 복합물을 처리한 경우 IL-10 및 TGF-β의 발현량이 증가되는 효과가 있었다 (도 6B).

또한, DNCB에 의해 피부염이 유발된 쥐에서는 Th2 특이적 사이토카인인 IL-4, IL-13 및 IL-31의 발현량이 정상 대조군에 비해 현저하게 증가되었고, NCB에 의해 피부염이 유발된 쥐에 황기, 형개 또는 복합물을 처리한 경우 IL-4, IL-13 및 IL-31의 발현량이 감소되는 효과가 있음을 확인하였다 (도 6C). 특히, IL-31에 있어서, 복합물을 처리한 경우 황기 또는 형개의 단독 추출물에 비해 IL-31의 발현량을 현저하게 감소시키는 효과가 있었고, 이는 양성 대조군보다 더 현저한 감소 효과이며, 정상 대조군과 유사한 수준인 것으로 확인되었다.

따라서, 본 발명자들은 복합물을 피부염이 유발된 피부조직에 투여한 경우 전-염증성 사이토카인을 현저하게 감소시키고, 항-염증성 사이토카인을 현저하게 증가시키며, Th2 특이적 사이토카인을 현저하게 감소시킴으로써 피부염에 대한 치료 효과가 있음을 확인하였다.

Claims

황기(Astragalus membranaceus BUNGE) 및 형개(Schizonepeta tenuifolia var. japonica)의 복합 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부염(dermatitis)의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
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제 1 항에 있어서,
상기 복합 물 추출물은 황기 및 형개의 추출물을 1:100 내지 100:1 중량비로 혼합한 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 피부염은 아토피성 피부염(atopic dermatitis), 접촉성 피부염(contact dermatitis), 지루성 피부염(seborrhoic dermatitis) 및 알러지성 접촉피부염(allergic contact dermatitis)으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 피부조직에 침투된 비만세포의 수를 감소시키는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 NGF(nerve growth factor) 및 TrkA(tropomyosin receptor kinase A)의 발현을 감소시키는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 Raf, MEK(mitogen-activated protein kinase kinase) 및 ERK(mitogen-activated protein kinase)의 인산화를 감소시키는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 전-염증성 사이토카인의 발현을 감소시키고, 항-염증성 사이토카인의 발현을 증가시키며, Th2 특이적 사이토카인의 발현을 감소시키는 것을 특징으로 하는 조성물.
황기 및 형개의 복합 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
황기 및 형개의 복합 물 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부염의 개선용 화장료 조성물.