KR20230111729A - 단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 단삼(Salvia miltiorrhiza) 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 본 발명에 따른 단삼 추출물이 알레르기 질환의 원인인 비만세포의 탈과립을 억제하고 알레르기 동물모델에서 우수한 항알레르기 효과를 나타냄을 확인하였다. 따라서, 본 발명에 따른 단삼 추출물은 종래의 증상회복 위주의 치료와는 달리 비만세포에서의 알레르기 유발물질의 분비를 원천적으로 차단하므로, 다양한 부작용을 제거할 수 있는 의약품, 화장품 또는 건강기능식품의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 조성물{Composition for preventing or treating allergic diseases comprising Salvia miltiorrhiza extract}
본 발명은 단삼(Salvia miltiorrhiza) 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
비만세포 및 혈중 호염구는 여러 알레르기 질환 즉, 알레르기성 비염, 아토피성 피부염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 천식, 음식 알레르기, 꽃가루 알레르기, 아나필락시스 쇼크(anaphylaxis shock) 등을 유발하는 체내 세포로 알려져 있다. 이들 세포는 세포의 표면에 알레르기를 유발하는 항체인 IgE에 대한 수용체(FcεRI)를 가지고 있고, 그것은 알레르기를 유발하는 물질(항원 혹은 알레르겐으로 불림)에 의해 자극을 받아 자신이 가지고 있는 다양한 알레르기를 유발시키는 물질을 세포 바깥으로 분비한다.
알레르기를 치료하는 다양한 방법들이 존재하나, 현재 대부분의 알레르기 치료는 그 원인을 없애기보다는 증상을 완화하는 방향으로 연구가 진행되고 있다. 대표적으로 알레르겐에 의해 비만세포 등에서 분비된 히스타민이나 류코트리엔 등의 수용체에 대한 길항약들이 주를 이루고 이러한 약물들이 거대한 시장을 이루고 있다. 그러나, 이러한 약물은 환자에게 투여 후 단기간 내에 내성을 보이기 때문에 일정기간 지난 후 혹은 반복 투여 시 환자들의 증상을 호전시키지 못하는 경우가 많다. 따라서, 항히스타민제 등의 부작용이 없는 알레르기 치료제 개발을 요구하고 있는 실정이다.
이 외에 다른 치료 방법으로 알레르기 환자가 앓고 있는 알레르기에 대한 알레르겐을 규명 후 이를 소량씩 수 년간 투여하여 그 알레르기를 점차 감소시키는 방법이 있다. 하지만 이 방법은 치료기간이 우선 수 년이 걸리고, 아나필락시스 쇼크 등을 유발시킬 수 있다는 단점이 있다. 기타 DNA 백신을 사용하는 방법, IgE가 비만세포의 수용체에 결합하는 것을 차단하는 치료법, 그리고 알레르기를 유발하는 사이토카인인 IL-4에 대한 항체 치료법 등의 치료적 접근법이 있다. 하지만 이러한 접근법들은 비용이 많이 들거나 아직 완전히 그 치료 효과가 규명되지 않은 문제가 있다.
단삼(Salvia miltiorrhiza)은 꿀풀과에 속하는 다년생 식물로, 한방에서 뿌리는 한약재로 쓰이며 탄신논과 비타민 E가 함유되어 있고 동물실험에서 말초혈관을 확장시키고 혈압을 내리는 작용이 인정되었다.
이에, 본 발명자들은 부작용이 없고 안정성이 높으며, 아토피성 피부질환, 알레르기성 비염, 천식 등 인간에게 불편함을 주거나 치명적인 다양한 알레르기를 유발하는 비만세포로부터 알레르기 유발물질의 분비를 차단함으로써 그 질환을 치료할 수 있는 물질을 확보하고자 예의 노력한 결과, 단삼 추출물이 저농도에서 비만세포로부터 알레르기 유발물질의 분비를 억제하고 알레르기 동물모델에서도 우수한 항알레르기 효과가 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
대한민국 공개특허 제10-2019-0042702호 대한민국 공개특허 제10-2012-0086855호
E. Passante, N. Frankish. The RBL-2H3 cell line: its provenance and suitability as a model for the mast cell. Inflamm. Res. (2009) 58:737-745.
본 발명의 목적은 단삼(Salvia miltiorrhiza) 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 단삼(Salvia miltiorrhiza) 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 개선용 피부 외용제를 제공한다.
아울러, 본 발명은 단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 개선용 화장품을 제공한다.
본 발명에서는 본 발명에 따른 단삼 추출물이 알레르기 질환의 원인인 비만세포의 탈과립을 억제하고 알레르기 동물모델에서 우수한 항알레르기 효과를 확인하였다. 따라서, 본 발명에 따른 단삼 추출물은 종래의 증상회복 위주의 치료와는 달리 비만세포에서의 알레르기 유발물질의 분비를 원천적으로 차단하므로, 다양한 부작용을 제거할 수 있는 의약품, 화장품 또는 건강기능식품으로 유용하게 사용될 수 있을 것이 기대된다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 단삼 추출물을 처리한 후 비만세포(RBL-2H3)를 배양하였을 때 나타나는 세포독성을 보여주는 그래프이다.
도 2는 알레르기를 유발하는 비만세포(RBL-2H3)에 대한 본 발명의 일 실시예에 따른 단삼 추출물의 농도 의존적 억제 효과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 단삼 추출물이 분자 수준에서 알레르기 반응에 관여하는 마커들의 인산화를 억제하는 효과를 나타낸 것이다.
도 4는 아나필락시스 쇼크 동물모델에서 본 발명의 일 실시예에 따른 단삼 추출물의 억제 효과를 나타낸 것이다.
도 5는 아토피성 피부질환 동물모델에서 등쪽 피부의 손상에 대한 본 발명의 일 실시예에 따른 단삼 추출물의 완화 효과를 나타낸 것이다.
도 6은 아토피성 피부질환 동물모델에서 귀 혈관 부종에 대한 본 발명의 일 실시예에 따른 단삼 추출물의 완화 효과를 나타낸 것이다.
도 7은 아토피성 피부질환 동물모델에서 피부 손상도를 나타낸 점수에 대한 본 발명의 일 실시예에 따른 단삼 추출물의 완화 효과를 나타낸 것이다.
도 8은 아토피성 피부질환 동물모델에서 혈청 내 IgE 레벨에 대한 본 발명의 일 실시예에 따른 단삼 추출물의 억제 효과를 나타낸 것이다.
도 9는 아토피성 피부질환 동물모델에서 알레르기에 의해 발생하는 비장에 비대화에 대한 본 발명의 일 실시예에 따른 단삼 추출물의 억제 효과를 나타낸 것이다.
도 10은 아토피성 피부질환 동물모델에서 알레르기에 의한 각질화에 대한 본 발명의 일 실시예에 따른 단삼 추출물의 억제 효과를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명에서 용어 "예방" 은 질환 또는 질병을 보유하고 있다고 진단된 적은 없으나, 이러한 질환 또는 질병에 걸리기 쉬운 경향이 있는 개체에서 질환 또는 질병의 발생을 억제하는 것을 의미한다. 본 명세서에서 용어 "치료"는 (ⅰ) 질환 또는 질병의 발전의 억제; (ⅱ) 질환 또는 질병의 경감; 및 (ⅲ) 질환 또는 질병의 제거를 의미한다.
본 발명은 단삼(Salvia miltiorrhiza) 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 유효성분인 단삼 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다:
1) 단삼에 추출용매를 가하여 추출하는 단계; 및
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1)의 단삼은 재배한 것 또는 시판되는 것을 제한 없이 사용할 수 있다. 또한, 상기 단삼은 단삼의 뿌리, 줄기, 꽃, 잎, 열매 및/또는 종자 부위를 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1)의 추출용매는 물, 알코올 또는 이의 혼합물을 사용할 수 있다. 상기 알코올로는 C1 내지 C4의 저급 알코올을 사용할 수 있고, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 사용할 수 있다. 추출방법으로는 초음파추출, 진탕추출, Soxhelt 추출 또는 환류 추출을 이용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 추출용매를 세척하고 잘 건조된 단삼 분량의 1 내지 15배 첨가하여 추출할 수 있고, 구체적으로 2 내지 10배 첨가하여 추출할 수 있으며, 보다 구체적으로 3 내지 6배 첨가하여 추출할 수 있다. 추출 온도는 20 내지 130℃일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 추출 시간은 10분 내지 72시간일 수 있고, 1시간 내지 48시간일 수 있으며, 12시간 내지 30시간일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 아울러 추출 횟수는 1 내지 5회일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 2)를 거친 후 하기의 단계들을 추가적으로 포함할 수 있다:
3) 단계 2)의 여과물을 감압 농축하는 단계; 및
4) 단계 3)의 농축물을 건조하는 단계.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 3)의 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서, 상기 알레르기 질환은 넓은 뜻으로는 I형, II형, III형 및 IV형의 알레르기 반응에 의해서 발증하는 질환 모두를 가리킨다. 그러나 보통 알레르기성 질환이라고 하면 좁은 뜻을 가리키는 경우가 많고 I형의 알레르기반응에 의해서 발증하는 것을 가리킨다. 또한, 상기 알레르기 질환은 예컨대, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 두드러기, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 천식, 알레르기성 중이염, 아나틸락시스 쇼크(anaphylaxis shock), 식품 알레르기, 세균 알레르기, 진균 알레르기, 바이러스 알레르기 또는 약물 알레르기일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 아토피성 피부염(atopic dermatitis)은 소양증, 피부 건조증, 습진 등을 동반하는 염증성 질환 또는 유전적, 환경적, 면역학적 원인으로 인하여 피부의 가장 바깥에 위치한 피부 보호벽인 각질층에 이상이 생겨서 발생하는 질환으로 건조한 기후에서는 더욱 심해지는 경향이 있다.
상기 알레르기성 비염(allergic rhinitis)은 연속적인 재채기, 계속 흘러내리는 맑은 콧물, 코막힘, 가려움증 등의 증상을 보이는 코 점막의 질환으로 알레르기를 일으키는 원인 물질(항원)이 코 점막에 노출된 후 자극 부위로 비만세포, 호산구를 비롯한 여러 종류의 IgE 항체를 매개로 하는 염증세포가 몰려들어 이들이 분비하는 다양한 매개물질에 의하여 염증반응이 발생한다. 연속적으로 일어나는 발작적인 재채기, 맑은 콧물, 코막힘, 가려움증의 네 가지 주요 증상을 특징으로 한다. 특징적인 증상 외에도 눈 주위 가려움, 눈 충혈, 두통, 후각 감퇴 등의 증상이 동반될 수 있으며 합병증으로 결막염, 중이염, 부비동염, 인후두염 등이 동반될 수 있다.
상기 알레르기성 결막염(allergic conjunctivitis)은 특정 알레르기 유발물질에 의한 알레르기 반응으로 발생한 결막(흰자위)의 염증 질환이다. 알레르기 반응을 유발하는 물질은 매우 다양하고 많다. 봄, 가을철의 꽃가루, 공기 중 (미세)먼지, 동물의 비듬, 집먼지 진드기, 곰팡이, 풀, 음식물, 비누, 화장품 등이 대표적인 원인물질이 될 수 있다. 이러한 알레르기 유발물질들이 눈의 결막에 접촉하여 비만세포, 호산구 또는 호염기구 등의 면역세포를 통한 알레르기 반응을 유발하게 되면, 히스타민과 같은 여러 염증유발물질이 분비되어 결막의 염증 반응을 유발하게 된다.
상기 알레르기성 천식(asthma)은 호흡곤란, 기침, 거친 숨소리 등의 증상이 반복적, 발작적으로 나타나는 질환으로, 천식 역시 일종의 염증반응으로 일어나는 질환이다. 대표적인 천식 증상은 천명, 호흡곤란, 가슴 답답함, 기침 등이다. 알레르기 원인 물질에 노출된 이후 일시적으로 증상이 발생하기도 하며, 계절에 따른 증상 변화, 아토피 질환의 가족력 등이 있다면 천식이 나타날 가능성이 높다.
본 발명에서, 상기 단삼 추출물은 알레르기를 유발하는 비만세포의 알레르기 유발물질 분비를 저농도에서 억제하여 우수한 항알레르기 효과를 나타낸다. 또한, 상기 단삼 추출물은 독성 및 부작용이 거의 없다. 이에, 상기 단삼 추출물은 종래의 증상 회복 위주의 알레르기성 질환의 치료제와 달리, 부작용 없이 비만세포에서의 알레르기 유발물질의 분비를 근원적으로 차단함으로써 알레르기성 질환의 예방 또는 치료할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 그 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물의 약학적 투여 형태는 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제제, 외용제, 좌제 및 주사제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 추출물을 포함하는 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한 다양한 화합물 혹은 혼합물을 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 kg당 본 발명의 조성물을 1일 0.0001 내지 1,000 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 500 mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서, 상기 단삼 추출물의 추출방법 및 추출대상, 특성에 대한 내용은 단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 기재된 내용과 동일하므로, 구체적인 설명은 상기 내용을 원용하고, 이하에서는 건강기능식품 조성물의 특유한 구성에 대해서만 설명하도록 한다.
한편, 본 발명자들은 본 발명에 따른 단삼 추출물이 알레르기 질환의 원인인 비만세포의 탈과립을 억제하고 알레르기 동물모델에서 우수한 항알레르기 효과를 확인하였다. 따라서, 본 발명에 따른 단삼 추출물은 종래의 증상회복 위주의 치료와는 달리 비만세포에서의 알레르기 유발물질의 분비를 원천적으로 차단하므로, 다양한 부작용을 제거할 수 있는 건강기능식품 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 상기 추출물은 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 조정제물 또는 정제물 중에 어느 하나를 포함하는 것으로 한다.
상기 건강기능식품 조성물은 질환을 예방하거나 개선하기 위해 섭취할 수 있는 것이면 특별히 제한되지 않는다. 본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다. 또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다.
본 발명의 기능성 식품은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다.
또한, 본 발명은 단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 개선용 피부 외용제를 제공한다.
아울러, 본 발명은 단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 개선용 화장품을 제공한다.
본 발명에서, 상기 단삼 추출물의 추출방법 및 추출대상, 특성에 대한 내용은 단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 기재된 내용과 동일하므로, 구체적인 설명은 상기 내용을 원용하고, 이하에서는 피부 외용제 및 화장품의 특유한 구성에 대해서만 설명하도록 한다.
한편, 본 발명자들은 본 발명에 따른 단삼 추출물이 알레르기 질환의 원인인 비만세포의 탈과립을 억제하고 알레르기 동물모델에서 우수한 항알레르기 효과를 확인하였다. 따라서, 본 발명에 따른 단삼 추출물은 종래의 증상회복 위주의 치료와는 달리 비만세포에서의 알레르기 유발물질의 분비를 원천적으로 차단하므로, 다양한 부작용을 제거할 수 있는 피부 외용제 및 화장품의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 외용제 또는 화장품 조성물에 포함되는 성분은 상기 유효성분 이외에 외용제 또는 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
본 발명의 유효성분을 제제화 하기 위해서는 상법에 따라서 실시하면 용이하게 제제화할 수 있으며 계면활성제, 부형제, 착색료, 향신료, 보존제, 안정제, 완충제, 현탁제, 기타 상용화하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어,연고제, 액제, 드레싱제, 패취제, 스프레이제, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유클렌징, 오일, 분말파운데이션, 유탁액파운데이션, 왁스파운데이션, 팩 및 마사지크림 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 벤질벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜오일, 글리세롤지방족에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의지방산에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴알코올, 폴리옥시에틸렌소르비톨에스테르 및 폴리옥시에틸렌소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성셀룰로오스, 알루미늄메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로 히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 단삼( Salvia miltiorrhiza ) 추출물의 제조
단삼(Salvia miltiorrhiza) 뿌리를 10분간 240℃에서 로스팅한 후 70% 에탄올을 추출용매로 하여 환류추출법으로 85℃에서 2시간씩 3회 추출하여 단삼 추출물을 획득하였다.
<실험예 1> 단삼 추출물의 세포독성 확인
상기 <실시예 1>에서 제조한 단삼 추출물의 세포독성을 측정하였다.
구체적으로, 비만세포로 RBL-2H3 세포를 96-웰 플레이트에 4×105 cells/웰이 되도록 분주하고, 37 ℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 배양하였다. 그 다음, 상기 <실시예 1>에서 제조한 단삼 추출물을 50 또는 100 ㎍/㎖ 농도로 첨가하여 24시간 동안 배양한 후 EzCytox 키트(Ez3000, Daeillab])를 이용하여 제조사의 절차에 따라 세포 생존율을 측정하였다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 단삼 추출물 무처리군의 세포 생존율을 100%로 볼 때 단삼 추출물 처리군에서는 90% 이상의 세포 생존율을 확인하였다.
상기 결과를 통해 단삼 추출물은 세포 독성을 나타내지 않음을 알 수 있다.
<실험예 2> 비만세포에서 단삼 추출물의 알레르기 유발물질 분비 억제 효과 확인
체내 알레르기를 유발하는 비만세포에서 상기 <실시예 1>에서 제조한 단삼 추출물의 알레르기 유발물질 분비 억제 효과를 확인하기 위하여, 다음의 실험을 수행하였다.
구체적으로, 비만세포로 RBL-2H3 세포를 글루타민, 항생제 및 10% 우혈청이 보충된 최소 배지에서 배양하고, 알레르기 유발물질 분비를 유도하기 위해 배양한 세포를 수거한 후 24-웰 배양기에 2×105 cells/웰로 분주하고 12시간 배양한 후 200 ng/㎖ DNP-특이성 IgE와 같이 12시간 이상 배양하였다. 상기 배양한 세포는 PIPES 완충액(25 mM PIPES, pH 7.2, 119 mM NaCl, 5 mM KCl, 0.4 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 5.6 mM glucose, 및 0.1% BSA)으로 세척한 다음, 항원을 첨가하기 전에 30분 동안 상기 <실시예 1>에서 제조한 단삼 추출물을 25, 50 및 100 ㎍/㎖로 첨가하고 전배양하였다. 전 배양 후 항원(DNP-BSA)을 최종 농도 25 ng/㎖로 첨가하여 10분 동안 자극을 유도하였다.
알레르기 유도물질의 분비 정도는 배지 중에 분비된 탈과립의 표식자인 헥소사미니다제(hexosaminidase)의 활성을 p-니트로페닐아세틸-β-D-글루코사미나이드(p-nitrophenylacetyl-β-D-glucosaminide)로부터 유리된 p-니트로페놀(p-nitrophenol)의 양을 측정하여 확인하였다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 단삼 추출물이 농도 의존적으로 비만세포의 알레르기 유발물질 분비를 억제하는 것을 확인하였다.
<실험예 3> 단삼 추출물의 비만세포 억제 기전 확인
상기 <실시예 1>에서 제조한 단삼 추출물이 체내 알레르기를 유발하는 비만 세포를 억제하는 기전을 알아보기 위하여, 다음의 실험을 수행하였다.
구체적으로, RBL-2H3 세포를 글루타민, 항생제 및 10% 우혈청이 보충된 최소 배지에서 배양하고, 알레르기 유발물질 분비를 유도하기 위해 배양한 세포를 수거한 후 6-웰 배양기에 4×105 cells/웰로 분주하고 200 ng/㎖ DNP-특이성 IgE와 같이 12시간 이상 배양하였다. 상기 배양한 세포는 PBS 완충액으로 세척한 다음, 항원을 첨가하기 전에 30분 동안 상기 <실시예 1>에서 제조한 단삼 추출물을 25, 50 및 100 ㎍/㎖로 첨가하고 전배양하였다. 전 배양 후 항원(DNP-BSA)을 최종 농도 25 ng/㎖로 첨가하여 10분 동안 자극을 유도하고 얼음 위에서 반응을 중지하였다. 자극한 세포를 4℃의 PBS 완충액으로 세척 후 0.1 ㎖ lysis 완충액(20 mM HEPES, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1% Noidet p-40, 10% glycerol, 60 mM cotyl β-glucoside, 10 mM NaF, 1 mM Na3VO4, 1 mM PMSF, 2.5 mM nitrophenylphosphate, 0.7 ㎍/㎖ pepstatin, protease inhibitor coctail tablet)에서 30분간 세포를 파쇄한 다음, 단백질을 SDS-PAGE상에서 분리한 후 PVDF 막에 이동시키고 5% 스킴 밀크를 포함한 TBS-T 완충액으로 15분 동안 처리하였다. 이후 측정하고자 하는 단백질에 대한 1차 항체를 1:1000배로 희석하여 4℃에서 12시간 동안 처리하였다. 막을 TBS-T로 세척 후 HRP 접합된 2차 항체를 1:2500배로 희석하여 1시간 동안 상온에서 처리, 세척 후 목적하는 단백질을 Chemoluminescent 시약을 이용하여 확인하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 단삼 추출물이 JNK, Erk, Akt, Syk의 항원에 의한 인산화를 억제하는 것을 확인하였고, 특히 100 ㎍/㎖ 농도에서 그 효과가 현저한 것을 확인하였다.
상기의 결과를 통해 단삼 추출물이 비만세포의 다양한 알레르기 유발 경로를 억제함을 알 수 있다.
<실험예 4> 알레르기 동물모델에서 단삼 추출물의 항알레르기 효과 확인
알레르기 동물모델에서 상기 <실시예 1>에서 제조한 단삼 추출물의 알레르기 억제 효과를 확인하기 위하여, 다음의 실험을 수행하였다.
구체적으로, 전신성 알레르기 반응성 아나필락시스 쇼크(anaphylasis shock) 동물모델은 항원(Albumin, dinitrophenyl) 200 ㎍을 마우스에 피하 주사하여 얻었다. 마우스에 항원특이 IgE 0.5 ㎍을 오른쪽 귀에 피내주사 24시간 후 상기 <실시예 1>에서 제조한 단삼 추출물 50 및 100 mg/kg을 경구투여하였다. 30분 후 4% 에반스블루용액에 녹아있는 200 ㎍의 항원을 미정맥 주사하였다. 항원 주사 1시간 후 치사하여 귀를 제거, 700 ㎕ formamide 용액에 넣은 후 70℃에서 24시간 동안 추출한 후 추출된 에반스블루 색소의 양을 650 nm에서 측정하였다. 양성 대조군은 단삼 추출물 대신 DPH 50 mg/kg을 투여하였다.
그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 항원자극에 의한 에반스블루의 유출은 단삼 추출물에 의해 농도 의존적으로 억제되는 것을 확인하였다.
상기의 결과를 통해 단삼 추출물이 항알레르기 효과를 나타냄을 알 수 있다.
<실험예 5> 아토피성 피부질환 동물모델에서 단삼 추출물의 항알레르기 효과 확인
아토피성 피부질환 동물모델에서 상기 <실시예 1>에서 제조한 단삼 추출물의 알레르기 억제 효과를 확인하기 위하여, 다음의 실험을 수행하였다.
구체적으로, 아토피성 피부질환 동물모델은 접촉성 피부염을 일으키는 DNCB(1-Chloro-2,4-dinitrobenzene)를 아세톤과 올리브오일 혼합액에 녹인 후 마우스의 등쪽 피부에 도포하여 얻었다. 또한, DNCB를 4일 동안 도포하였고, 격일로 상기 <실시예 1>에서 제조한 단삼 추출물 10 mg/㎖를 6일 동안 도포하였다. 그 후 아토피성 피부염 완화 효과를 측정하였다.
임상적 육안 평가법을 이용하여 실험동물의 피부 손상 정도(Clinical skin severity score)를 측정하였다. DNCB 용액을 도포하면 실험동물은 홍반/색소침착, 부종, 출혈, 삼출/진물, 찰상, 태선화, 각질/피부건조 등이 일어나는데, 이 항목을 없음(0), 경증(1), 중증(2), 고증(3)으로 나누어 채점하고 합산하였다. 그 결과는 도 7에 나타냈었다. 또한, 도포 전, 도포 3일째 및 도포 6일째의 피부의 이미지를 도 5에 나타내었고, 귀의 이미지를 도 6에 나타내었다.
실험 종결 후 실험동물의 심장으로부터 혈액을 채취 후 혈청이 잘 분리되도록 상온에 30분 동안 방치하였다. 그후, 3,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 얻은 혈청으로 Mouse IgE ELISA kit(BD Biosciences, San Jose, CA, USA)를 사용하여 혈청 중의 총 IgE의 발현양을 측정하였다. 그 결과는 도 8에 나타내었다.
실험 종결 후 실험동물을 CO2로 마취한 후 개복하여 비장 조직을 채취하였다. 상기 채취된 비장 조직을 생리식염수에 세척한 뒤 물기를 제거하고 미세저울을 이용해 무게를 측정하였다. 그 결과는 도 9에 나타내었다.
실험 종결 후 실험동물의 등 쪽 피부를 채취하여 4% formaldehyde 용액에 넣고 고정하였으며, 파라핀 포매 과정을 거쳐 block을 만들었다. 그 다음, 5 μm의 두께로 박절하여 Hematoxylin & Eosin 염색을 실시하였고, 광학현미경(×100, Leica, Germany)을 이용하여 이를 촬영하였다. 그 결과는 도 10에 나타내었다.
그 결과, 도 5 내지 도 7에 나타낸 바와 같이, 단삼 추출물 도포군의 경우 DNCB 도포군과 비교하여 피부 손상도가 완화되는 것을 확인하였다.
또한, 도 8에 나타낸 바와 같이, 단삼 추출물 도포군의 경우 DNCB 도포군과 비교하여 혈청 내 IgE 레벨이 감소하는 것을 확인하였다.
또한, 도 9에 나타낸 바와 같이, 단삼 추출물 도포군의 경우 DNCB 도포군과 비교하여 비장의 비대화가 억제되는 것을 확인하였다.
아울러, 도 10에 나타낸 바와 같이, 단삼 추출물 도포군의 경우 DNCB 도포군과 비교하여 피부 상처 및 자극으로 인한 피부 각질화가 억제되는 것을 확인하였다.
상기의 결과를 통해 단삼 추출물이 피부에서 유발된 알레르기 억제 효과를 나타냄을 알 수 있다.
하기에 본 발명의 조성물을 위한 제조예를 예시한다.
<제조예 1> 본 발명의 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 제제의 제조
<1-1> 산제의 제조
본 발명의 추출물 10 mg
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<1-2> 정제의 제조
본 발명의 추출물 0.1 mg
옥수수전분 100 mg
유 당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<1-3> 캡슐제의 제조
본 발명의 추출물 0.1 mg
옥수수전분 100 mg
유 당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<1-4> 환의 제조
본 발명의 추출물 1 mg
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 g이 되도록 제조하였다.
<1-5> 과립의 제조
본 발명의 추출물 0.15 mg
포도당 200 mg
전분 600 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 mg을 첨가하여 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
<제조예 2> 본 발명의 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강식품의 제조
<2-1> 밀가루 식품의 제조
본 발명의 추출물의 0.5 내지 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
<2-2> 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명의 추출물의 0.1 내지 5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
<2-3> 그라운드 비프(ground beef)의 제조
본 발명의 추출물의 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
<2-4> 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 추출물의 5 내지 10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
<2-5> 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 추출물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 본 발명의 추출물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),
종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),
본 발명의 추출물(3 중량부),
영지(0.5 중량부),
지황(0.5 중량부)
<제조예 3> 본 발명의 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강음료의 제조
<3-1> 건강음료의 제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명의 추출물 100 mL를 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.
<3-2> 야채 주스의 제조
본 발명의 추출물 100 mL를 토마토 또는 당근 주스 1,000 mL에 가하여 야채 주스를 제조하였다.
<3-3> 과일 주스의 제조
본 발명의 추출물 100 mL를 사과 또는 포도 주스 1,000 mL에 가하여 과일 주스를 제조하였다.
<제조예 4> 본 발명의 추출물을 유효성분으로 함유하는 외용제의 제조
<4-1> 연고제의 제조
본 발명의 추출물을 함유한 연고제를 하기 [표 1]에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 제조하였다.
성분 함량(%)
본 발명의 추출물 1.0
글리세린 8.0
부틸렌글리콜 4.0
유동파라핀 15.0
케타글루칸 7.0
카보머 0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0
스쿠알란 1.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
소르비탄 스테아레이트 0.4
세테아릴 알코올 1.0
밀납 4.0
방부제 미량
향료 미량
정제수 잔량
합계 100
<제조예 5> 본 발명의 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물의 제조
<5-1> 영양화장수(lotion)
본 발명의 추출물을 함유한 영양화장수(lotion)을 하기 [표 2]의 성분비로 통상적인 방법으로 제조하였다.
성분 함량(중량%)
본 발명의 추출물 2.0
글리세릴 스테아레이트 SE 1.5
세테아릴알콜 1.5
라놀린 1.5
폴리솔베이트 60 1.3
솔비타스테아레이트 0.5
경화식물유 4.0
광물유 5.0
트리옥타노인 2.0
디메치콘 0.8
초산 토코페롤 0.5
카르복시비닐 폴리머 0.12
글리세린 5.0
1,3-부틸렌글리콜 3.0
소듐히아루로네이트 5.0
트리에탄올아민 0.12
유니사이드-유 13 0.02
향 미량
증류수 잔량
합계 100
<5-2> 영양크림
본 발명의 추출물을 함유한 영양크림을 하기 [표 3]의 성분비로 통상적인 방법으로 제조하였다.
성분 함량(중량%)
본 발명의 추출물 2.0
친유형 모노스테아린산 글리세린 1.5
세테아릴알콜 1.5
스테아린산 1.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비타스테아레이트 0.6
이소스테아릴 이소스테레이트 5.0
스쿠알란 5.0
광물유 35.0
디메치콘 0.5
히드록시에틸셀룰로오스 0.12
글리세린 6.0
트리에탄올아민 0.7
유니사이드-유 13 0.02
향 미량
증류수 잔량
합계 100

Claims (10)

  1. 단삼(Salvia miltiorrhiza) 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 단삼 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 단삼 추출물은 단삼의 뿌리, 줄기, 꽃, 잎, 열매 및 종자로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상의 부위의 추출물인 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 알레르기 질환은 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 두드러기, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 천식, 알레르기성 중이염, 아나틸락시스 쇼크(anaphylaxis shock), 식품 알레르기, 세균 알레르기, 진균 알레르기, 바이러스 알레르기 및 약물 알레르기로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  6. 단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  7. 제 6항에 있어서, 상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  8. 단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 개선용 피부 외용제.
  9. 제 8항에 있어서, 상기 피부 외용제는 연고제, 액제, 드레싱제, 패취제 및 스프레이제로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 예방 또는 개선용 피부 외용제.
  10. 단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 개선용 화장품.
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KR20120086855A (ko) 2011-01-27 2012-08-06 연세대학교 산학협력단 복분자 씨 기름을 함유하는 알레르기, 아토피 피부염 치료 및 개선용 조성물
KR20190042702A (ko) 2016-09-01 2019-04-24 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. Il-4r 길항제를 투여함에 의해 알레르기를 예방하거나 치료하기 위한 방법

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