KR101838142B1

KR101838142B1 - 쥐눈이콩 추출물을 포함하는 각막 질환의 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR101838142B1
Application number: KR1020170047303A
Authority: KR
Inventors: 김경아; 강태겸; 강석우; 오상록; 정상훈
Original assignee: 한국과학기술연구원
Priority date: 2017-04-12
Filing date: 2017-04-12
Publication date: 2018-03-14
Also published as: WO2018190638A1

Abstract

본 명세서에는 쥐눈이콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 각막 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 쥐눈이콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 각막 손상 개선용 건강식품 조성물이 개시된다. 상기 쥐눈이콩 추출물은 각막 세포 손상을 억제하고 각막 세포를 보호하며, 안구건조증, 각막찰과상을 예방, 개선 또는 치료하는 효과가 있다.

Description

쥐눈이콩 추출물을 포함하는 각막 질환의 예방 또는 치료용 조성물{COMPOSITION FOR PREVENTION OR TREATMENT OF CORNEAL DISEASES COMPRISING SMALL BLACK SOYBEAN EXTRACT}

본 명세서에는 쥐눈이콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 각막 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 쥐눈이콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 각막 손상 개선용 건강식품 조성물이 개시된다.

각막은 안구 앞쪽 표면에 있는 투명하고 혈관이 없는 조직으로 흔히 검은자위라고 불리는 부분이다. 각막은 눈을 외부로부터 보호할 뿐만 아니라, 빛을 통과, 굴절시켜 볼 수 있게 하는 투명한 조직으로 빛의 굴절과 전달에 있어 주요한 기능을 하며 신경이 잘 발달되어 있어 외부 이물질에 민감하게 반응한다. 또한, 각막은 각막상피, 보우만막, 각막실질(stroma), 뒤경계판(데스메막), 각막내피 5개의 층으로 구성된다.

각막 표면은 외부에 직접 노출되어 있어 외상이나 스크래치에 취약하다. 특히, 눈물의 양이 부족하게 됨에 따라 눈물에 의한 안구 보호 기능이 현격하게 감소하여 발생하는 안구건조증과 같은 질환을 겪고 있는 환자의 경우 각막 손상이 자주 발생할 수 있다. 각막이 손상될 경우, 자극감, 이물감 또는 건조감 등의 자극 증상은 물론, 손상이 심각해질 경우 각막염 등으로 발전할 수 있다. 따라서, 안구를 건강하게 유지하고 시력을 보존하기 위해서는 각막 손상을 예방하거나, 경미한 각막 손상이 악화되지 않도록 하거나, 손상된 각막을 치료하는 것이 필수적이다.

안구건조증은 일반적으로 눈물 자체의 부족함 또는 눈물 구성 성분의 불균형으로 인해 눈물이 빠르게 증발되어 눈물막과 각막 표면에 손상을 유발시키는 질환으로, 2007년 Dry Eye Workshop (DEWS)에서는 단순한 눈물의 수분 부족 상태가 아닌 눈물 분비 과정에 관여하는 조직들의 염증성 변화와 눈물의 삼투압이 동반되는 질환으로 정의된 바 있다. 눈물막과 각막 표면에 손상을 입게 되면, 안구 표면이 건조하게 되고 이로 인해 눈의 불쾌감 및 자극 증상들이 유발된다. 안구건조증의 원인으로는 눈물의 분비를 조절하는 안드로겐의 감소, 실내 온도가 높고 건조한 환경에서의 생활, 쇼그렌 증후군과 같은 전신 질환이 있는 경우, 콘택트 렌즈의 착용, 컴퓨터, 스마트폰, 태블릿 pc의 사용 등이 있다. 또한, 노년 인구의 증가, 컴퓨터 관련 기기의 성능 향상과 통신기술의 발달, 산업의 성장 등으로 인해 고령인층뿐만 아니라 청년층에서도 안구건조증이 지속적으로 늘어나고 있는 추세이다.

현재 안구건조증의 주된 치료는 여러 가지 인공누액에 의존하고 있다. 최근 염증 반응이 안구건조증의 유발과도 관계되어 있다는 보고가 있어 cyclosporin 등의 면역 억제제도 안약으로 개발되어 치료에 이용되고 있으나, 아직 정확한 병태 생리가 밝혀지지 않은 실정이다.

한국 등록특허공보 제10-1662720호

일 측면에서, 본 명세서는 쥐눈이콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 각막 손상 또는/및 각막 질환을 예방 또는 치료하는 약학 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

다른 측면에서, 본 명세서는 쥐눈이콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 각막 손상 또는/및 각막 질환을 예방 또는 개선하는 건강식품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

일 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 쥐눈이콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 각막 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

예시적인 일 구현예에서, 상기 쥐눈이콩 추출물은 물 및 C₁ 내지 C₄의 저급 알코올로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상의 용매로 추출한 것일 수 있다.

예시적인 일 구현예에서, 상기 쥐눈이콩 추출물은 에탄올 추출물일 수 있다.

예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 안구건조증 또는 각막찰과상을 예방 또는 치료하는 것일 수 있다.

예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 각막 상피 세포 사멸 억제 및 각막 상피층 보호 효과를 갖는 것일 수 있다.

다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 쥐눈이콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 각막 손상 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.

예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 안구건조증 또는 각막찰과상을 개선하는 것일 수 있다.

일 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 쥐눈이콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 각막 손상 또는/및 각막 질환을 예방 또는 치료하는 약학 조성물을 제공하는 효과가 있다.

다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 쥐눈이콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 각막 손상 또는/및 각막 질환을 예방 또는 개선하는 건강식품 조성물을 제공하는 효과가 있다.

또 다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 쥐눈이콩 추출물은 각막 세포 손상을 억제하고 각막 세포를 보호하며, 안구건조증, 각막찰과상을 예방, 개선 또는 치료하는 효과가 있다.

도 1은 본 명세서의 일 실험예에 따라 BAC로 유도된 각막 손상 동물 모델에서, 각막 플루오레세인 염색 결과를 나타낸 것이다(***p<0.001).
도 2는 본 명세서의 일 실험예에 따라 BAC로 유도된 각막 손상 동물 모델에서, 눈물막 파괴시간 측정 결과를 나타낸 것이다(***p<0.001).
도 3은 본 명세서의 일 실험예에 따라 BAC로 유도된 각막 손상 동물 모델에서, 각막 표면과 각막 상피 세포를 관찰하기 위해 각막의 단면을 촬영한 헤마톡실린 에오신 염색 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 본 명세서의 일 실험예에 따라 BAC로 유도된 각막 손상 동물 모델에서, 각막 상피 세포 사멸을 확인하기 위한 TUNEL 분석 실험 결과를 나타낸 것이다(***p<0.001).

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 쥐눈이콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 각막 손상의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.

본 명세서에 개시된 조성물은 각막 손상을 예방하거나, 경미한 각막 손상이 악화되지 않도록 하거나, 손상된 각막을 개선 또는 치료하는 효과가 있다.

본 명세서에서 "유효성분"은 단독으로 목적으로 하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체 등과 함께 목적으로 하는 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

본 명세서에서 "각막 질환"은 각막 손상으로 발생하는 질환을 의미하는 것으로서, 예컨대 안구건조증, 각막찰과상일 수 있다.

본 명세서에서 "각막 손상"은 안구의 각막 조직이 손상된 것으로서, 이에 제한하는 것은 아니나 예를 들어, 병원균, 염증, 물리적 자극 (예컨대, 콘택트렌즈, 자외선), 화학적 자극 (예컨대, 약품), 신경 손상 또는 피로 누적 등에 의해 각막에 손상이 가해진 것을 의미하는 것으로서, 통증, 충혈, 각막 혼탁, 눈부심, 이물감 등의 증상을 동반할 수 있다. 또한, 상기 손상은 각막상피, 보우만막, 각막실질, 뒤경계판 및 각막내피 부위 중 어느 하나에 발생된 손상일 수 있으며, 구체적으로, 쥐눈이콩 추출물은 각막상피 손상에 대해 우수한 보호 효과를 갖는다.

안구건조증(dry eye syndrome)은 눈물이 부족하거나 눈물이 지나치게 증발하거나 또는 눈물 구성 성분의 균형이 맞지 않아서, 안구 표면이 손상되고 눈이 시리고 자극감, 이물감, 건조감과 같은 자극 증상을 느끼게 되는 눈의 질환을 말한다. 본 명세서에 따른 쥐눈이콩 추출물은 눈물막의 안정도를 증가시키고 각막 손상을 억제 및 각막 표면을 보호하여 안구건조증을 예방, 개선 또는 치료하는 효과가 있다.

각막찰과상(corneal abrasion)은 안구의 각막 상피 계층이 소실되는 현상으로 예컨대 상피층이 긁히거나 벗겨지는 현상을 말한다. 본 명세서에 따른 쥐눈이콩 추출물은 각막 스크레치를 감소시키고 각막 상피 세포 변성 또는 각막 상피 세포 사멸을 억제하여 각막 표면, 각막 상피층을 보호하는 효과가 있다.

쥐눈이콩(Rhynchosia Nulubilis)은 콩과의 다년생 만초(蔓草)로서, 우리나라 각지의 산야에 흔히 자생하는 식물로 서목태(鼠目太), 여두라고도 불리우며, 줄기와 잎은 갈색이다. 7월에 노란 꽃이 피어 타원형의 깍지 속에 지름 5~7 mm 정도의 검고 둥근 열매가 여물면 수확한다.

옛 문헌 『본초강목』에는 쥐눈이콩이 "성질이 따뜻하고, 맛이 달며, 독이 없다. 빛이 검으면서 반들반들하고 작은 수콩(雄豆)을 약으로 사용하면 더 좋다. 신장병을 다스리며 기를 내리어 풍열을 억제하고 혈액 순환을 활발히 하며 독을 푼다"고 알려져 있다. 쥐눈이콩은 예로부터 신경통, 신장질환, 노인성 치매 예방에 이용되었다. 쥐눈이콩은 isoflavone 함량이 노란콩(黃豆)보다 높을 뿐만 아니라, 종피에 항산화 효과가 탁월한 glycitein과 anthocyanin 성분 중 cyanidin-3-glucoside가 풍부하여 뇌혈관 및 심장 질환의 예방과 치료에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

본 명세서에서 쥐눈이콩 추출물은 쥐눈이콩 그 자체 또는 이를 분말화한 것일 수 있으며, 쥐눈이콩의 조추출물뿐만 아니라 추출물의 가공물, 예를 들어 건조, 농축, 분획, 발효 등 추가적인 가공에 의한 모든 형태를 포함하는 것을 의미한다.

예시적인 일 구현예에서, 상기 쥐눈이콩 추출물은 하기 단계를 포함하여 제조될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

1) 쥐눈이콩에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;

2) '단계 1)'의 추출물을 여과하는 단계; 및

3) '단계 2)'의 여과한 추출물을 감압농축하여 추출물을 제조하는 단계.

상기 쥐눈이콩 추출물은 4) '단계 3)'의 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하여 분획물을 제조하는 단계를 더 포함하여 제조될 수 있다.

상기 단계 1)의 쥐눈이콩은 재배한 것, 채취한 것 또는 시판되는 것 등의 제한이 없이 사용이 가능하다.

상기 단계 1)의 추출용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물, 바람직하게는 C₁ 내지 C₆, 또는 C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매를 사용하는 것이 바람직하며, 메탄올 또는 에탄올 수용액으로 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 추출용매의 양은 쥐눈이콩 중량의 1 내지 20 배인 것이 바람직하고, 10 배인 것이 더 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 단계 1)의 추출하는 방법은 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등이 있으며, 바람직하게는 초음파 추출 방법으로 1회 내지 5회 추출될 수 있다. 추출하는 온도는 10℃ 내지 100℃인 것이 바람직하며 상온인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다. 추출하는 시간은 1시간 내지 7일인 것이 바람직하고, 3일 내지 7일인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 추출하는 방법은 초임계 추출, 아임계 추출, 고온 추출, 고압 추출 등의 추출 장치를 이용한 방법 또는 XAD 및 HP-20을 포함한 흡착 수지를 이용한 방법 또는 미생물을 이용한 발효나 자연발효 방법 등 당업계의 통상적인 추출 방법을 사용할 수 있으며, 가온하며 환류 추출 또는 상온에서 추출하는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출 회수는 1회 내지 5회인 것이 바람직하며, 3회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.

예시적인 일 구현예에 따르면, 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계 유체 추출법으로 쥐눈이콩 추출물의 제조가 가능하며, 일반적으로 초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액체 및 기체의 성질을 지니고 있으며 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있어 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다. 이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 시료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면 시료에 함유된 지용성 물질은 초임계 이산화탄소에 추출되어 나온게 된다. 지용성 물질을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수도 있고, 이러한 공용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 대부분 이산화탄소를 함유하고 있는데 이산화탄소는 실온에서 공기 중으로 휘발되며, 공용매는 감압증발기로 제거할 수 있다.

예시적인 일 구현예에 따르면, 초음파 진동에 의해 발생되는 에너지를 이용한 초음파 추출법으로 쥐눈이콩 추출물의 제조가 가능하다. 초음파가 수용성 용매 속에서 시료에 포함된 불용성 물질을 파괴할 수 있으며, 이때 발생되는 높은 국부온도로 인하여 주위에 위치하는 반응물 입자들의 운동에너지를 크게 하기 때문에 반응에 필요한 충분한 에너지를 얻게 되고, 초음파 에너지의 충격 효과로 높은 압력을 유도하여 시료에 함유된 물질과 용매의 혼합 효과를 높여 추출 효율을 증가시키게 된다.

예시적인 일 구현예에 따르면, 발효 과정을 거쳐 쥐눈이콩 추출물의 제조가 가능하다. 쥐눈이콩을 100 내지 500 메쉬 정도로 미세하게 파쇄한 다음 통상적인 미생물 배양액을 1 내지 50 g/L로 첨가하고 효모균 또는 유산균 등의 미생물을 10,000 내지 100,000 cfu/L의 양으로 첨가한다. 배양 온도는 30 내지 37℃의 통상적인 미생물 배양 조건으로 배양하고 pH는 5 내지 7로 호기적 또는 혐기적인 조건에서 약 5 내지 10일간 배양하며, 이후 숙성 및 여과를 통해 추출물을 얻을 수 있다.

상기 단계 3)의 감압농축은 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 감압농축 후 건조할 수 있으며, 건조는 감압 건조, 진공 건조, 비등 건조, 분무 건조, 상온 건조 또는 동결 건조하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 단계 4)의 유기용매는 노르말-헥산, 염화 메틸렌, 에틸아세테이트 또는 노르말-부탄올인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 단계 4)의 분획물은 쥐눈이콩 추출물을 물에 현탁시킨 후 노르말-헥산, 염화 메틸렌, 에틸아세테이트, 노르말-부탄올 및 물로 순차적으로 계통 분획하여 수득한 노르말-헥산 분획물, 염화 메틸렌 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 노르말-부탄올 분획물 또는 물 분획물 중 어느 하나인 것이 바람직하며, 염화 메틸렌 분획물인 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 분획물은 쥐눈이콩 추출물로부터 분획 과정을 1회 내지 5회, 바람직하게는 3회 반복하여 수득할 수 있고, 분획 후 감압농축하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 상기 쥐눈이콩 추출물은 쥐눈이콩을 적당한 크기로 분쇄하여 추출용기에 넣고 에탄올 수용액을 가하여 실온에서 방치한 후, 거름종이로 여과한 뒤 여과액을 농축 및 동결 건조하여 추출물을 얻을 수 있다. 또한, 수득한 쥐눈이콩 추출물을 분별깔때기를 이용하여, 노르말-헥산, 염화 메틸렌, 에틸아세테이트, 노르말-부탄올 및 물 분획물로 순차적으로 계통 분획하여 쥐눈이콩 추출물의 분획물을 얻을 수 있다.

예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 50 중량%의 쥐눈이콩 추출물을 포함하는 것일 수 있다. 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 50 중량%의 쥐눈이콩 추출물을 포함함으로써, 유의적인 각막 손상 및/또는 각막 질환의 예방, 개선 및/또는 치료 효과를 나타내고, 유의적인 효과를 나타내는 효율성 및 경제성 면에서도 우수한 효과가 있다. 구체적으로, 상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.5 내지 45 중량%, 0.5 내지 40 중량%, 0.5 내지 35 중량%, 0.5 내지 30 중량%, 0.5 내지 25 중량%, 0.5 내지 20 중량%, 1.0 내지 15 중량% 또는 1.0 내지 10 중량%의 쥐눈이콩 추출물을 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 약제의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사 용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구투여하거나 비경구투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태, 체중, 연령, 성별, 식이, 배설율, 질환의 중증도, 약물형태, 투여시간, 투여방법, 투여경로 및 투여기간 등에 따라 그 범위가 다양하다. 1일 투여량은 본 발명에 따른 추출물을 동결건조하였을 때의 양으로 0.0001㎎/㎏ 내지 500㎎/㎏, 바람직하게는 0.001㎎/㎏ 내지 100㎎/㎏이며, 필요에 따라 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다.

본 발명의 건강식품 조성물은 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 비스켓, 떡, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등의 형태일 수 있으며, 상기 건강식품은 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 쥐눈이콩 추출물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합 양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 그 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수성분으로서 쥐눈이콩 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명의 쥐눈이콩 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 쥐눈이콩 추출물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 예를 들면 본 발명의 쥐눈이콩 추출물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1. 쥐눈이콩 추출물의 제조

쥐눈이콩(Rhynchosia nulubilis)을 분말화한 후 3 kg의 쥐눈이콩 분말에 2 L의 70% (v/v) 에탄올 용매를 가하고 4시간 동안 초음파 추출한 다음 추출액을 여과하였다. 추출액을 여과한 후 남은 잔사에 다시 15 L의 70% (v/v) 에탄올 용매를 가하고 4시간 동안 초음파 추출하는 방법을 추가로 2회 반복하여 총 추출액 45 L를 수득하였다. 상기 추출액 45 L를 35 ℃에서 감압 농축하여 쥐눈이콩의 에탄올 추출물 150 g을 수득하였다.

실험예 1. 화학적 각막 손상 유발 동물 모델

실험동물은 6 주령, 체중 18-20 g의 수컷 BALB/c 흰쥐를 사용하였으며, 구입 후 7일 동안 실험실 환경 (온도 25 ± 1 ℃, 습도 40 ± 5%)에서 순화시켜 실험에 사용하였다. 각막 손상 유발 동물 모델은 14일 동안 0.2% benzalkonium chloride (BAC, 5 μL)를 하루에 두 번씩 (9 am, 9 pm) 점안하여 유발시켰으며, 정상 대조군의 경우에는 PBS를 점안하였다. 시료의 투여는 실험 시작 3일 후부터, 상기 실시예 1에서 수득한 쥐눈이콩 추출물을 물에 녹여 10~50 mg/kg 용량으로 점안 시간을 피하여 매일 경구투여하였다. 또한, BAC 점안 후 14일이 되었을 때 흰쥐를 희생시켰다.

한편, Benzalkonium Chloride (BAC)는 안약의 보존제로 항균 작용이 우수하며 약제의 안정성과 각막 투과를 증진시키는 작용을 가지고 있어 가장 많이 사용되고 있다. 하지만, 장기간 점안 시 각막 상피 세포의 융해, 세포의 이탈, 형태학적 변화를 일으키는 것뿐만 아니라 접촉성 피부염, 결막염, 비염 등 여러 가지 염증성 병변을 유발하는 것으로 알려져 있다. 사람의 경우 각막 내피 세포의 재생 능력이 거의 없기 때문에 장기간 BAC를 사용하게 되면, BAC에 의한 손상은 더욱 심각하게 나타나게 된다. 특히, 각막 상피 세포가 없거나 기능이 저하되었을 경우, BAC가 함유되어 있는 안약을 사용하게 되면 심한 각막 손상을 유발시킬 수 있다.

실험예 2. 각막 분석 실험 및 실험 결과

상기 실시예 1에서 제조한 쥐눈이콩 추출물의 각막 손상에 대한 보호 효과를 하기와 같이 실험하였다. 구체적으로, 상기 실험예 1에서 BAC으로 유도한 각막 손상 유발 동물 모델에서 쥐눈이콩 추출물의 효과를 확인하기 위하여, 각막의 플루오레세인 염색, 눈물막 안정도 측정, 헤마톡실린 & 에오신 염색법, TUNEL 분석을 사용하여 각막의 상태를 분석하였다.

(1) 각막 플루오레세인 염색 (Corneal fluorescein staining)

실험 동물을 마취시킨 뒤 형광염료 (Fluorescein sodium salt)를 사용하여 각막의 손상 정도를 관찰하였다. 플루오레세인 염색을 하면 각막 상피 세포가 결손된 부위의 기질이 착색된다. 1 μL의 0.1% sodium fluorescein을 실험 동물의 안구에 떨어뜨린 후 slit-lamp를 이용하여 각막 세포의 손상 정도를 촬영하였다.

그 결과, 도 1에서 보는 바와 같이, 정상 대조군과 각막 손상 유발군을 비교해 보았을 때 각막의 손상 부위가 각막 손상 유발군에서 많이 발생하였고 쥐눈이콩 추출물 투여 시 각막 손상이 크게 감소하는 것을 확인하였다. 이에 따라, 쥐눈이콩 추출물이 각막 세포의 손상을 억제하고 각막 손상에 대해 보호 효과를 갖는 것을 알 수 있었다.

(2) 눈물막 파괴시간 (Tear break-up time, TBUT) 측정

눈물막 파괴시간은 각막 상피 세포의 손상 정도로 평가한다. 형광염료 (Fluorescein sodium salt)를 사용하여 눈물막 파괴시간을 측정하였다. 1 μL의 0.1% sodium Fluorescein을 실험 동물의 안구에 떨어뜨린 후 형광염료가 사라지는 시간을 측정하였다.

그 결과, 도 2에서 보는 바와 같이, 각막 손상 유발군에서 눈물막 파괴시간이 크게 감소하였으나, 쥐눈이콩 추출물 투여 시 눈물막 파괴시간이 증가되어 안구건조증 유발 동물 모델에서 쥐눈이콩 추출물을 처리하였을 때 각막 상피 세포를 보호함으로써 눈물막을 안정화시키는 효과가 있음을 확인하였다.

(3) 헤마톡실린 에오신 염색법 (Hematoxylin & Esosin staining)

각막 조직은 절편을 만들어 4% paraformaldehyde (pH 7.4)에 20분 동안 고정시킨 후 PBS로 세척하였다. 이후, 슬라이드 위의 각막 조직을 acetic acid를 이용하여 고정하고, 헤마톡실린으로 핵을 염색한 후 에오신으로 세포질을 염색하였다. 광학 현미경을 사용하여 각막 상피층의 균일성과 각막 상피 세포의 변성을 확인하였다.

그 결과, 도 3에서 보는 바와 같이, 각막 손상 유발군에서 각막 표면이 불균일(화살표 참고)해지고 각막 상피 세포의 변성(원 표시 참고)이 일어나는 것을 확인하였다. 반면, 쥐눈이콩 추출물 투여 시 각막 표면이 불균일해지는 현상이나 각막 상피 세포의 변성을 억제하는 효과가 있음을 확인하였다. 각막 손상 유발군에서 각막의 실질층이 얇아진 반면, 쥐눈이콩 추출물을 투여한 군에서는 이러한 현상을 억제하여 각막 실질층 손상을 억제하고 BAC에 의해 발생된 각막 스크레치를 감소시켜 각막 세포를 보호하는 효과가 있음을 확인하였다. 이에 따라, 쥐눈이콩 추출물이 각막 상피층과 각막 세포 변성을 억제하여 각막 손상에 대해 보호 효과를 갖는 것을 알 수 있었다.

(4) TUNEL 분석 (Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling, TUNEL assay)

각막 손상 유발 동물 모델에서 각막 상피 세포 사멸을 확인하기 위해 TUNEL 분석을 실시하였다. 각막 절편은 in situ cell death detection kit인 POD (Roche, Mannheim, Germany)를 이용하여 세포 내 internucleosomally cleaved DNA의 노출된 3'-OH group에 결합하여 표지되는 TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL)로 염색하여 직접적으로 아포프토시스가 일어나는 세포의 발현 위치와 정도를 관찰하였다.

그 결과, 도 4에서 보는 바와 같이, 각막 손상 유발군에서 각막 상피 세포 사멸이 크게 증가하고, 쥐눈이콩 추출물 투여 시 각막 상피 세포 사멸이 감소하는 것을 확인하였다. 이에 따라, 쥐눈이콩 추출물이 각막 상피 세포층의 각막 상피 세포 사멸을 억제하여 각막 손상을 감소시키고 각막을 보호하는 효과가 있음을 알 수 있었다.

본 명세서의 일 측면에 따른 조성물의 제제예를 아래에서 설명하나, 이는 다른 여러 가지 제제로도 응용이 가능하며, 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

[ 제제예 1] 점안겔제의 제조

쥐눈이콩 추출물 5 ㎎

카르보폴 934 20 ㎎

트리에탄올아민 적량

파라옥신안식향산메칠 2 ㎎

멸균 정제수 ad. 1 g

멸균 정제수에 파라옥신안식향산메칠을 가하고 가열하여 용해시킨 다음 냉각시켜 쥐눈이콩 추출물을 용해시켰다. 여기에 카르보폴 934를 가하여 고속 교반기로 혼합하여 분산시킨 다음 정치하여 공기를 제거하였다. 여기에 트리에탄올아민을 한 방울씩 가하면서 공기가 들어가지 않도록 주의하면서 교반하여 점안겔제를 제조하였다.

[제제예 2] 점안액제의 제조

쥐눈이콩 추출물 5 g

염화벤잘코늄 0.1 g

염화나트륨 5 g

붕산 6.2 g

티록사폴 1.0 g

묽은 염산 적량

멸균 정제수 ad. 1000 ㎖

쥐눈이콩 추출물에 염화나트륨, 붕산을 순서대로 투입하여 용해시키고, 여기에 소량의 멸균 정제수에 용해시킨 염화벤잘코늄, 티록사폴을 가하여 교반하였다. 묽은 염산을 가하여 pH를 조정하였다. 멸균은 0.45 마이크로필터를 사용하여 실시하였다.

[제제예 3] 점안연고제의 제조

쥐눈이콩 추출물 5 ㎎

멸균 정제수 10 ㎎

파라옥시안식향산메칠 2 ㎎

무수 라놀린 100 ㎎

백색 바셀린 ad. 1 g

멸균한 유리제 사발에 쥐눈이콩 추출물과 파라옥시안식향산메칠을 취하고, 쥐눈이콩 추출물을 가하여 녹인 후, 여기에 무수 라놀린을 가하면서 연합하여 균질하게 될 때까지 혼화하여 제조하였다.

[제제예 4] 연질캅셀제

쥐눈이콩 추출물 150 mg, 팜유 2 mg, 팜경화유 8 mg, 황납 4 mg 및 레시틴 6 mg을 혼합하고, 통상의 방법에 따라 1 캡슐당 400 mg씩 충진하여 연질캅셀제를 제조하였다.

[제제예 5] 정제

쥐눈이콩 추출물 150 mg, 포도당 100 mg, 홍삼추출물 50 mg, 전분 96 mg 및 마그네슘 스테아레이트 4 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 40 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하고 타정기를 이용하여 정제로 타정하였다.

[제제예 6] 과립제

쥐눈이콩 추출물 150 mg, 포도당 100 mg, 홍삼추출물 50 mg 및 전분 600 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 100 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 다음 포에 충진하였다. 내용물의 최종 중량은 1 g으로 하였다.

[제제예 7] 드링크제

쥐눈이콩 추출물 150 mg, 포도당 10 g, 홍삼추출물 50 mg, 구연산 2 g 및 정제수 187.8 g을 혼합하고 병에 충진하였다. 내용물의 최종 용량은 200 ml로 하였다.

[ 제제예 8] 건강식품의 제조

쥐눈이콩 추출물 ............... 1000 ㎎

비타민 혼합물

비타민 A 아세테이트...........70 ㎍

비타민 E .................... 1.0 ㎎

비타민 B1.................... 0.13 ㎎

비타민 B2 ................... 0.15 ㎎

비타민 B6.................... 0.5 ㎎

비타민 B12.................... 0.2 ㎍

비타민 C...................... 10 ㎎

비오틴........................ 10 ㎍

니코틴산아미드.............. . 1.7 ㎎

엽산........................... 50 ㎍

판토텐산 칼슘................. 0.5 ㎎

무기질 혼합물

황산제1철..................... 1.75 ㎎

산화아연...................... 0.82 ㎎

탄산마그네슘.................. 25.3 ㎎

제1인산칼륨................... 15 ㎎

제2인산칼슘................... 55 ㎎

구연산칼륨..................... 90 ㎎

탄산칼슘....................... 100 ㎎

염화마그네슘................... 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

[ 제제예 9] 건강음료의 제조

쥐눈이콩 추출물............. 1000 ㎎

구연산.................... 1000 ㎎

올리고당.................. 100 g

매실농축액................. 2 g

타우린..................... 1 g

정제수를 가하여 전체....... 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하였다. 이후, 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용하였다.

상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합 비율을 임의로 변형 실시하여도 무방하다. 본 발명이 속한 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 내용을 바탕으로 본 발명의 범주 내에서 다양한 응용 및 변형을 행하는 것이 가능할 것이다.

이상, 본 발명내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.

Claims

쥐눈이콩(Rhynchosia Nulubilis)의 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는 안구건조증 및 각막찰과상 중 1 이상의 각막 질환을 예방 또는 치료하는 약학 조성물.
삭제
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제 1항에 있어서,
상기 조성물은 각막 상피 세포 사멸 억제 및 각막 상피층 보호 효과를 갖는 것인, 안구건조증 및 각막찰과상 중 1 이상의 각막 질환을 예방 또는 치료하는 약학 조성물.
쥐눈이콩(Rhynchosia Nulubilis)의 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는 안구건조증 및 각막찰과상 중 1 이상의 각막 질환을 개선하는 건강식품 조성물.
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제 6항에 있어서,
상기 조성물은 각막 상피 세포 사멸 억제 및 각막 상피층 보호 효과를 갖는 것인, 안구건조증 및 각막찰과상 중 1 이상의 각막 질환을 개선하는 건강식품 조성물.