KR101862546B1 - 산톱풀 추출물을 이용한 망막질환 개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 시신경 부분 압착모델(partial optic nerve crush; PONC)의 동물실험에서 시신경 압착 손상에 의한 망막신경절세포층의 두께 감소와 망막신경세포의 사멸을 회복시키는 활성을 가진 산톱풀 추출물을 이용한 망막질환 개선용 조성물을 개시한다.

Description

산톱풀 추출물을 이용한 망막질환 개선용 조성물{Composition for Improving Retinal Diseases Using an Extract of Achillea sibirica}

본 발명은 산톱풀 추출물(Achillea sibirica)을 이용한 망막질환 개선용 조성물에 관한 것이다.

망막(Retina)은 안구의 가장 안쪽을 덮고 있는 투명한 신경조직으로 구조적으로는 광수용체층, 신경절세포층(Retinal ganglion cell layer), 신경섬유층 등을 포함한 10개의 층으로 구성되어 있다. 안구로 들어온 빛이 광수용체세포(photoreceptor cell)에서 감지되어 전기적 신호로 전환되면, 신경절세포층에 존재하는 망막신경절세포(Retinal ganglion cell)가 이 전기적 신호를 뇌의 시신경 중추로 전달함으로써, 우리가 사물을 볼 수 있게 된다. 따라서 안압 상승, 고혈압, 당뇨, 혈전, 동맥경화 등에 의해 망막신경절세포가 사멸하게 되면 시력 왜곡이나 시력 상실이 야기될 수 있다. 색소성 망막염(RP), 시신경병증(선천성 레베르시신경병증, 허혈성 시신경병증), 녹내장, 황반변성(노인성, 습성 또는 건성 황반변성), 망막병증(퇴행성 망막병증, 당뇨병성 망막병증, 고혈압성 망박병증, 미숙아 망막병증, 허혈성 망막병증) 등이 이러한 망막신경절세포의 사멸을 수반하는 망막질환 등이다(Eye (Lond). 2004 Nov;18(11):1161-8; Mult Scler Relat Disord. 2016 Jan;5:66-9; Ophthalmol Clin North Am. 2005 Sep;18(3):383-95; European Ophthalmic Review, 2009,3(2):109-112; Brain Res. 2006 May 1;1086(1):191-200; Am J Pathol. 2014 Jun;184(6):1752-62; Invest Ophthalmol Vis Sci. 2010 Jul; 51(7): 3660-3665; Prog Retin Eye Res. 2002 Sep;21(5):465-84; Invest Ophthalmol Vis Sci. 2001 Mar;42(3):795-803; Arch Ophthalmol. 1997 Apr;115(4):511-5; Front Cell Neurosci. 2013 Jan 9;6:60).

특히 망막신경절세포 사멸을 수반하는 대표적 질환이 녹내장인데, 녹내장에서 나타나는 망막신경절세포의 사멸은 세포자살(Apoptosis)로 알려져 있으며, 이는 안압을 상승시킨 동물모델뿐만 아니라 사후 부검을 통해 녹내장 환자에서도 관찰된 바 있다(Invest Ophthalmol Vis Sci., 36, 774-786, 1995; Exp Eye Res., 61, 33-44, 1995). 세포자살(apoptosis)이란, 세포괴사(necrosis)와는 구별되는 세포 내의 자발적이고 계획된 세포사(programmed cell death)로, 망막신경절세포에서는 글루타메이트(glutamate), 사이토크롬 C(cytochrome c), TNF-α(tumor necrosis factor α), Bad(BCL2-antagonist of cell death) 등이 세포자살을 유도하는 것으로 알려져 있고, 산화적 스트레스도 중요한 원인으로 알려져 있다(Arch Ophthalmol., 123:458-463, 2005; J Cell Physiol., 180:182-189, 1999).

이상의 점으로부터, 망막신경절세포에 대하여 보호 효과를 갖는 약물은 녹내장 등 망막신경절세포의 사멸을 수반하는 망막질환의 예방, 치료에 매우 유용할 것으로 기대되며, 실제 그러한 약물에 대한 연구가 활발히 이루어져 왔다(Invest Ophthalmol Vis Sci 45:2640-2651, 2004; Surv Ophthalmol 48:S47-S51, 2003; J Glaucoma 11:221-225, 2002; Curr Eye Res 28:153-157, 2004; Brain 128:550-558, 2005; Neurosci Lett 372:17-21, 2004).

한편 산톱풀은 산가새풀, 자주톱풀이라고도 하는 국화과의 다년초로서, 그 잎은 식품공전(식약처 고시 "식품의 기준 및 규격")에 식용 가능한 원료로도 등재되어 있다. B형 간염 바이러스의 복제 저해 활성(한국 등록특허 제10-0891488호)이 보고되어 있으나 현재까지 특별히 다른 활성에 대해서는 보고된 바 없다.

본 발명은 산톱풀 추출물의 망막신경절세포의 보호 활성과, 망막신경절세포 사멸을 수반하는 망막질환 개선 활성 등을 개시한다.

본 발명의 목적은 산톱풀 추출물을 이용한 망막질환 개선용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 산톱풀 추출물을 이용한 망막신경세포의 보호용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.

본 발명은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 산톱풀 추출물이 시신경 부분 압착모델(partial optic nerve crush; PONC)의 동물실험에서 시신경 압착 손상에 의한 망막신경절세포층의 두께 감소와 망막신경세포의 사멸을 회복시킴을 확인함으로써 완성된 것이다. 상기 시신경 부분 압착모델은 망막신경절세포 자살(apoptosis) 억제 약물 및 시신경 보호 약물의 스크리닝에 널리 이용되고 있는 모델이다(Korean Ophthalmol Soc 51(5):746-750, 2010; Brain. 131:250-263, 2008; Exp Ther Med. 4(3):401-404, 2012).

이러한 실험 결과는 산톱풀 추출물이 망막신경절세포(또는 망막신경세포)의 보호 용도로 유용하게 사용될 수 있음을 보여주는 것이며, 나아가 망막신경세포의 사멸을 수반하거나 이에 따른 시신경 손상을 수반하는 망막질환에도 유용하게 사용될 수 있음을 보여주는 것이라 할 수 있다.

전술한 바를 고려할 때, 일 측면에서 본 발명은 산톱풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 막신경세포의 사멸을 수반하는 망막질환 개선용 조성물로 파악할 수 있고, 다른 측면에 있어서는 산톱풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 망막신경세포 보호용 조성물로 파악할 수 있다.

본 명세서에서, "산톱풀 추출물"이란 추출 대상인 산톱풀 전초, 줄기, 잎, 열매, 꽃, 뿌리, 또는 이들의 혼합물 등을 물, 알콜 특히 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜(메탄올, 에탄올, 부탄올 등), 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출 용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방법을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 조추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물, 더 바람직하게는 추출용매로서 물과 에탄올의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.

또 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

또 본 명세서에서, "망막질환"은 망막신경세포의 사멸을 수반하거나 그에 의한 시신경의 손상을 수반하는 질환으로 정의되며, 색소성 망막염(RP), 시신경병증(선천성 레베르시신경병증, 허혈성 시신경병증), 녹내장, 황반변성(노인성, 습성 또는 건성 황반변성), 망막병증(퇴행성 망막병증, 당뇨병성 망막병증, 고혈압성 망박병증, 미숙아 망막병증, 허혈성 망막병증) 등을 포함하는 의미이다.

또 본 명세서에서, "망막질환 개선"은 망막질환 증상 경감, 치료, 그러한 질환의 예방(발병 억제 또는 지연)을 포함하는 의미이다.

또 본 명세서에서, "망막신경세포의 보호"란 글루타메이트, 산화적 스트레스 등 망막신경세포의 세포자살을 유도하는 내·외적 인자에 의한 망막신경세포의 사멸을 억제하거나 그 사멸을 회복한다는 의미이다.

본 발명의 망막질환 개선용 조성물 또는 망막신경세포 보호용 조성물(이하 "본 발명의 조성물")에서 그 유효성분은 망막질환의 개선 효과, 망막신경세포의 보호 효과 등 나타낼 수 있는 한, 용도, 제형 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함될 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게 의료 전문가 등의 제언에 의한 투여 기간 동안 본 발명의 조성물이 투여될 때, 망막질환의 개선 효과, 망막신경세포의 보호 효과 등 의도한 의료적·약리학적 효과를 나타낼 수 있는, 본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.

본 발명의 조성물은 유효성분 이외에, 망막질환의 개선 활성, 망막신경세포의 보호 활성의 상승·보강을 위하여 또는 눈의 피로도 개선 활성, 안구건조증 개선 활성 등 유사활성의 부가를 통한 복용이나 섭취의 편리성을 위하여, 당업계에서 이미 안전성이 검증되고 해당 활성이 확인된 임의의 화합물이나 천연 추출물을 추가로 포함할 수 있다.

이러한 화합물 또는 추출물에는 각국 약전(한국에서는 "대한민국약전"), 각국 건강기능식품공전(한국에서는 식약처 고시인 "건강기능식품 기준 및 규격"임) 등의 공정서에 실려 있는 화합물 또는 추출물, 의약품의 제조·판매를 규율하는 각국의 법률(한국에서는 "약사법"임)에 따라 품목 허가를 받은 화합물 또는 추출물, 건강기능식품의 제조·판매를 규율하는 각국 법률(한국에서는 "건강기능식품에관한법률"임)에 따라 개별적으로 기능성을 인정받은 화합물 또는 추출물이 포함된다. 예컨대 한국 건강기능식품공전 상의 루테인, 헤마토코쿠스(Haematococcus pluvialis) 추출물, 한국 "건강기능식품에관한법률"에 따라 개별적으로 인정받은 빌베리 추출물, 들쭉 열매 추출물, 루테인과 지아잔틴의 복합 추출물, 루테인 복합물, 마리골드추출물, 지아잔틴추출물 등이 이러한 화합물 또는 추출물에 해당할 것이다.

이러한 화합물 또는 추출물은 본 발명의 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.

본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서 식품 조성물로서 파악할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구루트 등의 가공 유류(乳類), 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다. 또 본 발명의 식품 조성물은 법률상·기능상의 구분에 있어서 제조·유통 시점의 시행 법규에 부합하는 한 임의의 제품 구분을 띨 수 있다. 예컨대 한국 "건강기능식품에관한법률"에 따른 건강기능식품이거나, 한국 "식품위생법"의 식품공전(식약처 고시 "식품의 기준 및 규격"임)상 각 식품유형에 따른 과자류, 두류, 다류, 음료류, 특수용도식품 등일 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 식품첨가물이 포함될 수 있다. 식품첨가물은 일반적으로 식품을 제조, 가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가되어 혼합되거나 침윤되는 물질로서 이해될 수 있는데, 식품과 함께 매일 그리고 장기간 섭취되므로 그 안전성이 보장되어야 한다. 식품의 제조·유통을 규율하는 각국 법률(한국에서는 "식품위생법"임)에 따른 식품첨가물공전에는 안전성이 보장된 식품첨가물이 성분 면에서 또는 기능 면에서 한정적으로 규정되어 있다. 한국 식품첨가물공전(식약처 고시 "식품첨가물 기준 및 규격)에서는 식품첨가물이 성분 면에서 화학적 합성품, 천연 첨가물 및 혼합 제제류로 구분되어 규정되어 있는데, 이러한 식품첨가물은 기능 면에 있어서는 감미제, 풍미제, 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등으로 구분된다.

감미제는 식품에 적당한 단맛을 부여하기 위하여 사용되는 것으로, 천연의 것이거나 합성된 것 모두 본 발명의 식품 조성물에 사용할 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.

풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위한 용도로 사용되는 것으로, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제로서는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.

보존제로서는 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등이 사용될 수 있고, 또 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등이 사용될 수 있으며, 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등이 사용될 수 있다. 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다. 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 전술한 바의 식품첨가물 이외에, 기능성과 영양성을 보충·보강할 목적으로 당업계에 공지되고 식품첨가물로서 안정성이 보장된 생리활성 물질이나 미네랄류를 포함할 수 있다.

그러한 생리활성 물질로서는 녹차 등에 포함된 카테킨류, 비타민 B1, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 B12 등의 비타민류, 토코페롤, 디벤조일티아민 등을 들 수 있으며, 미네랄류로서는 구연산칼슘 등의 칼슘 제제, 스테아린산마그네슘 등의 마그네슘 제제, 구연산철 등의 철 제제, 염화크롬, 요오드칼륨, 셀레늄, 게르마늄, 바나듐, 아연 등을 들 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 전술한 바의 식품첨가물이 제품 유형에 따라 그 첨가 목적을 달성할 수 있는 적량으로 포함될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에 포함될 수 있는 기타의 식품첨가물과 관련하여서는 각국 법률에 따른 식품공전이나 식품첨가물공전을 참조할 수 있다.

본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응 가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 의미이다.

본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 약제학적으로 허용되는 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 및/또는 부형제를 포함하여 제제화할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 점안제, 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제, 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 점안제로 제제화활 경우 적합한 담체로서는 멸균수, 식염수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있으며 필요에 따라 염화벤잘코늄, 메필파라벤, 에틸파라벤 등을 방부 목적으로 첨가할 수 있다. 주사제로 제제화할 경우 적합한 담체로서는 멸균수, 에탄올, 글리세롤이나 프로필렌 글리콜 등의 폴리올 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화할 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화할 수 있으며, 좌제로 제제화할 경우 그 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등을 사용할 수 있다.

약제학적 조성물의 구체적인 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.

본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001mg/kg ~ 10g/kg 범위, 바람직하게는 0.001mg/kg ~ 1g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 산톱풀 추출물을 이용한 망막질환 개선용 조성물을 제공할 수 있다. 본 발명의 조성물은 식품, 의약품 등으로 제품화될 수 있다.

본 발명의 조성물에 유효성분으로 사용되는 산톱풀 추출물은 시신경 부분 압착모델의 동물실험에서 시신경 압착 손상에 의한 망막신경절세포층의 두께 감소와 망막신경세포의 사멸을 회복시키는 효과를 갖는다.

도 1 및 도 2는 각각 산톱풀 추출물이 시신경 부분압착모델의 동물실험에서 시신경 압박에 의한 망막신경절세포층의 두께 감소와 망막신경세포의 사멸 회복 효과를 보여주는 결과이다.

이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 > 산톱풀 추출물의 제조

건조된 산톱풀 지상부 세절물 60g에 300mL의 95% 에탄올을 가하고 3시간 동안 60~80℃에서 온침 추출한 후 추출액을 여과하였다. 추출액을 여과한 후 남은 잔사에 다시 300 mL의 에탄올을 가하고 60-80℃에서 3시간 동안 온침 추출하는 방법을 추가로 1회 반복하였다. 총 추출액을 40℃에서 감압 농축하여 에탄올 추출물 4.44g을 수득하였다. 상기 추출물은 디메틸설폭사이드(Dimethyl sulfoxide; DMSO)에 녹인 후, 하기 실험에 이용되었다.

< 실험예 > 시신경 부분 압착모델로 유도한 C57BL /6J 쥐 망막 시신경세포의 사멸 억제 효과 측정

상기 실시예의 산톱풀 추출물의 시신경 부분 압착모델(partial optic nerve crush ; PONC)로 유도한 C57BL/6J 쥐 망막 시신경세포의 사멸 억제효과를 다음과 같이 확인하였다.

실험 일주일 전부터 C57BL/6J 쥐에 농도에 따라 실시예의 산톱풀 추출물과 대조군인 0.01M PBS를 경구투여 하였다. 2% 럼푼 주사액과 졸레틸을 혼합하여 1ml/kg 근육 주사하여 마취시킨 후 결막 뒤쪽을 혈관을 다치지 않도록 조심스럽게 절개하여 시신경을 노출시킨 후 안구에서 2mm 뒤쪽의 시신경에 크로스 액션 포셉을 이용하여 5초간 압착 손상을 적용하였다. 수술 후 감염을 예방하기 위해 0.5% 비가목스 점안액(ALcon Laboratoriss, Inc. USA)을 한 방울 점안하였다. 실험군에는 산톱풀 추출물 10 mg/kg, 50 mg/kg를 일 1회 경구 투여하였고 대조군에서는 같은 용량의 0.01M PBS를 경구 투여하였다.

시신경 손상 6일 후, 다시 쥐를 마취시킨 후 두피를 절개하였다. 시신경 세포 염색을 위해 시신경과 연결되어 있는 뇌의 상구부위에 수술용 드릴을 이용하여 타공하고 3% FluoroGold를 주입하였다. 절개부위를 봉합하고, 항생연고를 발라주어 감염을 예방하였다. 시신경 손상 12일 후, Phoenix사의 micron4를 이용하여 망막안저 촬영 및 망막단층을 촬영하여 망막신경절세포층의 손상정도를 확인하였다. 또한 안구를 적출하여 4% parafromaldehyde에 4시간 동안 고정하였다. 고정한 안구는 맥락막으로부터 망막을 분리하여 4개의 방사상 절개를 하고, 슬라이드위에 클로버잎 모양으로 마운트하였다. 각 실험군 슬라이드는 형광현미경을 이용하여 형광을 띄는 시신경 세포를 확인하고 40배, 200배 촬영하였다.

망막신경절세포층(GCL)D의 두께를 측정한 결과를 [도 1]에 나타내었고, 망막신경세포 보호 효과를 측정한 결과를 [도 2]에 나타내었다.

[도 1]을 참조하여 보면 시신경 압착 손상에 의해 망막신경절세포층(GCL)의 두께가 음성대조군(Control)에 비해 감소하였으나 산톱풀 추출물을 처리할 경우 농도 의존적으로 유의성 있게 회복되었음을 알 수 있으며, [도 2]를 참조하여 보면 망막신경세포도 시신경 압착 손상에 의해 감소하나 산톱풀 추출물 처리에 의해 농도 의존적으로 유의성 있게 회복되었음을 알 수 있다.

Claims (9)

1. 산톱풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 시신경 압착 손상에 의한 망막신경절세포층의 두께 감소와 망막신경세포의 사멸을 수반하는 망막질환 치료용 약제학적 조성물.
   
2. 삭제
3. 제1항에 있어서,
   상기 산톱풀 추출물은 산톱풀을 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 얻어진 것을 특징으로 하는 망막질환 치료용 약제학적 조성물.
   
4. 산톱풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 시신경 압착 손상에 의한 망막신경절세포층의 두께 감소와 망막신경세포의 사멸을 수반하는 망막질환 개선용 식품 조성물.
   
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7. 제4항에 있어서,
   상기 산톱풀 추출물은 산톱풀을 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 얻어진 것을 특징으로 하는 망막질환 개선용 식품 조성물.
   
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