KR102537089B1 - 연화시킨 식물을 이용한 콜라겐 펩타이드의 제조방법 및 그 방법에 의한 콜라겐 펩타이드 - Google Patents
연화시킨 식물을 이용한 콜라겐 펩타이드의 제조방법 및 그 방법에 의한 콜라겐 펩타이드 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 연화시킨 식물을 이용한 콜라겐 펩타이드의 제조방법 및 그 방법에 의한 콜라겐 펩타이드에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 식물을 준비하여 분쇄하는 단계와, 상기 분쇄된 식물에 물을 가하고, 90~100℃의 온도로 30~90분간 열처리하는 단계와, 상기 열처리된 처리물에 구연산수를 가하고, 35~45℃의 온도를 1~4일간 유지시켜 식물 조직을 연화하는 단계와, 상기 연화된 연화물을 중화시키는 단계와, 상기 중화된 중화물을 열처리하는 단계와, 상기 열처리된 중화물에 단백질 분해효소를 가하여 가수분해하는 단계와, 상기 가수분해된 가수분해물을 가열하여 효소를 실활시키는 단계와, 상기 실활된 가수분해물을 여과 및 원심분리하는 단계와, 상기 원심분리된 상층액을 이온교환수지로 처리하여 불순물 및 염을 제거하는 단계와, 상기 불순물 및 염이 제거된 상층액을 건조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 의하면, 제품의 안정성 및 신뢰도가 우수하고, 비린내가 없으며, 체내 흡수율이 우수할 뿐만 아니라, 체내 콜라겐 합성을 촉진하여 노화 개선 및 주름 개선 효과가 우수하다는 장점이 있다.
Description
본 발명은 연화시킨 식물을 이용한 콜라겐 펩타이드의 제조방법 및 그 방법에 의한 콜라겐 펩타이드에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 식물을 연화시키고, 이로부터 저분자량의 콜라겐 펩타이드를 제조함으로써, 비린내가 없고, 체내 흡수율이 우수하며, 체내 콜라겐 합성이 더욱 촉진되는 연화시킨 식물을 이용한 콜라겐 펩타이드의 제조방법, 그 방법에 의한 콜라겐 펩타이드에 관한 것이다.
콜라겐(collagen)은 동물의 결합조직, 피부, 뼈, 힘줄, 피부, 연골, 손톱, 발톱, 치아, 혈관 등을 구성하는 섬유상 구조단백질이다. 콜라겐은 인체 단백질의 약 30%를 차지하고, 결합조직의 주성분이며, 피부 진피층의 70~90%를 차지한다.
콜라겐의 기본 구조단위는 트로포콜라겐(tropocollagen)으로 분자량 10만달톤(Da)의 펩타이드가 3중 나선구조로 이루어지는 30만달톤(Da)의 매우 큰 고분자 단백질이다. 콜라겐을 구성하는 아미노산은 글라이신(glycine), 프롤린(proline), 하이드록시프롤린(hydroxyproline), 그 외 아미노산이 G-X-Y로 결합되어 있으며, 다른 단백질에는 비교적 적은 하이드록시프롤린을 함유하고 있어 하이드록시프롤린의 함량이 그 기관 내의 콜라겐 함량의 척도가 되기도 한다.
한편, 최근 노령인구의 급증으로 노화지연에 대한 연구가 활발히 이루어지고 있으며, 남녀노소 누구나 할 것 없이 젊음에 대한 갈망은 주체하기 어려울 정도이다. 이런 시대적인 붐을 타고 콜라겐의 효능 및 효과가 대두되면서 콜라겐을 찾는 사람들이 많아지고 있는 추세이다.
특히, 기능성 식품 및 화장품의 분야에서는 피부노화를 개선하기 위하여 콜라겐을 포함하는 기능성 식품 조성물 및 기능성 화장료 조성물이 다수 출시되었다.
그러나 현재 유통되고 있는 콜라겐의 대부분이 동물성이나 해양성 콜라겐이나, 구제역 및 광우병 등과 같은 질병이 돌고, 해양 오염 역시 심화되면서 동물성 및 해양성 콜라겐에 대한 불안감이 심화되어 신뢰도가 높지 못하다. 또한, 상기 동물성이나 해양성 콜라겐은 특유의 비린내로 인하여 섭취가 곤란하다는 문제가 있다.
이에 따라 콜라겐의 주성분인 Hydroxy proline, proline, lysine 등이 들어 있는 식물성 단백질(이하 “식물성 콜라겐”이라 칭함)의 개발로 불안감을 안고 사용하던 동물성 및 해양성 콜라겐의 취약성을 보완할 필요성이 대두 되고 있다.
따라서, 본 발명의 목적은 비린내가 없고, 체내 흡수율이 우수한 연화시킨 식물을 이용한 콜라겐 펩타이드의 제조방법 및 그 방법에 의한 콜라겐 펩타이드를 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 돌외잎 추출물 및 시호 추출물을 콜라겐 펩타이드와 함께 포함함으로써, 체내 콜라겐 합성이 더욱 촉진되는 연화시킨 식물을 이용한 콜라겐 펩타이드의 제조방법 및 그 방법에 의한 콜라겐 펩타이드를 제공하는 데 있다.
상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 연화시킨 식물을 이용한 콜라겐 펩타이드의 제조방법은, 식물을 준비하여 분쇄하는 단계와, 상기 분쇄된 식물에 물을 가하고, 90~100℃의 온도로 30~90분간 열처리하는 단계와, 상기 열처리된 처리물에 구연산수를 가하고, 35~45℃의 온도를 1~4일간 유지시켜 식물 조직을 연화하는 단계와, 상기 연화된 연화물을 중화시키는 단계와, 상기 중화된 중화물을 열처리하는 단계와, 상기 열처리된 중화물에 단백질 분해효소를 가하여 가수분해하는 단계와, 상기 가수분해된 가수분해물을 가열하여 효소를 실활시키는 단계와, 상기 실활된 가수분해물을 여과 및 원심분리하는 단계와, 상기 원심분리된 상층액을 이온교환수지로 처리하여 불순물 및 염을 제거하는 단계와, 상기 불순물 및 염이 제거된 상층액을 건조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.
상기 식물은 당근, 흰목이버섯, 금화규, 히비스커스, 브로콜리, 감자, 콩, 옥수수, 귀리, 시금치, 청경채, 아보카도, 양배추, 아스파라거스, 고구마, 토마토, 표고버섯, 호박씨 및 아몬드 중 1종 이상의 것임을 특징으로 한다.
상기 단백질 분해효소는 엔도(endo type) 가수분해효소 및 엑소 타입(exo type) 가수분해효소의 혼합 효소인 것을 특징으로 한다.
상기 구연산수의 농도는 4~12%임을 특징으로 한다.
상기 불순물 및 염이 제거된 상층액을 건조하는 단계 후, 상기 건조된 건조물에 돌외잎 추출물 및 시호 추출물을 혼합하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의한 콜라겐 펩타이드는 상기한 제조방법에 의해 제조되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의하면, 제품의 안정성 및 신뢰도가 우수하고, 비린내가 없으며, 식물성 콜라겐 펩타이드의 체내 흡수율이 우수할 뿐만 아니라, 체내 콜라겐 합성을 촉진하여 노화 개선 및 주름 개선 효과가 우수하다는 장점이 있다.
도 1은 본 발명에 의한 시험예 3의 결과를 나타낸 그래프.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명에 의한 연화시킨 식물을 이용한 콜라겐 펩타이드의 제조방법은, 식물을 준비하여 분쇄하는 단계와, 상기 분쇄된 식물에 물을 가하고, 90~100℃의 온도로 30~90분간 열처리하는 단계와, 상기 열처리된 처리물에 구연산수를 가하고, 35~45℃의 온도를 1~4일간 유지시켜 식물 조직을 연화하는 단계와, 상기 연화된 연화물을 중화시키는 단계와, 상기 중화된 중화물을 열처리하는 단계와, 상기 열처리된 중화물에 단백질 분해효소를 가하여 가수분해하는 단계와, 상기 가수분해된 가수분해물을 가열하여 효소를 실활시키는 단계와, 상기 실활된 가수분해물을 여과 및 원심분리하는 단계와, 상기 원심분리된 상층액을 이온교환수지로 처리하여 불순물 및 염을 제거하는 단계와, 상기 불순물 및 염이 제거된 상층액을 건조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
식물을 준비하여 분쇄하는 단계
먼저, 연화시킬 식물을 준비한다. 본 발명에서 상기 식물로는, 당근, 흰목이버섯, 금화규, 히비스커스, 브로콜리, 감자, 콩, 옥수수, 귀리, 시금치, 청경채, 아보카도, 양배추, 아스파라거스, 고구마, 토마토, 표고버섯, 호박씨 및 아몬드 중 1종 이상의 것을 사용할 수 있다. 본 발명에서 상기한 식물을 사용하는 이유는 식물 내 콜라겐의 함유율이 높고, 추출 효율 역시 우수하여 그 제조효율성이 높기 때문이나, 상기 식물의 종류를 반드시 제한하는 것은 아니다.
그리고 상기 준비한 식물을 분쇄한다. 본 발명에서 상기 분쇄의 입도를 반드시 제한하는 것은 아니나, 식물의 연화 및 가수분해를 용이하게 하기 위하여 10~100㎛의 입도로 분쇄함이 바람직하다. 이때, 상기 분쇄방법은 제한하지 않는 것으로, 파쇄기로 초핑하는 정도이면 족하다.
상기 분쇄된 식물에 물을 가하고, 90~100℃의 온도로 30~90분간 열처리하는 단계
다음으로, 상기 분쇄된 식물에 3~10중량배의 물을 가하고, 열처리한다. 상기 열처리는 식물을 연화시켜 단백질의 추출을 용이하게 하기 위한 것이다.
보다 구체적으로, 분쇄된 식물에 물을 가한 후, 1~3시간 침지하고, 이를 90~100℃에서 30~90분간 열처리하면 족하다.
상기 열처리된 처리물에 구연산수를 가하고, 35~45℃의 온도를 1~4일간 유지시켜 식물 조직을 연화하는 단계
그리고 상기 열처리된 처리물을 25~40℃ 정도로 냉각하고, 냉각된 냉각물에 구연산수를 가한다. 이때, 상기 구연산수는 상기 열처리된 처리물의 0.1~3중량배 정도임이 바람직하며, 구연산수의 농도는 4~12%임이 바람직하다. 이때, 상기 구연산수는 무수구연산으로 제조하며, 상기 구연산수의 농도는 뿌리, 줄기, 잎, 꽃잎 등 뿌리의 조직에 따라 달리할 수 있다.
다음으로, 이를 35~45℃의 온도로 1~4일간 유지시켜 식물 조직을 연화하고, 단백질이 용해되도록 한다. 상기 식물의 연화 및 단백질의 용해를 더욱 용이하게 하기 위하여, 상기 온도의 유지기간 중 구연산수를 첨가한 직후, 교반기를 이용하여 1,000~2,500rpm으로 10~60분간 교반하고, 2~4시간 경과한 후, 다시 교반기를 이용하여 1,000~2,500rpm으로 5~24시간 교반하는 것이 바람직하나, 이를 반드시 제한하는 것은 아니다.
아울러, 필요에 따라 상기 연화된 연화물을 디스퍼 믹서를 이용하여 2,000~3,500rpm의 속도로 10~30분간 분쇄함으로써, 가수분해 효율을 더욱 높일 수도 있다.
상기 연화된 연화물을 중화시키는 단계
다음으로, 상기 연화된 연화물을 25~35℃ 정도로 냉각하고, 탄산수소나트륨을 가해 pH를 6.0~7.0으로 중화시킨다. 이때, 상기 중화를 위해 사용되는 탄산나트륨은 분말 상태일 수도 있으며, 수용액 상태일 수도 있는바, 그 사용을 제한하지 않는다.
상기 중화된 중화물을 열처리하는 단계
그리고 상기 중화된 중화물을 90~100℃에서 40~80분간 열처리하여 가수분해를 용이하게 한다.
상기 열처리된 중화물에 단백질 분해효소를 가하여 가수분해하는 단계
상기 열처리가 완료되면 상기 열처리된 중화물을 25~35℃ 정도로 냉각하고, 이에 단백질 분해효소를 첨가하여 50~60℃에서 10~14시간 동안 가수분해한다.
이때, 상기 단백질 분해효소로는 단백질 펩타이드 사슬을 아미노산 단위로 분해가 가능한 엑소펩티다제 또는 분자량 조절을 위해 단백질을 무작위로 절단할 수 있는 엔도펩티다제를 사용할 수 있으며, 가장 바람직하게는 2종 모두를 사용하는 것이다. 그리고 상기 단백질 분해효소의 사용량은 제한하지 않으나, 상기 열처리된 중화물 100중량% 대비 0.05~5중량% 정도임이 바람직하다.
상기 가수분해된 가수분해물을 가열하여 효소를 실활시키는 단계
그리고 상기 가수분해된 가수분해물을 80~90℃로 10~30분간 가열하여 효소를 실활시킨다. 필요에 따라 효소의 실활 전, 500mesh의 망을 여과하는 과정을 추가할 수도 있는 것으로, 이를 제한하지 않는다.
상기 실활된 가수분해물을 여과 및 원심분리하는 단계
그리고 상기 효소가 실활된 가수분해물을 1㎛ 정도의 여과망을 이용하여 여과하고, 이 여과액을 다시 원심분리기로 2,000~3,000rpm에서 10~30분간 원심분리하여 상층액만을 회수한다.
상기 원심분리된 상층액을 이온교환수지로 처리하여 불순물 및 염을 제거하는 단계
그리고 상기 원심분리된 상층액을 이온교환수지로 처리함으로써, 불순물 및 염을 제거한다.
여기서, 상기 이온교환수지로의 처리는 양이온성 이온교환수지 또는 음이온성 이온교환수지 중 1종 이상의 이온교환수지에 상기 상층액을 접촉시키는 것을 의미한다.
상기 양이온성 이온교환수지 처리는, 양이온성 이온교환수지로 충전된 컬럼에 상기 상층액을 통과시키는 방식으로 수행될 수 있으며, 양이온성 이온교환수지로는 강양이온성 이온교환수지(예컨대, TRILITE-SCR-B), 약양이온성 이온교환수지(예컨대, DIAION WK11)가 모두 사용가능하다.
상기 음이온성 이온교환수지 처리는, 음이온성 이온교환수지로 충전된 컬럼에 상기 상층액을 통과시키는 방식으로 수행될 수 있다. 음이온성 이온교환수지로는 강음이온성 이온교환수지(예컨대, TRILITE AMP24), 약음이온성 이온교환수지(예컨대, DIAION WA10)가 모두 사용가능하다.
아울러, 2종 모두로 처리할 시에는 양이온성 이온교환수지로 처리한 후, 음이온성 이온교환수지로 처리할 수 있는바, 이를 제한하지 않는다.
상기 불순물 및 염이 제거된 상층액을 건조하는 단계
그리고 최종적으로 상기 불순물 및 염이 제거된 상층액을 건조함으로써, 콜라겐 펩타이드의 제조를 완료한다.
이때, 상기 건조방법은 동결건조 또는 분무건조 방법을 이용할 수 있다.
상기와 같이 제조된 본 발명의 콜라겐 펩타이드는 제품의 안정성 및 신뢰도가 우수하고, 비린내가 없으며, 중량평균분자량이 300~500달톤(Da)으로 체내 흡수율이 우수할 뿐만 아니라, 체내 콜라겐 합성을 촉진하여 노화 개선 및 주름 개선 효과가 우수하다는 장점이 있다.
본 발명의 콜라겐 펩타이드는 식품용 및 화장품용으로 모두 사용이 가능한 것으로, 이러한 콜라겐 펩타이드의 활용은 이 기술이 속하는 분야에서 충분히 공지된 것이므로 이에 대한 추가 설명은 생략한다.
한편, 상기 불순물 및 염이 제거된 상층액을 건조하는 단계 후, 상기 건조된 건조물에 돌외잎 추출물 및 시호 추출물을 혼합하는 단계를 더 포함할 수 있다. 이를 더 포함하면, 섬유아세포의 콜라겐 합성을 더욱 촉진함으로써, 상기 콜라겐 펩타이드의 효과가 배가되기 때문이다.
상기 돌외Gynostemma pentaphyllum)는 쌍떡잎식물 박목 박과의 여러해살이 덩굴식물을 의미한다.
상기 시호는 시호(Bupleurum falcatum Linne) 또는 그 변종(산형과 Umbelliferae)의 뿌리를 지칭하는 한약재를 의미한다.
이때, 상기 돌외잎 추출물 또는 시호 추출물은 돌외잎 또는 시호의 뿌리를 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 중 1종 이상의 것을 추출용매로하여 추출한 것임이 바람직하며, 그 추출방법은 종래 게시된 다양한 방법에 의하는 것으로, 이를 제한하지 않는다.
그리고 상기 건조물, 돌외잎 추출물 및 시호 추출물은 고형분 기준 1:0.1~1:0.1~1 중량비로 혼합될 수 있는바, 이는 우수한 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진을 위한 것이다.
이하, 실시예를 통해 본 발명을 상세히 설명한다.
(실시예 1)
건조 히비스커스 400g과 흰목이버섯 100g을 깨끗한 물로 세척하여 준비하고, 파쇄기로 10~100㎛의 입도로 초핑하였다. 그리고 이에 정제수 3kg을 가하여 2시간 침지 후, 95℃에서 1시간 열처리한 후, 실온에 방치하여 40℃로 냉각하였다.
그리고 이에 5%의 무수 구연산수 3kg을 가하고, 40℃의 온도를 3시간 유지시켜 식물 조직을 연화하고, 단백질을 용해시켰다. 이때, 온도 유지기간 중 구연산수의 첨가 직후 교반기를 이용하여 2,000rpm으로 30분간 교반하였으며, 교반 2시간 후 다시 10시간 동안 1,500rpm으로 교반하였다.
다음으로, 이 연화물을 디스퍼 믹서를 이용하여 3,000rpm으로 20분간 분쇄하고, 탄산수소나트륨을 가하여 pH가 6.5가 되도록 중화하였다. 이 중화물을 95℃에서 30분간 열처리하고, 이를 30℃로 냉각한 후, 단백질 분해효소를 첨가하고 55℃에서 10시간 동안 가수분해시켰다. 이때, 상기 단백질 분해효소로는 exo type의 A. oryzae 유래 prozyme 2000P(DuPont Industrial Biosciences)과 endo type의 B.amyloliquefaciens 유래 neutrase(Novo Nordisk)를 각각 50g씩 사용하였다.
다음으로, 이를 80~90℃로 20분간 가열하여 효소를 실활시킨 후, 1㎛의 여과망으로 여과하고, 원심분리기로 3,000rpm에서 20분간 원심분리하였다. 상기 원심분리된 상층액을 양이온성 이온교환수지(TRILITE-SCR-B)로 처리하고, 다시 음이온성 이온교환수지(TRILITE AMP24)로 처리한 후, 동결건조하여 콜라겐 펩타이드를 제조하였다.
(실시예 2)
돌외잎을 깨끗이 세척하고, 동결건조한 후, 이에 3중량배의 70% 에탄올 수용액을 가하고, 50℃에서 10시간 추출하고, 이를 여과, 농축 및 동결건조하여 돌외잎 추출물을 제조하였다.
아울러, 시호의 뿌리 역시 상기 돌외잎과 동일한 방법으로 시호 추출물을 제조하였다.
그리고 상기 실시예 1의 콜라겐 펩타이드와 상기 돌외잎 추출물, 시호 추출물을 1:0.2:0.2 중량비로 혼합하였다.
(시험예 1)
상기 실시예 1에서 제조된 콜라겐 펩타이드의 분자량을 측정하였다. 그 결과 실시예 1의 중량평균분자량이 420Da임을 확인할 수 있었는바, 흡수율이 우수할 것으로 판단되었다.
(시험예 2)
시료의 피부 미백 효능을 확인하기 위해, B16-F10 멜라닌 세포에 여러 가지 농도의 시료를 처리한 후, 티로시나아제(tyrosinase) 저해 활성을 측정하였다.
시험을 위한 멜라닌 세포를 준비하고자, 24 웰 플레이트에 B16-F10 멜라닌 세포 상등액(50,000 cells/well)을 500㎕씩 분주하고 37℃ 및 5% CO2 조건에서 24시간 동안 pre-incubation 시켜 세포를 well plate에 부착시켰다.
다음으로, 실시예 1, 2, 양성대조군으로 비타민 C 각각을 물에 희석하여 0.2mg/ml, 1.0mg/ml, 5.0mg/ml 농도의 시료를 제조한 후, 각 웰에 50㎕씩 분주하고 37℃ 및 5% CO2 조건에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 1mg/ml 트립신(trypsin)을 10㎕처리하고 10분 동안 반응시킨 후, 1,000rpm에서 약 2분 동안 원심분리시켜 펠렛을 얻었다. 이로부터 얻은 펠렛을 1% triton X-100 PBS 05ml 용액에 용해시켰으며, 0.2% L-DOPA 0.1M 소듐 포스페이트 버퍼(Sodium phosphate buffer)를 0.5ml 혼합한 후에 37℃에서 2시간 동안 배양시키고, 490nm의 빛을 조사해 흡광도를 측정하였다. 티로시나아제 저해율은 아래 식을 이용해 계산하였으며, 티로시나아제 저해율 측정결과를 하기 표 1에 나타내었다.
티로시나아제 활성 저해율(%)={(대조군의 흡광도-시료 첨가군의 흡광도)/대조군의 흡광도} × 100
| 구분 | 티로시나아제 활성 저해율(%) | |
| 실시예 1 | 0.2mg/ml | 19.14 |
| 1.0mg/ml | 30.18 | |
| 5.0mg/ml | 33.92 | |
| 실시예 2 | 0.2mg/ml | 20.57 |
| 1.0mg/ml | 32.41 | |
| 5.0mg/ml | 36.01 | |
| 양성대조군 (비타민 C) |
0.2mg/ml | 27.10 |
| 1.0mg/ml | 55.36 | |
| 5.0mg/ml | 69.84 | |
상기 표 1에서와 같이, 본 발명의 실시예 1 및 2는 티로시나아제 활성 저해율이 우수함을 확인할 수 있었다.
(시험예 2)
시료의 피부 주름 개선 효과를 확인하기 위해, B16-F10 멜라닌 세포에 여러 가지 농도의 시료를 처리한 후, 엘라스타아제(Elastase) 활성 저해율을 측정하였다.
시험을 위한 멜라닌 세포를 준비하고자, 24 웰 플레이트에 B16-F10 멜라닌 세포 상등액(50,000 cells/well)을 500㎕씩 분주하고 37℃, 5% CO2 조건에서 24시간 동안 pre-incubation 시켜 세포를 웰 플레이트에 부착시켰다.
다음으로, 실시예 1, 실시예 2, 양성대조군으로 비타민 C 각각을 물에 희석하여 0.2mg/ml, 1.0mg/ml, 5.0mg/ml 농도의 시료를 제조한 후, 각 웰에 10㎕씩 분주한 후, 50mM tris-HCl 버퍼(pH 8.6)에 녹인 porcine pancreas elastase(10㎍/mL)용액을 50㎕씩 첨가하고 기질로 50mM tris-HCl buffer (pH 8.6)에 녹인 N-succinyl-(LAla) 3-p-nitroanilide (0.5mg/mL)을 100㎕씩 첨가한 후, 20분간 반응시킨 다음 B16-F10 멜라닌 세포의 엘라스타아제 활성 저해율을 측정하였다. 엘라스타아제 활성 저해율은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율을 측정하고, 하기 식에 의해 엘라스타아제 활성 저해율을 계산한 후, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
엘라스타아제 활성 저해율(%)=(1-시료첨가군의 흡광도/[0091] 무첨가군의 흡광도) × 100
| 구분 | 엘라스타제 활성 저해율(%) | |
| 실시예 1 | 0.2mg/ml | 12.87 |
| 1.0mg/ml | 22.01 | |
| 5.0mg/ml | 31.89 | |
| 실시예 2 | 0.2mg/ml | 24.17 |
| 1.0mg/ml | 35.72 | |
| 5.0mg/ml | 41.39 | |
| 대조군(비타민 C) | 0.2mg/ml | 35.82 |
| 1.0mg/ml | 74.29 | |
| 5.0mg/ml | 89.34 | |
상기 표 2에서와 같이, 본 발명에 의한 실시예 1 및 2는 엘라스타제 활성 저해율이 우수함을 확인할 수 있었다.
(시험예 3)
사람 피부섬유아세포를 10% Fetal Bovine Serum과 1%의 페니실린과 스트렙토마이신이 첨가된 Dulbeccos's Minimum Essential Medium에 배양하여 계대수 5 이하를 유지하며, 상기 실시예 1, 2의 처리에 따른 콜라겐 합성량의 변화를 생체 외(in vitro 상)에서 실험하여, 사람 피부섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진 효과를 평가하였다. 또한, 비교예로서 무처리된 DMEM 배지를 준비하여 비교하였다.
시료별로 사람 피부섬유아세포를 웰 플레이트(well plate)에 1×104 cells/㎠의 밀도로 seeding한 후 세포 부착과 환경 적응을 위해 24시간 동안 인큐베이터(incubator)(37℃, 5% CO2)에서 배양하였다. 그리고 배지를 제거한 후, 혈청(Serum)이 첨가되지 않은 배지를 처리하여 8시간 동안 starvation시켰다. 상기 실시예 조성물을 배지에 용해하여 시료별로 처리하였다. 시료 처리 후, 사람 피부 섬유아세포를 72시간 동안 배양하고 배지의 상층액을 취하여 합성된 콜라겐을 정량하였다. 콜라겐 정량은 타입 1 프로콜라겐 C-펩타이드EIA 키트(Type I Procollagen C-Peptide EIA kit)를 사용하였다. 그 결과는 도 1에 나타내었다.
도 1에서와 같이, 본 발명의 실시예 1, 2는 사람 피부섬유아세포의 콜라겐 합성을 촉진하는 것을 확인할 수 있었다.
(제조예 1)
실시예 1의 시료 10중량%와 말토덱스트린 90중량%를 혼합하고, 정제로 제형화하였다.
(제조예 2)
실시예 2의 시료 10중량%와 말토덱스트린 90중량%를 혼합하고, 정제로 제형화하였다.
(시험예 3)
제조예 1 및 2의 시료별로 15명씩 50대의 여성에게 30일간 매일 하루에 2번 10g씩 식후에 복용하게 하였으며, 30일간의 복용 후, 주름 개선, 미백 개선 정도를 살펴보았다. 그리고 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
| 구분 |
개선 없음 | 약간 개선 | 중간 개선 | 상당 개선 | |
| 주름 | 제조예 1 | 0 | 6 | 8 | 1 |
| 제조예 2 | 0 | 2 | 5 | 8 | |
| 미백 | 제조예 1 | 0 | 8 | 7 | 0 |
| 제조예 2 | 0 | 5 | 10 | 0 | |
상기 표 3에서와 같이, 제조예 1, 2는 주름 개선 및 미백에 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
또한, 복용시 비린내 유, 무에 대해 조사하였으나, 모두 별다른 이취를 느끼지 못했다고 답변하였는바, 섭취 역시 용이하다는 장점이 있었다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
Claims (6)
- 식물을 준비하여 분쇄하는 단계와,
상기 분쇄된 식물에 물을 가하고, 90~100℃의 온도로 30~90분간 열처리하는 단계와,
상기 열처리된 처리물을 25~40℃로 냉각하며, 냉각된 냉각물에 4~12% 농도의 구연산수를 가하고, 35~45℃의 온도를 1~4일간 유지시켜 식물 조직을 연화하는 단계와,
상기 연화된 연화물을 25~35℃로 냉각하고, 중화시키는 단계와,
상기 중화된 중화물을 90~100℃에서 40~80분간 열처리하는 단계와,
상기 열처리된 중화물을 25~35℃로 냉각하고, 냉각된 중화물에 단백질 분해효소를 가하여 가수분해하는 단계와,
상기 가수분해된 가수분해물을 가열하여 효소를 실활시키는 단계와,
상기 실활된 가수분해물을 여과 및 원심분리하는 단계와,
상기 원심분리된 상층액을 이온교환수지로 처리하여 불순물 및 염을 제거하는 단계와,
상기 불순물 및 염이 제거된 상층액을 건조하는 단계와,
상기 불순물 및 염이 제거된 상층액을 건조하는 단계 후, 상기 건조된 건조물에 돌외잎 추출물 및 시호 추출물을 혼합하는 단계를 포함하고,
상기 건조물, 돌외잎 추출물 및 시호 추출물은 고형분 기준 1:0.1~1:0.1~1 중량비로 혼합되며,
상기 식물은 금화규, 히비스커스, 브로콜리, 감자, 콩, 옥수수, 귀리, 청경채, 아보카도, 양배추, 아스파라거스, 고구마, 표고버섯, 호박씨 및 아몬드 중 1종 이상의 것이고,
상기 단백질 분해효소는 엔도(endo type) 가수분해효소 및 엑소 타입(exo type) 가수분해효소의 혼합 효소인 것을 특징으로 하는 연화시킨 식물을 이용한 콜라겐 펩타이드의 제조방법.
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- 제1항의 방법으로 제조되는 것을 특징으로 하는 연화시킨 식물을 이용한 콜라겐 펩타이드.
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