KR20220010499A - 재조합 우유 단백질 및 그를 포함하는 조성물 - Google Patents

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KR20220010499A
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티모시 게이스트링거
헨드릭 미어먼
헤더 젠슨
라비라즈신 피. 잘라
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퍼펙트 데이, 인크.
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Abstract

비-천연 PTM을 갖는 재조합 우유 단백질, 재조합 우유 단백질을 포함하는 식제품, 및 재조합 우유 단백질을 수득하고 식제품을 제조하는 방법이 제공된다.

Description

재조합 우유 단백질 및 그를 포함하는 조성물
관련 출원
본 출원은 2019년 4월 22일에 출원된 미국 특허 가출원 일련 번호 62/837,098을 우선권 주장하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
발명의 분야
본 발명은 일반적으로 재조합 우유 단백질, 이러한 재조합 우유 단백질을 포함하는 조성물, 및 이러한 재조합 우유 단백질 및 조성물의 제조 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 비-천연 번역후 변형을 갖는 재조합 우유 단백질에 관한 것이다.
우유는 인기있는 영양 공급원이다. 이는 고품질 단백질, 필수 미네랄 및 비타민을 포함한다. 추가로, 우유는 매우 다양한 파생 제품 (예를 들어, 요구르트, 치즈, 크림, 버터)의 제조를 가능하게 하고 산업적 적용 (예를 들어, 중합체, 치료제, 가정용 제품의 제조)에 유용한 유리한 기능적 특징을 갖는 단백질을 포함한다.
축산업을 통한 통상적인 우유 생산이 동물 복지 및 환경에 미치는 영향 및 축산업으로부터 유래된 오염 제품의 잠재적 위험에 관해 광범위한 우려가 존재한다. 더욱이, 우유는 인간에서 건강하지 않은 반응을 유발할 수 있지만 통상적인 동물-기반 생산 과정 동안 용이하게 제거되거나 회피되지 않는 성분 (예를 들어, 락토스, 알레르겐, 포화 지방, 콜레스테롤)을 포함한다.
이들 우려는 우유 및 유제품에 대한 대안 (예를 들어, 락토스-무함유, 식물-베이스 및 견과-베이스 우유-/유제품-유사 식제품)의 개발을 급증시켰다. 그러나, 이들 노력은 지금까지 우유 및 유제품의 향미 및 영양 프로파일을 매칭시키는데 및 천연 우유 단백질과 동일하거나 유사한 기능성을 갖는 단백질을 재생성하는데 부족했다.
따라서, 천연 우유 단백질보다 우수하지는 않지만 동일하거나 유사한 속성을 갖는 단백질에 대한 필요성이 존재한다.
참조로 포함됨
본원에 언급된 모든 간행물, 특허, 특허 출원, 서열, 데이터베이스 엔트리 및 다른 참고문헌은 각각의 개별 간행물, 특허, 특허 출원, 서열, 데이터베이스 엔트리 또는 다른 참고문헌이 구체적으로 및 개별적으로 참조로 포함되는 것으로 나타내어진 것과 동일한 정도로 그 전문이 참조로 포함된다. 상충되는 경우에, 정의를 포함한 본 명세서가 우선할 것이다.
한 측면에서, 비-천연 번역후 변형 (PTM)을 포함하는 재조합 우유 단백질이 본원에 제공된다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스(Bos taurus) β-락토글로불린의 T4, T6, T18, S21, S27, S30, S36, T49, T76, T97, S110, S116, T125, S150, N152 및 T154로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 글리코실화를 갖는 재조합 β-락토글로불린일 수 있다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 아미노산 잔기 N152를 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 상에 비-천연 N-글리코실화를 갖는 재조합 β-락토글로불린일 수 있다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 T4, T6, T18, S21, S27, S30, S36, T49, T97, S110, S116, T125, S150 및 T154로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 O-글리코실화를 갖는 재조합 β-락토글로불린일 수 있다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 T4, T6, T18, Y20, S21, S27, S30, S36, Y42, T49, T76, T97, Y99, Y102, S110, S116, T125, S150 및 T154로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 인산화를 갖는 재조합 β-락토글로불린일 수 있다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 K8, K14, R40, K47, K60, K69, K70, K75, K77, K83, K91, K100, K101, R124, K135, K138, K141 및 R148로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 메틸화를 갖는 재조합 β-락토글로불린일 수 있다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 C66, C106, C119, C121 및 C160으로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 팔미토일화를 갖는 재조합 β-락토글로불린일 수 있다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 K8, K14, K47, K60, K69, K70, K75, K77, K83, K91, K100, K101, K135, K138 및 K141로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 SUMO화를 갖는 재조합 β-락토글로불린일 수 있다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 C66, C106, C119, C121 및 C160으로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 니트로실화를 갖는 재조합 β-락토글로불린일 수 있다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 Y20, Y42, Y99 및 Y102로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 티로신 니트로화를 갖는 재조합 β-락토글로불린일 수 있다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 F151로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 상에 비-천연 GPI화를 갖는 재조합 β-락토글로불린일 수 있다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 C160으로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 상에 비-천연 파르네실화를 갖는 재조합 β-락토글로불린일 수 있다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 C160으로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 상에 비-천연 게라닐게라닐화를 갖는 재조합 β-락토글로불린일 수 있다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스 α-락트알부민의 T4, S22, T29, T30, T33, S34, T38, N44, N45, S47, T48, N56, N57, N66, S69, S70, N71, N74, S76, T86, N102 및 S112로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 글리코실화를 갖는 재조합 α-락트알부민일 수 있다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스 α-락트알부민의 T4, Y18, S22, T29, T30, T33, S34, Y36, T38, S47, T48, Y50, S69, S70, S76, T86, Y103 및 S112로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 인산화를 갖는 재조합 α-락트알부민일 수 있다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스 κ-카세인의 S19, S33, S37, N41, N52, N53, S69, S80, N81, S87, T93, T94, S104, N113, T117, T121, N123, T124, S127, T131, S132, T133, T135, S141, T142, T145, S149, S155, N160, T161, T165, S166 및 T167로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 글리코실화를 갖는 재조합 κ-카세인일 수 있다.
본 발명의 재조합 우유 단백질은 보스 타우루스 κ-카세인의 S19, Y25, Y30, S33, Y35, S37, Y42, Y43, Y58, Y60, Y61, S69, S80, S87, T93, T94, S104, T117, T121, T124, S127, T131, S132, T133, T135, S141, T142, T145, S149, S155, T161, T165, S166 및 T167로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 인산화를 갖는 재조합 κ-카세인일 수 있다.
또 다른 측면에서, 유청 단백질의 하위세트 또는 카세인 우유 단백질의 하위세트 또는 유청 단백질의 하위세트와 카세인 우유 단백질의 하위세트의 혼합물로 이루어진 우유 단백질 성분을 포함하는 유제품 대체물이 본원에 제공되며, 여기서 우유 단백질 성분은 1개 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 β-락토글로불린, 1개 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 α-락트알부민 및/또는 1개 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 κ-카세인을 포함하고, 여기서 우유 단백질 성분은 유제품 대체물의 적어도 1종의 유제품 속성을 부여하거나 이러한 속성에 실질적으로 기여한다.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 β-락토글로불린을 포함하는 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 α-락트알부민을 포함하는 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 κ-카세인을 포함하는 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 β-락토글로불린의 혼합물을 포함하며, 여기서 혼합물은 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 β-락토글로불린으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 α-락트알부민의 혼합물을 포함하며, 여기서 혼합물은 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 α-락트알부민으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 κ-카세인의 혼합물을 포함하며, 여기서 혼합물은 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 κ-카세인으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 β-락토글로불린과 천연 및/또는 재조합 α-락트알부민, 예컨대, 예를 들어 상기 중 어느 것에 따른 재조합 α-락트알부민의 혼합물을 포함하는 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 β-락토글로불린과 천연 및/또는 재조합 κ-카세인, 예컨대, 예를 들어 상기 중 어느 것에 따른 재조합 κ-카세인의 혼합물을 포함하는 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 α-락트알부민과 천연 및/또는 재조합 κ-카세인, 예컨대, 예를 들어 상기 중 어느 것에 따른 재조합 κ-카세인의 혼합물을 포함하는 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 β-락토글로불린과 천연 및/또는 재조합 α-락트알부민과 천연 및/또는 재조합 κ-카세인의 혼합물을 포함하며, 여기서 재조합 α-락트알부민은 상기 중 어느 것에 따른 재조합 α-락트알부민일 수 있고, 재조합 κ-카세인은 상기 중 어느 것에 따른 재조합 κ-카세인일 수 있는 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질을 추가로 포함하는 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 β-락토글로불린 및 임의로 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어진 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 α-락트알부민 및 임의로 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어진 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 κ-카세인 및 임의로 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어진 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 β-락토글로불린의 혼합물 및 임의로 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어지며, 여기서 혼합물은 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 β-락토글로불린으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 α-락트알부민의 혼합물 및 임의로 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어지며, 여기서 혼합물은 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 α-락트알부민으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 κ-카세인의 혼합물 및 임의로 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어지며, 여기서 혼합물은 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 κ-카세인으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 β-락토글로불린과 천연 및/또는 재조합 α-락트알부민, 예컨대, 예를 들어 상기 중 어느 것에 따른 재조합 α-락트알부민의 혼합물 및 임의로 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어진 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 β-락토글로불린과 천연 및/또는 재조합 κ-카세인, 예컨대, 예를 들어 상기 중 어느 것에 따른 재조합 κ-카세인의 혼합물 및 임의로 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어진 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 상기 중 어느 것에 따른 재조합 α-락트알부민과 천연 및/또는 재조합 κ-카세인, 예컨대, 예를 들어 상기 중 어느 것에 따른 재조합 κ-카세인의 혼합물 및 임의로 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어진 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 성분이 천연 및/또는 재조합 β-락토글로불린과 천연 및/또는 재조합 α-락트알부민과 천연 및/또는 재조합 κ-카세인의 혼합물 및 임의로 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어지며, 여기서 혼합물은 상기 중 어느 것에 따른 재조합 β-락토글로불린, 상기 중 어느 것에 따른 재조합 α-락트알부민 및 상기 중 어느 것에 따른 재조합 κ-카세인 중 적어도 1종 (예를 들어, 1, 2종, 모두)을 포함하는 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 β-락토글로불린이 소 β-락토글로불린에 대해 적어도 80% 동일한 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 α-락트알부민이 소 α-락트알부민에 대해 적어도 80% 동일한 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 κ-카세인이 소 κ-카세인에 대해 적어도 80% 동일한 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 β-락토글로불린이 재조합 진균 숙주 세포 (예를 들어, 재조합 사상 진균 숙주 세포 [예를 들어, 아스페르길루스(Aspergillus), 칸디다(Candida), 푸사리움(Fusarium), 한세눌라(Hansenula), 클루이베로미세스(Kluyveromyces), 피키아(Pichia), 사카로미세스(Saccharomyces), 테트라히메나(Tetrahymena), 트리코더마(Trichoderma), 야로위아(Yarrowia) 및 지고사카로미세스(Zygosaccharomyces)로 이루어진 군으로부터 선택된 속으로부터의 것]), 재조합 박테리아 숙주 세포, 재조합 조류 숙주 세포 또는 재조합 식물 숙주 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 재조합 숙주 세포에서 생산된 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 α-락트알부민이 재조합 진균 숙주 (예를 들어, 재조합 사상 진균 숙주 세포 [예를 들어, 아스페르길루스, 칸디다, 푸사리움, 한세눌라, 클루이베로미세스, 피키아, 사카로미세스, 테트라히메나, 트리코더마, 야로위아 및 지고사카로미세스로 이루어진 군으로부터 선택된 속으로부터의 것]), 재조합 박테리아 숙주 세포, 재조합 조류 숙주 세포 또는 재조합 식물 숙주 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 재조합 숙주 세포에서 생산된 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 κ-카세인이 재조합 진균 숙주 세포 (예를 들어, 재조합 사상 진균 숙주 세포 [예를 들어, 아스페르길루스, 칸디다, 푸사리움, 한세눌라, 클루이베로미세스, 피키아, 사카로미세스, 테트라히메나, 트리코더마, 야로위아 및 지고사카로미세스로 이루어진 군으로부터 선택된 속으로부터의 것]), 재조합 박테리아 숙주 세포, 재조합 조류 숙주 세포 또는 재조합 식물 숙주 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 재조합 숙주 세포에서 생산된 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 β-락토글로불린이 비-천연 반응성 부위를 포함하는 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 α-락트알부민이 비-천연 반응성 부위를 포함하는 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 κ-카세인이 비-천연 반응성 부위를 포함하는 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 β-락토글로불린이 상응하는 천연 우유 단백질에 존재하는 반응성 부위가 결여된 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 α-락트알부민이 상응하는 천연 우유 단백질에 존재하는 반응성 부위가 결여된 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 κ-카세인이 상응하는 천연 우유 단백질에 존재하는 반응성 부위가 결여된 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 β-락토글로불린이 우유 단백질 반복부를 포함하는 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 α-락트알부민이 우유 단백질 반복부를 포함하는 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 κ-카세인이 우유 단백질 반복부를 포함하는 것인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 비-우유 단백질, 예컨대, 예를 들어 식물 (예를 들어, 완두, 감자, 잠두, 대두, 카놀라)로부터 수득된 비-우유 단백질을 추가로 포함하는 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 질량 기준 약 0.1% 내지 약 100%, 약 1% 내지 약 70%, 약 5% 내지 약 40% 또는 약 10% 내지 약 25%의 상기 중 어느 것에 따른 우유 단백질 성분을 포함하는 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 분말인 유제품 대체물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 중합체 네트워크를 포함하는 유제품 대체물.
또 다른 측면에서, 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 조성물이며, 여기서 유제품 대체물은 필적하는 조성물 내의 우유에 의해 부여되는 속성을 조성물에 부여하거나 이러한 속성에 실질적으로 기여하는 것인 조성물이 본원에 제공된다.
상기 중 어느 것에 있어서, 식제품인 조성물.
상기 중 어느 것에 있어서, 식제품이 유제품인 조성물.
상기 중 어느 것에 있어서, 식제품이 유제품 대체물 제품인 조성물.
상기 중 어느 것에 있어서, 우유 단백질 중합체 네트워크를 포함하는 조성물.
상기 중 어느 것에 있어서, 질량 기준 약 0.001% 내지 90% 또는 약 1% 내지 50% 또는 약 10% 내지 30%의 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 조성물.
또 다른 측면에서, 상기 중 어느 것에 따른 재조합 우유 단백질 중 1종 이상을 수득하는 단계를 포함하는, 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물의 제조 방법이 본원에 제공된다.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 β-락토글로불린을 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 글루코스로 이루어진 탄소 공급원을 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함하며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 T4 중 1개 이상 상에 비-천연 O-연결된 글리코실화를 갖는 것인 방법.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 β-락토글로불린을 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 글루코스로 이루어진 탄소 공급원을 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함하며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 T97 상에 비-천연 O-연결된 글리코실화를 갖는 것인 방법.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 β-락토글로불린을 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 락토스 및 폐곡물로 이루어진 탄소 공급원을 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함하며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 T97 상에 비-천연 O-연결된 글리코실화를 갖는 것인 방법.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 β-락토글로불린을 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 글루코스로 이루어진 탄소 공급원을 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함하며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 S27, T6, T97, S116 및 T125 중 1개 이상 상에 비-천연 O-연결된 글리코실화를 갖는 것인 방법.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 β-락토글로불린을 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 락토스 및 폐곡물로 이루어진 탄소 공급원을 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함하며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 S27, T6, T97, S116 및 T125 중 1개 이상 상에 비-천연 O-연결된 글리코실화를 갖는 것인 방법.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 β-락토글로불린을 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 적어도 30℃인 온도에서 배양하는 단계를 포함하며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 T49 상에 O-연결된 글리코실화를 갖는 것인 방법.
상기 중 어느 것에 있어서, 재조합 β-락토글로불린을 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 약 28℃의 온도에서 배양하는 단계를 포함하며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 T6 상에 O-연결된 글리코실화를 갖는 것인 방법.
본원에 사용된 용어 및 기재는 단지 특정한 실시양태를 기재하기 위한 목적이며, 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 추가로, 문맥에 의해 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함할 것이고, 복수 용어는 단수를 포함할 것이다.
정의
본원에 사용된 단수 용어 및 유사한 언급은, 본원에 달리 나타내지 않거나 문맥에 의해 명확하게 모순되지 않는 한, 단수 및 복수 둘 다를 지칭한다 (예를 들어, "적어도 하나" 또는 "하나 이상"을 의미함). 예를 들어, 용어 "화합물" 또는 "적어도 하나의 화합물" 또는 "하나 이상의 화합물"은 그의 혼합물을 포함한 복수의 화합물을 포함할 수 있다.
언급된 수치 값 또는 수치 값의 범위와 함께 본원에 사용된 용어 "약"은 언급된 수치 값 또는 수치 값의 범위의 변동 (즉, 언급된 수치 값 또는 수치 값의 범위보다 ±20%, ±10%, ±5%, ±1%, ±0.5%, ±0.1% 또는 언급된 값 또는 수치 값의 범위의 ± 1 표준 편차의 범위 내로 다소 더 많거나 다소 더 적은 것을 나타냄)을 포괄하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 용어 "및/또는"은 다수의 성분이 서로 조합되거나 배제되는 것을 지칭한다. 예를 들어, "x, y 및/또는 z"는 "x" 단독, "y" 단독, "z" 단독, "x, y 및 z", "(x 및 y) 또는 z", "(x 및 z) 또는 y", "(y 및 z) 또는 x", "x 및 y" 단독, "x 및 z" 단독, "y 및 z" 단독, 또는 "x 또는 y 또는 z"를 지칭할 수 있다.
아미노산은 본원에서 그의 단일-문자 코드, 아미노산 명칭 또는 3-문자 코드로 지칭될 수 있다. 단일-문자 코드, 아미노산 명칭 및 3-문자 코드는 하기와 같다: G-글리신 (Gly), P-프롤린 (Pro), A-알라닌 (Ala), V-발린 (Val), L-류신 (Leu), I-이소류신 (Ile), M-메티오닌 (Met), C-시스테인 (Cys), F-페닐알라닌 (Phe), Y-티로신 (Tyr), W-트립토판 (Trp), H-히스티딘 (His), K-리신 (Lys), R-아르기닌 (Arg), Q-글루타민 (Gln), N-아스파라긴 (Asn), E-글루탐산 (Glu), D-아스파르트산 (Asp), S-세린 (Ser), T-트레오닌 (Thr). 아미노산 잔기는 아미노산에 대한 제1 문자, 이어서 참조 서열 (예를 들어, 유니프롯(UniProt) 서열)에서 아미노산의 위치를 명시하는 번호로 표시된다.
본원에 사용된 용어 "적어도" 및 "하나 이상"은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10 또는 그 초과의 또는 모든 후속적으로 열거된 요소를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "필적하는 조성물" 또는 "필적하는 식제품"은, "필적하는 조성물" 또는 "필적하는 식제품"이 각각 본원에 제공된 바와 같은 재조합 우유 단백질 대신에 상응하는 천연 우유 단백질을 포함하는 것을 제외하고는, "필적하는 조성물" 또는 "필적하는 식제품" 각각과 비교하여 조성물 또는 식제품 각각을 제조하는데 사용된 방법과 동일한 방법에 의해 제조된 조성물 또는 식제품 각각을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "성분"은 달리 구체적으로 언급되지 않는 한 함께 그룹화된 1종의 유닛 (예를 들어, 1종의 단백질) 또는 1종 초과의 유닛 (예를 들어, 2종 이상의 단백질)을 지칭한다. 그룹화는 단지 상징적 그룹화로서 이해되어야 하고, 따라서 유닛들 사이의 물리적 상호작용을 요구하지 않는다 (그러나 물리적 상호작용이 용어 "성분"의 사용에 의해 배제되지는 않음).
본원에 사용된 용어 "유제품 속성"은 유제품의 속성; 또는 우유 (예를 들어, 전유 [적어도 3.25% 우유 지방], 부분 탈지유 [1% 내지 2% 우유 지방], 탈지유 [0.2% 미만 우유 지방], 조리 우유, 응축 우유, 향미 우유, 소 우유, 염소 우유, 양 우유, 건조 우유, 증발 우유, 우유 거품, 분유 (예를 들어, 전지 분유, 탈지 분유, 지방-충전 분유 (즉, 모든 또는 일부 동물 지방 대신에 식물 지방을 포함하는 분유)), 우유 단백질 농축물 (즉, 적어도 80 중량%의 단백질 함량; 예를 들어, 우유 단백질 농축물, 탈미네랄화 우유 단백질 농축물, 우유 단백질 가수분해물, 유청 단백질 농축물, 탈미네랄화 유청 단백질 농축물, 유청 단백질 가수분해물, β-락토글로불린 농축물, α-락트알부민 농축물, 카세인 농축물), 또는 우유 단백질 단리물 (즉, 적어도 90 중량%의 단백질 함량; 예를 들어, 우유 단백질 단리물, 유청 단백질 단리물, 탈미네랄화 유청 단백질 단리물, β-락토글로불린 단리물, α-락트알부민 단리물, 카세인 단리물))에 의해 조성물 (예를 들어, 식제품) 상에 부여되는 속성을 지칭한다. 본원에 개시된 전형적인 비교는 소로부터 유래된 우유로 이루어진다.
본원에 사용된 용어 "유제품"은 우유 (예를 들어, 전유 [적어도 3.25% 우유 지방], 부분 탈지유 [1% 내지 2% 우유 지방], 탈지유 [0.2% 미만 우유 지방], 조리 우유, 응축 우유, 향미 우유, 염소 우유, 양 우유, 건조 우유, 증발 우유, 우유 거품), 및 우유로부터 유래된 제품, 예컨대 비제한적으로 요구르트 (예를 들어, 전유 요구르트 [170 g당 적어도 6 그램의 지방], 저지방 요구르트 [170 g당 2 내지 5 그램의 지방], 무지방 요구르트 [170 g당 0.5 그램 이하의 지방], 그릭 요구르트 [유청이 제거된 여과 요구르트], 휘핑 요구르트, 염소 우유 요구르트, 라브네(Labneh) [labne], 양 우유 요구르트, 요구르트 드링크 [예를 들어, 전유 케피어, 저지방 우유 케피어], 라시), 치즈 (예를 들어, 유청 치즈, 예컨대 리코타; 파스타 필라타 치즈, 예컨대 모자렐라; 반연질 치즈, 예컨대 하바티 및 뮌스터; 중간-경질 치즈, 예컨대 스위스 및 자를스버그; 경질 치즈, 예컨대 체다 및 파마산; 워시드 커드 치즈, 예컨대 콜비 및 몬테레이 잭; 연질 숙성 치즈, 예컨대 브리 및 카망베르; 신선 치즈, 예컨대 코티지 치즈, 페타 치즈, 크림 치즈 및 커드), 가공 치즈, 가공 치즈 식품, 가공 치즈 제품, 가공 치즈 스프레드, 효소-조정 치즈; 콜드-팩 치즈), 유제품-베이스 소스 (예를 들어, 샐러드 드레싱, 베샤멜 소스, 신선 소스, 냉동 소스, 냉장 소스, 보관 안정성 소스), 유제품 스프레드 (예를 들어, 저지방 스프레드, 저지방 버터), 크림 (예를 들어, 건조 크림, 헤비 크림, 라이트 크림, 휘핑 크림, 하프-앤드-하프, 커피 화이트너, 커피 크리머, 사우어 크림, 생크림), 냉동 과자류 (예를 들어, 아이스크림, 스무디, 밀크 쉐이크, 냉동 요구르트, 선대, 젤라토, 커스타드), 유제품 디저트 (예를 들어, 신선, 냉장 또는 냉동), 버터 (예를 들어, 휘핑 버터, 발효 버터), 유제품 분말 (예를 들어, 전지 분유, 탈지 분유, 지방-충전 분유 (즉, 모든 또는 일부 동물 지방 대신에 식물 지방을 포함하는 분유), 유아용 조제분유, 단백질 농축물 (예를 들어, 우유 단백질 농축물, 유청 단백질 농축물, 탈미네랄화 유청 단백질 농축물, β-락토글로불린 농축물, α-락트알부민 농축물, 글리코마크로펩티드 농축물, 카세인 농축물), 단백질 단리물 (예를 들어, 우유 단백질 단리물, 유청 단백질 단리물, 탈미네랄화 유청 단백질 단리물, β-락토글로불린 단리물, α-락트알부민 단리물, 글리코마크로펩티드 단리물, 카세인 단리물), 영양 보충제, 텍스쳐화 블렌드, 착향 블렌드, 착색 블렌드), 즉석 음용 또는 즉석 혼합 제품 (예를 들어, 신선, 냉장 또는 저장 안정성 유제품 단백질 음료, 체중 감소 음료, 영양 음료, 스포츠 회복 음료 및 에너지 드링크), 푸딩, 겔, 츄어블, 크리스프, 바 (예를 들어, 영양 바, 단백질 바) 및 발효 유제품 (예를 들어, 요구르트, 치즈, 사우어 크림, 발효 버터밀크, 발효 버터, 발효 버터 오일)을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "본질적으로 없는"은 나타낸 성분이 통상의 분석 방법에 의해 나타낸 조성물에서 검출가능하지 않거나 또는 나타낸 성분이 기능적이지 않도록 하는 미량으로 존재하는 것을 지칭한다. 이와 관련하여 사용된 용어 "기능적"은 미량의 나타낸 성분을 포함하는 조성물의 특성에 기여하지 않거나 또는 미량의 나타낸 성분을 포함하는 나타낸 조성물에서 활성 (예를 들어, 효소적 활성)을 갖지 않거나 또는 미량의 나타낸 성분을 포함하는 조성물의 소비시 건강-유해 효과를 갖지 않는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "사상 진균"은 유미코타(Eumycota) 및 오오미코타(Oomycota) 아문의 사상 형태로부터의 유기체를 지칭한다 (문헌 [Hawksworth et al., In, Ainsworth and Bisby's Dictionary of The Fungi, 8th edition, 1995, CAB International, University Press, Cambridge, UK]에 정의된 바와 같음). 사상 진균은 영양 성장 동안 그의 균사 신장에 의해 효모와 구별된다. 본원에 사용된 용어 "사상 진균 세포"는 사상 진균으로부터 수득된 세포를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "식제품"은 식이 목적을 위해 가축 (예를 들어, 개, 고양이), 농장 동물 (예를 들어, 소, 돼지, 말) 및 야생 동물 (예를 들어, 비-가축 포식성 동물)을 포함한 인간 또는 동물에 의해 섭취될 수 있는 (즉, 건강에 해로운 영향은 없지만 위장관에서 소화된 물질의 흡수로 인해 유의한 영양 및/또는 칼로리 섭취를 갖는) 조성물을 지칭한다. 상기 용어는 인간 또는 동물에 의해 섭취될 수 있는 식제품을 제조하기 위해 1종 이상의 다른 성분과 조합되거나 이에 첨가될 수 있는 조성물을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "진균"은 아스코미코타(Ascomycota), 바시디오미코타(Basidiomycota), 지고미코타(Zygomycota) 및 키트리디오미코타(Chythridiomycota), 오오미코타(Oomycota) 및 글로메로미코타(Glomeromycota) 문의 유기체를 지칭한다. 그러나, 진균 분류가 지속적으로 진화하고 있고, 따라서 이러한 진균계의 특정 정의는 향후에 조정될 수 있는 것으로 이해된다. 본원에 사용된 용어 "진균 세포"는 진균으로부터 수득된 세포를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "숙주 세포"는 특정한 대상 세포뿐만 아니라 이러한 세포의 자손을 지칭한다. 특정 변형이 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 후속 세대에서 발생할 수 있기 때문에, 이러한 자손은 사실상 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 여전히 본원에 사용된 용어 "숙주 세포"의 범주 내에 포함된다.
폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열과 관련하여 본원에 사용된 용어 "동일한"은 2개의 서열이 최대 상응도로 정렬되었을 때 서열 내의 잔기가 동일한 것을 지칭한다. 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열 동일성을 측정하는데 사용될 수 있는 다수의 상이한 알고리즘이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 서열은 FASTA (예를 들어, 위스콘신주 매디슨 소재 제네틱스 컴퓨터 그룹 (GCG)의 위스콘신 패키지 버전 10.0에 제공된 바와 같은 그의 디폴트 파라미터를 사용함), Gap (예를 들어, 위스콘신주 매디슨 소재 GCG의 위스콘신 패키지 버전 10.0에 제공된 바와 같은 그의 디폴트 파라미터를 사용함), Bestfit, ClustalW (예를 들어, 버전 1.83의 디폴트 파라미터를 사용함), 또는 BLAST (예를 들어, 상호 BLAST, PSI-BLAST, BLASTP, BLASTN을 사용함) (예를 들어, 문헌 [Pearson. 1990. Methods Enzymol. 183:63; Altschul et al. 1990. J. Mol. Biol. 215:403] 참조)를 사용하여 비교될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "포함한", "포함한다", "갖는", "갖는다", "가진" 또는 그의 변형어는 용어 "포함하는"과 유사한 방식으로 포괄적인 것으로 의도된다. 본원에 사용된 용어 "실질적으로 기여하다"는 나타낸 성분의 부재 하에서 (예를 들어, 나타낸 성분이 결여된 것을 제외하고는 조성물과 동일한 참조 조성물에서) 조성물의 속성이 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 덜 존재하는/활성인/측정가능한 정도로, 나타낸 성분이 조성물의 속성에 기여하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "우유 단백질"은 포유동물-생산된 우유에서 천연으로 발견되는 단백질 (즉, 포유동물-생산된 우유에 천연인 단백질; 예를 들어, 천연 유청 단백질 또는 천연 카세인) 내의 아미노산 서열에 대해 적어도 50% (예를 들어, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 100%) 동일한 적어도 20개 (예를 들어, 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40, 적어도 50, 적어도 60, 적어도 70, 적어도 80, 적어도 90, 적어도 100, 적어도 150개) 아미노산의 서열을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 우유 단백질의 비제한적 예는 α-락트알부민 (예를 들어, 유니프롯(UniProt) 서열 P00709, P00711, P00712 또는 P09462의 아미노산 20-142), β-락토글로불린 (유니프롯 서열 P02754의 아미노산 17-178, 유니프롯 서열 P67976 또는 P02756의 아미노산 19-180), 락토페린 (예를 들어, 유니프롯 서열 P24627, D3G9G3 또는 Q29477의 아미노산 20 내지 708; 유니프롯 서열 P02788의 아미노산 20 내지 710), 트랜스페린 (예를 들어, 유니프롯 서열 Q29443 또는 W5PF65의 아미노산 20 내지 704; 유니프롯 서열 A0A452FJF9 또는 P02787의 아미노산 20 내지 698), 혈청 알부민 (예를 들어, 유니프롯 서열 P02769 또는 P14639의 아미노산 25 내지 607; 유니프롯 서열 A0A452F7Y5의 아미노산 19 내지 608; 유니프롯 서열 P02768의 아미노산 25 내지 609), 락토퍼옥시다제, 글리코마크로펩티드 (GMP), β-카세인 (예를 들어, 유니프롯 서열 P02666의 아미노산 16 내지 224; 유니프롯 서열 P11839 또는 P33048의 아미노산 16 내지 222; P05814의 아미노산 16 내지 226), γ-카세인, κ-카세인 (예를 들어, 유니프롯 서열 P02668의 아미노산 22 내지 190; 유니프롯 서열 P02669 또는 P02670의 아미노산 22 내지 192; 유니프롯 서열 P07498의 아미노산 21 내지 182), α-S1-카세인 (예를 들어, 유니프롯 서열 P02662, P04653 또는 P18626의 아미노산 16 내지 214; 유니프롯 서열 P47710의 아미노산 16 내지 185), 및 α-S2-카세인 (예를 들어, 유니프롯 서열 P02663의 아미노산 16 내지 222; 유니프롯 서열 P04654 또는 P33049의 아미노산 16 내지 223)을 포함한다. 우유 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드 서열의 비제한적 예는 2015년 8월 21일에 출원된 PCT 출원 PCT/US2015/046428 및 2017년 8월 25일에 출원된 PCT 출원 PCT/US2017/48730에 개시되어 있으며, 이들은 그 전문이 본원에 포함된다.
본원에 사용된 용어 "천연"은 자연에서 생산된 것 (예를 들어, 인간에 의해 유전자 변형되지 않고 인간에 의해 한정되지 않은 조건 [예를 들어, 산소화 수준, pH, 염 농도, 온도 및 영양소 (예를 들어, 탄소, 질소, 황) 이용가능성] 하에 유지되는 세포)을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "비-우유 단백질"은 포유동물-생산된 우유에서 발견되지 않는 폴리펩티드 (즉, 포유동물-생산된 우유에 대해 천연이 아닌 단백질)를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "임의적인" 또는 "임의로"는 특색 또는 구조가 존재하거나 존재하지 않는 것 또는 사건 또는 상황이 발생하거나 발생하지 않는 것을 지칭한다. 기재는 특색 또는 구조가 존재하는 경우, 특색 또는 구조가 부재하는 경우, 사건 또는 상황이 발생하는 경우 및 사건 또는 상황이 발생하지 않는 경우를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "폴리뉴클레오티드"는 RNA, cDNA, 게놈 DNA의 센스 및 안티센스 가닥 둘 다, 및 상기의 합성 형태 및 혼합 중합체를 지칭한다. 폴리뉴클레오티드는 화학적으로 또는 생화학적으로 변형될 수 있거나 또는 비-자연 또는 유도체화된 뉴클레오티드 염기를 함유할 수 있다. 이러한 변형은, 예를 들어 표지; 메틸화; 자연 발생 뉴클레오티드 중 1종 이상의 유사체로의 치환; 뉴클레오티드간 변형, 예컨대 비하전된 연결 (예를 들어, 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포르아미데이트, 카르바메이트), 하전된 연결 (예를 들어, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트), 펜던트 모이어티 (예를 들어, 폴리펩티드), 삽입제 (예를 들어, 아크리딘, 프소랄렌), 킬레이트화제, 알킬화제 및 변형된 연결 (예를 들어, 알파 아노머 핵산)을 포함한다. 변형된 뉴클레오티드의 예는 관련 기술분야에 기재되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Malyshev et al. 2014. Nature 509:385; Li et al. 2014. J. Am. Chem. Soc. 136:826] 참조). 또한, 수소 결합 또는 다른 화학적 상호작용을 통해 지정된 서열에 결합하는 능력에 있어서 폴리뉴클레오티드를 모방하는 합성 분자가 포함된다. 이러한 분자는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들어 펩티드 연결이 분자의 백본에서 포스페이트 연결을 대체하는 분자를 포함한다. 다른 변형은, 예를 들어 리보스 고리가 가교 모이어티 또는 다른 구조를 함유하는 유사체, 예컨대 "잠금" 폴리뉴클레오티드에서 발견되는 변형을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "폴리펩티드"는 아미노산의 중합체 형태를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "단백질"은 코딩 및 비-코딩 아미노산을 포함하는 폴리펩티드, 자연에서 발생하는 아미노산 및 자연에서 발생하지 않는 아미노산을 포함하는 폴리펩티드, 화학적으로 또는 생화학적으로 변형 또는 유도체화된 아미노산을 포함하는 폴리펩티드, 및 변형된 펩티드 백본을 포함하는 폴리펩티드를 포함할 수 있는, 임의의 길이의 폴리펩티드를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "번역후 변형" 또는 그의 두문자어 "PTM"은 생합성 후 단백질에 대한 변형 (예를 들어, 단백질에 대한 화학적 기의 공유 부착)을 지칭한다. PTM은 단백질의 아미노산 측쇄 상에서 또는 그의 C- 또는 N-말단에서 이루어질 수 있다. 적합한 PTM의 비제한적 예는 다음을 포함한다: 글리코실화 (즉, 글리칸 기 (예를 들어, 모노사카라이드, 디사카라이드, 폴리사카라이드, 선형 글리칸, 분지형 글리칸, galf 잔기를 갖는 글리칸, 술페이트 및/또는 포스페이트 잔기를 갖는 글리칸, D-글루코스, D-갈락토스, D-만노스, L-푸코스, N-아세틸-D-갈락토스 아민, N-아세틸-D-글루코스 아민, N-아세틸-D-뉴라민산, 갈락토푸라노스, 포스포디에스테르, N-아세틸글루코사민, N-아세틸갈락토사민, 시알산 및 그의 조합)의 단백질에 대한 C-연결 (즉, C-글리코실화), N-연결 (즉, N-글리코실화) 또는 O-연결 (즉, O-글리코실화)을 통한 또는 GPI화 (즉, 글리코실포스파티딜이노시톨 앵커의 부가) 또는 포스포글리코실화 (즉, 포스포-세린의 포스페이트를 통해 연결됨)를 통한 공유 부착; 예를 들어, 문헌 [Deshpande et al. 2008. Glycobiology 18(8):626] 참조), 인산화 (즉, 포스페이트 기의 단백질에 대한 공유 부착), 알킬화 (즉, 알칸 기 (예를 들어, 메틸화에서의 메탄 기)의 단백질에 대한 공유 부착), 지질화 (즉, 지질 기 (예를 들어, 프레닐화 및 이소프레닐화에서의 이소프레노이드 기 (예를 들어, 파르네실화에서의 파르네솔 기, 게라닐화에서의 게라니올 기, 게라닐게라닐화에서의 게라닐게라니올 기)), 지방 아실화에서의 지방산 기 (예를 들어, 미리스토일화에서의 미리스트산, 팔미토일화에서의 팔미트산), GPI화에서의 글리코실포스파티딜이노시톨 앵커의 공유 부착), 히드록실화 (즉, 히드록시드 기의 공유 부착), SUMO화 (즉, 소형 유비퀴틴-유사 개질제 (또는 SUMO) 단백질의 단백질에 대한 부착), 니트로실화 (즉, NO 기의 단백질에 대한 부착 (예를 들어, S-니트로실화)), 니트로소티올화 (즉, NO 기의 단백질 (예를 들어, S-니트로소티올) 내의 시스테인 티올에 대한 부착), 글루타티오닐화 (즉, 글루타티온 기의 단백질 내의 시스테인 티올에 대한 부착 (예를 들어, S-글루타티오닐화)), 및 티로신 니트로화 (즉, 니트레이트 기의 단백질의 티로신 잔기에 대한 부착). 재조합 우유 단백질의 PTM은 천연 PTM (예를 들어, 포유동물 PTM), 비-천연 PTM 또는 적어도 1종의 천연 PTM과 적어도 1종의 비-천연 PTM의 혼합물일 수 있다. 본원에 사용된 용어 "비-천연 PTM"은 포유동물-유래 우유에 존재하는 바와 같은 단백질 (즉, "천연 PTM"을 갖는 단백질)과 비교하여 단백질 내의 1종 이상의 PTM의 1개 이상의 위치(들)의 차이 (예를 들어, 글리코실화, 인산화) 및/또는 단백질 내의 1개 이상의 위치(들)에서의 1종 이상의 PTM의 유형의 차이를 지칭한다. 재조합 우유 단백질 내의 PTM의 유형 및/또는 수 및/또는 부재 및/또는 위치는 재조합 우유 단백질을 포함하는 조성물에 유제품 속성을 부여하거나 이러한 속성에 실질적으로 영향을 미칠 수 있다.
본원에 사용된 용어 "정제하는"은 단백질을 화학물질 및 세포 성분 (예를 들어, 세포 벽, 막 지질, 염색체, 다른 단백질)으로부터 실질적으로 분리하는 것을 지칭한다. 상기 용어는 단백질이 모든 다른 화학물질 및 세포 성분으로부터 분리될 것을 (허용하지만) 요구하지 않는다.
본원에 사용된 용어 "단백질 농축물"은 탄수화물, 지질, 회분 및 다른 부차적 구성성분 중 1종 이상의 적어도 한 부분 (또는 상당한 부분)의 제거시 수득되는 단백질 물질을 지칭한다. 이는 전형적으로 중량 기준 30% 내지 80% (예를 들어, 30% 내지 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40% 또는 35%; 35% 내지 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45% 또는 40%; 40% 내지 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50% 또는 45%; 45% 내지 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55% 또는 50%; 50% 내지 80%, 75%, 70%, 65%, 60% 또는 55%; 55% 내지 80%, 75%, 70%, 65% 또는 60%; 60% 내지 80%, 75%, 70% 또는 65%; 65% 내지 80%, 75% 또는 70%; 70% 내지 80% 또는 75%; 또는 75% 내지 80%)의 단백질을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "단백질 단리물"은 폴리사카라이드, 가용성 탄수화물, 회분 및 다른 부차적 구성성분 중 1종 이상의 적어도 한 부분 (또는 상당한 부분)의 제거시 수득되는 단백질 물질을 지칭한다. 이는 전형적으로 중량 기준 적어도 80% (즉, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 95%, 적어도 99%)의 단백질을 포함한다.
단백질 (예를 들어, 우유 단백질)과 관련하여 본원에 사용된 용어 "재조합"은 재조합적으로 생산된 (예를 들어, 재조합 숙주 세포에 의해 생산된) 단백질을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "재조합 α-락트알부민"은 천연 α-락트알부민 (예를 들어, 천연 보스 타우루스 α-락트알부민 [예를 들어, 유니프롯 서열 P00711의 아미노산 20 내지 142], 천연 오비스 아리에스(Ovis aries) α-락트알부민 [예를 들어, 유니프롯 서열 P09462의 아미노산 20 내지 142], 천연 카프라 히르쿠스(Capra hircus) α-락트알부민 [예를 들어, 유니프롯 서열 P00712의 아미노산 20 내지 142], 천연 호모 사피엔스(Homo sapiens) α-락트알부민 [예를 들어, 유니프롯 서열 P00709의 아미노산 20 내지 142]) 내의 아미노산 서열에 대해 적어도 50% (예를 들어, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 100%) 동일한 적어도 20개 (예를 들어, 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40, 적어도 50, 적어도 60, 적어도 70, 적어도 80, 적어도 90, 적어도 100, 적어도 150개) 아미노산의 서열을 포함하는 재조합적으로 생산된 폴리펩티드를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "재조합 β-락토글로불린"은 천연 β-락토글로불린 (예를 들어, 천연 보스 타우루스 β-락토글로불린 [예를 들어, 유니프롯 서열 P02754의 아미노산 17 내지 178], 천연 오비스 아리에스 β-락토글로불린 [예를 들어, 유니프롯 서열 P67976의 아미노산 19 내지 180], 천연 카프라 히르쿠스 β-락토글로불린 [예를 들어, 유니프롯 서열 P02756의 아미노산 19 내지 180]) 내의 아미노산 서열에 대해 적어도 50% (예를 들어, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 100%) 동일한 적어도 20개 (예를 들어, 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40, 적어도 50, 적어도 60, 적어도 70, 적어도 80, 적어도 90, 적어도 100, 적어도 150개) 아미노산의 서열을 포함하는 재조합적으로 생산된 폴리펩티드를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "재조합 숙주 세포"는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포를 지칭한다. 따라서, 예를 들어 재조합 숙주 세포는 숙주 세포의 천연 (비-재조합) 형태에서 발견되지 않는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 생산할 수 있거나, 또는 재조합 숙주 세포는 숙주 세포의 천연 (비-재조합) 형태에서와 상이한 수준으로 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 생산할 수 있다. 이러한 용어는 특정한 대상 세포뿐만 아니라 이러한 세포의 자손을 지칭하는 것으로 의도된다는 것이 이해되어야 한다. 특정 변형이 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 후속 세대에서 발생할 수 있기 때문에, 이러한 자손은 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 여전히 본원에 사용된 용어 "재조합 숙주 세포"의 범주 내에 포함된다.
본원에 사용된 용어 "재조합 폴리뉴클레오티드"는 그의 자연 발생 환경으로부터 제거된 폴리뉴클레오티드, 자연에서 발견되는 경우 폴리뉴클레오티드에 인접하거나 근접한 폴리뉴클레오티드의 모두 또는 부분과 회합되지 않은 폴리뉴클레오티드, 자연에서는 연결되지 않는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드, 변경된 폴리뉴클레오티드, 또는 자연에서는 발생하지 않는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 상기 용어는, 예를 들어 클로닝된 DNA 단리물, 또는 화학적으로 합성된 뉴클레오티드 유사체를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 기재하는데 사용될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 또한 자연 발생하지 않는 유전자 변형을 함유하는 경우에 "재조합"으로 간주된다. 예를 들어, 내인성 폴리뉴클레오티드는 인공적으로 (예를 들어, 인간 개입에 의해) 도입되는 1개 이상의 뉴클레오티드의 삽입, 결실 또는 치환을 함유하는 경우에 "재조합 폴리뉴클레오티드"로 간주된다. 이러한 변형은 폴리뉴클레오티드 내로 점 돌연변이, 치환 돌연변이, 결실 돌연변이, 삽입 돌연변이, 미스센스 돌연변이, 프레임시프트 돌연변이, 중복 돌연변이, 증폭 돌연변이, 전위 돌연변이 또는 역위 돌연변이를 도입할 수 있다. 상기 용어는 숙주 세포의 염색체 내의 폴리뉴클레오티드, 뿐만 아니라 숙주 세포의 염색체 내에 있지 않은 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 에피솜 내에 포함된 폴리뉴클레오티드)를 포함한다. 숙주 세포 또는 유기체 내의 재조합 폴리뉴클레오티드는 숙주 세포의 생체내 세포 기구를 사용하여 복제될 수 있지만; 이러한 재조합 폴리뉴클레오티드는, 후속적으로 세포내에서 복제되더라도, 여전히 본 발명의 목적상 재조합인 것으로 간주된다.
본원에 사용된 용어 "재조합 κ-카세인"은 보스 타우루스 κ-카세인 (예를 들어, 천연 보스 타우루스 κ-카세인 [예를 들어, 유니프롯 서열 P02668의 아미노산 22 내지 190], 천연 오비스 아리에스 κ-카세인 [예를 들어, 유니프롯 서열 P02669의 아미노산 22 내지 192], 천연 카프라 히르쿠스 κ-카세인 [예를 들어, 유니프롯 서열 P02670의 아미노산 22 내지 192], 천연 호모 사피엔스 κ-카세인 [예를 들어, 유니프롯 서열 P07498의 아미노산 21 내지 182]) 내의 아미노산의 서열에 대해 적어도 50% (예를 들어, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 100%) 동일한 적어도 20개 (예를 들어, 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40, 적어도 50, 적어도 60, 적어도 70, 적어도 80, 적어도 90, 적어도 100, 적어도 150개) 아미노산의 서열을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "효모"는 사카로미세탈레스(Saccharomycetales) 목의 유기체를 지칭한다. 효모의 영양 성장은 단세포성 엽상체의 출아/수포화에 의한 것이고, 탄소 이화작용은 발효성일 수 있다. 본원에 사용된 용어 "효모 세포"는 효모로부터 수득된 세포를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "질량 기준 % (질량%)"는, 수화 조성물이 분말의 질량뿐만 아니라 수화제의 질량을 포함하도록 하는, 수화 조성물에서 결정된 질량에 대한 백분율 값을 지칭하며, 100%는 전체 수화 조성물에 대한 백분율 값으로서 고정된다. 본원에 제공된 계란 대체물이 분말 형태인 (수화제의 질량은 나중에 추가될 것임) 실시양태에서, 상기 용어는 최종 전체 수화 조성물 대비 결정된 질량에 대한 백분율 값을 지칭한다 (100%는 전체 최종 수화 조성물에 대한 백분율 값으로서 고정됨).
수화 조성물 (즉, 물을 포함하는 조성물)과 관련하여 본원에 사용된 용어 "건조 질량 기준 %"는, 수화 조성물이 실질적으로 모든 물을 제거해야 하는 경우에 남아있을 총 건조 질량 대비 결정된 질량에 대한 백분율 값을 지칭하며, 100%는 그 총 건조 질량에 대한 백분율 값으로서 고정된다. 건조 조성물 (예를 들어, 분말)과 관련하여, 본원에 사용된 용어 "건조 질량 기준 %"는 분말화 조성물의 총 질량 대비 결정된 질량에 대한 백분율 값을 지칭하며, 100%는 그 총 건조 질량에 대한 백분율 값으로서 고정된다.
본원에서 값의 범위에 대한 언급은 본원에 달리 나타내지 않는 한, 단지 언급된 최소 및 최대 값을 포함하는 범위 내에 속하는 각각의 개별 값 (분수 또는 정수)을 개별적으로 지칭하는 약칭 방법으로서의 역할을 하는 것으로 의도되고, 각각의 개별 값은 본원에 개별적으로 언급된 것처럼 명세서에 포함된다. 또한, 본원에 언급된 임의의 수치 범위는 그 안에 포함된 모든 하위-범위를 포함하는 것으로 의도된다는 것이 이해되어야 한다. 예를 들어, "1 내지 10"의 범위는 언급된 최소값 1과 언급된 최대값 10 사이 (및 이들을 포함함)의, 즉 1 이상의 최소값 및 10 이하의 최대값을 갖는 모든 하위-범위를 포함하는 것으로 의도된다. 추가로, 하기 기재된 모든 범위 및 양은 근사치이며, 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는다는 것이 이해되어야 한다. 범위 및 수가 사용되는 경우에, 이들은 통계적 범위 또는 측정 오차 또는 변동을 포함하는 근사치일 수 있다. 일부 실시양태에서, 예를 들어 측정치는 플러스 또는 마이너스 10%일 수 있다.
비-천연 번역후 변형을 갖는 재조합 우유 단백질
한 측면에서, 비-천연 번역후 변형 (PTM)을 포함하는 재조합 우유 단백질이 본원에 제공된다.
재조합 우유 단백질은 살아있는 동물 (예를 들어, 소, 염소)로부터 추출된 우유로부터의 천연 우유 단백질의 비-재조합적 통상적인 생산과 비교하여, 동물의 생산성에 비의존성; 동물 사이의 질환 발생으로 인한 시장 불확실성에 비의존성; 환경에 대한 보다 제한된 부정적 영향 (예를 들어, 보다 적은 자연 자원 요건 [예를 들어, 보다 적은 물, 토지, 에너지 사용], 보다 낮은 이산화탄소 생산); 동물 복지에 대한 부정적 영향 없음 (예를 들어, 동물 구속, 강제 급식 또는 호르몬 치료 없음); 공급 체인 및 생산 위험의 완화 (예를 들어, 공급 체인 변동 및 생산 방법의 증가된 유연성을 제공하는 재조합 단백질의 사용); 및 보다 낮은 생산 비용을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 생산에서의 이점들을 제공하기 때문에 바람직하다.
더욱이, 비-천연 PTM을 갖는 재조합 우유 단백질은 비-천연 PTM이 그의 천연 형태와 비교하여 변경된 특성을 가질 수 있고 신규한 조작된 속성을 갖는 조성물을 제공하는데 사용될 수 있기 때문에 바람직하다. 비제한적 예로서, 비-천연 PTM을 갖는 재조합 우유 단백질은 그의 천연 형태보다 더 우수한 용해도를 가질 수 있으며, 이는 이러한 재조합 우유 단백질을 특정 식제품 (예를 들어, 유제품-유사 음료)의 제조에 보다 적합하게 만들 수 있다. 비-천연 PTM을 갖는 재조합 우유 단백질은 또한 덜 알레르겐성일 수 있고, 알레르겐성 에피토프가 결여된 재조합 우유 단백질은 식용 또는 섭취가능한 조성물 (예를 들어, 식제품, 제약 제제, 지혈 제품)의 제조에 보다 적합할 수 있다. 추가의 비제한적 예로서, 본원에 제공된 재조합 우유 단백질은 그의 천연 형태와 비교하여 개선된 소화율 (즉, 조성물이 인간 또는 다른 동물 장관에서 분해되는 속도)을 가질 수 있으며, 이는 또한 이러한 재조합 우유 단백질을 덜 알레르겐성이게 하고/거나 식제품의 제조에 보다 적합하게 만들 수 있다.
비-천연 PTM을 갖는 재조합 β-락토글로불린
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 우유 단백질은 비-천연 PTM을 포함하는 재조합 β-락토글로불린이다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 β-락토글로불린은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 T4, T6, T18, S21, S27, S30, S36, T49, T76, T97, S110, S116, T125, S150, N152 및 T154로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 글리코실화를 갖는다 (즉, 천연 보스 타우루스 β-락토글로불린 내의 동일한 아미노산 잔기에 결합되지 않는 결합된 글리칸 기를 갖고/거나, 천연 보스 타우루스 β-락토글로불린 내의 동일한 아미노산 잔기에 결합되는 결합된 글리칸 기를 갖지 않고/거나, 천연 보스 타우루스 β-락토글로불린 내의 동일한 아미노산 잔기에 결합되는 글리칸 기의 유형과 상이한 유형의 결합된 글리칸 기를 가짐).
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 β-락토글로불린은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 아미노산 잔기 N152를 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 이러한 아미노산 잔기 상에 비-천연 N-글리코실화 (예컨대, 예를 들어 적어도 1개의 헥소스 분자를 포함하는 결합된 글리칸 기)를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 β-락토글로불린은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 T4, T6, T18, S21, S27, S30, S36, T49, T97, S110, S116, T125, S150 및 T154로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 O-글리코실화 (예컨대, 예를 들어 적어도 1개의 헥소스 분자를 포함하는 결합된 글리칸 기)를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 β-락토글로불린은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 T4, T6, T18, Y20, S21, S27, S30, S36, Y42, T49, T76, T97, Y99, Y102, S110, S116, T125, S150 및 T154로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 인산화를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 β-락토글로불린은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 K8, K14, R40, K47, K60, K69, K70, K75, K77, K83, K91, K100, K101, R124, K135, K138, K141 및 R148로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 메틸화를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 β-락토글로불린은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 C66, C106, C119, C121 및 C160으로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 팔미토일화를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 β-락토글로불린은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 K8, K14, K47, K60, K69, K70, K75, K77, K83, K91, K100, K101, K135, K138 및 K141로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 SUMO화를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 β-락토글로불린은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 C66, C106, C119, C121 및 C160으로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 니트로실화를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 β-락토글로불린은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 Y20, Y42, Y99 및 Y102로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 티로신 니트로화를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 β-락토글로불린은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 아미노산 잔기 F151을 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 이러한 아미노산 잔기 상에 비-천연 GPI화를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 β-락토글로불린은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 아미노산 잔기 C160을 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 이러한 아미노산 잔기 상에 비-천연 파르네실화를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 β-락토글로불린은 보스 타우루스 β-락토글로불린의 아미노산 잔기 C160을 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 이러한 아미노산 잔기 상에 비-천연 게라닐게라닐화를 갖는다.
비-천연 PTM을 갖는 재조합 α-락트알부민
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 우유 단백질은 비-천연 PTM을 포함하는 재조합 α-락트알부민이다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 α-락트알부민은 보스 타우루스 α-락트알부민의 T4, S22, T29, T30, T33, S34, T38, N44, N45, S47, T48, N56, N57, N66, S69, S70, N71, N74, S76, T86, N102 및 S112로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 글리코실화를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 α-락트알부민은 보스 타우루스 α-락트알부민의 T4, Y18, S22, T29, T30, T33, S34, Y36, T38, S47, T48, Y50, S69, S70, S76, T86, Y103 및 S112로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 인산화를 갖는다.
비-천연 PTM을 갖는 재조합 κ-카세인
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 우유 단백질은 비-천연 PTM을 포함하는 재조합 κ-카세인이다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 κ-카세인은 보스 타우루스 κ-카세인의 S19, S33, S37, N41, N52, N53, S69, S80, N81, S87, T93, T94, S104, N113, T117, T121, N123, T124, S127, T131, S132, T133, T135, S141, T142, T145, S149, S155, N160, T161, T165, S166 및 T167로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 글리코실화를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 재조합 κ-카세인은 보스 타우루스 κ-카세인의 S19, Y25, Y30, S33, Y35, S37, Y42, Y43, Y58, Y60, Y61, S69, S80, S87, T93, T94, S104, T117, T121, T124, S127, T131, S132, T133, T135, S141, T142, T145, S149, S155, T161, T165, S166 및 T167로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 인산화를 갖는다.
유제품 대체물
또 다른 측면에서, 우유 단백질 성분을 포함하는 유제품 대체물이며, 여기서 우유 단백질 성분은 본원에 제공된 바와 같은 비-천연 PTM을 갖는 재조합 우유 단백질을 포함하고, 여기서 우유 단백질 성분은 유제품 대체물의 유제품 속성을 부여하거나 이러한 속성에 실질적으로 기여하는 것인 유제품 대체물이 본원에 제공된다.
본원에 사용된 용어 "우유 단백질 성분"은 유청 단백질의 하위세트 또는 카세인의 하위세트 또는 유청 단백질의 하위세트와 카세인의 하위세트의 혼합물로 이루어진 (즉, 예를 들어 유청 단백질 농축물, 유청 단백질 단리물, 유청 단백질 가수분해물, 카세인 단리물, 카세인 농축물, 카세인 가수분해물, 우유 단백질 단리물, 우유 단백질 농축물, 우유 단백질 가수분해물, 미셀 카세인 농축물, 카세인나트륨 또는 산 카세이네이트에 존재하는 모든 단백질은 아닌 일부 단백질로 이루어진) 성분을 지칭하며, 여기서 유청 단백질의 하위세트 또는 카세인의 하위세트 또는 유청 단백질의 하위세트와 카세인의 하위세트의 혼합물은 본원에 제공된 재조합 우유 단백질을 포함한다. 상기 용어는 우유 단백질 성분을 이루는 우유 단백질이 본원에 제공된 유제품 대체물에 포함된 유일한 우유 단백질임을 암시한다 (즉, 유제품 대체물은 우유 단백질 성분을 이루는 우유 단백질 이외의 다른 우유 단백질을 포함하지 않음).
본원에 제공된 유제품 대체물은 소의 생산성에 비의존성; 가축 사이의 질환 발생으로 인한 시장 불확실성에 비의존성; 환경에 대한 보다 제한된 부정적 영향 (예를 들어, 보다 적은 자연 자원 요건 [예를 들어, 보다 적은 물, 토지, 에너지 사용], 보다 낮은 이산화탄소 생산); 동물 복지에 대한 부정적 영향 없음 (예를 들어, 동물 구속, 강제 급식 또는 호르몬 치료 없음); 공급 체인 및 생산 위험의 완화 (예를 들어, 공급 체인 변동 및 생산 방법의 증가된 유연성을 제공하는 재조합 단백질의 사용); 및 보다 낮은 생산 비용을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 생산에서의 이점들을 제공하기 때문에 바람직하다.
본원에 제공된 유제품 대체물은 포유동물-유래 우유의 건강하지 않은 성분 (예를 들어, 우유 알레르겐, 포화 지방, 콜레스테롤, 미생물 오염물 [예를 들어, 이. 콜라이 박테리아])이 없거나 이의 감소된 수준을 갖는 것; 비-코셔 오염물 (예를 들어, 혈액)을 포함하지 않는 것; 할랄 식이에 적합한 것; 비건 식이에 적합한 것; 우유와 유사하거나 우유보다 우수한 영양소 함량 (예를 들어, 유리한 아미노산 프로파일, 낮은 당)을 갖는 것; 우유보다 우수한 맛/향미 및 향을 갖는 것; 바람직하거나 신규한 속성을 갖도록 특이적으로 조작될 잠재력; 유의한 분해 또는 박테리아 활성 없이 연장된 기간 (예를 들어, 적어도 1년) 동안 주위 조건에서 저장될 수 있는 건조 형태를 갖는 것; 연장된 보관 수명을 갖는 용이하게 재구성된 액체 또는 냉동 형태를 갖는 것; 및/또는 다수의 적용에서 우유를 대체하는데 기능성을 제공하는 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 조성물 및 용도에서의 이점들을 제공하기 때문에 추가로 바람직하다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 식물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 식물)로부터 수득된 단백질이 본질적으로 없을 수 있거나 또는 식물로부터 수득된 단백질을 건조 질량 기준 0.5% 미만, 1% 미만, 5% 미만, 10% 미만, 15% 미만, 20% 미만, 30% 미만, 40% 미만 또는 50% 미만으로 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 우유 단백질 성분에 포함된 우유 단백질 이외의 다른 단백질을 포함하지 않을 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 동물로부터 수득된 1종 이상의 성분, 예컨대, 예를 들어 포유동물-유래 우유, 포유동물-유래 우유로부터 추출된 유청 단백질 또는 포유동물-유래 우유로부터 추출된 카세인이 본질적으로 없을 수 있거나 또는 동물로부터 수득된 성분을 질량 기준 2% 이하로 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 포화 지질이 본질적으로 없을 수 있거나 또는 질량 기준 3% 미만, 2% 미만, 1% 미만, 0.5% 미만 또는 0.1% 미만의 포화 지질을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 콜레스테롤이 본질적으로 없을 수 있거나 또는 질량 기준 1.5% 미만, 1% 미만, 0.5% 미만, 0.1% 미만 또는 0.05% 미만의 콜레스테롤을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 락토스가 본질적으로 없을 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 우유의 알레르겐성보다 더 낮은 알레르겐성, 예컨대, 예를 들어 우유의 알레르겐성 대비 0%, 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이하의 알레르겐성을 가질 수 있다. 알레르겐성은 피부 단자 시험, 혈액 시험 또는 경구 식품 챌린지를 사용하여 측정될 수 있다.
표준 주위 온도 및 조건 (즉, 20-30℃ 및 0.95-1.05 atm)에서, 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 유체, 반고체 (예를 들어, 젤라틴성), 고체 또는 분말일 수 있다. 유제품 대체물은 분말 형태로 사용될 수 있거나, 또는 분말 형태는 사용 전에 수화제로 재구성될 수 있거나, 또는 분말 형태는 다른 건조 성분 (예를 들어, 가루, 당, 미네랄, pH 또는 이온 강도 조정제)과 혼합된 후에 수화제가 혼합물에 첨가될 수 있다. 적합한 수화제의 비제한적 예는 물, 우유 (예를 들어, 동물 우유, 견과류 우유, 식물-베이스 우유), 주스 (예를 들어, 채소 주스, 과일 주스, 다른 식물 주스), 염수 (예를 들어, 콩 또는 콩과식물을 침지시키는데 사용되는 유체 또는 액체), 및 그의 혼합물을 포함한다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 우유 단백질 중합체 네트워크를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "우유 단백질 중합체 네트워크"는 서로 공유 (예를 들어, 디술피드 결합) 또는 비-공유 (예를 들어, 이온) 결합을 통해, 서로 직접적으로 또는 중간 분자를 통해 연결된 반복된 우유 단백질 유닛으로 구성된 네트워크를 지칭한다.
우유 단백질 성분
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 질량 기준 0.1% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.9%, 0.8%, 0.7%, 0.6%, 0.5%, 0.4%, 0.3% 또는 0.2%; 0.2% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.9%, 0.8%, 0.7%, 0.6%, 0.5%, 0.4% 또는 0.3%; 0.3% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.9%, 0.8%, 0.7%, 0.6%, 0.5% 또는 0.4%; 0.4% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.9%, 0.8%, 0.7%, 0.6% 또는 0.5%; 0.5% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.9%, 0.8%, 0.7% 또는 0.6%; 0.6% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.9%, 0.8% 또는 0.7%; 0.7% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.9% 또는 0.8%; 0.8% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 또는 0.9%; 0.9% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1%; 1% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2%; 2% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4% 또는 3%; 3% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5% 또는 4%; 4% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6% 또는 5%; 5% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7% 또는 6%; 6% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8% 또는 7%; 7% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9% 또는 8%; 8% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10% 또는 9%; 9% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11% 또는 10%; 10% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12% 또는 11%; 11% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13% 또는 12%; 12% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14% 또는 13%; 13% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15% 또는 14%; 14% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20% 또는 15%; 15% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25% 또는 20%; 20% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30% 또는 25%; 25% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35% 또는 30%; 30% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40% 또는 35%; 35% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45% 또는 40%; 40% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50% 또는 45%; 45% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55% 또는 50%; 50% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60% 또는 55%; 55% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65% 또는 60%; 60% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70% 또는 65%; 65% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75% 또는 70%; 70% 내지 100%, 95%, 90%, 85%, 80% 또는 75%; 75% 내지 100%, 95%, 90%, 85% 또는 80%; 80% 내지 100%, 95%, 90% 또는 85%; 또는 85% 내지 100%, 95%, 90%; 90% 내지 100% 또는 95% 또는 95% 내지 100%의, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 우유 단백질을 포함하는 우유 단백질 성분을 포함할 수 있다.
우유 단백질 성분에 포함된 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 우유 단백질은 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 단일 재조합 우유 단백질 (예를 들어, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 β-락토글로불린, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 α-락트알부민, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 κ-카세인), 또는 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 우유 단백질 (예를 들어, 본원에 제공된 바와 같은 상이한 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 β-락토글로불린의 혼합물, 본원에 제공된 바와 같은 상이한 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 α-락트알부민의 혼합물, 본원에 제공된 바와 같은 상이한 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 κ-카세인의 혼합물, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 β-락토글로불린과 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 α-락트알부민의 혼합물, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 κ-카세인과 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 β-락토글로불린의 혼합물, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 κ-카세인과 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 α-락트알부민의 혼합물, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 β-락토글로불린과 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 α-락트알부민과 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 κ-카세인의 혼합물)을 포함한다.
우유 단백질 성분은 다른 우유 단백질을 추가로 포함할 수 있다. 임의적인 다른 우유 단백질은 천연 우유 단백질 또는 본원에 제공되지 않은 재조합 우유 단백질일 수 있다. 임의적인 다른 우유 단백질이 천연 우유 단백질인 실시양태에서, 천연 우유 단백질은 소, 인간, 양, 염소, 물소, 낙타, 말, 당나귀, 여우원숭이, 팬더, 기니 피그, 다람쥐, 곰, 마카크, 고릴라, 침팬지, 산 염소, 원숭이, 유인원, 고양이, 개, 왈라비, 래트, 마우스, 코끼리, 주머니쥐, 토끼, 고래, 개코원숭이, 긴팔원숭이, 오랑우탄, 만드릴, 돼지, 늑대, 여우, 사자, 호랑이, 순록 및 가시두더지를 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 포유동물 종으로부터 수득될 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 우유 단백질 성분은 하기로 이루어져야 한다: 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 β-락토글로불린; 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 α-락트알부민; 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 κ-카세인; 본원에 제공된 바와 같은 상이한 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 β-락토글로불린의 혼합물 (즉, 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 β-락토글로불린의 혼합물); 본원에 제공된 바와 같은 상이한 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 α-락트알부민의 혼합물 (즉, 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 α-락트알부민의 혼합물); 본원에 제공된 바와 같은 상이한 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 1종 이상의 재조합 κ-카세인의 혼합물 (즉, 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 κ-카세인의 혼합물); α-락트알부민 (예를 들어, 천연 α-락트알부민, 본원에 제공되지 않은 재조합 α-락트알부민, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 α-락트알부민), 락토페린 (예를 들어, 천연 락토페린, 재조합 락토페린), 트랜스페린 (예를 들어, 천연 트랜스페린, 재조합 트랜스페린), 혈청 알부민 (예를 들어, 천연 혈청 알부민, 재조합 혈청 알부민), 락토퍼옥시다제 (예를 들어, 천연 락토퍼옥시다제, 재조합 락토퍼옥시다제), GMP (예를 들어, 천연 GMP, 재조합 GMP), β-카세인 (예를 들어, 천연 β-카세인, 재조합 β-카세인), γ-카세인 (예를 들어, 천연 γ-카세인, 재조합 γ-카세인), κ-카세인 (예를 들어, 천연 κ-카세인, 본원에 제공되지 않은 재조합 κ-카세인, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 κ-카세인), α-S1-카세인 (예를 들어, 천연 α-S1-카세인, 재조합 α-S1-카세인) 및 α-S2-카세인 (예를 들어, 천연 α-S2-카세인, 재조합 α-S2-카세인) 중 어느 하나 이상 또는 모두와 조합된, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 β-락토글로불린; β-락토글로불린 (예를 들어, 천연 β-락토글로불린, 본원에 제공되지 않은 재조합 β-락토글로불린, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 β-락토글로불린), 락토페린 (예를 들어, 천연 락토페린, 재조합 락토페린), 트랜스페린 (예를 들어, 천연 트랜스페린, 재조합 트랜스페린), 혈청 알부민 (예를 들어, 천연 혈청 알부민, 재조합 혈청 알부민), 락토퍼옥시다제 (예를 들어, 천연 락토퍼옥시다제, 재조합 락토퍼옥시다제), GMP (예를 들어, 천연 GMP, 재조합 GMP), β-카세인 (예를 들어, 천연 β-카세인, 재조합 β-카세인), γ-카세인 (예를 들어, 천연 γ-카세인, 재조합 γ-카세인), κ-카세인 (예를 들어, 천연 κ-카세인, 본원에 제공되지 않은 재조합 κ-카세인, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 κ-카세인), α-S1-카세인 (예를 들어, 천연 α-S1-카세인, 재조합 α-S1-카세인) 및 α-S2-카세인 (예를 들어, 천연 α-S2-카세인, 재조합 α-S2-카세인) 중 어느 하나 이상 또는 모두와 조합된, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 α-락트알부민; 또는 β-락토글로불린 (예를 들어, 천연 β-락토글로불린, 본원에 제공되지 않은 재조합 β-락토글로불린, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 β-락토글로불린), 락토페린 (예를 들어, 천연 락토페린, 재조합 락토페린), 트랜스페린 (예를 들어, 천연 트랜스페린, 재조합 트랜스페린), 혈청 알부민 (예를 들어, 천연 혈청 알부민, 재조합 혈청 알부민), 락토퍼옥시다제 (예를 들어, 천연 락토퍼옥시다제, 재조합 락토퍼옥시다제), GMP (예를 들어, 천연 GMP, 재조합 GMP), β-카세인 (예를 들어, 천연 β-카세인, 재조합 β-카세인), γ-카세인 (예를 들어, 천연 γ-카세인, 재조합 γ-카세인), α-락트알부민 (예를 들어, 천연 α-락트알부민, 본원에 제공되지 않은 재조합 α-락트알부민, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 α-락트알부민), α-S1-카세인 (예를 들어, 천연 α-S1-카세인, 재조합 α-S1-카세인) 및 α-S2-카세인 (예를 들어, 천연 α-S2-카세인, 재조합 α-S2-카세인) 중 어느 하나 이상 또는 모두와 조합된, 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 κ-카세인.
상기 중 어느 것에 따른 우유 단백질 성분은 질량 비 약 100 대 1 내지 약 1 대 100 (예를 들어, 약 100 대 1, 약 90 대 1, 약 80 대 1, 약 70 대 1, 약 60 대 1, 약 50 대 1, 약 40 대 1, 약 30 대 1, 약 20 대 1, 약 10 대 1, 약 9 대 1, 약 8 대 1, 약 7 대 1, 약 6 대 1, 약 5 대 1, 약 4 대 1, 약 3 대 1, 약 2 대 1, 약 1 대 1, 약 1 대 2, 약 1 대 3, 약 1 대 4, 약 1 대 5, 약 1 대 6, 약 1 대 7, 약 1 대 8, 약 1 대 9, 약 1 대 10, 약 1 대 20, 약 1 대 30, 약 1 대 40, 약 1 대 50, 약 1 대 60, 약 1 대 70, 약 1 대 80, 약 1 대 90 또는 약 1 대 100)의 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 우유 단백질 및 천연 우유 단백질을 포함하거나 이로 이루어질 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 우유 단백질 성분은 질량 비 약 10 대 1 내지 약 1 대 10 (예를 들어, 약 10 대 1, 약 9 대 1, 약 8 대 1, 약 7 대 1, 약 6 대 1, 약 5 대 1, 약 4 대 1, 약 3 대 1, 약 2 대 1, 약 1 대 1, 약 1 대 2, 약 1 대 3, 약 1 대 4, 약 1 대 5, 약 1 대 6, 약 1 대 7, 약 1 대 8, 약 1 대 9, 약 1 대 10)의 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 β-락토글로불린 및/또는 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 α-락트알부민 및 천연 유청 단백질을 포함하거나 이로 이루어질 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 우유 단백질 성분은 질량 비 약 10 대 1 내지 약 1 대 10 (예를 들어, 약 10 대 1, 약 9 대 1, 약 8 대 1, 약 7 대 1, 약 6 대 1, 약 5 대 1, 약 4 대 1, 약 3 대 1, 약 2 대 1, 약 1 대 1, 약 1 대 2, 약 1 대 3, 약 1 대 4, 약 1 대 5, 약 1 대 6, 약 1 대 7, 약 1 대 8, 약 1 대 9, 약 1 대 10)의 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 κ-카세인 및 천연 카세인을 포함하거나 이로 이루어질 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물의 우유 단백질 성분은 알레르겐성 에피토프 (즉, 인간 또는 동물에서 면역 반응을 도출해낼 수 있는 아미노산 서열)가 결여된 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 우유 단백질을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물의 우유 단백질 성분은 반응성 부위를 포함하는 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 우유 단백질을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "반응성 부위"는 또 다른 분자 (예를 들어, 또 다른 폴리펩티드) 상의 화학적 기와 공유 결합 (즉, "가교")을 형성할 수 있는 분자 (예를 들어, 폴리펩티드) 상의 화학적 기를 지칭한다. 반응성 부위는 천연 반응성 부위, 비-천연 반응성 부위 (즉, 천연 우유 단백질에 존재하지 않는 반응성 부위), 또는 1종 이상의 천연 반응성 부위와 1종 이상의 비-천연 반응성 부위의 혼합물일 수 있다. 적합한 반응성 부위의 비제한적 예는 디술피드, 티올, 1급 아민, 카르복실, 카르복스아미드 및 히드록실을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Means & Feeney. 1971. Chemical Modification of Proteins. Holden Day, Inc. San Francisco, Cambridge, London, Amsterdam] 참조). 폴리펩티드에 반응성 부위를 도입하거나 제거하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고 (예를 들어, 문헌 [Means, GA & Feeney, RE. 1971. Chemical Modification of Proteins. Holden Day, Inc. San Francisco, Cambridge, London, Amsterdam] 참조), 예를 들어 반응성 부위를 포함하는 아미노산 잔기 (예를 들어, 시스테인 잔기, 리신 잔기, 글루탐산 잔기, 아스파르트산 잔기, 비-자연 아미노산 (예를 들어, 셀레노시스테인, 메틸화 아미노산, 아르기닐화 아미노산, 아실화 아미노산, 비오티닐화 아미노산))를 결실시키거나 삽입하는 것을 포함한다. 재조합 우유 단백질 내의 반응성 부위의 유형 및/또는 수 및/또는 위치는 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물에 유제품 속성을 부여하거나 이러한 속성에 실질적으로 영향을 미칠 수 있다. 또한, 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물의 우유 단백질 성분에 포함된 재조합 우유 단백질이 상응하는 천연 우유 단백질에 존재하는 반응성 부위가 결여되어 있다는 것은 본 발명의 범주 내에 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물의 우유 단백질 성분은 우유 단백질 반복부를 포함하는 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 우유 단백질을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "우유 단백질 반복부"는 포유동물-생산된 우유에서 발견되는 단백질 (예를 들어, 유청 단백질, 카세인) 내의 아미노산 서열에 대해 적어도 80% 동일 (예를 들어, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 동일, 적어도 99% 동일)하고 재조합 우유 단백질에 1배 초과 (예를 들어, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 10, 적어도 15, 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40, 적어도 50, 적어도 75, 적어도 100, 적어도 150 또는 적어도 200배)로 존재하는 아미노산 서열을 지칭한다. 우유 단백질 반복부는 적어도 10, 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40, 적어도 50, 적어도 75, 적어도 100, 적어도 150개 및 통상적으로 200개 이하의 아미노산을 포함할 수 있다. 재조합 우유 단백질 내의 우유 단백질 반복부는 연속적일 수 있거나 (즉, 개재 아미노산 서열을 갖지 않음) 또는 비-연속적일 수 있다 (즉, 개재 아미노산 서열을 가짐). 비-연속적으로 존재하는 경우에, 개재 아미노산 서열은 바람직하지 않은 특성을 도입하지 않으면서 분자량을 제공하는데 수동적 역할을 할 수 있거나 또는 특정한 특성 (예를 들어, 용해도, 생분해성, 다른 분자에 대한 결합)을 제공하는데 능동적 역할을 할 수 있다. 재조합 우유 단백질 내의 우유 단백질 반복부의 유형 및/또는 수 및/또는 위치는 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물에 유제품 속성을 부여하거나 이러한 속성에 실질적으로 영향을 미칠 수 있다.
다른 성분
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 다른 성분 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 다른 성분)을 추가로 포함할 수 있으며, 예를 들어 질량 기준 0.001% 내지 50%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 또는 0.01%; 0.01% 내지 50%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 또는 0.1%; 0.1% 내지 50%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 0.5%; 0.5% 내지 50%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1%; 1% 내지 50%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 또는 2%; 2% 내지 50%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 또는 3%; 3% 내지 50%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 또는 4%; 4% 내지 50%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 또는 5%; 5% 내지 50%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 또는 6%; 6% 내지 50%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 또는 7%; 7% 내지 50%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 또는 8%; 8% 내지 50%, 25%, 20%, 15%, 10%, 또는 9%; 9% 내지 50%, 25%, 20%, 15%, 또는 10%; 10% 내지 50%, 25%, 20%, 또는 15%; 15% 내지 50%, 25%, 또는 20%; 20% 내지 50% 또는 25%; 또는 25% 내지 50%의 임의의 1종의 이러한 다른 성분, 2종 이상의 이러한 다른 성분의 임의의 조합 또는 모든 이러한 다른 성분을 추가로 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 영양제 (예컨대, 예를 들어 기능식품, 영양 보충제, 프리바이오틱, 프로바이오틱, 프로-비타민, 비타민 (예를 들어, 비타민 A, 비타민 B, 비타민 E, 비타민 D, 비타민 K), 미네랄 (예를 들어, 칼슘, 인, 칼륨, 나트륨, 시트레이트, 클로라이드, 포스페이트, 술페이트, 마그네슘, 칼륨, 아연, 철, 몰리브데넘, 망가니즈, 구리), 항산화제, 지질 또는 비-우유 단백질) 또는 기능적 작용제 (예컨대, 예를 들어 산미제, 완충제, 보관 수명 연장제, pH 및/또는 이온 강도 조정제, 항미생물제, 항산화제, 보존제, 유화제, 텍스쳐화/구강촉감 작용제, 착색제, 맛/향미 작용제, 방향제, 팽창제, 유동제, 베이커리 컨디셔너 또는 감미제)를 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 지질, 예컨대, 예를 들어 지방, 오일, 모노글리세리드, 디글리세리드, 트리글리세리드, 인지질, 유리 지방산 또는 그의 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 오일, 예컨대, 예를 들어 식물 오일 (예를 들어, 해바라기 오일, 코코넛 오일, 머스타드 오일, 땅콩 오일, 카놀라 오일, 옥수수 오일, 목화씨 오일, 아마씨 오일, 올리브 오일, 팜 오일, 평지씨 오일, 홍화 오일, 참깨 오일, 대두 오일, 아몬드 오일, 비치 넛 오일, 브라질 넛 오일, 캐슈 오일, 헤이즐넛 오일, 마카다미아 넛 오일, 몽곤고 넛 오일, 피칸 오일, 잣 오일, 피스타치오 넛 오일, 호두 오일, 아보카도 오일, 포도 오일), 미생물-유래 오일, 조류-유래 오일, 진균-유래 오일, 해양 동물성 오일 (예를 들어, 아틀란타 어류 오일, 태평양 어류 오일, 지중해 어류 오일, 경압 어류 오일, 알칼리 처리된 어류 오일, 열 처리된 어류 오일, 경 및 중 갈색 어류 오일, 가다랑어 오일, 정어리 오일, 다랑어 오일, 시 바스 오일, 할리부트 오일, 청새치 오일, 창꼬치 오일, 대구 오일, 멘헤이든 오일, 정어리류 오일, 멸치 오일, 빙어 오일, 아틀란타 대구 오일, 아틀란타 청어 오일, 아틀란타 고등어 오일, 아틀란타 멘헤이든 오일, 연어 오일, 상어 오일, 오징어 오일, 오징어류 오일, 문어 오일, 크릴 오일, 물개 오일, 고래 오일), 논-에센셜 오일, 에센셜 오일, 자연 오일, 비-수소화 오일, 부분 수소화 오일, 수소화 오일 (예를 들어, 수소화 코코넛 오일), 원유, 반-정제 (또한 알칼리 정제로 불림) 오일, 에스테르교환 오일, 정제 오일 또는 그의 유도체 또는 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 모노글리세리드 또는 디글리세리드, 예컨대, 예를 들어 식물-유래 모노글리세리드 또는 디글리세리드 (예를 들어, 해바라기, 코코넛, 땅콩, 목화씨, 올리브, 팜, 평지씨, 홍화, 참깨씨, 대두, 아몬드, 비치 넛, 브라질 넛, 캐슈, 헤이즐넛, 마카다미아 넛, 몽곤고 넛, 피칸, 파인 넛, 피스타치오, 호두 및 아보카도로부터 유래된 모노글리세리드 또는 디글리세리드), 또는 본원에 개시된 임의의 유리 지방산의 아실 쇄를 포함하는 모노글리세리드 또는 디글리세리드 또는 그 중 2종 이상의 임의의 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 유리 지방산, 예컨대, 예를 들어 부티르산; 카프로산; 카프릴산; 카프르산; 라우르산; 미리스트산; 팔미트산; 스테아르산; 아라키드산; 베헨산; 리그노세르산; 세로트산; 미리스톨레산; 팔미톨레산; 사피엔산; 올레산; 엘라이드산; 바센산; 리놀레산; 리노엘라이드산; α-리놀렌산; 아라키돈산; 에이코사펜타엔산; 에루스산; 도코사헥사엔산; 오메가-지방산 (예를 들어, 아라키돈산, 오메가-3-지방산, 오메가-6-지방산, 오메가-7-지방산, 오메가-9-지방산); 4-16개 탄소 길이의 짝수의 탄소를 갖는 지방산; 단일포화 산 [특히 18개 탄소를 가짐]; 낮은 계면 장력 (예를 들어, 20 미만, 15 미만, 11 미만, 9 미만, 7 미만, 5 미만, 3 미만, 2 미만, 1 미만 또는 0.5 미만 다인/cm, 0.1 내지 20, 1 내지 15, 2 내지 9, 3 내지 9, 4 내지 9, 5 내지 9, 2 내지 7, 0.1 내지 5, 0.3 내지 2 또는 0.5 내지 1 다인/cm, 0.1, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0, 10.5, 11.0, 11.5, 12.0, 12.5, 13.0, 13.5, 14.0, 14.5, 15.0, 15.5, 16.0, 16.5, 17.0, 17.5, 18.0, 18.5, 19.0, 19.5 또는 20.0)을 갖는 지방산; sn-3에서 에스테르화된 부티르산 (4:0) 또는 카프로산 (6:0); 위치 sn-1 및 sn-2에서 에스테르화된 중간쇄 지방산 (8:0-14:0) 뿐만 아니라 16:0; 스테아르산 (18:0)이 위치 sn-1에 배치된 지방산; 올레산 (18:1)이 위치 sn-1 및 sn-3에 배치된 지방산; 소정 범위의 탄소 원자 (예를 들어, 8 내지 40, 10 내지 38, 12 내지 36, 14 내지 34, 16 내지 32, 18 내지 30 또는 20 내지 28개의 탄소 원자)를 갖는 지방산; 적어도 1개의 불포화 결합 (즉, 탄소-탄소 이중 또는 삼중 결합; 예를 들어, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7 또는 적어도 8개의 탄소-탄소 이중 결합 및/또는 삼중 결합)을 포함하는 지방산; 공액 불포화 결합을 갖는 지방산 (즉, 적어도 한 쌍의 탄소-탄소 이중 및/또는 삼중 결합이 이들 사이에 메틸렌 (CH2) 기 없이 함께 결합됨 [예를 들어, 4CH:CHi CH:CHi]); 또는 그의 유도체 (예를 들어, 에스테르 [예를 들어, 메틸 및 에틸 에스테르], 염 [예를 들어, 나트륨 및 칼륨 염], 트리글리세리드 유도체, 디글리세리드 유도체, 모노글리세리드 유도체); 또는 그 중 2종 이상의 임의의 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 인지질, 예컨대, 예를 들어 레시틴 인지질 (예를 들어, 대두 레시틴 인지질, 해바라기 레시틴 인지질, 목화 레시틴 인지질, 평지씨 레시틴 인지질, 쌀 겨 레시틴 인지질, 옥수수 레시틴 인지질, 가루 레시틴 인지질), 카르디올리핀, 세라미드 포스포콜린, 세라미드 포스포에탄올아민, 글리세로인지질, 포스파티드산, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨, 포스포스핑고지질, 포스파티딜세린 또는 그의 유도체 또는 그 중 2종 이상의 임의의 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 트리글리세리드, 예컨대 트리부티린; 단쇄 트리글리세리드; 3개의 올레산을 포함하는 단쇄 트리글리세리드; 헥산산을 포함하는 단쇄 트리글리세리드; 헥산산 및 부티르산을 포함하는 단쇄 트리글리세리드; 헥산산 및 데칸산을 포함하는 단쇄 트리글리세리드; 및 1개의 부티르산, 1개의 헥산산 및 1개의 옥탄산을 포함하는 단쇄 트리글리세리드; 또는 그의 유도체 또는 그 중 2종 이상의 임의의 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 탄수화물을 추가로 포함할 수 있다.
탄수화물은, 예를 들어 식물 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 식물), 조류 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 조류), 진균 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 진균) 또는 박테리아 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 박테리아)를 포함한 임의의 공급원으로부터 수득될 수 있다.
적합한 탄수화물의 비제한적 예는 다음을 포함한다: 모노사카라이드, 예컨대, 예를 들어 글루코스, 프룩토스, 갈락토스 및 그의 혼합물; 디사카라이드, 예컨대, 예를 들어 말토스, 락토스, 수크로스 및 그의 혼합물; 폴리사카라이드, 예컨대, 예를 들어 전분 (예를 들어, 펙틴, 옥수수 (메이즈) 전분, 귀리 전분, 감자 전분, 고구마 전분, 쌀 전분, 완두 전분, 밀 전분, 팥 전분, 그린빈 전분, 칡 전분, 카타쿠리 전분, 애로루트 전분, 녹두 전분, 사고 전분, 타피오카 전분, 식물 전분 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 식물로부터 수득된 전분) 및 그의 유도체 및 그 중 2종 이상의 혼합물. 일부 실시양태에서, 전분은 개질된 전분 (예를 들어, 예비젤라틴화 전분 (예를 들어, 옥수수, 밀, 타피오카), 예비젤라틴화 고 아밀로스 함량 전분, 예비젤라틴화 가수분해된 전분 (예를 들어, 말토덱스트린, 옥수수 시럽 고형물, 쌀 시럽 고형물, 타피오카 시럽 고형물), 화학적으로 개질된 전분, 예컨대 예비젤라틴화 치환된 전분 (예를 들어, 옥테닐 숙시네이트 개질된 전분), 알칼리 개질된 전분, 표백된 전분, 산화된 전분, 모노스타치 포스페이트, 디스타치 포스페이트, 포스페이트화 디스타치 포스페이트, 아세틸화 디스타치 포스페이트, 아세틸화 전분, 모노스타치 아세테이트, 아세틸화 전분, 모노스타치 아세테이트, 아세틸화 디스타치 아디페이트, 디스타치 글리세린, 히드록시프로필 전분, 히드록시프로필 디스타치 글리세린, 히드록시프로필 디스타치 포스페이트, 스타치 소듐 옥테닐 숙시네이트, 아세틸화 산화된 전분, 덱스트린, 소듐 옥테닐숙시네이트 전분 및 그의 유도체 및 그 중 2종 이상의 혼합물), 가루 (예를 들어, 도토리 가루, 아몬드 가루, 아마란스 가루, 아타 가루, 보리 가루, 콩 가루, 메밀 가루, 카사바 가루, 밤 가루, 츄노 가루, 코코넛 가루, 옥수수 (메이즈) 가루, 듀럼 가루, 외알밀 가루, 에머 가루, 잠두 가루, 가르반조 가루, 분쇄 치아씨, 분쇄 아마씨, 대마 가루, 호라산 가루, 렌틸 가루, 마이다 가루, 맥아 보리 가루, 마사 하리나, 메스키트 가루, 기장 가루, 견과 가루, 귀리 가루, 완두 가루, 땅콩 가루, 감자 가루, 퀴노아 가루, 쌀 가루, 호밀 가루, 수수 가루, 대두 가루, 나맥 가루, 찹쌀 가루, 토란 가루, 테프 가루, 밀가루, 활성 밀 글루텐, 분쇄 치아씨, 분쇄 아마씨 및 그의 유도체 및 그 중 2종 이상의 혼합물), 검 (예를 들어, 애로루트 가루, 크산탄 검, 아카시아 검 (아라비아 검), 겔란 검, 구아 검, 로커스트 빈 검 (캐롭 검), 트라가칸트 검, 카라기난, 타라 검, 밀 검, 곤약 검, 한천 검, 카라야 검), 살렙, 개질된 셀룰로스 (예를 들어, 메틸셀룰로스, 메톡시메틸셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스), 및 그의 유도체 및 혼합물이다. 일부 실시양태에서, 검은 개질된 검 (예를 들어, 탈아세틸화, 탈아세틸화 정화, 부분 탈아세틸화, 부분 탈아세틸화 정화 및 그의 유도체 및 그 중 2종 이상의 혼합물), 식용 섬유 (예를 들어, 아카시아 섬유, 대나무 섬유, 보리 겨, 당근 섬유, 셀룰로스 (예를 들어, 목재 펄프 셀룰로스), 시트러스 섬유, 옥수수 겨, 가용성 식이성 섬유, 불용성 식이성 섬유, 귀리 겨, 완두 섬유, 쌀 겨, 차전자피, 곤약, 대두 섬유, 대두 폴리사카라이드, 밀 겨, 이눌린 및 그의 유도체 및 그 중 2종 이상의 혼합물), 및 그 중 2종 이상의 혼합물; 및 그 중 2종 이상의 혼합물이다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 동물 (예컨대, 예를 들어 곤충 (예를 들어, 파리), 포유동물 (예를 들어, 소, 양, 염소, 토끼, 돼지, 인간) 또는 조류 (예를 들어, 닭)) 또는 식물 (예컨대, 예를 들어 완두, 감자, 잠두, 대두 및 카놀라) 또는 미생물 (즉, 단세포 유기체, 예컨대, 예를 들어 효모, 박테리아, 고세균, 단세포 원생생물, 단세포 동물, 단세포 식물, 단세포 진균, 단세포 조류, 원충 또는 크로미스타)로부터 수득된 비-우유 단백질 (천연 PTM, 비-천연 PTM 또는 그의 혼합물을 갖고/거나 천연 PTM이 결여되고/거나 인간 또는 동물에서 면역 반응을 도출해낼 수 있는 에피토프가 결여된 재조합 비-우유 단백질 포함)을 포함할 수 있다. 비-우유 단백질의 비제한적 예는 혈청 단백질 (예를 들어, 알부민), 계란 단백질 (예를 들어, 오보뮤코이드, 오브알부민, 오보트랜스페린, G162M F167A 오보뮤코이드, 오보글로불린 G2, 오보글로불린 G3, α-오보뮤신, β-오보뮤신, 리소자임, 오보억제제, 오보당단백질, 플라보단백질, 오보마크로글로불린, 오보스타틴, 시스타틴, 아비딘, 오브알부민 관련 단백질 X 및 오브알부민 관련 단백질 Y), 구조 단백질 (예를 들어, 콜라겐, 트로포엘라스틴, 엘라스틴) 및 식물 단백질 (예를 들어, 완두, 감자, 잠두, 대두 또는 카놀라로부터 수득된 단백질 농축물 또는 단백질 단리물)을 포함한다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 항산화제, 예컨대, 예를 들어 α-토코페롤 (예를 들어, 소 우유에 포함된 토코페롤), 저분자량 티올 (예를 들어, 소 우유에 포함된 저분자량 티올), 레티놀 (예를 들어, 소 우유에 포함된 레티놀), 카로티노이드 (예를 들어, 소 우유에 포함된 카로티노이드, α-카로틴, β-카로틴, γ-카로틴, 루테인, 제아크산틴, 아스타크산틴), 비타민 E, 아자디라크타 인디카(Azadirachta indica) 추출물, 리보플라빈, 로즈마리 추출물, 로즈마리 추출물에 포함된 페놀계 디테르펜 (예를 들어, 카르노솔, 카르노스산), 세이지 추출물, 아스코르브산 (비타민 C) 및 그의 염, 락트산 및 그의 염, 포도 잔류물 사일리지, 포도 잔류물 사일리지에 포함된 페놀계 화합물 (예를 들어, 페룰산), 대두 (글리신 맥스(Glycine max)) 추출물, 대두 추출물에 포함된 이소플라본 또는 폴리페놀계 화합물, 마늘 (알리움 사티붐(Allium sativum)) 추출물, 페놀계 또는 플라보노이드, 또는 마늘 추출물에 포함된 테르페노이드 화합물, 펜넬 (포에니쿨룸 불가레 밀.(Foeniculum vulgare Mill.)) 추출물, 카모마일 (마트리카리아 레쿠티타 엘.(Matricaria recutita L.)) 추출물, 지방산 (예를 들어, 알파-리포산), 갈조류 (예를 들어, 아스코필룸 노도숨(Ascophyllum nodosum), 푸쿠스 베시쿨로수스(Fucus vesiculosus)), 그린 핑크 페퍼의 에센셜 오일 (GEO), 성숙 핑크 페퍼의 에센셜 오일 (MEO), 녹차 추출물, 부틸화 히드록시아니솔 (E320), 부틸화 히드록시톨루엔 (E321), 폴리페놀 (예를 들어, 쿠르쿠민, 쿠르쿠미노이드, 데스메톡시쿠르쿠민 (히드록시시르마모일 페룰로일메탄), 비스-데스메톡시쿠르쿠민), 카테킨 (예를 들어, 에피갈로카테킨 갈레이트, 에피카테킨 갈레이트, 에피갈로카테킨, 에피카테킨, C 카테킨, 녹차 추출물에 포함된 카테킨), 또는 그의 유도체 또는 그 중 2종 이상의 임의의 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 유화제, 예컨대, 예를 들어 음이온성 유화제, 비-이온성 유화제, 양이온성 유화제, 양쪽성 유화제, 생물유화제, 입체 유화제, 피커링 유화제, 당지질 (예를 들어, 트레할로스 지질, 소포로리피드, 람노리피드, 만노실에리트리올 지질), 올리고펩티드 (예를 들어, 그라미시딘 S, 폴리믹신), 리포펩티드 (예를 들어, 서팩틴), 인지질, 지방산, 중성 지질, 중합체 생물계면활성제, 양친매성 폴리사카라이드, 리포폴리사카라이드, 단백질 (예를 들어, 완두 단백질, 대두 단백질, 병아리콩 단백질, 조류 단백질, 효모 단백질, 감자 단백질, 렌틸 단백질), 만노단백질, 인산나트륨, 칼슘 스테아로일 락틸레이트, 모노글리세리드의 모노- 및 디아세틸 타르타르산 에스테르, 인지질, 소르비탄 모노스테아레이트, 스테아르산마그네슘, 지방산의 나트륨/칼륨/칼슘 염, 칼슘 스테아로일 디 락테이트, 폴리글리세롤 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 모노글리세리드의 아세트산 에스테르, 모노글리세리드의 락트산 에스테르, 모노글리세리드의 시트르산 에스테르, 지방산의 폴리글리세롤 에스테르, 폴리글리세롤 폴리리시놀레에이트, 지방산의 프로판-1,2-디올 에스테르, 당 에스테르, 지방산의 수크로스 에스테르, 모노글리세리드, 아세틸화 모노글리세리드, 락틸화 모노글리세리드, 디글리세리드, 포스페이트 모노글리세리드, 디아세틸 타르타르산 에스테르, 소듐/칼슘 스테아로일-2-락틸레이트, 암모늄 포스파티드, 폴리소르베이트, 폴리소르베이트-80, 카르복시메틸셀룰로스 (CMC), 조정 셀룰로스, 시트르산 에스테르, 리포산, 에멀산, 레시틴 (예를 들어, 식물-베이스 레시틴, 가르반조 레시틴, 잠두 레시틴, 대두 레시틴, 해바라기 레시틴, 카놀라 레시틴), 계면활성제 (예를 들어, 소르비탄 트리올레에이트 (스팬 85), 소르비탄 트리스테아레이트 (스팬 65), 소르비탄 세스퀴올레에이트 (아를라셀 83), 글리세릴 모노스테아레이트, 소르비탄 모노올레에이트 (스팬 80), 소르비탄 모노스테아레이트 (스팬 60), 소르비탄 모노팔미테이트 (스팬 40), 소르비탄 모노라우레이트 (스팬 20), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 트리스테아레이트 (트윈 65), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 트리올레에이트 (트윈 85), 폴리에틸렌 글리콜 400 모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60 (트윈 60), 폴리옥시에틸렌 모노스테아레이트, 폴리소르베이트 80 (트윈 80), 폴리소르베이트 40 (트윈 40), 폴리소르베이트 20 (트윈 20), PEG 20 트리스테아레이트, PEG 20 트리올레에이트, PEG 20 모노스테아레이트, PEG 20 모노올레에이트, PEG 20 모노팔미테이트 및 PEG 20 모노라우레이트 소르비탄), 및 그의 유도체 및 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 감미제, 예컨대, 예를 들어 스테비아, 아스파르탐, 시클라메이트, 사카린, 수크랄로스, 모그로사이드, 브라제인, 쿠르쿨린, 에리트리톨, 글리시리진, 이눌린, 이소말트, 락티톨, 마빈린, 말티톨, 만니톨, 미라쿨린, 모나틴, 모넬린, 오슬라딘, 펜타딘, 소르비톨, 타우마틴, 크실리톨, 아세술팜 칼륨, 아드반탐, 알리탐, 아스파르탐-아세술팜, 소듐 시클라메이트, 둘신, 글루신, 네오헤스페리딘 디히드로칼콘, 네오탐, P-4000, 꿀, 수크로스, 옥수수 시럽 고형물, 글루코스, 락토스, 갈락토스, 덱스트로스, 프룩토스, 말토스, 이소말툴로스, 트레할로스, 말토덱스트린, 아술팜 K, 시클라메이트, L-아스파르틸-L-페닐알라닌, 타가토스, 스테비오시드, 수소화 전분 가수분해물, 고-프룩토스 옥수수 시럽, 프룩토올리고사카라이드, 폴리덱스트로스 또는 그의 유도체 또는 혼합물을 포함할 수 있다.
비-천연 PTM을 갖는 재조합 우유 단백질을 포함하는 조성물
또 다른 측면에서, 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 조성물이며, 여기서 유제품 대체물은 조성물의 유제품 속성을 부여하거나 이러한 속성에 실질적으로 기여하는 것인 조성물이 본원에 제공된다.
상기 중 어느 것에 따른 조성물은 질량 기준 적어도 0.001%, 0.01%, 0.1%, 1%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99%; 0.001% 내지 100%, 99%, 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 1%, 0.1% 또는 0.01%; 0.01% 내지 100%, 99%, 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 1% 또는 0.1%; 0.1% 내지 100%, 99%, 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% 또는 1%; 1% 내지 100%, 99%, 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20% 또는 10%; 10% 내지 100%, 99%, 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30% 또는 20%; 20% 내지 100%, 99%, 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40% 또는 30%; 30% 내지 100%, 99%, 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50% 또는 40%; 40% 내지 100%, 99%, 95%, 90%, 80%, 70%, 60% 또는 50%; 50% 내지 100%, 99%, 95%, 90%, 80%, 70% 또는 60%; 60% 내지 100%, 99%, 95%, 90%, 80% 또는 70%; 70% 내지 100%, 99%, 95%, 90% 또는 80%; 80% 내지 100%, 99%, 95% 또는 90%; 90% 내지 100%, 99% 또는 95%; 95% 내지 100% 또는 99%; 또는 99% 내지 100%의 유제품 대체물을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 조성물은 동물로부터 수득된 성분 (예를 들어, 본원에 개시된 동물로부터 수득된 임의의 또는 모든 성분)이 본질적으로 없을 수 있거나 또는 동물로부터 수득된 성분을 질량 기준 2% 이하로 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 조성물은 필적하는 조성물의 알레르겐성보다 더 낮은 알레르겐성, 예컨대, 예를 들어 필적하는 조성물의 알레르겐성 대비 0%, 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이하의 알레르겐성을 가질 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 조성물은 우유 단백질 중합체 네트워크를 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 조성물은, 예를 들어 식제품 (즉, 식이 목적을 위해 섭취되는 제품), 중합체, 제약 제품 또는 개인 관리 제품을 포함한 다양한 제품일 수 있다.
식제품
또 다른 측면에서, 본원은 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 식제품이며, 여기서 유제품 대체물은 식제품의 유제품 속성을 부여하거나 이러한 속성에 실질적으로 기여하는 것인 식제품이 본원에 제공된다.
β-락토글로불린 및/또는 α-락트알부민을 포함하는 식제품은 특히 운동선수를 위해 바람직하며, 이는 이들 우유 단백질이 근육 조직의 생산을 보조하는 것으로 생각되는 필수 및 분지쇄 아미노산의 높은 함량을 갖기 때문이다. 더욱이, β-락토글로불린은 우수한 물 결합 능력을 갖기 때문에 식품 첨가제로서 바람직하며, 이러한 특성은 β-락토글로불린이 식제품의 수분 활성을 관리하는데 적합하게 한다 (예를 들어, 문헌 [Gustavo et al. 2007. Water Activity in Foods: Fundamentals and Applications, Wiley-Blackwell, ISBN: 978-0-8138-2408-6] 참조). 더욱이, β-락토글로불린은 항미생물 활성을 갖기 때문에 식품 첨가제로서 바람직하며, 이러한 특성은 β-락토글로불린이 식제품의 보관 수명을 연장시키는데 적합하게 한다. 더욱이, β-락토글로불린은 계면에서 용이하게 흡수될 수 있기 때문에 식품 첨가제로서 바람직하며, 이러한 특성은 β-락토글로불린이 식제품에서 고도로 안정한 분산액을 제조하는데 적합하게 한다. 더욱이, α-락트알부민은 면역에서 중요한 역할을 하는 신체 내 강력한 항산화제인 글루타티온의 빌딩 블록인 아미노산 시스테인, 및 식욕, 수면-각성 리듬, 통증 지각, 기분, 불안 및 스트레스 조절과 같은 신경행동 효과를 조절하는데 소정 역할을 하는 신경전달물질 세로토닌 및 신경분비 호르몬 멜라토닌이 풍부하다. κ-카세인을 포함하는 식제품은, κ-카세인이 불용성 유기 및 무기 분자 (예를 들어, 칼슘 이온) 뿐만 아니라 불용성 단백질을 가용화하는 것을 돕고, 특정 식제품의 구강촉감을 개선시키며, 요구르트 및 다른 제품을 제조하기 위한 겔 및 커드를 형성할 수 있기 때문에 바람직하다. 더욱이, κ-카세인은 치즈를 제조하는데 핵심적인 효소 레닛 활성을 위한 부위를 포함한다. 더욱이, 비-알레르겐성 우유 단백질을 포함하는 식제품은 이들이 유제품에 대해 알레르기성인 증가하는 수의 사람에 의해 소비될 수 있기 때문에 바람직하다.
상기 중 어느 것에 따른 식제품은, 예를 들어 스낵 식품 및 검 (예를 들어, 스낵 바, 크래커, 곡물 제품으로부터의 염분 함유 스낵, 츄잉 검); 빵, 곡물 및 파스타 (예를 들어, 귀리 빵 및 롤, 옥수수빵, 옥수수 머핀, 또르티아, 가루 및 건조 믹스, 비스킷, 다곡물 빵 및 롤, 전밀 빵 및 롤, 파스타, 호밀 빵 및 롤, 크래킹 밀 빵 및 롤, 화이트 빵 및 롤); 음료 (예를 들어, 맥주 및 에일, 음료 농축물, 음료, 에너지 드링크, 스포츠 드링크, 유체 대체물, 소프트 드링크, 탄산 음료, 주스, 와인, 칵테일, 영양 드링크, 영양 분말, 단백질-풍부 음료); 단 것 및 디저트 (예를 들어, 케이크, 캔디, 칩, 쿠키, 코블러, 패스트리, 아이스 또는 팝시클, 머핀, 파이, 당 대체물 또는 대용물, 시럽, 꿀, 젤리, 잼, 보존제, 샐러드, 크레페, 대니쉬, 조식 패스트리, 도넛); 조식 식품 (예를 들어, 시리얼 곡물, 시리얼, 쌀, 프렌치 토스트, 팬케이크, 와플, 커피 케이크); 계란 (예를 들어, 전란 (예를 들어, 액체 전란, 분무-건조 전란, 냉동 전란), 난백 (예를 들어, 액체 난백, 분무-건조 난백, 냉동 난백), 계란 음식, 계란 수프, 난백으로 제조된 혼합물, 유제품 대체물, 유제품 대체물로 제조된 혼합물); 샐러드 드레싱, 오일, 소스, 조미료 (예를 들어, 조리용 지방, 식물성 오일, 샐러드 드레싱, 토마토 소스, 그레이비); 감자 (예를 들어, 감자 샐러드, 감자 수프, 칩 및 스틱, 튀긴 감자, 으깬 감자, 뭉친 감자, 퍼프); 및 수프 (예를 들어, 식물성 수프, 식물성 브로쓰), 밀, 메인 디쉬, 단백질 (예를 들어, 육류 대체물) 및 해산물을 포함한, 국립 보건 및 영양 조사 (NHANES)에 의해 정의된 식제품 카테고리 중 임의의 것으로부터 선택된 식제품일 수 있거나 이와 유사할 수 있다 (즉, "대체 식제품"일 수 있음).
상기 중 어느 것에 따른 식제품은 유제품일 수 있거나 이와 유사할 수 있다 (즉, "대체 유제품"일 수 있음).
상기 중 어느 것에 따른 식제품은 유제품 대체물에 포함된 우유 단백질 성분에 포함된 우유 단백질 이외의 다른 추가의 우유 단백질을 포함하지 않을 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 식제품은 포화 지질이 본질적으로 없을 수 있거나 또는 질량 기준 3% 미만, 2% 미만, 1% 미만, 0.5% 미만 또는 0.1% 미만의 포화 지질을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 식제품은 콜레스테롤이 본질적으로 없을 수 있거나 또는 질량 기준 1.5% 미만, 1% 미만, 0.5% 미만, 0.1% 미만 또는 0.05% 미만의 콜레스테롤을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 식제품은 유화제 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 유화제)가 본질적으로 없을 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 식제품은 락토스가 본질적으로 없을 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 식제품은 필적하는 식제품의 알레르겐성보다 더 낮은 알레르겐성, 예컨대, 예를 들어 필적하는 식제품의 알레르겐성 대비 0%, 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이하의 알레르겐성을 가질 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 조성물은 1종 이상의 계란 단백질 (예를 들어, 본원에 개시된 임의의 계란 단백질)이 본질적으로 없을 수 있다.
유제품 속성
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물 또는 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 조성물은, 유제품 대체물에 포함된 우유 단백질 성분에 의해 또는 조성물에 포함된 유제품 대체물에 의해 각각 부여되거나 그가 실질적으로 기여하는 유제품 속성을 갖는다.
속성은 물리적 속성, 기계적 속성, 화학적/생물학적 속성, 감각 속성 또는 기능적 속성 또는 그의 임의의 조합일 수 있다.
이러한 속성을 조정하기 위해 적정될 수 있는 변수는 우유 단백질 성분에 포함된 우유 단백질의 유형 및/또는 양 (예를 들어, 본원에 제공된 재조합 우유 단백질의 유형 및/또는 양, 본원에 제공되지 않은 재조합 우유 단백질의 유형 및/또는 양, 천연 우유 단백질의 유형 및/또는 양), 조성물에 포함된 다른 성분의 유형 및/또는 양, 및 유제품 대체물 또는 조성물의 제조 방법을 포함한다.
물리적 속성
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물 또는 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 조성물은 유제품의 물리적 속성이거나 또는 각각 우유에 의해 필적하는 조성물에 부여되거나 그가 실질적으로 기여하는 물리적 속성인 물리적 속성, 예컨대, 예를 들어 외관 (예를 들어, 색상, 반투명, 불투명), 형상, 구조, 점도, 밀도, 용해도, 겔화점/프로파일 (즉, 겔 형성이 시작되는 온도 및 시간선), 및/또는 융점/프로파일을 가질 수 있다.
외관은 정성적으로 평가될 수 있거나 (예를 들어, 인간 감각 전문가 패널에 의한 색상) 또는 정량적으로 측정될 수 있다 (예를 들어, L*a*b* 색 공간의 분광학적 분석에 의한 색상). 형상은 정성적으로 평가되거나 또는 정량적으로 측정될 수 있다. 구조는 정성적으로 평가되거나 (예를 들어, 육안 검사에 의해) 또는 현미경검사를 사용하여 정량적으로 점수화될 수 있다. 점도 및 겔화점/프로파일은 (예를 들어, 유동의 속도 또는 용이성, 취급 동안 이동의 용이성에 의해) 정성적으로 평가될 수 있거나 또는 점도계 또는 레오미터를 사용하여 (예를 들어, 회전 점도측정 방법, 모세관 점도측정 방법, 진동 점도측정 방법, 초음파 펄스 에코 방법, 비중측정 방법 또는 액체비중측정 방법을 사용하여) 정량적으로 측정될 수 있다. 밀도는 밀도측정 방법에 의해 정량적으로 측정될 수 있다. 겔화점/프로파일 및 용해도는 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 정량적으로 측정될 수 있다. 융점은 열량측정법을 사용하여 정량적으로 측정될 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 조성물은 우유에 의해 필적하는 조성물에 부여되거나 그가 실질적으로 기여하는 외관인 외관, 예컨대, 예를 들어 우유에 의해 필적하는 식제품에 부여되거나 그가 실질적으로 기여하는 것과 유사한 색상 (예를 들어, 백색빛 색상)을 가질 수 있다.
대안적으로, 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 조성물은 우유에 의해 필적하는 조성물에 부여되거나 그가 실질적으로 기여하는 외관과 상이한 외관, 예컨대, 예를 들어 우유에 의해 필적하는 식제품에 부여되거나 그가 실질적으로 기여하는 것과 상이한 색상을 가질 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 우유의 물리적 속성 (예를 들어, 상기 개시된 임의의 물리적 속성, 예컨대, 예를 들어 용해도)의 50% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100%, 90%, 80%, 70% 또는 60%; 60% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100%, 90%, 80% 또는 70%; 70% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100%, 90% 또는 80%; 80% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100% 또는 90%; 90% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110% 또는 100%; 100% 내지 150%, 140%, 130%, 120% 또는 110%; 110% 내지 150%, 140%, 130% 또는 120%; 120% 내지 150%, 140% 또는 130%; 130% 내지 150% 또는 140%; 또는 140% 내지 150%이거나 또는 우유의 상기 물리적 속성의 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배 또는 적어도 20배인 상기 물리적 속성 또는 2종 이상의 물리적 속성의 조합 (예를 들어, 상기 개시된 물리적 속성 중 2종 이상의 임의의 조합)을 가질 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 식제품은 필적하는 식제품의 물리적 속성 (예를 들어, 상기 개시된 임의의 물리적 속성)의 50% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100%, 90%, 80%, 70% 또는 60%; 60% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100%, 90%, 80% 또는 70%; 70% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100%, 90% 또는 80%; 80% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100% 또는 90%; 90% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110% 또는 100%; 100% 내지 150%, 140%, 130%, 120% 또는 110%; 110% 내지 150%, 140%, 130% 또는 120%; 120% 내지 150%, 140% 또는 130%; 130% 내지 150% 또는 140%; 또는 140% 내지 150%이거나 또는 필적하는 식제품의 상기 물리적 속성의 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배 또는 적어도 20배인 상기 물리적 속성 또는 2종 이상의 물리적 속성의 조합 (예를 들어, 상기 개시된 물리적 속성 중 2종 이상의 임의의 조합)을 가질 수 있다.
기계적 속성
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물 또는 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 조성물은 각각 우유의 기계적 속성이거나 또는 우유에 의해 필적하는 조성물에 부여되거나 그가 실질적으로 기여하는 기계적 속성, 예를 들어 경도/견고성, 부착성, 복원성/회복가능한 에너지, 구조 완전성/응집성, 탄성/탄력성/반동성 또는 씹힘성/분해성을 가질 수 있다.
기계적 속성은, 예를 들어 텍스쳐 분석기를 사용하여 정량적으로 측정할 수 있다 (실시예 3 참조).
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 우유의 기계적 속성 (예를 들어, 상기 개시된 임의의 기계적 속성)의 50% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100%, 90%, 80%, 70% 또는 60%; 60% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100%, 90%, 80% 또는 70%; 70% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100%, 90% 또는 80%; 80% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100% 또는 90%; 90% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110% 또는 100%; 100% 내지 150%, 140%, 130%, 120% 또는 110%; 110% 내지 150%, 140%, 130% 또는 120%; 120% 내지 150%, 140% 또는 130%; 130% 내지 150% 또는 140%; 또는 140% 내지 150%이거나 또는 우유의 상기 기계적 속성의 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배 또는 적어도 20배인 상기 기계적 속성 또는 2종 이상의 기계적 속성의 조합 (예를 들어, 상기 개시된 기계적 속성 중 2종 이상의 임의의 조합)을 가질 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 식제품은 필적하는 식제품의 기계적 속성 (예를 들어, 상기 개시된 임의의 기계적 속성)의 50% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100%, 90%, 80%, 70% 또는 60%; 60% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100%, 90%, 80% 또는 70%; 70% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100%, 90% 또는 80%; 80% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100% 또는 90%; 90% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110% 또는 100%; 100% 내지 150%, 140%, 130%, 120% 또는 110%; 110% 내지 150%, 140%, 130% 또는 120%; 120% 내지 150%, 140% 또는 130%; 130% 내지 150% 또는 140%; 또는 140% 내지 150%이거나 또는 필적하는 식제품의 상기 기계적 속성의 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배 또는 적어도 20배인 상기 기계적 속성 또는 2종 이상의 기계적 속성의 조합 (예를 들어, 상기 개시된 기계적 속성 중 2종 이상의 임의의 조합)을 가질 수 있다.
화학적/생물학적 속성
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물 또는 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 조성물은 각각 우유의 화학적/생물학적 속성이거나 또는 우유에 의해 필적하는 조성물에 부여되거나 그가 실질적으로 기여하는 화학적/생물학적 속성, 예컨대, 예를 들어 영양소 함량 (예를 들어, 단백질의 유형 및/또는 양, 아미노산의 유형 및/또는 양, PDCAAS, BV), pH, 흡수율 (예를 들어, 식제품으로부터의 흡수된 단백질의 비율), 소화율 (예를 들어, 위장 소화율), 산화 안정성 또는 포만감 조절을 가질 수 있다.
영양소 함량은 단백질 및 아미노산의 유형 및/또는 함량의 결정을 위해 AOAC 국제 참조 방법 AOAC 990.03 및 AOAC 992.15, 전기영동 (예를 들어, SDS-PAGE), 액체 칼럼 크로마토그래피, 면역화학적 시험 또는 온-칩 전기영동 (예를 들어, 애질런트(Agilent) 단백질 80 키트 및 애질런트 2100 바이오애널라이저를 사용함)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 관련 기술분야에 공지된 분석 방법을 사용하여 평가될 수 있다. 대안적으로, 화학적/생물학적 속성은 성분의 영양소 함량으로부터 계산될 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 질량 기준 3% 내지 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% 또는 5%; 5% 내지 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%; 10% 내지 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30% 또는 20%; 20% 내지 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40% 또는 30%; 30% 내지 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50% 또는 40%; 40% 내지 100%, 90%, 80%, 70%, 60% 또는 50%; 50% 내지 100%, 90%, 80%, 70% 또는 60%; 60% 내지 100%, 90%, 80% 또는 70%; 70% 내지 100%, 90% 또는 80%; 80% 내지 100% 또는 90%; 또는 90% 내지 100%의 단백질을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 적어도 0.8, 적어도 0.82, 적어도 0.84, 적어도 0.86, 적어도 0.88, 적어도 0.9, 적어도 0.92, 적어도 0.94, 적어도 0.96 또는 적어도 0.98의 PDCAAS를 가질 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 건조 질량 기준 5% 내지 30%, 25%, 20%, 15% 또는 10%; 10% 내지 30%, 25%, 20% 또는 15%; 15% 내지 30%, 25% 또는 20%; 20% 내지 30% 또는 25%; 또는 25% 내지 30%의 분지쇄 아미노산을 포함할 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 적어도 80, 적어도 85, 적어도 90, 적어도 95, 적어도 100, 적어도 105, 적어도 110, 적어도 115 또는 적어도 120의 BV를 가질 수 있다.
기능적 속성
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물 또는 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 조성물은 각각 우유의 기능적 속성이거나 또는 우유에 의해 필적하는 조성물에 부여되거나 그가 실질적으로 기여하는 기능적 속성, 예컨대, 예를 들어 거품형성/팽창 거동 (예를 들어, 거품형성 능력 (즉, 거품을 형성하는 능력, 여기서 본원에 사용된 용어 "거품"은 고체 또는 수성 연속 상에 분산된 기포를 지칭함), 거품 항복 응력 (즉, 거품에서 유동을 개시하는데 요구되는 응력), 거품 안정성 (즉, 물리적 및/또는 화학적 조건에 반응한 거품의 반감기), 거품 배수 (즉, 거품이 탈안정화되고 수성 상이 거품으로부터 배수되기 시작하는 속도)), 겔화/증점/응고 거동 (예를 들어, 겔화 능력 (즉, 겔을 형성하는 능력, 여기서 본원에 사용된 용어 "겔"은 단백질 분자에 수소 결합에 의해 연결된 용매로 충전된 공간을 갖는 단백질 네트워크를 지칭함), 겔화 프로파일 (예를 들어, 시간 경과에 따른 겔화 능력의 곡선, 온도의 함수로서의 점탄성 파라미터), 겔 강도 (즉, 한정된 면적의 겔 표면을 파괴하는데 요구되는 기계적 힘)), 유화 거동 (예를 들어, 유화 능력 (즉, 에멀젼을 안정화시키는 능력 또는 주어진 질량의 샘플이 탈안정화 없이 유화시킬 수 있는 오일의 양), 에멀젼 안정성 (즉, 주어진 조건, 예컨대, 예를 들어 주어진 단백질 농도, 지질 농도, pH, 이온 강도 또는 제조 방법 하에 생산된 에멀젼의 반감기)), 물 결합 거동 (예를 들어, 물 결합 능력 (즉, 물에 결합하는 능력), 물 결합 강도), 겔화시의 시네레시스 (즉, 시간 경과에 따른 물 삼출), 응집 거동 (예를 들어, 응집 능력 (즉, 침전물 (즉, 단백질 분자 사이의 강한 상호작용 및 용매의 배제에 기초한 치밀한 단백질 네트워크)을 형성하는 능력), 응집체 안정성 (예를 들어, 가열시, 다양한 pH에서, 다양한 이온 농도에서), 미셀 (즉, 조성물 내에 분산액으로서 존재하고 1종 이상의 생체분자 [예를 들어, 물, 미네랄, 비타민]를 캡슐화할 수 있는 일반적으로 또는 대략적으로 구형인 초분자 구조)을 형성하는 능력), 다른 단백질 (예를 들어, 다른 우유 단백질)과의 상호작용 및 사용 다양성 (즉, 다양한 조성물의 다양한 사용 및 제조에 대한 잠재력)을 가질 수 있다.
거품형성/팽창 거동은, 예를 들어 한정된 조건 (예를 들어, 온도, pH, 이온 강도, 단백질 농도, 탄수화물 농도) 하에서 특정 속도로 특정 시간 동안 휘핑한 후에 조성물에 의해 형성된 거품에 혼입된 공기의 백분율의 측정, 주어진 질량의 거품이 액체 배수 또는 삼출의 형태로 탈안정화되는데 걸리는 시간의 측정, 전단 하의 항복 응력 또는 샘플에서 유동을 개시하는데 요구되는 응력의 양의 측정 및 본원에 제공된 유제품 대체물 또는 우유를 사용하여 제조된 구워진/조리된 식제품의 높이 및 통기성의 가벼운 텍스쳐 정도의 측정을 포함한, 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 평가될 수 있다.
겔화/증점/응고 거동은 관련 기술분야에 공지된 방법, 예컨대, 예를 들어 조성물이 한정된 조건 (예를 들어, 온도, pH, 이온 강도, 단백질 농도, 탄수화물 농도) 하에 겔을 형성하는데 요구되는 시간의 측정, 레오미터 상에서 주파수 스위프로 수득된 저장 및 탄성 모듈러스 및 위상각의 측정, 및 물리적 힘 및/또는 화학적 조건 (예를 들어, 교반, 온도, pH, 이온 강도, 단백질 농도, 당 농도, 이온 강도)에 대한 겔의 저항성의 측정을 사용하여 평가될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Ikeda et al. 2000. Biopolymers, 56: 109-119] 참조).
유화 거동은, 예를 들어 한정된 조건 (예를 들어, 혼합 장치, 혼합 속도, 혼합 시간) 하에서의 수중 지질 에멀젼의 제조 및 후속하여 지질과 물의 혼합물에서의 상 분리의 시간 경과에 따른 안정성의 측정, 크림화 또는 침강 속도의 측정, 시간 경과에 따른 불투명도의 변화의 측정, 또는 시간 경과에 따른 분산된 상 입자 크기의 변화의 측정을 포함한, 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 평가될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Liang et al. 2013. Food Hydrocolloids, 33, 297-308] 참조).
물 결합 거동은, 예를 들어 원심분리 후 샘플에 의해 삼출된 물의 양의 측정 (이는 단백질의 질량당 결합된 물의 양을 결정하는데 사용됨), 또는 증기압의 함수로서 단백질의 질량당 결합된 물의 질량에 기초한 수분 수착 등온선의 전개를 포함한, 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 평가될 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 우유의 기능적 속성 (예를 들어, 거품형성 능력, 거품 항복 응력, 거품 안정성, 거품 배수, 겔화 능력, 겔 강도, 응집 능력, 응집체 안정성, 미셀을 형성하는 능력, 유화 능력, 에멀젼 안정성, 물 결합 능력 및 겔화시의 시네레시스를 포함한, 상기 개시된 임의의 기능적 속성)의 50% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100%, 90%, 80%, 70% 또는 60%; 60% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100%, 90%, 80% 또는 70%; 70% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100%, 90% 또는 80%; 80% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110%, 100% 또는 90%; 90% 내지 150%, 140%, 130%, 120%, 110% 또는 100%; 100% 내지 150%, 140%, 130%, 120% 또는 110%; 110% 내지 150%, 140%, 130% 또는 120%; 120% 내지 150%, 140% 또는 130%; 130% 내지 150% 또는 140%; 또는 140% 내지 150%이거나 또는 우유의 상기 기계적 속성의 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배 또는 적어도 20배인 상기 기능적 속성 또는 2종 이상의 기능적 속성의 조합 (예를 들어, 상기 개시된 기능적 속성 중 2종 이상의 임의의 조합)을 가질 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 우유의 것과 유사한 사용 다양성 (즉, 유제품 대체물을 다양한 방식으로 사용하고/거나 유제품 대체물로부터 다양한 다른 조성물을 유도하는 능력)을 가질 수 있다. 이러한 사용 다양성의 비제한적 예는 유제품 대체물 (예를 들어, 요구르트, 치즈, 크림, 버터) 및 단백질 이량체를 형성하는 능력을 포함하는 본원에 제공된 임의의 식제품의 제조이다.
감각 속성
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물 또는 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 조성물은 각각 우유의 감각 속성이거나 또는 우유에 의해 필적하는 조성물에 부여되거나 그가 실질적으로 기여하는 감각 속성, 예컨대, 예를 들어 맛/향미, 향 또는 섭식 품질 (예를 들어, 지방성, 크림성, 풍부성, 기름짐성, 두께, 경도/견고성, 바삭바삭함, 부서짐, 크런키함, 씹힘성, 씹어먹음, 유연함, 치밀성, 응집성, 부착성, 입자성, 매끄러움, 즙이 많음, 촉촉함, 구강코팅성, 혀 위에서의 미끄러짐성, 거칠음, 마모성, 물고/거나 씹는 균일성, 탄력성, 텍스쳐, 통기성, 스푼으로부터 혀 위로 샘플을 가져오는데 요구되는 노력)을 가질 수 있다.
감각 속성은 감각 전문가 패널에 의해 정성적으로 평가될 수 있거나 또는 텍스쳐 및 감각 지각에 영향을 미치는 상관관계가 있는 물리적, 기계적, 화학적 및/또는 기능적 속성 (예를 들어, 경도/견고성, 부착성, 복원성/회복가능한 에너지, 구조 완전성/응집성, 탄성/탄력성/반동성, 씹힘성/분해성, 밀도, 점도, 고체 입자의 함량/크기/형상, 물 결합)으로부터 유도될 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 식제품은 우유에 의해 필적하는 식제품에 부여되거나 그가 실질적으로 기여하는 감각 속성 (예를 들어, 맛/향미, 섭식 품질)과 유사한 감각 속성을 가질 수 있다.
대안적으로, 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 포함하는 식제품은 우유에 의해 필적하는 식제품에 부여되거나 그가 실질적으로 기여하는 감각 속성 (예를 들어, 맛/향미, 섭식 품질)과 상이한 감각 속성, 예컨대, 예를 들어 비-우유 맛/향미 또는 중성 맛/향미 (즉, 식제품의 맛/향미에 영향을 미치지 않음)를 가질 수 있다.
비-천연 PTM을 갖는 재조합 우유 단백질의 제조 방법
또 다른 측면에서, 본원에 제공된 유제품 대체물의 제조 방법이 본원에 제공된다. 방법은 본원에 제공된 바와 같은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 1종 이상의 재조합 우유 단백질을 포함한 1종 이상의 천연 및/또는 재조합 우유 단백질을 수득하는 단계를 포함한다.
재조합 우유 단백질은 재조합 우유 단백질을 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 재조합 벡터)를 포함하는 적합한 재조합 숙주 세포를 배양 배지에서 재조합 우유 단백질의 생산 및/또는 분비에 적합한 조건 하에 배양함으로써 수득될 수 있다. 방법은 a) 우유 단백질을 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드를 수득하는 단계 및 재조합 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 도입하여 재조합 숙주 세포를 수득하는 단계; 및/또는 b) 재조합 우유 단백질을 단리 (즉, 정제)하는 단계; 및/또는 c) 재조합 우유 단백질을 후가공하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
대안적으로, 재조합 우유 단백질은 시험관내 방법을 사용하여 (예를 들어, 무세포 전사 및/또는 번역 시스템을 사용하여) 수득될 수 있다.
천연 우유 단백질은 우유로부터 단리될 수 있다. 천연 공급원으로부터 단백질을 단리하는 방법은 공지되어 있고, 단백질 단리물, 단백질 농축물, 단백질 가루 및 부분 정제 또는 정제된 단백질을 생산하는데 사용된다.
재조합 폴리뉴클레오티드
재조합 숙주 세포에 포함된 재조합 폴리뉴클레오티드는 직접 화학적 합성 및 클로닝을 포함하나 이에 제한되지는 않는 관련 기술분야에 공지된 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다.
재조합 폴리뉴클레오티드는 전형적으로 1개 이상의 발현 카세트를 포함하며, 여기서 각각의 발현 카세트는 프로모터 (예를 들어, 진균 프로모터), 임의적인 신호 서열 (즉, 펩티드에 부착된 신생 단백질을 신생 단백질이 합성되는 세포의 외부로 전달하는 것을 매개하는 펩티드를 코딩하는 서열 (즉, 재조합 단백질의 분비를 매개하는 펩티드를 코딩하는 서열)), 우유 단백질을 코딩하는 서열 및 종결 서열 (또는 다중 종결 서열)을 포함하고, 여기서 프로모터는 임의적인 신호 서열에 센스 배향으로 작동가능하게 연결되고 (즉, 프로모터 및 임의적인 신호 서열 및 우유 단백질을 코딩하는 후속 서열은 프로모터가 임의적인 신호 서열 및 우유 단백질을 코딩하는 서열의 전사를 조절하는데 효과적이도록 위치됨), 임의적인 신호 서열은 우유 단백질을 코딩하는 서열에 센스 배향으로 작동가능하게 연결되고 (즉, 신호 서열 및 우유 단백질을 코딩하는 서열은 전사 및 번역이 기능적 신호 서열을 포함하는 우유 단백질을 생산하도록 위치됨), 종결 서열은 우유 단백질을 코딩하는 서열에 작동가능하게 연결된다 (즉, 우유 단백질을 코딩하는 서열 및 종결 서열은 종결인자가 임의적인 신호 서열 및 우유 단백질을 코딩하는 서열의 전사를 종결시키는데 효과적이도록 위치됨).
프로모터는 재조합 숙주 세포에서 기능적인 임의의 적합한 프로모터일 수 있다. 일부 실시양태에서, 프로모터는 구성적 프로모터이다. 다른 실시양태에서, 프로모터는 유도성 프로모터 또는 억제성 프로모터 (예를 들어, 글루코스, 갈락토스, 락토스, 수크로스, 셀룰로스, 소포로스, 겐티오비오스, 소르보스, 셀룰라제 프로모터를 유도하는 디사카라이드, 전분, 트립토판 또는 포스페이트의 존재 하에 유도되거나 또는 억제되는 프로모터)이다.
재조합 진균 숙주 세포에서 사용하기에 적합한 프로모터의 비제한적 예는 하기 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 유전자의 프로모터 및 그의 기능적 부분을 포함한다: 글루코아밀라제 (예를 들어, 아스페르길루스 니거(Aspergillus niger), 아스페르길루스 아와모리(Aspergillus awamori), 아스페르길루스 자포니쿠스(Aspergillus japonicus), 아스페르길루스 투빈겐시스(Aspergillus tubingensis), 아스페르길루스 포에티두스(Aspergillus foetidus) 또는 아스페르길루스 카르보나리우스(Aspergillus carbonarius)의 glaA), 아밀라제 (예를 들어, 아스페르길루스 오리자에(Aspergillus oryzae) TAKA 아밀라제, 아스페르길루스 니거(Aspergillus niger) 중성 알파-아밀라제, 아스페르길루스 니거 산 안정성 알파-아밀라제, 진균 α-아밀라제 [amy], 박테리아 알파-아밀라제), 프로테아제 (예를 들어, 리조뮤코르 미에헤이(Rhizomucor miehei) 아스파르트산 프로테아제, 아스페르길루스 오리자에 알칼리성 프로테아제, 푸사리움 옥시스포룸(Fusarium oxysporum) 트립신-유사 프로테아제, 트리코더마 레에세이(Trichoderma reesei) 프로테아제), 리파제 (예를 들어, 리조뮤코르 미에헤이 리파제), 이소머라제 (예를 들어, 아스페르길루스 오리자에 트리오스 포스페이트 이소머라제, 진균 트리오스 포스페이트 이소머라제 [tpi], 효모 트리오스포스페이트 이소머라제), 아세트아미다제 (예를 들어, 아스페르길루스 니둘란스(Aspergillus nidulans) 또는 아스페르길루스 오리자에 또는 다른 진균 아세트아미다제 [amdS]), 데히드로게나제 (예를 들어, 진균 알콜 데히드로게나제 [adhA], 진균 글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나제 [gpd], 효모 알콜 데히드로게나제), 크실라나제 (예를 들어, 진균 크실라나제 [xlnA], 트리코더마 크실라나제 [xyn1, xyn2, bxl1]), 키나제 (예를 들어, 효모 3-포스포글리세레이트 키나제), 히드롤라제 (예를 들어, 진균 셀로비오히드롤라제 I [cbh1], 트리코더마 히드롤라제 [cbh2, egl1, egl2]), 포스파타제 (예를 들어, 푸사리움 산 포스파타제), 및 다른 진균 단백질 (예를 들어, 진균 엔도 α-L-아라비나제 [abnA], 진균 α-L-아라비노푸라노시다제 A [abfA], 진균 α-L-아라비노푸라노시다제 B [abfB], 진균 피타제, 진균 ATP-신테타제, 진균 서브유닛 9 [oliC], 진균 포자형성-특이적 단백질 [Spo2], 진균 SSO, 효모 알콜 옥시다제, 효모 락타제, 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa) CPC1, 아스페르길루스 니둘란스 trpC, 진균 키틴용해 효소 [예를 들어, 엔도- & 엑소-키티나제, 베타-글루카나제], 진균 VAMP-연관 단백질 [VAP], 진균 번역 신장 인자 [TEF1], 진균 DNA 손상-반응성 단백질 [DDRP], 진균 [예를 들어, 푸사리움 또는 뉴로스포라 크라사] 육각 퍼옥시솜 [Hex1], 진균 [예를 들어, 뉴로스포라 크라사] 카탈라제), 및 재조합 진균 숙주 세포에서 높은 수준으로 생산된 임의의 다른 단백질.
재조합 박테리아 또는 효모 숙주 세포에서 사용하기에 적합한 프로모터의 비제한적 예는 하기 단백질: LAC4, T7 폴리머라제, TAC, GAL1, λPL, λPR, 베타-락타마제, spa, CYC1, TDH3, GPD, TEF1, ENO2, PGL1, GAP, SUC2, ADH1, ADH2, HXT7, PHO5, CLB1, AOX1, 셀룰라제, 아밀라제, 프로테아제, 크실라나제, 및 재조합 박테리아 또는 효모 숙주 세포에서 높은 수준으로 생산된 임의의 다른 단백질 중 임의의 것을 코딩하는 유전자의 프로모터 및 그의 기능적 부분, 예컨대, 예를 들어 스트레스 (예를 들어, 열 쇼크) 반응 유전자 (예를 들어, hac1, BIP)의 프로모터를 포함한다.
신호 서열은 재조합 숙주 세포에서 기능적인 임의의 적합한 신호 서열일 수 있다. 재조합 진균 숙주 세포에서 사용하기에 적합한 신호 서열의 비제한적 예는 트리코더마 레에세이(Trichoderma reesei)로부터의 신호 서열 (예를 들어, Cbh1, cbh2, egl1, egl2, xyn1, xyn2, bxl1, hfb1 또는 hfb2의 신호 서열), 아스페르길루스 니거(Aspergillus niger)로부터의 신호 서열 (예를 들어, glaA, amyA, amyC 또는 aamA의 신호 서열), 효모로부터의 신호 서열 (예를 들어, 알파 교배 인자 [MFa]의 신호 서열), 및 그의 기능적 부분을 포함한다. 재조합 효모 숙주 세포에서 사용하기에 적합한 신호 서열의 비제한적 예는 효모로부터의 신호 서열 (예를 들어, 알파 교배 인자 [MFa]의 신호 서열), 및 그의 기능적 부분을 포함한다.
종결 서열은 재조합 숙주 세포에서 기능적인 임의의 적합한 종결 서열일 수 있다. 재조합 진균 숙주 세포에서 사용하기에 적합한 종결 서열의 비제한적 예는 아스페르길루스 오리자에(Aspergillus oryzae)의 종결 서열 (예를 들어, TAKA 아밀라제 유전자의 종결 서열), 아스페르길루스 니거(Aspergillus niger) (예를 들어, glaA, gpdA, aamA, trpC, pdc1, adh1, amdS 또는 tef1 유전자의 종결 서열), 푸사리움 옥시스포룸(Fusarium oxysporum) (예를 들어, 세린 프로테아제 [트립신] 유전자의 종결 서열), 트리코더마 레에세이(Trichoderma reesei) (예를 들어, cbh1, pdc1, TEF1, gpd1, xyn1 또는 adh1 유전자의 종결 서열), 피키아 파스토리스(Pichia pastoris) (예를 들어, aox1, gap1, adh1, tef1, tps1 또는 pgk1 유전자의 종결 서열), 사카로미세스 세레비지아에(Saccharomyces cerevisiae) (예를 들어, adh1, cyc1, gal1, tef1, pdc1, pgk1 또는 tps1 유전자의 종결 서열), 합성 종결 서열, 및 상기 열거된 서열의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 재조합 효모 숙주 세포에서 사용하기에 적합한 종결 서열의 비제한적 예는 PGK1 및 TPS1 종결 서열을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
재조합 폴리뉴클레오티드는 추가의 요소를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 추가의 요소의 비제한적 예는 인핸서 서열, 반응 요소, 단백질 인식 부위, 유도성 요소, 단백질-결합 서열, 5' 및 3' 비번역 영역, 폴리아데닐화 서열, 인트론, 복제 기점, 오퍼레이터 (즉, 리프레서 단백질이 프로모터에 결합하여 그의 활성을 감소시키거나 제거할 수 있는 단백질-결합 도메인을 포함하는 프로모터에 인접한 폴리뉴클레오티드), 및 선택 마커 (즉, 숙주 세포의 영양요구성을 보완하거나, 항생제 저항성을 제공하거나 또는 색상 변화를 유발할 수 있는 단백질을 코딩하는 유전자)를 포함한다. 이러한 요소는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 복제 기점의 비제한적 예는 AMA1 및 ANSI를 포함한다. 적합한 선택 마커의 비제한적 예는 amdS (아세트아미다제), argB (오르니틴 카르바모일트랜스퍼라제), bar (포스피노트리신 아세틸트랜스퍼라제), hph (히그로마이신 포스포트랜스퍼라제), niaD (니트레이트 리덕타제), pyrG (오로티딘 5'-포스페이트 데카르복실라제), sC (술페이트 아데닐트랜스퍼라제) 및 trpC (안트라닐레이트 신타제) 및 그의 유도체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 선택 마커는 선택 마커의 생산을 감소시켜 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포가 선택 하에 생존하도록 허용하는데 필요한 카피의 수를 증가시키는 변경을 포함한다.
재조합 폴리뉴클레오티드가 2개 이상의 발현 카세트를 포함하는 실시양태에서, 작동가능하게 연결된 프로모터, 임의적인 신호 서열, 폴리펩티드 종결 서열을 코딩하는 서열 및 임의적인 추가의 요소는 2개 이상의 발현 카세트 사이에서 동일하거나 상이할 수 있다.
재조합 숙주 세포
재조합 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 도입하여 재조합 숙주 세포를 수득하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 이러한 방법의 비제한적 예는 인산칼슘 형질감염, 덴드리머 형질감염, 리포솜 형질감염 (예를 들어, 양이온성 리포솜 형질감염), 양이온성 중합체 형질감염, 세포 스퀴징, 초음파천공, 광학적 형질감염, 원형질체 융합, 임페일펙션, 유체역학적 전달, 유전자 총, 마그네토펙션, 바이러스 형질도입, 전기천공 및 화학적 변환 (예를 들어, PEG 사용)을 포함한다.
재조합 폴리뉴클레오티드는 재조합 숙주 세포에서 발현 벡터 (즉, 숙주 세포를 형질도입하거나, 형질전환시키거나 또는 감염시키고, 숙주 세포에 대해 천연이 아닌 방식으로의 또는 숙주 세포에 대해 천연인 것 이외의 폴리뉴클레오티드 및/또는 폴리펩티드를 발현하도록 하는 폴리뉴클레오티드) 상에 염색체외로 유지될 수 있거나, 또는 재조합 숙주 세포의 게놈 (예를 들어, 염색체) 내에 안정하게 통합될 수 있다. 게놈 내로의 통합을 위해, 재조합 폴리뉴클레오티드는 상동 (즉, 표적화된 통합) 또는 비상동 재조합에 의한 게놈 내로의 통합을 위한 서열을 포함할 수 있다. 재조합 폴리뉴클레오티드는 상동 재조합의 확률을 증진시키기 위해 재조합 숙주 세포의 게놈 내의 표적 서열과 고도로 상동인 적어도 100개, 적어도 250개, 적어도 500개, 적어도 750개, 적어도 1,000개 또는 적어도 10,000개의 염기 쌍을 포함할 수 있다. 이러한 고도로 상동인 서열은 비-코딩 또는 코딩 서열일 수 있다. 재조합 폴리뉴클레오티드의 1개 초과의 카피를 재조합 숙주 세포 내로 삽입하여 재조합 우유 단백질의 생산을 증가시킬 수 있다.
재조합 숙주 세포는 임의의 동물, 식물, 조류 진균 (예를 들어, 효모, 사상 진균) 또는 박테리아, 뿐만 아니라 일반적으로 안전한 것으로 인식되는 (GRAS) 임의의 산업용 균주를 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 유기체로부터 수득된 숙주 세포로부터 수득될 수 있다.
적합한 식물의 비제한적 예는 소철, 징코 빌로바, 침엽수, 사이프레스, 주니퍼, 투자, 시더우드, 소나무, 안젤리카, 캐러웨이, 코리안더, 쿠민, 펜넬, 파슬리, 딜, 민들레, 헬리크리숨, 마리골드, 쑥, 홍화, 카모마일, 상추, 약쑥, 금잔화속, 시트로넬라, 세이지, 타임, 치아씨, 겨자, 올리브, 커피, 캅시쿰, 가지, 파프리카, 크랜베리, 키위, 채소 (예를 들어, 당근, 셀러리), 타게테, 탄시, 타라곤, 해바라기, 윈터그린, 바질, 히솝, 라벤더, 레몬 버베나, 마조람, 멜리사, 파출리, 페니로얄, 페퍼민트, 로즈마리, 참깨, 스피아민트, 프림로스, 사마라, 페퍼, 피망, 감자, 고구마, 토마토, 블루베리, 가지과, 페튜니아, 모닝 글로리, 라일락, 자스민, 허니서클, 금어초, 사일륨, 웜시드, 메밀, 아마란스, 근대, 퀴노아, 시금치, 루바브, 호호바, 시프셀레아, 클로렐라, 마룰라, 헤이즐넛, 카놀라, 케일, 청경채, 루타바가, 프란킨센스, 미르, 엘레미, 대마, 호박, 스쿼시, 쿠르쿠르비트, 마니옥, 달베르기아, 콩과 식물 (예를 들어, 알팔파, 렌틸, 콩, 클로버, 완두, 파바 코세이라, 프리졸 볼라 로자, 프리졸 네그로, 레스페데자, 감초, 루핀, 메스키트, 캐롭, 대두, 땅콩, 타마린드, 위스테리아, 카시아, 병아리콩/가르반조, 호로파, 녹색 완두, 황색 완두, 스노우 완두, 리마콩, 잠두), 제라늄, 아마, 석류, 목화, 오크라, 니임, 무화과, 멀베리, 클로브, 유칼립투스, 티트리, 니아오울리, 과일 식물 (예를 들어, 사과, 살구, 복숭아, 자두, 배, 승도복숭아), 딸기, 블랙베리, 라즈베리, 체리, 프룬, 장미, 탄제린, 시트러스 (예를 들어, 그레이프프루트, 레몬, 라임, 오렌지, 비터 오렌지, 만다린, 탄제린), 망고, 시트러스 베르가모트, 부추, 포도, 브로콜리, 브뤼셀 스프라우트, 카멜리나, 콜리플라워, 평지, 평지씨 (카놀라), 순무, 양배추, 오이, 수박, 감로 멜론, 주키니, 자작나무, 호두, 카사바, 바오밥, 올스파이스, 아몬드, 브레드프룻, 샌달우드, 마카다미아, 토란, 투베로스, 알로에 베라, 마늘, 양파, 샬롯, 바닐라, 유카, 베티버, 갈랑갈, 보리, 옥수수, 쿠르쿠마 아로마티카, 생강, 레몬 그래스, 귀리, 야자, 파인애플, 벼, 호밀, 수수, 트리티케일, 강황, 참마, 대나무, 보리, 캐쥬풋, 칸나, 카르다몸, 메이즈, 귀리, 밀, 시나몬, 사사프라스, 린데라 벤조인, 베이 라우렐, 아보카도, 일랑-일랑, 메이스, 넛멕, 모링가, 쇠뜨기, 오레가노, 실란트로, 처빌, 차이브, 복과류, 곡물 식물, 허브 식물, 잎 채소, 비-곡물 콩과 식물, 견과 식물, 다즙 식물, 육지 식물, 물 식물, 델베르기아, 기장, 드루프, 스키조카르프, 현화 식물, 비-현화 식물, 재배 식물, 야생 식물, 나무, 관목, 꽃, 풀, 초본 식물, 덤불, 리아나, 칵티, 열대 식물, 아열대 식물, 온대 식물 및 이끼 (예를 들어, 피스코미트렐라 파텐스(Physcomitrella patens))를 포함한다.
적합한 조류의 비제한적 예는 하기 속 중 임의의 것의 구성원 및 그의 유도체 또는 교배물을 포함한다: 홍조류, 갈조류, 녹조류, 미세조류, 아시네토박터(Acinetobacter), 아크난테스(Achnanthes) (예를 들어, 아크난테스 오리엔탈리스(Achnanthes orientalis)), 아그메넬룸(Agmenellum), 알라리아(Alaria) (예를 들어, 알라리아 마르기나타(Alaria marginata)), 암피프로라(Amphiprora) (예를 들어, 암피프로라 히알린(Amphiprora hyaline)), 암포라(Amphora) (예를 들어, 암포라 코페이포르미스(Amphora coffeiformis), 암포라 코페이포르미스 리네아(Amphora coffeiformis linea), 암포라 코페이포르미스 푼크타타(Amphora coffeiformis punctata), 암포라 코페이포르미스 테일로리(Amphora coffeiformis taylori), 암포라 코페이포르미스 테누이스(Amphora coffeiformis tenuis), 암포라 델리카티시마(Amphora delicatissima), 암포라 델리카티시마 카피타타(Amphora delicatissima capitata), 암포라 종), 아나바에나(Anabaena), 아날리푸스(Analipus) (예를 들어, 아날리푸스 자포니쿠스(Analipus japonicus)), 안키스트로데스무스(Ankistrodesmus) (예를 들어, 안키스트로데스무스 팔카투스(Ankistrodesmus falcatus)), 아스코필룸(Ascophyllum) (예를 들어, 아스코필룸 노도숨(Ascophyllum nodosum)), 보에켈로비아(Boekelovia) (예를 들어, 보에켈로비아 후글란디이(Boekelovia hooglandii)), 보로디넬라(Borodinella) (예를 들어, 보로디넬라 종), 보트리오코쿠스(Botryococcus) (예를 들어, 보트리오코쿠스 브라우니이(Botryococcus braunii), 보트리오코쿠스 수데티쿠스(Botryococcus sudeticus)), 카르테리아(Carteria), 카에토세로스(Chaetoceros) (예를 들어, 카에토세로스 그라실리스(Chaetoceros gracilis)), 카에토세로스 뮐레리(Chaetoceros muelleri), 카에토세로스 뮐레리 수브살숨(Chaetoceros muelleri subsalsum), 카에토세로스 종), 클로렐라(Chlorella) (예를 들어, 클로렐라 아니트라타(Chlorella anitrata), 클로렐라 안타르크티카(Chlorella Antarctica), 클로렐라 아우레오비리디스(Chlorella aureoviridis), 클로렐라 칸디다(Chlorella candida), 클로렐라 캅술레이트(Chlorella capsulate), 클로렐라 데시케이트(Chlorella desiccate), 클로렐라 엘립소이데아(Chlorella ellipsoidea), 클로렐라 에메르소니이(Chlorella emersonii), 클로렐라 푸스카(Chlorella fusca), 클로렐라 푸스카 변종 바쿠올라타(Chlorella fusca var. vacuolata), 클로렐라 글루코트로파(Chlorella glucotropha), 클로렐라 인푸시오눔(Chlorella infusionum), 클로렐라 인푸시오눔 변종 악토필라(Chlorella infusionum var. actophila), 클로렐라 인푸시오눔 변종 아욱세노필라(Chlorella infusionum var. auxenophila), 클로렐라 케슬레리(Chlorella kessleri), 클로렐라 로보포라(Chlorella lobophora) (균주 SAG 37.88), 클로렐라 루테오비리디스(Chlorella luteoviridis), 클로렐라 루테오비리디스 변종 아우레오비리디스(Chlorella luteoviridis var. aureoviridis), 클로렐라 루테오비리디스 변종 루테센스(Chlorella luteoviridis var. lutescens), 클로렐라 미니아타(Chlorella miniata), 클로렐라 미누티시마(Chlorella minutissima), 클로렐라 무타빌리스(Chlorella mutabilis), 클로렐라 녹투르나(Chlorella nocturna), 클로렐라 파르바(Chlorella parva), 클로렐라 포토필라(Chlorella photophila), 클로렐라 프링쉐이미이(Chlorella pringsheimii), 클로렐라 프로토테코이데스(Chlorella protothecoides), 클로렐라 프로토테코이데스 변종 아시디콜라(Chlorella protothecoides var. acidicola), 클로레알라(Chlorealla), 클로렐라 레굴라리스(Chlorella regularis), 클로렐라 레굴라리스 변종 미니마(Chlorella regularis var. minima), 클로렐라 레굴라리스 변종 움브리카타(Chlorella regularis var. umbricata), 클로렐라 레이시글리이(Chlorella reisiglii), 클로렐라 사카로필라(Chlorella saccharophila), 클로렐라 사카로필라 변종 엘립소이데아(Chlorella saccharophila var. ellipsoidea), 클로렐라 살리나(Chlorella salina), 클로렐라 심플렉스(Chlorella simplex), 클로렐라 소로키니아나(Chlorella sorokiniana), 클로렐라 종, 클로렐라 스파에리카(Chlorella sphaerica), 클로렐라 스티그마토포라(Chlorella stigmatophora), 클로렐라 반니엘리이(Chlorella vanniellii), 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris), 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris), 클로렐라 불가리스 에프. 테르티아(Chlorella vulgaris f. tertia), 클로렐라 불가리스 변종 오토트로피카(Chlorella vulgaris var. autotrophica), 클로렐라 불가리스 변종 비리디스(Chlorella vulgaris var. viridis), 클로렐라 불가리스 변종 불가리스(Chlorella vulgaris var. vulgaris), 클로렐라 불가리스 변종 불가리스 에프. 테르티아(Chlorella vulgaris var. vulgaris f. tertia), 클로렐라 불가리스 변종 불가리스 에프. 비리디스(Chlorella vulgaris var. vulgaris f. viridis), 클로렐라 크산텔라(Chlorella xanthella), 클로렐라 조핀기엔시스(Chlorella zofingiensis), 클로렐라 트레보욱시오이데스(Chlorella trebouxioides), 클로렐라 불가리스(Chlorella vulgaris)), 클로로코쿰(Chlorococcum) (예를 들어, 클로로코쿰 인푸시오눔(Chlorococcum infusionum), 클로로코쿰 종), 클로로고니움(Chlorogonium), 콘드루스(Chondrus) (예를 들어, 콘드루스 크리스푸스(Chondrus crispus), 콘드루스 오셀라투스(Chondrus ocellatus)), 크로오모나스(Chroomonas) (예를 들어, 크로오모나스 종), 크리소스파에라(Chrysosphaera) (예를 들어, 크리소스파에라 종), 크리코스파에라(Cricosphaera) (예를 들어, 크리코스파에라 종), 크립토모나스(Cryptomonas) (예를 들어, 크립토모나스 종), 시클로텔라(Cyclotella) (예를 들어, 시클로텔라 크립티카(Cyclotella cryptica), 시클로텔라 메네기니아나(Cyclotella meneghiniana), 시클로텔라 종), 두날리엘라(Dunaliella) (예를 들어, 두날리엘라 종, 두날리엘라 바르다윌(Dunaliella bardawil), 두날리엘라 비오쿨라타(Dunaliella bioculata), 두날리엘라 그라눌레이트(Dunaliella granulate), 두날리엘라 마리티메(Dunaliella maritime), 두날리엘라 미누타(Dunaliella minuta), 두날리엘라 파르바(Dunaliella parva), 두날리엘라 페이르세이(Dunaliella peircei), 두날리엘라 프리모렉타(Dunaliella primolecta), 두날리엘라 살리나(Dunaliella salina), 두날리엘라 테리콜라(Dunaliella terricola), 두날리엘라 테르티오렉타(Dunaliella tertiolecta), 두날리엘라 비리디스(Dunaliella viridis), 두날리엘라 테르티오렉타(Dunaliella tertiolecta)), 엑클로니아(Ecklonia) (예를 들어, 엑클로니아 종), 에이세니아(Eisenia) (예를 들어, 에이세니아 비시클리스(Eisenia bicyclis)), 엘립소이돈(Ellipsoidon) (예를 들어, 엘립소이돈 종), 에레모스파에라(Eremosphaera) (예를 들어, 에레모스파에라 비리디스(Eremosphaera viridis), 에레모스파에라 종), 유케우마(Eucheuma) (예를 들어, 유케우마 코토니이(Eucheuma cottonii), 유케우마 스피노숨(Eucheuma spinosum)), 유글레나(Euglena), 프라길라리아(Fragilaria) (예를 들어, 프라길라리아 크로토넨시스(Fragilaria crotonensis), 프라길라리아 종), 프란세이아(Franceia) (예를 들어, 프란세이아 종), 푸르셀라리아(Furcellaria) (예를 들어, 푸르셀라리아 파스티기아타(Furcellaria fastigiata)), 기가르티나(Gigartina) (예를 들어, 기가르티나 아시쿨라리스(Gigartina acicularis), 기가르티나 부르사-파스토리스(Gigartina bursa-pastoris), 기가르티나 피스틸라타(Gigartina pistillata), 기가르티나 라둘라(Gigartina radula), 기가르티나 스코츠베르기이(Gigartina skottsbergii), 기가르티나 스텔레이트(Gigartina stellate)), 글리오캅사(Gleocapsa) (예를 들어, 글리오캅사 종), 글로에오탐니온(Gloeothamnion) (예를 들어, 글로에오탐니온 종), 글로이오펠티스(Gloiopeltis) (예를 들어, 글로이오펠티스 푸르카타(Gloiopeltis furcata)), 그라실라리아(Gracilaria) (예를 들어, 그라실라리아 부르사-파스토리스(Gracilaria bursa-pastoris), 그라실라리아 리케노이데스(Gracilaria lichenoides)), 히지키아(Hizikia) (예를 들어, 히지키아 푸시포르메(Hizikia fusiforme)), 히메노모나스(Hymenomonas) (예를 들어, 히메노모나스 종), 이소크리시스(Isochrysis) (예를 들어, 이소크리시스 유사종 갈바나(Isochrysis aff. galbana), 이소크리시스 갈바나(Isochrysis galbana)), 크젤마니엘라(Kjellmaniella) (예를 들어, 크젤마니엘라 기라타(Kjellmaniella gyrata)), 라미나리아(Laminaria) (예를 들어, 라미나리아 안구스타타(Laminaria angustata), 라미나리아 롱기루리스(Laminaria longirruris), 라미나리아 롱기시마(Laminaria Longissima), 라미나리아 오코텐시스(Laminaria ochotensis), 라미나리아 클라우스토니아(Laminaria claustonia), 라미나리아 사카리나(Laminaria saccharina), 라미나리아 디기타타(Laminaria digitata), 라미나리아 자포니카(Laminaria japonica)), 레포신클리스(Lepocinclis), 마크로시스티스(Macrocystis) (예를 들어, 마크로시스티스 피리페라(Macrocystis pyrifera)), 미크락티니움(Micractinium), 모노라피디움(Monoraphidium) (예를 들어, 모노라피디움 미누툼(Monoraphidium minutum), 모노라피디움 종), 난노클로리스(Nannochloris) (예를 들어, 난노클로리스 종), 난노클로롭시스(Nannochloropsis) (예를 들어, 난노클로롭시스 살리나(Nannochloropsis salina), 난노클로롭시스 종), 나비쿨라(Navicula) (예를 들어, 나비쿨라 아셉타타(Navicula acceptata), 나비쿨라 비스칸테라에(Navicula biskanterae), 나비쿨라 슈도테넬로이데스(Navicula pseudotenelloides), 나비쿨라 펠리쿨로사(Navicula pelliculosa), 나비쿨라 사프로필라(Navicula saprophila), 나비쿨라 종), 네프로클로리스(Nephrochloris) (예를 들어, 네프로클로리스 종), 네프로셀미스(Nephroselmis) (예를 들어, 네프로셀미스 종), 니츠키아(Nitzschia) (예를 들어, 니츠키아 콤무니스(Nitzschia communis), 니츠키아 알렉산드리나(Nitzschia alexandrina), 니츠키아 콤무니스(Nitzschia communis), 니츠키아 디시파타(Nitzschia dissipata), 니츠키아 프루스툴룸(Nitzschia frustulum), 니츠키아 한츠키아나(Nitzschia hantzschiana), 니츠키아 인콘스피쿠아(Nitzschia inconspicua), 니츠키아 인테르메디아(Nitzschia intermedia), 니츠키아 미크로세팔라(Nitzschia microcephala), 니츠키아 푸실라(Nitzschia pusilla), 니츠키아 푸실라 엘립티카(Nitzschia pusilla elliptica), 니츠키아 푸실라 모노엔시스(Nitzschia pusilla monoensis), 니츠키아 쿼드란굴라(Nitzschia quadrangular), 니츠키아 종), 오크로모나스(Ochromonas) (예를 들어, 오크로모나스 종), 오오시스티스(Oocystis) (예를 들어, 오오시스티스 파르바(Oocystis parva), 오오시스티스 푸실라(Oocystis pusilla), 오오시스티스 종), 오실라토리아(Oscillatoria) (예를 들어, 오실라토리아 림네티카(Oscillatoria limnetica), 오실라토리아 종, 오실라토리아 수브브레비스(Oscillatoria subbrevis)), 팔마리아(Palmaria) (예를 들어, 팔마리아 팔마타(Palmaria palmata)), 파스케리아(Pascheria) (예를 들어, 파스케리아 아시도필라(Pascheria acidophila)), 파블로바(Pavlova) (예를 들어, 파블로바 종), 페탈로니아(Petalonia) (예를 들어, 페탈로니아 파시아(Petalonia fascia)), 파구스(Phagus), 포르미디움(Phormidium), 플라티모나스(Platymonas) (예를 들어, 플라티모나스 종), 플레우로크리시스(Pleurochrysis) (예를 들어, 플레우로크리시스 카르테라에(Pleurochrysis carterae), 플레우로크리시스 덴테이트(Pleurochrysis dentate), 플레우로크리시스 종), 포르피라(Porphyra) (예를 들어, 포르피라 콜룸비나(Porphyra columbina), 포르피라 크리스파타(Porphyra crispata), 포르피라 듀타타(Porphyra deutata), 포르피라 페르포라타(Porphyra perforata), 포르피라 수보르비쿨라타(Porphyra suborbiculata), 포르피라 테네라(Porphyra tenera)), 포르피리디움(Porphyridium) (예를 들어, 포르피리디움 크루엔툼(Porphyridium cruentum), 포르피리디움 푸르푸레움(Porphyridium purpureum), 포르피리디움 아에루기네움(Porphyridium aerugineum)), 프로토테카(Prototheca) (예를 들어, 프로토테카 위커하미이(Prototheca wickerhamii), 프로토테카 스타그노라(Prototheca stagnora), 프로토테카 포르토리센시스(Prototheca portoricensis), 프로토테카 모리포르미스(Prototheca moriformis), 프로토테카 조프피이(Prototheca zopfii)), 피라미모나스(Pyramimonas) (예를 들어, 피라미모나스 종), 피로보트리스(Pyrobotrys), 로델라(Rhodella) (예를 들어, 로델라 마쿨라타(Rhodella maculata), 로델라 레티쿨라타(Rhodella reticulata), 로델라 비올라세아(Rhodella violacea)), 로디메니아(Rhodymenia) (예를 들어, 로디메니아 팔마타(Rhodymenia palmata)), 사르시노이드(Sarcinoid) (예를 들어, 사르시노이드 크리소피테(Sarcinoid chrysophyte)), 세네데스무스(Scenedesmus) (예를 들어, 세네데스무스 아르마투스(Scenedesmus armatus)), 스키토시폰(Scytosiphon) (예를 들어, 스키토시폰 로메(Scytosiphon lome)), 스피로기라(Spirogyra), 스피룰리나(Spirulina) (예를 들어, 스피룰리나 플라텐시스(Spirulina platensis)), 스티코코쿠스(Stichococcus) (예를 들어, 스티코코쿠스 종), 시네코코쿠스(Synechococcus) (예를 들어, 시네코코쿠스 종), 테트라에드론(Tetraedron), 테트라셀미스(Tetraselmis) (예를 들어, 테트라셀미스 종, 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica)), 탈라시오시라(Thalassiosira) (예를 들어, 탈라시오시라 웨이스플로기이(Thalassiosira weissflogii)), 및 비리디엘라(Viridiella) (예를 들어, 비리디엘라 프리데리시아나(Viridiella fridericiana)).
적합한 효모의 비제한적 예는 하기 속 중 임의의 것의 구성원 및 그의 유도체 또는 교배물을 포함한다: 칸디다(Candida) (예를 들어, 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 칸디다 에첼시이(Candida etchellsii), 칸디다 구일리에르몬디이(Candida guilliermondii), 칸디다 휴밀리스(Candida humilis), 칸디다 리폴리티카(Candida lipolytica), 칸디다 오르토프실로시스(Candida orthopsilosis), 칸디다 팔미올레오필라(Candida palmioleophila), 칸디다 슈도트로피칼리스(Candida pseudotropicalis), 칸디다 종, 칸디다 유틸리스(Candida utilis), 칸디다 베르사틸리스(Candida versatilis)), 클라도스포리움(Cladosporium), 크립토코쿠스(Cryptococcus) (예를 들어, 크립토코쿠스 테리콜루스(Cryptococcus terricolus), 크립토코쿠스 쿠르바투스(Cryptococcus curvatus)), 데바리오미세스(Debaryomyces) (예를 들어, 데바리오미세스 한세니이(Debaryomyces hansenii)), 엔도미세스(Endomyces) (예를 들어, 엔도미세스 베르날리스(Endomyces vernalis)), 엔도미콥시스(Endomycopsis) (예를 들어, 엔도미콥시스 베르날리스(Endomycopsis vernalis)), 에레모테시움(Eremothecium) (예를 들어, 에레모테시움 아쉬비이이(Eremothecium ashbyii)), 한세눌라(Hansenula) (예를 들어, 한세눌라 종, 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha)), 클루이베로미세스(Kluyveromyces) (예를 들어, 클루이베로미세스 종, 클루이베로미세스 락티스(Kluyveromyces lactis), 클루이베로미세스 마르시아누스 변종 락티스(Kluyveromyces marxianus var. lactis), 클루이베로미세스 마르시아누스(Kluyveromyces marxianus), 클루이베로미세스 써모톨레란스(Kluyveromyces thermotolerans)), 리포미세스(Lipomyces) (예를 들어, 리포미세스 스타르케이이(Lipomyces starkeyi), 리포미세스 리포퍼(Lipomyecs lipofer)), 오가타에아(Ogataea) (예를 들어, 오가타에아 미누타(Ogataea minuta)), 피키아(Pichia) (예를 들어, 피키아 종, 피키아 파스토리스(Pichia pastoris), 피키아 핀란디카(Pichia finlandica), 피키아 트레할로필라(Pichia trehalophila), 피키아 코클라마에(Pichia koclamae), 피키아 멤브라나에파시엔스(Pichia membranaefaciens), 피키아 미누타(Pichia minuta), 피키아 린드네리(Pichia lindneri)), 피키아 오푼티아에(Pichia opuntiae), 피키아 써모톨레란스(Pichia thermotolerans), 피키아 살릭타리아(Pichia salictaria), 피키아 구에르쿠움(Pichia guercuum), 피키아 피즈페리(Pichia pijperi), 피키아 스팁티스(Pichia stiptis), 피키아 메타놀리카(Pichia methanolica)), 로도스포리디움(Rhodosporidium) (예를 들어, 로도스포리디움 토룰로이데스(Rhodosporidium toruloides)), 로도토룰라(Rhodotorula) (예를 들어, 로도토룰라 종, 로도토룰라 그라실리스(Rhodotorula gracilis), 로도토룰라 글루티니스(Rhodotorula glutinis), 로도토룰라 그라미니스(Rhodotorula graminis)), 사카로미세스(Saccharomyces) (예를 들어, 사카로미세스 종, 사카로미세스 바야누스(Saccharomyces bayanus), 사카로미세스 베티쿠스(Saccharomyces beticus), 사카로미세스 세레비지아에(Saccharomyces cerevisiae), 사카로미세스 케발리에리(Saccharomyces chevalieri), 사카로미세스 디아스타티쿠스(Saccharomyces diastaticus), 사카로미세스 엘립소이데우스(Saccharomyces ellipsoideus), 사카로미세스 엑시구우스(Saccharomyces exiguus), 사카로미세스 플로렌티누스(Saccharomyces florentinus), 사카로미세스 프라길리스(Saccharomyces fragilis), 사카로미세스 파스토리아누스(Saccharomyces pastorianus), 사카로미세스 폼베(Saccharomyces pombe), 사카로미세스 사케(Saccharomyces sake), 사카로미세스 우바룸(Saccharomyces uvarum)), 스포로볼로미세스(Sporobolomyces) (예를 들어, 스포로볼로미세스 로세우스(Sporobolomyces roseus)), 스포리디오볼루스(Sporidiobolus) (예를 들어, 스포리디오볼루스 존소니이(Sporidiobolus johnsonii), 스포리디오볼루스 살모니콜로르(Sporidiobolus salmonicolor)), 트리코스포론(Trichosporon) (예를 들어, 트리코스포론 카카올리포시밀리스(Trichosporon cacaoliposimilis), 트리코스포론 올레아기노수스 종 신종(Trichosporon oleaginosus sp. nov.), 트리코스포론 카카올리포시밀리스 종 신종(Trichosporon cacaoliposimilis sp. nov.), 트리코스포론 그라실레(Trichosporon gracile), 트리코스포론 둘시툼(Trichosporon dulcitum), 트리코스포론 지로베시이(Trichosporon jirovecii), 트리코스포론 인섹토룸(Trichosporon insectorum)), 크산토필로미세스(Xanthophyllomyces) (예를 들어, 크산토필로미세스 덴드로로우스(Xanthophyllomyces dendrorhous)), 야로위아(Yarrowia) (예를 들어, 야로위아 리폴리티카(Yarrowia lipolytica)), 및 지고사카로미세스(Zygosaccharomyces) (예를 들어, 지고사카로미세스 로욱시이(Zygosaccharomyces rouxii)).
적합한 사상 진균의 비제한적 예는 홀로모르프, 텔레오모르프 및 아나모르프 형태의 진균, 예컨대 하기 속 중 임의의 것의 구성원 및 그의 유도체 또는 교배물을 포함한다: 아크레모니움(Acremonium) (예를 들어, 아크레모니움 알라바멘세(Acremonium alabamense)), 아스페르길루스(Aspergillus) (예를 들어, 아스페르길루스 아쿨레아투스(Aspergillus aculeatus)), 아스페르길루스 아와모리(Aspergillus awamori), 아스페르길루스 클라바투스(Aspergillus clavatus), 아스페르길루스 플라부스(Aspergillus flavus), 아스페르길루스 포에티두스(Aspergillus foetidus), 아스페르길루스 푸미가투스(Aspergillus fumigatus), 아스페르길루스 자포니쿠스(Aspergillus japonicus), 아스페르길루스 니둘란스(Aspergillus nidulans), 아스페르길루스 니거(Aspergillus niger), 아스페르길루스 니거 변종 아와모리(Aspergillus niger var. awamori), 아스페르길루스 오크라세우스(Aspergillus ochraceus), 아스페르길루스 오리자에(Aspergillus oryzae), 아스페르길루스 소자에(Aspergillus sojae), 아스페르길루스 테레우스(Aspergillus terreus), 뿐만 아니라 에메리셀라(Emericella), 네오사르토리아(Neosartorya), 및 페트로미세스(Petromyces) 종), 아우레오바시디움(Aureobasidium), 카나리오미세스(Canariomyces), 카에토미움(Chaetomium), 카에토미디움(Chaetomidium), 코리나스쿠스(Corynascus), 크리소스포리움(Chrysosporium) (예를 들어, 크리소스포리움 보트리오이데스(Chrysosporium botryoides), 크리소스포리움 카르미카엘리(Chrysosporium carmichaeli), 크리소스포리움 크라시투니카툼(Chrysosporium crassitunicatum), 크리소스포리움 유로파에(Chrysosporium europae), 크리소스포리움 에볼세안누이(Chrysosporium evolceannui), 크리소스포리움 파리니콜라(Chrysosporium farinicola), 크리소스포리움 파스티디움(Chrysosporium fastidium), 크리소스포리움 필리포르메(Chrysosporium filiforme), 크리소스포리움 게오르기아에(Chrysosporium georgiae), 크리소스포리움 글로비페룸(Chrysosporium globiferum), 크리소스포리움 글로비페룸 변종 아르티쿨라툼(Chrysosporium globiferum var. articulatum), 크리소스포리움 글로비페룸 변종 니베움(Chrysosporium globiferum var. niveum), 크리소스포리움 히룬도(Chrysosporium hirundo), 크리소스포리움 히스파니쿰(Chrysosporium hispanicum), 크리소스포리움 홀미이(Chrysosporium holmii), 크리소스포리움 인디쿰(Chrysosporium indicum), 크리소스포리움 아이옵스(Chrysosporium iops), 크리소스포리움 케라티노필룸(Chrysosporium keratinophilum), 크리소스포리움 크레이셀리이(Chrysosporium kreiselii), 크리소스포리움 쿠주로비아눔(Chrysosporium kuzurovianum), 크리소스포리움 리그노룸(Chrysosporium lignorum), 크리소스포리움 오바툼(Chrysosporium obatum), 크리소스포리움 룩크노웬세(Chrysosporium lucknowense), 크리소스포리움 룩크노웬세 가르그(Chrysosporium lucknowense Garg) 27K, 크리소스포리움 메디움(Chrysosporium medium), 크리소스포리움 미디움 변종 스피세센스(Chrysosporium medium var. spissescens), 크리소스포리움 메피티쿰(Chrysosporium mephiticum), 크리소스포리움 메르다리움(Chrysosporium merdarium), 크리소스포리움 메르다리움 변종 로세움(Chrysosporium merdarium var. roseum), 크리소스포리움 미노르(Chrysosporium minor), 크리소스포리움 판니콜라(Chrysosporium pannicola), 크리소스포리움 파르붐(Chrysosporium parvum), 크리소스포리움 파르붐 변종 크레센스(Chrysosporium parvum var. crescens), 크리소스포리움 필로숨(Chrysosporium pilosum), 크리소스포리움 슈도메르다리움(Chrysosporium pseudomerdarium), 크리소스포리움 피리포르미스(Chrysosporium pyriformis), 크리소스포리움 퀘엔슬란디쿰(Chrysosporium queenslandicum), 크리소스포리움 시글레리(Chrysosporium sigleri), 크리소스포리움 술푸레움(Chrysosporium sulfureum), 크리소스포리움 신크로눔(Chrysosporium synchronum), 크리소스포리움 트로피쿰(Chrysosporium tropicum), 크리소스포리움 운둘라툼(Chrysosporium undulatum), 크리소스포리움 발레나렌세(Chrysosporium vallenarense), 크리소스포리움 베스페르틸리움(Chrysosporium vespertilium), 크리소스포리움 조나툼(Chrysosporium zonatum)), 쿠네메리아(Coonemeria), 쿤닝하멜라(Cunninghamella) (예를 들어, 쿤닝하멜라 에히눌라타(Cunninghamella ehinulata)), 닥틸로미세스(Dactylomyces), 에메리셀라(Emericella), 필리바시디움(Filibasidium), 푸사리움(Fusarium) (예를 들어, 푸사리움 모닐리포르메(Fusarium moniliforme), 푸사리움 베네나툼(Fusarium venenatum), 푸사리움 옥시스포룸(Fusarium oxysporum), 푸사리움 그라미네아룸(Fusarium graminearum), 푸사리움 프롤리페라툼(Fusarium proliferatum), 푸사리움 베르티시올리오이데스(Fusarium verticiollioides), 푸사리움 쿨모룸(Fusarium culmorum), 푸사리움 크룩웰렌세(Fusarium crookwellense), 푸사리움 포아에(Fusarium poae), 푸사리움 스포로트리키오이데스(Fusarium sporotrichioides), 푸사리움 삼부시눔(Fusarium sambuccinum), 푸사리움 토룰로숨(Fusarium torulosum), 뿐만 아니라 그의 연관된 지베렐라(Gibberella) 텔레오모르프 형태), 지베렐라(Gibberella), 휴미콜라(Humicola), 히포크레아(Hypocrea), 렌티눌라(Lentinula), 말브란케아(Malbranchea) (예를 들어, 말브란케아 필라멘토사(Malbranchea filamentosa)), 마그나포르테(Magnaporthe), 말브란키움(Malbranchium), 멜라노카르푸스(Melanocarpus), 모르티에렐라(Mortierella) (예를 들어, 모르티에렐라 알피나(Mortierella alpina) 1S-4, 모르티에랄라 이사벨린(Mortieralla isabelline), 모르티에를라 비나세아(Mortierrla vinacea), 모르티에랄라 비나세아에 변종 라피노스유틸라이저(Mortieralla vinaceae var. raffinoseutilizer)), 무코르(Mucor) (예를 들어, 무코르 미에헤이 쿠니 에 에머슨 (리조무코르 미에헤이 (쿠니 앤 알. 에머슨)) 쉬퍼(Mucor miehei Cooney et Emerson (Rhizomucor miehei (Cooney & R. Emerson)) Schipper), 무코르 푸실루스 린트(Mucor pusillus Lindt), 무코르 시르시넬로이데스 무코르 무세도(Mucor circinelloides Mucor mucedo)), 미셀리오프토라(Myceliophthora) (예를 들어, 미셀리오프토라 써모필라(Myceliophthora thermophila)), 미로테시움(Myrothecium), 네오칼리마스틱스(Neocallimastix), 뉴로스포라(Neurospora) (예를 들어, 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa)), 파에실로미세스(Paecilomyces), 페니실륨(Penicillium) (예를 들어, 페니실륨 크리소게눔(Penicillium chrysogenum), 페니실륨 일라시눔(Pennicillium iilacinum), 페니실륨 로퀘포르티이(Penicillium roquefortii)), 페네로카에테(Phenerochaete), 플레비아(Phlebia), 피로미세스(Piromyces), 피티움(Pythium), 리조푸스(Rhizopus) (예를 들어, 리조푸스 니베우스(Rhizopus niveus)), 쉬조필룸(Schizophyllum), 시탈리디움(Scytalidium), 스포로트리쿰(Sporotrichum) (예를 들어, 스포로트리쿰 셀룰로필룸(Sporotrichum cellulophilum)), 스테레움(Stereum), 탈라로미세스(Talaromyces), 써모아스쿠스(Thermoascus), 써모미세스(Thermomyces), 티엘라비아(Thielavia) (예를 들어, 티엘라비아 테레스트리스(Thielavia terrestris)), 톨리포클라디움(Tolypocladium), 및 트리코더마(Trichoderma) (예를 들어, 트리코더마 하르지아눔(Trichoderma harzianum), 트리코더마 코닌기이(Trichoderma koningii), 트리코더마 롱기브라키아툼(Trichoderma longibrachiatum), 트리코더마 레에세이(Trichoderma reesei), 트리코더마 아트로비리데(Trichoderma atroviride), 트리코더마 비렌스(Trichoderma virens), 트리코더마 시트리노비리데(Trichoderma citrinoviride), 트리코더마 비리데(Trichoderma viride)).
적합한 박테리아의 비제한적 예는 피르미쿠테, 시아노박테리아 (청록조류), 오실리오프시데아에, 바실랄레스, 락토바실랄레스, 오실라토리알레스, 바실라세아에, 락토바실라세아에, 및 하기 속 중 임의의 것의 구성원 및 그의 유도체 및 교배물을 포함한다: 아시네토박터(Acinetobacter), 아세토박터(Acetobacter) (예를 들어, 아세토박터 수복시단스(Acetobacter suboxydans)), 아세토박터 크실리눔(Acetobacter xylinum)), 악티노플라네스(Actinoplanes) (예를 들어, 악티노플라네스 미소우리엔시스(Actinoplanes missouriensis)), 아르트로스피라(Arthrospira) (예를 들어, 아르트로스피라 플라텐시스(Arthrospira platensis), 아르트로스피라 막시마(Arthrospira maxima)), 바실루스(Bacillus) (예를 들어, 바실루스 세레우스(Bacillus cereus), 바실루스 코아굴란스(Bacillus coagulans), 바실루스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis), 바실루스 스테아로써모필루스(Bacillus stearothermophilus), 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis)), 에스케리키아(Escherichia) (예를 들어, 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli)), 락토바실루스(Lactobacillus) (예를 들어, 락토바실루스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus)), 락토바실루스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus)), 락토코쿠스(Lactococcus) (예를 들어, 락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis), 락토코쿠스 락티스 란세필드 그룹(Lactococcus lactis Lancefield Group) N, 락토바실루스 루테리(Lactobacillus reuteri)), 류코노스톡(Leuconostoc) (예를 들어, 류코노스톡 시트로보룸(Leuconostoc citrovorum), 류코노스톡 덱스트라니쿰(Leuconostoc dextranicum), 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)), 미크로코쿠스(Micrococcus) (예를 들어, 미크로코쿠스 리소데이크티쿠스(Micrococcus lysodeikticus)), 로도코쿠스(Rhodococcus) (예를 들어, 로도코쿠스 오파쿠스(Rhodococcus opacus), 로도코쿠스 오파쿠스 균주 PD630), 스피룰리나(Spirulina), 스트렙토코쿠스(Streptococcus) (예를 들어, 스트렙토코쿠스 크레모리스(Streptococcus cremoris), 스트렙토코쿠스 락티스(Streptococcus lactis), 스트렙토코쿠스 락티스 아종 디아세틸락티스(Streptococcus lactis subspecies diacetylactis), 스트렙토코쿠스 써모필루스(Streptococcus thermophilus)), 스트렙토미세스(Streptomyces) (예를 들어, 스트렙토미세스 카타노오겐시스(Streptomyces chattanoogensis), 스트렙토미세스 그리세우스(Streptomyces griseus), 스트렙토미세스 나탈렌시스(Streptomyces natalensis), 스트렙토미세스 올리바세우스(Streptomyces olivaceus), 스트렙토미세스 올리보크로모게네스(Streptomyces olivochromogenes), 스트렙토미세스 루비기노수스(Streptomyces rubiginosus)), 테트라히메나(Tetrahymena) (예를 들어, 테트라히메나 써모필레(Tetrahymena thermophile), 테트라히메나 헤게위쉬(Tetrahymena hegewischi), 테트라히메나 히페란굴라리스(Tetrahymena hyperangularis), 테트라히메나 말라센시스(Tetrahymena malaccensis), 테트라히메나 피그멘토사(Tetrahymena pigmentosa), 테트라히메나 피리포르미스(Tetrahymena pyriformis), 테트라히메나 보락스(Tetrahymena vorax)), 및 크산토모나스(Xanthomonas) (예를 들어, 크산토모나스 캄페스트리스(Xanthomonas campestris)).
재조합 숙주 세포는 재조합 우유 단백질의 생산을 개선시키는 유전자 변형을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 유전자 변형의 비제한적 예는 변경된 프로모터, 변경된 키나제 활성, 변경된 포스파타제 활성, 변경된 단백질 폴딩 활성, 변경된 단백질 분비 활성 및 변경된 유전자 발현 유도 경로를 포함한다.
재조합 숙주 세포는 재조합 우유 단백질의 분해를 최소화하기 위해 프로테아제의 감소된 또는 본질적으로 제거된 활성을 추가로 가질 수 있다 (예를 들어, PCT 출원 WO 96/29391 참조). 프로테아제의 감소된 또는 본질적으로 제거된 활성을 갖는 재조합 숙주 세포는 돌연변이체의 스크리닝에 의해 또는 관련 기술분야에 공지된 방법에 따른 특이적 유전자 변형에 의해 수득될 수 있다.
재조합 숙주 세포는 천연 또는 재조합 글리코실트랜스퍼라제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 내인성 또는 재조합 글리코실트랜스퍼라제의 비제한적 예는 푸코실트랜스퍼라제, 갈락토실트랜스퍼라제, 글루코실트랜스퍼라제, 크실로실트랜스퍼라제, 아세틸라제, 글루코로닐트랜스퍼라제, 글루코로닐에피머라제, 시알릴트랜스퍼라제, 만노실트랜스퍼라제, 술포트랜스퍼라제, β-아세틸갈락토사미닐트랜스퍼라제 및 N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제를 포함한다.
재조합 숙주 세포는 천연 또는 재조합 키나제 또는 포스파타제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 천연 또는 재조합 키나제 또는 포스파타제의 비제한적 예는 단백질 키나제 A, 단백질 키나제 B, 단백질 키나제 C, 크레아틴 키나제 B, 단백질 키나제 C 베타, 단백질 키나제 G, TmkA, Fam20 키나제 (예를 들어, Fam20C), ATM, CaM-II, cdc2, cdk5, CK1, CKII, DNAPK, EGFR, GSK3, INSR, p38MAPK, RSK, SRC, 포스포트랜스퍼라제, 알칼리성 포스파타제 (예를 들어, 유니프롯KB - O77578), 산 포스파타제 및 기타를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Kabir & Kazi. 2011. Genet Mol Biol. 34(4):587] 참조).
재조합 숙주 세포의 배양
본원에 제공된 재조합 우유 단백질의 생산에 적합한 조건은 재조합 숙주 세포가 성장하고/거나 생존가능하게 남아있고 본원에 제공된 재조합 우유 단백질을 생산할 수 있는 조건이다. 적합한 조건의 비제한적 예는 적합한 배양 배지 (예를 들어, 적합한 영양소 함량 [예를 들어, 적합한 탄소 함량, 적합한 질소 함량, 적합한 인 함량], 적합한 보충물 함량, 적합한 미량 금속 함량, 적합한 pH, 적합한 온도, 적합한 공급 속도, 적합한 압력, 적합한 산소화 수준, 적합한 발효 지속기간 (즉, 재조합 숙주 세포를 포함하는 배양 배지의 부피), 적합한 발효 부피 (즉, 재조합 숙주 세포를 포함하는 배양 배지의 부피), 및 적합한 발효 용기를 갖는 배양 배지)를 포함한다.
적합한 배양 배지는 재조합 숙주 세포가 성장하고/거나 생존가능하게 남아있고 본원에 제공된 재조합 우유 단백질을 생산할 수 있는 모든 배양 배지를 포함한다. 전형적으로, 배양 배지는 탄소 공급원, 동화가능한 질소 공급원 (즉, 재조합 숙주 세포에 의한 대사 이용에 적합한 형태로 질소를 방출할 수 있는 질소-함유 화합물), 및 포스페이트 공급원을 포함하는 수성 배지이다.
탄소 공급원의 비제한적 예는 모노사카라이드, 디사카라이드, 폴리사카라이드, 아세테이트, 에탄올, 메탄올, 글리세롤, 메탄 및 그의 조합을 포함한다. 모노사카라이드의 비제한적 예는 덱스트로스 (글루코스), 프룩토스, 갈락토스, 크실로스, 아라비노스 및 그의 조합을 포함한다. 디사카라이드의 비제한적 예는 수크로스, 락토스, 말토스, 트레할로스, 셀로비오스 및 그의 조합을 포함한다. 폴리사카라이드의 비제한적 예는 전분, 글리코겐, 셀룰로스, 아밀로스, 헤미셀룰로스, 말토덱스트린 및 그의 조합을 포함한다.
상기 중 어느 것에 따른 방법은 β-락토글로불린을 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하는 적합한 재조합 숙주 세포를 글루코스로 이루어진 탄소 공급원을 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 T4 중 1개 이상 상에 비-천연 O-연결된 글리코실화를 갖는다. 상기 중 어느 것에 따른 방법은 β-락토글로불린을 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하는 적합한 재조합 숙주 세포를 글루코스로 이루어진 탄소 공급원을 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 T97 상에 비-천연 O-연결된 글리코실화를 갖는다. 상기 중 어느 것에 따른 방법은 β-락토글로불린을 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하는 적합한 재조합 숙주 세포를 락토스 및 폐곡물로 이루어진 탄소 공급원을 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 T97 상에 비-천연 O-연결된 글리코실화를 갖는다. 상기 중 어느 것에 따른 방법은 β-락토글로불린을 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하는 적합한 재조합 숙주 세포를 글루코스로 이루어진 탄소 공급원을 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 S27, T6, T97, S116 및 T125 중 1개 이상 상에 비-천연 O-연결된 글리코실화를 갖는다. 상기 중 어느 것에 따른 방법은 β-락토글로불린을 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하는 적합한 재조합 숙주 세포를 락토스 및 폐곡물로 이루어진 탄소 공급원을 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 S27, T6, T97, S116 및 T125 중 1개 이상 상에 비-천연 O-연결된 글리코실화를 갖는다.
동화가능한 질소 공급원의 비제한적 예는 무수 암모니아, 황산암모늄, 수산화암모늄, 질산암모늄, 인산이암모늄, 인산일암모늄, 피로인산암모늄, 염화암모늄, 질산나트륨, 우레아, 펩톤, 단백질 가수분해물, 옥수수 침지액, 옥수수 침지 고형물, 폐곡물, 폐곡물 추출물 및 효모 추출물을 포함한다. 암모니아 기체의 사용은 대규모 작업에 편리하고, 적합한 양으로 수성 발효물 (발효 배지)을 통해 버블링함으로써 사용될 수 있다. 동시에, 이러한 암모니아는 또한 pH 제어를 보조하는데 사용될 수 있다.
배양 배지는 무기 염, 미네랄 (예를 들어, 마그네슘, 칼슘, 칼륨, 나트륨; 예를 들어, 적합한 가용성 동화가능한 이온 및 조합 형태), 금속 또는 전이 금속 (예를 들어, 구리, 망가니즈, 몰리브데넘, 아연, 철, 붕소, 아이오딘; 예를 들어, 적합한 가용성 동화가능한 형태), 비타민 및 임의의 다른 영양소 또는 기능적 성분 (예를 들어, 재조합 우유 단백질의 분해를 방지할 수 있는 프로테아제 [예를 들어, 식물-기반 프로테아제], 재조합 우유 단백질을 분해할 수 있는 프로테아제의 활성을 감소시킬 수 있는 프로테아제 억제제, 및/또는 프로테아제 활성을 사이펀 제거할 수 있는 희생 단백질, 소포제, 항미생물제, 계면활성제, 유화 오일)을 추가로 포함할 수 있다.
적합한 배양 배지는 상업적 공급업체로부터 입수가능하거나 또는 (예를 들어, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션의 카탈로그에) 공개된 조성물에 따라 제조될 수 있다.
적합한 pH는 2 내지 8, 7.5, 7, 6.5, 6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2, 5.1, 5, 4.9, 4.8, 4.7, 4.6, 4.5, 4, 3.5, 3 또는 2.5; 2.5 내지 8, 7.5, 7, 6.5, 6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2, 5.1, 5, 4.9, 4.8, 4.7, 4.6, 4.5, 4, 3.5 또는 3; 3 내지 8, 7.5, 7, 6.5, 6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2, 5.1, 5, 4.9, 4.8, 4.7, 4.6, 4.5, 4 또는 3.5; 3.5 내지 8, 7.5, 7, 6.5, 6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2, 5.1, 5, 4.9, 4.8, 4.7, 4.6, 4.5 또는 4; 4 내지 8, 7.5, 7, 6.5, 6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2, 5.1, 5, 4.9, 4.8, 4.7, 4.6 또는 4.5; 4.5 내지 8, 7.5, 7, 6.5, 6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2, 5.1, 5, 4.9, 4.8, 4.7 또는 4.6; 4.6 내지 8, 7.5, 7, 6.5, 6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2, 5.1, 5, 4.9, 4.8 또는 4.7; 4.7 내지 8, 7.5, 7, 6.5, 6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2, 5.1, 5, 4.9 또는 4.8; 4.8 내지 8, 7.5, 7, 6.5, 6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2, 5.1, 5 또는 4.9; 4.9 내지 8, 7.5, 7, 6.5, 6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2, 5.1 또는 5; 5 내지 8, 7.5, 7, 6.5, 6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2 또는 5.1; 5.1 내지 8, 7.5, 7, 6.5, 6, 5.5, 5.4, 5.3 또는 5.2; 5.2 내지 8, 7.5, 7, 6.5, 6, 5.5, 5.4 또는 5.3; 5.3 내지 8, 7.5, 7, 6.5, 6, 5.5 또는 5.4; 5.4 내지 8, 7.5, 7, 6.5, 6 또는 5.5; 5.5 내지 8, 7.5, 7, 6.5 또는 6; 6 내지 8, 7.5, 7 또는 6.5; 6.5 내지 8, 7.5 또는 7; 7 내지 8 또는 7.5; 또는 7.5 내지 8의 pH일 수 있다.
적합한 온도는 20℃ 내지 46℃, 44℃, 42℃, 40℃, 38℃, 36℃, 34℃, 32℃, 30℃, 28℃, 26℃, 24℃ 또는 22℃; 22℃ 내지 46℃, 44℃, 42℃, 40℃, 38℃, 36℃, 34℃, 32℃, 30℃, 28℃, 26℃ 또는 24℃; 24℃ 내지 46℃, 44℃, 42℃, 40℃, 38℃, 36℃, 34℃, 32℃, 30℃, 28℃ 또는 26℃; 26℃ 내지 46℃, 44℃, 42℃, 40℃, 38℃, 36℃, 34℃, 32℃, 30℃ 또는 28℃; 28℃ 내지 46℃, 44℃, 42℃, 40℃, 38℃, 36℃, 34℃, 32℃ 또는 30℃; 30℃ 내지 46℃, 44℃, 42℃, 40℃, 38℃, 36℃, 34℃ 또는 32℃; 32℃ 내지 46℃, 44℃, 42℃, 40℃, 38℃, 36℃ 또는 34℃; 36℃ 내지 46℃, 44℃, 42℃, 40℃ 또는 38℃; 38℃ 내지 46℃, 44℃, 42℃ 또는 40℃; 40℃ 내지 46℃, 44℃ 또는 42℃, 42℃ 내지 46℃ 또는 44℃; 또는 44℃ 내지 46℃의 온도일 수 있다.
상기 중 어느 것에 따른 방법은 β-락토글로불린을 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하는 적합한 재조합 숙주 세포를 적어도 30℃ (예를 들어, 적어도 30℃, 적어도 32℃, 적어도 34℃ 또는 적어도 36℃)인 온도에서 배양하는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 T49 상에 O-연결된 글리코실화를 갖는다. 상기 중 어느 것에 따른 방법은 β-락토글로불린을 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하는 적합한 재조합 숙주 세포를 약 28℃의 온도에서 배양하는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 T6 상에 O-연결된 글리코실화를 갖는다.
적합한 공급 속도는 시간당 건조 세포 중량 (DCW) g당 0.01 g 내지 0.2 g 글루코스 당량의 공급 속도일 수 있다.
적합한 압력은 0 psig 내지 50 psig, 40 psig, 30 psig, 20 psig 또는 10 psig; 10 psig 내지 50 psig, 40 psig, 30 psig 또는 20 psig; 20 psig 내지 50 psig, 40 psig 또는 30 psig; 30 psig 내지 50 psig 또는 40 psig; 또는 40 psig 내지 50 psig의 압력일 수 있다.
적합한 산소화는 분당 발효기 내의 액체 부피당 0.1 부피의 산소 (vvm) 내지 2.1 vvm, 1.9 vvm, 1.7 vvm, 1.5 vvm, 1.3 vvm, 1.1 vvm, 0.9 vvm, 0.7 vvm, 0.5 vvm 또는 0.3 vvm; 0.3 vvm 내지 2.1 vvm, 1.9 vvm, 1.7 vvm, 1.5 vvm, 1.3 vvm, 1.1 vvm, 0.9 vvm, 0.7 vvm 또는 0.5 vvm; 0.5 vvm 내지 2.1 vvm, 1.9 vvm, 1.7 vvm, 1.5 vvm, 1.3 vvm, 1.1 vvm, 0.9 vvm 또는 0.7 vvm; 0.7 vvm 내지 2.1 vvm, 1.9 vvm, 1.7 vvm, 1.5 vvm, 1.3 vvm, 1.1 vvm 또는 0.9 vvm; 0.9 vvm 내지 2.1 vvm, 1.9 vvm, 1.7 vvm, 1.5 vvm, 1.3 vvm 또는 1.1 vvm; 1.1 vvm 내지 2.1 vvm, 1.9 vvm, 1.7 vvm, 1.5 vvm 또는 1.3 vvm; 1.3 vvm 내지 2.1 vvm, 1.9 vvm, 1.7 vvm 또는 1.5 vvm; 1.5 vvm 내지 2.1 vvm, 1.9 vvm 또는 1.7 vvm; 1.7 vvm 내지 2.1 vvm 또는 1.9 vvm; 또는 1.9 vvm 내지 2.1 vvm의 통기 속도일 수 있다.
적합한 발효 지속기간은 10시간 내지 500시간, 400시간, 300시간, 200시간, 100시간, 50시간, 40시간, 30시간 또는 20시간; 20시간 내지 500시간, 400시간, 300시간, 200시간, 100시간, 50시간, 40시간 또는 30시간; 30시간 내지 500시간, 400시간, 300시간, 200시간, 100시간, 50시간 또는 40시간; 40시간 내지 500시간, 400시간, 300시간, 200시간, 100시간 또는 50시간; 50시간 내지 500시간, 400시간, 300시간, 200시간 또는 100시간; 100시간 내지 500시간, 400시간, 300시간 또는 200시간; 200시간 내지 500시간, 400시간 또는 300시간; 300시간 내지 500시간 또는 400시간; 또는 400시간 내지 500시간의 발효 지속기간일 수 있다.
적합한 발효 부피는 1 L 내지 10,000,000 L, 5,000,000 L, 1,000,000 L, 500,000L, 100,000 L, 50,000 L, 10,000 L, 5,000 L, 1,000 L, 500 L, 100 L, 50 L 또는 10 L; 10 L 내지 10,000,000 L, 5,000,000 L, 1,000,000 L, 500,000L, 100,000 L, 50,000 L, 10,000 L, 5,000 L, 1,000 L, 500 L, 100 L 또는 50 L; 50 L 내지 10,000,000 L, 5,000,000 L, 1,000,000 L, 500,000L, 100,000 L, 50,000 L, 10,000 L, 5,000 L, 1,000 L, 500 L 또는 100 L; 100 L 내지 10,000,000 L, 5,000,000 L, 1,000,000 L, 500,000L, 100,000 L, 50,000 L, 10,000 L, 5,000 L, 1,000 L 또는 500 L; 500 L 내지 10,000,000 L, 5,000,000 L, 1,000,000 L, 500,000L, 100,000 L, 50,000 L, 10,000 L, 5,000 L 또는 1,000 L; 1,000 L 내지 10,000,000 L, 5,000,000 L, 1,000,000 L, 500,000L, 100,000 L, 50,000 L, 10,000 L 또는 5,000 L; 5,000 L 내지 10,000,000 L, 5,000,000 L, 1,000,000 L, 500,000L, 100,000 L, 50,000 L 또는 10,000 L; 10,000 L 내지 10,000,000 L, 5,000,000 L, 1,000,000 L, 500,000L, 100,000 L 또는 50,000 L; 50,000 L 내지 10,000,000 L, 5,000,000 L, 1,000,000 L, 500,000L 또는 100,000 L; 100,000 L 내지 10,000,000 L, 5,000,000 L, 1,000,000 L 또는 500,000L; 500,000 L 내지 10,000,000 L, 5,000,000 L 또는 1,000,000 L; 1,000,000 L 내지 10,000,000 L 또는 5,000,000 L; 또는 5,000,000 L 내지 10,000,000 L일 수 있다.
적합한 발효 용기는 관련 기술분야에 공지된 임의의 발효 용기일 수 있다. 발효 용기의 비제한적 예는 배양 플레이트, 진탕 플라스크, 발효기 (예를 들어, 교반 탱크 발효기, 에어리프트 발효기, 기포탑 발효기, 고정층 생물반응기, 실험실 발효기, 산업용 발효기 또는 그의 임의의 조합)를 포함하며, 이는 임의의 적합한 규모 (예를 들어, 소규모, 대규모)로 및 임의의 공정 (예를 들어, 고형물 배양, 침지 배양, 회분식, 유가식 또는 연속-흐름식)으로 사용된다.
천연 또는 재조합 우유 단백질의 정제
천연 또는 재조합 단백질을 포함하는 제제를 수득하기 위해 (예를 들어, 우유 또는 발효 브로쓰로부터) 천연 또는 재조합 단백질을 정제하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고 (예를 들어, 문헌 [Protein Purification, JC Janson and L Ryden, Eds., VCH Publishers, New York, 1989; Protein Purification Methods: A Practical Approach, ELV Harris and S Angel, Eds., IRL Press, Oxford, England, 1989] 참조), 이는 천연 또는 재조합 우유 단백질을 정제하는데 적합화될 수 있다.
우유 단백질은 그의 분자량에 기초하여, 예를 들어 크기 배제/교환 크로마토그래피, 막을 통한 한외여과, 겔 투과 크로마토그래피 (예를 들어, 정제용 디스크-겔 전기영동) 또는 밀도 원심분리에 의해 정제될 수 있다.
우유 단백질은 또한 그의 표면 전하 또는 소수성/친수성에 기초하여, 예를 들어 등전 침전, 음이온/양이온 교환 크로마토그래피, 등전 포커싱 (IEF) 또는 역상 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다.
우유 단백질은 또한 그의 용해도에 기초하여, 예를 들어 황산암모늄 침전, 등전 침전, 계면활성제, 세제 또는 용매 추출에 의해 정제될 수 있다.
우유 단백질은 또한 또 다른 분자에 대한 그의 친화도에 기초하여, 예를 들어 친화성 크로마토그래피, 반응성 염료 또는 히드록시아파타이트에 의해 정제될 수 있다. 친화성 크로마토그래피는 우유 단백질에 대한 특이적 결합 친화성을 갖는 항체 또는 His-태그부착된 재조합 우유 단백질에 대한 니켈 NTA 또는 재조합 우유 단백질 상의 당 모이어티에 결합하는 렉틴 또는 우유 단백질에 특이적으로 결합하는 임의의 다른 분자의 사용을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 재조합 우유 단백질은 정제를 용이하게 하는 태그를 보유한다. 이러한 태그의 비제한적 예는 에피토프 태그 및 단백질 태그를 포함한다. 에피토프 태그의 비제한적인 예는 c-myc, 헤마글루티닌 (HA), 폴리히스티딘 (6x-HIS), GLU-GLU 및 DYKDDDDK (FLAG) 에피토프 태그를 포함한다. 단백질 태그의 비제한적 예는 글루타티온-S-트랜스퍼라제 (GST), 녹색 형광 단백질 (GFP) 및 말토스 결합 단백질 (MBP)을 포함한다. 에피토프 또는 단백질 태그는 재조합 우유 단백질의 단리 후에 (예를 들어, 프로테아제 절단을 통해) 제거될 수 있다.
재조합 숙주 세포에 의해 분비되는 재조합 우유 단백질은 배양 배지로부터 직접 정제될 수 있다. 재조합 숙주 세포에 의해 분비되지 않는 재조합 우유 단백질은 세포 용해물로부터 정제될 수 있다.
우유 단백질은 발효 브로쓰 또는 제제에 포함된 다른 성분 대비 30% 초과, 35% 초과, 40% 초과, 45% 초과, 50% 초과, 55% 초과, 60% 초과, 65% 초과, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 97% 초과 또는 99% 초과의 순도로, 또는 발효 브로쓰에 포함된 다른 성분 대비 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배 또는 적어도 10배 더 큰 존재비로, 또는 중량 기준 30% 초과, 35% 초과, 40% 초과, 45% 초과, 50% 초과, 55% 초과, 60% 초과, 65% 초과, 70% 초과, 75% 초과, 80% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 97% 초과 또는 99% 초과의 순도로 정제될 수 있다.
우유 단백질의 정체는 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC), 웨스턴 블롯 분석, 이스턴 블롯 분석, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 모세관 전기영동, 효소 생성물의 형성, 효소 기질의 소멸 및 2차원 질량 분광분석법 (2D-MS/MS) 서열 식별에 의해 확인되고/거나 정량화될 수 있다.
천연 또는 재조합 우유 단백질은 추가로 후가공될 수 있다. 후가공은 크기, 전하, 소수성, 친수성, 용매화, 단백질 폴딩 및 화학적 반응성을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 천연 또는 재조합 우유 단백질의 특정 화학적 및/또는 물리적 특성을 변경시킬 수 있다.
후가공은 단편화 (예를 들어, 화학적 수단에 의해 또는 프로테아제 효소 [예를 들어, 트립신, 펩신]에 대한 노출에 의해), 가열 (예를 들어, 단백질 응집체를 제거하기 위해), 반응성 부위의 제거 (예를 들어, 산화에 의한 메티오닌 및/또는 트립토판 잔기의 반응성 부위의 제거), 조정 (예를 들어, 화학적, 광화학적 및/또는 효소적 전략을 통해), 고리화, 비오티닐화 (즉, 비오틴의 부착), 및 다른 요소 (예를 들어, 폴리-에틸렌-글리콜, 항체, 리포솜, 인지질, DNA, RNA, 폴리뉴클레오티드, 당, 디사카라이드, 폴리사카라이드, 전분, 셀룰로스, 세제, 세포벽)에 대한 접합을 포함할 수 있다.
후가공은 무작위 방식으로 또는 부위-특이적 방식으로 (예를 들어, 시스테인 잔기의 술프히드릴 기 [예를 들어, 아미노에틸화, 아이오도아세트아미드의 형성, 말레이미드의 형성, Dha의 형성, 디술피드 결합을 통한 공유 부착 및 탈황화의 경우]에서, 리신 잔기의 1급 아민 기 [예를 들어, 활성화된 에스테르, 술포닐 클로라이드, 이소티오시아네이트, 불포화 알데히드 에스테르 및 알데히드의 부착의 경우]에서, 티로신 잔기의 페놀성 히드록실 기에서, 특이적 알레르겐성 에피토프 [예를 들어, 글리칸 기]에서) 이루어질 수 있다.
천연 또는 재조합 우유 단백질은 (예를 들어, 분말을 수득하기 위해) 분무 건조되거나 또는 증발을 통해 농축될 수 있다.
1종 이상의 천연 및/또는 재조합 우유 단백질은 우유 단백질 성분을 수득하기 위해 조합될 수 있고, 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물을 수득하기 위해 1종 이상의 다른 성분과 임의로 조합될 수 있다. 가열은 분말 조성물의 수화를 보조할 수 있다.
식제품의 제조 방법
또 다른 측면에서, 상기 중 어느 것에 따른 식제품의 제조 방법이 본원에 제공된다.
식제품을 제조하기 위한 다양한 레시피가 존재하고, 임의의 이러한 레시피는 상기 중 어느 것에 따른 식제품을 제조하기 위해 본원에 제공된 방법에 사용될 수 있다. 상기 중 어느 것에 따른 유제품 대체물은 우유 대신에 또는 우유에 추가로 이러한 레시피에 사용될 수 있다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 구체적 실시양태를 예시하기 위해 포함된다. 실시예에 개시된 기술은 본 발명의 실시에서 잘 기능하도록 본 발명자들에 의해 발견된 기술을 나타내지만; 관련 기술분야의 통상의 기술자는, 본 개시내용에 비추어, 개시된 구체적 실시양태에서 많은 변화가 이루어질 수 있고, 여전히 본 발명의 취지 및 범주로부터 벗어나지 않으면서 비슷하거나 유사한 결과를 얻을 수 있음을 인지하여야 한다. 따라서, 실시예에 제시되거나 나타낸 모든 사항은 제한적인 의미가 아니라 예시적인 것으로 해석되어야 한다.
실시예 1: 재조합 피키아 파스토리스 숙주 세포에서의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 β-락토글로불린의 생산.
피키아 파스토리스 (코마가타엘라 파피이(Komagateaella phaffii)) 균주 BGF12 (바이오그래마틱스(Biogrammatics), 캘리포니아주 칼스배드)를 효모에서의 발현을 위해 코돈-최적화되고 N-말단 분비 신호 (사카로미세스 세레비지아에의 알파 메이팅 인자의 프리 또는 프리-프로 신호 펩티드 영역)에 인 프레임으로 융합된 보스 타우루스 β-락토글로불린 코딩 서열 (유니프롯 서열 P02754의 아미노산 17-178)을 포함하는 벡터로 형질전환시킴으로써 재조합 피키아 파스토리스 숙주 세포를 생성하였다. 분비된 β-락토글로불린 코딩 서열에 프로모터 (pGAP 또는 pAOX1) 및 종결인자 (tAOX1 pA 신호)가 플랭킹되었다. 벡터는 박테리아 및 효모 형질전환체의 선택을 위한 우성 저항성 마커 및 박테리아 복제 기점을 추가로 포함하였다. 열-쇼크 프로토콜을 사용하여 벡터를 피키아 파스토리스 숙주 세포 내로 형질전환시켜, 분비된 β-락토글로불린 코딩 서열의 통합된 카피를 포함하는 재조합 숙주 균주를 생성하였다. 형질전환체를 최소 배지 상에 플레이팅하고, 30℃에서 48시간 동안 인큐베이션하였다. 각각의 최종 형질전환으로부터의 클론을 96-웰 블록 내 300 μL의 완충 최소 배지 내로 접종하고, 600 rpm에서 교반하면서 30℃에서 72시간 또는 100시간 초과 동안 인큐베이션하였다. 샘플을 제거하고, 재조합 숙주 세포를 원심분리를 통해 펠릿화하고, 발효 상청액을 회수하였다. ELISA 검정 및 SDS-PAGE 겔 분석을 상청액 샘플로 수행하여 양성 형질전환체를 확인하였다.
재조합 피키아 파스토리스 숙주 세포를 30℃, 1 VVM의 기류 및 100 rpm의 최소 교반으로 제어된 교반 발효 용기 내, 출발 공급원료로서 80%의 글리세롤과 포스페이트 및 질소 염을 함유하는 최소 기초 배지에서 성장시켰다. 발효 브로쓰의 pH를 수산화암모늄의 요구시 첨가로 5로 제어하였다. 배치 글리세롤이 고갈되면, 6 g/L/h의 속도로 글리세롤을 전달하는 프로그램화된 공급 레시피를 통해 글리세롤을 첨가하였다. 균주의 산소 요구량은 요구되는 경우 교반 속도를 제어함으로써 충족시켰다. 교반이 용존 산소 설정점을 더 이상 유지할 수 없을 때, 100% 산소 기체를 용기 내로 살포하여 용존 산소를 제어하였다. 배치 글리세롤이 고갈되면 발효의 pH를 5에서 3으로 이동시켰다. 소포제 C를 필요에 따라 첨가하여 거품을 제어하였다. 발효물을 적어도 100시간 후에 OD600에서 약 600-800의 세포 밀도로 수거하였다. 5,000 g에서의 원심분리에 의해 브로쓰로부터 바이오매스를 제거하였다. 상청액을 100 kDa MWCO 막 상에서 농축시켰다. 농축 보유물을 5 kda MWCO 막 상에서 50 mM 이미다졸, pH 6.8 내로 투석여과하였다. 농축 보유물을 Q 세파로스 FF 칼럼에 통과시켰다. 이동상은 50 mM 이미다졸, pH 6.8이었고, 재조합 β-락토글로불린을 2M NaCl 구배에서 용리시켰다. 구배는 30 칼럼 부피에 걸쳐 0-30%로 실행하였다. 피크 분획을 수집하고, RP-HPLC 상에서 분석하였다. > 85%의 순도를 갖는 재조합 β-락토글로불린을 함유하는 피크를 물 내로의 최종 투석여과를 위해 풀링하였다.
천연 보스 타우루스 β-락토글로불린 및 재조합 피키아 파스토리스 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린의 샘플을 트립신 소화시켰다. 트립신 펩티드를 질량 분광측정법 (LC-MS)에 의해 포스페이트 및 단일 N- 및 O-연결된 헥소스의 존재 하에 분석하였다 (프룩토스, 갈락토스, 글루코스, 만노스; SDS-PAGE 겔 상에서 보스 타우루스 표준물과 비교하여 재조합 우유 단백질에 대해 어떠한 주요 질량 이동도 관찰되지 않았기 때문에 단지 단일 헥소스만을 조사하였음). 트립신 단편은 β-락토글로불린 서열의 100%를 커버하였으며, 천연 보스 타우루스 β-락토글로불린은 인산화되지 않고, N-글리코실화되지 않았지만, 아미노산 잔기 Y99 및/또는 N63 상에서 O-글리코실화된 반면; 재조합 β-락토글로불린은 N-글리코실화되지 않았지만, 아미노산 잔기 Y20, Y99, Y102, T18, T97, S110 및/또는 S150 상에서 인산화되고, 아미노산 잔기 Y42, Y99, Y102 및/또는 S110 상에서 O-글리코실화되었음이 밝혀졌다. 천연 보스 타우루스 β-락토글로불린 및 재조합 β-락토글로불린을 시차 주사 열량측정법 (마이크로칼 PEAQ-DSC)에 적용하였다. 시험 샘플을 pH 2.5의 10 mM 시트레이트 완충제 중에 1.0 및 0.5 mg/mL 단백질로 가용화시켰다. 샘플을 20℃ 내지 100℃의 온도 범위에 노출시켰으며, 스캔 속도는 60℃/h였다. 각각의 샘플을 2회 스캐닝하여 제1 열 처리 후에 재폴딩된 단백질의 퍼센트를 결정하였다. PEAQ-DSC 소프트웨어로 측정치를 분석하였다.
표 1에 제시된 바와 같이, 재조합 β-락토글로불린 및 천연 보스 타우루스 β-락토글로불린은 유사한 온도기록도, 용융 온도 및 반트 호프 엔탈피를 가졌다.
표 1: 보스 타우루스 및 피키아 파스토리스로부터의 재조합 β-락토글로불린의 DSC 데이터
Figure pct00001
재조합 β-락토글로불린의 전이 엔탈피 (ΔHcal)는 보스 타우루스 β-락토글로불린의 전이 엔탈피보다 더 컸으며 (각각 77.9 kcal/mol 대 67.9 kcal/mol), 이는 재조합 β-락토글로불린을 변성시키기 위해 더 많은 열이 요구된다는 것을 나타낸다. 전이 엔탈피는 재조합 및 보스 타우루스 β-락토글로불린 둘 다에서 반트 호프보다 더 크며, 이는 협력적 언폴딩 메카니즘, 예를 들어 변성 전에 단량체로 해리되는 이량체를 나타낸다. 제2 스캔은 제1 열 처리 후 37%의 재조합 β-락토글로불린 재폴딩, 반면 제1 열 처리 후 44%의 보스 타우루스 β-락토글로불린 재폴딩을 나타낸다 (둘 다의 측정치는 1 mg/mL 단백질에서 취함).
실시예 2: 재조합 트리코더마 레에세이 숙주 세포에서의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 β-락토글로불린의 생산.
트리코더마 레에세이 (히포크레아 제코리나(Hypocrea jecorina)) 균주 Qm6a를 보스 타우루스 β-락토글로불린 코딩 서열 (유니프롯 서열 P02754의 아미노산 17-178)을 포함하는 벡터로 형질전환시킴으로써 재조합 트리코더마 레에세이 숙주 세포를 생성하였다. ELISA 검정 및 SDS-PAGE 겔 분석을 상청액 샘플로 수행하여 양성 형질전환체를 확인하였다.
25℃ 내지 34℃ 범위의 온도에서 0.2 vvm 내지 1 vvm의 통기 속도 및 바이오매스와 산소 (압축 공기 중에 전달됨)를 포함한 영양소의 적절한 혼합 및 분산을 보장하기 위한 최소 교반 하에 제어된 교반 발효 용기 내, 포스페이트, 암모늄, 마그네슘, 칼륨, 나트륨, 술페이트, 클로라이드, 칼슘, 철, 망가니즈, 아연, 몰리브데넘, 구리, 코발트 및 보레이트의 공급원으로서 무기 염을 함유하고 출발 공급원료로서 탄수화물-기재 탄소 공급원을 갖는 최소 기초 배지에서 재조합 트리코더마 레에세이 숙주 세포를 성장시켰다. 발효 브로쓰의 pH를 수산화암모늄의 요구시 첨가로 3.0 내지 5.5 범위의 다양한 설정점에서 제어하였다. 배치 탄수화물이 고갈되면, 글루코스 또는 락토스를 함유하는 용액을 시간당 DCM 그램당 0.01 내지 0.1 g 건조 기질 범위의 특정 공급 속도로 탄소 공급원을 전달하는 프로그램화된 공급 레시피를 통해 첨가하였다. 배양물의 산소 요구량은 5% 내지 50% 범위의 표적 용존 산소 설정점을 유지하기 위해 요구되는 경우 교반 속도를 제어함으로써 충족시켰다. 교반이 표적 용존 산소 설정점을 더 이상 유지할 수 없을 때, 통기를 2.0 vvm까지 증가시켰다. 배양이 최대 교반 및 통기로 실행되면, 용존 산소는 추가 행위를 취하지 않고도 설정점 아래로 떨어졌다. ACP 1500, 안티폼 204 (시그마(Sigma)), 에롤 DF6000K, 호다그 K-60K, 인더스트롤 DF204 (바스프(BASF)), P-2000E (다우(Dow)), SAG 471, SAG 5693, SAG 710, SAG 730, 실리콘 안티폼 (시그마), 스트룩톨 J647, 스트룩톨 J673A 및 해바라기 오일을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 소포제를 필요에 따라 첨가하여 발효물에서 거품형성을 제어하였다. 각각의 발효물을 적어도 120시간 후에, 전형적으로 L당 20 g 내지 50 g DCW의 바이오매스 농도에서 수거하였다. 바이오매스를 5,000 x g에서의 원심분리에 의해 브로쓰로부터 제거하고, 재조합 β-락토글로불린을 정제하였다.
천연 보스 타우루스 β-락토글로불린 및 재조합 트리코더마 레에세이 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린의 샘플을 트립신 소화시켰다. N-연결된 헥소스를 EndoH (뉴 잉글랜드 바이오랩스(New England Biolabs))로 처리된 샘플로 조사한 후, N-연결된 글리칸을 단일 헥소스로 소화시켰다. 트립신 펩티드를 질량 분광측정법 (LC-MS)에 의해 포스페이트 및 단일 N- 및 O-연결된 헥소스의 존재 하에 분석하였다 (프룩토스, 갈락토스, 글루코스, 만노스; 단지 단일 헥소스만을 N-연결된 처리에 대해 조사하였는데, 이는 이들이 EndoH의 존재 또는 부재 하에 처리되었고; 1-3개의 헥소스는 트리코더마 레에세이에서의 전형적 O-글리칸 길이로서 이전에 문헌에 기인한 바와 같이 O-연결된 처리에 대해 조사되었으며; SDS-PAGE 겔 상에서 보스 타우루스 표준물과 비교하여 재조합 우유 단백질에 대해 어떠한 주요 질량 이동도 관찰되지 않았기 때문임). 트립신 단편은 β-락토글로불린 서열의 100%를 커버하였으며, 천연 보스 타우루스 β-락토글로불린은 인산화되지 않고, N-글리코실화되지 않았지만, 아미노산 잔기 Y99 및/또는 N63 상에서 O-글리코실화된 반면; 재조합 β-락토글로불린은 N-글리코실화되지 않았지만, 아미노산 잔기 T4, T6, T18, Y20, S21, S27, S30, S36, Y42, T49, T97, Y99, Y102, S110, T125 및/또는 S150 상에서 인산화되었고 (여기서 아미노산 잔기 T18, Y20, S21, S27, T49, T97, Y99, Y102, S110 및/또는 S150 상의 인산화는 24회 실행 중 30% 초과에서 관찰되었고; 아미노산 잔기 Y20, S21, T97, Y99, Y102, S110 및/또는 S150 상의 인산화는 24회 실행 중 50% 초과에서 관찰되었음), 아미노산 잔기 T4, T6, T18, S21, S27, S30, S36, T49, T97, S110, S116, T125, S150 및/또는 T154 상에서 O-글리코실화되었음 (여기서 아미노산 잔기 T18, S21, T49, T97, S110 및/또는 S150 상의 글리코실화는 24회 실행 중 30% 초과에서 관찰되었고; 아미노산 잔기 T18, S21 및/또는 S110 상의 글리코실화는 24회 실행 중 50% 초과에서 관찰되었음)이 밝혀졌다.
재조합 LGB의 O-연결된 글리코실화와 발효 조건 사이에 하기 상관관계가 관찰되었다: i) 탄소 공급원으로서의 글루코스 단독 (대 보다 복잡한 기질 공급원을 함유하는 대안)은 아미노산 잔기 T4 상의 O-연결된 글리코실화와 상관관계가 있음; ii) 보다 높은 온도 (대 시험된 조건의 범위에서 보다 낮은 온도)는 아미노산 잔기 T49 상의 O-연결된 글리코실화와 상관관계가 있음; iii) 탄소 공급원으로서 글루코스 단독 또는 락토스와 폐곡물의 조합은 아미노산 잔기 S27, T6, S116 및 T125 상의 O-연결된 글리코실화와 상관관계가 있음; iv) 탄소 공급원으로서 글루코스 또는 락토스와 폐곡물의 조합은 아미노산 잔기 T97 상의 O-연결된 글리코실화와 상관관계가 있음; 및 v) 발효 온도 28℃ (대 보다 높은 온도)는 아미노산 잔기 T6 상의 O-연결된 글리코실화와 상관관계가 있음.
천연 보스 타우루스 β-락토글로불린 및 재조합 β-락토글로불린을 다음을 포함한 다양한 입체형태적 분석에 적용하였다: i) 엘만 시약 시험: 단백질 상에서 용매-노출된 시스테인 잔기로부터 유래하는 용매-노출된 술프히드릴의 수를 측정함; 보스 타우루스 LGB는 단백질이 변성된 경우에만 용매-노출된 1개의 유리 시스테인 잔기를 가짐; ii) 시차 주사 열량측정법: 단백질의 열역학을 밝혀냄; 용융 온도 (TM)는 언폴딩되는 경우에 LGB의 절반의 온도를 나타냄; 용융 온도 TM,1/2는 샘플의 균질성 또는 불균질성의 척도임 (값이 보다 작을수록, 샘플이 보다 균질함); 델타 H (표준과 비교한 곡선하 면적)는 샘플 내 폴딩된 단백질의 분율을 보고함; 재폴딩 능력은 제1 라운드의 가열 후에 재폴딩되는 샘플 내 단백질의 분율을 나타냄; 및 iii) 비-환원 PAGE 분석: 단량체 분자량에 기초하여 단백질을 분리하고, 따라서 분자간 디술피드 셔플링의 정도 (즉, 얼마나 많은 단백질이 공유 연결된 이량체, 삼량체 등의 입체형태로 존재하는지)를 나타냄.
표 2에 제시된 바와 같이, 재조합 β-락토글로불린 및 보스 타우루스 β-락토글로불린은 상이한 입체형태를 갖는다.
표 2: 보스 타우루스 및 트리코더마 레에세이로부터의 재조합 β-락토글로불린의 입체형태 데이터
Figure pct00002
Figure pct00003
실시예 3: 기계적 속성의 측정
이중 압축 시험을 수행하는 원추형 프로브 (22mm 높이, 27mm 베이스 직경, 60° 정점 각도 (즉, 원추 팁의 각도)를 갖는 우측 원형 원추체, 아크릴)가 구비된 TA.XT 플러스 C 텍스쳐 분석기 (스테이블 마이크로 시스템즈 리미티드(Stable Micro Systems Ltd), 영국 서리)를 사용하여 11.5 mm의 깊이로 기계적 속성을 측정할 수 있다.
이중 압축 시험 동안, 텍스쳐 분석기 프로브는 샘플에 11.5 mm 시험 깊이를 통해 느린 일정한 속도로 2회 하강 및 상승하고 (0.83 mm/초, 제1 상승의 완료와 제2 하강의 시작 사이에 순간 정지함 (5.0초); 즉, 시작--다운스트로크--업스트로크--순간-정지--다운스트로크--업스트로크--종료), 기기의 로드 셀은 프로브가 그 일정한 속도로 이동할 때 프로브에 가해진 순간 힘을 검출한다 (0.049 N의 촉발력으로). 단일 이중 압축 시험으로부터 생성된 데이터는 x-축이 시간이고 y-축이 힘인 플롯 상에 2-피크 곡선으로서 가장 잘 가시화된다. 곡선의 형상은 일반적으로 다음과 같았다: 시작 (0 힘)--샘플 내로 다운스트로크 (프로브가 추가로 하강함에 따라 0에서부터 힘이 증가함, 피크까지의 힘은 11.5mm 깊이에서 경험됨 (최대 압축))--압축된 샘플로부터 업스트로크 (프로브가 추가로 상승함에 따라 피크 힘에서부터 힘이 이제 감소함, 0 힘에 도달하고, 음으로 계속됨, 이어서 프로브가 샘플로부터 분리되고 샘플 위로 들어올려질 때 다시 0까지의 힘으로 상승함 (프로브에 대한 샘플의 부착으로 인한 음의 힘 영역))--순간-정지 (샘플 회복, 복귀 (0 힘))--샘플 내로 다운스트로크 (프로브가 추가로 하강함에 따라 0에서부터 힘이 증가함, 피크까지의 힘)--압축된 샘플로부터 업스트로크 (프로브가 추가로 상승함에 따라 피크 힘에서부터 힘이 감소함, 0 힘에 도달하고, 음으로 계속됨, 이어서 프로브가 샘플로부터 분리되고 샘플 위로 들어올려질 때 다시 0까지의 힘으로 상승함)--종료 (0 힘).
제1 압축으로부터 기록된 피크 힘은 제2 압축으로부터 기록된 피크 힘보다 더 클 수 있으며, 이는 샘플의 구조가 제1 압축 동안 손상될 수 있기 때문이다. 제2 압축에 대한 곡선하 면적 (즉, 제2 압축 동안의 일)은 또한 이러한 구조 손상으로 인해 제1 압축에 대한 곡선하 면적 (즉, 제1 압축 동안의 일)보다 더 작을 수 있다. 손상된 샘플은 제1 압축 후에 그의 원래 높이로 완전히 반동하지 않기 때문에, 제2 다운스트로크는 나중에 새로운 더 낮은 높이에서 샘플 표면과 접촉할 때까지 25mm를 지나 하강할 때 0의 힘을 등록한다. 주어진 압축에 대한 곡선하 면적은 다운스트로크 부분 (즉, 압축의 다운스트로크 에너지) 및 업스트로크 부분 (즉, 압축의 업스트로크 에너지)으로 세분될 수 있다. 다운스트로크 동안, 다운스트로크 에너지의 부분은 탄성 위치 에너지로서 샘플에 저장되고, 업스트로크 동안, 그 탄성 위치 에너지의 부분은 샘플에 의해 업스트로크 에너지로서 상승 프로브 상에 가해진다. 따라서, 압축의 업스트로크 에너지는 압축의 이전 다운스트로크 에너지보다 항상 더 작다 (그러나 이상적인 완벽한 탄성 샘플은 동등한 다운스트로크 에너지 및 업스트로크 에너지를 가질 것임). 업스트로크 동안, 프로브가 압축-및-반동 샘플을 넘어 상승할 때, 프로브가 샘플 표면 (프로브에 부착되었음)으로부터 멀어지게 당겨짐에 따라 기록된 힘은 음이 된다.
다수의 출력 파라미터는 단일 이중 압축 시험 곡선으로부터 계산될 수 있으며, 상이한 파라미터는 샘플의 상이한 특성에 대한 통찰력을 제공한다. 엑스포넌트 커넥트 소프트웨어 (버전 7.0.3.0, 스테이블 마이크로 시스템즈 리미티드(Stable Micro Systems Ltd), 영국 서리)를 사용하여 각각의 이중 압축 시험에 대한 출력 파라미터를 개별적으로 계산할 수 있다. 피크 힘 (즉, 경도/견고성)은 샘플의 경도/견고성에 대한 정보를 전달하는 제1 압축 동안의 최대 힘이며; 보다 높은 피크 힘은 샘플이 보다 많은 힘으로 다운스트로크에 저항하였음을 의미하고, 보다 견고한 샘플일 가능성이 있다. 곡선의 업스트로크의 음의 힘 부분이 프로브에 대한 샘플의 부착을 반영하기 때문에, 제1 업스트로크 음의 일 (즉, 부착성)은 샘플의 부착성에 대한 정보를 전달하며; 보다 음인 값은 보다 부착성인 샘플을 암시한다. 회복가능한 에너지 (즉, 복원성)는 제1 업스트로크 에너지를 제1 다운스트로크 에너지로 나눔으로써 계산되고, 탄성 방식으로 다운스트로크 에너지를 저장하고 소비하는 샘플의 능력에 대한 정보를 전달하며; 100%의 값은 이상적인, 완벽하게 탄성인 샘플을 나타낸다. 일의 비--제2 대 제1 압축 (즉, 구조 완전성/응집성)은 제2 압축 동안의 일을 제1 압축 동안의 일로 나눔으로써 계산되고, 샘플의 구조가 제1 압축에 의해 손상된 후 샘플의 구조 완전성/응집성에 대한 정보를 전달하고; 보다 높은 값 (즉, 1.0에 보다 가까움)은 제1 압축 후 보다 큰 구조 완전성을 암시하는 반면, 보다 낮은 값 (즉, 0.0에 보다 가까움)은 제1 압축으로부터의 보다 큰 구조 손상을 암시한다. 반동성 (즉, 탄성/탄력성)은 제2 다운스트로크 샘플 접촉 시간 (즉, 프로브가 제2 다운스트로크 동안 0이 아닌 힘에 저항한 시간의 길이)을 제1 다운스트로크 샘플 접촉 시간으로 나눔으로써 계산되며; 100%의 값은 샘플이 제1 압축으로부터의 접촉의 초기 높이로 완전히 반동하였음을 나타낸다. 유도된 파라미터 (피크 힘) x (일의 비--제2 대 제1 압축) x (반동성) (즉, 씹힘성/분해성)은 제1 압축 후 샘플의 일반적 분해성에 대한 정보를 전달하고, 보다 높은 값은 인간이 "보다 씹어야 하는" 샘플로, 보다 낮은 값은 "보다 유연한" 샘플로 간주할 것임을 나타낼 수 있다.
본 발명의 상기 논의는 예시 및 설명의 목적으로 제시되었다. 상기 내용은 본 발명을 본원에 개시된 형태 또는 형태들로 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본 발명의 기재가 한 실시양태의 기재 및 특정 변경 및 변형을 포함하였지만, 예를 들어 본 개시내용을 이해한 후 관련 기술분야의 통상의 기술자의 기술 및 지식 내에 있을 수 있는 것과 같은 다른 변경 및 변형도 본 발명의 범주 내에 속한다. 본원에 개시된 것에 대한 대안적인, 상호교환가능한 및/또는 등가의 구조, 기능, 범위 또는 단계를 비롯하여 허용되는 정도까지의 대안적 실시양태를 포함하는 권리를 얻고자 의도하며, 임의의 특허가능한 대상을 공개적으로 전용하고자 의도하지는 않는다.

Claims (112)

  1. 보스 타우루스(Bos taurus) β-락토글로불린의 T4, T6, T18, S21, S27, S30, S36, T49, T76, T97, S110, S116, T125, S150, N152 및 T154로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 글리코실화를 갖는 재조합 β-락토글로불린.
  2. 보스 타우루스 β-락토글로불린의 아미노산 잔기 N152를 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 상에 비-천연 N-글리코실화를 갖는 재조합 β-락토글로불린.
  3. 보스 타우루스 β-락토글로불린의 T4, T6, T18, S21, S27, S30, S36, T49, T97, S110, S116, T125, S150 및 T154로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 O-글리코실화를 갖는 재조합 β-락토글로불린.
  4. 보스 타우루스 β-락토글로불린의 T4, T6, T18, Y20, S21, S27, S30, S36, Y42, T49, T76, T97, Y99, Y102, S110, S116, T125, S150 및 T154로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 인산화를 갖는 재조합 β-락토글로불린.
  5. 보스 타우루스 β-락토글로불린의 K8, K14, R40, K47, K60, K69, K70, K75, K77, K83, K91, K100, K101, R124, K135, K138, K141 및 R148로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 메틸화를 갖는 재조합 β-락토글로불린.
  6. 보스 타우루스 β-락토글로불린의 C66, C106, C119, C121 및 C160으로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 팔미토일화를 갖는 재조합 β-락토글로불린.
  7. 보스 타우루스 β-락토글로불린의 K8, K14, K47, K60, K69, K70, K75, K77, K83, K91, K100, K101, K135, K138 및 K141로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 SUMO화를 갖는 재조합 β-락토글로불린.
  8. 보스 타우루스 β-락토글로불린의 C66, C106, C119, C121 및 C160으로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 니트로실화를 갖는 재조합 β-락토글로불린.
  9. 보스 타우루스 β-락토글로불린의 Y20, Y42, Y99 및 Y102로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 티로신 니트로화를 갖는 재조합 β-락토글로불린.
  10. 보스 타우루스 β-락토글로불린의 F151로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 상에 비-천연 GPI화를 갖는 재조합 β-락토글로불린.
  11. 보스 타우루스 β-락토글로불린의 C160으로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 상에 비-천연 파르네실화를 갖는 재조합 β-락토글로불린.
  12. 보스 타우루스 β-락토글로불린의 C160으로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 상에 비-천연 게라닐게라닐화를 갖는 재조합 β-락토글로불린.
  13. 보스 타우루스 α-락트알부민의 T4, S22, T29, T30, T33, S34, T38, N44, N45, S47, T48, N56, N57, N66, S69, S70, N71, N74, S76, T86, N102 및 S112로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 글리코실화를 갖는 재조합 α-락트알부민.
  14. 보스 타우루스 α-락트알부민의 T4, Y18, S22, T29, T30, T33, S34, Y36, T38, S47, T48, Y50, S69, S70, S76, T86, Y103 및 S112로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 인산화를 갖는 재조합 α-락트알부민.
  15. 보스 타우루스 κ-카세인의 S19, S33, S37, N41, N52, N53, S69, S80, N81, S87, T93, T94, S104, N113, T117, T121, N123, T124, S127, T131, S132, T133, T135, S141, T142, T145, S149, S155, N160, T161, T165, S166 및 T167로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 글리코실화를 갖는 재조합 κ-카세인.
  16. 보스 타우루스 κ-카세인의 S19, Y25, Y30, S33, Y35, S37, Y42, Y43, Y58, Y60, Y61, S69, S80, S87, T93, T94, S104, T117, T121, T124, S127, T131, S132, T133, T135, S141, T142, T145, S149, S155, T161, T165, S166 및 T167로부터 선택된 아미노산 잔기 중 1개 이상을 포함하는 아미노산 서열을 포함하고 이러한 아미노산 잔기 중 1개 이상 상에 비-천연 인산화를 갖는 재조합 κ-카세인.
  17. 유청 우유 단백질의 하위세트 또는 카세인 우유 단백질의 하위세트 또는 유청 우유 단백질의 하위세트와 카세인 우유 단백질의 하위세트의 혼합물로 이루어진 우유 단백질 성분을 포함하는 유제품 대체물이며, 여기서 우유 단백질 성분은 1종 이상의 비-천연 PTM을 갖는 재조합 β-락토글로불린, 재조합 α-락트알부민 및/또는 재조합 κ-카세인을 포함하고, 여기서 우유 단백질 성분은 유제품 대체물의 적어도 1종의 유제품 속성을 부여하거나 이러한 속성에 실질적으로 기여하는 것인 유제품 대체물.
  18. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린을 포함하는 것인 유제품 대체물.
  19. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민을 포함하는 것인 유제품 대체물.
  20. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인을 포함하는 것인 유제품 대체물.
  21. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 우유 단백질 성분이 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질을 추가로 포함하는 것인 유제품 대체물.
  22. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린의 혼합물을 포함하며, 여기서 혼합물은 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 β-락토글로불린으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  23. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민의 혼합물을 포함하며, 여기서 혼합물은 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 α-락트알부민으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  24. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인의 혼합물을 포함하며, 여기서 혼합물은 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 κ-카세인으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  25. 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 우유 단백질 성분이 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질을 추가로 포함하는 것인 유제품 대체물.
  26. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린과 천연 및/또는 재조합 α-락트알부민의 혼합물을 포함하는 것인 유제품 대체물.
  27. 제26항에 있어서, 재조합 α-락트알부민이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민인 유제품 대체물.
  28. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린과 천연 및/또는 재조합 κ-카세인의 혼합물을 포함하는 것인 유제품 대체물.
  29. 제17항에 있어서, 재조합 κ-카세인이 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인인 유제품 대체물.
  30. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민과 천연 및/또는 재조합 κ-카세인의 혼합물을 포함하는 것인 유제품 대체물.
  31. 제17항에 있어서, 재조합 κ-카세인이 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인인 유제품 대체물.
  32. 제26항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 우유 단백질 성분이 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질을 추가로 포함하는 것인 유제품 대체물.
  33. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린과 천연 및/또는 재조합 α-락트알부민과 천연 및/또는 재조합 κ-카세인의 혼합물을 포함하는 것인 유제품 대체물.
  34. 제33항에 있어서, 재조합 α-락트알부민이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민인 유제품 대체물.
  35. 제33항에 있어서, 재조합 κ-카세인이 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인인 유제품 대체물.
  36. 제33항에 있어서, 재조합 α-락트알부민이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민이고, 재조합 κ-카세인이 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인인 유제품 대체물.
  37. 제33항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 우유 단백질 성분이 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질을 추가로 포함하는 것인 유제품 대체물.
  38. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  39. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린 및 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  40. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  41. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민 및 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  42. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  43. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인 및 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  44. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린의 혼합물로 이루어지며, 여기서 혼합물은 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 β-락토글로불린으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  45. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린의 혼합물 및 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어지며, 여기서 재조합 β-락토글로불린의 혼합물은 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 β-락토글로불린으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  46. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민의 혼합물로 이루어지며, 여기서 혼합물은 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 α-락트알부민으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  47. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민의 혼합물 및 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어지며, 여기서 혼합물은 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 α-락트알부민으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  48. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인의 혼합물로 이루어지며, 여기서 혼합물은 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 κ-카세인으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  49. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인의 혼합물 및 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어지며, 여기서 혼합물은 1종 이상의 상이한 비-천연 PTM을 갖는 2종 이상의 재조합 κ-카세인으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  50. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린과 천연 및/또는 재조합 α-락트알부민의 혼합물로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  51. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린과 천연 및/또는 재조합 α-락트알부민의 혼합물 및 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  52. 제50항 또는 제51항에 있어서, 재조합 α-락트알부민이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민인 유제품 대체물.
  53. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린과 천연 및/또는 재조합 κ-카세인의 혼합물로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  54. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린과 천연 및/또는 재조합 κ-카세인의 혼합물 및 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  55. 제53항 또는 제54항에 있어서, 재조합 κ-카세인이 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인인 유제품 대체물.
  56. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민과 천연 및/또는 재조합 κ-카세인의 혼합물로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  57. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민과 천연 및/또는 재조합 κ-카세인의 혼합물 및 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  58. 제56항 또는 제57항에 있어서, 재조합 κ-카세인이 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인인 유제품 대체물.
  59. 제17항에 있어서, 우유 단백질 성분이 천연 및/또는 재조합 β-락토글로불린과 천연 및/또는 재조합 α-락트알부민과 천연 및/또는 재조합 κ-카세인의 혼합물로 이루어지며, 여기서 혼합물은 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린, 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민 또는 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인 중 적어도 1종을 포함하는 것인 유제품 대체물.
  60. 제59항에 있어서, 우유 단백질 성분이 천연 및/또는 재조합 β-락토글로불린과 천연 및/또는 재조합 α-락트알부민과 천연 및/또는 재조합 κ-카세인의 혼합물 및 천연 및/또는 재조합 락토페린, 천연 및/또는 재조합 트랜스페린, 천연 및/또는 재조합 혈청 알부민, 천연 및/또는 재조합 락토퍼옥시다제, 천연 및/또는 재조합 GMP, 천연 및/또는 재조합 β-카세인, 천연 및/또는 재조합 γ-카세인, 천연 및/또는 재조합 α-S1-카세인 및 천연 및/또는 재조합 α-S2-카세인으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 우유 단백질로 이루어지며, 여기서 혼합물은 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린, 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민 또는 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인 중 적어도 1종을 포함하는 것인 유제품 대체물.
  61. 제59항 또는 제60항에 있어서, 혼합물이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린을 포함하는 것인 유제품 대체물.
  62. 제59항 또는 제60항에 있어서, 혼합물이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민을 포함하는 것인 유제품 대체물.
  63. 제59항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 혼합물이 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인을 포함하는 것인 유제품 대체물.
  64. 제59항 또는 제60항에 있어서, 혼합물이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  65. 제59항 또는 제60항에 있어서, 혼합물이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  66. 제59항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 혼합물이 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  67. 제59항 또는 제60항에 있어서, 혼합물이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린 및 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  68. 제59항 또는 제60항에 있어서, 혼합물이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린 및 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  69. 제59항 또는 제60항에 있어서, 혼합물이 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민 및 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  70. 제59항 또는 제60항에 있어서, 혼합물이 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 재조합 β-락토글로불린, 제13항 또는 제14항의 재조합 α-락트알부민 및 제15항 또는 제16항의 재조합 κ-카세인으로 이루어진 것인 유제품 대체물.
  71. 제1항 내지 제12항, 제18항, 제21항, 제22항, 제25항 내지 제39항, 제44항, 제45항, 제50항 내지 제55항, 제59항 내지 제64항, 제67항, 제68항 및 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 β-락토글로불린이 소 β-락토글로불린에 대해 적어도 80% 동일한 것인 유제품 대체물.
  72. 제13항, 제14항, 제19항, 제21항, 제23항, 제25항 내지 제27항, 제30항, 제32항 내지 제37항, 제40항, 제41항, 제46항, 제47항, 제50항 내지 제52항, 제56항 내지 제63항, 제65항, 제67항, 제69항 및 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 α-락트알부민이 소 α-락트알부민에 대해 적어도 80% 동일한 것인 유제품 대체물.
  73. 제15항, 제16항, 제20항, 제21항, 제24항, 제25항, 제28항 내지 제37항, 제42항, 제43항, 제48항, 제49항, 제53항 내지 제63항, 제66항 및 제68항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 κ-카세인이 소 κ-카세인에 대해 적어도 80% 동일한 것인 유제품 대체물.
  74. 제1항 내지 제12항, 제18항, 제21항, 제22항, 제25항 내지 제39항, 제44항, 제45항, 제50항 내지 제55항, 제59항 내지 제64항, 제67항, 제68항 및 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 β-락토글로불린이 재조합 진균 숙주 세포, 재조합 박테리아 숙주 세포, 재조합 조류 숙주 세포 또는 재조합 식물 숙주 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 재조합 숙주 세포에서 생산된 것인 유제품 대체물.
  75. 제13항, 제14항, 제19항, 제21항, 제23항, 제25항 내지 제27항, 제30항, 제32항 내지 제37항, 제40항, 제41항, 제46항, 제47항, 제50항 내지 제52항, 제56항 내지 제63항, 제65항, 제67항, 제69항 및 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 α-락트알부민이 재조합 진균 숙주 세포, 재조합 박테리아 숙주 세포, 재조합 조류 숙주 세포 또는 재조합 식물 숙주 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 재조합 숙주 세포에서 생산된 것인 유제품 대체물.
  76. 제15항, 제16항, 제20항, 제21항, 제24항, 제25항, 제28항 내지 제37항, 제42항, 제43항, 제48항, 제49항, 제53항 내지 제63항, 제66항 및 제68항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 κ-카세인이 재조합 진균 숙주 세포, 재조합 박테리아 숙주 세포, 재조합 조류 숙주 세포 또는 재조합 식물 숙주 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 재조합 숙주 세포에서 생산된 것인 유제품 대체물.
  77. 제67항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 진균 숙주 세포가 재조합 사상 진균 숙주 세포인 유제품 대체물.
  78. 제70항에 있어서, 재조합 진균 숙주 세포가 아스페르길루스(Aspergillus), 칸디다(Candida), 푸사리움(Fusarium), 한세눌라(Hansenula), 클루이베로미세스(Kluyveromyces), 피키아(Pichia), 사카로미세스(Saccharomyces), 테트라히메나(Tetrahymena), 트리코더마(Trichoderma), 야로위아(Yarrowia) 및 지고사카로미세스(Zygosaccharomyces)로 이루어진 군으로부터 선택된 속으로부터의 것인 유제품 대체물.
  79. 제1항 내지 제12항, 제18항, 제21항, 제22항, 제25항 내지 제39항, 제44항, 제45항, 제50항 내지 제55항, 제59항 내지 제64항, 제67항, 제68항 및 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 β-락토글로불린이 비-천연 반응성 부위를 포함하는 것인 유제품 대체물.
  80. 제13항, 제14항, 제19항, 제21항, 제23항, 제25항 내지 제27항, 제30항, 제32항 내지 제37항, 제40항, 제41항, 제46항, 제47항, 제50항 내지 제52항, 제56항 내지 제63항, 제65항, 제67항, 제69항 및 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 α-락트알부민이 비-천연 반응성 부위를 포함하는 것인 유제품 대체물.
  81. 제15항, 제16항, 제20항, 제21항, 제24항, 제25항, 제28항 내지 제37항, 제42항, 제43항, 제48항, 제49항, 제53항 내지 제63항, 제66항 및 제68항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 κ-카세인이 비-천연 반응성 부위를 포함하는 것인 유제품 대체물.
  82. 제1항 내지 제12항, 제18항, 제21항, 제22항, 제25항 내지 제39항, 제44항, 제45항, 제50항 내지 제55항, 제59항 내지 제64항, 제67항, 제68항 및 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 β-락토글로불린이 상응하는 천연 우유 단백질에 존재하는 반응성 부위가 결여된 것인 유제품 대체물.
  83. 제13항, 제14항, 제19항, 제21항, 제23항, 제25항 내지 제27항, 제30항, 제32항 내지 제37항, 제40항, 제41항, 제46항, 제47항, 제50항 내지 제52항, 제56항 내지 제63항, 제65항, 제67항, 제69항 및 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 α-락트알부민이 상응하는 천연 우유 단백질에 존재하는 반응성 부위가 결여된 것인 유제품 대체물.
  84. 제15항, 제16항, 제20항, 제21항, 제24항, 제25항, 제28항 내지 제37항, 제42항, 제43항, 제48항, 제49항, 제53항 내지 제63항, 제66항 및 제68항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 κ-카세인이 상응하는 천연 우유 단백질에 존재하는 반응성 부위가 결여된 것인 유제품 대체물.
  85. 제1항 내지 제12항, 제18항, 제21항, 제22항, 제25항 내지 제39항, 제44항, 제45항, 제50항 내지 제55항, 제59항 내지 제64항, 제67항, 제68항 및 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 β-락토글로불린이 우유 단백질 반복부를 포함하는 것인 유제품 대체물.
  86. 제13항, 제14항, 제19항, 제21항, 제23항, 제25항 내지 제27항, 제30항, 제32항 내지 제37항, 제40항, 제41항, 제46항, 제47항, 제50항 내지 제52항, 제56항 내지 제63항, 제65항, 제67항, 제69항 및 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 α-락트알부민이 우유 단백질 반복부를 포함하는 것인 유제품 대체물.
  87. 제15항, 제16항, 제20항, 제21항, 제24항, 제25항, 제28항 내지 제37항, 제42항, 제43항, 제48항, 제49항, 제53항 내지 제63항, 제66항 및 제68항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 κ-카세인이 우유 단백질 반복부를 포함하는 것인 유제품 대체물.
  88. 제17항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 비-우유 단백질을 추가로 포함하는 유제품 대체물.
  89. 제88항에 있어서, 비-우유 단백질이 식물로부터 수득된 것인 유제품 대체물.
  90. 제89항에 있어서, 식물이 완두, 감자, 잠두, 대두 및 카놀라로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 유제품 대체물.
  91. 제17항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 질량 기준 약 0.1% 내지 약 100%의 우유 단백질 성분을 포함하는 유제품 대체물.
  92. 제91항에 있어서, 질량 기준 약 1% 내지 약 70%의 우유 단백질 성분을 포함하는 유제품 대체물.
  93. 제92항에 있어서, 질량 기준 약 5% 내지 약 40%의 우유 단백질 성분을 포함하는 유제품 대체물.
  94. 제93항에 있어서, 질량 기준 약 10% 내지 약 25%의 우유 단백질 성분을 포함하는 유제품 대체물.
  95. 제17항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 분말인 유제품 대체물.
  96. 제17항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 우유 단백질 중합체 네트워크를 포함하는 유제품 대체물.
  97. 제17항 내지 제96항 중 어느 한 항의 유제품 대체물을 포함하는 조성물이며, 여기서 유제품 대체물은 필적하는 조성물 내의 우유에 의해 부여된 속성을 조성물에 부여하거나 이러한 속성에 실질적으로 기여하는 것인 조성물.
  98. 제97항에 있어서, 식제품인 조성물.
  99. 제98항에 있어서, 식제품이 유제품인 조성물.
  100. 제98항에 있어서, 식제품이 유제품 대체물 제품인 조성물.
  101. 제97항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 우유 단백질 중합체 네트워크를 포함하는 조성물.
  102. 제97항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 질량 기준 약 0.001% 내지 90%의 유제품 대체물을 포함하는 조성물.
  103. 제102항에 있어서, 질량 기준 약 1% 내지 50%의 유제품 대체물을 포함하는 조성물.
  104. 제103항에 있어서, 질량 기준 약 10% 내지 30%의 유제품 대체물을 포함하는 조성물.
  105. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항의 재조합 우유 단백질 중 1종 이상을 수득하는 단계를 포함하는, 제17항 내지 제96항 중 어느 한 항의 유제품 대체물의 제조 방법.
  106. 제105항에 있어서, 재조합 β-락토글로불린을 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 글루코스로 이루어진 탄소 공급원을 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함하며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 T4 중 1개 이상 상에 비-천연 O-연결된 글리코실화를 갖는 것인 방법.
  107. 제105항에 있어서, 재조합 β-락토글로불린을 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 글루코스로 이루어진 탄소 공급원을 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함하며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 T97 상에 비-천연 O-연결된 글리코실화를 갖는 것인 방법.
  108. 제105항에 있어서, 재조합 β-락토글로불린을 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 락토스 및 폐곡물로 이루어진 탄소 공급원을 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함하며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 T97 상에 비-천연 O-연결된 글리코실화를 갖는 것인 방법.
  109. 제105항에 있어서, 재조합 β-락토글로불린을 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 글루코스로 이루어진 탄소 공급원을 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함하며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 S27, T6, T97, S116 및 T125 중 1개 이상 상에 비-천연 O-연결된 글리코실화를 갖는 것인 방법.
  110. 제105항에 있어서, 재조합 β-락토글로불린을 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 락토스 및 폐곡물로 이루어진 탄소 공급원을 포함하는 배양 배지에서 배양하는 단계를 포함하며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 S27, T6, T97, S116 및 T125 중 1개 이상 상에 비-천연 O-연결된 글리코실화를 갖는 것인 방법.
  111. 제105항에 있어서, 재조합 β-락토글로불린을 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 적어도 30℃인 온도에서 배양하는 단계를 포함하며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 T49 상에 O-연결된 글리코실화를 갖는 것인 방법.
  112. 제105항에 있어서, 재조합 β-락토글로불린을 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 약 28℃의 온도에서 배양하는 단계를 포함하며, 여기서 재조합 숙주 세포에 의해 생산된 재조합 β-락토글로불린은 아미노산 잔기 T6 상에 O-연결된 글리코실화를 갖는 것인 방법.
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