KR20120086855A - 복분자 씨 기름을 함유하는 알레르기, 아토피 피부염 치료 및 개선용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 복분자 씨 기름(RubuscoreanusMiquelseedoil)을 함유하는 항알레르기, 항아토피 피부염 조성물에 관한 것으로, 복분자 씨 기름은 비만세포의 탈과립 및 사이토카인 생산을 억제함으로서 비만세포의 알레르기 유발물질의 분비를 감소시키는 효과가 우수하며, 알레르기 및 아토피 피부염의 예방, 억제 및 치료에 우수한 효능을 갖는 식품, 화장품, 의약품 및 사료첨가제로서 유용하다.
Description
본 발명은 항알레르기, 항아토피 피부염에 효과를 가지는 복분자 씨 기름(RubuscoreanusMiquelseedoil)에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, 복분자 씨 기름을 함유하는 알레르기, 아토피피부염 개선용 기능성 식품 또는 화장료 조성물에 대한 것이다.
본 발명은 항알레르기, 항아토피 피부염에 효과를 가지는 복분자 씨 기름에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, 복분자 씨 기름을 함유하는 알레르기, 아토피피부염 개선용 기능성 식품 또는 화장료 조성물에 대한 것이다.
현대사회는 점점 복잡해지고 산업과 문명의 발달로 인해 자연환경오염의 증가, 식생활의 변화, 스트레스의 가중 등으로 인해 알레르기성 질환이 매년 증가하고 있다. 1980년에 아토피성 피부염을 비롯한 알레르기 환자는 1%미만이었으나, 2000년대에는 5% 이상으로 급증하고 있으며 잠재적인 환자까지 포함하면 10%가 넘는 것으로 생각되고 있다.
알레르기(allergy)란 이물질(항원, allergen)에 대한 특이하고 변형된 반응을 나타내는 생화학적 현상이며, 이 때 방출 된 물질이 증상을 일으키게 되면 알레르겐(Allergen)이라 하고 그 결과 생긴 질환을 알레르기 질환이라고 한다. 알레르기(Allergy)의 발생원인 항원항체반응의 결과로 나타나는 생체의 병적 과정이며, 일반적으로 반응을 일으키는데 필요한 시간 및 보체관여의 유형으로부터 4종류로 분류하고 있다(Itoh T. et al., Bioorg. Med. Chem., 16:7592-98, 2008). 이 중 제1형은 아나필락틱(anaphylatctic[cytotropic;즉시형]) 형태로 표적기관이 주로 소화장기, 피부 및 폐장으로 일반적인 증상은 위장관알러지, 담마진, 위축성 피부염, 알러지성 비염 및 기관지성 천식 등이 있다. 제1형의 병리기전은 항원이 비만세포와 호염기구의 표면에 부착되어 있는 IgE 항체에 접촉됨으로써 표적세포를 활성화시켜 히스타민, 루코트리엔, PAF 등의 화학매체를 분비하여 혈관과 평활근을 수축시킨다고 알려져 있는데 이는 주로 제4형(지연형)과 복합되는 경우가 많다. 즉, 이 아나필라시스와 알레르기 반응은 비만 세포 등에서 일어나는 다양한 변화에 기인된다. 탈과립을 유도하는 비만세포의 활성화는 Fc 수용제에 대한 항원, 안티(anti)-IgE, 렉틴(lectin) 등의 결합, 아나필라톡신(anaphylatoxin)등의 자극, 칼슘 이오노포어(calcium ionopore), compound 48/80, 코데인(codeine) 등 합성피질 자극 호르몬과 같은 약물에 의해 야기된다.
비만세포 및 혈중 호염구는 여러 가지 알레르기 질환 즉, 알레르기성 비염, 알레르기성 피부염, 천식, 음식 알레르기 및 아나필락틱 쇼크 등을 유발하는 주요체내 세포로 알려져 있다. 이들 세포는 세포표면에 알레르기를 유발하는 항체인 IgE에 대한 수용체(FcRI)를 가지고 있고, 그것은 알레르기를 유발하는 물질(항원, allergen)에 의해 자극을 받아 자신이 가지고 있는 다양한 알레르기를 유발시키는 물질을 세포 바깥으로 분비한다(Kim K. et al., Eur. J. Pharmacol., 581:191-203, 2008).
알레르기를 치료하는 다양한 방법들이 존재하며, 대부분의 현대의 알레르기 치료는 그 원인을 없애기보다는 증상을 완화하는 방향으로 연구가 진행되고 있다. 대표적으로 알레르겐에 의해 비만세포 등에서 분비된 히스타민이나 류코트리엔 등의 수용체에 대한 길항약들이 주를 이루고 이러한 약물들이 거대한 시장을 이루고 있다. 그러나 이러한 약물은 환자에게 투여 후 단기간 내에 내성을 보이기 때문에 일정기간 지난 후 혹은 반복 투여 시 환자들의 증상을 호전시키지 못하는 경우가 많다. 따라서 본 발명에서는 비만세포 등에서 알레르기 물질분비를 원천적으로 차단함으로써 환자에게서 일어나는 항 히스타민제 등의 부작용이 없는 알레르기 치료제를 개발하고자 하였다.
이 외에 다른 치료 방법으로는 알레르기 환자가 앓고 있는 알레르기에 대한 알레르겐을 규명 후 이를 소량씩 수년간 투여하여 그 알레르기를 점차 감소시키는 방법이 있다. 하지만 이 방법은 우선 수년의 치료기간이 필요하고, 아나필락틱 쇼크 등을 유발 시킬 수 있다는 단점이 있다. 다음으로 DNA백신을 사용하는 방법, IgE가 비만세포의 수용체에 결합하는 것을 차단하는 치료법, 그리고 알레르기를 유발 하는 사이토카인인 인터루킨-4(IL-4)에 대한 항체 치료법 등의 치료적 접근법이 있다. 하지만 이러한 접근법들은 비용이 많이 들거나 아직 완전히 그 치료효과가 규명되지 않았다는 단점이 있다.
이에 본 발명자들은 알레르기 및 아토피피부염 등 인간에게 불편함을 주거나 치명적인 다양한 알레르기를 유발하는 비만세포로부터 알레르기 유발물질의 분비를 차단함으로써 그 질환을 치료할 수 있는 물질을 비교적 안전성이 보장되어있는 전통한방약재로부터 확보하고자 예의 노력한 결과, 천연물로부터 오랫동안 사용해오던 다양한 한방약재를 선택하여 실험해 오던 중 복분자 씨 기름이 비만세포로부터 알레르기 유발물질의 분비를 억제한다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 복분자 씨 기름을 함유하는 알레르기, 아토피 피부염의 예방 및 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 알레르기 유발물질의 분비를 차단하여 항알레르기 및 항아토피 피부염 효과를 나타내는 복분자 씨 기름을 제공한다.
복분자는 장미과의 복분자딸기의 채 익지 않은 열매로 만든 약재로 냄새가 없으며 맛은 시고 달며 성질은 따뜻하다. 신(腎)기능을 북돋아 유정(遺精), 몽정(夢精) 등에 사용하며 시력약화에 쓰고 몸을 가볍게 하며 머리를 검게 한다. 또한 살결을 부드럽고 아름답게 하기도 한다. 약리작용으로 항염작용, 항산화작용, 항바이러스작용, 항헬리코박터 파이로리 작용이 보고되었다(Ju H. K., J. Pharm. Biomed. Anal., 49(3):820-7, 2009, Kim T. G. et al., Phytother. Res., 5(8):718-20, 2001) 이와 같은 효능을 지닌 복분자에서 얻어진 복분자 씨는 항산화 효과를 가지는 것으로 보고된 바(Ku C. S. et al., Bioresour. Technol., 299(10):4503-9, 2008)가 있으나, 본 발명의 이전에는 항 알레르기 및 항아토피 피부염 효과에 대해 알려진 바가 없었다.
본 발명의 알레르기, 아토피 피부염의 예방 및 치료용 조성물에 포함되는 복분자 씨 기름은 복분자 씨로부터 추출할 수 있다. 추출방법으로는 대한민국 공개특허공보 제 2000-73295호 및 PCT 특허 제 WO88/05304호에 개시된 바와 같이 유기용매 추출법, 초임계 추출법, 마이크로 웨이브 추출법 및 초음파 추출법 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 복분자 씨 기름을 포함하는 항알레르기, 항아토피 피부염 조성물은 식품, 식이보조제(dietary supplements), 화장품, 의약품, 사료 등에 유용하게 적용될 수 있다.
상기와 같이 복분자 씨 기름을 포함하는 항알레르기, 항아토피 피부염 조성물은 비만세포의 탈과립 및 그에 따른 알레르기 유발물질의 분비를 억제하여 알레르기 및 아토피 피부염의 예방 및 치료에 우수한 효능을 갖는 식품, 화장품, 의약품 및 사료 첨가제로서 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 활성화 된 비만세포에서 분비하는 탈과립(베타 헥소스아미니데이즈)에 대한 복분자 씨 기름의 억제효과를 측정한 결과이다.
도 2는 활성화된 비만세포에서 일어나는 탈과립 현상에 대한 복분자 씨 기름의 탈과립 억제효과를 주사전자현미경(SEM: scanning electron microscope)을 이용하여 촬영한 결과이다.
도 3 은 활성화 된 비만세포에서 염증성 사이토카인인 종양괴사인자-(TNF-)와 인터루킨-4(IL-4), 인터루킨-13(IL-13) 발현에 대한 복분자 씨 기름의 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 2는 활성화된 비만세포에서 일어나는 탈과립 현상에 대한 복분자 씨 기름의 탈과립 억제효과를 주사전자현미경(SEM: scanning electron microscope)을 이용하여 촬영한 결과이다.
도 3 은 활성화 된 비만세포에서 염증성 사이토카인인 종양괴사인자-(TNF-)와 인터루킨-4(IL-4), 인터루킨-13(IL-13) 발현에 대한 복분자 씨 기름의 억제효과를 나타낸 결과이다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: RBL-2H3 비만세포의 탈과립 억제효과
본 발명자들은 복분자 씨 기름이 체내에서 알레르기를 유발하는 비만세포 RBL-2H3(Jeong. H.J. et al., Cytokine, 18:252-9, 2002)로부터 비만세포의 과립 내 존재하는 알레르기 유발물질의 분비 억제효과를 조사하였다. RBL 2H3 세포는 항생제와 10% 우혈청이 보충된 최소배지에서 배양되었다. 분비실험을 하기 위하여 세포를 트립신에 의해 수거한 후, 24-well 배양기에 well당 200,000개의 세포를 상기 최소배지에서 배양하였다. 상기 배양된 세포를 PIPES 완충액(25 mM PIPES, pH 7.2, 159 mM NaCl, 5 mM KCl, 0.4 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 5.6 mM glucose, 및 0.1% BSA)으로 치환한 후, 각각 10, 50, 100 g/ml 농도의 복분자 씨 기름과 1시간 동안 배양 하였다. 1 시간 후 A23187을 최종농도 10 M 농도로 첨가하여 30 분간 자극을 유도하였다. 알레르기 유도물질의 분비정도는 배지중에 분비된 탈과립의 표식자인 베타 헥소스아미니데이즈 (-hexosaminidase)의 활성을 p-nitrophenyl-acetyl--D-glucosaminide로부터 유리된p-nitrophenol의 양으로 결정하였다(Funaba, M. et al., Cell Biol. Int., 27:879-85, 2003). 실험 결과, 도 1에 나타난 것과 같이, 복분자 씨 기름에 의해 비만세포의 탈과립 수치가 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 2: RBL-2H3 비만세포의 활성화 억제효과
상기 실시예1에서 복분자 씨 기름을 처리한 비만세포는 주사전자현미경(SEM: Scanning Electron Microscope)을 통해 관찰하였다. 복분자 씨 기름 및 A23187을 처리한 비만세포의 상층액을 제거한 후 글루타알데하이드(glutaraldehyde fixative) 용액에 1시간 동안 전 고정한 다음 PBS (phosphate buffer saline)용액으로 여러 번 세척하였다. 이어서, 후 고정을 위해 OsO4용액을30분간 처리하고 PBS용액으로 여러 번 세척하였다. 시료 내 수분제거를 위해 농도 별 에탄올로 탈수시킨 후 양면 테이프가 붙은 시료대위에 올려 건조시켰다. 건조된 시료는 플라티늄(Pt)으로 코팅하여 주사전자현미경 (GEOL, JSM-6701F)으로 관찰하였다. 그 결과, 복분자 씨 기름을 처리한 비만세포의 표면이 다공성의 활성화 된 비만세포에 비하여 매끄럽게 관찰되어 탈과립 억제효과가 있음을 관찰 할 수 있었다.
실시예
3:
RBL
-2
H3
비만세포의 사이토카인 생성 억제효과
알레르기에 관계된 비만세포에서 분비되는 사이토카인으로 잘 알려진 종양괴사인자-(TNF-)와 인터루킨-4(IL-4), 인터루킨-13(IL-13)에 대한 복분자 씨 기름의 억제효과를 보기 위해 각각의 사이토카인에 특이적인 primer를 이용 RT-PCR을 실시하였다. 우선 6 well plate에서 복분자 씨 기름을 처리하고 A23187과 PMA로 자극시킨 RBL-2H3 세포를 trizol reagent (Invitrogen)로 용해시켰다. 용해된 시료를 1.5 ml E-tube에 옮긴 후, 클로로포름(chloroform)을 200 l넣어 섞고, 12,000 g에서 20분 동안 원심분리하여 얻은 상층액과 이소프로판올(isopropanol)을 1:1로 섞은 후 12,000 g에서 20 분간 원심분리하여 RNA를 완전히 침전시킨 뒤, 에탄올로 세 번 씻어주고 DEPC-water 30 l에 녹여서 total RNA를 얻었다. PCR (polymerase chain reaction)은 58, 60초, 62, 60 초, 58, 60초를30회 반복하였다. Primer는 rat TNF-는 forward 5CAA GGA GGA GAA GTT CCC AA -3(서열번호 1), reverse는 5CGG ACT CCG TGA TGT CTA AG -3(서열번호 2), IL-4는 forward 5ACC TTG CTG TCA CCC TGT TG-3(서열번호 3), reverse는 5TTG TGA GCG TGG ACT CAT TC -3(서열번호 4), IL-13은 forward 5GCT CTC GCC TTG CCT TGG TGG-3(서열번호 5), reverse는 5CAT CCG AGG CCT TTT GGT TA -3(서열번호 6)이고 rat -actin은 forward 5CCA ACT GGG ACG ATA TG-3(서열번호 7), reverse는 5CAG GGA CAG CAC AGC CT-3(서열번호 8)이다. 그 결과, 복분자 씨 기름에 의한 사이토카인 생산에 대한 억제능은 유의적이고 농도 의존적으로 감소됨을 알 수 있었다. 상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 복분자 씨 기름 추출물은 우수한 항 알레르기 효과가 있는 소재임이 증명되었다.
<110> Office of Research Affairs, Yonsei University
<120> Anti-allergic composition comprising Rubus coreanus Miquel seed
oil
<130> 97319731
<160> 8
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Rat TNF-alpha forward
<400> 1
caaggaggag aagttcccaa 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Rat TNF-alpha reverse
<400> 2
cggactccgt gatgtctaag 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Rat IL-4 forward
<400> 3
accttgctgt caccctgttg 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Rat IL-4 reverse
<400> 4
ttgtgagcgt ggactcattc 20
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Rat IL-13 forward
<400> 5
gctctcgcct tgccttggtg g 21
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Rat IL-13 reverse
<400> 6
catccgaggc cttttggtta 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Rat beta-actin forward
<400> 7
taaccaactg ggacgatatg 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Rat beta-actin reverse
<400> 8
atacagggac agcacagcct 20
Claims (4)
- 복분자 씨 기름을 함유하는 항알레르기, 항아토피 피부염 조성물
- 복분자 씨 기름을 주성분으로 비만세포의 탈과립을 억제하는 것을 특징으로 하는 항알레르기, 항아토피 피부염 조성물
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 복분자 씨 기름을 주성분으로 하여 비만세포의 사이토카인 생산을 감소시키는 것을 특징으로 하는 항알레르기, 항아토피 피부염 조성물
- 제3항의 복분자 씨 기름을 포함하는 것을 특징으로 하는 항알레르기, 항아토피 피부염 조성물
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101510092B1 (ko) * | 2013-03-25 | 2015-04-08 | 재단법인 한국한방산업진흥원 | 복분자 씨 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백 및 피부노화의 예방 및 치료용 조성물 |
| WO2015137633A1 (ko) * | 2014-03-11 | 2015-09-17 | 주식회사 제이크린베리너리 | 복분자유, 라즈베리유 및 오디유 복합 추출물 |
| KR20230111729A (ko) | 2022-01-19 | 2023-07-26 | 연세대학교 원주산학협력단 | 단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 조성물 |
-
2011
- 2011-01-27 KR KR1020110008162A patent/KR20120086855A/ko not_active Application Discontinuation
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| WO2015137633A1 (ko) * | 2014-03-11 | 2015-09-17 | 주식회사 제이크린베리너리 | 복분자유, 라즈베리유 및 오디유 복합 추출물 |
| KR20230111729A (ko) | 2022-01-19 | 2023-07-26 | 연세대학교 원주산학협력단 | 단삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 예방 또는 치료용 조성물 |
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