KR102527339B1 - 일산화탄소 탈수소효소 및 포름산 탈수소효소를 이용한 개미산의 제조 방법 - Google Patents

일산화탄소 탈수소효소 및 포름산 탈수소효소를 이용한 개미산의 제조 방법 Download PDF

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Abstract

일 양상은 일산화탄소 탈수소효소 및 포름산 탈수소효소를 이용하여 상온 및 상압에서 폐가스 중 독성이 있는 일산화탄소 및/또는 이산화탄소를 부산물 없이 개미산으로 전환시킬 수 있으며, 효율이 떨어지지 않은 상태로 재사용이 가능한 조성물, 장치, 필터, 방법 등을 제공한다. 상기 조성물, 장치, 필터, 방법 등을 활용하여, 석유화학, 철강산업 등의 산업체, 담배 연소, 가정용 취사기구, 각종 보일러 연소 시 다량 배출되는 일산화탄소를 담배필터, 공기정화기, 가정용 취사기구 흡입필터, 가스보일러 등을 통해 제거가 가능한 바, 다양한 활용이 가능하다.

Description

일산화탄소 탈수소효소 및 포름산 탈수소효소를 이용한 개미산의 제조 방법{PREPARING METHOD OF FORMIC ACID USING CARBON MONOXIDE DEHYDROGENASE AND FORMATE DEHYDROGENASE}
일산화탄소 탈수소효소 및 포름산 탈수소효소를 이용한 개미산의 제조 방법에 관한 것이다.
철강산업, 석유화학산업 등의 산업체에서 배출하는 폐가스에는 상당량의 독성을 가지는 CO(carbon monoxide: 일산화탄소)가 포함되어 있다. 순수하게 분리된 일산화탄소는 다양한 화합물을 만들 수 있는 출발 원료가 될 수 있다. 그러나 폐가스에는 다양한 불순물이 포함되어 있어 산업폐가스에 포함되어 있는 일산화탄소를 직접적으로 화학반응의 원료로 이용하는 것은 상당히 기술적으로 어려운 문제이다. 이러한 이유로 대부분의 산업체는 일산화탄소가 포함된 산업폐가스를 연소시켜 일부 열에너지를 회수하는 방법을 사용하고 있다. 그러나 이 방법은 일산화탄소 연소를 통하여 이산화탄소가 다량 생성 배출되기에 최근 온실가스 저감에 대한 사회적인 관심이 커져서 이산화탄소 다량 배출에 대한 규제가 이루어지고 있어서 다른 대안 마련이 필요한 상황이다. 이리하여 폐가스에 포함된 일산화탄소를 단순 연소가 아니라 귀중한 탄소 자원으로 이용하려는 요구가 커지고 있다.
한편, 화학산업 중에 오랫동안 사용되어 오고 있는 water gas shift reaction을 통하여 일산화탄소가 포함된 폐가스를 전환하는 연구가 있으며, 그 반응식은 하기 반응식 1과 같다:
[반응식 1]
CO + H2O -> CO2 + H2.
상기 반응식 1에서 제시된 것은 일산화탄소를 물 분자와 반응시켜 수소 한 분자를 생성하는 것이다. 그러나 이 반응식에서 볼 수 있듯이 일산화탄소 연소 반응과 동일하게 동량의 이산화탄소가 발생하는 문제가 있어 일산화탄소를 탄소자원으로 이용하지 못하는 문제점이 있다. 또한 불순물이 다량 포함된 폐가스 전환은 상대적으로 어려워 사전에 폐가스로부터 일산화탄소를 순수 분리해야 하기에 경제적으로 부담이 가중될 수 있다.
이에 반하여 초산 생성 미생물(acetogen)을 이용하여 폐가스 중의 일산화탄소를 에탄올로 만들려는 시도가 상당히 있어 왔다. 미생물의 대사과정을 이용하는 반응식은 하기 반응식 2와 같다:
[반응식 2]
6CO + 3H2O -> C2H5OH + 4CO2.
상기 반응식 2에서 알 수 있듯이 일산화탄소의 탄소는 일부는 에탄올의 탄소로 전환되어 제품이 되나 대부분은 제품 속에 포함되지 않고 이산화탄소로 배출되는 문제가 있다. 그리고 이 반응은 이론상 반응식이고 미생물의 성장과 생존에는 더 많은 에너지가 필요하고 이를 이산화탄소 생성에서 발생하는 에너지를 이용하기 때문에 훨씬 더 많은 이산화탄소 배출이 발생하게 된다. 또한 미생물의 경우 폐가스에 포함된 일산화탄소에 대한 선택성을 가지기는 하나 불순물에 의하여 쉽게 생존율이 영향을 받을 수 있어 안정적으로 에탄올 생산이 어려운 단점이 존재한다.
이에, 폐가스 내 일산화탄소를 제거하는 새로운 반응인 CO 수화 반응을 통하여 개미산을 생산하는 반응식을 실제로 구현하여 폐가스 중의 일산화탄소를 탄소원으로 이용하면서 이산화탄소 생성없이 완전하게 새로운 부가가가치가 높은 개미산으로 재탄생시키는 기술을 제시하고자 한다.
한국등록특허 제10-2186734호
일 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 개미산 제조용 조성물을 제공하는 것이다.
다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자 제거용 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 폐가스 처리용 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 공기 정화용 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 개미산 제조용 장치를 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자 제거용 장치를 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 폐가스 처리용 장치를 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 공기 정화용 장치를 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 필터를 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자를 포함하는 가스(gas)를 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)에 접촉시키는 단계를 포함하는 개미산의 제조 방법을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자를 포함하는 가스(gas)를 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)에 접촉시키는 단계를 포함하는 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자를 제거하는 방법을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자를 포함하는 가스(gas)를 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)에 접촉시키는 단계를 포함하는 폐가스 처리 방법을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자를 포함하는 가스(gas)를 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)에 접촉시키는 단계를 포함하는 공기 정화 방법을 제공하는 것이다.
일 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 개미산 제조용 조성물을 제공한다.
상기 개미산은 포름산(Formic acid)를 의미하며, 상기 조성물은 일산화탄소 및/또는 이산화탄소와 접촉하여 개미산으로 전환시킬 수 있다. 구체적으로, 상기 일산화탄소 탈수소효소는 일산화탄소를 하기 반응식 4를 통해 이산화탄소로 전환시킬 수 있다:
[반응식 4]
CO + H2O + EM(산화된 상태) -> CO2 + 2H+ + EM(환원된 상태).
또한, 상기 포름산 탈수소효소는 이산화탄소를 하기 반응식 5를 통해 포름산으로 전환시킬 수 있다:
[반응식 5]
CO2 + 2H+ + EM(환원된 상태) -> HCOOH + EM(산화된 상태).
따라서, 상기 조성물은 일산화탄소 또는 일산화탄소를 포함하는 가스(gas)에서 이산화탄소로 전환시키고, 상기 이산화탄소를 개미산으로 전환시켜 개미산을 제조하는 것일 수 있다.
또한, 상기 조성물은 이산화탄소 또는 이산화탄소를 포함하는 가스(gas)에서 상기 이산화탄소를 개미산으로 전환시켜 개미산을 제조하는 것일 수 있다.
또한, 상기 조성물은 개미산 제조 효율이 떨어지지 않은 상태로 재사용이 가능하다.
상기 일산화탄소 탈수소효소는 천연으로부터 유래될 수도 있고, 당해 분야에서 널리 공지된 다양한 단백질 합성 방법으로 획득할 수 있다. 일례로서, 폴리뉴클레오티드 재조합과 단백질 발현 시스템을 이용하여 제조하거나 단백질 합성과 같은 화학적 합성을 통하여 시험관 내에서 합성하는 방법 및 무세포 단백질 합성법 등으로 제조될 수 있다. 또한, 일례로서, 상기 일산화탄소 탈수소효소는 펩티드, 식물 유래 조직이나 세포의 추출물, 미생물(예를 들어 세균류 또는 진균류, 그리고 특히 효모)의 배양으로 얻어진 생산물일 수 있다.
용어 "단백질(Protein)”는 아마이드 결합 (또는 펩티드 결합)으로 연결된 2개 이상의 아미노산으로 이루어진 폴리머를 의미한다.
용어 '발현(expression)'은 폴리펩티드(polypeptide)이 구조 유전자로부터 생산되는 과정을 지칭한다. 상기 과정은 유전자(폴리뉴클레오티드)의 mRNA로의 전사, 및 이러한 mRNA의 폴리펩티드(단백질)(들)로의 해독을 포함한다.
용어 '재조합'은 세포가 이종의 핵산을 복제하거나, 상기 핵산을 발현하거나 또는 펩티드, 이종의 펩티드 또는 이종의 핵산에 의해 코딩된 단백질을 발현하는 세포를 지칭하는 것이다.　재조합　세포는 상기 세포의 천연 형태에서는 발견되지 않는　유전자　또는　유전자　절편을, 센스 또는 안티센스 형태 중 하나로 발현할 수 있다. 또한　재조합　세포는 천연 상태의 세포에서 발견되는　유전자를 발현할 수 있으며, 그러나 상기　유전자는 변형된 것으로써 인위적인 수단에 의해 세포 내 재도입된 것이다.
상기 일산화탄소 탈수소효소는 일산화탄소 탈수소효소의 아미노산 서열과 각각 약 70% 이상, 약 75% 이상, 약 80% 이상, 약 85%이상, 약 90% 이상, 약 92% 이상, 약 95% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 또는 약 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 단백질을 포함할 수 있다. 상기 일산화탄소 탈수소효소는 일산화탄소 탈수소효소의 동질효소일 수 있고, 예를 들어, 상기 일산화탄소 탈수소효소는 무렐라속(Moorella sp.), 로드스피릴룸속(Rhodospirillum sp.), 메타노코쿠스속(Methanococcus sp.), 메타노사르시나속(Methanosarcina sp.), 메타노써모박터속(Methanothermobacter sp.), 클로스티리듐속(Clostridium sp.), 올리고트로파속(Oligotropha sp.), 에르피룸속(Aeropyrum sp.), 페로글로버스속(Ferroglobus sp.) 및 써모코커스속(Thermococcus sp.)으로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 속의 미생물 유래일 수 있다.
구체적으로, 상기 일산화탄소 탈수소효소는 무렐라 써모아세티카(Moorella thermoacetica), 로도스피릴룸 루브룸(Rhodospirillum rubrum), 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans), 메타노코쿠스 바니엘리(Methanococcus vannielii), 메타노사르시나 바커리(Methanosarcina barkeri), 메타노써모박터 써마우토트로피커스(Methanothermobacter thermautotrophicus), 클로스티리듐 파스튜리아늄(Clostridium pasteurianum), 올리고트로파 카르복시도보란스(Oligotropha carboxidovorans), 에르피룸 페르닉스(Aeropyrum pernix), 페로글로버스 플라씨더스(Ferroglobus placidus), 클로스티리듐 아우토에타노게눔(Clostridium autoethanogenum), 클로스트리듐 라그스달레이(Clostridium ragsdalei), 클로스티리듐 리융달리(Clostridium ljungdahlii), 클로스티리듐 스카톨로게네스(Clostridium scatologenes), 클로스티리듐 아세토뷰틸리쿰(Clostridium acetobutylicum), 클로스티리듐 베이예린키(Clostridium beijerinckii), 클로스티리듐 페르프린겐스(Clostridium perfringens), 클로스티리듐 써모셀룸(Clostridium thermocellum), 클로스티리듐 클루이베리(Clostridium kluyveri), 클로스티리듐 보툴리늄(Clostridium botulinum) 및 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus)로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 미생물 유래 일산화탄소 탈수소효소일 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 일산화탄소 탈수소효소는 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 II, 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 IV 및 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus) 유래 일산화탄소 탈수소효소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 일산화탄소 탈수소효소일 수 있다.
상기 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 II는 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드일 수 있고, 상기 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 IV는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드일 수 있고, 상기 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus) 유래 일산화탄소 탈수소효소는 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드일 수 있다.
또한, 상기 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 II는 서열번호 11의 염기 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드가 코딩하는 폴리펩티드일 수 있고, 상기 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 IV는 서열번호 12의 염기 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드가 코딩하는 폴리펩티드일 수 있고, 상기 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus) 유래 일산화탄소 탈수소효소는 서열번호 13의 염기 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드가 코딩하는 폴리펩티드일 수 있다.
용어 "상동성(Homology)"은 야생형 아미노산 서열과의 유사한 정도를 나타내기 위한 것으로서, 이러한 상동성의 비교는 당업계에서 널리 알려진 비교 프로그램을 이용하여 수행할 수 있으며, 2개 이상의 서열간 상동성을 백분율(%)로 계산할 수 있다.
또한, 보다 나은 화학적 안정성, 강화된 약리 특성(반감기, 흡수성, 역가, 효능 등), 변경된 특이성(예를 들어, 광범위한 생물학적 활성 스펙트럼), 감소된 항원성을 획득하기 위하여, 상기 일산화탄소 탈수소효소의 N- 또는 C-말단에 보호기가 결합되어 있을 수 있다. 상기 보호기는 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기 또는 폴리에틸렌글리콜(PEG)일 수 있으나, 상기 일산화탄소 탈수소효소의 개질, 특히 일산화탄소 탈수소효소의 안정성을 증진시킬 수 있는 성분이라면, 제한없이 포함될 수 있다.
상기 용어 "안정성"은 생체 내 단백질 절단 효소의 공격으로부터 상기 일산화탄소 탈수소효소를 보호하는 인 비보(in vivo) 안정성뿐만 아니라, 저장 안정성(예컨대, 상온 저장 안정성)도 의미하는 것일 수 있다.
아울러, 상기 일산화탄소 탈수소효소는 표적화 서열, 태그 (tag), 표지된 잔기를 위한 특정 목적으로 제조된 아미노산 서열도 추가적으로 포함할 수 있고, 구체적으로 His-tag 말단의 단백질과 결합된 형태일 수 있다.
또한, 일 양상에 있어서, 상기 포름산 탈수소효소는 천연으로부터 유래될 수도 있고, 당해 분야에서 널리 공지된 다양한 단백질 합성 방법으로 획득할 수 있다. 일례로서, 폴리뉴클레오티드 재조합과 단백질 발현 시스템을 이용하여 제조하거나 단백질 합성과 같은 화학적 합성을 통하여 시험관 내에서 합성하는 방법 및 무세포 단백질 합성법 등으로 제조될 수 있다. 또한, 일례로서, 상기 포름산 탈수소효소는 펩티드, 식물 유래 조직이나 세포의 추출물, 미생물(예를 들어 세균류 또는 진균류, 그리고 특히 효모)의 배양으로 얻어진 생산물일 수 있다.
상기 포름산 탈수소효소는 포름산 탈수소효소의 아미노산 서열과 각각 약 70% 이상, 약 75% 이상, 약 80% 이상, 약 85%이상, 약 90% 이상, 약 92% 이상, 약 95% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 또는 약 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 단백질을 포함할 수 있다. 상기 포름산 탈수소효소는 포름산 탈수소효소의 동질효소일 수 있고, 예를 들어, 상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움속(Methylobacterium sp.), 싸이오바실러스속(Thiobacillus sp.) 및 로도박터속(Rhodobacter sp.)으로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 속의 미생물 유래일 수 있다.
구체적으로, 상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움 엑스토쿠엔스(Methylobacterium extorquens), 싸이오바실러스속(Thiobacillus sp.) KNK65MA 및 로도박터 캡슐레이터스(Rhodobacter capsulatus)로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 미생물 유래일 수 있다.
보다 구체적으로 상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움 엑스토쿠엔스(Methylobacterium extorquens) 유래 포름산 탈수소효소 I, 싸이오바실러스속(Thiobacillus sp.) KNK65MA 유래 포름산 탈수소효소 및 로도박터 캡슐레이터스(Rhodobacter capsulatus) 유래 포름산 탈수소효소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 포름산 탈수소효소일 수 있다.
상기 메틸로박테리움 엑스토쿠엔스(Methylobacterium extorquens) 유래 포름산 탈수소효소 I는 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드인 MeFDH I α subunit 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드인 MeFDH I β subunit으로 이루어질 수 있고, 상기 싸이오바실러스속(Thiobacillus sp.) KNK65MA 유래 포름산 탈수소효소는 서열번호 6의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드일 수 있고, 상기 로도박터 캡슐레이터스(Rhodobacter capsulatus) 유래 포름산 탈수소효소는 서열번호 7의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드인 RcFDH α subunit, 서열번호 8의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드인 RcFDH β subunit 및 서열번호 9의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드인 RcFDH γ subunit으로 이루어질 수 있다.
또한, 상기 메틸로박테리움 엑스토쿠엔스(Methylobacterium extorquens) 유래 포름산 탈수소효소 I는 서열번호 17의 염기 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드인 fdh1A 및 서열번호 18의 염기 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드인 fdh1B가 코딩하는 폴리펩티드일 수 있고, 상기 싸이오바실러스속(Thiobacillus sp.) KNK65MA 유래 포름산 탈수소효소는 서열번호 21의 염기 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드가 코딩하는 폴리펩티드일 수 있고, 상기 로도박터 캡슐레이터스(Rhodobacter capsulatus) 유래 포름산 탈수소효소는 서열번호 23의 염기 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드인 fdsA, 서열번호 24의 염기 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드인 fdsB, 서열번호 25의 염기 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드인 fdsG, 서열번호 26의 염기 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드인 fdsC 및 서열번호 27의 염기 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드인 fdsD가 코딩하는 폴리펩티드일 수 있다.
또한, 보다 나은 화학적 안정성, 강화된 약리 특성(반감기, 흡수성, 역가, 효능 등), 변경된 특이성(예를 들어, 광범위한 생물학적 활성 스펙트럼), 감소된 항원성을 획득하기 위하여, 상기 포름산 탈수소효소의 N- 또는 C-말단에 보호기가 결합되어 있을 수 있다. 상기 보호기는 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기 또는 폴리에틸렌글리콜(PEG)일 수 있으나, 상기 포름산 탈수소효소의 개질, 특히 포름산 탈수소효소의 안정성을 증진시킬 수 있는 성분이라면, 제한없이 포함될 수 있다.
아울러, 상기 포름산 탈수소효소는 표적화 서열, 태그 (tag), 표지된 잔기를 위한 특정 목적으로 제조된 아미노산 서열도 추가적으로 포함할 수 있고, 구체적으로 His-tag 말단의 단백질과 결합된 형태일 수 있다.
또한, 일 양상에 있어서, 상기 개미산 제조용 조성물은 전자전달체를 더 포함할 수 있다.
상기 조성물은 전자전달체를 추가로 포함할 경우, 보다 개미산 제조 효율이 증가될 수 있다.
상기 전자전달체는 천연 전자전달체 또는 인공 전자전달체일 수 있다. 또한, 상기 전자전달체는 바이올로젠(viologen)기를 가지는 전자전달체 및 아데닌 디뉴클레오티드(adenine dinucleotide)기를 가지는 전자전달체로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 전자전달체일 수 있고, 예를 들어, 알킬 바이올로젠(alkyl viologen), 벤질 바이올로젠(benzyl viologen), NAD(nicotinamide adenine dinucleotide) 및 FAD(Flavin adenine dinucleotide)로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 전자전달체일 수 있고, 상기 알킬 바이올로젠(alkyl viologen)은 메틸 바이올로젠(methyl viologen), 에틸 바이올로젠(ethyl viologen), 프로필 바이올로젠(propyl viologen) 등을 포함할 수 있다.
구체적으로, 상기 전자전달체는 메틸 바이올로젠(Methyl viologen), 에틸 바이올로젠(Ethyl viologen), 벤질 바이올로젠(Benzyl viologen), NAD(nicotinamide adenine dinucleotide) 및 FAD(Flavin adenine dinucleotide)로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 전자전달체일 수 있고, 보다 구체적으로, 메틸 바이올로젠(methyl viologen) 및 에틸 바이올로젠(ethyl viologen)로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 전자전달체일 수 있다.
또한, 일 양상에 있어서, 상기 조성물 내 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소는 1:1 내지 1:3의 비율로 존재할 수 있다.
구체적으로, 상기 조성물 내 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소는 1:1 내지 1:3, 1:1 내지 1:2.5, 1:1 내지 1:2.25, 1.5:1 내지 1.5:3, 1.5:1 내지 1.5:2.5, 1.5:1 내지 1.5:2.25, 1.75:1 내지 1.75:3, 1.75:1 내지 1.75:2.5 또는 1.75:1 내지 1.75:2.25의 비율로 존재할 수 있으며, 상기 비율은 구체적으로 몰비일 수 있다.
상기 조성물 내 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소의 존재 비율이 1:1 내지 1:3인 경우, 개미산이 최대로 생산될 수 있다.
또한, 일 양상에 있어서, 상기 조성물의 pH는 5.0 내지 8.0, 5.0 내지 7.5, 5.0 내지 7.0, 5.5 내지 8.0, 5.5 내지 7.5, 5.5 내지 7.0, 6.0 내지 8.0, 6.0 내지 7.5 또는 6.0 내지 7.0일 수 있다.
상기 조성물의 pH가 5.0 미만인 경우, 상기 일산화탄소 탈수소효소의 활성이 저하될 수 있고, 상기 조성물의 pH가 8.0 초과인 경우, 상기 포름산 탈수소효소의 활성이 저하되어, 개미산 제조 효율이 저하될 수 있다.
다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자 제거용 조성물을 제공한다.
상기 "일산화탄소 탈수소효소", "포름산 탈수소효소" 등은 전술한 범위 내일 수 있다.
상기 조성물은 일산화탄소 및/또는 이산화탄소와 접촉하여 개미산으로 전환시킴으로써, 일산화탄소 및/또는 이산화탄소를 제거시킬 수 있으며, 제거 효율이 떨어지지 않은 상태로 재사용이 가능하다. 구체적인 일산화탄소 및/또는 이산화탄소의 제거 메커니즘은 전술한 범위 내일 수 있다.
또 다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 폐가스 처리용 조성물을 제공한다.
상기 "일산화탄소 탈수소효소", "포름산 탈수소효소" 등은 전술한 범위 내일 수 있다.
상기 폐가스는 석유화학, 철강산업 등의 산업체, 담배 연소, 가정용 취사기구, 각종 보일러 연소 시 다량 배출되는 폐가스일 수 있고, 구체적으로 일산화탄소 및/또는 이산화탄소를 다량 함유하는 폐가스일 수 있다.
상기 조성물은 폐가스 내 일산화탄소 및/또는 이산화탄소와 접촉하여 개미산으로 전환시킴으로써, 일산화탄소 및/또는 이산화탄소를 제거시켜 폐가스를 처리할 수 있으며, 처리 효율이 떨어지지 않은 상태로 재사용이 가능하다. 구체적인 일산화탄소 및/또는 이산화탄소의 제거 메커니즘은 전술한 범위 내일 수 있다.
또 다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 공기 정화용 조성물을 제공한다.
상기 "일산화탄소 탈수소효소", "포름산 탈수소효소" 등은 전술한 범위 내일 수 있다.
상기 조성물은 공기 중 일산화탄소 및/또는 이산화탄소와 접촉하여 개미산으로 전환시킴으로써, 일산화탄소 및/또는 이산화탄소를 제거시켜 공기를 정화할 수 있으며, 공기 정화 효율이 떨어지지 않은 상태로 재사용이 가능하다. 구체적인 일산화탄소 및/또는 이산화탄소의 제거 메커니즘은 전술한 범위 내일 수 있다.
또 다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 개미산 제조용 장치를 제공한다.
상기 "일산화탄소 탈수소효소", "포름산 탈수소효소", "개미산" 등은 전술한 범위 내일 수 있다.
상기 장치는 일산화탄소 및/또는 이산화탄소와 접촉하여 개미산으로 전환시킬 수 있으며, 제조 효율이 떨어지지 않은 상태로 재사용이 가능하다. 구체적으로, 상기 장치는 일산화탄소 또는 일산화탄소를 포함하는 가스(gas)에서 이산화탄소로 전환시키고, 상기 이산화탄소를 개미산으로 전환시켜 개미산을 제조하는 것일 수 있다.
또한, 상기 장치는 이산화탄소 또는 이산화탄소를 포함하는 가스(gas)에서 상기 이산화탄소를 개미산으로 전환시켜 개미산을 제조하는 것일 수 있다. 구체적인 개미산 제조 메커니즘은 전술한 범위 내일 수 있다.
또 다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자 제거용 장치를 제공한다.
상기 "일산화탄소 탈수소효소", "포름산 탈수소효소" 등은 전술한 범위 내일 수 있다.
상기 장치는 일산화탄소 및/또는 이산화탄소와 접촉하여 개미산으로 전환시킴으로써, 일산화탄소 및/또는 이산화탄소를 제거시킬 수 있으며, 제거 효율이 떨어지지 않은 상태로 재사용이 가능하다. 구체적인 일산화탄소 및/또는 이산화탄소의 제거 메커니즘은 전술한 범위 내일 수 있다.
또 다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 폐가스 처리용 장치를 제공한다.
상기 "일산화탄소 탈수소효소", "포름산 탈수소효소", "폐가스" 등은 전술한 범위 내일 수 있다.
상기 장치는 폐가스 내 일산화탄소 및/또는 이산화탄소와 접촉하여 개미산으로 전환시킴으로써, 일산화탄소 및/또는 이산화탄소를 제거시켜 폐가스를 처리할 수 있으며, 처리 효율이 떨어지지 않은 상태로 재사용이 가능하다. 구체적인 일산화탄소 및/또는 이산화탄소의 제거 메커니즘은 전술한 범위 내일 수 있다.
또 다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 공기 정화용 장치를 제공한다.
상기 "일산화탄소 탈수소효소", "포름산 탈수소효소" 등은 전술한 범위 내일 수 있다.
상기 장치는 공기 중 일산화탄소 및/또는 이산화탄소와 접촉하여 개미산으로 전환시킴으로써, 일산화탄소 및/또는 이산화탄소를 제거시켜 공기를 정화할 수 있으며, 공기 정화 효율이 떨어지지 않은 상태로 재사용이 가능하다. 구체적인 일산화탄소 및/또는 이산화탄소의 제거 메커니즘은 전술한 범위 내일 수 있다.
또 다른 양상은 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 필터를 제공한다.
상기 "일산화탄소 탈수소효소", "포름산 탈수소효소" 등은 전술한 범위 내일 수 있다.
상기 필터는 일산화탄소 및/또는 이산화탄소와 접촉하여 개미산으로 전환시킴으로써, 일산화탄소 및/또는 이산화탄소를 제거시킬 수 있으며, 제거 효율이 떨어지지 않은 상태로 재사용이 가능하다. 구체적인 일산화탄소 및/또는 이산화탄소의 제거 메커니즘은 전술한 범위 내일 수 있다.
상기 필터는 담배 필터, 공기청정기 필터 등 일산화탄소 및/또는 이산화탄소가 발생되는 장소에서 다양한 필터에 적용될 수 있으며, 나아가 유해 가스 처리 기술이 필요한 산업 현장, 공기 내 유해 물질 살균/제거 정화기술 및 시스템, 차량, 열차 등 이동수단 내 실내 공기질 관리를 위한 처리시설 및 관련기술, 환기효율 및 경제적 환기를 위한 기술 및 장치, 공기청정기, 에어컨, 환풍기 등과 같은 실내공기 정화장치 등에 포함될 수 있다.
또 다른 양상은 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자를 포함하는 가스(gas)를 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)에 접촉시키는 단계를 포함하는 개미산의 제조 방법을 제공한다.
상기 "일산화탄소 탈수소효소", "포름산 탈수소효소", "개미산" 등은 전술한 범위 내일 수 있다.
상기 일산화탄소 및/또는 이산화탄소를 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)에 접촉시켜 개미산을 상온, 상압에서 쉽게 효율적으로 제조할 수 있다.
구체적으로, 상기 일산화탄소 탈수소효소가 일산화탄소 및/또는 일산화탄소를 포함하는 가스(gas)에서 일산화탄소를 이산화탄소로 전환시키고, 상기 포름산 탈수소효소가 이산화탄소를 개미산으로 연속적으로 전환시켜 개미산을 제조하는 것일 수 있다.
또한, 상기 포름산 탈수소효소가 이산화탄소 및/또는 이산화탄소를 포함하는 가스에서 이산화탄소를 개미산으로 전환시켜 개미산을 제조하는 것일 수 있다. 구체적인 개미산 제조 메커니즘은 전술한 범위 내일 수 있다.
또한, 상기 일산화탄소 탈수소효소 및/또는 포름산 탈수소효소는 개미산 제조 효율이 떨어지지 않은 상태로 재사용이 가능하다.
또한, 일 양상에 있어서, 상기 접촉시키는 단계는 상기 가스를 일산화탄소 탈수소효소에 접촉시키는 단계; 및
상기 일산화탄소 탈수소효소와 접촉된 가스를 포름산 탈수소효소에 접촉시키는 단계로 이루어진 것일 수 있다.
상기 개미산의 제조 방법은 상기 가스를 일산화탄소 탈수소효소 및 포름산 탈수소효소를 동시에 접촉시킬 수도 있으나, 순차적으로 일산화탄소 탈수소효소에 먼저 접촉시킨 후, 포름산 탈수소효소에 접촉시킬 수 있다.
또한, 일 양상에 있어서, 상기 가스는 연속적으로 공급되는 가스일 수 있다.
상기 가스가 연속적으로 공급되는 경우, 일산화탄소 탈수소효소 및/또는 포름산 탈수소효소는 재사용이 가능하므로 연속적으로 개미산을 생성할 수 있다.
상기 연속적으로 공급되는 가스의 양이 증가되는 경우, 개미산 생성 속도도 증가할 수 있다.
또한, 일 양상에 있어서, 상기 가스는 전자전달체와 동시에 일산화탄소 탈수소효소 및 포름산 탈수소효소에 접촉되는 것일 수 있다.
상기 "전자전달체"는 전술한 범위 내일 수 있으며, 상기 전자전달체를 추가적으로 접촉시키는 경우, 보다 개미산 제조 효율이 증가될 수 있다.
또 다른 양상은 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자를 포함하는 가스(gas)를 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)에 접촉시키는 단계를 포함하는 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자를 제거하는 방법을 제공한다.
상기 "가스", 일산화탄소 탈수소효소", "포름산 탈수소효소" 등은 전술한 범위 내일 수 있다.
상기 가스를 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소에 접촉시킴으로써 일산화탄소 및/또는 이산화탄소를 제거시킬 수 있으며, 상기 효소들은 제거 효율이 떨어지지 않은 상태로 재사용이 가능하다. 구체적인 일산화탄소 및/또는 이산화탄소의 제거 메커니즘은 전술한 범위 내일 수 있다.
또 다른 양상은 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자를 포함하는 가스(gas)를 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)에 접촉시키는 단계를 포함하는 폐가스 처리 방법을 제공한다.
상기 "가스", "일산화탄소 탈수소효소", "포름산 탈수소효소", "폐가스" 등은 전술한 범위 내일 수 있다.
상기 가스를 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소에 접촉시킴으로써 일산화탄소 및/또는 이산화탄소를 제거시켜 폐가스를 처리할 수 있으며, 상기 효소들은 제거 효율이 떨어지지 않은 상태로 재사용이 가능하다. 구체적인 일산화탄소 및/또는 이산화탄소의 제거 메커니즘은 전술한 범위 내일 수 있다.
또 다른 양상은 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자를 포함하는 가스(gas)를 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)에 접촉시키는 단계를 포함하는 공기 정화 방법을 제공한다.
상기 "가스", 일산화탄소 탈수소효소", "포름산 탈수소효소" 등은 전술한 범위 내일 수 있다.
상기 가스를 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소에 접촉시킴으로써 일산화탄소 및/또는 이산화탄소를 제거시켜 공기를 정화할 수 있으며, 상기 효소들은 제거 효율이 떨어지지 않은 상태로 재사용이 가능하다. 구체적인 일산화탄소 및/또는 이산화탄소의 제거 메커니즘은 전술한 범위 내일 수 있다.
일 양상에 따른 개미산의 제조 방법에 따르면, 일산화탄소 탈수소효소 및 포름산 탈수소효소를 이용하여 상온 및 상압에서 폐가스 중 독성이 있는 일산화탄소 및/또는 이산화탄소를 부산물 없이 개미산으로 전환시킬 수 있으며, 상기 효소들은 효율이 떨어지지 않은 상태로 재사용이 가능하다. 일 양상에 따른 개미산의 제조 방법은 석유화학, 철강산업 등의 산업체, 담배 연소, 가정용 취사기구, 각종 보일러 연소 시 다량 배출되는 일산화탄소를 담배필터, 공기정화기, 가정용 취사기구 흡입필터, 가스보일러 등을 통해 제거가 가능한 바, 다양한 활용이 가능하다.
도 1은 CO 수화반응을 촉매하는 효소와 개미산 생산 개념도를 나타낸다(EV는 ethyl viologen으로 일종의 electron mediator로 사용되는 화합물임).
도 2는 전자전달체의 종류에 따른 자유에너지값을 도식화한 도이다(Mdox: 산화된 형태의 전자 매개체, 반응 초기 상태의 자유 에너지를 0으로 가정하였음).
도 3은 반응 pH에 따른 ChCODH II(검은색)와 MeFDH I(빨간색)의 상대적인 활성 변화를 측정한 도이다.
도 4는 100 mL 기포 탑 반응기에 지속적인 가스 유입을 하여 실험한 CO 수화 효소 반응의 개미산 농도의 시간 별 변화를 나타낸 도이다(50% CO, 50% CO2 가스를 사용함).
도 5는 CO 50%를 포함하는 조제 가스(검정색)와 실제 제철산업 배출 폐가스(붉은색)를 이용하여 CO 수화반응을 수행할 때 생성되는 개미산의 시간에 따른 변화를 나타낸 도이다.
도 6은 CO 수화 효소 반응의 반복 사용 가능성을 확인한 도이다(검은색: 50% CO, 50% CO2 가스, 빨간색: 실제 제철산업 발생 폐가스 LDG).
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
참조예
실시예에서는 하기 반응식 3과 같은 새로운 일산화탄소 수화 반응을 제시한다:
[반응식 3]
CO + H2O -> HCOOH.
상기 반응식 3을 보면 일산화탄소 분자에 물 분자가 결합되어 개미산이 생성되며, 어떠한 이산화탄소 생성없이 일산화탄소에 원래 포함되어 있는 탄소원자가 개미산의 탄소 원자로 완전하게 전환되는 것을 알 수 있다. 이러한 반응을 진행하기 위하여 두가지 효소가 하단의 반응식 4 및 5와 같이 연계되어 반응을 진행한다:
[반응식 4]
CO + H2O + EM(산화된 상태) -> CO2 + 2H+ + EM(환원된 상태)
[반응식 5]
CO2 + 2H+ + EM(환원된 상태) -> HCOOH + EM(산화된 상태)
EM: electron mediator (전자전달체).
상기 반응식 4의 반응은 CO를 산화하는 효소인 CO dehydrogenase가 촉매하며, 상기 반응식 5의 반응은 formate dehydrogenase가 촉매한다. 이를 개념도로 나타내면 도 1과 같다.
도 1에서 확인할 수 있듯이 상기 반응식 3의 반응에서 개미산 생성의 자유에너지 차이는 음의 값인 -8.7 kJ/mol이기에 외부 에너지 투입없이 반응을 진행할 수 있다는 것을 의미한다. 원활한 반응 수행을 위해서는 반응을 촉매하는 효소(CO dehydrogenase, formate dehydrogenase) 외에 이들 전자전달체체가 이들 두 효소 간에 전자를 전달할 수 있어야 한다. 전자를 전달하기 위해서는 전자전달체가 효소와 결합 반응을 할 수 있어야 하며 동시에 CO를 산화하면서 생긴 환원력을 CO2를 환원하는데 충분한 상태로 보전하여 이용할 수 있어야 한다.
실시예
실시예 1. CODH(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 FDH(formate dehydrogenase)의 제조
(1) CODH와 FDH의 클로닝
ChCODH II(서열번호 1), ChCODH IV(서열번호 2), ToCODH(서열번호 3)(각각 Carboxydothermus hydrogenoformans에서 유래된 II, IV 유형의 CODH 및 Thermococcus onnurineus에서 유래된 CODH), MeFDH I(MeFDH I α subunit: 서열번호 4; MeFDH I β subunit: 서열번호 5), TsFDH(서열번호 6) 및 RcFDH(RcFDH α subunit: 서열번호 7; RcFDH β subunit: 서열번호 8; RcFDH γ subunit: 서열번호 9)(각각 Methylobacterium extorquens에서 유래된 I 유형의 FDH, Thiobacillus sp. KNK65MA에서 유래된 FDH 및 Rhodobacter capsulatus에서 유래된 FDH)의 발현과 정제 과정은 하기와 같았다.
CODH들(ChCODH II, ChCODH IV 및 ToCODH)의 경우, 우선 pET-28a(+) 벡터(vector)(서열번호 10)에 실험하고자 하는 CODH 유전자들(ChCODH II 유전자: 서열번호 11; ChCODH IV 유전자: 서열번호 12; ToCODH 유전자: 서열번호 13)을 히스택(His-tag)을 함유하는 벡터와 함께 각각 클로닝(cloning)하였다. 이 플라스미드(plasmid)들(ChCODH II + His-tag 포함 플라스미드: 서열번호 14; ChCODH IV + His-tag 포함 플라스미드: 서열번호 15; ToCODH + His-tag 포함 플라스미드: 서열번호 16)을 각각 pRKISC와 함께 Escherichia coli BL21(DE3)에 넣어 형질전환(transformation)시킨 후 발현시켰다.
MeFDH I의 경우, FDH 유전자(fdh1A: 서열번호 17; fdh1B: 서열번호 18)를 His-tag과 함께 pCM110 vector(서열번호 19)에 cloning하였다. 그리고 이 plasmid(MeFDH I 유전자 + His-tag 포함 플라스미드: 서열번호 20)를 FDH 유전자가 삭제된 Methylobacterium extorquens AM1에 넣어 형질전환(transformation)시켰다.
TsFDH는 FDH 유전자(서열번호 21)를 His-tag과 함께 pET-23b(+) vector에 cloning하여 만든 plasmid(TsFDH 유전자 + His-tag 포함 플라스미드: 서열번호 22)를 E.coli BL21(DE3)에 형질전환(transformation)시킨 후 발현시켰다.
RcFDH는 FDH 유전자(fdsA: 서열번호 23; fdsB: 서열번호 24; fdsG: 서열번호 25; fdsC: 서열번호 26; fdsD: 서열번호 27)를 His-tag과 함께 pTrcHis vector(서열번호 28)에 cloning하여 만든 plasmid(RcFDH 유전자 + His-tag 포함 플라스미드: 서열번호 29)를 E.coli MC1061에 형질전환(transformation)시킨 후 발현시켰다.
(2) CODH의 발현
ChCODH II, ChCODH IV와 ToCODH을 모두 동일한 방법으로 발현시켰다. 먼저 50 μg/mL의 카나마이신(kanamycin)과 10 μg/mL의 테트라사이클린(tetracycline)이 포함된 LB 배지에서 준비된 균주를 37℃, 200 rpm의 진탕 배양기에서 16 시간 동안 배양하였다. 이 후 0.02 mM NiCl2, 0.1 mM FeSO4, 2 mM 과 이전과 동일한 농도의 항생제가 들어있는 TB 배지(12 g/L trypton, 24 g/L Yeast extract, 10 g/L NaCl, 11 g/L glycerol, 12.3 g/L K2hPO4, 2.2 g/L KH2PO4) 400 mL에 배양된 균주 5 mL를 넣었다. 이 후 1 L 삼각 플라스크에서 OD600 0.4 ~ 0.6에 도달할 때까지 37℃, 200 rpm에서 배양하였다. 500 mL serum bottle로 배양된 균을 옮기고 1 시간 동안 질소로 퍼징하여 용존 기체를 교환하였다. 기체 교환 과정에서 30분이 경과했을 때, 0.5 mM NiCl2, 1 mM FeSO4, 50 mM KNO3, 0.2 mM의 IPTG(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside)를 넣어 단백질을 발현시켰다. 기체 교환 후 30℃, 200 rpm에서 24 시간 동안 배양하였고, 배양된 세포들을 harvest하여 보관하였다. 10 L 반응기의 구동에 사용할 분량은 이 방법을 참조하여 100 L 배양기를 통해 배양되었다.
(3) FDH의 발현
1) MeFDH I의 발현
1.62 g/L NH4Cl, 0.2 g/L MgSO4, 2.21 g/L K2HPO4, 1.25 g/L NaH2PO42H2O, 15 mg/L Na2EDTA2H2O, 4.5 mg/L ZnSO47H2O, 0.3 mg/L CoCl26H2O, 1 mg/L MnCl24H2O, 1 mg/L H3BO3, 2.5 mg/L CaCl2, 0.4 mg/L Na2MoO42H2O, 3 mg/L FeSO47H2O, 0.3 mg/L CuSO45H2O, 30 μM Na2WO4, 16 g/L succinate, 50 μg/mL 리파마이신(rifamycin)과 10 μg/mL tetracycline의 조성을 가진 배지를 준비하였다. 상기 배지에서 준비한 균주를 72 시간 동안 30℃, 200 rpm의 진탕 배양기에서 배양하였다. Rifamycin을 제외한 동일 배지 200 mL을 1 L 삼각 플라스크에 넣고 2 mL의 배양된 균주를 넣고 같은 조건에서 OD600 0.4 ~ 0.6에 도달할 때까지 배양하였다. 0.5 wt%의 메탄올을 넣어 단백질 발현을 유도하였고, 이후 24 시간 동안 배양하고 harvest하여 보관하였다. 10 L 반응기의 구동에 사용할 분량은 이 방법을 참조하여 100 L 배양기를 통해 배양되었다.
2) TsFDH의 발현
사전 배양은 50 μg/mL 의 암피실린(ampicillin)이 포함된 3 mL의 LB 배지에서 37℃, 200 rpm의 진탕 배양기로 배양되었다. 사전 배양된 cell을 1 mM IPTG가 추가된 배지 300 mL에 넣고 37℃, 200 rpm의 진탕 배양기에서 24 시간 동안 발현시켰다.
3) RcFDH의 발현
1 mM molybdate, 20 μM IPTG, 150 μg/mL ampicillin의 첨가물이 있는 LB 배지에서 12 시간 동안 37℃로 preculture를 하였다. 1:500 비율로 사전 배양한 균주를 같은 조성의 배지에 넣어 본 배양을 수행하였다. 본 배양 시 30℃, 130 rpm으로 진탕 배양기에서 24 시간 동안 배양하였다.
(4) CODH의 정제
50 mM KH2PO4, 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, 2 mM DTE(dithioerythritol), 2 μM resazurin, pH 8.0의 lysis buffer, 50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 20 mM imidazole, 2 mM DTE, 2 μM resazurin, pH 8.0의 wash buffer, 50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 250 mM imidazole, 2 mM DTE, 2 μM resazurin, pH 8.0의 elution buffer를 준비하였다. 혐기성 챔버에서 harvest된 cell pellet 1 g 당 10 mL의 lysis buffer를 섞고 피펫으로 풀어주었다. Cell pellet 1 g 당 30 분씩 초음파로 세포를 용해시키고, 11000 rpm, 4℃에서 20 분 동안 원심 분리하여 supernatant만 취하였다. Cell pellet 1 g 기준으로 1 mL의 Ni-NTA agarose와 supernatant를 섞고 피펫팅하여 발현된 단백질을 15 분 동안 binding시켰다. Binding된 용액을 컬럼에 붓고 10 cv의 wash buffer를 부어 washing하였다. 지속적 가스 유입을 하는 실험에는 이 중 일부만 elution buffer로 elution하여 농도와 활성을 측정하고 나머지 효소는 binding 된 채로 사용하였다. 이 외 실험은 elution buffer로 elution하여 사용하였으며, 10 L 반응기를 구동할 때는 예외적으로 호모게나이저를 이용하여 세포를 용해시켰다.
(5) FDH의 정제
1) MeFDH I의 정제
50 mM MOPS, 300 mM NaCl, 20 mM imidazole, pH 7.0 인 buffer A와 50 mM MOPS, 300 mM NaCl, 300 mM imidazole, pH 7.0 인 buffer B를 준비하였다. 혐기성 챔버에서 harvest된 cell pellet 1 g 당 20 mL의 buffer A를 섞고 피펫으로 풀어주었다. 이 후, OD600을 확인해가며 값이 초기의 30% 이하가 될 때까지 초음파로 세포를 용해시키고, 11000 rpm, 4℃에서 20 분 동안 원심 분리하여 supernatant만 취하였다. Cell pellet 1 g 기준으로 1 mL의 Ni-NTA agarose와 supernatant를 섞고 피펫팅하여 발현된 단백질을 15 분 동안 binding시켰다. Binding된 용액을 컬럼에 붓고 10 cv의 buffer A를 부어 washing하였다. 지속적 가스 유입을 하는 실험에는 이 중 일부만 buffer B로 elution하여 농도와 활성을 측정하고 나머지 효소는 binding 된 채로 사용하였다. 이 외 실험은 buffer B로 elution하여 사용하였고, 10 L 반응기를 구동할 때는 예외적으로 호모게나이저를 이용하여 세포를 용해시켰다.
2) TsFDH의 정제
50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, pH 7.0의 lysis buffer, 40 mM imidazole, 50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, pH 7.0의 wash buffer, 250 mM imidazole, 50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, pH 7.0의 elution buffer를 준비하였다. 혐기성 챔버에서 harvest된 cell pellet 1 g 당 20 mL의 lysis buffer를 섞고 피펫으로 풀어주었다. 이 후, OD600을 확인해가며 값이 초기의 30% 이하가 될 때까지 초음파로 세포를 용해시켰고, 11000 rpm, 4℃에서 20 분 동안 원심 분리하여 supernatant만 취하였다. Cell pellet 1 g 기준으로 1 mL의 Ni-NTA agarose와 supernatant를 섞고 피펫팅하여 발현된 단백질을 15 분 동안 binding시켰다. Binding 된 용액을 컬럼에 붇고 10 cv의 wash buffer를 부어 washing하였다. Elution buffer로 elution하여 이 후 실험에 사용하였으며, 10 L 반응기를 구동할 때는 예외적으로 호모게나이저를 이용하여 세포를 용해시켰다.
3) RcFDH의 정제
50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, pH 8.0의 lysis buffer, 20 mM imidazole, 50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, pH 8.0의 wash buffer, 250 mM imidazole, 50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, pH 8.0의 elution buffer를 준비하였다. 혐기성 챔버에서 harvest된 cell pellet 1 g 당 20 mL의 lysis buffer를 섞고 피펫으로 풀어주었다. 5분 동안 초음파로 세포를 용해시켰고, 11000 rpm, 4℃에서 20 분 동안 원심 분리하여 supernatant만 취하였다. Cell pellet 1 g 기준으로 1 mL의 Ni-NTA agarose와 supernatant를 섞고 피펫팅하여 발현된 단백질을 15 분 동안 binding시켰다. Binding된 용액을 컬럼에 붇고 10 cv의 wash buffer를 부어 washing하였다. Elution buffer로 elution하여 이 후 실험에 사용하였다.
(6) CODH와 FDH의 농도 측정
CODH와 TsFDH는 Bradford assay를 이용해 농도를 측정하였다. MeFDH I은 흡광도를 8.94 L/gm-cm으로 하여(340 nm 기준), RcFDH는 흡광도를 340 nm에서 169500 L/mol-cm을 기준으로 Nanodrop에서 측정하였다.
(7) CODH의 활성 측정
혐기성 챔버에서 50 mM HEPES, 2 mM DTE, pH 8.0의 buffer를 준비하였다. 이 buffer를 serum bottle에 넣고 1 시간 동안 100 % CO 가스에 퍼징시켰다. 혐기성 챔버에서 위의 buffer에 20 mM의 EV를 넣고 0.1 μg의 CODH를 주입한 후 30℃를 유지하며 578 nm에서 흡광도의 변화를 측정하여 활성을 측정하였다.
(8) FDH의 활성 측정
1) MeFDH I의 활성 측정
50 mM MOPS, 30 mM sodium formate, 0.5 mM NAD+, pH 7.0의 buffer 2 mL에 20 μg의 MeFDH I을 넣고 340 nm에서 30℃를 유지하며 흡광도의 변화를 측정하여 개미산 산화 반응의 활성을 측정하였다.
2) TsDFH의 활성 측정
100 mM sodium phosphate, 200 mM sodium formate, 2 mM NAD+, pH 6.5의 buffer 2 mL에 20 μg의 TsFDH를 넣고 25℃의 조건에서 340 nm의 흡광도 변화를 측정하여 활성을 측정하였다.
3) RcFDH의 활성 측정
100 mM Tris-HCl, 6 mM sodium formate, 2 mM NAD+, pH 9.0 buffer에서 100 nM의 RcFDH를 주입하고 30℃의 조건에서 340 nm의 흡광도 변화를 측정하여 활성을 측정하였다.
실시예 2. CO 수화 효소 반응의 구성
CO 수화 효소 반응은 기본적으로 200 mM Bis-Tris propane, 2 mM DTE, 2 μM resazurin, pH 6.5 buffer를 바탕으로 한 조건에서 이루어졌으며 실험에 따라 종류와 양이 달라졌지만 모두 CODH, FDH와 전자 매개체가 사용되었다. 지속적으로 가스를 유입하는 경우가 아니면 100% CO 가스를 이용하여 반응을 진행하였다. CODH, FDH와 전자 매개체의 종류를 선별하는 실험에서는 CODH 75 nM, FDH 150 nM, 전자 매개체 5 mM을 사용하여 serum bottle에서 실험하였다. pH에 따른 활성 측정은 pH 버퍼링 범위가 넓은 200 mM Bis-Tris propane buffer로 pH를 바꿔가며 실험하였다. MeFDH I의 경우, CO2 환원 반응을 측정하였는데, 아연으로 미리 환원시킨 EV와 50 mM의 sodium bicarbonate를 넣어 CO2를 만들어서 실험을 진행하였다. 100 mL 기포 탑 반응기(bubble column reactor)를 사용한 실험에서는 CODH 12000 U, FDH 400 U, 5 mM EV를 사용했고 이후 실험에서는 1 mM의 EV를 사용하였다. LDG가 사용된 실험에서, EV 적정 농도를 구하는 실험 이후로는 0.1 mM에서 진행하였다. 재사용성 관련 실험에서는 CODH 150 U, FDH 5 U을 10 mL serum bottle에 넣어 진행하였고, 10 L 반응기에서는 CODH 500 kU, FDH 90 kU가 사용되었다.
실시예 3. CODH와 FDH 종류에 따른 CO 수화 반응 결과
상기 실시예 2에서 구성된 CO 수화반응계를 이용하였으며, 사용된 CODH, FDH 조합을 달리하여 CO 수화반응을 진행하였다(반응 2시간 후 측정된 개미산 농도 기준, 5 mM ethyl viologen(EV)을 전자전달체로 이용함).
FDH 종류 CODH 종류 개미산 생산농도 (mM)
MeFDH I ChCODH II 40
MeFDH I ChCODH IV 2
MeFDH I ToCODH 7
RcFDH ChCODH II 0
RcFDH ChCODH IV 0
RcFDH ToCODH 0
TsFDH ChCODH II 0
TsFDH ChCODH IV 0
TsFDH ToCODH 0
그 결과, 상기 표 1에서 볼 수 있듯이 오직 MeFDH I을 FDH로 이용한 경우만 개미산 생성 결과를 보였으며, 다른 FDH는 전혀 개미산 생성이 측정되지 않았다. 이를 미루어 볼 때 모든 FDH가 CO 수화반응을 촉매로 작용할 수는 없으며, 특정 FDH만이 이러한 작용을 할 수 있음을 알 수 있었다.
다만 CODH는 시험된 모든 CODH에서 개미산이 생성되는 것을 확인할 수 있으나, 본 실시예에서는 ChCODH II가 가장 우수한 개미산 생성 능력을 보였다. 따라서 이 후 실시예에서는 MeFDH1과 ChCODH II를 기본 효소로 사용하여 실험을 진행하였다.
실시예 4: 전자전달체 종류에 따른 개미산 생산 비교
실시예 3에서 실행한 조건에서 효소를 ChCODH-II와 MeFDH I을 이용하고 다양한 전자전달체를 이용하여 실험을 실시하였으며 그 결과를 하기 표 2에 표시하였다(반응 2시간 후 개미산 농도 측정).
전자전달체 종류 개미산 생산 농도 (mM)
Methyl viologen (MV) 38
Ethyl viologen (EV) 40
Benzyl viologen (BV) 0
nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) 0
Flavin adenine dinucleotide (FAD) 0
그 결과, 상기 표 2에서 볼 수 있듯이 전자전달체의 종류에 따라서도 CO 수화반응을 매개하는 성능차이가 매우 큰 것을 볼 수 있었다. 이러한 차이는 도 2에서 나타난 자유에너지 변화를 살펴보면 설명이 가능하였다.
도 2에서 볼 수 있듯이 BV, NAD의 경우에는 CO 산화반응에는 매우 유리한 열역학적 상태를 보이나 CO2가 환원되어 개미산이 되는 반응은 도리어 자유에너지가 증가되기에 열역학적으로 불리하게 되는 반면, EV의 경우는 CO 산화와 CO2 환원 모두 지속적으로 자유에너지가 감소하게 되기에 열역학적으로 개미산 생산이 자발적으로 유리하게 된다고 해석할 수 있었다.
실시예 5. ChCODH-II 와 MeFDH-I 의 최적 활성 조건 분석
CO 수화 반응이 하나의 조건하에서 이루어져야 하기에 두가지 효소의 활성이 반응 조건에 받는 영향을 고려하여 초기 효소의 투입 활성을 결정하는 것이 필요하였다. 그렇지 않으면 효소 간의 활성 불균형으로 원활한 개미산 생성이 어려울 수 있었다. 이를 해결하기 위하여 도 3에서와 같이 수소이온농도(pH)에 변화에 따른 활성을 측정하여 표기하였다.
그 결과, 도 3에서 볼 수 있듯이 알칼리 조건하에서는 ChCODH II(검은색)의 활성이 올라가나 MeFDH I(빨간색)의 활성은 급격히 감소함을 확인하였다. CO2의 경우 수중에 용해될 때 pH 6.5 이상에서는 CO2 상태로 존재하지 못하고 중탄산이온이나 탄산 이온의 형태로 존재하며, 이러한 이온화된 형태의 이산화탄소 분자는 MeFDH1에 의하여 개미산으로 전환이 어려웠다. 따라서 반응 pH는 6.5 이하로 유지되어야 하는 데, 이 때 ChCODH-II의 활성의 급격한 감소가 있기 때문에 이를 고려하여 CO 수화반응을 pH 6.5 이하의 환경 하에서 실행할 경우 초기 ChCODH-II의 투입 활성을 크게 하여 진행하여야 원활한 개미산 생산을 기대할 수 있음을 알 수 있었다.
실시예 6. 100 mL 기포 탑 반응기에서 연속적으로 CO 함유 기체를 주입할 때 생성되는 개미산의 시간 별 농도 증가
지속적인 혼합 가스(50% CO, 50% CO2 가스 사용) 유입과 pH 조정을 하며(pH 6.5로 설정, 2 N NaOH로 적정함) 100 mL 기포 탑 반응기를 운용하였다.
그 결과, 최종적으로 1 M이 넘는 개미산이 ChCODH II와 MeFDH I에 의해 촉진되는 CO 수화 효소 반응으로 생산되었다(도 4).
실시예 7. 투입되는 CO 포함 기체 유량 증가에 따른 CO 수화반응기에서의 개미산 생산성 변화 시험
실시예 6의 조건하에서 투입되는 기체의 유량을 증가시켜 가면서 개미산 생산성을 측정한 결과를 하기 표 3에 나타내었다(반응기 부피 100 mL 이용). 투입되는 기체에 포함된 일산화탄소는 수중에 용해된 후 CO 수화 반응에 관계되는 효소들에 의하여 개미산으로 전환되었다.
표 3에서 볼 수 있듯이 기체의 유량을 증가시키면, 기체에서 용액으로 용해되어 전달되는 CO 물질전달속도가 커져서 이를 이용하여 개미산이 생성되는 속도 역시 커짐을 알 수 있다.
기체 투입 유량 (mL/min) 개미산 생성 속도 (mM/hr)
200 10
500 43
1,000 78
실시예 8. 제철산업 실제 배출 폐가스 이용 개미산 전환 시험
실시예 5와 같은 실험을 진행할 때 기존 순수 CO 포함 가스 대신에 실제 제철산업에서 배출되는 폐가스를 이용하여 CO 수화반응을 수행하였다. 이를 위하여 사용된 실제 제철산업 배출 폐가스 (LDG)의 가스 조성 성분을 분석하여 하기 표 4에 나타내었다. 하기 표 4를 보면 주 함유 조성 성분은 CO, CO2임을 알 수 있으며 기타 알기 어려운 소량의 다양한 화합물이 포함되어 있음을 알 수 있었다.
포함 물질 함량 (%)
CO 53.17
CO2 18.51
H2 1.43
O2 0.11
N2 26.77
기타 0.01
실시예 5와 같이 상기 표 4의 조성을 가지는 실제 제철산업 폐가스를 이용하여 개미산 생성을 실험한 결과 도 5와 같았다. 도 5를 살피면 실제 폐가스의 경우 약간의 개미산 생성 속도가 느리나 거의 순수 조제 가스의 경우와 유사하게 개미산이 생성되는 것을 확인할 수 있었다. 도 5의 실험 결과를 통하여 폐가스에 포함된 미지의 성분들에 의하여 CO 수화 반응에 관계하는 효소들의 활성이 크게 저하되지 않고 원활하게 유사한 수준으로 개미산이 생성되는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 9. 사용된 효소의 반복 사용을 통하여 CO 수화 반응 효소의 재사용성 확인
실시예 7에서와 같은 조건하에서 반복적으로 효소를 사용할 수 있는 지를 확인하였다.
그 결과, 도 6에서 나타낸 바와 같이 효소를 반복하여 실제 제철산업 발생 가스에 적용한 경우에도 효소의 활성 저하가 거의 관찰되지 않고 개미산이 생성되는 것을 확인하였다. 이러한 결과는 본 발명에서 제안한 효소들이 매우 안정하여 상당히 상업적 적용성이 높은 상태로 전 처리없이 제철산업 발생 폐가스를 개미산으로 전환할 수 있음을 나타낸다.
<110> UNIST(ULSAN NATIONAL INSTITUTE OF SCIENCE AND TECHNOLOGY) <120> PREPARING METHOD OF FORMIC ACID USING CARBON MONOXIDE DEHYDROGENASE AND FORMATE DEHYDROGENASE <130> PN136959KR <160> 29 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 636 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> Carbon monoxide dehydrogenase II derived from Carboxydothermus hydrogenoformans <400> 1 Met Ala Lys Gln Asn Leu Lys Ser Thr Asp Arg Ala Val Gln Gln Met 1 5 10 15 Leu Asp Lys Ala Lys Arg Glu Gly Ile Gln Thr Val Trp Asp Arg Tyr 20 25 30 Glu Ala Met Lys Pro Gln Cys Gly Phe Gly Glu Thr Gly Leu Cys Cys 35 40 45 Arg His Cys Leu Gln Gly Pro Cys Arg Ile Asn Pro Phe Gly Asp Glu 50 55 60 Pro Lys Val Gly Ile Cys Gly Ala Thr Ala Glu Val Ile Val Ala Arg 65 70 75 80 Gly Leu Asp Arg Ser Ile Ala Ala Gly Ala Ala Gly His Ser Gly His 85 90 95 Ala Lys His Leu Ala His Thr Leu Lys Lys Ala Val Gln Gly Lys Ala 100 105 110 Ala Ser Tyr Met Ile Lys Asp Arg Thr Lys Leu His Ser Ile Ala Lys 115 120 125 Arg Leu Gly Ile Pro Thr Glu Gly Gln Lys Asp Glu Asp Ile Ala Leu 130 135 140 Glu Val Ala Lys Ala Ala Leu Ala Asp Phe His Glu Lys Asp Thr Pro 145 150 155 160 Val Leu Trp Val Thr Thr Val Leu Pro Pro Ser Arg Val Lys Val Leu 165 170 175 Ser Ala His Gly Leu Ile Pro Ala Gly Ile Asp His Glu Ile Ala Glu 180 185 190 Ile Met His Arg Thr Ser Met Gly Cys Asp Ala Asp Ala Gln Asn Leu 195 200 205 Leu Leu Gly Gly Leu Arg Cys Ser Leu Ala Asp Leu Ala Gly Cys Tyr 210 215 220 Met Gly Thr Asp Leu Ala Asp Ile Leu Phe Gly Thr Pro Ala Pro Val 225 230 235 240 Val Thr Glu Ser Asn Leu Gly Val Leu Lys Ala Asp Ala Val Asn Val 245 250 255 Ala Val His Gly His Asn Pro Val Leu Ser Asp Ile Ile Val Ser Val 260 265 270 Ser Lys Glu Met Glu Asn Glu Ala Arg Ala Ala Gly Ala Thr Gly Ile 275 280 285 Asn Val Val Gly Ile Cys Cys Thr Gly Asn Glu Val Leu Met Arg His 290 295 300 Gly Ile Pro Ala Cys Thr His Ser Val Ser Gln Glu Met Ala Met Ile 305 310 315 320 Thr Gly Ala Leu Asp Ala Met Ile Leu Asp Tyr Gln Cys Ile Gln Pro 325 330 335 Ser Val Ala Thr Ile Ala Glu Cys Thr Gly Thr Thr Val Ile Thr Thr 340 345 350 Met Glu Met Ser Lys Ile Thr Gly Ala Thr His Val Asn Phe Ala Glu 355 360 365 Glu Ala Ala Val Glu Asn Ala Lys Gln Ile Leu Arg Leu Ala Ile Asp 370 375 380 Thr Phe Lys Arg Arg Lys Gly Lys Pro Val Glu Ile Pro Asn Ile Lys 385 390 395 400 Thr Lys Val Val Ala Gly Phe Ser Thr Glu Ala Ile Ile Asn Ala Leu 405 410 415 Ser Lys Leu Asn Ala Asn Asp Pro Leu Lys Pro Leu Ile Asp Asn Val 420 425 430 Val Asn Gly Asn Ile Arg Gly Val Cys Leu Phe Ala Gly Cys Asn Asn 435 440 445 Val Lys Val Pro Gln Asp Gln Asn Phe Thr Thr Ile Ala Arg Lys Leu 450 455 460 Leu Lys Gln Asn Val Leu Val Val Ala Thr Gly Cys Gly Ala Gly Ala 465 470 475 480 Leu Met Arg His Gly Phe Met Asp Pro Ala Asn Val Asp Glu Leu Cys 485 490 495 Gly Asp Gly Leu Lys Ala Val Leu Thr Ala Ile Gly Glu Ala Asn Gly 500 505 510 Leu Gly Gly Pro Leu Pro Pro Val Leu His Met Gly Ser Cys Val Asp 515 520 525 Asn Ser Arg Ala Val Ala Leu Val Ala Ala Leu Ala Asn Arg Leu Gly 530 535 540 Val Asp Leu Asp Arg Leu Pro Val Val Ala Ser Ala Ala Glu Ala Met 545 550 555 560 His Glu Lys Ala Val Ala Ile Gly Thr Trp Ala Val Thr Ile Gly Leu 565 570 575 Pro Thr His Ile Gly Val Leu Pro Pro Ile Thr Gly Ser Leu Pro Val 580 585 590 Thr Gln Ile Leu Thr Ser Ser Val Lys Asp Ile Thr Gly Gly Tyr Phe 595 600 605 Ile Val Glu Leu Asp Pro Glu Thr Ala Ala Asp Lys Leu Leu Ala Ala 610 615 620 Ile Asn Glu Arg Arg Ala Gly Leu Gly Leu Pro Trp 625 630 635 <210> 2 <211> 633 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> Carbon monoxide dehydrogenase IV derived from Carboxydothermus hydrogenoformans <400> 2 Met Asp Lys Ser Lys Leu Ser Val Asp Pro Val Ile Pro Asn Leu Tyr 1 5 10 15 Arg Lys Ala Arg Glu Glu Gly Ile Ser Thr Val Phe Asp Arg Tyr Glu 20 25 30 Ala Gln Gln Pro Gln Cys Gly Phe Gly Leu Thr Gly Leu Cys Cys Arg 35 40 45 His Cys Val Gln Gly Pro Cys Arg Ile Asp Pro Phe Gly Glu Gly Pro 50 55 60 Gln Ala Gly Ile Cys Gly Ala Thr Ala Glu Val Ile Thr Ala Arg Asn 65 70 75 80 Leu Leu Arg Gln Val Thr Ala Gly Ala Ala Ala His Val Asp His Ala 85 90 95 Tyr Asp Val Leu Glu Val Leu 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ctgcacctga ataccagcat 1680 gaaaaggctt tgagcatcgg aacctgggcg gtagcgatgg gtattatgac ccacttggga 1740 gttgttccac ctgtggtcgg aagttcaaaa gttacccgta ttcttaccca agatgccgag 1800 gctttaatag gcggcaaatt ttatgtggaa acggacccat ataaagcagc agcgggcatc 1860 attgaacata ttaaggctaa acgggctcta ctgaatttat aa 1902 <210> 13 <211> 1890 <212> DNA <213> Thermococcus sp. <400> 13 atggccggaa agaaggttcc ctcaaagcaa gtctccataa ctccaggtgt tggaaagctt 60 attgagaaag ccgaggagga tggggtcaag actgcctggc acagattttt ggagcagcag 120 cctcagtgtg gattcggtct cttaggtgtc tgctgtaaga actgtacaat gggaccatgt 180 agaatcgatc cgtttggggt tggcccaact aagggagttt gtggtgcgga tgcagataca 240 atagtagcaa ggaacattgt aagaatgata gcggctggta ctgccggtca cagcgatcac 300 tcaagagatg tagtccatgt attcaagggc attgctgaag gaaagttcaa ggactataaa 360 ctaacagatg ttgaaaagct caaagagctg gctaagattc tgggtgtcga aacagagggc 420 aagagcgaaa atgaaattgc attggaagtc gcccacattc ttgagatgga gttcggaaaa 480 caggatgagg agccagtaag attacttgca gcaacagcac caaagaagag gattaaggtc 540 tgggagaagc taggagtctt accaagagcc atcgacaggg agatatgtct cagtatgcac 600 agaacccaca taggctgtga tgcagaccct gcaagccttc tactgcatgg tgtgaggact 660 gccctggccg acggctggtg cggctcaatg atggccactt atctgagcga cattctcttt 720 ggaacaccaa agccgataaa gtcgctggcg aacctgggag tcttgaagga agacatggtc 780 aacataatcg ttcacggcca caacccgatt ctctccatga aaatagcaga gattgcccag 840 agtgaagaga tgcagaagct tgcagagcag tacggagcaa agggaattaa cgttgctgga 900 atgtgctgta ccggaaacga agttctctca agaatgggag ttcaggtcgc tggaaacttc 960 ctaatgcaag agctggcgat tataactggt gcagttgagg ccgtgatagt tgactaccag 1020 tgcctaatgc cctcattagt tgatgtcgct tcatgttacc acactaagat aataactact 1080 gagccaaagg ctcgcattcc gggagcaata cacgtcgaat ttgaacctga gaaagcggac 1140 gagatcgcca aagagatcat caagattgca attgagaact ataagaacag agttccggca 1200 aaagtctaca ttccagagca caagatggaa ttggttgctg gatttagtgt cgaggcaata 1260 cttgaagccc ttggtggaac actggagccc ctcataaaag ccctccagga cggaacaata 1320 aagggaatcg tcggaatcgt tggatgtaac aatccaaggg tcaagcagaa ctacggtcac 1380 gtcaccttgg ccaaggagct catcaagagg gacatcctgg ttgttggaac tggttgctgg 1440 ggaattgctg cagcaatgca tggattacta acccccgaag cagctgaaat ggccggtcca 1500 gggctgaagg cagtatgcga agcgctcgga attccaccat gcctgcacat gggaagctgt 1560 gttgactgtt cgagaatcct gctggtcttg agtgcccttg ccaatgctct gaatgttgac 1620 atttcagact tgccagttgc tggctctgct ccagaatgga tgagcgagaa ggcagtggca 1680 ataggaacct acttcgttgc aagcggcgtc ttcacgcact tgggagttat cccaccagtc 1740 cttggaagcc agaaggttac caaactcctt acggatgaca tcgaggatct ccttggaggg 1800 aagttctacg ttgagacaga tccagtgaaa gcggcagaaa caatatacaa cgtgataatt 1860 gagaagagga aaaaacttgg attgcccatc 1890 <210> 14 <211> 7244 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> plasmid comprising ChCODH II and His-tag <400> 14 tggcgaatgg gacgcgccct gtagcggcgc attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg 60 cagcgtgacc gctacacttg ccagcgccct agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc 120 ctttctcgcc acgttcgccg gctttccccg tcaagctcta aatcgggggc tccctttagg 180 gttccgattt agtgctttac ggcacctcga ccccaaaaaa cttgattagg gtgatggttc 240 acgtagtggg ccatcgccct gatagacggt ttttcgccct ttgacgttgg agtccacgtt 300 ctttaatagt ggactcttgt tccaaactgg aacaacactc aaccctatct cggtctattc 360 ttttgattta taagggattt tgccgatttc ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta 420 acaaaaattt aacgcgaatt ttaacaaaat attaacgttt acaatttcag gtggcacttt 480 tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta 540 tccgctcatg aattaattct tagaaaaact catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat 600 tcatatcagg attatcaata ccatattttt gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa 660 actcaccgag gcagttccat aggatggcaa gatcctggta tcggtctgcg attccgactc 720 gtccaacatc aatacaacct attaatttcc cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga 780 aatcaccatg agtgacgact gaatccggtg agaatggcaa aagtttatgc atttctttcc 840 agacttgttc aacaggccag ccattacgct cgtcatcaaa atcactcgca tcaaccaaac 900 cgttattcat tcgtgattgc gcctgagcga gacgaaatac gcgatcgctg ttaaaaggac 960 aattacaaac aggaatcgaa tgcaaccggc gcaggaacac tgccagcgca tcaacaatat 1020 tttcacctga atcaggatat tcttctaata cctggaatgc tgttttcccg gggatcgcag 1080 tggtgagtaa ccatgcatca 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aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt 1980 ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag 2040 cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg 2100 gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt tcctgcgtta 2160 tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gcctttgagt gagctgatac cgctcgccgc 2220 agccgaacga ccgagcgcag cgagtcagtg agcgaggaag cggaagagcg cctgatgcgg 2280 tattttctcc ttacgcatct gtgcggtatt tcacaccgca tatatggtgc actctcagta 2340 caatctgctc tgatgccgca tagttaagcc agtatacact ccgctatcgc tacgtgactg 2400 ggtcatggct gcgccccgac acccgccaac acccgctgac gcgccctgac gggcttgtct 2460 gctcccggca tccgcttaca gacaagctgt gaccgtctcc gggagctgca tgtgtcagag 2520 gttttcaccg tcatcaccga aacgcgcgag gcagctgcgg taaagctcat cagcgtggtc 2580 gtgaagcgat tcacagatgt ctgcctgttc atccgcgtcc agctcgttga gtttctccag 2640 aagcgttaat gtctggcttc tgataaagcg ggccatgtta agggcggttt tttcctgttt 2700 ggtcactgat gcctccgtgt aagggggatt tctgttcatg ggggtaatga taccgatgaa 2760 acgagagagg atgctcacga tacgggttac tgatgatgaa catgcccggt tactggaacg 2820 ttgtgagggt aaacaactgg cggtatggat gcggcgggac cagagaaaaa tcactcaggg 2880 tcaatgccag cgcttcgtta atacagatgt aggtgttcca cagggtagcc agcagcatcc 2940 tgcgatgcag atccggaaca taatggtgca gggcgctgac ttccgcgttt ccagacttta 3000 cgaaacacgg aaaccgaaga ccattcatgt tgttgctcag gtcgcagacg ttttgcagca 3060 gcagtcgctt cacgttcgct cgcgtatcgg tgattcattc tgctaaccag taaggcaacc 3120 ccgccagcct agccgggtcc tcaacgacag gagcacgatc atgcgcaccc gtggggccgc 3180 catgccggcg ataatggcct gcttctcgcc gaaacgtttg gtggcgggac cagtgacgaa 3240 ggcttgagcg agggcgtgca agattccgaa taccgcaagc gacaggccga tcatcgtcgc 3300 gctccagcga aagcggtcct cgccgaaaat gacccagagc gctgccggca cctgtcctac 3360 gagttgcatg ataaagaaga cagtcataag tgcggcgacg atagtcatgc cccgcgccca 3420 ccggaaggag ctgactgggt tgaaggctct caagggcatc ggtcgagatc ccggtgccta 3480 atgagtgagc taacttacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa 3540 cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat 3600 tgggcgccag ggtggttttt cttttcacca gtgagacggg caacagctga ttgcccttca 3660 ccgcctggcc ctgagagagt tgcagcaagc ggtccacgct ggtttgcccc agcaggcgaa 3720 aatcctgttt gatggtggtt aacggcggga tataacatga gctgtcttcg gtatcgtcgt 3780 atcccactac cgagatatcc gcaccaacgc gcagcccgga ctcggtaatg gcgcgcattg 3840 cgcccagcgc catctgatcg ttggcaacca gcatcgcagt gggaacgatg ccctcattca 3900 gcatttgcat ggtttgttga aaaccggaca tggcactcca gtcgccttcc cgttccgcta 3960 tcggctgaat ttgattgcga gtgagatatt tatgccagcc agccagacgc agacgcgccg 4020 agacagaact taatgggccc gctaacagcg cgatttgctg gtgacccaat gcgaccagat 4080 gctccacgcc cagtcgcgta ccgtcttcat gggagaaaat aatactgttg atgggtgtct 4140 ggtcagagac atcaagaaat aacgccggaa cattagtgca ggcagcttcc acagcaatgg 4200 catcctggtc atccagcgga tagttaatga tcagcccact gacgcgttgc gcgagaagat 4260 tgtgcaccgc cgctttacag gcttcgacgc cgcttcgttc taccatcgac accaccacgc 4320 tggcacccag ttgatcggcg cgagatttaa tcgccgcgac aatttgcgac ggcgcgtgca 4380 gggccagact ggaggtggca acgccaatca gcaacgactg tttgcccgcc agttgttgtg 4440 ccacgcggtt gggaatgtaa ttcagctccg ccatcgccgc ttccactttt tcccgcgttt 4500 tcgcagaaac gtggctggcc tggttcacca cgcgggaaac ggtctgataa gagacaccgg 4560 catactctgc gacatcgtat aacgttactg gtttcacatt caccaccctg aattgactct 4620 cttccgggcg ctatcatgcc ataccgcgaa aggttttgcg ccattcgatg gtgtccggga 4680 tctcgacgct ctcccttatg cgactcctgc attaggaagc agcccagtag taggttgagg 4740 ccgttgagca ccgccgccgc aaggaatggt gcatgcaagg agatggcgcc caacagtccc 4800 ccggccacgg ggcctgccac catacccacg ccgaaacaag cgctcatgag cccgaagtgg 4860 cgagcccgat cttccccatc ggtgatgtcg gcgatatagg cgccagcaac cgcacctgtg 4920 gcgccggtga tgccggccac gatgcgtccg gcgtagagga tcgagatctc gatcccgcga 4980 aattaatacg actcactata ggggaattgt gagcggataa caattcccct ctagaaataa 5040 ttttgtttaa ctttaagaag gagatatacc atgggcagca gccatcatca tcatcatcac 5100 agcagcggcc tggtgccgcg cggcagccat atggcgaaac aaaatctgaa gagcaccgac 5160 cgtgcggttc aacaaatgct ggataaagcg aagcgtgagg gtattcaaac cgtgtgggat 5220 cgttacgagg cgatgaagcc gcagtgcggt ttcggcgaaa ccggtctgtg ctgccgtcac 5280 tgcctgcaag gtccgtgccg tattaacccg tttggcgatg agccgaaagt gggcatttgc 5340 ggtgcgaccg cggaagtgat cgttgcgcgt ggtctggacc gtagcattgc ggcgggtgcg 5400 gcgggtcata gcggtcatgc gaagcacctg gcgcacaccc tgaagaaagc ggtgcagggc 5460 aaagcggcga gctatatgat taaggaccgt accaaactgc acagcatcgc gaagcgtctg 5520 ggtattccga ccgaaggcca aaaagacgag gatattgcgc tggaagttgc gaaagcggcg 5580 ctggcggact tccatgagaa agataccccg gttctgtggg tgaccaccgt tctgccgccg 5640 agccgtgtga aggttctgag cgcgcatggt ctgatcccgg cgggtattga tcacgaaatc 5700 gcggagatta tgcaccgtac cagcatgggt tgcgacgcgg atgcgcagaa cctgctgctg 5760 ggtggcctgc gttgcagcct ggcggacctg gcgggttgct acatgggcac cgacctggcg 5820 gatatcctgt ttggtacccc ggcgccggtg gttaccgaaa gcaacctggg cgtgctgaag 5880 gcggatgcgg tgaacgttgc ggtgcacggt cacaacccgg ttctgagcga catcattgtt 5940 agcgtgagca aagagatgga aaacgaggcg cgtgcggcgg gtgcgaccgg tatcaacgtg 6000 gttggtattt gctgcaccgg caacgaggtg ctgatgcgtc acggtattcc ggcgtgcacc 6060 cacagcgtta gccaggaaat ggcgatgatc accggcgcgc tggacgcgat gatcctggat 6120 tatcagtgca ttcaaccgag cgtggcgacc attgcggagt gcaccggtac caccgttatt 6180 accaccatgg aaatgagcaa aatcaccggt gcgacccatg tgaactttgc ggaggaagcg 6240 gcggttgaga acgcgaagca aatcctgcgt ctggcgattg atacctttaa acgtcgtaag 6300 ggtaaaccgg tggagatccc gaacattaag accaaagtgg ttgcgggctt cagcaccgaa 6360 gcgatcatta acgcgctgag caagctgaac gcgaacgatc cgctgaaacc gctgattgac 6420 aacgtggtta acggtaacat ccgtggcgtg tgcctgttcg cgggttgcaa caacgttaag 6480 gtgccgcagg accaaaactt taccaccatt gcgcgtaagc tgctgaaaca gaacgttctg 6540 gtggttgcga ccggttgcgg tgcgggtgcg ctgatgcgtc acggttttat ggacccggcg 6600 aacgtggatg agctgtgcgg cgacggtctg aaagcggttc tgaccgcgat cggtgaagcg 6660 aacggtctgg gtggcccgct gccgccggtg ctgcacatgg gtagctgcgt tgacaacagc 6720 cgtgcggtgg cgctggttgc ggcgctggcg aaccgtctgg gcgttgacct ggatcgtctg 6780 ccggtggttg cgagcgcggc ggaagcgatg catgagaagg cggtggcgat tggtacctgg 6840 gcggttacca tcggtctgcc gacccacatt ggtgtgctgc cgccgatcac cggcagcctg 6900 ccggtgaccc aaatcctgac cagcagcgtt aaagatatta ccggtggcta cttcatcgtt 6960 gaactggacc cggagaccgc ggcggacaaa ctgctggcgg cgatcaatga gcgtcgtgcg 7020 ggtctgggtc tgccgtggtg aggatccgaa ttcgagctcc gtcgacaagc ttgcggccgc 7080 actcgagcac caccaccacc accactgaga tccggctgct aacaaagccc gaaaggaagc 7140 tgagttggct gctgccaccg ctgagcaata actagcataa ccccttgggg cctctaaacg 7200 ggtcttgagg ggttttttgc tgaaaggagg aactatatcc ggat 7244 <210> 15 <211> 7195 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> plasmid comprising ChCODH IV and His-tag <400> 15 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa 60 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt 120 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagttataaa ttcagtagag 180 cccgtttagc cttaatatgt tcaatgatgc ccgctgctgc tttatatggg tccgtttcca 240 cataaaattt gccgcctatt aaagcctcgg catcttgggt aagaatacgg gtaacttttg 300 aacttccgac cacaggtgga acaactccca agtgggtcat aatacccatc gctaccgccc 360 aggttccgat gctcaaagcc ttttcatgct ggtattcagg tgcagaagcc gcaatcggaa 420 ggtcttttgg acttacttta aggtagtttg cgacggcgat cactaagtcc ccgattcggg 480 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aattgttatc cgctcacaat tcccctatag tgagtcgtat taatttcgcg 2220 ggatcgagat ctcgatcctc tacgccggac gcatcgtggc cggcatcacc ggcgccacag 2280 gtgcggttgc tggcgcctat atcgccgaca tcaccgatgg ggaagatcgg gctcgccact 2340 tcgggctcat gagcgcttgt ttcggcgtgg gtatggtggc aggccccgtg gccgggggac 2400 tgttgggcgc catctccttg catgcaccat tccttgcggc ggcggtgctc aacggcctca 2460 acctactact gggctgcttc ctaatgcagg agtcgcataa gggagagcgt cgagatcccg 2520 gacaccatcg aatggcgcaa aacctttcgc ggtatggcat gatagcgccc ggaagagagt 2580 caattcaggg tggtgaatgt gaaaccagta acgttatacg atgtcgcaga gtatgccggt 2640 gtctcttatc agaccgtttc ccgcgtggtg aaccaggcca gccacgtttc tgcgaaaacg 2700 cgggaaaaag tggaagcggc gatggcggag ctgaattaca ttcccaaccg cgtggcacaa 2760 caactggcgg gcaaacagtc gttgctgatt ggcgttgcca cctccagtct ggccctgcac 2820 gcgccgtcgc aaattgtcgc ggcgattaaa tctcgcgccg atcaactggg tgccagcgtg 2880 gtggtgtcga tggtagaacg aagcggcgtc gaagcctgta aagcggcggt gcacaatctt 2940 ctcgcgcaac gcgtcagtgg gctgatcatt aactatccgc tggatgacca ggatgccatt 3000 gctgtggaag 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<212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> plasmid comprising ToCODH and His-tag <400> 16 gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt 60 caaatatgta tccgctcatg aattaattct tagaaaaact catcgagcat caaatgaaac 120 tgcaatttat tcatatcagg attatcaata ccatattttt gaaaaagccg tttctgtaat 180 gaaggagaaa actcaccgag gcagttccat aggatggcaa gatcctggta tcggtctgcg 240 attccgactc gtccaacatc aatacaacct attaatttcc cctcgtcaaa aataaggtta 300 tcaagtgaga aatcaccatg agtgacgact gaatccggtg agaatggcaa aagtttatgc 360 atttctttcc agacttgttc aacaggccag ccattacgct cgtcatcaaa atcactcgca 420 tcaaccaaac cgttattcat tcgtgattgc gcctgagcga gacgaaatac gcgatcgctg 480 ttaaaaggac aattacaaac aggaatcgaa tgcaaccggc gcaggaacac tgccagcgca 540 tcaacaatat tttcacctga atcaggatat tcttctaata cctggaatgc tgttttcccg 600 gggatcgcag tggtgagtaa ccatgcatca tcaggagtac ggataaaatg cttgatggtc 660 ggaagaggca taaattccgt cagccagttt agtctgacca tctcatctgt aacatcattg 720 gcaacgctac ctttgccatg tttcagaaac aactctggcg catcgggctt cccatacaat 780 cgatagattg tcgcacctga ttgcccgaca ttatcgcgag cccatttata cccatataaa 840 tcagcatcca tgttggaatt taatcgcggc ctagagcaag acgtttcccg ttgaatatgg 900 ctcataacac cccttgtatt actgtttatg taagcagaca gttttattgt tcatgaccaa 960 aatcccttaa cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg 1020 atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc 1080 gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac 1140 tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt agttaggcca 1200 ccacttcaag aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt 1260 ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc 1320 ggataaggcg cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg 1380 aacgacctac accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc 1440 cgaagggaga aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac 1500 gagggagctt ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct 1560 ctgacttgag cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc 1620 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cgctgccggc actgaaaggc ctgtttggta aaccgaccgt 1800 cgtgaacaat ctgctgtccc tggcggccgt tccgtggatt atcgcgcacg gtgcaaaagc 1860 ttatgaatca ttcggtatgg atcgtagccg tggtaccatt ccgctgcaga tcggcggtaa 1920 tgtgaaacgt ggcggtctgt ttgaaaccgg cttcggtatt acgctgggtg aactggttga 1980 agatatttgc ggcggtaccg ctagtggtcg cccggtcaaa gccgtccaag tgggcggtcc 2040 gctgggtgca tatcatccgg tctccgacta ccacctgccg ttttgctatg aacagtttgc 2100 tggtcaaggc ggtctggtgg gccatgcagg tctggttgtc cacgatgaca ccgcggatat 2160 gctgaaactg gcgcgttttg ccatggaatt ctgtgcgatt gaaagctgcg gtacctgtac 2220 gccgtgccgt attggtgcgg ttcgcggcgt tgaagtcatt gatcgtattg cagctggtga 2280 tgcgagcgca atgccgctgc tggatgacct gtgtcagacc atgaaactgg gttctctgtg 2340 tgccctgggc ggttttacgc cgtacccggt gcagtcggct atccgtcatt ttccggctga 2400 ttttccgtgt gctcgtgaag cggcagaata aatattaaag aggtatatat taatgaaaga 2460 cctgattatc ccgccgctgg actggacgca agacatgggt acgccgaaac gcgaaggtgc 2520 tccggtgcat ctgacgattg atggcgtcga agtgacggtt ccggcgggta ccagcgttct 2580 gcgtgccgca gcagaagctg gcatttctat cccgaaactg tgcgcgaccg ataacgtgga 2640 accggttggt agttgccgtc tgtgtatggt ggaaattgaa ggcatgcgtg gtaccccgac 2700 gtcctgtacc acgccggttg ccccgggtat gcgtgtccat acccagacgc cgcagctgca 2760 aaaactgcgt cgcggtgtga tggaactgta tatcagcgat cacccgctgg actgcctgac 2820 ctgtgctgcg aacggcgatt gcgaactgca ggacatggca ggcgctgtgg gtctgcgtga 2880 agttcgctat caagcgaaag atacgcattt tgcgcgtcgc gatgccaccg gtccgaatcc 2940 gcgttacatt ccgaaagata actcaaatcc gtatttctcg tacgacccgg ccaaatgcat 3000 cgtctgtatg cgttgcgtgc gcgcctgcga agaagtgcag ggcacgtttg cactgaccgt 3060 tatgggccgt ggtttcgatg cgcgcattag tccggccgca ccggattttc tgagcagcga 3120 ctgtgtgtcc tgcggcgcct gtgttcaggc atgtccgacc gctaccctgg tggaaaaatc 3180 tgtggaacgt atcggtaccc cggaacgcaa agtggttacc acgtgcgcct attgtggcgt 3240 tggttgctcg tttgaagcac atatgctggg cgatcagctg gtccgtatgg tgccgtggaa 3300 aggcggtgct gcgaaccgtg gtcatagctg tgtgaaaggc cgcttcgcgt atggttacgc 3360 cacccaccag gatcgtattc tgaaaccgat gattcgcgat aaaatcacgg acccgtggcg 3420 cgaagttaac tggaccgaag cactggattt taccgctacg cgtctgcgcg cgctgcgtga 3480 tagccatggt gccgatgcac tgggtgtgat caccagttcc cgctgcacga atgaagaaac 3540 ctatctggtt cagaaactgg cacgtgctgt cttcggtacg aacaataccg atacgtgcgc 3600 ccgcgtttgt cattctccga ccggctacgg tctgaaacag acctttggca cgagtgccgg 3660 tacgcaagat ttcgactccg tcgaagaaac cgatctggcc ctggtgattg gcgcaaatcc 3720 gaccgacggt cacccggtgt ttgcgagtcg tctgcgtaaa cgtctgcgtg ccggtgcaaa 3780 actgattgtc gtggatccgc gtcgcatcga cctgctgaac accccgcatc gtggcgaagc 3840 atggcacctg cagctgaaac cgggtacgaa tgtcgcagtg atgaccgcaa tggctcatgt 3900 tattgtcacc gaacaaatct ttgataaacg tttcatcggt gaccgctgcg attgggacga 3960 atgggcggat tatgccgaat tcgtggcgaa cccggaatac gcaccggaag ctgtcgaaag 4020 cctgaccggc gtgccggctg gtctgctgcg tcaggcggca cgtgcctatg ctgccgcacc 4080 gaatgcagct atttattacg gcctgggtgt gaccgaacac agccaaggct ctaccacggt 4140 tattgcgatc gccaacctgg ccatgatgac cggcaatatc ggtcgtccgg gcgtgggtgt 4200 taacccgctg cgtggtcaga acaatgtgca aggcagctgt gatatgggtt cttttccgca 4260 tgaattcccg ggttatcgcc acgttagtga tgacgcgacc cgtggcctgt ttgaacgcac 4320 gtggggtgtg accctgtcat cggaaccggg cctgcgtatt ccgaatatgc tggatgcggc 4380 cgttgaaggc cgcttcaaag cgctgtatgt ccagggtgaa gacattctgc aatcagatcc 4440 ggacacccgt catgtttcgg ccggtctggc agctatggat ctggtcatcg tgcatgacct 4500 gtttctgaac gaaacggcga attacgccca cgtgtttctg ccgggctcca ccttcctgga 4560 aaaagatggt acctttacga acgcggaacg tcgcattaat cgcgttcgtc gcgtcatggc 4620 accgaaagct ggtttcgcgg attgggaagt gacgcagatg ctggcaaacg ctctgggcgc 4680 tggttggcat tatacccacc cgtcagaaat tatggcggaa attgccgcaa ccacgccggg 4740 ttttgcagct gtcacctacg aaatgctgga tgcacgtggt tcagtgcagt ggccgtgcaa 4800 tgaaaaagcg ccggaaggct cgccgattat gcatgtcgaa ggttttgtgc gcggcaaagg 4860 tcgtttcatc cgcaccgcgt atctgccgac ggatgaaaaa accggtccgc gtttcccgct 4920 gctgctgacc acgggccgca ttctgagcca gtacaacgtt ggtgcccaaa cccgtcgcac 4980 ggaaaatacc gtctggcatg gtgaagatcg cctggaaatt cacccgacgg acgcagaaac 5040 ccgtggcatc cgcgatggtg attgggttcg tctggccagc cgtgcaggtg aaaccaccct 5100 gcgtgcaacc gttacggatc gcgtctctcc gggtgttgtc tataccacgt ttcatcaccc 5160 ggacacccag gcgaacgtgg ttaccacgga tacgtctgac tgggctacca attgtccgga 5220 atacaaagtg accgcggttc aagtcgcggc cagtaatggc ccgtccgatt ggcaacagga 5280 ctatgcggca caagcagcag cagcccgtcg tattgaagca gcagaatgaa tattaaagag 5340 gtatatatta atgtccctgc cggctggtgc tgttacggtt ccgctgccgg gtggtgctcg 5400 tgctgttctg gccgaagaag ttccggtggc gctggtcttc gacggcgtta cccaggcagt 5460 gatgatggcg agcccggtgg atctggaaga ctttctgctg ggttttgcac tgaccgaagg 5520 catgattgcg gatcgtgctg aactgctgcg tcatgaagtg gttcgccagc cgcaaggtat 5580 tgaactgcgc ggttggctgg ctgcaccggc cggccagcgt tttgcggcac gccgtcgtgc 5640 gatggcaggc ccggttggtt gtggcctgtg tggtctggat agcctggcag cggttctgcg 5700 tccgctgccg cgtgcaccgc gcggcggtgc gccgccgccg ctggcggatg gtgctctggc 5760 ggcactgcgc gcgggccaaa gcctgcagga tgcagtgcgt agcgttcatg cagcgggctt 5820 ttgggatggc gcgcagatgc gtgccctgcg tgaagatgtt ggccgtcata atgcgctgga 5880 taaactggcg ggcgctctgg caggccaggg tatcgatgct gcggcaggtg cactggtgct 5940 gacctcacgt ctgtccgttg atctggtgca aaaagcagcg atgattggcg cgcgtgtgct 6000 gattgcgccg tctgcaccga ccgctctggc ggtcgcagaa gcgcaggcag ccggcctggc 6060 actgattgcc cgtggcccgg atggtccgac gctgtacacc gaaaccgaag cagaatgaat 6120 attaaagagg tatatattaa tgagtgacga caaaattatc cgtatggcaa atcaaatcgc 6180 tgcgttcttc gccgttcaac cgggtgaccg tgcgggtccg gtggcagcgc atattagcga 6240 aaactggtct gcaccgatgc gtgccgcact gctggcgcac gtggcagctc agagtccggg 6300 tctggatccg ctggttatcg cagcagcacc gcaaattcgt ccggttccgg cgtgagagct 6360 cgagatctgc agctggtacc atatgggaat tcgaagcttg gctgttttgg cggatgagag 6420 aagattttca gcctgataca gattaaatca gaacgcagaa gcggtctgat aaaacagaat 6480 ttgcctggcg gcagtagcgc ggtggtccca cctgacccca tgccgaactc agaagtgaaa 6540 cgccgtagcg ccgatggtag tgtggggtct ccccatgcga gagtagggaa ctgccaggca 6600 tcaaataaaa cgaaaggctc agtcgaaaga ctgggccttt cgttttatct gttgtttgtc 6660 ggtgaacgct ctcctgagta ggacaaatcc gccgggagcg gatttgaacg ttgcgaagca 6720 acggcccgga gggtggcggg caggacgccc gccataaact gccaggcatc aaattaagca 6780 gaaggccatc ctgacggatg gcctttttgc gtttctacaa actctttttg tttatttttc 6840 taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa 6900 tattgaaaaa ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat tccctttttt 6960 gcggcatttt gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct 7020 gaagatcagt tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg atctcaacag cggtaagatc 7080 cttgagagtt ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa agttctgcta 7140 tgtggcgcgg tattatcccg tgttgacgcc gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac 7200 tattctcaga atgacttggt tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc 7260 atgacagtaa gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac tgcggccaac 7320 ttacttctga caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca caacatgggg 7380 gatcatgtaa ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat accaaacgac 7440 gagcgtgaca ccacgatgcc tgtagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc 7500 gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt 7560 gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga taaatctgga 7620 gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc 7680 cgtatcgtag ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag 7740 atcgctgaga taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca agtttactca 7800 tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc 7860 ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca 7920 gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc 7980 tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta 8040 ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt 8100 ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc 8160 gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg 8220 ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg 8280 tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag 8340 ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc 8400 agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat 8460 agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg 8520 gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc 8580 tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt 8640 accgcctttg agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca 8700 gtgagcgagg aagcggaaga gcgcctgatg cggtattttc tccttacgca tctgtgcggt 8760 atttcacacc gcatatggtg cactctcagt acaatctgct ctgatgccgc atagttaagc 8820 cagtatacac tccgctatcg ctacgtgact gggtcatggc tgcgccccga cacccgccaa 8880 cacccgctga cgcgccctga cgggcttgtc tgctcccggc atccgcttac agacaagctg 8940 tgaccgtctc cgggagctgc atgtgtcaga ggttttcacc gtcatcaccg aaacgcgcga 9000 ggcagcagat caattcgcgc gcgaaggcga agcggcatgc atttacgttg acaccatcga 9060 atggtgcaaa acctttcgcg gtatggcatg atagcgcccg gaagagagtc aattcagggt 9120 ggtgaatgtg aaaccagtaa cgttatacga tgtcgcagag tatgccggtg tctcttatca 9180 gaccgtttcc cgcgtggtga accaggccag ccacgtttct gcgaaaacgc gggaaaaagt 9240 ggaagcggcg atggcggagc tgaattacat tcccaaccgc gtggcacaac aactggcggg 9300 caaacagtcg ttgctgattg gcgttgccac ctccagtctg gccctgcacg cgccgtcgca 9360 aattgtcgcg gcgattaaat ctcgcgccga tcaactgggt gccagcgtgg tggtgtcgat 9420 ggtagaacga agcggcgtcg aagcctgtaa agcggcggtg cacaatcttc tcgcgcaacg 9480 cgtcagtggg ctgatcatta actatccgct ggatgaccag gatgccattg ctgtggaagc 9540 tgcctgcact aatgttccgg cgttatttct tgatgtctct gaccagacac ccatcaacag 9600 tattattttc tcccatgaag acggtacgcg actgggcgtg gagcatctgg tcgcattggg 9660 tcaccagcaa atcgcgctgt tagcgggccc attaagttct gtctcggcgc gtctgcgtct 9720 ggctggctgg cataaatatc tcactcgcaa tcaaattcag ccgatagcgg aacgggaagg 9780 cgactggagt gccatgtccg gttttcaaca aaccatgcaa atgctgaatg agggcatcgt 9840 tcccactgcg atgctggttg ccaacgatca gatggcgctg ggcgcaatgc gcgccattac 9900 cgagtccggg ctgcgcgttg gtgcggatat ctcggtagtg ggatacgacg ataccgaaga 9960 cagctcatgt tatatcccgc cgtcaaccac catcaaacag gattttcgcc tgctggggca 10020 aaccagcgtg gaccgcttgc tgcaactctc tcagggccag gcggtgaagg gcaatcagct 10080 gttgcccgtc tcactggtga aaagaaaaac caccctggcg cccaatacgc aaaccgcctc 10140 tccccgcgcg ttggccgatt cattaatgca gctggcacga caggtttccc gactggaaag 10200 cgggcagtga gcgcaacgca attaatgtga gttagcgcga attgatctg 10249

Claims (24)

  1. 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 개미산 제조용 조성물로서,
    상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움속(Methylobacterium sp.) 유래 포름산 탈수소효소 I이고,
    상기 포름산 탈수소효소 I은 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드를 포함하고,
    상기 일산화탄소 탈수소효소는 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 II, 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 IV 및 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus) 유래 일산화탄소 탈수소효소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나이고,
    상기 조성물 내 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소는 1:1 내지 1:3의 비율로 존재하고,
    상기 조성물은 에틸 바이올로젠(Ethyl viologen) 전자전달체를 더 포함하는 것인, 개미산 제조용 조성물.
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  9. 청구항 1에 있어서, 상기 조성물의 pH는 5.0 내지 8.0인, 개미산 제조용 조성물.
  10. 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자 제거용 조성물로서,
    상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움속(Methylobacterium sp.) 유래 포름산 탈수소효소 I이고,
    상기 포름산 탈수소효소 I은 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드를 포함하고,
    상기 일산화탄소 탈수소효소는 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 II, 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 IV 및 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus) 유래 일산화탄소 탈수소효소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나이고,
    상기 조성물 내 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소는 1:1 내지 1:3의 비율로 존재하고,
    상기 조성물은 에틸 바이올로젠(Ethyl viologen) 전자전달체를 더 포함하는 것인, 분자 제거용 조성물.
  11. 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 폐가스 처리용 조성물로서,
    상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움속(Methylobacterium sp.) 유래 포름산 탈수소효소 I이고,
    상기 포름산 탈수소효소 I은 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드를 포함하고,
    상기 일산화탄소 탈수소효소는 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 II, 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 IV 및 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus) 유래 일산화탄소 탈수소효소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나이고,
    상기 조성물 내 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소는 1:1 내지 1:3의 비율로 존재하고,
    상기 조성물은 에틸 바이올로젠(Ethyl viologen) 전자전달체를 더 포함하는 것인, 폐가스 처리용 조성물.
  12. 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 공기 정화용 조성물로서,
    상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움속(Methylobacterium sp.) 유래 포름산 탈수소효소 I이고,
    상기 포름산 탈수소효소 I은 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드를 포함하고,
    상기 일산화탄소 탈수소효소는 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 II, 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 IV 및 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus) 유래 일산화탄소 탈수소효소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나이고,
    상기 조성물 내 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소는 1:1 내지 1:3의 비율로 존재하고,
    상기 조성물은 에틸 바이올로젠(Ethyl viologen) 전자전달체를 더 포함하는 것인, 공기 정화용 조성물.
  13. 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 개미산 제조용 장치로서,
    상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움속(Methylobacterium sp.) 유래 포름산 탈수소효소 I이고,
    상기 포름산 탈수소효소 I은 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드를 포함하고,
    상기 일산화탄소 탈수소효소는 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 II, 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 IV 및 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus) 유래 일산화탄소 탈수소효소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나이고,
    상기 조성물 내 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소는 1:1 내지 1:3의 비율로 존재하고,
    상기 장치는 에틸 바이올로젠(Ethyl viologen) 전자전달체를 더 포함하는 것인, 개미산 제조용 장치.
  14. 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자 제거용 장치로서,
    상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움속(Methylobacterium sp.) 유래 포름산 탈수소효소 I이고,
    상기 포름산 탈수소효소 I은 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드를 포함하고,
    상기 일산화탄소 탈수소효소는 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 II, 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 IV 및 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus) 유래 일산화탄소 탈수소효소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나이고,
    상기 조성물 내 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소는 1:1 내지 1:3의 비율로 존재하고,
    상기 장치는 에틸 바이올로젠(Ethyl viologen) 전자전달체를 더 포함하는 것인, 분자 제거용 장치.
  15. 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 폐가스 처리용 장치로서,
    상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움속(Methylobacterium sp.) 유래 포름산 탈수소효소 I이고,
    상기 포름산 탈수소효소 I은 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드를 포함하고,
    상기 일산화탄소 탈수소효소는 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 II, 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 IV 및 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus) 유래 일산화탄소 탈수소효소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나이고,
    상기 조성물 내 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소는 1:1 내지 1:3의 비율로 존재하고,
    상기 장치는 에틸 바이올로젠(Ethyl viologen) 전자전달체를 더 포함하는 것인, 폐가스 처리용 장치.
  16. 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 공기 정화용 장치로서,
    상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움속(Methylobacterium sp.) 유래 포름산 탈수소효소 I이고,
    상기 포름산 탈수소효소 I은 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드를 포함하고,
    상기 일산화탄소 탈수소효소는 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 II, 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 IV 및 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus) 유래 일산화탄소 탈수소효소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나이고,
    상기 조성물 내 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소는 1:1 내지 1:3의 비율로 존재하고,
    상기 장치는 에틸 바이올로젠(Ethyl viologen) 전자전달체를 더 포함하는 것인, 공기 정화용 장치.
  17. 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)를 포함하는 필터로서,
    상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움속(Methylobacterium sp.) 유래 포름산 탈수소효소 I이고,
    상기 포름산 탈수소효소 I은 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드를 포함하고,
    상기 일산화탄소 탈수소효소는 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 II, 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 IV 및 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus) 유래 일산화탄소 탈수소효소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나이고,
    상기 조성물 내 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소는 1:1 내지 1:3의 비율로 존재하고,
    상기 필터는 에틸 바이올로젠(Ethyl viologen) 전자전달체를 더 포함하는 것인, 필터.
  18. 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자를 포함하는 가스(gas)를 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)에 접촉시키는 단계를 포함하는 개미산의 제조 방법로서,
    상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움속(Methylobacterium sp.) 유래 포름산 탈수소효소 I이고,
    상기 포름산 탈수소효소 I은 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드를 포함하고,
    상기 일산화탄소 탈수소효소는 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 II, 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 IV 및 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus) 유래 일산화탄소 탈수소효소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나이고,
    상기 조성물 내 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소는 1:1 내지 1:3의 비율로 존재하고,
    상기 가스는 전자전달체와 동시에 일산화탄소 탈수소효소 및 포름산 탈수소효소에 접촉되는 것인, 개미산의 제조 방법.
  19. 청구항 18에 있어서, 상기 접촉시키는 단계는 상기 가스를 일산화탄소 탈수소효소에 접촉시키는 단계; 및
    상기 일산화탄소 탈수소효소와 접촉된 가스를 포름산 탈수소효소에 접촉시키는 단계로 이루어진 것인, 개미산의 제조 방법.
  20. 청구항 18에 있어서, 상기 가스는 연속적으로 공급되는 가스인, 개미산의 제조 방법.
  21. 삭제
  22. 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자를 포함하는 가스(gas)를 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)에 접촉시키는 단계를 포함하는 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자를 제거하는 방법로서,
    상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움속(Methylobacterium sp.) 유래 포름산 탈수소효소 I이고,
    상기 포름산 탈수소효소 I은 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드를 포함하고,
    상기 일산화탄소 탈수소효소는 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 II, 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 IV 및 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus) 유래 일산화탄소 탈수소효소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나이고,
    상기 조성물 내 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소는 1:1 내지 1:3의 비율로 존재하고,
    상기 가스는 전자전달체와 동시에 일산화탄소 탈수소효소 및 포름산 탈수소효소에 접촉되는 것인, 방법.
  23. 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자를 포함하는 가스(gas)를 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)에 접촉시키는 단계를 포함하는 폐가스 처리 방법로서,
    상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움속(Methylobacterium sp.) 유래 포름산 탈수소효소 I이고,
    상기 포름산 탈수소효소 I은 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드를 포함하고,
    상기 일산화탄소 탈수소효소는 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 II, 카르복시도써머스 하이드로게노포르만스(Carboxydothermus hydrogenoformans) 유래 일산화탄소 탈수소효소 IV 및 써모코커스 온누리누스(Thermococcus onnurineus) 유래 일산화탄소 탈수소효소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나이고,
    상기 조성물 내 상기 일산화탄소 탈수소효소 및 상기 포름산 탈수소효소는 1:1 내지 1:3의 비율로 존재하고,
    상기 가스는 전자전달체와 동시에 일산화탄소 탈수소효소 및 포름산 탈수소효소에 접촉되는 것인, 폐가스 처리 방법.
  24. 일산화탄소 및 이산화탄소로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 분자를 포함하는 가스(gas)를 일산화탄소 탈수소효소(Carbon monoxide dehydrogenase) 및 포름산 탈수소효소(Formate dehydrogenase)에 접촉시키는 단계를 포함하는 공기 정화 방법로서,
    상기 포름산 탈수소효소는 메틸로박테리움속(Methylobacterium sp.) 유래 포름산 탈수소효소 I이고,
    상기 포름산 탈수소효소 I은 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드를 포함하고,
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101826207B1 (ko) 2016-11-09 2018-02-06 주식회사 씨원켐 대장균 내 과발현 가능한 Pantoea species YR343 유래 호기성 일산화탄소-탈수소효소(carbon monoxide dehydrogenase, PsCODH)를 코딩하는 재조합 벡터, 재조합 PsCODH의 과발현 방법 및 PsCODH를 이용하여 철강 제조 공정에서 발생한 CO(carbon monoxide) 포함 폐가스를 전환하는 방법

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20020001519A (ko) * 2000-06-28 2002-01-09 신운섭 아세트산의 전기화학적 제조 방법
KR100468049B1 (ko) * 2002-07-26 2005-01-24 학교법인 서강대학교 이산화탄소를 이용한 포름산의 전기화학적 제조 방법
KR101524340B1 (ko) * 2012-10-12 2015-06-04 광운대학교 산학협력단 재조합 미생물, 이로부터 발현된 재조합 포름산 탈수소효소를 이용한 포름산의 제조방법
CN104936679B (zh) 2013-02-14 2017-08-18 托普索公司 用于从烟道气或废气中同时除去一氧化碳和氮氧化物的方法和催化剂
CN108603178A (zh) * 2016-01-06 2018-09-28 株式会社西化学 Co水合酶以及使用其产生甲酸的方法
KR101976691B1 (ko) * 2017-11-15 2019-05-09 울산과학기술원 재조합 미생물 및 이를 이용한 개미산 제조 방법
KR102129279B1 (ko) * 2018-11-12 2020-07-03 한국해양과학기술원 Fe-S 융합단백질을 매개로 한 신규한 일산화탄소:포름산 산화·환원효소 및 이의 용도

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101826207B1 (ko) 2016-11-09 2018-02-06 주식회사 씨원켐 대장균 내 과발현 가능한 Pantoea species YR343 유래 호기성 일산화탄소-탈수소효소(carbon monoxide dehydrogenase, PsCODH)를 코딩하는 재조합 벡터, 재조합 PsCODH의 과발현 방법 및 PsCODH를 이용하여 철강 제조 공정에서 발생한 CO(carbon monoxide) 포함 폐가스를 전환하는 방법

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