KR102628628B1 - 효모를 이용한 우유 단백질을 생산하는 방법 및 이를 이용한 우유 단백질을 포함하는 카우-프리 우유 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 우유 단백질 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하도록 유전자 재조합된 효모를 이용하여 우유 단백질을 생산하는 방법 및 이에 따라 생산된 우유 단백질을 포함하는 카우-프리 대체 우유 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 유전자 재조합 효모를 이용한 우유 단백질을 생산하는 방법 및 이를 이용하여 생산된 카우-프리 우유에 관한 것이다.
우유는 물 87%, 지방 4%, 단백질 3.5%, 유당 5%, 미네랄 0.7% 정도의 성분이 콜로이드 형태로 구성되어, 다양한 영양 성분을 포함하고 있어 고대부터 널리 섭취되어 온 건강 음료이다.
최근에는 축산업이 환경에 미치는 영향이나, 동물 복지 차원에서 우유도 섭취하지 않는 채식주의 식단이 널리 확산되는 추세이며, 기호에 따라서는 지방 성분의 섭취량을 줄이기 위하여 대체유를 섭취하는 등 우유를 대체한 새로운 우유 대체 음료가 널리 개발되고 있다.
비건 식품의 하나로서, 아몬드 우유, 오트 우유 등과 같은 식물 원료를 활용한 식물성 대체유가 개발 및 출시되고 있으나, 최근에는 카우-프리 인공 우유도 활발하게 개발되고 있다.
카우-프리 인공 우유는 미생물 발효공정 대체 우유라고도 불리우는데, 우유에 포함되는 단백질을 생산하는 유전자를 합성해 미생물에 주입하고, 유전자 변형 미생물을 설탕과 함께 생물 반응기에 넣어 정밀 발효 과정을 거쳐 우유 단백질을 생산하고, 유전자 변형 미생물이 생산한 우유 단백질을 이용하여 소에서 얻은 우유와 유사한 성분 비율로 제조하여 우유로 제조한다.
우유 속 단백질과 맛·성분이 동일한 비동물성 단백질을 축사가 아닌 실험실에서 만들어 냄으로써, 치즈· 요구르트·아이스크림 등 유제품에 사용될 수 있을 것으로 기대됨에 따라, 해당 기술분야에 대한 기대가 더욱 증가하고 있는 실정이다.
대한민국 공개특허 제2022-0156032호는 재조합 미생물로부터 유기 생성물을 생산하기 위한 생물제조 시스템 및 방법으로서, 유기 기질 생산 능력을 갖는 제1 재조합 미생물을 함유하며, 제1 재조합 미생물은, 적어도 하나의 비-천연 유기 기질 형성 효소 뉴클레오타이드 서열을 발현시킴으로써, 적어도 하나의 유기 기질 형성 재조합 효소를 발현시키며, 유기 기질을 생산하기 위해 탄소 공급원을 사용할 수 있으며, 산소, 적어도 가스, 액체 및 고체 상의 부산물을 포함하는, 적어도 하나의 유기 기질 배양 불순물을 생산하며, 유기 생성물 배양액은 개선된 유기 생성물 생산 능력을 갖는 제2 재조합 미생물을 함유하며, 제2 재조합 유기물은, 적어도 하나의 비-천연 유기 생성물 형성 효소 뉴클레오타이드 서열을 발현시킴으로써, 적어도 하나의 유기 생성물 형성 효소를 발현시키며, 제2 재조합 유기물은 적어도 하나의 유기 생성물을 생산하기 위한 유기 기질을 사용하는 기술을 개시하고 있다.
대한민국 등록특허 제0254063호는 재조합대장균을 이용한 재조합단백질의 제조 방법에 관한 것으로서, 종양괴사인자 (TNF-α)의 아미노 말단을 융합 파트너로 이용하여 외래 단백질을 T7 프로모터 등으로부터 생산할 수 있는 발현 벡터로 형질전환된 대장균을 성장배지의 조성과 주입방법 등을 최적화시켜 고농도로 배양한 다음 배양된 재조합 대장균을 단백질 발현에 최적인 생산배지를 사용하여 유용한 외래 단백질을 고수율로 생산방법을 개시하고 있다.
이러한 기술 개발의 흐름에 따라, 본 발명의 발명자들은 수많은 연구와 실험을 거듭한 끝에 유전자 재조합 미생물을 활용한 카우-프리 인공 우유 조성물과 이의 제조방법을 완성하기에 이르렀다.
본 발명은 유전자 재조합 효모를 이용하여 우유 단백질을 생산하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 우유 단백질의 수득율을 향상시키는 우유 단백질을 생산하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 또한, 유전자 재조합 효모를 이용하여 제조된 우유 단백질이 포함된 카우-프리 대체 우유를 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기와 같은 과제를 해결하기 위한 본 발명에 따른 우유 단백질을 생산하는 방법은, 프로모터 서열, 임의적인 분비 신호 서열, 우유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열, 및 종결 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제조하는 단계, 상기 벡터를 숙주 세포에 도입하는 단계, 배양 배지에서 상기 숙주 세포, 설탕, 폴리옥시에틸렌-60 솔비탄모노라우레이트, 구아검 및 카르복시메틸레반을 넣고 발효시키는 단계 및 상기 우유 단백질을 정제하여 수득하는 단계를 포함하고, 상기 프로모터 서열은 센스 배향으로 임의적인 분비 신호 서열 및 우유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결되고, 임의적인 분비 신호 서열은 센스 배향으로 우유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결되고, 1개 이상의 종결인자 서열은 우유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결되는 것을 포함한다.
본 발명에 있어서, 상기 숙주 세포는 효모 세포일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 발효 단계는, 상기 배양 배지에 숙주 세포 100 중량부, 설탕 5 내지 10 중량부, 폴리옥시에틸렌-60 솔비탄모노라우레이트 3 내지 5 중량부, 구아검 0.1 내지 1 중량부, 및 카르복시메틸레반 0.1 내지 1 중량부를 첨가하는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 우유 단백질은, 알파-락트알부민 및 베타-락토글로불린으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
본 발명은 또한, 상술한 우유 단백질을 생산하는 방법으로 생산된 우유 단백질을 포함하는 포함하는 카우-프리 대체 우유 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 우유 단백질을 생산하는 방법은, 유전자 재조합 효모를 이용하여 비동물적인 방법으로 우유 단백질을 수득할 수 있는 효과를 갖는다.
본 발명은 우유 단백질의 수득율이 향상된 효과를 갖는다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 각 구성을 보다 상세히 설명하나, 이는 하나의 예시에 불과할 뿐, 본 발명의 권리범위가 다음 내용에 의해 제한되지 아니한다.
본 발명에 사용된 "바람직한" 또는 "바람직하게는"은 특정 조건에서 특정 장점을 갖는 본 발명의 실시예를 나타낸다. 그러나, 다른 실시예 또한 동일 조건 또는 다른 조건에서 바람직할 수 있다. 또한, 하나 이상의 바람직한 실시예는 다른 실시예가 유용하지 않다는 것을 의미하는 것은 아니며, 본 발명의 범위 내에 있는 다른 실시예를 배제하는 것도 아니다.
본 명세서에 사용된 "포함한다"는 용어는 본 발명에 유용한 재료, 조성물, 장치, 및 방법들을 나열할 때 사용되며 그 나열된 예에 제한되는 것은 아니다.
특히, 본 발명에서 "포함한다"는 용어는 구성요소를 그대로 포함하는 상태, 구성요소를 전구물질로 하여 가공된 상태, 가공된 후에 구성요소를 만족하는 상태 등과 같이 다양한 상태를 지칭하는 것이며, 그 나열된 예에 제한되는 것은 아니다.
폴리뉴클레오티드의 맥락에서 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "코딩하는"은 적절한 조절 서열의 제어하에 놓일 때 폴리펩티드로 번역될 수 있는 mRNA로 전사되는 코딩 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다.
코딩 서열은 일반적으로 개시 코돈 (예를 들어, ATG)에서 시작하고, 종결 코돈 (예를 들어, UAA, UAG 및 UGA)에서 종결된다. 코딩 서열은 단일 오픈 리딩 프레임 또는 (예를 들어, 인트론에 의해 분리된) 몇몇 오픈 리딩 프레임을 함유할 수 있다.
용어 "숙주 세포"는 특정한 대상 세포 뿐만 아니라 이러한 세포의 자손을 지칭한다. 특정한 변형이 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 후속 세대에서 발생할 수 있기 때문에, 이러한 자손은 실제로 대상 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 본원에서 사용된 용어 "숙주 세포"의 범위 내에 여전히 포함된다.
용어 "우유 단백질"은 유청 단백질 또는 카세인을 지칭한다. 우유 단백질은 소, 인간 등을 비롯하여 이로 제한되지 않는 임의의 포유동물 종으로부터 유래될 수 있다.
용어 "작동가능하게 연결된"은 요소들이 기능적으로 관련될 수 있도록 하는 그들의 배열을 지칭한다. 예를 들어, 프로모터 서열이 단백질 코딩 서열의 전사를 제어하는 경우, 그는 단백질 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 것이고, 분비 신호 서열이 세포의 분비 시스템을 통해 단백질을 지시하는 경우, 분비 신호 서열은 단백질에 작동가능하게 연결된 것이다. "작동가능하게 연결된" 요소는 또 다른 요소와 연속적으로 연결될 수 있거나, 또는 또 다른 요소와 트랜스로 또는 거리를 두고 작동할 수 있다. 작동가능하게 연결될 수 있는 기능의 비제한적인 예에는 전사의 제어, 번역의 제어, 단백질 폴딩, 및 단백질 분비가 포함된다.
용어 "폴리뉴클레오티드"는 적어도 2개의 뉴클레오티드의 중합체 형태를 지칭한다. 상기 용어는 DNA 분자 및 RNA 분자의 센스 및 안티센스 가닥 모두, 뿐만 아니라 비-자연 뉴클레오티드 유사체, 비-천연 뉴클레오시드간 결합, 및/또는 화학적 변형을 함유하는 DNA 또는 RNA의 유사체를 포함한다. 폴리뉴클레오티드는 화학적으로 또는 생화학적으로 변형될 수 있거나 또는 비천연 또는 유도체화된 뉴클레오티드 염기를 함유할 수 있다.
용어 "폴리펩티드" 및 "단백질"은 상호교환될 수 있고, "폴리펩티드" 또는 "단백질"은 활성 구조를 갖거나 또는 기능적 구조가 결여될 수 있고, 코딩된 및/또는 코딩되지 않은 아미노산을 포함할 수 있고, 자연 발생하는 아미노산 및/또는 자연 발생하지 않는 아미노산을 포함할 수 있고, 화학적으로 변형된 및/또는 생화학적으로 변형된 및/또는 유도체화된 아미노산을 포함할 수 있고, 비변형된 및/또는 변형된 펩티드 백본을 포함할 수 있고/거나, 단량체 또는 중합체일 수 있다.
용어 "아미노산 서열"은 "폴리펩티드" 또는 "단백질"에 포함되거나또는 "폴리펩티드" 또는 "단백질"을 구성하는 아미노산의 서열을 지칭한다.
용어 "프로모터 서열"은 세포에서 하류 폴리뉴클레오티드의 전사를 지시하는 폴리뉴클레오티드를 의미한다. 프로모터 서열은 폴리머라제 II 유형 프로모터의 경우 TATA 요소와 같이 전사 개시 부위 근처에 필요한 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 프로모터 서열은 또한 임의적으로 전사 개시 부위로부터 수천 개의 염기 쌍만큼 떨어져 위치할 수 있는 원위 인핸서 또는 억제자 요소를 포함할 수 있다.
용어 "재조합 폴리뉴클레오티드"는 그의 자연 발생 환경으로부터 제거된 폴리뉴클레오티드, 또는 자연에서 발견될 때 폴리뉴클레오티드와 인접한 또는 근접한 폴리뉴클레오티드의 전부 또는 일부와 회합되지 않은 폴리뉴클레오티드, 또는 자연에서는 연결되지 않는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드, 또는 자연에서 발생하지 않는 폴리뉴클레오티드, 또는 자연에서 해당 폴리뉴클레오티드에서 발견되지 않는 변형 (예를 들어, 인공적으로, 예를 들어 인간 개입에 의해 도입된 삽입, 결실, 또는 점 돌연변이)을 함유하는 폴리뉴클레오티드, 또는 이종성 부위에서 염색체에 통합된 폴리뉴클레오티드를 지칭한다.
용어 "조절 요소"는 조절 요소가 작동가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드의 발현(예를 들어, 전사, 전사후 사건, 번역)을 매개, 조정 또는 조절하는 폴리뉴클레오티드 서열을 지칭한다.
용어 "분비 신호"는 단백질의 N-말단에 작동가능하게 연결되고, 단백질이 생성되는 (즉, 합성되는) 숙주 세포의 세포내 분비 경로를 통해 숙주 세포의 외부로 단백질의 전달을 매개하는 펩티드를 지칭한다. 전형적으로, 재조합 단백질과 분비 신호의 작동가능한 연결은 재조합 단백질을 코딩하는 폴리뉴 클레오티드 서열의 개시 코돈의 제거를 필요로 한다.
용어 "벡터"는 숙주 세포에 도입될 폴리뉴클레오티드 서열을 운반할 수 있는 핵산을 지칭한다. 벡터의 비제한적인 예에는 클로닝 벡터, 발현 벡터, 셔틀 벡터, 플라스미드, 파지 입자, 바이러스 벡터, 코스미드, 박테리아 인공 염색체 (BAC), 효모 인공 염색체 (YAC), 바이러스 입자, DNA 구축물 (예를 들어, 클로닝 또는 PCR 증폭에 의해 생성됨), 및 선형 이중 가닥 분자 (예를 들어, PCR 단편)가 포함된다. 특정한 벡터는 그들이 도입되는 숙주 세포에서 자율 복제할 수 있다.
용어 "효모"는 사카로마이세탈레스(Saccharomycetales) 목의 임의의 유기체를 지칭한다. 효모의 영양 생장은 단세포 엽상체의 출아/수포화에 의한 것이며, 탄소 이화작용은 발효적일 수 있다.
본 발명에 따른 우유 단백질을 생산하는 방법은,
프로모터 서열, 임의적인 분비 신호 서열, 우유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열, 및 종결 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제조하는 단계;
상기 벡터를 숙주 세포에 도입하는 단계;
배양 배지에서 상기 숙주 세포, 설탕, 폴리옥시에틸렌-60 솔비탄모노라우레이트, 구아검 및 카르복시메틸레반을 넣고 발효시키는 단계; 및
상기 우유 단백질을 정제하여 수득하는 단계;
를 포함하고,
상기 프로모터 서열은 센스 배향으로 임의적인 분비 신호 서열 및 우유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결되고, 임의적인 분비 신호 서열은 센스 배향으로 우유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결되고, 1개 이상의 종결인자 서열은 우유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결되는 구성을 갖는다.
본 발명에서, 상기 벡터는 프로모터 서열, 임의적인 분비 신호 서열, 우유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열, 및 종결 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하되, 숙주 세포에서 재조합 벡터의 전파에 적합한 하나 이상의 다른 요소를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 다른 요소의 비제한적인 예에는 복제 및 선택 마커의 기점이 포함된다. 복제 및 선택 마커의 기점은 관련 기술분야에 공지된 기술을 참고할 수 있다. 선택 마커는 선택적인 마커의 생성을 감소시키는 변경을 포함할 수 있으며, 따라서 재조합 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포가 선택하에 생존할 수 있도록 허용하는데 필요한 카피의 수를 증가시킨다. 선택은 또한 공동-형질전환에 의해 달성될 수 있으며, 형질전환은 두 벡터의 혼합에 의해 수행되고, 선택은 한 벡터에 대해서만 이루어진다.
상기 벡터는 숙주 세포의 게놈 내에 안정하게 통합될 수 있고 그 기술에 관하여는 공지된 임의의 적합한 기술을 참고할 수 있다.
상기 숙주 세포는 효모 세포일 수 있으며, 효모의 유도체 및 교배물이 포함된다.
상기 벡터는 하기 중 어느 것에 다른 재조합 숙주 세포에서 활성인 임의의 프로모터 서열을 포함할 수 있다.
프로모터 서열은 구성적 프로모터 서열 (즉, 대부분의 환경 및 발달 조건하에 활성인 프로모터 서열), 또는 유도성 또는 억제성 프로모터 서열일 수 있다.
프로모터 서열은 단일 프로모터 서열 또는 2개 이상의 프로모터 서열 (예를 들어, 서열에서 배열된 2개 이상의 프로모터 또는 그의 기능적 부분의 조합물, 유도성 및 구성적 프로모터의 조합물)로 이루어질 수 있다. 2개 이상의 프로모터 서열은 동일할 수 있거나, 또는 2개 이상의 프로모터 서열 중 적어도 2개는 동일하지 않을 수 있다.
프로모터 서열은 양방향 프로모터 서열 (즉, 예를 들어 2개의 동일한 또는 상이한 프로모터를 반대 방향으로 융합시킴으로써 생성된 전사 인자를 동원함으로써 양쪽 배향 모두에서 전사를 개시하는 폴리뉴클레오티드)을 포함할 수 있거나 또는 그로 이루어질 수 있다.
적합한 프로모터 서열의 비제한적인 예에는 진균 숙주 세포에서 기능성인 프로모터 서열, 예컨대 xlnA 프로모터, xyn1 프로모터, xyn2 프로모터, xyn3 프로모터, xyn4 프로모터, bxl1 프로모터, cbh1 프로모터, cbh2 프로모터, egl1 프로모터, egl2 프로모터, egl3 프로모터, egl4 프로모터, egl5 프로모터, glaA 프로모터, agdA 프로모터, gpdA 프로모터, gpd1 프로모터, AOX1 프로모터, GAP1 프로모터, MET3 프로모터, ENO1 프로모터, GPD1 프로모터, PDC1 프로모터, TEF1 프로모터, AXE1 프로모터, CIP1 프로모터, GH61 프로모터, PKI1 프로모터, RP2 프로모터, ADH1 프로모터, CUP1 프로모터, GAL1 프로모터, PGK1 프로모터, YPT1 프로모터, LAC4 프로모터, LAC4-PB1 프로모터, FLD1 프로모터, MOX 프로모터, DAS1 프로모터, DAS2 프로모터, GAP1 프로모터, STR3 프로모터, ADH3 프로모터, GUT2 프로모터, CYC1 프로모터, TDH3 프로모터, PGL1 프로모터, ADH2 프로모터, HXT7 프로모터, CLB1 프로모터, 및 PHO5 프로모터, 및 이들의 기능적 부분 및 조합물이 포함된다.
상기 벡터는 임의적으로 하기 중 어느 것에 다른 재조합 숙주 세포에서 활성인 임의의 분비 신호 서열을 포함할 수 있다.
임의적인 분비 신호 서열은 초기 재조합 단백질이 번역 후에 (즉, 초기 재조합 단백질이 ER로 전위되기 전에 세포질에 존재하도록 단백질 합성이 전위보다 선행함) 또는 번역과 동시에 (즉, 단백질 합성 및 ER로의 전위가 동시에 발생함) ER로 전위되는 것을 매개하는 분비 신호를 코딩할 수 있다.
적합한 분비 신호 서열의 비제한적인 예에는 진균 숙주 세포에서 기능성인 분비 신호 서열, 예컨대 하기단백질: CBH1, CBH2, EGL1, EGL2, XYN1, XYN2, BXL1, HFB1, HFB2, GLAA, AMYA, AMYC, AAMA, 알파 메이팅 인자, SUC2, PHO5, INV, AMY, LIP, PIR, OST1, 및 β-글루코시다제, 및 이들의 기능적 부분 및 조합물 중 어느 것을 코딩하는 유전자의 분비 신호 서열이 포함된다.
상기 벡터는 하기 중 어느 것에 다른 재조합 숙주 세포에서 활성인 임의의 종결 서열을 포함할 수 있다.
적합한 종결 서열의 비제한적인 예에는 종결 서열이 포함되고, adh1, amaA, amdS, amyA, aox1, cbh1, cbh2, cyc1, egl1, egl2, gal1, gap1, glaA, gpd1, gpdA, pdc1, pgk1 tef1, tps1, trpC, xyn1, xyn2, xyn3, 및 xyn4 유전자, 및 이들의 기능적 부분 및 조합물의 종결 서열이 포함된다.
종결 서열은 단일 종결 서열 또는 2개 이상의 종결 서열로 이루어질 수 있고, 2개 이상의 종결 서열은 동일할 수 있거나, 또는 2개 이상의 종결 서열 중 적어도 2개는 동일하지 않을 수 있다. 종결 서열은 양방향 종결 서열로 이루어질 수 있다.
상기 벡터는 추가의 조절 요소를 추가로 포함할 수 있다. 조절 요소의 비제한적인 예에는 프로모터 서열, 종결 서열, 전사 시작 서열, 번역 시작 서열, 번역 정지 서열, 인핸서 서열, 활성화제 서열, 반응 요소, 단백질 인식 부위, 유도성 요소, 단백질 결합 서열, 5' 및 3' 비번역 영역 (예를 들어, 폴리-아데닐화 신호를 포함하는 3' 비번역 영역), 상류 활성화 서열 (UAS), 인트론, 오퍼레이터 (즉, 단백질-결합 도메인을 포함하는 프로모터에 인접한 핵산의 서열이며, 억제자 단백질은 프로모터에 결합하여 그의 활성을 감소시키거나 제거할 수 있음), 효율적인 RNA 가공 신호 (예를 들어, 스플라이싱 신호, 폴리아데닐화 신호), 세포질 mRNA를 안정화시키는 서열, 번역 효율을 증강시키는 서열 (예를 들어, 리보솜 결합 부위 [예를 들어, 샤인-달가노(Shine-Dalgarno) 서열]), 단백질 안정성을 증강시키는 서열, 및 단백질 분비를 증강시키는 서열, 및 이들의 조합물이 포함된다.
본 발명에서, 우유 단백질의 생산은 유전자 재조합된 효모를 적합한 조건하에 배양 배지 중에서 상기 중 어느 것에 다른 재조합 숙주 세포를 발효하여 생산된다.
재조합 단백질을 생성하는데 적합한 조건은 전형적으로 상기 중 어느 것에 따른 재조합 숙주 세포가 성장할 수 있고/거나 생존을 유지할 수 있고, 재조합 단백질을 생성할 수 있는 조건이다.
적합한 조건의 비제한적인 예에는 적합한 배양 배지 (예를 들어, 적합한 영양분 함량 [예를 들어, 적합한 탄소 함량, 적합한 질소 함량, 적합한 인 함량], 적합한 보충제 함량, 적합한 미량 금속 함량, 적합한 pH를 갖는 배양 배지), 적합한 온도, 적합한 공급 속도, 적합한 압력, 적합한 산소화 수준, 적합한 발효 기간 (즉, 재조합 숙주 세포를 포함하는 배양 배지의 부피), 적합한 발효 부피 (즉, 재조합 숙주 세포를 포함하는 배양 배지의 부피), 및 적합한 발효 용기가 포함된다.
적합한 배양 배지에는 재조합 숙주 세포가 성장할 수 있고/거나 생존을 유지할 수 있고, 재조합 단백질을 생성할 수 있는 것인 모든 배양 배지가 포함된다. 전형적으로, 배양 배지는 탄소 공급원, 동화성 질소 공급원 (즉, 재조합 숙주 세포에 의한 대사 이용에 적합한 형태로 질소를 방출할 수 있는 질소-함유 화합물), 및 포스페이트 공급원을 포함하는 수성 배지이다.
탄소 공급원의 비제한적인 예에는 단당류, 이당류, 다당류, 아세테이트, 에탄올, 메탄올, 글리세롤, 메탄, 및 이들의 조합물이 포함된다. 단당류의 비제한적인 예에는 덱스트로스 (글루코스), 프럭토스, 갈락토스, 크실로스, 아라비노스, 및 이들의 조합물이 포함된다. 이당류의 비제한적인 예에는 수크로스, 락토스, 말토스, 트레할로스, 셀로비오스, 및 이들의 조합물이 포함된다. 다당류의 비제한적인 예에는 전분, 글리코겐, 셀룰로스, 아밀로스, 헤미셀룰로스, 말토덱스트린, 및 이들의 조합물이 포함된다.
동화성 질소 공급원의 비제한적인 예에는 무수 암모니아, 황산암모늄, 수산화암모늄, 질산암모늄, 인산이암모늄, 인산일암모늄, 피로인산암모늄, 염화암모늄, 질산나트륨, 우레아, 펩톤, 단백질 가수분해물, 옥수수 침지액, 옥수수 침지 고체, 폐곡물, 폐곡물 추출물, 및 효모 추출물이 포함된다. 암모니아 기체의 사용은 대규모 작업에 편리하고, 수성 발효물 (발효 배지)을 통해 적합한 양으로 버블링시킴으로써 이용될 수 있다.
상기 배양 배지는 무기 염, 무기질 (예를 들어, 마그네슘, 칼슘, 칼륨, 나트륨; 예를 들어 적합한 가용성 동화성 이온성 및 조합된 형태로), 금속 또는 전이 금속 (예를 들어, 구리, 망가니즈, 몰리브데넘, 아연, 철, 붕소, 아이오딘; 예를 들어 적합한 가용성 동화성 형태로), 비타민, 및 임의의 다른 영양분 또는 기능적 성분 (예를 들어,재조합 단백질의 분해를 방지할 수 있는 프로테아제 [예를 들어, 식물-기반 프로테아제], 재조합 단백질을 분해할 수 있는 프로테아제의 활성을 감소시킬 수 있는 프로테아제 억제제, 및/또는 프로테아제 활성을 제거할 수 있는 희생 단백질, 소포제, 항미생물제, 계면활성제, 유화 오일)을 추가로 포함할 수 있다.
적합한 배양 배지는 상업적인 공급자로부터 하는 것이 바람직하다.
본 발명에서는 특히, 유전자 재조합된숙주세포와 함께 설탕, 폴리옥시에틸렌-60 솔비탄모노라우레이트, 구아검 및 카르복시메틸레반을 첨가하여 발효를 진행하는 것을 특징으로 한다.
보다 상세하게는, 상기 배양 배지에 숙주 세포 100 중량부, 설탕 5 내지 10 중량부, 폴리옥시에틸렌-60 솔비탄모노라우레이트 3 내지 5 중량부, 구아검 0.1 내지 1 중량부, 및 카르복시메틸레반 0.1 내지 1 중량부를 첨가하는 것일 수 있다.
이러한 과정에 의하여, 우유 단백질의 수율이 향상된 효과를 가진다.
재조합 단백질(우유 단백질)을 (예를 들어, 발효 브로쓰로부터) 정제하여 재조합 단백질을 포함하는 제제를 수득하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 상기 중 어느 것에 따른 재조합 단백질을 정제하도록 적합화될 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 재조합 단백질은 그의 분자량을 기반으로 하여, 예를 들어 크기 배제/교환 크로마토그래피, 막을 통한 한외여과, 겔 투과 크로마토그래피 (예를 들어, 제조용 디스크-겔 전기영동), 또는 밀도 원심분리에 의해 정제될 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 재조합 단백질은 또한 그의 표면 전하 또는 소수성/친수성을 기반으로 하여, 예를 들어 등전 침전, 음이온/양이온 교환 크로마토그래피, 등전점 전기이동 (IEF), 또는 역상 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 재조합 단백질은 또한 그의 용해도를 기반으로 하여, 예를 들어 황산암모늄 침전, 등전침전, 계면활성제, 세제, 또는 용매 추출에 의해 정제될 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 재조합 단백질은 또한 또 다른 분자에 대한 그의 친화도를 기반으로 하여, 예를 들어 친화도 크로마토그래피, 반응성 염료, 또는 히드록시아파타이트에 의해 정제될 수 있다. 친화도 크로마토그래피에는 재조합 단백질에 대해 특이적인 결합 친화도를 갖는 항체, 또는 재조합 단백질 상의 당 모이어티에 결합하는 렉틴, 또는 재조합 단백질에 특이적으로 결합하는 임의의 다른 분자의 사용이 포함될 수 있다. 재조합 단백질은 재조합 단백질의 친화도-기반 정제를 용이하게 하기 위해 그의 C-말단, N-말단 또는 이들 둘 다에 작동 가능하게 연결된 정제 태그를 포함할 수 있다. 적합한 정제 태그의 비제한적인 예에는 친화도 태그 (즉, 특정한 작용제 또는 매트릭스에 결합하는 펩티드 또는 폴리펩티드), 가용화 태그 (즉, 단백질의 적합한 폴딩을 보조하고 침전을 방지하는 펩티드 또는 폴리펩티드), 크로마토그래피 태그 (즉, 특정한 분리 기술에 걸쳐 상이한 분해능을 제공하기 위해 단백질의 크로마토그래피 성질을 변경시키는 펩티드 또는 폴리펩티드), 에피토프 태그(즉, 항체에 의해 결합되는 펩티드 또는 폴리펩티드), 형광 태그, 발색 태그, 효소 기질 태그 (즉, 특이적인 효소 반응에 대한 기질인 펩티드 또는 폴리펩티드), 화학적 기질 태그 (즉, 특이적인 화학적 변형에 대한 기질인 펩티드 또는 폴리펩티드), 자가-절단 태그 (유도성 단백질분해 활성을 갖는 펩티드 또는 폴리펩티드; 예를 들어, 소르타제 태그, Npro 태그, FrpC 모듈, CPD), 소수성 태그 (고도로 소수성이며, 봉입체 형성을 위해 단백질을 지시하는 단백질 또는 폴리펩티드; 예를 들어, KSI 태그, TrpE 태그), 또는 이들의 조합물이 포함된다.
적합한 친화도 태그의 비제한적인 예에는 말토스 결합 단백질 (MBP) 태그, 글루타티온-S-트랜스퍼라제 (GST) 태그, 폴리(His) 태그, 헥사(His) 태그, SBP-태그, Strep-태그, 및 칼모듈리-태그가 포함된다. 적합한 가용성 태그의 비제한적인 예에는 티오레독신 (TRX) 태그, 폴리(NANP) 태그, MBP 태그, SUMO 태그, GB1 태그, NUSA CBD태그, 및 GST 태그가 포함된다. 크로마토그래피 태그의 비제한적인 예에는 다중음이온성 아미노산 태그 (예를 들어, FLAG-태그) 및 폴리글루타메이트 태그가 포함된다. 에피토프 태그의 비제한적인 예에는 V5-태그, VSV-태그, E-태그, NE-태그, 헤마글루티닌 (Ha)-태그, Myc-태그, 및 FLAG-태그가 포함된다. 형광 태그의 비제한적인 예에는 녹색 형광 단백질 (GFP) 태그, 청색 형광 단백질 (BFP) 태그, 시안색 형광 단백질 (CFP) 태그, 황색 형광 단백질 (YFP) 태그, 오렌지색 형광 단백질 (OFP) 태그, 적색 형광 단백질 (RFP) 태그, 및 그의 유도체가 포함된다. 효소 기질 태그의 비제한적인 예에는 비오틴화에 적합한 서열 내에 리신을 포함하는 펩티드 또는 폴리펩티드 (예를 들어, AviTag, 비오틴 카르복실 운반 단백질 [BCCP])가 포함된다. 화학적 기질 태그의 비제한적인 예에는 FIAsH-EDT2와의 반응에 적합한 기질이 포함된다.
상기 중 어느 것에 따른 재조합 단백질이 상기 중 어느 것에 다른 재조합 숙주 세포에 의해 분비되는 것인 실시 양태에서, 재조합 단백질은 배양 배지로부터 직접적으로 정제될 수 있다. 다른 실시양태에서, 재조합 단백질은 세포 용해물로부터 정제하여 수득될 수 있다.
이와 같이 수득된 우유 단백질은, 알파-락트알부민 및 베타-락토글로불린으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다. 바람직하게는, 알파-락트알부민일 수 있다.
본 발명에서는, 조성물 전체 중량을 기준으로 0.0001 내지 0.01 중량%의 알파-락트알부민을 포함하는 카우-프리 대체 우유 조성물로 제공될 수 있다.
이하, 본 발명의 실시예를 기초로 보다 상세히 설명하나 이는 본 발명의 이해를 위한 하나의 예시적인 기재에 불과한 것일 뿐, 본 발명의 권리범위가 다음의 실시예로 한정되거나 제한되지 아니한다.
<실시예 1>
숙주 세포에서 발현을 위해 코돈-최적화되고, N-말단 분비 신호 서열 (사카로마이세스 세레비지아에 알파 교배 인자의 프리 또는 프리-프로 신호 펩티드)에 작동가능하게 연결되고; 적합한 프로모터 (gap 또는 aox1 유전자의 프로모터 서열) 및 종결인자 (피치아 숙주세포의 경우 aox1 유전자의 종결인자 서열)의 제어하에 있는 알파-락트알부민을 코딩하는 단백질 코딩 서열을 포함하는 재조합 벡터를 제조한다. 숙주 세포의 게놈으로의 (피치아 숙주 세포의 경우 aox1 유전자좌로의) 발현 구축물의 통합을 지시할 수 있는 폴리뉴클레오티드, 박테리아 및/또는 진균 형질전환체의 선택을 위한 선택 마커, 및 박테리아 복제 기점을 추가로 포함한다. 박테리아 선택 마커 및 복제 기점은 숙주 세포로의 재조합 벡터의 형질전환 전에 제한 효소 소화를 통해 재조합 벡터로부터 제거된다.
재조합 벡터는 피치아 숙주 세포로 형질전환되고, 형질전환체는 양성 선택을 위해 최소 배지 또는 항생제 상에서 성장시켜 선택된다. 형질전환체를 24-웰 플레이트에서 배양하고, 배양 상청액을 수확하여 SDS-PAGE 겔 분석에 의해 발현 구축물의 통합된 카피를 포함하고 재조합 단백질의 분비하는 재조합 숙주 세포를 식별한다.
재조합 숙주 세포는 재조합 단백질의 세포 성장 및 생성을 허용하는 조건하에 교반된 발효 용기에서 발효된다.
발효는 약 20 g 내지 약 50 g 건조 세포 중량 (DCW)/L의 바이오매쓰 농도에서 적어도 100 시간 후에 수확된다. 이 때 발효 배지 내에 숙주 세포의 건조 세포 중량 100 중량부, 설탕 7 중량부, 폴리옥시에틸렌-60 솔비탄모노라우레이트 3 중량부, 구아검 0.2 중량부, 및 카르복시메틸레반 0.3 중량부를 더 추가한다.
발효를 완료한 후 이로부터 알파-락트알부민만을 수득하고, 단백질의 수득량을 비교하는 실험을 진행하였다.
<비교예 1>
상기 실시예 1에서, 발효 배지 내에, 설탕 7 중량부, 폴리옥시에틸렌-60 솔비탄모노라우레이트 3 중량부, 구아검 0.2 중량부, 및 카르복시메틸레반 0.3 중량부를 더 추가하는 대신, 설탕 7 중량부만을 첨가하여 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 진행하였다.
<비교예 2>
상기 실시예 1에서, 발효 배지 내에, 설탕 7 중량부, 폴리옥시에틸렌-60 솔비탄모노라우레이트 3 중량부, 구아검 0.2 중량부, 및 카르복시메틸레반 0.3 중량부를 더 추가하는 대신, 설탕 7 중량부와 구아검 0.2 중량부만을 첨가하여 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 진행하였다.
[실험방법]
1. 우유 단백질 수득율 평가
- 시험방법: 각 시험 샘플을 발효 전 숙주 세포(건조 중량) 단위 중량 당 우유 단백질의 상대 수득량을 계산하였다. 비교예 1의 수득량을 기준으로 상대값을 계산하여 아래 표 1에 나타냈다.
| 우유 단백질 상대 수득율(%) | |
| 실시예 1 | 142 |
| 비교예 1 | 100 |
| 비교예 2 | 94 |
상기 표 1을 참고하면, 비교예 1과 대비하여, 실시예의 우유 단백질 수득율이 더 높은 것을 확인할 수 있다. 비교예 2에서는 오히려 수득율이 다소 감소한 반면, 설탕과 함께 폴리옥시에틸렌-60 솔비탄모노라우레이트, 구아검, 및 카르복시메틸레반을 첨가하는 경우, 우유 단백질의 수득율, 즉, 발효 효율이 향상되는 효과를 가지는 것을 확인할 수 있다.
Claims (5)
- 프로모터 서열, N-말단 분비 신호 서열, 우유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열, 및 종결 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제조하는 단계;
상기 벡터를 효모 세포에 도입하는 단계;
배양 배지에서 상기 효모 세포, 설탕, 폴리옥시에틸렌-60 솔비탄모노라우레이트, 구아검 및 카르복시메틸레반을 넣고 발효시키는 단계; 및
상기 우유 단백질을 정제하여 수득하는 단계;
를 포함하고,
상기 프로모터 서열은 센스 배향으로 N-말단 분비 신호 서열 및 우유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결되고, N-말단 분비 신호 서열은 센스 배향으로 우유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결되고, 1개 이상의 종결인자 서열은 우유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결되는 것이고,
상기 발효 단계는, 상기 배양 배지에 효모 세포의 건조 세포 중량 100 중량부, 설탕 5 내지 10 중량부, 폴리옥시에틸렌-60 솔비탄모노라우레이트 3 내지 5 중량부, 구아검 0.1 내지 1 중량부, 및 카르복시메틸레반 0.1 내지 1 중량부를 첨가하는 것이며,
상기 우유 단백질은 알파-락트알부민인 우유 단백질을 생산하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 발효 단계의 설탕은 7 중량부로 포함되는 것인, 우유 단백질을 생산하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 발효 단계의 폴리옥시에틸렌-60 솔비탄모노라우레이트는 3 중량부로 포함되는 것인, 우유 단백질을 생산하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 발효 단계의 구아검은 0.2 중량부로 포함되는 것인, 우유 단백질을 생산하는 방법.
- 제1항에 따라 생산된 우유 단백질을 포함하는 카우-프리 대체 우유 조성물.
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| KR20210012979A (ko) * | 2019-07-26 | 2021-02-03 | 한국생명공학연구원 | 레반-단백질 나노복합체 및 이의 용도 |
| KR20220010499A (ko) * | 2019-04-22 | 2022-01-25 | 퍼펙트 데이, 인크. | 재조합 우유 단백질 및 그를 포함하는 조성물 |
| KR20220156032A (ko) | 2020-03-20 | 2022-11-24 | 셈비타 팩토리, 인크. | 재조합 미생물로부터 유기 생성물을 생산하기 위한 생물제조 시스템 및 방법 |
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Patent Citations (4)
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|---|---|---|---|---|
| KR100254063B1 (ko) | 1997-09-30 | 2000-04-15 | 신동권 | 재조합대장균을이용한재조합단백질의제조방법 |
| KR20220010499A (ko) * | 2019-04-22 | 2022-01-25 | 퍼펙트 데이, 인크. | 재조합 우유 단백질 및 그를 포함하는 조성물 |
| KR20210012979A (ko) * | 2019-07-26 | 2021-02-03 | 한국생명공학연구원 | 레반-단백질 나노복합체 및 이의 용도 |
| KR20220156032A (ko) | 2020-03-20 | 2022-11-24 | 셈비타 팩토리, 인크. | 재조합 미생물로부터 유기 생성물을 생산하기 위한 생물제조 시스템 및 방법 |
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